特許 7651552 抗ＣＤ７３抗体及び変異体に関連する方法及び組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-03-17

(45)【発行日】2025-03-26

(54)【発明の名称】抗ＣＤ７３抗体及び変異体に関連する方法及び組成物

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20250318BHJP

   C07K 16/40 20060101ALI20250318BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20250318BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20250318BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20250318BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20250318BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20250318BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250318BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250318BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250318BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250318BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20250318BHJP

   G01N 33/543 20060101ALI20250318BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20250318BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

C07K16/40

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P43/00 105

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K45/00 101

G01N33/543 545A

G01N33/53 D

【請求項の数】 22

(21)【出願番号】P 2022505389

(86)(22)【出願日】2020-07-17

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-09-29

(86)【国際出願番号】 CN2020102678

(87)【国際公開番号】W WO2021017892

(87)【国際公開日】2021-02-04

【審査請求日】2023-07-14

(31)【優先権主張番号】201910683287.5

(32)【優先日】2019-07-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(73)【特許権者】

【識別番号】522033726

【氏名又は名称】上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＨＥＮＬＩＵＳ ＢＩＯＴＥＣＨ， ＩＮＣ．

【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ ３３０， Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ， Ｎｏ．２２２ Ｋａｎｇｎａｎ Ｒｏａｄ， Ｃｈｉｎａ （Ｓｈａｎｇｈａｉ） Ｐｉｌｏｔ Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｚｏｎｅ， Ｐｕｄｏｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２１０， Ｃｈｉｎａ

(73)【特許権者】

【識別番号】522033737

【氏名又は名称】上海復宏漢霖生物製薬有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＨＥＮＬＩＵＳ ＢＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １ （Ｂｕｉｌｄｉｎｇ Ｄ）， Ｎｏ．１２８９， Ｙｉｓｈａｎ Ｒｏａｄ， Ｘｕｈｕｉ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００２３３， Ｃｈｉｎａ

(73)【特許権者】

【識別番号】522033748

【氏名又は名称】上海復宏漢霖生物医薬有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＧＨＡＩ ＨＥＮＬＩＵＳ ＢＩＯＬＯＧＩＣＳ ＣＯ．，ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ ６１７， Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ２９， Ｎｏ．１， Ｌａｎｅ ６１８， Ｄｉｎｇｙｕａｎ Ｒｏａｄ， Ｓｏｎｇｊｉａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１６１６， Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100170520

【弁理士】

【氏名又は名称】笹倉 真奈美

(74)【代理人】

【識別番号】100221545

【弁理士】

【氏名又は名称】白江 雄介

(72)【発明者】

【氏名】姜 偉東

(72)【発明者】

【氏名】陳 奕穎

(72)【発明者】

【氏名】曾 ▲チー▼鈴

【審査官】福澤 洋光

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１８－５０１１９７（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１７－５３７６２０（ＪＰ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１８／１１０５５５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１８／２１５５３５（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Cancer Research，2016年，Vol.76, No.10，pp.3045-3056

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １／００－１５／９０

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

Ｃ１２Ｐ １／００－４１／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＵｎｉＰｒｏｔ／ＧｅｎｅＳｅｑ

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下を含む、抗ＣＤ７３抗体：
（ｉ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列
（ｉｉ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列；
（ｉｉｉ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列；
（ｉｖ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列；
（ｖ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列；
（ｖｉ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列；
（ｖｉｉ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列；
（ｖｉｉｉ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列；
（ｉｘ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列；または
（ｘ）ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列及び、ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列。

【請求項2】

（ｉ）抗ＣＤ７３抗体のＬＣはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９のアミノ酸配列を含む；
（ｉｉ）抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２のアミノ酸配列を含む；
（ｉｉｉ）抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含む；
（ｉｖ）抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含む；
（ｖ）抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含む；
（ｖｉ）抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含む；
（ｖｉｉ）抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７のアミノ酸配列を含む；
（ｖｉｉｉ）抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８のアミノ酸配列を含む；
（ｉｘ）抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９のアミノ酸配列を含む；
（ｘ）抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０のアミノ酸配列を含む；
（ｘｉ）抗ＣＤ７３抗体のＬＣはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８のアミノ酸配列を含む；または
（ｘｉｉ）抗ＣＤ７３抗体のＬＣはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗ＣＤ７３抗体。

【請求項3】

ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列、及びａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ７３抗体。

【請求項4】

抗ＣＤ７３抗体のＶＬはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗ＣＤ７３抗体。

【請求項5】

ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列、及びａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及びｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ７３抗体。

【請求項6】

抗ＣＤ７３抗体のＬＣはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ７３抗体のＶＨはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗ＣＤ７３抗体。

【請求項7】

Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ断片、二重抗体及びリニア抗体からなる群から選択される抗原結合断片を含む、請求項１または２に記載の抗ＣＤ７３抗体。

【請求項8】

抗ＣＤ７３抗体は多重特異性抗体である、請求項１または２に記載の抗ＣＤ７３抗体。

【請求項9】

治療剤または標識に抱合される、請求項１または２に記載の抗ＣＤ７３抗体。

【請求項10】

放射性同位元素、蛍光色素、または酵素に抱合される、請求項１または２に記載の抗ＣＤ７３抗体。

【請求項11】

請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗ＣＤ７３抗体をコードする、単離された核酸分子。

【請求項12】

請求項１１に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。

【請求項13】

請求項１２に記載の発現ベクターを含む、細胞。

【請求項14】

請求項１３に記載の細胞を培養すること及び、細胞培養物から抗ＣＤ７３抗体を回収することを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ７３抗体を産生する方法。

【請求項15】

請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ７３抗体および薬学的に許容される担体を含む、組成物。

【請求項16】

ＣＤ３７タンパク質に結合した抗ＣＤ７３抗体を検出することにより患者由来の試料中にＤ７３タンパク質を検出する方法において使用するための、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ７３抗体を含む剤。

【請求項17】

抗ＣＤ７３抗体は免疫組織化学的アッセイ（ＩＨＣ）又はＥＬＩＳＡアッセイに使用される、請求項１６に記載の使用するための剤。

【請求項18】

被験者において癌を治療することにおいて使用するための、請求項１５に記載の組成物。

【請求項19】

癌は黒色腫、ＮＳＣＬＣ、頭頸部癌、尿路上皮癌、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、胃癌、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）、非ホジキンリンパ腫の原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＮＨＬ ＰＭＢＣＬ）、中皮腫、卵巣癌、肺癌、食道癌、鼻咽頭癌（ＮＰＣ）、胆道癌、結腸直腸癌、乳癌、子宮頸癌、甲状腺癌、前立腺癌、膀胱癌、膵臓癌、唾液腺癌及びＣＤ７３発現悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項１８に記載の使用するための組成物。

【請求項20】

被験者において線維症を治療することにおいて使用するための、請求項１５に記載の組成物。

【請求項21】

該被験者に、抗腫瘍剤、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害性薬物及び免疫治療剤からなる群から選択された治療剤をさらに投与する、請求項１８、１９または２０に記載の使用するための組成物。

【請求項22】

該被験者に、放射線療法及び／又は外科手術をさらに投与する、請求項１８、１９または２０に記載の使用するための組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、一般的に、全体的に抗ＣＤ７３抗体、変異体もしくは突然変異体、又はこれらの抗原結合断片、及びそれらを用いてヒト癌を治療する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

ＣＤ７３（エクト－５’－ヌクレオチダーゼ（ＮＴ５Ｅ、ＥＣ ３．１．３．５）と呼ばれる）は、大部分の組織に見出されたグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）連結７０－ｋＤａ細胞表面酵素（Ｚｈａｎｇ Ｂ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．［癌研究］、７０（１６）：６４０７～６４１１（２０１０））である。ＣＤ７３（最初にリンパ球分化抗原と定義される）は、Ｔリンパ球の共シグナル伝達分子の作用を果たし、かつリンパ球と内皮との結合に必要な接着分子の作用を果たすと考えられている。最近の研究から分かるように、ＣＤ７３は、上皮細胞のイオン輸送及び体液輸送、虚血プレコンディショニング、組織傷害、血小板機能、低酸素症及び血液漏出（Ｚｈａｎｇ Ｂ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．［癌研究］、７０（１６）：６４０７～６４１１（２０１０））を含む様々な生理的反応を制御することができる。

【0003】

細胞外アデノシンの免疫抑制効果は既に証明された（Ｓｔａｇｇ Ｊ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ［癌遺伝子］、２９（３９）：５３４６～５３５８（２０１０））。アデノシンとその受容体との相互作用は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の細胞傷害性、マクロファージの食作用、Ｔ細胞の細胞傷害性及びサイトカイン放出を含む大部分の免疫細胞機能を阻害することができる（Ｇｏｔｏ Ｔ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１３０（３）：１３５０～１３５５（１９８３）、Ｏｈｔａ Ａ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１８３（９）：５４８７～５４９３（２００９））。アデノシンシグナルの伝達を遮断することにより、免疫療法を改善することができる。ＣＤ７３はアデノシンシグナルの伝達に関与する重要な分子である。ＣＤ７３は、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）（ＣＤ３９によるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の加水分解の経路に由来する生成物）をアデノシンに加水分解することで腫瘍微小環境に影響を与える（Ａｌｌａｒｄ Ｂ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．［免疫学レビュー］、２７６（１）：１２１～１４４（２０１７）、Ｒｅｓｔａ Ｒ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．［免疫学レビュー］、１６１：９５～１０９（１９９８））。ＣＤ７３アデノシン軸は、免疫腫瘍学における最も有望な経路の１つを構成する。

【0004】

研究報告には、ＣＤ７３が細胞－細胞及び細胞－基質の相互作用に関与し、かつＣＤ７３が薬剤耐性及び発癌促進に関与することが報告された（Ｓｐｙｃｈａｌａ Ｊ．、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．［薬理と治療］、８７（２－３）：１６１～１７３（２０００））。ＣＤ７３は、複数種の癌細胞において過剰発現され（Ｇａｏ ＺＷ．ら、Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｉｎｔ．［国際生物医学研究］、２０１４：４６０６５４（２０１４））、かつ該発現がいくつかの癌の予後不良又は患者生存に関連することが証明された（Ｌｏｉ Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］、１１０（２７）：１１０９１－１１０９６（２０１３）、Ｔｕｒｃｏｔｔｅ Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．［癌研究］、７５（２１）：４４９４～４５０３（２０１５）、Ｘｉｏｎｇ Ｌ．ら、Ｃｅｌｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｓ．［細胞組織研究］、３５５（２）：３６５～３７４（２０１４））。いくつかの例において、抗ＣＤ７３モノクローナル抗体（ｍＡｂ）による治療は、転移及び腫瘍血管新生を阻害することができる（Ａｌｌａｒｄ Ｂ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ［国際癌雑誌］、１３４（６）：１４６６～１４７３（２０１４）、Ｔｅｒｐ ＭＧ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１９１（８）：４１６５～４１７３（２０１３））。また、研究者は、癌におけるＣＤ７３－アデノシンの免疫抑制効果を証明し、ＣＤ７３又はアデノシン受容体を標的にして遮断することにより抗腫瘍免疫を効果的に促進し、かつ第一世代免疫チェックポイント阻害薬の活性を強化することができると考えている（Ａｌｌａｒｄ Ｄ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ［免疫療法］、８（２）：１４５～１６３（２０１６））。

【0005】

近年、ＣＤ７３を標的にすることは、前臨床モデルにおいて有利な抗腫瘍効果を達成し、そしてＣＤ７３の遮断と他の免疫調節剤の使用との組み合わせ治療は特に魅力的な治療選択肢である（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ Ｌ．ら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｃａｎｃｅｒ［癌傾向］、２（２）：９５～１０９（２０１６））。抗ＣＤ７３ ｍＡｂとの組み合わせは、抗ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４）ｍＡｂ及び抗ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）ｍＡｂの抗腫瘍活性を顕著に強化することができる。（Ａｌｌａｒｄ Ｂ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．［臨床癌研究］、１９（２０）：５６２６～５６３５（２０１３））。

【0006】

しかしながら、ＣＤ７３に対する研究が進展し、かつ該タンパク質を利用して臨床利益を得るにもかかわらず、依然としてＣＤ７３に対する効果的で、安全で強力な抗体薬剤を開発する必要がある。本発明は、これらの需要及び他の需要を満たす。

【発明の概要】

【0007】

本発明の１つ以上の目的に基づいて、本明細書で具現化され広く説明されたように、本発明は、一態様において抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体、及び／又はこれらの抗原結合断片、それらを作製する方法、それらを含む医薬組成物、及びそれらを用いてヒト被験者を治療する方法に関する。例えば、開示された抗ＣＤ７３抗体、及び親和性変異体及び／又は突然変異体、又はこれらの抗原結合断片は、ＣＤ７３発現、ＣＤ７３過剰発現及び／又は異常ＣＤ７３機能に関連する疾患（例えば癌又は線維症）の治療において単独で使用できるか又は他の薬剤と組み合わせて使用できる。本明細書で提供される抗体は、さらに、患者に抗ＣＤ７３抗体、及び／又は親和性変異体／突然変異体、又はこれらの抗原結合断片を投与し、かつ該患者由来の試料（例えば、インビボ又はインビトロ）中にＣＤ７３タンパク質に結合した抗ＣＤ７３抗体、及び／又は変異体／突然変異体、又はこれらの抗原結合断片を検出することにより、又は、抗ＣＤ７３抗体、及び／又は変異体／突然変異体、又はこれらの抗原結合断片を患者由来の試料に接触させ、かつＣＤ７３タンパク質に結合した抗ＣＤ７３抗体、及び／又は親和性変異体／突然変異体、又はこれらの抗原結合断片を定性的又は定量的に検出することにより、患者又は患者の試料中にＣＤ７３タンパク質を検出するために用いられる。

【0008】

本発明は、抗ＣＤ７３抗体及び変異体、及び／又はこれらの抗原結合断片を提供する。いくつかの実施例では、本発明は、少なくとも１８種の抗ＣＤ７３抗体、変異体及び／又はこれらの抗原結合断片、すなわち、抗ＣＤ７３抗体、及び／又は変異体Ｎ１、変異体Ｎ１変異体（Ｎ１＃２、Ｎ１＃２－Ｐ、Ｎ１＃９及びＮ１＃９－ＰＨ）、変異体Ｎ２、変異体Ｎ４、変異体Ｎ４変異体（Ｎ４＃１、Ｎ４＃４、Ｎ４＃４－３、Ｎ４＃５、Ｎ４＃６、Ｎ４＃６－２、Ｎ４＃６－３、Ｎ４＃６－３－Ｐ、Ｎ４＃６－４、Ｎ４＃６－４－Ｐ及びＮ４＃６－５）を提供する。以下の配列表には、これら（１８種）の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体のそれぞれの軽鎖及び重鎖の核酸及び／又は核酸でコードされたアミノ酸配列が示されている。以下の表１及び２には、それぞれ、各抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体の各軽鎖（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３）及び各重鎖（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３）のＣＤＲ配列が示されている。

【0009】

【表1】

【0010】

【表2-1】

【表2-2】

【0011】

いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、本発明の抗ＣＤ７３抗体は、その可変ドメインの１つ以上のＣＤＲのＮ－グリコシル化部位に１つ以上の突然変異を含む。

【0012】

得られた脱グリコシル化抗体は、親の非脱グリコシル化抗体と同様の機能を保持している。

【0013】

いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、本発明の抗ＣＤ７３抗体は、全長ＩｇＧ抗体であり、軽鎖は、上記軽鎖可変領域及びヒト抗体軽鎖定常領域からなり、重鎖は、上記重鎖可変領域及びヒト抗体重鎖定常領域からなる。

【0014】

いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、本発明の抗ＣＤ７３抗体は、全長ＩｇＧ抗体であり、軽鎖は、上記軽鎖可変領域及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１５に示すようなヒト抗体軽鎖定常領域からなり、重鎖は、上記重鎖可変領域及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１２、１１３又は１１４に示すようなヒト抗体重鎖定常領域からなる。

【0015】

いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、本発明の抗ＣＤ７３抗体は、全長ＩｇＧ抗体であり、
（抗体変異体Ｎ１＃２－Ｐ）軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９３に示すとおりであり、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１６に示すとおりであり、或いは
（抗体変異体Ｎ１＃９－ＰＨ）軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９４に示すようであり、重鎖はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１７に示すとおりであり、或いは
（（抗体変異体Ｎ４＃６－３－Ｐ）軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９５に示すとおりであり、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１８に示すとおりであり、或いは
（抗体変異体Ｎ４＃６－４－Ｐ）軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９６に示すとおりであり、重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１９に示すとおりである。

【0016】

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【0017】

いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、抗ＣＤ７３抗体は、ヒトＩｇＧのＦｃ配列を含む。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ断片、二重抗体及びリニア抗体からなる群から選択される。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、抗体は、多重特異性抗体である。

【0018】

いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、抗ＣＤ７３抗体、変異体又はこれらの抗原結合断片は、治療剤に抱合される。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、抗ＣＤ７３抗体、変異体又はこれらの抗原結合断片は、標識に抱合される。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、標識は、放射性同位元素、蛍光色素及び酵素からなる群から選択される。

【0019】

本発明は、上記実施例のいずれかに係る（又は適用されるような）抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体又はこれらの抗原結合断片をコードする、単離された核酸分子を提供する。上記実施例のいずれかに係る（又は適用されるような）核酸分子をコードする発現ベクターをさらに提供する。上記実施例に係る（又は適用されるような）発現ベクターを含む細胞をさらに提供する。本発明は、抗ＣＤ７３抗体、変異体又はこれらの抗原結合断片を産生する方法を提供し、該方法は、上記実施例のいずれかに係る（又は適用されるような）細胞を培養することと、細胞培養物から抗体又はその抗原結合断片を回収することと、を含む。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞である。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、細胞は、安定な哺乳動物細胞株である。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、安定な哺乳動物細胞株は、ＣＨＯ細胞株である。

【0020】

いくつかの実施例では、細胞表面にヒトＣＤ７３に特異的に結合し、かつ可溶性又は膜結合性のヒトＣＤ７３タンパク質のエクト－５’－ヌクレオチダーゼの活性を中和することができる単離抗体は提供される。抗体は、ＣＤ７３の細胞内在化を誘導することができる。

【0021】

いくつかの実施例では、可溶性又は膜結合性のヒトＣＤ７３タンパク質に結合し、かつその酵素活性を阻害するすることができる抗体を提供し、上記抗体は、ＣＤ７３を発現する細胞に内在化されない。

【0022】

本発明は、上記実施例のいずれかに係る（又は適用されるような）抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体又はこれらの抗原結合断片を含む組成物、及び薬学的に許容される担体を提供する。

【0023】

本発明は、上記実施例のいずれかに係る（又は適用されるような）抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体又はこれらの抗原結合断片を試料に接触させ、かつＣＤ７３タンパク質に結合した抗ＣＤ７３抗体を検出することにより患者由来の試料中にＣＤ７３タンパク質を検出する方法を提供する。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、抗ＣＤ７３抗体、変異体又はこれらの抗原結合断片は、免疫組織化学的アッセイ（ＩＨＣ）又はＥＬＩＳＡ測定に使用される。

【0024】

上記実施例のいずれかに係る（又は適用されるような）組成物を有効な量で被験者に投与することを含む、被験者の癌を治療する方法をさらに提供する。癌を治療するために用いられる、上記実施例のいずれかに係る（又は適用されるような）抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体又はこれらの抗原結合断片を含む組成物をさらに提供する。癌（例えばＣＤ７３の発現に関連する癌）を治療するための薬物の製造における上記実施例に係る（又は適用されるような）抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体又はこれらの抗原結合断片の用途を提供する。

【0025】

いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、癌は、黒色腫、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌、ＴＮＢＣ）、胃癌、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）、非ホジキンリンパ腫の原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＮＨＬ ＰＭＢＣＬ）、中皮腫、卵巣癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、食道癌、鼻咽頭癌（ＮＰＣ）、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌及び唾液腺癌から選択される。いくつかの実施例では、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、被験者に、抗腫瘍剤、化学療法剤、増殖阻害剤及び細胞傷害性薬物からなる群から選択された治療剤をさらに投与する。いくつかの実施例において、上記実施例のいずれかによれば（又は適用されるように）、被験者に、放射線療法及び／又は手術をさらに施行する。

【0026】

以下の図面及び詳細な説明を研究することにより、本発明の他のシステム、方法、特徴及び利点は、当業者にとって自明であるか又は明らかになる。全てのこの追加されるシステム、方法、特徴及び利点は、本明細書内に含まれ、本発明の範囲内であり、かつ添付の請求項により保護されると意図されている。また、説明された実施例の全ての任意選択かつ好ましい特徴及び修正は、本明細書で教示された本発明の全ての態様に適用できる。また、添付の特許請求の範囲の個体特徴は、説明された実施例の全ての任意選択かつ好ましい特徴及び修正と共に、互いに組み合わせ、かつ交換することができる。

【図面の簡単な説明】

【0027】

以下の図面を参照して、本発明の多くの態様をよりよく理解することができる。

【図1A】ナイーブファージのパニングにより選択された抗ＣＤ７３リードＮ１、Ｎ２及びＮ４の軽鎖（図１Ａ）（図１Ａは、それぞれ、出現順にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７９～８１を示す）及び重鎖可変領域（図１Ｂ）（図１Ｂは、それぞれ、出現順にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９７～９９を示す）のアミノ酸配列アライメントを示す。ヒトＣＤ７３－ＥＣＤ／ＨｉｓでヒトＦａｂナイーブファージディスプレイライブラリーをスクリーニングすることにより、ＣＤ７３酵素の結合及び遮断活性を有する３つの選択された抗体リードが同定された。次に、これらの選択された可変配列をヒトＩｇＧ１ Ｆｃの主鎖のＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ突然変異体にクローニングすることにより、全長抗体とした。本明細書において抗体リードの配列アライメントを列挙し、かつＫａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識する。

【図1B】ナイーブファージのパニングにより選択された抗ＣＤ７３リードＮ１、Ｎ２及びＮ４の軽鎖（図１Ａ）（図１Ａは、それぞれ、出現順にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．７９～８１を示す）及び重鎖可変領域（図１Ｂ）（図１Ｂは、それぞれ、出現順にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９７～９９を示す）のアミノ酸配列アライメントを示す。ヒトＣＤ７３－ＥＣＤ／ＨｉｓでヒトＦａｂナイーブファージディスプレイライブラリーをスクリーニングすることにより、ＣＤ７３酵素の結合及び遮断活性を有する３つの選択された抗体リードが同定された。次に、これらの選択された可変配列をヒトＩｇＧ１ Ｆｃの主鎖のＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ突然変異体にクローニングすることにより、全長抗体とした。本明細書において抗体リードの配列アライメントを列挙し、かつＫａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識する。

【図2A】選択された抗体のＣＤ７３への結合を示す。選択された抗体と、組換えヒトＣＤ７３タンパク質（ＥＬＩＳＡ法による（図２Ａ））、ＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒト乳癌）細胞（図２Ｂ）、及びＮＣＩ－Ｈ２９２（ヒト肺粘液性類表皮癌）細胞（図２Ｃ）（フローサイトメトリー法による）との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図2B】選択された抗体のＣＤ７３への結合を示す。選択された抗体と、組換えヒトＣＤ７３タンパク質（ＥＬＩＳＡ法による（図２Ａ））、ＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒト乳癌）細胞（図２Ｂ）、及びＮＣＩ－Ｈ２９２（ヒト肺粘液性類表皮癌）細胞（図２Ｃ）（フローサイトメトリー法による）との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図2C】選択された抗体のＣＤ７３への結合を示す。選択された抗体と、組換えヒトＣＤ７３タンパク質（ＥＬＩＳＡ法による（図２Ａ））、ＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒト乳癌）細胞（図２Ｂ）、及びＮＣＩ－Ｈ２９２（ヒト肺粘液性類表皮癌）細胞（図２Ｃ）（フローサイトメトリー法による）との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図3A】可溶性ＣＤ７３酵素活性及び細胞ＣＤ７３酵素活性に対する抗ＣＤ７３リードの作用を示す。抗ＣＤ７３抗体が組換えヒトＣＤ７３タンパク質及び細胞表面ＣＤ７３の酵素活性を阻害する能力を試験した。組換えＣＤ７３タンパク質（図３Ａ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２細胞（図３Ｂ）を、抗ＣＤ７３抗体、ＡＴＰ及びＡＭＰと共にインキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイを用いて試料中のＡＭＰ濃度を決定した。ルミネセンス読取値は、ＣＤ７３酵素活性を示す。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＡＰＣＰを陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図3B】可溶性ＣＤ７３酵素活性及び細胞ＣＤ７３酵素活性に対する抗ＣＤ７３リードの作用を示す。抗ＣＤ７３抗体が組換えヒトＣＤ７３タンパク質及び細胞表面ＣＤ７３の酵素活性を阻害する能力を試験した。組換えＣＤ７３タンパク質（図３Ａ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２細胞（図３Ｂ）を、抗ＣＤ７３抗体、ＡＴＰ及びＡＭＰと共にインキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイを用いて試料中のＡＭＰ濃度を決定した。ルミネセンス読取値は、ＣＤ７３酵素活性を示す。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＡＰＣＰを陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図4】抗ＣＤ７３リードによって媒介されるＣＤ７３内在化を示す。抗ＣＤ７３抗体処理の後に、フローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図5A】異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する選択された抗体のＣＤ７３への結合を示す。さらに、Ｎ１、Ｎ２及びＮ４の可変配列をヒト野生型又はＣ２１９Ｓ突然変異体ＩｇＧ２ Ｆｃの主鎖にクローニングした。フローサイトメトリー法によりＮ１（図５Ａ）、Ｎ２（図５Ｂ）、Ｎ４（図５Ｃ）の異なるＩｇＧアイソタイプと、ＣＤ７３を発現するヒトＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図5B】異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する選択された抗体のＣＤ７３への結合を示す。さらに、Ｎ１、Ｎ２及びＮ４の可変配列をヒト野生型又はＣ２１９Ｓ突然変異体ＩｇＧ２ Ｆｃの主鎖にクローニングした。フローサイトメトリー法によりＮ１（図５Ａ）、Ｎ２（図５Ｂ）、Ｎ４（図５Ｃ）の異なるＩｇＧアイソタイプと、ＣＤ７３を発現するヒトＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図5C】異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する選択された抗体のＣＤ７３への結合を示す。さらに、Ｎ１、Ｎ２及びＮ４の可変配列をヒト野生型又はＣ２１９Ｓ突然変異体ＩｇＧ２ Ｆｃの主鎖にクローニングした。フローサイトメトリー法によりＮ１（図５Ａ）、Ｎ２（図５Ｂ）、Ｎ４（図５Ｃ）の異なるＩｇＧアイソタイプと、ＣＤ７３を発現するヒトＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図6A】細胞ＣＤ７３酵素活性に対する異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する抗ＣＤ７３リードの作用を示す。異なるＩｇＧアイソタイプを有する抗ＣＤ７３リードＮ１（図６Ａ）、Ｎ２（図６Ｂ）、Ｎ４（図６Ｃ）が細胞ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、抗ＣＤ７３抗体と共にインキュベートした。ＡＴＰ、ＡＭＰ及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加えてルミネセンスを記録した。酵素活性アッセイではＡＰＣＰを陽性対照として用いた。

【図6B】細胞ＣＤ７３酵素活性に対する異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する抗ＣＤ７３リードの作用を示す。異なるＩｇＧアイソタイプを有する抗ＣＤ７３リードＮ１（図６Ａ）、Ｎ２（図６Ｂ）、Ｎ４（図６Ｃ）が細胞ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、抗ＣＤ７３抗体と共にインキュベートした。ＡＴＰ、ＡＭＰ及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加えてルミネセンスを記録した。酵素活性アッセイではＡＰＣＰを陽性対照として用いた。

【図6C】細胞ＣＤ７３酵素活性に対する異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する抗ＣＤ７３リードの作用を示す。異なるＩｇＧアイソタイプを有する抗ＣＤ７３リードＮ１（図６Ａ）、Ｎ２（図６Ｂ）、Ｎ４（図６Ｃ）が細胞ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、抗ＣＤ７３抗体と共にインキュベートした。ＡＴＰ、ＡＭＰ及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加えてルミネセンスを記録した。酵素活性アッセイではＡＰＣＰを陽性対照として用いた。

【図7A】異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する抗ＣＤ７３抗体によって媒介されるＣＤ７３内在化を示す。細胞と、Ｎ１（図７Ａ）、Ｎ２（図７Ｂ）及びＮ４（図７Ｃ）を有する異なるＩｇＧアイソタイプの細胞とをインキュベートした後、フローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図7B】異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する抗ＣＤ７３抗体によって媒介されるＣＤ７３内在化を示す。細胞と、Ｎ１（図７Ａ）、Ｎ２（図７Ｂ）及びＮ４（図７Ｃ）を有する異なるＩｇＧアイソタイプの細胞とをインキュベートした後、フローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図7C】異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する抗ＣＤ７３抗体によって媒介されるＣＤ７３内在化を示す。細胞と、Ｎ１（図７Ａ）、Ｎ２（図７Ｂ）及びＮ４（図７Ｃ）を有する異なるＩｇＧアイソタイプの細胞とをインキュベートした後、フローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【図8A】ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒトトリプルネガティブ乳癌）異種移植マウスモデルにおける抗ＣＤ７３リードの腫瘍増殖阻害活性を示す。マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の皮下にＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を移植した。腫瘍を接種した後の１４日に、移植された腫瘍のサイズが１５０～３００ｍｍ^３に達すると、第１の用量の被験物質を投与した。指定時間内に５ｍｇ／ｋｇの抗体を用いて、マウスを腹腔内で処理した。腫瘍増殖曲線は、図８Ａに示される。４５日目の個体腫瘍体積は、図８Ｂに示される。全てのデータ点は、いずれも平均値±ＳＥＭである。

【図8B】ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒトトリプルネガティブ乳癌）異種移植マウスモデルにおける抗ＣＤ７３リードの腫瘍増殖阻害活性を示す。マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の皮下にＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を移植した。腫瘍を接種した後の１４日に、移植された腫瘍のサイズが１５０～３００ｍｍ^３に達すると、第１の用量の被験物質を投与した。指定時間内に５ｍｇ／ｋｇの抗体を用いて、マウスを腹腔内で処理した。腫瘍増殖曲線は、図８Ａに示される。４５日目の個体腫瘍体積は、図８Ｂに示される。全てのデータ点は、いずれも平均値±ＳＥＭである。

【図9】親和性成熟したＮ１及びＮ４変異体由来の軽鎖可変領域のアミノ酸配列アライメントを示す。インビトロファージディスプレイに基づく親和性成熟実験から、より優れたＣＤ７３結合親和性及び可溶性ＣＤ７３酵素遮断活性を有するＮ１及びＮ４変異体を同定した。Ｋａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識する。図９は、それぞれ、出現順にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．８２～８５、８８、８６～８７及び８９～９２を示す。

【図10】親和性成熟したＮ１及びＮ４変異体由来の重鎖可変領域のアミノ酸配列アライメントを示す。インビトロファージディスプレイに基づく親和性成熟実験から、より優れたＣＤ７３結合親和性及び可溶性ＣＤ７３酵素遮断活性を有するＮ１及びＮ４変異体を同定した。Ｋａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識する。次に、これらの選択された可変配列をヒトＩｇＧ２ Ｆｃの主鎖にクローニングすることにより、全長抗体とした。図１０は、それぞれ、出現順にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１００～１０３、１０６、１０４～１０５及び１０７～１１０を示す。

【図11A】Ｎ１及びＮ４変異体のＣＤ７３への結合を示す。フローサイトメトリー法により、選択された変異体と、ＣＤ７３を発現するヒトＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１１Ａ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２細胞（図１１Ｂ）との結合を試験した。ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図11B】Ｎ１及びＮ４変異体のＣＤ７３への結合を示す。フローサイトメトリー法により、選択された変異体と、ＣＤ７３を発現するヒトＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１１Ａ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２細胞（図１１Ｂ）との結合を試験した。ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図12】固定化ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４変異体の作用を示す。Ｎ１及びＮ４変異体が固定化ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。抗ＣＤ７３抗体及びＣＤ７３タンパク質をインキュベートした後、ＡＴＰ、ＡＭＰ及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加えてルミネセンスを記録した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図13】Ｎ１及びＮ４変異体によって媒介されるＣＤ７３内在化を示す。ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞を、Ｎ１及びＮ４変異体と共にインキュベートし、かつフローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図14】Ｎ１及びＮ４トップ変異体の軽鎖のアミノ酸配列アライメントを示す。Ｋａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識する。図１４は、それぞれ、出現順にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．９３～９６を示す。

