特表 2022-506517 標的指向化二価結合体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-01-17

(54)【発明の名称】標的指向化二価結合体

(51)【国際特許分類】

   C07H 15/18 20060101AFI20220107BHJP

   C07H 15/26 20060101ALI20220107BHJP

【ＦＩ】

C07H15/18 CSP

C07H15/26

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021523919

(86)(22)【出願日】2019-11-04

(85)【翻訳文提出日】2021-06-04

(86)【国際出願番号】 US2019059687

(87)【国際公開番号】W WO2020093053

(87)【国際公開日】2020-05-07

(31)【優先権主張番号】62/755,179

(32)【優先日】2018-11-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】513146871

【氏名又は名称】アルブータス・バイオファーマー・コーポレイション

(74)【代理人】

【識別番号】100139723

【弁理士】

【氏名又は名称】樋口 洋

(74)【代理人】

【識別番号】100116540

【弁理士】

【氏名又は名称】河野 香

(72)【発明者】

【氏名】ヘイズ，ジェイムズ

(72)【発明者】

【氏名】ホーランド，リチャード ジェイ

(72)【発明者】

【氏名】パルマー，ローン ラルフ

(72)【発明者】

【氏名】ウッド，マーク

【テーマコード（参考）】

4C057

【Ｆターム（参考）】

4C057BB02

4C057DD03

4C057JJ19

4C057JJ55

(57)【要約】

本発明は、標的指向性二価部分と核酸と任意選択の連結基とを含む結合体、ならびに結合体の調製に有用な合成中間体及び合成方法、標的指向性二座リガンド及び結合体を含む組成物、ならびに二座結合体によって治療核酸を標的指向化する方法を提供する。結合体は、治療核酸を標的指向化するのに有用である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）の結合体：

【化1】

〔式中、
Ｒ^１は糖であり、
Ｌ^１は、０～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されており、
Ｂは、５～１０員アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、前記５～１０員アリールまたは５～１０員ヘテロアリールは、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
Ｌ^２は、０～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２は糖であり、
Ｌ^３は、非存在、または連結基であり、
Ａは、非存在、３～２０員シクロアルキル、５～２０員アリール、５～２０員ヘテロアリール、または３～２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各Ｒ^Ａは独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－Ｃ_１－２アルキル－ＯＲ^ａ、Ｃ_１－１０アルキル Ｃ_２－１０アルケニル、及びＣ_２－１０アルキニルからなる群から選択され、前記Ｃ_１－１０アルキル Ｃ_２－１０アルケニル、及びＣ_２－１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ及びＣ_１－３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり、
Ｌ^４は、非存在、または連結基であり、
Ｒ^３は核酸であり、
Ｒ^ａは、水素、保護基、固体担体との共有結合、または固体担体に結合している連結基Ｌ^５との結合であり、
Ｌ^５は連結基である〕、
またはその塩。

【請求項2】

Ａが非存在である、請求項１に記載の結合体または塩。

【請求項3】

Ａが、３～２０員シクロアルキル、５～２０員アリール、５～２０員ヘテロアリール、または３～２０員ヘテロシクロアルキルである、請求項１に記載の結合体または塩。

【請求項4】

Ｂが５～１０員アリールである、請求項１～３のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項5】

Ｂがナフチルまたはフェニルである、請求項１～３のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項6】

Ｂがフェニルである、請求項１～３のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項7】

前記基：

【化2】

が、

【化3】

である、請求項１～３のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項8】

Ｂが５～１０員ヘテロアリールである、請求項１～３のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項9】

Ｂが、ピリジル、ピリミジル、キノリル、イソキノリル、イミダゾイル、チアゾリル、ジオキサゾリルまたはオキサゾリルである、請求項１～３のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項10】

前記基：

【化4】

が、

【化5】

である、請求項１～３のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項11】

前記基：

【化6】

が、

【化7】

である、請求項１～３のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項12】

Ｌ^１が、０～２０個の炭素原子を有する二価の非分岐型の飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖が、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されている、請求項１～１１のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項13】

Ｌ^１が、０～１２個の炭素原子を有する二価の非分岐型の飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、または－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項14】

Ｌ^１が、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、または
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－
である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項15】

Ｌ^２が、０～２０個の炭素原子を有する二価の非分岐型の飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖が、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されている、請求項１～１４のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項16】

Ｌ^２が、０～１２個の炭素原子を有する二価の非分岐型の飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、または－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルである、請求項１～１４のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項17】

Ｌ^２が、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、または
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－
である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項18】

Ｒ^１が、

【化8】

〔式中、
ＸはＮＲ^２０であり、Ｙは、－（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^２１、－ＳＯ_２Ｒ^２２、及び－（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^２３Ｒ^２４から選択され；またはＸが－（Ｃ＝Ｏ）－でありＹがＮＲ^２５Ｒ^２６であり；またはＸが－ＮＲ^３７Ｒ^３８でありＹが非存在であり、
Ｒ^２０は水素または（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキルであり、
Ｒ^２１、Ｒ^２２、Ｒ^２３、Ｒ^２４、Ｒ^２５及びＲ^２６は各々独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２７は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、または－Ｆであり、
Ｒ^２８は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、または－Ｆであり、
Ｒ^２９は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、－Ｆ、－Ｎ_３、－ＮＲ^３５Ｒ^３６、またはハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、アリール及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換された５員複素環であり、任意の（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシが、ハロからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意のアリールが、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、アミノ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３５及びＲ^３６は独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており；またはＲ^３５とＲ^３６とがそれらに結合している窒素と一緒になって５～６員ヘテロアリール環を形成しており、前記ヘテロアリール環が、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、アリール及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意のアリール及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが１つ以上の基Ｒ^３９で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３７及びＲ^３８は独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており；またはＲ^３７とＲ^３８とがそれらに結合している窒素と一緒になって、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換された５～８員複素環を形成しており、任意の（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシが、ハロから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３９は独立して、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されている〕
である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項19】

Ｒ^１が、

【化9】

である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項20】

Ｒ^１が、

【化10】

である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項21】

Ｒ^１が、

【化11】

である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項22】

Ｒ^１が、

【化12】

である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項23】

Ｒ^２が、

【化13】

〔式中、
ＸはＮＲ^２０であり、Ｙは、－（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^２１、－ＳＯ_２Ｒ^２２、及び－（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^２３Ｒ^２４から選択され；またはＸが－（Ｃ＝Ｏ）－でありＹがＮＲ^２５Ｒ^２６であり；またはＸが－ＮＲ^３７Ｒ^３８でありＹが非存在であり、
Ｒ^２０は水素または（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキルであり、
Ｒ^２１、Ｒ^２２、Ｒ^２３、Ｒ^２４、Ｒ^２５及びＲ^２６は各々独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２７は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、または－Ｆであり、
Ｒ^２８は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、または－Ｆであり、
Ｒ^２９は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、－Ｆ、－Ｎ_３、－ＮＲ^３５Ｒ^３６、またはハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、アリール及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換された５員複素環であり、任意の（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシが、ハロからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意のアリールが、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、アミノ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３５及びＲ^３６は独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており；またはＲ^３５とＲ^３６とがそれらに結合している窒素と一緒になって５～６員ヘテロアリール環を形成しており、前記ヘテロアリール環が、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、アリール及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意のアリール及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが１つ以上の基Ｒ^３９で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３７及びＲ^３８は独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており；またはＲ^３７とＲ^３８とがそれらに結合している窒素と一緒になって、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換された５～８員複素環を形成しており、任意の（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシが、ハロから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３９は独立して、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されている〕
である、請求項１～２２のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項24】

Ｒ^２が、

【化14】

である、請求項１～２２のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項25】

Ｒ^２が、

【化15】

である、請求項１～２２のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項26】

Ｒ^２が、

【化16】

である、請求項１～２２のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項27】

Ｒ^２が、

【化17】

である、請求項１～２２のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項28】

Ｌ^３が、０～５０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖が、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば、１、２、３または４個）の置換基で任意選択的に置換されている、請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項29】

Ｌ^３が、１～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖が、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば、１、２、３または４個）の置換基で任意選択的に置換されている、請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項30】

Ｌ^３が、１～３０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭素原子の１つ以上が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖が１つ以上のハロまたはオキソ（＝Ｏ）で任意選択的に置換されている、請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項31】

Ｌ^３が、

【化18】

である、請求項１～２７のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項32】

Ｌ^３が、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）－Ｏ－、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－ＮＨ－、または－ＮＨ－（ＳＯ_２）－によってＢに連結されている、請求項１～２７のいずれか１項に記載の化合物または塩。

【請求項33】

Ｌ^４が、０～５０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖が、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば、１、２、３または４個）の置換基で任意選択的に置換されている、請求項１～３２のいずれか１項に記載の化合物または塩。

【請求項34】

Ｌ^４が、１～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖が、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば、１、２、３または４個）の置換基で任意選択的に置換されている、請求項１～３２のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項35】

Ｌ^４が、１～３０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭素原子の１つ以上が任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖が１つ以上のハロまたはオキソ（＝Ｏ）で任意選択的に置換されている、請求項１～３２のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項36】

Ｌ^４が－Ｏ－によってＲ^３に連結されている、請求項１～３２のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項37】

前記基：

【化19】

が、

【化20】

〔式中、各Ｒ’は独立して、Ｃ_１－９アルキル、Ｃ_２－９アルケニルまたはＣ_２－９アルキニルであり、前記Ｃ_１－９アルキル、Ｃ_２－９アルケニルまたはＣ_２－９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで任意選択的に置換されている〕
からなる群から選択される、請求項１及び請求項３～３６のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項38】

前記基：

【化21】

が、

【化22】

〔式中、
各Ｒ’は独立して、Ｃ_１－９アルキル、Ｃ_２－９アルケニルまたはＣ_２－９アルキニルであり、前記Ｃ_１－９アルキル、Ｃ_２－９アルケニルまたはＣ_２－９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで任意選択的に置換されており、
^＊で標示された価数はＬ^３に付いており、
^＊＊で標示された価数はＲ^３に付いている〕
からなる群から選択される、請求項１及び請求項３～３６のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項39】

前記基：

【化23】

が、

【化24】

である、請求項１及び請求項３～３６のいずれか１項に記載の結合体または塩。

【請求項40】

【化25-1】

【化25-2】

【化25-3】

【化25-4】

【化25-5】

〔式中、Ｒ^３は核酸である〕
からなる群から選択される結合体、またはその塩。

【請求項41】

請求項１～４０のいずれか１項に記載の結合体またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項42】

式（Ｉａ）の化合物：

【化26】

〔式中、
Ｒ^１は糖であり、
Ｌ^１は、０～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されており、
Ｂは、５～１０員アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、前記５～１０員アリールまたは５～１０員ヘテロアリールは、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
Ｌ^２は、０～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、前記炭化水素鎖中の前記炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、前記炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２は糖であり、
Ｌ^３は、非存在、または連結基であり、
Ａは、非存在、３～２０員シクロアルキル、５～２０員アリール、５～２０員ヘテロアリール、または３～２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各Ｒ^Ａは独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－Ｃ_１－２アルキル－ＯＲ^ａ、Ｃ_１－１０アルキル Ｃ_２－１０アルケニル、及びＣ_２－１０アルキニルからなる群から選択され、前記Ｃ_１－１０アルキル Ｃ_２－１０アルケニル、及びＣ_２－１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ及びＣ_１－３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり、
Ｌ^４は、非存在、または連結基であり、
Ｒ^３ａは、Ｈ、保護基、合成活性化基、固体担体との共有結合、または固体担体に結合している連結基との結合であり、
Ｒ^ａは、水素、保護基、固体担体との共有結合、または固体担体に結合している連結基Ｌ^５との結合であり、
Ｌ^５は連結基である〕、
またはその塩。

【請求項43】

Ａが非存在である、請求項４２に記載の化合物。

【請求項44】

Ａが、３～２０員シクロアルキル、５～２０員アリール、５～２０員ヘテロアリール、または３～２０員ヘテロシクロアルキルである、請求項４２に記載の化合物。

【請求項45】

Ｒ^３ａがＨである、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の化合物。

【請求項46】

Ｒ^３ａが保護基である、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の化合物。

【請求項47】

前記保護基が、アセテート、トリフラート、メシラートまたはスクシナートである、請求項４６に記載の化合物。

【請求項48】

Ｒ^３ａが合成活性化基である、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の化合物。

【請求項49】

前記合成活性化基が、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰまたはＨＢＴＵから誘導され得るものである、請求項４８に記載の化合物。

【請求項50】

Ｒ^３ａが固体担体との共有結合である、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の化合物。

【請求項51】

Ｒ^３ａが、固体担体に結合している連結基との結合である、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の化合物。

【請求項52】

固体担体に結合している前記連結基が、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－である、請求項５１に記載の化合物。

【請求項53】

【化27-1】

【化27-2】

【化27-3】

【化27-4】

〔式中、Ｐｇは保護基である〕
からなる群から選択される化合物、またはその塩。

【発明の詳細な説明】

【関連出願の相互参照】

【0001】

本特許出願は、２０１８年１１月２日に出願された米国出願第６２／７５５，１７９号に基づく優先権の利益を主張するものであり、参照によりこの出願を本明細書に援用する。

【背景技術】

【0002】

循環糖タンパク質の認識及び輸送におけるアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰｒ）の役割を解明するＡｓｈｗｅｌｌ及びＭｏｒｅｌｌによる発展性のある論文が出て以来、この受容体は集中的な研究の焦点となってきた（非特許文献１）。この受容体は肝細胞の表面における高レベルの発現ゆえに肝臓特異的送達剤の魅力的な標的にされる。この受容体は、Ｎ－アセチルガラクトースアミンと選択的に結合する三価の炭水化物結合ドメインを有する。一般的に受け入れられている法則は、標的指向性リガンドとの結合親和性が以下の順でＧａｌＮａｃ単位の数とともに高くなるということである：６つのＧａｌＮａｃ単位は４つのＧａｌＮａｃ単位よりも大きく、４つのＧａｌＮａｃ単位は３つのＧａｌＮａｃ単位よりも大きく、３つのＧａｌＮａｃ単位は２つのＧａｌＮａｃ単位よりも大きく、２つのＧａｌＮａｃ単位は１つのＧａｌＮａｃ単位よりも大きい（非特許文献２～６）。

【0003】

大抵は多座の標的指向性リガンドの化学合成が必要になり得、結果的に複数（時には２０～３０個）の合成ステップを必要とし得る。これは製造要件及び商品のコストに影響を及ぼす。しかも、ＧａｌＮａｃ／ｓｉＲＮＡ結合体の合成は、固定化コントロールドポアグラス（ＣＰＧ）担体上で行われることが典型的である。担体上の反お応性部位への接近は孔径と関係があり、このため、当該部位に接近する分子の大きさによる悪影響を受ける。標的指向性リガンドの大きさ（単糖単位数、分子量、分子半径など）の増大は担体における積載効率に悪影響を与える。したがって、有用な送達特性を有するが、より簡単に調製される、より安価に調製される、より小さい分子量を有する及び／またはより高い積載効率を有する標的指向性リガンドが今日必要とされている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0004】

【非特許文献1】Ｄ’Ｓｏｕｚａ ｅｔ ａｌ，２０１５，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ，２０３，１２６－１３９

【非特許文献2】Ｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ，２０００，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，３００，８５７－８６５

【非特許文献3】Ｓｐｉｅｓｓ Ｍ，１９９０，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２９，４３，１０００９－１００１８

【非特許文献4】Ｇｒｅｗａｌ Ｐ．，２０１０，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，４７９，２２３－２４１

【非特許文献5】Ｌｅｅ， ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２５８，１，１９９－２０２

【非特許文献6】Ｖａｌｅｎｔｉｊｎ，ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５３，２，７５９－７７０

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

既知の三分岐型及び四分岐型リガンドと比較して標的指向活性が同程度またはより良好である、２つの糖基（例えばＮ－アセチルガラクトサミン部分）を含有する標的指向性二座ＧａｌＮａｃリガンドが同定された。これらの標的指向性二座リガンドは総じてより短い合成経路を有してより高い全体合成効率をもたらす。加えて、それらの分子の大きさがより小さいことはＣＰＧへのより大きな浸透を可能にし、その結果、積載レベルがいくつかの三分岐型及び四分岐型リガンドに比べて３０～５０％高くなる。加えて、標的指向性二座リガンドは三分岐型及び四分岐型リガンドと比較して分析が単純であり、これによってＡＤＭＥ毒性調査及び関係する研究活動は促進され得る。本発明は、標的指向性二座リガンド、これらの標的指向性二座リガンドの核酸結合体、標的指向性二座リガンド及び結合体を含む組成物、ならびに二座結合体によって治療核酸を標的指向化する方法を提供する。

【0006】

一実施形態において本発明は、
式（Ｉ）の結合体：

【化1】

〔式中、
Ｒ^１は糖であり、
Ｌ^１は、０～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されており、
Ｂは、５～１０員アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、当該５～１０員アリールまたは５～１０員ヘテロアリールは、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
Ｌ^２は、０～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２は糖であり、
Ｌ^３は、非存在、または連結基であり、
Ａは、非存在、３～２０員シクロアルキル、５～２０員アリール、５～２０員ヘテロアリール、または３～２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各Ｒ^Ａは独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－Ｃ_１－２アルキル－ＯＲ^ａ、Ｃ_１－１０アルキル Ｃ_２－１０アルケニル、及びＣ_２－１０アルキニルからなる群から選択され、Ｃ_１－１０アルキル Ｃ_２－１０アルケニル、及びＣ_２－１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ及びＣ_１－３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり、
Ｌ^４は、非存在、または連結基であり、
Ｒ^３は核酸であり、
Ｒ^ａは、水素、保護基、固体担体への共有結合、または固体担体に結合している連結基Ｌ^５への結合であり、
Ｌ^５は連結基である〕、
またはその塩を提供する。

【0007】

本発明はまた、本明細書に記載の式Ｉの結合体またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。

【0008】

本発明はまた、式Ｉの結合体を調製するのに有用な、本明細書に開示される合成中間体及び方法を提供する。

【0009】

本発明の他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び図から当業者に明らかとなろう。

【発明を実施するための形態】

【0010】

本明細書中で使用する場合、以下の用語は、特に指定がない限り、それらが属するとみなされる意味を有する。

【0011】

「アルコキシ」及び「アルキルチオ」という用語は、それらの従来の意味で使用され、酸素原子（「オキシ」）またはチオ基を介して分子の残部に結合しているアルキル基を指し、さらにはそのモノハロゲン化及びポリハロゲン化変異体も含む。

【0012】

「アルキル」という用語は、特に指定がない限り、それ自体で、または別の置換基の一部として、指定された炭素原子の数（つまり、Ｃ_１－８は１～８個の炭素を意味する）を有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチルなどが挙げられる。「アルケニル」という用語は、１つ以上の二重結合を有する不飽和アルキルラジカルを指す。同様に、「アルキニル」という用語は、１つ以上の三重結合を有する不飽和アルキルラジカルを指す。そのような不飽和アルキル基の例としては、ビニル、２－プロペニル、クロチル、２－イソペンテニル、２－（ブタジエニル）、２，４－ペンタジエニル、３－（１，４－ペンタジエニル）、エチニル、１－及び３－プロピニル、３－ブチニル、ならびに高級同族体及び異性体が挙げられる。

