特許 7674278 抗ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）抗原結合タンパク質およびその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-04-28

(45)【発行日】2025-05-09

(54)【発明の名称】抗ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）抗原結合タンパク質およびその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/30 20060101AFI20250430BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20250430BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20250430BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20250430BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20250430BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20250430BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20250430BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20250430BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20250430BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20250430BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20250430BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20250430BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20250430BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20250430BHJP

【ＦＩ】

C07K16/30 ZNA

C07K19/00

A61K39/395 N

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61P35/00

A61K35/12

A61P35/02

A61P35/04

【請求項の数】 49

(21)【出願番号】P 2021578186

(86)(22)【出願日】2020-07-02

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-09-02

(86)【国際出願番号】 US2020040642

(87)【国際公開番号】W WO2021003357

(87)【国際公開日】2021-01-07

【審査請求日】2023-06-30

(31)【優先権主張番号】62/870,232

(32)【優先日】2019-07-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/021,826

(32)【優先日】2020-05-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/020,177

(32)【優先日】2020-05-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(73)【特許権者】

【識別番号】597160510

【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(72)【発明者】

【氏名】ブレイ， ケビン エー．

(72)【発明者】

【氏名】デルフィーノ， フランク

(72)【発明者】

【氏名】ディリロ， デイビッド

(72)【発明者】

【氏名】フランクリン， マシュー シー．

(72)【発明者】

【氏名】カーシュナー， ジェシカ

(72)【発明者】

【氏名】マクドナルド， ダグラス

【審査官】坂井田 京

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１０／１０６４３１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１８－５２５９７３（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＨＬＡ－Ａ２提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１ペプチド（ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド）複合体に特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片であって、
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号４の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号６のＨＣＤＲ２、配列番号８のＨＣＤＲ３、配列番号１２の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号１４のＬＣＤＲ２および配列番号１６のＬＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に特異的に結合する、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｘ線結晶解析によって４．０Å以上の分解能で決定されるときに、前記ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチドのアミノ酸Ｍ１６０、Ｗ１６１、およびＱ１６４と相互作用する、抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に特異的に結合するが、ＢＣＬ９Ｌ １３５１～１３５９（配列番号２７３）、ＧＲＩＤ１ ７～１５（配列番号２７４）、ＺＤＨＨＣ１ ３７６～３８４（配列番号２７６）、ＩＴＣＨ ８０７～８１５（配列番号２７７）、およびＵＲＢ１ １８５３～１８６１（配列番号２８０）からなる群から選択される１つ以上のオフターゲットペプチドに特異的に結合しない、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片であって、ｉ）前記１つ以上のオフターゲットペプチドでパルスされた細胞に結合する前記抗体またはその抗原結合断片の、ｉｉ）非パルス細胞に対する比が、９未満である、抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

配列番号２／配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項10】

前記抗体またはその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて２５℃で測定されるときに、単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に１ｎＭ未満の結合解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）で結合する、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項11】

全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、またはＴ体構築物である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項12】

ｓｃＦｖである、請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項14】

前記ＣＡＲが、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含む、請求項１３に記載のＣＡＲ。

【請求項15】

前記共刺激ドメインが４－１ＢＢ共刺激ドメインである、請求項１４に記載のＣＡＲ。

【請求項16】

前記共刺激ドメインがＣＤ２８共刺激ドメインである、請求項１４に記載のＣＡＲ。

【請求項17】

前記抗原結合断片がｓｃＦｖである、請求項１３～１６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項18】

検出可能な部分を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項１３～１７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項19】

請求項１～１２のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１に結合する抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項１３～１７のいずれか一項に記載のＣＡＲと、薬学的に許容される担体または希釈剤と、を含む、医薬組成物。

【請求項20】

ａ）請求項１～１２および１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列、および
ｂ）請求項１～１２および１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列
を含む、ポリヌクレオチド分子。

【請求項21】

請求項１～１２および１８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド分子、および
請求項１～１２および１８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド分子
を含む、組み合わせ物。

【請求項22】

請求項２０に記載のポリヌクレオチド分子または請求項２１に記載の組み合わせ物を含む、ベクター。

【請求項23】

請求項１～１２および１８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド分子を含むベクター、および
請求項１～１２および１８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド分子を含むベクター
を含む、組み合わせ物。

【請求項24】

請求項２０に記載のポリヌクレオチド分子、請求項２１もしくは２３に記載の組み合わせ物、または請求項２２に記載のベクターを発現する、細胞。

【請求項25】

ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を有する対象を治療するための方法における使用のための、請求項１～１２および１８のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または請求項１３～１７のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む組成物、あるいは請求項１９に記載の医薬組成物、あるいは請求項２４に記載の細胞を含む組成物。

【請求項26】

前記ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害が、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんである、請求項２５に記載の組成物、あるいは医薬組成物。

【請求項27】

前記ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんが、脂肪肉腫、神経芽腫、骨髄腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、卵巣上皮がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、黒色腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、滑膜肉腫、転移性固形腫瘍、食道がん、横紋筋肉腫、進行性粘液様円形細胞脂肪肉腫、転移性黒色腫、または再発性非小細胞肺がんからなる群より選択される、請求項２６に記載の組成物、あるいは医薬組成物。

【請求項28】

第２の治療剤と組み合わせて使用するためのものである、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の組成物、あるいは医薬組成物。

【請求項29】

前記第２の治療剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、ウイルス感染細胞抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二重特異性抗体、栄養補充剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、化学療法剤、細胞傷害剤、手術、放射線、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、ならびに前記疾患または障害に関連する少なくとも１つの症状を改善するために有用な任意の他の、前記抗体もしくはその抗原結合断片または前記ＣＡＲを含む組成物、あるいは前記医薬組成物、あるいは前記細胞を含む前記組成物からなる群より選択される、請求項２８に記載の組成物、あるいは医薬組成物。

【請求項30】

皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内投与のためのものである、請求項２５～２９のいずれか一項に記載の組成物、あるいは医薬組成物。

【請求項31】

前記対象の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの用量での投与のためのものである、請求項２５～３０のいずれか一項に記載の組成物、あるいは医薬組成物。

【請求項32】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸分子であって、前記ＣＡＲが、ＨＬＡ－Ａ２提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１ペプチド（ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド）に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み、
前記細胞外結合ドメインが、配列番号４の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号６のＨＣＤＲ２、配列番号８のＨＣＤＲ３、配列番号１２の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号１４のＬＣＤＲ２および配列番号１６のＬＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合断片である、核酸分子。

【請求項33】

前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲを含む、請求項３２に記載の核酸分子。

【請求項34】

前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣＶＲを含む、請求項３２または３３に記載の核酸分子。

【請求項35】

前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号２／配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ対を含む、請求項３２～３４のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項36】

前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項３２～３５のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項37】

前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３２～３６のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項38】

前記抗体またはその抗原結合断片が配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項３２～３７のいずれか一項に記載の核酸分子。

【請求項39】

前記抗原結合断片がｓｃＦｖである、請求項３２～３８のいずれか一項記載の核酸分子。

【請求項40】

請求項３２～３９のいずれか一項に記載の核酸分子を含む、ベクター。

【請求項41】

請求項３２～３９のいずれか一項に記載の核酸分子または請求項４０に記載のベクターを含む、単離された免疫エフェクター細胞。

【請求項42】

Ｔ体である、請求項４１に記載の単離された免疫エフェクター細胞。

【請求項43】

ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を有する対象を治療するための、請求項４１または４２に記載の免疫エフェクター細胞の集団を含む組成物。

【請求項44】

前記ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害が、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんである、請求項４３に記載の組成物。

【請求項45】

前記ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんが、脂肪肉腫、神経芽腫、骨髄腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、卵巣上皮がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、黒色腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、滑膜肉腫、転移性固形腫瘍、食道がん、横紋筋肉腫、進行性粘液様円形細胞脂肪肉腫、転移性黒色腫、または再発性非小細胞肺がんからなる群より選択される、請求項４４に記載の組成物。

【請求項46】

前記抗体もしくはその抗原結合断片または前記ＣＡＲを含む前記組成物、あるいは前記医薬組成物、あるいは前記細胞を含む前記組成物が、第２の治療剤と組み合わせて使用するためのものである、請求項４３～４５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項47】

前記第２の治療剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、ウイルス感染細胞抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二重特異性抗体、栄養補充剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、化学療法剤、細胞傷害剤、手術、放射線、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、ならびに前記疾患または障害に関連する少なくとも１つの症状を改善するために有用な任意の他の、前記抗体もしくはその抗原結合断片または前記ＣＡＲを含む組成物、あるいは前記医薬組成物、あるいは前記細胞を含む前記組成物からなる群より選択される、請求項４６に記載の組成物。

【請求項48】

皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内投与のためのものである、請求項４３～４７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項49】

前記対象の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの用量での投与のためのものである、請求項４３～４８のいずれか一項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０１９年７月３日に出願された米国仮特許出願第６２／８７０，２３２号、２０２０年５月５日に出願された米国仮特許出願第６３／０２０，１７７号、および２０２０年５月８日に出願された米国仮特許出願第６３／０２１，８２６号の優先権を主張する。前述の各々の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されている配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２０年７月２日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは、１１８００３＿１０５２０＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは２４５，２２７バイトである。

【0003】

本開示は、ＨＬＡ提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）ペプチドに特異的に結合する抗原結合タンパク質、ならびにそれらの結合タンパク質を使用する治療方法および診断方法に関する。

【背景技術】

【0004】

ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）は、がん－精巣抗原（ＣＴＡ）であり、ＣＴＡＧ１Ｂとも称される。ＣＴＡＧ１Ｂ遺伝子によってコードされるＮＹ－ＥＳＯ－１の発現は、生殖細胞に限定される。しかし、ＮＹ－ＥＳＯ－１は、しばしば種々の腫瘍型によって異常に再発現される。ＣＴＡＧ１Ｂ遺伝子の主なタンパク質産物は、１８０アミノ酸長の１８ＫＤａタンパク質であり、グリシンリッチＮ末端領域および極めて疎水性のＣ末端領域を有する。しかし、ＮＹ－ＥＳＯ－１の機能は依然として不明確なままである。

【0005】

がん患者におけるＮＹ－ＥＳＯ－１に対する自発的なＣＤ８^＋およびＣＤ４^＋Ｔ細胞応答が観察され、分析されている（Ｊａｇｅｒ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８７：２６５－２７０、Ｊａｇｅｒ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９１：６２８－６３０）。特に、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド１５７～１６５、１５７～１６７、および１５５～１６３は、腫瘍反応性ＣＤ８^＋Ｔ細胞株においてＨＬＡ－Ａ２によって制限され、ペプチド５６～６２は、ＨＬＡ－Ａ３１ ＣＤ８^＋Ｔ細胞によって認識されることが認められた（Ｊａｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８７：２６５－２７０、Ｗａｎｇ，Ｒ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：３５９８－３６０６）。ＣＤ４ Ｔ細胞応答においてＨＬＡ－ＤＲ４によって制限されるいくつかのエピトープも実証されており、ペプチド１５７～１７０に対する応答は、白人の大部分に認められる対立遺伝子であるＨＬＡ－ＤＰ４によって制限された（Ｊａｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９１：６２５－６３０、Ｚａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９８：３９６４－３９６９）。

【0006】

ＮＹ－ＥＳＯ－１が自発的な体液性および細胞性免疫応答を誘発する能力は、その制限された発現パターンとともに、それをがん療法のための優れた候補標的にしている。ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原は、がんワクチン候補として評価されているが、完全な体液性および細胞性免疫応答はほとんど得られていない。実際、治療標的としてのＮＹ－ＥＳＯ－１の使用は、ＨＬＡ提示抗原を標的とする抗原結合タンパク質を設計する際の困難性、ならびに治療効果の低下および／または有害効果の増加（例えば、腫瘍細胞殺傷活性を減少させ、かつ／または対象における副作用を引き起こす非特異的細胞傷害性）をもたらし得る非特異的結合を防止するように、オフターゲット結合を回避する必要性のため、挑戦的である。
したがって、ＮＹ－ＥＳＯ－１を高い特異性で標的にして、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんを治療する新規治療戦略について、当該技術分野で必要性が満たされていない。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【文献】Ｊａｇｅｒ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８７：２６５－２７０

【文献】Ｊａｇｅｒ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９１：６２８－６３０

【文献】Ｗａｎｇ，Ｒ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：３５９８－３６０６

【文献】Ｚａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９８：３９６４－３９６９

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

本開示は、ＨＬＡ提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）ペプチドの立体構造エピトープに特異的に結合する抗原結合タンパク質を提供する。本開示の抗原結合タンパク質は、ＨＬＡ提示ＮＹ－ＥＳＯ－１に高い特異度で結合し、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上のアミノ酸によって異なるＨＬＡ提示ペプチドに結合しない。本開示の抗原結合タンパク質は、ＮＹ－ＥＳＯ－１を発現するがん細胞などの、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド提示細胞（すなわち、それらの表面に、ＭＨＣ分子、例えば、ＨＬＡ－Ａ２に結合したＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドを提示する細胞）の特異的な標的化を可能にし、いくつかの実施形態において、例えば、かかる細胞のＴ細胞媒介性殺傷を刺激するために、Ｔ細胞活性化を刺激する。さらに、検出可能な部分に融合される場合、本開示の抗原結合タンパク質は、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド提示細胞の数および分布の変化に対して高い感度でＮＹ－ＥＳＯ－１陽性疾患または障害の診断および予後診断を可能にし、循環するＮＹ－ＥＳＯ－１レベルよりも疾患進行の関連性の高い尺度である。

【0009】

本開示の抗原結合タンパク質は、全長（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）抗体などの抗体であり得るか、または抗体の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、またはｓｃＦｖ断片）のみを含み得、例えば、残留エフェクター機能を排除するために、機能性に影響を及ぼすように改変され得る（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５－１９３３）。いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、抗体、またはその抗原結合断片であり得る。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、二重特異的であり得る。

【0010】

第１の態様において、本開示は、ＨＬＡ提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）ペプチドの立体構造エピトープ、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むＨＬＡ提示ペプチドなどに、特異的に結合する組換え抗原結合タンパク質を提供する。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、完全にヒトのものである。

【0011】

例示的な抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、本明細書において表１および２に列挙される。表１は、例示的な抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、および軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別子を示す。表２は、例示的な抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の核酸配列識別子を示す。

【0012】

本開示は、表１に列挙されるＨＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、もしくは１００％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含むＨＣＶＲを含む抗原結合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、１００％未満の配列同一性を有する抗原結合タンパク質は、表１のＨＣＶＲからのＣＤＲ配列を含む。例えば、かかる抗原結合タンパク質は、それらのＣＤＲ配列を含むことができるが、表１のＨＣＶＲと比較してフレームワーク領域において差異を有する。

【0013】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、少なくとも９９．９％、もしくは１００％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含むＬＣＶＲを含む抗原結合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、１００％未満の配列同一性を有する抗原結合タンパク質は、表１のＬＣＶＲからのＣＤＲ配列を含む。例えば、かかる抗原結合タンパク質は、それらのＣＤＲ配列を含むことができるが、表１のＬＣＶＲと比較してフレームワーク領域において差異を有する。

【0014】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかと対になる表１に列挙されるＨＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかを含む、ＨＣＶＲのアミノ酸配列およびＬＣＶＲのアミノ酸配列の対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む抗原結合タンパク質を提供する。特定の実施形態により、本開示は、表１に列挙される例示的な抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質のうちのいずれか内に含まれるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む抗原結合タンパク質を提供する。特定の実施形態において、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号２／１０、２２／３０、４２／５０、６２／７０、８２／９０、１０２／１１０、１２２／１３０、１４２／１５０、１６２／１７０、１８０／１８６、１９６／２０３、２１１／２１９、および２３０／２３８からなる群から選択される。特定の実施形態において、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号２／１０（例えば、ｍＡｂ２４９５５Ｎ）、２２／３０（例えば、ｍＡｂ２４９５６Ｎ）、４２／５０（例えば、ｍＡｂ２４９５８Ｎ）、および６２／７０（例えば、ｍＡｂ２４９５９Ｎ）のうちの１つから選択される。

【0015】

特定の実施形態において、本開示は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を提供し、当該ＨＣＶＲは、５つ以下のアミノ酸置換を有する表１に列挙されるアミノ酸配列を含み、当該ＬＣＶＲは、５つ以下のアミノ酸置換を有する表１に列挙されるアミノ酸配列を含む。例えば、本開示は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を提供し、当該ＨＣＶＲは、５つ以下のアミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、当該ＬＣＶＲは、５つ以下のアミノ酸置換を有する配列番号１０のアミノ酸配列を含む。別の例示的な実施形態において、本開示は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を提供し、当該ＨＣＶＲは、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する配列番号２のアミノ酸配列を含み、当該ＬＣＶＲは、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する配列番号１０のアミノ酸配列を含む。

【0016】

本開示はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む抗原結合タンパク質を提供する。

【0017】

本開示はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む抗原結合タンパク質を提供する。

【0018】

本開示はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む抗原結合タンパク質を提供する。

【0019】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む抗原結合タンパク質を提供する。

【0020】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む抗原結合タンパク質を提供する。

【0021】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む抗原結合タンパク質を提供する。

【0022】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかと対になる表１に列挙されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかを含む、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列およびＬＣＤＲ３のアミノ酸配列の対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む抗原結合タンパク質を提供する。特定の実施形態により、本開示は、表１に列挙される例示的な抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質のうちのいずれか内に含まれるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む抗原結合タンパク質を提供する。特定の実施形態において、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は、配列番号８／１６（例えば、ｍＡｂ２４９５５Ｎ）、２８／３６（例えば、ｍＡｂ２４９５６Ｎ）、４８／５６（例えば、ｍＡｂ２５９５８Ｎ）、および６８／７６（例えば、ｍＡｂ２４９５９Ｎ）からなる群から選択される。

【0023】

本開示はまた、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗原結合タンパク質を提供し、当該ＨＣＶＲは、表１に列挙されるアミノ酸配列とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１と、表１に列挙されるアミノ酸配列とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、表１に列挙されるアミノ酸配列とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含む。特定の実施形態において、本開示は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗原結合タンパク質を提供し、当該ＬＣＶＲは、表１に列挙されるアミノ酸配列とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、表１に列挙されるアミノ酸配列とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、表１に列挙されるアミノ酸配列とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む。例えば、本開示は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を提供し、当該ＨＣＶＲは、配列番号４のアミノ酸配列または配列番号４とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１と、配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列または配列番号８とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含む。別の例示的な実施形態において、本開示は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む抗原結合タンパク質を提供し、当該ＬＣＶＲは、配列番号１２のアミノ酸配列または配列番号１２とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、配列番号１４のアミノ酸配列または配列番号１４とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、配列番号１６のアミノ酸配列または配列番号１６とは１つのアミノ酸で異なるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む。

【0024】

本開示はまた、表１に列挙される例示的な抗原結合タンパク質のうちのいずれか内に含まれる６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む抗原結合タンパク質を提供する。特定の実施形態において、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、配列番号４－６－８－１２－１４－１６（例えば、ｍＡｂ２４９５５Ｎ）、２４－２６－２８－３２－３４－３６（例えば、ｍＡｂ２４９５６Ｎ）、４４－４６－４８－５２－５４－５６（例えば、ｍＡｂ２４９５８Ｎ）、および６４－６６－６８－７２－７４－７６（例えば、ｍＡｂ２４９５９Ｎ）からなる群から選択される。

【0025】

関連する実施形態において、本開示は、表１に列挙される例示的な抗原結合タンパク質のうちのいずれかによって定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含まれる６つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む抗原結合タンパク質を提供する。例えば、本開示は、配列番号２／１０（例えば、ｍＡｂ２４９５５Ｎ）、２２／３０（例えば、ｍＡｂ２４９５６Ｎ）、４２／５０（例えば、ｍＡｂ２４９５８Ｎ）、および６２／７０（例えば、ｍＡｂ２４９５９Ｎ）からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含まれるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットを含む抗原結合タンパク質を含む。

【0026】

ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを特定するための方法および技法は当該技術分野において周知であり、本明細書に開示される明示されたＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを特定するために使用することができる。ＣＤＲの境界を特定するために使用することができる例示的な規則には、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が含まれる。概説すると、Ｋａｂａｔ定義は、配列多様性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造ループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとのアプローチ間の折衷である。例えば、Ｋａｂａｔ，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（１９９７）、およびＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：９２６８－９２７２（１９８９）を参照されたい。公開データベースも抗原結合タンパク質内のＣＤＲ配列を特定するために利用可能である。

【0027】

本開示は、修飾グリコシル化パターンを有する抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合パターンを含む。いくつかの実施形態において、望ましくないグリコシル化部位を除去する修飾が有用であり得、すなわち、オリゴ糖鎖に存在するフコース部分を欠いている抗体は、例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）機能を増加させる（Ｓｈｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＪＢＣ ２７７：２６７３３を参照）。他の用途において、ガラクトシル化の修飾は、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を改変するために行うことができる。

【0028】

特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、表１に列挙されるＬＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかと対となる表１に列挙されるＨＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかを含む、ＨＣＶＲのアミノ酸配列およびＬＣＶＲのアミノ酸配列の対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含むモノクローナル抗体である。特定の実施形態において、モノクローナル抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、およびそのバリアントからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインを含む。

【0029】

本開示は、表３に列挙されるＨＣアミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む重鎖を含む、抗原結合タンパク質、またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態において、１００％未満の配列同一性を有する抗原結合タンパク質は、表３のＨＣからのＣＤＲ配列を含む。例えば、かかる抗原結合タンパク質は、それらのＣＤＲ配列を含むことができるが、表３のＨＣと比較してフレームワーク領域において差異を有する。

【0030】

本開示はまた、表３に列挙されるＬＣアミノ酸配列のうちのいずれかから選択されるアミノ酸配列、またはそれと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む軽鎖を含む、抗原結合タンパク質、またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態において、１００％未満の配列同一性を有する抗原結合タンパク質は、表３のＬＣからのＣＤＲ配列を含む。例えば、かかる抗原結合タンパク質は、それらのＣＤＲ配列を含むことができるが、表３のＬＣと比較してフレームワーク領域において差異を有する。

【0031】

本開示はまた、表３に列挙されるＬＣアミノ酸配列のうちのいずれかと対になる表３に列挙されるＨＣアミノ酸配列のうちのいずれかを含む、ＨＣのアミノ酸配列およびＬＣのアミノ酸配列の対（ＨＣ／ＬＣ）を含む、抗原結合タンパク質、またはその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態により、本開示は、表３に列挙される例示的な抗ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体のうちのいずれか内に含まれるＨＣ／ＬＣアミノ酸配列対を含む抗体、またはその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態において、ＨＣ／ＬＣアミノ酸配列対は、配列番号１８／２０、３８／４０、５８／６０、および７８／８０からなる群から選択される。特定の実施形態において、ＨＣ／ＬＣアミノ酸配列対は、配列番号１８／２０、３８／４０、５８／６０、および７８／８０からなる群から選択される。

【0032】

一態様において、本開示は、ＨＬＡ－ペプチド複合体に結合する抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片を提供し、抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片は、ＨＬＡ－ペプチド複合体に含まれるペプチドのアミノ酸残基の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％に接触する。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片は、ＨＬＡ－ペプチド複合体に含まれるペプチドのアミノ酸残基のすべてを「覆う」か、またはそれらすべてに接触する。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片は、ＨＬＡ－ペプチド複合体に高い親和性および特異性で結合し、抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片は、提示ペプチドの全長に接触する。「接触」は、本明細書で使用される場合、直接的または水媒介性の水素結合、電荷－電荷相互作用、または疎水性／ファンデルワールス相互作用を含む。一実施形態において、抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片は、ＨＬＡ－Ａ２－ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に結合し、抗原結合タンパク質は、ペプチド１５７～１６５（配列番号２６９）の９つのアミノ酸残基のうちの少なくとも３つに結合し、かつ抗原結合タンパク質がＨＬＡ－Ａ２ペプチド結合溝におけるペプチドで大まかに中心化されるようにＨＬＡ－Ａ２に結合して、それによって、ＨＬＡ－Ａ２ペプチド複合体を「覆う」（物理的に遮断する）。別の実施形態において、抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片は、ＨＬＡ－Ａ２－ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に結合し、抗原結合タンパク質は、ペプチド１５７～１６５（配列番号２７０または２９１）の９つのアミノ酸残基のうちの少なくとも３つに結合し、かつ抗原結合タンパク質がＨＬＡ－Ａ２ペプチド結合溝におけるペプチドで大まかに中心化されるようにＨＬＡ－Ａ２に結合して、それによって、ＨＬＡ－Ａ２ペプチド複合体を「覆う」（物理的に遮断する）。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片は、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含み、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの各々は、表１に列挙されるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、完全にヒトのものである。特定の実施形態において、完全にヒトの抗原結合タンパク質は、ファージディスプレイ法および技術を使用して得られない。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＩＧＫＶ１－３９サブタイプの軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＩＧＫＪ１サブタイプの軽鎖可変領域を含む。

