特表2022-508835眼咽頭筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）を治療するための方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-19
(54)【発明の名称】眼咽頭筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）を治療するための方法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/7105 20060101AFI20220112BHJP
C12N 15/113 20100101ALI20220112BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20220112BHJP
C12N 15/864 20060101ALI20220112BHJP
C12N 15/867 20060101ALI20220112BHJP
C12N 15/861 20060101ALI20220112BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20220112BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20220112BHJP
A61P 11/04 20060101ALI20220112BHJP
A61P 21/02 20060101ALI20220112BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20220112BHJP
A61K 35/761 20150101ALI20220112BHJP
【ＦＩ】
A61K31/7105
C12N15/113 Z ZNA
C12N15/12
C12N15/864 100Z
C12N15/867 Z
C12N15/861 Z
A61K48/00
A61K35/76
A61P11/04
A61P21/02
A61P27/02
A61K35/761
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021546400
(86)(22)【出願日】2019-10-17
(85)【翻訳文提出日】2021-04-20
(86)【国際出願番号】 AU2019051134
(87)【国際公開番号】W WO2020077412
(87)【国際公開日】2020-04-23
(31)【優先権主張番号】62/747,089
(32)【優先日】2018-10-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521161060
【氏名又は名称】ベニテック バイオファーマ リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002572
【氏名又は名称】特許業務法人平木国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ストリングス－ウフォムバー，ヴァネッサ
(72)【発明者】
【氏名】スーイ，デイヴィッド
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
4C087
【Ｆターム（参考）】
4C084AA13
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA33
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4C084ZA94
4C086AA01
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4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA66
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4C086ZA59
4C086ZA94
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC83
4C087CA12
4C087CA20
4C087MA66
4C087NA14
4C087ZA33
4C087ZA59
4C087ZA94
(57)【要約】
本開示は、眼咽頭筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）に罹患しているか、またはそれに罹患しやすい個人におけるＯＰＭＤの治療のために、短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）などのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）試薬を含む遺伝子療法構築物を、ＲＮＡｉ試薬によって標的化されない機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするポリヌクレオチドなどのＰＡＢＰＮ１置換試薬と組み合わせて投与する方法に関する。ある特定の態様では、方法は、対象の咽頭筋への直接注射を含む。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
眼咽頭筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）に罹患している対象を治療するための方法であって、（ａ）短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸と、
（ｂ）前記核酸によってコードされた前記ｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含むＰＡＢＰＮ１構築物と、を含む組成物を前記対象に投与することを含み、前記組成物が、前記対象の咽頭筋への直接注射によって投与される、前記方法。
【請求項2】
対象における眼咽頭筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）の原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を阻害する方法であって、前記方法が、（ａ）短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物と、
（ｂ）前記ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされた前記ｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含むＰＡＢＰＮ１構築物と、を含む組成物を前記対象に投与することを含み、前記組成物が、前記対象の咽頭筋への直接注射によって投与される、前記方法。
【請求項3】
前記対象が、前記対象の咽頭筋への直接注射によって前記組成物を投与することに続いて改善した嚥下を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
組成物が、前記ｄｄＲＮＡｉ構築物、前記ＰＡＢＰＮ１構築物、またはそれらの組み合わせを含む発現ベクターを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
前記発現ベクターが、５’から３’方向に、前記ｄｄＲＮＡｉ構築物及び前記ＰＡＢＰＮ１構築物を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記発現ベクターが、５’から３’方向に、前記ＰＡＢＰＮ１構築物及び前記ｄｄＲＮＡｉ構築物を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項7】
前記発現ベクターが、プラスミドまたはミニサークルである、請求項４～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項8】
前記発現ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルス（ＡｄＶ）ベクター、及びレンチウイルス（ＬＶ）ベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである、請求項４～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
前記核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、及び／またはＰＡＢＰＮ１構築物が発現構築物内に含まれ、前記発現構築物がＡＡＶ血清型からの逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項４～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
前記ＡＡＶ血清型が、ＡＡＶ２、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９である、請求項４～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする前記ＤＮＡ配列が、そのｍＲＮＡ転写物が前記ｄｄＲＮＡｉ構築物の前記ｓｈｍｉＲによって標的化されないように、コドン最適化される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
前記機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする前記ＤＮＡ配列が、配列番号７３に定められる、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項13】
前記機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする前記ＤＮＡ配列が、前記ＰＡＢＰＮ１構築物内に含まれたプロモーターに作動可能に連結され、前記機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする前記ＤＮＡ配列の上流に位置する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項14】
前記ＰＡＢＰＮ１構築物内に含まれた前記プロモーターが、筋特異的プロモーターである、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
前記ｓｈｍｉＲが、長さが少なくとも１７ヌクレオチドのエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
プライマリマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）骨格と、を含み、
前記エフェクター配列が、ヒトＰＡＢＰＮ１のＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項16】
前記ｓｈｍｉＲが、配列番号８７に定められたＲＮＡ配列内で対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記ｓｈｍｉＲが、配列番号１～１３のいずれか１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含む、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項18】
前記ｓｈｍｉＲが、配列番号１５に定められたエフェクター配列と、配列番号１４に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号１９に定められたエフェクター配列と、配列番号１８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号２１に定められたエフェクター配列と、配列番号２０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号２３に定められたエフェクター配列と、配列番号２２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号２５に定められたエフェクター配列と、配列番号２４に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号２７に定められたエフェクター配列と、配列番号２６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号２９に定められたエフェクター配列と、配列番号２８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号３５に定められたエフェクター配列と、配列番号３４に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、
配列番号３７に定められたエフェクター配列と、配列番号３６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲ、及び
配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲからなる群から選択される、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項19】
前記ｓｈｍｉＲが、５’から３’方向に、前記ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列と、
前記エフェクター相補配列と、
前記ステムループ配列と、
前記エフェクター配列と、
前記ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列と、を含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項20】
前記ステムループ配列が、配列番号４０に定められた配列である、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格が、ｐｒｉ－ｍｉＲ－３０ａ骨格である、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項22】
前記ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の前記５’隣接配列が配列番号４１に定められ、前記ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の前記３’隣接配列が配列番号４２に定めれられる、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項23】
前記ｓｈｍｉＲが、配列番号４３～５５のいずれか１つに定められた配列を含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項24】
前記ｓｈｍｉＲをコードする前記ＤＮＡ配列が、配列番号５６～６８のいずれか１つに定められる、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項25】
ｓｈｍｉＲをコードする少なくとも２つの核酸を投与すること、または前記少なくとも２つの核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を投与することを含み、各ｓｈｍｉＲが、ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するＲＮＡ転写物に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含み、各ｓｈｍｉＲが、異なるエフェクター配列を含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項26】
前記少なくとも２つの核酸の各々が、配列番号１、２、４、７、９、１０、及び１３のうちの１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記少なくとも２つの核酸が、配列番号１５に定められたエフェクター配列と、配列番号１４に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ２）、
配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ３）、
配列番号２１に定められたエフェクター配列と、配列番号２０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ５）、
配列番号２７に定められたエフェクター配列と、配列番号２６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ９）、
配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、
配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、及び
配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１７）からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
前記少なくとも２つの核酸が、配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ２）、
配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ３）、
配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ５）、
配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ９）、
配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、
配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、及び
配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１７）からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項29】
前記少なくとも２つの核酸の各々が、配列番号２、９、１０、及び１３のうちの１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする、請求項２６に記載の方法。
【請求項30】
前記少なくとも２つの核酸が、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ３）、
配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、
配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、及び
配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１７）からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項31】
前記少なくとも２つの核酸が、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ３）、
配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、
配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、及び
配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１７）からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項32】
前記ｄｄＲＮＡｉ構築物が、（ａ）配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び
（ｂ）配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１７）を含む、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項33】
前記ｄｄＲＮＡｉ構築物が、（ａ）配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び
（ｂ）配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１７）を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記組成物が、１つ以上の薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項35】
前記咽頭筋が、下部収縮筋、中部収縮筋、上部収縮筋、口蓋咽頭筋、耳管咽頭筋、茎突咽頭筋、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月１７日に出願された米国仮第６２／７４７，０８９号に対する優先権を主張し、その完全な内容は、その全体の参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１８年１０月１７日に出願された米国仮第６２／７４７，０８９号に対する優先権を主張し、その完全な内容は、その全体の参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本開示は、眼咽頭筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）に罹患しているか、またはそれに罹患しやすい個人におけるＯＰＭＤの治療のための方法に関する。
【背景技術】
【0003】
ＯＰＭＤは、常染色体優性遺伝性で、緩徐進行性で、遅発性の変性筋障害である。疾患は、進行性の目蓋の降下（眼瞼下垂）及び嚥下困難（嚥下障害）によって主に特徴付けられる。咽頭筋及び輪状咽頭筋は、ＯＰＭＤにおける特異的標的である。近位肢の脱力は、疾患進行の後期に続く傾向がある。疾患を引き起こす変異は、ポリ（Ａ）結合タンパク質核１（ＰＡＢＰＮ１）遺伝子のコード領域の（ＧＣＮ）ｎトリヌクレオチド反復の異常な拡張である。この拡張は、ＰＡＢＰＮ１タンパク質のＮ末端で拡張されたポリアラニントラクトを生じる。１０のアラニンが正常タンパク質に存在し、変異型（ｅｘｐＰＡＢＰＮ１）では１１～１８のアラニンに拡張される。疾患の主な病理学的特徴は、ｅｘｐＰＡＢＰＮ１の核凝集体である。拡張されたＰＡＢＰＮ１のミスフォールディングは、影響を受けた細胞の核の内側に不溶性の高分子繊維状凝集体の蓄積をもたらす。ＰＡＢＰＮ１は凝集しやすいタンパク質であり、ＯＰＭＤにおける変異体アラニン拡張ＰＡＢＰＮ１は、野生型の正常タンパク質よりも高い凝集率を有する。しかしながら、ＯＰＭＤにおける核凝集体が細胞防御機構の結果として病理学的機能または保護的役割のどちらを有するのかは、未だに不明である。
【0004】
現在、ＯＰＭＤに対する治療は、薬理学的またはその他の方法であっても利用不可能である。症候性の外科的介入は、中等度から重度の影響を受けた個人において、眼瞼下垂を部分的に矯正し嚥下を改善することができる。例えば、輪状咽頭筋切開術は、現在、これらの患者において嚥下を改善するために利用可能な唯一の可能な治療である。しかしながら、これは、多くの場合嚥下困難及び窒息に続いて死に至る、咽頭筋組織の進行性の劣化を修正しない。
【0005】
したがって、ＯＰＭＤに罹患している及び／またはＯＰＭＤに罹患しやすい患者のＯＰＭＤを治療するための治療薬に対する必要性が残っている。
【発明の概要】
【0006】
本開示は、部分的には、ＯＰＭＤの治療のために承認された治療薬が現在存在しないという発明者による認識に基づいている。したがって、本開示は、ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するＲＮＡｉ試薬を投与するための方法を提供する。さらに、本開示は、開示のＲＮＡｉ試薬によって標的とされないｍＲＮＡ転写物を有する野生型ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現のための試薬（以下、「ＰＡＢＰＮ１置換試薬」）を投与するための方法を提供する。
【0007】