【0013】

「動物」という用語には、哺乳動物種、例えば、ヒト、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ハムスター、モルモット、ウサギ、家畜動物などが含まれる。

【0014】

本明細書中で使用される「アリール」という用語は、単環式全炭素芳香環、または環の少なくとも１つが芳香環である多環縮合全炭素環系を指す。例えば、ある特定の実施形態では、アリール基は、６～２０個の炭素原子、６～１４個の炭素原子、６～１２個の炭素原子、または６～１０個の炭素原子を有する。アリールにはフェニルラジカルが含まれる。アリールには、約９～２０個の炭素原子を有しており少なくとも１つの環が芳香環でありその他の環が芳香環または非芳香環（例えばシクロアルキル）であり得る多環縮合炭素環系（例えば、２、３または４個の環を含んでいる環系）も含まれる。多環縮合環系の環は、価数要件によって許容される場合に融合結合、スピロ結合及び架橋結合によって互いに連結され得る。上に定義される多環縮合環系の結合点が環系の任意の位置、例えば環の芳香環部分または炭素環部分にあり得ることは理解されるべきである。アリール基の非限定的な例としては、フェニル、インデニル、インダニル、ナフチル、１，２，３，４－テトラヒドロナフチル、アントラセニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0015】

「シクロアルキル」という用語は、３～８個の炭素原子を有する飽和または部分不飽和（非芳香族）全炭素環（すなわち、（Ｃ_３－Ｃ_８）炭素環）を指す。当該用語には、多環縮合型飽和全炭素環系（例えば、２、３または４個の炭素環を含んでいる環系）も含まれる。したがって、炭素環には、二環式炭素環（例えば、約３～１５個の炭素原子、約６～１５個の炭素原子、または約６～１２個の炭素原子を有する二環式炭素環、例えば、ビシクロ［３．１．０］ヘキサン、及びビシクロ［２．１．１］ヘキサン）などの多環式炭素環、及び多環式炭素環（例えば、最大約２０個の炭素原子を有する三環式及び四環式炭素環）が含まれる。多環縮合環系の環は、価数要件によって許容される場合に融合結合、スピロ結合及び架橋結合によって互いに連結され得る。例えば、多環式炭素環は、単一の炭素原子によって互いに連結されてスピロ型連結部を形成していることもあるし（例えば、スピロペンタン、スピロ［４，５］デカンなど）、２つの隣接炭素原子によって互いに連結されて融合型連結部を形成していることもあるし（例えば、デカヒドロナフタレン、ノルサビナン、ノルカランなどの炭素環）、または２つの非隣接炭素原子によって互いに連結されて架橋型連結部を形成していることもある（例えば、ノルボルナン、ビシクロ［２．２．２］オクタンなど）。シクロアルキルの非限定的な例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ピナン及びアダマンタンが挙げられる。

【0016】

「遺伝子」という用語は、ポリペプチドまたは前駆体ポリペプチドの産生に必要な部分長または全長コード配列を含む核酸（例えばＤＮＡまたはＲＮＡ）配列を指す。

【0017】

「遺伝子産物」は、本明細書中で使用される場合、遺伝子の産物、例えば、ＲＮＡ転写産物またはポリペプチドを指す。

【0018】

「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、特に明記しない限り、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味する。

【0019】

本明細書中で使用される「ヘテロアリール」という用語は、炭素以外の原子であって酸素、窒素及び硫黄からなる群から選択される当該原子を環内に少なくとも１つ有する単環式芳香環を指し、「ヘテロアリール」には、そのような芳香環を少なくとも１つ有する多環縮合環系であって以下にさらに説明される当該多環縮合環系も含まれる。したがって、「ヘテロアリール」には、炭素原子が約１～６個であり、酸素、窒素及び硫黄からなる群から選択されるヘテロ原子が約１～４個である、単環式芳香環が含まれる。環が芳香環である限り、硫黄及び窒素原子が酸化形態で存在していてもよい。例示的なヘテロアリール環系としては、ピリジル、ピリミジニル、オキサゾリル及びフリルが挙げられるが、これらに限定されない。「ヘテロアリール」には、上に定義されるヘテロアリール基と、シクロアルキル、アリール、複素環及びヘテロアリールから選択される１つ以上の環とが縮合している多環縮合環系（例えば、２、３または４個の環を含んでいる環系）も含まれる。ヘテロアリールまたはヘテロアリール多環縮合環系との結合点が、ヘテロアリールまたはヘテロアリール多環縮合環系の炭素原子及びヘテロ原子（例えば窒素）を含めた任意の好適な原子であり得ることは理解されるべきである。例示的なヘテロアリールとしては、ピリジル、ピロリル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、チエニル、インドリル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、フリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、キノリル、イソキノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、インダゾリル、キノキサリル及びキナゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0020】

「複素環」という用語は、炭素以外の原子であって酸素、窒素及び硫黄からなる群から選択される当該原子を少なくとも１つ有する飽和または部分不飽和単環を指し、当該用語には、少なくとも１つのそのような飽和または部分不飽和環を有する多環縮合環系であって以下にさらに説明される当該多環縮合環系も含まれる。したがって、当該用語には、環において炭素原子が約１～６個であり、酸素、窒素及び硫黄からなる群から選択されるヘテロ原子が約１～３個である、飽和または部分不飽和単環（例えば、３、４、５、６または７員環）が含まれる。硫黄及び窒素原子がそれらの酸化形態で存在していてもよい。例示的な複素環としては、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル及びピペリジニルが挙げられるが、これらに限定されない。「複素環」という用語には、単一の（上に定義される）複素環と、シクロアルキル、アリール及び複素環から選択される１つ以上の基とが縮合して多環縮合環系を形成したものであり得る多環縮合環系（例えば、２、３または４個の環を含んでいる環系）も含まれる。多環縮合環系の環は、価数要件によって許容される場合に融合結合、スピロ結合及び架橋結合によって互いに連結され得る。多環縮合環系の個々の環が互いに対していかなる順序で連結されていてもよいことは理解されるべきである。（複素環に関して上に定義される）多環縮合環系の結合点が、環の複素環、アリール及び炭素環部分を含めた多環縮合環系の任意の位置であり得ることも、理解されるべきである。一実施形態では、複素環という用語には３～１５員複素環が含まれる。一実施形態では、複素環という用語には３～１０員複素環が含まれる。一実施形態では、複素環という用語には３～８員複素環が含まれる。一実施形態では、複素環という用語には３～７員複素環が含まれる。一実施形態では、複素環という用語には３～６員複素環が含まれる。一実施形態では、複素環という用語には４～６員複素環が含まれる。一実施形態では、複素環という用語には、１～４個のヘテロ原子を含む単環式または二環式の３～１０員複素環が含まれる。一実施形態では、複素環という用語には、１～３個のヘテロ原子を含む単環式または二環式の３～８員複素環複素環が含まれる。一実施形態では、複素環という用語には、１～２個のヘテロ原子を含む単環式または二環式の３～６員複素環が含まれる。一実施形態では、複素環という用語には、１～２個のヘテロ原子を含む単環式の４～６員複素環が含まれる。例示的な複素環としては、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロオキサゾリル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１，２，３，４－テトラヒドロキノリル、ベンゾオキサジニル、ジヒドロオキサゾリル、クロマニル、１，２－ジヒドロピリジニル、２，３－ジヒドロベンゾフラニル、１，３－ベンゾジオキソリル、１，４－ベンゾジオキサニル、スピロ［シクロプロパン－１，１’－イソインドリニル］－３’－オン、イソインドリニル－１－オン、２－オキサ－６－アザスピロ［３．３］ヘプタニル、イミダゾリジン－２－オン イミダゾリジン、ピラゾリジン、ブチロラクタム、バレロラクタム、イミダゾリジノン、ヒダントイン、ジオキソラン、フタルイミド及び１，４－ジオキサンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0021】

「糖」という用語には、単糖、二糖及び三糖が含まれ、これらは全て、任意選択的に置換されたものであり得る。当該用語には、グルコース、スクロース フルクトース、ガラクトース及びリボース、ならびにデオキシ糖、例えばデオキシリボース、ならびにアミノ糖、例えばガラクトサミンが含まれる。糖誘導体は、国際特許出願公開第ＷＯ９６／３４００５号及び第９７／０３９９５号に記載されているように好都合に調製され得る。糖は、エーテル結合、チオエーテル結合（例えば、Ｓ－グリコシド）、アミン窒素（例えば、Ｎ－グリコシド）または炭素－炭素結合（例えば、Ｃ－グリコシド）によって式Ｉの化合物の残部に好都合に繋げられ得る。一実施形態では、糖はエーテル結合によって式Ｉの化合物の残部に好都合に繋げられ得る。

【0022】

本明細書中で使用される「低分子干渉ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」という用語は、ｓｉＲＮＡが標的遺伝子または配列と同じ細胞の中にあるときに（例えばｓｉＲＮＡ配列に対して相補的であるｍＲＮＡの分解を媒介する、または翻訳を阻害することによって）標的遺伝子または配列の発現を低減または阻害することができる二本鎖ＲＮＡ（すなわち二重鎖ＲＮＡ）を指す。ｓｉＲＮＡは、標的遺伝子もしくは配列との実質的もしくは完全な同一性を有する場合もあるし、またはミスマッチの領域（すなわちミスマッチモチーフ）を含む場合もある。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、長さが約１９～２５（二重鎖）ヌクレオチドであり得、好ましくは長さが約２０～２４、２１～２２、または２１～２３（二重鎖）ヌクレオチドである。ｓｉＲＮＡ二重鎖は、約１～約４ヌクレオチド、または約２～約３ヌクレオチドの３’突出部、及び５’リン酸末端を含み得る。ｓｉＲＮＡの例としては、限定されないが、一方の鎖をセンス鎖としもう一方を相補性アンチセンス鎖とする２本の別個の分子鎖から組み立てられた二本鎖ポリヌクレオチド分子が挙げられる。

【0023】

ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡの片方または両方の鎖上の５’及び／または３’突出部は、標的配列（例えばアンチセンサ鎖中の３’突出部）またはその相補鎖（例えばセンス鎖中の３’突出部）との相補性を有する１～４個（例えば、１、２、３または４個）の修飾及び／または非修飾デオキシチミジン（ｔまたはｄＴ）ヌクレオチド、１～４個（例えば、１、２、３または４個）の修飾（例えば２’ＯＭｅ）及び／または非修飾ウリジン（Ｕ）リボヌクレオチド、及び／または１～４個（例えば、１、２、３または４個）の修飾（例えば２’ＯＭｅ）及び／または非修飾リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドを含む。

【0024】

好ましくは、ｓｉＲＮＡは化学合成される。ｓｉＲＮＡは、Ｅ．ｃｏｌｉのＲＮアーゼＩＩＩまたはＤｉｃｅｒを使用したより長いｄｓＲＮＡ（例えば長さ約２５ヌクレオチド超のｄｓＲＮＡ）の切断によっても生成され得る。これらの酵素はｄｓＲＮＡを生物学的に活性なｓｉＲＮＡにプロセシングする（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９９：９９４２－９９４７（２００２）、Ｃａｌｅｇａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９９：１４２３６（２００２）、Ｂｙｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｂｉｏｎ ＴｅｃｈＮｏｔｅｓ，１０（１）：４－６（２００３）、Ｋａｗａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３１：９８１－９８７（２００３）、Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９３：２２６９－２２７１（２００１）、及びＲｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２４３：８２（１９６８）を参照されたい）。好ましくは、ｄｓＲＮＡは長さが少なくとも５０ヌクレオチド～約１００、２００、３００、４００または５００ヌクレオチドである。ｄｓＲＮＡは、１０００、１５００、２０００、５０００ヌクレオチドもの長さ、またはそれを上回る長さがあり得る。ｄｓＲＮＡは、遺伝子転写産物全体、または部分的な遺伝子転写産物をコードし得る。場合によっては，ｓｉＲＮＡは、プラスミドにコードされ得る（例えば、ヘアピンループを有する二重鎖に自動的に折りたたまれる配列として転写される）。

【0025】

「標的遺伝子の発現を阻害する」という語句は、標的遺伝子の発現をサイレンシング、低減または阻害する本発明のｓｉＲＮＡの能力を指す。遺伝子サイレンシングの程度を調べるには、検査試料（例えば、標的遺伝子が発現している関心対象の生物からの生体試料、または標的遺伝子が発現している培養物中の細胞の試料）を、標的遺伝子の発現をサイレンシング、低減または阻害するｓｉＲＮＡと接触させる。検査試料における標的遺伝子の発現を、ｓｉＲＮＡと接触させていない対照試料（例えば、標的遺伝子が発現している関心対象の生物からの生体試料、または標的遺伝子が発現している培養物中の細胞の試料）における標的遺伝子の発現と比較する。対照試料（例えば、標的遺伝子が発現している試料）に１００％の値が与えられ得る。詳しい実施形態では、対照試料（例えば、緩衝液のみ、異なる遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ配列、スクランブルｓｉＲＮＡ配列など）と比較して検査試料の値が約１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％または０％である場合に、標的遺伝子の発現のサイレンシング、阻害または低減が成し遂げられる。好適なアッセイとしては、限定されないが、ドットブロット、ノーザンブロット、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能などの当業者に知られている技術、及び当業者に知られている表現型アッセイを用いる、タンパク質またはｍＲＮＡレベルの試験が挙げられる。

【0026】

ｓｉＲＮＡなどの治療核酸の「有効量」または「治療的有効量」は、所望の効果、例えば、ｓｉＲＮＡの非存在下で検出される正常発現レベルと比較したときの標的配列の発現の阻害を生じさせるのに十分な量である。詳しい実施形態では、対照（例えば、緩衝液のみ、異なる遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ配列、スクランブルｓｉＲＮＡ配列など）と比較して、ｓｉＲＮＡを使用して得られた値が約１００％、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％または０％である場合に、標的遺伝子または標的配列の発現の阻害が成し遂げられる。標的遺伝子または標的配列の発現を測定するのに適したアッセイとしては、例えばドットブロット、ノーザンブロット、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能などの当業者に知られている技術、及び当業者に知られている表現型アッセイを用いる、タンパク質またはｍＲＮＡレベルの試験が挙げられるが、これらに限定されない。

【0027】

本明細書中で使用される「核酸」という用語は、少なくとも２つのヌクレオチド（すなわちデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド）を一本鎖か二本鎖かのどちらかの形態で含有するポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。「ヌクレオチド」は、糖であるデオキシリボース（ＤＮＡ）またはリボース（ＲＮＡ）と、塩基と、リン酸基とを含有する。ヌクレオチドはリン酸基によって繋がり合っている。「塩基」は、プリン及びピリミジンを含むが、これらはさらに、天然化合物であるアデニン、チミン、グアニン、シトシン、ウラシル、イノシン、及び天然の類縁体、ならびにプリン及びピリミジンの合成誘導体が含まれ、これには、限定されないが、新たな反応性基、例えば限定されないがアミン、アルコール、チオール、カルボキシラート及びアルキルハライドを付ける改変形態が含まれる。核酸には、基準となる核酸と同程度の結合特性を有する、合成の、天然に存在する、及び天然に存在しない既知のヌクレオチド類縁体または改変された主鎖残基もしくはリンケージを含有する核酸が含まれる。そのような類縁体、及び／または改変された残基の例としては、限定されないが、ホスホロチオエート、ホスホロアミダート、メチルホスホナート、キラル－メチルホスホナート、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。加えて、核酸は１つ以上のＵＮＡ部分を含み得る。

【0028】

「保護基」という用語は、化合物上の特定の官能基をブロッキングまたは保護するために一般に採用される置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物のアミノ官能性をブロッキングまたは保護する、アミノ基に結合した置換基である。好適なアミノ保護基としては、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ－ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、及び９－フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。同様に、「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ官能性をブロッキングまたは保護する、ヒドロキシ基の置換基を指す。好適な保護基としては、アセチル、シリル及び２，２－ジメトキシプロペンが挙げられる。「カルボキシ保護基」は、カルボキシ官能性をブロッキングまたは保護する、カルボキシ基の置換基を指す。一般的なカルボキシ保護基としては、フェニルスルホニルエチル、シアノエチル、２－（トリメチルシリル）エチル、２－（トリメチルシリル）エトキシメチル、２－（ｐ－トルエンスルホニル）エチル、２－（ｐ－ニトロフェニルスルフェニル）エチル、２－（ジフェニルホスフィノ）－エチル、ニトロエチルなどが挙げられる。保護基及びその使用についての全般的説明については、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ ａｎｄ Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ４^ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００６を参照されたい。

【0029】

「合成活性化基」という用語は、原子に結合してその原子を活性化させてそれと別の反応性基との共有結合を形成させることができる基を指す。合成活性化基の性質は、それが活性化させる原子によって決まり得ることが理解される。例えば、合成活性化基を酸素原子に結合させる場合、合成活性化基は、その酸素原子を活性化させて別の反応性基との結合（例えば、エステル、カルバメートまたはエーテル結合）を形成することになる基である。そのような合成活性化基は既知である。酸素原子に結合させることができる合成活性化基の例としては、アセテート、スクシナート、トリフラート及びメシラートが挙げられるが、これらに限定されない。合成活性化基をカルボン酸の酸素原子に結合させる場合、合成活性化基は、既知のカップリング試薬（例えば、既知のアミドカップリング試薬）から誘導され得る基であり得る。そのようなカップリング試薬は既知である。そのようなカップリング試薬の例としては、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカーボネート（ＥＤＣ）、（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、（１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、無水プロピルホスホン酸溶液（Ｔ３Ｐ）、またはＯ－ベンゾトリアゾール－１－イル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0030】

核酸
「核酸」という用語には、任意のオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが含まれ、６０ヌクレオチド以下の断片は一般にオリゴヌクレオチドと称され、より長い断片はポリヌクレオチドと称される。デオキシリボオリゴヌクレオチドは、デオキシリボースと呼称される五炭糖がこの糖の５’及び３’炭素においてリン酸と共有結合で結び合わされて交互非分岐型ポリマーを形成したものからなる。ＤＮＡは、例えばアンチセンス分子、プラスミドＤＮＡ、事前凝集ＤＮＡ、ＰＣＲ産物、ベクター、発現カセット、キメラ配列、染色体ＤＮＡ、またはこれらの群の派生体及び組合せの形態であり得る。リボオリゴヌクレオチドは、五炭糖がリボースである類似する反復構造からなる。ＲＮＡは、例えば、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、Ｄｉｃｅｒ基質ｄｓＲＮＡ、短鎖ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）、自己増幅ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）及びその組合せの形態であり得る。したがって、本発明との関連において、「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」という用語は、天然に存在する塩基と糖と糖間（主鎖）リンケージとからなるヌクレオチドまたはヌクレオシド単量体のポリマーまたはオリゴマーを指す。「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」という用語には、同様に機能する天然に存在しない単量体またはその一部を含むポリマーまたはオリゴマーも含まれる。そのような改変または置換されたオリゴヌクレオチドは、例えば増強された細胞取込み、低減された免疫原性、及びヌクレアーゼの存在下での向上した安定性などの特性ゆえに、天然形態よりも好まれることが多い。

