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特表2022-507260ＭＣＬ－１阻害剤とミドスタウリンとの組み合わせ、その使用及び医薬組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-18
(54)【発明の名称】ＭＣＬ－１阻害剤とミドスタウリンとの組み合わせ、その使用及び医薬組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/519 20060101AFI20220111BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220111BHJP
A61K 31/553 20060101ALI20220111BHJP
A61K 31/7076 20060101ALI20220111BHJP
A61K 31/704 20060101ALI20220111BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220111BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220111BHJP
C07D 495/04 20060101ALI20220111BHJP
【ＦＩ】
A61K31/519
A61P43/00 121
A61K31/553
A61K31/7076
A61K31/704
A61P35/00
A61P35/02
C07D495/04 105
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021525741
(86)(22)【出願日】2019-11-14
(85)【翻訳文提出日】2021-07-12
(86)【国際出願番号】 EP2019081291
(87)【国際公開番号】W WO2020099542
(87)【国際公開日】2020-05-22
(31)【優先権主張番号】62/767,007
(32)【優先日】2018-11-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/824,515
(32)【優先日】2019-03-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/912,160
(32)【優先日】2019-10-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】500287019
【氏名又は名称】レ ラボラトワール セルヴィエ
(71)【出願人】
【識別番号】504389991
【氏名又は名称】ノバルティス アーゲー
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】特許業務法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】ハリロヴィッチ，エンサー
(72)【発明者】
【氏名】ワン，ユーチェン
(72)【発明者】
【氏名】モーリス，エリック
(72)【発明者】
【氏名】コノプレヴァ，マリナ
(72)【発明者】
【氏名】スクワルスカ，アンナ
【テーマコード（参考）】
4C071
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C071AA01
4C071BB01
4C071CC02
4C071CC21
4C071EE13
4C071FF05
4C071GG10
4C071HH05
4C071JJ01
4C071LL01
4C086AA01
4C086AA02
4C086CB22
4C086CB26
4C086EA10
4C086EA17
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA52
4C086MA66
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC75
(57)【要約】
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と（ｂ）Ｍｃｌ－１阻害剤との組み合わせ及び組成物並びにそれらの使用。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
同時、連続的又は別個の使用のための、（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤
もしくはそのエナンチオマー、ジアステレオ異性体、アトロプ異性体又は薬学的に許容し得る酸もしくは塩基とのそれらの付加塩と
の組み合わせ。
【化8】
［式中、
Ｄは、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基又はヘテロアリール基を表わし、
Ｅは、フリル、チエニル又はピロリル環を表わし、
Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４及びＸ５は、それぞれ独立して、炭素原子又は窒素原子を表わし、
Ｘ２は、Ｃ－Ｒ２６基又は窒素原子を表わし、
【化9】
は、環が芳香族であることを意味し、
Ｙは、窒素原子又はＣ－Ｒ３基を表わし、
Ｚは、窒素原子又はＣ－Ｒ４基を表わし、
Ｒ１は、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－Ｃｙ８、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ１，Ｒ２）、（Ｒ２，Ｒ３）、（Ｒ３，Ｒ４）、（Ｒ４，Ｒ５）の置換基は、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、ハロゲン、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される１～２個の基により置換されていることができると理解され、
Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ６，Ｒ７）の置換基は、２つの隣接する炭素原子上でグラフト化されている場合、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される基により置換されていることができると理解され、
Ｗは、－ＣＨ２－基、－ＮＨ－基又は酸素原子を表わし、
Ｒ８は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基、－ＣＨＲａＲｂ基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基又はヘテロアリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基を表わし、
Ｒ９は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、－Ｃｙ２、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－Ｃｙ３、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｏ－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ３、ハロゲン原子、シアノ基、－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１４又は－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１４Ｒ１４’を表わし、
Ｒ１０は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、アリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基、シクロアルキルアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル又は－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｏ－Ｃｙ４を表わし、
又は、
ペア（Ｒ９，Ｒ１０）の置換基は、２つの隣接する炭素原子上でグラフト化されている場合、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、
Ｒ１１及びＲ１１’は、それぞれ独立して、水素原子、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１を表わし、
又は、
ペア（Ｒ１１，Ｒ１１’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、当該窒素は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす１～２個の基により置換されていることができると理解され、可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解され、
Ｒ１２は、－Ｃｙ５、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－Ｃｙ６－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ７、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ９、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ９、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｒ１１、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ９、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＯＲ１１、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＯＲ１１、－ＳＯ２－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、
【化10】
を表わし、
該定義されたアンモニウムは、双性イオン型として存在するか又は一価のアニオン性カウンターイオンを有する可能性があり、
Ｒ１３、Ｒ１３’、Ｒ１４及びＲ１４’は、それぞれ独立して、水素原子又は場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒａは、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒｂは、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－Ｒｃ基、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲｃＲｃ’基又は－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｃ）２基を表わし、
Ｒｃ及びＲｃ’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基、シクロアルキル基、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシカルボニル（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒｃ，Ｒｃ’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている非芳香環を形成しており、同環は、該窒素原子に加えて、酸素及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、当該窒素は、直鎖又は分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｃｙ１、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ４、Ｃｙ５、Ｃｙ６、Ｃｙ７、Ｃｙ８及びＣｙ１０は、それぞれ独立して、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基又はヘテロアリール基を表わし、
Ｃｙ９は、
【化11】
を表わし、
又は、
Ｃｙ９は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２０）２；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－Ｍ＋）２；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０；ヒドロキシ；ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル；－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル；又は－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’から選択される基により置換されているヘテロアリール基を表わし、
Ｒ１５は、水素原子；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基；直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基；－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’基；又は－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル基を表わし、
Ｒ１６は、水素原子；ヒドロキシ基；ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基；－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル基；（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－Ｖ－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２０）２基；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－Ｍ＋）２基；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ２２Ｒ２３基；又は－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’基を表わし、
Ｒ１７は、水素原子；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２０）２基；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－Ｍ＋）２基；ヒドロキシ基；ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基；－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル基；－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’基；又はアルドン酸を表わし、
Ｍ＋は、薬学的に許容し得る一価のカチオンを表わし、
Ｕは、結合又は酸素原子を表わし、
Ｖは、－（ＣＨ２）ｓ－基又は－Ｃ（Ｏ）－基を表わし、
Ｒ１８は、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ１９は、水素原子又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２０は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２１及びＲ２１’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２１，Ｒ２１’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｒ２２は、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－（ＣＨ２）ｐ－ＮＲ２４Ｒ２４’基又は－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基を表わし、
Ｒ２３は、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２２，Ｒ２３）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～１８個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～５個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はヘテロシクロアルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｒ２４及びＲ２４’は、それぞれ独立して、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２４，Ｒ２４’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｒ２５は、水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２６は、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はシアノ基を表わし、
Ｒ２７は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２８は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－）（Ｏ－）基、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－）（ＯＲ３０）基、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ３０）（ＯＲ３０’）基、－Ｏ－ＳＯ２－Ｏ－基、－Ｏ－ＳＯ２－ＯＲ３０基、－Ｃｙ１０、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ２９基、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ２９基又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ２９Ｒ２９’基を表わし、
Ｒ２９及びＲ２９’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は直鎖もしくは分岐鎖アミノ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ３０及びＲ３０’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はアリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基を表わし、
ｎは、０又は１に等しい整数であり、
ｐは、０、１又は２に等しい整数であり、
ｑは、１、２、３又は４に等しい整数であり、
ｒ及びｓは、独立して、０又は１に等しい整数であり、
－「アリール」は、フェニル、ナフチル、ビフェニル、インダニル又はインデニル基を意味し、
－「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの芳香族部分を有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、５～１０個の環員で構成されている、任意の単環式又は二環式の基を意味し、
－「シクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、
－「ヘテロシクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、同非芳香族炭素環基は、縮合、架橋又はスピロ環系を含むことができると理解され、
