特許 7659268 デュアルモード１８Ｆ標識セラノスティック化合物及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-04-01

(45)【発行日】2025-04-09

(54)【発明の名称】デュアルモード１８Ｆ標識セラノスティック化合物及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07F 5/02 20060101AFI20250402BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20250402BHJP

   C12N 15/115 20100101ALI20250402BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20250402BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250402BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20250402BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20250402BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20250402BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20250402BHJP

   A61P 25/18 20060101ALI20250402BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20250402BHJP

   A61K 47/66 20170101ALI20250402BHJP

   A61K 51/10 20060101ALI20250402BHJP

   A61K 51/08 20060101ALI20250402BHJP

   A61K 51/04 20060101ALI20250402BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20250402BHJP

   A61K 31/555 20060101ALI20250402BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20250402BHJP

   C07K 5/09 20060101ALI20250402BHJP

   C07K 7/06 20060101ALI20250402BHJP

【ＦＩ】

C07F5/02 B CSP

C07K16/28 ZNA

C12N15/115 Z

A61K47/68

A61P35/00

A61P35/02

A61P25/00

A61P11/06

A61P1/04

A61P25/18

A61P29/00

A61K47/66

A61K51/10 200

A61K51/08 200

A61K51/04 320

A61K51/04 100

A61K51/10 100

A61K51/08 100

A61K51/04 310

A61K47/54

A61K31/555

C07K19/00

C07K5/09

C07K7/06

A61K51/04 200

【請求項の数】 18

(21)【出願番号】P 2021534657

(86)(22)【出願日】2019-12-18

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-07

(86)【国際出願番号】 CA2019051853

(87)【国際公開番号】W WO2020124237

(87)【国際公開日】2020-06-25

【審査請求日】2022-12-19

(31)【優先権主張番号】62/781,584

(32)【優先日】2018-12-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】520143199

【氏名又は名称】プロビンシャル・ヘルス・サービシーズ・オーソリティ

【氏名又は名称原語表記】ＰＲＯＶＩＮＣＩＡＬ ＨＥＡＬＴＨ ＳＥＲＶＩＣＥＳ ＡＵＴＨＯＲＩＴＹ

(73)【特許権者】

【識別番号】300066874

【氏名又は名称】ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ベナール、フランソワ

(72)【発明者】

【氏名】リン、クオシュヤン

(72)【発明者】

【氏名】チャン、チェンシェン

(72)【発明者】

【氏名】クオ、シャオ － ティン

(72)【発明者】

【氏名】ペラン、ダヴィッド

(72)【発明者】

【氏名】ロキシン、アーロン

(72)【発明者】

【氏名】ルパージュ、マチュー

(72)【発明者】

【氏名】フー、サンジョン

(72)【発明者】

【氏名】リュー、チーボ

(72)【発明者】

【氏名】カンダサミー、ラジャグル

【審査官】水島 英一郎

(56)【参考文献】

【文献】中国特許出願公開第１０６９６７１５２（ＣＮ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１５／１００４９８（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Nuclear Medicine and Biology，2018年，61，11-20

【文献】Bioconjugate Chem.，2019年03月21日，30(4)，1210-1219

【文献】ChemBioChem，2019年10月16日，21(7)，943-947，2020, First Published: 20191016

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｆ，Ａ６１Ｋ，Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ（ＳＴＮ）

ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ）経細胞最晩期抗原４（ＶＬＡ－４）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ソマトスタチン受容体、ガストリン放出ペプチド受容体（ＧＲＰＲ）、又はブラジキニン受容体を標的とする細胞抗原結合モジュールと、
ｂ）ＤＯＴＡ（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸）、ＮＯＴＡ（１，４，７－トリアザシクロノナン１，４，７－三酢酸）、ＮＯＤＡＧＡ（２－（４，７－ビス（カルボキシメチル）－１，４，７－トリアゾナン－１－イル）ペンタン二酸）、Ｏｃｔａｐａ（Ｎ，Ｎ’－ビス（６－カルボキシ－２－ピリジルメチル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸）、及びＭａｃｒｏｐａ（Ｎ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６）から選択される少なくとも１種の金属キレート剤と、
ｃ）ジメチルアンモニオメチルトリフルオロボラート（ＡＭＢＦ_３）を含むトリフルオロボラート（ＢＦ_３）含有部分と、
を含む、化合物。

【請求項2】

前記細胞抗原結合モジュールが、ペプチド、ポリペプチド、標的となる細胞抗原に結合することができる非ペプチド／非タンパク質リガンド、又は抗体若しくは抗体断片を含む、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

前記細胞抗原結合モジュールが、ＬＬＰ２Ａ、ＰＳＭＡ－６１７、ＴＡＴＥ、又はペプチドＤ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２を含む、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

リンカーを含む請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

前記リンカーが、前記ＡＭＢＦ_３を含むＢＦ_３含有部分を含む、請求項４に記載の化合物。

【請求項6】

前記ＡＭＢＦ_３を含むＢＦ_３含有部分がＬｙｓ－ε－１，２，３トリアゾール－Ｎ，Ｎ－ジメチル－アンモニオメチル－トリフルオロボラート（Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３））である、請求項５に記載の化合物。

【請求項7】

前記ＢＦ_３含有部分が少なくとも１つの^１８Ｆを含み、前記少なくとも１種の金属キレート剤がキレート化されていないか又は非放射性金属同位体でキレート化されている、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項8】

前記ＢＦ_３含有部分が^１８Ｆで標識されておらず、前記少なくとも１種の金属キレート剤がキレート化されていないか又は非放射性金属同位体でキレート化されている、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項9】

前記ＢＦ_３含有部分が少なくとも１つの^１８Ｆを含み、前記少なくとも１種の金属キレート剤が放射性金属同位体でキレート化されている、請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項10】

【化1】

【化2】

【化3】

【化4】

及び

【化5】

からなる群から選択される化合物。

【請求項11】

放射性金属同位体でキレート化されている、請求項１０に記載の化合物。

【請求項12】

少なくとも１つの^１８Ｆを含む、請求項１０又は１１に記載の化合物。

【請求項13】

疾患の治療に使用するための又は放射線治療に使用するための請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物であって、
前記金属キレート剤が放射性金属同位体でキレート化されている、
化合物。

【請求項14】

疾患の治療に使用するための又は放射線治療に使用するための、請求項１１又は請求項１１を引用する請求項１２に記載の化合物。

【請求項15】

前記疾患が癌である、請求項１３又は１４に記載の化合物。

【請求項16】

前記癌が黒色腫又は前立腺癌である、請求項１５に記載の化合物。

【請求項17】

インビボ画像診断の方法に使用するための請求項１～６及び１０～１２のいずれか一項に記載の化合物であって、前記ＢＦ_３含有部分が少なくとも１つの^１８Ｆを含む、化合物。

【請求項18】

エクスビボ画像診断の方法に使用するための請求項１～６及び１０～１２のいずれか一項に記載の化合物であって、前記ＢＦ_３含有部分が少なくとも１つの^１８Ｆを含む、化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、イメージング及び／又は治療のための化合物／複合体に関する。特に、本発明は、^１８Ｆ標識されている場合はイメージング用に、放射性金属でキレート化されている場合は治療用に構成されたデュアルモード化合物／複合体に関する。

【背景技術】

【0002】

ＰＥＴイメージングは、非侵襲的な臨床診断においてますます重要な役割を果たしている^１～７。ＭＲＩ又はＳＰＥＣＴと比較して、ＰＥＴは、生体内分布及びクリアランスを調べるために、非常に高い感度^１０と動的時空間分解能とを組み合わせている^{１１、１２}。^１８Ｆ－デオキシグルコース（ＦＤＧ）及び^１８Ｆ－チミジン（ＦＬＴ）^１３は、すべてではないがほとんどの癌に特徴的な代謝の亢進に基づく画像を提供する^４。癌サブタイプは、病理学的に異なる細胞型を区別し、特定の分子標的の存在を評価するペプチド^{４、１４～１９}によってますます区別されており、ＦＤＧでは不可能な功績である^{２０～２３}。臨床用ペプチドトレーサ及び薬物には、オクトレオテート^{２４～２８}、ボンベシン^２９、及びＲＧＤ^{３０～３２}、リュープリン（商標）及びサンドスタチン（商標）^{３３、３４}が含まれる。

【0003】

放射性金属（例えば^６８Ｇａ、^６４Ｃｕ、^９９ｍＴｃ）キレート化は標識の容易さを提供するが、^１８Ｆ－フッ化物はより低いコストで拡張性を提供する。したがって、^１８Ｆ－フッ化物が好ましく、^１８Ｆ－フッ化物は、きれいに崩壊し（９７％超のβ＋）、^６８Ｇａよりもはるかに低コスト（４００ドルで１Ｃｉ超）で高い同位体純度で製造することができ^３５、最適なイメージング特性を持つ^{３６、３７}。半減期が短いため、放射線量を最小限に抑え、一方、高比放射能により、トレーサがマイクロドーズ要件を満たすことができる^３８。それにもかかわらず、その半減期の短さ（１０９．８分）はまた、ペプチドの標識化にも課題がある。^１８Ｆ標識オルガノトリフルオロボラート（ＲＢＦ３ｓ）に関する以前の研究は、現在、放射性金属キレート化と同様に^１８Ｆ標識を容易にする^３９。特定の^１８Ｆ－ＲＢＦ３ペプチドは高い腫瘍取込みを示すが^４０、放射性金属化ペプチドの明確な利点は、一般に腫瘍取込みが高いことである^４１。

【0004】

それにもかかわらず、放射性毒性メタロペプチドは、治療の選択肢がほとんど存在しない特定の癌を治療するために使用される。例えば、膵臓癌を治療するために、オクトレオテート－キレート剤を^９０Ｙと複合体化した^４２。いくつかのペプチドが、放射線療法のための標的化（ｔａｒｇｅｔｔｉｎｇ）剤として出現している^{４３、４４}。それにもかかわらず、すべての患者がそのような治療に応答するわけではない。理想的には、患者は治療前に同じペプチドでイメージングされるべきである。しかし、放射線治療ペプチドのＰＥＴイメージングは、一方がイメージング用であり、他方が治療用である一対の同位体（例えば^８６Ｙ／^９０Ｙ、^６４Ｃｕ／^６７Ｃｕ、^２０３Ｐｂ／^２１２Ｐｂ）を有する金属に限定される^{４５、４６}。残念ながら、診断用ＰＥＴ金属の製造は制限され、高価である。さらに悪いことに、いくつかの放射性金属、例えば^１７７Ｌｕでは、ＰＥＴに容易に利用可能な又は有用な同位体はない（β＋を放出する^１６７Ｌｕを用いたＰＥＴの報告が１件ある）。典型的には、異なる金属がイメージングに使用される。

【0005】

したがって、現在の実施は、１種の放射性金属がイメージングに使用され、異なる放射性金属が治療に使用される場合に重大な問題を引き起こす。例えば、ＴＡＴＥを^１１１Ｉｎ（イメージング用）及び^９０Ｙ（治療用）で標識した。取込みに有意な差があることから、ＴＡＴＥは同じ同位体、すなわちβ＋を放出する^８６Ｙで評価すべきだという結論に達した^{４５、４６}。残念ながら、^８６Ｙは非常に高価であり、^１８Ｆよりも分解能が低い^４７。同様の問題は、ＳＰＥＣＴイメージングにも及び、^１１１Ｉｎ^、６７Ｇａ、^１７７Ｌｕ、及び^９０ＹのＤＯＴＡ－ＴＡＴＥキレートはすべて異なる親和性を示し、放射性金属が親和性とイメージングシグナルの両方に影響を及ぼすため、異なるメタロペプチド間で画像を相関させることが困難になる^{４３、４８}。同様の違いがボンベシン－ＮＯＴＡで見られ、^６８Ｇａ－キレートは、^１１１Ｉｎ－キレートよりもはるかに低い親和性を示し、それぞれ１．２ｎＭ対２３ｐＭである^４９。親和性の変動は、画像相関及び放射線治療による取込みの予測を妨げる。さらに、２種の金属同位体を同定して、同位体置換体のセラノスティックペアを提供することができる例はごくわずかである。したがって、ＰＥＴイメージング結果に基づく治療計画の改善を容易にするセラノスティック二重機能ＰＥＴイメージングトレーサ／放射線治療薬の分野における満たされていない必要性がある。

【0006】

前述の情報のいずれかが本発明に対する先行技術を構成することを、必ずしも承認することを意図しておらず、また解釈すべきでもない。

【発明の概要】

【0007】

様々な実施形態は、化合物又は分子複合体に関するものであり、この化合物又は分子複合体は、放射性金属同位体又は非放射性金属同位体とのキレート化のために構成された金属キレート剤、及び^１９Ｆ／^１８Ｆ交換用に構成されたトリフルオロボラート（ＢＦ_３）含有部分、又は^１８Ｆ標識トリフルオロボラートへの変換が可能なボロナート前駆体を含む。

【0008】

様々な実施形態は、化合物又は分子複合体に関するものであり、この化合物又は分子複合体は、細胞標的化ドメイン、金属放射性同位体又は非放射性金属同位体とのキレート化のために構成された金属キレート剤、及び^１９Ｆ／^１８Ｆ交換用に構成されたトリフルオロボラート（ＢＦ_３）含有部分、又は^１８Ｆ標識トリフルオロボラートへの変換が可能なボロナート前駆体を含む。いくつかのこのような実施形態では、細胞標的化ドメインは、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質、ペプチド模倣物、あるいは核酸アプタマー、大環状分子、ステロイド、又は小分子を含むことができ、細胞標的化ドメインは、細胞マーカーに特異的に結合する。他のこのような実施形態では、細胞標的化ドメインは、ＬＬＰ２Ａ、ＰＳＭＡ－６１７、ＴＡＴＥ、又はペプチドＤ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２を含む。他のこのような実施形態では、細胞標的化ドメインは、（ｉ）標的細胞の抗原に特異的に結合する抗体又は抗体誘導体又は断片、あるいは（ｉｉ）抗原に特異的に結合する抗体又は抗体誘導体又は断片に特異的に結合するタンパク質ドメインを含む。

【0009】

いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、ＢＦ_３含有部分を含有するリンカーによって細胞標的化ドメインに連結することができる。リンカーは、複数のＢＦ_３含有部分を含むことができる。リンカーは、ペプチドリンカーであってもよい。リンカーは、Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）を含むことができる。

【0010】

いくつかの実施形態では、金属キレート剤の化合物又は分子複合体は、キレート化されていないか、又は非放射性金属同位体でキレート化されており、ＢＦ_３含有部分は^１８Ｆ標識されている。

【0011】

いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、放射性金属同位体でキレート化されており、ＢＦ_３含有部分は^１９Ｆ標識されている。

【0012】

いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、放射性金属同位体でキレート化されており、ＢＦ_３含有部分は^１８Ｆ標識されている。

【0013】

いくつかの実施形態では、放射性金属同位体は、アルファ放射体、ベータ放射体又はオージェ放射体である。

【0014】

いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、ＤＯＴＡ及び誘導体；ＤＯＴＡＧＡ；ＮＯＴＡ；ＮＯＤＡＧＡ；ＮＯＤＡＳＡ；ＣＢ－ＤＯ２Ａ；３ｐ－Ｃ－ＤＥＰＡ；ＴＣＭＣ；ＤＯ３Ａ；ＤＴＰＡ並びにＣＨＸ－Ａ’’－ＤＴＰＡ及び１Ｂ４Ｍ－ＤＴＰＡから選択されてもよいＤＴＰＡ類似体；ＴＥＴＡ；ＮＯＰＯ；Ｍｅ－３，２－ＨＯＰＯ；ＣＢ－ＴＥ１Ａ１Ｐ；ＣＢ－ＴＥ２Ｐ；ＭＭ－ＴＥ２Ａ；ＤＭ－ＴＥ２Ａ；サルコファジン並びにＳａｒＡｒ、ＳａｒＡｒ－ＮＣＳ、ｄｉａｍＳａｒ、ＡｍＢａＳａｒ、及びＢａＢａＳａｒから選択されてもよいサルコファジン誘導体；ＴＲＡＰ；ＡＡＺＴＡ；ＤＡＴＡ及びＤＡＴＡ誘導体；Ｈ２－ｍａｃｒｏｐａ又はその誘導体；Ｈ２ｄｅｄｐａ、Ｈ４ｏｃｔａｐａ、Ｈ４ｐｙ４ｐａ、Ｈ４Ｐｙｐａ、Ｈ２ａｚａｐａ、Ｈ５ｄｅｃａｐａ、及び他のピコリン酸誘導体；ＣＰ２５６；ＰＣＴＡ；ＤＯＴＰ；ＨＥＨＡ；Ｃ－ＮＥＴＡ；Ｃ－ＮＥ３ＴＡ；ＨＢＥＤ；ＳＨＢＥＤ；ＢＣＰＡ；ＣＰ２５６；ＹＭ１０３；サイクラム；ＤｉａｍＳａｒ；デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）及びＤＦＯ誘導体；Ｈ６ｐｈｏｓｐａ；トリチオールキレート；メルカプトアセチル；ヒドラジノニコチンアミド；ジメルカプトコハク酸；１，２－エチレンジイルビス－Ｌ－システインジエチルエステル；メチレンジホスホナート；ヘキサメチルプロピレンアミンオキシム；及びヘキサキス（メトキシイソブチルイソニトリル）；ポルフィリン、クロリン、テキサフリン、フタロシアニンからなる群から選択されるキレート剤から選択されるキレート剤である。いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、ＤＯＴＡ及びＤＯＴＡ誘導体から選択される。いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、ＤＯＴＡである。

【0015】

いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分は、

【0016】

【化1】

あるいは表３又は４に示される基であり、式中、各Ｒは独立して、Ｃ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐アルキル基である。

【0017】

いくつかの実施形態では、化合物は、ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ３－ＰＥＧ２－ＬＬＰ２Ａ、ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＴＡＴＥ、及びＤＯＴＡ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－Ｐｉｐ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２からなる群から選択される。

【0018】

いくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、フルオロフォア又は他の発光部分をさらに含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）を含む。

【0020】

いくつかの実施形態では、化合物は、ＤＯＴＡ－Ｂｎ－ＮＨ－Ｌｙｓ－（ＡＭＢＦ３）を含む。

【0021】

化合物又は分子複合体がＢＦ_３含有部分と細胞標的化ドメインの両方を含むいくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、^１８Ｆで標識された化合物又は分子複合体を使用して、疾患又は状態の細胞マーカーの存在を確認するために対象をイメージングすること、及び治療用放射性同位体でキレート化された化合物又は分子複合体を使用して、疾患又は状態を治療することに使用するためのものである。

【0022】

化合物又は分子複合体が、ＢＦ_３含有部分を含む化合物であり、細胞標的化ドメインを含まないいくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、対象の疾患又は状態を画像化及び／又は治療するために二重特異性抗体と組み合わせて使用するためのものであり、二重特異性抗体は、（ｉ）疾患又は状態の細胞マーカー、及び（ｉｉ）金属キレート剤に特異的である。いくつかのそのような実施形態では、化合物又は分子複合体は、二重特異性抗体との複合体として対象に投与するためのものであってもよい。他のこのような実施形態では、二重特異性抗体は、二重特異性抗体が細胞マーカーに結合するプレ標的化ステップにおいて、化合物又は分子複合体を対象に投与する前に対象に投与するためのものであってもよい。

【0023】

本発明の特徴は、添付の図面を参照する以下の説明から明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0024】

【図1】特定のデュアルモードＰＥＴイメージング放射線治療薬の機能的ドメインの様々な相対的構成の概略図を示す。

【0025】

【図2】ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ３－ＰＥＧ２－ＬＬＰ２Ａ（ＬＬＰ２Ａ－ＬｙｓＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡとも呼ばれる）及びＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡの化学構造を示す図である。

【0026】

【図3】非放射性ＬＬＰ２Ａ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡ（１００μｇ）の同時注射（Ａ）なし及び（Ｂ）ありのＢ１６Ｆ１０黒色腫異種移植片を有するマウスにおけるＦ－１８標識ＬＬＰ２Ａ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡの最大強度投影画像（注射１時間後）を示す。

【0027】

【図4】ＤＣＦＰｙＬ（０．５ｍｇ）の同時注射（Ａ）なし及び（Ｂ）ありのＬＮＣａＰ前立腺癌異種移植片を有するマウスにおけるＦ－１８標識ＰＳＭＡ－６１７－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡの最大強度投影画像（注射１時間後）を示す。

【0028】

【図5】（１：９）ＥｔＯＨ：０．９％生理食塩水（ｖ／ｖ）に配合された精製^１８Ｆ放射性トレーサ、７、（分取ＨＰＬＣ精製及びＣ１８ Ｓｅｐ－Ｐａｋ溶出後）の代表的なＨＰＬＣクロマトグラムを示しており、ａ）ＨＰＬＣ方法Ｂを使用して、ｔ_Ｒ＝１４．９７分で、９８．５％の放射化学純度、１．１％の^１８Ｆ^－（ｔ_Ｒ＝２．３０分）及び０．４％の不純物（ｔ_Ｒ＝８．２６分）を示す７のラジオクロマトグラム、及びｂ）７単独（ｔ_Ｒ＝１４．４４分）及び０．１ｎｍｏｌの低温前駆体６との同時注射（ｔ_Ｒ＝１４．４９分）の吸光クロマトグラムを示す。

【0029】

【図6】７単独（ａ及びｂ、４～６ＭＢｑ注射）の１時間ｐ．ｉ．でのＰＥＴ画像、及びブロック剤１（２００μｇ）（ｃ及びｄ）との７（４～６ＭＢｑ注射）の同時注射からのＰＥＴ画像を、Ｂ１６－Ｆ１０腫瘍（矢印）を有するマウスにおいて示し、スケールバーは０～２０％ＩＤ／ｇである。

【0030】

【図7】Ｂ１６－Ｆ１０腫瘍を有するマウスにおける［^１８Ｆ］６（５ＭＢｑ注射）の動的ＰＥＴスキャン（５秒～５２．５分ｐ．ｉ．、２８時点）を示す。

【0031】

【図8】１の^１Ｈ ＮＭＲ（アセトン－ｄ_６、３００ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0032】

【図9】ＬＬＰ２Ａ－ＰＥＧ_２－ＡＭＢＦ_３－Ｆｍｏｃ（３）のＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_７６Ｈ_９８ＢＦ_３Ｎ_１４Ｏ_１３について１４８３．５ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１５０６．８ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｋ］^＋＝１５２０．９ｍ／ｚとなった。

【0033】

【図10】ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ－ＮＨ_２（４）のＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_６１Ｈ_８８ＢＦ_３Ｎ_１４Ｏ_１１について１２６１．３ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１２６２．６ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１２８４．６ｍ／ｚとなった。

【0034】

【図11】ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（６）のＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_７７Ｈ_１１４ＢＦ_３Ｎ_１８Ｏ_１８について１６４７．６ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１６４８．９ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１６７０．９ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｋ］^＋＝１６８７．０ｍ／ｚとなった。

【0035】

【図12】ＨＰＬＣ方法Ａを使用して実施したセミ分取ＨＰＬＣ精製（純度９５％超）後の６（ｔ_Ｒ＝８．９分）の分析ＨＰＬＣクロマトグラム（λ_Ａｂｓ＝２４１ｎｍ）を示す。

【0036】

【図13】６のＵＶ－ｖｉｓ吸収（λ＝２５７ｎｍ）に基づいて［^１８Ｆ］６（ＨＰＬＣ精製及び製剤化後）を特徴付けるために使用され、ＨＰＬＣ方法Ｃを使用して得られた標準曲線を示す。

【0037】

【図14】ＶＬＡ－４発現Ｂ１６－Ｆ１０細胞（それぞれ反復しており、エラーバーは±ＳＤを示す）を用いた^１８Ｆ放射性トレーサ［^１８Ｆ］６のインビトロ結合飽和アッセイを示し、計算Ｋ_ｄ値は６．９±０．５９ｎＭであった（ｎ＝３）。

【0038】

【図15】１の^１３Ｃ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（アセトン－ｄ_６、７５ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0039】

【図16】１のＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_１２Ｈ_２３ＢＮＯ_２ ^＋＝２２４．１ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ］^＋＝２２４．６ｍ／ｚとなった。

【0040】

【図17】２の^１Ｈ ＮＭＲ（アセトン－ｄ_６、３００ＭＨｚ、室温）を示す。

【0041】

【図18】２の^１３Ｃ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（アセトン－ｄ_６、７５ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0042】

【図19】２の^１９Ｆ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（アセトン－ｄ_６、２８２ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0043】

【図20】２のＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_６Ｈ_１１ＢＦ_３Ｎについて１６５．０ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１８８．４ｍ／ｚとなった。

【0044】

【図21】３の^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、３００ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0045】

【図22】３の^１３Ｃ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、７５ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0046】

【図23】３のＥＳＩ－ＭＳ（－）スペクトルを示し、Ｃ_２１Ｈ_２２Ｎ_４Ｏ_４について３９４．４ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－Ｈ］^－＝３９３．４ｍ／ｚ及び［２Ｍ－Ｈ］^－＝７８７．７ｍ／ｚとなった。

【0047】

【図24】４の^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、３００ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0048】

【図25】４の^１３Ｃ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、７５ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0049】

【図26】４の^１９Ｆ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、２８２ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0050】

【図27】４のＥＳＩ－ＭＳ（－）スペクトルを示し、Ｃ_２７Ｈ_３３ＢＦ_３Ｎ_５Ｏ_４について５５９．４ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－Ｈ］^－＝５５８．５ｍ／ｚ及び［Ｍ＋Ｉ］^－＝６８６．４ｍ／ｚとなった。

【0051】

【図28】５の^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、３００ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0052】

【図29】５の^１３Ｃ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、７５ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0053】

【図30】５の^１３Ｃ ＤＥＰＴ－１３５ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、７５ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0054】

【図31】５の^１９Ｆ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、２８２ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0055】

【図32】５のＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_３１Ｈ_３６ＢＦ_３Ｎ_６Ｏ_６について６５６．５ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝６７９．８ｍ／ｚとなった。

【0056】

【図33】５のスペクトルのＨＲＭＳを示し、Ｃ_３１Ｈ_３６ＢＦ_３Ｎ_６Ｏ_６について６５６．４７０２ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝６７９．２６１８ｍ／ｚとなった。

【0057】

【図34】Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＯＨの^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、３００ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0058】

【図35】Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＯＨの^１３Ｃ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、７５ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0059】

【図36】Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＯＨの^１９Ｆ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、２８２ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0060】

【図37】Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＯＨのＥＳＩ－ＭＳ（－）スペクトルを示し、Ｃ_２７Ｈ_３３ＢＦ_３Ｎ_５Ｏ_４について５５９．４ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－Ｈ］^－＝５５８．５ｍ／ｚ及び［Ｍ＋Ｉ］^－＝６８６．４ｍ／ｚとなった。

【0061】

【図38】 ^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、３００ＭＨｚ、室温）によるＦｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｏ－ＮＨＳの構造特性評価を示す。

【0062】

【図39】 ^１３Ｃ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、７５ＭＨｚ、室温）によるＦｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｏ－ＮＨＳの構造特性評価を示す。

【0063】

【図40】Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｏ－ＮＨＳの^１９Ｆ｛^１Ｈ｝ＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ、２８２ＭＨｚ、室温）スペクトルを示す。

【0064】

【図41】Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｏ－ＮＨＳのＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_３１Ｈ_３６ＢＦ_３Ｎ_６Ｏ_６について６５６．５ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝６７９．８ｍ／ｚとなった。

【0065】

【図42】ＰＳＭＡ－６１７－ＮＨ_２のＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_４１Ｈ_６１Ｎ_５Ｏ_９について７６７．９７ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７６８．７ｍ／ｚとなった。

【0066】

【図43】ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＦｍｏｃのＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_６８Ｈ_９２ＢＦ_３Ｎ_１０Ｏ_１２について１３０９．３５ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－Ｆ］^＋＝１２９０．１ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１３３２．０ｍ／ｚとなった。

【0067】

【図44】ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＮＨ_２のＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_５３Ｈ_８２ＢＦ_３Ｎ_１０Ｏ_１０について１０８７．１０ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－Ｆ］^＋＝１０６８．１ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１０８８．１ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１１１０．１ｍ／ｚとなった。

【0068】

【図45】ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡのＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_６１Ｈ_９３ＢＦ_３Ｎ_１３Ｏ_１７について１３６０．３１ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－３Ｆ－２Ｈ］^＋＝１３０２．１ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１３６２．１ｍ／ｚとなった。

【0069】

【図46】ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（Ｃｕ）のＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_６１Ｈ_９０ＢＣｕＦ_３Ｎ_１０Ｏ_１０について１４２２．８ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－３Ｆ－２Ｈ］^＋＝１３６２．８ｍ／ｚ、［Ｍ－Ｆ］^＋＝１４０２．８ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１４２３．８ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１４４４．８ｍ／ｚとなった。

【0070】

【図47】ＤＯＴＡ／ＡＭＢＦ_３コンジュゲートＲＭ２ペプチド（１１）を示す。

【0071】

【図48】ＤＯＴＡ／ＡＭＢＦ_３コンジュゲートＢＫペプチド（９）を示す。

【0072】

【図49】固相ペプチド合成に使用される共通の保護基を示す。

【0073】

【図50】２２９ｎｍでのＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＢＫ（化合物９）のＨＰＬＣトレースを示す。

【0074】

【図51】分解されたペプチド（１０）のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦを示す。

【0075】

【図52】分解されたペプチド（１０）の特徴的な同位体パターンを示す。

【0076】

【図53】ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＢＫ（９）のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦを示す。

【0077】

【図54】ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＢＫ（９）の特徴的な同位体パターンを示す。

【0078】

【図55】切断手順（スキーム６ｖ）中のペプチド９の脱ホウ素化反応の結果であると予測されたＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＢＫ（１０）の提唱された脱ホウ素化反応生成物を示す。正確な質量は１７８４．０３である。図５２は、［Ｍ＋Ｎａ^＋］^＋＝１８０７．０２での予測同位体パターンを示す、ペプチド１０のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦを示す。

【0079】

【図56】ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＲＭ２（１１）のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦを示す。

【0080】

【図57】ＤＯＴＡ－（（Ｌ）－Ｌｙｓ－ε－１，２，３トリアゾール－Ｎ，Ｎ－ジメチル－アンモニオメチル－トリフルオロボラート）－４－アミノ－１－カルボキシメチル－ピペリジン－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｃｈａ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ＣＯＯＨの構造を示す。

【0081】

【図58】粗化合物９のＨＰＬＣトレース（２２９ｎｍ）を示す。

【0082】

【図59】化合物９のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦスペクトルを示す。

【0083】

【図60】ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＴＡＴＥのＥＳＩ－ＭＳ（＋）スペクトルを示し、Ｃ_７９Ｈ_１１４ＢＦ_３Ｎ_２０Ｏ_２１Ｓ_２について１８１１．８ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋２Ｎａ］^＋＝１８５５．１ｍ／ｚとなった。

【発明を実施するための形態】

【0084】

本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」という用語及びその文法的変形は、包括的又はオープンエンドであり、その一部として定義された特徴／構成要素が特定の特徴／構成要素からなるか、又は本質的になる場合であっても、追加の列挙されていない要素及び／又は方法ステップを排除しない。「から本質的になる」という用語は、化合物、組成物、使用又は方法に関連して本明細書で使用される場合、追加の要素及び／又は方法ステップが存在してもよいが、これらの追加は、列挙された化合物、組成物、方法又は使用機能の様式に実質的に影響を及ぼさないことを示す。「からなる」という用語は、化合物、組成物、使用又は方法の特徴に関連して本明細書で使用される場合、その特徴における追加の要素及び／又は方法ステップの存在を除外する。特定の要素及び／又はステップを含むものとして本明細書に記載される化合物、組成物、使用又は方法はまた、特定の実施形態では、これらの要素及び／又はステップから本質的になってもよく、他の実施形態では、これらの実施形態が具体的に言及されているか否かにかかわらず、これらの要素及び／又はステップからなってもよい。特定の要素及び／又はステップを含むものとして本明細書に記載される使用又は方法はまた、特定の実施形態では、これらの要素及び／又はステップから本質的になってもよく、他の実施形態では、これらの実施形態が具体的に言及されているか否かにかかわらず、それらの要素及び／又はステップからなってもよい。

