特許7919406IP Force 特許公報全文掲載

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本出願は、２０１５年８月１７日に出願された米国特許仮出願第６２／２０６，２４６ 号の利益を主張するものであり、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。

発明が解決しようとする課題[発明の詳細な説明]から抜粋

それでもなお、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ－Ｒ、及びＴＡＣＩ、すなわちＴＮＦ受容体スーパ ーファミリーに属するＢ細胞受容体、並びにそれらのリガンドのＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬ は、がんとの闘いで治療の対象であるという事実にもかかわらず、依然としてこのような 病状の治療に使用可能な更なるオプションを有する必要がある。

課題を解決するための手段[発明の詳細な説明]から抜粋

本明細書において、ＢＣＭＡに免疫特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメン トが提供される。また、提供されたＢＣＭＡ特異性抗体及び抗原結合フラグメントをコー ド可能な関連するポリヌクレオチド、提供された抗体及び抗原結合フラグメントを発現し ている細胞、並びに関連するベクター、及び検出可能に標識された抗体及び抗原結合フラ グメントも記載されている。加えて、提供された抗体及び抗原結合フラグメ・・・　続きを知財ポータルサイト IP Force にログインして見る

この特許の権利範囲[特許請求の範囲]

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この特許公報に記載されている図面[図面の簡単な説明]から抜粋

【図1A】 ヒトＢＣＭＡ（図１Ａ）及びカニクイザルＢＣＭＡ（図１Ｂ）をクローンするために使用されるベクター。
【図1B】 ヒトＢＣＭＡ（図１Ａ）及びカニクイザルＢＣＭＡ（図１Ｂ）をクローンするために使用されるベクター。
【図2A】 ＢＣＭＢ６９のエピトープ位置及びヒトＢＣＭＡとＢＣＭＢ６９との相互作用。（図２Ａ）エピトープ位置の概観。ＢＣＭＢ６９は、ＢＣＭＡの凹状表面（黒色領域）に結合する。（図２Ｂ）ＢＣＭＡとＢＣＭＢ６９との直接接触を示す相互作用マップ。ＢＣＭＡに接触するＣＤＲ－Ｌ１を除く全てのＣＤＲからの残基。ファンデルワールス相互作用は破線で示し、水素結合は実線であり、矢印は骨格水素結合を示しており、骨格原子を指している。ＢＣＭＢ６９及びＡＰＲＩＬの両方に接触するＢＣＭＡ残基は黒色枠を有する。接触残基を特定するために４Åの距離のカットオフ値を用いた（水素結合に関しては３．５Åの距離の閾値）。（図２Ｃ及び図２Ｄ）ＢＣＭＢ６９の軽鎖（図２Ｃ）及び重鎖（図２Ｄ）とのＢＣＭＡの主な相互作用の拡大図。水素結合はオングストローム単位の距離を有する破線で示す。
【図2B】 ＢＣＭＢ６９のエピトープ位置及びヒトＢＣＭＡとＢＣＭＢ６９との相互作用。（図２Ａ）エピトープ位置の概観ＢＣＭＢ６９は、ＢＣＭＡの凹状表面（黒色領域）に結合する。（図２Ｂ）ＢＣＭＡとＢＣＭＢ６９との直接接触を示す相互作用マップ。ＢＣＭＡに接触するＣＤＲ－Ｌ１を除く全てのＣＤＲからの残基。ファンデルワールス相互作用は破線で示し、水素結合は実線であり、矢印は骨格水素結合を示しており、骨格原子を指している。ＢＣＭＢ６９及びＡＰＲＩＬの両方に接触するＢＣＭＡ残基は黒色枠を有する。接触残基を特定するために４Åの距離のカットオフ値を用いた（水素結合に関しては３．５Åの距離の閾値）。（図２Ｃ及び図２Ｄ）ＢＣＭＢ６９の軽鎖（図２Ｃ）及び重鎖（図２Ｄ）とのＢＣＭＡの主な相互作用の拡大図。水素結合はオングストローム単位の距離を有する破線で示す。
【図2C】 ＢＣＭＢ６９のエピトープ位置及びヒトＢＣＭＡとＢＣＭＢ６９との相互作用。（図２Ａ）エピトープ位置の概観ＢＣＭＢ６９は、ＢＣＭＡの凹状表面（黒色領域）に結合する。（図２Ｂ）ＢＣＭＡとＢＣＭＢ６９との直接接触を示す相互作用マップ。ＢＣＭＡに接触するＣＤＲ－Ｌ１を除く全てのＣＤＲからの残基。ファンデルワールス相互作用は破線で示し、水素結合は実線であり、矢印は骨格水素結合を示しており、骨格原子を指している。ＢＣＭＢ６９及びＡＰＲＩＬの両方に接触するＢＣＭＡ残基は黒色枠を有する。接触残基を特定するために４Åの距離のカットオフ値を用いた（水素結合に関しては３．５Åの距離の閾値）。（図２Ｃ及び図２Ｄ）ＢＣＭＢ６９の軽鎖（図２Ｃ）及び重鎖（図２Ｄ）とのＢＣＭＡの主な相互作用の拡大図。水素結合はオングストローム単位の距離を有する破線で示す。
【図2D】 ＢＣＭＢ６９のエピトープ位置及びヒトＢＣＭＡとＢＣＭＢ６９との相互作用。（図２Ａ）エピトープ位置の概観ＢＣＭＢ６９は、ＢＣＭＡの凹状表面（黒色領域）に結合する。（図２Ｂ）ＢＣＭＡとＢＣＭＢ６９との直接接触を示す相互作用マップ。ＢＣＭＡに接触するＣＤＲ－Ｌ１を除く全てのＣＤＲからの残基。ファンデルワールス相互作用は破線で示し、水素結合は実線であり、矢印は骨格水素結合を示しており、骨格原子を指している。ＢＣＭＢ６９及びＡＰＲＩＬの両方に接触するＢＣＭＡ残基は黒色枠を有する。接触残基を特定するために４Åの距離のカットオフ値を用いた（水素結合に関しては３．５Åの距離の閾値）。（図２Ｃ及び図２Ｄ）ＢＣＭＢ６９の軽鎖（図２Ｃ）及び重鎖（図２Ｄ）とのＢＣＭＡの主な相互作用の拡大図。水素結合はオングストローム単位の距離を有する破線で示す。