【0033】

特定の実施形態において、本開示は、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に結合する抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片を提供し、抗原結合タンパク質は、配列番号２６９の１つ以上のアミノ酸に結合する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号２６９の少なくとも３つのアミノ酸に結合する。

【0034】

特定の実施形態において、本開示は、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に結合する抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片を提供し、抗原結合タンパク質は、配列番号２７０または２９１の１つ以上のアミノ酸に結合する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号２７０または２９１の少なくとも３つのアミノ酸に結合する。一実施形態において、抗原結合タンパク質は、配列番号２７０のＭ１６０、Ｗ１６１、およびＱ１６４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸に結合する。

【0035】

特定の実施形態において、本開示は、ＨＬＡ提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）ペプチドの立体構造エピトープに特異的に結合する抗原結合タンパク質を提供し、立体構造エピトープは、配列番号２６９の１つ以上のアミノ酸を含む。

【0036】

特定の実施形態において、本開示は、ＨＬＡ提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）ペプチドの立体構造エピトープに特異的に結合する抗原結合タンパク質を提供し、立体構造エピトープは、配列番号２７０または２９１の１つ以上のアミノ酸を含む。特定の実施形態において、立体構造エピトープは、配列番号２７０または２９１のＭ１６０、Ｗ１６１、およびＱ１６４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸を含む。

【0037】

本開示はまた、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１との特異的結合について、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む抗原結合タンパク質と競合する抗原結合タンパク質を提供し、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの各々は、表１に列挙されるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。

【0038】

本開示はまた、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１との結合について、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗原結合タンパク質と交差競合する抗原結合タンパク質を提供し、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの各々は、表１に列挙されるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。

【0039】

本開示はまた、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合する抗原結合タンパク質を提供し、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの各々は、表１に列挙されるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。特定の実施形態において、本開示は、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合する抗原結合タンパク質を提供し、ＨＣＶＲは、配列番号２、２２、４２、および６２からなる群から選択され、ＬＣＶＲは、配列番号１０、３０、５０、および、７０からなる群から選択される。

【0040】

一実施形態において、本開示は、ＨＬＡ－Ａ２提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）ペプチドの立体構造エピトープに特異的に結合する組換え抗原結合タンパク質を提供し、抗原結合タンパク質は、（ａ）表面プラズモン共鳴アッセイにおいて２５℃で測定されるときに、単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体（Ｃ１６５またはＶ１６５）に約１ｎＭ未満の結合解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）で結合する特性、（ｂ）フローサイトメトリーアッセイによって決定されるときに、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体発現細胞に約１０ｎＭ未満のＥＣ_５０で結合し、予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない特性、および（ｃ）エピトープが、配列番号２６９、２７０、または２９１の１つ以上のアミノ酸を含む特性からなる群から選択される特性を有する。本明細書の他の箇所に開示されるように、「オフターゲットペプチド」は、標的ペプチド（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド（配列番号２６９および／または配列番号２７０もしくは２９１））とは２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上のアミノ酸で異なるペプチドを指す。

【0041】

第２の態様において、本開示は、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質をコードする核酸分子を提供する。例えば、本開示は、表１に列挙されるＨＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＶＲ核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。

【0042】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されるＬＣＶＲ核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。

【0043】

本開示はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＤＲ１核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。

【0044】

本開示はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＤＲ２核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。

【0045】

本開示はまた、表１に列挙されるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＤＲ３核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。

【0046】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されるＬＣＤＲ１核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。

【0047】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されるＬＣＤＲ２核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。

【0048】

本開示はまた、表１に列挙されるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供し、特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されるＬＣＤＲ３核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む。

【0049】

本開示はまた、ＨＣＶＲをコードする核酸分子を提供し、ＨＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、表１に列挙される例示的な抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質のうちのいずれかによって定義されるとおりである。

【0050】

本開示はまた、ＬＣＶＲをコードする核酸分子を提供し、ＬＣＶＲは、３つのＣＤＲのセット（すなわち、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含み、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、表１に列挙される例示的な抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質のうちのいずれかによって定義されるとおりである。

【0051】

本開示はまた、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子を提供し、ＨＣＶＲは、表１に列挙されるＨＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲは、表１に列挙されるＬＣＶＲアミノ酸配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、核酸分子は、表２に列挙されるＨＣＶＲ核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、表２に列挙されるＬＣＶＲ核酸配列のうちのいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列と、を含む。本開示のこの態様による特定の実施形態において、核酸分子は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方は、表１に列挙される同じ抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質に由来する。

【0052】

本開示は、表３に列挙される重鎖アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供する。本開示はまた、表３に列挙される軽鎖アミノ酸配列のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供する。

【0053】

本開示はまた、重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）の両方をコードする核酸分子を提供し、ＨＣは、表３に列挙されるＨＣアミノ酸配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含み、ＬＣは、表３に列挙されるＬＣアミノ酸配列のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む。

【0054】

関連する態様において、本開示は、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の重鎖および／または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現することができる組換え発現ベクターを提供する。例えば、本開示は、上記核酸分子、すなわち、表１に示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ配列のうちのいずれかをコードする核酸分子のうちのいずれかを含む、組換え発現ベクターを含む。本開示はまた、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の重鎖および／または軽鎖を含むポリペプチドを発現することができる組換え発現ベクターを提供する。例えば、本開示は、上記核酸分子、すなわち、表２に示される重鎖または軽鎖配列のうちのいずれかをコードする核酸分子のうちのいずれかを含む組換え発現ベクターを含む。本開示の範囲には、かかるベクターが導入されている宿主細胞、ならびに抗原結合タンパク質の産生を可能にする条件下で宿主細胞を培養することによって抗原結合タンパク質を産生し、そのように産生された抗原結合タンパク質を回収する方法も含まれる。

【0055】

第３の態様において、本開示は、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むペプチド）の立体構造エピトープに特異的に結合する治療有効量の組換え抗原結合タンパク質と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物を提供する。関連する態様において、本開示は、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と、第２の治療剤との組み合わせである組成物を特徴とする。一実施形態において、第２の治療剤は、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と有利に組み合わされる任意の薬剤である。抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と有利に組み合わせられ得る例示的な薬剤には、限定されないが、免疫細胞活性化を調節する他の薬剤が含まれる。本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と組み合わせて使用することができる追加療法は、本明細書の他の場所に開示される。

【0056】

第４の態様において、本開示は、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がんなどのＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を有する対象を治療する方法を提供する。本方法は、治療有効量の本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質または本開示の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。治療される障害は、本明細書で提供される抗原結合タンパク質および組成物によって改善、寛解、阻害、または防止される任意の疾患または状態である。特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質（または医薬組成物）は、第２の治療剤と組み合わせて、それを必要とする対象に投与される。第２の治療剤は、Ｔ細胞共抑制物質に対する抗体、腫瘍細胞抗原に対する抗体、Ｔ細胞受容体に対する抗体、細胞傷害剤、抗がん剤、抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド）、化学療法剤、手術、放射線療法、免疫抑制剤、および当該技術分野において既知の任意の他の薬物または療法からなる群から選択され得る。特定の実施形態において、第２の治療剤は、本開示の抗原結合タンパク質に関連する任意の可能性のある副作用を、かかる副作用が生じる場合に、相殺または低減するのに役立つ薬剤であり得る。

【0057】

特定の実施形態において、本開示は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんの増殖を抑制するための方法を提供する。例えば、本開示は、対象における原発性腫瘍または転移性腫瘍による腫瘍増殖を抑制する方法を提供する。特定の実施形態において、本開示は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんを有する対象の生存（例えば、無増悪生存または全生存）を高める方法を提供する。がんの例には、脂肪肉腫、神経芽腫、骨髄腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、卵巣上皮がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、黒色腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、滑膜肉腫、転移性固形腫瘍、食道がん、横紋筋肉腫、進行性粘液様円形細胞脂肪肉腫、転移性黒色腫、または再発性非小細胞肺がんが含まれるが、これらに限定されない。

【0058】

特定の実施形態において、本開示は、確立された腫瘍の増殖を阻害または抑制するための方法を提供する。本方法は、治療有効量の本開示の抗原結合タンパク質を含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、第２の治療剤と組み合わせて投与される。

【0059】

抗原結合タンパク質、例えば、抗体、またはその抗原結合断片は、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内によって投与され得る。抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合断片は、対象の体重の約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。

【0060】

第５の態様において、本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子、またはかかるＣＡＲを発現する細胞（例えば、ＣＡＲを表面で発現する細胞）を提供する。ＣＡＲは、ＨＬＡ提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）ペプチドの立体構造エピトープ、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５に特異的に結合する細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。一実施形態において、細胞外結合ドメインは、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質またはその抗原結合断片である。本開示の例示的な抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、本明細書に記載の抗原結合タンパク質のうちのいずれかである。

【0061】

例えば、特定の実施形態において、本開示のＣＡＲにおける使用のために好適である抗原結合タンパク質は、表１に列挙される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、表１に列挙される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む。

【0062】

他の実施形態において、本開示のＣＡＲにおける使用のために好適である抗原結合タンパク質は、表１に列挙されるＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および／または表１に列挙されるＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。

【0063】

いくつかの実施形態において、本開示のＣＡＲにおける使用のために好適である抗原結合タンパク質は、（ａ）表１に列挙されるＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、（ｂ）表１に列挙されるＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む。

【0064】

一実施形態において、本開示のＣＡＲにおける使用のために好適である抗原結合タンパク質は、（ａ）配列番号４、２４、４４、６４、８４、１０４、１２４、１４４、１６４、２１３、および２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、（ｂ）配列番号６、２６、４６、６６、８６、１０６、１２６、１４６、１６６、１８２、１９９、２１５、および２３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、（ｃ）配列番号８、２８、４８、６８、８８、１０８、１２８、１４８、１６８、１８４、２０１、２１７、および２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、（ｄ）配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１８８、２２１、および２４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、（ｅ）配列番号１４、３４、５４、７４、９４、１１４、１３４、１５４、１７４、および２４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、（ｆ）配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１９０、２０５、２２４、および２４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと、を含む。

【0065】

さらなる実施形態において、本開示のＣＡＲにおける使用のために好適である抗原結合タンパク質は、配列番号２／１０、２２／３０、４２／５０、６２／７０、８２／９０、１０２／１１０、１２２／１３０、１４２／１５０、１６２／１７０、１８０／１８６、１９６／２０３、２１１／２１９、および２３０／２３８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。

【0066】

いくつかの実施形態において、本開示のＣＡＲにおける使用のための抗原結合タンパク質は、ｓｃＦｖである。

【0067】

他の態様において、本開示は、単離されたＣＡＲ核酸分子を含むベクター、およびかかるベクターを含む免疫エフェクター細胞を提供する。

【0068】

本開示のさらなる他の態様において、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がん、例えば、脂肪肉腫、神経芽腫、骨髄腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、卵巣上皮がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、黒色腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、滑膜肉腫、転移性固形腫瘍、食道がん、横紋筋肉腫、進行性粘液様円形細胞脂肪肉腫、転移性黒色腫、または再発性非小細胞肺がん、などのＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を有する対象を治療するための方法が提供される。本方法は、対象に、本開示のＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞の集団を投与することを含む。

【0069】

いくつかの態様において、本開示は、例えば、対象または対象から得られる試料において、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性細胞を検出するための方法を提供する。本方法は、検出可能な部分を含む本開示の抗原結合タンパク質を、対象から得られる細胞試料などの細胞に接触させるか、または対象に投与することと、検出可能な部分の存在を検出することと、を含む。

【0070】

他の実施形態は、後述の詳細な説明のレビューから明らかとなるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0071】

【図1A】３つの異なるＣＡＲ構築物の図を示し、プロモーターおよびベクター要素を含む。

【図1B】非結合対照ＢＢ／ｚ ＣＡＲ（対照ＣＡＲ Ｔ）、抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}ＢＢ／ｚ ＣＡＲ、または抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}２８／ｚ ＣＡＲのいずれかを発現するＴ細胞によって、０～２１日間にわたって処置したマウスにおける腫瘍体積を示す。左パネル：平均腫瘍体積、右パネル：個別マウスの腫瘍体積。

【図1C】非結合対照ＢＢ／ｚ ＣＡＲ（対照ＣＡＲ Ｔ）、抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}ＢＢ／ｚ ＣＡＲ、または抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}２８／ｚ ＣＡＲのいずれかを発現するＴ細胞によって、０～３８日間にわたって処置したマウスにおける腫瘍体積を示す。左パネル：平均腫瘍体積、右パネル：個別マウスの腫瘍体積。

【発明を実施するための形態】

【0072】

本方法を説明する前に、本開示は、記載される特定の方法および実験条件に限定されないと理解されるべきであり、それはかかる方法および条件が変化し得るためである。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを説明する目的のためのものであり、限定することは意図されていないことも理解されるべきであり、それは本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるためである。

【0073】

別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または等価の任意の方法および材料を本開示の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料がここで説明される。本明細書で言及されるすべての刊行物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0074】

「ＮＹ－ＥＳＯ－１」、「ＮＹ－ＥＳＯ－１」、「ニューヨーク食道扁平上皮がん１」、および「ＣＴＡＧ１Ｂ」という用語は、多数のがんタイプにおいて再発現され、ＣＴＡＧ１Ｂ遺伝子によってコードされる、周知のがん－精巣抗原（ＣＴＡ）を指す。

【0075】

全長ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋにおいて登録番号ＮＰ＿００１３１８．１（配列番号２７１）として提供される。「ＮＹ－ＥＳＯ－１」という用語は、組換えＮＹ－ＥＳＯ－１またはその断片を含む。本用語はまた、例えば、ヒスチジンタグ、マウスもしくはヒトＦｃ、またはＲＯＲ１などのシグナル配列に結合したＮＹ－ＥＳＯ－１またはその断片も包含する。特定の実施形態において、本用語は、ＨＬＡ－Ａ２との関連でＨＬＡ－Ａ２に連結されているか、またはＨＬＡ－Ａ２によって提示されるような、ＮＹ－ＥＳＯ－１またはその断片を含む。

【0076】

特定の実施形態において、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドは、配列番号２７１のアミノ酸１５７～１６５（ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号２６９））を含み、本明細書では、「ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５Ｃペプチド」または「ＮＹ－ＥＳＯ－１（１５７～１６５）ペプチド」と称される（「ＮＹ－ＥＳＯ－１（１５７～１６５）ペプチド」は、１６５位にＣまたはＶを有するものとしてさらに明確化される場合を除く）。他の実施形態において、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドは、残基１６５のシステインがバリンで置換されている配列番号２７１のアミノ酸残基１５７～１６５（ＳＬＭＭＷＩＴＱＶ（配列番号２７０））を含み、本明細書では、「ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５Ｖペプチド」もしくは「ＮＹ－ＥＳＯ－１（１５７～１６５Ｖペプチド）」と称されるか、またはさもなければ、「Ｃ１６５Ｖ」もしくは「Ｖ１６５」で示される。簡単に説明すると、「ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５ペプチド」、「ＮＹ－ＥＳＯ－１（１５７～１６５）」、および「ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むペプチド」という用語は、特定されない限り、ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５ＣペプチドおよびＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５Ｖペプチドの両方を包含すると理解される。

【0077】

「ＨＬＡ」という用語は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）系または複合体を指し、ヒトにおける主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）タンパク質をコードする遺伝子複合体である。これらの細胞表面タンパク質は、ヒトにおける免疫系の調節に関与する。ＭＨＣクラスＩ（Ａ、Ｂ、およびＣ）に対応するＨＬＡは、細胞内からペプチドを提示する。

【0078】

「ＨＬＡ－Ａ」という用語は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）の群を指し、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座によってコードされる。ＨＬＡ－Ａは、３つの主要なタイプのヒトＭＨＣクラスＩ細胞表面受容体のうちの１つである。受容体はヘテロ二量体であり、重α鎖およびより小さいβ鎖からなる。α鎖は、バリアントＨＬＡ－Ａ遺伝子によってコードされ、β鎖（β２－マイクログロブリン）は、インバリアントβ２マイクログロブリン分子である。

【0079】

「ＨＬＡ－Ａ２」という用語は、ＨＬＡ－Ａ遺伝子座における特定のクラスＩ主要組織適合複合体（ＭＨＣ）対立遺伝子群の１つであり、α鎖は、ＨＬＡ－Ａ＊０２遺伝子によってコードされ、β鎖は、β２－マイクログロブリンまたはＢ２Ｍ遺伝子座によってコードされる。

【0080】

本明細書で使用される「抗原結合タンパク質」、「結合タンパク質」、または「結合分子」という用語は、ＨＬＡ－Ａ２提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１ペプチド（ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド）の立体構造エピトープ、例えば、アミノ酸残基１５７～１６５を含むＨＬＡ－Ａ２提示ペプチドなどの、関心対象の分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位を含む分子を含む。結合タンパク質は、抗体であり得、全長抗体、または抗体の抗原結合断片、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、または任意の他のポリペプチド、例えば、受容体抗体（Ｒａｂ）タンパク質などが挙げられる。

【0081】

「ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質」または「ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質」などの用語は、ＨＬＡ－Ａ２によるＮＹ－ＥＳＯ－１のペプチド断片、例えば、アミノ酸残基１５７～１６５の提示によって立体構造エピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分などの抗原結合タンパク質を指す。特定の実施形態において、立体構造エピトープは、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドによって細胞の表面に生成される。本明細書で使用される場合、「ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体」などの用語は、ＨＬＡ－Ａ２とＮＹ－ＥＳＯ－１ポリペプチドとの間の複合体を指し、ＨＬＡ－Ａ２は、ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を提示する。この文脈において、ＮＹ－ＥＳＯ－１は、全長ＮＹ－ＥＳＯ－１ポリペプチドであることができるか、またはアミノ酸１５７～１６５（配列番号２７１に関連する）がＮＹ－ＥＳＯ－１ポリペプチド内に存在し、ＨＬＡ－Ａ２によって提示される限り、切断型であることができる。疑義を避けるために、「ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド」という用語は、ＮＹ－ＥＳＯ－１の１５７～１６５（配列番号２７１に関連する）と同じように短いか、または最大で全長ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質（例えば、配列番号２７１の配列）を含むペプチドを包含する。

【0082】

「エピトープ」という用語は、パラトープとして知られる抗原結合タンパク質の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一抗原は、２つ以上のエピトープを有し得る。したがって、異なる抗原結合タンパク質は、抗原で異なる領域に結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。「エピトープ」という用語はまた、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。また、抗原結合タンパク質によって結合される抗原の領域も指す。エピトープは、構造的または機能的として定義され得る。機能的エピトープは概して、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与するこれらの残基を有する。エピトープはまた、「立体構造」であり得、すなわち、非線形アミノ酸からなり得る。特定の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの分子を化学的に活性な表面で分類分けする決定基を含み得、特定の実施形態において、特定の三次元構造特徴および／または特定の電荷特徴を有し得る。いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド複合体の立体構造エピトープと相互作用する。いくつかの実施形態において、この立体構造エピトープは、配列番号２７１のＭ１６０、Ｗ１６１、およびＱ１６４に対応する１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、または３つのアミノ酸）を含む。Ｍ１６０、Ｗ１６１、またはＱ１６４のうちの１つ以上に対応するアミノ酸を決定するために、配列アラインメントを本明細書に記載されるように行うことができる。いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、Ｘ線結晶解析によって４．０Å以上の分解能で決定されるときに、配列番号２７１のアミノ酸１５７～１６５に対応するアミノ酸を含むＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド複合体に特異的に結合する。疑義を避けるため、４．０Å以上の分解能は、３．９Å以上、３．８Å以上、３．７Å以上、３．６Å以上、３．５Å以上、３．４Å以上、３．３Å以上、３．２Å以上、３．１Å以上、３．０Å以上、２．９Å以上、２．８Å以上、２．７Å以上、２．６Å以上、２．５Å以上、２．４Å以上、２．３Å以上、２．２Å以上、２．１Å以上、２．０Å以上、１．９Å以上、１．８Å以上、１．７Å以上、１．６Å以上、１．５Å以上、１．４Å以上、１．３Å以上、１．２Å以上、１．１Å以上、１．０Å以上、０．９Å以上、０．８Å以上、０．７Å以上、０．６Å以上、または０．５Å以上の分解能を包含する。

【0083】

いくつかの実施形態において、結合タンパク質は、全長抗体またはその抗原結合断片などの抗体またはその抗原結合断片である。

【0084】

「抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、ジスルフィド結合によって相互結合された４つのポリペプチド鎖である、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖からなる免疫グロブリン、ならびにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）またはそれらの抗原結合断片を指すことが意図される。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「Ｖ_Ｈ」）および重鎖定常領域（ドメインＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、およびＣ_Ｈ３からなる）からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「Ｖ_Ｌ」）および軽鎖定常領域（Ｃ_Ｌ）からなる。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存される領域によって点在される。各Ｖ_ＨおよびＶ_Lは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなり、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置される。特定の実施形態において、抗体（またはその抗原結合断片）のＦＲは、ヒト生殖系配列と同一であり得るか、または天然にもしくは人工的に改変され得る。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義され得る。

【0085】

１つ以上のＣＤＲ残基の置換、または１つ以上のＣＤＲの省略も可能である。抗体などの抗原結合タンパク質は、結合のために１つまたは２つのＣＤＲを省き得ることが科学文献で報告されている。Ｐａｄｌａｎら（１９９５ ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－１３９）は、抗体とその抗原との間の接触領域を、公開されている結晶構造に基づいて分析し、ＣＤＲ残基の約５分の１～３分の１のみが実際に抗原に接触することを結論付けた。Ｐａｄｌａｎはまた、１つまたは２つのＣＤＲが抗原と接触するアミノ酸を有しない多くの抗体を見出した（Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．２００２ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３２０：４１５－４２８も参照する）。

【0086】

抗原に接触しないＣＤＲ残基は、分子モデリングおよび／または経験によって、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの外側にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から、過去の試験に基づいて特定することができる（例えば、ＣＤＲＨ２中の残基Ｈ６０～Ｈ６５は、しばしば必要とされない）。ＣＤＲまたはその残基が省略される場合、通常、別のヒト抗体配列またはかかる配列のコンセンサスにおいて対応する位置を占めるアミノ酸で置換される。ＣＤＲ内の置換のための位置および置換するアミノ酸も、経験的に選択することができる。経験的置換は、保存的置換または非保存的置換であることができる。

【0087】

本明細書に開示される抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質、例えば、完全にヒトの抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１モノクローナル抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＣＡＲは、対応する生殖系配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を含み得る。かかる変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば公開の抗体配列データベースから入手可能な生殖系配列と比較することによって容易に確認することができる。本開示は、本明細書に開示されるアミノ酸配列のうちのいずれかに由来する抗原結合タンパク質、例えば、抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＣＡＲを含み、１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸は、抗原結合タンパク質が由来する生殖系配列の対応する残基に、または別のヒト生殖系配列の対応する残基に、または対応する生殖系残基の保存的アミノ酸置換に変異される（かかる配列変化は、本明細書ではまとめて、「生殖系変異」と称される）。当業者は、本明細書に開示される重鎖および軽鎖可変領域配列から出発して、１つ以上の個々の生殖系変異またはそれらの組み合わせを含む多数の抗原結合タンパク質、例えば、抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＣＡＲを容易に産生することができる。特定の実施形態において、Ｖ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基はすべて、抗原結合タンパク質、例えば、抗体が由来した元の生殖系配列に見出される残基に戻り変異される。他の実施形態において、特定の残基のみが元の生殖系配列に戻り変異され、例えば、変異した残基のみがＦＲ１の最初の８つのアミノ酸内、もしくはＦＲ４の最後の８つのアミノ酸内に見出されるか、または変異した残基のみがＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３内に見出される。他の実施形態において、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のうちの１つ以上が、異なる生殖系配列（すなわち、抗体が本来由来した生殖系配列とは異なる生殖系配列）の対応する残基に変異される。さらに、本開示の抗原結合タンパク質、例えば、抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＣＡＲは、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系変異の任意の組み合わせを含み得、例えば、特定の個々の残基は、特定の生殖系配列の対応する残基に変異され、一方、元の生殖系配列と異なる特定の他の残基は、維持されるか、または異なる生殖系配列の対応する残基に変異される。得られると、１つ以上の生殖系変異を含む抗原結合タンパク質、例えば、抗体および抗原結合断片は、結合特異性の改善、結合親和性の増加、拮抗的または作用的な生物学的特性の改善もしくは増強（場合によって）、免疫原性の低減などの１つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な手段で得られる抗原結合タンパク質、例えば抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＣＡＲは、本開示内に包含される。

