特表2022-506548化合物の抗ＰＣＳＫ９（抗プロタンパク質変換酵素スブチリシン ケキシン９型）ナノ製剤および心血管疾患の治療および／または予防におけるその使用方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-17
(54)【発明の名称】化合物の抗ＰＣＳＫ９（抗プロタンパク質変換酵素スブチリシン ケキシン９型）ナノ製剤および心血管疾患の治療および／または予防におけるその使用方法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/424 20060101AFI20220107BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20220107BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220107BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20220107BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20220107BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20220107BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220107BHJP
A61P 9/08 20060101ALI20220107BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220107BHJP
A61K 9/14 20060101ALI20220107BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20220107BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20220107BHJP
A61K 47/38 20060101ALI20220107BHJP
A61K 47/32 20060101ALI20220107BHJP
A61K 47/28 20060101ALI20220107BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20220107BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220107BHJP
A61K 31/397 20060101ALI20220107BHJP
A61K 31/194 20060101ALI20220107BHJP
【ＦＩ】
A61K31/424
A61P3/06
A61P9/10 101
A61P9/00
A61P3/04
A61P3/00
A61P3/10
A61P9/08
A61P43/00 121
A61P43/00 111
A61K9/14
A61K47/36
A61K47/34
A61K47/38
A61K47/32
A61K47/28
A61K47/26
A61K45/00
A61K31/397
A61K31/194
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021523959
(86)(22)【出願日】2019-11-05
(85)【翻訳文提出日】2021-04-30
(86)【国際出願番号】 US2019059777
(87)【国際公開番号】W WO2020097016
(87)【国際公開日】2020-05-14
(31)【優先権主張番号】62/755,709
(32)【優先日】2018-11-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516104010
【氏名又は名称】シファ バイオメディカル コーポレーション
(74)【代理人】
【識別番号】110000109
【氏名又は名称】特許業務法人特許事務所サイクス
(72)【発明者】
【氏名】ムーサ シェーカー エイ
(72)【発明者】
【氏名】エルショーバギー ナビル エイ
(72)【発明者】
【氏名】メイヤーズ ハロルド ヴィ
(72)【発明者】
【氏名】アブデル ミギード シェリン サラヘルディン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C076AA31
4C076AA95
4C076CC11
4C076CC21
4C076DD69
4C076DD70
4C076EE16
4C076EE24
4C076EE33
4C076EE37
4C076FF68
4C084AA19
4C084MA41
4C084NA05
4C084ZA361
4C084ZA391
4C084ZA451
4C084ZA701
4C084ZC201
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4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC03
4C086BC70
4C086GA02
4C086GA07
4C086MA02
4C086MA03
4C086MA05
4C086MA41
4C086NA05
4C086NA13
4C086ZC33
4C086ZC75
4C206AA01
4C206AA02
4C206DA36
4C206MA02
4C206MA03
4C206MA05
4C206MA61
4C206NA05
4C206ZC33
4C206ZC75
(57)【要約】
プロタンパク質変換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）の生理学的作用を調節するナノ処方化合物，ならびにＬＤＬおよび関連コレステロールレベルを低下させるための，ならびに／または高コレステロール血症の処置を含む心血管疾患（ＣＶＤ）の処置および／または予防のための，このような化合物の使用のための治療方法が開示される．
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ナノ粒子内にカプセル化された少なくとも１つのＰＣＳＫ９アンタゴニストを含むナノ粒子であって，前記ＰＣＳＫ９アンタゴニストが式（Ｉ）の化合物（前記化合物の薬学的に許容される塩および立体異性体を含む．）であるナノ粒子：【化1】
Ｒ２およびＲ３が，Ｈ，ハロゲン，（Ｃ１－Ｃ３）-アルキルおよび（Ｃ１－Ｃ３）-アルコキシからなる群から独立して選択され，
Ｒ４が，ＣＯ２Ｒ５，ＣＯＮＲ５Ｒ６，アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され，
ここで，Ｒ５およびＲ６が，Ｈおよび（Ｃ１－Ｃ３）-アルキルからなる群から独立して選択される，
【請求項2】
Ｒ４が，アリールまたはヘテロアリールである，請求項１に記載のナノ粒子．
【請求項3】
Ｒ４が，２-オキサゾール，２-オキサゾリン，２-ベンゾオキサゾールおよび２-ベンゾイミダゾールからなる群から選択される，請求項２に記載のナノ粒子．
【請求項4】
前記ＰＣＳＫ９アンタゴニストが，式（ＩＩ）の化合物（前記化合物の薬学的に許容可能な塩および立体異性体を含む．）請求項１～３のいずれか１項に記載のナノ粒子：【化2】
Ｒ２が，Ｈまたはメトキシであり；
Ｒ３が，Ｈまたはハロゲンであり，そして，
Ｒ７が，Ｈおよび（Ｃ１－Ｃ２）-アルキルからなる群から独立して選択され，またはＲ７は一緒になって，任意に置換された６員炭素環を形成する，
【請求項5】
Ｒ1が，Ｈである場合，Ｒ2はＨであり，そして，Ｒ1が，メチルである場合，Ｒ2はメトキシである，請求項４に記載のナノ粒子．
【請求項6】
Ｒ7が一緒になってアリールを形成する，請求項４または５に記載のナノ粒子．
【請求項7】
前記ハロゲンがフッ素である，請求項１～６のいずれか１項に記載のナノ粒子．
【請求項8】
前記ＰＣＳＫ９アンタゴニストが，ＳＢＣ－１１５，４１８，
ＳＢＣ－１１５，４３３，
ＳＢＣ－１１５，４４８，
ＳＢＣ－１１５，４６２および
ＳＢＣ－１１５，４７７からなる群より選択される，請求項１～７のいずれか１項に記載のナノ粒子．
【請求項9】
前記ＰＣＳＫ９アンタゴニストが，ＳＢＣ-１１５，４１８である，請求項１～８のいずれか１項に記載のナノ粒子．
【請求項10】
前記ナノ粒子が疎水性である，請求項１～９のいずれか１項に記載のナノ粒子．
【請求項11】
前記ナノ粒子が，キトサンハイブリッドナノ粒子，アミン修飾ポリ（乳酸-コ-グリコール酸)(ＰＬＧＡ)ナノ粒子，固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）ナノ粒子，ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートコハク酸塩（HPMC-ＡＳ）ナノ粒子，またはそれらの組み合わせである，請求項１～１０のいずれか１項に記載のナノ粒子．
【請求項12】
前記ナノ粒子が，キトサンおよびポリ（乳酸-コ-グリコール酸)(ＰＬＧＡ)を含む，請求項１１に記載のナノ粒子．
【請求項13】
前記ナノ粒子が，ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートコハク酸塩（HPMC-ＡＳ）を含む，請求項１１に記載のナノ粒子．
【請求項14】
前記ナノ粒子が，ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびキトサンを含む，請求項１１に記載のナノ粒子．
【請求項15】
前記ナノ粒子が，ナノ粒子の外側に肝臓標的化部分を含む，請求項１～１４のいずれか１項に記載のナノ粒子．
【請求項16】
前記肝臓標的化部分が，グリチルレチン酸（ＧＡ），ラクトビオン酸（ＬＡ），アルギン酸およびそれらの組み合わせからなる群より選択される，請求項１５に記載のナノ粒子．
【請求項17】
前記キトサンハイブリッドナノ粒子が，脂肪酸に架橋されたキトサン，アミノ酸に架橋されたキトサン，ヒアルロン酸に架橋されたキトサン，デオキシコール酸に架橋されたキトサン，アルギン酸に架橋されたキトサン，ＰＬＧＡに架橋されたキトサン，およびコラーゲン-ヒドロキシアパタイトに架橋されたキトサンからなる群から選択される，請求項１１に記載のナノ粒子．
【請求項18】
前記脂肪酸が，ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ），エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ），ＤＨＡおよびＥＰＡ，リノール酸，ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される，請求項１７に記載のナノ粒子．
【請求項19】
前記アミノ酸が，アルギニンを含む，請求項１７に記載のナノ粒子．
【請求項20】
前記ナノ粒子が，少なくとも１つの他のＬＤＬ低下物質をさらに封入する，請求項１～１９のいずれか１項に記載のナノ粒子．
【請求項21】
前記ＬＤＬ低下物質が抗脂質異常症剤である，請求項２０に記載のナノ粒子．
【請求項22】
前記抗脂質異常症剤が，スタチン，エゼチミブ，ベムペド酸，甲状腺ホルモン受容体βアゴニスト，またはそれらの組み合わせである，請求項２１に記載のナノ粒子．
【請求項23】
請求項１～２２のいずれか１項に記載のナノ粒子と，生理学的に適合性の担体媒体とを含む組成物．
【請求項24】
対象の肝臓にＰＣＳＫ９アンタゴニストを送達するための方法であって，前記方法は，前記対象に請求項１～２３のいずれか１項に記載の少なくとも１つのナノ粒子を投与することを含む，方法．
【請求項25】
前記対象がヒトである，請求項２４に記載の方法．
【請求項26】
前記ナノ粒子が，生理学的に適合性の担体媒体をさらに含む組成物中で前記対象に投与される，請求項２４に記載の方法．
【請求項27】
対象における，血清コレステロール，ＬＤＬ-Ｃ，および／またはトリグリセリドを低下させるための，および／または遊離コレステロール，コレステロールエステル，ＨＤＬ-Ｃなどの他の脂質バイオマーカーを調節するための方法であって，前記方法が，前記対象に，請求項１～２２のいずれか１項に記載の少なくとも１つのナノ粒子を投与することを含む，方法．
【請求項28】
前記対象がヒトである，請求項２７に記載の方法．
【請求項29】
前記ナノ粒子が，生理学的に適合性の担体媒体をさらに含む組成物中で，前記対象に投与される，請求項２７に記載の方法．
【請求項30】
前記対象が，脂質異常症，アテローム性動脈硬化症，心血管疾患，高コレステロール血症，家族性高コレステロール血症，肥満，メタボリックシンドローム，２型糖尿病，腹部大動脈瘤およびそれらの組み合わせからなる群より選択される障害を有する，請求項２７～２９のいずれか一項記載の方法．
【請求項31】
前記対象における血清コレステロール，トリグリセリド，および／または脂質プロフィールの低下が，前記対象の心血管リスクを低下させるのに十分である，請求項２７～２９のいずれか１項に記載の方法．
【請求項32】
前記治療を必要とする患者における，高コレステロール血症，および／または脂質異常症，アテローム性動脈硬化症，ＣＶＤまたは冠状動脈心疾患の少なくとも１つの症状を治療または予防するための方法であって，前記患者に治療有効量の請求項１～２２のいずれか１項に記載の少なくとも１つのナノ粒子を投与することを含む方法．
【請求項33】
前記ナノ粒子が，生理学的に適合性の担体媒体をさらに含む組成物中で前記対象に投与される，請求項３２に記載の方法．
【請求項34】
少なくとも１つの他のＬＤＬ低下物質の投与をさらに含む，請求項２４～３３のいずれか１項に記載の方法．
【請求項35】
前記ＬＤＬ低下物質が抗脂質異常症剤である，請求項３４に記載の方法．
【請求項36】
前記抗脂質異常症剤が，スタチン，エゼチミブ，ベムペド酸，甲状腺ホルモン受容体βアゴニスト，またはそれらの組み合わせである，請求項３５に記載の方法．
【請求項37】
ＰＶＰ／ＨＰＭＣ-ＡＳ／ＳＢＣ-１１５，４１８またはその類似体と肝臓標的化部分との組合せを含むナノ製剤．
【請求項38】
前記肝臓標的化部分が，グリチルレチン酸（ＧＡ），ラクトビオン酸（ＬＡ），アルギン酸，またはそれらの組み合わせからなる群より選択される，請求項３７に記載のナノ製剤．
【請求項39】
ＳＢＣ－１１５，４３３，ＳＢＣ－１１５，４４８，ＳＢＣ－１１５，４６２およびＳＢＣ－１１５，４７７からなる群より選択される化合物．
【請求項40】
ＳＢＣ－１１５，４４８，ＳＢＣ－１１５，４６２およびＳＢＣ－１１５，４７７からなる群より選択される，請求項３９に記載の化合物．
【請求項41】
ＳＢＣ-１１５，４７７である，請求項３９に記載の化合物．
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は，２０１８年１１月５日に出願された米国仮特許出願第６２／７５５，７０９号に対する３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ． §１１９（ｅ）に基づく優先権を主張するものである．
前述の出願は，参照により本明細書に組み込まれる．
前述の出願は，参照により本明細書に組み込まれる．
【0002】
連邦政府支援の研究または開発に関する声明
本発明は，米国国立心肺血液研究所（ＮＨＬＢＩ）から授与されたＳＢＩＲグラントＮｏ．ＨＬ１３７４４９に基づく政府の支援を受けて行われた．
政府は本発明について一定の権利を有する．
本発明は，米国国立心肺血液研究所（ＮＨＬＢＩ）から授与されたＳＢＩＲグラントＮｏ．ＨＬ１３７４４９に基づく政府の支援を受けて行われた．
政府は本発明について一定の権利を有する．
【0003】
発明の属する技術分野
本発明は，低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）との相互作用を含む，プロタンパク質変換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）の生理学的作用を調節する化合物のナノ製剤に関する．
特定の実施形態において，本発明は，ＰＣＳＫ９阻害剤またはアンタゴニスト（たとえば，ＳＢＣ-１１５，４１８またはそのアナログ（たとえば，ＷＯ ２０１７／２２２９５３を参照のこと））の，対象の肝臓への肝臓標的化送達のための組成物および関連する方法に関する．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子，各ナノ粒子の外側に付着または連結された（たとえば，共有結合的に）肝臓標的化部分（たとえば，米国特許第９，６８２，０８５号を参照のこと），および各ナノ粒子内にカプセル化された少なくとも１つのＰＣＳＫ９阻害剤またはアンタゴニスト（たとえば，ＳＢＣ-１１５，４１８）を含む組成物が提供される．
ナノ粒子は，キトサンハイブリッドナノ粒子，アミン修飾ポリ-（乳酸-コ-グリコール酸)(ＰＬＧＡ)ナノ粒子，固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ），および／またはそれらの組み合わせを含んでもよい．
肝臓標的化部分の例としては，グリチルレチン酸（ＧＡ），ラクトビオン酸（ＬＡ），アルギン酸，および／またはそれらの組み合わせが挙げられる．
ＰＣＳＫ９機能の小分子モジュレーターは，血液中のＬＤＬ－コレステロールレベルを低下させるために治療的に使用することができ，高コレステロール血液症，家族性高コレステロール血液症，アテローム生成性脂質異常症，アテローム性動脈硬化症，およびより一般的には心血液管疾患（ＣＶＤ），糖尿病を含むコレステロール，脂質，およびリポタンパク質代謝障害の予防および／または治療，ならびに心血液管リスクの高い肥満被験者に使用することができる．
本発明は，低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）との相互作用を含む，プロタンパク質変換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）の生理学的作用を調節する化合物のナノ製剤に関する．
特定の実施形態において，本発明は，ＰＣＳＫ９阻害剤またはアンタゴニスト（たとえば，ＳＢＣ-１１５，４１８またはそのアナログ（たとえば，ＷＯ ２０１７／２２２９５３を参照のこと））の，対象の肝臓への肝臓標的化送達のための組成物および関連する方法に関する．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子，各ナノ粒子の外側に付着または連結された（たとえば，共有結合的に）肝臓標的化部分（たとえば，米国特許第９，６８２，０８５号を参照のこと），および各ナノ粒子内にカプセル化された少なくとも１つのＰＣＳＫ９阻害剤またはアンタゴニスト（たとえば，ＳＢＣ-１１５，４１８）を含む組成物が提供される．
ナノ粒子は，キトサンハイブリッドナノ粒子，アミン修飾ポリ-（乳酸-コ-グリコール酸)(ＰＬＧＡ)ナノ粒子，固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ），および／またはそれらの組み合わせを含んでもよい．
肝臓標的化部分の例としては，グリチルレチン酸（ＧＡ），ラクトビオン酸（ＬＡ），アルギン酸，および／またはそれらの組み合わせが挙げられる．
ＰＣＳＫ９機能の小分子モジュレーターは，血液中のＬＤＬ－コレステロールレベルを低下させるために治療的に使用することができ，高コレステロール血液症，家族性高コレステロール血液症，アテローム生成性脂質異常症，アテローム性動脈硬化症，およびより一般的には心血液管疾患（ＣＶＤ），糖尿病を含むコレステロール，脂質，およびリポタンパク質代謝障害の予防および／または治療，ならびに心血液管リスクの高い肥満被験者に使用することができる．
【0004】
発明の背景技術
心血管疾患（ＣＶＤ）は主要な死因であり，アテローム性動脈硬化症が心血管疾患の主要な原因である．
アテローム性動脈硬化症は動脈の疾患であり，先進工業国における多くの死亡に関連する冠動脈性心疾患の原因となっている．
現在，冠動脈性心疾患のいくつかの危険因子が同定されており，これには，脂質異常症，高血圧，糖尿病，喫煙，不良な食餌，不活発およびストレスが含まれるが，これらに限定されない．
脂質異常症は，アテローム性動脈硬化症の発症に寄与する血漿コレステロール（高コレステロール血症）および／またはトリグリセリド（ＴＧ）または低高密度リポ蛋白質（ＨＤＬ）レベルの上昇であり，これは心血管疾患に寄与することが証明されている代謝障害である．
血液中では，コレステロールはリポタンパク質粒子中に輸送され，そこで，低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）は「悪い」コレステロールと考えられ，ＨＤＬ－コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）は「良い」コレステロールとして知られている．
