▶ セラヴァンス バイオファーマ アール＆ディー アイピー， エルエルシーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-17
(54)【発明の名称】ＪＡＫ阻害剤としての２－アザビシクロヘキサン化合物
(51)【国際特許分類】
C07D 471/04 20060101AFI20220107BHJP
A61K 31/437 20060101ALI20220107BHJP
A61K 9/10 20060101ALI20220107BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220107BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220107BHJP
A61P 27/04 20060101ALI20220107BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220107BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220107BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20220107BHJP
【ＦＩ】
C07D471/04 105Z
C07D471/04 CSP
A61K31/437
A61K9/10
A61P29/00
A61P3/10
A61P27/04
A61P9/10
A61P43/00 111
A61P27/02
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021523279
(86)(22)【出願日】2019-10-18
(85)【翻訳文提出日】2021-06-25
(86)【国際出願番号】 US2019056947
(87)【国際公開番号】W WO2020092019
(87)【国際公開日】2020-05-07
(31)【優先権主張番号】62/751,967
(32)【優先日】2018-10-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＢＲＩＪ
２．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】514190040
【氏名又は名称】セラヴァンス バイオファーマ アール＆ディー アイピー， エルエルシー
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ファザリー， ポール アール．
(72)【発明者】
【氏名】ジアン， ラン
【テーマコード（参考）】
4C065
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C065AA05
4C065BB06
4C065CC01
4C065DD03
4C065EE02
4C065HH09
4C065JJ01
4C065KK06
4C065LL01
4C065PP18
4C065QQ04
4C076AA22
4C076BB24
4C076CC04
4C076CC10
4C076CC29
4C076FF70
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086CB05
4C086GA13
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA23
4C086MA58
4C086NA14
4C086ZA33
4C086ZA45
4C086ZB11
4C086ZC20
4C086ZC35
(57)【要約】
本発明は、ＪＡＫ阻害剤として有用である、式１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。本発明は、前記化合物を含む薬学的組成物、ＪＡＫ阻害剤の影響を受けやすい疾患を処置するために前記化合物を使用する方法、および前記化合物の調製に有用なプロセスも提供する。１つの態様において、本発明は、哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、前記方法が、哺乳動物に化合物１または本発明の薬学的組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式：【化20】
【請求項2】
式：【化21】
【請求項3】
請求項１または２に記載の化合物および薬学的に許容され得るキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項4】
前記組成物が、眼への適用に適している、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項5】
前記組成物が、硝子体内注射に適している、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項6】
前記組成物が、懸濁液である、請求項５に記載の薬学的組成物。
【請求項7】
式１の化合物【化22】
（ａ）式６の化合物：
【化23】
【化24】
【化25】
（ｂ）化合物１－ＰＧを脱保護する工程；および
（ｃ）必要に応じて、薬学的に許容され得る塩を調製して、式１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を得る工程
を含む、プロセス。
【請求項8】
ＲＡが、ヒドロキシルである、請求項７に記載のプロセス。
【請求項9】
６と７－ＰＧとの間の前記反応が、ＨＡＴＵの存在下において行われる、請求項８に記載のプロセス。
【請求項10】
ＰＧが、Ｂｏｃである、請求項７に記載のプロセス。
【請求項11】
哺乳動物の眼疾患の処置において使用するための、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項12】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性症、網膜静脈閉塞および萎縮性角結膜炎からなる群より選択される、請求項１１に記載の化合物。
【請求項13】
前記眼疾患が、糖尿病性黄斑浮腫またはブドウ膜炎である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項14】
哺乳動物の眼疾患を処置するための薬の製造における、請求項１または２に記載の化合物の使用。
【請求項15】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性症、網膜静脈閉塞および萎縮性角結膜炎からなる群より選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項16】
前記眼疾患が、糖尿病性黄斑浮腫またはブドウ膜炎である、請求項１５に記載の使用。
【請求項17】
哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、前記方法は、請求項１または２に記載の化合物および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物を前記哺乳動物の眼に投与する工程を含む、方法。
【請求項18】
前記眼疾患が、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性症、網膜静脈閉塞および萎縮性角結膜炎からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記眼疾患が、糖尿病性黄斑浮腫またはブドウ膜炎である、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の背景
発明の分野
本発明は、炎症性疾患、特に眼疾患の処置に有用なＪＡＫキナーゼ阻害剤化合物に関する。本発明は、そのような化合物を含む薬学的組成物、眼疾患を処置するためにそのような化合物を使用する方法、およびその化合物の調製に有用なプロセスにも関する。
発明の分野
本発明は、炎症性疾患、特に眼疾患の処置に有用なＪＡＫキナーゼ阻害剤化合物に関する。本発明は、そのような化合物を含む薬学的組成物、眼疾患を処置するためにそのような化合物を使用する方法、およびその化合物の調製に有用なプロセスにも関する。
【背景技術】
【0002】
当該分野の状況
サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンフォカインおよび腫瘍壊死因子を含む細胞間シグナル伝達分子である。サイトカインは、正常な細胞増殖および免疫調節に不可欠であるだけでなく、免疫介在疾患を主導し、悪性細胞の増殖に関与する。多くのサイトカインの高レベルは、多数の疾患または症状、特に炎症を特徴とする疾患の病理に関係づけられている。疾患に関係づけられているサイトカインの多くは、シグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）ファミリーの転写因子を介してシグナル伝達するＪａｎｕｓファミリーのチロシンキナーゼ（ＪＡＫ）に依存するシグナル伝達経路を介して作用する。
サイトカインは、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンフォカインおよび腫瘍壊死因子を含む細胞間シグナル伝達分子である。サイトカインは、正常な細胞増殖および免疫調節に不可欠であるだけでなく、免疫介在疾患を主導し、悪性細胞の増殖に関与する。多くのサイトカインの高レベルは、多数の疾患または症状、特に炎症を特徴とする疾患の病理に関係づけられている。疾患に関係づけられているサイトカインの多くは、シグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）ファミリーの転写因子を介してシグナル伝達するＪａｎｕｓファミリーのチロシンキナーゼ（ＪＡＫ）に依存するシグナル伝達経路を介して作用する。
【0003】
ＪＡＫファミリーは、４つのメンバーＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびチロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２）を含む。サイトカインがＪＡＫ依存性サイトカインレセプターに結合すると、レセプターの二量体化が誘導され、それにより、ＪＡＫキナーゼ上のチロシン残基がリン酸化され、ＪＡＫの活性化がもたらされる。次に、リン酸化されたＪＡＫは、様々なＳＴＡＴタンパク質に結合してリン酸化し、そのＳＴＡＴタンパク質は、二量体化し、細胞核に内部移行して、遺伝子の転写を直接調節することにより、他の作用の中でも、炎症性疾患に関連する下流の作用をもたらす。これらのＪＡＫは、通常、２つ１組でホモ二量体またはヘテロ二量体として、サイトカインレセプターと会合する。特定のサイトカインが、特定のＪＡＫ対形成に関連する。ＪＡＫファミリーの４つのメンバーの各々が、炎症に関連するサイトカインの少なくとも１つのシグナル伝達に関係づけられている。
【0004】
炎症は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性症、網膜静脈閉塞および萎縮性角結膜炎をはじめとした多くの眼疾患において際だった役割を果たす。ブドウ膜炎は、複数の眼内炎症症状をもたらし、自己免疫性であることが多く、公知の感染性トリガーなしに生じる。米国の約２００万人の患者がこの症状に罹患していると推定されている。一部の患者では、ブドウ膜炎に伴う慢性炎症によって、組織が破壊され、これが米国における失明の主な原因の第５位になっている。ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達する、ブドウ膜炎患者の眼において増加しているサイトカインとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－２３およびＩＦＮ－γが挙げられる（Ｈｏｒａｉ ａｎｄ Ｃａｓｐｉ，Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ，２０１１，３１，７３３－７４４；Ｏｏｉら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，４，２９４－３０９）。ブドウ膜炎に対する既存の治療は、最適に満たないことが多く、多くの患者が十分に管理されていない。ステロイドは、有効であることが多いが、白内障および眼内圧上昇／緑内障に関連する。
【0005】
糖尿病性網膜症（ＤＲ）は、網膜における血管に対する傷害によって引き起こされる。糖尿病性網膜症は、糖尿病を有する人々の間で最も一般的な視力喪失原因である。この疾患では、血管新生経路ならびに炎症性経路が重要な役割を果たす。多くの場合、ＤＲは、糖尿病を有する患者において最も頻度の高い視力喪失原因である糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）に進行する。この症状に、米国だけで約１５０万人の患者が罹患していると推定されており、そのうちの約２０％が、両眼に疾患がある。ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６）、ならびにその産生がＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路シグナル伝達によって部分的に引き起こされる他のサイトカイン（例えば、ＩＰ－１０およびＭＣＰ－１（別名ＣＣＬ２））が、ＤＲ／ＤＭＥに関連する炎症において役割を果たすと考えられている（Ａｂｃｏｕｗｅｒ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１３，Ｓｕｐｐｌ １，１－１２；Ｓｏｈｎら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１１，１５２，６８６－６９４；Ｏｗｅｎ ａｎｄ Ｈａｒｔｎｅｔｔ，Ｃｕｒｒ Ｄｉａｂ Ｒｅｐ，２０１３，１３，４７６－４８０；Ｃｈｅｕｎｇら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｖｉｓｉｏｎ，２０１２，１８，８３０－８３７；Ｄｏｎｇら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｖｉｓｉｏｎ，２０１３，１９，１７３４－１７４６；Ｆｕｎａｔｓｕら、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２００９，１１６，７３－７９）。ＤＭＥに対する既存の治療は、最適に満たない。抗ＶＥＧＦによる硝子体内処置は、一部の患者でしか有効でなく、ステロイドは、白内障および眼内圧上昇に関連する。
【0006】
ドライアイ疾患（ＤＥＤ）は、米国のおよそ５００万人の患者が罹患している多因子障害である。この疾患の発症および伝播では、眼表面の炎症が重要な役割を果たすと考えられている。高レベルのサイトカイン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６およびＩＦＮ－γ）が、ＤＥＤを有する患者の眼内液において顕著であり（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，２０１２，１３０，９０－１００）、このレベルは、疾患重症度と相関することが多かった。加齢黄斑変性症および萎縮性角結膜炎も、ＪＡＫ依存性サイトカインと関連すると考えられている。
【0007】
網膜静脈閉塞（ＲＶＯ）は、非常に蔓延している視覚障害性疾患である。網膜の血流障害は、網膜血管系の傷害、出血および組織虚血に至り得る。ＲＶＯの原因は、多因子であるが、血管メディエーターと炎症性メディエーターの両方が、重要であると示された（Ｄｅｏｂｈａｋｔａら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１３，ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ４３８４１２）。ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６およびＩＬ－１３）、ならびにその産生がＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路シグナル伝達によって部分的に引き起こされる他のサイトカイン（例えば、ＭＣＰ－１）が、ＲＶＯを有する患者の眼組織において高レベルで検出された（Ｓｈｃｈｕｋｏら、Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１５，６３（１２），９０５－９１１）。ＲＶＯを有する多くの患者は、光凝固術によって処置されるが、これは、本質的に破壊性の治療である。抗ＶＥＧＦ剤も使用されるが、それらは、患者の一部でしか有効でない。眼の炎症レベルを低下させるステロイド薬剤（トリアムシノロンアセトニドおよびデキサメタゾン留置剤）も、ある特定の形態のＲＶＯを有する患者にとって有益な結果をもたらすと示されたが、それらは、白内障および眼内圧上昇／緑内障を引き起こすとも示された。
【0008】
眼疾患を処置するための強力な汎ＪＡＫ阻害剤の必要性が残っている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0009】
【非特許文献1】Ｈｏｒａｉ ａｎｄ Ｃａｓｐｉ，Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ，２０１１，３１，７３３－７４４
【非特許文献2】Ｏｏｉら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，４，２９４－３０９
【非特許文献3】Ａｂｃｏｕｗｅｒ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１３，Ｓｕｐｐｌ １，１－１２
【非特許文献4】Ｓｏｈｎら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１１，１５２，６８６－６９４
【非特許文献5】Ｏｗｅｎ ａｎｄ Ｈａｒｔｎｅｔｔ，Ｃｕｒｒ Ｄｉａｂ Ｒｅｐ，２０１３，１３，４７６－４８０
【非特許文献6】Ｃｈｅｕｎｇら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｖｉｓｉｏｎ，２０１２，１８，８３０－８３７
【非特許文献7】Ｄｏｎｇら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｖｉｓｉｏｎ，２０１３，１９，１７３４－１７４６
【非特許文献8】Ｆｕｎａｔｓｕら、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２００９，１１６，７３－７９
【非特許文献9】Ｄｅｏｂｈａｋｔａら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１３，ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ４３８４１２
【非特許文献10】Ｓｈｃｈｕｋｏら、Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１５，６３（１２），９０５－９１１
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0010】
発明の概要
１つの態様において、本発明は、眼炎症性疾患の処置に有用なＪＡＫ阻害剤化合物を提供する。
１つの態様において、本発明は、眼炎症性疾患の処置に有用なＪＡＫ阻害剤化合物を提供する。
【0011】
特に、１つの態様において、本発明は、式：
の化合物（本明細書中以後、化合物１）またはその薬学的に許容され得る塩を提供する。
【化1】
【0012】
本発明は、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物も提供する。
【0013】
１つの態様において、本発明は、哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、その方法が、哺乳動物に化合物１または本発明の薬学的組成物を投与する工程を含む、方法を提供する。１つの態様において、眼疾患は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性症、網膜静脈閉塞および萎縮性角結膜炎からなる群より選択される。特に、眼疾患は、糖尿病性黄斑浮腫またはブドウ膜炎である。
【0014】
別個の異なる態様では、本発明は、化合物１の調製に有用な、本明細書中に記載される合成プロセスも提供する。
【0015】
本発明は、医学的治療において使用するための本明細書中に記載されるような化合物１またはその薬学的に許容され得る塩、ならびに眼疾患を処置するための製剤または薬の製造における本発明の化合物の使用も提供する。
【発明を実施するための形態】
【0016】
発明の詳細な説明
化学構造は、本明細書中で、ＣｈｅｍＤｒａｗソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に実装されているようなＩＵＰＡＣの慣例に従って命名される。
化学構造は、本明細書中で、ＣｈｅｍＤｒａｗソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に実装されているようなＩＵＰＡＣの慣例に従って命名される。
【0017】
さらに、本化合物の構造におけるテトラヒドロイミダゾピリジン部分のイミダゾ部は、互変異性体で存在する。本化合物は、
と等価に示され得る。ＩＵＰＡＣの慣例によると、これらの表示は、テトラヒドロイミダゾピリジン部の原子の異なるナンバリングを生じさせる。したがって、この構造は、（（１Ｓ，５Ｒ）－２－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン－１－イル）（２－（６－（２－エチル－５－フルオロ－４－ヒドロキシフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－３，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）メタノンと名付けられる。この構造は、（（１Ｓ，５Ｒ）－２－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン－１－イル）（２－（６－（２－エチル－５－フルオロ－４－ヒドロキシフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）メタノンとも名付けられ得る。構造は、ある特定の形態として示されているかまたは命名されているが、本発明は、それらの互変異性体も含むことが理解される。
【化2】
【0018】
本発明の化合物は、いくつかの塩基性基も含むので、それらの化合物は、遊離塩基として、または様々な塩の形態（例えば、モノプロトン化塩の形態、ジプロトン化塩の形態またはそれらの混合物）で存在し得る。別段示されない限り、そのような形態のすべてが、本発明の範囲内に含まれる。
【0019】
本発明は、同位体で標識された式１の化合物、すなわち、原子が、同じ原子番号を有するが自然界で優勢である原子質量とは異なる原子質量を有する原子で置き換えられているかまたは富化されている式１の化合物も含む。式１の化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、および１８Ｆが挙げられるが、これらに限定されない。トリチウムまたは炭素－１４に富化した式１の化合物が特に興味深く、それらの化合物は、例えば、組織分布研究において使用され得る。また、特に代謝部位においてジュウテリウムに富化した式１の化合物も特に興味深く、それらの化合物は、より高い代謝的安定性を有すると予想される。さらに、陽電子放出同位体（例えば、１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎ）に富化した式１の化合物も特に興味深く、それらの化合物は、例えば、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）研究において使用され得る。
【0020】
定義
様々な態様および実施形態を含む本発明を説明する際、以下。
様々な態様および実施形態を含む本発明を説明する際、以下。
【0021】
用語「治療有効量」は、処置を必要とする患者に投与されたとき、処置をもたらすのに十分な量を意味する。
【0022】
用語「処置する」または「処置」は、患者（特にヒト）の処置される病状、疾患もしくは障害（例えば、呼吸器疾患）を予防すること、回復させることもしくは抑制すること；または病状、疾患もしくは障害の症候を軽減することを意味する。
【0023】
用語「薬学的に許容され得る塩」は、患者または哺乳動物（例えば、ヒト）への投与が許容され得る塩（例えば、所与の投与レジメンについて許容され得る哺乳動物の安全性を有する塩）を意味する。代表的な薬学的に許容され得る塩としては、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、エジシル酸（ｅｄｉｓｙｌｉｃ）、フマル酸、ゲンチシン酸、グルコン酸、グルクロン酸（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ）、グルタミン酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２，６－ジスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、オロチン酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ－トルエンスルホン酸およびキシナホ酸（ｘｉｎａｆｏｉｃ ａｃｉｄ）などの塩が挙げられる。
【0024】
用語「その塩」は、酸の水素がカチオン（例えば、金属カチオンまたは有機カチオンなど）によって置き換えられたときに形成される化合物を意味する。例えば、カチオンは、プロトン化型の式１の化合物、すなわち、１つまたはそれより多くのアミノ基が酸によってプロトン化されている形態であり得る。代表的には、塩は、薬学的に許容され得る塩であるが、これは、患者への投与が意図されていない中間体化合物の塩には求められない。
【0025】
