7641947 ポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-02-27

(45)【発行日】2025-03-07

(54)【発明の名称】ポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法

(51)【国際特許分類】

   C12P 7/62 20220101AFI20250228BHJP

   C12N 1/00 20060101ALI20250228BHJP

   C08L 101/16 20060101ALI20250228BHJP

   C02F 1/44 20230101ALI20250228BHJP

   B01D 61/02 20060101ALI20250228BHJP

   B01D 61/04 20060101ALI20250228BHJP

   C12N 9/50 20060101ALN20250228BHJP

【ＦＩ】

C12P7/62

C12N1/00 S

C08L101/16 ZBP

C02F1/44 K

B01D61/02 500

B01D61/04

C12N9/50

【請求項の数】 9

(21)【出願番号】P 2022508089

(86)(22)【出願日】2021-01-15

(86)【国際出願番号】 JP2021001275

(87)【国際公開番号】W WO2021186872

(87)【国際公開日】2021-09-23

【審査請求日】2023-11-22

(31)【優先権主張番号】P 2020048183

(32)【優先日】2020-03-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000000941

【氏名又は名称】株式会社カネカ

(74)【代理人】

【識別番号】110000040

【氏名又は名称】弁理士法人池内アンドパートナーズ

(72)【発明者】

【氏名】福本 明日香

(72)【発明者】

【氏名】廣田 翔悟

(72)【発明者】

【氏名】平野 優

【審査官】三原 健治

(56)【参考文献】

【文献】特開２００５－３４８６４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００８－２３７１８２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００９－１９５１７９（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｐ

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ポリヒドロキシ酪酸系樹脂を含有する微生物細胞を破砕又は可溶化する工程（ａ）、及び
工程（ａ）で得られた組成物中のポリヒドロキシ酪酸系樹脂を分離する工程（ｂ）を含み、
工程（ａ）及び工程（ｂ）では、カルシウムイオンの濃度が４．５ｍｇ／Ｌ以下の水を用いており、
工程（ａ）及び工程（ｂ）に用いる水は、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造工程にて排出された排水に対し、微生物による嫌気処理及び好気処理を行った後、膜分離活性汚泥法による前処理ろ過工程、並びにカルシウムイオン除去膜によるろ過工程を行うことで得られることを特徴とするポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。

【請求項2】

工程（ａ）及び工程（ｂ）に用いる水において、ナトリウムイオンの濃度が４５０ｍｇ／Ｌ以下である請求項１に記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。

【請求項3】

前記カルシウムイオン除去膜は、ＮＦ膜及びＲＯ膜からなる群から選択される一つ以上である請求項１又は２に記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。

【請求項4】

前記ＮＦ膜又はＲＯ膜は、２０℃で、３０００ｋＰａの圧力をかけた時のＭｇＳＯ₄阻止率が６０％以上１００％以下である請求項３に記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。

【請求項5】

工程（ａ）は、化学的処理及び物理的破砕処理からなる群から選択される少なくとも一つの処理を含む請求項１から４のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。

【請求項6】

前記化学的処理が、アルカリ性化合物、蛋白質分解酵素及び細胞壁分解酵素からなる群から選択される少なくとも一つによる化学的処理である請求項５に記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。

【請求項7】

前記ポリヒドロキシ酪酸系樹脂は、ポリ（３－ヒドロキシ酪酸－ｃｏ－３－ヒドロキシへキサン酸）である請求項１から６のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。

【請求項8】

前記ポリヒドロキシ酪酸系樹脂は、１６０℃で２０分間熱処理した場合の重量平均分子量保持率が７０％以上である請求項１から７のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。

【請求項9】

前記ポリヒドロキシ酪酸系樹脂を１６０℃でプレス成形して得られた厚みが５ｍｍのシートの黄色度指数（ＹＩ値）が２０以下である請求項１から８のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

生分解性プラスチックは、土中や水中の微生物により完全に生分解され、自然界の炭素循環プロセスに取り込まれることになるため、生態系への悪影響がほとんどない環境調和型のプラスチック材料として積極的な使用が望まれている。代表的な生分解性プラスチックとして、ポリヒドロキシ酪酸等の植物由来の生分解性プラスチックが注目されている。ポリヒドロキシ酪酸は、微生物によって植物由来の天然の有機酸や油脂を炭素源として生産され、細胞内にエネルギー蓄積物質として蓄積される脂肪族ポリエステル（熱可塑性ポリエステル）である。

【0003】

微生物が生産するポリヒドロキシ酪酸は、水不溶性であり、通常顆粒体として微生物細胞内に蓄積されるため、ポリヒドロキシ酪酸をプラスチックとして利用するためには、微生物細胞内からポリヒドロキシ酪酸を分離して取り出すという工程が必要である。例えば、特許文献１には、ポリヒドロキシ酪酸の分離精製方法として、アルカリ添加と高圧破砕を組み合わせた方法が報告されている。例えば、特許文献２には、ポリヒドロキシ酪酸の分離精製方法として、物理的細胞破砕と酵素及び界面活性剤による化学的処理を組み合わせた方法が報告されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【文献】特開平０７－３１４８９号公報

【文献】特開２００８－１９３９４０号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

しかしながら、特許文献１及び２に記載の方法で分離したポリヒドロキシ酪酸は、着色する問題や、熱安定性が低く高温で加熱した際に分子量が低下する問題等があった。

【0006】

本発明は、上記の問題を解決するため、色調が良好であるとともに、熱安定性が高いポリヒドロキシ酪酸系樹脂が得られるポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明は、１以上の実施形態において、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂を含有する微生物細胞を破砕又は可溶化する工程（ａ）、及び工程（ａ）で得られた組成物中のポリヒドロキシ酪酸系樹脂を分離する工程（ｂ）を含み、工程（ａ）及び工程（ｂ）では、カルシウムイオンの濃度が４．５ｍｇ／Ｌ以下の水を用いることを特徴とするポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法に関する。