【図15】Ｎ１及びＮ４トップ変異体の重鎖可変領域のアミノ酸配列アライメントを示す。Ｋａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識する。次に、これらの配列をヒトＩｇＧ２ Ｆｃの主鎖にクローニングすることにより、全長抗体とした。図１５は、それぞれ、出現順にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１１１、１０１、及び１０８～１０９を示す。

【図16A】Ｎ１及びＮ４トップ変異体のＣＤ７３結合能力を示す。ＥＬＩＳＡ法により抗ＣＤ７３抗体と組換えヒトＣＤ７３タンパク質との結合を試験し（図１６Ａ）、そしてフローサイトメトリー法によりＣＤ７３抗体と、ＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１６Ｂ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２（図１６Ｃ）との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図16B】Ｎ１及びＮ４トップ変異体のＣＤ７３結合能力を示す。ＥＬＩＳＡ法により抗ＣＤ７３抗体と組換えヒトＣＤ７３タンパク質との結合を試験し（図１６Ａ）、そしてフローサイトメトリー法によりＣＤ７３抗体と、ＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１６Ｂ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２（図１６Ｃ）との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図16C】Ｎ１及びＮ４トップ変異体のＣＤ７３結合能力を示す。ＥＬＩＳＡ法により抗ＣＤ７３抗体と組換えヒトＣＤ７３タンパク質との結合を試験し（図１６Ａ）、そしてフローサイトメトリー法によりＣＤ７３抗体と、ＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１６Ｂ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２（図１６Ｃ）との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図17A】可溶性ＣＤ７３酵素活性（図１７Ａ）及び細胞表面ＣＤ７３酵素活性（図１７Ｂ、図１７Ｃ）に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用を示す。抗ＣＤ７３抗体が組換えヒトＣＤ７３タンパク質及び細胞表面ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。組換えＣＤ７３タンパク質（図１７Ａ）、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１７Ｂ）、ＮＣＩ－Ｈ２９２（図１７Ｃ）細胞を、抗ＣＤ７３抗体と共にインキュベートした。ＡＴＰ、ＡＭＰ及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを加えてルミネセンスを記録した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体、抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体及びＡＰＣＰを陽性対照として用いた。ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図17B】可溶性ＣＤ７３酵素活性（図１７Ａ）及び細胞表面ＣＤ７３酵素活性（図１７Ｂ、図１７Ｃ）に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用を示す。抗ＣＤ７３抗体が組換えヒトＣＤ７３タンパク質及び細胞表面ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。組換えＣＤ７３タンパク質（図１７Ａ）、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１７Ｂ）、ＮＣＩ－Ｈ２９２（図１７Ｃ）細胞を、抗ＣＤ７３抗体と共にインキュベートした。ＡＴＰ、ＡＭＰ及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを加えてルミネセンスを記録した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体、抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体及びＡＰＣＰを陽性対照として用いた。ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図17C】可溶性ＣＤ７３酵素活性（図１７Ａ）及び細胞表面ＣＤ７３酵素活性（図１７Ｂ、図１７Ｃ）に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用を示す。抗ＣＤ７３抗体が組換えヒトＣＤ７３タンパク質及び細胞表面ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。組換えＣＤ７３タンパク質（図１７Ａ）、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１７Ｂ）、ＮＣＩ－Ｈ２９２（図１７Ｃ）細胞を、抗ＣＤ７３抗体と共にインキュベートした。ＡＴＰ、ＡＭＰ及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを加えてルミネセンスを記録した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体、抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体及びＡＰＣＰを陽性対照として用いた。ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図18A】Ｎ１及びＮ４トップ変異体によって媒介されるＣＤ７３内在化を示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１８Ａ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２（図１８Ｂ）細胞を、抗ＣＤ７３Ｎ１及びＮ４変異体と共にインキュベートした。インキュベートした後に、フローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図18B】Ｎ１及びＮ４トップ変異体によって媒介されるＣＤ７３内在化を示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１８Ａ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２（図１８Ｂ）細胞を、抗ＣＤ７３Ｎ１及びＮ４変異体と共にインキュベートした。インキュベートした後に、フローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【図19A】Ｎ１及びＮ４トップ変異体による、Ｔ細胞の活性に対するＡＭＰの阻害効果の反転を示す。単離されたヒトＴ細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ、ＡＭＰ及び連続希釈された抗体と共に３７℃で４日間培養した。ＣＤ３^＋ Ｔ細胞の増殖後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイを行い（図１９Ａ）、かつヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（登録商標） Ｄｅｌｕｘｅキット（図１９Ｂ）を用いてＩＦＮ－γ分泌を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０４（抗ＶＥＧＦ）を陰性対照として用いた。

【図19B】Ｎ１及びＮ４トップ変異体による、Ｔ細胞の活性に対するＡＭＰの阻害効果の反転を示す。単離されたヒトＴ細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ、ＡＭＰ及び連続希釈された抗体と共に３７℃で４日間培養した。ＣＤ３^＋ Ｔ細胞の増殖後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイを行い（図１９Ａ）、かつヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（登録商標） Ｄｅｌｕｘｅキット（図１９Ｂ）を用いてＩＦＮ－γ分泌を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０４（抗ＶＥＧＦ）を陰性対照として用いた。

【図20】ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒトトリプルネガティブ乳癌）異種移植マウスモデルにおけるＮ１及びＮ４トップ変異体の腫瘍増殖阻害活性を示す。マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の皮下にＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を移植した。腫瘍を接種した後の７日に、移植された腫瘍のサイズが約１００ｍｍ^３に達すると、第１の用量の被験物質を投与した。１週間に２回、１０ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの抗体を用いて、マウスを腹膜内で処理し、５～６週間持続した。全てのデータ点は、いずれも平均値±ＳＥＭである。

【図21】ＮＣＩ－Ｈ２９２（ヒト肺粘液性類表皮癌）異種移植マウスモデルにおけるＮ１及びＮ４トップ変異体の腫瘍増殖阻害活性を示す。マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の皮下にＮＣＩ－Ｈ２９２細胞を移植した。腫瘍を接種した後の３日に第１の用量の被験物質を投与した。１週間に２回、５０、１０及び２ｍｇ／ｋｇの抗体を用いて、マウスを腹膜内で処理し、３週間持続した。全てのデータ点は、いずれも平均値±ＳＥＭである。

【図22】ＮＣＩ－Ｈ２９２異種移植腫瘍における細胞ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用を示す。Ｎ１及びＮ４トップ変異体がＮＣＩ－Ｈ２９２異種移植モデルにおいてＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。抗体で処理する前の４日に、マウス（ｎ＝４匹のマウス／群）の皮下にＮＣＩ－Ｈ２９２細胞を移植した。０日目に、腹腔内に抗体、ＡＰＣＰ及びプラセボを注射した。抗体を投与した後の１、３及び７日目に腫瘍を切除した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイにより腫瘍におけるＣＤ７３酵素活性を測定した。

【図23A】ＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植腫瘍におけるＣＤ７３発現及び細胞ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用を示す。抗ＣＤ７３抗体がＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植モデルにおいて表面ＣＤ７３発現を低下させ、かつＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。抗体で処理する前の７日に、マウス（ｎ＝４匹のマウス／群）の皮下にＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を移植した。０日目に、抗体及びプラセボを注射した。抗体を投与した後の１、３及び７日目に腫瘍を収集した。染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）によりＣＤ７３発現を測定し（図２３Ａ）、かつＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイにより腫瘍におけるＣＤ７３酵素活性を測定した（図２３Ｂ）。

【図23B】ＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植腫瘍におけるＣＤ７３発現及び細胞ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用を示す。抗ＣＤ７３抗体がＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植モデルにおいて表面ＣＤ７３発現を低下させ、かつＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。抗体で処理する前の７日に、マウス（ｎ＝４匹のマウス／群）の皮下にＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を移植した。０日目に、抗体及びプラセボを注射した。抗体を投与した後の１、３及び７日目に腫瘍を収集した。染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）によりＣＤ７３発現を測定し（図２３Ａ）、かつＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイにより腫瘍におけるＣＤ７３酵素活性を測定した（図２３Ｂ）。

【図24A】Ｎ１及びＮ４トップ変異体と、マウス及びサルのＣＤ７３を発現する細胞との交差結合を示す。フローサイトメトリー法により抗ＣＤ７３抗体と、ＣＤ７３を発現するマウス乳癌４Ｔ１細胞（図２４Ａ）及びサル腎上皮ＬＬＣ－ＭＫ２細胞（図２４Ｂ）との結合を試験した。ＨＬＸ０１を陰性対照として用いた。

【図24B】Ｎ１及びＮ４トップ変異体と、マウス及びサルのＣＤ７３を発現する細胞との交差結合を示す。フローサイトメトリー法により抗ＣＤ７３抗体と、ＣＤ７３を発現するマウス乳癌４Ｔ１細胞（図２４Ａ）及びサル腎上皮ＬＬＣ－ＭＫ２細胞（図２４Ｂ）との結合を試験した。ＨＬＸ０１を陰性対照として用いた。

【0028】

本発明の他の利点は、一部が以下の説明で列挙され、一部が該説明から明らかになるか又は本発明の実践により理解され得る。添付の特許請求の範囲に具体的に指摘された要素と組み合わせにより本発明の利点を実現と達成する。理解すべきことは、前述の一般的な説明及び以下の詳細な説明は、いずれも例示的及び説明的なものに過ぎず、特許請求された本発明を限定するものではない。

【発明を実施するための形態】

【0029】

一態様では、本発明は、抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体、及び／又はこれらの抗原結合断片、それらを作製する方法、それらを含む医薬組成物、及びそれらを用いてヒト被験者を治療する方法に関する。本発明は、ＣＤ７３に特異的に結合し、かつマクロファージ媒介の食作用を誘導することにより腫瘍増殖を阻害する抗ＣＤ７３抗体をさらに提供する。開示された抗体は、臨床症状（例えば癌又は線維症）を治療するための一般的な抗ＣＤ７３モノクローナル抗体より優れた有効性及び／又は抗腫瘍活性を示す。免疫抱合体、（本明細書で記載された）新規な抗ＣＤ７３抗体、それらの親和性変異体又はこれらの抗原結合断片をコードする核酸、及び組成物（例えば医薬組成物）をさらに提供する。

【0030】

いくつかの実施例では、本発明は、少なくとも１８種の抗ＣＤ７３抗体、変異体及び／又はこれらの抗原結合断片、すなわち、表１及び表２に指定された抗ＣＤ７３抗体、変異体及び／又は突然変異体を提供する。以下に開示された配列－配列表部分には、これらの抗ＣＤ７３抗体、その変異体及び／又は突然変異体のそれぞれの軽鎖及び重鎖の核酸及び／又は核酸でコードされたアミノ酸配列が示されている。表１及び２には、それぞれ、各抗ＣＤ７３抗体、その変異体及び／又は突然変異体の各軽鎖（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３）及び各重鎖（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３）のＣＤＲ配列が示されている。

【0031】

本発明は、新規な抗ＣＤ７３抗体、親和性変異体及び／又は突然変異体又はこれらの抗原結合断片を用いて試料（例えばインビボ又はインビトロ試料）におけるＣＤ７３を検出する方法、及び／又は、ＣＤ７３発現、ＣＤ７３過剰発現及び／又は異常ＣＤ７３機能（例えば癌又は線維症）に関連する臨床症状又は疾患を治療するために用いられる、このような抗体、変異体及び／又は突然変異体又はこれらの抗原結合断片を含む組成物をさらに提供する。他の実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、親和性変異体及び／又は突然変異体又はこれらの抗原結合断片は、ＣＤ７３発現、ＣＤ７３過剰発現及び／又は異常ＣＤ７３機能に関連する疾患（例えば癌又は線維症）の治療において他の薬剤と組み合わせて使用できる。本発明は、癌治療に用いられる薬物の製造におけるこのような抗体、変異体又はこれらの抗原結合断片の用途をさらに提供する。

【0032】

本明細書で提供される抗体は、さらに、患者に抗ＣＤ７３抗体、及び／又はそれらの親和性変異体／突然変異体、又はこれらの抗原結合断片を投与し、かつ該患者由来の試料（例えば、インビボ又はインビトロ）中にＣＤ７３タンパク質に結合した抗ＣＤ７３抗体、及び／又は変異体／突然変異体、又はこれらの抗原結合断片を検出することにより、又は、抗ＣＤ７３抗体、及び／又は変異体／突然変異体、又はこれらの抗原結合断片を患者由来の試料に接触させ、かつＣＤ７３タンパク質に結合した抗ＣＤ７３抗体、及び／又は親和性変異体／突然変異体、又はこれらの抗原結合断片を定性的又は定量的に検出することにより、患者又は患者の試料中にＣＤ７３タンパク質を検出するために用いられる。

【0033】

以上の説明及び関連図面に示された教示に基づいて、開示された組成物及び方法が属する分野の当業者は、本明細書で開示された多くの修正及び他の実施例を想到する。したがって、本発明は、開示された具体的な実施例に限定されるものではなく、改良及び他の実施例が添付の特許請求の範囲内に含まれることを理解すべきである。当業者は、本明細書で記載された態様の多くの変形や修正を認識する。これらの変形や修正は、本発明の教示に含まれると共に本願の特許請求の範囲に含まれることを意図する。

【0034】

本明細書で特定の用語が採用されるが、それらは一般的及び説明的な意味で用いられ、限定を目的とするものではない。

【0035】

当業者にとって明らかなように、本発明の明細書を読んだ場合に、本明細書で記述と示された個別の実施例は、離散的な構成成分及び特徴を有し、これらの成分及び特徴は、本発明の範囲又は精神から逸脱することなく任意の他の複数の実施例の特徴と単離するか又は組み合わせることができる。

【0036】

記載されたイベントの順に、又は論理的に実行可能な任意の他の順に、記載された任意の方法を行うことができる。すなわち、特に明確に説明しない限り、本明細書で説明された任意の方法又は態様を、特定の順にそのステップを実行するように解釈することを意図しない。したがって、方法の請求項において、特許請求の範囲又は明細書でこれらのステップが特定の順に限定されると具体的に説明していない場合、いかなる態様も順を推定することを意図しない。これは、ステップ又は操作フローの配置に関する論理、文法構成又は句読点から由来した明確な意味又は明細書で記載された態様の数又はタイプを含む、解釈のための任意の可能な非表現基礎に当てはまる。

【0037】

特許出願及び刊行物を含む、本明細書で引用された全ての参照文献は、いずれも引用によりその全体にわたって本明細書に組み込まれる。本明細書で説明されたこれらの刊行物の本願の提出日より前の開示内容のみが提供される。本明細書は、本発明が先の本発明によりこのような刊行物に先行する権利がないことを承認すると解釈されるべきではない。また、本明細書で提供される出版日は、実際の出版日と異なる可能性があるため、独立して確認する必要がある。

【0038】

本発明の態様が具体的な法定分類（例えばシステムの法定種類）において特許請求と説明することができるが、これは単に便利上のものであり、当業者であれば、いかなる法定分類においても本発明の各態様を説明しかつ特許要求することができることを理解すべきである。

【0039】

さらに理解すべきことは、本明細書で用いられる用語は、具体的な態様を説明することのみを目的とし、限定するものではない。他の定義がない限り、本明細書で用いられる全ての技術及び科学的用語は、開示された組成物及び方法が属する分野の当業者が一般的に理解する意味と同じ意味を有する。さらに理解されるように、用語（例えば、一般的な辞書に定義されたそれらの用語）は、それが明細書及び関連分野の文脈において一致する意味を有すると解釈されるべきであり、本明細書に明確に定義しない限り、理想化又はあまり正式的な意味として解釈されるべきではない。

【0040】

本発明の様々な態様を説明する前に、他の指示がない限り、以下の定義を提供し、かつ以下の定義を使用すべきである。他の用語は、本発明の他の箇所で定義されてよい。

【0041】

定義
理解すべきことは、本明細書で記載された本発明の態様及び実施例は、「「態様及び実施例」を含む」こと、「「態様及び実施例」からなる」こと、及び「基本的に「態様及び実施例」からなる」ことを含む。

【0042】

本明細書で用いられる「含む」は、記載された特徴、整数、ステップ又は構成要素の存在を特定するものと解釈されるべきであり、１つ以上の特徴、整数、ステップ又は構成要素又はそれらの群の存在又は添加を排除するものではない。また、用語「により」、「含有（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ ｏｆ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｉｎｃｌｕｄｅｓ、ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」、「関する（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ、ｉｎｖｏｌｖｅｓ、ｉｎｖｏｌｖｅｄ）」及び「例えば」のそれぞれは、その開放された非限定的な意味で使用され、かつ交換して使用できる。また、用語「含有」は、用語「基本的に．．．からなる」及び「．．．からなる」がカバーする実施例及び態様を含むことを意図する。同様に、用語「基本的に．．．からなる」は、用語「．．．からなる」がカバーする実施例を含むことを意図する。

【0043】

注意すべきことは、比率、濃度、量及び他の数値データは、本明細書において範囲の形式で示すことができる。さらに理解されるように、各範囲の端点は、他の端点に対していずれも重要であり、かつ他の端点から独立する。さらに理解されるように、本明細書において多くの値が開示され、各値が、値自体に加えて、「約」その特定の値としても本明細書に開示される。例えば、値「１０」が開示されている場合、「約１０」も開示されている。本明細書において、「約」ある特定の値から、及び／又は、「約」他の特定の値までという範囲を表すことができる。同様に、先行詞「約」を用いて値を近似値として表す場合、該特定の値が別の態様を形成することが理解されよう。例えば、値「約１０」が開示されている場合、「１０」も開示されている。

【0044】

範囲を表す場合、他の態様では、１つの特定の値から、及び／又は、他の特定の値までを含む。例えば、
説明された範囲が限界値の１つ又は２つを含む場合、それらの含まれた限界値の１つ又は２つを排除する範囲も本発明に含まれ、例えば、フレーズ「ｘ～ｙ」は、「ｘ」から「ｙ」までの範囲、及び「ｘ」より大きく「ｙ」より小さい範囲を含む。該範囲は、上限値として表されてよく、例えば、「約ｘ、ｙ、ｚ以下」であり、そして「約ｘ」、「約ｙ」及び「約ｚ」の特定の範囲、「ｘより小さい」範囲、「ｙより小さい」範囲及び「ｚより小さい」範囲を含むと解釈されるべきである。同様に、フレーズ「約ｘ、ｙ、ｚ以上」は、「約ｘ」、「約ｙ」及び「約ｚ」の特定の範囲、「ｘより大きい」範囲、「ｙより大きい」範囲及び「ｚより大きい」範囲を含むと解釈されるべきである。また、フレーズ「約「ｘ」～「ｙ」」において、「ｘ」及び「ｙ」は、数値であり、「約「ｘ」～約「ｙ」」を含む。

【0045】

理解すべきことは、この範囲の形式は、便利かつ簡潔の目的で使用されるため、範囲限界として明確に記載された数値を含むだけでなく、各数値及び部分範囲が明確に説明されるように該範囲内にカバーされた全ての単独数値又は部分範囲を含むと柔軟に解釈されるべきである。説明のために、「約０．１％～５％」の数値範囲は、約０．１％～約５％という明確に記載された値を含むだけではなく、指定された範囲内の単独の値（例えば、約１％、約２％、約３％及び約４％）、及び部分範囲（例えば、約０．５％～約１．１％、約０．５％～約２．４％、約０．５％～約３．２％及び約０．５％～約４．４％、並びに他の可能な部分範囲）を含むと解釈されるべきである。

【0046】

本明細書で用いられる用語「約」、「程度」、「．．．であるか又は約．．．である」及び「基本的」は、議論された量又は値が正確な値であってもよく、本特許請求の範囲又は教示に記載される等価結果又は効果を提供する値であってもよいことを意味する。本明細書における「約」値又はパラメータの引用は、当業者が容易に知ることができる対応する値の一般的な誤差範囲を意味する。すなわち、理解すべきことは、量、サイズ、配合方法、パラメータ及び他の数や性質は、正確なものではなく、正確である必要もなく、（必要に応じて）近似値であり、及び／又は、該値より大きいか又はより小さい場合もあり、公差、変換係数、四捨五入、測定誤差など、及び当業者に知られている他の要素を反映して等価結果又は効果を達成することができる。いくつかの場合に、等価結果又は効果を達成する値を合理的に決定することができない。このような例では、特に断らない限り、本明細書で用いられる「約」及び「．．．であるか又は約．．．である」は、一般的に理解されるように、±１０％以内に変動する公称値を意味する。一般的に、量、サイズ、配合方法、パラメータ又は他の数や特徴は、明確に説明するか否かにかかわらず、「約」、「程度」、「．．．であるか又は約．．．である」である。理解すべきことは、定量値の前に「約」、「程度」、「．．．であるか又は約．．．である」を使用する時に、特に断らない限り、パラメータは、さらに特定の定量値自体を含む。すなわち、本明細書における「約」値又はパラメータの引用は、該値又はパラメータ自体の態様を含む（かつ説明する）。例えば、「約Ｘ」に関する説明は、「Ｘ」の説明を含む。

【0047】

本明細書で用いられる用語「任意選択の」又は「任意選択に」は、後述するイベント又は状況が発生してもよいし、発生しなくてもよいことを意味し、かつ該説明は、上記イベント又は状況が発生した実施例及び発生しない実施例を含む。

【0048】

本明細書で用いられる「ＣＤ７３」及び「ＣＤ－７３」は、交換して使用でき、かつ８個のエクソンを含むヒト遺伝子によりコードされた細胞表面酵素を意味し、該ヒト遺伝子の細胞遺伝学的位置が３ｑ１３．１２であり、そして塩基対の分子位置が染色体６（ホモサピエンス注釈リリース（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ Ｒｅｌｅａｓｅ）１０９、ＧＲＣｈ３８．ｐ１２）に８５、４４９、５８４－８５、４９５、７９１である。ＣＤ７３タンパク質は、５’－ヌクレオチダーゼ（Ｚｎ^＋２を補助因子として利用する）を有する酵素（ＥＣ分類：３．１．３．５）である。該タンパク質は、細胞外ヌクレオチドを膜透過性ヌクレオシドに加水分解することができ、かつ核塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド及び核酸代謝の調節に関与する。該タンパク質は、主にＧＰＩアンカーを介してプラズマ膜上の細胞内位置に関連する。ヒトＣＤ７３タンパク質は、選択的スプライシングにより産生された２種のアイソタイプを有する。典型的なアイソタイプ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別子Ｐ２１５８９）は、５７４個のアミノ酸を含み、かつ約６３ｋＤａの分子量を有する。ＣＤ７３は、エクト－５’－ヌクレオチダーゼ及び５’－ヌクレオチダーゼとも呼ばれる。ＣＤ７３遺伝子の突然変異は、関節及び動脈の石灰化、すなわち遺伝性動脈及び関節多発性石灰化症候群に関連する。

【0049】

本明細書で用いられる「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ又はｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、有益な又は所望の結果を得るための方法（臨床結果を含む）である。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果は、疾患から生じる１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の減少、疾患の安定化（例えば、疾患の悪化の予防又は遅延）、疾患の広がり（例えば、転移）の予防又は遅延、疾患の再発の予防又は遅延、疾患の進行の遅延又は緩徐、病状の軽減、疾患の寛解（部分又は全体）、疾患の治療に必要とされる１つ以上の他の薬物の用量の減少、疾患の進行の遅延、生活の質の向上又は改善、体重の増加、及び／又は生存期間の延長という１種以上の結果を含むが、それらに限定されない。「治療」には、癌の病理学的結果（例えば、腫瘍の体積など）の減少も包含される。本明細書で提供される方法には、これらの治療態様のうちのいずれか１つ以上が考慮される。

【0050】

用語「再発」、「回帰」又は「再燃」は、病気の消失の臨床的評価後の癌又は疾患の再発を意味する。遠隔転移又は局所再発の診断は、再発と考えられ得る。

【0051】

用語「難治性」又は「耐性」は、治療に応答しない癌又は疾患を意味する。

【0052】

用語「補助療法」は、一次療法、通常、外科手術後に付与される療法を意味する。癌又は疾患の補助療法は、免疫療法、化学療法、放射線療法又はホルモン療法を含み得る。

【0053】

用語「維持療法」は、前の治療の効果を維持することを助けるための予定された再処置を意味する。一般的には、維持療法は、癌の寛解を保つのを助けるため、又は疾患の進行に関わらず特定の療法に対する応答を延長させるために付与される。

【0054】

用語「浸潤性癌」は、組織層を超えて広がった（正常な周辺組織へと開始した）癌を意味する。浸潤性癌は、転移性であってもよいし、転移性でなくてもよい。

【0055】

用語「非浸潤性癌」は、非常に早期の癌又は元の組織を超えて広がっていない癌を意味する。

【0056】

腫瘍学における用語「無増悪生存期間」は、癌が増殖しない治療期間及び後の時間の長さを意味する。無増悪生存期間は、患者が完全な応答もしくは部分的な応答を経た時間、ならびに患者が安定な疾患を経た時間を含む。

【0057】

腫瘍学における用語「進行性疾患」は、腫瘍における質量増加又は広がりのいずれかにより、治療開始から２０％以上の腫瘍増殖を意味し得る。

【0058】

「障害」は、被験者（例えば、ヒトなどの哺乳動物）における、ＣＤ７３発現、ＣＤ７３過剰発現及び／又は異常ＣＤ７３機能に関連する任意の臨床症状を意味し、被験者が、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を使用する治療又は予防から利益を得ることができる。例えば、哺乳動物は、ＣＤ７３過剰発現に苦しむか又はＣＤ７３過剰発現の予防を必要とする。これは、哺乳動物を議論された障害にかかりやすくするそれらの病理学的状態を含む慢性及び急性障害又は疾患を含む。本明細書で治療対象の障害の非限定的な実施例は、開示された癌（例えば頭頸部癌、咽頭癌、結腸直腸癌、肺癌など）又は線維症（特発性肺線維症を含む）を含む。

【0059】

本明細書で用いられる「腫瘍」は、悪性であれ、良性であれ、全ての腫瘍細胞の成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性の細胞及び組織を意味する。

【0060】

用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、具体的には、天然ポリペプチドに特異的に結合し、及び／又は本発明の生物学的活性又は免疫学的活性を示す限り、例えば、単一のモノクローナル抗体（作用薬、拮抗薬及び中和抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、ポリクローナル抗体、一本鎖抗体及び抗体断片（以下を参照）を網羅する。１つの実施例によれば、抗体は、標的タンパク質のオリゴマー型、例えば三量体型に結合する。別の実施例によれば、抗体はタンパク質に特異的に結合し、本発明のモノクローナル抗体（例えば本発明の沈着抗体など）は、該結合を阻害することができる。語句抗体の「機能的断片又は類似体」は、参照される抗体と同様に定性的な生物学的活性を有する化合物である。例えば、本発明の抗体の機能的断片又は類似体は、ＣＤ７３に特異的に結合することができる抗体であってよい。１つの実施例では、抗体は、ＣＤ７３を発現する癌細胞のマクロファージによって媒介される食作用を誘導することができる。

【0061】

「単離された抗体」は、自然環境の構成成分から同定、単離及び／又は回収された抗体である。その自然環境の混入成分は、抗体の診断又は治療用途に干渉する物質であり、酵素、ホルモン及び他のタンパク質又は非タンパク質溶質を含み得る。好ましい実施例では、抗体は、（１）例えばＬｏｗｒｙ法により決定されたように抗体の重量で９５％より大きくなり、最も好ましくは重量で９９％より大きくなるまで、（２）スピニングカップシークエネーターを用いて、Ｎ末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度になるまで、又は（３）クマシーブルー又は好ましくは銀染色を用いて還元又は非還元条件でＳＤＳ－ＰＡＧＥにより決定された均一性を取得するまで、精製される。単離された抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１種の構成成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイツの抗体を含む。しかしながら、一般的には、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより、作製される。

【0062】

基本的な４鎖抗体単位は、２本の同じ軽（Ｌ）鎖と２本の同じ重（Ｈ）鎖からなるヘテロ四量体糖タンパク質である（ＩｇＭ抗体は、５個の基本的なヘテロ四量体単位とＪ鎖と呼ばれるさらなるポリペプチドからなり、したがって１０個の抗原結合部位を含む一方、分泌型ＩｇＡ抗体は、重合して２～５個の基本的な４鎖単位とＪ鎖を含む多価構成を形成することができる）。ＩｇＧの場合、４鎖単位は、一般的に約１５００００ダルトンである。各軽（Ｌ）鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合により重（Ｈ）鎖に連結されているが、２本のＨ鎖は、１つ以上のジスルフィド結合（Ｈ鎖アイソタイプに依存する）により互いに連結されている。各Ｈ鎖及びＬ鎖は、規則的な間隔の鎖間ジスルフィド架橋をさらに有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端において、可変ドメイン（ＶＨ）、続いてα及びγ鎖のそれぞれについて３つの定常ドメイン（ＣＨ）、及びμ及びεアイソタイプについて４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端において、可変ドメイン（ＶＬ）を有し、そのもう一方の末端に定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬはＶＨと整列され、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖と重鎖との可変ドメインの間に界面を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬは一緒にペアになって、単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ［基礎・臨床免疫学］、第８版、Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓら、Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ［アップルトン＆ラング出版社］、Ｎｏｒｗａｌｋ［ノーウォーク］、ＣＴ［コネチカット州］、１９９４、第７１ページ及び第６章を参照する。

【0063】

任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ及びλと呼ばれる２つの明らかに異なるタイプのうちの１つに分けることができる。その重鎖（ＣＨ）の定常ドメインのアミノ酸配列により、免疫グロブリンを異なるクラス又はアイソタイプに分けることができる。免疫グロブリンには、それぞれα、δ、γ、ε及びμと命名される重鎖を有する、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭという５つのクラスが存在する。ＣＨ配列及び機能における比較的小さい差異に基づいて、γ及びαクラスは、さらにサブクラスに分類され、例えば、ヒトは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２というサブクラスを発現する。

【0064】

用語「可変」は、可変ドメインの一定の部分が抗体の間の配列に関して広範囲で異なるということを意味する。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体の特定の抗原に対する特異性を定義する。しかしながら、変異性は、可変ドメインの１１０個のアミノ酸にわたって均一に分布しない。逆に、Ｖ領域は、１５～３０個のアミノ酸の、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変なセグメントからなり、これらのセグメントは、「超可変領域」と呼ばれる短い領域（各領域の長さが９～１２個のアミノ酸である）で仕切られる。天然の重鎖及び軽鎖の各々の可変ドメインは、主に３つの超可変領域により連結されたβシート構造を用いる４つのＦＲを含み、この３つの超可変領域の連結により、βシート構造を連結するループを形成し、いくつかの場合にβシート構造の一部を形成する。各鎖における超可変領域は、ＦＲにより、密接に近接して一体に保持され、かつ超可変領域が他の鎖に由来する場合に、抗体の抗原結合部位の形成に役立つ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ［免疫学的意義のある蛋白質の配列］、第５版、Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔら、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ［公衆衛生局］、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ［国立衛生研究所］、Ｂｅｔｈｅｓｄａ［ベセスダ］、ＭＤ［メリーランド州］、１９９１を参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与していないが、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）における抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示す。

【0065】

本明細書で用いられる用語「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」は、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの可変領域内に見出される非連続抗原結合部位を意味することを意図する。これらの特定の領域は、既に、Ｋａｂａｔ ＥＡ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．［生物化学ジャーナル］、２５２（１９）：６６０９～６６１６（１９７７）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ［免疫学的意義のある蛋白質の配列］、第５版、Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔら、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ［公衆衛生局］、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ［国立衛生研究所］、Ｂｅｔｈｅｓｄａ［ベセスダ］、ＭＤ［メリーランド州］、１９９１、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［分子生物学ジャーナル］、１９６（４）：９０１～９１７（１９８７）、及びＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［分子生物学ジャーナル］、２６２（５）：７３２～７４５（１９９６）に記載されており、これらの定義は、相互に比較したときのアミノ酸残基の重複又は部分集団を含む。それにも関わらず、抗体又は移植した抗体又はその変異体のＣＤＲを意味する定義のいずれの適用も、本明細書で定義され、用いられる用語の範囲内であるものとされる。上記各参考文献のように定義されたＣＤＲを含むアミノ酸残基は、比較として下記表４に示される。

