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7751773トリアゾール構造を含有するＧａｌＮＡｃ化合物、およびそのオリゴヌクレオチドコンジュゲート
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B1)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2025-09-30
(45)【発行日】2025-10-08
(54)【発明の名称】トリアゾール構造を含有するＧａｌＮＡｃ化合物、およびそのオリゴヌクレオチドコンジュゲート
(51)【国際特許分類】
C07H 15/04 20060101AFI20251001BHJP
A61K 47/54 20170101ALI20251001BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20251001BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20251001BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20251001BHJP
【ＦＩ】
C07H15/04 B CSP
A61K47/54
A61K48/00
A61K31/7105
A61P1/16
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2025094843
(22)【出願日】2025-06-06
【審査請求日】2025-06-06
(31)【優先権主張番号】202411117768.7
(32)【優先日】2024-08-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
【早期審査対象出願】
(73)【特許権者】
【識別番号】525219846
【氏名又は名称】ベイジン ユーカークチュアン ファーマシューティカル テクノロジー カンパニー，リミテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｙｏｕｃａｒｅｋｅｃｈｕａｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．
(74)【代理人】
【識別番号】110003694
【氏名又は名称】弁理士法人有我国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ホアン，ゼアオ
(72)【発明者】
【氏名】ソン，ゲンシェン
(72)【発明者】
【氏名】リー，ジェンミン
(72)【発明者】
【氏名】ワン，ジエ
(72)【発明者】
【氏名】シエ，ハオ
【審査官】岡部 佐知子
(56)【参考文献】
【文献】中国特許出願公開第１１８１４６２７７（ＣＮ，Ａ）
【文献】中国特許出願公開第１１６８５４７５４（ＣＮ，Ａ）
【文献】国際公開第２０２３／２０８０２３（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０２３－５４６３６９（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０２４－５３２２７１（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｈ
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
Ｃ１２Ｎ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）で示されるＧａｌＮＡｃ化合物、またはその医薬学的に許容される塩。【化1】
Ｌ１は、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－＊であり、＊端は、Ｇに連結され、
Ｌ２は、－（ＣＨ２）ｎ１－、または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ２ＣＨ２－であり、ここで、ｎ１およびｎ２は、１～７の整数であり、
Ｚ１は、－（ＣＨ２）ｎ３－であり、ここで、ｎ３は、１～７の整数であり、
Ｌ３は、－ＨＮＣ（Ｏ）－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、
ｎは、０であり、
Ｌ４は、－（ＣＨ２）ｎ４－であり、ここで、ｎ４は、０～７の整数であり、
Ａは、
【化2】
Ｂは、酸素、または硫黄であり、
Ｇは、
【化3】
ここで、
Ｘ１は、－（ＣＨ２）３－であり、
Ｘ２は、－ＨＮＣ（Ｏ）－＊＊であり、＊＊端は、Ｘ３に連結され、
Ｘ３は、－（ＣＨ２）ｂ－であり、ｂは、１～６の整数であり、
Ｘ４は、
【化4】
Ｙ１は、１であり、
Ｙ２は、１であり、
Ｙ３は、３であり、
Ｋは、炭素である。）
【請求項2】
前記式（Ｉ）で示されるＧａｌＮＡｃ化合物は、下記条件のうちの１つまたは複数を満たす、請求項１に記載の式（Ｉ）で示されるＧａｌＮＡｃ化合物、またはその医薬学的に許容される塩。（１）Ｌ２は、－（ＣＨ２）３－、－（ＣＨ２）４－、－（ＣＨ２）５－、－（ＣＨ２）６－、または－（ＣＨ２）７－である；
（２）Ｌ４は、無し、－（ＣＨ２）３－、－（ＣＨ２）４－、－（ＣＨ２）５－、－（ＣＨ２）６－、または－（ＣＨ２）７－である；
（３）Ｒ１は、水素、またはメトキシ基である；
（４）Ｒ２は、４，４'－ジメトキシトリチル基である；
（５）Ｂは、酸素である。
【請求項3】
Ｌ２は、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２－である、請求項１に記載の式（Ｉ）で示されるＧａｌＮＡｃ化合物、またはその医薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｇは、【化5】
【化6】
【化7】
【請求項5】
以下の構造を有する化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、ＹＫ－ＧＡＬ－４０３、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、またはＹＫ－ＧＡＬ－４０６であり、ここで、Ｅは、調整された多孔性ガラスである、請求項１に記載の式（Ｉ）で示されるＧａｌＮＡｃ化合物、またはその医薬学的に許容される塩。【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
【化12】
【化13】
【請求項6】
式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートまたはその医薬学的に許容される塩。【化14】
【化15】
【化16】
Ｒ２は、水素で、Ｒ３は、水素で、Ｌ１、Ｌ２、Ｚ１、Ｌ３、Ｌ４、ｎ、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、およびＫの定義は、請求項１に記載の通りであり、
前記オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、配列番号４６で示される配列を有し、アンチセンス鎖は、配列番号４７で示される配列を有する。）
【請求項7】
前記コンジュゲートは、オリゴヌクレオチドと請求項５に記載のＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、ＹＫ－ＧＡＬ－４０３、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、またはＹＫ－ＧＡＬ－４０６とをコンジュゲートしたものであり、前記オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、配列番号４６で示される配列を有し、前記オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、配列番号４７で示される配列を有する、請求項６に記載のコンジュゲートまたはその医薬学的に許容される塩。
【請求項8】
前記コンジュゲートは、以下のコンジュゲートのいずれかである、請求項６に記載のコンジュゲートまたはその医薬学的に許容される塩。【化17】
【化18】
【化19】
【化20】
【化21】
【化22】
【請求項9】
請求項６～８のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたはその医薬学的に許容される塩と、少なくとも１種の医薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項10】
請求項６～８のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたはその医薬学的に許容される塩を含むキット。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、生物医薬の分野に関し、具体的には、トリアゾール環構造を有するＧａｌＮＡｃ化合物、およびそれで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートに関する。
【背景技術】
【0002】
近年、低分子薬物および抗体薬物に続き、オリゴヌクレオチド薬物が徐々に新薬研究開発の第３波となりつつある。オリゴヌクレオチド薬物は、主に病原性タンパク質の上流ｍＲＮＡに結合し、遺伝子レベルで制御できるため、利用可能な薬物が存在しない緊急の臨床ニーズに対して治療の可能性を提供し、かつ、神経障害および心血管疾患の治療において巨大な潜在力を示している。
【0003】
低分子核酸薬物（オリゴヌクレオチド）は、その自身のユニークな特性により、従来の低分子薬物の代替品として徐々に発展しており、疾患関連タンパク質の機能を制御するために使用されている。オリゴヌクレオチドは、特定の疾患における遺伝子の発現をサイレンシングまたは活性化するために使用することができ、それによって特定のタンパク質の形成を防止または促進し、疾患を治療する役割を果たす。オリゴヌクレオチドには、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）、およびマイクロＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）が含まれるが、これらに限定されない。オリゴヌクレオチド薬物は、治療効果が比較的よく、技術的突破が得られたため、現在最も人気のある技術となり、世界中でいくつかの薬物の販売が承認されている。
【0004】
現在市販されているオリゴヌクレオチド薬物の送達システムには、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ：ＬｉｐｉｄＮａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）送達システムとＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）送達システムがあり、その中でＧａｌＮＡｃ送達システムが最も広く使用されている。ＧａｌＮＡｃは、肝細胞の表面に特異的に発現するエンドサイトーシス受容体であるＡＳＧＰＲ（アシアロ糖タンパク質受容体）に結合することができ、オリゴヌクレオチド薬物の肝臓を標的とした送達を実現することができる。したがって、ＧａｌＮＡｃの改良によりオリゴヌクレオチド薬物の送達効率を高めることができる。
【0005】
ガラクトース（Ｇａｌ）とＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ：Ｎ－ａｃｅｔｙｌｇａｌｇａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）は、肝表面のＡＳＧＰＲに結合できるリガンドである。ＧａｌＮＡｃのＡＳＧＰＲへの結合の親和性は、Ｇａｌよりも約５０高い。研究により、さまざまなアンテナ構造を有するＧａｌＮＡｃの親和性の順序は、４アンテナ＞３アンテナ＞＞２アンテナ＞＞１アンテナガラクトサミンであることがわかっている。近年、ＡＳＧＰＲの高親和性リガンドであるＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を標的分子として使用することにより、核酸薬物の肝臓を標的とした送達において一定の進歩が遂げられている。さまざまなＧａｌＮＡｃをｓｉＲＮＡやＡＳＯにコンジュゲートすることを実現でき、この技術を利用して、アミロイドーシス、血友病、高コレステロール血症、Ｂ型肝炎などの疾患を治療する薬物を開発している。
【0006】
ＧａｌＮＡｃ構造が異なれば、核酸送達効率も大きく異なる。補体阻害剤類の薬物などの肝臓標的薬の送達効率を高めるために、当該分野では、新たなＧａｌＮＡｃ化合物を開発する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明は、トリアゾール構造を含有する新規ＧａｌＮＡｃ化合物を提供し、ＧａｌＮＡｃ化合物のリンカーにトリアゾールを導入し、クリックケミストリー（ｃｌｉｃｋｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）の利点により、トリアゾール構造を含有する一連の新規ＧａｌＮＡｃ化合物をモジュール式に、簡単かつ迅速に構築することができる。ホスホロアミダイト固相合成法を用いてＧａｌＮＡｃリガンドをオリゴヌクレオチドの３'末端に結合する。従来技術と比較して、本発明のＧａｌＮＡｃ化合物は、オリゴヌクレオチドを肝臓に送達する効率が著しく向上しており、肝組織関連疾患を治療する薬物の開発に使用することができる。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明は、式（Ｉ）で示されるＧａｌＮＡｃ化合物、またはその医薬学的に許容される塩を提供する。
（ただし、Ｌ１は、－ＨＮＣ（Ｏ）－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、
Ｌ２は、－（ＣＨ２）ｎ１－、または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ２ＣＨ２－であり、ここで、ｎ１およびｎ２は、１～７の整数であり、
Ｚ１は、－（ＣＨ２）ｎ３－であり、ここで、ｎ３は、１～７の整数であり、
Ｌ３は、－ＨＮＣ（Ｏ）－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、
ｎは、０～１０の整数であり、
Ｌ４は、－（ＣＨ２）ｎ４－であり、ここで、ｎ４は、０～７の整数であり、
Ａは、
であり、Ｒ１は、水素、Ｃ１～６アルキル基、Ｃ１～６アルコキシ基、またはハロゲンであり、Ｒ２は、４，４'－ジメトキシトリチル基、モノメトキシトリチル基、トリチル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基、トリイソプロピルシリル基、またはイソプロピルジメチルシリル基であり、Ｒ３は、水素、ヒドロキシ保護基、リン含有反応性基、－ＣＯ（ＣＨ２）ｘＣＯＮＨ－Ｅ、または－ＣＯ（ＣＨ２）ｘＣＯＯＨであり、ここで、ｘは、１～１０の整数であり、Ｅは、調整された多孔性ガラス（ＣＰＧ）、またはポリスチレンであり、
Ｂは、酸素、または硫黄であり、
Ｇは、
であり、
ここで、
Ｘ１は、－（ＣＨ２）ａ－、または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａＣＨ２－であり、ａは、１～５の整数であり、
Ｘ２は、－ＨＮＣ（Ｏ）－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、
Ｘ３は、－（ＣＨ２）ｂ－であり、ｂは、１～６の整数であり、
Ｘ４は、
であり、ここで、ｃ、ｄは、０～５の整数であり、
Ｙ１は、０、または１であり、
Ｙ２は、０、または１であり、
Ｙ３は、１、２、または３であり、
Ｙ３が１である場合、Ｋは、ＣＨ２であり、Ｙ３が２である場合、Ｋは、ＣＨであり、Ｙ３が３である場合、Ｋは、炭素である。）
【化1】
Ｌ２は、－（ＣＨ２）ｎ１－、または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ２ＣＨ２－であり、ここで、ｎ１およびｎ２は、１～７の整数であり、
Ｚ１は、－（ＣＨ２）ｎ３－であり、ここで、ｎ３は、１～７の整数であり、
Ｌ３は、－ＨＮＣ（Ｏ）－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、
ｎは、０～１０の整数であり、
Ｌ４は、－（ＣＨ２）ｎ４－であり、ここで、ｎ４は、０～７の整数であり、
Ａは、
【化2】
Ｂは、酸素、または硫黄であり、
Ｇは、
【化3】
ここで、
Ｘ１は、－（ＣＨ２）ａ－、または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ａＣＨ２－であり、ａは、１～５の整数であり、
Ｘ２は、－ＨＮＣ（Ｏ）－、または－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、
Ｘ３は、－（ＣＨ２）ｂ－であり、ｂは、１～６の整数であり、
Ｘ４は、
【化4】
Ｙ１は、０、または１であり、
Ｙ２は、０、または１であり、
Ｙ３は、１、２、または３であり、
Ｙ３が１である場合、Ｋは、ＣＨ２であり、Ｙ３が２である場合、Ｋは、ＣＨであり、Ｙ３が３である場合、Ｋは、炭素である。）
【0009】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｌ１は、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－＊であり、＊端は、Ｇに連結される。
【0010】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｌ２は、－（ＣＨ２）３－、－（ＣＨ２）４－、－（ＣＨ２）５－、－（ＣＨ２）６－、－（ＣＨ２）７－、または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２－である。
【0011】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｌ２は、－（ＣＨ２）５－、または－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２－である。
【0012】
本発明のいくつかの実施態様では、ｎは、０である。
【0013】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｌ４は、無し、－（ＣＨ２）３－、－（ＣＨ２）４－、－（ＣＨ２）５－、－（ＣＨ２）６－、または－（ＣＨ２）７－である。
【0014】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｌ４は、無し、－（ＣＨ２）３－、または－（ＣＨ２）５－である。
【0015】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｒ１は、水素、またはメトキシ基である。
【0016】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｒ２は、４，４'－ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）である。
【0017】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｒ３は、－ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯＮＨ－Ｅであり、Ｅは、調整された多孔性ガラスである。
【0018】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｂは、酸素である。
【0019】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ１は、－（ＣＨ２）３－である。
【0020】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ２は、－ＨＮＣ（Ｏ）－＊＊であり、＊＊端は、Ｘ３に連結される。
【0021】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ３は、－（ＣＨ２）２－、－（ＣＨ２）４－、または－（ＣＨ２）５－である。
【0022】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｘ４は、
であり、＊＊＊端は、Ｘ３に連結される。
【化5】
【0023】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｙ１は、１である。
【0024】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｙ２は、１である。
【0025】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｙ３は、３であり、Ｋは、炭素である。
【0026】
本発明のいくつかの実施態様では、Ａは、
または
であり、Ｅは、調整された多孔性ガラスである。
【化6】
【化7】
【0027】
本発明のいくつかの実施態様では、Ｇは、以下のものである。
または
【化8】
【化9】
【化10】
【0028】
本発明のいくつかの実施態様では、前記式（Ｉ）で示される化合物は、式（ＩＡ）で示される構造を有する。
（ただし、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ４、Ｂ、Ａ、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｙ１、およびＹ２の定義は、前記の通りである。）
【化11】
【0029】
本発明のいくつかの実施態様では、前記式（Ｉ）で示される化合物、またはその医薬学的に許容される塩は、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に結合可能である。
【0030】
本発明のいくつかの実施態様では、前記式（Ｉ）で示される化合物は、以下の化合物のいずれかである。
または
【化12】
【化13】
【化14】
【化15】
【化16】
【化17】
【0031】
本発明はまた、式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートまたはその医薬学的に許容される塩を提供する。
または
（ただし、Ｏｌｉｇｏオリゴヌクレオチドを表し、Ｘは、ヒドロキシ基、またはメルカプト基を表し、Ｇ１は、
であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｚ１、Ｌ３、Ｌ４、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、およびＫの定義は、前記の通りである。）
当業者により理解されるように、前記式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートにおいて、構造単位
は、固相合成中に前記オリゴヌクレオチドがモノマーによって５員糖環（すなわち、
または
）におけるヒドロキシ基に連結してから形成されたものである。
【化18】
【化19】
【化20】
Ｌ１、Ｌ２、Ｚ１、Ｌ３、Ｌ４、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、およびＫの定義は、前記の通りである。）
当業者により理解されるように、前記式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートにおいて、構造単位
【化21】
【化22】
【化23】
【0032】
前記式（ＩＩＡ）で示されるコンジュゲートにおいて、Ｒ３は、水素が好ましい。
【0033】
前記式（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートにおいて、Ｒ２は、水素が好ましい。
【0034】
本発明のいくつかの実施態様では、前記オリゴヌクレオチドは、低分子干渉ヌクレオチド（ｓｉＲＮＡ）、ＤＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）、低分子ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ：ｓｍａｌｌｇｕｉｄｅＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、およびアプタマ（Ａｐｔａｍｅｒ）からなる群から選択されるいずれか１つまたは少なくとも２つの組み合わせ、好ましくは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、または低分子干渉ヌクレオチド（ｓｉＲＮＡ）である。
【0035】
本発明のいくつかの実施態様では、前記アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）または低分子干渉ヌクレオチド（ｓｉＲＮＡ）のうちのそれぞれのヌクレオチドは、それぞれ独立して、修飾または未修飾ヌクレオチドである。
【0036】
本発明のいくつかの実施態様では、前記オリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を調節する。
【0037】
本発明のいくつかの実施態様では、前記オリゴヌクレオチドは、二本鎖ＲＮＡｉ剤である。
【0038】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤は、ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する二本鎖ＲＮＡｉ剤である。
【0039】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも１つのヌクレオチドである３'オーバーハングを含む。
【0040】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも２つのヌクレオチドである３'オーバーハングを含む。
【0041】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の二本鎖領域は、１５～３０対のヌクレオチドの長さ分である。
【0042】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の二本鎖領域は、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０対のヌクレオチドの長さ分である。
【0043】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の二本鎖領域は、１７～２５対のヌクレオチドの長さ分である。
【0044】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の二本鎖領域は、１９～２３対のヌクレオチドの長さ分である。
【0045】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の二本鎖領域は、２１対のヌクレオチドの長さ分である。
【0046】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の各鎖は、１５～３０個のヌクレオチドを有する。
【0047】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のセンス鎖および／またはアンチセンス鎖のヌクレオチドの数は、それぞれ、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、および３０から選択されるいずれかである。
【0048】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の各鎖は、１９～２５個のヌクレオチドを有する。
【0049】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、２１個のヌクレオチドを有し、アンチセンス鎖は、２３個のヌクレオチドを有する。
【0050】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤は、下記の表に示される無修飾センス鎖と無修飾アンチセンス鎖とが対合してなるオリゴヌクレオチド二本鎖体からなる群から選択されるいずれか１つまたは少なくとも２つの組み合わせを含む（配列は、ＣＮ１１７２１０４６８Ａの明細書の表８に記載されている）。
【表1】
【0051】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列番号１～１２の配列のいずれかに比べて１～３個のヌクレオチドの置き換え、追加、または削除を有する。
【0052】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、配列番号１３～２４の配列の何れかに比べて１～３個のヌクレオチドの置き換え、追加、または削除を有する。