用語「アミノ保護基」は、アミノ窒素において望まれない反応を妨げるのに適した保護基を意味する。代表的なアミノ保護基としては、ホルミル；アシル基、例えば、アルカノイル基（例えば、アセチルおよびトリ－フルオロアセチル）；アルコキシカルボニル基（例えば、ｔｅｒｔブトキシカルボニル（Ｂｏｃ））；アリールメトキシカルボニル基（例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）および９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ））；アリールメチル基（例えば、ベンジル（Ｂｎ）、トリチル（Ｔｒ）および１，１－ジ－（４’－メトキシフェニル）メチル）；シリル基（例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ））；などが挙げられるが、これらに限定されない。
【0026】
数多くの保護基ならびにそれらの導入および除去は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されている。
【0027】
一般的な合成手順
化合物１およびそれらの中間体は、商業的に入手可能なまたは日常的に調製される出発物質および試薬を使用して、以下の一般的な方法および手順に従って調製され得る。さらに、酸性または塩基性の原子または官能基を有する化合物は、別段示されない限り、塩として使用され得るかまたは生成され得る（場合によっては、特定の反応において塩を使用するためには、その反応を行う前に、日常的な手順を使用して、その塩から非塩形態、例えば、遊離塩基に変換することが必要である）。
化合物１およびそれらの中間体は、商業的に入手可能なまたは日常的に調製される出発物質および試薬を使用して、以下の一般的な方法および手順に従って調製され得る。さらに、酸性または塩基性の原子または官能基を有する化合物は、別段示されない限り、塩として使用され得るかまたは生成され得る（場合によっては、特定の反応において塩を使用するためには、その反応を行う前に、日常的な手順を使用して、その塩から非塩形態、例えば、遊離塩基に変換することが必要である）。
【0028】
本発明の特定の実施形態が、以下の手順に示され得るかまたは記載され得るが、当業者は、本発明の他の実施形態または態様も、そのような手順を用いて、または当業者に公知の他の方法、試薬および出発物質を用いて、調製され得ることを認識する。特に、化合物１は、反応体が異なる順序で混和されることにより最終生成物を生成する途中で異なる中間体が提供される種々のプロセス経路によって調製され得ることが認識される。
【0029】
化合物１の調製は、添付の実施例に詳細に記載されている。重要な工程がスキーム１に要約されている。ＲＡは、ヒドロキシルであり得、その場合、化合物７－ＰＧは、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴなどのような活性化試薬の存在下、通常のアミド結合形成条件下において中間体６とカップリングされる。あるいは、ＲＡは、Ｃｌなどの脱離基であってもよい。
スキーム１
スキーム１
【化3】
【0030】
化合物６を７－ＰＧとカップリングさせた後、保護基「ＰＧ」を除去して、化合物１を得る。その保護基は、上で定義されたようなアミノ保護基から選択され得る。例えば、ＰＧは、Ｂｏｃ保護基であり得、その場合、脱保護は、ＴＦＡまたはＨＣｌなどの強酸の存在下において行われ得る。
【0031】
中間体３は、実験の項に記載されているように調製され得る。保護された重要な中間体５を調製する代替方法をスキーム２に示す。
スキーム２
スキーム２
【化4】
【0032】
ブロモインダゾールアルデヒド８を、ベンジルで保護されたイミン化合物２と反応させて、中間体９を得ることができる。この反応は、代表的には、重亜硫酸ナトリウムの存在下、約１３０℃～約１４０℃の温度において、約１～約６時間にわたってまたは反応が実質的に完了するまで、行われる。化合物９を、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤を用いて還元して化合物１０を得て、それを通常のＳｕｚｕｋｉ－Ｍｉｙａｕｒａカップリング条件下において、保護されたフェニルトリフルオロボレート１１と合わせることにより、中間体５を得る。この反応は、代表的には、パラジウム触媒の存在下において高温で行われる。スキーム２にトリフルオロホウ酸カリウム塩として示されているＳｕｚｕｋｉパートナー１１は、対応するボロネート（下記の調製法１における中間体１－５）を二フッ化水素カリウムと反応させて中間体１１を得ることによって調製することができる。あるいは、そのボロネート中間体をトリフルオロボレート１１の代わりに使用することができる。
【0033】
したがって、方法の態様において、本発明は、式１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を調製するプロセスを提供し、そのプロセスは、式６の化合物を式７－ＰＧの化合物と反応させた後、保護基ＰＧを除去し、必要に応じて、化合物１の薬学的に許容され得る塩を調製することにより、式１の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を得る工程を含む。
【0034】
薬学的組成物
化合物１およびその薬学的に許容され得る塩は、通常、薬学的組成物または製剤の形態で使用される。そのような薬学的組成物は、任意の許容され得る投与経路によって好都合に患者に投与されてよく、その投与経路としては、経口、吸入、光注入（ｏｐｔｉｃａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、局所（経皮を含む）、直腸、経鼻および非経口的な投与形式が挙げられるがこれらに限定されない。
化合物１およびその薬学的に許容され得る塩は、通常、薬学的組成物または製剤の形態で使用される。そのような薬学的組成物は、任意の許容され得る投与経路によって好都合に患者に投与されてよく、その投与経路としては、経口、吸入、光注入（ｏｐｔｉｃａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、局所（経皮を含む）、直腸、経鼻および非経口的な投与形式が挙げられるがこれらに限定されない。
【0035】
したがって、上記組成物の態様の１つにおいて、本発明は、薬学的に許容され得るキャリアまたは賦形剤および化合物１を含む薬学的組成物に関し、ここで、上で定義されたように、「化合物１」は、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩を意味する。必要に応じて、そのような薬学的組成物は、所望であれば、他の治療剤および／または製剤化剤を含んでもよい。組成物およびその使用を論じる際、化合物１は、本明細書中で「活性な作用物質」と称されることがある。
【0036】
いくつかの態様において、本開示は、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの態様において、薬学的組成物は、眼への適用に適している。いくつかの態様において、組成物は、眼への注射に適している。いくつかの態様において、組成物は、硝子体内注射に適している。いくつかの態様において、組成物は、懸濁液である。いくつかの態様において、組成物は、結晶性の懸濁液である。
【0037】
本発明の薬学的組成物は、通常、治療有効量の化合物１を含む。しかしながら、薬学的組成物は、治療有効量より多い、すなわち、大量の組成物または治療有効量より少ない、すなわち、治療有効量を達成するための複数回投与のためにデザインされた個別の単位用量を含むことがあることを当業者は認識する。
【0038】
代表的には、そのような薬学的組成物は、約０．０１～約９５重量％の活性な作用物質（例えば、約０．０５～約３０重量％；および約０．１％～約１０重量％の活性な作用物質を含む）を含む。
【0039】
任意の従来のキャリアまたは賦形剤を、本発明の薬学的組成物において使用してもよい。特定のキャリアもしくは賦形剤、またはキャリアもしくは賦形剤の組み合わせの選択は、特定の患者を処置するために用いられる投与様式、または病状もしくは疾患状態のタイプに依存する。この点において、特定の投与様式に対して好適な薬学的組成物の調製法は、十分に薬学分野の当業者の技術の範囲内である。さらに、本発明の薬学的組成物において使用されるキャリアまたは賦形剤は、商業的に入手可能である。さらなる例証として、従来の製剤化の手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（２０００）；およびＨ．Ｃ．Ａｎｓｅｌら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｈｉｔｅ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９９９）に記載されている。
【0040】
薬学的に許容され得るキャリアとして機能し得る材料の代表例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：糖（例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース）；デンプン（例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン）；セルロース（例えば、微結晶性セルロース）およびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース）；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、カカオバターおよび坐剤ろう）；油（例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油）；グリコール（例えば、プロピレングリコール）；ポリオール（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール）；エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質非含有水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝液；および薬学的組成物において使用される他の無毒性の適合性物質。
【0041】
薬学的組成物は、代表的には、活性な作用物質を薬学的に許容され得るキャリアおよび１つまたはそれより多くの必要に応じた成分と十分かつ完全に混合または混和することによって調製される。次いで、得られた均一に混和された混合物は、従来の手順および器具を用いて、錠剤、カプセル剤、丸剤などに成形または充填され得る。
【0042】
本発明の薬学的組成物は、好ましくは、単位剤形に包装される。用語「単位剤形」とは、患者への投与に適した物理的に別々の単位のことを指し、すなわち、各単位は、単独でまたは１つもしくはそれより多くのさらなる単位と組み合わさって所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性な作用物質を含む。例えば、そのような単位剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤など、または眼投与もしくは非経口投与に適した単位パッケージであり得る。
【0043】
１つの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、経口投与に適している。経口投与に好適な薬学的組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、舐剤、カシェ剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤の形態であり得るか；または水性もしくは非水性液体における溶液または懸濁液として存在し得るか；または水中油型もしくは油中水型の液体エマルジョンとして存在し得るか；またはエリキシル剤もしくはシロップ剤などとして存在し得；それらの各々は、所定の量の化合物１を活性成分として含んでいる。
【0044】
固形剤形（すなわち、カプセル剤、錠剤、丸剤など）での経口投与が意図されているとき、本発明の薬学的組成物は、通常、活性な作用物質および１つまたはそれより多くの薬学的に許容され得るキャリアを含む。必要に応じて、そのような固形剤形は、充填剤または増量剤（例えば、デンプン、微結晶性セルロース、ラクトース、リン酸二カルシウム、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸）；結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア）；保湿剤（例えば、グリセロール）；崩壊剤（例えば、クロスカルメロース（ｃｒｏｓｓｃａｒｍｅｌｌｏｓｅ）ナトリウム、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケートおよび／または炭酸ナトリウム）；溶解遅延剤（例えば、パラフィン）；吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）；湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよび／またはモノステアリン酸グリセロール）；吸収剤（例えば、カオリンおよび／またはベントナイト粘土）；滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよび／またはそれらの混合物）；着色剤；および緩衝剤を含み得る。
【0045】
離型剤、湿潤剤、コーティング剤、甘味料、香味料および香料、保存剤ならびに酸化防止剤も、本発明の薬学的組成物に存在し得る。薬学的に許容され得る酸化防止剤の例としては、水溶性の酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど）；油溶性の酸化防止剤（例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロールなど）；および金属キレート剤（例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）が挙げられる。錠剤、カプセル剤、丸剤などのためのコーティング剤としては、腸溶コーティングのために使用されるもの（例えば、セルロースアセテートフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸、メタクリル酸エステル共重合体、セルロースアセテートトリメリテート、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートなど）が挙げられる。
【0046】
本発明の薬学的組成物はまた、例えば、様々な比率でヒドロキシプロピルメチルセルロース；または他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／もしくはミクロスフェアを用いて、活性な作用物質の持続放出または制御放出を提供するように製剤化され得る。さらに、本発明の薬学的組成物は、必要に応じて不透明化剤を含んでもよく、消化管のある特定の部分において、必要に応じて遅延様式で、活性成分だけを放出するようにまたは活性成分を優先的に放出するように製剤化され得る。使用され得る包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびろうが挙げられる。活性な作用物質は、適切な場合、上に記載された賦形剤の１つまたは複数とともに、マイクロカプセル化された形態でも存在し得る。
【0047】
経口投与に好適な液体剤形としては、例証として、薬学的に許容され得るエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。液体剤形は、代表的には、活性な作用物質および不活性な希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、オレイン酸、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含む。あるいは、ある特定の液体製剤は、例えば噴霧乾燥によって、粉末に変換され得、その粉末は、従来の手順によって固形剤形を調製するために使用される。
【0048】
懸濁剤は、活性成分に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガント、ならびにそれらの混合物を含み得る。
【0049】
化合物１は、非経口的に（例えば、静脈内、皮下、筋肉内または腹腔内注射によって）も投与され得る。非経口投与の場合、活性な作用物質は、代表的には、非経口投与に好適なビヒクルと混合され、そのビヒクルの例としては、滅菌水溶液、食塩水、低分子量アルコール、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルなどが挙げられる。非経口製剤は、１つまたはそれより多くの酸化防止剤、可溶化剤、安定剤、保存剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤または分散剤も含み得る。これらの製剤は、滅菌された注射可能な媒質、滅菌剤の使用、濾過、照射または加熱によって、滅菌され得る。
【0050】
化合物１は、眼注射用の滅菌水性懸濁液または滅菌水性溶液としても製剤化され得る。そのような水性製剤に含められ得る有用な賦形剤としては、ポリソルベート８０、セルロースポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ヒスチジン、α－α－トレハロース二水和物、スクロース、ポリソルベート２０、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、塩化ベンザルコニウム、アンバーライトＩＲＰ－６９、ポリオキシエチレングリコールエーテル（ラウリル、ステアリルおよびオレイル）、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム塩、タウロコール酸ナトリウム、サポニンおよびクレモフォールＥＬ、ポリカルボフィル－システイン、キサンタンガム、ジェランガム、ヒアルロン酸、リポソームおよびリン酸ナトリウムが挙げられる。透過性向上剤、界面活性剤、胆汁酸、シクロデキストリン（例えば、２－ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン）およびキレート剤が、製剤に含められ得る。親水性の外表面および親油性の内表面を有し、活性な作用物質と複合体を形成する能力を有する円筒形のオリゴヌクレオチドも、製剤に含められ得る。ベンジルアルコールは、保存剤として働き得、塩化ナトリウムは、張度を調整するために含められ得る。さらに、塩酸および／または水酸化ナトリウムが、ｐＨ調整のために溶液に加えられ得る。眼注射用の水性製剤は、保存剤フリーとして調製され得る。
【0051】
眼製剤は、眼への活性成分の徐放を可能にし得る。眼製剤は、エマルジョン（水中油型または油中水型）、懸濁液または軟膏として製剤化され得る。懸濁液の製剤は、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩を結晶形態、例えば、形態１もしくは形態２として、または非晶質状態で含み得る。
【0052】
化合物１は、点眼投薬に適するように、または硝子体内インプラントとして、製剤化され得る。そのインプラントは、一定の治療レベルの薬物の送達を可能にし得る。レザバーインプラントは、通常、ケイ素、エチレンビニルアセテート（ＥＶＡ）またはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）などの非反応性物質によって取り囲まれたペレット状の薬物コアで作製される。これらのインプラントは、非生物分解性であり、数ヶ月間から１年間にわたって持続した量の薬物を送達できる。マトリックスインプラントも使用され得る。それらは、通常、負荷投与量に続いて漸減量の薬物を１日から６ヶ月間にわたって送達するために使用される。それらは、最も一般的には、水および二酸化炭素に分解される共重合体であるポリ乳酸（ＰＬＡ）および／またはポリ乳酸グリコール酸（ＰＬＧＡ）から作製される。イオン導入も使用され得る。イオン導入は、低電流を流して、イオン化した薬物が組織に浸透するのを高める非侵襲的な手法である。
【0053】
細胞ベースの送達系であるカプセル化細胞技術（ＥＣＴ）も、治療剤を眼に送達するために使用され得る。代表的には、遺伝的に改変された細胞を半透膜の中空管の中に詰める。これにより、免疫細胞の侵入が防がれ、栄養分および治療的分子がその膜を越えて自由に拡散することが可能になる。ポリマーセクションの２つの末端をシールし、アンカリング末端にチタンループを配置して、それを毛様体扁平部に埋め込み、強膜に固定する。
【0054】
化合物１は、眼底への送達を可能にする任意の形態に製剤化され得る。送達形式の例は、文献（Ｋｕｎｏら、Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２０１１，３，１９３－２２１，ｄｅｌ Ａｍｏら、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ，２００８，１３，１３５－１４３， Ｓｈｏｒｔ，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００８，３６，４９－６２）において知られている。そのような送達形式としては、脈絡膜上腔を通じた脈絡膜および網膜への送達を可能にする脈絡膜上（ｓｕｐｒａｃｈｏｒｏｉｄａｌ）送達、テノン嚢下（ｓｕｂ－Ｔｅｎｏｎ）送達、眼周囲送達、コンタクトレンズ、涙点プラグおよび強膜プラグが挙げられるがこれらに限定されない。化合物１は、眼周囲注射、強膜上注射、眼球後注射、眼球周囲注射または結膜下注射によっても送達され得る。
【0055】
化合物１は、エマルジョン、ポリマーマイクロスフェアもしくはポリマーナノスフェア、リポソーム、微粒子もしくはナノ粒子、ミクロスフェア、ミセルまたはデンドリマーとして送達され得る。ポリラクチド（ｐｏｌｙａｃｔｉｄｅ）およびＰＬＧＡなどの生分解性ポリマーおよび生体適合性ポリマーが使用され得る。化合物１は、カプセル化されてもよい。
【0056】
さらに、化合物１は、皮膚への局所投与のために軟膏またはクリームとしても製剤化され得る。軟膏製剤は、代表的には透明の油性または脂肪性の材料の基剤を有する半固体の調製物である。軟膏製剤において使用するめに適した油性材料としては、ペトロラタム（ペトロレアムゼリー）、蜜ろう、カカオバター、シアバターおよびセチルアルコールが挙げられる。軟膏は、所望であれば、必要に応じてさらに軟化薬および浸透促進剤を含んでもよい。
【0057】
クリーム製剤は、代表的には精製水を含む、油相および水相を含むエマルジョンとして調製され得る。クリーム製剤の構成要素としては、油性基剤（例えば、ペトロラタム（ｐｅｔｒｏｌａｔｒｕｍ）、鉱油、植物油および動物油ならびにトリグリセリド）；クリーム基剤（例えば、ラノリンアルコール、ステアリン酸およびセトステアリルアルコール）；ゲル基剤（例えば、ポリビニルアルコール）；溶媒（例えば、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール）；乳化剤（例えば、ポリソルベート、ステアレート（例えば、ステアリン酸グリセリル、ヒドロキシステアリン酸オクチル（octylhydroxystearate）、ステアリン酸ポリオキシル、ＰＥＧステアリルエーテル、パルミチン酸イソプロピルおよびモノステアリン酸ソルビタン））；安定剤（例えば、多糖および亜硫酸ナトリウム）；軟化薬（すなわち、保湿剤（例えば、中鎖トリグリセリド、ミリスチン酸イソプロピルおよびジメチコーン））；硬化剤（例えば、セチルアルコールおよびステアリルアルコール）；抗菌剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェノキシエタノール、ソルビン酸、ジアゾリジニル尿素およびブチル化ヒドロキシアニソール）；浸透促進剤（例えば、Ｎ－メチルピロリドン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールモノラウレートなど）；およびキレート剤（例えば、エデト酸二ナトリウム）が挙げられ得る。
【0058】
あるいは、本発明の薬学的組成物は、吸入による投与のために製剤化される。吸入による投与に好適な薬学的組成物は、代表的には、エアロゾルまたは粉末の形態であり得る。そのような組成物は、一般に、周知の送達デバイス（例えば、定量吸入器、乾燥粉末吸入器、噴霧器または同様の送達デバイス）を用いて投与される。
【0059】
加圧容器を用いて吸入によって投与されるとき、本発明の薬学的組成物は、代表的には、活性成分および好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガス）を含み得る。さらに、薬学的組成物は、化合物１および粉末吸入器での使用に適した粉末を含むカプセルまたはカートリッジ（例えばゼラチンでできたもの）の形態であり得る。好適な粉末基剤の例としては、ラクトースまたはデンプンが挙げられる。
【0060】
以下の非限定的な例は、本発明の代表的な薬学的組成物を例証する。
【0061】
錠剤経口固形剤形
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、例えば、錠剤１つあたり５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で乾式混合され、錠剤に圧縮される。
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、例えば、錠剤１つあたり５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で乾式混合され、錠剤に圧縮される。
【0062】
カプセル経口固形剤形
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、例えば、カプセル１つあたり５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で湿式造粒によって混和され、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルに充填される。