【0088】

本開示はまた、１つ以上の保存的置換を有する本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲのアミノ酸配列のうちのいずれかのバリアントを含む、抗原結合タンパク質、例えば、完全にヒトの抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１モノクローナル抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＣＡＲを含む。例えば、本開示は、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のうちのいずれかと比べて、例えば１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有するＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含む。

【0089】

「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖系免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本開示のヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３における、ヒト生殖系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異誘発によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入される変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系に由来するＣＤＲ配列がヒトＦＲ配列上に移植されているｍＡｂを含むことを意図するものではない。本用語は、非ヒト哺乳動物において、または非ヒト哺乳動物の細胞において組換え生成される抗体を含む。本用語は、ヒト対象から単離される、またはヒト対象において生成される抗体を含むことは意図されない。

【0090】

「組換え」という用語は、本明細書で使用される場合、例えばＤＮＡスプライシングおよび遺伝子導入発現を含む組換えＤＮＡ技術として当該技術分野で既知の技術または方法によって作製、発現、単離、または取得される本開示の抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合断片を指す。本用語は、非ヒト哺乳動物（トランスジェニック非ヒト哺乳動物、例えば、トランスジェニックマウスを含む）、もしくは細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）発現系において発現されるか、または組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗原結合タンパク質、例えば抗体を指す。

【0091】

本明細書で使用される場合、「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、本明細書において互換的に使用され、抗原（例えば、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープ、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むペプチド）に結合することができる細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインを含む組換え融合タンパク質を指す。

【0092】

本明細書で使用される「免疫エフェクター細胞」は、１つ以上のエフェクター機能（例えば、細胞傷害性細胞殺傷活性、サイトカインの分泌、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの誘導）を有する免疫系の任意の細胞を指す。一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲで使用される免疫エフェクター細胞は、Ｔリンパ球、特に細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、ＣＤ８＋Ｔ細胞）およびヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ、ＣＤ４＋Ｔ細胞）である。Ｔ細胞の他の集団も、本明細書において有用であり、例えば、ナイーブＴ細胞およびメモリーＴ細胞である。当業者によって理解されるように、他の細胞もまた、本明細書に記載されるＣＡＲを有する免疫エフェクター細胞として使用され得る。特に、免疫エフェクター細胞には、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、およびマクロファージも含まれる。免疫エフェクター細胞にはまた、エフェクター細胞の前駆細胞（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）も含まれ、かかる前駆細胞（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ）は、インビボまたはインビトロで免疫エフェクター細胞に分化するように誘導することができる。したがって、この点において、免疫エフェクター細胞には、臍帯血、骨髄、または動員末梢血に由来するＣＤ３４＋細胞集団内に含有される造血幹細胞（ＨＳＣ）などの免疫エフェクター細胞の前駆細胞が含まれ、これらは、対象における投与で成熟免疫エフェクター細胞に分化するか、または成熟免疫エフェクター細胞に分化するようにインビトロで誘導することができる。

【0093】

本明細書に開示される場合、「オフターゲットペプチド」という用語は、標的ペプチド（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５ペプチド）と２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上のアミノ酸で異なるペプチドを指す。特定の実施形態において、本用語は、標的ペプチドよりもアミノ酸が３つ以上少ないことによって異なるペプチドを含む。例えば、９－ｍｅｒペプチドでは、２、３、または４つのアミノ酸が標的ペプチドと同一でない場合、それは「オフターゲット」ペプチドとみなされる。特定の実施形態において、アミノ酸同一性は、「類似度」（ＤｏＳ）の用語で表される。９－ｍｅｒペプチド内の６つのアミノ酸が同一である場合、ＤｏＳは６である。特定の実施形態において、ＤｏＳ≦６を有するペプチドは、「オフターゲット」ペプチドとみなされる。「オフターゲット」ペプチドという用語はまた、配列相同性に基づいて標的ペプチドと類似であり、ＨＬＡ－Ａ２に結合することが予測され、必須の正常組織において発現されるタンパク質に含まれるペプチドを指す。

【0094】

「に特異的と結合する」または「と特異的に結合する」などの用語は、抗原結合タンパク質、例えば、抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＣＡＲが、生理学的条件下で比較的安定である抗原と複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０^－８Ｍ以下の平衡解離定数を特徴とし得る（例えば、より小さいＫ_Ｄは、より強い結合を示す）。２つの分子が特異的に結合するか決定するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが含まれる。本明細書に記載されるように、ＨＬＡ－Ａ２提示ニューヨーク食道扁平上皮がん腫１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）ペプチド、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むペプチドの立体構造エピトープに特異的に結合する抗原結合タンパク質、例えば、抗体は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって特定されている。

【0095】

「高親和性」抗原結合タンパク質、例えば抗体、という用語は、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープ、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むペプチドに対して、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液親和性ＥＬＩＳＡによって測定されるときに、少なくとも１０^－８Ｍ、好ましくは１０^－９Ｍ、より好ましくは１０^－１０Ｍ、さらにより好ましくは１０^－１１Ｍ、さらにより好ましくは１０^－１２ＭのＫ_Ｄとして表される結合親和性を有する、これらの抗原結合タンパク質、例えば、ｍＡｂを指す。

【0096】

「スローオフレート」という用語によって、「Ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって決定されるときに、１×１０^－３ｓ^－１以下、好ましくは１×１０^－４ｓ^－１以下の速度定数でＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１から解離する抗原結合タンパク質を意味する。

【0097】

抗原結合タンパク質（例えば、抗体）の「抗原結合部分」、抗原結合タンパク質（例えば、抗体）の「抗原結合断片」などの用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、天然に存在して酵素処理で得ることができるか、合成か、または遺伝子操作されたポリペプチドもしくは糖タンパク質を含む。抗体の「抗原結合断片」、または「抗体断片」という用語は、本明細書で使用される場合、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープ、例えば、ＨＬＡ－Ａ２に結合したＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むペプチドに結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片を指す。

【0098】

特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質、例えば、抗体もしくは抗体断片、またはＣＡＲは、リガンド、検出可能部分、あるいは細胞毒、第２の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質、腫瘍特異的抗原に対する抗体、抗がん剤、またはＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がんなどのＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患もしくは障害を含む疾患もしくは状態を治療するために有用である任意の他の治療用部分などの治療用部分（「免疫複合体」）などの部分とコンジュゲートされ得る。

【0099】

「単離された抗原結合タンパク質」、例えば、単離された抗体は、本明細書で使用される場合、異なる抗原特異性を有する他の抗原結合タンパク質、例えば、抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗原結合タンパク質、例えば抗体を指す（例えば、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１に特異的に結合する単離された抗体、またはその断片は、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープ以外の抗原に特異的に結合する抗原結合タンパク質、例えば、抗体を実質的に含まない。

【0100】

「表面プラズモン共鳴」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサーマトリクス内のタンパク質濃度における変化の検出によってリアルタイムの生体分子相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。

【0101】

「Ｋ_Ｄ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗原結合タンパク質－抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図される。

【0102】

本明細書で使用される場合、「交差競合する」という用語は、抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合断片が抗原に結合し、別の抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合断片の結合を阻害または遮断することを意味する。本用語はまた、２つの抗原結合タンパク質、例えば、抗体間の両方の適応における競合、すなわち、結合して第２の抗原結合タンパク質、例えば、抗体の結合を遮断する第１の抗原結合タンパク質、例えば、抗体、またはその逆を含む。特定の実施形態において、第１の抗原結合タンパク質、例えば、抗体、および第２の抗原結合タンパク質、例えば、抗体は、同じエピトープに結合し得る。あるいは、第１および第２の抗原結合タンパク質、例えば、抗体は、異なるが、例えば、重複しているエピトープに結合し得、それによって一方の結合が、例えば、立体障害を介して第２の結合を阻害または遮断する。抗原結合タンパク質、例えば、抗体間の交差競合は、当該技術分野で既知の方法によって、例えば、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉法アッセイによって測定され得る。２つの抗原結合タンパク質、例えば、抗体間の交差競合は、自己－自己結合によるバックグラウンドシグナルよりも低い第２の抗原結合タンパク質、例えば、抗体の結合として表され得る（第１および第２の抗原結合タンパク質、例えば、抗体は、同じ抗原結合タンパク質、例えば、抗体である）。２つの抗原結合タンパク質、例えば、抗体間の交差競合は、例えば、ベースライン自己－自己バックグランド結合よりも低い第２の抗原結合タンパク質、例えば、抗体の結合％として表され得る（第１および第２の抗原結合タンパク質、例えば、抗体は、同じ抗原結合タンパク質、例えば、抗体である）。

【0103】

「実質的な同一性」または「実質的に同一な」という用語は、核酸またはその断片を指す場合、別の核酸（またはその相補鎖）を用いて適切なヌクレオチド挿入または欠失と最適に整列した場合、以下に考察される配列同一性の周知のアルゴリズムによって測定されるとき、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のヌクレオチド配列同一性があることを示す。参照核酸分子と実質的な同一性を有する核酸分子は、特定の場合では、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。

【0104】

配列同一性は、アルゴリズム、例えば、大域的アラインメントについてＮｅｅｄｌｅｍａｎ Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ １９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３－４５３）、または局所的アラインメントについてＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ １９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５－１９７）を使用して計算することができる。別の好ましいアルゴリズムは、２００２年にＮａｔｕｒｅ ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙでＤｕｆｒｅｓｎｅら（ｖｏｌ．２０，ｐｐ．１２６９－７１）によって報告され、ソフトウェアＧｅｎｅＰＡＳＴ（ＧＱ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）で使用されている。

【0105】

ポリペプチドに適用される場合、「実質的な類似性」または「実質的に類似した」という用語は、２つのペプチド配列が、初期設定のギャップウェイト付けを使用したプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列されるとき、少なくとも９０％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されるものである。概して、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合、類似性の割合または程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整され得る。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３３１を参照されたい。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸基の例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン、２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）含硫側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、およびアスパラギン－グルタミンである。あるいは、保存的な置換は、本明細書に参照により組み込まれるＧｏｎｎｅｔら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３－４５で開示されているＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負以外の値を有する任意の変化である。

【0106】

ポリペプチドにおける配列類似性は、典型的には、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失、および他の改変に割り当てられた類似の測定値を使用して類似配列と一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアでは、初期設定パラメータを使用して、異なる種の生物に由来する相同的ポリペプチド、または野生型タンパク質とその変異タンパク質との間の相同的ポリペプチドなどの、密接に関連するポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定することができる、ＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムが含まれる。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列はまた、ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムである、初期設定または推奨パラメータを用いたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列との間の最善な重複の領域の整列およびパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上記）。配列はまた、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスで、ギャップ開始ペナルティ１２およびギャップ伸長ペナルティ２を用いてアフィンギャップ検索を使用した、スミス－ウォーターマン相同性検索アルゴリズムを使用して比較することもできる。本開示の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含むデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、初期設定パラメータを使用するコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０およびＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２を参照されたい。

【0107】

「治療有効量」という語句は、投与されて所望の効果を生じる量を意味する。正確な量は、治療の目的に依存し、既知の技法を使用して当業者によって確認可能であろう（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。

【0108】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がん（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がん）など、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害などの疾患または障害の改善、予防、および／または治療を必要とする動物、好ましくは哺乳動物を指す。本用語は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんまたは転移性ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんなどのＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を有するか、または有するリスクがあるヒト対象を含む。

【0109】

本明細書で使用される場合、「抗がん剤」は、がんを治療または改善または阻害するために有用である任意の薬剤を意味し、細胞毒、ならびに代謝拮抗剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、抗生物質、有糸分裂阻害剤、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、シクロホスファミド、ミトタン（Ｏ，Ｐ’－（ＤＤＤ））、生物製剤（例えば、抗体およびインターフェロン）、および放射性薬剤などの薬剤が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「細胞毒または細胞傷害剤」は、化学療法剤も指し、細胞に有害である任意の薬剤を意味する。例としては、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、テモゾラミド、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、シスプラチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンビアスチン、コイチシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにそれらの類似体または相同体が挙げられる。

【0110】

本明細書で使用される場合、「抗ウイルス剤」という用語は、宿主対象におけるウイルス感染を治療、予防、または改善するために使用される任意の薬物または療法を指す。「抗ウイルス剤」という用語には、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、リバビリン、ロピナビル、エファビレンツ、コビシスタット、テノフォビル、リルピビリン、鎮痛剤、およびコルチコステロイドが含まれるが、これらに限定されない。

【0111】

以下のうちのいずれか１つを含む免疫原を使用して、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープ、例えば、ＨＬＡ－Ａ２に連結したＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むペプチドに対する抗原結合タンパク質、例えば、抗体を生成することができる。特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質、例えば、抗体は、ＨＬＡ－Ａ２などのＨＬＡタンパク質に結合した、全長天然ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１３１８．１を参照されたい）（配列番号２７１）または組換えＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１３１８．１（配列番号２７１）のアミノ酸残基１５７～１６５（ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ、配列番号２６９）を含むペプチド、もしくはまたＧｅｎＢａｎｋ登録のＣ１６５Ｖ置換（ＳＬＭＭＷＩＴＱＶ、配列番号２７０）を有するその配列によって免疫したマウスから得ることができる。

【0112】

あるいは、ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質またはその断片は、標準的な生化学的技法を使用して産生され得、ＨＬＡ－Ａ２との関連で修飾され、免疫原として使用され得る。

【0113】

いくつかの実施形態において、免疫原は、Ｅ．ｃｏｌｉ、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの任意の他の真核細胞もしくは哺乳動物細胞において発現される組換えＮＹ－ＥＳＯ－１ポリペプチドであり得る（ＨＬＡによって提示される組換えＮＹ－ＥＳＯ－１であり得る）。

【0114】

特定の実施形態において、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープに特異的に結合する抗原結合タンパク質は、上記ポリペプチド、またはその断片を使用して調製され得る。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドは、本明細書に記載される領域のＮ末端もしくはＣ末端のいずれかまたは両方から、指定領域を超えて約５～約２０個のアミノ酸残基によって＋伸長することができる。特定の実施形態において、上記領域またはその断片の任意の組み合わせは、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的抗原結合タンパク質、例えば、抗体の調製において使用され得る。

【0115】

ペプチドは、タグ化のため、またはＫＬＨなどの担体分子とのコンジュゲーションの目的のため、特定の残基の付加または置換を含むように改変され得る。例えば、システインが、ペプチドのＮ末端もしくはＣ末端のいずれかに付加され得るか、またはリンカー配列が、免疫のために、例えばＫＬＨへのコンジュゲーションのためのペプチドを調製するために付加され得る。

【0116】

結合活性を測定するための非限定的な例示的なインビトロアッセイが、本明細書の実施例で説明される。実施例３では、ヒト抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的抗原結合タンパク質、例えば、抗体の結合親和性および反応速度定数を、表面プラズモン共鳴によって決定し、測定をＢｉａｃｏｒｅ ４０００またはＴ２００装置で実施した。実施例４は、ＮＹ－ＥＳＯ－１の断片を過剰発現する細胞への抗体の結合を説明する。

【0117】

ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１に特異的な抗原結合タンパク質、例えば抗体は、追加の標識もしくは部分を含み得ないか、またはそれらはＮ末端もしくはＣ末端の標識もしくは部分を含み得る。一実施形態において、標識または部分は、ビオチンである。結合アッセイにおいて、標識の位置（存在する場合）は、ペプチドが結合する表面に関連してペプチドの適応を決定し得る。例えば、表面がアビジンでコーティングされる場合、Ｎ末端ビオチンを含むペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面に対して遠位になるように適応される。一実施形態において、標識は、放射性核種、蛍光色素、またはＭＲＩ検出可能な標識であり得る。特定の実施形態において、かかる標識された抗原結合タンパク質は、イメージングアッセイを含む診断アッセイに使用され得る。

【0118】

抗原結合タンパク質
本開示は、抗体、またはその抗原結合断片、およびＣＡＲ（例えば、本開示のＣＡＲをコードする核酸分子）（以下に記載）を含む抗原結合タンパク質を提供する。特に指示がない限り、本明細書で使用される「抗体」という用語は、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖（すなわち、「完全抗体分子」）を含む抗体分子、ならびにその抗原結合断片を包含するものと理解されるべきである。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などの用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、天然に存在して酵素処理で得ることができるか、合成か、または遺伝子操作されたポリペプチドもしくは糖タンパク質を含む。本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合断片」、または「抗体断片」という用語は、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープに特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体断片などの抗原結合タンパク質は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含む断片、または単離されたＣＤＲを含み得る。抗体の抗原結合断片などの抗原結合タンパク質は、例えば、タンパク質消化技法または抗体可変ドメインおよび（任意選択的に）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子操作技法などの任意の好適な標準的技法を使用して、例えば、完全抗体分子から誘導され得る。かかるＤＮＡは既知であり、かつ／または例えば市販の供給源、ＤＮＡライブラリー（例えばファージ－抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、または合成することができる。ＤＮＡは、例えば、１つ以上の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを好適な立体配置に配置するか、またはコドンを導入し、システイン残基を作製し、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失などするために、化学的に、または分子生物学技法を使用することによって配列決定および操作され得る。

【0119】

抗体の抗原結合断片の非限定的な例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片、（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂ断片、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））または拘束ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が含まれる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小型モジュール型免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子も、本明細書で使用する「抗原結合断片」という表現に包含される。

【0120】

抗原結合タンパク質（例えば、抗体）の抗原結合断片は、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意の大きさまたはアミノ酸組成であり得、概して、１つ以上のフレームワーク配列に隣接しているかまたは１つ以上のフレームワーク配列とともにインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。Ｖ_Ｌドメインと結合したＶ_Ｈドメインを有する抗体結合タンパク質において、Ｖ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインは、任意の好適な配置で互いに対して位置され得る。例えば、可変領域は二量体であり得、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｈ－Ｖ_L、またはＶ_L－Ｖ_Ｌ二量体を含み得る。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体のＶ_ＨドメインまたはＶ_Ｌドメインを含み得る。

【0121】

特定の実施形態において、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合された少なくとも１つの可変ドメインを含み得る。本開示の抗原結合タンパク質の抗原結合断片内に見出され得る可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な立体構造には、（ｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１、（ｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２、（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ３、（ｉｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２、（ｖ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｖｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｖｉｉ）Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｌ、（ｖｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１、（ｉｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２、（ｘ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ３、（ｘｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２、（ｘｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、（ｘｉｉｉ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３、および（ｘｉｖ）Ｖ_Ｌ－Ｃ_Ｌが含まれる。上に列挙した例示的な立体配置のうちのいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインの任意の立体配置において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結され得るか、または完全なもしくは部分的なヒンジ領域もしくはリンカー領域によって連結され得る。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間のフレキシブルまたは半フレキシブルな結合をもたらす少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれより以上の）アミノ酸からなり得る。そのうえ、本開示の抗体の抗原結合断片は、互いとの、および／または１つ以上の単量体Ｖ_ＨドメインもしくはＶ_Ｌドメイン（例えば、ジスルフィド結合による）との非共有結合において、上に列挙した可変ドメインおよび定常ドメイン立体配置のうちのいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。

【0122】

完全抗体分子と同様に、抗原結合タンパク質、例えば、抗体の抗原結合断片は、単一特異的または多重特異的（例えば、二重特異的）であり得る。抗体の多重特異的抗原結合断片は、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別個の抗原に、または同じ抗原で異なるエピトープに、特異的に結合することができる。本明細書に開示される例示的な二重特異性抗体形式を含む任意の多重特異性抗体形式は、当該技術分野で利用可能な通例の技法を使用して、本開示の抗体の抗原結合断片との関連で使用するために適応され得る。

【0123】

抗原結合タンパク質の調製
トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体などの抗原結合タンパク質を生成するための方法は、当該技術分野で知られている。任意のかかる既知の方法を、本開示の文脈において使用して、ＨＬＡ－Ａ２提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１ペプチド（ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド）の立体構造エピトープに特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。

【0124】

抗原結合タンパク質、例えば、モノクローナル抗体、を生成するためにＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標））または任意の他の既知の方法を使用して、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープに対する高親和性抗原結合タンパク質、例えば、キメラ抗体が、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有して最初に単離される。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、ゲノムが内在性マウス定常領域遺伝子座に操作可能に連結されたヒト重鎖および軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの生成を含み、これによって、マウスは、抗原刺激に応答するヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗原結合タンパク質、例えば、抗体を産生する。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、ヒト重鎖およびヒト軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに操作可能に連結する。次に、完全ヒト抗体を発現することができる細胞においてＤＮＡを発現させる。

【0125】

概して、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに関心対象の抗原を負荷し、リンパ細胞（Ｂ細胞など）を抗原結合タンパク質、例えば抗体、を発現するマウスから回収する。リンパ細胞を骨髄腫細胞株と融合させて不死化ハイブリドーマ細胞株を調製し得、関心対象の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を特定するためにかかるハイブリドーマ細胞株をスクリーニングおよび選択する。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し得、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプ定常領域に連結し得る。かかる抗原結合タンパク質は、ＣＨＯ細胞などの細胞において産生され得る。あるいは、抗原特異的抗原結合タンパク質、例えばキメラ抗体、または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ球から直接単離され得る。

【0126】

最初に、高親和性抗原結合タンパク質、例えばキメラ抗体を、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有して単離する。以下の実験セクションのように、抗原結合タンパク質を特徴付けして、親和性、選択性、エピトープなどを含む所望の特徴について選択する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域と置き換えて、本開示の抗原結合タンパク質、例えば、完全ヒト抗体、例えば、野生型もしくは改変したＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択された定常領域は特定の使用に応じて変化し得るが、高親和性抗原結合および標的特異性の特徴は、可変領域に存在する。

【0127】

生物学的等価物
本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、記載される抗原結合タンパク質、例えば、抗体のものとは異なるが、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープに結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。かかるバリアント抗原結合タンパク質は、親配列と比較したとき、アミノ酸の１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、記載の抗原結合タンパク質と実質的に同等である生物学的活性を示す。同様に、本開示の抗体結合タンパク質コードＤＮＡ配列は、開示される配列と比較したとき、ヌクレオチドの１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本開示の抗原結合タンパク質と本質的に生物学的に等価である抗原結合タンパク質をコードする配列を包含する。

【0128】

２つの抗原結合タンパク質または抗体は、例えば、それらが類似の実験条件下で単回用量または複数回用量のいずれかで同じモル用量で投与される場合に、吸収の速度および程度が有意差を示さない医薬的等価物または医薬的代替物である場合、生物学的等価物とみなされる。いくつかの抗原結合タンパク質または抗体は、それらがそれらの吸収の程度で同等だがそれらの吸収速度で同等ではなく、それでも、吸収速度におけるかかる差が意図的であり、表示に反映され、有効な身体薬剤濃度の達成に、例えば長期使用で必須ではなく、試験した特定の医薬品について医学的に有意でないとみなされるために、生物学的に等価とみなされ得る場合、等価物または医薬的代替物とみなされる。

【0129】

一実施形態において、２つの抗原結合タンパク質（または抗体）は、それらの安全性、純度、または有効性において臨床的に意味のある差がない場合、生物学的に等価である。

【0130】

一実施形態において、２つの抗原結合タンパク質（例えば、抗体）は、患者が参照生成物と生物学的生成物との間で１回以上切り替えられることが、かかる切り替えなしで継続される療法と比較して、免疫原性の臨床的に有意な変化または有効性の低下を含む有害作用のリスクにおける予測される上昇なしで行われ得る場合、生物学的に等価である。

