特許 7631296 Ｈ因子増強性抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-02-07

(45)【発行日】2025-02-18

(54)【発明の名称】Ｈ因子増強性抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/18 20060101AFI20250210BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20250210BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20250210BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20250210BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20250210BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20250210BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20250210BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250210BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20250210BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250210BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20250210BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20250210BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20250210BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20250210BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250210BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20250210BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20250210BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20250210BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20250210BHJP

【ＦＩ】

C07K16/18 ZNA

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N15/864 100Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61P43/00 111

A61P7/06

A61P13/12

A61P29/00

A61P27/02

A61K39/395 N

A61K47/60

A61K48/00

A61K35/12

A61K35/76

【請求項の数】 33

(21)【出願番号】P 2022503450

(86)(22)【出願日】2020-07-17

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-09-22

(86)【国際出願番号】 US2020042627

(87)【国際公開番号】W WO2021011903

(87)【国際公開日】2021-01-21

【審査請求日】2023-07-10

(31)【優先権主張番号】62/875,309

(32)【優先日】2019-07-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】520137084

【氏名又は名称】ジェミニ・セラピューティクス・サブ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｇｅｍｉｎｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓｕｂ．Ｉｎｃ．

(73)【特許権者】

【識別番号】522021941

【氏名又は名称】スティヒティング・サンキン・ブルートフォールジーニング

【氏名又は名称原語表記】ＳＴＩＣＨＴＩＮＧ ＳＡＮＱＵＩＮ ＢＬＯＥＤＶＯＯＲＺＩＥＮＩＮＧ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100122301

【弁理士】

【氏名又は名称】冨田 憲史

(74)【代理人】

【識別番号】100170520

【弁理士】

【氏名又は名称】笹倉 真奈美

(74)【代理人】

【識別番号】100221545

【弁理士】

【氏名又は名称】白江 雄介

(72)【発明者】

【氏名】ローダー，スコット

(72)【発明者】

【氏名】パーセル，トム

(72)【発明者】

【氏名】ゴビンダラジャン，スリダル

(72)【発明者】

【氏名】カイペルス，タコ ウィレム

(72)【発明者】

【氏名】ヴァウテルス，ディアナ

(72)【発明者】

【氏名】ブラウウェル，マリア クララ

(72)【発明者】

【氏名】パウ，リシャルト ベンヤミン

(72)【発明者】

【氏名】リスペンス，ターデ

(72)【発明者】

【氏名】ヨンヘリウス，イルセ

(72)【発明者】

【氏名】デッケルス，ギリアン

【審査官】上村 直子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５２５３６２（ＪＰ，Ａ）

【文献】Blood advances，2019年，Vol.3, No.4，pp.621-632

【文献】Clinical Chemistry，2005年，Vol.51, No.5，pp.856-863

【文献】THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY，2000年，Vol.275, No.17，pp.12917-12925

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｋ １６／００－１９／００

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ａ６１Ｐ

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｈ因子（ＦＨ）の補体制御タンパク質ドメイン１８（ＣＣＰ１８）に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、
－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）または配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＴＳ（配列番号２）または配列ＡＳＳ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）または配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）または配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、前記抗体またはその抗原結合性フラグメント。

【請求項2】

－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＴＳ（配列番号２）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項3】

－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＴＳ（配列番号２）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項4】

－ 配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＳＳ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を有する重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項5】

－ 配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＳＳ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、請求項１に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項6】

前記抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２．５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有するか、あるいは、前記抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して１．２５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０４×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項7】

前記抗体またはフラグメントは、
－ １０％（ｖ／ｖ）の血清の存在下で、ｉｎ ｖｉｔｒｏのリポ多糖におけるＣ３ｂ沈着を、３８ｎＭ以下のＩＣ_５０ 値で阻害する、及び／または
－ １０％（ｖ／ｖ）の血清の存在下で、ｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、１５０ｎＭ以下のＩＣ_５０ 値で阻害する、及び／または
－ ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨのＫ_Ｄを最大で２μＭまで減少させる（結合親和性を増加させる）、及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性を少なくとも３倍増加させる、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項8】

－ 配列番号４または配列番号１６の配列を含む可変軽鎖配列、および
－ 配列番号１２または配列番号８の配列を含む可変重鎖配列
を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項9】

配列番号４の配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号１２の配列を含む可変重鎖配列とを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項10】

配列番号４の配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号８の配列を含む可変重鎖配列とを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項11】

配列番号１６の配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号８の配列を含む可変重鎖配列とを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項12】

配列番号１６の配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号１２の配列を含む可変重鎖配列とを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項13】

前記抗体またはフラグメントは、ＦＨ活性を増強し、場合により、前記ＦＨ活性は、代替補体活性化の阻害であり、さらに場合により、代替補体活性化の阻害は、
－ 溶血活性の阻害、
－ Ｃ３ｂ沈着の阻害、及び／または
－ Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加
を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項14】

前記抗体またはフラグメントは、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、免疫グロブリン重鎖定常領域及び免疫グロブリン軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項15】

前記抗体またはフラグメントは、Ｆａｂフラグメントを含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項16】

前記抗体またはフラグメントは、モノクローナルである、請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項17】

前記抗体またはフラグメントは、ヒト軽鎖及び重鎖定常領域を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項18】

定常領域がヒトＩｇＧ４のＦｃドメインを含む、請求項１７に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項19】

ヒトＩｇＧ４のＦｃドメインが２９７位にアミノ酸残基ＡｌａまたはＧｌｎを含む、請求項１８に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項20】

前記抗体またはフラグメントは、ＰＥＧ化されている、請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項21】

前記抗体またはフラグメントは、ＰＥＧ化されたＦａｂフラグメントである、請求項２０に記載の抗体またはフラグメント。

【請求項22】

請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメントをコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸。

【請求項23】

請求項２２に記載の核酸を含むベクター。

【請求項24】

前記ベクターは、ＡＡＶベクターである、請求項２３に記載のベクター。

【請求項25】

前記ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、及びＡＡＶ１２からなる群から選択される、請求項２４に記載のベクター。

【請求項26】

請求項２２に記載の核酸、または請求項２３～２５のいずれか１項に記載のベクターを含む、組換え型細胞。

【請求項27】

請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、請求項２２に記載の核酸、請求項２３～２５のいずれか１項に記載のベクター、または請求項２６に記載の組換え型細胞、ならびに薬学的に許容されるキャリア、希釈剤、及び／または賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項28】

療法において使用するための、請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、請求項２２に記載の核酸、請求項２３～２５のいずれか１項に記載のベクター、請求項２６に記載の組換え型細胞、または請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項29】

代替補体活性化を阻害するのに使用するための、請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、請求項２２に記載の核酸、請求項２３～２５のいずれか１項に記載のベクター、請求項２６に記載の組換え型細胞、または請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項30】

代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止において使用するための、請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、請求項２２に記載の核酸、請求項２３～２５のいずれか１項に記載のベクター、請求項２６に記載の組換え型細胞、または請求項２７に記載の医薬組成物。

【請求項31】

前記障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、及びＩｇＡ腎症からなる群から選択される、請求項３０に記載の使用のための抗体もしくはフラグメント、核酸、組換え型細胞、または医薬組成物。

【請求項32】

抗体またはフラグメントを生成する方法であって、請求項２２に記載の核酸または請求項２３～２５のいずれか１項に記載のベクターを細胞に供給することと、前記核酸またはベクターに含まれる前記核酸配列を前記細胞に翻訳させることにより、請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメントを生成することとを含む前記方法。

【請求項33】

前記抗体またはフラグメントを採取、精製、及び／または単離することをさらに含む、請求項３２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年７月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／８７５，３０９号の利益及び優先権を主張するものであり、同仮特許出願の開示内容は、あらゆる目的のために全体として参照により本明細書に組み込まれる。
本出願には、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子提出され、参照により全体として本明細書に組み込まれる配列表が含まれる。２０２０年８月４日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、ＧＥＭ－０１３ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、１８，０３７バイトのサイズである。

【背景技術】

【0002】

補体系は、哺乳動物などの多くの生物を侵入病原体から保護するのに寄与する自然免疫の重要な要素である。補体系は、主に肝臓で合成される３０を超える異なる成分からなる。補体系の活性化は、古典的経路、レクチン経路、及び代替経路という３つの異なる経路によって起こる。３つの経路は、各経路で異なるが同様の活性を有する、Ｃ３転換酵素の形成で合流する。

【0003】

古典的補体経路では、抗体－抗原複合体と結合すると、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、及びＣ１ｓからなる補体成分（Ｃ）１複合体の活性化が起こる。Ｃ１複合体は、Ｃ４及びＣ２を切断し、Ｃ４ｂＣ２ａからなるＣ３転換酵素の形成をもたらす。Ｃ３転換酵素はＣ３を切断して活性成分のＣ３ａ及びＣ３ｂにする。レクチン経路では、マンノース結合レクチンが病原体表面のマンノース残基に結合し、Ｃ４及びＣ２を切断することのできるセリンプロテアーゼであるＭＡＳＰ－１及びＭＡＳＰ－２を活性化する。古典的経路と同様に、これがＣ４ｂＣ２ａ Ｃ３転換酵素の形成をもたらす。このＣ３転換酵素は、Ｃ３ｂに結合してＣ５転換酵素を形成しうる。古典的経路及びレクチン経路に反して、代替経路は、血漿中のＣ３からＣ３（Ｈ２Ｏ）への自然加水分解に起因する低レベルの持続的活性を有する。このＣ３ｂ様Ｃ３（Ｈ２Ｏ）は、Ｂ因子（ＦＢ）に結合することにより流体相Ｃ３転換酵素を形成することができ、これは次に、Ｄ因子によってＢｂへと活性化される。同様に、Ｃ３ｂが表面に結合すると、ＦＢに結合してＣ３ｂＢを形成しうる。この複合体はＤ因子によって切断され、代替経路のＣ３転換酵素であるＣ３ｂＢｂとなり、これはプロパージン（Ｐ因子）によってＣ３ｂＢｂＰへと安定化されうる。このＣ３転換酵素はＣ３を切断してＣ３ａ及びＣ３ｂにすることができる。このプロセスに加えて、代替経路は、古典的経路及びレクチン活性化経路の増幅ループとして機能する。なぜなら、これらの経路で生成されたＣ３ｂは、代替経路の開始点として機能しうるからである。それにより、増幅ループは、古典的経路及びレクチン経路の強化をもたらす。３つの活性化経路のうちの１つで形成されたＣ３転換酵素は、Ｃ３ｂに結合してＣ５転換酵素を形成することができる。３つすべての補体経路のＣ５転換酵素が、Ｃ５をＣ５ａ及びＣ５ｂへと活性化し、これが補体系の末端経路を開始する。Ｃ５ｂはＣ６、Ｃ７、Ｃ８、及びＣ９に結合して膜侵襲複合体（ＭＡＣ）を形成し、これが膜貫通チャネルを形成して細胞溶解を引き起こす。

【0004】

補体は、病原体の膜に細孔を形成することに加えて、Ｃ３ｂ分子によるオプソニン化、ならびに免疫細胞を感染部位に誘引して活性化するＣ３ａ及びＣ５ａなどの炎症促進性ペプチドの生成により、病原体または変化した自己細胞を排除するのを助ける。補体の強い炎症促進性の性質のため、宿主細胞は、いくつかの膜及び可溶性補体調節タンパク質によって良好に保護される。

【0005】

代替経路は全補体活性の８０～９０％に寄与する。したがって、この経路の調節はきわめて重要である。Ｃ３の自然加水分解によって形成されるＣ３（Ｈ２Ｏ）、及びＣ３ｂは通常、病原体が結合していなければ、Ｈ因子（ＦＨ）、Ｉ因子（ＦＩ）、及び宿主細胞表面分子によって急速に不活性化され、それにより、Ｃ３転換酵素の形成が阻害される。ＣＤ５５（別名、崩壊加速因子またはＤＡＦ）は、宿主細胞表面でＣ３ｂに結合する。ＦＩはＣ３ｂを切断して不活性型にするが、細胞表面で発現する補因子（ＣＤ４６、ＭＣＰ）、または血漿中を循環する補因子（ＦＨ）のいずれかに依存する。

【0006】

ＦＨは、溶解状態と細胞表面上の両方で補体の代替経路を制御するのに不可欠な血漿糖タンパク質である。ＦＨはＦＢと同じ位置でＣ３ｂに結合し、それによりＣ３転換酵素の形成を防止する。ＦＨはまた、崩壊加速活性を有し、すなわち、代替経路Ｃ３転換酵素が形成されるとそれらの解離を促進する。ＦＨがＣ３ｂに結合するかどうかは、細胞表面に存在する炭水化物によって決まる。宿主細胞表面に存在するシアル酸、グリコサミノグリカン、及びヘパリンは、ＦＨがＣ３ｂに結合するのを促進し、一方、病原体の表面で発現する分子へのＣ３ｂの結合は、ＦＢの結合をもたらす。したがって、ＦＨは、宿主細胞にその補体阻害活性を及ぼすが、病原性細胞の表面には及ぼさない。なぜなら、ＦＨに結合する細胞表面分子は、宿主細胞で発現するが、病原性細胞では通常発現しないためである。ＦＨは、ＦＨのＮ末端から開始して１～２０とナンバリングされる２０個の補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメインを含有する。ＣＣＰドメインは短コンセンサスリピート（ＳＣＲ）またはｓｕｓｈｉドメインとも呼ばれる。ＣＣＰ１～４は、調節に関与するドメインであり、ＣＣＰ１９～２０は、Ｃ３ｂの結合に関与し、ＣＣＰ６、７、８、１９、及び２０は、細胞の表面で発現するＧＡＧ及びシアル酸に結合する。ＣＣＰ１９及び／またはＣＣＰ２０に結合する抗体は、ＦＨの活性を阻害する。

【0007】

Ｈ因子関連タンパク質（ＣＦＨＲ）は、構造及び抗原性においてＦＨに関連する血漿糖タンパク質である。ＦＨＲタンパク質もＣＣＰドメインから構成されており、これらは、ＦＨに見出されるＣＣＰドメインに対して様々な程度の相同性を有する。例えば、ＦＨＲ１は、ＣＣＰ６、ＣＣＰ７、ＣＣＰ１８、ＣＣＰ１９及びＣＣＰ２０に対応するドメインを含む。ＦＨとは対照的に、ＣＦＨＲは強い補体阻害活性を有しない。ＣＦＨＲの一般的な特徴は、それらが補体のＣ３ｂ成分に結合することにより、Ｃ３ｂに対する結合をＦＨと競合し、したがって補体の代替経路の正の調節因子とみなされることである。

【0008】

変異に起因する宿主表面のＦＨ欠損または認識障害は、補体媒介性の組織損傷及び疾患に関連している。正常な止血中の補体活性化を制御することに加えて、ＦＨは、疾患細胞及び組織の補体媒介性損傷の制限においても重要な役割を果たす。ＦＨタンパク質の機能喪失につながりうる、ＦＨ遺伝子の変異が複数報告されている。ＦＨのＣ末端領域は、疾患の変異のホットスポットである。これは、ＦＨが宿主細胞に結合するための重要な領域である。この領域におけるほとんどの疾患関連変異が、ＦＨ結合に干渉する。変異型ＦＨ遺伝子を有するほとんどの患者はヘテロ接合性変異を有し、これは循環ＦＨのおよそ半分が正常な機能を有することを意味する。しかしながら、これは、補体が活性化されるある特定の条件下では、自己表面を保護するのに充分ではないようである。ＦＨ欠損は、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）及び非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）などの腎疾患につながりうる。さらに最近では、ＦＨ変異と加齢性黄斑疾患（ＡＭＤ）との関係が報告されている。