該定義されたアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル基並びにアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシは、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル－Ｓ－、ヒドロキシ、オキソ（又は該当する場合、Ｎ－オキシド）、ニトロ、シアノ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ’、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’Ｒ’’、－（Ｃ＝ＮＲ’）－ＯＲ’’、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、トリフルオロメトキシ又はハロゲンから選択される１～４個の基により置換されている可能性があり、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素原子又は、場合により置換されている直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わすと理解され、先の可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解される］
【請求項2】
式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤が、式（ＩＢ）のものである、請求項１記載の組み合わせ。【化12】
［式中、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１１’及びＲ１２が、上記請求項１に記載されたとおりである］
【請求項3】
式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤が、化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩である、請求項１又は２記載の組み合わせ。
【請求項4】
式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤が、化合物Ｃ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（５－フルオロフラン－２－イル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩である、請求項１又は２記載の組み合わせ。
【請求項5】
化合物Ｂが、静脈内に投与され、ミドスタウリンが、経口投与される、請求項３記載の組み合わせ。
【請求項6】
少なくとも１種の更なる抗ガン剤、例えば、シタラビン及び／又はダウノルビシンをさらに含む、請求項１～５のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項7】
非固定用量組み合わせの形態にある、請求項１～６のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項8】
医薬における使用ための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項9】
ガンの処置における使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項10】
ガンが、急性骨髄性白血病である、請求項９記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項11】
ガンが、ＦＬＴ３突然変異を有する患者にみられる急性骨髄性白血病である、請求項１０記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項12】
ガンが、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有する患者にみられる急性骨髄性白血病である、請求項１１記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項13】
ガンが、ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異を有する患者にみられる急性骨髄性白血病である、請求項１１記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項14】
前記ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異が、ＦＬＴ３のチロシンキナーゼドメイン（ＴＫＤ）内のＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ又はＦＬＴ３－Ｆ６９１突然変異を含む、請求項１３記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項15】
ガンが、先の治療に抵抗性である、請求項９～１４のいずれか一項記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項16】
ガンが、ベネトクラウス、デシタビン、ダウノルビシン及びシタラビンから選択される１種以上の化合物に抵抗性を示す急性骨髄性白血病である、請求項１５記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項17】
ガンが、ベネトクラウスに抵抗性を示す急性骨髄性白血病である、請求項１６記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項18】
前記ガンが、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有する患者にみられる急性骨髄性白血病であり、前記ガンが、ベネトクラウスに抵抗性である、請求項１２記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項19】
ミドスタウリン及び化合物Ｂが、ガンの処置に相乗的に有効な量で提供される、請求項８～１７のいずれか一項記載の使用のための、請求項３又は５～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【請求項20】
請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせと、少なくとも１種の薬学的に許容し得る担体とを含む、医薬組成物。
【請求項21】
ガンの処置のための医薬の製造における、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせの使用。
【請求項22】
ガンが、ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異の存在下で、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有する患者にみられる急性骨髄性白血病である、請求項１１記載の使用のための、請求項１～７のいずれか一項記載の組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野
本発明は、以下で定義されるマルチターゲットチロシンキナーゼ阻害剤であるミドスタウリンと、Ｍｃｌ－１阻害剤との組み合わせに関する。また、本発明は、ガン、特に、急性骨髄性白血病の処置における使用のための前記組み合わせ及びこのような組み合わせの投与に適した医薬製剤に関する。
本発明は、以下で定義されるマルチターゲットチロシンキナーゼ阻害剤であるミドスタウリンと、Ｍｃｌ－１阻害剤との組み合わせに関する。また、本発明は、ガン、特に、急性骨髄性白血病の処置における使用のための前記組み合わせ及びこのような組み合わせの投与に適した医薬製剤に関する。
【0002】
背景
ミドスタウリンは、４’－Ｎ－ベンゾイルスタウロスポリン又はＰＫＣ４１２とも呼ばれる。ミドスタウリンの化学構造は、以下：
に示される。
ミドスタウリンは、４’－Ｎ－ベンゾイルスタウロスポリン又はＰＫＣ４１２とも呼ばれる。ミドスタウリンの化学構造は、以下：
【化1】
に示される。
【0003】
本明細書において化合物Ａとも呼ばれるミドスタウリン、その合成、ガンの処置におけるその使用及びその医薬製剤は、ＵＳ第５，０９３，３３０号に記載されている。同文献の内容は、参照により組み入れられる。ミドスタウリンは、ＵＳ第５，０９３，３３０号の実施例１８に特に記載されている。ミドスタウリンの固形ガンに対する単剤での第１相試験では、毒性は低いが、有効性は限定的であった（Propper et al., Journal of Clinical Ｒncology 2001, 19, 1485-1492）。シタラビン及びダウノルビシンによる導入療法並びにシタラビンによる地固め療法の標準処置に、ミドスタウリンを加えると、ＦＬＴ３突然変異を有するＡＭＬ患者において統計学的に有意な有効性及び全生存期間の延長が示された（Stone et al., New England Journal of Medicine 2017, 377, 454-464）。
【0004】
ミドスタウリンは、ＦＬＴ３突然変異を有する新たに診断された急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者の治療のためのRYDAPT（商標）の有効成分として、シタラビン及びダウノルビシンによる導入療法並びにシタラビンによる地固め療法との組み合わせで、２０１７年４月にＵＳ ＦＤＡにより承認された。
【0005】
シタラビン及びダウノルビシンによる導入療法、続けて、シタラビンによる地固め療法は、ＡＭＬについての標準処置である。シタラビン及びダウノルビシンは、増殖している細胞を殺傷することにより作用する化学療法薬である。シタラビンは、ＤＮＡポリメラーゼの阻害剤であり、ダウノルビシンは、複製を阻害するアントラサイクリンである。シタラビン又はダウノルビシンの投与は、悪心及び嘔吐並びにより重度の副作用を引き起こす場合がある。いずれの薬剤も注射で投与する必要があり、投与後に患者を綿密にモニターすることができるように、専門施設で投与すべきである。
【0006】
本発明のＭｃｌ－１阻害剤は、本明細書に記載された式（Ｉ）で示される化合物である。前記式（Ｉ）で示される化合物、その合成、ガンの処置におけるその使用及びその医薬製剤は、ＷＯ第２０１５／０９７１２３号、同第２０１６／２０７２１６号、同第２０１６／２０７２１７号、同第２０１６／２０７２２５号、同第２０１６／２０７２２６号及び同第２０１７／１２５２２４号に記載されている。これらの文献の内容は、参照により組み入れられる。
【0007】
特に、Ｍｃｌ－１阻害剤は、化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩である。これらは、ＷＯ第２０１５／０９７１２３号の実施例３０に記載されている。同文献の内容は、参照により組み入れられる。
【0008】
別の実施態様では、Ｍｃｌ－１阻害剤は、化合物Ｃ（Ｓ６３８４５）：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（５－フルオロフラン－２－イル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩である。これらは、ＷＯ第２０１５／０９７１２３号の実施例１８５に記載されている。同文献の内容は、参照により組み入れられる。
【0009】
アポトーシスは、発ガン性ストレス及び化学療法剤を含む種々の細胞傷害性刺激により開始される高度にレギュレーションされた細胞死経路である。アポトーシスの回避は、ガンの特徴であり、多くの化学療法剤の効力は、内因性ミトコンドリア経路の活性化により決まることが示されている。Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質の３つの異なるサブグループにより、内因性アポトーシス経路：（ｉ）アポトーシス促進性ＢＨ３（Ｂｃｌ－２ホモロジー３）ｏｎｌｙタンパク質；（ｉｉ）生存促進性メンバー、例えば、Ｂｃｌ－２自体、Ｂｃｌ－ｘｌ、Ｂｃｌ－ｗ、Ｍｃｌ－１及びＢｃｌ－２ａ１；並びに（ｉｉｉ）アポトーシス促進性エフェクタータンパク質ＢＡＸ及びＢＡＫが制御される（Czabotar et al., Nature Reviews Molecular Cell Biology 2014, 15, 49-63）。Ｂｃｌ－２ファミリーの抗アポトーシスメンバーの過剰発現は、多くのガン、特に、血液悪性腫瘍、例えば、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫／びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＦＬ／ＤＬＣＬ）及び多発性骨髄腫において観察される（Adams and Cory, Oncogene 2007, 26, 1324-1337）。近年開発されたＢＨ３模倣剤、例えば、ＡＢＴ－１９９（venetoclax）、ＡＢＴ－２６３（navitoclax）及びＳ６３８４５による抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－ｘｌ、Ｂｃｌ－ｗ及びＭｃｌ－１の薬理学的阻害が、アポトーシスを誘引し、ガンにおいて腫瘍退縮を引き起こす治療戦略として出現した（Zhang et al., Drug Resist. Updat. 2007, 10, 207-217; Kotschy et al., Nature 2016, 538, 477-482）。それにもかかわらず、ＢＨ３模倣物に対する抵抗性のメカニズムが観察されており（Choudhary et al., Cell Death and Disease 2015, 6, e1593）、併用療法の使用は、効力を改善し、抵抗性の発達を遅延させるか又は阻止することさえできる。
【0010】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、造血幹細胞のクローントランスフォーメーションから生じる急速で致死的な血液ガンであり、正常な骨髄機能の麻痺及び深刻な汎血球減少症からの合併症による死をもたらす。ＡＭＬは、成人白血病全体の２５％を占め、米国、オーストラリア及びヨーロッパで最も高い発生率を示している（WHO. GLOBOCAN 2012. Estimated cancer incidence, mortality and prevalence worldwide in 2012. International Agency for Research on Cancer）。世界中で、毎年約８８，０００の新たな症例が診断されている。ＡＭＬは、全ての白血病のうち生存率が最も低い状態が続いており、５年生存率はわずか２４％と期待されている。ＡＭＬについての標準治療（アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシンと組み合わせたシタラビン）が、４０年以上前に考えられていたが、この疾患についての成功したターゲット化療法の導入は、依然として困難な目標であった。ＡＭＬにおけるターゲット化療法の概念は、この疾患が薬剤抵抗性及び疾患再発の主な原因としての白血病サブクローンの急速な増殖を伴う、マルチクローン階層として進行するという現実により妨げられてきた（Ding et al., Nature 2012, 481, 506-510）。
【0011】
ＦＬＴ３の活性化突然変異（ほとんどがＦＬＴ３－ＩＴＤ）は、診断時にＡＭＬ患者の約３０％に存在し、ＦＬＴ３／ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋシグナル伝達経路を含む下流シグナル伝達カスケードの後続の活性化をもたらす。ＦＬＴ３シグナル伝達の活性化により、アポトーシス促進性タンパク質ＢＡＤのリン酸化及び抗アポトーシス性Ｂｃｌ２ファミリーメンバーの発現を誘引することを介して、アポトーシスシグナルがサプレッションされる。ＦＬＴ３－ＩＴＤキナーゼ活性の阻害により、ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞において、ＢＡＤリン酸化及びＢｃｌ－ｘＬの発現のダウンレギュレーションを介して、アポトーシスが誘引される（Minami et al., Blood 2003, 102, 2969-2975）。
【0012】
ガンの処置のための新規な処置及び治療が依然として必要とされている。ミドスタウリンは、本明細書に記載された式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤との組み合わせで、相乗的に相互作用して、特に、ＡＭＬ、とりわけ、ＦＬＴ３突然変異体ＡＭＬについて、細胞増殖を強力に阻害することが予想外に見出された。
【0013】
発明の概要
本発明の第１の態様によれば、同時、連続的又は別個の使用に適した、
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）式（Ｉ）：
［式中、
Ｄは、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基又はヘテロアリール基を表わし、
Ｅは、フリル、チエニル又はピロリル環を表わし、
Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４及びＸ５は、それぞれ独立して、炭素原子又は窒素原子を表わし、
Ｘ２は、Ｃ－Ｒ２６基又は窒素原子を表わし、
は、環が芳香族であることを意味し、
Ｙは、窒素原子又はＣ－Ｒ３基を表わし、
Ｚは、窒素原子又はＣ－Ｒ４基を表わし、
Ｒ１は、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－Ｃｙ８、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ１，Ｒ２）、（Ｒ２，Ｒ３）、（Ｒ３，Ｒ４）、（Ｒ４，Ｒ５）の置換基は、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、ハロゲン、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される１～２個の基により置換されていることができると理解され、
Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ６，Ｒ７）の置換基は、２つの隣接する炭素原子上でグラフト化されている場合、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される基により置換されていることができると理解され、
Ｗは、－ＣＨ２－基、－ＮＨ－基又は酸素原子を表わし、
Ｒ８は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基、－ＣＨＲａＲｂ基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基又はヘテロアリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基を表わし、
Ｒ９は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、－Ｃｙ２、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－Ｃｙ３、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｏ－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ３、ハロゲン原子、シアノ基、－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１４又は－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１４Ｒ１４’を表わし、
Ｒ１０は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、アリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基、シクロアルキルアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル又は－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｏ－Ｃｙ４を表わし、
又は、
ペア（Ｒ９，Ｒ１０）の置換基は、２つの隣接する炭素原子上でグラフト化されている場合、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、
Ｒ１１及びＲ１１’は、それぞれ独立して、水素原子、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１を表わし、
又は、
ペア（Ｒ１１，Ｒ１１’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、当該窒素は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす１～２個の基により置換されていることができると理解され、可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解され、