脂質およびリポ蛋白異常は，一般集団において極めて一般的であり，アテローム性動脈硬化症に対するコレステロールの影響により，心血管疾患の高度に修飾可能な危険因子とみなされている．
スタチンによる治療（アテローム性動脈硬化症における現在の標準治療）にもかかわらず発生する心血管イベント，心臓発作および脳卒中の６０～７０％を伴うＣＶＤに関しては，かなりのアンメットニーズがある．
さらに，新たなガイドラインでは，高リスク患者を早発性ＣＶＤから守るためにはさらに低いＬＤＬ濃度を達成すべきであることが示唆されている（１）．
心血管疾患（ＣＶＤ）は主要な死因であり，アテローム性動脈硬化症が心血管疾患の主要な原因である．
アテローム性動脈硬化症は動脈の疾患であり，先進工業国における多くの死亡に関連する冠動脈性心疾患の原因となっている．
現在，冠動脈性心疾患のいくつかの危険因子が同定されており，これには，脂質異常症，高血圧，糖尿病，喫煙，不良な食餌，不活発およびストレスが含まれるが，これらに限定されない．
脂質異常症は，アテローム性動脈硬化症の発症に寄与する血漿コレステロール（高コレステロール血症）および／またはトリグリセリド（ＴＧ）または低高密度リポ蛋白質（ＨＤＬ）レベルの上昇であり，これは心血管疾患に寄与することが証明されている代謝障害である．
血液中では，コレステロールはリポタンパク質粒子中に輸送され，そこで，低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）は「悪い」コレステロールと考えられ，ＨＤＬ－コレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）は「良い」コレステロールとして知られている．
脂質およびリポ蛋白異常は，一般集団において極めて一般的であり，アテローム性動脈硬化症に対するコレステロールの影響により，心血管疾患の高度に修飾可能な危険因子とみなされている．
スタチンによる治療（アテローム性動脈硬化症における現在の標準治療）にもかかわらず発生する心血管イベント，心臓発作および脳卒中の６０～７０％を伴うＣＶＤに関しては，かなりのアンメットニーズがある．
さらに，新たなガイドラインでは，高リスク患者を早発性ＣＶＤから守るためにはさらに低いＬＤＬ濃度を達成すべきであることが示唆されている（１）．
【0005】
ＰＣＳＫ９とコレステロール代謝との関連性の確立は，ＰＣＳＫ９遺伝子の特定の変異が常染色体優性高コレステロール血症を引き起こすこと（２）の直後の発見が続き，この変異がＰＣＳＫ９の正常な活性を増加させることによって機能獲得をもたらすことが示唆された（３）．
これは，ワイルドタイプと変異ＰＣＳＫ９（Ｓ１２７ＲおよびＦ２１６Ｌ）が，マウスの肝臓において高いレベルで表現され，ワイルドタイプまたは変異ＰＣＳＫ９を受け取ったマウスにおいて，肝臓ＬＤＬＲタンパク質レベル劇的に低下することが判明した実験によって支持された（４，５）．
ＬＤＬＲ ｍＲＮＡレベルの関連する減少は観察されず，突然変異体または野生型のいずれであっても，ＰＣＳＫ９の過剰発現が転写後機構を介してＬＤＬＲを減少させることを示した．
これは，ワイルドタイプと変異ＰＣＳＫ９（Ｓ１２７ＲおよびＦ２１６Ｌ）が，マウスの肝臓において高いレベルで表現され，ワイルドタイプまたは変異ＰＣＳＫ９を受け取ったマウスにおいて，肝臓ＬＤＬＲタンパク質レベル劇的に低下することが判明した実験によって支持された（４，５）．
ＬＤＬＲ ｍＲＮＡレベルの関連する減少は観察されず，突然変異体または野生型のいずれであっても，ＰＣＳＫ９の過剰発現が転写後機構を介してＬＤＬＲを減少させることを示した．
【0006】
ＰＣＳＫ９の機能獲得型突然変異が高コレステロール血症を引き起こすことを考えると，機能喪失型突然変異が逆の作用を持ち，低コレステロール血症をもたらすかどうかを尋ねるのは妥当であった．
ＰＣＳＫ９における３つの機能損失変異（Ｙ１４２Ｘ，Ｌ２５３Ｆ，Ｃ６７９Ｘ）は，アフリカ系アメリカ人で確認された（６）．
これらの変異は，ＬＤＬ－Ｃ値を２８％低下させ，そして，冠動脈性心疾患（心筋梗塞，冠動脈死または冠動脈血行再建と定義）の発生頻度を８８％低下させることが示された．
Ｒａｓｈｉｄら（７）は，ＰＣＳＫ９が不活性化されたマウスの機能喪失型変異のメカニズムを研究した．
彼らは，これらのノックアウトマウスが，肝ＬＤＬＲタンパク質（ｍＲＮＡではない）の増加，循環リポタンパク質のクリアランスの増加，および血漿コレステロールレベルの低下を示したことを報告した．
ＰＣＳＫ９の自然発生突然変異の構造－機能相関分析からも，ＰＣＳＫ９の作用機序に関する洞察が得られている．
興味深いことに，ＬＤＬ－Ｃ血漿レベルの最大の低下と関連していることが判明したＰＣＳＫ９の変異は，成熟したＰＣＳＫ９の合成（Ｙ１４２Ｘ），自己触媒加工（Ｌ２５３Ｆ），または折りたたみ（Ｃ６７９Ｘ)を妨げることによって，成熟したＰＣＳＫ９の分泌を阻害するものである(８）．
Ｙ１４２Ｘ変異は，転写の初期に起こり，ナンセンス仲介型ｍＲＮＡ崩壊を開始すると予測されるので，検出可能なタンパク質を生み出さない．
触媒ドメイン（Ｌ２５３Ｆ）における突然変異は，タンパク質の自己触媒切断を妨害する．
ＰＣＳＫ９－２５３Ｆを発現する細胞では，ＰＣＳＫ９－ＷＴを発現する細胞に比べて，成熟タンパク質の量が減少し，その変異が自己触媒による切断を阻害することを示唆した．
Ｌ２５３Ｆの変異は触媒三角地帯に近い（ＰＣＳＫ９はセリンプロテイージーである）ため，活性部位を妨害する可能性がある（８）．
小胞体（ＥＲ）からのタンパク質の輸出には，ＰＣＳＫ９の自己触媒的切断が必要であるが，Ｌ２５３Ｆ変異は，ＥＲから細胞表面へのＰＣＳＫ９の輸送を遅らせる．
ＰＣＳＫ９のナンセンス変異（Ｃ６７９Ｘ）は，タンパク質を１４個のアミノ酸で切断するものであるが，タンパク質のプロセシングには干渉しない．しかし，成熟したタンパク質は細胞内に蓄積し，分泌されるものはないことから，タンパク質は正常に切断されるが，ミスフォールドして，小胞体（ＥＲ）に保持されていると考えられる（８，９）．
ＰＣＳＫ９における３つの機能損失変異（Ｙ１４２Ｘ，Ｌ２５３Ｆ，Ｃ６７９Ｘ）は，アフリカ系アメリカ人で確認された（６）．
これらの変異は，ＬＤＬ－Ｃ値を２８％低下させ，そして，冠動脈性心疾患（心筋梗塞，冠動脈死または冠動脈血行再建と定義）の発生頻度を８８％低下させることが示された．
Ｒａｓｈｉｄら（７）は，ＰＣＳＫ９が不活性化されたマウスの機能喪失型変異のメカニズムを研究した．
彼らは，これらのノックアウトマウスが，肝ＬＤＬＲタンパク質（ｍＲＮＡではない）の増加，循環リポタンパク質のクリアランスの増加，および血漿コレステロールレベルの低下を示したことを報告した．
ＰＣＳＫ９の自然発生突然変異の構造－機能相関分析からも，ＰＣＳＫ９の作用機序に関する洞察が得られている．
興味深いことに，ＬＤＬ－Ｃ血漿レベルの最大の低下と関連していることが判明したＰＣＳＫ９の変異は，成熟したＰＣＳＫ９の合成（Ｙ１４２Ｘ），自己触媒加工（Ｌ２５３Ｆ），または折りたたみ（Ｃ６７９Ｘ)を妨げることによって，成熟したＰＣＳＫ９の分泌を阻害するものである(８）．
Ｙ１４２Ｘ変異は，転写の初期に起こり，ナンセンス仲介型ｍＲＮＡ崩壊を開始すると予測されるので，検出可能なタンパク質を生み出さない．
触媒ドメイン（Ｌ２５３Ｆ）における突然変異は，タンパク質の自己触媒切断を妨害する．
ＰＣＳＫ９－２５３Ｆを発現する細胞では，ＰＣＳＫ９－ＷＴを発現する細胞に比べて，成熟タンパク質の量が減少し，その変異が自己触媒による切断を阻害することを示唆した．
Ｌ２５３Ｆの変異は触媒三角地帯に近い（ＰＣＳＫ９はセリンプロテイージーである）ため，活性部位を妨害する可能性がある（８）．
小胞体（ＥＲ）からのタンパク質の輸出には，ＰＣＳＫ９の自己触媒的切断が必要であるが，Ｌ２５３Ｆ変異は，ＥＲから細胞表面へのＰＣＳＫ９の輸送を遅らせる．
ＰＣＳＫ９のナンセンス変異（Ｃ６７９Ｘ）は，タンパク質を１４個のアミノ酸で切断するものであるが，タンパク質のプロセシングには干渉しない．しかし，成熟したタンパク質は細胞内に蓄積し，分泌されるものはないことから，タンパク質は正常に切断されるが，ミスフォールドして，小胞体（ＥＲ）に保持されていると考えられる（８，９）．
【0007】
ＰＣＳＫ９がＬＤＬＲの分解を引き起こす機構は，完全には解明されていない．
しかしながら，ＰＣＳＫ９のプロテアーゼ活性が，ＬＤＬＲ分解に必要でないことは明らかである（１０，１１）．
しかしながら，ＰＣＳＫ９のプロテアーゼ活性が，ＬＤＬＲ分解に必要でないことは明らかである（１０，１１）．
【0008】
Ｌｉら（１０）は，プロドメインおよび触媒ドメインを共発現し，分泌されたＰＣＳＫ９が触媒的に不活性であるが，細胞のＬＤＬ取り込みおよびＬＤＬＲレベルを低下させる点で野生型タンパク質と機能的に同等であることを示した．
ＭｃＮｕｔｔら（１１）も同様の研究を報告している．
さらに，Ｚｈａｎｇら（１２）は，ＰＣＳＫ９結合をＬＤＬＲのＥＧＦ-Ａ反復にマッピングし，そのような結合が受容体リサイクルを減少させ，その分解を増加させることを示した．
彼らはまた，ＥＧＦ-Ａドメインへの結合がカルシウム依存性であり，ｐＨが７から５．２に低下することにつれて劇的に増加することを報告した．
Ｋｗｏｎら（１３）は，ＬＤＬＲ-ＥＧＦ-ＡＢ（ＥＧＦ-ＡおよびＥＧＦ-Ｂ）との複合体におけるＰＣＳＫ９の結晶構造を決定した．
この構造は，十分に規定されたＥＧＦ－Ａドメインを示すが，ＥＧＦ－Ｂドメインは無秩序であり，それらの電子密度マップには存在しない．
ＥＧＦ-Ａドメインは，触媒部位から離れた部位でＰＣＳＫ９触媒ドメインに結合し，Ｃ末端ドメインまたはプロドメインのいずれとも接触しない（１４）．
ＭｃＮｕｔｔら（１１）も同様の研究を報告している．
さらに，Ｚｈａｎｇら（１２）は，ＰＣＳＫ９結合をＬＤＬＲのＥＧＦ-Ａ反復にマッピングし，そのような結合が受容体リサイクルを減少させ，その分解を増加させることを示した．
彼らはまた，ＥＧＦ-Ａドメインへの結合がカルシウム依存性であり，ｐＨが７から５．２に低下することにつれて劇的に増加することを報告した．
Ｋｗｏｎら（１３）は，ＬＤＬＲ-ＥＧＦ-ＡＢ（ＥＧＦ-ＡおよびＥＧＦ-Ｂ）との複合体におけるＰＣＳＫ９の結晶構造を決定した．
この構造は，十分に規定されたＥＧＦ－Ａドメインを示すが，ＥＧＦ－Ｂドメインは無秩序であり，それらの電子密度マップには存在しない．
ＥＧＦ-Ａドメインは，触媒部位から離れた部位でＰＣＳＫ９触媒ドメインに結合し，Ｃ末端ドメインまたはプロドメインのいずれとも接触しない（１４）．
【0009】
ＰＣＳＫ９を標的とするためのいくつかの戦略が提案されている（１５）．
【0010】
戦略１：アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＲＮＡｉの使用を含むｍＲＮＡノックダウンアプローチ．
マウスに投与されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは，ＰＣＳＫ９発現を＞９０％低下させ，そして，血漿コレステロールレベルを５３％低下させた（１６）．
カニクイザルに，リピドイドナノ粒子（ｌｉｐｉｄｏｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ）で送達したＲＮＡｉを単回静脈内注射すると，血漿中のＰＣＳＫ９レベルは７０％，そして，血漿中ＬＤＬ－Ｃレベルは５６％低下した（１７）．
マウスに投与されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは，ＰＣＳＫ９発現を＞９０％低下させ，そして，血漿コレステロールレベルを５３％低下させた（１６）．
カニクイザルに，リピドイドナノ粒子（ｌｉｐｉｄｏｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ）で送達したＲＮＡｉを単回静脈内注射すると，血漿中のＰＣＳＫ９レベルは７０％，そして，血漿中ＬＤＬ－Ｃレベルは５６％低下した（１７）．
【0011】
戦略２：ＰＣＳＫ９プロセシングの小分子阻害剤の開発．
ＰＣＳＫ９の触媒活性がＬＤＬＲ分解に必要でないという証拠にもかかわらず（１１），ＰＣＳＫ９の自己触媒プロセシングがＥＲからのタンパク質の分泌に必要であるので，ＰＣＳＫ９触媒活性の細胞内阻害剤は有効であるはずである．
その合成に続いて，ＰＣＳＫ９は，プロドメインを切り取る自己触媒切断反応を受けるが，プロドメインは触媒ドメインに結合したままである（１８，１９）．
自己触媒プロセスステップは，おそらくプロドメインがシャペロンとして働き，折り畳みを促進するので，ＰＣＳＫ９の分泌に必要である（２０）．
プロドメインの継続した結合は，ＰＣＳＫ９の基質結合ポケットを部分的にブロックする（１８，１９）．
ＰＣＳＫ９の触媒活性がＬＤＬＲ分解に必要でないという証拠にもかかわらず（１１），ＰＣＳＫ９の自己触媒プロセシングがＥＲからのタンパク質の分泌に必要であるので，ＰＣＳＫ９触媒活性の細胞内阻害剤は有効であるはずである．
その合成に続いて，ＰＣＳＫ９は，プロドメインを切り取る自己触媒切断反応を受けるが，プロドメインは触媒ドメインに結合したままである（１８，１９）．
自己触媒プロセスステップは，おそらくプロドメインがシャペロンとして働き，折り畳みを促進するので，ＰＣＳＫ９の分泌に必要である（２０）．
プロドメインの継続した結合は，ＰＣＳＫ９の基質結合ポケットを部分的にブロックする（１８，１９）．
【0012】
戦略３：小分子，ペプチド，またはＰＣＳＫ９に対する抗体を用いて，細胞表面上のＬＤＬＲへのＰＣＳＫ９の結合を防止することである．
ＭｃＮｕｔｔら（２１）は，分泌されたＰＣＳＫ９の拮抗作用によりＨｅｐＧ２細胞のＬＤＬＲ発現が亢進することを明らかにした．
彼らは，機能の獲得変異（ｇａｉｎ－ｏｆ－ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ）をもたらす，ＦＨ関連ＬＤＬＲ対立遺伝子（Ｈ３０６Ｙ）は，ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲへの親和性の増加によるものであり，これは，ＬＤＬＲ破壊の強化，および血漿ＬＤＬ－Ｃクリアランスの低下につながることを示した．
さらに，彼らは，ＬＤＬＲ（Ｈ３０６Ｙ）サブフラグメントで，分泌されたＰＣＳＫ９を遮断することにより，培養ＨｅｐＧ２細胞のＬＤＬＲレベルの増加をもたらしたことを示すことができた．
したがって，ＰＣＳＫ９は，ＬＤＬＲ分解を引き起こす分泌因子として作用し，そして，ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲへの結合を妨げる低分子阻害薬はＬＤＬＲ破壊を減少させ，血漿ＬＤＬ－Ｃクリアランスを増加させると考えられる．
ＭｃＮｕｔｔら（２１）は，分泌されたＰＣＳＫ９の拮抗作用によりＨｅｐＧ２細胞のＬＤＬＲ発現が亢進することを明らかにした．
彼らは，機能の獲得変異（ｇａｉｎ－ｏｆ－ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ）をもたらす，ＦＨ関連ＬＤＬＲ対立遺伝子（Ｈ３０６Ｙ）は，ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲへの親和性の増加によるものであり，これは，ＬＤＬＲ破壊の強化，および血漿ＬＤＬ－Ｃクリアランスの低下につながることを示した．
さらに，彼らは，ＬＤＬＲ（Ｈ３０６Ｙ）サブフラグメントで，分泌されたＰＣＳＫ９を遮断することにより，培養ＨｅｐＧ２細胞のＬＤＬＲレベルの増加をもたらしたことを示すことができた．
したがって，ＰＣＳＫ９は，ＬＤＬＲ分解を引き起こす分泌因子として作用し，そして，ＰＣＳＫ９のＬＤＬＲへの結合を妨げる低分子阻害薬はＬＤＬＲ破壊を減少させ，血漿ＬＤＬ－Ｃクリアランスを増加させると考えられる．
【0013】
現在（２２～２４），ＦＤＡ承認の注射液ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体アンタゴニストが市販されている．
これらは，Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／ＳａｎｏｆｉのＰＲＡＬＵＥＮＴ（ａｌｉｒｏｃｕｍａｂ）およびＡｍｇｅｎのＲＥＰＡＴＨＡ（ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ）であり，いずれも完全ヒト抗ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体である．
これらのモノクローナル抗体アプローチは，経口小分子の代わりに注射液抗体を使用する，戦略３に従う．
これらは，Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／ＳａｎｏｆｉのＰＲＡＬＵＥＮＴ（ａｌｉｒｏｃｕｍａｂ）およびＡｍｇｅｎのＲＥＰＡＴＨＡ（ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ）であり，いずれも完全ヒト抗ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体である．
これらのモノクローナル抗体アプローチは，経口小分子の代わりに注射液抗体を使用する，戦略３に従う．
【0014】
発明の概要
本発明は，ＰＣＳＫ９機能と選択的に相互作用し，ＰＣＳＫ９機能をダウンモジュレートする，必要に応じて肝臓標的化されたナノ製剤小分子の治療用途に関する．
第１の実施形態において，本発明の実施において使用される化合物は，一般式Ｉを有する：
前記化合物の薬学的に許容される塩および立体異性体を含み，
ここで，Ｒ１は，ＨおよびＣＨ３からなる群から独立して選択され；
Ｒ２およびＲ３は，Ｈ，ハロゲン，（Ｃ１－Ｃ３）-アルキルおよび（Ｃ１－Ｃ３）-アルコキシからなる群から独立して選択され；
Ｒ４は，ＣＯ２Ｒ５，ＣＯＮＲ５Ｒ６，アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立して選択され，ここで，Ｒ５およびＲ６は，Ｈおよび（Ｃ１－Ｃ３）-アルキルからなる群から独立して選択される．
特定の実施形態では，Ｒ4は，アリールまたはヘテロアリールである．
特定の実施形態では，Ｒ4は，２-オキサゾール，２-オキサゾリン，２-ベンゾオキサゾールおよび２-ベンゾイミダゾールからなる群から選択される．
本発明は，ＰＣＳＫ９機能と選択的に相互作用し，ＰＣＳＫ９機能をダウンモジュレートする，必要に応じて肝臓標的化されたナノ製剤小分子の治療用途に関する．
第１の実施形態において，本発明の実施において使用される化合物は，一般式Ｉを有する：
【化1】
ここで，Ｒ１は，ＨおよびＣＨ３からなる群から独立して選択され；
Ｒ２およびＲ３は，Ｈ，ハロゲン，（Ｃ１－Ｃ３）-アルキルおよび（Ｃ１－Ｃ３）-アルコキシからなる群から独立して選択され；
Ｒ４は，ＣＯ２Ｒ５，ＣＯＮＲ５Ｒ６，アリールおよびヘテロアリールからなる群から独立して選択され，ここで，Ｒ５およびＲ６は，Ｈおよび（Ｃ１－Ｃ３）-アルキルからなる群から独立して選択される．
特定の実施形態では，Ｒ4は，アリールまたはヘテロアリールである．
特定の実施形態では，Ｒ4は，２-オキサゾール，２-オキサゾリン，２-ベンゾオキサゾールおよび２-ベンゾイミダゾールからなる群から選択される．
【0015】
特定の実施形態において，本発明は，式ＩＩの化合物を提供する：
化合物の薬学的に許容される塩および立体異性体を含み，
ここで，Ｒ１は，ＨおよびＣＨ３からなる群から独立して選択され；
Ｒ２は，Ｈまたはメトキシであり；
Ｒ３は，Ｈまたはハロゲンであり；そして
Ｒ７は，Ｈおよび（Ｃ１－Ｃ２）-アルキルからなる群から独立して選択されるか，または一緒になって，任意に置換された６員炭素環（アリールを含む）を形成する．
特定の実施形態では，Ｒ１がＨの場合，Ｒ２はＨである．
特定の実施形態において，Ｒ１がメチルである場合，Ｒ２はメトキシである．
特定の実施形態では，Ｒ３は，フッ素（たとえば，２－Ｆまたは３－Ｆ）である．
特定の実施形態において，オキサゾールは，イミダゾール（ｉ）で置換される（すなわち，酸素が，窒素で置換される）．
【化2】
ここで，Ｒ１は，ＨおよびＣＨ３からなる群から独立して選択され；
Ｒ２は，Ｈまたはメトキシであり；
Ｒ３は，Ｈまたはハロゲンであり；そして
Ｒ７は，Ｈおよび（Ｃ１－Ｃ２）-アルキルからなる群から独立して選択されるか，または一緒になって，任意に置換された６員炭素環（アリールを含む）を形成する．
特定の実施形態では，Ｒ１がＨの場合，Ｒ２はＨである．
特定の実施形態において，Ｒ１がメチルである場合，Ｒ２はメトキシである．
特定の実施形態では，Ｒ３は，フッ素（たとえば，２－Ｆまたは３－Ｆ）である．
特定の実施形態において，オキサゾールは，イミダゾール（ｉ）で置換される（すなわち，酸素が，窒素で置換される）．
【0016】
本発明はさらに，対象の肝臓へのＰＣＳＫ９アンタゴニストの肝臓標的送達のための組成物を提供する．
