特許 7657230 Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む併用療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-03-27

(45)【発行日】2025-04-04

(54)【発明の名称】Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む併用療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4985 20060101AFI20250328BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250328BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250328BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20250328BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250328BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20250328BHJP

   C07D 487/04 20060101ALN20250328BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4985 ZNA

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P37/04

A61P43/00 121

C12N15/13

C07D487/04 145

【請求項の数】 24

(21)【出願番号】P 2022540992

(86)(22)【出願日】2020-12-30

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2023-03-08

(86)【国際出願番号】 US2020067593

(87)【国際公開番号】W WO2021138512

(87)【国際公開日】2021-07-08

【審査請求日】2023-12-14

(31)【優先権主張番号】62/956,960

(32)【優先日】2020-01-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】505193450

【氏名又は名称】インサイト・コーポレイション

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＣＹＴＥ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】ワン，ホイ

(72)【発明者】

【氏名】カールセン，ピーター ニールス

(72)【発明者】

【氏名】フアン，タイシェン

(72)【発明者】

【氏名】リィ，ヨン

(72)【発明者】

【氏名】リン，ルーピン

(72)【発明者】

【氏名】チィ，チャオ

(72)【発明者】

【氏名】テッカート，プラモード ウニクリシュナン

(72)【発明者】

【氏名】ワン，シャオジャオ

(72)【発明者】

【氏名】ウー，リアンシン

(72)【発明者】

【氏名】ヤオ，ウェンチン

(72)【発明者】

【氏名】ジュー，ウェンユー

【審査官】新熊 忠信

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１９／１６８８４７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１９／２２２６７７（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１８／１１９２６６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１８－５２４３９４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特許第７４９０６３１（ＪＰ，Ｂ２）

【文献】特許第７４４７１２８（ＪＰ，Ｂ２）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００－３３／４４

Ａ６１Ｋ ３９／００－３９／４４

Ａ６１Ｐ ３５／００

Ａ６１Ｐ ３７／００

Ａ６１Ｐ ４３／００

Ｃ０７Ｄ ４８７／００－４８７／２２

Ｃ０７Ｋ １６／００－１６／４６

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤；及び
（ｉｉ）ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤
を含む、対象におけるがんを治療するための組合せ医薬であって、
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、式（ＩＩＩ）：

【化1】

［式中、
Ｃｙ ^１ は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１または２個の置換基によって置換されるフェニルであり；
Ｒ ^２ は、５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルから選択され、ここで、前記Ｒ ^２ の５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^２Ａ 置換基で置換され；
各Ｒ ^２Ａ は、Ｄ、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、及びＣ _１－６ ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ ^４ は、フェニル－Ｃ _１－３ アルキル－、Ｃ _３－７ シクロアルキル－Ｃ _１－３ アルキル－、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル－、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ _１－３ アルキルから選択され、ここで、前記Ｒ ^４ のフェニル－Ｃ _１－３ アルキル－、Ｃ _３－７ シクロアルキル－Ｃ _１－３ アルキル－、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル－、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ _１－３ アルキル－は、その各々が、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^４Ａ 置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ ^４Ａ は、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、Ｃ _１－６ ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲ ^ａ４１ 、及びＮＲ ^ｃ４１ Ｒ ^ｄ４１ から独立して選択され；及び
各Ｒ ^ａ４１ 、Ｒ ^ｃ４１ 、及びＲ ^ｄ４１ は、Ｈ及びＣ _１－６ アルキルから独立して選択される］
で示される化合物またはその薬学的に許容される塩であり；
かつ、
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、
（ａ）アテゾリズマブ；または
（ｂ）抗体Ｘであって、前記抗体Ｘが、抗体またはその抗原結合断片であり、ここで、
前記抗体が、可変重（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み、ここで、
前記ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
前記ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、そして、
前記ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
かつ、
前記抗体が、さらに、可変軽（ＶＬ） ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み、ここで、
前記ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
前記ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、そして
前記ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、
前記抗体Ｘである、
前記組合せ医薬。

【請求項2】

前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、
３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び
３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（２，６－ジメチルピリジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩
から選択される、
請求項１に記載の組合せ医薬。

【請求項3】

前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の組合せ医薬。

【請求項4】

前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、アテゾリズマブである、請求項１～３のいずれか１項に記載の組合せ医薬。

【請求項5】

前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、抗体Ｘである、請求項１～３のいずれか１項に記載の組合せ医薬。

【請求項6】

抗体Ｘが、ヒト化抗体である、請求項５に記載の組合せ医薬。

【請求項7】

前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルまたはその薬学的に許容される塩であり；かつ
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、抗体Ｘである、
請求項１に記載の組合せ医薬。

【請求項8】

前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、遊離塩基基準で約０．１ｍｇから約１０００ｍｇの用量で前記対象に投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の組合せ医薬。

【請求項9】

前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が、１日１回、１日おき、または週に１回前記対象に投与される、請求項１～８のいずれか１項に記載の組合せ医薬。

【請求項10】

前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、同時に投与される、請求項１～９のいずれか１項に記載の組合せ医薬。

【請求項11】

前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、連続して投与される、請求項１～９のいずれか１項に記載の組合せ医薬。

【請求項12】

前記がんが、膀胱癌、乳癌、大腸癌、頭頸部癌、肺癌、卵巣癌、膵癌、及び前立腺癌から選択される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の組合せ医薬。

【請求項13】

前記がんが、頭頸部癌である、請求項１２に記載の組合せ医薬。

【請求項14】

前記頭頸部癌が、頭頸部扁平上皮細胞癌である、請求項１３に記載の組合せ医薬。

【請求項15】

前記がんが、肺癌である、請求項１２に記載の組合せ医薬。

【請求項16】

前記肺癌が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項１５に記載の組合せ医薬。

【請求項17】

前記がんが、卵巣癌である、請求項１２に記載の組合せ医薬。

【請求項18】

前記がんが、前立腺癌である、請求項１２に記載の組合せ医薬。

【請求項19】

前記前立腺癌が、転移性去勢抵抗性前立腺癌である、請求項１８に記載の組合せ医薬。

【請求項20】

前記がんが、乳癌である、請求項１２に記載の組合せ医薬。

【請求項21】

前記がんが、膀胱癌である、請求項１２に記載の組合せ医薬。

【請求項22】

前記がんが、大腸癌である、請求項１２に記載の組合せ医薬。

【請求項23】

前記がんが、膵癌である、請求項１２に記載の組合せ医薬。

【請求項24】

対象における膀胱癌、乳癌、大腸癌、頭頸部癌、肺癌、卵巣癌、膵癌、及び前立腺癌から選択されるがんの治療に用いるための組合せ医薬であって、前記組合せ医薬が、
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルまたはその薬学的に許容される塩であるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤；及び
（ｉｉ）抗体ＸであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤
を含み、ここで、
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、遊離塩基基準で約０．１ｍｇから約５００ｍｇの用量で前記対象に投与され、前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、１日１回または１日おきに１回投与され、かつ、
前記抗体Ｘが、Ｑ４Ｗで約１００ｍｇから約１０００ｍｇの用量で前記対象に投与され、ここで、
前記抗体Ｘが、抗体またはその抗原結合断片であり、ここで、
前記抗体が、可変重（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み、ここで、
前記ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
前記ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、そして、
前記ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
かつ、
前記抗体が、さらに、可変軽（ＶＬ） ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み、ここで、
前記ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
前記ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、そして、
前記ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、
前記組合せ医薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本明細書に開示されるのは、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤を含む併用療法、及びがんなどの障害を治療するためにそれを使用する方法である。

【背景技術】

【0002】

一部の癌患者は、長期予後が不良であり、及び／または当該技術分野で一般的に使用される１つまたは複数のタイプの治療に耐性がある。したがって、この治療が困難な患者集団において、有効性が向上し、安全性プロファイルが改善された、がんに対する効果的な治療法の必要性が残っている。

【発明の概要】

【0003】

本出願は、とりわけ、対象におけるがんを治療する方法を提供し、対象に以下を投与することを含む：
（ｉ）Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤；及び
（ｉｉ）ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0004】

本発明の他の特性、目的、及び利点は、説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0005】

【図1】Ａ～Ｃ。初代Ｔ細胞と共培養されたＣＨＯ－ＰＤ－Ｌ１における（１Ａ）ペムブロリズマブ、（１Ｂ）抗体Ｘ及び（１Ｃ）化合物Ｙとの化合物９の相乗効果を示す（実施例１を参照）。

【図2】Ａ～Ｄ。ＣＤ３抗体で刺激されたＰＢＭＣにおけるアテゾリズマブとの化合物９または化合物３Ａの相乗効果を示す。

【図3】Ａ～Ｃ。前臨床ＣＴ２６及びＢ１６－Ｆ１０腫瘍モデルにおける化合物９及び抗ＰＤ１（マウスＰＤ－１に対するクローン２９Ｆ．１Ａ１２）の抗腫瘍効果を示す。（３Ａ）単剤として及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせたＣＴ２６同系モデルにおける１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤ化合物９の有効性研究。（３Ｂ）ＣＴ－２６ＮＳＧ異種移植モデルにおける１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤ化合物９の有効性研究。（３Ｃ）単剤として、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせたＢ１６同系モデルにおける１０ｍｇ／ｋｇＢＩＤ化合物９の有効性研究。

【発明を実施するための形態】

【0006】

本出願は、対象におけるがんを治療する方法を提供し、対象に以下を投与することを含む：
（ｉ）Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤；及び
（ｉｉ）ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0007】

Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤
アデノシンは、多くの免疫細胞タイプを介して免疫応答を調節できる細胞外シグナル伝達分子である。アデノシンは、Ｄｒｕｒｙ ａｎｄ Ｓｚｅｎｔ－Ｇｙｏｒｇｙｕ（Ｓａｃｈｄｅｖａ、Ｓ．ａｎｄ Ｇｕｐｔａ、Ｍ．Ｓａｕｄｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ、２０１３、２１、２４５－２５３）によって冠状血管緊張の生理学的調節因子として最初に認識されたが、ＳａｔｔｉｎとＲａｌｌは、アデノシンが細胞表面の特定の受容体の占有を介して細胞機能を調節することを示した、（Ｓａｔｔｉｎ，Ａ．，ａｎｄ Ｒａｌｌ，Ｔ．Ｗ．，１９７０）．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６，１３－２３；Ｈａｓｋｏ’，Ｇ．，ａｔ ａｌ．，２００７，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１１３，２６４－２７５）１９７０年まで認識されていなかった。

【0008】

アデノシンは、様々な他の生理的機能において重要な役割を果たしている。それは、核酸の合成に関与し、３つのリン酸基に連結した場合、それは、細胞エネルギーシステムの不可欠な成分であるＡＴＰを形成する。アデノシンは、細胞外ＡＴＰの酵素分解によって生成され得るか、または損傷した細胞膜を通過することによって傷ついたニューロン及びグリア細胞からも放出され得る（Ｔａｕｔｅｎｈａｈｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１２，６２，１７５６－１７６６）。アデノシンは、細胞膜上に局在する特定の受容体への作用を介して、末梢と中枢神経系の両方で様々な薬理作用をもたらす（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．，２０１２，６５，８１－９０）。細胞外アデノシン生成のための代替経路が記載されている。これらの経路には、ＣＤ３８、ＣＤ２０３ａ、及びＣＤ７３の協調作用による、ＡＴＰの代わりにニコチンアミドジヌクレオチド（ＮＡＤ）からのアデノシンの生成が含まれる。アデノシンのＣＤ７３非依存的産生は、アルカリホスファターゼまたは前立腺特異的ホスファターゼなどの他のホスフェートによっても生じ得る。

【0009】

Ａ１、Ａ２Ａ（ＡＤＯＲＡ２Ａ）、Ａ２Ｂ（ＡＤＯＲＡ２Ｂ）、及びＡ３受容体を含むヒトにおけるアデノシン受容体の４つの既知のサブタイプが存在する。Ａ１及びＡ２Ａは高親和性受容体である一方で、Ａ２Ｂ及びＡ３は低親和性受容体である。アデノシンとそのアゴニストは、これらの受容体の１つまたは複数を介して作用し、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の増加に関与する酵素であるアデニル酸シクラーゼの活性を調節することができる。異なる受容体は、この酵素に対して異なる刺激効果と抑制効果を持っている。ｃＡＭＰの細胞内濃度の増加は、免疫及び炎症細胞の活性を抑制し得る（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．，２００４，５３，１７１－１７８）。

【0010】

Ａ２Ａアデノシン受容体は、末梢及びＣＮＳ（中枢神経系）でシグナルを伝達することができ、アゴニストは抗炎症薬として探索され、アンタゴニストは神経変性疾患に対して探索される（Ｃａｒｌｓｓｏｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，５３，３７４８－３７５５）。ほとんどの細胞型では、Ａ２Ａサブタイプは細胞内カルシウムレベルを阻害するが、Ａ２Ｂはそれらを増強する。Ａ２Ａ受容体は一般に、免疫細胞からの炎症反応を阻害するようである（Ｂｏｒｒｍａｎｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００９，５２（１３），３９９４－４００６）。

【0011】

Ａ２Ｂ受容体は、消化管、膀胱、肺内に、及び肥満細胞上に高度に発現している（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，２０１３，１３，８４２－８５７）。Ａ２Ｂ受容体は、構造的にはＡ２Ａ受容体と密接に関連しており、アデニル酸シクラーゼを活性化することができるが、機能的には異なる。このサブタイプは、アデニル酸シクラーゼ以外のシグナル伝達系を利用し得ることが仮定されている（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．，２００４，５３，１７１－１７８）。全てのアデノシン受容体の中で、Ａ２Ｂアデノシン受容体は、生理学的条件下で沈黙を保ち、細胞外アデノシンレベルの増加の結果として活性化されると考えられている低親和性受容体と見なされる（Ｒｙｚｈｏｖ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，２００８，１０，９８７－９９５）。Ａ２Ｂアデノシン受容体の活性化は、それぞれＧｓ及びＧｑタンパク質の活性化を通じて、アデニル酸シクラーゼ及びホスホリパーゼＣを刺激することができる。マイトジェン活性化プロテインキナーゼへのカップリングも記載されている（Ｂｏｒｒｍａｎｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００９，５２（１３），３９９４－４００６）。

【0012】

免疫系では、アデノシンシグナル伝達の関与は、過剰な免疫反応から組織を保護する重要な調節メカニズムである可能性がある。アデノシンは、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、骨髄由来抑制細胞など、多くの免疫細胞タイプを介して免疫応答を負に調節することができる（Ａｌｌａｒｄ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１６，２９，７－１６）。

【0013】

腫瘍では、この経路は腫瘍の微小環境によって乗っ取られ、免疫系の抗腫瘍能力を妨害し、癌の進行を促進する。腫瘍の微小環境では、アデノシンは主に２つのエクトヌクレオチダーゼＣＤ３９とＣＤ７３によって細胞外ＡＴＰから生成される。複数の細胞タイプは、ＣＤ３９及びＣＤ７３を発現させることによってアデノシンを生成することができる。これは、腫瘍細胞、Ｔエフェクター細胞、Ｔ調節細胞、腫瘍関連マクロファージ、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、内皮細胞、癌関連線維芽細胞（ＣＡＦ）、及び間葉系間質／幹細胞（ＭＳＣ）の場合である。さらに、腫瘍の微小環境に共通する状態である低酸素症及び炎症は、ＣＤ３９及びＣＤ７３の発現を誘導し、アデノシン産生の増加をもたらす。結果として、固形腫瘍のアデノシンレベルは、通常の生理学的状態と比較して高くなる。

【0014】

Ａ２Ａは主に、Ｔエフェクター細胞、Ｔ制御性細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球由来細胞に発現している。Ａ２Ａ受容体を遮断すると、Ｔ細胞を一時的に不活性化する下流の免疫抑制シグナルを防ぐことができる。Ａ２Ｂ受容体は主に、樹状細胞、腫瘍随伴マクロファージ、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、間葉系間質／幹細胞（ＭＳＣ）などの単球由来細胞に発現している。前臨床モデルでのＡ２Ｂ受容体の遮断は、腫瘍増殖を抑制し、転移を阻止し、腫瘍抗原の提示を増加させ得る。

【0015】

ＡＤＯＲＡ２Ａ／ＡＤＯＲＡ２Ｂ（Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ）遮断の安全性プロファイルに関して、Ａ２Ａ及びＡ２Ｂ受容体ノックアウト（ＫＯ）マウスは全て成長異常を示さずに生存可能であり、繁殖可能である（Ａｌｌａｒｄ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１６，２９，７－１６）。Ａ２ＡＫＯマウスは、リポ多糖（ＬＰＳ）による負荷時にのみ、炎症誘発性サイトカインのレベルの増加を示し、ベースラインでは炎症の根拠を示さなかった（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，２０１３，１３，８４２－８５７）。Ａ２Ｂ ＫＯマウスは、正常な血小板、赤血球、及び白血球の数を示したが、ＴＮＦ－αやＩＬ－６などのベースラインで炎症が増加した）（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，２０１３，１３，８４２－８５７）。ＬＰＳ処理後、ＴＮＦ－α及びＩＬ－６の産生のさらなる増加が検出された。Ａ２Ｂ ＫＯマウスはまた、炎症及び白血球接着／ローリングを媒介する血管接着分子の増加を示した。強化された肥満細胞活性化；ＩｇＥを介したアナフィラキシーに対する感受性の増加、及び低酸素下での血管漏出と好中球流入の増加（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，２０１３，１３，８４２－８５７）。

【0016】

アデノシン経路は、過剰な免疫反応から組織を保護する重要な免疫抑制経路である（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗ Ｃａｎｃｅｒ．２０１３，１３，８４２－８５７；Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．２００４，５３：１７１－１７８；Ａｌｌａｒｄ，ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２０１６，２９：７）。アデノシンの免疫抑制活性は、Ａ２Ａ及びＡ２Ｂとして知られる２つのＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）を介して媒介される。両方の受容体は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞、骨髄由来サプレッサー細胞など、多くの免疫細胞タイプで発現していることがわかる（Ｓａｕｄｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ．２０１３，２１：２４５；Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１９，１０：９２５；Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１７，１２７（３）：９２９；Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．２００８，１０：９８７；Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．２０１３，１５：１４００）。腫瘍微小環境で観察された高レベルのアデノシン産生の結果として、免疫系の抗腫瘍能力が抑制され、癌の進行をもたらすことが報告されている。

【0017】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、表１から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩である。

【0018】

表１：

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【0019】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（Ｉ）の化合物

【化1】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｃｙ^１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１または２個の置換基によって置換されるフェニルであり；
Ｃｙ^２は、５～６員ヘテロアリールまたは４～７員ヘテロシクロアルキルであり、式中、上記Ｃｙ^２の５～６員ヘテロアリールまたは４～７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_１－３アルコキシ、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－３アルキル）及びＮ（Ｃ_１－３アルキル）_２から独立して選択される１、２、または３個の基でそれぞれ任意選択で置換され；
Ｒ^２は、フェニル－Ｃ_１－３アルキル－、Ｃ_３－７シクロアルキル－Ｃ_１－３アルキル－、（５～７員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル－、（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ_１－３アルキル－、及びＯＲ^ａ２から選択され、式中、上記Ｒ^２のフェニル－Ｃ_１－３アルキル－、Ｃ_３－７シクロアルキル－Ｃ_１－３アルキル－、（５～７員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル－、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ_１－３アルキル－は、その各々が、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^Ｃ置換基で任意選択で置換され；
Ｒ^ａ２は、１または２個の独立して選択されるＲ^Ｃ置換基で任意選択で置換された（５～７員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル－であり；
各Ｒ^Ｃは、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_６アリール、５～７員ヘテロアリール、（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ_１－３アルキル－、ＯＲ^ａ４、及びＮＲ^ｃ４Ｒ^ｄ４から独立して選択され；
各Ｒ^ａ４、Ｒ^ｃ４、及びＲ^ｄ４は、Ｈ及びＣ_１－６アルキルから独立して選択される。

【0020】

式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｃｙ^２は、ピリミジニルである。

【0021】

式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ^２は、ピリジン－２－イルメチル、（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル、（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル、（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ、及び（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチルから選択される。

【0022】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物１、表１を参照）である。

【0023】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物２、表１を参照）である。

【0024】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物３Ａ、表１を参照）である。

【0025】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物３Ｂ、表１を参照）である。

【0026】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物４、表１を参照）である。

【0027】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物２１Ａ、表１を参照）である。

【0028】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物２１Ｂ、表１を参照）である。

【0029】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、
３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び
３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩から選択される。
式（Ｉ）の化合物の合成及び特徴付けは、ＷＯ２０１９／１６８８４７及びＵＳ ６２／８９１，６８５に見出すことができ、これらは両方とも、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0030】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（ＩＩ）の化合物

【化2】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｒ^２は、Ｈ及びＣＮから選択され；
Ｃｙ^１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１または２個の置換基によって置換されるフェニルであり；
Ｌは、Ｃ_１－３アルキレンであり、式中、上記アルキレンは、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^８Ｄ置換基で置換され；
Ｃｙ^４は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、式中、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルは、それぞれ、Ｒ^８Ｄ及びＲ^８から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^８は、独立して、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、フェニル、Ｃ_３－７シクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、４～７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル－Ｃ_１－３アルキル、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ_１－３アルキルから選択され、式中、上記Ｒ^８のＣ_１－６アルキル、Ｃ_２－４アルケニル、Ｃ_２－４アルキニル、フェニル、Ｃ_３－７シクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、４～７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ_１－３アルキル、Ｃ_３－７シクロアルキル－Ｃ_１－３アルキル、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ_１－３アルキルはそれぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^８Ａ置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^８Ａは、独立して、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、５～６員ヘテロアリール、４～７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲ^ａ８１、及びＮＲ^ｃ８１Ｒ^ｄ８１から選択され、式中、上記Ｒ^８ＡのＣ_１－３アルキル、５～６員ヘテロアリール、及び４～７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^８Ｂ置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^ａ８１、Ｒ^ｃ８１、及びＲ^ｄ８１が独立して、Ｈ、Ｃ_１－６アルキル、及び４～７員ヘテロシクロアルキルから選択され、式中、上記Ｒ^ａ８１、Ｒ^ｃ８１、及びＲ^ｄ８１のＣ_１－６アルキル及び４～７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^８Ｂ置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^８Ｂが、ハロ及びＣ_１－３アルキルから独立して選択され；及び
各Ｒ^８Ｄが、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、及びＣ_１－６ハロアルキルから独立して選択される。

【0031】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物５、表１を参照）である。

【0032】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物６、表１を参照）である。

【0033】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、５－アミノ－７－（３－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－８－カルボニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物７、表１を参照）である。

【0034】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－（（（１－メチル－２－オキソピロリジン－３－イル）アミノ）メチル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物８、表１を参照）である。

【0035】

式（ＩＩ）の化合物の合成及び特徴付けは、ＷＯ２０１９／２２２６７７に見出すことができ、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0036】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（ＩＩＩ）の化合物

【化3】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｃｙ^１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１または２個の置換基によって置換されるフェニルであり；
Ｒ^２は、５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルから選択され、式中、上記Ｒ^２の５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^２Ａ置換基で置換され；
各Ｒ^２Ａが、Ｄ、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、及びＣ_１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ^４は、フェニル－Ｃ_１－３アルキル－、Ｃ_３－７シクロアルキル－Ｃ_１－３アルキル－、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル－、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ_１－３アルキルから選択され、式中、上記Ｒ^４のフェニル－Ｃ_１－３アルキル－、Ｃ_３－７シクロアルキルＣ_１－３－アルキル－、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル－、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ_１－３アルキル－は、その各々が、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^４Ａ置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^４Ａが、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲ^ａ４１、及びＮＲ^ｃ４１Ｒ^ｄ４１から独立して選択され；及び
各Ｒ^ａ４１、Ｒ^ｃ４１、及びＲ^ｄ４１が、Ｈ及びＣ_１－６アルキルから独立して選択される。

【0037】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物９、表１を参照）である。

【0038】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物１０、表１を参照）である。

【0039】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物１１、表１を参照）である。

【0040】

いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（２，６－ジメチルピリジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物１２、表１を参照）である。

【0041】

式（ＩＩＩ）の化合物の合成及び特徴付けは、ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４０４９６に見出すことができ、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0042】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（ＩＶ）の化合物

【化4】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｃｙ^１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１または２個の置換基によって置換されるフェニルであり；
Ｃｙ^２が、５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルから選択され、式中、上記Ｃｙ^２の５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルがそれぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^６置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^６が、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、及びＣ_１－６ハロアルキルから独立して選択され、
Ｒ^２は、フェニル－Ｃ_１－３アルキル－または（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル－であり、式中、上記Ｒ^２のフェニル－Ｃ_１－３アルキル－及び（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル－はそれぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^２Ａ置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^２Ａが独立して、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、及びＣ_１－６ハロアルキルから選択される。

【0043】

いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物１３、表１を参照）である。

【0044】

いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物１４、表１を参照）である。

【0045】

いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物１５、表１を参照）である。

【0046】

いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（４－アミノ－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩（化合物１６、表１を参照）である。

【0047】

式（ＩＶ）の化合物の合成及び特徴付けは、ＵＳ６２／７９８，１８０に見出すことができ、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0048】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（Ｖ）の化合物

【化5】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｒ^２は、Ｈ、Ｄ、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、及びＣ_１－６ハロアルキルから選択され、
Ｒ^３は、Ｈ及びＣ_１－６アルキルから選択され、
Ｒ^４は、Ｈ及びＣ_１－６アルキルから選択され、
Ｒ^５は、Ｈ、ハロ、ＣＮ、Ｃ_１－６アルキルから選択され、
Ｒ^６は、フェニル、Ｃ_３－７シクロアルキル、５～７員ヘテロアリール、及び４～７員ヘテロシクロアルキルから選択され；上記Ｒ^６のフェニル、Ｃ_３－７シクロアルキル、５～７員ヘテロアリール、及び４～７員ヘテロシクロアルキルは、１、２、または３個の独立して選択されるＲ^Ａ置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^Ａは、（５～１０員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル－、及び（４～１０員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ_１－３アルキル－から独立して選択され、上記Ｒ^Ａの（５～１０員ヘテロアリール）－Ｃ_１－３アルキル－、及び（４～１０員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ_１－３アルキル－はそれぞれ、１または２個の独立して選択されるＲ^Ｂ置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^Ｂは、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、及びＣ（Ｏ）Ｒ^ｂ２６から独立して選択され；
各Ｒ^ｂ２６が、Ｈ及びＣ_１－３アルキルから独立して選択され、上記Ｒ^ｂ２６のＣ_１－３アルキルが、１または２個の独立して選択されるＲ^Ｃ置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ^Ｃが、ハロ、Ｃ_１－６アルキル、ＣＮ、ＯＲ^ａ３６、及びＮＲ^ｃ３６Ｒ^ｄ３６から独立して選択され、
各Ｒ^ａ３６、Ｒ^ｃ３６、及びＲ^ｄ３６は、Ｈ及びＣ_１－６アルキルから独立して選択される。