【発明の効果】

【0008】

本発明の製造方法によれば、色調が良好であるとともに、熱安定性が高いポリヒドロキシ酪酸系樹脂を提供することができる。

【発明を実施するための形態】

【0009】

本発明の発明者らは、上述した課題を解決するために検討を重ねた結果、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂（以下において、単に「ＰＨＢ」とも記す。）を含有する微生物細胞を破砕又は可溶化する工程（ａ）及び工程（ａ）で得られた組成物中のポリヒドロキシ酪酸系樹脂を分離する工程（ｂ）において、カルシウムイオンの濃度が特定の範囲の水を用いることで、得られたポリヒドロキシ酪酸系樹脂の色調が良好になるとともに、高温、例えば１６０℃で加熱した場合でも分子量の低下が抑制されることを見出した。さらに、工程（ａ）及び（ｂ）で用いる水において、ナトリウムイオンの濃度を特定の範囲にすることが好ましい。

【0010】

［低カルシウムイオン水］
本発明の１以上の実施形態において、工程（ａ）及び（ｂ）で用いる水中のカルシウムイオンの濃度は４．５ｍｇ／Ｌ以下であり、色調及び熱安定性をより良好にする観点から、好ましくは３．０ｍｇ／Ｌ以下であり、より好ましくは２．０ｍｇ／Ｌ以下である。本発明の１以上の実施形態において、工程（ａ）及び（ｂ）で用いる水は、カルシウムイオンを含まないことが理想的であるが、実用性の観点から、０．００１ｍｇ／Ｌ以上であってもよく、０．００５ｍｇ／Ｌ以上であってもよい。

【0011】

本発明の１以上の実施形態において、色調及び熱安定性をより良好にする観点から、工程（ａ）及び（ｂ）に用いる水中のナトリウムイオンの濃度は４５０ｍｇ／Ｌ以下であることが好ましく、より好ましくは２５０ｍｇ／Ｌ以下であり、さらに好ましくは２２０ｍｇ／Ｌ以下である。本発明の１以上の実施形態において、工程（ａ）及び（ｂ）で用いる水は、ナトリウムイオンを含まないことが理想的であるが、実用性の観点から、０．０５ｍｇ／Ｌ以上であってもよく、０．１ｍｇ／Ｌ以上であってもよい。

【0012】

工程（ａ）及び（ｂ）で用いる水は、水中のカルシウムイオンの濃度は４．５ｍｇ／Ｌ以下であればよく、特に限定されないが、水使用量を削減して環境負荷を低減する観点から、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造工程にて排出された排水に対し、微生物による嫌気発酵処理及び好気発酵処理を行った後、膜分離活性汚泥法による前処理ろ過工程、並びにカルシウムイオン除去膜によるろ過工程を行うことで得られる処理水を用いることが好ましい。ポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造工程にて排出された排水は、工程（ａ）及び（ｂ）等のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の任意の製造工程で排出された排水を含む。

【0013】

微生物による嫌気処理及び好気処理、並びに膜分離活性汚泥法による前処理ろ過は、特に限定されず、水処理で用いられる一般的な方法で行うことができる。嫌気処理装置は、例えば、酸生成菌の作用により、高分子量の炭水化物や脂質類を有機酸や低級アルコールに分解する酸生成槽と、グラニュール状のメタン生成菌の作用により、有機酸や低級アルコールをメタンガスと炭酸ガスに分解するＥＧＳＢ方式のメタン生成反応槽で構成することができる。好気処理は、例えば、脱窒槽（活性汚泥の処理槽）と曝気槽（活性汚泥の処理槽）で構成された装置を用い、嫌気処理で分解されなかった有機物を、曝気槽にて好気性菌の作用により分解することで行うことができる。好気処理装置は、脱窒槽（活性汚泥の処理槽）、曝気槽（活性汚泥の処理槽）、第２脱窒槽（活性汚泥の処理槽）、再曝気槽（活性汚泥の処理槽）で構成されてもよい。膜分離活性汚泥法による前処理ろ過工程は、例えば、曝気槽（活性汚泥の処理槽）又は再曝気槽（活性汚泥の処理槽）に、ＵＦ膜又はＭＦ膜のＭＢＲ（メンブレンバイオリアクター膜分離活性汚泥法浸透膜）を設置することで行うことができる。

【0014】

本発明の１以上の実施形態において、カルシウムイオン除去膜としては、カルシウムイオン除去性能が高いことから、ＮＦ膜及びＲＯ膜からなる群から選択される一つ以上を用いることが好ましい。

【0015】

本発明の１以上の実施形態において、ＮＦ膜又はＲＯ膜は、２０℃で、３０００ｋＰａの圧力をかけた時のＭｇＳＯ₄阻止率が６０％以上１００％以下であることが好ましく、より好ましくは７０％以上１００％以下であり、さらに好ましくは９０％以上１００％以下である。ＭｇＳＯ₄阻止率が６０％以上であれば、膜のカルシウムイオン透過性が高くならず、得られた処理水を工程（ａ）及び（ｂ）で用いることで、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂の色調が良好になりやすく、高温における分子量の低下も抑制されやすい。

【0016】

本発明の１以上の実施形態において、ＮＦ膜又はＲＯ膜によるろ過時の膜間差圧は特に規定されないが、カルシウムイオン除去率及びナトリウムイオン除去率の観点から、０．４ＭＰａ以上４．１４ＭＰａ以下であることが好ましく、より好ましくは０．５ＭＰａ以上２．５ＭＰａ以下である。膜間差圧が０．４ＭＰａ以上であれば、透過水量及びイオン除去率が低下せず、４．１４ＭＰａ以下であれば、膜が破損しにくい。

【0017】

本発明の１以上の実施形態において、ＮＦ膜又はＲＯ膜によるろ過時の透過速度は特に規定されないが、例えば、０．０１Ｌ／分以上２０００Ｌ／分以下が好ましく、より好ましくは０．５Ｌ／分以上１５００Ｌ／分以下である。透過速度が０．０１Ｌ／分以上であると、生産性がよい。

【0018】

本発明の１以上の実施形態において、ＮＦ膜又はＲＯ膜によるろ過時の水温度は特に規定されないが、水温は５０℃以下が好ましく、より好ましくは４５℃以下である。水温が５０℃以下であれば、膜が劣化しくい。

【0019】

［ＰＨＢを含有する微生物細胞］
本発明の１以上の実施態様において、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂を含有する微生物細胞は、ＰＨＢ生産能を有する微生物を培養することで得ることができる。