特定の実施形態では，組成物はナノ粒子（たとえば，疎水性ナノ粒子），各ナノ粒子の外側に付着した少なくとも１つの肝臓標的化部分（たとえば，共有結合した），および各ナノ粒子内にカプセル化された少なくとも１つのＰＣＳＫ９アンタゴニスト（たとえば，式ＩまたはＩＩの化合物）を含む．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，キトサンハイブリッドナノ粒子，アミン修飾ポリ-（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子，固体脂質ナノ粒子，および／またはそれらの組み合わせからなる群から選択される．
特定の実施形態において，肝臓標的化部分は，グリチルレチン酸（ＧＡ；エノキソロン），ラクトビオン酸（ＬＡ），アルギン酸，および／またはそれらの組合せからなる群より選択される．
特定の実施形態では，組成物はナノ粒子（たとえば，疎水性ナノ粒子），各ナノ粒子の外側に付着した少なくとも１つの肝臓標的化部分（たとえば，共有結合した），および各ナノ粒子内にカプセル化された少なくとも１つのＰＣＳＫ９アンタゴニスト（たとえば，式ＩまたはＩＩの化合物）を含む．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，キトサンハイブリッドナノ粒子，アミン修飾ポリ-（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子，固体脂質ナノ粒子，および／またはそれらの組み合わせからなる群から選択される．
特定の実施形態において，肝臓標的化部分は，グリチルレチン酸（ＧＡ；エノキソロン），ラクトビオン酸（ＬＡ），アルギン酸，および／またはそれらの組合せからなる群より選択される．
【0017】
本発明は，さらに，ＰＣＳＫ９アンタゴニスト（たとえば，ＳＢＣ-１１５，４１８およびその類似体，式ＩまたはＩＩの化合物）の，対象の肝臓への標的送達のための方法を提供する．
特定の実施形態では，本方法は，組成物を対象に投与することを含み，ここで，組成物は，ナノ粒子（たとえば，疎水性ナノ粒子），各ナノ粒子の外側に付着した少なくとも１つの肝臓標的化部分（たとえば，共有結合した）および，各ナノ粒子内にカプセル化された少なくとも１つのＰＣＳＫ９アンタゴニスト（たとえば，式ＩまたはＩＩの化合物）を含む．
この方法は，それを必要とする対象における，高コレステロール血症（たとえば，家族性高コレステロール血症），脂質異常症（たとえば，アテローム生成性脂質異常症），アテローム性動脈硬化症，および／または心血管疾患（ＣＶＤ）を処置，阻害，および／または予防することができる．
特定の実施形態では，本方法は，組成物を対象に投与することを含み，ここで，組成物は，ナノ粒子（たとえば，疎水性ナノ粒子），各ナノ粒子の外側に付着した少なくとも１つの肝臓標的化部分（たとえば，共有結合した）および，各ナノ粒子内にカプセル化された少なくとも１つのＰＣＳＫ９アンタゴニスト（たとえば，式ＩまたはＩＩの化合物）を含む．
この方法は，それを必要とする対象における，高コレステロール血症（たとえば，家族性高コレステロール血症），脂質異常症（たとえば，アテローム生成性脂質異常症），アテローム性動脈硬化症，および／または心血管疾患（ＣＶＤ）を処置，阻害，および／または予防することができる．
【0018】
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，米国特許第９，９５６，２９１号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている通りである．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，正に帯電している．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，１μｍ未満，特に１ｎｍ～約５００ｎｍ，特に５０ｎｍ～約３００ｎｍの直径を有する．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，キトサンハイブリッドナノ粒子，アミン修飾ポリ（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子，固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）ナノ粒子，ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣ-ＡＳ）ナノ粒子，またはそれらの組み合わせである．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，キトサンハイブリッドナノ粒子，アミン修飾ポリ-（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子，固体脂質ナノ粒子，および／またはそれらの組み合わせからなる群から選択される．
特定の実施形態では，ナノ粒子は，キトサンおよびポリ（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む．
特定の実施形態では，ナノ粒子は，ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣ-ＡＳ）を含む．
特定の実施形態では，ナノ粒子は，ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびキトサンを含む．
特定の実施形態では，ナノ粒子は，ＤＳＰＥ-ＰＥＧおよび／またはＰＬＧＡを含む．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，正に帯電している．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，１μｍ未満，特に１ｎｍ～約５００ｎｍ，特に５０ｎｍ～約３００ｎｍの直径を有する．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，キトサンハイブリッドナノ粒子，アミン修飾ポリ（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子，固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）ナノ粒子，ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣ-ＡＳ）ナノ粒子，またはそれらの組み合わせである．
特定の実施形態では，疎水性ナノ粒子は，キトサンハイブリッドナノ粒子，アミン修飾ポリ-（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ナノ粒子，固体脂質ナノ粒子，および／またはそれらの組み合わせからなる群から選択される．
特定の実施形態では，ナノ粒子は，キトサンおよびポリ（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む．
特定の実施形態では，ナノ粒子は，ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣ-ＡＳ）を含む．
特定の実施形態では，ナノ粒子は，ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびキトサンを含む．
特定の実施形態では，ナノ粒子は，ＤＳＰＥ-ＰＥＧおよび／またはＰＬＧＡを含む．
【0019】
特定の実施形態において，肝臓標的化部分は，グリチルレチン酸（ＧＡ），ラクトビオン酸（ＬＡ），アルギン酸，および／またはそれらの組合せからなる群より選択される．
特定の実施形態において，肝臓標的化部分は，ナノ粒子上にコーティングされる．
特定の実施形態において，肝臓標的化部分は，ナノ粒子と結合される．
特定の実施形態では，肝臓標的化部分は，イオン結合（たとえば，ＣＯＯ－とＮＨ３ ＋）によってナノ粒子に結合される．
特定の実施形態において，肝臓標的化部分は，ナノ粒子に共有結合される．
特定の実施形態において，肝臓標的化部分は，ナノ粒子上にコーティングされる．
特定の実施形態において，肝臓標的化部分は，ナノ粒子と結合される．
特定の実施形態では，肝臓標的化部分は，イオン結合（たとえば，ＣＯＯ－とＮＨ３ ＋）によってナノ粒子に結合される．
特定の実施形態において，肝臓標的化部分は，ナノ粒子に共有結合される．
【0020】
特定の実施形態において，ＰＣＳＫ９アンタゴニストは，式ＩまたはＩＩのものである．
特定の実施形態において，ＰＣＳＫ９アンタゴニストは，ＳＢＣ-１１５，４１８，ＳＢＣ-１１５，４３３，ＳＢＣ-１１５，４４８，ＳＢＣ-１１５，４６２およびＳＢＣ-１１５，４７７からなる群より選択される．
特定の実施形態では，ＰＣＳＫ９アンタゴニストは，ＷＯ２０１７／２２２９５３（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される式Ｉ～Ｖの化合物である．
特定の実施形態において，ＰＣＳＫ９アンタゴニストは，ＳＢＣ-１１５，４１８，ＳＢＣ-１１５，４３３，ＳＢＣ-１１５，４４８，ＳＢＣ-１１５，４６２およびＳＢＣ-１１５，４７７からなる群より選択される．
特定の実施形態では，ＰＣＳＫ９アンタゴニストは，ＷＯ２０１７／２２２９５３（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される式Ｉ～Ｖの化合物である．
【0021】
特定の実施形態では，組成物および／または方法は，少なくとも１つのＬＤＬ低下物質および／または抗脂質異常症剤をさらに含む．
抗脂質異常症剤は，ナノ粒子内に（封入されて）および／またはナノ粒子の外側に含有されてもよい．
特定の実施形態では，この方法は，上記組成物とは別に抗脂質異常症剤を投与することを含む．
特定の実施形態において，抗脂質異常症剤は，スタチン，エゼチミブ，ベムペド酸，甲状腺ホルモン受容体βアゴニスト（ＴＲ-βアゴニスト），および／またはそれらの組合せからなる群より選択される．
抗脂質異常症剤は，ナノ粒子内に（封入されて）および／またはナノ粒子の外側に含有されてもよい．
特定の実施形態では，この方法は，上記組成物とは別に抗脂質異常症剤を投与することを含む．
特定の実施形態において，抗脂質異常症剤は，スタチン，エゼチミブ，ベムペド酸，甲状腺ホルモン受容体βアゴニスト（ＴＲ-βアゴニスト），および／またはそれらの組合せからなる群より選択される．
【図面の簡単な説明】
【0022】
【0023】
簡単に述べると，２０ｍｇのＳＢＣ-１１５，４１８を，４ｍＬのＰＬＧＡ溶液（酢酸エチル中１００ｍｇ／ｍＬ）と混合した．
この混合物に，２０ｍＬの２％ ｗ／ｖ Ｍｏｗｉｏｌ（登録商標）４-８８（ポリ-（ビニルアルコール）；分子量～３１，０００）および０．２％ ｗ／ｖキトサン溶液を添加し，十分に混合した．
混合物全体をプローブ超音波処理機中で約９０秒間超音波処理して，ナノ粒子を合成した．
１２～１４ｋＤａカットオフ透析膜（２４時間）による透析によって，溶液から酢酸エチルを除去した．
最後に，ナノ粒子を，凍結保護剤として２％スクロース溶液を用いて凍結乾燥した．
凍結乾燥粉末を再分散させ，さらなる研究に使用した．
動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したＳＢＣ-１１５，４１８ナノ粒子（製剤Ａ）のサイズ測定値を示す．
この混合物に，２０ｍＬの２％ ｗ／ｖ Ｍｏｗｉｏｌ（登録商標）４-８８（ポリ-（ビニルアルコール）；分子量～３１，０００）および０．２％ ｗ／ｖキトサン溶液を添加し，十分に混合した．
混合物全体をプローブ超音波処理機中で約９０秒間超音波処理して，ナノ粒子を合成した．
１２～１４ｋＤａカットオフ透析膜（２４時間）による透析によって，溶液から酢酸エチルを除去した．
最後に，ナノ粒子を，凍結保護剤として２％スクロース溶液を用いて凍結乾燥した．
凍結乾燥粉末を再分散させ，さらなる研究に使用した．
動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したＳＢＣ-１１５，４１８ナノ粒子（製剤Ａ）のサイズ測定値を示す．
【0024】
［図１Ｂ］図１Ｂは，ＳＢＣ-１１５，４１８ナノ製剤Ｅの合成の特性を提供する．
製剤Ｅは，ＳＢＣ-１１５，４１８を封入するポリマー脂質ナノ粒子（ＰＬＮＰ）（ＰＬＮＰ-ＳＢＣ-１１５，４１８）であり，本明細書に記載されるように合成された．
簡単に述べると，１６０ｍｇのレシチン，４０ｍｇのＤＳＰＥ-ＰＥＧ（１，２-ジステアロイル-Ｓｎ-グリセロ-３-ホスホエタノールアミン-Ｎ-［アミノ-（ポリエチレングリコール）-２０００］を２０ｍＬの４％エタノール溶液に溶解した．
この溶液を，７０℃で約１５分間加熱した．
並べて，別のバイアル中で，５００μＬのＳＢＣ-１１５，４１８（ジメチルスフォキシド，ＤＭＳＯ中４０ｍｇ／ｍＬ），２００μＬのＰＬＧＡ（ＤＭＳＯ中８０ｍｇ／ｍＬ），および２００μＬのＭｏｗｉｏｌ（登録商標）１５％ ｗ／ｖのＤＭＳＯ中を一緒に混合した．
次のステップでは，両方の溶液を一定の磁気撹拌下で混合し，プローブ超音波処理機を用いて約２分間断続的に超音波処理した．
最後に，磁気撹拌を７０℃で約１時間（開放ビーカー中で）適用して，エタノールを蒸発させた．
サンプル全体を約６～８時間透析した．
ＳＢＣ－１１５，４１８を封入する透析ＰＬＮＰを，凍結保護剤として３％スクロースを使用して凍結乾燥した．
凍結乾燥粉末を，さらなる使用のために脱イオン（ＤＩ）水／ＰＢＳ中に再分散した．
水性分散液中のＰＬＮＰ-ＳＢＣ-１１５，４１８ナノ粒子のサイズ分布を，Ｍａｌｖｅｒｎ ｚｅｔａ ｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｃｏ，Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）を使用して決定した．
５０ｍｇの凍結乾燥ナノ粒子を２ｍＬのＤＩ水に再懸濁した．
このナノ粒子溶液を，３ｍＬの４面透明プラスチックキュベットに入れ，直接測定した．
動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したナノ粒子（製剤Ｅ）のサイズ測定値を示す．
製剤Ｅは，ＳＢＣ-１１５，４１８を封入するポリマー脂質ナノ粒子（ＰＬＮＰ）（ＰＬＮＰ-ＳＢＣ-１１５，４１８）であり，本明細書に記載されるように合成された．
簡単に述べると，１６０ｍｇのレシチン，４０ｍｇのＤＳＰＥ-ＰＥＧ（１，２-ジステアロイル-Ｓｎ-グリセロ-３-ホスホエタノールアミン-Ｎ-［アミノ-（ポリエチレングリコール）-２０００］を２０ｍＬの４％エタノール溶液に溶解した．
この溶液を，７０℃で約１５分間加熱した．
並べて，別のバイアル中で，５００μＬのＳＢＣ-１１５，４１８（ジメチルスフォキシド，ＤＭＳＯ中４０ｍｇ／ｍＬ），２００μＬのＰＬＧＡ（ＤＭＳＯ中８０ｍｇ／ｍＬ），および２００μＬのＭｏｗｉｏｌ（登録商標）１５％ ｗ／ｖのＤＭＳＯ中を一緒に混合した．
次のステップでは，両方の溶液を一定の磁気撹拌下で混合し，プローブ超音波処理機を用いて約２分間断続的に超音波処理した．
最後に，磁気撹拌を７０℃で約１時間（開放ビーカー中で）適用して，エタノールを蒸発させた．
サンプル全体を約６～８時間透析した．
ＳＢＣ－１１５，４１８を封入する透析ＰＬＮＰを，凍結保護剤として３％スクロースを使用して凍結乾燥した．
凍結乾燥粉末を，さらなる使用のために脱イオン（ＤＩ）水／ＰＢＳ中に再分散した．
水性分散液中のＰＬＮＰ-ＳＢＣ-１１５，４１８ナノ粒子のサイズ分布を，Ｍａｌｖｅｒｎ ｚｅｔａ ｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｃｏ，Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）を使用して決定した．
５０ｍｇの凍結乾燥ナノ粒子を２ｍＬのＤＩ水に再懸濁した．
このナノ粒子溶液を，３ｍＬの４面透明プラスチックキュベットに入れ，直接測定した．
動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したナノ粒子（製剤Ｅ）のサイズ測定値を示す．
【0025】
［図１Ｃ］図１Ｃは，封入／担持効率（Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ／Ｌｏａｄｉｎｇ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）グラフを提供する．
ナノ粒子中に封入されたＳＢＣ－１１５，４１８の量（製剤Ａおよび製剤Ｅ）は，ナノ粒子を崩壊させ，ＵＶ－Ｖｉｓ分光法を使用してＳＢＣ－１１５，４１８の量（λ３３５ｎｍでの吸光度）を測定することによって決定した．
封入効率は，以下の式で決定した：
ナノ粒子中に封入されたＳＢＣ－１１５，４１８の量（製剤Ａおよび製剤Ｅ）は，ナノ粒子を崩壊させ，ＵＶ－Ｖｉｓ分光法を使用してＳＢＣ－１１５，４１８の量（λ３３５ｎｍでの吸光度）を測定することによって決定した．
封入効率は，以下の式で決定した：
【0026】
封入効率（担持）＝（［薬品］ｆ）／（［薬品］ｔ）×１００
【0027】
ここで，［薬品］ｆは，ナノ粒子内のＳＢＣ－１１５，４１８の濃度であり，［薬品］ｔは，薬品の理論的な濃度（最初に添加されたＳＢＣ－１１５，４１８の総量を意味する）である．
両方のナノ粒子（製剤Ａおよび製剤Ｅ）において，封入は９０％を超えることが見出された．
担持（ｗ／ｗ）は，天秤上でナノ製剤の総量を秤量し，ＵＶ／ＶＩＳ分光法を用いてＳＢＣ-１１５，４１８の対応する量を測定することによって決定した．
ナノ粒子中のＳＢＣ-１１５，４１８の全担持は，製剤Ａについては，約４．０％ ｗ／ｗであり，製剤Ｅについては，約６．５％ ｗ／ｗであることが見出された．
両方のナノ粒子（製剤Ａおよび製剤Ｅ）において，封入は９０％を超えることが見出された．
担持（ｗ／ｗ）は，天秤上でナノ製剤の総量を秤量し，ＵＶ／ＶＩＳ分光法を用いてＳＢＣ-１１５，４１８の対応する量を測定することによって決定した．
ナノ粒子中のＳＢＣ-１１５，４１８の全担持は，製剤Ａについては，約４．０％ ｗ／ｗであり，製剤Ｅについては，約６．５％ ｗ／ｗであることが見出された．
【0028】
ナノ粒子中に封入されたＳＢＣ-１１５，４１８の封入／担持効率の測定を示す．
【0029】
上図：ＳＢＣ-１１５，４１８の標準曲線を構築するために使用したＵＶ-ＶＩＳスペクトル（挿入図：０．３，０．６２５，１．２５，２．５，５および１０ μｇ／ｍＬからのＳＢＣ-１１５，４１８の濃度）．
中図および下図：それぞれ，製剤Ａおよび製剤Ｅにおける，総量ＳＢＣ-１１５，４１８（遊離＋封入化）および封入化ＳＢＣ-１１５，４１８のＵＶ-ＶｉｓスペクトルからのＯＤを比較することによる封入効率の測定．
中図および下図：それぞれ，製剤Ａおよび製剤Ｅにおける，総量ＳＢＣ-１１５，４１８（遊離＋封入化）および封入化ＳＢＣ-１１５，４１８のＵＶ-ＶｉｓスペクトルからのＯＤを比較することによる封入効率の測定．
【0030】
［図１Ｄ］図１Ｄは，ＳＢＣ-１１５，４１８ナノ製剤Ｄの特性を提供する．
ＨＰＬＣ-ＵＶによる，製剤Ｄにおける，ＳＢＣ-１１５，４１８の封入化効率（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）および担持率（ｌｏａｄｉｎｇ ｒａｔｅ）の測定を示す．
ナノ粒子をナノ沈殿法によって調製した．
簡単に述べると，ＳＢＣ-１１５，４１８薬物については，１ｍｌのＤＭＳＯ中のＳＢＣ-１１５，４１８（１０ｍｇ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ；ポリビドンまたはポビドン１５ｍｇとも呼ばれる；平均分子量４０，０００）およびアルギン酸（１ｍｇ）の有機溶液を，室温で磁気撹拌しながら１０ｍｌの水に添加した．
次いで，プローブソニケーターを使用して，溶液全体を１～２分間超音波処理した．
乳酸塩キトサンオリゴ糖（１ｍｇ）を０．５ｍＬの水に溶解した．
次いで，このキトサン溶液を，超音波処理下で上記の溶液全体に添加し，そして室温で３０分間インキュベートした．
ＮＰ懸濁液を，遠心分離（１５，０００×ｇ，４℃，６０分）を用いて水で２回洗浄した．
次いで，ＮＰペレットを-８０℃で１２時間凍結させ，その後，室温で，０．１１０ ｍＰａの圧力下で２４時間昇華させた．
最後に，薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）研究のために，ＮＰを採取し，冷凍庫に保存した．
ＳＢＣ-１１５，４１８ ＮＰの封入化効率（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）は，最初に供給されたＳＢＣ-１１５，４１８と比較して，ＮＰ中のＳＢＣ-１１５，４１８担持を分析することによって決定された．
凍結乾燥後，秤量したＮＰ粉末を，３ｍＬのＤＭＳＯ中に３０分間分散させた．