【0066】

【表4】

【0067】

本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体、すなわち少量で存在しうる可能性のある天然に存在する突然変異を除いて同一である集団を含む各抗体を意味する。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対して高度に特異的である。さらに、ポリクローナル抗体製剤（異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含む）とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体が混入することなく合成できる点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、いずれか特定の方法による抗体の産生が必要とされるものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に有用であるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、２５６（５５１７）：４９５～４９７（１９７５）に最初に記載されたハイブリドーマ法で作製でき、又は細菌、真核動物又は植物細胞において組換えＤＮＡ方法を用いて作製できる（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ Ｔ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３５２（６３３６）：６２４～６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ＪＤ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［分子生物学ジャーナル］、２２２（３）：５８１～５９７（１９９１）、及び例えば以下の実施例に記載された技術を用いてを用いてファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。

【0068】

本明細書のモノクローナル抗体は、本発明の生物学的活性を示す限り、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか又は特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか又は相同性を有する一方、この又はこれらの鎖の残りの部分が、別の種に由来するか、別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体及びこのような抗体の断片における対応する配列と同一であるか又は相同性を有する「キメラ」抗体を含む（米国特許第４８１６５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］８１（２１）：６８５１～６８５５（１９８４）を参照）。本明細書の目的のキメラ抗体は、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列を含む「霊長類化」抗体、及びヒト定常領域配列を含む。

【0069】

「インタクト」な抗体は、抗原結合部位と、ＣＬ及び少なくとも重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３とを含む抗体である。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体であってよい。好ましくは、インタクトな抗体は、１種以上のエフェクター機能を有する。定常ドメイン（定常領域）は、好ましくはヒト抗体定常領域であり、より好ましくはヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３又はヒトＩｇＧ４抗体定常領域であり、選択可能な重鎖定常領域の具体的な配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２、１１３又は１１４に示すとおりであり、選択可能な軽鎖定常領域の具体的な配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５に示すとおりである。

【0070】

「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部を含み、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片、二重抗体、リニア抗体（米国特許第５６４１８７０号の実施例２、Ｚａｐａｔａ Ｇ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．［タンパク質工学］、８（１０）：１０５７～１０６２（１９９５）を参照）、一本鎖抗体分子、抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。表現「リニア抗体」は、一般的に、Ｚａｐａｔａ Ｇ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．［タンパク質工学］８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）に記載された抗体を意味する。簡単に説明すると、これらの抗体は、相補的な軽鎖ポリペプチドと共に抗原結合領域のペアを形成するタンデムＦｄセグメントのペア（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む。リニア抗体は、二重特異性又は単一特異性であり得る。

【0071】

抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片、残りの「Ｆｃ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片を産生する（この名称は、容易に結晶化する能力を反映する）。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体と、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と、１本の重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とからなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合で連結されたＦａｂ断片にほぼ相当し、まだ抗原に架橋結合することができる単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を産生する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に他の残基を有する点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を保有するＦａｂ’についての本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、Ｆａｂ’断片のペア（ヒンジシステインをそれらの間に有する）として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた公知である。

【0072】

Ｆｃ断片は、ジスルフィド結合によって一緒に保持された２本のＨ鎖のカルボキシル末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定され、その領域はまた、あるタイプの細胞に見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される一部である。

【0073】

「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも本明細書で定義されるような「アミノ酸修飾」により、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。

【0074】

好ましくは、変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域において約１～約１０個のアミノ酸置換、好ましくは、約１～約５個のアミノ酸置換を有する。１つの実施例では、本明細書における変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、少なくとも約８５％の相同性、少なくとも約９０％の相同性、少なくとも約９５％の相同性又は少なくとも約９９％の相同性を有する。別の実施例では、本明細書における変異体Ｆｃ領域は、親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、少なくとも約８５％の相同性、少なくとも約９０％の相同性、少なくとも約９５％の相同性又は少なくとも約９９％の相同性を有する。

【0075】

用語「Ｆｃ領域を含むポリペプチド」は、Ｆｃ領域を含む抗体又はイムノアドヘシン（本明細書の他の定義を参照）などのポリペプチドを意味する。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによると残基４４７）は、例えば、ポリペプチドの精製中に、又はポリペプチドをコードする核酸を組換え的に操作することによって除去されていてよい。したがって、本開示のＦｃ領域を有するポリペプチド（抗体を含む）を含む組成物は、全てのＫ４４７残基が除去されたポリペプチド集団、Ｋ４４７残基が除去されていないポリペプチド集団、又はＫ４４７残基を有するポリペプチドとポリペプチドを有さないポリペプチドの混合物を有するポリペプチド集団を含んでよい。

【0076】

抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に起因し得る生物学的活性を意味し、抗体アイソタイプにより変動する。抗体エフェクター機能の例は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体の下流調節、及びＢ細胞活性化を含む。「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に存在するＦｃ領域のアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を含む。Ｆｃ配列の例は、例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ［免疫学的意義のある蛋白質の配列］、第５版、Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔら、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ［公衆衛生局］、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ［国立衛生研究所］、Ｂｅｔｈｅｓｄａ［ベセスダ］、ＭＤ．［メリーランド州］、１９９１に記載されるが、これらに限定されない。

【0077】

「Ｆｖ」は、インタクトな抗原認識部位及び抗原結合部位を含む最小抗体断片である。該断片は、緊密に非共有結合的に会合した１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとの二量体からなる。この２つのドメインの折り畳み構造から、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗体に対する抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）を生じる。

【0078】

しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に対して特異性を有する３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、インタクトな結合部位より低い親和性ではあるが、抗原を認識し、かつ結合する能力を有する。

【0079】

「一本鎖Ｆｖ」（「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略称される）は、単一のポリペプチド鎖に連結されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするＶＨとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、Ａ．Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［モノクローナル抗体の薬理学］第１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ［シュプリンガー・フェアラーク出版社］、ニューヨーク、１９９４、第２６９～３１５ページにおける「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ［大腸菌由来の抗体］」、又はＡｈｍａｄ ＺＡ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［臨床と発生免疫学］、２０１２：９８０２５０（２０１２）を参照する。

【0080】

用語「二重抗体」は、Ｖドメインの鎖内ではなく鎖間ペアが達成され、二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片を産生するように、ＶＨ及びＶＬドメイン間に、短いリンカー（約５～１０残基）を有するｓＦｖ断片（前段落を参照）を構築することによって作製された小さな抗体断片を意味する。二重特異性二重抗体は、２つの「交差」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体であり、２つの抗体のＶＨとＶＬドメインは異なるポリペプチド鎖に存在する。二重抗体は、例えば、ＥＰ ４０４０９７、ＷＯ ９３／１１１６１、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］９０（１４）：６４４４～６４４８（１９９３）により詳細に記載されている。

【0081】

非ヒト（例えば、げっ歯動物）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。多くの場合、ヒト化抗体は、受容体超可変領域からの残基が、非ヒト種（例えばマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類）からの、所望の抗原特異性、親和性及び容量を有する超可変領域（ドナー抗体）の残基で置換される、ヒト免疫グロブリン（受容体抗体）である。いくつかの実施例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基で置換される。

【0082】

また、ヒト化抗体は、受容体抗体又はドナー抗体で見出されない残基を含み得る。これらの修飾は抗体の能力をさらに高めるためになされる。一般的には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的に２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ループの全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を任意選択に含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ＰＴ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３２１（６０６９）：５２２～５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３３２（６１６２）：３２３～３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ ＬＧ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．［バイオテクノロジーに関する現在の評価］、３（４）：３９４～３９８（１９９２）を参照する。

【0083】

本明細書で同定されたポリペプチド及び抗体配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」又は「相同性」は、（任意の保存的置換を配列同一性の一部として考慮して）配列を整列した後、比較されるポリペプチド中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的で、当該技術分野の技術における様々な方式で、例えば公衆に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用してアライメントを実現することができる。当業者は、比較される配列の全長の範囲で最大アライメントを実現するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメント測定用の適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を用いてアミノ酸配列同一性（％）の値を生成する。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、ジーネンテック社（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）によって作成され、かつソースコードは、既にアメリカ合衆国著作権局（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ）（コロンビア特別区（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．）、２０５５９）においてユーザ文書と共に提出された（アメリカ合衆国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録される）。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、カリフォルニア州サウスサンフランシスコのジーネンテック社（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）により公衆に入手可能である。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、ＵＮＩＸオペレーティングシステム（好ましくはデジタルＵＮＩＸＶ４．０Ｄ）で使用されるように、コンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、いずれもＡＬＩＧＮ－２プログラムにより設定され、かつ不変である。

【0084】

用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体Ｆｃ領域に結合する受容体を説明する。１つの実施例では、本発明のＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲ（γ受容体）であり、かつＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子変異体及び選択的スプライシング型を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、類似するアミノ酸配列（これらの配列は主にその細胞質ドメインにおいて異なる）を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Ｄａｅｒｏｎ Ｍ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学の年次レビュー］、１５：２０３～２３４（１９９７）を参照）。該用語は、アロタイプ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩＡ－Ｐｈｅ１５８、ＦｃγＲＩＩＩＡ－Ｖａｌ１５８、ＦｃγＲＩＩＡ－Ｒ１３１及び／又はＦｃγＲＩＩＡ－Ｈ１３１というＦｃγＲＩＩＩＡアロタイプを含む。ＦｃＲｓは、Ｒａｖｅｔｃｈ ＪＶ．ら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学の年次レビュー］、９：４５７～４９２（１９９１）、Ｃａｐｅｌ ＰＪ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ［免疫方法］、４（１）：２５～３４（１９９４）、及びｄｅ Ｈａａｓ Ｍ．ら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．［実験と臨床医学ジャーナル］、１２６（４）：３３０～３４１（１９９５）に総説される。本明細書の用語「ＦｃＲ」は、将来同定されるＦｃＲを含む他のＦｃＲをカバーする。該用語は、母体ＩｇＧの胎児への移行を担当する新生児受容体ＦｃＲｎをさらに含む（Ｇｕｙｅｒ ＲＬ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１１７（２）：５８７～５９３（１９７６）及びＫｉｍ ＪＫ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［欧州免疫学会誌］、２４（１０）：２４２９～２４３４（１９９４）を参照）。

【0085】

用語「ＦｃＲｎ」は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を意味する。ＦｃＲｎは、構造上に主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）と類似し、かつβ２－ミクログロブリンに非共有結合的に結合したα鎖からなる。新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎの様々な機能は、Ｇｈｅｔｉｅ Ｖ．ら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学の年次レビュー］、１８：７３９－７６６（２０００）に総説される。ＦｃＲｎは、母親から後代への免疫グロブリンＩｇＧの受動送達及び血清ＩｇＧレベルの調節に役割を果たす。ＦｃＲｎは、サルベージ受容体として作用することができ、細胞内及び細胞を渡って、インタクトな形態で飲作用ＩｇＧに結合し、輸送し、デフォルトの分解経路からそれらを救う。

【0086】

ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ばれる）は、一般的に、約アミノ酸１１８から約アミノ酸２１５まで伸長する（ＥＵナンバリングシステム）。

【0087】

「ヒンジ領域」は、一般的に、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６からＰｒｏ２３０までの伸長として定義される（Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ．、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［分子免疫学］、２２（３）：１６１～２０６（１９８５））。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間Ｓ－Ｓ結合を形成する最初と最後のシステイン残基を同一位置に配置することによってＩｇＧ１配列と整列されてよい。

【0088】

Ｆｃ領域の「低ヒンジ領域」は、一般的に、ヒンジ領域のすぐＣ末端にある残基の範囲、すなわち、Ｆｃ領域の残基２３３～２３９として定義される。これまでの報告では、ＦｃＲ結合は、一般的に、ＩｇＧ Ｆｃ領域の低ヒンジ領域におけるアミノ酸残基を起因とされた。

【0089】

ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」（「Ｈ２」ドメインの「Ｃ２」とも呼ばれる）は、一般的に、約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０まで伸長する。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接にペアにならないため、特異的である。むしろ、２つのＮ－連結分岐炭化水素鎖は、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に挿入されている。炭水化物は、ドメイン－ドメイン間のペアのための置換を提供し、かつＣＨ２ドメインの安定性に役立つことができることが予測されている（Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ．、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［分子免疫学］、２２（３）：１６１～２０６（１９８５））。

【0090】

「ＣＨ３ドメイン」（「Ｃ２」又は「Ｈ３」ドメインとも呼ばれる）は、Ｆｃ領域におけるＣ末端からＣＨ２ドメインまでの残基の範囲（すなわち、約アミノ酸残基３４１から抗体配列のＣ末端までの範囲（典型的に、ＩｇＧのアミノ酸残基４４６又は４４７）を含む。

【0091】

「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下流調節などを含む。このようなエフェクター機能は、一般的に、Ｆｃ領域を結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わせることを必要とし、例えば、本明細書で開示された様々なアッセイを用いて測定することができる。

【0092】

「Ｃ１ｑ」は、免疫グロブリンのＦｃ領域に対する結合部位を含むポリペプチドである。Ｃ１ｑは、２つのセリンプロテアーゼＣ１ｒ及びＣ１ｓと共に複合体Ｃ１（補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）経路の第１の構成成分である）を形成する。ヒトＣ１ｑは、例えば、カリフォルニア州（ＣＡ）のサンディエゴ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）のクウィデル社（Ｑｕｉｄｅｌ）から商業的に購入することができる。

【0093】

用語「結合ドメイン」は、別の分子に結合するポリペプチドの領域を意味する。ＦｃＲの場合、結合ドメインは、Ｆｃ領域の結合を担当しているそのポリペプチド鎖の一部（例えば、そのα鎖）を含み得る。１つの有用な結合ドメインは、ＦｃＲα鎖の細胞外ドメインである。

【0094】

（「変化した」ＦｃＲ結合親和性又はＡＤＣＣ活性を有する）変異体ＩｇＧ Ｆｃを有する抗体は、親ポリペプチド又は天然配列Ｆｃ領域を含むポリペプチドと比較して高まったか又は低下したＦｃＲ結合活性（例えば、ＦｃγＲ又はＦｃＲｎ）及び／又はＡＤＣＣ活性を有するものである。ＦｃＲに対して「高まった結合性を示す」変異体Ｆｃは、親ポリペプチド又は天然配列ＩｇＧ Ｆｃより高い親和性（例えば、より低い見掛けのＫｄ又はＩＣ５０値）を有する少なくとも１つのＦｃＲに結合する。いくつかの実施例によれば、親ポリペプチドと比較した結合性の改善度合いは、約３倍、好ましくは約５倍、１０倍、２５倍、５０倍、６０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、５００倍であり、又は約２５％～１０００％の結合性の改善度合いである。ＦｃＲに対して「低下した結合性を示す」ポリペプチド変異体は、親ポリペプチドより低い親和性（例えば、より高い見掛けのＫｄ又は高いＩＣ５０値）を有する少なくとも１つのＦｃＲに結合する。親ポリペプチドと比較した結合性の低下度合いは、約４０％又はそれ以上の結合性の低下度合いであってよい。

【0095】

「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性」又は「ＡＤＣＣ」は、一定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌型Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞を、抗原を有する標的細胞に特異的に結合させ、続いて該標的細胞を細胞毒によって死滅させることを可能にする細胞傷害の形態を意味する。抗体は、細胞傷害性細胞を「装備し」、このような死滅に絶対的に必要とされる。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ＪＶ．ら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学の年次レビュー］９：４５７～４９２（１９９１）の第４６４ページの表３にまとめられる。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、インビトロＡＤＣＣアッセイ（例えば、米国特許第５５００３６２号又は第５８２１３３７号又は下記の実施例に記載のもの）が行われてもよい。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替可能又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボ、例えば、動物モデル、例えばＣｌｙｎｅｓ Ｒ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］９５（２）：６５２～６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて評価されてよい。

【0096】

（「高まったＡＤＣＣを示す」か、又はヒトエフェクター細胞の存在下で野生型ＩｇＧ Ｆｃを有するポリペプチド又は親ポリペプチドより効果的に抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する）変異体Ｆｃ領域を含むポリペプチドは、アッセイにおいて変異体Ｆｃ領域を有するポリペプチドと野生型Ｆｃ領域を有するポリペプチド（又は親ポリペプチド）の量が実質的に同一である場合、インビトロ又はインビボでＡＤＣＣ媒介時に実質的により効果的であるものである。一般的に、このような変異体は、当該技術分野で公知のいずれかのインビトロＡＤＣＣアッセイ、例えば、（動物モデルなどにおける）ＡＤＣＣ活性を決定するためのアッセイ又は方法を用いて同定される。１つの実施例では、好ましい変異体は、ＡＤＣＣの媒介時に野生型Ｆｃ（又は親ポリペプチド）より約５倍から約１００倍（例えば、約２５から約５０倍）効果的である。

【0097】

「補体依存性細胞傷害性」又は「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的細胞の溶解を意味する。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１の構成成分（Ｃ１ｑ）の（適切なサブクラスの）抗体（該抗体がその同族抗原に結合した）への結合によって開始する。補体活性化を評価するために、（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ Ｈ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ［免疫学方法ジャーナル］、２０２（２）：１６３～１７１（１９９７）に記載されているような）ＣＤＣアッセイが行われてよい。Ｆｃ領域アミノ酸配列が変化し、Ｃ１ｑ結合能力が高まったか又は低下したポリペプチド変異体は、米国特許第６１９４５５１ Ｂ１号及びＷＯ ９９／５１６４２に記載されている。これらの特許公報の内容は、引用により本明細書に明確に組み込まれる（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１６４（８）：４１７８～４１８４（２０００）をさらに参照）。

【0098】

本明細書で開示された抗ＣＤ７３抗体（又はその断片）又は組成物の「有効な量」は、具体的に記載される目的を達成するために十分な量である。「有効な量」は、記載される目的に関して経験的に公知の方法によって決定することができる。用語「治療上有効な量」は、哺乳動物（患者とも称される）における疾患又は障害を「治療する」ために有効である本明細書で開示された抗ＣＤ７３抗体（又は変異体又はこれらの抗原結合断片）又は組成物の量を意味する。癌の場合、本明細書で開示された抗ＣＤ７３抗体（又は変異体又はこれらの抗原結合断片）又は組成物の治療上有効な量は、癌細胞の数を減少させ、腫瘍のサイズ又は重量を減少させ、癌細胞の末梢器官への浸潤を阻害し（すなわち、ある程度まで遅延させ、好ましくは停止させ）、腫瘍の転移を阻害し（すなわち、ある程度まで遅延させ、好ましくは停止させ）、腫瘍の増殖をある程度まで阻害し、及び／又は癌に関連する１つ以上の症状をある程度まで軽減させることができる。ある程度まで、本明細書で開示された抗ＣＤ７３抗体（又は変異体又はこれらの抗原結合断片）又は組成物は、存在する癌細胞の増殖を阻害し及び／又は存在する癌細胞を死滅させることができ、細胞阻害性及び／又は細胞傷害性であり得る。１つの実施例では、治療上有効な量は、増殖阻害量である。別の実施例では、治療上有効な量は、患者の生存率を高める量である。別の実施例では、治療上有効な量は、患者の無増悪生存期間を改善する量である。

【0099】

本発明の抗ＣＤ７３抗体（又は変異体又はこれらの抗原結合断片）又は本明細書で開示された組成物の「増殖阻害量」は、細胞（特に、腫瘍、例えば、癌細胞）の増殖をインビトロ又はインビボで阻害することができる量である。腫瘍の細胞増殖を阻害するための本開示のポリペプチド、抗体、拮抗薬又は組成物の「増殖阻害量」は、経験的に公知の方法又は本明細書で提供される実施例によって決定することができる。

【0100】

本発明の抗ＣＤ７３抗体（変異体又はこれらの抗原結合断片）又は組成物の「細胞傷害量」は、インビトロ又はインビボで細胞（特に、腫瘍、例えば、癌細胞）を破壊することができる量である。腫瘍の細胞増殖を阻害するための本発明の抗ＣＤ７３抗体（又は変異体又はこれらの抗原結合断片）又は組成物の「細胞傷害量」は、経験的に公知の方法によって決定することができる。

【0101】

本発明の抗ＣＤ７３抗体（又は変異体又はこれらの抗原結合断片）又は組成物の「増殖阻害量」は、細胞（特に、腫瘍、例えば、癌細胞）の増殖をインビトロ又はインビボで阻害することができる量である。腫瘍の細胞増殖を阻害するための本開示の抗ＣＤ７３抗体（又は変異体又はこれらの抗原結合断片）又は組成物の「増殖阻害量」は、経験的に公知の方法又は本明細書で提供される実施例によって決定することができる。

【0102】

本明細書で用いられる「薬学的に許容される」又は「薬理学的に適合な」は、生物学的又は不所望のものではない物質、例えば、あまり望ましくない生物学的効果を生じることなく、又は組成物の他の構成成分のいずれとも有害な形で相互作用することなく、患者に投与される医薬組成物に取り込まれ得る物質を意味する。薬学的に許容される担体又は賦形剤は、好ましくは、要求される毒性学及び製造試験の標準基準を満たし、及び／又は米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって作成された不活性成分ガイドに含まれる。

【0103】

用語「検出」は、物質の存在又は非存在を決定するか、又は物質（例えば、ＣＤ７３）の量を定量化することを含むものとされる。したがって、該用語は、定性的及び定量的決定のための本発明の物質、組成物及び方法の用途を意味する。一般的に、検出のために用いられる特定の技術は、本発明の実施に不可欠ではない。

【0104】

例えば、本発明に係る「検出」は、ＣＤ７３遺伝子産物、ｍＲＮＡ分子、又はＣＤ７３ポリペプチドの存在又は非存在を観察することと、ＣＤ７３ポリペプチドのレベル又は標的に結合する量の変化と、ＣＤ７３ポリペプチドの生物学的機能／活性の変化と、を含んでよい。いくつかの実施例では、「検出」は、野生型ＣＤ７３レベル（例えば、ｍＲＮＡ又はポリペプチドレベル）を検出することを含んでよい。検出は、対照と比較して１０％～９０％のいずれかの値、又は３０％～６０％のいずれかの値、又は１００％以上の変化（増加又は減少）を定量することを含んでよい。検出は、２倍～１０倍のいずれかの値（限界値を含む）を含め、又はその以上（例えば、１００倍）の変化を定量することを含んでよい。

【0105】

用語「標識」は、本明細書で用いられる場合、抗体に直接的又は間接的に抱合されている検出可能な化合物又は組成物を意味する。標識は、それ自体により検出可能であってもよく（例えば、放射性同位元素標識又は蛍光標識）、又は酵素標識の場合、検出可能な基質化合物又は組成物の化学変化を触媒してもよい。

【0106】

抗ＣＤ７３抗体及び親和性変異体／突然変異体
本発明は、本明細書で開示されたＣＤ７３受容体に結合する抗体に関する。開示された抗ＣＤ７３抗体、及びそれらの親和性変異体及び／又は突然変異体、又はこれらの抗原結合断片は、様々な治療方法及び診断方法で用いることができる。抗ＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３に結合するのに十分な親和性及び特異性を有する抗体である。いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体（又はその変異体もしくは突然変異体、又はこれらの抗原結合断片）は、ＣＤ７３発現に関連する疾患又は症状を標的にして干渉する過程において治療剤として使用することができる。様々な態様では、開示された抗ＣＤ７３抗体（又は変異体／突然変異体、又はこれらの抗原結合断片）は、他のタンパク質との最小結合を示す。いくつかの実施例では、好ましくは、開示された抗ＣＤ７３抗体（又は変異体／突然変異体又はこれらの抗原結合断片）は、ヒト又は組換えヒト化抗ＣＤ７３モノクローナル抗体である。

【0107】

特定の理論に束縛されるものではないが、開示された抗ＣＤ７３抗体、及びそれらの親和性変異体及び／又は突然変異体、又はこれらの抗原結合断片は、ＣＤ７３を発現する細胞におけるＣＤ７３の内在化を増加させることにより、開示された抗ＣＤ７３抗体、及びそれらの親和性変異体及び／又は突然変異体、又はこれらの抗原結合断片に結合する細胞上のプラズマ膜上のＣＤ７３タンパク質の量を減少させることができると思量される。したがって、プラズマ膜上のＣＤ７３タンパク質の量の減少は、ＣＤ７３に関連する５’－ヌクレオチダーゼの活性の低下に関連する。いくつかの態様では、再び特定の理論に束縛されるものではないが、５’－ヌクレオチダーゼの活性が低下するため、ＣＤ７３に関連する５’－ヌクレオチダーゼの活性の低下（内在化が増加した）は、腫瘍部位で強化された免疫細胞機能により腫瘍細胞の増殖を減少させることができると思量される。

【0108】

本明細書で開示されたように、開示された抗ＣＤ７３抗体、及びそれらの親和性変異体及び／又は突然変異体、又はこれらの抗原結合断片は、ＣＤ７３発現に関連する他の臨床症状（例えば、特発性肺線維症を含む線維症）において有益な作用を有する。特定の理論に束縛されるものではないが、開示された抗ＣＤ７３抗体、及びそれらの親和性変異体及び／又は突然変異体、又はこれらの抗原結合断片は、ＣＤ７３を発現する適切な細胞のＣＤ７３タンパク質が減少する（それに応じて、５’－ヌクレオチダーゼの活性が低下する）ため、他のこのような臨床症状において患者（例えば、線維症（特発性肺線維症を含む））に対して積極的な臨床利益を有すると思量される。

【0109】

いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体は、本明細書で開示された抗体のうちのいずれか１つのＣＤＲ、可変重鎖領域及び／又は可変軽鎖領域を含む。

【0110】

本発明は、抗ＣＤ７３抗体、それらの親和性変異体／突然変異体、及び／又はこれらの抗原結合断片を提供する。いくつかの実施例では、本発明の特定の抗ＣＤ７３抗体、その１種以上の親和性変異体／１種以上の突然変異体、及び／又はこれらの１種以上の抗原結合断片は、軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン配列（上記表１に列挙された特異性ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３配列を含む）及び重鎖（ＨＣ）可変ドメイン配列（上記表２に列挙された特異性ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含む）を含む。本発明の各特定の抗ＣＤ７３抗体、その１種以上の親和性変異体／１種以上の突然変異体、及び／又はこれらの１種以上の抗原結合断片の各軽鎖及び重鎖の核酸及びそのアミノ酸配列は、以下の配列表に提供される。本発明は、重鎖及び軽鎖可変ドメインならびに本明細書に言及されたＣＤＲが全ての可能なペアとなる組み合わせで組み合わされて大量の抗ＣＤ７３抗体、及びそれらの１種以上の親和性変異体／１種以上の突然変異体、及び／又は１種以上の抗原結合断片を生成することを提供する。

【0111】

いくつかの実施例では、１つ以上のアミノ酸置換は、１つ以上の保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施例では、アミノ酸置換は、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない。例えば、開示された抗体と標的ＣＤ７３との結合親和性を実質的に低下させない保存的変化（例えば、本明細書で提供される保存的置換）がなされ得る。抗ＣＤ７３抗体変異体の結合親和性は、下記実施例に記載の方法を用いて評価することができる。

【0112】

保存的置換は、「保存的置換」の表題として表５に示される。より実質的変換は、「例示的な置換」の表題として表４において、アミノ酸側鎖クラスに関して下記にさらに記載されるように提供される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入され、その生成物が、所望の活性（例えば、ＣＤ７３結合の保持／改善、免疫原性の低下、或いはＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善）についてスクリーニングされ得る。

【0113】

【表5】

【0114】

非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスに交換することを必要とする。例示的な置換の変異体は、親和性成熟抗体であり、（例えば、本明細書に開示された方法などの）ファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用いて都合よく生成され得る。簡単に言えば、１つ以上のＣＤＲ残基を突然変異させ、変異体抗体をファージ上にディスプレイし、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。変化（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲにおいて行われてよい。このような変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」（すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異するコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［分子生物学方法］２０７：１７９～１９６（２００８））、及び／又はＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）で行われる場合があり、得られた変異体ＶＨ又はＶＬの結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築し、二次ライブラリーから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ＨＲ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［分子生物学方法］１７８：１～３７（２００２）、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ［抗体ファージディスプレイ］（Ｐｈｉｌｉｐｐａ Ｏ’Ｂｒｉｅｎ、 Ｒ．Ａ．、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ［ヒューマナ出版社］、Ｔｏｔｏｗａ［トトワ］、ＮＪ［ニュージャージー州］、２００１）に記載されている。

【0115】

親和性成熟のいくつかの実施例では、多様性は、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング又はオリゴヌクレオチド定方向突然変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。そして、二次ライブラリーが産生される。続いて、このライブラリーは、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、１回に４～６個の残基）をランダム化するＨＶＲ定方向法に関する。抗原結合に関するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発法又はモデリングを用いて特異的に同定されてもよい。

【0116】

いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体、変異体もしくは突然変異体、又はこれらの抗原結合断片は、重鎖又は軽鎖可変領域内にＮ－グリコシル化モチーフを欠失している場合があり、それはバッチにおいて相違を引き起こし得、その結果、機能、免疫原性又は安定性に変化をもたらす。抗体グリコシル化の分析方法は、例えば、クロマトグラフィー（例えば、陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）又は液体クロマトグラフィー）、質量分析法（例えば、エレクトロスプレーイオン化質量分析法）及びキャピラリー電気泳動－硫酸ドデシルナトリウムを含むが、それらに限定されない。このような方法は例えば、Ｊｕｎｇ ＳＴ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｃｈｎｏｌ．［バイオテクノロジーに関する現在の評価］、２２（６）：８５８～６７（２０１１）、Ｖａｒｋｉ Ａ、Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ＲＤ、Ｅｓｋｏ ＪＤら編集のＥｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ［糖生物学の基礎］第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ［コールド・スプリング・ハーバー］（ニューヨーク）：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ［コールド・スプリング・ハーバー研究所出版社］、２００９、第４５章におけるＣｕｍｍｉｎｇｓ ＲＤ、 Ｅｔｚｌｅｒ ＭＥ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｌｅｃｔｉｎｓ ｉｎ Ｇｌｙｃａｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ．［多糖分析における抗体及びレクチン］、Ｖａｒｋｉ Ａ、Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ＲＤ、Ｅｓｋｏ ＪＤら編集のＥｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ．［糖生物学の基礎］第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ［コールド・スプリング・ハーバー］（ニューヨーク）：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ［コールド・スプリング・ハーバー研究所出版社］、２００９、第４７章におけるＭｕｌｌｏｙ Ｂ、Ｈａｒｔ ＧＷ、Ｓｔａｎｌｅｙ Ｐ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｌｙｃａｎｓ．［オリゴ糖の構造分析］、Ｌｅｙｍａｒｉｅ Ｎ．ら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．［分析化学］、８４（７）：３０４０～３０４８（２０１２）、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ ＤＤ．、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ［欧州バイオ製薬レビュー］第１０６～１１０ページ（２００５）、及びＲａｊｕ ＴＳ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［分子生物学方法］、９８８：１６９～１８０（２０１３）に記載されている。

【0117】

いくつかの実施例では、特定の抗ＣＤ７３抗体の突然変異体は、１つ以上のＣＤＲ領域におけるＮ－グリコシル化部位、例えばシークオンＮ－Ｘ－Ｓ／Ｔに１つ以上の突然変異を含む。Ｎ－グリコシル化部位に１つ以上の突然変異体を有する抗ＣＤ７３抗体変異体は、Ｎ－グリコシル化部位を除去するが、同等の機能を保持する。

