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特許7646140置換された｛１，２，４，｝トリアゾロ｛１，５－Ａ｝ピリミジン化合物および微小管の安定化におけるその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-03-07
(45)【発行日】2025-03-17
(54)【発明の名称】置換された｛１，２，４，｝トリアゾロ｛１，５－Ａ｝ピリミジン化合物および微小管の安定化におけるその使用
(51)【国際特許分類】
C07D 487/04 20060101AFI20250310BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20250310BHJP
A61K 31/55 20060101ALI20250310BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20250310BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20250310BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20250310BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20250310BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20250310BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20250310BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20250310BHJP
【ＦＩ】
C07D487/04 146
C07D487/04 CSP
A61K31/519
A61K31/55
A61P21/00
A61P25/00
A61P25/16
A61P25/18
A61P25/28
A61P35/00
A61P35/02
【請求項の数】
27
(21)【出願番号】P 2022562242
(86)(22)【出願日】2021-04-12
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2023-05-25
(86)【国際出願番号】 US2021026791
(87)【国際公開番号】W WO2021211408
(87)【国際公開日】2021-10-21
【審査請求日】2022-12-07
(31)【優先権主張番号】63/009,727
(32)【優先日】2020-04-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】500429103
【氏名又は名称】ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア
(73)【特許権者】
【識別番号】503257376
【氏名又は名称】ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ カリフォルニア
(74)【代理人】
【識別番号】100104411
【弁理士】
【氏名又は名称】矢口 太郎
(72)【発明者】
【氏名】ブランデン、カート アール．
(72)【発明者】
【氏名】トロヤノフスキー、ジョン キュー．
(72)【発明者】
【氏名】スミス、アモス ビー．、ザ サード
(72)【発明者】
【氏名】リー、バージニア エム－ワイ
(72)【発明者】
【氏名】バラトレ、カルロ
(72)【発明者】
【氏名】アッレ ティボー
【審査官】▲来▼田 優来
(56)【参考文献】
【文献】特表２００５－５２７５４３（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２００６／１０００３８（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２００６／１０００３７（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１９／１６９１１１（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２００４－５０２６９１（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｄ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
化合物であって、前記化合物が、
【化1】
【請求項2】
請求項１に記載の化合物において、前記化合物が、
【化2】
【請求項3】
請求項１に記載の化合物において、前記化合物が、
【化3】
【請求項4】
請求項１に記載の化合物において、前記化合物が、
【化4】
【請求項5】
神経変性疾患を治療するための組成物であって、
【化5】
【請求項6】
請求項５に記載の組成物において、前記化合物が、
【化6】
【請求項7】
請求項５に記載の組成物において、前記化合物が、
【化7】
【請求項8】
請求項５に記載の組成物において、前記化合物が、
【化8】
【請求項9】
がんを治療するための組成物であって、
【化9】
【請求項10】
請求項９に記載の組成物において、前記化合物が、
【化10】
【請求項11】
請求項９に記載の組成物において、前記化合物が、
【化11】
【請求項12】
請求項９に記載の組成物において、前記化合物が、
【化12】
【請求項13】
それを必要とする対象における神経変性疾患を治療するための薬剤の調整のための治療有効量の化合物の使用であって、前記化合物が、
【化13】
【請求項14】
請求項１３に記載の使用において、前記化合物が、
【化14】
【請求項15】
請求項１３に記載の使用において、前記化合物が、
【化15】
【請求項16】
請求項１３に記載の使用において、前記化合物が、
【化16】
【請求項17】
請求項１３～１６のいずれか一項に記載の使用において、前記神経変性疾患が、前記対象の脳におけるタウオパシーまたは微小管機能の低下によって特徴付けられる、使用。
【請求項18】
請求項１３～１６のいずれか一項に記載の使用において、前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、前頭側頭葉変性症、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、皮質基底変性症、パーキンソン病（ＰＤ）、認知症を伴うＰＤ、認知症を伴うレビー小体病、または筋萎縮性側索硬化症である、使用。
【請求項19】
請求項１３～１６のいずれか一項に記載の使用において、前記神経変性疾患が、外傷性脳損傷または外傷後ストレス障害である、使用。
【請求項20】
請求項１９に記載の使用において、前記外傷性脳損傷は、反復性外傷性脳損傷または慢性外傷性脳症である、使用。
【請求項21】
請求項１３～１６のいずれか一項に記載の使用において、前記神経変性疾患が統合失調症である、使用。
【請求項22】
それを必要とする対象におけるがんを治療するための薬剤の調整のための治療有効量の化合物の使用であって、前記化合物が、
【化17】
【請求項23】
請求項２２に記載の使用において、前記組成物が、
【化18】
【請求項24】
請求項２２に記載の使用において、前記組成物が、
【化19】
【請求項25】
請求項２２に記載の使用において、前記組成物が、
【化20】
【請求項26】
請求項２２～２５のいずれか一項に記載の使用において、前記癌が脳癌である、使用。
【請求項27】
請求項２６に記載の使用において、前記癌がグリオーマまたは星細胞腫である、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈから授与されたＡＧ０４４３３２およびＡＧ０６１１７３の政府支援を受けて行われたものである。政府は、この発明について一定の権利を有する。
【0002】
本出願は、２０２０年４月１４日に出願された米国仮出願第６３／００９，７２７号の優先権の利益を主張し、その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0003】
本発明は、癌またはアルツハイマー病や前頭側頭葉変性症のような神経変性タウパチーの治療のための化合物および方法を対象とする。
【背景技術】
【0004】
アルツハイマー病（ＡＤ）などの神経変性タウパチーは、微小管（ＭＴ）に結合するタンパク質であるタウの誤形成および凝集によって特徴づけられる。通常、タウはＭＴに結合して安定化し、神経細胞の軸索輸送に不可欠な微小管のネットワークを維持する。ＡＤでは、タウは神経原線維変化（ＮＦＴ）や神経原線維糸と呼ばれる凝集体に隔離され、ＭＴとの結合が減少する。このタウの機能低下やオリゴマーあるいはフィブリラータウの形成は、ＭＴの不安定化とそれに伴う軸索輸送障害につながり、神経細胞の機能障害や死に至る可能性があると考えられている。
【0005】
ＭＴの機能が低下する可能性のある他の神経変性疾患には、前頭側頭葉変性症、多発性硬化症、パーキンソン病、筋萎縮性物質硬化症、統合失調症、ハンチントン病、多発性硬化症、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、特にボクサー痴呆および反復性サッカーでの脳震盪によるもの、およびＩＥＤによる軍隊での閉鎖性頭部外傷による起こる、これは慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）としても知られる反復性ＴＢＩ（ｒＴＢＩ）が含まれる。
【0006】
ＭＴに関連するタンパク質であるタウのミスフォールディングや凝集に少なくとも部分的に起因する神経変性疾患の治療には、血液脳関門を通過してＭＴを効果的に安定化できる化合物が必要とされる。
【0007】
微小管（ＭＴ）活性を有する［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジンおよび関連複素環化合物は、抗真菌剤として報告されて以来、癌化学療法や神経変性疾患治療など様々な応用が期待される分子として注目されてきた。セビパブリン（化合物１）は、強力な抗がん作用を有する化合物である。この化合物は、ビンクリスチンと同様にチューブリンのヘテロダイマーと相互作用し、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）の交換速度を阻害することができるため、ＭＴへの結合についてビンクリスチンと競合するがタキソールやコルヒチンとは競合しない。参照：Ｚｈａｎｇ，"Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ＳＡＲ ｏｆ［１，２，４］ｔｒｉａｚｏｌｏ［１，５－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ，ａ ｃｌａｓｓ ｏｆ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｇｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａ ｕｎｉｑｕｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｕｂｕｌｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，"Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００７，５０：３１９－２７。
【化1】
【0008】
ビンクリスチン／ビンブラスチンの活性とは反対に、トリアゾロピリミジン化合物２は、とりわけＭＴにのみ結合し、未重合チューブリンヘテロ二量体には結合しない。Ｓａｅｚ－Ｃａｌｖｏ，"Ｔｒｉａｚｏｌｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｓ Ａｒｅ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－Ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ｔｈａｔ Ｂｉｎｄ ｔｈｅ Ｖｉｎｃａ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｓｉｔｅ ｏｆ Ｔｕｂｕｌｉｎ，"Ｃｅｌｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１７，２４，７３７－７５０ｅ６．を参照。
【化2】
【0009】
トリアゾロピリミジンの構造修飾は、ＭＴの安定化を促進することもあれば、ＭＴの完全性を崩壊させることもある。これらの違いは、異なる結合様式を示すなど、トリアゾロピリミジンの治療応用に重要かつ未知の影響を及ぼす可能性がある。
【0010】
神経変性疾患の治療のために、適切に置換されたトリアゾロピリミジン化合物の必要性が残される。
【0011】
略述
式Ｉによる置換｛１，２，４，｝トリアゾロ｛１，５－Ａ｝ピリミジン化合物が提供され、
式中、
Ｒ１は、Ｃｌであり、
Ｒ２は、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＨ３、ＣＨ（ｔｅｒｔ－ブチル）ＣＨ３、またはＣＨ（メチルジアジリニル）ＣＨ３であり、ここでＲ２は、任意でモノまたはポリ重水素化されても良く、
Ｒ３は、Ｈまたはアルキルであるか、または、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合するＮ原子とともに、Ｃ５－Ｃ７複素環または３－メトキシ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イルであり、
Ｒ４は、ＨまたはＦであり、
Ｒ５は、ＨまたはＦであり、
Ｒ６は、ヨード、シアノ、エチニル、または－Ｃ≡Ｃ－（ＣＨ２）ｎ－Ｒ７であり、ここでｎ＝０～３であり、Ｒ７はＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、または－Ｎ（ＣＨ３）２であり、ここでＲ６は、任意でモノまたはポリ重水素であって良く、
Ｒ８は、Ｈまたはアルキルであり、
またはそれらの立体化学異性体であり、
またはそれらの薬学的に許容される塩である。
式Ｉによる置換｛１，２，４，｝トリアゾロ｛１，５－Ａ｝ピリミジン化合物が提供され、
【化3】
Ｒ１は、Ｃｌであり、
Ｒ２は、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＨ３、ＣＨ（ｔｅｒｔ－ブチル）ＣＨ３、またはＣＨ（メチルジアジリニル）ＣＨ３であり、ここでＲ２は、任意でモノまたはポリ重水素化されても良く、
Ｒ３は、Ｈまたはアルキルであるか、または、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合するＮ原子とともに、Ｃ５－Ｃ７複素環または３－メトキシ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イルであり、
Ｒ４は、ＨまたはＦであり、
Ｒ５は、ＨまたはＦであり、
Ｒ６は、ヨード、シアノ、エチニル、または－Ｃ≡Ｃ－（ＣＨ２）ｎ－Ｒ７であり、ここでｎ＝０～３であり、Ｒ７はＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、または－Ｎ（ＣＨ３）２であり、ここでＲ６は、任意でモノまたはポリ重水素であって良く、
Ｒ８は、Ｈまたはアルキルであり、
またはそれらの立体化学異性体であり、
またはそれらの薬学的に許容される塩である。
【0012】
また、治療有効量の式Ｉによる化合物を含む神経変性疾患または癌を治療するための組成物、および治療有効量の式Ｉによる化合物を対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象における神経変性疾患または癌を治療する方法が開示される。
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
（先行技術文献）
（特許文献）
（特許文献１） 国際公開第２０１９／１６９１１１号
（特許文献２） 米国特許出願公開第２０１３／０２７４２４３号明細書
（特許文献３） 米国特許第７，３２９，６６３号明細書
（特許文献４） 米国特許出願公開第２００６／０１８３７５５号明細書
（特許文献５） 米国特許第４，５７９，８４８号明細書
（特許文献６） 米国特許出願公開第２００８／０２９３７１３号明細書
（特許文献６） 米国特許出願公開第２００７／０２４９６３４号明細書
（特許文献１０） 米国特許第７，１４８，２２７号明細書
（非特許文献）
（非特許文献１） （ＹＵＡＮ，Ｓ ｅｔ ａｌ．）Ｂｒｏｎｓｔｅｄ ａｃｉｄ－ｐｒｏｍｐｔｅｄ'ｏｎ－ｗａｔｅｒ'Ｃ（ｓｐ３）－Ｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｉｓｏｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅ／［１，２，４］ｔｒｉａｚｏｌｏ［１．５．－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ＳＫＰ２－ＣＫＳ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒｓ． ２０２０，Ｅｐｕｂ １０ Ｊｕｌｙ ２０１９，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．２；ｐａｇｅｓ ３４９－３５２；ｐａｇｅ ３５０，ｆｉｇｕｒｅ １；ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｃｃｌｅｔ．２０１９．０７．０１９
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