ＤＭＳＯ中のＳＢＣ-１１５，４１８の量を，ＨＰＬＣおよび検量線（右）を用いて３３７ｎｍで測定した．
ＳＢＣ-１１５，４１８封入化効率（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）は９７％であり，そして，ＳＢＣ-１１５，４１８担持は２８％であり，これは，それぞれ，式１，２から計算された：
ＨＰＬＣ-ＵＶによる，製剤Ｄにおける，ＳＢＣ-１１５，４１８の封入化効率（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）および担持率（ｌｏａｄｉｎｇ ｒａｔｅ）の測定を示す．
ナノ粒子をナノ沈殿法によって調製した．
簡単に述べると，ＳＢＣ-１１５，４１８薬物については，１ｍｌのＤＭＳＯ中のＳＢＣ-１１５，４１８（１０ｍｇ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ；ポリビドンまたはポビドン１５ｍｇとも呼ばれる；平均分子量４０，０００）およびアルギン酸（１ｍｇ）の有機溶液を，室温で磁気撹拌しながら１０ｍｌの水に添加した．
次いで，プローブソニケーターを使用して，溶液全体を１～２分間超音波処理した．
乳酸塩キトサンオリゴ糖（１ｍｇ）を０．５ｍＬの水に溶解した．
次いで，このキトサン溶液を，超音波処理下で上記の溶液全体に添加し，そして室温で３０分間インキュベートした．
ＮＰ懸濁液を，遠心分離（１５，０００×ｇ，４℃，６０分）を用いて水で２回洗浄した．
次いで，ＮＰペレットを-８０℃で１２時間凍結させ，その後，室温で，０．１１０ ｍＰａの圧力下で２４時間昇華させた．
最後に，薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）研究のために，ＮＰを採取し，冷凍庫に保存した．
ＳＢＣ-１１５，４１８ ＮＰの封入化効率（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）は，最初に供給されたＳＢＣ-１１５，４１８と比較して，ＮＰ中のＳＢＣ-１１５，４１８担持を分析することによって決定された．
凍結乾燥後，秤量したＮＰ粉末を，３ｍＬのＤＭＳＯ中に３０分間分散させた．
ＤＭＳＯ中のＳＢＣ-１１５，４１８の量を，ＨＰＬＣおよび検量線（右）を用いて３３７ｎｍで測定した．
ＳＢＣ-１１５，４１８封入化効率（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）は９７％であり，そして，ＳＢＣ-１１５，４１８担持は２８％であり，これは，それぞれ，式１，２から計算された：
【0031】
【数1】
【0032】
水性分散液中のナノ粒子のサイズ分布は，Ｍａｌｖｅｒｎ ｚｅｔａ ｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｃｏ，Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）を用いて測定した．
５０ｍｇの凍結乾燥ナノ粒子を２ｍＬの水に再懸濁した．
このナノ粒子溶液を，３ｍＬの４面透明プラスチックキュベットに入れ，直接測定した．
異なる濃度で標準曲線を構築するために使用したＳＢＣ-１１５，４１８のＨＰＬＣクロマトグラムを示す．
３．９，７．８，１５．６，３１．５，６２．５，１２５，２５０ μｇ／ｍＬを含む２倍系列希釈でＳＢＣ－１１５，４１８のキャリブレーターシリーズをＤＭＳＯで調製した（左図）．
８０％アセトニトリルは，１００μｇ／ｍＬのＳＢＣ－１１５，４１８を完全に溶解しない．
５０ｍｇの凍結乾燥ナノ粒子を２ｍＬの水に再懸濁した．
このナノ粒子溶液を，３ｍＬの４面透明プラスチックキュベットに入れ，直接測定した．
異なる濃度で標準曲線を構築するために使用したＳＢＣ-１１５，４１８のＨＰＬＣクロマトグラムを示す．
３．９，７．８，１５．６，３１．５，６２．５，１２５，２５０ μｇ／ｍＬを含む２倍系列希釈でＳＢＣ－１１５，４１８のキャリブレーターシリーズをＤＭＳＯで調製した（左図）．
８０％アセトニトリルは，１００μｇ／ｍＬのＳＢＣ－１１５，４１８を完全に溶解しない．
【0033】
［図２Ａ］図２Ａは，ナノ製剤番号１および３（上図）についての，ＤＳＬによるサイズおよびゼータ電位データのグラフを提供する．
ナノ製剤番号１は，１６２．４ｎｍのｚ平均およびゼータ電位-１９．１ ｍＶを有する粒子を生じた．
ナノ製剤番号３は，１１８．５ｎｍのｚ平均およびゼータ電位-１１．８ ｍＶを有する粒子を生じた．
マンニトール（５％）を添加した，ナノ製剤番号３は，１２７．５ｎｍのｚ平均およびゼータ電位-３０．８ ｍＶを有する粒子が得られた（中央）．
ナノ製剤番号４（８ｍｇのＳＢＣ-１１５，４１８，４ｍｇのＰＶＰ（４０ｋ），４ｍｇのヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣＡＳ），０．６ｍｇのグリチルレチン酸）は，９０．０ｎｍのｚ平均およびゼータ電位-１２．８ ｍＶを有する粒子を生じた（下）．
ナノ製剤番号１は，１６２．４ｎｍのｚ平均およびゼータ電位-１９．１ ｍＶを有する粒子を生じた．
ナノ製剤番号３は，１１８．５ｎｍのｚ平均およびゼータ電位-１１．８ ｍＶを有する粒子を生じた．
マンニトール（５％）を添加した，ナノ製剤番号３は，１２７．５ｎｍのｚ平均およびゼータ電位-３０．８ ｍＶを有する粒子が得られた（中央）．
ナノ製剤番号４（８ｍｇのＳＢＣ-１１５，４１８，４ｍｇのＰＶＰ（４０ｋ），４ｍｇのヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ＨＰＭＣＡＳ），０．６ｍｇのグリチルレチン酸）は，９０．０ｎｍのｚ平均およびゼータ電位-１２．８ ｍＶを有する粒子を生じた（下）．
【0034】
［図２Ｂ］図２Ｂは，ＳＢＣ-１１５，４１８のナノ製剤（ナノＳＢＣ-１１５，４１８）の特徴を提供する．
簡潔には，ＳＢＣ-１１５，４１８（６９ｍｇ），ＰＶＰ（平均分子量４０，０００；６９ｍｇ），ＨＰＭＣ-ＡＳ（１００ｍｇ）およびアルギン酸（１ｍｇ）を利用して，ナノ粒子を合成した．
ＳＢＣ-１１５，４１８溶液を，ＨＰＬＣ-ＵＶ-ＣＡＤ（上部）によって分析した．
溶液のＳＢＣ-１１５，４１８濃度は４２ｍｇ／ｍｌであった．
インビボ実験のために，３０ｍｇ／ｍｌ，１０ｍｇ／ｍｌおよび３ｍｇ／ｍｌ（中央）を含む３つの濃度を調製した．
ストック製剤と比較して有意な変化は観察されなかった．
効力研究のために，同じ製剤を，高脂肪食を与えたマウスにおいて，１，３，１０および３０ｍｇ／Ｋｇ，経口（ＰＯ）および３ｍｇ／Ｋｇ，皮下（ＳＣ）での投薬のために希釈した．
ナノ粒子はまた，試験期間（下）の間，良好な安定性（物理的および化学的）を示した．
簡潔には，ＳＢＣ-１１５，４１８（６９ｍｇ），ＰＶＰ（平均分子量４０，０００；６９ｍｇ），ＨＰＭＣ-ＡＳ（１００ｍｇ）およびアルギン酸（１ｍｇ）を利用して，ナノ粒子を合成した．
ＳＢＣ-１１５，４１８溶液を，ＨＰＬＣ-ＵＶ-ＣＡＤ（上部）によって分析した．
溶液のＳＢＣ-１１５，４１８濃度は４２ｍｇ／ｍｌであった．
インビボ実験のために，３０ｍｇ／ｍｌ，１０ｍｇ／ｍｌおよび３ｍｇ／ｍｌ（中央）を含む３つの濃度を調製した．
ストック製剤と比較して有意な変化は観察されなかった．
効力研究のために，同じ製剤を，高脂肪食を与えたマウスにおいて，１，３，１０および３０ｍｇ／Ｋｇ，経口（ＰＯ）および３ｍｇ／Ｋｇ，皮下（ＳＣ）での投薬のために希釈した．
ナノ粒子はまた，試験期間（下）の間，良好な安定性（物理的および化学的）を示した．
【0035】
［図２Ｃ］図２Ｃは，透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いた，ナノＳＢＣ－１１５，４１８の特性を提供する．これは，ナノ粒子の平均サイズ（Ｚ－平均）を示すゼータサイズアナライザーが１２８．２ｎｍであることを示す（上）．
また，サイズ（５０～２５０ｎｍ）を確認したＴＥＭ画像も提供している（下）．
また，サイズ（５０～２５０ｎｍ）を確認したＴＥＭ画像も提供している（下）．
【0036】
［図３］図３は，ＳＢＣ－１１５，４１８，ＳＢＣ－１１５，４３３，ＳＢＣ－１１５，４４８，ＳＢＣ－１１５，４６２およびＳＢＣ－１１５，４７７の化学構造を示す．
これらの化合物（式ＩおよびＩＩ内）は，対照と比較してＬＤＬＲアップレギュレーションに影響を及ぼすが，ＰＣＳＫ９プロセシングおよび分泌に有意な影響を及ぼさない．
ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用のインビトロ阻害（ＩＣ５０，μＭ）を提供する．
全てが，５μＭ未満である．
これらの化合物（式ＩおよびＩＩ内）は，対照と比較してＬＤＬＲアップレギュレーションに影響を及ぼすが，ＰＣＳＫ９プロセシングおよび分泌に有意な影響を及ぼさない．
ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用のインビトロ阻害（ＩＣ５０，μＭ）を提供する．
全てが，５μＭ未満である．
【0037】
［図４Ａ］図４Ａは，ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用に対する，ＳＢＣ－１１５，４１８，ＳＢＣ－１１５，４３３，ＳＢＣ－１１５，４４８，およびＳＢＣ－１１５，４６２の効果のグラフを提供する．
インビトロＥＬＩＳＡアッセイキットを利用した（Ｃｉｒｃｕｌｅｘ）．
ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用の阻害剤をスクリーニングするために，選択された化合物の異なる濃度（０．０１ｎＭ～１００μＭ）を，Ｈｉｓタグ化ＰＣＳＫ９と共にインキュベートし，次いで組換えＬＤＬＲ-ＡＢドメインで予めコーティングしたウェルに添加した．
インキュベーション後，プレートを洗浄し，ビオチン化抗Ｈｉｓタグおよび西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジンを用いて，組換えＨｉｓタグ化ＰＣＳＫ９の量を測定し，ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）２ プレートリーダーを用いて定量した．
組換えＬＤＬＲ-ＡＢドメインへのＰＣＳＫ９結合に対する各化合物の効果を計算した．
インビトロＥＬＩＳＡアッセイキットを利用した（Ｃｉｒｃｕｌｅｘ）．
ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用の阻害剤をスクリーニングするために，選択された化合物の異なる濃度（０．０１ｎＭ～１００μＭ）を，Ｈｉｓタグ化ＰＣＳＫ９と共にインキュベートし，次いで組換えＬＤＬＲ-ＡＢドメインで予めコーティングしたウェルに添加した．
インキュベーション後，プレートを洗浄し，ビオチン化抗Ｈｉｓタグおよび西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジンを用いて，組換えＨｉｓタグ化ＰＣＳＫ９の量を測定し，ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）２ プレートリーダーを用いて定量した．
組換えＬＤＬＲ-ＡＢドメインへのＰＣＳＫ９結合に対する各化合物の効果を計算した．
【0038】
［図４Ｂ］図４Ｂは，増加した可溶化条件（１０％ ＤＭＳＯ）（４１８ｓ）下での，ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用に対するＳＢＣ-１１５，４１８の効果のグラフを提供する．
インビトロＥＬＩＳＡアッセイ（Ｃｉｒｃｕｌｅｘ）を利用した．
ＤＭＳＯ中の，ＳＢＣ-１１５，４１８の異なる濃度（０．０１γＭ-１００μＭ）を，Ｈｉｓタグ化ＰＣＳＫ９と共にインキュベートし，次いで，図４Ａに記載されたように，組換えＬＤＬＲ-ＡＢドメインで予めコーティングしたウェルに添加した．
インビトロＥＬＩＳＡアッセイ（Ｃｉｒｃｕｌｅｘ）を利用した．
ＤＭＳＯ中の，ＳＢＣ-１１５，４１８の異なる濃度（０．０１γＭ-１００μＭ）を，Ｈｉｓタグ化ＰＣＳＫ９と共にインキュベートし，次いで，図４Ａに記載されたように，組換えＬＤＬＲ-ＡＢドメインで予めコーティングしたウェルに添加した．
【0039】
［図５］図５は，ＨｅｐＧ２細胞における，蛍光Ｄｉｌ－ＬＤＬの取り込みに対する，ＳＢＣ－１１５，４１８，ＳＢＣ－１１５，４３３，ＳＢＣ－１１５，４４８，およびＳＢＣ－１１５，４６２の効果のグラフを提供する．
化合物は，ＨｅｐＧ２細胞における蛍光Ｄｉｌ-ＬＤＬの取り込みを増加させるそれらの能力について検証された．
データは，１０μＭの化合物を用いた蛍光Ｄｉｌ-ＬＤＬ取り込みの増加を示す．
化合物は，ＨｅｐＧ２細胞における蛍光Ｄｉｌ-ＬＤＬの取り込みを増加させるそれらの能力について検証された．
データは，１０μＭの化合物を用いた蛍光Ｄｉｌ-ＬＤＬ取り込みの増加を示す．
【0040】
［図６］図６は，ナノ製剤ＤのＰＫ分析のグラフを提供する．
４～５週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを，５０±１０％の湿度および１２時間の明／暗サイクルで，２０±２℃に維持された部屋に，５／ケージ収容した．
動物には，標準ペレット化マウス固形飼料を与えた．
単回静脈内（ＩＶ）（１０ｍｇ／ｋｇ）および経口（３０ｍｇ／ｋｇ）用量のＳＢＣ-１１５，４１８製剤Ｄを投与し，５０μＬの血液サンプルを，抗凝固キャピラリーチューブを用いて，確立されたＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法を用いて，ＰＫプロファイルのために，投与後，０．２５，０．５，１，３，６，１２，２４および４８時間で収集した．
抽出効率を較正するために内部標準を使用した．
血漿中の化合物濃度を，ｎｇ／ｍｌとして表す．
データは，ＳＢＣ-１１５，４１８についてのＩＶと比較して，投与後３０分に，１８％の経口バイオアベイラビリティを有する化合物の濃度の増加が観察され，より長い半減期を示す．
４～５週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを，５０±１０％の湿度および１２時間の明／暗サイクルで，２０±２℃に維持された部屋に，５／ケージ収容した．
動物には，標準ペレット化マウス固形飼料を与えた．
単回静脈内（ＩＶ）（１０ｍｇ／ｋｇ）および経口（３０ｍｇ／ｋｇ）用量のＳＢＣ-１１５，４１８製剤Ｄを投与し，５０μＬの血液サンプルを，抗凝固キャピラリーチューブを用いて，確立されたＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法を用いて，ＰＫプロファイルのために，投与後，０．２５，０．５，１，３，６，１２，２４および４８時間で収集した．
抽出効率を較正するために内部標準を使用した．
血漿中の化合物濃度を，ｎｇ／ｍｌとして表す．
データは，ＳＢＣ-１１５，４１８についてのＩＶと比較して，投与後３０分に，１８％の経口バイオアベイラビリティを有する化合物の濃度の増加が観察され，より長い半減期を示す．
【0041】
［図７］図７は，ナノ製剤ＤのＰＤ分析のグラフを提供する．
製剤Ｄ中のＳＢＣ-１１５，４１８を，雄マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス）における効力について試験した．
マウスを，温度（２０～２４℃），湿度（６０～７０％），および１２時間交互の明／暗サイクルの気候制御条件下で，ケージあたり４匹の動物で飼育した．
マウスは，３群に分けた．
１つの群には，市販の固形飼料（Ｐｒｏｌａｂ ＲＭＨ ３０００，ＰＭＩ飼料，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を与え，陰性対照として用いた．
他の２群には，脂肪からカロリーの６０％を供給する，高脂肪食（ＴＤ０６４１４）を与えた．
水を自由に与えた．
血漿を週１回採取し，ＬＤＬレベルをモニタリングした．
高脂肪食を４週間与えた後，マウスを，平均ＬＤＬレベルが，異なる群間で等しくなるように，いくつかの群の１つに無作為に割り当てた．
高脂肪食を与えたマウスの２群のうちの１群をビヒクルで処理し，陽性対照として供し，一方，第２群を１０ｍｇ／ｋｇのＳＢＣ-１１５，４１８で５日間経口的に毎日処理した．
血液試料（７５μｌ）を，薬物投与の５日後に，１チューブあたり２ ＵＳＰ単位のヘパリンアンモニウム（Ｃａｒｏｌｉｎａ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）を含有するヘパリン化キャピラリーチューブを介して眼窩後静脈叢（ｒｅｔｒｏ－ｏｒｂｉｔａｌ ｖｅｎｏｕｓ ｐｌｅｘｕｓ）から収集した．
血漿は，室温で５分間の遠心分離（５，０００×ｇ）によって直ちに分離され，次いで，脂質プロファイルについてアッセイされるまで－８０℃に維持された．
血漿コレステロールおよびＬＤＬ-Ｃレベルを酵素的に測定した．
製剤Ｄ中のＳＢＣ-１１５，４１８を，雄マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス）における効力について試験した．
マウスを，温度（２０～２４℃），湿度（６０～７０％），および１２時間交互の明／暗サイクルの気候制御条件下で，ケージあたり４匹の動物で飼育した．
マウスは，３群に分けた．
１つの群には，市販の固形飼料（Ｐｒｏｌａｂ ＲＭＨ ３０００，ＰＭＩ飼料，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を与え，陰性対照として用いた．
他の２群には，脂肪からカロリーの６０％を供給する，高脂肪食（ＴＤ０６４１４）を与えた．
水を自由に与えた．
血漿を週１回採取し，ＬＤＬレベルをモニタリングした．
高脂肪食を４週間与えた後，マウスを，平均ＬＤＬレベルが，異なる群間で等しくなるように，いくつかの群の１つに無作為に割り当てた．
高脂肪食を与えたマウスの２群のうちの１群をビヒクルで処理し，陽性対照として供し，一方，第２群を１０ｍｇ／ｋｇのＳＢＣ-１１５，４１８で５日間経口的に毎日処理した．
血液試料（７５μｌ）を，薬物投与の５日後に，１チューブあたり２ ＵＳＰ単位のヘパリンアンモニウム（Ｃａｒｏｌｉｎａ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）を含有するヘパリン化キャピラリーチューブを介して眼窩後静脈叢（ｒｅｔｒｏ－ｏｒｂｉｔａｌ ｖｅｎｏｕｓ ｐｌｅｘｕｓ）から収集した．
血漿は，室温で５分間の遠心分離（５，０００×ｇ）によって直ちに分離され，次いで，脂質プロファイルについてアッセイされるまで－８０℃に維持された．
血漿コレステロールおよびＬＤＬ-Ｃレベルを酵素的に測定した．
【0042】
［図８］図８は，高脂肪食を与えたマウスにおける，ナノＳＢＣ-１１５，４１８の投与の２４時間後の血漿および肝臓の両方における測定されたＳＢＣ-１１５，４１８レベルの，対分散製剤のグラフを提供する．
肝臓組織を秤量し，内部標準としてのレセルピンと共に，ＤＭＳＯ／アセトニトリル／メタノールの１：１：１の比の有機溶媒中でホモジナイズした．
組織ホモジネートを，１５，０００×ｇで１５分間遠心分離し，上清を凍結乾燥し，ＬＣ／ＭＳ／ＭＳへの注入のために少量であるが既知の容量のアセトニトリル中に再構成した．
肝臓組織を秤量し，内部標準としてのレセルピンと共に，ＤＭＳＯ／アセトニトリル／メタノールの１：１：１の比の有機溶媒中でホモジナイズした．
組織ホモジネートを，１５，０００×ｇで１５分間遠心分離し，上清を凍結乾燥し，ＬＣ／ＭＳ／ＭＳへの注入のために少量であるが既知の容量のアセトニトリル中に再構成した．
【0043】
［図９］図９は，高脂肪食を与えたマウスにおける，ナノＳＢＣ-１１５，４１８の毎日の投与の２４時間および２週間後のＳＢＣ-１１５，４１８レベルのグラフを提供する．
ナノＳＢＣ－１１５，４１８の肝臓標的送達は，薬物の有意な蓄積は認められなかったが，反復投与後の肝臓中レベル（２週間）の調整が，持続的な効果が得られるほどの残留濃度が認められた．
ナノＳＢＣ－１１５，４１８の肝臓標的送達は，薬物の有意な蓄積は認められなかったが，反復投与後の肝臓中レベル（２週間）の調整が，持続的な効果が得られるほどの残留濃度が認められた．
【0044】
［図１０］図１０は，高脂肪食を与えたＣ５７ＢＬ／６マウスにおける，ＳＢＣ-１１５，４１８の分散製剤（左）対ナノ結晶／肝臓標的化製剤（ナノＳＢＣ-１１５，４１８）（右）によるＬＤＬ-コレステロール減少のグラフを提供する．
Ｃ５７ＢＬ／６マウスは，５日間（分散）または７日間（ナノＳＢＣ-１１５，４１８）毎日１０ｍｇ／ｋｇの経口を受けた．
指示された時期に，血漿を採取し，血漿ＬＤＬ－Ｃレベルを測定した．
グラフは，ＳＢＣ－１１５，４１８の分散製剤（～２０％ＬＤＬ低下）に対して，ナノＳＢＣ－１１５，４１８のより大きな有効性（～６０％ＬＤＬ低下）を示す．
Ｃ５７ＢＬ／６マウスは，５日間（分散）または７日間（ナノＳＢＣ-１１５，４１８）毎日１０ｍｇ／ｋｇの経口を受けた．
