特表 2022-505327 ＳＹＴ１１抑制剤を有効成分として含む胃癌治療用組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-01-14

(54)【発明の名称】ＳＹＴ１１抑制剤を有効成分として含む胃癌治療用組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20220106BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220106BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220106BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20220106BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20220106BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20220106BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P35/00

A61P43/00 111

A61K31/7105

A61K31/7088

A61K31/713

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021521300

(86)(22)【出願日】2019-10-17

(85)【翻訳文提出日】2021-04-16

(86)【国際出願番号】 KR2019013686

(87)【国際公開番号】W WO2020080861

(87)【国際公開日】2020-04-23

(31)【優先権主張番号】10-2018-0125073

(32)【優先日】2018-10-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ｗｉｔｅｐｓｏｌ

(71)【出願人】

【識別番号】515276624

【氏名又は名称】コリア リサーチ インスティチュート オブ バイオサイエンス アンド バイオテクノロジー

【氏名又は名称原語表記】ＫＯＲＥＡ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ

(71)【出願人】

【識別番号】507175175

【氏名又は名称】インダストリー－アカデミック コーポレーション ファウンデーション，ヨンセイ ユニバーシティ

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】ゼ・ホ・ジョン

(72)【発明者】

【氏名】ミ・ソン・ウォン

(72)【発明者】

【氏名】ボ・キョン・キム

(72)【発明者】

【氏名】ヒョン・スン・バン

(72)【発明者】

【氏名】キョン・チャン・パク

(72)【発明者】

【氏名】ヨン・イル・ヨム

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA17

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZB21

4C084ZB26

4C084ZC41

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA66

4C086NA14

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZC41

(57)【要約】

本発明は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤を有効成分として含む胃癌治療用組成物およびＳＹＴ１１の発現測定を含む幹型胃癌の診断方法に関する。本発明によるＳＹＴ１１抑制剤を含む組成物は、胃癌胞の移動および浸潤を抑制し、細胞外基質に対する付着能を抑制し、各種癌転移関連サイトカインの分泌を抑制し、胃癌細胞の増殖を抑制することで、胃癌の転移抑制、胃癌の予防または治療用組成物として優れた効果を示す。また、本発明では、ＳＹＴ１１の発現と幹型胃癌との相関関係を確認したところ、ＳＹＴ１１の発現水準を測定することで、幹型胃癌の診断に優れた効果を示す。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤を有効成分として含む、胃癌の予防または治療用薬学組成物。

【請求項2】

前記ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドからなる群から選択される、請求項１に記載の胃癌の予防または治療用薬学組成物。

【請求項3】

前記ｓｉＲＮＡは、配列番号２、配列番号３、配列番号４および配列番号５からなる群から選択される塩基配列を有する、請求項２に記載の胃癌の予防または治療用薬学組成物。

【請求項4】

前記ｓｈＲＮＡは、配列番号６、配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７からなる群から選択される塩基配列を有する、請求項２に記載の胃癌の予防または治療用薬学組成物。

【請求項5】

前記アンチセンスヌクレオチドは、配列番号１８および配列番号１９からなる群から選択される塩基配列を有する、請求項２に記載の胃癌の予防または治療用薬学組成物。

【請求項6】

前記胃癌は、幹型または混合型の亜型を有する胃癌である、請求項１に記載の胃癌の予防または治療用薬学組成物。

【請求項7】

ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）の発現水準を測定する製剤を含む、幹型胃癌の診断用組成物。

【請求項8】

前記ＳＹＴ１１ ｍＲＮＡ水準を測定する製剤は、ＳＹＴ１１遺伝子に特異的なプライマー（ｐｒｉｍｅｒ）対、プローブ（ｐｒｏｂｅ）、またはアンチセンスヌクレオチド（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）であるか、
前記ＳＹＴ１１タンパク質水準を測定する製剤は、ＳＹＴ１１タンパク質に特異的な抗体である、請求項７に記載の幹型胃癌の診断用組成物。

【請求項9】

（ａ）分離した生物学的胃組織試料からＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準を測定するステップと、
（ｂ）前記発現水準を正常対照群試料のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準と比較するステップと、
（ｃ）前記生物学的胃組織試料のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準が正常対照群のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準より高い場合、幹型胃癌として判定するステップとを含む、幹型胃癌診断のための情報を提供する方法。

【請求項10】

（ａ）ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）を発現する分離した胃癌細胞に胃癌治療候補物質を処理するステップと、
（ｂ）前記候補物質が処理された分離した胃癌細胞でＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準を測定するステップと、
（ｃ）前記（ｂ）ステップで測定されたＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準が候補物質が処理されていない分離した胃癌細胞に比べて低い水準を示す場合、前記候補物質を胃癌治療用製剤として使用可能であると判定するステップとを含む、胃癌の治療用製剤のスクリーニング方法。

【請求項11】

ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤を含む組成物を個体に投与するステップを含む、胃癌の予防または治療方法。

【請求項12】

前記ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドからなる群から選択される、請求項１１に記載の胃癌の予防または治療方法。

【請求項13】

ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤を含む組成物の胃癌の予防または治療用途。

【請求項14】

前記ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドからなる群から選択される、請求項１３に記載の胃癌の予防または治療用途。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０１８年１０月１９日付けで出願された韓国特許出願第１０‐２０１８‐０１２５０７３号を優先権として主張し、前記明細書の全体は、本出願の参考文献である。

【0002】

本発明は、ＳＹＴ１１発現抑制剤を有効成分として含む胃癌の予防または治療用薬学組成物、ＳＹＴ１１の発現水準を測定する製剤を含む胃癌診断用組成物、ＳＹＴ１１の発現水準を測定するステップを含む胃癌診断のための情報を提供する方法および胃癌の治療用製剤のスクリーニング方法に関する。

【背景技術】

【0003】

癌は、世界的に高い死亡率を示しており、西欧社会では、心血管疾患の次に最も一般的な死亡原因である。特に、人口の高齢化、食生活の西欧化による高脂肪食の摂取の一般化、環境汚染物質の急激な増加、飲酒量の増加などによって、大腸癌、乳癌、前立腺癌などが増加し続ける傾向にある。かかる状況で、癌の早期予防および治療を可能とし、ヒトの健康の増進、健康な生活の質の向上および人類保健の増進に寄与することができる抗癌物質の創出が切実に求められている。

【0004】

中でも、胃癌は、特に、アジアで高い発生頻度を示し、癌関連死亡の主な原因になっている。韓国では、癌患者の１６．２％（男性癌患者の２０．３％および女性癌患者の１１．２％）が胃癌患者であると推定される。胃癌の症状は、全く症状がない場合から激しい痛みに至るまで様々な様相を示しており、胃癌の症状がある特性を有するのではなく、一般的な消化器症状を示し、胃癌の初期は症状がない場合がほとんどであり、症状があるとしても比較的軽微で、若干の消化不良や上腹部の違和感を感じる程度であり、ほとんどのヒトがこれを見逃しやすく、胃癌の死亡率を高める原因になることがある。