【0031】

特に示されない限り、特定の核酸配列は、明示的に示された配列だけでなく、その保存的に改変された変異体（例えば、縮重コドン置換体）、対立遺伝子、オーソログ、ＳＮＰ及び相補配列も暗に包含する。具体的には、縮重コドン置換体は、１つ以上の選択された（または全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって得られ得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９：５０８１（１９９１）、Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．，２６０：２６０５－２６０８（１９８５）、Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ，８：９１－９８（１９９４））。

【0032】

ある特定の実施形態では、本明細書に記載の標的指向性二座リガンドは核酸に結合体化され得る。ある特定の実施形態では、核酸は本明細書に記載の核酸である。例えば、本明細書において使用される核酸は、一本鎖ＤＮＡもしくはＲＮＡ、または二本鎖ＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはＤＮＡ－ＲＮＡ混成鎖であり得る。二本鎖ＲＮＡの例は本明細書に記載されており、例えば、ｓｉＲＮＡ及び他のＲＮＡｉ剤、例えばａｉＲＮＡ及び前駆体ｍｉＲＮＡを含む。一本鎖核酸としては、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、成熟ｍｉＲＮＡ、及び３本鎖形成オリゴヌクレオチドが挙げられる。

【0033】

ある特定の実施形態では、核酸はオリゴヌクレオチドである。詳しい実施形態では、オリゴヌクレオチドは長さが約１０～約１００ヌクレオチドの範囲である。関係する様々な実施形態において、一本鎖、二本鎖及び三本鎖のオリゴヌクレオチドはどれも長さが約１０～約６０ヌクレオチド、約１５～約６０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約１５～約３０ヌクレオチド、または約２０～約３０ヌクレオチドの範囲であり得る。

【0034】

ある特定の実施形態では、核酸は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＡ）、Ｄｉｃｅｒ基質ｄｓＲＮＡ、短鎖ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）、自己増幅ＲＮＡ（ｓａ－ＲＮＡ）及びその組合せからなる群から選択される。

【0035】

ある特定の実施形態では、核酸はアンチセンス分子である。ある特定の実施形態では、核酸はｍｉＲＮＡ分子である。ある特定の実施形態では、核酸はｓｉＲＮＡである。好適なｓｉＲＮＡ、ならびにそれを調製するのに有用な方法及び中間体は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０５４４２１号の中で報告されている。

【0036】

標的遺伝子
ある特定の実施形態では、核酸（例えばｓｉＲＮＡ）は、関心対象の遺伝子の翻訳（すなわち発現）を下方制御またはサイレンシングするために使用され得る。関心対象の遺伝子としては、ウイルス感染及び生存に関連する遺伝子、代謝性疾患及び障害（例えば肝疾患及び肝障害）に関連する遺伝子、腫瘍発生及び細胞形質転換（例えば、がん）に関連する遺伝子、血管新生遺伝子、免疫調節因子遺伝子、例えば炎症及び免疫応答に関連するもの、リガンド受容体遺伝子、ならびに神経変性障害に関連する遺伝子が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、関心対象の遺伝子は肝細胞に発現する。

【0037】

ウイルス感染及び生存に関連する遺伝子としては、細胞における結合、侵入及び複製のためにウイルスによって発現するものが挙げられる。特に興味深いのは、慢性ウイルス疾患に関連するウイルス配列である。特に興味深いウイルス配列としては、フィロウイルス、例えばエボラウイルス及びマールブルグウイルス（例えば、Ｇｅｉｓｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，１９３：１６５０－１６５７（２００６）を参照されたい）、アレナウイルス、例えば、ラッサウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス及びサビアウイルス（Ｂｕｃｈｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ：ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｉｎ：ＦＩＥＬＤＳ ＶＩＲＯＬＯＧＹ，Ｋｎｉｐｅ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），４ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（２００１））、インフルエンザウイルス、例えばインフルエンザＡ、Ｂ及びＣウイルス（例えば、Ｓｔｅｉｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅｔ．，３６：３０５－３３２（２００２）、及びＮｅｕｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，８３：２６３５－２６６２（２００２）を参照されたい）、肝炎ウイルス（例えば、Ｈａｍａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，５４３：５１（２００３）、Ｙｏｋｏｔａ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｒｅｐ．，４：６０２（２００３）、Ｓｃｈｌｏｍａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，３７：７６４（２００３）、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１００：２７８３（２００３）、Ｋａｐａｄｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１００：２０１４（２００３）、及びＦＩＥＬＤＳ ＶＩＲＯＬＯＧＹ，Ｋｎｉｐｅ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），４ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（２００１）を参照されたい）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）（Ｂａｎｅｒｊｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，８：６２（２００３）、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７７：７１７４（２００３）、Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎ，ＪＡＭＡ，２８９：１４９４（２００３）、Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１００：１８３（２００３））、ヘルペスウイルス（Ｊｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７７：３３０１（２００３））、ならびにヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７７：６０６６（２００３）、Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２１：６０４１（２００２））の配列が挙げられる。

【0038】

サイレンシングされ得る例示的なフィロウイルス核酸配列としては、構造タンパク質をコードする核酸配列（例えば、ＶＰ３０、ＶＰ３５、核タンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼタンパク質（Ｌ－ｐｏｌ））及び膜結合タンパク質（例えば、ＶＰ４０、糖タンパク質（ＧＰ）、ＶＰ２４）が挙げられるが、これらに限定されない。エボラウイルスの完全ゲノム配列は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＣ＿００２５４９、ＡＹ７６９３６２、ＮＣ＿００６４３２、ＮＣ＿００４１６１、ＡＹ７２９６５４、ＡＹ３５４４５８、ＡＹ１４２９６０、ＡＢ０５０９３６、ＡＦ５２２８７４、ＡＦ４９９１０１、ＡＦ２７２００１及びＡＦ０８６８３３に示されている。エボラウイルスＶＰ２４配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号Ｕ７７３８５及びＡＹ０５８８９７に示されている。エボラウイルスＬ－ｐｏｌ配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号Ｘ６７１１０に示されている。エボラウイルスＶＰ４０配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ０５８８９６に示されている。エボラウイルスＮＰ配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ０５８８９５に示されている。エボラウイルスＧＰ配列は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ０５８８９８、Ｓａｎｃｈｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．，２９：２１５－２４０（１９９３）、Ｗｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６７：１２０３－１２１０（１９９３）、Ｖｏｌｃｈｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，３０５：１８１－１８４（１９９２）、及び米国特許第６，７１３，０６９号に示されている。さらなるエボラウイルス配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号Ｌ１１３６５及びＸ６１２７４に示されている。マールブルグウイルスの完全ゲノム配列は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＣ＿００１６０８、ＡＹ４３０３６５、ＡＹ４３０３６６及びＡＹ３５８０２５に示されている。マールブルグウイルスＧＰ配列は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ００５７３４、ＡＦ００５７３３及びＡＦ００５７３２に示されている。マールブルグウイルスＶＰ３５配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＦ００５７３１及びＡＦ００５７３０に示されている。さらなるマールブルグウイルス配列は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号Ｘ６４４０６、Ｚ２９３３７、ＡＦ００５７３５及びＺ１２１３２に示されている。エボラウイルス及びマールブルグウイルス核酸配列を標的とするｓｉＲＮＡ分子の非限定的な例としては、米国特許公開第２００７０１３５３７０号に記載されているものが挙げられ、参照によりこれの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。

【0039】

サイレンシングされ得る例示的なインフルエンザウイルス核酸配列としては、核タンパク質（ＮＰ）、マトリックスタンパク質（Ｍ１及びＭ２）、非構造タンパク質（ＮＳ１及びＮＳ２）、ＲＮＡポリメラーゼ（ＰＡ、ＰＢ１、ＰＢ２）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）及びヘマグルチニン（ＨＡ）をコードする核酸配列が挙げられるが、これらに限定されない。Ａ型インフルエンザＮＰ配列は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＣ＿００４５２２、ＡＹ８１８１３８、ＡＢ１６６８６３、ＡＢ１８８８１７、ＡＢ１８９０４６、ＡＢ１８９０５４、ＡＢ１８９０６２、ＡＹ６４６１６９、ＡＹ６４６１７７、ＡＹ６５１４８６、ＡＹ６５１４９３、ＡＹ６５１４９４、ＡＹ６５１４９５、ＡＹ６５１４９６、ＡＹ６５１４９７、ＡＹ６５１４９８、ＡＹ６５１４９９、ＡＹ６５１５００、ＡＹ６５１５０１、ＡＹ６５１５０２、ＡＹ６５１５０３、ＡＹ６５１５０４、ＡＹ６５１５０５、ＡＹ６５１５０６、ＡＹ６５１５０７、ＡＹ６５１５０９、ＡＹ６５１５２８、ＡＹ７７０９９６、ＡＹ７９０３０８、ＡＹ８１８１３８及びＡＹ８１８１４０に示されている。Ａ型インフルエンザＰＡ配列は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＹ８１８１３２、ＡＹ７９０２８０、ＡＹ６４６１７１、ＡＹ８１８１３２、ＡＹ８１８１３３、ＡＹ６４６１７９、ＡＹ８１８１３４、ＡＹ５５１９３４、ＡＹ６５１６１３、ＡＹ６５１６１０、ＡＹ６５１６２０、ＡＹ６５１６１７、ＡＹ６５１６００、ＡＹ６５１６１１、ＡＹ６５１６０６、ＡＹ６５１６１８、ＡＹ６５１６０８、ＡＹ６５１６０７、ＡＹ６５１６０５、ＡＹ６５１６０９、ＡＹ６５１６１５、ＡＹ６５１６１６、ＡＹ６５１６４０、ＡＹ６５１６１４、ＡＹ６５１６１２、ＡＹ６５１６２１、ＡＹ６５１６１９、ＡＹ７７０９９５及びＡＹ７２４７８６に示されている。インフルエンザウイルス核酸配列を標的とするｓｉＲＮＡ分子の非限定的な例としては、米国特許公開第２００７０２１８１２２号に記載されているものが挙げられ、参照によりこれの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。

【0040】

サイレンシングされ得る例示的な肝炎ウイルス核酸配列としては、転写及び翻訳に関与する核酸配列（例えば、Ｅｎ１、Ｅｎ２、Ｘ、Ｐ）、ならびに構造タンパク質（例えば、Ｃ及びＣ関連タンパク質を含めたコアタンパク質、Ｓ、Ｍ及び／またはＬタンパク質を含めたカプシド及びエンベロープタンパク質、またはその断片）をコードする核酸配列が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、上記ＦＩＥＬＤＳ ＶＩＲＯＬＯＧＹを参照されたい）。サイレンシングされ得る例示的なＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）核酸配列としては、５’非翻訳領域（５’－ＵＴＲ）、３’－非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）、ポリプロテイン翻訳開始コドン領域、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列、及び／またはコアタンパク質、Ｅ１タンパク質、Ｅ２タンパク質、ｐ７タンパク質、ＮＳ２タンパク質、ＮＳ３プロテアーゼ／ヘリカーゼ、ＮＳ４Ａタンパク質、ＮＳ４Ｂタンパク質、ＮＳ５Ａタンパク質及び／またはＮＳ５Ｂ ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸配列が挙げられるが、これらに限定されない。ＨＣＶゲノム配列は、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＣ＿００４１０２（ＨＣＶ遺伝子型１ａ）、ＡＪ２３８７９９（ＨＣＶ遺伝子型１ｂ）、ＮＣ＿００９８２３（ＨＣＶ遺伝子型２）、ＮＣ＿００９８２４（ＨＣＶ遺伝子型３）、ＮＣ＿００９８２５（ＨＣＶ遺伝子型４）、ＮＣ＿００９８２６（ＨＣＶ遺伝子型５）、及びＮＣ＿００９８２７（ＨＣＶ遺伝子型６）に示されている。Ａ型肝炎ウイルス核酸配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＣ＿００１４８９に示されている。Ｂ型肝炎ウイルス核酸配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＣ＿００３９７７に示されており、Ｄ型肝炎ウイルス核酸配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＣ＿００１６５３に示されており、Ｅ型肝炎ウイルス核酸配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＣ＿００１４３４に示されており、Ｇ型肝炎ウイルス核酸配列は例えばＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＣ＿００１７１０に示されている。ウイルス感染及び生存に関連する遺伝子をコードする配列のサイレンシングは、ウイルス性の症状を治療するために使用される従来の薬剤の投与と組み合わせて好都合に用いられ得る。肝炎ウイルス核酸配列を標的とするｓｉＲＮＡ分子の非限定的な例としては、米国特許公開第２００６０２８１１７５号、第２００５００５８９８２号及び第２００７０１４９４７０号、米国特許第７，３４８，３１４号、ならびに２００９年３月２０日に出願された米国仮出願第６１／１６２，１２７号に記載されているものが挙げられ、参照によりこれらの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。

【0041】

代謝性疾患及び障害（例えば、肝臓が標的となる障害、ならびに肝疾患及び肝障害）に関連する遺伝子としては、例えば、脂質異常症（例えば、肝臓Ｘ受容体、例えばＬＸＲα及びＬＸＲβ（Ｇｅｎｂａｃｋ受託番号ＮＭ＿００７１２１）、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００５１２３）、ステロール調節エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）、ｓｉｔｅ－１プロテアーゼ（ＳＩＰ）、３－ヒドロキシ－３－メチルグルタリル補酵素Ａ還元酵素（ＨＭＧ補酵素Ａ還元酵素）、アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００３８４）、アポリポタンパク質ＣＩＩＩ（ＡｐｏＣ３）（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００００４０及びＮＧ＿００８９４９ ＲＥＧＩＯＮ：５００１．８１６４）、及びアポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００００４１及びＮＧ＿００７０８４ ＲＥＧＩＯＮ：５００１．８６１２））、及び糖尿病（例えば、グルコース６－ホスファターゼ）（例えば、Ｆｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８１：６８７（１９９５）、Ｓｅｏｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，９：７２（１９９５）、Ｚａｖａｃｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：７９０９（１９９７）、Ｓａｋａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８５：１０３７－１０４６（１９９６）、Ｄｕｎｃａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：１２７７８－１２７８５（１９９７）、Ｗｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，９：１０３３－１０４５（１９９５）、Ｌｅｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：３１３７－３１４０（１９９７）、Ｊａｎｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３８３：７２８－７３１（１９９６）、及びＰｅｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，９３：６９３－７０４（１９９８）を参照されたい）において発現する遺伝子が挙げられる。当業者であれば、代謝性疾患及び障害（例えば、肝臓が標的となる疾患及び障害、ならびに肝疾患及び肝障害）に関連する遺伝子に、肝臓自体に発現する遺伝子ならびに他の臓器及び組織に発現する遺伝子が含まれることを認識するであろう。代謝性疾患及び障害に関連する遺伝子をコードする配列のサイレンシングは、当該疾患または障害を治療するために使用される従来の薬剤の投与と組み合わせて好都合に用いられ得る。ＡｐｏＢ遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ分子の非限定的な例としては、米国特許公開第２００６０１３４１８９号に記載されているものが挙げられ、参照によりこれの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。ＡｐｏＣ３遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ分子の非限定的な例としては、２００９年１月２６日に出願された米国仮出願第６１／１４７，２３５号に記載されているものが挙げられ、参照によりこれの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。

【0042】

腫瘍形成及び細胞形質転換（例えば、がんまたは他の新生物）に関連する遺伝子配列の例としては、有糸分裂期キネシン、例えばＥｇ５（ＫＳＰ、ＫＩＦ１１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００４５２３）、セリン／スレオニンキナーゼ、例えばｐｏｌｏ様キナーゼ１（ＰＬＫ－１）（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００５０３０、Ｂａｒｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：４２９－４４０（２００４））、チロシンキナーゼ、例えばＷＥＥ１（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００３３９０及びＮＭ＿００１１４３９７６）、アポトーシスの阻害因子、例えばＸＩＡＰ（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１１６７）、ＣＯＰ９シグナロソームサブユニット、例えば、ＣＳＮ１、ＣＳＮ２、ＣＳＮ３、ＣＳＮ４、ＣＳＮ５（ＪＡＢ１、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６８３７）、ＣＳＮ６、ＣＳＮ７Ａ、ＣＳＮ７Ｂ及びＣＳＮ８、ユビキチンリガーゼ、例えばＣＯＰ１（ＲＦＷＤ２、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０２２４５７及びＮＭ＿００１００１７４０）、ならびにヒストンデアセチラーゼ、例えば、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１５２７）、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ８、ＨＤＡＣ９などが挙げられる。Ｅｇ５及びＸＩＡＰ遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ分子の非限定的な例としては、２００７年５月２９日に出願された米国特許出願第１１／８０７，８７２号に記載されているものが挙げられ、参照によりこれの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。ＰＬＫ－１遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ分子の非限定的な例としては、米国特許公開第２００５０１０７３１６号及び第２００７０２６５４３８号、ならびに２００８年１２月２３日に出願された米国特許出願第１２／３４３，３４２号に記載されているものが挙げられ、参照によりこれらの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。ＣＳＮ５遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ分子の非限定的な例としては、２００８年４月１５日に出願された米国仮出願第６１／０４５，２５１号に記載されているものが挙げられ、参照によりこれの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。

【0043】

腫瘍形成及び細胞形質転換に関連する遺伝子配列のさらなる例としては、転座配列、例えば、ＭＬＬ融合遺伝子、ＢＣＲ－ＡＢＬ（Ｗｉｌｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２１：５７１６（２００２）、Ｓｃｈｅｒｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０１：１５６６（２００３））、ＴＥＬ－ＡＭＬ１、ＥＷＳ－ＦＬＩ１、ＴＬＳ－ＦＵＳ、ＰＡＸ３－ＦＫＨＲ、ＢＣＬ－２、ＡＭＬ１－ＥＴＯ、及びＡＭＬ１－ＭＴＧ８（Ｈｅｉｄｅｎｒｅｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０１：３１５７（２００３））、過剰発現配列、例えば、多剤耐性遺伝子（Ｎｉｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，５４５：１４４（２００３）、Ｗｕ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６３：１５１５（２００３））、サイクリン（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６３：３５９３（２００３）、Ｚｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１６：２９２３（２００２））、ベータ－カテニン（Ｖｅｒｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，９：１２９１（２００３））、テロメラーゼ遺伝子（Ｋｏｓｃｉｏｌｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２：２０９（２００３））、ｃ－ＭＹＣ、Ｎ－ＭＹＣ、ＢＣＬ－２、成長因子受容体（例えば、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ１（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００５２２８、ＮＭ＿２０１２８２、ＮＭ＿２０１２８３及びＮＭ＿２０１２８４、また、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．，２８５：３９－４９（２００３）も参照のこと、ＥｒｂＢ２／ＨＥＲ－２（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００４４４８及びＮＭ＿００１００５８６２）、ＥｒｂＢ３（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１９８２及びＮＭ＿００１００５９１５）、及びＥｒｂＢ４（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００５２３５及びＮＭ＿００１０４２５９９）、ならびに変異配列、例えば、ＲＡＳ（Ｔｕｓｃｈｌ ａｎｄ Ｂｏｒｋｈａｒｄｔ，Ｍｏｌ．Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ，２：１５８（２００２）に総説されている）が挙げられる。ＥＧＦＲ遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ分子の非限定的な例としては、２００７年５月２９日に出願された米国特許出願第１１／８０７，８７２号に記載されているものが挙げられ、参照によりこれの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。