【0053】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、前記修飾ヌクレオチドは、デオキシヌクレオチド、３'－末端デオキシ－チミン（ｄＴ）ヌクレオチド、２'－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、２'－フルオロ修飾ヌクレオチド、２'－デオキシ－修飾ヌクレオチド、ロックヌクレオチド、アンロックヌクレオチド、配座固定ヌクレオチド、拘束エチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２'－アミノ－修飾ヌクレオチド、２'－Ｏ－アリル－修飾ヌクレオチド、２'－Ｃ－アルキル－修飾ヌクレオチド、２'－ヒドロキシ－修飾ヌクレオチド、２'－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２'－Ｏ－アルキル－修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミダイト、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン修飾ヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトール修飾ヌクレオチド、シクロヘキセニル修飾ヌクレオチド、ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５'－ホスフェートを含むヌクレオチド、および５'－ホスフェート模倣体を含むヌクレオチドからなる群から選択されるいずれか１つまたは少なくとも２つの組み合わせを含む。
【0054】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖のヌクレオチド修飾形態は、ヌクレオチドリボースの２'位の化学修飾である。
【0055】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のヌクレオチドリボースの２'位の化学修飾は、２'－メトキシ修飾、２'－Ｏ－メトキシエチル修飾、２'－フルオロ修飾、２'－ベンジルオキシ修飾、２'－メチルカルボニルアミノ修飾、および２'－ピリジンメトキシ修飾からなる群から選択されるいずれか１つまたは少なくとも２つの組み合わせである。
【0056】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の各ヌクレオチドリボースの２'位の化学修飾は、２'－メトキシ基と２'－フルオロとの組み合わせから選択される。
【0057】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の各ヌクレオチドリボースの２'位の化学修飾形態は、センス鎖の奇数位をすべて２'－フルオロ修飾、かつ、偶数位をすべて２'－メトキシ修飾にし、アンチセンス鎖の奇数位をすべて２'－メトキシ修飾、かつ、偶数位をすべて２'－フルオロ修飾にすることである。
【0058】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のヌクレオチドモノマー同士は、３'，５'－ホスホジエステル結合を介して連結される。
【0059】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のヌクレオチドモノマー同士は、チオ修飾３'，５'－ホスホジエステル結合を介して連結される。
【0060】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤は、以下の修飾を有する。
【0061】
アンチセンス鎖は、以下修飾形態Ａ、Ｂ、Ｃのうちのいずれかを有し、
センス鎖は、以下の修飾形態ａ、ｂのうちのいずれかを有し、
表において、２'－ＯＭｅは、２'－メトキシ基であり、２'－Ｆは、２'－フルオロであり、ＰＳは、チオリン酸骨格である。
【表2】
【表3】
【0062】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、以下（Ｉ）～（Ｘ）修飾形態のうちのいずれかを有する。
（Ｉ）５'－３'方向において、第２位、第３位、第４位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、第７位は、ＧＮＡ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＩＩ）５'－３'方向において、第２位、第３位、第４位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＩＩＩ）５'－３'方向において、第２位、第３位、第４位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。第１位は、５'－トランスビニルリン酸ヌクレオチドである。
（ＩＶ）５'－３'方向において、第２位、第４位、第５位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、第７位は、ＧＮＡ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。第１位は、５'－トランスビニルリン酸ヌクレオチドである。
（Ｖ）５'－３'方向において、第２位、第４位、第５位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＶＩ）５'－３'方向において、第２位、第４位、第５位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。第１位は、５'－トランスビニルリン酸ヌクレオチドである。
（ＶＩＩ）５'－３'方向において、第２位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、第７位は、ＧＮＡ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＶＩＩＩ）５'－３'方向において、第２位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＩＸ）５'－３'方向において、第２位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。第１位は、５'－トランスビニルリン酸ヌクレオチドである。
（Ｘ）５'－３'方向において、第２、第４位、第５位、第６位、第８位、第１０位、第１２位、第１４位、第１６位、第１８位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（Ｉ）５'－３'方向において、第２位、第３位、第４位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、第７位は、ＧＮＡ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＩＩ）５'－３'方向において、第２位、第３位、第４位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＩＩＩ）５'－３'方向において、第２位、第３位、第４位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。第１位は、５'－トランスビニルリン酸ヌクレオチドである。
（ＩＶ）５'－３'方向において、第２位、第４位、第５位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、第７位は、ＧＮＡ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。第１位は、５'－トランスビニルリン酸ヌクレオチドである。
（Ｖ）５'－３'方向において、第２位、第４位、第５位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＶＩ）５'－３'方向において、第２位、第４位、第５位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。第１位は、５'－トランスビニルリン酸ヌクレオチドである。
（ＶＩＩ）５'－３'方向において、第２位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、第７位は、ＧＮＡ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＶＩＩＩ）５'－３'方向において、第２位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（ＩＸ）５'－３'方向において、第２位、第６位、第１４位、第１６位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。第１位は、５'－トランスビニルリン酸ヌクレオチドである。
（Ｘ）５'－３'方向において、第２、第４位、第５位、第６位、第８位、第１０位、第１２位、第１４位、第１６位、第１８位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士、最後から第１位と第２位のヌクレオチド同士、最後から第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
【0063】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、以下の（１）～（３）修飾形態のうちのいずれかを有する。
（１）５'－３'方向において、第７位、第９位、第１０位、第１１位、第１７位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（２）５'－３'方向において、第７位、第９位、第１１位、第１７位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（３）５'－３'方向において、第７位、第９位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結され、第１１位は、チミンヌクレオシドである。
（１）５'－３'方向において、第７位、第９位、第１０位、第１１位、第１７位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（２）５'－３'方向において、第７位、第９位、第１１位、第１７位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結される。
（３）５'－３'方向において、第７位、第９位は、すべて２'位フルオロ修飾であり、残りの位は、すべて２'位メトキシ修飾であり、第１位と第２位のヌクレオチド同士、第２位と第３位のヌクレオチド同士は、すべてチオホスフェート結合を介して連結され、第１１位は、チミンヌクレオシドである。
【0064】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤は、以下の修飾のうちのいずれかを有する。
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ａを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ａを有し、
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ｂを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ａを有し、
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ｃを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ａを有し、
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ｂを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ｂを有し、
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ｃを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ｂを有する。
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ａを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ａを有し、
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ｂを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ａを有し、
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ｃを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ａを有し、
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ｂを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ｂを有し、
アンチセンス鎖は、上記の修飾形態Ｃを有し、センス鎖は、上記の修飾形態ｂを有する。
【0065】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、５'末端からの第２位～第８位において修飾基を有し、前記修飾基は、ＵＮＡ、ＧＮＡ、またはＤＮＡであり、ＵＮＡ、およびＧＮＡの構造は、以下の通りである。
（塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、またはウラシルである。）
【化24】
【0066】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤における修飾アンチセンス鎖の５'末端ヌクレオチドのグリコシドの５'位炭素原子のリン酸化は、以下の５'位リン酸化基：５'－ビニルホスホネート基（５'－Ｅ－ＶＰ）、５'－メチルホスホネート基（５'－ＭＰ）、５'－Ｃ－メチルホスフェート基、５'－チオホスフェート基（５'－ＰＳ）、および５'－ホスフェート基（５'－Ｐ）を含むが、これらに限定されず、これらの構造は、以下に示される。
（ただし、Ｒは、水素、ヒドロキシ基、アミン基、Ｃ１～４アルキル基、芳香族基、Ｃ１～４アルコキシ基、Ｃ１～４アルキルカルボニルアミノ基、またはハロゲンであり、
塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミンまたはウラシルである。）
【化25】
塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミンまたはウラシルである。）
【0067】
本発明のいくつかの実施態様では、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤は、下記の表に示される修飾のセンス鎖と修飾のアンチセンス鎖とが対合してなるオリゴヌクレオチド二本鎖体のいずれかを含む（配列は、ＣＮ１１７２１０４６８Ａの明細書の表３８に記載されている）。
【表4】
【0068】
本発明のいくつかの実施態様では、前記式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートは、二本鎖ＲＮＡｉ剤と、前記ＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、ＹＫ－ＧＡＬ－４０３、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、またはＹＫ－ＧＡＬ－４０６とをコンジュゲートしたものであり、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤は、以下のセンス鎖とアンチセンス鎖とが対合してなるオリゴヌクレオチド二本鎖体のいずれかを含む。
（１）前記センス鎖は、配列番号２９で示される配列を有し、また、前記アンチセンス鎖は、配列番号４１で示される配列を有し、
（２）前記センス鎖は、配列番号３０で示される配列を有し、また、前記アンチセンス鎖は、配列番号４２で示される配列を有し、
（３）前記センス鎖は、配列番号３０で示される配列を有し、また、前記アンチセンス鎖は、配列番号４１で示される配列を有する。
（１）前記センス鎖は、配列番号２９で示される配列を有し、また、前記アンチセンス鎖は、配列番号４１で示される配列を有し、
（２）前記センス鎖は、配列番号３０で示される配列を有し、また、前記アンチセンス鎖は、配列番号４２で示される配列を有し、
（３）前記センス鎖は、配列番号３０で示される配列を有し、また、前記アンチセンス鎖は、配列番号４１で示される配列を有する。
【0069】
本発明のいくつかの実施態様では、前記コンジュゲートは、二本鎖ＲＮＡｉ剤と、前記ＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、ＹＫ－ＧＡＬ－４０３、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、またはＹＫ－ＧＡＬ－４０６とをコンジュゲートしたものであり、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤は、配列番号３０で示されるセンス鎖と配列番号４１で示されるアンチセンス鎖とが対合してなるオリゴヌクレオチド二本鎖体を含む。
【0070】
本発明のいくつかの実施態様では、前記式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートは、二本鎖ＲＮＡｉ剤と、前記ＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、ＹＫ－ＧＡＬ－４０３、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、またはＹＫ－ＧＡＬ－４０６とをコンジュゲートしたものであり、前記二本鎖ＲＮＡｉ剤の配列は、以下の通りである。
センス鎖：５'－Ｃｍｓ－Ｕｍｓ－Ａｍ－Ｇｍ－Ａｍ－Ｃｍ－Ｃｆ－Ｕｍ－Ｇｆ－Ｕｍ－ｄＴ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｇｍ－Ｃｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｇｍ－Ｕｍ－３'（配列番号４６）
アンチセンス鎖：５'－Ａｍｓ－Ｃｆｓ－Ａｍ－Ａｆ－Ａｆ－Ａｆ－Ｇｍ－Ｃｆ－Ａｍ－Ａｆ－Ａｍ－Ａｆ－Ｃｍ－Ａｆ－Ｇｍ－Ｇｆ－Ｕｍ－Ｃｆ－Ｕｍ－Ａｍ－Ｇｍｓ－Ａｍｓ－Ａｍ－３'（配列番号４７）
センス鎖：５'－Ｃｍｓ－Ｕｍｓ－Ａｍ－Ｇｍ－Ａｍ－Ｃｍ－Ｃｆ－Ｕｍ－Ｇｆ－Ｕｍ－ｄＴ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｇｍ－Ｃｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｇｍ－Ｕｍ－３'（配列番号４６）
アンチセンス鎖：５'－Ａｍｓ－Ｃｆｓ－Ａｍ－Ａｆ－Ａｆ－Ａｆ－Ｇｍ－Ｃｆ－Ａｍ－Ａｆ－Ａｍ－Ａｆ－Ｃｍ－Ａｆ－Ｇｍ－Ｇｆ－Ｕｍ－Ｃｆ－Ｕｍ－Ａｍ－Ｇｍｓ－Ａｍｓ－Ａｍ－３'（配列番号４７）
【0071】
本発明のいくつかの実施態様では、前記式（ＩＩＡ）で示されるコンジュゲートは、以下のコンジュゲートのいずれかである。
または
（ただし、ｓｉＲＮＡのセンス鎖は、配列番号４６で示される配列を有し、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、配列番号４７で示される配列を有する。）
【化26】
【化27】
【化28】
【化29】
【化30】
【化31】
【0072】
本発明はまた、前記式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートと、少なくとも１種の医薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。
【0073】
本発明はまた、肝細胞における特定の遺伝子の発現によって引き起こされる病理学的状態または疾患を治療および／または予防する薬物の調製における、前記式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートまたは前記医薬組成物の使用を提供する。
【0074】
本発明のいくつかの実施態様では、前記肝細胞における特定の遺伝子の発現によって引き起こされる疾患は、慢性肝疾患、肝炎、肝線維症、肝増殖性疾患、脂質異常症、および補体関連疾患から選択される。
【0075】
本発明はまた、肝細胞における特定遺伝子の発現を阻害する方法であって、前記式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）で示されるコンジュゲートの有効量を前記肝細胞と接触させることを含む、方法を提供する。
【0076】
本発明は、前記式（ＩＩＡ）または（ＩＩＢ）に記載のコンジュゲートを含むキットを提供する。
【0077】
本発明で記載されているすべての出版物および特許は、その全体が引用により本発明に組み込まれている。引用により組み込まれた刊行物および特許のいずれかで使用される用途または用語が、本発明で使用される用途または用語と矛盾する場合は、本発明の用途および用語が優先される。
【0078】
本明細書で使用されているセクションの見出しは、文章を構成する目的のみであり、前記主題を限定するものとして解釈されるべきではない。
【0079】
別途規定されていない限り、本明細書で使用されているすべての技術用語および科学用語は、請求された主題が属する分野における共通の意味を持つ。ある用語に複数の定義がある場合、本明細書における定義が優先される。
【0080】
実施例以外、または別途指摘されている場合を除いて、明細書および特許請求の範囲において、投与量などの定量的特性を示すすべての数値は、すべての場合において「約」という用語によって修飾されているものと理解されるものとする。また、本明細書で記載される数値範囲は、その範囲内のすべてのサブ範囲、およびその範囲またはサブ範囲のさまざまなエンドポイントの任意の組み合わせを含むことを意図していることも理解される。
【0081】
本発明で使用されている「備える」、「含有する」または「含む」などの単語は、その単語の前の要素が、その単語の後に記載された要素およびそれらの同等物を含むことを意味し、記載されていない要素を排除するものではない。本明細書で使用されている「含有する」または「備える（含む）」という用語は、オープン、セミクローズ、またはクローズドでっあてもよい。言い換えれば、前記用語には「本質的に...からなる」または「...からなる」も含まれる。
【0082】
本発明において、「ヒドロキシ保護基」とは、ＲＮＡまたはその誘導体の合成においてリボース構造のヒドロキシを保護するために通常用いられる保護基を指し、例えば、アセチル基、フェノキシアセチル基、ピバロイル基、ベンジル基、４－メトキシベンジル基、ベンゾイル基、トリフェニルメチル基、４，４'－ジメトキシトリチル基（ＤＭｒ：４，４'－ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）、モノメトキシトリチル基（ＭＭＴｒ：ｍｏｎｏｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）、９－フェニル－キサンテン－９－イル（９－ｐｈｅｎｙｌｘａｎｔｈｅｎ－９－ｙｌ）、９－（ｐ－トリル）－キサンテン－９－イル（９－（ｐ－ｔｏｌｙｌ）－ｘａｎｔｈｅｎ－９－ｙｌ）、トリメチルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基（ＴＢＤＭＳ）、シアノメトキシメチル基、２－（シアノエトキシ）エチル基、シアノエトキシメチル基など、好ましくは４，４'－ジメトキシトリチル基である。
【0083】
本発明において、「リン含有反応性基」とは、他の分子、特に他のヌクレオチド単位または他のヌクレオチド類似体に含まれるヒドロキシ基、またはアミン基と求核攻撃反応により反応することができるリン含有基を指す。通常、このような反応により、ヌクレオチド単位またはヌクレオチド類似体単位を別のヌクレオチド単位またはヌクレオチド類似体単位に連結するエステル型ヌクレオシド間結合が生成される。これらのリン含有反応性基は、当該技術分野で知られており、ＰＩＩＩまたはＰＶ価数のリン原子を含み、前記リン含有反応性基は、ホスホロアミダイト、Ｈ－ホスホネート、リン酸トリエステル、およびリン含有キラル助剤、例えば、
を含むが、これらに限定されない。
【化32】
【0084】
本発明において、調整された多孔性ガラス（ＣＰＧ）、およびポリスチレン（高度に架橋されたポリスチレンマイクロビーズ）は、オリゴヌクレオチド合成用の固体担体であり、合成プロセス中にオリゴヌクレオチドに結合する不溶性粒子であり、市販から入手可能なものである。
【0085】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指す。
【0086】
「アルキル基」という用語は、指定された数の炭素原子（例えば、Ｃ１～Ｃ６）を有する直鎖または分岐鎖のアルキル基を指す。アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基、ｎ－ヘプチル基、ｎ－オクチル基などが含まれるが、これらに限定されない。
【0087】
「アルコキシ基」という用語は、ＲＸ－Ｏ－基を指し、ここで、ＲＸは、上記で定義したアルキル基である。
【0088】
「医薬学的に許容される塩」という用語は、化合物を医薬学的に許容される（比較的無毒で、安全で、患者による使用に適している）酸または塩基と反応させることによって得られる塩を指す。化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、適切な不活性溶媒中で化合物の遊離形態を十分な量の医薬学的に許容される塩基と接触させることによって塩基付加塩を得ることができる。医薬学的に許容される塩基付加塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルミニウム塩、マグネシウム塩、ビスマス塩、アンモニウム塩などが含まれるが、これらに限定されない。化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、適切な不活性溶媒中で化合物の遊離形態を十分な量の医薬学的に許容される酸と接触させることによって酸付加塩を得ることができる。医薬学的に許容される酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩などが含まれるが、これらに限定されない。
【0089】
本発明において、「医薬学的に許容される賦形剤」とは、医薬製剤中に含まれる有効成分以外の全ての物質を指す。
【0090】
「治療」という用語は、次のいずれかを指す。（１）疾患の１つまたは複数の生物学的症状を緩和すること、（２）疾患につながる生物学的カスケードの１つまたは複数のポイントに干渉すること、（３）疾患の１つまたは複数の生物学的症状の進行を遅らせること。
【0091】
「予防」という用語は、疾患発生のリスクを軽減することを指す。
【0092】
本発明におけるオリゴヌクレオチドには、一本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドで、簡単にＡＳＯと呼ばれる）、および二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、低分子干渉ヌクレオチドで、簡単にｓｉＲＮＡと呼ばれる）が含まれる。
【0093】
本発明におけるオリゴヌクレオチドには、天然オリゴヌクレオチドおよび化学的に修飾されたオリゴヌクレオチドが含まれる。ここでの化学修飾には、ヌクレオシド修飾（糖部分の修飾および核酸塩基の修飾を含む）、およびヌクレオシド間の結合修飾が含まれる。オリゴヌクレオチドの化学修飾には、核酸塩基配列のみが異なる場合は含まれない。ここでの「天然」とは、天然に存在するＲＮＡまたはＤＮＡに対応する状況を指す。
【0094】
当該技術分野における常識に従えば、上記の好ましい条件を任意に組み合わせて、本発明の各実施例を得ることができる。
【0095】
本発明で使用されている試薬および原料はいずれも市販から入手できる。
【0096】
本発明の積極的かつ進歩的な効果は以下の通りである：本発明は、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して化学構造が完全に異なる一連の新規ＧａｌＮＡｃ化合物を設計することである。本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物は、連結アームにトリアゾール構造を導入しており、クリックケミストリーの利点により、トリアゾール構造を含有する一連の新規ＧａｌＮＡｃ化合物を迅速に構築することができる。本発明のＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、肝臓を標的とした効率的な送達を実現することができ、従来技術の代表的なＧａｌＮＡｃ化合物と比較してその活性は顕著に向上する。
【0097】