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、例えば、カプセル１つあたり５ｍｇ、２０ｍｇまたは４０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドンおよびクロスカルメロースナトリウムと４：５：１：１の比で湿式造粒によって混和され、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルに充填される。
【0063】
液体製剤
化合物１（０．１％）、水（９８．９％）およびアスコルビン酸（１．０％）を含む液体製剤が、本発明の化合物を水とアスコルビン酸との混合物に加えることによって形成される。
化合物１（０．１％）、水（９８．９％）およびアスコルビン酸（１．０％）を含む液体製剤が、本発明の化合物を水とアスコルビン酸との混合物に加えることによって形成される。
【0064】
腸溶コーティングされた経口剤形
化合物１を、ポリビニルピロリドンを含む水溶液に溶解させ、１：５ｗ／ｗという活性な作用物質：ビーズの比で微結晶性セルロースまたは糖のビーズ上にスプレーコーティングし、次いで、アクリル共重合体を含む腸溶コーティングのおよそ５％重量増加を適用する。その腸溶コーティングされたビーズを、例えば、カプセル１つあたり３０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルの中に充填する。
化合物１を、ポリビニルピロリドンを含む水溶液に溶解させ、１：５ｗ／ｗという活性な作用物質：ビーズの比で微結晶性セルロースまたは糖のビーズ上にスプレーコーティングし、次いで、アクリル共重合体を含む腸溶コーティングのおよそ５％重量増加を適用する。その腸溶コーティングされたビーズを、例えば、カプセル１つあたり３０ｍｇの活性な作用物質という単位投与量が提供されるように、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのカプセルの中に充填する。
【0065】
腸溶コーティングされた経口剤形
Ｅｕｄｒａｇｉｔ－Ｌ（登録商標）とＥｕｄｒａｇｉｔ－Ｓ（登録商標）との組み合わせまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートを含む腸溶コーティングを、上に記載された錠剤経口剤形またはカプセル経口剤形に適用する。
Ｅｕｄｒａｇｉｔ－Ｌ（登録商標）とＥｕｄｒａｇｉｔ－Ｓ（登録商標）との組み合わせまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネートを含む腸溶コーティングを、上に記載された錠剤経口剤形またはカプセル経口剤形に適用する。
【0066】
眼注射用の水性製剤
１ｍＬの滅菌水性懸濁液は、５ｍｇ～５０ｍｇの化合物１、張度用の塩化ナトリウム、保存剤としての０．９９％（ｗ／ｖ）ベンジルアルコール、０．７５％カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび０．０４％ポリソルベートを含む。ｐＨを５～７．５に調整するために水酸化ナトリウムまたは塩酸を含めてもよい。
１ｍＬの滅菌水性懸濁液は、５ｍｇ～５０ｍｇの化合物１、張度用の塩化ナトリウム、保存剤としての０．９９％（ｗ／ｖ）ベンジルアルコール、０．７５％カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび０．０４％ポリソルベートを含む。ｐＨを５～７．５に調整するために水酸化ナトリウムまたは塩酸を含めてもよい。
【0067】
眼注射用の水性製剤
保存剤フリーの滅菌水性懸濁液は、１０ｍＭリン酸ナトリウム、４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０３％ポリソルベート２０および５％スクロース中に５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの化合物１を含む。
保存剤フリーの滅菌水性懸濁液は、１０ｍＭリン酸ナトリウム、４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０３％ポリソルベート２０および５％スクロース中に５ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの化合物１を含む。
【0068】
局所投与用の軟膏製剤
化合物１は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、ペトロラタム、Ｃ８－Ｃ１０トリグリセリド、ヒドロキシステアリン酸オクチルおよびＮ－メチルピロリドンと、ある比で混和される。
化合物１は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、ペトロラタム、Ｃ８－Ｃ１０トリグリセリド、ヒドロキシステアリン酸オクチルおよびＮ－メチルピロリドンと、ある比で混和される。
【0069】
局所投与用の軟膏製剤
化合物１は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、白色ワセリン、プロピレングリコール、モノ－およびジ－グリセリド、パラフィン、ブチル化ヒドロキシトルエンおよびエデト酸カルシウム二ナトリウムと、ある比で混和される。
化合物１は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、白色ワセリン、プロピレングリコール、モノ－およびジ－グリセリド、パラフィン、ブチル化ヒドロキシトルエンおよびエデト酸カルシウム二ナトリウムと、ある比で混和される。
【0070】
局所投与用の軟膏製剤
化合物１は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、鉱油、パラフィン、炭酸プロピレン、白色ワセリンおよび白ろうと混和される。
化合物１は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、鉱油、パラフィン、炭酸プロピレン、白色ワセリンおよび白ろうと混和される。
【0071】
局所投与用のクリーム製剤
鉱油が、化合物１、プロピレングリコール、パルミチン酸イソプロピル、ポリソルベート６０、セチルアルコール、モノステアリン酸ソルビタン、ステアリン酸ポリオキシル４０、ソルビン酸、メチルパラベンおよびプロピルパラベンと混和されて、油相が形成され、それが、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、剪断混合（ｓｈｅａｒ ｂｌｅｎｄｉｎｇ）によって精製水と混和される。
鉱油が、化合物１、プロピレングリコール、パルミチン酸イソプロピル、ポリソルベート６０、セチルアルコール、モノステアリン酸ソルビタン、ステアリン酸ポリオキシル４０、ソルビン酸、メチルパラベンおよびプロピルパラベンと混和されて、油相が形成され、それが、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む組成物が提供されるように、剪断混合（ｓｈｅａｒ ｂｌｅｎｄｉｎｇ）によって精製水と混和される。
【0072】
局所投与用のクリーム製剤
化合物１、ベンジルアルコール、セチルアルコール、無水クエン酸、モノグリセリドおよびジグリセリド、オレイルアルコール、プロピレングリコール、硫酸セトステアリルナトリウム、水酸化ナトリウム、ステアリルアルコール、トリグリセリドならびに水を含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む。
化合物１、ベンジルアルコール、セチルアルコール、無水クエン酸、モノグリセリドおよびジグリセリド、オレイルアルコール、プロピレングリコール、硫酸セトステアリルナトリウム、水酸化ナトリウム、ステアリルアルコール、トリグリセリドならびに水を含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む。
【0073】
局所投与用のクリーム製剤
化合物１、セトステアリルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル、プロピレングリコール、セトマクロゴール１０００、ジメチコーン３６０、クエン酸、クエン酸ナトリウムおよび精製水を、保存剤としてイミド尿素、メチルパラベンおよびプロピルパラベンとともに含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む。
化合物１、セトステアリルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル、プロピレングリコール、セトマクロゴール１０００、ジメチコーン３６０、クエン酸、クエン酸ナトリウムおよび精製水を、保存剤としてイミド尿素、メチルパラベンおよびプロピルパラベンとともに含むクリーム製剤は、重量基準で０．０５％～５％の活性な作用物質を含む。
【0074】
乾燥粉末組成物
微粒子化された化合物１（１ｇ）を、粉砕ラクトース（２５ｇ）とブレンドする。次いで、このブレンド混合物を、１用量あたり約０．１ｍｇ～約４ｍｇの化合物１を提供するのに十分な量で、剥離可能なブリスター包装の個々のブリスターに充填する。それらのブリスターの内容物が、乾燥粉末吸入器を用いて投与される。
微粒子化された化合物１（１ｇ）を、粉砕ラクトース（２５ｇ）とブレンドする。次いで、このブレンド混合物を、１用量あたり約０．１ｍｇ～約４ｍｇの化合物１を提供するのに十分な量で、剥離可能なブリスター包装の個々のブリスターに充填する。それらのブリスターの内容物が、乾燥粉末吸入器を用いて投与される。
【0075】
定量吸入器用組成物
微粒子化された化合物１（１０ｇ）を、レシチン（０．２ｇ）を脱塩水（２００ｍＬ）に溶解することによって調製された溶液に分散させる。得られた懸濁液を噴霧乾燥し、次いで、微粒子化して、約１．５μｍ未満の平均直径を有する粒子を含む微粒子化された組成物を形成する。次いで、その微粒子化された組成物を、定量吸入器によって投与されたとき１用量あたり約０．１ｍｇ～約４ｍｇの化合物１を提供するのに十分な量で、加圧された１，１，１，２－テトラフルオロエタンを含む定量吸入器カートリッジに充填する。
微粒子化された化合物１（１０ｇ）を、レシチン（０．２ｇ）を脱塩水（２００ｍＬ）に溶解することによって調製された溶液に分散させる。得られた懸濁液を噴霧乾燥し、次いで、微粒子化して、約１．５μｍ未満の平均直径を有する粒子を含む微粒子化された組成物を形成する。次いで、その微粒子化された組成物を、定量吸入器によって投与されたとき１用量あたり約０．１ｍｇ～約４ｍｇの化合物１を提供するのに十分な量で、加圧された１，１，１，２－テトラフルオロエタンを含む定量吸入器カートリッジに充填する。
【0076】
ネブライザー用組成物
化合物１（２５ｍｇ）を、１．５～２．５当量の塩酸を含む溶液に溶解させた後、ｐＨを３．５～５．５に調整するために水酸化ナトリウム、および３重量％のグリセロールを加える。すべての構成要素が溶解するまで、その溶液を十分撹拌する。その溶液を、１用量あたり約０．１ｍｇ～約４ｍｇの化合物１を提供するネブライザーデバイスを用いて投与する。
化合物１（２５ｍｇ）を、１．５～２．５当量の塩酸を含む溶液に溶解させた後、ｐＨを３．５～５．５に調整するために水酸化ナトリウム、および３重量％のグリセロールを加える。すべての構成要素が溶解するまで、その溶液を十分撹拌する。その溶液を、１用量あたり約０．１ｍｇ～約４ｍｇの化合物１を提供するネブライザーデバイスを用いて投与する。
【0077】
有用性
化合物１は、ＪＡＫファミリーの酵素：ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２の強力な阻害剤であると示された。
化合物１は、ＪＡＫファミリーの酵素：ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２の強力な阻害剤であると示された。
【0078】
眼疾患
多くの眼疾患が、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路に依存する炎症促進性サイトカインの増加に関連すると示された。化合物１は、４つすべてのＪＡＫ酵素において強力な阻害を示すので、ＪＡＫを介してシグナル伝達する数多くのサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－２およびＩＦＮ－γ）のシグナル伝達および病原性の作用を強く阻害すると予想され、ならびにその産生がＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路のシグナル伝達によって引き起こされる他のサイトカイン（例えば、ＭＣＰ－１およびＩＰ－１０）の増加を防ぐと予想される。
多くの眼疾患が、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路に依存する炎症促進性サイトカインの増加に関連すると示された。化合物１は、４つすべてのＪＡＫ酵素において強力な阻害を示すので、ＪＡＫを介してシグナル伝達する数多くのサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－２およびＩＦＮ－γ）のシグナル伝達および病原性の作用を強く阻害すると予想され、ならびにその産生がＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路のシグナル伝達によって引き起こされる他のサイトカイン（例えば、ＭＣＰ－１およびＩＰ－１０）の増加を防ぐと予想される。
【0079】
アッセイの項に例証されるように、化合物１は、サイトカイン増加の下流効果の阻害を示すアッセイを含む細胞アッセイにおいて活性を示した。
【0080】
さらに、化合物１の硝子体内投薬は、ラットの網膜／脈絡膜組織において、ＩＬ－６によって誘導されるｐＳＴＡＴ３の有意な阻害を示した。
【0081】
有意な全身レベルの非存在下における眼のＪＡＫ阻害は、全身で引き起こされる有害作用なく、眼において強力な局所的抗炎症活性をもたらすと予想される。したがって、化合物１は、いくつかの眼疾患において有益であると予想され、それらの眼疾患としては、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性症、網膜静脈閉塞および萎縮性角結膜炎が挙げられるが、これらに限定されない。
【0082】
特に、ブドウ膜炎（Ｈｏｒａｉ ａｎｄ Ｃａｓｐｉ，Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ，２０１１，３１，７３３－７４４）、糖尿病性網膜症（Ａｂｃｏｕｗｅｒ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１３，Ｓｕｐｐｌ １，１－１２）、糖尿病性黄斑浮腫（Ｓｏｈｎら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１１，１５２，６８６－６９４）、ドライアイ疾患（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，２０１２，１３０，９０－１００）、網膜静脈閉塞（Ｓｈｃｈｕｋｏら、Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１５，６３（１２），９０５－９１１）および加齢黄斑変性症（Ｋｎｉｃｋｅｌｂｅｉｎら、Ｉｎｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｃｌｉｎ，２０１５，５５（３），６３－７８）は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するある特定の炎症促進性サイトカインの増加を特徴とする。したがって、化合物１は、付随する眼の炎症を軽減することおよび疾患の進行を逆転させることまたはこれらの疾患の症候緩和を提供することができると予想される。
【0083】
ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物の眼疾患を処置する方法であって、その方法が、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩および薬学的キャリアを含む薬学的組成物を哺乳動物の眼に投与する工程を含む、方法を提供する。１つの態様において、眼疾患は、ブドウ膜炎、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、加齢黄斑変性症、網膜静脈閉塞または萎縮性角結膜炎である。１つの態様において、その方法は、硝子体内注射によって化合物１を投与する工程を含む。
【0084】
炎症性皮膚疾患
アトピー性皮膚炎などの炎症性皮膚疾患は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路に依存する炎症促進性サイトカイン、特に、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３およびＩＦＮγの増加に関連した。ゆえに、化合物１は、いくつかの皮膚炎症性症状または皮膚そう痒性症状において有益であると予想され、それらの症状としては、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、白斑、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、結節性痒疹、扁平苔癬、原発性限局性皮膚アミロイドーシス、水疱性類天疱瘡、移植片対宿主病の皮膚発現、類天疱瘡、円板状狼瘡、環状肉芽腫、慢性単純性苔癬、外陰部／陰嚢／肛門周囲のそう痒、硬化性苔癬、帯状疱疹後神経痛かゆみ、毛孔性扁平苔癬および脱毛性毛包炎（ｆｏｌｉｃｕｌｉｔｉｓ ｄｅｃａｌｖａｎｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。特に、円形脱毛症（Ｘｉｎｇら、Ｎａｔ Ｍｅｄ．２０１４ Ｓｅｐ；２０（９）：１０４３－９）、白斑（Ｃｒａｉｇｌｏｗら、ＪＡＭＡ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１５ Ｏｃｔ；１５１（１０）：１１１０－２）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（Ｎｅｔｃｈｉｐｏｒｏｕｋら、Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ．２０１４；１３（２１）：３３３１－５）、結節性痒疹（Ｓｏｎｋｏｌｙら、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６ Ｆｅｂ；１１７（２）：４１１－７）、扁平苔癬（Ｗｅｌｚ－Ｋｕｂｉａｋら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２０１５；２０１５：８５４７４７）、原発性限局性皮膚アミロイドーシス（Ｔａｎａｋａら、Ｂｒ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００９ Ｄｅｃ；１６１（６）：１２１７－２４）、水疱性類天疱瘡（Ｆｅｌｉｃｉａｎｉら、Ｉｎｔ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９ Ｍａｙ－Ａｕｇ；１２（２）：５５－６１）および移植片対宿主病の皮膚発現（Ｏｋｉｙａｍａら、Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１４ Ａｐｒ；１３４（４）：９９２－１０００）は、ＪＡＫ活性化を介してシグナル伝達するある特定のサイトカインの増加を特徴とする。したがって、化合物１は、これらのサイトカインによって引き起こされる関連する皮膚の炎症またはそう痒症を軽減することができると予想される。
アトピー性皮膚炎などの炎症性皮膚疾患は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路に依存する炎症促進性サイトカイン、特に、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３およびＩＦＮγの増加に関連した。ゆえに、化合物１は、いくつかの皮膚炎症性症状または皮膚そう痒性症状において有益であると予想され、それらの症状としては、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、白斑、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、結節性痒疹、扁平苔癬、原発性限局性皮膚アミロイドーシス、水疱性類天疱瘡、移植片対宿主病の皮膚発現、類天疱瘡、円板状狼瘡、環状肉芽腫、慢性単純性苔癬、外陰部／陰嚢／肛門周囲のそう痒、硬化性苔癬、帯状疱疹後神経痛かゆみ、毛孔性扁平苔癬および脱毛性毛包炎（ｆｏｌｉｃｕｌｉｔｉｓ ｄｅｃａｌｖａｎｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。特に、円形脱毛症（Ｘｉｎｇら、Ｎａｔ Ｍｅｄ．２０１４ Ｓｅｐ；２０（９）：１０４３－９）、白斑（Ｃｒａｉｇｌｏｗら、ＪＡＭＡ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１５ Ｏｃｔ；１５１（１０）：１１１０－２）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（Ｎｅｔｃｈｉｐｏｒｏｕｋら、Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ．２０１４；１３（２１）：３３３１－５）、結節性痒疹（Ｓｏｎｋｏｌｙら、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６ Ｆｅｂ；１１７（２）：４１１－７）、扁平苔癬（Ｗｅｌｚ－Ｋｕｂｉａｋら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２０１５；２０１５：８５４７４７）、原発性限局性皮膚アミロイドーシス（Ｔａｎａｋａら、Ｂｒ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００９ Ｄｅｃ；１６１（６）：１２１７－２４）、水疱性類天疱瘡（Ｆｅｌｉｃｉａｎｉら、Ｉｎｔ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９９ Ｍａｙ－Ａｕｇ；１２（２）：５５－６１）および移植片対宿主病の皮膚発現（Ｏｋｉｙａｍａら、Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１４ Ａｐｒ；１３４（４）：９９２－１０００）は、ＪＡＫ活性化を介してシグナル伝達するある特定のサイトカインの増加を特徴とする。したがって、化合物１は、これらのサイトカインによって引き起こされる関連する皮膚の炎症またはそう痒症を軽減することができると予想される。
【0085】
ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の炎症性皮膚疾患を処置する方法であって、その方法が、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩および薬学的キャリアを含む薬学的組成物を哺乳動物の皮膚に塗布する工程を含む、方法を提供する。１つの態様において、炎症性皮膚疾患は、アトピー性皮膚炎である。
【0086】
化合物１は、炎症性皮膚疾患を処置するためにグラム陽性抗生物質（例えば、ムピロシンおよびフシジン酸）と併用しても使用され得る。ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物の炎症性皮膚疾患を処置する方法であって、その方法が、化合物１およびグラム陽性抗生物質を哺乳動物の皮膚に塗布する工程を含む、方法を提供する。別の態様において、本発明は、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩、グラム陽性抗生物質および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物を提供する。
【0087】
呼吸器疾患
ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するサイトカイン、特に、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＩＬ－３１、ＩＬ－２７、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、インターフェロン－γ（ＩＦＮγ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）は、喘息炎症および他の炎症性呼吸器疾患にも関係づけられている。上に記載されたように、化合物１は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２酵素の強力な阻害剤であると示されており、細胞アッセイにおいて炎症促進性サイトカインの強力な阻害も示した。
ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を介してシグナル伝達するサイトカイン、特に、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３、ＩＬ－２３、ＩＬ－３１、ＩＬ－２７、胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）、インターフェロン－γ（ＩＦＮγ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）は、喘息炎症および他の炎症性呼吸器疾患にも関係づけられている。上に記載されたように、化合物１は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２酵素の強力な阻害剤であると示されており、細胞アッセイにおいて炎症促進性サイトカインの強力な阻害も示した。
【0088】