【0049】

いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、７－（１－（（５－クロロピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン、またはその薬学的に許容される塩（化合物１７、表１を参照）である。

【0050】

いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－メチル－７－（１－（（５－メチルピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン、またはその薬学的に許容される塩（化合物１８、表１を参照）である。

【0051】

いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－メチル－９－ペンチル－７－（１－（チエノ［３，２－ｂ］ピリジン－６－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン、またはその薬学的に許容される塩（化合物１９、表１を参照）である。

【0052】

いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、７－（１－（（２－（２－（ジメチルアミノ）アセチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン、またはその薬学的に許容される塩（化合物２０、表１を参照）である。

【0053】

式（Ｖ）の化合物の合成及び特徴付けは、ＵＳ－２０１９－０３３７９５７に見出すことができ、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0054】

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤
免疫系は、がんなどの疾患の制御及び根絶において重要な役割を果たす。しかし、癌細胞はしばしば、それらの成長を促進するために免疫系を回避または抑制するための戦略を開発する。そのようなメカニズムの１つは、免疫細胞で発現する共刺激及び共抑制分子の発現を変化させることである（Ｐｏｓｔｏｗ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１５，１－９）。ＰＤ－１などの阻害免疫チェックポイントのシグナル伝達をブロックすることは、有望で効果的な治療法であることが証明されている。

【0055】

プログラム死－１（「ＰＤ－１」、別名「ＣＤ２７９」）は、免疫応答を広く負に調節する拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリーのＴ細胞レギュレーターの約３１ｋＤタイプＩ膜タンパク質メンバーである（Ｉｓｈｉｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）ＥＭＢＯ Ｊ．１１：３８８７－３８９５；米国特許公開第２００７／０２０２１００号；同第２００８／
３１１１１７号；及び同第２００９／００１１０６６７号；米国特許番号６，８０８，７１０号；同第７，１０１，５５０号；同第７，４８８，８０２号；同第７，６３５，７５７号；及び同第７，７２２，８６８号；ＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４５５７号）。

【0056】

ＰＤ－１は、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び単球で発現する（Ａｇａｔａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８（５）：７６５－７７２；Ｙａｍａｚａｋｉ、Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２００２））Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５５３８－５５４５）及びナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞の低レベル（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：８９１－８９８；Ｍａｒｔｉｎ－Ｏｒｏｚｃｏ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｓｅｍｉｎ．ＣａｎｃｅｒＢｉｏｌ．１７（４）：２８８－２９８）。

【0057】

ＰＤ－１の細胞外領域は、ＣＴＬＡ－４の同等のドメインと２３％の同一性を持つ単一の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｖドメインで構成されている（Ｍａｒｔｉｎ－Ｏｒｏｚｃｏ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｓｅｍｉｎ．ＣａｎｃｅｒＢｉｏｌ．１７（４）：２８８－２９８）。細胞外ＩｇＶドメインは、膜貫通領域及び細胞内テールに続く。細胞内テールは、免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ及び免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフに位置する２つのリン酸化部位を含み、これはＰＤ－１がＴＣＲシグナルを負に調節することを示唆している。（Ｉｓｈｉｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）ＥＭＢＯ Ｊ．１１：３８８７－２８９５；Ｂｌａｎｋ，Ｃ．ｅｔ ａｔ．（２００６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５６（５）：７３９－７４５）。

【0058】

ＰＤ－１は、Ｂ７－Ｈ１及びＢ７－ＤＣに結合することにより、免疫系の阻害を仲介する（Ｆｌｉｅｓ，Ｄ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３０（３）：２５１－２６０；米国特許第６，８０３，１９２号；同第７，７９４，７１０号；米国特許出願公開第２００５／００５９０５１号；同第２００９／００５５９４４号；同第２００９／０２７４６６６号；同第２００９／０３１３６８７号；ＰＣＴ公開第ＷＯ０１／３９７２２号；同第ＷＯ０２／０８６０８３号）。

【0059】

ヒトＰＤ－１タンパク質（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５００９）のアミノ酸配列は、ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号１）である。

【0060】

ＰＤ－１は、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の２つのリガンドを有し（Ｐａｒｒｙ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ２００５，９５４３－９５５３；Ｌａｔｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００１，２，２６１－２６８）、それらはそれらの発現パターンが異なる。ＰＤ－Ｌ１タンパク質は、リポ多糖及びＧＭ－ＣＳＦ処理に応答してマクロファージ及び樹状細胞で、Ｔ細胞受容体及びＢ細胞受容体シグナル伝達時にＴ細胞及びＢ細胞でアップレギュレートされる。ＰＤ－Ｌ１はほとんど全ての腫瘍細胞でも高度に発現しており、ＩＦＮ－γ治療後に発現がさらに増加する（Ｉｗａｉ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ２００２，９９（１９）：１２２９３－７；Ｂｌａｎｋ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００４，６４（３）：１１４０－５）。実際、腫瘍のＰＤ－Ｌ１発現状態は、複数の腫瘍タイプで予後が予測されることが示されている（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ ２０１５；Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ ２０１５；Ｓａｂａｔｉｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ２０１５、６（７）：５４４９－５４６４）。対照的に、ＰＤ－Ｌ２の発現はより制限されており、主に樹状細胞によって発現される（Ｎａｋａｅ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００６，１７７：５６６－７３）。Ｔ細胞上でのＰＤ－１とそのリガンドＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２のライゲーションは、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γの産生、ならびにＴ細胞受容体の活性化時に誘導される細胞増殖を阻害するシグナルを伝達する（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２，３２（３）：６３４－４３；Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２０００，１９２（７）：１０２７－３４）。このメカニズムには、Ｓｙｋ及びＬｃｋリン酸化などのＴ細胞受容体シグナル伝達を阻害するためのＳＨＰ－２またはＳＨＰ－１ホスファターゼの動員が含まれる（Ｓｈａｒｐｅ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００７，８，２３９－２４５）。ＰＤ－１シグナル伝達軸の活性化は、ＰＫＣ－θ活性化ループのリン酸化も減衰させる。これは、ＮＦ－κＢ及びＡＰ１経路の活性化、及びＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦなどのサイトカイン産生に必要である（Ｓｈａｒｐｅ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００７，８，２３９－２４５；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２，３２（３）：６３４－４３；Ｆｒｅｅｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２０００，１９２（７）：１０２７－３４）。

【0061】

前臨床動物研究からの数連の証拠は、ＰＤ－１及びそのリガンドが免疫応答を負に制御していることを示す。ＰＤ－１欠損マウスは、ループス様糸球体腎炎及び拡張型心筋症を発症することが示されている（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １９９９，１１：１４１－１５１；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００１，２９１：３１９－３２２）。慢性感染症のＬＣＭＶモデルを使用して、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用が、ウイルス特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のエフェクター機能の活性化、拡大、獲得を阻害することが示されている（Ｂａｒｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２００６，４３９，６８２－７）。まとめると、これらのデータは、Ｔ細胞応答を増大または「救済」するためにＰＤ－１媒介阻害シグナル伝達カスケードをブロックする治療アプローチの開発を支持する。したがって、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１タンパク質／タンパク質相互作用をブロックし、それによって対象の癌を治療する新しい方法が必要である。

【0062】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ１１０６、またはＭＫ－３４７７５）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ＭＫ－３４７５、ＳＣＨ－９００４７５、ランブロリズマブ）、ＣＡＳ登録番号１３７４８５３－９１－４）、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）、ＣＡＳ Ｒｅｇ番号１３８０７２３－４４－３）、デュルバルマブ、アベルマブ（Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標））、セミプリマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４／ＭＥＤＩ－０６８０、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＧＢ－Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、デュルバルマブ、ＪＴＸ－４０１４、ＳＨＲ－１２１０、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－１０８、ＢＧＢ－Ａ３１７、ＳＨＲ－１２１０（ＨＲ－３０１２１０、ＳＨＲ１２１０、またはＳＨＲ－１２１０）、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＭＤＸ１１０５－０１、及び米国特許第７，４８８，８０２号、第７，９４３，７４３号、第８，００８，４４９号、第８，１６８，７５７号、第８，２１７，１４９号、または公開番号ＷＯ０３０４２４０２、ＷＯ２００８／１５６７１２、ＷＯ２０１０／０８９４１１、ＷＯ２０１０／０３６９５９、ＷＯ２０１１／０６６３４２、ＷＯ２０１１／１５９８７７、ＷＯ２０１１／０８２４００、ＷＯ２０１１／１６１６９９、ＷＯ２０１７／０７００８９、ＷＯ２０１７／０８７７７７、ＷＯ２０１７／１０６６３４、ＷＯ２０１７／１１２７３０、ＷＯ２０１７／１９２９６１、ＷＯ２０１７／２０５４６４、ＷＯ２０１７／２２２９７６、ＷＯ２０１８／０１３７８９、ＷＯ２０１８／０４４７８、ＷＯ２０１８／１１９２３６、ＷＯ２０１８／１１９２６６、ＷＯ２０１８／１１９２２１、ＷＯ２０１８／１１９２８６、ＷＯ２０１８／１１９２６３、ＷＯ２０１８／１１９２２４、ＷＯ２０１９／１９１７０７、及びＷＯ２０１９／２１７８２１に記載されているＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断薬の１つ以上、及びそれらの任意の組み合わせから選択される化合物である。本明細書に示される特許、出願及び特許出願公開のそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0063】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、例えば、ＷＯ２０１８／１１９２６６に開示されるような化合物から選択される。
（Ｓ）－１－（（７－クロロ－２－（２’－クロロ－３’－（５－（（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）メチル）ピコリナミド）－２－メチル－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピペリジン－２－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｓ）－１－（（７－クロロ－２－（３’－（７－クロロ－５－（（（Ｓ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－２－イル）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｓ）－１－（（２－（２’－クロロ－３’－（１，５－ジメチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－２－メチルビフェニル－３－イル）－７－シアノベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（２，２’－ジメチル－３’－（４，５，６，７－テトラヒドロチアゾロ［５，４－ｃ］ピリジン－２－イル）ビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（５－（２－（ジメチルアミノ）アセチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［３，４－ｄ］チアゾール－２－イル）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；及び
１－（（７－シアノ－２－（３’－（５－（２－（ジメチルアミノ）アセチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［３，４－ｄ］チアゾール－２－イル）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピペリジン－４－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩。

【0064】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩である。

【0065】

（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩は、本明細書では化合物Ｙとも呼ばれる。化合物Ｙの合成及び特徴付けは、ＷＯ２０１８／１１９２６６に開示されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0066】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、以下から選択される：
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸臭化水素酸塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸シュウ酸塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸塩酸塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸Ｌ－酒石酸塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸マロン酸塩；及び
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸リン酸塩。

【0067】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、例えば、ＷＯ２０１８／１１９２２４に開示されるような化合物から選択される。
（Ｓ）－１－（（２－（２’－クロロ－３’－（１，５－ジメチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－２－メチルビフェニル－３－イル）－７－シアノベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｒ）－１－（（２－（２’－クロロ－３’－（６－イソプロピル－４，５，６，７－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｃ］ピリジン－２－イル）－２－メチルビフェニル－３－イル）－７－シアノベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｓ）－Ｎ－（２－クロロ－３’－（５－（２－ヒドロキシプロピル）－１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－２’－メチルビフェニル－３－イル）－５－イソプロピル－１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド、またはその薬学的に許容される塩；
シス－４－（（２－（（２，２’－ジクロロ－３’－（１－メチル－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）カルバモイル）－１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）メチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
トランス－４－（２－（２－（（２，２’－ジクロロ－３’－（５－（２－ヒドロキシエチル）－１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）カルバモイル）－１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）エチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
トランス－４－（２－（２－（（２－クロロ－２’－メチル－３’－（１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）カルバモイル）－１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）エチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；及び
シス－４－（（２－（２－クロロ－３’－（５－（２－（エチル（メチル）アミノ）アセチル）－５，６－ジヒドロ－４Ｈ－ピロロ［３，４－ｄ］チアゾール－２－イル）－２’－メチルビフェニル－３－イルカルバモイル）－１－メチル－６，７－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５（４Ｈ）－イル）メチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩。

【0068】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、例えば、ＷＯ２０１９／１９１７０７に開示されるような化合物から選択される。
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（７－（（３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－２－メチルピリド［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピペリジン－４－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（７－（（（Ｓ）－１－ヒドロキシプロパン－２－イルアミノ）メチル）－２－メチルピリド［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（２－（ジフルオロメチル）－７－（（３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）ピリド［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピペリジン－４－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（２－（ジフルオロメチル）－７－（（３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）ピリド［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルピペリジン－４－カルボキサミド、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（２－シクロプロピル－７－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）ピリド［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；及び
（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－６－メチル－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩。

【0069】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、例えば、ＷＯ２０１９／２１７８２１に開示されるような化合物から選択される。
４－（２－（２－（（２，２’－ジクロロ－３’－（１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）カルバモイル）－１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）エチル）ビシクロ［２．２．１］ヘプタン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
４－（２－（２－（（３’－（５－（（１Ｈ－ピラゾール－３－イル）メチル）－１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－２，２’－ジクロロ－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）カルバモイル）－１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）エチル）ビシクロ［２．２．１］ヘプタン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
（Ｒ）－４－（２－（２－（（２，２’－ジクロロ－３’－（５－（２－ヒドロキシプロピル）－１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）カルバモイル）－１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）エチル）ビシクロ［２．２．１］ヘプタン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
４，４’－（（（（（２，２’－ジクロロ－［１，１’－ビフェニル］－３，３’－ジイル）ビス（アザネジイル））ビス（カルボニル））ビス（１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２，５－ジイル））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（ビシクロ［２．２．１］ヘプタン－１－カルボン酸）、またはその薬学的に許容される塩；
４－（２－（２－（（２－クロロ－２’－メチル－３’－（１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）カルバモイル）－１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）エチル）ビシクロ［２．２．１］ヘプタン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；
４－（２－（２－（（２，２’－ジメチル－３’－（１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）カルバモイル）－１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）エチル）ビシクロ［２．２．１］ヘプタン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩；及び
４－（２－（２－（（３’－（５－（トランス－４－カルボキシ－４－メチルシクロヘキシル）－１－メチル－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－カルボキサミド）－２，２’－ジクロロ－［１，１’－ビフェニル］－３－イル）カルバモイル）－１－メチル－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）エチル）ビシクロ［２．２．１］ヘプタン－１－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩。

【0070】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、ペムブロリズマブである。

【0071】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、ニボルマブである。

【0072】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、アテゾリズマブである。

【0073】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、抗体Ｘである。本明細書で使用される場合、抗体Ｘは、ヒトＰＤ－１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ＷＯ２０１７０１９８４６のｈＰＤ－１ｍＡｂ７（１．２）を参照されたい。これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。成熟抗体Ｘ重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を以下に記載する。可変重（ＶＨ）ドメイン及び可変軽（ＶＬ）ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３は、成熟ＶＬ及びＶＨ配列のＮ末端からＣ末端までの順序で示され、両方とも下線及び太字である。以下に列挙する成熟重鎖（配列番号２）及び成熟軽鎖（配列番号３）からなる抗体は、抗体Ｘと称される。

【0074】

成熟抗体Ｘ重鎖（ＨＣ）

【化6】

【0075】

成熟抗体Ｘ軽鎖（ＬＣ）

【化7】

【0076】

抗体Ｘの可変重（ＶＨ）ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する。

【化8】

【0077】

抗体Ｘの可変軽（ＶＬ）ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する。

【化9】

【0078】

抗体ＸのＶＨ ＣＤＲのアミノ酸配列を以下に列挙する。
ＶＨ ＣＤＲ１：ＳＹＷＭＮ（配列番号６）、
ＶＨ ＣＤＲ２：ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）、
ＶＨ ＣＤＲ３：ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）

【0079】

抗体ＸのＶＬ ＣＤＲのアミノ酸配列を以下に列挙する：
ＶＬ ＣＤＲ１：ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）、
ＶＬ ＣＤＲ２：ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）、及び
ＶＬ ＣＤＲ３：ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）。

【0080】

本明細書で使用される場合、「ＱＤ」は、対象に１日１回投与される投与量を意味すると解釈される。「ＱＯＤ」は、対象に１日おきに１回投与される投与量を意味すると解釈される。「ＱＷ」は、対象に週に１回投与される投与量を意味すると解釈される。「Ｑ２Ｗ」は、対象に２週に１回投与される投与量を意味すると解釈される。「Ｑ３Ｗ」は、対象に３週に１回投与される投与量を意味すると解釈される。「Ｑ４Ｗ」は、対象に４週に１回投与される投与量を意味すると解釈される。

【0081】

本明細書で使用される場合、量、投与量、時間的持続時間などの測定可能な値を指すときの「約」は、±１０％の変動を包含することを意味する。特定の実施形態では、「約」は、指定された値からの±５％、±１％、または±０．１％の変動、及びその間の任意の変動を含み得、そのような変動は、開示された方法を実行するのに適切である。

【0082】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される化合物は、前述の化合物のうちの１つの（Ｓ）－エナンチオマー、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、化合物は、前述の化合物のうちの１つの（Ｒ）－エナンチオマー、またはその薬学的に許容される塩である。

【0083】

明確にするために、別個の実施形態と関連して記載される、本発明のある特定の特徴はまた、単一の実施形態では組み合わせて提供され得るとさらに理解される。逆に、簡潔性のために単一の実施形態の文脈において記載されている本発明の様々な特徴は、別々にまたは任意の好適な部分的組み合わせで提供することもできる。

【0084】

ｎが整数である「ｎ員」という用語は典型的には、環形成原子の数がｎである部位における環形成原子の数を表す。例えば、ピペリジニルは、６員ヘテロシクロアルキル環の例であり、ピラゾリルは、５員ヘテロアリール環の例であり、ピリジルは、６員ヘテロアリール環の例であり、１，２，３，４－テトラヒドロ－ナフタレンは、１０員シクロアルキル基の例である。

【0085】

本明細書で使用される場合、「任意選択で置換される」という語句は、非置換または置換されていることを意味する。置換基は独立して選択され、置換は化学的に到達可能な任意の位置で行われてよい。本明細書で使用される場合、「置換される」という用語は、水素原子が除去され、置換基によって置き換えられることを意味する。単一の二価の置換基、例えば、オキソは、２つの水素原子を置き換えることができる。所与の原子での置換は原子価によって制限されることを理解されるべきである。

【0086】

本明細書で使用される場合、「各『変数』は、以下から独立して選択される」という語句は、「出現ごとに『変数』は、以下から選択される」ことと実質的に同じことを意味する。

【0087】

定義を通じて、「Ｃ_ｎ～ｍ」という用語は、端点を含む範囲を示し、ｎ及びｍは整数であり、炭素の数を示す。例としては、Ｃ_１－３、Ｃ_１－４、Ｃ_１－６などが挙げられる。

【0088】

本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「Ｃ_ｎ－ｍアルキル」という用語は、ｎ～ｍ個の炭素を有する、直鎖または分岐であり得る飽和炭化水素基を指す。アルキル部分の例としては、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ－プロピル（ｎ－Ｐｒ）、イソプロピル（ｉＰｒ）、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル等の化学基、２－メチル－１－ブチル、ｎ－ペンチル、３－ペンチル、ｎ－ヘキシル、１，２，２－トリメチルプロピル等の高級同族体等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１～６個の炭素原子、１～４個の炭素原子、１～３個の炭素原子、または１～２個の炭素原子を含有する。

【0089】

本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「Ｃ_ｎ～ｍアルコキシ」という用語は、式－Ｏ－アルキルの基を指し、アルキル基がｎ～ｍ個の炭素を有する。例となるアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ－プロポキシ及びイソプロポキシ）、ブトキシ（例えば、ｎ－ブトキシ及びｔｅｒｔ－ブトキシ）等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0090】

本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「アリール」という用語は、単環式または多環式（例えば、２、３、または４つの縮合環を有する）であり得る、芳香族炭化水素基を指す。「Ｃ_ｎ～ｍアリール」という用語は、ｎ～ｍ個の環炭素原子を有するアリール基を指す。アリール基としては、例えば、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、インダニル、インデニルなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、アリール基は、５～１０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は、フェニルまたはナフチルである。いくつかの実施形態では、アリールは、フェニル（すなわち、Ｃ_６アリール）である。

【0091】

本明細書で使用される場合、「ハロ」または「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを指す。いくつかの実施形態では、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒである。いくつかの実施形態では、ハロは、ＦまたはＣｌである。いくつかの実施形態では、ハロは、Ｆである。いくつかの実施形態では、ハロは、Ｃｌである。

【0092】

本明細書で使用される場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる「Ｃ_ｎ～ｍハロアルキル」という用語は、１個のハロゲン原子から２ｓ＋１個のハロゲン原子（同じであっても異なっていてもよい）を有するアルキル基を指し、「ｓ」はアルキル基中の炭素原子の数であり、アルキル基はｎ～ｍ個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、ハロアルキル基は、フッ素化のみされている。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１～６個、１～４個、または１～３個の炭素原子を有する。例示的なハロアルキル基としては、ＣＦ_３、Ｃ_２Ｆ_５、ＣＨＦ_２、ＣＨ_２Ｆ、ＣＣｌ_３、ＣＨＣｌ_２、Ｃ_２Ｃｌ_５などが挙げられる。

【0093】

本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」は、環化アルキル及びアルケニル基を含む、非芳香族環式炭化水素を指す。シクロアルキル基としては、単環式または多環式（例えば、２個の縮合環を有する）基、スピロ環、及び架橋環（例えば、架橋ビシクロアルキル基）が挙げられ得る。シクロアルキル基の環形成炭素原子は、オキソまたはスルフィド（例えば、Ｃ（Ｏ）またはＣ（Ｓ））によって任意選択で置換されていてもよい。またシクロアルキルの定義には、シクロアルキル環に縮合した（すなわち、それと共通の結合を有する）１つ以上の芳香環を有する部分、例えば、シクロペンタン、シクロヘキサンなどのベンゾまたはチエニル誘導体が含まれる。縮合芳香環を含むシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む任意の環形成原子を介して結合することができる。シクロアルキル基は、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の環形成炭素（すなわち、Ｃ_３－１０）を有してもよい。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、Ｃ_３－１０の単環式または二環式のシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、Ｃ_３－７単環式シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、Ｃ_４－７の単環式のシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、Ｃ_４－１０スピロ環または架橋シクロアルキル（例えば、架橋ビシクロアルキル基）である。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプタトリエニル、ノルボルニル、ノルピニル、ノルカルニル、キュバン、アダマンタン、ビシクロ［１．１．１］ペンチル、ビシクロ［２．１．１］ヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、ビシクロ［２．２．２］オクタニル、スピロ［３．３］ヘプタニルなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルである。

【0094】

本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから選択される少なくとも１つのヘテロ原子環員を有する、単環式または多環式（例えば、２個の縮合環を有する）の芳香族複素環を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール環は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子環員を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール部分における任意の環形成Ｎは、Ｎ－オキシドであり得る。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子環員を有する、５～１０員の単環式または二環式のヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子環員を有する、５～１０員の単環式または二環式のヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択される１または２個のヘテロ原子環員を有する、５～６員の単環式のヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子環員を有する、５～６単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、３～１０、４～１０、５～１０、５～７、３～７、または５～６個の環形成原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、１～４個の環形成ヘテロ原子、１～３個の環形成ヘテロ原子、１～２個の環形成ヘテロ原子、または１個の環形成ヘテロ原子を有する。ヘテロアリール基が１個を超えるヘテロ原子環員を含む場合、ヘテロ原子は同じでも異なっていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、チエニル（またはチオフェニル）、フリル（またはフラニル）、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、１，２，３－トリアゾリル、テトラゾリル、１，２，３－チアジアゾリル、１，２，３－オキサジアゾリル、１，２，４－トリアゾリル、１，２，４－チアジアゾリル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，３，４－トリアゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリル、及び１，２－ジヒドロ－１，２－アザボリン、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、アゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンズイソキサゾリル、イミダゾ［１、２－ｂ］チアゾリル、プリニル、トリアジニル、チエノ［３，２－ｂ］ピリジニル、イミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、１，５－ナフチリジニル、１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｂ］ピリジニル、トリアゾロ［４，３－ａ］ピリジニル、１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジニル、１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジニル、ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジニル、インダゾリルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0095】

本明細書で使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」は、少なくとも１つの非芳香族環（飽和または部分不飽和環）を有する単環式または多環式の複素環を指し、ヘテロシクロアルキルの環形成炭素原子のうちの１個以上は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから選択されるヘテロ原子によって置き換えられており、ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子及びヘテロ原子は、１個以上のオキソまたはスルフィド（例えば、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、またはＳ（Ｏ）_２など）によって任意選択で置換されていてもよい。ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子またはヘテロ原子が任意選択で１つまたは複数のオキソまたは硫化物で置換される場合、上記基のＯまたはＳは、本明細書で指定される環形成原子の数に追加される（例えば、１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イルは６員ヘテロシクロアルキル基であり、環形成炭素原子がオキソ基で置換されており、６員ヘテロシクロアルキル基がさらにメチル基で置換されている）。ヘテロシクロアルキル基としては、単環式及び多環式（例えば、２つの縮合環を有する）系が挙げられる。ヘテロシクロアルキルには、単環式及び多環式の３～１０員、４～１０員、５～１０員、４～７員、５～７員、または５～６員のヘテロシクロアルキル基が含まれる。ヘテロシクロアルキル基にはまた、スピロ環及び架橋環（例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択されるヘテロ原子によって置き換えられた１つ以上の環形成炭素原子を有する５～１０員架橋ビヘテロシクロアルキル環）が含まれ得る。ヘテロシクロアルキル基は、環形成炭素原子または環形成ヘテロ原子を介して結合することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０～３つの二重結合を含有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０～２つの二重結合を含有する。