【0005】

胃癌組織の分類には、様々な基準が知られている。例えば、Ｌａｕｒｅｎ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎにより胃癌の種類が分類され得る。Ｌａｕｒｅｎ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎによると、胃癌のほとんどを占める腺癌を腸型（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｙｐｅ）とびまん型（ｄｉｆｆｕｓｅ ｔｙｐｅ）とに分ける。ヘリコバクターピロリ菌の感染が長く進行した萎縮性胃炎がある場合に特に腸型胃癌がよく発生するが、これは潰瘍をよく形成し、粘着力のある腫瘍細胞が集まって特徴的な管状構造をなす。一方、びまん型は、腫瘍細胞の粘着力が低くて明確な腫塊の形成なしに個別細胞が胃壁を浸潤する類型であり、若い層で多く発生し、予後が良くないという問題がある。かかるびまん型胃癌の患者の多数は、成人になってから初めてヘリコバクターに感染し、宿主の強い拒絶反応によってびまん型胃癌に進行した結果現れる患者である。かかる反応は、萎縮性胃炎が少ない若い女性であるほど過剰に現れ、結局、急性感染が治ることができず、胃粘膜の浮腫性および結節性変化が続き、予後が非常に良くないびまん型胃癌に進行する。したがって、同じ胃癌患者であってもびまん型胃癌に診断された若い成人であるほど完治可能性が非常に低く、結局数年内に死亡するようになる。前記のようにびまん型胃癌は、臨床的にその迅速な確認が難しく、これによって実際治療が遅くなるか治療に入っても十分な治療効果を示す治療剤がなく、上記の問題が継続している。

【0006】

最近、胃癌患者組織のマイクロアレイ（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）分析で遺伝子の発現パターンの特徴によって、腸型（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ）、幹型（ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ）、混合型（ｍｉｘｅｄ ｓｔｒｏｍａｌ）、炎症型（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）に分子亜型を分類することができることが確認され、上記で言及しているように、腸型は、幹型、混合型および炎症型に比べて治療が容易な胃癌として知られており、幹型は、治療が難しく、予後が非常に悪い胃癌群に属すると報告されている［Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１５；２１：４４９‐４５６ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ ｓｕｂｔｙｐｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅｓ］。

【0007】

かかる背景の下で、上記のように診断が難しい特定の癌を迅速に診断し、これを治療することができる新たな技術に関する研究開発が至急必要となっている。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

したがって、本発明者らは、人体に副作用を引き起こさず胃癌の治療に優れた効果を示すことができる抗癌製剤を開発すべく鋭意努力を重ねた結果、ＳＹＴ１１発現抑制剤が、毒性のない範囲内で胃癌の治療に優れた効果を示し、診断目的としても有用に用いられることを見出し、本発明を完成するに至った。

【0009】

本発明の一つの目的は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現抑制剤を有効成分として含む胃癌の予防または治療用薬学組成物を提供することにある。

【0010】

本発明の他の一つの目的は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）の発現水準を測定する製剤を含む、幹型胃癌の診断用組成物を提供することにある。

【0011】

本発明のさらに他の一つの目的は、（ａ）分離した生物学的胃組織試料からＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準を測定するステップと、（ｂ）前記発現水準を正常対照群試料のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準と比較するステップと、（ｃ）前記生物学的胃組織試料のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準が正常対照群のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準より高い場合、幹型胃癌として判定するステップとを含む、幹型胃癌診断のための情報を提供する方法を提供することにある。

【0012】

本発明のさらに他の一つの目的は、（ａ）ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）を発現する分離した胃癌細胞に胃癌治療候補物質を処理するステップと、（ｂ）前記候補物質が処理された分離した胃癌細胞でＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準を測定するステップと、（ｃ）前記（ｂ）ステップで測定されたＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準が候補物質が処理されていない分離した胃癌細胞に比べて低い水準を示す場合、前記候補物質を胃癌治療用製剤として使用可能であると判定するステップとを含む、胃癌の治療用製剤のスクリーニング方法を提供することにある。

【0013】

本発明のさらに他の目的は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）の発現抑制剤を含む組成物を個体に投与するステップを含む胃癌の予防または治療方法を提供することにある。

【0014】

本発明のさらに他の目的は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）の発現抑制剤を含む組成物を個体に投与するステップを含む胃癌の予防または治療用途を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0015】

上記目的を達成するために、本発明の一側面は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現抑制剤を有効成分として含む胃癌の予防または治療用薬学組成物を提供する。

【0016】

また、本発明の他の側面は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）の発現水準を測定する製剤を含む、幹型胃癌の診断用組成物を提供する。

【0017】

また、本発明のさらに他の側面は、（ａ）分離した生物学的胃組織試料からＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準を測定するステップと、（ｂ）前記発現水準を正常対照群試料のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準と比較するステップと、（ｃ）前記生物学的胃組織試料のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準が正常対照群のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準より高い場合、幹型胃癌として判定するステップとを含む、幹型胃癌診断のための情報を提供する方法を提供する。

【0018】

また、本発明のさらに他の側面は、（ａ）ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）を発現する分離した胃癌細胞に胃癌治療候補物質を処理するステップと、（ｂ）前記候補物質が処理された分離した胃癌細胞でＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準を測定するステップと、（ｃ）前記（ｂ）ステップで測定されたＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準が候補物質が処理されていない分離した胃癌細胞に比べて低い水準を示す場合、前記候補物質を胃癌治療用製剤として使用可能であると判定するステップとを含む、胃癌の治療用製剤のスクリーニング方法を提供する。

【0019】

また、本発明のさらに他の側面は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）の発現抑制剤を含む組成物を個体に投与するステップを含む胃癌の予防または治療方法を提供する。

【0020】

また、本発明のさらに他の側面は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）の発現抑制剤を含む組成物を個体に投与するステップを含む胃癌の予防または治療用途を提供する。

【発明の効果】

【0021】

本発明によるＳＹＴ１１抑制剤を含む組成物は、胃癌細胞の移動および浸潤を抑制し、細胞外基質に対する付着能を抑制し、各種の癌転移関連サイトカインの分泌を抑制し、胃癌細胞の増殖を抑制することで、癌の転移の抑制、癌の予防または治療用組成物として優れた効果を示す。

【0022】

また、本発明では、ＳＹＴ１１の発現と幹型胃癌との相関関係を確認したところ、ＳＹＴ１１の発現水準を測定することで、幹型胃癌の診断に優れた効果を示す。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1】ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ、ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ、ｍｉｘｅｄ、ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｕｂｔｙｐｅを有する胃癌細胞株の中で、ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ ｓｕｂｔｙｐｅ胃癌細胞株でＳＹＴ１１発現増進を確認した結果を示す図である。

【図2】胃癌細胞株でＳＹＴ１１発現の減少による胃癌細胞株の移動抑制を確認した結果を示す図である。

【図3】胃癌細胞株でＳＹＴ１１発現の減少による胃癌細胞株の浸潤抑制を確認した結果を示す図である。

【図4】胃癌細胞株でＳＹＴ１１発現の減少による細胞外基質に対する付着能の抑制を確認した結果を示す図である。

【図5】胃癌細胞株でＳＹＴ１１発現の減少による癌転移関連成長因子およびサイトカイン分泌抑制を確認した結果を示す図である。

【図6】マウス動物モデルでＳＹＴ１１発現の減少による腫瘍減少効果を確認した結果を示す図である。

【図7】胃癌細胞株でＳＹＴ１１発現の減少による癌転移関連成長因子およびサイトカイン分泌抑制を確認した結果と、マウス動物モデルからの腫瘍組織でＳＹＴ１１抑制による癌転移関連成長因子およびサイトカイン分泌抑制を確認した結果を示す図である。