ＪＡＫ阻害剤の抗炎症活性は、喘息の前臨床モデルにおいて強く実証された（Ｍａｌａｖｉｙａら、Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１０，１０，８２９，－８３６；Ｍａｔｓｕｎａｇａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２０１１，４０４，２６１－２６７；Ｋｕｄｌａｃｚら、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００８，５８２，１５４－１６１）。したがって、化合物１は、炎症性呼吸器障害、特に、喘息の処置に有用であると予想される。肺の炎症および線維症は、喘息に加えて他の呼吸器疾患（例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫および閉塞性細気管支炎）に特徴的である。ゆえに、化合物１は、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎およびサルコイドーシスの処置にも有用であると予想される。
【0089】
ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の呼吸器疾患を処置する方法であって、その方法が、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【0090】
１つの態様において、呼吸器疾患は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、肺臓炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、肺臓炎、間質性肺疾患（特発性肺線維症を含む）、急性肺損傷、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎、気腫、閉塞性細気管支炎またはサルコイドーシスである。別の態様において、呼吸器疾患は、喘息または慢性閉塞性肺疾患である。
【0091】
さらなる態様において、呼吸器疾患は、肺感染症、蠕虫感染症、肺動脈高血圧症、サルコイドーシス、リンパ管平滑筋肉腫症、気管支拡張症または浸潤性肺疾患である。さらに別の態様において、呼吸器疾患は、薬物誘発性肺臓炎、真菌誘発性肺臓炎、アレルギー性 気管支肺アスペルギルス症、過敏性肺臓炎、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群、レフラー症候群、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎または免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎である。
【0092】
本発明はさらに、哺乳動物の喘息を処置する方法であって、その方法が、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【0093】
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、好酸球性肺疾患の処置にも有用であると予想される。好酸球性肺疾患と総称される疾患の特徴的な特徴である好酸球性気道炎症（Ｃｏｔｔｉｎら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｓｔ．Ｍｅｄ．，２０１６，３７（３），５３５－５６）。好酸球性疾患は、ＩＬ－４、ＩＬ－１３およびＩＬ－５のシグナル伝達に関連した。好酸球性肺疾患としては、感染症（特に、蠕虫感染症）、薬物誘発性肺臓炎（例えば、抗生物質、フェニトインまたはｌ－トリプトファンなどの治療薬によって誘発される）、真菌誘発性肺臓炎（例えば、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症）、過敏性肺臓炎および好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（以前はチャーグ・ストラウス症候群として知られていた）が挙げられる。病因が不明の好酸球性肺疾患としては、特発性急性好酸球性肺炎、特発性慢性好酸球性肺炎、好酸球増多症候群およびレフラー症候群が挙げられる。
【0094】
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、ＰＡＨの処置にも有用であり得る。ＩＬ－６遺伝子の多型が、ＩＬ－６の高レベルおよび肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）を発症する高リスクに関連した（Ｆａｎｇら、Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．，２０１７，１１（３），１７１－１７７）。ＰＡＨにおけるＩＬ－６の役割を裏付けるように、ＩＬ－６レセプター鎖ｇｐ１３０の阻害によって、ＰＡＨのラットモデルにおいてその疾患が回復した（Ｈｕａｎｇら、Ｃａｎ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．，２０１６，３２（１１），１３５６．ｅ１－１３５６．ｅ１０）。
【0095】
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、サルコイドーシスなどの非アレルギー性肺疾患およびリンパ管平滑筋肉腫症の処置にも有用であり得る。ＩＦＮγ、ＩＬ－１２およびＩＬ－６などのサイトカインは、サルコイドーシスなどの一連の非アレルギー性肺疾患、およびリンパ管平滑筋肉腫症に関係づけられた（Ｅｌ－Ｈａｓｈｅｍｉｔｅら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００５，３３，２２７－２３０およびＥｌ－Ｈａｓｈｅｍｉｔｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００４，６４，３４３６－３４４３）。
【0096】
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、慢性好中球炎症に関連する疾患である気管支拡張症および浸潤性肺疾患の処置にも有用であり得る。ある特定のサイトカインが、好中球炎症に関連する（例えば、ＩＬ－６、ＩＦＮγ）。
【0097】
病的なＴ細胞活性化は、複数の呼吸器疾患の病因において不可欠である。自己反応性Ｔ細胞は、閉塞性細気管支炎性器質化肺炎（ＣＯＳとも呼ばれる）において役割を果たす。ＣＯＳと同様に、肺移植片拒絶の病因は、移植されたドナー肺によるレシピエントのＴ細胞の異常なＴ細胞活性化と関係がある。肺移植片拒絶は、原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）、器質化肺炎（ＯＰ）、急性拒絶反応（ＡＲ）またはリンパ球性細気管支炎（ＬＢ）として初期に生じることもあり、また、慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）として肺移植の数年後に生じることもある。ＣＬＡＤは、以前は閉塞性細気管支炎（ＢＯ）として知られていたが、現在は、ＢＯ、拘束性ＣＬＡＤ（ｒＣＬＡＤまたはＲＡＳ）および好中球同種移植片機能不全をはじめとした種々の病理発現を有し得る症候群と考えられている。慢性肺同種移植片機能不全（ＣＬＡＤ）は、それによって移植された肺が次第に機能を失うので、肺移植レシピエントの長期間の管理における大きな課題である（Ｇａｕｔｈｉｅｒら、Ｃｕｒｒ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｒｅｐ．，２０１６，３（３），１８５－１９１）。ＣＬＡＤは、処置に対する応答が不十分であるので、この症状を予防または処置することができる有効な化合物が必要とされている。ＩＦＮγおよびＩＬ－５などのいくつかのＪＡＫ依存性サイトカインは、ＣＬＡＤおよび肺移植片拒絶において上方制御される（Ｂｅｒａｓｔｅｇｕｉら、Ｃｌｉｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０１７，３１，ｅ１２８９８）。さらに、ＪＡＫ依存性ＩＦＮシグナル伝達の下流にあるＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０などのＣＸＣＲ３ケモカインが肺において高レベルであることは、肺移植患者の不良な予後と関係がある（Ｓｈｉｎｏら、ＰＬＯＳ Ｏｎｅ，２０１７，１２（７），ｅ０１８０２８１）。ＪＡＫ阻害は、腎臓移植片拒絶において有効であると示された（Ｖｉｃｅｎｔｉら、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２０１２，１２，２４４６－５６）。ゆえに、化合物１は、肺移植片拒絶およびＣＬＡＤの処置または予防において有効である可能性を有する。肺移植片拒絶の根拠と記載されるＴ細胞活性化事象と類似のＴ細胞活性化事象は、造血幹細胞移植後に生じ得る肺の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の主な要因であるとも考えられている。ＣＬＡＤと同様に、肺ＧＶＨＤは、極めて不良な予後を伴う慢性の進行性の症状であり、現在認可されている処置がない。ＪＡＫ阻害剤ルキソリチニブを救済療法として全身投与された、ステロイド不応性の急性または慢性ＧＶＨＤを有する９５人の患者の後向き多施設調査研究は、肺ＧＶＨＤを有する患者を含む患者の大部分においてルキソリチニブに対して完全奏効または部分奏効を示した（Ｚｅｉｓｅｒら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２０１５，２９，１０，２０６２－６８）。より最近では、別のＴ細胞介在性肺疾患である、免疫チェックポイント阻害剤誘発性肺臓炎が、免疫チェックポイント阻害剤の使用の増加に伴って出現した。これらのＴ細胞刺激剤で処置された癌患者は、致命的な肺臓炎を発症し得る。化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、これらの十分に対処されていない重篤な呼吸器疾患に対する新規処置となる可能性を有する。
【0098】
胃腸疾患
ＪＡＫ阻害剤として、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、他の種々の疾患にも有用であり得る。化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、種々の胃腸炎症性適応症に有用であり得、それらの適応症としては、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎（直腸Ｓ状結腸炎、汎大腸炎、潰瘍性直腸炎および左側大腸炎）、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、ベーチェット病、セリアック病、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎、回腸炎、好酸球性食道炎、移植片対宿主病関連大腸炎および感染性大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。潰瘍性大腸炎（Ｒｅｉｍｕｎｄら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９６，１６，１４４－１５０）、クローン病（Ｗｏｙｗｏｄｔら、Ｅｕｒ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９９，１１，２６７－２７６）、コラーゲン蓄積大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３，５５，３５５－３６４）、リンパ球性大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、２０１３）、好酸球性食道炎（Ｗｅｉｎｂｒａｎｄ－Ｇｏｉｃｈｂｅｒｇら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ，２０１３，５６，２４９－２６０）、移植片対宿主病関連大腸炎（Ｃｏｇｈｉｌｌら、Ｂｌｏｏｄ，２００１，１１７，３２６８－３２７６）、感染性大腸炎（Ｓｔａｌｌｍａｃｈら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｄｉｓ，２００４，１９，３０８－３１５）、ベーチェット病（Ｚｈｏｕら、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ Ｒｅｖ，２０１２，１１，６９９－７０４）、セリアック病（ｄｅ Ｎｉｔｔｏら、Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００９，１５，４６０９－４６１４）、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎（例えば、ＣＴＬＡ－４阻害剤によって誘発される大腸炎；（Ｙａｎｏら、Ｊ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｍｅｄ，２０１４，１２，１９１）ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤によって誘発される大腸炎）および回腸炎（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｄｉｇ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓ，２００８，４０，２５３－２５９）は、ある特定の炎症促進性サイトカインのレベルの上昇を特徴とする。多くの炎症促進性サイトカインが、ＪＡＫの活性化を介してシグナル伝達するので、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、炎症を軽減することおよび症候の軽減を提供することができ得る。特に、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、潰瘍性大腸炎の緩解の誘導および維持、ならびにクローン病、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎および移植片対宿主病における胃腸有害作用の処置に有用であり得る。ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の胃腸炎症性疾患を処置する方法であって、その方法が、化合物１もしくはその薬学的に許容され得る塩、または薬学的に許容され得るキャリアおよび化合物１もしくはその薬学的に許容され得る塩を含む薬学的組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
ＪＡＫ阻害剤として、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、他の種々の疾患にも有用であり得る。化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、種々の胃腸炎症性適応症に有用であり得、それらの適応症としては、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎（直腸Ｓ状結腸炎、汎大腸炎、潰瘍性直腸炎および左側大腸炎）、クローン病、コラーゲン蓄積大腸炎、リンパ球性大腸炎、ベーチェット病、セリアック病、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎、回腸炎、好酸球性食道炎、移植片対宿主病関連大腸炎および感染性大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。潰瘍性大腸炎（Ｒｅｉｍｕｎｄら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９６，１６，１４４－１５０）、クローン病（Ｗｏｙｗｏｄｔら、Ｅｕｒ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９９，１１，２６７－２７６）、コラーゲン蓄積大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３，５５，３５５－３６４）、リンパ球性大腸炎（Ｋｕｍａｗａｔら、２０１３）、好酸球性食道炎（Ｗｅｉｎｂｒａｎｄ－Ｇｏｉｃｈｂｅｒｇら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ，２０１３，５６，２４９－２６０）、移植片対宿主病関連大腸炎（Ｃｏｇｈｉｌｌら、Ｂｌｏｏｄ，２００１，１１７，３２６８－３２７６）、感染性大腸炎（Ｓｔａｌｌｍａｃｈら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｄｉｓ，２００４，１９，３０８－３１５）、ベーチェット病（Ｚｈｏｕら、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ Ｒｅｖ，２０１２，１１，６９９－７０４）、セリアック病（ｄｅ Ｎｉｔｔｏら、Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００９，１５，４６０９－４６１４）、免疫チェックポイント阻害剤によって誘発される大腸炎（例えば、ＣＴＬＡ－４阻害剤によって誘発される大腸炎；（Ｙａｎｏら、Ｊ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｍｅｄ，２０１４，１２，１９１）ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤によって誘発される大腸炎）および回腸炎（Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｄｉｇ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓ，２００８，４０，２５３－２５９）は、ある特定の炎症促進性サイトカインのレベルの上昇を特徴とする。多くの炎症促進性サイトカインが、ＪＡＫの活性化を介してシグナル伝達するので、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、炎症を軽減することおよび症候の軽減を提供することができ得る。特に、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、潰瘍性大腸炎の緩解の誘導および維持、ならびにクローン病、免疫チェックポイント阻害剤誘発性大腸炎および移植片対宿主病における胃腸有害作用の処置に有用であり得る。ゆえに、１つの態様において、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の胃腸炎症性疾患を処置する方法であって、その方法が、化合物１もしくはその薬学的に許容され得る塩、または薬学的に許容され得るキャリアおよび化合物１もしくはその薬学的に許容され得る塩を含む薬学的組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【0099】
他の疾患
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、他の炎症性疾患、自己免疫疾患または癌などの他の疾患の処置にも有用であり得る。
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、他の炎症性疾患、自己免疫疾患または癌などの他の疾患の処置にも有用であり得る。
【0100】
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、移植片拒絶、眼球乾燥症、乾癬性関節炎、糖尿病、インスリン依存性糖尿病、運動ニューロン疾患、骨髄異形成症候群、疼痛、サルコペニア、悪液質、敗血症性ショック、全身性エリテマトーデス、白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、強直性脊椎炎、骨髄線維症、Ｂ細胞リンパ腫、肝細胞癌腫、ホジキン病、乳癌、多発性骨髄腫、メラノーマ、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣明細胞癌腫、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、真性多血症、シェーグレン症候群、軟部組織肉腫、肉腫、脾腫、Ｔ細胞リンパ腫および重症型サラセミアのうちの１つまたは複数の処置に有用であり得る。
【0101】
併用療法
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、疾患を処置するために、同じ機序または異なる機序によって作用する１つまたはそれより多くの作用物質と併用して使用され得る。それらの異なる作用物質は、別個の組成物または同じ組成物で連続的にまたは同時に投与され得る。併用療法のための作用物質の有用なクラスとしては、抗血管新生、ステロイド、抗炎症、血漿カリクレイン阻害剤、胎盤成長因子リガンド阻害剤、ＶＥＧＦ－Ａリガンド阻害剤、アンジオポエチンリガンド－２阻害剤、タンパク質チロシンホスファターゼベータ阻害剤、Ｔｅｋチロシンキナーゼレセプター刺激物質、カルシニューリン阻害剤、ＶＥＧＦリガンド阻害剤、ｍＴＯＲ複合体１阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＩＬ－１７アンタゴニスト、カルモジュリン調節因子、ＦＧＦレセプターアンタゴニスト、ＰＤＧＦレセプターアンタゴニスト、ＶＥＧＦレセプターアンタゴニスト、ＴＮＦアルファリガンド阻害剤、ＴＮＦ結合剤、プロテオグリカン４刺激物質、ＶＥＧＦ－Ｃリガンド阻害剤、ＶＥＧＦ－Ｄリガンド阻害剤、ＣＤ１２６アンタゴニスト、補体カスケード阻害剤、糖質コルチコイドアゴニスト、補体Ｃ５因子阻害剤、カンナビノイドレセプターアンタゴニスト、スフィンゴシン－１－リン酸レセプター－１調節因子、スフィンゴシン－１－リン酸レセプター－３調節因子、スフィンゴシン－１－リン酸レセプター－４調節因子、スフィンゴシン－１－リン酸レセプター－５調節因子、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤、Ｆｌｔ３チロシンキナーゼ阻害剤、Ｋｉｔチロシンキナーゼ阻害剤、タンパク質キナーゼＣ阻害剤、副腎皮質刺激ホルモンリガンド、間質細胞由来因子１リガンド阻害剤、免疫グロブリンＧ１アゴニスト；インターロイキン－１ベータリガンド阻害剤、ムチン刺激物質；核因子カッパーＢ調節因子、細胞傷害性Ｔ－リンパ球タンパク質－４刺激物質、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ２８阻害剤、リポタンパク質リパーゼ刺激物質；ＰＰＡＲアルファアゴニスト、アデノシンＡ３レセプターアゴニスト、アンジオテンシンＩＩレセプターアンタゴニスト、ＶＥＧＦレセプターアンタゴニスト、インターフェロンベータリガンド、ＳＭＡＤ－２調節因子；ＴＧＦベータ１リガンド阻害剤、ソマトスタチンレセプターアゴニスト、ＩＬ－２レセプターアルファサブユニット阻害剤、ＶＥＧＦ－Ｂリガンド阻害剤、サイモシンベータ４リガンド、アンジオテンシンＩＩ ＡＴ－１レセプターアンタゴニスト、ＣＣＲ２ケモカインアンタゴニスト、膜銅アミンオキシダーゼ阻害剤、ＣＤ１１ａアンタゴニスト、ＩＣＡＭ－１阻害剤、インスリン様成長因子１アンタゴニスト、カリクレイン阻害剤、フコシルトランスフェラーゼ６刺激物質、ＧＤＰフコースシンテターゼ調節因子、ＧＨＲ遺伝子阻害剤、ＩＧＦ１遺伝子阻害剤、ＶＥＧＦ－１レセプターアンタゴニスト、アルブミンアゴニスト、ＩＬ－２アンタゴニスト、ＣＳＦ－１アンタゴニスト；ＰＤＧＦレセプターアンタゴニスト、ＶＥＧＦ－２レセプターアンタゴニスト、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＰＡＲアルファアゴニスト、Ｒｈｏ ＧＴＰａｓｅ阻害剤、Ｒｈｏ結合タンパク質キナーゼ阻害剤、補体Ｃ３阻害剤、ＥＧＲ－１転写因子阻害剤、核赤血球２関連因子調節因子、核因子カッパーＢ阻害剤、インテグリンアルファ－Ｖ／ベータ－３アンタゴニスト、エリトロポイエチンレセプターアゴニスト、グルカゴン様ペプチド１アゴニスト、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ遺伝子刺激物質、アンジオポエチンリガンド－２阻害剤、アルファ－２抗プラスミン阻害剤、コラーゲンアンタゴニスト、フィブロネクチン阻害剤、ラミニンアンタゴニスト、プラスミン刺激物質、神経成長因子リガンド、ＦＧＦ１レセプターアンタゴニスト、ＦＧＦ３レセプターアンタゴニスト、ｉｔｋチロシンキナーゼ阻害剤、Ｌｃｋチロシンキナーゼ阻害剤、Ｌｔｋチロシンキナーゼレセプター阻害剤、ＰＤＧＦレセプターアルファアンタゴニスト、ＰＤＧＦレセプターベータアンタゴニスト、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ－３レセプターアンタゴニスト、膜銅アミンオキシダーゼ阻害剤、ソマトスタチン２レセプターアゴニスト、ソマトスタチン４レセプターアゴニスト、ソマトスタチン５レセプターアゴニスト、タンパク質キナーゼＣアルファ阻害剤、タンパク質キナーゼＣベータ阻害剤、タンパク質キナーゼＣデルタ阻害剤 タンパク質キナーゼＣイプシロン阻害剤 タンパク質キナーゼＣエータ阻害剤、タンパク質キナーゼＣシータ阻害剤、アンキリン調節因子、ムチン刺激物質、Ｐ２Ｙ２プリンレセプターアゴニスト、ギャップ結合アルファ－１タンパク質阻害剤、ＣＣＲ３ケモカインアンタゴニスト；エオタキシンリガンド阻害剤、アミロライド感受性ナトリウムチャネル阻害剤、ＰＤＧＦレセプターアンタゴニスト、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、網膜色素上皮タンパク質阻害剤、マトリクスメタロプロテアーゼ阻害剤、ＰＤＧＦレセプターアンタゴニスト、ＰＤＧＦレセプターベータアンタゴニスト、ＰＤＧＦ－Ｂリガンド阻害剤、成長ホルモンレセプターアンタゴニスト、細胞接着分子阻害剤、インテグリン調節因子、ＣＸＣＲ４ケモカインアンタゴニスト、コイルドコイルドメイン含有タンパク質阻害剤、Ｈｓｐ９０調節因子、Ｒｈｏ結合タンパク質キナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ遺伝子阻害剤、エンドグリン阻害剤、ＣＣＲ３ケモカインアンタゴニスト、ｍａｘｉ Ｋカリウムチャネル調節因子、ｍａｘｉ Ｋカリウムチャネル刺激物質、ＰＧＦ２アルファアゴニスト、プロスタノイドレセプターアゴニスト、電位開口型クロライドチャネル２調節因子、補体Ｃ５ａレセプターアンタゴニスト、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、インターロイキン１８リガンド阻害剤、ＴＲＰカチオンチャネルＭ８刺激物質、ＣＮＴＦレセプターアゴニスト、ＴＲＰＶ１遺伝子阻害剤、デオキシリボヌクレアーゼＩ刺激物質、ＩＲＳ１遺伝子阻害剤、Ｒｈｏ結合タンパク質キナーゼ阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ１阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ２阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ３阻害剤、バニロイドＶＲ１アゴニスト、ＮＦＡＴ５遺伝子刺激物質、ムチン刺激物質、Ｓｙｋチロシンキナーゼ阻害剤、アルファ２アドレノセプターアゴニスト、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、アミロイドタンパク質沈着阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼ－３阻害剤、ＰＡＲＰ刺激物質、タウ沈着阻害剤、ＤＤＩＴ４遺伝子阻害剤、ヘモグロビン合成調節因子、インターロイキン－１ベータリガンド阻害剤、ＴＮＦアンタゴニスト、ＫＣＮＱ電位開口型カリウムチャネル刺激物質、ＮＭＤＡレセプターアンタゴニスト、シクロオキシゲナーゼ１阻害剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５－ＨＴ １ａレセプターアゴニスト、カルシウムチャネル阻害剤、ＦＧＦ－２リガンド調節因子、ホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤、ＣＤ４４アンタゴニスト、ヒアルロニダーゼ調節因子、ヒアルロン酸アゴニスト、ＩＬ－１アンタゴニスト、Ｉ型ＩＬ－１レセプターアンタゴニスト、補体Ｐ因子阻害剤、チューブリンアンタゴニスト、ベータアミロイドアンタゴニスト、ＩＬ２遺伝子刺激物質、Ｉ－カッパーＢキナーゼベータ阻害剤、核因子カッパーＢ調節因子、プラスミノゲンアクチベーター阻害剤１阻害剤、ＦＧＦ－２リガンド、プロテアーゼ調節因子およびコルチコトロピン調節因子が挙げられるが、これらに限定されない。
