特許 7741893 線維芽細胞活性化タンパク質の過剰発現を検出するための（（Ｒ）－１－（（６－ヒドラジニルニコチノイル）－Ｄ－アラニル）ピロリジン－２－イル）ボロン酸（ＨＹＮＩＣ－ＩＦＡＰ）をベースとする放射性医薬品

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-09-09

(45)【発行日】2025-09-18

(54)【発明の名称】線維芽細胞活性化タンパク質の過剰発現を検出するための（（Ｒ）－１－（（６－ヒドラジニルニコチノイル）－Ｄ－アラニル）ピロリジン－２－イル）ボロン酸（ＨＹＮＩＣ－ＩＦＡＰ）をベースとする放射性医薬品

(51)【国際特許分類】

   A61K 51/04 20060101AFI20250910BHJP

   A61K 51/08 20060101ALI20250910BHJP

   A61K 103/10 20060101ALN20250910BHJP

   A61K 103/00 20060101ALN20250910BHJP

   A61K 103/30 20060101ALN20250910BHJP

   A61K 103/40 20060101ALN20250910BHJP

【ＦＩ】

A61K51/04 200

A61K51/08 200

A61K103:10

A61K103:00

A61K103:30

A61K103:40

【請求項の数】 15

(21)【出願番号】P 2023567111

(86)(22)【出願日】2021-10-14

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-16

(86)【国際出願番号】 MX2021050055

(87)【国際公開番号】W WO2022231410

(87)【国際公開日】2022-11-03

【審査請求日】2024-07-08

(31)【優先権主張番号】MX/A/2021/005089

(32)【優先日】2021-04-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】MX

(73)【特許権者】

【識別番号】523409407

【氏名又は名称】インスティトゥト・ナシオナル・デ・インベスティガシオネス・ニュークレアレス

【住所又は居所原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴＯ ＮＡＣＩＯＮＡＬ ＤＥ ＩＮＶＥＳＴＩＧＡＣＩＯＮＥＳ ＮＵＣＬＥＡＲＥＳ

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】フェッロ－フロレス，ギジェルミーナ

(72)【発明者】

【氏名】オカンポ－ガルシア，ブランカ・エリ

(72)【発明者】

【氏名】ルナ－グティエレス，マーナ・アレハンドラ

(72)【発明者】

【氏名】サントス－クエバス，クララ・レチシア

(72)【発明者】

【氏名】ヒメネス－マンシラ，ナレリー・パトリシア

(72)【発明者】

【氏名】アソリン－ベガ，エリカ・パトリシア

【審査官】伊藤 基章

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１５－５２６４０２（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２００４－５２３５１４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１９－５２４８５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１９－５１９４６７（ＪＰ，Ａ）

【文献】中国特許出願公開第１１２６２５０６５（ＣＮ，Ａ）

【文献】国際公開第２０１９／１５４８８６（ＷＯ，Ａ１）

【文献】欧州特許出願公開第０３４８６２４９（ＥＰ，Ａ１）

【文献】J Med Chem，2013年，Vol. 56，pp. 3467-3477，DOI：10.1021/jm400351a

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

構造：

【化1】

を含む化学式^９９ｍＴｃ－ＥＤＤＡ／ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ（^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ）の放射性医薬品。

【請求項2】

請求項１に記載した放射線医薬品を含むことを特徴とする、放射性医薬品組成物。

【請求項3】

放射性診断剤としての使用のための、請求項１に記載の放射性医薬品。

【請求項4】

構造：

【化2】

を含む、放射性医薬品の前駆体リガンド。

【請求項5】

構造：

【化3】

を含み、化学式ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰを有する、請求項４に記載の放射性医薬品の前駆体リガンド。

【請求項6】

構造：

【化4】

を含み、化学式ＤＯＴＡ－Ｂｚ－ＮＣＳ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰを有する、請求項４に記載の放射性医薬品の前駆体リガンド。

【請求項7】

^９９ｍ Ｔｃによる放射性標識に使用するための、請求項５に記載の前駆体リガンドを含む放射性医薬品。

【請求項8】

^９９ｍ Ｔｃにより放射性標識された、請求項７に記載の放射性医薬品。

【請求項9】

放射性診断剤としての使用のための、請求項８に記載の放射性医薬品。

【請求項10】

単一光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）に使用するための、請求項９に記載の放射性医薬品。