【0096】

ヘテロシクロアルキルの定義にはまた、非芳香族複素環式環、例えば、ピペリジン、モルホリン、アゼピンなどのベンゾまたはチエニル誘導体に縮合した（すなわち、それと共通の結合を有する）１つ以上の芳香環を有する部分も含まれる。縮合芳香環を含むヘテロシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む任意の環形成原子を介して結合することができる。

【0097】

いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、３～１０個の環形成原子、４～１０個の環形成原子、３～７個の環形成原子、または５～６個の環形成原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、１～４個のヘテロ原子、１～３個のヘテロ原子、１～２個のヘテロ原子または１個のヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択される１または２個のヘテロ原子を有し、かつ１個以上の酸化環員を有する、単環式４～６員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を有し、かつ１個以上の酸化環員を有する、単環式または二環式の５～１０員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を有し、かつ１個以上の酸化環員を有する単環式または二環式の５～１０員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を有し、かつ１個以上の酸化環員を有する単環式の５～６員ヘテロシクロアルキルである。

【0098】

例示的なヘテロシクロアルキル基としては、ピロリジン－２－オン（または２－オキソピロリジニル）、１，３－イソオキサゾリジン－２－オン、ピラニル、テトラヒドロピラン、オキセタニル、アゼチジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピペリジニル、ピロリジニル、イソオキサゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、アゼパニル、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン、ベンズアザペン、アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、ジアザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、オキソビシクロ［２．１．１］ヘキサニル、アザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、アザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、ジアザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、ジアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、オキソビシクロ［２．２．２］オクタニル、アザビシクロ［２．２．２］オクタニル、アザアダマンタニル、ジアザアダマンタニル、オキソ－アダマンタニル、アザスピロ［３．３］ヘプタニル、ジアザスピロ［３．３］ヘプタニル、オキソ－アザスピロ［３．３］ヘプタニル、アザスピロ［３．４］オクタニル、ジアザスピロ［３．４］オクタニル、オキソ－アザスピロ［３．４］オクタニル、アザスピロ［２．５］オクタニル、ジアザスピロ［２．５］オクタニル、アザスピロ［４．４］ノナニル、ジアザスピロ［４．４］ノナニル、オキソ－アザスピロ［４．４］ノナニル、アザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［４．４］ノナニル、オキソ－ジアザスピロ［４．４］ノナニル、オキソ－ジヒドロピリダジニル、オキソ－２，６－ジアザスピロ［３．４］オクタニル、オキソヘキサヒドロピロロ［１，２ａ］ピラジニル、３－オキソピペラジニル、オキソ－ピロリジニル、オキソ－ピラジニルなどが挙げられる。例えば、ヘテロシクロアルキル基には、次の基が含まれる（Ｎ－メチル置換がある場合とない場合）：

【化10】

【0099】

本明細書で使用される場合、「Ｃ_ｏ～ｐシクロアルキル－Ｃ_ｎ～ｍアルキル－」は、式シクロアルキル－アルキレン－の基を指し、シクロアルキルはｏ～ｐ個の炭素原子を有し、アルキレン連結基はｎ～ｍ個の炭素原子を有する。

【0100】

本明細書で使用される場合、「Ｃ_ｏ～ｐアリール－Ｃ_ｎ～ｍアルキル－」は、式アリール－アルキレン－の基を指し、アリールはｏ～ｐ個の炭素原子を有し、アルキレン連結基はｎ～ｍ個の炭素原子を有する。

【0101】

本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール－Ｃ_ｎ～ｍアルキル－」は、式ヘテロアリール－アルキレン－の基を指し、アルキレン連結基はｎ～ｍ個の炭素原子を有する。

【0102】

本明細書で使用される場合、「ヘテロシクロアルキル－Ｃ_ｎ－ｍアルキル－」は、式ヘテロシクロアルキル－アルキレン－の基を指し、式中、アルキレン連結基は、ｎ～ｍ個の炭素原子を有する。

【0103】

ある特定の箇所では、定義または実施形態は、具体的な環（例えば、アゼチジン環、ピリジン環等）を指す。特に明記されていない限り、これらの環は、原子の原子価を超えない限り、任意の環員に取り付けることができる。例えば、アゼチジン環は、環の任意の位置で結合されてよく、これに対してピリジン－３－イル環は３位で結合される。

【0104】

本明細書で使用される場合、「オキソ」という用語は、炭素に結合した場合はカルボニル基（例えば、Ｃ＝ＯもしくはＣ（Ｏ））を形成するか、または窒素もしくは硫黄ヘテロ原子に結合して、ニトロソ、スルフィニルもしくはスルホニル基を形成する、二価置換基としての酸素原子（すなわち、＝Ｏ）を指す。

【0105】

本明細書で使用される場合、「から独立して選択される」という用語は、変数または置換基の各出現が、適用可能な一覧から出現ごとに独立して選択されることを意味する。

【0106】

本明細書に記載される化合物は、非対称（例えば、１つ以上の立体中心を有する）であり得る。エナンチオマーやジアステレオマーなどの全ての立体異性体は、特に明記されていない限り意図されている。非対称に置換された原子を含有する本開示の化合物は、光学的活性形態、またはラセミ形態で単離され得る。光学的に不活性な出発材料から光学活性形態を調製する方法は、ラセミ混合物の分割または立体選択的合成によるものなど、当該技術分野において既知である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合等の多くの幾何異性体もまた、本明細書に記載される化合物中に存在することができ、全てのそのような安定した異性体が本発明において企図される。本開示の化合物のシス及びトランスの幾何異性体が記載され、異性体の混合物として、または分離された異性体形態として単離され得る。いくつかの実施形態では、化合物は、（Ｒ）配置を有する。いくつかの実施形態では、化合物は（Ｓ）－配置を有する。本明細書に提供される式（例えば、式（Ｉ）、（ＩＩ）等）は、該化合物の立体異性体を含む。

【0107】

化合物のラセミ混合物の分割は、当該技術分野で周知である多数の方法のいずれかによって実行され得る。例示的な方法としては、光学活性の塩形成有機酸であるキラル分割酸を用いた分別再結晶が挙げられる。分別再結晶法に適する分割剤は、例えば、Ｄ及びＬ型の酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸などの光学活性酸、またはβ－カンファースルホン酸などの様々な光学活性カンファースルホン酸である。分別結晶法に適する他の分割剤としては、立体異性的に純粋な形態のα－メチルベンジルアミン（例えば、Ｓ型及びＲ型、またはジアステレオマー的に純粋な形態）、２－フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ－メチルエフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、１，２－ジアミノシクロヘキサンなどが挙げられる。

【0108】

ラセミ混合物の分割は、光学活性分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）が充填されたカラムでの溶出によって実施することもできる。好適な溶出溶媒組成物は、当業者によって決定され得る。

【0109】

本明細書に記載される化合物には、互変異性の形態も含まれる。互変異性の形態は、隣接する二重結合と単結合の交換と、同時にプロトンが移動することによって得られる。互変異性形態には、同じ実験式及び総電荷を有する異性体のプロトン化状態であるプロトトロピック互変異性体が含まれる。プロトトロピック互変異性体の例には、ケトン－エノール対、アミド－イミド酸対、ラクタム－ラクチム対、エナミン－イミン対ならびにプロトンがヘテロ環系の２つ以上の位置を占めることが可能な環状形態、例えば、１Ｈ－イミダゾール、及び３Ｈ－イミダゾール、１Ｈ－１，２，４－トリアゾール、２Ｈ－１，２，４－トリアゾール、及び４Ｈ－１，２，４－トリアゾール、１Ｈ－イソインドール及び２Ｈ－イソインドール、２－ヒドロキシピリジン及び２－ピリドン、ならびに１Ｈ－ピラゾール及び２Ｈ－ピラゾールが含まれる。互変異性型は平衡状態であり得るか、または適切な置換によって１つの形態に立体的に固定され得る。

【0110】

全ての化合物及びその薬学的に許容可能な塩は、水及び溶媒などの他の物質と一緒に確認され得る（例えば、水和物及び溶媒和物）または、単離され得る。

【0111】

いくつかの実施形態では、化合物の調製は、例えば、所望の反応の触媒作用または酸付加塩などの塩形態の形成に影響を及ぼすような酸または塩基の添加を含み得る。

【0112】

いくつかの実施形態では、本明細書において記載される化合物またはその塩は、実質的に単離される。「実質的に単離されている」とは、化合物が形成または検出された環境から化合物が少なくとも部分的に、または実質的に分離されていることを意味する。部分的な分離は、例えば、本明細書に記載の化合物が濃縮された組成物を含むことができる。実質的な分離には、本明細書において記載される化合物またはその塩の少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約９９重量％を含有する組成物が含まれ得る。化合物及びそれらの塩を単離する方法は、当該技術分野において日常的なものである。

【0113】

「化合物」という用語は、本明細書で使用される場合、図示される構造の全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、及び同位体を含むことを意味する。特定の１つの互変異性の形態として名前また構造で特定されている本明細書の化合物は、他に特定されていない限り、他の互変異性の形態を含むように意図される。

【0114】

「薬学的に許容される」という語句は、適切な医学的判断の範囲内でヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに好適であり、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、妥当な利益／リスク比に見合うような化合物、物質、組成物、及び／または剤形を指すために本明細書で用いられる。

【0115】

本願はまた、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容される塩も含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することによって親化合物が改変されている、開示される化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の無機塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられる、これらに限定されない。本開示の薬学的に許容可能な塩には、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩が含まれる。本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、塩基性部分または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、水中もしくは有機溶媒中、またはその２つの混合物中で、化学量論的量の適切な塩基または酸と、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を反応させることにより調製することができ、一般に、エーテル、酢酸エチル、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、もしくはブタノール）またはアセトニトリル（ＡＣＮ）のような非水性培地が好ましい。好適な塩の一覧は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８ ａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）に見出され、その各々の全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0116】

本明細書に記載の化合物は、その塩を含めて、既知の有機合成技術を使用して調製することができ、多数の可能な合成経路のうちのいずれかに従って合成することができる。

【0117】

本明細書に記載の化合物を調製するための反応は、有機合成の当業者により容易に選択され得る好適な溶媒中で実施することができる。好適な溶媒は、反応が実施される温度、例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度の範囲であり得る温度で、出発物質（反応物）、中間体または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１つの溶媒または２つ以上の溶媒の混合物中で実施され得る。特定の反応工程に応じて、特定の反応工程に好適な溶媒が当業者によって選択され得る。

【0118】

本明細書に記載の化合物の調製は、種々の化学基の保護及び脱保護を伴い得る。保護及び脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者により容易に決定され得る。保護基の化学的性質については、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に見出すことができ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【0119】

反応は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法に従ってモニターすることができる。例えば、生成物の形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、^１Ｈまたは^１３Ｃ）、赤外分光法、分光光度法（例えば、紫外可視）等の分光手段、質量分析法によって、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー－質量分光法（ＬＣＭＳ）、もしくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）等のクロマトグラフ方法によってモニターすることができる。化合物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣ－ＭＳ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ（分取ＬＣ－ＭＳ精製：化合物固有のメソッド最適化の改善）」 Ｋａｒｌ Ｆ．Ｂｌｏｍ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．２００４，６（６），８７４－８８３、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）及び順相シリカクロマトグラフィーを含む、種々の方法によって、当業者により精製することができる。

【0120】

本明細書に記載の化合物は、例えば、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを含む様々なＧＰＣＲのうちの１つまたは複数の活性を調節することができる。「変調する」という用語は、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂファミリーの１つまたは複数のメンバーの活動を増加または減少させる能力を指すことを意味する。したがって、本明細書に記載の化合物は、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを本明細書に記載の化合物または組成物のいずれか１つまたは複数と接触させることによってＡ２Ａ／Ａ２Ｂを調節する方法で使用することができる。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、Ａ２Ａ及びＡ２Ｂの一方または両方の阻害剤として作用することができる。さらなる実施形態では、本明細書に記載の化合物は、本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の調節量を投与することにより、受容体の調節を必要とする個体における。Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの活性を調節するために使用することができる。いくつかの実施形態では、調節は、阻害である。

【0121】

癌細胞の成長及び生存が複数のシグナル伝達経路によって影響を受けることを考えると、本発明は、薬剤耐性変異体によって特徴付けられる病状を治療するために有用である。さらに、それらが活性を調節するＧＰＣＲにおいて異なる選好を示す異なるＧＰＣＲ阻害剤を組み合わせて使用することができる。このアプローチは、複数のシグナル伝達経路を標的とすることで病状を治療するのに非常に効率的であり、細胞内で薬剤耐性が生じる可能性を減らし、病気の治療の毒性を減らすことができる。

【0122】

本化合物が結合及び／または調節する（例えば、阻害する）ＧＰＣＲには、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂファミリーの任意のメンバーが含まれる。

【0123】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される２つ以上の化合物は、１つのＧＰＣＲ（例えば、Ａ２Ａ）の活性を阻害するために使用される。

【0124】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される２つ以上の化合物は、少なくとも２つのＧＰＣＲ（例えば、Ａ２Ａ及びＡ２Ｂ）などの２つ以上のＧＰＣＲを阻害するために使用される。

【0125】

いくつかの実施形態では、１つ以上の化合物は、別のＧＰＣＲアンタゴニストと組み合わせて使用されて、１つのＧＰＣＲ（例えば、Ａ２ＡまたはＡ２Ｂ）の活性を阻害する。

【0126】

本明細書に記載のＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は選択的であり得る。「選択的」とは、化合物が、少なくとも１つの他のＧＰＣＲと比較して、それぞれ、より大きい親和性または効力でＧＰＣＲに結合するか、またはそれを阻害することを意味する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、Ａ２ＡまたはＡ２Ｂの選択的阻害剤である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、Ａ２Ａの選択的阻害剤（例えば、Ａ２Ｂを上回る）である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物は、Ａ２Ｂの選択的阻害剤（例えば、Ａ２Ａを上回る）である。いくつかの実施形態では、選択性は、少なくとも約２倍、５倍、１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約５００倍または少なくとも約１０００倍であり得る。選択性は、当該技術分野で日常的な方法によって測定することができる。いくつかの実施形態では、選択性は、各ＧＰＣＲに対する生化学的親和性で試験することができる。いくつかの実施形態では、本開示の化合物の選択性は、特定のＡ２Ａ／Ａ２Ｂ ＧＰＣＲ活性に関連する細胞アッセイによって決定することができる。

【0127】

本明細書で使用される場合、「接触させること」という用語は、インビトロ系またはインビボ系にて、示された部分を一緒にすることを指す。例えば、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを本明細書に記載の化合物と「接触させること」は、本発明の化合物を、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを有するヒト等の個体または患者に投与すること、及び例えば、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを含む細胞調製物または精製された調製物を含む試料へ本明細書に記載の化合物を導入することを含む。

【0128】

本明細書で使用される場合、互換的に使用される「個体」または「患者」という用語は、哺乳動物を含む任意の動物、好ましくはマウス、ラット、他の齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、最も好ましくはヒトを指す。

【0129】

本明細書で使用される場合、「治療上有効量」という語句は、研究者、獣医、医師、または他の臨床医が組織、系、動物、個体、またはヒトにおいて求めている生物学的または医薬的応答を引き出す、活性化合物または医薬品の量を指す。

【0130】

本明細書で使用される場合、「治療すること」または「治療」という用語は、（１）疾患を予防すること、例えば、疾患、状態、または障害の素因がある可能性があるが、疾患の病態または症状をまだ経験または示していない個人の疾患、状態、または障害を予防すること、（２）疾患を阻害すること、例えば、疾患、状態または障害の病態または症状を経験または示している個体における疾患、状態または障害を阻害すること（すなわち、病態及び／または症状のさらなる進行を阻止すること）、及び（３）疾患を寛解すること、例えば、疾患、状態または障害の病態または症状を経験または示している個体における疾患、状態または障害を寛解すること（すなわち、病態及び／または症状を逆転すること）、例えば、疾患の重症度を低下させること、のうちの１つまたは複数を指す。いくつかの実施形態では、「治療すること」または「治療」という用語は、疾患を阻害または寛解することを指す。

【0131】

投薬及び投与経路
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約０．１ｍｇ～約１０００ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約１ｍｇ～約５００ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約５ｍｇ～約２５０ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約１０ｍｇ～約１００ｍｇの投与量で対象に投与される。

【0132】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、遊離塩基基準で、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２０５ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２１５ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２３５ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２４５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２５５ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２６５ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２８５ｍｇ、約２９０ｍｇ、約２９５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３０５ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３１５ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３３５ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３４５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３５５ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３６５ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３８５ｍｇ、約３９０ｍｇ、約３９５ｍｇ、約４００ｍｇ、約４０５ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４１５ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４２５ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４３５ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４４５ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４５５ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４６５ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４７５ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４８５ｍｇ、約４９０ｍｇ、約４９５ｍｇ、約５００ｍｇ、約５０５ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５１５ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５３５ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５４５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５５５ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５６５ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５８５ｍｇ、約５９０ｍｇ、約５９５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６０５ｍｇ、約６１０ｍｇ、約６１５ｍｇ、約６２０ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６３０ｍｇ、約６３５ｍｇ、約６４０ｍｇ、約６４５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６５５ｍｇ、約６６０ｍｇ、約６６５ｍｇ、約６７０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約６８０ｍｇ、約６８５ｍｇ、約６９０ｍｇ、約６９５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７０５ｍｇ、約７１０ｍｇ、約７１５ｍｇ、約７２０ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７３０ｍｇ、約７３５ｍｇ、約７４０ｍｇ、約７４５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７５５ｍｇ、約７６０ｍｇ、約７６５ｍｇ、約７７０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約７８０ｍｇ、約７８５ｍｇ、約７９０ｍｇ、約７９５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８０５ｍｇ、約８１０ｍｇ、約８１５ｍｇ、約８２０ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８３０ｍｇ、約８３５ｍｇ、約８４０ｍｇ、約８４５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８５５ｍｇ、約８６０ｍｇ、約８６５ｍｇ、約８７０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約８８０ｍｇ、約８８５ｍｇ、約８９０ｍｇ、約８９５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９０５ｍｇ、約９１０ｍｇ、約９１５ｍｇ、約９２０ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９３０ｍｇ、約９３５ｍｇ、約９４０ｍｇ、約９４５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９５５ｍｇ、約９６０ｍｇ、約９６５ｍｇ、約９７０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約９８０ｍｇ、約９８５ｍｇ、約９９０ｍｇ、約９９５ｍｇ、及び約１０００ｍｇから選択される投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、遊離塩基基準で、約０．１ｍｇ～約５００ｍｇの範囲の投与量またはそれらの間の任意の投与量値で対象に投与される。いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約１ｍｇ～約１００ｍｇの範囲の投与量またはそれらの間の任意の投与量値で対象に投与される。

【0133】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、１日１回、１日おきに、週に１回、またはその間の任意の時間間隔で対象に投与される。いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、１日１回対象に投与される。いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、１日おきに対象に投与される。いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、週に１回対象に投与される。

【0134】

いくつかの実施形態では、投与量のそれぞれは、単一の、１日１回の投与量として投与される。いくつかの実施形態では、投与量のそれぞれは、単一の、１日１回の経口投与量として投与される。

【0135】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約０．１ｍｇ～約１０００ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約１ｍｇ～約５００ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約５ｍｇ～約２５０ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約１０ｍｇ～約１００ｍｇの投与量で対象に投与される。

【0136】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、遊離塩基基準で、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２０５ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２１５ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２３５ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２４５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２５５ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２６５ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２８５ｍｇ、約２９０ｍｇ、約２９５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３０５ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３１５ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３３５ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３４５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３５５ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３６５ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３８５ｍｇ、約３９０ｍｇ、約３９５ｍｇ、約４００ｍｇ、約４０５ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４１５ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４２５ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４３５ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４４５ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４５５ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４６５ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４７５ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４８５ｍｇ、約４９０ｍｇ、約４９５ｍｇ、約５００ｍｇ、約５０５ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５１５ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５３５ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５４５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５５５ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５６５ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５８５ｍｇ、約５９０ｍｇ、約５９５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６０５ｍｇ、約６１０ｍｇ、約６１５ｍｇ、約６２０ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６３０ｍｇ、約６３５ｍｇ、約６４０ｍｇ、約６４５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６５５ｍｇ、約６６０ｍｇ、約６６５ｍｇ、約６７０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約６８０ｍｇ、約６８５ｍｇ、約６９０ｍｇ、約６９５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７０５ｍｇ、約７１０ｍｇ、約７１５ｍｇ、約７２０ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７３０ｍｇ、約７３５ｍｇ、約７４０ｍｇ、約７４５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７５５ｍｇ、約７６０ｍｇ、約７６５ｍｇ、約７７０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約７８０ｍｇ、約７８５ｍｇ、約７９０ｍｇ、約７９５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８０５ｍｇ、約８１０ｍｇ、約８１５ｍｇ、約８２０ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８３０ｍｇ、約８３５ｍｇ、約８４０ｍｇ、約８４５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８５５ｍｇ、約８６０ｍｇ、約８６５ｍｇ、約８７０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約８８０ｍｇ、約８８５ｍｇ、約８９０ｍｇ、約８９５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９０５ｍｇ、約９１０ｍｇ、約９１５ｍｇ、約９２０ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９３０ｍｇ、約９３５ｍｇ、約９４０ｍｇ、約９４５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９５５ｍｇ、約９６０ｍｇ、約９６５ｍｇ、約９７０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約９８０ｍｇ、約９８５ｍｇ、約９９０ｍｇ、約９９５ｍｇ、及び約１０００ｍｇから選択される投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容される塩は、遊離塩基基準で、約０．１ｍｇ～約５００ｍｇの範囲の投与量、またはその間の任意の投与量値で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容可能な塩は、遊離塩基基準で、約１ｍｇ～約１００ｍｇの投与量、またはその間の任意の投与量値で対象に投与される。

【0137】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、約２００ｍｇ～約１０００ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２５ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４７５ｍｇ、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、または約１０００ｍｇの投与量で対象に投与される。

【0138】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、１日１回、１日おきに、週に１回、またはその間の任意の時間間隔で対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、１日１回対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、１日おきに対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、週に１回対象に投与される。

【0139】

いくつかの実施形態では、投与量のそれぞれは、単一の、１日１回の投与量として投与される。いくつかの実施形態では、投与量のそれぞれは、単一の、１日１回の経口投与量として投与される。

【0140】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、２週間ごと、３週間ごと、または４週間ごとに対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、毎月または四半期ごとに対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、静脈内投与によって対象に投与される。

【0141】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、１ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗの投与量で対象に投与される。

【0142】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、３ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗの投与量で対象に投与される。

【0143】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、３ｍｇ／ｋｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0144】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、１０ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗの投与量で対象に投与される。

【0145】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、１０ｍｇ／ｋｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0146】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、２００ｍｇ Ｑ３Ｗの投与量で対象に投与される。

【0147】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、２５０ｍｇ Ｑ３Ｗの投与量で対象に投与される。

【0148】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、３７５ｍｇ Ｑ３Ｗの投与量で対象に投与される。

【0149】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、５００ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0150】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、７５０ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0151】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、抗体Ｘである。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約２５０ｍｇから約８５０ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約３７５ｍｇから約８５０ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約４５０ｍｇから約８５０ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約５００ｍｇから約７５０ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約５００ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約７５０ｍｇの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、４週間ごとに対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、静脈内投与によって対象に投与される。

【0152】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、１ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗの投与量で対象に投与される。

【0153】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、３ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗの投与量で対象に投与される。

【0154】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、３ｍｇ／ｋｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0155】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、１０ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗの投与量で対象に投与される。

【0156】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、１０ｍｇ／ｋｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0157】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、２００ｍｇ Ｑ３Ｗの投与量で対象に投与される。

【0158】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、２５０ｍｇ Ｑ３Ｗの投与量で対象に投与される。

【0159】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、３７５ｍｇ Ｑ３Ｗの投与量で対象に投与される。

【0160】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、５００ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0161】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、７５０ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0162】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）抗体ＸであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0163】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、遊離塩基基準で約０．１ｍｇ～約５００ｍｇの用量で対象に投与され、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、１日１回または１日おきに投与される。

【0164】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約１００ｍｇ～約１０００ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0165】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）抗体ＸであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤；
ここで、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、遊離塩基基準で、約０．１ｍｇ～約５００ｍｇの投与量で対象に投与され、ここで、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、１日１回または１日おきに投与され；及び
抗体Ｘは、約１００ｍｇ～約１０００ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0166】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約３７５ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約５００ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約７５０ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0167】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）ペムブロリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0168】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）ペムブロリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0169】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）アテゾリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0170】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）アテゾリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0171】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸であるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容される塩（化合物Ｙ）。

【0172】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸であるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容される塩（化合物Ｙ）。

【0173】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）抗体ＸであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0174】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）抗体ＸであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0175】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、遊離塩基基準で約０．１ｍｇ～約５００ｍｇの用量で対象に投与され、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、１日１回または１日おきに投与される。

【0176】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約１００ｍｇ～約１０００ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0177】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）抗体ＸであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤；
ここで、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、遊離塩基基準で、約０．１ｍｇ～約５００ｍｇの投与量で対象に投与され、ここで、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、１日１回または１日おきに投与され；及び
抗体Ｘは、約１００ｍｇ～約１０００ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0178】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）抗体ＸであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤；
ここで、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、遊離塩基基準で、約０．１ｍｇ～約５００ｍｇの投与量で対象に投与されここで、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、１日１回または１日おきに投与され；及び
抗体Ｘは、約１００ｍｇ～約１０００ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0179】

いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、対象に、約３７５ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約５００ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体Ｘは、約７５０ｍｇ Ｑ４Ｗの投与量で対象に投与される。

【0180】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）ペムブロリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0181】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）ペムブロリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0182】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）ペムブロリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0183】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）ペムブロリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0184】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）アテゾリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0185】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）アテゾリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0186】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）アテゾリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0187】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）アテゾリズマブであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤。

【0188】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸であるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容される塩（化合物Ｙ）。

【0189】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるのは、以下のものを対象に投与することを含む、対象におけるがんの治療方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸であるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容される塩（化合物Ｙ）。

【0190】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸であるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容される塩（化合物Ｙ）。

【0191】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるのは、対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝臓癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、以下のものを対象に投与することを含む、方法である：
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸であるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、またはその薬学的に許容される塩（化合物Ｙ）。