【0118】

いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体、変異体及び／又は突然変異体、又はこれらの抗原結合断片のＣＤ７３に対する結合親和性は、ＣＤ７３同族体に対する結合親和性より高い。一般的に、抗ＣＤ７３抗体、及び／又は変異体、又はこれらの抗原結合断片は、ＣＤ７３に「特異的に結合する」（すなわち、約１×１０^－７Ｍ以下、好ましくは、約１×１０^－８以下、最も好ましくは、約１×１０^－９Ｍ以下の結合親和性（Ｋｄ）の値を有する）が、ＣＤ７３に対する結合親和性より少なくとも約５０倍、又は少なくとも約５００倍、又は少なくとも約１０００倍弱い多くの非ＣＤ７３に対する結合親和性を有する。ＣＤ７３に特異的に結合する抗ＣＤ７３抗体は、上記で定義される様々なタイプの抗体のいずれかであってよいが、好ましくはヒト化又はヒト抗体である。

【0119】

いくつかの実施例では、当該技術分野で公知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）分析又は放射性免疫沈降法（ＲＩＡ））によって決定されると、抗ＣＤ７３抗体の非標的タンパク質への結合の程度は、抗体のＣＤ７３への結合の程度の約１０％より小さい。例えば、対照分子（一般的に、結合活性を有していない類似構造の分子である）の結合と比較して分子の結合を決定することによって、特異的な結合を測定することができる。例えば、標的（例えば、過剰量の非標識標的）と類似する対照分子との競合によって、特異的な結合を決定することができる。この場合、特異的な結合は、標識された標的のプローブへの結合が過剰量の非標識標的によって競合的に阻害される場合に示される。本明細書で用いられる、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド標的上のエピトープに「特異的結合」又は「特異的に結合する」、又はそれに対して「特異的である」なる用語は、例えば、標的に対して少なくとも約１０^－４Ｍ、代替可能に少なくとも約１０^－５Ｍ、代替可能に少なくとも約１０^－６Ｍ、代替可能に少なくとも約１０^－７Ｍ、代替可能に少なくとも約１０^－８Ｍ、代替可能に少なくとも約１０^－９Ｍ、代替可能に少なくとも約１０^－１０Ｍ、代替可能に少なくとも約１０^－１１Ｍ、代替可能に少なくとも約１０^－１２Ｍ、又はそれ以上のＫｄを有する分子によって示すことができる。１つの実施例では、用語「特異的結合」は、ある分子が、特定のポリペプチド又は特定のポリペプチド上のエピトープに、いずれの他のポリペプチド又はポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく結合する結合を意味する。

【0120】

抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）は、腫瘍細胞に対する治療抗体の作用メカニズムである。ＡＤＣＣは、細胞媒介性免疫防御であり、免疫系のエフェクター細胞は、この細胞媒介性免疫防御により、標的細胞（例えば、癌細胞）を積極的に溶解し、これらの標的細胞の膜表面抗原は、特異性抗体（例えば、本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又は親和性変異体など）によって結合されている。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又は親和性変異体は、例えば、実施例に記載されたアッセイによって示されるように、対照抗ＣＤ７３モノクローナル抗体と類似する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）エフェクター機能を示す。

【0121】

例えば、いくつかの実施例では、本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はそれらの親和性変異体もしくは突然変異体のＡＤＣＣエフェクター機能活性は、対照抗ＣＤ７３抗体のＡＤＣＣエフェクター機能活性の少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約１００％、又は１００％以上（例えば、約１０５％、約１０６％、約１０７％、約１０８％、約１０９％、約１１０％、約１１１％、約１１２％、約１１３％、約１１４％、約１１５％、約１１６％、約１１７％、約１１８％、約１１９％、約１２０％、約１２１％、約１２２％、約１２３％、約１２４％、約１２５％又は約１３０％（その数値間のいずれの範囲を含む）である。

【0122】

いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体、及び／又はそれらの親和性変異体もしくは突然変異体は、対照抗ＣＤ７３抗体と類似するＣＤ７３に対する結合親和性を示す。いくつかの実施例では、ＣＤ７３への結合は、実施例に記載されるように、ＥＬＩＳＡによって証明される。例えば、抗ＣＤ７３抗体及び／又はそれらの親和性変異体もしくは突然変異体のＣＤ７３に対する結合親和性は、対照抗ＣＤ７３抗体のＣＤ７３に対する結合親和性より約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又は１００％以上（例えば、約１０５％、約１０６％、約１０７％、約１０８％、約１０９％、約１１０％、約１１１％、約１１２％、約１１３％、約１１４％、約１１５％、約１１６％、約１１７％、約１１８％、約１１９％、約１２０％、約１２１％、約１２２％、約１２３％、約１２４％、約１２５％又は約１２５％以上）高い。

【0123】

いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はそれらの親和性変異体もしくは突然変異体は、約０．１ｐＭ～２００ｐＭ（０．２ｎＭ）（例えば、約０．１ｐＭ、約０．２５ｐＭ、約０．５ｐＭ、約０．７５ｐＭ、約１ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約２０ｐＭ、約３０ｐＭ、約４０ｐＭ、約５０ｐＭ、約６０ｐＭ、約７０ｐＭ、約８０ｐＭ、約９０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１１０ｐＭ、約１２０ｐＭ、約１３０ｐＭ、約１４０ｐＭ、約１５０ｐＭ、約１６０ｐＭ、約１７０ｐＭ、約１８０ｐＭ、約１９０ｐＭ、又は約１９０ｐＭ以上（これらの数値の間のいずれの範囲も含む））のＫｄでヒトＣＤ７３に結合する。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はそれらの親和性変異体もしくは突然変異体のＣＤ７３に対する結合親和性は、対照抗ＣＤ７３抗体のＣＤ７３に対する結合親和性より約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％又は約１００％以上（例えば、約１０５％、約１１０％、約１２０％又は約１３０％）高い。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３及び／又はその変異体もしくは突然変異体のＣＤ７３に対する結合親和性は、対照抗ＣＤ７３抗体のＣＤ７３に対する結合親和性より約１．１倍、約１．２倍、約１．３倍、約１．４倍、約１．５倍、約１．６倍、約１．７倍、約１．８倍、約１．９倍、約２倍、約２．２５倍、約２．５倍、約２．７５倍、約３倍、約３．２５倍、約３．５倍、約３．７５倍、約４倍、約４．２５倍、約４．５倍、約４．７５倍、又は約４．７５倍以上（これらの数値の間のいずれの範囲も含む）高い。

【0124】

いくつかの実施例では、対照抗ＣＤ７３抗体と比較して、本明細書で提供される抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、インビボ半減期が延長した。いくつかの実施例では、本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体のインビボ半減期は、対照抗ＣＤ７３抗体のインビボ半減期より短くない。

【0125】

いくつかの実施例では、本明細書で提供される抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、対照抗ＣＤ７３抗体と類似する薬物動態特性を示す。いくつかの実施例では、本明細書で提供される抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、対照抗ＣＤ７３抗体の血清濃度－時間プロファイルの約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、又は９５％以上（例えば、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％以上）（これらの数値の間のいずれの範囲も含む）のＡＵＣ（曲線下面積）を示す。

【0126】

いくつかの実施例では、本発明の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、ヒトＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４）のＦｃ配列を含む。いくつかの実施例では、Ｆｃ配列は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）エフェクター機能（それらのＦｃ受容体（ＦｃＲ）への結合に関連する場合が多い）を欠失するように変化されているか又は他の方式により変化される。エフェクター機能を変えることができるＦｃ配列に対する変化又は突然変異の例は多く存在する。例えば、ＷＯ００／４２０７２、及びＳｈｉｅｌｄｓら、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．［生物化学ジャーナル］９（２）：６５９１～６６０４（２００１）には、ＦｃＲへの結合が改善するか又は減少した抗体変異体が記載されている。これらの刊行物の内容は、引用により本明細書に明確に組み込まれる。本開示の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ断片、二重抗体及びリニア抗体の形態であってよい。また、本開示の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、ＣＤ７３に結合するだけではなく、１つ以上の他の突然変異体にも結合し、それらの１種以上の機能を阻害する多重特異性抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体であってよい。本開示の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、治療剤（例えば、細胞傷害性薬物、放射性同位元素及び化学療法剤）又はイメージングにより患者の試料中又はインビボでＣＤ７３を検出するための標識（例えば、放射性同位元素、蛍光色素及び酵素）に抱合されてよい。本明細書は、毒素の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体への抱合が含まれる他の修飾も提供する。

【0127】

本明細書には、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体及び／又は突然変異体をコードする核酸分子と、ＣＤＲ及び／又は重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメインをコードする核酸分子を含む発現ベクターとがさらに考慮されており、これらの核酸分子を含む細胞も考慮される。本発明の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、（例えば、ＦＡＣＳ、免疫組織化学法（ＩＨＣ）、ＥＬＩＳＡアッセイによって）患者の試料又は患者におけるＣＤ７３タンパク質を検出するために、本明細書に記載された治療法で用いることができる。

【0128】

モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、例えばハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ Ｇ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、１７４（５）：２４５３～２４５５（２００５）を参照）を用いて作製されるか、又は組換えＤＮＡ方法（米国特許第４８１６５６７号）により製造されるか、又は以下の実施例の本明細書に記載された方法により産生されてよい。ハイブリドーマ法において、典型的にハムスター、マウス又は他の適切な宿主動物を免疫剤で免疫することにより、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生するか又は産生することができるリンパ球を誘発する。代替可能に、リンパ球は、インビトロで免疫することができる。

【0129】

免疫剤は、典型的に、ポリペプチド、目的のタンパク質の融合タンパク質、又はタンパク質を含む組成物を含む。一般的に、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）は、ヒト細胞が望ましい場合に用いられ、或いは脾臓細胞又はリンパ節細胞は、非ヒト哺乳動物供給源が望ましい場合に用いられる。次いで、適切な融合剤（例えば、ポリエチレングリコール）を用いてリンパ球を不死化細胞株と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ［モノクローナル抗体：原理及び実践］、Ｊａｍｅｓ Ｗ．Ｇｏｄｉｎｇ、ニューヨーク：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ［学術出版社］、１９８６、第５９～１０３ページ）。不死化細胞株は、一般的に、形質転換された哺乳動物細胞、特に、げっ歯動物、ウシ及びヒト骨髄腫細胞である。一般的には、ラット又はマウス骨髄腫細胞株が用いられる。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、融合されていない不死化細胞の増殖又は生存を阻害する１つ以上の物質を含有する適切な培地中で培養することができる。例えば、親細胞がヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠乏する場合、ハイブリドーマの培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジン（「ＨＡＴ培地」）を含み、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠失細胞の増殖を阻害する。

【0130】

好ましい不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの発現を助け、そして培地（例えば、ＨＡＴ培地）に感受性を有するものである。より好ましい不死化細胞株は、マウス骨髄腫細胞株であり、例えば、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ［ソーク研究所］Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ［細胞分布中心］、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ［サンディエゴ］、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ［カリフォルニア州］及びＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ［アメリカ培養細胞系統保存機関］、Ｍａｎａｓｓａｓ［マナサス］、Ｖｉｒｇｉｎｉａ［バージニア州］から入手可能である。ヒトミエローマ及びマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞株もヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ Ｄ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１３３（６）：３００１～３００５（１９８４）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［モノクローナル抗体の産生技術及び応用］、Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．［マーセルデッカー社］：ニューヨーク、１９８７、第５１～６３ページ）。

【0131】

次いで、ハイブリドーマ細胞が培養された培地に対して、ポリペプチドに対するモノクローナル抗体の存在について測定することができる。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法によって、又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）や酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイによって決定することができる。このような技術及びアッセイは、当該技術分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ ＰＪ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．［分析生物化学］、１０７（１）：２２０～２３９（１９８０）のスキャッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）分析により決定することができる。

【0132】

所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンは、限界希釈法によってサブクローニングし、標準方法によって増殖することができる（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ［モノクローナル抗体：原理及び実践］、Ｊａｍｅｓ Ｗ．Ｇｏｄｉｎｇ、ニューヨーク：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ［学術出版社］、１９８６、第５９～１０３ページ）。このための適切な培地は、例えば、ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）及びＲＰＭＩ－１６４０培地を含む。代替可能に、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物のインビボで腹水として増殖することができる。

【0133】

サブクローンから分泌されるモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製方法（例えば、プロテインＡセファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又は親和性ロマトグラフィー）によって、培地又は腹水から単離するか又は精製することができる。

【0134】

モノクローナル抗体はまた、当該技術分野で公知の及び／又は後に開発された組換えＤＮＡ方法によって作製することができる。従来の方法を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いて）、本明細書で提供されるモノクローナル抗体をコードするＤＮＡを、容易に単離し、配列決定することができる。本明細書で提供されるハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として用いられる。単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター内に組み込まれ、次いで、これらの発現ベクターは、免疫グロブリンタンパク質を特に産生していない宿主細胞（例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は骨髄腫細胞）にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を可能とする。また、例えば、ヒト重鎖及び軽鎖定常領域のコード配列を、同種のマウス配列で置換することによって（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、前出を参照）、又は非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全て又は一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合させることによって、ＤＮＡを修飾することができる。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本明細書で提供される抗体の定常ドメインを置換するか又は本明細書で提供される抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインを置換することにより、キメラ二価抗体を産生することができる。

【0135】

いくつかの実施例では、本発明で提供される抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、安定な哺乳動物細胞株によって発現される。いくつかの実施例では、本発明で提供される抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、約２．０グラム／リットル、約２．５グラム／リットル、約３．０グラム／リットル、約３．５グラム／リットル、約４．０グラム／リットル、約４．５グラム／リットル、約５．０グラム／リットル、約５．５グラム／リットル、約６．０グラム／リットル、約６．５グラム／リットル、約７．０グラム／リットル、又は約７．０グラム／リットル以上（これらの数値間のいずれの範囲も含む）の力価で安定な哺乳動物細胞株によって発現される。いくつかの実施例では、本発明で提供された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を発現する安定な哺乳動物細胞株は、ＣＨＯ細胞株である。

【0136】

いくつかの実施例では、抗体は、一価抗体である。一価抗体の作製方法は、当該技術分野で公知である。例えば、免疫グロブリン軽鎖及び修飾された重鎖の組換え発現に関する方法がある。一般的に、重鎖は、重鎖の架橋を生じないようにするために、Ｆｃ領域におけるいくつかの点で短くされている。代替可能に、関連するシステイン残基は、重鎖の架橋を生じないようにするために、別のアミノ酸残基で置換されているか又は削除されている。

【0137】

インビトロ方法は、一価抗体の作製にも適している。当該技術分野で公知の技術を用いて抗体の消化を行ってその断片（特に、Ｆａｂ断片）を産生することができるが、それに限定されない。

【0138】

ヒト抗体及びヒト化抗体
本発明の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、ヒト抗体である。それらは、ヒト化抗体であってもよい。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を典型的に含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又はこれらの断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は抗体の他の抗原結合部分配列）である。ヒト化抗体は、受容体のＣＤＲ由来の残基が、非ヒト種（ドナー抗体）（例えば、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギ）のＣＤＲ由来の残基で置換されているヒト免疫グロブリン（受容体抗体）を含む。いくつかの実施例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基で置換される。ヒト化抗体はまた、受容体抗体にも、導入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見出されていない残基を含んでよい。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的に２つの可変ドメインの実質的に全てを含んでよく、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン共通配列のものである。ヒト化抗体はまた、好ましくは、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含む（例えば、Ｊｏｎｅｓ ＰＴ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３２１（６０６９）：５２２～５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３３２（６１６２）：３２３～３２７（１９８８）、Ｐｒｅｓｔａ ＬＧ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｃｈｎｏｌ．［バイオテクノロジーに関する現在の評価］、３（４）：３９４～３９８（１９９２））。

【0139】

一般的には、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、一般的に、「インポート」残基と呼ばれ、典型的には、「インポート」可変ドメインから取り込まれる。１つの実施例では、Ｗｉｎｔｅｒと共同研究者の方法に従って、基本的に、げっ歯動物ＣＤＲ又はＣＤＲ配列でヒト抗体の対応する配列を置換することによってヒト化を行う（Ｊｏｎｅｓ ＰＴ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３２１（６０６９）：５２２～５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３３２（６１６２）：３２３～３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ Ｍ．ら．、Ｓｃｉｅｎｃｅ［科学］、２３９（４８４７）：１５３４～１５３６（１９８８））。よって、本明細書で記載された「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ない分が、非ヒト種に由来する対応する配列で置換されている抗体である。実際には、ヒト化抗体は、典型的に、いくつかのＣＤＲ残基及び場合によりいくつかのＦＲ残基が、げっ歯動物抗体における類似部位に由来する残基で置換されている抗体である。

【0140】

ヒト化の代わりに、ヒト抗体を生成することできる。例えば、現在、免疫化された後に、内在性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の全レパートリーを産生できるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作成することができる。例えば、キメラ及び生殖系列突然変異マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失は、内在性抗体の産生の完全な阻害を引き起こすことが記載されている。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子配列をこのような生殖系列突然変異マウスに導入することにより、抗原チャレンジ後にヒト抗体の産生を引き起こし、例えばＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］、９０（６）：２５５１～２５５５（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ Ａ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３６２（６４１７）：２５５～２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ Ｍ．ら、Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学年報］、７：３３～４０（１９９３）、米国特許第５５４５８０６号、第５５６９８２５号、第５５９１６６９号、第５５４５８０７号、及びＷＯ ９７／１７８５２を参照する。

【0141】

代替可能に、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、トランスジェニック動物、例えば、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的又は完全に不活性化されたマウスに導入することによってヒト抗体を作製することができる。チャレンジ後に、ヒト抗体の産生が観察され、これは、遺伝子再構成、会合、及び抗体レパートリーを含む全ての面においてヒトで見られるものと類似する。該方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｍａｒｋｓ ＪＤ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［バイオテクノロジー］、１０（７）：７７９－７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｎ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３６８（６４７４）：８５６－８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ．、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３６８（６４７４）：８１２－８１３（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ＤＭ．ら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．［ネイチャーバイオテクノロジー］、１４（７）：８４５～８５１（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ Ｍ．、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．［ネイチャーバイオテクノロジー］、１４（７）：８２６（１９９６）、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｎ．ら、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［国際免疫学レビュー］、１３（１）：６５～９３（１９９５）を参照する。

【0142】

代替可能に、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ Ｊ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３４８（６３０１）：５５２～５５４（１９９０））は、免疫されていないドナーに由来する免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからインビトロでヒト抗体及び抗体断片を産生するために用いることができる。該技術の１つの実施例によれば、抗体Ｖドメイン配列は、糸状バクテリオファージの主要又は非主要コートタンパク質遺伝子（例えば、Ｍ１３又はｆｄ）にインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上に機能的な抗体断片としてディスプレイされる。ファージディスプレイは、様々な形式で行うことができ、例えば、以下の実施例部分に説明されるか又は例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ＫＳ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．［構造生物学における現在の意見］、３（４）：５６４～５７１（１９９３）に総説される。いくつかの供給源のＶ遺伝子断片は、ファージディスプレイに用いることができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ Ｔ．ら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３５２（６３３６）：６２４～６２８（１９９１）では、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小ランダムコンビナトリアルライブラリーから様々な抗オキサゾロン抗体が単離される。免疫されていないヒトドナーに由来するＶ遺伝子のレパートリーを構築し、基本的にＭａｒｋｓ ＪＤ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［分子生物学ジャーナル］、２２２（３）：５８１～５９７（１９９１）、又はＧｒｉｆｆｉｔｈ ＡＤ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．［ＥＭＢＯ会誌］１２（２）：７２５～７３４（１９９３）に記載される技術に従って、様々な抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を単離することができる。さらに、米国特許第５５６５３３２号及び第５５７３９０５号を参照する。

【0143】

上記に記載されるように、さらに、当該技術分野で公知の方法で、インビトロで活性化されたＢ細胞によってヒト抗体を生成することができる。

【0144】

当該技術分野で公知の様々な技術（ファージディスプレイライブラリーを含む）を用いてヒト抗体を産生することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ＨＲ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［分子生物学ジャーナル］、２２７（２）：３８１～３８８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ＪＤ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．［分子生物学ジャーナル］、２２２（３）：５８１～５９７（１９９１）を参照する。Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの技術も、ヒトモノクローナル抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ［モノクローナル抗体と癌療法］、Ｃｏｌｅら、Ａｌａｎ Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．［アランリス社］、１９８５、第７７ページ、及びＢｏｅｒｎｅｒ Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１４７（１）：８６～９５（１９９１））」の作製に用いることができる。

【0145】

多重特異性抗体
多重特異性抗体は、２種類又はそれ以上の異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくはヒト抗体又はヒト化抗体である（例えば、少なくとも２種類の抗原に対して結合特異性を有する二重特異性抗体である）。例えば、結合特異性のうちの１つは、ａ５～１タンパク質に対するものであってよく、もう１つは、他のいずれかの抗原に対するものであってよい。１つの好ましい実施例によれば、他の抗原は、細胞表面タンパク質又は受容体もしくは受容体サブユニットである。例えば、細胞表面タンパク質は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞受容体であってよい。よって、１つの実施例によれば、本発明の二重特異性抗体は、ＣＤ７３及び例えば、第２の細胞表面受容体の両方に結合できる。

【0146】

二重特異性抗体を作製するための適切な方法は、当該技術分野で公知である。例えば、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアの共発現に基づくものであり、この２つの重鎖が異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ［自然］、３０５（５９３４）：５３７～５４０（１９８３））。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダム組み合わせにより、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０種の異なる抗体分子の混合物を産生する可能性があるが、そのうちの１つのみが正しい二重特異性構造を有する。一般的に、親和性クロマトグラフィーステップによって正しい分子の精製を行う。類似の方法は、当該技術分野で、例えば、ＷＯ９３／０８８２９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ Ａ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．［ＥＭＢＯ会誌］、１０（１２）：３６５５～３６５９（１９９１）に開示されている。

【0147】

所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体－抗原結合部位）は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合することができる。ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインに融合することが好ましい。好ましくは、これらの融合物のうちの少なくとも１種には、軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が存在する。免疫グロブリン重鎖融合物及び（必要があれば）免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、単独の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に同時トランスフェクトされる。二重特異性抗体を生成するさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ ＭＲ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．［酵素学方法］、１２１：２１０～２２８（１９８６）を参照する。

【0148】

また、二重特異性抗体断片を組換え細胞培養物から直接作製し、単離するための様々な技術も開示されている。例えば、ロイシンジッパーを用いて二重特異性抗体を産生する（Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ＳＡ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免免疫学会誌］、１４８（５）：１５４７～１５５３（１９９２））。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質に由来するロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合により２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結する。抗体ホモ二量体をヒンジ領域で還元させて単量体を形成し、次いで再度酸化して抗体ヘテロ二量体を形成する。この方法は、抗体ホモ二量体の産生に用いることもできる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］、９０（１４）：６４４４～６４４８（１９９３）に記載された「二重抗体」技術は、二重特異性抗体断片を作製するための代替メカニズムを提供する。この断片は、リンカーによってＶＬに連結されたＶＨを含み、このリンカーがあまりに短いため、同一鎖において２つのドメインがペアになることができない。よって、１つの断片のＶＨ及びＶＬドメインは、別の断片の相補的なＶＬ及びＶＨドメインとペアになることにより、２つの抗原結合部位を形成する。さらに、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を用いて二重特異性抗体断片を作製するための別の方法が報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１５２（１１）：５３６８～５３７４（１９９４）を参照する。

【0149】

２つ以上の結合価を有する抗体が考慮される。例えば、三重特異性抗体を作製することができる（Ｔｕｔｔ Ａ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１４７（１）６０～６９（１９９１））。

【0150】

ヘテロ抱合抗体
ヘテロ抱合抗体は、２つの共有結合的に連結された抗体からなる。例えば、このような抗体は、望ましくない細胞に対して免疫系細胞を標的にし、ＨＩＶ感染の治療に用いられることが提案されている。合成タンパク質化学における公知の方法（架橋剤に関する方法を含む）を用いてインビトロでこれらの抗体を作製することができることが考慮される。例えば、ジスルフィド結合交換反応を用いるか又はチオエーテル結合を形成することによって免疫毒素を構築することができる。このような目的のための適切な試薬の例は、イミノチオレート（ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｔｅ）、メチル－４－メルカプトブチルイミデート（ｍｅｔｈｙｌ－４－ｍｅｒｃａｐｔｏｂｕｔｙｒｉｍｉｄａｔｅ）、及び当該技術分野で公知のものを含む。

【0151】

エフェクター機能操作
エフェクター機能に関して、例えば、癌の治療における抗体の有効性を高めるように、本明細書で提供される抗体を修飾することが望ましい。例えば、１つ以上のシステイン残基をＦｃ領域に導入することにより、該領域において鎖間ジスルフィド結合を形成することができる。このように生成されたホモ二量体抗体は、改善された内在化能力及び／又は高まった補体媒介性細胞死滅及び抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有することができる。Ｃａｒｏｎ ＰＣ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．［実験医学雑誌］、１７６（４）：１１９１～１１９５（１９９２）及びＳｈｏｐｅｓ Ｂ．、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［免疫学会誌］、１４８（９）：２９１８～２９２２（１９９２）を参照する。さらに、当該技術分野で公知のヘテロ二官能性架橋剤を用いて、高まった抗腫瘍活性を有するホモ二量体抗体を作製することができる。代替可能に、抗体は、二重Ｆｃ領域を有するように操作されることにより、高まった補体溶解性及びＡＤＣＣ能力を有することができる。例えば、Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ ＧＴ．ら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．［抗癌薬物設計］、３（４）：２１９～２３０（１９８９）を参照する。

【0152】

ＦｃＲ結合を改善するように、Ｆｃ領域配列における突然変異又は変化を行ってよい（例えば、ＦｃγＲ、ＦｃＲｎ）。１つの実施例によれば、本発明の抗体は、天然ＩｇＧ又は親抗体と比較して、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ及び改善されたＦｃＲｎ結合からなる群から選択される少なくとも１つの変化したエフェクター機能を有する。いくつかの有用な特異的突然変異の例は、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．［生物化学ジャーナル］、２７６（６）：６５９１～６６０４（２００１）、Ｐｒｅｓｔａ、ＬＧ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．［生化学協会報告］３０（４）：４８７～４９０（２００２）、及びＷＯ００／４２０７２に記載されている。

【0153】

１つの実施例によれば、Ｆｃ受容体の突然変異は、Ｆｃ領域の２３８、２３９、２４６、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８又は４３９からなる群から選択される少なくとも１つの位置の置換であり、Ｆｃ領域における残基の番号は、ＥＵナンバリングシステムに従うものである。いくつかの実施例では、Ｆｃ受容体の突然変異は、Ｄ２６５Ａ置換である。いくつかの実施例では、Ｆｃ受容体の突然変異は、Ｎ２９７ Ａ置換である。さらに適切な突然変異は、当該技術分野で公知のものであり、例えば、米国特許第７３３２５８１号に示されるものである。

【0154】

免疫抱合体
本発明はまた、細胞傷害性薬物（例えば化学療法剤）、毒素（例えば、細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒又はこれらの断片）、又は放射性同位元素（すなわち、放射性抱合体）に抱合された抗体又はその変異体もしくは突然変異体を含む免疫抱合体に関する。

【0155】

使用可能な酵素活性毒及びその断片は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ－Ｓ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含む。様々な放射性核種は、放射性抱合抗体の産生に用いることができる。例は、^２１２Ｂｉ、^１３１Ｉ、^１３１Ｉｎ、^９０Ｙ、及び^１８６Ｒｅを含む。このような免疫抱合体の生成に有用な例示的な化学療法剤は、本明細書の別の箇所に記載されているものを含む。

【0156】

いくつかの実施例では、本発明の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）又はカリケアミシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）に抱合される。いくつかの実施例では、本発明の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、メイタンシノイドＤＭ１に抱合される。

【0157】

抗体及び細胞傷害性薬物の抱合体は、様々な二官能性タンパク質カップリング剤（例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ））、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステル二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ）、活性エステル類（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド類（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾウイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６－ジイソシアネート）、及びビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）を用いて作製される。例えば、Ｖｉｔｅｔｔａ ＥＳ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ［科学］、２３８（４８３０）：１０９８～１１０４（１９８７）に記載されるようにリシン免疫毒素を作製することができる。炭素－１４－で標識された１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体に抱合するための例示的なキレート剤である。ＷＯ ９４／１１０２６を参照する。

【0158】

いくつかの実施例では、本発明の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、腫瘍の前標的化のために「受容体」（例えば、ストレプトアビジン）に抱合することができ、抗体－受容体抱合体を患者に投与し、続いて除去剤を用いて血液循環から結合していない抱合体を除去し、次いで細胞傷害性薬物（例えば、放射性ヌクレオチド）に抱合されている「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する。

【0159】

共有結合的修飾
抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び断片の共有結合的修飾は、本開示の範囲内に含まれる。１つのタイプの共有結合的修飾は、ポリペプチドの標的アミノ酸残基を、ポリペプチドの選択された側鎖又はＮ末端もしくはＣ末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることを含む。二官能性薬剤による誘導体化は、例えば、ポリペプチドを水不溶性支持基質又は表面に架橋して抗体を精製する方法において有用であり、その逆のためにも有用である。一般的な架橋剤は、例えば、１，１－ビス（ジアゾアセチル）－２－フェニルエタン、グルタルアルデヒド、Ｎ－ヒドロキシコハク酸イミドエステル（例えば、４－アジドサリチル酸とのエステル）、ホモ二官能性イミドエステル（ジスクシンイミジルエステルを含み、例えば、３，３’－ジチオビス（スクシンイミジル－プロピオネート））、二官能性マレイミド（例えば、ビス－Ｎ－マレイミド－１，８－オクタン）、及び薬剤（メチル－３－［（ｐ－アジドフェニル）－ジチオ］プロピオイミデート）を含む。

【0160】

他の修飾には、グルタミニル及びアスパラギニル残基のそれぞれ対応するグルタミル及びアスパルチル残基への脱アミド化、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン及びヒスチジン側鎖のα－アミノ基のメチル化（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［タンパク質：構造及び分子特性］、Ｔｈｏｍａｓ Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ， Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．［Ｗ．Ｈ．フリーマン社］、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ［サンフランシスコ］、１９８３、第７９～８６ページ）、Ｎ末端アミンのアセチル化、及び任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。

【0161】

ポリペプチドの別のタイプの共有結合的修飾は、当該技術分野で公知の方法（例えば、米国特許第４６４０８３５号、第４４９６６８９号、第４３０１１４４号、第４６７０４１７号、第４７９１１９２号又は第４１７９３３７号に説明される方法）で、ポリペプチドを様々な非タンパク質性重合体の１つ、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール又はポリオキシアルキレンに連結することを含む。

【0162】

キメラ分子
別の異種性ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合するポリペプチド（例えば、イムノアドヘシン又はペプチボディー）を含むキメラ分子を形成することに有利であれば、本発明の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は修飾されてもよい。

【0163】

１つの実施例では、このようなキメラ分子は、ポリペプチドとタンパク質形質導入ドメインとの融合物を含み、該タンパク質形質導入ドメインは、ポリペプチドを、様々な組織へ、より具体的には、血液脳関門を通って標的化送達するものであり、例えば、ヒト免疫不全ウイルスＴＡＴタンパク質のタンパク質形質導入ドメインを用いる（Ｓｃｈｗａｒｚｅ ＳＲ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ［科学］２８５（５４３３）：１５６９～１５７２（１９９９））。