Ｒ１２は、－Ｃｙ５、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－Ｃｙ６－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ７、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ９、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ９、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｒ１１、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ９、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＯＲ１１、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＯＲ１１、－ＳＯ２－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、
を表わし、
該定義されたアンモニウムは、双性イオン型として存在するか又は一価のアニオン性カウンターイオンを有する可能性があり、
Ｒ１３、Ｒ１３’、Ｒ１４及びＲ１４’は、それぞれ独立して、水素原子又は場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒａは、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒｂは、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－Ｒｃ基、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲｃＲｃ’基又は－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｃ）２基を表わし、
Ｒｃ及びＲｃ’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基、シクロアルキル基、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシカルボニル（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒｃ，Ｒｃ’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている非芳香環を形成しており、同環は、該窒素原子に加えて、酸素及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、当該窒素は、直鎖又は分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｃｙ１、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ４、Ｃｙ５、Ｃｙ６、Ｃｙ７、Ｃｙ８及びＣｙ１０は、それぞれ独立して、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基又はヘテロアリール基を表わし、
Ｃｙ９は、
を表わし、
又は、
Ｃｙ９は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２０）２；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－Ｍ＋）２；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０；ヒドロキシ；ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル；－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル；又は－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’から選択される基により置換されているヘテロアリール基を表わし、
Ｒ１５は、水素原子；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基；直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基；－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’基；又は－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル基を表わし、
Ｒ１６は、水素原子；ヒドロキシ基；ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基；－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル基；（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－Ｖ－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２０）２基；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－Ｍ＋）２基；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ２２Ｒ２３基；又は－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’基を表わし、
Ｒ１７は、水素原子；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２０）２基；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－Ｍ＋）２基；ヒドロキシ基；ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基；－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル基；－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’基；又はアルドン酸を表わし、
Ｍ＋は、薬学的に許容し得る一価のカチオンを表わし、
Ｕは、結合又は酸素原子を表わし、
Ｖは、－（ＣＨ２）ｓ－基又は－Ｃ（Ｏ）－基を表わし、
Ｒ１８は、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ１９は、水素原子又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２０は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２１及びＲ２１’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２１，Ｒ２１’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｒ２２は、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－（ＣＨ２）ｐ－ＮＲ２４Ｒ２４’基又は－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基を表わし、
Ｒ２３は、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２２，Ｒ２３）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～１８個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～５個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はヘテロシクロアルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｒ２４及びＲ２４’は、それぞれ独立して、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２４，Ｒ２４’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｒ２５は、水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２６は、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はシアノ基を表わし、
Ｒ２７は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２８は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－）（Ｏ－）基、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－）（ＯＲ３０）基、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ３０）（ＯＲ３０’）基、－Ｏ－ＳＯ２－Ｏ－基、－Ｏ－ＳＯ２－ＯＲ３０基、－Ｃｙ１０、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ２９基、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ２９基又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ２９Ｒ２９’基を表わし、
Ｒ２９及びＲ２９’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は直鎖もしくは分岐鎖アミノ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ３０及びＲ３０’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はアリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基を表わし、
ｎは、０又は１に等しい整数であり、
ｐは、０、１又は２に等しい整数であり、
ｑは、１、２、３又は４に等しい整数であり、
ｒ及びｓは、独立して、０又は１に等しい整数であり、
－「アリール」は、フェニル、ナフチル、ビフェニル、インダニル又はインデニル基を意味し、
－「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの芳香族部分を有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、５～１０個の環員で構成されている、任意の単環式又は二環式の基を意味し、
－「シクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、
－「ヘテロシクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、同非芳香族炭素環基は、縮合、架橋又はスピロ環系を含むことができると理解され、
該定義されたアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル基並びにアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシは、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル－Ｓ－、ヒドロキシ、オキソ（又は該当する場合、Ｎ－オキシド）、ニトロ、シアノ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ’、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’Ｒ’’、－（Ｃ＝ＮＲ’）－ＯＲ’’、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、トリフルオロメトキシ又はハロゲンから選択される１～４個の基により置換されている可能性があり、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素原子又は、場合により置換されている直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わすと理解され、先の可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解される］
で示されるＭｃｌ－１阻害剤
もしくはそのエナンチオマー、ジアステレオ異性体、アトロプ異性体又は薬学的に許容し得る酸もしくは塩基とのそれらの付加塩との、新規な組み合わせが提供される。
本発明の第１の態様によれば、同時、連続的又は別個の使用に適した、
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）式（Ｉ）：
【化2】
［式中、
Ｄは、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基又はヘテロアリール基を表わし、
Ｅは、フリル、チエニル又はピロリル環を表わし、
Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４及びＸ５は、それぞれ独立して、炭素原子又は窒素原子を表わし、
Ｘ２は、Ｃ－Ｒ２６基又は窒素原子を表わし、
【化3】
は、環が芳香族であることを意味し、
Ｙは、窒素原子又はＣ－Ｒ３基を表わし、
Ｚは、窒素原子又はＣ－Ｒ４基を表わし、
Ｒ１は、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－Ｃｙ８、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ１，Ｒ２）、（Ｒ２，Ｒ３）、（Ｒ３，Ｒ４）、（Ｒ４，Ｒ５）の置換基は、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、ハロゲン、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される１～２個の基により置換されていることができると理解され、
Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ６，Ｒ７）の置換基は、２つの隣接する炭素原子上でグラフト化されている場合、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される基により置換されていることができると理解され、
Ｗは、－ＣＨ２－基、－ＮＨ－基又は酸素原子を表わし、
Ｒ８は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基、－ＣＨＲａＲｂ基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基又はヘテロアリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基を表わし、
Ｒ９は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、－Ｃｙ２、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－Ｃｙ３、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｏ－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ３、ハロゲン原子、シアノ基、－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１４又は－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１４Ｒ１４’を表わし、
Ｒ１０は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、アリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基、シクロアルキルアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル又は－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｏ－Ｃｙ４を表わし、
又は、
ペア（Ｒ９，Ｒ１０）の置換基は、２つの隣接する炭素原子上でグラフト化されている場合、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、
Ｒ１１及びＲ１１’は、それぞれ独立して、水素原子、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１を表わし、
又は、
ペア（Ｒ１１，Ｒ１１’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、当該窒素は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす１～２個の基により置換されていることができると理解され、可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解され、
Ｒ１２は、－Ｃｙ５、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－Ｃｙ６－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ７、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ９、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ９、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｒ１１、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ９、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＯＲ１１、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＯＲ１１、－ＳＯ２－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、
【化4】
を表わし、
該定義されたアンモニウムは、双性イオン型として存在するか又は一価のアニオン性カウンターイオンを有する可能性があり、
Ｒ１３、Ｒ１３’、Ｒ１４及びＲ１４’は、それぞれ独立して、水素原子又は場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒａは、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒｂは、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－Ｒｃ基、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲｃＲｃ’基又は－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｃ）２基を表わし、
Ｒｃ及びＲｃ’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基、シクロアルキル基、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシカルボニル（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒｃ，Ｒｃ’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている非芳香環を形成しており、同環は、該窒素原子に加えて、酸素及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、当該窒素は、直鎖又は分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｃｙ１、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ４、Ｃｙ５、Ｃｙ６、Ｃｙ７、Ｃｙ８及びＣｙ１０は、それぞれ独立して、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基又はヘテロアリール基を表わし、