【0085】

不定冠詞「ａ」による要素への言及は、文脈上、要素が１つだけであることが明確に要求されない限り、複数の要素が存在する可能性を排除しない。単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈で明確に指示されていない限り、複数の参照が含まれる。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と組み合わせて本明細書で使用される場合の「ａ」又は「ａｎ」という単語の使用は、「１つ」を意味し得るが、「１つ又は複数」、「少なくとも１つ」及び「１つ以上」の意味とも一致する。

【0086】

本開示では、端点による数値範囲の列挙は、すべての整数（ｗｈｏｌｅ ｎｕｍｂｅｒ）、すべての整数（ｉｎｔｅｇｅｒ）、及び適切な場合にはすべての小数中間体（例えば、１～５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、及び５などを含み得る）を含む、その範囲内に包含されるすべての数を含む。

【0087】

別段の指定がない限り、「特定の実施形態」、「様々な実施形態」、「実施形態」及び同様の用語は、他の実施形態が直接的又は間接的に参照されるか否かにかかわらず、及びその特徴又は実施形態が方法、生成物、使用、組成物、化合物などの文脈で記載されているかどうかにかかわらず、その実施形態について記載された特定の特徴（複数可）を単独で、又は本明細書に記載された任意の他の実施形態又は実施形態と組み合わせて含む。

【0088】

本明細書で使用される場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療的（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」などの用語は、症状の改善、疾患進行の低減、予後の改善、及び再発の低減を含む。

【0089】

本明細書で使用される場合、「診断薬」という用語は「イメージング剤」を含む。したがって、「診断用放射性核種」には、イメージング剤での使用に適した放射性核種が含まれる。

【0090】

「対象」という用語は、動物（例えば、哺乳動物又は非哺乳動物）を指す。対象は、ヒト又は非ヒト霊長類であってもよい。対象は、実験用哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスターなど）であってもよい。対象は、農業動物（例えば、ウマ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ラクダなど）又は家畜（例えば、イヌ、ネコなど）であってもよい。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

【0091】

本明細書に開示される化合物はまた、その塩基を含まない形態、溶媒和物、塩又は薬学的に許容される塩を含むことができる。別段の指定又は指示がない限り、特許請求の範囲に記載され、本明細書に記載される化合物は、本明細書に明示的に表されているか否かにかかわらず、すべてのラセミ混合物及びすべての個々のエナンチオマー又はそれらの組合せを含むことを意味する。

【0092】

本明細書に開示される化合物は、１つ又は複数の荷電基を有するものとして示すことができ、非荷電（例えばプロトン化）状態のイオン化性基で示すことができ、又は形式的な電荷を指定せずに示すことができる。当業者には理解されるように、化合物（例えば、限定されないが、ＣＯ_２Ｈ、ＰＯ_３Ｈ_２、ＳＯ_２Ｈ、ＳＯ_３Ｈ、ＳＯ_４Ｈ、ＯＰＯ_３Ｈ_２など）内の特定の基のイオン化状態は、とりわけ、その基のｐＫａ及びその位置のｐＨに依存する。例えば、限定されないが、カルボン酸基（すなわち、ＣＯＯＨ）は、プロトン化状態が安定化されない限り、通常、中性ｐＨ及びほとんどの生理学的ｐＨ値において、脱プロトン化（及び負に帯電）されると理解される。同様に、ＯＳＯ_３Ｈ（すなわち、ＳＯ_４Ｈ）基、ＳＯ_２Ｈ基、ＳＯ_３Ｈ基、ＯＰＯ_３Ｈ_２（すなわち、ＰＯ_４Ｈ_２）基及びＰＯ_３Ｈ基は、一般に、中性及び生理学的ｐＨ値において、脱プロトン化（及び負に帯電）される。

【0093】

本明細書で使用される場合、「塩」及び「溶媒和物」という用語は、化学においてそれらの通常の意味を有する。したがって、化合物が塩又は溶媒和物である場合、それは適切な対イオンと会合する。塩を調製する方法又は対イオンを交換する方法は当技術分野で周知である。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸形態を化学量論量の適切な塩基（例えば、限定されないが、Ｎａ、Ｃａ、Ｍｇ、又はＫ水酸化物、炭酸、炭酸水素など）と反応させることによって、又はこれらの化合物の遊離塩基形態を化学量論量の適切な酸と反応させることによって調製することができる。そのような反応は、一般に、水中又は有機溶媒中、あるいはこれら２つの混合物中で行われる。対イオンは、例えば、イオン交換クロマトグラフィなどのイオン交換技術によって変化させることができる。特定の形態が具体的に示されていない限り、すべての双性イオン、塩、溶媒和物及び対イオンが意図される。

【0094】

特定の実施形態では、塩又は対イオンは、対象への投与のために薬学的に許容され得る。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」は、対象におけるインビボ使用に適していることを意味し、必ずしも治療的使用に限定されず、診断的使用も含む。より一般的には、本明細書に開示される任意の医薬組成物に関して、適切な賦形剤の非限定的な例としては、任意の適切な緩衝剤、安定化剤、塩、酸化防止剤、錯化剤、等張化剤、凍結防止剤、凍結保護剤、懸濁化剤、乳化剤、抗菌剤、保存剤、キレート剤、結合剤、界面活性剤、湿潤剤、非水性ビヒクル、例えば固定油、あるいは持続放出又は徐放のためのポリマーが挙げられる。例えば、Ｂｅｒｇｅら、１９７７（Ｊ．Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．６６：１～１９）又はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ－Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版（Ｇｅｎｎａｒｏら編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ社、フィラデルフィア）を参照されたい。これらの各々は、その全体が参照により組み込まれる。

【0095】

本明細書で使用される場合、「Ｃｙ～Ｃｚ」という表現は、ｙ及びｚが整数（例えば、Ｃ_１～Ｃ_１５、Ｃ_１～Ｃ_３０、Ｃ_１～Ｃ_１００など）である場合、化合物、Ｒ基又は置換基中の炭素数（例えば、アルキル、アルケニル又はアルキニル基において）を指すか、又は１つ又は複数のヘテロ原子を有する又は有してもよいと表現がさらに定義される場合には、炭素＋ヘテロ原子の数を指す。後者の場合、式「Ｘｙ～Ｘｚ」を使用することができ（例えば、Ｘ_３～Ｘ_１５など）、ここで、ｙ及びｚは、炭素＋ヘテロ原子の数を指す整数である。ヘテロ原子は、任意の、いくつかの、又はすべての可能なヘテロ原子を含むことができる。例えば、いくつかの実施形態では、ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｐ及びＳｅから選択される。いくつかの実施形態では、ヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＰから選択される。そのような実施形態は非限定的である。

【0096】

特に明記しない限り、「アルキル」という用語は、水素原子を欠いているアルカンを指し、直鎖アルキル、分岐アルキル、非環式アルキル、単環式及び多環式シクロアルキル（例えば、縮合環、複数の非縮合環、又はそれらの組合せ）を含むシクロアルキル、並びに／あるいは非置換又は置換のいずれか１つ又は複数を含む。例えば、アルキルは、分岐及び環状の両方であってもよい。指定されない場合、アルキルのサイズは、当業者にとって合理的であると考えられるものである。例えば、限定されないが、指定されない場合、アルキルのサイズは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００又は１００を超える長さの炭素であってもよく、当業者の一般的な知識に従う。本明細書で使用される場合、「アルキレニル」という用語は、アルキル基の二価類似体を指す。

【0097】

化合物のアルキル基の文脈において本明細書で使用される場合、「直鎖」という用語は、当業者に通常理解されるように使用することができ、一般に、２つ以上の連続した鎖に分割されない骨格又は主鎖を含む化学的実体を指す。直鎖アルキルの非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル及びｎ－ブチルが挙げられる。

【0098】

本明細書で使用される場合、「分岐」という用語は、当業者に通常理解されるように使用することができ、一般に、２つ以上の連続した鎖に分かれる骨格又は主鎖を含む化学的実体を指す。２つ以上の方向に分割される骨格又は主鎖の部分は、直鎖状、環状、又はそれらの任意の組合せであってもよい。分岐アルキル基の非限定的な例としては、ｔｅｒｔ－ブチル及びイソプロピルが挙げられる。

【0099】

Ｃ_１～Ｃ_２０アルキル基の非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｓｅｃ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｉ－ペンチル、ｓｅｃ－ペンチル、ｔ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｉ－ヘキシル、１，２－ジメチルプロピル、２－エチルプロピル、１－メチル－２－エチルプロピル、ｌ－エチル－２－メチルプロピル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，１，２－トリエチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、２－エチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、ｓｅｃ－ヘキシル、ｔ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｉ－ヘプチル、ｓｅｃ－ヘプチル、ｔ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｉ－オクチル、ｓｅｃ－オクチル、ｔ－オクチル、ｎ－ノニル、ｉ－ノニル、ｓｅｃ－ノニル、ｔ－ノニル、ｎ－デシル、ｉ－デシル、ｓｅｃ－デシル、ｔ－デシル、シクロプロパニル、シクロブタニル、シクロペンタニル、シクロヘキサニル、シクロヘプタニル、シクロオクタニル、シクロノナニル、シクロデカニルなどが挙げられ得る。したがって、別段の指定がない限り、Ｃ_１～Ｃ_２０アルキレニルは、上記の飽和アルキル基のすべての二価類似体を包含するが、これらに限定されない。

【0100】

本明細書で使用される場合、「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、水素原子を欠いているアルケン及びアルキンをそれぞれ指し、直鎖、分岐及び／又は環状基を含むことができ、非置換であっても置換されていてもよい。Ｃ_２～Ｃ_２０アルケニル基の非限定的な例としては、ビニル、アリル、イソプロペニル、ｌ－プロペン－２－イル、１－ブテン－ｌ－イル、ｌ－ブテン－２－イル、ｌ－ブテン－３－イル、２－ブテン－ｌ－イル、２－ブテン－２－イル、オクテニル、デセニル、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル、シクロノナネニル、シクロデカネニルなどが挙げられ得る。したがって、別段の指定がない限り、Ｃ_１～Ｃ_２０アルケニレニルは、上記のアルケニル基のすべての二価類似体を包含するが、これらに限定されない。Ｃ_２～Ｃ_２０アルキニル基の非限定的な例としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、ヘプチニル、オクチニル、ノニニル、デシニルなどが挙げられ得る。したがって、別段の指定がない限り、Ｃ_１～Ｃ_２０アルキニレニルは、上記のアルキニル基のすべての二価類似体を包含するが、これらに限定されない。

【0101】

非芳香族複素環基の非限定的な例としては、アジリジニル、アゼチジニル、ジアゼチジニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、フタルイミジル、スクシンイミジル、オキシラニル、テトラヒドロピラニル、オキセタニル、ジオキサニル、チエタニル、チエピニル、モルホリニル、オキサチオラニルなどが挙げられる。さらに指定されない限り、「アリール」基は、単一の芳香環並びに少なくとも１つの芳香環を含む縮合環の両方を含む。Ｃ_３～Ｃ_２０アリール基の非限定的な例としては、フェニル（Ｐｈ）、ペンタレニル、インデニル、ナフチル及びアズレニルが挙げられる。Ｘ_３～Ｘ_２０芳香族複素環基の非限定的な例としては、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、キノリニル、イソキノリニル、アクリジニル、インドリル、イソインドリル、インドリジニル、プリニル、カルバゾリル、インダゾリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、フェナントリジニル、フェナジニル、フェナントロリニル、ペリミジニル、フリル、ジベンゾフリル、キサンテニル、ベンゾフリル、チオフェニル、チアントレニル、ベンゾチオフェニル、ホスホリニル、ホスフィノリニル、ホスフィンドリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルなどが挙げられる。

【0102】

本明細書で使用される場合、「置換」という用語は、当業者に通常理解されるように使用され、一般に、１つの化学基が異なる化学基で置換された化合物又は化学的実体を指す。別段の指定がない限り、置換アルキルは、１個又は複数の水素原子がそれぞれ独立して、水素ではない原子で置き換えられているアルキルである。例えば、クロロメチルは、置換アルキルの非限定的な例、より具体的には置換メチルの例である。アミノエチルは、置換アルキルの別の非限定的な例、より具体的には置換エチルの例である。別段の指定がない限り、置換された化合物又は基（例えば、アルキル、アリールなど）は、当業者に合理的な任意の化学基で置換され得る。例えば、限定されないが、炭素又はヘテロ原子（例えば、Ｎ）に結合した水素は、ハロゲン化物（例えば、Ｆ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ）、アミン、アミド、オキソ、ヒドロキシル、チオール、ホスファート、ホスホナート、スルファート、ＳＯ_２Ｈ、ＳＯ_３Ｈ、アルキル、アリール、ケトン、カルボキシアルデヒド、カルボキシラート、カルボキサミド、ニトリル、モノハロメチル、ジハロメチル又はトリハロメチルで置換されてもよい。

【0103】

本明細書で使用される場合、「非置換」という用語は、当業者に通常理解されるように使用される。非置換アルキルの非限定的な例としては、メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチルなどが挙げられる。「置換されていてもよい」という表現は、「非置換又は置換されている」という表現と互換的に使用される。

【0104】

本明細書で提供される構造では、水素は、示されても示されなくてもよい。いくつかの実施形態では、水素（図示又は暗黙）は、プロチウム（すなわち、^１Ｈ）、重水素（すなわち、^２Ｈ）又は^１Ｈと^２Ｈの組合せであってもよい。^１Ｈを^２Ｈと交換する方法は、当技術分野で周知である。溶媒交換可能な水素の場合、^１Ｈと^２Ｈの交換は、適切な重水素源の存在下で、触媒なしで容易に起こる。酸、塩基又は金属触媒を使用して、高温度及び高圧の条件と組み合わせると、交換不可能な水素原子の交換が促進され、一般的には分子中のすべての^１Ｈを^２Ｈに交換することができる。

【0105】

化学式（例えば、表３及び表４に列挙した基において）の結合を介して、又は末端部に示される波線「

【化2】

」記号は、波線の反対側の構造の定義を変更することなく、波線の片側にＲ基を定義することを意図している。Ｒ基が２つ以上の側に結合している場合（例えば、Ｒ^２）、波線の外側に示されている原子は、Ｒ基の向きを明確にすることを意図している。したがって、２つの波線の間の原子のみがＲ基の定義を構成する。原子が波線の外側に示されていない場合、又は波線なしで示されているが複数の側に結合を有する化学基（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－など）の場合、化学基は、他の向きが明確に意図されていない限り、その基が関連する式の向きと一致して左から右に読み取られる（例えば、式－Ｒ^ａ－Ｒ^ｂ－Ｒ^ｃ－の場合、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－としてのＲ^ｂの定義は、－Ｒ^ａ－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｒ^ｃ－としてではなく－Ｒ^ａ－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｒ^ｃ－として式に組み込まれる）べきである。

【0106】

本開示は、放射性同位体及び非放射性同位体、並びに同位体置換体である化合物、複合体又は分子組成物に関する。同位体置換体が特定の同位体を含有すると同定される場合、化合物／複合体／組成物は、実際には、同定された同位体に大きく有利な同位体置換体の混合物中で得られる可能性があることが理解される。例えば、ｈｏｔ－Ｆ又は^１８Ｆ同位体置換体として同定された化合物／複合体／組成物の調製物は、実際には、対応する^１９Ｆ同位体置換体の最小量を含有してもよい。逆に、ｈｏｔ－Ｍ又は放射性金属化同位体置換体（例えば、^１７７Ｌｕ）として同定された化合物／複合体／組成物の調製物は、対応する非放射性同位体置換体（例えば^１７４Ｌｕ、^ｎａｔＬｕ）の最小量を含有してもよい。

【0107】

「Ｘａａ」という用語は、ペプチド鎖中のアミノ酸残基、又はそうでなければ化合物の一部であるアミノ酸を指す。アミノ酸は、アミノ基とカルボン酸基の両方を有し、そのいずれか又は両方を共有結合に使用することができる。化合物の残りの部分に結合する際に、アミノ基及び／又はカルボン酸基は、アミド又は他の構造に変換されてもよく、例えば、第１のアミノ酸のカルボン酸基は、第２のアミノ酸のアミノ基に結合するとアミド（すなわち、ペプチド結合）に変換される。したがって、Ｘａａは、式－Ｎ（Ｒ^ａ）Ｒ^ｂＣ（Ｏ）－を有することができ、式中、Ｒ^ａ及びＲ^ｂはＲ基である。Ｒ^ａは、典型的には、水素又はメチルであるか、又はＲ^ａ及びＲ^ｂは、環状構造を形成し得る。ペプチドのアミノ酸残基は、典型的なペプチド（アミド）結合を含むことができ、側鎖官能基と別のアミノ酸の側鎖又は主鎖官能基との間の結合をさらに含むことができる。例えば、ペプチド中の１つのアミノ酸残基の側鎖カルボキシラート（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕなど）は、ペプチド中の別のアミノ酸残基のアミン（例えば、Ｄａｐ、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｌｙｓ）に結合することができる。さらなる詳細を以下に提供する。別段の指示がない限り、「Ｘａａ」は、タンパク質原性又は非タンパク質原性アミノ酸を含む任意のアミノ酸であってもよい。非タンパク質原性アミノ酸の非限定的な例を表１に示し、Ｄ－アミノ酸（以下のアミノ酸のＤ型を含むがこれに限定されない）、オルニチン（Ｏｒｎ）、３－（１－ナフチル）アラニン（Ｎａｌ）、３－（２－ナフチル）アラニン（２－Ｎａｌ）、α－アミノ酪酸、ノルバリン、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ホモノルロイシン、ベータ－（１，２，３－トリアゾール－４－イル）－Ｌ－アラニン、１，２，４－トリアゾール－３－アラニン、Ｐｈｅ（４－Ｆ）、Ｐｈｅ（４－Ｃｌ）、Ｐｈｅ（４－Ｂｒ）、Ｐｈｅ（４－Ｉ）、Ｐｈｅ（４－ＮＨ_２）、Ｐｈｅ（４－ＮＯ_２）、ホモアルギニン（ｈＡｒｇ）、２－アミノ－４－グアニジノ酪酸（Ａｇｂ）、２－アミノ－３－グアニジノプロピオン酸（Ａｇｐ）、Β－アラニン、４－アミノ酪酸、５－アミノ吉草酸、６－アミノヘキサン酸、７－アミノヘプタン酸、８－アミノオクタン酸、９－アミノノナン酸、１０－アミノデカン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノ－３－（アントラセン－２－イル）プロパン酸、２－アミノ－３－（アントラセン－９－イル）プロパン酸、２－アミノ－３－（ピレン－１－イル）プロパン酸、Ｔｒｐ（５－Ｂｒ）、Ｔｒｐ（５－ＯＣＨ_３）、Ｔｒｐ（６－Ｆ）、Ｔｒｐ（５－ＯＨ）又はＴｒｐ（ＣＨＯ）、２－アミノアジピン酸（２－Ａａｄ）、３－アミノアジピン酸（３－Ａａｄ）、プロパルギルグリシン（Ｐｒａ）、ホモプロパルギルグリシン（Ｈｐｇ）、ベータ－ホモプロパルギルグリシン（Ｂｐｇ）、２，３－ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、２，４－ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、アジドリジン（Ｌｙｓ（Ｎ_３））、アジドオルニチン（Ｏｒｎ（Ｎ_３））、２－アミノ－４－アジドブタン酸Ｄａｂ（Ｎ_３）、Ｄａｐ（Ｎ_３）、２－（５’－アジドペンチル）アラニン、２－（６’－アジドヘキシル）アラニン、４－アミノ－１－カルボキシメチル－ピペリジン（Ｐｉｐ）、４－（２－アミノエチル）－１－カルボキシメチル－ピペラジン（Ａｃｐ）、及びトラネキサム酸が挙げられる。Ｌ－又はＤ－アミノ酸として指定されない場合、アミノ酸はＬ－アミノ酸と理解されるものとする。

【0108】

【表1-1】

【表1-2】

【0109】

本明細書で使用される場合、「分子組成物」という用語は、多鎖タンパク質などの非共有結合相互作用（例えば、疎水性、イオン性、静電性など）によって２つ以上の分子が一緒に保持されている分子複合体を意味すると理解される。

【0110】

本発明の様々な態様は、化合物又は分子複合体に関するものであり、
・放射性同位体又は非放射性同位体あるいは非金属でキレート化してもよいように構成された金属キレート剤、
・^１９Ｆ／^１８Ｆ交換による放射性フッ素化のために構成されたトリフルオロボラート（ＢＦ_３）含有部分又は^１８Ｆ標識トリフルオロボラートへの変換が可能なボロナート前駆体、及び場合により
・細胞標的化ドメインを含む。

【0111】

そのような化合物／複合体は、イメージング又は放射線療法に適しているという点でデュアルモードであり、又は両方の用途に使用することができる。例えば、化合物／複合体は、^１８Ｆ標識されている場合（「ｈｏｔ－Ｆ」）、イメージング／診断剤として使用されてもよく、又は治療用放射性金属同位体（「ｈｏｔ－Ｍ」）でキレート化されている場合、治療剤として使用されてもよい。これは、イメージング及び治療のために同じ化合物を使用する利点を提供し、すなわち、放射線治療剤（ｈｏｔ－Ｍを使用した治療に最適化された）と化学的に同一である^１８Ｆ標識コンパニオン診断薬（ｈｏｔ－Ｆを使用したイメージングに最適化）が提供される。

【0112】

いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、非キレート化であるか、又は非放射性金属同位体（「ｃｏｌｄ－Ｍ」）でキレート化されている。本明細書で使用される場合、非キレート化及び非放射性金属同位体でのキレート化の両方が「ｃｏｌｄ－Ｍ」であると考えられる。そのような実施形態のＢＦ_３含有部分が^１８Ｆ標識されている場合、ｈｏｔ－Ｆ／ｃｏｌｄ－Ｍ化合物／複合体は、放射性金属同位体からのいかなる悪影響も引き起こすことなく、イメージング剤又は診断剤として有用である。

【0113】

対象が治療的処置の候補であることをイメージングが明らかにする場合、同じ化合物／複合体を（ｃｏｌｄ－Ｆ／ｈｏｔ－Ｍ又はｈｏｔ－Ｆ／ｈｏｔ－Ｍのいずれかとして）投与することができる。したがって、ｈｏｔ－Ｆ／ｃｏｌｄ－Ｍ化合物／複合体は、ｈｏｔ－Ｍ治療剤のコンパニオン診断薬として有用である。他の場合には、キレートされていない化合物／複合体を同様に良好に使用することができることが考えられ、他の実施形態では、ホットメタルカチオンの代わりに代替の金属カチオンを使用してもよいことが認識されている。例えば、いくつかの実施形態では、放射性Ｚｎ^２＋が治療的又は診断的に一般的に使用されない場合でも、非放射性Ｚｎ^２＋でキレート化されたｈｏｔ－Ｆ化合物を使用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、金属キレート剤は放射性同位体でキレート化され、ＢＦ_３含有部分は^１９Ｆ標識され、他の実施形態では、金属キレート剤は放射性同位体でキレート化され、ＢＦ_３含有部分も^１８Ｆ標識される。

【0114】

「ＢＦ３」及び「ＢＦ_３」という用語（すなわち、下付き文字「３」）は同じ意味を有し、本出願では互換的に使用される。

【0115】

「細胞標的化ドメイン」（「細胞抗原標的化モジュール」とも呼ばれる）という用語は広い意味を有し、細胞マーカーに特異的に結合する任意の化合物又は複合体、例えば、限定されないが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、ペプチド模倣物、核酸、ステロイド、アプタマー、アフィボディ、ミニボディ、ビタミン、小分子、大環状分子などを含む。「細胞マーカー」という用語は、限定するものではないが、分化クラスター（ＣＤ）分子などの細胞表面抗原を含む。別段の指示がない限り、本明細書で使用される「抗原」という用語は、細胞標的化ドメインの細胞マーカー（又は抗原）への結合によって誘発される免疫応答を必ずしも必要としないと理解され、様々な実施形態は、生理学的条件下（例えばインビボ）での細胞マーカーへの特異的結合のみを必要とする。いくつかの実施形態では、細胞標的化ドメインは、ヒト細胞マーカー又はヒトＣＤ分子を標的とする。上記の各カテゴリーの様々な細胞標的化ドメインが生産されており、多くが市販されている。例えば、抗体は、広範囲のヒトＣＤ分子について生成されている。

【0116】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」という語句は、タンパク質及び／又は他の高分子の異種集団とのバックグラウンドでの会合とは対照的に、好ましい会合（例えば、非共有結合性複合体の形成）を指す。したがって、指定された条件下（例えば、イムノアッセイ条件）で、細胞標的化ドメインは、サンプル（インビトロ）又は生物（インビボ）中に存在する他の高分子との会合のバックグラウンドレベルの少なくとも２倍を会合すると、細胞マーカーに「特異的に結合する」。様々なイムノアッセイ形式又は他の結合アッセイを使用して、特定の標的マーカーと特異的に結合する細胞標的化ドメインを選択することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的に結合する抗体を選択するために日常的に使用されている。いくつかの実施形態では、細胞標的化ドメインは、バックグラウンドシグナルに対して少なくとも２倍、場合によってはバックグラウンドに対して少なくとも１０倍～１００倍の結合シグナルを生じる。別段の指定がない限り、細胞標的化ドメインと標的マーカーとの会合は、一般に、約１０^－４Ｍ～１０^－１５Ｍの平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－４Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－５Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－６Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－７Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－８Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－９Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－１０Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－１１Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－１２Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－１３Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、会合は約１０^－１４Ｍ未満である。当技術分野で既知の任意の方法を使用して平衡解離定数を測定することができる。

【0117】

いくつかの実施形態では、細胞標的化ドメインは、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である。ペプチド及びポリペプチドは、標準的な方法を使用して合成することができ、その非限定的な例を以下にさらに詳細に記載する。タンパク質は、標準的な分子生物学的方法を使用して調製することができる。

【0118】

標的細胞マーカーに特異的に結合する様々なペプチド、ポリペプチド及びペプチド模倣物が知られている。非限定的な例としては、ＬＬＰ２Ａ、ＰＳＭＡ－６１７、ＴＡＴＥ、ボンベシン又は誘導体（例えば、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２など）、ＲＧＤ、コレシストキニンが挙げられる。ＬＬＰ２Ａは、経細胞最晩期抗原４（ＶＬＡ－４）を標的とする。ＰＳＭＡ－６１７は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）を標的とする。ＴＡＴＥは、ソマトスタチン受容体を標的とする。ボンベシン及びその誘導体は、ガストリン放出ペプチド受容体（ＧＲＰＲ）を標的とする。ブラジキニン（ＢＫ）及びその誘導体は、ブラジキニン１受容体を標的とする。受容体の任意の他のペプチドリガンドを使用することができる。

【0119】

いくつかの実施形態では、細胞標的化ドメインは、ペプチド模倣物である。ペプチド模倣物は、ペプチド／ポリペプチド基を非ペプチド基で置換することによって産生することができる。例えば、限定されないが、ペプチド結合アミド（－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－）は、インビボでのペプチド半減期を増加させるために、擬似ペプチド結合（－ＣＨ_２－ＮＨ－）、炭素－炭素結合（－ＣＨ_２－ＣＨ_２－）又は尿素結合（－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－）で置き換えることができる。

【0120】

細胞マーカーを特異的に標的化することができる様々なタイプのポリペプチド／タンパク質ドメインが知られている。いくつかの実施形態では、細胞標的化ドメインは、細胞マーカーに特異的に結合する抗体、又は抗体可変ドメインを含む抗体誘導体／断片であるか、又はそれを含む。抗体及び抗体誘導体の場合、細胞マーカーは、抗体可変ドメインによって特異的に結合されるエピトープを含有する抗原と考えられる。一般に、「エピトープ」は、ペプチド、タンパク質、核酸、炭水化物、多糖、脂質、有機化合物など、並びに抗体可変ドメインとの接触を形成するそれらの複合体であってもよい。エピトープは、連続的でも不連続的であってもよい。抗体可変ドメインと接触するエピトープの領域は、典型的には約４～１０ｎｍ^２である。リンカーの有無にかかわらず、抗体又は抗体誘導体／断片を化合物／複合体の残りの部分に結合させる方法は公知である。例えば、化合物は、そのＮ末端、Ｃ末端、システイン残基、リジン残基、又は他の場所で、化学的又は酵素的コンジュゲーション（例えば、抗体－薬物コンジュゲートについて十分に実証されているように）によって抗体に結合されている。

【0121】

抗体の重鎖は、可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び複数の定常ドメイン（例えば、ＩｇＧ１の場合、Ｃ_Ｈ ^１、Ｃ_Ｈ ^２及びＣ_Ｈ ^３）から構成される。抗体の軽鎖は、可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）及び定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）から構成される。Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈの各々は、それぞれ３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）並びにフレームワーク領域を含む。６つのＣＤＲはすべてエピトープ結合に寄与し得るが、それらの相対的寄与は様々であり、特定の場合には、６つすべてのＣＤＲが結合に必要であるわけではない。例えば、重鎖のＣＤＲ３は、エピトープ結合に不釣り合いに多く寄与する傾向がある。さらに、３つのＣＤＲのみを有する単一ドメイン抗体、ナノボディなどが公知である（例えば、ヒトコブラクダ、ラクダ、ラマ、アルパカ、サメ又は類似の動物の重鎖可変ドメインから得られるか又はそれに由来するか、あるいはヒト抗体及びマウス抗体を含むがこれらに限定されない従来の抗体の重鎖から操作された単一ドメイン抗体）。別段の指定がない限り、本明細書で使用される「抗体可変ドメイン」という語句は、Ｖ_Ｈ、Ｖ_ＨとＶ_Ｌの両方、単一ドメイン抗体、ナノボディ、又は抗原のエピトープ部分の特異的結合に必要なＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５又は６つのＣＤＲ）を適切に配置する任意の抗体由来タンパク質を含む任意のタンパク質を指す。標的エピトープに結合する抗体可変ドメインを含むタンパク質を産生する方法は公知であり、（限定されないが）、免疫化動物からの抗体の単離、全抗体の改変、組換えＤＮＡ法又は固相ペプチド／ポリペプチド合成を用いたデノボ合成、又はディスプレイライブラリーなどから選択される抗体の単離が挙げられる。

【0122】

いくつかの実施形態では、細胞標的化ドメインは、抗体を含む。抗体は、任意の種のものであってもよく、あるいはキメラ又は人工又は遺伝子操作されたものであってもよい。例えば、限定されないが、抗体は、非ヒト（例えば、ラクダ、ヒトコブラクダ、アルパカ、ラマなどのラクダ科動物、サメなどの軟骨魚類、マウス、ラット、サル又はその他）、霊長類化、ヒト化又は完全ヒトであってもよい。キメラ抗体は、複数の種、例えばヒト及び非ヒト又は２つの非ヒト種由来のアミノ酸配列を含む。非ヒト抗体をヒト化又は霊長類化するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、非ヒト（又は非霊長類）定常ドメインをヒト抗体の定常ドメインと置換する（キメラ抗体を作成する）ことによるか、又はヒト（又は霊長類）抗体のＣＤＲの１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５又は６つ）を非ヒト抗体と置換することによる。抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖から構成され得る。抗体は、リンカーによって分離された重鎖及び軽鎖を有する一本鎖抗体であってもよい。抗体は、重鎖のみの抗体（例えば、軽鎖を欠くラクダ、ヒトコブラクダ、アルパカ、ラマ、又はサメ抗体、あるいはヒト重鎖）であってもよい。抗体は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）であってもよい。