【0020】

本発明の１以上の実施態様において、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂は、３－ヒドロキシ酪酸（以下、３ＨＢとも記す。）をモノマーユニットとする重合体の総称である。ＰＨＢは、３－ヒドロキシ酪酸の単独重合体であるポリ（３－ヒドロキシ酪酸）であってもよく、３－ヒドロキシ酪酸と他の３－ヒドロキシアルカン酸の共重合体であってもよい。他の３－ヒドロキシアルカン酸としては、例えば、３－ヒドロキシへキサン酸（以下、３ＨＨとも記す。）、３-ヒドロキシヘプタン酸、３-ヒドロキシオクタン酸、３-ヒドロキシノナン酸、３-ヒドロキシデカン酸、３-ヒドロキシウンデカン酸、３-ヒドロキシドデカン酸、３-ヒドロキシトリデカン酸、３-ヒドロキシテトラデカン酸、３-ヒドロキシペンタデカン酸及び３-ヒドロキシへキサデカン酸からなる群から選ばれる１以上のモノマーを用いることができる。

【0021】

ＰＨＢとしては、工業的に生産が容易である点から、ポリ（３－ヒドロキシ酪酸）、ポリ（３－ヒドロキシ酪酸－ｃｏ－３－ヒドロキシへキサン酸）、ポリ（３－ヒドロキシ酪酸－ｃｏ－３－ヒドロキシオクタン酸）等が好ましく、ポリ（３－ヒドロキシ酪酸－ｃｏ－３－ヒドロキシへキサン酸）が特に好ましい。前記３ＨＢ及び３ＨＨの２成分共重合体ＰＨＢＨを構成する各モノマーユニットの組成比については特に限定されるものではないが、全モノマーユニットの合計を１００モル％とした時に、３ＨＨユニットが１モル％以上５０モル％以下であってもよく、１モル％以上２５モル％以下であってもよく、１モル％以上１５モル％以下であってもよい。

【0022】

本発明の１以上の実施形態において、ＰＨＢ生産能を有する微生物は、特に限定されず、天然から単離された微生物や菌株の寄託機関（例えばＩＦＯ、ＡＴＣＣ等）に寄託されている微生物、または、それらから調製し得る変異体や形質転換体等を使用できる。例えば、カプリアビダス（Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ）属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、ラルストニア（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ）属、シュウドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）属、ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）属、アエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）属の菌等が挙げられる。特に、アルカリゲネス・リポリティカ（Ａ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、アルカリゲネス・ラトゥス（Ａ．ｌａｔｕｓ）、アエロモナス・キャビエ（Ａ．ｃａｖｉａｅ）、アエロモナス・ハイドロフィラ（Ａ．ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、カプリアビダス・ネカトール（Ｃ．ｎｅｃａｔｏｒ）等の菌株が好ましい。また、微生物が、本来ＰＨＢの生産能力を有しない場合、もしくは生産量が低い場合には、該微生物に目的とするＰＨＢの合成酵素遺伝子及び/又はその変異体を導入し、得られる形質転換体を用いることもできる。このような形質転換体の作製に用いるＰＨＢの合成酵素遺伝子としては特に限定はないが、アエロモナス・キャビエ由来のＰＨＢ合成酵素の遺伝子が好ましい。

【0023】

上述した微生物を適切な条件で培養することで、菌体内にＰＨＢを蓄積させた微生物を得ることができる。その培養方法については特に限定はないが、例えば特開平０５－９３０４９号公報、国際公開公報２００８／０１０２９６号等に挙げられる方法等を用いることができる。ＰＨＢを含有する微生物細胞としては、培養完了後の、ＰＨＢ含有微生物細胞を含む菌体培養液をそのまま用いるか、或いは、菌体培養液を加熱することで菌体を死滅した後の滅菌済みの菌体培養液を用いることができる。前記滅菌は、例えば、５０℃以上８０℃以下の温度下で５分以上１２０分以下熱処理することで行ってもよい。

【0024】

［工程（ａ）］
工程（ａ）において、ＰＨＢを含有する微生物細胞を破砕又は可溶化する。工程（ａ）は、例えば、化学的処理及び物理的破砕処理からなる群から選択される少なくとも一つの処理で行うことができる。

【0025】

化学的処理は、アルカリ性化合物、蛋白質分解酵素及び細胞壁分解酵素からなる群から選択される少なくとも一つの化合物で行うことができる。

【0026】

アルカリ性化合物は、ＰＨＢ含有微生物細胞の細胞壁を破壊して細胞中のＰＨＢを細胞外に流出できるものであれば特に限定されるものではなく、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等のアルカリ金属の水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属の炭酸塩、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等のアルカリ金属の炭酸水素塩、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等の有機酸のアルカリ金属塩、ホウ砂等のアルカリ金属のホウ酸塩、リン酸三ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸三カリウム、リン酸水素二カリウム等のアルカリ金属のリン酸塩、水酸化バリウム等のアルカリ土類金属の水酸化物、アンモニア水等が挙げられる。この中でも、工業生産に適し、コストを低減する観点から、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、及び水酸化リチウムからなる群から選択される一つ以上が好ましい。

【0027】

蛋白質分解酵素としては、特に限定されないが、例えば、アルカラーゼ、ペプシン、トリプシン、パパイン、キモトリプシン、アミノペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ等が挙げられる。具体的な蛋白質分解酵素としては、例えば「プロテアーゼＡ」、「プロテアーゼＰ」、「プロテアーゼＮ」（以上、天野エンザイム社製）、「アルカラーゼ」、「エスペラーゼ」、「ザビナーゼ」、「エバラーゼ」（以上、ノボザイムズ社製）等が工業的に使用可能であり、分解活性の点からも好適に使用できる。

【0028】

細胞壁分解酵素としては、特に限定されないが、例えば、リゾチーム、アミラーゼ、セルラーゼ、マルターゼ、サッカラーゼ、α－グリコシナーゼ及びβ－グリコシナーゼ等が挙げられる。上記細胞壁分解酵素の内、溶菌効果の点からリゾチームの使用が好ましい。具体的な細胞壁分解酵素としては、例えば「リゾチーム」（山東省華源経貿製）、「ビオザイムＡ」、「セルラーゼＡ「アマノ」３」、「セルラーゼＴ「アマノ」４」、「α－グルコシダーゼ「アマノ」」（以上、天野エンザイム社製）、「ターマミル」、「セルソフト」（以上、ノボザイムズ社製）等が工業的に使用可能である。