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩は、疾患を処置するために、同じ機序または異なる機序によって作用する１つまたはそれより多くの作用物質と併用して使用され得る。それらの異なる作用物質は、別個の組成物または同じ組成物で連続的にまたは同時に投与され得る。併用療法のための作用物質の有用なクラスとしては、抗血管新生、ステロイド、抗炎症、血漿カリクレイン阻害剤、胎盤成長因子リガンド阻害剤、ＶＥＧＦ－Ａリガンド阻害剤、アンジオポエチンリガンド－２阻害剤、タンパク質チロシンホスファターゼベータ阻害剤、Ｔｅｋチロシンキナーゼレセプター刺激物質、カルシニューリン阻害剤、ＶＥＧＦリガンド阻害剤、ｍＴＯＲ複合体１阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＩＬ－１７アンタゴニスト、カルモジュリン調節因子、ＦＧＦレセプターアンタゴニスト、ＰＤＧＦレセプターアンタゴニスト、ＶＥＧＦレセプターアンタゴニスト、ＴＮＦアルファリガンド阻害剤、ＴＮＦ結合剤、プロテオグリカン４刺激物質、ＶＥＧＦ－Ｃリガンド阻害剤、ＶＥＧＦ－Ｄリガンド阻害剤、ＣＤ１２６アンタゴニスト、補体カスケード阻害剤、糖質コルチコイドアゴニスト、補体Ｃ５因子阻害剤、カンナビノイドレセプターアンタゴニスト、スフィンゴシン－１－リン酸レセプター－１調節因子、スフィンゴシン－１－リン酸レセプター－３調節因子、スフィンゴシン－１－リン酸レセプター－４調節因子、スフィンゴシン－１－リン酸レセプター－５調節因子、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ阻害剤、Ｆｌｔ３チロシンキナーゼ阻害剤、Ｋｉｔチロシンキナーゼ阻害剤、タンパク質キナーゼＣ阻害剤、副腎皮質刺激ホルモンリガンド、間質細胞由来因子１リガンド阻害剤、免疫グロブリンＧ１アゴニスト；インターロイキン－１ベータリガンド阻害剤、ムチン刺激物質；核因子カッパーＢ調節因子、細胞傷害性Ｔ－リンパ球タンパク質－４刺激物質、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ２８阻害剤、リポタンパク質リパーゼ刺激物質；ＰＰＡＲアルファアゴニスト、アデノシンＡ３レセプターアゴニスト、アンジオテンシンＩＩレセプターアンタゴニスト、ＶＥＧＦレセプターアンタゴニスト、インターフェロンベータリガンド、ＳＭＡＤ－２調節因子；ＴＧＦベータ１リガンド阻害剤、ソマトスタチンレセプターアゴニスト、ＩＬ－２レセプターアルファサブユニット阻害剤、ＶＥＧＦ－Ｂリガンド阻害剤、サイモシンベータ４リガンド、アンジオテンシンＩＩ ＡＴ－１レセプターアンタゴニスト、ＣＣＲ２ケモカインアンタゴニスト、膜銅アミンオキシダーゼ阻害剤、ＣＤ１１ａアンタゴニスト、ＩＣＡＭ－１阻害剤、インスリン様成長因子１アンタゴニスト、カリクレイン阻害剤、フコシルトランスフェラーゼ６刺激物質、ＧＤＰフコースシンテターゼ調節因子、ＧＨＲ遺伝子阻害剤、ＩＧＦ１遺伝子阻害剤、ＶＥＧＦ－１レセプターアンタゴニスト、アルブミンアゴニスト、ＩＬ－２アンタゴニスト、ＣＳＦ－１アンタゴニスト；ＰＤＧＦレセプターアンタゴニスト、ＶＥＧＦ－２レセプターアンタゴニスト、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＰＡＲアルファアゴニスト、Ｒｈｏ ＧＴＰａｓｅ阻害剤、Ｒｈｏ結合タンパク質キナーゼ阻害剤、補体Ｃ３阻害剤、ＥＧＲ－１転写因子阻害剤、核赤血球２関連因子調節因子、核因子カッパーＢ阻害剤、インテグリンアルファ－Ｖ／ベータ－３アンタゴニスト、エリトロポイエチンレセプターアゴニスト、グルカゴン様ペプチド１アゴニスト、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ遺伝子刺激物質、アンジオポエチンリガンド－２阻害剤、アルファ－２抗プラスミン阻害剤、コラーゲンアンタゴニスト、フィブロネクチン阻害剤、ラミニンアンタゴニスト、プラスミン刺激物質、神経成長因子リガンド、ＦＧＦ１レセプターアンタゴニスト、ＦＧＦ３レセプターアンタゴニスト、ｉｔｋチロシンキナーゼ阻害剤、Ｌｃｋチロシンキナーゼ阻害剤、Ｌｔｋチロシンキナーゼレセプター阻害剤、ＰＤＧＦレセプターアルファアンタゴニスト、ＰＤＧＦレセプターベータアンタゴニスト、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ－３レセプターアンタゴニスト、膜銅アミンオキシダーゼ阻害剤、ソマトスタチン２レセプターアゴニスト、ソマトスタチン４レセプターアゴニスト、ソマトスタチン５レセプターアゴニスト、タンパク質キナーゼＣアルファ阻害剤、タンパク質キナーゼＣベータ阻害剤、タンパク質キナーゼＣデルタ阻害剤 タンパク質キナーゼＣイプシロン阻害剤 タンパク質キナーゼＣエータ阻害剤、タンパク質キナーゼＣシータ阻害剤、アンキリン調節因子、ムチン刺激物質、Ｐ２Ｙ２プリンレセプターアゴニスト、ギャップ結合アルファ－１タンパク質阻害剤、ＣＣＲ３ケモカインアンタゴニスト；エオタキシンリガンド阻害剤、アミロライド感受性ナトリウムチャネル阻害剤、ＰＤＧＦレセプターアンタゴニスト、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、網膜色素上皮タンパク質阻害剤、マトリクスメタロプロテアーゼ阻害剤、ＰＤＧＦレセプターアンタゴニスト、ＰＤＧＦレセプターベータアンタゴニスト、ＰＤＧＦ－Ｂリガンド阻害剤、成長ホルモンレセプターアンタゴニスト、細胞接着分子阻害剤、インテグリン調節因子、ＣＸＣＲ４ケモカインアンタゴニスト、コイルドコイルドメイン含有タンパク質阻害剤、Ｈｓｐ９０調節因子、Ｒｈｏ結合タンパク質キナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ遺伝子阻害剤、エンドグリン阻害剤、ＣＣＲ３ケモカインアンタゴニスト、ｍａｘｉ Ｋカリウムチャネル調節因子、ｍａｘｉ Ｋカリウムチャネル刺激物質、ＰＧＦ２アルファアゴニスト、プロスタノイドレセプターアゴニスト、電位開口型クロライドチャネル２調節因子、補体Ｃ５ａレセプターアンタゴニスト、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、インターロイキン１８リガンド阻害剤、ＴＲＰカチオンチャネルＭ８刺激物質、ＣＮＴＦレセプターアゴニスト、ＴＲＰＶ１遺伝子阻害剤、デオキシリボヌクレアーゼＩ刺激物質、ＩＲＳ１遺伝子阻害剤、Ｒｈｏ結合タンパク質キナーゼ阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ１阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ２阻害剤、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ３阻害剤、バニロイドＶＲ１アゴニスト、ＮＦＡＴ５遺伝子刺激物質、ムチン刺激物質、Ｓｙｋチロシンキナーゼ阻害剤、アルファ２アドレノセプターアゴニスト、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、アミロイドタンパク質沈着阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼ－３阻害剤、ＰＡＲＰ刺激物質、タウ沈着阻害剤、ＤＤＩＴ４遺伝子阻害剤、ヘモグロビン合成調節因子、インターロイキン－１ベータリガンド阻害剤、ＴＮＦアンタゴニスト、ＫＣＮＱ電位開口型カリウムチャネル刺激物質、ＮＭＤＡレセプターアンタゴニスト、シクロオキシゲナーゼ１阻害剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５－ＨＴ １ａレセプターアゴニスト、カルシウムチャネル阻害剤、ＦＧＦ－２リガンド調節因子、ホスホイノシチド３－キナーゼ阻害剤、ＣＤ４４アンタゴニスト、ヒアルロニダーゼ調節因子、ヒアルロン酸アゴニスト、ＩＬ－１アンタゴニスト、Ｉ型ＩＬ－１レセプターアンタゴニスト、補体Ｐ因子阻害剤、チューブリンアンタゴニスト、ベータアミロイドアンタゴニスト、ＩＬ２遺伝子刺激物質、Ｉ－カッパーＢキナーゼベータ阻害剤、核因子カッパーＢ調節因子、プラスミノゲンアクチベーター阻害剤１阻害剤、ＦＧＦ－２リガンド、プロテアーゼ調節因子およびコルチコトロピン調節因子が挙げられるが、これらに限定されない。
【0102】
化合物１と併用して使用され得る特定の作用物質としては、ラナデルマブ、アフリベルセプト、ＲＧ－７７１６、ＡＫＢ－９７７８、シクロスポリン、ベバシズマブ、エベロリムス、セクキヌマブ、フルオシノロンアセトニド、ＲＰ－１０１、乳酸スクアラミン、組換えヒトラブリシン、ＯＰＴ－３０２、サリルマブ、デキサメタゾン、エクリズマブ、フィンゴリモド、アダリムマブ、レプロキサラップ（ｒｅｐｒｏｘａｌａｐ）、ミドスタウリン、コルチコトロピン、オラプテセドペゴル（ｏｌａｐｔｅｓｅｄ ｐｅｇｏｌ）、カナキヌマブ、レコフラボン（ｒｅｃｏｆｌａｖｏｎｅ）、アバタセプト、フェノフィブラート、ピクリデノソン（ｐｉｃｌｉｄｅｎｏｓｏｎ）、ＯｐＲｅｇｅｎ、カンデサルタン（ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ）、ゴリムマブ、ペガプタニブ、インターフェロン－ベータ、ジシテルチド（ｄｉｓｉｔｅｒｔｉｄｅ）、酢酸オクトレオチド、アネコルタブ、バシリキシマブ、脈絡膜上トリアムシノロンアセトニド、ＲＧＮ－２５９、ジフルプレドナート、ＨＬ－０３６、アバシンカプタドペゴルナトリウム（ａｖａｃｉｎｃａｐｔａｄ ｐｅｇｏｌ ｓｏｄｉｕｍ）、イルベサルタン、プロパゲルマニウム、トリアムシノロンアセトニド、アジスロマイシン、ＢＩ－１４６７３３５、リフィテグラスト、エタボン酸ロテプレドノール、テプロツムマブ、ＫＶＤ－００１、ＴＺ－１０１、アテシドルセン（ａｔｅｓｉｄｏｒｓｅｎ）、Ｎｏｖ－０３、ベバシズマブ、ＡＶＡ－１０１、ＲＵ－１０１、ボクロスポリン（ｖｏｃｌｏｓｐｏｒｉｎ）、ボロラニブ（ｖｏｒｏｌａｎｉｂ）、シロリムス、コリンフェノフィブラート、ＶＸ－２１０、ＡＰＬ－２、ＣＰＣ－５５１、エラミプレチド、ＳＦ－０１６６、シビネチド（ｃｉｂｉｎｅｔｉｄｅ）、エラミプレチド、リラグルチド、ＥＹＳ－６０６、ネスバクマブ（ｎｅｓｖａｃｕｍａｂ）、アフリベルセプト、オクリプラスミン、フィルゴチニブ、セネゲルミン（ｃｅｎｅｇｅｒｍｉｎ）、アジポセル（ａｄｉｐｏｃｅｌｌ）、ブロルシズマブ（ｂｒｏｌｕｃｉｚｕｍａｂ）、ラニビズマブ、アフリベルセプト、パデリポルフィン（ｐａｄｅｌｉｐｏｒｆｉｎ）光線力学的療法、パゾパニブ、ＡＳＰ－８２３２、ベルドレオチド（ｖｅｌｄｏｒｅｏｔｉｄｅ）、ソトラスタウリン（ｓｏｔｒａｓｔａｕｒｉｎ）、アビシパルペゴル、ジカフォソルテトラナトリウム（ｄｉｑｕａｆｏｓｏｌ ｔｅｔｒａｓｏｄｉｕｍ）、ＨＣＢ－１０１９、コンベルセプト（ｃｏｎｂｅｒｃｅｐｔ）、ベルチリムマブ（ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、ＳＨＰ－６５９、ＴＨＲ－３１７、ＡＬＫ－００１、ＰＡＮ－９０８０６、インターフェロンアルファ－２ｂ、フルオシノロン、スニチニブリンゴ酸塩、エミクススタト、ｈＩ－ｃｏｎ１、ＴＢ－４０３、ミノサイクリン、ＭＡ０９－ｈＲＰＥ細胞、ペグプレラニブ（ｐｅｇｐｌｅｒａｎｉｂ）ナトリウム、ペグビソマント、ルミネート（ｌｕｍｉｎａｔｅ）、ブリキサホル（ｂｕｒｉｘａｆｏｒ）、Ｈ－１１２９、カロツキシマブ（ｃａｒｏｔｕｘｉｍａｂ）、ＡＸＰ－１２７５、ラニビズマブ、イソプロピルウノプロストン、テシドルマブ（ｔｅｓｉｄｏｌｕｍａｂ）、腸溶コーティングされたミコフェノール酸ナトリウム、タデキニグ（ｔａｄｅｋｉｎｉｇ）アルファ、トリアムシノロンアセトニド、シクロスポリン、ＳＴ－２６６、ＡＶＸ－０１２、ＮＴ－５０１－ＥＣＴ、チバニシラン（ｔｉｖａｎｉｓｉｒａｎ）、ベルテポルフィン、ドルナーゼアルファ、アガニルセン（ａｇａｎｉｒｓｅｎ）、リパスジル、ルカパリブリン酸塩、ズカプサイシン（ｚｕｃａｐｓａｉｃｉｎ）、テトラチオモリブデート、ジクロフェナク、ＬＨＡ－５１０、ＡＧＮ－１９５２６３、タクロリムス、レバミピド、Ｒ－３４８、ブリモニジン酒石酸塩、ビゾミチン（ｖｉｚｏｍｉｔｉｎ）、Ｔ－８９、ＬＭＥ－６３６、ＢＩ－１０２６７０６、リメキソロン、トブラマイシン、ＴＯＰ－１６３０、タラポルフィン、ブロムフェナクナトリウム、トリアムシノロンアセトニド、ダブネチド（ｄａｖｕｎｅｔｉｄｅ）、エタボン酸ロテプレドノール、ＸＥＤ－６０、ＥＧ－Ｍｉｒｏｔｉｎ、ＡＰＤ－２０９、アデノビル（ａｄｅｎｏｖｉｒ）、ＰＦ－０４５２３６５５、ヒドロキシカルバミド、ナバメペント（ｎａｖａｍｅｐｅｎｔ）、レチナラミン（ｒｅｔｉｎａｌａｍｉｎ）、ＣＮＴＯ－２４７６、ラニビズマブ、フルピルチン、Ｂ２７ＰＤ、Ｓ－６４６２４０、ＧＬＹ－２３０、ヒドララジン、ネパフェナク、ＤｅｘＮＰ、トレハロース、ヒアルロン酸、デキサメタゾン－Ｃａ徐放性デポ剤、ナルゾタン（ｎａｌｕｚｏｔａｎ）、ヒアルロニダーゼ、ヒアルロン酸ナトリウム、イスナキンラ（ｉｓｕｎａｋｉｎｒａ）、ソマトスタチン、ＣＬＧ－５６１、ＯＣ－１０Ｘ、ＵＣＡ－００２、組換えヒト上皮成長因子、ペミロラスト、ＶＭ－１００、ＭＢ－１１３１６、アルファルミノール一ナトリウム、ラニビズマブ、ＩＭＤ－１０４１、ＬＭＧ－３２４、ＨＥ－１０、シンヒアルロン酸ナトリウム（ｃｉｎｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ）、ＢＤＭ－Ｅ、間葉系前駆細胞、ジスルフィラム、ＣＴＣ－９６、ＰＧ－１０１、Ｂｅｉｆｕｓｈｕ、キモトリプシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【0103】
化合物１またはその薬学的に許容され得る塩および１つまたはそれより多くの他の治療剤を含む薬学的組成物も本明細書中に提供される。その治療剤は、上記で特定された作用物質のクラスおよび上に記載された特定の作用物質のリストから選択され得る。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、眼への送達に適している。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、液体または懸濁液の組成物である。
【0104】
さらに、方法の態様において、本発明は、哺乳動物の疾患または障害を処置する方法であって、化合物１またはその薬学的に許容され得る塩および１つまたはそれより多くの他の治療剤を哺乳動物に投与する工程を含む、方法を提供する。
【0105】
それらの作用物質は、併用療法において使用されるとき、単一の薬学的組成物として製剤化されてもよいし、それらの作用物質は、同時にまたは別々の時点において同じまたは異なる投与経路によって投与される別個の組成物として提供されてもよい。そのような組成物は、別々に包装されてもよいし、キットとして一緒に包装されてもよい。キットの中の２つまたはそれより多くの治療剤は、同じ投与経路によって投与されてもよいし、異なる投与経路によって投与されてもよい。
【実施例】
【0106】
以下の合成および生物学の実施例は、本発明を例証するために提供されるのであって、決して本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。下記の実施例では、以下の省略形は、別段示されない限り、以下の意味を有する。下記に定義されない省略形は、それらの一般に認められている意味を有する。
ＡＣＮ ＝アセトニトリル
Ｂｏｃ ＝ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ＤＣＣ ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ ＝Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡｃ ＝ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ ＝Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ＝ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ ＝酢酸エチル
ＨＡＴＵ ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＬＤＡ ＝リチウムジイソプロピルアミド
ｍｉｎ ＝分
ＭＴＢＥ ＝メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル
ＮＢＳ ＝Ｎ－ブロモスクシンイミド
ＮＭＰ ＝Ｎ－メチル－２－ピロリドン
ＲＴ ＝室温
ＴＨＦ ＝テトラヒドロフラン
ビス（ピナコラト）ジボロン ＝４，４，５，５，４’，４’，５’，５’－オクタメチル－［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２－ＣＨ２Ｃｌ２ ＝ジクロロメタンとのジクロロ（１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－フェロセン）－ジパラジウム（ＩＩ）錯体
ＡＣＮ ＝アセトニトリル
Ｂｏｃ ＝ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ＤＣＣ ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ ＝Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡｃ ＝ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ ＝Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ＝ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ ＝酢酸エチル
ＨＡＴＵ ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＬＤＡ ＝リチウムジイソプロピルアミド
ｍｉｎ ＝分
ＭＴＢＥ ＝メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル
ＮＢＳ ＝Ｎ－ブロモスクシンイミド
ＮＭＰ ＝Ｎ－メチル－２－ピロリドン
ＲＴ ＝室温
ＴＨＦ ＝テトラヒドロフラン
ビス（ピナコラト）ジボロン ＝４，４，５，５，４’，４’，５’，５’－オクタメチル－［２，２’］ビ［［１，３，２］ジオキサボロラニル］
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２－ＣＨ２Ｃｌ２ ＝ジクロロメタンとのジクロロ（１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－フェロセン）－ジパラジウム（ＩＩ）錯体
【0107】
試薬および溶媒は、商業的供給業者（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａなど）から購入し、さらに精製せずに使用した。反応混合物の進行は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分析用高速液体クロマトグラフィー（ａｎａｌ．ＨＰＬＣ）および質量分析法によってモニターした。反応混合物は、各反応において具体的に記載されるように後処理した；通常、それらは、抽出および他の精製方法（例えば、温度依存性および溶媒依存性の結晶化および沈殿）によって精製した。さらに、反応混合物は、代表的にはＣ１８またはＢＤＳカラムパッキングおよび従来の溶離剤を用いる、カラムクロマトグラフィーまたは分取ＨＰＬＣによって通例のように精製した。代表的な分取ＨＰＬＣ条件は、下記に記載される。
【0108】
反応生成物の特徴付けは、質量分析法および１Ｈ－ＮＭＲ分光法によって通例のように行った。ＮＭＲ解析の場合、サンプルを重水素化溶媒（例えば、ＣＤ３ＯＤ、ＣＤＣｌ３またはｄ６－ＤＭＳＯ）に溶解させ、標準的な観測条件下でＶａｒｉａｎ Ｇｅｍｉｎｉ ２０００装置（４００ＭＨｚ）を用いて１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを取得した。化合物の質量分析同定は、自動精製システムに連結された、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のモデルＡＰＩ １５０ ＥＸ装置またはＷａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）の３１００装置を用いるエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＭＳ）によって行った。
分取ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｃ１８、５μｍ．２１．２×１５０ｍｍまたはＣ１８、５μｍ ２１×２５０またはＣ１４、５μｍ ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流速：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ、
注入量：（１００～１５００μＬ）
検出器の波長：２１４ｎｍ
分取ＨＰＬＣ条件
カラム：Ｃ１８、５μｍ．２１．２×１５０ｍｍまたはＣ１８、５μｍ ２１×２５０またはＣ１４、５μｍ ２１×１５０ｍｍ
カラム温度：室温
流速：２０．０ｍＬ／分
移動相：Ａ＝水＋０．０５％ＴＦＡ
Ｂ＝ＡＣＮ＋０．０５％ＴＦＡ、
注入量：（１００～１５００μＬ）
検出器の波長：２１４ｎｍ
【0109】
粗化合物を約５０ｍｇ／ｍＬで１：１水：酢酸に溶解させた。４分間の分析スケールの試験ランを、２．１×５０ｍｍ Ｃ１８カラムを用いて行った後、１５または２０分間の分取スケールのランを、分析スケールの試験ランの％Ｂ保持に基づくグラジエントを伴う１００μＬの注入を用いて行った。正確なグラジエントは、サンプル依存的であった。近くを流れる（ｃｌｏｓｅ ｒｕｎｎｉｎｇ）不純物を含むサンプルは、最善の分離のために２１×２５０ｍｍ Ｃ１８カラムおよび／または２１×１５０ｍｍ Ｃ１４カラムを用いて調べた。所望の生成物を含む画分を質量分析によって特定した。
調製法１：２－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１－５）
（ａ）２－（ベンジルオキシ）－４－ブロモ－１－フルオロベンゼン（１－２）
調製法１：２－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１－５）
【化5】
【0110】
２つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。５－ブロモ－２－フルオロフェノール（１－１）（８５０ｇ，４．５ｍｏｌ）、臭化ベンジル（８３７ｇ，４．９ｍｏｌ）および炭酸カリウム（９２３ｇ，６．７ｍｏｌ）を含むＡＣＮ（５Ｌ）の混合物を、２０℃で１２時間撹拌した。その反応物を合わせ、濃縮し、水（８Ｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×３Ｌ）。有機層を分離し、ブライン（３Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗生成物をシリカゲルパッド（３：１石油エーテル：ＥｔＯＡｃで溶出）に通して精製して、表題中間体（１．８３ｋｇ，７３％収率）を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.38-7.46(m, 5H), 7.15 (dd, J = 7.6, 2.0 Hz, 1H),6.98-7.15 (m, 1H), 5.12 (s, 2H).
