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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-18
(54)【発明の名称】治療用ＳＩＲＰα抗体
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220111BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20220111BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20220111BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20220111BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20220111BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20220111BHJP
C12Q 1/02 20060101ALI20220111BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220111BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220111BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220111BHJP
G01N 33/574 20060101ALI20220111BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20220111BHJP
G01N 33/531 20060101ALI20220111BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C12N15/62 Z
C07K16/28
C07K16/46
C07K19/00
C12P21/08
C12Q1/02
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61P35/00
A61P35/02
G01N33/574 D
G01N33/53 V
G01N33/531 A
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021525789
(86)(22)【出願日】2019-11-13
(85)【翻訳文提出日】2021-07-06
(86)【国際出願番号】 US2019061278
(87)【国際公開番号】W WO2020102422
(87)【国際公開日】2020-05-22
(31)【優先権主張番号】62/820,718
(32)【優先日】2019-03-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/767,509
(32)【優先日】2018-11-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/886,872
(32)【優先日】2019-08-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/931,746
(32)【優先日】2019-11-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】521202743
【氏名又は名称】アーチ オンコロジー，インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100079108
【弁理士】
【氏名又は名称】稲葉 良幸
(74)【代理人】
【識別番号】100109346
【弁理士】
【氏名又は名称】大貫 敏史
(74)【代理人】
【識別番号】100117189
【弁理士】
【氏名又は名称】江口 昭彦
(74)【代理人】
【識別番号】100134120
【弁理士】
【氏名又は名称】内藤 和彦
(72)【発明者】
【氏名】プーロ，ロビン
(72)【発明者】
【氏名】マンニング，パメラ，ティー．
(72)【発明者】
【氏名】カール，ロバート，ダブリュ．
(72)【発明者】
【氏名】ヒービッシュ，ロナルド，アール．
(72)【発明者】
【氏名】カポッシア，ベンジャミン，ジェイ．
(72)【発明者】
【氏名】アンドレジェバ，ガブリエラ
【テーマコード（参考）】
4B063
4B064
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B063QA01
4B063QA18
4B063QA19
4B063QQ02
4B063QQ08
4B063QQ79
4B063QR02
4B063QR48
4B063QR56
4B063QR58
4B063QS28
4B063QS33
4B063QX02
4B064AG27
4B064CA10
4B064CA19
4B064CA20
4B064CC24
4B064DA01
4C085AA13
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB11
4C085EE01
4C085EE03
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA22
4H045EA28
4H045EA51
4H045FA74
(57)【要約】
【課題】治療用ＳＩＲＰα抗体に関する。
【解決手段】多重特異性ＳＩＲＰα抗体を含む、異なる機能プロフィールを有する抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体（抗ＳＩＲＰαｍＡｂ）が、関連組成物、並びに固形癌及び血液癌の予防及び治療のための治療薬として抗ＳＩＲＰαｍＡｂを使用する方法と同様に提供される。例示的な抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体のアミノ酸配列も提供される。
【選択図】なし
【解決手段】多重特異性ＳＩＲＰα抗体を含む、異なる機能プロフィールを有する抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体（抗ＳＩＲＰαｍＡｂ）が、関連組成物、並びに固形癌及び血液癌の予防及び治療のための治療薬として抗ＳＩＲＰαｍＡｂを使用する方法と同様に提供される。例示的な抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体のアミノ酸配列も提供される。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）及び３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）を含む、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３が、【表1】
から選択され、且つＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３が、
【表2】
から選択される、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項2】
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片がキメラであるか、又はヒト化されている、請求項１に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項3】
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の組合せを含み、前記組合せが、ｉ． 配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号６４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｉ． 配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号６５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｉｉ． 配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号６６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｖ． 配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号６７を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖ． 配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖｉ． 配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号６９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖｉｉ． 配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖｉｉｉ． 配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｘ． 配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘ． 配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉ． 配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｉ． 配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｉｉ． 配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｖ． 配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖ． 配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖｉ． 配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖｉｉ． 配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖｉｉｉ． 配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｘ． 配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘ． 配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉ． 配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｉ． 配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｉｉ． 配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７７を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｖ． 配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖ． 配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖｉ． 配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号８０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖｉｉ． 配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖｉｉｉ． 配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｘ． 配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号８０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘ． 配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘｉ． 配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘｉｉ． 配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号８０を含む軽鎖可変ドメイン；並びに
ｘｘｘｉｉｉ． 配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン及びアミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖可変ドメイン
からなる群から選択される、請求項１又は２に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項4】
ｉ． 配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号９８を含む軽鎖；ｉｉ． 配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号９９を含む軽鎖；
ｉｉｉ． 配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１００を含む軽鎖；
ｉｖ． 配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｖ． 配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｖｉ． 配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｖｉｉ． 配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｖｉｉｉ． 配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｉｘ． 配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｘ． 配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｘｉ． 配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｘｉｉ． 配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｘｉｉｉ． 配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｘｉｖ． 配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｘｖ． 配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｘｖｉ． 配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０４を含む軽鎖；
ｘｖｉｉ． 配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０５を含む軽鎖；
ｘｖｉｉｉ． 配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０６を含む軽鎖；
ｘｉｘ． 配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０７を含む軽鎖；
ｘｘ． 配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０５を含む軽鎖；
ｘｘｉ． 配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０６を含む軽鎖；
ｘｘｉｉ． 配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０７を含む軽鎖；
ｘｘｉｉｉ． 配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０５を含む軽鎖；
ｘｘｉｖ． 配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０６を含む軽鎖；
ｘｘｖ． 配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０７を含む軽鎖；並びに
ｘｘｖｉ． 配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖及びアミノ酸配列配列番号１０８を含む軽鎖
からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖及び少なくとも１つの軽鎖を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項5】
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ｑ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ、ＩｇＧ４ ＰＥ及びこれらの変異体から選択されるＩｇＧアイソタイプを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項6】
ヒトＳＩＲＰαに加えてヒトＳＩＲＰγに結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項7】
ヒトＳＩＲＰαに選択的に結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項8】
抗腫瘍活性を示す、請求項１～７のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項9】
ヒト腫瘍細胞の食作用を増大させる、請求項１～８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項10】
前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が二重特異性抗体である、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項11】
前記二重特異性抗体が第１の抗原及び第２の抗原を認識し、前記第１の抗原がＳＩＲＰαであり、前記第２の抗原がＣＤ４７発現細胞のマーカーである、請求項１０に記載の二重特異性抗体。
【請求項12】
前記二重特異性抗体が第１の抗原及び第２の抗原を認識し、前記第１の抗原がＳＩＲＰαであり、前記第２の抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＨＥＲ２、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、ＥＧＦＲ、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９／ＣＤ３、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）、及びＧＤ２から選択される、請求項１０に記載の二重特異性抗体。
【請求項13】
ＣＤ４７（分化抗原群４７）、ＣＤ７０（分化抗原群７０）、ＣＤ２００（ＯＸ－２膜糖タンパク質、分化抗原群２００）、ＣＤ１５４（分化抗原群１５４、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０リガンド、分化抗原群４０リガンド）、ＣＤ２２３（リンパ球活性化遺伝子３、ＬＡＧ３、分化抗原群２２３）、ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質、活性化誘導性ＴＮＦＲファミリー受容体、ＡＩＴＲ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１８）、ＣＤ２０（分化抗原群）、ＣＤ２８（分化抗原群２８）、ＣＤ４０（分化抗原群４０、Ｂｐ５０、ＣＤＷ４０、ＴＮＦＲＳＦ５、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５、ｐ５０）、ＣＤ８６（Ｂ７－２、分化抗原群８６）、ＣＤ１６０（分化抗原群１６０、ＢＹ５５、ＮＫ１、ＮＫ２８）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ、分化抗原群２５８、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４、ＴＮＦＳＦ１４、ヘルペスウイルス侵入メディエータリガンド（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４、ヘルペスウイルス侵入メディエータ、分化抗原群２７０、ＬＩＧＨＴＲ、ＨＶＥＡ）、ＣＤ２７５（ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳリガンド、誘導性Ｔ細胞共刺激因子リガンド、分化抗原群２７５）、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７ホモログ３、分化抗原群２７６）、ＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０リガンド）、Ｂ７－Ｈ４（Ｂ７ホモログ４、ＶＴＣＮ１、Ｖセットドメイン含有Ｔ細胞活性化インヒビター１）、ＧＩＴＲＬ（グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体リガンド、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲリガンド）、４－１ＢＢＬ（４－１ＢＢリガンド）、ＣＤ３（分化抗原群３、Ｔ３Ｄ）、ＣＤ２５（ＩＬ２Ｒα、分化抗原群２５、インターロイキン－２受容体α鎖、ＩＬ－２受容体α鎖）、ＣＤ４８（分化抗原群４８、Ｂリンパ球活性化マーカー、ＢＬＡＳＴ－１、シグナル伝達リンパ球活性化分子２、ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ６６ａ（Ｃｅａｃａｍ－１、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１、胆汁糖タンパク質、ＢＧＰ、ＢＧＰ１、ＢＧＰＩ、分化抗原群６６ａ）、ＣＤ８０（Ｂ７－１、分化抗原群８０）、ＣＤ９４（分化抗原群９４）、ＮＫＧ２Ａ（ナチュラルキラー群２Ａ、キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＤメンバー１、ＫＬＲＤ１）、ＣＤ９６（分化抗原群９６、ＴＡｃｔＩＬＥ、Ｔ細胞活性化増大後期発現）、ＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２、ネクチン、ポリオウイルス受容体関連２、ヘルペスウイルス侵入メディエータＢ、ＨＶＥＢ、ネクチン－２、分化抗原群１１２）、ＣＤ１１５（ＣＳＦ１Ｒ、コロニー刺激因子１受容体、マクロファージコロニー刺激因子受容体、Ｍ－ＣＳＦＲ、分化抗原群１１５）、ＣＤ２０５（ＤＥＣ－２０５、ＬＹ７５、リンパ球抗原７５、分化抗原群２０５）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１、分化抗原群２２６、ＤＮＡＸアクセサリー分子－１、ＰＴＡ１、血小板及びＴ細胞活性化抗原１）、ＣＤ２４４（分化抗原群２４４、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４）、ＣＤ２６２（ＤＲ５、ＴｒａｉｌＲ２、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、分化抗原群２６２、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＩＣＫ２、ＴＲＩＣＫＢ、ＺＴＮＦＲ９、ＴＲＩＣＫ２Ａ、ＴＲＩＣＫ２Ｂ）、ＣＤ２８４（Ｔｏｌｌ様受容体－４、ＴＬＲ４、分化抗原群２８４）、ＣＤ２８８（Ｔｏｌｌ様受容体－８、ＴＬＲ８、分化抗原群２８８）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、ＴＮＦＳＦ１５（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１５、血管内皮増殖インヒビター、ＶＥＧＩ、ＴＬ１Ａ）、ＴＤＯ２（トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ、ＴＰＨ２、ＴＲＰＯ）、ＩＧＦ－１Ｒ（１型インスリン様増殖因子）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＴＭＩＧＤ２（膜貫通及び免疫グロブリンドメイン含有タンパク質２）、ＲＧＭＢ（ＲＧＭドメインファミリー、メンバーＢ）、ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶ－ドメイン免疫グロブリン含有抑制因子、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７ホモログ５）、ＢＴＮＬ２（ブチロフィリン様タンパク質２）、Ｂｔｎ（ブチロフィリンファミリー）、ＴＩＧＩＴ（Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ）、シグレック（シアル酸結合Ｉｇ様レクチン）、すなわち、ＳＩＧＬＥＣ－１５、ニューロフィリン、ＶＥＧＦＲ（血管内皮増殖因子受容体）、ＩＬＴファミリー（ＬＩＲｓ、免疫グロブリン様転写物ファミリー、白血球免疫グロブリン様受容体）、ＮＫＧファミリー（ナチュラルキラー群ファミリー、Ｃ型レクチン膜貫通受容体）、ＭＩＣＡ（ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ）、ＴＧＦβ（トランスフォーミング増殖因子β）、ＳＴＩＮＧ経路（インターフェロン遺伝子経路の刺激因子）、アルギナーゼ（アルギニンアミジナーゼ、カナバナーゼ、Ｌ－アルギナーゼ、アルギニントランスアミジナーゼ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体変異体ＩＩＩ）、及びＨＨＬＡ２（Ｂ７－Ｈ７、Ｂ７ｙ、ＨＥＲＶ－Ｈ ＬＴＲ関連タンパク質２、Ｂ７ホモログ７）から選択される細胞標的に対する第２の抗体、ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１、ＰＤ－１、ＣＤ２７９、分化抗原群２７９）、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７ホモログ１、プログラム死リガンド１、ＣＤ２７４、分化抗原群２７４）、ＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ、プログラム細胞死１リガンド２、ＰＤＣＤ１ＬＧ２、ＣＤ２７３、分化抗原群２７３）、ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４、ＣＤ１５２、分化抗原群１５２）、ＢＴＬＡ（Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ、ＣＤ２７２、分化抗原群２７２）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ、ＩＤＯ１）、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン－３、ＫＩＭ－３、腎臓傷害分子３、ＴＩＭＤ－３、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン－ドメイン３）、Ａ２Ａアデノシン受容体（ＡＤＯ受容体）、ＣＤ３９（エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ－１、分化抗原群３９、ＥＮＴＰＤ１）、及びＣＤ７３（エクト－５’－ヌクレオチダーゼ、５’－ヌクレオチダーゼ、５’－ＮＴ、分化抗原群７３）、ＣＤ２７（分化抗原群２７）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８、分化抗原群２７８、誘導性Ｔ細胞共刺激因子）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、分化抗原群１３７、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９、ＴＮＦＲＳＦ９）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４、分化抗原群１３４）、ＴＮＦＳＦ２５（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー２５）、ＩＬ－１０（インターロイキン－１０、ヒトサイトカイン合成阻害因子、ＣＳＩＦ）、及びガレクチンの阻害剤と組み合わされて、ヒト腫瘍細胞の食作用を増大させる、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項14】
腫瘍細胞上の抗原を標的とするオプソニン化モノクローナル抗体と組み合わされて、ヒト腫瘍細胞の食作用を増大させる、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項15】
前記オプソニン化モノクローナル抗体が、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、オファツムマブ（抗ＣＤ２０）、デノスマブ（抗ＲＡＮＫＬ）、ペルツズマブ（抗ＨＥＲ２）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２）、エロツズマブ（ＳＬＡＭＦ７）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）、アベルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）、デュルバルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）、ネシツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、ダラツムマブ（抗ＣＤ３８）、オビヌツズマブ（抗ＣＤ２０）、ブリナツモマブ（抗ＣＤ１９／ＣＤ３）、ジヌツキシマブ（抗ＧＤ２）から選択される、請求項１４に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項16】
前記オプソニン化モノクローナル抗体が、ＣＤ２０、ＥＧＦＲ、及びＰＤ－Ｌ１から選択される腫瘍細胞上の抗原を標的とする、請求項１４に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項17】