【0044】

ＤＮＡ修復酵素をコードする配列のサイレンシングは、化学療法剤の投与と組み合わせて利用される（Ｃｏｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６３：１５５０（２００３））。腫瘍遊走に関連するタンパク質をコードする遺伝子も関心対象の標的配列であり、これには例えば、インテグリン、セレクチン及び金属タンパク質がある。上記例は排他的なものではない。当業者であれば、腫瘍形成もしくは細胞形質転換、腫瘍成長または腫瘍遊走を容易にするまたは促進する任意の全または部分的遺伝子配列が鋳型配列として含められ得ることを理解するであろう。

【0045】

血管新生遺伝子は、新たな血管の形成を促進することができる。特に興味深いものは、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）（Ｒｅｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｖｉｓ．，９：２１０（２００３））またはＶＥＧＦＲである。ＶＥＧＦＲを標的とするｓｉＲＮＡ配列は、例えば、ＧＢ２３９６８６４、米国特許公開第２００４０１４２８９５号、及びＣＡ２４５６４４４に示されており、参照によりこれらの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。

【0046】

抗血管新生遺伝子は、血管新生を阻害することができる。これらの遺伝子は、疾患の病態進展に血管新生が役割を果たしているがんを治療する上で、特に有用である。抗血管新生遺伝子の例としては、限定されないが、エンドスタチン（例えば、米国特許第６，１７４，８６１号を参照されたい）、アンジオスタチン（例えば、Ｕ 米国特許第５，６３９，７２５号を参照されたい）、及びＶＥＧＦＲ２（例えば、Ｄｅｃａｕｓｓｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１８８：３６９－３７７（１９９９）を参照されたい）が挙げられ、参照によりこれらの開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。免疫調節因子遺伝子は、１つ以上の免疫応答を調節する遺伝子である。免疫調節因子遺伝子の例としては、限定されないが、サイトカイン、例えば成長因子（例えば、ＴＧＦ－α、ＴＧＦ－β、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＩＧＦ、ＮＧＦ、ＰＤＧＦ、ＣＧＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＳＣＦなど）、インターロイキン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２（Ｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７１：６９１（２００３））、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２０など）、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γなど）及びＴＮＦが挙げられる。Ｆａｓ及びＦａｓリガンド遺伝子も関心対象の免疫調節因子標的配列である（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，９：３４７（２００３））。造血及びリンパ球系細胞における副シグナル伝達分子をコードする遺伝子も本発明に含まれ、これには例えば、Ｔｅｃファミリーキナーゼ、例えばＢｒｕｔｏｎ型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）がある（Ｈｅｉｎｏｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，５２７：２７４（２００２））。

【0047】

細胞受容体リガンドには、細胞表面受容体（例えば、インスリン受容体、ＥＰＯ受容体、Ｇタンパク質結合受容体、チロシンキナーゼ活性を有する受容体、サイトカイン受容体、成長因子受容体など）に結合して当該受容体が関与する生理学的経路（例えば、血糖値調節、血球発達、有糸分裂誘発など）を調節すること（例えば、阻害すること、活性化させることなど）ができるリガンドが含まれる。細胞受容体リガンドの例としては、サイトカイン、成長因子、インターロイキン、インターフェロン、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インスリン、グルカゴン、Ｇタンパク質結合受容体リガンドなどが挙げられるが、これらに限定されない。トリヌクレオチドリピート（例えばＣＡＧリピート）の延長をコードする鋳型は、トリヌクレオチドリピートの延長を原因とする神経変性障害、例えば球脊髄性筋萎縮症及びハンチントン病の病原配列をサイレンシングするのに利用される（Ｃａｐｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１１：１７５（２００２））。

【0048】

遺伝子の発現を下方制御またはサイレンシングする核酸（例えばｓｉＲＮＡ）の標的となり得る他のある特定の標的遺伝子としては、大動脈平滑筋アルファ２アクチン（ＡＣＴＡ２）、アルコール脱水素酵素１Ａ（ＡＤＨ１Ａ）、アルコール脱水素酵素４（ＡＤＨ４）、アルコール脱水素酵素６（ＡＤＨ６）、アファミン（ＡＦＭ）、アンジオテンシノーゲン（ＡＧＴ）、セリン－ピルビン酸アミノ基転移酵素（ＡＧＸＴ）、アルファ－２－ＨＳ－糖タンパク質（ＡＨＳＧ）、アルド－ケト還元酵素ファミリー１メンバーＣ４（ＡＫＲ１Ｃ４）、血清アルブミン（ＡＬＢ）、アルファ－１－ミクログロブリン／ビクニン前駆体（ＡＭＢＰ）、アンジオポエチン関連タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）、血清アミロイドＰ成分（ＡＰＣＳ）、アポリポタンパク質Ａ－ＩＩ（ＡＰＯＡ２）、アポリポタンパク質Ｂ－１００（ＡＰＯＢ）、アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）、アポリポタンパク質Ｃ－ＩＶ（ＡＰＯＣ４）、アポリポタンパク質Ｆ（ＡＰＯＦ）、ベータ－２－糖タンパク質１（ＡＰＯＨ）、アクアポリン－９（ＡＱＰ９）、胆汁酸－ＣｏＡ：アミノ酸Ｎ－アシルトランスフェラーゼ（ＢＡＡＴ）、Ｃ４ｂ結合タンパク質ベータ鎖（Ｃ４ＢＰＢ）、ＬＩＮＣ０１５５４にコードされる推定上の性質不明のタンパク質（Ｃ５ｏｒｆ２７）、補体因子３（Ｃ３）、補体因子５（Ｃ５）、補体成分Ｃ６（Ｃ６）、補体成分Ｃ８アルファ鎖（Ｃ８Ａ）、補体成分Ｃ８ベータ鎖（Ｃ８Ｂ）、補体成分Ｃ８ガンマ鎖（Ｃ８Ｇ）、補体成分Ｃ９（Ｃ９）、カルモジュリン結合転写活性化因子１（ＣＡＭＴＡ１）、ＣＤ３８（ＣＤ３８）、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）、補体因子Ｈ関連タンパク質１（ＣＦＨＲ１）、補体因子Ｈ関連タンパク質２（ＣＦＨＲ２）、補体因子Ｈ関連タンパク質３（ＣＦＨＲ３）、カンナビノイド受容体１（ＣＮＲ１）、セルロプラスミン（ＣＰ）、カルボキシペプチダーゼＢ２（ＣＰＢ２）、結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン２（ＣＸＣＬ２）、シトクロムＰ４５０ １Ａ２（ＣＹＰ１Ａ２）、シトクロムＰ４５０ ２Ａ６（ＣＹＰ２Ａ６）、シトクロムＰ４５０ ２Ｃ８（ＣＹＰ２Ｃ８）、シトクロムＰ４５０ ２Ｃ９（ＣＹＰ２Ｃ９）、シトクロムＰ４５０ファミリー２サブファミリーＤメンバー６（ＣＹＰ２Ｄ６）、シトクロムＰ４５０ ２Ｅ１（ＣＹＰ２Ｅ１）、フィロキノンオメガヒドロキシラーゼＣＹＰ４Ｆ２（ＣＹＰ４Ｆ２）、７－アルファ－ヒドロキシコレステ－４－エン－３－オン １２－アルファ－ヒドロキシラーゼ（ＣＹＰ８Ｂ１）、ジペプチジルペプチダーゼ４（ＤＰＰ４）、凝固因子１２（Ｆ１２）、凝固因子ＩＩ（トロンビン）（Ｆ２）、凝固因子ＩＸ（Ｆ９）、フィブリノーゲンアルファ鎖（ＦＧＡ）、フィブリノーゲンベータ鎖（ＦＧＢ）、フィブリノーゲンガンマ鎖（ＦＧＧ）、フィブリノーゲン様１（ＦＧＬ１）、フラビン含有モノオキシゲナーゼ３（ＦＭＯ３）、フラビン含有モノオキシゲナーゼ５（ＦＭＯ５）、群特異的成分（ビタミンＤ結合タンパク質）（ＧＣ）、成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）、グリシンＮ－メチルトランスフェラーゼ（ＧＮＭＴ）、ヒアルロナン結合タンパク質２（ＨＡＢＰ２）、ヘプシジン抗菌ペプチド（ＨＡＭＰ）、ヒドロキシ酸オキシダーゼ（グリコール酸オキシダーゼ）１（ＨＡＯ１）、ＨＧＦ活性化因子（ＨＧＦＡＣ）、ハプトグロブリン関連タンパク質、ハプトグロブリン（ＨＰＲ）、ヘモペキシン（ＨＰＸ）、ヒスチジンリッチ糖タンパク質（ＨＲＧ）、ヒドロキシステロイド（１１－ベータ）脱水素酵素１（ＨＳＤ１１Ｂ１）、ヒドロキシステロイド（１７－ベータ）脱水素酵素１３（ＨＳＤ１７Ｂ１３）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖Ｈ１（ＩＴＩＨ１）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖Ｈ２（ＩＴＩＨ２）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖Ｈ３（ＩＴＩＨ３）、インター－アルファ－トリプシン阻害因子重鎖Ｈ４（ＩＴＩＨ４）、プレカリクレイン（ＫＬＫＢ１）、乳酸脱水素酵素Ａ（ＬＤＨＡ）、肝臓発現抗菌ペプチド２（ＬＥＡＰ２）、白血球細胞由来ケモタキシン２（ＬＥＣＴ２）、リポタンパク質（ａ）（ＬＰＡ）、マンナン結合レクチンセリンペプチダーゼ２（ＭＡＳＰ２）、Ｓ－アデノシルメチオニン合成酵素アイソフォーム１型（ＭＡＴ１Ａ）、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ４（ＮＯＸ４）、ポリ［ＡＤＰ－リボース］ポリメラーゼ１（ＰＡＲＰ１）、パラオキソナーゼ１（ＰＯＮ１）、パラオキソナーゼ３（ＰＯＮ３）、ビタミンＫ依存性タンパク質Ｃ（ＰＲＯＣ）、レチノール脱水素酵素１６（ＲＤＨ１６）、恒常的血清アミロイドＡ４（ＳＡＡ４）、セリン脱水酵素（ＳＤＳ）、セルピンファミリーＡメンバー１（セルピンＡ１）、セルピンＡ１１（ＳＥＲＰＩＮＡ１１）、カリスタチン（ＳＥＲＰＩＮＡ４）、コルチコステロイド結合グロブリン（ＳＥＲＰＩＮＡ６）、抗トロンビンＩＩＩ（ＳＥＲＰＩＮＣ１）、ヘパリン補因子２（ＳＥＲＰＩＮＤ１）、セルピンファミリーＨメンバー１（ＳＥＲＰＩＮＨ１）、溶質輸送担体ファミリー５メンバー２（ＳＬＣ５Ａ２）、ナトリウム／胆汁酸共輸送因子（ＳＬＣ１０Ａ１）、溶質輸送担体ファミリー１３メンバー５（ＳＬＣ１３Ａ５）、溶質輸送担体ファミリー２２メンバー１（ＳＬＣ２２Ａ１）、溶質輸送担体ファミリー２５メンバー４７（ＳＬＣ２５Ａ４７）、溶質輸送担体ファミリー２、促進型グルコーストランスポーターメンバー２（ＳＬＣ２Ａ２）、ナトリウム結合中性アミノ酸トランスポーター４（ＳＬＣ３８Ａ４）、溶質輸送担体有機アニオントランスポーターファミリーメンバー１Ｂ１（ＳＬＣＯ１Ｂ１）、スフィンゴミエリンホスホジエステラーゼ１（ＳＭＰＤ１）、胆汁酸塩スルホトランスフェラーゼ（ＳＵＬＴ２Ａ１）、チロシンアミノトランスフェラーゼ（ＴＡＴ）、トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ２）、ＵＤＰグルクロン酸転移酵素２ファミリーポリペプチドＢ１０（ＵＧＴ２Ｂ１０）、ＵＤＰグルクロン酸転移酵素２ファミリーポリペプチドＢ１５（ＵＧＴ２Ｂ１５）、ＵＤＰグルクロン酸転移酵素２ファミリーポリペプチドＢ４（ＵＧＴ２Ｂ４）、及びビトロネクチン（ＶＴＮ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0049】

治療目的のための上記遺伝子のいずれかの発現のサイレンシングにおけるその有用性に加えて、本明細書に記載のある特定の核酸（例えばｓｉＲＮＡ）は、研究開発用途、ならびに診断、予防、予後予測、臨床及び他の医療用途においても有用である。非限定的な例を挙げると、ある特定の核酸（例えばｓｉＲＮＡ）は、関心対象の遺伝子が治療標的となる可能性があるか否かを試験することを狙いとする標的検証研究に使用され得る。ある特定の核酸（例えばｓｉＲＮＡ）はまた、潜在的な治療標的としての遺伝子を発見することを目的とする標的同定研究にも使用され得る。

【0050】

ｓｉＲＮＡ分子の生成
ｓｉＲＮＡは、様々な形態で、例えば、１本以上の単離された低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）二本鎖として、より長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）として、またはＤＮＡプラスミドの転写カセットから転写されたｓｉＲＮＡもしくはｄｓＲＮＡとして、提供され得る。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは酵素的に、または部分的／完全有機合成によって生成され得、改変型リボヌクレオチドは、試験管内での酵素的または有機合成によって導入され得る。場合によっては、各鎖は化学的に調製される。ＲＮＡ分子を合成する方法は当技術分野で知られており、例えば、Ｖｅｒｍａ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（１９９８）に記載されている、または本明細書に記載されている化学合成法がある。

【0051】

ＲＮＡを単離する、ＲＮＡを合成する、核酸をハイブリダイズさせる、ｃＤＮＡライブラリーを作りスクリーニングする、及びＰＣＲを実施する方法は、当技術分野でよく知られている（例えば、Ｇｕｂｌｅｒ及びＨｏｆｆｍａｎ，Ｇｅｎｅ，２５：２６３－２６９（１９８３）、上記Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．、上記Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．を参照されたい）、ＰＣＲ方法についても同様である（米国特許第４，６８３，１９５号及び第４，６８３，２０２号、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，１９９０）を参照されたい）。発現ライブラリーも当業者によく知られている。本発明における一般的な使用方法を開示しているさらなる基礎的文書としては、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．１９８９）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９９０）、及びＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）が挙げられる。参照によりこれらの参考文献の開示内容の全体をあらゆる目的のために本明細書に援用する。

【0052】

ｓｉＲＮＡは化学合成されるのが典型的である。本発明のｓｉＲＮＡ分子を含むオリゴヌクレオチドは、当技術分野で知られている様々な技術のいずれか、例えば、Ｕｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０９：７８４５（１９８７）、Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８：５４３３（１９９０）、Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２３：２６７７－２６８４（１９９５）、及びＷｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，７４：５９（１９９７）に記載されているものを用いて合成され得る。オリゴヌクレオチドの合成は、核酸に対する一般的な保護基及びカップリング基、例えば、５’末端にはジメトキシトリチル、及び３’末端にはホスホロアミダイトを利用する。非限定的な例を挙げると、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓの合成装置で０．２μｍｏｌ規模のプロトコールを用いて小規模合成を行うことができる。あるいは、０．２μｍｏｌ規模での合成は、Ｐｒｏｔｏｇｅｎｅ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）提供の９６ウェルプレート合成装置で実施され得る。しかしながら、より大きいまたはより小さい規模の合成も本発明の範囲内である。オリゴヌクレオチド合成、ＲＮＡ脱保護のための方法、及びＲＮＡ精製のための方法に適する試薬は、当業者に知られている。

【0053】

ｓｉＲＮＡ分子は、２つの別個のオリゴヌクレオチドから組み立てられ得、この場合、一方のオリゴヌクレオチドはｓｉＲＮＡのセンス鎖を含み、他方はアンチセンス鎖を含む。例えば、各鎖を別個に合成することができ、合成及び／または脱保護に続いてハイブリダイゼーションまたはライゲーションによって繋ぎ合わせることができる。

【0054】

連結基
本発明の化合物及び結合体は、１つ以上の連結基（例えばＬ^３またはＬ^４）を含み得る。各連結基の構造は、結合体が本明細書に記載のとおりに機能する限り、様々であり得る。例えば、各連結基の構造は長さ及び原子組成が様々であり、各連結基は、分岐型、非分岐型、環状またはその組合せであり得る。連結基は、結合体の溶解性、安定性または凝集特性を調節するものであってもよい。

【0055】

一実施形態では、各連結基は約３～１０００個の原子を含む。一実施形態では、各連結基は約３～５００個の原子を含む。一実施形態では、各連結基は約３～２００個の原子を含む。一実施形態では、各連結基は約３～５０個の原子を含む。一実施形態では、各連結基は約１０～１０００個の原子を含む。一実施形態では、各連結基は約１０～５００個の原子を含む。一実施形態では、各連結基は約１０～２００個の原子を含む。一実施形態では、各連結基は約１０～５０個の原子を含む。

【0056】

一実施形態では、各連結基は、Ｈ、Ｃ、Ｎ、Ｓ及びＯから選択される原子を含む。

【0057】

一実施形態では、各連結基は、Ｈ、Ｃ、Ｎ、Ｓ、Ｐ及びＯから選択される原子を含む。

【0058】

一実施形態では、各連結基は、約１～１０００（または、１～７５０、１～５００、１～２５０、１～１００、１～５０、１～２５、１～１０、１～５、５～１０００、５～７５０、５～５００、５～２５０、５～１００、５～５０、５～２５、５～１０、もしくは２～５個の炭素原子）を有する分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖を含み、炭素原子の１つ以上が独立して任意選択的に－Ｏ－、－Ｓ、－Ｎ（Ｒ^ａ）－、３～７員複素環、５～６員ヘテロアリールまたは炭素環に置き換わっており、ここで、各鎖、３～７員複素環、５～６員ヘテロアリールまたは炭素環は独立して、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、－Ｎ（Ｒ^ａ）_２、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば、１、２、３、４、５個またはそれ以上）の置換基で任意選択的に置換されており、各Ｒ^ａは独立してＨまたは（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルである。一実施形態では、リンカーは、約１～１０００（または、１～７５０、１～５００、１～２５０、１～１００、１～５０、１～２５、１～１０、１～５、５～１０００、５～７５０、５～５００、５～２５０、５～１００、５～５０、５～２５、５～１０、もしくは２～５個の炭素原子）を有する分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖を含み、炭素原子の１つ以上が独立して任意選択的に－Ｏ－、－Ｓ、－Ｎ（Ｒ^ａ）－に置き換わっており、各Ｒ^ａは独立してＨまたは（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルである。

【0059】

一実施形態では、各連結基はポリエチレングリコールを含む。一実施形態では、連結基は、標的指向化結合体の残部にカルボニル基によって繋げられたポリエチレングリコールを含む。一実施形態では、ポリエチレングリコールは、約１～約５００個、または約５～約５００個、または約３～約１００個の反復単位（例えば、－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－）を含む（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａｌｔｅｒｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ，２．３．１．，２８３－３３８、Ｆｉｌｐｕｌａ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｌｅａｓａｂｌｅ ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｃｕｓｔｏｍｉｚｅｄ ｌｉｎｋｅｒｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，６０，２００８，２９－４９、Ｚｈａｏ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｐｏｌｙ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ），Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１２，６２７－６５６）。