【図8】胃癌細胞株で様々なｓｉＲＮＡを用いたＳＹＴ１１発現抑制による細胞増殖抑制を確認した結果を示す図である。

【図9】胃癌細胞株でＳＹＴ１１アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた癌細胞増殖抑制を確認した結果を示す図である。

【図10】胃癌細胞株でＳＹＴ ｆａｍｉｌｙの発現抑制による細胞成長抑制を比較した結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0024】

上記目的を達成するための本発明の一つの様態は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現抑制剤を有効成分として含む胃癌の予防または治療用薬学組成物である。

【0025】

本発明において、用語「ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１，ＮＭ＿１５２２８０．４）」は、シナプトタグミン（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ）遺伝子ファミリの一つであり、カルシウムセンサ（ｃａｌｃｉｕｍ ｓｅｎｓｏｒｓ）として知られた他のファミリメンバーと類似のタンパク質を暗号化し、シナプス伝達（ｓｙｎａｐｔｉｃ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）で膜輸送のカルシウム依存的調節を調整する。暗号化したタンパク質は、ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－Ｅ３－ｌｉｇａｓｅ ｐａｒｋｉｎの基質として知られている。前記のＳＹＴ１１は、配列番号１のアミノ酸配列を有する。

【0026】

本発明の具体的な一実施形態では、ヒト胃癌細胞株の分析により癌細胞株の分子亜型をｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ、ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ、ｍｉｘｅｄ、ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙに分類し、分類したヒト胃癌細胞株のうちｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ亜型でＳＹＴ１１の発現が増加することを確認した。

【0027】

本発明の他の具体的な一実施形態では、ＳＹＴ１１発現抑制による細胞の転移変化、すなわち、移動および浸潤能力変化との相関関係を確認するために、胃癌細胞でＳＹＴ１１を抑制したときに、浸潤能および移動能が著しく減少することを確認した。

【0028】

本発明のさらに他の具体的な一実施形態では、ＳＹＴ１１発現抑制による癌細胞の細胞外基質に対する付着能変化との相関関係を確認するために、胃癌細胞でＳＹＴ１１発現を抑制したときに細胞外基質に対する付着能が著しく減少することを確認した。

【0029】

本発明のさらに他の具体的な一実施形態では、ＳＹＴ１１発現抑制による癌細胞転移と関連する成長因子（Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）またはサイトカイン（ｃｙｔｏｃｋｉｎｅ）の変化との相関関係を確認するために、胃癌細胞でＳＹＴ１１発現を抑制したときに癌細胞転移と関連するＰＤＧＦ－ＡＡ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦＢＰ－２、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－８、ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１、ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２などが減少することを確認した。

【0030】

本発明のさらに他の具体的な実施形態では、マウス動物モデルでＳＹＴ１１発現抑制による腫瘍の減少を確認した。

【0031】

本発明のさらに他の具体的な一実施形態では、ＳＹＴ１１抑制による腫瘍細胞の増殖抑制を確認した。

【0032】

本発明において、用語「ＳＹＴ１１抑制剤」は、ＳＹＴ１１の発現または活性を減少させる製剤をすべて通称する意味として使用され、具体的には、ＳＹＴ１１の発現減少に影響を与えるかＳＹＴ１１に直接作用するか、そのリガンドに間接作用するなどの方式で、ＳＹＴ１１の発現量を転写（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）、ｍＲＮＡ水準、または移行（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）水準で減少させるか、ＳＹＴ１１活性を邪魔することで、ＳＹＴ１１の活性を減少させるすべての製剤を含むことができる。

【0033】

前記ＳＹＴ１１の抑制剤は、ＳＹＴ１１の発現またはＳＹＴ１１を標的にして活性を抑制することができる化合物、核酸、ペプチド、ウイルスまたは前記核酸を含むベクターなどその形態に制限なく使用可能である。前記ＳＹＴ１１抑制剤は、これに制限されないが、ＳＹＴ１１遺伝子のｍＲＮＡを分解させるｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ、ＳＹＴ１１タンパク質の発現を減少させるアンチセンスオリゴヌクレオチドがある。また、ＳＹＴ１１タンパク質に結合して機能を抑制するＳＹＴ１１抑制剤として、アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）または低分子化合物であり得る。

【0034】

例示的な一具現例において、前記ｓｉＲＮＡは、配列番号２、３、４および５から選択される塩基配列を有し得る。

【0035】

【表1】

【0036】

例示的な一具現例において、前記ｓｈＲＮＡは、配列番号６、１５、１６および１７から選択される塩基配列を有するｓｈＲＮＡおよびその同族体、同種型、変異体、誘導体、断片などの合成、変形されたものであってもよく、例えば、配列番号６、１５～１７から選択される塩基配列において中央に存在するｌｏｏｐ ｓｅｑｕｅｎｃｅ（下記の表２の下線）が変形されたものであってもよい。

【0037】

【表2】

【0038】

例示的な一具現例において、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１８および１９から選択されるいずれか一つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびその誘導体であってもよく、前記誘導体は、配列番号１８および１９から選択される一つ以上のオリゴヌクレオチドにおいてｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ修飾および／または２´-Ｏ－メチル化修飾を有し得る。

【0039】

【表3】

【0040】

本発明において、用語「治療」は、治療しようとする個々人または細胞の天然過程を変更させるために臨床的に介入することを指し、これは、臨床病理状態が進行する間にまたはこれを予防するために行うことができる。目的とする治療効果には、疾病の発生または再発を予防し、症状を緩和させ、疾病によるすべての直接または間接的な病理学的結果を低下させ、転移を予防し、疾病進行速度を減少させ、疾病状態を軽減または一時的に緩和させ、好転させるか予後を改善させることが含まれる。好ましくは、本発明では、ＳＹＴ１１を抑制する物質を含む組成物の投与によって胃癌の経過を好転させるすべての行為を含む。また、「予防」は、本発明によるＳＹＴ１１を抑制する物質を含む組成物の投与によって前記胃癌の発病を抑制または遅延させるすべての行為を意味する。

【0041】

本発明において、用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」は、特定のｍＲＮＡの配列に相補的な核酸配列を含んでいるＤＮＡ、ＲＮＡまたはこれらの誘導体として、ｍＲＮＡ内の相補的な配列に結合し、ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳を阻害する働きをする。アンチセンスオリゴヌクレオチド配列は、前記ＳＹＴ１１ ｍＲＮＡに相補的で前記ｍＲＮＡに結合することができるＤＮＡまたはＲＮＡ配列を意味する。これは、前記ＳＹＴ１１ ｍＲＮＡの翻訳、細胞質内への転位（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）、成熟（ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ）または他のすべての全体的な生物学的機能に対する必須の活性を阻害することができる。アンチセンスオリゴヌクレオチドの長さは、６～１００塩基、好ましくは８～６０塩基、より好ましくは１０～４０塩基であり得る。前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、通常の方法で試験管内で合成されて生体内に投与するか生体内でアンチセンスオリゴヌクレオチドが合成されるようにすることができる。試験管内でアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成する一つの例は、ＲＮＡ重合酵素Ｉを用いることである。生体内でアンチセンスＲＮＡが合成されるようにする一つの例は、多重クローニング部位（ＭＣＳ）の起源が逆方向にあるベクターを使用してアンチセンスＲＮＡが転写されるようにすることである。前記アンチセンスＲＮＡは、配列内に翻訳中止コドンが存在するようにして、ペプチド配列に翻訳されないようにすることが好ましい。本発明で利用可能なアンチセンスオリゴヌクレオチドのデザインは、ＳＹＴ１１の塩基配列を参照し、当業界において公知の方法にしたがって作製することができる。