【0192】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、同時に投与される。

【0193】

いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、連続して投与される。

【0194】

ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片である場合、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、様々な方法によって、対象、例えば、それを必要とする対象、例えば、ヒト対象に投与され得る。本明細書で議論される方法及び投与量は、全ての抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片、例えば、抗体Ｘに適用可能である。多くの用途において、投与経路は、静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、または筋肉内注射のうちの１つである。関節内送達を使用することも可能である。非経口投与の他の方法も使用することができる。そのような様式の例としては、動脈内、くも膜下腔内、被膜内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、ならびに硬膜外及び胸骨内注射が挙げられる。いくつかの場合では、投与は経口であり得る。

【0195】

抗体またはその抗原結合断片の投与経路及び／または投与様式はまた、例えば、対象をモニタリングすることによって、例えば、腫瘍を視覚化するために、例えば断層撮像を使用して、個々の症例に合わせて調整され得る。

【0196】

抗体またはその抗原結合断片は、固定用量として、またはｍｇ／ｋｇ患者体重用量で投与され得る。用量はまた、抗ＰＤ－１抗体に対する抗体の産生を低減または回避するように選択され得る。投薬レジメンは、所望の応答（例えば、治療応答）または組み合わせ治療効果を提供するために調整される。一般に、抗ＰＤ－１抗体（及び任意選択で第２の薬剤）の用量は、対象に薬剤を生物が利用可能な量で提供するために使用され得る。例えば、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～２０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、または１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を投与することができる。他の用量も使用することができる。特定の実施形態では、治療を必要とする対象に、抗ＰＤ－１抗体を、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、または４０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。

【0197】

組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、または約１０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ、または約５０～２５０ｍｇ／ｍＬ、または約１００～１５０ｍｇ／ｍＬ、または約１００～２５０ｍｇ／ｍＬの、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片を含んでよい。

【0198】

本明細書で使用される投薬単位形態または「固定用量」または「均一用量」は、対象を治療するための単位投与量として適した、物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体に関連して、及び任意選択で他の薬剤に関連して所望の治療効果をもたらすように算出された、既定量の活性化合物を含有する。単回または複数回の投薬が行われ得る。代替的に、または加えて、抗体は、連続注入を介して投与されてもよい。例示的な固定用量は、３７５ｍｇ、５００ｍｇ、及び７５０ｍｇを含む。

【0199】

抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片の用量は、例えば、少なくとも２回の用量、３回の用量、５回の用量、１０回の用量、またはそれ以上、例えば、１日１回もしくは２回、または１週間に約１～４回、または好ましくは週に１回、隔週（２週間毎）、３週間毎、月１回、例えば、約１～１２週間、好ましくは２～８週間、より好ましくは約３～７週間、さらにより好ましくは約４、５、または６週間を包含するのに十分な期間（治療の経過）にわたって周期的な間隔で投与することができる。対象を効果的に治療するために必要とされる投与量及び時期に影響を及ぼし得る因子としては、例えば、疾患または障害の重症度、製剤、送達経路、以前の治療、対象の一般的な健康及び／または年齢、ならびに存在する他の疾患が挙げられる。さらに、治療有効量の化合物を用いた対象の治療は、単一の治療を含むことができ、または好ましくは、一連の治療を含むことができる。

【0200】

薬学的組成物は、本明細書に記載される薬剤の「治療有効量」を含み得る。かかる有効量は、投与される薬剤の効果、または２つ以上の薬剤が使用される場合の薬剤の組み合わせ効果に基づいて決定され得る。薬剤の「治療有効量」はまた、個人の疾患状態、年齢、性別、及び体重などの要因、ならびに個人における所望の応答を引き出す化合物の能力、例えば、少なくとも１つの障害パラメータの改善、または少なくとも１つの障害の症状の改善により変動し得る。治療有効量は、治療上有益な効果が、組成物の任意の毒性または有害効果を上回るものでもある。

【0201】

医薬製剤
薬剤として用いられる場合、本開示の化合物は、医薬組成物の形態で投与することができる。これらの組成物は、医薬分野で周知の様式で調製することができ、局所処置が所望されるか、または全身処置が所望されるか、及び処置対象となる領域に応じて、様々な経路によって投与することができる。投与は、局所的（経皮、表皮、眼、ならびに、鼻腔内、膣、及び直腸送達を含む粘膜への送達を含む）、経肺（例えば、ネブライザーによるものを含む散剤もしくはエアロゾル剤の吸入もしくは吹送によるもの；気管内もしくは経鼻）、経口、または非経口であってよい。非経口投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、または注射もしくは注入、または頭蓋内、例えば、髄腔内もしくは脳室内、投与が含まれる。非経口投与は、単回ボーラス用量の形態であり得るか、または、例えば、連続灌流ポンプによるものであってもよい。局所投与のための薬学的組成物及び製剤としては、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐薬、スプレー、液体、及び粉末が挙げられ得る。従来の薬学的担体、水性基剤、粉末基剤、または油性基剤、増粘剤などは、必須であるか、または望ましいことがある。

【0202】

本開示には、１つ以上の薬学的に許容される担体（賦形剤）と組み合わせて、活性成分として、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物も含まれる。いくつかの実施形態では、組成物は、局所的投与に適する。この組成物を作製する際に、典型的には活性成分は賦形剤と混合され、賦形剤によって希釈されるか、または例えば、カプセル、小袋、紙もしくは他の容器の形態のそのような担体に封入される。賦形剤が希釈剤として機能する場合、それは、活性成分のためのビヒクル、担体、または媒体として作用する固体、半固体、または液体の材料であり得る。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、粉末、ロゼンジ、サシェ、カシェ、エリキシル、懸濁剤、エマルション、溶液、シロップ、エアロゾル（固体または液体媒体として）、例えば、１０重量％までの活性化合物を含む軟膏、軟質及び硬質ゼラチンカプセル、坐剤、無菌注射用溶液、及び無菌包装粉末の形態であり得る。

【0203】

製剤を調製する際は、活性化合物は、他の成分と組み合わせる前に、適切な粒径を提供するために粉砕することができる。活性化合物が実質的に不溶性である場合、２００メッシュ未満の粒径まで粉砕され得る。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒径は、粉砕によって調整されて、製剤中に実質的に均一な分布、例えば約４０メッシュをもたらすことができる。

【0204】

本開示の化合物は、錠剤形成及び他の製剤タイプに適した粒経を得るために、湿式粉砕などの既知の粉砕手順を使用して粉砕され得る。本開示の化合物の微細に分割された（ナノ粒子）調製物は、当該技術分野で知られているプロセスによって調製することができ、例えば、国際出願第ＷＯ２００２／０００１９６号の開示を参照されたい。

【0205】

適切な賦形剤のいくつかの例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、及びメチルセルロースが含まれる。製剤には、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱物油などの潤滑剤、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、メチルベンゾエート及びプロピルヒドロキシベンゾエートなどの保存剤、甘味料、ならびに香味料をさらに含み得る。本発明の組成物は、当該技術分野で既知の手順を用いることによる患者への投与後に、活性成分の迅速、持続、または遅延放出を提供するように製剤化することができる。

【0206】

組成物は、単位剤形で製剤化され得る。「単位剤形」という用語は、ヒト対象及び他の哺乳動物のための単位投与量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位には、好適な薬学的賦形剤に関連して、所望の治療効果を生み出すために算出された、既定量の活性物質が含まれる。

【0207】

錠剤などの固体組成物を調製するために、主要な活性成分を薬学的賦形剤と混合して、本発明の化合物の均質な混合物を含有する固体の前製剤組成物を形成する。これらの前製剤組成物が均質物として言及される場合、活性成分は、典型的には、組成物全体に均一に分散され、それにより、組成物は、錠剤、丸剤、及びカプセル剤などの等しく有効な単位剤形に容易に細分化することができる。次いで、この固体予備製剤は、単位剤形に細分化される。

【0208】

本開示の錠剤または丸剤は、長期作用の利点をもたらす剤形を提供するためにコーティングまたは別様に配合され得る。例えば、錠剤または丸剤は、内部用量及び外部用量の成分を含み得、後者は前者上のエンベロープの形態である。２つの成分は、胃における崩壊に抵抗し、かつその内部成分を無傷で十二指腸内まで通過させる、または放出を遅延させることができる、腸溶性の層によって分離することができる。多数のポリマー酸、ならびにシェラック、セチルアルコール、及び酢酸セルロースなどの物質とのポリマー酸の混合物を含む様々な物質は、そのような腸溶性層またはコーティングとして利用することができる。

【0209】

本発明の化合物及び組成物が経口または注射による投与のために組み込まれ得る液体形態には、水溶液、好適に風味付けされたシロップ、水性または油性懸濁液、及び綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、またはピーナッツ油などの食用油で風味付けされた乳剤、ならびにエリキシル剤及び類似の薬学的ビヒクルが含まれる。

【0210】

吸入または吹送のための組成物には、薬学的に許容される水性もしくは有機溶媒、またはそれらの混合物中の液体及び懸濁液、ならびに粉末が含まれる。液体または固体の組成物は、上記のような好適な薬学的に許容される賦形剤を含有し得る。いくつかの実施形態では、組成物は、局所または全身効果のために口または鼻呼吸経路により投与される。組成物は、不活性ガスの使用により噴霧され得る。噴霧された溶液は、噴霧デバイスから直接的に吸入され得るか、または噴霧デバイスが、顔面マスク、テント、もしくは断続的陽圧呼吸機器に装着され得る。溶液、懸濁液、または粉末の組成物は、適切な様式で製剤を送達するデバイスから経口的または鼻腔に投与され得る。

【0211】

局所製剤は、１つ以上の従来の担体を含有し得る。いくつかの実施形態では、軟膏は、水、及び例えば、流動パラフィン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、プロピレングリコール、白色ワセリン（登録商標）（ワセリン）等から選択される１つ以上の疎水性担体を含有し得る。クリームの担体組成物は、水と、グリセロール及び１つ以上の他の構成成分、例えば、グリセリンモノステアリン酸塩、ＰＥＧ－グリセリンモノステアリン酸塩、及びセチルステアリルアルコールとの組み合わせに基づき得る。ゲルは、イソプロピルアルコール及び水を使用して、好適には、例えばグリセロール、ヒドロキシエチルセルロースなどの他の構成成分と組み合わせて製剤化され得る。いくつかの実施形態では、局所製剤は、少なくとも約０．１、少なくとも約０．２５、少なくとも約０．５、少なくとも約１、少なくとも約２、または少なくとも約５重量％の本開示の化合物を含む。局所製剤は、例えば、乾癬または他の皮膚症状等の選択された適応症を治療するための指示書を任意選択で添付した１００ｇのチューブ中に適切に包装され得る。

【0212】

患者に投与される化合物または組成物の量は、投与されるもの、予防または治療などの投与の目的、患者の状態、投与の方法などに応じて変化するであろう。治療的用途では、組成物は、疾患の症状及びその合併症を治癒または少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で、すでに疾患に罹患している患者に投与することができる。有効用量は、治療される疾患病態、ならびに疾患の重症度、患者の年齢、体重、及び一般状態などの因子に基づく担当医師の判断に依存する。

【0213】

患者に投与される組成物は、上記の薬学的組成物の形態であり得る。これらの組成物は、従来の殺菌技法によって殺菌され得るか、または無菌濾過されてもよい。水溶液は、そのままで使用するために包装するか、または凍結乾燥することができ、凍結乾燥調製物は、投与前に無菌水性担体と組み合わされる。化合物調製物のｐＨは、典型的には、３～１１、より好ましくは５～９、最も好ましくは７～８であろう。ある特定の前述の賦形剤、担体、または安定剤の使用によって、薬学的塩の製剤が得られることは理解されよう。

【0214】

本開示の化合物の治療量は、例えば、治療を行う特定の用途、化合物の投与方法、患者の健康及び症状ならびに処方する医師の判断に従って変動し得る。医薬組成物中の本開示の化合物の割合または濃度は、投与量、化学的性質（例えば、疎水性）、及び投与経路を含めたいくつかの要因に応じて様々であり得る。例えば、本発明の化合物は、非経口投与の場合、約０．１～約１０％ｗ／ｖの化合物を含有する生理緩衝水溶液中で提供することができる。

【0215】

本発明の組成物は、化学療法薬、ステロイド、抗炎症性化合物または免疫抑制剤などの１種または複数種の追加の医薬品をさらに含むことが可能であり、その例は本明細書に収載している。

【0216】

特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、インプラントを含む徐放性製剤及びマイクロカプセル化送達システムなど、急速放出から化合物を保護する担体を用いて調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の調製のための多くの方法は、特許取得されているか、または一般的に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７８）を参照されたい。

【0217】

固形腫瘍及びがん
本開示の治療方法及びレジメンを使用して治療可能ながんの例には、これらに限定されないが、骨癌、脾臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ）、子宮内膜癌（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ）、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿管癌、尿道癌、尿膜管癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、陰茎癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病を含む慢性または急性白血病、小児固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓癌または尿道癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘発されるがんを含む環境的に誘発されるがん、ならびに上記がんの組み合わせが挙げられる。本開示の方法は、転移がん、特にＰＤ－Ｌ１を発現する転移がんの処置にも有用である。

【0218】

いくつかの実施形態では、本開示の方法により治療可能ながんには、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫）、腎癌（例えば、明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、乳癌、結腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌）、頭頸部扁平上皮細胞癌、尿路上皮癌（例えば、膀胱）、及びマイクロサテライト不安定性の高いがん（ＭＳＩｈｉｇｈ）が含まれる。さらに、本開示は、本開示の方法を使用して成長が阻害される可能性がある難治性または再発性悪性腫瘍を含む。

【0219】

いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して治療可能ながんとしては、固形腫瘍（例えば、前立腺癌、結腸癌、食道癌、子宮内膜癌、卵巣癌、子宮癌、腎癌、肝癌、膵臓癌、胃癌、乳癌、肺癌、頭頸部癌、甲状腺癌、膠芽腫、肉腫、膀胱癌など）、血液がん（例えば、リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（再発性もしくは難治性ＮＨＬ及び再発濾胞性を含む）、ホジキンリンパ腫または多発性骨髄腫などのリンパ腫、白血病）ならびに該がんの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0220】

いくつかの実施形態では、本開示の本方法を使用して処置可能ながんとしては、胆管癌（ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）、胆管癌（ｂｉｌｅ ｄｕｃｔ ｃａｎｃｅｒ）、トリプルネガティブ乳癌、横紋筋肉腫、小細胞肺癌、平滑筋肉腫、肝細胞癌、ユーイング肉腫、脳癌、脳腫瘍、星細胞腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、基底細胞癌、軟骨肉腫、類上皮肉腫、眼癌（ｅｙｅ ｃａｎｃｅｒ）、卵管癌、胃腸癌、消化管間質腫瘍、有毛細胞白血病、腸癌、膵島細胞癌、口腔癌（口腔癌）、口腔癌（ｍｏｕｔｈ ｃａｎｃｅｒ）、咽頭癌、喉頭癌、口唇癌、中皮腫、頸部癌、鼻腔癌、眼癌（ｏｃｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ）、眼黒色腫、骨盤癌、直腸癌、腎細胞癌、唾液腺癌、副鼻腔癌、脊椎癌、舌癌、管状癌、尿道癌、及び尿管癌が挙げられるが、これらに限定されない。

【0221】

いくつかの実施形態では、疾患または障害は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、黒色腫、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、肝臓癌、結腸癌、子宮内膜癌、膀胱癌、皮膚癌、子宮癌、腎癌、胃癌、または肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、多発性骨髄性白血病、本質的な血小板血症、慢性骨髄性白血病、骨髄線維症、原発性骨髄線維症、多発性赤血球増加症後／本質的な血小板血症骨髄線維症、本質的な血小板血症後の骨髄線維症及び多発性赤血球増加症後の骨髄線維症から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、子宮内膜癌、肺癌、腎細胞癌、尿路上皮癌、膀胱癌、乳癌、及び膵癌から選択される。

【0222】

いくつかの実施形態では、がんは、膀胱癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、または肺転移）、黒色腫（例えば、転移性黒色腫）、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、大腸癌、膵癌、食道癌、前立腺癌、腎臓癌、皮膚癌、甲状腺癌、肝癌、子宮癌、頭頸部癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、肛門癌、胆管癌、口腔癌、非黒色腫皮膚癌、及びメルケル細胞癌から選択される。

【0223】

いくつかの実施形態では、前立腺癌は、転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）である。

【0224】

いくつかの実施形態では、大腸癌は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）である。

【0225】

いくつかの実施形態では、がんは、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、黒色腫、膵臓癌、乳癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、結腸癌（ｃｏｌｏｒ ｃａｎｃｅｒ）、子宮内膜癌、膀胱癌、皮膚癌、子宮癌、腎癌、胃癌、または肉腫である。いくつかの実施形態では、肉腫は、アスキン腫瘍、ブドウ状肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、骨肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、葉状嚢肉腫、隆起性皮膚線維肉腫、デスモイド腫瘍、線維形成性小丸細胞腫瘍、類上皮肉腫、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、血管周囲細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、または未分化多形肉腫である。

【0226】

いくつかの実施形態では、がんは、中皮腫または腺癌である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、中皮腫である。いくつかの実施形態では、がんは、腺癌である。

【0227】

ＭＤＳＣ（骨髄系由来抑制細胞）は、骨髄系列（骨髄幹細胞を起源とする細胞のファミリー）からの不均一な免疫細胞の群である。ＭＤＳＣは、造血の変化の結果として、慢性感染症や癌などの病理学的状況で強く拡大する。ＭＤＳＣは、免疫刺激特性ではなく強力な免疫抑制活性を有する他の骨髄細胞タイプとは区別される。他の骨髄細胞と同様に、ＭＤＳＣは、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ及びナチュラルキラー細胞を含む他の種類の免疫細胞と相互作用して、それらの機能を制御する。いくつかの実施形態では、例えば、本明細書に記載の化合物は、マクロファージ及び／またはＭＤＳＣの浸潤の高い基底レベルを伴う固形腫瘍を含む、ＭＤＳＣの高い浸潤を伴うがん組織（例えば、腫瘍）に関連する方法において使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の併用療法は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を発現する腫瘍または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を伴う癌組織（例えば、腫瘍）に関連する方法で使用することができる。

【0228】

いくつかの実施形態では、がんは、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸直腸癌（例えば、結腸癌）、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、腎細胞癌、肝臓癌、または肝細胞癌である。

【0229】

いくつかの実施形態では、がんは、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択される。

【0230】

いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、子宮内膜癌、肺癌、腎臓癌、膀胱癌、乳癌、膵臓癌、及び結腸癌から選択されるがんから選択される。

【0231】

いくつかの実施形態では、がんは、子宮内膜癌、肛門癌、及び胆管癌から選択される。

【0232】

いくつかの実施形態では、がんは、腫瘍微小環境において高いアデノシンレベルを示す腫瘍である。これらの腫瘍は、遺伝子発現シグネチャーによって濃縮されるか、またはＣＤ７３及び／または組織非特異的アルカリホスファターゼ（すなわち、ＴＮＡＰ及びＰＡＰ）を含む他のアルカリホスファターゼの高発現レベルによって濃縮される可能性がある。

【0233】

いくつかの実施形態では、がんは、直腸癌である。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫である。いくつかの実施形態では、がんは、子宮内膜癌である。いくつかの実施形態では、子宮内膜癌（子宮内膜癌）（例えば、子宮内膜癌（ｅｎｄｏｍｅｔｉｒａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ））である。いくつかの実施形態では、がんは、肺癌である。いくつかの実施形態では、肺癌は、小細胞肺癌または非小細胞肺癌である。いくつかの実施形態では、がんは、腎臓腎明細胞癌である。いくつかの実施形態では、がんは、扁平上皮癌である。いくつかの実施形態では、がんは、膀胱癌である。いくつかの実施形態では、がんは、乳癌である。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳癌である。いくつかの実施形態では、がんは、肺癌である。いくつかの実施形態では、膵臓癌は、膵管腺癌である。いくつかの実施形態では、がんは、肉腫である。いくつかの実施形態では、肉腫は、アスキン腫瘍、ブドウ状肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、骨肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、葉状嚢肉腫、隆起性皮膚線維肉腫、デスモイド腫瘍、線維形成性小丸細胞腫瘍、類上皮肉腫、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、血管周囲細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、または未分化多形肉腫である。

【0234】

標識化合物及びアッセイ法
本開示は、本開示の同位体標識化合物をさらに含む。「同位体標識」または「放射性標識された」化合物は、１つ以上の原子が、自然界で通常見られる（すなわち、天然に存在する）原子量または質量数とは異なる原子量または質量数を有する原子に置き換えられた、すなわち置換された本開示の化合物である。本開示の化合物に組み込まれてよい好適な放射性核種としては、^２Ｈ（重水素についてはＤとも記載される）、^３Ｈ（トリチウムについてはＴとも記載される）、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｎ、^１５Ｏ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^１８Ｆ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^８２Ｂｒ、^７５Ｂｒ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ及び^１３１Ｉが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、本開示の化合物中における１個以上の水素原子が、重水素原子によって置き換えられ得る（例えば、本開示の化合物のアルキル基の１個以上の水素原子が、重水素原子で任意選択で置換され得る、例えば、－ＣＨ_３が－ＣＤ_３で置換されるなど）。

【0235】

本明細書に提示される化合物の１つ以上の構成原子は、天然または非天然存在度の原子の同位体で置き換えまたは置換することができる。いくつかの実施形態では、化合物は、少なくとも１個の重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、化合物は、２個以上の重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、化合物は、１～２個、１～３個、１～４個、１～５個、または１～６個の重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、化合物中の全ての水素原子を、重水素原子に置き換えられる、すなわち置換することができる。

【0236】

いくつかの実施形態では、任意の式Ａ置換基の炭素原子に結合した１、２、３、４、５、６、７、または８個の水素原子は、それぞれ、任意選択で重水素原子によって置き換えられる。

【0237】

有機化合物中に同位体を含めるための合成法は、当該技術分野では周知のものである（Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｂｙ Ａｌａｎ Ｆ．Ｔｈｏｍａｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ａｐｐｌｅｔｏｎ－Ｃｅｎｔｕｒｙ－Ｃｒｏｆｔｓ，１９７１、Ｔｈｅ Ｒｅｎａｉｓｓａｎｃｅ ｏｆ Ｈ／Ｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｙ Ｊｅｎｓ Ａｔｚｒｏｄｔ，Ｖｏｌｋｅｒ Ｄｅｒｄａｕ，Ｔｈｏｒｓｔｅｎ Ｆｅｙ ａｎｄ Ｊｏｃｈｅｎ Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７，７７４４－７７６５；Ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｂｙ Ｊａｍｅｓ Ｒ．Ｈａｎｓｏｎ，Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１）。同位体標識化合物は、ＮＭＲ分光法、代謝実験、及び／またはアッセイなどのさまざまな研究で使用することができる。

【0238】

重水素などより重い同位体への置換は、代謝安定性がより高まることに由来するある特定の治療上の利点、例えば、インビボ半減期の延長または投薬必要量の減少など、をもたらすことができ、したがって、場合によっては、好ましくなり得る（例えば、Ａ．Ｋｅｒｅｋｅｓ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，５４、２０１－２１０；Ｒ．Ｘｕ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｌａｂｅｌ Ｃｏｍｐｄ．Ｌａｂｅｌ Ｃｏｍｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２０１５，５８、３０８－３１２を参照されたい）。特に、１つ以上の代謝部位での置換は、１つ以上の治療上の利点をもたらす可能性がある。

【0239】

当該放射標識化合物に組み込まれる放射性核種は、その放射標識化合物の特定の用途に依存する。例えば、インビトロＡ２Ａ／Ａ２Ｂ標識及び競合アッセイの場合、^３Ｈ、^１４Ｃ、^８２Ｂｒ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、または^３５Ｓを組み込む化合物が有用であり得る。放射性画像化用途の場合、^１１Ｃ、^１８Ｆ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１３１Ｉ、^７５Ｂｒ、^７６Ｂｒ、または^７７Ｂｒが有用であり得る。

【0240】

「放射性標識」または「標識化合物」は、少なくとも１つの放射性核種を組み込んだ化合物であることが理解される。いくつかの実施形態では、放射性核種は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^３５Ｓ、及び^８２Ｂｒからなる群から選択される。

【0241】

本開示は、放射性同位体を本開示の化合物に組み込むための合成方法をさらに含むことができる。有機化合物に放射性同位体を組み込むための合成方法は、当該技術分野で周知であり、当業者は、開示の化合物に適用可能な方法を容易に認識するであろう。

【0242】

抗体の産生方法
抗体は、細菌または真核細胞において産生され得る。いくつかの抗体、例えば、Ｆａｂ’は、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞において産生され得る。抗体はまた、形質転換細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ）などの真核細胞において産生され得る。加えて、抗体（例えば、ｓｃＦｖ’）は、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３－３５（２００１））、Ｈａｎｓｅｕｌａ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母細胞内で発現され得る。目的の抗体を産生するために、抗体をコードするポリヌクレオチドを構築し、発現ベクターに導入し、次いで、好適な宿主細胞に発現させる。標準的な分子生物学的技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を回収する。

【0243】

抗体が細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現される場合、発現ベクターは、細菌細胞内のベクターの増幅を可能にする特徴を有するべきである。さらに、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、またはＸＬ１－ＢｌｕｅなどのＥ．ｃｏｌｉを宿主として使用する場合、ベクターは、プロモーター、例えば、ｌａｃＺプロモーター（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，３４１：５４４－５４６（１９８９）、ａｒａＢプロモーター（Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１－１０４３（１９８８））、またはＥ．ｃｏｌｉにおいて効率的な発現を可能にすることができるＴ７プロモーターを有さなければならない。そのようなベクターの例としては、例えば、Ｍ１３シリーズベクター、ｐＵＣシリーズベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ－５Ｘ－１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ ｓｙｓｔｅｍ」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、及びｐＥＴ（この発現ベクターが使用される場合、宿主は好ましくはＴ７ ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が挙げられる。発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含有し得る。Ｅ．ｃｏｌｉの周辺質への産生のために、ｐｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６９：４３７９（１９８７））を、抗体分泌のシグナル配列として使用してもよい。細菌の発現については、塩化カルシウム法またはエレクトロポレーション法を使用して、発現ベクターを細菌細胞に導入してもよい。