指示された時期に，血漿を採取し，血漿ＬＤＬ－Ｃレベルを測定した．
グラフは，ＳＢＣ－１１５，４１８の分散製剤（～２０％ＬＤＬ低下）に対して，ナノＳＢＣ－１１５，４１８のより大きな有効性（～６０％ＬＤＬ低下）を示す．
【0045】
【0046】
【0047】
【0048】
【0049】
［図１５］図１５は，高脂肪食を与えたＣ５７／Ｂｌａｃｋ６マウスにおけるナノＳＢＣ－１１５，４１８の経口投与（３０ｍｇ／Ｋｇ，２週間）と，ヒトにおけるＲｅｐａｔｈａ（登録商標）注射剤（２００ｍｇ 隔週）の血漿中ＬＤＬ－ＣおよびＰＣＳＫ９レベルに対する効果を比較したグラフである．
【0050】
［図１６］図１６は，高脂肪食を与えたＣ５７／Ｂｌａｃｋ６マウスにおける経口ナノＳＢＣ-１１５，４１８（３０ｍｇ／Ｋｇ，１日）とマウスにおけるＰｒａｌｕｅｎｔ（登録商標）のＳＣ注射液（２００ｍｇ，１日）の血漿ＬＤＬ-ＣおよびＰＣＳＫ９レベルに対する効果の比較を示すグラフを提供する．
【0051】
【0052】
発明の詳細な説明
本発明は，強力なＬＤＬ低下剤，およびナノ肝臓標的化アプローチを含むその使用方法を提供する．
小分子ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲアンタゴニストの効力を改善するために，本発明は，ＳＢＣ-１１５，４１８などのＰＣＳＫ９アンタゴニストおよびその類似体を，スタチンまたは他のＬＤＬ-Ｃ低下剤の有無において，効力を最大化し，その全身分布を最小化するために，肝臓への差次的標的送達（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）のために標的化し，ナノテクノロジープラットフォームを使用した．
図１および２は，本発明の実施形態による，ＳＢＣ-１１５，４１８および肝臓標的化部分（グリチルレチン酸（ＧＡ），ラクトビオン酸（ＬＡ）およびアルギン酸）を含むナノ粒子の選択された例を示す．
本明細書中で実証されるように，ＰＣＳＫ９アンタゴニスト（たとえば，ＳＢＣ-１１５，４１８および肝臓標的化のために改変されたその類似体）のナノ製剤は，ＬＤＬ-コレステロールを低下させることにおいて，改善された効力を提供する．
コレステロール合成を減少させるスタチン系薬物とは異なり，ＳＢＣ‐１１５，４１８およびその類似体のようなＰＣＳＫ９アンタゴニストは，低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体（ＬＤＬＲ）との相互作用を含む細胞外プロ蛋白質転換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）の機能をダウンレギュレートする．
ＰＣＳＫ９アンタゴニストおよびそのナノ製剤は，治療的に，血液中のＬＤＬ－コレステロールレベルを低下させるため，ならびに家族性高コレステロール血液症，アテローム生成性脂質異常症，アテローム性動脈硬化症，およびより一般的には心血液管疾患（ＣＶＤ）を含むコレステロールおよびリポタンパク質代謝障害の予防および／または治療に使用することができる．
本発明は，強力なＬＤＬ低下剤，およびナノ肝臓標的化アプローチを含むその使用方法を提供する．
小分子ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲアンタゴニストの効力を改善するために，本発明は，ＳＢＣ-１１５，４１８などのＰＣＳＫ９アンタゴニストおよびその類似体を，スタチンまたは他のＬＤＬ-Ｃ低下剤の有無において，効力を最大化し，その全身分布を最小化するために，肝臓への差次的標的送達（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）のために標的化し，ナノテクノロジープラットフォームを使用した．
図１および２は，本発明の実施形態による，ＳＢＣ-１１５，４１８および肝臓標的化部分（グリチルレチン酸（ＧＡ），ラクトビオン酸（ＬＡ）およびアルギン酸）を含むナノ粒子の選択された例を示す．
本明細書中で実証されるように，ＰＣＳＫ９アンタゴニスト（たとえば，ＳＢＣ-１１５，４１８および肝臓標的化のために改変されたその類似体）のナノ製剤は，ＬＤＬ-コレステロールを低下させることにおいて，改善された効力を提供する．
コレステロール合成を減少させるスタチン系薬物とは異なり，ＳＢＣ‐１１５，４１８およびその類似体のようなＰＣＳＫ９アンタゴニストは，低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体（ＬＤＬＲ）との相互作用を含む細胞外プロ蛋白質転換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）の機能をダウンレギュレートする．
ＰＣＳＫ９アンタゴニストおよびそのナノ製剤は，治療的に，血液中のＬＤＬ－コレステロールレベルを低下させるため，ならびに家族性高コレステロール血液症，アテローム生成性脂質異常症，アテローム性動脈硬化症，およびより一般的には心血液管疾患（ＣＶＤ）を含むコレステロールおよびリポタンパク質代謝障害の予防および／または治療に使用することができる．
【0053】
本発明のナノ肝標的ＰＣＳＫ９アンタゴニスト（たとえば，ＳＢＣ-１１５，４１８）は，スタチンまたは他の脂質低下物質と組み合わせることができる．
特定の実施形態において，薬物（たとえば，ＰＣＳＫ９アンタゴニストおよび脂質低下（たとえば，ＬＤＬ低下物質）物質）は，疎水性ナノ粒子中にナノ封入される．
疎水性ナノ粒子の例としては，アミン修飾ポリ-（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ），ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ），エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ），またはＥＰＡ／ＤＨＡ，またはキトサンへの架橋またはグラフト化の有無にかかわらず，ＨＤＬを使用する固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）が挙げられるが，これらに限定されない．
キトサン，特に低～超低分子量キトサンは，脂肪酸（ＥＰＡ，ＤＨＡ，および／または異なる量の組合せを含むが，これらに限定されない）または他の酸（たとえば，アミノ酸，ヒアルロン酸，および／またはリノール酸）に結合され得，細胞膜上に長い滞留時間にわたって粘膜付着特性および正電荷を依然として保持する疎水性ポリマーの生成をもたらす．
キトサンおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ），キトサン-ＥＰＡ，キトサン-ＤＨＡまたはキトサン-ＥＰＡ／ＤＨＡナノ粒子，ならびにグリチルレチン酸，ラクトビオン酸，およびアルギン酸などの肝臓標的化部分に結合したＳＬＮを含むかまたは含まない，疎水性のＰＬＧＡへのＳＢＣ-１１５，４１８の封入化を以下に例示する．
特定の実施形態において，薬物（たとえば，ＰＣＳＫ９アンタゴニストおよび脂質低下（たとえば，ＬＤＬ低下物質）物質）は，疎水性ナノ粒子中にナノ封入される．
疎水性ナノ粒子の例としては，アミン修飾ポリ-（乳酸-コ-グリコール酸）（ＰＬＧＡ），ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ），エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ），またはＥＰＡ／ＤＨＡ，またはキトサンへの架橋またはグラフト化の有無にかかわらず，ＨＤＬを使用する固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）が挙げられるが，これらに限定されない．
キトサン，特に低～超低分子量キトサンは，脂肪酸（ＥＰＡ，ＤＨＡ，および／または異なる量の組合せを含むが，これらに限定されない）または他の酸（たとえば，アミノ酸，ヒアルロン酸，および／またはリノール酸）に結合され得，細胞膜上に長い滞留時間にわたって粘膜付着特性および正電荷を依然として保持する疎水性ポリマーの生成をもたらす．
キトサンおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ），キトサン-ＥＰＡ，キトサン-ＤＨＡまたはキトサン-ＥＰＡ／ＤＨＡナノ粒子，ならびにグリチルレチン酸，ラクトビオン酸，およびアルギン酸などの肝臓標的化部分に結合したＳＬＮを含むかまたは含まない，疎水性のＰＬＧＡへのＳＢＣ-１１５，４１８の封入化を以下に例示する．
【0054】
本明細書中で使用される場合，用語「対象」は，ヒトおよび動物の両方を含む．
本明細書中で使用される場合，用語「ＰＣＳＫ９」は，ＰＣＳＫ９活性または機能の少なくとも一部を保持する，ＰＣＳＫ９変異体およびバリアントを含む，タンパク質ＰＣＳＫ９の任意の形態をいう．
たとえばヒトＰＣＳＫ９への特異的記載のような，特に明記がない限り，ＰＣＳＫ９は，たとえば，ヒト，ブタ，ウシ，ウマ，イヌおよびネコのような，天然配列ＰＣＳＫ９の全ての哺乳動物種を指す．
本明細書中で使用される場合，用語「ＰＣＳＫ９」は，ＰＣＳＫ９活性または機能の少なくとも一部を保持する，ＰＣＳＫ９変異体およびバリアントを含む，タンパク質ＰＣＳＫ９の任意の形態をいう．
たとえばヒトＰＣＳＫ９への特異的記載のような，特に明記がない限り，ＰＣＳＫ９は，たとえば，ヒト，ブタ，ウシ，ウマ，イヌおよびネコのような，天然配列ＰＣＳＫ９の全ての哺乳動物種を指す．
【0055】
１つの例示的なヒトＰＣＳＫ９配列は，Ｕｎｉｐｒｏｔ受入番号Ｑ８ＮＢＰ７として見出される．
例示的なアミノ酸配列は，以下の通りである：
例示的なアミノ酸配列は，以下の通りである：
【0056】
MGTVSSRRSW WPLPLLLLLL LLLGPAGARA QEDEDGDYEE LVLALRSEED
GLAEAPEHGT TATFHRCAKD PWRLPGTYVV VLKEETHLSQ SERTARRLQA
QAARRGYLTK ILHVFHGLLP GFLVKMSGDL LELALKLPHV DYIEEDSSVF
AQSIPWNLER ITPPRYRADE YQPPDGGSLV EVYLLDTSIQ SDHREIEGRV
MVTDFENVPE EDGTRFHRQA SKCDSHGTHL AGVVSGRDAG VAKGASMRSL
RVLNCQGKGT VSGTLIGLEF IRKSQLVQPV GPLVVLLPLA GGYSRVLNAA
CQRLARAGVV LVTAAGNFRD DACLYSPASA PEVITVGATN AQDQPVTLGT
LGTNFGRCVD LFAPGEDIIG ASSDCSTCFV SQSGTSQAAA HVAGIAAMML
SAEPELTLAE LRQRLIHFSA KDVINEAWFP EDQRVLTPNL VAALPPSTHG
AGWQLFCRTV WSAHSGPTRM ATAVARCAPD EELLSCSSFS RSGKRRGERM
EAQGGKLVCR AHNAFGGEGV YAIARCCLLP QANCSVHTAP PAEASMGTRV
HCHQQGHVLT GCSSHWEVED LGTHKPPVLR PRGQPNQCVG HREASIHASC
CHAPGLECKV KEHGIPAPQE QVTVACEEGW TLTGCSALPG TSHVLGAYAV
DNTCVVRSRD VSTTGSTSEG AVTAVAICCR SRHLAQASQE LQ(配列番号1).
GLAEAPEHGT TATFHRCAKD PWRLPGTYVV VLKEETHLSQ SERTARRLQA
QAARRGYLTK ILHVFHGLLP GFLVKMSGDL LELALKLPHV DYIEEDSSVF
AQSIPWNLER ITPPRYRADE YQPPDGGSLV EVYLLDTSIQ SDHREIEGRV
MVTDFENVPE EDGTRFHRQA SKCDSHGTHL AGVVSGRDAG VAKGASMRSL
RVLNCQGKGT VSGTLIGLEF IRKSQLVQPV GPLVVLLPLA GGYSRVLNAA
CQRLARAGVV LVTAAGNFRD DACLYSPASA PEVITVGATN AQDQPVTLGT
LGTNFGRCVD LFAPGEDIIG ASSDCSTCFV SQSGTSQAAA HVAGIAAMML
SAEPELTLAE LRQRLIHFSA KDVINEAWFP EDQRVLTPNL VAALPPSTHG
AGWQLFCRTV WSAHSGPTRM ATAVARCAPD EELLSCSSFS RSGKRRGERM
EAQGGKLVCR AHNAFGGEGV YAIARCCLLP QANCSVHTAP PAEASMGTRV
HCHQQGHVLT GCSSHWEVED LGTHKPPVLR PRGQPNQCVG HREASIHASC
CHAPGLECKV KEHGIPAPQE QVTVACEEGW TLTGCSALPG TSHVLGAYAV
DNTCVVRSRD VSTTGSTSEG AVTAVAICCR SRHLAQASQE LQ(配列番号1).
【0057】
本明細書中で使用される場合，「ＰＣＳＫ９機能のモジュレーター」は，ＰＣＳＫ９生物学的活性または機能，および／またはＰＣＳＫ９シグナル伝達によって媒介される下流経路（ＬＤＬＲのＰＣＳＫ９媒介ダウンレギュレーション，およびＬＤＬ血液クリアランスの減少のＰＣＳＫ９媒介阻害を含む）を阻害し得る小分子をいう．
ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターは，ＰＣＳＫ９シグナル伝達によって媒介される下流経路（たとえば，ＬＤＬＲの相互作用および／またはＰＣＳＫ９に対する細胞応答の誘発）を含む，ＰＣＳＫ９生物学的活性を遮断し，拮抗し，抑制し，または（有意を含む任意の程度まで）減少させる化合物を包含する．
本発明の目的のために，用語「ＰＣＳＫ９機能のモジュレーター」は，それによって，ＰＣＳＫ９自体，ＰＣＳＫ９生物学的活性（ＬＤＬＲとの相互作用，ＬＤＬＲのダウンレギュレーション，および血液ＬＤＬクリアランスの減少を阻害するその任意の態様を媒介する能力を含むが，これらに限定されない），または生物学的活性の結果が，任意の測定可能な程度で実質的に無効にされ，減少され，または中和される，以前に同定された用語，タイトル，ならびに機能的状態および特性のすべてを包含することが明確に理解される．
いくつかの実施形態において，ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターは，ＰＣＳＫ９に結合し，そして，ＬＤＬＲまたはその分泌とのその相互作用を妨げる．
他の実施形態において，ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターは，ＰＣＳＫ９の活性部位に結合して，そのチモーゲンを安定化し，そして自己プロセシングを妨げる．
さらなる実施形態において，ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターは，
ＬＤＬＲのＰＣＳＫ９媒介ダウンレギュレーションを減少またはブロックする；
ＬＤＬ血液クリアランスのＰＣＳＫ９媒介減少を阻害する；
培養肝細胞による培地中のＬＤＬクリアランスを増加させる；
インビボで肝臓による血中ＬＤＬクリアランスを増加させる；
スタチンを含む他のＬＤＬ低下薬に対する患者の感受性を改善する；
スタチンを含む他のＬＤＬ低下薬と相乗的である；および
他のまだ同定されていない因子とのＰＣＳＫ９相互作用をブロックする．
ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターの例は，本明細書中に提供される．
特定の実施形態において，「ＰＣＳＫ９機能のモジュレーター」は，ＰＣＳＫ９アンタゴニストである．
ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターは，ＰＣＳＫ９シグナル伝達によって媒介される下流経路（たとえば，ＬＤＬＲの相互作用および／またはＰＣＳＫ９に対する細胞応答の誘発）を含む，ＰＣＳＫ９生物学的活性を遮断し，拮抗し，抑制し，または（有意を含む任意の程度まで）減少させる化合物を包含する．
本発明の目的のために，用語「ＰＣＳＫ９機能のモジュレーター」は，それによって，ＰＣＳＫ９自体，ＰＣＳＫ９生物学的活性（ＬＤＬＲとの相互作用，ＬＤＬＲのダウンレギュレーション，および血液ＬＤＬクリアランスの減少を阻害するその任意の態様を媒介する能力を含むが，これらに限定されない），または生物学的活性の結果が，任意の測定可能な程度で実質的に無効にされ，減少され，または中和される，以前に同定された用語，タイトル，ならびに機能的状態および特性のすべてを包含することが明確に理解される．
いくつかの実施形態において，ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターは，ＰＣＳＫ９に結合し，そして，ＬＤＬＲまたはその分泌とのその相互作用を妨げる．
他の実施形態において，ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターは，ＰＣＳＫ９の活性部位に結合して，そのチモーゲンを安定化し，そして自己プロセシングを妨げる．
さらなる実施形態において，ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターは，
ＬＤＬＲのＰＣＳＫ９媒介ダウンレギュレーションを減少またはブロックする；
ＬＤＬ血液クリアランスのＰＣＳＫ９媒介減少を阻害する；
培養肝細胞による培地中のＬＤＬクリアランスを増加させる；
インビボで肝臓による血中ＬＤＬクリアランスを増加させる；
スタチンを含む他のＬＤＬ低下薬に対する患者の感受性を改善する；
スタチンを含む他のＬＤＬ低下薬と相乗的である；および
他のまだ同定されていない因子とのＰＣＳＫ９相互作用をブロックする．
ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターの例は，本明細書中に提供される．
特定の実施形態において，「ＰＣＳＫ９機能のモジュレーター」は，ＰＣＳＫ９アンタゴニストである．
【0058】
本発明の化合物は，塩として投与することができ，これも本発明の範囲内である．
薬学的に許容される（すなわち，非毒性の，生理学的に適合性の）塩が好ましい）．
本発明の方法の化合物が，たとえば，少なくとも１つの塩基性中心を有する場合，それらは酸付加塩を形成することができる．
これらは，
たとえば，鉱酸などの強無機酸（たとえば，硫酸，リン酸，塩酸など）と，
強烈な有機カルボン酸，たとえば，非置換またはたとえばハロゲンで置換されている炭素数１～４のアルカンカルボン酸（たとえば酢酸）と，
たとえば，飽和または不飽和ジカルボン酸，たとえばシュウ酸，マロン酸，コハク酸，マレイン酸，フマル酸，フタル酸，テレフタル酸，
たとえば，ヒドロキシルカルボン酸，たとえば，アスコルビン酸，グリコール酸，乳酸，リンゴ酸，酒石酸，クエン酸，
たとえば，アミノ酸，たとえばアスパラギン酸，グルタミン酸，リジン，アルギニン，
または，安息香酸，
または有機スルホン酸，たとえば非置換または置換（たとえば，ハロゲン）された（Ｃ１－Ｃ４）アルキルまたはアリールスルホン酸，たとえばメチルまたはパラトルエンスルホン酸などと形成することができる．
対応する酸付加塩はまた，所望であれば，複数の塩基性中心を有して形成され得る．
少なくとも１つの酸基（たとえば，ＣＯＯＨ）を有する本発明の方法において使用される化合物は，適切な塩基と塩を形成することもできる．
このような塩の代表的な例としては，アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩，たとえばナトリウム，カリウムまたはマグネシウム塩，またはアンモニアまたは有機アミン，たとえばモルヒネ，チオモルホリン，ピペリジン，ピロリジン，モノ，ジまたはトリ低級アルキルアミン，たとえばエチル，ｔｅｒｔ－ブチル，ジエチル，ジイソプロピル，トリエチル，トリブチルまたはジメチル-プロピルアミンとの塩，またはモノ，ジまたはトリヒドロキシ低級アルキルアミン，たとえばモノ，ジまたはトリエタノールアミンが挙げられる．
対応する内部塩を形成することもできる．
薬学的に許容される（すなわち，非毒性の，生理学的に適合性の）塩が好ましい）．
本発明の方法の化合物が，たとえば，少なくとも１つの塩基性中心を有する場合，それらは酸付加塩を形成することができる．
これらは，
たとえば，鉱酸などの強無機酸（たとえば，硫酸，リン酸，塩酸など）と，
強烈な有機カルボン酸，たとえば，非置換またはたとえばハロゲンで置換されている炭素数１～４のアルカンカルボン酸（たとえば酢酸）と，
たとえば，飽和または不飽和ジカルボン酸，たとえばシュウ酸，マロン酸，コハク酸，マレイン酸，フマル酸，フタル酸，テレフタル酸，
たとえば，ヒドロキシルカルボン酸，たとえば，アスコルビン酸，グリコール酸，乳酸，リンゴ酸，酒石酸，クエン酸，
