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特許7634531ｇＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物、薬学的に許容できる塩、および使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-02-13
(45)【発行日】2025-02-21
(54)【発明の名称】ｇＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物、薬学的に許容できる塩、および使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/605 20060101AFI20250214BHJP
C12N 15/16 20060101ALI20250214BHJP
A61K 38/22 20060101ALI20250214BHJP
A61K 38/26 20060101ALI20250214BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20250214BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20250214BHJP
C07K 1/06 20060101ALI20250214BHJP
C12P 21/02 20060101ALN20250214BHJP
【ＦＩ】
C07K14/605 ZNA
C12N15/16
A61K38/22
A61K38/26
A61P3/10
A61P3/04
C07K1/06
C12P21/02 C
【請求項の数】
8
(21)【出願番号】P 2022521629
(86)(22)【出願日】2019-10-12
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-01-11
(86)【国際出願番号】 CN2019110848
(87)【国際公開番号】W WO2021068251
(87)【国際公開日】2021-04-15
【審査請求日】2022-04-07
(31)【優先権主張番号】201910952193.3
(32)【優先日】2019-10-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】522142660
【氏名又は名称】江蘇諾泰澳賽諾生物製薬股▲ふん▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＳＩＮＯＰＥＰ－ＡＬＬＳＩＮＯ ＢＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．２８， Ｌｉｎｐｕ Ｒｏａｄ， Ｅｃｏｎｏｍｉｃ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ， Ｊｉａｎｇｓｕ ２２２０００ Ｃｈｉｎａ
(73)【特許権者】
【識別番号】522142671
【氏名又は名称】杭州諾泰澳賽諾医薬技術開発有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＨＡＮＧＺＨＯＵ ＳＩＮＯＰＥＰ－ＡＬＬＳＩＮＯ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ ＣＯ．， ＬＴＤ
【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ １２０１－１２０３ Ｂｌｄｇ Ｅ， １３７８ Ｗｅｓｔ Ｗｅｎｙｉｘｉ Ｒｏａｄ， Ｙｕｈａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ Ｈａｎｇｚｈｏｕ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ ３１１１００ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100205936
【弁理士】
【氏名又は名称】崔 海龍
(72)【発明者】
【氏名】趙 呈青
(72)【発明者】
【氏名】谷 海涛
(72)【発明者】
【氏名】施 国強
(72)【発明者】
【氏名】姜 建軍
(72)【発明者】
【氏名】王 蔡典
【審査官】上村 直子
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１７－５０７１２４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１１－５３０５０９（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１７－５０３４７４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５００２７８（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １４／００－１９／００
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
アミノ酸配列は、（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ１ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
から選択され、
式中、
【化4】
【請求項2】
以下のステップ（１）、（２）を含む請求項１に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の製造方法であって、（１）樹脂を取り、活性化させた後、アミノ酸を逐一連結させることでペプチド樹脂が得られ、
（２）ペプチド樹脂を取り、側鎖を結合させ、分解し、精製することで側鎖保護されたポリペプチドが得られることを特徴とする、製造方法。
【請求項3】
ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物は、請求項１に記載のポリペプチド化合物であり、このポリペプチド化合物のＣ末端アミノ酸は、Ｃ末端第一級アミドまたはその薬学的に許容できる塩としてアミド化されることを特徴とする、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩。
【請求項4】
前記塩は、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物と、
塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、ピロ硫酸、リン酸、硝酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ギ酸、酢酸、アセト酢酸、ピルビン酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、カプロン酸、ヘプタン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、安息香酸、サリチル酸、２－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、樟脳酸、桂皮酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、３－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、パモ酸、ペクチン酸、過硫酸、３－フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、イタコン酸、スルファミン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ドデシル硫酸、２－ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、脂肪酸、アルギン酸、マレイン酸、フマル酸、Ｄ－グルコン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、スルホサリチル酸、ヘミ硫酸およびチオシアン酸塩のうちの１種と；