感受性癌を予防又は治療するための薬剤の製造において使用するための、請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項18】
ヒトの感受性癌を予防又は治療するための方法であって、有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む方法。
【請求項19】
前記癌が、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌（大腸癌）、直腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌（非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌）、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、肝細胞癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌、腎細胞癌、甲状腺癌、頭部及び頚部の扁平上皮癌（頭部及び頚部癌）、精巣癌、内分泌腺癌、副腎腺癌、脳下垂体癌、皮膚癌、軟組織の癌、血管の癌、脳腫瘍、神経癌、眼の癌、髄膜癌、中咽頭癌、下咽頭癌、子宮頸癌、及び子宮癌、膠芽腫、髄芽腫、星細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、ガストリノーマ、神経芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、並びに肉腫からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記白血病が、全身性肥満細胞症、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍、骨髄異形成症候群、単球性白血病、及びプラズマ細胞白血病病から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項21】
前記リンパ腫が、ホジキンリンパ腫、並びに例えば、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大病変（ｂｕｌｋｙ ｄｉｓｅａｓ）ＮＨＬ、及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）などの非ホジキンリンパ腫をはじめとする、組織球性リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫から選択されることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項22】
前記肉腫が、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、及び軟骨肉腫から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項23】
ヒトの感受性癌を予防又は治療するための方法であって、ＳＩＲＰαに結合してＳＩＲＰαとＣＤ４７との結合を防止する請求項１～９のいずれか一項に記載の第１のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、ＣＤ４７に選択的に結合する第２の抗体とを投与することを含む方法。
【請求項24】
ヒトの感受性癌を予防又は治療するための方法であって、ＳＩＲＰαに結合してＳＩＲＰαとＣＤ４７との結合を防止する請求項１～９のいずれか一項に記載の第１のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、ＥＧＦＲに選択的に結合する第２の抗体とを投与することを含む方法。
【請求項25】
ヒトの感受性癌を予防又は治療するための方法であって、ＳＩＲＰαに結合してＳＩＲＰαとＣＤ４７との結合を防止する請求項１～９のいずれか一項に記載の第１のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、ＰＤ－１に選択的に結合する第２の抗体とを投与することを含む方法。
【請求項26】
ヒトの感受性癌を予防又は治療するための方法であって、ＳＩＲＰαに結合してＳＩＲＰαとＣＤ４７との結合を防止する請求項１～９のいずれか一項に記載の第１のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、ＰＤ－Ｌ１に選択的に結合する第２の抗体とを投与することを含む方法。
【請求項27】
ヒトの感受性癌を予防又は治療するための方法であって、ＳＩＲＰαに結合してＳＩＲＰαとＣＤ４７との結合を防止する請求項１～９のいずれか一項に記載の第１のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、ＣＴＬＡ－４に選択的に結合する第２の抗体とを投与することを含む方法。
【請求項28】
請求項１乃至５の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を使用して、腫瘍及び／又は免疫細胞中のＳＩＲＰα発現を検定する方法において、配列番号１２１及び／又は配列番号１２２の配列内のエピトープと特異的に結合することを特徴とする、方法。
【請求項29】
請求項２８に記載の方法において、患者のサンプルを取得するステップ、配列番号１２１及び／又は配列番号１２２の配列内のエピトープと特異的に結合するモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片と前記患者のサンプルを接触させるステップ、及び前記抗体と前記患者のサンプルとの結合を検定するステップを含み、ここで、前記抗体と前記患者のサンプルとの結合が、患者のサンプル中のＳＩＲＰα発現を示すことを特徴とする、方法。
【請求項30】
請求項２８に記載の方法において、前記腫瘍が、癌腫瘍又は転移性癌腫瘍であることを特徴とする、方法。
【請求項31】
請求項２８に記載の方法において、前記抗体、又はその抗原結合断片と前記患者のサンプルとの結合を検定する前記ステップが、組織サンプルの免疫組織化学染色標識を使用することを特徴とする、方法。
【請求項32】
請求項２８に記載の方法において、前記抗体又はその抗原結合断片と前記患者のサンプルとの結合を検定する前記ステップが、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用することを特徴とする、方法。
【請求項33】
請求項２８に記載の方法において、前記抗体又はその抗原結合断片と前記患者のサンプルとの結合の前記アッセイが、フローサイトメトリーを使用することを特徴とする、方法。
【請求項34】
請求項２８に記載の方法において、前記患者のサンプルが、腫瘍細胞を含み、前記アッセイが、前記抗体又はその抗原結合断片と前記患者のサンプル中の腫瘍細胞との結合を検定するステップを含むことを特徴とする、方法。
【請求項35】
請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、薬学的又は生理学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
開示の分野
本出願は、２０１８年１１月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／７６７，５０９号、２０１９年３月１９日に出願された同第６２／８２０，７１８号、２０１９年８月１４日に出願された同第６２／８８６，８７２号、及び２０１９年１１月６日に出願された同第６２／９３１，７４６号の優先権の利益を主張するものであり、これらの開示は、あたかもその全体が本明細書中に記載されているかのように参照によって本明細書に援用される。
本出願は、２０１８年１１月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／７６７，５０９号、２０１９年３月１９日に出願された同第６２／８２０，７１８号、２０１９年８月１４日に出願された同第６２／８８６，８７２号、及び２０１９年１１月６日に出願された同第６２／９３１，７４６号の優先権の利益を主張するものであり、これらの開示は、あたかもその全体が本明細書中に記載されているかのように参照によって本明細書に援用される。
【0002】
本開示は、免疫療法の分野に関する。本開示は、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を妨害し、腫瘍細胞の食作用を増強し、免疫応答の免疫調節を引き起こす抗ＳＩＲＰα抗体（抗ＳＩＲＰα）と、抗ＳＩＲＰα抗体を作製する方法と、血液癌及び固形癌の予防及び治療のための治療薬として抗ＳＩＲＰα抗体を使用する方法とを提供する。
【背景技術】
【0003】
背景
Ｔ細胞免疫応答の細胞傷害活性を増強するために、Ｔ細胞チェックポイント、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＣＴＬＡ－４を含む適応免疫を標的とする治療抗体は、転移性疾患を有する患者の長期寛解、又はさらに治癒の可能性をもたらした（Hodi 2010、McDermott 2015）。良好な結果にもかかわらず、これらのチェックポイント阻害剤に応答できない（一次耐性）か、或いは応答するが最終的には疾患の進行を起こす（獲得耐性）大きな患者集団が残されている（Pitt 2016、Restifo 2016、Sharma 2017）。最近の研究では、耐性機序は、独特の腫瘍抗原タンパク質の欠如、又は腫瘍抗原提示の阻害を含む腫瘍細胞に内因的なものと、浸潤性Ｔ細胞の不在、冗長な阻害性チェックポイント、及び／又は腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の存在を含む腫瘍細胞に外因的なものとの両方であり得ることが示唆される（Sharma 2017）。チェックポイント阻害剤に感受性があると考えられる腫瘍でさえ、或いは抗ＣＴＬＡ－４及び抗ＰＤ－１／ＰＤＬ－１剤と組み合わせた場合でも、患者の約５０％は腫瘍の縮小を経験せず、治療患者全てについて、治療期間又は無進行生存の中央値は、比較的短い約２～５ヶ月に留まる（Kazandjian, 2016）。さらに、最も多くみられる固形腫瘍のいくつか及び血液悪性腫瘍の大部分は、これらのチェックポイント阻害剤により期待外れの結果を示した。特に、ホルモン受容体陽性の乳癌、大腸癌（非マイクロサテライト不安定性）及び前立腺癌はこのタイプの免疫操作に感受性がないと思われ、異なる免疫療法アプローチの恩恵を受け得る（Le 2015、Dirix 2015、Topalian 2012、Graff 2016）。これらの知見は、適応免疫応答に加えて自然免疫応答を活性化して、臨床結果をさらに改善するために、付加的なチェックポイントを標的とする代替的又は相乗的なアプローチの必要性を強調する。腫瘍細胞及び骨髄細胞（マクロファージ、樹状細胞、単球由来のサプレッサー細胞、顆粒球）上には自然免疫応答のいくつかのチェックポイントが存在し、これらは、腫瘍の進行、転移及び全体の結果に影響を与える腫瘍微小環境の重要な細胞成分である（Barclay and van den Berg 2014、Yanagita 2017）。
Ｔ細胞免疫応答の細胞傷害活性を増強するために、Ｔ細胞チェックポイント、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＣＴＬＡ－４を含む適応免疫を標的とする治療抗体は、転移性疾患を有する患者の長期寛解、又はさらに治癒の可能性をもたらした（Hodi 2010、McDermott 2015）。良好な結果にもかかわらず、これらのチェックポイント阻害剤に応答できない（一次耐性）か、或いは応答するが最終的には疾患の進行を起こす（獲得耐性）大きな患者集団が残されている（Pitt 2016、Restifo 2016、Sharma 2017）。最近の研究では、耐性機序は、独特の腫瘍抗原タンパク質の欠如、又は腫瘍抗原提示の阻害を含む腫瘍細胞に内因的なものと、浸潤性Ｔ細胞の不在、冗長な阻害性チェックポイント、及び／又は腫瘍微小環境内の免疫抑制細胞の存在を含む腫瘍細胞に外因的なものとの両方であり得ることが示唆される（Sharma 2017）。チェックポイント阻害剤に感受性があると考えられる腫瘍でさえ、或いは抗ＣＴＬＡ－４及び抗ＰＤ－１／ＰＤＬ－１剤と組み合わせた場合でも、患者の約５０％は腫瘍の縮小を経験せず、治療患者全てについて、治療期間又は無進行生存の中央値は、比較的短い約２～５ヶ月に留まる（Kazandjian, 2016）。さらに、最も多くみられる固形腫瘍のいくつか及び血液悪性腫瘍の大部分は、これらのチェックポイント阻害剤により期待外れの結果を示した。特に、ホルモン受容体陽性の乳癌、大腸癌（非マイクロサテライト不安定性）及び前立腺癌はこのタイプの免疫操作に感受性がないと思われ、異なる免疫療法アプローチの恩恵を受け得る（Le 2015、Dirix 2015、Topalian 2012、Graff 2016）。これらの知見は、適応免疫応答に加えて自然免疫応答を活性化して、臨床結果をさらに改善するために、付加的なチェックポイントを標的とする代替的又は相乗的なアプローチの必要性を強調する。腫瘍細胞及び骨髄細胞（マクロファージ、樹状細胞、単球由来のサプレッサー細胞、顆粒球）上には自然免疫応答のいくつかのチェックポイントが存在し、これらは、腫瘍の進行、転移及び全体の結果に影響を与える腫瘍微小環境の重要な細胞成分である（Barclay and van den Berg 2014、Yanagita 2017）。
【0004】
ＣＤ１７２ａ、ＢＩＴ又はＳＨＰＳ－１としても知られているシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）－α又はＳＩＲＰαは、密接に関連するＳＩＲＰタンパク質のＳＩＲＰ対合受容体ファミリーのメンバーである。ＳＩＲＰαは、主に、マクロファージ、樹状細胞及び顆粒球を含む造血細胞によって発現され、特に脳内のニューロン、グリア、平滑筋細胞、並びに内皮及び一部の腫瘍細胞においても発現される（Barclay and van den Berg 2014）。ＳＩＰＲαは、３つのＩｇ様ドメインを含有する細胞外ドメインと、免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する細胞質領域とを有する膜貫通タンパク質である。ヒトＳＩＲＰαをコードする遺伝子は、表面アミノ酸の変化を伴うがそのリガンド分化抗原群４７（ＣＤ４７）への結合には影響を与えないと思われる、ＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２で識別される２つの共通変異体を有する多形である（Barclay and van den Berg 2014）。骨髄細胞により発現されるＳＩＲＰαと、多数の腫瘍細胞及び正常細胞上で発現又は過剰発現されるＣＤ４７との相互作用は、接着、遊走、活性化及び阻害活性を含む骨髄機能を制御する自然応答の重要な免疫チェックポイントである。ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用は、阻害性「don’t eat meシグナル」を食細胞へ送る標的細胞のマクロファージ及び樹状細胞食作用を制御する。ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合は阻害性シグナル伝達カスケードを開始させ、その細胞質ＩＴＩＭのリン酸化の後に食作用の阻害をもたらし（Oldenborg 2000、Oldenborg 2001、Okazawa 2005）、Ｓｒｃ相同性ドメイン含有タンパク質チロシンホスファターゼであるＳＨＰ－１及びＳＨＰ－２の補充及び結合をもたらし（Veillette 1998、Oldenborg 2001）、非筋肉性ミオシンＩＩＡ及び最終的には食細胞機能の阻害をもたらす（Tsai and Discher 2008、Barclay and van den Berg 2014、Murata 2014、Veillette and Chen 2018、Matazaki 2009）。「don’t eat me」シグナルとしてのＣＤ４７の作用の重要な結果は、「自身のマーカー」としてのその役割である。これは自身の食作用の有意な妨害を提供し、それに続く自己免疫応答を遮断する（Oldenborg, 2002、Oldenborg 2004）。癌細胞はＣＤ４７を使用して、「自己（selfness）」の中に自分自身を遮蔽し、結果的に、自然及び適応免疫系の両方を逃れる。マクロファージ及び樹状細胞などの自然免疫細胞上のＳＩＲＰαと、腫瘍細胞上のＣＤ４７との相互作用を遮断することは、癌治療における実行可能な標的として浮上している。前臨床データにより、抗ＣＤ４７抗体と同様に、ＳＩＲＰα／ＣＤ４７相互作用を遮断する抗ＳＩＲＰα抗体は、単独療法として又は他の薬剤と組み合せて、マウス腫瘍モデルにおいて抗腫瘍効果を示すことが示された（Gauttier, 2017；Ring, 2017；Yanigita, 2017；Poirier, 2018；及びGuattier, 2018）。重要なことには、ＳＩＲＰα／ＣＤ４７相互作用の中断後の自然免疫応答に加えて、適応免疫応答の発生が、強い抗腫瘍応答を得るために極めて重要であると思われる（Tseng 2013、Li 2015、Xu 2017）。
【0005】
ＤＣ細胞上のＳＩＲＰαの発現、及びＴ細胞上のＣＤ４７とのその相互作用は、適応免疫応答の誘発において重要であると思われる。ＳＩＲＰα／ＣＤ４７相互作用の遮断は、ＤＣが抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を刺激する能力に影響を与えることが報告され、これは、腫瘍ＤＮＡに対するＤＣ媒介性の応答の増強と相関した（Liu 2015、Xu 2017）。
【0006】
対合受容体のＳＩＲＰファミリーの別のメンバーであるＳＩＲＰ－γはヒトＴ細胞の表面で選択的に発現され（しかし、齧歯類では発現されない）、４つのアミノ酸からなる短い細胞質領域を有する。ＳＩＲＰ－γもＣＤ４７に結合し、Ｔ細胞とＡＰＣとの間の接着を媒介するため、並びに増殖及び活性化を含むＴ細胞機能のために重要であると思われる（Barclay and van den Berg 2014；及びPiccio, 2005）。したがって、ＳＩＲＰ－γとＣＤ４７との間ではなく、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用の遮断は、Ｔ細胞機能の保護に対する利点を提供し得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0007】
本開示は、異なる機能プロフィールを有する抗ＳＩＲＰαｍＡｂを記載する。本開示の抗体は、固形癌及び血液癌の予防及び治療のための治療薬としての抗ＳＩＲＰαｍＡｂの使用を含む、ヒトのＳＩＲＰαに関連する疾患及び状態を治療するための種々の治療法において有用である。また本開示の抗体は、組織サンプル中の抗ＳＩＲＰαの発現レベルを決定するための診断薬としても有用である。本開示の実施形態は、単離抗体及びその免疫学的に活性な結合断片；抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体、好ましくは、前記抗体のキメラ型又はヒト化型の１つ又は複数を含む医薬組成物；並びにこのような抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体の治療的使用方法を含む。
【0008】
本開示の実施形態はｍＡｂ又はその抗原結合断片を含み、これらは、特定の構造的特徴、すなわちＣＤＲ、又は重鎖及び軽鎖可変ドメイン全体、又は重鎖及び軽鎖全体のいずれかの規定のアミノ酸配列を参照することによって定義される。本明細書に開示されるこれらの抗体の全ては、ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰγ、又はＳＩＲＰα及びＳＩＲＰγのいずれかに結合する。
【0009】
モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片は、本明細書に記載するように、少なくとも１つ、通常３つのＣＤＲ配列を、通常、ヒト可変領域又は単離されたＣＤＲペプチド由来のフレームワーク配列と組み合わせて含んでもよい。１部の実施形態では、抗体は、可変領域フレームワーク（限定はしないが、マウス又はヒト可変領域フレームワークであってもよい）に位置する本明細書に記載の３つの軽鎖ＣＤＲ配列を含む少なくとも１つの軽鎖と、可変領域フレームワーク（限定はしないが、ヒト又はマウス可変領域フレームワークであってもよい）に位置する本明細書に記載の３つの重鎖ＣＤＲ配列を含む少なくとも１つの重鎖とを含む。
【0010】
ある実施形態では、６つのＣＤＲの組合せは、限定されないが、以下：
配列番号３３を含むＨＣＤＲ１、配列番号３４を含むＨＣＤＲ２、配列番号３５を含むＨＣＤＲ３、配列番号１を含むＬＣＤＲ１、配列番号２を含むＬＣＤＲ２、配列番号３を含むＬＣＤＲ３；
配列番号３６を含むＨＣＤＲ１、配列番号３７を含むＨＣＤＲ２、配列番号３８を含むＨＣＤＲ３、配列番号４を含むＬＣＤＲ１、配列番号５を含むＬＣＤＲ２、配列番号６を含むＬＣＤＲ３；
配列番号３９を含むＨＣＤＲ１、配列番号４０を含むＨＣＤＲ２、配列番号４１を含むＨＣＤＲ３、配列番号７を含むＬＣＤＲ１、配列番号８を含むＬＣＤＲ２、配列番号９を含むＬＣＤＲ３；
配列番号４２を含むＨＣＤＲ１、配列番号４３を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、配列番号１２を含むＬＣＤＲ３；
配列番号４５を含むＨＣＤＲ１、配列番号４６を含むＨＣＤＲ２、配列番号４７を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４を含むＬＣＤＲ２、配列番号１５を含むＬＣＤＲ３；
配列番号４８を含むＨＣＤＲ１、配列番号４９を含むＨＣＤＲ２、配列番号５０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７を含むＬＣＤＲ２、配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
配列番号５１を含むＨＣＤＲ１、配列番号５２を含むＨＣＤＲ２、配列番号５３を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０を含むＬＣＤＲ２、配列番号２１を含むＬＣＤＲ３。
配列番号５４を含むＨＣＤＲ１、配列番号５５を含むＨＣＤＲ２、配列番号５６を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３を含むＬＣＤＲ２、配列番号２４を含むＬＣＤＲ３。
配列番号３３を含むＨＣＤＲ１、配列番号３４を含むＨＣＤＲ２、配列番号３５を含むＨＣＤＲ３、配列番号１を含むＬＣＤＲ１、配列番号２を含むＬＣＤＲ２、配列番号３を含むＬＣＤＲ３；
配列番号３６を含むＨＣＤＲ１、配列番号３７を含むＨＣＤＲ２、配列番号３８を含むＨＣＤＲ３、配列番号４を含むＬＣＤＲ１、配列番号５を含むＬＣＤＲ２、配列番号６を含むＬＣＤＲ３；
配列番号３９を含むＨＣＤＲ１、配列番号４０を含むＨＣＤＲ２、配列番号４１を含むＨＣＤＲ３、配列番号７を含むＬＣＤＲ１、配列番号８を含むＬＣＤＲ２、配列番号９を含むＬＣＤＲ３；
配列番号４２を含むＨＣＤＲ１、配列番号４３を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、配列番号１１を含むＬＣＤＲ２、配列番号１２を含むＬＣＤＲ３；
配列番号４５を含むＨＣＤＲ１、配列番号４６を含むＨＣＤＲ２、配列番号４７を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４を含むＬＣＤＲ２、配列番号１５を含むＬＣＤＲ３；
配列番号４８を含むＨＣＤＲ１、配列番号４９を含むＨＣＤＲ２、配列番号５０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１６を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７を含むＬＣＤＲ２、配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
配列番号５１を含むＨＣＤＲ１、配列番号５２を含むＨＣＤＲ２、配列番号５３を含むＨＣＤＲ３、配列番号１９を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０を含むＬＣＤＲ２、配列番号２１を含むＬＣＤＲ３。
配列番号５４を含むＨＣＤＲ１、配列番号５５を含むＨＣＤＲ２、配列番号５６を含むＨＣＤＲ３、配列番号２２を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３を含むＬＣＤＲ２、配列番号２４を含むＬＣＤＲ３。
【0011】
配列番号５７を含むＨＣＤＲ１、配列番号５８を含むＨＣＤＲ２、配列番号５９を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６を含むＬＣＤＲ２、配列番号２７を含むＬＣＤＲ３。
【0012】
配列番号６０を含むＨＣＤＲ１、配列番号６１を含むＨＣＤＲ２、配列番号６２を含むＨＣＤＲ３、配列番号２８を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９を含むＬＣＤＲ２、配列番号３０を含むＬＣＤＲ３。
【0013】
配列番号４２を含むＨＣＤＲ１、配列番号４３を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、配列番号３１を含むＬＣＤＲ２、配列番号１２を含むＬＣＤＲ３。
【0014】
配列番号４２を含むＨＣＤＲ１、配列番号４３を含むＨＣＤＲ２、配列番号４４を含むＨＣＤＲ３、配列番号１０を含むＬＣＤＲ１、配列番号３１を含むＬＣＤＲ２、配列番号３２を含むＬＣＤＲ３。
【0015】
配列番号５７を含むＨＣＤＲ１、配列番号５８を含むＨＣＤＲ２、配列番号６３を含むＨＣＤＲ３、配列番号２５を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６を含むＬＣＤＲ２、配列番号２７を含むＬＣＤＲ３。
から選択される可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）の組合せが挙げられる。
から選択される可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）の組合せが挙げられる。
【0016】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、及び配列番号９７のアミノ酸配列、並びに列挙した配列の１つに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を示すアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む抗体又はその抗原結合断片を含む。代替的又は付加的に、抗体又はその抗原結合断片を含む抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、及び配列番号８０のアミノ酸配列、並びに列挙した配列の１つに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を示すアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み得る。
【0017】
上に挙げたＶＨドメイン及びＶＬドメイン配列群から選択されるＶＨドメイン及びＶＬドメインの考えられる全ての対合は許容され、ＶＨ及びＶＬドメインの特定の組合せが開示される。従って、抗ＳＩＲＰα抗体、又はその抗原結合断片は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の組合せを含むものであり、この組合せは、以下のものからなる群から選択される：
ｉ． 配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｉ． 配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｉｉ． 配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｖ． 配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６７を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖ． 配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖｉ． 配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖｉｉ． 配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖｉｉｉ． 配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｘ． 配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘ． 配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉ． 配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｉ． 配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｉｉ． 配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｖ． 配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖ． 配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖｉ． 配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖｉｉ． 配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖｉｉｉ． 配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｘ． 配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘ． 配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉ． 配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｉ． 配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｉｉ． 配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７７を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｖ． 配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖ． 配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖｉ． 配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号８０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖｉｉ． 配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖｉｉｉ． 配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｘ． 配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号８０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘ． 配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘｉ． 配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘｉｉ． 配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号８０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘｉｉｉ． 配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖可変ドメイン。