【請求項11】

^６８ Ｇａ、 ^６４ Ｃｕ、 ^１７７ Ｌｕ、または ^２２５ Ａｃによる放射性標識に使用するための、請求項６に記載の前駆体リガンドを含む放射性医薬品。

【請求項12】

^６８ Ｇａ、 ^６４ Ｃｕ、 ^１７７ Ｌｕ、または ^２２５ Ａｃにより放射性標識された、請求項１１に記載の放射性医薬品。

【請求項13】

放射性診断剤または放射性治療剤としての使用のための、請求項１２に記載の放射性医薬品。

【請求項14】

エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）、トリシン、塩化第一スズ、およびマンニトールを含有する凍結乾燥剤形のＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰを含む、放射性標識用組成物。

【請求項15】

（ａ）請求項１４に記載の放射性標識用組成物を準備する工程、
（ｂ） ^９９ Ｍｏ／ ^９９ｍ Ｔｃ発生装置からその場で得られた過テクネチウム酸ナトリウム溶液（ ^９９ｍ ＴｃＯ _４ Ｎａ）で前記放射性標識用組成物を再構成する工程、
（ｃ）逆相ＨＰＬＣによる測定で放射化学的純度が９８％を超える化合物 ^９９ｍ Ｔｃ－ＥＤＤＡ／ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ（ ^９９ｍ Ｔｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ）を得る工程、
を含む、請求項１に記載の放射性医薬品の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

明細書
本発明の技術分野
本発明は、線維芽細胞活性化タンパク質（ｉＦＡＰ）阻害剤（（Ｒ）－１－（（６－ヒドラジニルニコチノイル）－Ｄ－アラニル）ピロリジン－２－イル）ボロン酸（ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ）をベースとする新しい放射性医薬品であって、放射性金属の^９９ｍＴｃのキレート剤としてのＨＹＮＩＣの従来の使用と組み合わせて、ＨＹＮＩＣのヒドラジン窒素は、ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ分子と線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）の本質的な活性中心、フェニルアラニン（Ｐｈｅ－３５０およびＰｈｅ－３５１）、グルタミン酸（Ｇｌｕ－２０３およびＧｌｕ－２０４）、およびセリン（Ｓｅｒ－６２４）との相互作用について好ましい化学基として機能する、放射性医薬品に関する。特に、^９９ｍＴｃで標識された新しい放射性医薬品ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰは、核医学におけるＳＰＥＣＴ分子イメージング技術によって、インビボにおいて高い親和性で、腫瘍微小環境で発現したＦＡＰを検出する。

【背景技術】

【0002】

背景
線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）は、ジペプチジルペプチダーゼおよびエンドペプチダーゼ活性によってプロリン残基の下流に位置するペプチドを切断するＩＩ型セリンプロテアーゼである。ＦＡＰは、ほとんどのヒト上皮腫瘍に存在する活性化された間質線維芽細胞の細胞表面で高度に発現されるが、正常な線維芽細胞では発現されない。がん関連線維芽細胞は肉眼で見える腫瘍質量の最大９０％を占める（Ｈａｍｓｏｎ他、Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＦＡＰ）：ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ，ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ Ｃｌｉｎ．Ａｐｐｌ．、２０１４、８巻、４５４～４６３）。