【0042】

具体的には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１８または１９のオリゴヌクレオチドであってもよいが、これに制限されない。

【0043】

また、前記配列番号１８または１９のオリゴヌクレオチドは、前記配列番号１８または１９のオリゴヌクレオチドと実質的に同じ塩基配列を含むオリゴヌクレオチドおよびその誘導体を含む。前記実質的に同じ塩基配列を含むオリゴヌクレオチドとは、前記配列番号１８または１９の塩基配列と、それぞれ７５％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上の配列相同性を有する塩基配列を含むオリゴヌクレオチドを意味する。前記誘導体は、配列番号１８および１９から選択される一つ以上のオリゴヌクレオチドにおいてｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ修飾および／または２´‐Ｏ‐メチル化修飾を有するものであってもよいが、これに制限されない。

【0044】

本発明において、用語「アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）」は、一本鎖オリゴヌクレオチドとして、２０～６０ヌクレオチド程度のサイズであり、所定の標的分子に対する結合活性を有する核酸分子を指す。配列によって様々な３次元構造を有し、抗原‐抗体反応のように特定の物質と高い親和力を有することができる。アプタマーは、所定の標的分子に対して結合することで、所定の標的分子の活性を阻害することができる。本発明のアプタマーは、ＲＮＡ、ＤＮＡ、修飾された（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）核酸またはこれらの混合物であってもよく、また、直鎖状または環状の形態であってもよい。好ましくは、前記アプタマーは、ＳＹＴ１１に結合してＳＹＴ１１の活性を阻害する役割を果たすことができる。かかるアプタマーは、ＳＹＴ１１の配列から当業者が公知の方法にしたがって製造することができる。

【0045】

本発明において、用語「ｓｉＲＮＡ」および「ｓｈＲＮＡ」は、ＲＮＡ妨害または遺伝子サイレンシング（ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ）を媒介することができる核酸分子として、標的遺伝子の発現を抑制できることから、効率的な遺伝子ノックダウン（ｋｎｏｃｋ ｄｏｗｎ）方法または遺伝子治療方法として使用される。ｓｈＲＮＡは、一本鎖のオリゴヌクレオチド内で相補的な配列間の結合によってヘアピン（ｈａｉｒｐｉｎ）構造を形成したものであり、生体内で前記ｓｈＲＮＡは、ダイサー（ｄｉｃｅｒ）によって切断されて２１～２５ヌクレオチドサイズの小さなＲＮＡ断片で二本鎖のオリゴヌクレオチドであるｓｉＲＮＡになり、相補的な配列を有するｍＲＮＡに特異的に結合して発現を抑制することができる。したがって、ｓｈＲＮＡおよびｓｉＲＮＡのうちいずれの手段を利用するかは、当業者の選択によって決定され得、これらを標的とするｍＲＮＡ配列が同じ場合であれば、類似の発現減少の効果を期待することができる。本発明の目的上、ＳＹＴ１１に特異的に作用してＳＹＴ１１ ｍＲＮＡ分子を切断し、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡi、ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）現象を誘導することで、前記ＳＹＴ１１を抑制することができる。ｓｉＲＮＡは、化学的にまたは酵素学的に合成され得る。ｓｉＲＮＡの製造方法は、特に限定されず、当業界において公知の方法を使用することができる。例えば、ｓｉＲＮＡを直接化学的に合成する方法、試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）転写を用いたｓｉＲＮＡの合成法、試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）転写によって合成された長い二本鎖ＲＮＡを酵素を用いて切断する方法、ｓｈＲＮＡ発現プラスミドやウイルス性ベクターの細胞内伝達による発現法およびＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）誘導ｓｉＲＮＡ発現カセット（ｃａｓｓｅｔｔｅ）の細胞内伝達による発現法などがあるが、これに限定されるものではない。

【0046】

具体的には、本発明のＳＹＴ１１に対するｓｉＲＮＡは、配列番号２、３、４および５から選択される塩基配列を有するｓｉＲＮＡおよびその相補的な配列を有するｓｉＲＮＡの二本鎖からなってもよいが、これに制限されない。

【0047】

本発明のＳＹＴ１１に対するｓｈＲＮＡは、配列番号６、１５、１６および１７から選択される塩基配列を有してもよいが、これに制限されない。

【0048】

本発明の目的上、前記抗体は、ＳＹＴ１１またはＳＹＴ１１のリガンドタンパク質と結合してＳＹＴ１１の活性を抑制することができる抗体であり得る。

【0049】

本発明において、用語「リガンド」は、生体分子（ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅ）と複合体を形成して生物学的反応をもたらす物質を意味し、「ＳＹＴ１１のリガンドタンパク質」または「ＳＹＴ１１に対するリガンドタンパク質」は、ＳＹＴ１１と結合してＳＹＴ１１を活性化させるか活性を増加させるタンパク質であり得る。

【0050】

本発明において、用語「胃癌」は、胃で細胞が過剰増殖することから生じる疾病を称する。かかる非正常的な過剰増殖細胞は、場合によって、周りの組織および臓器に侵入して腫塊を形成し、胃の正常な構造を破壊または変形させるが、かかる状態を胃癌と言う。一般的に腫瘍（ｔｕｍｏｒ）といえば、身体組織の自律的な過剰増殖によって非正常的に成長した塊を胃意味し、良性腫瘍（ｂｅｎｉｇｎ ｔｕｍｏｒ）と悪性腫瘍（ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｕｍｏｒ）とに区分することができる。悪性腫瘍は、良性腫瘍に比べて増殖速度が非常に速く、周辺組織に浸潤しながら転移（ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）が起こり生命を脅威する。本発明において、胃癌は、好ましくは、幹型亜型および／または混合型亜型、より好ましく幹型亜型である。

【0051】

本発明において、用語「転移（ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）」は、悪性腫瘍が発病した臓器から離れた他の組織に伝播した状態を言う。一つの臓器から始まった悪性腫瘍が進行するに伴い、最初に発生した原発部位である臓器から他の組織に広がって行くが、このように原発部位から他の組織に広がって行くことを転移と言える。転移は、悪性腫瘍の進行に伴われる現象と言えるが、悪性腫瘍細胞が増殖し、癌が進行するにつれて新たな遺伝形質を獲得して転移が起こり得る。新たな遺伝形質を獲得した腫瘍細胞が血管とリンパ腺に侵入し、血液とリンパに沿って循環しながら他の組織に定着、増殖すると、転移が生じ得る。

【0052】

転移が発生する組織によって、肝臓癌、腎臓癌、肺癌、胃癌、大腸癌、直腸癌、膵臓癌など各種の癌疾患が誘発され得る。本発明の組成物は、転移を抑制して癌が広がることを予防および治療することができる。