１．本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が顕著に向上する。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による７日目の阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２による７日目の阻害率よりも２１．５％、１４．５％、および１２．７％向上し、１４日目の阻害率は、それぞれ１７．３％、１０．４％、および１０．８％向上する。
【0098】
１）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡでは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率に顕著な差があり、ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による阻害率は、ＹＫ－Ｇａｌ－４０４～４０６による阻害率よりも顕著に高かった。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による阻害率よりも２０．７％、および１６．０％向上した。
【0099】
２）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が顕著に向上する。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による阻害率よりも２１．５％、および１７．３％向上する。
【0100】
３）構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物とｓｉＲＮＡとのコンジュゲートでは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率に顕著な差がある。したがって、化学構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物であれば、オリゴヌクレオチド送達効率が必ずしも近いわけではなく、それらで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が一致しておらず、非常に大きな差がある可能性もある。
【0101】
２．本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が顕著に向上する。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、およびｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂによる阻害率よりも２１．１％および９．８％向上し、顕著な向上が見られた。
【0102】
１）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡでは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率に顕著な差があり、ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による阻害率は、ＹＫ－Ｇａｌ－４０４～ＹＫ－Ｇａｌ－４０６による阻害率よりも顕著に向上する。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による阻害率よりも１９．４％向上する。
【0103】
２）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３は、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対するそれがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡによる阻害率が顕著に向上する。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による阻害率よりも２１．１％向上する。
【0104】
３）構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物とｓｉＲＮＡとのコンジュゲートでは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率に顕著な差がある。したがって、化学構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物であれば、オリゴヌクレオチド送達効率が必ずしも近いわけではなく、それらで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が一致しておらず、非常に大きな差がある可能性もある。
【0105】
３．本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルが顕著に向上する。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１群では、マウスの１４日目のＬＤＬ－Ｃ低下レベルは、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびＮＡＧ００５２群よりも、３６．４％、２０．６％、および１７．８％向上し、顕著な向上が見られた。
【0106】
１）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡでは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃレベルの低下には顕著な差があり、ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による低下レベルは、ＹＫ－Ｇａｌ－４０４～４０６よりも顕著に高かった。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による低下レベルは、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による低下レベルよりも３３．０％、および３６．０％向上し、顕著な向上が見られた。
【0107】
２）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルが顕著に向上する。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による低下レベルは、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による低下レベルよりも３３．４％、および３６．４％向上する。
【0108】
３）構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物とｓｉＲＮＡとのコンジュゲートでは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルに顕著な差がある。したがって、化学構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物であれば、オリゴヌクレオチド送達効率が必ずしも近いわけではなく、それらで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が一致しておらず、非常に大きな差がある可能性もある。
【0109】
４．本発明により設計される化合物は、オリゴヌクレオチドを肝臓に効率的に送達することができる。
【0110】
例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３群において、４時間で肝臓蛍光強度は、それぞれ、９．０３Ｅ＋０９、８．７９Ｅ＋０９、および８．９２Ｅ＋０９に達し、８時間でそれぞれ、９．１１Ｅ＋０９、８．９５Ｅ＋０９、および９．０１Ｅ＋０９に達し、これは、本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物がオリゴヌクレオチドを動物の肝臓に効率的に送達できることを示している。
【図面の簡単な説明】
【0111】
【図1】各試験薬群（ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２）の投与７日後および１４日後のマウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率である。
【図2】各試験薬群（ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２）の投与１４日後のマウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率である。
【図3】各試験薬群（ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２）の投与７日後および１４日後のマウスの血清中のＬＤＬ－Ｃの低下レベルである。
【図4】各試験薬群（ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２）の投与４時間および８時間後の、マウスの肝臓および腎臓における蛍光強度である。
【発明を実施するための形態】
【0112】
本発明の実施例の目的、技術的解決手段および利点をより明確にするために、本発明の実施例の技術的解決手段を以下に明確かつ完全に説明する。明らかに、説明される実施例は、本発明の実施例のすべてではなく、実施例の一部にすぎない。説明される本発明の実施例に基づいて、当業者が創造的な努力を払わずに得た他のすべての実施例は、本発明の保護範囲内である。
【0113】
本発明は、その本質的な属性から逸脱することなく、他の特定の形態で実施されてもよい。矛盾がない場合、本発明のいずれかおよびあらゆる実施態様は、他の実施態様のいずれかまたは複数の他の実施態様の技術的特徴と組み合わせて、追加の実施態様を得ることができることを理解すべきである。本発明は、このような組み合わせから得られる追加の実施態様も含む。
【0114】
以下、実施例を参照して本発明をさらに説明する。ただし、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。実施例で使用される実施条件は、特定の用途の異なる要件に応じてさらに調整することができ、明記されていない実施条件は、業界で通常の条件である。本発明の特定の実施例において、使用される原料は、商業的に入手可能である。特に記載がない限り、温度はすべて摂氏で示される。本発明の様々な実施形態に含まれる技術的特徴は、互いに矛盾しない限り、互いに組み合わせることができる。
【0115】
以下の略語は、それぞれ以下の試薬を表す。ＤＣＭ：ジクロロメタン、ＰＥ：石油エテール、ＥＡ：酢酸エチル、ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、ＡＣＮ：アセトニトリル、ＫＯＨ：水酸化カリウム、ＤＣＥ：１，２－ジクロロエタン、ＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ：ｐ－トルエンスルホン酸一水和物、ＥＤＣＩ：１－エチル－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、ＴＨＰＴＡ：トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン、ＶＣＮａ：アスコルビン酸ナトリウム、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、ＴＥＡＢ：トリエチルアミン重炭酸アンモニウム水溶液、ＨＢＴＵ：Ｏ－ベンゾトリアゾリル－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン、ＴＭＳＯＴｆ：トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル、Ｐｙ：ピリジン、Ａｃ２Ｏ：無水酢酸、ＣＰＧ－ＮＨ２：アミノ修飾さらた調整された多孔性ガラス（ＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＰｏｒｅＧｌａｓｓ）（薬明康徳社製）。
【0116】
実施例１：ＧａｌＮＡｃ化合物の合成
１．ＹＫ－ＧＡＬ－４０１の合成
合成スキームは、以下の通りである。
１．ＹＫ－ＧＡＬ－４０１の合成
合成スキームは、以下の通りである。
【化33】
【化34】
【0117】
ステップ１：Ｇ１－２の合成
化合物Ｇ１－１（５．０ｇ、２２．６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を無水ＤＭＦ（６０．０ｍＬ）に溶解し、０℃で撹拌した。次いで、プロパルギルブロマイド（４０．３ｇ、２７１ｍｍｏｌ、２９．２ｍＬ、１２．０ｅｑ）を加え、細かく研磨したＫＯＨ（１５．２ｇ、２７１ｍｍｏｌ、１２．０ｅｑ）を１５分間かけて反応液にバッチ式で加えた。３５℃に昇温して２４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液に酢酸エチル（３００ｍＬ）を加え、水（５０ｍＬ×３）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムで精製し（石油エーテル／酢酸エチル）、黄色油状物Ｇ１－２（５．３０ｇ、１５．８ｍｍｏｌ、６９．９％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：３３４．２；１ＨＮＭＲ：δｐｐｍ４．９０（ｓ，１Ｈ），４．１４（ｄ，Ｊ＝２．４，６Ｈ），３．７７（ｓ，６Ｈ），２．４３－２．４１（ｍ，３Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ）。
化合物Ｇ１－１（５．０ｇ、２２．６ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を無水ＤＭＦ（６０．０ｍＬ）に溶解し、０℃で撹拌した。次いで、プロパルギルブロマイド（４０．３ｇ、２７１ｍｍｏｌ、２９．２ｍＬ、１２．０ｅｑ）を加え、細かく研磨したＫＯＨ（１５．２ｇ、２７１ｍｍｏｌ、１２．０ｅｑ）を１５分間かけて反応液にバッチ式で加えた。３５℃に昇温して２４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液に酢酸エチル（３００ｍＬ）を加え、水（５０ｍＬ×３）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムで精製し（石油エーテル／酢酸エチル）、黄色油状物Ｇ１－２（５．３０ｇ、１５．８ｍｍｏｌ、６９．９％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：３３４．２；１ＨＮＭＲ：δｐｐｍ４．９０（ｓ，１Ｈ），４．１４（ｄ，Ｊ＝２．４，６Ｈ），３．７７（ｓ，６Ｈ），２．４３－２．４１（ｍ，３Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ）。
【0118】
ステップ２：Ｇ１－４の合成
化合物Ｇ１－３（２２．３ｇ、５７．３ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）をＤＣＥ（２００ｍＬ）に溶解し、３A分子篩（２０．０ｇ）を加え、０℃に降温した。次に、ＴＭＳＯＴｆ（２１．２ｇ、９５．６ｍｍｏｌ、１７．３ｍＬ、２．０ｅｑ）、および３－（ベンジルオキシカルボニルアミノ）－１－プロパノール（１０．０ｇ、４７．８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を０℃で順に加えた。１５℃に昇温して、撹拌を１０ｍｉｎ持続した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液に飽和重炭酸ナトリウム溶液（２００ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（２００ｍＬ×３）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムで精製し（石油エーテル／酢酸エチル）、白色固体Ｇ１－４（１３．４ｇ、２４．９ｍｍｏｌ、５２．１％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋：５３９．１；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．３８－７．２９（ｍ，５Ｈ），６．３１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３３－５．２８（ｍ，１Ｈ），５．１４－５．０２（ｍ，３Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１６－４．０９（ｍ，３Ｈ），３．９８－３．９３（ｍ，１Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．５７－３．４８（ｍ，１Ｈ），３．３９（ｔｄ，Ｊ＝９．９，３．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１２－３．０５（ｍ，１Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ），１．９３（ｓ，３Ｈ），１．８３－１．７６（ｍ，１Ｈ），１．６５－１．５７（ｍ，１Ｈ）。
化合物Ｇ１－３（２２．３ｇ、５７．３ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）をＤＣＥ（２００ｍＬ）に溶解し、３A分子篩（２０．０ｇ）を加え、０℃に降温した。次に、ＴＭＳＯＴｆ（２１．２ｇ、９５．６ｍｍｏｌ、１７．３ｍＬ、２．０ｅｑ）、および３－（ベンジルオキシカルボニルアミノ）－１－プロパノール（１０．０ｇ、４７．８ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を０℃で順に加えた。１５℃に昇温して、撹拌を１０ｍｉｎ持続した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液に飽和重炭酸ナトリウム溶液（２００ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（２００ｍＬ×３）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムで精製し（石油エーテル／酢酸エチル）、白色固体Ｇ１－４（１３．４ｇ、２４．９ｍｍｏｌ、５２．１％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋：５３９．１；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．３８－７．２９（ｍ，５Ｈ），６．３１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），５．３３－５．２８（ｍ，１Ｈ），５．１４－５．０２（ｍ，３Ｈ），４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１６－４．０９（ｍ，３Ｈ），３．９８－３．９３（ｍ，１Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．５７－３．４８（ｍ，１Ｈ），３．３９（ｔｄ，Ｊ＝９．９，３．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１２－３．０５（ｍ，１Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ），１．９３（ｓ，３Ｈ），１．８３－１．７６（ｍ，１Ｈ），１．６５－１．５７（ｍ，１Ｈ）。
【0119】
ステップ３：Ｇ１－５の合成
化合物Ｇ１－４（１３．０ｇ、２４．１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、およびＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ（４．５９ｇ、２４．１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をパラジウム炭素（６．５０ｇ、２６．４ｍｍｏｌ、１．０９ｅｑ）のテトラヒドロフラン（１３０ｍＬ）溶液に加えた。水素ガス（１５ｐｓｉ）の条件下で、反応液を２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、白色固体として粗生成物Ｇ１－５（１５．０ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：４０３．２。
化合物Ｇ１－４（１３．０ｇ、２４．１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、およびＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ（４．５９ｇ、２４．１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をパラジウム炭素（６．５０ｇ、２６．４ｍｍｏｌ、１．０９ｅｑ）のテトラヒドロフラン（１３０ｍＬ）溶液に加えた。水素ガス（１５ｐｓｉ）の条件下で、反応液を２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、白色固体として粗生成物Ｇ１－５（１５．０ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：４０３．２。
【0120】
ステップ４：Ｇ１－６の合成
ＥＤＣＩ（７．４７ｇ、３８．９ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）、ＨＯＢｔ（５．５１ｇ、４０．８ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を５－アジドペンタン酸（５．３１ｇ、３７．１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（１５０ｍＬ）に加え、０℃に降温した。次に、ＤＩＰＥＡ（９．５９ｇ、７４．２ｍｍｏｌ、１２．９ｍＬ、２．０ｅｑ）、および化合物Ｇ１－５（１５．０ｇ、３７．１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を上記の溶液に順に加えた。２０℃に昇温して撹拌を１ｈ持続した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をジクロロメタン（１５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ×３）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、無色液体として粗生成物Ｇ１－６（１８．０ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：５２８．３；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ６．３０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．１７（ｄｄ，Ｊ＝７．１，４．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３４（ｄｄ，Ｊ＝３．４，１．１Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２９－４．０８（ｍ，３Ｈ），４．０３－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｔｄ，Ｊ＝６．７，１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７１－３．５７（ｍ，１Ｈ），３．４５（ｔｄ，Ｊ＝９．２，３．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．１４－３．０２（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．８４－１．５８（ｍ，６Ｈ）。
ＥＤＣＩ（７．４７ｇ、３８．９ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）、ＨＯＢｔ（５．５１ｇ、４０．８ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を５－アジドペンタン酸（５．３１ｇ、３７．１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（１５０ｍＬ）に加え、０℃に降温した。次に、ＤＩＰＥＡ（９．５９ｇ、７４．２ｍｍｏｌ、１２．９ｍＬ、２．０ｅｑ）、および化合物Ｇ１－５（１５．０ｇ、３７．１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を上記の溶液に順に加えた。２０℃に昇温して撹拌を１ｈ持続した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をジクロロメタン（１５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ×３）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、無色液体として粗生成物Ｇ１－６（１８．０ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：５２８．３；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ６．３０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．１７（ｄｄ，Ｊ＝７．１，４．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３４（ｄｄ，Ｊ＝３．４，１．１Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２９－４．０８（ｍ，３Ｈ），４．０３－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｔｄ，Ｊ＝６．７，１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７１－３．５７（ｍ，１Ｈ），３．４５（ｔｄ，Ｊ＝９．２，３．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．１４－３．０２（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．８４－１．５８（ｍ，６Ｈ）。
【0121】
ステップ５：Ｇ１－７の合成
Ｇ１－２（４００ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＧ１－６（２．５３ｇ、４．７７ｍｍｏｌ、４．０ｅｑ）のＤＭＳＯ溶液（５０．０ｍＬ）に加えた。次に、ＣｕＳＯ４（１．７１ｇ、１０．７ｍｍｏｌ、１．６５ｍＬ、９．０ｅｑ）、およびＴＨＰＴＡ（３．１１ｇ、７．１６ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ）を水（１５．０ｍＬ）に加え、次いで、ＶＣ Ｎａ（３．５４ｇ、１７．８９ｍｍｏｌ、１５．０ｅｑ）を加えて水溶液を調製し、この水溶液を上記のＤＭＳＯ溶液に加え、２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ×２）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムで精製し（石油エーテル／酢酸エチル、ジクロロメタン／メタノール）、白色固体Ｇ１－７（１．９０ｇ、９８７．５μｍｏｌ、８２．８％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９６０．８；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．６２（ｓ，３Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，３Ｈ），６．７３（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），５．３２（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ），５．２８（ｓ，３Ｈ），５．０５（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，３Ｈ），４．５５－４．４９（ｍ，１０Ｈ），４．３７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ），４．２７－４．０６（ｍ，１０Ｈ），４．００－３．９５（ｍ，３Ｈ），３．９２－３．８５（ｍ，３Ｈ），３．６７（ｓ，６Ｈ），３．５４－３．４２（ｍ，６Ｈ），３．１３－３．０８（ｍ，３Ｈ），２．３２－２．２３（ｍ，７Ｈ），２．１３（ｓ，１０Ｈ），２．０１（ｓ，１０Ｈ），１．９６（ｓ，１０Ｈ），１．８８（ｓ，９Ｈ），１．７０－１．６１（ｍ，９Ｈ），１．３８（ｓ，１０Ｈ）。
