【図1】 Ｚｏｌ＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５とのＰＢＭＣ培養物の様々な日における、濃縮された細胞間凝集塊の中のＴＣＲＶγ９＋γδＴ細胞の存在量を示す。代表的なＦＡＣＳプロット中の数字は、Ｚｏｌ＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５で刺激されたＰＢＭＣの３日目（左列）、８日目（中央列）、及び１３日目（右列）における、全ＰＢＭＣ中のＴＣＲγδ及びαβＴ細胞（上段）並びにγδＴ細胞中のＴＣＲＶγ９＋細胞（下段）の頻度を示す。矢印は、親及び子孫ゲートを表す。

【図2A】 Ｚｏｌ＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５で３日間刺激されたＰＢＭＣ培養物に由来するｉＰＳＣコロニーの顕微鏡観察を示す。図２Ａは、ＭＥＦ支持細胞層上のｉＰＳＣを、緊密で滑らかな境界及び緻密な細胞内部境界を有する丸いコロニーとして示す代表的な顕微鏡画像を示す。背景の細長い細胞は、マイトマイシンＣ処理ＭＥＦ支持細胞層である。

【図2B】 Ｚｏｌ＋ＩＬ－２＋ＩＬ－１５で３日間刺激されたＰＢＭＣ培養物に由来するｉＰＳＣコロニーの顕微鏡観察を示す。図２Ｂは、様々な継代、すなわち、継代３、４、５、及び７における３つの個々のクローンからのｉＰＳＣコロニーを示す代表的な顕微鏡画像を示す。ｉＰＳＣコロニーは、照射されたＭＥＦ支持細胞層上にあった。

【図3】 ＩｄｅｎｔｉＣｌｏｎｅ（商標）ＴＣＲＧ遺伝子再配置アッセイを使用したＴＲＧ遺伝子座における遺伝子再配置の評価を示す。ゲノムＤＮＡを５つのコロニー全てから単離した。ＩｄｅｎｔｉＣｌｏｎｅ（商標）ＴＣＲＧ遺伝子再配置アッセイキットからのプライマーを使用して、製造業者のプロトコールに従ってゲノムＰＣＲを実施した。代表的なピークは、クローンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥのゲノムＰＣＲからのアンプリコンのサイズを（塩基対で）示す。

【図4】 ｉＰＳＣコロニー間のＴＲＧ遺伝子座及びＴＲＤ遺伝子座の遺伝子再配置の評価を示す。代表的なアガロースゲル画像は、様々な連結領域プライマー（joining region primer）と組み合わせたＶγ９又はＶδ２順方向プライマーのいずれかによって媒介されたクローンＡ、Ｂ、及びＣ由来のゲノムＤＮＡの増幅を示す。陰性対照として、２２Ｒｖ１細胞株ゲノムＤＮＡを使用した。

【図5-1】 （クローンＢからの）アンプリコンから得られた配列とヒトＴＣＲ Ｖγ９配列及びＶδ２配列との間の類似性を示す代表的な配列アラインメントを示す。

【図5-2】 図５－１の続きである。

【図6A-1】 ５つのｉＰＳＣクローンについてのゲノムＤＮＡ増幅アンプリコンとＴＲＧＶ９及びＴＲＤＶ２との間の配列相同性の評価を示す。ゲノムＤＮＡを５つ全てのｉＰＳＣクローンから単離し、ＴＣＲＶγ９（ＦＰ）、ＪＰ１／ＪＰ２、ＪＰ又はＪ１／Ｊ２（ＲＶ）及びＴＣＲＶδ２（ＦＰ）、Ｊδ１（ＲＰ）又はＪδ３（ＲＰ）に対するプライマーを用いてゲノムＰＣＲを実施した。増幅生成物をゲル溶出し、トップクローン化し（ｔｏｐ ｃｌｏｎｅｄ）、配列決定した。配列を、全ヒトゲノムに対するＢＬＡＳＴに供した。図６Ａは、クローンＡである。代表的な配列アラインメントは、アンプリコンとＴＲＧＶ９及びＴＲＤＶ２遺伝子配列との間の配列相同性を示す。

【図6A-2】 図６Ａ－１の続きである。

【図6B】 ５つのｉＰＳＣクローンについてのゲノムＤＮＡ増幅アンプリコンとＴＲＧＶ９及びＴＲＤＶ２との間の配列相同性の評価を示す。ゲノムＤＮＡを５つ全てのｉＰＳＣクローンから単離し、ＴＣＲＶγ９（ＦＰ）、ＪＰ１／ＪＰ２、ＪＰ又はＪ１／Ｊ２（ＲＶ）及びＴＣＲＶδ２（ＦＰ）、Ｊδ１（ＲＰ）又はＪδ３（ＲＰ）に対するプライマーを用いてゲノムＰＣＲを実施した。増幅生成物をゲル溶出し、トップクローン化し、配列決定した。配列を、全ヒトゲノムに対するＢＬＡＳＴに供した。図６Ｂは、クローンＣである。代表的な配列アラインメントは、アンプリコンとＴＲＧＶ９及びＴＲＤＶ２遺伝子配列との間の配列相同性を示す。