【0053】

本発明において、用語「抑制」は、本発明による組成物の投与によって前記癌転移を抑制するすべての行為を指す。

【0054】

胃癌は、分子亜型によって分類され得る。例えば、胃癌検体で全ゲノム水準のｍＲＮＡ発現をマイクロアレイ（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）技法で調査し、群集分析により胃癌に内在的な亜型（ｓｕｂｔｙｐｅ）を確認した後、各亜型に特異的な遺伝子を統計的検証により選別することができる。このように選別された遺伝子発現量に基づいて上皮細胞特徴的な遺伝子発現が高い亜型を腸型（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｕｂｔｙｐｅ）、発生段階シグナル伝達（ＥＭＴ）および間質（ｓｔｒｏｍａ）由来遺伝子発現が高い亜型を幹型（ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ ｓｕｂｔｙｐｅ）、腸型および幹型の特徴をすべて発現する混合型（ｍｉｘｅｄ ｓｔｒｏｍａｌ ｓｕｂｔｙｐｅ）、また、免疫調節関連遺伝子発現が高い炎症型（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｕｂｔｙｐｅ）に分類することができる。それぞれの亜型は、既存によく明かされた臨床および病理組織学的所見と関連する差別的な特性を有していることが確認された。

【0055】

具体的には、腸型の場合、胃の下部に主に位置し、組織学的分化度が良い特徴を示す。Ｌａｕｒｅｎ分類上、ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｙｐｅとｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ ｔｙｐｅが多く分布している。

【0056】

一方、幹型の場合、６０歳未満の比較的若い年齢層によく発生し、胃の体部と上部に位置し、組織学的分化度が不良である。特に、印環細胞型（Ｓｉｇｎｅｔ ｒｉｎｇ ｃｅｌｌ ｔｙｐｅ）が全組織型の２０％を占める特徴があり、ｌａｕｒｅｎ分類上、ｄｉｆｆｕｓｅ ｔｙｐｅの分布が多い。幹型の場合、非常に不良な予後を示す臨床的特徴がある。

【0057】

混合型は、腸型と幹型の特徴を共有している。

【0058】

炎症型は、他の亜型に比べて、特徴的に胃‐食道接合部を含む噴門部（ｃａｒｄｉａ）に位置する場合が多く、組織学的には分化度が良くない類型である。しかし、ｌａｕｒｅｎ分類上、ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｙｐｅとｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ ｔｙｐｅが多く、幹型よりは腸型の特徴に近い。予後的観点で、腸型と混合型は、中間程度の予後を示し、炎症型の場合、予後が最も良好である。

【0059】

本発明の薬学組成物は、薬学組成物の製造に通常使用する適切な担体、賦形剤または希釈剤をさらに含むことができる。薬学的に許容可能な担体を含む組成物は、経口または非経口の様々な剤形であってもよい。製剤化する場合には、普通使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調剤され得る。経口投与のための固形製剤としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ得、かかる固形製剤は、一つ以上の化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）またはラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混合して調剤され得る。また、単純な賦形剤以外にステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤も使用され得る。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内容液剤、乳剤、シロップ剤などが相当するが、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれ得る。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれ得る。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、エチルオレエートのような注射可能なエステルなどが使用され得る。坐剤の基剤としてはウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用され得る。

【0060】

また、本発明の薬学組成物は、これに制限されないが、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内容液剤、乳剤、シロップ剤、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤および坐剤からなる群から選択されるいずれか一つの剤形を有することができる。

【0061】

前記目的を達成するための本発明の他の様態は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤を有効成分として含む薬学組成物を個体に投与するステップを含む胃癌の治療方法を提供することである。

【0062】

本発明において、用語「個体」は、本発明の胃癌疾患を有するかまたは発病した、ヒトを含むすべての動物を意味し、ヒト以外の個体であってもよい。本発明の薬学組成物を個体に投与することで、胃癌の治療に優れた効果を示し、また、胃癌の転移を抑制することができる。

【0063】

前記本発明の薬学組成物は、薬学的に有効な量で投与する。

【0064】

本発明において、用語「投与」は、ある適切な方法で対象に本発明の薬学組成物を導入することを意味し、投与経路は、目的組織に逹することができる限り、経口または非経口の様々な経路を介して投与され得る。

【0065】

前記薬学組成物は目的または必要に応じて、当業界において使用される通常の方法、投与経路、投与量に応じて個体に適宜投与され得る。投与経路の例として、経口、非経口、皮下、腹腔内、肺内、および鼻腔内に投与され得、非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内または皮下投与が含まれる。また、当業界において公知の方法にしたがって適切な投与量および投与回数が選択され得、実際に投与される本発明の薬学組成物の量および投与回数は、治療しようとする症状の種類、投与経路、性別、健康状態、食餌、個体の年齢および体重、および疾患の重症度のような様々な因子によって適切に決定され得る。

【0066】

本発明において、用語「薬学的に有効な量」は、医学的用途に適用可能な合理的な割合で疾患を抑制または緩和するのに十分な量を意味し、有効用量水準は、個体の種類および重症度、年齢、性別、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路および排出の割合、治療期間、同時使用される薬物を含む要素およびその他の医学分野によく知られている要素によって決定され得る。本発明の組成物は、個別治療剤として投与するか他の治療剤と併用して投与され得、従来の治療剤とは順次または同時に投与され得る。また、単一または多重投与され得る。前記要素をすべて考慮して、副作用なく最小限の量で最大の効果を得ることができる量を投与することが重要であり、当業者によって容易に決定され得る。例えば、薬学的に有効な量は、０．５～１０００ｍｇ／ｄａｙ／体重ｋｇ、好ましくは０．５～５００ｍｇ／ｄａｙ／体重ｋｇである。

【0067】

前記目的を達成するための本発明のさらに他の様態は、胃癌治療のための薬剤の製造において、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤を含む組成物の用途を提供することである。

【0068】

前記目的を達成するための本発明のさらに他の様態は、胃癌治療に使用するためのＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）抑制剤を含む組成物を提供することである。

【0069】

前記目的を達成するための本発明のさらに他の様態は、ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）の発現水準を測定する製剤を含む、幹型胃癌の診断用組成物を提供することである。例えば、配列番号７および配列番号８の塩基配列がＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）の発現水準を測定する製剤として使用され得る。

【0070】

本発明のさらに他の一つの目的は、（ａ）分離した生物学的胃組織試料からＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準を測定するステップと、（ｂ）前記発現水準を正常対照群試料のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準と比較するステップと、（ｃ）前記生物学的胃組織試料のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準が正常対照群のＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準より高い場合、幹型胃癌として判定するステップとを含む、幹型胃癌診断のための情報を提供する方法を提供することにある。

【0071】

本発明において、用語「診断」は、生物学的組織試料または組織サンプルにおいて本発明のＳＹＴ１１の存在または不在を測定することで、幹型胃癌疾患の存在または特徴を確認することを意味する。また、「マーカーまたは診断マーカー（ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｍａｒｋｅｒ）」とは、幹型胃癌細胞または幹型胃癌疾患を有する個体を正常細胞または正常個体と区分して診断することができる物質であり、正常細胞に比べて幹型胃癌を有する細胞または個体において増加または減少を示すポリペプチド、タンパク質または核酸（例：ｍＲＮＡなど）、脂質、糖脂質、糖蛋白質または糖（単糖類、二糖類、オリゴ糖類など）などの有機生体分子を含む。本発明の目的上、本発明の幹型胃癌診断マーカーは、正常細胞または組織の細胞に比べて、幹型胃癌細胞において特異的に高い水準の発現を示すＳＹＴ１１である。