Ｇ１－２（４００ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＧ１－６（２．５３ｇ、４．７７ｍｍｏｌ、４．０ｅｑ）のＤＭＳＯ溶液（５０．０ｍＬ）に加えた。次に、ＣｕＳＯ４（１．７１ｇ、１０．７ｍｍｏｌ、１．６５ｍＬ、９．０ｅｑ）、およびＴＨＰＴＡ（３．１１ｇ、７．１６ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ）を水（１５．０ｍＬ）に加え、次いで、ＶＣ Ｎａ（３．５４ｇ、１７．８９ｍｍｏｌ、１５．０ｅｑ）を加えて水溶液を調製し、この水溶液を上記のＤＭＳＯ溶液に加え、２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ×２）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルカラムで精製し（石油エーテル／酢酸エチル、ジクロロメタン／メタノール）、白色固体Ｇ１－７（１．９０ｇ、９８７．５μｍｏｌ、８２．８％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９６０．８；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．６２（ｓ，３Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，３Ｈ），６．７３（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），５．３２（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ），５．２８（ｓ，３Ｈ），５．０５（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，３Ｈ），４．５５－４．４９（ｍ，１０Ｈ），４．３７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ），４．２７－４．０６（ｍ，１０Ｈ），４．００－３．９５（ｍ，３Ｈ），３．９２－３．８５（ｍ，３Ｈ），３．６７（ｓ，６Ｈ），３．５４－３．４２（ｍ，６Ｈ），３．１３－３．０８（ｍ，３Ｈ），２．３２－２．２３（ｍ，７Ｈ），２．１３（ｓ，１０Ｈ），２．０１（ｓ，１０Ｈ），１．９６（ｓ，１０Ｈ），１．８８（ｓ，９Ｈ），１．７０－１．６１（ｍ，９Ｈ），１．３８（ｓ，１０Ｈ）。
【0122】
ステップ６：Ｇ１－８の合成
トリフルオロ酢酸（９．２１ｇ、８０．７ｍｍｏｌ、６．００ｍＬ、８１．７ｅｑ）をＧ１－７（１．９０ｇ、９８８μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（１８．０ｍＬ）に加え、２５℃で０．５ｈ撹拌した。サンプルを採取してＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール）で検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をトルエン（５０．０ｍＬ）とともに合計３回回転蒸発させ、黄色油状物Ｇ１－８（１．８０ｇ、９６７μｍｏｌ、９７．８％歩留まり、９８．０％純度）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９１０．７。
トリフルオロ酢酸（９．２１ｇ、８０．７ｍｍｏｌ、６．００ｍＬ、８１．７ｅｑ）をＧ１－７（１．９０ｇ、９８８μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（１８．０ｍＬ）に加え、２５℃で０．５ｈ撹拌した。サンプルを採取してＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール）で検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をトルエン（５０．０ｍＬ）とともに合計３回回転蒸発させ、黄色油状物Ｇ１－８（１．８０ｇ、９６７μｍｏｌ、９７．８％歩留まり、９８．０％純度）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９１０．７。
【0123】
ステップ７：Ｇ１－１０の合成
ＨＢＴＵ（１７４ｍｇ、４６０μｍｏｌ、１．５ｅｑ）、およびＤＩＰＥＡ（７９．４ｍｇ、６１４μｍｏｌ、１０７μＬ、２．０ｅｑ）をＧ１－９（調製方法は、ＣＮ１１６８５４７５４Ｂを参照する）（２００ｍｇ、３０７μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＤＭＦ溶液（３．０ｍＬ）に加えた。次に、粗生成物Ｇ１－８（９５５ｍｇ、４９１μｍｏｌ、１．６ｅｑ、ＴＦＡ）（ＤＩＰＥＡでｐＨを約７に調節した）を上記の反応液に加え、２５℃で６ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２２７．０。
ＨＢＴＵ（１７４ｍｇ、４６０μｍｏｌ、１．５ｅｑ）、およびＤＩＰＥＡ（７９．４ｍｇ、６１４μｍｏｌ、１０７μＬ、２．０ｅｑ）をＧ１－９（調製方法は、ＣＮ１１６８５４７５４Ｂを参照する）（２００ｍｇ、３０７μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＤＭＦ溶液（３．０ｍＬ）に加えた。次に、粗生成物Ｇ１－８（９５５ｍｇ、４９１μｍｏｌ、１．６ｅｑ、ＴＦＡ）（ＤＩＰＥＡでｐＨを約７に調節した）を上記の反応液に加え、２５℃で６ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２２７．０。
【0124】
ステップ８：Ｇ１－１１の合成
Ｇ１－１０（７５０ｍｇ、３０５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（４．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（１１８ｍｇ、９１５μｍｏｌ、１５９μＬ、３．０ｅｑ）、無水コハク酸（２４４ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ、８．００ｅｑ）、およびＤＭＡＰ（３７．３ｍｇ、３０５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、この反応液を２５℃で４０ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、主ピークは、目的の生成物である。反応液を濾過し、濾液を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ１－１１（１２０．０ｍｇ、４６．０μｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２７６．８；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５５（ｓ，２Ｈ），７．４３－７．３６（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．８Ｈｚ，３Ｈ），７．２１－７．１７（ｍ，６Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ＝８．３，６．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．７６－６．７０（ｍ，３Ｈ），６．６８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，２Ｈ），５．０９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．９３（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５７－４．４１（ｍ，７Ｈ），４．３２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，４Ｈ），４．２４－４．００（ｍ，８Ｈ），３．９５－３．９０（ｍ，２Ｈ），３．８６－３．８２（ｍ，３Ｈ），３．７１－３．６１（ｍ，１０Ｈ），３．４８－３．３７（ｍ，５Ｈ），３．３４－３．２９（ｍ，３Ｈ），３．１８－３．０２（ｍ，５Ｈ），２．７３（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，７Ｈ），２．６４－２．５７（ｍ，２Ｈ），２．４７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．３２－１．７５（ｍ，５４Ｈ），１．７２－１．５８（ｍ，１１Ｈ），１．５０－１．４１（ｍ，４Ｈ），１．１９－１．０９（ｍ，２０Ｈ）。
Ｇ１－１０（７５０ｍｇ、３０５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（４．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（１１８ｍｇ、９１５μｍｏｌ、１５９μＬ、３．０ｅｑ）、無水コハク酸（２４４ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ、８．００ｅｑ）、およびＤＭＡＰ（３７．３ｍｇ、３０５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、この反応液を２５℃で４０ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、主ピークは、目的の生成物である。反応液を濾過し、濾液を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ１－１１（１２０．０ｍｇ、４６．０μｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２７６．８；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．５５（ｓ，２Ｈ），７．４３－７．３６（ｍ，２Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．８Ｈｚ，３Ｈ），７．２１－７．１７（ｍ，６Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ＝８．３，６．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．７６－６．７０（ｍ，３Ｈ），６．６８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，２Ｈ），５．０９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），５．００（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．９３（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５７－４．４１（ｍ，７Ｈ），４．３２（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，４Ｈ），４．２４－４．００（ｍ，８Ｈ），３．９５－３．９０（ｍ，２Ｈ），３．８６－３．８２（ｍ，３Ｈ），３．７１－３．６１（ｍ，１０Ｈ），３．４８－３．３７（ｍ，５Ｈ），３．３４－３．２９（ｍ，３Ｈ），３．１８－３．０２（ｍ，５Ｈ），２．７３（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，７Ｈ），２．６４－２．５７（ｍ，２Ｈ），２．４７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．３２－１．７５（ｍ，５４Ｈ），１．７２－１．５８（ｍ，１１Ｈ），１．５０－１．４１（ｍ，４Ｈ），１．１９－１．０９（ｍ，２０Ｈ）。
【0125】
ステップ９：ＹＫ－ＧＡＬ－４０１の合成
Ｇ１－１１（１６０ｍｇ、６２．５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（１０．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（６４．７ｍｇ、５００μｍｏｌ、８７．２０μＬ、８．０ｅｑ）、ＨＢＴＵ（１１８ｍｇ、３１２μｍｏｌ、５．０ｅｑ）、ＤＭＡＰ（３７．３ｍｇ、３０５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）、およびＣＰＧ－ＮＨ２（１．１ｇ）を加え、この反応液を４０℃で１６ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（２０ｍＬ×４）、およびＤＣＭ（２０ｍＬ×４）の順で洗浄し、窒素ガスの条件で乾燥し、淡黄色固体を得て、そのまま次のステップに用いた。
Ｇ１－１１（１６０ｍｇ、６２．５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（１０．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（６４．７ｍｇ、５００μｍｏｌ、８７．２０μＬ、８．０ｅｑ）、ＨＢＴＵ（１１８ｍｇ、３１２μｍｏｌ、５．０ｅｑ）、ＤＭＡＰ（３７．３ｍｇ、３０５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）、およびＣＰＧ－ＮＨ２（１．１ｇ）を加え、この反応液を４０℃で１６ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（２０ｍＬ×４）、およびＤＣＭ（２０ｍＬ×４）の順で洗浄し、窒素ガスの条件で乾燥し、淡黄色固体を得て、そのまま次のステップに用いた。
【0126】
粗生成物（１．２ｇ）をピリジン（１０．０ｍＬ）に溶解した。次いで、無水酢酸（２．１７ｇ、２１．３ｍｍｏｌ、２．０ｍＬ、４５．３ｅｑ）を加え、この反応液を４０℃で１ｈ撹拌し、次いで、反応液を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（２０ｍＬ×４）、およびＤＣＭ（２０ｍＬ×４）の順で洗浄し、窒素ガスの条件で乾燥し、淡黄色固体ＹＫ－ＧＡＬ－４０１（１．０ｇ、担持量：３７．１μｍｏｌ／ｇ）を得た。
【0127】
担体の担持量の一般的な測定方法：１．５ｍＬ遠心分離チューブにＹＫ－ＧＡＬ－４０１を秤取り、その後、遠心分離チューブにＰＴＳＡ（ＣＡＳ：１０４－１５－４）（０．１ＭのＡＣＮ溶液）１．０ｍＬを加えた。試験管を密閉して均一に混合した。溶液はオレンジ色を呈しており、１時間静置した。溶液１００μＬを４．０ｍＬ遠心分離チューブに加えた。遠心分離チューブにＰＴＳＡ（０．１ＭのＡＣＮ溶液）３．０ｍＬを加えた。試験管を密閉して均一に混合し、ＰＴＳＡ（ＡＣＮ中で、０．１Ｍである）を参照キュベットに充填した。空白溶液の４１１ｎｍにおける吸光度を計測した。サンプル溶液をキュベットに填充し、サンプル溶液の４１１ｎｍにおける吸光度を計測し、計算により担持量を得た。
【0128】
２．ＹＫ－ＧＡＬ－４０２の合成
合成スキームは、以下の通りである。
合成スキームは、以下の通りである。
【化35】
【化36】
【0129】
ステップ１：Ｇ２－３の合成
化合物Ｇ２－１（１．３０ｇ、１１．３ｍｍｏｌ、１．０４ｅｑ）、およびＧ２－２（２．００ｇ、１０．９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を無水酢酸エチル（２０．０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。次いで、ＥＤＣＩ（２．１７ｇ、１１．３ｍｍｏｌ、１．０４ｅｑ）をバッチ式で加え、０℃で撹拌を１ｈ持続した。次いで、２５℃までゆっくりと昇温して４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を水（２０ｍＬ×３）、１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ×３）、水（２０ｍＬ×２）、５％ＫＨＳＯ４水溶液（２０ｍＬ×２）、および水（２０ｍＬ×３）の順で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、茶色油状物Ｇ２－３（２．５０ｇ、８．８９ｍｍｏｌ、８１．８％歩留まり）を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ３．７２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．９４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）；１９ＦＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ－１５２．５４～－１５２．６３（ｍ，２Ｆ），－１５７．４６（ｔ，Ｊ＝２１．８Ｈｚ，１Ｆ），－１６１．９８～－１６２．１３（ｍ，２Ｆ）。
化合物Ｇ２－１（１．３０ｇ、１１．３ｍｍｏｌ、１．０４ｅｑ）、およびＧ２－２（２．００ｇ、１０．９ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を無水酢酸エチル（２０．０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。次いで、ＥＤＣＩ（２．１７ｇ、１１．３ｍｍｏｌ、１．０４ｅｑ）をバッチ式で加え、０℃で撹拌を１ｈ持続した。次いで、２５℃までゆっくりと昇温して４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を水（２０ｍＬ×３）、１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ×３）、水（２０ｍＬ×２）、５％ＫＨＳＯ４水溶液（２０ｍＬ×２）、および水（２０ｍＬ×３）の順で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、茶色油状物Ｇ２－３（２．５０ｇ、８．８９ｍｍｏｌ、８１．８％歩留まり）を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ３．７２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．９４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）；１９ＦＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ－１５２．５４～－１５２．６３（ｍ，２Ｆ），－１５７．４６（ｔ，Ｊ＝２１．８Ｈｚ，１Ｆ），－１６１．９８～－１６２．１３（ｍ，２Ｆ）。
【0130】
ステップ２：Ｇ２－４の合成
ＤＩＰＥＡ（１．５４ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、２．０８ｍＬ、２．０ｅｑ）を化合物Ｇ１－５（３．５５ｇ、５．９７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、および化合物Ｇ２－３（１．６８ｇ、５．９７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（３０．０ｍＬ）に加えた。２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をＮａＨＣＯ３水溶液（３０．０ｍＬ×１）、水（３０ｍＬ×３）の順で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ２－４（７１０ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ、２３．７％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：５００．２；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ６．３７－６．２８（ｍ，１Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３０－４．２３（ｍ，１Ｈ），４．２０－４．１０（ｍ，２Ｈ），４．０６－４．０１（ｍ，１Ｈ），３．９２－３．８４（ｍ，１Ｈ），３．７１－３．５７（ｍ，３Ｈ），３．４６（ｔｄ，Ｊ＝９．１，３．３Ｈｚ，１Ｈ），３．２１－３．０９（ｍ，１Ｈ），２．６２－２．４４（ｍ，２Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．９８（ｓ，３Ｈ），１．７１－１．６６（ｍ，２Ｈ）。
ＤＩＰＥＡ（１．５４ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、２．０８ｍＬ、２．０ｅｑ）を化合物Ｇ１－５（３．５５ｇ、５．９７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）、および化合物Ｇ２－３（１．６８ｇ、５．９７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（３０．０ｍＬ）に加えた。２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をＮａＨＣＯ３水溶液（３０．０ｍＬ×１）、水（３０ｍＬ×３）の順で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ２－４（７１０ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ、２３．７％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：５００．２；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ６．３７－６．２８（ｍ，１Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３０－４．２３（ｍ，１Ｈ），４．２０－４．１０（ｍ，２Ｈ），４．０６－４．０１（ｍ，１Ｈ），３．９２－３．８４（ｍ，１Ｈ），３．７１－３．５７（ｍ，３Ｈ），３．４６（ｔｄ，Ｊ＝９．１，３．３Ｈｚ，１Ｈ），３．２１－３．０９（ｍ，１Ｈ），２．６２－２．４４（ｍ，２Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．９８（ｓ，３Ｈ），１．７１－１．６６（ｍ，２Ｈ）。
【0131】
ステップ３：Ｇ２－５の合成
Ｇ１－２（１１０ｍｇ、３２８μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＧ２－４（５７５ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）のＤＭＳＯ溶液（２０．０ｍＬ）に加えた。次に、ＣｕＳＯ４（４７１ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ、４５３μＬ、９．０ｅｑ）、およびＴＨＰＴＡ（８５５ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ）を水（４．０ｍＬ）に加え、次に、ＶＣＮａ（９７４ｍｇ、４．９２ｍｍｏｌ、１５．０ｅｑ）を加えて水溶液を調製し、この水溶液を上記のＤＭＳＯ溶液に加え、２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液に水（２．０ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（３ｍＬ×３）で抽出し、水（２ｍＬ×３）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ２－５（３５０ｍｇ、１９０μｍｏｌ、５８．０％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９１８．６；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．６９（ｓ，３Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，３Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，３Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，３Ｈ），５．０８（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，３．４Ｈｚ，３Ｈ），４．７７－４．６６（ｍ，６Ｈ），４．５２（ｓ，６Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），４．２６－４．１１（ｍ，９Ｈ），３．９６－３．９１（ｍ，６Ｈ），３．６０（ｓ，６Ｈ），３．５２－３．４７（ｍ，２Ｈ），３．４２－３．３６（ｍ，３Ｈ），３．１６－３．１１（ｍ，３Ｈ），３．０４－２．９７（ｍ，３Ｈ），２．８６－２．８０（ｍ，３Ｈ），２．１５（ｓ，９Ｈ），２．０４（ｓ，９Ｈ），２．００（ｓ，９Ｈ），１．８５（ｓ，９Ｈ），１．７８（ｓ，８Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）。
Ｇ１－２（１１０ｍｇ、３２８μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＧ２－４（５７５ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）のＤＭＳＯ溶液（２０．０ｍＬ）に加えた。次に、ＣｕＳＯ４（４７１ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ、４５３μＬ、９．０ｅｑ）、およびＴＨＰＴＡ（８５５ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ）を水（４．０ｍＬ）に加え、次に、ＶＣＮａ（９７４ｍｇ、４．９２ｍｍｏｌ、１５．０ｅｑ）を加えて水溶液を調製し、この水溶液を上記のＤＭＳＯ溶液に加え、２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液に水（２．０ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（３ｍＬ×３）で抽出し、水（２ｍＬ×３）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ２－５（３５０ｍｇ、１９０μｍｏｌ、５８．０％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９１８．６；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．６９（ｓ，３Ｈ），７．０９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，３Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，３Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，３Ｈ），５．０８（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，３．４Ｈｚ，３Ｈ），４．７７－４．６６（ｍ，６Ｈ），４．５２（ｓ，６Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），４．２６－４．１１（ｍ，９Ｈ），３．９６－３．９１（ｍ，６Ｈ），３．６０（ｓ，６Ｈ），３．５２－３．４７（ｍ，２Ｈ），３．４２－３．３６（ｍ，３Ｈ），３．１６－３．１１（ｍ，３Ｈ），３．０４－２．９７（ｍ，３Ｈ），２．８６－２．８０（ｍ，３Ｈ），２．１５（ｓ，９Ｈ），２．０４（ｓ，９Ｈ），２．００（ｓ，９Ｈ），１．８５（ｓ，９Ｈ），１．７８（ｓ，８Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）。
【0132】
ステップ４：Ｇ２－６の合成
トリフルオロ酢酸（１．０７ｇ、９．４２ｍｍｏｌ、７００μＬ、４９．５ｅｑ）をＧ２－５（３５０ｍｇ、１９０μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（２．８ｍＬ）に加え、２５℃で０．５ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をトルエン（１０．０ｍＬ）とともに合計３回回転蒸発させ、赤色油状物Ｇ２－６（５２３ｍｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：８６８．６。