【0009】

現在、ａＨＵＳにおけるようなＦＨ欠損の標準治療は、血漿補充または血漿交換療法である。そのような療法では、欠損した補体調節因子が補充される。血漿交換療法はさらに、変異型補体因子及び／または補体因子に対する自己抗体を除去する。しかしながら、血漿療法にはいくつかの制限もある。これまでの前向き臨床試験で、血漿交換療法がａＨＵＳの治療に安全または有効であること、及び血漿療法の効率が根底にある変異に依存しうることを示したものはない。一部の患者は新鮮凍結血漿に対してアナフィラキシー反応を発現し、あらゆる形態の血漿療法の休止が必要となる場合がある。さらに、血漿交換は、血漿由来の活性病原性補体成分の投与のためにａＨＵＳの臨床像を悪化させうる。

【0010】

最近では、治療用モノクローナル抗体エクリズマブが、米国及び欧州諸国を含む数か国でａＨＵＳ及び発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）の治療のために承認された。エクリズマブは、Ｃ５が切断されてＣ５ａ及びＣ５ｂになることを防止する、Ｃ５に対して特異的なヒト化マウスモノクローナル抗体である。したがって、末端経路の活性化を防止し、免疫細胞の流入を減少させる。しかしながら、エクリズマブの使用は、不必要な副作用に関連している。末端経路の開始にきわめて重要な成分であるＣ５を遮断するので、エクリズマブで治療された患者は、クリアランスがＭＡＣ形成に大きく依存する被包性細菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓなど）の感染に罹りやすくなる。したがって、エクリズマブでの治療を受ける前の患者には、髄膜炎菌に対するワクチン接種が必要である。さらに、エクリズマブはＣ３の下流で作用するため、Ｃ３沈着が維持され、不必要または過剰な補体活性化が関与する数種の障害において有害である。さらに、エクリズマブ治療には高いコストが伴い、抗体の利用可能性は限られている。

【0011】

ＣＣＰ１８に結合するマウスモノクローナル抗体がＣｈｅｎｇら（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５）によって報告されている。Ｘ５２．１と呼ばれるこの抗体は、ＦＨの二量体化によって引き起こされると考えられているＣ３ｂ及びＣ３ｄへのＦＨの結合を増加させることが報告されている。Ｘ５２．１によって誘導されるＣ３ｂ及びＣ３ｄへのＦＨの結合の増加は、Ｃｏｒｅｙら（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２０００）によって示されているように、ＲＢＣ及び数種類のがん細胞を含む細胞の補体媒介性溶解の増加をもたらす。これは、抗体Ｘ５２．１がＦＨの補体阻害活性を阻害することを実証している。実際、Ｃｏｒｅｙらは、この抗体が、がん細胞の補体媒介性溶解を増進することにより、がんの治療に使用されうることを示唆している。

【0012】

依然として、不必要または過剰な補体活性化に関連する障害の治療において有用な薬剤のような、ＦＨに結合する新規の改善された治療剤が必要である。

【発明の概要】

【0013】

本発明は、Ｈ因子（ＦＨ）の補体制御タンパク質ドメイン１８（ＣＣＰ１８）に特異的に結合する、抗体またはその抗原結合性フラグメント、例えば、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。かかる抗体及び抗原結合性フラグメントは、ＦＨの活性の増強、例えば、Ｃ３ｂに対するＦＨの結合親和性の増加、Ｃ３沈着を阻害するＦＨの能力の増加、及び／または溶血活性を阻害するＦＨの能力の増加のために有用である。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）または配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＴＳ（配列番号２）または配列ＡＳＳ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）またはＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）の配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）または配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＴＳ（配列番号２）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列番号４または１６に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号８または１２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列とを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列番号４に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号１２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列とを含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＴＳ（配列番号２）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列番号４に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号８に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列とを含む。

【0016】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＳＳ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を有する重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列番号１６に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号８に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列とを含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＳＳ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列番号１６に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号１２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列とを含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２．５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有するか、あるいは、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して１．２５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０４×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２．５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有するか、あるいは、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して０．６×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．６×１０^－１１Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのリポ多糖（ＬＰＳ）におけるＣ３沈着を、３８ｎＭ以下のＩＣ_５０値、例えば３０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する、及び／または１０％（ｖ／ｖ）の血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、１５０ｎＭ以下のＩＣ_５０値、例えば１３０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する、及び／または１０％（ｖ／ｖ）の血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨのＫ_Ｄ値を２μＭ以下まで減少させる（結合親和性を増加させる）、及び／または１０％（ｖ／ｖ）の血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性を少なくとも３倍増加させる。ある特定の実施形態において、血清は、正常ヒト血清である。

【0019】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨ活性を増強し、場合により、ＦＨ活性は、代替補体活性化の阻害であり、さらに場合により、代替補体活性化の阻害は、溶血活性の阻害、補体成分３（Ｃ３）沈着の阻害、及び／またはＣ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、抗体またはフラグメントは、免疫グロブリン重鎖定常領域及び免疫グロブリン軽鎖定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＩｇＧの定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧの定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）である。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＩｇＧ４（例えば、ヒトＩｇＧ４）の定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４の定常領域は、２９７位に変異を含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＧ４の定常領域は、２９７位にアミノ酸残基Ｑを含む。ある特定の実施形態において、ＩｇＧ４の定常領域は、２９７位にアミノ酸残基Ａを含む。

【0020】

いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくともＦａｂフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、モノクローナル抗体またはそのフラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ヒト軽鎖及び重鎖定常領域を含むキメラ抗体もしくはヒト化抗体またはそのフラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＰＥＧ化されている。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＰＥＧ化されたＦａｂフラグメントである。

【0021】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントをコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるいずれかの核酸を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは、ＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、及びＡＡＶ１２からなる群から選択される。

【0022】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるいずれかの核酸、または本明細書で開示されるいずれかのベクターを含む、組換え型細胞を提供する。

【0023】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるいずれかの抗体もしくはフラグメント、本明細書で開示されるいずれかの核酸、本明細書で開示されるいずれかのベクター、または本明細書で開示されるいずれかの組換え型細胞、ならびに薬学的に許容されるキャリア、希釈剤、及び／または賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。

【0024】

いくつかの実施形態では、本開示は、療法において使用するための、本明細書で開示されるいずれかの抗体もしくはフラグメント、本明細書で開示されるいずれかの核酸、本明細書で開示されるいずれかのベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、代替補体活性化を阻害するのに使用するための、本明細書で開示されるいずれかの抗体もしくはフラグメント、本明細書で開示されるいずれかの核酸、または本明細書で開示されるいずれかのベクターを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止において使用するための、本明細書で開示されるいずれかの抗体もしくはフラグメント、本明細書で開示されるいずれかの核酸、または本明細書で開示されるいずれかのベクターを提供する。いくつかの実施形態では、障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、及びＩｇＡ腎症からなる群から選択される。

【0025】

いくつかの実施形態では、本開示は、代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止のための医薬を調製するための、本明細書で開示されるいずれかの抗体もしくはフラグメント、本明細書で開示されるいずれかの核酸、または本明細書で開示されるいずれかのベクターの使用を提供する。いくつかの実施形態では、障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、及びＩｇＡ腎症からなる群から選択される。

【0026】

いくつかの実施形態では、本開示は、代替経路補体活性化に関連する障害を治療、緩和、または防止する方法であって、それを必要とする個体に、本明細書で開示されるいずれかの抗体もしくはフラグメント、本明細書で開示されるいずれかの核酸、本明細書で開示されるいずれかのベクター、または本明細書で開示されるいずれかの医薬組成物を治療有効量で投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、及びＩｇＡ腎症からなる群から選択される。

【0027】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるいずれかの抗体もしくはフラグメント、本明細書で開示されるいずれかの核酸、本明細書で開示されるいずれかのベクター、または本明細書で開示されるいずれかの医薬組成物を対象に投与することを含む、代替補体活性化を阻害する方法を提供する。

【0028】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるいずれかの抗体もしくはフラグメントを生成する方法であって、本明細書で開示されるいずれかの核酸または本明細書で開示されるいずれかのベクターを細胞に供給することと、核酸またはベクターに含まれる核酸配列を細胞に翻訳させることにより、抗体またはフラグメントを生成することとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、抗体またはフラグメントを採取、精製、及び／または単離することをさらに含む。

【発明を実施するための形態】

【0029】

Ａ． 一般的技術及び定義
本明細書中で別途定義しない限り、本明細書に記載される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解されている意味を有するものとする。概して、本明細書に記載される薬理学、細胞及び組織培養、分子生物学、細胞及びがん生物学、神経生物学、神経化学、ウイルス学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質及び核酸化学に関連する命名法、ならびにそれらの技術は、当該技術分野で周知であり、一般的に使用されているものである。矛盾がある場合には、本明細書が定義を含めて優先する。

【0030】

本開示の実践では、別途記載しない限り、当業者の技能範囲内にある、分子生物学（組換え技術など）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来技術を用いる。そのような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３－１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ．ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２００１）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（２００２）、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９９８）、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（２００３）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）などの文献で充分に説明されている。

【0031】

酵素反応及び精製技術は、製造元の仕様書に従って、当該技術分野で一般的に実行されるように、または本明細書に記載されるように行われる。本明細書に記載される分析化学、生化学、免疫学、分子生物学、有機合成化学、ならびに医薬品化学及び製薬化学に関連して使用される命名法、ならびにそれらの実験手順及び技術は、当該技術分野で周知であり、一般的に使用されているものである。化学合成及び化学分析には標準的技術が使用される。

【0032】

本明細書及び実施形態を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載される整数または整数の群の包含を意味するが、いずれかの他の整数または整数の群の除外を意味するものではないと理解されたい。

【0033】

実施形態が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という文言を用いて本明細書に記載される場合は必ず、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載されること以外は類似の実施形態も提供されるものと理解される。

【0034】

「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語は、「を含むがこれに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」を意味するように使用される。「含む」及び「を含むがこれに限定されない」は同義に使用される。

【0035】

「例えば（ｅ．ｇ．）」または「例えば（ｆｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）」という用語に続く例（複数可）はいずれも、網羅的または限定的であることを意図しない。

【0036】

文脈上他の解釈が必要な場合を除き、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。

【0037】

冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書では、冠詞の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）の文法的対象を指すように使用される。例えば、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または複数の要素を意味する。

【0038】

状態または患者を「治療する」とは、臨床結果を含め、有益または所望の結果を得るためのステップをとることを指す。疾患または状態（例えば、眼の疾患）に関して、治療とは、感染（例えば、眼の疾患またはそれに関連する症状）の進行、重篤度、及び／または持続期間の低減もしくは回復、または１つ以上の療法の投与（１つ以上の予防薬または治療剤の投与を含むがこれに限定されない）から生じる１つ以上の症状の回復を指す。

【0039】

本明細書で使用する場合、「特異的な」及び「特異的に結合する」または「特異的に結合することが可能な」という用語は、抗体とそのエピトープとの間の非共有結合的相互作用を指す。これは、抗体またはフラグメントが、他の結合部位または他の抗原よりもそのエピトープに優先的に結合することを示す。よって、抗体またはフラグメントは、他の結合部位または抗原に非特異的に結合する場合があるが、抗体またはフラグメントのそのエピトープに対する結合親和性は、抗体またはフラグメントのいかなる他の結合部位または抗原に対する結合親和性よりも著しく高い。

【0040】

アミノ酸配列もしくは核酸配列の同一性のパーセンテージ、または「％の配列同一性」という用語は、本明細書では、２つの配列をアラインし、必要に応じてギャップを導入して、最大の同一性パーセントを達成した後に、参照アミノ酸配列または核酸配列における残基と同一である、完全長のアミノ酸配列または核酸配列の残基のパーセンテージと定義される。アラインメントの方法及びコンピュータプログラムは、当該技術分野で周知であり、例えば「Ａｌｉｇｎ ２」がある。

【0041】

本明細書で使用する場合、「ＦＨ．０７」とは、配列番号３２の可変軽鎖アミノ酸配列及び配列番号３６の可変重鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。

【0042】

本明細書で使用する場合、「ＦＨＲ－１．３Ｂ４」とは、配列番号４８の可変軽鎖アミノ酸配列及び配列番号５２の可変重鎖アミノ酸配列を含む抗体を指す。

【0043】

本明細書に示すアミノ酸配列において、アミノ酸は１文字記号によって表記される。これらの１文字記号及び３文字記号は、当業者に周知であり、次の意味を有する：Ａ（Ａｌａ）はアラニンであり、Ｃ（Ｃｙｓ）はシステインであり、Ｄ（Ａｓｐ）はアスパラギン酸であり、Ｅ（Ｇｌｕ）はグルタミン酸であり、Ｆ（Ｐｈｅ）はフェニルアラニンであり、Ｇ（Ｇｌｙ）はグリシンであり、Ｈ（Ｈｉｓ）はヒスチジンであり、Ｉ（Ｉｌｅ）はイソロイシンであり、Ｋ（Ｌｙｓ）はリジンであり、Ｌ（Ｌｅｕ）はロイシンであり、Ｍ（Ｍｅｔ）はメチオニンであり、Ｎ（Ａｓｎ）はアスパラギンであり、Ｐ（Ｐｒｏ）はプロリンであり、Ｑ（Ｇｌｎ）はグルタミンであり、Ｒ（Ａｒｇ）はアルギニンであり、Ｓ（Ｓｅｒ）はセリンであり、Ｔ（Ｔｈｒ）はトレオニンであり、Ｖ（Ｖａｌ）はバリンであり、Ｗ（Ｔｒｐ）はトリプトファンであり、Ｙ（Ｔｙｒ）はチロシンである。

【0044】

「ＦＨ活性を増強する」という用語は、本開示に係る抗体またはフラグメントがＦＨに結合した場合にＦＨの活性が増加することを意味する。いくつかの実施形態では、本開示の抗体及びフラグメントによって増強されるＦＨの活性は、例えば個体における、代替補体活性化の阻害である。本明細書で使用する場合、「代替補体活性化」という用語は、代替経路を介した、すなわち、代替経路のＣ３転換酵素、すなわちＣ３ｂＢｂ／Ｃ３ｂＢｂＰの形成を少なくとも伴う、またはこのＣ３転換酵素の形成の増加を伴う、補体系の活性化を指す。代替補体活性化は、代替経路Ｃ３転換酵素によるＣ３ａ及びＣ３ｂへのＣ３の切断、代替経路Ｃ５転換酵素、すなわちＣ３ｂＢｂＣ３ｂ／Ｃ３ｂＢｂＣ３ｂＰの形成、及び／またはＣ５の切断及びその後のＣ６、Ｃ７、Ｃ８及びＣ９の結合によるＭＡＣの形成をさらに伴いうる。代替補体活性化は、代替経路増幅ループの増加をさらに含みうる。

【0045】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、本明細書で開示される代替補体活性化プロセスのうちのいずれか１つ以上を阻害することが可能である。いくつかの実施形態では、代替補体活性化は、個体において（例えば、血液、間質液または脳脊髄液などの個体の体液において）阻害される。本明細書で使用する場合、「個体」という用語は、「対象」または「患者」と同義に使用され、補体系をその免疫系の一部として含む、ヒトまたは哺乳動物（例えば、げっ歯類、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ）などの動物を指す。いくつかの実施形態では、個体は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。

【0046】

本明細書で使用する場合、「代替補体活性化の阻害」は、代替補体系の成分、因子、または活性の量または活性における、その阻害を引き起こす、またはその阻害の結果である任意の変化を含む。代替補体活性化の阻害は、例えば、溶血活性の阻害、対象の細胞における補体成分３（Ｃ３）沈着の阻害、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加、代替補体経路Ｃ３転換酵素Ｃ３ｂＢｂ／Ｃ３ｂＢｂＰの形成の阻害、Ｃ３ｂに対するＢ因子の結合の阻害及び／またはＣ３ｂとＢ因子との間の相互作用の阻害、代替経路Ｃ３転換酵素によるＣ３ａ及びＣ３ｂへのＣ３の切断の阻害、宿主細胞への、特に宿主細胞で発現するシアル酸、グリコサミノグリカン及び／またはヘパリンへのＦＨの結合の増加、代替補体経路の増幅ループの阻害、ならびに代替補体経路Ｃ５転換酵素Ｃ３ｂＢｂＣ３ｂＰ／Ｃ３ｂＢｂＣ３ｂＰの形成の阻害、代替経路Ｃ５転換酵素によるＣ５ａ及びＣ５ｂへのＣ５の切断の阻害、ＦＨの崩壊加速活性の増加、すなわち、代替経路Ｃ３転換酵素が形成された際のその解離の促進、及び／またはＣ３ｂの分解をもたらすＦＩ補因子活性の増加を含む。特定の実施形態において、本開示の抗ＦＨ抗体及びフラグメントによって増強されるＦＨによる代替補体活性化の阻害は、溶血活性の阻害、対象の細胞におけるＣ３沈着の阻害、及び／またはＣ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加を含む。