（先行技術文献）
（特許文献）
（特許文献１） 国際公開第２０１９／１６９１１１号
（特許文献２） 米国特許出願公開第２０１３／０２７４２４３号明細書
（特許文献３） 米国特許第７，３２９，６６３号明細書
（特許文献４） 米国特許出願公開第２００６／０１８３７５５号明細書
（特許文献５） 米国特許第４，５７９，８４８号明細書
（特許文献６） 米国特許出願公開第２００８／０２９３７１３号明細書
（特許文献６） 米国特許出願公開第２００７／０２４９６３４号明細書
（特許文献１０） 米国特許第７，１４８，２２７号明細書
（非特許文献）
（非特許文献１） （ＹＵＡＮ，Ｓ ｅｔ ａｌ．）Ｂｒｏｎｓｔｅｄ ａｃｉｄ－ｐｒｏｍｐｔｅｄ'ｏｎ－ｗａｔｅｒ'Ｃ（ｓｐ３）－Ｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｉｓｏｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅ／［１，２，４］ｔｒｉａｚｏｌｏ［１．５．－ａ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ＳＫＰ２－ＣＫＳ１ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒｓ． ２０２０，Ｅｐｕｂ １０ Ｊｕｌｙ ２０１９，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．２；ｐａｇｅｓ ３４９－３５２；ｐａｇｅ ３５０，ｆｉｇｕｒｅ １；ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｃｃｌｅｔ．２０１９．０７．０１９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0013】
微小管（ＭＴ）活性を有する［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン（ＴＰＤ）および関連複素環分子は、神経変性疾患の治療への応用のための潜在的候補として注目されてきた。本発明者らは、これまでに、多数のＭＴ安定化およびＭＴ不安定化ＴＰＤを特徴付けてきた。例えば、米国特許第第９，６４９，３１７号は、そのような化合物の使用方法を開示する。本開示は、指定されたＣ６－フェニル置換を含む新規ＴＰＤを提供する。ＭＴ安定化の細胞ベースのアッセイにおけるＴＰＤのＭＴ安定化特性に関する事前の調査により、置換パターンを変化させると、ＭＴ安定化を促進するか、逆にＭＴ安定化を破壊することができる分子になることが明らかになった。ＴＰＤ内の特定の構造的特徴がＭＴ安定性の増加を引き出すのに重要であるという観察に基づいて、本発明者らは、ＴＰＤ足場のＳＡＲのより体系的な探求に取り組んだ。このＳＡＲ研究は、本明細書に記載されるように、新規なＣ６ニトリルおよびアルキン置換ＴＰＤの合成につながった。重要なことは、本明細書に開示される分子は、以前に記載された例と比較して、ＭＴ安定化活性および薬学的特性が改善されていることである。
【0014】
したがって、現在、あるクラスの微小管安定化化合物が、神経変性疾患、特にタウパチー、例えば、アルツハイマー病、前頭側頭葉変性症、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、および大脳皮質変性症の治療に有用であることが発見された。さらに、本発明の化合物は、タウ病理が併発する、または微小管機能が低下する他の疾患、例えば、統合失調症、パーキンソン病（ＰＤ）、認知症を伴うＰＤ、認知症を伴うレビー小体病、および筋萎縮性側索硬化症に有用であると考えられる。
【0015】
本発明の化合物は、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、特に反復性ＴＢＩ（ｒＴＢＩ）、例えばボクサー痴呆および反復性サッカーでの脳震盪によるもの、およびＩＥＤによる軍隊での閉鎖性頭部外傷による起こる、これは慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）としても知られる反復性ＴＢＩ（ｒＴＢＩ）として知られており、タウオパシーまたはＡＤ様病理の特徴を有する、を治療するために用いることも可能である。ＣＴＥもＰＴＳＤから出現するのではないかと推測される。
【0016】
本開示において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、複数の参照を含み、特定の数値への参照は、文脈が明らかにそうでないことを示していない限り、少なくともその特定の数値を含む。したがって、例えば、「ある材料」への言及は、当業者に知られているそのような材料およびその等価物の少なくとも１つへの言及である、などである。
【0017】
値が記述子「約」の使用によって近似値として表現される場合、特定の値が別の実施形態を形成することが理解されるだろう。一般に、用語「約」の使用は、開示された主題によって得ようとする所望の特性に応じて変化し得る近似値を示し、その機能に基づいて、使用される特定の文脈で解釈されるものである。当業者であれば、日常的に解釈することが可能だろう。場合によっては、特定の値に使用される有効数字の数は、「約」という言葉の範囲を決定する１つの非限定的な方法である可能性がある。他の場合では、一連の値で使用される階調を使用して、各値について「約」という用語に利用可能な意図された範囲を決定することができる。存在する場合、すべての範囲は包括的であり、組み合わせが可能である。すなわち、範囲内に記載された値への言及は、その範囲内のすべての値を含む。
【0018】
リストが提示される場合、特に断らない限り、そのリストの個々の要素およびそのリストのすべての組み合わせは、別々の実施形態として解釈されるものと理解されるものとする。例えば、「Ａ、Ｂ、またはＣ」として提示された実施形態のリストは、「Ａ」、「Ｂ」、「Ｃ」、「ＡまたはＢ」、「ＡまたはＣ」、「ＢまたはＣ」、または「Ａ、Ｂ、またはＣ」という実施形態が含まれると解釈される。
【0019】
本明細書で使用される場合、「アルキル」は、約１～約２０個の炭素原子（およびその中の炭素原子の範囲および特定の数のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ）を有する任意に置換された、飽和直鎖または分枝状の、炭化水素ラジカルを指す。例えば、「アルキル」は、約１～２０、１～１５、１～１０、１～８、１～６、１～５、１～４、または１～３の炭素原子を有する置換または非置換の、直鎖または分岐炭化水素ラジカルを指す場合がある。いくつかの実施形態では、「アルキル」は、約１～６個の炭素原子を有する非置換の直鎖ラジカルを指す。適切な場合、「アルキル」は「アルキレン」を意味し得る。例えば、Ｘが－Ｒ１Ｒ２、およびＲ１が「アルキル」であると言われる場合、「アルキル」は「アルキレン」を意味すると正しく解釈されることがある。
【0020】
「ヘテロシクリル」または「複素環」は、２～１２個の炭素原子と、窒素、酸素および硫黄から選択される１～６個のヘテロ原子を含む安定な３～１８員非芳香環ラジカルを意味する。いくつかの実施形態では、唯一のヘテロ原子は、Ｒ２およびＲ３が結合している窒素原子である。本明細書に登場する場合、「３～１８」などの数値範囲は、与えられた範囲内の各整数を指し、例えば、「３～１８環原子」は、ヘテロシクリル基が３環原子、４環原子、等々、１８環原子までで構成されていて良いことを意味する。本明細書において特に記載がない限り、ヘテロシクリル基は、単環式、二環式、三環式、または四環式環系であり、縮合環系または架橋環系が含まれていても良い。ヘテロシクリルラジカル中のヘテロ原子は、任意に酸化されていても良い。存在する場合、１つまたはそれ以上の窒素原子は、任意に四級化される。ヘテロシクリルラジカルは、部分的にまたは完全に飽和している。ヘテロシクリルは、環（複数可）の任意の原子を介して分子の残りの部分に結合していても良い。ヘテロシクリルラジカルの例としては、アゼパニル、アゾカニル、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２－オキソピペラジニル、２－オキソピペリジニル、２－オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４－ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリン、１－オキソチオオモリニルおよび１，１－ジオキソチオモリニルなどを含むが、これらに限定されない。「ヘテロシクリル」は、通常３～７個の環原子を有する一方の非芳香族環が、酸素、硫黄、および窒素から独立して選択される１～３個のヘテロ原子に加えて少なくとも２個の炭素原子を含む二環系、ならびに前述のヘテロ原子の少なくとも１つを含む組み合わせ、および通常３～７個の環原子を有する他方の環が、任意に酸素、硫黄および窒素から独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含み、芳香族ではない環系も含むことができる。ヘテロシクリル部分は、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ、好ましくはＦ）、－ＯＨ、－ＯＣ１－６アルキル、－ＣＮ、－ＮＨ２、－ＮＨ（Ｃ１－６アルキル）、－ＮＨ（Ｃ１－６アルキル）２、Ｃ３－８シロアルキル、ヘテロシクリル、アリル、またはヘテロアリルから選ばれる１、２または３の置換基によって任意に置換される。
【0021】
明確化のために、本明細書において別々の実施形態の文脈で説明されている本発明の特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供することもできることが理解されるものとする。すなわち、明らかに非互換または除外されない限り、個々の実施形態は、他の任意の実施形態（複数可）と組み合わせ可能であるとみなされ、そのような組み合わせは、別の実施形態であるとみなされる。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈で説明されている本発明の様々な特徴も、別々にまたは任意のサブコンビネーションで提供されても良い。さらに、特許請求の範囲は、任意の要素を除外するように起草することができることに留意されたい。このように、本明細書は、請求項要素の記載に関連して、「単独で」、「のみ」などの排他的用語の使用、または「否定」制限の使用に対する先行根拠として機能することを意図している。最後に、実施形態は、一連の工程の一部またはより一般的な構造の一部として記載される場合があるが、各前記は、それ自体独立した実施形態とみなされる場合もある。
【0022】
本発明化合物には、式Ｉの化合物が含まれる。
式中
Ｒ１はＣｌであり、
Ｒ２は、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＨ３、ＣＨ（ｔｅｒｔ－ブチル）ＣＨ３、またはＣＨ（メチルジアジリニル）ＣＨ３であり、ここでＲ２は、任意でモノまたはポリ重水素化されても良く、
Ｒ３はＨまたはアルキルであるか、あるいは、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＮ原子とともに、Ｃ５－Ｃ７ヘテロ環または３－メトキシ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イルを形成し、
Ｒ４は、ＨまたはＦであり、
Ｒ５は、ＨまたはＦであり、
Ｒ６は、ヨード、シアノ、エチニル、または－Ｃ≡Ｃ－（ＣＨ２）ｎ－Ｒ７であり、ここでｎ＝０～３であり、Ｒ７はＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、または－Ｎ（ＣＨ３）２であり、ここでＲ６は、任意でモノまたはポリ重水素であって良く、
Ｒ８は、Ｈまたはアルキルであり、
またはその立体化学異性体であり、
またはその薬学的に許容される塩である。
【化4】
Ｒ１はＣｌであり、
Ｒ２は、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＨ３、ＣＨ（ｔｅｒｔ－ブチル）ＣＨ３、またはＣＨ（メチルジアジリニル）ＣＨ３であり、ここでＲ２は、任意でモノまたはポリ重水素化されても良く、
Ｒ３はＨまたはアルキルであるか、あるいは、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＮ原子とともに、Ｃ５－Ｃ７ヘテロ環または３－メトキシ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イルを形成し、
Ｒ４は、ＨまたはＦであり、
Ｒ５は、ＨまたはＦであり、
Ｒ６は、ヨード、シアノ、エチニル、または－Ｃ≡Ｃ－（ＣＨ２）ｎ－Ｒ７であり、ここでｎ＝０～３であり、Ｒ７はＨ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＮＨＣＨ３、または－Ｎ（ＣＨ３）２であり、ここでＲ６は、任意でモノまたはポリ重水素であって良く、
Ｒ８は、Ｈまたはアルキルであり、
またはその立体化学異性体であり、
またはその薬学的に許容される塩である。
【0023】
式Ｉの化合物の立体異性体形態、例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、およびアトロピソマーも、式Ｉの任意の化合物または立体異性体の薬学的に許容される塩と同様に、本発明の範囲内である。本明細書で使用される場合、「立体異性体」は、本発明のすべてのエナンチオマー／ジアステレオマー的に純粋な化合物およびエナンチオマー／ジアステレオマー的に濃縮された化合物を指す。アトロピソマー、すなわち、単結合についての回転を妨げられて生じる立体異性体もまた、用語「立体異性体」の範囲内である。
【0024】
本明細書で使用する「薬学的に許容される塩」とは、一般に医薬用途として安全であると考えられる本発明の化合物の塩を指す。例えば、塩酸塩、硫酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、およびイソエトン酸塩を含む。
【0025】
Ｒ３は、Ｈまたはアルキルである。特定の実施形態において、Ｒ３はＨである。他の実施形態において、Ｒ３はアルキル、例えば、Ｃ１－Ｃ６アルキルである。
【0026】
本化合物の特定の実施形態において、Ｒ６はヨードである。これらの実施形態のいくつかでは、Ｒ４およびＲ５は両方ともＦであり、Ｒ３はＨである。Ｒ４およびＲ５が両方ともＦである実施形態では、Ｒ２は、例えば、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＨ３、またはＣＨ（ｔｅｒｔ－ブチル）ＣＨ３であっても良い。
【0027】
本化合物の特定の実施形態において、Ｒ６はシアノである。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ４およびＲ５は両方ともＦである。Ｒ４およびＲ５が両方ともＦである実施形態において、Ｒ２はＣＨ（ＣＨ３）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＨ３、またはＣＨ（ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ）ＣＨ３であっても良い。Ｒ４およびＲ５がともにＦである他の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＮ原子と一緒に、ピペリジニル、アゼパニル、またはアゾカニルを形成しても良い。
【0028】
Ｒ６がシアノである特定の他の実施形態では、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＦである。これらの実施形態のいくつかでは、Ｒ２は、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＨ３、またはＣＨ（ｔｅｒｔ－ブチル）ＣＨ３であっても良い。これらの実施形態のいくつかの他のものでは、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＮ原子と一緒に、ピペリジニル、アゼパニル、またはアゾカニルを形成している。
【0029】
他の実施形態では、Ｒ６はエチニルである。これらの実施形態のうちのあるものに関して、Ｒ４およびＲ５は、両方ともＦであっても良い。これらの実施形態のうちのあるものに関して、Ｒ２は、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＨ３、またはＣＨ（ｔｅｒｔ－ブチル）ＣＨ３としても良い。これらの実施形態の特定の他のものでは、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＮ原子と一緒になって、ピペリジニル、アゼパニル、またはアゾカニルを形成する。
【0030】
Ｒ６がエチニルである特定の他の実施形態では、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＦである。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ２はＣＨ（ＣＨ３）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＦ３、ＣＨ（イソプロピル）ＣＨ３、またはＣＨ（ｔｅｒｔ－ブチル）ＣＨ３である。これらの実施形態の他の特定のものにおいて、Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＮ原子とともに、ピペリジニル、アゼパニル、またはアゾカニルを形成する。
【0031】
いくつかの実施形態において、Ｒ６は、－Ｃ≡Ｃ－（ＣＨ２）ｎ－Ｒ７これらの実施形態のうちのあるものにおいて、ｎは１～３である。これらの実施形態のいくつかにおいて、Ｒ４およびＲ５は、両方ともＦである。
【0032】
本開示による例示的な化合物は、以下の表１に描かれる。
【表1】