【図3】 ＢＣＭＢ６９のエピトープ及びパラトープ残基。エピトープ及びパラトープ残基は影付き、ＣＤＲ領域は下線付き（Ｋａｂａｔ定義）、ヒトと異なるＢＣＭＡ残基は太字イタリック体である。ＢＣＭＢ６９ Ｆａｂ及び細胞外ＢＣＭＡ配列のみを示す。
【図4A】 ＢＣＭＢ６９ Ｆａｂ及びＡＰＲＩＬ間（図４Ａ）並びにＢＣＭＢ６９ Ｆａｂ及びＢＡＦＦ間（図４Ｂ）のクラッシュ領域。Ｆａｂ及びリガンド間のクラッシュ領域を示すＢＣＭＡ／ＡＰＲＩＬ及びＢＣＭＡ／ＢＡＦＦ複合体に対するＢＣＭＡ／ＢＣＭＢ６９複合体の構造的オーバーレイ。ＢＣＭＡの溶媒接触可能表面を表示する。Ｆａｂ及びリガンド分子をそれぞれ灰色及び黒色画で示す。両方の複合体中の等価ＢＣＭＡ Ｃα原子の重ね合わせにより、オーバーレイを得た（ＡＰＲＩＬ複合体では０．９Å、ＢＡＦＦでは１．２ÅのＲＭＳＤ）。
【図4B】 ＢＣＭＢ６９ Ｆａｂ及びＡＰＲＩＬ間（図４Ａ）並びにＢＣＭＢ６９ Ｆａｂ及びＢＡＦＦ間（図４Ｂ）のクラッシュ領域。Ｆａｂ及びリガンド間のクラッシュ領域を示すＢＣＭＡ／ＡＰＲＩＬ及びＢＣＭＡ／ＢＡＦＦ複合体に対するＢＣＭＡ／ＢＣＭＢ６９複合体の構造的オーバーレイ。ＢＣＭＡの溶媒接触可能表面を表示する。Ｆａｂ及びリガンド分子をそれぞれ灰色及び黒色画で示す。両方の複合体中の等価ＢＣＭＡ Ｃα原子の重ね合わせにより、オーバーレイを得た（ＡＰＲＩＬ複合体では０．９Å、ＢＡＦＦでは１．２ÅのＲＭＳＤ）。
【図5】 ＢＣＭＢ７２のＳＰＲデータは、分子が、ヒト、カニクイザル、及びマウスＢＣＭＡに対する結合性を有することを実証する。カニクイザル及びマウスＢＣＭＡの平均ＫＤは、ヒトＢＣＭＡと比較するとき、それぞれ約３６倍及び４０２倍である。
【図6】 ＢＣＭＡ＋細胞株におけるＢＣＭＢ７２の結合性に関するＥＣ５０の測定。ＢＣＭＢ７２を用いてＢＣＭＡに対して細胞株を染色した。細胞に対するＢＣＭＢ７２の結合性の幾何学的平均蛍光強度を示す。ＥＣ５０を凡例内に示す。約１００ｎＭの濃度で飽和に達した。平均蛍光強度を考慮して、Ｕ２９３２（ＥＣ５０＝７．９２ｎＭ）、ＭＭ１Ｒ（ＥＣ５０＝８．７４ｎＭ）、Ｈ９２９（ＥＣ５０＝１４．７ｎＭ）、ＥＪＭ（ＥＣ５０＝１７．５ｎＭ）、及びＬＰ１（ＥＣ５０＝２２．３ｎＭ）細胞についてＥＣ５０値を得た。データのグラフ化及びフィッティングは、可変勾配（４パラメータ）関数を有する非線形回帰を使用してＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６で行った。
【図7】 全血におけるＢＣＭＢ７２の結合プロファイル。３人の正常ヒトドナー由来の全血を、ＢＣＭＡに対するモノクローナル若しくはポリクローナル抗体又はＢＣＭＢ７２で染色した。ゲーティング解析を行って、標準的な細胞特異的マーカーを用いて白血球集団中のリンパ球を同定した。１人の代表ドナーの染色強度をパネルに示しており、黒色実線は所望の抗体であり、灰色塗り潰しの破線は対応するアイソタイプである。ＢＣＭＡ発現なしは、３人の正常ドナーにおけるリンパ球、単球、顆粒球、又は形質細胞様ＤＣで観察された。ＢＣＭＢ７２は、３人の全てのドナーでＣＤ３＋Ｔ細胞に対する結合性を示したが、ドナー間で強度が異なった。ＢＣＭＢ７２は、このアッセイで試験した他のいずれの細胞種にも結合しなかった。
【図8A】 種々のＭＭ細胞株の存在下におけるＢＣＭＢ７２依存性Ｔ細胞活性化。Ｈ９２９（図９Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図９Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図９Ｃ）、Ｕ２６６（図９Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図９Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図8B】 種々のＭＭ細胞株の存在下におけるＢＣＭＢ７２依存性Ｔ細胞活性化。Ｈ９２９（図９Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図９Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図９Ｃ）、Ｕ２６６（図９Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図９Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図8C】 種々のＭＭ細胞株の存在下におけるＢＣＭＢ７２依存性Ｔ細胞活性化。Ｈ９２９（図９Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図９Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図９Ｃ）、Ｕ２６６（図９Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図９Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図8D】 種々のＭＭ細胞株の存在下におけるＢＣＭＢ７２依存性Ｔ細胞活性化。