【0047】

本明細書で使用する「阻害」は、好ましくは、示される活性が少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％低減することを意味する。したがって、「代替補体活性化の阻害」は、代替補体経路の活性が少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％低減することを意味する。同様に、「溶血活性の阻害」は、溶血活性が少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％低減することを意味する。

【0048】

本明細書で使用する「増加」は、好ましくは、示される活性が少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％増加することを意味する。したがって、「Ｃ３ｂに対するＦＨの結合の増加」は、Ｃ３ｂに対するＦＨの結合が少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％増加することを意味する。同様に、「宿主細胞に対するＦＨの結合の増加」は、宿主細胞に対するＦＨの結合が少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約３００％、少なくとも約３５０％、少なくとも約４００％、少なくとも約４５０％、少なくとも約５００％、少なくとも約５５０％、少なくとも約６００％、少なくとも約７００％、少なくとも約８００％、少なくとも約９００％、または少なくとも約１０００％増加することを意味する。

【0049】

本明細書で使用する場合、「溶血活性」とは、好ましくは細胞表面におけるＭＡＣの形成の結果として、補体系の活性化によって誘導される、赤血球の破裂及びその後の細胞の内容物の、例えば循環中への放出を指す。溶血活性は例えば、本明細書の実施例に記載されるように、Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｃｏｒｒａｌら（２００４）及びＷｏｕｔｅｒｓら（２００８）によって報告された溶血アッセイを場合により多少修正して使用することにより測定される。この代表的かつ非限定的なアッセイでは、ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）などの赤血球を、例えば３７℃で１．２５時間振盪しながら、血清（例えばヒト血清）と共にインキュベートする。低レベルのＦＨまたは機能不全のＦＨを含む血清は、ＳＲＢＣの溶解をもたらす。溶解は、２０ｍＭ ＥＤＴＡを含有するベロナール緩衝液の添加後、予め冷却した遠心機（例えば７℃）で２．５分間の遠心分離を行うことによって停止することができる。赤血球溶解のパーセンテージは、上清の吸光度を４１２ｎｍで測定することによって決定される。血清は例えば、健康なヒト個体に由来してもよく、不必要または過剰な代替経路補体活性化に関連する障害、例えばａＨＵＳを患うヒト個体に由来してもよい。溶血活性を阻害する抗体またはフラグメントの能力は、抗体またはフラグメントの存在下で赤血球を血清と共にインキュベートすることによって決定されうる。

【0050】

「結合親和性」とは、抗体または機能的部分もしくは機能的均等物の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合的相互作用の総和の強度を指す。別途記載しない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（本出願では抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。本明細書において、結合親和性は、ｋ_ａ対ｋ_ｄの比として算出される平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表される。例えば、Ｃｈｅｎ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，１９９９を参照のこと。親和性は、例えば、ＢｉａＣｏｒｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）もしくはＩＢＩＳ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＢＶ（Ｈｅｎｇｅｌｏ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）のＩＢＩＳ－ｉＳＰＲ機器などの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、またはＫｉｎｅｘａなどの溶液相アッセイのような、当該技術分野で公知の一般的方法によって測定することができる。

【0051】

Ｂ． 抗ＦＨ抗体及びそのフラグメント
ＷＯ ２０１６／０２８１５０には、Ｃ３ｂに対するＦＨの結合の増加、媒介されるＣ３沈着の阻害、及び溶血活性の阻害によって示されるように、代替経路活性化を阻害する、ＦＨ．０７と呼ばれるマウスアゴニスト抗ＦＨ抗体が記載されている。抗体のＦａｂ’及びＦ（ａｂ’）２フラグメントは、同じＦＨ増強効果を有することが示された。ＷＯ ２０１９／１３９４８１には、ＦＨ．０７よりもＦＨに対する結合親和性が高く、ＦＨ活性を増強する能力が増加している、ＦＨＲ－１．３Ｂ４と呼ばれる別のマウスアゴニスト抗ＦＨ抗体が記載されている。

【0052】

一態様において、本開示は、アゴニスト抗ＦＨ抗体（例えば、ヒト化抗体）及びそのフラグメント、すなわちＦＨ活性を増強する抗体及びフラグメントを提供する。一態様において、これらの抗体は、ＦＨのドメインＣＣＰ１８内の同じエピトープに対する結合を抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と競合する。増強性抗ＦＨ抗体は、代替補体経路の活性化の強力な阻害剤であり、したがって、補体系の代替経路の不必要または過剰な活性化に関連する障害の治療において有用である。ＦＨは、Ｃ３が切断されてＣ３ｂになり、その後これが細胞表面でＦＢに結合し、Ｃ３転換酵素が形成されて、Ｃ３分子がさらに切断されてＣ３ｂになることが促進される、代替経路の増幅ループを特異的に阻害する。本開示の抗体及びフラグメントがＣ３のレベルで補体活性化に干渉するという事実の主な利点は、表面へのＣ３ｂの蓄積及びＣ３ａの放出が回避されることである。反対に、エクリズマブのように補体活性化がＣ５レベルで阻害された場合、Ｃ３ｂの蓄積及びＣ３ａの放出は阻害されない。Ｃ３ｂはオプソニンとして作用し、Ｃ３ａはアナフィラトキシンである。したがって、Ｃ３ｂの蓄積及びＣ３ａの形成が防止されることが好ましい。なぜなら、これらのプロセスは、免疫細胞の誘引及び標的のオプソニン化貪食作用をもたらすからである。これは、例えばエクリズマブを投与されているＰＮＨ患者では、Ｃ３ｂの蓄積により赤血球がオプソニン化され、その後肝臓及び脾臓で除去されるため、依然として輸血が必要であることを意味する。さらに、抗Ｃ５抗体で治療すると、さもなければＭＡＣによって溶解される細胞でＣ３ｂが形成され、Ｃ３ａが蓄積する。抗Ｃ５抗体の重要な欠点は、病原体によって誘導される補体活性化にも抗体が干渉するので、患者が感染に罹りやすくなることである。宿主細胞を保護する補体系の調節因子をターゲティングすることにより、これは回避される。

【0053】

本明細書で使用する「抗体」という用語は、標的エピトープに対して特異的な、軽鎖可変領域（ＶＬ）と対になった重鎖可変領域（ＶＨ）を少なくとも含む免疫グロブリンタンパク質を指す。この用語は、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方を含む。これは、完全長免疫グロブリンを含め、ＦＨのＣＣＰ１８に特異的に結合するあらゆる形態の抗体を指す。本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、少なくとも１つの抗原結合部位を含む。本明細書で使用する「抗原結合部位」という用語は、少なくとも１つのＣＤＲ配列、好ましくは少なくとも２つのＣＤＲ配列、より好ましくは少なくとも３つのＣＤＲ配列を含む、抗体またはそのフラグメントの部位を指す。例えば、抗原結合部位は、軽鎖ＣＤＲ１～３または重鎖ＣＤＲ１～３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合部位は、軽鎖ＣＤＲ１～３及び重鎖ＣＤＲ１～３を含む。

【0054】

当業者には周知であるように、抗体は２つの重鎖及び２つの軽鎖を含有する。抗体の重鎖は、免疫グロブリン分子を構成する２種類の鎖のうち大きい方である。重鎖は定常ドメイン及び可変ドメインを含み、この可変ドメインは抗原結合に関与している。抗体の軽鎖は、免疫グロブリン分子を構成する２種類の鎖のうち小さい方である。軽鎖は定常ドメイン及び可変ドメインを含む。軽鎖の可変ドメインは、抗原結合に関与する重鎖の可変ドメインと一緒になっていることが多いが、常にそうとは限らない。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに存在する超可変領域である。完全長抗体の場合、重鎖のＣＤＲ１～３と、接続した軽鎖のＣＤＲ１～３とは、一緒になって抗原結合部位を形成する。

【0055】

ＣＤＲは、抗原結合に関与し、抗原特異性及び結合親和性を抗体に付与する。重鎖及び軽鎖の可変ドメインのそれぞれに３つのＣＤＲがあり、これらは可変ドメインのそれぞれでＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と称される。本明細書で使用する「ＣＤＲセット」という用語は、標的抗原に結合することが可能な単一の重鎖または軽鎖可変ドメインで生じる３つのＣＤＲのグループを指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムによって定義が異なる。３つの重鎖ＣＤＲは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３と呼ばれることがあり、３つの軽鎖ＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３と呼ばれることがある。

【0056】

「抗体の抗原結合性フラグメント」は、本明細書では、抗体と同じ抗原（例えばＦＨのＣＣＰ１８）に必ずしも同程度とは限らないが特異的に結合することが可能な抗体の一部と定義される。ＦＨ活性増強性抗体のフラグメントはさらにまた、必ずしも同程度とは限らないが、ＦＨ活性を増強する。ＦＨ活性阻害抗体のフラグメントはさらにまた、必ずしも同程度とは限らないが、ＦＨ活性を阻害する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体フラグメントは、抗体（例えば、本明細書で開示されるいずれかの抗体）の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、いくつかの実施形態では、抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列をさらに含む。抗体のフラグメントの非限定的な例は、単一ドメイン抗体、単鎖抗体、ナノボディ、ユニボディ、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、及びＦ（ａｂ）_２フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体のフラグメントは、少なくとも重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び／または軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくともＦａｂフラグメントを含む。いくつかの実施形態では同じエピトープへの結合を本開示の抗体と競合する増強性抗ＦＨ抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４のＦａｂ’フラグメントは、ＦＨの機能を増強する能力を保持することが実証されている。したがって、いくつかの実施形態では、本開示の抗体のフラグメントは、本開示に係る抗体のＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、またはＦ（ａｂ）_２フラグメントである。別の実施形態において、本開示に係る抗体のフラグメントは、免疫グロブリン重鎖可変領域、免疫グロブリン重鎖定常領域、免疫グロブリン軽鎖可変領域、及び免疫グロブリン軽鎖定常領域を含む。

【0057】

いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体及びフラグメントは、ヒトＦＨなどのＦＨの活性を増強することができる。

【0058】

いくつかの実施形態では、Ｃ３沈着の阻害は、本明細書の実施例に記載されるＣ３沈着アッセイなどのＣ３沈着アッセイを使用して測定される。この代表的かつ非限定的なアッセイは、マイクロタイタープレートをＬＰＳでコーティングすることを含む。その後このプレートを、例えば、上記のように健康な個体あるいは不必要または過剰な代替補体活性化に関連する障害を患う個体に由来する血清と共に、抗体またはフラグメントの存在下または非存在下でインキュベートする。ＬＰＳにおけるＣ３沈着は、抗Ｃ３抗体で検出することができる。

【0059】

いくつかの実施形態では、Ｃ３ｂに対するＦＨの結合の増加は、本明細書の実施例に記載されるように、ＥＬＩＳＡを使用して測定される。この代表的かつ非限定的なアッセイは、マイクロタイターＥＬＩＳＡプレートをＣ３ｂでコーティングし、このプレートを、例えば、上記のように健康な個体あるいは不必要または過剰な代替補体活性化に関連する障害を患う個体に由来する血清と共にインキュベートすることを含む。結合したＦＨは、ペルオキシダーゼ標識ポリクローナル抗ＦＨなどの抗ＦＨ抗体で検出することができる。Ｃ３ｂに対するＦＨ結合を増進する抗体またはフラグメントの能力は、コーティングされたＣ３ｂとのインキュベーションの前に、抗体またはフラグメントの存在下で血清をプレインキュベートすることによって決定することができる。別の例として、Ｃ３ｂに対するＦＨの結合は、例えば、本明細書の実施例に記載されるように、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定することができる。ＳＰＲは、標識のない環境で生体分子の相互作用をリアルタイムで測定する技術である。相互作用物質の一方、例えばＣ３ｂを、センサ表面に固定化し、もう一方、例えばＦＨを、例えば（異なる濃度の）本開示の抗体またはフラグメントの存在下または非存在下で、溶液中に遊離させ、表面を通過させる。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性を最大で２μＭ、最大で１．９５μＭ、最大で１．８μＭ、最大で１．７μＭまで増加させる（Ｋ_Ｄ値を減少させる）、及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性を少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、もしくは少なくとも１０倍増加させる。特定の実施形態において、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性（Ｋ_Ｄ）を１μＭ未満、７５０ｎＭ未満、５００ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、または２５０ｎＭ未満まで増加させる。特定の実施形態において、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性（Ｋ_Ｄ）を２５０ｎＭ～１μＭまで増加させる。特定の実施形態において、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性を少なくとも３～５倍増加させる。

【0060】

いくつかの実施形態では、本開示によって提供される抗体またはそのフラグメントは、１つ以上の機能的アッセイにおいて低いｉｎ ｖｉｔｒｏ ＩＣ_５０値、例えばいくつかの実施形態では、同じ機能的アッセイにおける抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４のｉｎ ｖｉｔｒｏ ＩＣ_５０値よりも低いｉｎ ｖｉｔｒｏ ＩＣ_５０値を有する。「ＩＣ_５０」は、当該技術分野で周知の用語であり、ある特定の機能的活性を５０％阻害または低減するために必要な抗体またはフラグメントの濃度を指す。抗体またはフラグメントのＩＣ_５０値が低いほど、抗体またはフラグメントの阻害活性が強くなり、治療剤としての潜在能力が高くなる。いくつかの実施形態では、機能的アッセイは、本明細書上記のＣ３ｂ沈着アッセイ及び／または溶血アッセイである。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を、３８ｎＭ以下、３５ｎＭ以下、３２ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２８ｎＭ以下、２７ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、２３ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１８ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、または１０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を、１５ｎＭ～３０ｎＭのＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、１５０ｎＭ以下、１３０ｎＭ以下、１２０ｎＭ以下、１１５ｎＭ以下、１１０ｎＭ以下、１０５ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９５ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８５ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７５ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６５ｎＭ以下、または６０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、６０ｎＭ～８０ｎＭのＩＣ_５０値で阻害する。

【0061】

いくつかの実施形態では、本開示の抗体またはフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を、本明細書上記のように低いＩＣ_５０値で阻害し、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、本明細書上記のように低いＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を３８ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害し、かつ１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を１５０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害するか、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を３０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害し、かつ１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を１５０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害するか、または１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を２７ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害し、かつ１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を１００ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着のＩＣ_５０値は、本明細書上記のようにＣ３沈着アッセイにおいて決定される。いくつかの実施形態では、溶血活性のＩＣ_５０値は、本明細書上記のように溶血活性アッセイにおいて決定される。