Ｃｙ９は、
【化5】
を表わし、
又は、
Ｃｙ９は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２０）２；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－Ｍ＋）２；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０；ヒドロキシ；ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル；－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル；又は－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’から選択される基により置換されているヘテロアリール基を表わし、
Ｒ１５は、水素原子；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基；直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基；－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’基；又は－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル基を表わし、
Ｒ１６は、水素原子；ヒドロキシ基；ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基；－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル基；（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－Ｖ－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２０）２基；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－Ｍ＋）２基；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ２２Ｒ２３基；又は－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’基を表わし、
Ｒ１７は、水素原子；－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２０）２基；－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－Ｍ＋）２基；ヒドロキシ基；ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基；－（ＣＨ２）ｒ－Ｕ－（ＣＨ２）ｓ－ヘテロシクロアルキル基；－Ｕ－（ＣＨ２）ｑ－ＮＲ２１Ｒ２１’基；又はアルドン酸を表わし、
Ｍ＋は、薬学的に許容し得る一価のカチオンを表わし、
Ｕは、結合又は酸素原子を表わし、
Ｖは、－（ＣＨ２）ｓ－基又は－Ｃ（Ｏ）－基を表わし、
Ｒ１８は、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ１９は、水素原子又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２０は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２１及びＲ２１’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２１，Ｒ２１’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｒ２２は、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－（ＣＨ２）ｐ－ＮＲ２４Ｒ２４’基又は－（ＣＨ２）ｐ－Ｏ－（ＣＨＲ１８－ＣＨＲ１９－Ｏ）ｑ－Ｒ２０基を表わし、
Ｒ２３は、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２２，Ｒ２３）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～１８個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～５個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はヘテロシクロアルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｒ２４及びＲ２４’は、それぞれ独立して、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２４，Ｒ２４’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、
Ｒ２５は、水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２６は、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はシアノ基を表わし、
Ｒ２７は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２８は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－）（Ｏ－）基、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｏ－）（ＯＲ３０）基、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ３０）（ＯＲ３０’）基、－Ｏ－ＳＯ２－Ｏ－基、－Ｏ－ＳＯ２－ＯＲ３０基、－Ｃｙ１０、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ２９基、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ２９基又は－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ２９Ｒ２９’基を表わし、
Ｒ２９及びＲ２９’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は直鎖もしくは分岐鎖アミノ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ３０及びＲ３０’は、それぞれ独立して、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又はアリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基を表わし、
ｎは、０又は１に等しい整数であり、
ｐは、０、１又は２に等しい整数であり、
ｑは、１、２、３又は４に等しい整数であり、
ｒ及びｓは、独立して、０又は１に等しい整数であり、
－「アリール」は、フェニル、ナフチル、ビフェニル、インダニル又はインデニル基を意味し、
－「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの芳香族部分を有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、５～１０個の環員で構成されている、任意の単環式又は二環式の基を意味し、
－「シクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、
－「ヘテロシクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、同非芳香族炭素環基は、縮合、架橋又はスピロ環系を含むことができると理解され、
該定義されたアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル基並びにアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシは、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル－Ｓ－、ヒドロキシ、オキソ（又は該当する場合、Ｎ－オキシド）、ニトロ、シアノ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ’、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’Ｒ’’、－（Ｃ＝ＮＲ’）－ＯＲ’’、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、トリフルオロメトキシ又はハロゲンから選択される１～４個の基により置換されている可能性があり、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素原子又は、場合により置換されている直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わすと理解され、先の可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解される］
で示されるＭｃｌ－１阻害剤
もしくはそのエナンチオマー、ジアステレオ異性体、アトロプ異性体又は薬学的に許容し得る酸もしくは塩基とのそれらの付加塩との、新規な組み合わせが提供される。
【0014】
別の態様では、本発明は、ガン、特に、急性骨髄性白血病の処置における使用のための、本明細書に記載された組み合わせを提供する。
【0015】
更なる態様では、本発明は、本明細書に記載された組み合わせと、少なくとも１種の薬学的に許容し得る担体とを含む、医薬組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1】図１は、ＡＭＬ細胞系統Ｍｏｌｍ１３及びＭＶ４１１において、ＦＬＴ３阻害剤化合物Ａ（ミドスタウリン）をＭｃｌ－１阻害剤化合物Ｂと組み合わせた場合のカスパーゼ３．７活性に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ効果を示す。
【図2】図２：ＦＬＴ３とＭｃｌ－１との併用ターゲット化は、ＦＬＴ３－ＩＴＤ ＡＭＬ初代サンプルにおいて有効である。初代ＡＭＬサンプルの突然変異プロファイリング及びＳ６３８４５／ミドスタウリン併用処置に対する２４時間での感受性。細胞増殖をCellTiter-Gloにより測定した。組み合わせ指数（ＣＩ）を、CalcuSynソフトウェアを使用して計算し、ＥＤ５０、ＥＤ７５及びＥＤ９０におけるＣＩの平均である。ＣＩ＜１は、相乗効果を示し、ＣＩ＞１は、拮抗作用を示す。初代ＡＭＬサンプルを、下記連続希釈の組み合わせ用量で処理した。ミドスタウリン ３．１nM～８００nM；及びＳ６３８４５ ０．３１nM～８０nM。Ｓ６３８４５に対するミドスタウリンの比率は、１０：１とした。突然変異の存在を各サンプルについて塗りつぶされた青いボックスにより示す。
【図3A】図３：ミドスタウリンにより、ミドスタウリン／Ｓ６３８４５（化合物Ｃ）致死に寄与するＢＩＭ蓄積が誘引される Ａ．ミドスタウリンにより、アポトーシス促進性Ｂｉｍのレベルが向上し、次に、残存Ｍｃｌ－１活性に結合し、それを打ち消すことができた。Ｂｉｍの上昇は、Ｓ６３８４５共処理により持続し、Ｂｉｍが、ミドスタウリン／Ｓ６３８４５媒介致死において機能的役割を果たすことが示唆される。Ｂ．ミドスタウリン、Ｓ６３８４５単独又は併用で６時間処理されたＭＶ４１１細胞におけるＦＬＴ３媒介シグナル伝達経路及びＢｃｌ－２ファミリータンパク質の発現のウェスタンブロット分析。ＦＬＴ３－ＩＴＤの脱リン酸化により、ＳＴＡＴ５及びＭＡＰＫの不活性化がもたらされ、Ｍｃｌ－１の安定性に必要な部位であるＴｈｒ１６３におけるＭｃｌ－１のＭＡＰＫ媒介性リン酸化の顕著なダウンレギュレーションを伴った。その結果、ミドスタウリンにより、Ｍｃｌ－１レベルが低下した。
【図3B】図３：ミドスタウリンにより、ミドスタウリン／Ｓ６３８４５（化合物Ｃ）致死に寄与するＢＩＭ蓄積が誘引される Ａ．ミドスタウリンにより、アポトーシス促進性Ｂｉｍのレベルが向上し、次に、残存Ｍｃｌ－１活性に結合し、それを打ち消すことができた。Ｂｉｍの上昇は、Ｓ６３８４５共処理により持続し、Ｂｉｍが、ミドスタウリン／Ｓ６３８４５媒介致死において機能的役割を果たすことが示唆される。Ｂ．ミドスタウリン、Ｓ６３８４５単独又は併用で６時間処理されたＭＶ４１１細胞におけるＦＬＴ３媒介シグナル伝達経路及びＢｃｌ－２ファミリータンパク質の発現のウェスタンブロット分析。ＦＬＴ３－ＩＴＤの脱リン酸化により、ＳＴＡＴ５及びＭＡＰＫの不活性化がもたらされ、Ｍｃｌ－１の安定性に必要な部位であるＴｈｒ１６３におけるＭｃｌ－１のＭＡＰＫ媒介性リン酸化の顕著なダウンレギュレーションを伴った。その結果、ミドスタウリンにより、Ｍｃｌ－１レベルが低下した。
【図4】図４及び図５：ＦＬＴ３とＭｃｌ－１との併用ターゲット化によりアポトーシスが促進される カスパーゼ活性化を、薬剤処理の６時間後にCaspase-Glo（登録商標）3/7アッセイを使用して測定した。％ アポトーシス細胞を、アネキシン－Ｖ－ＡＰＣ／ＤＡＰＩ染色を使用するフローサイトメトリーにより測定した。ＡＭＬ初代細胞を１６時間処理した。
【図5】図４及び図５：ＦＬＴ３とＭｃｌ－１との併用ターゲット化によりアポトーシスが促進される カスパーゼ活性化を、薬剤処理の６時間後にCaspase-Glo（登録商標）3/7アッセイを使用して測定した。％ アポトーシス細胞を、アネキシン－Ｖ－ＡＰＣ／ＤＡＰＩ染色を使用するフローサイトメトリーにより測定した。ＡＭＬ初代細胞を１６時間処理した。
【図6】図６：Ｓ６３８４５（化合物Ｃ）及びＦＬＴ３ ＴＫｉの抗白血病相乗作用 Ｓ６３８４５（化合物Ｃ）及び選択されたＦＬＴ３阻害剤（ＦＬＴ３ ＴＫｉ）に対する２４時間暴露後のＡＭＬ細胞系統の感受性。細胞増殖をCellTiter-Gloにより測定した。組み合わせ指数（ＣＩ）を、CalcuSynソフトウェアを使用して計算し、ＥＤ５０、ＥＤ７５及びＥＤ９０におけるＣＩの平均である。薬剤を併用した割合を括弧内に示す。
【図7】図７及び図８：Ｓ６３８４５及びＦＬＴ３ ＴＫｉの抗白血病相乗作用 ＭＶ４－１１ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるミドスタウリンと組み合わされたＳ６３８４５間の代表的な相乗的相互作用を大規模薬剤相乗作用ＢＬＩＳＳ独立モデルにより決定した。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を２４時間後に評価した（図７）。相乗的相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす（図８）。
【図8】図７及び図８：Ｓ６３８４５及びＦＬＴ３ ＴＫｉの抗白血病相乗作用 ＭＶ４－１１ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるミドスタウリンと組み合わされたＳ６３８４５間の代表的な相乗的相互作用を大規模薬剤相乗作用ＢＬＩＳＳ独立モデルにより決定した。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を２４時間後に評価した（図７）。相乗的相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす（図８）。
【図9】図９：ＢＨ３プロファイリング：ミドスタウリンにより、Ｓ６３８４５に曝露されたＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるアポトーシスのためのミトコンドリアプライミングが増加する ＢＨ３プロファイリングアッセイから、ミドスタウリンにより、Ｍｃｌ－１阻害剤Ｓ６３８４５に対してＭＶ４－１１ ＦＬＴ３－ＩＴＤにおけるミトコンドリアプライミング、特に、Ｂｉｍペプチドが増加したことが示される。細胞をミドスタウリン（１００nM）での処理の４時間後にＢＨ３プロファイリングアッセイに供した。シトクロムＣ放出の増加は、ミトコンドリアのアポトーシス開始の定量的尺度である。
【図10】図１０、図１１、図１２及び図１３：Ｓ６３８４５とミドスタウリンとの組み合わせは、ＦＬＴ３－ＩＴＤを有するベネトクラウス抵抗性ＡＭＬ細胞に有効であるが、ＦＬＴ３－ＷＴには有効ではない ＭＯＬＭ１３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞及びベネトクラウス抵抗性亜株におけるミドスタウリンと組み合わせたＳ６３８４５間の相乗的相互作用についてのＢＬＩＳＳ独立モデル。ベネトクラウス抵抗性細胞をZhang et al. Blood, 2015, 126, 328に記載されているように生じさせ、１μM ベネトクラウスを含有する培地中で定期的に維持した。実験前に、ベネトクラウスを洗い流し、細胞をＳ６３８４５及びミドスタウリンの９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
【図11】図１０、図１１、図１２及び図１３：Ｓ６３８４５とミドスタウリンとの組み合わせは、ＦＬＴ３－ＩＴＤを有するベネトクラウス抵抗性ＡＭＬ細胞に有効であるが、ＦＬＴ３－ＷＴには有効ではない ＭＯＬＭ１３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞及びベネトクラウス抵抗性亜株におけるミドスタウリンと組み合わせたＳ６３８４５間の相乗的相互作用についてのＢＬＩＳＳ独立モデル。ベネトクラウス抵抗性細胞をZhang et al. Blood, 2015, 126, 328に記載されているように生じさせ、１μM ベネトクラウスを含有する培地中で定期的に維持した。実験前に、ベネトクラウスを洗い流し、細胞をＳ６３８４５及びミドスタウリンの９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
【図12】図１０、図１１、図１２及び図１３：Ｓ６３８４５とミドスタウリンとの組み合わせは、ＦＬＴ３－ＩＴＤを有するベネトクラウス抵抗性ＡＭＬ細胞に有効であるが、ＦＬＴ３－ＷＴには有効ではない ＭＯＬＭ１３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞及びベネトクラウス抵抗性亜株におけるミドスタウリンと組み合わせたＳ６３８４５間の相乗的相互作用についてのＢＬＩＳＳ独立モデル。ベネトクラウス抵抗性細胞をZhang et al. Blood, 2015, 126, 328に記載されているように生じさせ、１μM ベネトクラウスを含有する培地中で定期的に維持した。実験前に、ベネトクラウスを洗い流し、細胞をＳ６３８４５及びミドスタウリンの９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
【図13】図１０、図１１、図１２及び図１３：Ｓ６３８４５とミドスタウリンとの組み合わせは、ＦＬＴ３－ＩＴＤを有するベネトクラウス抵抗性ＡＭＬ細胞に有効であるが、ＦＬＴ３－ＷＴには有効ではない ＭＯＬＭ１３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞及びベネトクラウス抵抗性亜株におけるミドスタウリンと組み合わせたＳ６３８４５間の相乗的相互作用についてのＢＬＩＳＳ独立モデル。ベネトクラウス抵抗性細胞をZhang et al. Blood, 2015, 126, 328に記載されているように生じさせ、１μM ベネトクラウスを含有する培地中で定期的に維持した。実験前に、ベネトクラウスを洗い流し、細胞をＳ６３８４５及びミドスタウリンの９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
【図14】図１４：予備的なｉｎ ｖｉｖｏ研究：ＡＭＬ ＦＬＴ３－ＩＴＤ異種移植 １０６個 ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有する患者由来のＡＭＬ細胞をＮＳＧマウスに移植した。腫瘍負荷を、ＦＡＣＳを使用して、マウス血液中の％ ｈＣＤ４５＋細胞により測定した。生着後、マウスを（ｉ）媒体、（ｉｉ）Ｓ６３８４５ ４０mg/kg ＩＶ、週一回（ｉｉｉ）ミドスタウリン ７５mg/kg、経口強制投与、毎日又は（ｉｖ）組み合わせで処置した。