【0003】

特異的ＦＡＰ阻害剤は最初に、可能性のある抗がん剤として開発された（Ａｅｒｔｇｅｅｒｔｓ他、Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｋｉｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ α．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２００５、２８０巻、１９４４１～１９４４４；Ｅｄｏｓａｄａ他、Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｄｉｐｅｐｔｉｄｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ． Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００６、２８１巻、７４３７～７４４４；Ｔｒａｎ他、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ Ｎ－ａｃｙｌ－Ｇｌｙ－，Ｎ－ａｃｙｌ－Ｓａｒ－ ａｎｄ Ｎ－ｂｌｏｃｋｅｄ－ｂｏｒｏＰｒｏ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ＦＡＰ，ＤＰＰ４，ａｎｄ ＰＯＰ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１７巻、２００７、１４３８～１４４２）。これらのうち、最も適当なものは、２群の選択性の高い化合物で、１つはキノリン－シアノピロリジン構造をベースにしており、もう１つはピロリジン－ボロン酸をベースにするか、またはプロリン－ボロン酸（ｂｏｒｏｎＰｒｏ）としても知られている。第１群に関しては、Ｊａｎｓｅｎ他が３９種類の新しいＦＡＰ阻害剤の合成を最初に報告し、４－キノリノイル－グリシアノピロリジン足場の構造活性相関を探索した（Ｊａｎｓｅｎ他、Ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ（４－ｑｕｉｎｏｌｉｎｏｙｌ）－ｇｌｙｃｙｌ－２－ｃｙａｎｏｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０１４、５７巻、３０５３～３０７４）。著者等は、ＦＡＰが酵素とこれらの分子に存在するニトリル基との間に共有結合を形成するために厳しい構造要件を課していると報告した（Ｊａｎｓｅｎ他、Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＦＡＰ）ｗｉｔｈ ａ（４－ｑｕｉｎｏｌｉｎｏｙｌ）－ｇｌｙｃｙｌ－２－ｃｙａｎｏｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎ ｓｃａｆｆｏｌｄ．ＡＣＳ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、２０１３、４巻、４９１～４９６）。著者等はまた、Ｎ－ピリジンが、ジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）およびプロリルオリゴペプチダーゼ（ＰＲＥＰ）などの他のポストプロリン切断酵素に対して高い選択性のあるＦＡＰ阻害剤を生じることを発見した。キノリノイル断片は分子のＦＡＰに対する親和性をより高くするが、この残基が別のアザヘテロ芳香族置換基に置換されると、ＦＡＰに対する親和性は劇的に減少した。さらに、シアノピロリジン環断片にフッ素またはジフルオロを付加すると、ＦＡＰに対する親和性および選択性が向上することがわかった。著者等がグリシン残基をいくつかの他のアミノ酸に置換すると、ＰＲＥＰに対する親和性が増加し、ＦＡＰの能力が著しく減少した。この研究の結果、著者等は、Ｎ－（４－キノリノイル）－グリシル－（２－シアノピロリジン）足場がＦＡＰの最良の阻害剤であることを特定した。選択されたＦＡＰ阻害剤のマウスにおける薬物動態研究は、経口投与後の高いバイオアベイラビリティを、血漿半減期が短く、インビボでのＦＡＰ阻害が長期間持続することとともに示した。

【0004】

同時に、Ｐｏｐｌａｗｓｋｙ他はＦＡＰおよびＰＲＥＰに対する２０種類を超えるプロリンボロン酸ベースの阻害剤を設計し、特徴づけた（Ｐｏｐｌａｗｓｋｉ他、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｙｌ ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３、５６巻、３４６７～３４７７）。著者等は、プロトン化されたピリジン性窒素原子を使用することによって、ＦＡＰに対する親和性を高めることができると報告したが、これはこの窒素原子がＦＡＰには存在するがＰＲＥＰには存在しないグルタミン酸（Ｇｌｕ－２０４）のカルボニル酸素と水素結合を形成するからである。著者等はまた、ＦＡＰのエンドペプチダーゼ活性が非常に厳しい要件を有し、グリシンまたはＤ－アラニンなどの小さなアミノ酸のみを受け入れることも発見した。Ｄ－アラニンが好ましいが、これはこの阻害剤がナノモル範囲でＦＡＰ阻害能力を保持し、ＰＲＥＰよりもＦＡＰに対して３６０倍の選択性を提供するためである。これらの結果に基づいて、Ｐｏｐｌａｗｓｋｉ他は、Ｎ－（ピリジン－４－カルボニル）－Ｄ－Ａｌａ－ｂｏｒｏＰｒｏが発見した最良の線維芽細胞活性化タンパク質阻害剤であることを立証した。

【0005】

合成されて特徴づけられたＦＡＰ阻害剤は多数あるにも関わらず、それらのうちの限られた数のみが医療目的で放射性標識されている。２０１５年に、ヨウ素－１２５による最初の放射性標識ボロン酸ベースのＦＡＰ阻害剤（^１２５Ｉ－ＭＩＰ－１２３２）がアテローム性プラークイメージングのために報告されたが、Ｉ－１２５は単一光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングに有用な放射性核種ではないことを明確にすることが重要である（Ｍｅｌｅｔｔａ他、Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ ｂｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｂａｓｅｄ ＦＡＰ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ＭＩＰ－１２３２ ｆｏｒ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｐｌａｑｕｅ ｉｍａｇｉｎｇ．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、２０１５、２０巻、２０８１～２０９９）。