【0062】

いくつかの実施形態では、本開示によって提供される抗体またはそのフラグメントは、ＦＨ及び／またはドメインＣＣＰ１８～２０を含むＦＨフラグメントに対して高い結合親和性、例えばいくつかの実施形態では抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４の結合親和性よりも高い結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントのｉｎ ｖｉｖｏの治療活性は、例えば、抗体またはフラグメントが、それが特異的なエピトープまたは抗原以外の結合部位及び／または抗原に結合することを最小限に抑えるために、またｉｎ ｖｉｖｏで投与する必要のある抗体またはフラグメントの量を最小限に抑えるために、典型的に高い結合親和性を必要とする。いくつかの実施形態では、高い結合親和性を有する抗体が好ましい。いくつかの実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ＦＨに対して２．５×１０^－８Ｍ以下の解離定数（Ｋ_Ｄ）の結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。したがって本開示は、一実施形態において、Ｈ因子（ＦＨ）に特異的に結合し、ＦＨ活性を増強する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供し、この抗体は、ＦＨに対して２．５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２２．５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１７．５ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１２．５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、９ｎＭ以下、８ｎＭ以下、７ｎＭ以下、６ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、または０．６ｎＭ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、ＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０９×１０^－９Ｍ以下、０．０８×１０^－９Ｍ以下、０．０７×１０^－９Ｍ以下、０．０６×１０^－９Ｍ以下、０．０５×１０^－９Ｍ以下、０．０４×１０^－９Ｍ以下、０．０３×１０^－９Ｍ以下、０．０２×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－１１Ｍ以下、０．９×１０^－１１Ｍ以下、０．８×１０^－１１Ｍ以下、０．７×１０^－１１Ｍ以下、または０．６×１０^－１１Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ＦＨに対して１．２５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０４×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ＦＨに対して０．６×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．６×１０^－１１Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、例えば、本明細書に記載されるアッセイで、すなわち、完全長ＦＨ（ＦＨの結合親和性の場合）またはドメイン１８～２０から成るＦＨのフラグメント（ＣＣＰ１８～２０の結合親和性の場合）のいずれかを表面に流す前に抗体またはフラグメントを捕捉したＰｒｏｔＡチップ上でのＳＰＲによって結合親和性が決定されるアッセイで、ＳＰＲを使用して決定される。

【0063】

いくつかの実施形態では、本開示によって提供される抗体またはそのフラグメントは、ＦＨとＣ３ｂとの相互作用を増加させる。いくつかの実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、２μＭ以下の解離定数（Ｋ_Ｄ）のＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性を増加させる。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、２μＭ以下、１．５μＭ以下、１μＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、または３００ｎＭ以下のＫ_ＤのＣ３ｂに対する結合親和性を増加させる。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性を、少なくとも２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、または５倍増加させる（Ｋ_Ｄを低減させる）。

【0064】

いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、高い結合親和性を有し、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を低いＩＣ_５０値で阻害する、及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を低いＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２．５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有し、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を３８ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する、及び／または１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を１５０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して１．２５×１０^－８Ｍ以下（例えば、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下）のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０４×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有し、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を３０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害し、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を１１５ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して１．２５×１０^－８Ｍ以下（例えば、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下）のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０４×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有し、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を２７ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害し、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を１００ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して１．２５×１０^－８Ｍ以下（例えば、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下）のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０４×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有し、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を２５ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害し、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を８０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して１．２５×１０^－８Ｍ以下（例えば、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下）のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０４×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有し、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を１５ｎＭ～２５ｎＭのＩＣ_５０値で阻害し、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を１５ｎＭ～２５ｎＭのＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、結合親和性は、本明細書に記載されるように、ＳＰＲによって決定される。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着のＩＣ_５０値は、本明細書上記のようにＣ３沈着アッセイにおいて決定される。いくつかの実施形態では、溶血活性のＩＣ_５０値は、本明細書上記のように溶血活性アッセイにおいて決定される。

【0065】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、ＦＨ及び／またはＣＣＰ１８を含むＦＨフラグメントに対して、抗体ＦＨ．０７の結合親和性よりも高い結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、ＦＨ及び／またはＣＣＰ１８～２０を含むＦＨフラグメントに対して、抗体ＦＨ．０７の結合親和性よりも高い結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、抗体ＦＨ．０７のＩＣ_５０値よりも低いＩＣ_５０値を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、抗体ＦＨ．０７よりも大きなＬＰＳにおけるＣ３沈着の阻害を示す。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、抗体ＦＨ．０７よりも大きな溶血活性の阻害を示す。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、ＦＨのＣＣＰ１８における同じエピトープへの結合を抗体ＦＨ．０７と競合する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、高い貯蔵能力、特に抗体ＦＨ．０７と比較して改善された貯蔵安定性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、高い安定性、特に抗体ＦＨ．０７と比較して改善された安定性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、高い選択性、特に抗体ＦＨ．０７と比較して増加した選択性を有する。

【0066】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、ＦＨ及び／またはＣＣＰ１８を含むＦＨフラグメントに対して、抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４の結合親和性よりも高い結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、ＦＨ及び／またはＣＣＰ１８～２０を含むＦＨフラグメントに対して、抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４の結合親和性よりも高い結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４のＩＣ_５０値よりも低いＩＣ_５０値を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、ＬＰＳにおけるＣ３沈着を抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４よりも良好に阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４よりも大きな溶血活性の阻害を示す。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、ＦＨのＣＣＰ１８における同じエピトープへの結合を抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と競合する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、高い貯蔵能力、特に抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と比較して改善された貯蔵安定性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、高い安定性、特に抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と比較して改善された安定性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、高い選択性、特に抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と比較して増加した選択性を有する。

【0067】

いくつかの実施形態では、本開示によって提供される抗体またはそのフラグメントは、ＦＨ、特にＦＨのＣＣＰ１８ドメインに対する結合を、抗ＦＨ．０７抗体と競合する。

【0068】

表１に本開示の例示的な抗体を列挙する。ＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴナンバリングシステム（Ｌｅｆｒａｎｃ １９９７、Ｌｅｆｒａｎｃ １９９９、及びＬｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．２００３）に従ってナンバリングされている。ＬＣは軽鎖であり、ＨＣは重鎖であり、ＣＤＲは相補性決定領域であり、ＶＨは重鎖可変領域であり、ＶＬは軽鎖可変領域である。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【0069】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｈ因子（ＦＨ）の補体制御タンパク質ドメイン１８（ＣＣＰ１８）に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、表１に開示されている抗体のＶＨ及びＶＬ配列の、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａを参照のこと）、Ｃｈｏｔｈｉａ（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ＆Ｌｅｓｋ Ａ Ｍ，（１９８７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７を参照のこと）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（ＭａｃＣａｌｌｕｍ Ｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５を参照のこと）、または当該技術分野で公知の任意の他のＣＤＲ決定方法によって決定される、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗体またはフラグメントを提供する。

【0070】

いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体は、抗体１である。表１は、抗体１の可変重鎖及び軽鎖配列ならびに個々のＣＤＲ配列の概略を提供する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、抗体１の重鎖ＣＤＲ配列のうちの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、抗体１の軽鎖ＣＤＲ配列のうちの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。本明細書で使用する「抗体１」という用語は、例えば、単離及び／または精製された抗体あるいは組換え生成された抗体などの、表１に示される重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を少なくとも含むすべての抗体及びフラグメントを包含する。いくつかの実施形態では、抗体１は、ＦＨのＣＣＰ１８における同じエピトープへの結合を抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と競合する。

【0071】

いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体は、抗体２である。表１は、抗体２の可変重鎖及び軽鎖配列ならびに個々のＣＤＲ配列の概略を提供する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、抗体２の重鎖ＣＤＲ配列のうちの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、抗体２の軽鎖ＣＤＲ配列のうちの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。本明細書で使用する「抗体２」という用語は、例えば、単離及び／または精製された抗体あるいは組換え生成された抗体などの、表１に示される重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を少なくとも含むすべての抗体及びフラグメントを包含する。いくつかの実施形態では、抗体２は、ＦＨのＣＣＰ１８における同じエピトープへの結合を抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と競合する。

【0072】

いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体は、抗体３である。表１は、抗体３の可変重鎖及び軽鎖配列ならびに個々のＣＤＲ配列の概略を提供する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、抗体３の重鎖ＣＤＲ配列のうちの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、抗体３の軽鎖ＣＤＲ配列のうちの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。本明細書で使用する「抗体３」という用語は、例えば、単離及び／または精製された抗体あるいは組換え生成された抗体などの、表１に示される重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を少なくとも含むすべての抗体及びフラグメントを包含する。いくつかの実施形態では、抗体３は、ＦＨのＣＣＰ１８における同じエピトープへの結合を抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と競合する。

【0073】

いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体は、抗体４である。表１は、抗体４の可変重鎖及び軽鎖配列ならびに個々のＣＤＲ配列の概略を提供する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、抗体４の重鎖ＣＤＲ配列のうちの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、抗体４の軽鎖ＣＤＲ配列のうちの少なくとも１つ、２つ、または３つを含む。本明細書で使用する「抗体４」という用語は、例えば、単離及び／または精製された抗体あるいは組換え生成された抗体などの、表１に示される重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を少なくとも含むすべての抗体及びフラグメントを包含する。いくつかの実施形態では、抗体４は、ＦＨのＣＣＰ１８における同じエピトープへの結合を抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と競合する。

【0074】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｈ因子（ＦＨ）の補体制御タンパク質ドメイン１８（ＣＣＰ１８）に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、
－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）または配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＴＳ（配列番号２）または配列ＡＳＳ（配列番号１４）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１、
－ 配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）もしくはＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）の配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び／または
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）もしくは配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を有する重鎖ＣＤＲ３配列、及び／または
－ 前述の任意の組み合わせ
を含む、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。

【0075】

特定の実施形態において、抗体またはフラグメントは、以下を含む：
－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＴＳ（配列番号２）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を有する重鎖ＣＤＲ３配列。

【0076】

特定の実施形態において、抗体またはフラグメントは、以下を含む：
－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＴＳ（配列番号２）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を有する重鎖ＣＤＲ３配列。

【0077】

特定の実施形態において、抗体またはフラグメントは、以下を含む：
－ 配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＳＳ（配列番号１４）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を有する重鎖ＣＤＲ３配列。

【0078】

特定の実施形態において、抗体またはフラグメントは、以下を含む：
－ 配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＳＳ（配列番号１４）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を有する重鎖ＣＤＲ３配列。

【0079】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨ活性、例えば代替補体活性化の阻害、例えば溶血活性の阻害、補体成分３（Ｃ３）沈着の阻害、及び／またはＣ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加を増強する。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくとも重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び／または軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくともＦａｂフラグメントを含む。

【0080】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２．５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する、例えば、ＦＨに対して１．２５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０４×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する抗体またはフラグメントである。

【0081】

さらなる実施形態において、本開示は、ＦＨのＣＣＰ１８に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＴＳ（配列番号２）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１、配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を有する重鎖ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。一実施形態において、抗体またはフラグメントは、配列番号４の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列を含む。特定の実施形態において、抗体またはフラグメントは、配列番号４の配列を含む可変軽鎖配列及び配列番号８の配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨ活性、例えば代替補体活性化の阻害、例えば溶血活性の阻害、補体成分３（Ｃ３）沈着の阻害、及び／またはＣ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加を増強する。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくとも重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び／または軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくともＦａｂフラグメントを含む。

【0082】

さらなる実施形態において、本開示は、ＦＨのＣＣＰ１８に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＴＳ（配列番号２）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１、配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を有する重鎖ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。一実施形態において、抗体またはフラグメントは、配列番号４の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列番号１２の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列を含む。特定の実施形態において、抗体またはフラグメントは、配列番号４の配列を含む可変軽鎖配列、及び配列番号１２の配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨ活性、代替補体活性化の阻害、例えば溶血活性の阻害、補体成分３（Ｃ３）沈着の阻害、及び／またはＣ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加を増強する。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくとも重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び／または軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくともＦａｂフラグメントを含む。

【0083】

さらなる実施形態において、本開示は、ＦＨのＣＣＰ１８に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＳＳ（配列番号１４）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１、配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を有する重鎖ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。一実施形態において、前記抗体またはフラグメントは、配列番号１６の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列番号８の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列を含む。特定の実施形態において、抗体またはフラグメントは、配列番号１６の配列を含む可変軽鎖配列、及び配列番号８の配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨ活性、例えば代替補体活性化の阻害、例えば溶血活性の阻害、補体成分３（Ｃ３）沈着の阻害、及び／またはＣ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加を増強する。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくとも重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び／または軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくともＦａｂフラグメントを含む。

【0084】

さらなる実施形態において、本開示は、ＦＨのＣＣＰ１８に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＳＳ（配列番号１４）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１、配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を有する重鎖ＣＤＲ３配列を含む、抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。一実施形態において、抗体またはフラグメントは、配列番号１６の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、配列番号１２の配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列を含む。特定の実施形態において、抗体またはフラグメントは、配列番号１６の配列を含む可変軽鎖配列、及び配列番号１２の配列を含む可変重鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨ活性、例えば代替補体活性化の阻害、例えば溶血活性の阻害、補体成分３（Ｃ３）沈着の阻害、及び／またはＣ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加を増強する。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくとも重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び／または軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、フラグメントは、少なくともＦａｂフラグメントを含む。

【0085】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２．５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０^－９Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２２．５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１７．５ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１２．５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、９ｎＭ以下、８ｎＭ以下、７ｎＭ以下、６ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、もしくは０．６ｎＭ以下のＫ_Ｄの結合親和性、及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０９×１０^－９Ｍ以下、０．０８×１０^－９Ｍ以下、０．０７×１０^－９Ｍ以下、０．０６×１０^－９Ｍ以下、０．０５×１０^－９Ｍ以下、０．０４×１０^－９Ｍ以下、０．０３×１０^－９Ｍ以下、０．０２×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－１１Ｍ以下、０．９×１０^－１１Ｍ以下、０．８×１０^－１１Ｍ以下、０．７×１０^－１１Ｍ以下、もしくは０．６×１０^－１１Ｍ以下のＫ_Ｄの結合親和性を有する。

【0086】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を、３８ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を、３５ｎＭ以下、３２ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２８ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、２３ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１８ｎＭ以下、１５ｎＭ以下または１０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏのＬＰＳにおけるＣ３沈着を、１５ｎＭ～３０ｎＭのＩＣ_５０値で阻害する。

【0087】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、１５０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、１０５ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、１５０ｎＭ以下、１３０ｎＭ以下、１１５ｎＭ以下、１０５ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９５ｎＭ以下、７５ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６５ｎＭ以下、または６０ｎＭ以下のＩＣ_５０値で阻害する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、１０％（ｖ／ｖ）の正常ヒト血清の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、６０ｎＭ～８０ｎＭのＩＣ_５０値で阻害する。

【0088】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性（Ｋ_Ｄ）を２μＭ以下、１．５μＭ以下、１μＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、もしくは３００ｎＭ以下まで増加させる、及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性を少なくとも２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、もしくは５倍増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性（Ｋ_Ｄ）を５０～５００ｎＭまで増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性（Ｋ_Ｄ）を５０～３００ｎＭまで増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性（Ｋ_Ｄ）を１００～３００ｎＭまで増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性（Ｋ_Ｄ）を２５０～３００ｎＭまで増加させる。

【0089】

場合により、本明細書で開示されるＣＤＲのいずれか１つ以上のうちの少なくとも１つの配列が最適化され、それにより、例えば、結合親和性、選択性、ＦＨ増強能力、及び／またはｉｎ ｖｉｖｏ安定性もしくは貯蔵安定性を（さらに）改善するような、バリアント抗体またはフラグメントが生成される。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、高い貯蔵安定性、特に抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と比較して改善された貯蔵安定性を有する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、高いｉｎ ｖｉｖｏ安定性、特に抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と比較して改善されたｉｎ ｖｉｖｏ安定性を有する。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、高い選択性、特に抗体ＦＨ．０７または抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４と比較して増加した選択性を有する。