【0123】

いくつかの実施形態では、細胞標的化ドメインは、抗体誘導体を含む。本明細書で使用される場合、「抗体誘導体」という用語は、抗原結合機能を保持する抗体断片、並びに人工抗体を含む。抗体誘導体は、抗体可変ドメインを含む。抗原結合断片は、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈの両方、又はＶ_Ｌを含まないＶ_Ｈを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体誘導体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ（すなわち、一本鎖Ｆｖ）、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ｓｄＡｂ、ミニボディ、ナノボディ、二重特異性抗体又は三重特異性抗体を含む。

【0124】

いくつかの実施形態では、抗体又は抗体誘導体は、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ｓｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ミニボディ、ナノボディ、二重特異性抗体又は三重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。

【0125】

多くの抗体は、低いマイクロモル濃度からナノモル濃度の範囲のＫ_Ｄ値を有し、高親和性抗体は、低いナノモル濃度のＫ_Ｄ値を有し、非常に高親和性の抗体は、ピコモル濃度のＫ_Ｄ値を有する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗体誘導体は、５００ｎＭ未満、４００ｎＭ未満、３００ｎＭ未満、２００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、又は１ｎＭ未満のＫ_Ｄで細胞抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗体誘導体は、ピコモル濃度のＫ_Ｄ（１０^－１０Ｍ～１０^－１２Ｍ）で結合基質に結合し得る。このような結合親和性は、ｍＲＮＡディスプレイ、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ、及び酵母ディスプレイなどの公知のディスプレイ技術を使用して、所望の標的に対する特異的及び高親和性について選択することによってライブラリーをスクリーニングして、そしていくつかの場合には親和性成熟方法によって得ることができる。

【0126】

いくつかの実施形態では、細胞標的化ドメインは、細胞マーカーに特異的に結合する核酸アプタマーである。アプタマーは、広範囲の細胞標的に結合することができる一本鎖オリゴヌクレオチド（ＤＮＡ又はＲＮＡ）である。アプタマーは、ランダムライブラリーからの選択及び配列最適化などの様々な方法を使用して、所望の標的に高親和性、例えばサブナノモル濃度Ｋ_Ｄで結合するように産生することができる。アプタマーは、標準的なオリゴヌクレオチド合成方法／装置によって合成され、リンカーの有無にかかわらず、化学的コンジュゲーションを使用して化合物／複合体の残りの部分に結合することができる。

【0127】

いくつかの実施形態では、細胞標的化ドメインは、注射前又は注射後のいずれかにキレート剤－ＢＦ_３と反応する反応性基に最初にコンジュゲートされるプレ標的化の状況で使用され得る。例えば、限定されないが、抗体又はアプタマーは、シクロオクテンにコンジュゲートされる。これを注射し、標的と会合させ、次いで同じ動物又は患者に、Ｎ_２押出環化付加反応を介してシクロオクテンコンジュゲートとインビボで反応するように、テトラジンに連結されたキレート剤－ＢＦ３を注射する。他の場合では、Ｎ_２押出環化付加反応を注射前に行う。

【0128】

金属キレート剤は、放射性金属を結合するのに適した任意のキレート剤であってもよい。多くの適切な放射性金属キレート剤は、例えばＰｒｉｃｅ及びＯｒｖｉｇ、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．、２０１４、４３、２６０～２９０に要約されているように、公知であり、広範な種類の金属キレート剤が市販されているか（例えば、Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ（商標）から）、又は文献に記載されており、ここに列挙するには多すぎる。

【0129】

いくつかの実施形態では、限定されないが、金属キレート剤は、ＤＯＴＡ及び誘導体；ＤＯＴＡＧＡ；ＮＯＴＡ；ＮＯＤＡＧＡ；ＮＯＤＡＳＡ；ＣＢ－ＤＯ２Ａ；３ｐ－Ｃ－ＤＥＰＡ；ＴＣＭＣ；ＤＯ３Ａ；ＤＴＰＡ並びにＣＨＸ－Ａ’’－ＤＴＰＡ及び１Ｂ４Ｍ－ＤＴＰＡから選択されてもよいＤＴＰＡ類似体；ＴＥＴＡ；ＮＯＰＯ；Ｍｅ－３，２－ＨＯＰＯ；ＣＢ－ＴＥ１Ａ１Ｐ；ＣＢ－ＴＥ２Ｐ；ＭＭ－ＴＥ２Ａ；ＤＭ－ＴＥ２Ａ；サルコファジン並びにＳａｒＡｒ、ＳａｒＡｒ－ＮＣＳ、ｄｉａｍＳａｒ、ＡｍＢａＳａｒ、及びＢａＢａＳａｒから選択されてもよいサルコファジン誘導体；ＴＲＡＰ；ＡＡＺＴＡ；ＤＡＴＡ及びＤＡＴＡ誘導体；Ｈ２－ｍａｃｒｏｐａ又はその誘導体；Ｈ２ｄｅｄｐａ、Ｈ４ｏｃｔａｐａ、Ｈ４ｐｙ４ｐａ、Ｈ４Ｐｙｐａ、Ｈ２ａｚａｐａ、Ｈ５ｄｅｃａｐａ、及び他のピコリン酸誘導体；ＣＰ２５６；ＰＣＴＡ；ＤＯＴＰ；ＨＥＨＡ；Ｃ－ＮＥＴＡ；Ｃ－ＮＥ３ＴＡ；ＨＢＥＤ；ＳＨＢＥＤ；ＢＣＰＡ；ＣＰ２５６；ＹＭ１０３；サイクラム；ＤｉａｍＳａｒ；デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）及びＤＦＯ誘導体；Ｈ６ｐｈｏｓｐａ；トリチオールキレート；メルカプトアセチル；ヒドラジノニコチンアミド；ジメルカプトコハク酸；１，２－エチレンジイルビス－Ｌ－システインジエチルエステル；メチレンジホスホナート；ヘキサメチルプロピレンアミンオキシム；及びヘキサキス（メトキシイソブチルイソニトリル）；ポルフィリン、クロリン、テキサフリン、フタロシアニンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、ＤＯＴＡ又はＤＯＴＡ誘導体である。特に、当業者は、本明細書に列挙されたキレート剤のいずれかを当技術分野の別のキレート剤で置き換えることができる。

【0130】

金属キレート剤の例示的な非限定的な例及びこれらのキレート剤によってキレート化され得る例示的な放射性金属を表２に示す。代替の実施形態では、金属キレート剤は、表２で選択される金属キレート剤であるか、又はそれを含む。

【0131】

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【表2-5】

【0132】

いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、キレート化されていない（すなわち、非金属化）。

【0133】

いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、放射性金属同位体（放射性金属）又は非放射性金属同位体のいずれかの金属にキレート化／複合体形成される。いくつかの実施形態では、キレート化金属は、非放射性である。いくつかの実施形態では、キレート化金属は、放射性金属である。いくつかの実施形態では、放射性金属は、治療用放射性金属であり、放射性毒性であることを意味する（本明細書では「放射性毒素」とも呼ばれる）。いくつかの実施形態では、放射性金属は、治療用アルファ放射体である。いくつかの実施形態では、放射性金属は、ベータ放射体である。いくつかの実施形態では、放射性金属は、オージェ放射体である。いくつかの実施形態では、治療用放射性金属は、^６４Ｃｕ、^６７Ｇａ、^１１１Ｉｎ、^１７７Ｌｕ、^１１７ｍＳｎ、^１６５Ｅｒ、^９０Ｙ、^２２７Ｔｈ、^２２５Ａｃ、^２１３Ｂｉ、^２１２Ｂｉ、^２１１Ａｓ、^２１２Ｐｂ、^４７Ｓｃ、^１６６Ｈｏ、^１８８Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^１４９Ｐｍ、^１５９Ｇｄ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^１７５Ｙｂ、^１４２Ｐｒ又は^１１４ｍＩｎである。

【0134】

いくつかの実施形態では、放射性金属は、^６８Ｇａ、^６１Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^１１１Ｉｎ、^４４Ｓｃ、^８６Ｙ、^８９Ｚｒ、^９０Ｎｂ、^１７７Ｌｕ、^１１７ｍＳｎ、^１６５Ｅｒ、^９０Ｙ、^２２７Ｔｈ、^２２５Ａｃ、^２１３Ｂｉ、^２１２Ｂｉ、^７２Ａｓ、^７７Ａｓ、^２１１Ａｔ、^２０３Ｐｂ、^２１２Ｐｂ、^４７Ｓｃ、^１６６Ｈｏ、^１８８Ｒｅ、^１８６Ｒｅ、^１４９Ｐｍ、^１５９Ｇｄ、^１０５Ｒｈ、^１０９Ｐｄ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^１７５Ｙｂ、^１４２Ｐｒ、^１１４ｍＩｎ、^９４ｍＴｃ、^９９ｍＴｃ、^１４９Ｔｂ、^１５２Ｔｂ、^１５５Ｔｂ又は^１６１Ｔｂである。他の実施形態では、放射性金属、放射性核種結合金属、又は放射性核種結合金属含有部分又は補欠分子族は、^６８Ｇａ、^６１Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^１１１Ｉｎ、^４４Ｓｃ、^８６Ｙ、^１７７Ｌｕ、^９０Ｙ、^２２５Ａｃ、^２１３Ｂｉ又は^２１２Ｂｉである。いくつかの実施形態では、キレート剤は表２のキレート剤であり、キレート化放射性金属／放射性核種は、キレート剤の結合剤として表２に示される放射性核種である。

【0135】

いくつかの実施形態では、キレート剤は、ＤＯＴＡあるいは^１７７Ｌｕ、^１１１Ｉｎ、^２１３Ｂｉ、^６８Ｇａ、^６７Ｇａ、^２０３Ｐｂ、^２１２Ｐｂ、^４４Ｓｃ、^４７Ｓｃ、^９０Ｙ、^８６Ｙ、^２２５Ａｃ、^１１７ｍＳｎ、^１５３Ｓｍ、^１４９Ｔｂ、^１５２Ｔｂ、^１５５Ｔｂ、^１６１Ｔｂ、^１６５Ｅｒ、^２１３Ｂｉ、^２２４Ｒａ、^２１２Ｂｉ、^２１２Ｐｂ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈ、^２２３Ｒａ、^４７Ｓｃ、^６４Ｃｕ又は^６７Ｃｕでキレート化したその誘導体、^２２５ＡｃとコンジュゲートしたＨ２－ＭＡＣＲＯＰＡ、^２２７Ｔｈでキレート化したＭｅ－３，２－ＨＯＰＯ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈ又は^１７７Ｌｕでキレート化したＨ_４ｐｙ４ｐａ、^１７７Ｌｕでキレート化したＨ_４ｐｙｐａ、^６８Ｇａでキレート化したＮＯＤＡＧＡ、^１１１Ｉｎでキレート化したＤＴＰＡ、又は^８９Ｚｒでキレート化したＤＦＯである。

【0136】

いくつかの実施形態では、キレート剤は、ＴＥＴＡ（１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢酸）、ＳａｒＡｒ（１－Ｎ－（４－アミノベンジル）－３，６，１０，１３，１６，１９－ヘキサアザビシクロ［６．６．６］エイコサン－１，８－ジアミン）、ＮＯＴＡ（１，４，７－トリアザシクロノナン１，４，７－三酢酸）、ＴＲＡＰ（１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－トリス［メチル（２－カルボキシエチル）ホスフィン酸）、ＨＢＥＤ（Ｎ，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシベンジル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸）、２，３－ＨＯＰＯ（３－ヒドロキシピリジン－２－オン）、ＰＣＴＡ（３，６，９，１５－テトラアザビシクロ［９．３．１］－ペンタデカ－１（１５），１１，１３－トリエン－３，６，９，－三酢酸）、ＤＦＯ（デスフェリオキサミン）、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）、ＯＣＴＡＰＡ（Ｎ，Ｎ’－ビス（６－カルボキシ－２－ピリジルメチル）－エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸）又は別のピコリン酸誘導体である。

【0137】

いくつかの実施形態では、キレート剤は、メルカプトアセチル、ヒドラジノニコチンアミド、ジメルカプトコハク酸、１，２－エチレンジイルビス－Ｌ－システインジエチルエステル、メチレンジホスホナート、ヘキサメチルプロピレンアミンオキシム及びヘキサキス（メトキシイソブチルイソニトリル）などの、^９９ｍＴｃ、^９４ｍＴｃ、^１８６Ｒｅ、又は^１８８Ｒｅで放射性標識するためのキレート剤である。いくつかの実施形態では、キレート剤は、メルカプトアセチル、ヒドラジノニコチンアミド、ジメルカプトコハク酸、１，２－エチレンジイルビス－Ｌ－システインジエチルエステル、メチレンジホスホナート、ヘキサメチルプロピレンアミンオキシム又はヘキサキス（メトキシイソブチルイソニトリル）である。これらの実施形態のいくつかでは、キレート剤は、放射性金属によって結合される。いくつかのこのような実施形態では、放射性金属は、^９９ｍＴｃ、^９４ｍＴｃ、^１８６Ｒｅ、又は^１８８Ｒｅである。

【0138】

いくつかの実施形態では、キレート剤は、^７２Ａｓ又は^７７Ａｓに結合することができるキレート剤、例えばトリチオールキレートなどである。いくつかの実施形態では、キレート剤は、トリチオールキレートである。いくつかの実施形態では、キレート剤は、^７２Ａｓにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、キレート剤は、^７７Ａｓにコンジュゲートされる。

【0139】

上記の金属キレート剤へのキレート化に適した非放射性金属、例えば^８９Ｙ、^１７４Ｌｕ、^２０８Ｐｂなどが周知であり、金属キレート化の技術分野に精通した者によって典型的に使用されるような遷移金属、ランタニド及びアクチニドにおいて一般に知られている既知の安定又は準安定同位体を含む。

【0140】

ＢＦ_３含有部分（「ＢＦ_３含有補欠分子族」とも呼ばれる）は、^１８Ｆ／^１９Ｆ交換放射標識が可能な任意のそのような基であってもよい。

【0141】

いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分は

【化3】

であり、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの各々は独立してＣ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐アルキル基である。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、メチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、エチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、プロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、イソプロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、ｎ－ブチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、メチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、エチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、プロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、イソプロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、ｎ－ブチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、同一である。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、異なる。

【0142】

いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分は、表３（下記）に示す基であり、例えば－ＯＲ、－ＳＲ、－ＮＲ－、－ＮＨＲ又は－ＮＲ_２基で置換されたピリジン中の各Ｒ（存在する場合）は、独立してＣ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、メチルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、エチルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、プロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、イソプロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、ｎ－ブチルである。いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分は、

【化4】

である。

【0143】

【表3-1】

【表3-2】

【0144】

いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分は、表４（下記）に示す基であり、例えば－ＯＲ、－ＳＲ、－ＮＲ－、－ＮＨＲ又は－ＮＲ_２基で置換されたピリジン中の各Ｒ（存在する場合）は、独立してＣ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、メチルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、エチルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、プロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒは、イソプロピルである。

【0145】

【表4-1】

【表4-2】

【0146】

いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分は、^１８Ｆを含む。いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分中の１個のフッ素は、^１８Ｆである。いくつかの実施形態では、３個のフッ素はすべて^１８Ｆである。いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分の３個のフッ素はすべて^１９Ｆである。

【0147】

いくつかの実施形態では、化合物又は複合体は、複数のＢＦ_３含有部分を含み、その各々は、同一であっても異なっていてもよく、又はそれらの組合せであってもよい。いくつかの実施形態は、２個のＢＦ_３含有部分を含み、その各々は、上に列挙したものから独立して選択される。いくつかの実施形態は、３個のＢＦ_３含有部分を含み、その各々は、上に列挙したものから独立して選択される。いくつかの実施形態は、４個のＢＦ_３含有部分を含み、その各々は、上に列挙したものから独立して選択される。いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分は、金属キレート剤と細胞標的化ドメインとの間に位置するリンカーに結合している。

【0148】

同位体交換による^１８Ｆ標識化は、標識化の好ましい方法であってもよいが、他のｓｐ２／ｓｐ３ハイブリダイズしたボロナート種の変換は、特定の場合には有利であってもよいことが理解される。そのようなボロナートの例としては、ピナコラート、ジ－、トリ－、テトラ－アリール化ピナコラート、ネオペンチルジオラート、カテコラート、ジオラート一般、ＭＩＤＡ－ボロナート、アントラニルアミドに基づく複合体、場合によってはボロヒドリドが挙げられる。そのようなボロナート複合体は、有機ボロン化学の当業者に知られているか又は容易に知られており、そのような複合体は、対応するトリフルオロボラートに容易に変換することができる場合、場合により興味深い。したがって、いくつかの実施形態では、化合物／複合体は、ＢＦ_３含有部分の代わりに^１８Ｆ標識トリフルオロボラートに変換することができるボロナート前駆体を含む。

【0149】

化合物又は分子複合体は、リンカーをさらに含むことができる。例えば、限定されないが、金属キレート剤は、ＢＦ_３含有部分を含有するリンカーによって細胞標的化ドメインに連結することができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、２個（又はそれを超える）のＢＦ_３含有部分を含む。しかし、化合物／複合体の成分は、任意の構成を有し得る。例えば、ＢＦ_３含有部分（１個又は複数）は、金属キレート剤及び／又は細胞標的化ドメインに直接結合することができる。リンカーの非限定的な例は、ペプチドリンカーである。

【0150】

リンカーは、例えば、限定されないが、アミノ酸リンカー、ペプチドリンカー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカー、アルキレンリンカー（例えば、Ｃ_１～Ｃ_３０）、エーテル、エステル、チオエーテル、ジスルフィド、チオエステル、アミド、カルバマート、ウレイド、ホスホジエステルを含む任意のリンカーであってもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１５超である－Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ_２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－であるか、又はそれを含む。

【0151】

いくつかの実施形態では、リンカーは、直鎖又は分岐ペプチドリンカー（Ｘａａ^１）_ｎであり、式中、ｎは１～８であり、各Ｘａａ^１は、同一又は異なり、あるいはそれらの組合せである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、直鎖ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、分岐ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、ｎは、１である。いくつかの実施形態では、ｎは、２である。いくつかの実施形態では、ｎは、３である。いくつかの実施形態では、ｎは、４である。いくつかの実施形態では、ｎは、５である。いくつかの実施形態では、ｎは、６である。いくつかの実施形態では、ｎは、７である。いくつかの実施形態では、ｎは、８である。いくつかの実施形態では、各Ｘａａ^１は、表１に列挙されたタンパク質原性アミノ酸及び非タンパク質原性アミノ酸から独立して選択される。いくつかの実施形態では、リンカー中の各ペプチド骨格アミノ基は、メチル化されていてもよい。

【0152】

いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）を含む。いくつかの実施形態、例えば（限定されないが）ＰＥＧリンカー又はペプチドリンカー（Ｘａａ^１）_１～８を含むいくつかの実施形態では、リンカーは、－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（Ｒ^１Ｒ^２Ｒ^３）（Ｈ）－Ｃ（Ｏ）－として定義されるアミノ酸残基Ｘａａ^２を含み、式中、Ｒ^１はＣ_１～Ｃ_５アルキレニル基であり、Ｒ^２は

【化5】

又は

【化6】

であり、Ｒ^３は

【化7】

あるいは表１又は表２に示す基であり、各Ｒは独立してＣ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐アルキル基である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１は、－ＣＨ_２－である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１は、－（ＣＨ_２）_２－である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１は、－（ＣＨ_２）_３－である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１は、－（ＣＨ_２）_４－である。いくつかの実施形態では、Ｒ^１は、－（ＣＨ_２）_５－である。いくつかの実施形態では、Ｒ^２は、

【化8】

である。いくつかの実施形態では、Ｒ^２は、

【化9】

である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、

【化10】

であり、式中、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの各々は、独立して、Ｃ_１～Ｃ_５直鎖又は分岐鎖アルキル基である。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、メチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、エチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、プロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、イソプロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａは、ｎ－ブチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、メチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、エチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、プロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、イソプロピルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ｂは、ｎ－ブチルである。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、同一である。いくつかの実施形態では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、異なる。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、

【化11】

である。いくつかの実施形態では、Ｒ^３は、

【化12】

である。いくつかの実施形態では、リンカーは、それぞれが独立して上記に定義される通りである２個のＸａａ^２残基を含む（すなわち、同一又は異なる）。

【0153】

いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、アミド結合（アミノ基とカルボン酸基との間）又は１，２，３－トリアゾール（アジドとアルキンとの間の反応）を形成することによって、あるいはマレイミドとチオール基との間の反応によって、リンカー又は細胞標的化ドメインに結合する。

【0154】

いくつかの実施形態では、キレート剤は、ペプチド／ポリペプチド／タンパク質細胞標的化ドメインのＮ末端に（リンカーを用いて又は用いずに）結合し、ＢＦ_３含有部分（又は前駆体）は、細胞標的化ドメインのＣ末端に（リンカーを用いて又は用いずに）結合する。いくつかの実施形態では、キレート剤は、ペプチド／ポリペプチド／タンパク質細胞標的化ドメインのＣ末端に（リンカーを用いて又は用いずに）結合し、ＢＦ_３含有部分（又は前駆体）は、細胞標的化ドメインのＮ末端に（リンカーを用いて又は用いずに）結合する。いくつかの実施形態では、キレート剤は、ペプチド／ポリペプチド／タンパク質細胞標的化ドメインのＮ末端に（リンカーを用いて又は用いずに）結合し、ＢＦ_３含有部分（又は前駆体）は、細胞標的化ドメインの側鎖に（リンカーを用いて又は用いずに）結合する。いくつかの実施形態では、キレート剤は、ペプチド／ポリペプチド／タンパク質細胞標的化ドメインのＣ末端に（リンカーを用いて又は用いずに）結合し、ＢＦ_３含有部分（又は前駆体）は、細胞標的化ドメインの側鎖に（リンカーを用いて又は用いずに）結合する。いくつかの実施形態では、キレート剤及びＢＦ_３含有部分の両方が、ペプチド／ポリペプチド／タンパク質細胞標的化ドメインの別々の側鎖に（リンカーを用いて又は用いずに）結合する。いくつかの実施形態では、キレート剤は、リンカーを介してペプチド／ポリペプチド／タンパク質細胞標的化ドメインのＮ末端又はＣ末端に結合し、ＢＦ_３含有部分（又は前駆体）はリンカーに結合する。いくつかの実施形態では、キレート剤は、リンカーを介してペプチド／ポリペプチド／タンパク質細胞標的化ドメインの側鎖に結合し、ＢＦ_３含有部分（又は前駆体）は、リンカーに結合する。例示を目的として、図１は、化合物又は複合体の様々な非限定的な構成を示す。

【0155】

いくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、式Ｉを有するか、あるいは式Ｉの塩又は溶媒和物であり、
［キレート剤］－［リンカー］－［細胞標的化ドメイン］（Ｉ）、
ここで、キレート剤は、上記の任意のキレート剤であり、細胞標的化ドメインは、上記の任意の細胞標的化ドメインであり、リンカーは、上記のものから独立して選択される１個又は複数の任意のＢＦ_３含有部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、上記で定義した任意のペプチドリンカーである。

【0156】

いくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ３－ＰＥＧ２－ＬＬＰ２Ａであるか、又はそれを含む。

【0157】

いくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡであるか、又はそれを含む。

【0158】

いくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＴＡＴＥであるか、又はそれを含む。

【0159】

いくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－Ｐｉｐ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２であるか、又はそれを含む。

【0160】

いくつかの実施形態では、組成物は、［キレート剤］－［リンカー］－ＢＦ_３を含有する。

【0161】

いくつかの実施形態では、化合物又は分子複合体は、フルオロフォア又は他の発光部分、例えば（限定されないが）Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ７、他の近ＩＲ色素、又はフルオレセインをさらに含む。

【0162】

化合物又は分子複合体の様々な実施形態は、イメージング及び放射線療法に適し、ａ）細胞抗原標的化モジュール、ｂ）^１８Ｆで容易に標識されるＢＦ_３含有部分／補欠分子族、及びｃ）放射性治療用同位体又は非放射性同位体と容易に配合される放射性毒素含有部分を含む、デュアルモード化合物又は分子組成物に関する。上記のように、画像診断モード／フォーマットでは、ＢＦ_３部分は少なくとも１個の「ｈｏｔ」放射性フッ素（すなわち、^１８Ｆ）を含有し、放射性毒素含有部分は非放射性（「ｃｏｌｄ」）同位体／金属原子を含有する（あるいは、全く含有しない）。したがって、いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分／補欠分子族は^１８Ｆで標識され、放射性毒素含有部分は放射性治療同位体を含有する。標的化された放射線治療モード／形式では、ＢＦ_３部分は、「ｃｏｌｄ」フッ素（すなわち、^１９Ｆ）を含有し得るが、放射性毒素含有部分は、放射性／放射性毒性「ｈｏｔ」同位体／金属原子（放射線療法に適切に有効）を含有する。したがって、いくつかの実施形態では、ＢＦ_３含有部分／補欠分子族は、^１９Ｆで標識され、放射性毒素含有部分は、非放射性同位体を含有するか、又は放射性同位体を含有しない。したがって、このような化合物は、有用なセラノスティックペアを含み、それにより、画像診断モード（すなわち、^１８Ｆを用いる）で組成物を使用することによって疾患検出／診断が行われ、標的化された放射線治療モード（すなわち、^１８Ｆを用いない及び放射線治療同位体を用いる）で同じ組成物をその後使用することによって疾患治療／治療が行われる。そして、前者は、後者に対する「コンパニオン診断薬」を構成する。

【0163】

上記のように、様々な実施形態では、本発明のデュアルモード（イメージング／放射線療法）化合物の機能的ドメインは、当業者に周知の様々なサイズ／長さの様々なリンカー／介在基によって分離することができる。いくつかの実施形態では、細胞抗原結合モジュール、ＢＦ_３含有補欠分子族及び放射性毒素含有部分は、セラノスティックペアの所望の特性（同じ化学組成のイメージング及び標的化放射線治療のコンパニオン診断薬）を得るために複数の異なる構成で互いに相対的に配置することができる。図１は、デュアルモードＰＥＴイメージング剤／放射線治療薬のいくつかの構成の非限定的な表現を示す。

【0164】

いくつかの実施形態では、細胞抗原結合モジュールは、ｉ）ペプチド／ポリペプチド、ｉｉ）標的となる細胞抗原に結合することができる非ペプチド／非タンパク質リガンド、ｉｉｉ）抗体又は抗体断片、ｉｖ）ｓｃＦｖドメイン／断片、ｖ）核酸アプタマー、あるいはｖｉ）二重特異性抗体又はその断片を含むことができる。したがって、トリフルオロボラート及びキレート剤の両方による修飾は、非ペプチド性小分子、薬物、又は多様な特性を有する他の組成物あるいはより大きな分子、例えば抗体、アプタマーなどに適用され得る。いくつかの実施形態では、標的となる細胞抗原は、経細胞最晩期抗原４（ＶＬＡ－４）として知られるインテグリンであり、化合物はＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ２－ＬＬＰ２Ａであるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、標的となる細胞抗原／タンパク質は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）であり、化合物はＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡであるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、標的となる細胞抗原は、ソマトスタチン受容体（すなわち、ＳＳＴＲ）であり、化合物はＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＴＡＴＥであるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、標的となる細胞抗原は、ガストリン放出ペプチド受容体（ＧＲＰＲ）であり、化合物はＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＲＭ２（ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ_３－４－アミノ－１－カルボキシメチル－ピペリジン－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２）であるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、標的となる細胞抗原は、ブラジキニン受容体（例えば、ブラジキニン－１受容体、Ｂ１Ｒ）であり、化合物はＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＢＫであるか又はそれを含む。いくつかの実施形態では、^１８Ｆで容易に標識されるＢＦ_３含有部分／補欠分子族は、以下の特許出願である国際公開第２００５／０７７９６７号、国際公開第２００９／０１２５９６Ａ１号及び国際公開第２０１４／１３４７１６号に開示されている通りであり、これらはそれぞれその全体が参照により組み込まれる米国特許出願第６１／７７５，２８０号に対する優先権を主張している。

【0165】

いくつかの実施形態では、限定されないが、放射性毒素キレート化部分は、金属イオンキレート剤（例えば、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＮＯＤＡＧＡ、Ｏｃｔａｐａ、Ｍａｃｒｏｐａなど）を含むことができる。他の実施形態では、二峰性又は多峰性と考えられる用途のために金属及びキレート剤を使用する方法で、キレート剤を使用して、蛍光用途、ＭＲＩ用途、及び金属を含む他の用途（治療、診断、又は放射）のために金属をキレート化することができる。いくつかの実施形態では、限定されないが、治療用放射性毒素／金属は、^１７７Ｌｕ又は^２１０Ｂｉ又は^２１２Ｐｂを含む。本発明の治療モードを実施するのに有用であろう他の適切な放射性金属が公知であるか、又は得られる。いくつかの実施形態では、キレート剤は、金属なしで使用されるか、又は非放射性金属、例えばＺｎ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｎｉ^２＋、Ｇｄ^３＋などをキレート化する。そのような化合物は、イメージング（例えば、ＰＥＴイメージング）に有用であり得る。いくつかの実施形態では、化合物は、^１８Ｆと放射性金属（例えば、^２２５Ａｃ）の両方を含むことができる。そのような化合物は、^２２５Ａｃの安定同位体が存在しないという知識を用いて、^２２５Ａｃによる標的化療法に応答する患者を同定するためのイメージング（例えば、ＰＥＴ）に使用され得る。治療のために、放射性毒性^２２５Ａｃを保持しながら^１９Ｆ同位体置換体を使用する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のトリフルオロボラートを、少なくとも１つのキレート剤を含むトレーサに連結することができる。したがって、いくつかの実施形態では、化合物／組成物は、２つ以上のトリフルオロボラート基を含む。放射性金属も所望されるイメージング用途のために、制限量の^１８Ｆ－フッ化物を使用して二重標識放射性トレーサを調製することも可能である。

【0166】

本明細書に提示される化合物は、当技術分野で確立された様々な方法のいずれかによって合成され得るペプチドを組み込む。これには、９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）及び／又はｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）化学を用いる方法、並びに／あるいは他の合成アプローチを用いた液相及び固相ペプチド合成が含まれるが、これらに限定されない。

【0167】

固相ペプチド合成方法及び技術は、当技術分野において十分に確立されている。例えば、ペプチドは、目的のアミノ酸残基を１個ずつ連続的に組み込むことによって合成することができる。そのような方法では、ペプチド合成は、典型的には、目的のペプチドのＣ末端アミノ酸を適切な樹脂に結合させることによって開始される。これに先立って、アミノ酸の反応性側鎖及びアルファアミノ基は、適切な保護基によって反応から保護され、アルファカルボキシル基のみが固体支持体上のアミン基、ヒドロキシル基、又はハロゲン化アルキル基などの官能基と反応することを可能にする。Ｃ末端アミノ酸の支持体へのカップリングに続いて、アミノ酸の側鎖上の保護基及び／又はアルファアミノ基が選択的に除去され、次の目的のアミノ酸のカップリングが可能になる。所望のペプチドが完全に合成されるまでこのプロセスを繰り返し、その時点でペプチドを支持体から切断し、精製することができる。固相ペプチド合成のための機器の非限定的な例は、Ａａｐｐｔｅｃ Ｅｎｄｅａｖｏｒ９０ペプチド合成装置である。

【0168】

さらなるアミノ酸のカップリングを可能にするために、例えばＤＭＦ中のピペリジン（２０～５０％ｖ／ｖ）などの穏やかな塩基性条件下で、固体支持体上のアミノ酸からＦｍｏｃ保護基を除去することができる。添加されるアミノ酸もカップリングのために活性化されていなければならない（例えば、アルファカルボキシラートで）。活性化試薬の非限定的な例としては、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、２－（７－アザ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシ－トリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。ラセミ化は、１－ヒドロキシ－ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）及び１－ヒドロキシ－７－アザ－ベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）などのトリアゾールを使用することによって最小限に抑えられる。カップリングは、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ／ＤＩＥＡ）などの適切な塩基の存在下で行うことができる。長いペプチドの場合、又は所望であれば、ペプチド合成及びライゲーションを使用することができる。