Ｈ９２９（図９Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図９Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図９Ｃ）、Ｕ２６６（図９Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図９Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図8E】 種々のＭＭ細胞株の存在下におけるＢＣＭＢ７２依存性Ｔ細胞活性化。Ｈ９２９（図９Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図９Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図９Ｃ）、Ｕ２６６（図９Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図９Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図9A】 複数の正常ドナー由来のＴ細胞を使用して２回の独立試験から得られたＥＣ５０及び最大Ｔ細胞活性化値の概要。各細胞株及び各試験について個々のドナーの値及びドナーの平均値を示す。データなし＝試験未実施、フィットなし＝ソフトウェアの曲線作成不能、～値＝モデル外挿に基づく近似値。
【図9B】 複数の正常ドナー由来のＴ細胞を使用して２回の独立試験から得られたＥＣ５０及び最大Ｔ細胞活性化値の概要。各細胞株及び各試験について個々のドナーの値及びドナーの平均値を示す。データなし＝試験未実施、フィットなし＝ソフトウェアの曲線作成不能、～値＝モデル外挿に基づく近似値。
【図10A】 種々の多発性骨髄腫細胞株のＴ細胞媒介性ＢＣＭＢ７２依存性細胞傷害。Ｈ９２９（図１１Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図１１Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図１１Ｃ）、Ｕ２６６（図１１Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図１１Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体濃度に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図10B】 種々の多発性骨髄腫細胞株のＴ細胞媒介性ＢＣＭＢ７２依存性細胞傷害。Ｈ９２９（図１１Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図１１Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図１１Ｃ）、Ｕ２６６（図１１Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図１１Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体濃度に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図10C】 種々の多発性骨髄腫細胞株のＴ細胞媒介性ＢＣＭＢ７２依存性細胞傷害。Ｈ９２９（図１１Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図１１Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図１１Ｃ）、Ｕ２６６（図１１Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図１１Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体濃度に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図10D】 種々の多発性骨髄腫細胞株のＴ細胞媒介性ＢＣＭＢ７２依存性細胞傷害。Ｈ９２９（図１１Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図１１Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図１１Ｃ）、Ｕ２６６（図１１Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図１１Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体濃度に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図10E】 種々の多発性骨髄腫細胞株のＴ細胞媒介性ＢＣＭＢ７２依存性細胞傷害。