【図1】 ５３５個のアミノ酸の長さを有するＢａｃｉｌｌｕｓ ｓａｆｅｎｓｉｓ株ＣＣＭＡ－５６０（配列番号２、Ｓｂｊｃｔ）のゲノム、配列ＩＤ：ＷＰ＿０２９７０８０８９．１において同定された推定セリンリコンビナーゼと、ＳＰＢｅｔａｃ２インテグラーゼタンパク質（配列番号１、クエリ）とのアライメント統計及び配列アライメントを示す。２つのタンパク質は、アミノ酸１～５２９の範囲のタンパク質レベルで６４％の配列同一性を有する。この推定セリンリコンビナーゼは、本明細書においてＳＲ２１（セリンリコンビナーゼ２１）と呼ばれる。

【図2】 挿入前遺伝子座を表す株の同定：５６８０９３個のヌクレオチドの長さを有するＢａｃｉｌｌｕｓ ｓａｆｅｎｓｉｓ株Ｆａｉｒｖｉｅｗ ｃｏｎｔｉｇ５６＿１（Ｓｂｊｃｔ）の全ゲノムショットガン配列、配列ＩＤ：ＮＺ＿ＪＦＢＹ０１００００１８．１のヌクレオチド４６４３５２～４６４８３９と、ＣＣＭＡ－５６０ ＤＮＡ配列（クエリ）とのアライメント統計及び配列アライメントを示す。

【図3】 ＳＲ２１リコンビナーゼａｔｔＰ及びａｔｔＢ部位を示す。ａｔｔＰ及びａｔｔＢ部位は、中央ジヌクレオチド組換え交差部位（下線付き）の周囲の二回転対称から構成される。半分の部位が番号付けされている。以前の研究（Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４１：８３４１－８３５６）から外挿する亜鉛リボンドメイン（zinc ribbon domain、ＺＤ）及びリコンビナーゼドメイン（recombinase domain、ＲＤ）によって結合されると予測される配列のアライメントを示すために、スペースをａｔｔＢ配列に導入した。ＺＤ又はＲＤドメインのうちの３つ又は４つにおいて同一である残基は、太字である。２つの交互のａｔｔＢ配列（配列番号８）及び（配列番号９）に対するａｔｔＰ（配列番号７）アライメントを示す。

【図4】 レポータ遺伝子のリコンビナーゼ活性化を示す。プラスミドＰ４１は、２つのレポータ遺伝子転写物をコードする。ＥＦ１αプロモータによって駆動される最初のものは、構成的に活性であり、自己切断Ｆ２Ａペプチドリンカーによって連結された緑色蛍光タンパク質（green fluorescent protein、ＧＦＰ）とレニラルシフェラーゼとの間の融合タンパク質をコードする。ＣＭＶによって駆動される第２の転写物は、ＳＲ２１リコンビナーゼａｔｔＢ部位（配列番号９）、続いて、Ｐ２Ａ自己切断ペプチドリンカーによって連結されたｍＣｈｅｒｒｙ及びホタルルシフェラーゼをコードする逆位融合タンパク質コード領域、並びにＳＲ２１ ａｔｔＰ部位を含む。ルシフェラーゼもｍＣｈｅｒｒｙも、プロモータに対して反対の配向にあるため、発現されない。ＳＲ２１リコンビナーゼが発現する場合、ａｔｔＢ及びａｔｔＰ配列は組み換えられ、これは、レポータ遺伝子の逆位並びにホタルルシフェラーゼ及びｍＣｈｅｒｒｙの発現をもたらす。

【図5】 本出願の一実施形態に従って産生された精製組換えＡＡＶ試料中のＡＡＶキャプシドタンパク質を示す。プラスミドＰ４３９で安定してトランスフェクトし、２０ ＭＯＩ（Ａ）及び４０ ＭＯＩ（Ｂ）においてＨｙｐｅｒｆｌａｓｋ容器内で成長及び感染させた細胞から試料を精製し、ＰＡＧＥ及び銀染色に供した。

【図6】 本出願の一実施形態に従った、内部に停止カセットが挿入された人工イントロンを有するｒｅｐ／ｃａｐ発現カセットを示す。

【図7】 本出願の一実施形態に従ったベクター（プラスミドＰ４３９）を示す。

【図8】 ＲＴ－ＰＣＲによってＰ４３９で同定されたＲＮＡスプライス部位の位置及び配列を示す。上の図面は、停止カセット切除後のＲＥＰ遺伝子の構造を表す。ＲＥＰの５’及び３’半分は、ベータ－アクチンイントロン（配列番号１４）の上流半分、ＳＲ２１ＡｔｔＬ要素（配列番号３５）、及びベータ－アクチンイントロンの下流半分（配列番号１５）によって分離される。（２）ベータ－アクチンスプライスドナー（配列番号７１）と、（３）ベータ－アクチンスプライスアクセプタ（配列番号７２）との間のスプライシングを実線によって示す。（１）５’ＲＥＰ配列中の上流スプライスドナー（配列番号６４）と、（３）３’ベータ－アクチンアクセプタ（配列番号７２）との間のスプライシングを点線で示す。スプライスドナー及びアクセプタの配列を下に示す。小文字の配列は、イントロン配列を示す。

【図9】 本出願の一実施形態に従ったベクター（プラスミドＰ６００）を示す。