【0006】

２０１８年に、ＬｉｎｄｎｅｒおよびＬｏｋｔｅｖは、画像診断または治療目的のために適切な放射性核種で標識するために、２，２’，２’’，２’’’－（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライル）四酢酸（ＤＯＴＡ）の４－キノリノイル－Ｇｌｙ－シアノピロリジン足場への結合を報告した（Ｌｉｎｄｎｅｒ他、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃ ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２０１８、５９巻、１４１５～１４２２；Ｌｏｋｔｅｖ他、Ａ ｔｕｍｏｒ－ｉｍａｇｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２０１８、５９巻、１４２３～１４２９）。著者等は、ＦＡＰ阻害剤（ＦＡＰＩ）誘導体の腫瘍への取り込みおよび保持時間を改善するために、異なる位置を使用してＤＯＴＡを４－キノリノイル－Ｇｌｙ－シアノピロリジン足場に結合させた１５種類の誘導体を開発した。１５種類の異なるＦＡＰＩは、^１７７Ｌｕ、^９０Ｙ、または^６８Ｇａで放射性標識された。放射性標識され、報告されたＦＡＰＩ複合体全ての中で、^６８Ｇａ－ＦＡＰＩ－０２および^６８Ｇａ－ＦＡＰＩ－０４が診断用途に最も適した薬剤であることが判明した。その後、同じ著者等が、ＦＡＰＩ－２１からＦＡＰＩ－５５まで連続して番号付けられた同じフレームワークの他の誘導体を報告した（Ｌｏｋｔｅｖ他、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｒａｄｉｏｔｒａｃｅｒｓ ｗｉｔｈ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２０１９、６０巻、１４２１～１４２９）。ＤＯＴＡの１，４，７－トリアザシクロノナン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－三酢酸（ＮＯＴＡ）による置換は、誘導体ＦＡＰＩ－７４を生じ、これは^６８Ｇａおよび^１８Ｆ（^１８Ｆ－ＡｌＦ、ＡｌＣｌ_３の存在下）で標識されうる（Ｇｉｅｓｅｌ他、ＦＡＰＩ－７４ ＰＥＴ／ＣＴ Ｕｓｉｎｇ Ｅｉｔｈｅｒ ^１８Ｆ－ＡｌＦ ｏｒ Ｃｏｌｄ－Ｋｉｔ ^６８Ｇａ Ｌａｂｅｌｉｎｇ：Ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ，ａｎｄ Ｔｕｍｏｒ Ｄｅｌｉｎｅａｔｉｏｎ ｉｎ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２０２１、６２巻、２０１～２０７）。特に、ＦＡＰＩ－３５は^９９ｍＴｃおよびおそらく^１８８Ｒｅで標識するために開発された（Ｌｉｎｄｎｅｒ他、Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ^９９ｍＴｃ－Ｌａｂｅｌｅｄ ＦＡＰＩ Ｔｒａｃｅｒｓ ｆｏｒ ＳＰＥＣＴ Ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ ^１８８Ｒｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２０２０、６１巻、１５０７～１５１３）。

【0007】

ＰＥＴスキャンのためにヒトで使用された最初のＦＡＰ阻害剤は、^６８Ｇａ－ＦＡＰＩ－０２および^６８Ｇａ－ＦＡＰＩ－０４であった（Ｇｉｅｓｅｌ他、^６８Ｇａ－ＦＡＰＩ ＰＥＴ／ＣＴ：ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ ｅｓｔｉｍａｔｅ ｏｆ ２ ＤＯＴＡ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ＦＡＰ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２０１９、６０巻、３８６～３９２；Ｋｒａｔｏｃｈｗｉｌ他、^６８Ｇａ－ＦＡＰＩ ＰＥＴ／ＣＴ：Ｔｒａｃｅｒ Ｕｐｔａｋｅ ｉｎ ２８ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２０１９、６０巻、８０１～８０５）。

【0008】

興味深いことに、^６４Ｃｕ－／^２２５Ａｃ－ＦＡＰＩ－０４セラノスティック結合は、マウスモデルにおいてＦＡＰを過剰発現している膵臓がんの治療においてその有用性を示した。線維芽細胞活性化タンパク質を標的とする療法はがん治療に効果があり、新しい治療戦略の確立に貢献しうる（Ｗａｔａｂｅ他、Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｕｍｏｒ Ｓｔｒｏｍａ：^６４Ｃｕ－ ａｎｄ ^２２Ａｃ－Ｌａｂｅｌｅｄ ＦＡＰＩ－０４ ｉｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｄｅｌｓ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、２０２０、６１巻、５６３～５６９）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