【0060】

本発明の実施形態
本発明の一態様は、発明の概要において示されている式Ｉの化合物、またはその塩である。

【0061】

一実施形態では、Ａは非存在である。

【0062】

一実施形態では、Ａは３～２０員シクロアルキル、５～２０員アリール、５～２０員ヘテロアリール、または３～２０員ヘテロシクロアルキルである。

【0063】

一実施形態では、Ｂは５～１０員アリールである。

【0064】

一実施形態では、Ｂはナフチルまたはフェニルである。

【0065】

一実施形態では、Ｂはフェニルである。

【0066】

一実施形態では、基：

【化2】

は、

【化3】

である。

【0067】

一実施形態では、Ｂは５～１０員ヘテロアリールである。

【0068】

一実施形態では、Ｂは、ピリジル、ピリミジル、キノリル、イソキノリル、イミダゾイル、チアゾリル、オキサジアゾリルまたはオキサゾリルである。

【0069】

一実施形態では、基：

【化4】

は、

【化5】

である。

【0070】

一実施形態では、基：

【化6】

は、

【化7】

である。

【0071】

一実施形態では、Ｌ^１は、０～２０個の炭素原子を有する二価の非分岐型の飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されている。

【0072】

一実施形態では、Ｌ^１は、０～１２個の炭素原子を有する二価の非分岐型の飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、または－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルである。

【0073】

一実施形態では、Ｌ^１は、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、または
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－
である。

【0074】

一実施形態では、Ｌ^２は、０～２０個の炭素原子を有する二価の非分岐型の飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されている。

【0075】

一実施形態では、Ｌ^２は、０～１２個の炭素原子を有する二価の非分岐型の飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、または－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルである。

【0076】

一実施形態では、Ｌ^２は、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、または
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２－
である。

【0077】

一実施形態では、Ｒ^１は、

【化8】

〔式中、
ＸはＮＲ^２０であり、Ｙは、－（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^２１、－ＳＯ_２Ｒ^２２、及び－（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^２３Ｒ^２４から選択され；またはＸが－（Ｃ＝Ｏ）－でありＹがＮＲ^２５Ｒ^２６であり；またはＸが－ＮＲ^３７Ｒ^３８でありＹが非存在であり、
Ｒ^２０は水素または（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキルであり、
Ｒ^２１、Ｒ^２２、Ｒ^２３、Ｒ^２４、Ｒ^２５及びＲ^２６は各々独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２７は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、または－Ｆであり、
Ｒ^２８は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、または－Ｆであり、
Ｒ^２９は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、－Ｆ、－Ｎ_３、－ＮＲ^３５Ｒ^３６、またはハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、アリール及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換された５員複素環であり、任意の（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシが、ハロからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意のアリールが、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、アミノ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３５及びＲ^３６は独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており；またはＲ^３５とＲ^３６とがそれらに結合している窒素と一緒になって５～６員ヘテロアリール環を形成しており、当該ヘテロアリール環が、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、アリール及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意のアリール及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが１つ以上の基Ｒ^３９で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３７及びＲ^３８は独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており；またはＲ^３７とＲ^３８とがそれらに結合している窒素と一緒になって、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換された５～８員複素環を形成しており、任意の（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシが、ハロから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３９は独立して、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されている〕
である。

【0078】

一実施形態では、Ｒ^１は、

【化9】

である。

【0079】

一実施形態では、Ｒ^１は、

【化10】

である。

【0080】

一実施形態では、Ｒ^１は、

【化11】

である。

【0081】

一実施形態では、Ｒ^１は、

【化12】

である。

【0082】

一実施形態では、Ｒ^２は、

【化13】

〔式中、
ＸはＮＲ^２０であり、Ｙは、－（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^２１、－ＳＯ_２Ｒ^２２、及び－（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ^２３Ｒ^２４から選択され；またはＸが－（Ｃ＝Ｏ）－でありＹがＮＲ^２５Ｒ^２６であり；またはＸが－ＮＲ^３７Ｒ^３８でありＹが非存在であり、
Ｒ^２０は水素または（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキルであり、
Ｒ^２１、Ｒ^２２、Ｒ^２３、Ｒ^２４、Ｒ^２５及びＲ^２６は各々独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２７は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、または－Ｆであり、
Ｒ^２８は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、または－Ｆであり、
Ｒ^２９は、－ＯＨ、－ＮＲ^２５Ｒ^２６、－Ｆ、－Ｎ_３、－ＮＲ^３５Ｒ^３６、またはハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、アリール及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換された５員複素環であり、任意の（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシが、ハロからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意のアリールが、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、アミノ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３５及びＲ^３６は独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており；またはＲ^３５とＲ^３６とがそれらに結合している窒素と一緒になって５～６員ヘテロアリール環を形成しており、当該ヘテロアリール環が、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、アリール及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、任意のアリール及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが１つ以上の基Ｒ^３９で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３７及びＲ^３８は独立して、水素、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルカノイルオキシ、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロ、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており；またはＲ^３７とＲ^３８とがそれらに結合している窒素と一緒になって、ハロ、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換された５～８員複素環を形成しており、任意の（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル及び（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシが、ハロから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
各Ｒ^３９は独立して、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルからなる群から選択され、任意の（Ｃ_１－Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_８）アルコキシ及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキルが、ハロから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されている〕
である。

【0083】

一実施形態では、Ｒ^２は、

【化14】

である。

【0084】

一実施形態では、Ｒ^２は、

【化15】

である。

【0085】

一実施形態では、Ｒ^２は、

【化16】

である。

【0086】

一実施形態では、Ｒ^２は、

【化17】

である。

【0087】

一実施形態では、Ｌ^３は、０～５０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば、１、２、３または４個）の置換基で任意選択的に置換されている。

【0088】

一実施形態では、Ｌ^３は、１～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖が、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば、１、２、３または４個）の置換基で任意選択的に置換されている。

【0089】

一実施形態では、Ｌ^３は、１～３０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘが水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は１つ以上のハロまたはオキソ（＝Ｏ）で任意選択的に置換されている。

【0090】

一実施形態では、Ｌ^３は、

【化18】

である。

【0091】

一実施形態では、Ｌ^３は、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－、－（Ｃ＝Ｏ）－Ｏ－、－ＮＨ－（Ｃ＝Ｏ）－ＮＨ－、または－ＮＨ－（ＳＯ_２）－によってＢに連結されている。

【0092】

一実施形態では、Ｌ^４は、０～５０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば、１、２、３または４個）の置換基で任意選択的に置換されている。

【0093】

一実施形態では、Ｌ^４は、１～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上（例えば、１、２、３または４個）は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルチオ、アジド、シアノ、ニトロ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ（＝Ｏ）、カルボキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール及びヘテロアリールオキシから選択される１つ以上（例えば、１、２、３または４個）の置換基で任意選択的に置換されている。

【0094】

一実施形態では、Ｌ^４は、１～３０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は１つ以上のハロまたはオキソ（＝Ｏ）で任意選択的に置換されている。

【0095】

一実施形態では、Ｌ^４は－Ｏ－によってＲ^３に連結されている。

【0096】

一実施形態では、核酸分子Ｒ^３（例えばｓｉＲＮＡ）は、核酸分子のリン酸の酸素によって結合体の残部と結合している。

【0097】

一実施形態では、核酸分子Ｒ^３（例えばｓｉＲＮＡ）は、センスまたはアンチセンス鎖の５’末端にあるリン酸の酸素によって結合体の残部と結合している。

【0098】

一実施形態では、核酸分子Ｒ^３（例えばｓｉＲＮＡ）は、センスまたはアンチセンス鎖の３’末端にあるリン酸の酸素によって結合体の残部と結合している。

【0099】

一実施形態では、核酸分子Ｒ^３（例えばｓｉＲＮＡ）は、センス鎖の３’末端にあるリン酸の酸素によって結合体の残部と結合している。

【0100】

一実施形態では、基：

【化19】

は、

【化20】

〔式中、各Ｒ’は独立して、Ｃ_１－９アルキル、Ｃ_２－９アルケニルまたはＣ_２－９アルキニルであり、Ｃ_１－９アルキル、Ｃ_２－９アルケニルまたはＣ_２－９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで任意選択的に置換されている〕
からなる群から選択される。

【0101】

一実施形態では、基：

【化21】

は、

【化22】

〔式中、
各Ｒ’は独立して、Ｃ_１－９アルキル、Ｃ_２－９アルケニルまたはＣ_２－９アルキニルであり、Ｃ_１－９アルキル、Ｃ_２－９アルケニルまたはＣ_２－９アルキニルは、ハロまたはヒドロキシルで任意選択的に置換されており、
^＊で標示された価数はＬ^３に付いており、
^＊＊で標示された価数はＲ^３に付いている〕
からなる群から選択される。

【0102】

一実施形態では、基：

【化23】

は、

【化24】

である。

【0103】

本発明はさらに、式（Ｉ）の結合体を調製するのに有用となる本明細書に記載の合成中間体及び方法を提供する。例えば、本発明には、式（Ｉａ）の化合物：

【化25】

〔式中、
Ｒ^１は糖であり、
Ｌ^１は、０～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されており、
Ｂは、５～１０員アリールまたは５～１０員ヘテロアリールであり、当該５～１０員アリールまたは５～１０員ヘテロアリールは、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシ、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ、（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル、及び（Ｃ_３－Ｃ_６）シクロアルキル（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルからなる群から独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
Ｌ^２は、０～２０個の炭素原子を有する二価の分岐型または非分岐型の飽和または不飽和炭化水素鎖であり、炭化水素鎖中の炭素原子の１つ以上は任意選択的に、－Ｏ－、－ＮＲ^Ｘ－、－ＮＲ^Ｘ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ^Ｘ－、または－Ｓ－に置き換わっており、Ｒ^Ｘは水素または（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキルであり、炭化水素鎖は、オキソ（＝Ｏ）及びハロから選択される１つ以上の置換基で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２は糖であり、
Ｌ^３は、非存在、または連結基であり、
Ａは、３～２０員シクロアルキル、５～２０員アリール、５～２０員ヘテロアリール、または３～２０員ヘテロシクロアルキルであり、
各Ｒ^Ａは独立して、水素、ヒドロキシ、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＯＲ^ａ、－Ｃ_１－２アルキル－ＯＲ^ａ、Ｃ_１－１０アルキル Ｃ_２－１０アルケニル、及びＣ_２－１０アルキニルからなる群から選択され、Ｃ_１－１０アルキル Ｃ_２－１０アルケニル、及びＣ_２－１０アルキニルは、ハロ、ヒドロキシ及びＣ_１－３アルコキシから独立して選択される１つ以上の基で任意選択的に置換されており、
ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり、
Ｌ^４は、非存在、または連結基であり、
Ｒ^３ａは、Ｈ、保護基、合成活性化基、固体担体との共有結合、または固体担体に結合している連結基との結合であり、
Ｒ^ａは、水素、保護基、固体担体との共有結合、または固体担体に結合している連結基Ｌ^５との結合であり、
Ｌ^５は連結基である〕、
またはその塩が含まれる。

【0104】

一実施形態では、Ｒ^３ａはＨである。

【0105】

一実施形態では、Ｒ^３ａは保護基である。一実施形態では、保護基は、アセテート、トリフラート、メシラートまたはスクシナートである。

【0106】

一実施形態では、Ｒ^３ａは合成活性化基である。一実施形態では、合成活性化基は、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰまたはＨＢＴＵから誘導され得るものである。

【0107】

一実施形態では、Ｒ^３ａは固体担体への共有結合である。

【0108】

一実施形態では、Ｒ^３ａは、固体担体に結合している連結基への結合である。一実施形態では、固体担体に結合している連結基は、－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）－である。

【実施例】

【0109】

本発明を具体例によってよりいっそう詳しく説明する。以下の実施例は、例示を目的として提供されており、いかようにも本発明を限定する意図はない。当業者であれば、変更または改変されて本質的に同じ結果をもたらすことができる様々な重要でないパラメータを容易に認識するであろう。

【0110】

以下のスキーム１～２２は、式Ｉの結合体を調製するために使用され得る中間体化合物の調製を例示する。スキーム１～２２に例示されている中間体化合物及び合成プロセスは本発明の実施形態である。

【0111】

スキーム１ 化合物６の調製

【化26】

ステップ１．（３ａＲ，６ａＳ）－５－ベンジル－３ａ，６ａ－ジメチルテトラヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｃ］ピロール－１，３（３ａＨ）－ジオン１の調製
３，４－ジメチルフラン－２，５－ジオン（４０ｇ、３１７ｍｍｏｌ）とＮ－ベンジル－１－メトキシ－Ｎ－（（トリメチルシリル）メチル）メタンアミン（９４．１ｇ、３９６．５ｍｍｏｌ）とをＤＣＭ（６００ｍｌ）中に含んだ冷却された溶液（０℃）に、トリフルオロ酢酸（７３２μｌ）をゆっくり添加した。一晩撹拌して溶液を緩やかに室温に温めた。反応混合物を濃縮乾固し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）に溶解させ、飽和重炭酸ナトリウム（２×５００ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固した。カラムクロマトグラフィー（勾配：ヘキサン中酢酸エチル２０％から酢酸エチル１００％まで）によってシリカゲルで精製することにより、（３ａＲ，６ａＳ）－５－ベンジル－３ａ，６ａ－ジメチルテトラヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｃ］ピロール－１，３（３ａＨ）－ジオンを黄色の油として得た（５３．７ｇ、６５％）。Ｒｆ０．８５ ４０％ＥｔＯＡｃ－ヘキサン。

【0112】

ステップ２．（（３Ｒ，４Ｓ）－１－ベンジル－３，４－ジメチルピロリジン－３，４－ジイル）ジメタノール２の調製
（３ａＲ，６ａＳ）－５－ベンジル－３ａ，６ａ－ジメチルテトラヒドロ－１Ｈ－フロ［３，４－ｃ］ピロール－１，３（３ａＨ）－ジオン（５３．７ｇ、２０５．７ｍｍｏｌ）を無水ジエチルエーテル（７５０ｍｌ）中に含んだ冷却された溶液（０℃）に、水素化アルミニウムリチウムペレット（１７．６ｇ、４６３ｍｍｏｌ）を午後にわたって数回に分けてゆっくり添加した。溶液は一晩撹拌され、氷水浴が融解するにつれて室温に温まった。終了してすぐに反応物を０℃に冷却し、２５ｍｌの５ＭのＮａＯＨとそれに続く１２ｍｌの水とを使用して非常にゆっくり失活させた。３０分間撹拌し、その後、硫酸マグネシウムを添加し、濾過した。濾液を濃縮して（（３Ｒ，４Ｓ）－１－ベンジル－３，４－ジメチルピロリジン－３，４－ジイル）ジメタノールを無色の油（３３．６ｇ、６５％）として得た。Ｒｆ０．２５ １０％ＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２。

【0113】

ステップ３．（（３Ｒ，４Ｓ）－３，４－ジメチルピロリジン－３，４－ジイル）ジメタノール３の調製
（（３Ｒ，４Ｓ）－１－ベンジル－３，４－ジメチルピロリジン－３，４－ジイル）ジメタノール（４０．１ｇ、１６１ｍｍｏｌ）のメタノール（３００ｍｌ）溶液に、１０％パラジウム活性炭湿潤品（４ｇ）を添加した。溶液を水素雰囲気下で１６時間激しく撹拌した。終了してすぐに溶液をセライトで濾過し、濃縮乾固して（（３Ｒ，４Ｓ）－３，４－ジメチルピロリジン－３，４－ジイル）ジメタノールを無色の固体として得た（２４ｇ、９４％）。Ｒｆ０．０５ １０％ＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２。

【0114】

ステップ４．１０－（（３Ｒ，４Ｓ）－３，４－ビス（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカン酸メチル４の調製
３（２４ｇ、１５１ｍｍｏｌ）とセバシン酸モノメチル（３４．２ｇ、１５９ｍｍｏｌ）とをＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｌ）中に含んだ溶液を、ＨＢＴＵ（６２．９ｇ、１６６ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（１０５ｍｌ、６０４ｍｍｏｌ）で処理した。一晩撹拌した後、混合物をＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）、水及びブラインで洗浄し、次いで乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、濃縮した。粗製材料をクロマトグラフィー（勾配：０％ＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２から２０％まで）に供して４（４１．５ｇ、７７％）を得た。Ｒｆ０．５５ １０％ＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２。

【0115】

ステップ５．１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカン酸メチル５の調製
４（４１．５ｇ、１１６ｍｍｏｌ）と４，４’－ジメトキシトリチルクロリド（３８．８ｇ、１１６ｍｍｏｌ）とをピリジン（４００ｍｌ）中に含んだ溶液を一晩撹拌した。その後、ピリジンを減圧下で除去し、粗製材料をクロマトグラフィー（勾配：０％ＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２から１０％まで）に供して５（２９．５ｇ、３９％）を黄色の油として得た。Ｒｆ０．５ ５％ＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２。

【0116】

ステップ６．１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカン酸リチウム６の調製
化合物５（２９．５ｇ、４５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２５０ｍｌ）及び水（２５０ｍｌ）の中に含んだ溶液に、水酸化リチウム（１．１９ｇ、５０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で１８時間撹拌し、その後、濃縮してＴＨＦを除去した。残存する水溶液を一晩凍結乾燥して６を淡紫色の固体として得た（２８．５ｇ、９８％）。Ｒｆ０．５６ １０％ＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２。

【0117】

スキーム２ 化合物１０の調製

【化27】

ステップ１．１２－アミノドデカン酸メチル８の調製
１２－アミノウンデカン酸７（１０ｇ、４．６４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中、室温で撹拌した。アセチルクロリド（８５６μＬ、１２ｍｍｏｌ）を滴加し、反応物を１．５時間撹拌した。真空下で溶媒を除去し、残渣をＭＴＢＥ中に取り、冷蔵庫内で一晩冷却した。結果として生成した沈澱物を濾過によって濾別し、氷冷ＭＴＢＥで洗浄し、高真空下で乾燥させて１２－アミノドデカン酸メチル８を得た。

【0118】

ステップ２．１２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）ドデカン酸メチル９の調製
１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカン酸リチウム（６）（２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）、１２－アミノドデカン酸メチル（８）（７７８ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１．２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１．４ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で一晩、室温で撹拌した。沈澱物を濾過によって除去し、濾液を真空下で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ、ＤＣＭ）によって精製した。ＴＬＣは、同一質量を有して近接して走行する２つのスポットを示し、それを幾何異性体に帰属し、まとめて１２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）ドデカン酸メチル（９）として定量的に溜めた。

【0119】

ステップ３．１２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）－メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）－ドデカン酸リチウム１０の調製
１２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）ドデカン酸メチル９（３．１ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（５０：５０）の中でＬｉＯＨ（８８ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）と共に一晩、室温で撹拌した。反応をＴＬＣによって確認し、ＴＨＦを真空下で除去した。水溶液を液体Ｎ_２中で凍結させ、４８時間にわたって凍結乾燥して１２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）ドデカン酸リチウム１０を定量的に得た。