【0090】

さらに、場合により、本開示の抗体またはフラグメントのフレームワーク領域のうちの少なくとも１つにおける少なくとも１つの配列が、例えば、抗体もしくはフラグメントの結合有効性もしくは安定性を改善するために、または非ヒト配列のヒトへの投与後のその副作用を低減させるために、最適化される。これは例えば、変異誘発手順によって行われる。当業者には、少なくとも１つの変化したＣＤＲまたはフレームワーク配列を含む抗体バリアントを生成することが可能である。ＣＤＲ及び／またはフレームワーク配列は、例えば、そのようなフレームワーク配列をコードする核酸を変異させることによって最適化される。例えば、保存的アミノ酸置換が適用される。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＣＤＲ、フレームワーク、可変重鎖、可変軽鎖配列のいずれかは、本明細書で開示されるアミノ酸配列のいずれか１つ以上と比較して、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸置換、欠失、または挿入（例えば、保存的置換）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＣＤＲ、フレームワーク、可変重鎖、可変軽鎖配列のいずれかは、本明細書で開示されるアミノ酸配列のいずれか１つ以上と比較して、少なくとも１、２、３、４、または５個のアミノ酸置換、欠失、または挿入（例えば、保存的置換）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＣＤＲ、フレームワーク、可変重鎖、可変軽鎖配列のいずれかは、本明細書で開示されるアミノ酸配列のいずれか１つ以上と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個以下のアミノ酸置換、欠失、または挿入（例えば、保存的置換）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるＣＤＲ、フレームワーク、可変重鎖、可変軽鎖配列のいずれかは、本明細書で開示されるアミノ酸配列のいずれか１つ以上と比較して、１、２、３、４、または５個以下のアミノ酸置換、欠失、または挿入（例えば、保存的置換）を含む。保存的アミノ酸置換の例としては、イソロイシン、バリン、ロイシンまたはメチオニンなどの１つの疎水性残基の別の疎水性残基への置換、及び１つの極性残基の別の極性残基への置換、例えばアルギニンのリジンへの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸への置換、またはグルタミンのアスパラギンへの置換が挙げられる。

【0091】

改善された抗体またはフラグメントを選択するために、例えば本明細書に記載される試験を使用して、得られたバリアント抗体またはフラグメントの結合親和性、ＦＨ増強能力、及び／または安定性を試験してもよい。ＦＨ、特にＦＨのＣＣＰ１８に対して特異的な抗体またはフラグメントが得られたら、その所望の生物学的活性、すなわちＦＨの活性を増強するその能力を、当業者に知られるいくつかの方法によって試験することができる。本明細書で前述したように、ＦＨの活性の増強は、溶血活性の阻害、細胞におけるＣ３沈着の阻害、及び／またはＣ３ｂに対するＦＨの結合の増加を含みうる。これらの活性を試験するための機能的アッセイは、本明細書で前述してあり、実施例に詳述する。通常、ＣＤＲ配列の最大３つのアミノ酸残基が、ＣＤＲを構成するアミノ酸の数に応じて、同じ特異性を維持しながら変化する可能性がある。よって、いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、各ＣＤＲの最大で３、最大で２、または最大で１個のアミノ酸が表１の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と比較して変化している、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含有しうる。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、表１に示すものと同じ抗体の軽鎖ＣＤＲ３及び重鎖ＣＤＲ３、最大で１個のアミノ酸が変化している抗体の軽鎖ＣＤＲ２、ならびに最大で３個のアミノ酸が変化している軽鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ１及び重鎖ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、表１に示すものと同じ抗体の軽鎖ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ならびに重鎖ＣＤＲ３、ならびに最大で２個のアミノ酸または最大で１個のアミノ酸が変化している軽鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ１及び重鎖ＣＤＲ２を含む。

【0092】

したがって本開示はさらに、Ｈ因子（ＦＨ）の補体制御タンパク質ドメイン１８（ＣＣＰ１８）に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはそのフラグメントであって、
－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）と少なくとも６０％もしくは少なくとも８０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＴＳ（配列番号２）と少なくとも６０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）と少なくとも６０％もしくは少なくとも８０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＴＳ（配列番号２）と少なくとも６０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）と少なくとも６０％もしくは少なくとも８０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、ＡＳＳ（配列番号１４）と少なくとも６０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）と少なくとも６０％もしくは少なくとも８０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、ＡＳＳ（配列番号１４）と少なくとも６０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及びＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）の配列と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する軽鎖ＣＤＲ３、配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一の配列を有する重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、抗体またはそのフラグメントを提供する。

【0093】

いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＦＨ活性を増強する。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、示される配列と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一の、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／またはＣＤＲ３配列、及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／またはＣＤＲ３配列を含む。

【0094】

本開示はさらに、Ｈ因子（ＦＨ）の補体制御タンパク質ドメイン１８（ＣＣＰ１８）に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはそのフラグメントであって、
－ １個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＴＳ（配列番号２）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３、１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１、１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する重鎖ＣＤＲ３配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）、
－ １個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＴＳ（配列番号２）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３、１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１、１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する重鎖ＣＤＲ３配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）、
－ １もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、軽鎖ＣＤＲ２配列ＡＳＳ（配列番号１４）、及び１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３、１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１、１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する重鎖ＣＤＲ３ ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）、または
－ １個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を有する軽鎖ＣＤＲ１配列、配列ＡＳＳ（配列番号１４）を有する軽鎖ＣＤＲ２配列、及び１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を有する軽鎖ＣＤＲ３、１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を有する重鎖ＣＤＲ１、１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を有する重鎖ＣＤＲ２、及び１もしくは２個のアミノ酸置換を場合により有する配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を有する重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、抗体またはそのフラグメントを提供する。

【0095】

いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書で開示される重鎖または軽鎖配列のいずれかに由来する少なくとも１つ以上のＣＤＲ（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号４、８、１２、または１６の可変重鎖または可変軽鎖配列のいずれかに由来する少なくとも１つ以上のＣＤＲ（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書で開示される重鎖または軽鎖配列のいずれかに由来する少なくとも１つ以上のＣＤＲを含み、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステムを使用してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書で開示される重鎖または軽鎖配列のいずれかに由来する少なくとも１つ以上のＣＤＲを含み、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａシステムを使用してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書で開示される重鎖または軽鎖配列のいずれかに由来する少なくとも１つ以上のＣＤＲを含み、ＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍシステムを使用してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書で開示される重鎖または軽鎖配列のいずれかに由来する少なくとも１つ以上のＣＤＲを含み、ＣＤＲは、ＡｂＭシステムを使用してナンバリングされる。いくつかの実施形態では、本明細書で開示されるいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書で開示される重鎖または軽鎖配列のいずれかに由来する少なくとも１つ以上のＣＤＲを含み、ＣＤＲは、ＩＭＧＴシステムを使用してナンバリングされる。

【0096】

Ｋａｂａｔによって記述されたシステムは、「Ｋａｂａｔに従ってナンバリングされる」、「Ｋａｂａｔナンバリング」、「Ｋａｂａｔ定義」、及び「Ｋａｂａｔラベリング」ともいい、抗体のいかなる可変ドメインにも適用可能な明確な残基ナンバリングシステムを提供し、各鎖の３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界を提供する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１）。この内容は参照により全体として本明細書に組み込まれる）。これらのＣＤＲはＫａｂａｔ ＣＤＲと呼ばれ、軽鎖可変ドメインの残基２４～３４あたり（ＣＤＲ１）、５０～５６あたり（ＣＤＲ２）、及び８９～９７あたり（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインの３１～３５あたり（ＣＤＲ１）、５０～６５あたり（ＣＤＲ２）、及び９５～１０２あたり（ＣＤＲ３）を含む。ＣＤＲがＫａｂａｔに従って定義される場合、軽鎖ＦＲ残基は、残基１～２３あたり（ＬＣＦＲ１）、３５～４９あたり（ＬＣＦＲ２）、５７～８８あたり（ＬＣＦＲ３）、及び９８～１０７あたり（ＬＣＦＲ４）に位置付けられ、重鎖ＦＲ残基は、重鎖残基の残基１～３０あたり（ＨＣＦＲ１）、３６～４９あたり（ＨＣＦＲ２）、６６～９４あたり（ＨＣＦＲ３）、及び１０３～１１３あたり（ＨＣＦＲ４）に位置付けられる。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。

【0097】

他のＣＤＲナンバリングシステムも当該技術分野では使用されている。Ｃｈｏｔｈｉａらは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲの特定の小部分が、アミノ酸配列のレベルでは大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格の立体構造を採ることを見出した。（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７、及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３）。これらの小部分はＬ１、Ｌ２、及びＬ３、またはＨ１、Ｈ２、及びＨ３と称され、「Ｌ」及び「Ｈ」はそれぞれ軽鎖領域及び重鎖領域を表す。これらのＣＤＲは「Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ」、「Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング」、または「Ｃｈｏｔｈｉａに従ってナンバリングされる」といわれることがあり、軽鎖可変ドメインの残基２４～３４あたり（ＣＤＲ１）、５０～５６あたり（ＣＤＲ２）、及び８９～９７あたり（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインの２６～３２あたり（ＣＤＲ１）、５２～５６あたり（ＣＤＲ２）、及び９５～１０２あたり（ＣＤＲ３）を含む。Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）。

【0098】

ＭａｃＣａｌｌｕｍによって記述されたシステムは、「ＭａｃＣａｌｌｕｍに従ってナンバリングされる」、または「ＭａｃＣａｌｌｕｍナンバリング」ともいい、軽鎖可変ドメインの残基３０～３６あたり（ＣＤＲ１）、４６～５５あたり（ＣＤＲ２）、及び８９～９６あたり（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインの３０～３５あたり（ＣＤＲ１）、４７～５８あたり（ＣＤＲ２）、及び９３～１０１あたり（ＣＤＲ３）を含む。ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．（（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２－７４５）。

【0099】

ＡｂＭによって記述されたシステムは、「ＡｂＭに従うナンバリング」、または「ＡｂＭナンバリング」ともいい、軽鎖可変ドメインの残基２４～３４あたり（ＣＤＲ１）、５０～５６あたり（ＣＤＲ２）、及び８９～９７あたり（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインの２６～３５あたり（ＣＤＲ１）、５０～５８あたり（ＣＤＲ２）、及び９５～１０２あたり（ＣＤＲ３）を含む。

【0100】

ＩＭＧＴ（ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＭＭＵＮＯＧＥＮＥＴＩＣＳ ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ ＳＹＳＴＥＭ）による可変領域のナンバリングを使用することもでき、これは、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．，“Ｔｈｅ ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ｔ ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｇ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ”，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ，７，１３２－１３６（１９９９）に記載され、参照により全体として本明細書に明示的に組み込まれる、ＩＩＭＧＴの方法に従った免疫グロブリン可変重鎖または軽鎖の残基のナンバリングである。本明細書で使用する場合、「ＩＭＧＴ配列ナンバリング」または「ＩＭＴＧに従うナンバリング」とは、ＩＭＧＴに従う、可変領域をコードする配列のナンバリングを指す。重鎖可変ドメインの場合、ＩＭＧＴに従ってナンバリングすると、超可変領域の範囲は、ＣＤＲ１でアミノ酸２７～３８位、ＣＤＲ２でアミノ酸５６～６５位、及びＣＤＲ３でアミノ酸１０５～１１７位になる。軽鎖可変ドメインの場合、ＩＭＧＴに従ってナンバリングすると、超可変領域の範囲は、ＣＤＲ１でアミノ酸２７～３８位、ＣＤＲ２でアミノ酸５６～６５位、及びＣＤＲ３でアミノ酸１０５～１１７位になる。本明細書に記載されるコンストラクト及び抗原結合アームのいくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従ってナンバリングした場合、軽鎖可変ドメインの残基２４～３４あたり（ＣＤＲ１）、４９～５６あたり（ＣＤＲ２）、及び８９～９７あたり（ＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変ドメインの２７～３５あたり（ＣＤＲ１）、４９～６０あたり（ＣＤＲ２）、及び９３～１０２あたり（ＣＤＲ３）を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインのＣＤＲ２は、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従ってナンバリングした場合、アミノ酸４９～５６を含みうる。

【0101】

本開示に係る抗体またはそのフラグメントは、いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体またはフラグメントである。モノクローナル抗体は、単一の分子種から実質的になる抗体である。モノクローナル抗体は、自然に、例えば生成中に生じた１つ以上の変異を有する、可能性のあるバリアント抗体またはフラグメントを例外として、同じ配列を有し、同じエピトープに結合する、均一な抗体の集団から得られる。モノクローナル抗体は、有利なことに、抗血清中に存在するポリクローナル抗体の量よりも大幅に高い量の抗体を得ることができるように、組換えにより生成されうる。しかしながら、ポリクローナル抗体及びフラグメントも本開示に包含される。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、キメラ抗体またはヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、したがって、少なくともヒト軽鎖及び重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントはまた、重鎖及び軽鎖可変領域内のヒトフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、完全にヒト配列からなるヒト抗体またはフラグメントが提供される。ヒト疾患の治療のための非ヒト抗体またはフラグメントの使用はいくつかの要因によって妨げられるので、いくつかの実施形態では、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体の使用は、非ヒト抗体の使用よりも望ましい。人体は非ヒト抗体を異物として認識することがあり、その結果、非ヒト抗体またはフラグメントに対する免疫応答が生じ、有害な副作用及び／または循環からの抗体もしくはフラグメントの急速なクリアランスがもたらされる。キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体をヒトに投与した場合、副作用の可能性は低減する。さらに、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を使用すると、非ヒト抗体と比較してクリアランスが低減するため、一般により長い循環半減期が達成される。いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントのフレームワーク領域にヒト生殖系列配列が使用される。ヒト生殖系列配列の使用により、抗体またはフラグメントの免疫原性のリスクが最小限に抑えられる。なぜなら、これらの配列には、フレームワーク領域が由来する個体に固有であり、別のヒト個体に適用すると免疫原性応答を引き起こしうる体細胞変異が含まれる可能性が低いからである。

【0102】

抗体のヒト化またはキメラ抗体を提供するための手段は、当該技術分野で周知である。親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を維持しながら、ヒト抗体の同じまたは同様の位置で発生する抗体中のアミノ酸残基の含有量を増加させることを目的とした、様々な組換え型ＤＮＡベースのアプローチが確立されている。例えば、マウス抗体の可変領域のフレームワーク領域は、非ヒトＣＤＲを無傷のままにして、最高度の相同性を有する対応するヒトフレームワーク領域によって置換される。本開示に係る抗体をヒト化するのに好適なさらなる方法は、ＣＤＲグラフティング（Ｑｕｅｅｎ，Ｃ ｅｔ．ａｌ．１９８９、Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ ｅｔ ａｌ．１９９２）、リサーフェシング（Ｐａｄｌａｎ，ＥＡ，ｅｔ．ａｌ．１９９１）、超ヒト化（ｓｕｐｅｒｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ）（Ｔａｎ，ＰＤＡ，ｅｔ．ａｌ．２００２）、ヒトストリング内容最適化（ｈｕｍａｎ ｓｔｒｉｎｇ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ）（Ｌａｚａｒ，Ｇ．Ａ．ｅｔ．ａｌ．２００７）、及びヒューマニアリング（ｈｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ）（Ａｌｍａｇｒｏ，ＪＣ，ｅｔ．ａｌ．２００８）を含むがこれに限定されない。

【0103】

一実施形態において、本開示に係る抗体またはフラグメントは、二重特異性抗体などの多特異性抗体である。多特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原及び／またはエピトープに対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。一実施形態において、二重特異性抗体は、ＦＨに対する結合特異性を有し、例えば、本明細書に記載されるようにＦＨのＣＣＰ１８に特異的に結合する１つの可変軽鎖及び１つの可変重鎖を含み、かつ別の抗原に対する結合特異性を有する。別の実施形態において、二重特異性抗体は、ＦＨの２つの異なるエピトープに結合しうる。

【0104】

本開示に係る抗体またはフラグメントは、任意のクラスのものでありうる。抗体の「クラス」とは、その重鎖が有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４などのサブクラスまたはアイソタイプにさらに分類されうる。ある特定の実施形態において、本開示に係る抗体は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）の定常領域（例えば、Ｆｃドメイン）を含む。ある特定の実施形態において、本開示に係る抗体は、ヒトＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）の定常領域（例えば、Ｆｃドメイン）を含む。Ｆｃドメインは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導する能力を含め、抗体のエフェクター機能を媒介する。ある特定の実施形態において、本明細書で開示される抗体は、Ｆｃのエフェクター機能を低減させる１つ以上の変異を有するＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で開示される抗体は、２３４、２３５、２３６、２３７、２７０、２９７、３１８、３２０、３２２、３２９、及び３３１から選択される１つ以上の位置に変異（例えば、野生型ヒトＩｇＧ１に対する置換）を含むＦｃドメインを含む。そのような変異は当該技術分野で公知であり、限定するものではないが、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ３２９ＡまたはＰ３２９Ｇ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ａ、及びそれらの組み合わせを含む。Ｆｃドメインはまた、新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎに結合し、それによって抗体のリサイクルを促進し、それによって抗体の半減期を延長する。ある特定の実施形態において、本明細書で開示される抗体は、ＦｃＲｎに対するＦｃの結合親和性を増加させる１つ以上の変異を有するＦｃドメインを含む。そのような変異は当該技術分野で公知であり、限定するものではないが、Ｍ２５２Ｙ／Ｔ２５６Ｄ、Ｔ２５６Ｄ／Ｔ３０７Ｑ、及びＴ２５６Ｄ／Ｔ３０７Ｗを含む。