ｉ． 配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｉ． 配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｉｉ． 配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｖ． 配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６７を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖ． 配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖｉ． 配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号６９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖｉｉ． 配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｖｉｉｉ． 配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖可変ドメイン；
ｉｘ． 配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘ． 配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉ． 配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｉ． 配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｉｉ． 配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｖ． 配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖ． 配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖｉ． 配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖｉｉ． 配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｖｉｉｉ． 配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｉｘ． 配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘ． 配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉ． 配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｉ． 配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７６を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｉｉ． 配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７７を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｖ． 配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖ． 配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖｉ． 配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号８０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖｉｉ． 配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｖｉｉｉ． 配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｉｘ． 配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号８０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘ． 配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７８を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘｉ． 配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７９を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘｉｉ． 配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号８０を含む軽鎖可変ドメイン；
ｘｘｘｉｉｉ． 配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖可変ドメイン。
【0018】
ある実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変ドメインが、上の（ｉ）～（ｘｘｘｉｉｉ）に示される重鎖アミノ酸配列と、少なくとも８５％の配列同一性、又は少なくとも９０％の配列同一性、又は少なくとも９５％の配列同一性、又は少なくとも９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列を含み、並びに／又は軽鎖可変ドメインが、上の（ｉ）～（ｘｘｘｉｉｉ）に示される軽鎖アミノ酸配列と、少なくとも８５％の配列同一性、又は少なくとも９０％の配列同一性、又は少なくとも９５％の配列同一性、又は少なくとも９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインの組合せを含んでもよい。（ｉ）～（ｘｘｘｉｉｉ）の特定のＶＨ及びＶＬ対合又は部分的組合せを、これらの基準配列に対して特定のパーセンテージの配列同一性を有するＶＨ及びＶＬドメイン配列を有する抗ＳＩＲＰα抗体のために維持してもよい。
【0019】
抗体又はその抗原結合断片の重鎖及び／又は軽鎖可変ドメインが、基準配列に対する具体的な配列同一性パーセンテージによって定義される全ての実施形態について、ＶＨ及び／又はＶＬドメインは、相違がフレームワーク領域内にのみ存在するように、基準配列内に存在するＣＤＲ配列と同一のＣＤＲ配列を保持してもよい。
【0020】
別の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体、又はその抗原結合断片は、重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）の組合せを含むものであり、この組合せは、以下：
ｉ． 配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号９８を含む軽鎖；
ｉｉ． 配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号９９を含む軽鎖；
ｉｉｉ． 配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１００を含む軽鎖；
ｉｖ． 配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｖ． 配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｖｉ． 配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｖｉｉ． 配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｖｉｉｉ． 配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｉｘ． 配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｘ． 配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｘｉ． 配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｘｉｉ 配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｘｉｉｉ． 配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｘｉｖ． 配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｘｖ． 配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｘｖｉ． 配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０４を含む軽鎖；
ｘｖｉｉ． 配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０５を含む軽鎖；
ｘｖｉｉｉ． 配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０６を含む軽鎖；
ｘｉｘ． 配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０７を含む軽鎖；
ｘｘ． 配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０５を含む軽鎖；
ｘｘｉ． 配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０６を含む軽鎖；
ｘｘｉｉ． 配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０７を含む軽鎖；
ｘｘｉｉｉ． 配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０５を含む軽鎖；
ｘｘｉｖ． 配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０６を含む軽鎖；
ｘｘｖ． 配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０７を含む軽鎖；
ｘｘｖｉ． 配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０８を含む軽鎖；
から選択される。
ｉ． 配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号９８を含む軽鎖；
ｉｉ． 配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号９９を含む軽鎖；
ｉｉｉ． 配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１００を含む軽鎖；
ｉｖ． 配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｖ． 配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｖｉ． 配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｖｉｉ． 配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｖｉｉｉ． 配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｉｘ． 配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｘ． 配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｘｉ． 配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｘｉｉ 配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｘｉｉｉ． 配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
ｘｉｖ． 配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０２を含む軽鎖；
ｘｖ． 配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖；
ｘｖｉ． 配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０４を含む軽鎖；
ｘｖｉｉ． 配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０５を含む軽鎖；
ｘｖｉｉｉ． 配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０６を含む軽鎖；
ｘｉｘ． 配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０７を含む軽鎖；
ｘｘ． 配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０５を含む軽鎖；
ｘｘｉ． 配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０６を含む軽鎖；
ｘｘｉｉ． 配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０７を含む軽鎖；
ｘｘｉｉｉ． 配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０５を含む軽鎖；
ｘｘｉｖ． 配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０６を含む軽鎖；
ｘｘｖ． 配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０７を含む軽鎖；
ｘｘｖｉ． 配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０８を含む軽鎖；
から選択される。
【0021】
抗ＳＩＲＰαｍＡｂの様々な形態が開示される。例えば、抗ＣＤ４７ｍＡｂは、本明細書に開示されるように、ヒトフレームワークと、アイソタイプ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、より具体的には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の定常領域を有し、場合によっては、Ｆｃ受容体機能を改変する、若しくはＦａｂアーム交換を防止する様々な突然変異を有する完全長ヒト化抗体、又は抗体断片、例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆ（ａｂ）断片、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）などであってよい。
【0022】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１－Ｎ２９７Ｑ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ、ＩｇＧ４ ＰＥ及びこれらの変異体から選択されるＩｇＧアイソタイプを含む。
【0023】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、ヒトＳＩＲＰαに加えて、ヒトＳＩＲＰγに結合する。
【0024】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、ヒトＳＩＲＰαに選択的に結合する。
【0025】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、ヒト腫瘍細胞の食作用を増大させる。
【0026】
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗ＳＩＲＰαｍＡｂはＳＩＲＰα及び少なくとも第２の抗原に特異的に結合する多重特異性抗体であり、第２の抗原は、ＣＤ４７発現細胞のマーカーである。
【0027】
一部の実施形態では、多重特異性抗体の第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＨＥＲ２、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、ＥＧＦＲ、ＲＡＮＫＬ、ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９／ＣＤ３、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）、及びＧＤ２から選択される。
【0028】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片はヒト腫瘍細胞の食作用を増大させ、腫瘍細胞上の抗原を標的とするオプソニン化モノクローナル抗体と組み合わせて投与される。
【0029】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片はヒト腫瘍細胞の食作用を増大させ、腫瘍細胞上の抗原を標的とするオプソニン化モノクローナル抗体と組み合わせて投与され、ここで、オプソニン化モノクローナル抗体は、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、オファツムマブ（抗ＣＤ２０）、デノスマブ（抗ＲＡＮＫＬ）、ペルツズマブ（抗ＨＥＲ２）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、ペルツズマブ（ＨＥＲ２）、エロツズマブ（ＳＬＡＭＦ７）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）、アベルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）、デュルバルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）、ネシツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、ダラツムマブ（抗ＣＤ３８）、オビヌツズマブ（抗ＣＤ２０）、ブリナツモマブ（抗ＣＤ１９／ＣＤ３）、ジヌツキシマブ（抗ＧＤ２）から選択される。
【0030】
一部の実施形態では、オプソニン化モノクローナル抗体は、ＣＤ２０、ＥＧＦＲ、及びＰＤ－Ｌ１を標的とする。
【0031】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、抗腫瘍活性を示す。
【0032】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は抗ＣＤ４７抗体と組み合わせて投与され、ここで、抗ＣＤ４７抗体は、米国特許第１０，２３９，９４５号において記載されており、これは参照によってその全体が本明細書に援用される。
【0033】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、抗ＥＧＦＲ抗体と組み合わせて投与される。
【0034】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、抗ＰＤ－１抗体と組み合わせて投与される。
【0035】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、抗ＣＴＬＡ－４抗体と組み合わせて投与される。
【0036】
一部の実施形態では、本開示は、任意選択的にキメラ型又はヒト化型である、本明細書に開示される抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又は抗原結合断片の１つ又は複数と、薬学的又は生理学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【0037】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、ヒトの治療において使用するためのものである。
【0038】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαｍＡｂ又はその抗原結合断片は、ヒト患者における癌の予防又は治療において使用するためのものである。
【0039】
本開示に先立って、本明細書に記載される機能プロフィールを有する抗ＳＩＲＰαｍＡｂを同定することが必要とされていた。本開示の抗ＳＩＲＰαｍＡｂは、ヒトの治療、特に固形癌及び血液癌の予防及び／又は治療において使用するために、ｍＡｂを特に有利にする特性の組合せを示す。
【0040】
一部の実施形態では、癌は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌（大腸癌）、直腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌（非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌）、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、肝細胞癌、胆嚢癌、胆管癌、食道癌、腎細胞癌、甲状腺癌、頭部及び頚部の扁平上皮癌（頭部及び頚部癌）、精巣癌、内分泌腺癌、副腎腺癌、脳下垂体癌、皮膚癌、軟組織の癌、血管の癌、脳腫瘍、神経癌、眼の癌、髄膜癌、中咽頭癌、下咽頭癌、子宮頸癌、及び子宮癌、膠芽腫、髄芽腫、星細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、ガストリノーマ、神経芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、並びに肉腫から選択される。
【0041】
一部の実施形態では、白血病は、全身性肥満細胞症、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞－ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍、骨髄異形成症候群、単球性白血病、及びプラズマ細胞白血病からなる群から選択され；前記リンパ腫は、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫、例えば、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ、及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症を含む、組織球性リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択され；並びに前記肉腫は、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、及び軟骨肉腫からなる群から選択される。
【0042】
一部の実施形態では、配列番号１２１の配列内のエピトープに特異的に結合する抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を用いて、腫瘍及び／又は免疫細胞におけるＳＩＲＰα発現をアッセイするための方法が開示される。
【0043】
一部の実施形態では、方法は、患者サンプルを得ることと、配列番号１２１の配列内のエピトープに特異的に結合する抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と患者サンプルを接触させることと、抗体の患者サンプルへの結合についてアッセイすることとを含み、抗体の患者サンプルへの結合は、患者サンプル中のＳＩＲＰα発現の診断である。
【0044】
一部の実施形態では、配列番号１２２の配列内のエピトープに特異的に結合する抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を用いて、腫瘍及び又は免疫細胞におけるＳＩＲＰγ発現をアッセイするための方法が開示される。
【0045】
一部の実施形態では、方法は、患者サンプルを得ることと、配列番号１２２の配列内のエピトープに特異的に結合する抗ＳＩＲＰγモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と患者サンプルを接触させることと、抗体の患者サンプルへの結合についてアッセイすることとを含み、抗体の患者サンプルへの結合は、患者サンプル中のＳＩＲＰγ発現の診断である。
【0046】
一部の実施形態では、腫瘍は、原発性癌腫瘍又は転移性癌腫瘍である。
【0047】
一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体又はその抗原結合断片の患者サンプルへの結合についてのアッセイは、組織サンプルの免疫組織化学標識、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、又はフローサイトメトリーを利用する。
【0048】
一部の実施形態では、方法は腫瘍細胞を含み、アッセイは、患者サンプルにおける抗ＳＩＲＰαモノクローナル抗体又はその抗原結合断片の腫瘍細胞への結合についてアッセイすることを含む。
【0049】
本開示の適用可能性のさらなる範囲は、以下に記載する詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、詳細な説明及び具体的な例は、本開示の実施形態を示してはいるが、本開示の精神及び範囲内の様々な変更及び修正は、詳細な説明から当業者に対して明らかになることから、あくまで例示として賦与されるに過ぎないことは理解すべきである。
【0050】
図面の簡単な説明
本開示の上記及びその他の態様、特徴、及び利点は、添付の図面と共に考慮される以下の詳細な説明からよりよく理解されよう。尚、これらの図面は全て、例示として賦与されるに過ぎず、本開示を限定するものではない。
本開示の上記及びその他の態様、特徴、及び利点は、添付の図面と共に考慮される以下の詳細な説明からよりよく理解されよう。尚、これらの図面は全て、例示として賦与されるに過ぎず、本開示を限定するものではない。
【図面の簡単な説明】
【0051】