たとえば，アミノ酸，たとえばアスパラギン酸，グルタミン酸，リジン，アルギニン，
または，安息香酸，
または有機スルホン酸，たとえば非置換または置換（たとえば，ハロゲン）された（Ｃ１－Ｃ４）アルキルまたはアリールスルホン酸，たとえばメチルまたはパラトルエンスルホン酸などと形成することができる．
対応する酸付加塩はまた，所望であれば，複数の塩基性中心を有して形成され得る．
少なくとも１つの酸基（たとえば，ＣＯＯＨ）を有する本発明の方法において使用される化合物は，適切な塩基と塩を形成することもできる．
このような塩の代表的な例としては，アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩，たとえばナトリウム，カリウムまたはマグネシウム塩，またはアンモニアまたは有機アミン，たとえばモルヒネ，チオモルホリン，ピペリジン，ピロリジン，モノ，ジまたはトリ低級アルキルアミン，たとえばエチル，ｔｅｒｔ－ブチル，ジエチル，ジイソプロピル，トリエチル，トリブチルまたはジメチル-プロピルアミンとの塩，またはモノ，ジまたはトリヒドロキシ低級アルキルアミン，たとえばモノ，ジまたはトリエタノールアミンが挙げられる．
対応する内部塩を形成することもできる．
【0059】
塩基性基を含有する本明細書に記載の化合物の例示的な塩には，一塩酸塩，硫酸水素塩，メタンスルホン酸塩，リン酸塩または硝酸塩が含まれる．
酸基を含有する，本明細書に記載される化合物の例示的な塩は，ナトリウム，カリウムおよびマグネシウム塩，ならびに薬学的に許容される有機アミンを含む．
酸基を含有する，本明細書に記載される化合物の例示的な塩は，ナトリウム，カリウムおよびマグネシウム塩，ならびに薬学的に許容される有機アミンを含む．
【0060】
混合物または純粋または実質的に純粋な形態のいずれかで，本明細書に記載される方法において使用され得る化合物のすべての立体異性体は，本発明の範囲内であると考えられる．
本発明の化合物は，Ｒ置換基のいずれか１つを含むいずれかの炭素原子に不斉中心を有することができる．
結果として，本発明の方法で使用される化合物は，鏡像異性体またはジアステレオマー形態で，またはそれらの混合物で存在することができる．
このような化合物の調製方法は，出発物質としてラセミ体，鏡像異性体またはジアステレオマーを利用することができる．
ジアステレオマーまたはエナンチオマー生成物が調製される場合，それらは，従来の方法（たとえば，クロマトグラフィー，キラルＨＰＬＣまたは分別結晶化）によって分離され得る．
本発明の化合物は，Ｒ置換基のいずれか１つを含むいずれかの炭素原子に不斉中心を有することができる．
結果として，本発明の方法で使用される化合物は，鏡像異性体またはジアステレオマー形態で，またはそれらの混合物で存在することができる．
このような化合物の調製方法は，出発物質としてラセミ体，鏡像異性体またはジアステレオマーを利用することができる．
ジアステレオマーまたはエナンチオマー生成物が調製される場合，それらは，従来の方法（たとえば，クロマトグラフィー，キラルＨＰＬＣまたは分別結晶化）によって分離され得る．
【0061】
本明細書中で使用される場合，用語「ファーマコフォア」は，特定の生物学的標的構造との最適な超分子相互作用（ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ）を確実にし，場合によっては，生物学的標的の生物学的活性を誘発し，活性化し，ブロックし，阻害し，または調節するために必要な立体的および電子的特徴の集合をいう．
ＩＵＰＡＣ，Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９８） ７０： １１２９－１１４３を参照されたい．
ＩＵＰＡＣ，Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９８） ７０： １１２９－１１４３を参照されたい．
【0062】
本明細書中で使用される場合，用語「ファーマコフォアモデル」は，規定された座標系における点の表現をいい，ここで，点は，リガンドおよび／または相互作用するポリペプチド，タンパク質，または秩序水分子（ｏｒｄｅｒｅｄ ｗａｔｅｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）の結合したコンホメーションにおける原子または化学部分の位置または他の特性に対応する．
秩序水分子（ｏｒｄｅｒｅｄ ｗａｔｅｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）は，ポリペプチドまたはタンパク質の構造決定に由来するモデルにおいて観察可能な水である．
ファーマコフォアモデルは，たとえば，リガンドの結合コンホメーションの原子，またはその一部を含むことができる．
ファーマコフォアモデルは，リガンドまたはその部分の結合したコンフォメーション，およびリガンドと相互作用し，そして，結合したポリペプチドまたはタンパク質に由来する１つ以上の原子の両方を含むことができる．
したがって，リガンドの結合コンホメーションの幾何学的特性に加えて，ファーマコフォアモデルは，たとえば，原子または化学部分の電荷または疎水性を含む他の特性を示すことができる．
ファーマコフォアモデルは，リガンドの結合コンホメーション内の内部相互作用，またはリガンドと，ポリペプチド，タンパク質，または他の受容体との結合コンホメーション間の相互作用（たとえばファンデルワールス相互作用，水素結合，イオン結合，および疎水性相互作用を含む）を組み込むことができる．
ファーマコフォアモデルは，リガンドの２つ以上の結合したコンホメーションから誘導することができる．
秩序水分子（ｏｒｄｅｒｅｄ ｗａｔｅｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）は，ポリペプチドまたはタンパク質の構造決定に由来するモデルにおいて観察可能な水である．
ファーマコフォアモデルは，たとえば，リガンドの結合コンホメーションの原子，またはその一部を含むことができる．
ファーマコフォアモデルは，リガンドまたはその部分の結合したコンフォメーション，およびリガンドと相互作用し，そして，結合したポリペプチドまたはタンパク質に由来する１つ以上の原子の両方を含むことができる．
したがって，リガンドの結合コンホメーションの幾何学的特性に加えて，ファーマコフォアモデルは，たとえば，原子または化学部分の電荷または疎水性を含む他の特性を示すことができる．
ファーマコフォアモデルは，リガンドの結合コンホメーション内の内部相互作用，またはリガンドと，ポリペプチド，タンパク質，または他の受容体との結合コンホメーション間の相互作用（たとえばファンデルワールス相互作用，水素結合，イオン結合，および疎水性相互作用を含む）を組み込むことができる．
ファーマコフォアモデルは，リガンドの２つ以上の結合したコンホメーションから誘導することができる．
【0063】
本明細書中で使用される場合，用語「リガンド」は，レセプターのリガンド結合ドメインと相互作用し，そしてその活性を調節する任意の化合物，組成物または分子をいう．
「リガンド」はまた，受容体に直接結合することなく受容体を調節する化合物を含み得る．
「リガンド」はまた，受容体に直接結合することなく受容体を調節する化合物を含み得る．
【0064】
本発明の方法を実施する際に，上記の化合物は，そのまま，またはプロドラッグなどの活性剤を誘導することができる形態で投与することができる．
プロドラッグは，本明細書中に記載される化合物の誘導体であり，その薬理学的作用は，インビボでの化学的プロセスまたは代謝プロセスによる活性化合物への変換から生じる．
本明細書で使用される「プロドラッグエステル」という用語は，本発明の方法で使用される化合物の１つまたは複数のヒドロキシルを，当業者に公知の手順を使用して，アルキル，アルコキシ，またはアリール置換アシル化剤と反応させて，アセテート，ピバレート，メチルカーボネート，ベンゾエートなどを生成することによって形成されるエステルおよびカーボネートを含む．
生物活性剤（たとえば，式ＩまたはＩＩの化合物）を提供するためにインビボで変換され得る任意の化合物は，本発明の範囲および精神内のプロドラッグである．
様々な形態のプロドラッグが当技術分野で周知である．
プロドラッグおよびプロドラッグ誘導体の包括的な説明は，
（ａ）Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈら，Ｃｈ ３１ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９６）；
（ｂ）Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５）；
（ｃ）Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， Ｐ． Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ－ＬａｒｓｏｎおよびＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集， Ｃｈ． ５，１１３－１９１頁（Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９１）．
本発明の方法を実施する際に使用される治療薬は，一般に，そのレシピエントにおいて所望の治療効果を誘導するのに十分な量で投与される．
したがって，本明細書で使用される「治療有効量」という用語は，式ＩまたはＩＩの化合物またはそのプロドラッグのうちの１つ以上の投与によって治療可能な状態を治療または予防するのに十分な治療剤の量を指す．
特定の実施形態では，治療有効量は，ＰＣＳＫ９関連状態を治療する，すなわち，検出可能な治療効果，予防効果，または改善効果をもたらすことに適切な量を指す．
この効果は，たとえば，本明細書中に記載される状態の処置または予防を含み得る．
プロドラッグは，本明細書中に記載される化合物の誘導体であり，その薬理学的作用は，インビボでの化学的プロセスまたは代謝プロセスによる活性化合物への変換から生じる．
本明細書で使用される「プロドラッグエステル」という用語は，本発明の方法で使用される化合物の１つまたは複数のヒドロキシルを，当業者に公知の手順を使用して，アルキル，アルコキシ，またはアリール置換アシル化剤と反応させて，アセテート，ピバレート，メチルカーボネート，ベンゾエートなどを生成することによって形成されるエステルおよびカーボネートを含む．
生物活性剤（たとえば，式ＩまたはＩＩの化合物）を提供するためにインビボで変換され得る任意の化合物は，本発明の範囲および精神内のプロドラッグである．
様々な形態のプロドラッグが当技術分野で周知である．
プロドラッグおよびプロドラッグ誘導体の包括的な説明は，
（ａ）Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈら，Ｃｈ ３１ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９６）；
（ｂ）Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５）；
（ｃ）Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， Ｐ． Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ－ＬａｒｓｏｎおよびＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集， Ｃｈ． ５，１１３－１９１頁（Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９１）．
本発明の方法を実施する際に使用される治療薬は，一般に，そのレシピエントにおいて所望の治療効果を誘導するのに十分な量で投与される．
したがって，本明細書で使用される「治療有効量」という用語は，式ＩまたはＩＩの化合物またはそのプロドラッグのうちの１つ以上の投与によって治療可能な状態を治療または予防するのに十分な治療剤の量を指す．
特定の実施形態では，治療有効量は，ＰＣＳＫ９関連状態を治療する，すなわち，検出可能な治療効果，予防効果，または改善効果をもたらすことに適切な量を指す．
この効果は，たとえば，本明細書中に記載される状態の処置または予防を含み得る．
【0065】
本明細書中に記載される化合物は，約０．０１ｍｇ～約２００ｍｇ／ｋｇ体重／日からの範囲の用量で投与され得る．
０．１～１００ｍｇ／ｋｇ／日からの用量．特に１～３０ｍｇ／ｋｇ／日を１日または１週間につき１回または複数回適用することが，所望の結果をもたらすのに有効である．
例として，経口投与のための適当な投与量は，１～３０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲であり，一方，静脈内投与のための典型的な用量は，１～１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である．
もちろん，当業者が理解するように，実際に投与される投薬量は，処置される状態，レシピエントの年齢，健康および重量，同時処置のタイプ（存在する場合），ならびに処置の頻度に依存する．
さらに，効果的な用量は，バイオアッセイにおける化合物の生物活性を測定し，したがって投与されるべき適切な用量を確立するためのルーティンの実験的活性試験に基づいて，当業者によって決定され得る．
０．１～１００ｍｇ／ｋｇ／日からの用量．特に１～３０ｍｇ／ｋｇ／日を１日または１週間につき１回または複数回適用することが，所望の結果をもたらすのに有効である．
例として，経口投与のための適当な投与量は，１～３０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲であり，一方，静脈内投与のための典型的な用量は，１～１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である．
もちろん，当業者が理解するように，実際に投与される投薬量は，処置される状態，レシピエントの年齢，健康および重量，同時処置のタイプ（存在する場合），ならびに処置の頻度に依存する．
さらに，効果的な用量は，バイオアッセイにおける化合物の生物活性を測定し，したがって投与されるべき適切な用量を確立するためのルーティンの実験的活性試験に基づいて，当業者によって決定され得る．
【0066】
本発明の方法において使用される化合物は，典型的には，１日に１～２回～週に１～２回投与されて，上記の１日用量を送達する．
しかしながら，本明細書中に記載される化合物の投与のための正確なレジメンは，必然的に，処置される個々の対象の必要性，投与される処置の型，および担当医療専門家の判断に依存する．
しかしながら，本明細書中に記載される化合物の投与のための正確なレジメンは，必然的に，処置される個々の対象の必要性，投与される処置の型，および担当医療専門家の判断に依存する．
【0067】
１つの態様において，本発明は，個体において，高コレステロール血症，および／または脂質異常症，アテローム性動脈硬化症，ＣＶＤまたは冠状動脈性心疾患の少なくとも１つの症状を処置または予防するための方法を提供し，これは，循環ＰＣＳＫ９に拮抗するＰＣＳＫ９機能のモジュレーターの有効量を個体に投与することを包含する．
【0068】
さらなる局面において，本発明は，個体において，高コレステロール血症，および／または脂質異常症，アテローム性動脈硬化症，ＣＶＤまたは冠状動脈心疾患の少なくとも１つの症状を処置または予防する際に使用するための，細胞内，細胞外または循環ＰＣＳＫ９に拮抗するＰＣＳＫ９機能のモジュレーターの有効量を提供する．
【0069】
本発明はさらに，個体における，高コレステロール血症，および／または脂質異常症，アテローム性動脈硬化症，ＣＶＤまたは冠状動脈心疾患の少なくとも１つの症状を治療または予防するための医薬の製造における，細胞内，細胞外または循環ＰＣＳＫ９に拮抗するＰＣＳＫ９機能のモジュレーターの有効量の使用を提供する．
【0070】
本発明の方法は，ＰＣＳＫ９シグナル伝達によって媒介されるダウンストリーム経路（たとえば，ＰＣＳＫ９に対する細胞応答の誘発）を含む，ＰＣＳＫ９生物学的活性を遮断し，抑制し，または減少させる（有意に減少させることを含む）任意の分子である，ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターを使用する．
【0071】
ＰＣＳＫ９機能のモジュレーターは，以下のいずれか１つ以上の特徴を示す：
（ａ）ＰＣＳＫ９に結合する，
（ｂ）ＬＤＬＲとの，ＰＣＳＫ９相互作用を減少またはブロックする，
（ｃ）ＰＣＳＫ９の分泌を減少またはブロックする，
（ｄ）ＬＤＬＲのＰＣＳＫ９媒介ダウンレギュレーションを減少またはブロックする，
（ｅ）ＰＣＳＫ９媒介ＬＤＬ血中クリアランスの減少を阻害する，
（ｆ）培養肝細胞による培地中のＬＤＬクリアランスを増加させる，
（ｇ）ｉｎ ｖｉｖｏで肝臓による血中ＬＤＬクリアランスを増加させる，
（ｈ）スタチンを含む他のＬＤＬ低下薬に対する患者の感受性を改善する，
（ｉ）スタチンを含む他のＬＤＬ低下薬と相乗的である，および
（ｊ）同定されていない他の因子とのＰＣＳＫ９相互作用をブロックする．
（ａ）ＰＣＳＫ９に結合する，
（ｂ）ＬＤＬＲとの，ＰＣＳＫ９相互作用を減少またはブロックする，
（ｃ）ＰＣＳＫ９の分泌を減少またはブロックする，
（ｄ）ＬＤＬＲのＰＣＳＫ９媒介ダウンレギュレーションを減少またはブロックする，
（ｅ）ＰＣＳＫ９媒介ＬＤＬ血中クリアランスの減少を阻害する，
（ｆ）培養肝細胞による培地中のＬＤＬクリアランスを増加させる，
（ｇ）ｉｎ ｖｉｖｏで肝臓による血中ＬＤＬクリアランスを増加させる，
（ｈ）スタチンを含む他のＬＤＬ低下薬に対する患者の感受性を改善する，
（ｉ）スタチンを含む他のＬＤＬ低下薬と相乗的である，および
（ｊ）同定されていない他の因子とのＰＣＳＫ９相互作用をブロックする．
【0072】
一般に，本発明の方法において使用される化合物は，単独で，または１つ以上の他の治療薬と組み合わせて，当該分野で公知の任意の許容可能な経路を使用することによって，ＰＣＳＫ９機能の活性調節を達成するために投与され得る．
従って，活性薬剤は，経口，口腔，非経口，たとえば静脈内または動脈内注入，筋肉内，腹腔内，くも膜下または皮下注射，リポソーム媒介送達またはナノ粒子カプセル化，直腸，膣，吸入または吹送，経皮または光学送達（ｏｐｔｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）によって投与することができる．
従って，活性薬剤は，経口，口腔，非経口，たとえば静脈内または動脈内注入，筋肉内，腹腔内，くも膜下または皮下注射，リポソーム媒介送達またはナノ粒子カプセル化，直腸，膣，吸入または吹送，経皮または光学送達（ｏｐｔｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）によって投与することができる．
【0073】
経口投与される用量単位は，錠剤，カプレット，ピル，半固体，軟または硬ゼラチンカプセル，水溶液または油性溶液，エマルジョン，懸濁液またはシロップの形成であり得る．
非経口投与のための適切な投薬形態としては，注射可能な溶液または懸濁液，坐剤，粉末製剤（たとえば，ナノクリスタル，微結晶またはエアロゾルスプレー）が挙げられる．
活性剤はまた，従来の経皮送達システムに組み込まれてもよい．
非経口投与のための適切な投薬形態としては，注射可能な溶液または懸濁液，坐剤，粉末製剤（たとえば，ナノクリスタル，微結晶またはエアロゾルスプレー）が挙げられる．
活性剤はまた，従来の経皮送達システムに組み込まれてもよい．
【0074】
本明細書中で使用される場合，「生理学的に適合性の担体媒体」という表現は，任意のおよびすべての溶媒，希釈剤，または他の液体ビヒクル，分散または懸濁助剤，表面剤，等張剤，増粘剤または乳化剤，保存剤，固体結合剤，潤滑剤，充填剤および所望の特定の剤形に適しているその他を含む．
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎａｒｏら， Ｐａｒｔ ５， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ， ｐｐ． ６６９－１０１５（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ／Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）（２０００））は，医薬組成物の製剤化に使用される種々の担体およびその調製のための公知の技術を開示している．
任意の従来の医薬担体媒体が，望ましくない生物学的効果を生じること，またはそのような化合物を含む製剤の任意の他の成分（単数または複数）と有害な方法で相互作用することなどによって，本発明で使用されるＰＣＳＫ９モジュレーターと不適合である限りを除いて，その使用は，本発明の範囲内であることが企図される．