Ｈ９２９（図１１Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図１１Ｂ）、ＲＰＭＩ ８２２６（図１１Ｃ）、Ｕ２６６（図１１Ｄ）、及びＭｖ４－１１（図１１Ｅ）細胞を、６人の正常ドナー由来のＴ細胞（ドナー平均±ＳＥＭを示す）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、提示した抗体濃度に４８時間供した。ＥＣ５０値をグラフに示した。統計分析：モデル収束の単純な事実に加えて、ＬｏｇＥＣ５０に関する９５％信頼区間の幅を考慮して、フィットの妥当性を評価する。（対称であるため、ＬｏｇＥＣ５０に関する信頼区間を使用し、ＥＣ５０自体に関する信頼区間は使用しない。）＋／－２未満の区間（又は４未満の９５％信頼区間幅全体）を適切に考慮する。
【図11A】 複数の正常ドナー由来のＴ細胞を使用して２回の独立試験から得られたＥＣ５０及び最大溶解値の概要。各細胞株及び各試験について個々のドナーの値及びドナーの平均値を示す。データなし＝試験未実施、フィットなし＝ソフトウェアの曲線作成不能、～値＝モデル外挿に基づく近似値。
【図11B】 複数の正常ドナー由来のＴ細胞を使用して２回の独立試験から得られたＥＣ５０及び最大溶解値の概要。各細胞株及び各試験について個々のドナーの値及びドナーの平均値を示す。データなし＝試験未実施、フィットなし＝ソフトウェアの曲線作成不能、～値＝モデル外挿に基づく近似値。
【図12A】 Ｈ９２９細胞における細胞傷害性及びＴ細胞活性化。ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（ＢＣＭＢ７２の変異体分子）をＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイで試験した。ＢＣＭＡ陽性細胞株（Ｈ９２９）を、正常ドナー（ドナーＩＤ：Ｍ５７６３及びＭ６５７６）由来の外来性ヒトＴ細胞の存在下で種々の抗体濃度を用いて４８時間インキュベートした。４８時間インキュベーション後、フローサイトメトリーに基づく方法（ＦＡＣＳ）により細胞殺傷を測定し、細胞傷害性％として図１２Ａに報告した。図１２Ｂは、Ｔ細胞表面上のＣＤ２５のアップレギュレーションにより評価したときのＴ細胞活性化を示す。概して、データ点は作成したフィット曲線に沿ってぴったり並び、Ｔ細胞ドナー及び繰り返し試験間のばらつきはほとんどなかった。
【図12B】 Ｈ９２９細胞における細胞傷害性及びＴ細胞活性化。ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（ＢＣＭＢ７２の変異体分子）をＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイで試験した。ＢＣＭＡ陽性細胞株（Ｈ９２９）を、正常ドナー（ドナーＩＤ：Ｍ５７６３及びＭ６５７６）由来の外来性ヒトＴ細胞の存在下で種々の抗体濃度を用いて４８時間インキュベートした。４８時間インキュベーション後、フローサイトメトリーに基づく方法（ＦＡＣＳ）により細胞殺傷を測定し、細胞傷害性％として図１２Ａに報告した。図１２Ｂは、Ｔ細胞表面上のＣＤ２５のアップレギュレーションにより評価したときのＴ細胞活性化を示す。概して、データ点は作成したフィット曲線に沿ってぴったり並び、Ｔ細胞ドナー及び繰り返し試験間のばらつきはほとんどなかった。
【図13】 ＢＣＭＢ７２媒介性サイトカイン放出のＥＣ５０値の概要。細胞傷害性試験（実施例１２、図８参照）から得られたＲＰＭＩ８２２６細胞の上清を収集し、ＭＳＤに基づく多重アッセイを使用して６つの異なるサイトカイン濃度について分析した。ＢＣＭＢ７２（ＢＣＭＡ×ＣＤ３）及びコントロール抗体（ＢＣＭＡ×無及び無×ＣＤ３）を種々の濃度で使用した。
【図14A】 ＢＣＭＡ陽性Ｈ９２９細胞株を使用して、Ｔ細胞媒介性ＢＣＭＢ７２依存性細胞傷害アッセイを行った。複数の正常ドナー（代表として３人のドナーＭ７１９７、Ｍ５１３７、及びＭ６４５７の概要を示す）由来のＴ細胞及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、細胞を種々の濃度のＢＣＭＢ７２に４８時間供した。エフェクター／標的（Ｅ／Ｔ）比は５：１であった。図１４Ａは細胞傷害能を示し、右側の図１４ＢはＴ細胞活性化曲線を示しており、これらの曲線はＢＣＭＢ７２の種々のロット間で同様であった。
【図14B】 ＢＣＭＡ陽性Ｈ９２９細胞株を使用して、Ｔ細胞媒介性ＢＣＭＢ７２依存性細胞傷害アッセイを行った。複数の正常ドナー（代表として３人のドナーＭ７１９７、Ｍ５１３７、及びＭ６４５７の概要を示す）由来のＴ細胞及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、細胞を種々の濃度のＢＣＭＢ７２に４８時間供した。エフェクター／標的（Ｅ／Ｔ）比は５：１であった。図１４Ａは細胞傷害能を示し、右側の図１４ＢはＴ細胞活性化曲線を示しており、これらの曲線はＢＣＭＢ７２の種々のロット間で同様であった。