【図1A】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1B】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1C】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1D】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1E】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1F】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1G】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1H】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1I】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1J】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1K】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1L】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1M】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1N】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1O】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1P】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1Q】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1R】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1S】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1T】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1U】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図1V】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰαへの結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図2】ハイブリドーマ由来ｍＡｂ（ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ２、及びＳＩＲＰ３）のＳＩＲＰα発現ＴＨＰ１細胞への結合。ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ２、及びＳＩＲＰ３のＴＨＰ－１単球細胞株への結合を決定した。増加する濃度の抗体と共に細胞を１時間インキュベートした。細胞を洗浄してから、Alexaflour 647標識二次抗体と共に１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図3A】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3B】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3C】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3D】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3E】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3F】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3G】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3H】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3I】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3J】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3K】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3L】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3M】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3N】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3O】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3P】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3Q】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3R】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3S】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3T】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3U】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図3V】抗ＳＩＲＰ抗体のヒトＳＩＲＰガンマへの結合。固相ＥＬＩＳＡによって抗ＳＩＲＰ抗体の組換えヒトＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合を決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰガンマでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図4A】ＳＩＲＰｍＡｂのＳＩＲＰγ発現ジャーカットＴ細胞への結合。ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ２、ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ４及びＳＩＲＰ９のジャーカットＴ－ＡＬＬ細胞への結合を決定した。増加する濃度の抗体（図４Ａ）、又は１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰ抗体と共に、細胞を１時間インキュベートした（図４Ｂ）。細胞を洗浄してから、Alexaflour 647標的二次抗体と共に１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図4B】ＳＩＲＰｍＡｂのＳＩＲＰγ発現ジャーカットＴ細胞への結合。ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ２、ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ４及びＳＩＲＰ９のジャーカットＴ－ＡＬＬ細胞への結合を決定した。増加する濃度の抗体（図４Ａ）、又は１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰ抗体と共に、細胞を１時間インキュベートした（図４Ｂ）。細胞を洗浄してから、Alexaflour 647標的二次抗体と共に１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図5A】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲαとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図5B】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲαとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図5C】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲαとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図5D】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲαとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図5E】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲαとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図5F】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲαとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図5G】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲαとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰαでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図6A】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲＰγとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰγでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図6B】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲＰγとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰγでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図6C】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲＰγとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰγでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図6D】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲＰγとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰγでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図6E】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲＰγとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰγでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図6F】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲＰγとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰγでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図6G】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲＰγとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰγでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図6H】抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合の遮断。ＣＤ４７と組換えヒトＳＩＲＰγとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力を、固相ＥＬＩＳＡによって決定した。高結合ＥＬＩＳＡプレートを組換えヒトＳＩＲＰγでコーティングし、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体を１時間添加した。ウェルを洗浄してから、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７と共に１時間インキュベートした。ウェルを洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と共に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【図7A】抗ＳＩＲＰ抗体は食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体（図７Ａ）又は１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰ抗体（図７Ｂ）をマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図7B】抗ＳＩＲＰ抗体は食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体（図７Ａ）又は１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰ抗体（図７Ｂ）をマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8A】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8B】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8C】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8D】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8E】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8F】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8G】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8H】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8I】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図8J】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ４７抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトジャーカットＴ細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ４７抗体単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及び抗ＣＤ４７抗体の組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないジャーカット細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図9A】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ２０抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＲＡＪＩリンパ腫細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ２０抗体Rituxan単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及びRituxanの組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないＲＡＪＩ細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図9B】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ２０抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＲＡＪＩリンパ腫細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ２０抗体Rituxan単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及びRituxanの組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないＲＡＪＩ細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図9C】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ２０抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＲＡＪＩリンパ腫細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ２０抗体Rituxan単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及びRituxanの組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないＲＡＪＩ細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図9D】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＣＤ２０抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＲＡＪＩリンパ腫細胞と、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＣＤ２０抗体Rituxan単独、又は抗ＳＩＲＰ抗体及びRituxanの組合せとをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないＲＡＪＩ細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図10A】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＥＧＦＲ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＦａＤｕ ＨＮＳＣＣと、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＥＧＦＲ抗体Erbitux単独、又はErbituxと組み合わせた若しくはアベルマブと組み合わせた抗ＳＩＲＰ抗体とをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないＦａＤｕ細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図10B】抗ＳＩＲＰ抗体は抗ＥＧＦＲ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わされて食作用を増強する。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり３×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間接着させた。８×１０４のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＦａＤｕ ＨＮＳＣＣと、増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体単独、抗ＥＧＦＲ抗体Erbitux単独、又はErbituxと組み合わせた若しくはアベルマブと組み合わせた抗ＳＩＲＰ抗体とをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。貪食されていないＦａＤｕ細胞を除去し、マクロファージ培養物を洗浄した。マクロファージをトリプシン処理し、ＣＤ１４について染色した。フローサイトメトリーを使用して、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞の割合を決定した。
【図11】抗ＳＩＲＰ抗体はマクロファージ及び樹状細胞上のＳＩＲＰαに結合する。抗ＳＩＲＰ抗体のヒトマクロファージ又は樹状細胞への結合を決定した。ヒト単球由来マクロファージを増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体と共に１時間インキュベートした。細胞を洗浄してから、ＡＦ６４７標識二次抗体と共に４５分間インキュベートし、洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図12A】抗ＳＩＲＰ抗体はナイーブ及び活性化Ｔ細胞上のＳＩＲＰγに結合する。ナイーブＴ細胞（図１２Ａ及び図１２Ｂ）又は抗ＣＤ３でコーティングされたプレート上で３日間活性化した後の活性化Ｔ細胞（図１２Ｃ）への抗ＳＩＲＰ抗体の結合をフローサイトメトリーにより決定した。Ｔ細胞を増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体と共に１時間インキュベートし、細胞を洗浄し、ＦＩＴＣ標識抗マウス二次抗体を１時間添加した。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図12B】抗ＳＩＲＰ抗体はナイーブ及び活性化Ｔ細胞上のＳＩＲＰγに結合する。ナイーブＴ細胞（図１２Ａ及び図１２Ｂ）又は抗ＣＤ３でコーティングされたプレート上で３日間活性化した後の活性化Ｔ細胞（図１２Ｃ）への抗ＳＩＲＰ抗体の結合をフローサイトメトリーにより決定した。Ｔ細胞を増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体と共に１時間インキュベートし、細胞を洗浄し、ＦＩＴＣ標識抗マウス二次抗体を１時間添加した。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図12C】抗ＳＩＲＰ抗体はナイーブ及び活性化Ｔ細胞上のＳＩＲＰγに結合する。ナイーブＴ細胞（図１２Ａ及び図１２Ｂ）又は抗ＣＤ３でコーティングされたプレート上で３日間活性化した後の活性化Ｔ細胞（図１２Ｃ）への抗ＳＩＲＰ抗体の結合をフローサイトメトリーにより決定した。Ｔ細胞を増加する濃度の抗ＳＩＲＰ抗体と共に１時間インキュベートし、細胞を洗浄し、ＦＩＴＣ標識抗マウス二次抗体を１時間添加した。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図13】マクロファージ上の抗ＳＩＲＰ抗体によるヒトＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合の遮断。組換えヒトＣＤ４７と、マクロファージ発現ＳＩＲＰαとの間の相互作用を抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力をフローサイトメトリーにより決定した。マクロファージ上のＦｃ受容体を遮断した後、１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰ抗体と共にインキュベーションした。ＡＦ６４７タグ付き抗ヒト二次抗体を用いて、可溶性Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７（２０μｇ／ｍｌ）の結合を測定した。
【図14A】抗ＳＩＲＰ抗体は同種異系樹状細胞刺激においてＴ細胞増殖を阻害しない。１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰ抗体の存在下でCellTrace Violet標識ヒトＣＤ３ Ｔ細胞を同種異系ヒト単球由来樹状細胞と共に１：５のＴ細胞：ＤＣ比で活性化することによって、Ｔ細胞の増殖に対する抗ＳＩＲＰ抗体の効果を決定した。フローサイトメトリーを使用して、６～７日の共培養の後に増殖したＣＤ３ Ｔ細胞の割合を決定した。点線は、ｈＩｇＧ４Ｐ対照の増殖を表す。
【図14B】抗ＳＩＲＰ抗体は同種異系樹状細胞刺激においてＴ細胞増殖を阻害しない。１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰ抗体の存在下でCellTrace Violet標識ヒトＣＤ３ Ｔ細胞を同種異系ヒト単球由来樹状細胞と共に１：５のＴ細胞：ＤＣ比で活性化することによって、Ｔ細胞の増殖に対する抗ＳＩＲＰ抗体の効果を決定した。フローサイトメトリーを使用して、６～７日の共培養の後に増殖したＣＤ３ Ｔ細胞の割合を決定した。点線は、ｈＩｇＧ４Ｐ対照の増殖を表す。
【図15】抗ＳＩＲＰ抗体は抗原リコール応答を阻害しない。ヒトサイトメガロウイルス血清陽性ドナーからのＰＢＭＣを用いて、Ｔ細胞抗原リコール応答に対する抗ＳＩＲＰ抗体の効果を評価した。増加する濃度のＣＭＶ抗原の存在下でCellTrace Violet色素標識ＰＢＭＣを１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰ抗体と共に５日間インキュベートした。フローサイトメトリーを用いてＣＤ４＋ Ｔ細胞集団内のCellTrace Violet色素の希釈によりＴ細胞増殖を決定した。
【発明を実施するための形態】
【0052】
本開示の詳細な説明
定義
別に定義されない限り、本開示に関連して使用される科学及び技術用語は、当業者により一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈から別のことが要求されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。概して、細胞及び組織培養、分子生物学、並びにタンパク質及びオリゴ又はポリヌクレオチド化学に関して使用される命名法、並びにそれらの技術は、当技術分野で公知であり、一般に使用されている。
定義
別に定義されない限り、本開示に関連して使用される科学及び技術用語は、当業者により一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈から別のことが要求されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。概して、細胞及び組織培養、分子生物学、並びにタンパク質及びオリゴ又はポリヌクレオチド化学に関して使用される命名法、並びにそれらの技術は、当技術分野で公知であり、一般に使用されている。
【0053】
本明細書で使用されるとき、用語「ＳＩＲＰα」及び「Ｓｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメイン含有タンパク質チロシンホスファターゼ基質１（ＳＨＰＳ－１）」は同義であり、互換的に使用され得る。
【0054】
用語「抗ＳＩＲＰα抗体」は、治療薬又は診断薬としての使用が意図された、ＳＩＲＰα、特にヒトＳＩＲＰαに対して特異的に結合する本開示の抗体を指す。
【0055】
用語「抗ＳＩＲＰ」は、治療薬又は診断薬としての使用が意図された、ＳＩＲＰα、特にヒトＳＩＲＰα、ＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２で識別される２つの共通変異体の一方又は両方、及び／又はＳＩＲＰγ、並びにこれらの抗体変異体に対して特異的に結合する本開示の抗体を指す。
【0056】
本明細書で使用されるとき、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、すなわち抗原と特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含む分子を指す。～と、若しくは～に対して「特異的に結合する」又は「免疫反応する」とは、抗体が、所望の抗原の１つ又は複数の抗原決定基と反応するが、他のポリペプチドとは反応しないか、又ははるかに低い親和性（Ｋｄ＞１０－６Ｍ）で結合することを意味する。抗体としては、限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一本鎖Ｆｖ断片、及び単一アーム(one-armed)抗体が挙げられる。
【0057】
本明細書で使用されるとき、用語「モノクローナル抗体（ｍＡｂ）」は、本開示の抗ＳＩＲＰα化合物に適用される場合、例えば、任意の真核、原核、若しくはファージクローンをはじめとする単一コピー若しくはクローンから得られる抗体を指すものであり、それらを生成する方法ではない。本開示のモノクローナル抗体は、均一又はほぼ均一の集団に存在するのが好ましい。完全なｍＡｂは、２つの重鎖と２つの軽鎖を含む。
【0058】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の１部分を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【0059】
本明細書に開示されるように、「抗体化合物」は、ｍＡｂ及びその抗原結合断片を指す。本開示に従う類似の機能的特性を呈示する別の抗体化合物は、従来の方法により作製することができる。例えば、マウスをヒトＳＩＲＰα又はその断片で免疫し、得られた抗体を回収し、精製することができ、それらが本明細書に開示される抗体化合物と類似の、若しくは同じ結合及び機能的特性を有するか否かの決定は、実施例に開示される方法によって評価することができる。また、抗原結合断片も、従来の方法により調製することができる。抗体及び抗原結合断片を生成及び精製する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、以下：Harlow and Lane (1988)Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,第５～８章及び第１５章に見出すことができる。
【0060】
本明細書に開示されるように、「多重特異性抗体」は、例えば、二重特異性、三重特異性又は四重特異性抗体である。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、１つの分子内で、ＳＩＲＰα及び／又はＳＩＲＰγ、並びに少なくとも１つの他の抗原結合特異性を標的とする。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、ＳＩＲＰα及び／又はＳＩＲＰγ、並びに少なくとも第２の抗原（二重特異性）、又は少なくとも第２及び第３の抗原（三重特異性）、又は少なくとも第２、第３、及び第４の抗原（四重特異性）を同時に標的とすることができ、ここで、第２の抗原、第３の抗原、及び第４の抗原は、本明細書に開示されるような腫瘍細胞上にある。
【0061】
二重特異性抗体は、１つの分子内に２つの異なる抗原結合特異性を有する抗体である。三重特異性抗体は、したがって、１つの分子内に３つの異なる抗原結合特異性を有する抗体である。四重特異性抗体は、１つの分子内に４つの異なる抗原結合特異性を有する抗体である。一実施形態では、本明細書に開示される抗ＳＩＲＰα抗体は、ＳＩＲＰα及び／又はＳＩＲＰγ、並びに本明細書に開示されるような腫瘍細胞上の第２の抗原を標的とする二重特異性抗体である。
【0062】
モノクローナル抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の１部分が、マウス抗体の対応する配列、特にマウスＣＤＲと同一、又は相同的であるが、鎖の残りは、ヒト抗体の対応する配列と同一、又は相同的である抗体を包含する。本開示の他の実施形態は、モノクローナル抗体と類似若しくは同一の結合及び生物学的特性を呈示するこれらのモノクローナル抗体の抗原結合断片を含む。本開示の抗体は、κ又はλ軽鎖定常領域、及び重鎖ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、若しくはＩｇＭ定常領域を含んでよく、そうしたものとして、ＩｇＧサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のものがあり、これらは、場合によっては、Ｆｃ受容体機能を改変するための様々な突然変異を含む。
【0063】
本明細書に開示されるマウスＣＤＲを含有するモノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ方法をはじめとする、当業者には周知の様々な方法の何れかによって調製することができる。
【0064】