開示のある特定の態様は、眼咽頭筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）に罹患している対象を治療するための方法であって、
（ａ）短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸と、
（ｂ）核酸によってコードされたｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含むＰＡＢＰＮ１構築物と、を含む組成物を当該対象に投与することを含む方法に関し、組成物は、対象の咽頭筋への直接注射によって投与される。
（ａ）短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸と、
（ｂ）核酸によってコードされたｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含むＰＡＢＰＮ１構築物と、を含む組成物を当該対象に投与することを含む方法に関し、組成物は、対象の咽頭筋への直接注射によって投与される。
【0008】
ある特定の態様は、対象における眼咽頭筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）の原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を阻害する方法に関し、当該方法は、
（ａ）短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物と、
（ｂ）ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含むＰＡＢＰＮ１構築物と、を含む組成物を対象に投与することを含み、組成物は、対象の咽頭筋への直接注射によって投与される。
（ａ）短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物と、
（ｂ）ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含むＰＡＢＰＮ１構築物と、を含む組成物を対象に投与することを含み、組成物は、対象の咽頭筋への直接注射によって投与される。
【0009】
一例では、対象は、対象の咽頭筋への直接注射によって組成物を投与することに続いて、改善した嚥下を有する。
【0010】
一例では、組成物は、ｄｄＲＮＡｉ構築物、ＰＡＢＰＮ１構築物、またはそれらの組み合わせを含む発現ベクターを含む。
【0011】
一例では、発現ベクターは、５’から３’方向に、ｄｄＲＮＡｉ構築物及びＰＡＢＰＮ１構築物を含む。
【0012】
一例では、発現ベクターは、５’から３’方向に、ＰＡＢＰＮ１構築物及びｄｄＲＮＡｉ構築物を含む。
【0013】
一例では、発現ベクターは、プラスミドまたはミニサークルである。
【0014】
一例では、発現ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルス（ＡｄＶ）ベクター、及びレンチウイルス（ＬＶ）ベクターからなる群から選択される、ウイルスベクターである。例えば、発現ベクターは、ＡＡＶベクター、例えば、血清型ＡＡＶ２、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９からのＡＡＶであり得る。
【0015】
一例では、核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、及び／またはＰＡＢＰＮ１構築物は発現構築物を含み、発現構築物はＡＡＶ血清型からの逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む。
【0016】
一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、そのｍＲＮＡ転写物が核酸またはｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲによって標的化されないように、コドン最適化される。例えば、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、配列番号７３に定められたＤＮＡ配列であり得る。
【0017】
一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、ＰＡＢＰＮ１構築物内に含まれたプロモーターに作動可能に連結され、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列の上流に位置する。例えば、ＰＡＢＰＮ１構築物内に含まれるプロモーターは、筋特異的プロモーターであり得る。
【0018】
一例では、核酸は、ヒトＰＡＢＰＮ１のＲＮＡ転写物を標的化するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み、ｓｈｍｉＲは、
長さが少なくとも１７ヌクレオチドのエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
プライマリマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）骨格と、を含み、
エフェクター配列は、ヒトＰＡＢＰＮ１のＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。例えば、エフェクター配列は、配列番号８７に定められた配列内で対応する長さの領域（すなわち、ヒトＰＡＢＰＮ１をコードするメッセンジャーＲＮＡ転写物）に対して実質的に相補的であり得る。
長さが少なくとも１７ヌクレオチドのエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
プライマリマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）骨格と、を含み、
エフェクター配列は、ヒトＰＡＢＰＮ１のＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。例えば、エフェクター配列は、配列番号８７に定められた配列内で対応する長さの領域（すなわち、ヒトＰＡＢＰＮ１をコードするメッセンジャーＲＮＡ転写物）に対して実質的に相補的であり得る。
【0019】
いくつかの例では、核酸は、
長さが少なくとも１７ヌクレオチドのエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み、
エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。
長さが少なくとも１７ヌクレオチドのエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み、
エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。
【0020】
好ましくは、エフェクター配列は、長さが３０ヌクレオチド未満であろう。例えば、好適なエフェクター配列は、長さが１７～２９ヌクレオチドの範囲にあり得る。好ましくは、エフェクター配列は、長さが２０ヌクレオチドであろう。より好ましくは、エフェクター配列は長さが２１ヌクレオチドであり、エフェクター相補配列は長さが２０ヌクレオチドであろう。
【0021】
ある特定の例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号１～１３（すなわち、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３）のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含む。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する４つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する３つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する２つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する１つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に１００％相補的であり得る。ミスマッチが存在する場合、それらは、ｓｈｍｉＲのシード領域に対応する領域、すなわち、エフェクター配列のヌクレオチド２～８内に位置しないことが好まれる。
【0022】
開示の方法において有用であり得る例示的な核酸は、表２に記載されるようなエフェクター／エフェクター相補配列の組み合わせを有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。
【0023】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号１４に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号１５に定められたエフェクター配列及び配列番号１４に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0024】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号１６に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号１７に定められたエフェクター配列及び配列番号１６に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0025】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号１８に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号１９に定められたエフェクター配列及び配列番号１８に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0026】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号２０に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号２１に定められたエフェクター配列及び配列番号２０に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0027】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号２２に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号２３に定められたエフェクター配列及び配列番号２２に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0028】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号２４に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号２５に定められたエフェクター配列及び配列番号２４に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0029】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号２６に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号２７に定められたエフェクター配列及び配列番号２６に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0030】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号２８に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号２９に定められたエフェクター配列及び配列番号２８に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0031】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号３０に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号３１に定められたエフェクター配列及び配列番号３０に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0032】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号３２に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号３３に定められたエフェクター配列及び配列番号３２に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0033】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号３４に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号３５に定められたエフェクター配列及び配列番号３４に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0034】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号３６に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号３７に定められたエフェクター配列及び配列番号３６に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0035】
一例では、核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号３８に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲである。例えば、配列番号３９に定められたエフェクター配列及び配列番号３８に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲ。
【0036】
一例では、ｓｈｍｉＲは、５’から３’方向に、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
エフェクター配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列と、を含む。
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
エフェクター配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列と、を含む。
【0037】
一例では、ｓｈｍｉＲは、５’から３’方向に、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列と、
エフェクター配列と、
ステムループ配列と、
エフェクター相補配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列と、を含む。
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列と、
エフェクター配列と、
ステムループ配列と、
エフェクター相補配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列と、を含む。
【0038】
一例では、ステムループ配列は、配列番号４０に示される配列であり得る。
【0039】
一例では、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格は、ｐｒｉ－ｍｉＲ－３０ａ骨格である。例えば、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列は配列番号４１に定められた配列であり得、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列は配列番号４２に定められ得る。
【0040】
開示の方法において有用であり得る例示的な核酸は、表３に記載されるような、及び／または表４における配列によってコードされた配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、開示の核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、配列番号４３～５５のいずれか１つに定められた配列を含み得る。ｓｈｍｉＲは、配列番号５６～６８のいずれか１つに定められたＤＮＡ配列によってコードされ得る。
【0041】
いくつかの例では、方法は、ｓｈｍｉＲをコードする少なくとも２つの核酸を投与すること、または少なくとも２つの核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を投与することを含み、各ｓｈｍｉＲは、ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するＲＮＡ転写物に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含み、各ｓｈｍｉＲは、異なるエフェクター配列を含む。
【0042】
少なくとも２つの核酸は、別々に、または単一のｄｄＲＮＡｉ構築物内で投与され得る。一例では、少なくとも２つの核酸の各々は、配列番号１、２、４、７、９、１０、及び１３のうちの１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲを各々コードする。例えば、少なくとも２つの核酸は、配列番号１５に定められたエフェクター配列及び配列番号１４に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ２）、配列番号１７に定められたエフェクター配列及び配列番号１６に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）、配列番号２１に定められたエフェクター配列及び配列番号２０に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ５）、配列番号２７に定められたエフェクター配列及び配列番号２６に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ９）、配列番号３１に定められたエフェクター配列及び配列番号３０に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、配列番号３３に定められたエフェクター配列及び配列番号３２に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、ならびに配列番号３９に定められたエフェクター配列及び配列番号３８に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）からなる群から選択され得る。
【0043】
一例では、少なくとも２つの核酸は、配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ２）、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）、配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ５）、配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ９）、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、及び配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）からなる群から選択される。
【0044】
一例では、少なくとも２つの核酸の各々は、配列番号２、９、１０、及び１３のうちの１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする。例えば、少なくとも２つの核酸は、配列番号１７に定められたエフェクター配列及び配列番号１６に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）、配列番号３１に定められたエフェクター配列及び配列番号３０に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、配列番号３３に定められたエフェクター配列及び配列番号３２に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、ならびに配列番号３９に定められたエフェクター配列及び配列番号３８に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）からなる群から選択され得る。
【0045】
一例では、少なくとも２つの核酸は、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、及び配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）からなる群から選択される。
【0046】
一例では、それを含む少なくとも２つの核酸またはｄｄＲＮＡｉ構築物は、
（ａ）配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び
（ｂ）配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１７）を含む。
（ａ）配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び
（ｂ）配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸（ｓｈｍｉＲ１７）を含む。
【0047】
一例では、それを含む少なくとも２つの核酸またはｄｄＲＮＡｉ構築物は、
（ａ）配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び
（ｂ）配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）を含む。
（ａ）配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び
（ｂ）配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）を含む。
【0048】
本明細書の任意の実施例に記載される組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体をさらに含み得る。
【0049】
いくつかの例では、咽頭筋は、下部収縮筋、中部収縮筋、上部収縮筋、口蓋咽頭筋、耳管咽頭筋、茎突咽頭筋、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を含む。
【0050】
１つの特定の例によれば、本開示は、それを必要とする対象の咽頭筋に、
（ａ）本明細書に記載されるようなｄｄＲＮＡｉ構築物と、
（ｂ）ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含むＰＡＢＰＮ１構築物と、を含むＤＮＡ構築物を投与するための方法を提供する。好ましくは、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、そのｍＲＮＡ転写物がｄｄＲＮＡｉ構築物のｓｈｍｉＲによって標的化されないように、コドン最適化される。一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質は、例えば、配列番号７４に定められた配列を有する野生型ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質である。一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化ＤＮＡ配列は、配列番号７３に定められる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ構築物は、１つ以上のプロモーターを含むことができる。開示のＤＮＡ構築物における使用のための例示的なプロモーターは、例えば、Ｓｐｃ５１２及びＣＫ８などの筋特異的プロモーターである。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ構築物は、ＰＡＢＰＮ１構築物及びｄｄＲＮＡｉ構築物に作動可能に連結されたプロモーターを含み、プロモーターは、ＰＡＢＰＮ１構築物及びｄｄＲＮＡｉ構築物の上流に位置する。