【0072】

本発明において、用語「分離した生物学的胃癌組織試料」は、診断しようとする個体の組織から分離した試料を指し、具体的には、胃の組織である。

【0073】

本発明において、ＳＹＴ１１発現水準を測定することは、ＳＹＴ１１のｍＲＮＡ発現水準を測定するか、ＳＹＴ１１タンパク質発現水準を測定することであり得る。

【0074】

前記「ｍＲＮＡ発現水準測定」とは、幹型胃癌を診断するために生物学的組織試料で幹型胃癌マーカー遺伝子のｍＲＮＡ存在可否と発現程度を確認する過程であり、ｍＲＮＡの量を測定することで知ることができる。このための分析方法としては、ＲＴ－ＰＣＲ、競合的ＲＴ－ＰＣＲ（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ＲＴ－ＰＣＲ）、リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＲＴ－ＰＣＲ）、ＲＮａｓｅ保護分析法（ＲＰＡ；ＲＮａｓｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）、ノーザンブロット（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、ＤＮＡチップなどがあるがこれに制限されるものではない。

【0075】

前記「タンパク質発現水準測定」とは、幹性胃癌を診断するために生物学的胃組織試料での幹性胃癌マーカー遺伝子で発現したタンパク質の存在可否と発現程度を確認する過程であり、前記遺伝子のタンパク質に対して特異的に結合する抗体を用いてタンパク質の量を確認する。このための分析方法としては、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）、放射線免疫分析（ＲＩＡ：Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）、放射免疫拡散法（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）、オークタロニ（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）免疫拡散法、ロケット（ｒｏｃｋｅｔ）免疫電気泳動、組織免疫染色、免疫沈殿分析法（Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）、補体固定分析法（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｆｉｘａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）、ＦＡＣＳ、タンパク質チップ（ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈｉｐ）などがあるが、これに制限されるものではない。

【0076】

一例として、前記ｍＲＮＡ水準を測定する製剤は、本発明のＳＹＴ１１のｍＲＮＡに対するプライマー（ｐｒｉｍｅｒ）対、プローブ（ｐｒｏｂｅ）、またはアンチセンスヌクレオチド（ａｎｔｉ－ｓｅｎｓｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）であってもよく、本発明のＳＹＴ１１のポリヌクレオチド配列によって、当業者が、プライマー、プローブ、またはアンチセンスヌクレオチド配列を容易にデザインすることができる。他の一例として、前記タンパク質水準を測定する製剤は、抗体であってもよい。

【0077】

本発明においては、ＳＹＴ１１の幹性胃癌診断マーカーとしての可能性を確認することで、ＳＹＴ１１の水準を測定し、幹性胃癌を診断することができる効果を確認した。

【0078】

本発明のさらに他の一つの目的は、（ａ）ＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）を発現する分離した胃癌細胞に胃癌治療候補物質を処理するステップと、（ｂ）前記候補物質が処理された分離した胃癌細胞でＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準を測定するステップと、（ｃ）前記（ｂ）ステップで測定されたＳＹＴ１１（Ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ １１）発現水準が候補物質が処理されていない分離した胃癌細胞に比べて低い水準を示す場合、前記候補物質を胃癌治療用製剤として使用可能であると判定するステップとを含む、胃癌の治療用製剤のスクリーニング方法を提供することにある。

【0079】

胃癌を治療することができる候補物質の不在の下で細胞での本発明の前記遺伝子の発現水準または前記遺伝子がコードするタンパク質の水準を測定し、また、前記候補物質の存在の下で本発明の前記遺伝子の発現水準または前記遺伝子がコードするタンパク質の水準を測定し、両者を比較した後、前記候補物質が存在する時の本発明の前記遺伝子の発現水準または前記遺伝子がコードするタンパク質の水準が前記候補物質の不在の下での水準より減少させる物質を胃癌の治療用製剤として予測することができる。

【0080】

前記スクリーニング方法は、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）または試験管内（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で行われ得、特に制限されない。候補物質は、公知の物質または新規物質であってもよく、例えば、植物抽出物またはケミカルライブラリ（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｂｒａｒｙ）を通じて大規模でスクリーニングを行うことができる。これにより、ＳＹＴ１１の発現または活性を抑制し、胃癌、特に幹型亜型胃癌を抑制することができる製剤を見い出すことができる。

【0081】

以下、本発明の理解を容易にするために、好ましい実施例および製剤例を提示する。しかし、下記の実施例および製剤例は、本発明をより容易に理解するために提供されるものであって、実施例または製剤例によって本発明の内容が限定されるものではない。

【0082】

＜実施例１＞幹型（Ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ ｓｕｂｔｙｐｅ）胃癌細胞株でＳＹＴ１１発現変化の確認
２５個のヒト胃癌細胞株でマイクロアレイ（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）分析により癌細胞株の分子亜型をｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ、ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ、ｍｉｘｅｄ、ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙに分類した。また、代表的な１１種の胃癌細胞株を用いて、ウェスタンブロットおよびＲＴ－ＰＣＲ技法によりＳＹＴ１１発現の差を確認した。

【0083】

ウェスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）実験のために細胞株からＲＩＰＡ溶液（ＲＩＰＡ ｂｕｆｆｅｒ、ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）を用いてタンパク質を抽出し、ポリアクリルアミドゲルから電気泳動で分離した後、ゲルからポリビニリデンフルオライド膜にタンパク質を移動させた。膜に移動されたタンパク質は、ＳＹＴ１１抗体を用いて基質との反応で確認した。

【0084】

細胞株からＲＮＡ抽出溶液（Ｔｒｉｚｏｌ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いてｍＲＮＡを分離し、ＲＴ－ＰＣＲとマイクロアレイ（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）を行った。ｍＲＮＡからＲＴ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ（ｅｎｚｙｎｏｍｉｃｓ社製）を用いて相補的ＤＮＡを合成した。相補的ＤＮＡから合成されたＳＹＴ１１プライマーを用いてＰＣＲを行った。また、対照群遺伝子としては、ＲＰＬ１３Ａプライマーを使用した。実験に使用されたプライマー配列情報は、表２に示した。ＰＣＲが終了した後、サンプルを臭化エチジウム（ｅｔｉｄｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ）が含まれたアガローズゲルに電気泳動し、ＵＶを照射し、バンドを確認した。

【0085】

【表4】

【0086】

マイクロアレイは、抽出されたＲＮＡから相補的に結合することができるオリゴ塩基が内蔵されたチップ（ｉｌｌｕｍｉｎａ社製、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して各遺伝子の発現程度を測定した。

【0087】

その結果を図１のＡおよび図１のＢに示した。

【0088】

図１のＡは、２５個のヒト胃癌細胞株でのマイクロアレイ（Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）分析結果を示し、ＳＹＴ１１のｍＲＮＡ発現が幹型胃癌亜型で著しく増加することが確認された。