しかし、あらゆる放射線治療の前に、その治療が患者にとって有用であるかどうかを確認するために、ならびに腫瘍に切除放射線量を送達するために投与するのに必要な活性を決定するために、腫瘍またはその転移における放射性医薬品の取り込みを核イメージングによって評価しなければならない、すなわち、個別化医療が実践される。このためには、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴによって分子画像を取得するためにＦＡＰ阻害剤診断用放射性医薬品を使用する必要がある。これら２つの技術のうち、ＰＥＴは空間分解能および感度が最高の技術であり、したがって、前述したように、これまでに開発され臨床研究に適用された診断用ＦＡＰ阻害剤放射性医薬品は、ＰＥＴのための放射性医薬品である４－キノリノイル－Ｇｌｙ－シアノピロリジン誘導体に結合した^６８Ｇａおよび^１８Ｆを使用しており、キノリン－シアノピロリジンに同様に結合した^９９ｍＴｃの誘導体を使用した研究は１件のみであった（以下の表を参照）。それにも関わらず、病院内または病院の近くにサイクロトロンを設置する必要がないため、国内および国際的に、ＳＰＥＣＴ研究は費用が低く、機器や放射性核種がより入手しやすいため、核医学全体の７０％超を占めている。ＳＰＥＣＴイメージングの場合、最も一般的に使用される放射性核種は^９９ｍＴｃであり、ピロリジン－ボロン酸誘導体またはｂｏｒｏｎ－Ｐｒｏに基づくＦＡＰイメージングについての放射性医薬品に関する研究に特化した出版物はない。

【0010】

【表1】

【図面の簡単な説明】

【0011】

【発明を実施するための形態】

【0012】

本発明の詳細な説明
特許の目的のために、（（Ｒ）－１－（（６－ヒドラジニルニコチノイル）－Ｄ－アラニル）ピロリジン－２－イル）ボロン酸（ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ）分子をベースとする新規の線維芽細胞活性化タンパク質（ｉＦＡＰ）阻害性放射性医薬品であって、エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）が放射性金属の配位圏を完成させるために使用される、放射性金属の^９９ｍＴｃのキレート剤としてのＨＹＮＩＣの従来の使用とを組み合わせて、ＨＹＮＩＣのヒドラジン窒素が、ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ分子と線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）の活性中心にあるフェニルアラニン（Ｐｈｅ－３５０およびＰｈｅ－３５１）、グルタミン酸（Ｇｌｕ－２０３およびＧｌｕ－２０４）、およびセリン（Ｓｅｒ－６２４）との相互作用について好ましい化学基として機能する、放射性医薬品が提示される。^９９ｍＴｃ－ＥＤＤＡ／ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰの新しい放射性医薬品（^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ）は、核医学ＳＰＥＣＴ分子イメージング技術を使用して、上皮起源の悪性腫瘍の微小環境で発現したＦＡＰをインビボで高い親和性で検出する。図１は、ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ構造に基づいて特許対象となる^９９ｍＴ放射性医薬品の構造を概略的に示している。

【0013】

分子ドッキングの研究に基づいて、ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ誘導体［（（Ｒ）－１－（（６－ヒドラジニルニコチノイル－）－ダラニル）－ピロリジン－２－イル）ボロン酸］を設計し、合成し、文献で報告されているｂｏｒｏｎＰｒｏの２つの最も代表的な構造、Ｎ－アシル－Ｇｌｙ－ｂｏｒｏＰｒｏ（Ｔｒａｎ他、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ Ｎ－ａｃｙｌ－Ｇｌｙ－，Ｎ－ａｃｙｌ－Ｓａｒ－ ａｎｄ Ｎ－ｂｌｏｃｋｅｄ－ｂｏｒｏＰｒｏ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ＦＡＰ，ＤＰＰ４，ａｎｄ ＰＯＰ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１７巻、２００７、１４３８～１４４２）およびＮ－（ピリジン－４－カルボニル）－Ｄ－Ａｌａ－ｂｏｒｏＰｒｏ（Ｐｏｐｌａｗｓｋｉ他、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｙｌ ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１３、５６巻、３４６７～３４７７）を親和性および阻害定数（Ｋｉ）について比較した。別の誘導体、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－ＤＯＴＡに結合したＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ分子（ＤＯＴＡ－Ｂｚ－ＮＣＳ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ）の親和性も、この誘導体の親和性が^６８Ｇａ、^１７７Ｌｕ、^６４Ｃｕ、^２２５Ａｃなどの他のＤＯＴＡ様の放射性金属による標識能力に適しているかどうかを研究するために得られた。この目的のために、全構造はＣｈｅｍＤｒａｗ（．ｃｄｘ形式）で作成され、３Ｄ構造はＣｈｅｍ３Ｄソフトウェアを介して．ｐｄｂ形式でエクスポートされた。分子エディタＡＶＯＧＡＤＲＯ１．２．０を使用して、各構造にホウ素原子が存在するため、分子幾何学はユニバーサルフォースフィールド（ＵＦＦ）を使用して合計１０，０００ステップで最適化された。続いて、ＰＭ７レベルの理論を用いた半経験的量子化学ソフトウェアＭＯＰＡＣ２０１６を使用して２回目の幾何学的最適化が実行され、得られた空間構成を．ｐｄｂ形式にエクスポートした。