（ａ）本明細書に記載されるようなｄｄＲＮＡｉ構築物と、
（ｂ）ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含むＰＡＢＰＮ１構築物と、を含むＤＮＡ構築物を投与するための方法を提供する。好ましくは、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、そのｍＲＮＡ転写物がｄｄＲＮＡｉ構築物のｓｈｍｉＲによって標的化されないように、コドン最適化される。一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質は、例えば、配列番号７４に定められた配列を有する野生型ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質である。一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化ＤＮＡ配列は、配列番号７３に定められる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ構築物は、１つ以上のプロモーターを含むことができる。開示のＤＮＡ構築物における使用のための例示的なプロモーターは、例えば、Ｓｐｃ５１２及びＣＫ８などの筋特異的プロモーターである。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ構築物は、ＰＡＢＰＮ１構築物及びｄｄＲＮＡｉ構築物に作動可能に連結されたプロモーターを含み、プロモーターは、ＰＡＢＰＮ１構築物及びｄｄＲＮＡｉ構築物の上流に位置する。
【0051】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡ構築物は、５’から３’方向に、
（ａ）筋特異的プロモーター、例えば、Ｓｐｃ５１２と、
（ｂ）ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲによって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む、本明細書に記載されるようなＰＡＢＰＮ１構築物と、
（ｃ）本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１３をコードするＤＮＡ配列を含む核酸、及び本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１７をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を含む、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物と、を含む。
（ａ）筋特異的プロモーター、例えば、Ｓｐｃ５１２と、
（ｂ）ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲによって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む、本明細書に記載されるようなＰＡＢＰＮ１構築物と、
（ｃ）本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１３をコードするＤＮＡ配列を含む核酸、及び本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１７をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を含む、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物と、を含む。
【0052】
いくつかの実施形態では、咽頭筋は、下部収縮筋、中部収縮筋、上部収縮筋、口蓋咽頭筋、耳管咽頭筋、茎突咽頭筋、またはそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上を含む。
【図面の簡単な説明】
【0053】
【図1】Ａ：内因性ＰＡＢＰＮ１の同時の遺伝子サイレンシング、及びｗｔＰＡＢＰＮ１を標的化する２つのｓｈｍｉＲを２つのｐＡＡＶ２ ＩＴＲの中間のコドン最適化ＰＡＢＰＮ１転写物の３’非翻訳領域にサブクローニングすることによって生成されたコドン最適化ＰＡＢＰＮ１での置換についての構築物を示す概略図である。Ｂ：内因性ＰＡＢＰＮ１の同時の遺伝子サイレンシング、及びｗｔＰＡＢＰＮ１を標的化する２つのｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ１７及びｓｈｍｉＲ１３）をｐＡＡＶ２ベクター骨格におけるコドン最適化ＰＡＢＰＮ１転写物の３’非翻訳領域にサブクローニングすることによって生成されたコドン最適化ＰＡＢＰＮ１での置換について設計された「サイレンス及び置換」構築物（ＳＲ構築物）を示す概略図である。Ｃ：５’隣接領域、ｓｉＲＮＡセンス鎖、ステム／ループジャンクション配列、ｓｉＲＮＡアンチセンス鎖、及び３’隣接領域を含む代表的なｓｈｍｉＲ構築物の予測された二次構造を示す。
【図2】ＳＲ構築物を示す概略図である。ＳＲ構築物では、「置換」及び「サイレンス」カセットは、Ｓｐｃ５１２筋特異的プロモーターを有する単一のベクターに全て挿入される。２つのｓｈｍｉＲ配列は、コドン最適化ＰＡＢＰＮ１カセットの３’ＵＴＲに挿入される。
【図3A】ＳＲ構築物を注射されたＡ１７マウスの（前脛骨筋）ＴＡ筋におけるｓｈＲＮＡの発現を示す。ＲＮＡを、ＳＲ構築物投与の１４週間後にＴＡ試料から抽出した。
【図3B】ＳＲ構築物で治療されたＡ１７マウスのＴＡ筋におけるＰＡＢＰＮ１発現（ｅｘｐＰＡＢＰＮ１を含む）のサイレンシングを示す。ＲＮＡを、ＳＲ構築物投与の１４週間後にＴＡ試料から抽出した。
【図3C】ＳＲ構築物での治療時のＡ１７マウスモデルにおける正常なＰＡＢＰＮ１レベルの回復を示す。ＲＮＡを、ＳＲ構築物投与の１４週間後にＴＡ筋試料から抽出した。
【図4A】ＳＲ構築用量効果を伴うＰＡＢＰＮ１を含む不溶性凝集体（核内封入体（ＩＮＩ））の顕著に低減した形成を示す。ＳＲ構築物を、Ａ１７マウスのＴＡ筋に注射した。筋を、ＳＲ構築物投与の１４週間後に組織学的研究のために回収及びマウントした。ＰＡＢＰＮ１に対する免疫蛍光は緑色で示され、ラミニンに対する免疫蛍光は赤色で示される。
【図4B】ＳＲ構築物での治療が未治療のＡ１７ ＴＡ筋と比較してＩＮＩの量を有意に低減することを示している、筋切片にＩＮＩを含む核の百分率の定量化を示す（ボンフェローニ事後検定での一元配置分散分析、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎｓ：有意でない）。
【図5A】ＳＲ構築物用量依存的方式でＡ１７マウスのＴＡ筋によって生成された最大力の顕著な増加を示す。最大力を、インサイツ筋生理学によって測定した。
【図5B】Ａ１７マウスのＳＲ構築物治療ＴＡ筋の体重（ＢＷ）に正規化された筋重量を示す。正規化された筋重量は、注射されたＴＡあたり１ｅ１０ｖｇを超える用量で対照ＦｖＢマウスのものと同等であった（平均±ＳＥＭ ｎ＝１０、ボンフェローニ事後検定での一元配置分散分析、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、ｎｓ：有意でない）。
【図6A】ＳＲ構築物投与の１４週間後にＡ１７マウスのＴＡ筋によって生成された最大力を示す。最大力を、インサイツ筋生理学によって測定した。
【図6B】ＳＲ構築物投与の２０週間後にＡ１７マウスのＴＡ筋によって生成された最大力を示す。最大力を、インサイツ筋生理学によって測定した。
【図7A】ヒツジの咽頭筋へのＳＲ構築物の直接注射を示す。
【図7B】「ファウッセ（ｆａｕｓｓｅ）経路」のリスクを有するヒトＯＰＭＤ患者における重度の嚥下障害を示す放射標識されたクリームを使用する放射線画像を示す。
【発明を実施するための形態】
【0054】
配列表の見出し
配列番号１：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域２と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号２：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域３と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号３：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域４と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号４：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域５と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号５：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域６と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号６：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域７と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号７：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域９と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号８：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１１と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号９：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１３と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１０：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１４と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１１：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１５と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１２：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１６と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１３：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１７と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１４：ｓｈｍｉＲ２と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１５：ｓｈｍｉＲ２と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１６：ｓｈｍｉＲ３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１７：ｓｈｍｉＲ３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１８：ｓｈｍｉＲ４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１９：ｓｈｍｉＲ４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２０：ｓｈｍｉＲ５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２１：ｓｈｍｉＲ５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２２：ｓｈｍｉＲ６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２３：ｓｈｍｉＲ６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２４：ｓｈｍｉＲ７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２５：ｓｈｍｉＲ７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２６：ｓｈｍｉＲ９と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２７：ｓｈｍｉＲ９と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２８：ｓｈｍｉＲ１１と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２９：ｓｈｍｉＲ１１と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３０：ｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３１：ｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３２：ｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３３：ｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３４：ｓｈｍｉＲ１５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３５：ｓｈｍｉＲ１５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３６：ｓｈｍｉＲ１６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３７：ｓｈｍｉＲ１６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３８：ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３９：ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号４０：ｓｈｍｉＲに対するＲＮＡステムループ配列
配列番号４１：ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列。
配列番号４２：ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列
配列番号４３：ｓｈｍｉＲ２と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４４：ｓｈｍｉＲ３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４５：ｓｈｍｉＲ４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４６：ｓｈｍｉＲ５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４７：ｓｈｍｉＲ６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４８：ｓｈｍｉＲ７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４９：ｓｈｍｉＲ９と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５０：ｓｈｍｉＲ１１と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５１：ｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５２：ｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５３：ｓｈｍｉＲ１５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５４：ｓｈｍｉＲ１６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５５：ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５６：ｓｈｍｉＲ２と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号５７：ｓｈｍｉＲ３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号５８：ｓｈｍｉＲ４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号５９：ｓｈｍｉＲ５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６０：ｓｈｍｉＲ６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６１：ｓｈｍｉＲ７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６２：ｓｈｍｉＲ９と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６３：ｓｈｍｉＲ１１と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６４：ｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６５：ｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６６：ｓｈｍｉＲ１５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６７：ｓｈｍｉＲ１６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６８：ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６９：筋特異的ＣＫ８プロモーターの制御下でｓｈｍｉＲ３及びｓｈｍｉＲ１４、ならびにＳｐｃ５１２の制御下でコドン最適化ＰＡＢＰＮ１をコードする二重構築物バージョン１に対するＤＮＡ配列
配列番号７０：筋特異的ＣＫ８プロモーターの制御下でｓｈｍｉＲ１７及びｓｈｍｉＲ１３、ならびにＳｐｃ５１２の制御下でコドン最適化ＰＡＢＰＮ１をコードする二重構築物バージョン１に対するＤＮＡ配列
配列番号７１：Ｓｐｃ５１２の制御下で、ｃｏＰＡＢＰＮ１ならびにｓｈｍｉＲ３及びｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする二重構築物バージョン２に対するＤＮＡ配列。
配列番号７２：Ｓｐｃ５１２の制御下で、ｃｏＰＡＢＰＮ１ならびにｓｈｍｉＲ１７及びｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする二重構築物バージョン２に対するＤＮＡ配列。
配列番号７３：ヒトコドン最適化ＰＡＢＰＮ１ ｃＤＮＡ配列に対するＤＮＡ配列。
配列番号７４：コドン最適化ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質に対するアミノ酸配列。
配列番号７５：ＦＬＡＧタグを有する野生型ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質に対するアミノ酸配列。
配列番号７６：ＦＬＡＧタグを有するコドン最適化ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質に対するアミノ酸配列。
配列番号７７：ｗｔＰＡＢＰＮ１－Ｆｗｄと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列。
配列番号７８：ｗｔＰＡＢＰＮ１－Ｒｅｖと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号７９：ｗｔＰＡＢＰＮ１－Ｐｒｏｂｅと呼ばれるプローブに対するＤＮＡ配列
配列番号８０：ｏｐｔＰＡＢＰＮ１－Ｆｗｄと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８１：ｏｐｔＰＡＢＰＮ１－Ｒｅｖと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８２：ｏｐｔＰＡＢＰＮ１－Ｐｒｏｂｅと呼ばれるプローブに対するＤＮＡ配列
配列番号８３：ｓｈｍｉＲ３－ＦＷＤと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８４：ｓｈｍｉＲ１３－ＦＷＤと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８５：ｓｈｍｉＲ１４－ＦＷＤと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８６：ｓｈｍｉＲ１７－ＦＷＤと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８７：野生型ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＲＮＡ配列
配列番号８８：ＡＡＶ ＶＰ１の修飾されたホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）ドメインに対するコンセンサス配列
配列番号８９：ＡＡＶ８に対する修飾されたＰＬＡ２ドメイン
配列番号９０：ＡＡＶ９に対する修飾されたＰＬＡ２ドメイン
配列番号１：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域２と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号２：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域３と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号３：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域４と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号４：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域５と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号５：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域６と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号６：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域７と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号７：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域９と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号８：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１１と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号９：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１３と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１０：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１４と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１１：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１５と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１２：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１６と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１３：ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ領域１７と呼ばれるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するｍＲＮＡ転写物内の領域に対するＲＮＡ配列。