【0169】

ペプチドを伸長させるための典型的なペプチド結合の形成とは別に、ペプチドは、側鎖官能基（例えば、カルボン酸基又はアミノ基）に、側鎖対側鎖、あるいは側鎖対骨格アミノもしくはカルボキシラートのいずれかで結合することによって分岐様式で伸長することができる。アミノ酸側鎖へのカップリングは、公知の方法で行うことができ、樹脂上又は樹脂外で行うことができる。非限定的な例としては、カルボキシル基を含有するアミノ酸側鎖（例えば、Ａｓｐ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｄ－Ｇｌｕなど）と、アミノ基を含有するアミノ酸側鎖（例えば、Ｌｙｓ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄ－Ｏｒｎ、Ｄａｂ、Ｄ－Ｄａｂ、Ｄａｐ、Ｄ－Ｄａｐなど）又はペプチドＮ末端との間にアミドを形成すること、アミノ基を含有するアミノ酸側鎖（例えば、Ｌｙｓ、Ｄ－Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｄ－Ｏｒｎ、Ｄａｂ、Ｄ－Ｄａｂ、Ｄａｐ、Ｄ－Ｄａｐなど）と、カルボキシル基を含有するアミノ酸側鎖（例えば、Ａｓｐ、Ｄ－Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｄ－Ｇｌｕなど）又はペプチドＣ末端のいずれかとの間にアミドを形成すること、及びアジド基を含有するアミノ酸側鎖（例えば、Ｌｙｓ（Ｎ_３）、Ｄ－Ｌｙｓ（Ｎ_３）など）と、アルキン基（例えば、Ｐｒａ、Ｄ－Ｐｒａなど）との間にクリックケミストリーを介して１，２，３－トリアゾールを形成することが挙げられる。適切な官能基上の保護基は、アミド結合形成の前に選択的に除去されなければならないが、１，２，３－トリアゾールを形成するためのクリック反応を介したアルキンとアジド基との間の反応は、選択的な脱保護を必要としない。選択的に除去可能な保護基の非限定的な例としては、２－フェニルイソプロピルエステル（Ｏ－２－ＰｈｉＰｒ）（例えば、Ａｓｐ／Ｇｌｕ上）並びに４－メチルトリチル（Ｍｔｔ）、アリルオキシカルボニル（ａｌｌｏｃ）、１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）エチル（Ｄｄｅ）及び１－（４，４－ジメチル－２，６－ジオキソシクロヘキサ－１－イリデン）－３－メチルブチル（ｉｖＤｄｅ）（例えば、Ｌｙｓ／Ｏｒｎ／Ｄａｂ／Ｄａｐ上）が挙げられる。Ｏ－２－ＰｈｉＰｒ及びＭｔｔ保護基は、ＤＣＭ中２．５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）などの穏和な酸性条件下で選択的に脱保護することができる。Ａｌｌｏｃ保護基は、ＤＣＭ中テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）及びフェニルシランを使用して選択的に脱保護することができる。Ｄｄｅ及びｉｖＤｄｅ保護基は、ＤＭＦ中２～５％のヒドラジンを使用して選択的に脱保護することができる。次いで、Ａｓｐ／Ｇｌｕ（Ｌ－又はＤ－形態）及びＬｙｓ／Ｏｒｎ／Ｄａｂ／Ｄａｐ（Ｌ－又はＤ－形態）の脱保護された側鎖を、例えば上記のカップリング反応条件を使用することによってカップリングすることができる。

【0170】

ペプチド骨格アミドは、Ｎ－メチル化されていてもよい（すなわちアルファアミノメチル化）。これは、ペプチド合成中にＦｍｏｃ－Ｎ－メチル化アミノ酸を直接使用することによって達成することができる。あるいは、光延条件下でＮ－メチル化を行ってもよい。最初に、ＮＭＰ中の４－ニトロベンゼンスルホニルクロリド（Ｎｓ－Ｃｌ）及び２，４，６－トリメチルピリジン（コリジン）溶液を使用して、遊離第一級アミン基を保護する。次いで、トリフェニルホスフィン、ジイソプロピルアゾジカルボキシラート（ＤＩＡＤ）及びメタノールの存在下でＮ－メチル化を達成することができる。続いて、ＮＭＰ中のメルカプトエタノール及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）を使用して、Ｎ－脱保護を行うことができる。保護アミノ酸をＮ－メチル化アルファアミノ基にカップリングさせるために、ＨＡＴＵ、ＨＯＡｔ及びＤＩＥＡを使用することができる。

【0171】

リンカーと、本発明の化合物／複合体の異なる成分との間のカップリングは、チオエーテル（－Ｓ－）又はエーテル（－Ｏ－）結合の形成を必要としてもよく、これは、固相又は溶液相のいずれかで達成することができる。例えば、チオエーテル（－Ｓ－）結合の形成は、塩基（例えば、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンなど）の存在下、適切な溶媒（Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドなど）中で、チオール含有化合物（システイン側鎖上のチオール基など）とハロゲン化アルキル（３－（Ｆｍｏｃ－アミノ）プロピルブロミドなど）との間のカップリングによって達成することができる。エーテル（－Ｏ－）結合の形成は、非プロトン性溶媒（例えば、１，４－ジオキサンなど）中、トリフェニルホスフィン及びジイソプロピルアジジカルボキシラート（ＤＩＡＤ）の存在下、アルコール（例えば、セリン又はトレオニンの側鎖上のヒドロキシル基など）とフェノール基（例えば、チロシンの側鎖など）との間の光延反応によって達成することができる。反応が溶液相で行われる場合、使用される反応物は、好ましくは当量モル比（１対１）であり、所望の生成物は、フラッシュカラムクロマトグラフィ又は高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によって精製することができる。反応が固相で行われる場合、すなわち一方の反応物が固相に結合している場合、他方の反応物は通常過剰量（固相に結合した反応物の３当量以上）で使用される。反応後、例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、メタノール及びジクロロメタンなどの溶媒の組合せを用いて固相（樹脂）を順次洗浄することにより、過剰の未反応の反応物や試薬を除去することができる。

【0172】

非ペプチド部分（例えば、放射性標識基、アルブミン結合基及び／又はリンカー）は、ペプチドが固体支持体に結合している間に、ペプチドＮ末端にカップリングすることができる。これは、非ペプチド部分が活性化されたカルボキシラート（及び必要に応じて保護された基）を含み、その結果、カップリングを樹脂に対して行うことができる場合に容易である。例えば、限定されないが、ペプチドにカップリングするために、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）トリス（ｔｅｒｔ－ブチルエステル）などの二官能性キレート剤を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）及びＮ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の存在下で活性化することができる。あるいは、非ペプチド部分は、液相又は固相条件下のいずれかで、銅触媒クリック反応を介して化合物に組み込むことができる。銅触媒クリック反応は、当技術分野において十分に確立されている。例えば、２－アジド酢酸は、ＮＨＳ及びＤＣＣによって最初に活性化され、ペプチドにカップリングされる。次いで、アルキン含有非ペプチド部分を、水並びにアセトニトリル（ＡＣＮ）及びＤＭＦなどの有機溶媒中のＣｕ^２＋及びアスコルビン酸ナトリウムの存在下で、アジド含有ペプチドにクリックすることができる。

【0173】

放射性金属キレート剤の合成は周知であり、多くのキレート剤が市販されている（例えば、シグマアルドリッチ（商標）／ミリポアシグマ（商標）など）。キレート剤への放射性金属のコンジュゲーションのためのプロトコルも周知である（例えば、以下の例１を参照）。

【0174】

一般に、ＢＦ_３含有モチーフは、リンカー上のＢＦ_３含有アジド（又はアルキニル）基とアルキニル（又はアジド）基との間に１，２，３－トリアゾール環を形成することによって、又はリンカー上のＢＦ_３含有カルボキシラートとアミノ基との間にアミド結合を形成することによって、クリックケミストリーを介してリンカーに結合することができる。ＢＦ_３含有アジド、アルキン又はカルボキシラートを生成するために、ボロン酸エステル含有アジド、アルキン又はカルボキシラートを最初に調製し、続いてＨＣｌ、ＤＭＦ及びＫＨＦ_２の混合物中でボロン酸エステルをＢＦ_３に変換する。アルキルＢＦ_３の場合、ボロン酸エステル含有アジド、アルキン又はカルボキシラートは、ボロン酸エステル含有ハロゲン化アルキル（ヨードメチルボロン酸ピナコールエステルなど）をアミン含有アジド、アルキン又はカルボキシラート（例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパルギルアミン）とカップリングさせることによって調製することができる。アリールＢＦ_３の場合、ボロン酸エステルは、ハロゲン化アリール（ヨウ素又は臭化物）及びビス（ピナコラート）ジボロンを使用して鈴木カップリングによって調製することができる。

【0175】

^１８Ｆ－^１９Ｆ同位体交換反応を介したＢＦ_３含有部分の^１８Ｆフッ素化は、以前に公開された手順（Ｌｉｕら、Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ ２０１５ １０：１４２３～１４３２、参照によりその全体が組み込まれる）に従って達成することができる。一般に、約１００ｎｍｏｌのＢＦ_３含有化合物を、１５μｌのピリダジン－ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ＝２．０～２．５、１Ｍ）、１５μｌのＤＭＦ及び１μｌの７．５ｍＭ ＫＨＦ_２水溶液の混合物に溶解させる。^１８Ｆ－フッ化物溶液（生理食塩水中、６０μｌ）を反応混合物に添加し、得られた溶液を８０℃で２０分間加熱する。反応の最後に、水とアセトニトリルの混合物を移動相として使用して、固相抽出又は逆高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によって所望の生成物を精製することができる。

【0176】

ペプチドが固体支持体上で完全に合成されたとき、所望のペプチド／化合物は、ＴＦＡ、トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）及び水などの適切な試薬を使用して固体支持体から切断することができる。Ｂｏｃ、ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル（Ｐｂｆ）、トリチル（Ｔｒｔ）及びｔｅｒｔ－ブチル（ｔＢｕ）などの側鎖保護基を、同時に除去する（すなわち、脱保護）。粗ペプチド／化合物を沈殿させ、冷エーテルを添加し、続いて遠心分離することによって溶液から回収することができる。ペプチドの精製及び特性評価は、ペプチドのサイズ、電荷及び極性に基づいて、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）などの標準的な分離技術によって実施することができる。精製ペプチドの同定は、質量分析又は他の同様のアプローチによって確認することができる。

【0177】

合成スキームの例は、例に提供されている。

【0178】

上記のように、本明細書に開示される化合物／複合体は、イメージング又は放射線療法に適しているという点でデュアルモードであり、又は両方の用途に使用することができる。例えば、化合物／複合体は、^１８Ｆ標識されている場合（「ｈｏｔ－Ｆ」）、イメージング／診断剤として使用されてもよく、又は治療用放射性金属同位体（「ｈｏｔ－Ｍ」）でキレート化されている場合、治療剤として使用されてもよい。

【0179】

したがって、いくつかの実施形態では、金属キレート剤は、ｈｏｔ－Ｆ／ｃｏｌｄ－Ｍ、すなわち^１８Ｆ標識（ＰＥＴに好ましい）であり、キレート化されていないか、又は非放射性金属同位体でキレート化されている。そのような実施形態は、放射性金属同位体からの悪影響を引き起こすことなく、イメージング剤又は診断剤として有用である。対象が治療的処置の候補であることをイメージングが明らかにする場合、同じ化合物／複合体を（ｃｏｌｄ－Ｆ／ｈｏｔ－Ｍ又はｈｏｔ－Ｆ／ｈｏｔ－Ｍのいずれかとして）投与することができる。したがって、ｈｏｔ－Ｆ／ｃｏｌｄ－Ｍ化合物／複合体は、ｈｏｔ－Ｍ治療剤のコンパニオン診断薬として有用である。したがって、^１８Ｆは、非放射性金属同位体、例えば^８９Ｙ、^１７４Ｌｕ、^２０８Ｐｂにキレート化された結合化合物／複合体を画像化するために使用される。ｈｏｔ－Ｆ／ｃｏｌｄ－Ｍ同位体置換体で陽性画像を示す患者は、ｃｏｌｄ－Ｆ／ｈｏｔ－Ｍを含む放射性毒性同位体置換体で治療することができる。

【0180】

ＢＦ_３含有部分基が^１８Ｆ標識されている場合（すなわち、ｈｏｔ－Ｆ）、対象において細胞マーカー／抗原を発現する組織をイメージングするための放射性標識トレーサを調製するための化合物／複合体の使用が開示されている。対象において細胞マーカー／抗原を発現する組織をイメージングする方法も開示され、その方法は、化合物／複合体及び適切な賦形剤を含む組成物を対象に投与すること、及び例えば、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを使用して対象の組織をイメージングすることを含む。組織が疾患組織である場合、対象を治療するために、ｈｏｔ－Ｍバージョンを使用した標的治療を選択することができる。

【0181】

金属キレート剤が治療用放射性同位体にキレート化される場合、細胞マーカー／抗原の発現に関連する状態又は疾患の対象を治療するための化合物／複合体（又はその医薬組成物）の使用が開示される。したがって、細胞マーカー／抗原の発現に関連する状態又は疾患の対象を治療するための医薬の調製における化合物の使用が提供される。対象の状態又は疾患を治療する方法も開示され、その方法は、化合物／複合体及び薬学的に許容される賦形剤を含む組成物を対象に投与することを含む。

【0182】

化合物又は分子複合体の様々な実施形態は、^１８Ｆで標識された化合物又は分子複合体を使用して、疾患又は状態の細胞マーカーの存在を確認するために対象をイメージングするため、及び治療用放射性同位体でキレート化された化合物又は分子複合体を使用して、疾患又は状態を治療することために使用することができる。したがって、^１８Ｆ標識化合物又はセラノスティックペアの分子複合体を対象に投与すること、^１８Ｆで標識された化合物又は分子複合体を使用して、疾患又は状態の細胞マーカーの存在を確認するために対象をイメージングすること、及び放射性金属化化合物又はセラノスティックペアの分子複合体を投与することによって疾患又は状態を治療することを含む方法が開示されている。いくつかの実施形態では、方法／使用は、^１８Ｆ／^１９Ｆ同位体交換反応を行って、放射性フッ素化化合物／複合体を調製することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法／使用は、キレート化反応を行って、放射性金属化化合物／複合体を調製することをさらに含む。いくつかの実施形態では、診断工程に使用される化合物／複合体は、治療工程で使用される化合物／複合体にキレート化された治療用金属の非治療用同位体置換体で金属化される。

【0183】

例えば、限定されないが、細胞標的化ドメインは、ＬＬＰ２Ａであってもよく、イメージングされる組織は、ＶＬＡ－４発現組織であってもよい。例えば、限定されないが、細胞標的化ドメインは、ＬＬＰ２Ａであってもよく、状態又は疾患は、多発性骨髄腫、白血病及び他の血液悪性腫瘍、並びに黒色腫、多発性硬化症、喘息、クローン病、炎症性腸疾患などのＶＬＡ－４発現状態又は疾患であってもよい。例えば、限定されないが、化合物は、ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ３－ＰＥＧ２－ＬＬＰ２Ａであってもよい。

【0184】

例えば、限定されないが、細胞標的化ドメインは、ＰＳＭＡ－６１７であってもよく、イメージングされる組織は、ＰＳＭＡ発現組織であってもよい。例えば、限定されないが、細胞標的化ドメインは、ＰＳＭＡ－６１７であってもよく、疾患は、ＰＳＭＡ発現癌であってもよい。例えば、限定されないが、化合物は、ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡであってもよい。ＰＳＭＡ発現は、様々な癌において検出されている（例えば、Ｒｏｗｅら、２０１５年、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２９：８７７～８８２、Ｓａｔｈｅｋｇｅら、２０１５年、Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ Ｍｏｌ Ｉｍａｇｉｎｇ、４２：１４８２～１４８３、Ｖｅｒｂｕｒｇら、２０１５年、Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ Ｍｏｌ Ｉｍａｇｉｎｇ、４２：１６２２～１６２３、及びＰｙｋａら、Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ２０１５年１１月１９日、ｊｎｕｍｅｄ．１１５．１６４４４２）。したがって、限定されないが、ＰＳＭＡ発現癌は、前立腺癌、腎癌、乳癌、甲状腺癌、胃癌、結腸直腸癌、膀胱癌、膵臓癌、肺癌、肝臓癌、脳腫瘍、黒色腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌又は肉腫であってもよい。いくつかの実施形態では、癌は、前立腺癌である。

【0185】

例えば、限定されないが、細胞標的化ドメインは、ＴＡＴＥであってもよく、イメージングされる組織は、ソマトスタチン受容体発現組織であってもよい。例えば、限定されないが、細胞標的化ドメインは、ＴＡＴＥであってもよく、状態又は疾患は、神経内分泌腫瘍、乳癌、小細胞肺癌、リンパ腫、髄膜腫、下垂体腺腫及び膵臓癌などのソマトスタチン受容体発現状態又は疾患であってもよい。例えば、限定されないが、化合物は、ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＴＡＴＥであってもよい。

【0186】

例えば、限定されないが、細胞標的化ドメインは、ボンベシン又はボンベシン誘導体（例えば、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２）であってもよく、イメージングされる組織は、ＧＲＰＲ発現組織であってもよい。例えば、限定されないが、細胞標的化ドメインは、ボンベシン又はボンベシン誘導体（例えば、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２）であってもよく、状態又は疾患は、ＧＲＰＲ発現状態又は疾患であってもよい。異常又は異所性のＧＲＰＲ発現が、精神医学的／神経学的障害、炎症性疾患及び癌を含む様々な状態及び疾患において検出されている。したがって、限定されないが、ＧＲＰＲ発現状態又は疾患は、精神障害、神経障害、炎症性疾患、前立腺癌、肺癌、頭頸部癌、結腸癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、膵臓癌、乳癌、神経膠腫又は神経芽細胞腫であってもよい。いくつかの実施形態では、癌は、前立腺癌である。例えば、限定されないが、化合物は、ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－Ｐｉｐ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２であってもよい。

【0187】

引用されていない文献

【0188】

本発明を以下の例においてさらに説明する。

【0189】

例

【0190】

^１８Ｆ標識コンパニオン診断薬は、放射線治療薬と化学的に同一である。ＰＥＴには^１８Ｆが好ましいので、イメージング用のｈｏｔ－Ｆ／ｃｏｌｄ－Ｍ同位体置換体が調製され、これは治療に使用することができるｃｏｌｄ－Ｆ／ｈｏｔ－Ｍ同位体置換体のコンパニオン診断薬として機能する。したがって、^１８Ｆを使用して、非放射性金属同位体、例えば^８９Ｙ、^１７４Ｌｕ、^２０８Ｐｂにキレート化されたペプチドを画像化することができる。次いで、ｈｏｔ－Ｆ／ｃｏｌｄ－Ｍ同位体置換体で陽性画像を示す患者は、ｃｏｌｄ－Ｆ／ｈｏｔ－Ｍを含む放射性毒性同位体置換体で治療することができる。

【0191】

治療のために、放射性毒性金属（例えば、^９０Ｙ又は^１７７Ｌｕ^{５０、５１}など）を使用することができる。治療前のイメージングのために、例えばＳＰＥＣＴのための^１１１Ｉｎ又はＰＥＴのための^６４Ｃｕなど、異なる診断金属が通常使用される。この実施は、画像を潜在的な治療結果と相関させる際に問題を引き起こす。例えば、ＤＯＴＡ－ＴＡＴＥは、ＳＰＥＣＴイメージングのために^１１１Ｉｎで標識され、次いで治療のために^９０Ｙで標識されるが、取込みには明らかな違いがある。ＰＥＴ同位体^８６Ｙと同じトレーサを使用することは高価であり、容易に入手することはできない^{４５、４６}。したがって、^１８Ｆ－フッ化物で標識するために、金属キレート剤、例えばＤＯＴＡ並びにペンダントオルガノトリフルオロボロアートの両方を含有するペプチドには利点がある。最終的には、キレート剤は、治療的使用のための放射性毒性金属、又は放射性毒素（すなわち、放射性毒性金属）の代用として使用され得る非放射性金属のいずれかへの金属キレート化のために、又はＦ－１８標識トレーサのＰＫＰＣを変化させることを含む他の目的のために使用することができるが、キレート剤及びＢＦ_３補欠分子族の両方を有する化合物／複合体（トレーサ）は、優れたＰＥＴイメージング剤であり得る。

【0192】

最初に、ＰＳＭＡ標的化尿素及びインテグリン標的化ペプチド性リガンドＬＬＰ２Ａに基づいて、２つの組成物を調製した（図２参照）。驚くべきことに、同位体交換によって^１８Ｆ－フッ化物で標識すると、これらの非金属化組成物は、並外れた腫瘍：非腫瘍比と共に優れた腫瘍取込み値を与える（表５、６、７並びに図３及び図４参照）。

【0193】

細胞培養方法

【0194】

Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞株（ハツカネズミ）は、ＡＴＴＣ（ＣＲＬ－６４７５）から購入した。細胞株は、ＩＭＰＡＣＴ１マウスプロファイル試験（ＩＤＥＸＸ ＢｉｏＲｅｓｅａｒｃｈ）によって病原体を含まないことが確認された。細胞を、５％ＣＯ２を含有する加湿インキュベーター中、３７℃で、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）中で培養した。約９０％のコンフルエンスまで増殖させた細胞を滅菌１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄した後、トリプシン処理した。

【0195】

ＬＮＣａｐ細胞株をＡＴＣＣ（ＬＮＣａＰクローンＦＧＣ、ＣＲＬ－１７４０）から得た。その細胞株は、ヒト前立腺腺癌の左鎖骨上リンパ節の転移部位から確立された。細胞を、５％ＣＯ_２を含有する加湿インキュベーター中、３７℃で、１０％ＦＢＳ、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を補充したＰＲＭＩ １６４０培地中で培養した。次いで、８０～９０％のコンフルエンスまで増殖させた細胞を滅菌リン酸緩衝生理食塩水（１×ＰＢＳ ｐＨ７．４）で洗浄し、トリプシン処理した。

【0196】

Ｆ－１８ ＬＬＰ２Ａ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡのインビボ生体内分布及びＰＥＴ／ＣＴイメージング研究

【0197】

すべての動物実験は、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅによって確立されたガイドラインに従って行い、ブリティッシュコロンビア大学の動物倫理委員会によって承認された。マウスを病原体のない条件下で収容し、カナダ、バンクーバーのＢＣ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＣｅｎｔｒｅのＡｎｉｍａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｒｅにおいて１２時間の明暗サイクルで飼育した。雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを使用して、ＰＥＴイメージング及び生体内分布研究を実施した。腫瘍移植のために、マウスを２．０Ｌ／分の酸素中の２％イソフルランでの吸入によって麻酔し、１×１０^６個のＢ１６Ｆ１０細胞を前肢のレベルで右背部の皮下に移植した。腫瘍が８～１０日で直径８～１０ｍｍに達するまで増殖すると、マウスをイメージングするか、又は生体内分布研究に使用した。

【0198】

ＰＥＴ／ＣＴイメージング研究を、マイクロＰＥＴ／ＣＴスキャナ（Ｉｎｖｅｏｎ、Ｓｉｅｍｅｎｓ社）で行った。簡潔には、静的ＰＥＴスキャンのために、各腫瘍を有するマウスに、イソフルラン鎮静下で尾側外側尾静脈を介して４～６ＭＢｑのＦ－１８標識ＬＬＰ２Ａ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡを注射した。ブロッキング試験のために、マウスに１００μｇの非放射性ＬＬＰ２Ａ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡを同時注射した。注射後、マウスを回復させ、ケージ内で自由に歩き回らせた。５０分後、マウスを再び鎮静させ、スキャナに入れた。局在化及び減衰補正のためにベースラインＣＴスキャンを得た。これに続いて、１０分間の静的ＰＥＴスキャンを行った。取得中、マウスを加熱パッドによって保温した。静的ＰＥＴイメージング後にＣＯ_２吸入を使用してマウスを安楽死させ、続いて生体内分布を行った。ＰＥＴ画像は、オーダードサブセット期待値最大化及び最大事後確率アルゴリズム（ＯＳＥＭ３Ｄ／ＭＡＰ）を使用して、２回のＯＳＥＭ３Ｄ反復とそれに続く１８回のＭＡＰ反復を用いて、１．５ｍｍの要求分解能で再構成した。

【0199】

生体内分布研究のみのマウスを２％イソフルラン吸入によって麻酔し、１～２ＭＢｑのＦ－１８標識ＬＬＰ２Ａ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡを注射した。ブロッキング研究のために、１００μｇの非放射性ＬＬＰ２Ａ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡを放射性化合物と同時注射した。注射後、マウスを回復させ、ケージ内で自由に歩き回らせ、１時間後にＣＯ_２吸入によって安楽死させた。血液を直ちに取り出し、目的の臓器を採取し、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）ですすぎ、ブロット乾燥した。各臓器を秤量し、ＷＩＺＡＲＤ ２４８０（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）を使用して、回収した組織の放射能を測定し、標準曲線を使用して注射用量に対して正規化し、組織１グラム当たりの注射用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として表した。

【0200】

Ｆ－１８ ＰＳＭＡ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡのインビボ生体内分布及びＰＥＴ／ＣＴイメージング研究

【0201】

イメージング及び生体内分布実験を、ＮＯＤＳＣＩＤ １Ｌ２ＲγＫＯ雄マウスを使用して行った。マウスを維持し、実験は、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅによって確立されたガイドラインに従って行い、ブリティッシュコロンビア大学の動物倫理委員会によって承認された。マウスを酸素中２％イソフルランでの吸入によって麻酔し、左肩の後ろに１×１０^７個のＬＮＣａＰ細胞を皮下移植した。腫瘍が５～６週間の間に直径５～８ｍｍに達するまで増殖した際に、マウスをイメージングするか、又は生体内分布研究に使用した。

【0202】

ＰＥＴイメージング実験は、Ｓｉｅｍｅｎｓ社のＩｎｖｅｏｎ（Ｅｒｌａｎｇｅｒ、ドイツ）マイクロＰＥＴ／ＣＴスキャナを使用して行った。各腫瘍を有するマウスに、麻酔下（酸素中２％イソフルラン）で６～８ＭＢｑのＦ－１８標識ＰＳＭＡ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡを尾静脈から注射した。ブロッキングのために、マウスに非放射性ＤＣＦＰｙＬ（０．５ｍｇ）を同時注射した。マウスを回復させ、ケージ内で自由に歩き回らせた。５０分後、マウスを再び酸素吸入中の２％イソフルランで鎮静させ、スキャナに入れた。ＰＥＴ画像を再構成するためのセグメント化後に、局在化及び減衰補正のために、１０分間のＣＴスキャンを最初に行った。次いで、１０分間の静的ＰＥＴイメージングを行い、腫瘍及び他の臓器における取込みを決定した。取得中、マウスを加熱パッドによって保温した。

【0203】

生体内分布研究のために、マウスに上記のように放射性トレーサを注射した。ブロッキングのために、マウスに非放射性ＤＣＦＰｙＬ（０．５ｍｇ）を同時注射した。１時間後、マウスを２％イソフルラン吸入により麻酔し、ＣＯ_２吸入により安楽死させた。血液を心臓から直ちに取り出し、目的の臓器／組織を回収した。回収した臓器／組織を秤量し、自動γカウンタを用いて計数した。各臓器／組織における取込みを、標準曲線を使用して注射用量に対して正規化し、％ＩＤ／ｇとして表した。

【0204】

例１：黒色腫のＶＬＡ－４標的ＰＥＴイメージングのためのＤＯＴＡコンジュゲーションによる^１８Ｆ－ＬＬＰ２Ａトリフルオロボラート放射性トレーサの調整された生体内分布

【0205】

１．１ 要約

【0206】

経細胞最晩期抗原４（ＶＬＡ－４）は、腫瘍転移、薬物耐性に関連しており、多くの癌によって過剰発現される。以前の報告は、ＬＬＰ２Ａコンジュゲートにキレート化された^６４Ｃｕ及び^６８Ｇａを使用して、より最近では［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３放射性補欠分子族を使用した^１８Ｆを使用したＶＬＡ－４発現黒色腫腫瘍のＰＥＴイメージングが成功したことを示している。しかし、これらの先行する［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ誘導体は、中程度の腫瘍取込み値及びＧＩ管内での有意な蓄積を示した。これに対処するために、本発明者らは、腫瘍取込みを増加させ、ＧＩ蓄積を減少させる、ＤＯＴＡ部分が付加された新規のＲＢＦ_３－ＬＬＰ２Ａバイオコンジュゲートを設計した。方法：本明細書において、本発明者らは、^１８Ｆ－トリフルオロボラート放射性補欠分子族、ＡＭＢＦ_３及びＤＯＴＡ部分を備えた改変ＬＬＰ２Ａ－ＰＥＧ_２－ＮＨ_２（１）コンジュゲートの合成を記載する。前駆体ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（６）を同位体交換によって放射性標識し、半分取ＨＰＬＣ及びＣ１８カートリッジ溶出によって精製した。ＶＬＡ－４標的を過剰発現するＢ１６－Ｆ１０黒色腫腫瘍を有する雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを使用して、静的及び動的ＰＥＴスキャン、生体内分布研究、及び注射後（ｐ．ｉ．）１時間で［^１８Ｆ］６に対して過剰の１を同時注射することによるブロッキングの組合せを使用して、ＤＯＴＡ－［^１８Ｆ］ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（［^１８Ｆ］６）を評価した。結果：前駆体６を合成し、^１８Ｆ標識して、４．８±２．９％の放射化学収率で、１３１．７２±５０．３２ＧＢｑ／μｍｏｌのモル活性を有する、９５．９±１．８％の平均（±ＳＤ）放射化学純度の［^１８Ｆ］６の製剤を得た。［^１８Ｆ］６のインビボ静的ＰＥＴ画像は明確な腫瘍の視覚化を示し、生体内分布研究は、腫瘍取込みが組織１グラム当たり９．４６±２．１９％の注射用量（％ＩＤ／ｇ）であり、それぞれ約８及び約１０の高い腫瘍：筋肉及び腫瘍：血液コントラスト比を有することを示した。ブロッキングにより、腫瘍及び骨髄におけるＶＬＡ－４に対する［^１８Ｆ］６の特異性が確認された。動的ＰＥＴは、主に腎経路を介して［^１８Ｆ］６のクリアランスを示し、腸への蓄積は以前に調査した［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａと比較して約１０倍減少したが、脾臓取込みは以前に報告されたＬＬＰ２Ａ－キレート剤放射性トレーサと同様のレベルに増強された。結論：本研究は、［^１８Ｆ］６を有望なＶＬＡ－４放射性トレーサとして強調し、ＬＬＰ２Ａ放射性トレーサの生体内分布がＧＩ管から脾臓及び膀胱にどのように経路変更され得るかを実証している。

【0207】

１．２ 序論

【0208】

経細胞最晩期抗原４（ＶＬＡ－４）受容体は、いくつかの癌で過剰発現し（１～１５）、腫瘍転移（１１、１６～１８）及び化学療法に対する耐性（１９）と相関している。したがって、高親和性ペプチド模倣物リガンドＬＬＰ２Ａによるイメージングのための汎用バイオマーカーを表す。Ｌａｍらによる最初の開発（２０）以来、ＬＬＰ２Ａファーマコフォアは、ＮＩＲ蛍光イメージング（２１）、^１１１Ｉｎ（２２）及び^９９ｍＴｃ（２３）を使用する単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、並びに^６８Ｇａ及び^６４Ｃｕを用いた陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）（２３～２７）によって広範に、インビボＶＬＡ－４標的化について検証されている。^１８Ｆを用いたＰＥＴイメージングの報告はこれまで１件しかなく、ＬＬＰ２Ａ－ＰＥＧ_２－ＮＨ_２（１）を、２つの放射性補欠分子族であるアンモニウムジメチル－トリフルオロボラート（ＡＭＢＦ_３）及びＮ－ピリジニル－パラ－トリフルオロボラート（Ｎ－Ｐｙｒ－ｐ－ＢＦ_３）のうちの１つに付加し、次いで、単一ステップで^１８Ｆ標識に成功し、Ｂ１６－Ｆ１０黒色腫腫瘍を有するマウスにおいてＰＥＴイメージングを行った（２８）。注射１時間後（ｐ．ｉ．）、これら２つの［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａの腫瘍取込み値は中程度（２．８及び４．４％ＩＤ／ｇ）であったが、高い腸内蓄積（約５２％ＩＤ／ｇ）が観察された。