【0014】

線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）のアルファサブユニットの結晶構造は、ＲＳＣＢタンパク質データバンクデータベース（ＰＤＢ ＩＤ：１Ｚ６８）から得られた。分子ドッキングの計算で受容体高分子として使用するために、この分子はＢＩＯＶＩＡ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｔｕｄｉｏ ２０２１で編集されて、Ｘ線回折で示された水分子および残基が除去され、主要なアミノ酸鎖のみが．ｐｄｂファイルに残された。モデルで表された二量体のＡ鎖も除去され、Ｂ鎖のみが残された。高分子の三次元モデルは２．６０Åの分解能が必要なため、相同性モデリングステップがＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬオンラインプラットフォームによって実行された。得られた構造は、受容体として使用するためにｐｄｂ形式で保存された。受容体およびＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ由来の構造は両方とも、欠落した水素の添加および生理的ｐＨ（ｐＨ＝７．４）に対する分子最適化を示すＯＰＥＮ ＢＡＢＥＬ ＧＵＩ ２００６ライブラリを用いて調製され、再び．ｐｄｂ形式で構造が作成された。ＡｕｔｏＤｏｃｋツール１．５．６ソフトウェアパッケージを使用して、受容体を高分子として構成し、各リガンドを別個のファイルに構成し、ファイルを．ｐｄｂｑｔ拡張子でエクスポートした。検索ボックスは、２０１３年にＰｏｐｌａｗｓｋｙおよび共同研究者等によって提案されたように、受容体のＳｅｒ－６２４の周囲の疎水性部位Ｓ１に配置され、中心としてＸＹＺ座標１８．９４８、１０．６７６、２８．９８９それぞれおよびサイズ９０が、ボックスの各軸に設定された。リガンドに関しては、ｈｔｔｐ：／／ｍｇｌｄｅｖ．ｓｃｒｉｐｐｓ．ｅｄｕ／ｐｉｐｅｒｍａｉｌ／ａｕｔｏｄｏｃｋ／２００９－Ｍａｒｃｈ／００５４３９．ｈｔｍｌで入手可能なホウ素原子のパラメータを追加するために、＜＜ＡＤ４＿ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ．ｄａｔ＞＞ファイルを変更する必要があった。

【0015】

タンパク質リガンド分子ドッキングの実行はＡｕｔｏＤｏｃｋ４．２．６パッケージを用いて実行され、事前にＡｕｔｏＧｒｉｄ４．２．６ツールで、必要な．ｍａｐグリッドを計算した。分子ドッキングの結果を含むログファイルは、最良の親和性スコアを有する複合体を．ｐｄｂ形式にエクスポートすることによって、ＡｕｔｏＤｏｃｋツールで視覚化された。距離および相互作用の視覚化および分析は、ＢＩＯＶＡ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｔｕｄｉｏ Ｖｉｓｕａｌｉｚｅｒ ２０２１によって実行された。

【0016】

阻害定数（Ｋｉ）は、式：

【数1】

を使用して計算され、
ここで、
親和性：ＡｕｔｏＤｏｃｋ４．２．６スコアリング関数で得られた値に対応する。
Ｒ：理想気体の熱力学定数の値に対応する（０．００１９８１７９ｋｃａｌ／ｍｏｌＫ）。
Ｔ：ＡｕｔｏＤｏｃｋ４．２．６が分子カップリング計算で扱う絶対スケール２９８．１５Ｋの温度値に対応する。

【0017】

Ｋｉ値は、モル単位（Ｍ）で得られる。表２は、各リガンドの親和性スコア、Ｋｉ阻害定数、およびＳｅｒ６２４までの距離を示す。表２で明らかなように、ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ分子は、Ｎ－（ピリジン－４－カルボニル）－Ｄ－Ａｌａ－ｂｏｒｏＰｒｏ誘導体（Ｋｉ＝１４．０７）よりも２６倍低い阻害定数（Ｋｉ＝０．５３６ｎＭ）を示し、これはＦＡＰによるＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰの阻害能力がより高いことを意味する。