配列番号１４：ｓｈｍｉＲ２と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１５：ｓｈｍｉＲ２と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１６：ｓｈｍｉＲ３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１７：ｓｈｍｉＲ３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号１８：ｓｈｍｉＲ４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号１９：ｓｈｍｉＲ４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２０：ｓｈｍｉＲ５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２１：ｓｈｍｉＲ５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２２：ｓｈｍｉＲ６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２３：ｓｈｍｉＲ６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２４：ｓｈｍｉＲ７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２５：ｓｈｍｉＲ７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２６：ｓｈｍｉＲ９と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２７：ｓｈｍｉＲ９と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号２８：ｓｈｍｉＲ１１と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号２９：ｓｈｍｉＲ１１と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３０：ｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３１：ｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３２：ｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３３：ｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３４：ｓｈｍｉＲ１５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３５：ｓｈｍｉＲ１５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３６：ｓｈｍｉＲ１６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３７：ｓｈｍｉＲ１６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号３８：ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター相補配列。
配列番号３９：ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡエフェクター配列。
配列番号４０：ｓｈｍｉＲに対するＲＮＡステムループ配列
配列番号４１：ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列。
配列番号４２：ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列
配列番号４３：ｓｈｍｉＲ２と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４４：ｓｈｍｉＲ３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４５：ｓｈｍｉＲ４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４６：ｓｈｍｉＲ５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４７：ｓｈｍｉＲ６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４８：ｓｈｍｉＲ７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号４９：ｓｈｍｉＲ９と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５０：ｓｈｍｉＲ１１と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５１：ｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５２：ｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５３：ｓｈｍｉＲ１５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５４：ｓｈｍｉＲ１６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５５：ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＲＮＡ配列。
配列番号５６：ｓｈｍｉＲ２と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号５７：ｓｈｍｉＲ３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号５８：ｓｈｍｉＲ４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号５９：ｓｈｍｉＲ５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６０：ｓｈｍｉＲ６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６１：ｓｈｍｉＲ７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６２：ｓｈｍｉＲ９と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６３：ｓｈｍｉＲ１１と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６４：ｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６５：ｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６６：ｓｈｍｉＲ１５と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６７：ｓｈｍｉＲ１６と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６８：ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲに対するＤＮＡ配列コード。
配列番号６９：筋特異的ＣＫ８プロモーターの制御下でｓｈｍｉＲ３及びｓｈｍｉＲ１４、ならびにＳｐｃ５１２の制御下でコドン最適化ＰＡＢＰＮ１をコードする二重構築物バージョン１に対するＤＮＡ配列
配列番号７０：筋特異的ＣＫ８プロモーターの制御下でｓｈｍｉＲ１７及びｓｈｍｉＲ１３、ならびにＳｐｃ５１２の制御下でコドン最適化ＰＡＢＰＮ１をコードする二重構築物バージョン１に対するＤＮＡ配列
配列番号７１：Ｓｐｃ５１２の制御下で、ｃｏＰＡＢＰＮ１ならびにｓｈｍｉＲ３及びｓｈｍｉＲ１４と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする二重構築物バージョン２に対するＤＮＡ配列。
配列番号７２：Ｓｐｃ５１２の制御下で、ｃｏＰＡＢＰＮ１ならびにｓｈｍｉＲ１７及びｓｈｍｉＲ１３と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする二重構築物バージョン２に対するＤＮＡ配列。
配列番号７３：ヒトコドン最適化ＰＡＢＰＮ１ ｃＤＮＡ配列に対するＤＮＡ配列。
配列番号７４：コドン最適化ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質に対するアミノ酸配列。
配列番号７５：ＦＬＡＧタグを有する野生型ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質に対するアミノ酸配列。
配列番号７６：ＦＬＡＧタグを有するコドン最適化ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質に対するアミノ酸配列。
配列番号７７：ｗｔＰＡＢＰＮ１－Ｆｗｄと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列。
配列番号７８：ｗｔＰＡＢＰＮ１－Ｒｅｖと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号７９：ｗｔＰＡＢＰＮ１－Ｐｒｏｂｅと呼ばれるプローブに対するＤＮＡ配列
配列番号８０：ｏｐｔＰＡＢＰＮ１－Ｆｗｄと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８１：ｏｐｔＰＡＢＰＮ１－Ｒｅｖと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８２：ｏｐｔＰＡＢＰＮ１－Ｐｒｏｂｅと呼ばれるプローブに対するＤＮＡ配列
配列番号８３：ｓｈｍｉＲ３－ＦＷＤと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８４：ｓｈｍｉＲ１３－ＦＷＤと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８５：ｓｈｍｉＲ１４－ＦＷＤと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８６：ｓｈｍｉＲ１７－ＦＷＤと呼ばれるプライマーに対するＤＮＡ配列
配列番号８７：野生型ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＲＮＡ配列
配列番号８８：ＡＡＶ ＶＰ１の修飾されたホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）ドメインに対するコンセンサス配列
配列番号８９：ＡＡＶ８に対する修飾されたＰＬＡ２ドメイン
配列番号９０：ＡＡＶ９に対する修飾されたＰＬＡ２ドメイン
【0055】
概要
本明細書全体を通じて、具体的に別段明記されない限り、または文脈が別段必要としない限り、単一のステップ、特徴、物質の組成物、ステップの群、または特徴もしくは物質の組成物の群は、それらのステップ、特徴、物質の組成、ステップの群、または特徴もしくは物質の組成の群のうちの１つ及び複数（すなわち、１つ以上）を包含すると解釈されるものとする。
本明細書全体を通じて、具体的に別段明記されない限り、または文脈が別段必要としない限り、単一のステップ、特徴、物質の組成物、ステップの群、または特徴もしくは物質の組成物の群は、それらのステップ、特徴、物質の組成、ステップの群、または特徴もしくは物質の組成の群のうちの１つ及び複数（すなわち、１つ以上）を包含すると解釈されるものとする。
【0056】
当業者は、本開示が、具体的に記載されているもの以外の変形例及び修正例に影響されやすいことを理解するであろう。開示が全てのかかる変形例及び修正例を含むことを、理解されたい。開示は、本明細書中で個別にまたは集合的に参照されるか、または示されるステップ、特徴、組成物、及び化合物の全て、ならびに当該ステップまたは特徴の全ての組み合わせもしくは任意の２つ以上も含む。
【0057】
本開示は、例示の目的のみのために意図される、本明細書に記載される具体的な例によって範囲を限定されないものとする。機能的に等価の産物、組成物、及び方法は、明らかに本開示の範囲内にある。
【0058】
本開示の任意の例は、具体的に別段明記されない限り、必要な変更を考慮して開示の任意の他の例に適用するように解釈されるものとする。
【0059】
具体的に別段定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者（例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、及び生化学における）によって一般的に理解されるのと同じ意味を有するように解釈されるものとする。
【0060】
別段示されない限り、本開示において利用される組換えＤＮＡ、組換えタンパク質、細胞培養、及び免疫学的技法は、当業者に周知の標準手順である。かかる技法は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４）、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（ｅｄｉｔｏｒ），Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １ ａｎｄ ２，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）、Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（ｅｄｉｔｏｒｓ），ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １－４，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９５ ａｎｄ １９９６）、及びＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｌｌ ｕｐｄａｔｅｓ ｕｎｔｉｌ ｐｒｅｓｅｎｔ）、Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）、及びＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｌｌ ｕｐｄａｔｅｓ ｕｎｔｉｌ ｐｒｅｓｅｎｔ）などの出典における文献の全体を通じて記載及び説明される。
【0061】
本明細書全体を通じて、文脈が別段必要としない限り、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形例は、明記されるステップもしくは要素もしくは整数、またはステップもしくは要素もしくは整数の群の包含を意味するが、任意の他のステップもしくは要素もしくは整数、または要素もしくは整数の群の除外を意味しないように理解される。
【0062】
用語「及び／または」、例えば、「Ｘ及び／またはＹ」は、「Ｘ及びＹ」または「ＸまたはＹ」のいずれかを意味するように理解されるものとし、両方の意味またはいずれかの意味に対する明示的な支持を提供するように解釈されるものとする。
【0063】
選択された定義
「ＲＮＡ」によって、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子が意味される。「リボヌクレオチド」によって、β－Ｄ－リボ－フラノース部分の２’位でヒドロキシル基を有するヌクレオチドが意味される。用語は、２本鎖ＲＮＡ、１本鎖ＲＮＡ、部分的に精製されたＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換えにより産生されたＲＮＡ、同様に１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換、及び／または改変によって天然に生じるＲＮＡとは異なる改変されたＲＮＡを含む。かかる改変は、ｓｉＮＡの末端（複数可）に対する、または内部での、例えば、ＲＮＡの１つ以上のヌクレオチドでなどの、非ヌクレオチド材料の付加を含むことができる。本開示のＲＮＡ分子におけるヌクレオチドは、非天然に生じるヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドなどの、非標準ヌクレオチドも含むことができる。これらの改変されたＲＮＡは、類似体または天然に生じるＲＮＡの類似体と称され得る。
「ＲＮＡ」によって、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子が意味される。「リボヌクレオチド」によって、β－Ｄ－リボ－フラノース部分の２’位でヒドロキシル基を有するヌクレオチドが意味される。用語は、２本鎖ＲＮＡ、１本鎖ＲＮＡ、部分的に精製されたＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換えにより産生されたＲＮＡ、同様に１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換、及び／または改変によって天然に生じるＲＮＡとは異なる改変されたＲＮＡを含む。かかる改変は、ｓｉＮＡの末端（複数可）に対する、または内部での、例えば、ＲＮＡの１つ以上のヌクレオチドでなどの、非ヌクレオチド材料の付加を含むことができる。本開示のＲＮＡ分子におけるヌクレオチドは、非天然に生じるヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドなどの、非標準ヌクレオチドも含むことができる。これらの改変されたＲＮＡは、類似体または天然に生じるＲＮＡの類似体と称され得る。
【0064】
用語「ＲＮＡ干渉」または「ＲＮＡｉ」は、一般に、細胞の細胞質における２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子によって開始される遺伝子発現のＲＮＡ依存的サイレンシングを指す。ｄｓＲＮＡ分子は、標的核酸配列の転写産物を低減または阻害し、それによって遺伝子をサイレンシングするか、またはその遺伝子の発現を低減する。
【0065】
本明細書で使用される場合、用語「２本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」は、２重鎖構造を有し、互いに類似した長さのものであるエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むＲＮＡ分子を指す。エフェクター配列及びエフェクター相補配列は、単一のＲＮＡ鎖にあるか、または別々のＲＮＡ鎖にあり得る。「エフェクター配列」（多くの場合「ガイド鎖」と称される）は、この場合、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域である標的配列に対して実質的に相補的である。「エフェクター配列」は、「アンチセンス配列」とも称され得る。「エフェクター相補配列」は、エフェクター配列にアニーリングして２重鎖を形成することができるように、エフェクター配列に十分に相補的であろう。この点で、エフェクター相補配列は、標的配列の領域と実質的に相同であろう。当業者に明らかであろうように、用語「エフェクター相補配列」は、「エフェクター配列の補完物」またはセンス配列とも称され得る。
【0066】
本明細書で使用される場合、用語「２重鎖」は、ワトソン－クリック塩基対形成、または相補的もしくは実質的に相補的であるヌクレオチド配列間の安定化された二重鎖を可能にする任意の他の方式のいずれかによって互いとの塩基対を形成する、の２つの相補的もしくは実質的に相補的な核酸（例えば、ＲＮＡ）における、または１本鎖核酸（例えば、ＲＮＡ）の２つの相補的もしくは実質的に相補的な領域における領域を指す。２重鎖領域内では、１００％の相補性は必要とされず、実質的な相補性は許容されることが、当業者によって理解されるであろう。実質的な相補性は、７９％以上の相補性を含み得る。例えば、１９塩基対からなる２重鎖領域における単一のミスマッチ（すなわち、１８塩基対及び１つのミスマッチ）は、９４．７％の相補性を生じ、２重鎖領域を実質的に相補的にする。別の例では、１９塩基対からなる２重鎖領域における２つのミスマッチ（すなわち、１７塩基対及び２つのミスマッチ）は、８９．５％の相補性を生じ、２重鎖領域を実質的に相補的にする。さらに別の例では、１９塩基対からなる２重鎖領域における３つのミスマッチ（すなわち、１６塩基対及び３つのミスマッチ）は、８４．２％の相補性を生じ、２重鎖領域を実質的に相補的にする、などである。
【0067】
ｄｓＲＮＡは、ステムループと名付けられている少なくとも２つのヌクレオチド配列によって連結されたエフェクター配列及びエフェクター相補配列からなる２重鎖領域を有するヘアピンまたはステムループ構造として提供され得る。ｄｓＲＮＡは、ヘアピンまたはステムループ構造として提供される場合、「ヘアピンＲＮＡ」または「短いヘアピンＲＮＡｉエージェント」または「ｓｈＲＮＡ」と称され得る。ヘアピンまたはステムループ構造において提供されるか、またはそれを引き起こす他のｄｓＲＮＡ分子は、プライマリｍｉＲＮＡ転写物（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）及び前駆体マイクロＲＮＡ（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）を含む。ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ ｓｈＲＮＡは、ステムループ構造を形成するプライマリｍｉＲＮＡ転写物の領域を認識及び放出する酵素Ｄｒｏｓｈａ及びＰａｓｈａの作用によって、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡから天然に産生され得る。代替的には、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ転写物は、天然のステムループ構造を人工／組換えステムループ構造で置換するように操作され得る。つまり、人工／組換えステムループ構造は、その天然のステムループ構造を欠くｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格配列に挿入またはクローニングされ得る。ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ分子の一部として発現するように操作されたステムループ配列の場合では、Ｄｒｏｓｈａ及びＰａｓｈａは、人工ｓｈＲＮＡを認識及び放出する。このアプローチを使用して産生されたｄｓＲＮＡ分子は、「ｓｈｍｉＲＮＡ」、「ｓｈｍｉＲ」、または「マイクロＲＮＡフレームワークｓｈＲＮＡ」として知られる。
【0068】