から形成される塩であることを特徴とする、請求項３に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩。
【請求項5】
請求項１に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物を用いて製造される医薬品であって、前記医薬品は、ＧＬＰ－１アゴニストポリペプチド化合物を有効成分とし、剤形が錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ、トローチ剤、吸入剤、噴霧剤、注射剤、膜剤、貼付剤、散剤、顆粒剤、ブロック剤、乳剤、坐剤および配合剤のいずれか１種の製剤であることを特徴とする、医薬品。
【請求項6】
ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の医薬組成物であって、前記医薬組成物は、請求項１に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物を有効原料とし、或いは請求項３または４に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩を有効原料とし、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤をさらに含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項7】
請求項１に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物または請求項２に記載の製造方法により製造されるＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の使用であって、前記使用は、糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品の製造または痩せ薬の製造における、有効原料とするＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の使用であることを特徴とする、使用。
【請求項8】
請求項３または４に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩、請求項５に記載の医薬品、或いは６に記載の医薬組成物の使用であって、前記使用は、糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品の製造または痩せ薬の製造における、有効原料とするポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩、医薬品または医薬組成物の使用であることを特徴とする、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ポリペプチド化合物分野に関し、具体的には、デュアルインクレチンペプチド類似化合物であるポリペプチド化合物に関し、ヒトグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（ＧＩＰ）およびグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）の受容体を活性化させ、２型糖尿病および肥満症の治療に適用できる。本発明は、このポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩、ポリペプチド医薬組成物、医薬品、製造方法およびその使用にも関する。
【背景技術】
【0002】
メタボリックシンドロームの病因は、タンパク質、脂肪、炭水化物などのさまざまな物質の異常な代謝である。栄養過剰と身体活動の低下は、肥満や糖尿病などの肥満関連疾患を引き起こす可能性がある。近年、２型糖尿病と脂質異常症の発生率が増加している。２型糖尿病は糖尿病の最も一般的な形態であり、すべての糖尿病の約９０％を占めている。２型糖尿病は、インスリン抵抗性によって引き起こされる高血糖値を特徴としている。現在の２型糖尿病の標準治療には、食事療法、運動、および経口や注射可能な血糖降下薬による治療が含まれる。しかしながら、２型糖尿病の多くの患者はまだ血糖値が十分にコントロールされていない。
【0003】
ＧＩＰは４２アミノ酸の胃腸調節ペプチドであり、膵臓のβ細胞を刺激してインスリンを分泌し、グルコースの存在下で膵臓のβ細胞を保護することにより、グルコースの体内バランスにおいて生理学的役割を果たしている。ＧＬＰ－１は、３７アミノ酸のペプチドであり、インスリン分泌を刺激し、膵臓β細胞を保護し、グルカゴン分泌、胃内容排出、および食物摂取を阻害することで体重を減少させる。ＧＩＰおよびｇＬＰ－１は、インクレチンと呼ばれている。インクレチン素受容体は、シグナル伝達がグルコースの体内バランスに対して重要な役割を果たしている。正常の生理学では、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１は食後に腸から分泌され、これらのインクレチンは満腹、インスリン分泌、栄養素処理などの食物に対する生理学的反応を増強させる。２型糖尿病患者のインクレチン反応は低下する。現在市販されているインクレチンアナログまたはジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）阻害剤は、単一の作用メカニズムのみにより血糖をコントロールしている。二重作用メカニズムを有する２型糖尿病化合物を使用することにより、血糖降下活性および体重減少効果の両方に優れたポリペプチド化合物が得られる。
【0004】
ＧＬＰ－１アナログの投与は、悪心や嘔吐などの副作用によって制限され、投与によって血糖コントロールや体重減少に十分な効果が得られないことがよくある。単独なＧＩＰは２型糖尿病患者において非常に適度な血糖降下能力を有する。天然ＧＩＰおよびＧＬＰ－１はいずれも遍在するプロテアーゼＤＰＰ ＩＶによって急速に不活性化されるため、短期間の代謝制御にのみ使用できる。ＤＰＰ ＩＶはエピペプチダーゼ類タンパク質加水分解酵素に属する。配列に非天然アミノ酸を導入することにより任意のペプチドのタンパク質分解安定性を高めることができる。従って、非天然アミノ酸の使用は、ＤＰＰ ＩＶタンパク質による分解および他の形態の分解に対するペプチドの安定性を向上できる。
【0005】
本発明の一部として、非天然アミノ酸は、ＧＩＰとＧＬＰ－１のアゴニスト活性のバランスに対してポジティブな影響を与えている。例えば、脂肪酸は、アルブミン結合モチーフにより半減期を延長させることでペプチドの薬物動態を改善することができる。脂肪酸を使用してペプチドの半減期を改善できるが、本出願人は、本発明の一部として脂肪酸鎖の長さ、組成、位置およびペプチドと脂肪酸鎖との間のリンカーが意外にＧＩＰおよびＧＬＰ－１アゴニスト活性のバランスに影響があり、ペプチドの半減期を延長できることを発見した。いくつかのＧＩＰアナログは、ＷＯ２０１３／１６４４８３、ＷＯ２０１４／１９２２８４およびＷＯ２０１１／１１９６５７などの特許文献においてＧＩＰおよびＧＬＰ－１活性を示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
本発明の目的は、従来技術の不足に対して、二重作用メカニズムを利用し、血糖降下活性および体重減少効果を有するＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物を提供することである。
【0007】
本発明の別の目的は、前記ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の製造方法を提供することである。
【0008】
本発明の別の目的は、前記ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩を提供することである。
【0009】
本発明の別の目的は、前記ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の医薬組成物を提供することである。