抗体改変及び改善のための最新の方法についての論評は、例えば、以下：P.Chames,Ed.,(2012)Antibody Engineering:Methods and Protocols,Second Edition(Methods in Molecular Biology,Book 907),Humana Press,ISBN-10:1617799734;C.R.Wood,Ed.,(2011)Antibody Drug Discovery(Molecular Medicine and Medicinal Chemistry,Book 4),Imperial College Press;R.Kontermann and S.Dubel,Eds.,(2010)Antibody Engineering Volumes 1 and 2(Springer Protocols),Second Edition;並びにW.Strohl and L.Strohl(2012)Therapeutic antibody engineering:Current and future advances driving the strongest growth area in the pharmaceutical industry,Woodhead Publishingに見出すことができる。
【0065】
抗体及び抗原結合断片を生成及び精製する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、以下：Harlow and Lane (1988)Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York,第５～８章及び第１５章に見出すことができる。
【0066】
天然に存在する完全長抗体は、４つのポリペプチド鎖：ジスルフィド結合により互いに連結された２つの同じ重（Ｈ）鎖と２つの同じ軽（Ｌ）鎖を含む、「Ｙ」型の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子である。フラグメント抗原結合領域（ＦＡＢ）と呼ばれる各鎖のアミノ酸末端部分は、主として、そこに含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）を介した抗原認識を担う約１００～１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域（「Ｆｃ」領域）を画定する。
【0067】
ＣＤＲには、フレームワーク（「ＦＲ」）と呼ばれる、より保存された領域が散在する。多くのＦＲのアミノ酸配列が当技術分野で公知である。各軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、次の順にアミノ末端からカルボキシ末端まで配列されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。軽鎖の３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と呼ばれ、重鎖の３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と呼ばれる。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基のほとんどを含有する。ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の番号付け及び配置は、公知のＫａｂａｔナンバーリング則(Kabat numbering convention)Kabat et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition.NIH Publication No.91-3242に従う。
【0068】
本明細書に記載するように、「抗原結合部位」は、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」として定義することができ、Chothia及びLesk(Chothia and Lesk,Mol.Biol.196:901-917,1987)により定義される通りの抗体可変ドメインの構造的に超可変領域を指す。6つのＨＶＲがあり、そのうち、３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に存在する。本明細書では、延長されてＨ１を含むＨ－ＣＤＲ１を除き、Ｋａｂａｔにより定義されるＣＤＲを使用した。
【0069】
ギリシャ文字α（アルファ）、δ（デルタ）、ε（イプシロン）、γ（ガンマ）、及びμ（ミュー）と称される５つのタイプの哺乳類免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖があり、これらは、それぞれ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、若しくはＩｇＭとして抗体のクラス又はアイソタイプを定義する。ＩｇＧ抗体は、サブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４にさらに区分され得る。
【0070】
各重鎖タイプは、当技術分野で公知である配列を含み特定の定常領域を特徴とする。定常領域は、同じアイソタイプのあらゆる抗体で同一であるが、別のアイソタイプの抗体では異なる。重鎖γ、α、及びδは、３つのタンデム免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインから構成される定常領域と、柔軟性追加のためのヒンジ領域とを含む。重鎖μ及びεは、４つのＩｇドメインから構成される定常領域を有する。
【0071】
ヒンジ領域は、抗体のＦｃ及びＦａｂ部分を連結させる柔軟なアミノ酸区間がある。この領域は、２つの重鎖を連結するジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基を含有する。
【0072】
重鎖の可変領域は、別のＢ細胞により産生される抗体では異なるが、単一Ｂ細胞又はＢ細胞クローンにより産生されるあらゆる抗体については同じである。各重鎖の可変領域は、約１１０アミノ酸長さであり、単一Ｉｇドメインから構成される。
【0073】
哺乳類の場合、軽鎖は、カッパ（κ）又はラムダ（λ）として分類され、当技術分野において公知の特定の定常領域を特徴とする。軽鎖は、２つの連続的ドメイン：アミノ酸末端に１つの可変ドメインと、カルボキシ末端に１つの定常ドメインを有する。各抗体は、常に同一である２つの軽鎖を含み；哺乳類において、１抗体につき軽鎖κ又はλの１タイプしか存在しない。
【0074】
抗体のクラスに応じて３つ又は４つの定常ドメインを提供する２つの重鎖から構成されるＦｃ領域は、免疫細胞の活性をモジュレートする上で役割を果たす。特定のタンパク質に結合することにより、Ｆｃ領域は、各抗体が所与の抗原に対して適切な免疫応答を生み出すことを確実にする。Ｆｃ領域はまた、Ｆｃ受容体などの様々な細胞受容体、並びに補体タンパク質などの他の免疫分子にも結合する。これによって、Ｆｃ領域は、オプソニン化、細胞溶解、並びに肥満細胞、好塩基球及び好酸球の脱顆粒を媒介する。
【0075】
本明細書で使用されるとき、用語「エピトープ」は、抗体又は抗体断片が結合するペプチド若しくはタンパク質に位置するアミノ酸の具体的な配列を指す。エピトープは、多くの場合、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面集団からなり、特定の三次元構造特徴、並びに特定の電荷特徴を備える。エピトープは、線状、すなわち、アミノ酸の単一配列への結合を含むか、又は立体配座、すなわち、抗原（線状配列では必ずしも連続的ではなくてもよい）の様々な領域内のアミノ酸の２つ以上の配列への結合を含むかのいずれであってもよい。
【0076】
本明細書で使用されるとき、用語「特異的に結合する」、「特異的に結合する」、「特異的結合」、及び本発明の抗体化合物に適用される同等の用語は、特定の結合物質（抗体など）が、特定の結合物質及び標的分子種が混合されている他の分子種との結合に優先して、標的分子種に結合する能力を指す。特定の結合物質は、標的と特異的に結合することができるとき、標的分子種を特異的に認識すると言える。
【0077】
本明細書で使用されるとき、用語「結合親和性」は、当該分子上の１部位における１つの分子と別の分子の結合の強度を指す。特定の分子が別の特定の分子と特異的に結合するか、又は会合する場合、これらの２つの分子は、互いに結合親和性を呈示すると言える。結合親和性は、１対の分子の会合定数及び解離定数に関するが、これらの定数を測定又は決定することは、本明細書に記載の方法には重要ではない。それよりも、記載される方法の分子同士の相互作用を説明するために本明細書で用いられる親和性は、一般に、実験的試験で観測される見かけ上の親和性（別に明示されない限り）であり、これを用いて、１つの分子（例えば、抗体又は他の特異的結合相手）が、２つの他の分子（例えば、ペプチドの２つのバージョン又は変異体）に結合する相対強度を比較することができる。結合親和性、会合定数、及び解離定数の概念は、公知である。
【0078】
本明細書で使用されるとき、用語「配列同一性」は、配列マッチングを最大にするように、すなわち、ギャップと挿入を計算に入れて、配列をアラインメントしたときの２つ以上の配列の対応する位置における同一のヌクレオチド又はアミノ酸残基のパーセンテージを意味する。同一性は、公知の方法によって容易に計算することができ、そうした方法として、限定されないが、以下のものが挙げられる：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993;Computer Analysis of Sequence Data,Part I,Griffin,A.M.,and Griffin,H.G.,eds.,Humana Press,New Jersey,1994;Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987;及びSequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,M Stockton Press,New York,1991;並びにCarillo,H.,and Lipman,D.,SIAM J.Applied Math.,48:1073(1988)。同一性を決定する方法は、試験される配列同士の最大マッチを与えるように設計されている。さらに、同一性を決定する方法は、一般に入手可能なコンピュータプログラムにコード化されている。
【0079】
比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Smith & Watermanの局所相同性アルゴリズムにより、相同性アラインメントアルゴリズムにより、類似性の検索方法により、又はこれらアルゴリズムのコンピュータ用実装（GCG Wisconsin PackageのGAP,BESTFIT,PASTA及びTFASTA,Accelrys,Inc.,San Diego,California,United States of Americaから入手可能）、又は肉眼検査により実施することができる。概要は、Altschul,S.F.et al.,J.Mol.Biol.215:403-410(1990)及びAltschul et al.Nucl.Acids Res.25:3389-3402(1997)を参照されたい。
【0080】
配列同一性及び配列類似性の割合（％）を決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、(Altschul,S.,et al.,NCBI NLM NIH Bethesda,Md.20894;及びAltschul,S.,et al.,J.Mol.Biol.215:403-410(1990)に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、National Center for Biotechnology Informationから一般に入手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードと整列させた場合にいくつかの正の数の閾値スコアＴに一致するか、又はそれを満たすクエリー配列中の長さＷの短いワードの同定によって高スコアリング配列対（ＨＳＰ）を最初に同定するステップを含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値(neighborhood word score threshold)と呼ばれる。
【0081】
これらの最初の隣接ワードヒットは、これらを含む、より長いＨＳＰを見出すための検索開始のシード(seed)として作用する。次に、累積アラインメントスコアを増加させることができる限り、ワードヒットを各配列に沿って両方向に伸長する。累積スコアは、ヌクレオチド配列の場合、パラメータＭ（１対のマッチする残基についての報酬スコア；常に；０）及びＮ（ミスマッチ残基のペナルティスコア；常に；０）を用いて計算する。アミノ酸配列の場合には、スコアリング行列を用いて累積スコアを計算する。各方向へのワードヒットの伸長は、以下の場合に停止する：累積アラインメントスコアが、その達成された最大値から量Ｘだけ低下した場合、１つ又は複数の負のスコアの残基アラインメントの累積によって累積スコアが０以下になる場合、又は何れかの配列の末端に到達する場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定付ける。ＢＬＡＳＴＮプログラムは（ヌクレオチド配列の場合）、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）：１１、期待値（Ｅ）：１０、カットオフ：１００、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列の場合、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）：３、期待値（Ｅ）：１０、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列を使用する。
【0082】
同一性の割合（％）の計算に加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列同士の類似性の統計解析を行う。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって得られる類似性の１つの尺度は、最小和確率(smallest sum probability)（Ｐ（Ｎ））であり、これによって、２つのヌクレオチド同士又はアミノ酸配列同士のマッチが偶然に起こる確率の指標が得られる。例えば、試験核酸配列と基準核酸配列を比較した最小和確率が、一実施形態で約０．１未満、別の実施形態で約０．０１未満、また別の実施形態で約０．００１未満である場合、試験核酸配列は基準配列に類似するとみなされる。
【0083】
本明細書で使用されるとき、用語「ヒト化（された）」、「ヒト化」などは、ヒトＦＲ及び定常領域に、本明細書に開示されるマウスモノクローナル抗体ＣＤＲを移植することを指す。これらの用語には、以下に説明するように、様々な抗体特性を改善する目的で、例えば、Kashmiri et al.(2005)Methods 36(1):25-34及びHou et al.(2008)J.Biochem.144(1):115-120に開示される方法によりそれぞれマウスＣＤＲ、及びヒトＦＲに対して可能なさらなる修飾も含まれる。
【0084】
本明細書で使用されるとき、用語「ヒト化抗体」は、本明細書に開示される抗体化合物をはじめとする、本明細書に開示されるものと類似する開示に従う結合及び機能的特性を有し、且つＦＲと、非ヒト抗体由来の実質的にヒト又は完全にヒトの周囲ＣＤＲである定常領域とを有するｍＡｂ及び抗原結合断片を指す。
【0085】
本明細書で使用されるとき、用語「ＦＲ」又は「フレームワーク配列」は、ＦＲ１～４の何れか１つを指す。本開示により包含されるヒト化抗体及び抗原結合断片は、ＦＲ１～４の何れか１つ又は複数が、実質的又は完全にヒト由来である、すなわち、実質的又は完全にヒトのＦＲ１～４の考えられる組合せの何れかが存在する、分子を含む。例えば、これは、ＦＲ１とＦＲ２、ＦＲ１とＦＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３などが実質的又は完全にヒト由来である分子を含む。実質的にヒトのフレームワークは、既知のヒト生殖細胞系フレームワーク配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトのフレームワークは、本明細書に開示されるフレームワーク配列、又は既知のヒト生殖細胞系フレームワーク配列と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【0086】
完全にヒトのフレームワークは、既知のヒト生殖細胞系フレームワーク配列と同じものである。ヒトＦＲ生殖細胞系配列は、国際ImMunoGeneTics(IMGT)データベース及びMarie-Paule Lefranc and Gerard Lefranc,Academic Press,2001によるThe Immunoglobulin FactsBookから取得することができ、その内容は、全体として参照により本明細書に開示組み込む。
【0087】
The Immunoglobulin Facts Bookは、ヒト抗体レパトアを作製するために使用されるヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子の概要であり、２０３の遺伝子と４５９の対立遺伝子のエントリーを含み、総計８３７の配列が展示されている。個々のエントリーは、全て、少なくとも１つの機能性又はオープンリーディングフレーム対立遺伝子を有し、且つ３つの主要遺伝子座に位置する、ヒト免疫グロブリン定常遺伝子、並びに生殖細胞系可変、多様性、及びジョイニング遺伝子を含む。例えば、生殖細胞系軽鎖ＦＲは、以下：ＩＧＫＶ３Ｄ－２０、ＩＧＫＶ２－３０、ＩＧＫＶ２－２９、ＩＧＫＶ２－２８、ＩＧＫＶ１－２７、ＩＧＫＶ３－２０、ＩＧＫＶ１－１７、ＩＧＫＶ１－１６、１－６、ＩＧＫＶ１－５、ＩＧＫＶ１－１２、ＩＧＫＶ１Ｄ－１６、ＩＧＫＶ２Ｄ－２８、ＩＧＫＶ２Ｄ－２９、ＩＧＫＶ３－１１、ＩＧＫＶ１－９、ＩＧＫＶ１－３９、ＩＧＫＶ１Ｄ－３９及びＩＧＫＶ１Ｄ－３３並びにＩＧＫＪ１－５からなる群から選択することができ、また、生殖細胞系重鎖ＦＲは、以下：ＩＧＨＶ１－２、ＩＧＨＶ１－１８、ＩＧＨＶ１－４６、ＩＧＨＶ１－６９、ＩＧＨＶ２－５、ＩＧＨＶ２－２６、ＩＧＨＶ２－７０、ＩＧＨＶ１－３、ＩＧＨＶ１－８、ＩＧＨＶ３－９、ＩＧＨＶ３－１１、ＩＧＨＶ３－１５、ＩＧＨＶ３－２０、ＩＧＨＶ３－６６、ＩＧＨＶ３－７２、ＩＧＨＶ３－７４、ＩＧＨＶ４－３１、ＩＧＨＶ３－２１、ＩＧＨＶ３－２３、ＩＧＨＶ３－３０、ＩＧＨＶ３－４８、ＩＧＨＶ４－３９、ＩＧＨＶ４－５９及びＩＧＨＶ５－５１並びにＩＧＨＪ１－６からなる群から選択することができる。
【0088】
実質的にヒトのＦＲは、既知のヒト生殖細胞系ＦＲ配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトのフレームワークは、本明細書に開示されるフレームワーク配列、又は既知のヒト生殖細胞系フレームワーク配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【0089】
本開示に含まれるＣＤＲは、本明細書に具体的に開示されるものだけではなく、本明細書に開示されるＣＤＲ配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するＣＤＲ配列も含む。或いは、本開示に含まれるＣＤＲは、本明細書に具体的に開示されるものだけではなく、本明細書に開示されるＣＤＲ配列と比較して、対応する位置に１、２、３、４、又は５個のアミノ酸変更を有するＣＤＲ配列も含む。このような配列が同一、又はアミノ酸が修飾されたＣＤＲは、好ましくは、インタクトな抗体によって認識される抗原に結合する。
【0090】
本明細書に開示されるもの以外に、本開示に従う類似の機能的特性を呈示するヒト化抗体は、いくつかの異なる方法：Almagro et al.Frontiers in Biosciences.Humanization of antibodies.(2008)Jan 1;13:1619-33を用いて作製することができる。一アプローチでは、親抗体化合物ＣＤＲは、親抗体化合物フレームワークと高い配列同一性を有するヒトフレームワークに移植される。新規フレームワークの配列同一性は、一般に、親抗体化合物中の対応するフレームワークの配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。１００アミノ酸残基未満を有するフレームワークの場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸残基を変更することができる。この移植によって、親抗体のそれと比較して結合親和性の低下が起こり得る。その場合には、Queen et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:2869により開示される具体的な基準に基づいて、いくつかの位置でフレームワークを親フレームワークに復帰突然変異させることができる。相同性及び復帰突然変異に基づいてヒト化変異体を作製する上で有用な方法を記載する別の参照文献としては、以下に記載されるものなどが挙げられる：Olimpieri et al.Bioinformatics.2015 Feb 1;31(3):434-435及び米国特許第４，８１６，３９７号明細書、同第５，２２５，５３９号明細書、及び同第５，６９３，７６１号明細書；及びWinter and co-workersの方法(Jones et al.(1986)Nature 321:522-525;Riechmann et al.(1988)Nature 332:323-327；並びにVerhoeyen et al.(1988)Science 239:1534-1536。
【0091】
ヒト化は、１９８０年代前半に開発された方法であるキメラ化(Morrison,S.L.,M.J.Johnson,L.A.Herzenberg & V.T Oi:Chimeric human antibody molecules:mouse antigen-binding domains with human constant region domains.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,81,6851-5(1984))から開始するが、これは、マウス抗体の可変（Ｖ）ドメインをヒト定常（Ｃ）ドメインと組み合わせることによって、ヒト内容物の約７０％を含む分子を作製することから成る。
【0092】
いくつかの異なる方法を用いて、ヒト化抗体を作製することができ、これは本明細書に記載されている。一アプローチでは、親抗体化合物ＣＤＲは、親抗体化合物フレームワークと高い配列同一性を有するヒトＦＲに移植される。新たなＦＲの配列同一性は、一般に、親抗体化合物中の対応するＦＲの配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。１００アミノ酸残基未満を有するＦＲの場合、１、２、３、４、５個以上のアミノ酸残基を変更することができる。この移植によって、親抗体のそれと比較して結合親和性の低下が起こり得る。その場合には、Queen et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:2869により開示される具体的な基準に基づき、いくつかの位置で、ＦＲを親フレームワークに復帰突然変異させることができる。相同性及び復帰突然変異に基づいてヒト化変異体を作製する上で有用な方法を記載する別の参照文献としては、以下に記載されるものなどが挙げられる：Olimpieri et al.Bioinformatics.2015 Feb 1;31(3):434-435及び米国特許第４，８１６，３９７号明細書、同第５，２２５，５３９号明細書、及び同第５，６９３，７６１号明細書；並びにWinter and co-workersの方法(Jones et al.(1986)Nature 321:522-525;Riechmann et al.(1988)Nature 332:323-327；並びにVerhoeyen et al.(1988)Science 239:1534-1536。
【0093】
復帰突然変異のために考慮すべき残基の同定は、以下に記載するように実施することができる。アミノ酸が下記のカテゴリーに入るとき、使用されているヒト生殖細胞系配列のフレームワークアミノ酸（「アクセプターＦＲ」）は、親抗体化合物のフレームワーク由来のフレームワークアミノ酸（「ドナーＦＲ」）により置換される：
（ａ）アクセプターフレームワークのヒトＦＲ内のアミノ酸が、その位置のヒトフレームワークでは稀であるが、ドナー免疫グロブリン内の対応するアミノ酸は、その位置のヒトフレームワークでは典型的である；
（ｂ）アミノ酸の位置が、ＣＤＲの１つに隣接している；又は
（ｃ）フレームワークアミノ酸の何れかの側鎖原子が、三次元免疫グロブリンモデル中のＣＤＲアミノ酸の何れかの原子から約５～６オングストローム（中心間）以内にある。
（ａ）アクセプターフレームワークのヒトＦＲ内のアミノ酸が、その位置のヒトフレームワークでは稀であるが、ドナー免疫グロブリン内の対応するアミノ酸は、その位置のヒトフレームワークでは典型的である；
（ｂ）アミノ酸の位置が、ＣＤＲの１つに隣接している；又は
（ｃ）フレームワークアミノ酸の何れかの側鎖原子が、三次元免疫グロブリンモデル中のＣＤＲアミノ酸の何れかの原子から約５～６オングストローム（中心間）以内にある。
【0094】
アクセプターフレームワークのヒトＦＲ内のアミノ酸の各々及びドナーフレームワーク内の対応するアミノ酸が、概して、その位置のヒトフレームワークでは稀であるとき、そのようなアミノ酸は、その位置のヒトフレームワークに典型的なアミノ酸により置換することができる。この復帰突然変異の基準によって親抗体化合物の活動を復帰させることが可能になる。
【0095】
本明細書に開示される抗体化合物と類似の機能的特性を提示するヒト化抗体を作製する別のアプローチは、フレームワークを変更することなく、移植ＣＤＲ内でアミノ酸をランダムに突然変異させるステップ、次に、親抗体化合物のそれと同等又はより優れた結合親和性及びその他の機能的特性について、得られた分子をスクリーニングするステップを含む。さらに、単一の突然変異を各ＣＤＲ内の各アミノ酸位置に導入した後、結合親和性及びその他の機能的特性に対するそうした突然変異の作用を評価することもできる。改善された特性をもたらす単一突然変異を組み合わせて、相互の組合せの作用を評価することができる。
【0096】
さらに、以上のアプローチの両方の組合せも可能である。ＣＤＲ移植後、ＣＤＲにアミノ酸変更を導入する以外に、特定のＦＲを復帰突然変異させることができる。この方法は、Wu et al.(1999)J.Mol.Biol.294:151-162に記載されている。
【0097】
本開示の教示を適用して、当業者は、例えば、部位指定突然変異誘発などの一般的技術を使用して、本明細書に開示されるＣＤＲ及びＦＲ配列内のアミノ酸を置換することにより、この配列に由来する別の可変領域アミノ酸配列を作製することができる。最大全部の天然に存在するアミノ酸を特定の置換部位に導入することができる。本明細書に開示される方法を用いて、これらの追加可変領域アミノ酸配列をスクリーニングすることにより、表示されるインビボ機能を有する配列を同定することができる。このようにして、本開示に従ってヒト化抗体及びその抗原結合部分を作製するのに好適なさらなる配列を同定することができる。フレームワーク内のアミノ酸置換は、本明細書に開示される４つの軽鎖及び／又は重鎖ＦＲの何れか１つ又は複数において１つ、２つ、３つ、４つ、若しくは５つの位置に制限するのが好ましい。ＣＤＲ内のアミノ酸置換は、３つの軽鎖及び／又は重鎖ＣＤＲの何れか１つ又は複数において１つ、２つ、３つ、４つ、若しくは５つの位置に制限するのが好ましい。前述したこれらのＦＲ及びＣＤＲ内の様々な変更の組合せも可能である。
【0098】
上述のアミノ酸修飾を導入することにより作製した抗体化合物の機能的特性が、本明細書に開示される特定の分子により呈示されるものと一致することは、以下に開示する実施例の方法により確認することができる。
【0099】
上に記載したように、患者にヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を誘発する問題を回避するために、マウス抗体を遺伝子操作し、ヒト免疫グロブリン分子の可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）フレームワーク上に、相補性決定領域（ＣＤＲ）を移植することによって、抗原結合部位の完全性に必須とみなされるこれらのマウスフレームワーク残基は維持しながら、そのマウス内容物をそのヒト対応部分に存在するアミノ酸残基で段階的に置換した。しかし、ヒト化抗体の異種ＣＤＲは、患者に抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）応答を引き起こし得る。
【0100】
抗Ｉｄ応答を最小限にするために、ヒトフレームワークに、抗体－リガンド相互作用に最も重要なＣＤＲ残基だけを移植する（「ＳＤＲ移植」と呼ばれる）ことによって、異種抗体をヒト化する方法が開発されており、この方法では、ＣＤＲの必須特異性決定残基（ＳＤＲ）だけがヒトフレームワークに移植される。この方法は、Kashmiri et al.(2005)Methods 36(1):25-34に記載されており、既知構造の抗原－抗体複合体の三次元構造のデータベースを用いた、又は抗体結合部位の突然変異分析によるＳＤＲの同定を含む。より多くのＣＤＲ残基の保持を含むヒト化のための別のアプローチは、「短縮」ＣＤＲ、すなわち、全てのＳＤＲを含むＣＤＲ残基の区間の移植に基づくものである。Kashmiriらは、マウス抗体を投与された患者からの血清に対するヒト化抗体の反応性を評価する方法も開示している。
【0101】
改善された免疫原性を有するヒト抗体変異体を構築する別の戦略は、Hou et al.(2008) J.Biochem.144(1):115-120に開示されている。これらの著者らは、コンピュータ支援相同性モデル化により構築された４Ｃ８の分子モデルを用いるＣＤＲ移植により、４Ｃ８からのヒト化抗体、すなわち、マウス抗ヒトＣＤ３４モノクローナル抗体を開発した。この分子モデルを用いて、上記の著者らは、抗原結合に潜在的に重要なＦＲ残基を同定した。４Ｃ８のヒト化バージョンは、マウス抗体ＦＲに対する相同性に基づいて選択されたヒト抗体フレームワークにこれらの重要なマウスＦＲ残基を、マウスＣＤＲ残基と一緒に移植することによって作製された。得られたヒト化抗体は、本来のマウス抗体のそれと類似した抗原結合親和性及び特異性を有することが判明したが、これは、臨床的に常用されているマウス抗ＣＤ３４抗体の代替物となり得ることを示唆している。
【0102】
本開示の実施形態は、考慮されるｍＡｂが、本明細書に開示される単一マウスｍＡｂ由来のＣＤＲのセット、又は開示されるマウスｍＡｂの２つ若しくは３つに由来する個別のＣＤＲを含むＣＤＲのセットを含有する軽鎖及び重鎖を含むことができるように、任意の組合せ形態で本明細書に開示されるＣＤＲを含むヒト免疫系による認識を回避するように作製された抗体を包含する。こうしたｍＡｂは、分子生物学の標準的技術により作製し、本明細書に記載されるアッセイを用いて、所望の活性についてスクリーニングすることができる。このようにして、本開示は、新たな、又は改善された治療活性を達成するために、開示されるマウスｍＡｂ由来のＣＤＲの混合物を含む新規のｍＡｂを作製する「ミックス及びマッチ(mix and match)」アプローチを提供する。
【0103】