【0029】

上述した酵素による処理は、高い分離精製効果が得られる点で界面活性化剤の存在下に行うことが望ましい。また、酵素としては、例えば酵素と、酵素の安定化剤、界面活性化剤及び再汚染防止剤等からなる群から選ばれる一つ以上の添加剤を含有する酵素組成物を用いてもよい。

【0030】

界面活性剤としては、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤が挙げられる。細胞膜の破壊による残留物の除去効果が高い観点からは、陰イオン界面活性剤及び／又は非イオン界面活性剤が好ましい。蛋白質等を除去する目的においては、陰イオン界面活性剤を用いることが好ましく、また、脂肪酸や油脂の除去を目的とする場合、非イオン界面活性剤を用いることが好ましい。また陰イオン界面活性剤及び非イオン界面活性剤の両方を用いることができる。両方を用いる場合、陰イオン界面活性剤／非イオン界面活性剤の重量比は１／１００～１００／１０が好ましく、５／１００～１００／２０がより好ましく、５／１００～１００／１００がさらに好ましく、５／１００～５０／１００が特に好ましい。

【0031】

陰イオン界面活性剤としては、例えば、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルケニル硫酸エステル塩、アルキルエーテル硫酸エステル塩、アルケニルエーテル硫酸エステル塩、α－オレフィンスルホン酸塩、α－スルホ脂肪酸塩、α－スルホ脂肪酸塩のエステル、アルキルエーテルカルボン酸塩、アルケニルエーテルカルボン酸塩、アミノ酸型界面活性剤、Ｎ－アシルアミノ酸型界面活性剤等が挙げられる。中でもアルキル基の炭素数が１２～１４のアルキル硫酸塩、アルキル基の炭素数が１２～１６の直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル基の炭素数が１０～１８のアルキル硫酸エステル塩又はアルキル基の炭素数が１０～１８のアルキルエーテル硫酸エステル塩が好ましい。対イオンとしてはナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、マグネシウム等のアルカリ土類金属、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等のアルカノールアミンが好ましい。

【0032】

非イオン界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、脂肪酸ソルビタンエステル、アルキルポリグルコシド、脂肪酸ジエタノールアミド、アルキルモノグリセリルエーテル等が挙げられる。親水性が高く、生分解性が比較的良好である点から、ポリオキシエチレンアルキルエーテルやポリオキシアルキレンアルキルエーテルが好ましい。

【0033】

陽イオン界面活性剤としては、例えば、アルキルトリメチルアンモニウム塩、ジアルキルジメチルアンモニウム塩等が挙げられる。

【0034】

両性界面活性剤としては、例えば、カルボベタイン型、スルホベタイン型等が挙げられる。

【0035】

上述した界面活性剤のうち、陰イオン界面活性剤であるドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム及びオレイン酸ナトリウム、非イオン界面活性剤であるポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシアルキレンアルキルエーテル等がコスト、使用量や添加効果の点で好ましい。

【0036】

界面活性剤の添加量は、特に制限されないが、菌体培養液１００重量部に対して、０．００１重量部以上１０重量部以下が好ましく、さらにはコストの点から、５重量部以下が好ましい。界面活性剤は、１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。

【0037】

酵素処理は、例えば、菌体培養液にアルカリ化合物及び／又は界面活性剤を添加し、撹拌しながら行うことが好ましい。酵素処理条件については、使用する酵素の至適値のコントロール下で行うのが好ましい。酵素の必要量は、酵素の種類及び活性に依存する。特に制限はされないが、１００重量部のＰＨＢ１００に対して、０．００１～１０重量部が好ましく、コストの点から０．００１～５重量部がより好ましい。

【0038】

物理的破砕処理は、破砕効果を高め、ＰＨＢを回収しやすい観点から、アルカリ性化合物、又は、アルカリ性化合物及び界面活性剤を添加した後に行うことが好ましい。アルカリ性化合物及び界面活性剤としては、上述したものを適宜用いることができる。上述したアルカリ性化合物の中、工業生産に適し、コストを低減する観点から、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムが好ましい。上述した界面活性剤の中、陰イオン界面活性剤であるドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム及びオレイン酸ナトリウム、非イオン界面活性剤であるポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシアルキレンアルキルエーテル等がコスト、使用量や添加効果の点で好ましい。

【0039】

アルカリ性化合物を添加することで、菌体培養液のｐＨを８．０以上１２．５以下に調整することが好ましい。ＰＨＢに影響することなく、菌体（微生物細胞）残渣、菌体生成有機物、菌体構成有機物等を可溶化しやすい。菌体培養液にアルカリ性化合物を添加した後に、２０℃以上８０℃以下の温度、好ましくは２０℃以上５０℃以下の温度で３０分以上２時間以下処理してもよい。

【0040】

界面活性剤の添加量は、特に制限されないが、菌体培養液１００重量部に対して、０．００１重量部以上１０重量部以下が好ましく、さらにはコストの点から、５重量部以下が好ましい。界面活性剤は、１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。

【0041】

物理的破砕処理を行う装置としては、特に限定されないが、例えば、高圧ホモジナイザー、超音波破砕機、乳化分散機、ビーズミル等が挙げられる。中でも破砕効率の点から高圧ホモジナイザーの使用が好ましく、懸濁液が微小開口部を有する耐圧性容器に導入され高圧をかけられることにより開口部から押し出されるタイプがより好ましい。このタイプの破砕機としては、例えば、ニロソアビ社製の高圧ホモジナイザーモデル「ＰＡ２Ｋ型」等が挙げられる。高圧ホモジナイザーを用いると微生物細胞に大きな剪断力が働くため、微生物細胞は効率的に破壊されＰＨＢの分離性が向上する。このような機器は開口部で高圧がかかり、瞬間的に高温になるため、必要に応じて、一般の低温恒温循環槽により菌体培養液を冷却し、温度の上昇を防ぎ、２０℃以上４０℃以下での破砕処理を行うことが好ましい。２０℃以上４０℃以下で処理を行うことにより、ＰＨＢの分子量をほとんど低下させずに処理することができる。高圧破砕を行う際の破砕圧力は、特に限定されないが、破砕効率及びコストの観点から、３０ＭＰａ以上６０ＭＰａ以下が好ましい。