【0105】

ある特定の実施形態において、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはフラグメントは、ネイティブな抗体またはフラグメントに天然に存在するものに加えて、翻訳後修飾をさらに含みうる。そのような修飾は、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、ＰＥＧ化（ポリエチレングリコール）、及びアシル化を含むがこれに限定されない。結果として、修飾されたポリペプチドは、ポリエチレングリコール、脂質、単糖または多糖、及びホスフェートなどの非アミノ酸要素を含み得る。特定の実施形態において、抗体またはフラグメントは、ＰＥＧ化されている。さらなる特定の実施形態では、抗体またはフラグメントは、ＰＥＧ化されたＦａｂ分子である。

【0106】

本開示に係るＦＨなどの特定の抗原に対して特異的な抗体は、当該技術分野で公知の様々な方法によって調製することができる。例えば、抗体を誘発するための免疫原としてヒトＦＨを使用することができる。別の例として、ＦＨ関連タンパク質のヒトＦＨのＣＣＰ１８ドメインを免疫原として使用することができる。そのような方法の一例は、実施例に記載するような免疫化及びハイブリドーマ生成によるものである。ＦＨに対するマウスモノクローナル抗体は、例えば、場合によりモンタニドなどのアジュバントの存在下で、例えば４週間間隔でのヒトＨ因子またはＦＨＲ－１などのＦＨ関連タンパク質の腹腔内投与により、マウス（例えばＢＡＬＢ／ｃマウス）を免疫化することによって生成することができる。４回目の免疫化から数日後、脾臓細胞を、例えば骨髄腫細胞株ＳＰ２／０と融合させることができる。ハイブリドーマの上清中のＨ因子特異的抗体の存在はＥＬＩＳＡによって試験することができる。例えば、マイクロタイタープレートをｍｏＡｂ（例えばラット抗マウスカッパｍｏＡｂ ＲＭ１９）でコーティングして、マウスＩｇＧ抗体を捕捉することができる。抗体の特異性はビオチン化Ｈ因子によって決定されうる。ＦＨ特異的抗体をもたらす方法の別の例は、免疫グロブリン鎖をコードする組換え型核酸配列を発現するファージディスプレイライブラリをスクリーニングすることによる。抗体ファージディスプレイの方法は、当該技術分野で使用されており、広く報告されている。抗体のライブラリのスクリーニングは、免疫化に使用されるものと同じ抗原、例えばヒトＦＨ、ＦＨ関連タンパク質、またはヒトＦＨのＣＣＰ１８ドメインを用いて行うことができる。

【0107】

Ｃ． 核酸及びベクター
本開示はさらに、本明細書で開示されるいずれかの抗体またはそのフラグメントをコードする核酸配列を含む１つ以上の単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸を提供する。いくつかの実施形態では、核酸は、表１に示される抗体１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を少なくともコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、表１に示される抗体２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を少なくともコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、表１に示される抗体抗体３の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を少なくともコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、表１に示される抗体４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を少なくともコードする。

【0108】

いくつかの実施形態では、本開示に係る核酸は、少なくとも３０ヌクレオチド、少なくとも５０ヌクレオチド、または少なくとも７５ヌクレオチドの長さを有する。いくつかの実施形態では、本開示に係る核酸は、抗体１の重鎖ＣＤＲ配列及び軽鎖ＣＤＲ配列及び／または重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むキメラ型もしくはヒト化型のモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする。いくつかの実施形態では、本開示に係る核酸は、抗体２の重鎖ＣＤＲ配列及び軽鎖ＣＤＲ配列及び／または重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むキメラ型もしくはヒト化型のモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする。いくつかの実施形態では、本開示に係る核酸は、抗体３の重鎖ＣＤＲ配列及び軽鎖ＣＤＲ配列及び／または重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むキメラ型もしくはヒト化型のモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする。いくつかの実施形態では、本開示に係る核酸は、抗体４の重鎖ＣＤＲ配列及び軽鎖ＣＤＲ配列及び／または重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むキメラ型もしくはヒト化型のモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする。

【0109】

抗体５～７の重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列を表１に示す。しかしながら、表１に示される核酸配列とは異なるが、表１に示される重鎖、軽鎖、重鎖ＣＤＲ、または軽鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列をコードする核酸コドンを含む核酸配列を含む、本開示に係る抗体の重鎖または軽鎖ＣＤＲをコードする核酸もまた、本開示に包含される。

【0110】

したがって、配列番号１、２、３、５、６及び７、またはそれらの任意の組み合わせもしくはフラグメントの配列のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸が提供される。さらに、配列番号１、２、３、５、１０、及び１１、またはそれらの任意の組み合わせもしくはフラグメントの配列のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸が提供される。さらに、配列番号３、５、６、７、１３、及び１４、またはそれらの任意の組み合わせもしくはフラグメントの配列のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸が提供される。さらに、配列番号３、５、１０、１１、１３、及び１４、またはそれらの任意の組み合わせもしくはフラグメントの配列のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸が提供される。

【0111】

さらに、配列番号４及び８、またはそれらの任意の組み合わせもしくはフラグメントの配列のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸が提供される。さらに、配列番号４及び１２、またはそれらの任意の組み合わせもしくはフラグメントの配列のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸が提供される。さらに、配列番号８及び１６、またはそれらの任意の組み合わせもしくはフラグメントの配列のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸が提供される。さらに、配列番号１２及び１６、またはそれらの任意の組み合わせもしくはフラグメントの配列のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸が提供される。重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲをコードする核酸、または例えば保存的アミノ酸置換によって修飾された抗体もまた、本開示に包含される。

【0112】

いくつかの実施形態では、本開示に係る核酸または核酸配列は、ヌクレオチドの鎖（すなわち、ＤＮＡ及び／またはＲＮＡ）を含む。しかしながら、本開示の核酸または核酸配列は、例えば、ＤＮＡ／ＲＮＡヘリックス、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）及び／またはリボザイムのような他の種類の核酸構造を含んでもよい。そのような他の核酸構造は、核酸配列の機能的均等物と呼ばれ、本開示に包含される。「核酸配列の機能的均等物」という用語には、天然ヌクレオチドと同じ機能を呈する非天然ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及び／または非ヌクレオチド構成要素を含む鎖も包含される。

【0113】

本開示はさらに、本開示に係る１つ以上の核酸を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターはプラスミドである。プラスミドは、本明細書では環状と定義される。いくつかの実施形態では、プラスミドは二本鎖のＤＮＡ分子である。本開示に係る核酸を含むベクターを調製する方法は、当該技術分野で周知である。本開示のベクターを生成するのに好適なベクターの非限定的な例は、レトロウイルスベクター及びレンチウイルスベクターである。本開示に係るベクターは、様々な用途に使用することができる。本開示に係るベクターは、いくつかの実施形態では、例えば本開示に係る抗体またはフラグメントの生成のために、細胞における本開示に係る核酸のｉｎ ｖｉｔｒｏ発現のために使用される。さらに、本開示に係る核酸を含む本開示に係るベクターは、治療のために使用することができる。そのようなベクターを、それを必要とするヒトなどの個体に投与すると、本開示に係る抗体またはフラグメントがｉｎ ｖｉｖｏで発現される。

【0114】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で開示されるいずれかの抗体もしくはフラグメントをコードするベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、ＡＡＶベクターである。本開示の組換え型ＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターは、様々なアデノ随伴ウイルスから生成されうる。例えば、いずれのＡＡＶ血清型のＩＴＲも、複製、組込み、切除、及び転写メカニズムに関して同様の構造及び機能を有すると予想される。ＡＡＶ血清型の例には、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、及びＡＡＶ１２が含まれる。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、またはＡＡＶ８から生成される。これらの血清型は、光受容細胞または網膜色素上皮をターゲティングすることが知られている。特定の実施形態において、ｒＡＡＶベクターは、血清型ＡＡＶ２から生成される。ある特定の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ８ＲまたはＡＡＶｒｈ１０を含む。ｒＡＡＶベクターが血清型ＡＡＶ１～ＡＡＶ１２から選択される２つ以上の血清型のキメラでありうることも理解されよう。ベクターの向性は、１つの血清型の組換え型ゲノムを別のＡＡＶ血清型に由来するカプシドにパッケージングすることによって変化させることができる。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶウイルスのＩＴＲは、ＡＡＶ１～１２のうちのいずれか１つのＩＴＲに基づくことができ、ＡＡＶ１～１２、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶ－ＤＪ８、ＡＡＶ－ＤＪ９、または他の改変された血清型のうちのいずれか１つから選択されるＡＡＶカプシドと組み合わせてもよい。ある特定の実施形態において、任意のＡＡＶカプシド血清型が本開示のベクターと共に使用されうる。ＡＡＶ血清型の例には、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶ－ＤＪ８、ＡＡＶ－ＤＪ９、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ８Ｒ、またはＡＡＶｒｈ１０が含まれる。ある特定の実施形態において、ＡＡＶカプシド血清型はＡＡＶ２である。

【0115】

さらに、本開示に係る核酸またはベクターを含む組換え型細胞が提供される。いくつかの実施形態では、細胞の核酸翻訳機構が、コードされる抗体またはフラグメントを生成するように、核酸またはベクターが細胞に導入される。いくつかの実施形態では、本開示に係る核酸またはベクターは、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＮＳＯ（マウス骨髄腫）、または２９３（Ｔ）細胞株の細胞などのいわゆるプロデューサー細胞で発現され、これらの細胞のうちのいくつかは、商業的な抗体生産に適応している。そのようなプロデューサー細胞の増殖は、本開示に係る抗体またはフラグメントを生成することが可能なプロデューサー細胞株をもたらす。いくつかの実施形態では、プロデューサー細胞株は、ヒトで使用するための抗体を生成するのに好適である。いくつかの実施形態では、プロデューサー細胞株は、病原性微生物などの病原因子を含まない。

【0116】

本開示はさらに、本開示に係る抗体またはフラグメントを生成する方法であって、本開示に係る核酸またはベクターを細胞に供給することと、核酸またはベクターに含まれる核酸配列を細胞に翻訳させることにより、本開示に係る抗体またはフラグメントを生成することとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示に係る方法は、抗体またはフラグメントを採取、精製、及び／または単離することをさらに含む。本開示に係る抗体またはフラグメントを生成する方法を用いて得られる抗体またはフラグメントも提供される。

【0117】

Ｄ． 医薬組成物
いくつかの実施形態では、本開示に係る抗体またはフラグメントは、治療的用途で有利に使用することができる。したがって、本開示に係る抗体またはフラグメント、ならびに薬学的に許容されるキャリア、希釈剤、及び／または賦形剤を含む、医薬組成物が提供される。また、本開示に係る核酸またはベクター（例えばＡＡＶベクター）、ならびに少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリア、希釈剤、及び／または賦形剤を含む、医薬組成物も提供される。好適なキャリアの非限定的な例は、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、血清アルブミン（例えばＢＳＡまたはＲＳＡ）、及び卵白アルブミンである。いくつかの実施形態では、キャリアは、水溶液、例えば食塩水、または油性溶液などの溶液である。錠剤、カプセルなどに組み込むことができる賦形剤の非限定的な例は、トラガカントガム、アカシア、トウモロコシデンプン、またはゼラチンなどの結合剤、微結晶性セルロースなどの賦形剤、トウモロコシデンプン、アルファ化デンプン、及びアルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、スクロース、ラクトース、またはサッカリンなどの甘味剤、ならびにペパーミント、ウィンターグリーンまたはチェリーの油などの香味剤である。いくつかの実施形態では、単位剤形はカプセルである。いくつかの実施形態では、単位剤形は、上記の賦形剤のうちの１つ以上に加えて、脂肪油などの液体キャリアを含有する。コーティングとして、または投与単位の物理的形態を変更するために、他の様々な材料が存在してもよい。例えば、錠剤はシェラック及び／または糖、あるいはその両方でコーティングされうる。いくつかの実施形態では、本開示に係る医薬組成物は、ヒトでの使用に好適である。

【0118】

本明細書に記載される医薬組成物は、様々な異なる方法で投与することができる。例としては、本開示に係る抗体を含み、薬学的に許容されるキャリアを含有する医薬組成物を、眼内、硝子体内、網膜下、経口、鼻腔内、直腸、局所、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、真皮下、経皮、髄腔内、及び頭蓋内の方法によって投与することが挙げられる。特定の実施形態において、本明細書で開示される抗体、フラグメント、ベクター、または医薬組成物のいずれも、対象に硝子体内投与されうる。特定の実施形態において、本明細書で開示される抗体、フラグメント、ベクター、または医薬組成物のいずれも、対象に網膜下投与されうる。経口投与の場合、有効成分は、カプセル、錠剤、及び粉末などの固体剤形、またはエリキシル剤、シロップ、及び懸濁液などの液体剤形で投与することができる。注射用無菌組成物は、従来の薬学的慣行に従って、本開示の抗体またはフラグメントを、水、もしくはゴマ油、ココナッツ油、ピーナッツ油、綿実油などの天然油のような注射用ビヒクル、またはオレイン酸エチルのような合成脂肪ビヒクルに溶解または懸濁させることによって製剤することができる。バッファー、防腐剤、及び／または抗酸化剤を組み込んでもよい。

【0119】

Ｅ． 治療的／予防的用途
本開示はさらに、療法において使用するための、本開示に係る抗体またはフラグメントを提供する。さらに、療法において使用するための、本開示に係る核酸が提供される。療法は、治療的または予防的でありうる。本開示に係る抗体またはフラグメントは、代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止に特に好適である。したがって、代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止において使用するための、本開示に係る抗体またはフラグメントが提供される。また、代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止において使用するための、本開示に係る核酸が提供される。本明細書で使用する場合、「代替補体活性化に関連する障害」は、本明細書では、不必要な及び／または過剰な代替経路補体活性化が細胞、組織、または細胞外マトリックスの損傷をもたらす障害と定義される。不必要な及び／または過剰な代替経路活性化によって損傷しうる細胞は、血液と接触しているあらゆる細胞、例えば、赤血球、上皮細胞、特に肝臓及び／または腎臓の上皮細胞、血小板、白血球、内皮細胞である。いくつかの実施形態では、障害は、ＦＨ機能障害またはＦＨ欠損に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、ＦＨ機能障害またはＦＨ欠損に関連するが、ＦＨの非存在には関連しない障害である。本開示の抗体及びフラグメントはＦＨの機能を増強するので、抗体及びフラグメントは、ＦＨ機能障害またはＦＨ欠損の影響を遮断または低減させるのに特に好適である。しかしながら、本開示の増強性抗ＦＨ抗体は、ＦＨが人為的に遮断されている健康な個体の血清と共にインキュベートした赤血球の溶解も阻害しうる。したがって、抗体及びフラグメントは、ＦＨ機能障害またはＦＨ欠損以外の要因によって引き起こされる不必要な及び／または過剰な代替経路補体活性化を遮断または低減させるために使用することもできる。そのような治療されうる障害の非限定的な例は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）である。

