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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-08-04
(45)【発行日】2025-08-13
(54)【発明の名称】新規抗糖鎖抗体及びその用途
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20250805BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20250805BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20250805BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20250805BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20250805BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20250805BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20250805BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20250805BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20250805BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20250805BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20250805BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20250805BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20250805BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20250805BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20250805BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20250805BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20250805BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20250805BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20250805BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20250805BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20250805BHJP
C12N 5/12 20060101ALI20250805BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20250805BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20250805BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20250805BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
A61K35/76
A61K39/395 N
A61K48/00
A61P1/04
A61P3/10
A61P9/10 101
A61P11/02
A61P11/06
A61P17/00
A61P17/06
A61P19/02
A61P27/02
A61P29/00
A61P29/00 101
A61P37/06
A61P37/08
C07K16/46
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12N5/12
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12P21/08
【請求項の数】
27
(21)【出願番号】P 2022555517
(86)(22)【出願日】2021-10-06
(86)【国際出願番号】 JP2021036893
(87)【国際公開番号】W WO2022075337
(87)【国際公開日】2022-04-14
【審査請求日】2024-09-13
(31)【優先権主張番号】P 2020169966
(32)【優先日】2020-10-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）令和２年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、「次世代治療・診断実現のための創薬基盤技術開発事業」「糖鎖利用による革新的創薬技術開発」委託研究開発、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願
(73)【特許権者】
【識別番号】304021831
【氏名又は名称】国立大学法人千葉大学
(74)【代理人】
【識別番号】100079108
【弁理士】
【氏名又は名称】稲葉 良幸
(74)【代理人】
【識別番号】100109346
【弁理士】
【氏名又は名称】大貫 敏史
(74)【代理人】
【識別番号】100117189
【弁理士】
【氏名又は名称】江口 昭彦
(74)【代理人】
【識別番号】100134120
【弁理士】
【氏名又は名称】内藤 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100152331
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 拓
(72)【発明者】
【氏名】川島 博人
(72)【発明者】
【氏名】松村 龍志
【審査官】木原 啓一郎
(56)【参考文献】
【文献】平川城太朗，川島博人，新規抗糖鎖モノクローナル抗体を用いたリンパ球体内動態の解析，生化学，2018年，Vol. 90, No. 2，pp. 221-224
【文献】MATSUMURA, R. et al.，Novel antibodies reactive with sialyl lewis X in both humans and mice define its critical role in leukocyte trafficking and contact hypersensitivity responses，J. Biol. Chem.，2015年，Vol. 290, No. 24，pp. 15313-15326
【文献】HIRAKAWA, J. et al.， Novel anti-carbohydrate antibodies reveal the cooperative function of sulfated N- and O-glycans in lymphocyte homing，J. Biol. Chem.，2010年，Vol. 285, No. 52，pp. 40864-40878
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片であって、以下の：（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；及び
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
を含む重鎖可変領域と、以下の：
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
を含む軽鎖可変領域とを含む、抗体又はその断片。
【請求項2】
重鎖可変領域が、配列番号１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその断片。
【請求項3】
以下に示す重鎖可変領域と軽鎖可変領域の組み合わせのいずれか：
（１）配列番号１５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（２）配列番号１５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１９で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（３）配列番号１６で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；又は
（４）配列番号１７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
を含む、請求項１に記載の抗体又はその断片。
【請求項4】
配列番号１３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１に記載の抗体又はその断片。
【請求項5】
以下に示す重鎖と軽鎖の組み合わせのいずれか：
（１）配列番号２５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；
（２）配列番号２７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；又は
（３）配列番号２８で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖、
を含む、請求項１に記載の抗体又はその断片。
【請求項6】
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現する高内皮細静脈とＬ－セレクチンの結合を阻害する、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
【請求項7】
定常領域がヒト由来である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
【請求項8】
ヒト化されている、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
【請求項9】
Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ及び一本鎖抗体から成る群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
【請求項10】
一本鎖抗体が、配列番号２１～２４のいずれかに記載のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の抗体又はその断片。
【請求項11】
抗体又はその断片が、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に対して１×１０-6Ｍ以下の解離定数（ＫD値）を示す、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
【請求項12】
請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド。
【請求項13】
請求項１２に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項14】
請求項１３に記載の発現ベクターによりトランスフェクトされた、宿主細胞。
【請求項15】
真核細胞である、請求項１４に記載の宿主細胞。
【請求項16】
請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体を産生する、ハイブリドーマ。
【請求項17】
請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその断片、請求項１２に記載のポリヌクレオチド、あるいは請求項１３に記載の発現ベクターを含む、リンパ球ホーミング阻害剤。
【請求項18】
請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその断片、請求項１２に記載のポリヌクレオチド、あるいは請求項１３に記載の発現ベクターを含む、医薬組成物。
【請求項19】
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患を治療又は予防するための、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項20】
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項21】
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項22】
免疫関連疾患が、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項23】
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択される自己免疫疾患である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項24】
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項25】
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、請求項２３又は２４に記載の医薬組成物。
【請求項26】
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防のための薬剤を更に含む、請求項１９～２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項27】
請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその断片を製造する方法であって、請求項１４又は１５に記載の宿主細胞、又は請求項１６に記載のハイブリドーマを培養する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は広く、糖鎖を標的とする新規抗体、特に、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合は６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する抗体又はその断片、及びその用途等に関する。
【背景技術】
【0002】
免疫関連疾患の多くは未だに病態メカニズムが不明であり、中でも、自己免疫疾患はアンメットメディカルニーズの高い疾患の一つである。自己免疫疾患のうち、多発性硬化症の治療に関しては、炎症細胞の中枢神経系への浸潤を司る接着分子であるＶＬＡ－４インテグリンに対する抗体ナタリズマブは病態改善効果を示したが、ＪＣウイルス感染による進行性多巣性白質脳症を引き起こすことがある。また、低分子医薬であるフィンゴリモド（ＦＴＹ７２０）は多発性硬化症治療薬としての有効性が認められているが、感染症や徐脈性不整脈等の副作用も知られており、作用機序の異なる新規治療薬の開発が望まれる。ＦＴＹ７２０は抗原感作を受けたリンパ球をリンパ節内にとどめることを作用機序とするが、リンパ球がリンパ節内に移行する過程(リンパ球ホーミング)を抑制することが出来れば、リンパ節内における抗原感作を抑制し、多発性硬化症をはじめとする種々の免疫関連疾患の根本治療に繋がる可能性が考えられる。しかしこれまでに、リンパ節へのリンパ球ホーミングの阻害によって、自己免疫疾患等の免疫関連疾患の治療が可能か明らかではない。
【0003】
免疫系では数多くの免疫細胞が血液・リンパ液を介して生体内を循環し、外来抗原に対する監視を行っている。なかでも末梢血を循環するリンパ球が二次リンパ組織へと遊走する現象はリンパ球ホーミングと呼ばれ、多段階の接着分子カスケードにより厳密に制御されている。そのため、これら接着分子カスケードを理解することは、リンパ球の体内動態と組織指向性を理解するために重要である。
【0004】
リンパ球ホーミングは効率よく免疫応答を誘導するために備わった生体防御機構であり、リンパ球が末梢リンパ節、腸間膜リンパ節、パイエル板等の二次リンパ組織へと移行する際には、サイコロ状の特殊な形態の内皮細胞から成る高内皮細静脈（ｈｉｇｈ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｖｅｎｕｌｅ：ＨＥＶ）に接着した後に組織内へと浸潤する。
【0005】
リンパ球ホーミングを阻害することにより、このリンパ球とＨＥＶとの特異的な接着を抑制することができれば、例えば生体のアレルギー応答を制御でき、種々の疾患の治療に役立つ可能性が考えられる。しかし、自己免疫疾患やアレルギー疾患等の免疫関連疾患の発症には様々な要因が関与するため、リンパ球ホーミングを阻害することにより、それらの免疫関連疾患の治療が可能かどうかは明らかではない。
【0006】
接着分子カスケードにおいて、６－スルホシアリルルイスＸは、リンパ球の浸潤を媒介する高内皮細静脈への初期接着を担うことから、リンパ球ホーミングに必須な糖鎖構造である。本発明者らは、糖鎖に硫酸基を転移する硫酸基転移酵素の遺伝子欠損マウスを作製し、ＨＥＶに特異的に発現する硫酸化糖鎖である６－スルホシアリルルイスＸがリンパ球の二次リンパ組織へのホーミング及び接触性皮膚炎の発症に必須の役割を果たすことを証明している（非特許文献１：Ｋａｗａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１：１０９６－１１０４，２００５）。
【0007】
ＨＥＶを認識する抗体も知られているが、生体内に発現する糖鎖は微量且つ多様な結合様式を持つため、抗体によって認識する糖鎖構造は異なる。例えば、末梢リンパ節のＨＥＶを特異的に染色するＭＥＣＡ－７９（非特許文献２：Ｓｔｒｅｅｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１０７：１８５３－１８６２，１９８８）は、伸長型コア１構造と呼ばれる特殊なＯ－型糖鎖上に存在する場合にのみ６－スルホシアリルルイスＸを認識する。また、その認識には６－スルホシアリルルイスＸ中の硫酸基を要するが、６－スルホシアリルルイスＸを構成する糖鎖のうち、リンパ球ホーミングに重要な働きをするフコースやシアル酸を要しない。また、Ｓ１抗体およびＳ２抗体（非特許文献３：Ｈｉｒａｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８５：４０８６４－４０８７８，２０１０）も６－スルホシアリルルイスＸを認識するが、その認識には６－スルホシアリルルイスＸ中の硫酸基及びシアル酸を要し、フコースを要しない。したがってこれらの抗体は、ＨＥＶのみでなくフコースを欠く６－スルホシアリルＬａｃＮＡｃ糖鎖を発現する組織とも結合し、生体にリンパ球ホーミングの阻害以外の思わぬ副作用を及ぼす可能性が否定できない。さらに、抗シアリルルイスＸモノクローナル抗体であるＦ１抗体およびＦ２抗体（非特許文献４：Ｍａｔｓｕｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２９０：１５３１３－１５３２６，２０１５）も６－スルホシアリルルイスＸを認識するが、その認識には６－スルホシアリルルイスＸ中の硫酸基を要さず、硫酸化されていないシアリルルイスＸを認識する。したがってこれらの抗体は、ＨＥＶに結合してリンパ球ホーミングを阻害するのに加えて、シアリルルイスＸを発現する白血球とも結合し、Ｐ－セレクチンやＥ－セレクチン依存的な白血球のローリングをも阻害する。
【0008】
Ｓ１抗体、Ｓ２抗体はいずれもＩｇＭクラスの抗体であるため、高純度で大量調製するのは困難であることから、頻回投与が必要な自己免疫疾患等の免疫関連疾患に対する治療効果を検証することは困難であり、自己免疫疾患等の免疫関連疾患に対する治療効果は不明である。
【0009】
また、Ｓ１抗体、Ｓ２抗体以外にも６－スルホシアリルルイスＸに結合性を持つ抗体は知られているものの（非特許文献２，４，５，６）、それらの抗体の自己免疫疾患等の免疫関連疾患に対する治療効果も不明である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0010】
【文献】Ｋａｗａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１：１０９６－１１０４，２００５
【文献】Ｓｔｒｅｅｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１０７：１８５３－１８６２，１９８８
【文献】Ｈｉｒａｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８５：４０８６４－４０８７８，２０１０
【文献】Ｍａｔｓｕｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２９０：１５３１３－１５３２６，２０１５
【文献】Ｍｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：１１２２５－１１２３３，１９９８
【文献】松浦寛明ら，日本薬学会第１３５年会要旨集（ＣＤ－ＲＯＭ），ページ：ＲＯＭＢＵＮＮＯ．２７Ｘ－ＰＭ０５Ｓ，２０１５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0011】
本発明は、多発性硬化症等の免疫関連疾患の有効な治療標的となる糖鎖を発見するとともに、同糖鎖を標的とする新規抗体、特に、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合は６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する抗体又はその断片、及びその用途等を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明者は、糖鎖合成酵素欠損マウスに糖鎖合成酵素を過剰発現させた細胞を免疫するという本発明者らが考案した手法を用いて複数の抗体を作製した。その中から、免疫組織化学的検討により、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現するＨＥＶと特異的に結合するＩｇＧ１クラスの抗糖鎖モノクローナル抗体（ＳＦ１抗体）を選別し、その結合特異性と配列解析を行った。その結果、得られた抗糖鎖抗体は配列が新規であり、６－スルホシアリルルイスＸを認識し、その認識には６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸の３つを同時に要求し、厳格に６－スルホシアリルルイスＸを他の糖鎖構造から識別することが明らかとなった。バイオレイヤー干渉法による解析の結果、ＳＦ１抗体と６－スルホシアリルルイスＸとの結合のＫＤ値は、６．０９×１０－９（Ｍ）であることが示された。