【図15】図１５及び図１６：マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるミドスタウリンとＳ６３８４５との相乗効果 マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるミドスタウリンと組み合わせたＳ６３８４５間の相乗的相互作用を大規模薬剤相乗作用ＢＬＩＳＳ独立モデルにより決定した。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を２４時間後に評価した（図１５）。相乗的相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす（図１６）。
【図16】図１５及び図１６：マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるミドスタウリンとＳ６３８４５との相乗効果 マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるミドスタウリンと組み合わせたＳ６３８４５間の相乗的相互作用を大規模薬剤相乗作用ＢＬＩＳＳ独立モデルにより決定した。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を２４時間後に評価した（図１５）。相乗的相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす（図１６）。
【図17】図１７及び図１８：マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ細胞におけるミドスタウリンとＳ６３８４５との相乗効果 マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ細胞におけるミドスタウリンと組み合わせたＳ６３８４５間の相乗的相互作用を大規模薬剤相乗作用ＢＬＩＳＳ独立モデルにより決定した。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を２４時間後に評価した（図１７）。相乗的相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす（図１８）。
【図18】図１７及び図１８：マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ細胞におけるミドスタウリンとＳ６３８４５との相乗効果 マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ細胞におけるミドスタウリンと組み合わせたＳ６３８４５間の相乗的相互作用を大規模薬剤相乗作用ＢＬＩＳＳ独立モデルにより決定した。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を２４時間後に評価した（図１７）。相乗的相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わす。一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす（図１８）。
【0017】
定義
「組み合わせ」は、１つの単位剤形（例えば、カプセル剤、錠剤又は小袋）での固定容量組み合わせ、非固定用量組み合わせ又は本発明の化合物及び１種以上の組み合わせパートナー（例えば、以下に説明されるような別の薬剤、「治療剤」又は「共剤」とも呼ばれる）が同時に独立して又は時間隔内で別々に投与することができ、特に、これらの時間間隔により、組み合わせパートナーが協同的効果、例えば、相乗効果を示すことが可能となる、組み合わせ投与のためのキットパーツのいずれかを指す。
「組み合わせ」は、１つの単位剤形（例えば、カプセル剤、錠剤又は小袋）での固定容量組み合わせ、非固定用量組み合わせ又は本発明の化合物及び１種以上の組み合わせパートナー（例えば、以下に説明されるような別の薬剤、「治療剤」又は「共剤」とも呼ばれる）が同時に独立して又は時間隔内で別々に投与することができ、特に、これらの時間間隔により、組み合わせパートナーが協同的効果、例えば、相乗効果を示すことが可能となる、組み合わせ投与のためのキットパーツのいずれかを指す。
【0018】
本明細書で利用する場合、「同時投与」又は「併用投与」等の用語は、それを必要とする単一の対象（例えば、患者）への選択された組み合わせパートナーの投与を包含することを意味し、薬剤が必ずしも同じ投与経路により又は同時に投与されるわけではない処置計画を含むことが意図される。
【0019】
「固定用量組み合わせ」という用語は、有効成分、例えば、式（Ｉ）で示される化合物及び１種以上の組み合わせパートナーの両方が、単一の実体の形態又は用量で同時に患者に投与されることを意味する。
【0020】
「非固定用量組み合わせ」という用語は、有効成分、例えば、本発明の化合物及び１種以上の組み合わせパートナーの両方が特定の時間制限なしに、別個の実体として同時又は連続のいずれかで患者に投与されることを意味する。ここで、このような投与は、患者の体内の２種の化合物の治療上有効なレベルを提供する。後者は、カクテル療法、例えば、３種以上の有効成分の投与にも適用される。
【0021】
「ガン」は、一群の細胞が制御不能な増殖を示す疾患の総称である。ガンの種類は、血液ガン（リンパ腫及び白血病）を含む。特に、「ガン」は、血液ガン、特に、急性骨髄性白血病を指す。
【0022】
「ＡＭＬ」は、急性骨髄性白血病を意味する。特定の実施態様では、ＡＭＬは、ＦＬＴ３突然変異を有する患者にみられる。更なる実施態様では、この突然変異は、ＦＬＴ３－ＩＴＤである。別の実施態様では、この突然変異は、ＦＬＴ３－ＴＫＤである。特に、前記ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異は、ＦＬＴ３のチロシンキナーゼドメイン（ＴＫＤ）内のＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ又はＦＬＴ３－Ｆ６９１突然変異を含む。処置されるＡＭＬは、先の抗ガン療法に抵抗性である場合がある。このような先の治療は、ＡＭＬを処置するのに使用される１種以上の化合物、例えば、ベネトクラウス、デシタビン、ダウノルビシン及びシタラビン、特に、ベネトクラウスを含むことができる。一実施態様では、処置されるＡＭＬは、ベネトクラウス抵抗性ＡＭＬ、特に、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有するベネトクラウス抵抗性ＡＭＬである。
【0023】
「協同的に治療上有効」という用語は、処置される温血動物、特に、ヒトにおいて、治療剤が依然として（好ましくは相乗的）相互作用（併用治療効果）を好ましく示すような間隔で、治療剤を別々に（時系列的にずらして、特に、順序固有に）提供することができることを意味する。これが事実であるかどうかは、とりわけ、両化合物が少なくとも特定の時間間隔で、処置されるヒトの血中に存在することを示す、血中レベルを追跡することにより決定することができる。
【0024】
「相乗的に有効」又は「相乗作用」は、２種以上の薬剤の投与後に観察される治療効果が各単剤の投与後に観察される治療効果の合計より高いことを意味する。
【0025】
本明細書で使用する場合、任意の疾患又は障害の「処理する」、「処理すること」又は「処理」という用語は、一実施態様では、疾患又は障害を改善すること（すなわち、病気の進行又はその少なくとも１つの臨床的症状を遅延させ又は停止する又は減少させること）を指す。別の実施態様では、「処理する」、「処理すること」又は「処理」は、患者に認識することができないパラメータを含む少なくとも１つの身体パラメータを緩和し又は改善することを指す。さらに別の実施態様では、「処理する」、「処理すること」又は「処理」は、身体的（認識可能な症状の安定化）、生理的（例えば、身体パラメータの安定化）のいずれか又はその両方で、疾患又は障害を変調させることを指す。
【0026】
本明細書で使用する場合、対象は、このような対象がこのような処置から生物学的に、医学的に又は生活の質において利益を得るであろう場合、処置を「必要とする」。
【0027】
「医薬」は、１種以上の賦形剤の存在下で１種以上の有効成分を含有する、医薬組成物又は複数の医薬組成物の組み合わせを意味する。
【0028】
発明の詳細な説明
以下に、本発明の数多くの実施態様が記載されるが、便宜上、Ｅ１は、上記本発明の第１の態様と同一である。本発明の更なる列挙された実施態様（Ｅ）が、本明細書に記載される。各実施態様で指定された特徴は、本発明の更なる実施態様を提供するために、他の指定された特徴と組み合わせることができることを認識されたい。
以下に、本発明の数多くの実施態様が記載されるが、便宜上、Ｅ１は、上記本発明の第１の態様と同一である。本発明の更なる列挙された実施態様（Ｅ）が、本明細書に記載される。各実施態様で指定された特徴は、本発明の更なる実施態様を提供するために、他の指定された特徴と組み合わせることができることを認識されたい。
【0029】
Ｅ２．
同時、連続的又は別個の使用のための、
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤もしくはそのエナンチオマー、ジアステレオ異性体、アトロプ異性体又は薬学的に許容し得る酸もしくは塩基とのそれらの付加塩とを含み、
ここで、式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤は、式（ＩＡ）：
［式中、
Ｚは、窒素原子又はＣ－Ｒ４基を表わし、
Ｒ１は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、シアノ、－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｃｙ８又はハロゲン原子を表わし、
Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２，Ｒ３）、（Ｒ３，Ｒ４）のうちの一方の置換基は、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される基により置換されていることができると理解され、
Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ６，Ｒ７）の置換基は、２つの隣接する炭素原子上でグラフト化されている場合、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される基により置換されていることができると理解され、
Ｒ８は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基又はヘテロアリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基を表わし、
Ｒ９は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、－Ｃｙ２、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－Ｃｙ３、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｏ－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ３、ハロゲン原子、シアノ基、－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１４又は－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１４Ｒ１４’を表わし、
Ｒ１１及びＲ１１’は、それぞれ独立して、水素原子、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１を表わし、
又は、
ペア（Ｒ１１，Ｒ１１’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、当該窒素は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解され、
Ｒ１２は、－Ｃｙ５、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－Ｃｙ６－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ７、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＯＲ１１、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＯＲ１１、－ＳＯ２－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１又は－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｒ１１を表わし、
Ｒ１３、Ｒ１３’、Ｒ１４及びＲ１４’は、それぞれ独立して、水素原子又は場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２５は、水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｃｙ１、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ６、Ｃｙ７及びＣｙ８は、それぞれ独立して、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基又はヘテロアリール基を表わし、
ｎは、０又は１に等しい整数であり、
－「アリール」は、フェニル、ナフチル、ビフェニル、インダニル又はインデニル基を意味し、
－「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの芳香族部分を有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、５～１０個の環員で構成されている、任意の単環式又は二環式の基を意味し、
－「シクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、
－「ヘテロシクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、同非芳香族炭素環基は、縮合、架橋又はスピロ環系を含むことができると理解され、
該定義されたアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル基並びにアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシは、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル－Ｓ－、ヒドロキシ、オキソ（又は該当する場合、Ｎ－オキシド）、ニトロ、シアノ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ’、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’Ｒ’’、－（Ｃ＝ＮＲ’）－ＯＲ’’、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、トリフルオロメトキシ又はハロゲンから選択される１～４個の基により置換されている可能性があり、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素原子又は、場合により置換されている直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わすと理解され、先の可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解される］
である、Ｅ１記載の組み合わせ。
同時、連続的又は別個の使用のための、
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤もしくはそのエナンチオマー、ジアステレオ異性体、アトロプ異性体又は薬学的に許容し得る酸もしくは塩基とのそれらの付加塩とを含み、
ここで、式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤は、式（ＩＡ）：
【化6】
［式中、
Ｚは、窒素原子又はＣ－Ｒ４基を表わし、
Ｒ１は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、シアノ、－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｃｙ８又はハロゲン原子を表わし、
Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ２，Ｒ３）、（Ｒ３，Ｒ４）のうちの一方の置換基は、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される基により置換されていることができると理解され、
Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、ヒドロキシ基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、－Ｓ－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、シアノ基、ニトロ基、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－Ｏ－Ｃｙ１、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ１、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｒ１２、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１’、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－ＳＯ２－ＮＲ１１Ｒ１１’又は－ＳＯ２－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）を表わし、
又は、
ペア（Ｒ６，Ｒ７）の置換基は、２つの隣接する炭素原子上でグラフト化されている場合、それらを有している炭素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、得られた環は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１３’、－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１又はオキソから選択される基により置換されていることができると理解され、
Ｒ８は、水素原子、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基又はヘテロアリールアルキル（Ｃ１～Ｃ６）基を表わし、
Ｒ９は、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、－Ｃｙ２、－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルケニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－Ｃｙ３、－アルキニル（Ｃ２～Ｃ６）－Ｏ－Ｃｙ２、－Ｃｙ２－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ３、ハロゲン原子、シアノ基、－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１４又は－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１４Ｒ１４’を表わし、
Ｒ１１及びＲ１１’は、それぞれ独立して、水素原子、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基又は－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ１を表わし、
又は、
ペア（Ｒ１１，Ｒ１１’）の置換基は、それらを有している窒素原子と共に、５～７個の環員で構成されている芳香環又は非芳香環を形成しており、これらの環は、該窒素原子に加えて、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有することができ、当該窒素は、水素原子又は直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わす基により置換されていることができると理解され、可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解され、