【0164】

いくつかの実施例では、このようなキメラ分子は、ポリペプチドと、抗タグ抗体が選択可能的に結合するエピトープを提供するタグポリペプチドとの融合物を含む。エピトープタグは、一般的に、ポリペプチドのアミノ末端又はカルボキシル末端に配置される。このようなエピトープタグ型のポリペプチドの存在は、該タグポリペプチドに対する抗体を用いて検出することができる。また、エピトープタグを提供することにより、抗タグ抗体又は該エピトープタグに結合する別のタイプの親和性基質を用いて親和性精製によってポリペプチドを容易に精製することができる。様々なタグポリペプチド及びそれらの各抗体は、当該技術分野で公知である。例は、ポリ－ヒスチジン（ｐｏｌｙ－Ｈｉｓ）又はポリ－ヒスチジン－グリシン（ｐｏｌｙ－Ｈｉｓ－ｇｌｙ）タグ、インフルエンザＨＡタグポリペプチド及びその抗体１２ＣＡ５（Ｆｉｅｌｄら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、［分子細胞生物学雑誌］、８（５）：２１５９～２１６５（１９８８））、ｃ－ｍｙｃタグ及びその８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７及び９Ｅ１０抗体（Ｅｖａｎ ＧＩ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．［分子細胞生物学雑誌］、５（１２）：３６１０～３６１６（１９８５））、並びに単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグ及びその抗体（Ｐａｂｏｒｓｋｙ ＬＲら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、［タンパク質工学］、３（６）：５４７～５５３（１９９０））を含む。他のタグポリペプチドは、Ｆｌａｇ－ペプチド（Ｈｏｐｐ ＴＰら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［バイオテクノロジー］、６：１２０４～１２１０（１９８８））、ＫＴ３エピトープペプチド（Ｍａｒｔｉｎ ＧＡ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ［科学］、２５５（５０４１）：１９２～１９４（１９９２））、α－チュブリンエピトープペプチド（Ｓｋｉｎｎｅｒ ＭＰ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．［生物化学ジャーナル］、２６６（９）：１５１６３～１５１６６（１９９１））、及びＴ７遺伝子１０タンパク質ペプチドタグ（Ｌｕｔｚ－Ｆｒｅｙｅｒｍｕｔｈ Ｃ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］、８７（１６）：６３９３～６３９７（１９９０））を含む。

【0165】

代替の実施例では、キメラ分子は、ポリペプチドと免疫グロブリン又は免疫グロブリンの特定の領域との融合物を含んでよい。二価形態のキメラ分子（例えば、「イムノアドヘシン」）について、このような融合物は、ＩｇＧ分子のＦｃ領域に対するものであってよい。本発明のＩｇ融合物は、Ｉｇ分子内の少なくとも１つの可変領域の代わりに、ヒトの残基９４～２４３、残基３３～５３又は残基３３～５２の前後又はこれらのみを含むポリペプチドを含む。１つの特に好ましい実施例では、免疫グロブリン融合物は、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３、又はヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む。免疫グロブリン融合物の産生については、当該技術分野で公知であり、例えば、米国特許第５４２８１３０号を参照する。

【0166】

免疫リポソーム
また、本発明の抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は免疫リポソームとして製剤化することができる。抗体を含有するリポゾームは、Ｅｐｓｔｅｉｎ ＤＡ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］、８２（１１）：３６８８～３６９２（１９８５）、及びＨｗａｎｇ ＫＪ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］、７７（７）：４０３０～４０３４（１９８０）、並びに米国特許第４４８５０４５号及び第４５４４５４５号に記載されるような当該技術分野で公知の方法によって作製される。米国特許第５０１３５５６号には、血液循環時間が延長したリポゾームが開示されている。

【0167】

特に有用なリポゾームは、逆相蒸発法によって、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びＰＥＧ由来のホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いて生成することができる。リポゾームを、規定の孔径を有するフィルターに通して押し出して、所望の直径を有するリポゾームが生成される本開示の抗体のＦａｂ’断片は、Ｍａｒｔｉｎ ＦＪ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．［生物化学ジャーナル］、２５７（１）：２８６～２８８（１９８２）に記載されるように、ジスルフィド結合交換反応によりリポゾームに抱合することができる。また、リポゾーム内には、抗腫瘍剤、増殖阻害剤又は化学療法剤（例えば、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ））が任意選択に含有されてよい。Ｇａｂｉｚｏｎ Ａ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．［アメリカ国立癌研究所雑誌］、８１（１９）：１４８４～１４８８（１９８９）を参照する。

【0168】

抗ＣＤ７３抗体、その変異体もしくは突然変異体を用いる治療
開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を被験者（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することにより、ＣＤ７３発現、ＣＤ７３過剰発現又は異常ＣＤ７３機能に関連する疾患、障害又は臨床症状を治療することができる。例えば、ＣＤ７３発現に関連する癌は、例えば、リンパ腫、腎臓癌、肺癌、結腸癌、肝臓癌、胃癌、原発性浸出性リンパ腫、骨肉腫及び非ホジキンリンパ腫であってよいが、それらに限定されない。ＣＤ７３発現に関連する疾患、障害又は臨床症状の別の例としては、特発性肺線維症を含む線維症であってよい。いくつかの実施例では、本発明は、被験者において癌又は線維症を治療するための薬物の製造における本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体／突然変異体（又はこれらの断片）の用途を提供する。いくつかの実施例では、治療対象の被験者は、哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなど）である。いくつかの実施例では、被験者は、ヒトである。いくつかの実施例では、受験者は、臨床患者、臨床試験ボランティア、実験動物などである。いくつかの実施例では、被験者は、癌又は線維症に罹っている疑いがあるか又はそのリスクがある。

【0169】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を被験者（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することにより、ＣＤ７３発現に関連する癌の癌再現又は再発を治療することができる。

【0170】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を被験者（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することにより、ＣＤ７３発現に関連する難治性癌又は耐性癌を治療することができる。

【0171】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を被験者（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することにより、ＣＤ７３発現に関連する癌の補助療法を提供することができる。

【0172】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を被験者（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することにより、ＣＤ７３発現に関連する癌の維持療法を提供することができる。

【0173】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を被験者（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することにより、ＣＤ７３発現に関連する浸潤性癌を治療することができる。

【0174】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を被験者（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することにより、ＣＤ７３発現に関連する非浸潤性癌を治療することができる。

【0175】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を被験者（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することにより、ＣＤ７３発現に関連する癌に罹っていると診断された被験者の無増悪生存期間を増加させることができる。

【0176】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片を用いて治療されたＣＤ７３発現に関連する癌は、多剤耐性（ＭＤＲ）又は薬物感受性であってよい。癌の例は、癌、リンパ腫、芽腫、肉腫、血液癌及び白血病を含むが、それらに限定されない。いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片を用いて治療されたＣＤ７３発現に関連する癌は、結腸直腸癌、卵巣癌、胃癌、胆嚢癌、白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、前立腺癌、黒色腫、乳癌、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、膀胱癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、膵臓癌、膠腫、頭頸部癌、甲状腺癌、Ｂ－細胞急性リンパ球性白血病、髄芽腫、非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍及び口腔扁平上皮癌を含むが、それらに限定されない。別の実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片を用いて治療されたＣＤ７３発現に関連する癌は、血液（又は造血組織）癌、膀胱癌、脳癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌ＴＮＢＣ）、中枢及び末梢神経系癌、子宮頸癌、結腸癌、頭頸部癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌（小細胞肺癌を含む）、食道癌、胆嚢癌、消化管癌、尿生殖器管癌、リンパ系造血器腫瘍、骨髄細胞系列造血器腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、直腸癌、胃癌、前立腺癌、皮膚癌（扁平上皮癌を含む）及び甲状腺癌を含むが、それらに限定されない。

【0177】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片を用いて治療されたＣＤ７３発現に関連する癌は、血液癌であってよい。依然として別の態様では、血液癌は、白血病、骨髄腫又はリンパ腫から選択され、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、ホジキンリンパ腫、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）、非ホジキンリンパ腫原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＮＨＬ ＰＭＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、孤立性骨髄腫、限界性骨髄腫、髄外骨髄腫、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫及び大Ｂ細胞リンパ腫を含むが、それらに限定されない。リンパ系の例示的な造血器腫瘍は、白血病、急性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞リンパ腫及びバーキットリンパ腫を含むが、それらに限定されない。骨髄細胞系列造血器腫瘍は、急性及び慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群及び前骨髄球性白血病、線維肉腫及び横紋筋肉腫を含む間葉系由来腫瘍を含むが、それらに限定されない。

【0178】

他の実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片を用いて治療されたＣＤ７３発現に関連する癌は、脳癌又は中枢神経系癌であってよい。中枢及び末梢神経系腫瘍は、星細胞腫、神経芽細胞腫、膠腫及び神経鞘腫を含むが、それらに限定されない。他の例示的な脳癌又は中枢神経系癌は、膠腫、髄芽腫、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、聴神経腫瘍、膠腫、髄膜腫、下垂体腺腫、神経鞘腫、ＣＮＳリンパ腫、原始神経外胚葉性腫瘍、頭蓋咽頭腫、脊索腫、髄芽腫、中枢神経芽細胞腫、中枢神経細胞腫、松果体細胞腫、松果体芽腫（ｐｉｎｅｏｂｌａｓｔｏｍａ）、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、軟骨肉腫、軟骨腫、脈絡叢癌（ｃｈｏｒｏｉｄ ｐｌｅｘｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、脈絡叢乳頭腫、頭蓋咽頭腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、神経節細胞腫、胚細胞腫瘍、血管芽腫、血管外皮腫及び転移性脳腫瘍を含む。さらに別の態様では、膠腫は、上衣腫、星細胞腫、乏突起膠腫及び乏突起星細胞腫から選択される。さらに別の態様では、膠腫は、若年性毛様細胞性星細胞腫、上衣下巨細胞性星細胞腫、神経節膠腫、上衣下腫、多形黄色星細胞腫（ｐｌｅｏｍｏｒｐｈｉｃ ｘａｎｔｈｏａｓｔｒｏｃｙｔｏｍａ）、退形成星細胞腫瘍、多形性膠芽細胞腫、脳幹部膠腫、乏突起膠腫、上衣腫、乏突起星細胞腫、毛様細胞性星細胞腫、線維形成性乳児星細胞腫、上衣下巨細胞性星細胞腫、びまん性星細胞腫、混合性神経膠腫、視神経膠腫、大脳膠腫症（ｇｌｉｏｍａｔｏｓｉｓ ｃｅｒｅｂｒｉ）、多巣性神経膠腫（ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ ｇｌｉｏｍａｔｏｕｓ ｔｕｍｏｒ）、多中心性多形性膠芽細胞腫（ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｉｃ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ ｔｕｍｏｒ）、神経節細胞腫及び神経節膠腫から選択される。

【0179】

開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片を用いて治療されたＣＤ７３発現に関連する他の例示的な腫瘍は、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎児性腫瘍、腎芽腫、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、骨肉腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽腫、黒色腫、奇形癌、色素性乾皮症（ｘｅｎｏｄｅｒｏｍａ ｐｉｇｍｅｎｔｏｓｕｍ）、角化棘細胞腫（ｋｅｒａｔｏｃｔａｎｔｈｏｍａ）、甲状腺濾胞癌及びカポジ肉腫を含むが、それらに限定されない。

【0180】

癌（例えば、黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部癌、尿路上皮癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌ＴＮＢＣ）、胃癌、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）、非ホジキンリンパ腫原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＮＨＬ ＰＭＢＣＬ）、中皮腫、卵巣癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌）、食道癌、鼻咽頭癌（ＮＰＣ）、胆道癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、甲状腺癌）又は異常なＣＤ７３機能を示す他の疾患のいずれかのための多くの診断方法及びこれらの疾患の臨床的基準は、当該技術分野で公知である。このような方法は、例えば、免疫組織化学法、ＰＣＲ、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を含むが、それらに限定されない。異常なＣＤ７３活性又は発現のための診断方法に関するさらなる詳細は、当該技術分野で記載されている。

【0181】

開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、静脈内、筋肉内又は皮下を含む任意の適切な経路により投与されてよい。いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、非経口投与により投与されてよい。「非経口」とは、静脈内、皮下及び筋肉内投与を意味する。

【0182】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、少なくとも１種の薬剤（例えば、第２、第３又は第４の薬剤）と組み合わせて投与されてよい。該少なくとも１種の薬剤は、癌又は線維症（特発性肺線維症を含む）を治療する公知の任意の適切な薬剤であってよい。

【0183】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、癌治療に用いられる少なくとも１種の薬剤と組み合わせて投与されてよい。様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、癌治療に用いられる少なくとも１種の薬剤（例えば、オキサリプラチン、ロイコボリン、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ゲムシタビン、パクリタキセル（蛋白結合パクリタキセル（例えば、ナノ粒子アルブミン結合パクリタキセルであるが、それに限定されず、「アルブミン結合パクリタキセル（ｎａｂ－ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）」と呼ばれる場合がある）、又はそれらの組み合わせ）と組み合わせて投与されてよい。

【0184】

癌治療に用いられる少なくとも１種の薬剤の別の例は、化学療法剤、免疫治療剤、癌ワクチン、抗血管新生剤、サイトカイン、ホルモン療法、遺伝子療法、生物療法及び放射線療法を含むが、それらに限定されない。例えば、癌治療に関して公知の少なくとも１種の薬剤は、公知の細胞阻害性又は細胞傷害性又は抗癌剤（例えば抗腫瘍剤）、増殖阻害剤、細胞傷害性薬物又は化学療法剤（例えば、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、ＦＯＬＦＩＲＩ（イリノテカン（ｉｒｃｈｔｅｃａｎ）、５－フルオロウラシル及びフロリン酸（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ））、イリノテカン、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、ベバズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（抗ＶＥＧＦ抗体）、ＦＯＬＦＯＸ－４、注入投与のフルオロウラシル、ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）、並びにオキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、アファチニブ（ａｆａｔｉｎｉｂ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、チバンチニブ（ｔｉｖａｎｔｉｎｉｂ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、ＣｐＧ－ＯＤＮ、ラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）、レナリドミド（ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、ベムラフェニブ（ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ）、エンドスタチン、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ＰＸ－８６６、Ｉｍｐｒｉｍｅ ＰＧＧ及びｉｒｌｏｔｉｎｉｂｍであってよい。

【0185】

いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体／突然変異体（又はこれらの断片）は、別の薬剤に抱合される。例えば、該少なくとも１種の薬剤は、ウラシルマスタード（ｕｒａｃｉｌ ｍｕｓｔａｒｄ）、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、ピポプロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）、トリエチレンメラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）、トリエチレンチオホスホラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｎｅ）、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ストレプトゾシン、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、テモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）、アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、メトトレキサート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、フルダラビンリン酸エステル（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、デキサメタゾン、クロファラビン、クラドリビン、ｐｅｍｅｘｔｒｅｓｅｄ、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、パクリタキセル、ドセタキセル、イキサベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）、ミトラマイシン（ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、ノギテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、イリノテカン、ペントスタチン（ｄｅｏｘｙｃｏｆｏｒｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン－Ｃ、Ｌ－アスパラギナーゼ、インターフェロン、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、テニポシド１７α－エチニルエストラジオール（ｅｔｈｉｎｙｌｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、ジエチルスチルベストロール（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ）、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、テストラクトン、酢酸メゲストロール、タモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ）、クロロトリアニセン（ｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｎｉｓｅｎｅ）、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、酢酸メドロキシプロゲステロン（ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ）、ロイプロリド、フルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、トレミフェン、ゴセレリン、シスプラチン、カルボプラチン、ヒドロキシ尿素（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）、アムサクリン、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、レバミゾール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、ビノレルビン（ｎａｖｅｌｂｅｎｅ）、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ）、レトロゾール（ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）、カペシタビン、レロキサフィン（ｒｅｌｏｘａｆｉｎｅ）、ドロロキサフィン（ｄｒｏｌｏｘａｆｉｎｅ）、ヘキサメチルメラミン（ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｍｅｌａｍｉｎｅ）、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、イレッサ（ｉｒｅｓｓａ）（ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｎｉｔｉｂ）、Ｚｄ１８３９）、ＸＥＬＯＤＡ（登録商標）（カペシタビン）、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、アザシチジン（５－アザシチジン、５－ＡｚａＣ）、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、ゲムシタビン（例えば、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビンＨＣｌ））及びバソスタチン（ｖａｓｏｓｔａｔｉｎ）を含む。

【0186】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、少なくとも１種の薬剤と組み合わせて投与されてよく、該少なくとも１種の薬剤は、例えば、チオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮ（Ｒ）シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）及びピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）などのスルホン酸アルキル；ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン（ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン類（ａｚｉｒｉｄｉｎｅｓ）；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホラミン（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）及びトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む、エチレンイミン及びメチルアメラミン類（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）；アセトゲニン類（ａｃｅｔｏｇｅｎｉｎｓ）（特にブラタシン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎ）及びブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；δ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（Ｒ））；β－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体ノギテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（Ｒ））、ＣＰＴ－Ｉｌ（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（Ｒ））、アセチルカンプトテシン（ａｃｅｔｙｌｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、スコポレチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）及び９－アミノカンプトテシン（ａａｍｉｎｏｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ）を含む）；ブリオスタチン；ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）及びバイゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；テニポシド；クリプトフィシン類（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎｓ）（具体的にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）；デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（合成類似体、ＫＷ－２１８９及びＣＢｌ－ＴＭＬを含む）；エレトロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコディクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、チョロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆ ａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタードなどのメクロレタミン類；カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）及びラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロスレアス類（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）；エネジイン抗生物質などの抗生物質類（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンγＩ１及びカリケアミシンωＩ１である（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ ＫＣ．ら、Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．「応用化学英文国際版」、３３：１８３～１８６（１９９４）を参照））；ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ Ａを含むｄｙｎｅｍｉｃｉｎ；エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）；ネオカルチノスタチン発光団（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ）及び関連色素蛋白エネジイン抗生物質発光団、アクラシノマイシン類（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン（ａｚａｓｅｒｉｎｅ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎｓ）、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシンＣ、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（Ｒ）、モルフォリノ－ドキソルビシン、シアノモルフォリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポゾーム注射（ＤＯＸＩＬ（Ｒ））及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン類（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ）、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン（ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス（ｕｂｅｎｉｍｅｘ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（Ｒ））、テガフール（ｔｅｇａｆｕｒ）（ＵＦＴＯＲＡＬ（Ｒ））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（Ｒ））、エポチロン、及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗物質；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）などの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン（ａｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン、６－アザウリジン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、シタラビン、ジデオキシウリジン（ｄｉｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸などの葉酸リプレニッシャー；アセグラトン（ａｃｅｇｌａｔｏｎｅ）；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン；ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシン及びアンサマイトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ）などのメイタンシノイド；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２－エチルヒドラジド（ｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅ）；プロカルバジン；ＰＳＫ（Ｒ）多糖類複合体（ＪＨＳ自然製品社（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ユージーン（Ｅｕｇｅｎｅ）、オレゴン州（ＯＲ））；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；トリアジクオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）（特に、Ｔ－２トキシン、ベラキュリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリデン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａ及びアングイデン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン（ｕｒｅｔｈａｎｅ）；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＥＭＥ（Ｒ）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（Ｒ））；ダカルバジン；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポプロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（Ｒ））、パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（ＴＭ））アルブミン設計のナノ粒子製剤、及びドセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（Ｒ））などのタキソイド類；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチンなどのプラチナ類似体；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（Ｒ））；プラチナ；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド（ｉｆｏｓｆ ａｍｉｄｅ）；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（Ｒ））；オキサリプラチン；ロイコボリン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（Ｒ））；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）；アミノプテリン；イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド類；上述したものの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；並びに、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾロンの併用療法の略記号）、及びＦＯＬＦＯＸ（５－ＦＵとロイコボリンが組み合わされるオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（ＴＭ））による治療計画の略記号）などの、上述したものの２種以上の組み合わせを含む。

【0187】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、少なくとも１種の薬剤と組み合わせて投与されてよく、該少なくとも１種の薬剤は、血管新生阻害剤、例えば、アンギオスタチン（プラスミノゲン断片）、抗血管新生アンチトロンビンＩＩＩ、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ、ＡＢＴ－６２７、Ｂａｙ １２－９５６６、ベネフィン（Ｂｅｎｅｆｉｎ）、ベバズマブ、ＢＭＳ－２７５２９１、軟骨由来阻害剤（ＣＤＩ）、ＣＡＩ、ＣＤ５９補体断片、ＣＥＰ－７０５５、Ｃｏｌ ３、コンブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）Ａ－４、エンドスタチン（コラーゲンＸＶＩＩＩ断片）、フィブロネクチン断片、ｇｒｏ－β、ハロフジノン（ｈａｌｏｆｕｇｉｎｏｎｅ）、ヘパリナーゼ（ｈｅｐａｒｉｎａｓｅｓ）、ヘパリン六糖断片、ＨＭＶ８３３、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、ＩＭ－８６２、インターフェロンα／β／γ、インターフェロン誘導タンパク質（ＩＰ－１０）、インターロイキン－１２、Ｋｒｉｎｇｌｅ ５（プラスミノゲン断片）、マリマスタット（Ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）、金属プロテイナーゼ阻害剤（ＴＩＭＰ）、２－メトキシエストラジオール（２－ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、ＭＭＩ ２７０（ＣＧＳ ２７０２３Ａ）、ＭｏＡｂ ＩＭＣ－１Ｃ１１、ネオバスタット（Ｎｅｏｖａｓｔａｔ）、ＮＭ－３、ｐａｎｚｅｍ、ＰＩ－８８、胎盤リボヌクレアーゼ阻害剤、プラスミノゲンアクチベータ阻害剤、血小板第４因子（ＰＦ４）、プリノマスタット（ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ）、プロラクチン１６ｋＤ断片、プロリフェリン関連タンパク質（ＰＲＰ）、ＰＴＫ ７８７／ＺＫ ２２２５９４、レチノイド、ソリマスタット（ｓｏｌｉｍａｓｔａｔ）、スクアラミン、ＳＳ ３３０４、ＳＵ ５４１６、ＳＵ６６６８、ＳＵ１１２４８、テトラヒドロコルチゾール－Ｓ、テトラチオモリブデイト、サリドマイド、トロンボスポンジン－１（ＴＳＰ－１）、ＴＮＰ－４７０、トランスフォーミング増殖因子－β（ＴＧＦ－ｂ）、バスキュロスタチン（ｖａｓｃｕｌｏｓｔａｔｉｎ）、バソスタチン（カルレティキュリン断片）、ＺＤ６１２６、ＺＤ ６４７４、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（ＦＴＩ）、及びビスホスホネートであるが、それらに限定されない。

【0188】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、少なくとも１種の薬剤と組み合わせて投与されてよく、該少なくとも１種の薬剤は、シスプラチン及びドキソルビシンなどのＤＮＡ相互作用剤；エトポシドなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；ＣＰＴ－１１又はノギテカンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤；天然に存在するか又は合成されたパクリタキセル、ドセタキセル又はエポチロン（例えばイキサベピロン）などのチューブリン相互作用剤；タモキシフェンなどのホルモン剤；５－フルオロウラシルなどのチミジル酸合成酵素阻害剤（ｔｈｙｍｉｄｉｌａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）；メトトレキサート、イレッサ及びＯＳＩ－７７４などの他のチロシンキナーゼ阻害剤などの代謝拮抗物質；血管新生阻害剤；ＢＴＫ阻害剤、ＳＹＫ阻害剤、ＩＴＫ抑制剤、ＰＩ３－キナーゼ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＥＧＦ阻害剤；ＰＡＫ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤；ＣＤＫ阻害剤；ＳＲＣ阻害剤；ｃ－Ｋｉｔ阻害剤；Ｈｅｒ１／２阻害剤及び成長因子受容体に対するモノクローナル抗体、例えばセツキシマブ（ｅｒｂｉｔｕｘ）（ＥＧＦ）及びハーセプチン（ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）（Ｈｅｒ２）及び他のプロテインキナーゼ調節剤から選択される。これらの薬剤は、ＡＴＲＡ、ＥＺＨ２阻害剤、ＤＮＭＴ阻害剤、コルチコステロイド、ＩＤＨ１阻害剤、ＩＤＨ２阻害剤及びビタミンＣのような分化剤と組み合わせて使用されてよい。

【0189】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、癌細胞においてＤＮＡ殺傷効果を増強する小分子（ＰＡＲＰ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ＮＡＭＰＴ阻害剤及びＨＳＰ９０阻害剤を含む）と組み合わせて投与されてよい。

【0190】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、１種以上の免疫治療剤（拮抗薬、抗体及び免疫調節剤を含み、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮＳ、ＲＩＴＵＸＡＮＳ、ＯＶＡＲＥＸ（登録商標）、ＰＡＮＯＲＥＸ＠、ＢＥＣ２、ＩＭＣ－Ｃ２２５、ＶＩＴＡＭＩＮ、ＣＡＭＰＡＴＨ＠Ｉ／Ｈ、Ｓｍａｒｔ ＭＩ９５、ＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（登録商標）、Ｓｍａｒｔ Ｉ Ｄ１０及びＯＮＣＯＬＹＭ（登録商標）、リツキシマブ、ゲムツズマブ（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）又はトラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）を含むが、それらに限定されない）と組み合わせて投与されてよい。他の実施例では、免疫治療剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ガレクチン－１、ガレクチン－９、ＢＬＴＡ、ＣＤ６９、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－４、ＶＩＳＴＡ、ＧＡＲＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３９、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３を標的にする抗体又はこのような標的に対する抗体の組み合わせであってよい。いくつかの実施例では、免疫治療剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ガレクチン－１、ガレクチン－９、ＢＬＴＡ、ＣＤ６９、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－４、ＶＩＳＴＡ、ＧＡＲＰ、ＣＤ７３、ＣＤ３９、Ａ２ＡＲ又はそれらの組み合わせを標的にする拮抗薬、Ｂ７－１、Ｂ７－２、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３又はそれらの組み合わせを標的にする作用薬、又は前述の拮抗薬及び作用薬の組み合わせであってよい。

【0191】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、免疫細胞又は癌細胞上の細胞表面分子（ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ３８、メソテリン、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ１２３、ＣＤ７０、ＢＡＦＦＲ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５６、ＣＤ３８を含むが、それらに限定されない）を標的にする抗体又はこのような抗体の組み合わせと組み合わせて投与されてよい。いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、免疫細胞又は癌細胞上の細胞表面分子（ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２を含むが、それらに限定されない）を標的にする抗体又はこのような抗体の組み合わせと組み合わせて投与されてよい。

【0192】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、少なくとも１種の化学療法剤（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗物質、プラチナ製剤、パクリタキセル、抗ホルモン剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン薬剤、シグナル伝達阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）及び他の化学療法剤）と組み合わせて投与されてよい。「化学療法剤」は、癌治療に有用な化学化合物である。化学療法剤の例は、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）及びピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）などのスルホン酸アルキル；ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン（ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）及びウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン類（ａｚｉｒｉｄｉｎｅｓ）；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホラミン（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）及びトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む、エチレンイミン及びメチルアメラミン類（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）；アセトゲニン類（ａｃｅｔｏｇｅｎｉｎｓ）（特にブラタシン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎ）及びブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；δ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；β－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体ノギテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン（ａｃｅｔｙｌｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）、スコポレチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）及び９－アミノカンプトテシン（ａｍｉｎｏｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）を含む）；ブリオスタチン；ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）及びバイゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｏｔｏｘｉｎ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；テニポシド；クリプトフィシン類（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎｓ）（具体的にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）；デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（合成類似体、ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレトロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコディクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、チョロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆ ａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタードなどのメクロレタミン類；カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）及びラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロスレアス類（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）；エネジイン抗生物質などの抗生物質類（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンγ１Ｉ及びカリケアミシンωＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ ＫＣら、Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．「応用化学英文国際版」、３３：１８３～１８６（１９９４）を参照））；ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ Ａを含むｄｙｎｅｍｉｃｉｎ；エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）；並びにネオカルチノスタチン発光団（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ）及び関連色素蛋白エネジイン抗生物質発光団、アクラシノマイシン類（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン（ａｚａｓｅｒｉｎｅ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎｓ）、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシンＣ、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルフォリノ－ドキソルビシン、シアノモルフォリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、ドキソルビシンリポゾームＴＬＣ Ｄ－９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化ドキソルビシンリポソーム（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン類（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ）、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン（ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス（ｕｂｅｎｉｍｅｘ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ｔｅｇａｆｕｒ）（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗物質；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）などの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン（ａｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン、６－アザウリジン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、シタラビン、ジデオキシウリジン（ｄｉｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸などの葉酸リプレニッシャー；アセグラトン（ａｃｅｇｌａｔｏｎｅ）；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン；ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシン及びアンサマイトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ）などのメイタンシノイド；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２－エチルヒドラジド（ｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅ）；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ自然製品社（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ユージーン（Ｅｕｇｅｎｅ）、オレゴン州（Ｏｒｅｇ））；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ ａｃｉｄ）；トリアジクオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）（特に、Ｔ－２トキシン、ベラキュリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリデン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａ及びアングイデン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン（ｕｒｅｔｈａｎ）、ダカルバジン；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポプロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））アルブミン設計のナノ粒子製剤、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））などのタキソイド類；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンなどのプラチナ剤；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、チューブリンの重合による微小管の形成を予防するビンカ類（ｖｉｎｃａｓ）；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）；アミノプテリン；イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含む、レチノイン酸などのレチノイド；クロドロン酸（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳＯ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロン酸（ｅｔｉｄｒｏｎａｔｅ）（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ｔｉｌｕｄｒｏｎａｔｅ）（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））又はリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））などのビスホスホネート；トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常細胞増殖に関連するシグナル伝達経路中の遺伝子（例えば、ＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ））の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド；ワクチン、例えばＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソ
ラフェニブ、バイエル社（Ｂａｙｅｒ））；ＳＵ－１１２４８（ファイザー社（Ｐｆｉｚｅｒ））；ペリホシン（ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ）、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）又はエトリコキシブ（ｅｔｏｒｉｃｏｘｉｂ））、プロテアソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ－７７９；チピファルニブ（ｉｐｉｆａｒｎｉｂ）（Ｒ１１５７７）；ｓｏｒａｆｅｎｉｂ、ＡＢＴ５１０；オブリマーセンナトリウム（ｏｂｌｉｍｅｒｓｅｎ ｓｏｄｉｕｍ）（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））などのＢｃｌ－２阻害剤；ピクサントロン（ｐｉｘａｎｔｒｏｎｅ）；ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照）；チロシンキナーゼ阻害剤（以下の定義を参照）；上述したものの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；並びに、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾロンの併用療法の略記号）、及びＦＯＬＦＯＸ（５－ＦＵとロイコボリンが組み合わされるオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））による治療計画の略記号）などの、上述したものの２種以上の組み合わせを含む。

【0193】

本明細書において、化学療法剤は、癌の増殖を促進するホルモンの作用を調節し、減少させ、遮断するか又は阻害するための「抗ホルモン剤」又は「内分泌治療剤」を含む。それら自体は、ホルモンである可能性があり、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４－ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、ヨードキシフェン（ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、及びＳＥＲＭ３などの選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）を含む、混合作用薬／拮抗薬プロファイルを有する抗エストロゲン；フルベストラント（ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））及びＥＭ８００などの作用薬特性を有さない純粋な抗エストロゲン（このような薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）の二量化をブロックし、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲの代謝回転を増加させ、及び／又はＥＲレベルを抑制することができる）；フォルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｅ）及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイド性アロマターゼ阻害剤、及びアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））及びアミノグルテチミドなどの非ステロイド性アロマターゼ阻害剤を含むアロマターゼ阻害剤、並びにボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ）及び４（５）－イミダゾールを含む他のアロマターゼ阻害剤；ロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン（ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ）及びトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）を含む黄体形成ホルモン放出ホルモン作用薬；酢酸メゲストロール及び酢酸メドロキシプロゲステロンなどのプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリン（ｐｒｅｍａｒｉｎ）などのエストロゲン、並びにフルオキシメステロン、全トランス型レチノイン酸及びフェンレチニドなどのアンドロゲン／レチノイドを含む性ステロイド；オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）及びビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）などの抗アンドロゲン；上述したものの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；及び、上述したものの２種以上の組み合わせを含むが、それらに限定されない。

【0194】

本明細書において、「タキソイド」は、微小管解重合機能を阻害する化学療法剤である。その例は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））アルブミン設計のナノ粒子製剤、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））を含む。好ましいタキソイドは、パクリタキセルである。