（ｂ）２－（ベンジルオキシ）－４－エチル－１－フルオロベンゼン（１－３）
（ｂ）２－（ベンジルオキシ）－４－エチル－１－フルオロベンゼン（１－３）
【0111】
６つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。前の工程の生成物（２００ｇ，７１１ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（１００ｍＬ）の溶液に、炭酸カリウム（１９７ｇ，１．４ｍｏｌ）を加えた。その反応混合物に窒素を３回パージした後、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２－ＣＨ２Ｃｌ２（１１．６ｇ，１４．２ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を０℃に冷却し、ジエチル亜鉛（１Ｍ，１．０７Ｌ）を滴下して加え、その反応混合物を７０℃で１時間撹拌した。その反応物を合わせ、２０℃に冷却し、水（７Ｌ）にゆっくり注ぎ込んだ。その混合物に４Ｍ ＨＣｌ水溶液をｐＨ６になるまで加えた。有機層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで抽出した（３×２Ｌ）。合わせた有機層をブライン（５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、シリカゲルパッド（５０：１石油エーテル：ＥｔＯＡｃで溶出））に通して精製して、表題中間体（９００ｇ，９２％収率）を淡黄色油状物として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.29-7.43(m, 5H), 6.94-6.97 (m, 1H), 6.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.70 (m, 1H), 5.09(s, 2H), 2.52-2.58 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
（ｃ）１－（ベンジルオキシ）－４－ブロモ－５－エチル－２－フルオロベンゼン（１－４）
（ｃ）１－（ベンジルオキシ）－４－ブロモ－５－エチル－２－フルオロベンゼン（１－４）
【0112】
４つの反応を並行して行い、合わせた。２－（ベンジルオキシ）－４－エチル－１－フルオロベンゼン（１－３）（２９３ｇ，１．３ｍｏｌ）を含むＡＣＮ（１Ｌ）の溶液に、ＮＢＳ（２４９ｇ，１．４ｍｏｌ）を小分けにして２０℃において加えた。その反応混合物を２０℃で２時間撹拌した。その反応混合物を合わせ、濃縮した。残渣を水（５Ｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（２×５Ｌ）。有機相をブライン（４Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ１００：１～１０：１で溶出）によって精製して、表題中間体（１．４ｋｇ，８９％収率）を淡黄色油状物として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.29-7.38 (m, 5H), 7.2 (d, J = 10.4 Hz, 1H),6.8 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.06 (s, 2H), 2.6 (q, J = 7.6 Hz, 2 H),1.1 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
（ｄ）２－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１－５）
（ｄ）２－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１－５）
【0113】
７つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。前の工程の生成物（２００ｇ，６４７ｍｍｏｌ）を含むジオキサン（２Ｌ）の溶液に、酢酸カリウム（１９０ｇ，１．９ｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１８１ｇ，７１２ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２－ＣＨ２Ｃｌ２（１０．６ｇ，１２．９ｍｍｏｌ）を窒素下、２０℃において加えた。その混合物を１２０℃で２時間撹拌した。その反応混合物を合わせ、濃縮し、水（５Ｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×４Ｌ）。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ１：０～５：１で溶出）によって精製して、表題化合物（１．３５ｋｇ，８４％収率）を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.33-7.51 (m, 6H), 6.82 (d, J = 7.6 Hz, 1H),5.17 (s, 2H), 2.85 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.33 (s, 12H), 1.15 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
調製法２：１－ベンジル－４－イミノ－１，４－ジヒドロピリジン－３－アミン（２）
調製法２：１－ベンジル－４－イミノ－１，４－ジヒドロピリジン－３－アミン（２）
【化6】
【0114】
ピリジン－３，４－ジアミン（４００ｇ，３．６７ｍｏｌ）を含むＡＣＮ（３Ｌ）の溶液に、臭化ベンジル（５９６ｇ，３．４９ｍｏｌ）を小分けにして０℃において加え、その反応混合物を３０分間撹拌し、次いで、２０℃で１２時間撹拌し、濾過した。濾過ケークをＡＣＮ（５００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、表題化合物のＨＢｒ塩（６００ｇ，２．１４ｍｏｌ，５８％収率）を白色粉末として得た。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ7.83 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.32-7.40 (m, 5H), 6.76 (d, J = 6.8 Hz,1H), 5.28 (s, 2H).
調製法３：６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－カルボアルデヒド（３）
（ａ）１－（４－ブロモ－２，６－ジフルオロフェニル）－２，２－ジエトキシエタン－１－オン（３－１）
調製法３：６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－カルボアルデヒド（３）
【化7】
【0115】
９つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。１－ブロモ－３，５－ジフルオロベンゼン（１００ｇ，５１８ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（７００ｍＬ）の溶液を脱気し、窒素を３回パージした。次いで、２Ｍ ＬＤＡ（３１１ｍＬ）を－７０℃において加え、その反応混合物を窒素下、－７０℃で０．５時間撹拌した。２，２－ジエトキシ酢酸エチル（９６ｇ，５４４ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（２００ｍＬ）の溶液を窒素下、－７０℃で滴下して加え、その反応混合物を１時間撹拌した。その反応物を合わせ、氷上の飽和塩化アンモニウム（１０Ｌ）に小分けにして注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×３Ｌ）。有機層を分離し、ブライン（５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル ＥｔＯＡｃ１：０～１００：１で溶出）によって精製して、表題化合物（１．２６ｋｇ，８４％収率）を黄色油状物として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.12 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 5.15 (s, 1H), 3.61-3.7 (m, 4H), 1.2(t, J = 7.2 Hz, 6H).
（ｂ）１－（４’－（ベンジルオキシ）－２’－エチル－３，５，５’－トリフルオロ－［１，１’－ビフェニル］－４－イル）－２，２－ジエトキシエタン－１－オン（３－２）
（ｂ）１－（４’－（ベンジルオキシ）－２’－エチル－３，５，５’－トリフルオロ－［１，１’－ビフェニル］－４－イル）－２，２－ジエトキシエタン－１－オン（３－２）
【0116】
５つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。１－（４－ブロモ－２，６－ジフルオロフェニル）－２，２－ジエトキシエタン－１－オン（３－１）（１８９ｇ，５８６ｍｍｏｌ）を含むエタノール（１５０ｍＬ）およびトルエン（１．５Ｌ）の混合物に、水（１５０ｍＬ）、炭酸ナトリウム（８４．８ｇ，８００ｍｍｏｌ）および２－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（１－５）（１９０ｇ，５３３ｍｍｏｌ）を２０℃において加えた。その懸濁液を真空下で脱気し、窒素を数回パージした。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２－ＣＨ２Ｃｌ２（１３ｇ，１６ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物に窒素を数回パージし、１２０℃で２時間撹拌した。その反応物を合わせ、２０℃に冷却し、水（５Ｌ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×４Ｌ）。合わせた有機層をブライン（５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ１００：１～５：１で溶出）によって精製して、表題中間体（８８０ｇ，７０％収率）を黄色油状物として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.36-7.48 (m, 5H), 6.94-6.96 (m, 2H), 6.86-6.92 (m, 2H),5.29 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 3.67-3.77 (m, 4H), 2.52 (q, J = 7.6 Hz, 2H),1.25 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.07 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
（ｃ）６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－３－（ジエトキシメチル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール（３－３）
（ｃ）６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－３－（ジエトキシメチル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール（３－３）
【0117】
４つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。前の工程の生成物（２２０ｇ，４６６ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（２Ｌ）の溶液に、ヒドラジン一水和物（４７．６ｇ，９３１ｍｍｏｌ）を２０℃において加えた。その反応混合物を１００℃で１２時間撹拌した。４つの反応物を合わせ、２０℃に冷却し、濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（５Ｌ）に溶解させ、０．１Ｍ ＨＣｌで洗浄した（２×１．５Ｌ）。合わせた有機層をブライン（１．５Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題中間体（９００ｇ，粗）を黄色ゴム状物として得て、それを次の工程で直接使用した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ7.36-7.48 (m, 5H), 6.94-6.96 (m, 2H), 6.86-6.92 (m, 2H),5.29 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 3.67-3.77 (m, 4H), 2.52 (q, J = 7.6 Hz, 2H),1.25 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.07 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
（ｄ）６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－カルボアルデヒド（３）
（ｄ）６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－カルボアルデヒド（３）
【0118】
３つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。前の工程の生成物（３００ｇ，６４３ｍｍｏｌ）を含むアセトン（１．５Ｌ）の溶液に、４Ｍ ＨＣｌ（１６ｍＬ）を２０℃で滴下して加え、その反応混合物を２０℃で０．１７時間撹拌した。その反応物を合わせ、濃縮し、ＭＴＢＥ（１Ｌ）で希釈し、濾過した。濾過ケークをＭＴＢＥで洗浄し（２×３００ｍＬ）、減圧下で乾燥させて、表題中間体（７０５ｇ，粗）を黄色固体として得て、それを次の工程で直接使用した。Ｃ２３Ｈ１８Ｆ２Ｎ２Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値３９３．１３、実測値３９３．１。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ14.51 (s, 1H), 10.17 (d,J = 3.6 Hz, 1H), 7.50(d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.40-7.42 (m, 4H), 7.24 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.15 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H),5.25 (s, 2H), 2.52-2.53 (m, 2H), 1.03 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
調製法４：５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（４）
調製法４：５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（４）
【化8】
【0119】
４つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。調製法３の生成物である６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－カルボアルデヒド（３）（１７２ｇ，４４０ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（１．１Ｌ）の溶液に、重亜硫酸ナトリウム（６８．６ｇ，６５９ｍｍｏｌ）および１－ベンジル－４－イミノ－１，４－ジヒドロピリジン－３－アミン（２）（１３６ｇ，４８４ｍｍｏｌ）を２０℃において加え、その反応混合物を１５０℃で２時間撹拌した。４つの反応物を合わせ、その反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を水（１０Ｌ）に注ぎ込み、濾過した。濾過ケークを減圧下で乾燥させて、表題中間体（９９０ｇ，粗）を黄色固体として得て、それを精製せずに直接使用した。Ｃ３５Ｈ２７Ｆ２Ｎ５Ｏの（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５７２．２、実測値５７２．３。
調製法５：５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（５）
調製法５：５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（５）
【化9】
【0120】
３つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。調製法４の生成物である５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（４）（３３０ｇ，５７７ｍｍｏｌ）を含むメタノール（１．５Ｌ）およびＴＨＦ（１Ｌ）の混合物に、水素化ホウ素ナトリウム（２６７ｇ，６．９ｍｏｌ）を小分けにして２０℃において加え、その反応混合物を２０℃で２４時間撹拌した。３つの反応物を合わせ、その反応混合物を水（１０Ｌ）に加え、１０分間撹拌し、濾過した。濾液をＥｔＯＡｃで抽出し（２×５Ｌ）、合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で希釈し、３０分間撹拌し、濾過した。濾過ケークをＭＴＢＥで洗浄して（３×２００ｍＬ）、表題中間体（２７５ｇ，２８％収率）を淡黄色固体として得た。Ｃ３５Ｈ３１Ｆ２Ｎ５Ｏの（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５７６．２５、実測値５７６．３。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ7.50-7.52 (m, 2H), 7.35-7.43 (m, 7H), 7.23-7.25 (m, 3H),7.15 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5.25 (s,2H), 3.72 (s, 2H), 3.43 (br. s, 2H), 2.78 (br. s, 2H), 2.66 (br. s, 2H), 2.55(q, 2H), 1.04 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
調製法６：５－エチル－２－フルオロ－４－（４－フルオロ－３－（４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（６）
調製法６：５－エチル－２－フルオロ－４－（４－フルオロ－３－（４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（６）
【化10】
【0121】
５つの反応を並行して行い、後処理のために合わせた。調製法５の生成物である５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（５）（５５ｇ，９５．５ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（５００ｍＬ）およびメタノール（５００ｍＬ）の混合物に、炭素担持パラジウム（１５ｇ，９．６ｍｍｏｌ）および１２Ｍ ＨＣｌ水溶液（１０ｍＬ）を加えた。その懸濁液を真空下で脱気し、水素を数回パージし、水素下（５０ｐｓｉ）、５０℃で１２時間撹拌した。その反応物を合わせ、反応混合物を濾過した。濾液を真空下で濃縮して、表題中間体のＨＣｌ塩（１５０ｇ，粗）をオフホワイトの固体として得た。Ｃ２１Ｈ１９Ｆ２Ｎ５Ｏの（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値３９６．１６、実測値３９６．２。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ7.43 (s, 1H), 7.07 (d, J = 11.6Hz, 1H), 6.97 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.8 Hz,1H), 4.57 (s, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.24 (s, 2H), 2.55 (q, J= 7.6 Hz, 2H), 1.08 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
【0122】
実施例１：（１Ｓ，５Ｒ）－２－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン－１－イル（２－（６－（２－エチル－５－フルオロ－４－ヒドロキシフェニル）－４－フルオロ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－６，７－ジヒドロ－３Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５（４Ｈ）－イル）メタノン（１）
５－エチル－２－フルオロ－４－（４－フルオロ－３－（４，５，６，７－テトラヒドロ－３Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（２１．４ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ）（６）および（１ｓ，５ｒ）－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン－１－カルボン酸（２４．６ｍｇ，０．１０８ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（０．５ｍｌ）の混合物に、ＨＡＴＵ（４５．３ｍｇ，０．１１９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０７６ｍｌ，０．４３３ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を室温で１６時間撹拌した。その反応混合物に、ＭｅＯＨ（２．００ｍｌ）および水（０．５００ｍｌ）を加え、次いで、水酸化リチウム（７．７８ｍｇ，０．３２５ｍｍｏｌ）を加え、その溶液を６５℃で１時間撹拌した。次いで、その溶液を濃縮し、残渣にＴＦＡ（０．５００ｍｌ）を加えた。得られた溶液を室温で３０分間撹拌し、次いで、濃縮した。次いで、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを含む５～６５％アセトニトリル水溶液のグラジエント，Ｚｏｒｂａｘ Ｂｏｎｕｓ－ＲＰカラム）によって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（１９．４ｍｇ，５７％収率）。Ｃ２７Ｈ２６Ｆ２Ｎ６Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５０５．１８、実測値５０５．２。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 13.62 (s, 1H), 12.44 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.03 (d,J = 11.9 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.59 (m,2H), 3.96 (m, 1H), 3.79 (m, 1H), 3.27 (m, 1H), 2.89 (m, 1H), 2.72 (m, 2H), 2.47(q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.92 (m, 1H), 1.30 (m, 2H), 1.00 (t, J =7.5, 3H)
調製法７：１－（ベンジルオキシ）－４－ブロモ－５－エチル－２－フルオロベンゼン
（ａ）５－エチル－２－フルオロフェノール
【化11】
調製法７：１－（ベンジルオキシ）－４－ブロモ－５－エチル－２－フルオロベンゼン
【化12】
【0123】
化合物５－ブロモ－２－フルオロフェノール（８０ｇ，４１９ｍｍｏｌ）を含む乾燥テトラヒドロフラン（８００ｍＬ）の混合物を脱気し、窒素を３回パージし、Ｐｄ（ｔ－Ｂｕ３Ｐ）２（４．２８ｇ，８．３８ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物にジエチル亜鉛（１１４ｇ，９２１ｍｍｏｌ）を２５℃で滴下して加え、その反応混合物を窒素下、５０℃で１２時間撹拌し、氷水（１Ｌ）にゆっくり注ぎ込んだ。ＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）を加え、その反応混合物を２０分間撹拌し、濾過した。濾過ケークをＥｔＯＡｃで洗浄した（３×５００ｍＬ）。合わせた有機層をブライン（６００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題中間体（８５ｇ，粗）を黄色油状物として得た。
（ｂ）２－（ベンジルオキシ）－４－エチル－１－フルオロベンゼン
（ｂ）２－（ベンジルオキシ）－４－エチル－１－フルオロベンゼン
【0124】
前の工程の生成物（８５ｇ，６０６ｍｍｏｌ）を含むＡＣＮ（８５０ｍＬ）の溶液に、臭化ベンジル（１２４ｇ，７２８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１２６ｇ，９０９ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を２５℃で１２時間撹拌し、水（１Ｌ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出した（４×５００ｍＬ）。合わせた有機層をブライン（６００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題中間体（１００ｇ）を黄色油状物として得た。
（ｃ）１－（ベンジルオキシ）－４－ブロモ－５－エチル－２－フルオロベンゼン
（ｃ）１－（ベンジルオキシ）－４－ブロモ－５－エチル－２－フルオロベンゼン
【0125】
前の工程の生成物（１００ｇ，４３４ｍｍｏｌ）を含むＡＣＮ（１．０Ｌ）の溶液に、Ｎ－ブロモスクシンイミド（８５ｇ，４７７ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。その反応混合物を２５℃で５時間撹拌し、水（１．３Ｌ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×５００ｍＬ）。合わせた有機層をブライン（８００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（８３ｇ）を黄色油状物として得た。1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ (ppm) 7.27-7.43 (m, 6H), 6.86 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 2.64 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.15 (t, J= 7.2 Hz, 1H).
調製法８：２－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン
調製法８：２－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン
【化13】
【0126】
調製法７の化合物（８３ｇ，２６８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１０２ｇ，４０２ｍｍｏｌ）およびＫＯＡｃ（７９．０ｇ，８０５ｍｍｏｌ）を含むジオキサン（８３０ｍＬ）の混合物を脱気し、窒素を３回パージし、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３．９３ｇ，５．３７ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を窒素下、１２０℃で４時間撹拌した。その混合物を２５℃に冷却し、水（１Ｌ）に注ぎ込み、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×５００ｍＬ）。合わせた有機層をブライン（８００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。その生成物をメタノール（２００ｍＬ）で洗浄し、濾過し、濾過ケークを乾燥させて、表題化合物（６５ｇ）を白色固体として得た。1H NMR (CDCl3,400 MHz) δ (ppm) 7.26-7.42 (m, 5H),6.74 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.08 (s, 2H), 2.76 (q, J = 7.2 Hz, 2H),1.25 (s, 12 H), 1.06 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
調製法９：１－ベンジル－４－イミノ－１，４－ジヒドロピリジン－３－アミン
調製法９：１－ベンジル－４－イミノ－１，４－ジヒドロピリジン－３－アミン
【化14】
【0127】
ピリジン－３，４－ジアミン（２００ｇ，１．８ｍｏｌ）を含むＡＣＮ（１７．０Ｌ）の溶液に、臭化ベンジル（３０６ｇ，１．７９ｍｏｌ）を加え、その反応混合物を１５℃で１２時間撹拌し、濾過し、濾過ケークを真空下で乾燥させて、表題化合物（２５０ｇ）を白色固体として得た。1H NMR (d6-DMSO, 400 MHz) δ (ppm) 8.02 (dd, J =7.2,1.6 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.34-7.41 (m, 5H), 6.79 (d, J = 6.8 Hz, 1H),5.62 (s, 2H), 5.36 (s, 2H).
調製法１０：５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
（ａ）６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル－カルボアルデヒド
調製法１０：５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
【化15】
【0128】
ＮａＮＯ２（７０４ｇ，１０．２ｍｏｌ）を含む水（１Ｌ）の溶液を、６－ブロモ－１Ｈ－インドール（４００ｇ，２．０ｍｏｌ）を含むアセトン（７Ｌ）の溶液に１０℃で滴下して加えた。その反応混合物を１０℃で３０分間撹拌し、内部温度を１０～２５℃に維持しつつ激しく撹拌しながら３Ｍ ＨＣｌ水溶液（４３７ｍＬ）をゆっくり加えた。その溶液を２０℃で３時間撹拌し、温度を３５℃未満に維持しつつ、濃縮した。固体を濾過によって収集した。濾過ケークを１：２石油エーテル：ＭＴＢＥ（８００ｍＬ）で洗浄した。固体を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、表題中間体（４５０ｇ）を黒茶色固体として得た。1H NMR (CH3OD, 400 MHz) δ (ppm) 7.77 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.69 (s,1H), 7.22 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H).