【0010】
本発明の別の目的は、前記ＧＩＰ和ＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の医薬品を提供することである。
【0011】
本発明の別の目的は、前記ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物、其薬学的に許容できる塩、その医薬組成物および医薬品の使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明の目的は、以下の技術的手段により実現される。
本発明は、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物を開示する。このＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物のアミノ酸配列は、
Ｙ Ｘａａ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩ Ｘａａ２ＬＤＫＩＡＱ Ｘａａ３ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳであり、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端第一級アミドとしてアミド化されており、
Ｘａａ１は、
から選択され、
Ｘａａ２は、
から選択され、
Ｘａａ１とＸａａ２は同じ出会っても異なっていてもよく、
Ｘａａ３は
から選択され、
ｎは５－２５の自然数である。
本発明は、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物を開示する。このＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物のアミノ酸配列は、
Ｙ Ｘａａ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩ Ｘａａ２ＬＤＫＩＡＱ Ｘａａ３ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳであり、
Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端第一級アミドとしてアミド化されており、
Ｘａａ１は、
【化1】
Ｘａａ２は、
【化2】
Ｘａａ１とＸａａ２は同じ出会っても異なっていてもよく、
Ｘａａ３は
【化3】
ｎは５－２５の自然数である。
【0013】
本発明に記載のポリペプチド医薬組成物において、前記ｎは自然数１６または１８である。
【0014】
本発明に記載のポリペプチド医薬組成物において、ポリペプチドアミノ酸配列は、好ましくは、
（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
ＹＶＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＶＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ１ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳ ＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０
ＹＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ１ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２
ＹＶＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＶＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ１ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９
ＹＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（２０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（２１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１
ＹＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ１ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
であり、
式中、
である。
（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
ＹＶＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＶＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ１ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳ ＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０
ＹＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ１ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２
ＹＶＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＶＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ１ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（１９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９
ＹＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（２０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
（２１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１
ＹＸ２ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ１ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
であり、
式中、
【化4】
【0015】
本発明は、以下のステップ（１）、（２）を含むＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の製造方法をさらに開示する。
（１）樹脂を取り、活性化させた後、アミノ酸を逐一連結させることでペプチド樹脂が得られる。
（２）ペプチド樹脂を取り、側鎖を結合させ、分解し、精製することで側鎖保護されたポリペプチドが得られる。
（１）樹脂を取り、活性化させた後、アミノ酸を逐一連結させることでペプチド樹脂が得られる。
（２）ペプチド樹脂を取り、側鎖を結合させ、分解し、精製することで側鎖保護されたポリペプチドが得られる。
【0016】
本発明は、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩をさらに開示する。前記ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物は、上述したいずれかのポリペプチド化合物であり、かつこのポリペプチド化合物のＣ末端アミノ酸は、Ｃ末端第一級アミドまたはその薬学的に許容できる塩としてアミド化されている。
【0017】
本発明に記載のＧＩＰ和ＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩において、好ましくは、前記塩は、
ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物と、
塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、ピロ硫酸、リン酸、硝酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ギ酸、酢酸、アセト酢酸、ピルビン酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、カプロン酸、ヘプタン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、安息香酸、サリチル酸、２－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、樟脳酸、桂皮酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、３－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、パモ酸、ペクチン酸、過硫酸、３－フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、イタコン酸、スルファミン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ドデシル硫酸、２－ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、脂肪酸、アルギン酸、マレイン酸、フマル酸、Ｄ－グルコン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、スルホサリチル酸、ヘミ硫酸およびチオシアン酸塩のうちの１種と、
から形成される塩である。
ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物と、
塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、ピロ硫酸、リン酸、硝酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、ギ酸、酢酸、アセト酢酸、ピルビン酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、カプロン酸、ヘプタン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸、安息香酸、サリチル酸、２－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、樟脳酸、桂皮酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、３－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、パモ酸、ペクチン酸、過硫酸、３－フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、イタコン酸、スルファミン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ドデシル硫酸、２－ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、脂肪酸、アルギン酸、マレイン酸、フマル酸、Ｄ－グルコン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、スルホサリチル酸、ヘミ硫酸およびチオシアン酸塩のうちの１種と、
から形成される塩である。
【0018】
本発明は、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の医薬組成物をさらに開示する。この医薬組成物は、上述したいずれかのＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物を有効原料とし、或いは上述したいずれかのＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩を有効原料とし、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤をさらに含む。
【0019】
本発明に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の薬学的に許容できる塩は、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物および上述化合物を原料とし、従来技術に開示の通常方法に従って製造される。
【0020】
本発明は、上述したいずれかのＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物を用いて製造される医薬品をさらに開示する。前記医薬品は、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ、トローチ剤、吸入剤、噴霧剤、注射剤、膜剤、貼付剤、散剤、顆粒剤、ブロック剤、乳剤、坐剤および配合剤である。医薬品は、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物および薬学的に許容できる医薬品添加剤、キャリアまたは希釈剤から構成される。本発明に記載の医薬品は、従来技術における通常方法に従って製造できる。
【0021】
本発明に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の使用としては、有効原料として糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品または痩せ薬の製造に使用できる。
【0022】
本発明に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチドの薬学的に許容できる使用は、糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品の製造または痩せ薬の製造における有効原料とする使用である。
【0023】
本発明に記載のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物の医薬組成物、医薬品は、糖尿病を治療もしくは予防するための医薬品または痩せ薬として適用できる。
【0024】
本明細書に使用される略語を下に示す。
＜略 語＞ ＜意 味＞
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ Ｎ－メチルピロリドン
ＨＢＴＵ ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスファート
ＨＯＢｔ １－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＤＩＥＡ／ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン
Ｆｍｏｃ Ｎ－９－フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＥＤＴ エタンジチオール
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ｔＢｕ ｔｅｒｔ－ブチル
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
Ａｌｌｏｃ アリルオキシカルボニル
＜略 語＞ ＜意 味＞
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ Ｎ－メチルピロリドン
ＨＢＴＵ ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウ
ロニウムヘキサフルオロホスファート
ＨＯＢｔ １－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＤＩＥＡ／ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン
Ｆｍｏｃ Ｎ－９－フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＥＤＴ エタンジチオール
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ｔＢｕ ｔｅｒｔ－ブチル
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
Ａｌｌｏｃ アリルオキシカルボニル
【発明の効果】
【0025】
従来のポリペプチド化合物および製造技術に比べ、本発明は、以下の有益な効果を有する。
本発明は、新規のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物を開示する。本発明のポリペプチド化合物は、血糖降下、体重減少の効果を有し、有効原料として糖尿病を治療または予防するための医薬品または痩せ薬の製造に適用できる。動物エネルギ消耗データにより、本発明のポリペプチド化合物は、患者の体重を減らす作用を有するとともに、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１受容体に対してバランスの共アゴニスト活性を有し、グルカゴンおよびＧＬＰ－２受容体に対して選択性を有し、免疫原性が低い特性および週に１回投与可能な薬物動態（ＰＫ）特徴を有し、糖尿病、肥満の治療薬の有効成分として適用される。
本発明は、新規のＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物を開示する。本発明のポリペプチド化合物は、血糖降下、体重減少の効果を有し、有効原料として糖尿病を治療または予防するための医薬品または痩せ薬の製造に適用できる。動物エネルギ消耗データにより、本発明のポリペプチド化合物は、患者の体重を減らす作用を有するとともに、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１受容体に対してバランスの共アゴニスト活性を有し、グルカゴンおよびＧＬＰ－２受容体に対して選択性を有し、免疫原性が低い特性および週に１回投与可能な薬物動態（ＰＫ）特徴を有し、糖尿病、肥満の治療薬の有効成分として適用される。
【0026】
本発明の製造方法により製造されたＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物は、血糖降下および体重増加抑制の活性が高く、効果持続時間が長く、収率が高く、合成周期が短く、粗製品の精製が容易で、生産コストが低く、産業の自動化生産が容易である。
【図面の簡単な説明】
【0027】
【図1】実験における各試験薬の単回投与の、ｏｂ／ｏｂマウスのランダム血糖値およびＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕに対する影響（▲Ｘ▼±ｓ，ｎ＝７）（▲Ｘ▼は、Ｘ文字の上に－が付く文字を指す、以下同じ）を示す図である。
【図2】実験における各試験薬の単回投与のｏｂ／ｏｂマウスのランダム血糖値およびＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕに対する影響（▲Ｘ▼±ｓ，ｎ＝７）を示す図である。
【図3】実験における各試験薬の単回投与の、ｏｂ／ｏｂマウスＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕに対する影響（▲Ｘ▼±ｓ，ｎ＝７）を示す図である。図におけるデータはＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕの低下率である。
【0028】
【発明を実施するための形態】
【0029】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、これらの実施例は本発明を制限するものではない。
【0030】
（実施例１：配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ）１のポリペプチド化合物の合成）
ＹＶＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＶＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
１．ペプチド鎖の合成
１．１ 樹脂の膨潤
Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ Ｒｅｓｉｎ（置換度０．３５ｍｍｏｌ／ｇ）を１０ｇ秤量し、１００ｍＬのＤＣＭで３０ｍｉｎ膨潤した後、吸引濾過してＤＣＭを除去し、さらに１００ｍＬのＤＭＦで３０ｍｉｎ膨潤し、それぞれ１００ｍＬのＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄した。
ＹＶＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＶＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
１．ペプチド鎖の合成
１．１ 樹脂の膨潤
Ｆｍｏｃ－Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ Ｒｅｓｉｎ（置換度０．３５ｍｍｏｌ／ｇ）を１０ｇ秤量し、１００ｍＬのＤＣＭで３０ｍｉｎ膨潤した後、吸引濾過してＤＣＭを除去し、さらに１００ｍＬのＤＭＦで３０ｍｉｎ膨潤し、それぞれ１００ｍＬのＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄した。
【0031】
１．２ Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＡＭ Ｒｅｓｉｎの合成
Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ（８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１６ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１６ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＤＭＦに溶解し、得られた溶液を前のステップで得られた樹脂に加えて２時間反応させ、反応終了後、濾過して反応液を除去し、それぞれ１００ｍＬのＤＣＭおよび１００ｍＬのＤＭＦを用いて樹脂を３回洗浄した。
Ｆｍｏｃ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ（８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１６ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（１６ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＤＭＦに溶解し、得られた溶液を前のステップで得られた樹脂に加えて２時間反応させ、反応終了後、濾過して反応液を除去し、それぞれ１００ｍＬのＤＣＭおよび１００ｍＬのＤＭＦを用いて樹脂を３回洗浄した。
【0032】
１．３ Ｆｍｏｃ保護基の除去
洗浄後の樹脂に０．１ＭのＨＯＢｔを含む２５％ピペリジン／ＤＭＦ（Ｖ／Ｖ）溶液を加えてＦｍｏｃを除去し、反応終了後、それぞれ１００ｍＬのＤＣＭおよび１００ｍＬのＤＭＦを用いて樹脂を３回洗浄した。
洗浄後の樹脂に０．１ＭのＨＯＢｔを含む２５％ピペリジン／ＤＭＦ（Ｖ／Ｖ）溶液を加えてＦｍｏｃを除去し、反応終了後、それぞれ１００ｍＬのＤＣＭおよび１００ｍＬのＤＭＦを用いて樹脂を３回洗浄した。
【0033】
１．４ ペプチド鎖の延長
配列に従って、ペプチド鎖の合成が終了してペプチド樹脂が得られるまで、上記の脱保護および連結のステップを繰り返して順に対応するアミノ酸をつけた。