【0244】

抗体が、ＣＨＯ、ＣＯＳ、及びＮＩＨ３Ｔ３細胞などの動物細胞において発現される場合、発現ベクターは、これらの細胞において発現するのに必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８（１９７９））、ＭＭＬＶ－ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８：５３２２（１９９０））、またはＣＭＶプロモーターを含む。免疫グロブリンまたはそのドメインをコードする核酸配列に加えて、追加の配列、例えば、宿主細胞内でのベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択マーカー遺伝子を、組換え発現ベクターに保有させることができる。選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞の選択を促進することができる（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、及び同第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例えば、通常、選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、メトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択マーカーを有するベクターの例としては、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ－ＲＳＶ、ｐＢＫ－ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶ、及びｐＯＰ１３が挙げられる。

【0245】

一実施形態では、抗体は、哺乳動物細胞で産生される。抗体を発現するための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０に記載されるｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含み、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１－６２１に記載されるように、ＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用される）、ヒト胚性腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、ならびにトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物に由来する細胞が挙げられる。

【0246】

抗体発現のための例示的な系では、抗ＰＤ－１抗体（例えば、抗体Ｘ）と結合する抗体の抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションによって、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞内に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子はそれぞれ、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントなどのＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来する）に作用可能に連結され、遺伝子の高レベルの転写を駆動する。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用してベクターでトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保有する。選択された形質転換宿主細胞は、抗体重鎖及び軽鎖の発現を可能にするように培養され、抗体は、培養培地から回収される。

【0247】

抗体は、遺伝子改変動物によっても産生される。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号は、トランスジェニック哺乳動物の乳腺において抗体を発現させる方法を記載している。目的の抗体と分泌のためのシグナル配列をコードする乳汁特異的プロモーターと核酸を含む導入遺伝子が構築される。そのようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって産生される乳は、そのなかに分泌される、目的の抗体を含む。抗体は、乳から精製することができるか、またはいくつかの用途のために直接使用されることができる。本明細書に記載される核酸のうちの１つ以上を含む動物も提供される。

【0248】

本開示の抗体は、宿主細胞の内部または外部（培地など）から単離され、実質的に純粋で均質な抗体として精製され得る。抗体精製のために一般的に使用される単離及び精製方法は、抗体の単離及び精製のために使用されてもよく、任意の特定の方法に限定されない。抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィー、濾過、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈殿、ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電気集束、透析、及び再結晶化を適切に選択及び組み合わせることによって単離及び精製され得る。クロマトグラフィーとしては、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、及び吸着クロマトグラフィー（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ Ｄａｎｉｅｌ Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｔ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９６）。クロマトグラフィーは、ＨＰＬＣ及びＦＰＬＣなどの液相クロマトグラフィーを使用して実施され得る。アフィニティークロマトグラフィーに使用されるカラムとしては、プロテインＡカラム及びプロテインＧカラムが挙げられる。プロテインＡカラムを使用するカラムの例としては、Ｈｙｐｅｒ Ｄ、ＰＯＲＯＳ、及びＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。本開示はまた、これらの精製方法を使用して高度に精製される抗体も含む。

【0249】

抗体Ｘなどの抗体は、例えば、列挙されたアミノ酸配列をコードする合成遺伝子を調製及び発現することによって、またはヒト生殖細胞系列遺伝子を変異させて、列挙されたアミノ酸配列をコードする遺伝子を提供することによって作製され得る。さらに、この抗体及び他の抗ＰＤ－１抗体は、例えば、以下の方法のうちの１つまたは複数を使用して得ることができる。

【0250】

ヒト化抗体は、抗原結合に直接関与していないＦｖ可変領域の配列を、ヒトＦｖ可変領域由来の同等の配列で置き換えることによって生成され得る。ヒト化抗体を生成するための一般的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：１２０２－１２０７（１９８５）、Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，４：２１４（１９８６）、ならびにＵＳ５，５８５，０８９、ＵＳ５，６９３，７６１、ＵＳ５，６９３，７６２、ＵＳ５，８５９，２０５、及びＵＳ６，４０７，２１３によって提供される。これらの方法は、重鎖または軽鎖のうちの少なくとも１つから免疫グロブリンＦｖ可変領域の全てまたは一部をコードする核酸配列を単離、操作、及び発現することを含む。かかる核酸の供給源は、当業者に周知であり、例えば、上述のように、所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子から、または合成構築物から得ることができる。次いで、ヒト化抗体をコードする組換えＤＮＡを、適切な発現ベクターにクローニングすることができる。

【0251】

例えば、ヒト生殖系列配列は、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７７６－７９８（１９９２）；Ｃｏｏｋ，Ｇ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１６：２３７－２４２（１９９５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２２７：７９９－８１７（１９９２）；ａｎｄ Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１４：４６２８－４６３８（１９９５）に開示されている。Ｖ ＢＡＳＥディレクトリは、ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的なディレクトリを提供する（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，ＭＲＣ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫによってコンパイルされた）。これらの配列は、例えば、フレームワーク領域及びＣＤＲのためのヒト配列の供給源として使用され得る。コンセンサスヒトフレームワーク領域もまた、例えば、米国特許第６，３００，０６４号に記載されているように、使用され得る。

【0252】

抗体をヒト化するための他の方法もまた、使用され得る。例えば、他の方法は、抗体の三次元構造、結合決定基に三次元的に近接するフレームワーク位置、及び免疫原性ペプチド配列を説明することができる。例えば、ＷＯ９０／０７８６１、米国特許第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第６，４０７，２１３号、Ｔｅｍｐｅｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６－２７１を参照されたい。さらに別の方法は、「ヒューマニアリング（ｈｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ）」と称され、例えば、ＵＳ２００５－００８６２５に記載されている。

【0253】

抗体は、ヒトＦｃ領域、例えば、野生型Ｆｃ領域または１つ以上の改変を含むＦｃ領域を含むことができる。一実施形態では、定常領域は、抗体の特性を改変するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補完機能）。例えば、ヒトＩｇＧ１定常領域は、１つ以上の残基、例えば、残基２３４及び２３７のうちの１つ以上で変異され得る（Ｋａｂａｔ番号付けに基づく）。抗体は、エフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体結合及び補体活性化を低減または改変させる重鎖のＣＨ２領域に変異を有し得る。例えば、抗体は、米国特許第５，６２４，８２１号及び第５，６４８，２６０号に記載されるような変異を有し得る。抗体はまた、当該技術分野に開示されるように、ＩｇＧ４のヒンジ領域における変異（例えば、Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５－０８）などのように、免疫グロブリンの２つの重鎖間のジスルフィド結合を安定化する変異を有してもよい。例えば、Ｕ．Ｓ．２００５／００３７０００も参照されたい。

【0254】

抗ＰＤ－１抗体は、全長抗体の形態であり得るか、または抗ＰＤ－１抗体、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ｓｃＦｖ、及びｓｃ（Ｆｖ）２の低分子量形態（例えば、生物学的に活性な抗体断片またはミニボディ）の形態であり得る。本開示に包含される他の抗ＰＤ－１抗体としては、ＶＨもしくはＶＬなどの単一の可変鎖、またはその生物学的に活性な断片を含有する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）が挙げられる。例えば、Ｍｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８５（４９）：３８３４８－３８３６１（２０１０）；Ｈａｒｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，７７（１）：１３－２２（２００７）；ＵＳ２００５／００７９５７４ ａｎｄ Ｄａｖｉｅｓｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，９（６）：５３１－７を参照されたい。全抗体と同様に、ｓｄＡｂは、特定の抗原に選択的に結合することができる。わずか１２～１５ｋＤａの分子量を有するｓｄＡｂは、一般的な抗体よりもはるかに小さく、Ｆａｂ断片及び一本鎖可変断片よりもさらに小さい。

【0255】

本明細書では、抗ＰＤ－１抗体、またはその抗原結合断片、及び１つ以上の酸性変異体の混合物を含む組成物が提供され、例えば、酸性変異体（複数可）の量は、約８０％、７０％、６０％、６０％、５０％、４０％、３０％、３０％、２０％、１０％、５％、または１％未満である。少なくとも１つの脱アミド化部位を含む、抗ＰＤ－１抗体、またはその抗原結合断片を含む組成物も提供され、組成物のｐＨは、例えば、少なくとも約９０％の抗体が脱アミド化されない（すなわち、約１０％未満の抗体が脱アミド化される）ように、約５．０～約６．５である。特定の実施形態では、抗体の約５％、３％、２％または１％未満が脱アミド化される。ｐＨは、５．５または６．０などの５．０～６．０であってよい。特定の実施形態では、組成物のｐＨは、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、または６．５である。

【0256】

「酸性変異体」は、目的のポリペプチドよりも酸性である（例えば、カチオン交換クロマトグラフィーによって決定される）目的のポリペプチドの変異体である。酸性変異体の例は、脱アミド化変異体である。

【0257】

ポリペプチド分子の「脱アミド化」変異体は、元のポリペプチドの１つ以上のアスパラギン残基（複数可）がアスパラギン酸に変換された、すなわち、中性アミド側鎖が、全体的な酸性特性を有する残基に変換されたポリペプチドである。

【0258】

本明細書で使用される「混合物」という用語は、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合断片を含む組成物に関し、ヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する所望の抗体、またはその抗原結合断片、及びその１つ以上の酸性変異体の両方の存在を意味する。酸性変異体は、少量の他の酸性変異体（複数可）と共に、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１と結合する主として脱アミド抗体を含んでよい。

【0259】

特定の実施形態では、脱アミド化を排除するために変異させた抗体の結合親和性（Ｋ_Ｄ）、オンレート（Ｋ_Ｄオン）及び／またはオフレート（Ｋ_Ｄオフ）は、例えば、約５倍、２倍、１倍（１００％）、５０％、３０％、２０％、１０％、５％、３％、２％または１％未満の差を有する、野生型抗体のものと類似する。

【0260】

抗体断片
抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、及びＦｖ）は、インタクトな抗体のタンパク質分解によって調製され得る。例えば、抗体断片は、全抗体を、パパイン、ペプシン、またはプラスミンなどの酵素で処理することによって得ることができる。全抗体のパパイン消化は、Ｆ（ａｂ）２またはＦａｂ断片を産生し、全抗体のペプシン消化は、Ｆ（ａｂ’）２またはＦａｂ’を産生し、全抗体のプラスミン消化は、Ｆａｃｂ断片を産生する。

【0261】

代替的に、抗体断片は、組換えで産生され得る。例えば、目的の抗体断片をコードする核酸を構築し、発現ベクターに導入し、好適な宿主細胞で発現させることができる。例えば、Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：２９６８－２９７６（１９９４）、Ｂｅｔｔｅｒ，Ｍ．ａｎｄ Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ａ．Ｈ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６－４９６（１９８９）、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ａ．ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，Ａ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６－４９６（１９８９）、Ｌａｍｏｙｉ，Ｅ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：６５２－６６３（１９８９）、Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，（１９８９）１２１：６６３－６６９（１９８９）、及びＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ，９：１３２－１３７（１９９１）を参照されたい）。抗体断片は、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現されて、それから分泌され得るため、これらの断片を容易に大量に産生することができる。抗体断片は、抗体ファージライブラリから単離することができる。代替的に、Ｆａｂ’－ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収されてもよく、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ）２断片を形成してもよい（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２））。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片については、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。

【0262】

ミニボディ
ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体のミニボディには、ダイアボディ、一本鎖（ｓｃＦｖ）、及び一本鎖（Ｆｖ）２（ｓｃ（Ｆｖ）２）が含まれる。

【0263】

「ダイアボディ」は、遺伝子融合によって構築される二価のミニボディである（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９０：６４４４－６４４８（１９９３）、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１を参照されたい）。ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖からなる二量体である。ダイアボディの各ポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインは、リンカーによって結合される。リンカーを構成するアミノ酸残基の数は、２～１２個の残基（例えば、３～１０個の残基、または５個もしくは約５個の残基）であり得る。ダイアボディ中のポリペプチドのリンカーは、典型的には、ＶＬとＶＨとが互いに結合することを可能にするには短すぎる。したがって、同じポリペプチド鎖にコードされるＶＬ及びＶＨは、一本鎖可変領域断片を形成することはできないが、代わりに、異なる一本鎖可変領域断片を有する二量体を形成する。その結果、ダイアボディは２つの抗原結合部位を有する。

【0264】

ｓｃＦｖは、ＶＨ及びＶＬをリンカーと連結することによって得られる一本鎖ポリペプチド抗体である（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５：５８７９－５８８３（１９８８）、及びＰｌｉｃｋｔｈｕｎ，“Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”Ｖｏｌ．１１３，Ｅｄ Ｒｅｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５，（１９９４）を参照されたい）。連結されるＶＨ及びＶＬの順序は特に限定されず、任意の順序で配置され得る。配置の例としては、［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］、または［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］が挙げられる。ＳｃＦｖにおけるＨ鎖Ｖ領域及びＬ鎖Ｖ領域は、本明細書に記載のヒトＰＤ－１もしくはヒトＰＤ－Ｌ１、またはその抗原結合断片と結合する任意の抗体に由来し得る。

【0265】

ｓｃ（Ｆｖ）２は、２つのＶＨ及び２つのＶＬがリンカーによって連結されて、一本鎖を形成するミニボディである（Ｈｕｄｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，（１９９９）２３１：１７７－１８９（１９９９））。ｓｃ（Ｆｖ）２は、例えば、ｓｃＦｖをリンカーと接続することによって調製することができる。本発明のｓｃ（ＦＶ）２は、好ましくは、２つのＶＨ及び２つのＶＬが一本鎖ポリペプチドのＮ末端から始まるＶＨ、ＶＬ、ＶＨ、及びＶＬ（［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］）の順に配置されているが、ただし、２つのＶＨ及び２つのＶＬの順序は、上記の配置に限定されず、それらは任意の順序で配置され得る。

【0266】

二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＰＤ－１タンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のそのような抗体は、ＰＤ－１結合部位を、別のタンパク質の結合部位と組み合わせ得る。二重特異性抗体は、全長抗体またはその低分子量形態（例えば、Ｆ（ａｂ’）_２二重特異性抗体、ｓｃ（Ｆｖ）２二重特異性抗体、ダイアボディ二重特異性抗体）として調製することができる。

【0267】

全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の共発現に基づき、これらの２つの鎖は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７－５３９（１９８３））。異なるアプローチによると、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。免疫グロブリン重鎖融合体、また所望の場合は免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別個の発現ベクターに挿入され、好適な宿主細胞に共トランスフェクトされる。これは、３つのポリペプチド断片の比率を調整する際のより大きな柔軟性を提供する。しかしながら、均等な比率での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現により高収率がもたらされる場合、２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。

【0268】

米国特許第５，７３１，１６８号に記載される別のアプローチに従って、一対の抗体分子間の界面を操作して、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にしてもよい。好ましい界面は、Ｃ_Ｈ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面由来の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖が、より大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えられる。大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）で置き換えることによって、大きい側鎖（複数可）と同一または同様のサイズの補償「空洞」が第２の抗体分子の界面上に作製される。これにより、ホモ二量体などの他の望ましくない最終産物よりもヘテロ二量体の収率を増加させるための機序が提供される。

【0269】

二重特異性抗体としては、架橋または「ヘテロコンジュゲート」抗体が挙げられる。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体のうちの一方がアビジンにカップリングし得、他方がビオチンにカップリングし得る。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製され得る。

【0270】

「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体断片の作製のための代替機序を提供している。これらの断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによってＶＬに接続されたＶＨを含む。したがって、１つの断片のＶＨ及びＶＬドメインが別の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと対合させられ、それにより２つの抗原結合部位が形成される。

【0271】

多価抗体
多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内部移行（及び／または異化）され得る。本明細書に提供される抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（例えば、四価抗体）であってもよく、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生され得る。多価抗体は、二量体化ドメイン、及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。例示的な二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。多価抗体は、３～約８個（例えば、４個）の抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）ことができる。多価抗体は、任意選択で少なくとも１つのポリペプチド鎖（例えば、少なくとも２つのポリペプチド鎖）を含み、このポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１－（Ｘ１）_ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）_ｎ－Ｆｃを含み得、ここで、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはペプチドスペーサーを表し、ｎは０または１である。

【0272】

コンジュゲート抗体
本明細書に開示される抗体は、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧ（ＰＥＩ－ＰＥＧ）で修飾されたポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）（Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）コポリマー）、ヒアルロン酸、放射性物質（例えば、^９０Ｙ、^１３１Ｉ）蛍光物質、発光物質、ハプテン、酵素、金属キレート、薬物、及び毒素（例えば、カルケアマイシン、シュードモナス外毒素Ａ、リシン（例えば、デグリコシル化リシンＡ鎖）））などの巨大分子物質を含む様々な分子に結合されるコンジュゲート抗体であってもよい。

【0273】

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体の細胞傷害作用を改善し、その結果、それらの治療効果を改善するために、抗体は、放射性同位体及び細胞傷害剤を含む強毒性物質とコンジュゲートされる。これらのコンジュゲートは、標的部位（すなわち、抗体によって認識される抗原を発現する細胞）に選択的に毒性負荷を送達することができ、一方で、抗体によって認識されない細胞は、免除される。毒性を最小限に抑えるために、コンジュゲートは、一般に、血清半減期が短い分子（したがって、マウス配列、及びＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの使用）に基づいて操作される。

【0274】

特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体、またはその抗原結合断片は、例えば、血液、血清、もしくは他の組織中で、例えば、少なくとも１．５、２、５、１０、または５０倍、循環におけるその安定化及び／または保持を改善する部分で修飾される。例えば、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合断片は、ポリマー、例えば、ポリアルキレンオキシドまたはポリエチレンオキシドなどの実質的に非抗原性ポリマーと会合する（例えば、コンジュゲートする）ことができる。好適なポリマーは、重量によって実質的に変化する。約２００～約３５，０００ダルトン（または約１，０００～約１５，０００、及び２，０００～約１２，５００）の範囲の分子数平均重量を有するポリマーを使用することができる。例えば、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に結合する抗体、またはその抗原結合断片は、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンにコンジュゲートされ得る。かかるポリマーの例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールなどのポリアルキレンオキシドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、これらのコポリマー及びこれらのブロックコポリマーが挙げられるが、ブロックコポリマーの水溶性が維持されることを条件とする。さらなる有用なポリマーとしては、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンなどのポリオキシアルキレン、ならびにポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロックコポリマー、ポリメタクリレート、カルボマー、ならびに分枝または非分枝の多糖類が挙げられる。

【0275】

上述のコンジュゲート抗体は、本明細書に記載の抗体またはその低分子量形態に対して化学修飾を行うことによって調製することができる。抗体を修飾するための方法は、当該技術分野で周知である（例えば、ＵＳ５０５７３１３及びＵＳ５１５６８４０）。

【0276】

キット
本開示はまた、例えば、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ関連疾患または障害の処置または予防において有用な、医薬キットも含み、これは、治療上有効量の本開示の化合物を含む医薬組成物を収容する１つまたは複数の容器を含む。当業者には明らかなように、そのようなキットは、必要に応じて、例えば、１つ以上の薬学的に許容される担体を有する容器、追加の容器等の様々な従来の医薬キット構成要素のうちの１つ以上をさらに含むことができる。挿入物またはラベルのいずれかとして、投与される成分の量、投与のガイドライン、及び／または成分を混合するためのガイドラインを示す指示書も、キットに含めることができる。

【0277】

本発明は、特定の例により、より詳細に説明されるであろう。以下の実施例は例示の目的のために提供され、いかなる様式でも本発明を限定するようには意図されない。当業者らは、本質的に同じ結果をもたらすように変更または修正され得る様々な重要ではないパラメータを容易に認識するであろう。明確にするために別個の実施形態の文脈中で記載される本発明のある特定の特徴を組み合わせて、単一の実施形態ではも提供され得ることが理解される。逆に、簡潔性のために単一の実施形態の文脈において説明される本発明の様々な特徴を、別個にまたは任意の好適な部分的組み合わせで提供することもできる。

【0278】

本明細書で説明されるものに加えて、本発明の様々な修正は、前述の説明から当業者には明らかとなろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。本出願において引用される全ての特許、特許出願及び特許公開を含む各参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【実施例】

【0279】

実施例１：インビトロでのＣＨＯ－ＰＤ－Ｌ１共培養アッセイ
インビトロでのＣＨＯ－ＰＤ－Ｌ１共培養アッセイでは、Ｔ細胞をＣＨＯ－ＰＤ－Ｌ１細胞の存在下でＰＤ－１抗体で処理し、アデノシン模倣物である５’－Ｎ－エチルカルボキサミドアデノシン（ＮＥＣＡ）を使用した。試薬、アデノシンシグナル伝達を活性化する。これらの条件下で、化合物９は抗ＰＤ１試薬でＴ細胞機能を回復させることができる。

【0280】

このシステムで試験された抗ＰＤ１試薬には、図１に示すように、２μＭのＮＥＣＡの処理下での（Ａ）ペムブロリズマブ、（Ｂ）抗体Ｘ及び（Ｃ）化合物Ｙが含まれる。

【0281】

プロトコル
０日目、抗生物質を含まない１００ｕｌのＣＨＯ培地でプレート９６組織培養フラットボトムプレートに１０，０００個のＣＨＯＰＤＬ１＋細胞をプレートする。１日目に、Ｔ細胞を解凍し、１ｘ１０６細胞／ｍｌでＴ細胞培地に再懸濁した。培地をＣＨＯＰＤＬ１＋細胞プレートから除去し、１３０ｕｌのＴ細胞培地を添加した。１９８ｕｌのＴ細胞培地を２ｕｌ、または－１：１００希釈で化合物プレートに添加し、次に再懸濁した。化合物プレートからの２０ｕｌの化合物を、化合物を１：１０００で最終希釈してＣＨＯ細胞プレートに加えた。５０μｌのＴ細胞（５０，０００個の細胞）をＣＨＯ細胞を含むプレートに加えて合計２００μｌの容量にし、３７℃で７２時間インキュベーションを行った。培養３日後、ｈＩＦＮｇ及びｈＩＬ２（メーカーのプロトコル）用のＰｒｏＣａｒｔａｐｌｅｘ ２プレックスキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号ＰＰＸ－０２）を使用して実行されるｈＩＦＮｇ及びｈＩＬ２サイトカインアッセイのために上清を収集した。ＰｒｏＣａｒｔａｐｌｅｘキットを使用したサイトカインアッセイは、Ｆｌｅｘ Ｍａｐ３ＤＬｕｍｉｎｅｘマルチプレックスプラットフォームで実行される。

【0282】

実施例２：インビトロでの混合系統反応アッセイ
別のインビトロアッセイである混合系統反応アッセイ（ＭＬＲ）では、健康なドナーからのＰＢＭＣをＣＤ３抗体で刺激し、１０μＭのアデノシン模倣試薬であるＮＥＣＡの下でアテゾリズマブ、化合物９または化合物３Ａで処理した（図２Ａ～２Ｄ）。

【0283】

プロトコル
０日目に、健康なドナーからの１０，０００個のＰＢＭＣを、別の健康なドナーからの１０，０００個のγ線照射されたＰＢＭＣと共培養した。細胞を９６ウェル組織培養丸底プレートに１０％ＦＢＳを添加した２００ｕｌ ＲＰＭＩ－１６４０培地にプレーティングし、１０μＭＮＥＣＡ、５ｎｇ／ｍｌ ＣＤ３抗体（クローンＯＫＴ３）、及び化合物／抗体の表示濃度の有無にかかわらず処理した。細胞を３７℃で４日間インキュベートした。各ウェルの上清中のＩＦＮ－γをＨＴＲＦキット（Ｃｉｓｂｉｏ、６２ＨＩＦＮＧＰＥＨ）で測定し、４日目にＰｈｅｒａｓｔａｒ ＦＳプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で蛍光シグナルを検出した。

【0284】

化合物９を抗ＰＤ－Ｌ１抗体（すなわち、アテゾリズマブ）と組み合わせると、ＩＦＮγ産生を有意に増加させることができた（図２Ａ～２Ｂ）。また、化合物３Ａを抗ＰＤ－Ｌ１抗体（すなわち、アテゾリズマブ）と組み合わせると、ＩＦＮγ産生を有意に増加させることができた（図２Ｃ～２Ｄ）。

【0285】

実施例３：マウス相乗モデルでのインビボ有効性研究
化合物９は、２つの異なるモデルで腫瘍増殖の阻害について評価された。ＣＴ－２６マウス結腸癌は、腫瘍微小環境に高レベルのアデノシンがあり、臨床調査のために選択された高アデノシン腫瘍を反映していることが実証されている（Ｍｏｓｅｌｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ；５（１）Ｊａｎｕａｒｙ ２０１７，ｐｐ．２９－４１）。単剤として、１０ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤで、化合物９は、ビヒクル対照と比較して５２％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）で腫瘍増殖を有意に遅らせ、さらに抗ＰＤ－１抗体（７７％ＴＧＩ）と組み合わせて相加性を示したビヒクルに対して）（図３Ａ）。対照的に、化合物９がその治療作用の大部分を発揮すると考えられるＴ及びＮＫ細胞を欠く、ＮＳＧマウスで宿主化されたときに同じレジメンがモデルに適用された場合、単剤の有効性は観察されなかった（図３Ｂ）。

【0286】

化合物９は、免疫チェックポイント耐性を破壊する能力について、免疫学的に低温のモデルであるＢ１６黒色腫モデルでさらに評価された。化合物９及び抗ＰＤ－Ｌ１の両方は、適度であるが有意ではない単剤活性を有したが、組み合わせた場合、相乗作用して、５４％の腫瘍増殖阻害をもたらした（図３Ｃ）。これらのデータは、化合物９が高アデノシン腫瘍の微小環境を変化させ、他の免疫腫瘍学薬と協力して効果的な抗腫瘍反応を促進できることを示唆している。