Ｒ１２は、－Ｃｙ５、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－ＮＲ１１－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ６、－Ｃｙ５－Ｃｙ６－Ｏ－アルキル（Ｃ０～Ｃ６）－Ｃｙ７、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＮＲ１１Ｒ１１’、－ＯＲ１１、－ＮＲ１１－Ｃ（Ｏ）－Ｒ１１’、－Ｏ－アルキル（Ｃ１～Ｃ６）－ＯＲ１１、－ＳＯ２－Ｒ１１、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ１１又は－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｒ１１を表わし、
Ｒ１３、Ｒ１３’、Ｒ１４及びＲ１４’は、それぞれ独立して、水素原子又は場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｒ２５は、水素原子、ヒドロキシ基又はヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わし、
Ｃｙ１、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ６、Ｃｙ７及びＣｙ８は、それぞれ独立して、シクロアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、アリール基又はヘテロアリール基を表わし、
ｎは、０又は１に等しい整数であり、
－「アリール」は、フェニル、ナフチル、ビフェニル、インダニル又はインデニル基を意味し、
－「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの芳香族部分を有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、５～１０個の環員で構成されている、任意の単環式又は二環式の基を意味し、
－「シクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、
－「ヘテロシクロアルキル」は、３～１０個の環員を含有し、酸素、硫黄及び窒素から選択される１～３個のヘテロ原子を含有する、任意の単環式又は二環式の非芳香族炭素環基を意味し、同非芳香族炭素環基は、縮合、架橋又はスピロ環系を含むことができると理解され、
該定義されたアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキル基並びにアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシは、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルケニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ２～Ｃ６）アルキニル基、場合により置換されている直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル－Ｓ－、ヒドロキシ、オキソ（又は該当する場合、Ｎ－オキシド）、ニトロ、シアノ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ’、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’Ｒ’’、－（Ｃ＝ＮＲ’）－ＯＲ’’、直鎖もしくは分岐鎖（Ｃ１～Ｃ６）ポリハロアルキル、トリフルオロメトキシ又はハロゲンから選択される１～４個の基により置換されている可能性があり、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、水素原子又は、場合により置換されている直鎖もしくは分枝鎖（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表わすと理解され、先の可能性のある置換基の１つ以上の炭素原子は、重水素化されていることができると理解される］
である、Ｅ１記載の組み合わせ。
【0030】
Ｅ３．
式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤が、式（ＩＢ）：
［式中、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１１’及びＲ１２が、上記Ｅ１又はＥ２に記載されたとおりである］
で示されるものである、Ｅ１又はＥ２記載の組み合わせ。
式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤が、式（ＩＢ）：
【化7】
［式中、Ｒ９、Ｒ１１、Ｒ１１’及びＲ１２が、上記Ｅ１又はＥ２に記載されたとおりである］
で示されるものである、Ｅ１又はＥ２記載の組み合わせ。
【0031】
Ｅ４．
式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤が、化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩である、Ｅ１、Ｅ２又はＥ３のいずれか１つ記載の組み合わせ。
式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤が、化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩である、Ｅ１、Ｅ２又はＥ３のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0032】
Ｅ５．
式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤が、化合物Ｃ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（５－フルオロフラン－２－イル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩である、Ｅ１、Ｅ２又はＥ３のいずれか１つ記載の組み合わせ。
式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤が、化合物Ｃ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（５－フルオロフラン－２－イル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩である、Ｅ１、Ｅ２又はＥ３のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0033】
Ｅ６．
化合物Ｂが、静脈内に投与され、ミドスタウリンが、経口投与される、Ｅ４記載の組み合わせ。
化合物Ｂが、静脈内に投与され、ミドスタウリンが、経口投与される、Ｅ４記載の組み合わせ。
【0034】
Ｅ７．
少なくとも１種の更なる抗ガン剤、例えば、シタラビン及び／又はダウノルビシンをさらに含む、Ｅ１～Ｅ６のいずれか１つ記載の組み合わせ。
少なくとも１種の更なる抗ガン剤、例えば、シタラビン及び／又はダウノルビシンをさらに含む、Ｅ１～Ｅ６のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0035】
Ｅ８．
非固定用量組み合わせの形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載の組み合わせ。
非固定用量組み合わせの形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0036】
Ｅ９．
非固定用量組み合わせの形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載の組み合わせ。
非固定用量組み合わせの形態にある、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0037】
Ｅ１０．
医薬における使用ための、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
医薬における使用ための、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0038】
Ｅ１１．
前記使用が、ガンの処置における使用である、Ｅ１０記載の使用のための、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
前記使用が、ガンの処置における使用である、Ｅ１０記載の使用のための、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0039】
Ｅ１２．
ガンが、血液ガンである、Ｅ１１記載の使用のための、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
ガンが、血液ガンである、Ｅ１１記載の使用のための、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0040】
Ｅ１３．
ガンが、急性骨髄性白血病である、Ｅ１１記載の使用のための、Ｅ１２記載の使用のための、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。特に、急性骨髄性白血病は、ＦＬＴ３突然変異を有する患者にみられる。とりわけ、前記突然変異は、ＦＬＴ３－ＩＴＤである。
ガンが、急性骨髄性白血病である、Ｅ１１記載の使用のための、Ｅ１２記載の使用のための、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。特に、急性骨髄性白血病は、ＦＬＴ３突然変異を有する患者にみられる。とりわけ、前記突然変異は、ＦＬＴ３－ＩＴＤである。
【0041】
Ｅ１４．
ミドスタウリン及び化合物Ｂが、ガンの処置に協同的に治療上有効な量で提供される、Ｅ１０～Ｅ１３のいずれか１つ記載の使用のための、Ｅ４又はＥ６～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
ミドスタウリン及び化合物Ｂが、ガンの処置に協同的に治療上有効な量で提供される、Ｅ１０～Ｅ１３のいずれか１つ記載の使用のための、Ｅ４又はＥ６～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0042】
Ｅ１５．
ミドスタウリン及び化合物Ｂが、ガンの処置に相乗的に有効な量で提供される、Ｅ１０～Ｅ１３のいずれか１つ記載の使用のための、Ｅ４又はＥ６～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
ミドスタウリン及び化合物Ｂが、ガンの処置に相乗的に有効な量で提供される、Ｅ１０～Ｅ１３のいずれか１つ記載の使用のための、Ｅ４又はＥ６～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0043】
Ｅ１６．
ミドスタウリン及び化合物Ｂが、ガンの処置における各化合物に必要な用量を減少させ、一方で、副作用を減少させながら有効なガン処置を提供するのに相乗的に有効な量で提供される、Ｅ１０～Ｅ１３のいずれか１つ記載の使用のための、Ｅ４又はＥ６～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
ミドスタウリン及び化合物Ｂが、ガンの処置における各化合物に必要な用量を減少させ、一方で、副作用を減少させながら有効なガン処置を提供するのに相乗的に有効な量で提供される、Ｅ１０～Ｅ１３のいずれか１つ記載の使用のための、Ｅ４又はＥ６～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせ。
【0044】
Ｅ１７．
Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせと、少なくとも１種の薬学的に許容し得る担体とを含む、
医薬組成物。
Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせと、少なくとも１種の薬学的に許容し得る担体とを含む、
医薬組成物。
【0045】
Ｅ１８．
ガンの処置のための医薬の製造における、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせの使用。
ガンの処置のための医薬の製造における、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせの使用。
【0046】
Ｅ１９．
ガンが、急性骨髄性白血病である、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせのＥ１８記載の使用。特に、急性骨髄性白血病は、ＦＬＴ３突然変異を有する患者にみられる。とりわけ、前記突然変異は、ＦＬＴ３－ＩＴＤ又はＦＬＴ３－ＴＫＤである。
ガンが、急性骨髄性白血病である、Ｅ１～Ｅ９のいずれか１つ記載の組み合わせのＥ１８記載の使用。特に、急性骨髄性白血病は、ＦＬＴ３突然変異を有する患者にみられる。とりわけ、前記突然変異は、ＦＬＴ３－ＩＴＤ又はＦＬＴ３－ＴＫＤである。
【0047】
Ｅ２０．
同時、連続的又は別個の使用のための、
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩とを、別個に又は共に含有し、
ここで、ミドスタウリン及び化合物Ｂは、ガン、特に、ＡＭＬの処置に有効な量で提供される、
医薬。
同時、連続的又は別個の使用のための、
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩とを、別個に又は共に含有し、
ここで、ミドスタウリン及び化合物Ｂは、ガン、特に、ＡＭＬの処置に有効な量で提供される、
医薬。
【0048】
Ｅ２１．
ガン、特に、ＡＭＬを処置する方法であって、
協同的に治療上有効量の
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩とを投与することを含む、
方法。
ガン、特に、ＡＭＬを処置する方法であって、
協同的に治療上有効量の
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸又はその薬学的に許容し得る塩とを投与することを含む、
方法。
【0049】
Ｅ２２．
（ｉ）少なくとも１種の化学療法処置に難治性であるかもしくは（ｉｉ）化学療法による処置後に再発しているか又は（ｉ）及び（ｉｉ）の両方である患者を感作し又は処置するための方法であって、
協同的に治療上有効量の（ａ）ミドスタウリンと、本明細書で定義された式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤とを前記患者に投与することを含む、
方法。
（ｉ）少なくとも１種の化学療法処置に難治性であるかもしくは（ｉｉ）化学療法による処置後に再発しているか又は（ｉ）及び（ｉｉ）の両方である患者を感作し又は処置するための方法であって、
協同的に治療上有効量の（ａ）ミドスタウリンと、本明細書で定義された式（Ｉ）で示されるＭｃｌ－１阻害剤とを前記患者に投与することを含む、
方法。
【0050】
Ｅ２３．
ガン、特に、ＡＭＬの処置のための、ミドスタウリンとの併用療法における使用のための化合物Ｂ。
ガン、特に、ＡＭＬの処置のための、ミドスタウリンとの併用療法における使用のための化合物Ｂ。
【0051】
Ｅ２４．
ガン、特に、ＡＭＬの処置のための、化合物Ｂとの併用療法における使用のためのミドスタウリン。
ガン、特に、ＡＭＬの処置のための、化合物Ｂとの併用療法における使用のためのミドスタウリン。
【0052】
Ｅ２５．
先の治療に抵抗性のＡＭＬの処置のための、本明細書における実施態様のいずれか１つに記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
先の治療に抵抗性のＡＭＬの処置のための、本明細書における実施態様のいずれか１つに記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
【0053】
Ｅ２６．
ベネトクラウス、デシタビン、ダウノルビシン及びシタラビン、特に、ベネトクラウスから選択される少なくとも１種の化合物に対して抵抗性のＡＭＬの処置のための、本明細書における実施態様のいずれか１つに記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
ベネトクラウス、デシタビン、ダウノルビシン及びシタラビン、特に、ベネトクラウスから選択される少なくとも１種の化合物に対して抵抗性のＡＭＬの処置のための、本明細書における実施態様のいずれか１つに記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
【0054】
Ｅ２７．
ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有するベネトクラウス抵抗性ＡＭＬの処置のための、本明細書における実施態様のいずれか１つに記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有するベネトクラウス抵抗性ＡＭＬの処置のための、本明細書における実施態様のいずれか１つに記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
【0055】
Ｅ２８．
ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異を有するＡＭＬの処置のための、本明細書における実施態様のいずれか１つに記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異を有するＡＭＬの処置のための、本明細書における実施態様のいずれか１つに記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
【0056】
Ｅ２９．
前記ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異が、ＦＬＴ３のチロシンキナーゼドメイン（ＴＫＤ）内のＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ又はＦＬＴ３－Ｆ６９１突然変異を含む、実施態様Ｅ２８記載の使用、方法又は使用のための組み合わせ。
前記ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異が、ＦＬＴ３のチロシンキナーゼドメイン（ＴＫＤ）内のＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ又はＦＬＴ３－Ｆ６９１突然変異を含む、実施態様Ｅ２８記載の使用、方法又は使用のための組み合わせ。
【0057】
Ｅ３０．
前記ガンは、ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異の存在下で、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有する患者にみられる急性骨髄性白血病である、本明細書に記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
前記ガンは、ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異の存在下で、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有する患者にみられる急性骨髄性白血病である、本明細書に記載された使用、方法又は使用のための組み合わせ。
【0058】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載されたように、特に、化合物Ｂ又は化合物Ｃとミドスタウリンとを含み、ここで、前記ガン、特に、ＡＭＬが、先の抗ガン治療に対して抵抗性である、組み合わせ、使用のための組み合わせ、方法、組成物、医薬又は使用を提供する。このような先の治療は、ガン、例えば、ＡＭＬの処置に使用される１種以上の化合物、例えば、ベネトクラウス、デシタビン、ダウノルビシン及びシタラビン、特に、ベネトクラウスを含む場合がある。一実施態様では、処置されるＡＭＬは、ベネトクラウス抵抗性ＡＭＬ、特に、ＦＬＴ３－ＩＴＤを有するベネトクラウス抵抗性ＡＭＬである。
【0059】
別の実施態様では、処置されるＡＭＬは、ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異を有するＡＭＬである。特に、ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異は、ＦＬＴ３のチロシンキナーゼドメイン（ＴＫＤ）内のＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ又はＦＬＴ３－Ｆ６９１突然変異を含む。更なる実施態様では、ガンは、ＦＬＴ３－ＴＫＤ突然変異の存在下でＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有する患者にみられる急性骨髄性白血病である。
【0060】