【0209】

対照的に、キレート化放射性金属に対するＬＬＰ２Ａコンジュゲートは、同じマウス黒色腫腫瘍モデルを用いて、１時間～２時間ｐ．ｉ．で１０～１５％ＩＤ／ｇの範囲の腫瘍取込み値を一貫して示す（２３～２７）。それにもかかわらず、放射性金属化ＬＬＰ２Ａ－キレート剤コンジュゲートは、細網内皮系（ＲＥＳ）による部分的なクリアランスのために、脾臓において一貫して隔離される。前述の［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａは、最適以下の画像をもたらす疎水性特性を示したので、本発明者らは、ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａバイオコンジュゲートへの親水性キレート剤ＤＯＴＡの組み込みが腎臓クリアランスに有利であると仮定した。したがって、この仮説を試験するために、本発明者らは、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）をほぼ同一のＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ前駆体骨格に結合させた。この目的のために、本発明者らは、ＤＯＴＡ部分のさらなる付加を可能にするためにグラフト化及び脱保護された新規アミノ酸Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－（ＡＭＢＦ_３）も設計した。得られたコンジュゲートＤＯＴＡ－［^１８Ｆ］ＡＭＢＦ_３－ＬＬＰ２Ａ（６）を^１８Ｆ／^１９Ｆ同位体交換（ＩＥＸ）によって標識し（２８、２９）、検証されたブロッキング剤として１を使用して、インビボＰＥＴイメージング（静的及び動的スキャン）、生体内分布研究、及びＶＬＡ－４ブロッキング研究によって調査した。本発明者らの知る限り、本報告は、腎臓クリアランスに有利になるよう生体内分布を調整するために使用されるＤＯＴＡ－キレート剤が付加された任意の^１８Ｆ標識ペプチド性放射性トレーサの最初の調査を表す。

【0210】

１．３ 材料及び方法。

【0211】

ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（６）の合成。ＬＬＰ２Ａペプチド模倣物は、以前に報告されたように（２８、３０）、ＰＥＧ_２スペーサ及び－ＮＨ_２コンジュゲーションハンドルを固定するためにＯ－ビス－（アミノエチル）エチレングリコールトリチル樹脂を使用しながら、以前に報告されたように（２０）、固相上で合成した。ＬＬＰ２Ａ－ＰＥＧ_２－ＮＨ_２（１）（４．２ｍｇ、４．４６μｍｏｌ、１当量）を、２００μＬの（１：１９）ＤＩＰＥＡ：ＤＭＦ（ｖ／ｖ）に溶解し、その後、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－（ＡＭＢＦ_３）－ＮＨＳ（２）（５．８５ｍｇ、８．９１μｍｏｌ、２当量）を溶解するために使用し、その合成は補足情報（スキーム２）に示す。コンジュゲーションは室温で２時間進行した。混合物をｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって濃縮（約５０μＬ～１００μＬ）し、１．０ｍＬのＥｔ_２Ｏで沈殿させ、遠心分離した。上清を除去し、生成物を５０μＬのＤＭＦに再溶解した。記載されたＥｔ_２Ｏ沈殿／遠心分離方法を繰り返し、最終ペレットをｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって乾燥させた。これらの方法により、６．５ｍｇ（約４．３μｍｏｌ）の生成物が、ＬＬＰ２Ａ－ＰＥＧ_２－ＡＭＢＦ_３－Ｆｍｏｃ（３）のほぼ定量的収率で得られた。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_７６Ｈ_９８ＢＦ_３Ｎ_１４Ｏ_１３について１４８３．５ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１５０６．８ｍ／ｚ、［Ｍ＋２Ｎａ－Ｈ］^＋＝１５２８．８ｍ／ｚとなった（図９）。ＴＬＣ：［（１：１９）ＮＨ_４ＯＨ：ＥｔＯＨ、ｖ／ｖ］、Ｒ_ｆ＝０．４６（２５４ｎｍで可視）。中間体３（１．５ｍｇ、１μｍｏｌ、１当量）を２００μＬの（１：４）ピペリジン：ＤＭＦ（ｖ／ｖ）で溶解し、室温で２時間以内にＦｍｏｃ除去が達成された。混合物を濃縮し、記載のＥｔ_２Ｏ沈殿／遠心分離方法を２回行った。最終ペレットをｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって乾燥させて、約１．３ｍｇ（約１μｍｏｌ）のＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ－ＮＨ_２（４）を定量的収率で得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_６１Ｈ_８８ＢＦ_３Ｎ_１４Ｏ_１１について１２６１．３ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１２６２．６ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１２８４．６ｍ／ｚとなった（図１０）。ＴＬＣ：［（１：１９）ＮＨ_４ＯＨ：ＥｔＯＨ、ｖ／ｖ］、Ｒ_ｆ＝０．１８（２５４ｎｍで可視、ニンヒドリンで染色）。中間体４（１．８ｍｇ、１．４μｍｏｌ、１当量）を１００μＬの（１：１９）ＤＩＰＥＡ：ＤＭＦ（ｖ／ｖ）に溶解し、室温で２時間以内にＤＯＴＡ－ＮＨＳ（５）（１．６ｍｇ、２．１μｍｏｌ、１．５当量）にコンジュゲートした。混合物を濃縮し、記載のＥｔ_２Ｏ沈殿／遠心分離方法を２回行った。最終ペレットをｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって乾燥させて、２．４ｍｇ（約１．４μｍｏｌ）の粗ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（６）を得た。前述の手順を繰り返して、ＨＰＬＣ精製のための４２．１ｍｇの粗６を得た。これらの合わせたサンプルを、１．０ｍＬの（１：１）０．１％ギ酸を含むＭｅＣＮ：０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）を含むＨ_２Ｏに溶解し、ＨＰＬＣ方法Ａによって精製した。生成物（６）をｔ_Ｒ＝８．９分で回収し、等量のＨ_２Ｏで希釈した後、ドライアイスで凍結し、凍結乾燥した。これらの方法により、３．１ｍｇ（１．９μｍｏｌ）の精製（純度９５％超）放射性トレーサ前駆体６（ＥＳＩ－ＭＳにより特性評価、図１１及びＨＰＬＣにより特性評価、図１２）を収率７．４％で得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_７７Ｈ_１１４ＢＦ_３Ｎ_１８Ｏ_１８について１６４７．６ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１６４８．９ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１６７０．９ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｋ］^＋＝１６８７．０ｍ／ｚとなった。ＴＬＣ：［（１：１９）ＮＨ_４ＯＨ：ＭｅＯＨ］、Ｒ_ｆ＝０．６７（２５４ｎｍで可視、ブロモクレゾールグリーンで薄青色に染色）。

【0212】

スキーム２：Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－Ｏ－ＮＨＳの合成スキーム。

【化13】

【0213】

ＥＳＩ－ＭＳ特性評価。質量スペクトルは、移動相としてＭｅＯＨ又はＣＨ_３ＣＮのいずれかを用いてＷａｔｅｒｓ ＺＱ分光計を使用して取得した。

【0214】

ＨＰＬＣ方法及び特性評価。Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣ（オートサンプラーユニット及びマルチチャネルＰＤＡ検出器）を使用して、ＨＰＬＣ方法Ａによって前駆体６を精製した。Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ社。Ｋｎａｕｅｒ社のスマートラインポンプ１００及びＢｉｏｓｃａｎ社の放射線検出器は、ＨＰＬＣ法Ｂによって^１８Ｆ放射性トレーサ７を精製するためのものであった。Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社の１２００ ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ３５９００Ｅによって連結された、単一チャネル１２００シリーズＰＤＡ検出器及びＢｉｏｓｃａｎ社の放射線検出器）を使用して、ＨＰＬＣ方法Ｃによる動物への前に、前駆体６について、及び７つの製剤のＱＣについて標準曲線を作成した。

【0215】

ＨＰＬＣ方法Ａ：６の精製及び分析。Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８、９．４ｍｍ×２５０ｍｍ、５μｍカラム、溶媒Ａ＝０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）を含むＭｅＣＮ及び溶媒Ｂ＝０．１％ギ酸（ｖ／ｖ）を含むＨ_２Ｏ、流速＝２．０ｍＬ／分、吸光度チャネル＝２５７ｎｍ（精製）及び２４１ｎｍ（分析）。勾配：ｉ）２５％～８０％の溶媒Ａを１５分間、ｉｉ）８０％～１００％の溶媒Ａを１分間、ｉｉｉ）１００％の溶媒Ａを６分間、ｉｖ）１００％～２５％の溶媒Ａを１分間、ｖ）２５％の溶媒Ａを６分間。

【0216】

ＨＰＬＣ方法Ｂ：［^１８Ｆ］６の精製。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社のＬｕｎａ Ｃ１８－１００Ａ、１０ｍｍ×２５０ｍｍ、５μＭカラム、溶媒Ａ＝０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）を含むＨ_２Ｏ及び溶媒Ｂ＝０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）を含むＭｅＯＨ、流速＝４．５ｍＬ／分、吸光度チャネル＝２５７ｎｍ。最初に、４０％溶媒Ｂ（ｖ／ｖ）を含む均一濃度混合物を１２分間使用し、次いで、１００％溶媒Ｂ（ｖ／ｖ）にさらに１２分間切り替えた。^１８Ｆ放射性トレーサ［^１８Ｆ］６を約２１分～２３分で回収した。

【0217】

ＨＰＬＣ方法Ｃ：［^１８Ｆ］６の分析。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社のＪｕｐｉｔｅｒ Ｃ１８－３００Ａ、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、１０μｍカラム、溶媒Ａ＝０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）を含むＨ_２Ｏ、溶媒Ｂ＝０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）を含むＭｅＣＮ、流速＝２．０ｍＬ／分、吸光度チャネル＝２５７ｎｍ。勾配：ｉ）０％の溶媒Ｂを４分間、ｉｉ）０％～４０％の溶媒Ｂを２分間、ｉｉｉ）４０％の溶媒Ｂを４分間、ｉｖ）４０％～８０％の溶媒Ｂを４分間、ｖ）８０％の溶媒Ｂを１１分間、ｖｉ）８０％～０％溶媒Ｂを３分間、及びｖｉｉ）０％の溶媒Ｂを４分間。

【0218】

Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ_３－ＮＨＳの合成

【0219】

化学物質、溶媒、ハードウェア。３－ジメチルアミノ－１－プロピン及びトリフルオロメチルスルホニル無水物は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入した。ヨードメチルボロン酸ピナコールエステルは、Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から購入した。二フッ化カリウム（ＫＨＦ_２）は、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ社から購入した。アジ化ナトリウムは、Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ Ｒｉｅｄｅｌ－ｄｅ Ｈａｅｎ社から購入した。Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨは、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社から購入した。硫酸銅、アスコルビン酸、水酸化ナトリウム、及び炭酸カリウムは、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から購入した。Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド及びＮ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミドは、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ社から購入した。フラッシュクロマトグラフィは、Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ社から購入したシリカゲル（２３０～４００メッシュ）を使用して行った。薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）は、ＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社から購入したシリカゲル６０ Ｆ_２５４で行った。^１Ｈ、^１９Ｆ及び^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、室温でＢｒｕｋｅｒ社のＡＶ３００装置で記録した。重水素化溶媒アセトニトリル－ｄ_３、クロロホルム－ｄ及びアセトン－ｄ_６は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入した。エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）は、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＬＣＴ装置を使用して行った。ＨＲＭＳは、飛行時間型（ＴＯＦ）検出器を備えたＷａｔｅｒｓ－Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＬＣＴを使用して行った。

【0220】

Ｎ－プロパルギル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニオメチルボロニルピナコラート。Ａｒ_（ｇ）下の火炎乾燥丸底フラスコに、１．５ｍＬの３－ジメチルアミノ－１－プロピン（１３．８ｍｍｏｌ、１．０１当量）を入れ、２８ｍＬのＥｔ_２Ｏに溶解した。３．６７ｇサンプルのヨードメチルボロン酸ピナコールエステル（１３．７ｍｍｏｌ、１当量）を滴加し、反応物を室温で３０分間撹拌した。生成物は、白色固体として沈殿し、真空濾過によって回収した。粗生成物を冷Ｅｔ_２Ｏで洗浄した。粗生成物を、予め秤量したシンチレーションバイアルに移し、真空中で乾燥させた。これにより、３．４ｇ（９．８１ｍｍｏｌ）の１を、淡ベージュ色粉末として収率７２％で得た。

【数1】

【0221】

Ｎ－プロパルギル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニオメチル－トリフルオロボラート。３Ｍ ＫＨＦ_{２（水溶液）}及び４Ｍ ＨＣｌ_{（水溶液）}のストック溶液を調製した。化合物１（１．８７ｇ、５．３３ｍｍｏｌ、１当量）を、１０ｍＬのＣＨ_３ＣＮを含む５０ｍＬファルコンチューブに入れた。９ｍＬ容量の３Ｍ ＫＨＦ_{２（水溶液）}（２７ｍｍｏｌ、５．１当量）及び８ｍＬの４Ｍ ＨＣｌ_{（水溶液）}（３２ｍｍｏｌ、６当量）を添加し、溶液を４５℃で加熱しながら２時間撹拌した。次いで、溶液を濃ＮＨ_４ＯＨ_{（水溶液）}でｐＨ約７まで中和し、ＣＨ_３ＣＮ及び水層の二相層を形成した。上部の層（有機ＣＨ_３ＣＮ層）を２５０ｍＬ丸底フラスコに回収し、水層をＣＨ_３ＣＮ（３×１０ｍＬ）で洗浄した。粗生成物を回転蒸発によって乾燥させた。２０ｍＬ容量のアセトンを使用して、粗生成物サンプルからさらに塩を沈殿させ、混合物をガラス焼結漏斗を使用して濾過した。濾液を丸底フラスコに回収し、回転蒸発によって濃縮し、真空中でさらに乾燥させた。次いで、粗生成物を２０ｍＬのジエチルエーテルで洗浄し、次いで２０ｍＬのクロロホルムで洗浄して、残っている過剰のピナコールを溶解した。粗サンプルを最小限のアセトンで溶解し、カラムクロマトグラフィ（シリカゲル、４３～６０μｍ、２３０～４００メッシュ、約４０ｇ、均一濃度アセトン）を、ＴＬＣ（アセトン、Ｒ_ｆ＝０．４１、Ｉ_２で染色）によって溶出画分を監視しながらを行った。精製した２を含有する画分をプールし、回転蒸発によって濃縮し、真空中でさらに乾燥させた。固体生成物を、予め秤量したバイアルに回収し、真空中で乾燥させた。これにより、９１１ｍｇ（５．５２ｍｍｏｌ）の２を、淡橙色固体として定量的収率で得た。

【数2】

【0222】

Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｎ_３）－ＯＨ。Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨの第一級アミンのジアゾ転移には、トリフルオロメチルスルホニルアジドを使用した。２．９４ｇサンプルのＮａＮ_３（４５．２ｍｍｏｌ、８．６３当量）を丸底フラスコに入れ、２０ｍＬの（２：３）Ｈ_２Ｏ：ＣＨ_２Ｃｌ_２（ｖ／ｖ）に溶解した。混合物を撹拌しながら、１．０２ｍＬのトリフルオロメタンスルホン酸無水物（Ｔｆ_２Ｏ）（６ｍｍｏｌ、１．１５当量）を３０分間にわたって滴加した。反応物を約０℃の氷水浴中で５時間撹拌した。有機層をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×２０ｍＬ）で抽出し、続いて、回収した有機層を飽和ＮａＨＣＯ_{３（水溶液）}（２０ｍＬ）洗浄した。トリフルオロメチルスルホニルアジドを、記載の回収した有機層に溶解した。１．９３ｇサンプルのＦｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨ（５．２４ｍｍｏｌ、１当量）を、２．３２ｇのＫ_２ＣＯ_３（１６．８ｍｍｏｌ、３当量）及び１５ｍｇのＣｕ（ＩＩ）ＳＯ_４（９４．０μｍｏｌ、０．３９ｍｏｌ％）を入れた丸底フラスコに入れ、１５ｍＬの（１：１）ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ（ｖ／ｖ）に溶解した。トリフルオロメタンスルホニルアジドを含む有機層を３０分間にわたって滴加した。溶液を室温で２１時間撹拌し、反応物を６０ｍＬの２．５Ｍ ＨＣｌ_{（水溶液）}でクエンチした。有機層をＣＨ_２Ｃｌ_２（３×２０ｍＬ）で抽出し、ブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄した。回収した有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、塩を真空濾過によって除去した。回収した溶液を回転蒸発によって濃縮した。カラムクロマトグラフィ（シリカゲル、４３～６０μｍ、２３０～４００メッシュ、約８０ｇ、（０．５：９９．５）ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２（ｖ／ｖ）～（１：９９）ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２（ｖ／ｖ）の溶媒勾配）を、ＴＬＣ（（１：９）ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２（ｖ／ｖ）、Ｒ_ｆ＝０．３７、２５４ｎｍで可視、Ｉ_２及びブロモクレゾールグリーンで染色）によって溶出画分を監視しながら行った。純粋な画分を回転蒸発によって濃縮し、真空中でさらに乾燥させた。これにより、１．６０ｇ（４．０６ｍｍｏｌ）の３を、白色ワックス状固体として収率７７％で得た。

【数3】

【0223】

Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＯＨ。１Ｍアスコルビン酸ナトリウムの新鮮なストック溶液を、１．９８ｇのアスコルビン酸ナトリウム（０．０１ｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＩ Ｈ_２Ｏに溶解することによって調製した。次いで、１Ｍ Ｃｕ（ＩＩ）ＳＯ_{４（水溶液）}のストック溶液を、１．６０ｇの無水Ｃｕ（ＩＩ）ＳＯ_４（０．０１ｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＩ Ｈ_２Ｏに溶解することによって調製した。４１４．６ｍｇサンプルの化合物２（２．５１３ｍｍｏｌ、５．２４当量）を丸底フラスコに入れ、２．５ｍＬの（３：２）ＣＨ_３ＣＮ：Ｈ_２Ｏ（ｖ／ｖ）に溶解した。１．５ｍＬ容量の１Ｍ Ｃｕ（ＩＩ）ＳＯ_{４（水溶液）}（１．５ｍｍｏｌ、３．１当量）を最初に添加し、続いて３ｍＬの１Ｍアスコルビン酸ナトリウム（３ｍｍｏｌ、６．２当量）を添加した。次いで、１８９ｍｇサンプルの化合物３（４７９μｍｏｌ、１当量）を溶液に添加した。次いで、１０１ｍｇのＫ_２ＣＯ_３（７３２μｍｏｌ、１．５当量）を添加して溶液を約ｐＨ７に中和し、次いで、４５℃で１６時間撹拌した。混合物を真空濾過して沈殿物を除去し、濾液を回転蒸発によって濃縮した。乾燥した粗生成物を（１：１）ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２（ｖ／ｖ）（５×１０ｍＬ）に再懸濁し、真空濾過して沈殿物を除去し、濾液を回転蒸発によって乾燥させた。次いで、乾燥した粗生成物を（５：９５）ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２（ｖ／ｖ）（５×１０ｍＬ）に再懸濁し、真空濾過して沈殿物を除去し、濾液を回転蒸発によって再び乾燥させた。カラムクロマトグラフィ（シリカゲル、２３０～４００メッシュ、約５０ｇ、（１：４：９５）ＡｃＯＨ：ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２（ｖ／ｖ／ｖ）の溶媒）を、ＴＬＣ（１：１０：８９ ＡｃＯＨ：ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２（ｖ／ｖ／ｖ）、Ｒ_ｆ＝０．２１、２５４ｎｍの光で可視、Ｉ_２で染色）によって溶出画分を監視しながら行った。純粋な４を含有する画分をプールし、回転蒸発によって濃縮し、真空中でさらに乾燥させた。これにより、１９２ｍｇ（３４３μｍｏｌ）の４を暗黄色油状物として収率７１％で得た。

【数4】

【0224】

Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－Ｏ－ＮＨＳ。１６３．３ｍｇサンプルの４（２９１．７μｍｏｌ、１当量）を丸底フラスコに添加し、８ｍＬの（１：１）ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＣＨ_３ＣＮ（ｖ／ｖ）で溶解した。３０５ｍｇサンプルのＤＣＣ（１．４８ｍｍｏｌ、５．０７当量）を溶液に添加し、その後、１７０ｍｇのＮＨＳ（１．４８ｍｍｏｌ、５．０７当量）を添加し、溶液を室温で２１時間撹拌した。反応混合物を焼結漏斗を使用して真空濾過し、回収した濾液を回転蒸発によって濃縮した。カラムクロマトグラフィ（カラム直径＝０．５ｃｍ、シリカゲル（２３０～４００メッシュ）、約１０ｇ、５０ｍＬあたり１０％ＣＨ_３ＣＮ（ｖ／ｖ）増加するＣＨ_２Ｃｌ_２～（１：１）ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＣＨ_３ＣＮ（ｖ／ｖ）の勾配）を、ＴＬＣ（１：１）ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＣＨ_３ＣＮ（ｖ／ｖ）、Ｒ_ｆ＝０．５２、２５４ｎｍで可視、Ｉ_２で染色）によって溶出画分を監視しながら行った。純粋な５を含有する画分をプールし、回転蒸発によって濃縮し、真空中でさらに乾燥させた。これにより、１１８ｍｇ（１８０μｍｏｌ）の５を黄色油状物として収率６１％で得た。

【数5】

【0225】

Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ_３の構造的特性評価を添付の図１５～図３３に示す。

【0226】

飽和結合アッセイ。公開された手順に従ってＢ１６－Ｆ１０細胞に対してインビトロ結合飽和アッセイを行った（ｎ＝３）（２８）。細胞を２４ウェルポリ－Ｄ－リジンプレート上でコンフルエンスに近くなるまで増殖させた。増殖培地を除去し、反応培地（ＲＰＭＩ、１％ＢＳＡ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシン）を添加し、３７℃で少なくとも１時間インキュベートした。漸増濃度（５ｐＭ～２０ｎＭ）の［^１８Ｆ］６を細胞に添加し、穏やかに撹拌しながら２５℃で１時間インキュベートした。非特異的結合は、１（１０μＭ）を同時に添加しながら、［^１８Ｆ］６を用いた記載のインキュベーションを繰り返すことによって決定した。インキュベーション後、細胞を氷冷ＰＢＳで２回洗浄し、トリプシンとのインキュベーション後に回収し、ＷＩＺＡＲＤ ２４８０ガンマカウンタ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）を使用して放射能を測定した。非特異的結合アッセイからの値を、特異的結合アッセイのそれぞれの値から差し引いた。解離定数（Ｋ_ｄ’ｓ）は、１部位特異的結合モデルを用いたＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭ ７を使用して決定した。

【0227】

［^１８Ｆ］フッ化物アニオンを用いたＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（６）の放射性標識。前駆体６（８０ｎｍｏｌ）を１５μＬの１Ｍピリダジン－ＨＣｌ（ｐＨ＝２）、１０μＬのＤＭＦ、１５μＬのＭｅＯＨ及び４μＬの５ｍＭ ＫＨＦ_{２（水溶液）}（５０ｍｏｌ％^１９Ｆ^－担体）に溶解し、最終ｐＨは約２．０であった（スキーム１）。^１８Ｆ／Ｈ_２ ^１８Ｏ（約１Ｃｉ）を、活性化された９ｍｇ ＱＭＡカートリッジ（１．７ｍＬのブラインで予めコンディショニングし、次いで２．５ｍＬの水ですすぎ、３ｍＬの空気で乾燥させた）に通して^１８Ｆを捕捉し（効率９５％超）、次いで、これを、約８０～１００μＬの０．９％生理食塩水を使用して前駆体を含有するセプタム密封反応容器に溶出した（効率９０％超）。溶液を８２～８４℃で５分間加熱し、次いで、真空中で１５分間加熱した。２ｍＬの４０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_{２（水溶液）}（ｐＨ＝６．８）でクエンチした後、溶液を、２つの連続した均一濃度溶媒条件を用いる半分取ＨＰＬＣによって精製した（ＨＰＬＣ方法Ｂ）。放射性トレーサ［^１８Ｆ］６を回収し、５０ｍＬのＨ_２Ｏに直接希釈した。容器に少量のＨｅ_（ｇ）の圧力を印加することによって、得られた溶液をＳｅｐ－Ｐａｋ Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８カートリッジ（９ｍＬのＥｔＯＨ、９ｍＬのＨ_２Ｏ及び１０ｍＬの空気で連続的に予備洗浄）に通した。捕捉された［^１８Ｆ］６を、０．５ｍＬの（９：１）ＥｔＯＨ：０．９％生理食塩水（ｖ／ｖ）を含むセプタム密封バイアルに溶出し、最後に４ｍＬのＰＢＳを用いて製剤化して、動物注射のために、ｐＨ約７の（１：９）ＥｔＯＨ：ＰＢＳ（ｖ／ｖ）中の［^１８Ｆ］６を得た。［^１８Ｆ］６のすべての精製製剤を分析ＨＰＬＣ（方法Ｃ）によって特性評価し、動物注射前の標準曲線（図１３）に基づいて放射化学純度、放射化学収率及びモル活性を定量した。

【0228】

スキーム１。４及び［^１８Ｆ］６を生成するための前駆体６の合成。

【化14】

【0229】

Ｂ１６－Ｆ１０腫瘍を有するマウスにおけるＤＯＴＡ－［^１８Ｆ］ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（［^１８Ｆ］６）のＰＥＴイメージング。Ｂ１６－Ｆ１０細胞（ＡＴＴＣ、ＣＲＬ－６４７５）を、１０％ＦＢＳ（ｖ／ｖ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ中、３７℃、５％ＣＯ_２（ｇ）下で培養した。すべての動物実験は、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｎ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅのガイドラインに従って行い、ブリティッシュコロンビア大学の動物倫理委員会によって承認された。雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを２％イソフルランで麻酔し、１×１０^６個のＢ１６－Ｆ１０細胞を右肩の皮下に注射した。腫瘍を７～９ｍｍの直径に達するまで増殖させた。ＰＥＴ及びＣＴイメージング研究は、以前に報告されたように、マイクロＰＥＴ／ＣＴスキャナ（Ｉｎｖｅｏｎ、Ｓｉｅｍｅｎｓ社）を使用した（２８、３１～３３）。静的ＰＥＴスキャン（１０分間記録）のために、最初に、マウスは、２％イソフルランで麻酔しながら、尾静脈を介して４～６ＭＢｑの（［^１８Ｆ］６）を注射し、ＰＥＴイメージングの前にベースラインＣＴスキャン（１０分間記録）に供した。競合的ＶＬＡ－４ブロッキングを伴う静的ＰＥＴ画像の場合、２００μｇの１を４～６ＭＢｑの［^１８Ｆ］６と同時注射し、記載の方法を使用して１時間ｐ．ｉ．でベースラインＣＴ及びＰＥＴ画像の両方を得た。動的ＰＥＴスキャンは、記載の麻酔、４～６ＭＢｑの［^１８Ｆ］６の注射、ベースラインＣＴスキャン、及び５秒～５２．５分ｐ．ｉ．（２８時点）で記録されたＰＥＴスキャンを伴った。各静的ＰＥＴイメージング研究の後、最終的にマウスをＣＯ_２（ｇ）吸入を使用して安楽死させ、生体内分布測定のためにその臓器を採取した。

【0230】

Ｂ１６－Ｆ１０腫瘍を有するマウスにおけるＤＯＴＡ－［^１８Ｆ］ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（［^１８Ｆ］６）の生体内分布。マウスを、２％イソフルランを使用して麻酔し、尾静脈を介して２～３ＭＢｑの［^１８Ｆ］６を注射した。競合的ＶＬＡ－４ブロッキング研究のために、２００μｇの１を２～３ＭＢｑの［^１８Ｆ］６と同時注射した。１時間ｐ．ｉ．で、マウスをＣＯ_２（ｇ）吸入によって安楽死させ、血液を採取し、臓器を切除した。サンプルをすすぎ、乾燥させた後、臓器を秤量し、Ｗａｌｌａｃ ＷＩＺＡＲＤ ２ガンマカウンタ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）を使用して放射能を記録し、値を各臓器の％ＩＤ／ｇとして表した。両側ＡＮＯＶＡ Ｓｉｄａｋの多重比較検定（グラフパッドプリズム）を使用して、［^１８Ｆ］６単独の生体内分布と、１の同時注射によるＶＬＡ－４の競合的ブロッキングとの間の統計的有意性を評価した。

【0231】

さらなる詳細は、Ｌｅｐａｇｅら、ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ １０．１００２／ｃｂｉｃ．２０１９００６３２に提供されている。

【0232】

１．４ 結果

【0233】

ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（６）の合成及びＶＬＡ－４親和性。ＬＬＰ２Ａペプチド模倣物は、本発明者らの研究室によって報告された改変（樹脂切断時のＰＥＧ_２－ＮＨ_２組み込み）（２８）を用いて、他者によって以前に記載された（２０）ように合成した。中間体１の末端第一級アミンを、ＮＨＳ化学を介してＦｍｏｃ保護リジン－ＡＭＢＦ_３コンジュゲート２に定量的収率でカップリングさせた。次の中間体３を、効率的なＦｍｏｃ除去に供し（中間体４）、塩基性条件下で非保護ＤＯＴＡ－ＮＨＳ（５）にカップリングさせた。これらの方法を繰り返して、ＨＰＬＣ精製のための実質的な粗サンプル（４２．１ｍｇ）の６を得た。この戦略により、その後の^１８Ｆ放射性標識のための高純度（ＨＰＬＣにより９５％超）で、３．１ｍｇ（１．９μｍｏｌ）の凍結乾燥前駆体６が得られた。６．９±０．５９ｎＭ（ｎ＝３）のＫ_ｄ値が計算され（図１４）、他の［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａコンジュゲートについて見出されたＫ_ｄ値よりも少なくとも５倍高かった（図８）。

【0234】

ＤＯＴＡ－［^１８Ｆ］ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（［^１８Ｆ］６）の放射合成。前駆体６（８０ｎｍｏｌ）を、７１．８±１．０分（±ＳＤ）で酸性水性ピリダジン緩衝液中、ＩＥＸを介して［^１８Ｆ］フッ化物で放射性標識した（製剤への^１８Ｆ／Ｈ_２ ^１８Ｏ送達、ｎ＝４）。ＨＰＬＣによって６の^１８Ｆ標識誘導体としてのサンプルの同一性を確認した後（図５ｂ）、［^１８Ｆ］６の平均放射化学純度は９５．９±１．８％（±ＳＤ）であると計算された（図５ａ）。［^１８Ｆ］６の平均放射化学収率は４．８±２．９％であり、平均モル活性（Ａ_ｍ）は１３１．７２±５０．３２ＧＢｑ／μｍｏｌ（３．５６±１．３６Ｃｉ／μｍｏｌ）と算出された。

【0235】

Ｂ１６－Ｆ１０腫瘍を有するマウスにおけるＤＯＴＡ－［^１８Ｆ］ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（［^１８Ｆ］６）のＰＥＴイメージング。