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎａｒｏら， Ｐａｒｔ ５， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ， ｐｐ． ６６９－１０１５（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ／Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）（２０００））は，医薬組成物の製剤化に使用される種々の担体およびその調製のための公知の技術を開示している．
任意の従来の医薬担体媒体が，望ましくない生物学的効果を生じること，またはそのような化合物を含む製剤の任意の他の成分（単数または複数）と有害な方法で相互作用することなどによって，本発明で使用されるＰＣＳＫ９モジュレーターと不適合である限りを除いて，その使用は，本発明の範囲内であることが企図される．
【0075】
硬カプセルおよび軟カプセルを含む固体剤形の産生のために，治療薬は，ラクトース，スクロース，グルコース，ゼラチン，麦芽，マンニトール，シリカゲル，デンプンまたはその誘導体，タルク，ステアリン酸またはその塩，乾燥脱脂乳，植物，石油，動物油または合成油，ワックス，脂肪，ポリオールなどの薬学的に不活性な無機または有機賦形剤と混合されてもよい．
液体溶液，エマルジョンまたは懸濁液またはシロップの産生のために，水溶液，アルコール，水溶液性生理食塩水溶液，水溶液性デキストロース，ポリオール，グリセリン，脂質，リン脂質，シクロデキストリン，植物，石油，動物または合成油などの賦形剤を使用することができる．
坐剤については，植物，石油，動物または合成油，ワックス，脂肪およびポリオールのような賦形剤を使用し得る．
エアロゾル製剤の場合，この目的に適した圧縮ガス，たとえば酸素，窒素および二酸化炭素を使用することができる．
医薬組成物または製剤はまた，防腐剤，安定剤，たとえば，ＵＶ安定剤，乳化剤，甘味料，浸透圧を調整するための塩，緩衝液，コーティング材料および酸化防止剤を含むが，これらに限定されない，１つ以上の添加剤を含有する可能性がある．
液体溶液，エマルジョンまたは懸濁液またはシロップの産生のために，水溶液，アルコール，水溶液性生理食塩水溶液，水溶液性デキストロース，ポリオール，グリセリン，脂質，リン脂質，シクロデキストリン，植物，石油，動物または合成油などの賦形剤を使用することができる．
坐剤については，植物，石油，動物または合成油，ワックス，脂肪およびポリオールのような賦形剤を使用し得る．
エアロゾル製剤の場合，この目的に適した圧縮ガス，たとえば酸素，窒素および二酸化炭素を使用することができる．
医薬組成物または製剤はまた，防腐剤，安定剤，たとえば，ＵＶ安定剤，乳化剤，甘味料，浸透圧を調整するための塩，緩衝液，コーティング材料および酸化防止剤を含むが，これらに限定されない，１つ以上の添加剤を含有する可能性がある．
【0076】
本発明は，さらに，活性剤の投与のための制御放出，徐放，または徐放治療剤形を含み，これは，適切な送達システムへの活性剤の組み込みを含む．
この剤形は，治療結果を改善し，かつ／または副作用を最小限に抑えるために，血流中の有効濃度が長期間にわたって維持され得，血液中の濃度が比較的一定のままであるような方法で，活性薬剤の放出を制御する．
さらに，制御放出システムは，活性剤の血漿レベルにおける最小ピーク-トラフ変動（ｍｉｎｉｍｕｍ ｐｅａｋ ｔｏ ｔｒｏｕｇｈ ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎｓ）を提供する．
この剤形は，治療結果を改善し，かつ／または副作用を最小限に抑えるために，血流中の有効濃度が長期間にわたって維持され得，血液中の濃度が比較的一定のままであるような方法で，活性薬剤の放出を制御する．
さらに，制御放出システムは，活性剤の血漿レベルにおける最小ピーク-トラフ変動（ｍｉｎｉｍｕｍ ｐｅａｋ ｔｏ ｔｒｏｕｇｈ ｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎｓ）を提供する．
【0077】
本発明を実施する際に使用するための化合物には，ＰＣＳＫ９アンタゴニスト（たとえば，上記の式Ｉおよび特に上記式ＩＩのアンタゴニスト）が含まれる．
特定の実施形態において，ＰＣＳＫ９アンタゴニストは，ＳＢＣ-１１５，４１８，ＳＢＣ-１１５，４３３，ＳＢＣ-１１５，４４８，ＳＢＣ-１１５，４６２およびＳＢＣ-１１５，４７７からなる群より選択される（たとえば，図３を参照のこと）．
特定の実施形態において，ＰＣＳＫ９アンタゴニストは，ＳＢＣ-１１５，４１８である．
特定の実施形態において，ＰＣＳＫ９アンタゴニストは，ＳＢＣ-１１５，４１８，ＳＢＣ-１１５，４３３，ＳＢＣ-１１５，４４８，ＳＢＣ-１１５，４６２およびＳＢＣ-１１５，４７７からなる群より選択される（たとえば，図３を参照のこと）．
特定の実施形態において，ＰＣＳＫ９アンタゴニストは，ＳＢＣ-１１５，４１８である．
【0078】
本発明の方法は，通常，本明細書中に記載される化合物および／または組成物での処置を受けている対象においてもたらされる治療または予防効果を決定するための医学的追跡を含む．
【0079】
定義
以下の定義は，本発明の理解を容易にするために提供される：
単数形「ａ」，「ａｎ」，および「ｔｈｅ」は，文脈が明らかに沿わないと指示しない限り，複数の指示対象を含む．
本明細書中で使用される場合，用語「アルキル」は，分岐または非分岐の飽和炭化水素鎖部分である．
「低級アルキル」は，１～約８個の炭素，たとえばメチル，エチル，ｎ－プロピル，イソ－プロピル，ｎ－ブチル，ｓｅｃ－ブチル，イソ－ブチル，ｔｅｒｔ－ブチル，２－メチルペンチルペンチル，ヘキシル，イソヘキシル，ヘプチル，４，４－ジメチルペンチル，オクチル，２，２，４－トリメチルペンチルなどを有する分岐または非分岐炭化水素鎖を示す．
「置換アルキル」は，そのような鎖に通常結合されている１つ以上の置換基（たとえば，ヒドロキシ，ハロゲン，メルカプトまたはチオ，シアノ，アルキルチオ，カルボキシ，カルボアルコキシ，アミノ，ニトロ，アルコキシ，または任意に置換された，アルケニル，アルキニル，ヘテロシクリル，アリール，ヘテロアリールなど）で置換されていてもよく，トリフルオロメチル，３-ヒドロキシヘキシル，２-カルボキシプロピル，２-フルオロエチル，カルボキシメチル，シアノブチル，フェネチル，ベンジルなどのアルキル基を形成するアルキル基を含む．
以下の定義は，本発明の理解を容易にするために提供される：
単数形「ａ」，「ａｎ」，および「ｔｈｅ」は，文脈が明らかに沿わないと指示しない限り，複数の指示対象を含む．
本明細書中で使用される場合，用語「アルキル」は，分岐または非分岐の飽和炭化水素鎖部分である．
「低級アルキル」は，１～約８個の炭素，たとえばメチル，エチル，ｎ－プロピル，イソ－プロピル，ｎ－ブチル，ｓｅｃ－ブチル，イソ－ブチル，ｔｅｒｔ－ブチル，２－メチルペンチルペンチル，ヘキシル，イソヘキシル，ヘプチル，４，４－ジメチルペンチル，オクチル，２，２，４－トリメチルペンチルなどを有する分岐または非分岐炭化水素鎖を示す．
「置換アルキル」は，そのような鎖に通常結合されている１つ以上の置換基（たとえば，ヒドロキシ，ハロゲン，メルカプトまたはチオ，シアノ，アルキルチオ，カルボキシ，カルボアルコキシ，アミノ，ニトロ，アルコキシ，または任意に置換された，アルケニル，アルキニル，ヘテロシクリル，アリール，ヘテロアリールなど）で置換されていてもよく，トリフルオロメチル，３-ヒドロキシヘキシル，２-カルボキシプロピル，２-フルオロエチル，カルボキシメチル，シアノブチル，フェネチル，ベンジルなどのアルキル基を形成するアルキル基を含む．
【0080】
本明細書で単独で，または別の基の一部として使用される「ハロゲン」または「ハロ」という用語は，塩素，臭素，フッ素，およびヨウ素を指す．
【0081】
「アルコキシ」という用語は，アルキル-Ｏ-を指し，アルキルは，上で定義した通りである．
【0082】
別段の指示がない限り，本明細書において単独で，または別の基の一部として使用される用語「シクロアルキル」は，１～３個の環を含有する飽和または部分不飽和（１個以上の二重結合を含有する）環状炭化水素基（「炭素環」）を包含し，単環，二環および三環を含み，環を形成する合計３～２０個の炭素，特に３～１０個の炭素を含有し，環を形成し，１または２個の芳香環（アリールで記載したような）に縮合され得，たとえば，シクロプロピル，シクロブチル，シクロペンチル，シクロヘキシル，シクロヘプチル，シクロオクチル，シクロデシル，シクロドデシルおよびシクロヘキセニルを包含する．
【0083】
「置換シクロアルキル」は，ハロゲン，アルキル，置換アルキル，アルコキシ，ヒドロキシ，アリール，置換アリール，アリールオキシ，シクロアルキル，アルキルアミド，アルカノイルアミノ，オキソ，アシル，アリールカルボニルアミノ，アミノ，ニトロ，シアノ，チオールおよび／またはアルキルチオおよび／または「置換アルキル」の定義に含まれる置換基のいずれかのような１個以上の置換基で置換されていてもよいシクロアルキル基を含む．
【0084】
別段の指示がない限り，本明細書で単独で，または別の基の一部として使用される「アリール」または「Ａｒ」という用語は，環部分に６～１０個の炭素を含有する単環および多環芳香族基（フェニルまたは１-ナフチルおよび２-ナフチルを含有するナフチルなど）を指し，任意選択で，シクロアルキル環などの炭素環に縮合した，またはアリールもしくは複素環，またはそれらの置換形態に縮合した，１～３個の追加の環を含むことができる．
【0085】
「置換アリール」は，ハロ，アルキル，ハロアルキル（たとえば，トリフルオロメチル），アルコキシ，ハロアルコキシ（たとえば，ジフルオロメトキシ）．
アルケニル，
アルキニル，
シクロアルキルアルキル，
ヘテロシクロアルキル，
アリール，
ヘテロアリール，
アリールアルキル，
アリールオキシ，
アリールオキシアルキル，
アリールアルコキシ，
アルコキシカルボニル，
アルキルカルボニル，
アリールカルボニル，
アリールアルケニル，
アミノカルボニル,
モノアルキルアミノカルボニル，
ジアルキルアミノカルボニル，
アミノカルボニルアリール，
アリールチオ，
アリールスルフィニル，
アリールアゾ，
ヘテロアリールアルキル，
ヘテロアリールアルケニル，
ヘテロアリールヘテロアリール，
ヘテロアリールオキシ，
ヒドロキシ，
ニトロ，
シアノ，
アミノ，
アミノ基が，1または2個の置換基（任意に，アルキル，アリールまたは定義に記載された他の置換基のいずれかで置換された）を含む置換アミノ，
チオール，
アルキルチオ，
ヘテロアリールチオ，
アリールチオアルキル，
アルコシアリールチオ，
アルキルアミノカルボニル，
アリールアミノカルボニル，
アルキルカルボニルオキシ，
アリールカルボニルオキシ，
アルキルカルボニルアミノ，
アリールカルボニルアミノ，
アリールスルフィニルアルキル，
アリールスルホニルアミノまたはアリールスルホンアミノカルボニルおよび／または上記で言及されたアルキル置換基のいずれかの，
１つまたは複数の置換基で置換されていてもよいアリール基を含む．
アルケニル，
アルキニル，
シクロアルキルアルキル，
ヘテロシクロアルキル，
アリール，
ヘテロアリール，
アリールアルキル，
アリールオキシ，
アリールオキシアルキル，
アリールアルコキシ，
アルコキシカルボニル，
アルキルカルボニル，
アリールカルボニル，
アリールアルケニル，
アミノカルボニル,
モノアルキルアミノカルボニル，
ジアルキルアミノカルボニル，
アミノカルボニルアリール，
アリールチオ，
アリールスルフィニル，
アリールアゾ，
ヘテロアリールアルキル，
ヘテロアリールアルケニル，
ヘテロアリールヘテロアリール，
ヘテロアリールオキシ，
ヒドロキシ，
ニトロ，
シアノ，
アミノ，
アミノ基が，1または2個の置換基（任意に，アルキル，アリールまたは定義に記載された他の置換基のいずれかで置換された）を含む置換アミノ，
チオール，
アルキルチオ，
ヘテロアリールチオ，
アリールチオアルキル，
アルコシアリールチオ，
アルキルアミノカルボニル，
アリールアミノカルボニル，
アルキルカルボニルオキシ，
アリールカルボニルオキシ，
アルキルカルボニルアミノ，
アリールカルボニルアミノ，
アリールスルフィニルアルキル，
アリールスルホニルアミノまたはアリールスルホンアミノカルボニルおよび／または上記で言及されたアルキル置換基のいずれかの，
１つまたは複数の置換基で置換されていてもよいアリール基を含む．
【0086】
別段の指示がない限り，本明細書で単独でまたは別の基の一部として使用される「ヘテロアリール」または「Ｈｅｔ」という用語は，窒素，酸素または硫黄などの１，２，３または４個のヘテロ原子を含む５員または７員芳香族環を指し，そのような環は，アリール，シクロアルキル，ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル環に縮合し，可能なＮ-オキシドを含む．
【0087】
ヘテロアリール基の例としては，ピロリル，フラニル，チエニル，ピラゾリル，イミダゾリル，ピリジル，ピラジニル，ピリミジニル，ピリダジニル，オキサゾリル，イソオキサゾリル，チアゾリル，イソチアゾリル，チアジアゾリルおよびオキサジアゾリルが挙げられる．
縮合ヘテロアリール基の例としては，キノリン，イソキノリン，インドール，イソインドール，カルバゾール，アクリジン，ベンゾイミダゾール，ベンゾフラン，ベンゾオキサゾール，イソベンゾフラン，ベンゾチオフェン，フェナンスロリン，プリンなどが挙げられる．
「置換ヘテロアリール」は，「置換アルキル」，「置換シクロアルキル」，および「置換アリール」の定義において上記に含まれる置換基のような，１～４個の置換基で置換され得るヘテロアリール基を含む．
縮合ヘテロアリール基の例としては，キノリン，イソキノリン，インドール，イソインドール，カルバゾール，アクリジン，ベンゾイミダゾール，ベンゾフラン，ベンゾオキサゾール，イソベンゾフラン，ベンゾチオフェン，フェナンスロリン，プリンなどが挙げられる．
「置換ヘテロアリール」は，「置換アルキル」，「置換シクロアルキル」，および「置換アリール」の定義において上記に含まれる置換基のような，１～４個の置換基で置換され得るヘテロアリール基を含む．
【0088】
用語「ヘテロシクリル」，「複素環」または「複素環式環」は，本明細書において単独でまたは別の基の一部として使用される場合，飽和または部分的に不飽和であってもよい，非置換または置換の安定な５～７員の単環式環系を表す．そして，炭素原子と，Ｎ，Ｏ，またはＳから選択される１～４個のヘテロ原子とからなり，窒素および硫黄ヘテロ原子は任意に酸化されてもよく，窒素ヘテロ原子は任意に４級化（ｑｕａｔｅｍｉｚｅｄ）されてもよい．
「置換ヘテロシクリル」（または複素環または複素環式環）は，「置換アルキル」，「置換シクロアルキル」，および「置換アリール」の定義において上記に含まれる置換基など，１～４個の置換基で置換されていてもよいヘテロシクリル基を含む．
ヘテロシクリル環は，任意のヘテロ原子または炭素原子で結合することができ，その結果，安定な構造が生成される．
このようなヘテロシクリル基の例としては，ピペリジニル，ピペラジニル，オキソピペラジニル，オキソピペリジニル，オキソピロリジニル，オキソアゼピニル，アゼピニル，ピロリジニル，ピラゾリジニル，イミダゾリニル，オキサゾリジニル，イソオキサゾリジニル，モルホリニル，チアゾリジニル，テトラヒドロピラニル，チアモルホリニル，チアモルホリニルスルホキシドおよびチアモルホリニルスルホンが挙げられるが，これらに限定されない．
「置換ヘテロシクリル」（または複素環または複素環式環）は，「置換アルキル」，「置換シクロアルキル」，および「置換アリール」の定義において上記に含まれる置換基など，１～４個の置換基で置換されていてもよいヘテロシクリル基を含む．
ヘテロシクリル環は，任意のヘテロ原子または炭素原子で結合することができ，その結果，安定な構造が生成される．
このようなヘテロシクリル基の例としては，ピペリジニル，ピペラジニル，オキソピペラジニル，オキソピペリジニル，オキソピロリジニル，オキソアゼピニル，アゼピニル，ピロリジニル，ピラゾリジニル，イミダゾリニル，オキサゾリジニル，イソオキサゾリジニル，モルホリニル，チアゾリジニル，テトラヒドロピラニル，チアモルホリニル，チアモルホリニルスルホキシドおよびチアモルホリニルスルホンが挙げられるが，これらに限定されない．
【0089】
用語「任意に置換された」，「置換されていてもよい」は，本明細書において，言及される化学部分（たとえば，アルキル，アリール，ヘテロアリール）
が，無置換または，
低級アルキル，
アルケニル，
アルキニル，
シクロアルキル，
アリールアルキル，
アリール，
ハロアリール，
ヘテロサイクル，
ヘテロシクロアルキル，
ヘテロアリール，
ヒドロキシル，
アミノ，
モノアルキルアミノ，
ジアルキルアミノ，
アルコキシ，
ハロゲン，
ハロアルコキシ，
アリールオキシ，
アリールオキシアルキル，
アルキルアリールオキシ，
アリールアルコキシ，
アルコシアリル，
カルボキシ，
カルボアルコキシ，
カルボキサミド，
アミノカルボニル，
モノアルキルアミノカルボニル，
ジアルキルアミノカルボニル，
モノアルキルアミノスルフィニル，
ジアルキルアミノスルフィニル，
モノアルキルアミノスルホニル，
ジアルキルアミノスルホニル，
アルキルスルホニルアミノ，
ヒドロキシスルホニルオキシ，
アルコキシスルホニルオキシ，
アルキルスルホニルオキシ．
ヒドロキシスルホニル，
アルコキシスルホニル，
アルキルスルホニルアルキル，
モノアルキルアミノスルホニルアルキル，
ジアルキルアミノスルホニルアルキル，
モノアルキルアミノスルフィニルアルキル，
ジアルキルアミノスルフィニルアルキルなど，を含み，制限はない，１以上の基で置換されていることを意味するために使用される．
が，無置換または，
低級アルキル，
アルケニル，
アルキニル，
シクロアルキル，
アリールアルキル，
アリール，
ハロアリール，
ヘテロサイクル，
ヘテロシクロアルキル，
ヘテロアリール，
ヒドロキシル，
アミノ，
モノアルキルアミノ，
ジアルキルアミノ，
アルコキシ，
ハロゲン，
ハロアルコキシ，
アリールオキシ，
アリールオキシアルキル，
アルキルアリールオキシ，
アリールアルコキシ，
アルコシアリル，
カルボキシ，
カルボアルコキシ，
カルボキサミド，
アミノカルボニル，
モノアルキルアミノカルボニル，
ジアルキルアミノカルボニル，
モノアルキルアミノスルフィニル，
ジアルキルアミノスルフィニル，
モノアルキルアミノスルホニル，
ジアルキルアミノスルホニル，
アルキルスルホニルアミノ，
ヒドロキシスルホニルオキシ，
アルコキシスルホニルオキシ，
アルキルスルホニルオキシ．
ヒドロキシスルホニル，
アルコキシスルホニル，
アルキルスルホニルアルキル，
モノアルキルアミノスルホニルアルキル，
ジアルキルアミノスルホニルアルキル，
モノアルキルアミノスルフィニルアルキル，
ジアルキルアミノスルフィニルアルキルなど，を含み，制限はない，１以上の基で置換されていることを意味するために使用される．
【0090】
置換されていてもよい上記式ＩおよびＩＩの化学部分は，
低級アルキル，
アルケニル，
アルキニル，
シクロアルキル，
アリールアルキル，
アリール，
複素環，および
ヘテロアリール
を含む．
たとえば，置換されていてもよいアルキルは，プロピルおよび２-クロロ-プロピルの両方を含む．
さらに，「任意に置換された」はまた，指定された置換基(または複数)が単に単一の置換基ではなく複数の置換基を有する実施形態を含む．
たとえば，任意に置換されたアリールは，フェニルおよび３-ブロモ-４-クロロ-６-エチル-フェニルの両方を含む．
低級アルキル，
アルケニル，
アルキニル，
シクロアルキル，
アリールアルキル，
アリール，
複素環，および
ヘテロアリール
を含む．
たとえば，置換されていてもよいアルキルは，プロピルおよび２-クロロ-プロピルの両方を含む．
さらに，「任意に置換された」はまた，指定された置換基(または複数)が単に単一の置換基ではなく複数の置換基を有する実施形態を含む．
たとえば，任意に置換されたアリールは，フェニルおよび３-ブロモ-４-クロロ-６-エチル-フェニルの両方を含む．
【0091】
特に断らない限り，アルキル基およびアリール基への本明細書中の全ての記載はまた，その置換形態を含む．
【0092】
本明細書に記載の化合物の活性は，実験的に実証されている．
以下の実施例は，本発明をさらに詳細に記載するために提供される．
これらの実施例は，例示の目的のためにのみ提供され，いかなる方法においても本発明を限定することを意図しない．
以下の実施例は，本発明をさらに詳細に記載するために提供される．