【図6C-1】 ５つのｉＰＳＣクローンについてのゲノムＤＮＡ増幅アンプリコンとＴＲＧＶ９及びＴＲＤＶ２との間の配列相同性の評価を示す。ゲノムＤＮＡを５つ全てのｉＰＳＣクローンから単離し、ＴＣＲＶγ９（ＦＰ）、ＪＰ１／ＪＰ２、ＪＰ又はＪ１／Ｊ２（ＲＶ）及びＴＣＲＶδ２（ＦＰ）、Ｊδ１（ＲＰ）又はＪδ３（ＲＰ）に対するプライマーを用いてゲノムＰＣＲを実施した。増幅生成物をゲル溶出し、トップクローン化し、配列決定した。配列を、全ヒトゲノムに対するＢＬＡＳＴに供した。図６Ｃは、クローンＤである。代表的な配列アラインメントは、アンプリコンとＴＲＧＶ９及びＴＲＤＶ２遺伝子配列との間の配列相同性を示す。

【図6C-2】 図６Ｃ－１の続きである。

【図6D-1】 ５つのｉＰＳＣクローンについてのゲノムＤＮＡ増幅アンプリコンとＴＲＧＶ９及びＴＲＤＶ２との間の配列相同性の評価を示す。ゲノムＤＮＡを５つ全てのｉＰＳＣクローンから単離し、ＴＣＲＶγ９（ＦＰ）、ＪＰ１／ＪＰ２、ＪＰ又はＪ１／Ｊ２（ＲＶ）及びＴＣＲＶδ２（ＦＰ）、Ｊδ１（ＲＰ）又はＪδ３（ＲＰ）に対するプライマーを用いてゲノムＰＣＲを実施した。増幅生成物をゲル溶出し、トップクローン化し、配列決定した。配列を、全ヒトゲノムに対するＢＬＡＳＴに供した。図６Ｄは、クローンＥである）。代表的な配列アラインメントは、アンプリコンとＴＲＧＶ９及びＴＲＤＶ２遺伝子配列との間の配列相同性を示す。

【図6D-2】 図６Ｄ－１の続きである。

【図7A】 γδＴ細胞由来ｉＰＳＣの特徴付けを示す。図７Ａは、Ａ、Ｂ、及びＣのｉＰＳＣクローン由来のＯｃｔ３／４、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ２、Ｌｉｎ２８、センダイウイルス（ＳｅＶ）、ＧＡＰＤＨ、ＴＣＲα及びβについてのＲＴ－ＰＣＲアンプリコンを示す代表的なアガロースゲル画像を示す。

【図7B】 γδＴ細胞由来ｉＰＳＣの特徴付けを示す。図７Ｂは、ｉＰＳＣクローン間でＤＡＰＩ（青色のみ）、マーカー（Ｎａｎｏｇ／Ｏｃｔ３／４／Ｓｏｘ２ 赤色のみ）、又はＤＡＰＩ＋マーカー（ピンク色）について陽性の細胞を可視化したオーバーレイ免疫組織化学（immunohistochemistry、ＩＨＣ）画像を示す。

【図7C】 γδＴ細胞由来ｉＰＳＣの特徴付けを示す。図７Ｃは、ｉＰＳＣクローンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥの間のＳＳＥＡ－４及びＴＲＡ１－６０表面発現並びにＯｃｔ－３及びＳｏｘ２細胞内発現について陽性である細胞の頻度を示す代表的なヒストグラムを示す。

【図8A】 核型分析を介したｉＰＳＣクローンＢ、Ｃ、Ｄ、及びＥのゲノム安定性の評価を示す。図８Ａは、クローンＢである。

【図8B】 核型分析を介したｉＰＳＣクローンＢ、Ｃ、Ｄ、及びＥのゲノム安定性の評価を示す。図８Ｂは、クローンＤである。

【図8C】 核型分析を介したｉＰＳＣクローンＢ、Ｃ、Ｄ、及びＥのゲノム安定性の評価を示す。図８Ｃは、クローンＣである。

【図8D】 核型分析を介したｉＰＳＣクローンＢ、Ｃ、Ｄ、及びＥのゲノム安定性の評価を示す。図８Ｄは、クローンＥである。

【図9】 異なるマトリックス及び培地の組み合わせの存在下で、支持細胞を含まない条件に採用された５つ全てのクローン（クローンＡ～Ｅ）からの支持細胞ベースのｉＰＳＣコロニーを示す代表的な明視野顕微鏡画像を示す。