【0131】

一実施形態において、２つの抗原結合タンパク質（または抗体）は、これらが両方とも、使用条件（複数可）についての共通の作用機序（複数可）によって、かかる機序が既知である程度まで作用する場合、生物学的に等価である。

【0132】

生物学的等価性は、インビボおよび／またはインビトロの方法によって実証され得る。生物学的等価性測定法には、例えば、（ａ）抗原結合タンパク質またはその代謝産物の濃度が血液、血漿、血清、または他の生物学的流体中で時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳動物におけるインビボでの試験と、（ｂ）ヒトインビボ生物学的利用能データと相関した、このデータを合理的に予測しているインビトロ試験と、（ｃ）抗原結合タンパク質（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果が時間の関数として測定されるヒトまたは他の哺乳動物におけるインビボ試験と、（ｄ）抗原結合タンパク質の安全性、効能、または生物学的利用能もしくは生物学的等価性を確立する、十分に管理された臨床試験と、が含まれる。

【0133】

本開示の抗原結合タンパク質（または抗体）の生物学的に等価なバリアントは、例えば、残基もしくは配列の種々の置換を生じること、または生物学的活性に必要とされない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失することによって構築され得る。例えば、生物学的活性にとって必須ではないシステイン残基は、再生の際の不必要または不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するために、欠失または他のアミノ酸で置換することができる。他の文脈において、生物学的に等価な抗原結合タンパク質は、抗原結合タンパク質のグリコシル化特性を改変するアミノ酸変化、例えばグリコシル化を排除または除去する変異を含む、抗原結合タンパク質のバリアントを含み得る。

【0134】

Ｆｃバリアントを含む抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質
本開示の特定の実施形態により、抗原結合タンパク質のＦｃＲｎ受容体との結合を、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨで、増強または減少させる１つ以上の変異を含むＦｃドメインを含む、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質、例えば抗体、が提供される。例えば、本開示は、ＦｃドメインのＣ_Ｈ２またはＣ_Ｈ３領域に変異を含む抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含み、変異は、酸性環境（例えば、ｐＨが約５．５～約６．０の範囲であるエンドソーム内）において、ＦｃドメインのＦｃＲｎに対する親和性を増加させる。かかる変異は、動物に投与されるときに、抗原結合タンパク質の血清半減期の増加をもたらし得る。かかるＦｃ改変の非限定的な例には、例えば、２５０位（例えば、ＥまたはＱ）、２５０位および４２８位（例えば、ＬまたはＦ）、２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４位（例えば、ＳまたはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）での改変、または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、Ｆ、またはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、またはＮ４３４Ｙ］）での改変、または２５０位および／もしくは４２８位での改変、または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位での改変が含まれる。一実施形態において、改変は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）の改変と、４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の改変と、４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）の改変と、２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）の改変と、２５０Ｑおよび４２８Ｌの改変（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）と、３０７および／または３０８の改変（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）と、を含む。さらに別の実施形態において、改変は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）改変を含む。

【0135】

例えば、本開示は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ）、４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）、２５７Ｉおよび３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１Ｉ）、２５７Ｉおよび４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ）、３７６Ｖおよび４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ）、３０７Ａ、３８０Ａ、および４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａ）、ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される変異の１つ以上の対または群を含むＦｃドメインを含む抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含む。一実施形態において、本開示は、二量体安定化を促進するために、ＩｇＧ４のヒンジ領域にＳ１０８Ｐ変異を含むＦｃドメインを含む抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含む。前述のＦｃドメイン変異、および本明細書に開示される抗原結合タンパク質可変ドメイン内の他の変異のすべての可能な組み合わせが、本開示の範囲内で企図される。

【0136】

本開示はまた、キメラ重鎖定常（Ｃ_Ｈ）領域を含む抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含み、キメラＣ_Ｈ領域は、２つ以上の免疫グロブリンアイソタイプのＣ_Ｈ領域に由来するセグメントを含む。例えば、本開示の抗原結合タンパク質は、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子、またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣ_Ｈ３ドメインの一部または全部と組み合わされた、ヒトＩｇＧ１分子、ヒトＩｇＧ２分子、またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣ_Ｈ２ドメインの一部または全部を含む、キメラＣ_Ｈ領域を含み得る。特定の実施形態により、本開示の抗原結合タンパク質は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣ_Ｈ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列（ＥＵ番号付けによる２２８～２３６位のアミノ酸残基）と組み合わされた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵ番号付けによる２１６～２２７位のアミノ酸残基）を含み得る。特定の実施形態により、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４上部ヒンジに由来するアミノ酸残基と、ヒトＩｇＧ２下部ヒンジに由来するアミノ酸残基と、を含む。本明細書に記載されるようなキメラＣ_Ｈ領域を含む抗原結合タンパク質は、特定の実施形態において、抗原結合タンパク質の治療特性または薬物動態学的特性に悪影響を与えることなく、改善されたＦｃエフェクター機能を示し得る。（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１４／０２４３５０４号を参照されたい）。

【0137】

抗原結合タンパク質の生物学的特徴
一般に、本開示の抗原結合タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ２提示ニューヨーク食道扁平上皮がん腫１（ＮＹ－ＥＳＯ－１）ペプチドの立体構造エピトープに結合することによって機能する。

【0138】

本開示は、ＨＬＡ－Ａ２との関連でＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドに高い特異性で結合する抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含む。抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ２が存在しないと、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドに結合しない。さらに、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ２との関連でオフターゲットペプチドに結合しない。

【0139】

本開示は、単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１（１５７～１６５）ペプチド（ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチドは、Ｃ１６５またはＶ１６５のいずれかを含み得、すなわち、本開示の抗原結合タンパク質は、いずれかの形態に対して特異的であり得るか、またはどの形態に関しても非特異的であり得る）に、高親和性で結合する抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含む。例えば、本開示は、表面プラズモン共鳴によって、例えば、本明細書の実施例３に定義されるアッセイ形式を使用して測定されるときに、約１ｎＭ未満のＫ_Ｄで（例えば、２５℃または３７℃で）単量体ＨＬＡ－Ａ２：１５７～１６５ペプチド（任意選択的に、Ｃ１６５Ｖ置換を有する）に結合する抗原結合タンパク質を含む。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５ペプチドに、表面プラズモン共鳴によって、例えば、本明細書の実施例３に定義されるアッセイ形式、または実質的に同様のアッセイを使用して測定されるときに、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．１ｎＭ未満、約０．０５ｎＭ未満、または約０．０４ｎＭ未満のＫ_Ｄで結合する。

【0140】

本開示はまた、本明細書の実施例４および５に定義されるようにフローサイトメトリーアッセイによって、または実質的に同様のアッセイによって決定されるときに、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５ペプチド複合体（ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチドはＣ１６５またはＶ１６５のいずれかを含み得、すなわち、本開示の抗原結合タンパク質は、いずれかの形態に特異的であり得るか、またはどの形態に関しても非特異的であり得る）を発現する細胞に、約１０ｎＭ未満のＥＣ_５０で結合し、かつ予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない抗原結合タンパク質を含む。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５ペプチドを発現する細胞に、本明細書の実施例４および５に定義されるようにフローサイトメトリーアッセイによって、または実質的に同様のアッセイによって、例えば、本明細書の実施例４および５におけるアッセイ形式、または実質的に同様のアッセイを使用して決定されるときに、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、または約０．５ｎＭ未満のＥＣ_５０で結合し、かつ予測されるオフターゲットペプチドを発現する細胞に結合しない。

【0141】

特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、腫瘍の増殖を阻害するか、またはそれを必要とする対象に予防的に投与されたときにがんの進行を遅延させるのに有用であり、対象の生存を増加させ得る。例えば、本開示の抗原結合タンパク質の投与は、原発性腫瘍の縮小をもたらし得、転移または二次腫瘍の発生を防止し得る。特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質は、それを必要とする対象に治療的に投与されるときに腫瘍の増殖を阻害するのに有用であり、対象の生存を増加させ得る。例えば、治療有効量の本開示の抗原結合タンパク質の対象への投与は、対象において確立された腫瘍の縮小および消失をもたらし得る。

【0142】

一実施形態において、本開示は、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープに結合する、単離された組換え抗原結合タンパク質を提供し、抗原結合タンパク質は、（ｉ）配列番号２、２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８０、１９６、２１１、および２３０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＶＲを含む特徴と、（ｉｉ）配列番号１０、３０、５０、７０、９０、１１０、１３０、１５０、１７０、１８６、２０３、２１９、および２３８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＶＲを含む特徴と、（ｉｉｉ）配列番号８、２８、４８、６８、８８、１０８、１２８、１４８、１６８、１８４、２０１、２１７、および２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、ならびに配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１９０、２０５、２２４、および２４４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含む特徴と、（ｉｖ）配列番号４、２４、４４、６４、８４、１０４、１２４、１４４、１６４、２１３、および２３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６、２６、４６、６６、８６、１０６、１２６、１４６、１６６、２１５、および２３４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１８８、２２１、および２４０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、ならびに配列番号１４、３４、５４、７４、９４、１１４、１３４、１５４、１７４、および２４２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含む特徴と、（ｖ）表面プラズモン共鳴アッセイにおいて２５℃で測定されるときに、単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５（Ｃ１６５またはＶ１６５）ペプチド複合体に約１ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で結合する特徴と、（ｖｉ）表面プラズモン共鳴アッセイにおいて２５℃で測定されるときに、単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５（Ｃ１６５またはＶ１６５）ペプチド複合体に約１ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で結合する特徴と、（ｖｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５（Ｃ１６５またはＶ１６５）ペプチド複合体発現細胞に約１０ｎＭ未満のＥＣ_５０で結合する特徴と、（ｖｉｉｉ）配列番号２７１と２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上のアミノ酸によって異なるＨＬＡ－Ａ２提示オフターゲットペプチドに結合しない特徴と、のうちの１つ以上を示す。

【0143】

本開示の抗原結合タンパク質は、上記生物学的特徴のうちの１つ以上、またはそれらの任意の組み合わせを有し得る。本開示の抗原結合タンパク質の他の生物学的特徴は、本明細書の実際の実施例を含む本開示のレビューから当業者には明らかであろう。

【0144】

エピトープマッピングおよび関連技術
本開示は、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの１つ以上のドメイン内に見出される１つ以上のアミノ酸と相互作用する抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含む。エピトープは、ＮＹ－ＥＳＯ－１分子（例えば、立体構造エピトープ）の上記ドメインのうちのいずれかまたは両方内に位置する複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなり得る。

【0145】

当業者に既知の様々な技法を使用して、抗原結合タンパク質が、ポリペプチドまたはタンパク質内の「１つ以上のアミノ酸と相互作用する」か決定することができる。例示的な技法には、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）に記載されるものなどの定型的なクロスブロッキングアッセイが含まれる。他の方法には、アラニンスキャニング変異解析、ペプチドブロット解析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８：４４３－６３）、ペプチド切断解析結晶学的試験、およびＮＭＲ解析が含まれる。さらに、エピトープ切除、エピトープ抽出、および抗原の化学修飾などの方法を用いることができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００）Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９：４８７－４９６を参照）。抗原結合タンパク質が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を特定するために使用することができる別の方法は、質量分析によって検出される水素／重水素交換である。一般的にいえば、水素／重水素交換法は、関心対象のタンパク質を重水素標識した後、抗原結合タンパク質を重水素標識タンパク質に結合させることを含む。次に、タンパク質／抗原結合タンパク質複合体は水に移され、抗原結合タンパク質複合体によって保護されるアミノ酸内の交換可能なプロトンは、界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で重水素から水素へのバック交換を受ける。結果として、タンパク質／抗原結合タンパク質界面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持し得、したがって界面に含まれないアミノ酸と比較して比較的高い質量を示す。抗原結合タンパク質の解離後、標的タンパク質をプロテアーゼ切断および質量分析に供し、それによって、抗原結合タンパク質が相互作用する特異的アミノ酸に対応する重水素標識残基が明らかにされる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７：２５２－２５９、Ｅｎｇｅｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ－２６５Ａを参照されたい。

【0146】

「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、タンパク質の三次フォールディングによって並置された連続するアミノ酸または不連続のアミノ酸の両方から形成され得る。連続するアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持され、一方、三次フォールディングによって形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒による処理で失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間立体配置内に、少なくとも３つ、より一般的には、少なくとも５つ、または８～１０個のアミノ酸を含む。

【0147】

抗原構造ベース抗体プロファイリング（ＡＳＡＰ）としても知られる修飾支援プロファイリング（ＭＡＰ）は、化学的または酵素的に修飾された抗原表面に対する各抗体の結合プロファイルの類似性に従って、同じ抗原に対して指向される多数のモノクローナル抗原結合タンパク質、例えば、抗体（ｍＡｂ）を分類する方法である（参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれるＵＳ２００４／０１０１９２０を参照されたい）。各カテゴリーは、別のカテゴリーによって表されるエピトープと明らかに異なるか、または部分的に重複する独自のエピトープのいずれかを反映し得る。この技術は、遺伝的に同一の抗原結合タンパク質の迅速なフィルタリングを可能し、それによって特徴付けが遺伝的に異なる抗原結合タンパク質に焦点を当てることができる。ハイブリドーマスクリーニングに適用される場合、ＭＡＰは、所望の特徴を有する抗原結合タンパク質を産生する希少なハイブリドーマクローンの特定を容易にし得る。ＭＡＰを使用して、本開示の抗原結合タンパク質を、異なるエピトープに結合する抗原結合タンパク質の群に分類し得る。

【0148】

本開示は、本明細書において表１に記載の具体的な例示的な抗原結合タンパク質のうちのいずれかと同じエピトープか、もしくはエピトープの一部に結合する抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質、または表１に記載の例示的な抗原結合タンパク質のうちのいずれかのＣＤＲ配列を有する抗原結合タンパク質を含む。同様に、本開示はまた、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１もしくはその断片への結合について、表１に記載の具体的な例示的な抗原結合タンパク質のうちのいずれかと、または表１に記載の例示的な抗原結合タンパク質のうちのいずれかのＣＤＲ配列を有する抗原結合タンパク質と、競合する抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含む。

【0149】

抗原結合タンパク質が参照抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合するか、または参照抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と結合について競合するかは、当技術分野で既知の定型的な方法を使用して容易に決定することができる。例えば、試験抗原結合タンパク質が、本開示の参照抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合するか決定するために、参照抗原結合タンパク質を、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質またはペプチドに飽和条件下で結合させる。次に、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１分子に結合する試験抗原結合タンパク質の能力を評価する。試験抗原結合タンパク質が、参照抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の飽和結合後にＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１に結合することができる場合、試験抗原結合タンパク質は、参照抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と異なるエピトープに結合すると結論付けることできる。他方、試験抗原結合タンパク質が、参照抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質との飽和結合後にＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１に結合することができない場合、試験抗原結合タンパク質は、本開示の参照抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質によって結合されるエピトープと同じエピトープに結合し得る。

【0150】

抗原結合タンパク質が参照抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と結合について競合するか決定するために、上記結合方法論が２つの適応で行われる。第１の適応では、参照抗原結合タンパク質をＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質に飽和条件下で結合させ、続いて、試験抗原結合タンパク質のＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１分子との結合を評価する。第２の適応では、試験抗原結合タンパク質を飽和条件下でＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１分子に結合させ、続いて、参照抗原結合タンパク質のＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１分子との結合を評価する。両適応において、第１の（飽和）抗原結合分子のみがＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１分子に結合することができる場合、試験抗原結合タンパク質および参照抗原結合タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１との結合について競合すると結論付けられる。当業者によって認識されるように、参照抗原結合タンパク質との結合について競合する抗原結合タンパク質は、必ずしも参照抗原結合タンパク質と同一のエピトープに結合し得ないが、重複または隣接しているエピトープに結合することによって、参照抗原結合タンパク質の結合を立体的に遮断し得る。

【0151】

２つの抗原結合タンパク質は、各々が抗原との他の結合を競合的に阻害（遮断）する場合、同じかまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、一方の抗原結合タンパク質の１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰が、競合結合アッセイで測定されるときに、少なくとも５０％、しかし好ましくは７５％、９０％、またはさらに９９％他方の結合を阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０：５０：１４９５－１５０２を参照されたい）。あるいは、一方の抗原結合タンパク質の結合を低減または排除する、抗原における本質的にすべてのアミノ酸変異が、他方の結合を低減または排除する場合、２つの抗原結合タンパク質は同じエピトープを有する。一方の抗原結合タンパク質の結合を低減または排除するアミノ酸変異が他方の結合を低減または排除する場合、２つの抗原結合タンパク質は重複エピトープを有する。

【0152】

次に、試験抗原結合タンパク質の結合の観察された欠如が、実際に、参照抗原結合タンパク質と同じエピトープへの結合によるものであるか、それとも立体遮断（または別の現象）が、観察された結合の欠如の原因であるのかを確認するために、さらなる通例の実験（例えば、ペプチド変異および結合分析）を実行することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または当該技術分野で利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的な抗原結合タンパク質結合アッセイを使用して行うことができる。

【0153】

免疫コンジュゲート
本開示は、がんを治療するための細胞毒または化学療法剤などの治療用部分にコンジュゲートされた抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質（「免疫コンジュゲート」）を包含する。本明細書で使用される場合、「免疫コンジュゲート」という用語は、細胞毒、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、検出可能な部分などの標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチドもしくはタンパク質、または治療剤に、化学的または生物学的に連結されている抗原結合タンパク質を指す。抗原結合タンパク質は、細胞毒、放射性剤、サイトカイン、インターフェロン、標的もしくはレポーター部分、酵素、毒素、ペプチド、または治療剤に、抗原結合タンパク質がその標的に結合することができる限り、分子に沿った任意の位置で結合され得る。免疫コンジュゲートの例には、抗原結合タンパク質－薬物コンジュゲートおよび抗原結合タンパク質－毒素融合タンパク質が含まれる。一実施形態において、薬剤は、ＮＹ－ＥＳＯ－１またはＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１に対する第２の異なる抗体であり得る。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、腫瘍細胞に特異的な薬剤にコンジュゲートされ得る。抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質にコンジュゲートされ得る治療用部分のタイプは、治療されるべき状態および達成されるべき所望の治療効果を考慮する。免疫コンジュゲートを形成するために好適な薬剤の例は、当該技術分野で知られており、例えば、ＰＣＴ公開第０５／１０３０８１号を参照されたい。

【0154】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞特異性を、がん細胞の表面に発現される抗体認識抗原にリダイレクトし、一方、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、細胞内腫瘍抗原を含むように標的の範囲を拡大する。Ｂ細胞分化抗原ＣＤ１９に特異的なＴ細胞にリダイレクトされるＣＡＲは、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療において劇的な効能を示しており、一方、ＴＣＲリダイレクトＴ細胞は、固形がんに罹患している患者において利益を示している。Ｓｔａｕｓｓらは、がんの治療に使用するために、例えば、抗原特異的エフェクター機能を増強し、操作されたＴ細胞の毒性を制限するように、治療用ＣＡＲおよびＴＣＲを改変する戦略を記載する（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２０１５，２４：１１３－１１８）。

【0155】

本開示の一態様は、ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むペプチドなどの、ＨＬＡ－Ａ２によって腫瘍細胞の表面に提示されるＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドに特異的であるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。本開示の一実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、細胞外標的特異的結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ゼータまたはＦｃＲガンマに由来するシグナル伝達ドメインなど）、および／または限定されないがＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、またはＣＤ２７８などの共刺激分子に由来する１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態において、ＣＡＲは、細胞外結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に、ＣＤ８アルファヒンジまたはＣＤ２８ヒンジなどのヒンジまたはスペーサー領域を含む。本開示の別の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲは、細胞外標的特異的結合ドメイン、およびＴ細胞受容体定常ドメインを含む（「Ｔ体構築物」）。いくつかの実施形態において、ヒンジ／膜貫通ドメインは、配列番号２９６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、配列番号３０５のＣＤ２８配列を含む。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、配列番号３０４のＣＤ２８配列を含む。いくつかの実施形態において、４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号２９７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号２９９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインは、配列番号２９８のアミノ酸配列を含む。

【0156】

本明細書に記載のＣＡＲのうちのいずれかで使用するために、細胞外標的特異的結合ドメインは、本開示の抗原結合タンパク質のＦａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含み得ることを理解されたい。

【0157】

本明細書で使用される場合、ＣＡＲの結合ドメインまたは細胞外ドメインは、ＣＡＲに、関心対象の標的抗原に結合する能力を提供する。結合ドメインは、生物学的分子（例えば、細胞表面受容体もしくは腫瘍タンパク質、またはそれらの構成要素）を特異的に認識して結合する能力を有する任意のタンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、またはペプチドであることができる。結合ドメインは、関心対象の生物学的分子に対する、天然に存在するか、合成的か、半合成的か、または組換えによって産生された任意の結合パートナーを含む。例えば、本明細書にさらに記載されるように、結合ドメインは、抗体軽鎖および重鎖可変領域であり得るか、または軽鎖および重鎖可変領域は、単鎖でいずれかの適応（例えば、ＶＬ－ＶＨまたはＶＨ－ＶＬ）で一緒に連結され得る。特定の標的と特異的に結合する本開示の結合ドメインを特定するために様々なアッセイが知られており、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、または表面プラズモン共鳴分析（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析を使用する）が含まれ、それらは本明細書に記載されている。標的は、腫瘍殺傷をもたらすエフェクター免疫応答を引き起こすことが望ましい、臨床的な関心対象の任意の抗原であり得る。一実施形態において、キメラ抗原受容体の結合ドメインの標的抗原は、腫瘍細胞の表面におけるＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドの立体構造エピトープ、例えばＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸残基１５７～１６５を含むペプチドなどである。

【0158】

例示的な結合ドメインには、抗原結合タンパク質が含まれ、例えば、ｓｃＦｖなどの抗体の抗原結合断片、ｓｃＴＣＲ、受容体の細胞外ドメイン、細胞表面分子／受容体のリガンドまたはその受容体結合ドメイン、および腫瘍結合タンパク質が挙げられる。特定の実施形態において、本開示のＣＡＲに含まれる抗原結合ドメインは、可変領域（Ｆｖ）、ＣＤＲ、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ＶＨ、ＶＬ、ドメイン抗体バリアント（ｄＡｂ）、ラクダ科抗体（ＶＨＨ）、フィブロネクチン３ドメインバリアント、アンキリンリピートバリアント、および他のタンパク質骨格に由来する他の抗原特異的結合ドメインであることができる。

【0159】

一実施形態において、ＣＡＲの結合ドメインは、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１単鎖抗体（ｓｃＦｖ）であり、マウス、ヒト、またはヒト化ｓｃＦｖであり得る。単鎖抗体は、所望の標的に特異的なハイブリドーマのＶ領域遺伝子からクローニングされ得る。可変領域重鎖（ＶＨ）および可変領域軽鎖（ＶＬ）をクローニングするために使用することができる技法は、例えば、Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１９８９；８６：３８３３－３８３７に記載されている。したがって、特定の実施形態において、結合ドメインは、抗体由来結合ドメインを含むが、非抗体由来結合ドメインであり得る。抗体由来結合ドメインは、抗体の断片、または抗体の１つ以上の断片の遺伝子操作産物であり得、いずれの断片も抗原との結合に関与する。

【0160】

特定の実施形態において、本開示のＣＡＲは、分子の適切なスペーシングおよび立体構造のために付加される様々なドメイン間のリンカーを含み得る。例えば、いくつかの実施形態において、１～１０アミノ酸長であり得る結合ドメインＶＨとＶＬ領域との間にリンカーが存在し得る。他の実施形態において、キメラ抗原受容体のドメインのいずれかの間のリンカーは、１～２０、または２０アミノ酸長であり得る。これに関して、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長であり得る。さらなる実施形態において、リンカーは、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸長であり得る。本明細書に記載される数を含む範囲も、本明細書に含まれ、例えば、リンカー１０～３０アミノ酸長などが挙げられる。

【0161】

特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲにおける使用に好適なリンカーは、フレキシブルリンカーである。好適なリンカーは、容易に選択することができ、１アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）～２０アミノ酸、２アミノ酸～１５アミノ酸、３アミノ酸～１２アミノ酸などの異なる長さの好適ないずれかであることができ、４アミノ酸～１０アミノ酸、５アミノ酸～９アミノ酸、６アミノ酸～８アミノ酸、または７アミノ酸～８アミノ酸を含み、１、２、３、４、５、６、または７アミノ酸であり得る。