【0236】

［^１８Ｆ］６の静的ＰＥＴ画像は、Ｂ１６－Ｆ１０腫瘍を有するマウスの腫瘍、脾臓、腎臓及び骨髄（図６ａ及び６ｂ）において、１時間ｐ．ｉ．で優先的なトレーサ取込みを示した（ｎ＝２）。［^１８Ｆ］６と１との同時注射を伴うブロッキング試験（ｎ＝２）では、腫瘍及び骨髄におけるトレーサ取込み値がベースラインレベルに近いレベルまで減少したが、脾臓では活性が認められたままであった（図６ｃ及び図６ｄ）。すべての画像は、膀胱における実質的な活性を示し、腎臓を介した［^１８Ｆ］６の腎臓クリアランスを確認した。

【0237】

動的ＰＥＴスキャンは、循環による［^１８Ｆ］６の初期灌流及び４分ｐ．ｉ．以内の肝臓の初回通過を示した（図７）。放射性トレーサは、１．９分ｐ．ｉ．以内に腫瘍への効率的な取込み及び５２．５分ｐ．ｉ．までの腫瘍への安定した蓄積を示した。ＶＬＡ－４標的化は、骨髄における放射性トレーサ蓄積によっても観察された。これらのスキャンにより、スキャン期間中の腸内の［^１８Ｆ］６の初期の存在及び腸内の保持が特定された。［^１８Ｆ］６の蓄積がバックグラウンドの筋組織において低いままであるので、動的ＰＥＴスキャンも高コントラスト静的ＰＥＴ画像を再現した。

【0238】

生体内分布研究により、脾臓での［^１８Ｆ］６の高い蓄積が明らかになり、１時間ｐ．ｉ．で肺及び腸に実質的に取り込まれた。（表５）。特異的なＶＬＡ－４結合は、腫瘍及び骨髄における［^１８Ｆ］６の高い取込みによって証明された。１の同時注射は、脾臓（８８％低い、ｐ＜０．０００１）、腸（４３％低い、ｐ＜０．０５）、肺（８５％低い、ｐ＜０．０００１）、骨及び骨髄（７８％低い、ｐ＜０．０００１）及び腫瘍（７５％低い、ｐ＜０．０００１）において［^１８Ｆ］６の蓄積を減少させた。コントラスト比（表６）は、バックグラウンドの筋肉（約７倍高い）及び血液プール（約９倍高い）と比較して、［^１８Ｆ］６の比較的高い腫瘍取込みを示した。ＶＬＡ－４ブロッキングは、［^１８Ｆ］６についてこれらの腫瘍対筋肉（９２％低い、ｐ＜０．０００１）及び腫瘍対血液（８５％低い、ｐ＜０．０００１）のコントラストを低下させたが、腫瘍対腎臓及び腫瘍対骨及び骨髄のコントラストは有意に影響を受けなかった（ｐ＞０．０５）。

【0239】

【表5】

【0240】

【表6】

【0241】

１．５ 考察

【0242】

^１８Ｆ標識ＬＬＰ２Ａ放射性トレーサを以前に生成し、その各々を、構造的に関連しているが比較的疎水性の２つの［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａトレーサ上の同位体交換によって標識した。放射性トレーサの極性を増加させるためにいくつかのアプローチが存在するが（例えば、グルタマートを添加し、ＰＥＧリンカーの長さを増加させる）、本開示は、親水性を増加させ、それによってトレーサのクリアランスを調節する手段としてＤＯＴＡ部分を導入する新規なアプローチを提示する。［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａコンジュゲートについて、高い腸取込みが以前に観察された。リガンドのＬＬＰ２Ａクラスをペプチド性骨格として試験するために、化合物６を、他の点ではほぼ同一のＬＬＰ２ＡコンジュゲートにＤＯＴＡを付加して、ＤＯＴＡ部分のすべての差異を最小限に抑えるように設計した（図８の構造の比較を参照）。ＤＯＴＡ修飾ＬＬＰ２Ａ誘導体６の合成は、効率的な段階的様式で進行し、ほとんどの化学反応についてほ定量的収率が得られた。最終ステップにおける６の比較的低い回収率は、厳密なＨＰＬＣ精製条件の結果としてのサンプル損失に起因していた。しかし、回収された材料は高純度であり、記載のすべての^１８Ｆ放射性標識及びインビボ試験に十分な量で得られた。

【0243】

［^１８Ｆ］６の放射合成は、本発明者らの研究室によって評価されたＡＭＢＦ_３放射性補欠分子族及び他のトリフルオロボラートについて以前に実証されたように、水性条件下で^１８Ｆ－ＩＥＸによって単一の水性ステップで達成された。放射合成時間、放射化学収率、純度及びモル活性はインビボ研究に適しており、先行する［^１８Ｆ］ＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ及び［^１８Ｆ］Ｎ－Ｐｙｒ－ｐ－ＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａ（２８）に類似していた。収率は比較的低かったが、［^１８Ｆ］６の十分な活性、０．３７～１．８５ＧＢｑ（１０～５０ｍＣｉ）が各インビボ研究について一貫して得られた（ｎ＞６）。標識方法及び回収方法の両方が最適化されていないので、本発明者らは、［^１８Ｆ］６の直接製剤化及び回収のためにＨＰＬＣ精製中に代替の溶液（例えば、緩衝水性等張エタノール溶液）を使用することによって、これらの収率を高めることができると確信している。これは、標識後の［^１８Ｆ］６のＣ１８カートリッジ単離の必要性を回避し、この親水性トレーサは、初期捕捉ステップ中に失われた可能性が高い。

【0244】

標的ＶＬＡ－４を発現する標準的なマウス黒色腫モデルＢ１６－Ｆ１０を画像化した。［^１８Ｆ］６は、１時間ｐ．ｉで脾臓、腫瘍及び骨髄への優先的な蓄積を示した。喜ばしいことに、Ｂ１６－Ｆ１０黒色腫腫瘍における［^１８Ｆ］６の取込み並びに対応する腫瘍対筋肉比及び腫瘍対血液比は、同様の時点（１時間～２時間ｐ．ｉ．）で同じ腫瘍モデルで、［^６４Ｃｕ］Ｃｕ－ＣＢ－ＴＥ１Ａ１Ｐ－ＰＥＧ_４－ＬＬＰ２Ａ、［^６４Ｃｕ］Ｃｕ－ＣＢ－ＴＥ２Ａ－ＬＬＰ２Ａ、［^６４Ｃｕ］Ｃｕ－ＮＯＤＡＧＡ－ＰＥＧ_４－ＬＬＰ２Ａ及び［^６８Ｇａ］Ｇａ－ＮＯＤＡＧＡ－ＰＥＧ_４－ＬＬＰ２Ａについて観察されたものと類似していた（２３、２５～２７）。ブロッキングは、腫瘍及び骨髄におけるＶＬＡ－４に対する［^１８Ｆ］６の特異性を確認し、Ｂ１６－Ｆ１０腫瘍及び骨髄中に見られる造血幹細胞における周知のＶＬＡ－４発現と一致する（２、９、１０、３４～３７）。脾臓への［^１８Ｆ］６の高い蓄積は望ましくないが、前述の^６４Ｃｕ及び^６８Ｇａ標識ＬＬＰ２Ａ誘導体では、ＲＥＳへのＬＬＰ２Ａ放射性トレーサの捕捉が観察されている（２３、２５～２７）。本発明者らの結果はまた、ＬＬＰ２Ａ放射性トレーサを用いた以前に報告されたすべてのインビボ研究（２２、２４、２６、３８～４０）と同様に、［^１８Ｆ］６のクリアランス経路が腎臓及び膀胱を介したことを確認した。

【0245】

［^１８Ｆ］６は、^６４Ｃｕ標識ＬＬＰ２Ａ誘導体について以前に報告されたものよりも高いモル活性で標識された（２４、２６、２７）。［^１８Ｆ］６の高コントラスト静的ＰＥＴ画像には高いモル活性が寄与している可能性があるが、ＶＬＡ－４に対して４．６倍及び２３倍高いインビトロ結合親和性を示した以前に報告された２つの［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａトレーサについても同様に高いモル活性が達成された。しかし、両方の先行例において、腫瘍取込み値は、本明細書に示される値よりも２～３倍低かった。

【0246】

特に、６と先行するＡＭＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａコンジュゲートとの間の唯一の顕著な差はＤＯＴＡ部分であり（図８）、これはより高い腫瘍取込み値及び良好な腎臓クリアランスの主な原因であることを本発明者らは示唆している。対照的に、本発明者らが以前に報告した［^１８Ｆ］ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａは、［^１８Ｆ］６と比較して疎水性が高く（ＨＰＬＣ保持差によって証明）、したがって、これらの誘導体は、脾臓の保持が約３～５倍低く、ＧＩ管内での蓄積が約１１倍高いことを示した。一般に、これらの結果は、他の結果と共に、ＬＬＰ２Ａバイオコンジュゲートのクリアランス経路（すなわち、腎臓対肝胆道）に影響を及ぼす手段として、親水性の高い部分（以前はリン酸基及びカルボン酸基を使用、本明細書ではＤＯＴＡ）の付加をサポートする。腎臓クリアランスを促進するために配置されている他の化学的官能基とは異なり、ＤＯＴＡは、様々な非放射性金属（例えば、Ｚｎ^２＋、Ｃａ^２＋）にキレートすることができるため、^１８Ｆ－ＰＥＴイメージングを介してインビボＰＫ／ＰＣへの影響をさらに調べることができるというさらなる利点を提供することができる。さらに、ＰＥＴイメージングのためのＦ－１８及び治療のための放射性金属にそれぞれ依存する、コンパニオン二重同位体「ｈｏｔ－ｃｏｌｄ／ｃｏｌｄ－ｈｏｔ」同位体置換体セラノスティック（例えば、^１８Ｆ／^１７４Ｌｕ及び^１９Ｆ／^１７７Ｌｕ）を開発する可能性が容易に企図される。

【0247】

この例は、^１８Ｆ標識が高いモル活性で同位体交換によって進行する一方で、^１８Ｆ標識ＲＢＦ_３－ＰＥＧ_２－ＬＬＰ２Ａの腫瘍取込みが、単純な合成アプローチで導入することができる親水性金属を含まないＤＯＴＡを使用することによって増強することができることを示している。インビボＰＥＴイメージング及び生体内分布研究は、ＤＯＴＡ部分が放射性トレーサ蓄積をＧＩ管からＲＥＳに転換し、特に脾臓に蓄積することを実証している。本発明者らは、ＶＬＡ－４標的化イメージングのために、大幅に改善された^１８Ｆ標識ＬＬＰ２Ａ放射性トレーサを提示しているので、付加されたＤＯＴＡは、トレーサクリアランスを調節するための新規かつ有用な基として機能するようである。これは、他の^１８Ｆ標識放射性補欠分子族でも使用できる可能性がある。

【0248】

例２：ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡ

【0249】

報告された手順に従って、ＡＭＢＦ_３及びＦｍｏｃ－ＬｙｓＮ_３－ＯＨを調製した。Ｐｅｒｒｉｎら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１４、５３、１１８７６～１１８８０。Ｎａｋａｈａｒａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２００８、４９、５４９２～５４９４。

【化15】

【0250】

Ｉ．Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＯＨ

【化16】

【0251】

１Ｍアスコルビン酸ナトリウムの新鮮なストック溶液を、１．９８ｇのアスコルビン酸ナトリウム（０．０１ｍｏｌ）を１０ｍＬの脱イオン水に溶解することによって調製した。次いで、１Ｍ Ｃｕ（ＩＩ）ＳＯ_{４（水溶液）}のストック溶液を、１．６０ｇの無水Ｃｕ（ＩＩ）ＳＯ４（０．０１ｍｏｌ）を１０ｍＬの脱イオン水に溶解することによって調製した。ＡＭＢＦ_３（４１４．６ｍｇ、２．５１３ｍｍｏｌ、５．２４当量）をフラスコに入れ、（３：２）ＭｅＣＮ：Ｈ_２Ｏ（ｖ／ｖ）（２．５ｍＬ）に溶解した。１．５ｍＬ容量の１Ｍ Ｃｕ（ＩＩ）ＳＯ_{４（水溶液）}（１．５ｍｍｏｌ、３．１当量）を最初に添加し、続いて３ｍＬの１Ｍアスコルビン酸ナトリウム（３ｍｍｏｌ、６．２当量）を添加した。次いで、Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＮ_３－ＯＨ（１８９．１ｍｇ、０．４７９ｍｍｏｌ、１当量）を溶液に添加した。次いで、Ｋ_２ＣＯ_３（１０１．１ｍｇ、０．７３２ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加して溶液をｐＨ７に中和した。溶液を４５℃で１６時間撹拌した。混合物を真空濾過して沈殿物を除去し、濾液を回転蒸発によって濃縮した。乾燥した粗生成物を（１：１）ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（ｖ／ｖ）（５×１０ｍＬ）に再懸濁し、真空濾過して沈殿物を除去し、濾液を回転蒸発によって乾燥させた。次いで、乾燥した粗生成物を（５：９５）ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（ｖ／ｖ）（５×１０ｍＬ）に再懸濁し、真空濾過して沈殿物を除去し、濾液を回転蒸発によって再び乾燥させた。カラムクロマトグラフィ（シリカゲル、２３０～４００メッシュ、５０ｇ、（１：４：９５）ＡｃＯＨ：ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（ｖ／ｖ）の溶媒）を、ＴＬＣ（１：１０：９０ ＡｃＯＨ：ＭｅＯＨ：ＤＣＭ（ｖ／ｖ）、生成物のＲ_ｆ＝０．２１、２５４ｎｍのＵＶランプ下で可視、Ｉ_２／シリカで染色）によって溶出画分を監視しながら行った。純粋な画分をロータリーエバポレータによって濃縮し、真空中でさらに乾燥させた。これにより、Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＯＨ（１９２．０ｍｇ、０．３４３ｍｍｏｌ）を暗黄色油状物として収率７１％で得た。

【数6】

【0252】

ＩＩ．Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｏ－ＮＨＳ

【化17】

【0253】

Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＯＨ（１６３．３ｍｇ、２９５．５μｍｏｌ、１当量）をフラスコに添加し、８ｍＬの（１：１）ＤＣＭ：ＭｅＣＮ（ｖ／ｖ）に溶解した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（３０５ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ、５当量）を溶液に添加し、続いてＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（１７０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ、５当量）を添加した。溶液を室温で２１時間撹拌した。反応混合物を焼結漏斗を使用して真空濾過し、回収した濾液をロータリーエバポレータで濃縮した。カラムクロマトグラフィ（カラム直径＝０．５ｃｍ、シリカゲル（２３０～４００メッシュ）、１０ｇ、５０ｍＬあたり１０％ＣＨ_３ＣＮ（ｖ／ｖ）増加するＤＣＭ～（１：１）ＤＣＭ：ＭｅＣＮ（ｖ／ｖ）の勾配）を、ＴＬＣ（１：１ ＤＣＭ：ＣＨ_３ＣＮ、生成物のＲ_ｆ＝０．５２、２５４ｎｍのＵＶランプ下で可視、Ｉ_２／シリカで染色）によって溶出画分を監視しながら行った。純粋な画分をプールし、ロータリーエバポレータで濃縮し、真空中でさらに乾燥させた。これにより、Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｏ－ＮＨＳ（１１８．３ｍｇ、１８０．２ｍｍｏｌ）を黄色油状物として収率６１％で得た。

【数7】

【0254】

ＩＩＩ．ＰＳＭＡ－６１７－ＮＨ２

【0255】

報告された手順に従って、樹脂上のＰＳＭＡ－６１７－ＦｍｏｃをＳＰＰＳによって合成した。Ｅｄｅｒら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２０１５、５６、９１４～９２０。

【化18】

【0256】

樹脂上のＰＳＭＡ－６１７－Ｆｍｏｃ（４５．６ｍｇ、１５．１μｍｏｌ）をエッペンドルフチューブに入れた。ＤＭＦ（４００μＬ）を添加して、サンプルをロティサリー振盪機に入れることによって樹脂を３０分間膨潤させた。混合物を遠心分離し、上清を除去した。（１：４）ピペリジン：ＤＭＦ（２００μＬ）を樹脂に添加し、混合物をロティサリー振盪機を用いて室温で３０分間撹拌した。次いで、混合物を遠心分離し、上清を除去した。ＤＭＦ（３×２００μＬ）を使用して、ボルテックス、遠心分離、及び上清の除去によって樹脂を洗浄した。（３：７）ＨＦＩＰ：ＤＣＭ（２００μＬ）を添加して生成物を樹脂から切断し、混合物をロティサリー振盪機で３０分間撹拌した。生成物混合物を、１ｍＬのピペットフィルタチップで濾過して樹脂を除去し、濾液を別個のエッペンドルフチューブに回収した。穏やかな空気を吹き付けて、体積が約５０～１００μＬになるまで混合物を濃縮した。次いで、冷ジエチルエーテル（１ｍＬ）を添加して生成物を粉砕した。生成物をボルテックスし、遠心分離した。次いで、上清を除去し、生成物を５０μＬのＤＭＦに溶解した。さらなる洗浄のためにジエチルエーテル（１ｍＬ）を添加し、混合物をボルテックスし、遠心分離した。上清を除去し、混合物をｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって乾燥させて、予想されるＰＳＭＡ－６１７－ＮＨ_２を定量的収率（１１．６ｍｇ、１５．１μｍｏｌ）で得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_４１Ｈ_６１Ｎ_５Ｏ_９について７６７．９７ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７６８．７ｍ／ｚとなった。ＴＬＣ（２：９８）ＭｅＯＨ、生成物のＲ_ｆ＝０．２９、２５４ｎｍのＵＶランプ下で可視）。データについては図４２を参照。

【0257】

ＩＶ．ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＮＨ_２

【化19】

【0258】

エッペンドルフチューブ中のＰＳＭＡ－６１７－ＮＨ_２（１２．２ｍｇ、９．３μｍｏｌ、１当量）を（１：１９）ＤＩＰＥＡ：ＤＭＦ（２００μＬ）に溶解し、Ｆｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｏ－ＮＨＳ（２５．２ｍｇ、３８．４μｍｏｌ、４．１当量）を含む別のエッペンドルフチューブに移した。混合物を、ロティサリー撹拌機を使用して室温で２時間撹拌した。混合物を、体積が約５０から１００μＬになるまでｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって濃縮した。冷ジエチルエーテル（１ｍＬ）を添加して生成物を沈殿させた。次いで、混合物をボルテックスし、遠心分離して上清を除去した。最小量のＤＭＦ（５０μＬ）を生成物に添加して生成物を溶解し、ジエチルエーテル（１ｍＬ）を添加して粗生成物を洗浄した。混合物をボルテックスし、遠心分離して上清を除去した。次いで、生成物をｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって乾燥させた。次いで、ＭｅＣＮ（５００μＬ）を添加して、過剰のＦｍｏｃ－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｏ－ＮＨＳを溶解及び除去した。混合物を遠心分離し、過剰な試薬を含む上清を除去した。生成物をｓｐｅｅｄ－ｖａｃで再度乾燥させた。生成物ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｆｍｏｃの少量のサンプルをＭＳ用のＭｅＯＨに溶解した。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_６８Ｈ_９２ＢＦ_３Ｎ_１０Ｏ_１２について１３０９．３５ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－Ｆ］^＋＝１２９０．１ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１３３２．０ｍ／ｚとなった。ＴＬＣ（１：１９のＮＨ_４ＯＨ：ＥｔＯＨ、生成物のＲｆ＝０．４２、２５４ｎｍで可視）。図４３を参照。

【0259】

次いで、ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－Ｆｍｏｃを（１：４）ピペリジン：ＤＭＦ（２００μＬ）に溶解してＦｍｏｃを除去した。反応を、ロティサリー撹拌機中で混合することによって室温で３０分間行った。混合物を、容量が約５０～１００μＬになるまでｓｐｅｅｄ－ｖａｃを使用して濃縮した。冷ジエチルエーテル（１ｍＬ）を添加して生成物を沈殿させた。次いで、これをボルテックスし、遠心分離して上清を除去した。最小量のＤＭＦ（５０μＬ）を生成物に添加して溶解させ、ジエチルエーテル洗浄を再度行った。混合物をボルテックスし、遠心分離した。上清を除去し、次いで生成物をｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって乾燥させて、ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＮＨ_２を含む粗混合物を得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_５３Ｈ_８２ＢＦ_３Ｎ_１０Ｏ_１０について１０８７．１０ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－Ｆ］^＋＝１０６８．１ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１０８８．１ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１１１０．１ｍ／ｚとなった。ＴＬＣ（１：１９ ＮＨ_４ＯＨ：ＭｅＯＨ、生成物のＲ_ｆ＝０．２３、２５４ｎｍのＵＶランプ下で可視、ニンヒドリンで染色）。図４４を参照。

【0260】

Ｖ．ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ

【化20】

【0261】

ＤＯＴＡ－ＮＨＳ・ＨＰＦ_６・ＴＦＡ（２０．２ｍｇ、２６．２μｍｏｌ、２．８当量）を秤量し、エッペンドルフチューブ中の粗ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＮＨ_２（最大９．３μｍｏｌ、１当量）に添加した。（１：１９）ＤＩＰＥＡ：ＤＭＦ（ｖ／ｖ）を混合物に添加し、ロティサリー撹拌機を使用して室温で２時間撹拌した。最小体積（５０～１００μＬ）になるまでｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって混合物を濃縮し、混合物をジエチルエーテル（１ｍＬ）によって沈殿させた。混合物をボルテックスし、遠心分離した。上清を除去し、次いで生成物をｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって乾燥させた。（９５：２．５：２．５）ＴＦＡ：ＴＩＰＳ：Ｈ_２Ｏ（ｖ／ｖ／ｖ）（２００μＬ）を添加することによってｔｅｒｔ－ブチルを脱保護し、混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、穏やかな空気を吹き付けて、体積が５０～１００μＬになるまで混合物を濃縮した。ジエチルエーテル（１ｍＬ）を添加して生成物を沈殿させ、混合物をボルテックスし、遠心分離した。上清を除去し、次いで混合物をｓｐｅｅｄ－ｖａｃによって乾燥させて、ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡを含有する粗残渣（３３ｍｇ）を得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_６１Ｈ_９３ＢＦ_３Ｎ_１３Ｏ_１７について１３６０．３１ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－３Ｆ－２Ｈ］^＋＝１３０２．１ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１３６２．１ｍ／ｚとなった。図４５を参照。

【0262】

粗残渣（３３ｍｇ）を（１：１）ＭｅＣＮ：Ｈ_２Ｏ（＋０．１％ギ酸）（１ｍＬ）に溶解し、ＨＰＬＣ（カラムはＡｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８、５μｍ、９．４ｍｍ×２５０ｍｍ、流速は２ｍＬ／ｍｉｎ、ＵＶ－ｖｉｓ検出器は２７６ｎｍ、勾配は１９分にわたって１５％～６５％ＭｅＣＮ：Ｈ_２Ｏ（＋０．１％ギ酸））で精製した。ピークを９．２５分で回収した。生成物を５０ｍＬファルコンチューブに回収し、ドライアイス上で凍結した。完全に凍結したら、回収した画分を凍結乾燥させ、純粋なＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（２．５ｍｇ、１．８μｍｏｌ、１９％）を得た。

【0263】

ＶＩ．ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（Ｃｕ）

【化21】

【0264】

ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（Ｃｕ）は、ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（４４．２ｍｇ、３１．１μｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１．５ｍＬ）と共に０．１Ｍ ＣｕＣｌ_２－ＮａＯＡｃ（１．５５ｍＬ、ｐＨ＝４）で処理することによって合成した。混合物を６５℃のホットプレートに３０分間入れた。次いで、Ｓｐｅｅｄ－ｖａｃを使用して混合物を濃縮して、予想される銅キレートを含有する粗残渣を得た。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_６１Ｈ_９０ＢＣｕＦ_３Ｎ_１０Ｏ_１０について１４２２．８ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－３Ｆ－２Ｈ］^＋＝１３６２．８ｍ／ｚ、［Ｍ－Ｆ］^＋＝１４０２．８ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１４２３．８ｍ／ｚ、［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１４４４．８ｍ／ｚとなった。

【0265】

粗残渣（４４．２ｍｇ）を（１：１）ＭｅＣＮ：Ｈ_２Ｏ（＋０．１％ギ酸）（１ｍＬ）に溶解し、ＨＰＬＣ（カラムはＡｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８、５μｍ、９．４ｍｍ×２５０ｍｍ、流速は２ｍＬ／ｍｉｎ、ＵＶ－ｖｉｓ検出器は２７６ｎｍ、勾配は２３分にわたって１５％～４０％ＭｅＣＮ：Ｈ_２Ｏ（＋０．１％ギ酸））で精製した。生成物を５０ｍＬファルコンチューブに回収し、ドライアイス上で凍結した。完全に凍結したら、回収した画分を凍結乾燥させ、純粋なＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（Ｃｕ）（８．５ｍｇ、６．０μｍｏｌ、１９％）を得た。図４６を参照。

【0266】

ＶＩＩ．ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ又はＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（Ｃｕ）の^１８Ｆ－標識。

【0267】

８０ｎｍｏｌの^１９Ｆ－ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ又は^１９Ｆ－ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（Ｃｕ）を、ポリプロピレンチューブ内の水性ピリダジン－ＨＣｌ緩衝液（１５μＬ、１Ｍ、ｐＨ＝２）、ＤＭＦ（１５μＬ）及び水性ＫＨＦ_２（４μＬ、５ｍＭ）に再懸濁した。１８ＭｅＶのプロトンをＨ_２ ^１８Ｏに衝突させた後、陰イオン交換カラム（９ｍｇ、ＱＭＡ、塩化物形態）で捕捉しても、担体を付加した^１８Ｆ－フッ化物は得られなかった。^１８Ｆ－フッ化物を生理食塩水（１００μＬ）で反応チューブに溶出した。反応混合物を真空下、８０℃で２０分間加熱し、４０ｍＭギ酸アンモニウム水溶液（２ｍＬ）で希釈した。溶液を、半分取カラムを使用するＨＰＬＣによって精製し、４．５ｍＬ／分の流速で（３０：７０）ＭｅＣＮ／水（＋０．１％ＴＦＡ）（ｖ／ｖ）で溶出した。保持時間は、キレート化トレーサと非キレート化トレーサの両方について約１０分であった。減衰補正放射化学収率は、^１８Ｆ－ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ又は^１８Ｆ－ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（Ｃｕ）について、それぞれ１．０±０．３％（ｎ＝３）又は２．７±０．７％（ｎ＝３）であった。放射性ＨＰＬＣによって判定して、両方の標識トレーサについて９９％超の放射化学純度が達成された。比活性は、分析ＨＰＬＣシステムを使用して測定した。これは、最終生成物溶液中の注射放射能（１．５～３ｍＣｉ）を注射溶液中の質量で割ることによって計算した。注射生成物の質量は、注射から得られたＵＶ吸光度を予め調製した標準曲線と比較することによって推定した。^１８Ｆ－ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ又は^１８Ｆ－ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ_３－ＤＯＴＡ（Ｃｕ）の比活性は、それぞれ３．７±２．５Ｃｉ／μｍｏｌ（ｎ＝３）又は４．８±２．２Ｃｉ／μｍｏｌ（ｎ＝３）であった。

【0268】

結果

【0269】

表７は、ＰＳＭＡ発現ＬＮＣａＰ前立腺癌異種移植片を有するマウスにおけるＦ－１８標識ＰＳＭＡ－６１７－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡの生体内分布（注射後１時間）を示す。ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡの構造を図２に示す。図４は、ＬＮＣａＰ前立腺癌異種移植片を有するマウスにおけるＦ－１８標識ＰＳＭＡ－６１７－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡの最大強度投影ＰＥＴ画像（注射１時間後）を示す。

【0270】

【表7】

【0271】

例２の参考文献

【0272】

例３及び４：ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＲＭ２（ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－４－アミノ－１－カルボキシメチル－ピペリジン－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ２）及びＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＢＫの合成及び特性評価

【0273】

結果及び考察

【0274】

ＤＴＰＡの合成

【化22】

【0275】

ジエチレンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）は、放射性金属（例えば、^６４Ｃｕ）のシャペロンとして治療薬と診断薬の両方の合成に使用される酸性キレート剤である^２５。このキレート剤は、ペプチドへのコンジュゲーションに利用可能な５つのアームを有するので、アーム自体は、本出願に特有の設計で保護されなければならない。本発明者らの目的のために、１つの遊離アームが固相化学に望ましいが、他の４つのアームは酸不安定性保護基（化合物４）によって保護されるべきであった。次いで、最終的に酸性ＴＦＡでペプチドを樹脂から切断すると、保護基を除去することができた。この設計概念は、文献から採用された合成スキーム３につながった^{２６、２７}。

【0276】

スキーム３。ＤＴＰＡの合成スキーム。

【化23】

【0277】

化合物４の合成は、塩基性条件下で市販のエタノールアミンを２当量のｔ－ブチルブロモアセタートと混合することによって行った。ジエチルエーテルで抽出し、続いて炭酸水素ナトリウム及びブライン洗浄した後、油性残渣をシリカカラムで精製した。ほぼ３ｇの化合物１が収率７１％で精製されたため、精製はスケールアップに適していた。この化合物の^１Ｈ－ＮＭＲは高純度を示し、水及びヘキサンからのシグナルは無視できるほどであった（付録を参照）。その後、無水条件下でＤＣＭ中のＮＢＳ／ＰＰｈ_３で第三級アミノアルコールを処理することによって化合物１を２に変換し、収率７１％で精製した。反応が完了したら、トリフェニルホスフィンオキシド副生成物を、粗反応混合物を短いシリカカラムで濾過することによって除去し、その後、所望の生成物を、５：１ヘキサン／ジエチルエーテルを使用する第２のシリカカラムによって精製した。この化合物の純度を^１Ｈ－ＮＭＲにより確認し、ＥＳＩ－ＭＳは予想される臭素同位体パターンを示した（データは示さず）。

【0278】

この時点で、適切なグリシンエステルを、２を用いて二重アルキル化して、ＤＴＰＡ誘導体（３）を得た。本発明者らが最初にメチルエステルを選択したのは、鹸化によってメチル基を容易に除去し、他の４つのアームのｔｅｒｔ－ブチル保護基に影響を与えないことを想定していたからである。この目的のために、リン酸ナトリウム塩から作成したリン酸緩衝アセトニトリル水溶液中で３ａの合成を行った。残念なことに、リン酸塩の溶解度は非常に低く、周囲温度が低下すると塩が沈殿することが多かった。したがって、リン酸塩のモノ－及びジ－カリウム塩を代わりに使用して緩衝液を作成し、ＮａＯＨ又はＨＣｌ水溶液を添加してｐＨを８に調整した。この高濃度溶液は、アセトニトリルと混合すると二相系を形成した。２４時間後、混合物を濾過し、有機層を除去し、蒸発させた。残りの無機塩を除去するために、非晶質油をＣＨＣｌ_３に溶解し、再濾過した。この化合物のクロマトグラフィ精製は、酸性シリカ上で容易にプロトン化され得る３個の第三級アミノ基のために問題があった。残念なことに、シリカをトリエチルアミンで前処理し、１％トリエチルアミンで溶出しても、完全な精製は依然としてできなかった。それにもかかわらず、本発明者らは、不純物である３ａを１当量のＬｉＯＨ水溶液で処理し、メチルエステル（４）の鹸化を行うことにした。反応の完了をＴＬＣが示した後、生成物をジエチルエーテルに抽出した。質量分析により、モノ脱保護ＤＴＰＡ付加物の存在が確認され、ｍ／ｚ＝６４０で［Ｍ＋Ｎａ^＋］シグナルを示した（データは示さず）。鹸化は、いくつかの所望の材料の形成をもたらしたが、反応は、清浄でも高収率でもなかった。本発明者らは、鹸化条件が生成物の精製を妨げていると仮定し、実際、文献調査により、モノメチルテトラ－ｔｅｒｔ－ブチル保護ＤＴＰＡ（３ａ）の合成は報告されていないことが示された。代わりにベンジル保護グリシンエステルを使用すると、パラジウム触媒水素化によって所望の生成物（３ｂ）が得られた^{２６、２８}。