【0018】

【表2】

【0019】

分子ドッキングの研究で得られたＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰとＦＡ活性中心のアミノ酸残基との相互作用マップと一致して、ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰがＮ－（ピリジン－４－カルボニル）－Ｄ－Ａｌａ－ｂｏｒｏＰｒｏよりも親和性が増加しているのは、ＨＹＮＩＣのヒドラジン窒素の存在によるものであり、この増加は、ＦＡＰの活性中心、主にＧｌｕ－２０３、Ｇｌｕ－２０４、Ｐｈｅ－３５０、およびＰｈｅ－３５１残基との結合、ならびにより近接したＳｅｒ－６２４との相互作用におけるＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ分子のファンデルワールス型相互作用および水素結合に都合がよい（上述の分子ドッキングの方法論で得られたＦＡＰのアミノ酸残基とＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰリガンドとの相互作用マップ）。ＤＯＴＡ－Ｂｚ－ＮＣＳ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰリガンドの高い親和性およびＦＡＰ阻害能力は、新しい診断および治療用放射性医薬品の調製に使用できる可能性を示しているが、これはこのリガンドが、ＤＯＴＡ大環状化合物によってキレート化されうる放射性核種、例えば、^６８Ｇａ、^６４Ｃｕ、^１７７Ｌｕ、および^２２５Ａｃで標識される有用なリガンドであるためである。

【0020】

本発明の放射性医薬品の調製方法
ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ分子の合成のために、最初にＢｏｃ－ピロリジンを窒素雰囲気下、－４０℃でエチルエーテル／ＴＭＥＤＡに溶解した。続いて、５℃でｓ－ＢｕＬｉの溶液（シクロヘキサン中）と反応させた。次いで、Ｂ（ＯＭｅ）_３を添加し、抽出精製方法を実施し（最初に２Ｍ ＮａＯＨで抽出し、続いて２Ｍ ＨＣｌで酸性化し、最後にＥｔＯＡｃで抽出し、溶媒を蒸発させた）、Ｂｏｃ－ピロリジン－ボロン酸を得て、これにピナンジオールを添加し、ＨＰＬＣ分離（ミクロポラシルカラム）によってＲジアステレオマーが得られた。Ｂｏｃ脱保護後、Ｄ－アラニンカップリング、続いてＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを使用するスクシンイミジル－Ｎ－ｂｏｃ－ＨＹＮＩＣカップリングを実施した。最後に、化合物をＴＦＡで脱保護し、逆相ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥した。最終生成物は（（Ｒ）－１－（（６－ヒドラジニルニコチノイル）－ダラニル）ピロリジン－２－イル）ボロン酸（ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ）で、予測される質量スペクトルを示した：ｍ／ｚ３２２（計算値３２１）［Ｍ＋Ｈ］^＋；ｍ／ｚ６４２（計算値３２１）２×［Ｍ＋Ｈ］^＋。^１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）、δ（ｐｐｍ）：８．５－６．７（ｓ，１Ｈ，－ＣＨ^６－，ａｒｏｍ．ピリジン）、９．７（ｓ，１Ｈ，－ＮＨ－ＮＨ－）、８．３（ｓ，１Ｈ，－ＣＨ_２－ＮＨＣＯ）、３．１－３．３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ_２ ＣＨＢ）。

【0021】

凍結乾燥させた白色固体の逆相ＨＰＬＣ分析は、化合物の化学純度が９５％であることを示した。

【0022】

ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ（３０μｇ）は、ＥＤＤＡ１０ｍｇ、トリシン２０ｍｇ、塩化第一スズ２０μｇ、およびマンニトール５０ｍｇを含有する凍結乾燥剤形として製剤化された。前記製剤は、０．２Ｍ、ｐＨ７の溶液１ｍＬおよび^９９Ｍｏ／^９９ｍＴｃ発生装置からその場で得られた過テクネチウム酸ナトリウム溶液（^９９ｍＴｃＯ_４Ｎａ）１ｍＬで再構成すると、特許対象となる化合物^９９ｍＴｃ－ＥＤＤＡ／ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ（^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ）を逆相ＨＰＬＣによる測定で９８％を超える放射化学的純度で生じる。