【0162】

例示的なフレキシブルリンカーには、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（Ｇ）ｎＳ（ｎは少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、および当該技術分野で既知の他のフレキシブルリンカーが含まれる。加えて、リンカーは、上記配列の複数の単位、例えば、（（Ｇ）ｎＳ）ｍ）を含み得、式中、ｎは、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の整数であり、ｍは、少なくとも１つ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の整数である。いくつかの実施形態において、ｎは４であり、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳ（配列番号２９５）を含む。いくつかの実施形態において、ｎは４であり、ｍは３であり、リンカーは配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０３）を含む。グリシンおよびグリシン－セリンポリマーは、比較的構造化されておらず、したがって、本明細書に記載のＣＡＲなどの融合タンパク質のドメイン間の中立的テザーとして機能することができる。グリシンは、アラニンよりも有意に多くのパイ－プサイ空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限されていない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１１７３－１４２（１９９２）を参照されたい）。当業者は、ＣＡＲの設計がすべてまたは部分的にフレキシブルであるリンカーを含むことができ、それによってリンカーがフレキシブルリンカー、ならびに所望のＣＡＲ構造を提供するより低いフレキシブル構造を付与する１つ以上の部分を含むことができることを認識するであろう。

【0163】

ＣＡＲの結合ドメインに続いて、「スペーサー」、または「ヒンジ」が続き得、これは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離して、適切な細胞／細胞接触、抗原結合、および活性化を可能にする領域を指す（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９９；６：４１２－４１９）。ＣＡＲにおけるヒンジ領域は、一般に、膜貫通（ＴＭ）ドメインと結合ドメインとの間にある。特定の実施形態において、ヒンジ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域であり、野生型免疫グロブリンヒンジ領域または変異した野生型免疫グロブリンヒンジ領域であり得る。本明細書に記載されるＣＡＲにおいて使用される他の例示的なヒンジ領域には、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ２８、およびＣＤ７などの１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域が含まれ、これらの分子に由来する野生型ヒンジ領域であり得るか、または変異され得る。一実施形態において、ヒンジ領域は、ＣＤ８アルファヒンジを含む。

【0164】

「膜貫通」領域またはドメインは、細胞外結合部分を免疫エフェクター細胞の形質膜に固定し、結合ドメインの標的抗原への結合を促進するＣＡＲの一部である。膜貫通ドメインは、ＣＤ３ゼータ膜貫通ドメインであり得るが、用いられ得る他の膜貫通ドメインには、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、およびＣＤ１５４から得られるものが含まれる。一実施形態において、膜貫通ドメインは、ＣＤ１３７の膜貫通ドメインである。特定の実施形態において、膜貫通ドメインは合成ドメインであり、その場合、それはロイシンおよびバリンなどの主として疎水性の残基を含む。

【0165】

「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、標的抗原との有効なＣＡＲ結合のメッセージを免疫エフェクター細胞の内部に伝達することに関与して、エフェクター細胞機能、例えば、活性化、サイトカイン産生、増殖、およびＣＡＲ結合標的細胞への細胞傷害性因子の放出を含む細胞傷害性活性を誘発するか、または細胞外ＣＡＲドメインへの抗原結合で誘発された他の細胞応答を誘発する、キメラ抗原受容体タンパク質の部分を指す。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特化した機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性、またはサイトカインの分泌を含む援助もしくは活性であり得る。したがって、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に指示して特化した機能を実行するタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、ドメイン全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される範囲内で、かかる切断部分は、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、ドメイン全体の代わりに使用され得る。細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことが意味される。細胞内シグナル伝達ドメイン（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）は、「シグナル伝達ドメイン（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ）」としても知られており、典型的には、ヒトＣＤ３またはＦｃＲｙ鎖の一部に由来する。

【0166】

Ｔ細胞受容体のみを介して生成されるシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であり、二次的または共刺激シグナルも必要とされることが知られている。したがって、Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞受容体を介した抗原依存性一次活性化を開始するもの（一次細胞質シグナル配列）と、二次または共刺激シグナルを提供するために抗原非依存性手段で作用するもの（二次細胞質シグナル配列）と、の２つの異なるクラスの細胞質シグナル配列によって媒介されると言うことができる。一次細胞質シグナル伝達配列は、Ｔ細胞受容体複合体の一次活性化を、阻害的な方法または阻害的な方法のいずれかで制御する。共刺激手段で作用する一次細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシン系活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られているシグナル伝達モチーフを含み得る。

【0167】

本開示で特に使用されるＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例には、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが含まれる。特定の実施形態において、本明細書に記載の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータまたはＦｃＲガンマに由来する。

【0168】

本明細書で使用される場合、「共刺激シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激分子は、抗原への結合時にＴリンパ球の効率的な活性化および機能に必要な第２のシグナルを提供する、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。かかる共刺激分子の例には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＤ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ２、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが含まれる。したがって、本開示は、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ２８、および４－１ＢＢに由来する例示的な共刺激ドメインを提供するが、他の共刺激ドメインが、本明細書に記載されるＣＡＲとともに使用されることが企図される。１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインの包含は、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性および増殖を増強し得る。細胞内シグナル伝達ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインのカルボキシル末端に任意の順序で直列に連結され得る。

【0169】

ＣＤ３またはＦｃＲガンマに由来するシグナル伝達ドメインを含むように操作されたｓｃＦｖベースのＣＡＲは、Ｔ細胞活性化およびエフェクター機能のために強力なシグナルを送達することが示されているが、それらは、併用の共刺激シグナルの不存在下でＴ細胞生存および増殖を促進するシグナルを誘発するのに十分ではない。結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通、および１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、およびＣＤ２７８に由来する細胞内共刺激ドメイン）とともに、ＣＤ３ゼータまたはＦｃＲガンマに由来するシグナル伝達ドメインを含む他のＣＡＲは、インビトロ、動物モデル、およびがん患者における抗腫瘍活性、ならびにＣＡＲ発現Ｔ細胞の増加したサイトカイン分泌、溶解活性、生存、および増殖の増加をより効率的に指示し得る（Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２００９；１７：１４５３－１４６４、Ｚｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１０；１８：４１３－４２０、Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００９；１０６：３３６０－３３６５）。

【0170】

一実施形態において、本開示のＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲは、（ａ）結合ドメインとして抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ｓｃＦｖ（例えば、表１に記載のＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体のうちのいずれか１つ以上からの結合領域（例えば、ＣＤＲまたは可変ドメイン）を有するｓｃＦｖ）と、（ｂ）ヒトＣＤ８アルファに由来するヒンジ領域と、（ｃ）ヒトＣＤ８アルファ膜貫通ドメインと、（ｄ）ヒトＴ細胞受容体ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３）細胞内シグナル伝達ドメインと、任意選択的に、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、およびＣＤ２７８に由来する１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインと、を含む。一実施形態において、異なるタンパク質ドメインは、アミノ末端からカルボキシル末端に向けて、結合ドメイン、ヒンジ領域、および膜貫通ドメインの順序で配置される。細胞内シグナル伝達ドメインおよび任意選択的な共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の順序で膜貫通カルボキシ末端に直列で連結され、単鎖キメラポリペプチドを形成する。一実施形態において、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲをコードする核酸構築物は、異なるコード配列、例えば、（５’から３’に）ヒト抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８アルファ－ヒンジ、ヒトＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインのコード配列を含む核酸分子を含むキメラ核酸分子である。別の実施形態において、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲをコードする核酸構築物は、異なるコード配列、例えば、（５’から３’に）ヒト抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８アルファ－ヒンジ、ヒトＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ゼータ共刺激ドメインのコード配列を含む核酸分子を含むキメラ核酸分子である。特定の実施形態において、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲをコードする核酸構築物は、異なるコード配列、例えば、（５’から３’に）ヒト抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８アルファヒンジ、ヒトＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７共刺激ドメイン、およびＣＤ３ゼータ共刺激ドメインのコード配列を含む核酸分子を含むキメラ核酸分子であり、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ｓｃＦｖは、配列番号２、２２、４２、６２、８２、１０２、１２２、１４２、１６２、１８０、１９６、２１１、２３０、および２５０からなる群から選択されるＶ_Ｈを含むか、または抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ｓｃＦｖは、配列番号１０、３０、５０、７０、９０、１１０、１３０、１５０、１７０、１８６、２０３、２１９、２３８、および２５８からなる群から選択されるＶ_Ｌを含むか、または抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ｓｃＦｖは、配列番号２／１０、２２／３０、４２／５０、６２／７０、８２／９０、１０２／１１０、１２２／１３０、１４２／１５０、１６２／１７０、１８０／１８６、１９６／２０３、２１１／２１９、２３０／２３８、および２５０／２５８からなる群から選択されるＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌ対を含む。いくつかの実施形態において、本開示は、表２の配列からなる群から選択されるＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲをコードする核酸分子を含む。

【0171】

特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、ベクターに挿入される。本明細書で使用される「ベクター」という用語は、タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、そのタンパク質の発現および／またはポリヌクレオチドのクローニングをもたらすように、共有結合によって挿入され得るビヒクルを指す。かかるベクターは、「発現ベクター」と称され得る。単離されたポリヌクレオチドは、当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用してベクターに挿入され得、例えば、限定されないが、ベクターは、適切な制限酵素を使用して消化され得、次いで、マッチング制限末端を有する単離されたポリヌクレオチドと連結され得る。発現ベクターは、細胞内で転写することができる遺伝子産物の少なくとも一部をコードする異種または改変核酸配列を組み込んで発現する能力を有する。ほとんどの場合、ＲＮＡ分子は次いでタンパク質に翻訳される。発現ベクターは、特定の宿主生物において操作可能に連結されたコード配列の転写、および場合によって翻訳に必要な核酸配列を指す、様々な制御配列を含むことができる。転写および翻訳を統御する制御配列に加えて、ベクターおよび発現ベクターは、他の機能も果たし、以下で考察される核酸配列を含み得る。発現ベクターは、追加の要素を含み得、例えば、発現ベクターは、２つの複製系を有し得、したがって、それが２つの生物内、例えば、発現のためのヒト細胞内ならびにクローニングおよび増幅のための原核宿主内で維持されることを可能にする。

【0172】

発現ベクターは、そのそれぞれの宿主細胞における効率的な遺伝子転写および翻訳のために、ＣＭＶ、ＰＧＫ、およびＥＦ１アルファプロモーターなどのプロモーター配列、リボソーム認識および結合ＴＡＴＡボックス、ならびに３’ＵＴＲ ＡＡＵＡＡＡ転写終結配列などの必要な５’上流および３’下流調節エレメントを有し得る。他の好適なプロモーターには、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）早期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ＨＩＶ ＬＴＲプロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、ＥＢＶ前早期プロモーター、およびラウス肉腫ウイルスプロモーターの構成的プロモーターが含まれる。ヒト遺伝子プロモーターも使用され得、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、誘導性プロモーターはまた、キメラ抗原受容体を発現するベクターの一部として企図される。これは、関心対象のポリヌクレオチド配列の発現をオンにするか、または発現をオフにすることができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例には、メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、またはテトラサイクリンプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。

【0173】

発現ベクターは、発現されるＣＡＲに組み込まれる６×ヒスチジン（配列番号２９２）、ｃ－Ｍｙｃ、およびＦＬＡＧタグなどの追加の配列を有し得る。したがって、発現ベクターは、発現ベクターに担持される関心対象の核酸の効率的な転写を促進または増強することができる、エンハンサー配列、プロモーター領域、および／またはターミネーター配列として時に機能することができる、５’および３’非翻訳調節配列を含むように操作され得る。発現ベクターはまた、特定の細胞型、細胞位置、または組織型における複製および／または発現機能性（例えば、転写および翻訳）のために操作され得る。発現ベクターは、宿主または受容細胞におけるベクターの維持のために選択可能マーカーを含み得る。

【0174】

ベクターの例は、プラスミド、自律複製配列、および転移因子である。さらなる例示的なベクターには、限定されないが、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、ラムダファージまたはＭ１３ファージなどのバクテリオファージ、および動物ウイルスが含まれる。ベクターとして有用な動物ウイルスのカテゴリーの例には、限定されないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が含まれる。発現ベクターの例は、哺乳動物細胞における発現のためのＬｅｎｔｉ－Ｘ（商標）バイシストロニック発現系（Ｎｅｏ）ベクター（Ｃｌｏｎｔｒｃｈ）、ｐＣｌｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）、哺乳動物細胞におけるレンチウイルス媒介遺伝子移入および発現のためのｐＬｅｎｔｉ４／Ｖ５－ＤＥＳＴ．ＴＭ．、ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＤＥＳＴ．ＴＭ．、およびｐＬｅｎｔｉ６．２Ｎ５－ＧＷ／ｌａｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である。本明細書に開示されるＣＡＲのコード配列は、哺乳動物細胞におけるキメラタンパク質の発現のためのかかる発現ベクターに連結することができる。

【0175】

特定の実施形態において、本開示のＣＡＲをコードする核酸は、ウイルスベクターにおいて提供される。ウイルスベクターは、レトロウイルス、レンチウイルス、または泡沫状ウイルスに由来するものであることができる。本明細書で使用される場合、用語「ウイルスベクター」は、ウイルス起源の少なくとも１つの要素を含み、ウイルスベクター粒子にパッケージングされる能力を有する核酸ベクター構築物を指す。ウイルスベクターは、非必須ウイルス遺伝子の代わりに、本明細書に記載される様々なキメラタンパク質のコード配列を含むことができる。ベクターおよび／または粒子は、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞にＤＮＡ、ＲＮＡ、または他の核酸を移入する目的のために利用することができる。多数の形態のウイルスベクターが当該技術分野で知られている。

【0176】

特定の実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲのコード配列を含むウイルスベクターは、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。「レトロウイルスベクター」という用語は、主にレトロウイルスに由来する構造的および機能的遺伝子要素を含むベクターを指す。「レンチウイルスベクター」という用語は、主にレンチウイルスに由来するＬＴＲの外側に構造的および機能的遺伝子要素を含むベクターを指す。

【0177】

本明細書における使用のためのレトロウイルスベクターは、任意の既知のレトロウイルス（例えば、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳がんウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプーマウイルス、Ｆｒｉｅｎｄ、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）などのｃ型レトロウイルス）に由来し得る。本開示の「レトロウイルス」にはまた、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ＨＴＬＶ－１およびＨＴＬＶ－２、ならびにヒト免疫不全ウイルス、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ免疫不全ウイルス（ＥＩＶ）、および他のクラスのレトロウイルスなどのレトロウイルス科のレンチウイルスも含まれる。

【0178】

本明細書で使用するためのレンチウイルスベクターは、徐々に発症する疾患を引き起こすレトロウイルスのグループ（または属）であるレンチウイルスに由来するベクターを指す。このグループに含まれるウイルスには、ＨＩＶ（ＨＩＶ１型およびＨＩＶ２型を含むヒト免疫不全ウイルス）、ビスナ・マエディ、ヤギ関節炎－脳炎ウイルス、ウマ伝染性貧血ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が含まれる。組換えレンチウイルスの調製は、ＤｕｌｌらおよびＺｕｆｆｅｒｅｙら（Ｄｕｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，１９９８；７２：８４６３－８４７１およびＺｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１９９８；７２：９８７３－９８８０）による方法を使用して達成することができる。

【0179】

本開示における使用のためのレトロウイルスベクター（すなわち、レンチウイルスおよび非レンチウイルスの両方）は、本明細書に記載の指示および適応で所望のＤＮＡ配列を組み合わせることによって、標準的なクローニング技法を使用して生成することができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，（１９８９），Ｓｅｃｔｉｏｎｓ ９．１０－９．１４および他の標準的な検査室マニュアル、Ｅｇｌｉｔｉｓ，ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１３９５－１３９８、Ｄａｎｏｓ ａｎｄ Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：６４６０－６４６４、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：３０１４－３０１８、Ａｒｍｅｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６１４１－６１４５、Ｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８０３９－８０４３、Ｆｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８３７７－８３８１、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１８０２－１８０５、ｖａｎ Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７６４０－７６４４、Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：６４１－６４７、Ｄａｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０８９２－１０８９５、Ｈｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １５０：４１０４－４１１５、米国特許第４，８６８，１１６号、米国特許第４，９８０，２８６号、ＰＣＴ出願第８９／０７１３６号、ＰＣＴ出願第８９／０２４６８号、ＰＣＴ出願第８９／０５３４５号、およびＰＣＴ出願第９２／０７５７３号）。

【0180】

ベクターを生成する際に使用するためのレトロウイルス（すなわち、レンチウイルスおよび非レンチウイルスの両方）配列を得るために好適な供給源には、例えば、Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄを含む市販の供給源から入手可能なゲノムＲＮＡおよびｃＤＮＡが含まれる。配列はまた、化学的に合成することもできる。

【0181】

ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲの発現では、ベクターを宿主細胞に導入して、宿主細胞内でポリペプチドの発現を可能にし得る。発現ベクターは、発現を制御するための様々な要素を含み得、限定されないが、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能マーカー、およびシグナル配列が含まれる。これらの要素は、上記のように、当業者によって適切に選択され得る。例えば、プロモーター配列は、ベクターにおけるポリヌクレオチドの転写を促進するために選択され得る。好適なプロモーター配列には、限定されないが、Ｔ７プロモーター、Ｔ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ベータアクチンプロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ＣＭＶプロモーター、およびＳＶ４０プロモーターが含まれる。エンハンサー配列は、ポリヌクレオチドの転写を増強するために選択され得る。選択可能マーカーは、ベクターが挿入された宿主細胞を、挿入されていないものから選択することを可能にし得、例えば、選択可能マーカーは、抗生物質耐性を付与する遺伝子であり得る。シグナル配列は、発現されたポリペプチドが、宿主細胞の外側に輸送されることを可能するために選択され得る。

【0182】

ポリヌクレオチドのクローニングでは、ベクターが宿主細胞（単離された宿主細胞）に導入されて、ベクター自体の複製を可能にし、それによって、そこに含まれるポリヌクレオチドのコピーを増幅し得る。クローニングベクターは、一般に、限定されないが、複製起点、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、および選択可能マーカーを含む、配列成分を含み得る。これらの要素は、当業者によって適切に選択され得る。例えば、複製起点は、宿主細胞におけるベクターの自律的複製を促進するように選択され得る。

【0183】

特定の実施形態において、本開示は、本明細書に提供されるベクターを含む単離された宿主細胞を提供する。ベクターを含む宿主細胞は、ベクターに含まれるポリヌクレオチドの発現またはクローニングにおいて有用であり得る。好適な宿主細胞には、限定されないが、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、または哺乳動物細胞などの高等真核細胞が含まれ得る。この目的のために好適な原核細胞には、限定されないが、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、例えばＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、例えばＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、およびＳｈｉｇｅｌｌａ、ならびにＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓなどのＢａｃｉｌｌｉ、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａなどのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓが含まれる。

【0184】

本開示のＣＡＲは、当該技術分野で知られているトランスフェクションおよび／または形質導入技法を使用して宿主細胞に導入される。本明細書で使用される場合、「トランスフェクション」および「形質導入」という用語は、外因性核酸配列が宿主細胞に導入されるプロセスを指す。核酸は、宿主細胞ＤＮＡに組み込まれ得るか、または染色体外で維持され得る。核酸は、一時的に維持され得るか、または、安定的な導入であり得る。トランスフェクションは、当該技術分野で既知の様々な手段によって達成され得、リン酸カルシウム－ＤＮＡ共沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、ポリブレン媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポソーム融合、リポフェクション、プロトプラスト融合、レトロウイルス感染、および遺伝子銃が含まれるが、これらに限定されない。形質導入は、トランスフェクションよりもむしろウイルス感染の手段によって、ウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターを使用した遺伝子の送達を指す。特定の実施形態において、レトロウイルスベクターは、細胞と接触する前に、ベクターをビリオンにパッケージングすることによって形質導入される。例えば、レトロウイルスベクターによって担持される抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲをコードする核酸は、感染およびプロウイルス組み込みを通じて細胞に形質導入することができる。

【0185】

本明細書で使用される場合、「遺伝子操作された」または「遺伝子改変された」という用語は、細胞内の全遺伝子材料へのＤＮＡまたはＲＮＡの形態での余分な遺伝子材料の付加を指す。「遺伝子改変細胞」、「改変細胞」、および「再指示細胞」という用語は、互換的に使用される。

【0186】

特に、本開示のＣＡＲは、免疫エフェクター細胞に導入されて発現され、それによってそれらの特異性を、関心対象の標的抗原、例えば、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド、例えば、アミノ酸残基１５７～１６５に対してリダイレクトする。

【0187】

本開示は、本明細書に記載のＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を作製するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を有する対象などの対象から単離された免疫エフェクター細胞をトランスフェクトまたは形質導入することを含み、それによって、免疫エフェクター細胞は本明細書に記載の１つ以上のＣＡＲを発現する。特定の実施形態において、免疫エフェクター細胞は、個体から単離され、さらにインビトロでの操作を伴わずに遺伝子改変される。次いで、かかる細胞は、同じ個体（自己療法用として）に、または別の個体（同種異系療法用として）に、直接再投与することができる。さらなる実施形態において、免疫エフェクター細胞は、最初にインビトロで増殖するように活性化および刺激され、その後にＣＡＲを発現するように遺伝子改変される。この点に関して、免疫エフェクター細胞は、遺伝子改変される（すなわち、本明細書に記載のＣＡＲを発現するように形質導入またはトランスフェクションされる）前または後に培養され得る。

【0188】

本明細書に記載の免疫エフェクター細胞のインビトロでの操作または遺伝子改変の前に、細胞源は対象から得ることができる。特に、本明細書に記載のＣＡＲで使用するための免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含む。かかる組換えＴ細胞は、本明細書において「Ｔ体」と称される。

【0189】

本開示の一実施形態において、Ｔ体は、細胞外標的特異的結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ゼータまたはＦｃＲガンマに由来するシグナル伝達ドメインなど）、および／または１つ以上の共刺激分子に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン（ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、またはＣＤ２７８などであるがこれらに限定されない）を含む、本開示のＣＡＲを含む。本開示の別の実施形態において、Ｔ体は、細胞外標的特異的結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞外結合ドメインと膜貫通ドメインとの間のヒンジまたはスペーサー領域、細胞内シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ゼータまたはＦｃＲガンマに由来するシグナル伝達ドメインなど）、および／または共刺激分子に由来する１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む本開示のＣＡＲを含む。本開示のさらに別の実施形態において、Ｔ体は、細胞外標的特異的結合ドメインおよびＴ細胞受容体定常ドメインを含むＴ体構築物ＣＡＲを含む。本明細書に記載のＣＡＲのいずれかを含むＴ体における使用のために好適な細胞外標的特異的結合ドメインは、本開示の抗原結合タンパク質のＦａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含み得る。

【0190】

Ｔ細胞は、多数の供給源から得ることができ、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺流出物（ｔｈｙｍｕｓ ｉｓｓｕｅ）、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍が含まれる。特定の実施形態において、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ分離などの当業者に知られている任意の数の技法を使用して、対象から収集される血液の単位から得ることができる。一実施形態において、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞を含むリンパ球、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含有する。一実施形態において、アフェレーシスによって収集された細胞は、洗浄して血漿画分を除去し、その後の処理のために細胞を適切な緩衝液または培地中に配置し得る。本開示の一実施形態において、細胞はＰＢＳで洗浄される。代替の実施形態において、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、かつマグネシウムを欠き得るか、またはすべてではないが多くの二価カチオンを欠き得る。当業者によって理解されるように、洗浄ステップは、半自動フロースルー遠心分離機を使用するなど、当業者に既知の方法によって達成され得る。洗浄後、細胞は、緩衝液の有無にかかわらず、様々な生体適合性緩衝液または他の生理食塩溶液に再懸濁され得る。特定の実施形態において、アフェレーシス試料の望ましくない成分は、細胞を直接再懸濁した培地中で除去され得る。