【0042】

工程（ａ）において、化学的処理及び物理的破砕処理は併用してもよく、この場合、破砕効果を高める観点から、化学的処理を行った後に、物理的破砕処理を行うことが好ましい。コストの観点から、工程（ａ）は、物理的破砕処理のみで行ってもよい。

【0043】

工程（ａ）において、水として、カルシウムイオンの濃度が４．５ｍｇ／Ｌ以下（好ましくは３．０ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは２．０ｍｇ／Ｌ以下）の水を用いる。例えば、界面活性剤やアルカリ性化合物等の添加時にカルシウムイオンの濃度が４．５ｍｇ／Ｌ以下（好ましくは３．０ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは２．０ｍｇ／Ｌ以下）の水を用いる。該水は、ナトリウムイオンの濃度が４５０ｍｇ／Ｌ以下であることが好ましく、２５０ｍｇ／Ｌ以下であることがより好ましく、２２０ｍｇ／Ｌ以下であることがさらに好ましい。

【0044】

［工程（ｂ）］
工程（ｂ）において、工程（ａ）で得られた組成物、例えば菌体破砕液中のポリヒドロキシ酪酸系樹脂を分離する。分離は、特に限定されず、ろ過、沈降分離、遠心分離等の方法を用いて、固液分離を行い、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂を水不溶性成分と回収することができる。工業的に大量処理可能でかつ連続使用可能という観点から、遠心分離が好ましい。

【0045】

遠心分離機としては、特に限定されないが、孔なし回転容器をもつ遠心沈降機が好ましく、種類としては分離板型、円筒型、デカンター型等がある。ＰＨＢ粒子は水との比重差が小さいので、分離沈降面積が大きく、高い加速度が得られる分離板型（間欠排出型、ノズル排出型）が好ましく、破砕処理液に含まれるＰＨＢ濃度が高い場合は特にノズル排出型が好ましい。デカンター型としては、分離板を有し、分離沈降面積を大きくした機種が好ましい。

【0046】

工程（ｂ）において、分離の前に、工程（ａ）で得られた組成物、例えば菌体破砕液１００重量部に水系媒体を５００重量部以上１０００重量部以下添加してもよい。

【0047】

工程（ｂ）において、水系媒体は、水、又は水と水混和性有機溶媒の混合溶媒であってもよい。水系媒体中の水の含有量は、５０重量％以上が好ましく、より好ましくは７０重量％以上、さらに好ましくは８０重量％以上、特に好ましくは８５重量％以上である。工程（ｂ）において、水として、カルシウムイオンの濃度が４．５ｍｇ／Ｌ以下、好ましくは３．０ｍｇ／Ｌ以下、より好ましくは２．０ｍｇ／Ｌ以下の水を用いる。該水は、ナトリウムイオンの濃度が４５０ｍｇ／Ｌ以下であることが好ましく、２５０ｍｇ／Ｌ以下であることがより好ましく、２２０ｍｇ／Ｌ以下であることがさらに好ましい。

【0048】

水混和性有機溶媒としては、特に限定されないが、例えば、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、ｉｓｏ－ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール等のアルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル類；ジメチルホルムアミド、アセトアミド等のアミド類；ジメチルスルホキシド、ピリジン、ピペリジン等が挙げられる。中でも、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール、ｉｓｏ－ブタノール、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、プロピオニトリル等が、除去しやすい点から好ましい。また、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、ブタノール、アセトン等が入手容易であることからより好ましい。さらに、メタノール、エタノール、アセトンが特に好ましい

【0049】

工程（ｂ）においては、分離したＰＨＢ（ＰＨＢを含む水不溶性成分）を少なくとも１回以上上述した水系媒体で洗浄することでＰＨＢを精製してもよい。水系媒体による洗浄は、例えば、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂を含む水不溶性成分１００重量部に水系媒体を５００重量部以上１０００重量部以下添加して行ってもよい。また、微生物細胞由来の不純物を効果的に除去し、精製効果を高めるために、水系媒体にアルカリ性化合物、界面活性剤及び蛋白質分解酵素等を添加してもよい。

【0050】

［工程（ｃ）］
本発明の１以上の実施形態の製造方法は、工程（ｂ）で分離したＰＨＢを乾燥する工程（ｃ）を含んでもよい。水系媒体で洗浄し、脱水したＰＨＢ（脱水樹脂）は、そのまま乾燥して粉体状のＰＨＢを得ることができる。乾燥方法は適宜選択でき、特に限定されないが、例えば、スプレー乾燥、気流乾燥、流動乾燥、バンド乾燥等の一般的な乾燥方法を好ましく用いることができる。

【0051】

或いは、水系媒体で洗浄し、濃縮したＰＨＢ分散液に、分散剤を添加し、ｐＨを７以下に調整した後に、乾燥して粉体状のＰＨＢを得ることができる。分散剤としては、例えば、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリアクリル酸カリウム、ポリメタクリル酸、ポリメタクリル酸ナトリウム等の水溶性高分子；ポリエチレングリコール・ポリプロピレングリコール・ブロックエーテル型（ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン・ブロックポリマー型）等の非イオン界面活性剤等が挙げられる。ｐＨを７以下に調整する方法としては、例えば酸を添加する方法が挙げられる。酸は特に限定されず、有機酸、無機酸のいずれでもよく、例えば、硫酸、塩酸、リン酸、酢酸等を適宜使用できる。

【0052】

ＰＨＢの分子量は、目的とする用途で、実質的に十分な物性を示すものであれば、その分子量は特に制限されない。例えば、成形加工性や成形体の強度の観点から、ＰＨＢの重量平均分子量は、５０，０００以上３，０００，０００以下が好ましく、６０，０００以上１，５００，０００以下がより好ましい。なお、ここでの重量平均分子量は、クロロホルム溶離液を用いたゲルバーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）を用い、ポリスチレン換算分子量分布より測定されたものをいう。当該ＧＰＣにおけるカラムとしては、前記分子量を測定するのに適切なカラムを使用すればよい。