【0287】

実施例Ａ：Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤の活性
Ｉ．Ａ２Ａ Ｔａｇ－ｌｉｔｅ（登録商標）ＨＴＲＦアッセイ
アッセイは、黒色の少量の３８４ウェルポリスチレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８４０７６－２５）で、最終容量１０μＬで実施した。試験化合物を最初にＤＭＳＯで段階的に希釈し、次いで、１００ｎｌをプレートのウェルに添加した後、他の反応成分を添加した。ＤＭＳＯの最終濃度は１％であった。Ｔａｇ－ｌｉｔｅ（登録商標）アデノシンＡ２Ａ標識細胞（ＣｉｓＢｉｏ Ｃ１ＴＴ１Ａ２Ａ）をＴａｇ－ｌｉｔｅバッファー（ＣｉｓＢｉｏ ＬＡＢＭＥＤ）で１：５に希釈し、１２００ｇで５分間回転させた。ペレットをタグライトバッファーに初期細胞懸濁量の１０．４倍の量で再懸濁し、アデノシンＡ２Ａレセプタレッドアンタゴニスト蛍光リガンド（ＣｉｓＢｉｏ Ｌ００５８ＲＥＤ）を最終濃度１２．５ｎＭで添加した。１０ｕｌの細胞とリガンドの混合物をアッセイウェルに加え、室温で４５分間インキュベートした後、ＨＴＲＦ３３７／６２０／６６５光学モジュールを備えたＰＨＥＲＡｓｔａｒＦＳプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で読み取った。蛍光リガンドの結合パーセントを算出し、１００ｎＭのＡ２ＡアンタゴニストＺＭ２４１３８５（Ｔｏｃｒｉｓ１０３６）対照は１００％のリガンドに取って代わり、１％ＤＭＳＯは０％に取って代わる。阻害剤濃度の対数に対する結合％のデータを１部位競合結合モデル（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン７．０２）（リガンド定数＝１２．５ｎＭ及びリガンドＫｄ＝１．８５ｎＭ）に適合させた。この方法により得られた実施例のＫ_ｉデータを表２に示す。

【0288】

ＩＩ．アデノシンＡ２Ｂ受容体サイクリックＡＭＰ ＧＳアッセイ
ヒトアデノシンＡ２Ｂ受容体（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を発現する安定的にトランスフェクトされたＨＥＫ－２９３細胞を１０％のＦＢＳ及び１００μｇ／ｍｌのジェネティシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を有するＭＥＭ培地で維持した。アッセイの１８～２４時間前に、ジェネティシンを培養物から除去した。ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）技術を利用するｃｉｓｂｉｏのｃＡＭＰ－ＧＳダイナミックキットを使用して細胞内のｃＡＭＰ蓄積を測定した。適切な濃度の本開示の化合物を、室温（ＲＴ）で３０分間穏やかに振盪しながら、白色９６ウェル半領域プレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）中の１００００細胞／ウェルと混合する。１２ｎＭのアゴニストであるＮＥＣＡ（Ｒ＆Ｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を室温で６０分間穏やかに振盪しながら、各ウェルに添加した。検出試薬であるｄ２標識ｃＡＭＰ（受容体）及び抗ｃＡＭＰクリプタート（供与体）を室温で６０分間穏やかに振盪しながら、各ウェルに添加した。プレートをＰｈｅｒａｓｔａｒ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で読み取り、蛍光比６６５／６２０を算出し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して化合物の濃度の対数に対する対照のパーセントの曲線を適合させることによってＥＣ_５０を決定した。この方法により得られた実施例のＥＣ_５０データを表２に示す。

【0289】

表２．Ａ_２Ａ＿Ｋｉデータ（実施例Ａ（Ｉ））及びＡ_２Ｂ＿ｃＡＭＰ＿ＥＣ_５０データ（実施例Ａ（ＩＩ））を以下に提供する。

【表2】

【0290】

実施例Ａ１：３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物１）

【化11】

工程１：３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル

【化12】

１，４－ジオキサン（６０ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）中の４，６－ジクロロピリミジン－２－アミン（２．５ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）、（３－シアノフェニル）ボロン酸（２．０２ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．０６ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（３．２３ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で脱気し、次いで得られた混合物を６０℃で２日間加熱し、撹拌した。室温（ｒ．ｔ．）に冷却した後、混合物を濃縮し、水で希釈し、ＤＣＭ（３０ｍＬ×３）で抽出した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残渣をジクロロメタン中８％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィによって精製して所望の生成物を得た。Ｃ_１１Ｈ_８ＣｌＮ_４について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：２３１．０、実測値：２３１．０。

【0291】

工程２：２－（ピリジン－２－イル）アセトヒドラジド

【化13】

ヒドラジン（４．１５ｍＬ、１３２ｍｍｏｌ）を２－（ピリジン－２－イル）酢酸メチル（１０ｇ、６６．２ｍｍｏｌ）のエタノール（６６ｍＬ）溶液に室温で添加した。混合物を８５℃で４時間加熱し、撹拌し、次いで室温に冷却した。起立時に白色の固体が形成され、これを濾過により収集し、さらなる精製をせずに次の工程で使用した。Ｃ_７Ｈ_１０Ｎ_３Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：１５２．１、実測値：１５２．０。

【0292】

工程３：３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化14】

２－（ピリジン－２－イル）アセトヒドラジド（２．６２ｇ、１７．３４ｍｍｏｌ）を３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル（４．００ｇ、１７．３４ｍｍｏｌ）のエタノール（３５ｍＬ）溶液に室温で添加した。還流下で２時間加熱し、撹拌した後、反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。得られた残留物をＮ，Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（２０ｍＬ）に取り、１２０℃で７時間撹拌した。次に、混合物を室温に冷却し、氷に注ぎ、室温で１時間撹拌した。得られた固体を濾過によって収集し、２０ｍＬの１ＮのＨＣｌ溶液に取った。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、濾過し、水層を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液の添加によって中和した。得られた固体を濾過によって収集し、乾燥させて所望の生成物を得た。Ｃ_１８Ｈ_１４Ｎ_７について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：３２８．１；実測値３２８．１。

【0293】

工程４：３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化15】

－３０℃のＤＭＦ（１２ｍＬ）中の３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（２ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）の混合物にＮＢＳ（１．０９ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。反応混合物をゆっくりと０℃まで温め、均質な溶液を得た。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈し、得られた沈殿物を濾過によって収集した。次いで固体をＤＣＭ中０～１０％のＭｅＯＨで溶離するシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィによって精製して所望の生成物を得た。Ｃ_１８Ｈ_１３ＢｒＮ_７について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４０６．０；実測値４０６．０。

【0294】

工程５：３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
Ｐｄ（Ｐｈ_３Ｐ）_４（２８４ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１２ｍＬ）中の４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（１０９０ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）、３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（１０００ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、及び塩化銅（Ｉ）（２４４ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。反応混合物をＮ_２でパージし、８０℃で７時間撹拌した。得られた混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮＨ_４ＯＨ溶液で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮し、分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを有するアセトニトリル／水）によって精製して生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２２Ｈ_１６Ｎ_９について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４０６．２；実測値４０６．２。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ８．９５（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｍ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），７．６０－７．５３（ｍ，２Ｈ）、７．５３－７．４８（ｍ，１Ｈ），７．４８－７．４２（ｍ，１Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ）。

【0295】

実施例Ａ２：３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物２）の合成

【化16】

工程１：２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチル

【化17】

濃硫酸（１．４２ｍＬ、２７ｍｍｏｌ）を２，６－ジフルオロマンデル酸（５ｇ、２７ｍｍｏｌ）のメタノール（４５ｍＬ）溶液に０℃で添加した。混合物を室温で４時間撹拌してから濃縮した。得られたスラリーに飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（３０ｍＬ）を添加した。得られた混合物をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を水で洗浄し、Ｍｇ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得、これをさらなる精製をせずに次の工程で使用した。Ｃ_１１Ｈ_１２Ｆ_２ＮＯ_３（Ｍ＋Ｈ＋ＭｅＣＮ）^＋について計算されたＬＣ－ＭＳ：ｍ／ｚ＝２４４．１；実測値２４４．２。

【0296】

工程２：３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
この化合物は、実施例Ａ１について記載されているものと同様の手順を使用して、工程２において２－（ピリジン－２－イル）酢酸メチルに代えて２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチルを用いて調製した。２つのエナンチオマーを、８０ｍＬ／分の流速でＣＯ_２中２５％のＭｅＯＨのイソクラティック移動相で溶離するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘセルロース－１カラム（２１．２×２５０ｍｍ、５μｍの粒子サイズ）を使用するキラルＳＦＣによって分離した。ピーク１を単離し、分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを有するＭｅＣＮ／水）によって精製して所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２３Ｈ_１５Ｆ_２Ｎ_８Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝４５７．１；実測値４５７．１。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ８．９４（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），８．８１（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝５．３、１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄｔ，Ｊ＝７．４，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｔ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄｔ，Ｊ＝７．８，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｔｔ，Ｊ＝８．４，６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．２７（ｓ，１Ｈ）。

【0297】

実施例Ａ３：３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリミジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物３Ａ）及び３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリミジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物３Ｂ）の合成

【化18】

工程１：３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化19】

２－ヒドロキシアセトヒドラジド（２．３４ｇ、２６．０１ｍｍｏｌ）を３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル（４．００ｇ、１７．３４ｍｍｏｌ）（実施例Ａ１、工程１）のエタノール（３５ｍＬ）溶液に室温で添加した。還流下で２時間加熱し、撹拌した後、反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。得られた残留物をＮ，Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（２０ｍＬ）に取り、１２０℃で７時間撹拌した。次に、混合物を室温に冷却し、氷に注ぎ、室温で１時間撹拌した。得られた固体を濾過によって収集し、２０ｍＬの１ＮのＨＣｌ溶液に取った。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、濾過し、水層を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液の添加によって中和した。得られた固体を濾過によって収集し、乾燥させて所望の生成物を得た。Ｃ_１３Ｈ_１１Ｎ_６Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：２６７．１；実測値２６７．１。

【0298】

工程２：３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（ヒドロキシメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化20】

－３０℃のＤＭＦ（１２ｍＬ）中の３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（１．０ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）の混合物にＮＢＳ（０．６７ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。反応混合物をゆっくりと０℃まで温め、均質な溶液を得た。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で希釈し、そして所望の生成物を濾過により収集し、そして乾燥させた。Ｃ_１３Ｈ_１０ＢｒＮ_６Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：３４５．０；実測値３４５．０。

【0299】

工程３：３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化21】

テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０６７ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（５．０ｍＬ）中の４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（０．３２１ｇ、０．８６９ｍｍｏｌ）、３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（ヒドロキシメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（０．２０ｇ、０．５７９ｍｍｏｌ）、ＣｓＦ（０．１７６ｇ、１．１５９ｍｍｏｌ）、及びヨウ化銅（Ｉ）（０．０２２ｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。反応混合物をＮ_２でパージし、８０℃で７時間撹拌した。得られた混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＤＣＭ中０％～１０％のメタノールで溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製して生成物を得た。Ｃ_１７Ｈ_１３Ｎ_８Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：３４５．１；実測値３４５．１。

【0300】

工程４：３－（５－アミノ－２－（クロロメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化22】

アセトニトリル（１０ｍｌ）中の３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（０．１ｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）の混合物に塩化チオニル（０．２１２ｍｌ、２．９０ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌し、濃縮し、ＤＣＭ中０％～５％のメタノールで溶離するフラッシュクロマトグラフィによって精製して生成物を得た。Ｃ_１７Ｈ_１２ＣｌＮ_８について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：３６３．１；実測値３６３．１。

【0301】

工程５：３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物３Ａ）、及び３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物３Ｂ）の混合物
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の３－（５－アミノ－２－（クロロメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（１０ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、２－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ピリジン（８．１ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）及びＣｓ_２ＣＯ_３（２０．７ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で１０分間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、メタノール（４ｍＬ）で希釈し、分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを有するアセトニトリル／水）によって精製して生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２３Ｈ_１６Ｎ_１３について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４７４．２；実測値４７４．２。

【0302】

化合物３Ａ：^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ８．９９（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８５（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），８．８０－８．７１（ｍ，１Ｈ），８．７１－８．３９（ｂ、２Ｈ）、８．１８（ｄ，Ｊ＝７．７，１．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０４（ｔ，Ｊ＝７．８，１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｍ，２Ｈ）、７．８０－７．７６（ｍ，１Ｈ），７．６２－７．５５（ｍ，２Ｈ）、７．５３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｓ，２Ｈ）。

【0303】

実施例Ａ４：３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物４）の合成

【化23】

工程１：６－クロロ－Ｎ^２，Ｎ^２－ビス（４－メトキシベンジル）ピリミジン－２，４－ジアミン

【化24】

２－プロパノール（３１ｍＬ）中の２，６－ジクロロピリミジン－４－アミン（５．０ｇ、３１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６．４ｍｌ、３７ｍｍｏｌ）及びビス（４－メトキシベンジル）アミン（７．９ｇ、３１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を１００℃で１６時間撹拌し、室温に冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈し、そしてＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して粗生成物を得、これをさらなる精製をせずに次の工程で使用した。Ｃ_２０Ｈ_２２ＣｌＮ_４Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３８５．１；実測値３８５．１。

【0304】

工程２：７－クロロ－Ｎ^５，Ｎ^５－ビス（４－メトキシベンジル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－２，５－ジアミン

【化25】

Ｏ－エチルカーボンイソチオシアナチデート（３．１ｍＬ、２６ｍｍｏｌ）を６－クロロ－Ｎ^２，Ｎ^２－ビス（４－メトキシベンジル）ピリミジン－２，４－ジアミン（室温で１．０ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の１．４－ジオキサン（５．０ｍL）溶液に加えた。次いで、反応混合物を９０℃で一晩撹拌し、室温に冷却し、濾過した。得られた物質をメタノール（１２ｍＬ）及びエタノール（１２ｍＬ）に溶解し、Ｎ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．９１ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ）、続いてヒドロキシルアミン塩酸塩（０．５４ｇ、７．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４５℃で２時間撹拌し、室温に冷却し、濃縮した。得られた物質をＥｔＯＡｃに取り、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして濃縮した。粗物質を、０％から５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出させるシリカカラムクロマトグラフィーによって精製して、生成物を得た。Ｃ_２１Ｈ_２２ＣｌＮ_６Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４２５．１；実測値：４２５．２。

【0305】

工程３：３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化26】

クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’、４’、６’－トリ－ｉ－プロピル－１，１’－ビフェニル）（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル－２－イル）パラジウム（ＩＩ）（３３０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（８．８ｍＬ）と水（１．８ｍＬ）中の（３－シアノフェニル）ボロン酸（４６０ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）、７－クロロ－Ｎ^５、Ｎ^５－ビス（４－メトキシベンジル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－２，５－ジアミン（８９０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）、及び炭酸ナトリウム（８９０ｍｇ、８．４ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。混合物をＮ_２でパージし、９５℃で一晩撹拌した。次いで反応混合物を室温に冷却し、濃縮して、ＤＣＭ中０％～５０％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物を得た。Ｃ_２８Ｈ_２６Ｎ_７Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４９２．２；実測値４９２．２。

【0306】

工程４：３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－８－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化27】

ＤＭＦ（１．４ｍＬ）中の３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（３３０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の溶液にＮＢＳ（１２０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を０℃で徐々に添加した。次いで、反応混合物を室温で３０分間撹拌してから、水（１０ｍＬ）を添加した。得られた固体を濾過によって収集し、乾燥させて所望の生成物を得た。Ｃ_２８Ｈ_２５ＢｒＮ_７Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５７０．１；実測値５７０．２。

【0307】

工程５：３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化28】

ジオキサン（４．７ｍＬ）中の３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－８－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（３５０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（２１０μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（７０ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（２３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びフッ化セシウム（１８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波反応器内で１４０℃で３０分間加熱し、撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、セライトプラグ（ＤＣＭで洗浄した）を通して濾過し、濃縮した。得られた物質を０～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して所望の生成物を得た。Ｃ_３２Ｈ_２８Ｎ_９Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５７０．２；実測値５７０．３。

【0308】

工程６：３－（５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル

【化29】

窒素下の５０℃のアセトニトリル（３ｍＬ）中の臭化銅（ＩＩ）（９１ｍｇ、０．４０７ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチルニトリル（０．０５４ｍｌ、０．４０７ｍｍｏｌ）の混合物にアセトニトリル（３ｍＬ）中の３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を５０℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、１Ｎの水性ＮＨ_４ＯＨ溶液（２０ｍＬ）を添加し、混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）で３回抽出した。組み合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質を５０～１００％酢酸エチル／ヘキサンで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製して所望の生成物を得た。Ｃ_３２Ｈ_２６ＢｒＮ_８Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝６３３．１；実測値６３３．２。

【0309】

工程７：３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
１，４－ジオキサン（１ｍＬ）中の水素化ナトリウム（鉱油中６０％、３．８ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）、３－（５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（２０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）及び（３－メチルピリジン－２－イル）メタノール（９．１μＬ、０．０９５ｍｍｏｌ）の懸濁液を１１０℃で窒素下で一晩加熱し、撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を添加した。次いで得られた混合物を１１０℃で３０分間撹拌し、室温に冷却し、アセトニトリルで希釈し、濾過し、分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを有するアセトニトリル／水）によって精製して所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２３Ｈ_１８Ｎ_９Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝４３６．２；実測値４３６．２。^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ８．９７（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．５８－８．５２（ｍ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄｄ，Ｊ＝５．４，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｔ，Ｊ＝７．５，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６０－７．５４（ｍ，２Ｈ），７．５３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６９（ｓ，２Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ）。

【0310】

実施例Ａ５：３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物５）の合成

【化30】

工程１：３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル

【化31】

１，４－ジオキサン（６０ｍＬ）、及び水（５ｍＬ）中の４，６－ジクロロピリミジン－２－アミン（２．５ｇ、１５．２４ｍｍｏｌ）、（３－シアノフェニル）ボロン酸（２．０１６ｇ、１３．７２ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．０５７ｇ、０．９１５ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（３．２３ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で脱気し、次いで得られた混合物を６０℃で２日間加熱した。室温（ＲＴ）に冷却した後、混合物を濃縮し、水で希釈し、ジクロロメタン（ＤＣＭ、３×３０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残留物をジクロロメタン中８％の酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）でシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物を得た。Ｃ_１１Ｈ_８ＣｌＮ_４について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：２３１．０、実測値：２３１．０。

【0311】

工程２：３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０．４３４ｍｍｏｌ）及び２－ヒドロキシ－２－フェニルアセトヒドラジド（１０８ｍｇ、０．６５０ｍｍｏｌ）のエタノール（２ｍｌ）溶液を加熱し、９５℃で３時間撹拌した。ＲＴに冷却した後、反応混合物を濃縮乾固し、Ｎ、Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（１ｍＬ）に取り、１２０℃で７時間撹拌した。得られた混合物を室温に冷却し、氷に注ぎ、１時間撹拌した。得られた懸濁液をＤＣＭで３回抽出した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗残留物をメタノール（ＭｅＯＨ）に溶解し、分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを有するアセトニトリル／水）によって精製して生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_１９Ｈ_１５Ｎ_６Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３４３．１；実測値３４３．１。

【0312】

実施例Ａ６：３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（化合物６）の合成

【化32】

工程１：３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）－２－フルオロベンゾニトリル

【化33】

０℃に冷却したＴＨＦ（６０ｍＬ）中の３－ブロモ－２－フルオロベンゾニトリル（１８．３ｇ、９１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（１．３Ｍ）中のｉ－ＰｒＭｇＣｌＬｉＣｌ錯体（７０．４ｍＬ、９１ｍｍｏｌ）を２０分かけて加えた。混合物を０℃で５０分間撹拌し、次に２－ＭｅＴＨＦ（１．９Ｍ）中の塩化亜鉛（４８．１ｍＬ、９１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応物を室温で２５分間撹拌し、その時点で４，６－ジクロロピリミジン－２－アミン（１０ｇ、６１．０ｍｍｏｌ）を一度に加えた。溶液を１０分間撹拌した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１．４１ｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を混合物に加え、反応物を室温で１６時間撹拌した。完了したら、２，４，６－トリメルカプトトリアジンシリカゲル（２ｇ）を反応溶液に加えた。その混合物を１時間攪拌し、次いで濾過した。所望の生成物が完全に溶出するまで（ＬＣＭＳによって検出されるように）、固体を酢酸エチルで洗浄した。濾液を飽和塩化アンモニウム溶液及び水で洗浄した。有機物を濃縮して、粗生成物を得た。粗物質質に水を加え、得られた沈殿物を濾過により収集し、窒素流下で乾燥させた。粗物質をさらに精製することなく進めた。Ｃ_１１Ｈ_８ＣｌＮ_４Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝２４９．０；実測値２４９．０。

【0313】

工程２：２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチル

【化34】

濃硫酸（１．４ｍＬ、２７ｍｍｏｌ）を２，６－ジフルオロマンデル酸（５．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）のメタノール（４５ｍＬ）溶液に０℃で添加した。混合物を室温で４時間撹拌してから濃縮した。得られたスラリーに飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。組み合わせた有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得、これをさらなる精製をせずに次の工程で使用した。Ｃ_１１Ｈ_１２Ｆ_２ＮＯ_３（Ｍ＋Ｈ＋ＭｅＣＮ）^＋について計算されたＬＣ－ＭＳ：ｍ／ｚ＝２４４．１；実測値２４４．２。

【0314】

工程３：２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシアセチルヒドラジド

【化35】

ヒドラジン（３．０ｍＬ、９６ｍｍｏｌ）を２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチル（１０．８ｇ、５３ｍｍｏｌ）のエタノール（９０ｍＬ）溶液にＲＴで加えた。反応混合物を１００℃で２時間撹拌し、ＲＴに冷却し、濃縮して、さらに精製することなく次の工程で使用した。Ｃ_８Ｈ_９Ｆ_２Ｎ_２Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：２０３．１；実測値：２０３．２。

【0315】

工程４：３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
表題化合物は、実施例Ａ５の工程２に記載されたのと同様の手順を使用して、３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリルに代えて３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）－２－フルオロベンゾニトリルを用いて、２－ヒドロキシ－２－フェニルアセトヒドラジドに代えて２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシアセトヒドラジドを用いて調製した。２つのエナンチオマーを、８５ｍＬ／分の流速でＣＯ_２中１５％のＭｅＯＨのイソクラティック移動相で溶離するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｒ，Ｒ）－Ｗｈｅｌｋ－Ｏ１カラム（２１．２×２５０ｍｍ、５μｍの粒子サイズ）を使用するキラルＳＦＣによって分離した。ピーク１及びピーク２の保持時間は、それぞれ３．８分と５．３分であった。濃縮後、ピーク２を分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを有するＭｅＣＮ／水）によって精製して所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_１９Ｈ_１７Ｎ_６Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３９７．１；実測値３９７．１。

【0316】

実施例Ａ７：５－アミノ－７－（３－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾール［１，５－ｃ］ピリミジン－８－カルボニトリル（化合物７）の合成

【化36】

工程１：３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル

【化37】

この化合物は、実施例Ａ１、工程４について記載されているものと同様の手順を使用して、３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルに代えて３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（実施例Ａ６から）を用いて調製した。Ｃ_１９Ｈ_１１ＢｒＦ_３Ｎ_６Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４７５．０；実測値４７５．０。

【0317】

工程２：５－アミノ－７－（３－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－８－カルボニトリル
１，４－ジオキサン（０．６３ｍＬ）及び水（０．６３ｍＬ）中の３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル－２－フルオロベンゾニトリル（０．１２ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ＺｎＣＮ_２（０．０６０ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）及びｔＢｕＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（０．０２０ｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）の混合物をＮ_２でパージし、１００℃で１時間撹拌した。室温に冷却した後、反応物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈し、有機物をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。組み合わせた有機物をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。２つのエナンチオマーを、２０ｍＬ／分の流速でヘキサン中６０％のＥｔＯＨのイソクラティック移動相で溶離するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘセルロース－４カラム（２１．２×２５０ｍｍ、５μｍの粒子サイズ）を使用するキラルＨＰＬＣによって分離した。ピーク１及びピーク２の保持時間は、それぞれ、４．９分及び７．２分であった。濃縮後、ピーク１は、分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを有するアセトニトリル／水）によって精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２０Ｈ_１１Ｆ_３Ｎ_７Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４２２．１；実測値４２２．１。

【0318】

実施例Ａ８：３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－（（（１－メチル－２－オキソピロリジン－３－イル）アミノ）メチル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（化合物８）の合成

【化38】

工程１：２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）酢酸メチル

【化39】

２－（２－ブロモ－６－フルオロフェニル）酢酸メチル（６．０ｇ、２４ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム、三塩基性（１５．５ｇ、７３ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．５５ｇ、２．４ｍｍｏｌ）、及びＳＰｈｏｓ（１．０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）の混合物を５００ｍＬの圧力容器に加えた。次に、ジオキサン（１５０ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）中の４，４，５，５－テトラメチル－２－ビニル－１，３，２－ジオキサボロラン（６．４ｍｌ、３６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をＮ_２でパージし、８０℃で１６時間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィによって精製した（ＤＣＭ中０から５０％のＥｔＯＡｃ）。Ｃ_１１Ｈ_１２ＦＯ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：１９５．１；実測値１９５．１。

【0319】

工程２：２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチル

【化40】

２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）酢酸メチル（２．５ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１３０ｍＬ）に溶解し、－７８℃に冷却した。ＴＨＦ（１．０Ｍ）中のＬＤＡ（１６．７ｍＬ、１６．７ｍｍｏｌ）を滴下して、得られた溶液を－７８℃で３０分間撹拌した。次に、９，９－ジメチルテトラヒドロフラン－４Ｈ－４ａ、７－メタノベンゾ［ｃ］［１，２］オキサジレノ［２，３－ｂ］イソチアゾール３，３－ジオキシド（４．７ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（０．５Ｍ）に滴下する。－７８℃で３０分間撹拌した後、反応混合物を０℃に温め、１時間撹拌した。その反応物を、飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液でクエンチした。水層をＤＣＭ（３×）で抽出した。組み合わせた有機物を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗物質を０～５０％酢酸エチル／ヘキサンで溶離するカラムクロマトグラフィによって精製して所望の生成物を得た。Ｃ_１１Ｈ_１１ＦＯ_３Ｎａについて計算されたＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）^＋：２３３．１；実測値２３３．１。

【0320】

工程３：２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）－２－ヒドロキシアセトヒドラジド

【化41】

この化合物は、実施例Ａ６、工程３について記載されているものと同様の手順を使用して、２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチルに代えて２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチルを用いて調製した。Ｃ_１０Ｈ_１１ＦＮ_２Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：２１１．１、実測値：２１１．１。

【0321】

工程４：３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）―２－フルオロベンゾニトリル

【化42】

この化合物は、実施例Ａ６、工程４について記載されているものと同様の手順を使用して、２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシアセトヒドラジドに代えて２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）－２－ヒドロキシアセトヒドラジドを用いて調製した。Ｃ_２１Ｈ_１５Ｆ_２Ｎ_６Ｏについて計算されたＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４０５．１；実測値：４０５．１。