（ｂ）５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
（ｂ）５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
【0129】
６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル－カルボアルデヒド（１５０．０ｇ，６６６ｍｍｏｌ）および１－ベンジル－４－イミノ－１，４－ジヒドロピリジン－３－アミン（１２７．５ｇ，６３９．９ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（７５０ｍＬ）の撹拌溶液に、ＮａＨＳＯ３（８３．２ｇ，７９９．９ｍｍｏｌ）を投入し、その反応混合物を１４０℃で６時間撹拌し、水（３．５Ｌ）に注ぎ込んだ。沈殿物を濾過し、水（１Ｌ）で洗浄して、表題化合物（１８０ｇ）を黒茶色固体として得た。1H NMR (d6-DMSO,400 MHz) δ (ppm) 8.69 (s, 1H) 8.71 (d, J = 7.2 Hz, 1H) 8.37 (d, J= 8.4 Hz, 1H) 8.07 (d, J = 6.4 Hz, 1H) 7.97 (s, 1H) 7.38-7.43(m, 3H)7.50-7.54 (m, 4H) 5.87 (s, 2H).
調製法１１：５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
調製法１１：５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
【化16】
【0130】
５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（２３．０ｇ，５６．９ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ（２００ｍＬ）およびＴＨＦ（１Ｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（１２．９ｇ，３４１．３ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、その反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。酢酸（１０ｅｑ）を加え、その溶液を濃縮乾固し、シリカゲルクロマトグラフィー（３０ｇシリカ，０．１％ＴＥＡを含む０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、表題化合物（６．０ｇ）を得た。1H NMR (d6-DMSO,400 MHz) δ (ppm) 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.28 - 7.37 (m,7H), 3.74 (s, 2H), 3.48 (br.s, 2H), 2.80 (s, 2H), 2.66 (s, 2H).
調製法１２：５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
（ａ）ｔｅｒｔ－ブチル５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－１－カルボキシレート
調製法１２：５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
【化17】
【0131】
２つの反応を並行して行った。５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（８０ｇ，１９６ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１２８ｇ，５８７．８ｍｍｏｌ，１３５ｍＬ）およびＴＥＡ（７９．３ｇ，７８４ｍｍｏｌ，１０９ｍＬ）を含むＤＣＭ（１Ｌ）の懸濁液を２０℃で１２時間撹拌した。その２つの反応懸濁液を合わせ、濃縮乾固し、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ１０：１～０：１）によって精製して、表題中間体（１７０．０ｇ）を得た。
（ｂ）５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
（ｂ）５－ベンジル－２－（６－ブロモ－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
【0132】
２つの反応を並行して行った。前の工程の生成物（８５ｇ，１４０ｍｍｏｌ）および４Ｍ ＨＣｌのＭｅＯＨ溶液（４００ｍＬ）を含むＤＣＭ（４００ｍＬ）の溶液を２５℃で１２時間撹拌した。その反応混合物を合わせ、濃縮乾固し、撹拌しながらＤＣＭ（２５０ｍＬ）を加え、その反応混合物を３０分間撹拌し、濾過した。濾過ケークをＤＣＭで洗浄し（２×２０ｍＬ）、乾燥させて、表題化合物（８５ｇ）をオフホワイトの固体として得た。
（ｃ）５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
（ｃ）５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン
【0133】
８５個の反応を並行して行った。前の工程の生成物（１．０ｇ，２．５ｍｍｏｌ）、２－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン（８７３ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（２２７ｍｇ，１９６．μｍｏｌ）を、水（４ｍＬ）およびジオキサン（１０ｍＬ）の混合物に溶解させた。その反応バイアルに窒素を２分間バブリングし、速やかにＮａ２ＣＯ３（７７９ｍｇ，７．４ｍｍｏｌ）を窒素下で加えた。その反応混合物を１３０℃で１．５時間加熱した。８５個の反応混合物を合わせ、減圧下で濃縮した。残渣をＤＣＭ（５００ｍＬ）に溶解させ、シリカゲルクロマトグラフィー（１５０ｇシリカ，ＤＣＭ：ＴＨＦ（６：１～３：１）で溶出）によって精製して、化合物表題化合物（５０ｇ）をオフホワイトの固体として得た。
調製法１３：５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール
調製法１３：５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール
【化18】
【0134】
５－ベンジル－２－（６－（４－（ベンジルオキシ）－２－エチル－５－フルオロフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン（４４．５ｇ，７９．８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（２５ｇ，２．７ｍｍｏｌ，５０％純度）およびＴＦＡ（４４．５ｇ，３９０ｍｍｏｌ，２８．９ｍＬ）を含むＭｅＯＨ（５００ｍＬ）の混合物を水素下（５０Ｐｓｉ）で４時間撹拌し、濾過した。濾液にＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（２５ｇ，２．７ｍｍｏｌ，５０％純度）を加え、得られた懸濁液を水素下（５０Ｐｓｉ）、２５℃で１２時間撹拌した。その懸濁液を、５．５ｇスケールでの前の反応からの懸濁液と合わせ、濾過した。濾過ケークを２０：１ＭｅＯＨ：ＴＦＡで洗浄した（２×２００ｍＬ）。合わせた濾液を濃縮し、残渣に４Ｍ ＨＣｌのＭｅＯＨ溶液（２００ｍＬ）を撹拌しながら加えた。得られた懸濁液を濃縮し、ＭｅＯＨ（８０ｍＬ）でスラリー化し、３０分間撹拌した。白色固体が沈殿した。その固体を濾過し、濾過ケークをＭｅＯＨで洗浄し（２×１０ｍＬ）、真空下で乾燥させて、表題化合物のＨＣｌ塩（２４．８ｇ）をオフホワイトの固体として得た。Ｃ２１Ｈ２０ＦＮ５Ｏの（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値３７８．１７、実測値３７８．１。1H NMR (d6-DMSO,400 MHz) δ (ppm) 8.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.35 (d, J =11.2 Hz, 1H), 6.90 - 6.97 (m, 2H), 4.57 (s, 2H), 3.72 (t, J = 6.0Hz, 2H), 3.22 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.51 (q, J = 7.6 Hz,2H), 1.04 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
【0135】
実施例２：（（１Ｓ，５Ｒ）－２－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン－１－イル）（２－（６－（２－エチル－５－フルオロ－４－ヒドロキシフェニル）－１Ｈ－インダゾール－３－イル）－１，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－５－イル）メタノン Ｃ－１
５－エチル－２－フルオロ－４－（３－（４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－６－イル）フェノール（４．０ｇ，１０．６０ｍｍｏｌ）、（１ｓ，５ｒ）－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン－１－カルボン酸（３．６１ｇ，１５．９０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（７．４０ｍｌ，４２．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６０ｍｌ）に溶解させ、次いで、ＨＡＴＵ（８．０６ｇ，２１．２０ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物を室温で２４時間撹拌した。次いで、ヒドラジン（０．６６５ｍｌ，２１．２０ｍｍｏｌ）を加えて、望まれない副産物を切断し、次いで、反応混合物を約２０ｍＬに濃縮した。次いで、この溶液を２００ｍＬの水に滴下して、生成物を析出させ、次いでそれを濾過によって収集し、真空下で乾燥させた。得られた固体をジオキサン（４０ｍｌ）および水（８ｍｌ）に溶解させ、次いで塩酸，４Ｍのジオキサン溶液（４０ｍｌ，１６０ｍｍｏｌ）を加え、その反応混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、その溶液を凍結し、凍結乾燥し、得られた固体を分取ＨＰＬＣ（５～７０％アセトニトリル／水のグラジエント，Ｃ１８カラム）によって精製して、表題化合物のＴＦＡ塩を得た（２．６９ｇ，４２％収率）。Ｃ２７Ｈ２７ＦＮ６Ｏ２の（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４８７．５５、実測値４８７．７。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 13.15 (s, 1H), 12.42 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.29 (d, J = 8.4 Hz,1H), 7.34 (s, 1H), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 6.88(d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.51 (m, 2H), 3.92 (m, 2H), 3.99 (m, 1H), 2.65 (m, 3H),2.47 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.89 (m, 1H), 1.72 (m, 2H), 0.98 (t, J = 7.5 Hz, 3H),0.89 (m, 2H).
【化19】
【0136】
生物学的アッセイ
化合物１を、以下の生物学的アッセイのうちの１つまたは複数のアッセイにおいて特徴付けた。
化合物１を、以下の生物学的アッセイのうちの１つまたは複数のアッセイにおいて特徴付けた。
【0137】
アッセイ１：生化学的ＪＡＫキナーゼアッセイ
４つのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ ＪＡＫ生化学的アッセイのパネル（ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２）を、通常のキナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ－３５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２および１ｍＭ ＥＧＴＡ）に含めた。組換えＧＳＴタグ化ＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ化ＳＴＡＴ１ペプチド基質をＬｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。
４つのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ ＪＡＫ生化学的アッセイのパネル（ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２）を、通常のキナーゼ反応緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．５、０．０１％Ｂｒｉｊ－３５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２および１ｍＭ ＥＧＴＡ）に含めた。組換えＧＳＴタグ化ＪＡＫ酵素およびＧＦＰタグ化ＳＴＡＴ１ペプチド基質をＬｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。
【0138】
段階希釈した化合物を、それらの４つのＪＡＫ酵素の各々および基質とともに、白色３８４ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）において周囲温度で１時間プレインキュベートした。続いて、ＡＴＰを加えて、１％ＤＭＳＯを含む１０μＬの総体積でキナーゼ反応を開始した。ＪＡＫ１、２、３およびＴｙｋ２に対する最終的な酵素濃度は、それぞれ４．２ｎＭ、０．１ｎＭ、１ｎＭおよび０．２５ｎＭであり；使用された対応するＫｍ
ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭおよび１０μＭであり；基質濃度は、４つすべてのアッセイについて２００ｎＭである。キナーゼ反応を周囲温度で１時間進めた後、ＴＲ－ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（最終濃度１０ｍＭ）およびＴｂ－抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，最終濃度２ｎＭ）の１０μＬ調製物を加えた。そのプレートを周囲温度で１時間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）において読み出した。発光シグナル比（Ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｓｉｇｎａｌｓ）（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
ＡＴＰ濃度は、２５μＭ、３μＭ、１．６μＭおよび１０μＭであり；基質濃度は、４つすべてのアッセイについて２００ｎＭである。キナーゼ反応を周囲温度で１時間進めた後、ＴＲ－ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中のＥＤＴＡ（最終濃度１０ｍＭ）およびＴｂ－抗ｐＳＴＡＴ１（ｐＴｙｒ７０１）抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，最終濃度２ｎＭ）の１０μＬ調製物を加えた。そのプレートを周囲温度で１時間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）において読み出した。発光シグナル比（Ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｓｉｇｎａｌｓ）（５２０ｎｍ／４９５ｎｍ）を記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
【0139】
用量反応解析の場合、パーセント阻害のデータを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ｐＩＣ５０（ＩＣ５０の対数に負号をつけたもの）として表され、続いてＣｈｅｎｇ－Ｐｒｕｓｏｆｆ式を用いてｐＫｉ（解離定数Ｋｉの対数に負号をつけたもの）に変換した。
【0140】
化合物１は、以下の酵素効力を示した。
【表1】
【0141】
アッセイ２：Ｔａｌｌ－１Ｔ細胞におけるＩＬ－２で刺激されるｐＳＴＡＴ５の阻害
インターロイキン－２（ＩＬ－２）で刺激されるＳＴＡＴ５リン酸化の阻害に対する試験化合物の効力を、ＡｌｐｈａＬｉｓａを用いてＴａｌｌ－１ヒトＴ細胞株（ＤＳＭＺ）において測定した。ＩＬ－２は、ＪＡＫ１／３を介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ１／３の細胞効力の尺度を提供する。
インターロイキン－２（ＩＬ－２）で刺激されるＳＴＡＴ５リン酸化の阻害に対する試験化合物の効力を、ＡｌｐｈａＬｉｓａを用いてＴａｌｌ－１ヒトＴ細胞株（ＤＳＭＺ）において測定した。ＩＬ－２は、ＪＡＫ１／３を介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ１／３の細胞効力の尺度を提供する。
【0142】
リン酸化されたＳＴＡＴ５を、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ Ｕｌｔｒａ ｐＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ６９４／６９９）キット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって測定した。Ｔａｌｌ－１細胞株由来のヒトＴ細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿恒温器内において、１５％熱失活ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されたＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、空のウェルに音響学的に分注した。アッセイ培地（１０％ＦＢＳ（ＡＴＣＣ）が補充されたフェノールレッドフリーＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））を分注し（４μＬ／ウェル）、プレートを９００ｒｐｍで１０分間振盪した。細胞を４５，０００細胞／ウェルでアッセイ培地（４μＬ／ウェル）中に播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、予め加温したアッセイ培地（４μＬ）中のＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度３００ｎｇ／ｍＬ）を３０分間加えた。サイトカイン刺激の後、細胞を、１×ＰｈｏｓＳｔｏｐおよびＣｏｍｐｌｅｔｅタブレット（Ｒｏｃｈｅ）を含む６ｕｌの３×ＡｌｐｈａＬｉｓａ溶解緩衝液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で溶解させた。その溶解産物を９００ｒｐｍ、室温（ＲＴ）で１０分間振盪した。リン酸化されたＳＴＡＴ５をｐＳＴＡＴ５ ＡｌｐｈａＬｉｓａキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって測定した。調製されたばかりのアクセプタービーズ混合物を、緑フィルターをかけた１００ルクス未満の光の下で溶解産物（５μＬ）上に分注した。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、手短に遠心し、ＲＴで２時間、暗所にてインキュベートした。緑フィルターをかけた１００ルクス未満の光の下でドナービーズを分注した（５μＬ）。プレートを９００ｒｐｍで２分間振盪し、手短に遠心し、ＲＴで一晩、暗所にてインキュベートした。緑フィルターをかけた１００ルクス未満の光の下でＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用し、６８９ｎｍの励起および５７０ｎｍの発光を用いて、ルミネセンスを測定した。
【0143】
ＩＬ－２に応答した試験化合物の阻害性効力を測定するために、ｐＳＴＡＴ５に結合したビーズの平均発光強度をヒトＴ細胞株において測定した。化合物濃度に対するシグナル強度の阻害曲線の解析から、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値（平均値±標準偏差）として表される。化合物１は、このアッセイにおいて７．８というｐＩＣ５０値を示した。
【0144】
アッセイ３：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＢＥＡＳ－２Ｂ細胞におけるＩＬ－１３によって刺激されるｐＳＴＡＴ６の阻害
ＢＥＡＳ－２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）におけるインターロイキン－１３（ＩＬ－１３，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって誘導されるＳＴＡＴ６リン酸化を測定することによって、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎＪＡＫＩ細胞効力アッセイを行った。抗ＳＴＡＴ６抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に結合体化し、抗ｐＳＴＡＴ６（ｐＴｙｒ６４１）抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。
ＢＥＡＳ－２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）におけるインターロイキン－１３（ＩＬ－１３，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって誘導されるＳＴＡＴ６リン酸化を測定することによって、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎＪＡＫＩ細胞効力アッセイを行った。抗ＳＴＡＴ６抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に結合体化し、抗ｐＳＴＡＴ６（ｐＴｙｒ６４１）抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、ＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。
【0145】
ＢＥＡＳ－２Ｂ細胞を、３７℃の５％ＣＯ２加湿恒温器内にて、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充された５０％ＤＭＥＭ／５０％Ｆ－１２培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で生育した。
アッセイの１日目に、細胞を、２５μＬの培地が入った、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングされた白色３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に７，５００細胞／ウェルの密度で播種し、恒温器内で一晩接着させた。アッセイの２日目に、培地を除去し、試験化合物の用量反応物を含む１２μＬのアッセイ緩衝液（ハンクス平衡塩類溶液／ＨＢＳＳ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン／ＢＳＡ）と交換した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるようにさらに培地で１０００倍希釈した。細胞を３７℃で１時間、試験化合物とインキュベートした後、刺激のために、予め加温した１２μＬのＩＬ－１３（アッセイ緩衝液中８０ｎｇ／ｍｌ）を加えた。３７℃で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液（化合物およびＩＬ－１３を含む）を除去し、１０μＬの細胞溶解緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１％ＳＤＳ、１％ＮＰ－４０、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１．３ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、ならびにＲｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製のＣｏｍｐｌｅｔｅ Ｕｌｔｒａミニプロテアーゼ阻害剤およびＰｈｏｓＳＴＯＰによる補充）。プレートを周囲温度で３０分間振盪した後、検出試薬を加えた。まず、ビオチン－抗ｐＳＴＡＴ６および抗ＳＴＡＴ６結合体化アクセプタービーズの混合物を加え、周囲温度で２時間インキュベートした後、ストレプトアビジン結合体化ドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を加えた。最低２時間のインキュベーションの後、アッセイプレートをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーにおいて読み出した。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎルミネセンスシグナルを記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
アッセイの１日目に、細胞を、２５μＬの培地が入った、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングされた白色３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に７，５００細胞／ウェルの密度で播種し、恒温器内で一晩接着させた。アッセイの２日目に、培地を除去し、試験化合物の用量反応物を含む１２μＬのアッセイ緩衝液（ハンクス平衡塩類溶液／ＨＢＳＳ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳおよび１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン／ＢＳＡ）と交換した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％になるようにさらに培地で１０００倍希釈した。細胞を３７℃で１時間、試験化合物とインキュベートした後、刺激のために、予め加温した１２μＬのＩＬ－１３（アッセイ緩衝液中８０ｎｇ／ｍｌ）を加えた。３７℃で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液（化合物およびＩＬ－１３を含む）を除去し、１０μＬの細胞溶解緩衝液（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１％ＳＤＳ、１％ＮＰ－４０、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１．３ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、ならびにＲｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製のＣｏｍｐｌｅｔｅ Ｕｌｔｒａミニプロテアーゼ阻害剤およびＰｈｏｓＳＴＯＰによる補充）。プレートを周囲温度で３０分間振盪した後、検出試薬を加えた。まず、ビオチン－抗ｐＳＴＡＴ６および抗ＳＴＡＴ６結合体化アクセプタービーズの混合物を加え、周囲温度で２時間インキュベートした後、ストレプトアビジン結合体化ドナービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を加えた。最低２時間のインキュベーションの後、アッセイプレートをＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーにおいて読み出した。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎルミネセンスシグナルを記録し、それを用いて、ＤＭＳＯに基づくパーセント阻害値およびバックグラウンドコントロールを算出した。