これらの実施例は，例示の目的のためにのみ提供され，いかなる方法においても本発明を限定することを意図しない．
【0093】
実施例１
ＬＤＬＲ／ＰＣＳＫ９結合のＩｎ ｖｉｔｒｏ試験
ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用を阻害するそれらの能力を決定するために，結合アッセイにおいて，ＳＢＣ-１１５，４１８および類似体の試験を行った．
ＳＢＣ‐１１５，４１８は，マイクロモル以下のＩＣ５０で，ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用を阻害した．
実験の詳細は，上記および国際公開第２０１７／２２２９５３号パンフレットに提供されている．
いくつかの新しい類似体（図３参照）もサブマイクロモル（ＳＢＣ－１１５，４３３およびＳＢＣ－１１５，４７７）または低マイクロモル（ＳＢＣ－１１５，４４８およびＳＢＣ－１１５，４６２）範囲で阻害した（図４Ａ）．
リード化合物ＳＢＣ-１１５，４１８の親油性を考慮して，結合に対するその効果を調べるために溶解度研究を行った（図４Ｂ）．
異なる可溶化条件下，ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＥＬＩＳＡ結合アッセイを，ＳＢＣ-１１５，４１８の異なる濃度（０．０１μＭ～１００μＭ）で行った．
データは，改善された溶解性条件下でのＳＢＣ-１１５，４１８のインビトロ結合が，ＩＣ５０が，５０ｎＭという，結合力の有意な改善をもたらしたことを示した．
さらに，ＳＢＣ－１１５，４１８のベンゾオキサゾール部分の酸素原子を窒素原子で形式的に置換してベンズイミダゾール部分（ＳＢＣ－１１５，４７７；ｌｏｇ Ｐ＝４．５）を作製することにより，その結果，溶解度が増加し，ＩＣ５０が０．１９μＭになって，効力の増大がさらに観察された．
ＬＤＬＲ／ＰＣＳＫ９結合のＩｎ ｖｉｔｒｏ試験
ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用を阻害するそれらの能力を決定するために，結合アッセイにおいて，ＳＢＣ-１１５，４１８および類似体の試験を行った．
ＳＢＣ‐１１５，４１８は，マイクロモル以下のＩＣ５０で，ＰＣＳＫ９／ＬＤＬＲ相互作用を阻害した．
実験の詳細は，上記および国際公開第２０１７／２２２９５３号パンフレットに提供されている．
いくつかの新しい類似体（図３参照）もサブマイクロモル（ＳＢＣ－１１５，４３３およびＳＢＣ－１１５，４７７）または低マイクロモル（ＳＢＣ－１１５，４４８およびＳＢＣ－１１５，４６２）範囲で阻害した（図４Ａ）．
リード化合物ＳＢＣ-１１５，４１８の親油性を考慮して，結合に対するその効果を調べるために溶解度研究を行った（図４Ｂ）．
異なる可溶化条件下，ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＥＬＩＳＡ結合アッセイを，ＳＢＣ-１１５，４１８の異なる濃度（０．０１μＭ～１００μＭ）で行った．
データは，改善された溶解性条件下でのＳＢＣ-１１５，４１８のインビトロ結合が，ＩＣ５０が，５０ｎＭという，結合力の有意な改善をもたらしたことを示した．
さらに，ＳＢＣ－１１５，４１８のベンゾオキサゾール部分の酸素原子を窒素原子で形式的に置換してベンズイミダゾール部分（ＳＢＣ－１１５，４７７；ｌｏｇ Ｐ＝４．５）を作製することにより，その結果，溶解度が増加し，ＩＣ５０が０．１９μＭになって，効力の増大がさらに観察された．
【0094】
実施例２
分泌ＰＣＳＫ９についての試験
ＳＢＣ-１１５，４１８およびその類似体は，細胞中または培地中のいずれにおいても，ＰＣＳＫ９の合成，プロセシングおよび分泌に対して影響を示さなかった．
実験の詳細は，上記および国際公開第２０１７／２２２９５３号パンフレットに提供されている．
分泌ＰＣＳＫ９についての試験
ＳＢＣ-１１５，４１８およびその類似体は，細胞中または培地中のいずれにおいても，ＰＣＳＫ９の合成，プロセシングおよび分泌に対して影響を示さなかった．
実験の詳細は，上記および国際公開第２０１７／２２２９５３号パンフレットに提供されている．
【0095】
実施例３
ｉｎ ｓｉｔｕでのＬＤＬＲアップレギュレーションおよびＤｉｌ－ＬＤＬの取り込みのための細胞ベースのアッセイ
同じ体積のＤＭＳＯ（制御）で処理した細胞と比較して，ＳＢＣ－１１５，４１８，ＳＢＣ－１１５，４３３，ＳＢＣ－１１５，４４８およびＳＢＣ－１１５，４６２は，ＬＤＬＲの有意なアップレギュレーションを有するＬＤＬＲのレベルの増加を示した．
さらに，ＳＢＣ－１１５，４１８およびＳＢＣ－１１５，４６２は，１０μＭ濃度でＨｅｐＧ２細胞におけるＤｉｌ－ＬＤＬ取り込みの有意な増加を示した（図５）．
ｉｎ ｓｉｔｕでのＬＤＬＲアップレギュレーションおよびＤｉｌ－ＬＤＬの取り込みのための細胞ベースのアッセイ
同じ体積のＤＭＳＯ（制御）で処理した細胞と比較して，ＳＢＣ－１１５，４１８，ＳＢＣ－１１５，４３３，ＳＢＣ－１１５，４４８およびＳＢＣ－１１５，４６２は，ＬＤＬＲの有意なアップレギュレーションを有するＬＤＬＲのレベルの増加を示した．
さらに，ＳＢＣ－１１５，４１８およびＳＢＣ－１１５，４６２は，１０μＭ濃度でＨｅｐＧ２細胞におけるＤｉｌ－ＬＤＬ取り込みの有意な増加を示した（図５）．
【0096】
実施例４
ＳＢＣ－１１５，４１８ナノ製剤の最適化プロセス
いくつかのＳＢＣ－１１５，４１８ナノ製剤を調製し，最適化した（図１Ａ－１Ｄ）．
ＳＢＣナノ処方１～３の成分とその量を，表１および２に示す．
ＤＭＳＯ中の，ＳＢＣ-１１５，４１８，ＰＶＰ（平均分子量４０，０００），ＨＰＭＣ-ＡＳおよびアルギン酸を，室温で１～２分間，プローブ超音波処理下で水に添加した．
次に，上記溶液を室温で３０分間インキュベートした．
ＮＰ懸濁液を，遠心分離（１５，０００×ｇ，４℃，６０分）を用いて水で２回洗浄した．
アルギン酸をラクトビオン酸で置き換えたか，または製剤番号４についてはグリチルレチン酸（ＧＡ）で置き換えた．
ＳＢＣ－１１５，４１８ナノ製剤の最適化プロセス
いくつかのＳＢＣ－１１５，４１８ナノ製剤を調製し，最適化した（図１Ａ－１Ｄ）．
ＳＢＣナノ処方１～３の成分とその量を，表１および２に示す．
ＤＭＳＯ中の，ＳＢＣ-１１５，４１８，ＰＶＰ（平均分子量４０，０００），ＨＰＭＣ-ＡＳおよびアルギン酸を，室温で１～２分間，プローブ超音波処理下で水に添加した．
次に，上記溶液を室温で３０分間インキュベートした．
ＮＰ懸濁液を，遠心分離（１５，０００×ｇ，４℃，６０分）を用いて水で２回洗浄した．
アルギン酸をラクトビオン酸で置き換えたか，または製剤番号４についてはグリチルレチン酸（ＧＡ）で置き換えた．
【表1】
【0097】
表２は，最適化されたナノ製剤番号１～３のサイズ，ゼータ電位，および封入効率（％）を示す．
表２は，さらに，凝集を防ぐために５％マンニトールを凍結保護剤として加えた，ナノ製剤番号３を含む．
ナノ製剤番号３は，サイズがより小さいため，望ましい．
表２は，さらに，凝集を防ぐために５％マンニトールを凍結保護剤として加えた，ナノ製剤番号３を含む．
ナノ製剤番号３は，サイズがより小さいため，望ましい．
【表2】
【0098】
ＮＰ中のＳＢＣ-１１５，４１８を定量するために使用されるＨＰＬＣ-ＵＶ．
【0099】
実施例５
ＳＢＣ－１１５，４１８のナノ製剤のＰＫおよびＰＤ分析
ＳＢＣ-１１５，４１８／ナノ製剤Ｄ（ＳＢＣ-１１５，４１８，ＰＶＰ，アルギン酸，キトサンオリゴ糖乳酸塩（Ｃｈｉｔｏｓａｎ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｌａｃｔａｔｅ））を使用して，ＰＫおよびＰＤを決定した．
ＳＢＣ－１１５，４１８のＰＫおよび経口バイオアベイラビリティーについて，データはＳＢＣ－１１５，４１８の濃度増加（５ｍｇ／ｋｇ経口および静注）が，マウス血漿中で３０分から１時間観察されたことを示した．
データは，ＳＢＣ-１１５，４１８が１８％の経口バイオアベイラビリティを有することを示す（図６）．
ＰＤについては，高脂肪食（ＨＦＤ）を食餌したＣ５７／Ｂｌａｃｋ６マウスにおける，ＬＤＬコレステロール値に対するＳＢＣ－１１５，４１８の効果は，ＳＢＣ－１１５，４１８を５日間投与した後に，２０％のＬＤＬ－Ｃ低下を示した（図７）．
ＳＢＣ－１１５，４１８のナノ製剤のＰＫおよびＰＤ分析
ＳＢＣ-１１５，４１８／ナノ製剤Ｄ（ＳＢＣ-１１５，４１８，ＰＶＰ，アルギン酸，キトサンオリゴ糖乳酸塩（Ｃｈｉｔｏｓａｎ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｌａｃｔａｔｅ））を使用して，ＰＫおよびＰＤを決定した．
ＳＢＣ－１１５，４１８のＰＫおよび経口バイオアベイラビリティーについて，データはＳＢＣ－１１５，４１８の濃度増加（５ｍｇ／ｋｇ経口および静注）が，マウス血漿中で３０分から１時間観察されたことを示した．
データは，ＳＢＣ-１１５，４１８が１８％の経口バイオアベイラビリティを有することを示す（図６）．
ＰＤについては，高脂肪食（ＨＦＤ）を食餌したＣ５７／Ｂｌａｃｋ６マウスにおける，ＬＤＬコレステロール値に対するＳＢＣ－１１５，４１８の効果は，ＳＢＣ－１１５，４１８を５日間投与した後に，２０％のＬＤＬ－Ｃ低下を示した（図７）．
【0100】
実施例６
ＳＢＣ－１１５，４１８分散および肝臓標的製剤の分析
ＨＰＭＣ-ＡＳは，増大した溶解性を有し，固体分散体を形成し，分散マトリックスからのＡＰＩの結晶化を阻害することができ，ならびに持続放出用量形態のための速度制御ポリマーを有する，広く使用されている賦形剤である．
分散液を以下のように調製した：
ＳＢＣ-１１５，４１８を，超音波処理を１０分間使用して，ＨＰＭＣ-ＡＳに可溶化した．
ＳＢＣ－１１５，４１８／ＨＰＭＣ－ＡＳを，ナノクリスタル／肝標的最適製剤であるナノＳＢＣ－１１５，４１８（ＳＢＣ－１１５，４１８／ＰＶＰ／ＨＰＭＣ－ＡＣ／アルギン酸）に対する分散製剤として使用すると（図２），分散製剤は，マウスにおけるＳＢＣ－１１５，４１８について，より大きなＡＵＣ，血中Ｃｍａｘ，および経口バイオアベイラビリティ％Ｆを示した（表３）．
しかしながら，ＳＢＣ-１１５，４１８の分散製剤に対して，ナノＳＢＣ-１１５，４１８を用いて，ＳＢＣ-１１５，４１８のより大きな肝臓送達が得られた（図８および９）．
さらに，高脂肪食を食餌したＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＬＤＬ－Ｃレベルに対するナノＳＢＣ－１１５，４１８の効力は，ＳＢＣ－１１５，４１８の分散製剤に対して，ナノＳＢＣ－１１５，４１８を用いた場合のＬＤＬ－Ｃ有効性が予想外に高いことを示している（図１０）．
ＳＢＣ－１１５，４１８分散および肝臓標的製剤の分析
ＨＰＭＣ-ＡＳは，増大した溶解性を有し，固体分散体を形成し，分散マトリックスからのＡＰＩの結晶化を阻害することができ，ならびに持続放出用量形態のための速度制御ポリマーを有する，広く使用されている賦形剤である．
分散液を以下のように調製した：
ＳＢＣ-１１５，４１８を，超音波処理を１０分間使用して，ＨＰＭＣ-ＡＳに可溶化した．
ＳＢＣ－１１５，４１８／ＨＰＭＣ－ＡＳを，ナノクリスタル／肝標的最適製剤であるナノＳＢＣ－１１５，４１８（ＳＢＣ－１１５，４１８／ＰＶＰ／ＨＰＭＣ－ＡＣ／アルギン酸）に対する分散製剤として使用すると（図２），分散製剤は，マウスにおけるＳＢＣ－１１５，４１８について，より大きなＡＵＣ，血中Ｃｍａｘ，および経口バイオアベイラビリティ％Ｆを示した（表３）．
しかしながら，ＳＢＣ-１１５，４１８の分散製剤に対して，ナノＳＢＣ-１１５，４１８を用いて，ＳＢＣ-１１５，４１８のより大きな肝臓送達が得られた（図８および９）．
さらに，高脂肪食を食餌したＣ５７ＢＬ／６マウスにおけるＬＤＬ－Ｃレベルに対するナノＳＢＣ－１１５，４１８の効力は，ＳＢＣ－１１５，４１８の分散製剤に対して，ナノＳＢＣ－１１５，４１８を用いた場合のＬＤＬ－Ｃ有効性が予想外に高いことを示している（図１０）．
【表3】
【0101】
実施例７
栄養誘発高コレステロール血症マウスモデルを用いた試験
マウスを，温度（２０～２４℃），湿度（６０～７０％），および交互の１２時間の明／暗サイクルの気候制御条件下で，ケージあたり４匹の動物として飼育した．
マウスに高脂肪食（ＴＤ．０６４１４，（株）ハーランリサーチダイエット，インディアナ州，インディアナポリス）を与えた．これは脂肪源から６０カロリーを供給し，総コレステロールを増加させる．
従って，栄養的に誘導されたマウスは，ＬＤＬ－Ｃレベルの低下における肝臓標的化のためのナノＳＢＣ－１１５，４１８の効果を調べるのに適したモデルである．
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスに，陰性対照として，市販の固形飼料（Ｐｒｏｌａｂ ＲＭＨ ３０００，ＰＭＩ飼料，ミズーリ州，ルイス），または，高脂肪食（ＴＤ．０６４１４，（株）ハーランリサーチダイエット，インディアナ州，インディアナポリス）として，いずれかを与えた．
血漿を週１回採取し，ＬＤＬ－Ｃ値およびＰＣＳＫ９値をモニタリングした．
高脂肪食を４週間与えた後，各バイオマーカーレベルの平均が異なる群間で同等になるように，マウスを異なる群の１つに無作為に割り当てた．
一方の群をベヒクルで処置し，他方の群を異なる用量のナノＳＢＣ-１１５，４１８で処置した（表４）．
血液試料（７５μｌ）を，１管当たり２ ＵＳＰ単位のヘパリンアンモニウム（Ｃａｒｏｌｉｎａ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）を含有するヘパリン化キャピラリーチューブを介して眼窩後静脈叢（ｒｅｔｒｏ－ｏｒｂｉｔａｌ ｖｅｎｏｕｓ ｐｌｅｘｕｓ）から収集した．
血漿は，室温で５分間の遠心分離（５，０００×ｇ）によって直ちに分離され，次いで，脂質プロファイルについてアッセイされるまで－８０℃に維持された．
血漿の総および遊離コレステロール，ＬＤＬ－Ｃおよび遊離ＰＣＳＫ９レベルを測定した．
栄養誘発高コレステロール血症マウスモデルを用いた試験
マウスを，温度（２０～２４℃），湿度（６０～７０％），および交互の１２時間の明／暗サイクルの気候制御条件下で，ケージあたり４匹の動物として飼育した．
マウスに高脂肪食（ＴＤ．０６４１４，（株）ハーランリサーチダイエット，インディアナ州，インディアナポリス）を与えた．これは脂肪源から６０カロリーを供給し，総コレステロールを増加させる．
従って，栄養的に誘導されたマウスは，ＬＤＬ－Ｃレベルの低下における肝臓標的化のためのナノＳＢＣ－１１５，４１８の効果を調べるのに適したモデルである．
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスに，陰性対照として，市販の固形飼料（Ｐｒｏｌａｂ ＲＭＨ ３０００，ＰＭＩ飼料，ミズーリ州，ルイス），または，高脂肪食（ＴＤ．０６４１４，（株）ハーランリサーチダイエット，インディアナ州，インディアナポリス）として，いずれかを与えた．
血漿を週１回採取し，ＬＤＬ－Ｃ値およびＰＣＳＫ９値をモニタリングした．
高脂肪食を４週間与えた後，各バイオマーカーレベルの平均が異なる群間で同等になるように，マウスを異なる群の１つに無作為に割り当てた．
一方の群をベヒクルで処置し，他方の群を異なる用量のナノＳＢＣ-１１５，４１８で処置した（表４）．
血液試料（７５μｌ）を，１管当たり２ ＵＳＰ単位のヘパリンアンモニウム（Ｃａｒｏｌｉｎａ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ）を含有するヘパリン化キャピラリーチューブを介して眼窩後静脈叢（ｒｅｔｒｏ－ｏｒｂｉｔａｌ ｖｅｎｏｕｓ ｐｌｅｘｕｓ）から収集した．
血漿は，室温で５分間の遠心分離（５，０００×ｇ）によって直ちに分離され，次いで，脂質プロファイルについてアッセイされるまで－８０℃に維持された．
血漿の総および遊離コレステロール，ＬＤＬ－Ｃおよび遊離ＰＣＳＫ９レベルを測定した．
【表4】
【0102】
データは，ナノＳＢＣ-１１５，４１８が，高脂肪食を与えたマウスにおいて，ＬＤＬ-ＣおよびＰＣＳＫ９を低下させるのに非常に有効であることを実証する（図１１～１６）．
さらに，ナノＳＢＣ-１１５，４１８は，ＨＤＬコレステロールの有意な増加（２倍）を引き起こす．
高脂肪食を与えたマウスに，ナノＳＢＣ－１１５，４１８を単独で経口投与（３０ｍｇ／ｋｇ）したところ，ＬＤＬ－Ｃが９０％近く低下し，モノクローナル抗体よりも強力である．
さらに，ナノＳＢＣ－１１５，４１８は，肝臓のＬＤＬ受容体レベルを濃度依存的に増加させる（図１７）．
前述の観点から，ナノＳＢＣ-１１５，４１８は，ＬＤＬ-Ｃを低減するための予想外に優れた特性を明らかに実証している．
さらに，ナノＳＢＣ-１１５，４１８は，ＨＤＬコレステロールの有意な増加（２倍）を引き起こす．
高脂肪食を与えたマウスに，ナノＳＢＣ－１１５，４１８を単独で経口投与（３０ｍｇ／ｋｇ）したところ，ＬＤＬ－Ｃが９０％近く低下し，モノクローナル抗体よりも強力である．
さらに，ナノＳＢＣ－１１５，４１８は，肝臓のＬＤＬ受容体レベルを濃度依存的に増加させる（図１７）．
前述の観点から，ナノＳＢＣ-１１５，４１８は，ＬＤＬ-Ｃを低減するための予想外に優れた特性を明らかに実証している．
【0103】
本明細書は，本発明が関係する技術水準を示すために提供される，特定の刊行物に対する引用を含む．
引用された刊行物の各々の開示全体は，参照により本明細書に組み込まれる．
引用された刊行物の各々の開示全体は，参照により本明細書に組み込まれる．
【0104】
本発明の特定の実施形態を上記で説明および／または例示したが，様々な他の実施形態が，前述の開示から当業者に明らかになるのであろう．
したがって，本発明は，記載および／または例示された特定の実施形態に限定されず，添付の特許請求の範囲から逸脱することなく，かなりの変更および修飾が可能である．
さらに，添付の特許請求の範囲において使用される場合，元および補正された形で，「構成する」，「本質的に構成する」，および「構成する」という経過用語は，記載されていない追加のクレーム要素またはステップ（もしあれば）が，当該クレームの範囲から除外されるものについて，クレームの範囲を定義する．
用語「含む」は，包括的またはオープンエンドであることが意図され，追加の，列挙されていない元素，方法，ステップ，または材料を排除しない．
用語「からなる」は，請求項に特定されたもの以外の任意の要素，ステップ，または材料，および後者の場合には，特定された材料に通常関連する不純物を除外する．
「本質的に，・・・からなる」という用語は，クレームの範囲を，特定された元素，ステップまたは材料，およびクレームに係る発明の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない元素，ステップまたは材料に限定する．
本発明を具体化するすべての組成物およびその使用方法は，代替実施形態では，遷移用語「含む」，「本質的にからなる」，および「からなる」のいずれかによってより具体的に定義することができる．
したがって，本発明は，記載および／または例示された特定の実施形態に限定されず，添付の特許請求の範囲から逸脱することなく，かなりの変更および修飾が可能である．
さらに，添付の特許請求の範囲において使用される場合，元および補正された形で，「構成する」，「本質的に構成する」，および「構成する」という経過用語は，記載されていない追加のクレーム要素またはステップ（もしあれば）が，当該クレームの範囲から除外されるものについて，クレームの範囲を定義する．
用語「含む」は，包括的またはオープンエンドであることが意図され，追加の，列挙されていない元素，方法，ステップ，または材料を排除しない．
用語「からなる」は，請求項に特定されたもの以外の任意の要素，ステップ，または材料，および後者の場合には，特定された材料に通常関連する不純物を除外する．
「本質的に，・・・からなる」という用語は，クレームの範囲を，特定された元素，ステップまたは材料，およびクレームに係る発明の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない元素，ステップまたは材料に限定する．
本発明を具体化するすべての組成物およびその使用方法は，代替実施形態では，遷移用語「含む」，「本質的にからなる」，および「からなる」のいずれかによってより具体的に定義することができる．
【0105】
参照文献
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6. Cohen et al. (2005) Nature Genetics 37, 161-165.
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【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図1D】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【配列表】
【国際調査報告】