【0322】

工程５：３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－ホルミルフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル

【化43】

水中の四酸化オスミウム（４％ｗ／ｗ、０．３６ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を、３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６）－ビニルフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（９３０ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１８ｍＬ）及び水（４．６ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を室温で５分間撹拌し、次に過ヨウ素酸ナトリウム（２．５ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を加えた。１時間撹拌した後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（５％ ｗ／ｗ、２０ｍＬ）中のメタ重亜硫酸ナトリウムで希釈し、ＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。組み合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮した。粗物質を０～１００％酢酸エチル／ヘキサンで溶離するカラムクロマトグラフィによって精製して所望の生成物を得た。Ｃ_２０Ｈ_１３Ｆ_２Ｎ_６Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４０７．１；実測値４０７．１。

【0323】

工程６：３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－（（（１－メチル－２－オキソピロリジン－３－イル）アミノ）メチル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
３－アミノ－１－メチルピロリジン－２－オン（６３ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）及び３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－ホルミルフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液を１，２－ジクロロエタン（１．９ｍＬ）中で４０℃で２時間撹拌した。次に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１６０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈し、有機物をＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。組み合わせた有機物をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。ジアステレオマーを、２０ｍＬ／分の流速でヘキサン中４５％のＥｔＯＨのイソクラティック移動相で溶離するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘセルロース－４カラム（２１．２×２５０ｍｍ、５μｍの粒子サイズ）を使用するキラルＨＰＬＣによって分離した。ピーク１及びピーク２の保持時間は、それぞれ、１４．９分及び１７．５分であった。濃縮後、ピーク２を、２０ｍＬ／分の流速でヘキサン中３０％のＥｔＯＨのイソクラティック移動相で溶離するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘセルロース－１カラム（２１．２×２５０ｍｍ、５μｍの粒子サイズ）を使用するキラルＨＰＬＣによってさらに分離した。ピーク１及びピーク２の保持時間は、それぞれ、１１．０分及び１５．５分であった。濃縮後、ピーク１を分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを有するＭｅＣＮ／水）によって精製して所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２５Ｈ_２３Ｆ_２Ｎ_８Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：５０５．２；実測値５０５．２。

【0324】

実施例Ａ９：３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物９）の合成

【化44】

工程１：３－ブロモ－１－（２－（３－シアノフェニル）－２－オキソエチル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル

【化45】

ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の３－ブロモ－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル（５．０ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）、３－（２－ブロモアセチル）ベンゾニトリル（５．４４ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）に炭酸カリウム（３．３５ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。反応混合物を、水及びＤＣＭで希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を白色の固体として得た（５．２ｇ、６１％）。Ｃ_１３Ｈ_１０ＢｒＮ_４Ｏ_３について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３４９．０；実測値３４９．０。

【0325】

工程２：３－（２－ブロモ－８－オキソ－７，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化46】

３－ブロモ－１－（２－（３－シアノフェニル）－２－オキソエチル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル（１０．５ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）を酢酸（１００ｍＬ）に溶解し、酢酸アンモニウム（２３．１８ｇ、３０１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１１０℃で１２時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を水で希釈した。得られた沈殿物を濾過により収集し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、生成物（８．４ｇ、８８％）を得た。Ｃ_１２Ｈ_７ＢｒＮ_５Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３１６．０；実測値３１６．０。

【0326】

工程３：３－（２－ブロモ－８－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化47】

３－（２－ブロモ－８－オキソ－７，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（８．４ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）とＰＯＣｌ_３（４９．５ｍＬ、５３１ｍｍｏｌ）を１１０℃で一晩撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を氷及び重炭酸ナトリウムを含むフラスコにゆっくりと加えた。得られた沈殿物を収集し、水で洗浄し、乾燥させて、生成物（８．８ｇ、９９％）を得た。Ｃ_１２Ｈ_６ＢｒＣｌＮ_５について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３３３．９；実測値３３４．０。

【0327】

工程４：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化48】

ＤＭＦ（１３４ｍＬ）中の３－（２－ブロモ－８－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（８．９９ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）、ビス（４－メトキシベンジル）アミン（１０．３７ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（９．４ｍＬ、５３．７ｍｍｏｌ）の混合物を８５℃で一晩撹拌した。この反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。得られた沈殿物を濾過により収集し、乾燥させて生成物（１４．１ｇ、９４％）を得た。Ｃ_２８Ｈ_２４ＢｒＮ_６Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５５５．１；実測値５５５．１。

【0328】

工程５：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化49】

ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中の２－メチルピリジン（０．０５０ｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）の溶液に、－７８℃で２．５Ｍｎ－ブチルリチウム（０．２１６ｍＬ、０．５４０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を同じ温度で１時間撹拌した後、２－メチルテトラヒドロフラン（０．２８４ｍＬ、０．５４０ｍｍｏｌ）中の１．９Ｍ塩化亜鉛を加え、得られた混合物を室温で１０分間撹拌した。

【0329】

３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（０．１５ｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（１．１ｍｇ、４．７μｍｏｌ）、及び２’－（ジシクロヘキシルホスフィノ）－Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’－テトラメチルビフェニル－２，６－ジアミン（４．１ｍｇ、９．５μｍｏｌ）を高真空で排気し、窒素で埋め戻した。次に、ＴＨＦ（２．０ｍＬ）とトルエン（０．５ｍＬ）を反応バイアルに加えた。混合物を０℃に冷却し、前の工程で調製した亜鉛試薬を注射器を介してゆっくりと加えた。次に、反応混合物を６０℃で一晩撹拌し、室温に冷却し、酢酸エチルと飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液との間で分配した。層を分離させ、水層を酢酸エチルで抽出した。組み合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物（０．１１ｇ、７１％）を得た。Ｃ_３４Ｈ_３０Ｎ_７Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５６８．２；実測値５６８．３。

【0330】

工程６：３－（８－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化50】

３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１１０ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（７４６μＬ、９．６９ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で３０分間撹拌し、室温まで冷却し、濃縮した。得られた残留物を分取ＬＣＭＳ（ｐＨ２）により精製して、生成物を白色の固体（ＴＦＡ塩）として得た（５７ｍｇ、９０％）。Ｃ_１８Ｈ_１４Ｎ_７について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３２８．１；実測値３２８．１。

【0331】

工程７：３－（８－アミノ－５－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化51】

ＤＭＦ（０．５ｍＬ）／ＤＣＭ（０．５ｍＬ）中の３－（８－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（ＴＦＡ塩）（３５ｍｇ 、０．０７９ｍｍｏｌ）の溶液にＮＢＳ（１４．１ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮して粗生成物を得、これをさらなる精製をせずに次の工程で使用した。Ｃ_１８Ｈ_１３ＢｒＮ_７について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４０６．０；実測値４０６．０。

【0332】

工程８．３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
１，４－ジオキサン（１ｍＬ）中の６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（３０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（５３ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（１５．７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）（ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２）及び酢酸カリウム（６１．７ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を１００℃で１時間撹拌した。次に、３－（８－アミノ－５－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１０ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（３７．６ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）及び水（０．２ｍＬ）を反応混合物に加えた。得られた混合物を９０℃で１時間加熱した。混合物を濃縮し、分取ＬＣＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを有するアセトニトリル／水）によって精製して生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２３Ｈ_１８Ｎ_９Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝４３６．２；実測値４３６．２。

【0333】

^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．６６－８．６２（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０９－８．０２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８８－７．８５（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８５－７．８１（ｍ，３Ｈ）、７．７８－７．７２（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６６－７．５１（ｍ，４Ｈ）、７．１０－７．０６（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５９－４．４８（ｓ，２Ｈ），３．５３－３．４３（ｓ，３Ｈ）。

【0334】

実施例Ａ１０：３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１０）の合成

【化52】

工程１：３－ブロモ－１－（２－（３－シアノフェニル）－２－オキソエチル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル

【化53】

ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の３－ブロモ－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル（５．０ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）、３－（２－ブロモアセチル）ベンゾニトリル（５．４４ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）に炭酸カリウム（３．３５ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。次いで反応混合物を、水及びＤＣＭで希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を白色の固体として得た（５．２ｇ、６１％）。Ｃ_１３Ｈ₁₀ＢｒＮ_４Ｏ_３について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３４９．０；実測値３４９．０。

【0335】

工程２：３－（２－ブロモ－８－オキソ－７，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化54】

３－ブロモ－１－（２－（３－シアノフェニル）－２－オキソエチル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル（１０．５ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）を酢酸（１００ｍＬ）に溶解し、酢酸アンモニウム（２３．１８ｇ、３０１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１１０℃で１２時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物を水で希釈した。得られた沈殿物を濾過により収集し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、生成物（８．４ｇ、８８％）を得た。Ｃ_１２Ｈ_７ＢｒＮ_５Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３１６．０；実測値３１６．０。

【0336】

工程３：３－（２－ブロモ－８－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化55】

３－（２－ブロモ－８－オキソ－７，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（８．４ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）とＰＯＣｌ_３（４９．５ｍＬ、５３１ｍｍｏｌ）の混合物を１１０℃で一晩撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を氷及び重炭酸ナトリウムを含むフラスコにゆっくりと加えた。得られた沈殿物を濾過により回収し、水で洗浄し、乾燥させて、生成物（８．８ｇ、９９％）を得た。Ｃ_１２Ｈ_６ＢｒＣｌＮ_５について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３３６．０；実測値３３６．０。

【0337】

工程４：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化56】

ＤＭＦ（１３４ｍＬ）中の３－（２－ブロモ－８－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（８．９９ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）、ビス（４－メトキシベンズイル）アミン（１０．３７ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（９．４ｍＬ、５３．７ｍｍｏｌ）の混合物を６５℃で一晩撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。得られた沈殿物を濾過により収集し、乾燥させて生成物（１４．１ｇ、９４％）を得た。Ｃ_２８Ｈ_２４ＢｒＮ_６Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５５５．１；実測値：５５５．１。

【0338】

工程５：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化57】

１，４－ジオキサン（２００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１０．０ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）、４，４，５，５－テトラメチル－２－ビニル－１，３，２－ジオキサボロラン（３．８８ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム三塩基性（９．５５ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）及びクロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’、４’、６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（５６７ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の混合物を８５℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、１，４－ジオキサンの大部分を除去した。得られた沈殿物を濾過によって収集し、乾燥させて粗生成物（９．１ｇ）を得、これを次の工程で直接使用した。Ｃ_３０Ｈ_２７Ｎ_６Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５０３．２；実測値５０３．１。

【0339】

工程６：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化58】

１０ｍＬのジクロロメタン中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（７１７ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、１－ブロモピロリジン－２，５－ジオン（２５４ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。得られた混合物を４時間撹拌し、シリカゲルカラムで直接精製して、所望の生成物（７８０ｍｇ、９４％）を得た。Ｃ_３０Ｈ_２６ＢｒＮ_６Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５８１．１；実測値５８１．２。

【0340】

工程７：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－（ピリミジン－４－イル）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化59】

ＴＨＦ（５ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（２６０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（２１５ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）、塩化リチウム（２８．４ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、塩化銅（Ｉ）（６７ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５２ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）を９０℃で４５分間撹拌した。反応混合物を水でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。組み合わせた有機層を濃縮し、シリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１７６ｍｇ、６７％）を得た。Ｃ_３４Ｈ_２９Ｎ_８Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５８１．２；実測値５８１．１。

【0341】

工程８：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ホルミル－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化60】

ＴＨＦ／水（１：１、６ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－（ピリミジン－４－イル）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１７６ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、酸化オスミウム（ＶＩＩＩ）（０．３ｍＬの水に３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、及び過ヨウ素酸ナトリウム（２９２ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）の混合物を６５℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わせた有機層を濃縮し、シリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１３０ｍｇ、７４％）を得た。Ｃ_３３Ｈ_２７Ｎ_８Ｏ_３について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５８３．２；実測値５８３．２。

【0342】

工程９：３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
グリニャール試薬の調製：テトラヒドロフラン（１ｍＬ）中の１，３－ジフルオロ－２－ヨードベンゼン（１４２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、イソプロピルマグネシウムクロリド溶液（２９６μｌ、２Ｍ）を－１０℃で添加した。得られた混合物を１時間撹拌し、次の工程で直接使用した。

【0343】

ＴＨＦ（２ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ホルミル－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１２０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、前の工程から新たに調製したグリニャール試薬を－１０℃で加えた。反応混合物を３０分間撹拌し、塩化アンモニウム溶液（４ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。組み合わせた有機層を真空中で濃縮した。得られた材料をＴＦＡ（５ｍＬ）に溶解し、８０℃で２０分間撹拌した。次に、反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、水性ＮａＨＣＯ_３溶液を加えることにより塩基性化した。

【0344】

粗物質をシリカゲルカラムによって直接精製して、所望の生成物（６０ｍｇ、６４％）をラセミ混合物として得た。次に、キラルカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ ５ｕｍ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－４、２１．２ｘ２５０ｍｍ）及びヘキサン中の７５％ＥｔＯＨ（２０ｍＬ／ｍｉｎ）溶媒システムを使用したキラルＨＰＬＣで生成物を分離した。

【0345】

ピーク２を分離し、分取ＬＣ／ＭＳ（ｐＨ＝２、アセトニトリル／ＴＦＡを含む水）でさらに精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２３Ｈ_１５Ｆ_２Ｎ_８Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝４５７．１；実測値：４５７．０。

【0346】

^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ９．１４（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），８．９５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄｄ，Ｊ＝５．２，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｄｔ，Ｊ＝７．６，１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｔ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄｔ，Ｊ＝７．９，１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５１－７．４０（ｍ，２Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．２７（ｓ，１Ｈ）。

【0347】

実施例Ａ１１：３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５ －ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１１）の合成

【化61】

工程１：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化62】

ＤＣＭ（５ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（実施例Ａ１０、工程５；２４１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（８４．６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮して粗生成物を得、これをさらなる精製をせずに次の工程で使用した。Ｃ_３０Ｈ_２６ＢｒＮ_６Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５８１．１；実測値：５８１．１。

【0348】

工程２：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ホルミル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化63】

ＴＨＦ／水（１：１、６ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンズイル）アミノ）－５－ブロモ－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１７４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、酸化オスミウム（ＶＩＩＩ）（０．３ｍＬの水に３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、及び過ヨウ素酸ナトリウム（２９２ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）の混合物を６５℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ジクロロメタンで抽出した。組み合わせた有機層を濃縮し、シリカゲルカラムで精製して、所望の生成物を得た。Ｃ_２９Ｈ_２４Ｎ_６Ｏ_３Ｂｒについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５８３．１；実測値５８３．１。

【0349】

工程３：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化64】

グリニャール試薬の調製：テトラヒドロフラン（１ｍＬ）中の１，３－ジフルオロ－２－ヨードベンゼン（１４２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、イソプロピルマグネシウムクロリド溶液（２９６μｌ、２Ｍ）を－１０℃で添加した。得られた混合物を１時間撹拌し、次の工程で直接使用した。

【0350】

ＴＨＦ（２ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ホルミル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１２０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、前の工程から新たに調製したグリニャール試薬を－１０℃で加えた。反応混合物を３０分間撹拌し、塩化アンモニウム溶液（４ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。組み合わせた有機層を真空下で濃縮し、シリカゲルカラムによって精製して、ラセミ混合物として所望の生成物を得た。Ｃ_３５Ｈ_２８Ｎ_６Ｏ_３ＢｒＦ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝６９７．１；実測値６９７．１。

【0351】

工程４：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化65】

１，４－ジオキサン（２ｍＬ）及び水（２００μｌ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５ －ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（３８２ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、４－メチル－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）オキサゾール（１３７ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシル（２’、４’、６’－トリイソプロピルビフェニル－２－イル）ホスフィン－（２’－アミノビフェニル－２－イル）（クロロ）パラジウム（１：１）（１７ｍｇ、２１．６μｍｏｌ）、及びＣｓ_２ＣＯ_３（３５６ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）をＮ_２でパージし、９５℃で７時間加熱した。混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を無色の油状物として得た。Ｃ_３９Ｈ_３２Ｎ_７Ｏ_４Ｆ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋について計算したＬＣＭＳ：７００．２；実測値７００．２。

【0352】

工程５：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（クロロ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化66】

２ｍＬのジクロロメタン中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（２０１ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化チオニル（１０５μｌ、１．４３５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られた混合物を４時間撹拌し、濃縮し、さらに精製することなく次の工程で使用した。Ｃ_３９Ｈ_３１Ｎ_７Ｏ_３ＣｌＦ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝７１８．２；実測値７１８．２。

【0353】

工程６：３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
１ｍＬのＤＭＳＯ中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（クロロ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２、４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（４０ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）に、アンモニア溶液（１ｍＬ）を加えた。混合物をマイクロ波条件で１００℃で１０時間加熱した後、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。組み合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。得られた残渣をＴＦＡ（１ｍＬ）中に溶解し、８０℃で２０分間攪拌した。次いで反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、水性ＮａＨＣＯ_３溶液を加えることにより塩基性化した。粗物質をシリカゲルカラムによって直接精製して、所望の生成物をラセミ混合物として得た。次に、生成物を、キラルカラム（ＡＭ－１）及びヘキサン中の４５％ＥｔＯＨ（２０ｍＬ／分）溶媒系を使用するキラルＨＰＬＣで分離した。ピーク１を単離し、分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを有するアセトニトリル／水）によってさらに精製して所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２３Ｈ_１７Ｆ_２Ｎ_８Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝４５９．１；実測値４５９．０。

【0354】

実施例Ａ１２：３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（２，６－ジメチルピリジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１２）の合成

【化67】

ジオキサン（３．０ｍＬ）及び水（０．６０ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（実施例Ａ１１、工程３；０．５１８ｇ、０．６３８ｍｍｏｌ）、２，６－ジメチル－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン（０．３４６ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、及びジシクロヘキシル（２’、４’、６’－トリイソプロピルビフェニル－２－イル）ホスフィン－（２’－アミノビフェニル－２－イル）（クロロ）パラジウム（１：１）（０．０５８ｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）の溶液に、三塩基性リン酸カリウム（０．４７２ｇ、２．２３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を９０℃で１時間撹拌した。次いで反応混合物を水及びＤＣＭで希釈した。層を分離し、水層をＤＣＭで抽出し、合わせた有機画分をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質をＴＦＡ（５ｍＬ）に溶解し、８０℃に２０分間加熱した。その後、反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、水性ＮａＨＣＯ_３溶液を加えることにより塩基性化した。粗物質をシリカゲルカラムによって直接精製して、所望の生成物（２５７ｍｇ、７２％）をラセミ混合物として得た。

【0355】

次に、キラルカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ ５ｕｍ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－２、２１．１×２５０ｍｍ）及びヘキサン中の３５％ＥｔＯＨ（２０ｍＬ／ｍｉｎ）溶媒システムを使用したキラルＨＰＬＣで生成物を分離した。ピーク２を分離し、分取ＬＣ／ＭＳ（ｐＨ＝２、アセトニトリル／水とＴＦＡ）を使用してさらに精製し、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２６Ｈ_２０Ｆ_２Ｎ_７Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝４８４．２；実測値４８４．２。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．９２（ｓ，２Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５３－７．４０（ｍ，４Ｈ）、７．１０（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．２７（ｓ，１Ｈ），２．５１（ｓ，６Ｈ）。

【0356】

実施例Ａ１３：３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１３）の合成

【化68】

工程１．４，６－ジクロロ－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン

【化69】

水（３ｍＬ）中のＮａＮＯ_２（３．８８ｇ、５６．２ｍｍｏｌ）の溶液を、３７％の塩酸（５ｍＬ）中の２，６－ジクロロピリジン－３，４－ジアミン（１０ｇ、５６ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で加えた。溶液を３０分間撹拌した。水（２０ｍＬ）を加え、白色の沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、所望の生成物を得た。Ｃ_５Ｈ_３Ｃｌ_２Ｎ_４について計算されたＬＣ－ＭＳ：１８９．０（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：１８９．０（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0357】

工程２．６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン

【化70】

１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）中の４，６－ジクロロ－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン（６００ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ）、（２，４－ジメトキシフェニル）メタンアミン（０．５３ｍＬｌ、３．４９ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．５３ｍＬ、３．８１ｍｍｏｌ）の混合物を１１０℃で３日間撹拌した。シリカゲルカラムでの直接精製により、所望の生成物（８７５ｍｇ、８６％）を得た。Ｃ_１４Ｈ_１５ＣｌＮ_５Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ：３２０．１（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：３２０．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0358】

工程３．６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン

【化71】

ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン（８７５ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）、ピリジン－２－イルメタノール（０．３１７ｍＬ、３．２８ｍｍｏｌ）、及びトリフェニルホスフィン（１４３６ｍｇ、５．４７ｍｍｏｌ）の混合物に、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（０．６４７ｍＬ、３．２８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。得られた混合物を０℃で１時間攪拌した。シリカゲルカラムでの直接精製により、所望の生成物（３７５ｍｇ、３３．４％）を得た。Ｃ_２０Ｈ_２０ＣｌＮ_６Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ：４１１．１（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４１１．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0359】

工程４．３－（４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化72】

１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）及び水（１．００ｍＬ）中の６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン（３７５ｍｇ、０．９１３ｍｍｏｌ）及び（３－シアノフェニル）ボロン酸（２６８ｍｇ、１．８２５ｍｍｏｌ）の混合物に、炭酸セシウム（５９５ｍｇ、１．８２５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物をＮ_２でパージし、次いでクロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（７１．８ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をマイクロ波照射下で１２０℃で９０分間撹拌した。反応を２０ｍＬの酢酸エチル及び２０ｍＬの水でクエンチした。有機相を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。組み合わせた抽出物をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（３００ｍｇ、６８．９％）を得た。Ｃ_２７Ｈ_２４Ｎ_７Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ：４７８．２（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４７８．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0360】

工程５．３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化73】

ＴＦＡ（５ｍＬ）中の３－（４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（３００．３ｍｇ、０．６２９ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃で３０分間撹拌した。ＴＦＡを減圧下で蒸発させ、次いで２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液及び２０ｍＬの酢酸エチルを加えた。有機相を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。組み合わせた抽出物をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１７５ｍｇ、８５％）を得た。Ｃ_１８Ｈ_１４Ｎ_７について計算されたＬＣ－ＭＳ：３２８．１（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：３２８．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0361】

工程６．３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化74】

ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（１７５ｍｇ、０．５３５ｍｍｏｌ）及び１－ブロモピロリジン－２，５－ジオン（１００ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）の混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いで飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液でクエンチした。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。生じた残渣をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１３５ｍｇ、６２．２％）を得た。Ｃ_１８Ｈ_１３ＢｒＮ_７について計算されたＬＣ－ＭＳ：４０６．０（Ｍ＋Ｈ）^＋及び４０８．０（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４０６．１（Ｍ＋Ｈ）^＋及び４０８．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0362】

工程７．３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化75】

ＴＨＦ（１ｍｌ）中の３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（１８２ｍｇ、０．４４８ｍｍｏｌ）、４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（４９６ｍｇ、１．３４４ｍｍｏｌ）、及び塩化銅（Ｉ）（５３．２ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ）、塩化リチウム（２２．７９ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ）、及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５１．８ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）の混合物を最初にＮ_２でパージし、次いで加熱し、９０℃で２時間撹拌した。反応物をメタノールで希釈し、分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２）で生成して所望の生成物を得た。Ｃ_２２Ｈ_１６Ｎ_９について計算されたＬＣ－ＭＳ：４０６．２（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４０６．２（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0363】

実施例Ａ１４．３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１４）の合成

【化76】

工程１．６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン

【化77】

ＤＣＭ（１．７ｍＬ）中の６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン（実施例Ａ１３、工程２、１０００ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ）、（３－フルオロピリジン－２－イル）メタノール（４７７ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）、及びトリフェニルホスフィン（１６４１ｍｇ、６．２５ｍｍｏｌ）の混合物に、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（７３９μｌ、３．７５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。シリカゲルカラムでの直接精製により、所望の生成物（４３３ｍｇ、３２％）を得た。Ｃ_２０Ｈ_１９ＣｌＦＮ_６Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ：４２９．１（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４２９．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0364】

工程２．３－（４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化78】

１，４－ジオキサン（１０．０ｍＬ）及び水（１．０ｍＬ）中の炭酸セシウム（６５８ｍｇ、２．０１９ｍｍｏｌ）を、６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン（４３３ｍｇ、１．０１０ｍｍｏｌ）及び（３－シアノフェニル）ボロン酸（２９７ｍｇ、２．０１９ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得られた混合物を２分間Ｎ_２でスパージし、（ＳＰ－４－４）－［２’－アミノ［１，１’－ビフェニル］－２－イル］クロロ［ジシクロヘキシル［２’，４’，６’－トリス（１－メチルエチル）［１，１’－ビフェニル］－２－イル］ホスフィン］パラジウム（７９ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、マイクロ波照射下、１２０℃で１．５時間撹拌した。反応を２０ｍＬの酢酸エチル及び２０ｍＬの水でクエンチした。有機相を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。組み合わせた抽出物をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（３５７ｍｇ、７１％）を得た。Ｃ_２７Ｈ_２３ＦＮ_７Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ：４９６．２（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４９６．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0365】

工程３．３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化79】

ＴＦＡ（５ｍＬ）中の３－（４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（３５７．３ｍｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃で１時間撹拌した。ＴＦＡを減圧下で蒸発させ、次いで２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液及び２０ｍＬの酢酸エチルを加えた。有機相を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。組み合わせた抽出物をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（２１３ｍｇ、６１％）を得た。Ｃ_１８Ｈ_１３ＦＮ_７について計算されたＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：３４６．１（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：３４６．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0366】

工程４．３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化80】

ＴＨＦ（５ｍＬ）中の３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（２１３ｍｇ、０．６１７ｍｍｏｌ）及び１－ブロモピロリジン－２，５－ジオン（２２０ｍｇ、１．２３４ｍｍｏｌ）の混合物を０℃で１時間撹拌した。シリカゲルでの直接精製により、所望の生成物（１７５ｍｇ、６７％）を得た。Ｃ_１８Ｈ_１２ＢｒＦＮ_７について計算されたＬＣ－ＭＳ：４２４．０（Ｍ＋Ｈ）^＋及び４２６．０（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４２４．３（Ｍ＋Ｈ）^＋及び４２６．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0367】