トリフルオロ酢酸（１．０７ｇ、９．４２ｍｍｏｌ、７００μＬ、４９．５ｅｑ）をＧ２－５（３５０ｍｇ、１９０μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（２．８ｍＬ）に加え、２５℃で０．５ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をトルエン（１０．０ｍＬ）とともに合計３回回転蒸発させ、赤色油状物Ｇ２－６（５２３ｍｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：８６８．６。
【0133】
ステップ５：Ｇ２－７の合成
ＨＢＴＵ（６５．６ｍｇ、１７３μｍｏｌ、１．５ｅｑ）、およびＤＩＰＥＡ（２９．８ｍｇ、２３０μｍｏｌ、４０．２μＬ、２．０ｅｑ）をＧ１－９（７５．０ｍｇ、１１５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＤＭＦ溶液（１．５ｍＬ）に加えた。次に、粗生成物Ｇ２－６（２００ｍｇ、１１５μｍｏｌ、１．０ｅｑ、ＴＦＡ）（ＤＩＰＥＡでｐＨを約７に調節した）を上記の反応液に加え、２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１１８４．８。
ＨＢＴＵ（６５．６ｍｇ、１７３μｍｏｌ、１．５ｅｑ）、およびＤＩＰＥＡ（２９．８ｍｇ、２３０μｍｏｌ、４０．２μＬ、２．０ｅｑ）をＧ１－９（７５．０ｍｇ、１１５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＤＭＦ溶液（１．５ｍＬ）に加えた。次に、粗生成物Ｇ２－６（２００ｍｇ、１１５μｍｏｌ、１．０ｅｑ、ＴＦＡ）（ＤＩＰＥＡでｐＨを約７に調節した）を上記の反応液に加え、２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１１８４．８。
【0134】
ステップ６：Ｇ２－８の合成
Ｇ２－７（２７３ｍｇ、１１５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（３．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（４４．７ｍｇ、３４５μｍｏｌ、６０．２μＬ、３．０ｅｑ）、無水コハク酸（１０４ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ、９．０ｅｑ）、およびＤＭＡＰ（５６．３ｍｇ、４６１μｍｏｌ、４．０ｅｑ）を加え、この反応液を３０℃で２４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過し、濾液を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ２－８（１１０ｍｇ、４４．５μｍｏｌ、３８．６％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２３４．９；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．６６（ｓ，３Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．２０－７．１３（ｍ，４Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，３Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ），５．０８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，３Ｈ），４．７３－４．６９（ｍ，５Ｈ），４．５３－４．４７（ｍ，８Ｈ），４．２６－４．１０（ｍ，１１Ｈ），３．９７－３．８９（ｍ，７Ｈ），３．７８（ｓ，６Ｈ），３．６５（ｓ，５Ｈ），３．５６－３．４４（ｍ，４Ｈ），３．４０－３．３７（ｍ，５Ｈ），３．２４－３．２１（ｍ，２Ｈ），３．１６－３．０９（ｍ，４Ｈ），３．０１－２．９４（ｍ，４Ｈ），２．８２－２．７８（ｍ，２Ｈ），２．６９－２．６４（ｍ，２Ｈ），２．５６－２．５３（ｍ，２Ｈ），２．１５（ｓ，９Ｈ），２．０４（ｓ，９Ｈ），２．００（ｓ，９Ｈ），１．９３－１．７６（ｍ，３２Ｈ），１．２７（ｂｒ，１０Ｈ）。
Ｇ２－７（２７３ｍｇ、１１５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（３．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（４４．７ｍｇ、３４５μｍｏｌ、６０．２μＬ、３．０ｅｑ）、無水コハク酸（１０４ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ、９．０ｅｑ）、およびＤＭＡＰ（５６．３ｍｇ、４６１μｍｏｌ、４．０ｅｑ）を加え、この反応液を３０℃で２４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過し、濾液を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ２－８（１１０ｍｇ、４４．５μｍｏｌ、３８．６％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２３４．９；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．６６（ｓ，３Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．２４（ｓ，１Ｈ），７．２０－７．１３（ｍ，４Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，３Ｈ），５．３５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ），５．０８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，３Ｈ），４．７３－４．６９（ｍ，５Ｈ），４．５３－４．４７（ｍ，８Ｈ），４．２６－４．１０（ｍ，１１Ｈ），３．９７－３．８９（ｍ，７Ｈ），３．７８（ｓ，６Ｈ），３．６５（ｓ，５Ｈ），３．５６－３．４４（ｍ，４Ｈ），３．４０－３．３７（ｍ，５Ｈ），３．２４－３．２１（ｍ，２Ｈ），３．１６－３．０９（ｍ，４Ｈ），３．０１－２．９４（ｍ，４Ｈ），２．８２－２．７８（ｍ，２Ｈ），２．６９－２．６４（ｍ，２Ｈ），２．５６－２．５３（ｍ，２Ｈ），２．１５（ｓ，９Ｈ），２．０４（ｓ，９Ｈ），２．００（ｓ，９Ｈ），１．９３－１．７６（ｍ，３２Ｈ），１．２７（ｂｒ，１０Ｈ）。
【0135】
ステップ７：ＹＫ－ＧＡＬ－４０２の合成
Ｇ２－８（１１０ｍｇ、４２．７４μｍｏｌ、１．０ｅｑ、ＴＥＡ）をＤＭＦ（８．０ｍＬ）に加え、次いで、ＤＩＰＥＡ（４４．２ｍｇ、３４２μｍｏｌ、５９．５μＬ、８．０ｅｑ）、ＨＢＴＵ（８１．０ｍｇ、２１３μｍｏｌ、５．０ｅｑ）、ＤＭＡＰ（５．２２ｍｇ、４２．７μｍｏｌ、１．０ｅｑ）、およびＣＰＧ－ＮＨ２（７１３ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、２８．４ｅｑ）を加え、この反応液を４０℃で１６ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（１０ｍＬ×４）、およびＤＣＭ（１０ｍＬ×４）の順で洗浄し、窒素ガスの条件で乾燥し、淡黄色固体を得て、そのまま次のステップに用いた。
Ｇ２－８（１１０ｍｇ、４２．７４μｍｏｌ、１．０ｅｑ、ＴＥＡ）をＤＭＦ（８．０ｍＬ）に加え、次いで、ＤＩＰＥＡ（４４．２ｍｇ、３４２μｍｏｌ、５９．５μＬ、８．０ｅｑ）、ＨＢＴＵ（８１．０ｍｇ、２１３μｍｏｌ、５．０ｅｑ）、ＤＭＡＰ（５．２２ｍｇ、４２．７μｍｏｌ、１．０ｅｑ）、およびＣＰＧ－ＮＨ２（７１３ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、２８．４ｅｑ）を加え、この反応液を４０℃で１６ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（１０ｍＬ×４）、およびＤＣＭ（１０ｍＬ×４）の順で洗浄し、窒素ガスの条件で乾燥し、淡黄色固体を得て、そのまま次のステップに用いた。
【0136】
粗生成物をピリジンおよび無水酢酸溶液（Ｐｙ／Ａｃ２Ｏ＝５／１、９．０ｍＬ）に溶解し、この反応液を４０℃で４０ｍｉｎ撹拌し、次いで、反応液を濾過し、濾過ケーキをＤＣＭ（５．０ｍＬ×４）、およびＭｅＯＨ（５．０ｍＬ×４）の順で洗浄し、窒素ガスの条件で乾燥し、淡黄色固体ＹＫ－ＧＡＬ－４０２（７２６ｍｇ、担持量：３３．１５μｍｏｌ／ｇ）を得た。担体の担持量を上記の担体の担持量の一般的な測定方法に従って測定した。
【0137】
３．ＹＫ－ＧＡＬ－４０３の合成
合成スキームは、以下の通りである。
合成スキームは、以下の通りである。
【化37】
【化38】
【0138】
ステップ１：Ｇ３－１の合成
ＥＤＣＩ（１．９２ｇ、１０．０ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）、ＨＯＢｔ（１．４２ｇ、１０．５０ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を６－アジドヘキサン酸（１．５０ｇ、９．５４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（４０．０ｍＬ）に加え、０℃に降温した。次に、ＤＩＰＥＡ（２．４７ｇ、１９．１ｍｍｏｌ、３．３２ｍＬ、２．０ｅｑ）、および化合物Ｇ１－５（３．８６ｇ、９．５４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を上記の溶液に順に加えた。２５℃に昇温して撹拌を２ｈ持続した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をジクロロメタンで希釈し（２０．０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（４０．０ｍＬ）で洗浄してから、水（４０．０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、黄色油状の粗生成物Ｇ３－１（１．４２ｇ、２．６１ｍｍｏｌ、３２．７％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：５４２．２；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ６．３２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０９－６．０１（ｍ，１Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２８－４．０９（ｍ，３Ｈ），４．０３－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｔｄ，Ｊ＝６．７，１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７１－３．６２（ｍ，１Ｈ），３．４４（ｔｄ，Ｊ＝９．３，３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１０－３．０３（ｍ，１Ｈ），２．２４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．７６－１．６３（ｍ，６Ｈ），１．４６－１．３８（ｍ，２Ｈ）。
ＥＤＣＩ（１．９２ｇ、１０．０ｍｍｏｌ、１．０５ｅｑ）、ＨＯＢｔ（１．４２ｇ、１０．５０ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ）を６－アジドヘキサン酸（１．５０ｇ、９．５４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）のジクロロメタン溶液（４０．０ｍＬ）に加え、０℃に降温した。次に、ＤＩＰＥＡ（２．４７ｇ、１９．１ｍｍｏｌ、３．３２ｍＬ、２．０ｅｑ）、および化合物Ｇ１－５（３．８６ｇ、９．５４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）を上記の溶液に順に加えた。２５℃に昇温して撹拌を２ｈ持続した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をジクロロメタンで希釈し（２０．０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（４０．０ｍＬ）で洗浄してから、水（４０．０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、黄色油状の粗生成物Ｇ３－１（１．４２ｇ、２．６１ｍｍｏｌ、３２．７％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：５４２．２；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ６．３２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０９－６．０１（ｍ，１Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２８－４．０９（ｍ，３Ｈ），４．０３－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｔｄ，Ｊ＝６．７，１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７１－３．６２（ｍ，１Ｈ），３．４４（ｔｄ，Ｊ＝９．３，３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），３．１０－３．０３（ｍ，１Ｈ），２．２４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．７６－１．６３（ｍ，６Ｈ），１．４６－１．３８（ｍ，２Ｈ）。
【0139】
ステップ２：Ｇ３－２の合成
Ｇ１－２（２３０ｍｇ、６８６μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＧ３－１（１．３０ｇ、２．４０ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）のＤＭＳＯ溶液（５０．０ｍＬ）に加えた。次に、ＣｕＳＯ４（９８５ｍｇ、６．１７ｍｍｏｌ、９４７μＬ、９．０ｅｑ）、およびＴＨＰＴＡ（１．７９ｇ、４．１１ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ）を水（６．０ｍＬ）に加え、その後、ＶＣＮａ（２．０４ｇ、１０．３ｍｍｏｌ、１５．０ｅｑ）を加えて水溶液を調製し、この水溶液を上記のＤＭＳＯ溶液に加え、２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を水（３０．０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（３０．０ｍＬ×３）で抽出し、次に、水（３０．０ｍＬ×３）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ３－２（１．０ｇ、５０８μｍｏｌ、７４．２％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９８１．８；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．６０（ｓ，３Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，３Ｈ），６．６２－６．５４（ｍ，３Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，３Ｈ），４．５７（ｓ，６Ｈ），４．５０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），４．３６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），４．２８－４．０７（ｍ，１０Ｈ），４．００－３．９５（ｄｔ，Ｊ＝９．９，５．０Ｈｚ，３Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），３．６９（ｓ，６Ｈ），３．５９－３．５５（ｍ，３Ｈ），３．５１－３．４１（ｍ，３Ｈ），３．１１－３．０６（ｍ，３Ｈ），２．２１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ），２．１５（ｓ，９Ｈ），２．０３（ｓ，９Ｈ），１．９９（ｓ，９Ｈ），１．９３（ｓ，９Ｈ），１．８２（ｓ，９Ｈ），１．７２－１．６１（ｍ，９Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ），１．３７－１．２９（ｍ，６Ｈ）。
Ｇ１－２（２３０ｍｇ、６８６μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＧ３－１（１．３０ｇ、２．４０ｍｍｏｌ、３．５ｅｑ）のＤＭＳＯ溶液（５０．０ｍＬ）に加えた。次に、ＣｕＳＯ４（９８５ｍｇ、６．１７ｍｍｏｌ、９４７μＬ、９．０ｅｑ）、およびＴＨＰＴＡ（１．７９ｇ、４．１１ｍｍｏｌ、６．０ｅｑ）を水（６．０ｍＬ）に加え、その後、ＶＣＮａ（２．０４ｇ、１０．３ｍｍｏｌ、１５．０ｅｑ）を加えて水溶液を調製し、この水溶液を上記のＤＭＳＯ溶液に加え、２５℃で２ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を水（３０．０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（３０．０ｍＬ×３）で抽出し、次に、水（３０．０ｍＬ×３）で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過した後、減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ３－２（１．０ｇ、５０８μｍｏｌ、７４．２％歩留まり）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９８１．８；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．６０（ｓ，３Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，３Ｈ），６．６２－６．５４（ｍ，３Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，３Ｈ），４．５７（ｓ，６Ｈ），４．５０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，３Ｈ），４．３６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），４．２８－４．０７（ｍ，１０Ｈ），４．００－３．９５（ｄｔ，Ｊ＝９．９，５．０Ｈｚ，３Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），３．６９（ｓ，６Ｈ），３．５９－３．５５（ｍ，３Ｈ），３．５１－３．４１（ｍ，３Ｈ），３．１１－３．０６（ｍ，３Ｈ），２．２１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ），２．１５（ｓ，９Ｈ），２．０３（ｓ，９Ｈ），１．９９（ｓ，９Ｈ），１．９３（ｓ，９Ｈ），１．８２（ｓ，９Ｈ），１．７２－１．６１（ｍ，９Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ），１．３７－１．２９（ｍ，６Ｈ）。
【0140】
ステップ３：Ｇ３－３の合成
トリフルオロ酢酸（３．０７ｇ、２６．９ｍｍｏｌ、２．０ｍＬ、５２．９ｅｑ）をＧ３－２（１．００ｇ、５０８μｍｏｌ、１．００ｅｑ）のジクロロメタン溶液（１０．０ｍＬ）に加え、２５℃で１ｈ撹拌した。サンプルを採取してＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール）で検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をトルエン（２０．０×３ｍＬ）とともに合計３回回転蒸発させ、黄色油状物Ｇ３－３（９５０ｍｇ、４５８．２１μｍｏｌ、９０．０９％歩留まり、９０％純度）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９３１．７。
トリフルオロ酢酸（３．０７ｇ、２６．９ｍｍｏｌ、２．０ｍＬ、５２．９ｅｑ）をＧ３－２（１．００ｇ、５０８μｍｏｌ、１．００ｅｑ）のジクロロメタン溶液（１０．０ｍＬ）に加え、２５℃で１ｈ撹拌した。サンプルを採取してＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール）で検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま減圧濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をトルエン（２０．０×３ｍＬ）とともに合計３回回転蒸発させ、黄色油状物Ｇ３－３（９５０ｍｇ、４５８．２１μｍｏｌ、９０．０９％歩留まり、９０％純度）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：９３１．７。
【0141】
ステップ４：Ｇ３－４の合成
ＨＢＴＵ（１７４ｍｇ、４６０μｍｏｌ、１．５ｅｑ）、およびＤＩＰＥＡ（７９．４ｍｇ、６１４μｍｏｌ、１０７μＬ、２．０ｅｑ）をＧ１－９（２００ｍｇ、３０７μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＤＭＦ溶液（３．０ｍＬ）に加えた。次に、粗生成物Ｇ３－３（８３７ｍｇ、４３０μｍｏｌ、１．４ｅｑ、ＴＦＡ）（ＤＩＰＥＡでｐＨを約７に調節した）を上記の反応液に加え、２５℃で４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２４７．８。
ＨＢＴＵ（１７４ｍｇ、４６０μｍｏｌ、１．５ｅｑ）、およびＤＩＰＥＡ（７９．４ｍｇ、６１４μｍｏｌ、１０７μＬ、２．０ｅｑ）をＧ１－９（２００ｍｇ、３０７μｍｏｌ、１．０ｅｑ）のＤＭＦ溶液（３．０ｍＬ）に加えた。次に、粗生成物Ｇ３－３（８３７ｍｇ、４３０μｍｏｌ、１．４ｅｑ、ＴＦＡ）（ＤＩＰＥＡでｐＨを約７に調節した）を上記の反応液に加え、２５℃で４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２４７．８。
【0142】
ステップ５：Ｇ３－５の合成
Ｇ３－４（７６０ｍｇ、３０４μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（４．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（１１２ｍｇ、９１２μｍｏｌ、１５８μＬ、３．０ｅｑ）、無水コハク酸（２４３ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ、８．０ｅｑ）、およびＤＭＡＰ（３７．１ｍｇ、３０４μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、この反応液を３５℃で２４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示し、目的の生成物は検出された。反応液を濾過し、濾液を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ３－５（４００ｍｇ、１４２μｍｏｌ、４６．７％歩留まり、９６．０％純度、ＴＥＡ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２９８．２；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．５３（ｓ，３Ｈ），７．４０－７．３６（ｍ，２Ｈ），７．３１－７．２４（ｍ，４Ｈ），７．２２－７．０７（ｍ，６Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．７７－６．７０（ｍ，４Ｈ），６．５９（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），６．０８（ｓ，１Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ），５．０９（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），５．０４－４．９０（ｍ，４Ｈ），４．５０（ｓ，６Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３Ｈ），４．３０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），４．２１－４．０２（ｍ，１０Ｈ），３．９３－３．８８（ｍ，３Ｈ），３．８７－３．８１（ｍ，４Ｈ），３．７０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１２Ｈ），３．５０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ），３．３９（ｔｄ，Ｊ＝９．２，３．７Ｈｚ，３Ｈ），３．３２（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｄｄ，Ｊ＝９．８，４．３Ｈｚ，２Ｈ），３．０８－２．９９（ｍ，４Ｈ），２．７６（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，９Ｈ），２．６３－２．５７（ｍ，２Ｈ），２．４７－２．４４（ｍ，２Ｈ），２．１５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ），２．０９（ｓ，９Ｈ），１．９７（ｓ，９Ｈ），１．９２（ｓ，９Ｈ），１．８７（ｓ，９Ｈ），１．７１－１．６７（ｍ，３Ｈ），１．６６－１．５６（ｍ，９Ｈ），１．５１－１．４０（ｍ，４Ｈ），１．２９－１．２４（ｍ，６Ｈ），１．１０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１１Ｈ）。
Ｇ３－４（７６０ｍｇ、３０４μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（４．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（１１２ｍｇ、９１２μｍｏｌ、１５８μＬ、３．０ｅｑ）、無水コハク酸（２４３ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ、８．０ｅｑ）、およびＤＭＡＰ（３７．１ｍｇ、３０４μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を加え、この反応液を３５℃で２４ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示し、目的の生成物は検出された。反応液を濾過し、濾液を分取クロマトグラフィーで精製し、白色固体Ｇ３－５（４００ｍｇ、１４２μｍｏｌ、４６．７％歩留まり、９６．０％純度、ＴＥＡ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２９８．２；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．５３（ｓ，３Ｈ），７．４０－７．３６（ｍ，２Ｈ），７．３１－７．２４（ｍ，４Ｈ），７．２２－７．０７（ｍ，６Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．７７－６．７０（ｍ，４Ｈ），６．５９（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３Ｈ），６．０８（ｓ，１Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ，３Ｈ），５．０９（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），５．０４－４．９０（ｍ，４Ｈ），４．５０（ｓ，６Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，３Ｈ），４．３０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），４．２１－４．０２（ｍ，１０Ｈ），３．９３－３．８８（ｍ，３Ｈ），３．８７－３．８１（ｍ，４Ｈ），３．７０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１２Ｈ），３．５０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ），３．３９（ｔｄ，Ｊ＝９．２，３．７Ｈｚ，３Ｈ），３．３２（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｄｄ，Ｊ＝９．８，４．３Ｈｚ，２Ｈ），３．０８－２．９９（ｍ，４Ｈ），２．７６（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，９Ｈ），２．６３－２．５７（ｍ，２Ｈ），２．４７－２．４４（ｍ，２Ｈ），２．１５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ），２．０９（ｓ，９Ｈ），１．９７（ｓ，９Ｈ），１．９２（ｓ，９Ｈ），１．８７（ｓ，９Ｈ），１．７１－１．６７（ｍ，３Ｈ），１．６６－１．５６（ｍ，９Ｈ），１．５１－１．４０（ｍ，４Ｈ），１．２９－１．２４（ｍ，６Ｈ），１．１０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１１Ｈ）。