【図15】 Ｈ９２９細胞を、ＢＣＭＢ７２（ＢＣＭＡ×ＣＤ３）及びコントロール抗体（ＢＣＭＡ×無及び無×ＣＤ３）を用いてグラフのＸ軸に示した用量で３０分間処理し、全タンパク質をＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅユーザーマニュアルのような標準プロトコルに従ってＳｉｍｐｌｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ分析法を使用して分析した。ハウスキーピング遺伝子としてアクチンを用いてデータを正規化し、比率をＹ軸にプロットした。ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦは予想どおりＰ３８のリン酸化を誘発し、抗体は試験したいずれの濃度でも刺激作用を有さなかった。
【図16A】 ＢＣＭＡを発現しているＨＥＫ－ＮＦκＢ細胞（図１６Ａ、図１６Ｃ、及び図１６Ｅ）又は親細胞（図１６Ｂ、図１６Ｄ、及び図１６Ｆ）をＴＮＦα及び種々の濃度のＡＰＲＩＬ又はＢＣＭＢ７２で刺激した。３つの時間点、１６時間（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、２４時間（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）、及び４８時間（図１６Ｅ及び図１６Ｆ）を分析した。ＴＮＦαは、ＨＥＫ－Ｎｆ－ｋＢ親細胞及びＨＥＫ－ＮＦ－ｋＢ－ＢＣＭＡ細胞の両方でＮＦ－ｋＢ活性化を誘発したが、ＡＰＲＩＬの誘発はＢＣＭＡ特異性細胞腫のみに見られた。ＢＣＭＢ７２は、親細胞株では効果を有しておらず、ＢＣＭＡ発現細胞では高濃度においてのみ活性化を示した。
【図16B】 ＢＣＭＡを発現しているＨＥＫ－ＮＦκＢ細胞（図１６Ａ、図１６Ｃ、及び図１６Ｅ）又は親細胞（図１６Ｂ、図１６Ｄ、及び図１６Ｆ）をＴＮＦα及び種々の濃度のＡＰＲＩＬ又はＢＣＭＢ７２で刺激した。３つの時間点、１６時間（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、２４時間（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）、及び４８時間（図１６Ｅ及び図１６Ｆ）を分析した。ＴＮＦαは、ＨＥＫ－Ｎｆ－ｋＢ親細胞及びＨＥＫ－ＮＦ－ｋＢ－ＢＣＭＡ細胞の両方でＮＦ－ｋＢ活性化を誘発したが、ＡＰＲＩＬの誘発はＢＣＭＡ特異性細胞腫のみに見られた。ＢＣＭＢ７２は、親細胞株では効果を有しておらず、ＢＣＭＡ発現細胞では高濃度においてのみ活性化を示した。
【図16C】 ＢＣＭＡを発現しているＨＥＫ－ＮＦκＢ細胞（図１６Ａ、図１６Ｃ、及び図１６Ｅ）又は親細胞（図１６Ｂ、図１６Ｄ、及び図１６Ｆ）をＴＮＦα及び種々の濃度のＡＰＲＩＬ又はＢＣＭＢ７２で刺激した。３つの時間点、１６時間（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、２４時間（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）、及び４８時間（図１６Ｅ及び図１６Ｆ）を分析した。ＴＮＦαは、ＨＥＫ－Ｎｆ－ｋＢ親細胞及びＨＥＫ－ＮＦ－ｋＢ－ＢＣＭＡ細胞の両方でＮＦ－ｋＢ活性化を誘発したが、ＡＰＲＩＬの誘発はＢＣＭＡ特異性細胞腫のみに見られた。ＢＣＭＢ７２は、親細胞株では効果を有しておらず、ＢＣＭＡ発現細胞では高濃度においてのみ活性化を示した。
【図16D】 ＢＣＭＡを発現しているＨＥＫ－ＮＦκＢ細胞（図１６Ａ、図１６Ｃ、及び図１６Ｅ）又は親細胞（図１６Ｂ、図１６Ｄ、及び図１６Ｆ）をＴＮＦα及び種々の濃度のＡＰＲＩＬ又はＢＣＭＢ７２で刺激した。３つの時間点、１６時間（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、２４時間（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）、及び４８時間（図１６Ｅ及び図１６Ｆ）を分析した。ＴＮＦαは、ＨＥＫ－Ｎｆ－ｋＢ親細胞及びＨＥＫ－ＮＦ－ｋＢ－ＢＣＭＡ細胞の両方でＮＦ－ｋＢ活性化を誘発したが、ＡＰＲＩＬの誘発はＢＣＭＡ特異性細胞腫のみに見られた。ＢＣＭＢ７２は、親細胞株では効果を有しておらず、ＢＣＭＡ発現細胞では高濃度においてのみ活性化を示した。
【図16E】 ＢＣＭＡを発現しているＨＥＫ－ＮＦκＢ細胞（図１６Ａ、図１６Ｃ、及び図１６Ｅ）又は親細胞（図１６Ｂ、図１６Ｄ、及び図１６Ｆ）をＴＮＦα及び種々の濃度のＡＰＲＩＬ又はＢＣＭＢ７２で刺激した。３つの時間点、１６時間（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、２４時間（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）、及び４８時間（図１６Ｅ及び図１６Ｆ）を分析した。ＴＮＦαは、ＨＥＫ－Ｎｆ－ｋＢ親細胞及びＨＥＫ－ＮＦ－ｋＢ－ＢＣＭＡ細胞の両方でＮＦ－ｋＢ活性化を誘発したが、ＡＰＲＩＬの誘発はＢＣＭＡ特異性細胞腫のみに見られた。ＢＣＭＢ７２は、親細胞株では効果を有しておらず、ＢＣＭＡ発現細胞では高濃度においてのみ活性化を示した。