【0120】

スキーム３ 化合物１３の調製

【化28】

ステップ１．４－メチルベンゼンスルホン酸２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル１２の調製
テトラエチレングリコール（１１）（９３４ｇ、４．８ｍｏｌ）をＴＨＦ（１７５ｍｌ）及びＮａＯＨ水溶液（５Ｍ、１４５ｍｌ）の中に含んだ溶液を冷却し（０℃）、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（９１．４ｇ、４８０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０５ｍｌ）中に溶解させたもので処理し、その後、２時間撹拌した（０℃）。反応混合物を水（３Ｌ）で希釈し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出物を水及びブラインで洗浄し、次いで乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、濃縮して４－メチルベンゼンスルホン酸２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル（１２）（１４０ｇ、８４％）を淡黄色の油として得た。Ｒ_ｆ（０．５７、１０％ＭｅＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）。

【0121】

ステップ２．２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オール１３の調製
１２（１４０ｇ、４０３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８８０ｍｌ）溶液をアジ化ナトリウム（１３１ｇ、２．０２ｍｏｌ）で処理し、一晩加熱した（４５℃）。大部分のＤＭＦを減圧下で除去し、残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２（５００ｍｌ）に溶解させ、ブライン（３×５００ｍｌ）で洗浄し、次いで乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、濃縮した。残渣を短いシリカ床に通し（５％ＭｅＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）、濃縮して２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オール１３（６５ｇ、７４％）を黄色の油として得た。Ｒ_ｆ（０．５６、１０％ＭｅＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）。

【0122】

スキーム４ 化合物１９ａ～１９ｃの調製

【化29】

ステップ１．（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）－３－（（（Ｅ）－４－メトキシベンジリデン）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリオール１６の調製
Ｄ－ガラクトサミンＨＣｌ（１４）（９ｇ、４１．７ｍｍｏｌ）を室温で１ＭのＮａＯＨ溶液の中で撹拌した。アニスアルデヒド（５１ｍｌ、４２０ｍｍｏｌ）を添加し、固化するまで反応物を激しく撹拌した。固体反応物を４℃で１６時間保った。氷冷水（２００ｍｌ）を添加し、得られた固体を濾過によって回収し、氷冷ＥｔＯＨ／Ｅｔ_２Ｏ（１：１）で洗浄した。固体を重量が一定になるまで乾燥させて（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）－３－（（（Ｅ）－４－メトキシベンジリデン）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリオール（１６）を得た（９．８１ｇ、７８％）。

【0123】

ステップ２．（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（（（Ｅ）－４－メトキシベンジリデン）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート１７の調製
（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）－３－（（（Ｅ）－４－メトキシベンジリデン）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリオール（１６）（９．８１ｇ、３０ｍｍｏｌ）をピリジン中、０℃で撹拌した。無水酢酸（３４ｍｌ）、及びそれに続けてＤＭＡＰ（１００ｍｇ、触媒）を添加し、反応物を１６時間撹拌して緩やかに室温に温もらせた。得られた溶液を、砕いた氷に注ぎ、４℃で１６時間保った。反応物をＥｔＯＡｃ（×３）で抽出し、合わせた有機物をＨ_２Ｏ及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮して（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（（（Ｅ）－４－メトキシベンジリデン）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート（１７）（６．０ｇ、４３％）を得た。

【0124】

ステップ３．（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－アミノテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート塩酸塩１８の調製
（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（（（Ｅ）－４－メトキシベンジリデン）アミノ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート（１７）（６．０ｇ、４３％）をアセトン（３００ｍｌ）中で加熱還流した。ＨＣｌ（水溶液）（５Ｎ、３．０ｍｌ）を添加し、反応物を１５分間撹拌した。冷却した後、Ｅｔ_２Ｏ（４００ｍｌ）を添加し、反応物を４℃で１６時間保った。結果として生成した固体を濾過によって回収し、氷冷Ｅｔ_２Ｏで２回洗浄した。固体を重量が一定になるまで乾燥させて（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－アミノテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート塩酸塩（１８）（４．１７ｇ、８４．４％）を得た。

【0125】

ステップ４ａ．（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート１９ａの調製
（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－アミノテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート塩酸塩（１８）（１３．５ｇ、３５．２ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（７．８３ｇ、７７．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中、室温で撹拌した。ＴＦＡＡ（８．１３ｇ、３８．７ｍｍｏｌ）を含んだＤＣＭを滴加し、反応物を１時間撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート（１９ａ）（９．６４ｇ、６１．８％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0126】

ステップ４ｂ．（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－プロピオンアミドテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート１９ｂの調製
この化合物を、ＴＦＡＡの代わりに無水プロピオン酸を使用して（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート（１９ａ）と同様にして調製して、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－プロピオンアミドテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート（１９ｂ）（１．２ｇ、８５．３％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0127】

ステップ４ｃ．（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（２，２－ジフルオロプロパンアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート１９ｃの調製
（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－アミノテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート塩酸塩（１８）（１５．３４ｇ、３９．９８ｍｍｏｌ）、２，２－ジフルオロプロピオン酸（４．４ｇ、３９．９８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２４．３７ｇ、６４ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１２．１４ｇ、１２０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中で１６時間、室温で撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃと水との間で分配した。有機物を分離し、１ＭのＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（３％ＭｅＯＨ／ＤＣＭによって精製して（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（２，２－ジフルオロプロパンアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート（１９ｃ）（１５．８ｇ、９０％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0128】

スキーム５ 化合物２４の調製

【化30】

ステップ１．（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル２２の調製
アミノアルコール（２０）（３１３．６ｇ、２．１ｍｏｌ）のＴＨＦ（３．５Ｌ）溶液をＮ－（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（２１）（５５０ｇ、２．２１ｍｏｌ）によって数回に分けて処理した。反応が終了した時点（１８時間）で、ＴＨＦを減圧下で除去し、残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２（２．５Ｌ）に溶解させ、その後、等体積のＨＣｌ（１Ｍ）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）、Ｈ_２Ｏ及びブラインで洗浄した。有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、濃縮した。粗製材料（６００ｇ）をクロマトグラフィー（４ｋｇのシリカ、１～１２％ＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）に供してＨＯ－Ｔｒｉｇ－ＮＨＺ（２２）（４６８ｇ、７８％）を透明で粘稠な黄色の油として得た。

【0129】

ステップ２．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０－トリオキサ－４－アザドデカン－１２－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート２３の調製
ガラクトサミンペンタアセテート（７１５．２ｇ、１．８４ｍｏｌ）とＨＯ－Ｔｒｉｇ－ＮＨＺ（２２）（４００ｇ、１．４１ｍｏｌ）とを１，２ジクロロエタン（１０Ｌ）の中に含んだ不均一混合物を、５ｍｏｌ％のＳｃ（ＯＴｆ）_３（３４．６ｇ、７０．５ｍｍｏｌ）で処理し、加熱した（８５℃）。撹拌した後（５．５時間）に溶液は透明で均一になり、反応物を冷却し、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）、ＨＣｌ（１Ｍ）、Ｈ_２Ｏ及びブラインで洗浄した。有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濾過し、濃縮した。粗製材料（９００ｇ）をＥｔＯＡｃ（９００ｍｌ）で処理して、乳濁した不均一混合物が得られ、これを粗いフリットで濾過し、かくして残存ペンタアセテートが除去された。濾液を濃縮し、粗製材料をクロマトグラフィー（５ｋｇのシリカ、０～１０％ＣＨ_３ＯＨ－ＥｔＯＡｃ）に供してグリコシル化生成物（２３）（７５１ｇ、８７％）を淡褐色の泡状物として得た。

【0130】

ステップ３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（２－（２－（２－（（２，２，２－トリフルオロアセチル）－ｌ４－アザンイル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート２４の調製
Ｇａｌ－ｔｒｉｇ－ＮＨＺ（２３）（７５０ｇ、１．２２ｍｏｌ）、ＴＦＡ（１０３．８ｍｌ、１．３５ｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（１０％湿潤担持品、７５ｇ）を含んだ溶液をＨ_２でパージした。激しく撹拌した後（４．５時間）、反応混合物をＮ_２で（３０分）パージし、その後、セライトで濾過し、濃縮した。得られた褐色の泡状物（７１２ｇ、９９％）をさらに処理せずに次のステップに使用した。

【0131】

スキーム６ 化合物３４の調製

【化31】

ステップ１．２－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オール２５の調製
２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オール（１３）（７０．０ｇ、３１８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中、室温で撹拌した。反応物を１０％ＰＤ－Ｃ（７ｇ）で１６時間にわたって水素化した。反応物をセライトで濾過し、真空下で濃縮して２－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オール（２５）（６１．４ｇ、１００％）を得、これをさらに精製せずに使用した。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0132】

ステップ２．（２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－カルバミン酸ベンジル２７の調製
２－（２－（２－（２－アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－オール（２５）（６１．４ｇ、３１８ｍｍｏｌ）を５℃で、Ｎａ_２ＣＯ_３（５０．５１ｇ、４７６ｍｍｏｌ）を含んだＨ_２Ｏ（５００ｍｌ）の中で撹拌した。クロロギ酸ベンジル（２６）（６５．０ｇ、３８１ｍｍｏｌ）を含んだＴＨＦ（４８０ｍｌ）を滴加し、反応物を１６時間撹拌して室温に温もらせた。ＴＨＦを真空下で除去し、水層をＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。合わせた有機物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮し、残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル（２７）（２３．６ｇ、２２．７％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0133】

ステップ３．（１，１－ビス（４－メトキシフェニル）－１－フェニル－２，５，８，１１－テトラオキサトリデカン－１３－イル）カルバミン酸ベンジル２８の調製
（２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸エステル（２７）（２３．６ｇ、７２．１ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（７．７ｇ、７５．７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中、室温で撹拌した。ＤＭＴｒ－Ｃｌ（２５．６５ｇ、７５．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で２時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して（１，１－ビス（４－メトキシフェニル）－１－フェニル－２，５，８，１１－テトラオキサトリデカン－１３－イル）カルバミン酸エステル（２８）（２５．５ｇ、５６．２％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0134】

ステップ４．（１，１－ビス（４－メトキシフェニル）－１－フェニル－２，５，８，１１－テトラオキサトリデカン－１３－イル）（メチル）カルバミン酸ベンジル２９の調製
（１，１－ビス（４－メトキシフェニル）－１－フェニル－２，５，８，１１－テトラオキサトリデカン－１３－イル）カルバミン酸エステル（２８）（２５．５ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）及びＭｅＩ（４６．０ｇ、３２４ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ中、０℃で撹拌した。ＮａＨ（鉱油中６０％の分散液）（２．９２ｇ、１２１．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を０℃で撹拌し、次いで室温で１時間撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃとＨ_２Ｏとの間で分配した。有機物を分離し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して（１，１－ビス（４－メトキシフェニル）－１－フェニル－２，５，８，１１－テトラオキサトリデカン－１３－イル）（メチル）カルバミン酸ベンジル（２９）を得た（２６．０６ｇ、１００％）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0135】

ステップ５．（２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバミン酸ベンジル３０の調製
（１，１－ビス（４－メトキシフェニル）－１－フェニル－２，５，８，１１－テトラオキサトリデカン－１３－イル）（メチル）カルバミン酸ベンジル（２９）（２６．０６ｇ、４０．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中、室温で撹拌した。ＴＦＡ（５．１ｇ、４４．５ｍｍｏｌ）を添加し、１時間撹拌した。もう２当量のＴＦＡを添加し、反応物を１６時間撹拌した。反応物を真空下で濃縮し、残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバミン酸ベンジル（３０）（６．７６ｇ、４８．９％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0136】

ステップ６．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（４－メチル－３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート３１の調製
（２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバミン酸エステル（３０）（６．７６ｇ、１９．８ｍｍｏｌ）、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート（７．７１ｇ、１９．８ｍｍｏｌ）及びＳｃ（ＩＩＩ）ＯＴｆ（０．４９ｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＤＣＥ中で２時間加熱還流した。冷却した後、反応物をＴＥＡによって失活させ、１ＭのＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィーによって精製して（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（４－メチル－３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（３１）（９．３７ｇ、７０．６％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0137】

ステップ７．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（１，１，１－トリフルオロ－３－メチル－２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３ｌ４－アザテトラデカン－１４－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート３２の調製
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（４－メチル－３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（３１）（９．３７ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（１．７６ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中、室温で撹拌した。反応物を１０％Ｐｄ－Ｃ（１ｇ）でおよそ２時間にわたって水素化した。反応物をセライトで濾過し、真空下で濃縮して（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（１，１，１－トリフルオロ－３－メチル－２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３ｌ４－アザテトラデカン－１４－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（３２）（９．０ｇ、９８．９％）を得た。生成物を精製せずに使用した。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0138】

ステップ８．（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（４－ニトロ－１，２－フェニレン）ビス（２－メチル－１－オキソ－５’，８’，１１’－トリオキサ－２’－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート３４の調製
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（１，１，１－トリフルオロ－３－メチル－２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３ｌ４－アザテトラデカン－１４－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（３２）（４．５ｇ、６．９３ｍｍｏｌ）、４－ニトロフタル酸（３３）（０．７３ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（８．４５ｇ、２２．１８ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（４．２１ｇ、４１．６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で１６時間、室温で撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュカラムクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（４－ニトロ－１，２－フェニレン）ビス（２－メチル－１－オキソ－５’，８’，１１’－トリオキサ－２’－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（３４）を得た（５．０ｇ、５７．４％）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0139】

スキーム７ 化合物４３の調製

【化32】

ステップ１．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテートの調製
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（１，１，１－トリフルオロ－２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３ｌ４－アザテトラデカン－１４－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（４５．０ｇ、７０．８ｍｍｏｌ）及びＮａ_２ＣＯ_３（１１．３ｇ、１０６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ（５０：５０）中、室温で撹拌した。クロロギ酸ベンジル（２６）（１４．５ｇ、８５ｍｍｏｌ）を滴加し、反応物を１６時間撹拌した。ＴＨＦを真空下で除去し、水溶液をＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。有機物を１ＭのＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（３５）を得た（２５．１２ｇ、５４％）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0140】

ステップ２．（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル３６の調製
気密反応容器内で（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（３５）（２５．１２ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）を７ＮのアンモニアのＭｅＯＨ溶液の中で１６時間、室温で撹拌した。反応物を５０℃で蒸発させてアンモニアを除去し、残部を真空下で濃縮して（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル（３６）（２０．３ｇ、１００％）を得、これをさらに精製せずに次の反応に使用した。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0141】

ステップ３．（２－（２－（２－（２－（（（３ａＲ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－４－（ヒドロキシメチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－６－イル）オキシ）－エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル３７の調製
（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル（３６）（２０．３ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２００ｍｌ）中、室温で撹拌した。２，２－ジメトキシプロパン（２７４ｇ、１．６ｍｏｌ）及びｐＴｓＯＨ（触媒）を添加し、反応物を６５℃で１６時間加熱した。反応物を室温に冷却し、ＴＥＡ（２０ｍｌ）を添加し、３０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣をＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ（１０：１）中に取り、反応物を１時間還流した。反応物を真空下で濃縮し（トルエン（×２）と共沸させ、残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２－（２－（２－（２－（（（３ａＲ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－４－（ヒドロキシル－メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－６－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）－エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル（３７）（２４．９ｇ、１００％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0142】

ステップ４．４－メチルベンゼンスルホン酸（（３ａＲ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－２，２－ジメチル－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－４－イル）メチル３８の調製
（２－（２－（２－（２－（（（３ａＲ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－４－（ヒドロキシメチル）－２，２－ジメチル－テトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－６－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル（３７）（２５．５ｇ、４４．８ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（９．９７ｇ、９８．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中、０℃で撹拌した。ｐ－トルエンスルホニルクロリド（１８．８ｇ、９８．５ｍｍｏｌ）を含んだＤＣＭを添加し、反応物を１６時間撹拌して室温に温もらせた。反応物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して４－メチルベンゼンスルホン酸（（３ａＲ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－２，２－ジメチル－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－４－イル）メチル（３８）を得た（２５．５ｇ、７８．８％）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0143】

ステップ５．（２－（２－（２－（２－（（（３ａＳ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－４－（アジドメチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－６－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－エチル）カルバミン酸ベンジル３９の調製
４－メチルベンゼンスルホン酸（（３ａＲ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－２，２－ジメチル－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－４－イル）メチル（３８）（２５．０ｇ、３４．５ｍｍｏｌ）及びＮａＮ_３（２８．７ｇ、４３４．６ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ／Ｈ_２Ｏ（２００ｍｌ／２０ｍｌ）中で１２時間、１００℃で加熱した。反応物を冷却し、ＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ_３との間で分配した。水溶液をさらにもう２回抽出し、合わせた有機物を飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２－（２－（２－（２－（（（３ａＳ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－４－（アジドメチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－６－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル（３９）（１６．１ｇ、７８．２％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0144】

ステップ６．（２－（２－（２－（２－（（（３ａＳ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－４－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－６－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル４０の調製
（２－（２－（２－（２－（（（３ａＳ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－４－（アジドメチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－６－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル（３９）（１６．１ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２００ｍｌ）中、室温で撹拌した。１－エチニル－３－メトキシベンゼン（４．２８ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）、トリス（ベンジルトリアゾリルメチル）アミン（０．７２ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ_４（０．０７ｇ、１ｍｌのＨ_２Ｏの中に０．２７ｍｍｏｌ）及びアスコルビン酸ナトリウム（０．５３ｇ、５ｍｌのＨ_２Ｏの中に２．７ｍｍｏｌ）を順次添加し、反応物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、残渣をＤＣＭ（２００ｍｌ）中に取り、水で洗浄した。水層をＤＣＭで抽出し直し、合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）た。反応物を真空下で濃縮し、残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）によって精製して（２－（２－（２－（２－（（（３ａＳ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－４－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－６－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル（４０）を得た（１５．０ｇ、７６．４％）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0145】

ステップ７．（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル４１の調製
（２－（２－（２－（２－（（（３ａＳ，４Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－７－アセトアミド－４－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）－２，２－ジメチルテトラヒドロ－４Ｈ－［１，３］ジオキソロ［４，５－ｃ］ピラン－６－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバミン酸ベンジル（４０）（１５．０ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（２００ｍｌ）及び１．８４％のＨ_２ＳＯ_４（１８０ｍｌ）の中で９６時間、室温で撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（３×２５０ｍｌ）で抽出し、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮して（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－カルバミン酸ベンジル（４１）（１１．０ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）を得た。生成物を粗製状態で次の反応に使用した。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0146】

ステップ８．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート４２の調製
（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジヒドロキシ－６－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－エチル）カルバミン酸ベンジル（４１）（１１．０ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）をピリジン（２００ｍｌ）中、室温で撹拌した。無水酢酸（１６．３ｇ、１６０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で１６時間撹拌し、続いて５０℃で３時間撹拌した。反応物を水に注ぎ、ＤＣＭ（２５０ｍｌ）で３回抽出した。合わせた有機物を飽和ＮａＨＣＯ_３（×２）、１ＮのＨＣｌ（×２）、水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（４２）を得た（１０．７ｇ、８６．７％）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0147】

ステップ９．（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）－６－（（１，１，１－トリフルオロ－２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３ｌ４－アザテトラデカン－１４－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート４３の調製
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）－６－（（３－オキソ－１－フェニル－２，７，１０，１３－テトラオキサ－４－アザペンタデカン－１５－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（４２）（９．０６ｇ、１１．７４ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（１．４７ｇ、１２．９１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中、室温で撹拌した。反応物を１０％Ｐｄ－Ｃで１時間にわたって水素化した。反応物をセライトで濾過し、真空下で濃縮して（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）－６－（（１，１，１－トリフルオロ－２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３ｌ４－アザテトラデカン－１４－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（４３）（８．８ｇ、９９．７％）を得、これを精製せずに次の反応に使用した。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0148】