【0143】
ステップ６：ＹＫ－ＧＡＬ－４０３の合成
Ｇ３－５（４００ｍｇ、１５４μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（１０．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（１５９ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ、２１４μＬ，８．０ｅｑ）、ＨＢＴＵ（２９１ｍｇ、７６９μｍｏｌ、５．０ｅｑ）、ＤＭＡＰ（１８．８ｍｇ、１５４μｍｏｌ、１．００ｅｑ）、およびＣＰＧ－ＮＨ２（２．２５ｇ）を加え、この反応液を４０℃で１６ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（２０ｍＬ×４）、およびＤＣＭ（２０ｍＬ×４）の順で洗浄し、窒素ガスの条件で乾燥し、淡黄色固体を得て、そのまま次のステップに用いた。
Ｇ３－５（４００ｍｇ、１５４μｍｏｌ、１．０ｅｑ）をＤＭＦ（１０．０ｍＬ）に加えた。次いで、ＤＩＰＥＡ（１５９ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ、２１４μＬ，８．０ｅｑ）、ＨＢＴＵ（２９１ｍｇ、７６９μｍｏｌ、５．０ｅｑ）、ＤＭＡＰ（１８．８ｍｇ、１５４μｍｏｌ、１．００ｅｑ）、およびＣＰＧ－ＮＨ２（２．２５ｇ）を加え、この反応液を４０℃で１６ｈ撹拌した。サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（２０ｍＬ×４）、およびＤＣＭ（２０ｍＬ×４）の順で洗浄し、窒素ガスの条件で乾燥し、淡黄色固体を得て、そのまま次のステップに用いた。
【0144】
粗生成物（２．４ｇ）をピリジン（１５．０ｍＬ）に溶解した。次に、無水酢酸（３．２６ｇ、３１．９ｍｍｏｌ、３．０ｍＬ、３４．５ｅｑ）を加え、この反応液を４０℃で１ｈ撹拌し、次いで、反応液を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（３０ｍＬ×４）、およびＤＣＭ（３０ｍＬ×４）の順で洗浄し、窒素ガスの条件で乾燥し、淡黄色固体ＹＫ－ＧＡＬ－４０３（２．２ｇ、担持量：３２．８μｍｏｌ／ｇ）を得た。担体の担持量を上記の担体の担持量の一般的な測定方法に従って測定した。
【0145】
４．ＹＫ－ＧＡＬ－４０４の合成
合成スキームは、以下の通りである。
合成スキームは、以下の通りである。
【化39】
【0146】
ステップ１：Ｇ４－１の合成
粗生成物Ｇ１－８（５３７ｍｇ、２８０μｍｏｌ、１．４ｅｑ、ＴＦＡ）、およびＧ１－９Ａ（調製方法は、ＣＮ１１６８５４７５４Ｂを参照する）（１２４ｍｇ、２００μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１０の合成方法に従って反応を行い、サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２１２．０。
粗生成物Ｇ１－８（５３７ｍｇ、２８０μｍｏｌ、１．４ｅｑ、ＴＦＡ）、およびＧ１－９Ａ（調製方法は、ＣＮ１１６８５４７５４Ｂを参照する）（１２４ｍｇ、２００μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１０の合成方法に従って反応を行い、サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２１２．０。
【0147】
ステップ２：Ｇ４－２の合成
Ｇ４－１（４８５ｍｇ、２００μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１１の合成方法に従って反応を行い、白色固体Ｇ４－２（１８７ｍｇ、７４．２μｍｏｌ、３７．１％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２６２．１；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６３（ｓ，２Ｈ），７．５３－７．４５（ｍ，２Ｈ），７．３６－７．３３（ｍ，３Ｈ），７．２９－７．１１（ｍ，７Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），６．７９－６．６８（ｍ，５Ｈ），５．１２－５．０５（ｍ，３Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０１－４．９７（ｍ，２Ｈ），４．７９－４．６１（ｍ，８Ｈ），４．５３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ），４．３４－４．２０（ｍ，３Ｈ），４．１４－４．０９（ｍ，４Ｈ），３．９８－３．８６（ｍ，５Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．７７－３．６５（ｍ，２Ｈ），３．４７－３．３２（ｍ，１０Ｈ），３．２５－３．１２（ｍ，３Ｈ），２．８５－２．６１（ｓ，９Ｈ），２．５３－２．４４（ｍ，２Ｈ），２．３９－１．８９（ｍ，５２Ｈ），１．８２－１．４９（ｍ，１９Ｈ），１．１９－１．０９（ｍ，１８Ｈ）。
Ｇ４－１（４８５ｍｇ、２００μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１１の合成方法に従って反応を行い、白色固体Ｇ４－２（１８７ｍｇ、７４．２μｍｏｌ、３７．１％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２６２．１；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６３（ｓ，２Ｈ），７．５３－７．４５（ｍ，２Ｈ），７．３６－７．３３（ｍ，３Ｈ），７．２９－７．１１（ｍ，７Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），６．７９－６．６８（ｍ，５Ｈ），５．１２－５．０５（ｍ，３Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０１－４．９７（ｍ，２Ｈ），４．７９－４．６１（ｍ，８Ｈ），４．５３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，４Ｈ），４．３４－４．２０（ｍ，３Ｈ），４．１４－４．０９（ｍ，４Ｈ），３．９８－３．８６（ｍ，５Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．７７－３．６５（ｍ，２Ｈ），３．４７－３．３２（ｍ，１０Ｈ），３．２５－３．１２（ｍ，３Ｈ），２．８５－２．６１（ｓ，９Ｈ），２．５３－２．４４（ｍ，２Ｈ），２．３９－１．８９（ｍ，５２Ｈ），１．８２－１．４９（ｍ，１９Ｈ），１．１９－１．０９（ｍ，１８Ｈ）。
【0148】
ステップ３：ＹＫ－ＧＡＬ－４０４の合成
Ｇ４－２（１２６ｍｇ、５０．０μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１の合成方法に従って反応を行い、淡黄色固体ＹＫ－ＧＡＬ－４０４（７８３ｍｇ、担持量：３５．９μｍｏｌ／ｇ）を得た。担体の担持量を上記の担体の担持量の一般的な測定方法に従って測定した。
Ｇ４－２（１２６ｍｇ、５０．０μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１の合成方法に従って反応を行い、淡黄色固体ＹＫ－ＧＡＬ－４０４（７８３ｍｇ、担持量：３５．９μｍｏｌ／ｇ）を得た。担体の担持量を上記の担体の担持量の一般的な測定方法に従って測定した。
【0149】
５．ＹＫ－ＧＡＬ－４０５の合成
合成スキームは、以下の通りである。
合成スキームは、以下の通りである。
【化40】
【0150】
ステップ１：Ｇ５－１の合成
粗生成物Ｇ１－８（５３７ｍｇ、２８０μｍｏｌ、１．４ｅｑ、ＴＦＡ）、およびＧ１－９Ｂ（調製方法は、ＣＮ１１６８５４７５４Ｂを参照する）（１２５ｍｇ、２００μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１０の合成方法に従って反応を行い、サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２１５．２。
粗生成物Ｇ１－８（５３７ｍｇ、２８０μｍｏｌ、１．４ｅｑ、ＴＦＡ）、およびＧ１－９Ｂ（調製方法は、ＣＮ１１６８５４７５４Ｂを参照する）（１２５ｍｇ、２００μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１０の合成方法に従って反応を行い、サンプルを採取してＬＣ／ＭＳにより検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２１５．２。
【0151】
ステップ２：Ｇ５－２の合成
Ｇ５－１（４８１ｍｇ、１９８μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１１の合成方法に従って反応を行い、白色固体Ｇ５－２（１７３ｍｇ、６８．４μｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２６５．２；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．５３（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２５－７．１６（ｍ，４Ｈ），７．０５－６．９１（ｍ，４Ｈ），６．８５－６．７２（ｍ，６Ｈ），６．８５－６．７２（ｍ，２Ｈ），５．４８－５．４５（ｍ，４Ｈ），５．３９（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），５．１２－４．９９（ｍ，３Ｈ），４．５７－４．３２（ｍ，１１Ｈ），４．１９－４．０６（ｍ，６Ｈ），３．９６－３．８７（ｍ，４Ｈ），３．８５－３．７９（ｍ，１４Ｈ），３．６８（ｓ，６Ｈ），３．６３－３．５６（ｍ，１２Ｈ），３．３７－３．２５（ｍ，１１Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，５Ｈ），３．１１－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．４８－２．３４（ｍ，１２Ｈ），２．２１－１．９８（ｍ，２５Ｈ），１．８２－１．６１（ｍ，１４Ｈ），１．２８－１．０８（ｍ，１３Ｈ）。
Ｇ５－１（４８１ｍｇ、１９８μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１１の合成方法に従って反応を行い、白色固体Ｇ５－２（１７３ｍｇ、６８．４μｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２６５．２；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．５３（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２５－７．１６（ｍ，４Ｈ），７．０５－６．９１（ｍ，４Ｈ），６．８５－６．７２（ｍ，６Ｈ），６．８５－６．７２（ｍ，２Ｈ），５．４８－５．４５（ｍ，４Ｈ），５．３９（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），５．１２－４．９９（ｍ，３Ｈ），４．５７－４．３２（ｍ，１１Ｈ），４．１９－４．０６（ｍ，６Ｈ），３．９６－３．８７（ｍ，４Ｈ），３．８５－３．７９（ｍ，１４Ｈ），３．６８（ｓ，６Ｈ），３．６３－３．５６（ｍ，１２Ｈ），３．３７－３．２５（ｍ，１１Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，５Ｈ），３．１１－２．８９（ｍ，４Ｈ），２．４８－２．３４（ｍ，１２Ｈ），２．２１－１．９８（ｍ，２５Ｈ），１．８２－１．６１（ｍ，１４Ｈ），１．２８－１．０８（ｍ，１３Ｈ）。
【0152】
ステップ３：ＹＫ－ＧＡＬ－４０５の合成
Ｇ５－２（１７１ｍｇ、６７．５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１の合成方法に従って反応を行い、淡黄色固体ＹＫ－ＧＡＬ－４０５（１．１ｇ、担持量：３５．９μｍｏｌ／ｇ）を得た。担体の担持量を上記の担体の担持量の一般的な測定方法に従って測定した。
Ｇ５－２（１７１ｍｇ、６７．５μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１の合成方法に従って反応を行い、淡黄色固体ＹＫ－ＧＡＬ－４０５（１．１ｇ、担持量：３５．９μｍｏｌ／ｇ）を得た。担体の担持量を上記の担体の担持量の一般的な測定方法に従って測定した。
【0153】
６．ＹＫ－ＧＡＬ－４０６の合成
合成スキームは、以下の通りである。
合成スキームは、以下の通りである。
【化41】
【0154】
ステップ１：Ｇ６－１の合成
粗生成物Ｇ１－８（４０２ｍｇ、２１０μｍｏｌ、１．４ｅｑ、ＴＦＡ）、およびＧ１－９Ｃ（調製方法は、ＣＮ１１６８５４７５４Ｂを参照する）（８８ｍｇ、１５０μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１０の合成方法に従って反応を行い、サンプルを採取してＬＣ／ＭＳで検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１１９８．０。
粗生成物Ｇ１－８（４０２ｍｇ、２１０μｍｏｌ、１．４ｅｑ、ＴＦＡ）、およびＧ１－９Ｃ（調製方法は、ＣＮ１１６８５４７５４Ｂを参照する）（８８ｍｇ、１５０μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１０の合成方法に従って反応を行い、サンプルを採取してＬＣ／ＭＳで検出したところ、原料が消えたことを示した。反応液をそのまま次のステップに用いた。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１１９８．０。
【0155】
ステップ２：Ｇ６－２の合成
Ｇ６－１（４７９ｍｇ、１５０μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１１の合成方法に従って反応を行い、白色固体Ｇ６－２（１４６ｍｇ、５８．８μｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２４７．８；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．４７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３６－７．３１（ｍ，３Ｈ），７．２７－７．２３（ｍ，４Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５－７．０８（ｍ，２Ｈ），７．０４－６．９７（ｍ，４Ｈ），６．９０－６．８３（ｍ，３Ｈ），５．５４－５．５１（ｍ，２Ｈ），５．４２（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，２Ｈ），５．３６（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．８９－４．８１（ｍ，１Ｈ），４．５５－４．４７（ｍ，５Ｈ），４．３８－４．２４（ｍ，７Ｈ），４．１６－４．０４（ｍ，４Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．７４－３．６５（ｍ，１１Ｈ），３．５９－３．５２（ｍ，４Ｈ），３．４６－３．２８（ｍ，１５Ｈ），２．８３－２．７８（ｍ，７Ｈ），２．６４（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ），２．５９－２．５０（ｍ，４Ｈ），２．４７－２．４１（ｍ，４Ｈ），２．３３－１．９７（ｍ，３３Ｈ），１．８６－１．６２（ｍ，２０Ｈ），１．３７－１．２９（ｍ，５Ｈ），１．１６－１．１３（ｍ，１３Ｈ）。
Ｇ６－１（４７９ｍｇ、１５０μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、Ｇ１－１１の合成方法に従って反応を行い、白色固体Ｇ６－２（１４６ｍｇ、５８．８μｍｏｌ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ－２Ｈ］２－：１２４７．８；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δｐｐｍ７．４７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３６－７．３１（ｍ，３Ｈ），７．２７－７．２３（ｍ，４Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１５－７．０８（ｍ，２Ｈ），７．０４－６．９７（ｍ，４Ｈ），６．９０－６．８３（ｍ，３Ｈ），５．５４－５．５１（ｍ，２Ｈ），５．４２（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，２Ｈ），５．３６（ｔ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．８９－４．８１（ｍ，１Ｈ），４．５５－４．４７（ｍ，５Ｈ），４．３８－４．２４（ｍ，７Ｈ），４．１６－４．０４（ｍ，４Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．７４－３．６５（ｍ，１１Ｈ），３．５９－３．５２（ｍ，４Ｈ），３．４６－３．２８（ｍ，１５Ｈ），２．８３－２．７８（ｍ，７Ｈ），２．６４（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，４Ｈ），２．５９－２．５０（ｍ，４Ｈ），２．４７－２．４１（ｍ，４Ｈ），２．３３－１．９７（ｍ，３３Ｈ），１．８６－１．６２（ｍ，２０Ｈ），１．３７－１．２９（ｍ，５Ｈ），１．１６－１．１３（ｍ，１３Ｈ）。
【0156】
ステップ３：ＹＫ－ＧＡＬ－４０６の合成
Ｇ６－２（１４６ｍｇ、５８．８μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１の合成方法に従って反応を行い、淡黄色固体ＹＫ－ＧＡＬ－４０６（８３２ｍｇ、担持量：３４．１μｍｏｌ／ｇ）を得た。担体の担持量を上記の担体の担持量の一般的な測定方法に従って測定した。
Ｇ６－２（１４６ｍｇ、５８．８μｍｏｌ、１．０ｅｑ）を原料として、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１の合成方法に従って反応を行い、淡黄色固体ＹＫ－ＧＡＬ－４０６（８３２ｍｇ、担持量：３４．１μｍｏｌ／ｇ）を得た。担体の担持量を上記の担体の担持量の一般的な測定方法に従って測定した。
【0157】
７．対照品ＹＫ－ＧＡＬ－３０１の合成
ＣＮ１１６８５４７５４Ｂの明細書の第３５ページにおけるＹＫ－ＧＡＬ－３０１の合成方法に従って、目的の生成物を得た。
【化42】
【0158】
８．対照品ＧａｌＮＡｃ１ｂの合成
ＷＯ２０２３０１４９３８Ａ１の明細書の第１４５ページにおけるＧａｌＮＡｃ１ｂの合成方法に従って、生成物３７７．２ｍｇ（総収率０．５８％であった）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１３７．９。
【化43】
【0159】
９．対照品ＮＡＧ００５２の合成
ＷＯ２０２３１０９９３８Ａ１の明細書の第１００ページにおけるＮＡＧ００５２の合成方法に従って、生成物２８８ｍｇ（総収率１．２６％、担持量３１．５μｍｏｌ／ｇ）を得た。
【化44】
【0160】
実施例２：ＧａｌＮＡｃ化合物とオリゴヌクレオチドとの結合
本実施例では、合成に同一のｓｉＲＮＡ配列が使用され、コンジュゲートされたｓｉＲＮＡ配列は、番号がｉｎｃの配列であり、ｉｎｃ配列は、以下の通りである。
センス鎖（ｉｎｃ－ＳＳ）：５'－Ｃｍｓ－Ｕｍｓ－Ａｍ－Ｇｍ－Ａｍ－Ｃｍ－Ｃｆ－Ｕｍ－Ｇｆ－Ｕｍ－ｄＴ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｇｍ－Ｃｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｇｍ－Ｕｍ－３'（配列番号４６）
アンチセンス鎖（ｉｎｃ－ＡＳ）：５'－Ａｍｓ－Ｃｆｓ－Ａｍ－Ａｆ－Ａｆ－Ａｆ－Ｇｍ－Ｃｆ－Ａｍ－Ａｆ－Ａｍ－Ａｆ－Ｃｍ－Ａｆ－Ｇｍ－Ｇｆ－Ｕｍ－Ｃｆ－Ｕｍ－Ａｍ－Ｇｍｓ－Ａｍｓ－Ａｍ－３'（配列番号４７）
ここで、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇは、ヌクレオチドの塩基組成、ｄＴは、デオキシチミンヌクレオチド、ｍは、ｍの左側に隣接するヌクレオチドが２'－ＯＭｅ修飾であること、ｆは、ｆの左側に隣接するヌクレオチドが２'－Ｆ修飾であること、ｓは、ｓの左側と右側に隣接する２つのヌクレオチド同士がチオホスフェート基によって連結されることを表す。
本実施例では、合成に同一のｓｉＲＮＡ配列が使用され、コンジュゲートされたｓｉＲＮＡ配列は、番号がｉｎｃの配列であり、ｉｎｃ配列は、以下の通りである。
センス鎖（ｉｎｃ－ＳＳ）：５'－Ｃｍｓ－Ｕｍｓ－Ａｍ－Ｇｍ－Ａｍ－Ｃｍ－Ｃｆ－Ｕｍ－Ｇｆ－Ｕｍ－ｄＴ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｇｍ－Ｃｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｕｍ－Ｇｍ－Ｕｍ－３'（配列番号４６）
アンチセンス鎖（ｉｎｃ－ＡＳ）：５'－Ａｍｓ－Ｃｆｓ－Ａｍ－Ａｆ－Ａｆ－Ａｆ－Ｇｍ－Ｃｆ－Ａｍ－Ａｆ－Ａｍ－Ａｆ－Ｃｍ－Ａｆ－Ｇｍ－Ｇｆ－Ｕｍ－Ｃｆ－Ｕｍ－Ａｍ－Ｇｍｓ－Ａｍｓ－Ａｍ－３'（配列番号４７）
ここで、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｇは、ヌクレオチドの塩基組成、ｄＴは、デオキシチミンヌクレオチド、ｍは、ｍの左側に隣接するヌクレオチドが２'－ＯＭｅ修飾であること、ｆは、ｆの左側に隣接するヌクレオチドが２'－Ｆ修飾であること、ｓは、ｓの左側と右側に隣接する２つのヌクレオチド同士がチオホスフェート基によって連結されることを表す。
【0161】
この配列は、公開配列から取得されており、海外で販売されているｓｉＲＮＡ薬インクリシラン（ｉｎｃｌｉｓｉｒａｎ）のオリゴヌクレオチド配列である。
【0162】
インクリシラン配列は、ＰＣＳＫ９タンパク質をコードするｍＲＮＡを標的として結合し、ＲＮＡ干渉メカニズムを通じてＰＣＳＫ９タンパク質の生成を阻害することによってＬＤＬ受容体のリサイクルと再利用を調節し、ＬＤＬとの結合を強化し、血中のＬＤＬレベルを低下させる目的を達成させる、化学的に修飾された合成二本鎖低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。
【0163】
１．ＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡセンス鎖の調製
ホスホロアミダイト化学法に従って、固相担体上にオリゴヌクレオチドＧａｌＮＡｃコンジュゲートを合成した。ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２コンジュゲートを合成する場合、実施例１で合成されたＧａｌＮＡｃ－ＣＰＧ化合物を固相担体として使用した。ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂコンジュゲートを合成する場合、一般的なＣＰＧを固相担体として、対照品ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂモノマーを最初のモノマーとして結合した。ここで、ＧａｌＮＡｃは、すべてｓｉＲＮＡセンス鎖の３'末端にコンジュゲートされ、使用されるＧａｌＮＡｃ化合物の具体的な構造は、表１に示される。
ホスホロアミダイト化学法に従って、固相担体上にオリゴヌクレオチドＧａｌＮＡｃコンジュゲートを合成した。ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２コンジュゲートを合成する場合、実施例１で合成されたＧａｌＮＡｃ－ＣＰＧ化合物を固相担体として使用した。ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂコンジュゲートを合成する場合、一般的なＣＰＧを固相担体として、対照品ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂモノマーを最初のモノマーとして結合した。ここで、ＧａｌＮＡｃは、すべてｓｉＲＮＡセンス鎖の３'末端にコンジュゲートされ、使用されるＧａｌＮＡｃ化合物の具体的な構造は、表１に示される。
【0164】
表１．ｓｉＲＮＡセンス鎖にコンジュゲートされるＧａｌＮＡｃ化合物
【表5】
【0165】
実験プロセス
（１）試薬およびモノマーの準備
モノマーのアセトニトリル溶液（１／２０、ｗ／ｖ）、０．２５Ｍの５－ベンジルメルカプトテトラゾールのアセトニトリル溶液を活性化剤とし、０．２Ｍのキサンタンヒドリドのアセトニトリル／ピリジン（１／４、ｖ／ｖ）溶液をチオ化試薬とし、０．０５Ｍのヨウ素の水／ピリジン（１／９、ｖ／ｖ）溶液を酸化試薬し、２０％の無水酢酸（アセトニトリル中（ｖ／ｖ）である）をキャップ剤Ａとし、２０／３０／５０（１－メチルイミダゾール／ピリジン／アセトニトリル、ｖ／ｖ／ｖ）をキャップ剤Ｂとし、２０％のジエチルアミン（アセトニトリル中（ｖ／ｖ）である）を脱シアノエチル化試薬とし、３％のジクロロ酢酸（トルエン中（ｖ／ｖ）である）を脱ＤＭＴ試薬として、対応するＣＰＧ担体を選択し、１９２ＰモデルＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成装置の指定された試薬位置に置いた。
（１）試薬およびモノマーの準備
モノマーのアセトニトリル溶液（１／２０、ｗ／ｖ）、０．２５Ｍの５－ベンジルメルカプトテトラゾールのアセトニトリル溶液を活性化剤とし、０．２Ｍのキサンタンヒドリドのアセトニトリル／ピリジン（１／４、ｖ／ｖ）溶液をチオ化試薬とし、０．０５Ｍのヨウ素の水／ピリジン（１／９、ｖ／ｖ）溶液を酸化試薬し、２０％の無水酢酸（アセトニトリル中（ｖ／ｖ）である）をキャップ剤Ａとし、２０／３０／５０（１－メチルイミダゾール／ピリジン／アセトニトリル、ｖ／ｖ／ｖ）をキャップ剤Ｂとし、２０％のジエチルアミン（アセトニトリル中（ｖ／ｖ）である）を脱シアノエチル化試薬とし、３％のジクロロ酢酸（トルエン中（ｖ／ｖ）である）を脱ＤＭＴ試薬として、対応するＣＰＧ担体を選択し、１９２ＰモデルＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成装置の指定された試薬位置に置いた。
【0166】
（２）粗製品の合成
指定されたオリゴヌクレオチド配列を入力し、合成プログラムを設定し正しいことを確認した後、オリゴヌクレオチド合成を繰り返し始めた。モノマー結合時間は約１分間、そのうち、酸化時間は約３０～４５秒、硫化時間は約２分間である。サイクルが完了すると、オリゴヌクレオチドの固相合成が完了した。
指定されたオリゴヌクレオチド配列を入力し、合成プログラムを設定し正しいことを確認した後、オリゴヌクレオチド合成を繰り返し始めた。モノマー結合時間は約１分間、そのうち、酸化時間は約３０～４５秒、硫化時間は約２分間である。サイクルが完了すると、オリゴヌクレオチドの固相合成が完了した。
【0167】
（３）脱保護
合成が完了した後、固相担体を反応器に移し、濃アンモニア水（２５～２８％）を用いて５０～６０℃の条件で１６～２４時間かけてオリゴヌクレオチドを固相担体から分解し、系を室温まで冷却した後、濾過し、精製水とエタノールとの混合溶液でリンスし、濾液を合わせ、濾液を低温で濃縮して粗残留物を得た。
合成が完了した後、固相担体を反応器に移し、濃アンモニア水（２５～２８％）を用いて５０～６０℃の条件で１６～２４時間かけてオリゴヌクレオチドを固相担体から分解し、系を室温まで冷却した後、濾過し、精製水とエタノールとの混合溶液でリンスし、濾液を合わせ、濾液を低温で濃縮して粗残留物を得た。
【0168】
（４）精製
脱保護後の粗残留物を精製水に溶解し、ＨＰＬＣで精製し、生成物のピ－ク溶液を回収してマイクロプレートリーダで含有量を測定し、ＥＳＩＭＳで分子量を確認した。