本明細書に開示される分子と「競合する」本開示により包含されるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、本開示の分子が結合する部位と同一であるか、又はそれとオーバーラップする部位でヒトＳＩＲＰαに結合するものである。競合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、例えば、抗体競合アッセイによって同定することができる。例えば、精製した、又は部分的に精製したヒトＳＩＲＰα細胞外ドメインのサンプルを固体支持体に結合することができる。次に、本開示の抗体化合物、又はその抗原結合断片並びにそのような開示抗体化合物と競合することができると思われるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を添加する。２つの分子のうちの一方を標識する。標識化合物及び非標識化合物が結合して、ＳＩＲＰα上の個別且つ独立の部位に結合すれば、標識化合物は、推定競合化合物が存在するか否かにかかわらず、同じレベルで結合するであろう。しかし、相互作用の部位が同一又はオーバーラップする場合には、非標識化合物は競合し、抗原に結合する標識化合物の量は低下するであろう。非標識化合物が過剰に存在する場合には、もしあるとしても、ごくわずかの標識化合物が結合するであろう。本開示の目的のために、競合モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰαに対する本発明の抗体化合物の結合を約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％低減するものである。こうした競合アッセイを実施する方法の詳細は当技術分野で公知であり、例えば、Harlow and Lane(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, N.Yに見出すことができる。こうしたアッセイは、精製抗体を用いることによって、定量的にすることができる。標準曲線は、１つの抗体をそれ自体に対して力価測定することによって作成し、言い換えれば、同じ抗体を標識及び競合者の両方に使用する。非標識競合モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、プレートに対する標識分子の結合を阻害する能力を滴定する。結果をプロットして、所望の程度の結合阻害を達成するのに必要な濃度を比較する。
【0104】
こうした競合アッセイで本開示の抗体化合物と競合するｍＡｂ又はその抗原結合断片が、本開示の抗体化合物と同じ若しくは類似の機能的特性を有するか否かは、これらの方法を、以下の実施例２～７に記載する方法と組み合わせて、決定することができる。様々な実施形態では、本明細書に包含される治療方法に使用するための競合抗体は、本明細書に開示される抗体化合物のそれと比較して、約５０％～約１００％又は約１２５％、若しくはそれ以上の範囲の本明細書に記載するような生物学的活性を有する。一部の実施形態では、競合抗体は、以下に記載する実施例に開示の方法により決定される通り、本明細書に開示される抗体化合物のそれと比較して、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は同一の生物学的活性を有する。
【0105】
本組成物及び方法において有用なｍＡｂ若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、本明細書に記載されるアイソタイプのいずれであってもよい。さらに、これらのアイソタイプのいずれも、後述する通り、さらなるアミノ酸修飾を含んでもよい。
【0106】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプであってよい。
【0107】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体半減期を改変することができる。抗体半減期は、大部分が、新生児Ｆｃ受容体とのＦｃ依存性相互作用により調節される(Roopenian and Alikesh,2007)。モノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、半減期を延長することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｎ４３４Ａ、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ(Petkova et al.,2006,Yeung et al.,2009);M252Y/S254T/T256E(Dall’Acqua et al.,2006);T250Q/M428L(Hinton et al.,2006);及びM428L/N434S(Zalevsky et al.,2010)が挙げられる。
【0108】
半減期の延長とは反対に、例えば、高い抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）抗体に関連する有害事象の可能性を低減するために、短い半減期が所望されるいくつかの状況がある(Presta 2008)。本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、半減期を短縮する、及び／又は内在性ＩｇＧを低減することもでき、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：I253A(Petkova et al.,2006);P257I/N434H、D376V/N434H(Datta-Mannan et al.,2007);及びM252Y/S254T/T256E/H433K/N434F(Vaccaro et al.,2005)が挙げられる。
【0109】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を増大又は低減することができる。こうした抗体エフェクター機能として、限定されないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、Ｃ１ｑ結合、及びＦｃ受容体に対する結合の改変が挙げられる。
【0110】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を増大することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４(Shields et al.,2001)；Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ及びＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ(Lazar et al.,2006)；Ｆ２３４Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２３４Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９３Ｌ、及びＦ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ(Stevenhagen et al.,2007)；Ｇ２３６Ａ，Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ(Richards et al.,2008)；Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ｓ及びＫ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ(Idusogie et al.,2001)；Ｓ２６７Ｅ及びＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ(Smith et al.,2012)；Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ、Ｓ２６７Ｅ／Ｓ２３４Ｔ、及びＳ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ(Moore et al.,2010)；Ｓ２９８Ｇ／Ｔ２９９Ａ(Sazinsky et al.,2008)；Ｅ３８２Ｖ／Ｍ４２８Ｉ(Jung et al.,2010)が挙げられる。
【0111】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を低減することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾Ｎ２９７Ａ及びＮ２９７Ｑ(Bolt et al.,1993,Walker et al.,1989)；Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ(Xu et al.,2000)；Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ(Ghevaert et al.,2008)；Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ(McEarchern et al.,2007)；Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ (Chu et al.,2008)が挙げられる。
【0112】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を低減することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ(Cole et al.,1999)；Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３０Ｒ、Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｑ／Ａ３３０Ｓ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｄ／Ａ３３０Ｓ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｑ／Ａ３３０Ｒ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｄ／Ａ３３０Ｒ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ、Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ(An et al.,2009,Mimoto,2013)が挙げられる。
【0113】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプであってもよい。
【0114】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ２定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を増大又は低減することができる。こうした抗体エフェクター機能として、限定されないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及びＣ１ｑ結合、並びにＦｃ受容体に対する結合の改変が挙げられる。
【0115】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ２定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を増大することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ｓ(Idusogie et al.,2001)が挙げられる。
【0116】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ２定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を低減することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ(Cole et al.,1999)；Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３０Ｒ、Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｑ／Ａ３３０Ｓ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｄ／Ａ３３０Ｓ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｑ／Ａ３３０Ｒ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｄ／Ａ３３０Ｒ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ、Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ(An et al.,2009,Mimoto,2013)が挙げられる。
【0117】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ２のＦｃ領域を修飾して、アイソフォーム及び／又はアゴニスト活性を改変することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾Ｃ１２７Ｓ（ＣＨ１ドメイン）、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｃ２３２Ｓ／Ｃ２３３Ｓ、Ｃ２３６Ｓ、及びＣ２３９Ｓ（White et al., 2015、Lightle et al., 2010）が挙げられる。
【0118】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ２のＦｃ領域を修飾して、ＦｃγＲ結合能力の低下を示すが、保存されたＦｃＲｎ結合を有することができる。これらのＩｇＧ Ｆｃ突然変異体は、免疫エフェクター機能のＦｃ関連結合及び補体媒介性の細胞傷害性を最小限にしながら、可溶性又は細胞表面抗原の治療標的化を可能にする。一実施形態では、ＩｇＧ２ Ｆｃ突然変異体は、ＥＵナンバリングシステムに従って、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓを含む。別の実施形態では、ＩｇＧ２ Ｆｃ突然変異体は、ＥＵナンバリングシステムに従って、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、又はＨ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓを含む。特定の態様では、ＩｇＧ２ Ｆｃ突然変異体は、ＥＵナンバリングシステムに従って、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及び任意選択的にＰ２３３Ｓを含む。
【0119】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、ヒトＩｇＧ３アイソタイプであってもよい。
【0120】
モノクローナル抗体、若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ３定常領域であって、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片の前記ヒトＩｇＧ３定常領域を１つ又は複数のアミノ酸にて修飾して、抗体半減期、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、又はアポトーシス活性を増大することができる。
【0121】
モノクローナル抗体、若しくはその抗原結合断片のヒトＩｇＧ３定常領域であって、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片の前記ヒトＩｇＧ３定常領域をアミノ酸Ｒ４３５Ｈにて修飾して、抗体半減期を延長することができる。
【0122】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【0123】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ４定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を低減することができる。こうした抗体エフェクター機能として、限定されないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）が挙げられる。
【0124】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ４定常領域を修飾して、Ｆａｂアーム交換を防止する、及び／又は抗体エフェクター機能を低減することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ(Alegre et al.,1994);S228P,L235E及びＳ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ(Reddy et al.,2000)が挙げられる。
【0125】
本明細書で使用されるとき、用語「腫瘍」は、悪性又は良性にかかわらず、あらゆる腫瘍細胞成長及び増殖、並びにあらゆる前癌及び癌性細胞と前癌及び癌性組織を指す。
【0126】
用語「癌」、「癌性」、及び「腫瘍」は、本明細書で使用される場合、互いに限定的ではない。用語「癌」及び「癌性」は、典型的には異常細胞成長／増殖を特徴とする、哺乳類における生理学的状態を指すか、又は記述する。癌の例として、限定されないが、癌腫、リンパ腫（すなわち、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）、多発性骨髄腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられる。こうした癌の具体的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸の癌、膵臓癌、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌(liver cancer)、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜若しくは子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、白血病及びその他のリンパ増殖性障害、並びに多様なタイプの頭部及び頚部癌が挙げられる。
【0127】
用語「感受性癌」は、本明細書で使用されるとき、その細胞がＣＤ４７、ＩＲＰα、又はＣＤ４７及びＳＩＲＰαを発現すると共に、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を防止する本開示からの抗体若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体若しくはその抗原結合断片による治療に対して応答性である癌を指す。
【0128】
用語「自己免疫疾患」は、本明細書で使用されるとき、身体の免疫系が自身に向かい、誤って健全な細胞を攻撃する場合を指す。
【0129】
用語「炎症性疾患」は、本明細書で使用されるとき、局所反応及びその結果生じる形態学的変化をはじめとする、物理的、化学的若しくは生物学的因子に起因する傷害又は異常刺激に応答して患部血管及び隣接組織に起こる組織学的に明らかな細胞学的変化、細胞浸潤、及びメディエータ放出の動的複合体を含む基本的病理過程である炎症；傷害性物質の破壊又は除去；並びに修復及び治癒をもたらす応答を特徴とする疾患を指す。
【0130】
用語「自己炎症性疾患」は、本明細書で使用されるとき、自然免疫系が、原因不明の炎症を引き起こす場合に起こる疾患を指す。
【0131】
本明細書で使用されるとき、用語「治療すること」又は「治療する」又は「治療」とは、徴候、症状、障害、病状、若しくは疾患の進行又は重症度を遅延、阻止、停止、制御、停止、低減、若しくは逆転させることを意味するが、必ずしも全ての疾患関連の徴候、症状、病状、若しくは障害の排除を意味するわけではない。用語「治療する（こと）」などは、発症開始後の疾患又は病状の徴候若しくは症状を改善する治療介入を指す。
【0132】
本明細書で使用されるとき、用語「有効量」は、患者又は臓器に対する１若しくは複数用量の投与時に、所望される治療若しくは予防をもたらす本開示の抗体化合物の量又は用量を指す。
【0133】
任意の特定の被験者に対する正確な有効量は、その大きさ及び健康状態、その病状の性質及び程度、並びに投与するために選択された治療薬又は治療薬の組合せに応じて変動する。所与の患者の有効量は、常用の実験により決定され、これは、臨床医の判断で行われる。本開示の抗体化合物の治療有効量はまた、摘出された臓器又は患者に投与される１用量当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、又は約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲の量を含み得る。公知の抗体系薬剤は、これに関してガイダンスを提供する。例えば、Herceptin（商標）は、２１ｍｇ／ｍｌ溶液の静脈内注入により投与され、その場合、初期負荷投与が４ｍｇ／ｋｇ体重、毎週の維持投与が２ｍｇ／ｋｇ体重であり；Rituxan（商標）は、例えば、毎週３７５ｍｇ／ｍ２で投与される。
【0134】
任意の個別患者に対する治療有効量は、腫瘍退縮、循環腫瘍細胞、腫瘍幹細胞又は抗腫瘍応答に対する抗体化合物の作用をモニターすることによって、医療提供者が決定することができる。これらの方法で得られたデータの解析によって、療法中の治療レジメンの変更が可能になり、その結果、単独で若しくは互いに組み合わせて、又は別の治療薬と組み合わせて、或いはその両方で使用されるかにかかわらず、本開示の抗体化合物の最適量が投与され、しかも、同様に治療期間も決定することができる。このようにして、投薬／治療レジメンを療法の過程で変更することでき、その結果、満足な効果を示す、単独で若しくは組み合わせて使用される最も低い量の抗体化合物が投与され、しかも、そうした化合物の投与は、患者の治療に成功するのに必要な期間だけ継続される。公知の抗体系薬剤は、例えば、薬剤が、毎日、毎週、毎月などで投与されるべきかにかかわらず、投与頻度に関するガイダンスを提供している。頻度及び投与量は、症状の重症度に応じても変動し得る。
【0135】
一部の実施形態では、本開示の抗体化合物は、ヒト及び動物医療における薬剤として使用することができ、限定されないが、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、髄腔内、心室内、経皮(transdermal)、経皮(transcutaneous)、局所、皮下、腫瘍内、鼻内、腸内、舌下、膣内、小胞内又は直腸経路を含む様々な経路により投与される。組成物はまた、腫瘍などの病変に直接投与することもできる。投薬治療は、単回投与スケジュール又は複数回投与スケジュールのいずれであってもよい。さらに、医薬組成物を投与するために、Ｈｙｐｏスプレーを使用してもよい。典型的には、治療組成物は、溶液又は懸濁液の何れかの形態で、注射液として調製することができる。また、注射前の液体ビヒクル中の溶液又は懸濁液に好適な固体形態を調製することもできる。獣医学適用には、ネコ及びイヌなどのコンパニオン／ペット動物；盲導犬若しくは介助犬、及びウマなどの使役動物；ウマ及びイヌなどの競技動物；霊長類、ライオン及びトラなどのネコ科動物、クマなどを含む動物園動物；並びに飼育されている他の有用な動物の治療が含まれる。
【0136】
こうした医薬組成物は、当技術分野において公知の方法により調製することができる。例えば、Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21stEdition(2005),Lippincott Williams & Wilkins,Philadelphia,PAを参照されたい。また、医薬組成物は、本明細書に開示される１つ又は複数の抗体化合物、及び薬学的に許容される、例えば、生理学的に許容される、担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。
【0137】
癌適用
限定されないが、下記を含む感受性血液癌及び固形腫瘍を有する患者に好ましくは非経口的に投与することができる癌治療薬として有効な抗ＳＩＲＰαｍＡｂ及びその抗原結合断片が本明細書に開示される：全身性肥満細胞症、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍、単球性白血病、及びプラズマ細胞白血病をはじめとする白血病；多発性骨髄腫（ＭＭ）；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症(Waldenstrom’s Macroglobulinemia)；ホジキンリンパ腫、並びに例えば、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大病変(bulky diseases)ＮＨＬなどの非ホジキンリンパ腫をはじめとする、組織球性リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫を含むリンパ腫；卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌（大腸癌）、直腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌（非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌）、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、肝細胞癌（肝臓癌、肝癌）、胆嚢癌、胆管癌、食道癌、腎細胞癌、甲状腺癌、頭部及び頚部の扁平上皮癌（頭部及び頚部癌）、精巣癌、内分泌腺癌、副腎腺癌、脳下垂体癌、皮膚癌、軟組織の癌、血管の癌、脳腫瘍、神経癌、眼の癌、髄膜癌、中咽頭癌、下咽頭癌、子宮頸癌、及び子宮癌、膠芽腫、髄芽腫、星細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、ガストリノーマ、神経芽細胞腫、骨髄異形成症候群などの固形腫瘍、並びに限定されないが、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、及び軟骨肉腫などの肉腫；並びに黒色腫。
限定されないが、下記を含む感受性血液癌及び固形腫瘍を有する患者に好ましくは非経口的に投与することができる癌治療薬として有効な抗ＳＩＲＰαｍＡｂ及びその抗原結合断片が本明細書に開示される：全身性肥満細胞症、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍、単球性白血病、及びプラズマ細胞白血病をはじめとする白血病；多発性骨髄腫（ＭＭ）；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症(Waldenstrom’s Macroglobulinemia)；ホジキンリンパ腫、並びに例えば、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大病変(bulky diseases)ＮＨＬなどの非ホジキンリンパ腫をはじめとする、組織球性リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫を含むリンパ腫；卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌（大腸癌）、直腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌（非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌）、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、肝細胞癌（肝臓癌、肝癌）、胆嚢癌、胆管癌、食道癌、腎細胞癌、甲状腺癌、頭部及び頚部の扁平上皮癌（頭部及び頚部癌）、精巣癌、内分泌腺癌、副腎腺癌、脳下垂体癌、皮膚癌、軟組織の癌、血管の癌、脳腫瘍、神経癌、眼の癌、髄膜癌、中咽頭癌、下咽頭癌、子宮頸癌、及び子宮癌、膠芽腫、髄芽腫、星細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、ガストリノーマ、神経芽細胞腫、骨髄異形成症候群などの固形腫瘍、並びに限定されないが、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、及び軟骨肉腫などの肉腫；並びに黒色腫。
【0138】
癌の治療
当業者には公知のように、単剤療法又は処置が、疾患若しくは病状を治療する、又は治癒させる上で十分でない場合もあることから、癌治療には往々にして併用療法が使用される。従来の癌治療は、多くの場合、相加若しくは相乗効果を達成するための手術、放射線治療、細胞傷害性薬物の組合せ、又はこれらのアプローチの何れか若しくは全部の組合せを含む。特に有用な化学療法及び生物学的療法の併用では、様々な作用機構を介して機能する薬物を使用して、癌細胞の制御若しくは殺傷を増大し、癌細胞の成長を制御する免疫系の能力を増大し、療法中の薬物耐性の可能性を低減すると共に、個々の薬物の低用量の使用を可能にすることによって、考えられる毒性の重複を最小限にする。
当業者には公知のように、単剤療法又は処置が、疾患若しくは病状を治療する、又は治癒させる上で十分でない場合もあることから、癌治療には往々にして併用療法が使用される。従来の癌治療は、多くの場合、相加若しくは相乗効果を達成するための手術、放射線治療、細胞傷害性薬物の組合せ、又はこれらのアプローチの何れか若しくは全部の組合せを含む。特に有用な化学療法及び生物学的療法の併用では、様々な作用機構を介して機能する薬物を使用して、癌細胞の制御若しくは殺傷を増大し、癌細胞の成長を制御する免疫系の能力を増大し、療法中の薬物耐性の可能性を低減すると共に、個々の薬物の低用量の使用を可能にすることによって、考えられる毒性の重複を最小限にする。
【0139】
本発明の方法に包含される併用療法において有用な従来の抗腫瘍及び抗悪性腫瘍薬のクラスは、Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, Twelfth Edition (2010) L.L. Brunton, B.A. Chabner, and B. C. Knollmann Eds., Section VIII,“Chemotherapy of Neoplastic Diseases”, Chapters 60-63, pp. 1665-1770, McGraw-Hill, NYに開示されており、アントラサイクリン、白金、タキソール、トポイソメラーゼ（topisomerase）阻害剤、抗代謝薬、抗腫瘍抗生物質、有糸分裂阻害剤、及びアルキル化剤が含まれるが、これらに限定されない。
【0140】