【0195】

本明細書で用いられる用語「ＥＧＦＲ阻害剤」は、ＥＧＦＲに結合するか又は他の方式でＥＧＦＲに直接的に相互作用してそのシグナル伝達活性を防止するか又は低下させる化合物を意味し、「ＥＧＦＲ拮抗薬」と代替可能に呼ばれる場合がある。このような薬剤の例は、ＥＧＦＲに結合した抗体及び小分子を含む。ＥＧＦＲに結合した抗体の例は、ＭＡｂ ５７９（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ ８５０６）、ＭＡｂ ４５５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ ８５０７）、ＭＡｂ ２２５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０８）、ＭＡｂ ５２８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０９）（米国特許第４９４３５３３号、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎら）及びその変異体を含み、例えば、キメラ化２２５（Ｃ２２５又はセツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）；ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標）及び再成形ヒト２２５（Ｈ２２５）（ＷＯ９６／４０２１０、イムクローンシステムズ社（Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）を参照）；ＩＭＣ－１１Ｆ８（完全ヒトＥＧＦＲ標的抗体（イムクローン社（Ｉｍｃｌｏｎｅ）））、ＩＩ型突然変異体ＥＧＦＲに結合する抗体（米国特許第５２１２２９０号）；米国特許第５８９１９９６号に記載されている、ＥＧＦＲに結合したヒト化及びキメラ抗体、及び、ＡＢＸ－ＥＧＦ又はパニツムマブなどの、ＥＧＦＲに結合したヒト抗体（ＷＯ ９８／５０４３３を参照、（アブジェニクス社（Ａｂｇｅｎｉｘ）／アムジェン社（Ａｍｇｅｎ）））；ＥＭＤ ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏ Ｇ．ら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ［欧州癌雑誌］３２Ａ（４）：６３６～６４０（１９９６））；ＥＧＦＲ結合についてＥＧＦ及びＴＧＦ－αの両方と競合する、ＥＧＦＲに対するＥＭＤ７２００（マツズマブ（ｍａｔｕｚｕｍａｂ））ヒト化ＥＧＦＲ抗体（ＥＭＤ社／メルク社（Ｍｅｒｃｋ））；ヒトＥＧＦＲ抗体、ＨｕＭａｘ－ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ社）；Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３及びＥ７．６．３と呼ばれ、かつ米国特許第６２３５８８３号に記載された完全ヒト抗体；ＭＤＸ－４４７（メダレックス社（Ｍｅｄａｒｅｘ Ｉｎｃ））；及び、ｍＡｂ ８０６又はヒト化ｍＡｂ ８０６（Ｊｏｈｎｓ ＴＧ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．［生物化学ジャーナル］２７９（２９）：３０３７５～３０３８４（２００４））を含む。抗ＥＧＦＲ抗体は、細胞傷害性薬物に抱合して、免疫抱合体を生成することができる（例えば、メルクパテントＧｍｂＨ（Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨ）のＥＰ６５９４３９Ａ２を参照）。ＥＧＦＲ拮抗薬は、小分子を含み、例えば、米国特許第５６１６５８２号、第５４５７１０５号、第５４７５００１号、第５６５４３０７号、第５６７９６８３号、第６０８４０９５号、第６２６５４１０号、第６４５５５３４号、第６５２１６２０号、第６５９６７２６号、第６７１３４８４号、第５７７０５９９号、第６１４０３３２号、第５８６６５７２号、第６３９９６０２号、第６３４４４５９号、第６６０２８６３号、第６３９１８７４号、第６３４４４５５号、第５７６００４１号、第６００２００８号及び第５７４７４９８号、並びにＰＣＴ公開ＷＯ ９８／１４４５１、ＷＯ ９８／５００３８、ＷＯ ９９／０９０１６及びＷＯ ９９／２４０３７に記載されている化合物である。特定の小分子ＥＧＦＲ拮抗薬は、ＯＳＩ－７７４（ＣＰ－３５８７７４、エルロチニブ、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）ジーネンテック社（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）／ＯＳＩ製薬会社（ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ））；ＰＤ １８３８０５（ＣＩ １０３３、２－プロペンアミド、Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－７－［３－（４－モルホリノ）プロポキシル］－６－キナゾリン］－二塩酸塩、ファイザー社（Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．））；ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ（イレッサ（ＩＲＥＳＳＡ）Ｊ）４－（３′－クロロ－４′－フルオロアニリン）－７－メトキシ－６－（３－モルフォリノプロポキシル）キナゾリン、アストラゼネカ社（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ））；ＺＭ １０５１８０（（６－アミノ－４－（３－メチルフェニル－アミノ）－キナゾリン、ゼネカ社（Ｚｅｎｅｃａ））；ＢＩＢＸ－１３８２（Ｎ８－（３－クロロ－４－フルオロ－フェニル）－Ｎ２－（１－メチル－ピペリジン－４－イル）－ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－２，８－ジアミン、ベーリンガーインゲルハイム社（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ－１６６（（Ｒ）－４－［４－［（１－フェニルエチル）アミノ］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］－フェノール）；（Ｒ）－６－（４－ヒドロキシフェニル）－４－［（１－フェニルエチル）アミノ］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン）；ＣＬ－３８７７８５（Ｎ－［４－［（３－ブロモフェニル）アミノ］－６－キナゾリン］－２－ブチルアミド）；ＥＫＢ－５６９（Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－３－シアノ－７－エトキシ－６－キノリニル］－４－（ジメチルアミノ）－２－ブテンアミド）（ワイス社（Ｗｙｅｔｈ））；ＡＧ１４７８（サージャン社（Ｓｕｇｅｎ））；ＡＧ１５７１（ＳＵ ５２７１、サージャン社（Ｓｕｇｅｎ））；ラパチニブ（ＧＷ ５７２０１６又はＮ－［３－クロロ－４－［（３フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］６［５［［［２メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］－２－フラニル］－４－アミノキナゾリンなどの二重ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤、グラクソ・スミスクライン社（Ｇｌａｘｏ－ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ））を含む。

【0196】

「チロシンキナーゼ阻害剤」は、チロシンキナーゼ、例えばＨＥＲ受容体のチロシンキナーゼ活性を阻害する分子である。このような阻害剤の例は、前述の段落に記載されたＥＧＦＲ－標的薬物；小分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えばＴＡＫ１６５（武田薬品会社（Ｔａｋｅｄａ）から入手可能である）；ＣＰ－７２４、７１４（ＥｒｂＢ２受容体チロシンキナーゼの経口選択性阻害剤（ファイザー社（Ｐｆｉｚｅｒ）及びＯＳＩ会社）；二重ＨＥＲ阻害剤、例えばＥＧＦＲに優先的に結合するがＨＥＲ２及びＥＧＦＲの両者の過剰発現細胞を阻害するＥＫＢ－５６９（ワイス社（Ｗｙｅｔｈ）から入手可能である）；ラパチニブ（ＧＷ５７２０１６、グラクソ・スミスクライン社（Ｇｌａｘｏ－ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）から入手可能で、経口ＨＥＲ２及びチロシンキナーゼ阻害剤である）；ＰＫＩ－１６６（ノバルティス社（Ｎｏｖａｒｔｉｓ））から入手可能である）；ｐａｎ－ＨＥＲ阻害剤、例えばカネルチニブ（ｃａｎｅｒｔｉｎｉｂ）（ＣＩ－１０３３、ファルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ））；Ｒａｆ－１阻害剤、例えばＲａｆ－１シグナル伝達を阻害するアンチセンス試薬ＩＳＩＳ－５１３２（ＩＳＩＳ製薬社（ＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）から入手可能である）；非ＨＥＲ標的ＴＫ阻害剤、例えばイマチニブメシル酸塩（Ｉｍａｔｉｎｉｂ ｍｅｓｙｌａｔｅ）（グリーベック（ＧＬＥＥＶＡＣ）Ｊ）（グラクソ社（Ｇｌａｘｏ）から入手可能である）；ＭＡＰＫ細胞外制御キナーゼＩ阻害剤ＣＩ－１０４０（ファルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）から入手可能である）；キナゾリン類、例えばＰＤ １５３０３５、４－（３－クロロアニリン）キナゾリン；ピリドピリミジン類；ピリミドピリミジン類；ピロロピリミジン類、例えばＣＧＰ ５９３２６、ＣＧＰ ６０２６１及びＣＧＰ ６２７０６；ピラゾロピリミジン類、例えば４－（フェニルアミノ）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン；クルクミン（ディフェルロイルメタン、４，５－ビス（４－フルオロアニリン）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分を含有するチルホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎｅｓ）；ＰＤ－０１８３８０５（ワーナー・ランバート社（Ｗａｒｎｅｒ－Ｌａｍｂｅｒ））；アンチセンス分子（例えば、ＨＥＲ－コード核酸に結合したアンチセンス分子）；キノキサリン類（米国特許第５８０４３９６号）；チルホスチン（ｔｒｙｐｈｏｓｔｉｎｓ）（米国特許第５８０４３９６号）；ＺＤ６４７４（アストラゼネカ社（Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａ））；ＰＴＫ－７８７（ノバルティス（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）／シェーリング社（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ））；ｐａｎ－ＨＥＲ阻害剤、例えばＣＩ－１０３３（ファイザー社（Ｐｆｉｚｅｒ））；Ａｆｆｉｎｉｔａｃ（ＩＳＩＳ ３５２１、Ｉｓｉｓ社／リリー会社（Ｌｉｌｌｙ））；イマチニブメシル酸塩（グリーベック（Ｇｌｅｅｖａｃ）、ノバルティス（Ｎｏｖａｒｔｉｓ））；ＰＫＩ １６６（ノバルティス（Ｎｏｖａｒｔｉｓ））；ＧＷ２０１６（グラクソ・スミスクライン社（Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ））；ＣＩ－１０３３（ファイザー社（Ｐｆｉｚｅｒ））；ＥＫＢ－５６９（ワイス社（Ｗｙｅｔｈ））；Ｓｅｍａｘｉｎｉｂ（サージャン社（Ｓｕｇｅｎ））；ＺＤ６４７４（アストラゼネカ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ））；ＰＴＫ－７８７（ノバルティス（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）／シェーリング社（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ））；ＩＮＣ－１Ｃ１１（イムクローン社（Ｉｍｃｌｏｎｅ））を含むか、又は米国特許第５８０４３９６号、国際特許公開ＷＯ ９９／０９０１６（アメリカン・サイアナミッド社（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ））、ＷＯ ９８／４３９６０（アメリカン・サイアナミッド社（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ））、ＷＯ ９７／３８９８３（ワーナー・ランバート社（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ））、ＷＯ ９９／０６３７８（ワーナー・ランバート社（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ））、ＷＯ ９９／０６３９６（ワーナー・ランバート社（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ））、ＷＯ ９６／３０３４７（ファイザー社（Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．））、ＷＯ ９６／３３９７８（ゼネカ社（Ｚｅｎｅｃａ））、ＷＯ ９６／３３９７（ゼネカ社（Ｚｅｎｅｃａ））、ＷＯ ９６／３３９８０（ゼネカ社（Ｚｅｎｅｃａ））のいずれかに記載されるとおりである。

【0197】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、アクチノマイシンＤ、カペシタビン、カルボプラチン、シスプラチン、コルヒチン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、５－フルオロウラシル、ゲムシタビン、メルファラン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、パクリタキセル、サリドマイド、ノギテカン、ビンブラスチン及びビンクリスチンと組み合わせて投与されてよい。

【0198】

様々な実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、１種以上の他の療法又は臨床的介入（例えば放射線療法、手術、化学療法及び／又は標的療法）と組み合わせて投与されてよい。いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、開示された癌に対する放射線療法と組み合わせて投与される。

【0199】

いくつかの実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、手術（例えば、開示された抗ＣＤ７３抗体を投与する前に手術を行ってもよく、開示された抗ＣＤ７３抗体を投与した後に手術を行ってもよく、及び／又は開示された抗ＣＤ７３抗体を投与すると同時又はほぼ同時に手術を行ってもよい）と組み合わせて投与されてよい。

【0200】

治療対象の適応症及び当業者がよく知っている投与に関連する因子に依存し、本明細書で提供される抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体又はこれらの断片は、有効な用量、例えば毒性及び副作用を最小化すると同時に該適応症を効果的に治療する用量で投与される。一般的には、最大用量、すなわち合理的な医学的判断に基づく最高安全用量の本開示の薬理学的薬剤（単独又は他の治療剤と組み合わせる）を使用することが好ましい。しかしながら、当業者であれば理解されるように、医学的理由、心理的理由又は事実上他の任意の理由で、患者は、より低い用量又は耐容可能な用量を主張する。いくつかの実施例では、有効な用量により、所望の応答は、疾患又は症状の進行、例えば癌の進行を阻害することでなる。所望の応答は、疾患の進行を一時的に緩徐化するだけである可能性があるが、より好ましくは、疾患の進行を恒久的に停止させることである。所望の応答は、当業者に知られている、任意の特定の疾患に対する一般的な診断方法によりモニターすることができる。疾患又は症状の治療に対する所望の応答は、疾患又は症状の発作を遅延させるか又は予防するかことであってもよい。

【0201】

開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物の毒性及び治療効果、例えば、ＬＤ_５０（５０％の集団を致死させる用量）及びＥＤ_５０（５０％の患者集団に対して治療上有効な用量）を決定するために、標準的な医薬手順により細胞培養物又は実験動物において決定することができる。毒性を示す用量と治療効果を示す用量との比率は、治療指数であり、比率ＬＤ_５０／ＥＤ_５０として表すことができる。大きな治療指数を示す化合物が望ましい場合がある。毒性及び副作用を示す、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を使用することができるが、影響される組織の部位をこのような化合物の標的にする送達システムを設計することにより、感染されていない細胞に対する潜在的な損傷を最小化して、副作用を減少させることに注意すべきである。

【0202】

細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータを用いて、ヒトでの使用のための用量の範囲を決定し得る。開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物の用量は、ほとんど又は全く毒性のないＥＤ_５０を含む循環濃度範囲内にあることが好ましい。用量は、該範囲内で、採用される剤形及び使用される投与経路に応じて異なる。任意の開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物に対して、最初に細胞培養アッセイから治療上有効な量を評価することができる。動物モデルにおいて用量を決定することにより、細胞培養実験で決定された、ＩＣ_５０を含む循環血漿濃度範囲に達することができる。該情報は、ヒトに対する有効な用量をより正確に決定するために用いることができる。例えば高速液体クロマトグラフィーにより血漿中のレベルを測定することができる。

【0203】

当該技術分野で公知の又はＹａｍａｎａｋａ Ｋ．ら、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．［微生物免疫］４５（７）：５０７～５１４（２００１）に記載された様々な実験動物モデル（例えば、ＳＣＩＤマウスモデル又はヒト腫瘍移植片を有するヌードマウス）を使用することにより、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物の抗癌活性を決定することができる。

【0204】

開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、所望の治療又は予防活性に関して、ヒトに用いられる前に、インビトロで試験され、その後にインビボで試験されてよい。例えば、特定の治療計画の投与が指示されたか否かを決定するためのインビトロアッセイには、患者の組織試料を培養中に増殖させ、治療計画に曝露するか又は他の方法により治療計画を投与し、かつこのような治療計画の該組織試料に対する作用を観察するインビトロ細胞培養アッセイが含まれる。

【0205】

接触した細胞の低いレベルの増殖又は生存は、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物が被験者において選択された障害を効果的に治療することを示すことができる。代替可能に、腫瘍細胞株又は悪性細胞株（患者由来の培養細胞ではない）を用いて治療計画をスクリーニングしてよい。当該技術分野で公知の多くのアッセイを用いてこのような生存及び／又は増殖を評価することができ、例えば、３Ｈ－チミジンの取り込みを測定することにより、細胞を直接計数することにより、又は、公知の遺伝子、例えば原癌遺伝子又は細胞周期マーカーの転写活性の変化を検出することにより、細胞増殖を測定することができ、トリパンブルー染色法により細胞の活力を評価することができ、また、形態の変化などに基づいて分化を目視で評価することができる。

【0206】

療法に用いられる、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、ヒトで試験される前に、適切な動物モデルシステム（ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなどを含むが、それらに限定されない）において試験されてよい。例えば、全ての内容が引用により本明細書に組み込まれるＨａｎｎ Ｂ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．［細胞生物学における新観点］１３（６）：７７８～７８４（２００１）に記載されるように、当該技術分野で公知でかつ広く使用される癌の主要動物モデルは、マウスを含む。

【0207】

また、当業者の公知の任意のアッセイは、開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物が１種以上の上述した疾患又は障害に関連する症状を治療、予防、管理又は改善する予防及び／又は治療上の有効性を評価するために使用することができる。

【0208】

当業者は、本明細書に記載された障害を治療するか又は予防するための適切な１日の用量を容易に決定することができる。開示された癌の治療について、典型的な用量は、例えば、０．００１μｇ～１０００μｇの範囲であってよいが、この例示的な範囲より下又は上の用量は、本開示の範囲内である。１日の用量は、全体重の約０．１μｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ（例えば、約５μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、又は前述の数値のいずれか２つによって定義される範囲）、好ましくは、全体重の約０．３μｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．５μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、又は前述の数値のいずれか２つによって定義される範囲）、より好ましくは、全体重の約１μｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ（例えば、約３μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、又は前述の数値のいずれか２つによって定義される範囲）、さらにより好ましくは、１日あたり全体重の約０．５～１０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約２ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、又は前述の数値のいずれか２つによって定義される範囲（前述の数値間のいずれかの範囲を含む））であってよい。上述したように、治療される患者の定期的な評価によって治療又は予防上の有効性をモニターすることができる。数日又はそれ以上にわたる繰り返し投与については、症状に応じて、治療は、疾患の病状の望ましい阻害を生じるまで繰り返される。しかしながら、他の用量計画が有用であることもあり、本開示の範囲内である。望ましい用量は、組成物の単回ボーラス投与、組成物の複数回ボーラス投与又は組成物の連続注入投与によって送達することができる。

【0209】

抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体又はこれらの断片を含む医薬組成物は、１日１回、２回、３回又は４回で投与されてよい。組成物はまた、１日１回より少ない頻度、例えば、１週間に６回、１週間に５回、１週間に４回、１週間に３回、１週間に２回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回又は６ヶ月に１回で投与されてよい。組成物はまた、徐放性製剤、例えば、一定期間にわたり使用するために組成物を徐々に放出し、組成物のより少ない頻度、例えば、１ヶ月に１回、２～６ヶ月に１回、１年に１回又は単回投与を可能にする移植片で投与されてもよい。徐放デバイス（例えば、ペレット（ｐｅｌｌｅｔｓ）、ナノ粒子、微小粒子、ナノスフェア、ミクロスフェアなど）は、注射によって投与されてよい。

【0210】

抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）は、１日１回の用量で投与されてもよく、合計の１日用量は、１日２回、３回又は４回の分割用量で投与されてもよい。組成物はまた、１日１回より少ない頻度、例えば、１週間に６回、１週間に５回、１週間に４回、１週間に３回、１週間に２回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回又は６ヶ月に１回で投与されてよい。抗体（又はその断片）はまた、徐放性製剤、例えば、一定期間にわたり使用するために組成物を徐々に放出し、組成物のより少ない頻度、例えば、１ヶ月に１回、２～６ヶ月に１回、１年に１回又は単回投与を可能にする移植片で投与されてもよい。徐放デバイス（例えば、ペレット（ｐｅｌｌｅｔｓ）、ナノ粒子、微小粒子、ナノスフェア、ミクロスフェアなど）は、注射によって投与されるか又は様々な位置に手術により移植されてよい。

【0211】

癌治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズの縮小、進行時間、生存期間、無増悪生存期間、全奏効率、応答期間、生活の質、タンパク質の発現及び／又は活性によって評価されてよいが、それらに限定されない。例えば、放射線学的画像による応答測定を含む、治療の有効性を決定するための方法を用いることができる。

【0212】

いくつかの実施例では、治療の有効性は、式１００－（Ｔ／Ｃ×１００）を用いて算出される腫瘍増殖阻害パーセント（％ＴＧＩ）として測定され、式中、Ｔは、治療された腫瘍の平均相対腫瘍体積であり、Ｃは、治療されなかった腫瘍の平均相対腫瘍体積である。いくつかの実施例では、％ＴＧＩは、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％又は９５％以上である。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体の％ＴＧＩは、対照抗ＣＤ７３抗体の％ＴＧＩと同一又はそれ以上、例えば、約１．１倍、約１．２倍、約１．３倍、約１．４倍、約１．５倍、約１．６倍、約１．７倍、約１．８倍、約１．９倍、約２倍、約２．１倍、約２．２倍、約２．３倍、約２．４倍、約２．５倍、約２．６倍、約２．７倍（これらの数値間のいずれかの範囲を含む）、又は対照抗ＣＤ７３抗体の％ＴＧＩ約２．７倍以上である。

【0213】

医薬組成物
本発明の開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又は変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）を、投与に適するように適切な担体又は賦形剤を含む医薬組成物に製造することができる。所望の純度を有する抗体（又はその断片）を、任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ［レミングトンの薬科学］第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．編集（１９８０））と混合することにより、凍結乾燥された製剤又は水溶液の形態で抗体の適切な医薬組成物を得る。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、用いられる用量と濃度で受容体に対して無毒であり、そして緩衝液（例えば、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸）；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール、メチルパラベン又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基以下）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性重合体；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む、単糖、二糖及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。例示的な抗体製剤は、引用により本明細書に組み込まれるＷＯ ９８／５６４１８に記載されている。皮下投与に適する凍結乾燥された医薬組成物は、ＷＯ ９７／０４８０１に記載されている。このような凍結乾燥された医薬組成物は、適切な希釈剤により高いタンパク質濃度に再構成されてよく、再構成された製剤が本明細書の治療対象の哺乳動物に皮下投与されてよい。

【0214】

いくつかの実施例では、開示された医薬組成物は、非経口又は静脈内投与に適する。いくつかの実施例では、非経口投与に適する開示された医薬組成物は、所望の被験者の血液などと等張である水性及び非水性製剤であってよく、水性及び非水性減菌懸濁液は、化合物を１つ以上の器官の血液成分を標的にするために設計される懸濁システムを含んでよい。製剤は、単位用量又は多回用量の密封容器（例えばアンプル又はバイアル）にあってよい。即時注入溶液及び懸濁液は、先に説明した種類の滅菌粉末、粒子及び錠剤から製造されてよい。非経口及び静脈内製剤は、選択された注射又は送達システムのタイプと適合するように、ミネラル及び他の材料を含んでよい。

【0215】

非経口投与のための一般的な薬学的に許容される担体は、水、適切な油、塩水、右旋性グルコース（グルコース）水溶液又は関連する糖溶液、及び、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなどのグリコールを含む。非経口投与のための溶液は、好ましくは、活性成分の水溶性塩、適切な安定剤及び（必要に応じて）緩衝物質を含み、単独又は組み合わせの抗酸化剤（例えば、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム又はアスコルビン酸）は、適切な安定剤である。クエン酸塩及びＥＤＴＡナトリウムは、担体として用いられてよい。また、非経口溶液は、防腐剤、例えば塩化ベンザルコニウム、メチルパラベン又はプロピルパラベン、又はクロロブタノールを含んでよい。適切な薬物担体は、上記で引用されたＲｅｍｉｎｇｔｏｎ［レミングトン］に記載されている。

【0216】

注射可能な製剤は、従来の形式で製造され、液体溶液又は懸濁液として、又は注射前に液体に溶解又は懸濁するのに適する固体形式として、又は乳液として製造され得る。好ましくは、当該技術分野で公知の技術によれば、適切な薬学的に許容される担体及び上述した任意選択の構成成分を用いて注射用減菌懸濁液を製剤化する。

【0217】

様々な方法で非経口投与を行うことができるが、注射器、カテーテル又は類似装置を用いて本明細書に記載された製剤の非経口投与を実現することが好ましい。製剤を全身的に注射することにより、活性薬剤が実質的に血流全体を通して伝達される。

【0218】

また、製剤を局所的に標的位置に注射し、例えば、身体の特定の部分に注射して癌又は線維症を治療することが望ましい。注射による局所投与の利点は、全身が１種以上の活性薬剤（例えば、阻害剤及び／又は治療剤）に曝露することを制限又は回避することである。注意すべきものとして、本発明の文脈において、用語「局所投与」は、領域投与、例えば、該身体領域で機能する血管に送達することにより身体の一部に対する製剤を投与することを含む。局所送達は、直接的、例えば腫瘍内送達であってよい。局所送達は、ほぼ直接的、すなわち病巣内又は腹腔内送達であってもよく、つまり腫瘍又は感染部位に十分に近い領域への送達により、阻害剤が所望の薬理学的活性を示す。したがって、局所送達が望ましい場合、薬物製剤を病巣内、腫瘍内又は腹腔内に送達することが好ましい。

【0219】

いくつかの実施例では、医薬組成物は、単位剤形である。このような形態で、組成物は、適量の活性成分を含む単位剤形に分けられる。単位剤形は、離散量の製剤、例えばバイアル又はアンプル内の凍結乾燥された粉末を含むパッケージ入り製剤であってよい。

【0220】

本明細書の医薬組成物は、治療対象の具体的な適応症に必要な１種以上の活性化合物、好ましくは補体活性を有するが互いに悪い影響を及ぼさない活性化合物をさらに含んでよい。例えば、抗腫瘍剤、増殖阻害剤、細胞傷害性薬物又は化学療法剤をさらに提供することが望ましい。このような分子は、意図する目的のために有効な量で適切に組み合わせて存在する。このような他の薬剤の有効な量は、製剤に存在する抗体の量、疾患もしくは障害もしくは治療のタイプ、及び上記に記載の他の因子に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載された同じ用量及び投与経路、又は従来用いられる用量の約１～９９％で用いられる。活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合によって製造されたマイクロカプセル、例えば、それぞれコロイド薬物送達系（例えば、リポゾーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションにおけるヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン－マイクロカプセル及びポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに封入されてよい。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ［レミングトンの薬科学］、第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．編集（１９８０）に開示されている。

【0221】

徐放性製剤は製造されてよい。徐放性製剤の適切な例は、拮抗薬を含む固形疎水性重合体の半透過性基質を含み、これらの基質は、成形品の形態、例えば、フィルム又はマイクロカプセルである。徐放性基質の例は、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ－グルタミン酸及びエチル－Ｌ－グルタミン酸の共重合体、非分解性エチレン－ビニル、分解性乳酸－グリコール酸共重合体（例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（登録商標）（乳酸－グリコール酸共重合体及び酢酸ロイプロリドからなる注射可能ミクロスフェア）、及びポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシル酪酸を含む。重合体（例えば、エチレン－酢酸ビニル及び乳酸－グリコール酸）は、分子を１００日にわたり放出することができる一方で、一定のハイドロゲルは、より短い時間でタンパク質を放出する。封入された抗体は、長期間体内に残ると、３７℃で水分に曝露した結果として変性するか又は凝集し、その結果として、生物学的活性を失い、免疫原性が変化する可能性を生じうる。安定性のために、関連するメカニズムに応じて合理的な方法を考案することができる。例えば、凝集メカニズムがチオジスルフィド変換による分子間Ｓ－Ｓ結合形成であることが見出された場合、メルカプト残基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥させ、水分含量を調節し、適切な添加剤を使用し、特定の重合体基質組成物を開発することにより安定化させることができる。

【0222】

リポフェクチン（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）又はリポゾームは、本発明のポリペプチド及び抗体（又はこれらの断片）又は組成物を細胞に送達するために用いることができる。抗体断片が用いられる場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小阻害断片が好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するようにペプチド分子を設計することができる。このようなペプチドは、化学的に合成され、及び／又は組換えＤＮＡ技術によって産生される。例えば、Ｍａｒａｓｃｏ ＷＡ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ［米国科学アカデミー紀要］９０（１６）：７８８９～７８９３（１９９３）を参照する。

【0223】

活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合によって製造されたマイクロカプセル、例えば、それぞれコロイド薬物送達系（例えば、リポゾーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションにおけるヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン－マイクロカプセル及びポリ－（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに封入されてよい。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ［レミングトンの薬科学］に開示されており、前出を参照する。

【0224】

徐放性製剤は製造されてよい。徐放性製剤の適切な例は、抗体（これらの断片）を含む固形疎水性重合体の半透過性基質を含み、これらの基質は、成形品の形態、例えば、フィルム又はマイクロカプセルである。徐放性基質の例は、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ－グルタミン酸及びエチル－Ｌ－グルタミン酸の共重合体、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸共重合体（例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ ＴＭ（乳酸－グリコール酸共重合体及び酢酸ロイプロリドからなる注射可能ミクロスフェア）、及びポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシル基酪酸を含む。重合体（例えば、エチレン－酢酸ビニル及び乳酸－グリコール酸）は、分子を１００日にわたり放出することができる一方で、一定のハイドロゲルは、より短い時間でタンパク質を放出する。封入された抗体は、長期間体内に残ると、３７℃で水分に曝露した結果として変性するか又は凝集し、その結果として、生物学的活性を失い、免疫原性が変化する可能性を生じうる。安定性のために、関連するメカニズムに応じて合理的な方法を考案することができる。例えば、凝集メカニズムがチオジスルフィド変換による分子間Ｓ－Ｓ結合形成であることが見出された場合、メルカプト残基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥させ、水分含量を調節し、適切な添加剤を使用し、特定の重合体基質組成物を開発することにより安定化させることができる。

【0225】

いくつかの実施例では、製剤は、本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を、約０．５ｍｇ／ｍＬより高く、約１ｍｇ／ｍＬより高く、約２ｍｇ／ｍＬより高く、約３ｍｇ／ｍＬより高く、約４ｍｇ／ｍＬより高く、約５ｍｇ／ｍＬより高く、約６ｍｇ／ｍＬより高く、約７ｍｇ／ｍＬより高く、約８ｍｇ／ｍＬより高く、約９ｍｇ／ｍＬより高く、約１０ｍｇ／ｍＬより高く、約１１ｍｇ／ｍＬより高く、約１２ｍｇ／ｍＬより高く、約１３ｍｇ／ｍＬより高く、約１４ｍｇ／ｍＬより高く、約１５ｍｇ／ｍＬより高く、約１６ｍｇ／ｍＬより高く、約１７ｍｇ／ｍＬより高く、約１８ｍｇ／ｍＬより高く、約１９ｍｇ／ｍＬより高く、約２０ｍｇ／ｍＬより高く、約２１ｍｇ／ｍＬより高く、約２２ｍｇ／ｍＬより高く、約２３ｍｇ／ｍＬより高く、約２４ｍｇ／ｍＬより高く、約２５ｍｇ／ｍＬより高く、約２６ｍｇ／ｍＬより高く、約２７ｍｇ／ｍＬより高く、約２８ｍｇ／ｍＬより高く、約２９ｍｇ／ｍＬより高く、又は約３０ｍｇ／ｍＬより高い（これらの数値間のいずれの範囲も含む）濃度で含む。

【0226】

開示された抗体を含む製剤は、該抗体又は断片の等電点値と類似しないｐＨ（最終製剤中）を有しべきであり、例えば、製剤のｐＨが７であれば、ｐＩが８～９又はそれ以上であることが適当である可能性がある。理論に束縛されるものではないが、安定性が改善された最終製剤を提供することができ、例えば、抗体又は断片を溶液中に留まると考えられる。例えば、いくつかの実施例では、ｐＨが４．０～７．０の範囲内の開示された薬物製剤は、１ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの本開示の抗体及び１～１００ｍＭの緩衝液、並びに（ａ）０．００１％～１％の界面活性剤、（ｂ）１０ｍＭ～５００ｍＭの安定剤、（ｃ）１０ｍＭ～５００ｍＭの安定剤及び５ｍＭ～５００ｍＭの等張化剤、及び／又は（ｄ）５ｍＭ～５００ｍＭの等張化剤のうちの任意選択の１種以上を含んでよい。適切な緩衝液は、クエン酸塩、グリシン、リン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩及び重炭酸塩を含むが、それらに限定されない。例えば、ｐＨが約６の製剤は、１～５０ｍｇ／ｍＬの抗体、２０ｍＭのＬ－ヒスチジＨＣｌ、２４０ｍＭのトレハロース及び０．０２％のポリソルベート２０を含んでよい。代替可能に、ｐＨが約５．５の製剤は、１～５０ｍｇ／ｍＬの抗体、２０ｍＭのクエン酸緩衝液、２４０ｍＭのスクロース、２０ｍＭのアルギニン及び０．０２％のポリソルベート２０を含んでよい。