スキーム８ 化合物５４の調製

【化33-1】

【化33-2】

ステップ１．過アセチル化ガラクトサミン４４の調製
Ｄ－ガラクトサミン塩酸塩（１４）（２５０ｇ、１．１６ｍｏｌ）を含んだピリジン（１．５Ｌ）を無水酢酸（１．２５Ｌ、１３．２ｍｏｌ）で４５分間掛けて処理した。一晩撹拌した後、反応混合物を３つの１Ｌ部分に分けた。各１Ｌ部分を３Ｌの氷水に注ぎ、１時間にわたって混合した。混合後、固体を濾別し、合わせ、液体窒素で凍結させ、次いで５日間にわたって凍結乾燥して過アセチル化ガラクトサミン（４４）（３６９．４ｇ、８２％）を白色の固体として得た。Ｒｆ（０．５８、１０％ＭｅＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）。

【0149】

ステップ２．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート４５の調製
過アセチル化ガラクトサミン（４４）（２５ｇ、６４．２１ｍｍｏｌ）をスカンジウムトリフラート（１．５８ｇ、３．２１ｍｍｏｌ）と共に無水ＤＣＥ中で３時間、９０℃で加熱した。反応物を室温に冷却し、５ｍｌのＴＥＡで失活させ、真空下で濃縮した。残渣を自動化カラムクロマトグラフィー（２～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（４５）（２７ｇ、７６．５％）を得た。生成物の確認はＭＳによって行った。

【0150】

ステップ３．２－（２－（２－（２－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－アミニウム２，２，２－トリフルオロアセテート４６の調製
アジド４５（７．１２ｇ、１３ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）及びトリフルオロ酢酸（２ｍｌ）の中に含んだ溶液をパラジウム炭（１．５ｇ、湿潤品基準で１０％ｗ／ｗ）で処理した。その後、反応混合物を水素でパージし、一晩激しく撹拌した。窒素でパージした後、混合物をセライトで濾過し、ＭｅＯＨですすいだ。濾液を濃縮し、クロマトグラフィー（５％→１０％→２０％ＭｅＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して４６（５．８ｇ、７２％）を褐色の油として得た。Ｒｆ（０．３４、１５％ＭｅＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２）。

【0151】

ステップ４．（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－ニトロ－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート４８の調製。
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（（１，１，１－トリフルオロ－２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３ｌ４－アザテトラデカン－１４－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（４６）（１３．２５ｇ、２０．８４ｍｍｏｌ）、５－ニトロイソフタル酸（４７）（２．０ｇ、９．５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１２．３ｇ、３２．２１ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（５．７５ｇ、５９．０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で１６時間、室温で撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、１ＭのＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－ニトロ－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（４８）（４．４３ｇ、３８．３％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0152】

ステップ５．（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－アミノ－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート４９の調製
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－ニトロ－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（４８）（２６．１ｇ、２３．０５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中、室温で撹拌した。反応物を１０％Ｐｄ－Ｃ（２．６ｇ）で２時間にわたって室温で水素化した。反応物をセライトで濾過し、真空下で濃縮して（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－アミノ－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（４９）（２８．０ｇ、９９．９％）を得、これをさらに精製せずに次の反応に使用した。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0153】

ステップ６．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－６－（（１－（３－（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－５－アセトキシ－６－（アセトキシメチル）－４－ヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）フェニル）－１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１３－イル）オキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート５１の調製
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－アミノ－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（４９）（０．５ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及びＣＢＺ－ｇｌｙ（５０）（０．０９ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ中、室温で撹拌した。Ｔ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中５０％の溶液）（０．２９ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で一晩撹拌した。追加のＴ３Ｐ（０．３当量）を添加し、反応物をさらに１時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ_３及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮し、残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－６－（（１－（３－（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－５－アセトキシ－６－（アセトキシメチル）－４－ヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）－エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）フェニル）－１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１３－イル）オキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（５１）（０．３３ｇ、５６．８％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0154】

ステップ７．（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－（２－（（２，２，２－トリフルオロアセチル）－ｌ４－アザンイル）アセトアミド）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート５２の調製
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－６－（（１－（３－（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－５－アセトキシ－６－（アセトキシメチル）－４－ヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）フェニル）－１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１３－イル）オキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（５１）（３．３ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（０．２９ｇ、２．５１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中、室温で撹拌した。反応物を１０％Ｐｄ－Ｃ（４００ｍｇ）で２時間にわたって水素化し、セライトで濾過し、真空下で濃縮して（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－（２－（（２，２，２－トリフルオロアセチル）－１４－アザンイル）－アセトアミド）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（５２）（３．２１ｇ、９８．７％）を得、これをさらに精製せずに次の反応に使用した。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0155】

ステップ８．（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－（２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）アセトアミド）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）トリアセテート５３の調製
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－（２－（（２，２，２－トリフルオロアセチル）－１４－アザンイル）アセトアミド）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（５２）（１．０ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）、１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチル－ピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカン酸リチウム（６）（０．４５ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．４７ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（０．２２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で４時間、室温で撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－（２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシ－フェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）アセトアミド）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（５３）（１．０２ｇ、７５．２％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0156】

ステップ９．４－（（１－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸５４の調製
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－（２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）－メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）アセトアミド）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（５４）（１．０５ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（０．２８ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．３５ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（０．５８ｇ、５．６８ｍｍｏｌ）を脱水ＤＣＥ中で２時間、６０℃で加熱した。ＭｅＯＨ（５ｍｌ）を添加し、反応物をさらに３０分間撹拌し、次いで冷却し、真空下で濃縮した。残渣をＤＣＭ中に取り、飽和ＮａＨＣＯ_３（×４）、水及びブラインで順次洗浄した。有機物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮して４－（（１－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸（５４）（１．１ｇ、９９．４％）を得、これを粗生成物として次の反応に使用した。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0157】

スキーム９ 化合物５６の調製

【化34】

ステップ１．（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシ－フェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート５５の調製
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－アミノ－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（４９）（４ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）、１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）－（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカン酸リチウム（６）（２．１３ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１ｍｌ、６．７ｍｍｏｌ）及びＴ３Ｐ（ＥｔＯＡｃ中５０％Ｗ／Ｗの溶液）（４．３ｇ、６．７２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で１６時間、室温で撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシル－メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（５５）（１．３７ｇ、２２．５％）を得た。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0158】

ステップ２．４－（（１－（１０－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸５６の調製
この化合物は、４－（（１－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸（５４）と同様にして調製された。

【0159】

スキーム１０ 化合物５７の調製

【化35】

３－（（（（１－（１０－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジジセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）カルボニル）オキシ）プロパン酸５７の合成
この化合物は、４－（（１－（１０－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸（５４）と同様にして調製された。

【0160】

スキーム１１ 化合物６６の調製

【化36】

ステップ１．５－（ヒドロキシメチル）イソフタル酸ジメチル５９の調製
ベンゼン－１，３，５－トリカルボン酸トリメチル（５８）（４０ｇ、１５９ｍｍｏｌ）及びＮａＢＨ_４をＴＨＦ中、室温で撹拌した。ＭｅＯＨ（３０ｍｌ）を含んだＴＨＦ（１２０ｍｌ）をゆっくり滴加した。滴加終了後、反応物を３０分間還流した。冷却した後、反応物を１ＭのＨＣｌで失活させ、ＥｔＯＡｃに抽出した。有機物を１ＭのＨＣｌ、ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５０／５０のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して５－（ヒドロキシメチル）イソフタル酸ジメチル（５９）を得た（２０．５ｇ、５３．２％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ８．５９（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｓ，２Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），３．９５（ｓ，６Ｈ）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0161】

ステップ２．５－（クロロメチル）イソフタル酸ジメチル６０の調製
５－（ヒドロキシメチル）イソフタル酸ジメチル（５９）（２０．５ｇ、８０．５％）をＳＯＣｌ_２（１１．１ｇ、９４ｍｍｏｌ）中で１．５時間還流した。反応物を冷却し、ＤＣＭで希釈し、０．１ＭのＮａＯＨ（×２）、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して５－（クロロメチル）イソフタル酸ジメチル（６０）を得た（１０．８４ｇ、５３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ８．６５（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｓ，２Ｈ），４．６６（ｓ，２Ｈ），３．９７（ｓ，６Ｈ）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0162】

ステップ３．５－（アジドメチル）イソフタル酸ジメチル６１の調製
５－（クロロメチル）イソフタル酸ジメチル（６０）（１０．８４ｇ、４５ｍｍｏｌ）及びＮａＮ_３（１８ｇ、２７０ｍｍｏｌ）をアセトン／水（３／１）で１６時間還流した。反応物を冷却し、真空下で濃縮し、残渣をＤＣＭ中に取った。有機物を水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して５－（アジドメチル）イソフタル酸ジメチル（６１）を得た（９．８４ｇ、８８％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ８．６６（ｓ，２Ｈ），８．２（ｓ，２Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），３．９７（ｓ，２Ｈ）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0163】

ステップ４．５－（アジドメチル）イソフタル酸６２の調製
５－（アジドメチル）イソフタル酸ジメチル（６１）（９．８４ｇ、３９．５ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ（２．１ｇ、８７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ／ＭｅＯＨ中で４８時間、室温で撹拌した。有機溶媒を真空下で除去し、残渣を１ＭのＨＣｌで酸性化した。水溶液をＥｔＯＡｃ（×３）で抽出し、合わせた有機物を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮して５－（アジドメチル）イソフタル酸（６２）（８．０ｇ、９１．６％）を得、これをさらに精製せずに次の反応に使用した。

【0164】

ステップ５．（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ）－（（（５－（アジドメチル）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート６３の調製
５－（アジドメチル）イソフタル酸（６２）（４．４２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、２－（２－（２－（２－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－アミニウム２，２，２－トリフルオロアセテート（４６）（２５ｇ、４０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２４．４ｇ、６４ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１７ｍｌ、１２０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中で１６時間、室温で撹拌した。反応物を１ＭのＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（７％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ）－（（（５－（アジドメチル）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（６３）を得た（１０．９ｇ、４４．５％）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0165】

ステップ６．（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ）－（（（５－（（（２，２，２－トリフルオロアセチル）－ｌ４－アザンイル）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート６４の調製
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ）－（（（５－（アジドメチル）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（６３）（１０．９ｇ、８．９ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（０．６８ｍｌ、８．９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ中、室温で撹拌した。反応物を１０％Ｐｄ－Ｃで１時間にわたって水素化した。反応物をセライトで濾過し、真空下で濃縮し、残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ）－（（（５－（（（２，２，２－トリフルオロアセチル）－１４－アザンイル）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（６４）を得た（６．４１ｇ、５４．７％）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0166】

ステップ７．（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ）－（（（５－（（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート６５の調製
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ）－（（（５－（（（２，２，２－トリフルオロアセチル）－１４－アザンイル）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（３．０ｇ、２．３ｍｍｏｌ）、１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカン酸リチウム（６５）（１．５ｇ、２．３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．４ｇ、３．７ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１ｍｌ、７．０ｍｍｏｌ）を室温で一晩撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３、水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、真空下で濃縮した。残渣を自動化フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ）－（（（５－（（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）メチル）－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（６５）を得た（１．８ｇ、４３．０％）。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0167】

ステップ８．４－（（１－（１０－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）ベンジル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸６６の調製
この化合物は、４－（（１－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸（５４）と同様にして調製された。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0168】

スキーム１２ 化合物６７の調製

【化37】

４－（（１－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）－３－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸６７の合成
この化合物は、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（２，２，２－トリフルオロアセトアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテートを過アセチル化ガラクトサミン（６）の代わりに使用して５４（スキーム８）と同様にして調製された。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0169】

スキーム１３ 化合物６８の調製

【化38】

４－（（１－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）－３－プロピオンアミドテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸６８の合成
この化合物は、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－プロピオンアミドテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート（１９ｂ）を過アセチル化ガラクトサミン（４４）の代わりに使用して５４（スキーム８）と同様にして調製された。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0170】

スキーム１４ 化合物６９の調製

【化39】

４－（（１－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）－３－（２，２－ジフルオロプロパンアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）－エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸６９の合成
この化合物は、（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－６－（アセトキシメチル）－３－（２，２－ジフルオロプロパンアミド）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，４，５－トリイルトリアセテート（１９ｃ）を過アセチル化ガラクトサミン（４４）の代わりに使用して５４（スキーム８）と同様にして調製された。生成物の確認はＭＳ（ＥＳＩ＋ｖｅ）によって行った。

【0171】

スキーム１５ 化合物７０の調製

【化40】

４－（（１－（１０－（（２－（（３，４－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（メチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸７０の合成
この化合物は、（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（４－ニトロ－１，２－フェニレン）ビス（２－メチル－１－オキソ－５’，８’，１１’－トリオキサ－２’－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（３４）を（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（５－ニトロ－１，３－フェニレン）ビス（１－オキソ－５，８，１１－トリオキサ－２－アザトリデカン－１，１３－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート（４８）の代わりに使用して化合物５４（スキーム８）と同様にして調製された。

【0172】

スキーム１６ 化合物７１の調製

【化41】

４－（（１－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸７１の合成
この化合物は、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（（４－（３－メトキシフェニル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）メチル）－６－（（１，１，１－トリフルオロ－２－オキソ－６，９，１２－トリオキサ－３ｌ４－アザテトラデカン－１４－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（４３）を２－（２－（２－（２－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－アミニウム２，２，２－トリフルオロアセテート（４６）の代わりに使用して化合物５４（スキーム８）と同様にして調製された。

【0173】

スキーム１７ 化合物７２の調製

【化42】

４－（（４－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－２－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－１，２－ジメチルシクロペンチル）メトキシ）－４－オキソブタン酸７２の合成
この化合物は、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）－５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）－６－（２－（２－（２－（（２，２，２－トリフルオロアセチル）－１４－アザンイル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（２４）を２－（２－（２－（２－（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－アミニウム２，２，２－トリフルオロアセテート（４６）の代わりに使用して化合物５４（スキーム８）と同様にして調製された。

【0174】

スキーム１８ 化合物８１の調製

【化43-1】

【化43-2】

ステップ１．１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデカン酸７６の調製
ドデカン二酸（７４）（２１．０ｇ、９１．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍｌ）溶液に、炭酸カリウム（１０ｇ、７２．４ｍｍｏｌ）及び臭化ベンジル（７５）（１０ｍｌ、８４．２ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を８０℃で４時間撹拌し、０℃に冷却し、次いで６ＭのＨＣｌで慎重に酸性化した。水（２５０ｍｌ）で希釈し、酢酸エチルで（５００ｍｌ）する。酢酸エチル抽出物をブライン（３×２５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固した。固体をジクロロメタン（２００ｍｌ）中に懸濁させ、濾過した。今や生成物が濃縮されたものである濾液を濃縮し、シリカゲル６０のカラムクロマトグラフィー（勾配：ＤＣＭ中０から１０％のメタノール）によって精製して１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデカン酸（７６）を無色の固体として得た（１３ｇ、４５％）。構造の確認は質量分析によって行った。

【0175】

ステップ２．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデカンアミド）ベンズアミド）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート７８の調製
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）－エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－アミノベンズアミド）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（７７）（４．０ｇ、３．６ｍｍｏｌ）、１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデカン酸（７６）（１．３ｇ、４．１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．５ｍｌ、１０．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（７５ｍｌ）中に含んだ溶液に、Ｔ３Ｐ（４．５ｇ、約９ｍｌ、酢酸エチル中５０％の溶液）を滴加した。溶液を室温で一晩撹拌した。終了してすぐに、反応混合物をジクロロメタンで希釈し、重炭酸ナトリウム（２００ｍｌ）の飽和溶液で慎重に失活させた。二相溶液を３０分間激しく撹拌した。ＤＣＭ層を分離し、水相をジクロロメタン（１×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮乾固した。残渣をシリカゲル６０のカラムクロマトグラフィー（勾配：ＤＣＭ中０から１０％のＭｅＯＨ）によって精製して表題化合物を無色の固体として得た（１．５ｇ、３０％）。

【0176】

ステップ３．１２－（（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（（２－（２－（２－（（（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－１２－オキソドデカン酸７９の調製
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）－エチル）カルバモイル）－５－（１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデカンアミド）ベンズアミド）エトキシ）エトキシ）－エトキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（７８）（１．５ｇ、１．１ｍｍｏｌ）のメタノール（２５ｍｌ）溶液に、１０％パラジウム炭素（湿潤品基準、１５０ｍｇ、１０％ｗｔ／ｗｔ）を添加した。溶液に水素ガスを１時間にわたって流した。終了してすぐに、溶液に窒素を流し、セライトで濾過し、真空下で濃縮乾固して無色の固体を得た（１．１ｇ、７９％）。

【0177】

ステップ４．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（１２－オキソ－１２－（パーフルオロフェノキシ）ドデカンアミド）ベンズアミド）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート８１の調製
１２－（（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（（２－（２－（２－（（（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－１２－オキソドデカン酸（７９）（０．６ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１２５μＬ、０．９２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍｌ）中に含んだ溶液に、トリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（８０）（１５０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で３０分間撹拌し、その後、真空下で濃縮乾固した。残渣をシリカゲル６０のカラムクロマトグラフィー（勾配：ジクロロメタン中０から１０％のメタノール）によって精製して表題化合物を無色の固体として得た（４７５ｍｇ、７０％）。質量（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ７４１．０（Ｍ＋２Ｈ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．１２（ｓ，１Ｈ），８．５２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｔ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），４．０６－３．９９（ｍ，７Ｈ），３．８８（ｄｔ，Ｊ＝１１．２，８．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．１，５．６，３．９Ｈｚ，２Ｈ），３．６２－３．４６（ｍ，２２Ｈ），３．４６－３．３８（ｍ，５Ｈ），２．７７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．１０（ｓ，７Ｈ），１．９９（ｓ，７Ｈ），１．８９（ｓ，７Ｈ），１．７７（ｓ，７Ｈ），１．６９－１．５４（ｍ，４Ｈ），１．４０－１．２０（ｍ，１４Ｈ）。質量（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ７４１．０（Ｍ＋２Ｈ）。

【0178】

スキーム１９ 化合物９０の調製

【化44-1】

【化44-2】

ステップ１．１２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ドデカン酸８４の調製
１２－アミノドデカン酸（８２）（５．０ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（８３）（６．１ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（６．３ｍｌ、４６．６ｍｍｏｌ）をメタノール（７５ｍｌ）中に含んだ溶液を、６０℃で３時間加熱し、次いで室温で一晩経過させた。終了してすぐに、溶液を真空下で濃縮乾固し、さらに精製せずに次のステップに使用した。

【0179】

ステップ２．１２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ドデカン酸ベンジル８５の調製
粗製１２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ドデカン酸（８４）（９．０ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（８５）（３．１ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ塩酸塩（６．９ｇ、３６．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１２ｍｌ、９０．０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍｌ）中に含んだ溶液を、室温で一晩撹拌した。終了してすぐに、溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液（１００ｍｌ）及びブライン（１００ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固した。シリカゲル６０のカラムクロマトグラフィー（Ｇｒａｄｉｅｎｔ：ヘキサン中０から５０％の酢酸エチル）によって精製して表題化合物を無色の固体として得た（２．０ｇ、２ステップで２１％）。