【0013】
本発明者は、ＳＦ１抗体がリンパ球ホーミングレセプターであるＬ－セレクチンとＨＥＶの結合を阻害するとともに、６－スルホシアリルルイスＸ発現細胞上におけるリンパ球のＬ－セレクチン依存的なローリングを阻害する活性を持ち、リンパ球ホーミングを阻害するのに有効であることを明らかにした。
【0014】
次に本発明者は、リンパ球ホーミングに関与する糖鎖が多発性硬化症等の免疫関連疾患の有効な治療標的となり得る可能性に着目し、リンパ球ホーミングに関与する６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖の合成不全によってリンパ球ホーミングが顕著に低下する硫酸基転移酵素ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－１／２二重欠損マウスを用いて、実験的自己免疫性脳脊髄炎の解析を行った。その結果、ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－１／２によって合成される６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖が、多発性硬化症等の免疫関連疾患の治療標的となることを発見した。
【0015】
そこで本発明者は、動物モデルを用いた非臨床試験により、ＳＦ１抗体の免疫関連疾患に対する治療効果を多面的に検討した。その結果、実験的自己免疫性脳脊髄炎の顕著な予防効果および治療効果を持つことを発見した。さらにリウマチ様関節炎モデルおよびアレルギー性鼻炎モデルにおいても疾患抑制効果を持つことを明らかとした。以上より、ＳＦ１抗体は、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖と特異的に結合し、リンパ節へのリンパ球ホーミングを特異的に阻害することによって、自己免疫疾患およびアレルギー疾患等の免疫関連疾患に対する顕著な治療効果を発揮することを明らかにした。
【0016】
本発明者は、ＳＦ１抗体を用いてヒト正常組織の免疫組織染色を行い、ＳＦ１抗体がヒトの末梢リンパ節および扁桃ＨＥＶと特異的に結合することを明らかにした。
【0017】
ＳＦ１抗体はマウス抗体であるためヒト免疫関連疾患の治療に用いるためには、抗体のヒト化が重要である。そこで本発明者はさらに、ＳＦ１抗体の超可変部の配列をヒト抗体可変部のフレーム配列に移植したヒト化一本鎖ＳＦ１抗体を作製したところ、ＨＥＶとの特異的な結合性を保持することを明らかにした。そこでその可変部配列をヒトＩｇＧ１重鎖およびヒトκ軽鎖に置き換えた完全型のヒト化ＳＦ１抗体を作製したところ、ＨＥＶと硫酸基、フコース依存的に特異的な結合性を示し、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に対する特異的な結合特異性を保持することを明らかにした。
【0018】
次に本発明者は、ヒト化ＳＦ１抗体が、マウスＳＦ１抗体と同様に、リンパ球ホーミングの阻害と実験的自己免疫性脳脊髄炎の発症抑制に有効であることを明らかにした。
【0019】
さらに本発明者は、Ｆｃ部分の配列を、抗体のＦｃ部分を介するエフェクター活性を低下させ、副作用リスクを低減させることが知られている配列に改変したヒト化ＳＦ１抗体を作製し、特異的な組織結合性を保持することを見出した。これらのＦｃ部分の配列を改変したヒト化ＳＦ１抗体は、自己免疫疾患やアレルギー疾患等の免疫関連疾患の治療抗体として有用と考えられる。
【0020】
すなわち、本願発明は以下の発明を包含する。
［１］
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片であって、以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
から成る群から選択される少なくとも１つ以上のＣＤＲを含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲを少なくとも１つ以上含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲを少なくとも１つ以上含む、抗体又はその断片。
［２］
以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；及び
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
を含む重鎖可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含む、［１］に記載の抗体又はその断片。
［３］
重鎖可変領域が、配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含む、［２］に記載の抗体又はその断片。
［４］
重鎖可変領域が、配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列、配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［２］又は［３］に記載の抗体又はその断片。
［５］
重鎖が、配列番号２５、２７又は２８に記載のアミノ酸配列、配列番号２５、２７又は２８に記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号２５、２７又は２８に記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［２］～［４］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［６］
以下の：
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
を含む軽鎖可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む、［１］～［５］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［７］
軽鎖可変領域が、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列の少なくとも８０個の連続したアミノ酸を含む、［６］に記載の抗体又はその断片。
［８］
軽鎖可変領域が、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［６］又は［７］に記載の抗体又はその断片。
［９］
軽鎖が、配列番号２６に記載のアミノ酸配列、配列番号２６に記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号２６に記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［６］～［８］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１０］
以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
から成るＣＤＲを含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む、［１］～［９］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１１］
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現する高内皮細静脈とＬ－セレクチンの結合を阻害する、［１］～［１０］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１２］
定常領域がヒト由来である、［１］～［１１］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１３］
ヒト化されている、［１］～［１２］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１４］
Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ及び一本鎖抗体から成る群から選択される、［１］～［１３］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１５］
一本鎖抗体が、配列番号２１～２４のいずれかに記載のアミノ酸配列における１～１１７番目及び１３３～２３８番目のアミノ酸配列、配列番号２１～２４のいずれかに記載のアミノ酸配列における１～１１７番目及び１３３～２３８番目のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号２１～２４のいずれかに記載のアミノ酸配列における１～１１７番目及び１３３～２３８番目のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［１４］に記載の抗体又はその断片。
［１６］
抗体又はその断片が、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に対して１×１０－６Ｍ以下の解離定数（ＫＤ値）を示す、［１］～［１５］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１７］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド。
［１８］
［１７］に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
［１９］
［１８］に記載の発現ベクターによりトランスフェクトされた、宿主細胞。
［２０］
真核細胞である、［１９］に記載の宿主細胞。
［２１］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体を産生する、ハイブリドーマ。
［２２］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片、［１７］に記載のポリヌクレオチド、あるいは［１８］に記載の発現ベクターを含む、リンパ球ホーミング阻害剤。
［２３］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片、［１７］に記載のポリヌクレオチド、あるいは［１８］に記載の発現ベクターを含む、医薬組成物。
［２４］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患を治療又は予防するための、［２３］に記載の医薬組成物。
［２５］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［２４］に記載の医薬組成物。
［２６］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［２５］に記載の医薬組成物。
［２７］
免疫関連疾患が、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［２６］に記載の医薬組成物。
［２８］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択される自己免疫疾患である、［２６］に記載の医薬組成物。
［２９］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［２８］に記載の医薬組成物。
［３０］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［２８］又は［２９］に記載の医薬組成物。
［３１］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防のための薬剤を更に含む、［２４］～［３０］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３２］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片を製造する方法であって、［１９］又は［２０］に記載の宿主細胞、又は［２１］に記載のハイブリドーマを培養する工程を含む、方法。
［３３］
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片、当該抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド、あるいは該ポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む、リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患を治療又は予防するための医薬組成物。
［３４］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［３３］に記載の医薬組成物。
［３５］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［３４］に記載の医薬組成物。
［３６］
免疫関連疾患が、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［３５］に記載の医薬組成物。
［３７］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択されるいずれかの自己免疫疾患である、［３５］に記載の医薬組成物。
［３８］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［３７］に記載の医薬組成物。
［３９］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［３８］に記載の医薬組成物。
［４０］
抗体又はその断片が、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現する高内皮細静脈とＬ－セレクチンの結合を阻害する、［３３］～［３９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４１］
抗体又はその断片が、［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片である、［３３］～［４０］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４２］
対象におけるリンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患を治療又は予防するための方法であって、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片、当該抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド、あるいは当該ポリヌクレオチドを含む発現ベクターを有効量当該対象に投与する工程を含む、方法。
［４３］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［４２］に記載の方法。
［４４］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［４３］に記載の方法。
［４５］
免疫関連疾患がアレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［４４］に記載の方法。
［４６］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択されるいずれかの自己免疫疾患である、［４４］に記載の方法。
［４７］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［４６］に記載の方法。
［４８］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［４６］又は［４７］に記載の方法。
［４９］
抗体又はその断片が、［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片である、［４２］～［４８］のいずれかに記載の方法。
［５０］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防のための薬剤を投与する工程を更に含む、［４２］～［４９］のいずれかに記載の方法。
［５１］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防において使用するための、［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［５２］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［５１］に記載の抗体又はその断片。
［５３］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［５２］に記載の抗体又はその断片。
［５４］
免疫関連疾患が、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［５３］に記載の抗体又はその断片。
［５５］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択される自己免疫疾患である、［５３］に記載の抗体又はその断片。
［５６］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［５５］に記載の抗体又はその断片。
［５７］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［５５］又は［５６］に記載の抗体又はその断片。
［５８］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患を治療又は予防するための医薬の製造のための、［１］～［１６］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片の使用。
［５９］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［５８］に記載の使用。
［６０］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［５９］に記載の使用。
［６１］
免疫関連疾患が、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［５９］に記載の使用。
［６２］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択される自己免疫疾患である、［５９］に記載の使用。
［６３］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［６２］に記載の使用。
［６４］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［６２］又は［６３］に記載の使用。
［１］
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片であって、以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
から成る群から選択される少なくとも１つ以上のＣＤＲを含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲを少なくとも１つ以上含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲを少なくとも１つ以上含む、抗体又はその断片。
［２］
以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；及び
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
を含む重鎖可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含む、［１］に記載の抗体又はその断片。
［３］
重鎖可変領域が、配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含む、［２］に記載の抗体又はその断片。
［４］
重鎖可変領域が、配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列、配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［２］又は［３］に記載の抗体又はその断片。
［５］
重鎖が、配列番号２５、２７又は２８に記載のアミノ酸配列、配列番号２５、２７又は２８に記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号２５、２７又は２８に記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［２］～［４］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［６］
以下の：
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
を含む軽鎖可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む、［１］～［５］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［７］
軽鎖可変領域が、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列の少なくとも８０個の連続したアミノ酸を含む、［６］に記載の抗体又はその断片。
［８］
軽鎖可変領域が、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［６］又は［７］に記載の抗体又はその断片。
［９］
軽鎖が、配列番号２６に記載のアミノ酸配列、配列番号２６に記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号２６に記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［６］～［８］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１０］
以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
から成るＣＤＲを含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む、［１］～［９］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１１］
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現する高内皮細静脈とＬ－セレクチンの結合を阻害する、［１］～［１０］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１２］