【0279】

３ｂを合成するために、グリシンベンジルエステルを、エーテル／カルボナート抽出を用いてベンジルグリシナートｐ－トルエンスルホナートの塩から最初に単離し、直ちに使用した。これを同様の条件（上記参照）で化合物２と反応させて、ベンジル保護ＤＴＰＡを２７％粗収率で得た。この場合も、官能基の性質のために、クロマトグラフィによる精製は困難であることが判明し、徹底的に追求することはできなかった。他の精製方法（例えば、酸性／塩基性／中性アルミナ、Ｃ１８逆相、蒸留）は調査しなかった。むしろ、粗３ｂは、パラジウム触媒水素化により、ＭｅＯＨ中で一晩かけて８１％の収率で脱保護した。完了したら、焼結ガラス漏斗で混合物を濾過することによってＰｄ／Ｃ固体を除去した。興味深いことに、化合物４は、^１Ｈ－ＮＭＲによって確認されたように、さらなる精製を必要としなかった（付録を参照）。全収率は４ステップにわたって１１．４％であった。

【0280】

新規ＡＭＢＦ_３の合成

【0281】

本プロジェクトのこの時点で、本発明者らの焦点は、ＤＴＰＡキレート剤（４）の合成から、任意のペプチド鎖に組み込むことができる新規なトリフルオロボラートの構築へと移った。ジメチルアンモニオメチルトリフルオロボラート（ＡＭＢＦ_３）（７）は、その高い加水分解安定性、調製の容易さ、及び銅支援アジド－アルキン環化付加反応の有用性のために前駆体として選択された^１９。実際、ｐＨ７．５の非常に希薄な条件（約５ｍＭ）であっても、化合物７は、図４に示すように非常に遅い一次速度で遊離フッ化物を失った^１９。このインビトロ安定性に加え、化合物７の合成が容易であることから、ＡＭＢＦ_３構造はＰＥＴイメージング剤の固有の標的となる。

【0282】

化合物６を、ジエチルエーテル中の市販のヨードメチルボロナートピナコールエステルとＮ，Ｎ－ジメチルプロパルギルアミンとの等モル反応から得た（スキーム４参照）。塩を迅速に沈殿させ、続いて濾過すると、９０％超の収率でＮＭＲ純粋な生成物が得られた（付録を参照）。ｐＨ２でＫＨＦ_２を用いてフッ素化すると、化合物７が得られた（スキーム４参照）。遊離フッ化物を、２０％ＡＣＮ／ＥｔＯＨで溶出する短いシリカプラグに通すことによって除去した。生成物の^１Ｈ－ＮＭＲはδ＝１．１５ｐｐｍを示し、ピナコールジオール不純物を示している。さらに、フッ化物塩、ＫＢＦ_４（－１５０ｐｐｍの^１９Ｆ－ＮＭＲで見られる）、溶解したケイ酸塩、及び他の特徴付けられていない無機不純物などの汚染のために、反応収率は２００％～３００％であることが多かった。これらの問題のいくつかを改善するために、粗固体をジエチルエーテルに溶解し、再濾過した。得られた白色粉末は、依然として除去されていないＫＢＦ_４不純物を除いて、^１Ｈ－ＮＭＲ及び^１９Ｆ－ＮＭＲ純粋であった。

【0283】

スキーム４。ＡＭＢＦ_３（７）の合成スキーム。

【化24】

【0284】

アルキルトリフルオロボラートの電子的性質に関する啓発的な議論は、化合物６及び７の^１Ｈ－ＮＭＲスペクトルに基づいて行うことができる。ＮＭＲ実験は、いずれもＤ_２Ｏで行ったが、これは、２つの化合物が溶解し、目的のシグナルを妨害しない唯一の溶媒であったためである。アンモニウム基とホウ素との間のメチレンプロトンのシグナルは、フッ素化の際に大きくシフトする。具体的には、６の２Ｈ一重項はδ＝３．０９ｐｐｍにあるが、化合物７では、シグナルはδ＝２．５５ｐｐｍに存在する（付録を参照）。化合物７中のホウ素は、ＮＭＲ環境をより遮蔽するはずの形式的な負電荷を有することが明らかであるが、３つのフッ素原子の存在は、メチレンプロトンにとって非常に電子吸引性の高い（それにより遮蔽性のない）環境を提供する。この相反する機能性は、アップフィールドシフトがＤ_２Ｏ及びＭｅＯＤの両方で観察されるので、実際には電子遮蔽（電子供与）として現れる（データは示さず）。メチレンシグナルの化学シフトの変化に加えて、その外観も、強い一重項から広い一重項又は場合によっては多重項に変化する。ホウ素－１１へのカップリングは、これが化合物６のスペクトルでは見られなかったので、除外することができる。したがって、これは、フッ素－１９への長距離カップリングによって、又はＮＭＲタイムスケール内にあるいくつかの配座の非柔軟性に起因して説明することができる。これらの理論のいずれかの検証は、徹底的に追求されなかった。

【0285】

化合物７及び８の^１９Ｆ－ＮＭＲに関して、^１１Ｂ－^１９Ｆカップリングから予想される１：１：１：１四重項は高分解能では観察されない。^１１Ｂの核スピンは３／２であるが、比較的緩和が速いため、標準的なパルスプログラムを使用するＮＭＲ実験では分裂パターンの可視化が困難な場合がある^{２９～３１}。見られるのは、－１４０ｐｐｍのかなり広いシグナルである。前述のように、化合物７のジエチルエーテル洗浄では、テトラフルオロホウ酸塩不純物を除去することができず、このシグナルは化合物７では－１５０ｐｐｍに現れる。しかし、次のステップで得られた修飾ＡＭＢＦ_３残基は、－１５０ｐｐｍのシグナルがない。化合物６、７、及び８の^１１Ｂ－ＮＭＲ分析は、ピークが非常に広く（５ｐｐｍ）、分割パターンが得られなかったため、追加情報が得られなかったことに留意すべきである（データは示さず）。

【0286】

クリック反応のアジドパートナーは、修飾リジン残基の形態をとった（５）。スキーム５に示すように、この短い合成プロトコルは、標準的な固相ペプチド合成を使用して、必要なトリフルオロボラート官能基を組み込むために使用することができる、潜在的に用途の広いペプチドビルディングブロックを得ることができる。Ｐｅｒｒｉｎらによって以前に使用されたアリールトリフルオロボラートは、固体支持体から切断され、ＨＰＬＣ精製された後にしかペプチドに付加することができないので、これは重要な違いである。過去２年間に、いくつかの刊行物がこの技術を描写しており、主にＲＧＤのアジド誘導体とアルキン－ＡｒＢＦ_３との間の銅触媒クリック反応に焦点を当てている^{１８、３２～３５}。アルキン置換アリールトリフルオロボラートは、ＳＰＰＳでの樹脂切断に必要な低いｐＨでは化合物が不安定なため、これらのペプチドの合成と精製には困難が生じた。実際、ＨＰＬＣに０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ溶媒系を使用しても、アリールトリフルオロボラートの分解が生じた^１９。セクション２．３の議論は、新規のリジン－ＡＭＢＦ_３とコンジュゲートした２つのペプチドの安定性を概説する。５を合成するために、ＤＣＭ中のＮａＮ_３及びＴｆ_２Ｏの混合物をＦｍｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨに添加した。この反応の機構は、リジン上のε－アミノ基の求電子剤として働くトリフルオロメタンスルホニルアジド（トリフルオロメタンスルホニルアジド）中間体を介して進行する。この二次反応中間体は、続いて、直近で放出されたアジドアニオンによってε－炭素が攻撃され、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｎ_３）－ＯＨ（５）が収率８６％で得られる。

【0287】

スキーム５。Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）（８）の合成スキーム。

【化25】

【0288】

２００１年にＳｈａｒｐｌｅｓｓらによって最初に記載されたクリック反応は、「モジュール式で、範囲が広く、高収率で、立体特異的であり、無害な副生成物のみを生成する」任意の反応として定義される^３６。増え続けるクリックケミストリーの下には、最も広く使われている例があり、６０年代初頭にＲｏｌｆ Ｈｕｉｓｇｅｎが開発した銅触媒アジド－アルキン環化付加がある^３７。このケミストリーを利用して、アルキン化合物７とアジド化合物５を用いて化合物８を合成した。８の合成は、反応条件の最適化及び再現性の問題のために困難であった（表８）。

【0289】

【表8】

【0290】

アスコルビン酸ナトリウムを使用して、アルキン基質が最初に結合するために、銅をＣｕ（ＩＩ）からＣｕ（Ｉ）にその場で還元した。すべての反応の溶媒は、およそ３：２のＡＣＮ／Ｈ_２Ｏであった。必要に応じて、この比を調整して単相系を維持した。すべての反応を４５℃で一晩行った。還元剤である１Ｍアスコルビン酸ナトリウムを新たに調製した。Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－（Ｎ_３）－ＯＨは９：１のＤＣＭ／ＭｅＯＨ中でＲ_ｆ＝０．３７を有するが、化合物８はＲ_ｆ＝０．１５でベースラインに近いので、反応の進行をＴＬＣで監視した。反応１及び２は、２４時間にわたって出発物質から生成物へ有意に変換しなかった（ＵＶ可視化）。１Ｍ炭酸水素ナトリウムによって中和されなかった反応３でも同様の問題が生じた。反応１～３と同様にして、反応４を中和し、さらにカラム精製した。溶媒系では精製が非常に遅く、生成物は多くの画分にわたって溶出した。反応５の粗混合物をＤＣＭに溶解し、ブライン（３×５ｍＬ）で洗浄して無機塩を除去した。有機抽出物はカラム精製により適していたが、全体的な反応収率は依然として低かった。反応６では、粗反応混合物の単純なＤＣＭ抽出を使用して、有機層から無機塩を除去した。次いで、有機抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製した（収率は６５％であった）。残念なことに、スケールアップ時に、この方法の再現性は低く、反応７及び８（２×スケール及び４×スケール）の収率はそれぞれ４５％及び１０％未満であった。このクリック反応がグラムスケールの条件に合致しない理由を理解するには、さらなる洞察が必要である。化合物８の全収率は、４工程にわたって５６％であると計算された（収束的合成）。

【0291】

最近、アスコルビン酸ナトリウムの還元環境を促進するために、混合物を濃縮すること、及び溶液を脱気することの両方により、反応を完了するための「ドライダウン」法が提案されている。反応９～１１を、漸増当量の銅及びアスコルビン酸塩を使用して行った。反応物は精製されなかったが、ＴＬＣプレートの目視検査により、ドライダウン法で識別可能な改善がなかったことが示された。しかし、２４時間後、反応９及び１０では、１１と比較して、有意により多くの出発物質が残存したことが判明した。これは、化学量論的、又はさらに過剰の銅を使用することがこの反応に必須であることを示唆している。

【0292】

固相ペプチド合成

【0293】

最近、Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）残基をそれらの配列に組み込む２つのペプチドが合成された。第１のペプチド、ＤＯＴＡ－及びＡＭＢＦ_３－コンジュゲートＲＭ２（ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ_３－４－アミノ－１－カルボキシメチル－ピペリジン－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ_２）を、自動ペプチド合成装置を用いて生成し、Ｚｈｉｂｏ ＬｉｕによってＨＰＬＣで精製した（図４７）^１９。樹脂結合ペプチドＲＭ２は、ＢＣ Ｃａｎｃｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＢＣＣＡ）のＬｉｎ Ｌａｂによって本発明者らに提供された。ＲＭ２は、前立腺、乳房、及びＧＩ管腫瘍に見られるガストリン放出ペプチド受容体（ＧＲＰｒ）に対して高い親和性を有するボンベシンアンタゴニストである^{２０、３８～４２}。以下の説明では、第２のペプチドであるブラジキニン由来ＡＭＢＦ_３コンジュゲートの合成に焦点を当てている（図４８）。スキーム６は、ＲＭ２コンジュゲートの合成に最初に使用され、その後、手動固相ペプチド合成にも応用された。

【0294】

キニンと総称される天然ブラジキニン及びその類似体は、疼痛及び正常な生理学的調節のシグナルとして体内に存在する^４３。これらのノナペプチドは、２つのタイプの受容体であるＢ１及びＢ２を有する^４４。後者は、細胞内のＢ１受容体よりも一般的であり、正常なノナマー及び類似のキニン類似体に結合する。逆に、Ｂ１受容体は、１アミノ酸短いキニンのみに結合し、具体的には［ｄｅｓ－Ａｒｇ^９］－ＢＫである^４４。体内のＢＫを破壊する主要な酵素は、７－８及び５－６結合で切断するアンジオテンシンＩ変換酵素（ＡＣＥ）である^４５。癌治療におけるＢＫ受容体の役割は、Ｂ２受容体が全身に高濃度であるため、魅力的な薬物標的にならないという事実によって証明される。むしろ、Ｂ１受容体は、炎症及び腫瘍増殖の増加中により一般的になるが、癌部位に特異的であるため、有望な薬物標的である^４５。この理由から、本発明者らは、Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）をＢ１受容体特異的［ｄｅｓ－Ａｒｇ^９］ブラジキニン類似体にコンジュゲートすることを選択した。

【0295】

これらのペプチドの設計は、いくつかの要因に基づいている。まず、セクション１．５で述べたように、これらの天然の親油性ペプチドは、マウスのＰＥＴスキャンにおいて肝臓及び腸に蓄積することが示されている^２１。キレート剤ＤＯＴＡなどの薬物動態学的調整剤の添加は、肝胆クリアランスの減少を促進し、画像コントラストを改善する^{２２、２３}。しかし、これはキレート剤を付加する唯一の目的ではない。名前が示唆するように、ＤＯＴＡ及びＤＴＰＡなどのキレート化官能基は、疾患の治療薬として、又は１８Ｆと同様に画像診断剤（例えば、^６８Ｇａ）のいずれかとして作用することができる特定の金属（例えば、^９０Ｙ又は^１８６Ｒｅ）をキレート化するのに役立つ^{２５、４６、４７}。この比較的新しい医学分野は、２００２年にＦｕｎｋｈｏｕｓｅｒによってセラノスティックと名付けられたもので、標的治療が疾患の可視化と攻撃の両方を可能にすることから、非常に有望視されている^{４７、４８}。本発明者らのアーキテクチャでは、ＡＭＢＦ_３は^１８Ｆ－ＰＥＴイメージングと組み合わせることで診断として機能し、ＤＯＴＡにキレートされた金属は、癌に対する潜在的な治療法として機能すると仮定される。これらの２つの機能は両方とも、高い腫瘍取込みに依存しており、これにより、Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）と天然ペプチドとの間のカチオン性リンカーが極めて重要になる。Ｍａｎｓｉらは、４－アミノ－１－カルボキシメチル－ピペリジンが、ペプチドにコンジュゲートされ、生理学的ｐＨでプロトン化されると、ＤＯＴＡ－ＲＭ２のＫ_ｄをほぼ３分の１に減少させることができることを示した^２０。

【0296】

スキーム６。ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＢＫペプチド（９）の合成スキーム。（ｉ）標準的なＦｍｏｃ合成。ＢＣＣＡのＬｉｎ Ｌａｂで行われた手順。ステップ（ｉｉ）で使用した樹脂カップリングＢＫは、共同研究により提供され、（ｉｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、３×５分、次いでＦｍｏｃ－４－アミノ－１－カルボキシメチル－ピペリジン、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、２時間、（ｉｉｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、３×５分、次いでＦｍｏｃ－Ｌ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ_３－ＯＨ（８）、ＨＢＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ、室温、２４時間、（ｉｖ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ、室温、３×５分、次いでＤＯＴＡ－トリ－ｔ－ブチル－エステル、ＮＨＳ、ＤＣＣ、ＤＣＭ、室温、２４時間、（ｖ）３０ｍＭ ＫＨＦ_２を含む９５：２．５：２．５のＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ／ＴＩＰＳ。

【化26】

【0297】

スキーム６は、ペプチド９を生成するために使用される手動固相ペプチド合成プロトコルを示す。固体支持体は、ヒドロキシメチルフェニル官能化樹脂（Ｗａｎｇ樹脂）であり、これをＬｉｎ ｌａｂによってＢＣＣＡでＦｍｏｃ保護修飾ブラジキニンにカップリングさせた。より高いインビボ安定性を得るために、この合成で使用するＢＫ類似体は、Ｈｙｐ^３及びＣｈａ^５をそれぞれ使用して、３位及び５位で修飾する（図４８）。これらの修飾により、これらの位置でのＡＣＥの効果が変化し、ペプチドの半減期が長くなり、優れたＰＥＴ画像が得られるはずである^４９。リジン残基及びアルギニン残基は、それぞれＢｏｃ（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）基及びＰｂｆ（２，２，４，６，７－ペンタメチル－ジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル）基によって保護されている。これらの基は酸に不安定であり、したがって、最終的なＴＦＡ樹脂の切断においてのみ脱離する。天然のブラジキニンは末端ロイシン残基を含まないので、アゴニストＢＫをアンタゴニスト形態に変換するために、末端ロイシン残基を付加した。すべての反応は３ｍＬスピンカラムで行う。脱保護条件は、２．５ｍＬの２０％ピペリジン／ＤＭＦでそれぞれ５分ずつ３回連続洗浄した。樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した後、第１のカップリング反応（スキーム６ｉｉ）でカチオン性スペーサを連結し、活性化剤としてＨＢＴＵを使用してＤＭＦ中で行った。各脱保護／カップリング反応（スキーム６ｉｉ～６ｉｖ）の後にカイザー（ニンヒドリン）テストを使用して、完了について試験した。簡潔には、この色試験は、第一級アミノ基の存在により、保護ペプチドと非保護ペプチドとを迅速に識別することができた^５０。これは半定量的分析方法であるが（ビーズの目視検査のみでは、保護アミンがどれだけ脱保護されているかを正確に区別することはできないため）、陽性対照を使用することで、ビーズをどれだけ加熱すべきかを決定することができた。試験は、樹脂のビーズを数個採取し、それらをニンヒドリン、エタノールに溶解したフェノール及びピリジン中のＫＣＮ水溶液で処理することを含んだ。一方の試験管は、遊離アミノ基を有するＲｉｎｋアミド樹脂を含有し（陽性対照）、他方の試験管は、問題のペプチドを有する樹脂を含有した。加熱すると、遊離末端アミンでは暗青色が予想されたが、Ｆｍｏｃ保護ペプチドでは色の変化は観察されなかった。

【0298】

次のカップリング反応（スキーム６ｉｉｉ）は同様の条件を使用したが、化合物８がカチオン性リンカーよりもはるかに価値が高いため、可能な最大の収率を確保するために２４時間混合した。ＤＯＴＡ－トリ－ｔ－ブチル－エステル（スキーム６ｉｖ）のカップリングは、最初にＤＭＦ中ＮＨＳ／ＤＣＣを用いて２４時間試みた。反応期間後、カイザーテストにより、有意な青色が依然として観察された。さらに２４時間後にも同様の結果が見られた。このようにして、溶媒をＤＣＭに切り替え、満足のいくことに、４８時間後にカイザーテストが陰性となった。ＨＢＴＵは、低分子ペプチドの合成のためにＤＯＴＡと協働することが示されているが、ＲＭ２及びＢＫ類似体に関する以前の経験から、ＤＣＣカップリングによるＤＯＴＡのＮＨＳエステルの合成がより効率的な方法であることが示されていた^{１９、５１}。

【0299】

水中９５％ＴＦＡを使用して樹脂からペプチドを切断しようとすると、困難が生じた。切断されたペプチドのＨＰＬＣトレースは、１０～２０分に多数のピークを示し、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析によって生成物を確認することはできなかった（データは示さず）。ＡＭＢＦ_３が樹脂からの配列の切断時に分解したか、又はＴＦＡが複数の位置でペプチドを潜在的に切断したかのいずれかであると仮定した。この新しい技術の目的は、加水分解安定性であったので、これは失望を招いた。それにもかかわらず、これらが極めて過酷な条件であり、したがっていかなるトリフルオロボラートも存在することができない可能性があることを認識することが重要であった。この問題を解決するために、過剰の遊離フッ化物を開裂混合物に添加して、平衡をボロン酸の方向ではなく、トリフルオロボラートの方向に押し進めるべきであることが示唆された。これは、スキーム４に示すＴｉｎｇらによって行われた動力学的研究に基づいていた。この推論に照らして、３０ｍＭのＫＨＦ_２を９５：２．５：２．５のＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ／ＴＩＰＳに添加し、開裂反応を最大２時間行った。溶液を濾過し、回収し、蒸発させ、ＭｅＯＨ／ジエチルエーテルを用いて粉砕した。沈殿した固体を５０％アセトニトリル水溶液に溶解し、図５０に示すようにＨＰＬＣによって精製した（詳細なＨＰＬＣプロトコルについては方法及び材料を参照）。１０～１１分（ピーク１）、１１．１～１２分（ピーク２）、１４～１４．８分（ピーク３）及び１４．９～１５．７分（ピーク４）のピークを回収し、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦによって分析した。最初の２つのピークのみが有用な特性評価データを提供した（図５１～図５４）。

【0300】

ブラジキニン誘導体のＨＰＬＣ精製は、ピークが両方とも本質的に広い保持時間で類似しているので困難であることが証明されている。これは合成手順の品質による可能性があるが、他のＢＫ類似体についても同様のＨＰＬＣトレースが以前に観察されている^１９。説明として、ＢＫペプチドは、それぞれ３／４及び８位のＰｒｏ及びＨｙｐ残基により、複数の立体配座を有する傾向があるということが考えられる。したがって、化学的に純粋なペプチドであっても、広いピークで溶出し得る。図５０に見られるように、ピーク１及び２は別々に溶出し、残念なことに、ピーク１（ｍ／ｚ＝１８０７）の化合物はピーク２のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ中に見出すことができ、逆もまた同様であるため、分離は完全には効果的ではなかった。ピーク１の正体は、ペプチド９の脱ホウ素生成物であると考えられる（図５５）。構造の予測同位体パターンは、観察されたＭＡＬＤＩ－ＴＯＦスペクトルと非常によく一致する（図５２）。

【0301】

図５３は、所望の生成物ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＢＫであるピーク２のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦを示す。残念なことに、困難なＨＰＬＣ精製の結果として、スペクトルは、少量の脱ボロニル化生成物に加えて、いくつかのさらなる特徴付けられていない不純物があることを示している。これはブラジキニンに特異的であると考えられており、前述のＲＭ２ペプチドでは、ＨＰＬＣのトレースがきれいになり、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦのスペクトルも非常によく一致している（図５６）。

【0302】

ペプチド９の収率はわずか５．５％であり、これはいくつかの理由により説明することができる。まず、保護されたＢＫを１６．５μｍｏｌのみ使用したため、固相合成の全体的なスケールは非常に低かった。さらに、上記のように、生成物のＨＰＬＣ精製では、所望のペプチドと同様の保持時間を有する他のピークが邪魔になった。最後に、ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＢＫの脱ホウ素は、低収率の原因の一部である。それにもかかわらず、ＭＡＤＬＩ－ＴＯＦ分析により、ブラジキニンなどの合成的に困難なペプチドでも、この方法が成功したことが確認できたのは喜ばしいことである。

【0303】

ペプチド１１のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦは、ｍ／ｚ＝［Ｍ＋Ｈ^＋］^＋１９５９．１に単一のピークを示す。この純粋なスペクトルは、ＢＫ（ペプチド９）と比較してＲＭ２の比較的容易な合成を明らかにしている。

【0304】

上記の議論に基づいて、以下の、この技術はＡＭＢＦ_３に特化したものなのか、又はアリールトリフルオロボラートにも使えるものなのか、アリールトリフルオロボラートをアミノ酸残基にコンジュゲートし、固相合成によってペプチドに組み込むことができるか、という疑問が生じる。本明細書に提示される観察結果は、ＡｒＢＦ_３を使用するよりもＬｙｓ（ＡＭＢＦ_３）官能性を使用してこれらのペプチドを合成する方がはるかに容易であることを示唆している。ＡｒＢＦ_３官能性は、開裂及び精製条件がトリフルオロボラートを破壊するので、クリッカブルペプチドのＳＰＰＳ及び精製後にのみコンジュゲートすることができる^２１。これは、トリフルオロボラートがアンモニウム基に隣接する場合、アリールトリフルオロボラート同族体と比較して、加水分解の安定性が高いことによる（図３及び図４）^１９。さらに、ＡＭＢＦ_３はインビボで安定である可能性の結果として、遊離フッ化物の骨への取り込みが少ないという本質的に有用な利点がある。新規のＡＭＢＦ_３では２つのペプチドしか合成されていないが、本発明者らは、やがてさらにいくつかのペプチドを調査する予定である。

【0305】

結論

【0306】

このプロジェクトの目的は、アリールトリフルオロボラート由来の^１８Ｆ－ＰＥＴイメージング剤が抱えるいくつかの問題点を改善することであった。具体的には、高い親油性及び固相ペプチド合成との不適合性により、それぞれ画質が低下し、合成の汎用性が制限された。この目的のために、極性を増大させるためにペプチドにコンジュゲーションすることを目的として、保護された金属キレート剤を標的とした。テトラ－ｔ－ブチル保護ＤＴＰＡ（４）を、４工程にわたって全体収率１１％で合成した。化合物３ａ及び３ｂの精製に関する問題のため、収率は不満足なものとなった。

【0307】

ＡＭＢＦ_３（７）と修飾リジン－アジドアミノ酸（５）とのクリック反応の結果として、新規なアルキルトリフルオロボラート（８）を合成した。加水分解に対するＡＭＢＦ_３のインビトロ安定性の改善を示す以前の動態研究に基づいて、この残基は、高い腫瘍親和性を有する低分子ペプチドの固相ペプチド合成に適合すると仮定された^１６。Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）残基を付加する基質としてブラジキニンアンタゴニストを選択した。ペプチドには、ＤＯＴＡ（金属キレート剤）及びカチオン性アンモニウムリンカーもカップリングされており、これらはそれぞれ低親油性及び高腫瘍取り込みに不可欠であることが知られている^２０。ペプチドをＨＰＬＣによって精製し、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析によって特性評価した。

【0308】

この新しい技術の強みは、固相ペプチド合成によるトリフルオロボラートペプチド類似体の合成における高い汎用性である。ＡＭＢＦ_３はまた、加水分解に安定しているので、骨への遊離フッ化物の取り込みを減少させることができ、本質的に有用である。この研究は、^１８Ｆ標識ペプチドを、ＤＯＴＡにキレート化された治療用金属とカップリングさせることによって、デュアルモーダルなセラノスティックの研究を可能にする。

【0309】

実験

【0310】

すべての市販の化学物質をＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ａｌｆａ－Ａｅｓａｒ社、Ｏａｋｗｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社又はＣｏｍｂｉ－Ｂｌｏｃｋ社から購入し、さらに精製することなく使用した。溶媒をＦｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社又はＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社から購入し、さらに精製することなく使用した。乾燥ＴＨＦを、指示薬としてベンゾフェノンを用いたナトリウム金属上での蒸留によって得た。使用前に少なくとも２４時間、活性化４Ａモレキュラーシーブ上に溶媒を保存することによってＤＭＦを乾燥させた。重水素化溶媒は、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社から購入した。^１Ｈ－ＮＭＲデータを３００ＭＨｚ Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで収集し、すべての化学シフトを、溶媒シグナルを基準点としてδスケールでｐｐｍで報告し、ＣＤＣｌ３についてδ７．２６、ＣＤ_３ＣＮについてδ１．９４、Ｄ_２Ｏについてδ４．７９、ＣＤ_２Ｃｌ_２についてδ５．３２、及びＣＤ_３ＯＤについてδ３．３１である。多重度は、一重項（ｓ）、二重項（ｄ）、三重項（ｔ）、四重項（ｑ）、多重項（ｍ）、又はブロードな（ｂｒ）一重項として報告される。質量スペクトルは、サンプル注入用のＷａｔｅｒｓ ２６９５ ＨＰＬＣと組み合わせたＷａｔｅｒｓ ＺＱ ＧＣ－ＭＳを使用して取得した。フラッシュカラムクロマトグラフィに使用したＨＰＬＣシリカゲルは、ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ社からのＳｉｌｉａＦｌａｓｈ Ｆ６０（２３０～４００メッシュ）シリカゲルであった。ＨＰＬＣ精製は、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ－Ｃ１８カラムを介してＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズシステムを使用して行った。検出は、２２９ｎｍでのＵＶ吸光度によって行った。勾配プログラムは以下の、溶媒Ａがアセトニトリル、溶媒Ｂが０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、０～２分で０％～５％Ａ、２～１５分で５％～２０％Ａ、１５～１６分で２０％～３５％Ａ、１６～１８分で３５％～１００％Ａ、１８～１９分で１００％～５％Ａ、流速は３ｍＬ／分、カラム温度は５０～５１℃の通りであった。文献から改変された合成手順は、参照により以下に記載されている。

【0311】

Ｎ，Ｎ－ビス［（ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル）メチル］－２－アミノエタノール（１）^２６。

【0312】

火炎乾燥した丸底フラスコ中で、ｔｅｒｔ－ブチルブロモアセタート（５．００ｍＬ、３３．９ｍｍｏｌ、２．５当量）、無水ＫＨＣＯ_３（３．４５ｇ、３４．５ｍｍｏｌ、２．５当量）及びＤＭＦ（２２ｍＬ）の混合物を０℃に冷却した。ＤＭＦ（１．６８ｍＬ）中のエタノールアミン（０．８２６ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を、不活性雰囲気下で５分間にわたってフラスコに滴加し、３０分間撹拌した。反応物を室温でさらに２４時間撹拌した。次いで、混合物を濾過し、濾液にジエチルエーテル（２５ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ_３（１７ｍＬ）を添加した。その後、水層をジエチルエーテル（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物をブライン（３×１０ｍＬ）で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥させた後、有機混合物を濾過し、減圧下で蒸発させて粘性油を得て、これをシリカカラムでのフラッシュクロマトグラフィ（石油エーテル／ジエチルエーテル、２：１、Ｒ_ｆ＝０．１７）によって精製した。

【数8】

【0313】

Ｎ，Ｎ－ビス［ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル）メチル］－２－ブロモエチルアミン（２）^２６

【0314】

火炎乾燥した丸底フラスコ中で、１（２．７７ｇ、９．５１ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解した。この溶液にトリフェニルホスフィン（２．１７ｇ、８．２７ｍｍｏｌ、０．８当量）を添加し、混合物を０℃に冷却した。次いで、Ｎ－ブロモスクシンイミド（１．４７ｇ、８．２７ｍｍｏｌ、０．８当量）を５分間にわたってゆっくり添加した。無色混合物を０℃で９０分間撹拌したが、観察可能な変色はほとんどなかった。混合物を減圧下で蒸発させて淡桃色固体を得た。これにジエチルエーテル（２８ｍＬ）を添加し、得られた白色沈殿物を濾過した。濾液を再び減圧下で蒸発させて黄色油を得て、これを短いシリカカラムに充填し、ジエチルエーテルで溶出した。粗溶出液を再度蒸発させ、最後にシリカカラムでのフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン／ジエチルエーテル、５：１、Ｒ_ｆ＝０．６５）によって精製した。

【数9】

【0315】

Ｎ，Ｎ，Ｎ’’，Ｎ’’－テトラキス［（ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル）メチル］－Ｎ’－［（メチルオキシカルボニル）メチル］ジエチレントリアミン（３ａ）^５２

【0316】

アセトニトリル（２ｍＬ）中のグリシンメチルエステル塩酸塩（３２．５ｍｇ、２５９μｍｏｌ、１当量）及び２（１８７ｍｇ、５３３μｍｏｌ、２．１当量）の溶液を作成した。次いで、Ｈ_２Ｏ（１０ｍＬ）中のＫ_２ＨＰＯ_４（３．２６ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）及びＫＨ_２ＰＯ_４（１６７ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を混合することによって作成したリン酸緩衝液（１ｍＬ、２Ｍ、ｐＨ８）を添加し、反応物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分液漏斗に移した。有機層を水層から除去し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。減圧下での蒸発により黄色油を得て、これをシリカカラム（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ／ＮＥｔ_３ １５０：３：１、Ｒ_ｆ＝０．３）に充填した。この溶媒系は、試みられた数ある中でもとりわけ（例えば、Ｈｅｘ／エーテル／ＮＥｔ_３、Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ／ＮＥｔ_３）、酸性及び塩基性官能基の性質のため、並びに溶解性の問題のために、標的化合物を高純度で単離することができなかった。