【0089】

図１のＢは、各分子亜型の代表的な細胞株でウェスタンブロットおよびＲＴ－ＰＣＲによりＳＹＴ１１の発現を確認した結果を示す。図１のＢから確認されるように、幹型胃癌亜型細胞株として確認されるＭＫＮ１、ＳＫ４、ＳＮＵ４８４およびＳＮＵ６３８細胞株（胃癌の幹型亜型の特性を有する細胞株に相当する）のすべてにおいて、ＳＹＴ１１の発現がウェスタンブロットおよびＲＴ－ＰＣＲ結果のすべてにおいて大きく増加することが確認された。

【0090】

＜実施例２＞胃癌細胞株でＳＹＴ１１抑制による移動／浸潤抑制の確認
ｓｉＳＹＴ１１の胃癌細胞移動能抑制を確認するために、胃の細胞株のうちＳＮＵ４８４細胞を使用して実験を行った。具体的には、ｓｉＳＹＴ１１（配列番号２）および対照群としてｓｉＳＣ（配列番号１１）をトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）したＳＮＵ４８４細胞を９６ ｗｅｌｌ‐Ｉｍａｇｅ Ｌｏｃ ｐｌａｔｅで接種し、２４時間育てた後、ｗｏｕｎｄ ｍａｋｅｒでスクラッチ（ｓｃｒａｔｃｈ）し、リアルタイム細胞分析システム（Ｉｎｃｕｃｙｔｅ）を用いて細胞の移動を０時間、２０時間、および４０時間ごとに創傷治癒アッセイ（ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ａｓｓａｙ）で確認した。

【0091】

上記の実験結果を図２に示した。

【0092】

図２のＡは、ＳＮＵ４８４細胞にｓｉＲＮＡ（ＳＹＴ１１）（配列番号３、４または５）またはｓｉＳＣ（配列番号１１）をウェスタンブロットによりＳＹＴ１１の抑制を確認した結果である。

【0093】

図２のＢは、時間経過による創傷治癒アッセイ（ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ａｓｓａｙ）の結果を示す図である。図２から確認されるように、胃癌細胞株にｓｉＳＹＴ１１を処理した結果、胃癌細胞の移動能力が著しく減少することが確認された。

【0094】

また、ｓｉＳＹＴ１１の胃癌細胞浸潤抑制を確認するために、浸潤アッセイ（Ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）を行った。具体的には、２４‐ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ細胞培養用ｉｎｓｅｒｔを使用して実験を行っており、上記のようにｓｉＳＹＴ１１またはｓｉＳＣをトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）したＳＮＵ４８４細胞をマトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）でコードしたｉｎｓｅｒｔに接種し、２４時間後、ｉｎｓｅｒｔの下に移動した細胞をスルホロダミンＢ（Ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ；ＳＲＢ）溶液で染色し、吸光度を測定した。

【0095】

その結果を図３に示した。

【0096】

図３から確認されるように、図３のＡは、浸潤アッセイ（Ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）による細胞浸潤を確認した結果を示し、図３のＢは、これを図式化した結果を示す。図３から確認されるように、ＳＹＴ１１抑制は、対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）に比べて癌細胞浸潤を約４０％程度減少させることが確認された。

【0097】

＜実施例３＞胃癌細胞株でＳＹＴ１１抑制による細胞外基質に対する付着能の抑制の確認
細胞外基質（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ、ＥＣＭ）は、細胞の外部を囲んでいるタンパク質と多糖類からなる基質として、細胞が正常な機能を果たすことができる環境を提供する。インテグリン（Ｉｎｔｅｇｒｉｎ）は、細胞膜に存在し、ｃｅｌｌ－ｃｅｌｌまたはｃｅｌｌ－ｍａｔｒｉｘ間の結合により、接着斑（ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ）と関連するシグナル伝達に関与し、癌細胞転移過程においてインテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）は、細胞外基質内のｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ、ｃｏｌｌａｇｅｎ、ｌａｍｉｎｉｎなどと結合し、ｃｅｌｌ－ｍａｔｒｉｘ間の結合により癌細胞の移動時に細胞付着機能を誘導する働きをする。

【0098】

これにより、ＳＹＴ１１が癌細胞付着能に及ぼす影響を確認するために、ＢＳＡ、ｃｏｌｌａｇｅｎ、ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎでコーティングした９６ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに前記の実施例２と同様、ｓｉＳＹＴ１１またはｓｉＳＣをトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）したＳＮＵ４８４細胞を接種してから１時間後、ＰＢＳで洗浄し、ｐｌａｔｅに付いていない細胞を除去した。Ｐｌａｔｅに付いた細胞をＳＲＢ溶液で染色し、吸光度を測定した。また、ＳＮＵ４８４細胞をｓｉＳＹＴ１１またはｓｉＳＣをトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）してから４８時間後、タンパク質を抽出し、電気泳動後、ウェスタンブロット（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）を行ってインテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）タンパク質の発現変化を確認した。

【0099】

その結果を図４に示した。

【0100】

図４のＡは、接着アッセイ（Ａｄｈｅｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）の結果を示す。図４のＡから確認されるように、コラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）やフィブロネクチン（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ）に結合した細胞は、ＳＹＴ１１抑制によってＡｄｈｅｓｉｏｎが減少することが確認された。

【0101】

図４のＢは、インテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）タンパク質の発現変化を確認した結果を示す。図４のＢから確認されるように、ＳＹＴ１１抑制によって様々なインテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）タンパク質発現が阻害されることが確認された。

【0102】

＜実施例４＞胃癌細胞株でＳＹＴ１１抑制による癌転移関連サイトカイン分泌抑制の確認
ＳＹＴ１１抑制が癌細胞転移と関連する成長因子（ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）やサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の分泌に影響を及ぼすかを確認するために、ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｒｒａｙ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍ社製、ｐｒｏｔｅｏｍｅ ｐｒｏｆｉｌｅｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｒｒａｙｓ）を行った。具体的には、ＳＮＵ４８４細胞を実施例２と同様、ｓｉＳＹＴ１１またはｓｉＳＣをトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）して２４時間後、血清がない培地に交替し、低酸素（ｈｙｐｏｘｉａ）状態（２％Ｏ_２）で２４時間培養後、細胞培養液を用いて、ＰＤＧＦ－ＡＡ、ＶＥＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦＢＰ-２、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－８、ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１、ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２のサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）を確認した。

【0103】

また細胞は収去してＲＮＡを抽出し、ｍＲＮＡからＲＴ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ（ｅｎｚｙｎｏｍｉｃｓ社製）を用いて相補的ＤＮＡを合成した。次に、ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｐｒｅ ｍｉｘ（ｓｏｌｇｅｎｔ社製）を用いて、ＶＥＧＦＡ、ＨＧＦ、ＩＬ－８、ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１のプライマー（ｂｉｏｎｅｅｒ社製）でｑＰＣＲを行った。

【0104】

前記実験結果を図５に示した。

【0105】

図５のＡは、Ｐｒｏｔｅｏｍｅ ｐｒｏｆｉｌｅ－ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｓｓａｙを行った結果を示す。図５から確認されるように、ｓｉＳＹＴ１１処理によって癌細胞転移と関連する成長因子（ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）やサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の分泌が大きく減少した。