定常領域がヒト由来である、［１］～［１１］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１３］
ヒト化されている、［１］～［１２］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１４］
Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ及び一本鎖抗体から成る群から選択される、［１］～［１３］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１５］
一本鎖抗体が、配列番号２１～２４のいずれかに記載のアミノ酸配列における１～１１７番目及び１３３～２３８番目のアミノ酸配列、配列番号２１～２４のいずれかに記載のアミノ酸配列における１～１１７番目及び１３３～２３８番目のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号２１～２４のいずれかに記載のアミノ酸配列における１～１１７番目及び１３３～２３８番目のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む、［１４］に記載の抗体又はその断片。
［１６］
抗体又はその断片が、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に対して１×１０－６Ｍ以下の解離定数（ＫＤ値）を示す、［１］～［１５］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［１７］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド。
［１８］
［１７］に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
［１９］
［１８］に記載の発現ベクターによりトランスフェクトされた、宿主細胞。
［２０］
真核細胞である、［１９］に記載の宿主細胞。
［２１］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体を産生する、ハイブリドーマ。
［２２］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片、［１７］に記載のポリヌクレオチド、あるいは［１８］に記載の発現ベクターを含む、リンパ球ホーミング阻害剤。
［２３］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片、［１７］に記載のポリヌクレオチド、あるいは［１８］に記載の発現ベクターを含む、医薬組成物。
［２４］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患を治療又は予防するための、［２３］に記載の医薬組成物。
［２５］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［２４］に記載の医薬組成物。
［２６］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［２５］に記載の医薬組成物。
［２７］
免疫関連疾患が、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［２６］に記載の医薬組成物。
［２８］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択される自己免疫疾患である、［２６］に記載の医薬組成物。
［２９］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［２８］に記載の医薬組成物。
［３０］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［２８］又は［２９］に記載の医薬組成物。
［３１］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防のための薬剤を更に含む、［２４］～［３０］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３２］
［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片を製造する方法であって、［１９］又は［２０］に記載の宿主細胞、又は［２１］に記載のハイブリドーマを培養する工程を含む、方法。
［３３］
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片、当該抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド、あるいは該ポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む、リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患を治療又は予防するための医薬組成物。
［３４］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［３３］に記載の医薬組成物。
［３５］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［３４］に記載の医薬組成物。
［３６］
免疫関連疾患が、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［３５］に記載の医薬組成物。
［３７］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択されるいずれかの自己免疫疾患である、［３５］に記載の医薬組成物。
［３８］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［３７］に記載の医薬組成物。
［３９］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［３８］に記載の医薬組成物。
［４０］
抗体又はその断片が、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現する高内皮細静脈とＬ－セレクチンの結合を阻害する、［３３］～［３９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４１］
抗体又はその断片が、［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片である、［３３］～［４０］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４２］
対象におけるリンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患を治療又は予防するための方法であって、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片、当該抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド、あるいは当該ポリヌクレオチドを含む発現ベクターを有効量当該対象に投与する工程を含む、方法。
［４３］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［４２］に記載の方法。
［４４］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［４３］に記載の方法。
［４５］
免疫関連疾患がアレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［４４］に記載の方法。
［４６］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択されるいずれかの自己免疫疾患である、［４４］に記載の方法。
［４７］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［４６］に記載の方法。
［４８］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［４６］又は［４７］に記載の方法。
［４９］
抗体又はその断片が、［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片である、［４２］～［４８］のいずれかに記載の方法。
［５０］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防のための薬剤を投与する工程を更に含む、［４２］～［４９］のいずれかに記載の方法。
［５１］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防において使用するための、［１］～［１６］のいずれかに記載の抗体又はその断片。
［５２］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［５１］に記載の抗体又はその断片。
［５３］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［５２］に記載の抗体又はその断片。
［５４］
免疫関連疾患が、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［５３］に記載の抗体又はその断片。
［５５］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択される自己免疫疾患である、［５３］に記載の抗体又はその断片。
［５６］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［５５］に記載の抗体又はその断片。
［５７］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［５５］又は［５６］に記載の抗体又はその断片。
［５８］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患を治療又は予防するための医薬の製造のための、［１］～［１６］のいずれか一項に記載の抗体又はその断片の使用。
［５９］
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患が免疫関連疾患である、［５８］に記載の使用。
［６０］
免疫関連疾患がアレルギー疾患又は自己免疫疾患である、［５９］に記載の使用。
［６１］
免疫関連疾患が、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択されるアレルギー疾患である、［５９］に記載の使用。
［６２］
免疫関連疾患が、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から成る群から選択される自己免疫疾患である、［５９］に記載の使用。
［６３］
自己免疫疾患が多発性硬化症又は膠原病である、［６２］に記載の使用。
［６４］
膠原病が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症及びＳＡＰＨＯ症候群から成る群から選択される１又は複数の疾患である、［６２］又は［６３］に記載の使用。
【発明の効果】
【0021】
本発明の抗糖鎖抗体によれば、リンパ球上に発現するＬ－セレクチンと高内皮細静脈（ＨＥＶ）上の糖鎖の結合を阻害し、リンパ球ホーミングの阻害による免疫関連疾患（例えば、多発性硬化症等の自己免疫疾患）の治療が可能になる。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【発明を実施するための形態】
【0023】
（抗糖鎖抗体）
第一の態様において、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合は６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片が提供される。本明細書では以降、この抗体を単に抗糖鎖抗体ともいう。本明細書で使用する場合、６－スルホシアリルルイスＸとの結合又は６－スルホシアリルルイスＸの認識に「６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求」するとは、抗体が６－スルホシアリルルイスＸとの結合にフコース、硫酸基及びシアル酸の３つを必要とし、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖からフコース、硫酸基又はシアル酸のいずれか一つでも欠損した糖鎖への結合活性が６－スルホシアリルルイスＸへの結合活性と比較して低下することを意味する。
第一の態様において、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合は６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片が提供される。本明細書では以降、この抗体を単に抗糖鎖抗体ともいう。本明細書で使用する場合、６－スルホシアリルルイスＸとの結合又は６－スルホシアリルルイスＸの認識に「６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求」するとは、抗体が６－スルホシアリルルイスＸとの結合にフコース、硫酸基及びシアル酸の３つを必要とし、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖からフコース、硫酸基又はシアル酸のいずれか一つでも欠損した糖鎖への結合活性が６－スルホシアリルルイスＸへの結合活性と比較して低下することを意味する。
【0024】
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖と抗体との反応性は常法により測定することができ、例えば、糖鎖が基板上に固定された糖鎖アレイを用いて行うことができる。糖鎖アレイは、例えば米国Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ ｆｏｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ＧｌｙｃｏｍｉｃｓのＧｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙを用いて実施可能である。６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖と抗体との反応性は、表面プラズモン共鳴や等温滴定型カロリメトリーを用いて評価することもできる。
【0025】
一実施形態において、抗原抗体反応における、本発明の抗体またはその断片の６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に対する結合親和性についての解離定数（ＫＤ値）は、通常１×１０－６Ｍ以下（例えば、１×１０－７Ｍ以下、１×１０－８Ｍ以下、１×１０－９Ｍ以下、１×１０－１０Ｍ以下、１×１０－１１Ｍ以下）である。
【0026】
一実施形態において、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖から、フコース、硫酸基又はシアル酸の少なくとも一つを欠損して得られる糖鎖（例、６－スルホルイスＸ、６－スルホシアリルＬａｃＮＡｃ、シアリルルイスＸ）に対する本発明の抗体またはその断片の結合親和性についてのＫＤ値は、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に対するＫＤ値と比較して、通常１０倍以上（例えば、１０２倍以上、１０３倍以上、１０４倍以上、１０５倍以上）大きい値である。
【0027】
一実施形態において、６－スルホルイスＸ、６－スルホシアリルＬａｃＮＡｃ、及びシアリルルイスＸに対する本発明の抗体またはその断片の結合親和性についてのＫＤ値は、いずれも６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に対するＫＤ値と比較して、通常１０倍以上（例えば、１０２倍以上、１０３倍以上、１０４倍以上、１０５倍以上）大きい値である。
【0028】
抗体またはその断片の糖鎖抗原に対する結合親和性についてのＫＤ値は、後述の実施例に準じ、ストレプトアビジンバイオセンサーに結合したビオチン化した糖鎖に対する抗体またはその断片の結合特性を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６（Ｐａｌｌ－Ｆｏｒｔｅｂｉｏ社製）を用いたバイオレイヤー干渉法により解析することにより測定することができる。
【0029】
６－スルホシアリルルイスＸは、ガラクトース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）で構成されるＮ－アセチルラクトサミン（ＬａｃＮＡｃ）構造にシアル酸、フコース及び硫酸基が付加した糖鎖である（図１）。６－スルホシアリルルイスＸの生合成にはＮ－アセチルグルコサミンの６位の硫酸化が必要であり、硫酸化を触媒する硫酸基転移酵素（ＳＴ）としてマウスではＮ－アセチルグルコサミン－６－Ｏ－スルホトランスフェラーゼ（ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ）－１～ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－４がクローニングされている。
【0030】
リンパ球ホーミングにおいて、リンパ球は、リンパ球上に発現するＬ－セレクチンと高内皮細静脈（ＨＥＶ）内腔に発現する６－スルホシアリルルイスＸとの特異的結合を介したＨＥＶ上でのローリング（リンパ球ローリング）を経由してリンパ節内へ浸潤する。このように、硫酸化糖鎖である６－スルホシアリルルイスＸはリンパ球の浸潤を媒介するＨＥＶへの初期接着を担うことからリンパ球ホーミングに必須な糖鎖構造である。
【0031】
Ｌ－セレクチンと６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖との結合には、フコース、硫酸基、シアル酸が関与する。フコース、硫酸基、シアル酸はリンパ球のホーミングにおいて重要な役割を果たすため、フコース、硫酸基及びシアル酸の３つを同時に認識する抗糖鎖抗体又はその断片はリンパ球ホーミング、特に６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現する細胞、例えば末梢リンパ節や腸管膜リンパ節等のリンパ節、又は扁桃の高内皮細静脈からのリンパ球ホーミングを高効率に阻害し、ひいてはリンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防に有効であると考えられる。好ましい実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片は、ホーミングの過程のうち、Ｌ－セレクチン依存的なリンパ球のローリングを阻害する。
【0032】
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する抗体は、例えば、ＨＥＶに発現するシアリルルイスＸの硫酸化を担う硫酸基転移酵素、ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－１及びＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－２を欠損したマウス（以下、硫酸基転移酵素二重欠損マウス又はＤＫＯマウス、ともいう。）を、フコース転移酵素及び硫酸基転移酵素の遺伝子導入により硫酸化糖鎖を発現させた細胞で免疫し、抗体産生細胞をミエローマと融合することで得られるハイブリドーマを用いて産生することができる。硫酸基転移酵素二重欠損マウスは当業者に公知の手法、例えばＫａｗａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，（上掲）に記載の手法を用いて作製することができる。産生した抗体は回収の前に更に精製工程等の追加の工程にかけてもよく、例えば純度を高めるために、塩析、フィルター濾過、遠心分離を用いた清澄化、アフィニティーによる回収、イオン交換による中間精製、ゲルろ過による最終精製を行うことが好ましい。
【0033】
このようにして得られる抗糖鎖抗体の例として、６－スルホシアリルルイスＸを認識する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する抗体、例えば、以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＧＦＳＬＴＳＹＡ）から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＩＷＧＧＧＳＴ）から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列（ＡＫＨＥＫＬＧＲＦＰＹ）から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＳＳＶＳＹ）から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＥＩＳ）から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列（ＱＱＷＮＹＰＬＡＴ）から成るＣＤＲＬ３；
から成る群から選択される少なくとも１つ以上のＣＤＲ、好ましくは６つ全てのＣＤＲを含む抗体が例示される。抗体は通常２つの重鎖と２つの軽鎖がジスルフィド結合により共有結合した構造を有し、各重鎖は重鎖可変領域と重鎖定常領域に、そして各軽鎖は軽鎖可変領域と軽鎖定常領域に分けられる。ＣＤＲは各可変領域に３つずつ含まれる。ここで、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３は重鎖の相補性決定領域を重鎖アミノ酸配列のアミノ末端側から順に表記したものであり、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３は軽鎖の相補性決定領域を軽鎖アミノ酸配列のアミノ末端側から順に表記したものである。
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＧＦＳＬＴＳＹＡ）から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＩＷＧＧＧＳＴ）から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列（ＡＫＨＥＫＬＧＲＦＰＹ）から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＳＳＶＳＹ）から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＥＩＳ）から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列（ＱＱＷＮＹＰＬＡＴ）から成るＣＤＲＬ３；