脱保護後の粗残留物を精製水に溶解し、ＨＰＬＣで精製し、生成物のピ－ク溶液を回収してマイクロプレートリーダで含有量を測定し、ＥＳＩＭＳで分子量を確認した。
【0169】
２．ＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされていないｓｉＲＮＡアンチセンス鎖の調製
ｓｉＲＮＡセンス鎖の合成方法に従ってｓｉＲＮＡアンチセンス鎖を合成した。ここで、一般的なＣＰＧ固相担体が使用され、センス鎖に相補的な各アンチセンス鎖の合成スケールは１μｍｏｌであった。
ｓｉＲＮＡセンス鎖の合成方法に従ってｓｉＲＮＡアンチセンス鎖を合成した。ここで、一般的なＣＰＧ固相担体が使用され、センス鎖に相補的な各アンチセンス鎖の合成スケールは１μｍｏｌであった。
【0170】
３．コンジュゲートされる二本鎖ｓｉＲＮＡの調製
ｓｉＲＮＡセンス鎖と相補アンチセンス鎖をＵＶ吸収含有量に従った１：１の比率で混合し、９５℃に加熱し、３分間後に室温まで冷却して二重鎖を形成した。得られた二本鎖溶液をＨＰＬＣで表徴した結果、生成物の純度が合格すると、マイクロプレートリーダで含有量を測定し、凍結乾燥して固体粉末を得て、後で使用するために保存した。
ｓｉＲＮＡセンス鎖と相補アンチセンス鎖をＵＶ吸収含有量に従った１：１の比率で混合し、９５℃に加熱し、３分間後に室温まで冷却して二重鎖を形成した。得られた二本鎖溶液をＨＰＬＣで表徴した結果、生成物の純度が合格すると、マイクロプレートリーダで含有量を測定し、凍結乾燥して固体粉末を得て、後で使用するために保存した。
【0171】
表１において、ＧａｌＮＡｃ化合物は、それぞれ、番号がｉｎｃのｓｉＲＮＡにコンジュゲートされ、得られたコンジュゲートは、それぞれ、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２と命名される。
【0172】
【化45】
【化46】
【化47】
【化48】
【化49】
【化50】
【化51】
【化52】
【化53】
【0173】
実施例３：ＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡによるマウスの血清および肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の阻害作用およびＬＤＬ－Ｃレベルへの影響
ＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされたインクリシランｓｉＲＮＡ配列が血中に入ると、ＧａｌＮＡｃを介して肝細胞膜上のＡＳＧＰＲに結合し、肝細胞内に入る。インクリシランｓｉＲＮＡ配列は、肝細胞に入ると、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に結合し、アンチセンス鎖の仲介によりＰＣＳＫ９タンパク質をコードするｍＲＮＡに結合し、ＰＣＳＫ９タンパク質の生成を阻害する。肝臓中のＰＣＳＫ９タンパク質の減少は、ＬＤＬ－Ｒの循環を促進し、肝細胞表面のＬＤＬ－Ｒ受容体の数を増加させ、さらに血漿ＬＤＬ－Ｃレベルを低下させることができる。したがって、肝臓に送達されるインクリシランｓｉＲＮＡ配列の量が多いほど、つまりＧａｌＮＡｃ送達効率が高いほど、肝臓および血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の量が少なくなり、肝臓内のＬＤＬ－Ｃレベルが低下する。
ＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされたインクリシランｓｉＲＮＡ配列が血中に入ると、ＧａｌＮＡｃを介して肝細胞膜上のＡＳＧＰＲに結合し、肝細胞内に入る。インクリシランｓｉＲＮＡ配列は、肝細胞に入ると、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に結合し、アンチセンス鎖の仲介によりＰＣＳＫ９タンパク質をコードするｍＲＮＡに結合し、ＰＣＳＫ９タンパク質の生成を阻害する。肝臓中のＰＣＳＫ９タンパク質の減少は、ＬＤＬ－Ｒの循環を促進し、肝細胞表面のＬＤＬ－Ｒ受容体の数を増加させ、さらに血漿ＬＤＬ－Ｃレベルを低下させることができる。したがって、肝臓に送達されるインクリシランｓｉＲＮＡ配列の量が多いほど、つまりＧａｌＮＡｃ送達効率が高いほど、肝臓および血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の量が少なくなり、肝臓内のＬＤＬ－Ｃレベルが低下する。
【0174】
結果は、従来技術によるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートと比較して、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３実験群では、マウスの血清および肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率およびＬＤＬ－Ｃ低下レベルがすべて顕著に向上することを示している。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、ｉｎｃ－ＮＡＧ００５２と比較して、７日目にそれぞれ２１．５％、１４．５％、および１２．７％向上し、１４日目にそれぞれ１７．３％、１０．４％、および１０．８％向上した。マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子に対する阻害率は、１４日目にそれぞれ２１．１％、９．８％、および５．１％向上し、ＬＤＬ－Ｃ低下レベルは、７日目にそれぞれ３３．４％、１９．１％、および１６．７％向上し、１４日目にそれぞれ３６．４％、２０．６％、および１７．８％と向上し、顕著な向上が見られた。
【0175】
動物の準備
まず、ｈＰＣＳＫ９トランスジェニックマウス（ＳＰＦグレ－ド、江蘇集萃薬康生物科技股▲ふん▼有限公司から購入した）を順応的に飼育し、血清ＰＳＣＫ９タンパク質含有量に応じて、群につき５匹のマウスをすべて雄として、陰性対照群（投与なし）とｓｉＲＮＡ試験薬群にランダムに分けた。
まず、ｈＰＣＳＫ９トランスジェニックマウス（ＳＰＦグレ－ド、江蘇集萃薬康生物科技股▲ふん▼有限公司から購入した）を順応的に飼育し、血清ＰＳＣＫ９タンパク質含有量に応じて、群につき５匹のマウスをすべて雄として、陰性対照群（投与なし）とｓｉＲＮＡ試験薬群にランダムに分けた。
【0176】
投与方法および投与量
投与量６ｍｇ／ｋｇ、投与体積１ｍＬ／ｋｇ、投与濃度６ｍｇ／ｍＬで単回皮下注射により投与し、投与日を０日目とした。
投与量６ｍｇ／ｋｇ、投与体積１ｍＬ／ｋｇ、投与濃度６ｍｇ／ｍＬで単回皮下注射により投与し、投与日を０日目とした。
【0177】
１．マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対するさまざまなＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの阻害効率
本発明のＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による７日目の阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２による７日目の阻害率よりも２１．５％、１４．５％、および１２．７％向上し、１４日目の阻害率は、それぞれ１７．３％、１０．４％、および１０．８％向上した。
本発明のＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による７日目の阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２による７日目の阻害率よりも２１．５％、１４．５％、および１２．７％向上し、１４日目の阻害率は、それぞれ１７．３％、１０．４％、および１０．８％向上した。
【0178】
実験プロセス
投与前（Ｄ０）、投与後７日目（Ｄ７）、および投与後１４日目（Ｄ１４）に実験動物の眼窩静脈叢から約２００μＬの血液（抗凝固なし）を採取した。全血サンプルを遠心分離前に一時的にアイスボックスに保存し、４℃の条件、４０００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して血清を分離し、血清中のＰＣＳＫ９タンパク質のレベルをＥＬＩＳＡキット（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ社）で検出した。
投与前（Ｄ０）、投与後７日目（Ｄ７）、および投与後１４日目（Ｄ１４）に実験動物の眼窩静脈叢から約２００μＬの血液（抗凝固なし）を採取した。全血サンプルを遠心分離前に一時的にアイスボックスに保存し、４℃の条件、４０００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して血清を分離し、血清中のＰＣＳＫ９タンパク質のレベルをＥＬＩＳＡキット（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ社）で検出した。
【0179】
実験結果
投与後７日目と１４日目に、陰性対照群と各試験薬群の血清中のＰＣＳＫ９タンパク質に対する阻害率を表３と図１に示す。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９ソフトウェアを使用してデ－タの統計と分析をした。
投与後７日目と１４日目に、陰性対照群と各試験薬群の血清中のＰＣＳＫ９タンパク質に対する阻害率を表３と図１に示す。ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９ソフトウェアを使用してデ－タの統計と分析をした。
【0180】
１．ＧａｌＮＡｃ化合物の構造的差異
表２．ＧａｌＮＡｃ化合物の構造の比較
表２．ＧａｌＮＡｃ化合物の構造の比較
【表6】
【0181】
１）本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０６の化学構造は非常に類似している。
【0182】
表１および表２から、本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、ＹＫ－ＧＡＬ－４０３、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、およびＹＫ－ＧＡＬ－４０６の化学構造は、リボースの１'位がすべて酸素であり、アンテナの数がすべて３であり、アンテナにすべてトリアゾール構造が含まれているなど、非常に類似していることが分かった。
【0183】
これらの化合物では、個別の基はわずかに異なるのみであり、例えば、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、およびＹＫ－ＧＡＬ－４０３のリボースの２'置換基はメトキシ基であり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、およびＹＫ－ＧＡＬ－４０６のそれは、水素であり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０４の主鎖構造は、いずれも－（ＣＨ２）１０Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０５のそれは、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０６のそれは、－（ＣＨ２）８Ｃ（Ｏ）ＮＨ－である。また、アンテナの鎖の長さは、わずかに異なるが、残りの構造は、まったく同じである。
【0184】
２）従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－ＧＡＬ－４０６のうち、化学構造が非常に類似しているものも、非常に異なっているものもある。
【0185】
本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、ＹＫ－ＧＡＬ－４０３、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、およびＹＫ－ＧＡＬ－４０６は、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－３０１およびＮＡＧ００５２と比較して、化学構造が非常に類似している。例えば、ＹＫ－ＧＡＬ－３０１およびＮＡＧ００５２も３つのアンテナを含み、主鎖構造には脂肪鎖とアミド結合が含まれているが、ＹＫ－ＧＡＬ－３０１およびＮＡＧ００５２のアンテナにはトリアゾール構造が含まれていない。
【0186】
本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物は、ＧａｌＮＡｃ１ｂとは化学構造が大きく異なり、例えば、ＧａｌＮＡｃ１ｂは、アンテナが１つしかなく、鎖が非常に短く、鎖にトリアゾール構造が含まれていない。
【0187】
２．マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対するさまざまなＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡによる阻害率
表３．マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率
表３．マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率
【表7】
【0188】
１）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡでは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率に顕著な差があり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による阻害率は、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４～４０６による阻害率よりも顕著に高かった。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１は、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による阻害率よりも、２０．７％、および１６．０％向上した。
【0189】
表３から、本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡのいずれもマウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現を阻害できることが分かった。異なるＧａｌＮＡｃコンジュゲート同士には、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率に顕著な差があった。ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６による７日目の阻害率は、それぞれ９４．２％、９２．４％、９３．１％、７３．５％、８４．３％、および８５．０％であり、１４日目の阻害率は、それぞれ９５．４％、９２．８％、９４．３％、７９．４％、８８．７％、および９０．２％であった。
【0190】
ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による阻害率は、すべて９０％を超え、一方、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による阻害率は、７０％～８０％の間であり、阻害率の最も高いｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１は、７日目および１４日目には、それぞれ阻害率の最も低いｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４よりも、阻害率がそれぞれ２０．７％、および１６．０％向上し、顕著な向上が見られた。
【0191】
２）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－ＧＡＬ－４０３に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、７日目および１４日目には、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による阻害率よりもそれぞれ２１．５％、および１７．３％向上した。
【0192】
従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたｓｉＲＮＡコンジュゲートｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２の７日目の阻害率は、それぞれ７２．７％、７９．７％、および８１．５％であり、１４日目の阻害率は、それぞれ７８．１％、８５．０％、および８４．６％であった。
【0193】
本発明のＧａｌＮＡｃ化合物に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による７日目の阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による７日目の阻害率よりもそれぞれ２１．５％、１９．７％、および２０．４％向上し、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂによる７日目の阻害率よりも１４．５％、１１．９％、および１３．４％向上し、ｉｎｃ－ＮＡＧ００５２による７日目の阻害率よりも１２．７％、１０．９％、および１１．６％向上し、顕著な向上が見られた。１４日目の阻害率は、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による１４日目の阻害率よりも１７．３％、１４．７％、および１６．２％向上し、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂによる１４日目の阻害率よりも１０．４％、７．８％、および９．３％向上し、ｉｎｃ－ＮＡＧ００５２による１４日目の阻害率よりも１０．８％、８．２％、および９．７％向上し、顕著な向上が見られた。
【0194】
３）構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物とｓｉＲＮＡとのコンジュゲートでは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率に顕著な差がある。
【0195】
本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物は、構造が非常に類似しているが、ｓｉＲＮＡコンジュゲートの活性が非常に顕著に異なる。例えば、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１とＹＫ－ＧＡＬ－４０４を比較すると、リボース環の２'位のみが異なり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１は、メトキシ基であり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４は、水素であり、残りの構造は、まったく同じであるが、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４よりもマウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が２０％以上向上し、顕著な向上が見られた。
【0196】
ＹＫ－ＧＡＬ－４０６とＹＫ－ＧＡＬ－３０１を比較すると、主鎖とアテンナ鎖部のみが異なり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０６の主鎖は、ＹＫ－ＧＡＬ－３０１よりも２つのメチレン基分少なく、ＹＫ－ＧＡＬ－４０６のアテンナ鎖部にはトリアゾール構造があり、ＹＫ－ＧＡＬ－３０１のアテンナ鎖部にはトリアゾール構造がなかった。しかし、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６による７日目の阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１よりも１２．３％向上し、顕著な向上が見られた。
【0197】
ＹＫ－ＧＡＬ－４０１とｉｎｃ－ＮＡＧ００５２を比較すると、個別の基はわずかに異なるのみであるが、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による７日目の阻害率は、ｉｎｃ－ＮＡＧ００５２による７日目の阻害率よりも１２．７％向上し、顕著な向上が見られた。
【0198】
したがって、化学構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物であれば、オリゴヌクレオチド送達効率が必ずしも近いわけではなく、それらで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が一致しておらず、非常に大きな差がある可能性もある。
【0199】
３．マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９に対するさまざまなＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの阻害効率
本発明のＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、およびｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂによる阻害率よりも２１．１％、および９．８％向上し、顕著な向上が見られた。
本発明のＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、およびｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂによる阻害率よりも２１．１％、および９．８％向上し、顕著な向上が見られた。
【0200】
実験プロセス
投与後１４日目（Ｄ１４）に実験動物を麻酔して殺し、灌流して肝臓を採取した。
投与後１４日目（Ｄ１４）に実験動物を麻酔して殺し、灌流して肝臓を採取した。
【0201】
組織重量に応じて、ＲＮＡ溶解液（ｔｒｉｚｏｌ、Ａｍｂｉｏｎ社）＝１００ｍｇ：１ｍＬを、ＲＮＡ溶解液（ｔｒｉｚｏｌ）１ｍＬを容れた１．５ｍＬＲＮａｓｅフリーＥＰチューブに素早く入れ、チューブに３ｍｍのスチールビーズ（ＲＮＡフリー処理済み）を３個加え、組織ホモジナイザ－に入れ、５０Ｈｚで３０秒間運転し、１０秒間停止し、３回運転すると、組織ホモジネートを調製した。
【0202】
４℃、１２，０００×ｇで３分間遠心分離し、ホモゲネート上清４００μＬを１．５ｍＬＲＮａｓｅフリーＥＰチューブに移し、氷上に置いた。各チューブにクロロホルム８０μＬを加え、１５秒間激しく振とうし、室温で５分間静置した。４℃、１２，０００×ｇで１５分間遠心分離し、上清１５０μＬを新しいＥＰチューブに移した。
【0203】
等体積のイソプロパノールを加え、チューブを逆さまにしてその中の液体を軽く均一に混合し、－２０℃で１０分間放置した後、４℃、１２，０００×ｇで１５分間遠心し、上清を捨てた。
【0204】
７５％エタノール１ｍＬを加えてＲＮＡ沈殿物を穏やかに洗浄し、４℃、７，５００×ｇで５分間遠心分離し、上清を吸引除去した。リンスをもう一度繰り返し、４℃、７，５００×ｇで５分間遠心分離し、マイクロピペットチップを使用して残留エタノールを除去した。
【0205】
残留エタノールを室温で１０分間乾燥させ、ＲＮａｓｅフリーｄｄＨ２Ｏ１５０μＬを加えて溶解した。微量ＵＶ分光光度計を使用してＲＮＡ濃度を検出した。ＰＣＳＫ９遺伝子の発現をｑＰＣＲによって検出した。
【0206】
実験結果
ｑＰＣＲ結果（Ｍｅａｎ±ＳＤ）を統計し、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９ソフトウェアを使用してプロットしてデータを統計し、具体的な結果を表４と図２に示す。
ｑＰＣＲ結果（Ｍｅａｎ±ＳＤ）を統計し、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９ソフトウェアを使用してプロットしてデータを統計し、具体的な結果を表４と図２に示す。
【0207】
表４．マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率
【表8】
【0208】
１）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡでは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率に顕著な差があり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－ＧＡＬ－４０３による阻害率は、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４～ＹＫ－ＧＡＬ－４０６による阻害率よりも顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による阻害率よりも１９．４％向上した。
【0209】
表４から、本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡのいずれもマウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害できることが分かった。異なるＧａｌＮＡｃコンジュゲート同士には、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率に顕著な差があった。ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６による阻害率は、それぞれ９０．９％、８９．３％、９０．１％、７１．５％、８３．２％、および８１．６％であった。
【0210】
ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による阻害率は、すべて９０％を超え、一方、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２による阻害率も８９．３％に達し、一方、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による阻害率は、僅か７１．５％であり、阻害率の最も高いｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１は、阻害率の最も低いｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４よりも阻害率が１９．４％し向上、顕著な向上が見られた。
【0211】
２）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－ＧＡＬ－４０３に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による阻害率よりも２１．１％向上した。
【0212】
従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたｓｉＲＮＡがコンジュゲートされたｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２の阻害率は、それぞれ６９．８％、８１．１％、および８５．８％であった。
【0213】
本発明のＧａｌＮＡｃ化合物に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による阻害率は、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による阻害率よりも２１．１％、１９．５％、および２０．３％向上し、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂによる阻害率よりも９．８％、８．２％、および９．０％向上し、顕著な向上が見られた。
【0214】
３）構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物とｓｉＲＮＡとのコンジュゲートは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率に顕著な差がある。
【0215】
本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物は、構造が非常に類似しているが、ｓｉＲＮＡコンジュゲートの活性が非常に顕著に異なる。例えば、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１とＹＫ－ＧＡＬ－４０４を比較すると、リボース環の２'位のみが異なり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１は、メトキシ基であり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４は、水素であり、残りの構造は、まったく同じであるが、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４よりもマウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が１９．４％向上し、顕著な向上が見られた。