【0120】

非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）は、補体媒介性ＨＵＳとも呼ばれ、溶血性貧血、血小板減少症、全身性血栓性微小血管症（ＴＭＡ）、及び腎不全を特徴とする。ａＨＵＳの発症は典型的には小児期にあり、疾患のエピソードは、例えば感染、妊娠、他の疾患、手術、または外傷に関連する。ａＨＵＳ患者の６０％超が、血漿交換または血漿補充にもかかわらず、死亡するか、または末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を発症する。ａＨＵＳ患者では、補体系の成分または因子におけるいくつかの変異が特定されている。ＦＨ、ＦＩ ＦＢ、膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）、トロンボモジュリン（ＴＨＢＤ）、またはＣ３の変異は、ＦＨの変異が最も高頻度であるａＨＵＳ患者（ａＨＵＳ患者の約２０～３０％）における既知の変異の約５０％を構成する。患者の大多数は変異に対してヘテロ接合性であるが、それにもかかわらず病的なＦＨ欠損が生じる。さらに、患者の約１０％において、ａＨＵＳはＦＨに対する自己抗体に起因し、機能的ＦＨの低減も生じる。現在、ａＨＵＳの標準治療は、血漿補充または血漿交換療法である。さらに、エクリズマブがａＨＵＳ患者の治療に使用されている。腎移植は、ａＨＵＳの根底にある変異に依存する再発のリスクが高いことに関連している。ＦＨ、ＦＢ、ＦＩ、Ｃ３またはＴＨＢＤに変異がある小児では、再発のリスクが増加するため、移植は禁忌である。本開示に係る、少なくともＦａｂフラグメントを含む抗体またはフラグメントなどの抗体またはフラグメントは、ＦＨの変異または抗ＦＨ自己抗体の存在に起因するａＨＵＳの治療、緩和、または防止に特に好適である。ＦＨに対する増強効果は、変異を有するＦＨのＣＣＰドメインとは無関係である。例えば、増強性ＦＨ抗体またはそのフラグメントは、ＦＨのＣＣＰ１、ＣＣＰ６、ＣＣＰ７、ＣＣＰ１４、ＣＣＰ１７、ＣＣＰ１８、ＣＣＰ１９及びＣＣＰ２０に変異を有するａＨＵＳ患者における代替補体活性化を阻害することができる。しかしながら、本開示の抗体及びフラグメントは、ＦＨ機能障害またはＦＨ欠損の非存在下でもＦＨの活性を増強しうるので、あらゆる形態の補体依存性ａＨＵＳが、本開示の抗体またはフラグメントによって有利に治療、緩和、または防止されうる。

【0121】

発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）は、全能性造血幹細胞のＸ染色体における遺伝子変異によって引き起こされる。この変異は、グリコシルホスファチジルイノシトール膜固定タンパク質（ＧＰＩ－ＡＰ）の合成に重要である、ホスファチジルイノシトールグリカンクラスＡタンパク質の欠損をもたらす。補体系の阻害剤ＣＤ５５はそのようなタンパク質の一例であり、宿主細胞表面でＣ３ｂに結合することにより、Ｃ３転換酵素の形成を防止する。よって、これらのタンパク質の欠損は、不必要または過剰な補体活性化をもたらす。ＰＮＨの主な帰結の１つは、補体系の過剰な活性の結果として赤血球が溶解することである。最近、エクリズマブが数か国でＰＮＨの治療のために承認された。他の療法には、輸血、赤血球刺激剤療法、コルチコステロイド及びタンパク同化ステロイドによる治療が含まれる。本開示の抗体及びフラグメントはまた、ＦＨのレベルまたはＦＨ機能とは無関係にＦＨの活性を増強し、それにより補体系の代替経路の活性化を阻害しうるので、抗体及びフラグメントは、ＰＮＨ患者において有利に使用されうる。さらに、本開示の抗体及びフラグメントは、活性化経路のより下流で作用するエクリズマブとは異なり、Ｃ３沈着のレベルで作用するので、Ｃ３ｂによってオプソニン化される細胞が少なくなるため、肝臓の細胞の消耗が低減する。

【0122】

加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）は、網膜の損傷であり、通常は高齢の個体が罹患し、視野の中心である黄斑の視力を喪失する。最近では、ＦＨにおける変異及びＳＮＰ（一塩基多型）がＡＭＤ患者の約３５％に関係するとされている。このＳＮＰは、ＦＨのＣＣＰ７に位置し、ヘパリンに対するＦＨの結合に影響を及ぼすことにより、宿主細胞表面及び細胞外マトリックスに結合するＦＨの能力を損なうことが実証された。本開示に係る、少なくともＦａｂフラグメントを含む抗体またはフラグメントなどの抗体またはフラグメントは、ＦＨ機能低下（すなわち、ＦＨをコードする遺伝子におけるＳＮＰ）を特徴とするＡＭＤの治療、緩和、または防止に特に好適である。

【0123】

膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）は、主に小児及び若年成人に発生する慢性腎炎のまれな原因である。メサンギウム細胞及び内皮細胞の増殖ならびにメサンギウム基質の増大、内皮下免疫沈着物及び／または膜内高密度沈着物による末梢毛細血管壁の肥厚、ならびに毛細血管壁への糸球体間質の介在の結果として、糸球体の傷害を引き起こす。ＭＰＧＮは、多くの場合、ＦＨが完全に欠如していることに関連付けられる。いくつかの実施形態では、本開示の抗体及び／またはフラグメントで治療されうるＭＰＧＮは、ＦＨ機能障害またはＦＨ欠損に関連するが、ＦＨの非存在には関連しない。

【0124】

したがって、本開示は、代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止において使用するための、本開示に係る抗体またはフラグメントまたは核酸を提供する。いくつかの実施形態では、障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）からなる群から選択される。また、代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止のための医薬を調製するための、本開示に係る抗体もしくはフラグメント、核酸またはベクターの使用が提供される。いくつかの実施形態では、障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、及びＩｇＡ腎症からなる群から選択される。特定の実施形態において、障害はＩｇＡ腎症である。いくつかの実施形態では、本開示による医薬または予防薬として使用される抗体またはフラグメントは、表１に示される抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む抗体またはそのフラグメント（すなわち、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ）_２またはＦ（ａｂ’）_２フラグメント）である。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ヒト化型またはキメラ型のモノクローナル抗体またはフラグメントである。

【0125】

本開示はさらに、本開示に係る抗体もしくはフラグメント、または本開示に係る核酸もしくはベクターを個体に投与することを含む、代替補体活性化を阻害する方法を提供する。本開示はさらに、代替経路補体活性化に関連する障害を治療、緩和、または防止する方法であって、それを必要とする個体に、本開示に係る抗体またはフラグメントを治療有効量で投与することを含む方法を提供する。また、代替経路補体活性化に関連する障害を治療、緩和、または防止する方法であって、それを必要とする個体に、本開示に係る核酸またはベクターを治療有効量で投与することを含む方法が提供される。さらに、代替経路補体活性化に関連する障害を治療、緩和、または防止する方法であって、それを必要とする個体に、本開示に係る医薬組成物を治療有効量で投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）からなる群から選択される。本明細書で使用する場合、「個体」は、ヒトまたは免疫系の一部として補体系を有する動物（例えば哺乳動物）である。特定の実施形態において、個体はヒトである。いくつかの実施形態では、本開示の方法で使用される抗体は、抗体１の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、抗体２の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、抗体３の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、または抗体４の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、抗体またはそのフラグメント、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）_２またはＦ（ａｂ’）_２フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体またはフラグメントは、ヒト化型またはキメラ型のモノクローナル抗体またはフラグメントである。

【0126】

本開示の抗体、フラグメント、核酸を含有する組成物は、予防的及び／または治療的な処置のために投与されうる。治療的用途において、本開示に係る抗体、フラグメント、核酸、または組成物は、疾患を既に患っている及び／または疾患の症状を既に示している個体（例えばヒト）に、疾患の症状及び／またはその合併症を和らげるのに充分な量で投与される。予防的用途では、本開示に係る抗体、フラグメント、核酸、または組成物は、これらの症状またはその合併症の発生を防止するために、個体が障害の症状を示す前に個体に投与される。例えば、代替補体活性化に関連する障害を引き起こしうる、または引き起こす遺伝子変異を有する個体は、本開示に係る抗体、フラグメント、核酸、または組成物で予防的に処置されうる。抗体、フラグメント、核酸、またはベクター分子は、典型的には、補体系の代替経路の不必要または過剰な活性化に関連する障害に対処するのに十分な量である治療有効量で、本開示に係る医薬組成物中に存在する。

【0127】

明確性及び簡潔な説明を目的として、本開示の同じまたは別個の態様または実施形態の一部として複数の特徴が本明細書に記載される場合がある。当業者には、本開示の範囲が、同じまたは別個の実施形態の一部として本明細書に記載される特徴のすべてまたはいくつかの組み合わせを有する実施形態を含みうることが理解されよう。

【実施例】

【0128】

これらの実施例は、例示を目的として提供するものに過ぎず、本明細書で提供する特許請求の範囲を限定するものではない。

【0129】

試薬
ヒト精製Ｈ因子はＣｏｍｐＴｅｃｈ（Ｔｙｌｅｒ，Ｔｅｘａｓ ＵＳＡ）から入手した。ラット抗マウスカッパ（ＲＭ１９）はＳａｎｑｕｉｎ（Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｕｎｉｔ ｒｅａｇｅｎｔｓ，Ｓａｎｑｕｉｎ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から入手した。高性能ＥＬＩＳＡバッファー（ＨＰＥ）はＳａｎｑｕｉｎから入手した。組換え型ＦＨ ＣＣＰ（ＣＣＰ１５～１８、ＣＣＰ１５～１９、ＣＣＰ１８～２０、またはＣＣＰ１９～１０）は、以前に報告されているように（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．２００８）生成した。ヒトＦＨに対するマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、以前に報告されているように作製した。抗ＩＬ－６．８はアイソタイプ対照として使用し、Ｓａｎｑｕｉｎから入手した。抗Ｃ３．１９は、分子のＣ３ｄフラグメント上のエピトープと反応しうる（Ｗｏｌｂｉｎｋ ｅｔ ａｌ．１９９３）。

【0130】

ｒｈＦＨＲタンパク質の発現
Ｃ末端に６つのヒスチジン（６ｘＨｉｓ）タグを含有する組換え型ヒトＨ因子関連（ｒｈＦＨＲ）タンパク質を生成し、以前に報告されているように（Ｐｏｕｗ ｅｔ ａｌ．２０１５）精製した。手短に述べると、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞でｐｃＤＮＡ３．１発現ベクターの一過性トランスフェクションによってタンパク質を発現させ、その後、ＨｉｓＴｒａｐ（商標）Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ １ｍｌカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用したＮｉ^２＋アフィニティークロマトグラフィーにより、タンパク質を上清から精製した。Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してｒｈＦＨＲを濾過し、濃縮した。

【0131】

抗体生成
２５μｇの組換え型ヒトＨ因子関連タンパク質１（ＦＨＲ－１）と２５μｇのｒｈＦＨＲ－１を含むモンタニドをアジュバントとして４週間間隔でＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔内投与して免疫化することにより生成したモノクローナル抗体ＦＨＲ－１．３Ｂ４。４回目のブースター免疫化から３日後、脾臓細胞を骨髄腫細胞株ＳＰ２／０と融合させた。ハイブリドーマの上清中のＦＨＲ－１特異的抗体の存在をＥＬＩＳＡによって試験した。簡潔に述べると、マイクロタイタープレートをラット抗マウスカッパｍｏＡｂ（ＲＭ１９）でコーティングして、マウスＩｇＧ抗体を捕捉した。抗体の特異性をビオチン化ｒｈＦＨＲ－１によって決定した。簡潔に述べると、ビオチン化ｒｈＦＨＲ－１の結合を、０．１％（ｖ／ｖ）のストレプトアビジンＨＲＰコンジュゲートと共にＨＰＥ中で３０分間インキュベートすることによって決定した。０．００３％（ｖ／ｖ）のＨ_２Ｏ_２を含有するｐＨ５．５の０．１Ｍ酢酸ナトリウム中で１００μｇ／ｍＬの３，５，３’，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を使用して、ＥＬＩＳＡをさらに展開した。１００μＬのＨ_２ＳＯ_４を加えて基質の変換を停止し、Ｓｙｎｅｒｇｙ ２ Ｍｕｌｔｉ－Ｍｏｄｅプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ，ＵＳＡ）を用い、４５０ｎｍで吸光度を測定し、５４０ｎｍでの吸光度に補正した。ＥＬＩＳＡステップはすべて、１ウェル当たり１００μＬの最終体積で行った。

【0132】

ＣＤＲ配列をヒト生殖系列抗体のフレームワーク領域にグラフトすることによってＦＨＲ－１．３Ｂ４抗体をヒト化した。ヒト化の結果として抗体５が生成された。次いで、抗体５の特定のアミノ酸を変異させて、ＦＨに対する結合親和性を改善させた。抗体１、抗体２、抗体３、及び抗体４は、表１に開示されているように、ＦＨに対して最も高い親和性を呈した抗体であった。

【0133】

Ｈ因子に対する抗体の結合親和性
抗体１～４の結合親和性を決定するために、ＢｉａＣｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及びＣＭ５センサチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を製造元の説明に従って使用し、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験を行った。簡潔に述べると、プロテインＡまたはプロテインＧを結合させたチップで抗体１～９または抗ＦＨＲ－１．３Ｂ４を捕捉し、捕捉されたｍｏＡＢ上に完全長ＦＨを漸減濃度で流した。ＳＰＲ実験から得られた結合動態を表２に提示する。

【表2】

【0134】

表２に示すように、抗体１、抗体２、抗体３、及び抗体４は、ナノモルまたはナノモル以下の親和性でヒトＦＨに結合した。さらに、抗体１～４は、完全長ＦＨに対してＦＨＲ－１．３Ｂ４のものよりも高い結合親和性を有した。

【0135】

ｍＡｂのエピトープマッピング及び競合アッセイ
特定のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の結合部位をマッピングした。具体的には、様々なＣＣＰドメイン（ＣＣＰ１５～１８、ＣＣＰ１５～１９、ＣＣＰ１８～２０、及びＣＣＰ１９～２０）を含む組換え型ＦＨフラグメント及び完全長ヒトＦＨに対してｍＡｂの反応性を試験した。複数のＣＣＰドメイン（１５～１８、１５～１９、１８～２０または１９～２０）から構成された組換え型ヒトＦＨフラグメントを使用し、表１に開示されているもののようなｍＡｂのエピトープの位置を決定した。簡潔に述べると、ＲＭ－１９でコーティングしたマイクロタイタープレートでＦＨ．０７及びＦＨＲ－１．３Ｂ４を捕捉して、最適な結合立体構造を確実にした。次に、１００倍高い濃度の示された非標識組換え型ＦＨフラグメントと混合したビオチン化ＦＨをプレート上で１時間インキュベートした。ビオチン化ＦＨの結合を、０．０１％（ｖ／ｖ）のストレプトアビジン－ポリＨＲＰコンジュゲートと共にＨＰＥ中で３０分間インキュベートすることによって決定した。以前に報告されているようにＥＬＩＳＡをさらに展開した。ＦＨ．０７及びＦＨＲ－１．３Ｂ４は、ヒトＦＨのＣＣＰ１８に結合することが見出された。

【0136】

表１に開示されている抗体またはフラグメントを使用した競合アッセイを、アゴニスト抗ＦＨ抗体ＦＨ．０７を用いて行った。表１に開示されているヒト化抗ＦＨＲ－１ ｍＡｂがＦＨの結合をＦＨ．０７と競合するかどうかを決定するために、上記と同様の設定を使用した。簡潔に述べると、ｍＡｂをプレートに直接コーティングし、１０倍高い濃度の示されたｍＡｂの非存在下または存在下でのビオチン化ＦＨ（ＦＨ－ｂｔ）の結合を、以前に報告されているようにＥＬＩＳＡによって評価した。ＦＨＲ－１．３Ｂ４は、ＦＨ．０７と競合することが見出された。