【0191】

特定の実施形態において、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、単球を枯渇させることによって、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を通した遠心分離によって、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離される。ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の亜集団は、陽性または陰性選択技法によってさらに単離することができる。例えば、陰性選択によるＴ細胞集団の豊富化は、陰性選択された細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせによって達成することができる。フローサイトメトリーを介した細胞選別および／または選択であり、陰性選択された細胞に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を豊富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。フローサイトメトリーおよび細胞選別もまた、本開示で使用する関心対象の細胞集団を単離するために使用され得る。

【0192】

ＰＢＭＣは、本明細書に記載される方法を使用して、ＣＡＲによる遺伝子改変のために直接使用され得る。特定の実施形態において、ＰＢＭＣの単離後、Ｔリンパ球はさらに単離され、特定の実施形態において、細胞傷害性およびヘルパーＴリンパ球の両方を、遺伝子改変および／または増殖の前もしくは後のいずれかで、ナイーブ、メモリー、およびエフェクターＴ細胞亜集団に選別することができる。ＣＤ８＋細胞は、標準的な方法を使用することによって得ることができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ８＋細胞は、これらのタイプのＣＤ８＋細胞の各々と会合する細胞表面抗原を特定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、およびエフェクター細胞にさらに選別される。実施形態において、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ６２Ｌサブセットの両方に存在する。ＰＢＭＣは、抗ＣＤ８および抗ＣＤ６２Ｌ抗体で染色した後、ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ８＋およびＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８＋画分に選別する。いくつかの実施形態において、セントラルメモリーＴＣＭの表現型マーカーの発現は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、およびＣＤ１２７を含み、グランザイムＢについて陰性である。いくつかの実施形態において、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、およびＣＤ１２７について陰性であり、およびグランザイムＢおよびパーフォリンについて陽性である。いくつかの実施形態において、ナイーブＣＤ８＋Ｔリンパ球は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ１２７、およびＣＤ４５ＲＡを含むナイーブＴ細胞の表現型マーカーの発現によって特徴付けられる。

【0193】

特定の実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、亜集団にさらに選別される。例えば、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を特定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、およびエフェクター細胞に選別することができる。ＣＤ４＋リンパ球は、標準の方法によって得ることができる。いくつかの実施形態において、ナイーブＣＤ４＋Ｔリンパ球は、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、セントラルメモリーＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ陽性およびＣＤ４５ＲＯ陽性である。いくつかの実施形態において、エフェクターＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２ＬおよびＣＤ４５ＲＯ陰性である。

【0194】

Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞は、既知の方法を使用した単離後に遺伝子改変することができるか、または免疫エフェクター細胞は、遺伝子改変される前にインビトロで活性化および増殖（または前駆細胞の場合に分化）することができる。別の実施形態において、Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞は、本明細書に記載のキメラ抗原受容体で遺伝子改変され（例えば、ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスベクターで形質導入される）、次いで、インビトロで活性化されて増殖される。Ｔ細胞を活性化および増殖するための方法は、当該技術分野で知られており、例えば、米国特許第６，９０５，８７４号、米国特許第６，８６７，０４１号、米国特許第６，７９７，５１４号、ＷＯ２０１２／０７９０００号、ＵＳ２０１６／０１７５３５８に記載されている。一般的に、かかる方法は、ＰＢＭＣまたは単離されたＴ細胞を、ＩＬ－２などの適切なサイトカインを添加した培養培地中で、一般的にビーズまたは他の表面に結合した抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体などの刺激剤および共刺激剤と接触させることを含む。同じビーズに結合した抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体は、「代理」抗原提示細胞（ＡＰＣ）として機能する。他の実施形態において、Ｔ細胞は、米国特許第６，０４０，１７７号、米国特許第５，８２７，６４２号、およびＷＯ２０１２／１２９５１４に記載されている方法などの方法を使用して、フィーダー細胞ならびに適切な抗体およびサイトカインとともに増殖するように活性化および刺激され得る。

【0195】

本開示は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害、例えば、がんの治療のために改変免疫エフェクター細胞の集団を提供し、改変免疫エフェクター細胞は、本明細書に開示されるＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲを含む。

【0196】

本明細書に記載されるように調製されるＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞は、本開示に基づいて当業者には明らかであろう既知の技法またはその変形に従って、養子免疫療法のための方法および組成物において利用することができる。例えば、Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇらによる米国特許出願公開第２００３／０１７０２３８号を参照し、またＲｏｓｅｎｂｅｒｇによる米国特許第４，６９０，９１５号も参照されたい。

【0197】

いくつかの実施形態において、細胞は、最初にそれらをその培地から採取し、次いで細胞を、治療有効量で、投与に適した培地および容器システム（「薬学的に許容される」担体）中で洗浄および濃縮することによって製剤化される。好適な注入媒体は、任意の等張媒体製剤、典型的には生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）、またはＰｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）であり得るが、水中の５％デキストロースまたは乳酸リンゲル液も利用することができる。注入媒体は、ヒト血清アルブミンを補充することができる。

【0198】

組成物中の治療有効細胞数は、少なくとも細胞２個（例えば、少なくとも１個のＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞および少なくとも１個のＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞サブセット）であるか、または典型的には、細胞１０^２個超で最大１０^６であり、細胞１０^８または１０^９個を含み、細胞１０^１０個超であることができる。細胞数は、組成物が意図される最終的な使用、およびそこに含まれる細胞型に依存する。

【0199】

細胞は、療法を受ける患者に対して自己または異種であり得る。所望される場合、治療はまた、免疫応答の誘導を増強するために、本明細書に記載されるマイトジェン（例えば、ＰＨＡ）もしくはリンホカイン、サイトカイン、および／またはケモカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１８、およびＴＮＦ－β、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、Ｆｌｔ３－Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１αなど）の投与を含み得る。

【0200】

本開示のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞集団は、単独で、あるいは希釈剤および／またはＩＬ－２もしくは他のサイトカインまたは細胞集団などの他の成分と組み合わせた医薬組成物として投与され得る。簡単に説明すると、本開示の医薬組成物は、本明細書に記載のＴ細胞などのＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞集団を、１つ以上の薬学的または生理学的に許容される担体、希釈剤、もしくは賦形剤と組み合わせて含み得る。かかる組成物は、中性緩衝化生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水などの緩衝液、グルコース、マンノース、スクロースもしくはデキストラン、マンニトールなどの炭水化物、タンパク質、ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸、抗酸化剤、ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、および保存剤を含み得る。本開示の組成物は、好ましくは、静脈内投与のために製剤化される。

【0201】

本明細書に記載の方法、または当該技術分野で既知の他の方法を使用して、本明細書に記載のＣＡＲ発現Ｔ細胞を投与することによって対象で誘導される抗腫瘍免疫応答は、感染細胞を殺傷することができる細胞傷害性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、およびヘルパーＴ細胞応答によって媒介される細胞免疫応答を含み得る。Ｂ細胞を活性化し、したがって抗体産生をもたらすことができるヘルパーＴ細胞によって主に媒介される体液性免疫応答も誘導され得る。様々な技法が本開示の組成物によって誘導される免疫応答のタイプを分析するために使用され得、それらは当該技術分野において、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ：Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ（２００１）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．で十分に説明されている。

【0202】

したがって、本開示は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がんを有すると診断されたか、もしくは有することが疑われるか、またはそれらを発症するリスクがある個体を治療するための方法を提供し、本方法は、個体に、治療有効量の本明細書に記載のＣＡＲ発現免疫エフェクター細胞を投与することを含む。

【0203】

一実施形態において、本開示は、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がんを有すると診断された対象を治療する方法を提供し、本方法は、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がんを有すると診断された対象から免疫エフェクター細胞を取り出すことと、本開示のキメラ抗原受容体をコードする核酸を含むベクターを用いて当該免疫エフェクター細胞を遺伝子改変することと、それによって改変免疫エフェクター細胞集団を産生することと、改変免疫エフェクター細胞集団を同じ対象に投与することと、を含む。一実施形態において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞を含む。

【0204】

本明細書に記載の細胞組成物を投与する方法は、生体外遺伝子改変免疫エフェクター細胞の再導入をもたらすのに有効である任意の方法を含み、それらの細胞は、対象において本開示のＣＡＲを直接発現するか、または対象への導入時に成熟免疫エフェクター細胞に分化する免疫エフェクター細胞の遺伝子改変前駆細胞の再導入でＣＡＲを発現するか、のいずれかである。１つの方法は、本開示による核酸構築物で末梢血Ｔ細胞を生体外で形質導入し、形質導入された細胞を対象に戻すことを含む。

【0205】

治療的投与および製剤
本開示は、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質、例えば、抗体、もしくはその抗原結合断片、またはＣＡＲを含む、治療用組成物を提供する。本開示による治療用組成物は、好適な担体と、賦形剤と、改善された移送、送達、耐性などをもたらすために製剤に組み込まれる他の薬剤と、ともに投与される。多くの適切な製剤は、すべての製薬化学者に知られている処方集であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに見出すことができる。これらの製剤には、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有ベシクル（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油および油中水エマルション、エマルションカーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックス含有半固体混合物が含まれる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．”Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８－３１１も参照されたい。

【0206】

抗原結合タンパク質、例えば、抗体またはその抗原結合タンパク質の用量は、投与される対象の年齢および大きさ、標的疾患、状態、投与経路などに応じて変化し得る。本開示の抗原結合タンパク質が、成人患者における疾患もしくは障害を治療するため、またはかかる疾患を予防するために使用される場合、本開示の抗原結合タンパク質、例えば、抗体、またはその抗原結合断片を、通常、約０．１～約６０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約５～約６０、約２０～約５０、約１０～約５０、約１～約１０、または約０．８～約１１ｍｇ／ｋｇ体重の単回用量で投与することが有利である。状態の重症度に応じて、治療の頻度および期間を調整することができる。特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質、例えば、抗体、またはその抗原結合断片は、少なくとも約０．１ｍｇ～約８００ｍｇ、約１～約５００ｍｇ、約５～約３００ｍｇ、または約１０～約２００ｍｇ、～約１００ｍｇ、もしくは～約５０ｍｇの初回用量として投与することができる。特定の実施形態において、初回用量の後に、初期用量とほぼ同じか、またはそれより少ない量であることができる、第２または複数回の後続用量の抗原結合タンパク質、例えば、抗体、またはその抗原結合断片の投与が続き得、後続用量は、少なくとも１日～３日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１２週間、または少なくとも１４週間離される。

【0207】

種々の送達系が知られており、本開示の医薬組成物を投与するために使用することができ、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルにおける封入、変異ウイルスを発現することのできる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスが挙げられる（例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照されたい）。導入方法には、皮内、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口の経路が含まれるが、これらに限定されない。組成物は、例えば、注入もしくはボーラス注射、上皮もしくは粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を介した吸収による任意の好都合な経路によって投与することができ、他の生物学的活性薬剤と一緒に投与することができる。投与は全身または局所であり得る。医薬組成物はまた、ベシクル、特にリポソームで送達することができる（例えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３を参照されたい）。

【0208】

本開示の抗原結合タンパク質、例えば抗体、またはその抗原結合断片を送達するナノ粒子の使用も本明細書において企図される。抗原結合タンパク質コンジュゲート化ナノ粒子は、治療適用および診断適用のための両方に使用され得る。抗原結合タンパク質コンジュゲート化ナノ粒子ならびに調製方法および使用方法は、Ａｒｒｕｅｂｏ，Ｍ．ら２００９（“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”ｉｎ Ｊ．Ｎａｎｏｍａｔ．Ｖｏｌｕｍｅ ２００９，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ４３９３８９，２４ｐａｇｅｓ，ｄｏｉ：１０．１１５５／２００９／４３９３８９）を参照されたく、参照により本明細書に組み込まれる。ナノ粒子は、腫瘍細胞または自己免疫組織細胞またはウイルス感染細胞を標的とするために開発され、医薬組成物に含有される抗原結合タンパク質にコンジュゲートされ得る。薬物送達のためのナノ粒子もまた、例えば、米国特許第８，２５７，７４０号、または米国特許第８，２４６，９９５号に記載されており、各々はその全体が本明細書に組み込まれる。

【0209】

特定の状況において、医薬組成物は、徐放システムで送達することができる。一実施形態において、ポンプが使用され得る。別の実施形態において、高分子材料を使用することができる。さらに別の実施形態において、徐放システムを組成物の標的の近傍に配置することができ、そのため全身用量の一部のみを必要とする。

【0210】

注射可能な調製物には、静脈内、皮下、皮内、頭蓋内、腹腔内、および筋肉内注射、点滴注入などのための投与形態が含まれ得る。これらの注射可能な調製物は、公然と知られている方法によって調製され得る。例えば、注射可能な調製物は、例えば、注射用に従来使用される滅菌水性媒体または油性媒体中に上記抗原結合タンパク質またはその塩を溶解、懸濁、または乳化させることによって調製され得る。注射のための水性媒体として、例えば、生理食塩水、グルコース含有等張溶液、および他の補助剤などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物））などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用され得る。油性媒体として、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用され、ベンジル安息香酸、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用され得る。このように調製される注射液は、好ましくは適切なアンプルに充填される。

【0211】

本開示の医薬組成物は、標準的な針および注射器を用いて皮下にまたは静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン送達デバイスは、本開示の医薬組成物を送達する適用を容易に有する。かかるペン送達デバイスは、再利用できるか、または使い捨てることができる。再利用可能なペン送達デバイスは、一般的に、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物がすべて投与されて、カートリッジが空になると、空のカートリッジは容易に廃棄して、医薬組成物を含有する新しいカートリッジに交換することができる。次に、ペン送達デバイスは、再利用することができる。使い捨てのペン送達デバイスでは、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン送達デバイスは、デバイス内のリサーバの中に保持される医薬組成物が事前に充填される。リサーバの医薬組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。

【0212】

数多くの再利用可能なペン送達デバイスおよび自動注入送達デバイスは、本開示の医薬組成物の皮下送達における適用を有する。例としては、ごくわずかな名として、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるが、もちろんこれらには限定されない。本開示の医薬組成物の皮下送達における適用を有する使い捨てペン送達デバイスの例には、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注射器（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ，Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ ＩＬ）が含まれるが、これらに限定されない。

【0213】

有利には、上記に記載される経口または非経口での使用のための医薬組成物は、有効成分の用量に適合する好適な単位用量の投薬形態に調製される。かかる単位用量の投与形態には、例えば、錠剤、ピル、カプセル、注射（アンプル）、坐薬などが含まれる。含有される抗原結合タンパク質の量は概して、単位用量の投与形態あたり約５～約５００ｍｇであり、特に注射の形態では、抗原結合タンパク質は、約５～約１００ｍｇで、他の投与形態では約１０～約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。

【0214】

抗原結合タンパク質の治療的使用
本開示の抗体は、ＮＹ－ＥＳＯ－１に関連するか、もしくは媒介される任意の疾患または障害の治療、予防、および／または改善のために、とりわけ有用である。例えば、本開示は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がん（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がん）などのＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を治療するための方法（腫瘍成長阻害）であって、かかる治療を必要とする患者に本明細書に記載の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質（または抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含む医薬組成物）を投与することによって治療する方法、およびＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんの治療（腫瘍成長阻害）における使用のための抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質（または抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含む医薬組成物）を提供する。本開示の抗原結合タンパク質は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんなどの疾患もしくは障害もしくは状態の治療、予防、および／または緩和のために、ならびに／あるいはかかる疾患、障害、もしくは状態に関連する少なくとも１つの症状の緩和するために、有用である。本明細書に記載の治療方法の文脈において、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、単剤療法として（すなわち、唯一の治療剤として）、または１つ以上の追加の治療剤（本明細書の他の場所に記載される例）と組み合わせて投与され得る。

【0215】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体は、原発性または再発性がんに罹患する対象を治療するために有用であり、限定されないが、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がん、例えば、脂肪肉腫、神経芽腫、骨髄腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、卵巣上皮がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、黒色腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、滑膜肉腫、転移性固形腫瘍、食道がん、横紋筋肉腫、進行性粘液様円形細胞脂肪肉腫、転移性黒色腫、または再発性非小細胞肺がんが含まれる。

【0216】

抗原結合タンパク質を使用して、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんの初期または後期症状を治療し得る。一実施形態において、本開示の抗体またはその断片を使用して、進行性または転移性がんを治療し得る。抗原結合タンパク質は、腫瘍増殖を低減するか、または阻害するか、または縮小するのに有用である。特定の実施形態において、本開示の抗原結合タンパク質による治療は、対象における腫瘍の４０％超の退縮、５０％超の退縮、６０％超の退縮、７０％超の退縮、８０％超の退縮、または９０％超の退縮をもたらす。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質を使用して、腫瘍の再発を防止し得る。特定の実施形態において、抗原結合タンパク質は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんを有する対象における無増悪生存期間または全生存期間を延長するのに有用である。いくつかの実施形態において、本抗体は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんに罹患している患者における長期生存を維持しながら、化学療法または放射線療法に起因する毒性を低減するのに有用である。

【0217】

本開示の１つ以上の抗体は、疾患または障害の症状または状態のうちの１つ以上の重症度を緩和するか、または予防するか、または軽減するために投与され得る。

【0218】

本開示の１つ以上の抗体を、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんなど、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害などの疾患または障害を発症するリスクがある患者に予防的に使用することもまた、本明細書で企図される。

【0219】

本開示のさらなる実施形態において、本抗体は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんなどのＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害に罹患している患者を治療するための医薬組成物の調製のために使用される。本開示の別の実施形態において、本抗体は、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんを治療するのに有用な、当業者に既知の任意の他の薬剤または任意の他の療法との補助療法として使用される。

【0220】

併用療法および製剤
併用療法は、本開示のＣＡＲ（例えば、本開示のＣＡＲを含む免疫エフェクター細胞）などの本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質または本開示の医薬組成物と、本開示の抗原結合タンパク質と有利に組み合わせられ得る任意の追加の治療剤と、を含み得る。本開示の抗原結合タンパク質は、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がん、例えば、脂肪肉腫、神経芽腫、骨髄腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、卵巣上皮がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、黒色腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、滑膜肉腫、転移性固形腫瘍、食道がん、横紋筋肉腫、進行性粘液様円形細胞脂肪肉腫、転移性黒色腫、または再発性非小細胞肺がんなどのＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を治療もしくは阻害するために使用される１つ以上の抗がん剤または療法と相乗的に組み合わされ得る。

【0221】

本明細書では、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を、免疫刺激療法および／または免疫支持療法と組み合わせて使用して、腫瘍増殖を阻害し、かつ／またはがん患者の生存を高めることが企図される。免疫刺激療法は、抑制された免疫細胞で「ブレーキを外す」か、または「アクセルを踏む」かのいずれかによって免疫細胞活性を増強して免疫応答を活性化する、直接免疫刺激療法を含む。例には、他のチェックポイント受容体、ワクチン接種、およびアジュバントを標的とすることが含まれる。免疫支持モダリティは、免疫原性細胞死、炎症を促進することによって腫瘍の抗原性を増加させ得るか、または抗腫瘍免疫応答を促進する他の間接的な効果を有し得る。例には、放射線、化学療法、抗血管新生剤、および手術が含まれる。

【0222】

様々な実施形態において、本開示の１つ以上の抗原結合タンパク質は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピディリズマブ、ＢＧＢ－Ａ３１７、またはＲＥＧＮ２８１０などの抗ＰＤ－１抗体）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、またはＲＥＧＮ３５０４などの抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０、またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３，ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト（例えば、ＵＳ７，０８７，４１１に示されるアフリベルセプトもしくは他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質などの「ＶＥＧＦ－Ｔｒａｐ」、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、ベバシズマブ、もしくはラニビズマブ）、またはＶＥＧＦ受容体の小分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、もしくはパゾパニブ））、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異的抗原に対する抗体（例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１、およびＣＡ１９－９）、ワクチン（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ、がんワクチン）、抗原提示を増加させるアジュバント（例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）、二重特異性抗体（例えば、ＣＤ３×ＣＤ２０二重特異性抗体、またはＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）、サイトトキシン、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、およびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、手術、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、サイトカインであるＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、およびＩＬ－１５など、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）、抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症剤）、抗酸化剤などの栄養補助食品、またはがんを治療する任意の他の療法と組み合わせて使用され得る。特定の実施形態において、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、抗腫瘍応答を増強するために、樹状細胞ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍細胞ワクチンなどを含むがんワクチンと組み合わせて使用され得る。本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と併用できるがんワクチンの例には、黒色腫および膀胱がんに対するＭＡＧＥ３ワクチン、乳がんに対するＭＵＣ１ワクチン、脳腫瘍（多形性膠芽腫を含む）に対するＥＧＦＲｖ３（例えば、リンドペピムト）、またはＡＬＶＡＣ－ＣＥＡ（ＣＥＡ＋がんに対する）が含まれる。

【0223】

特定の実施形態において、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、長期持続性の抗腫瘍応答を生じ、かつ／またはがんを有する患者の生存を高める方法において、放射線療法と組み合わせて投与され得る。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、がん患者に放射線療法を投与する前に、同時に、または後に投与され得る。例えば、放射線療法は、腫瘍病変に１回以上の用量で投与され得、その後に本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の１回以上の用量の投与が続く。いくつかの実施形態において、放射線療法は、患者の腫瘍の局所免疫原性を増強（作用性放射線）し、かつ／または腫瘍細胞を死滅（切除性放射線）させるために、腫瘍病変に局所投与され得、その後に本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の全身投与が続く。例えば、頭蓋内放射線は、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の全身投与と組み合わせて、脳がん（例えば、多形膠芽腫）を有する患者に投与され得る。特定の実施形態において、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、放射線療法および化学療法剤（例えば、テモゾロミド）またはＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト）と組み合わせて投与され得る。

【0224】

追加の治療活性剤／成分は、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の投与の前に、同時に、または後に投与され得る。本開示の目的のために、かかる投与レジメンは、第２の治療活性成分と「組み合わせた」抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の投与とみなされる。

【0225】

追加の治療活性成分は、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の投与前に対象に投与され得る。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の１週間前、７２時間前、６０時間前、４８時間前、３６時間前、２４時間前、１２時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、１５分前、１０分前、５分前、または１分未満前に投与される場合、第１の成分は、第２の成分の「前」に投与されるとみなされ得る。他の実施形態において、追加の治療活性成分は、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の投与後に対象に投与され得る。例えば、第１の成分が、第２の成分の投与の１分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後、または１週間後に投与される場合、第１の成分は、第２の成分の投与後に「後」投与されるとみなされ得る。さらに他の実施形態において、追加の治療活性成分が、対象に、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の投与と同時に投与され得る。「同時」投与は、本開示の目的のために、例えば、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質および追加の治療活性成分を、対象に、単一投与形態（例えば、共製剤化）で、または対象に互いに約３０分以内に投与される別個の投与形態で投与することを含む。別個の投与形態で投与される場合、各投与形態は、同じ経路を介して投与され得（例えば、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質および追加の治療活性成分の両方は、静脈内、皮下などによって投与され得る）、あるいは、各投与形態は、異なる経路を介して投与され得る（例えば、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、静脈内によって投与され得、追加の治療活性成分は、皮下によって投与され得る）。いずれにせよ、成分を単一投与形態で、同じ経路によって別個の投与形態で、または異なる経路によって別個の投与形態で投与することは、本開示の目的において、すべて、「同時投与」とみなされる。本開示の目的のために、追加の治療活性成分の「前」、「同時」、または「後」（これらの用語は、上記で定義されるとおり）の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の投与は、追加の治療活性成分と「組み合わせた」抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の投与とみなされる。

【0226】

本開示は、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質が、本明細書の他の箇所に記載される追加の治療活性成分のうちの１つ以上と、様々な投与組み合わせを使用して、共製剤化される医薬組成物を含む。

【0227】

投与レジメン
本開示の特定の実施形態により、複数回用量の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質（または抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と本明細書で言及される追加の治療活性薬剤のうちのいずれかとの組み合わせを含む医薬組成物）が、定義された時間経過にわたって対象に投与され得る。本開示のこの態様による方法は、複数回用量の本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を、対象に連続的に投与することを含む。本明細書で使用する場合、「連続的に投与すること」は、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の各用量が、対象に、異なる時点、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日間、数週間、または数か月間）で離された異なる日に投与されることを意味する。本開示は、対象に、単回の一次用量の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と、それに続く１回以上の二次用量の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と、次いで任意選択的に、それに続く１回以上の三次用量の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を、連続的に投与することを含む方法を含む。抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、対象の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。