【0216】
ＹＫ－ＧＡＬ－４０６とＹＫ－ＧＡＬ－３０１を比較すると、主鎖とアテンナ鎖部のみが異なり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０６の主鎖は、ＹＫ－ＧＡＬ－３０１よりも２つのメチレン基分少なく、ＹＫ－ＧＡＬ－４０６のアテンナ鎖部にはトリアゾール構造があり、ＹＫ－ＧＡＬ－３０１のアテンナ鎖部にはトリアゾール構造がなかった。しかしながら、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６による阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による阻害率よりも１１．８％向上し、顕著な向上が見られた。
【0217】
したがって、化学構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物であれば、オリゴヌクレオチド送達効率が必ずしも近いわけではなく、それらで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が一致しておらず、非常に大きな差がある可能性もある。
【0218】
４．マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃレベルに対するさまざまなＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの影響
本発明のＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルが顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１群によるマウスの１４日目のＬＤＬ－Ｃ低下レベルは、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびＮＡＧ００５２群のそれよりも３６．４％、２０．６％、および１７．８％向上し、顕著な向上が見られた。
本発明のＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルが顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１群によるマウスの１４日目のＬＤＬ－Ｃ低下レベルは、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびＮＡＧ００５２群のそれよりも３６．４％、２０．６％、および１７．８％向上し、顕著な向上が見られた。
【0219】
実験プロセス
投与前（Ｄ０）、投与後７日目（Ｄ７）、および投与後１４日目（Ｄ１４）に実験動物の眼窩静脈叢から約２００μＬの血液（抗凝固なし）を採取した。全血サンプルを遠心分離前に一時的にアイスボックスに保存し、４℃、４０００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して血清を分離し、血清ＬＤＬ－Ｃのレベルを検出した。
投与前（Ｄ０）、投与後７日目（Ｄ７）、および投与後１４日目（Ｄ１４）に実験動物の眼窩静脈叢から約２００μＬの血液（抗凝固なし）を採取した。全血サンプルを遠心分離前に一時的にアイスボックスに保存し、４℃、４０００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心分離して血清を分離し、血清ＬＤＬ－Ｃのレベルを検出した。
【0220】
実験結果
血清ＬＤＬ－Ｃ（Ｍｅａｎ±ＳＤ）を統計し、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９ソフトウェアを使用してプロットしてデータを分析し、具体的な結果を表５と図３に示す。
血清ＬＤＬ－Ｃ（Ｍｅａｎ±ＳＤ）を統計し、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９ソフトウェアを使用してプロットしてデータを分析し、具体的な結果を表５と図３に示す。
【0221】
表５．マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃの低下レベル
【表9】
【0222】
１）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡでは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃレベルに対する低下に顕著な差があり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－ＧＡＬ－４０３による低下レベルは、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４～４０６による低下レベルよりも顕著に高かった。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による低下レベルは、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による低下レベルよりも３３．０％、および３６．０％向上し、顕著な向上が見られた。
【0223】
表５から、本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡのいずれも、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃレベルを低下できることが分かった。異なるＧａｌＮＡｃコンジュゲートには、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルに顕著な差があった。ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０５、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６による７日目の低下レベルは、それぞれ４９．２％、３９．６％、４４．５％、１６．２％、３３．７％、および３０．３％であり、１４日目の低下レベルは、それぞれ５３．５％、４１．３％、５０．４％、１７．５％、３５．０％、および３２．２％であった。
【0224】
ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３のいずれにおいても、７日目の低下レベルは、４０％を超え、１４日目の低下レベルは、５０％を超え、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２においても、７日目の低下レベルは３９．６％に達し、１４日目の低下レベルは、４１．３％に達し、一方、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４においては、７日目の低下レベルは、わずか１６．２％であり、１４日目の低下レベルは、僅かに１７．５％であり、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による７日目の低下レベルは、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４のそれよりも３３．０％、２３．４％、および２８．３％向上し、１４日目の低下レベルは、それぞれ３６．０％、２３．８％、および３２．９％向上し、顕著な向上が見られた。
【0225】
２）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－ＧＡＬ－４０３に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルに顕著な向上が見られた。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による低下レベルは、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による低下レベルよりも３３．４％、および３６．４％向上した。
【0226】
従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたｓｉＲＮＡがコンジュゲートされたｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２においては、７日目のＬＤＬ－Ｃ低下レベルは、それぞれ１５．８％、３０．１％、および３２．５％であり、１４日目のＬＤＬ－Ｃ低下レベルは、それぞれ１７．１％、３２．９％、および３５．７％であった。
【0227】
本発明のＧａｌＮＡｃ化合物に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルに顕著な向上が見られた。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３は、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１よりも７日目の低下レベルが３３．４％、２３．８％、および２８．７％向上し、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂよりも７日目の低下レベルが１９．１％、９．５％、および１４．４％向上し、ｉｎｃ－ＮＡＧ００５２よりも７日目の低下レベルが１６．７％、７．１％、および１２．０％向上し、顕著な向上が見られた。それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１よりも１４日目の低下レベルが３６．４％、２４．２％、および３３．３％向上し、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂよりも１４日目の低下レベルが２０．６％、８．４％、および１７．５％向上し、ｉｎｃ－ＮＡＧ００５２よりも１４日目の低下レベルが１７．８％、５．６％、および１４．７％向上し、顕著な向上が見られた。
【0228】
３）構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物とｓｉＲＮＡとのコンジュゲートでは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルに顕著な差がある。
【0229】
本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物は、構造が非常に類似しているが、ｓｉＲＮＡコンジュゲートの活性が非常に顕著に異なる。例えば、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１とＹＫ－ＧＡＬ－４０４を比較すると、リボース環の２'位のみが異なり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０１は、メトキシ基であり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０４は、水素であり、残りの構造は、まったく同じであるが、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４よりもマウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルが３０％以上向上し、顕著な向上が見られた。
【0230】
ＹＫ－ＧＡＬ－４０６とＹＫ－ＧＡＬ－３０１を比較すると、主鎖とアテンナ鎖部のみが異なり、ＹＫ－ＧＡＬ－４０６の主鎖は、ＹＫ－ＧＡＬ－３０１よりも２つのメチレン基分少なく、ＹＫ－ＧＡＬ－４０６のアテンナ鎖部にはトリアゾール構造があり、ＹＫ－ＧＡＬ－３０１のアテンナ鎖部にはトリアゾール構造がなかった。しかし、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０６は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１よりもマウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルが１５．１％向上し、顕著な向上が見られた。
【0231】
ＹＫ－ＧＡＬ－４０１とｉｎｃ－ＮＡＧ００５２を比較すると、個別の基はわずかに異なるのみであるが、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１は、ｉｎｃ－ＮＡＧ００５２よりも、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルが１７．８％向上し、顕著な向上が見られた。
【0232】
したがって、化学構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物であれば、オリゴヌクレオチド送達効率が必ずしも近いわけではなく、それらで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が一致しておらず、非常に大きな差がある可能性もある。
【0233】
実施例４：マウスの体内のさまざまな組織と臓器におけるさまざまなＧａｌＮＡｃがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡの分布
結果は、本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物が核酸を動物の肝臓に効率的に送達できることを示している。
結果は、本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物が核酸を動物の肝臓に効率的に送達できることを示している。
【0234】
実験プロセス
６～８週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスを１群あたり６匹使用した。各群には、それぞれＣｙ５蛍光基を持つｓｉＲＮＡコンジュゲートｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０６、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２が投与された。陰性対照群には投与されなかった。マウスの体重を測定し、皮下注射により６ｍｇ／ｋｇの用量を投与した。注射量は、投与体積によって決定され、０．１～０．２ｍＬを超えない。
６～８週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスを１群あたり６匹使用した。各群には、それぞれＣｙ５蛍光基を持つｓｉＲＮＡコンジュゲートｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０２、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０３、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０４、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０５、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－４０６、ｉｎｃ－ＹＫ－ＧＡＬ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２が投与された。陰性対照群には投与されなかった。マウスの体重を測定し、皮下注射により６ｍｇ／ｋｇの用量を投与した。注射量は、投与体積によって決定され、０．１～０．２ｍＬを超えない。
【0235】
投与後、マウスの腹部の毛を剃毛し、イソフルラン麻酔下でマウスを小動物生体イメ－ジングシステム内に仰臥位で置き、投与４時間後と８時間後にＣｙ５チャンネルでマウスのイメ－ジング状況を観察した。生体内イメ－ジングソフトウェアＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅを用いて、マウスの発光強度を統計し、各被検群間の違いを比較した。
【0236】
実験結果
マウスの肝臓および腎臓における蛍光強度（オリゴ核酸の相対含有量を表す）の検出結果を表６と図４に示す。結果は、本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物が核酸を動物の肝臓に効率的に送達できることを示している。
マウスの肝臓および腎臓における蛍光強度（オリゴ核酸の相対含有量を表す）の検出結果を表６と図４に示す。結果は、本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物が核酸を動物の肝臓に効率的に送達できることを示している。
【0237】
表６．マウスの肝臓および腎臓における蛍光強度
【表10】
【0238】
表６からわかるように、Ｃｙ５蛍光標識されたオリゴヌクレオチドは、マウスの肝臓および腎臓のいずれにも分布していた。その中で、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１は、マウスの肝臓で最も高い蛍光強度（すなわち、オリゴヌクレオチドの相対含有量が最も高い）を示し、肝臓の蛍光強度は、４時間で９．０３Ｅ＋０９、８時間で９．１１Ｅ＋０９に達した。ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２とｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３の肝臓の蛍光強度も非常に高く、４時間でそれぞれ８．７９Ｅ＋０９と８．９２Ｅ＋０９、８時間でそれぞれ８．９５Ｅ＋０９と９．０１Ｅ＋０９に達した。これは、本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物がオリゴヌクレオチドを肝臓に効率的に送達できることを示している。
【0239】
以上の通り、本発明は、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して化学構造が完全に異なる一連の新規ＧａｌＮＡｃ化合物を設計する。本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物は、連結アームにトリアゾール構造を導入しており、クリックケミストリーの利点により、トリアゾール構造を含有する一連の新規ＧａｌＮＡｃ化合物を迅速に構築することができる。本発明のＧａｌＮＡｃ化合物で調製されたＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、肝臓を標的とした効率的な送達を実現することができ、従来技術の代表的なＧａｌＮＡｃ化合物と比較してその活性は顕著に向上する。
【0240】
１．本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－ＧＡＬ－４０３で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による７日目の阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびｉｎｃ－ＮＡＧ００５２による７日目の阻害率よりも２１．５％、１４．５％、および１２．７％向上し、１４日目の阻害率は、それぞれ１７．３％、１０．４％、および１０．８％向上した。
【0241】
１）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡでは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率に顕著な差があり、ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による阻害率は、ＹＫ－Ｇａｌ－４０４～４０６による阻害率よりも顕著に高かった。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１は、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による阻害率よりも、２０．７％、および１６．０％向上した。
【0242】
２）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による阻害率よりも２１．５％、および１７．３％向上した。
【0243】
３）構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物とｓｉＲＮＡとのコンジュゲートでは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率に顕著な差がある。したがって、化学構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物であれば、オリゴヌクレオチド送達効率が必ずしも近いわけではなく、それらで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が一致しておらず、非常に大きな差がある可能性もある。
【0244】
２．本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－ＧＡＬ－４０３で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、およびｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂによる阻害率よりも２１．１％、および９．８％向上し、顕著な向上が見られた。
【0245】
１）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡでは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率に顕著な差があり、ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による阻害率は、ＹＫ－Ｇａｌ－４０４～４０６による阻害率よりも顕著に向上する。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による阻害率よりも１９．４％向上した。
【0246】
２）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、コンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による阻害率は、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による阻害率よりも２１．１％向上した。
【0247】
３）構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物とｓｉＲＮＡとのコンジュゲートでは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率に顕著な差がある。したがって、化学構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物であれば、オリゴヌクレオチド送達効率が必ずしも近いわけではなく、それらで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、マウスの肝臓中のＰＣＳＫ９遺伝子の発現に対する阻害率が一致しておらず、非常に大きな差がある可能性もある。
【0248】
３．本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－ＧＡＬ－４０１～ＹＫ－ＧＡＬ－４０３で調製されたオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、従来技術によるＧａｌＮＡｃと比較して、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルが顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１群では、マウスの１４日目のＬＤＬ－Ｃ低下レベルは、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１、ｉｎｃ－ＧａｌＮＡｃ１ｂ、およびＮＡＧ００５２群よりも３６．４％、２０．６％、および１７．８％向上し、顕著な向上が見られた。
【0249】
１）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物がコンジュゲートされたｓｉＲＮＡでは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃレベルに対する低下に顕著な差があり、ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３による低下レベルは、ＹＫ－Ｇａｌ－４０４～ＹＫ－Ｇａｌ－４０６よりも顕著に高かった。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による低下レベルは、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０４による低下レベルよりも３３．０％、および３６．０％向上し、顕著な向上が見られた。
【0250】
２）本発明のＧａｌＮＡｃ化合物ＹＫ－Ｇａｌ－４０１～ＹＫ－Ｇａｌ－４０３に関しては、従来技術によるＧａｌＮＡｃ化合物と比較して、それがコンジュゲートされたｓｉＲＮＡは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルが顕著に向上した。例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１による低下レベルは、７日目および１４日目には、それぞれｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－３０１による低下レベルよりも３３．４％、および３６．４％向上した。
【0251】
３）構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物とｓｉＲＮＡとのコンジュゲートでは、マウスの血清中のＬＤＬ－Ｃに対する低下レベルに顕著な差がある。したがって、化学構造が類似しているＧａｌＮＡｃ化合物であれば、オリゴヌクレオチド送達効率が必ずしも近いわけではなく、それらで調製されるＧａｌＮＡｃオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、マウスの血清中のＰＣＳＫ９タンパク質の発現に対する阻害率が一致しておらず、非常に大きな差がある可能性もある。
【0252】
４．本発明により設計された化合物は、オリゴヌクレオチドを肝臓に効率的に送達できる。
【0253】
例えば、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０１、ｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０２、およびｉｎｃ－ＹＫ－Ｇａｌ－４０３群において、４時間で肝臓の蛍光強度は、それぞれ９．０３Ｅ＋０９、８．７９Ｅ＋０９、および８．９２Ｅ＋０９に達し、８時間でそれぞれ９．１１Ｅ＋０９、８．９５Ｅ＋０９、および９．０１Ｅ＋０９に達し、これは、本発明により設計されたＧａｌＮＡｃ化合物がオリゴヌクレオチドを動物の肝臓に効率的に送達できることを示している。
【0254】
出願人は、本発明に係るＧａｌＮＡｃ化合物及びその使用を上記実施例によって説明するものであると述べたが、本発明は、上記の実施例に限定されるものではなく、すなわち、上記実施例に依存しなければ実施できないことを意味するものではない。本発明に対するいかなる改良、本発明の製品の各原料の等価な置換、及び補助成分の添加、具体的な方法の選択なども、いずれも本発明の保護範囲及び開示範囲内に含まれることは、当業者に明らかである。
【要約】 （修正有）
【課題】トリアゾール構造を含有するＧａｌＮＡｃ化合物、およびそのオリゴヌクレオチドコンジュゲートを提供する。
【解決手段】下記の式で示されるＧａｌＮＡｃ化合物、またはその医薬学的に許容される塩が提供される。
本発明におけるＧａｌＮＡｃ化合物は、オリゴヌクレオチドとコンジュゲートを形成することができ、このコンジュゲートは、オリゴヌクレオチドの肝臓を標的とした高効率な送達を達成し、遺伝子の発現を制御でき、肝細胞における特定の遺伝子の発現によって引き起こされる疾患の予防および／または治療に用いることができる。
【選択図】図１
【解決手段】下記の式で示されるＧａｌＮＡｃ化合物、またはその医薬学的に許容される塩が提供される。
本発明におけるＧａｌＮＡｃ化合物は、オリゴヌクレオチドとコンジュゲートを形成することができ、このコンジュゲートは、オリゴヌクレオチドの肝臓を標的とした高効率な送達を達成し、遺伝子の発現を制御でき、肝細胞における特定の遺伝子の発現によって引き起こされる疾患の予防および／または治療に用いることができる。
【選択図】図１
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