【0227】

いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、クエン酸塩、ＮａＣｌ、酢酸塩、コハク酸塩、グリシン、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）又は前述の組み合わせのいずれかを含む緩衝液中において、（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬより高く、約１ｍｇ／ｍＬより高く、約５ｍｇ／ｍＬより高く、約１０ｍｇ／ｍＬより高く、約１５ｍｇ／ｍＬより高く、約２０ｍｇ／ｍＬより高く、又は約２５ｍｇ／ｍＬより高い（これらの数値間のいずれの範囲も含む）濃度で）製剤化される。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体は、１００ｍＭ～１５０ｍＭのグリシンを含む緩衝液中において、（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬより高く、約１ｍｇ／ｍＬより高く、約５ｍｇ／ｍＬより高く、約１０ｍｇ／ｍＬより高く、約１５ｍｇ／ｍＬより高く、約２０ｍｇ／ｍＬより高く、又は約２５ｍｇ／ｍＬより高い（これらの数値間のいずれの範囲も含む）濃度で）製剤化される。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体は、約５０ｍＭ～約１００ｍＭのＮａＣｌを含む緩衝液中において製剤化される。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、約１０ｍＭ～約５０ｍＭの酢酸塩を含む緩衝液中において、（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬより高く、約１ｍｇ／ｍＬより高く、約５ｍｇ／ｍＬより高く、約１０ｍｇ／ｍＬより高く、約１５ｍｇ／ｍＬより高く、約２０ｍｇ／ｍＬより高く、又は約２５ｍｇ／ｍＬより高い（これらの数値間のいずれの範囲も含む）濃度で）製剤化される。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体は、約１０ｍＭ～約５０ｍＭのコハク酸塩を含む緩衝液中において製剤化される。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、約０．００５％～約０．０２％のポリソルベート８０を含む緩衝液中において、（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬより高く、約１ｍｇ／ｍＬより高く、約５ｍｇ／ｍＬより高く、約１０ｍｇ／ｍＬより高く、約１５ｍｇ／ｍＬより高く、約２０ｍｇ／ｍＬより高く、又は約２５ｍｇ／ｍＬより高い（これらの数値間のいずれの範囲も含む）濃度で）製剤化される。いくつかの実施例では、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、約５．１～５．６の緩衝ｐＨを提供するように、適切な緩衝液中において製剤化される。例えば、抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体は、１０ｍＭのクエン酸、１００ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのグリシン及び０．０１％のポリソルベート８０を含む緩衝液中において製剤化され、該製剤は、ｐＨ＝５．５である。

【0228】

いくつかの実施例では、本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬより高く、約１ｍｇ／ｍＬより高く、約５ｍｇ／ｍＬより高く、約１０ｍｇ／ｍＬより高く、約１５ｍｇ／ｍＬより高く、約２０ｍｇ／ｍＬより高く、又は約２５ｍｇ／ｍＬより高い（これらの数値間のいずれの範囲も含む）濃度で）含む製剤（例えば、緩衝液（該緩衝液は１０ｍＭのクエン酸、１００ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのグリシン及び０．０１％のポリソルベート８０を含む）を含む製剤であり、該製剤は、ｐＨ＝５．５である）は、室温（例えば、約２０～２５℃）で約０．５週間、１．０週間、１．５週間、２．０週間、２．５週間、３．５週間、４．０週間、４．５週間又は５．０週間（これらの数値間のいずれの範囲も含む）で安定である。いくつかの実施例では、本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を（例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬより高く、約１ｍｇ／ｍＬより高く、約５ｍｇ／ｍＬより高く、約１０ｍｇ／ｍＬより高く、約１５ｍｇ／ｍＬより高く、約２０ｍｇ／ｍＬより高く、又は約２５ｍｇ／ｍＬより高い（これらの数値間のいずれの範囲も含む）濃度で）含む製剤（例えば、緩衝液（該緩衝液は１０ｍＭのクエン酸、１００ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのグリシン及び０．０１％のポリソルベート８０を含む）を含む製剤であり、該製剤は、ｐＨ＝５．５である）は、加速的な条件下で（例えば、約３７℃で保存されて）約０．５週間、１．０週間、１．５週間、２．０週間、２．５週間、３．５週間、４．０週間、４．５週間又は５．０週間（これらの数値間のいずれの範囲も含む）で安定である。

【0229】

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、物理化学的不安定性に対応する断片化及び凝集の可能性を検出するために、タンパク質安定化研究で周知であり、かつ広く用いられている方法である。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤は、３７℃で１週間後に、ＳＥＣを用いて測定されると、最初の高分子量種％に対して約１．６％、１．４％、１．２％、１．０％、０．８％、０．６％、０．４％、０．２％又は０．１％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）未満の高分子量種（ＨＭＷＳ）の増加を示す。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体を含む製剤は、３７℃で２週間後に、ＳＥＣを用いて測定されると、最初の高分子量種％に対して約２．０％、１．８％、１．６％、１．４％、１．２％、１．０％、０．８％、０．６％、０．４％、０．２％又は０．１％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）未満の高分子量種の増加を示す。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤は、３７℃で４週間後に、ＳＥＣを用いて測定されると、最初の高分子量種％に対して約３．３％、３．２％、３．１％、３．０％、２．９％、２．８％、２．７％、２．６％、２．５％、２．４％、２．２％、２．０％、１．８％、１．６％、１．４％、１．２％、１．０％、０．８％、０．６％、０．４％、０．２％又は０．１％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）未満の高分子量種の増加を示す。

【0230】

いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤は、３７℃で１週間後に、ＳＥＣを用いて測定されると、最初の低分子量種％に対して約１．６％、１．４％、１．２％、１．０％、０．８％、０．６％、０．４％、０．２％又は０．１％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）未満の低分子量種（ＬＭＷＳ）の増加を示す。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤は、３７℃で２週間後に、ＳＥＣを用いて測定されると、最初の低分子量種％に対して約２．０％、１．８％、１．６％、１．４％、１．２％、１．０％、０．８％、０．６％、０．４％、０．２％又は０．１％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）未満の低分子量種の増加を示す。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤は、３７℃で４週間後に、ＳＥＣを用いて測定されると、最初の低分子量種％に対して約２．４％、２．２％、２．０％、１．８％、１．６％、１．４％、１．２％、１．０％、０．８％、０．６％、０．４％、０．２％又は０．１％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）未満の低分子量種の増加を示す。

【0231】

いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤は、３７℃で１週間後に、ＳＥＣを用いて測定されると、最初の単量体％に対して約０．２％、０．４％、０．６％、０．８％、０．９％、１．０％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２．０％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．５％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％、３．０％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％又は３．５％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以下の単量体の増加を示す。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤は、３７℃で２週間後に、ＳＥＣを用いて測定されると、最初の単量体％に対して約０．２％、０．４％、０．６％、０．８％、０．９％、１．０％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２．０％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．５％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％、３．０％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％又は３．５％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以下の単量体の増加を示す。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤は、３７℃で２週間後に、ＳＥＣを用いて測定されると、最初の単量体％に対して約０．２％、０．４％、０．６％、０．８％、０．９％、１．０％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２．０％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．５％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％、３．０％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％又は３．５％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以下の単量体の増加を示す。

【0232】

陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）は、脱アミド化又は酸化などのタンパク質分解現象を検出するために、周知であり、かつ広く用いられる方法である（Ｍｏｏｒｈｏｕｓｅ ＫＧ．ら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．［医薬学と生物医学分析雑誌］１６（４）：５９３～６０３（１９９７））。分解産物は、典型的に、酸性又は塩基性物質と呼ばれる。酸性物質は、ＣＥＸの主要ピークより早期に溶離する変異体であり、塩基性物質は、ＣＥＸの主要ピークより遅れて溶離する変異体である。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤の酸性ピーク画分は、ＣＥＸを用いて測定されると、３７℃で１週間後に、総タンパク質の約７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％又は１５％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以下である。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体を含む製剤の酸性ピーク画分は、ＣＥＸを用いて測定されると、３７℃で２週間後に、総タンパク質の約８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％又は１８％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以下である。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を含む製剤の酸性ピーク画分は、ＣＥＸを用いて測定されると、３７℃で２週間後に、総タンパク質の約８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％又は２７％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以下である。

【0233】

いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を含む製剤の塩基性ピーク画分は、ＣＥＸを用いて測定されると、３７℃で１週間後に、総タンパク質の約３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％又は４６％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以下である。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を含む製剤の塩基性ピーク画分は、ＣＥＸを用いて測定されると、３７℃で２週間後に、総タンパク質の約３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％又は４６％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以下である。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を含む製剤の塩基性ピーク画分は、ＣＥＸを用いて測定されると、３７℃で４週間後に、総タンパク質の約３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％又は４６％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以下である。

【0234】

いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を含む製剤の主要ピーク画分は、ＣＥＸを用いて測定されると、３７℃で１週間後に、総タンパク質の約約３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％又は４６％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以上である。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を含む製剤の塩基性ピーク画分は、ＣＥＸを用いて測定されると、３７℃で２週間後に、総タンパク質の約約３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％又は４６％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以上である。いくつかの実施例では、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は２５ｍｇ／ｍＬの本明細書に記載された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を含む製剤の塩基性ピーク画分は、ＣＥＸを用いて測定されると、３７℃で４週間後に、総タンパク質の約約３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％又は４６％（これらの数値間のいずれの範囲も含む）以上である。

【0235】

インビボ投与で用いられる製剤は、滅菌でなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜に通す濾過により容易に行われる。

【0236】

抗ＣＤ７３抗体及びその変異体／突然変異体を用いる診断及びイメージング方法
ＣＤ７３に特異的に結合する標識された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体、断片、並びにその誘導体及び類似体は、ＣＤ７３の発現、異常な発現及び／又は活性に関連する疾患及び／又は障害を検出し、診断し、又はモニターするための診断目的で用いることができる。例えば、本明細書で開示された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又はこれらの断片）は、インサイチュ、インビボ、エクスビボ及びインビトロでの診断アッセイ又はイメージングアッセイに用いることができる。ＣＤ７３の発現を検出するための方法は、（ａ）本開示の１種以上の抗体を用いて個体の細胞（例えば、組織）又は体液におけるポリペプチドの発現を測定することと、（ｂ）該遺伝子発現レベルを標準遺伝子発現レベルと比較し、標準発現レベルと比較して測定した遺伝子発現レベルにおける増加又は減少が異常な発現を示すことと、を含む。

【0237】

本明細書で提供されるさらなる実施例は、動物（例えば、ヒトなどの哺乳動物）におけるＣＤ７３の発現又は異常な発現に関連する疾患又は障害の診断方法を含む。この方法は、哺乳動物においてＣＤ７３分子を検出することを含む。いくつかの実施例では、診断は、（ａ）有効な量の標識された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を哺乳動物に投与することと、（ｂ）標識された抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を、ＣＤ７３分子が発現される被験者の部位に優先的に集めるために（そして結合していない標識分子をバックグラウンドレベルまで除去するために）投与後一定期間待つことと、（ｃ）バックグラウンドレベルを決定することと、（ｄ）標識分子を被験者において検出することとを含み、バックグラウンドレベルを超える標識分子の検出は、被験者がＣＤ７３の発現又は異常な発現に関連する特定の疾患又は障害に罹っていることを示す。バックグラウンドレベルは、検出された標識分子の量と、特定の系について過去に決定された標準値とを比較することを含む、様々な方法によって決定することができる。

【0238】

本明細書で提供される抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）は、当業者に公知の従来の免疫組織法を用いて生物学的試料におけるタンパク質レベルを測定するために用いることができる（例えば、Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．［細胞生物学雑誌］１０１：９７６～９８５（１９８５）、Ｊａｌｋａｎｅｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．［細胞生物学雑誌］１０５：３０８７～３０９６（１９８７）を参照）。タンパク質遺伝子発現を検出するために有用な他の抗体に基づく方法は、免疫アッセイ、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及びラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を含む。適切な抗体アッセイ標識は、当該技術分野で公知であり、酵素標識（例えば、グルコースオキシダーゼ）；放射性同位元素、例えば、ヨウ素（^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２１Ｉ）、炭素（^１４Ｃ）、硫黄（^３５Ｓ）、トリチウム（^３Ｈ）、インジウム（^１１５ｍＩｎ、^１１３ｍＩｎ、^１１２Ｉｎ、^１１１Ｉｎ）、テクネチウム（^９９Ｔｃ、^９９ｍＴｃ）、タリウム（^２０１Ｔｉ）、ガリウム（^６８Ｇａ、^６７Ｇａ）、パラジウム（^１０３Ｐｄ）、モリブデン（^９９Ｍｏ）、キセノン（^１３３Ｘｅ）、フッ素（^１８Ｆ）、サマリウム（^１５３Ｓｍ）、ルテチウム（^１７７Ｌｕ）、ガドリニウム（^１５９Ｇｄ）、プロメチウム（^１４９Ｐｍ）、ランタン（^１４０Ｌａ）、イッテルビウム（^１７５Ｙｂ）、ホルミウム（^１６６Ｈｏ）、イットリウム（^９０Ｙ）、スカンジウム（^４７Ｓｃ）、レニウム（^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ）、プラセオジム（^１４２Ｐｒ）、ロジウム（^１０５Ｒｈ）、ルテニウム（^９７Ｒｕ）；ルミノール；及び蛍光標識（例えば、フルオレセイン、ローダミン及びビオチン）を含む。

【0239】

当該技術分野で公知の技術は、本明細書で提供される標識された抗体（又はこれらの断片）に適用されてよい。このような技術は、二官能性抱合剤の使用（例えば、米国特許第５７５６０６５号、第５７１４６３１号、第５６９６２３９号、第５６５２３６１号、第５５０５９３１号、第５４８９４２５号、第５４３５９９０号、第５４２８１３９号、第５３４２６０４号、第５２７４１１９号、第４９９４５６０号、及び第５８０８００３号を参照）を含むが、それらに限定されない。

【0240】

代替可能に又は追加的に、細胞における、ＣＤ７３をコードする核酸又はｍＲＮＡのレベルを測定することができ、例えば、ＣＤ７３をコードする核酸又はその相補性配列に対応する核酸に基づくプローブを用いる蛍光インサイチュハイブリダイゼーション、（ＦＩＳＨ、１９９８年１０月に公開されたＷＯ ９８／４５４７９を参照）、サザンブロッティング、ノーザンブロッティング又はポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）技術、例えば、リアルタイム定量ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）である。また、例えば、抗体に基づくアッセイ（例えば、１９９０年６月１２日に発行された米国特許第４９３３２９４号、１９９１年４月１８日に発行されたＷＯ ９１／０５２６４、１９９５年３月２８日に発行された米国特許第５４０１６３８号、及びＳｉａｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ［免疫方法雑誌］１３２：７３～８０（１９９０）も参照）を用いて、生体液（例えば、血清）におけるシェッド抗原を測定することによってＣＤ７３の過剰発現を研究することができる。上記アッセイの他に、様々なインビボ及びエクスビボアッセイが当業者に利用可能である。例えば、哺乳動物の体内の細胞を、検出可能な標識（例えば、放射性同位元素）で任意選択に標識されている抗体に曝露することができ、そして例えば、放射能について外部走査することによって、又は抗体に以前曝露された哺乳動物から取得した試料（例えば、バイオプシー又は他の生物学的試料）を分析することによって抗体の細胞への結合を評価することができる。

【0241】

製品及びキット
様々な実施例では、本発明は、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物、並びに（ａ）癌を治療する既知の少なくとも１種の薬剤、又は（ｂ）癌を治療するための説明書を含むキットに関する。

【0242】

別の実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、癌を治療する既知の少なくとも１種の薬剤と共に製剤化される。

【0243】

また別の実施例では、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物は、癌を治療する既知の少なくとも１種の薬剤と共に包装される。

【0244】

別の実施例では、癌を治療する既知の１種の薬剤は、ホルモン治療剤である。また別の実施例では、ホルモン治療剤は、ロイプロリド、タモキシフェン、ラロキシフェン、メゲストロール、フルベストラント、トリプテレリン（ｔｒｉｐｔｏｒｅｌｉｎ）、メドロキシプロゲステロン、レトロゾール、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、エキセメスタン、ビカルタミド、ゴセレリン、シソーラス（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）、フルオキシメステロン、エストラムスチン、フルタミド、トレミフェン、デガレリクス（ｄｅｇａｒｅｌｉｘ）、ニルタミド、アバレリクス（ａｂａｒｅｌｉｘ）及びテストラクトン、又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物又は多形体からなる群から選択される１種以上である。

【0245】

別の実施例では、癌を治療する既知の少なくとも１種の薬剤は、化学療法剤である。また別の実施例では、該化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質剤、抗腫瘍抗生物質剤、有糸分裂阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤又は他の化学療法剤からなる群から選択される１種以上である。

【0246】

別の実施例では、該抗腫瘍抗生物質剤は、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、アクチノマイシンＤ、エピルビシン、イダルビシン、プリカマイシン、マイトマイシン、ペントスタチン及びバルルビシン（ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物又は多形体からなる群から選択される１種以上である。

【0247】

別の実施例では、該代謝拮抗物質剤は、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、カペシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、ペメトレキセド、フルダラビン、ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）、クラドリビン、クロファラビン、シタラビン、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、プララトレキサート（ｐｒａｌａｔｒｅｘａｔｅ）、フロクスウリジン、メトトレキサート及びチオグアニン、又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物又は多形体からなる群から選択される１種以上である。

【0248】

別の実施例では、該アルキル化剤は、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン、ブスルファン、ロムスチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、イホスファミド、メクロレタミン、テモゾロミド、チオテパ、ベンダムスチン（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）及びストレプトゾシン、又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物又は多形体からなる群から選択される１種以上である。

【0249】

別の実施例では、該有糸分裂阻害剤は、イリノテカン、ノギテカン、ルビテカン（ｒｕｂｉｔｅｃａｎ）、カバジタキセル（ｃａｂａｚｉｔａｘｅｌ）、ドセタキセル、パクリタキセル、エトポシド（ｅｔｏｐｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、イキサベピロン、ビノレルビン、ビンブラスチン及びテニポシド、又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物又は多形体からなる群から選択される１種以上である。

【0250】

別の実施例では、該ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムス、シロリムス（ｓｉｒｏｌｉｕｍｕｓ）及びテムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、又はその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物又は多形体からなる群から選択される１種以上である。

【0251】

別の実施例では、キットは、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物と手術との組み合わせを示す説明書をさらに含む。また別の実施例では、キットは、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物と手術との組み合わせを示す説明書をさらに含み、この説明書は、少なくとも１種の化合物を投与する前に手術を行うことを示す。また別の実施例では、キットは、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物と手術との組み合わせを示す説明書をさらに含み、この説明書は、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を投与した後に手術を行うことを示す。さらに別の実施例では、キットは、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物と手術との組み合わせを示す説明書をさらに含み、この説明書は、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は医薬組成物を投与した後に手術を行うことを示し、そしてこの説明書は、術前の腫瘍縮小を実現するために、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を投与することを示す。また別の実施例では、キットは、化合物と手術との組み合わせを示す説明書をさらに含み、この説明書は、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を投与した後に手術を行うことを示し、そしてこの説明書は、開示された抗ＣＤ７３抗体、その変異体、突然変異体及び／又は断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物を投与するほぼ同時に手術を行うことを示す。

【0252】

別の実施例では、キットは、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は本明細書で提供される医薬組成物と放射治療との組み合わせを示す説明書をさらに含む。また別の実施例では、キットは、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物と放射治療との組み合わせを示す説明書をさらに含み、この説明書は、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物を投与する前に放射治療を行うことを示す。また別の実施例では、キットは、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物と放射治療との組み合わせを示す説明書をさらに含み、この説明書は、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物を投与するステップの後に放射治療を行うことを示す。さらに別の実施例では、キットは、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物と放射治療との組み合わせを示す説明書をさらに含み、この説明書は、開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物を投与するステップとほぼ同時に放射治療を行うことを示す。

【0253】

別の実施例では、キットは、１種以上の用量の剤形をさらに含み、各用量には、治療上有効な量の開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物、並びに少なくとも１種の薬剤が含まれる。また別の実施例では、キットは、１種以上の用量の剤形をさらに含み、各用量には、治療上有効な量の開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物、並びに少なくとも１種の薬剤が含まれ、そして各用量の開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物は、癌を治療する既知の少なくとも１種の薬剤と共に製剤化される。さらに別の実施例では、キットは、１種以上の用量の剤形をさらに含み、各用量には、治療上有効な量の開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物、並びに少なくとも１種の薬剤が含まれ、そして各用量の開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物は、癌を治療する既知の少なくとも１種の薬剤と共に包装される。

【0254】

別の実施例では、キットは、１種以上の用量の剤形をさらに含み、各用量には、治療上有効な量の開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物（静脈内投与のために製剤化される）、並びに少なくとも１種の薬剤（経口投与及び／又は静脈内投与のために製剤化される）が含まれる。また別の実施例では、キットは、１種以上の用量の剤形をさらに含み、各用量には、治療上有効な量の開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物（静脈内投与のために製剤化される）、並びに少なくとも１種の薬剤（経口投与のために製剤化される）が含まれる。さらに別の実施例では、キットは、１種以上の用量の剤形をさらに含み、各用量には、治療上有効な量の開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物（静脈内投与のために製剤化される）、並びに少なくとも１種の薬剤（静脈内投与のために製剤化される）が含まれる。

【0255】

開示された抗ＣＤ７３抗体、変異体、突然変異体及び／又はこれらの断片、及び／又は医薬組成物は、２種以上の構成成分（活性又は非活性成分、担体、希釈剤などであり得る）と、かつ患者又は薬物を患者に投与する人によって実際の剤形を製造するために用いられる説明書とを示すキットとして容易に提供することができる。このようなキットは、その中に含まれる全ての必要な材料及び成分を有してよく、或いはこのキットは、患者又は薬物を患者に投与する人によって独立して取得しなければならない材料又は構成成分を使用又は製造するために用いられる説明書を含んでよい。別の実施例では、キットは、患者への単位用量の投与に役立つ任意選択の構成成分、例えば、粉末形態を再構成するためのバイアル、注射用の注射器、カスタマイズされたＩＶ送達系、インヘイラーなどを含んでよい。また、キットは、組成物を製造と投与するための説明書を含んでよい。該キットは、１つの被験者に用いられる単回使用単位用量として製造されてよく、特定の被験者に用いられる数回使用単位用量（一定用量で又は療法の進展に伴って単一化合物の効力が変化することができる）として製造されてよく、或いは該キットは、複数の患者への投与に適する数回投与用量（「バルク包装」）を含んでよい。キットの構成成分は、ボール箱、ブリスターパック、ボトル、チューブなどに入られてよい。

【0256】

別の実施例では、開示されたキットは、毎日投与計画に応じて包装されてよい（例えば、カード型包装（ｐａｃｋａｇｅｄ ｏｎ ｃａｒｄｓ）、投与カード型包装（ｐａｃｋａｇｅｄ ｗｉｔｈ ｄｏｓｉｎｇ ｃａｒｄｓ）、ブリスター型包装又はブロー成形プラスチック型包装など）。このような包装により、製品の販売を促進し、かつ薬物計画に対する患者の順守性を向上させる。このような包装により、患者の困惑を減らすことができる。本開示は、使用説明書をさらに含むキットを特徴とする。

【0257】

別の実施例では、本発明は、本発明の医薬組成物の１種以上の成分が充填された１つ以上の容器を含む、薬物包装又はキットをさらに提供する。こような容器に関連するのは、薬物又は生物製品の製造、使用又は販売を管理する政府機関によって規定された形態のラベルであってよく、該ラベルは、製造、使用又は販売機関が人への投与を許可することを反映するものである。

【0258】

様々な実施例では、開示されたキットは、他の構成成分と共に包装され、共に製剤化され、及び／又は共に送達される化合物及び／又は製品をさらに含んでよい。例えば、薬物製造業者、薬物再販売業者、医師、調剤薬局（ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ ｓｈｏｐ）又は調剤師は、開示された化合物及び／又は製品、及び患者に送達される別の構成成分を含むキットを提供することができる。

【0259】

開示されたキットは、開示された製造方法、開示された用途又は治療方法及び／又は開示された組成物と共に使用することができることが考慮される。

【0260】

様々な目的のキット、例えば、任意選択に製品と組み合わせて患者においてＣＤ７３を単離又は検出するためのキットをさらに提供する。ＣＤ７３を単離と精製するために、キットは、ビーズ（例えば、ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ）とカップリングする、本明細書で提供される抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を含んでよい。例えば、ＥＬＩＳＡ又はウエスタンブロッティングにおいてＣＤ７３をインビトロで検出と定量するための、抗体（又はその断片）を含むキットを提供することができる。製品と同様に、キットは、容器と、容器上の又は容器に関連するラベル又は添付文書を含む。例えば、容器には、少なくとも１種の本明細書で提供される抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）を含む組成物が格納される。含まれ得る別の容器は、例えば、希釈剤及び緩衝液、対照抗体を格納する。ラベル及び添付文書は、組成物の記載及び所期のインビトロ又は診断用途のための説明書を提供することができる。

【0261】

本明細書で提供される別の実施例は、開示された癌を治療するための材料を含む製品である。製品は、容器と、該容器上の又は容器に関連するラベル又は添付文書を含んでよい。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、注射器などを含む。容器は、様々な材料、例えばガラス及びプラチックで製造されてよい。一般的には、容器は、症状を効果的に治療する組成物を格納し、そして減菌アクセスポートを有してよい（例えば、容器は、静脈内溶液袋、又は皮下注射針が突き刺し可能な栓を有するバイアルであってよい）。組成物うちの少なくとも１種の活性薬剤は、本明細書で提供される抗ＣＤ７３抗体及び／又はその変異体もしくは突然変異体（又は断片）である。ラベル又は添付文書は、組成物が特定の症状を治療するために用いられることを示す。ラベル又は添付文書は、患者に抗体組成物を投与する説明書をさらに含む。本明細書に記載された併用療法の製品及びキットも考慮される。

【0262】

添付文書は、このような治療製品の使用に関連する適応症、用法、用量、投与、禁忌及び／又は警告についての情報を含む治療製品の販売用包装に一般的に含まれる説明書を意味する。１つの実施例では、添付文書は、組成物が癌（例えば、頭頸部癌、肺癌又は結腸直腸癌）を治療するために用いられることを示す。

【0263】

さらに、製品には、薬学的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸塩緩衝生理食塩水、リンガー溶液及びデキストロース溶液を含む第２の容器がさらに含まれてよい。他の緩衝液、希釈剤、フィルター、ニードル及び注射器を含む、販売及びユーザーの立場から望まれる他の材料がさらに含まれてよい。

【0264】

現在、本発明の態様を全体的に説明し、以下の実施例は本発明のいくつかの他の態様を説明する。以下の実施例及び対応するテキスト及び図面を参照して本発明の態様を説明したが、本発明の態様をこの説明に限定することを意図していない。逆に、本発明の精神及び範囲内に含まれる全ての代替物、修正及び等価物をカバーすることを意図する。

【0265】

実施例
以下の実施例は、本明細書が特許請求している化合物、組成物、製品、装置及び／又は方法の完全な開示及び説明をどのように製造し評価するかを当業者に提供するものであり、単に本発明の例示であり、本発明の発明の範囲を限定することを意図するものではない。数字（例えば量、温度など）の正確性をできるだけ確保するが、いくつかの誤差及び偏差を考慮すべきである。また指示しない限り、部数は重量部であり、温度は℃又は環境温度であり、そして圧力は大気圧であるか又は大気圧に近い。

【表6】

【実施例1】

【0266】

抗ＣＤ７３抗体及び変異体の作製
ヒトＣＤ７３－ＥＣＤ／Ｈｉｓを用いてヒトＦａｂナイーブファージディスプレイライブラリーをパニングした。ストレプトアビジンでコーティングされた磁性Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｍ－２８０（サーモフィッシャーサイエンティフィック社（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）＃１１２０５Ｄ）にカップリングされたビオチン化されたｈｕＣＤ７３－ＥＣＤ／Ｈｉｓを用いて４回パニングした後、ＣＤ７３結合活性及び固定化されたＣＤ７３酵素遮断活性を有する５２個の可能なクローンを選択し、かつ４種の配列（Ｎ１～Ｎ４）を決定した。その後に、選択された可変配列を、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ主鎖のＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ突然変異体にクローニングすることにより、インビトロ機能分析（ＣＤ７３結合、ＣＤ７３酵素遮断活性、抗体媒介によるＣＤ７３内在化）に用いられる全長抗体とした。さらにＮ１、Ｎ２及びＮ４のリードをヒト野生型又はＣ２１９Ｓ突然変異体ＩｇＧ２ Ｆｃ主鎖にクローニングした。インビトロ有効性及びインビボ有効性試験（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植モデル）に基づいて、以下の親和性成熟のためにＮ１及びＮ４を選択し、かつｗｔＩｇＧ２主鎖を決定した。

【0267】

抗体リードＮ１及びリードＮ４を、インビトロファージディスプレイに基づく親和性成熟実験に用い、改善されたＣＤ７３結合活性性能及びＣＤ７３酵素遮断活性性能を有する別のクローンを生成した。ＰＣＲを介してリードＮ１のＣＤＲ－Ｌ１／ＣＤＲ－Ｌ３／ＣＤＲ－Ｈ３（３つのＣＤＲに集中する）核酸ライブラリーを生成し、ファージディスプレイベクターにクローニングし、かつ大腸菌ＴＧ１細胞に形質転換して、ファージライブラリーを作成した。ビオチン化されたｈｕＣＤ７３－ＥＣＤ／Ｈｉｓを用いて３回パニングした後、結合アッセイ及び酵素遮断アッセイを介して異なる配列を有する１５個のＦａｂクローンをスクリーニングし、そして２つのＦａｂ（Ｎ１＃２及びＮ１＃９）がより高い有効性を有することを見出した。リードＮ４の親和性成熟について、まずＣＤＲ－Ｌ３／ＣＤＲ－Ｈ１／ＣＤＲ－Ｈ３核酸ライブラリーを生成してファージライブラリを作成した。３回パニングした後、結合アッセイ及び酵素遮断アッセイを介して異なる配列を有する６つのＦａｂクローン（Ｎ４＃１～Ｎ４＃６）をスクリーニングした。その後に、クローンＮ４＃１、Ｎ４＃４、Ｎ４＃５及びＮ４＃６のＣＤＲ－Ｌ１／ＣＤＲ－Ｌ２／ＣＤＲ－Ｈ２核酸ライブラリーを作成してファージライブラリを作成した。３回パニングした後、より良好な結合活性及び酵素遮断活性を有するクローンＮ４＃４－３、Ｎ４＃６－２、Ｎ４＃６－３、Ｎ４＃６－４、Ｎ４＃６－５を選択した。

【0268】

親和性成熟後に、Ｎ１＃２、Ｎ１＃９、Ｎ４＃５、Ｎ４＃６、Ｎ４＃４－３、Ｎ４＃６－２、Ｎ４＃６－３、Ｎ４＃６－４、Ｎ４＃６－５をＩｇＧ２ Ｆｃ主鎖にクローニングすることにより、全長抗体とし、インビトロ有効性試験（ＣＤ７３タンパク質結合ＥＬＩＳＡ、ＣＤ７３を発現する腫瘍細胞結合、固定化及び細胞ＣＤ７３酵素遮断、抗体媒介によるＣＤ７３内在化）及びインビボ有効性試験（ＮＣＩ－Ｈ２９２異種移植モデル）を行い、クローンＮ１＃２、Ｎ１＃９、Ｎ４＃６－３、Ｎ４＃６－４を選択した。配列アライメント及びＣＭＣ安定性に基づいて、この４つのクローンを修飾することによりＮ１＃２－Ｐ、Ｎ１＃９－ＰＨ、Ｎ４＃６－３－Ｐ、Ｎ４＃６－４－Ｐを生成した。Ｎ１＃９－ＰＨは、より高い可溶性ＣＤ７３酵素遮断有効性を有し、Ｎ４＃６－３－Ｐ、Ｎ４＃６－４－Ｐは、表面ＣＤ７３内在化を誘導することができる。Ｎ１＃９－ＰＨ、Ｎ４＃６－３－Ｐ、Ｎ４＃６－４－Ｐは、ＡＭＰ媒介によるＴ細胞阻害を軽減することができ、かつインビボでＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植に対する抗腫瘍活性を有する。また、Ｎ４＃６－４－Ｐは、異種移植腫瘍においてＣＤ７３の下流調節を誘導し、ＣＤ７３酵素活性を遮断することができ、かつＮＣＩ－Ｈ２９２異種移植モデルにおいて他の抗ＣＤ７３抗体より高い抗腫瘍活性を有する。