【0137】

ＬＰＳにおけるＣ３沈着
抗体１～４がＦＨによる代替経路阻害に影響を与えるかどうかを調べるために、ＬＰＳにおけるＣ３沈着アッセイを行った。簡潔に述べると、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）に、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｏｓａ ＬＰＳ（４０μｇ／ｍＬ、Ｌ－６３８６ Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を含むＰＢＳを、室温で一晩コーティングした。ＬＰＳを使用して補体の代替経路を活性化した。プレートをＰＢＳ＋０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０、１０％（ｖ／ｖ）で洗浄した。正常ヒト血清（ＮＨＳ、最終濃度１０％（ｖ／ｖ））を、０．０５％（ｗ／ｖ）ゼラチン、５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１０ｍＭ ＥＧＴＡ、及び０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０を含有するベロナール緩衝液（ＶＢ；３ｍＭバルビタール、１．８ｍＭバルビタールナトリウム、１４５ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）中、示された濃度の抗ＦＨ／抗ＦＨＲ－１ ｍＡｂ（抗体１～４またはＦＨＲ－１．３Ｂ４）、アイソタイプ対照、または負の対照としてのａＩＬ６－８ ＡＢの存在下または非存在下でインキュベートした。Ｃ３ｂ沈着をビオチン化ｍＡｂ抗Ｃ３．１９（ＨＰＥ中０．５５μｇ／ｍＬ）で検出し、続いて０．０１％（ｖ／ｖ）のストレプトアビジン－ポリＨＲＰコンジュゲートと共にＨＰＥ中で３０分間インキュベートした。上記のようにＥＬＩＳＡを展開した。表３に抗体１～４及びＦＨＲ－１．３Ｂ４のＩＣ_５０値を記載する。表４に抗体１～４のＩＣ_５０値（２反復試験）を記載する。

【表3】

【表4】

【0138】

表３及び４に示すように、抗体１～４は、ＬＰＳにおけるＣ３ｂ沈着を阻害した。これにより、代替経路活性化に対するＦＨの阻害機能が抗体１、２、３、または４の添加によって強化されたことが示された。さらに、表３に示すように、抗体１～４は、ＬＰＳにおけるＣ３ｂ沈着の阻害において、より低いＩＣ_５０値によって示されるようにＦＨＲ－１．３Ｂ４よりも効果的であった。

【0139】

ＳＲＢＣ溶血アッセイ
Ｈ因子の機能に対する抗体１～４の影響を調べるために、Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｃｏｒｒａｌ ｅｔ ａｌ．（２００４）及びＷｏｕｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２００８）によって以前に概説されている溶血アッセイを行った。簡潔に述べると、２０μｇ／ｍｌの抗ＦＨ．０９（ＦＨに対する遮断抗体）を含有する事前希釈したヒト血清（２０％、ｖ／ｖ）を、示されたｍＡｂ（抗体１～４またはＦＨＲ－１．３Ｂ４）と共にプレインキュベートし、１対１の比でヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）と混合して、５ｍＭ ＭｇＣｌ_２及び１０ｍＭ ＥＧＴＡを含むＶＢ、またはブランクとして１０ｍＭ ＥＤＴＡを含むＶＢ中、１０％（ｖ／ｖ）血清及び１．０５＊１０^８細胞／ｍｌの最終濃度とし、続いて振盪しながら３７℃で７５分間インキュベートした。２０ｍＭ ＥＤＴＡを含む１００μｌの氷冷ＶＢを添加して溶解を停止させ、続いて遠心分離（２．５分、１，８００ＲＰＭ／４７１ ＲＣＦ、７℃）を行った。４１２ｎｍでの上清の吸光度として溶血を測定し、６９０ｎｍで測定したバックグラウンド吸光度に対して補正し、１００％溶解対照（０．６％（ｗ／ｖ）のサポニンと共にインキュベートしたＳＲＢＣ）に対するパーセンテージとして表した。負の対照として、補体活性化を防止するために１０ｍＭ ＥＤＴＡを補ったＶＢで希釈した血清と共にＳＲＢＣをインキュベートした。

【0140】

Ｇｒａｐｈｐａｄ ｐｒｉｓｍ ７．０４を使用して、表１に開示されているような様々な抗体を使用した複数の実験から溶血のＩＣ_５０を算出し、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ及びダネットの多重比較検定によって統計的比較を行った。表５に抗体１～４及びＦＨＲ－１．３Ｂ４のＩＣ_５０値を記載する。表６に抗体１～４のＩＣ_５０値（２反復試験）を記載する。

【表5】

【表6】

【0141】

表５及び６に示すように、抗体１～４はＳＲＢＣ溶解を阻害した。さらに、表６に示すように、抗体１～３は、ＳＲＢＣ溶解の阻害において、より低いＩＣ_５０値によって示されるようにＦＨＲ－１．３Ｂ４よりも効果的であった。

【0142】

抗ＦＨ抗体の存在下でのＣ３ｂに対するＨ因子の結合親和性
表１に開示されているような抗体１～４の存在下でのＣ３ｂに対するＦＨの結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈａｌｆｏｎｔ，ＵＫ）を使用した表面プラズモン共鳴によって決定した。具体的には、精製されたＣ３ｂ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、標準的なアミンカップリングの使用によりＣＭ５ Ｂｉａｃｏｒｅ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のフローセルに固定化した。残りのフローセルは参照面として使用し、タンパク質を添加せずにカップリング反応を行うことによって調製した。Ｃ３ｂとのカップリング後、２０００応答単位（ＲＵ）の応答が得られた。ＳＰＲ実験は、１０μｌ／分の流速を使用し、０．０１％（ｗ／ｖ）のＴｗｅｅｎ－２０（Ｍｅｒｃｋ）を補ったｐＨ７．４のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、Ｏｒｐｈｉ Ｆａｒｍａ）（ＰＢＳ－Ｔ）中、３７℃で行った。

【0143】

ｍｏＡｂによる架橋が干渉する可能性なしに抗体の効果を決定するために、ｍＡｂ（抗体１～４）の組換え生成されたＦａｂ’フラグメントを使用した。Ｆａｂ’フラグメントを血漿精製ＦＨ（ｐｄＦＨ）と混合した。異なる濃度（ＦＨ単独の場合は１０～０，０１９５３μＭ、ｍｏＡｂ Ｆａｂ’フラグメントと複合した場合は５～０，０１９５３μＭ）のＦＨを、１０μＭ（少なくとも２倍モル比過剰）の抗ＦＨＲ－１ ３Ｂ４ Ｆａｂ’フラグメントまたは抗体１～４のＦａｂ’フラグメントの非存在下または存在下で、チップ上に６０秒間注入した。また、ＦＨを添加せずに各Ｆａｂ’フラグメントを注入して、表面とＦａｂ’フラグメントの相互作用の有無を決定した。ｐｄＦＨの注入後、６０秒間の解離を行い、各サイクル間で１Ｍ ＮａＣｌ（Ｍｅｒｃｋ）を１回注入して表面を再生した。

【0144】

Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２（Ｂｉｏｌｏｇｉｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用してデータを分析し、平衡分析によって親和性を決定した。表７に抗体１～４の結合動態を列挙する。

【表7】

【0145】

表７に示すように、抗体１～４のＦａｂ’フラグメントの添加により、Ｃ３ｂコーティング表面での応答が増加し、抗体１～４がＣ３ｂに対するｐｄＦＨの結合を増進したことが示された。
本発明の実施形態
本発明の実施形態を以下の項にさらに記載する：
［項１］
Ｈ因子（ＦＨ）の補体制御タンパク質ドメイン１８（ＣＣＰ１８）に特異的に結合する、単離型、合成型、もしくは組換え型の抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、
－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）または配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＴＳ（配列番号２）または配列ＡＳＳ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）またはＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）の配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）または配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、前記抗体またはその抗原結合性フラグメント。
［項２］
－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＴＳ（配列番号２）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、上記項１に記載の抗体またはフラグメント。
［項３］
－ 配列ＳＳＶＴＹ（配列番号１）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＴＳ（配列番号２）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、上記項１に記載の抗体またはフラグメント。
［項４］
－ 配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＳＳ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＶＷＳＧＧＴＴ（配列番号６）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＹ（配列番号７）を有する重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、上記項１に記載の抗体またはフラグメント。
［項５］
－ 配列ＴＳＶＴＹ（配列番号１３）を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＡＳＳ（配列番号１４）を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、
－ 配列ＱＨＲＳＳＳＮＰＬＴ（配列番号３）を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、
－ 配列ＧＦＳＬＴＮＹＧ（配列番号５）を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
－ 配列ＩＷＳＧＧＴＴ（配列番号１０）を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
－ 配列ＡＲＮＦＧＮＹＡＭＤＦ（配列番号１１）を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、上記項１に記載の抗体またはフラグメント。
［項６］
前記抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２．５×１０ ^－８ Ｍ以下のＫ _Ｄ の結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０ ^－９ Ｍ以下のＫ _Ｄ の結合親和性を有するか、あるいは、前記抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して１．２５×１０ ^－８ Ｍ以下のＫ _Ｄ の結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．０４×１０ ^－９ Ｍ以下のＫ _Ｄ の結合親和性を有する、上記項１～５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項７］
前記抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して２．５×１０ ^－８ Ｍ以下のＫ _Ｄ の結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．１×１０ ^－９ Ｍ以下のＫ _Ｄ の結合親和性を有するか、あるいは、前記抗体またはフラグメントは、ＦＨに対して０．６×１０ ^－８ Ｍ以下のＫ _Ｄ の結合親和性及び／またはＣＣＰ１８～２０から成るＦＨフラグメントに対して０．６×１０ ^－１１ Ｍ以下のＫ _Ｄ の結合親和性を有する、上記項１～５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項８］
前記抗体またはフラグメントは、
－ １０％（ｖ／ｖ）の血清の存在下で、ｉｎ ｖｉｔｒｏのリポ多糖におけるＣ３沈着を、３８ｎＭ以下のＩＣ _５０ 値、例えば３０ｎＭ以下のＩＣ _５０ 値で阻害する、及び／または
－ １０％（ｖ／ｖ）の血清の存在下で、ｉｎ ｖｉｔｒｏの溶血活性を、１５０ｎＭ以下のＩＣ _５０ 値、例えば１３０ｎＭ以下のＩＣ _５０ 値で阻害する、及び／または
－ ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨのＫ _Ｄ を最大で２μＭまで減少させる（結合親和性を増加させる）、及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ３ｂに対するＦＨの結合親和性を少なくとも３倍増加させる、上記項１～７のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項９］
－ 配列番号４または１６に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列、
－ 配列番号８または１２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列
を含む、上記項１～８のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１０］
配列番号４に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列と、８に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列とを含む、上記項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１１］
配列番号４に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号１２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列とを含む、上記項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１２］
配列番号１６に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号８に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列とを含む、上記項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１３］
配列番号１６に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変軽鎖配列と、配列番号１２に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む可変重鎖配列とを含む、上記項１～９のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１４］
前記抗体またはフラグメントは、ＦＨ活性を増強し、場合により、前記ＦＨ活性は、代替補体活性化の阻害であり、さらに場合により、代替補体活性化の阻害は、
－ 溶血活性の阻害、
－ 補体成分３（Ｃ３）沈着の阻害、及び／または
－ Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ及び／またはＣ３ｄに対するＦＨの結合の増加
を含む、上記項１～１３のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１５］
前記抗体またはフラグメントは、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、免疫グロブリン重鎖定常領域及び免疫グロブリン軽鎖定常領域をさらに含む、上記項１～１４のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１６］
前記抗体またはフラグメントは、Ｆａｂフラグメントを含む、上記項１～１５のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１７］
前記抗体またはフラグメントは、モノクローナルである、上記項１～１６のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１８］
前記抗体またはフラグメントは、ヒト軽鎖及び重鎖定常領域を含む、上記項１～１７のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項１９］
前記抗体またはフラグメントは、ＰＥＧ化されている、上記項１～１８のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメント。
［項２０］
前記抗体またはフラグメントは、ＰＥＧ化されたＦａｂフラグメントである、上記項１９に記載の抗体またはフラグメント。
［項２１］
上記項１～２０のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメントをコードする核酸配列を含む、単離型、合成型、もしくは組換え型の核酸。
［項２２］
上記項２１に記載の核酸を含むベクター。
［項２３］
前記ベクターは、ＡＡＶベクターである、上記項２２に記載のベクター。
［項２４］
前記ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、及びＡＡＶ１２からなる群から選択される、上記項２３に記載のベクター。
［項２５］
上記項２１に記載の核酸、または上記項２２～２４のいずれか１項に記載のベクターを含む、組換え型細胞。
［項２６］
上記項１～２０のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、上記項２１に記載の核酸、上記項２２～２４のいずれか１項に記載のベクター、または上記項２５に記載の組換え型細胞、ならびに薬学的に許容されるキャリア、希釈剤、及び／または賦形剤を含む、医薬組成物。
［項２７］
療法において使用するための、上記項１～２０のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、上記項２１に記載の核酸、上記項２２～２４のいずれか１項に記載のベクター、上記項２５に記載の組換え型細胞、または上記項２６に記載の医薬組成物。
［項２８］
代替補体活性化を阻害するのに使用するための、上記項１～２０のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、上記項２１に記載の核酸、上記項２２～２４のいずれか１項に記載のベクター、上記項２５に記載の組換え型細胞、または上記項２６に記載の医薬組成物。
［項２９］
代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止において使用するための、上記項１～２０のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、上記項２１に記載の核酸、上記項２２～２４のいずれか１項に記載のベクター、上記項２５に記載の組換え型細胞、または上記項２６に記載の医薬組成物。
［項３０］
前記障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、及びＩｇＡ腎症からなる群から選択される、上記項２９に記載の使用のための抗体もしくはフラグメント、核酸、組換え型細胞、または医薬組成物。
［項３１］
代替経路補体活性化に関連する障害の治療、緩和、または防止のための医薬を調製するための、上記項１～２０のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、上記項２１に記載の核酸、上記項２２～２４のいずれか１項に記載のベクター、上記項２５に記載の組換え型細胞、または上記項２６に記載の医薬組成物の使用。
［項３２］
前記障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、及びＩｇＡ腎症からなる群から選択される、上記項３１に記載の使用。
［項３３］
代替経路補体活性化に関連する障害を治療、緩和、または防止する方法であって、それを必要とする対象に、上記項１～２０のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、上記項２１に記載の核酸、上記項２２～２４のいずれか１項に記載のベクター、上記項２５に記載の組換え型細胞、または上記項２６に記載の医薬組成物を治療有効量で投与することを含む前記方法。
［項３４］
前記障害は、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、及びＩｇＡ腎症からなる群から選択される、上記項３３に記載の方法。
［項３５］
上記項１～２０のいずれか１項に記載の抗体もしくはフラグメント、上記項２１に記載の核酸、上記項２２～２４のいずれか１項に記載のベクター、上記項２５に記載の組換え型細胞、または上記項２６に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、代替補体活性化を阻害する方法。
［項３６］
抗体またはフラグメントを生成する方法であって、上記項２１に記載の核酸または上記項２２～２４のいずれか１項に記載のベクターを細胞に供給することと、前記核酸またはベクターに含まれる前記核酸配列を前記細胞に翻訳させることにより、上記項１～２０のいずれか１項に記載の抗体またはフラグメントを生成することとを含む前記方法。
［項３７］
前記抗体またはフラグメントを採取、精製、及び／または単離することをさらに含む、上記項３６に記載の方法。
参考文献
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【0146】

参照による組み込み
本明細書に記載されるすべての刊行物、特許、及び特許出願は、各個別の刊行物、特許、または特許出願が参照により組み込まれることが明確かつ個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【0147】

均等物
本発明は、その精神または本質的特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化され得る。したがって、前述の実施形態は、本明細書に記載される本発明を限定するものではなく、あらゆる点において例示的であるとみなされるべきである。したがって、本発明の範囲は、前述の説明によってではなく添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の意味及び均等の範囲内に入るすべての変更が、その中に含まれることが意図される。

【配列表】

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