上記に加えて、本開示の方法は、癌適用の治療に関し、手術、放射線により、及び／又は限定されないが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸治療薬をはじめとする、腫瘍状態を治療するために通常使用されているか、若しくは現在開発中の化学小分子又は生物学的製剤を有効量で、そうした治療が必要な患者に投与することによって、患者を治療することをさらに含む。これは、本明細書に開示されるもの以外に、抗体及び抗原結合断片、サイトカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡが挙げられる。
【0141】
本明細書に開示され、請求される治療法は、本明細書に開示される抗体を単独で、及び／又は互いに組み合わせて、及び／又はＳＩＲＰαに結合する本開示のその抗原結合断片と一緒に、及び／又は適切な生物／治療活性を呈示する競合抗体と一緒に使用すること、並びに例えば最大の治療効果を達成するためのこれらの抗体化合物のあらゆる組合せの使用を含む。
【0142】
さらに、本開示の治療方法は、これらの抗体、その抗原結合断片、競合抗体及びそれらの組合せと、具体的な適用について所望の治療効果を達成するために適切に組み合わせた（１）手術、放射線、抗腫瘍薬、抗悪性腫瘍薬、又はこれらの何れかの組合せから選択される１種若しくは複数種の抗腫瘍薬治療、又は（２）１種若しくは複数種の抗腫瘍生物剤、又は（３）当業者には明らかな（１）若しくは（２）の何れかの同等物との併用も包含する。
【0143】
腫瘍抗原に対するＴ細胞応答に影響を与える共刺激若しくは阻害相互作用をモジュレートすることによって癌への免疫応答を増大する抗体及び小分子薬物（免疫チェックポイントの阻害剤及び共刺激分子のモジュレータなど）もまた、本開示に包含される併用療法に関して特に有利であり、このようなものとして、限定されないが、他の抗ＳＩＲＰα抗体がある。ＳＩＲＰαタンパク質に結合する治療薬、例えば、ＳＩＲＰαに結合して、ＣＤ４７及びＳＩＲＰα同士の相互作用を防止する抗体又は小分子の投与を患者に投与すると、食作用による癌細胞のクリアランスが起こる。ＳＩＲＰαタンパク質に結合する治療薬は、ＣＤ４７（分化抗原群４７）、ＣＤ７０（分化抗原群７０）、ＣＤ２００（ＯＸ－２膜糖タンパク質、分化抗原群２００）、ＣＤ１５４（分化抗原群１５４、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０リガンド、分化抗原群４０リガンド）、ＣＤ２２３（リンパ球活性化遺伝子３、ＬＡＧ３、分化抗原群２２３）、ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質、活性化誘導性ＴＮＦＲファミリー受容体、ＡＩＴＲ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１８）、ＣＤ２０（分化抗原群２０）、ＣＤ２８（分化抗原群２８）、ＣＤ４０（分化抗原群４０、Ｂｐ５０、ＣＤＷ４０、ＴＮＦＲＳＦ５、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５、ｐ５０）、ＣＤ８６（Ｂ７－２、分化抗原群８６）、ＣＤ１６０（分化抗原群１６０、ＢＹ５５、ＮＫ１、ＮＫ２８）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ、分化抗原群２５８、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４、ＴＮＦＳＦ１４、ヘルペスウイルス侵入メディエータリガンド（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４、ヘルペスウイルス侵入メディエータ、分化抗原群２７０、ＬＩＧＨＴＲ、ＨＶＥＡ）、ＣＤ２７５（ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳリガンド、誘導性Ｔ細胞共刺激因子リガンド、分化抗原群２７５）、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７ホモログ３、分化抗原群２７６）、ＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０リガンド）、Ｂ７－Ｈ４（Ｂ７ホモログ４、ＶＴＣＮ１、Ｖセットドメイン含有Ｔ細胞活性化インヒビター１）、ＧＩＴＲＬ（グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体リガンド、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲリガンド）、４－１ＢＢＬ（４－１ＢＢリガンド）、ＣＤ３（分化抗原群３、Ｔ３Ｄ）、ＣＤ２５（ＩＬ２Ｒα、分化抗原群２５、インターロイキン－２受容体α鎖、ＩＬ－２受容体α鎖）、ＣＤ４８（分化抗原群４８、Ｂリンパ球活性化マーカー、ＢＬＡＳＴ－１、シグナル伝達リンパ球活性化分子２、ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ６６ａ（Ｃｅａｃａｍ－１、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１、胆汁糖タンパク質、ＢＧＰ、ＢＧＰ１、ＢＧＰＩ、分化抗原群６６ａ）、ＣＤ８０（Ｂ７－１、分化抗原群８０）、ＣＤ９４（分化抗原群９４）、ＮＫＧ２Ａ（ナチュラルキラー群２Ａ、キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＤメンバー１、ＫＬＲＤ１）、ＣＤ９６（分化抗原群９６、ＴＡｃｔＩＬＥ、Ｔ細胞活性化増大後期発現）、ＣＤ１１２（ＰＶＲＬ２、ネクチン、ポリオウイルス受容体関連２、ヘルペスウイルス侵入メディエータＢ、ＨＶＥＢ、ネクチン－２、分化抗原群１１２）、ＣＤ１１５（ＣＳＦ１Ｒ、コロニー刺激因子１受容体、マクロファージコロニー刺激因子受容体、Ｍ－ＣＳＦＲ、分化抗原群１１５）、ＣＤ２０５（ＤＥＣ－２０５、ＬＹ７５、リンパ球抗原７５、分化抗原群２０５）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１、分化抗原群２２６、ＤＮＡＸアクセサリー分子－１、ＰＴＡ１、血小板及びＴ細胞活性化抗原１）、ＣＤ２４４（分化抗原群２４４、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４）、ＣＤ２６２（ＤＲ５、ＴｒａｉｌＲ２、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、分化抗原群２６２、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＩＣＫ２、ＴＲＩＣＫＢ、ＺＴＮＦＲ９、ＴＲＩＣＫ２Ａ、ＴＲＩＣＫ２Ｂ）、ＣＤ２８４（Ｔｏｌｌ様受容体－４、ＴＬＲ４、分化抗原群２８４）、ＣＤ２８８（Ｔｏｌｌ様受容体－８、ＴＬＲ８、分化抗原群２８８）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、ＴＮＦＳＦ１５（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１５、血管内皮増殖インヒビター、ＶＥＧＩ、ＴＬ１Ａ）、ＴＤＯ２（トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ、ＴＰＨ２、ＴＲＰＯ）、ＩＧＦ－１Ｒ（１型インスリン様増殖因子）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＴＭＩＧＤ２（膜貫通及び免疫グロブリンドメイン含有タンパク質２）、ＲＧＭＢ（ＲＧＭドメインファミリー、メンバーＢ）、ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶ－ドメイン免疫グロブリン含有抑制因子、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７ホモログ５）、ＢＴＮＬ２（ブチロフィリン様タンパク質２）、Ｂｔｎ（ブチロフィリンファミリー）、ＴＩＧＩＴ（Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ）、シグレック（シアル酸結合Ｉｇ様レクチン）、すなわち、ＳＩＧＬＥＣ－１５、ニューロフィリン、ＶＥＧＦＲ（血管内皮増殖因子受容体）、ＩＬＴファミリー（ＬＩＲｓ、免疫グロブリン様転写物ファミリー、白血球免疫グロブリン様受容体）、ＮＫＧファミリー（ナチュラルキラー群ファミリー、Ｃ型レクチン膜貫通受容体）、ＭＩＣＡ（ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ）、ＴＧＦβ（トランスフォーミング増殖因子β）、ＳＴＩＮＧ経路（インターフェロン遺伝子経路の刺激因子）、アルギナーゼ（アルギニンアミジナーゼ、カナバナーゼ、Ｌ－アルギナーゼ、アルギニントランスアミジナーゼ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体変異体ＩＩＩ）、及びＨＨＬＡ２（Ｂ７－Ｈ７、Ｂ７ｙ、ＨＥＲＶ－Ｈ ＬＴＲ関連タンパク質２、Ｂ７ホモログ７）から選択される１つ又は複数の追加の細胞標的に対する抗体、化学小分子又は生物学的製剤、ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１、ＰＤ－１、ＣＤ２７９、分化抗原群２７９）、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７ホモログ１、プログラム死リガンド１、ＣＤ２７４、分化抗原群２７４）、ＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ、プログラム細胞死１リガンド２、ＰＤＣＤ１ＬＧ２、ＣＤ２７３、分化抗原群２７３）、ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４、ＣＤ１５２、分化抗原群１５２）、ＢＴＬＡ（Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ、ＣＤ２７２、分化抗原群２７２）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ、ＩＤＯ１）、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン－３、ＫＩＭ－３、腎臓傷害分子３、ＴＩＭＤ－３、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン－ドメイン３）、Ａ２Ａアデノシン受容体（ＡＤＯ受容体）、ＣＤ３９（エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ－１、分化抗原群３９、ＥＮＴＰＤ１）、及びＣＤ７３（エクト－５’－ヌクレオチダーゼ、５’－ヌクレオチダーゼ、５’－ＮＴ、分化抗原群７３）、ＣＤ２７（分化抗原群２７）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８、分化抗原群２７８、誘導性Ｔ細胞共刺激因子）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ、分化抗原群１３７、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９、ＴＮＦＲＳＦ９）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４、分化抗原群１３４）、ＴＮＦＳＦ２５（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー２５）、ＩＬ－１０（インターロイキン－１０、ヒトサイトカイン合成阻害因子、ＣＳＩＦ）、及びガレクチンの阻害剤などの治療薬と組み合わされる。
【0144】
ERBITUX（登録商標）（セツキシマブ、Bristol-Meyers Squibb）は、ヒト上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）の細胞外ドメインに特異的に結合する、認可された組換えヒト／マウスキメラモノクローナル抗体の一例である。
【0145】
RITUXAN（登録商標）（リツキシマブ、Biogen IDEC／Genentech）は、認可された抗ＣＤ２０抗体の一例である。
【0146】
YERVOY（登録商標）（イピリムマブ；Bristol-Meyers Squibb）は、認可された抗ＣＴＬＡ－４抗体の一例である。
【0147】
KEYTRUDA（登録商標）（ペムブロリズマブ；Merck）及びOPDIVO（登録商標）（ニボルマブ；Bristol-Meyers Squibb Company）は、認可された抗ＰＤ－１抗体の例である。
【0148】
TECENTRIQ（商標）（アテゾリズマブ；Roche）は、認可された抗ＰＤ－Ｌ１抗体の一例である。
【0149】
BAVENCIO（商標）（アベルマブ；Merck KGaA及びPfizer及びEli Lilly and Company）は、認可された抗ＰＤ－Ｌ１抗体の一例である。
【0150】
IMFINZI（商標）（デュルバルマブ；Medimmune／AstraZeneca）は、認可された抗ＰＤ－Ｌ１抗体の一例である。
【実施例】
【0151】
実施例は本開示の種々の実施形態を説明するが、これらの具体的に開示された実施形態のみに本開示を限定すると考えられてはならない。
【0152】
【表1】
【0153】
【表2】
【0154】
【表3】
【0155】
【表4】
【0156】
【表5】
【0157】
【表6】
【0158】
【表7】
【0159】
【表8】
【0160】
【表9】
【0161】
【表10】
【0162】
【表11】
【0163】
【表12】
【0164】
【表13】
【0165】
【表14】
【0166】
【表15】
【0167】
【表16】
【0168】
【表17】
【0169】
【表18】
【0170】
【表19】
【0171】
【表20】
【0172】
実施例２
ＳＩＲＰモノクローナル抗体のＳＩＲＰαへの結合
本開示の抗ＳＩＲＰモノクローナル抗体（ｍＡｂ）のＳＩＲＰアルファ（ＳＩＲＰα）への結合を、Ｆｃタグ付きヒトＳＩＲＰアルファを用いて固相ＥＬＩＳＡにより決定した。可溶性抗ＳＩＲＰ抗体による結合をインビトロで測定した。
ＳＩＲＰモノクローナル抗体のＳＩＲＰαへの結合
本開示の抗ＳＩＲＰモノクローナル抗体（ｍＡｂ）のＳＩＲＰアルファ（ＳＩＲＰα）への結合を、Ｆｃタグ付きヒトＳＩＲＰアルファを用いて固相ＥＬＩＳＡにより決定した。可溶性抗ＳＩＲＰ抗体による結合をインビトロで測定した。
【0173】
リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に１μｇ／ｍｌの濃度で希釈したＦｃタグ付きヒトＳＩＲＰα（ACRO #SIG-H5251、遺伝子型変異体１）を４℃で一晩、高結合マイクロタイタープレートに吸着させる。コーティング溶液を除去し、ウェルを洗浄してから、０．５％のTween 20を含有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中７５％のカゼインにより、振とうさせながら室温で６０分間遮断する。遮断溶液を除去し、ウェルを洗浄し、３０μｇ／ｍｌの開始濃度で３倍連続希釈において濃度を低下させてＰＢＳＴ中に希釈したマウス又はヒト抗ＳＩＲＰｍＡｂのいずれかと共に、振とうさせながら室温で６０分間インキュベートする。ウェルをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳＴ中に１：１０，０００で希釈したＨＲＰ標識ロバ抗マウス又は抗ヒト二次抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories）と共に、振とうさせながら室温で６０分間インキュベートする。ウェルを洗浄してから、ペルオキシダーゼ基質と共にインキュベートし、４５０ｎｍにおける吸光度を測定する。非線形適合モデル（GraphPad Prism）を用いて見かけの親和性を計算した。
【0174】
【0175】
【表21】
【0176】
実施例３
マウス抗ＳＩＲＰｍＡｂのＳＩＲＰα発現ＴＨＰ－１細胞への結合
ＳＩＲＰαを発現するがＳＩＲＰγを発現しないＴＨＰ－１細胞に対するハイブリドーマ由来マウスＳＩＲＰ抗体ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ２、及びＳＩＲＰ３の結合活性をフローサイトメトリーにより決定した。
マウス抗ＳＩＲＰｍＡｂのＳＩＲＰα発現ＴＨＰ－１細胞への結合
ＳＩＲＰαを発現するがＳＩＲＰγを発現しないＴＨＰ－１細胞に対するハイブリドーマ由来マウスＳＩＲＰ抗体ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ２、及びＳＩＲＰ３の結合活性をフローサイトメトリーにより決定した。
【0177】
ＰＢＳ、ｐＨ７．２中に希釈した増加する濃度のｍＡｂと共に、ＴＨＰ－１細胞を３７℃で６０分間インキュベートした。次に、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中のAlexa Fluor-647標識ロバ抗マウス抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories）と共にさらに１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、C6 Accuriフローサイトメーター（Becton Dickinson）を用いて結合を分析した。
【0178】
図２に示されるように、抗体は全て濃度依存的に、ＳＩＲＰα発現ＴＨＰ－１細胞に結合した。
【0179】
実施例４
ＳＩＲＰｍＡｂのＳＩＲＰγへの結合
Ｆｃタグ付きヒトＳＩＲＰγを用いて、本開示の抗ＳＩＲＰ抗体のＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合をＥＬＩＳＡにより決定した。可溶性抗ＳＩＲＰ抗体による結合をインビトロで測定した。
ＳＩＲＰｍＡｂのＳＩＲＰγへの結合
Ｆｃタグ付きヒトＳＩＲＰγを用いて、本開示の抗ＳＩＲＰ抗体のＳＩＲＰガンマ（ＳＩＲＰγ）への結合をＥＬＩＳＡにより決定した。可溶性抗ＳＩＲＰ抗体による結合をインビトロで測定した。
【0180】
リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中１μｇ／ｍｌの濃度のＦｃタグ付きヒトＳＩＲＰγ（ACRO #SIG-H5253）を４℃で一晩、高結合マイクロタイタープレートに吸着させる。コーティング溶液を除去し、ウェルを洗浄してから、０．５％のTween 20を含有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中７５％のカゼインにより、振とうさせながら室温で６０分間遮断する。遮断溶液を除去し、ウェルを洗浄し、３０μｇ／ｍｌの開始濃度で３倍連続希釈において濃度を低下させてＰＢＳＴ中に希釈した抗ＳＩＲＰｍＡｂと共に、振とうさせながら室温で６０分間インキュベートする。ウェルをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳＴ中に１：１０，０００で希釈したＨＲＰ標識ロバ抗マウス又は抗ヒト二次抗体（Jackson ImmonResearch Laboratorie）と共に、振とうさせながら室温で６０分間インキュベートする。ウェルを洗浄してから、ペルオキシダーゼ基質と共にインキュベートし、４５０ｎｍにおける吸光度を決定する。非線形適合モデル（GraphPad Prism）を用いて見かけの親和性を計算した。
【0181】
表２に示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ２、ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ４、ＳＩＲＰ５、ＳＩＲＰ６、ＳＩＲＰ７、ＳＩＲＰ９、ＳＩＲＰ１０、ＳＩＲＰ１１、ＳＩＲＰ１２、ＳＩＲＰ１６、ＳＩＲＰ１７、ＳＩＲＰ１８、ＳＩＲＰ２０、ＳＩＲＰ２１及びＳＩＲＰ２３は、ピコモル又はナノモル範囲の見かけの親和性でヒトＳＩＲＰガンマに結合した。さらに、抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ８、ＳＩＲＰ１３、ＳＩＲＰ１４、ＳＩＲＰ１５、ＳＩＲＰ１９、及びＳＩＲＰ２２は、３０μｇ／ｍｌまでのｍＡｂ濃度において、ヒトＳＩＲＰガンマにはっきりとは結合しなかった。図３Ａ～図３Ｖは、本開示の抗体から得られる代表的な結合曲線を実証する。
【0182】
【表22】
【0183】
実施例５
マウスｍＡｂのＳＩＲＰγ発現ジャーカットＴ細胞への結合
ＳＩＲＰγを発現するがＳＩＲＰαを発現しないジャーカット細胞に対するマウスハイブリドーマ由来ＳＩＲＰｍＡｂの結合活性をフローサイトメトリーにより決定した。
マウスｍＡｂのＳＩＲＰγ発現ジャーカットＴ細胞への結合
ＳＩＲＰγを発現するがＳＩＲＰαを発現しないジャーカット細胞に対するマウスハイブリドーマ由来ＳＩＲＰｍＡｂの結合活性をフローサイトメトリーにより決定した。
【0184】
リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．２中に希釈した増加する濃度の抗ＳＩＲＰｍＡｂと共に、ジャーカット細胞を３７℃、５％ＣＯ２で６０分間インキュベートした。次に、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中のAlexa Fluor-647標識ロバ抗マウス抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories）と共にさらに１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、C6 Accuriフローサイトメーター（Becton Dickinson）を用いて結合を分析した。或いは、ＰＢＳ（Corning）中に１ｍＭのＥＤＴＡ（Sigma Aldrich）、１％のＦＢＳ（Biowest）を含有する結合緩衝液中１０μｇ／ｍｌの飽和濃度のＳＩＲＰｍＡｂと共に、細胞を３７℃で１時間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、ロバ抗マウスＩｇＧフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合二次抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories）により同じ条件下で４５分間染色した。次に、細胞を洗浄し、フローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。
【0185】
図４Ａに示されるように、ＳＩＲＰ３は、ＳＩＲＰγ発現ジャーカット細胞に結合したが、ＳＩＲＰ２又はＳＩＲＰ１は結合を示さなかった。さらに、図４Ｂに示されるように、ＳＩＲＰ９は、ＳＩＲＰγに結合することが既に示されているＫＷＡＲ－２３に匹敵して、１０μｇ／ｍｌの濃度でジャーカット細胞に結合したが、ＳＩＲＰ４は、ジャーカット細胞上のＳＩＲＰγへの結合を示さなかった。
【0186】
実施例６
抗ＳＩＲＰｍＡｂはＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合を遮断する
ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を本開示の抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力をインビトロで評価するために、ヒスチジン（ＨＩＳ）タグ付きヒトＳＩＲＰαでコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂはＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合を遮断する
ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を本開示の抗ＳＩＲＰ抗体が遮断する能力をインビトロで評価するために、ヒスチジン（ＨＩＳ）タグ付きヒトＳＩＲＰαでコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを用いて以下の方法を使用した。
【0187】
ＰＢＳ中に１μｇ／ｍｌの濃度で希釈したＨＩＳタグ付きヒトＳＩＲＰα（ACRO #SIG-H5225）を４℃で一晩、高結合マイクロタイタープレートに吸着させる。コーティング溶液を除去し、ウェルを洗浄してから、０．５％のTween 20を含有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中７５％のカゼインにより、振とうさせながら室温で６０分間遮断する。遮断溶液を除去し、ウェルを洗浄し、３０μｇ／ｍｌの開始濃度で３倍連続希釈により濃度を低下させてＰＢＳＴ中に希釈した抗ＳＩＲＰｍＡｂと共に、振とうさせながら室温で６０分間インキュベートする。ウェルをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳＴ中２５０ｎｇ／ｍｌの濃度のＦＣタグ付きヒトＣＤ４７（ACRO #CD7-H5256）と共に、振とうさせながら室温で６０分間インキュベートする。ウェルをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳＴ中に１：２０，０００で希釈したＨＲＰ標識ロバ抗マウス又は抗ヒト二次抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories）と共に、振とうさせながら室温で６０分間インキュベートする。ウェルを洗浄してから、ペルオキシダーゼ基質と共にインキュベートし、４５０ｎｍにおける吸光度を決定する。非線形適合モデル（GraphPad Prism）を用いてＩＣ５０を計算した。
【0188】
表３に示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ２、ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ４、及びＳＩＲＰ７は、ナノモル範囲のＩＣ５０値で、ヒトＳＩＲＰαのヒトＣＤ４７への結合を遮断する。さらに、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ５、ＳＩＲＰ６、ＳＩＲＰ８、及びＳＩＲＰ１０は、３０μｇ／ｍｌまでのｍＡｂ濃度において、ヒトＳＩＲＰαのヒトＣＤ４７への結合を遮断することができなかった。図５Ａ～図５Ｇは、本開示の抗体から得られる代表的な阻害曲線を実証する。
【0189】
【表23】
【0190】
実施例７
抗ＳＩＲＰモノクローナル抗体はＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合を遮断する
ＣＤ４７のＳＩＲＰγへの結合に対する本開示の抗ＳＩＲＰｍＡｂの効果をインビトロで評価するために、ＨＩＳタグ付きヒトＣＤ４７でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰモノクローナル抗体はＣＤ４７／ＳＩＲＰγ結合を遮断する
ＣＤ４７のＳＩＲＰγへの結合に対する本開示の抗ＳＩＲＰｍＡｂの効果をインビトロで評価するために、ＨＩＳタグ付きヒトＣＤ４７でコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを用いて以下の方法を使用した。
【0191】
ＰＢＳ中に２μｇ／ｍｌの濃度で希釈したＨＩＳタグ付きヒトＣＤ４７（ACRO #CD7-H5227）を４℃で一晩、高結合マイクロタイタープレートに吸着させる。コーティング溶液を除去し、ウェルを洗浄してから、０．５％のTween 20を含有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中７５％のカゼインにより、振とうさせながら室温で６０分間遮断する。遮断溶液を除去し、ウェルを洗浄し、３０μｇ／ｍｌの開始濃度で３倍連続希釈において濃度を低下させてＰＢＳＴ中に希釈した抗ＳＩＲＰｍＡｂ、及び０．５μｇ／ｍｌのヒトＳＩＲＰγ（ACRO# SIG-H5253）と共に、振とうさせながら室温で６０分間インキュベートする。ウェルをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳＴ中に１：２０，０００で希釈したＨＲＰ標識ロバ抗マウス又は抗ヒト二次抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories）と共に、振とうさせながら室温で６０分間インキュベートする。ウェルを洗浄してから、ペルオキシダーゼ基質と共にインキュベートし、４５０ｎｍにおける吸光度を決定する。非線形適合モデル（GraphPad Prism）を用いてＩＣ５０を計算した。
【0192】
表４に示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ２、ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ４、ＳＩＲＰ５、ＳＩＲＰ６、及びＳＩＲＰ７は、ナノモル範囲のＩＣ５０値でヒトＳＩＲＰγのヒトＣＤ４７への結合を遮断する。さらに、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ８、ＳＩＲＰ９、及びＳＩＲＰ１０は、３０μｇ／ｍｌまでのｍＡｂ濃度において、ヒトＳＩＲＰγのヒトＣＤ４７への結合を遮断することができなかった。図６Ａ～図６Ｈは、本開示の抗体から得られる代表的な阻害曲線を実証する。
【0193】
【表24】
【0194】
実施例８
抗ＳＩＲＰｍＡｂは食作用を誘発する
マクロファージによる腫瘍細胞の食作用に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂは食作用を誘発する
マクロファージによる腫瘍細胞の食作用に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
【0195】
ヒト単球由来マクロファージを健常ヒト末梢血の白血球除去から得て、５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦ（Biolegend）を補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Life Technologies）中で７日間インキュベートした。インビトロ食作用アッセイのために、９６ウェルプレート内の５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦを補充した１００μｌのＡＩＭ－Ｖ培地中、ウェル当たり３×１０４細胞の濃度でマクロファージを再プレーティングし、２４時間接着させた。エフェクターマクロファージが培養皿に接着したらすぐに、標的ヒト癌細胞（ジャーカット）を１μＭの５（６）－カルボキシフルオレセインジアセタートＮ－スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ；Sigma Aldrich）で標識し、補充なしの１００μｌのＡＩＭ－Ｖ培地中に８×１０４細胞の濃度でマクロファージ培養物に添加した。標的細胞及びエフェクター細胞を混合したらすぐに、種々の濃度の抗ＳＩＲＰｍＡｂ（図７Ａ）、又は１０μｇ／ｍｌの抗体（図７Ｂ）を添加し、３７℃で３時間インキュベートさせた。３時間後に、貪食されていない細胞を全て除去し、残りの細胞をＰＢＳで３回洗浄した。次に、細胞をAccutase（Stemcell Technologies）中でインキュベートしてマクロファージを切り離し、微量遠心管内に集め、１００ｎｇのアロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識ＣＤ１４抗体（BD biosciences）中で３０分間インキュベートし、１回洗浄し、完全な食作用を示すＣＦＳＥ＋でもあるＣＤ１４＋細胞の割合について、フローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。