【0033】
また、上述の実施形態のいずれか１つに従う化合物の治療有効量を含む、神経変性疾患または癌を治療するための組成物も提供される。また、上述の実施形態のいずれか１つに従う化合物の治療有効量を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における神経変性疾患または癌を治療する方法も開示される。
【0034】
本明細書で使用する場合、「治療上有効な量」という語句は、研究者、獣医師、医学博士または他の臨床医が組織、系、動物、個体またはヒトにおいて求めている生物学的または薬学的応答を誘発する活性化合物の量を指し、以下の１または複数が含まれる。
（１）疾患または状態またはその症状を少なくとも部分的に予防すること、例えば、疾患、状態、または障害の素因を有し得るが、疾患の病態または症状をまだ経験または示さない個体において、疾患、状態、または障害を予防すること。
（２）疾患または状態を抑制すること、例えば、疾患、状態、または障害の病態または症状を経験または示している個体における疾患、状態または障害を抑制すること（すなわち、病態および／または症状のさらなる進展を阻止することを含む）、および
（３）疾患または状態を少なくとも部分的に改善すること、例えば、疾患、状態、または障害の病態または症状を経験または示している個体において疾患、状態、または障害を改善すること（すなわち、病態および／または症状を逆転させることを含む）。
（１）疾患または状態またはその症状を少なくとも部分的に予防すること、例えば、疾患、状態、または障害の素因を有し得るが、疾患の病態または症状をまだ経験または示さない個体において、疾患、状態、または障害を予防すること。
（２）疾患または状態を抑制すること、例えば、疾患、状態、または障害の病態または症状を経験または示している個体における疾患、状態または障害を抑制すること（すなわち、病態および／または症状のさらなる進展を阻止することを含む）、および
（３）疾患または状態を少なくとも部分的に改善すること、例えば、疾患、状態、または障害の病態または症状を経験または示している個体において疾患、状態、または障害を改善すること（すなわち、病態および／または症状を逆転させることを含む）。
【0035】
本開示による化合物は、任意のタイプの投与のために製剤化された組成物において提供されても良い。例えば、組成物は、経口、局所、非経口、経腸、または吸入による投与のために製剤化されても良い。活性化合物は、ニート投与のために、または従来の医薬担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて処方されても良く、これらは液体または固体であっても良い。適用可能な固体担体、希釈剤、または賦形剤は、特に、結合剤、崩壊剤、充填剤、潤滑剤、滑沢剤、圧縮助剤、加工助剤、着色剤、甘味料、保存剤、懸濁／分散剤、錠剤崩壊剤、カプセル化材料、フィルム形成剤またはコーティング、香味剤、または印刷インクとして機能しても良い。任意の投与単位形態の調製に使用される任意の材料は、好ましくは、採用される量において薬学的に純粋であり、実質的に非毒性である。さらに、活性化合物は、徐放性調剤および製剤に組み入れることができる。この点における投与は、特に以下の経路：静脈内、筋肉内、皮下、眼内、経皮、眼科、舌下および頬を含む経皮；眼科、皮膚、眼、直腸および鼻を含む局所気腹、エアゾール、および直腸全身を介した吸入による投与を含む。
【0036】
粉末では、担体、希釈剤、または賦形剤は、細かく分割された活性成分と混和される細かく分割された固体であって良い。錠剤では、活性成分は、必要な圧縮特性を有する担体、希釈剤または賦形剤と適切な割合で混合され、所望の形状およびサイズに圧縮される。経口治療投与の場合、活性化合物は、担体、希釈剤、または賦形剤と一緒に組み込まれ、摂取可能な錠剤、頬錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウエハースなどの形態で使用され得る。このような治療上有用な組成物中の活性化合物（複数可）の量は、好ましくは、適切な投与量が得られるような量である。
【0037】
液体担体、希釈剤、または賦形剤は、溶液、懸濁液、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤などを調製する際に使用することができる。本発明の有効成分は、水、有機溶媒、両者の混合物、または薬学的に許容される油脂などの薬学的に許容される液体に溶解または懸濁させることができる。液体担体、賦形剤、または希釈剤は、可溶化剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤、甘味料、香味剤、懸濁剤、増粘剤、着色剤、粘度調整剤、安定剤、または浸透圧調整剤などの他の適切な医薬添加物を含むことができる。
【0038】
適切な固体担体、希釈剤、および賦形剤としては、例えば、リン酸カルシウム、二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリジン、低融点ワックス、イオン交換樹脂、クロスカルメロースカーボン、アカシア、ゼラチン化デンプン、クロスポビドン、ＨＰＭＣ、ポビドン、二酸化チタン、多結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、寒天、トラガカント、またはそれらの混合物などを含む。
【0039】
液体担体、希釈剤および賦形剤の好適な例としては、例えば、経口、局所、または非経口投与のための、水（特に上記のような添加物を含む、例えばセルロース誘導体、好ましくはカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液）、アルコール（一価アルコールおよび多価アルコールを含む、例えばグリコール）およびそれらの誘導体、ならびに油（例えば分別ココナッツ油およびアラキス油）、またはそれらの混合物などを含む。
【0040】
非経口投与の場合、担体、希釈剤、または賦形剤は、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルのような油性エステルであることもできる。また、非経口投与のための無菌液体形態組成物に使用される無菌液体担体、希釈剤、または賦形剤も企図される。遊離塩基または薬学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤と好適に混合した水中で調製することができる。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物、ならびに油中に調製することができる。通常の保管および使用条件下では、これらの製剤は、微生物の増殖を防ぐために防腐剤を含んでいても良い。
【0041】
注射用に適した医薬形態としては、例えば、無菌の水溶液または分散液、無菌の注射用溶液または分散液を即席で調製するための無菌の粉末が挙げられる。いずれの場合においても、その形態は、好ましくは、容易に注射できるように滅菌され、流動性を有するものである。それは、好ましくは、製造および貯蔵の条件下で安定であり、好ましくは、細菌および真菌のような微生物の汚染作用に対して保存される。担体、希釈剤、または賦形剤は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、および植物油を含む溶媒または分散媒であっても良い。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用、分散液の場合には必要な粒子径の維持、界面活性剤の使用などによって維持することができる。また、微生物の作用の防止は、各種抗菌剤、抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等によって達成することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖類または塩化ナトリウムを含むことが好ましいだろう。注射用組成物の長時間の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によって達成され得る。
【0042】
無菌注射液は、活性化合物を薬学的に適切な量で、適切な溶媒中に、必要に応じて上記に列挙した様々な他の成分と一緒に取り込み、その後、濾過滅菌することにより調製することができる。一般に、分散液は、滅菌された活性成分を、基本的な分散媒と上記に列挙した成分のうち必要な他の成分を含む無菌ビヒクルに取り込むことにより調製することができる。無菌注射液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分または成分の粉末を得る真空乾燥および凍結乾燥技術、ならびにその前に無菌ろ過した溶液からの任意の追加の所望の成分を含むことができる。
【0043】
したがって、活性化合物は、医療分野で十分に確立された従来の技術のいずれかによって、有効な量で本発明の組成物および方法に含まれていても良い。例えば、投与は、１日あたり約０．１ｍｇ～約５００ｍｇの量であっても良い。いくつかの実施形態では、投与は、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日の量であって良い。したがって、投与は、約０．１ｍｇ／日、約０．５ｍｇ／日、約１．０ｍｇ／日、約５ｍｇ／日、約１０ｍｇ／日、約２０ｍｇ／日、約５０ｍｇ／日、約１００ｍｇ／日、約２００ｍｇ／日、約２５０ｍｇ／日、約３００ｍｇ／日、または約５００ｍｇ／日の量であり得る。
【0044】
本開示による対象における神経変性疾患を治療する方法に従って、神経変性疾患は、対象の脳におけるタウオパシーまたは低下した微小管機能によって特徴付けられることがある。特定の実施形態では、神経変性疾患は、アルツハイマー病、前頭側頭葉変性症、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、皮質基底変性症、パーキンソン病（ＰＤ）、認知症を伴うＰＤ、認知症を伴うレビー小体病、または筋萎縮性側索硬化症であり得る。他の実施形態では、神経変性疾患は、外傷性脳損傷または外傷後ストレス障害である。外傷性脳損傷は、例えば、反復性外傷性脳損傷または慢性外傷性脳症であっても良い。他の実施形態において、神経変性疾患は、統合失調症である。
【0045】
本開示による対象における癌の治療方法に従って、癌は、癌腫、肉腫、メラノーマ、リンパ腫、または白血病であって良い。一般的な癌腫は、例えば、皮膚、肺、乳房、膵臓、および他の器官および腺に由来する癌を含む。肉腫は、骨、筋肉、脂肪、血管、軟骨、または身体の他の軟組織または結合組織に発生する癌で表される。本発明の方法に従って治療され得る例示的な癌には、グリオーマおよび星細胞腫などの脳癌、膀胱癌、乳癌、結腸または直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、白血病、肝肺癌、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、すい臓癌、前立腺癌、または甲状腺癌が含まれる。
【0046】
以下、本開示を例示することを目的とした実施例を通じて、本開示をより詳細に説明するが、本開示は実施例に限定されるものではない。
【実施例1】
【0047】
実施例１－合成の手順
この研究の一環として、７つの既知のトリアゾロピリミジン、２５の特許文献に例示されている化合物、４１の構造的に新規な化合物を含む、合計７３の化合物が合成され、試験された。いずれの場合も、適切なジエチルマロネート（７９－９５、スキーム１）と１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－アミンの環縮合反応によってトリアゾロピリミジン環にアクセスした。次に、オキシ塩化リン処理により、対応する５，７－ジクロロトリアゾロピリミジン（９６－１１２，スキーム１）を得た。（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－アミン－２を用いてＣ７を化学選択的にアミノ化すると、トリアゾロピリミジン６－２２が得られた（スキーム１）。
スキーム１．試薬と反応条件：ａ）７９－８８，９０－９４の場合、Ａｒ－Ｘ、ＣｕＢｒ、ＮａＨ、１，４－ジオキサン、６０－１００℃，１２時間、１９－７４％；８９の場合、Ａｒ－ＣＨ２Ｂｒ、ＮａＨ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、０℃，１時間，９０％；９５の場合：Ａｒ－Ｆ、ＫＣＯ、ＮａＨ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、６０℃、４時間，９０％：Ａｒ－Ｆ、Ｋ２ＣＯ３、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、６０℃、４時間、８６％；ｂ）Ｎ－トリブチルアミン、１７０－１８０℃、２－６時間；ｃ）オキシ塩化リン、１１０－１３０℃，６－１６時間，４６－５８％二段で処理する。ｄ）適切なアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ｒｔ－９０℃，１－１８時間，１２－５０％；ｅ）Ｆｅ、ＮＨ４Ｃｌ、Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ（４０／５０）、８０℃，２時間、６９％．
この研究の一環として、７つの既知のトリアゾロピリミジン、２５の特許文献に例示されている化合物、４１の構造的に新規な化合物を含む、合計７３の化合物が合成され、試験された。いずれの場合も、適切なジエチルマロネート（７９－９５、スキーム１）と１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－アミンの環縮合反応によってトリアゾロピリミジン環にアクセスした。次に、オキシ塩化リン処理により、対応する５，７－ジクロロトリアゾロピリミジン（９６－１１２，スキーム１）を得た。（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－アミン－２を用いてＣ７を化学選択的にアミノ化すると、トリアゾロピリミジン６－２２が得られた（スキーム１）。
【表2】
【0048】
対照化合物６に比べてＣ６とＣ７の両断片が修飾された化合物６１－７８（スキーム５）の合成は、適切なトリアゾロピリミジンジクロリド（９８、９９、１０９、または１１０）とアミン断片を反応させて行った（スキーム５）。特定の場合（すなわち６７および６８）、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製すると、個々のアトロポイソマーが得られ、その構造はＸ線結晶学によって決定することができた（スキーム５）。
スキーム５．試薬と反応条件：ａ）適切なアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ｒｔ、１時間、５６－８６％。
【表3】
【実施例2】
【0049】
実施例２－材料と方法
溶媒はすべて試薬グレードを使用した。すべての試薬はＡｌｄｒｉｃｈまたはＡｃｒｏｓから購入し、受け取ったまま使用した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、０．２５ｍｍＥ．Ｍｅｒｃｋプレコートシリカゲルプレートで実施した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ ａｎｄ Ｓｏｒｂｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社から供給されたシリカゲル６０（粒子径０．０４０－０．０６２ｍｍ）を用いて行った。ＴＬＣスポットは、ＵＶライト下で観察することにより検出した。融点（ｍｐ）はＭｅｌ－ＴｅｍｐＩＩ（モデル：１００１）で取得し、未補正である。赤外（ＩＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ、モデルＡｌｐｈａ分光計（部品番号１００３２７１／０３）で記録された。プロトン（１Ｈ）および炭素（１３Ｃ）ＮＭＲスペクトルは、５００ＭＨｚＢｒｕｋｅｒ ＡＭＸ－５００スペクトロメーターまたは６００ＭＨｚ Ｂｒｕｋｅｒ ＡｖａｎｃｅＩＩＩスペクトロメーターで記録された。化学シフトは溶媒に対する相対値で報告された。高分解能質量スペクトルは、Ｊｅｔ ｓｔｒｅａｍ エレクトロスプレーイオン化源（ＥＳＩ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ６２３０飛行時間型質量分析計（ＴＯＦＭＳ）を使用して測定された。単結晶Ｘ線構造決定は、ＡＰＥＸＩＩ検出器、ダブルバウンスマイクロフォーカス光学系、Ｃｕ回転陽極線源を備えたＢｒｕｋｅｒ ＭｉｃｒｏＳｔａｒで実施された。分析用逆相（Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８；４．６ｍｍ×５０ｍｍ、５ｍＬ）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、ＵＶおよび質量検出器を備えたＧｉｌｓｏｎＨＰＬＣで実施された。すべてのサンプルは、８分かけて水中のＣＨ３ＣＮの１０％から９０％までの線形勾配と１ｍＬ／分の流速を採用して分析し、特に断らない限り、純度レベルは>９５％であった。分取逆相ＨＰＬＣ精製は、Ｗａｔｅｒｓ ＳｕｎＦｉｒｅ分取Ｃ１８ＯＢＤカラム（５μｍ１９ｍｍ×５０ｍｍまたは１９ｍｍ×１００ｍｍ）を使用するＧｉｌｓｏｎ装置で実施した。精製は、水中ＣＨ３ＣＮの１０％から９０％までの線形勾配を用い、２０ｍＬ／分の流速で１５分間実施した。特に断りのない限り、すべての最終化合物は、ＨＰＬＣ／ＭＳおよびＮＭＲによって決定されるように、９５％以上の純度を有することが確認された。