ここで、第２０位Ｋは、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ｉＶｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）－ＯＨまたはＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨの保護戦略を採用することができる。本実施例ではＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）－ＯＨの保護戦略を採用した。
配列に従って、ペプチド鎖の合成が終了してペプチド樹脂が得られるまで、上記の脱保護および連結のステップを繰り返して順に対応するアミノ酸をつけた。
ここで、第２０位Ｋは、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ｉＶｄｄｅ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）－ＯＨまたはＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨの保護戦略を採用することができる。本実施例ではＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）－ＯＨの保護戦略を採用した。
【0034】
１．５ 側鎖の結合
得られたペプチド樹脂を反応フラスコに入れ、ＰｈＳｉＨ３を除去剤としてＰｄ（ＰＰｈ３）４を用いてＡｌｌｏｃ保護基を除去した。Ｆｍｏｃ／ｔ－Ｂｕの戦略により２０位Ｌｙｓ側鎖を合成し、またはＯｃｔ（ＯｔＢｕ）－γ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ－Ｏｓｕ断片を直接結合させ、完全保護ペプチド樹脂を得た。
得られたペプチド樹脂を反応フラスコに入れ、ＰｈＳｉＨ３を除去剤としてＰｄ（ＰＰｈ３）４を用いてＡｌｌｏｃ保護基を除去した。Ｆｍｏｃ／ｔ－Ｂｕの戦略により２０位Ｌｙｓ側鎖を合成し、またはＯｃｔ（ＯｔＢｕ）－γ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ－Ｏｓｕ断片を直接結合させ、完全保護ペプチド樹脂を得た。
【0035】
１．６ ペプチド樹脂の分解
トリフルオロ酢酸を秤量して反応器に入れ、－１０～０℃に冷却し、トリイソプロピルシラン、１，２－エタンジチオールおよび精製水を加え、撹拌して均一に混合した。ペプチド樹脂をゆっくりと加え、２０～３０℃に昇温し、１１５～１２５ｍｉｎ開裂反応させた。反応終了後、濾過して樹脂を除去し、除去した樹脂をＭ×８×２０％ｍｌのＴＦＡで洗浄し、濾液および洗浄液を全てＭ×８×１．２×４ｍｌのエーテルに移し、５～１０ｍｉｎ撹拌し、１５ｍｉｎ以上静置して沈降させた。沈降懸濁液を遠心分離機に入れ、遠心分離し、固体を収集した。エーテルで固体を６回（毎回５Ｌ以上）洗浄した。固体を２０～３５℃で６～１０ｈ真空乾燥し、粗ペプチドを得た。
トリフルオロ酢酸を秤量して反応器に入れ、－１０～０℃に冷却し、トリイソプロピルシラン、１，２－エタンジチオールおよび精製水を加え、撹拌して均一に混合した。ペプチド樹脂をゆっくりと加え、２０～３０℃に昇温し、１１５～１２５ｍｉｎ開裂反応させた。反応終了後、濾過して樹脂を除去し、除去した樹脂をＭ×８×２０％ｍｌのＴＦＡで洗浄し、濾液および洗浄液を全てＭ×８×１．２×４ｍｌのエーテルに移し、５～１０ｍｉｎ撹拌し、１５ｍｉｎ以上静置して沈降させた。沈降懸濁液を遠心分離機に入れ、遠心分離し、固体を収集した。エーテルで固体を６回（毎回５Ｌ以上）洗浄した。固体を２０～３５℃で６～１０ｈ真空乾燥し、粗ペプチドを得た。
【0036】
１．７ 粗ペプチドの精製
分取液体クロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィー条件は、Ｃ１８カラム（１００ｍｍ×２５０ｍｍ，１０μｍ）；移動相Ａ：０．１％のＴＦＡ／水（Ｖ／Ｖ）、移動相Ｂ：０．１％のＴＦＡ／アセトニトリル（Ｖ／Ｖ）；移動相グラジエント：移動相Ｂ２０％～６０％、６０ｍｉｎ；流速：２００ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長：２１４ｎｍであった。純度が９８．０％超えた留分を収集し、回転蒸発した後、凍結乾燥して１．３６ｇのサンプルを得た。
分取液体クロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィー条件は、Ｃ１８カラム（１００ｍｍ×２５０ｍｍ，１０μｍ）；移動相Ａ：０．１％のＴＦＡ／水（Ｖ／Ｖ）、移動相Ｂ：０．１％のＴＦＡ／アセトニトリル（Ｖ／Ｖ）；移動相グラジエント：移動相Ｂ２０％～６０％、６０ｍｉｎ；流速：２００ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長：２１４ｎｍであった。純度が９８．０％超えた留分を収集し、回転蒸発した後、凍結乾燥して１．３６ｇのサンプルを得た。
【0037】
（実施例２：配列番号２ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．４５ｇ得た。
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【化5】
【0038】
（実施例３：配列番号３ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．５１ｇ得た。
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【化6】
【0039】
（実施例４：配列番号４ポリペプチド化合物の合成）
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．１８ｇ得た。
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．１８ｇ得た。
【0040】
（実施例５：配列番号５ポリペプチド化合物の合成）
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．２２ｇ得た。
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．２２ｇ得た。
【0041】
（実施例６：配列番号６ポリペプチド化合物の合成）
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．９７ｇ得た。
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．９７ｇ得た。
【0042】
（実施例７：配列番号７ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ２＝Ａｉｂ
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．５５ｇ得た。
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【化7】
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．５５ｇ得た。
【0043】
（実施例８：配列番号８ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ１＝Ａｉｂ
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．０１ｇ得た。
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ１＝Ａｉｂ
【化8】
【0044】
（実施例９：配列番号９ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ２＝Ａｉｂ
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．６４ｇ得た。
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【化9】
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．６４ｇ得た。
【0045】
（実施例１０：配列番号１０ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ１＝Ａｉｂ