【0196】
図７Ａ及び図７Ｂに示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ４、ＳＩＲＰ９、ＳＩＲＰ１１、ＳＩＲＰ１２、ＳＩＲＰ１３、ＳＩＲＰ１４、ＳＩＲＰ１５、ＳＩＲＰ１６、ＳＩＲＰ１７、ＳＩＲＰ１８、ＳＩＲＰ１９、ＳＩＲＰ２０、ＳＩＲＰ２１、ＳＩＲＰ２２及びＳＩＲＰ２３は、マウスＩｇＧ１対照抗体（Biolegend）と比べて、ヒトマクロファージによるジャーカット細胞の食作用を誘発した。それに対して、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ２、ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ７、ＳＩＲＰ８及びＳＩＲＰ１０は、ヒトマクロファージによるジャーカット細胞の食作用を誘発しなかった。
【0197】
実施例９
抗ＳＩＲＰｍＡｂは、抗ＣＤ４７抗体と組み合わされたときに食作用を誘発する
マクロファージによる腫瘍細胞の食作用の誘発に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂ及び抗ＣＤ４７ｍＡｂの組合せの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂは、抗ＣＤ４７抗体と組み合わされたときに食作用を誘発する
マクロファージによる腫瘍細胞の食作用の誘発に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂ及び抗ＣＤ４７ｍＡｂの組合せの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
【0198】
ヒト単球由来マクロファージを健常ヒト末梢血の白血球除去から得て、５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦ（Biolegend）を補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Life Technologies）中で７日間インキュベートした。インビトロ食作用アッセイのために、９６ウェルプレート内の５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦを補充した１００μｌのＡＩＭ－Ｖ培地中、ウェル当たり３×１０４細胞の濃度でマクロファージを再プレーティングし、２４時間接着させた。エフェクターマクロファージが培養皿に接着したらすぐに、標的ヒト癌細胞（ジャーカット）を１μＭの５（６）－カルボキシフルオレセインジアセタートＮ－スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ；Sigma Aldrich）で標識し、補充なしの１００μｌのＡＩＭ－Ｖ培地中に８×１０４細胞の濃度でマクロファージ培養物に添加した。標的細胞及びエフェクター細胞を混合したらすぐに、抗ＳＩＲＰｍＡｂ単独、抗ＣＤ４７ｍＡｂ（食作用を誘発することが知られている）単独、又は抗ＳＩＲＰ及び抗ＣＤ４７ｍＡｂの合わせたものを種々の濃度で添加し、３７℃で３時間インキュベートさせた。３時間後に、貪食されていない細胞を全て除去し、残りの細胞をＰＢＳで３回洗浄した。次に、細胞をAccutase（Stemcell Technologies）中でインキュベートしてマクロファージを切り離し、微量遠心管内に集め、１００ｎｇのアロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識ＣＤ１４抗体（BD biosciences）中で３０分間インキュベートし、１回洗浄し、完全な食作用を示すＣＦＳＥ＋でもあるＣＤ１４＋細胞の割合について、フローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。
【0199】
図８Ａ～図８Ｊに示されるように、全ての可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ２、ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ４、ＳＩＲＰ５、ＳＩＲＰ７、ＳＩＲＰ１２、ＳＩＲＰ２０、ＳＩＲＰ２１及びＳＩＲＰ２２は抗ＣＤ４７ｍＡｂと組み合わされたときに、いずれかの薬剤単独の場合と比べて、ヒトマクロファージによるジャーカット細胞の食作用をより大きく増大させる。
【0200】
実施例１０
抗ＳＩＲＰｍＡｂはRituxanと組み合わされて食作用を誘発する
マクロファージによる腫瘍細胞の食作用の誘発に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂ及び抗ＣＤ２０ｍＡｂの組合せの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂはRituxanと組み合わされて食作用を誘発する
マクロファージによる腫瘍細胞の食作用の誘発に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂ及び抗ＣＤ２０ｍＡｂの組合せの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
【0201】
ヒト単球由来マクロファージを健常ヒト末梢血の白血球除去から得て、５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦ（Biolegend）を補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Life Technologies）中で７日間インキュベートした。インビトロ食作用アッセイのために、９６ウェルプレート内の５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦを補充した１００μｌのＡＩＭ－Ｖ培地中、ウェル当たり３×１０４細胞の濃度でマクロファージを再プレーティングし、２４時間接着させた。エフェクターマクロファージが培養皿に接着したらすぐに、標的ヒト癌細胞（ＲＡＪＩ）を１μＭの５（６）－カルボキシフルオレセインジアセタートＮ－スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ；Sigma Aldrich）で標識し、補充なしの１００μｌのＡＩＭ－Ｖ培地中に８×１０４細胞の濃度でマクロファージ培養物に添加した。標的細胞及びエフェクター細胞を混合したらすぐに、抗ＳＩＲＰｍＡｂ単独、抗ＣＤ２０ｍＡｂ（Rituxan、Roche）単独、又は抗ＳＩＲＰ及び抗ＣＤ２０ｍＡｂの合わせたものを種々の濃度で添加し、３７℃で３時間インキュベートさせた。３時間後に、貪食されていない細胞を全て除去し、残りの細胞をＰＢＳで３回洗浄した。次に、細胞をAccutase（Stemcell Technologies）中でインキュベートしてマクロファージを切り離し、微量遠心管内に集め、１００ｎｇのアロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識ＣＤ１４抗体（BD biosciences）中で３０分間インキュベートし、１回洗浄し、完全な食作用を示すＣＦＳＥ＋でもあるＣＤ１４＋細胞の割合について、フローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。
【0202】
図９Ａ～図９Ｄに示されるように、全ての可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ１、ＳＩＲＰ２、ＳＩＲＰ３、及びＳＩＲＰ７は抗ＣＤ２０ｍＡｂと組み合わされたときに、いずれかの薬剤単独の場合と比べて、ヒトマクロファージによるＲＡＪＩ細胞の食作用をより大きく増大させた。
【0203】
実施例１１
抗ＳＩＲＰｍＡｂはErbitux及びアベルマブと組み合わされて食作用を誘発する
マクロファージによる腫瘍細胞の食作用の誘発に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂ及び抗ＥＧＦＲｍＡｂ又は抗ＰＤ－Ｌ１ｍＡｂの組合せの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂはErbitux及びアベルマブと組み合わされて食作用を誘発する
マクロファージによる腫瘍細胞の食作用の誘発に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂ及び抗ＥＧＦＲｍＡｂ又は抗ＰＤ－Ｌ１ｍＡｂの組合せの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
【0204】
ヒト単球由来マクロファージを健常ヒト末梢血の白血球除去から得て、５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦ（Biolegend）を補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Life Technologies）中で７日間インキュベートした。インビトロ食作用アッセイのために、９６ウェルプレート内の５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦを補充した１００μｌのＡＩＭ－Ｖ培地中、ウェル当たり３×１０４細胞の濃度でマクロファージを再プレーティングし、２４時間接着させた。エフェクターマクロファージが培養皿に接着したらすぐに、標的ヒト癌細胞（ＦａＤｕ又はＥＳ－２）を１μＭの５（６）－カルボキシフルオレセインジアセタートＮ－スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ；Sigma Aldrich）で標識し、補充なしの１００μｌのＡＩＭ－Ｖ培地中に８×１０４細胞の濃度でマクロファージ培養物に添加した。標的細胞及びエフェクター細胞を混合したらすぐに、抗ＳＩＲＰｍＡｂ単独、抗ＥＧＦＲｍＡｂ（Erbitux、Bristol-Myers Squibb）単独、抗ＰＤ－Ｌ１ｍＡｂ（アベルマブ、Pfizer）、又は抗ＳＩＲＰ及び抗ＥＧＦＲｍＡｂの合わせたものを種々の濃度で添加し、３７℃で３時間インキュベートさせた。３時間後に、貪食されていない細胞を全て除去し、残りの細胞をＰＢＳで３回洗浄した。次に、細胞をAccutase（Stemcell Technologies）中でインキュベートしてマクロファージを切り離し、微量遠心管内に集め、１００ｎｇのアロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識ＣＤ１４抗体（BD biosciences）中で３０分間インキュベートし、１回洗浄し、完全な食作用を示すＣＦＳＥ＋でもあるＣＤ１４＋細胞の割合について、フローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。
【0205】
図１０Ａに示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ４は抗ＥＧＦＲｍＡｂと組み合わされたときに、いずれかの薬剤単独の場合と比べて、ヒトマクロファージによるＦａＤｕ細胞の食作用をより大きく増大させた。図１０Ｂに示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ４は抗ＰＤ－Ｌ１ｍＡｂと組み合わされたときに、いずれかの薬剤単独の場合と比べて、ヒトマクロファージによるＥＳ－２細胞の食作用をより大きく増大させた。
【0206】
実施例１２
ヒトマクロファージ及び樹状細胞への抗ＳＩＲＰｍＡｂの結合
ヒトマクロファージ及び樹状細胞などのＳＩＲＰα発現細胞への抗ＳＩＲＰｍＡｂの結合を評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
ヒトマクロファージ及び樹状細胞への抗ＳＩＲＰｍＡｂの結合
ヒトマクロファージ及び樹状細胞などのＳＩＲＰα発現細胞への抗ＳＩＲＰｍＡｂの結合を評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
【0207】
末梢血単核細胞（Astarte Biologics）から単離したヒトＣＤ１４＋単球をインビトロで７日間、マクロファージ又は樹状細胞に分化させた。マクロファージ分化の場合、５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦ（Biolegend）を補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Life Technologies）中で７日間、単球をインキュベートした。樹状細胞分化の場合、１０％のヒトＡＢ血清（Valley Biomedical）、２００ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦ（Biolegend）及び５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４（Biolegend）の存在下、単球をＡＩＭ－Ｖ培地（Life Technologies）中でインキュベートした。ＰＢＳ（Corning）中に１ｍＭのＥＤＴＡ（Sigma Aldrich）及び１％のＦＢＳ（Biowest）を含有する結合緩衝液中のＳＩＲＰｍＡｂの連続希釈物と共に、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、ロバ抗マウスＩｇＧフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合二次抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories）により同じ条件下で４５分間染色した。続いて、Alexa Fluor 647フルオロフォアにコンジュゲートした抗ＣＤ１４又は抗ＣＤ１１ｃ（それぞれ、Life Technologies及びBiolegend）により、細胞を氷上で３０分間染色し、洗浄し、フローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。二次抗体のみで染色した細胞から差し引いたＣＤ１４＋又はＣＤ１１ｃ＋細胞のＦＩＴＣ蛍光強度の中央値として、結合を評価した。
【0208】
表５に示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ４、ＳＩＲＰ５及びＳＩＲＰ９、並びにＯＳＥ－１８Ｄ５及びＫＷＡＲ－２３は、ピコモル範囲の見かけの親和性で、樹状細胞及び／又はマクロファージ上の細胞発現ＳＩＲＰαに結合した。図１１は、本開示の抗体から得られる代表的な結合曲線を実証する。
【0209】
【表25】
【0210】
実施例１３
抗ＳＩＲＰｍＡｂはヒトＣＤ３＋ Ｔ細胞への可変的な結合を示す
ヒトＣＤ３ Ｔ細胞に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂの結合を評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂはヒトＣＤ３＋ Ｔ細胞への可変的な結合を示す
ヒトＣＤ３ Ｔ細胞に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂの結合を評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
【0211】
末梢血単核細胞（Astarte Biologics）から単離したヒトＣＤ３ Ｔ細胞を２．５×１０５細胞／ウェルにおいて９６ウェルＶ底プレート内で、ＰＢＳ（Corning）中に１ｍＭのＥＤＴＡ（Sigma Aldrich）、１％のＦＢＳ（Biowest）を含有する結合緩衝液中のＳＩＲＰｍＡｂの連続希釈物と共に、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。次に、細胞を洗浄し、ロバ抗マウスＩｇＧフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）結合二次抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories）により同じ条件下で４５分間染色した。続いて、３－カルボキシ－６，８－ジフルオロ－７－ヒドロキシクマリン（Pacific Blue）フルオロフォアにコンジュゲートした抗ＣＤ３（BioLegend）により、細胞を氷上で３０分間染色し、洗浄し、フローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。二次抗体のみで染色したＣＤ３＋細胞から差し引いたＣＤ３＋細胞のＦＩＴＣ蛍光強度の中央値として、結合を評価した。ＬＳＢ２．２０（BioLegend）を除いて、全てのＳＩＲＰ抗体を社内で作製した。活性化Ｔ細胞については、結合アッセイの前に、１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（クローンＵＣＨＴ１；BioLegend）をコーティングした９６ウェル平底プレート内で、０．５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８（クローンＣＤ２８．２；BioLegend）の存在下、１×１０５細胞／ウェルでＣＤ３ Ｔ細胞を７２時間活性化した。
【0212】
表６に示されるように、可溶性ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ７、ＳＩＲＰ９、ＫＷＡＲ－２３、及びＳＩＲＰγ特異的抗体ＬＳＢ２．２０は、ピコモル範囲の親和性で、Ｔ細胞に結合する。抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ４、ＳＩＲＰ５及びＯＳＥ－１８Ｄ５の親和性ははるかに低く、ナノモル範囲である。図１２Ａ、図１２Ｂ、及び図１２Ｃは、本開示の抗体から得られる代表的な結合曲線を実証する。
【0213】
【表26】
【0214】
実施例１４
抗ＳＩＲＰｍＡｂは可溶性ＣＤ４７／細胞ＳＩＲＰγ結合を遮断しない
可溶性ＣＤ４７のＳＩＲＰγ発現細胞への結合の遮断に対する本開示の抗ＳＩＲＰ抗体の効果を評価するために、可溶性ヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７を用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂは可溶性ＣＤ４７／細胞ＳＩＲＰγ結合を遮断しない
可溶性ＣＤ４７のＳＩＲＰγ発現細胞への結合の遮断に対する本開示の抗ＳＩＲＰ抗体の効果を評価するために、可溶性ヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７を用いて以下の方法を使用した。
【0215】
ヒトＴ－ＡＬＬ細胞（ジャーカット）を、２．５×１０５細胞／ウェルにおいて、ＰＢＳ（Corning）中に１ｍＭのＥＤＴＡ（Sigma Aldrich）、１％のＦＢＳ（Biowest）を含有する結合緩衝液中１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰｍＡｂと共に３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。この後、５０μｇ／ｍｌの最終濃度に対して可溶性ヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７（ACRO #CD7-H5256）を添加し、上記のように細胞をさらに１時間インキュベートした。次に、細胞を十分に洗浄し、Alexa Fluor 647にコンジュゲートしたロバ抗ヒト抗体（Jackson ImmunoResearch）により同じ条件下で４５分間染色した。サンプルをフローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。分析のために、可溶性Ｆｃタグ付きＣＤ４７の非存在下でのバックグラウンドヒトＩｇＧ１ Ｆｃ染色を、Alexa Fluor 647蛍光強度の中央値から差し引いた。マウスＩｇＧ１（Biolegend、ＭＯＰＣ－２１）対照と比較して、ＳＩＲＰｍＡｂの存在下のバックグラウンド補正したAlexa Fluor 647の蛍光強度中央値の低下として、遮断を評価した。
【0216】
表７に示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ４、ＳＩＲＰ９、及びＯＳＥ １８Ｄ５は、細胞発現ＳＩＲＰγの可溶性ヒトＣＤ４７への結合を遮断しない。ＫＷＡＲ－２３は、ジャーカット細胞発現ＳＩＲＰγの可溶性ヒトＣＤ４７への結合を遮断する。
【0217】
【表27】
【0218】
実施例１５
抗ＳＩＲＰｍＡｂは可溶性ＣＤ４７／細胞ＳＩＲＰα結合を遮断する
可溶性ＣＤ４７のＳＩＲＰα発現細胞への結合に対する本開示の抗ＳＩＲＰ抗体の効果を評価するために、ヒトマクロファージ及び可溶性ヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７を用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂは可溶性ＣＤ４７／細胞ＳＩＲＰα結合を遮断する
可溶性ＣＤ４７のＳＩＲＰα発現細胞への結合に対する本開示の抗ＳＩＲＰ抗体の効果を評価するために、ヒトマクロファージ及び可溶性ヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７を用いて以下の方法を使用した。
【0219】
末梢血単核細胞（Astarte Biologics）から単離したヒトＣＤ１４＋単球をインビトロで７日間、５０ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦ（Biolegend）を補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Life Technologies）中で分化させた。次に、マクロファージＦｃ受容体をヒトＦｃ受容体遮断溶液（Biolegend）により室温で２０分間遮断した。次に、細胞を洗浄し、ＰＢＳ（Corning）中に１ｍＭのＥＤＴＡ（Sigma Aldrich）、１％のＦＢＳ（Biowest）を含有する結合緩衝液中１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰｍＡｂと共に、３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。この後、２０μｇ／ｍｌの最終濃度に対して可溶性ヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４７（ACRO #CD7-H5256）を添加し、上記のように細胞をさらに１時間インキュベートした。次に、細胞を十分に洗浄し、Alexa Fluor 647にコンジュゲートしたロバ抗ヒト抗体（Jackson ImmunoResearch）により同じ条件下で４５分間染色した。サンプルをフローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。分析のために、可溶性Ｆｃタグ付きＣＤ４７の非存在下でのバックグラウンドヒトＩｇＧ１ Ｆｃ染色を、Alexa Fluor 647蛍光強度の中央値から差し引いた。マウスＩｇＧ１（Biolegend、ＭＯＰＣ－２１）対照と比較して、ＳＩＲＰｍＡｂの存在下のバックグラウンド補正したAlexa Fluor 647の蛍光強度中央値の低下として、遮断を評価した。これらのアッセイにおいて４つの異なる単球ドナーを使用し、試験した抗体につき最低３つのドナーを用いた。
【0220】
図１３に示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ４及びＳＩＲＰ９は、マクロファージ上の細胞発現ＳＩＲＰαの可溶性ヒトＣＤ４７への結合を遮断する。ＯＳＥ １８Ｄ５ｍＡｂは、細胞発現ＳＩＲＰαの可溶性ヒトＣＤ４７への結合を遮断しない。
【0221】
実施例１６
抗ＳＩＲＰｍＡｂはＴ細胞増殖を阻害しない
同種異系樹状細胞に誘発されるＴ細胞増殖に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂはＴ細胞増殖を阻害しない
同種異系樹状細胞に誘発されるＴ細胞増殖に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
【0222】
１０％のヒトＡＢ血清（Valley Biomedical）、２００ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦ（Biolegend）及び５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４（Biolegend）を補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Life Technologies）中で、２日目に新鮮なサイトカイン豊富な培地を添加して、ＣＤ１４＋単球（Astarte Biologics）を６日間インキュベートすることにより、ヒト単球由来樹状細胞を作製した。同種異系樹状細胞及びＴ細胞の共培養アッセイのために、未成熟樹状細胞をウェル当たり１×１０５細胞の濃度で９６ウェルプレート上に再プレーティングした。４つの異なるドナーからのCellTrace（商標）Violet（Life Technologies）蛍光細胞増殖色素標識された同種異系健常ドナー由来ＣＤ３＋ Ｔ細胞（Astarte Biologics）を１：５のＤＣ：Ｔ細胞比で培養物に添加した。すぐに抗ＳＩＲＰｍＡｂを１０μｇ／ｍｌの飽和濃度で添加し、２００μｌの全体積において細胞を３７℃、５％ＣＯ２で６～７日間インキュベートした。次に、ピペットの先端でウェルをこすることによって細胞を取り外し、蛍光活性化細胞選別緩衝液（ＰＢＳ中１％のＦＢＳ、Biowest）中で洗浄した。次に、細胞をＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５蛍光染料標識ＣＤ３抗体（Biolegend）と共に氷上で３０分間インキュベートし、１回洗浄し、フローサイトメトリー（Attune、Life Technologies）により分析した。ＣＤ３＋細胞集団内のCellTrace（商標）Violet色素の希釈によってＴ細胞増殖を測定した。
【0223】
図１４Ａ及び図１４Ｂに示されるように、抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ３、ＳＩＲＰ４、ＳＩＲＰ５、ＳＩＲＰ９、ＳＩＲＰ１１、ＳＩＲＰ１２、ＳＩＲＰ１３、ＳＩＲＰ１４、ＳＩＲＰ１５、ＳＩＲＰ１７、ＳＩＲＰ１８、ＳＩＲＰ２０、ＳＩＲＰ２１、ＳＩＲＰ２３及びＯＳＥ－１８Ｄ５は、対照抗体（Biolegend）と比較して、Ｔ細胞増殖に対する有意な効果がなかった。それに対して、ＣＤ４７へのＳＩＲＰα及びＳＩＲＰγ結合の両方を遮断するＫＷＡＲ－２３は、Ｔ細胞増殖を阻害した。
【0224】
実施例１７
抗ＳＩＲＰｍＡｂは抗原特異的Ｔ細胞リコール応答を阻害しない
Ｔ細胞における抗原リコール応答に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
抗ＳＩＲＰｍＡｂは抗原特異的Ｔ細胞リコール応答を阻害しない
Ｔ細胞における抗原リコール応答に対する抗ＳＩＲＰｍＡｂの効果をインビトロで評価するために、フローサイトメトリーを用いて以下の方法を使用した。
【0225】
サイトメガロウイルス血清陽性ドナーからのヒト末梢血単核細胞（Astarte Biologics）をCellTrace（商標）Violet（Life Technologies）蛍光細胞増殖色素で標識し、９６ウェルプレートに２００，０００細胞／ウェルで播種した。次に、１０％のヒトＡＢ血清（Valley Biomedical）を補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Life Technologies）中で、様々な濃度のサイトメガロウイルス抗原（Astarte Biologics）と共に細胞をインキュベートした。これはＴ細胞増殖の抗原依存性刺激を誘発する。すぐに抗ＳＩＲＰｍＡｂ、並びに抗ＣＤ４７ｍＡｂ、クローンＢ６Ｈ１２（Biolegend）を１０μｇ／ｍｌの飽和濃度で添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で５日間インキュベートした。ＣＤ４＋細胞集団内のCellTrace（商標）Violet色素の希釈によってＴ細胞増殖を測定した。
【0226】
図１５に示されるように、可溶性抗ＳＩＲＰｍＡｂ ＳＩＲＰ４、ＳＩＲＰ５及びＳＩＲＰ９は、Ｔ細胞がＣＭＶ抗原リコール応答を誘発する能力を阻害しなかった。それに対して、Ｔ細胞応答を阻害することが知られている抗ＣＤ４７抗体クローンＢ６Ｈ１２は、マウスＩｇＧ１対照抗体（Biolegend）と比較して、Ｔ細胞増殖を低減した。
【0227】
【表28】
【0228】
【表29】
【0229】
【表30】
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図1D】
【図1E】
【図1F】
【図1G】
【図1H】
【図1I】
【図1J】
【図1K】
【図1L】
【図1M】
【図1N】
【図1O】
【図1P】
【図1Q】
【図1R】
【図1S】
【図1T】
【図1U】
【図1V】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図3E】
【図3F】
【図3G】
【図3H】
【図3I】
【図3J】
【図3K】
【図3L】
【図3M】
【図3N】
【図3O】
【図3P】
【図3Q】
【図3R】
【図3S】
【図3T】
【図3U】
【図3V】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図5E】
【図5F】
【図5G】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図6E】
【図6F】
【図6G】
【図6H】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図8E】
【図8F】
【図8G】
【図8H】
【図8I】
【図8J】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図9D】
【図10A】
【図10B】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【図12C】
【図13】
【図14A】
【図14B】
【図15】
【配列表】
【国際調査報告】