から成る群から選択される少なくとも１つ以上のＣＤＲ、好ましくは６つ全てのＣＤＲを含む抗体が例示される。抗体は通常２つの重鎖と２つの軽鎖がジスルフィド結合により共有結合した構造を有し、各重鎖は重鎖可変領域と重鎖定常領域に、そして各軽鎖は軽鎖可変領域と軽鎖定常領域に分けられる。ＣＤＲは各可変領域に３つずつ含まれる。ここで、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３は重鎖の相補性決定領域を重鎖アミノ酸配列のアミノ末端側から順に表記したものであり、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３は軽鎖の相補性決定領域を軽鎖アミノ酸配列のアミノ末端側から順に表記したものである。
【0034】
従って、抗糖鎖抗体またはその断片は、好ましくは、
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＧＦＳＬＴＳＹＡ）から成るＣＤＲＨ１、
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＩＷＧＧＧＳＴ）から成るＣＤＲＨ２、及び
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列（ＡＫＨＥＫＬＧＲＦＰＹ）から成るＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含むか、そして／あるいは
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＳＳＶＳＹ）から成るＣＤＲＬ１、
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＥＩＳ）から成るＣＤＲＬ２、及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列（ＱＱＷＮＹＰＬＡＴ）から成るＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む。
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＧＦＳＬＴＳＹＡ）から成るＣＤＲＨ１、
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＩＷＧＧＧＳＴ）から成るＣＤＲＨ２、及び
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列（ＡＫＨＥＫＬＧＲＦＰＹ）から成るＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含むか、そして／あるいは
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＳＳＶＳＹ）から成るＣＤＲＬ１、
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＥＩＳ）から成るＣＤＲＬ２、及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列（ＱＱＷＮＹＰＬＡＴ）から成るＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む。
【0035】
各ＣＤＲのアミノ酸配列は、抗糖鎖抗体またはその断片が、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する限り、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有していてもよい。本明細書で使用する場合、「数個」とは、配列の長さによっても異なるが、２～１０個、好ましくは２～５個、より好ましくは２又は３個を指す。
【0036】
置換後のアミノ酸は、以下の分類のような元のアミノ酸側鎖の性質が保存されているアミノ酸であることが望ましい。しかしながら、アミノ酸置換は保存的置換に限定されない。
疎水性アミノ酸（Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ、Ｖ）；
親水性アミノ酸（Ｒ、Ｄ、Ｎ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｓ、Ｔ）；
脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ）；
水酸基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｓ、Ｔ、Ｙ）；
硫黄原子含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃ、Ｍ）；
カルボン酸及びアミド含有側鎖を有するアミノ酸（Ｄ、Ｎ、Ｅ、Ｑ）；
塩基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｒ、Ｋ、Ｈ）；
芳香族含有側鎖を有するアミノ酸（Ｈ、Ｆ、Ｙ、Ｗ）
疎水性アミノ酸（Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ、Ｖ）；
親水性アミノ酸（Ｒ、Ｄ、Ｎ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｓ、Ｔ）；
脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ）；
水酸基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｓ、Ｔ、Ｙ）；
硫黄原子含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃ、Ｍ）；
カルボン酸及びアミド含有側鎖を有するアミノ酸（Ｄ、Ｎ、Ｅ、Ｑ）；
塩基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｒ、Ｋ、Ｈ）；
芳香族含有側鎖を有するアミノ酸（Ｈ、Ｆ、Ｙ、Ｗ）
【0037】
一実施形態において、アミノ酸置換は、天然のヒト抗体において対応する位置に存在するアミノ酸であってよい。
【0038】
一実施形態において、アミノ酸置換は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の外側に存在していてもよい。
【0039】
一実施形態において、アミノ酸置換は、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に存在していてもよい。
【0040】
あるいは、各ＣＤＲのアミノ酸配列は、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する限り、各配列番号に示される配列と８０％以上の相同性、好ましくは８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から構成されていてもよい。配列の相同性又は同一性は、好ましくは８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％以上、より好ましくは９９％以上である。
【0041】
一実施形態において、抗糖鎖抗体は、以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
から成る群から選択される少なくとも１つ以上のＣＤＲを含む可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲを含む可変領域を少なくとも１つ以上含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲを含む可変領域を少なくとも１つ以上含む、抗体又はその断片が結合するエピトープと結合する抗体又はその断片であってもよい。
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
から成る群から選択される少なくとも１つ以上のＣＤＲを含む可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲを含む可変領域を少なくとも１つ以上含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲを含む可変領域を少なくとも１つ以上含む、抗体又はその断片が結合するエピトープと結合する抗体又はその断片であってもよい。
【0042】
本明細書で使用する場合、「エピトープ」とは、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合は６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片が結合する６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖の部分構造を意味する。エピトープが立体構造エピトープの場合、Ｘ線結晶構造解析等により抗体に結合している６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖の構造を解析することによりエピトープを特定することができる。
【0043】
一実施形態において、抗糖鎖抗体は、以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；及び
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
を含む重鎖可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含む、抗体又はその断片であってもよい。
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；及び
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
を含む重鎖可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含む、抗体又はその断片であってもよい。
【0044】
一実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片における重鎖可変領域は、配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列の少なくとも９０個の連続したアミノ酸を含んでもよい。
【0045】
本明細書で使用する場合、「配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列の少なくとも９０個の連続したアミノ酸」とは、配列番号１３、１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列における９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６又は１１７個の連続したアミノ酸を意味する。そのような連続したアミノ酸は、順に、２６～３３番目のアミノ酸、５１～５７番目のアミノ酸、９６～１０６番目のアミノ酸で表されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含むことが好ましい。
【0046】
一実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片における重鎖可変領域は、配列番号１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列、配列番号１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号１５～１７のいずれかに記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。
【0047】
一実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片における重鎖は、配列番号２５、２７又は２８に記載のアミノ酸配列、配列番号２５、２７又は２８に記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号２５に記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。
【0048】
一実施形態において、抗糖鎖抗体は、以下の：
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
を含む軽鎖可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む、抗体又はその断片であってもよい。
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
を含む軽鎖可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む、抗体又はその断片であってもよい。
【0049】
一実施形態において、抗糖鎖抗体は、以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
を含む可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む可変領域を含む、抗体又はその断片であってもよい。
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３；
を含む可変領域を含むか、
各ＣＤＲのアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む可変領域を含むか、あるいは
各ＣＤＲのアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む可変領域を含む、抗体又はその断片であってもよい。
【0050】
一実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片における軽鎖可変領域は、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列の少なくとも８０個の連続したアミノ酸を含んでもよい。
【0051】
本明細書で使用する場合、「配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列の少なくとも８０個の連続したアミノ酸」とは、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列における８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６個の連続したアミノ酸を意味する。そのような連続したアミノ酸は、順に、２７～３１番目のアミノ酸、４９～５１番目のアミノ酸、８８～９６番目のアミノ酸で表されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含むことが好ましい。
【0052】
一実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片における軽鎖可変領域は、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列、配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号１４、１８～２０のいずれかに記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。
【0053】
一実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片における軽鎖は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列、配列番号２６に記載のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸の欠失、置換又は付加を有するアミノ酸配列、あるいは配列番号２６に記載のアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。
【0054】
抗糖鎖抗体は上記ＣＤＲを有する限り、その他の構造、例えばＣＤＲ以外の可変領域や定常領域の構造は特に限定されないが、上記のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域とをそれぞれコードするアミノ酸配列の例として、それぞれ、配列番号１３、１５、１６、１７のアミノ酸配列および配列番号１４、１８、１９、２０のアミノ酸配列が挙げられる。
【0055】
好ましい実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片は、配列番号１３、１５、１６又は１７のいずれかのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１４、１８、１９又は２０のいずれかのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでもよい。
【0056】
好ましい実施形態において、ヒト化抗糖鎖抗体又はその断片は、配列番号１５、１６又は１７のいずれかのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１８、１９又は２０のいずれかのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでもよい。
（組み合わせの例：配列番号１５と配列番号１８、配列番号１５と配列番号１９、配列番号１５と配列番号２０、配列番号１６と配列番号１８、配列番号１６と配列番号１９、配列番号１６と配列番号２０、配列番号１７と配列番号１８、配列番号１７と配列番号１９、配列番号１７と配列番号２０）
（組み合わせの例：配列番号１５と配列番号１８、配列番号１５と配列番号１９、配列番号１５と配列番号２０、配列番号１６と配列番号１８、配列番号１６と配列番号１９、配列番号１６と配列番号２０、配列番号１７と配列番号１８、配列番号１７と配列番号１９、配列番号１７と配列番号２０）
【0057】
より好ましい実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片は、以下に示す重鎖可変領域と軽鎖可変領域の組み合わせのいずれかを含んでもよい：
・配列番号１３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１４で表されるアミノ酸配列（配列番号４）を含む軽鎖可変領域（ＳＦ１）；
・配列番号１５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｈ１）と配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｌ１）；
・配列番号１５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｈ１）と配列番号１９で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｌ２）；
・配列番号１６で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｈ２）と配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｌ１）；
・配列番号１７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｈ３）と配列番号２０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｌ３）。
・配列番号１３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号１４で表されるアミノ酸配列（配列番号４）を含む軽鎖可変領域（ＳＦ１）；
・配列番号１５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｈ１）と配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｌ１）；
・配列番号１５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｈ１）と配列番号１９で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｌ２）；
・配列番号１６で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｈ２）と配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｌ１）；
・配列番号１７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｈ３）と配列番号２０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｌ３）。
【0058】
本明細書で使用する場合、「抗体」は、天然のものであるか、あるいは全体的又は部分的に合成により製造された人工の免疫グロブリン又はその断片を意味する。抗体はＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤのいずれのアイソタイプであってもよい。ヒトの免疫グロブリンとして、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭの９種類のクラス（アイソタイプ）が知られている。
【0059】
抗体の由来は問わず、任意の哺乳類、例えばヒトや、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ラクダ等の非ヒト動物であってもよい。ヒト抗体のみならず、ヒト化抗体、キメラ抗体等の組み換え抗体を使用することもできる。本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」とは、ヒト抗体のＣＤＲを、非ヒト動物抗体由来のＣＤＲで置き換えたものである。ＣＤＲ以外に一部のフレームワークのアミノ酸残基をヒト抗体に移植してもよい。非ヒト動物抗体由来のＣＤＲをヒトに使用する場合、ヒト抗体の定常領域と組み合わせることが好ましい。抗体はポリクローナル抗体であってもよいし、モノクローナル抗体であってもよいが、モノクローナル抗体、特に哺乳動物由来のモノクローナル抗体であることが好ましい。
【0060】
抗糖鎖抗体には、所望とする効果が奏される限り、化学的又は生物学的な修飾が施されていてもよい。化学的な修飾体には、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ－結合又はＯ－結合炭水化物鎖の化学修飾体等が含まれる。生物学的な修飾体には、翻訳後修飾（例えば、Ｎ－結合又はＯ－結合への糖鎖付加、Ｎ末端又はＣ末端のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化）されたもの、原核生物宿主細胞を用いて発現させることによりＮ末端にメチオニン残基が付加したもの等が含まれ得る。