溶媒はすべて試薬グレードを使用した。すべての試薬はＡｌｄｒｉｃｈまたはＡｃｒｏｓから購入し、受け取ったまま使用した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、０．２５ｍｍＥ．Ｍｅｒｃｋプレコートシリカゲルプレートで実施した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ ａｎｄ Ｓｏｒｂｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社から供給されたシリカゲル６０（粒子径０．０４０－０．０６２ｍｍ）を用いて行った。ＴＬＣスポットは、ＵＶライト下で観察することにより検出した。融点（ｍｐ）はＭｅｌ－ＴｅｍｐＩＩ（モデル：１００１）で取得し、未補正である。赤外（ＩＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ、モデルＡｌｐｈａ分光計（部品番号１００３２７１／０３）で記録された。プロトン（１Ｈ）および炭素（１３Ｃ）ＮＭＲスペクトルは、５００ＭＨｚＢｒｕｋｅｒ ＡＭＸ－５００スペクトロメーターまたは６００ＭＨｚ Ｂｒｕｋｅｒ ＡｖａｎｃｅＩＩＩスペクトロメーターで記録された。化学シフトは溶媒に対する相対値で報告された。高分解能質量スペクトルは、Ｊｅｔ ｓｔｒｅａｍ エレクトロスプレーイオン化源（ＥＳＩ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ６２３０飛行時間型質量分析計（ＴＯＦＭＳ）を使用して測定された。単結晶Ｘ線構造決定は、ＡＰＥＸＩＩ検出器、ダブルバウンスマイクロフォーカス光学系、Ｃｕ回転陽極線源を備えたＢｒｕｋｅｒ ＭｉｃｒｏＳｔａｒで実施された。分析用逆相（Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８；４．６ｍｍ×５０ｍｍ、５ｍＬ）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、ＵＶおよび質量検出器を備えたＧｉｌｓｏｎＨＰＬＣで実施された。すべてのサンプルは、８分かけて水中のＣＨ３ＣＮの１０％から９０％までの線形勾配と１ｍＬ／分の流速を採用して分析し、特に断らない限り、純度レベルは>９５％であった。分取逆相ＨＰＬＣ精製は、Ｗａｔｅｒｓ ＳｕｎＦｉｒｅ分取Ｃ１８ＯＢＤカラム（５μｍ１９ｍｍ×５０ｍｍまたは１９ｍｍ×１００ｍｍ）を使用するＧｉｌｓｏｎ装置で実施した。精製は、水中ＣＨ３ＣＮの１０％から９０％までの線形勾配を用い、２０ｍＬ／分の流速で１５分間実施した。特に断りのない限り、すべての最終化合物は、ＨＰＬＣ／ＭＳおよびＮＭＲによって決定されるように、９５％以上の純度を有することが確認された。
【0050】
一般手順Ａ（ジエチルマロネート誘導体の合成）
Ｎ２の下、６０℃で無水１，４－ジオキサン（あらかじめＮ２で脱気）中のＮａＨ（鉱油中６０重量％）（１．００ｅｑｕｉｖ）の懸濁液（臭化アリール誘導体から１．７５ｍｏｌ／Ｌ）にマロン酸ジエチル（３．００ｅｑｕｉｖ）をゆっくり加え、１０分間攪拌した。次に、ＣｕＢｒ（１．２０ｅｑｕｉｖ）と臭化アリール誘導体を加え、反応物を還流で一晩加熱した。その後、ｒ．ｔ．でＨＣｌ１２Ｎ（１．４０ｅｑｕｉｖ）で反応をクエンチした。混合物を濾過し、Ｈ２Ｏで洗浄した。濾液をＥｔＯＡｃで抽出した（×３）。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、ｖａｃｕｏで濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーまたは分取逆相ＨＰＬＣで精製し、純粋なジエチルマロネート誘導体を得た。
Ｎ２の下、６０℃で無水１，４－ジオキサン（あらかじめＮ２で脱気）中のＮａＨ（鉱油中６０重量％）（１．００ｅｑｕｉｖ）の懸濁液（臭化アリール誘導体から１．７５ｍｏｌ／Ｌ）にマロン酸ジエチル（３．００ｅｑｕｉｖ）をゆっくり加え、１０分間攪拌した。次に、ＣｕＢｒ（１．２０ｅｑｕｉｖ）と臭化アリール誘導体を加え、反応物を還流で一晩加熱した。その後、ｒ．ｔ．でＨＣｌ１２Ｎ（１．４０ｅｑｕｉｖ）で反応をクエンチした。混合物を濾過し、Ｈ２Ｏで洗浄した。濾液をＥｔＯＡｃで抽出した（×３）。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、ｖａｃｕｏで濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーまたは分取逆相ＨＰＬＣで精製し、純粋なジエチルマロネート誘導体を得た。
【0051】
一般手順Ｂ（ジクロロトリアゾロピリミジン誘導体の合成）
密閉管にジエチルマロネート誘導体（１．００等量）、３－アミノ－１，２，４－トリアゾール（１．０５等量）およびトリブチルアミン（１．０５等量）を入れ、１７０℃で２時間撹拌し、１３０℃に冷却後、トルエンを加えた（ジエチルマロネート誘導体から１．００ｍｏｌ／Ｌ）。その後、５０℃で冷却し、ＮａＯＨ（５０％ｗｔ）水溶液（ジエチルマロン酸誘導体から１６０μＬ／ｍｍｏｌ）を加えた。その後、０℃で１０分間攪拌し、濾過した。生成した固体を冷却したトルエンで洗浄し、乾燥させた。このジスアミド誘導体（１．００等量）とＰＯＣｌ３（１７．８０等量）を密閉管内で混合し、１３０℃で６時間加熱した。その後、反応をＨ２Ｏでクエンチし、ＥｔｏＡｃで抽出した（×２）。結合した有機抽出物を水（×５）、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。得られた生成物は、さらに精製することなく、次の反応に直接使用した。
密閉管にジエチルマロネート誘導体（１．００等量）、３－アミノ－１，２，４－トリアゾール（１．０５等量）およびトリブチルアミン（１．０５等量）を入れ、１７０℃で２時間撹拌し、１３０℃に冷却後、トルエンを加えた（ジエチルマロネート誘導体から１．００ｍｏｌ／Ｌ）。その後、５０℃で冷却し、ＮａＯＨ（５０％ｗｔ）水溶液（ジエチルマロン酸誘導体から１６０μＬ／ｍｍｏｌ）を加えた。その後、０℃で１０分間攪拌し、濾過した。生成した固体を冷却したトルエンで洗浄し、乾燥させた。このジスアミド誘導体（１．００等量）とＰＯＣｌ３（１７．８０等量）を密閉管内で混合し、１３０℃で６時間加熱した。その後、反応をＨ２Ｏでクエンチし、ＥｔｏＡｃで抽出した（×２）。結合した有機抽出物を水（×５）、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。得られた生成物は、さらに精製することなく、次の反応に直接使用した。
【0052】
一般手順Ｃ（アミンの添加）
報告されている手順（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００７，５０，３１９－３２７）、室温でＤＭＦ（０．１Ｍ）中の５，７－ジクロロ－６－（２，４，６－トリフルオロフェニル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン（１．０等量）に、必要に応じてｉ－ＰＲ２ＮＥｔ（３．０等量）またはＥｔ３Ｎ（３．０等量）および適当なアミン（１．５～３．０等量）を添加した。反応混合物を０．５－１６時間撹拌し、Ｈ２Ｏで希釈した。有機層を１Ｎ塩酸溶液（２×）で洗浄し、水相をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、合わせた有機層をブライン（２×）で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）、ろ過、および濃縮した。生成物をフラッシュクロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣで精製した。
報告されている手順（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００７，５０，３１９－３２７）、室温でＤＭＦ（０．１Ｍ）中の５，７－ジクロロ－６－（２，４，６－トリフルオロフェニル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン（１．０等量）に、必要に応じてｉ－ＰＲ２ＮＥｔ（３．０等量）またはＥｔ３Ｎ（３．０等量）および適当なアミン（１．５～３．０等量）を添加した。反応混合物を０．５－１６時間撹拌し、Ｈ２Ｏで希釈した。有機層を１Ｎ塩酸溶液（２×）で洗浄し、水相をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出し、合わせた有機層をブライン（２×）で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）、ろ過、および濃縮した。生成物をフラッシュクロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣで精製した。
【0053】
一般手順Ｄ（側鎖の付加）
報告されている手順に従い（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００７，５０，３１９－３２７；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００９，１７，１１１－８）に、ＤＭＳＯとＴＨＦの２：１混合液（０．３５Ｍ）中のＮａＨ（４．０等量）の懸濁液にアミノアルコール（４．０等量）を加え、この混合物を６０℃で１時間加熱し、得られた溶液をＤＭＳＯとＴＨＦの１：１混合液（０．５Ｍ）中のトリフルオロアルペン（１．０等量）の溶液で処理しました。反応混合物を６０℃で３時間攪拌し、ＬＣＭＳでモニターした。３時間後に出発物質が残っている場合、追加のアミノアルコール（４．０等量）およびＮａＨ（４．０等量）を順次加え、反応混合物を１６時間加熱した。出発物質の完全消費後、反応混合物を室温に冷却し、Ｈ２ＯおよびＥｔＯＡｃで希釈した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、合わせた水層をＥｔＯＡｃで抽出した（×３）。合わせた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗生成物を逆相ＨＰＬＣで精製した。
報告されている手順に従い（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００７，５０，３１９－３２７；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００９，１７，１１１－８）に、ＤＭＳＯとＴＨＦの２：１混合液（０．３５Ｍ）中のＮａＨ（４．０等量）の懸濁液にアミノアルコール（４．０等量）を加え、この混合物を６０℃で１時間加熱し、得られた溶液をＤＭＳＯとＴＨＦの１：１混合液（０．５Ｍ）中のトリフルオロアルペン（１．０等量）の溶液で処理しました。反応混合物を６０℃で３時間攪拌し、ＬＣＭＳでモニターした。３時間後に出発物質が残っている場合、追加のアミノアルコール（４．０等量）およびＮａＨ（４．０等量）を順次加え、反応混合物を１６時間加熱した。出発物質の完全消費後、反応混合物を室温に冷却し、Ｈ２ＯおよびＥｔＯＡｃで希釈した。有機層をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、合わせた水層をＥｔＯＡｃで抽出した（×３）。合わせた有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗生成物を逆相ＨＰＬＣで精製した。
【0054】
【化5】
（Ｓ）－４－（５－クロロ－７－（（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル（３０ｍｇ，０．０９４ｍｍｏｌ）および（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－アミン（２２ｍｇ，０．１９０ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従い、化合物を合成した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０－４０％ＥｔＯＡ）による精製で、表題化合物を白色粉末として得た（２０ｍｇ，０．０５０ｍｍｏｌ，５４％）。
１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４１（ｓ，１Ｈ）、７．４４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．７７（ｓ，１Ｈ），１．４５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６１．２８（ｄｄ，Ｊ＝２５６．４，５．９Ｈｚ）、１６０．８７（ｄｄ，Ｊ＝２５４．７，６．０Ｈｚ）、１５６．８４，１５５．６８、１５４．３２、１２４．４６（ｑ，Ｊ＝２８２．１Ｈｚ）、１１６．５８（ｔ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、１１６．４７（ｄｄｄ、Ｊ＝６７．６，２５．４，４．１Ｈｚ）、１１５．７９（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ）、１１６．５８（ｔ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、１１６．４７（ｄｄｄ、Ｊ＝６７．６，２５．４，４．１Ｈｚ）、１１５．７９（ｄ、Ｊ＝３．５Ｈｚ）、１１４．９３（ｔ、Ｊ＝２０．０Ｈｚ）、９０．６１、５１．２７（ｑ、Ｊ＝３２．２Ｈｚ）、２９．８３、１５．１４ｐｐｍ．である。
ＩＲ：２９２３、２２３９、１６１７、１５５６、１１４１ｃｍ－１
Ｃ１５Ｈ９Ｎ６ＣｌＦ５［Ｍ＋Ｈ］＋４０３．０４９２のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、４０３．０４８６がわかった。
【0055】
【化6】
（Ｓ）－４－（５－クロロ－７－（（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル：
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル（４０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）および（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－アミン（３１ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従い、化合物を製造した。逆相ＨＰＬＣによる精製で、表題化合物を白色粉末として得た（３１ｍｇ，０．０７０ｍｍｏｌ，５４％）。
アトロポイソマーの混合物
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４１（ｓ，１Ｈ）、７．６８（ｄｄｄ，Ｊ＝７．８，３．８，１．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．６１（ｄｄｄ、Ｊ＝８．４，３．８，１．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．５７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．６１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．６３（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ）５０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．９４（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．５７（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９７（ｓ，１Ｈ），４．５０（ｓ，１Ｈ）、１．４０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍがわかった。
１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６１．２９（ｄ，Ｊ＝５２．０Ｈｚ）、１５９．６１（ｄ，Ｊ＝５０．４Ｈｚ）、１５６．６５（ｄ，Ｊ＝２４．９Ｈｚ）、１５５．７２（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ）、１５４．２０（ｄ，Ｊ＝５７．５Ｈｚ）、１４５．６５（ｄ，Ｊ＝６２．８Ｈｚ）、１３５．００（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ）、１３３．８４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）、１２９．２１（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）、１３４．６５（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１５５．７５（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ２１（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），１２４．９７（ｄｄ、Ｊ＝１６．２，１３．１Ｈｚ）、１２４．６７（ｑｄ，Ｊ＝２８２．３，３４．７Ｈｚ）、１２０．６２（ｄｄ，Ｊ＝７４．３，２５．２Ｈｚ）、１１６．７１（ｑｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ）、１２６．６１（ｑｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ）、１２６．６１（ｑｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ）６７（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ）、１１６．３３（ｄｄ，Ｊ＝９．３，５．２Ｈｚ）、９７．６６，９６．６１，５１．２６（ｄｑ，Ｊ＝３７．９，３１．８Ｈｚ）、１５．１３，１４．９９ｐｐｍとなった。
