特許7913053IP Force 特許公報全文掲載

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Ｍ２又はＭ２様マクロファージの誘導又は活性化剤、Ｍ２又はＭ２様マクロファージの誘導又は活性化方法、真皮の色素沈着を予防及び／又は改善するための組成物、並びに真皮の色素沈着を予防及び／又は改善する方法

発明が解決しようとする課題[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明の課題は、光老化及び／又は真皮色素沈着を予防及び／又は改善する効果を有する、Ｍ２又はＭ２様マクロファージを誘導又は活性化し得る新たな薬剤又は方法を提供することである。

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明者らは、光老化及び／又は真皮色素沈着を予防及び／又は改善するための剤を鋭意探索した結果、ニコチン酸アミド又はニコチン酸アミドとハクシニン抽出物との混合物とが、マクロファージをＭ２又はＭ２様マクロファーへと誘導又は活性化し得ることを見出した。かかる発見に基づき、本発明を開発するに至った。すなわち、本発明は、以下の態様を含む。

発明の効果[発明の詳細な説明]から抜粋

本発明を適用することにより、光老化及び／又は真皮色素沈着を予防及び／又は改善することができる効果を有する、Ｍ２又はＭ２様マクロファージを誘導又は活性化し得ることが可能となる。

この特許の権利範囲[特許請求の範囲]

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1a】 図１ａは、ＴＨＰ－１からＭ０、Ｍ１及びＭ２マクロファージへの誘導方法の概略を示す。
【図1b】 図１ｂは、ＴＨＰ－１から誘導されたＭ０、Ｍ１及びＭ２マクロファージの顕微鏡写真である。
【図1c】 図１ｃの上図は，ＴＨＰ－１から誘導されたＭ０、Ｍ１及びＭ２マクロファージが産出するサイトカイン（ＩＬ－１ｂｅｔａ，ＴＮＦ－ａｌｐｈａ，ＩＬ－１０）の遺伝子発現量を示すグラフである。図１ｃの下図は，Ｍ１及びＭ２マクロファージの細胞表面マーカー（Ｍ１：ＣＤ８６，Ｍ２：ＣＤ２０６）のｍＲＮＡの発現量を示すグラフである。ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現量で補正し、Ｍ０の場合を１００％とした相対値（％）として示す。
【図2】 図２は、それぞれ各濃度のハクシニン抽出物（０．３ｐｐｍ，１．０ｐｐｍ，３．０ｐｐｍ）を添加した場合のＭ１とＭ２の各マーカーの発現量（マーカー／ＧＡＰＤＨ値）を、対照（ハクシニン加水分解無：ｃｏｎｔｒｏｌ）を１００％としたとき相対値（％）で示すグラフである。
【図3a】 図３ａは、加水分解をしていないハクシニン（ｃｏｎｔｒｏｌ）３ｐｐｍ又はハクシニン加水分解物を１．０ｐｐｍ、３．０ｐｐｍ添加した未成熟（Ｍ０）の状態のＴＨＰ－１細胞にメラニン添加をしてから３０分後の様子を示す。
【図3b】 図３ｂは、図３ａの拡大図である。黒矢印はメラニンを取り込んでいるマクロファージを示す。
【図4】 図４は、実験４において、Ｍ０マクロファージ、Ｍ１マクロファージ及びＭ２マクロファージの細胞内活性について、フラックスアナライザーを用いて解析した、（Ａ）酸素消費速度（ＯＣＲ）、（Ｂ）細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）及び、（Ｃ）ＯＣＲ／ＥＣＡＲの結果を示す。
【図5】 図５は、実験５において、ハクシニン抽出物を添加した場合のＭ０マクロファージの添加４８時間後の細胞内活性への影響をフラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）正規化したＯＣＲ、（Ｂ）Ｂａｓａｌ ＯＣＲ（Ａ計測３点目のＯＣＲの値）。
【図6】 図６は、実験５において、ハクシニン抽出物を添加した場合のＭ０マクロファージの添加４８時間後の細胞内活性への影響をフラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）正規化したＯＣＲ、（Ｂ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ(A計測3点目と12点目の差の値)。
【図7】 図７は、実験６において、ハクシニン抽出物に含まれる代表的な不飽和脂肪酸単独によるＭ０マクロファージの添加４８時間後の細胞内活性への影響をフラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）Ｂａｓａｌ ＯＣＲ、（Ｂ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ。
【図8】 図８は、実験７において、ハクシニン抽出物に含まれる各成分によるＭ０マクロファージの添加２４時間後の細胞内活性への影響をフラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）Ｂａｓａｌ ＯＣＲ、（Ｂ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ。
【図9】 図９は、実験８の方法の概略を示す。
【図10】 図１０は、実験８において、ハクシニン抽出物、又はハクシニン抽出物に含まれる各成分によるＭ１マクロファージ分化時の細胞内活性への影響をフラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）Ｂａｓａｌ ＯＣＲ、（Ｂ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ、（Ｃ）ＯＣＲ／ＥＣＡＲ。
【図11】 図１１は、実験９において、Ｍ０マクロファージにニコチン酸アミドを添加して２４時間後の細胞内活性を、フラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）実験９の概略、（Ｂ）Ｂａｓａｌ ＯＣＲ、（Ｃ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ、（Ｄ）ＯＣＲ／ＥＣＡＲ、（Ｅ）正規化したＥＣＡＲ。
【図12】 図１２は、実験１０の方法の概略を示す。
【図13】 図１３は、実験１０において、Ｍ１分化中のマクロファージにニコチン酸アミドを添加して２４時間後の細胞内活性を、フラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）Ｂａｓａｌ ＯＣＲ、（Ｂ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ、（Ｃ）ＯＣＲ／ＥＣＡＲ、（Ｄ）正規化したＥＣＡＲ。
【図14】 図１４は、実験１１の方法の概略を示す。
【図15】 図１５は、実験１１において、Ｍ２分化中のマクロファージにニコチン酸アミドを添加して２４時間後の細胞内活性を、フラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）Ｂａｓａｌ ＯＣＲ、（Ｂ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ、（Ｃ）ＯＣＲ／ＥＣＡＲ、（Ｄ）正規化したＥＣＡＲ。
【図16】 図１６は、実験１２において、Ｍ０マクロファージに、ハクシニン抽出物、ニコチン酸アミド又はそれらの混合物（Ｍｉｘ）を添加して２４時間後の細胞内活性を、フラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）実験１２の概略、（Ｂ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ。
【図17】 図１７は、実験１３において、Ｍ１分化中のマクロファージに、ハクシニン抽出物、ニコチン酸アミド又はそれらの混合物（Ｍｉｘ）を添加して２４時間後の細胞内活性を、フラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）実験１３の概略、（Ｂ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ、（Ｃ）ＯＣＲ／ＥＣＡＲ。
【図18】 図１８は、実験１４において、Ｍ２分化中のマクロファージに、ハクシニン抽出物、ニコチン酸アミド又はそれらの混合物（Ｍｉｘ）を添加して２４時間後の細胞内活性を、フラックスアナライザーを用いて解析した結果を示す。（Ａ）実験１４の概略、（Ｂ）ミトコンドリア呼吸のＯＣＲ。

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