本明細書で使用される場合、配列に関する用語「相補的」は、ワトソン－クリック塩基対形成による配列の補完物を指し、それによってグアニン（Ｇ）はシトシン（Ｃ）と対形成し、アデニン（Ａ）はウラシル（Ｕ）またはチミン（Ｔ）と対形成する。配列は、別の配列の全長に相補的であり得るか、または別の配列の具体的な部分もしくは長さに相補的であり得る。当業者は、ＵがＲＮＡに存在し得ること、及びＴがＤＮＡに存在し得ることを認識するであろう。したがって、ＲＮＡまたはＤＮＡ配列内いずれかのＡは、ＲＮＡ配列におけるＵまたはＤＮＡ配列におけるＴと対形成し得る。当業者は、ＲＮＡに存在するＧがＲＮＡにおけるＣまたはＵと対形成し得ることも認識するであろう。
【0069】
本明細書で使用される場合、用語「実質的に相補的」は、安定的かつ特異的結合が、核酸配列間、例えば、エフェクター配列及びエフェクター相補配列の間、またはエフェクター配列及び標的配列の間で生じるように、十分な程度の相補的または正確な対形成を示すために使用される。核酸の配列はその標的または補完物のものに１００％相補的である必要がないことが、理解される。用語は、オーバーハングを除いて、別の配列に相補的な配列を包含する。いくつかの場合では、配列は、１～２のミスマッチを除いて他の配列に相補的である。いくつかの場合では、配列は、１つのミスマッチを除いて相補的である。いくつかの場合では、配列は、２つのミスマッチを除いて相補的である。他の場合では、配列は、３つのミスマッチを除いて相補的である。さらに他の場合では、配列は、４つのミスマッチを除いて相補的である。
【0070】
開示のｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲの文脈において使用される場合、用語「コードされた」は、ＤＮＡテンプレートから転写されることができるｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲを意味するように理解されるものとする。したがって、開示のｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲをコードする（ｅｎｃｏｄｅｓ）、またはコードする（ｃｏｄｅｓ ｆｏｒ）核酸は、それぞれのｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲの転写のためのテンプレートとして役立つＤＮＡ配列を含むであろう。
【0071】
用語「ＤＮＡ指向性ＲＮＡｉ構築物」または「ｄｄＲＮＡｉ構築物」は、転写される際に、ＲＮＡｉを誘発するｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲ分子（好ましくはｓｈｍｉＲ）を産生するＤＮＡ配列を含む核酸を指す。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、少なくとも２つのヌクレオチドのステムループによって連結された２重鎖領域を有するヘアピン構造に自己アニーリングすることができる単一のＲＮＡ、すなわち、ｓｈＲＮＡもしくはｓｈｍｉＲとして、または複数のｓｈＲＮＡもしくはｓｈｍｉＲを有する単一のＲＮＡとして、または各々がそれぞれ単一のｓｈＲＮＡもしくはｓｈｍｉＲとして折りたたむことができる複数のＲＮＡ転写物として転写される核酸を含み得る。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、１つ以上の追加のＤＮＡ配列を含むより大きな「ＤＮＡ構築物」内に提供され得る。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、そのｍＲＮＡ転写物がｄｄＲＮＡｉ構築物のｓｈｍｉＲによって標的化されないようにコドン最適化されている機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするさらなるＤＮＡ配列を含むＤＮＡ構築物に提供され得る。ｄｄＲＮＡｉ構築物及び／またはそれを含むＤＮＡ構築物は、例えば、プロモーターに作動可能に連結された発現ベクター内にあり得る。
【0072】
本明細書で使用される場合、用語「作動可能に連結された」または「作動可能な連結」（または類似のもの）は、コード核酸配列が、コード配列の発現を促進する方式で、調節配列、例えば、プロモーターに連結されるか、または関連していることを意味する。調節配列は、プロモーター、エンハンサー、及び当該技術分野で認識され、コード配列の発現を誘導するように選択される他の発現制御要素を含む。
【0073】
「ベクター」は、核酸を細胞に導入するための媒体を意味するように理解されるであろう。ベクターは、プラスミド、ファージミド、ウイルス、細菌、及びウイルスまたは細菌源に由来する媒体を含むが、これらに限定されない。「プラスミド」は、環状の２本鎖ＤＮＡ分子である。本開示に従う使用のための有用な型のベクターは、異種ＤＮＡ配列が、１つ以上のウイルス遺伝子またはその一部を欠失させるように修飾され得るウイルスゲノムに挿入される、ウイルスベクターである。ある特定のベクターは、宿主細胞において自己複製することができる（例えば、宿主細胞において機能する複製の起点を有するベクター）。他のベクターは、宿主細胞のゲノムに安定的に組み込まれ得、それによって宿主ゲノムと共に複製される。本明細書で使用される場合、用語「発現ベクター」は、開示のＲＮＡ分子を発現することができるベクターを意味するように理解されるであろう。
【0074】
「機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質」は、野生型ＰＡＢＰＮ１タンパク質の機能的特性、例えば、哺乳動物細胞におけるｍＲＮＡポリアデニル化及び／またはイントロンスプライシングの部位を制御する能力を有するＰＡＢＰＮ１タンパク質を意味するように理解されるものとする。したがって、「機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質」は、対象において発現または存在する際にＯＰＭＤの原因とならないＰＡＢＰＮ１タンパク質であるように理解されるであろう。一例では、「機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質」への本明細書での参照は、ヒト野生型ＰＡＢＰＮ１タンパク質への参照である。ヒト野生型ＰＡＢＰＮ１タンパク質の配列は、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿００４６３４に定められる。したがって、機能的なヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質は、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿００４６３４に定められたヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質のインビボでの機能的特性を有し得る。
【0075】
本明細書で使用される場合、用語「治療すること」、「治療する」、または「治療」、及びその変形例は、臨床的病理の経過中に治療されている個体または細胞の自然経過を改変するように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果は、疾患進行の速度を減少させること、疾患状態を回復または緩和させること、及び寛解または改善した予後を含む。ＯＰＭＤの治療は、対象においてＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を低減もしくは阻害すること、及び／または正常な長さのポリアラニン残基を有するＰＡＢＰＮ１タンパク質を対象において発現することを含むことになる。好ましくは、ＯＰＭＤの治療は、対象においてＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を低減または阻害すること、及び正常な長さのポリアラニン残基を有するＰＡＢＰＮ１タンパク質を対象において発現することを含む。例えば、上記の治療アウトカムうちの１つ以上が達成された場合、個人は、上手く「治療される」。
【0076】
「治療有効量」は、例えば、限定されないが、対象における眼瞼下垂、嚥下障害、及び筋力低下を含む、ＯＰＭＤの１つ以上の症状の測定可能な改善などの、ＯＰＭＤ状態の測定可能な改善をもたらすのに必要とされる少なくとも最小の濃度または量である。本明細書での治療有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び重量、ならびにｓｈｍｉＲ、それをコードする核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、ＤＮＡ構築物、発現ベクター、またはそれを含む組成物の個体において所望の応答を誘発する能力、及び／または発現ベクターの対象において機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質を発現する能力などの因子に従って異なり得る。治療有効量は、ｓｈｍｉＲ、それをコードする核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、ＤＮＡ構築物、発現ベクター、またはそれを含む組成物の任意の毒性または有害な効果が、ｓｈｍｉＲ、それをコードする核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、ＤＮＡ構築物、発現ベクター、またはそれを含む組成物の、単独で、または対象における機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現の治療上有益な効果と組み合わせて考慮されるＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を阻害、抑制、または低減する治療上有益な効果に劣るものでもある。
【0077】
本明細書で使用される場合、「対象」または「患者」は、ＯＰＭＤに罹患しているか、または遺伝的にＯＰＭＤに罹患しやすい、すなわち、ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１遺伝子バリアントを保有する、ヒトまたは非ヒト動物であり得る。「非ヒト動物」は、霊長類、家畜（例えば、ヒツジ、ウマ、ウシ、ブタ、ロバ）、伴侶動物（例えば、イヌ及びネコなどのペット）、実験試験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ショウジョウバエ、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ、ゼブラフィッシュ）、パフォーマンス動物（例えば、競走馬、ラクダ、グレーハウンド）、または捕獲された野生動物であり得る。一例では、対象または患者は、哺乳動物である。一例では、対象または患者は、ヒトである。
【0078】
用語「低減した発現」、「発現の低減」または類似のものは、標的遺伝子、例えば、ＰＡＢＰＮ１遺伝子からのタンパク質及び／またはｍＲＮＡ産物のレベルの欠如または観察可能な減少を指す。減少は絶対的である必要はないが、開示のｓｈｍｉＲ、それをコードする核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、ＤＮＡ構築物、発現ベクター、またはそれを含む組成物によってもたらされたＲＮＡｉの結果として、検出可能または観察可能な変化に十分な部分的減少があり得る。減少は、ｓｈｍｉＲ、それをコードする核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、ＤＮＡ構築物、発現ベクター、またはそれを含む組成物を欠く細胞に対する、標的核酸からのｍＲＮＡ及び／またはタンパク質産物のレベルの減少を決定することによって測定され得、１％、５％、もしくは１０％程度であり得るか、または絶対的、すなわち、１００％の阻害であり得る。減少の影響は、外向きの特性、すなわち、細胞または生物の定量的及び／または定性的表現型の検査によって決定され得、開示の、ｓｈｍｉＲ、それをコードする核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、ＤＮＡ構築物、発現ベクター、またはそれを含む組成物の投与に続いて、細胞または生物におけるｅｘｐＰＡＢＰＮ１の核凝集体の量の存在または変化の検出も含み得る。
【0079】
本明細書で使用される「送達システム」は、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの外来遺伝材料をパッケージ化するための、かつ細胞に導入され得るベクターを指す。送達システムは、ウイルスベクター、例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター（ＡｄＶ）、及びレンチウイルス（ＬＶ）ベクターを含むことができる。本明細書に記載される場合、ウイルスベクターは、細胞において外来遺伝材料を送達及び発現するために使用され得る。したがって、本明細書に記載されるようなウイルス発現ベクターは、送達システムとして使用され得る。
【0080】
本明細書で使用されるような「咽頭筋」は、咽頭を形成する筋の群のうちの１つ以上を指す。咽頭筋は、下部収縮筋、中部収縮筋、上部収縮筋、口蓋咽頭筋、耳管咽頭筋、及び／または茎突咽頭筋のうちの１つ以上を含むことができる。
【0081】
治療の方法
開示のある特定の態様は、それを必要とするヒト対象に、本明細書に記載される、対象を治療する、及び／または対象においてＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質を含む内因性ＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を阻害するために使用されるような、１つ以上の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、発現ベクター（複数可）、送達システム（複数可）、またはそれを含む組成物（複数可）を投与することに関し、組成物は、対象の咽頭筋への直接注射によって投与される。
開示のある特定の態様は、それを必要とするヒト対象に、本明細書に記載される、対象を治療する、及び／または対象においてＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質を含む内因性ＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を阻害するために使用されるような、１つ以上の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、発現ベクター（複数可）、送達システム（複数可）、またはそれを含む組成物（複数可）を投与することに関し、組成物は、対象の咽頭筋への直接注射によって投与される。
【0082】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような１つ以上の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物（複数可）、発現ベクター（複数可）、送達システム（複数可）、またはそれを含む組成物（複数可）は、ＯＰＭＤに罹患している対象においてＯＰＭＤを治療するために使用され得る。同様に、本明細書に記載されるような１つ以上の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物（複数可）、発現ベクター（複数可）、送達システム（複数可）、またはそれを含む組成物（複数可）は、ＯＰＭＤに罹患しているか、またはＯＰＭＤに罹患しやすい対象においてＯＰＭＤの１つ以上の症状の発症または進行を予防するために使用され得る。
【0083】
いくつかの実施形態では、対象は、対象の咽頭筋への直接注射によって本明細書に記載されるような１つ以上の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物（複数可）、発現ベクター（複数可）、送達システム（複数可）、またはそれを含む組成物（複数可）を投与することに続いて、改善した嚥下を有する。
【0084】
ある特定の実施形態では、開示の発現ベクター及び／または組成物は、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物、及び開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸の両方を含み得る。したがって、発現ベクターまたは組成物の投与は、（ｉ）ＯＰＭＤの原因となる拡張されたポリアラニントラクトを含むＰＡＢＰＮ１タンパク質を含む内因性ＰＡＢＰＮ１の発現を阻害、低減、またはノックダウンし、（ｉｉ）内因性ＰＡＢＰＮ１の発現を阻害、低減、またはノックダウンするｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡによって標的化されない機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を提供するのに有効であり得る。したがって、開示の組成物は、ＰＡＢＰＮ１タンパク質機能、例えば、ＲＮＡの転写後プロセシングを、それが投与される細胞または動物において回復し得る。
【0085】
ある特定の実施形態では、ＯＰＭＤの治療は、対象とは別に対象の咽頭筋への直接注射によって、（ｉ）ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を阻害するための１つ以上の薬剤、及び（ｉｉ）開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸またはそれを含む組成物を含む発現ベクターを投与することを含み得る。本明細書に記載されるように、ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を阻害するための１つ以上の薬剤は、本明細書に記載されるような核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、発現ベクター、もしくはそれを含む組成物、またはそれらの複数の任意の１つ以上であり得る。対象は、成分（ｉ）及び（ｉｉ）を一緒に、同時に、または連続して投与され得る。
【0086】
いくつかの実施形態では、ＯＰＭＤの治療は、対象の咽頭筋への直接注射によって、開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸を投与することを含み得、対象は、ＯＰＭＤの原因となるが、コドン最適化核酸の発現を阻害しないＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を阻害するための１つ以上の薬剤を以前に投与されている。例えば、対象は、本明細書に記載されるような核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、発現ベクター、もしくはそれを含む組成物、またはそれらの複数の任意の１つ以上を以前に投与されている場合がある。
【0087】
いくつかの実施形態では、投与の経路は、ＩＭ（例えば、対象の咽頭筋への直接注射）であり、筋組織への有効な送達、ならびに開示のＰＡＢＰＮ１をコードするｄｄＲＮＡｉ構築物及び／またはコドン最適化核酸のトランスフェクション、ならびにｓｈｍｉＲもしくはｓｈＲＮＡ及び／またはそれらにおけるコドン最適化核酸の発現を達成する。
【0088】
任意の特定の患者に対する治療上有効な用量レベルは、使用される組成物；患者の年齢、体重、一般的な健康、性別、及び食事；投与の時間；投与の経路；本明細書に記載されるような核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、ＤＮＡ構築物、発現ベクター、もしくはそれを含む組成物、またはそれらの複数の任意の１つ以上の隔離の速度、治療の持続期間を、他の関連する因子と共に含む多様な因子に依存するであろう。
【0089】
ＰＡＢＰＮ１機能を回復するのに十分な量の、ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現を低減または阻害し、かつＯＰＭＤの原因とならない機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質を発現するための、開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、ＤＮＡ構築物、発現ベクター、送達システム、またはそれを含む組成物の有効性は、治療される対象における筋収縮特性及び／または嚥下困難を評価することによって決定され得る。嚥下能力及び筋収縮特性を試験するための方法は、当該技術分野で既知である。例えば、嚥下困難は、ビデオ蛍光透視法、ＵＧＩ内視鏡検査、または食道圧測定及びインピーダンス試験を使用して評価され得る。ＯＰＭＤの臨床的特徴を評価するための他の方法は、Ｒｕｅｇｇ ｅｔ ａｌ，．（２００５）Ｓｗｉｓｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｗｅｅｋｌｙ，１３５：５７４－５８６に記載される。
【0090】
ＲＮＡｉに対する薬剤
本明細書に記載される場合、開示の方法において有用な核酸は、ヒトＰＡＢＰＮ１のメッセンジャーＲＮＡ転写物の領域を標的化する短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含み、ｓｈｍｉＲは、
長さが少なくとも１７ヌクレオチドのエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
プライマリマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）骨格と、を含み、
エフェクター配列は、ヒトＰＡＢＰＮ１のＲＮＡ転写物内の対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。例えば、エフェクター配列は、配列番号８７に定められた配列内で対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得る。いくつかの例では、本開示は、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む核酸を提供し、当該ｓｈｍｉＲは、
長さが少なくとも１７ヌクレオチドのエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格と、を含み、
エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。好ましくは、エフェクター配列は、長さが３０ヌクレオチド未満であろう。例えば、好適なエフェクター配列は、長さが１７～２９ヌクレオチドの範囲にあり得る。特に好まれる例では、エフェクター配列は、長さが２１ヌクレオチドであろう。より好ましくは、エフェクター配列は長さが２１ヌクレオチドであり、エフェクター相補配列は長さが２０ヌクレオチドであろう。
本明細書に記載される場合、開示の方法において有用な核酸は、ヒトＰＡＢＰＮ１のメッセンジャーＲＮＡ転写物の領域を標的化する短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードするＤＮＡ配列を含み、ｓｈｍｉＲは、
長さが少なくとも１７ヌクレオチドのエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
プライマリマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）骨格と、を含み、
エフェクター配列は、ヒトＰＡＢＰＮ１のＲＮＡ転写物内の対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。例えば、エフェクター配列は、配列番号８７に定められた配列内で対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得る。いくつかの例では、本開示は、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む核酸を提供し、当該ｓｈｍｉＲは、
長さが少なくとも１７ヌクレオチドのエフェクター配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格と、を含み、
エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的である。好ましくは、エフェクター配列は、長さが３０ヌクレオチド未満であろう。例えば、好適なエフェクター配列は、長さが１７～２９ヌクレオチドの範囲にあり得る。特に好まれる例では、エフェクター配列は、長さが２１ヌクレオチドであろう。より好ましくは、エフェクター配列は長さが２１ヌクレオチドであり、エフェクター相補配列は長さが２０ヌクレオチドであろう。