【0061】
修飾体は更に、その重鎖カルボキシル末端において１又は２つのアミノ酸が欠失した欠失体、及びアミド化された当該欠失体（例えば、カルボキシル末端部位のプロリン残基がアミド化された重鎖）等であってもよい。
【0062】
Ｅｕ番号（ＫａｂａｔのＥｕナンバリング）で、ＩｇＧ１のＬｅｕ２３４－Ｌｅｕ２３５のアミノ酸は、抗体とＦｃ受容体および補体との結合によるエフェクター活性発現に影響を与える部位であることが知られている。ＩｇＧ１のこの領域に含まれるＬｅｕをＡｌａに置換する（得られる変異体を「ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体」という）ことで抗体のＦｃ部分を介するエフェクター活性を低下させ、副作用リスクを低減させることができる場合があり（米国特許公報 ＵＳ５８８５５７３）、必要に応じて抗体のＦｃ部分にこのような改変を施しても良い。これらの変異に加えて、Ｐｒｏ３２９をＧｌｙに置換する（得られる変異体を「ＩｇＧ１－Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ体」という）ことで抗体のＦｃ部分を介するエフェクター活性を低下させ、副作用リスクをさらに低減させることができる場合があり（米国特許公報 ＵＳ８９６９５２６、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． Ｄｅｓ Ｓｅｌ．， ２９：４５７－４６６， ２０１６）、必要に応じて抗体のＦｃ部分にこのような改変を施しても良い。ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体の重鎖の例として、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖が挙げられる。
【0063】
Ｅｕ番号で、ＩｇＧ４のＳｅｒ２２８をＰｒｏに置換することにより、ＩｇＧ４がｈａｌｆ ａｎｔｉｂｏｄｙとなるのを阻害することが知られている。また、ＩｇＧ４のＬｅｕ２３５をＧｌｕに置換することにより抗体とＦｃ受容体との結合によるエフェクター活性発現を低減させることが知られている。ＩｇＧ４のこの領域に含まれるＳｅｒ２２８をＰｒｏに、Ｌｅｕ２３５をＧｌｕに置換する（得られる変異体を「ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体」という）ことで抗体のＦｃ部分を介するエフェクター活性を低下させ、副作用リスクを低減させることができる場合があり（Ｎｅｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ９８：１６４－１７４， ２００１）、必要に応じて抗体のＦｃ部分にこのような改変を施しても良い。ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体の重鎖の例として、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖が挙げられる。
【0064】
別の態様では、抗体のＦｃ部分を介するエフェクター活性発現を低減させることが知られているその他のアミノ酸置換もしくは欠失（例えば、Ｅｕ番号で、Ａｓｐ２６５のＡｌａへの置換、Ｇｌｕ２９４の欠失、Ａｓｎ２９７のＡｌａへの置換、Ｌｙｓ３２２のＡｌａへの置換、Ａｌａ３３０のＬｅｕへの置換、Ｐｒｏ３３１のＳｅｒへの置換）を、抗体のＦｃ部分に施しても良い。
【0065】
抗糖鎖抗体を構成する２本の重鎖は、完全長及び上記の欠失体からなる群から選択される重鎖のいずれか一種の組み合わせからなるものであってもよいし、いずれか二種の組み合わせからなるものであってもよい。各欠失体の量比は抗糖鎖抗体を産生する哺乳類培養細胞の種類及び培養条件に影響を受け得るが、抗糖鎖抗体の主成分としては２本の重鎖の双方でカルボキシル末端の１つのアミノ酸残基が欠失している場合を挙げることができる。
【0066】
本明細書で使用する場合、抗体の「断片」とは、断片化される前の抗体が奏する機能の少なくとも一部を奏する機能的な断片を意味し、その例としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）等が挙げられる。断片はこれらの分子に限定されず、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求していればどのような断片であってもよい。例えば、抗糖鎖抗体は、単一ドメイン抗体やナノボディのように、単一の重鎖可変領域を有し、軽鎖配列を有さない抗体であってもよい。
【0067】
想定される抗糖鎖抗体の機能の例としては、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖の認識、リンパ球ホーミング阻害等が挙げられる。抗体又はその断片は、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖以外の他の１又は複数の抗原に対して特異性を有する多特異性抗体であってもよい。複数の特異性の付与に加え、所望等する用途に応じて抗癌剤等による修飾、結合親和性の向上を目指した多価化を抗糖鎖抗体に対して行うこともできる。
【0068】
抗糖鎖抗体は目的に応じてＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号２９）の３回繰り返し配列等のリンカーを含んでいてもよく、例えば一本鎖抗体等のように抗体の抗原結合部位を構成する複数の可変領域が結合されている場合にはその間にリンカーが介在しうる。例えば、重鎖可変部と軽鎖可変部とをリンカーを介して連結することにより一本鎖抗体を得る。リンカーの配列は当業者が適宜決定することができる。
【0069】
上記のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域とをコードするアミノ酸配列を含む一本鎖抗体の例として、配列番号２１、２２、２３又は２４に記載のアミノ酸配列における１～１１７番目及び１３３～２３８番目のアミノ酸配列を含む抗体が挙げられる。該一本鎖抗体は、例えば、配列番号２１、２２、２３又は２４に記載のアミノ酸配列を含む。
【0070】
抗糖鎖抗体の断片は、抗体タンパク質の全長分子をパパイン、ペプシン等の酵素で処理することで得ることができる。あるいは、所望の断片をコードする遺伝子を適当な宿主細胞において発現することで産生してもよい。宿主細胞を形質転換する際には、重鎖配列遺伝子と軽鎖配列遺伝子は、同一の発現ベクターに挿入されていることが可能であり、又別々の発現ベクターに挿入されていることも可能である。宿主細胞は原核細胞又は真核細胞のいずれでもよい。原核細胞の例としては、大腸菌や枯草菌等の細菌細胞が挙げられる。真核細胞を宿主として使用する場合、動物細胞、植物細胞、真核微生物を用いることができる。動物細胞、植物細胞、あるいは真菌細胞が使用できる。動物細胞の例としては、次のような細胞を例示することができる。
（１）哺乳類細胞、：ＣＨＯ、ＣＯＳ、ミエローマ、ＢＨＫ（ｂａｂｙ ｈａｍｓｔｅｒ ｋｉｄｎｅｙ）、Ｈｅｌａ、Ｖｅｒｏ、ＨＥＫ２９３、Ｂａ／Ｆ３、ＨＬ－６０、Ｊｕｒｋａｔ、ＳＫ－ＨＥＰ１等。
（２）両生類細胞：アフリカツメガエル卵母細胞等。
（３）昆虫細胞：ｓｆ９、ｓｆ２１、Ｔｎ５等。
（１）哺乳類細胞、：ＣＨＯ、ＣＯＳ、ミエローマ、ＢＨＫ（ｂａｂｙ ｈａｍｓｔｅｒ ｋｉｄｎｅｙ）、Ｈｅｌａ、Ｖｅｒｏ、ＨＥＫ２９３、Ｂａ／Ｆ３、ＨＬ－６０、Ｊｕｒｋａｔ、ＳＫ－ＨＥＰ１等。
（２）両生類細胞：アフリカツメガエル卵母細胞等。
（３）昆虫細胞：ｓｆ９、ｓｆ２１、Ｔｎ５等。
【0071】
好ましい実施形態において、抗糖鎖抗体は、以下に示す重鎖と軽鎖の組み合わせのいずれかを含んでもよい：
・配列番号２５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；
・配列番号２７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；及び
・配列番号２８で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖。
・配列番号２５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；
・配列番号２７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；及び
・配列番号２８で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖。
【0072】
（ポリヌクレオチド）
第二の態様において、上記本発明の抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド（本発明のポリヌクレオチド）が提供される。
第二の態様において、上記本発明の抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド（本発明のポリヌクレオチド）が提供される。
【0073】
本発明のポリヌクレオチドは、抗糖鎖抗体又はその断片のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列及び／又はその相補鎖を含む１本鎖又は２本鎖のポリヌクレオチド（ＤＮＡ（ｃＤＮＡ等）、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ、ｃＲＮＡ等））であってもよい。
【0074】
抗糖鎖抗体又はその断片の重鎖可変領域（又は重鎖）と軽鎖可変領域（又は軽鎖）は、同一のポリヌクレオチド上にコードされていてもよく、別々のポリヌクレオチドにコードされて、その組み合わせとして提供されてもよい。重鎖可変領域（又は重鎖）コードするポリヌクレオチドと、軽鎖可変領域（又は軽鎖）をコードするポリヌクレオチドの組み合わせも、「抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチド」に包含される。
【0075】
抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドの例として、
以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１をコードする塩基配列；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２をコードする塩基配列；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３をコードする塩基配列；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１をコードする塩基配列；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２をコードする塩基配列；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３をコードする塩基配列；
から成る群から選択される少なくとも１つ以上のＣＤＲをコードする塩基配列、好ましくは６つ全てのＣＤＲをコードする塩基配列を有するものが例示される。
以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１をコードする塩基配列；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２をコードする塩基配列；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３をコードする塩基配列；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１をコードする塩基配列；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２をコードする塩基配列；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３をコードする塩基配列；
から成る群から選択される少なくとも１つ以上のＣＤＲをコードする塩基配列、好ましくは６つ全てのＣＤＲをコードする塩基配列を有するものが例示される。
【0076】
（ａ）～（ｆ）の塩基配列の例は、順に配列番号７～１２で表される。抗体又はその断片の遺伝子をコードするポリヌクレオチドは、配列番号７～１２のいずれかで表される塩基配列と実質的に同一の塩基配列を有するものであってもよい。配列番号７～１２のいずれかで表される塩基配列と実質的に同一の塩基配列とは、配列番号７～１２のいずれかで表される塩基配列と８０％以上の相同性、好ましくは８０％以上の同一性、例えば８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上、好ましくは９９％以上の同一性を有する配列から成るポリヌクレオチド、あるいはもしくは、配列番号７～１２のいずれかで表される塩基配列に相補的な配列から成るポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるポリヌクレオチドであって、そのポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質が、所望の機能を有するもの、例えば６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求するもののことである。
【0077】
ここで、ストリンジェントな条件とは、当業者によって容易に決定されるハイブリダイゼーションの条件のことであり、一般的に核酸の塩基長、洗浄温度、及び塩濃度に依存する経験的な実験条件である。一般に、塩基が長くなると適切なアニーリングのための温度が高くなり、塩基が短くなると温度は低くなる。ハイブリッド形成は、一般的に、相補鎖がその融点よりやや低い環境における再アニール能力に依存する。
【0078】
一実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドは、以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１をコードする塩基配列；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２をコードする塩基配列；及び
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３をコードする塩基配列；
を有するか、
各ＣＤＲをコードする塩基配列において、１又は数個の塩基の欠失、置換又は付加を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３をコードする塩基配列を有するか、あるいは
各ＣＤＲをコードする塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３をコードする塩基配列を有してもよい。
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１をコードする塩基配列；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２をコードする塩基配列；及び
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３をコードする塩基配列；
を有するか、
各ＣＤＲをコードする塩基配列において、１又は数個の塩基の欠失、置換又は付加を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３をコードする塩基配列を有するか、あるいは
各ＣＤＲをコードする塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３をコードする塩基配列を有してもよい。
【0079】
一実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドは、以下の：
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１をコードする塩基配列；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２をコードする塩基配列；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３をコードする塩基配列；
を有するか、
各ＣＤＲをコードする塩基配列において、１又は数個の塩基の欠失、置換又は付加を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３をコードする塩基配列を有するか、あるいは
各ＣＤＲをコードする塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３をコードする塩基配列を有してもよい。
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１をコードする塩基配列；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２をコードする塩基配列；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３をコードする塩基配列；
を有するか、
各ＣＤＲをコードする塩基配列において、１又は数個の塩基の欠失、置換又は付加を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３をコードする塩基配列を有するか、あるいは
各ＣＤＲをコードする塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３をコードする塩基配列を有してもよい。
【0080】
一実施形態において、抗糖鎖抗体又はその断片の遺伝子をコードするポリヌクレオチドは、以下の：
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１をコードする塩基配列；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２をコードする塩基配列；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３をコードする塩基配列；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１をコードする塩基配列；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２をコードする塩基配列；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３をコードする塩基配列；
を含むか、
各ＣＤＲをコードする塩基配列において、１又は数個の塩基の欠失、置換又は付加を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３をコードする塩基配列を有するか、あるいは
各ＣＤＲをコードする塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３をコードする塩基配列を有してもよい。
（ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ１をコードする塩基配列；
（ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ２をコードする塩基配列；
（ｃ）配列番号３に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＨ３をコードする塩基配列；
（ｄ）配列番号４に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ１をコードする塩基配列；
（ｅ）配列番号５に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ２をコードする塩基配列；及び
（ｆ）配列番号６に記載のアミノ酸配列から成るＣＤＲＬ３をコードする塩基配列；
を含むか、
各ＣＤＲをコードする塩基配列において、１又は数個の塩基の欠失、置換又は付加を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３をコードする塩基配列を有するか、あるいは
各ＣＤＲをコードする塩基配列と８０％以上の同一性を有する塩基配列から成る、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３をコードする塩基配列を有してもよい。
【0081】
（ベクター及び宿主細胞）
第三の態様において、抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクター、及び該発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞が提供される。該発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞は、抗糖鎖抗体又はその断片を産生し得る。
第三の態様において、抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクター、及び該発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞が提供される。該発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞は、抗糖鎖抗体又はその断片を産生し得る。
【0082】
抗糖鎖抗体又はその断片の重鎖可変領域（又は重鎖）をコードするポリヌクレオチドと、抗糖鎖抗体又はその断片の軽鎖可変領域（又は軽鎖）をコードするポリヌクレオチドは、同一の発現ベクター中に含まれていてもよいし、別々の発現ベクター中に組み込まれて、その組み合わせとして提供されてもよい。重鎖可変領域（又は重鎖）をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター（重鎖可変領域（又は重鎖）の発現ベクター）と、軽鎖可変領域（又は軽鎖）をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター（軽鎖可変領域（又は軽鎖）の発現ベクター）の組み合わせも、「抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクター」に包含される。
【0083】
抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び該発現ベクターでトランスフェクトされた宿主細胞は当業者に公知の手法により得ることができる。例えば、一本鎖の抗糖鎖抗体をコードするポリヌクレオチド等を、その発現に適したベクターに組み込み、これを宿主に導入することによって、抗糖鎖抗体又はその断片が発現する。発現ベクターは抗糖鎖抗体又はその断片の宿主細胞における発現に適したプロモーターやターミネーター等を含んでいることが好ましい。発現ベクターは更にエンハンサー等のその他の適当な制御配列を含むことができる。