【図16F】 ＢＣＭＡを発現しているＨＥＫ－ＮＦκＢ細胞（図１６Ａ、図１６Ｃ、及び図１６Ｅ）又は親細胞（図１６Ｂ、図１６Ｄ、及び図１６Ｆ）をＴＮＦα及び種々の濃度のＡＰＲＩＬ又はＢＣＭＢ７２で刺激した。３つの時間点、１６時間（図１６Ａ及び図１６Ｂ）、２４時間（図１６Ｃ及び図１６Ｄ）、及び４８時間（図１６Ｅ及び図１６Ｆ）を分析した。ＴＮＦαは、ＨＥＫ－Ｎｆ－ｋＢ親細胞及びＨＥＫ－ＮＦ－ｋＢ－ＢＣＭＡ細胞の両方でＮＦ－ｋＢ活性化を誘発したが、ＡＰＲＩＬの誘発はＢＣＭＡ特異性細胞腫のみに見られた。ＢＣＭＢ７２は、親細胞株では効果を有しておらず、ＢＣＭＡ発現細胞では高濃度においてのみ活性化を示した。
【図17A】 Ｔ細胞は、ｓＢＣＭＡ媒介性及びＢＣＭＢ７２依存性活性化を示さない。ＢＣＭＢ７２（図１７Ａ）及び無×ＣＤ３コントロール抗体（図１７Ｂ）を、種々の用量の可溶性ＢＣＭＡ ＥＣＤの存在下で２人の正常ドナー（Ｍ７０７７及びＭ５１３７）由来のＴ細胞で用量設定した。データ：平均±ＳＥＭ。
【図17B】 Ｔ細胞は、ｓＢＣＭＡ媒介性及びＢＣＭＢ７２依存性活性化を示さない。ＢＣＭＢ７２（図１７Ａ）及び無×ＣＤ３コントロール抗体（図１７Ｂ）を、種々の用量の可溶性ＢＣＭＡ ＥＣＤの存在下で２人の正常ドナー（Ｍ７０７７及びＭ５１３７）由来のＴ細胞で用量設定した。データ：平均±ＳＥＭ。
【図18A】 Ｈ９２９細胞でのＢＣＭＢ７２のＴ細胞活性化及びＴ細胞媒介性細胞傷害能における可溶性因子、ｓＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、及びＢＡＦＦの影響。ドナーＴ細胞（Ｍ７０７７＆Ｍ６５２１）及びＢＣＭＢ７２を使用して、細胞を殺傷アッセイに４８時間供した。標的細胞傷害性を左側のグラフに示し、Ｔ細胞活性化を右側のグラフに示す（ｎ＝２）。各処理のＥＣ５０値を凡例内に示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ａ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｂ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｃ）の存在下における細胞傷害性を示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ｄ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｅ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｆ）の存在下におけるＴ細胞活性化を示す。データ：平均±ＳＥＭ。
【図18B】 Ｈ９２９細胞でのＢＣＭＢ７２のＴ細胞活性化及びＴ細胞媒介性細胞傷害能における可溶性因子、ｓＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、及びＢＡＦＦの影響。ドナーＴ細胞（Ｍ７０７７＆Ｍ６５２１）及びＢＣＭＢ７２を使用して、細胞を殺傷アッセイに４８時間供した。標的細胞傷害性を左側のグラフに示し、Ｔ細胞活性化を右側のグラフに示す（ｎ＝２）。各処理のＥＣ５０値を凡例内に示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ａ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｂ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｃ）の存在下における細胞傷害性を示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ｄ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｅ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｆ）の存在下におけるＴ細胞活性化を示す。データ：平均±ＳＥＭ。
【図18C】 Ｈ９２９細胞でのＢＣＭＢ７２のＴ細胞活性化及びＴ細胞媒介性細胞傷害能における可溶性因子、ｓＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、及びＢＡＦＦの影響。ドナーＴ細胞（Ｍ７０７７＆Ｍ６５２１）及びＢＣＭＢ７２を使用して、細胞を殺傷アッセイに４８時間供した。標的細胞傷害性を左側のグラフに示し、Ｔ細胞活性化を右側のグラフに示す（ｎ＝２）。各処理のＥＣ５０値を凡例内に示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ａ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｂ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｃ）の存在下における細胞傷害性を示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ｄ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｅ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｆ）の存在下におけるＴ細胞活性化を示す。データ：平均±ＳＥＭ。