【0228】

「一次用量」、「二次用量」、および「三次用量」という用語は、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の投与の時系列を指す。したがって、「一次用量」とは、治療レジメンの開始時に投与される用量（「ベースライン用量」とも呼ばれる）であり、「二次用量」とは、一次用量後に投与される用量であり、「三次用量」とは、二次用量後に投与される用量である。一次、二次、および三次用量はすべて、同じ量の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を含有し得るが、概して、投与頻度に関して互いに異なり得る。しかしながら、特定の実施形態において、一次、二次、および／または三次用量に含有される抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の量は、治療の経過期間中、互いに異なる（例えば、適宜増減で調整される）。特定の実施形態において、２回以上（例えば、２回、３回、４回、または５回）の用量が治療レジメンの開始時に「負荷用量（ｌｏａｄｉｎｇ ｄｏｓｅ）」として投与され、その後に、より低い頻度に基づいて投与される後続用量（例えば、「維持用量」）が続く。

【0229】

特定の実施形態において、一次、二次、および／または三次用量に含有される抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の量は、最適以下または治療量以下であり得る。本明細書で使用される場合、「治療量以下」または「最適以下」という用語は、治療効果を生じるには低すぎるレベルで、またはがんなどの疾患を治療するのに必要なレベル未満で、投与される抗体用量を指す。

【0230】

本開示の特定の例示的な実施形態において、各二次および／または三次用量は、直前の用量の１～２６（例えば、１、１と１／２、２、２と１／２、３、３と１／２、４、４と１／２、５、５と１／２、６、６と１／２、７、７と１／２、８、８と１／２、９、９と１／２、１０、１０と１／２、１１、１１と１／２、１２、１２と１／２、１３、１３と１／２、１４、１４と１／２、１５、１５と１／２、１６、１６と１／２、１７、１７と１／２、１８、１８と１／２、１９、１９と１／２、２０、２０と１／２、２１、２１と１／２、２２、２２と１／２、２３、２３と１／２、２４、２４と１／２、２５、２５と１／２、２６、２６と１／２、またはそれ以上）週後に投与される。「直前の用量」という語句は、本明細書で使用される場合、連続する複数回投与において、介入用量を伴わずに連続する直ぐ次の用量の投与前に患者へ投与される抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の用量を意味する。

【0231】

本開示のこの態様による方法は、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質の二次用量および／または三次用量の任意の回数を患者へ投与することを含み得る。例えば、特定の実施形態において、単回の二次用量のみが患者に投与される。他の実施形態において、２回以上（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回またはそれ以上）の二次用量が患者に投与される。同様に、特定の実施形態において、単回の三次用量のみが患者に投与される。他の実施形態において、２回以上（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回またはそれ以上）の三次用量が患者に投与される。

【0232】

複数回の二次用量を含む実施形態において、各二次用量は他の二次用量と同じ頻度で投与され得る。例えば、各二次用量は、直前の用量の１～２週後または１～２ヶ月後に患者に投与され得る。同様に、複数の三次用量を含む実施形態において、各三次用量は他の三次用量と同じ頻度で投与され得る。例えば、各三次用量は、直前の用量の２～１２週間後に患者に投与され得る。特定の実施形態において、二次および／または三次用量が患者に投与される頻度は、治療レジメンの経過にわたって変動させることができる。投与頻度はまた、臨床検査後の個々の患者の必要性に応じて、医師によって治療経過の間に調整され得る。

【0233】

抗原結合タンパク質の診断使用
本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質を使用して、例えば、診断目的のために、試料中のＮＹ－ＥＳＯ－１を検出および／または測定し得る。いくつかの実施形態は、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がんなどの、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害などの疾患または障害を検出するアッセイにおける、本開示の１つ以上の抗原結合タンパク質の使用を企図する。ＮＹ－ＥＳＯ－１における例示的な診断アッセイは、例えば、対象（例えば、患者）から得られる試料を、本開示の抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質と接触させることを含み得、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、検出可能な標識またはレポーター分子で標識されるか、または対象試料からＮＹ－ＥＳＯ－１を選択的に単離する捕捉リガンドとして使用される。あるいは、非標識抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質は、それ自体が検出可能に標識される第２の抗原結合タンパク質、例えば抗体、と組み合わせて診断適用において使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、もしくは^１２５Ｉなどの放射性同位元素、フルオレセインイソチオシアナートもしくはローダミンなどの蛍光もしくは化学発光部分、またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素であることができる。試料中のＮＹ－ＥＳＯ－１を検出または測定するために使用することができる具体的な例示的アッセイには、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が含まれる。

【0234】

本開示によるＮＹ－ＥＳＯ－１診断アッセイにおいて使用することができる試料には、患者から正常な状態または病理学的状態下で得ることができ、検出可能な量のＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質またはその断片を含有する、任意の組織または体液試料が含まれる。一般に、健常な患者（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害、例えばＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がんに罹患していない患者）から得られる特定の試料中のＮＹ－ＥＳＯ－１レベルが、ＮＹ－ＥＳＯ－１のベースラインレベルまたは標準レベルを最初に確立するために測定される。次いで、このＮＹ－ＥＳＯ－１ベースラインレベルを、がん関連状態またはかかる状態に関連する症状を有することが疑われる個体から得られる試料で測定されるＮＹ－ＥＳＯ－１のレベルと比較することができる。

【0235】

ＮＹ－ＥＳＯ－１に特異的な抗原結合タンパク質は、追加の標識もしくは部分を含み得ないか、またはそれらはＮ末端またはＣ末端の標識もしくは部分を含み得る。一実施形態において、標識または部分は、ビオチンである。結合アッセイにおいて、標識の位置（存在する場合）は、ペプチドが結合する表面に関連してペプチドの適応を決定し得る。例えば、表面がアビジンでコーティングされる場合、Ｎ末端ビオチンを含むペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面に対して遠位になるように適応される。

【0236】

本開示の態様は、患者におけるＮＹ－ＥＳＯ－１陽性がんの予後を予測するためのマーカーとしての、開示される抗原結合タンパク質の使用に関する。本開示の抗原結合タンパク質を診断アッセイに使用して、患者におけるがんの予後を評価し、生存を予測し得る。

【実施例】

【0237】

以下の実施例は、本発明の方法および組成物をどのように作製および使用するかに関する完全な開示および説明を当業者に提供するために示されており、本発明者らが本発明とみなすことの範囲を限定することを企図するものではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保することに努めているが、いくつかの実験上の誤差および偏差が考慮されるべきである。別段に示されない限り、割合は重量による割合であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、室温は約２５℃であり、圧力は大気圧またはそれに近い。

【0238】

実施例１．ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５に対するヒト抗体の生成
ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１に対するヒト抗体は、バリン（Ｖ）で置換された１６５位のシステイン（Ｃ）を有するアミノ酸１５７～１６５（ＳＬＬＭＷＩＴＱＶ、「ＮＹ－ＥＳＯ－１＿Ｖ」）、配列番号２９１）を含むＧｅｎＢａｎｋ登録ＮＰ＿００１３１８．１（配列番号２７１）のＨＬＡ－Ａ２結合ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド断片を使用して生成した。免疫原は、例えば、米国特許第８，５０２，０１８号に記載されるように、免疫応答を刺激するアジュバントとともに、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（すなわち、ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含む操作されたマウス）に直接投与された。抗体免疫応答を、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的イムノアッセイによってモニタリングした。所望の免疫応答が達成されたとき、脾細胞を採取し、マウス骨髄腫細胞と融合させて、それらの生存能力を維持し、ハイブリドーマ細胞株を形成した。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングおよび選択して、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的抗体を産生する細胞株を特定した。この技法および上記免疫源を使用して、いくつかの抗ＮＹ－ＥＳＯ－１キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを有する抗体）を得た。

【0239】

抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体はまた、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第７，５８２，２９８号に記載されるように、骨髄腫細胞への融合を伴わずに抗原陽性Ｂ細胞（免疫したマウスのいずれかから）から直接単離した。この方法を使用して、いくつかの抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを有する抗体）を得た。

【0240】

前述の方法に従って生成された例示的な抗体は、ｍＡｂ２４９５５Ｎ、ｍＡｂ２４９５６Ｎ、ｍＡｂ２４９５８Ｎ、ｍＡｂ２４９５９Ｎ、ｍＡｂ２８０４２Ｐ、ｍＡｂ２８０３５Ｐ、ｍＡｂ２８０３７Ｐ２、ｍＡｂ２８０７５Ｐ、ｍＡｂ２８１０５Ｐ、ｍＡｂ２８１１３Ｐ、ｍＡｂ２８１２８Ｐ、ｍＡｂ２９８１４Ｐ、ｍＡｂ２４９５５Ｎ、およびｍＡｂ２９８２２Ｐ２と名付けられた。

【0241】

この実施例の方法に従って生成された例示的な抗体の生物学的特性を、以下に示す実施例において詳細に記載する。

【0242】

実施例２．重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列および核酸配列
表１は、本開示の選択された抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体の重鎖および軽鎖可変領域ならびにＣＤＲ、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表２に示す。

【表1-1】

【表1-2】

【表2-1】

【表2-2】

【0243】

抗体は、本明細書において、典型的には、以下の命名法に従って当てはめられる。Ｆｃ接頭辞（例えば、「ｍＡｂ」など）、続いて数値識別子（例えば、表１に示すように、「１７６７０」、「１７９３０」など）、続いて「Ｐ」、「Ｎ」、または「Ｎ２」接尾辞。したがって、この命名法に従い、抗体は、本明細書では、例えば、「ｍＡｂ１７６７０Ｐ」、「ｍＡｂ１７９３０Ｎ」、「ｍＡｂ１７３６８Ｎ２」などと称され得る。当業者には理解されるように、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体は、ヒトＩｇＧ４を有する抗体に変換することができるなど）が、いずれにせよ、表１に示される数値識別子によって指定される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は、同じままであり、抗原への結合特性は、Ｆｃドメインの性質に関係なく、同一または実質的に類似すると予測される。

【0244】

特定の実施形態において、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する選択された抗体は、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃを有する抗体に変換した。特定の実施形態において、抗体は、米国特許公開第２０１０／０３３１５２７号（その全体が本明細書に組み込まれる）に開示されているように、２つ以上のアミノ酸変化を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃを含む。一実施形態において、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、ヒンジ領域内にセリンからプロリンへの変異（Ｓ１０８Ｐ）を含み、二量体安定化を促進する。

【0245】

表３は、本開示の選択された抗体の重鎖および軽鎖配列のアミノ酸配列識別子を示す。

【表3-1】

【表3-2】

【0246】

実施例３．ヒトモノクローナル抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１単一特異性抗体の表面プラズモン共鳴による結合親和性および速度定数
ヒト抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体の結合親和性および速度定数を、リアルタイム表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ ＳｃｉｅｎｃｅによるＢｉａｃｏｒｅ ４０００、またはＳｉｅｒｒａ ＳｅｎｓｏｒｓによるＭＡＳＳ－１）によって２５℃および３７℃で決定した。この実施例で試験した抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体は、ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１に対する二価の単一特異性結合剤だった（エフェクター機能が低減した（例えば、米国特許第９，３５９，４３７号に記載されるように）定常領域（例えば、ｈＩｇＧ４定常領域）、ｈＩｇＧ２ａ定常領域、ｍＩｇＧ２ａ定常領域、またはｍＩｇＧ１定常領域を有して発現された）。参照抗体１、２、および３は、Ｓｔｅｗａｒｔ－Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０６（１４）：５７８４－５７８８（２００９）および国際特許公開第２０１０／１０６４３１号に記載される抗体から生成した。Ｒｅｆ Ａｂ１は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃおよびヒトラムダ軽鎖を有するこれらの出版物に記載の３Ｍ４Ｅ５抗体に由来するＶＨおよびＶＬドメインを含み、Ｒｅｆ Ａｂ２は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃおよびヒトラムダ軽鎖を有する出版物に由来する３Ｍ４Ｅ５ ＶＨドメインおよびＴ１ Ｆａｂ ＶＬドメインを含み、Ｒｅｆ Ａｂ３は、エフェクター機能Ｆｃが低減した（米国特許第９，３５９，４３７号に記載するように）ヒトＩｇＧ４およびヒトラムダＶＬドメインを有する出版物に由来する３Ｍ４Ｅ５ ＶＨドメインおよびＴ１ Ｆａｂ ＶＬドメインを含む。抗体は、モノクローナル抗ヒトＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）とのアミン結合によって誘導体化したＣＭ５ Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、またはポリクローナル抗マウスＦｃ抗体（ＧＥ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）とのアミン結合によって誘導体化した高容量アミンセンサー表面（Ｓｉｅｒｒａ Ｓｅｎｓｏｒｓ）に捕捉した。様々な濃度の単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１（１５６～１６５）（配列番号２７０または２９１、１６５位のＶ）ペプチド複合体、２９０６（配列番号２７２）を、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体捕捉した表面にわたって、５０μＬ／分（ＭＡＳＳ－１）または３０μＬ／分（Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００）の流速で注入した。抗体－試薬会合を４～５分間モニタリングし、解離を１０分間モニタリングした。すべての結合試験は、ＨＢＳ－ＥＴ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５体積／体積％界面活性剤Ｐ２０）中で行った。

【0247】

動的会合（ｋａ）速度定数および動的解離（ｋｄ）速度定数は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ｃ曲線フィッティングソフトウェアを使用してリアルタイムセンサーグラムを１：１結合モデルにフィッティングすることによって決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を、動的速度定数から
Ｋ_Ｄ（Ｍ）＝（ｋｄ／ｋａ）、およびｔ１／２（分）＝（（ｌｎ_（２）））／（６０×ｋｄ））として計算した。

【0248】

単一特異性抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体の単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド複合体に対する結合動態パラメータを以下に表４に示す。

【表4-1】

【表4-2】

【表5-1】

【表5-2】

【0249】

データは、試験した抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体の大部分が可溶性ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド複合体に選択的に結合し、いくつかはナノモルまたは準ナノモル親和性を示し、多くは参照抗体よりも複合体に対する親和性が高かったことを示す。

【0250】

実施例４．ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチドでパルスしたＴ２細胞に対する抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体のＦＡＣＳ結合
ＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５抗体の相対的結合を、ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５（Ｃ１６５）ペプチド（配列番号２６９）でパルスしたＴ２（１７４ＣＥＭ．Ｔ２）細胞におけるフローサイトメトリーによって評価した。パルスするために、Ｔ２細胞（１７４ＣＥＭ．Ｔ２）を、細胞１×１０^６個／ｍｌの密度でＡＩＭ Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号３１０３５－０２５）に再懸濁した。細胞を、１０μｇ／ｍｌのｈＢ２Ｍ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号４７５８２８）および１００μｇ／ｍｌの指定ペプチドを添加することによってパルスした。次いで、Ｔ２細胞を３７℃で一晩インキュベートし、染色緩衝液で洗浄し、次いで、染色した。

【0251】

細胞を染色するために、細胞解離緩衝液（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号Ｓ－００４－Ｃ）を使用して細胞をフラスコから採取して計数した。細胞を、９６ウェルＶ底プレートにウェル当たり細胞２００，０００個の密度で、染色緩衝液（カルシウムおよびマグネシウム無添加ＰＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、参照番号２１－０３１－ＣＶ）＋２％ＦＢＳ（Ｓｅｒａｄｉｇｍ、ロット番号２３８Ｂ１５）中に播種し、一次抗体の３倍希釈系列（１．７ｐＭ～１００ｎＭ）によって４℃で３０分間染色した。一次抗体インキュベーション後、細胞を染色緩衝液中で１回洗浄し、ＡＰＣコンジュゲート化二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９－１３６－１７０）によって４℃で３０分間染色した。次いで、細胞を洗浄し、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ、カタログ番号５５４６５５）の５０％溶液を使用して固定した。試料をｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ ｉＱｕｅフローサイトメーターで分析して、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計算した。ＭＦＩ値は、１２ポイントの反応曲線にわたって４パラメータロジスティック方程式を使用してＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍにプロットし、ＥＣ_５０値を計算した。各用量反応曲線における二次抗体単独（すなわち、一次抗体なし）も、３倍希釈系列の連続として分析に含まれ、最低用量として表される。Ｒｅｆ Ａｂ２およびＲｅｆ Ａｂ３を、上記のように、対照として使用した。ＥＣ_５０値（Ｍ）を表６に示す。

【表6-1】

【表6-2】

【0252】

実施例５．予測されるオフターゲットペプチドでパルスしたＴ２細胞に対する抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体のＦＡＣＳ結合
ＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５抗体の結合特異性を、ＮＹ－ＥＳＯ－１（１５７～１６５）ペプチド（Ｃ１６５；配列番号２６９）または予測されるオフターゲットペプチドでパルスしたＴ２（１７４ＣＥＭ．Ｔ２）細胞におけるフローサイトメトリーによって評価した（表７）。パルスするために、Ｔ２細胞（１７４ＣＥＭ．Ｔ２）を、細胞１×１０^６個／ｍｌの密度でＡＩＭ Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号３１０３５－０２５）に再懸濁した。細胞を、１０μｇ／ｍｌのｈＢ２Ｍ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号４７５８２８）および１００μｇ／ｍｌの指定ペプチドを添加することによってパルスした。次いで、Ｔ２細胞を３７℃で一晩インキュベートし、染色緩衝液で洗浄し、実施例４における上記プロトコルに従って１０μｇ／ｍｌの濃度で指定抗体によって染色した。ＭＦＩ値を計算し、パルスされたＴ２細胞対非パルス細胞の比率として表した。これらのアッセイの結果を表８に示す。パルスされた細胞株からのＨＬＡ－Ａ２表面染色の増加を、抗ＨＬＡ－Ａ２抗体を使用した非パルス細胞株と比較することによって、有効なペプチド負荷を決定した。１．４倍以上のいずれかの増加は、ペプチドで負荷されるとみなされた。１つのペプチド（ＩＴＣＨ（８０７～８１５））について負荷が確認できなかったが、上記の２つの比較対照であるＮＹ－ＥＳＯ－１ｍＡｂ Ｒｅｆ Ａｂ１およびＲｅｆ Ａｂ２は、このペプチドでパルスした細胞に結合し、いくらかの量のペプチドが細胞に負荷されたことを示した。

【表7-1】

【表7-2】

【表8-1】

【表8-2】

【表8-3】

【0253】

表８に示されるように、試験した多くの抗体は、特に複数のオフターゲットペプチドに有意な結合を有した２つの比較対照抗体と比べて、予測されるオフターゲットのいずれかでパルスしたＴ２細胞に有意な結合を有しないと特定された。非特異的結合は、治療有効性の低下および／または副作用の増加（例えば、腫瘍細胞殺傷活性を低下させ、かつ／または対象において副作用を引き起こす非特異的細胞傷害性）をもたらし得る。したがって、最小限のオフターゲット結合を有する抗原結合タンパク質（例えば、抗体）の特定は、本明細書に記載のＭＡＧＥ－Ａ４を標的とする治療剤の開発において有益であり得る。

【0254】

アラニンスキャニングを行って、ＮＹ－ＥＳＯ－１（１５７～１６５）ペプチドにおけるどの残基が細胞結合に重要か決定した。Ｔ２細胞にアラニンスキャニングペプチド（表７）でパルスし、上記のようにＮＹ－ＥＳＯ－１（１５７～１６５）抗体で染色した。非パルス細胞に対する倍率変化を表９に示す。ＨＬＡ．Ａ２表面染色（上記）によって決定されるとき、ＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５，Ｃ１６５Ｖ，Ｓ１５７ＡおよびＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５，Ｃ１６５Ｖ，Ｉ１６２Ａを除くすべてのペプチドが効果的に負荷した。以下の残基は、試験した抗ＮＹ－ＥＳＯ－１ ｍＡｂの結合において重要だった（結合の９０％以上の低減として定義）：ロイシン１５８、トリプトファン１６１、スレオニン１６３、およびグルタミン１６４。スレオニン１６３およびグルタミン１６４は、上記のように、比較対照モノクローナル抗体Ｒｅｆ Ａｂ３の結合において必ずしも必要ではなかった。メチオニン１６０は、ｍＡｂ２４９５６Ｎ、ｍＡｂ２４９５８Ｎ、およびｍＡｂ２８１０５Ｐの結合において特に重要だった。

【表9-1】

【表9-2】

【表9-3】

【0255】

実施例６．キメラ抗原受容体での使用のための抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗体のｓｃＦｖへの再構成化
４つのＮＹ－ＥＳＯ－１（１５７～１６５）抗体（ｍＡｂ２４９５５Ｎ、ｍＡｂ２４９５６Ｎ、ｍＡｂ２４９５８Ｎ、およびｍＡｂ２４９５９Ｎ）を、ＣＤ８αヒンジおよび膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、ならびにＣＤ３ζ刺激ドメインを使用した、ＶＬ－ＶＨまたはＶＨ－ＶＬ単鎖可変断片キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に再構成した。ＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５ ＣＡＲをレンチウイルス発現ベクター（Ｌｅｎｔｉ－Ｘ（商標）バイシストロニック発現システム（Ｎｅｏ）、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ カタログ番号６３２１８１）にクローニングし、レンチウイルス粒子を、製造業者のプロトコルに従ってＬｅｎｔｉ－Ｘ Ｐａｃｋａｇｉｎｇ Ｓｉｎｇｌｅ－Ｓｈｏｔ（ＶＳＶ－Ｇ）システム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ カタログ番号６３１２７６）を介して生成した。次いで、ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ．３Ｃ７細胞（ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターを発現する細胞）を、製造業者のプロトコルに従ってＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ Ｐｒｅｃｏａｔｅｄ Ｄｉｓｈ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号Ｔ１１０ａ）を使用して、８つの異なるＣＡＲによって形質導入した。５００μｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１８１１－０９８）中で少なくとも２週間選択した後、以下のＣＡＲ－Ｔ細胞株を生成した：ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５５Ｎ ＶＨ－ＶＬ、ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５５Ｎ ＶＬ－ＶＨ、ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５６Ｎ ＶＨ－ＶＬ、ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５６Ｎ ＶＬ－ＶＨ、ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５８Ｎ ＶＨ－ＶＬ、ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５８Ｎ ＶＬ－ＶＨ、ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５９Ｎ ＶＨ－ＶＬ、およびジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５９Ｎ ＶＬ－ＶＨ。次いで、ＣＡＲ－Ｔ細胞株の活性を、ＣＡＲ－Ｔ／ＡＰＣ（抗原提示細胞）バイオアッセイで評価した。バイオアッセイを行うために、５０，０００個のＣＡＲ－Ｔ細胞を、５０ｍｌのアッセイ培地（１０％ＦＢＳおよび１％Ｐ／Ｓ／Ｇを添加したＲＰＭＩ培地）中のＴｈｅｒｍｏ－Ｎｕｎｃ９６ウェルホワイトプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１３６１０１）で添加し、続いて５０ｍｌのアッセイ培地中のＡＰＣ（細胞２００，０００～２７４個）の３倍希釈系列を添加した。ＡＰＣは、３Ｔ３／ＨＬＡ．Ａ２／ｈＢ２Ｍ／ＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５ＷＴ（ヒトＨＬＡ．Ａ２（登録番号Ｐ０１８９２）を発現するように操作されたＮＩＨ３Ｔ３細胞、ヒトＢ２Ｍ（登録番号ＮＰ＿００４０３９．１）、およびＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５ペプチドを含むユビキチンペプチドカセット）と、３Ｔ３／ＨＬＡ．Ａ２／ｈＢ２Ｍ／ＨＰＶ１６Ｅ７ １１～１９（ＨＰＶ１６Ｅ７：１１～１９ペプチドを含むユビキチンペプチドカセット（上記のように、Ｌｅｖｙ Ｆ，ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３（１０）：４９０７－４９１２、Ｖａｌｍｏｒｉ Ｄ，ｅｔ ｌ．（１９９９）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１８９（６）：８９５－９０６）を有する）と、ＩＭ９（ＨＬＡ．Ａ２陽性、ＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５陽性）と、ＨＥＫ２９３（ＨＬＡ．Ａ２陽性およびＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５陰性）と、を利用した。細胞混合物を３７℃、５％ＣＯ_２、加湿インキュベーターで５時間インキュベートした。ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼ活性は、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｏｎｅ－Ｇｌｏ（カタログ番号Ｅ６１３０）およびＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して測定した。相対的ルシフェラーゼ単位（ＲＬＵ）は、８ポイント反応曲線にわたって４パラメータロジスティック方程式を使用してＧｒａｐｈＰａｄ ＰｒｉｓｍにプロットしてＥＣ_５０値を計算した。各用量反応曲線におけるゼロＡＰＣ条件も、３倍希釈系列の連続として分析に含まれ、最低用量として表される。最大倍率活性化は、曲線上の最大ＲＬＵの最小に対する比を得ることによって決定した。８つすべてのＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲ細胞株が、３Ｔ３／ＨＬＡ．Ａ２／ｈＢ２Ｍ／ＮＹ－ＥＳＯ－１：１５７～１６５ＷＴ細胞の存在下で活性化した。 表１０に示されるように、３つのＮＹ－ＥＳＯ－１ ＣＡＲ細胞株が、ＩＭ９細胞（ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５５Ｎ ＶＨ－ＶＬ、ジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５５Ｎ ＶＬ－ＶＨ、およびジャーカット／ＮＦＡＴＬｕｃ ｃｌ ３Ｃ７／ＮＹ－ＥＳＯ ＣＡＲ－Ｔ ２４９５６Ｎ ＶＬ－ＶＨ）の存在下で活性化した。