【0056】
【化7】
（Ｒ）－４－（５－クロロ－７－（（１，１，１－トリフルオロ－３－メチルブタン－２－イル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル（５５ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）および（Ｒ）－１，１，１－トリフルオロ－３－メチル－２－ブチルアミン（４８ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従い、表題化合物を製造した。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物を白色粉末として得た（２６ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ，３６％）。
１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３、混合アトロポイソマー）δ８．８１（ｓ，０．５Ｈ）、８．６９（ｓ，０．５Ｈ）、７．４６（ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ）、７．３３（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）、６．２８（ｂｓ，１Ｈ）、４．００（ｂｓ，１Ｈ）、２．１９（ｈｅｐｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）．３３（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ）、６．２８（ｂｓ，１Ｈ），４．００（ｂｓ，１Ｈ）、２．１９（ｈｅｐｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）、１．０４（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）、０．９７（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ．であることが確認された。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３、アトロポイソマー混合物）δ１６２．０５，１６２．０１，１６１．７９，１６１．７４，１６１．５４，１６１．４９，１６０．３５，１６０．３０，１６０．１０，１６０．０７，１５９．８６，１５９．８１４，１５８．３７，１５７．２３，１５７．１６，１５５．６５，１５４．６１，１５２．１５，１４６．２７，１４４．７７，１３９．１７，１３４．１６，１５５．１６，１５５．１６，１５４．１６，１５５．１６，１５４．１６，１５２．１６，１４４．２７，１５７．１７，１５７．１９，１５４．１９，１５７．１９，１５７．２０，１５７．３０，１６０．４０，１５８．３０７９，１３３．４７，１２４．３３（ｑ，Ｊ＝２８３．８８Ｈｚ），１１７．４１，１１６．８５，１１６．８２，１１６．７８，１１６．７０，１１６．６８，１１６．６５，１１６．４０，１１６．１７，１１６．００，１１５．８４，１１５．３０，１１５．０４，１１４．９１，１１３．００，１０９．７１，１０６．８６，５９．２８（ｑ，Ｊ＝２８．６９Ｈｚ），２８．２８，１９．８０，１６．６０ｐｐｍ．（以下同）
Ｃ１８Ｈ１７ＣｌＦＮ６［Ｍ＋Ｈ］＋４２９．０６５９のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、４２９．０６５５がわかった。
【0057】
【化8】
（Ｒ）－４－（５－クロロ－７－（（１，１，１－トリフルオロ－３－メチルブタン－２－イル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル（５１ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）および（Ｒ）－１，１，１－トリフルオロ－３－メチル－２－ブチルアミン（４７ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従い、化合物を調製した。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物を白色粉末として得た（１３ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ，１９％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，混合アトロポイソマー）δ８．４２（ｓ，０．５Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，０．５Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，０．５Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，０．５Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，０．５Ｈ）、７．４５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，０．５Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，０．５Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，０．５Ｈ。５Ｈ），７．４８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，０．５Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，０．５Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，０．５Ｈ），２．１４（ｈｅｐｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），１．０２（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）となった。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，混合アトロポイソマー）δ１６０．４４（ｄｄ，Ｊ＝２５３．６８，２８．６９Ｈｚ），１５８．９１，１５５．６６，１５５．６０，１３４．８８，１３４．５０，１２９．１８，１２９．０２，１２６．６８，１２４．８６，１２０．９７，１２０．８１，１２０．３９，１２０．６１、１２９．６３、１３９．６３、１５９．６３、１５９．６３、１５９．６４、１２９．６７、１２９．６７（ｄｄ））２１，１１６．７４（ｔ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），１１６．４２（ｔ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ）１１６．３６（ｔ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ）５９．０８（ｑ，Ｊ＝２８．７Ｈｚ），５５．８９（ｑ，Ｊ＝２８．７Ｈｚ），２８．３３，２８．１９，２７．７５，１９．９２，１９．８０，１７．１１，１６．７４，１６．６９ｐｐｍ．が得られた。
Ｃ１８Ｈ１７ＣｌＦＮ６［Ｍ＋Ｈ］＋４１１．０７５４のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、４１１．０７４７がわかった。
【0058】
【化9】
（Ｒ）－４－（５－クロロ－７－（（３－メチルブタン－２－イル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル（３０ｍｇ，０．０９２ｍｍｏｌ）および（Ｒ）－３－メチルブタン－２－アミン（１７ｍｇ，０．１９０ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従った。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物を白色粉末として得た（２８ｍｇ，０．０７４ｍｍｏｌ，８１％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ８．６２（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），１．７８（ｄｑ，Ｊ＝１３．９，６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．１０（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．７４（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．９Ｈｚ，６Ｈ）となった。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１６０．７１（ｄｄ，Ｊ＝２４９．２，６．８Ｈｚ），１６０．３８（ｄｄ，Ｊ＝２４９．５，６．３Ｈｚ），１５５．０２，１４６．８１，１１７．００（ｄｄｄ，Ｊ＝２６．３，１２．６，３．９Ｈｚ），１１６．４８（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），１１４．８３（ｔ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ）．となった。
ＩＲ：２９６６、２２２０、１６９０、１５６２、１４２２、１２０４ｃｍ－１
Ｃ１７Ｈ１６ＣｌＦ２Ｎ６［Ｍ＋Ｈ］＋３７７．１０８８のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、３７７．１０８９がわかった。
【0059】
【化10】
（Ｒ）－４－（５－クロロ－７－（（３－メチルブタン－２－イル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル（４８ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）および（Ｒ）－３－メチルブタン－２－アミン（３７ｍｇ，０．４２ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従って、４－フルオロベンゾニトリル（４８ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）、４－メチルフタレート（０．５ｍｍｏｌ）を得た。混合物を真空中で乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、アトロポイソマーＡを白色固体として（２９ｍｇ，０．０８１ｍｍｏｌ，３９％）およびアトロポイソマーＢ（２３ｍｇ，０．０６４ｍｍｏｌ，３０％）を得た。
アトロポソマーＡ
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３５（ｓ，１Ｈ）、７．６３（ｄｄ，Ｊ＝１２．０、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５６（ｄｄ、Ｊ＝１２．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．３０（δδδδ）、６．２９（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．００（ｂｓ，１Ｈ）、１．６４（ｏｃｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ１Ｈ）２９（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．００（ｂｓ，１Ｈ）、１．６４（ｏｃｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、０．９９（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）、０．８０（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）、０．７７（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ．であることが確認された。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６１．３７、１５９．７０、１５６．９１、１５５．１５、１５３．１５、１４５．６７、１３４．３９、１２８．７１、１２８．６９、１２７．１３（ｄ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ）、１２０．０２（ｄ，Ｊ＝２５．７Ｈｚ）、１１６．９８、１１５．５０（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ）、９４．５３、５５．０４、３３．４８、１８．１６、１７．８０、１７．１４ｐｐｍ。
アトロポイソマーＢ
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３５（ｓ，１Ｈ）、７．６３（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，３．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５６（ｄｄ，Ｊ＝１２．０、３．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５２（ｔ，Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．６０（ｄｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．６０（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｓ，１Ｈ）３０（ｂｓ，１Ｈ），３．０５（ｂｓ，１Ｈ）、１．６１（ｏｃｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、１．０５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）、０．７９（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）、０．７５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ．であった。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６１．４０、１５９．７３、１５６．９０、１５５．１９、１５３，５７、１４５．６７、１３５．０８、１３４．４０（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ）、１２８．５５（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）、１２７．０５（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）、１２０．２２（ｄ，Ｊ＝２５．７Ｈｚ）、１１７．０１、１１５．４５（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ）、９４．３７，５４．０５（δδ）、０３（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ）、１２０．２２（ｄ，Ｊ＝２５．７Ｈｚ）、１１７．０１、１１５．４５（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ）、９４．３７、５４．８５、３３．８０、１８．２０，１７．９０、１７．８２ｐｐｍ．となった。
ＩＲ：２９６３、２２２０、１６０８、１５７０、１２６０、１１５６ｃｍ－１
Ｃ１８Ｈ１７ＣｌＦＮ６［Ｍ＋Ｈ］＋３５９．１１８２のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、３５９．１１８４．がわかった。
【0060】
【化11】
（Ｒ）－４－（５－クロロ－７－（（３，３－ジメチルブタン－２－イル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル（２０ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ）および（Ｒ）－３，３－ジメチルブタン－２－アミン（１３ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従い、化合物を調製した。逆相ＨＰＬＣによる精製で、表題化合物を白色粉末として得た（１８ｍｇ，０．０４６ｍｍｏｌ，７５％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３６（ｓ，１Ｈ），７．４５－７．４１（ｍ，２Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．９４（ｓ，１Ｈ），１．０２（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．８４（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６１．３３（ｄｄ，Ｊ＝２５３．８，６．２Ｈｚ），１６１．０５（ｄｄ，Ｊ＝２５３．８，６．２Ｈｚ），１５７．１２，１５５．２２，１４６．０３，１１６．２２（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），１１６．１３－１１５．９５（ｍ），１１５．９５－１１５．８２（ｍ），５８．５７，３４．９３，２５．８６，１６．５６ｐｐｍ。
ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｆｏｒＣ１８Ｈ１８ＣｌＦ２Ｎ６［Ｍ＋Ｈ］＋３９１．１２４４，ｆｏｕｎｄ３９１．１２４１．
【0061】
【化12】
（Ｒ）－４－（５－クロロ－７－（（３，３－ジメチルブタン－２－イル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル（４０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）および（Ｒ）－３，３－ジメチルブタン－２－アミン（２８ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従って、４－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリジン－２－イル（４－ＦＢＰ）を生成させた。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物を白色粉末として得た（２７ｍｇ，０．０７２ｍｍｏｌ，５６％）。
アトロポイソマーの混合物
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．４１－８．３４（ｍ，１Ｈ）、７．６７－７．６１（ｍ，１Ｈ）、７．６０－７．５５（ｍ，１Ｈ）、７．５５－７．４９（ｍ，１Ｈ）、６．３７（ｓ，１Ｈ）、２．９４（ｍ，１Ｈ）、１．０１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）、０．９４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）、０．８２（ｓ，５Ｈ）、０．８１（ｓ，４Ｈ）ｐｐｍ．であった。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６１．７１－１５９．２８（ｍ）、１５６．７６、１５６．６７，１４５．９６、１３５．２８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、１３３．９６（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）、１２８．６５（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ）、１２８．４３（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ）、１１９．９７（ｍ，Ｊ＝４．１ＭＨｚ）、１３４．９９（ｍ，Ｊ＝４．２ＭＨｚ）、１６１．９７（ｍ，Ｊ＝５．４ＭＨｚ）、１５４．９９（ｍ，Ｊ＝５．３ＭＨｚ）、１４４．９９（ｍ，ｊ＝５．４ＭＨｚ）９６（ｄｄ，Ｊ＝３７．６，２５．４Ｈｚ）、１１６．８６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ）、１１５．４２（ｄｄ，Ｊ＝１６．７，９．３Ｈｚ）、９４．２７，９４．１４，５８．２７，５８．０７，３５．０１，３４．８２、２５．７７（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ）、１６．４２（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）ｐｐｍ．［１］。
Ｃ１８Ｈ１９ＣｌＦＮ６［Ｍ＋Ｈ］＋３７３．１３３８のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、３７３．１３３８がわかった。
【0062】
【化13】
４－（５－クロロ－７－（ピペリジン－１－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル（４８ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）およびピペリジン（２５ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従った。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物を白色粉末として得た（５ｍｇ，０．０１０ｍｍｏｌ，９％）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６０．７１（ｄｄ，Ｊ＝２５３．７，９Ｈｚ）、１５７．０５，１５５．６０，１５５．４４、１５０．８４、１１８．１０（ｔ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ）、１１６．２２（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）、１１６．０４、１１５．０６（ｔ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ）、９６．７５、５１．３４、２５．９２、２３．５７ｐｐｍ．
Ｃ１８Ｈ１７ＣｌＦＮ６［Ｍ＋Ｈ］＋３７５．０９３１のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、３７５．０９３１がわかった。
【0063】
【化14】
４－（７－（アゼパン－１－イル）－５－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル
（５１）：
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル（２０ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ）およびアゼパン（１３ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従った。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物を白色粉末として得た（１５ｍｇ，０．０３９ｍｍｏｌ，６３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３８（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．４５－３．３９（ｍ，４Ｈ），１．７８－１．７０（ｍ，４Ｈ）、１．６４－１．６０（ｍ，４Ｈ）ｐｐｍ．が得られた。
１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６０．７４（ｄｄ，Ｊ＝２５３．４，６．６Ｈｚ）、１５７．１４、１５５．２６、１５２．１０、１１８．６１（ｔ，Ｊ＝１９．７Ｈｚ）、１１６．３０－１１５．９７（ｍ）、１１５．１２（ｔ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ）、９７．３２、５３．９９、５１．２２、２８．２７、２８．１７、２７．２８、２７．０７ｐｐｍ。
ＩＲ：２９２８、２８５７、２２３８、１５８９、１５１５、１４２２ｃｍ－１
Ｃ１８Ｈ１６ＣｌＦ２Ｎ６［Ｍ＋Ｈ］＋３８９．１０８８のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、ｆｏｕｎｄ３８９．１０８５がわかった。
【0064】
【化15】
４－（７－（アゼパン－１－イル）－５－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル（５５）：
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル（４０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）およびアゼパン（２７ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）を使用して一般手順Ｃに従った。逆相ＨＰＬＣによる精製により、表題化合物を白色粉末として得た（２７ｍｇ，０．０７３ｍｍｏｌ，５６％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３４（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３（ｄｄ，Ｊ＝８．７，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．４８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、１．７１（ｄｑ，Ｊ＝８．０，４．２Ｈｚ，４Ｈ）、７．６１（ｄｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ）４８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．３８－３．３３（ｍ，４Ｈ）、１．７１（ｄｑ，Ｊ＝８．０，４．２Ｈｚ，４Ｈ）、１．６０（ｐ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，４Ｈ）ｐｐｍであった。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６０．８５，１５９．１８、１５６．９３、１５５．２７、１５５．１８、１５１．６１、１３４．４４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ）、１２８．６０（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ）、１２８．４８、１２０．１１、１１９．９４、１１７．０９（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ）、１１４．６８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、１０３．５９，５４．０５、２８．２７、２８．０３ｐｐｍ。
ＩＲ：２９２６，２２３５、１５８９，１５１９、１４４６ｃｍ－１
Ｃ１８Ｈ１７ＣｌＦＮ６［Ｍ＋Ｈ］＋３７１．１１８２のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、３７１．１１８０がわかった。
【0065】
【化16】
４－（７－（アゾカン－１－イル）－５－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル（５４ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）およびアゾカン（１９ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を用いて一般手順Ｃに従い、４－（１，２，３－ジクロロ－［１，４］トリアゾロ［１，４－ａ］ピリジン－６－イル）を得た。混合物を真空中で乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を白色固体として得た（３１ｍｇ，０．０７７ｍｍｏｌ，４６％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．２９（ｓ，１Ｈ）、７．３０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．３６（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，５Ｈ）、１．６２（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，５Ｈ）、１．５２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，６Ｈ）、１．４４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６０．６８（ｄｄ，Ｊ＝２５３．６，６．５Ｈｚ）、１５７．２３、１５５．７３、１５５．１２、１５１．０６、１１８．５５（ｔ，Ｊ＝１９．８Ｈｚ）、１１６．３８、１１６．３４、１１６．２３、１１６．１９，１１５．２３（ｔ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ）、９７．２９、５２．２４、２７．７２、２６．８０，２４．４４ｐｐｍ。
Ｃ１８Ｈ１７ＣｌＦＮ６［Ｍ＋Ｈ］＋４０３．１２４４のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、４０３．１２４０がわかった。
【0066】
【化17】
４－（７－（アゾカン－１－イル）－５－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル（４８ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）およびアゾカン（３５ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）を用いて一般手順Ｃに従い、４－フルオロベンゾニトリル（４８ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）を得た。混合物を真空乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物を白色固体として得た（３２ｍｇ，０．０８３ｍｍｏｌ，５３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，混合アトロポイソマー）δ８．５９（ｓ，０．４Ｈ）、８．４２（ｓ，０．３Ｈ）、７．８０－７．７７（ｍ，０．６Ｈ）、７．３０（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，０．３Ｈ）、７．１６（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，０．４Ｈ）、３．４１（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１．２Ｈ）、３．３２（ｂｓ，１．８Ｈ）１．７０－１．４１（ｍ，１０Ｈ）ｐｐｍ．であった。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６３．６８、１５９．９４（ｄｄ，Ｊ＝２５０．７，１９．６Ｈｚ）、１５７．２１、１５５．２９、１５４．７９、１５１．３３、１５０．３９、１４８．２３、１４５．５２、１４４．３７、１４２．０、１４０．３８、１３４．１９、１３３．９８、１３３．９６、１３２．１０、１３０．２５、１３０．２０、１２９．２５、１２８．９８、１２８．８９、１２８．８６、１２８．５１、１２８．４０、１２８．３３、１２８．３０、１２８．２６、１２８．２１、１２６．１５、１２０．３８、１２０．３０、１２０．２２、１２０．１３、１１７．０９、１１６．８８、１１４．８９、１１４．８３、１１４．７３、１１４．６７、１０３．２６、９９．７８、５４．２０、５２．２７、５１．５６、５０．３１、４４．８０、２７．７１、２６．８４、２５．５７、２５．７０、２４．２７、２３．９５、２３．４２、２２．６９、２２．５５、２２．５１、２１．８４、２１．５２ｐｐｍとなった。
Ｃ１８Ｈ１７ＣｌＦＮ６［Ｍ＋Ｈ］＋３８５．１３３８のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、３８５．１３３２がわかった。
【0067】
【化18】
２－（４－シアノ－２，６－ジフルオロフェニル）マロン酸ジエチル
３，４，５－トリフルオロベンゾニトリル（１．００ｇ，６．３７ｍｍｏｌ、１等量）、炭酸カリウム（１．７６ｇ，１２．７ｍｍｏｌ，２．００等量）およびマロン酸ジエチル（１．０３ｇ，６．４３ｍｍｏｌ，１．０１等量）の混合物を杏林で攪拌した。ＤＭＦ（６．３７ｍｌ）をＮ２、６５℃でＴＬＣで示されるように出発物質が消費されるまで攪拌した。反応混合物をｒ．ｔ．まで冷却し、１ＭＨＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（３ｘ）で抽出した。有機層を合わせ、飽和ａｑ．ＮａＣｌで洗浄し、ａｎｈ．Ｎａで乾燥させた。Ｎａ２ＳＯ４、濾過し、バキュオで濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中で最大３０％ＥｔＯＡｃ）による精製で、表題化合物を白色固体として得た（１．４０ｇ，４．６９ｍｍｏｌ，７３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、５．０１（ｓ，１Ｈ）、４．３１－４．２４（ｍ，４Ｈ）、１．２９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ）ｐｐｍを得た。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６５．５４、１６１．０２（ｄｄ，Ｊ＝２５４．０，７．８Ｈｚ）、１１６．７８（ｔ，Ｊ＝１８．５Ｈｚ）、１１６．２０（ｔ，Ｊ＝３．４Ｈｚ）、１１５．９４－１１５．４８（ｍ）、１１３．８８（ｔ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ）、６２．６０，４７．２４，１３．８７ｐｐｍ．
ＩＲ：２８５６、２１７８、１６９５ｃｍ－１
ＬＣＭＳ。［Ｍ＋Ｈ］＋２９８．
【0068】
【化19】
２－（４－シアノ－２－フルオロフェニル）マロン酸ジエチル