【図18D】 Ｈ９２９細胞でのＢＣＭＢ７２のＴ細胞活性化及びＴ細胞媒介性細胞傷害能における可溶性因子、ｓＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、及びＢＡＦＦの影響。ドナーＴ細胞（Ｍ７０７７＆Ｍ６５２１）及びＢＣＭＢ７２を使用して、細胞を殺傷アッセイに４８時間供した。標的細胞傷害性を左側のグラフに示し、Ｔ細胞活性化を右側のグラフに示す（ｎ＝２）。各処理のＥＣ５０値を凡例内に示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ａ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｂ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｃ）の存在下における細胞傷害性を示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ｄ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｅ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｆ）の存在下におけるＴ細胞活性化を示す。データ：平均±ＳＥＭ。
【図18E】 Ｈ９２９細胞でのＢＣＭＢ７２のＴ細胞活性化及びＴ細胞媒介性細胞傷害能における可溶性因子、ｓＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、及びＢＡＦＦの影響。ドナーＴ細胞（Ｍ７０７７＆Ｍ６５２１）及びＢＣＭＢ７２を使用して、細胞を殺傷アッセイに４８時間供した。標的細胞傷害性を左側のグラフに示し、Ｔ細胞活性化を右側のグラフに示す（ｎ＝２）。各処理のＥＣ５０値を凡例内に示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ａ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｂ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｃ）の存在下における細胞傷害性を示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ｄ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｅ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｆ）の存在下におけるＴ細胞活性化を示す。データ：平均±ＳＥＭ。
【図18F】 Ｈ９２９細胞でのＢＣＭＢ７２のＴ細胞活性化及びＴ細胞媒介性細胞傷害能における可溶性因子、ｓＢＣＭＡ、ＡＰＲＩＬ、及びＢＡＦＦの影響。ドナーＴ細胞（Ｍ７０７７＆Ｍ６５２１）及びＢＣＭＢ７２を使用して、細胞を殺傷アッセイに４８時間供した。標的細胞傷害性を左側のグラフに示し、Ｔ細胞活性化を右側のグラフに示す（ｎ＝２）。各処理のＥＣ５０値を凡例内に示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ａ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｂ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｃ）の存在下における細胞傷害性を示す。ｓＢＣＭＡ（図１８Ｄ）、ＡＰＲＩＬ（図１８Ｅ）、及びＢＡＦＦ（図１８Ｆ）の存在下におけるＴ細胞活性化を示す。データ：平均±ＳＥＭ。
【図19A】 ２回の独立試験から得られたシグナルを、競合抗体の不在下でＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦに結合するＢＣＭＡ－Ｆｃの最大シグナルに正規化した。ＡＰＲＩＬ（図１９Ａ）及びＢＡＦＦ（図１９Ｂ）に結合するＢＣＭＡを、ＢＣＭＢ７２及びコントロール抗体（無×ＣＤ３）濃度の関数としてプロットした。
【図19B】 ２回の独立試験から得られたシグナルを、競合抗体の不在下でＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦに結合するＢＣＭＡ－Ｆｃの最大シグナルに正規化した。ＡＰＲＩＬ（図１９Ａ）及びＢＡＦＦ（図１９Ｂ）に結合するＢＣＭＡを、ＢＣＭＢ７２及びコントロール抗体（無×ＣＤ３）濃度の関数としてプロットした。
【図20A】 ヒト初代ＭＭ形質細胞に対するＢＣＭＢ７２の細胞傷害能。５人の異なる患者から得られた凍結骨髄由来単核細胞（ＭＭ２４０ＢＭ（図２０Ａ）、ＭＭ２５９ＢＭ（図２０Ｂ）、ＭＭ２７０ＢＭ（図２０Ｃ）、ＭＭ２７６ＢＭ（図２０Ｄ）、及びＭＭ２７７ＢＭ（図２０Ｅ））を使用して、ＩｇＧ４アイソタイプ（ＣＮＴＯ ９４１２、左パネル）コントロールと比較したＢＣＭＢ７２の結合性、形質細胞の細胞傷害性（中）、及びＴ細胞活性化（右）を評価した。細胞傷害アッセイについては、Ｍ７０７７正常健康ドナー由来のＴ細胞を患者ＢＭＭＣサンプルに外部添加し、ＢＣＭＢ７２（ＢＣＭＡ×ＣＤ３）、ＢＣ３Ｂ４（ＢＣＭＡ×無）、又はＣＮＴＯ７００８（無×ＣＤ３）を用いて４８時間インキュベートした。ＢＣＭＢ７２は、全てのドナーサンプルに対して用量依存的に形質細胞に結合し、その平均蛍光強度をＹ軸に記録した。ＢＣＭＢ７２の処理に反応した生存形質細胞（ＣＤ１３８＋）の喪失及びＴ細胞上のＣＤ２５の随伴的なアップレギュレーションに注目されたい。Ｔ細胞活性化のＥＣ５０値をグラフに示す。