【0091】
ある特定の実施形態では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１～１３（すなわち、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３）のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含む。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する４つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する３つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する２つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する１つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１～１３のいずれか１つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に１００％相補的であり得る。
【0092】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号９に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含む。例えば、エフェクター配列は、配列番号９に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する４つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号９に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する３つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号９つに定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する２つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号９に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する１つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号９に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して１００％相補的であり得る。
【0093】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含む。例えば、エフェクター配列は、配列番号１３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する４つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する３つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する２つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり得、それに対する１つのミスマッチ塩基を含み得る。例えば、エフェクター配列は、配列番号１３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して１００％相補的であり得る。
【0094】
開示のｓｈｍｉＲのエフェクター配列が、本明細書に記載されるＰＡＢＰＮ１ ｍｉＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であり、それに対して１、２、３、または４のミスマッチ塩基（複数可）を含む例に従って、ミスマッチ（複数可）は、ｓｈｍｉＲのシード領域に対応する領域、すなわち、エフェクター配列のヌクレオチド２～８内に位置しないことが、好まれる。
【0095】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号１４に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号１４に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１５に定められたエフェクター配列、及び配列番号１５に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号１５に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号１４に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ２」と呼ばれる。
【0096】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号１６に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号１６に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１７に定められたエフェクター配列、及び配列番号１７に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号１７に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号１６に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ３」と呼ばれる。
【0097】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号１８に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号１８に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号１９に定められたエフェクター配列、及び配列番号１９に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号１９に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号１８に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ４」と呼ばれる。
【0098】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号２０に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号２０に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２１に定められたエフェクター配列、及び配列番号２１に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号２１に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号２０に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ５」と呼ばれる。
【0099】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号２２に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号２２に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２３に定められたエフェクター配列、及び配列番号２３に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号２３に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号２２に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ６」と呼ばれる。
【0100】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号２４に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号２４に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２５に定められたエフェクター配列、及び配列番号２５に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号２５に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号２４に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ７」と呼ばれる。
【0101】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号２６に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号２６に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２７に定められたエフェクター配列、及び配列番号２７に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号２７に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号２６に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ９」と呼ばれる。
【0102】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号２８に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号２８に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号２９に定められたエフェクター配列、及び配列番号２９に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号２９に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号２８に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ１１」と呼ばれる。
【0103】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号３０に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号３０に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３１に定められたエフェクター配列、及び配列番号３１に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号３１に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号３０に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ１３」と呼ばれる。
【0104】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号３２に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号３２に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３３に定められたエフェクター配列、及び配列番号３３に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号３３に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号３２に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ１４」と呼ばれる。
【0105】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号３４に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号３４に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３５に定められたエフェクター配列、及び配列番号３５に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号３５に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号３４に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ１５」と呼ばれる。
【0106】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号３６に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号３６に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３７に定められたエフェクター配列、及び配列番号３７に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号３７に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号３６に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ１６」と呼ばれる。
【0107】
一例では、本明細書に記載される核酸は、（ｉ）エフェクター配列が配列番号３８に定められた配列と２重鎖を形成することができるという条件で、１、２、３、または４の塩基ミスマッチを除いて、配列番号３８に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター配列と、（ｉｉ）エフェクター配列に対して実質的に相補的である配列を含むエフェクター相補配列と、を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み得る。例えば、核酸によってコードされるｓｈｍｉＲは、配列番号３９に定められたエフェクター配列、及び配列番号３９に定められた配列に対して実質的に相補的であり、それと２重鎖を形成することができるエフェクター相補配列を含み得る。配列番号３９に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列は、配列番号３８に定められた配列であり得る。この例に従うｓｈｍｉＲは、本明細書で以後「ｓｈｍｉＲ１７」と呼ばれる。
【0108】
本明細書に記載される例のいずれにおいても、開示の核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、５’から３’方向に、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
エフェクター配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列と、を含み得る。
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列と、
エフェクター相補配列と、
ステムループ配列と、
エフェクター配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列と、を含み得る。
【0109】
本明細書に記載される例のいずれにおいても、開示の核酸によってコードされたｓｈｍｉＲは、５’から３’方向に、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列と、
エフェクター配列と、
ステムループ配列と、
エフェクター相補配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列と、を含み得る。
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列と、
エフェクター配列と、
ステムループ配列と、
エフェクター相補配列と、
ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列と、を含み得る。
【0110】
好適なループ配列は、当該技術分野で既知のものから選択され得る。しかしながら、例示的なステムループ配列は、配列番号４０に定められる。
【0111】
開示の核酸における使用のための好適なプライマリマイクロＲＮＡ（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡまたはｐｒｉ－Ｒ）骨格は、当該技術分野で既知のものから選択され得る。例えば、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格は、ｐｒｉ－ｍｉＲ－３０ａ骨格、ｐｒｉ－ｍｉＲ－１５５骨格、ｐｒｉ－ｍｉＲ－２１骨格、及びｐｒｉ－ｍｉＲ－１３６骨格から選択され得る。しかしながら、好ましくは、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格は、ｐｒｉ－ｍｉＲ－３０ａ骨格である。ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格がｐｒｉ－ｍｉＲ－３０ａ骨格である例に従って、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の５’隣接配列は配列番号４１に定められ、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ骨格の３’隣接配列は配列番号４２に定められ得る。したがって、開示のｓｈｍｉＲ（例えば、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲ－１からｓｈｍｉＲ－１７）をコードする核酸は、配列番号４１に定められた配列をコードするＤＮＡ配列と、配列番号４２に定められた配列をコードするＤＮＡ配列と、を含み得る。
【0112】
一例では、本明細書に記載の核酸は、配列番号５６～６８のいずれか１つに定められた配列から選択されるＤＮＡ配列を含み得る。
【0113】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号４３に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ２）をコードする。
【0114】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号４４に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ３）をコードする。
【0115】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号５８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号４５に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ４）をコードする。
【0116】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号４６に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ５）をコードする。
【0117】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号６０に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号４７に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ６）をコードする。
【0118】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号６１に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号４８に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ７）をコードする。
【0119】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号４９に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ９）をコードする。
【0120】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号６３に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号５０に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ１１）をコードする。
【0121】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号５１に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ１３）をコードする。
【0122】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号５２に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ１４）をコードする。
【0123】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号６６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号５３に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ１５）をコードする。
【0124】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号６７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号５４に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ１６）をコードする。
【0125】
一例では、本明細書に記載される核酸は、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、配列番号５５に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲ（ｓｈｍｉＲ１７）をコードする。
【0126】
開示の例示的な核酸は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２、ｓｈｍｉＲ３、ｓｈｍｉＲ５、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１３、ｓｈｍｉＲ１４、及びｓｈｍｉＲ１７から選択されるｓｈｍｉＲをコードする。本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ３、ｓｈｍｉＲ１３、ｓｈｍｉＲ１４、及びｓｈｍｉＲ１７から選択されるｓｈｍｉＲをコードする開示の核酸が、特に好まれる。
【0127】
本開示に従う核酸は、ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１タンパク質に対応するＲＮＡ転写物の領域に実質的に対して実質的に相補的である少なくとも１７の連続的なヌクレオチドのエフェクター配列を含むｓｈＲＮＡもしくはｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む１つ以上の他の核酸と組み合わせられ得るか、またはそれらと併せて使用され得ることが、当業者によって理解されるであろう。一例では、