【0146】
用量反応解析の場合、パーセント阻害のデータを化合物の濃度に対してプロットし、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、４パラメータのロバストな適合モデルからＩＣ５０値を決定した。結果は、ＩＣ５０値の対数に負号をつけたものであるｐＩＣ５０としても表されることがある。化合物１は、このアッセイにおいて８というｐＩＣ５０値を示した。
【0147】
アッセイ４：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ－２／抗ＣＤ３によって刺激されるＩＦＮγの阻害
インターロイキン－２（ＩＬ－２）／抗ＣＤ３で刺激されるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の阻害に対する試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）において測定した。ＩＬ－２は、ＪＡＫを介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
インターロイキン－２（ＩＬ－２）／抗ＣＤ３で刺激されるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の阻害に対する試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）において測定した。ＩＬ－２は、ＪＡＫを介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【0148】
（１）ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配を用いて健康ドナーのヒト全血から単離した。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２加湿恒温器内において、１０％熱失活ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されたＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した。細胞を、２００，０００細胞／ウェルで培地（５０μＬ）中に播種し、１時間培養した。化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、培地でさらに５００倍希釈した（２×最終アッセイ濃度になるように）。試験化合物の希釈物（１００μＬ／ウェル）を細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、予め加温したアッセイ培地（５０μＬ）中のＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１００ｎｇ／ｍＬ）および抗ＣＤ３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；最終濃度１μｇ／ｍＬ）を２４時間加えた。
【0149】
（２）サイトカイン刺激の後、細胞を５００ｇで５分間遠心分離し、上清を除去し、－８０℃で凍結した。ＩＬ－２／抗ＣＤ３に応答した試験化合物の阻害性効力を測定するために、上清のＩＦＮγ濃度をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。化合物濃度に対するＩＦＮγ濃度の阻害曲線の解析から、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値として表される。化合物１は、このアッセイにおいて６．７というｐＩＣ５０値を示した。
【0150】
アッセイ５：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＬ－２によって刺激されるｐＳＴＡＴ５の阻害
インターロイキン－２（ＩＬ－２）／抗ＣＤ３によって刺激されるＳＴＡＴ５リン酸化の阻害に対する試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを用いて、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中のＣＤ４陽性（ＣＤ４＋）Ｔ細胞において測定した。ＩＬ－２は、ＪＡＫを介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
インターロイキン－２（ＩＬ－２）／抗ＣＤ３によって刺激されるＳＴＡＴ５リン酸化の阻害に対する試験化合物の効力を、フローサイトメトリーを用いて、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中のＣＤ４陽性（ＣＤ４＋）Ｔ細胞において測定した。ＩＬ－２は、ＪＡＫを介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の尺度を提供する。
【0151】
ＣＤ４＋Ｔ細胞を、フィコエリトロビリン（ＰＥ）結合体化抗ＣＤ４抗体（Ｃｌｏｎｅ ＲＰＡ－Ｔ４，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて特定し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７結合体化抗ｐＳＴＡＴ５抗体（ｐＹ６９４，Ｃｌｏｎｅ ４７，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、ＳＴＡＴ５リン酸化を検出した。
【0152】
（１）ＩＬ－２／抗ＣＤ３によるサイトカイン刺激を２４時間の代わりに３０分間行ったこと以外は、アッセイ４のパラグラフ（１）のプロトコルに従った。
【0153】
（２）サイトカイン刺激の後、細胞を、予め加温した固定液（２００μＬ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で３７℃、５％ＣＯ２において１０分間固定し、ＤＰＢＳ緩衝液（１ｍＬ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で２回洗浄し、氷冷ＰｅｒｍＢｕｆｆｅｒＩＩＩ（１０００μＬ，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に４℃で３０分間再度懸濁させた。細胞を２％ＦＢＳのＤＰＢＳ溶液（ＦＡＣＳ緩衝液）で２回洗浄し、次いで、抗ＣＤ４ ＰＥ（１：５０希釈）および抗ＣＤ３抗ＣＤ３Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７（１：５希釈）を含むＦＡＣＳ緩衝液（１００μＬ）に室温において６０分間、暗所にて再度懸濁させた。インキュベーションの後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて解析した。ＩＬ－２／抗ＣＤ３に応答した試験化合物の阻害性効力を測定するために、ｐＳＴＡＴ５の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）をＣＤ４＋Ｔ細胞において測定した。化合物濃度に対するＭＦＩの阻害曲線の解析から、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値として表される。化合物１は、このアッセイにおいて７．７というｐＩＣ５０値を示した。
【0154】
アッセイ６：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：ヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ－６で刺激されるＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）の阻害
インターロイキン－６（ＩＬ－６）で刺激されるＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）産生の阻害に対する試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）において測定した。ＩＬ－６は、ＪＡＫを介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の遠位尺度（ｄｉｓｔａｌ ｍｅａｓｕｒｅ）を提供する。
インターロイキン－６（ＩＬ－６）で刺激されるＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）産生の阻害に対する試験化合物の効力を、ヒト全血（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離されたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）において測定した。ＩＬ－６は、ＪＡＫを介してシグナル伝達するので、このアッセイは、ＪＡＫ細胞効力の遠位尺度（ｄｉｓｔａｌ ｍｅａｓｕｒｅ）を提供する。
【0155】
（１）試験化合物とのインキュベーションまでは、アッセイ４のパラグラフ（１）のプロトコルに従った。本アッセイでは、試験化合物をウェルに加え、インキュベートした後、予め加温したアッセイ培地（５０μＬ）中のＩＬ－６（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；最終濃度１０ｎｇ／ｍｌ）を加えた。
【0156】
（２）４８時間のサイトカイン刺激の後、細胞を５００ｇで５分間遠心分離し、上清を除去し、－８０℃で凍結した。ＩＬ－６に応答した試験化合物の阻害性効力を測定するために、上清のＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）濃度をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。化合物濃度に対するＣＣＬ２／ＭＣＰ－１濃度の阻害曲線の解析から、ＩＣ５０値を決定した。データは、ｐＩＣ５０（負の常用対数ＩＣ５０）値として表される。化合物１は、このアッセイにおいて６．５というｐＩＣ５０値を示した。
【0157】
アッセイ７：薬力学的アッセイ：ラットにおけるＩＬ６によって誘導されるｐＳＴＡＴ３の阻害
試験化合物の単回の硝子体内投与がＩＬ－６によって誘導されるｐＳＴＡＴ３を阻害する能力をラット網膜／脈絡膜ホモジネートにおいて測定した。
試験化合物の単回の硝子体内投与がＩＬ－６によって誘導されるｐＳＴＡＴ３を阻害する能力をラット網膜／脈絡膜ホモジネートにおいて測定した。
【0158】
１０ｍｇ／ｍＬという標的濃度を達成するように化合物１を１％ＨＰＭＣ Ｅ５＋１５％ＨＰβＣＤ，ｐＨ７に溶解することによって、溶液製剤を調製した。雌Ｌｅｗｉｓラットに、ビヒクル、ビヒクル＋ラットＩＬ－６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ；０．５μｇ）、またはＩＬ－６＋化合物の組み合わせ（０．５μｇのＩＬ－６および４５μｇの化合物１）を硝子体内（ＩＶＴ）投与した（片眼につき５μＬ）。ＩＶＴ注射の１時間後に、眼組織を解剖した。網膜／脈絡膜組織をホモジナイズし、ＡｌｐｈａＬｉｓａ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いてｐＳＴＡＴ３レベルを測定した。ＩＬ－６によって誘導されるｐＳＴＡＴ３のパーセント阻害を、ビヒクル群およびＩＬ－６群と比較して計算した。
【0159】
４５μｇ用量の化合物１は、網膜／脈絡膜ホモジネートにおいて、ＩＬ－６によって誘導されるｐＳＴＡＴ３を８４％阻害した。
【0160】
アッセイ８：マウスの肺および血漿の薬物動態
血漿および肺における化合物１の濃度ならびにそれらの比を以下の様式で測定した。Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手したＢＡＬＢ／ｃマウスをこのアッセイに使用した。化合物１を、２０％プロピレングリコールを含むクエン酸緩衝液（ｐＨ４）中に、０．３２４ｍｇ／ｍＬの濃度で、溶液として製剤化した。５０μＬのこの溶液製剤を経口吸引によってマウスの気管に導入した。投与後の様々な時点（０．１６７、２、６時間後）において、血液サンプルを心臓穿刺によって取り出し、そのままの肺をマウスから切除した。血液サンプルをおよそ１２，０００ｒｐｍ、４℃で４分間遠心分離して（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心機，５８０４Ｒ）、血漿を収集した。肺をパッドで乾燥させ（ｐａｄｄｅｄ ｄｒｙ）、計量し、０．６ｍＬの滅菌水中でホモジナイズした。血漿および肺における化合物１の濃度を、試験マトリクスにおける検量線に作成された分析標準に対するＬＣ－ＭＳ解析によって決定した。４３．５μｇ ｈｒ／ｇという肺ＡＵＣ（０～６時間）によって、肺での持続的な曝露が見出された。肺対血漿比を、μｇ ｈｒ／ｇを単位とする肺ＡＵＣとμｇ ｈｒ／ｍＬを単位とする血漿ＡＵＣの比として測定した（ここで、ＡＵＣは、時間に対する試験化合物濃度の曲線下面積として慣例的に定義される）。肺ＡＵＣと血漿ＡＵＣとの比は、５９．６であったことから、血漿と比べて肺の曝露量が多かったことが強調される。
血漿および肺における化合物１の濃度ならびにそれらの比を以下の様式で測定した。Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手したＢＡＬＢ／ｃマウスをこのアッセイに使用した。化合物１を、２０％プロピレングリコールを含むクエン酸緩衝液（ｐＨ４）中に、０．３２４ｍｇ／ｍＬの濃度で、溶液として製剤化した。５０μＬのこの溶液製剤を経口吸引によってマウスの気管に導入した。投与後の様々な時点（０．１６７、２、６時間後）において、血液サンプルを心臓穿刺によって取り出し、そのままの肺をマウスから切除した。血液サンプルをおよそ１２，０００ｒｐｍ、４℃で４分間遠心分離して（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心機，５８０４Ｒ）、血漿を収集した。肺をパッドで乾燥させ（ｐａｄｄｅｄ ｄｒｙ）、計量し、０．６ｍＬの滅菌水中でホモジナイズした。血漿および肺における化合物１の濃度を、試験マトリクスにおける検量線に作成された分析標準に対するＬＣ－ＭＳ解析によって決定した。４３．５μｇ ｈｒ／ｇという肺ＡＵＣ（０～６時間）によって、肺での持続的な曝露が見出された。肺対血漿比を、μｇ ｈｒ／ｇを単位とする肺ＡＵＣとμｇ ｈｒ／ｍＬを単位とする血漿ＡＵＣの比として測定した（ここで、ＡＵＣは、時間に対する試験化合物濃度の曲線下面積として慣例的に定義される）。肺ＡＵＣと血漿ＡＵＣとの比は、５９．６であったことから、血漿と比べて肺の曝露量が多かったことが強調される。
【0161】
アッセイ９：カイノームスクリーニングおよびＧＩＮＩ係数
化合物１およびＣ－１を、それらの選択性プロファイルを評価するために、他のキナーゼに対してスクリーニングした。
化合物１およびＣ－１を、それらの選択性プロファイルを評価するために、他のキナーゼに対してスクリーニングした。
【0162】
キナーゼタグ化Ｔ７ファージ株を、ＢＬ２１株由来の大腸菌宿主において２４ウェルブロックにて並行して生育した。大腸菌を対数期まで生育し、凍結ストックからのＴ７ファージに感染させ（感染効率＝０．４）、溶解するまで、振盪しながら３２℃でインキュベートした（９０～１５０分）。溶解産物を遠心分離し（６，０００×ｇ）、濾過して（０．２μｍ）、細胞残屑を除去した。残っているキナーゼをＨＥＫ－２９３細胞において産生させ、続いて、ｑＰＣＲ検出のためにＤＮＡでタグ化した。
【0163】
ストレプトアビジンでコーティングされた磁気ビーズを室温で３０分間、ビオチン化小分子リガンドで処理して、キナーゼアッセイ用の親和性樹脂を生成した。リガンド結合されたビーズを過剰なビオチンでブロッキングし、ブロッキング緩衝液（ＳｅａＢｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ）、１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、１ｍＭ ＤＴＴ）で洗浄して、未結合のリガンドを除去し、非特異的ファージ結合を減少させた。キナーゼ、リガンド結合された親和性ビーズおよび試験化合物を１×結合緩衝液（２０％ＳｅａＢｌｏｃｋ、０．１７×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、６ｍＭ ＤＴＴ）中で合わせることによって、結合反応物をアセンブルした。試験化合物を１００％ＤＭＳＯ中に４０×ストックとして調製し、アッセイに直接希釈した。すべての反応を、ポリプロピレン３８４ウェルプレートにおいて０．０４ｍｌの最終体積で行った。アッセイプレートを振盪しながら室温で１時間インキュベートし、親和性ビーズを洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄した。次いで、それらのビーズを溶出緩衝液（１×ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．５μＭ非ビオチン化親和性リガンド）に再度懸濁させ、振盪しながら室温で３０分間インキュベートした。溶出物中のキナーゼ濃度をｑＰＣＲによって測定した。
【0164】
化合物を１μＭでスクリーニングし、表２および３における主要なスクリーニング結合相互作用の結果は、「％阻害」（＝１００－（（試験化合物のシグナル－ポジティブコントロールのシグナル）／（（ネガティブコントロールのシグナル）－（ポジティブコントロールのシグナル））×１００）として報告されており、ここで、ネガティブコントロールは、ＤＭＳＯであり、ポジティブコントロールは、コントロール化合物である。
【表2】
【表3】
【0165】
化合物１は、化合物Ｃ－１よりもＥＰＨＢ６、ＫＩＴ、ＰＡＫ４、ＳＲＣ、ＣＤＫ７およびＣＤＫ９に対して有意に低い結合阻害を示すことが見出された。化合物１は、他のいくつかのキナーゼに対しても低い結合阻害を有した。
【0166】
化合物１とＣ－１の両方を３５個の異なるキナーゼに対してスクリーニングした。両化合物に対してＧｉｎｉ係数を測定した。化合物１は、０．６０というＧＩＮＩ係数を有し、化合物Ｃ－１は、０．４６というＧＩＮＩ係数を有した。Ｇｉｎｉ係数は、キナーゼのパネルに対する化合物の選択性を表すために使用される（Ｇｒａｃｚｙｋ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００７，５０，５７７３－５７７９）。より高い数値は、より選択的な化合物に対応する。
【0167】
化合物１と化合物Ｃ－１との間の唯一の構造的差異は、コア上のフルオロ基の存在である。この構造的差異は、化合物のカイノーム選択性に対して重要な影響を及ぼすことが示された。
【0168】
アッセイ１０：細胞生存度アッセイ
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ発光細胞生存能／細胞傷害性アッセイを、通常の生育条件下のＢＥＡＳ－２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）において行った。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ発光細胞生存能／細胞傷害性アッセイを、通常の生育条件下のＢＥＡＳ－２Ｂヒト肺上皮細胞（ＡＴＣＣ）において行った。
【0169】
細胞を、３７℃の５％ＣＯ２加湿恒温器内にて、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充された５０％ＤＭＥＭ／５０％Ｆ－１２培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で生育した。アッセイの１日目に、細胞を、２５μＬの培地が入った、白色３８４ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に５００細胞／ウェルの密度で播種し、恒温器内で一晩接着させた。アッセイの２日目に、試験化合物の用量反応物を含む５μＬの培地を加え、３７℃で４８時間インキュベートした。その後、３０μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ検出液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、オービタルシェーカー上で５分間混合し、さらに１０分間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎリーダーにおいて読み出した。ルミネセンスシグナルを記録し、パーセントＤＭＳＯコントロール値を算出した。
【0170】
用量反応解析の場合、パーセントＤＭＳＯコントロールデータを化合物の濃度に対してプロットして、各データポイントをつなぐ線によって用量反応曲線を作成した。各曲線が１５％阻害閾値を横断する濃度をＣＣ１５と定義する。
【0171】
このアッセイにおいてより高いＣＣ１５値を示す試験化合物は、細胞傷害性を引き起こす可能性が低いと予想される。
【0172】
化合物１は、＜５というｐＣＣ１５（＞１０μＭというＣＣ１５に対応する）を示したのに対して、化合物Ｃ－１は、５．８というｐＣＣ１５（１．５８μＭというＣＣ１５に対応する）を示した。ゆえに、このアッセイに基づくと、化合物１は、細胞傷害性を引き起こす可能性が化合物Ｃ－１よりも有意に低い。
【0173】
化合物１と化合物Ｃ－１との間の唯一の構造的差異は、コア上のフルオロ基の存在である。この構造的差異は、化合物の細胞傷害性に対して重要な影響を及ぼすことが示された。
【0174】
アッセイ１０：細胞ＪＡＫ効力アッセイ：初代ヒト網膜毛細血管内皮細胞におけるＩＬ－６のトランスシグナル伝達によって刺激されるｐ－ＳＴＡＴ３の阻害
ＩＬ－６のトランスシグナル伝達（ＩＬ６＋ｓＩＬ６Ｒα）によって誘導されるＳＴＡＴ３リン酸化の阻害に対する試験化合物の細胞効力を、初代ヒト網膜毛細血管内皮細胞（ＨＲＭＥＣ）において測定した。ＩＬ－６のトランスシグナル伝達は、細胞内でＪＡＫ酵素と結合するＩＬ－６レセプターベータ（ｇｐ１３０）によって媒介される。ｇｐ１３０の会合および二量体化の後、ＪＡＫは、活性化され、直接、ＳＴＡＴ３をリン酸化する。したがって、このアッセイは、ＪＡＫの細胞効力の尺度を提供する。ＨＲＭＥＣ（Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＷＡ）を、Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ＦａｃｔｏｒＴＭ（Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＷＡ）でコーティングされた、組織培養処理済み滅菌平底９６ウェルアッセイプレートに１ウェルあたり１×１０４細胞の密度でプレーティングした。ＨＲＭＥＣ培養物を、３７℃、９５％湿度、５％ＣＯ２において、１０％ウシ胎児血清、Ｃｕｌｔｕｒｅ ＢｏｏｓｔＴＭ成長因子およびＢａｃＯｆｆ（登録商標）抗生物質（Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＷＡ）が補充された培養液中で３日間生育した。試験化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、完全培地中に１．１１×最終アッセイ濃度で調製した。細胞を９０μＬの１．１１×試験化合物と３７℃で１時間インキュベートした後、予め加温したアッセイ培地中の１０μＬの１０×ＩＬ－６／ｓＩＬ６Ｒα（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．；最終濃度５００ｐＭ ＩＬ－６、５ｎＭ ｓＩＬ６Ｒα）を３０分間加えた。刺激の後、上清を除去し、細胞材料を、ホスファターゼ阻害剤（ＰｈｏｓＳＴＯＰＴＭ，Ｒｏｃｈｅ）を含む５０μＬの溶解緩衝液（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）ＵｌｔｒａＴＭアッセイキット，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）中に収集し、解析するまで－８０℃で保存した。試験化合物の阻害性効力を測定するために、ｐ－ＳＴＡＴ３のレベルを、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）ＵｌｔｒａＴＭ ｐ－ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）アッセイキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を製造者の指示に従って使用して測定した。ＩＣ５０値を、試験化合物濃度に対する％ｐ－ＳＴＡＴ３アルファシグナルの阻害曲線から決定した（カーブフィッティングは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７．０を用いて行った）。データは、ｐＩＣ５０（負のｌｏｇ１０（試験化合物濃度））として表される。化合物１は、３つの独立した実験において６．３±０．１というｐＩＣ５０を示した。
ＩＬ－６のトランスシグナル伝達（ＩＬ６＋ｓＩＬ６Ｒα）によって誘導されるＳＴＡＴ３リン酸化の阻害に対する試験化合物の細胞効力を、初代ヒト網膜毛細血管内皮細胞（ＨＲＭＥＣ）において測定した。ＩＬ－６のトランスシグナル伝達は、細胞内でＪＡＫ酵素と結合するＩＬ－６レセプターベータ（ｇｐ１３０）によって媒介される。ｇｐ１３０の会合および二量体化の後、ＪＡＫは、活性化され、直接、ＳＴＡＴ３をリン酸化する。したがって、このアッセイは、ＪＡＫの細胞効力の尺度を提供する。ＨＲＭＥＣ（Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＷＡ）を、Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ＦａｃｔｏｒＴＭ（Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＷＡ）でコーティングされた、組織培養処理済み滅菌平底９６ウェルアッセイプレートに１ウェルあたり１×１０４細胞の密度でプレーティングした。ＨＲＭＥＣ培養物を、３７℃、９５％湿度、５％ＣＯ２において、１０％ウシ胎児血清、Ｃｕｌｔｕｒｅ ＢｏｏｓｔＴＭ成長因子およびＢａｃＯｆｆ（登録商標）抗生物質（Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ ＷＡ）が補充された培養液中で３日間生育した。試験化合物をＤＭＳＯで段階希釈し、次いで、完全培地中に１．１１×最終アッセイ濃度で調製した。細胞を９０μＬの１．１１×試験化合物と３７℃で１時間インキュベートした後、予め加温したアッセイ培地中の１０μＬの１０×ＩＬ－６／ｓＩＬ６Ｒα（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．；最終濃度５００ｐＭ ＩＬ－６、５ｎＭ ｓＩＬ６Ｒα）を３０分間加えた。刺激の後、上清を除去し、細胞材料を、ホスファターゼ阻害剤（ＰｈｏｓＳＴＯＰＴＭ，Ｒｏｃｈｅ）を含む５０μＬの溶解緩衝液（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）ＵｌｔｒａＴＭアッセイキット，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）中に収集し、解析するまで－８０℃で保存した。試験化合物の阻害性効力を測定するために、ｐ－ＳＴＡＴ３のレベルを、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）ＵｌｔｒａＴＭ ｐ－ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）アッセイキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を製造者の指示に従って使用して測定した。ＩＣ５０値を、試験化合物濃度に対する％ｐ－ＳＴＡＴ３アルファシグナルの阻害曲線から決定した（カーブフィッティングは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７．０を用いて行った）。データは、ｐＩＣ５０（負のｌｏｇ１０（試験化合物濃度））として表される。化合物１は、３つの独立した実験において６．３±０．１というｐＩＣ５０を示した。
【0175】
本発明は、その特定の態様または実施形態を参照して説明してきたが、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更が行われ得、等価物で置換され得ることが当業者によって理解される。さらに、適用される特許法および規則によって認められる限りにおいて、本明細書に引用されたすべての刊行物、特許および特許出願は、各文書が個別に参照により本明細書中に援用されるのと同程度に、その全体が参照により本明細書に援用される。
【国際調査報告】