特許7755853IP Force 特許公報全文掲載

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技術分野

ラットの精子を凍結保存するための方法に関する。本発明はまた、該方法を用いて凍結保存したラット精子を用いた体外受精方法

発明が解決しようとする課題[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明の目的は、ラット精子の凍結保存方法および凍結保存したラット精子を用いた体外受精方法を提供することである。

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

ラット精子は、ラット精子が置かれた溶液の粘度や浸透圧ストレスなどの環境変化に非常に敏感であることが知られている。一般に用いられるラット精子の凍結保存液（ＣＰＡ）は、希釈液であるｍＴＨＦの粘度および浸透圧（３００－３１０ mOsm）に比べ、高い粘度および浸透圧（３７０－３８０ mOsm）を有している。それ故、本発明者らは、精子を含む凍結保存液（ＣＰＡ）を解凍後すぐに希釈液で希釈すると、凍結保存・・・　続きを知財ポータルサイト IP Force にログインして見る

発明の効果[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明のラット精子の凍結保存方法および／または凍結ラット精子の融解方法により、従来技術よりも良好な受精率および／または産子発生能を達成できる凍結ラット精子を用いた体外受精を提供するものである。

この特許の権利範囲[特許請求の範囲]

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1】 本発明の一態様であるラット精子の凍結保存方法の概略図である。
【図2】 本発明の一態様である凍結ラット精子の融解方法の概略図である。
【図3】 本発明のラット精子の凍結方法に用いることができる器具の一態様を示した図である。図は、斜め上から見た器具を示している。
【図4】 図３に示した凍結補助器具に用いられた凍結保存容器配置台を斜め上から見た図である。
【図5】 図３に示した凍結補助器具に用いられた凍結保存容器配置台を上から見た図である。
【図6】 図３の凍結補助器具に用いられた凍結保存容器配置台を横から見た図である。
【図7】 本発明のラット精子の凍結方法に用いることができる器具の別の一態様を示した図である。
【図8】 図７に示した凍結補助器具に用いられた凍結保存容器配置台を斜め上から見た図である。
【図9】 図７に示した凍結補助器具に用いられた凍結保存容器配置台を上から見た図である。
【図10】 図７に示した凍結補助器具に用いられた凍結保存容器配置台を横から見た図である。
【図11】 本発明のラット精子凍結方法によりラット精子を凍結する工程における、精子懸濁液の温度変化を示した図である。図中では、それぞれの操作工程を、図１および図２に示した各工程の図番とともに示している。Ａは、氷上での精子懸濁液冷却開始時点（図１中Ｃ）を、Ｂは、精子懸濁液のストローへの充填時点（図１中のＤ）を、Ｃは、氷上でのストローへの冷却開示時点（図１中のＦ）を、Ｄは、液体窒素中でのストローへの凍結開始時点（図１中のＧ）を示している。
【図12】 本発明の方法を用いて凍結保存・融解したラット精子を用いて体外受精を行って得た胚盤胞期胚を顕微鏡で観察した写真である。緑色の（白黒では薄く見える）胚は、ＧＦＰシグナルを出している胚である。
【図13】 本発明の方法を用いて凍結保存・融解したラット精子を用いて体外受精を行って得た受精卵をラットに胚移植して生まれた産子の写真である。緑色の（白黒では白く見える）産子は、ＧＦＰシグナルを出している産子である。
【図14】 種々の濃度のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびケルセチン（Ｑ）を添加したＬｉｆｏｒ（登録商標）冷蔵保存液でラット精巣上体尾部を保存した後、精子の運動性を確認した結果である。左図は精子懸濁液調製後２時間、右図は調製後６時間後の運動している精子の割合を示している。
【図15】 通常の方法を用いて調製した卵子（無処理卵子：左図）と、さらに卵丘の除去を行った卵子（卵丘除去卵子：周りの卵丘細胞を除去した卵子：右図）の写真である。

代表図 図1本件の代表的な図

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