【0084】
ベクターは宿主細胞の種類、抗糖鎖抗体又はその断片の発現効率等を考慮して、当業者が周知の発現ベクターから適宜選択することができ、その種類はプラスミドベクターであっても、レトロウイルスやアデノウイルスに由来するウイルスベクターであってもよい。
【0085】
宿主細胞としては、発現ベクターから抗糖鎖抗体又はその断片を発現できる細胞であれば制限されず、大腸菌のような原核細胞や、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＣＯＳ－７等の哺乳動物由来の細胞、Ｆ９等の昆虫由来の細胞、酵母細胞等の真核細胞であってもよい。哺乳動物としては、ヒト、チンパンジー等の霊長類、マウス、ラット、ハムスター等のげっ歯類が挙げられる。
【0086】
発現ベクターの宿主細胞へのトランスフェクションは、例えば、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、ＤＥＡＥデキストラン法等の当業者に周知の方法や市販の試薬を用いた方法を用いて行うことができる。
【0087】
抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクターをトランスフェクトした宿主細胞（トランスフェクタント）には、
・該発現ベクターを含み、抗糖鎖抗体又はその断片を発現するトランスフェクタント；及び
・抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドが発現可能な態様で宿主細胞の染色体上に組み込まれることにより、抗糖鎖抗体又はその断片を発現するトランスフェクタント（ステーブルトランスフェクタント）
が包含される。該ステーブルトランスフェクタントには、抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクターが含まれていてもいなくてもよい。該トランスフェクタントは、好ましくは、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＣＯＳ－７等の哺乳動物由来の細胞である。
・該発現ベクターを含み、抗糖鎖抗体又はその断片を発現するトランスフェクタント；及び
・抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドが発現可能な態様で宿主細胞の染色体上に組み込まれることにより、抗糖鎖抗体又はその断片を発現するトランスフェクタント（ステーブルトランスフェクタント）
が包含される。該ステーブルトランスフェクタントには、抗糖鎖抗体又はその断片をコードするポリヌクレオチドを含む、発現ベクターが含まれていてもいなくてもよい。該トランスフェクタントは、好ましくは、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＣＯＳ－７等の哺乳動物由来の細胞である。
【0088】
（ハイブリドーマ）
第四の態様において、抗糖鎖抗体を産生するハイブリドーマが提供される。
第四の態様において、抗糖鎖抗体を産生するハイブリドーマが提供される。
【0089】
抗糖鎖抗体を産生するハイブリドーマは、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖の付加した糖タンパク質を注射したり、あるいは６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖をコードするベクターであって、免疫動物内で６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現することができるように設計されたベクターを投与することにより免疫動物を免疫し、免疫動物から得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知のミエローマ細胞と融合させることにより得ることができる。このようなハイブリドーマの中から、抗糖鎖抗体を産生する細胞がスクリーニングされる。免疫動物の例としては、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ等のげっ歯類や、サル等の哺乳類が挙げられる。
【0090】
一実施形態において、抗糖鎖抗体を産生するハイブリドーマは、ＨＥＶに発現する６－スルホシアリルルイスＸの硫酸化を担う硫酸基転移酵素、ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－１及びＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－２を欠損したマウスを、フコース転移酵素及び硫酸基転移酵素の遺伝子導入により６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現させた細胞で免疫したマウスから脾細胞を調製し、ミエローマと細胞融合して得る複数のハイブリドーマの中から、その培養上清を用いてマウス末梢リンパ節の免疫蛍光染色を行い、野生型マウスのＨＥＶと特異的に結合性を示すＩｇＧクラスの抗体を分泌するハイブリドーマの選別を行うことで得られる。
【0091】
（抗糖鎖抗体の製造方法）
第五の態様において、抗糖鎖抗体又はその断片の製造方法が提供される。抗糖鎖抗体又はその断片の製造は、上記の宿主細胞、トランスフェクタントやハイブリドーマを培養することで行ってもよいし、組換えＤＮＡ技術を用いて行ってもよい。
第五の態様において、抗糖鎖抗体又はその断片の製造方法が提供される。抗糖鎖抗体又はその断片の製造は、上記の宿主細胞、トランスフェクタントやハイブリドーマを培養することで行ってもよいし、組換えＤＮＡ技術を用いて行ってもよい。
【0092】
組換えＤＮＡ技術により組換えタンパク質として製造される抗体として、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体などが挙げられる。これらの抗体は、例えば、抗体や、その重鎖又は軽鎖をコードする組換えベクターにより形質転換された宿主細胞を培養することで製造することができる。組換え抗体は、所望の抗体をコードする遺伝子を導入したトランスジェニック動物を用いて製造することもできる。
【0093】
宿主細胞、トランスフェクタントやハイブリドーマの培養条件は所望とする抗糖鎖抗体又はその断片や宿主細胞の種類に応じて当業者が適宜決定することができる。製造方法は、培養工程で得られた培養物から、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に特異的に結合し、その結合が６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸を要求する、抗体又はその断片を回収する工程を更に含んでもよい。
【0094】
製造された抗体又はその断片は回収の前に更に精製工程等の追加の工程にかけてもよく、例えば純度を高めるために、塩析、フィルター濾過、遠心分離を用いた清澄化、アフィニティーによる回収、イオン交換による中間精製、ゲルろ過による最終精製を行うことが好ましい。
【0095】
（リンパ球ホーミング阻害剤）
第六の態様において、抗糖鎖抗体又はその断片を含む、リンパ球ホーミング阻害剤が提供される。
第六の態様において、抗糖鎖抗体又はその断片を含む、リンパ球ホーミング阻害剤が提供される。
【0096】
リンパ球ホーミングは効率よく免疫応答を誘導するために備わった生体防御機構であり、リンパ節へのリンパ球ホーミングは以下の三つのステップで制御されている。すなわち、ステップ１：リンパ球上に発現するＬ－セレクチンとＨＥＶ内腔に発現する硫酸化糖鎖６－スルホシアリルルイスＸとの結合を介したリンパ球ローリング、ステップ２：ＨＥＶ内腔のヘパラン硫酸に提示されたケモカインとケモカイン受容体との結合を介したシグナル伝達による接着分子インテグリンの活性化、ステップ３：活性化インテグリンと免疫グロブリンスーパーファミリーの接着分子ＩＣＡＭ－１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１）、ＶＣＡＭ－１（ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１）との強固な接着とリンパ組織への浸潤であり、これら三つのステップを経てリンパ球はリンパ組織実質へと移行する。
【0097】
このうちステップ１では、ＨＥＶ内腔に発現する硫酸化糖鎖６－スルホシアリルルイスＸが、ステップ２ではヘパラン硫酸が重要な機能を担っている。そのため、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を構成するフコース、硫酸基及びシアル酸に特異的に結合する抗体又はその断片を有効成分として使用することによりリンパ球ホーミング阻害剤が調製される。リンパ球ホーミング阻害剤は、特に６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現するリンパ節、例えば末梢リンパ節、腸間膜リンパ節又は扁桃の高内皮細静脈からのリンパ球ホーミングを阻害し、より具体的にはＬ－セレクチン依存的なリンパ球のローリングを阻害することが好ましい。
【0098】
（医薬組成物）
第七の態様において、抗糖鎖抗体又はその断片の医薬用途、例えば抗糖鎖抗体又はその断片を含む医薬組成物が提供される。
第七の態様において、抗糖鎖抗体又はその断片の医薬用途、例えば抗糖鎖抗体又はその断片を含む医薬組成物が提供される。
【0099】
抗糖鎖抗体又はその断片の医薬用途として、リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防が挙げられる。具体的には、抗糖鎖抗体又はその断片を疾患の発症前に投与することによる疾患予防効果、疾患発症後に投与することによる疾患治療効果、再発－寛解を繰り返す慢性的な疾患の再発防止効果が挙げられる。リンパ球ホーミングによってもたらされる過剰な免疫応答のうち、抗糖鎖抗体の投与が特に有効と考えられる免疫応答が生じる組織として、末梢リンパ節、腸間膜リンパ節、扁桃が挙げられる。リンパ球ホーミング、特にリンパ球とＨＥＶとの特異的な接着によってもたらされる免疫応答が通常のレベルを超えて過剰に作用することによって生じる疾患の例には、自己免疫疾患等の免疫関連疾患がある。免疫関連疾患は、例えば、再発寛解型多発性硬化症、一次進行型多発性硬化症及び二次進行型多発性硬化症を含む多発性硬化症；乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ球性血管炎；血小板減少性紫斑病；突発性血小板減少症；特発性自己免疫性溶血性貧血；赤芽球ろう；シェーグレン症候群；リウマチ性疾患；結合組織疾患；炎症性リウマチ；変形性リウマチ；非関節性リウマチ；若年性関節リウマチ；筋肉リウマチ；慢性多発性関節炎；クリオグロブリン血管炎；ＡＮＣＡ関連血管炎；抗リン脂質症候群；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；ギラン・バレー症候群；慢性免疫性多発ニューロパチー；自己免疫性甲状腺炎；インスリン依存性糖尿病；１型糖尿病；アジソン病；膜性糸球体腎症；グッドパスチャー病；自己免疫性胃炎；自己免疫性萎縮性胃炎；悪性貧血；天疱瘡；尋常性天疱瘡；肝硬変；原発性胆汁性肝硬変；皮膚筋炎；多発性筋炎；線維筋炎；筋硬症；セリアック病；免疫グロブリンＡ腎症；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病；エバンス症候群；乾癬；関節症性乾癬；グレーブス病；グレーブス眼症；強皮症；全身性強皮症；進行性全身性強皮症；原発性胆汁性肝硬変；橋本甲状腺炎；原発性粘液水腫；交感性眼炎；自己免疫性ぶどう膜炎；肝炎；慢性活動性肝炎；膠原病；強直性脊椎炎；肩関節周囲炎；結節性汎動脈炎；軟骨石灰化症；ヴェーゲナー肉芽腫症；顕微鏡的多発血管炎；慢性じんま疹；水疱性皮膚疾患；類天疱瘡；デビック病；小児自己免疫性溶血性貧血；難治性または慢性自己免疫性血球減少症；後天性血友病Ａ；寒冷凝集素病；視神経脊髄炎；全身硬直症候群；膵炎；心筋炎；血管炎；胃炎；痛風；痛風性関節炎；乾癬；正補体血症性蕁麻疹様血管炎；心膜炎；筋炎；抗合成酵素症候群；強膜炎；マクロファージ活性化症候群；ベーチェット症候群；ＰＡＰＡ症候群；Ｂｌａｕ症候群；成人および若年性スティル病；クリオピリン関連周期性症候群；マックル－ウェルズ症候群；家族性寒冷自己炎症性症候群；新生児期発症多臓器性炎症性疾患；家族性地中海熱；慢性乳児期発症神経皮膚関節症候群；全身型若年性特発性関節炎；高ＩｇＤ症候群；シュニッツラー症候群；自己免疫性網膜症；アテローム性動脈硬化症；慢性前立腺炎；ならびにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）からなる群から選択される自己免疫疾患である。
【0100】
自己免疫疾患は、多発性硬化症又は膠原病であってもよい。膠原病は、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、顕微鏡的多発血管炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、過敏性血管炎、ベーチェット病、コーガン症候群、ＲＳ３ＰＥ、巨細胞性動脈炎、成人スティル病、リウマチ性多発筋痛症、線維筋痛症、ＳＡＰＨＯ症候群等であってもよい。自己免疫疾患は、上記疾患以外にも、その他の過剰な免疫応答が自己を傷害する疾患から成る群から選択される１又は複数の疾患であってもよい。
【0101】
リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じるその他の疾患の例にはアレルギー疾患等の免疫関連疾患がある。免疫関連疾患は、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、口腔アレルギー症候群、薬剤アレルギー、花粉症、アレルギー性結膜炎、好酸球性肺炎、アレルギー性胃腸炎、蕁麻疹、光線過敏症、金属アレルギー、ネコアレルギー、ダニアレルギー、及び喘息から成る群から選択される１又は複数の疾患であってもよい。
【0102】
医薬組成物は有効成分としての抗糖鎖抗体又はその断片に加え、投与経路や適用疾患等に応じて更に追加の成分、例えば薬学上許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存剤、補助剤等を含んでもよい。抗糖鎖抗体の投与量は疾患の種類や、患者の年齢、性別、体重、疾患及び治療の程度等に応じて適宜決定され得る。医薬組成物は、抗糖鎖抗体以外の、リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防する効果が知られている薬剤を更に含んでもよい。
【0103】
医薬組成物の剤形は、液剤、凍結乾燥製剤等があり、医薬組成物の投与経路の例として、例えば点滴静脈注射、皮下注射又は筋肉注射等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0104】
別の態様において、リンパ球ホーミング、特にリンパ球とＨＥＶとの特異的な接着によってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防する方法であって、治療又は予防を必要とする対象に抗糖鎖抗体又はその断片を投与する工程を含む方法が提供される。抗糖鎖抗体又はその断片は、それ以外の、リンパ球ホーミングによってもたらされる免疫応答が過剰に作用することによって生じる疾患の治療又は予防について効果が知られている薬剤と併用してもよい。
【0105】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【0106】
１．抗糖鎖抗体の作製
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に対するモノクローナル抗体の作製を行った。はじめに、フコース転移酵素ＦｕｃＴ－ＶＩＩ及び硫酸基転移酵素ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－２をコードする遺伝子を導入することによりＣｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｏｖａｒｙ（ＣＨＯ）細胞に６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現させた。このＣＨＯ細胞で硫酸基転移酵素ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－１及びＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－２を欠損した硫酸基転移酵素二重欠損マウス（Ｋａｗａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．（上掲））を免疫した。その脾臓細胞をＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３ミエローマ細胞とポリエチレングリコールを用いて細胞融合し、免疫組織染色によるスクリーニングにより、野生型（ＷＴ）マウスの高内皮細静脈（ＨＥＶ）に反応性をもつ抗硫酸化糖鎖モノクローナル抗体ＳＦ１（ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ１， ｋａｐｐａ）を産生するハイブリドーマを樹立した。得られた抗体は、後述するとおり硫酸化かつフコシル化された糖鎖に対して反応性を有することから、ＳＦ１抗体と命名された（Ｓは硫酸基、Ｆはフコースを認識するクローンであることを意味する。）。
６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖に対するモノクローナル抗体の作製を行った。はじめに、フコース転移酵素ＦｕｃＴ－ＶＩＩ及び硫酸基転移酵素ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－２をコードする遺伝子を導入することによりＣｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｏｖａｒｙ（ＣＨＯ）細胞に６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を発現させた。このＣＨＯ細胞で硫酸基転移酵素ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－１及びＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－２を欠損した硫酸基転移酵素二重欠損マウス（Ｋａｗａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．（上掲））を免疫した。その脾臓細胞をＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３ミエローマ細胞とポリエチレングリコールを用いて細胞融合し、免疫組織染色によるスクリーニングにより、野生型（ＷＴ）マウスの高内皮細静脈（ＨＥＶ）に反応性をもつ抗硫酸化糖鎖モノクローナル抗体ＳＦ１（ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ１， ｋａｐｐａ）を産生するハイブリドーマを樹立した。得られた抗体は、後述するとおり硫酸化かつフコシル化された糖鎖に対して反応性を有することから、ＳＦ１抗体と命名された（Ｓは硫酸基、Ｆはフコースを認識するクローンであることを意味する。）。
【0107】
２．ＳＦ１抗体のＨＥＶへの反応性の解析
ＳＦ１抗体を精製し、常法に従ってビオチン標識を行い、ＷＴマウス、フコース転移酵素（ＦｕｃＴ）－ＩＶ及びＦｕｃＴ－ＶＩＩ遺伝子二重欠損マウス（ＦｕｃＴ ＤＫＯ）、硫酸基転移酵素（ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ）－１及びＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－２二重欠損マウス（Ｇ６ＳＴ ＤＫＯ）のリンパ節凍結切片を４℃で一晩インキュベートし、切片をＰＢＳで洗浄後、蛍光物質であるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ５９４標識ストレプトアビジンを室温で１時間さらにインキュベートし、蛍光免疫染色を行った（図２）。
ＳＦ１抗体を精製し、常法に従ってビオチン標識を行い、ＷＴマウス、フコース転移酵素（ＦｕｃＴ）－ＩＶ及びＦｕｃＴ－ＶＩＩ遺伝子二重欠損マウス（ＦｕｃＴ ＤＫＯ）、硫酸基転移酵素（ＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ）－１及びＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－２二重欠損マウス（Ｇ６ＳＴ ＤＫＯ）のリンパ節凍結切片を４℃で一晩インキュベートし、切片をＰＢＳで洗浄後、蛍光物質であるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ５９４標識ストレプトアビジンを室温で１時間さらにインキュベートし、蛍光免疫染色を行った（図２）。
【0108】
その結果、ＳＦ１抗体はＷＴマウスのリンパ節ＨＥＶと強く反応したが、ＦｕｃＴ ＤＫＯ及びＧ６ＳＴ ＤＫＯのＨＥＶとは全く反応しなかった。このことから、ＳＦ１抗体のマウスリンパ節への反応にフコース及び硫酸基の双方が関与することがわかる。一方、既知の抗体であるＭＥＣＡ－７９（Ｓｔｒｅｅｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，（上掲））はマウスリンパ節ＨＥＶに反応するが、ＦｕｃＴ ＤＫＯで反応性が消失しなかったことから、リンパ球ホーミングに重要な働きをするフコースは反応性に関与しない。
【0109】
さらにその他のＨＥＶ上の糖鎖を認識する抗体を用いて、蛍光免疫染色を行った。上記と同様に、ＳＦ１抗体はＷＴマウスのリンパ節ＨＥＶと強く反応したが、ＦｕｃＴ ＤＫＯ及びＧ６ＳＴ ＤＫＯのＨＥＶとは全く反応しなかった。一方、既知の抗体であるＦ２抗体（Ｍａｔｓｕｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，（上掲））は、ＷＴマウスリンパ節ＨＥＶに反応し、ＦｕｃＴ ＤＫＯとは反応しないが、Ｇ６ＳＴ ＤＫＯで反応性が消失しなかったことから、リンパ球ホーミングに重要な働きをする硫酸基は反応性に関与しない。これとは対照的に、既知の抗体であるＳ２抗体（Ｈｉｒａｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，（上掲））は、ＷＴマウスリンパ節ＨＥＶに反応し、Ｇ６ＳＴ ＤＫＯとは反応しないが、ＦｕｃＴ ＤＫＯで反応性が消失しなかったことから、リンパ球ホーミングに重要な働きをするフコースは反応性に関与しない。結果を図３に示す。
【0110】