特に、本明細書に記載された処置されるＡＭＬは、ＦＬＴ３阻害剤処置に対して抵抗性である。
【0061】
別の実施態様では、ガン、特に、ＡＭＬを処置する方法であって、協同的に治療上有効量の
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸もしくはその薬学的に許容し得る塩又は
（ｃ）化合物Ｃ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（５－フルオロフラン－２－イル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸もしくはその薬学的に許容し得る塩とを投与することを含む、方法が提供される。
（ａ）ミドスタウリン又はその薬学的に許容し得る塩又はその錯体又はその共結晶又はその水和物を含む溶媒和物と、
（ｂ）化合物Ｂ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（４－フルオロフェニル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［２－（２－メトキシフェニル）ピリミジン－４－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸もしくはその薬学的に許容し得る塩又は
（ｃ）化合物Ｃ：（２Ｒ）－２－｛［（５Ｓａ）－５－｛３－クロロ－２－メチル－４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ］フェニル｝－６－（５－フルオロフラン－２－イル）チエノ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル］オキシ｝－３－（２－｛［１－（２，２，２－トリフルオロエチル）－１Ｈ－ピラゾール－５－イル］メトキシ｝フェニル）プロパン酸もしくはその薬学的に許容し得る塩とを投与することを含む、方法が提供される。
【0062】
更なる実施態様では、協同的に治療上有効量のミドスタウリンと化合物Ｂ又は化合物Ｃとを投与することを含む、本明細書における実施態様のいずれかに記載されたガンを処置する方法が提供される。
【0063】
本発明の医薬組成物において、有効成分の重量比（組成物の総重量に対する有効成分の重量）は、５～５０％である。
【0064】
本発明の医薬組成物の中でも、経口、非経口及び特に、静脈内、経皮（ｐｅｒ－ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）もしくは経皮（ｔｒａｎｓ－ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、鼻、直腸、経舌、眼又は呼吸経路による投与に適切なもの、より具体的には、錠剤、糖衣錠、舌下錠、硬ゼラチンカプセル剤、グロセット、カプセル剤、ロゼンジ剤、注射用製剤、エアロゾル剤、点眼剤又は点鼻剤、坐剤、クリーム剤、軟膏剤、皮膚ゲル剤等が、とりわけ使用されるであろう。
【0065】
一実施態様では、式（Ｉ）で示される化合物、特に、化合物Ｂは、例えば、ＷＯ第２０１８／０７８０６４号に記載されている製剤を使用して静脈内に投与される。
【0066】
本発明の医薬組成物は、希釈剤、潤滑剤、バインダー、崩壊剤、安定剤、保存剤、吸収剤、着色剤、甘味料、香味料等から選択される１種以上の賦形剤又は担体を含む。
【0067】
非限定的な例として、以下に言及することができる。
希釈剤として：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリセロール、
潤滑剤として：シリカ、タルク、ステアリン酸並びにそのマグネシウム及びカルシウム塩、ポリエチレングリコール、
バインダーとして：ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びポリビニルピロリドン、
崩壊剤として：アガー、アルギン酸及びそのナトリウム塩、発泡性混合物。
希釈剤として：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリセロール、
潤滑剤として：シリカ、タルク、ステアリン酸並びにそのマグネシウム及びカルシウム塩、ポリエチレングリコール、
バインダーとして：ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びポリビニルピロリドン、
崩壊剤として：アガー、アルギン酸及びそのナトリウム塩、発泡性混合物。
【0068】
組み合わせの化合物は、同時に、別個に又は連続的に投与することができる。対応する医薬組成物は、有効成分の即時放出又は遅延放出を可能にする。組み合わせの化合物は、さらに、それぞれが有効成分の１つを含有する２つの別個の医薬組成物の形態又は有効成分が混合されている単一の医薬組成物の形態で投与することができる。
【0069】
有用な投与計画は、患者の性別、年齢及び体重、投与経路、ガンの性質並びに任意の関連する処置に応じて変化し、週あたりに２５mg～１５００mg、より好ましくは、週あたりに５０mg～１４００mgの範囲のＭｃｌ－１阻害剤である。
【0070】
ＦＬＴ３突然変異陽性のＡＭＬの治療のためのミドスタウリンの用量は、５０mg、経口、食事と共に１日２回である。ミドスタウリンは、標準的なシタラビン及びダウノルビシンによる導入療法及びシタラビンによる地固め療法と組み合わせて患者に提供される。この用量は、化合物Ｂとの併用処置において必要に応じて適合させることができる。
【0071】
一実施態様では、ミドスタウリンの経口投与は、固体形態による。ミドスタウリンの剤形は、２５mg 薬剤物質を含む軟ゼラチンカプセル剤である。
【0072】
実施例１：ＡＭＬ細胞系統Ｍｏｌｍ１３及びＭＶ４１１においてＦＬＴ３阻害剤化合物Ａ（ミドスタウリン）をＭｃｌ－１阻害剤化合物Ｂと組み合わせた場合のカスパーゼ３．７活性に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ効果
白血病細胞におけるアポトーシスを誘引する能力（すなわち、カスパーゼ３．７活性化）について、Ｍｃｌ－１阻害剤及びＦＬＴ３阻害剤を単剤及び併用で評価した。ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異（Ｍｏｌｍ１３及びＭＶ４１１）を有する２つのＡＭＬ細胞系統を利用した。化合物Ａ及び化合物Ｂが組み合わせ及び単剤として、カスパーゼ３．７を活性化する能力を試験した。単剤としての化合物Ａは、カスパーゼ活性の誘引を引き起こし、Ｍｏｌｍ１３では最大３３％及びＭＶ４１１では最大２４％増加した。また、化合物Ｂも、カスパーゼ活性を誘引し、Ｍｏｌｍ１３では最大８７％及びＭＶ４１１では最大８９％増加した。２つの化合物を組み合わせた場合、カスパーゼ３．７活性の相乗的誘引が観察された。相乗作用は、両細胞系統において観察され、相乗作用スコアは両方において３．１であった。特に、化合物Ｂの低用量で、強力な相乗作用が認められた。結果を図１に示す。
白血病細胞におけるアポトーシスを誘引する能力（すなわち、カスパーゼ３．７活性化）について、Ｍｃｌ－１阻害剤及びＦＬＴ３阻害剤を単剤及び併用で評価した。ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異（Ｍｏｌｍ１３及びＭＶ４１１）を有する２つのＡＭＬ細胞系統を利用した。化合物Ａ及び化合物Ｂが組み合わせ及び単剤として、カスパーゼ３．７を活性化する能力を試験した。単剤としての化合物Ａは、カスパーゼ活性の誘引を引き起こし、Ｍｏｌｍ１３では最大３３％及びＭＶ４１１では最大２４％増加した。また、化合物Ｂも、カスパーゼ活性を誘引し、Ｍｏｌｍ１３では最大８７％及びＭＶ４１１では最大８９％増加した。２つの化合物を組み合わせた場合、カスパーゼ３．７活性の相乗的誘引が観察された。相乗作用は、両細胞系統において観察され、相乗作用スコアは両方において３．１であった。特に、化合物Ｂの低用量で、強力な相乗作用が認められた。結果を図１に示す。
【0073】
方法
両化合物を、１００％ ＤＭＳＯ（Sigma、カタログ番号Ｄ２６５０）に溶解させて、１０mMの濃度にし、使用まで－２０℃で保存した。
両化合物を、１００％ ＤＭＳＯ（Sigma、カタログ番号Ｄ２６５０）に溶解させて、１０mMの濃度にし、使用まで－２０℃で保存した。
【0074】
この研究で使用された細胞系統Ｍｏｌｍ１３をLeibniz-Institut DSMZ（ＡＣＣ ５５４）から購入し、ＭＶ４１１をAmerican Type Cell Collection（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－９５９１）から購入した。これらの細胞系統を３７℃で、５％ ＣＯ２インキュベーターにおいて、Ｍｏｌｍ１３はＲＰＭＩ培地（Lonza、１２－７０２Ｆ）中で及びＭＶ４１１はＩＭＤＭ培地（Hyclone、ＳＨ３０２２８．０１）中で培養した。これらの培地には、１０％ 牛胎児血清（Seradigm、１５００－５００）を補充した。細胞を週に２回継代し、培地を２～３日毎に交換した。
【0075】
カスパーゼ３．７活性をPromega製のCaspase-Glo（登録商標）3/7キット（Ｇ８０９２）により測定した。９０００個／ウェルを、透明底３８４ウェル黒色プレート（Greiner、＃７８１０９１）に、３０μl/ウェル 増殖培地によりトリプリケートで分注した。１０ul/ウェル 化合物混合物（４×）を、３８４プレートの各ウェルに６時間の処理の間に加えた。ついで、３０ul/ウェル Caspase-Glo（登録商標）3/7試薬を各ウェルに最後に加え、発光を、Envisionプレートリーダー（Perkin Elmer）で記録した。測定された発光は、存在するカスパーゼ活性の量に比例する。
【0076】
組み合わせのカスパーゼ３．７活性を偏りのない方法で評価し、全ての可能な濃度での相乗効果を特定するために、この研究を「用量マトリックス」で行った。これには、連続希釈した化合物Ａ及び化合物Ｂの全ての可能な順列を利用した。
【0077】
化合物Ａ及び化合物Ｂの「用量マトリックス」は、下記からなる。両化合物を、１１用量の１：３連続希釈に供した。３uMを最高用量とし、化合物を含まない対照までとした。組み合わせアッセイでは、薬剤を同時に適用した。各単剤及び組み合わせ処理についての発光シグナル値を、未処理対照の値と比較した。％ カスパーゼ３．７活性を、下記計算：（１－対照／化合物処理）×１００を使用して計算した。全てのウェルの％ カスパーゼ３．７活性の値を、Chaliceソフトウェア（CombinatoRx, Cambridge MA）及びChalice Analyserを使用して、（Lehar et al 2009）に記載されているように計算した。この研究では、カスパーゼ３．７活性データを細胞増殖阻害データの代わりに、同じ数学的プロトコールにより分析した。対照と比較したカスパーゼ３．７活性を「％ カスパーゼ３．７活性」とラベル付けされたパネルに表示し、予想量を超える活性量を「Ｌｏｅｗｅ過剰活性」とラベル付けされたパネルに表示する。化合物Ａの濃度を下列に沿って左から右に示し、化合物Ｂの濃度は、最左行に沿って下から上へ増加する。グリッド表示の残りの点は全て、２つの軸上に示された単剤濃度に対応する２つの阻害剤の組み合わせから生じる。カスパーゼ３．７活性のデータ分析を、Chalice Analyserを使用して行った。過剰活性を、Ｌｏｅｗｅ相乗モデルを使用して計算した。このモデルは、２つの薬剤が用量相加的様式で挙動する場合に予想されるであろう効果に対するカスパーゼ３．７活性における効果を測定する。正の数字は、相乗作用が増大する領域を表わす。相乗作用スコアの解釈は、下記のとおりである。ＳＳ～０＝用量相加的、ＳＳ＞１＝弱い相乗作用及びＳＳ＞２＝相乗作用。
【0078】
実施例２：Ｍｃｌ－１阻害剤化合物Ｃとミドスタウリンの組み合わせは、Ｂｃｌ－２阻害剤であるベネトクラウスに抵抗性のものを含むＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異ＡＭＬ細胞及び初代ＡＭＬ細胞において相乗的である
材料及び方法
図２：ＦＬＴ３とＭｃｌ－１との併用ターゲット化は、ＦＬＴ３－ＩＴＤ ＡＭＬ初代サンプルにおいて有効である。細胞生存率アッセイ及び組み合わせ指数（ＣＩ）
初代ＡＭＬ細胞をM. D. Anderson Cancer Centerにおける、新たに診断されたＡＭＬ又は再発ＡＭＬを患い、芽細胞数が高値（４０％超）であった患者から採取した末梢血から取得した。Ficoll精製後、ＡＭＬ芽細胞（８×１０５個/ウェル）を、９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５をＤＭＳＯ中の１０mM ストックとして調製し、分析前に－８０℃で維持した。各薬剤を完全ＲＰＭＩ培地で希釈し、培地 ５０μL中に調製された４×濃縮溶液として与えた。対照細胞には、ＤＭＳＯを含有する培地 １００μLを与えた（ＤＭＳＯの体積は、４×溶液を調製するのに使用されたミドスタウリン及びＳ６３８４５ストックの体積の合計に相当した）。細胞を、単独で又は組み合わせて使用される薬剤と共に２４時間インキュベーションした。細胞生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。薬剤の組み合わせ効果の分析を、CalcuSyn（BioSoft, Ferguson, MO, USA）ソフトウェアにより計算された組み合わせ指数（ＣＩ）を使用して行った。１超、１及び１未満のＣＩはそれぞれ、相乗作用、相加効果及び拮抗作用を示す。
材料及び方法
図２：ＦＬＴ３とＭｃｌ－１との併用ターゲット化は、ＦＬＴ３－ＩＴＤ ＡＭＬ初代サンプルにおいて有効である。細胞生存率アッセイ及び組み合わせ指数（ＣＩ）
初代ＡＭＬ細胞をM. D. Anderson Cancer Centerにおける、新たに診断されたＡＭＬ又は再発ＡＭＬを患い、芽細胞数が高値（４０％超）であった患者から採取した末梢血から取得した。Ficoll精製後、ＡＭＬ芽細胞（８×１０５個/ウェル）を、９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５をＤＭＳＯ中の１０mM ストックとして調製し、分析前に－８０℃で維持した。各薬剤を完全ＲＰＭＩ培地で希釈し、培地 ５０μL中に調製された４×濃縮溶液として与えた。対照細胞には、ＤＭＳＯを含有する培地 １００μLを与えた（ＤＭＳＯの体積は、４×溶液を調製するのに使用されたミドスタウリン及びＳ６３８４５ストックの体積の合計に相当した）。細胞を、単独で又は組み合わせて使用される薬剤と共に２４時間インキュベーションした。細胞生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。薬剤の組み合わせ効果の分析を、CalcuSyn（BioSoft, Ferguson, MO, USA）ソフトウェアにより計算された組み合わせ指数（ＣＩ）を使用して行った。１超、１及び１未満のＣＩはそれぞれ、相乗作用、相加効果及び拮抗作用を示す。
【0079】
図３Ａ／図３Ｂ：ミドスタウリンによりミドスタウリン／Ｓ６３８４５（化合物Ｃ）致死に寄与するＢＩＭ蓄積が誘引される
ウェスタンブロット分析
細胞（３×１０６個/ウェル）を６ウェルプレートにおいて、完全ＲＰＭＩ培地 ５ml中に播種し、単独又は組み合わせで与えられたミドスタウリン及びＳ６３８４５に曝露させた。対照細胞にはＤＭＳＯを受けさせた。細胞を６時間インキュベーションし、ついで、回収し、ＰＢＳ中で２回洗浄し、１×プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤カクテル（ThermoFisher Scientific）を補充したＲＩＰＡバッファー（ThermoFisher Scientific）中で溶解させた。ライゼートを５分毎にボルテックスしながら、２０分間氷上に保持し、ついで、短時間超音波処理し、１３５００rpmで１５分間遠心分離した。上清を回収し、タンパク質含量を、ＢＳＡアッセイを使用して測定した。細胞ライゼート（ウェルあたりに３０～５０μg タンパク質）を４％～２０％ 勾配プレキャストドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル（Bio-Rad, Hercules, CA）上での電気泳動により分離し、ＰＶＤＦメンブラン（Bio-Rad）にトランスファーした。このメンブランを、最初に、Odysseyブロッキングバッファー（Li-Cor, Lincon, Nebraska, USA）中で１時間インキュベーションして、非特異的タンパク質結合をブロックし、ついで、一次抗体と４℃で一晩インキュベーションし、ＴＢＳＴで３回洗浄し、ＩＲＤｙｅコンジュゲート二次抗体（１：１５０００希釈）と室温で１時間インキュベーションした。メンブランを、Odyssay Imaging System（Li-Cor）を使用してスキャンした。
ウェスタンブロット分析
細胞（３×１０６個/ウェル）を６ウェルプレートにおいて、完全ＲＰＭＩ培地 ５ml中に播種し、単独又は組み合わせで与えられたミドスタウリン及びＳ６３８４５に曝露させた。対照細胞にはＤＭＳＯを受けさせた。細胞を６時間インキュベーションし、ついで、回収し、ＰＢＳ中で２回洗浄し、１×プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤カクテル（ThermoFisher Scientific）を補充したＲＩＰＡバッファー（ThermoFisher Scientific）中で溶解させた。ライゼートを５分毎にボルテックスしながら、２０分間氷上に保持し、ついで、短時間超音波処理し、１３５００rpmで１５分間遠心分離した。上清を回収し、タンパク質含量を、ＢＳＡアッセイを使用して測定した。細胞ライゼート（ウェルあたりに３０～５０μg タンパク質）を４％～２０％ 勾配プレキャストドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル（Bio-Rad, Hercules, CA）上での電気泳動により分離し、ＰＶＤＦメンブラン（Bio-Rad）にトランスファーした。このメンブランを、最初に、Odysseyブロッキングバッファー（Li-Cor, Lincon, Nebraska, USA）中で１時間インキュベーションして、非特異的タンパク質結合をブロックし、ついで、一次抗体と４℃で一晩インキュベーションし、ＴＢＳＴで３回洗浄し、ＩＲＤｙｅコンジュゲート二次抗体（１：１５０００希釈）と室温で１時間インキュベーションした。メンブランを、Odyssay Imaging System（Li-Cor）を使用してスキャンした。
【0080】
図４：ＦＬＴ３とＭｃｌ－１との併用ターゲット化によりアポトーシスが促進される
アポトーシス検出のためのカスパーゼ３／７活性アッセイ
ＡＭＬ細胞又はＡＭＬ初代芽細胞（３×１０６個/ウェル）を６ウェルプレートにおいて、完全ＲＰＭＩ培地 ５mL中に播種し、単独又は組み合わせで与えられたミドスタウリン及びＳ６３８４５に曝露させた。対照細胞にはＤＭＳＯを受けさせた。細胞を６時間インキュベーションし、ついで、細胞懸濁液 １００μLを白色不透明９６ウェルプレートに移し、Caspase-Glo3/7試薬（Promega） １００μLと混合し、暗所で３０分間、室温でのプレートシェーカー上でインキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。薬剤処理後のカスパーゼ－３／７活性における変化をＤＭＳＯ単独に対して正規化した。残りの細胞をウェスタンブロット分析に使用した。
アポトーシス検出のためのカスパーゼ３／７活性アッセイ
ＡＭＬ細胞又はＡＭＬ初代芽細胞（３×１０６個/ウェル）を６ウェルプレートにおいて、完全ＲＰＭＩ培地 ５mL中に播種し、単独又は組み合わせで与えられたミドスタウリン及びＳ６３８４５に曝露させた。対照細胞にはＤＭＳＯを受けさせた。細胞を６時間インキュベーションし、ついで、細胞懸濁液 １００μLを白色不透明９６ウェルプレートに移し、Caspase-Glo3/7試薬（Promega） １００μLと混合し、暗所で３０分間、室温でのプレートシェーカー上でインキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。薬剤処理後のカスパーゼ－３／７活性における変化をＤＭＳＯ単独に対して正規化した。残りの細胞をウェスタンブロット分析に使用した。
【0081】
図５：ＦＬＴ３とＭｃｌ－１との併用ターゲット化によりアポトーシスが促進される
アネキシン－Ｖ／ＤＡＰＩアッセイ