窒素下、乾燥フラスコに、３，４－ジフルオロベンゾニトリル（４．００ｇ，２８．８ｍｍｏｌ，１等量）、炭酸カリウム（７．９５ｇ，５７．５ｍｍｏｌ，２．００等量）、マロン酸ジエチル（４．６６ｇ，２９．１ｍｍｏｌ，１．０１等量）および無水ＤＭＦ（２４ｍｌ）を加えて６５℃で加熱し、出発物質が消費されるまでの間、出発物質がＴＬＣに基づき消費されるまで加熱した。反応混合物をｒ．ｔ．まで冷却し、５０ｍｌの１ＮＨＣｌを含む分離漏斗に添加した。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し（ｘ３）、合わせた有機層を水および飽和ａｑ．ＮａＣｌで洗浄した。有機層をａｎｈ．ａｑ．ＮａＣｌ上で乾燥させた。Ｎａ２ＳＯ４、濾過し、バキュオで濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中で最大３０％ＥｔＯＡｃ）による精製により、表題化合物を無色オイルとして得た（６．７３ｇ，２４．１ｍｍｏｌ，８４％）。
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６４（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．３８（ｄｄ，Ｊ＝９．２，１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｓ，１Ｈ）、４．２８－４．１８（ｍ，４Ｈ）、１．２６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６６．５５，１６０．０４（ｄ，Ｊ＝２５２．０Ｈｚ）、１３１．９８（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ）、１２８．２６（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ）、１２６．２１（ｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ）、１１９．２３（ｄ，Ｊ＝２６．０Ｈｚ）、１１７．２８（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、１１３．７１（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ）、６２．５５４Ｈｚ）、１１９．２３（ｄ，Ｊ＝２６．０Ｈｚ）、１１７．２８（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、１１３．７１（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ）、６２．５５、５０．４４（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、１４．００
ＩＲ：２９８４，２２３６，１７３３，１２１９ｃｍ－１
ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋２８０
【0069】
【化20】
５，７－ジクロロ－６－フェニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン
２－フェニルマロン酸ジエチル（７８０ｍｇ，３．３０ｍｍｏｌ）および３－アミノ－１，２，４－トリアゾール（２９２ｍｇ，３．４７ｍｍｏｌ）を用いて一般手順Ｂに従い、２－フェニルマロン酸ジエチルを製造する。次に、中間体ナトリウム６－フェニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－５，７－ビス（オレート）（７４０ｍｇ，２．７１ｍｍｏｌ）およびＰＯＣｌ３（７．４１ｇ，４８．４ｍｍｏｌ）を使用して、表題化合物を茶色固体（５２７ｍｇ，１．９９ｍｍｏｌ，７３％）として提供する。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．５６（ｓ，１Ｈ）、７．５８－７．５１（ｍ，３Ｈ）、７．３８－７．３４（ｍ，２Ｈ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５６．９３、１５６．６５、１５３．３５、１３９．９０、１３１．７２、１３０．０７、１２９．９５、１２９．１６、１２４．０１を得た。
ＩＲ（ＫＢｒ）ν３４３７、１６３７、１４５８、１３８３、１２６７、１２０５、１１８０，８６７、８０２，７６４、７４０，６９８，６５２ｃｍ－１
Ｃ１１Ｈ７Ｃｌ２Ｎ４［Ｍ＋Ｈ］＋２６５．００４２のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）、２６５．００４３がわかった。
【0070】
【化21】
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロベンゾニトリル（２２）：
２－（４－シアノ－２，６－ジフルオロフェニル）マロン酸ジエチル（５００ｍｇ，１．６８ｍｍｏｌ）および３－アミノ－１，２，４－トリアゾール（５００ｍｇ，１．６８ｍｍｏｌ）および３－アミノ－１，２，４－トリアゾール（１４８ｍｇ，１．７７ｍｍｏｌ）を用いて一般手順Ｂに従い、以下の操作を行った。中間体ナトリウム６－（４－シアノ－２，６－ジフルオロフェニル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－５，７－ビス（オレート）（４００ｍｇ，１．２０ｍｍｏｌ）およびＰＯＣｌ３（３．２８ｇ，２１．４ｍｍｏｌ）により表題化合物を茶色固体として得る（２１０ｍｇ，１．２０ｍｍｏｌ，５３％）．
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．６５（ｓ，１Ｈ）、７．４７（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ）ｐｐｍ。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６１．２１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）、１５９．５１（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ）、１５７．６６，１５５．５７、１１６．８５，１１６．６２－１１６．３０（ｍ）、１１５．８６（ｔ，Ｊ＝３．５Ｈｚ）、１１４．６４（ｔ，Ｊ＝１９．６Ｈｚ）ｐｐｍ。
ＩＲ：３０８７、２１９５，１５７１、１３３８、１１９５ｃｍ－１
ＬＣＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋３２７
【0071】
【化22】
４－（５，７－ジクロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３－フルオロベンゾニトリル（２３）：
２－（４－シアノ－２，６－ジフルオロフェニル）マロン酸ジエチル（５００ｍｇ，１．６８ｍｍｏｌ）および３－アミノ－１，２，４－トリアゾール（１４８ｍｇ，１．７７ｍｍｏｌ）を用いて一般手順Ｂに従い、２－シアノ－２，６－ジフルオロフェニル－２－トリアゾール（５００ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を得た。次に中間体ナトリウム６－（４－シアノ－２－フルオロフェニル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－５，７－ビス（オレート）（３．００ｇ、９．５２ｍｍｏｌ）およびＰＯＣｌ３（２６．０ｇ，１６９ｍｍｏｌ）を用いて、表題化合物を茶色固体として提供した（１．９７ｇ，９．５２ｍｍｏｌ，６７％）．
１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．６１（ｓ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．６，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ。
１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６０．４７、１５８．７９、１５７．４８、１５５．５２、１５３．７９、１４０．７３，１３３．３２、１２８．８６（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ）、１２４．６８（ｄ，Ｊ＝１５．７Ｈｚ）、１２０．４２（ｄ，Ｊ＝２４．９Ｈｚ）、１１６．７６（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ）、１１６．６９、１１６．３６（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ）ｐｐｍ。
【実施例3】
【0072】
実施例３－微小管安定化アッセイ
全ての試験化合物を、以前に記載されたＭＴ安定化の細胞ベースのアッセイで評価した（Ｋｏｖａｌｅｖｉｃｈ，Ｊ．，ｅｔａｌ．（２０１６）ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＢｒａｉｎ－Ｐｅｎｅｔｒａｎｔ Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－Ｃｏｎｔａｉｎ ｉｎｇ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓｗｉｔｈ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－Ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ａｓ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｔａｕｏｐａｔｈｉｅｓ．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３５７，４３２－４５０，その参照により明細書中に組み込まれる）において、細胞溶解物中のアセチル化α－チューブリンおよび総チューブリンのＥＬＩＳＡによる定量化を介して、ＱＢＩ２９３細胞を１および１０μＭ化合物で４時間インキュベートした後に、チューブリン重合および総チューブリンレベルにおける化合物依存性の変化を決定した。
全ての試験化合物を、以前に記載されたＭＴ安定化の細胞ベースのアッセイで評価した（Ｋｏｖａｌｅｖｉｃｈ，Ｊ．，ｅｔａｌ．（２０１６）ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＢｒａｉｎ－Ｐｅｎｅｔｒａｎｔ Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ－Ｃｏｎｔａｉｎ ｉｎｇ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓｗｉｔｈ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－Ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ Ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ａｓ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｔａｕｏｐａｔｈｉｅｓ．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ ３５７，４３２－４５０，その参照により明細書中に組み込まれる）において、細胞溶解物中のアセチル化α－チューブリンおよび総チューブリンのＥＬＩＳＡによる定量化を介して、ＱＢＩ２９３細胞を１および１０μＭ化合物で４時間インキュベートした後に、チューブリン重合および総チューブリンレベルにおける化合物依存性の変化を決定した。
【0073】
トリアゾロピリミジンは、ＭＴの安定性と質量を増加させるために、特定の構造的特徴が重要であるという観察から、トリアゾロピリミジン足場のＳＡＲをより系統的に探求し、Ｃ６およびＣ７で修飾したトリアゾロピリミジンのＭＴ安定性ＳＡＲを明らかにした。これらの研究の結果、既存のリードと比較して、インビトロ活性および物理化学的特性が改善された選択的なコンジェネラーが同定された。特に、これらの研究は、トリアゾロピリミジンの所望のクラスＩ ＭＴ安定化効果は、一般に、Ｃ６（式ＩのＲ６）に電子不足フェニル環が存在することを必要とすることを教示した。異なるフッ素化フェニルフラグメントは、活性クラスＩコンジェネラー、特にオルト位に１個または２個のフッ素原子を有するもの、および非置換または追加のフッ素もしくはニトロおよびニトリルなどの他の電子吸引基で置換されたパラ位のいずれかを許容することが可能である。さらに、Ｃ７に結合したフラグメントの性質は、ＭＴ活性トリアゾロピリミジンによって誘発される細胞表現型だけでなく、効力においても重要な役割を果たす可能性があり、この位置に置換窒素が存在することはクラスＩ活性の必要条件である可能性があることがわかった。最後に、Ｃ７の分岐アミン断片のキラル配置の影響も評価した。ほとんどの場合、アミンのキラリティーは化合物の効力に影響し、一方のエナンチオマーは他方よりも一般的に活性が高いことがわかった。
【0074】
以前に記載された例と比較してインビトロ活性が改善された、新規のＣ６ニトリルおよびアルキン置換トリアゾロピリミジン例であり、式Ｉに描かれた一般構造を有する。新規Ｃ６－ニトリル置換化合物の活性を、ＭＴ安定化の以前に記載された細胞アッセイで試験した（Ｋｏｖａｌｅｖｉｃｈ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６））。以下の表２．にまとめたように、１８の実施例を合成し、試験した。すべての場合において、これらの化合物は、活性なクラスＩトリアゾロピリミジンであることが確認された。さらに、この一連の同族体のうち、６４、６６、６９、７０、および７５－７７などの選択された化合物が、リード化合物３と比較して改善されたインビトロの効力を有することが確認された。表２は、１μＭまたは１０μＭの被験物質で４時間培養した後のＱＢＩ２９３細胞におけるアセチル化α－チューブリンおよび総α－チューブリンレベルの倍数変化を示す。データは、ビヒクル処理した細胞との相対的な変化として表した。一元配置分散分析により、＊ｐ<０．０５および＊＊ｐ<０．０１とした。
これらの結果は、本開示による試験されたＣ６ニトリル置換トリアゾロピリミジン化合物が、以前に記載された例と比較して、改善されたインビトロ活性を有することを実証した。
【表4】
【実施例4】
【0075】
実施例４－血漿および脳内化合物の測定
ＣＤ１マウス（ｎ＝３）に、ＣＮＤＲ－５１９０およびＣＮＤＲ－５１９９３（２つのジアステレオ異性体、５２０１７（６７）および５２０１６（６８）の１：１混合物を表す）をそれぞれ２．５ｍｇ／ｋｇで同時投与した。）投与１時間後、マウスを安楽死させ、血液を採取し、次いで生理食塩水で灌流した。マウス脳を１０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ５．７（１：２；ｗ／ｖ）中でハンドヘルドソニックホモジナイザーを用いてホモジナイズした。マウス血漿は、０．５ＭＥＤＴＡ溶液を含む１．５ｍｌチューブに採取し、４５００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した血液から得た。脳ホモジネートまたは血漿のアリコート（５０μｌ）を０．２ｍｌのアセトニトリルと混合し、１５０００ｘｇで遠心分離し、得られた上清をその後のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に使用した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析は、本質的に以前に記載されたような方法（Ｌｏｕら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５７：６１１６－２７，２０１４）を利用して、Ｉｎｏｔｉｖ，Ｉｎｃ．によって実施された。結果は、以下の表３に提供される。
ＣＤ１マウス（ｎ＝３）に、ＣＮＤＲ－５１９０およびＣＮＤＲ－５１９９３（２つのジアステレオ異性体、５２０１７（６７）および５２０１６（６８）の１：１混合物を表す）をそれぞれ２．５ｍｇ／ｋｇで同時投与した。）投与１時間後、マウスを安楽死させ、血液を採取し、次いで生理食塩水で灌流した。マウス脳を１０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ５．７（１：２；ｗ／ｖ）中でハンドヘルドソニックホモジナイザーを用いてホモジナイズした。マウス血漿は、０．５ＭＥＤＴＡ溶液を含む１．５ｍｌチューブに採取し、４５００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した血液から得た。脳ホモジネートまたは血漿のアリコート（５０μｌ）を０．２ｍｌのアセトニトリルと混合し、１５０００ｘｇで遠心分離し、得られた上清をその後のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に使用した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析は、本質的に以前に記載されたような方法（Ｌｏｕら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５７：６１１６－２７，２０１４）を利用して、Ｉｎｏｔｉｖ，Ｉｎｃ．によって実施された。結果は、以下の表３に提供される。
【表5】
【実施例5】
【0076】
実施例６－追加の微小管安定化化合物
本開示による追加の微小管安定化化合物を、以下のスキーム１～４にしたがって調製した。
スキーム１．試薬と反応条件：ａ）ＤｉＢＡｌ－Ｈ，トルエン、－７８℃、１時間、５１％；ｂ）Ｂｅｓｔｍａｎｎ－Ｏｈｉｒａ ｒｅａｇｅｎｔ、Ｋ２ＣＯ３、ＭｅＯＨ、２０℃、３時間、２０％；
本開示による追加の微小管安定化化合物を、以下のスキーム１～４にしたがって調製した。
【化23】
【化24】
【0077】