【0053】

ＰＨＢは、熱安定性が高く、１６０℃で２０分間熱処理した場合の重量平均分子量保持率が７０％以上であることが好ましく、７５％以上であることがより好ましく、８０％以上であることがさらに好ましく、８５％以上であることがさらにより好ましく、９０％以上であることが特に好ましい。

【0054】

ＰＨＢは、色調が良好であり、１６０℃でプレス成形した厚みが５ｍｍのシートの黄色度指数（ＹＩ値）が２０以下であることが好ましく、１７以下であることがより好ましい。

【0055】

ＰＨＢは、繊維、糸、ロープ、織物、編物、不織布、紙、フィルム、シート、チューブ、板、棒、容器、袋、部品、発泡体等の各種成形体に成形できる。その成形体は、農業、漁業、林業、園芸、医学、衛生品、衣料、非衣料、包装、その他の分野に好適に用いることができる。

【0056】

微生物が生産した他の生分解性プラスチックの場合も、生分解性プラスチックを含む微生物細胞を破砕又は可溶化し、生分解性プラスチックを分離する工程において、上述したカルシウムイオンの濃度が４．５ｍｇ／Ｌ以下の水を用いることができる。

【実施例】

【0057】

以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。

【0058】

［測定及び評価方法］
実施例及び比較例における測定・評価方法を、以下に示した。

【0059】

（色度）
作製した洗浄水２００ｍＬを専用の測定容器に入れ、測定器（笠原理化工業社製 ＴＣＲ－５Ｚ）を気泡が付かないように静かに浸漬させて、洗浄水の色度を測定した。厚生労働省の「水道水質基準」で、水道水は、色度５度以下である。

【0060】

（熱安定性）
熱安定性は、１６０℃で２０分間加熱した後のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の重量平均分子量保持率に基づいて、重量平均分子量保持率が７０％以上であれば、熱安定性良好と判断し、重量平均分子量保持率が７０％未満であれば、熱安定性不良と判断した。
重量平均分子量保持率（％）＝（加熱した後のＰＨＢの重量平均分子量／加熱する前のＰＨＢの重量平均分子量）×１００
＜加熱する前のＰＨＢの重量平均分子量＞
ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体１０ｍｇを用い、クロロホルム１０ｍＬに溶解させた後、不溶物を濾過により除いた。この溶液（濾液）を、「Ｓｈｏｄｅｘ Ｋ８０５Ｌ（３００ｘ８ｍｍ、２本連結）」（昭和電工社製）を装着した島津製作所製ＧＰＣシステムを用い、クロロホルムを移動相として分子量測定に付した。分子量標準サンプルには、市販の標準ポリスチレンを用いた。
＜加熱した後のＰＨＢの重量平均分子量＞
ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体に対して１６０℃で７分間予熱処理した後、１６０℃で２０分間加熱してポリヒドロキシ酪酸系樹脂シートを作製した。該ポリヒドロキシ酪酸系樹脂シート１０ｍｇを用いた以外は、加熱する前のＰＨＢの重量平均分子量の測定の場合と同様の手順で加熱した後のＰＨＢの重量平均分子量を測定した。

【0061】

（加熱する前のＰＨＢの組成）
ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体約２０ｍｇに２ｍＬの硫酸－メタノール混合液（１５：８５）と２ｍＬのクロロホルムを添加して密栓し、１００℃で１４０分間加熱することでポリエステル分解物のメチルエステルを得た。冷却後、これに１．５ｇの炭酸水素ナトリウムを少しずつ加えて中和し、炭酸ガスの発生がとまるまで放置した。４ｍＬのジイソプロピルエーテルを添加してよく混合した後、遠心して、上清中のポリエステル分解物のヒドロキシアルカン酸メチルエステルの組成をキャピラリーガスクロマトグラフィーにより分析し、得られたポリエステルのモノマーユニットの組成（含有率）を求めた。ガスクロマトグラフは島津製作所社製ＧＣ－１７Ａ、キャピラリーカラムはＧＬサイエンス社製ＮＥＵＴＲＡ ＢＯＮＤ－１（カラム長２５ｍ、カラム内径０．２５ｍｍ、液膜厚０．４μｍ）を用いた。温度条件は、初発温度１００℃～２００℃まで８℃／分の速度で昇温、さらに２００℃～２９０℃まで３０℃／分の速度で昇温した。

【0062】

（黄色度指数（ＹＩ値）の測定）
ポリヒドロキシ酪酸系樹脂のプレスシートを作製し、該プレスシートを測定サンプルとした。ポリヒドロキシ酪酸系樹脂のプレスシートは、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体３．０ｇを、１５ｃｍ四方の金属板で挟み、さらに金属板の四隅に厚さ０．５ｍｍの金属板を挿入して、これを実験用小型プレス機（高林理化株式会社製Ｈ－１５型）にセットして、１６０℃にて７分間加温後、１６０℃にて加熱しながら約５ＭＰａにて２分間プレスし、プレス後は室温に放置してポリヒドロキシ酪酸系樹脂を硬化させることで作製した。ＹＩ値は、色差計「ＳＥ－２０００」（日本電色社製）にて、３０ｍｍ測定板を使って該測定板にプレスシートを載せ、その上に白色標準板を被せて測定した。ＹＩ値が２０以下であれば、色調良好と判断し、ＹＩ値が２０を超える場合、色調不良と判断した。