ＡＭＬ芽細胞（８×１０５個/ウェル）を丸底９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地中で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。対照細胞には、ＤＭＳＯを含有する培地 １００μLを受けさせた（ＤＭＳＯの体積は、４×溶液を調製するのに使用されたミドスタウリン及びＳ６３８４５ストックの体積の合計に相当した）。細胞を単独で又は組み合わせて与えられた薬剤と共に２４時間インキュベーションした。翌日、細胞を含むプレートを１５００rpmで５分間遠心分離した。ついで、細胞をＰＢＳ中で１回洗浄し、アネキシン－Ｖ－ＡＰＣ（BD Bioscience） ０．３μL及びＤＡＰＩ（２μg/mL） ５μLを含有するアネキシン－Ｖ結合バッファー １００μL中に再懸濁させた。細胞を暗所で２０分間染色し、追加のアネキシン－Ｖ結合バッファー １００μLを補充し、BD LRSIIフローサイトメーター（Becton Dickinson）により分析した。アネキシン－Ｖ－ＡＰＣ陽性細胞を、FlowJoソフトウェア（LLC, Ashland, Oregon, USA）を使用して特定した。
アネキシン－Ｖ／ＤＡＰＩアッセイ
ＡＭＬ芽細胞（８×１０５個/ウェル）を丸底９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地中で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。対照細胞には、ＤＭＳＯを含有する培地 １００μLを受けさせた（ＤＭＳＯの体積は、４×溶液を調製するのに使用されたミドスタウリン及びＳ６３８４５ストックの体積の合計に相当した）。細胞を単独で又は組み合わせて与えられた薬剤と共に２４時間インキュベーションした。翌日、細胞を含むプレートを１５００rpmで５分間遠心分離した。ついで、細胞をＰＢＳ中で１回洗浄し、アネキシン－Ｖ－ＡＰＣ（BD Bioscience） ０．３μL及びＤＡＰＩ（２μg/mL） ５μLを含有するアネキシン－Ｖ結合バッファー １００μL中に再懸濁させた。細胞を暗所で２０分間染色し、追加のアネキシン－Ｖ結合バッファー １００μLを補充し、BD LRSIIフローサイトメーター（Becton Dickinson）により分析した。アネキシン－Ｖ－ＡＰＣ陽性細胞を、FlowJoソフトウェア（LLC, Ashland, Oregon, USA）を使用して特定した。
【0082】
図６：Ｓ６３８４５（化合物Ｃ）及びＦＬＴ３ ＴＫｉの抗白血病相乗作用
細胞生存率アッセイ
ＭＶ４－１１ ＦＬＴ３－ＩＴＤ＋／＋及びＭＯＬＭ１３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ＋／－ ＡＭＬ細胞（８×１０５個/ウェル）を９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地中で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。対照細胞には、ＤＭＳＯを含有する培地 １００μLを受けさせた（ＤＭＳＯの体積は、４×溶液を調製するのに使用されたミドスタウリン及びＳ６３８４５ストックの体積の合計に相当した）。細胞を単独で又は組み合わせて与えられた薬剤と共に２４時間インキュベーションした。細胞生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。薬剤の組み合わせ効果の分析を、CalcuSyn（BioSoft, Ferguson, MO, USA）ソフトウェアにより計算された組み合わせ指数（ＣＩ）を使用して行った。１超、１及び１未満のＣＩはそれぞれ、相乗作用、相加効果及び拮抗作用を示す。
細胞生存率アッセイ
ＭＶ４－１１ ＦＬＴ３－ＩＴＤ＋／＋及びＭＯＬＭ１３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ＋／－ ＡＭＬ細胞（８×１０５個/ウェル）を９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地中で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。対照細胞には、ＤＭＳＯを含有する培地 １００μLを受けさせた（ＤＭＳＯの体積は、４×溶液を調製するのに使用されたミドスタウリン及びＳ６３８４５ストックの体積の合計に相当した）。細胞を単独で又は組み合わせて与えられた薬剤と共に２４時間インキュベーションした。細胞生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。薬剤の組み合わせ効果の分析を、CalcuSyn（BioSoft, Ferguson, MO, USA）ソフトウェアにより計算された組み合わせ指数（ＣＩ）を使用して行った。１超、１及び１未満のＣＩはそれぞれ、相乗作用、相加効果及び拮抗作用を示す。
【0083】
図７及び図８：Ｓ６３８４５及びＦＬＴ３ ＴＫｉの抗白血病相乗作用
細胞生存率アッセイ及びＢＬＩＳＳ指数
ＭＶ４－１１ ＦＬＴ３－ＩＴＤ＋／＋細胞（８×１０５個/ウェル）を９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地中で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を測定し、生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。細胞増殖を％ ＤＭＳＯ処理細胞として表した。相乗相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わし、一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
細胞生存率アッセイ及びＢＬＩＳＳ指数
ＭＶ４－１１ ＦＬＴ３－ＩＴＤ＋／＋細胞（８×１０５個/ウェル）を９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地中で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を測定し、生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。細胞増殖を％ ＤＭＳＯ処理細胞として表した。相乗相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わし、一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
【0084】
図９：ミドスタウリンによりＳ６３８４５に曝露されたＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるアポトーシスのためのミトコンドリアプライミングが増加する
動的ＢＨ３プロファイリング
ＢＨ３プロファイリングを、Ａ．Ｌｅｔａｉ法（https://letailab.dana-farber.org/bh3-profiling.html）に従って、黒色３８４ウェルプレートにおいて行った。簡潔に、細胞（３×１０６個/ウェル）を６ウェルプレートにおいて、完全ＲＰＭＩ培地 ５mL中に播種し、単独又は組み合わせで与えられたミドスタウリン及びＳ６３８４５に曝露させた。対照細胞にはＤＭＳＯを受けさせた。細胞を６時間インキュベーションし、回収し、ＰＢＳ中で２回洗浄し、ＭＥＢバッファー（１５０mM マンニトール、１０mM ＨＥＰＥＳ－ＫＯＨ ｐＨ７．５、１５０mM ＫＣｌ、１mM ＥＧＴＡ、１mM ＥＤＴＡ、０．１％ ＢＳＡ、５mM スクシナート）中に最終密度１×１０６個/mLに再懸濁させた。細胞（１５μL）をＭＥＢバッファー中にペプチド／ＢＨ３模倣物及び０．００２％ ジギトニン １５μLを含有する３８４ウェルプレートに加えた。細胞を２５℃で１時間インキュベーションし、その後、ＰＢＳ中の４％ ホルムアルデヒド １０μL中で１０分間固定した。固定を終了させるために、Ｎ２バッファー（１．７M Ｔｒｉｓ、１．２５M グリシン、ｐＨ９．１） １０μLを加え、細胞を室温で５分間放置した。ついで、細胞を、抗シトクロムＣ抗体（蛍光タグでラベルされたクローン６Ｈ２．Ｂ４、BioLegend）を含有する１０×ＣｙｔｏＣ染色バッファー（ＰＢＳ中の１０％ ＢＳＡ、２％ Tween20） １０μLと１：４０希釈で混合し、４℃で一晩染色した。シトクロムＣ放出をフローサイトメトリーにより測定した。
動的ＢＨ３プロファイリング
ＢＨ３プロファイリングを、Ａ．Ｌｅｔａｉ法（https://letailab.dana-farber.org/bh3-profiling.html）に従って、黒色３８４ウェルプレートにおいて行った。簡潔に、細胞（３×１０６個/ウェル）を６ウェルプレートにおいて、完全ＲＰＭＩ培地 ５mL中に播種し、単独又は組み合わせで与えられたミドスタウリン及びＳ６３８４５に曝露させた。対照細胞にはＤＭＳＯを受けさせた。細胞を６時間インキュベーションし、回収し、ＰＢＳ中で２回洗浄し、ＭＥＢバッファー（１５０mM マンニトール、１０mM ＨＥＰＥＳ－ＫＯＨ ｐＨ７．５、１５０mM ＫＣｌ、１mM ＥＧＴＡ、１mM ＥＤＴＡ、０．１％ ＢＳＡ、５mM スクシナート）中に最終密度１×１０６個/mLに再懸濁させた。細胞（１５μL）をＭＥＢバッファー中にペプチド／ＢＨ３模倣物及び０．００２％ ジギトニン １５μLを含有する３８４ウェルプレートに加えた。細胞を２５℃で１時間インキュベーションし、その後、ＰＢＳ中の４％ ホルムアルデヒド １０μL中で１０分間固定した。固定を終了させるために、Ｎ２バッファー（１．７M Ｔｒｉｓ、１．２５M グリシン、ｐＨ９．１） １０μLを加え、細胞を室温で５分間放置した。ついで、細胞を、抗シトクロムＣ抗体（蛍光タグでラベルされたクローン６Ｈ２．Ｂ４、BioLegend）を含有する１０×ＣｙｔｏＣ染色バッファー（ＰＢＳ中の１０％ ＢＳＡ、２％ Tween20） １０μLと１：４０希釈で混合し、４℃で一晩染色した。シトクロムＣ放出をフローサイトメトリーにより測定した。
【0085】
図１０、図１１、図１２及び図１３：Ｓ６３８４５とミドスタウリンとの組み合わせはＦＬＴ３－ＩＴＤを有するベネトクラウス抵抗性ＡＭＬ細胞に有効であるが、ＦＬＴ３－ＷＴには有効ではない
ベネトクラウス抵抗性ＡＭＬ細胞における細胞生存率アッセイ及びＢＬＩＳＳ指数
ベネトクラウス抵抗性細胞系統（ＭＯＬＭ１３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ＋／－及びＯＣＩ－ＡＭＬ３ ＦＬＴ３－ＷＴ）を、細胞を段階的に高くなる濃度のベネトクラウスに曝露させることにより生じさせた。細胞を、１μM ベネトクラウスを含有する完全ＲＰＭＩ培地中で定期的に維持した。細胞生存率に対するミドスタウリンとＳ６３８４５との組み合わせの影響を試験する２４時間前に、細胞を、ベネトクラウスを含まないＲＰＭＩ培地中で培養した。続けて、ベネトクラウス抵抗性細胞及びそれらの親対応物を９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで２４時間処理した。細胞増殖を測定し、生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。細胞増殖を％ ＤＭＳＯ処理細胞として表した。相乗相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わし、一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
ベネトクラウス抵抗性ＡＭＬ細胞における細胞生存率アッセイ及びＢＬＩＳＳ指数
ベネトクラウス抵抗性細胞系統（ＭＯＬＭ１３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ＋／－及びＯＣＩ－ＡＭＬ３ ＦＬＴ３－ＷＴ）を、細胞を段階的に高くなる濃度のベネトクラウスに曝露させることにより生じさせた。細胞を、１μM ベネトクラウスを含有する完全ＲＰＭＩ培地中で定期的に維持した。細胞生存率に対するミドスタウリンとＳ６３８４５との組み合わせの影響を試験する２４時間前に、細胞を、ベネトクラウスを含まないＲＰＭＩ培地中で培養した。続けて、ベネトクラウス抵抗性細胞及びそれらの親対応物を９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで２４時間処理した。細胞増殖を測定し、生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。細胞増殖を％ ＤＭＳＯ処理細胞として表した。相乗相互作用を、ＢＬＩＳＳ独立モデルを使用して評価した。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わし、一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
【0086】
図１４：予備的なｉｎ ｖｉｖｏ研究：ＡＭＬ ＦＬＴ３－ＩＴＤ異種移植
ＡＭＬ－ＰＤＸモデル
ＡＭＬ－ＰＤＸモデルについて、メスＮＳＧマウス（６週齢、The Jackson Laboratory）に２００cGyを照射し、ＡＭＬ－ＰＤＸ（１×１０６個/１００μL）を静脈内注射した。末梢血を、後眼窩経路を介して週１回収集し、処理して、白血病の確立を確認するために、フローサイトメトリーによりｈＣＤ４５＋細胞を測定した。白血病の生着が２～１０％に達した時点で、マウスを媒体、ミドスタウリン（７５mg/kg、経口強制投与、毎日）、Ｓ６３８４５（４０mg/kg、ｉ．ｖ． 週１回）又は組み合わせでの処置のためにグループ分けした。２週間毎に１回、末梢血を、後眼窩経路を通してを収集し、処理して、フローサイトメトリーにより白血病負荷（ｈＣＤ４５＋細胞）を測定した。
ＡＭＬ－ＰＤＸモデル
ＡＭＬ－ＰＤＸモデルについて、メスＮＳＧマウス（６週齢、The Jackson Laboratory）に２００cGyを照射し、ＡＭＬ－ＰＤＸ（１×１０６個/１００μL）を静脈内注射した。末梢血を、後眼窩経路を介して週１回収集し、処理して、白血病の確立を確認するために、フローサイトメトリーによりｈＣＤ４５＋細胞を測定した。白血病の生着が２～１０％に達した時点で、マウスを媒体、ミドスタウリン（７５mg/kg、経口強制投与、毎日）、Ｓ６３８４５（４０mg/kg、ｉ．ｖ． 週１回）又は組み合わせでの処置のためにグループ分けした。２週間毎に１回、末梢血を、後眼窩経路を通してを収集し、処理して、フローサイトメトリーにより白血病負荷（ｈＣＤ４５＋細胞）を測定した。
【0087】
図２～図１４の実験から、Ｂｃｌ－２阻害剤であるベネトクラウスに抵抗性の細胞を含むＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異ＡＭＬ細胞及び初代ＡＭＬ細胞において、Ｍｃｌ－１阻害剤化合物Ｃとミドスタウリンとの組み合わせが相乗的であることが示される。ミドスタウリン曝露後のｈＢＩＭペプチドに応答したＢｉｍレベルの上昇及びミトコンドリアプライミングの増加は、Ｂｉｍがミドスタウリン／Ｓ６３８４５媒介致死において機能的役割を果たす可能性を示唆している。
【0088】
実施例３：Ｂａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ及びＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ細胞の細胞生存率アッセイ及びＢＬＩＳＳ指数
マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ及びＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ細胞（８×１０５個/ウェル）を９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地中で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。対照細胞には、ＤＭＳＯを含有する培地 １００μLを受けさせた（ＤＭＳＯの体積は、４×溶液を調製するのに使用されたミドスタウリン及びＳ６３８４５ストックの体積の合計に相当した）。細胞を、単独で又は組み合わせて与えられる薬剤と共に２４時間インキュベーションした。細胞生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。薬剤の組み合わせ効果の分析を、CalcuSyn（BioSoft, Ferguson, MO, USA）ソフトウェアにより計算された組み合わせ指数（ＣＩ）を使用して行った。１超、１及び１未満のＣＩはそれぞれ、相乗作用、相加効果及び拮抗作用を示す。
マウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ及びＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ細胞（８×１０５個/ウェル）を９６ウェルプレートにおいて、１０％ ＦＢＳ（Sigma）及び１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Sigma）を含有する完全ＲＰＭＩ培地 １００μL中に播種した。ミドスタウリン及びＳ６３８４５を完全ＲＰＭＩ培地中で希釈し、培地 ５０μL中で調製された４×濃縮溶液として与えた。対照細胞には、ＤＭＳＯを含有する培地 １００μLを受けさせた（ＤＭＳＯの体積は、４×溶液を調製するのに使用されたミドスタウリン及びＳ６３８４５ストックの体積の合計に相当した）。細胞を、単独で又は組み合わせて与えられる薬剤と共に２４時間インキュベーションした。細胞生存率を、CellTiter-Glo発光アッセイ（Promega）を製造メーカーの説明書に従って使用して測定した。簡潔に、細胞をピペッティングにより穏やかに混合し、細胞懸濁液 ３５μLを白色不透明な９６ウェルプレートに移した。次に、ＰＢＳ中で１：３に希釈したCellTiter-Glo試薬 ８０μLを各ウェルに加え、細胞をプレートシェーカーにおいて、暗所で３０分間インキュベーションした。発光を、Tekanプレートリーダー（Infinite m200 pro）を使用して読み取った。薬剤の組み合わせ効果の分析を、CalcuSyn（BioSoft, Ferguson, MO, USA）ソフトウェアにより計算された組み合わせ指数（ＣＩ）を使用して行った。１超、１及び１未満のＣＩはそれぞれ、相乗作用、相加効果及び拮抗作用を示す。
【0089】
結果
図１５及び図１６に、大規模薬剤相乗作用ＢＬＩＳＳ独立モデルにより決定されたマウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるＳ６３８４５とミドスタウリンとの間の相乗的相互作用を示す。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を２４時間後に評価した（ヒートマップ、左パネル）。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わし、一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
図１５及び図１６に、大規模薬剤相乗作用ＢＬＩＳＳ独立モデルにより決定されたマウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－ＩＴＤ細胞におけるＳ６３８４５とミドスタウリンとの間の相乗的相互作用を示す。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を２４時間後に評価した（ヒートマップ、左パネル）。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わし、一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
【0090】
図１７及び図１８に、大規模薬剤相乗作用ＢＬＩＳＳ独立モデルにより決定されたマウスＢａ／Ｆ３ ＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ細胞におけるＳ６３８４５とミドスタウリンとの間の相乗的相互作用を示す。細胞を各化合物の９つの２倍連続希釈液で、個々に又はチェッカーボード様式での全ての可能な順列でのいずれかで処理した。細胞増殖を２４時間後に評価した（ヒートマップ、左パネル）。各用量組み合わせについてのＢＬＩＳＳ指数値＞０は、相乗作用を表わし、一方、ＢＬＩＳＳ指数値＜０は、拮抗作用を表わす。
【0091】
Ｓ６３８４５とミドスタウリンとの組み合わせにより、ＦＬＴ３のチロシンキナーゼドメイン（ＴＫＤ）内にＦＬＴ３－ＩＴＤ又はＦＬＴ３－Ｄ８３５Ｙ点突然変異のいずれかを発現しているマウスＢａ／Ｆ３セルにおいて、顕著な相乗作用が引き起こされた。後者の観測から、Ｓ６３８４５／ミドスタウリンの組み合わせは、ＦＬＴ３阻害剤処置に抵抗性を与えることが臨床的に示されているＦＬＴ３ ＴＫＤ突然変異の存在においてさえも、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異体にかなりの有効性を提供する可能性があることが示唆される。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【国際調査報告】