【0023】

放射性医薬品は、標識の２４時間後も放射化学的純度が９５％超で安定している。ヒト血清におけるインビトロ安定性試験は、２．１±０．３％の血清タンパク質結合および高い放射化学的安定性（＞９５％）を示す。^９９ｍＴｃ ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰのインビトロ特異性の評価のために、本発明者等は、乳がんの２つの異なる分子サブタイプの腫瘍間質（患者の生検）：エストロゲン受容体（ＥＲ）およびヒト上皮成長因子受容体タイプ２（ＨＥＲ２）の高発現を特徴とするルミナルＢならびにＥＲ、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、およびＨＥＲ２の発現レベルがゼロのトリプルネガティブ（ＴＮＢＣ）を使用した。本発明者等は、異なる乳房腫瘍の表現型における以前の研究と同様に、これらの腫瘍間質を選択し、ＴＮＢＣ腫瘍は最高レベルのＦＡＰを発現することが示された一方、ルミナルＢ腫瘍は最低レベルのＦＡＰを発現した（Ｐａｒｋ他、Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｕｂｔｙｐｅ ａｎｄ ｓｔｒｏｍａｌ ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ Ｂｒｅａｓｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．、２０１５、１４９巻、７２７～７４１）。結果は、ＴＮＢＣ腫瘍の間質に添加された放射活性の^９９ｍＴｃ ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰの取り込みが７．８±１．２％であることを示し、これはルミナルＢ腫瘍の間質によって取り込まれた放射活性（添加された放射活性の２．３±０．３％）よりも有意に高かった（Ｐ＜０．０５、ｔ－スチューデント）。

【0024】

この化合物は、研究用ｂａｌｂ－Ｃマウスに４０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した場合、毒性や副作用を示さなかった。誘発性トリプルネガティブ乳がん腫瘍（ＭＢＣＤＦ－Ｔ細胞）を有する胸腺欠損マウスにおける^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰのＭｉｃｒｏ－ＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージングは、組織１グラムあたり投与活性の９．２±１．４％が腫瘍内に取り込まれ（％ＩＤ／ｇ）（図２）、主に腎臓を介して迅速に排出されることを示した。

【0025】

健康なボランティアにおける体内動態および線量測定の検査は、腎臓での取り込みおよび排泄の増加による迅速な血液クリアランスならびに投与された７４０ＭＢｑあたり２．０±０．５ｍＳｖの有効線量を示す。図３は、健康なボランティアで投与後１時間で得られた放射性医薬品の^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰのＳＰＥＣＴ画像を示す。図４は、^１８Ｆ－ＦＤＧ（ＰＥＴ、対照放射性医薬品、腫瘍代謝検出のためのゴールドスタンダード）および^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ（ＳＰＥＣＴ）の両方を投与されたトリプルネガティブ乳がんを有する同じ患者のＰＥＴおよびＳＰＥＣＴ画像を示しており、両方の放射性医薬品が高感度で乳がん腫瘍を検出することを示している。図５は、^１８Ｆ－ＦＤＧ（ＰＥＴ、対照放射性医薬品、腫瘍代謝検出のためのゴールドスタンダード）および^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰ（ＳＰＥＣＴ）の両方を投与された同じ肺がん患者（主に充実性パターンを有する低分化型肺腺癌）のＰＥＴおよびＳＰＥＣＴ画像を示しており、両方の放射性医薬品が高感度で肺腫瘍を検出することを示しているが、^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰの場合、高い取り込みは腫瘍微小環境におけるＦＡＰ発現の認識と関連している。これらの画像は、ＨＹＮＩＣヒドラジンに存在する窒素によって強化されたＦＡＰ活性阻害特性により、^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰが特異的な方法で腫瘍病変を検出できることを裏付け、主な証拠となる。

【0026】

結論として、^９９ｍＴｃ－ＨＹＮＩＣ－ｉＦＡＰは以下の特性で得られる：
－ ９８％を上回る放射化学的純度。
－ 核医学単一光子放出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）によって、線維芽細胞活性化タンパク質を発現する腫瘍の微小環境をインビボで特異的に検出する放射性医薬品の能力。
－ ｂｏｒｏｎＰｒｏ残基の分子認識に加えて、^９９ｍＴｃに基づいて特許対象となる放射性医薬品は、ＨＹＮＩＣ分子内のヒドラジン窒素の存在によって付与された親和性の増加によりＦＡＰ発現腫瘍微小環境を高感度で（低Ｋｉ値；Ｋｉ＝０．５３６）有意に捕捉し、検出する能力を有しており、これにより、ＳＰＥＣＴイメージングによる検出のためにＦＡＰ酵素の活性部位とドッキングして効率的に相互作用することが可能になる。

【0027】

本発明を十分に説明したので、次の条項の内容を新規として考慮し、したがって独占的な特徴として主張する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】