続いて、ＷＴマウスのリンパ節凍結切片をシアリダーゼ処理することで、ＨＥＶに対する反応性におけるシアル酸の関与を検討した。結果を図４に示す。
【0111】
シアリダーゼ処理により、ＳＦ１抗体の反応性が消失したことから、ＳＦ１抗体のマウスリンパ節への反応性に、フコース及び硫酸基に加えて、リンパ球ホーミングに重要な働きをするシアル酸も関与することがわかる。一方、既知の抗糖鎖モノクローナル抗体ＭＥＣＡ－７９の反応性にはシアル酸は関与しない。以上の免疫蛍光染色の結果より、本研究で得たＳＦ１抗体は、マウスリンパ節ＨＥＶ上のフコース、硫酸基、シアル酸を含む糖鎖構造を特異的に認識する抗糖鎖モノクローナル抗体であることがわかる。
【0112】
３．ＳＦ１抗体の合成糖鎖への反応性の解析
次に、米国Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ ｆｏｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ＧｌｙｃｏｍｉｃｓのＧｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙを用いて、ＳＦ１抗体の各種糖鎖への反応性を解析した。その結果、ＳＦ１抗体は、Ｇｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙ上の６１１種類の糖鎖のうち、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖とのみ特異的に結合した。図５にＧｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙ上に存在する６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖および同糖鎖と部分的に構造の類似する９種類の糖鎖の結果を抜粋して示す。図中の括弧内の数字は、Ｇｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙにおける各糖鎖のＩＤ番号を示す。図５から、ＳＦ１抗体は、ＬａｃＮＡｃ（ＩＤ番号１７０）、シアリルＬａｃＮＡｃ（ＩＤ番号２６１）と全く結合しないことが分かる。また、ＳＦ１抗体は、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖からフコースがはずれた６－スルホシアリルＬａｃＮＡｃ（ＩＤ番号２５２）、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖から硫酸基がはずれたシアリルルイスＸ（ＩＤ番号２５５）、および６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖からシアル酸がはずれた６－スルホルイスＸ（ＩＤ番号２９１）のいずれとも結合せず、６－スルホシアリルルイスＸ（ＩＤ番号２５３）と特異的に結合することが分かる。さらに、ＳＦ１抗体は、硫酸基がＧｌｃＮＡｃではなくガラクトースに付加した６’－スルホシアリルルイスＸ（ＩＤ番号２３１）、６－スルホシアリルルイスＸの末端のα２－３結合したシアル酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）の代わりに硫酸基がガラクトースの３位に付加した糖鎖（ＩＤ番号２２０）、α２－３結合したＮｅｕ５Ａｃの代わりにフコースがα１－２結合でガラクトースに付加した糖鎖（ＩＤ番号２２２）、およびガラクトースの６位とＧｌｃＮＡｃの６位がともに硫酸化された６，６’－ジスルホＬａｃＮＡｃ（ＩＤ番号４４５）のいずれとも結合しなかった。以上から、ＳＦ１抗体は、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖と特異的に結合することが分かった。
次に、米国Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ ｆｏｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ＧｌｙｃｏｍｉｃｓのＧｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙを用いて、ＳＦ１抗体の各種糖鎖への反応性を解析した。その結果、ＳＦ１抗体は、Ｇｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙ上の６１１種類の糖鎖のうち、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖とのみ特異的に結合した。図５にＧｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙ上に存在する６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖および同糖鎖と部分的に構造の類似する９種類の糖鎖の結果を抜粋して示す。図中の括弧内の数字は、Ｇｌｙｃａｎ Ａｒｒａｙにおける各糖鎖のＩＤ番号を示す。図５から、ＳＦ１抗体は、ＬａｃＮＡｃ（ＩＤ番号１７０）、シアリルＬａｃＮＡｃ（ＩＤ番号２６１）と全く結合しないことが分かる。また、ＳＦ１抗体は、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖からフコースがはずれた６－スルホシアリルＬａｃＮＡｃ（ＩＤ番号２５２）、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖から硫酸基がはずれたシアリルルイスＸ（ＩＤ番号２５５）、および６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖からシアル酸がはずれた６－スルホルイスＸ（ＩＤ番号２９１）のいずれとも結合せず、６－スルホシアリルルイスＸ（ＩＤ番号２５３）と特異的に結合することが分かる。さらに、ＳＦ１抗体は、硫酸基がＧｌｃＮＡｃではなくガラクトースに付加した６’－スルホシアリルルイスＸ（ＩＤ番号２３１）、６－スルホシアリルルイスＸの末端のα２－３結合したシアル酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）の代わりに硫酸基がガラクトースの３位に付加した糖鎖（ＩＤ番号２２０）、α２－３結合したＮｅｕ５Ａｃの代わりにフコースがα１－２結合でガラクトースに付加した糖鎖（ＩＤ番号２２２）、およびガラクトースの６位とＧｌｃＮＡｃの６位がともに硫酸化された６，６’－ジスルホＬａｃＮＡｃ（ＩＤ番号４４５）のいずれとも結合しなかった。以上から、ＳＦ１抗体は、６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖と特異的に結合することが分かった。
【0113】
４．ＳＦ１抗体と６－スルホシアリルルイスＸの結合の解離定数の決定
次に、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６（Ｐａｌｌ－Ｆｏｒｔｅｂｉｏ社製）を用いたバイオレイヤー干渉法により、ＳＦ１抗体と６－スルホシアリルルイスＸの結合の解離定数（ＫＤ）の測定を行った。ストレプトアビジンバイオセンサーにビオチン標識６－スルホシアリルルイスＸを結合させたのちに、ＳＦ１抗体との結合および解離をリアルタイムに解析した。結果を図６に示す。
次に、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６（Ｐａｌｌ－Ｆｏｒｔｅｂｉｏ社製）を用いたバイオレイヤー干渉法により、ＳＦ１抗体と６－スルホシアリルルイスＸの結合の解離定数（ＫＤ）の測定を行った。ストレプトアビジンバイオセンサーにビオチン標識６－スルホシアリルルイスＸを結合させたのちに、ＳＦ１抗体との結合および解離をリアルタイムに解析した。結果を図６に示す。
【0114】
その結果、ＳＦ１抗体と６－スルホシアリルルイスＸとの結合のＫＤ値は、６．０９×１０－９（Ｍ）であることが分かった。ネガティブコントロールとしてビオチン標識シアリルルＬａｃＮＡｃを使用した場合には、全く結合が認められなかった。
【0115】
５．抗糖鎖抗体のアミノ酸配列の決定
次に、ＳＦ１抗体を産生するハイブリドーマから抗体遺伝子を取得し、その塩基配列の解析を行い、ＳＦ１抗体の重鎖および軽鎖可変部の超可変部のアミノ酸配列を決定した。ＳＦ１抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２，ＣＤＲ３をそれぞれ、配列番号１（ＣＤＲＨ１）、配列番号２（ＣＤＲＨ２）、配列番号３（ＣＤＲＨ３）とし、ＳＦ１抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２，ＣＤＲ３をそれぞれ、配列番号４（ＣＤＲＬ１）、配列番号５（ＣＤＲＬ２）、配列番号６（ＣＤＲＬ３）として図７に示した。このような超可変部を持つ抗体はこれまでに報告されていないことから、新規の配列を持つ抗体であることが分かる。
次に、ＳＦ１抗体を産生するハイブリドーマから抗体遺伝子を取得し、その塩基配列の解析を行い、ＳＦ１抗体の重鎖および軽鎖可変部の超可変部のアミノ酸配列を決定した。ＳＦ１抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２，ＣＤＲ３をそれぞれ、配列番号１（ＣＤＲＨ１）、配列番号２（ＣＤＲＨ２）、配列番号３（ＣＤＲＨ３）とし、ＳＦ１抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２，ＣＤＲ３をそれぞれ、配列番号４（ＣＤＲＬ１）、配列番号５（ＣＤＲＬ２）、配列番号６（ＣＤＲＬ３）として図７に示した。このような超可変部を持つ抗体はこれまでに報告されていないことから、新規の配列を持つ抗体であることが分かる。
【0116】
ＳＦ１抗体の重鎖可変部の全アミノ酸配列を配列番号１３とし、図８に示す。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３の配列を太字で示す。
【0117】
ＳＦ１抗体の軽鎖可変部の全アミノ酸配列を配列番号１４とし、図９に示す。ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３の配列を太字で示す。
【0118】
６．Ｌ－セレクチンとＨＥＶの結合に及ぼすＳＦ１抗体の阻害作用の解析
マウスリンパ節凍結切片を室温で２時間、緩衝液Ａ（０．１ ％ ＢＳＡ， ２０ ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ， ０．１５ Ｍ ＮａＣｌ， １ｍＭ ＣａＣｌ２， １ｍＭ ＭｇＣｌ２， ｐＨ７．４）のみもしくは緩衝液Ａに溶解したＳＦ１抗体と室温で２時間インキュベートした後に、緩衝液Ａに溶解したＬ－セレクチンとヒトＩｇＧの融合タンパク質（Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ－Ｆｃ）と４℃で一晩インキュベートし、切片を緩衝液Ａで洗浄後、ビオチン標識抗ヒトＩｇＧ抗体と室温で２時間インキュベートした。切片を緩衝液Ａで洗浄後、蛍光物質であるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ５９４標識ストレプトアビジンを室温で１時間さらにインキュベートし、蛍光免疫染色を行った（図１０）。
マウスリンパ節凍結切片を室温で２時間、緩衝液Ａ（０．１ ％ ＢＳＡ， ２０ ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ， ０．１５ Ｍ ＮａＣｌ， １ｍＭ ＣａＣｌ２， １ｍＭ ＭｇＣｌ２， ｐＨ７．４）のみもしくは緩衝液Ａに溶解したＳＦ１抗体と室温で２時間インキュベートした後に、緩衝液Ａに溶解したＬ－セレクチンとヒトＩｇＧの融合タンパク質（Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ－Ｆｃ）と４℃で一晩インキュベートし、切片を緩衝液Ａで洗浄後、ビオチン標識抗ヒトＩｇＧ抗体と室温で２時間インキュベートした。切片を緩衝液Ａで洗浄後、蛍光物質であるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ５９４標識ストレプトアビジンを室温で１時間さらにインキュベートし、蛍光免疫染色を行った（図１０）。
【0119】
その結果、ＳＦ１抗体はＬ－セレクチン－ＦｃとＨＥＶの結合を強く阻害した。このことから、ＳＦ１抗体は、リンパ球ホーミングレセプターであるＬ－セレクチンとＨＥＶ上に発現するリガンドの相互作用を阻害することがわかる。
【0120】
７．Ｌ－セレクチン依存的なリンパ球のローリングに及ぼすＳＦ１抗体の阻害作用の解析
コアタンパク質ＣＤ３４および６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を安定発現する、ＨＥＶ上に発現するＬ－セレクチンのリガンドを再構成したＣＨＯ細胞をシャーレで培養し、これをフローチャンバーにセットした。次にマウス脾臓から調製したリンパ球を様々なずり応力（０．５、１．０、１．５、２．０ ｄｙｎｅｓ／ｃｍ２）で流し、Ｌ－セレクチンのリガンドを再構成した細胞上におけるローリング細胞数の測定を行った。その際に、未処理（図中、Ｎｏｎｅ）、Ｌ－セレクチンのリガンドを再構成した細胞を予めＳＦ１抗体とインキュベーションした群（図中、ＳＦ１）およびリンパ球を予め抗Ｌ－セレクチン抗体とインキュベーションした群（図中、ＭＥＬ－１４）の３群に分けて測定を行った。結果を図１１に示す。
コアタンパク質ＣＤ３４および６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖を安定発現する、ＨＥＶ上に発現するＬ－セレクチンのリガンドを再構成したＣＨＯ細胞をシャーレで培養し、これをフローチャンバーにセットした。次にマウス脾臓から調製したリンパ球を様々なずり応力（０．５、１．０、１．５、２．０ ｄｙｎｅｓ／ｃｍ２）で流し、Ｌ－セレクチンのリガンドを再構成した細胞上におけるローリング細胞数の測定を行った。その際に、未処理（図中、Ｎｏｎｅ）、Ｌ－セレクチンのリガンドを再構成した細胞を予めＳＦ１抗体とインキュベーションした群（図中、ＳＦ１）およびリンパ球を予め抗Ｌ－セレクチン抗体とインキュベーションした群（図中、ＭＥＬ－１４）の３群に分けて測定を行った。結果を図１１に示す。
【0121】
その結果、観察されたローリングは抗Ｌ－セレクチン抗体で阻害されたことからＬ－セレクチン依存的であることが確認され、ＳＦ１抗体はＬ－セレクチン依存的なローリングを抑制する作用を持つことが分かった。
【0122】
８．ＳＦ１抗体のリンパ球ホーミング阻害効果の解析
ＷＴマウスにＳＦ１抗体またはＰＢＳを尾静脈内注射したのちに蛍光物質ＣＦＳＥで標識したリンパ球（腸間膜リンパ節および脾臓由来）を尾静脈内注射し、２時間後に各リンパ組織を採取し、それぞれの組織に浸潤（ホーミング）したＣＦＳＥ標識リンパ球数を調べた（図１２）。
ＷＴマウスにＳＦ１抗体またはＰＢＳを尾静脈内注射したのちに蛍光物質ＣＦＳＥで標識したリンパ球（腸間膜リンパ節および脾臓由来）を尾静脈内注射し、２時間後に各リンパ組織を採取し、それぞれの組織に浸潤（ホーミング）したＣＦＳＥ標識リンパ球数を調べた（図１２）。
【0123】
その結果、ＳＦ１抗体はマウス末梢リンパ節へのリンパ球のホーミングを９０％以上抑制する活性を持つ抗体であることが分かった。また、腸間膜リンパ節へのホーミングも約６０％抑制した。一方で、ＳＦ１抗体によって認識される糖鎖を５％以下のＨＥＶにおいてのみ発現するパイエル板および同糖鎖を全く発現しない脾臓へのホーミングに対しては、有意な阻害効果を示さない特異性の高い抗体であることが分かった。パイエル板では腸管内の微生物や食物由来抗原に対する腸管免疫応答が起こり、脾臓では血液中に侵入した外来異物に対する免疫応答が起こることから、ＳＦ１抗体は、パイエル板および脾臓におけるそれらの正常な免疫応答を抑制することによって生じる副作用を引き起こすことなく、末梢リンパ節及び腸間膜リンパ節における過剰な免疫応答によって生じる免疫関連疾患の治療又は予防に有用であると予想された。
【0124】
９．ＥＡＥモデルにおけるＳＦ１抗体の効果の解析
難治性自己免疫関連疾患の一種である多発性硬化症の動物モデルとして知られている実験的自己免疫性脳脊髄炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ， ＥＡＥ）モデルを用い、ＳＦ１抗体の免疫関連疾患に対する効果の解析を行った。このモデルでは、マウスをｍｙｅｌｉｎ ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ （ＭＯＧ）ペプチドで免疫することにより、リンパ節へのリンパ球ホーミングを介して免疫応答が誘導され、自己免疫性の脳脊髄炎が発症する。はじめに、ＷＴマウス及びＧ６ＳＴ ＤＫＯマウスにおけるＥＡＥの症状の比較検討を行った（図１３）。
難治性自己免疫関連疾患の一種である多発性硬化症の動物モデルとして知られている実験的自己免疫性脳脊髄炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ， ＥＡＥ）モデルを用い、ＳＦ１抗体の免疫関連疾患に対する効果の解析を行った。このモデルでは、マウスをｍｙｅｌｉｎ ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ （ＭＯＧ）ペプチドで免疫することにより、リンパ節へのリンパ球ホーミングを介して免疫応答が誘導され、自己免疫性の脳脊髄炎が発症する。はじめに、ＷＴマウス及びＧ６ＳＴ ＤＫＯマウスにおけるＥＡＥの症状の比較検討を行った（図１３）。
【0125】
その結果、Ｇ６ＳＴ ＤＫＯマウスにおいて発症の遅延、ピーク時の症状の低下、及び再発時の症状の低下が認められたことから、ＨＥＶにおいてＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－１およびＧｌｃＮＡｃ６ＳＴ－２によって合成される６－スルホシアリルルイスＸ糖鎖が多発性硬化症の治療標的となることが分かった。
【0126】
そこで、同糖鎖に特異的に結合するＳＦ１抗体によるＥＡＥの発症の抑制実験を行った。ＭＯＧペプチドによる感作を行ったＤａｙ ０及びＤａｙ ２に２回ＳＦ１抗体をＥＡＥモデルマウスに投与したところ、上記のＤＫＯマウスと同様に、発症の遅延、ピーク時の症状の低下、及び再発時の症状の低下が認められた（図１４）。
【0127】
このことから、ＳＦ１抗体によりＥＡＥの発症が抑制されることが分かった。
【0128】
更に、ＳＦ１抗体をＥＡＥの症状が現れ始めた初回抗原感作後８日目の時点からに３日ごとに１２回投与することにより、３０日目以降に見られる再発が顕著に抑制され、抗体投与を中断した４２日目以降も再発が抑制された状態が維持された（図１５）。同様に、ＳＦ１抗体をＥＡＥの初発ピークを過ぎた初回抗原感作後２１日目の時点から３日ごとに１２回投与することにより、３０日目以降に見られる再発が顕著に抑制され、抗体投与を中断した５４日目以降も再発が抑制された状態が維持された（図１６）。
【0129】
多発性硬化症は再発と寛解を繰り返すことが知られている。上記の結果より、ＳＦ１抗体は再発の抑制効果を持つことから、多発性硬化症の治療に適用可能な抗体と考えられる。
【0130】
１０．マウスリウマチ様関節炎モデルおけるＳＦ１抗体の効果の解析
次に、ＥＡＥ以外の自己免疫関連疾患モデルにおけるＳＦ１抗体の効果を検討した。具体的には、マウスリウマチ様関節炎モデルであるコラーゲン誘導関節炎モデルにおいて、１回目の抗原皮下投与を行うＤａｙ０及び２回目の抗原皮下投与を行うＤａｙ２１、及びＤａｙ２４，２７，３０，３３にＰＢＳまたはＳＦ１を投与して検討を行った（図１７）。
次に、ＥＡＥ以外の自己免疫関連疾患モデルにおけるＳＦ１抗体の効果を検討した。具体的には、マウスリウマチ様関節炎モデルであるコラーゲン誘導関節炎モデルにおいて、１回目の抗原皮下投与を行うＤａｙ０及び２回目の抗原皮下投与を行うＤａｙ２１、及びＤａｙ２４，２７，３０，３３にＰＢＳまたはＳＦ１を投与して検討を行った（図１７）。
【0131】
その結果、関節炎症状の発症率及びクリニカルスコアともに、ＳＦ１抗体投与群で阻害されることが示された。
【0132】
１１．マウスアレルギー性鼻炎モデルおけるＳＦ１抗体の効果の解析
次に、マウスアレルギー性鼻炎モデルにおけるＳＦ１抗体の効果を検討した。具体的には、抗原である卵白アルブミン（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ，ＯＶＡ）とアジュバント作用を持つコレラ毒素（ＣＴ）を１週間おきに４回マウスに経鼻投与することによって引き起こすアレルギー性鼻炎モデルにおいて、ＰＢＳまたはＳＦ１抗体を１週間に２回腹腔内投与して検討を行った（図１８）。
次に、マウスアレルギー性鼻炎モデルにおけるＳＦ１抗体の効果を検討した。具体的には、抗原である卵白アルブミン（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ，ＯＶＡ）とアジュバント作用を持つコレラ毒素（ＣＴ）を１週間おきに４回マウスに経鼻投与することによって引き起こすアレルギー性鼻炎モデルにおいて、ＰＢＳまたはＳＦ１抗体を１週間に２回腹腔内投与して検討を行った（図１８）。
【0133】
その結果、ＯＶＡとＣＴの４回目の経鼻投与直後から１２分間に認められるマウスのくしゃみの回数、および鼻かき行動の回数が、ＳＦ１抗体投与群で有意に阻害された。
【0134】
１２．ＳＦ１抗体による正常ヒト組織の免疫染色
ＳＦ１抗体による正常ヒト組織の免疫組織染色を行ったところ、大動脈、乳腺、小脳、大脳、心臓、肺、小腸、大腸、皮膚、脾臓には染色が見られなかったが、リンパ節及び扁桃に染色が認められた（図１９，２０）。
ＳＦ１抗体による正常ヒト組織の免疫組織染色を行ったところ、大動脈、乳腺、小脳、大脳、心臓、肺、小腸、大腸、皮膚、脾臓には染色が見られなかったが、リンパ節及び扁桃に染色が認められた（図１９，２０）。
【0135】
図２０の拡大写真から、ＳＦ１抗体は、リンパ球がこれらのリンパ組織に移行する際に通り抜ける血管である高内皮細静脈ＨＥＶ（図中矢印）に特異的に結合することが分かった。
【0136】
１３．ヒト化一本鎖ＳＦ１抗体の調製及びそれを用いた免疫染色
図８に示すマウスＳＦ１抗体の重鎖可変部フレーム配列と相同性の高いヒト抗体重鎖可変部フレーム配列の中から、試行錯誤の結果ＩＧＨＶ４－５９を用いたときに活性が良好に維持されることを見出した。具体的には、図７に示したＳＦ１抗体の重鎖超可変部配列を、ＩＧＨＶ４－５９に移植したヒト化配列ＳＦ１重鎖可変部配列Ｈ１、Ｈ２を設計し、活性評価に用いた。Ｈ１の配列は、Ｈ２の配列中のヒト重鎖可変部フレーム配列部分の２カ所のアミノ酸をマウスＳＦ１抗体のものにバックミューテーションさせた配列である。さらに試行錯誤の結果、これとは別の配列の例として、図８に示すＳＦ１抗体の重鎖可変部フレーム配列と相同性の高いヒト抗体重鎖可変部フレーム配列の中から、ＩＧＨＶ３－４３を用い、その２カ所のアミノ酸をマウスＳＦ１抗体のものにバックミューテーションさせたときにも活性が良好に維持されることを見出した。具体的には、図７に示した重鎖超可変部配列をそのような重鎖可変部フレーム配列を持つＩＧＨＶ３－４３に移植したヒト化配列ＳＦ１重鎖可変部配列Ｈ３を設計し、活性評価に用いた。