工程５．３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル

【化81】

ＴＨＦ（１ｍｌ）中の３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（２２０ｍｇ、０．５１９ｍｍｏｌ）、４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（３８３ｍｇ、１．０３７ｍｍｏｌ）、及び塩化銅（Ｉ）（６１．６ｍｇ、０．６２２ｍｍｏｌ）、塩化リチウム（２６．４ｍｇ、０．６２２ｍｍｏｌ）、及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５９．９ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）の混合物を最初にＮ_２でパージし、次いで加熱し、９０℃で２時間撹拌した。反応物をメタノールで希釈し、分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２）で生成して所望の生成物を得た。Ｃ_２２Ｈ_１５ＦＮ_９について計算されたＬＣ－ＭＳ：４２４．１（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４２４．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）ｐｐｍ ８．９８（ｓ，１Ｈ），８．７７（ｄ，Ｊ＝５．０２Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｄｄ，Ｊ_１＝４．６０Ｈｚ，Ｊ_２＝１．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．９０－８．３０（ｂｓ，２Ｈ），７．７６－７．８９（ｍ，３Ｈ）、７．６６（ｄｄ，Ｊ_１＝５．２５Ｈｚ，Ｊ_２＝１．２５Ｈｚ，１Ｈ），７．４５－７．５８（ｍ，３Ｈ）、６．２５（ｓ，２Ｈ）。

【0368】

実施例Ａ１５．３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１５）の合成

【化82】

１，４－ジオキサン（２ｍＬ）及び水（０．２ｍＬ）中の炭酸セシウム（４６．１ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）を、３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（３０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）及びピリジン－４－イルボロン酸（１７．３８ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得られた混合物を２分間Ｎ_２でスパージし、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（５．５６ｍｇ、７．０７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、マイクロ波照射下、１２０℃で１．５時間撹拌した。反応混合物をメタノールで希釈した。分取ＨＰＬＣでの直接精製により、所望の生成物が得られた。Ｃ_２３Ｈ_１６ＦＮ_８について計算されたＬＣ－ＭＳ：４２３．１（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４２３．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0369】

実施例Ａ１６．３－（４－アミノ－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（化合物１６）の合成

【化83】

工程１．３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル

【化84】

この化合物は、実施例Ａ１３、工程１～工程６について記載されているものと同様の手順に従い、工程４において（３－シアノフェニル）ボロン酸に代えて（３－シアノ－２－フルオロフェニル）ボロン酸を用いて調製した。Ｃ_１８Ｈ_１２ＢｒＦＮ_７について計算されたＬＣ－ＭＳ：４２４．０（Ｍ＋Ｈ）^＋及び４２６．０（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４２４．３（Ｍ＋Ｈ）^＋及び４２６．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0370】

工程２．３－（４－アミノ－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル；

【化85】

この化合物は、実施例Ａ１５と同様の手順に従い、ピリジン－４－イルボロン酸に代えて（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ボロン酸を用いて、３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリルに代えて３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリルを用いて調製した。Ｃ_２２Ｈ_１７ＦＮ_９について計算されたＬＣ－ＭＳ：４２６．２（Ｍ＋Ｈ）^＋；実測値：４２６．３（Ｍ＋Ｈ）^＋。

【0371】

実施例Ａ１７：７－（１－（（５－クロロピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（化合物１７）の合成

【化86】

工程１：３－（ペンチルアミノ）－１Ｈ－ピロール－２－カルボン酸エチル

【化87】

３－アミノ－１Ｈ－ピロール－２－カルボン酸エチル（５ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）、ペンタナール（３．７９ｍｌ、３５．７ｍｍｏｌ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２．０３８ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）をメタノール（６４．９ｍｌ）中で室温で一晩混合した。反応混合物を減圧下で濃縮した。粗残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の０から１００％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、所望の生成物（４．４ｇ、６１％）を得た。Ｃ_１２Ｈ_２１Ｎ_２Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）に対して計算されたＬＣＭＳ：２２５．２。実測値：２２５．１

【0372】

工程２：３－（３－（エトキシカルボニル）－１－ペンチルチオウレイド）－１Ｈ－ピロール－２－カルボン酸エチル

【化88】

バイアルに、３－（ペンチルアミノ）－１Ｈ－ピロール－２－カルボン酸エチル（４．４ｇ、１９．６２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（３９．２ｍｌ）、及びエトキシカルボニルイソチオシアネート（２．７８ｍｌ、２３．５４ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を水（４０ｍＬ）でクエンチし、相を分離した。水性層をジクロロメタン（３×４０ｍＬ）で抽出し、組み合わせた有機画分をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗物質をさらに精製することなく次の工程で使用した。Ｃ_１６Ｈ_２６Ｎ_３Ｏ_４Ｓ（Ｍ＋Ｈ）に対して計算されたＬＣＭＳ：３５６．２。実測値：３５６．１。

【0373】

工程３：１－ペンチル－２－チオキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４（５Ｈ）－オン

【化89】

マイクロ波バイアルに、３－（３－（エトキシカルボニル）－１－ペンチルチオウレイド）－１Ｈ－ピロール－２－カルボキシレート（７．３１ｇ、２０．５７ｍｍｏｌ）及びナトリウムエトキシド（２１％ｗ／ｗ、８．４５ｍｌ、２２．６２ｍｍｏｌ）溶液を入れた。バイアルに蓋をして、マイクロ波反応器で摂氏１２０度で１０分間加熱した。１Ｍ ＨＣｌ溶液を加えて反応混合物を中性ｐＨにし、固体生成物を濾過して乾燥させた（３．１ｇ、６４％）。Ｃ_１１Ｈ_１６Ｎ_３ＯＳ（Ｍ＋Ｈ）に対して計算されたＬＣＭＳ：２３８．１。実測値：２３８．１。

【0374】

工程４：２－ヒドラゾノ－１－ペンチル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４（５Ｈ）－オン

【化90】

バイアルに、１－ペンチル－２－チオキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４（５Ｈ）－オン（３．１３ｇ、１３．１９ｍｍｏｌ）及びヒドラジン水和物（２０ｍＬ）を入れた。反応混合物を摂氏１００度で一晩撹拌した。形成された固体を濾過し、水で洗浄して、所望の生成物（２．２ｇ、７０％）を得た。Ｃ_１１Ｈ_１８Ｎ_５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）に対して計算されたＬＣＭＳ：２３６．１。実測値：２３６．１。

【0375】

工程５：３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン

【化91】

バイアルに、（Ｅ）－２－ヒドラゾノ－１－ペンチル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４（５Ｈ）－オン（４．８ｇ、２０．４０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸の滴、及びトリエチルオルトアセテート（２０ｍＬ）を入れた。反応混合物を摂氏１１０度に３時間加熱した。懸濁液を濾過し、ヘキサンで洗浄し、そして乾燥させた（４．０ｇ、７６％）。Ｃ_１３Ｈ_１８Ｎ_５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）に対して計算されたＬＣＭＳ：２６０．１。実測値：２６０．２。

【0376】

工程６：３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン

【化92】

バイアルに、３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（工程１から）（４ｇ、１５．４３ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（４０ｍＬ）、ジメチルアミノピリジン（０．１８８ｇ、１．５４３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３．２３ｍｌ、２３．１４ｍｍｏｌ）、及びベンゼンスルホニルクロリド（２．１８７ｍｌ、１６．９７ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を水でクエンチし、層を分離した。水性層をジクロロメタン（３×４０ｍＬ）で抽出し、組み合わせた有機画分をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗物質をさらに精製することなく次の工程で使用した（６．１ｇ、定量的）。Ｃ_１９Ｈ_２２Ｎ_５Ｏ_３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）に対して計算されたＬＣＭＳ：４００．１。実測値：４００．１。

【0377】

工程７：７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン

【化93】

バイアルに、３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（１ｇ、２．５０３ｍｍｏｌ）、乾燥ＴＨＦ（３０ｍＬ）を入れ、混合物を－７８℃に冷却した。リチウムジイソプロピルアミド溶液（ヘキサン中１Ｍ／ＴＨＦ、３．１３ｍｌ、３．１３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を－７８℃で１．５時間維持した。乾燥ＴＨＦ（３ｍｌ）中の１，２－ジブロモ－１，１，２，２－テトラクロロエタン（１．２２３ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）の溶液を反応混合物に滴下して加え、反応混合物を－７８℃にさらに１．５時間維持した。反応混合物を、飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液（３０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で希釈した。層を分離し、水性層をＤＣＭ（３ｘ３０ｍｌ）で抽出した。組み合わせた有機画分をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗残留物を自動フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０～１００％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、所望の生成物（０．８４ｇ、７０％）を得た。Ｃ_１９Ｈ_２１ＢｒＮ_５Ｏ_３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）について計算されたＬＣＭＳ：４７８．１。実測値：４７８．１。

【0378】

工程８：３－クロロ－５－（（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）ピリジン

【化94】

バイアルに、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（０．５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、３－（ブロモメチル）－５を入れた。－クロロピリジン臭化水素酸塩（０．７４１ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（２．５２ｇ、７．７３ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（６．４４ｍｌ）を入れた。反応混合物を摂氏６０度で１時間撹拌した。反応混合物を、水（１０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈した。層を分離し、水層をジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。自動フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０～１００％ＥｔＯＡｃ）による精製により、生成物（０．５４８ｇ、６７％）が得られた。Ｃ_１５Ｈ_２０ＢＣｌＮ_３Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）に対して計算されたＬＣＭＳ：３２０．１、３２２．１。実測値：３２０．１、３２２．１

【0379】

工程９：７－（１－（（５－クロロピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン
バイアルに、７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（０．０１ｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）、３－クロロ－５－（（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－トリアゾール－１－イル）メチル）ピリジン（０．０１３ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’、４’、６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（５．００ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）及び三塩基性リン酸カリウム（０．０１６ｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を入れた。１，４－ジオキサン（０．３５ｍｌ）及び水（０．０７ｍｌ）を加え、反応混合物に窒素ガスを５分間散布し、次に９０℃で２時間撹拌した。その後、反応混合物を室温に冷却し、水酸化ナトリウム（１０ｍｇ）を添加した。反応混合物を、４０℃で６０分間撹拌した。この反応混合物を室温まで冷却し、ＤＭＦ（５ｍＬ）で希釈した。最終物質を分取ＨＰＬＣ（ｐＨ２、ＴＦＡを有するアセトニトリル／水）によって精製して生成物をＴＦＡ塩（２ｍｇ、２１％）として得た。Ｃ_２２Ｈ_２４ＣｌＮ_８Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４５１．２；実測値４５３．２。

【0380】

実施例Ａ１８：３－メチル－７－（１－（（５－メチルピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（化合物１８）の合成

【化95】

この化合物は、工程８で３－（ブロモメチル）－５－クロロピリジン臭化水素酸塩の代わりに３－（ブロモメチル）－５－メチルピリジンを使用して、実施例Ａ１７に記載されたのと同様の手順を使用して調製した。Ｃ_２３Ｈ_２７Ｎ_８Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）：４３１．２。実測値：４３１．３。

【0381】

実施例Ａ１９：３－メチル－９－ペンチル－７－（１－（チエノ［３，２－ｂ］ピリジン－６－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（化合物１９）の合成

【化96】

この化合物は、工程８で３－（ブロモメチル）－５－クロロピリジン臭化水素酸塩の代わりに６－（ブロモメチル）チエノ［３，２－ｂ］ピリジンを使用して、実施例Ａ１７に記載されたのと同様の手順を使用して調製した。Ｃ_２４Ｈ_２５Ｎ_８ＯＳについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）：４７３．２。実測値：４７３．３。

【0382】

実施例Ａ２０：７－（１－（（２－（２－（ジメチルアミノ）アセチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（化合物２０）

【化97】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル６－（（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）－３，４ －ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボン酸塩

【化98】

フラスコに、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（．５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル６－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボキシレート（０．３３９ｇ、１．２８８ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（０．７４３ｇ、２．８３ｍｍｏｌ）、及びＴＨＦ（１２ｍｌ）を入れた。溶液を０℃に冷却し、ＤＩＡＤ（０．６０１ｍｌ、３．０９ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルで希釈し、その後、水で洗浄し、乾燥させ、濃縮した。生成物を、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（最大ＥｔＯＡｃ ６０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製して、生成物を得た。Ｃ_２４Ｈ_３５ＢＮ_３Ｏ_４（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚに対するＬＣＭＳ計算値４４０．３；実測値４４０．３。

【0383】

工程２：７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン

【化99】

ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１．０Ｍ）（２．０ｍｌ、２．０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（４．０ｍｌ）中の７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（０．３６０ｇ、０．７５３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、次に反応物を５０℃で１時間撹拌した。溶媒を除去し、生成物を、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ（最大ＭｅＯＨ １０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製した。Ｃ_１３Ｈ_１７ＢｒＮ_５Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝３３８．１；実測値３３８．１。

【0384】

工程３：ｔｅｒｔ－ブチル６－（（４－（３－メチル－５－オキソ－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボン酸塩

【化100】

７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（実施例Ａ２０、工程２から）（０．０４０ｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル６－（（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボキシレート（０．０６２ｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）、ジクロロ［１，１’－ビス（ジシクロヘキシルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）、ｔ－ＢｕＯＨ（１．５ｍｌ）／水（０．６ｍｌ）中のジクロロメタン付加物（Ｐｄ－１２７）（８．９４ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）及びフッ化セシウム（０．０９０ｇ、０．５９１ｍｍｏｌ）の混合物を真空にし、Ｎ_２に３回置き換えた。次いで反応混合物を１０５℃で２時間撹拌し、室温に冷却し、酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し、乾燥させ、濃縮した。生成物を、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ（最大ＭｅＯＨ １０％）で溶出するカラムによって精製した。Ｃ_３１Ｈ_３９Ｎ_８Ｏ_３について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５７１．３；実測値：５７１．５。

【0385】

工程４：３－メチル－９－ペンチル－７－（１－（（１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン

【化101】

ＴＦＡ（０．５ｍｌ、６．４９ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル６－（（４－（３－メチル－５－オキソ－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボキシレート（５０．０ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）に加え、次に反応物を室温で３０分間撹拌した。次に、溶媒を除去して、粗生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２６Ｈ_３１Ｎ_８Ｏについて計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝４７１．３；実測値４７１．２。

【0386】

工程５：７－（１－（（２－（２－（ジメチルアミノ）アセチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン
ジメチルグリシノイルクロリド（３．１０ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を３－メチル－９－ペンチル－７－（１－（（１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－の溶液に加えた。ピラゾール－４－イル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（６．０ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（８．８９μｌ、０．０６４ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（０．８ｍｌ）に溶かし、室温で３０分間撹拌した。溶媒を除去し、混合物をアセトニトリル／水で希釈し、分取ＨＰＬＣ（ｐＨ２、アセトニトリル／ＴＦＡを含む水）によって精製して、そのＴＦＡ塩として所望の化合物を得た。Ｃ_３０Ｈ_３８Ｎ_９Ｏ_２について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：ｍ／ｚ＝５５６．３；実測値５５６．３。

【0387】

実施例Ａ２１．３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物２１Ａ）及び３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物２１Ｂ）

【化102】

この化合物は、実施例Ａ３について記載されているものと同様の手順を使用して、２－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ピリジンに代えて５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾールを用いて調製した。化合物２１Ａを分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを有するアセトニトリル／水）によって精製して生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ_２１Ｈ_１５Ｎ_１４について計算されたＬＣ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４６３．２；実測値４６３．２。

【0388】

本明細書で説明されるものに加えて、本発明の様々な修正は、前述の説明から当業者には明らかとなろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。本出願で引用された全ての特許、特許出願、及び刊行物を含む各参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本願は下記の態様も包含する。
［態様１］
対象におけるがんを治療する方法であって、
（ｉ）Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤；及び
（ｉｉ）ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤
を前記対象に投与することを含む、方法。
［態様２］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、式（Ｉ）の化合物、

【化103】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｃｙ ^１ は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１または２個の置換基によって置換されるフェニルであり；
Ｃｙ ^２ は、５～６員ヘテロアリールまたは４～７員ヘテロシクロアルキルであり、式中、前記Ｃｙ ^２ の５～６員ヘテロアリールまたは４～７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、Ｃ _１－３ アルキル、Ｃ _１－３ アルコキシ、ＮＨ _２ 、ＮＨ（Ｃ _１－３ アルキル）及びＮ（Ｃ _１－３ アルキル） _２ から独立して選択される１、２、または３個の基でそれぞれ任意選択で置換され；
Ｒ ^２ は、フェニル－Ｃ _１－３ アルキル－、Ｃ _３－７ シクロアルキル－Ｃ _１－３ アルキル－、（５～７員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル－、（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ _１－３ アルキル－、及びＯＲ ^ａ２ から選択され、式中、前記Ｒ ^２ のフェニル－Ｃ _１－３ アルキル－、Ｃ _３－７ シクロアルキル－Ｃ _１－３ アルキル－、（５～７員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル－、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ _１－３ アルキル－は、その各々が、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^Ｃ 置換基で任意選択で置換され；
Ｒ ^ａ２ は、１または２個の独立して選択されるＲ ^Ｃ 置換基で任意選択で置換された（５～７員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル－であり；
各Ｒ ^Ｃ は、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、Ｃ _６ アリール、５～７員ヘテロアリール、（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ _１－３ アルキル－、ＯＲ ^ａ４ 、及びＮＲ ^ｃ４ Ｒ ^ｄ４ から独立して選択され；
各Ｒ ^ａ４ 、Ｒ ^ｃ４ 、及びＲ ^ｄ４ は、Ｈ及びＣ _１－６ アルキルから独立して選択される、態様１に記載の方法。
［態様３］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、
３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び
３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩
から選択される、態様１または２に記載の方法。
［態様４］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、式（ＩＩ）の化合物、

【化104】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｒ ^２ は、Ｈ及びＣＮから選択され；
Ｃｙ ^１ は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１または２個の置換基によって置換されるフェニルであり；
Ｌは、Ｃ _１－３ アルキレンであり、式中、前記アルキレンは、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^８Ｄ 置換基で置換され；
Ｃｙ ^４ は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、式中、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルは、それぞれ、Ｒ ^８Ｄ 及びＲ ^８ から独立して選択される１、２、または３個の置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ ^８ は、独立して、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、Ｃ _１－６ ハロアルキル、Ｃ _２－４ アルケニル、Ｃ _２－４ アルキニル、フェニル、Ｃ _３－７ シクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、４～７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ _１－３ アルキル、Ｃ _３－７ シクロアルキル－Ｃ _１－３ アルキル、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ _１－３ アルキルから選択され、式中、前記Ｒ ^８ のＣ _１－６ アルキル、Ｃ _２－４ アルケニル、Ｃ _２－４ アルキニル、フェニル、Ｃ _３－７ シクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、４～７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ _１－３ アルキル、Ｃ _３－７ シクロアルキル－Ｃ _１－３ アルキル、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ _１－３ アルキルはそれぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^８Ａ 置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ ^８Ａ が、独立して、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、５～６員ヘテロアリール、４～７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲ ^ａ８１ 、及びＮＲ ^ｃ８１ Ｒ ^ｄ８１ から選択され、式中、前記Ｒ ^８Ａ のＣ _１－３ アルキル、５～６員ヘテロアリール、及び４～７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^８Ｂ 置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ ^ａ８１ 、Ｒ ^ｃ８１ 、及びＲ ^ｄ８１ が独立して、Ｈ、Ｃ _１－６ アルキル、及び４～７員ヘテロシクロアルキルから選択され、式中、前記Ｒ ^ａ８１ 、Ｒ ^ｃ８１ 、及びＲ ^ｄ８１ のＣ _１－６ アルキル及び４～７員シクロアルキルは、それぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^８Ｂ 置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ ^８Ｂ が、ハロ及びＣ _１－３ アルキルから独立して選択され；及び
各Ｒ ^８Ｄ が、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、及びＣ _１－６ ハロアルキルから独立して選択される、態様１に記載の方法。
［態様５］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、
３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
５－アミノ－７－（３－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－８－カルボニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び
３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－（（（１－メチル－２－オキソピロリジン－３－イル）アミノ）メチル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩
から選択される、態様１または４に記載の方法。
［態様６］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、式（ＩＩＩ）の化合物、

【化105】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｃｙ ^１ は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１または２個の置換基によって置換されるフェニルであり；
Ｒ ^２ は、５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルから選択され、式中、前記Ｒ ^２ の５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^２Ａ 置換基で置換され；
各Ｒ ^２Ａ が、Ｄ、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、及びＣ _１－６ ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ ^４ は、フェニル－Ｃ _１－３ アルキル－、Ｃ _３－７ シクロアルキル－Ｃ _１－３ アルキル－、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル－、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ _１－３ アルキルから選択され、式中、前記Ｒ ^４ のフェニル－Ｃ _１－３ アルキル－、Ｃ _３－７ シクロアルキル－Ｃ _１－３ アルキル－、（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル－、及び（４～７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ _１－３ アルキル－は、その各々が、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^４Ａ 置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ ^４Ａ が、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、Ｃ _１－６ ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲ ^ａ４１ 、及びＮＲ ^ｃ４１ Ｒ ^ｄ４１ から独立して選択され；及び
各Ｒ ^ａ４１ 、Ｒ ^ｃ４１ 、及びＲ ^ｄ４１ が、Ｈ及びＣ _１－６ アルキルから独立して選択される、態様１に記載の方法。
［態様７］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、
３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル；
３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－ ６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び
３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（２，６－ジメチルピリジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩
から選択される、態様１または６に記載の方法。
［態様８］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、式（ＩＶ）の化合物、

【化106】

またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｃｙ ^１ は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１または２個の置換基によって置換されるフェニルであり；
Ｃｙ ^２ が、５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルから選択され、式中、前記Ｃｙ ^２ の５～６員ヘテロアリール及び４～７員ヘテロシクロアルキルがそれぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^６ 置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ ^６ が、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、及びＣ _１－６ ハロアルキルから独立して選択され、
Ｒ ^２ は、フェニル－Ｃ _１－３ アルキル－または（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル－であり、式中、前記Ｒ ^２ のフェニル－Ｃ _１－３ アルキル－及び（５～６員ヘテロアリール）－Ｃ _１－３ アルキル－はそれぞれ、１、２、または３個の独立して選択されるＲ ^２Ａ 置換基で任意選択で置換され；
各Ｒ ^２Ａ が独立して、ハロ、Ｃ _１－６ アルキル、及びＣ _１－６ ハロアルキルから選択される、またはその薬学的に許容される塩から選択される、態様１に記載の方法。
［態様９］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、
３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
３－（４－アミノ－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩
から選択される、態様１または８に記載の方法。
［態様１０］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である、態様１に記載の方法。
［態様１１］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である、態様１に記載の方法。
［態様１２］
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、（Ｒ）－１－（（７－シアノ－２－（３’－（３－（（（Ｒ）－３－ヒドロキシピロリジン－１－イル）メチル）－１，７－ナフチリジン－８－イルアミノ）－２，２’－ジメチルビフェニル－３－イル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）メチル）ピロリジン－３－カルボン酸、またはその薬学的に許容される塩である、態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。
［態様１３］
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、ペムブロリズマブである、態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。
［態様１４］
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、アテゾリズマブである、態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。
［態様１５］
前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、抗体Ｘであり、抗体Ｘが、抗体またはその抗原結合断片であり、可変重（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み、式中、
前記ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
前記ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、
前記ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
ここで、前記抗体は、可変軽（ＶＬ） ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み、ここで、
前記ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
前記ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、
前記ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。
［態様１６］
抗体Ｘが、ヒト化抗体である、態様１５に記載の方法。
［態様１７］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、遊離塩基基準で約０．１ｍｇから約１０００ｍｇの用量で前記対象に投与される、態様１～１６のいずれか１つに記載の方法。
［態様１８］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が、１日１回、１日おき、または週に１回前記対象に投与される、態様１～１７のいずれか１つに記載の方法。
［態様１９］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、同時に投与される、態様１～１８のいずれか１つに記載の方法。
［態様２０］
前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、連続して投与される、態様１～１８のいずれか１つに記載の方法。
［態様２１］
前記がんが、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択される、態様１～２０のいずれか１つに記載の方法。
［態様２２］
前記がんが、黒色腫、子宮内膜癌、肺癌、腎臓癌、膀胱癌、乳癌、膵臓癌、及び結腸癌から選択される、態様１～２０のいずれか１つに記載の方法。
［態様２３］
前記がんが、黒色腫である、態様１～２０のいずれか１つに記載の方法。
［態様２４］
前記がんが、結腸癌である、態様１～２０のいずれか１つに記載の方法。
［態様２５］
対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、
（ｉ）３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）抗体ＸであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤
を前記対象に投与することを含み、
式中、前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、遊離塩基基準で約０．１ｍｇから約５００ｍｇの用量で前記対象に投与され、前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、１日１回または１日おきに１回投与され、前記抗体Ｘが、Ｑ４Ｗで約１００ｍｇから約１０００ｍｇの用量で前記対象に投与され、
抗体Ｘが、抗体またはその抗原結合断片であり、可変重（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み、式中、
前記ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
前記ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、
前記ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
ここで、前記抗体は、可変軽（ＶＬ） ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み、ここで、
前記ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
前記ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、
前記ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、方法。
［態様２６］
対象における膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、子宮内膜癌、腎臓癌、口腔癌、頭頸部癌、肝癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非黒色腫皮膚癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、肉腫、甲状腺癌、及びメルケル細胞癌から選択されるがんの治療方法であって、
（ｉ）３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルであるＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤、またはその薬学的に許容される塩；及び
（ｉｉ）抗体ＸであるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤
を前記対象に投与することを含み、
式中、前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、遊離塩基基準で約０．１ｍｇから約５００ｍｇの用量で前記対象に投与され、前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤が、１日１回または１日おきに１回投与され、前記抗体Ｘが、Ｑ４Ｗで約１００ｍｇから約１０００ｍｇの用量で前記対象に投与され、
抗体Ｘが、抗体またはその抗原結合断片であり、可変重（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み、式中、
前記ＶＨ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＳＹＷＭＮ（配列番号６）を含み、
前記ＶＨ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＶＩＨＰＳＤＳＥＴＷＬＤＱＫＦＫＤ（配列番号７）を含み、
前記ＶＨ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＥＨＹＧＴＳＰＦＡＹ（配列番号８）を含み、
ここで、前記抗体は、可変軽（ＶＬ） ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み、ここで、
前記ＶＬ ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＲＡＳＥＳＶＤＮＹＧＭＳＦＭＮＷ（配列番号９）を含み、
前記ＶＬ ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１０）を含み、
前記ＶＬ ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＱＱＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１１）を含む、方法。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【配列表】

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