【図20B】 ヒト初代ＭＭ形質細胞に対するＢＣＭＢ７２の細胞傷害能。５人の異なる患者から得られた凍結骨髄由来単核細胞（ＭＭ２４０ＢＭ（図２０Ａ）、ＭＭ２５９ＢＭ（図２０Ｂ）、ＭＭ２７０ＢＭ（図２０Ｃ）、ＭＭ２７６ＢＭ（図２０Ｄ）、及びＭＭ２７７ＢＭ（図２０Ｅ））を使用して、ＩｇＧ４アイソタイプ（ＣＮＴＯ ９４１２、左パネル）コントロールと比較したＢＣＭＢ７２の結合性、形質細胞の細胞傷害性（中）、及びＴ細胞活性化（右）を評価した。細胞傷害アッセイについては、Ｍ７０７７正常健康ドナー由来のＴ細胞を患者ＢＭＭＣサンプルに外部添加し、ＢＣＭＢ７２（ＢＣＭＡ×ＣＤ３）、ＢＣ３Ｂ４（ＢＣＭＡ×無）、又はＣＮＴＯ７００８（無×ＣＤ３）を用いて４８時間インキュベートした。ＢＣＭＢ７２は、全てのドナーサンプルに対して用量依存的に形質細胞に結合し、その平均蛍光強度をＹ軸に記録した。ＢＣＭＢ７２の処理に反応した生存形質細胞（ＣＤ１３８＋）の喪失及びＴ細胞上のＣＤ２５の随伴的なアップレギュレーションに注目されたい。Ｔ細胞活性化のＥＣ５０値をグラフに示す。
【図20C】 ヒト初代ＭＭ形質細胞に対するＢＣＭＢ７２の細胞傷害能。５人の異なる患者から得られた凍結骨髄由来単核細胞（ＭＭ２４０ＢＭ（図２０Ａ）、ＭＭ２５９ＢＭ（図２０Ｂ）、ＭＭ２７０ＢＭ（図２０Ｃ）、ＭＭ２７６ＢＭ（図２０Ｄ）、及びＭＭ２７７ＢＭ（図２０Ｅ））を使用して、ＩｇＧ４アイソタイプ（ＣＮＴＯ ９４１２、左パネル）コントロールと比較したＢＣＭＢ７２の結合性、形質細胞の細胞傷害性（中）、及びＴ細胞活性化（右）を評価した。細胞傷害アッセイについては、Ｍ７０７７正常健康ドナー由来のＴ細胞を患者ＢＭＭＣサンプルに外部添加し、ＢＣＭＢ７２（ＢＣＭＡ×ＣＤ３）、ＢＣ３Ｂ４（ＢＣＭＡ×無）、又はＣＮＴＯ７００８（無×ＣＤ３）を用いて４８時間インキュベートした。ＢＣＭＢ７２は、全てのドナーサンプルに対して用量依存的に形質細胞に結合し、その平均蛍光強度をＹ軸に記録した。ＢＣＭＢ７２の処理に反応した生存形質細胞（ＣＤ１３８＋）の喪失及びＴ細胞上のＣＤ２５の随伴的なアップレギュレーションに注目されたい。Ｔ細胞活性化のＥＣ５０値をグラフに示す。
【図20D】 ヒト初代ＭＭ形質細胞に対するＢＣＭＢ７２の細胞傷害能。５人の異なる患者から得られた凍結骨髄由来単核細胞（ＭＭ２４０ＢＭ（図２０Ａ）、ＭＭ２５９ＢＭ（図２０Ｂ）、ＭＭ２７０ＢＭ（図２０Ｃ）、ＭＭ２７６ＢＭ（図２０Ｄ）、及びＭＭ２７７ＢＭ（図２０Ｅ））を使用して、ＩｇＧ４アイソタイプ（ＣＮＴＯ ９４１２、左パネル）コントロールと比較したＢＣＭＢ７２の結合性、形質細胞の細胞傷害性（中）、及びＴ細胞活性化（右）を評価した。細胞傷害アッセイについては、Ｍ７０７７正常健康ドナー由来のＴ細胞を患者ＢＭＭＣサンプルに外部添加し、ＢＣＭＢ７２（ＢＣＭＡ×ＣＤ３）、ＢＣ３Ｂ４（ＢＣＭＡ×無）、又はＣＮＴＯ７００８（無×ＣＤ３）を用いて４８時間インキュベートした。ＢＣＭＢ７２は、全てのドナーサンプルに対して用量依存的に形質細胞に結合し、その平均蛍光強度をＹ軸に記録した。ＢＣＭＢ７２の処理に反応した生存形質細胞（ＣＤ１３８＋）の喪失及びＴ細胞上のＣＤ２５の随伴的なアップレギュレーションに注目されたい。Ｔ細胞活性化のＥＣ５０値をグラフに示す。
【図20E】 ヒト初代ＭＭ形質細胞に対するＢＣＭＢ７２の細胞傷害能。５人の異なる患者から得られた凍結骨髄由来単核細胞（ＭＭ２４０ＢＭ（図２０Ａ）、ＭＭ２５９ＢＭ（図２０Ｂ）、ＭＭ２７０ＢＭ（図２０Ｃ）、ＭＭ２７６ＢＭ（図２０Ｄ）、及びＭＭ２７７ＢＭ（図２０Ｅ））を使用して、ＩｇＧ４アイソタイプ（ＣＮＴＯ ９４１２、左パネル）コントロールと比較したＢＣＭＢ７２の結合性、形質細胞の細胞傷害性（中）、及びＴ細胞活性化（右）を評価した。細胞傷害アッセイについては、Ｍ７０７７正常健康ドナー由来のＴ細胞を患者ＢＭＭＣサンプルに外部添加し、ＢＣＭＢ７２（ＢＣＭＡ×ＣＤ３）、ＢＣ３Ｂ４（ＢＣＭＡ×無）、又はＣＮＴＯ７００８（無×ＣＤ３）を用いて４８時間インキュベートした。ＢＣＭＢ７２は、全てのドナーサンプルに対して用量依存的に形質細胞に結合し、その平均蛍光強度をＹ軸に記録した。ＢＣＭＢ７２の処理に反応した生存形質細胞（ＣＤ１３８＋）の喪失及びＴ細胞上のＣＤ２５の随伴的なアップレギュレーションに注目されたい。Ｔ細胞活性化のＥＣ５０値をグラフに示す。
【図21】 Ｈ９２９予防モデルにおけるＢＣＭＢ７２のインビボでの有効性。
【図22】 Ｈ９２９異種移植マウスにおける血清可溶性ＢＣＭＡ濃度。ヒトＢＣＭＡ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、血清可溶性ＢＣＭＡ濃度を検出した。可溶性ＢＣＭＡ濃度は、これらの動物における腫瘍の負担とよく相関するＰＢＳコントロールと比較して、ＢＣＭＢ７２の１μｇ及び０．５μｇ／マウスを用いたマウス治療で著しく低かった。より低用量のＢＣＭＢ７２（０．１μｇ／マウス）は、ｓＢＣＭＡ濃度又は腫瘍サイズに効果がなかった。

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