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．８１ｇ得た。
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（ＨＯＯＣ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ－γ－Ｇｌｕ－ＡＥＥＡ－ＡＥＥＡ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ１＝Ａｉｂ
【化10】
【0046】
（実施例１１：配列番号１１ポリペプチド化合物の合成）
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．８４ｇ得た。
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．８４ｇ得た。
【0047】
（実施例１２：配列番号１２ポリペプチド化合物の合成）
ＹＶＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＶＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．１２ｇ得た。
ＹＶＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＶＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．１２ｇ得た。
【0048】
（実施例１３：配列番号１３ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．０７ｇ得た。
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【化11】
【0049】
（実施例１４：配列番号１４ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．８９ｇ得た。
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【化12】
【0050】
（実施例１５：配列番号１５ポリペプチド化合物の合成）
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．８１ｇ得た。
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．８１ｇ得た。
【0051】
（実施例１６：配列番号１６ポリペプチド化合物の合成）
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．７１ｇ得た。
ＹＡＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡｉｂＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．７１ｇ得た。
【0052】
（実施例１７：配列番号１７ポリペプチド化合物の合成）
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．５３ｇ得た。
ＹＡｉｂＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＡＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．５３ｇ得た。
【0053】
（実施例１８：配列番号１８ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ２＝Ａｉｂ
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．２５ｇ得た。
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【化13】
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．２５ｇ得た。
【0054】
（実施例１９：配列番号１９ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ１＝Ａｉｂ
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を０．９３ｇ得た。
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ１＝Ａｉｂ
【化14】
【0055】
（実施例２０：配列番号２０ポリペプチド化合物の合成）
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ２＝Ａｉｂ
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を０．９６ｇ得た。
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【化15】
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を０．９６ｇ得た。
【0056】
(実施例２１：配列番号１５ポリペプチド化合物の合成)
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ１＝Ａｉｂ
合成方法は実施例１と同様であった。収集した溶液を凍結乾燥して精製品を１．４７ｇ得た。
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫ（γ－Ｇｌｕ－Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ）ＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｘ１＝Ａｉｂ
【化16】
【0057】
(実施例２２)
以下、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物（「ポリペプチド化合物」と略す）に関する薬理学的実験方法および結果を示す。
１、 ポリペプチド化合物のＧＬＰ－１およびＧＩＰ受容体アゴニスト活性
ＨＥＫ２９３細胞は、ＧＬＰ－１ＲまたはＧＩＰＲをコードするｃＤＮＡをコトランスフェクションする。化合物の測定試験において、試験の２時間前に、細胞を９６ウェルプレートに接種し、ポリペプチド化合物をＤＭＳＯで溶解し、０．１％ウシ血清アルブミンを含む培地で異なる倍数希釈し、コトランスフェクションされた細胞に加えた。細胞を２０ｍｉｎインキュベートした後、Ｃｉｓｂｏ社のＥＬＩＳＡキットを用い、マイクロプレートリーダーにより蛍光強度を測定し、標準曲線を作成し、蛍光強度を対応するｃＡＭＰ数値に変換し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０ソフトウェアの非線形回帰により化合物のＥＣ５０数値を計算した。
以下、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニストポリペプチド化合物（「ポリペプチド化合物」と略す）に関する薬理学的実験方法および結果を示す。
１、 ポリペプチド化合物のＧＬＰ－１およびＧＩＰ受容体アゴニスト活性
ＨＥＫ２９３細胞は、ＧＬＰ－１ＲまたはＧＩＰＲをコードするｃＤＮＡをコトランスフェクションする。化合物の測定試験において、試験の２時間前に、細胞を９６ウェルプレートに接種し、ポリペプチド化合物をＤＭＳＯで溶解し、０．１％ウシ血清アルブミンを含む培地で異なる倍数希釈し、コトランスフェクションされた細胞に加えた。細胞を２０ｍｉｎインキュベートした後、Ｃｉｓｂｏ社のＥＬＩＳＡキットを用い、マイクロプレートリーダーにより蛍光強度を測定し、標準曲線を作成し、蛍光強度を対応するｃＡＭＰ数値に変換し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０ソフトウェアの非線形回帰により化合物のＥＣ５０数値を計算した。
【0058】
【表1】
Semaglutide：セマグルチド
【0059】