【0106】

また、５のＢは、ｑＰＣＲ結果を図式化した結果を示す。図５から確認されるように、酸素正常状態（Ｎｏｒｍｏｘｉａ）および低酸素状態（Ｈｙｐｏｘｉａ）条件の両方で癌細胞転移と関連する成長因子（ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）やサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）と関連するｍＲＮＡ発現が大きく減少することが確認された。

【0107】

＜実施例５＞動物モデルでＳＹＴ１１抑制による癌治療効果の確認
胃癌細胞株ＳＮＵ４８４にｓｈＳＹＴ１１‐Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓを感染（ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）させてノックダウン（ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ）した細胞またはｓｈＣｏｎｔｒｏｌ－Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎした細胞をヌードマウスに注射し、２～３日間隔で腫瘍のサイズを測定し、その質量および体積の変化を確認した。

【0108】

ここで、ｓｈＳＴＹ１１（ｓｉｇｍａ社製）で示したｓｈＲＮＡは、配列番号６、ｓｈＣｏｎｔｒｏｌ（ＣＴＲＬ）（ｓｉｇｍａ社製）で示したｓｈＲＮＡは、配列番号１２の塩基配列を有する。

【0109】

上記の結果を図６に示した。図６のＡは、日付けによる腫瘍サイズの変化を確認した結果であり、図６のＢは、１６日目にマウスを殺して腫瘍の重量を確認した結果を示し、図６のＣは、生成された腫瘍の写真を示すものである。図６の結果から確認されるように、ｓｈＳＹＴ１１が抑制された場合、ｓｈＣｏｎｔｒｏｌに比べて腫瘍の形成が抑制されることが確認された。

【0110】

また、上記の動物モデルの組織を取り、ｑＰＣＲにより癌細胞転移と関連する成長因子（ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）やサイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の発現変化、インテグリン（Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ）の発現変化、ｔｕｍｏｒ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍａｒｋｅｒであるＡＮＴＸＲ１を実施例４と同じ方法で確認した。

【0111】

これと共に、ＳＮＵ４８４細胞でも実施例２と同様、ｓｉＳＹＴ１１またはｓｉＳＣをトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）し、ＲＴ－ＰＣＲにより遺伝子発現変化を確認した。

【0112】

上記の結果を図７に示した。

【0113】

図７のＡのＳＮＵ４８４細胞から確認されるように、ｓｉＳＹＴ１１処理によってａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１、ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２、Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ－β１、ＡＮＴＸＲ１のいずれも減少することが確認された。

【0114】

また、図７のＢのｉｎ ｖｉｖｏモデルから確認した結果もａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－１、ａｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ－２、Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ－β１、ＡＮＴＸＲ１のいずれもＳＹＴ１１処理によって減少することが確認された。

【0115】

＜実施例６＞ＳＹＴ１１抑制による癌細胞増殖抑制の確認
＜６-１＞ｓｉＲＮＡ配列を用いた癌細胞増殖抑制の確認
ＳＮＵ４８４細胞に実施例２と同様、ｓｉＳＹＴ１１またはｓｉＳＣをトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）し、リアルタイム細胞分析システム（ＩｎＣｕｃｙｔｅ）を用いて４日間細胞増殖を確認した。

【0116】

また、これと同様、他のｓｉＲＮＡ配列を有するｓｉＳＹＴ１１（配列番号２、３、４または５）で上記の実施例２と同様にｓｉＳＹＴ１１またはｓｉＳＣをトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）し、７２時間後、スルホロダミンＢ（Ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ；ＳＲＢ）溶液で染色して吸光度を測定し、細胞生存率を確認した。

【0117】

その結果を図８に示した。

【0118】

図８のＡは、ウェスタンブロットによりＳＹＴ１１の発現減少を確認した結果を示し、図８のＢは、時間変化による癌細胞増殖を確認した結果を示す。

【0119】

図８のＡおよびＢから確認されるように、ＳＹＴ１１の発現減少に伴い癌細胞の増殖が阻害されることが確認された。

【0120】

また、図８のＣは、ＳＮＵ４８４細胞にｓｉＲＮＡ（ＳＹＴ１１）（配列番号３、４または５）またはｓｉＳＣ（配列番号１１）をウェスタンブロットによりＳＹＴ１１の抑制を確認した結果であり、図８のＤは、細胞増殖率を確認した結果であり、細胞増殖は、配列番号２、３、４または５を有するｓｉＲＮＡによってすべて抑制されることを確認した。

【0121】

＜６-２＞アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた癌細胞増殖抑制の確認
ＳＮＵ４８４細胞に実施例６－１のようにアンチセンスオリゴヌクレオチドＡＳ-ＳＹＴ１１（配列番号１８または１９）、または陰性対照群ＡＳ－ＮＣ（配列番号２０）をトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）し、リアルタイム細胞分析システム（ＩｎＣｕｃｙｔｅ）を用いて３日間細胞増殖を確認した。

【0122】

また、上記の実施例６－１と同様、アンチセンスオリゴヌクレオチドＡＳ-ＳＹＴ１１（配列番号１８または１９）または陰性対照群ＡＳ－ＮＣ（配列番号２０）をトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）し、７２時間後、スルホロダミンＢ（Ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ；ＳＲＢ）溶液で染色して吸光度を測定し、細胞生存率を確認した。

【0123】

その結果を図９に示した。

【0124】

図９から確認されるように、ＳＹＴ１１の抑制剤としてアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用した場合にも、実施例＜６-１＞のｓｉＲＮＡを使用した実験と同様、ＳＹＴ１１の抑制に伴い癌細胞の増殖が阻害されることが確認された。一方、陰性対照群（配列番号２０）を処理した場合は、細胞増殖に影響を及ぼさなかった。

【0125】

前記結果からＳＹＴ１１が幹型胃癌に対する診断因子として使用可能であることが確認された。また、ＳＹＴ１１に対する抑制剤が胃癌細胞の移動および浸潤を抑制し、細胞外基質に対する付着能を抑制し、各種癌転移関連サイトカインの分泌を抑制し、胃癌細胞の増殖を抑制することを確認することで、胃癌治療用組成物として優れた効果があることを確認した。

【0126】

＜実施例７＞ＳＹＴ１１選択的な癌細胞増殖抑制の確認
ＳＮＵ４８４細胞に実施例２と同様、ｓｉＳＣ、ｓｉＳＹＴ１１、ＳＹＴ ｆａｍｉｌｙの他の遺伝子でＳＹＴ４を抑制するｓｉＳＹＴ４（配列番号１３）、またはＳＹＴ７を抑制するｓｉＳＹＴ７（配列番号１４）をトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）し、７２時間後、スルホロダミンＢ（Ｓｕｌｆｏｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｂ；ＳＲＢ）溶液で染色して吸光度を測定し、細胞生存率を確認した。

【0127】

前記結果を図１０に示した。

【0128】

図１０から確認されたように、S N U４８４細胞増殖は、ＳＹＴ１１ ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ選択的に抑制され、他のＳＹＴ ｆａｍｉｌｙであるＳＹＴ４、ＳＹＴ７などによっては影響を受けないことを確認した。

【0129】

上記の結果から、ＳＹＴ１１のみが、胃癌、特に、幹型亜型胃癌に対して特異的に治療効果があることを確認した。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【配列表】

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【国際調査報告】