【0180】

ステップ３．１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデカン－１－アミニウムトリフルオロ酢酸８７の調製
１２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ドデカン酸ベンジル（８６）（２．０ｇ、４．９ｍｍｏｌ）とジクロロメタン（１５ｍｌ）とＴＦＡ（５ｍｌ）との溶液を、室温で一晩撹拌した。反応混合物を濃縮乾固して生成物を粘稠な油として得た（２．１ｇ。定量的）。

【0181】

ステップ４．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（１２－（（１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデシル）アミノ）－１２－オキソドデカンアミド）ベンズアミド）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート８８の調製
１２－（（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（（２－（２－（２－（（（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）－エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－１２－オキソドデカン酸（８８）（７５０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）、１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデカン－１－アミニウムトリフルオロアセテート（８７）（２２５ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（２１０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３ｍｌ、１．６２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍｌ）中に含んだ溶液を、室温で一晩撹拌した。溶液をジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し、飽和重炭酸塩溶液（１００ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタンを硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮乾固した。残渣をシリカゲル６０のカラムクロマトグラフィー（勾配：ジクロロメタン中０～１０％のメタノール）によって精製して表題化合物（８８）を無色の固体（６０５ｍｇ、７０％）として得た。

【0182】

ステップ５．１２－（１２－（（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（（２－（２－（２－（（（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－１２－オキソドデカンアミド）ドデカン酸８９の調製
水素化を先に記載されているように行って（８９）を得た（３５０ｍｇ、５５％）。

【0183】

ステップ６．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）－エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（１２－オキソ－１２－（（１２－オキソ－１２－（パーフルオロフェノキシ）－ドデシル）アミノ）ドデカンアミド）ベンズアミド）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート９０の調製
ＰＦＰエステル形成を先に記載されているように行って必要とする生成物（９０）を得た（１１２ｍｇ、２３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１０．１２（ｓ，１Ｈ），８．９１（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），８．５２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｔ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，２Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），４．０７－３．９６（ｍ，６Ｈ），３．８８（ｄｔ，Ｊ＝１１．２，８．９Ｈｚ，２Ｈ），３．８１－３．７４（ｍ，２Ｈ），３．６４－３．３６（ｍ，２４Ｈ），３．１５－３．０３（ｍ，６Ｈ），２．９９（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），２．１０（ｓ，６Ｈ），１．９９（ｓ，７Ｈ），１．８９（ｓ，７Ｈ），１．７６（ｓ，６Ｈ），１．７０－１．５３（ｍ，３Ｈ），１．４７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．４０－１．１０（ｍ，２９Ｈ）。質量（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ ８３９．７（Ｍ＋２Ｈ）。

【0184】

スキーム２０ 化合物９４の調製

【化45-1】

【化45-2】

ステップ１．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（２－（１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデカンアミド）アセトアミド）ベンズアミド）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート９２の調製
２－（（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（（２－（２－（２－（（（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）－エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエタン－１－アミニウムトリフルオロアセテート（９１）（１．０ｇ、０．８ｍｍｏｌ）、１２－（ベンジルオキシ）－１２－オキソドデカン酸（７６）（２５６ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３４１ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．４ｍｌ、２．４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍｌ）中に含んだ溶液を、室温で一晩撹拌した。終了してすぐに、反応混合物をジクロロメタン（８０ｍｌ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍｌ）で洗浄した。溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮乾固した。残渣をシリカゲル６０のカラムクロマトグラフィー（勾配：ジクロロメタン中０から１０％のメタノール）によって精製して表題化合物を無色の固体として得た（０．８ｇ、６８％）。

【0185】

ステップ２．１２－（（２－（（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（（２－（２－（２－（（（３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１２－オキソドデカン酸９３の調製
化合物９３は、類似する変換のための本明細書に記載の条件に類似した条件を用いて調製された（４５０ｍｇ、６０％）。

【0186】

ステップ３．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）－エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（２－（１２－オキソ－１２－（パーフルオロフェノキシ）ドデカンアミド）アセトアミド）ベンズアミド）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート９４の調製
化合物９４は、類似する変換のための本明細書に記載の条件に類似した条件を用いて調製された（４６０ｍｇ、９１％）。質量（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ １５３７．８（Ｍ＋Ｈ）。

【0187】

スキーム２１ 化合物９５の調製

【化46】

（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）－（（（（（（（（５－（２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（（（（２－シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）－オキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）アセトアミド）－イソフタロイル）ビス（アザンジイル））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））－ビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（５－アセトアミド－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－６，３，４－トリイル）テトラアセテート９５の合成
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）－エチル）カルバモイル）－５－（２－（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデカンアミド）アセトアミド）ベンズアミド）－エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート（７２）（１．６ｇ、０．９ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．４ｍｌ、１．８ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（２５ｍｌ）中に含んだ溶液に、２－シアノエチル Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト（０．３ｍｌ、１．３５ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で７５分間撹拌し、次いで濃縮乾固した。残渣をカラムクロマトグラフィー（勾配：ＤＣＭ（０．１％ＴＥＡ）中０から１０％のＭｅＯＨ）によって精製して生成物を無色の固体として得た（１．１ｇ、６２％）。３１Ｐ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１４６．７６（ｓ），１４６．４２（ｓ，重複する２つの信号），１４６．３４（ｓ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．２０（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），８．１７－８．０９（ｍ，３Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３９－７．２６（ｍ，４Ｈ），７．２６－７．１７（ｍ，６Ｈ），６．９１－６．８３（ｍ，４Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），４．０２（ｓ，６Ｈ），３．９３－３．８２（ｍ，４Ｈ），３．７３（ｓ，１０Ｈ），３．６６－３．３６（ｍ，３５Ｈ），３．２８－３．０６（ｍ，６Ｈ），３．０６－２．８７（ｍ，３Ｈ），２．７２－２．６３（ｍ，Ｊ＝１１．５，５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．１０（ｍ，１２Ｈ），１．９９（ｓ，６Ｈ），１．８９（ｓ，６Ｈ），１．７７（ｓ，６Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），１．２３（ｄｑ，Ｊ＝１３．９，６．４Ｈｚ，１８Ｈ），１．１７－１．０４（ｍ，１０Ｈ），０．９８（ｄｔ，Ｊ＝１３．４，５．９Ｈｚ，１０Ｈ）。

【0188】

スキーム２２ 化合物９６の調製

【化47】

ステップ１．（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（２－（１２－（（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－４－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデシル）アミノ）ドデカンアミド）アセトアミド）ベンズアミド）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート９５の調製
化合物９５は、類似する変換のための本明細書に記載の条件に類似した条件を用いて調製された（１．９ｇ、６１％）。

【0189】

ステップ２：（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）－５－アセトアミド－６－（２－（２－（２－（３－（（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）－エトキシ）エチル）カルバモイル）－５－（２－（１２－（（１０－（３－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）－メチル）－４－（（（（２－シアノエトキシ）（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－１－イル）－１０－オキソデシル）アミノ）ドデカンアミド）アセトアミド）ベンズアミド）－エトキシ）エトキシ）エトキシ）－２－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４－ジイルジアセテート９６の調製
化合物９６は、類似する変換のための本明細書に記載の条件に類似した条件を用いて調製された（１．３５ｇ、６５％）。^３１Ｐ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ１４６．７９（ｓ），１４６．７６（ｓ），１４６．４２（ｓ），１４６．３６（ｓ）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１０．１９（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），８．１３（ｄｄ，Ｊ＝６．１，３．５Ｈｚ，３Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．７１－７．６５（ｍ，１Ｈ），７．３９－７．２５（ｍ，４Ｈ），７．２５－７．１７（ｍ，４Ｈ），６．９２－６．８３（ｍ，４Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．９７（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，３．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），４．０７－３．９７（ｍ，６Ｈ），３．９４－３．８２（ｍ，４Ｈ），３．８２－３．７４（ｍ，２Ｈ），３．７３（ｓ，６Ｈ），３．６２－３．４５（ｍ，２３Ｈ），３．４２（ｍ，６Ｈ），３．２７－２．９２（ｍ，１４Ｈ），２．７３－２．６２（ｍ，２Ｈ），２．１０（ｓ，８Ｈ），１．９９（ｓ，９Ｈ），１．８９（ｓ，６Ｈ），１．７７（ｓ，６Ｈ），１．５２－１．４２（ｍ，６Ｈ），１．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２４Ｈ），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１１Ｈ），１．０９（ｄｔ，Ｊ＝６．７，３．３Ｈｚ，９Ｈ），１．０３－０．９２（ｍ，９Ｈ）。

【0190】

スキーム２３ オリゴヌクレオチドの３’末端によって連結されたオリゴヌクレオチドを有する式Ｉの結合体の一般的合成（化合物７３）

【化48】

４－（（１－（１０－（（２－（（３，５－ビス（（２－（２－（２－（２－（（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－エチル）カルバモイル）フェニル）アミノ）－２－オキソエチル）アミノ）－１０－オキソデカノイル）－４－（（ビス（４－メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ）メチル）－３，４－ジメチルピロリジン－３－イル）メトキシ）－４－オキソブタン酸９７を例としてスクシナートリガンドからＡＳＧＰｒ指向性二座リガンドを合成する一般的方法
標準的なアミドカップリング化学を用いてスクシナートを１０００ÅのＬＣＡＡ（長鎖アミノアルキル）ＣＰＧ（コントロールポアガラス）上に負荷させた。ＬＣＡＡ ＣＰＧ（２．０ｇ）をＤＣＭ（５ｍｌ）及びＭｅＣＮ（７．６ｍｌ）の中に懸濁させた。ジイソプロピルカルボジイミド（１００μｌ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（１１０μＬ、３０μＭ／ｇ）、ピリジン（１１０μＬ）及び５６（２００ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、懸濁液を室温で１６時間穏やかに混合した。ＣＰＧを濾過によって回収し、ＤＣＭ（×３）及びＭｅＣＮ（×３）で洗浄し、高真空下で乾燥させた。５％無水酢酸／５％Ｎ－メチルイミダゾール／５％ピリジンのＴＨＦ溶液を添加し、懸濁液を室温で２時間撹拌した。ＣＰＧを濾過によって回収し、ＤＣＭ（×３）及びＭｅＣＮ（×３）で洗浄し、高真空下で乾燥させた。負荷量は３１．３μｍｏｌ／ｇと決定された（ＵＶ／Ｖｉｓ ５０４ｎｍによるＤＭＴｒアッセイ）。得られたＧａｌＮＡｃ負荷ＣＰＧ固体担体を、標準的な手順を用いる自動化オリゴヌクレオチド合成に採用した。ヌクレオチド脱保護とそれに続く（同時進行でガラクトサミンアセテート脱保護を伴う）固体担体からの除去によってＧａｌＮＡｃ－オリゴヌクレオチド結合体９７が得られた。

【0191】

スキーム２４及びスキーム２５ オリゴヌクレオチドの５’によって連結されたオリゴヌクレオチドを有する式Ｉの結合体（化合物９８）の一般的合成
標準的なカップリング条件を用いてペンタフルオロフェニルエステルを、センス鎖オリゴヌクレオチド上にホスフェート／ホスホロチオエートリンケージを有するＣ_６ ５’－アミノ修飾剤に連結した。標準的な切断及び脱保護によって所望のセンス鎖結合体が得られた。例えばペンタフルオロフェニルエステル８１を使用して以下の結合体９８が得られた。

【化49】

【0192】

標準的なホスホロアミダイトカップリング化学を用いてホスホロアミダイトをセンス鎖末端ヌクレオチドの５’ヒドロキシルに連結した。標準的な切断及び脱保護によって所望のセンス鎖結合体が得られた。例えばホスホロアミダイト９５を使用して以下の結合体９９が得られた。

【化50】

【0193】

実施例１～９
スキーム２３に示した一般的手順を用いて本発明の以下の結合体を調製したが、式中、Ｒ^３ｂは以下の表Ａに記載の改変型ＴＴＲ ｓｉＲＮＡである。質量は、アニーリングした二本鎖ではなく一本鎖生成物のものである。

【0194】

実施例１

【化51】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８１８４．７、測定値：８１８４．２。

【0195】

実施例２

【化52】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８２１２．７、測定値：８２１１．９。

【0196】

実施例３

【化53】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８２１２．７、測定値：８２１２．８。

【0197】

実施例４

【化54】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８０９６．６、測定値：８０９７．０。

【0198】

実施例５

【化55】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８４９９．０、測定値：８４９８．７。

【0199】

実施例６

【化56】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８２８４．７、測定値：８２８３．８。

【0200】

実施例７

【化57】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：７５９６．０、測定値：７５９６．８。

【0201】

実施例８

【化58】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８１４０．６、測定値：８１３９．６。

【0202】

実施例９

【化59】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８０３８．５、測定値：８０３７．５。

【0203】

実施例１０～１１
スキーム２４に示した一般的手順を用いて本発明の以下の結合体を調製したが、式中、Ｒ^３ｂは以下の表Ａに記載の改変型ＴＴＲ ｓｉＲＮＡである。質量は、アニーリングした二本鎖ではなく一本鎖生成物のものである。

【0204】

実施例１０

【化60】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８０５６．７、測定値：８０５６．１。

【0205】

実施例１１

【化61】

ＭＳ（＋ＶＥ）計算値：８２５４．０、測定値：８２５３．５。

【0206】

実施例１２：ＴＴＲ ｓｉＲＮＡ二座結合体の生体内での試験
オリゴヌクレオチドを表Ａに記載の改変型ＴＴＲ ｓｉＲＮＡとした二座結合体（実施例１～８）を、生体内での活性についてＴＴＲノックダウンの野生型マウスモデルで試験した。ＴＴＲ結合体はＴＴＲ（トランスサイレチン）アミロイド症の希少疾患のための治療剤になると見込まれる。この疾患に罹患している者においてトランスサイレチンタンパク質のミスフォールディング及び凝集は疾患の進行と関連があることが知られている。このｓｉＲＮＡ結合体を使用することによって、患者においてミスフォールド／凝集タンパク質の量を減少させることができ、結果として疾患の進行が止まる可能性がある。

【0207】

【表1】

【0208】

ＴＴＲ ｓｉＲＮＡ配列及び動物モデルは両方ともＮａｉｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２０１４，１３６（４９），１６９５８－１６９６１によって記載されている。動物に関する全ての手順は、適切な動物関連業務に関するカナダ動物管理協会（ＣＣＡＣ）ガイドラインに準じて書面による作業手順に従って行われ、地域の動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。

【0209】

ｓｉＲＮＡ処置：雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝４）に肩甲骨領域の皮下注射によって単回２ｍｇ／ｋｇ用量のＴＴＲ ｓｉＲＮＡ結合体を０日目に１回投与した（動物１匹につき１用量）。１つの動物群には、対照としての役割を果たすビヒクルのみ（ＰＢＳ）を投与した。

【0210】

採血：試験品投与後の定められた時点（２、４、５、７、８、９、１４及び２１日目）に全ての動物の試験採血を行って血漿中ＴＴＲレベルの最大減少量、及び薬理活性の持続期間を決定した。

【0211】

分析：Ａｂｎｏｖａプレアルブミン（マウス）ＥＬＩＳＡキット（Ｃｅｄａｒ Ｌａｎｅ、カタログ番号ＫＡ２０７０）を製造業者の指示に従って使用して血漿試料のＴＴＲタンパク質レベルを決定した。ＴＴＲ血漿中タンパク質値を個々の血漿試料について算出し、各群の平均値を決定した。これらの平均値から、対照に対するＴＴＲタンパク質レベル（ＰＢＳ処置動物に対する％）を決定した。

【0212】

結果：試験からの結果を表Ｂに示す。値は、処置後２、４、５、７、８、９、１４及び２１日目の（ＰＢＳ対照に対する）ＴＴＲタンパク質レベル％を表す。

【0213】

結論：ＴＴＲ二座結合体で処置された動物は、標的ｍＲＮＡ及びタンパク質の著しいノックダウンを呈し、ＴＴＲタンパク質の最大ノックダウンが皮下注射後４～９日目に起こった。

【0214】

【表2】

【0215】

実施例１３：ＴＴＲ ｓｉＲＮＡ二座結合体の生体内での試験
一価、二座、三価及び四価結合体（化合物Ａ～Ｄ）〔式中、Ｒ^３ｂは上記表Ａに記載の改変型ＴＴＲ ｓｉＲＮＡである〕を、生体内での活性についてＴＴＲノックダウンの野生型マウスモデルで試験した。
化合物Ａ（一価）

【化62】

化合物Ｂ（二座）

【化63】

化合物Ｃ（三価）

【化64】

化合物Ｄ（四価）

【化65】

ＴＴＲ結合体はＴＴＲ（トランスサイレチン）アミロイド症の希少疾患のための治療剤になると見込まれる。この疾患に罹患している者においてトランスサイレチンタンパク質のミスフォールディング及び凝集は疾患の進行と関連があることが知られている。このｓｉＲＮＡ結合体を使用することによって、患者においてミスフォールド／凝集タンパク質の量が減少する可能性があり、結果として疾患の進行が止まる可能性がある。

【0216】

ＴＴＲ ｓｉＲＮＡ配列及び動物モデルは両方ともＮａｉｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２０１４，１３６（４９），１６９５８－１６９６１によって記載されている。動物に関する全ての手順は、適切な動物関連業務に関するカナダ動物管理協会（ＣＣＡＣ）ガイドラインに準じて書面による作業手順に従って行われ、地域の動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認された。

【0217】

ｓｉＲＮＡ処置：雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝４）に肩甲骨領域の皮下注射によって単回２ｍｇ／ｋｇ用量のＴＴＲ ｓｉＲＮＡ結合体を０日目に１回投与した（動物１匹につき１用量）。１つの動物群には、対照としての役割を果たすビヒクルのみ（ＰＢＳ）を投与した。

【0218】

採血：試験品投与後の定められた時間点（２、５、７、１４及び２１日目）に全ての動物の試験採血を行って血漿中ＴＴＲレベルの最大減少量、及び薬理活性の持続期間を決定した。

【0219】

分析：Ａｂｎｏｖａプレアルブミン（マウス）ＥＬＩＳＡキット（Ｃｅｄａｒ Ｌａｎｅ、カタログ番号ＫＡ２０７０）を製造業者の指示に従って使用して血漿試料のＴＴＲタンパク質レベルを決定した。ＴＴＲ血漿中タンパク質値を個々の血漿試料について算出し、各群の平均値を決定した。これらの平均値から、対照に対するＴＴＲタンパク質レベル（ＰＢＳ処置動物に対する％）を決定した。

【0220】

結果：試験からの結果を表Ｃに示す。値は、処置後２、５、７、１４及び２１日目の（ＰＢＳ対照に対する）ＴＴＲタンパク質レベル％を表す。

【0221】

結論：ＴＴＲ二座、三価及び四価結合体で処置された動物は、標的ｍＲＮＡ及びタンパク質のノックダウンを同程度のレベルで呈し、ＴＴＲタンパク質の最大ノックダウンが皮下注射後２～７日目に起こった。ＴＴＲ一価結合体は、あってもほんのわずかである標的ｍＲＮＡ及びタンパク質のノックダウンを示した。

【0222】

【表3】

【配列表】

2022506517000001.app

【国際調査報告】