表１に示すように、全てのポリペプチド化合物は、ＧＬＰ－１Ｒに対して高いアゴニスト活性を保持するとともに、ＧＩＰＲに対してかなり高いアゴニスト活性を保持し、修正された非天然アミノ酸および側鎖基はアゴニスト活性に対して大きな影響を与えなかった。
【0060】
２、 ポリペプチド化合物の血糖降下実験
雄ｏｂ／ｏｂマウスを離乳させた後、１匹／１ケージで飼育し、高脂肪飼料を投与し、６－７週齢後、血糖値を測定し、ランダム体重、ランダム血糖値および空腹血糖値によってモデル対照群、ポリペプチド化合物群（９つの化合物を選択する）、陽性対照リラグルチド（リラグルチド）群および陽性対照セマグルチド（Ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ）群に分けた。各試験薬群および陽性対照群マウスに対して、それぞれ異なる用量の各試験薬または陽性薬物リラグルチドおよびセマグルチドを単回皮下注射し、モデル対照群マウスに対してＰＢＳ緩衝液を単回皮下注射し、各群のマウスに対して投与前（０時間）および投与後の２、４、６、１０、２４時間目にランダム血糖値を測定し、その後、各群のマウスの血糖状況に応じてランダム血糖値の測定時間を調整して投与後の３４、４８、５８または７２時間目に延長した。また、各群のマウスの投与前（０時間）および投与の２４時間後のランダム体重を測定し、そしてランダム血糖値の測定状況に対応するマウス投与後４８または７２時間目のランダム体重を測定した。以下の算式により血糖降下率、投与２４時間内の血糖曲線下面積（ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕ）およびその低下率を計算した。
雄ｏｂ／ｏｂマウスを離乳させた後、１匹／１ケージで飼育し、高脂肪飼料を投与し、６－７週齢後、血糖値を測定し、ランダム体重、ランダム血糖値および空腹血糖値によってモデル対照群、ポリペプチド化合物群（９つの化合物を選択する）、陽性対照リラグルチド（リラグルチド）群および陽性対照セマグルチド（Ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ）群に分けた。各試験薬群および陽性対照群マウスに対して、それぞれ異なる用量の各試験薬または陽性薬物リラグルチドおよびセマグルチドを単回皮下注射し、モデル対照群マウスに対してＰＢＳ緩衝液を単回皮下注射し、各群のマウスに対して投与前（０時間）および投与後の２、４、６、１０、２４時間目にランダム血糖値を測定し、その後、各群のマウスの血糖状況に応じてランダム血糖値の測定時間を調整して投与後の３４、４８、５８または７２時間目に延長した。また、各群のマウスの投与前（０時間）および投与の２４時間後のランダム体重を測定し、そしてランダム血糖値の測定状況に対応するマウス投与後４８または７２時間目のランダム体重を測定した。以下の算式により血糖降下率、投与２４時間内の血糖曲線下面積（ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕ）およびその低下率を計算した。
【0061】
血糖降下率＝（モデル対照群血糖値－投与群血糖値）／モデル対照群血糖値×１００％
ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕ（ｍｍｏｌ／Ｌｈ・ｒ）＝（ＢＧ０＋ＢＧ２）＋（ＢＧ２＋ＢＧ４）＋（ＢＧ４＋ＢＧ６）＋（ＢＧ６＋ＢＧ１０）×２＋（ＢＧ１０＋ＢＧ２４）×７
ＢＧ０、ＢＧ２、ＢＧ４、ＢＧ６、ＢＧ１０およびＢＧ２４は、それぞれ投与前（０時間）および投与後の２、４、６、１０および２４時間目での血糖値を示す。
ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕ（ｍｍｏｌ／Ｌｈ・ｒ）低下率＝（モデル対照群ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕ－投与群ＡＵＧ０－２４ｈｇｌｕ）／モデル対照群ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｎ×１００％
実験を合計２回実施し、時間間の間隔は８－１０日であり、各実験を２３群に分け、実験の群分けおよび用量状況を表２に示す。
ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕ（ｍｍｏｌ／Ｌｈ・ｒ）＝（ＢＧ０＋ＢＧ２）＋（ＢＧ２＋ＢＧ４）＋（ＢＧ４＋ＢＧ６）＋（ＢＧ６＋ＢＧ１０）×２＋（ＢＧ１０＋ＢＧ２４）×７
ＢＧ０、ＢＧ２、ＢＧ４、ＢＧ６、ＢＧ１０およびＢＧ２４は、それぞれ投与前（０時間）および投与後の２、４、６、１０および２４時間目での血糖値を示す。
ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕ（ｍｍｏｌ／Ｌｈ・ｒ）低下率＝（モデル対照群ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｕ－投与群ＡＵＧ０－２４ｈｇｌｕ）／モデル対照群ＡＵＣ０－２４ｈｇｌｎ×１００％
実験を合計２回実施し、時間間の間隔は８－１０日であり、各実験を２３群に分け、実験の群分けおよび用量状況を表２に示す。
【0062】
【表2】
【0063】
図１－３に示すように、血糖降下実験の結果として、本発明のポリペプチド化合物の投与濃度が１００μｇ／ｋｇである場合、血糖降低下下はほとんどセマグルチドおよびＧＩＰの血糖降下効果に相当し、特に、配列番号２の血糖降下効果はセマグルチドとほぼ一致した。
【0064】
３、 ポリペプチド化合物のｏｂ／ｏｂマウスランダム体重に対する影響
表３－５の結果に示されるように、１００ｇ／ｋｇｇＩＰ、１００および３００ｇ／ｋｇｇＬＰ－１の単回皮下注射投与は、ｏｂ／ｏｂマウスのランダム体重およびその変化量に明らかな影響がなかった。１００ｇ／ｋｇのリラグルチドおよびセマグルチド群に単回皮下注射により投与した２４および４８時間後に、ｏｂ／ｏｂマウスのランダム体重およびその変化量は顕著に低下し、３００ｇ／ｋｇの配列番号１～９を単回皮下注射により投与した２４、４８および７２ｈ時間後にｏｂ／ｏｂマウスのランダム体重およびその変化量は顕著に低下した。１００ｇ／ｋｇの配列番号２を単回皮下注射により投与した２４時間後にｏｂ／ｏｂマウスのランダム体重の変化量は顕著に低下し、３００ｇ／ｋｇの配列番号９を単回皮下注射により投与した２４および４８時間後にｏｂ／ｏｂマウスの変化量は顕著に低下し、配列番号２は、等用量のセマグルチドの作用とほとんど同じであった。したがって、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニスト化合物の単回皮下注射投与は、２型糖尿病ｏｂ／ｏｂマウスのランダム血糖値を顕著に減少でき、配列番号２は等用量のセマグルチドの作用と相当する。長期間の投与後、全てのポリペプチド化合物はいずれもより良好な体重コントロール効果を示した。
表３－５の結果に示されるように、１００ｇ／ｋｇｇＩＰ、１００および３００ｇ／ｋｇｇＬＰ－１の単回皮下注射投与は、ｏｂ／ｏｂマウスのランダム体重およびその変化量に明らかな影響がなかった。１００ｇ／ｋｇのリラグルチドおよびセマグルチド群に単回皮下注射により投与した２４および４８時間後に、ｏｂ／ｏｂマウスのランダム体重およびその変化量は顕著に低下し、３００ｇ／ｋｇの配列番号１～９を単回皮下注射により投与した２４、４８および７２ｈ時間後にｏｂ／ｏｂマウスのランダム体重およびその変化量は顕著に低下した。１００ｇ／ｋｇの配列番号２を単回皮下注射により投与した２４時間後にｏｂ／ｏｂマウスのランダム体重の変化量は顕著に低下し、３００ｇ／ｋｇの配列番号９を単回皮下注射により投与した２４および４８時間後にｏｂ／ｏｂマウスの変化量は顕著に低下し、配列番号２は、等用量のセマグルチドの作用とほとんど同じであった。したがって、ＧＩＰおよびＧＬＰ－１デュアルアゴニスト化合物の単回皮下注射投与は、２型糖尿病ｏｂ／ｏｂマウスのランダム血糖値を顕著に減少でき、配列番号２は等用量のセマグルチドの作用と相当する。長期間の投与後、全てのポリペプチド化合物はいずれもより良好な体重コントロール効果を示した。
【0065】
【表3】
【0066】
【表4】
【0067】
【表5】
【図1】
【図2】
【図3】
【配列表】