【0317】

Ｎ，Ｎ，Ｎ’’，Ｎ’’－テトラキス［（ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル）メチル］－Ｎ’－［（ベンジルオキシカルボニル）メチル］ジエチレントリアミン（３ｂ）^{５２、２７}

【0318】

ベンジルグリシナートｐ－トルエンスルホナート（２００ｍｇ、５９２μｍｏｌ、１当量）をジエチルエーテル（４ｍＬ）に添加し、Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液（１８９ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ、３当量、４ｍＬの溶液）を添加した。室温で３０分間撹拌した後、エーテル層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、ベンジルグリシンエステル（８９ｍｇ、５４０μｍｏｌ）を得た。この中間体を、標的化合物３ｂに向けてさらに精製することなく使用した。リン酸緩衝液（１ｍＬ、２Ｍ、ｐＨ＝８）を、アセトニトリル（２ｍＬ）に溶解したベンジルグリシンエステル（６０ｍｇ、３６４μｍｏｌ、１当量）及び２（２８０ｍｇ、７９５μｍｏｌ、２．２当量）に添加した。この二相性反応物を室温で２４時間撹拌した。沈殿した塩を濾別し、有機層を単離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。次いで、半固体残渣をクロロホルムに溶解し、濾過し、再び蒸発させた。得られた黄色油をフラッシュクロマトグラフィ（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ／ＮＥｔ_３ １５０：３：１、Ｒ_ｆ＝０．３５）用のシリカカラムに充填した。３ａと同様に、シリカクロマトグラフィによる完全な精製は、塩基性官能基の性質のために困難であった。

【0319】

Ｎ，Ｎ，Ｎ’’，Ｎ’’－テトラキス［（ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル）メチル］－Ｎ’－［酢酸］ジエチレントリアミン（４）^{５２、２７}

【0320】

３ｂ（７６ｍｇ、１０８μｍｏｌ、１当量）をメタノール（１ｍＬ）に溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ（約２０ｍｇ、５０％湿潤）を添加した。反応物を水素雰囲気下（２つの大きなバルーン）、室温で２４時間撹拌した。反応物を焼結ガラス漏斗で濾過し、減圧下で蒸発させて粘性黄色油を得た。

【数10】

【0321】

Ｆｍｏｃ－（Ｌ）－Ｌｙｓ（Ｎ_３）－ＯＨ（５）^２４

【0322】

０℃で、ＮａＮ_３（７．３ｇ、１１３ｍｍｏｌ）をＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）とＤＣＭ（３０ｍＬ）の混合物に添加した。これに、Ｔｆ_２Ｏ（３．８ｍＬ、２２．４５ｍｍｏｌ）を３０分間かけて滴下した。この反応物を０℃で５時間撹拌し、続いてＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ_２ＣＯ_３の飽和水溶液（１×５０ｍＬ）で洗浄し、さらに精製することなく使用した。次いで、１：１のＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（３３ｍＬ）中のＫ_２ＣＯ_３（５．６ｇ、３９．５ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ（約２５ｍｇ）及びＦｍｏｃ－（Ｌ）－Ｌｙｓ－ＯＨ（４．７８ｇ、１３ｍｍｏｌ）の混合物を生成した。これに有機抽出物を３０分間かけて滴加し、混合物を室温で一晩さらに撹拌した。２．５Ｎ ＨＣｌ（１５０ｍＬ）を使用して反応をクエンチし、その後、生成物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、ブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させた。混合物を濾過し、減圧下で蒸発させて粗油を得て、これを直ちにフラッシュクロマトグラフィ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配０．５：９９．５～１：９９）用のシリカカラムに充填した。

【数11】

【0323】

Ｎ－プロパルギル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－アンモニオメチル－ボロニルピナコラート（６）^５３

【0324】

火炎乾燥した丸底フラスコ中で、Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパルギルアミン（０．６７ｍＬ、６．２７ｍｍｏｌ、１当量）をジエチルエーテル（２８ｍＬ）に添加し、反応物を４５℃に加熱した。ヨードメチルピナコールボロナート（１．１４４ｍＬ、６．２７ｍｍｏｌ、１当量）を溶液に滴加した。添加直後に混合物は濁り、続いて白色固体が溶液から沈殿した。反応物をさらに１５分間撹拌し、生成物を濾過し、冷ジエチルエーテルで洗浄した。残渣を高真空下で乾燥させて、薄片状の白色固体を得た。

【数12】

【0325】

Ｎ－プロパルギル－Ｎ，Ｎ－ジメチル－アンモニオメチル－トリフルオロボラート（７）

【0326】

６（１ｇ、４．４６ｍｍｏｌ、１当量）をアセトニトリル（１２ｍＬ）に溶解し、ＫＨＦ_２水溶液（３Ｍ、４．２５ｍＬ、１２．８ｍｍｏｌ、２．８当量）及びＨＣｌ（４Ｍ、４．２５ｍＬ、１７ｍｍｏｌ、３．８当量）を４５℃で２時間添加することによってフッ素化した。透明なオレンジ色の溶液を、濃ＮＨ_４ＯＨ水溶液（約１．５ｍＬ）を添加してｐＨ７にすることによってクエンチした。この混合物をより大きな丸底フラスコに移し、２０％アセトニトリル／エタノール溶液（１００ｍＬ）を添加する。シリカ（４０ｍＬ）をこの溶液に直接入れ、混合物を２０分間撹拌した。それまでは明るい黄色だった溶液は、色が大幅に失われ、無色透明の混合物に変化した。この混合物を短いシリカカラムに充填し、これを焼結ガラス漏斗にセットし、２０％アセトニトリル／エタノールで溶出した。減圧下で蒸発させ、続いて高真空で乾燥させた後、淡黄色固体を単離した。これを洗浄し、冷ジエチルエーテル（２０ｍＬ）で濾過して、ＮＭＲ純粋な双性イオンを生成した。ヨウ化物（ＥＳＩ－ＭＳによって観察可能）及びＫＢＦ_４（^１９Ｆ－ＮＭＲで見られる）に加えて、生成物中に過剰の塩が残っているため、生成物の収率は定量的よりも高かった。さらなる反応のために、７の合成の収率は定量的であると仮定した。

【数13】

【0327】

Ｆｍｏｃ－（Ｌ）－Ｌｙｓ－ε－１，２，３－トリアゾール－Ｎ，Ｎ－ジメチル－アンモニオメチル－トリフルオロボラート［Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）］（８）

【0328】

ＣｕＳＯ_４水溶液（１Ｍ、０．７５ｍＬ、０．７５ｍｍｏｌ）及びアスコルビン酸ナトリウム（１Ｍ、１．５ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）の混合物を、アセトニトリル／水３：２（２．５ｍＬ）に溶解した７（２５０ｍｇ、約０．７５ｍｍｏｌ、約３当量）に添加した。５（１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、１当量）を最小量のアセトニトリルに溶解し、混合物に滴加し、４５℃で一晩撹拌した。いくつかのＣｕ塩又はアスコルビン酸塩が反応全体にわたって沈殿することが一般的であった。反応をシリカＴＬＣで監視し、出発物質は２０～２４時間の反応時間の間に消失した。スケールアップ時に再現性が常に達成されるとは限らず、多くの場合、反応を完了させるために、より多くの触媒、還元剤、又はアルキンを添加しなければならなかった。沈殿物を濾過し、反応混合物を減圧下で蒸発させた。暗赤色残渣を１：１のＭｅＯＨ／ＤＣＭに溶解し、濾過し、再び蒸発させた。このプロセスを再度繰り返して、５：９５のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用してすべての過剰な塩及び不溶性不純物を除去した。最終的な粗油は５：９５のＭｅＯＨ／ＤＣＭに完全に溶解し、続いてシリカカラムに充填し、ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配系（５％～１０％）を用いたフラッシュクロマトグラフィによって溶出した。

【数14】

【0329】

ＤＯＴＡ－（（Ｌ）－Ｌｙｓ－ε－１，２，３－トリアゾール－Ｎ，Ｎ－ジメチル－アンモニオメチル－トリフルオロボラート）－４－アミノ－１－カルボキシメチル－ピペリジン－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｃｈａ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ＣＯＯＨ（９）

【0330】

この直鎖修飾ペプチドは、Ｗａｎｇ（ヒドロキシメチルフェニル）樹脂上で標準的なＦｍｏｃ固相ペプチド合成化学を用いて調製した。非天然型のブラジキニン（Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｐｒｏ－Ｈｙｐ－Ｇｌｙ－Ｃｈａ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ＣＯＯＨ）を樹脂に予め充填し、カチオン性スペーサ、Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）残基及びＤＯＴＡキレート剤を結合させるための足場として使用した。樹脂充填値は、０．４４ｍｍｏｌ／ｇで予め計算した。乾燥した樹脂（３７．５ｍｇ、１６．７μｍｏｌ）を３ｍＬスピンカラムに添加し、ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中で２時間膨潤させた後、最初のカップリング反応を行った。ＤＭＦを濾別し、２０％ピペリジン／ＤＭＦ（３×２．５ｍＬ、各５分間）を用いてＦｍｏｃを除去した。樹脂をＤＭＦ（３×２．５ｍＬ）、ＤＣＭ（３×２．５ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×２．５ｍＬ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ－４－アミノ－１－カルボキシメチル－ピペリジン（２５ｍｇ、６５μｍｏｌ、４当量）、ＨＢＴＵ（２５ｍｇ、６５μｍｏｌ、４当量）及びＤＩＰＥＡ（１１．４μＬ、６５μｍｏｌ、４当量）をＤＭＦ（２．５ｍＬ）に溶解し、キャップ付きスピンカラムに添加した。反応物を室温で２時間振盪した。溶液をスピンカラムを通して濾過し、次のカップリング反応の前にＤＭＦ（３×２．５ｍＬ）、ＤＣＭ（３×２．５ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×２．５ｍＬ）で洗浄した。８（１４ｍｇ、２５μｍｏｌ、１．５当量）、ＨＢＴＵ（１０ｍｇ、２５μｍｏｌ、１．５当量）及びＤＩＰＥＡ（５．６μＬ、３２．５μｍｏｌ、２当量）をＤＭＦ（２．５ｍＬ）に溶解し、キャップ付きスピンカラムに添加した。この反応物を室温で一晩振盪した。再び、溶液をスピンカラムを通して濾過し、次のカップリング反応の前にＤＭＦ（３×２．５ｍＬ）、ＤＣＭ（３×２．５ｍＬ）、及びＤＭＦ（３×２．５ｍＬ）で洗浄した。ＤＯＴＡ－トリ－ｔ－ブチル－エステル（２４ｍｇ、４１．６μｍｏｌ、２．５当量）、ＮＨＳ（４．６ｍｇ、４１．６μｍｏｌ、２．５当量）及びＤＣＣ（８．５ｍｇ、４１．６μｍｏｌ、２．５当量）をＤＣＭ（２．５ｍＬ）に溶解し、キャップ付きスピンカラムに添加した。この反応物を室温で４８時間振盪した。この最終的な付属物は保護Ｆｍｏｃ基を有していなかったので、ストック溶液ＴＦＡ（９．５ｍＬ）、Ｈ_２Ｏ（０．２５ｍＬ）、ＴＩＰＳ（０．２５ｍＬ）及び３０ｍＭ ＫＨＦ_２（１０μＬの３Ｍ ＫＨＦ_２）から作成したカクテル（２．５ｍＬ）を使用して、ペプチドを樹脂から切断した。混合物を室温で２時間振盪し、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を０℃で１：１１のＭｅＯＨ／Ｅｔ_２Ｏ（２４ｍＬ）で粉砕して白色固体を得た。混合物を２４本の１．５ｍＬエッペンドルフチューブに均等に分け、遠心分離してジエチルエーテル上清を除去した。各チューブにジエチルエーテル（１ｍＬ）を再度添加し、遠心分離し、上清を除去した。残留固体を１：１のＨ_２Ｏ／アセトニトリル（合計２ｍＬ）で回収し、ＨＰＬＣ（上記の条件）によって精製した。

【0331】

例３及び４の参考文献

【0332】

例５：ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＴＡＴＥ及びＤＯＴＡ－Ｂｎ－ＮＨ－Ｌｙｓ－（ＡＭＢＦ３）－ＮＨＦｍｏｃ。

【0333】

ＯｃｔｒｅｏＴＡＴＥ

【化27】

【0334】

ＴＡＴＥを含む１９．９ｍｇの樹脂（４．６μｍｏｌ、１当量）をＤＭＦで３０分間膨潤させた。遠心分離し、上清を除去することによってＤＭＦを除去した。ＤＭＦ中の６ｍＭのタリウム（ＩＩＩ）トリフルオロアセタート（７１３μＬ、４．２８μｍｏｌ、０．９３当量）を添加し、反応物を室温で８時間撹拌した。樹脂を遠心分離し、上清を除去した。ＤＭＦ（２００μＬ）を使用して３回洗浄した。次いで、（５００μＬ）のＤＣＭを添加し、遠心分離した。上清を除去し、サンプルをｓｐｅｅｄ ｖａｃによって乾燥させた。樹脂の少量のサンプルをマイクロピペットチップですくい取り、別のエッペンドルフチューブに入れ、（３：７）ＨＦＩＰ：ＤＣＭ（１００μＬ）を使用して、室温で１０分間、生成物を切断した。フィルターピペットチップを使用して混合物を濾過し、濾液を別のエッペンドルフチューブに回収した。穏やかに空気を吹き付けて、混合物を乾燥させ、ジエチルエーテルを添加して生成物を粉砕した。混合物を遠心分離し、上清を除去した。ＭｅＯＨ（２００μＬ）を添加してＭＳ用の生成物を溶解した。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_１０１Ｈ_１２７Ｎ_１１Ｏ_１５Ｓ_２Ｓｉ_２＝１８５５．５ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ－Ｔｒｔ＋２Ｈ］^＋＝１６１５．８ｍ／ｚ、［Ｍ－ＴＢＳ－ｔＢｕ］^＋＝１６８４．９ｍ／ｚとなった。

【化28】

【0335】

（１：４）ピペリジン：ＤＭＦ（２００μＬ）を樹脂に添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を遠心分離し、上清を除去した。ＤＭＦ（３×２００μＬ）を添加して樹脂を洗浄した。混合物をボルテックスし、遠心分離した。上清を除去し、混合物をｓｐｅｅｄ ｖａｃによって乾燥させた。樹脂の少量のサンプルをマイクロピペットチップですくい取り、別のエッペンドルフチューブに入れ、（３：７）ＨＦＩＰ：ＤＣＭ（１００μＬ）を使用して、室温で１０分間、生成物を切断した。フィルターピペットチップを使用して混合物を濾過し、濾液を別のエッペンドルフチューブに回収した。穏やかに空気を吹き付けて、混合物を乾燥させ、ジエチルエーテルを添加して生成物を粉砕した。混合物を遠心分離し、上清を除去した。ＭｅＯＨ（２００μＬ）を添加してＭＳ用の生成物を溶解した。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_８６Ｈ_１１７Ｎ_１１Ｏ_１３Ｓ_２Ｓｉ_２について１６３３．２ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ］^＋＝１６６３．０、［Ｍ＋２ＣＨ_３ＣＮ＋２Ｈ］^＋＝１３９０．７ｍ／ｚとなった。

【化29】

【0336】

Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＮＨＳ（１５．１ｍｇ、２３．０μｍｏｌ、５当量）を秤量し、２００μｌの（１：１９）ＤＩＰＥＡ：ＤＭＦに溶解した。次いで、溶液を樹脂に添加し、混合し、室温で２時間撹拌した。混合物を遠心分離し、上清を除去した。ＤＭＦ（３×２００μＬ）を添加して樹脂を洗浄した。混合物をボルテックスし、遠心分離した。上清を除去し、混合物をｓｐｅｅｄ ｖａｃによって乾燥させた。樹脂の少量のサンプルをマイクロピペットチップですくい取り、別のエッペンドルフチューブに入れ、（３：７）ＨＦＩＰ：ＤＣＭ（１００μＬ）を使用して、室温で１０分間、生成物を切断した。フィルターピペットチップを使用して混合物を濾過し、濾液を別のエッペンドルフチューブに回収した。穏やかに空気を吹き付けて、混合物を乾燥させ、ジエチルエーテルを添加して生成物を粉砕した。混合物を遠心分離し、上清を除去した。ＭｅＯＨ（２００μＬ）を添加してＭＳ用の生成物を溶解した。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_１１３Ｈ_１４８ＢＦ_３Ｎ_１６Ｏ_１６Ｓ_２Ｓｉ_２について２１７３．０３ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋ＣＨ_３ＣＮ＋Ｎａ］^＋＝２２３６．５ｍ／ｚとなった。

【化30】

【0337】

（１：４）ピペリジン：ＤＭＦ（２００μＬ）を樹脂に添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を遠心分離し、上清を除去した。（３×２００μＬ）ＤＭＦを添加して樹脂を洗浄した。（２００μＬ）のＤＣＭを添加し、遠心分離した。ＤＣＭを除去し、樹脂をｓｐｅｅｄ ｖａｃによって乾燥させた。樹脂の少量のサンプルをマイクロピペットチップですくい取り、別のエッペンドルフチューブに入れ、（３：７）ＨＦＩＰ：ＤＣＭ（１００μＬ）を使用して、室温で１０分間、生成物を切断した。フィルターピペットチップを使用して混合物を濾過し、濾液を別のエッペンドルフチューブに回収した。穏やかに空気を吹き付けて、混合物を乾燥させ、ジエチルエーテルを添加して生成物を粉砕した。混合物を遠心分離し、上清を除去した。ＭｅＯＨ（２００μＬ）を添加してＭＳ用の生成物を溶解した。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_９８Ｈ_１３８ＢＦ_３Ｎ_１６Ｏ_１４Ｓ_２Ｓｉ_２について１９５２．３ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１９７５．４ｍ／ｚとなった。

【化31】

【0338】

ＤＯＴＡ－ＮＨＳ・ＨＰＦ_６・ＴＦＡ（８．７５ｍｇ、１１．５μｍｏｌ、２．５当量）を（１：１９）ＤＩＰＥＡ：ＤＭＦ（２００μＬ）に溶解し、混合物をＨ_２Ｎ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＴＡＴＥと共に樹脂に添加し、室温で２時間撹拌した。樹脂をＤＭＦ（３×２００μＬ）で洗浄した。混合物をボルテックスし、遠心分離した。上清を除去した。樹脂をｓｐｅｅｄ ｖａｃによって乾燥させた。樹脂の少量のサンプルをマイクロピペットチップですくい取り、別のエッペンドルフチューブに入れ、（３：７）ＨＦＩＰ：ＤＣＭ（１００μＬ）を使用して、室温で１０分間、生成物を切断した。フィルターピペットチップを使用して混合物を濾過し、濾液を別のエッペンドルフチューブに回収した。穏やかに空気を吹き付けて、混合物を乾燥させ、ジエチルエーテルを添加して生成物を粉砕した。混合物を遠心分離し、上清を除去した。ＭｅＯＨ（２００μＬ）を添加してＭＳ用の生成物を溶解した。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_１１４Ｈ_１６４ＢＦ_３Ｎ_２０Ｏ_２１Ｓ_２Ｓｉ_２について２３３７．１ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｋ］^＋＝２３７５．４ｍ／ｚとなった。

【化32】

【0339】

（９５：２．５：２．５）ＴＦＡ：ＴＩＰＳ：Ｈ_２Ｏ（２００μＬ）を樹脂に添加して、ユニバーサル脱保護を行うと共に、ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）－ＴＡＴＥを樹脂から切断した。樹脂を室温で３０分間撹拌した。ピペットチップフィルターを用いて濾液を回収し、樹脂を除去した。穏やかに空気を吹き付けて、体積が約５０～１００μＬになるまで濾液を濃縮した。ジエチルエーテル（１ｍＬ）を添加して生成物を粉砕して、混合物をボルテックスし、遠心分離した。上清を除去し、混合物をｓｐｅｅｄ ｖａｃによって乾燥させた。収量は３．２ｍｇであった。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_７９Ｈ_１１４ＢＦ_３Ｎ_２０Ｏ_２１Ｓ_２について１８１１．８ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋２Ｎａ］^＋＝１８５５．１ｍ／ｚとなった。

【0340】

ＤＯＴＡ－Ｂｎ－ＮＨ－Ｌｙｓ－（ＡＭＢＦ３）－ＮＨＦｍｏｃの合成：

【化33】

【0341】

エッペンドルフチューブ中のＤＯＴＡ－Ｂｎ－ＮＨ_２（１０ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、１当量）を（２：１８）ＤＩＰＥＡ：ＤＭＦ（２００μＬ）に溶解し、Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＮＨＳ（１４ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、１．５当量）の別のエッペンドルフチューブに移した。混合物を、ロティサリー撹拌機を使用して室温で２時間撹拌した。次いで、１ｍＬの冷ジエチルエーテルを添加して生成物を沈殿させた。次いで、これをボルテックスし、遠心分離して上清を除去した。最小量のＤＭＦ（約５０μＬ）を生成物に添加して生成物を再溶解し、ジエチルエーテル（１ｍＬ）を添加して粗生成物を再洗浄した。混合物をボルテックスし、遠心分離して上清を除去した。次いで、生成物を乾燥させ、次いで、ＭｅＣＮ（約５００μＬ）を添加して、過剰のＦｍｏｃ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＮＨＳを再溶解及び除去した。混合物を遠心分離し、過剰な試薬を含む上清を除去した。生成物を再度ｓｐｅｅｄ ｖａｃで乾燥させた。生成物の少量のサンプルをＭＳ用のＭｅＯＨに溶解した。ＥＳＩ－ＭＳ（＋）：Ｃ_５０Ｈ_６６ＢＦ_３Ｎ_１０Ｏ_１１について１０５０．９４ｍ／ｚと計算され、実測値は［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１０５１．７ｍ／ｚとなり、［ＴＬＣ（１：１９のＮＨ_４ＯＨ：ＥｔＯＨ、生成物のＲｆ＝０．２、２５４ｎｍで可視）であった。

【0342】

上記のＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ_３）を蛍光分子にさらにコンジュゲートさせることができることが、当業者にはさらに理解される。そのような例は、マルチモーダルイメージング用途の当業者によって考慮され得る多くの例の１つとして、以下に提供される。そのような例は、実用的であることが見出されるＤＯＴＡ、Ｃｙ７又はＬｙｓＡＭＢＦ_３に限定されないであろう。

【化34】

【0343】

本発明は、１つ又は複数の実施形態に関して説明されている。しかし、本発明の範囲から逸脱することなく、多数の変形及び修正を行うことができることは、当業者には明らかであろう。本発明の範囲は、例に記載された好ましい実施形態によって限定されるべきではなく、全体としての説明と一致する最も広い解釈が与えられるべきである。

【0344】

優先権出願．本出願は、２０１８年１２月１８日に出願された米国特許出願第６２／７８１，５８４号の優先権を主張し、その全体が参照により組み込まれる。
本発明の一態様を以下に示すが、本発明はそれに限定されない。
［発明１］
化合物又は分子複合体であって、前記化合物又は分子複合体が、放射性金属同位体又は非放射性金属同位体とのキレート化のために構成された金属キレート剤と、 ^１９ Ｆ／ ^１８ Ｆ交換用に構成されたトリフルオロボラート（ＢＦ _３ ）含有部分又は ^１８ Ｆ標識トリフルオロボラートへの変換が可能なボロナート前駆体と、を含む、化合物又は分子複合体。
［発明２］
化合物又は分子複合体であって、前記化合物又は分子複合体が、細胞標的化ドメインと、放射性金属同位体又は非放射性金属同位体とのキレート化のために構成された金属キレート剤と、 ^１９ Ｆ／ ^１８ Ｆ交換用に構成されたトリフルオロボラート（ＢＦ _３ ）含有部分又は ^１８ Ｆ標識トリフルオロボラートへの変換が可能なボロナート前駆体と、を含む、化合物又は分子複合体。
［発明３］
前記細胞標的化ドメインが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、ペプチド模倣物、核酸アプタマー、大環状分子、ステロイド、又は小分子を含み、前記細胞標的化ドメインが、細胞マーカーに特異的に結合する、発明２に記載の化合物又は分子複合体。
［発明４］
前記細胞標的化ドメインが、ＬＬＰ２Ａ、ＰＳＭＡ－６１７、ＴＡＴＥ、又はペプチドＤ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ _２ を含む、発明３に記載の化合物又は分子複合体。
［発明５］
前記細胞標的化ドメインが、（ｉ）標的細胞の抗原に特異的に結合する抗体又は抗体誘導体又は断片、あるいは（ｉｉ）前記抗原に特異的に結合する抗体又は抗体誘導体又は断片に特異的に結合するタンパク質ドメインを含む、発明２から４のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体。
［発明６］
前記金属キレート剤が、前記ＢＦ _３ 含有部分を含有するリンカーによって前記細胞標的化ドメインに連結されている、発明２から５のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体。
［発明７］
前記リンカーが複数のＢＦ _３ 含有部分を含む、発明６に記載の化合物又は分子複合体。
［発明８］
前記リンカーがペプチドリンカーである、発明６又は７に記載の化合物又は分子複合体。
［発明９］
前記リンカーがＬｙｓ（ＡＭＢＦ _３ ）を含む、発明８に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１０］
前記金属キレート剤が、キレート化されていないか又は非放射性金属同位体でキレート化されており、前記ＢＦ _３ 含有部分が ^１８ Ｆ標識されている、発明１～９のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１１］
前記金属キレート剤が放射性金属同位体でキレート化されており、前記ＢＦ _３ 含有部分が ^１９ Ｆ標識されている、発明１～９のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１２］
前記金属キレート剤が放射性金属同位体でキレート化されており、前記ＢＦ _３ 含有部分が ^１８ Ｆ標識されている、発明１～９のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１３］
前記放射性金属同位体が、アルファ放射体、ベータ放射体又はオージェ放射体である、発明１１又は１２に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１４］
前記金属キレート剤が、ＤＯＴＡ及び誘導体；ＤＯＴＡＧＡ；ＮＯＴＡ；ＮＯＤＡＧＡ；ＮＯＤＡＳＡ；ＣＢ－ＤＯ２Ａ；３ｐ－Ｃ－ＤＥＰＡ；ＴＣＭＣ；ＤＯ３Ａ；ＤＴＰＡ並びにＣＨＸ－Ａ’’－ＤＴＰＡ及び１Ｂ４Ｍ－ＤＴＰＡから選択されてもよいＤＴＰＡ類似体；ＴＥＴＡ；ＮＯＰＯ；Ｍｅ－３，２－ＨＯＰＯ；ＣＢ－ＴＥ１Ａ１Ｐ；ＣＢ－ＴＥ２Ｐ；ＭＭ－ＴＥ２Ａ；ＤＭ－ＴＥ２Ａ；サルコファジン並びにＳａｒＡｒ、ＳａｒＡｒ－ＮＣＳ、ｄｉａｍＳａｒ、ＡｍＢａＳａｒ、及びＢａＢａＳａｒから選択されてもよいサルコファジン誘導体；ＴＲＡＰ；ＡＡＺＴＡ；ＤＡＴＡ及びＤＡＴＡ誘導体；Ｈ２－ｍａｃｒｏｐａ又はその誘導体；Ｈ２ｄｅｄｐａ、Ｈ４ｏｃｔａｐａ、Ｈ４ｐｙ４ｐａ、Ｈ４Ｐｙｐａ、Ｈ２ａｚａｐａ、Ｈ５ｄｅｃａｐａ、及び他のピコリン酸誘導体；ＣＰ２５６；ＰＣＴＡ；ＤＯＴＰ；ＨＥＨＡ；Ｃ－ＮＥＴＡ；Ｃ－ＮＥ３ＴＡ；ＨＢＥＤ；ＳＨＢＥＤ；ＢＣＰＡ；ＣＰ２５６；ＹＭ１０３；サイクラム；ＤｉａｍＳａｒ；デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）及びＤＦＯ誘導体；Ｈ６ｐｈｏｓｐａ；トリチオールキレート；メルカプトアセチル；ヒドラジノニコチンアミド；ジメルカプトコハク酸；１，２－エチレンジイルビス－Ｌ－システインジエチルエステル；メチレンジホスホナート；ヘキサメチルプロピレンアミンオキシム；及びヘキサキス（メトキシイソブチルイソニトリル）；ポルフィリン、クロリン、テキサフリン、及びフタロシアニンからなる群から選択されるキレート剤である、発明１～１３のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１５］
前記金属キレート剤がＤＯＴＡ及びＤＯＴＡ誘導体から選択される、発明１～１３のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１６］
前記ＢＦ _３ 含有部分が
［化１］

であるか、あるいは表３又は４に示される基であり、式中、各Ｒは独立してＣ _１ ～Ｃ _５ 直鎖又は分岐アルキル基である、発明１～１５のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１７］
ＤＯＴＡ－ＡＭＢＦ３－ＰＥＧ２－ＬＬＰ２Ａ；
ＰＳＭＡ－６１７－ＬｙｓＡＭＢＦ３－ＤＯＴＡ；
ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ３）－ＴＡＴＥ；及び
ＤＯＴＡ－Ｌｙｓ－ＡＭＢＦ３－Ｐｉｐ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｔａ－Ｌｅｕ－ＮＨ _２
からなる群から選択される、発明２に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１８］
前記化合物又は分子複合体がフルオロフォア又は他の発光部分をさらに含む、発明１～１７のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体。
［発明１９］
Ｌｙｓ（ＡＭＢＦ _３ ）を含む化合物である、発明１又は１８に記載の化合物又は分子複合体。
［発明２０］
前記金属キレート剤がＤＯＴＡである、発明１、１８又は１９に記載の化合物又は分子複合体。
［発明２１］
前記化合物がＤＯＴＡ－Ｂｎ－ＮＨ－Ｌｙｓ－（ＡＭＢＦ _３ ）を含む、発明２０に記載の化合物又は分子複合体。
［発明２２］
発明２から１８のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体であって、
前記化合物又は分子複合体が、前記ＢＦ _３ 含有部分と前記細胞標的化ドメインの両方を含み、
^１８ Ｆで標識された化合物又は分子複合体を使用して、疾患又は状態の細胞マーカーの存在を確認するために対象をイメージングすることと、
治療用放射性同位体でキレート化された前記化合物又は分子複合体を使用して、前記疾患又は状態を治療することと、
に使用するための、化合物又は分子複合体。
［発明２３］
対象の疾患又は状態を画像化及び／又は治療するために二重特異性抗体と組み合わせて使用するための、発明１あるいは発明６から２２のいずれか一に記載の化合物又は分子複合体であって、前記化合物又は分子複合体が、前記ＢＦ _３ 含有部分を含む化合物であり、前記細胞標的化ドメインを含まず、前記二重特異性抗体が、（ｉ）前記疾患又は状態の細胞マーカーと（ｉｉ）前記金属キレート剤に特異的である、化合物又は分子複合体。
［発明２４］
前記化合物又は分子複合体が、前記二重特異性抗体との複合体として前記対象に投与するためのものである、発明２３に記載の化合物又は分子複合体。
［発明２５］
前記二重特異性抗体が、前記二重特異性抗体が前記細胞マーカーに結合するプレ標的化ステップにおいて、前記化合物又は分子複合体を前記対象に投与する前に前記対象に投与するためのものである、発明２３に記載の化合物又は分子複合体。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31】

【図32】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【図37】

【図38】

【図39】

【図40】

【図41】

【図42】

【図43】

【図44】

【図45】

【図46】

【図47】

【図48】

【図49】

【図50】

【図51】

【図52】

【図53】

【図54】

【図55】

【図56】

【図57】

【図58】

【図59】

【図60】