スキーム２．試薬と反応条件ａ）ＮａＮＯ２、ＫＩ，６ＭＨＣｌ、水、０－２０℃，３時間、７２％；ｂ）Ｎ－トリブチルアミン、１７０℃、６時間；ｃ）オキシ塩化リン、１３０℃、６時間、６０％（２工程にわたって）；ｄ）ＴＡＬ－６２８、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ｒｔ、１６時間、４０％；Ｆ．ＴＡＬ－６２０，Ｆ．Ｆ．ＴＡＬ－６２８、Ｆ．Ｆ．ＴＡＬ－６２６，Ｆ．Ｆ．Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｅｔ＿ＣＯＰＹＮ、ｒｔ、１時間、６０％；ＴＡＬ－６２６とＴＡＬ－６２７は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｅｔ３Ｎ、ｒｔ、１時間、ＴＡＬ－６２６９１％とＴＡＬ－６２７８８％；ｅ）適切なアルキン、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ＣｕＩ、脱気Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、２０℃、８時間、３３－９９％；ｅ）ＴＡＬ－６２６とＴＡＬ－６２７は、ジメチルホルムアミド、ＥｔＮ、ｒｔ、１時間、３３－９９％，Ｆ．Ｄ．ＴＡＬ－６２６は、ジメチル・フォルマミド、Ｔ．ｆ）ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ、ＭｅＯＨ、２０℃、１時間、９９％．
【化25】
【0078】
スキーム３．試薬と反応条件：ａ）Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７、ＮａＩＯ４、ＨＮＯ３、水、０－２０℃、２４時間、７８％；ｂ）ＬｉＡｌＤ４、Ｅｔ２Ｏ、０℃、０．５時間、９９％；ｃ）ＴＡＬ－６２７、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ＣｕＩ，ｄｅｇａｓｓｅｄＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、２０℃、８時間、４４％．
【化26】
【0079】
スキーム４．試薬と反応条件：ａ）ＮａＨ、ＣＨ３Ｉ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、０－２０℃、２時間、ｂ）ｂｕｔ－３－ｙｎ－１－ｏｌ，Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ＣｕＩ、ｄｅｇａｓｓｅｄＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、２０℃、８時間、１７％（２工程にわたって）。
【0080】
前記合成スキームに従って製造した化合物は、微小管安定化用であった。以下の表４は、トリアゾロピリミジン類のＭＴ安定化活性を説明するものである。ＱＢＩ２９３細胞を１または１０μＭの試験化合物で４時間インキュベートした後のアセチル化αチューブリン（ＡｃＴｕｂ）およびαチューブリン（αＴｕｂ）レベルの倍率変化。ＡｃＴｕｂとα－Ｔｕｂの値は、コントロール（ＤＭＳＯ）処理細胞に対する変化量（一元配置分散分析による＊ｐ<０．０５および＊＊ｐ<０．０１）を表し、括弧内の数字は陽性コントロール処理細胞（すなわち、１００ｎＭのセビパブリン）に対するＡｃＴｕｂの変化量（倍）を表している。コントロールの±１５％の変化は、日々のアッセイ変動の範囲内であり、有意ではないと判断される。
【表6】
【0081】
材料と方法溶媒はすべて試薬グレードを使用した。すべての試薬はＡｌｄｒｉｃｈまたはＥｎａｍｉｎｅから購入し、受け取ったまま使用した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、０．２５ｍｍＥ．Ｍｅｒｃｋプレコートシリカゲルプレートで実施した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ ａｎｄ Ｓｏｒｂｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社から供給されたシリカゲル６０（粒子径０．０４０－０．０６２ｍｍ）を用いて行った。ＴＬＣスポットは、ＵＶライト下で観察することにより検出した。プロトン（１Ｈ）および炭素（１３Ｃ）ＮＭＲスペクトルは、６００ＭＨｚＢｒｕｋｅｒＡＶＡＮＣＥＩＩＩスペクトロメーターで記録された。化学シフトは溶媒に対する相対値で報告された。１ＨＮＭＲスペクトルのデータは以下のように報告される：化学シフト［ｐｐｍ、プロチウムを基準；ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｔ＝トリプレット、ｑ＝カルテット、キント＝キンテット、ｄｄ＝ダブレットのダブルト、ｂｓ＝ブロードシングレット、ｍ＝マルチプレット、結合定数（Ｈｚ）、積分］。高分解能質量スペクトルは、Ｊｅｔｓｔｒｅａｍエレクトロスプレーイオン化源を備えたＡｇｉｌｅｎｔ６２３０飛行時間型質量分析計で測定した。ＨＰＬＣは、ＵＶおよび質量検出器を備えたＧｉｌｓｏｎＨＰＬＣで実施した。すべてのサンプルは、Ｈ２Ｏ中１０％から９０％までのＡＣＮを８分間かけて、流速１ｍＬ／ｍｉｎの線形勾配を採用して分析されました。分取逆相ＨＰＬＣ精製は、ＷａｔｅｒｓＳｕｎＦｉｒｅ分取Ｃ１８ＯＢＤカラム（５μｍ１９ｍｍÅ～５０ｍｍまたは１９ｍｍÅ～１００ｍｍ）を使用したＧｉｌｓｏｎ装置で実施した。最終的な化合物はすべて、ＨＰＬＣで９５％以上の純度を確認した。
【0082】
一般手順Ａ脱気したＤＭＦ（０．２Ｍ）中のヨードトリアゾロピリミジン（１等量）の溶液に、ＣｕＩ（０．１５等量）、トリエチルアミン（３等量）および目的のアルキン（３等量）を連続的に添加した。テトラキスパラジウム（０．１等量）を加える前に、混合物を脱気し、窒素で裏込めした。混合物を脱気し、窒素で３回埋め戻し、混合物をｒｔで８時間攪拌した後、水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機画分をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｈｅｘａｎｅｓ／ＥｔＯＡｃ）または逆相ＨＰＬＣ（水／ＡＣＮ＋０．１％ＦＡ、（１０ｔｏ９０％）、２０ｍＬ／分、２０分ランプ時間）による精製で、所望の化合物を得る。
【0083】
一般手順Ｂ．Ｂｏｃで保護されたアルキニル化ＴＰＤ（１等量）のＭｅＯＨ（０．１Ｍ）中の溶液に、ジオキサン中のＨＣｌの４Ｍ溶液（１８等量）を添加した。ｒｔで３時間後、混合物を減圧下で蒸発させ、表題化合物をＨＣｌ塩として黄色または茶色の固体として得た。
【0084】
【化27】
【0085】
【化28】
【0086】
【化29】
【0087】
【化30】
【0088】
【化31】
（Ｒ）－５－クロロ－６－（２，６－ジフルオロ－４－ヨードフェニル）－Ｎ－（３，３－ジメチルブタン－２－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－７－アミン。５，７－ジクロロ－６－（２，６－ジフルオロ－４－ヨードフェニル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン（０．１５６ｇ，０．３６５ｍｍｏｌ，１等量）ｉｎＤＭＦ（１ｍＬ）の溶液に（Ｒ）－３，３－ジメチルブタン－２－アミン塩酸塩（０．０７５ｇ，０．５４８ｍｍｏｌ，１．４）およびトリエチルアミン（０．１５３ｍＬ，０．１１１ｇ，１．１００ｍｍｏｌ，３等量）を加え、混合物をｒｔで１時間撹拌した。水を加えて反応をクエンチし、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機画分をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｈｅｘａｎｅｓ／ＥｔＯＡｃ；１００／０ｔｏ７０／３０）による精製で、表題化合物をオフホワイト固体として得た（０．１５８ｇ，０．３２１ｍｍｏｌ，８８％）。１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３１（ｓ，１Ｈ）、７．４６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．４２（ｓ，１Ｈ）、３．１０（ｓ，１Ｈ）、１．００（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，４Ｈ）、０．８２（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ．．１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６０．６７（ｄｄ，Ｊ＝２５４．９，６．２Ｈｚ）、１６０．４０（ｄｄ，Ｊ＝２５４．８，６．０Ｈｚ）、１５７．５９、１５４．８９、１５３．５８、１４６．０３、１２１．８２（ｄｄ，Ｊ＝２１．２１３．８，３．９Ｈｚ）、１５１．８２（ｄｄ，Ｊ＝２５４．９，３．９Ｈｚ）、１５７．５９（ｄｄ）、１５４．８９（ｄｄ）、１４６．０３（ｄｄ）７，３．９Ｈｚ）、１２１．６７（ｄｄ，Ｊ＝２１．７，３．９Ｈｚ）、１１１．２３（ｔ，Ｊ＝１８．２Ｈｚ），９４．４１（ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、８８．７１、５８．１０、３４．７４、２５．７７、１６．５６、１６．５５ｐｐｍ．を得た。Ｃ１７Ｈ１８Ｎ５Ｆ２ＩＣｌ［Ｍ＋Ｈ］＋のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：４９２．０２５８，４９２．０２５６を発見した。
【0089】
【化32】
（Ｓ）－５－クロロ－６－（２，６－ジフルオロ－４－ヨードフェニル）－Ｎ－（１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－７－アミン．の溶液に、５，７－ジクロロ－６－（２，６－ジフルオロ－４－ヨードフェニル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン（０，２００ｇ，０．４６８ｍｍｏｌ，１等量）をＤＭＦ（２ｍＬ）中に溶解し、（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－アミン（０．０９７ｍＬ，０．１１１ｇ，０．９８４ｍｍｏｌ，２．１等量）を加え、４０?Ｃで２４時間攪拌した。反応を水の添加によりクエンチし、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機画分をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｈｅｘａｎｅｓ／ＥｔＯＡｃ：１００／０ｔｏ７０／３０）による精製で、表題化合物をオフホワイト固体として得た（０．１２１ｇ，０．２４０ｍｍｏｌ，５１％）。１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３８（ｓ，１Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）、５．９７（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．８４（ｂｓ，１Ｈ）、１．４３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６０．６１（ｄｄ，Ｊ＝２５７．４，５．９Ｈｚ）、１６０．２９（ｄｄ，Ｊ＝２５５．８，６．０Ｈｚ）、１５７．４１、１５５．４１、１５４．２６、１４５．８７、１２４．５９（ｑ，Ｊ＝２８２．１Ｈｚ）、１２２．３、１５６．４（ｄｄ，Ｊ＝２５６．３Ｈｚ），１５６．４（ｄｔ，Ｊ＝２８６．５Ｈｚ）３２（ｄｄ，Ｊ＝６３．０，３．８Ｈｚ），１２２．１６（ｄｄ，Ｊ＝６２．９，３．７Ｈｚ）、１０９．１０（ｔ，Ｊ＝２０．２Ｈｚ）、９５．５５（ｔ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、９１．７４、５１．０８（ｑ，Ｊ＝３２．１Ｈｚ）、１５．１６ｐｐｍ．であった。ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）ｃａｌｃｕｌａｔｅｄｆｏｒＣ１４Ｈ９Ｎ５Ｆ５ＩＣｌ［Ｍ＋Ｈ］＋：５０３．９５０６、５０３．９５０２を発見した。
【0090】
【化33】
（Ｒ）－５－クロロ－６－（４－（３－（ジメチルアミノ）プロプ－１－イン－１－イル）－２，６－ジフルオロフェニル）－Ｎ－（３－メチルブタン－２－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－７－アミン．ＴＡＬ－６２６（０．０７０ｇ，０．１４７ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ－ジメチルプロプ－２－イン－１－アミン（０．０４７ｍＬ，０．０３７ｇ，０．４４０ｍｍｏｌ）を用いて一般手順Ａに従い、逆相ＨＰＬＣによる精製および純粋画分のＥｔＯＡｃによる抽出後にオフホワイトとして表題化合物をもたらす（０．０４３ｇ，０．０９９ｍｍｏｌ，６８％）．１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．６０（ｓ，１Ｈ）、７．３３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．７４（ｓ，２Ｈ）、３．３８（ｓ，１Ｈ）、２．５６（ｓ，６Ｈ）、１．７２（ｐｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、１．１１（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）、０．７９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ）ｐｐｍを得ることができる。Ｃ２１Ｈ２４Ｎ６Ｆ２Ｃｌ［Ｍ＋Ｈ］＋のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：４３３．１７１４，４３３．１７１５を発見した。
【0091】
【化34】
（Ｒ）－５－クロロ－６－（４－（３－（ジメチルアミノ）プロプ－１－イン－１－イル）－２，６－ジフルオロフェニル）－Ｎ－（３，３－ジメチルブタン－２－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－７－アミン．ＴＡＬ－６２７（０．０７０ｇ，０．１４２ｍｍｏｌ）Ｎ，Ｎ－ジメチルプロプ－２－イン－１－アミン（０．０４６ｍＬ，０．０３６ｇ，０．４２７ｍｍｏｌ）を用いて一般手順Ａに従い、逆相ＨＰＬＣによる精製および純粋画分のＥｔｏＡｃによる抽出後にオフホワイトとして表題化合物をもたらす（０．０４３ｇ，０．０９６ｍｍｏｌ，６８％）．１Ｈ ＮＭＲ （６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ８．５０（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．５８（ｂｓ，２Ｈ），３．３１（ｂｓ，１Ｈ），２．４２（ｓ，６Ｈ），１．０８（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．８３（ｓ，９Ｈ）ｐｐｍ．Ｃ２２Ｈ２６Ｎ６Ｆ２Ｃｌ［Ｍ＋Ｈ］＋のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：４４７．１８７０、４４７．１８７２を発見した。
【0092】
【化35】
ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）－（４－（５－クロロ－７－（（３－メチルブタン－２－イル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリミジン－６－イル）－３，５－ジフルオロフェニル）ブ－３－エン－１－イル）カルバメート。一般的な手順Ａに従って、ＴＡＬ－６２６（０．０４０ｇ，０．０８４ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ－ブチル ブタ－３－イン－１－イルカルバメート（０．０４３ｇ，０．２５０ｍｍｏｌ）を使用して、シリカゲルクロマトグラフィー（Ｈｅｘａｎｅｓ／ＥｔＯＡｃ：９０／１０ｔｏ６０／４０）による精製の後に、表題化合物が黄色固体として得られる（０．０４３ｇ，０．０８３ｍｍｏｌ，９９％）．１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３４（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），６．３４（ｓ，１Ｈ），４．８５（ｓ，１Ｈ），３．４０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｓ，１Ｈ），３．１９（ｓ，１Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），１．６６－１．６２（ｍ，１Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．８０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ）ｐｐｍ．であった。Ｃ２５Ｈ２９Ｎ６Ｆ２ＣｌＯ２［Ｍ＋Ｎａ］＋のために計算されたＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：５１９．２０８１、５１９．２０８３を発見した。
【0093】
【化36】
【0094】
【化37】
【0095】
【化38】
【0096】
【化39】
【0097】
【化40】
【0098】
【化41】
【0099】
【化42】
【0100】
【化43】
【0101】
【化44】
【0102】
【化45】
【0103】
【化46】
【0104】
【化47】
【0105】
【化48】
【0106】
【化49】
【0107】
【化50】
【0108】
【化51】