【0269】

ナイーブファージのパニングにより選択された抗ＣＤ７３リードＮ１、Ｎ２及びＮ４の軽鎖及び重鎖可変領域のアミノ酸配列アライメントは、それぞれ図１Ａ及び図１Ｂに示されている。親和性成熟したＮ１及びＮ４変異体由来の軽鎖可変領域のアミノ酸配列アライメントは図９に示されており、ここでＫａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識し、そして親和性成熟したＮ１及びＮ４変異体由来の重鎖可変領域のアミノ酸配列アライメントは図１０に示されており、ここでＫａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識する。次に、これらの選択された可変配列を、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃの主鎖にクローニングすることにより、全長抗体とした。以下のヒト抗体の軽鎖定常領域及び重鎖定常領域のアミノ酸を選択することができる（本明細書の軽重鎖可変領域のアミノ酸配列を制限するものではない）。
ｗｔＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２）
ｍｔＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３）
ｔｍｔＩｇＧ１アイソタイプ重鎖定常領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）
軽鎖定常領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５）
Ｎ１＃２－Ｐ重鎖（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６）
Ｎ１＃９－ＰＨ重鎖（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７）
Ｎ４＃６－３－Ｐ＿重鎖（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８）
Ｎ４＃６－４－Ｐ重鎖（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９）。

【0270】

図１４は、Ｎ１及びＮ４のトップ変異体の軽鎖のアミノ酸配列アライメントを示しており、ここでＫａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識し、そして図１５は、Ｎ１及びＮ４のトップ変異体の重鎖可変領域のアミノ酸配列アライメントを示しており、ここでＫａｂａｔに定義されたＣＤＲ（相補性決定領域）に下線を加えて太字で標識する。次に、これらの配列を、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃの主鎖にクローニングすることにより、全長抗体とした。

【実施例2】

【0271】

選択された抗体のＣＤ７３結合能力
ＥＬＩＳＡアッセイを行って、選択された抗体と組換えヒトＣＤ７３－ＥＣＤ／Ｈｉｓタンパク質との結合を評価する。ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｄ（又はＦｃ）抗体を、ウェル当たりの３０ｎｇで４℃で９６ウェルＥＩＡマイクロプレートに一晩コーティングした。（ＰＢＳ中の）５％スキムミルクで遮断した後に、連続希釈された抗体を加え、室温で１時間インキュベートした。結合していない抗体を除去し、ウェルを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１×ＰＢＳＴで３回洗浄した。ビオチンで標識されたＣＤ７３－ＥＣＤ／Ｈｉｓタンパク質をウェル当たりの３０ｎｇでウェルに加え、室温でさらに１時間インキュベートした。結合していないビオチンで標識されたＣＤ７３－ＥＣＤ／Ｈｉｓを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１×ＰＢＳＴで３回洗浄した。その後にアビジン－ＨＲＰをウェルに加え、室温で３０分間インキュベートした。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１×ＰＢＳＴで３回洗浄することにより過剰の第２の抗体を除去した。洗浄した後、プレートをＴＭＢで発色させた。マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの波長での吸光度を読み取った。

【0272】

ＥＬＩＳＡアッセイにより選択された抗ＣＤ７３抗体は組換えヒトＣＤ７３タンパク質に結合し、かつ結合データは図２Ａに示されている。

【0273】

ＭＤＡ－ＭＢ－２３１又はＮＣＩ－Ｈ２９２細胞を、連続希釈された抗体と共に、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳを含むＰＢＳ）において４℃で３０分間インキュベートすることにより抗ＣＤ７３抗体の全細胞結合能力を試験した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＦＩＴＣで標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（又はＰＥで標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ）を用いて４℃で結合をさらに３０分間検出した。染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）により、抗体と細胞表面との結合を測定した。Ｃｙｔｏｍｉｃｓ ＦＣ５００又はＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（ベックマン・コールター社（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｎｃ．））を用いてフローサイトメトリー分析を行った。図２Ｂ及び図２Ｃは、選択された抗ＣＤ７３抗体がＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒト乳癌）細胞（図２Ｂ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２（ヒト肺粘液性類表皮癌）細胞（図２Ｃ）に結合したことを示している。

【0274】

これらの研究において、抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）をそれぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。これらのデータは、全ての選択された抗ＣＤ７３抗体がヒトＣＤ７３組換えタンパク質及びＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞に結合することができることを表明する。

【0275】

図１１Ａ～１１Ｂは、さらに、Ｎ１、Ｎ４変異体とＣＤ７３との結合を示している。選択された変異体とＣＤ７３を発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１１Ａ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２（図１１Ｂ）の細胞との結合をフローサイトメトリー法により試験した。ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。これらのデータは以下を表明する。親和性成熟後に、全てのＮ１及びＮ４変異体がいずれもＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞に結合することができる。この２種類の細胞株において、Ｎ４変異体は、Ｎ１変異体より優れたＣＤ７３結合能力を有する。全細胞結合能力の順位付けは、Ｎ４＃５、Ｎ４＃６－４、Ｎ４＃６－５＞Ｎ４＃６－２＞Ｎ４＃４－３、Ｎ４＃６、Ｎ４＃６－３、Ｎ１＃９＞Ｎ１＃２である。

【0276】

図１６Ａ～１６Ｃは、Ｎ１及びＮ４トップ変異体のＣＤ７３結合能力を示す。ＥＬＩＳＡ法により抗ＣＤ７３抗体と組換えヒトＣＤ７３タンパク質との結合を試験し（図１６Ａ）、そしてフローサイトメトリー法により抗ＣＤ７３抗体と、ＣＤ７３を発現するヒト腫瘍細胞ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１６Ｂ）及びＮＣＩ－Ｈ２９２（図１６Ｃ）との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。これらのデータは以下を表明する。Ｎ４＃６－３－Ｐ、Ｎ４＃６－４－Ｐ及びＮ１＃９－ＰＨが同等の親和性により組換えＣＤ７３及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞上の表面ＣＤ７３に結合する。Ｎ１＃９－ＰＨと、ＣＤ７３を発現するＮＣＩ－Ｈ２９２細胞との結合は、Ｎ４＃６－３－Ｐ及びＮ４＃６－４－Ｐと該細胞との結合よりもやや良い。

【実施例3】

【0277】

可溶性ＣＤ７３酵素活性及び細胞ＣＤ７３酵素活性に対する抗ＣＤ７３リードの作用
抗ＣＤ７３抗体がヒト組換えＣＤ７３タンパク質及び細胞表面ＣＤ７３の酵素活性を阻害する能力を試験した。ＡＭＰにより阻害されたフルオレセインのＡＴＰ依存性酸化（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイ、プロメガ社（Ｐｒｏｍｅｇａ））を測定することにより、ＣＤ７３触媒によるＡＭＰのアデノシン及び無機リン酸塩への加水分解を分析した。１５ｎｇの組換えヒトＣＤ７３－ＥＣＤ／Ｈｉｓタンパク質と、連続希釈された抗ＣＤ７３抗体、ＡＴＰ（最終濃度１００μＭ）及びＡＭＰ（最終濃度３００μＭ）とを、アッセイ緩衝液（２５ｍＭのＴｒｉｓ、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、ｐＨ７．４６）中に３７℃でインキュベートした。反応系中に同じ体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加えて白い９６ウェルマイクロプレートに２ｍｉｎ混合した。１０ｍｉｎインキュベートした後に、ルミネセンスを測定した。

【0278】

ＣＤ７３を発現する細胞（５Ｅ３－１Ｅ４細胞／ウェル）を培地に再懸濁し、９６ウェルマイクロプレートに入れた（又は２４時間予め接種した）。各培養物に３倍（又は５倍）の連続希釈された抗体を加えた。３７℃で１５分間インキュベートした後、ＡＭＰ（最終濃度２２５μＭ）を加え、４～２０時間インキュベートした。遠心分離した後、培養上清を収集し、９６ウェルマイクロプレートに入れ、最終濃度が１００μＭになるまでＡＴＰを加え、２ｍｉｎインキュベートした。同じ体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を各ウェルに加えて２ｍｉｎ混合した。１０ｍｉｎインキュベートした後に、ルミネセンスを測定した。

【0279】

可溶性ＣＤ７３酵素活性及び細胞ＣＤ７３酵素活性に対する抗ＣＤ７３リードの作用を示すデータは、それぞれ図３Ａ及び３Ｂに示されている。これらのデータは、全ての選択された抗体がヒト可溶性ＣＤ７３及び表面ＣＤ７３の両者の酵素活性を阻害することができることを表明する。可溶性ＣＤ７３酵素活性アッセイにおいて、ＩｇＧがｓＣＤ７３に対して化学量論的過剰量である場合、阻害の喪失が観察された。このようないわゆる「フック効果（ｈｏｏｋ ｅｆｆｅｃｔ）」は、ターゲット抗原上に限られた結合部位を競合する同じＩｇＧ分子上のＦａｂアームによって駆動される一価抗体結合から生じられてよい。

【0280】

異なるＩｇＧアイソタイプを有する抗ＣＤ７３リードＮ１、Ｎ２、Ｎ４が細胞ＣＤ７３の酵素活性を阻害する能力を試験した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、抗ＣＤ７３抗体と共にインキュベートした。ＡＴＰ、ＡＭＰ及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を加えてルミネセンスを記録した。酵素活性アッセイではＡＰＣＰを陽性対照として用いた。細胞ＣＤ７３酵素活性に対する異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有するこれらの抗ＣＤ７３リードの作用は、図６Ａ（リードＮ１）、６Ｂ（リードＮ２）及び６Ｃ（リードＮ４）に示されている。

【0281】

これらのデータは以下を示す。クローンＮ１のｗｔＩｇＧ２アイソタイプは、ｔｍｔＩｇＧ１及びｍｔＩｇＧ２アイソタイプより優れた遮断活性を有する。クローンＮ２のｔｍｔＩｇＧ１アイソタイプは、ｗｔＩｇＧ２及びｍｔＩｇＧ２アイソタイプより優れた遮断活性を有する。ｗｔＩｇＧ２アイソタイプを有するＮ４は、ｔｍｔＩｇＧ１及びｍｔＩｇＧ２アイソタイプより最適な遮断活性を示す。ｔｍｔＩｇＧ１アイソタイプは、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３３１ＳのＦｃ部位特異的変化を有する。

【0282】

図１７Ａ～１７Ｃは、可溶性ＣＤ７３酵素活性（図１７Ａ）及び細胞表面ＣＤ７３酵素活性（図１７Ｂ及び図１７Ｃ）に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用をさらに示す。抗ＣＤ７３抗体がヒト組換えＣＤ７３タンパク質及び細胞表面ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。組換えＣＤ７３タンパク質（図１７Ａ）、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１７Ｂ）、ＮＣＩ－Ｈ２９２（図１７Ｃ）細胞を、抗ＣＤ７３抗体と共にインキュベートした。ＡＴＰ、ＡＭＰ及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏを加えてルミネセンスを記録した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体、抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体及びＡＰＣＰを陽性対照として用いた。ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【0283】

図１７Ａ～１７Ｃに示されるデータは、Ｎ１＃９－ＰＨの可溶性ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力がＮ４＃６－３－Ｐ及びＮ４＃６－４Ｐよりも優れているが、Ｎ１＃９－ＰＨ及びＮ４＃６－４－Ｐが細胞表面ＣＤ７３酵素活性に対して同等の遮断活性を示すことを表明する。

【実施例4】

【0284】

抗ＣＤ７３リードによって媒介されるＣＤ７３内在化
腫瘍細胞（５Ｅ４～１Ｅ５細胞／ウェル）を培地に懸濁し、異なる濃度の抗ＣＤ７３抗体と共に４時間インキュベートした。培地を除去した後に、細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳを含むＰＢＳ）に懸濁し、マウス抗ヒトＣＤ７３抗体（４Ｇ４）と共に４℃で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＦＩＴＣで標識されたヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体又はＡｌｅｘａ４８８で標識されたヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃγ抗体と共にインキュベートした。Ｃｙｔｏｍｉｃｓ ＦＣ５００又はＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（ベックマン・コールター社（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｎｃ．））を用いてフローサイトメトリー分析を行った。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【0285】

図４に示されるデータは、Ｎ４－ｔｍｔＩｇＧ１のみがＣＤ７３内在化を誘導することができ、Ｎ１－ｔｍｔＩｇＧ１及びＮ２－ｔｍｔＩｇＧ１がＣＤ７３内在化を誘導することができないことを示す。

【0286】

図７は、異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する抗ＣＤ７３抗体によって媒介されるＣＤ７３内在化をさらに示す。細胞と、Ｎ１（図７Ａ）、Ｎ２（図７Ｂ）及びＮ４（図７Ｃ）の異なるＩｇＧアイソタイプとをインキュベートした後、フローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。データは、Ｎ４（Ｎ１及びＮ２ではない）がＣＤ７３内在化を誘導することができ、異なるＩｇＧアイソタイプの間に明らかな差異がないことを示す。

【0287】

図１３は、Ｎ１及びＮ４変異体によって媒介されるＣＤ７３内在化をさらに示す。ＮＣＩ－Ｈ２９２細胞を、Ｎ１及びＮ４変異体と共にインキュベートし、かつフローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。データは、親和性成熟後に、Ｎ４変異体がＣＤ７３内在化を誘導することができ、かつＮ１変異体が依然としてＣＤ７３内在化を誘導することができないことを示す。

【0288】

図１８Ａ及び１８Ｂは、Ｎ１及びＮ４トップ変異体によって媒介されるＣＤ７３内在化をさらに示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（図１８Ａ）、ＮＣＩ－Ｈ２９２（図１８Ｂ）細胞を、抗ＣＤ７３Ｎ１及びＮ４変異体と共にインキュベートした。インキュベートした後に、フローサイトメトリー法によりＣＤ７３の細胞表面発現を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。これらのデータは、Ｎ４＃６－３－Ｐ及びＮ４＃６－４－ＰがＣＤ７３を発現する２種類の癌細胞においてＣＤ７３内在化を誘導することができることを示す。

【実施例5】

【0289】

異なるＩｇＧ Ｆｃ領域を有する選択された抗体とＣＤ７３との結合
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、連続希釈されたビオチンで標識された抗ＣＤ７３抗体と共にＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳを含むＰＢＳ）において４℃で３０分間インキュベートすることにより抗ＣＤ７３抗体と細胞表面ＣＤ７３との結合を試験した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ストレプトアビジン－ＦＩＴＣを用いて４℃で結合を３０分間検出した。Ｃｙｔｏｍｉｃｓ ＦＣ５００（ベックマン・コールター社（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｎｃ．））を用いてフローサイトメトリー分析を行った。

【0290】

Ｎ１、Ｎ２及びＮ４の可変配列をヒト野生型又はＣ２１９Ｓ突然変異体ＩｇＧ２ Ｆｃの主鎖にクローニングした。フローサイトメトリー法によりＮ１（図５Ａ）、Ｎ２（図５Ｂ）、Ｎ４（図５Ｃ）の異なるＩｇＧアイソタイプと、ＣＤ７３を発現するヒトＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞との結合を試験した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及びＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。

【0291】

図５Ａ～５Ｃに示されるデータは、ＣＤ７３結合能においてＮ１の異なるＩｇＧアイソタイプの間に差異がないことを示す。データは、クローンＮ２（ｔｍｔＩｇＧ１アイソタイプ）がｗｔＩｇＧ２及びｍｔＩｇＧ２アイソタイプより優れたＣＤ７３結合活性を有し、かつクローンＮ４（ｔｍｔＩｇＧ１アイソタイプ）がｗｔＩｇＧ２及びｍｔＩｇＧ２アイソタイプより優れたＣＤ７３結合活性を有することをさらに示す。

【実施例6】

【0292】

ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒトトリプルネガティブ乳癌）異種移植マウスモデルにおける抗ＣＤ７３リードの腫瘍増殖阻害活性
免疫が損なわれたＮＯＤ／ＳＣＩＤ（非肥満糖尿病／重症複合免疫不全症）マウスを用い、異種移植マウスモデルにおいて抗ヒトＣＤ７３抗体のインビボ活性を研究した。１００μＬのＰＢＳにおける、ＣＤ７３を発現する合計１Ｅ７個のヒトトリプルネガティブ乳癌ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞と、１００μＬのマトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）（コーニング社（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、カリフォルニア州（ＣＡ）、米国）とを（１：１の比率で）混合し、雌性ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（バイオラスコ社（Ｂｉｏｌａｓｃｏ）、台北、台湾）の両側の脇腹に皮下に植え込んだ。腫瘍のサイズが１５０～３００ｍｍ^３（腫瘍接種後の１４日目）に達する時、１週間に２回又は指定時間に、腹腔内に５ｍｇ／ｋｇの抗ＣＤ７３抗体又は１０ｍＬ／ｋｇのプラセボを投与した。４５日目まで腫瘍を観察して測定した。腫瘍の体積をＴＶ（腫瘍の体積）＝（長さ×幅^２）／２と定義した。

【0293】

腫瘍増殖曲線は、図８Ａに示される。４５日目の個体腫瘍体積は、図８Ｂに示される。全てのデータ点は、いずれも平均値±ＳＥＭである。データは、クローンＮ１、Ｎ２及びＮ４のｔｍｔＩｇＧ１アイソタイプ以外に、全ての抗ＣＤ７３抗体がＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植モデルにおいて抗腫瘍活性を有し（ＴＧＩ≧５０％）、Ｎ１－ｗｔＩｇＧ２、Ｎ１－ｍｔＩｇＧ２、Ｎ２－ｗｔＩｇＧ２、Ｎ２－ｍｔＩｇＧ２が腫瘍増殖をほぼ完全に阻害することを証明する。

【0294】

図２０は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ヒトトリプルネガティブ乳癌）異種移植マウスモデルにおけるＮ１及びＮ４トップ変異体の腫瘍増殖阻害活性をさらに示す。マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の皮下にＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を移植した。腫瘍を接種した後の７日に、移植された腫瘍のサイズが約１００ｍｍ^３に達すると、第１の用量の被験物質を投与した。１週間に２回、１０ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇの抗体を用いて、マウスを腹腔内で処理し、５～６週間持続した。全てのデータ点は、いずれも平均値±ＳＥＭである。これらのデータは、全てのＮ１及びＮ４トップ変異体がインビボＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植に対して抗腫瘍活性を有し、Ｎ４＃６－３－Ｐ、Ｎ４＃６－４－Ｐ及びＮ１＃９－ＰＨが抗ＣＤ７３対照抗体より優れた抗腫瘍活性を有することを証明する。

【実施例7】

【0295】

固定化ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４変異体の作用
Ｎ１及びＮ４変異体が固定化ＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｄ抗体を、ウェル当たりの３００ｎｇで４℃で高い親和性で白い９６ウェルマイクロプレートに一晩コーティングした。（ＰＢＳ中の）５％スキムミルクで遮断した後に、連続希釈された抗体を加え、室温で１時間インキュベートした。結合していない抗体を除去し、ウェルを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０を含む１×ＰＢＳＴで３回洗浄した。アッセイ緩衝液（２５ｍＭのＴｒｉｓ、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、ｐＨ７．４６）における２５μＬの１００ｎｇ／ｍＬのＣＤ７３－ＥＣＤ／Ｈｉｓタンパク質をウェルに加え、室温でさらに１時間インキュベートした。６６μＭのＡＴＰと２００μＭのＡＭＰとの混合物を２５μＬ加え、３７℃で９分間インキュベートした。同じ体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を反応混合物に加えて（白い９６ウェルマイクロプレートに）内容物を２ｍｉｎ混合した。１０ｍｉｎインキュベートした後に、ルミネセンスを測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２を陽性対照として用い、ＨＬＸ０１（抗ＣＤ２０）を陰性対照として用いた。

【0296】

固定化ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４変異体の作用は、図１２に示される。これらのデータは以下を示す。親和性成熟後、全てのＮ１及びＮ４変異体は、いずれもＣＤ７３酵素活性を阻害することができる。Ｎ１変異体のＣＤ７３酵素遮断活性は、Ｎ４変異体及び抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体より優れるが、抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体と同等である。固定化ＣＤ７３酵素を遮断する活性について、Ｎ１＃２、Ｎ１＃９＞Ｎ４＃６－４、Ｎ４＃６－５＞Ｎ４＃４－３、Ｎ４＃６－２＞Ｎ４＃６－３、Ｎ４＃５＞Ｎ４＃６である。

【実施例8】

【0297】

Ｎ１及びＮ４トップ変異体による、Ｔ細胞の活性に対するＡＭＰの阻害効果の反転
ＣＤ７３は、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）を触媒して細胞外にアデノシンを生じた。アデノシンは、Ａ２ａＲ及びＡ２Ｑ受容体を活性化することにより免疫応答（Ｔ細胞、ＮＫ細胞及び樹状細胞の免疫応答を含む）を阻害する。ＣＤ７３酵素阻害及び内在化に加えて、Ｔ細胞増殖に対する抗ＣＤ７３抗体によるＣＤ７３阻害の機能的作用をさらに検出した。

【0298】

ＭａｇｎｉＳｏｒｔヒトＴ細胞濃縮キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｃ．））を用いて末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からヒトＴ細胞を単離し、５０ ＩＵ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－２（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｃ．）を含む完全培地（１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０）に懸濁した。体積が１００μＬのＴ細胞（５Ｅ４細胞／反応）と、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ヒトＴ－活性化因子ＣＤ３／ＣＤ２８（サーモフィッシャーサイエンティフィック社（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））とを１：０．５の細胞ビーズの比率で混合した。ＡＭＰ（１ｍＭ）及び連続希釈された抗体を１００μＬの体積で各反応系に加えた。活性化ビーズを含まない反応系（未刺激群）、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズのみを含む反応系（刺激群）又はＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ及びＡＭＰのみを含む（ＡＭＰ媒介による阻害群）反応系をアッセイ対照として用いた。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体、抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体及びＡＰＣＰを陽性対照として用いた。ＨＬＸ０４（抗ＶＥＧＦ）を陰性対照として用いた。細胞を３７℃で４日間培養した。４日目に、細胞を収集し、洗浄し、新鮮なＲＰＭＩ－１６４０培地に再懸濁した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－ＧｌｏアッセイによりＴ細胞増殖を分析した。培養物上清を収集してサイトカイン測定に用いた。ヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（登録商標） Ｄｅｌｕｘｅキット（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｉｎｃ．））を用いてＩＦＮ－γのレベルを測定した。

【0299】

Ｎ１及びＮ４トップ変異体による、Ｔ細胞の活性に対するＡＭＰの阻害効果の反転は、図１９Ａ及び１９Ｂに示される。ＣＤ３^＋ Ｔ細胞の増殖後に、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイを行い（図１９Ａ）、ヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（登録商標） Ｄｅｌｕｘｅキット（図１９Ｂ）を用いてＩＦＮ－γ分泌を測定した。抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－１抗体、抗ＣＤ７３ ｒｅｆ－２抗体及びＡＰＣＰを陽性対照として用いた。ＨＬＸ０４（抗ＶＥＧＦ）を陰性対照として用いた。図１９Ａ及び１９Ｂに示されるデータは、Ｎ１及びＮ４トップ変異体が用量依存性方式でＴ細胞増殖及びＩＦＮ－γ分泌を増強することができることを表明する。データは、Ｎ４＃６－３－Ｐ、Ｎ４＃６－４－Ｐ及びＮ１＃９－ＰＨがＡＭＰ媒介によるＴ細胞阻害を軽減することができることをさらに示す。

【実施例9】

【0300】

ＮＣＩ－Ｈ２９２（ヒト肺粘液性類表皮癌）異種移植マウスモデルにおけるＮ１及びＮ４トップ変異体の腫瘍増殖阻害活性
免疫が損なわれたＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを用い、異種移植マウスモデルにおいて抗ヒトＣＤ７３抗体のインビボ活性を研究した。１００μＬのＰＢＳにおける合計５Ｅ６個のＮＣＩ－Ｈ２９２細胞と、１００μＬのマトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）（コーニング社（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、カリフォルニア州（ＣＡ）、米国）とを（１：１の比率で）混合し、雄性ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（バイオラスコ社（Ｂｉｏｌａｓｃｏ）、台北、台湾）の両側の脇腹に皮下に植え込んだ。腫瘍のサイズが１５０～３００ｍｍ^３に達する時、１週間に２回、腹腔内に抗ＣＤ７３抗体又はプラセボを投与し、３週間持続した。１週間に２回、腫瘍を観察して測定した。腫瘍の体積をＴＶ（腫瘍の体積）＝（長さ×幅^２）／２と定義した。

【0301】

図２１は、ＮＣＩ－Ｈ２９２（ヒト肺粘液性類表皮癌）異種移植マウスモデルにおけるＮ１及びＮ４トップ変異体の腫瘍増殖阻害活性を示す。マウス（ｎ＝５匹のマウス／群）の皮下にＮＣＩ－Ｈ２９２細胞を移植した。腫瘍を接種した後の３日に第１の用量の被験物質を投与した。１週間に２回、５０、１０及び２ｍｇ／ｋｇの抗体を用いて、マウスを腹腔内で処理し、３週間持続した。全てのデータ点は、いずれも平均値±ＳＥＭである。データは、Ｎ４＃６－４－ＰがＮＣＩ－Ｈ２９２異種移植モデルにおいて他の抗ＣＤ７３抗体より高い抗腫瘍活性を有することを証明する。

【実施例10】

【0302】

ＮＣＩ－Ｈ２９２異種移植腫瘍における細胞ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用
１００μＬのＰＢＳにおける合計５Ｅ６個のＮＣＩ－Ｈ２９２細胞と、１００μＬのマトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）（コーニング社（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、カリフォルニア州（ＣＡ）、米国）とを（１：１の比率で）混合し、抗体を投与する前の４日に、雄性ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（バイオラスコ社（Ｂｉｏｌａｓｃｏ）、台北、台湾）の両側の脇腹に皮下に植え込んだ。０日目に３０ｍｇ／ｋｇの抗体、ＡＰＣＰ及びプラセボを用いてマウスを腹腔内で処理し、１、３及び７日目に腫瘍を収集した。腫瘍細胞（２Ｅ４）をアッセイ緩衝液（２５ｍＭのＴｒｉｓ、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、ｐＨ７．４６）に再懸濁し、ＡＴＰ（最終濃度１００μＭ）及びＡＭＰ（最終濃度３００μＭ）を用いて３７℃で４５分間処理した。同じ体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を反応混合物に加えて（白い９６ウェルマイクロプレートに）内容物を２ｍｉｎ混合した。１０ｍｉｎインキュベートした後に、ルミネセンスを測定した。

【0303】

図２２は、ＮＣＩ－Ｈ２９２異種移植腫瘍における細胞ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用を示す。Ｎ１及びＮ４トップ変異体がＮＣＩ－Ｈ２９２異種移植モデルにおいてＣＤ７３酵素活性を阻害する能力を試験した。抗体で処理する前の４日に、マウス（ｎ＝４匹のマウス／群）の皮下にＮＣＩ－Ｈ２９２細胞を移植した。０日目に、腹腔内に抗体、ＡＰＣＰ及びプラセボを注射した。抗体を投与した後の１、３及び７日目に腫瘍を切除した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイにより腫瘍におけるＣＤ７３酵素活性を測定した。

【0304】

データは、Ｎ１及びＮ４トップ変異体がＮＣＩ－Ｈ２９２異種移植モデルにおけるＣＤ７３酵素活性を阻害することができ、Ｎ４＃６－３－Ｐ及びＮ４＃６－４－Ｐの、腫瘍においてＣＤ７３酵素を遮断する活性がＮ１＃９－ＰＨ及び抗ＣＤ７３対照抗体よりも優れることを証明する。

【実施例11】

【0305】

ＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植腫瘍におけるＣＤ７３発現及び細胞ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用
１００μＬのＰＢＳにおける合計１Ｅ７のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞と、１００μＬのマトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）（コーニング社（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、カリフォルニア州（ＣＡ）、米国）とを（１：１の比率で）混合し、抗体を投与する前の７日に、雌性ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（バイオラスコ社（Ｂｉｏｌａｓｃｏ）、台北、台湾）の両側の脇腹に皮下に植え込んだ。０日目に２ｍｇ／ｋｇの抗体及び１０ｍＬ／ｋｇのプラセボを用いてマウスを腹腔内で処理した。１、３及び７日目に腫瘍を収集した。表面ＣＤ７３発現レベルを測定するために、５Ｅ４個の腫瘍細胞をＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳを含むＰＢＳ）に再懸濁し、抗ヒト及び抗マウスＦｃＲ遮断試薬を用いて４℃で３０分間処理した。遠心分離した後、細胞とマウス抗ヒトＣＤ７３抗体（４Ｇ４）を４℃で３０分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、Ａｌｅｘａ ４８８で標識されたヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃγ抗体と共に４℃でさらに３０分間インキュベートした。ＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（ベックマン・コールター社（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｎｃ．））を用いてフローサイトメトリー分析を行った。合計２Ｅ４個の腫瘍細胞をアッセイ緩衝液（２５ｍＭのＴｒｉｓ、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、ｐＨ７．４６）に再懸濁してＣＤ７３酵素活性の測定に用いた。細胞懸濁液をＡＴＰ（終濃度１００μＭ）及びＡＭＰ（最終濃度３００μＭ）を用いて３７℃で４５分間処理した。同じ体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を反応混合物に加えて（白い９６ウェルマイクロプレートに）２ｍｉｎ混合した。１０ｍｉｎインキュベートした後に、ルミネセンスを測定した。

【0306】

図２３Ａ及び２３Ｂは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植腫瘍におけるＣＤ７３発現及び細胞ＣＤ７３酵素活性に対するＮ１及びＮ４トップ変異体の作用を示す。染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）によりＣＤ７３発現を測定し（図２３Ａ）、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイにより腫瘍におけるＣＤ７３酵素活性を測定した（図２３Ｂ）。データは、プラセボ群に比べて、Ｎ４＃６－４－ＰがＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植マウスモデルにおける表面ＣＤ７３発現を下流調節し、かつＣＤ７３酵素活性を阻害することができることを証明する。

【実施例12】

【0307】

Ｎ１及びＮ４トップ変異体と、マウス及びサルのＣＤ７３を発現する細胞との交差結合
４Ｔ１又はＬＬＣ－ＭＫ２細胞（１Ｅ５個の細胞／試験）と、連続希釈された抗体とをＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳを含むＰＢＳ）において４℃で３０分間インキュベートすることにより抗ＣＤ７３抗体の結合を評価した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＦＩＴＣで標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体を用いて４℃で結合をさらに３０分間検出した。染色の平均蛍光強度（ＭＦＩ）により、抗体と細胞表面との結合を測定した。Ｃｙｔｏｍｉｃｓ ＦＣ５００又はＣｙｔｏＦＬＥＸフローサイトメーター（ベックマン・コールター社（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｉｎｃ．））を用いてフローサイトメトリー分析を行った。

【0308】

図２４Ａ及び２４Ｂは、Ｎ１及びＮ４トップ変異体と、マウス及びサルのＣＤ７３を発現する細胞との交差結合を示す。フローサイトメトリー法により抗ＣＤ７３抗体と、ＣＤ７３を発現するマウス乳癌４Ｔ１細胞（図２４Ａ）及びサル腎上皮ＬＬＣ－ＭＫ２細胞（図２４Ｂ）との結合を試験した。ＨＬＸ０１を陰性対照として用いた。これらのデータは、Ｎ１及びＮ４トップ変異体が、サルのＣＤ７３を発現する細胞と交差反応性を有し、Ｎ１及びＮ４トップ変異体が、マウスのＣＤ７３と交差結合することができないことを示す。

【0309】

前述の実施例は、単に目的を説明するために用いられ、かつ本発明の原理を明確に理解するために提供された実施形態の可能な実施例だけであり、いかなる方式で本発明の範囲を限定することを意図するものではない。本発明の精神及び原理から基本的に逸脱しない場合、上記１つ以上の実施例に対して多くの変化や修正を行うことができる。このような修正や変化は、本発明の範囲に含まれ、かつ添付の請求項によって保護される。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23A】

【図23B】

【図24A】

【図24B】

【配列表】

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