【0063】

（洗浄水の製造例１）
ポリヒドロキシ酪酸系樹脂の生産で排出される排水に対し、微生物による嫌気処理と好気処理を行った後、ＵＦ膜を用いた膜分離活性汚泥法にて前処理ろ過し、その後ＲＯ膜でろ過を行った。嫌気処理は、酸生成槽（ｐＨ７．１付近）にて、酸生成菌の作用により、高分子量の炭水化物や脂質類を有機酸や低級アルコールに分解し、次いで、ＥＧＳＢ方式のメタン生成反応槽（負荷量１５ｋｇ－ＣＯＤｃｒ／ｍ³／ｄ）にて、グラニュール状のメタン生成菌の作用により、有機酸や低級アルコールをメタンガスと炭酸ガスに分解することで行った。好気処理は、脱窒槽（活性汚泥の処理槽）、曝気槽（活性汚泥の処理槽）、第２脱窒槽（活性汚泥の処理槽）、再曝気槽（活性汚泥の処理槽）で構成された装置で、嫌気処理で分解されなかった有機物を好気性菌の作用により分解することで行った。膜分離活性汚泥法による前処理ろ過は、再曝気槽（活性汚泥の処理槽）に、ＵＦ膜（中空糸膜：ＰＶＤＦ、三菱ケミカル社製、公称孔径：０．０５μｍ、２０℃で、３０００ｋＰａの圧力をかけた時のＭｇＳＯ₄阻止率０％）を設置して行った。ＵＦ膜ではろ過線速０．８６～１．１５ｍ/ｄａｙで水を透過させた。ＵＦ膜透過水を集水し、水温３０℃、膜間差圧（透過圧）０．７～１．１５ＭＰａ、透過速度０．７５～０．８５Ｌ/分でＲＯ膜（材質：複合ポリアミド、日東電工製、２０℃で、３０００ｋＰａの圧力をかけた時のＭｇＳＯ₄阻止率９９．７％）に送液した。ＲＯ膜を透過しなかった水は、集水槽に戻し、透過した水を洗浄水として用いた。ＲＯ膜にＵＦ膜透過水を９７分間透過させ、ＵＦ膜透過水の７０重量％を透過させた。透過初期から１３分までのＲＯ膜透過水を採取して洗浄水１を得た。

【0064】

（洗浄水の製造例２）
ＲＯ膜を透過した水の中、９０分から９７分までの透過水を採取した以外は、製造例１と同様にして、洗浄水２を得た。

【0065】

（洗浄水の製造例３）
製造例１と同条件でＲＯ膜を透過させた水を、さらにＲＯ膜（材質：複合ポリアミド、日東電工製、２０℃で、３０００ｋＰａの圧力をかけた時のＭｇＳＯ₄阻止率９９．７％）を水温３０℃、透過圧０．８ＭＰａ、透過速度１．２５Ｌ/分で透過させることで洗浄水３を得た。透過水量はＵＦ膜透過水の９０％量であった。

【0066】

（洗浄水の製造例４）
製造例１と同条件でＵＦ膜を透過させたＵＦ膜透過水を採取して洗浄水４を得た。

【0067】

（洗浄水の製造例５）
製造例１と同条件でＵＦ膜透過水を集水し、水温２０℃、透過圧３ＭＰａ、透過速度３０～３００ｇ/時間でＮＦ膜（材質：複合ポリアミド、Ｓｙｎｄｅｒ製、２０℃で、３０００ｋＰａの圧力をかけた時のＭｇＳＯ₄阻止率９６．１％）を透過させたＮＦ膜透過水を採取して洗浄水５を得た。透過水量はＵＦ膜透過水の７５％量であった。

【0068】

（洗浄水の製造例６）
工業用水（カネカ製）をイオン交換樹脂（オルガノ製、強酸性陽イオン樹脂と強塩基性陰イオン樹脂）で処理して洗浄水６を得た。

【0069】

（洗浄水の製造例７）
製造例１と同条件でＵＦ膜透過水を集水し、水温２０℃、透過圧３ＭＰａ、透過速度１００～５５０ｇ/時間でＮＦ膜（材質：複合ポリアミド、Ｓｙｎｄｅｒ製、２０℃で、３０００ｋＰａの圧力をかけた時のＭｇＳＯ₄阻止率６．７％）を透過させたＮＦ膜透過水を採取して洗浄水７を得た。透過水量はＵＦ膜透過水の７５％量であった。

【0070】

洗浄水１～７におけるカルシウムイオンの濃度、ナトリウムイオンの濃度及び色度を下記表１に示した。

【0071】

【表1】

【0072】

［実施例１］
（菌体培養液の調製）
国際公開公報第２００８／０１０２９６号の段落［００４９］に記載のラルストニア・ユートロファＫＮＫ－００５株を、同文献の段落［００５０］～［００５３］に記載の方法で培養し、ＰＨＢ（３ＨＨ含有量が１１．５モル％のポリ（３－ヒドロキシ酪酸－ｃｏ－３－ヒドロキシへキサン酸））を含有する菌体を含む菌体培養液を得た。なお、ラルストニア・ユートロファは、現在では、カプリアビダス・ネカトールに分類されている。

【0073】

（滅菌処理）
上記で得られた菌体培養液を内温６０～８０℃で２０分間加熱・攪拌処理し、滅菌処理を行った。

【0074】

（工程（ａ）及び（ｂ））
上記で得られた滅菌済みの菌体培養液に、ドデシル硫酸ナトリウムを０．２重量％になるように添加した。さらに、ｐＨが１１．０になるように水酸化ナトリウムを溶解した洗浄水を添加した後、５０℃で１時間保温した。その後、高圧破砕機（ニロソアビ社製高圧ホモジナイザーモデルＰＡ２Ｋ型）を用いて、４４～５４ＭＰａの圧力で高圧破砕を行った。
上記で得られた高圧破砕後の菌体破砕液に同じ重量の洗浄水を添加した。これを遠心分離した後、上清を除去して２倍濃縮した。この濃縮したＰＨＢの水性懸濁液に、水酸化ナトリウムを添加した洗浄水（ｐＨ１１．０）を除去した上清と同じ重量になるように添加し、遠心分離した。次いで、上清を除去してから洗浄水を添加して懸濁させ、０．２重量％のドデシル硫酸ナトリウムと、ＰＨＢの１／１００重量のプロテアーゼ（ノボザイム社製、エスペラーゼ）とを添加し、ｐＨ１０．０で５０℃に保持したまま、２時間攪拌した。その後、遠心分離により上清を除去して５倍濃縮した。この濃縮したＰＨＢの水性懸濁液に水酸化ナトリウムを添加した洗浄水（ｐＨ１１．０）を、除去した上清と同じ重量になるように添加し、遠心分離した。同様の操作を５回繰り返した後、上清を除去して、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂濃度が５２重量％になるように調整した。
工程（ａ）及び（ｂ）では、洗浄水として、洗浄水１を用いた。