【表10】

【0256】

実施例７．ＨＬＡ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５ペプチドに結合するＦａｂの構造解析
抗体とＨＬＡ－ペプチド複合体との間の特異的相互作用をよりよく理解するために、Ｘ線結晶構造を、がん精巣抗原１（ＣＴＡＧ１Ｂ；ＮＹ－ＥＳＯ－１）からの残基１５７～１６５を含むペプチドを提示するＨＬＡ－Ａ２／ｈＢ２Ｍに結合した抗体ｍＡｂ２８１０５ＰのＦａｂ断片について決定した。このペプチドは、その天然システインからの残基１６５をバリンで置換することによって改変された。ＨＬＡ提示ＮＹ－ＥＳＯ－１（Ｃ１６５Ｖ）ペプチドの９個すべての残基がこの構造の電子密度マップで明らかに目視され、ペプチドを囲むＨＬＡおよびＦａｂの残基も良好に解像された。この構造は、３．３Åの分解能で精密化されたが、より新しい結晶学的精密化技法（変形可能な弾性ネットワーク、または「ゼリーボディ」精密化）は、過剰適合を防止し、得られたモデルの精度を確保するのに役立った。

【0257】

ｍＡｂ２８１０５Ｐ Ｆａｂは、ＴＣＲが結合するのと同様な手段で、ＨＬＡ－ペプチド複合体の上部に結合した。このＦａｂは、結合したペプチドで中心化され、結合したペプチドのＣ末端側の半分に接触するＨＣＤＲ３、およびプチドのＮ末端側の半分に接触する軽鎖ＣＤＲを有した。ペプチド残基Ｍ１６０およびＷ１６１は、Ｆａｂ結合界面の中心にあり、以下に記載されるように、重鎖および軽鎖ＣＤＲ残基の両方と接触した。他の公表されている溝内ペプチド抗体複合体構造（例えば、ＰＤＢコード１Ｗ７２および４ＷＵＵ）は、抗体がＨＬＡ提示ペプチド全体を覆うことはないが、部分的にのみペプチドを覆う抗体は特異性が乏しく、結合親和性の損失をほとんど伴わずに接触されていないペプチドの部分における広範な変化に耐容することを示す。

【0258】

構造は、ｍＡｂ２８１０５Ｐ Ｆａｂ重鎖は、ＨＬＡ結合ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドにおける残基１６０、１６１、および１６４と接触しているが、一方、Ｆａｂ軽鎖は、残基１６０および１６１と接触していることを示した。ペプチド残基１５７、１５８、１５９、１６２、および１６５はすべて、ＨＬＡ分子に向いていた。残基１６３は、Ｆａｂ軽鎖によって溶媒から完全に遮断されたが、抗体残基と直接接触しなかった。結合したペプチドを配列番号２９１に示すように、配列番号２７１の残基位置に従って番号付けした。

【表23】

【0259】

すべてのＦａｂ接触は、ＨＬＡ結合ペプチドの側鎖でなされ、その骨格ではなかった。

【0260】

ＭＡｂ２８１０５Ｐ Ｆａｂによってなされたペプチド接触は、ＬＣＤＲ１およびＬＣＤＲ２からのわずかな寄与を伴いながら、ＨＣＤＲ３に集中された。特に、Ｆａｂ重鎖残基１００、１０１、１０４、１０５、および１１１（配列番号１６２）、ならびに軽鎖残基３２および４９（配列番号１７０）は、結合したペプチドと相互作用し、一方、Ｆａｂ重鎖残基１００、１０１、１０７、および１０９（配列番号１６２）、ならびに軽鎖残基９２（配列番号１７０）は、ＨＬＡと相互作用した。上記で使用される場合、「と相互作用した」という用語は、直接的または水媒介性の水素結合、電荷－電荷相互作用、または疎水性／ファンデルワールス相互作用を含むことができる。

【0261】

ＮＹ－ＥＳＯ－１＿１５７～１６５抗体のうちの４つ（ｍＡｂ２４９５５Ｎ、ｍＡｂ２４９５６Ｎ、ｍＡｂ２４９５８Ｎ、およびｍＡｂ２４９５９Ｎ）は、いずれも軽鎖配列において非常に類似していたが、重鎖配列は、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３において分岐した。７つのペプチド結合残基は概して保存され、３つの残基は、４つすべての抗体において同一であり、４つの配列のうち３つにおいてさらに３つが同一であり、抗体間の共通の結合様式を示唆した。

【0262】

実施例８．キメラ抗原受容体シグナル伝達ドメインの分析
Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ適応における抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}ｓｃＦｖと、１）ヒトＣＤ８（ｈｕＣＤ８）ヒンジ／膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン（ＢＢ／ｚ ＣＡＲ）（全長ＣＡＲ配列：配列番号３０１）、または２）ｈｕＣＤ２８ヒンジ／膜貫通／共刺激ドメイン、およびＣＤ３ｚシグナル伝達ドメイン（２８／ｚ ＣＡＲ）（全長ＣＡＲ配列：配列番号３０２）のいずれかと、を含むキメラ抗原受容体を、抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}抗体であるｍＡｂ２８１０５ＰのＶ_ＬおよびＶ_Ｈ配列（Ｖ_Ｌ：配列番号２９４、Ｖ_Ｈ：配列番号２９３）を使用して構築した。非結合対照として、ＢＢ／ｚ ＣＡＲを、無関連ｓｃＦｖと、ｈｕＣＤ８ヒンジ／膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ｚシグナル伝達ドメインと、を使用して設計した。これらのＣＡＲを、ＥＦ１ａプロモーターおよびＣＡＲ形質導入細胞を追跡するためのＰ２Ａ：ｅＧＦＰ配列（配列番号３００）を有するｐＬＶＸレンチウイルスベクターにクローニングし、ＶＳＶ偽型レンチウイルスを産生した。構築物設計について図１Ａ、および構築物の概要について表１１を参照されたい。

【0263】

ＣＤ３＋Ｔ細胞を正常ドナーのヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離し、ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズ＋１００Ｕ／ｍｌ組換えヒトＩＬ－２で刺激し、レンチウイルスによってＭＯＩ＝５で形質導入した。形質導入された細胞をＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズ＋１００Ｕ／ｍｌ組換えヒトＩＬ－２で１９日間増殖させてから、インビボ実験での使用まで凍結保存した。

【0264】

抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}標的化キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞のインビボの有効性を決定するために、異種腫瘍試験を行った。０日目に、免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ＳＣＩＤＩｌ２ｒｇ（商標）^１ＷＪｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスに、５×１０^６個のＨＬＡ－Ａ２^＋ＮＹ－ＥＳＯ－１^＋Ａ３７５ヒト黒色腫腫瘍細胞を皮下注射した。腫瘍を確立した後３日目に、異なるドナー２名から、非結合対照ＢＢ／ｚ ＣＡＲ（対照ＣＡＲ Ｔ）、抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}ＢＢ／ｚ ＣＡＲ、または抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}２８／ｚ ＣＡＲ（ＣＡＲで形質導入されたそれらの細胞のマーカーであるＧＦＰを発現する細胞の頻度によって決定される）のいずれかを発現する２０×１０^６個のＴ細胞をマウス（ｎ＝５／群）に静脈内注射した。腫瘍増殖は、腫瘍体積を測定することによって、２１日間にわたって評価した。

【0265】

外部キャリパーによって腫瘍体積を決定するために、最大縦径（ｍｍでの長さ）および最大横径（ｍｍでの幅）を決定した。キャリパー測定に基づいた腫瘍体積を、式：容積（ｍｍ^３）＝（長さ×幅^２）／２によって計算した。

【表11】

【0266】

まとめると、結果は、抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}２８／ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞が、抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}ＢＢ／ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞と比較して優れたインビボ抗腫瘍活性および抗腫瘍動態を示したが、両方のタイプのＣＡＲが、非結合対照と比較して抗腫瘍活性を示したことを実証する。Ａ３７５腫瘍は、対照ＣＡＲ Ｔ細胞を受けたマウスにおいて漸進的に増殖した。抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}ＢＢ／ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を受けたマウスは、いくらかの腫瘍制御を示し、対照ＣＡＲ Ｔ処置マウスと比較して、２１日目（ｐ＜０．０４）、２８日目（ｐ＜０．０００１）、および３８日目（ｐ＜０．０００１）に、腫瘍増殖の低減を有した（統計は、二元配置分散分析によって分析された）。抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}２８／ｚ ＣＡＲ Ｔ処置はまた、１６日目（ｐ＝０．０３）、１９日目（ｐ＝０．０００２）、２１日目（ｐ＜０．０００１）、２８日目（ｐ＜０．０００１）、および３８日目（ｐ＜０．０００１）に、確立されたＡ３７５腫瘍増殖の抑制をもたらした（統計は、二元配置分散分析によって分析された）。抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}２８／ｚ ＣＡＲと抗ＨＬＡ－Ａ２／ＮＹ－ＥＳＯ－１_{１５７～１６５}ＢＢ／ｚ ＣＡＲとの増強された有効性は、腫瘍サイズとして、２１日目（ｐ＝０．００２）、２８日目（ｐ＜０．０００１）、および３８日目（ｐ＜０．０００１）に確証され、二元配置分散分析によって統計的に有意である（両日ともｐ＜０．０００１）。図１Ｂおよび図１Ｃ、ならびに表１２～２２を参照されたい。

【表12】

【表13-1】

【表13-2】

【表14】

【表15】

【表16-1】

【表16-2】

【表17】

【表18】

【表19-1】

【表19-2】

【表20】

【表21】

【表22】

【0267】

本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて本発明の様々な修正は、前述の記載および添付の図から当業者には明らかであろう。そのような変更は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
ＨＬＡ－Ａ２：ニューヨーク食道扁平上皮がん１ペプチド（ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド）複合体に、配列番号２７１のＭ１６０、Ｗ１６１、およびＱ１６４からなる群から選択されるアミノ酸に対応する少なくとも１つのアミノ酸で特異的に結合する、抗原結合タンパク質。
(項目２)
単離された前記抗原結合タンパク質が、ＨＬＡ－Ａ２提示ＮＹ－ＥＳＯ－１ポリペプチドの立体構造エピトープに特異的に結合する、項目１に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３)
前記少なくとも１つのアミノ酸が、少なくとも２つのアミノ酸である、項目１または２に記載の抗原結合タンパク質。
(項目４)
前記少なくとも１つのアミノ酸が、３つのアミノ酸である、項目３に記載の抗原結合タンパク質。
(項目５)
ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に特異的に結合する抗原結合タンパク質であって、単離された前記抗原結合タンパク質が、Ｘ線結晶解析によって４．０Å以上の分解能で決定されるときに、前記ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチドのアミノ酸Ｍ１６０、Ｗ１６１、およびＱ１６４と相互作用する、抗原結合タンパク質。
(項目６)
前記分解能が、３．５Å以上である、項目５に記載の抗原結合タンパク質。
(項目７)
前記分解能が、３．３Å以上である、項目６に記載の抗原結合タンパク質。
(項目８)
ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に特異的に結合するが、ＢＣＬ９Ｌ １３５１～１３５９（配列番号２７３）、ＧＲＩＤ１ ７～１５（配列番号２７４）、ＺＤＨＨＣ１ ３７６～３８４（配列番号２７６）、ＩＴＣＨ ８０７～８１５（配列番号２７７）、およびＵＲＢ１ １８５３～１８６１（配列番号２８０）からなる群から選択される１つ以上のオフターゲットペプチドに特異的に結合しない抗原結合タンパク質であって、ｉ）前記１つ以上のオフターゲットペプチドでパルスされた細胞に結合する前記抗原結合タンパク質の、ｉｉ）非パルス細胞に対する比が、約９未満である、抗原結合タンパク質。
(項目９)
前記比が、約８未満である、項目８に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１０)
前記比が、約７未満である、項目９に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１１)
前記比が、約６未満である、項目１０に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１２)
前記比が、約５未満である、項目１１に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１３)
前記比が、約４未満である、項目１２に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１４)
前記比が、約３未満である、項目１３に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１５)
前記比が、約２未満である、項目１４に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１６)
前記抗原結合タンパク質が、表面プラズモン共鳴アッセイにおいて２５℃で測定されるときに、単量体ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１ １５７～１６５ペプチド複合体に約１ｎＭ未満の結合解離平衡定数（Ｋ _Ｄ ）で結合する、項目１～１５のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１７)
前記ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドが、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号２６９）またはＳＬＬＭＷＩＴＱＶ（配列番号２９１）のアミノ酸配列を含む、項目１～１６のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１８)
前記抗原結合タンパク質が、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｔ体構築物、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、項目１～１７のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目１９)
前記抗原結合タンパク質が、ＣＡＲである、項目１９に記載の抗原結合タンパク質。
(項目２０)
前記ＣＡＲが、重鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含む、項目１９に記載のＣＡＲ。
(項目２１)
前記共刺激ドメインが、４－１ＢＢ共刺激ドメインである、項目２０に記載のＣＡＲ。
(項目２２)
前記共刺激ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメインである、項目２０に記載のＣＡＲ。
(項目２３)
前記抗原結合タンパク質が、ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片である、項目１～２２のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目２４)
表１に列挙される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、表１に列挙される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む、項目１～２３のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目２５)
前記ＨＣＶＲ配列が、配列番号２、２２、４２、１４２、および２５０からなる群から選択される、項目２４に記載の抗原結合タンパク質。
(項目２６)
前記ＬＣＶＲ配列が、配列番号１０、３０、５０、１５０、および２６０からなる群から選択される、項目２４に記載の抗原結合タンパク質。
(項目２７)
前記ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列が、配列番号２／１０、２２／３０、４２／５０、６２／７０、８２／９０、１０２／１１０、１２２／１３０、１４２／１５０、１６２／１７０、１８０／１８６、１９６／２０３、２１１／２１９、２３０／２３８、および２５０／２５８からなる群から選択される、項目２４に記載の抗原結合タンパク質。
(項目２８)
前記ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列が、配列番号２／１０、２２／３０、４２／５０、１４２／１５０、および２５０／２５８からなる群から選択される、項目２４に記載の抗原結合タンパク質。
(項目２９)
表１に列挙されるＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、項目１～２５のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３０)
前記ＨＣＶＲ配列が、配列番号２、２２、４２、１４２、および２５０からなる群から選択される、項目２９に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３１)
表１に列挙されるＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、項目１～３０のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３２)
前記ＬＣＶＲ配列が、配列番号１０、３０、５０、１５０、および２６０からなる群から選択される、項目３１に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３３)
（ａ）表１に列挙されるＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、（ｂ）表１に列挙されるＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、項目１～３２のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３４)
前記ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列が、配列番号２／１０、２２／３０、４２／５０、６２／７０、８２／９０、１０２／１１０、１２２／１３０、１４２／１５０、１６２／１７０、１８０／１８６、１９６／２０３、２１１／２１９、２３０／２３８、および２５０／２５８からなる群から選択される、項目３３に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３５)
前記ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列が、配列番号２／１０、２２／３０、４２／５０、１４２／１５０、および２５０／２５８からなる群から選択される、項目３４に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３６)
（ａ）配列番号４、２４、４４、６４、８４、１０４、１２４、１４４、１６４、２１３、２３２、および２５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号６、２６、４６、６６、８６、１０６、１２６、１４６、１６６、１８２、１９９、２１５、２３４、および２５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号８、２８、４８、６８、８８、１０８、１２８、１４８、１６８、１８４、２０１、２１７、２３６、および２５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１８８、２２１、２４０、および２６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号１４、３４、５４、７４、９４、１１４、１３４、１５４、１７４、２４２、および２６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１９０、２０５、２２４、２４４、および２６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと、を含む、項目１～３５のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３７)
前記抗原結合タンパク質が、表１に列挙されるＨＣＶＲ配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を含むＨＣＶＲを含む、項目１～２８および３６のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３８)
前記抗原結合タンパク質が、表１に列挙されるＨＣＶＲ配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むＨＣＶＲを含む、項目３７に記載の抗原結合タンパク質。
(項目３９)
前記単離された抗原結合タンパク質が、表１に列挙されるＨＣＶＲ配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を含むＨＣＶＲを含む、項目３８に記載の抗原結合タンパク質。
(項目４０)
前記抗原結合タンパク質が、表１に列挙されるＬＣＶＲ配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を含むＬＣＶＲを含む、項目１～２８および３６～３９のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目４１)
前記単離された抗原結合タンパク質が、表１に列挙されるＬＣＶＲ配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を含むＬＣＶＲを含む、項目４０に記載の抗原結合タンパク質。
(項目４２)
前記抗原結合タンパク質が、表１に列挙されるＬＣＶＲ配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を含むＬＣＶＲを含む、項目３８に記載の抗原結合タンパク質。
(項目４３)
結合について、項目１～４２のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質と競合する、抗原結合タンパク質。
(項目４４)
項目１～４２のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質と同じエピトープに結合する、抗原結合タンパク質。
(項目４５)
検出可能な部分を含む、項目１～４４のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質。
(項目４６)
項目１～４５のいずれか一項に記載のＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１に結合する抗原結合タンパク質と、薬学的に許容される担体または希釈剤と、を含む、医薬組成物。
(項目４７)
項目１～４５のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質のＨＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
(項目４８)
項目１～４５のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質のＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
(項目４９)
項目４７または４８に記載のポリヌクレオチド分子を含む、ベクター。
(項目５０)
項目４７もしくは４８に記載のポリヌクレオチド分子、または項目４９に記載のベクターを発現する、細胞。
(項目５１)
ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の項目１～４５のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質、または項目４６に記載の医薬組成物、または項目５０に記載の細胞を投与することを含み、それによって前記対象を治療する、方法。
(項目５２)
前記ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害が、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんである、項目５１に記載の方法。
(項目５３)
前記ＮＹ－ＥＳＯ関連がんが、脂肪肉腫、神経芽腫、骨髄腫、転移性黒色腫、滑膜肉腫、膀胱がん、食道がん、肝細胞がん、頭頸部がん、非小細胞肺がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、星状細胞腫瘍、多形性膠芽腫、未分化星状細胞腫、脳腫瘍、卵管がん、卵巣上皮がん、原発性腹腔がん、進行性固形腫瘍、軟組織肉腫、黒色腫、肉腫、骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、滑膜肉腫、転移性固形腫瘍、食道がん、横紋筋肉腫、進行性粘液様円形細胞脂肪肉腫、転移性黒色腫、または再発性非小細胞肺がんからなる群から選択される、項目５２に記載の方法。
(項目５４)
前記抗原結合タンパク質が、前記対象に、第２の治療剤と組み合わせて投与される、項目５１～５３のいずれか一項に記載の方法。
(項目５５)
前記第２の治療剤が、ＰＤ－１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、ウイルス感染細胞抗原に対する抗体、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、ＣＤ２０およびＣＤ３に対する二重特異性抗体、抗酸化剤などの栄養補充剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、化学療法剤、細胞傷害剤、手術、放射線、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、ならびに前記疾患または障害に関連する少なくとも１つの症状を改善するために有用な任意の他の療法からなる群から選択される、項目５４に記載の方法。
(項目５６)
前記抗原結合タンパク質が、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口、筋肉内、または頭蓋内で投与される、項目５１～５５のいずれか一項に記載の方法。
(項目５７)
前記抗原結合タンパク質が、前記対象の体重の約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、項目５１～５６のいずれか一項に記載の方法。
(項目５８)
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離された核酸分子であって、前記ＣＡＲが、ＨＬＡ－Ａ２提示ニューヨーク食道扁平上皮がん１ペプチド（ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド）の立体構造エピトープに特異的に結合する細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む、単離された核酸分子。
(項目５９)
前記細胞外結合ドメインが、抗ＨＬＡ－Ａ２：ＮＹ－ＥＳＯ－１抗原結合タンパク質である、項目５８に記載の単離された核酸分子。
(項目６０)
前記抗原結合タンパク質が、表１に列挙される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含まれる３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）と、表１に列挙される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のうちのいずれか１つに含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）と、を含む、項目５９に記載の単離された核酸分子。
(項目６１)
前記抗原結合タンパク質が、表１に列挙されるＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、項目５８～６０のいずれか一項に記載の単離された核酸分子。
(項目６２)
前記抗原結合タンパク質が、表１に列挙されるＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、項目５８～６１のいずれか一項に記載の単離された核酸分子。
(項目６３)
前記抗原結合タンパク質が、（ａ）表１に列挙されるＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲと、（ｂ）表１に列挙されるＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲと、を含む、項目５８～６２のいずれか一項に記載の単離された核酸分子。
(項目６４)
前記抗原結合タンパク質が、
（ａ）配列番号４、２４、４４、６４、８４、１０４、１２４、１４４、１６４、２１３、２３２、および２５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメインと、
（ｂ）配列番号６、２６、４６、６６、８６、１０６、１２６、１４６、１６６、１８２、１９９、２１５、２３４、および２５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメインと、
（ｃ）配列番号８、２８、４８、６８、８８、１０８、１２８、１４８、１６８、１８４、２０１、２１７、２３６、および２５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメインと、
（ｄ）配列番号１２、３２、５２、７２、９２、１１２、１３２、１５２、１７２、１８８、２２１、２４０、および２６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメインと、
（ｅ）配列番号１４、３４、５４、７４、９４、１１４、１３４、１５４、１７４、２４２、および２６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメインと、
（ｆ）配列番号１６、３６、５６、７６、９６、１１６、１３６、１５６、１９０、２０５、２２４、２４４、および２６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメインと、を含む、項目５８～６３のいずれか一項に記載の単離された核酸分子。
(項目６５)
前記抗原結合タンパク質が、配列番号２／１０、２２／３０、４２／５０、６２／７０、８２／９０、１０２／１１０、１２２／１３０、１４２／１５０、１６２／１７０、１８０／１８６、１９６／２０３、２１１／２１９、２３０／２３８、および２５０／２５８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、項目５８～６４のいずれか一項に記載の単離された核酸分子。
(項目６６)
前記抗原結合タンパク質が、配列番号２／１０、２２／３０、４２／５０、１４２／１５０、および２５０／２５８からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、項目５８～６５のいずれか一項に記載の単離された核酸分子。
(項目６７)
表２に列挙される配列のうちのいずれか１つを含む、項目５８～６６のいずれか一項に記載の単離された核酸分子。
(項目６８)
前記抗原結合タンパク質が、ｓｃＦｖである、項目５８～６７のいずれか一項に記載の単離された核酸分子。
(項目６９)
項目５８～６８のいずれか一項に記載の単離された核酸分子を含む、ベクター。
(項目７０)
項目５８～６８のいずれか一項に記載の単離された核酸分子または項目６９に記載のベクターを含む、単離された免疫エフェクター細胞。
(項目７１)
Ｔ体である、項目７０に記載の単離された免疫エフェクター細胞。
(項目７２)
前記細胞が、前記ＣＡＲを発現する、項目７０または７１に記載の単離された免疫エフェクター細胞。
(項目７３)
ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、項目７０～７２のいずれか一項に記載の免疫エフェクター細胞を投与することを含む、方法。
(項目７４)
前記ＮＹ－ＥＳＯ－１関連疾患または障害が、ＮＹ－ＥＳＯ－１関連がんである、項目７３に記載の方法。
(項目７５)
前記抗原結合タンパク質が、前記対象に、第２の治療剤と組み合わせて投与される、項目７３または７４に記載の方法。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【配列表】

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