図８に示すマウスＳＦ１抗体の重鎖可変部フレーム配列と相同性の高いヒト抗体重鎖可変部フレーム配列の中から、試行錯誤の結果ＩＧＨＶ４－５９を用いたときに活性が良好に維持されることを見出した。具体的には、図７に示したＳＦ１抗体の重鎖超可変部配列を、ＩＧＨＶ４－５９に移植したヒト化配列ＳＦ１重鎖可変部配列Ｈ１、Ｈ２を設計し、活性評価に用いた。Ｈ１の配列は、Ｈ２の配列中のヒト重鎖可変部フレーム配列部分の２カ所のアミノ酸をマウスＳＦ１抗体のものにバックミューテーションさせた配列である。さらに試行錯誤の結果、これとは別の配列の例として、図８に示すＳＦ１抗体の重鎖可変部フレーム配列と相同性の高いヒト抗体重鎖可変部フレーム配列の中から、ＩＧＨＶ３－４３を用い、その２カ所のアミノ酸をマウスＳＦ１抗体のものにバックミューテーションさせたときにも活性が良好に維持されることを見出した。具体的には、図７に示した重鎖超可変部配列をそのような重鎖可変部フレーム配列を持つＩＧＨＶ３－４３に移植したヒト化配列ＳＦ１重鎖可変部配列Ｈ３を設計し、活性評価に用いた。
【0137】
同様にして、図９に示すマウスＳＦ１抗体の軽鎖可変部フレーム配列と相同性の高いヒト抗体軽鎖可変部フレーム配列の中から、試行錯誤の結果ＩＧＫＶ１－３９を用いたときに活性が良好に維持されることを見出した。具体的には、図７に示したＳＦ１抗体の軽鎖超可変部配列をＩＧＫＶ１－３９に移植したヒト化配列ＳＦ１軽鎖可変部配列Ｌ１、Ｌ２を設計し、活性評価に用いた。Ｌ１の配列は、Ｌ２の配列中のヒト軽鎖可変部フレーム配列部分の１カ所のアミノ酸をマウスＳＦ１抗体のものにバックミューテーションさせた配列である。さらに試行錯誤の結果、これとは別の配列の例として、図９に示すＳＦ１抗体の軽鎖可変部フレーム配列と相同性の高いヒト抗体軽鎖可変部フレーム配列の中から、ＩＧＫＶ６－２１を用い、その1カ所のアミノ酸をマウスＳＦ１抗体のものにバックミューテーションさせたときにも活性が良好に維持されることを見出した。具体的には、図７に示した軽鎖超可変部配列をそのような軽鎖可変部フレーム配列を持つＩＧＫＶ６－２１に移植したヒト化配列ＳＦ１軽鎖可変部配列Ｌ３を設計し、活性評価に用いた。
【0138】
以上のヒト化ＳＦ１重鎖可変部Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３およびヒト化ＳＦ１軽鎖可変部Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３のアミノ酸配列を図２１に示す。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３の配列を太字で示す。
【0139】
次に、コムギ胚芽抽出液を用いた無細胞タンパク質合成系を用いて、図２１に示すヒト化ＳＦ１重鎖可変部Ｈ１～Ｈ３およびヒト化ＳＦ１軽鎖可変部Ｌ１～Ｌ３を、様々な組合せで含むヒト化ＳＦ１一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を作製した。作製した各種のヒト化ＳＦ１ ｓｃＦｖの全アミノ酸配列を図２２に示す。下線部のＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（ＧＧＧＧＳ）の３回繰り返し配列（Ｇ４Ｓリンカー）は重鎖と軽鎖のリンカー配列で、Ｃ末端側の二重下線部のＧｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ－Ｈｉｓ（ＧＬＱＱＧＧＴＨＨＨＨＨＨ）配列は、ビオチン化抗（Ｈｉｓ）６ 抗体と結合させるためのタグ配列である。太字の配列はＮ末端側からそれぞれ、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３の配列を示す。ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ１Ｌ１はヒト化ＳＦ１重鎖可変部Ｈ１およびヒト化ＳＦ１軽鎖可変部Ｌ１を、ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ１Ｌ２はヒト化ＳＦ１重鎖可変部Ｈ１およびヒト化ＳＦ１軽鎖可変部Ｌ２を、ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ２Ｌ１はヒト化ＳＦ１重鎖可変部Ｈ２およびヒト化ＳＦ１軽鎖可変部Ｌ１を、ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ３Ｌ３はヒト化ＳＦ１重鎖可変部Ｈ３およびヒト化ＳＦ１軽鎖可変部Ｌ３を含む配列である。
【0140】
予めビオチン化抗（Ｈｉｓ）６ 抗体とインキュベーションして複合体を作らせたヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖを、マウスリンパ節凍結切片と４℃で一晩インキュベートし、切片をＰＢＳで洗浄後、蛍光物質であるＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ５９４標識ストレプトアビジンを室温で１時間さらにインキュベートし、蛍光免疫染色を行ったところ、いずれの組み合わせで作製したヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖにおいても、ＨＥＶに対して特異的な染色性を示した（図２３）。以上から、図７に示したＳＦ１抗体の超可変部の配列は、ヒト抗体およびマウス抗体の様々な可変部フレーム配列と連結した際にも活性を持つ、汎用性のある配列であることが分かった。
【0141】
１４．ヒト化ＳＦ１抗体の調製及びそれを用いた免疫染色
図２１に示したヒト化ＳＦ１重鎖可変部配列Ｈ１をヒト抗体重鎖ＩｇＧ１定常部と連結し、ヒト化ＳＦ１重鎖全長アミノ酸配列を設計した（図２４）。同様にして、図２１に示したヒト化ＳＦ１軽鎖可変部配列Ｌ１をヒト抗体軽鎖であるκ鎖定常部と連結し、ヒト化ＳＦ１軽鎖全長アミノ酸配列を設計した（図２５）。これらのヒト化ＳＦ１重鎖全長アミノ酸配列およびヒト化ＳＦ１軽鎖全長アミノ酸配列をコードする遺伝子を、ヒト由来細胞株であるＨＥＫ２９３Ｔ細胞に導入し、ヒト化ＳＦ１抗体を作製した。
ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖全アミノ酸配列を配列番号２５とし、図２４に示す。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３の配列を太字で示す。
図２１に示したヒト化ＳＦ１重鎖可変部配列Ｈ１をヒト抗体重鎖ＩｇＧ１定常部と連結し、ヒト化ＳＦ１重鎖全長アミノ酸配列を設計した（図２４）。同様にして、図２１に示したヒト化ＳＦ１軽鎖可変部配列Ｌ１をヒト抗体軽鎖であるκ鎖定常部と連結し、ヒト化ＳＦ１軽鎖全長アミノ酸配列を設計した（図２５）。これらのヒト化ＳＦ１重鎖全長アミノ酸配列およびヒト化ＳＦ１軽鎖全長アミノ酸配列をコードする遺伝子を、ヒト由来細胞株であるＨＥＫ２９３Ｔ細胞に導入し、ヒト化ＳＦ１抗体を作製した。
ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖全アミノ酸配列を配列番号２５とし、図２４に示す。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３の配列を太字で示す。
【0142】
ヒト化ＳＦ１抗体の軽鎖可変部の全アミノ酸配列を配列番号２６とし、図２５に示す。ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３の配列を太字で示す。
【0143】
ヒト化ＳＦ１抗体を用いてマウスリンパ節の蛍光免疫染色を行ったところ、ヒト化ＳＦ１抗体は、野生型（ＷＴ）マウスの高内皮細静脈に特異的に結合し、６－スルホシアリルルイスＸの硫酸基を欠損するＧ６ＳＴ ＤＫＯマウス及びフコースを欠損するＦｕｃＴ ＤＫＯとは全く反応しなかった（図２６）。これは、ヒト化ＳＦ１抗体の６－スルホシアリルルイスＸに対する特異性が高いことを示す。
【0144】
上記の結果から、ＳＦ１抗体の重鎖及び軽鎖可変部の超可変部アミノ酸配列を持つヒト化抗体は、マウスＳＦ１抗体と同様に６－スルホシアリルルイスＸに対する特異的な糖結合特異性を保持していることが確認された。
【0145】
１５．ヒト化ＳＦ１抗体のリンパ球ホーミング阻害効果の解析
次に、ＷＴマウスにヒト化ＳＦ１抗体またはＰＢＳを尾静脈内注射したのちに蛍光物質ＣＦＳＥで標識したリンパ球（腸間膜リンパ節および脾臓由来）を尾静脈内注射した。２時間後に各リンパ組織を採取し、それぞれの組織にホーミングしたＣＦＳＥ標識リンパ球数を調べた（図２７）。
次に、ＷＴマウスにヒト化ＳＦ１抗体またはＰＢＳを尾静脈内注射したのちに蛍光物質ＣＦＳＥで標識したリンパ球（腸間膜リンパ節および脾臓由来）を尾静脈内注射した。２時間後に各リンパ組織を採取し、それぞれの組織にホーミングしたＣＦＳＥ標識リンパ球数を調べた（図２７）。
【0146】
その結果、ヒト化ＳＦ１抗体は、マウスＳＦ１抗体と同様に、マウス末梢リンパ節へのリンパ球のホーミングを約９０％以上抑制した。また、腸間膜リンパ節へのホーミングも約７０％抑制した。一方で、パイエル板および脾臓へのホーミングに対しては、有意な阻害効果を示さなかった。
【0147】
１６．ＥＡＥモデルにおけるヒト化ＳＦ１抗体の効果の解析
ヒト化ＳＦ１抗体によるＥＡＥの発症の抑制実験を行った。ＭＯＧペプチドによる感作を行ったＤａｙ ０及びＤａｙ ２に２回ヒト化ＳＦ１抗体をＥＡＥモデルマウスに投与したところ、マウスＳＦ１抗体と同様に、発症の遅延、ピーク時の症状の低下、及び再発時の症状の低下が認められた（図２８）。
ヒト化ＳＦ１抗体によるＥＡＥの発症の抑制実験を行った。ＭＯＧペプチドによる感作を行ったＤａｙ ０及びＤａｙ ２に２回ヒト化ＳＦ１抗体をＥＡＥモデルマウスに投与したところ、マウスＳＦ１抗体と同様に、発症の遅延、ピーク時の症状の低下、及び再発時の症状の低下が認められた（図２８）。
【0148】
このことから、ヒト化ＳＦ１抗体によりＥＡＥの発症が抑制されることが分かった。
【0149】
１７．Ｆｃ部分の配列を改変したヒト化ＳＦ１抗体の調製
さらに、Ｆｃ部分の配列を改変したヒト化ＳＦ１抗体の調製を行った。すなわち、図２４に示したヒト化ＳＦ１重鎖ＩｇＧ１定常部に関して、Ｅｕ番号でＬｅｕ２３４－Ｌｅｕ２３５をＡｌａ２３４－Ａｌａ２３５に置換したヒト化ＳＦ１重鎖ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体の全長アミノ酸配列を設計した（図２９）。また同様に、図２４に示したヒト化ＳＦ１重鎖ＩｇＧ１定常部をＩｇＧ４定常部に置換した後、Ｅｕ番号でＳｅｒ２２８をＰｒｏに、Ｌｅｕ２３５をＧｌｕに置換したヒト化ＳＦ１重鎖ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体の全長アミノ酸配列を設計した（図３０）。これらのＦｃ部分の配列を改変したヒト化ＳＦ１重鎖全長アミノ酸配列をコードする遺伝子をそれぞれ、図２５に示したヒト化ＳＦ１軽鎖全長アミノ酸配列をコードする遺伝子とともにＨＥＫ２９３Ｔ細胞に導入し、ヒト化ＳＦ１抗体－ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体（ＨＳＦ１－ＬＡＬＡ）及びヒト化ＳＦ１抗体－ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体（ＨＳＦ１－Ｇ４ＰＥ）を作製した。
さらに、Ｆｃ部分の配列を改変したヒト化ＳＦ１抗体の調製を行った。すなわち、図２４に示したヒト化ＳＦ１重鎖ＩｇＧ１定常部に関して、Ｅｕ番号でＬｅｕ２３４－Ｌｅｕ２３５をＡｌａ２３４－Ａｌａ２３５に置換したヒト化ＳＦ１重鎖ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体の全長アミノ酸配列を設計した（図２９）。また同様に、図２４に示したヒト化ＳＦ１重鎖ＩｇＧ１定常部をＩｇＧ４定常部に置換した後、Ｅｕ番号でＳｅｒ２２８をＰｒｏに、Ｌｅｕ２３５をＧｌｕに置換したヒト化ＳＦ１重鎖ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体の全長アミノ酸配列を設計した（図３０）。これらのＦｃ部分の配列を改変したヒト化ＳＦ１重鎖全長アミノ酸配列をコードする遺伝子をそれぞれ、図２５に示したヒト化ＳＦ１軽鎖全長アミノ酸配列をコードする遺伝子とともにＨＥＫ２９３Ｔ細胞に導入し、ヒト化ＳＦ１抗体－ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体（ＨＳＦ１－ＬＡＬＡ）及びヒト化ＳＦ１抗体－ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体（ＨＳＦ１－Ｇ４ＰＥ）を作製した。
【0150】
ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体の全アミノ酸配列を配列番号２７とし、図２９に示す。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３の配列を太字で示す。
【0151】
ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体の全アミノ酸配列を配列番号２８とし、図３０に示す。ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３の配列を太字で示す。
【0152】
次に、図２９、図３０に示されるヒト化ＳＦ１抗体の重鎖改変体及び図２５に示される軽鎖から構成される、ヒト化ＳＦ１抗体－ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体（ＨＳＦ１－ＬＡＬＡ）及びヒト化ＳＦ１抗体－ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体（ＨＳＦ１－Ｇ４ＰＥ）を含有する２９３Ｔ細胞の培養上清を用いて、マウスリンパ節の蛍光免疫染色を行った。その結果、遺伝子導入を行っていない２９３Ｔ細胞の培養上清のみでは全く染色は見られなかったが、ＨＳＦ１－ＬＡＬＡ含有培養上清およびＨＳＦ１－Ｇ４ＰＥ含有培養上清によってマウスリンパ節高内皮細静脈に特異的な結合が認められた（図３１）。
【0153】
上記の結果から、Ｆｃ部分の配列を改変したヒト化ＳＦ１抗体も、特異的な組織結合性を保持していることが確認された。これらのようなＦｃ部分の配列を改変したヒト化抗体は、抗体のＦｃ部分を介するエフェクター活性を低下させ、副作用リスクを低減させることが知られている。以上より、ヒト化ＳＦ１抗体およびＦｃ部分の配列を改変したヒト化ＳＦ１抗体は、マウスＳＦ１抗体と同様に特異的な組織結合性により高効率なリンパ球ホーミング阻害作用を有し、自己免疫疾患やアレルギー疾患等の免疫関連疾患に対して治療効果を発揮する治療用抗体として有用と考えられる。
【0154】
本願は、特願2020-169966を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。
【配列表フリーテキスト】
【0155】
配列番号１：ＳＦ１抗体のＣＤＲＨ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２：ＳＦ１抗体のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号３：ＳＦ１抗体のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号４：ＳＦ１抗体のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号５：ＳＦ１抗体のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６：ＳＦ１抗体のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号７：ＳＦ１抗体ＣＤＲＨ１の塩基配列を示す。
配列番号８：ＳＦ１抗体ＣＤＲＨ２の塩基配列を示す。
配列番号９：ＳＦ１抗体ＣＤＲＨ３の塩基配列を示す。
配列番号１０：ＳＦ１抗体ＣＤＲＬ１の塩基配列を示す。
配列番号１１：ＳＦ１抗体ＣＤＲＬ２の塩基配列を示す。
配列番号１２：ＳＦ１抗体ＣＤＲＬ３の塩基配列を示す。
配列番号１３：ＳＦ１抗体の重鎖可変部のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４：ＳＦ１抗体の軽鎖可変部のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖可変部Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号１６：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖可変部Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１７：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖可変部Ｈ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号１８：ヒト化ＳＦ１抗体の軽鎖可変部Ｌ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号１９：ヒト化ＳＦ１抗体の軽鎖可変部Ｌ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号２０：ヒト化ＳＦ１抗体の軽鎖可変部Ｌ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号２１：ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ１Ｌ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２２：ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ１Ｌ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号２３：ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ２Ｌ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２４：ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ３Ｌ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号２５：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖全長のアミノ酸配列を示す。
配列番号２６：ヒト化ＳＦ１抗体の軽鎖全長のアミノ酸配列を示す。
配列番号２７：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体全長のアミノ酸配列を示す。
配列番号２８：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体全長のアミノ酸配列を示す。
配列番号２９：Ｇ４Ｓリンカーのアミノ酸配列を示す。
配列番号２：ＳＦ１抗体のＣＤＲＨ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号３：ＳＦ１抗体のＣＤＲＨ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号４：ＳＦ１抗体のＣＤＲＬ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号５：ＳＦ１抗体のＣＤＲＬ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号６：ＳＦ１抗体のＣＤＲＬ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号７：ＳＦ１抗体ＣＤＲＨ１の塩基配列を示す。
配列番号８：ＳＦ１抗体ＣＤＲＨ２の塩基配列を示す。
配列番号９：ＳＦ１抗体ＣＤＲＨ３の塩基配列を示す。
配列番号１０：ＳＦ１抗体ＣＤＲＬ１の塩基配列を示す。
配列番号１１：ＳＦ１抗体ＣＤＲＬ２の塩基配列を示す。
配列番号１２：ＳＦ１抗体ＣＤＲＬ３の塩基配列を示す。
配列番号１３：ＳＦ１抗体の重鎖可変部のアミノ酸配列を示す。
配列番号１４：ＳＦ１抗体の軽鎖可変部のアミノ酸配列を示す。
配列番号１５：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖可変部Ｈ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号１６：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖可変部Ｈ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号１７：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖可変部Ｈ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号１８：ヒト化ＳＦ１抗体の軽鎖可変部Ｌ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号１９：ヒト化ＳＦ１抗体の軽鎖可変部Ｌ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号２０：ヒト化ＳＦ１抗体の軽鎖可変部Ｌ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号２１：ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ１Ｌ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２２：ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ１Ｌ２のアミノ酸配列を示す。
配列番号２３：ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ２Ｌ１のアミノ酸配列を示す。
配列番号２４：ヒト化ＳＦ１－ｓｃＦｖ－Ｈ３Ｌ３のアミノ酸配列を示す。
配列番号２５：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖全長のアミノ酸配列を示す。
配列番号２６：ヒト化ＳＦ１抗体の軽鎖全長のアミノ酸配列を示す。
配列番号２７：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ体全長のアミノ酸配列を示す。
配列番号２８：ヒト化ＳＦ１抗体の重鎖ＩｇＧ４－ＳＰＬＥ体全長のアミノ酸配列を示す。
配列番号２９：Ｇ４Ｓリンカーのアミノ酸配列を示す。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31】
【配列表】