【0075】

（工程（ｃ））
上記で得られたポリヒドロキシ酪酸系樹脂水性懸濁液（固形分濃度５２重量％）に、分散剤（ポリエチレングリコール・ポリプロピレングリコール・ブロックエーテル型非イオン界面活性剤、商品名「プロノン♯２０８」、日油製）を１ｐｈｒ（水性懸濁液中に存在するポリヒドロキシ酪酸系樹脂１００重量部に対して１重量部）添加し、その後、固形分濃度を蒸留水で３０重量％に調整した。この液を３０分間撹拌した後、硫酸を添加してｐＨが４に安定するまで調整した。得られたポリヒドロキシ酪酸系樹脂の水性懸濁液を、６０℃で１２時間乾燥してポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体を作製した。

【0076】

［実施例２］
工程（ａ）及び（ｂ）において、洗浄水として洗浄水２を用いた以外は、実施例１と同様にして、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体を得た。

【0077】

［実施例３］
工程（ａ）及び（ｂ）において、洗浄水として洗浄水３を用いた以外は、実施例１と同様にして、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体を得た。

【0078】

［比較例１］
工程（ａ）及び（ｂ）において、洗浄水として洗浄水４を用いた以外は、実施例１と同様にして、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体を得た。

【0079】

［実施例４］
菌体培養液の調製でＰＨＢ（３ＨＨ含有量が１０．９モル％のポリ（３－ヒドロキシ酪酸－ｃｏ－３－ヒドロキシへキサン酸））を含有する菌体を含む菌体培養液を用いたことと、工程（ａ）及び（ｂ）において、洗浄水として洗浄水２を用いた以外は、実施例１と同じ操作により、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体を得た。

【0080】

［実施例５］
工程（ａ）及び（ｂ）において、洗浄水として洗浄水５を用いた以外は、実施例４と同様にして、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体を得た。

【0081】

［実施例６］
工程（ａ）及び（ｂ）において、洗浄水として洗浄水６を用いた以外は、実施例４と同様にして、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体を得た。

【0082】

［比較例２］
工程（ａ）及び（ｂ）において、洗浄水として洗浄水７を用いた以外は、実施例４と同様にして、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体を得た。

【0083】

［比較例３］
工程（ａ）及び（ｂ）において、洗浄水として洗浄水４を用いた以外は、実施例４と同様にして、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体を得た。

【0084】

実施例及び比較例で得られたポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体の熱安定性及びＹＩ値を上述したとおりに測定・評価し、その結果を下記表２に示した。下記表２において、加熱前の３ＨＨ含有量は、加熱前のポリヒドロキシ酪酸系樹脂における３ＨＨの含有量を意味する。

【0085】

【表2】

【0086】

実施例では、工程（ａ）及び（ｂ）において、カルシウムイオンの濃度が４．５ｍｇ／Ｌ以下洗浄水を用いることで、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体の熱安定性が高く、色調が良好となる。また、洗浄水中のカルシウムイオン濃度が低ければ、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体の熱安定性及び色調に優れる傾向がある。比較例２では、透明度の高い水を利用したが、ＹＩ値は基準値を超えていることからも、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体のＹＩ値には、カルシウムイオン濃度がより強く影響を及ぼすことが示された。特に、洗浄水としてポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造工程にて排出された排水を処理した処理水を洗浄水として用いた実施例１～５では、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂粉体の熱安定性が高く、色調が良好であることから、水使用量の削減が可能となり、環境負荷を低減しながら色調及び熱安定性が良好であるポリヒドロキシ酪酸系樹脂を製造することができた。

【0087】

本発明は、特に限定されないが、例えば、下記の１以上の実施形態を含む。
［１］ ポリヒドロキシ酪酸系樹脂を含有する微生物細胞を破砕又は可溶化する工程（ａ）、及び
工程（ａ）で得られた組成物中のポリヒドロキシ酪酸系樹脂を分離する工程（ｂ）を含み、
工程（ａ）及び工程（ｂ）では、カルシウムイオンの濃度が４．５ｍｇ／Ｌ以下の水を用いることを特徴とするポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。
［２］ 工程（ａ）及び工程（ｂ）に用いる水において、ナトリウムイオンの濃度が４５０ｍｇ／Ｌ以下である、［１］に記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。
［３］ 工程（ａ）及び工程（ｂ）に用いる水は、ポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造工程にて排出された排水に対し、微生物による嫌気処理及び好気処理を行った後、膜分離活性汚泥法による前処理ろ過工程、並びにカルシウムイオン除去膜によるろ過工程を行うことで得られる、［１］又は［２］に記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。
［４］ 前記カルシウムイオン除去膜は、ＮＦ膜及びＲＯ膜からなる群から選択される一つ以上である、［１］から［３］のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。
［５］ 前記ＮＦ膜又はＲＯ膜は、２０℃で、３０００ｋＰａの圧力をかけた時のＭｇＳＯ₄阻止率が６０％以上１００％以下である、［４］に記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。
［６］ 工程（ａ）は、化学的処理及び物理的破砕処理からなる群から選択される少なくとも一つの処理を含む、［１］から［５］のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。
［７］ 前記化学的処理が、アルカリ性化合物、蛋白質分解酵素及び細胞壁分解酵素からなる群から選択される少なくとも一つによる化学的処理である、［６］に記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。
［８］ 前記ポリヒドロキシ酪酸系樹脂は、ポリ（３－ヒドロキシ酪酸－ｃｏ－３－ヒドロキシへキサン酸）である、［１］から［７］のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。
［９］ 前記ポリヒドロキシ酪酸系樹脂は、１６０℃で２０分間熱処理した場合の重量平均分子量保持率が７０％以上である、［１］から［８］のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。
［１０］ 前記ポリヒドロキシ酪酸系樹脂を１６０℃でプレス成形して得られた厚みが５ｍｍのシートの黄色度指数（ＹＩ値）が２０以下である、［１］から［９］のいずれかに記載のポリヒドロキシ酪酸系樹脂の製造方法。