（ａ）本明細書に記載されるような少なくとも１つの核酸と、
（ｂ）
（ｉ）本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む核酸、または
（ｉｉ）本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲの同族のエフェクター及びエフェクター相補配列を含む短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸から選択される、少なくとも１つのさらなる核酸と、を含む、複数の核酸が、提供され、
（ａ）で核酸によってコードされたｓｈｍｉＲ及び（ｂ）で核酸によってコードされたｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡは、異なるエフェクター配列を含む。
（ａ）本明細書に記載されるような少なくとも１つの核酸と、
（ｂ）
（ｉ）本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む核酸、または
（ｉｉ）本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲの同族のエフェクター及びエフェクター相補配列を含む短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）をコードするＤＮＡ配列を含む核酸から選択される、少なくとも１つのさらなる核酸と、を含む、複数の核酸が、提供され、
（ａ）で核酸によってコードされたｓｈｍｉＲ及び（ｂ）で核酸によってコードされたｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡは、異なるエフェクター配列を含む。
【0128】
したがって、一例では、開示の複数の核酸は、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする２、または３、または４、または５、または６、または７、または８、または９、または１０の核酸などの、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする２つ以上の核酸を含み得る。
【0129】
別の例では、開示の複数の核酸は、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする少なくとも１つの核酸と、同族のエフェクターを含むｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列、及び本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲのエフェクター相補配列を含む、少なくとも１つの核酸と、を含む。例えば、ｓｈｍｉＲ２のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ２」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ３のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ３」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ４のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ４」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ５のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ５」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ６のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ６」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ７のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ７」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ９のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ９」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ１１のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ１１」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ１３のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ１３」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ１４のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ１４」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ１５のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ１５」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ１６のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ１６」と呼ばれる。例えば、ｓｈｍｉＲ１７のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むｓｈＲＮＡは、本明細書で以後「ｓｈＲＮＡ１７」と呼ばれる。
【0130】
本明細書に記載される複数の核酸における核酸のうちの１つ以上がｓｈＲＮＡをコードする任意の例に従って、ｓｈＲＮＡは、同族のエフェクターとエフェクター相補配列との間に位置するループまたはステムループ配列を含み得る。好適なループ配列は、当該技術分野で既知のものから選択され得る。代替的には、好適なステムループは、新たに開発され得る。一例では、ｓｈＲＮＡをコードする本明細書に記載される複数の核酸は、それぞれエフェクター配列及びエフェクター相補配列をコードするＤＮＡ配列の間に位置するステムループをコードするＤＮＡ配列を含み得る。
【0131】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ２をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ２をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４３に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ２）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ３～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0132】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ３をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ３をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４４に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２、ｓｈｍｉＲ４～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0133】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ４をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ４をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号５８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４５に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号５８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ４）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２、ｓｈｍｉＲ３、ｓｈｍｉＲ５～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0134】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ５をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ５をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４６に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ５）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ４、ｓｈｍｉＲ６～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0135】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ６をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ６をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号６０に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４７に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号６０に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ６）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ５、ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0136】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ７をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ７をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号６１に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４８に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号６１に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ７）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ６、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0137】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ９をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ９をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４９に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ９）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0138】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ１１をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ１１をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号６３に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５０に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号６３に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１１）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0139】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ１３をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ１３をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５１に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１４～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0140】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ１４をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ１４をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５２に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、ｓｈｍｉＲ１３、もしくはｓｈｍｉＲ１５～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0141】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ１５をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ１５をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号６６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５３に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号６６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１５）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、ｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１４、もしくはｓｈｍｉＲ１６～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0142】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ１６をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ１６をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号６７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５４に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号６７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１６）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、ｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１５、もしくはｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0143】
一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、ｓｈｍｉＲ１７をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。ｓｈｍｉＲ１７をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸は、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５５に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸、及びＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする開示の少なくとも１つの他の核酸を含む。例えば、本明細書に記載される複数の核酸は、（ｉ）配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１６のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。
【0144】
本明細書に記載されるような複数の核酸の任意の例に従って、複数の核酸は、核酸のうちの少なくとも１つが開示のｓｈｍｉＲをコードするという条件で、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする２、または３、または４、または５、または６、または７、または８、または９、または１０の核酸などの、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする２つ以上の核酸を含み得る。
【0145】
一例では、複数の核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする２つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする３つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする４つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする５つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする６つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする７つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする８つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする９つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、複数の核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする１０の核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。
【0146】
本明細書に記載される複数の核酸の一例では、核酸のうちの１つは、配列番号１に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む。配列番号１に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードする好適な核酸は、例えば、ｓｈｍｉＲ２について本明細書に記載される。
【0147】
本明細書に記載される複数の核酸の一例では、核酸のうちの１つは、配列番号２に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む。配列番号２に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードする好適な核酸は、例えば、ｓｈｍｉＲ３について本明細書に記載される。
【0148】
本明細書に記載される複数の核酸の一例では、核酸のうちの１つは、配列番号４に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む。配列番号４に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードする好適な核酸は、例えば、ｓｈｍｉＲ５について本明細書に記載される。
【0149】
本明細書に記載される複数の核酸の一例では、核酸のうちの１つは、配列番号７に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む。配列番号７に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードする好適な核酸は、例えば、ｓｈｍｉＲ９について本明細書に記載される。
【0150】
本明細書に記載される複数の核酸の一例では、核酸のうちの１つは、配列番号９に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む。配列番号９に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードする好適な核酸は、例えば、ｓｈｍｉＲ１３について本明細書に記載される。
【0151】
本明細書に記載される複数の核酸の一例では、核酸のうちの１つは、配列番号１０に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含む。配列番号１０に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードする好適な核酸は、ｓｈｍｉＲ１４について本明細書に記載される。
【0152】
一例では、ｓｈｍｉＲは、配列番号１３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含む。配列番号１３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードする好適な核酸は、ｓｈｍｉＲ１７について本明細書に記載される。
【0153】
開示の例示的な複数の核酸は少なくとも２つの核酸を含み、各々は開示のｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み、各ｓｈｍｉＲは異なるエフェクター配列を含む。
【0154】
一例では、少なくとも２つの核酸の各々は、配列番号１、２、４、７、９、１０、及び１３のうちの１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする。配列番号１、２、４、７、９、１０、及び１３に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする開示の例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0155】
一例では、少なくとも２つの核酸は、
例えば、配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ２）である、配列番号１５に定められたエフェクター配列と、配列番号１４に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ５）である、配列番号２１に定められたエフェクター配列と、配列番号２０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ９）である、配列番号２７に定められたエフェクター配列と、配列番号２６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸からなる群から選択される。
例えば、配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ２）である、配列番号１５に定められたエフェクター配列と、配列番号１４に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ５）である、配列番号２１に定められたエフェクター配列と、配列番号２０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ９）である、配列番号２７に定められたエフェクター配列と、配列番号２６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸からなる群から選択される。
【0156】
一例では、少なくとも２つの核酸の各々は、配列番号２、９、１０、及び１３のうちの１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする。配列番号２、９、１０、及び１３に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする開示の例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0157】
一例では、少なくとも２つの核酸は、
例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸からなる群から選択される。
例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸からなる群から選択される。
【0158】
一例では、複数の核酸は、配列番号９に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする核酸、及び配列番号１３に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。例えば、複数の核酸は、
（ａ）例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
（ｂ）例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸を含み得る。
（ａ）例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
（ｂ）例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸を含み得る。
【0159】
開示の例示的な複数の核酸は、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）を含む。
【0160】
一例では、複数の核酸は、配列番号２に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする核酸、及び配列番号１０に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。例えば、複数の核酸は、
（ａ）例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
（ｂ）例えば、配列番号６５に定められた配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸を含み得る。
（ａ）例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
（ｂ）例えば、配列番号６５に定められた配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸を含み得る。
【0161】
開示の例示的な複数の核酸は、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）、及び配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）を含む。
【0162】
複数の核酸が提供される例に従って、２つ以上の核酸は、同じポリヌクレオチドの別々の部分を形成し得る。別の例では、複数の核酸のうちの２つ以上は、それぞれ、異なるポリヌクレオチドの部分を形成する。別の例では、本明細書に記載される複数の核酸は、複数の成分、例えば、複数の組成物として提供される。例えば、複数の核酸の各々は、別々に提供され得る。代替的には、開示の３つ以上の核酸が提供される例では、核酸のうちの少なくとも１つは別々に提供され得、複数の２つ以上は一緒に提供され得る。
【0163】
いくつかの例では、本開示に従う、該または各核酸は、例えば、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡの転写を促進するために、追加の要素を含み得るか、または追加の要素との作動可能な連結にあり得る。例えば、または各核酸は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含み得る。他の要素、例えば、転写ターミネーター及びイニシエーターは、当該技術分野で既知であり、及び／または本明細書に記載される。
【0164】
代替的には、または加えて、本開示に従う、該または各核酸は、例えば、クローニングまたは発現ベクターへの核酸（複数可）のクローニングを促進するために、１つ以上の制限部位を含み得る。例えば、本明細書に記載される核酸は、開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の上流及び／または下流の制限部位を含み得る。適切な制限酵素認識配列は、当業者に既知であろう。しかしながら、一例では、開示の核酸（複数可）は、５’末端、すなわち、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の上流でＢａｍＨ１制限部位（ＧＧＡＴＣＣ）、及び３’末端、すなわち、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする配列の下流で、ＥｃｏＲ１制限部位（ＧＡＡＴＴＣ）を含み得る。
【0165】
ｄｄＲＮＡｉ構築物
一例では、開示の該または各核酸は、ＤＮＡ指向性ＲＮＡｉ（ｄｄＲＮＡｉ）構築物の形態で提供されるか、またはそれに含まれる。したがって、一例では、本開示は、本明細書に記載されるような核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を提供する。別の例では、本開示は、本明細書に記載される複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を提供する。さらに別の例では、本開示は、複数のｄｄＲＮＡｉ構築物を提供し、各々は本明細書に記載されるような複数の核酸の核酸を含む（すなわち、複数の核酸の全てが複数のｄｄＲＮＡｉ構築物において表されるように）。ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１のｍＲＮＡ転写物を標的化するエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
一例では、開示の該または各核酸は、ＤＮＡ指向性ＲＮＡｉ（ｄｄＲＮＡｉ）構築物の形態で提供されるか、またはそれに含まれる。したがって、一例では、本開示は、本明細書に記載されるような核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を提供する。別の例では、本開示は、本明細書に記載される複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を提供する。さらに別の例では、本開示は、複数のｄｄＲＮＡｉ構築物を提供し、各々は本明細書に記載されるような複数の核酸の核酸を含む（すなわち、複数の核酸の全てが複数のｄｄＲＮＡｉ構築物において表されるように）。ＯＰＭＤの原因となるＰＡＢＰＮ１のｍＲＮＡ転写物を標的化するエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0166】
一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーターに作動可能に連結された開示の核酸を含む。
【0167】
ｄｄＲＮＡｉ構築物が本明細書に記載される複数の核酸を含む例に従って、核酸の各々は、プロモーターに作動可能に連結され得る。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物における核酸は、同じプロモーターに作動可能に連結され得る。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物における核酸は、異なるプロモーターに作動可能に連結され得る。
【0168】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ２をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号１に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４３に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ３～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ２）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ３～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ３～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、及びｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0169】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ３をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号２に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ３をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４４に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２、ｓｈｍｉＲ４～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２、ｓｈｍｉＲ４～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２、ｓｈｍｉＲ４～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0170】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ４をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ４をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号５８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４５に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２、ｓｈｍｉＲ３、ｓｈｍｉＲ５～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号５８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ４）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２、ｓｈｍｉＲ３、ｓｈｍｉＲ５～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２、ｓｈｍｉＲ３、ｓｈｍｉＲ５～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0171】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ５をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号４に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ５をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４６に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ４、ｓｈｍｉＲ６～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ５）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ４、ｓｈｍｉＲ６～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ４、ｓｈｍｉＲ６～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0172】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ６をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号５に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ６をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６０に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４７に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ５、ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号６０に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ６）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ５、ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ５、ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0173】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ７をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ７をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６１に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４８に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ６、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号６１に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ７）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ６、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ６、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0174】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ９をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号７に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ９をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号４９に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ９）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0175】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ１１をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号８に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ１１をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６３に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５０に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号６３に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１１）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0176】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ１３をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号９に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ１３をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５１に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１４～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１４～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１４～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0177】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ１４をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号１０に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ１４をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５２に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３、ｓｈｍｉＲ１５～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３、ｓｈｍｉＲ１５～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３、ｓｈｍｉＲ１５～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0178】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ１５をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号１１に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ１５をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５３に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１４、もしくはｓｈｍｉＲ１６～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号６６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１５）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１４、もしくはｓｈｍｉＲ１６～ｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１４、またはｓｈｍｉＲ１６～ｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0179】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ１６をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号１２に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ１６をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５４に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１５、もしくはｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号６７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１６）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１５、もしくはｓｈｍｉＲ１７のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１５、またはｓｈｍｉＲ１７と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0180】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲ１７をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号１３に定められた配列を含むか、またはそれからなるＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を有するｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ１７をコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり、かつ配列番号５５に定められた配列を含むか、またはそれからなるｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるような、ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１６のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸などの、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の領域を標的化するｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含む開示の１つ以上のさらなる核酸を含み得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、（ｉ）配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）、及び（ｉｉ）ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、もしくはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１６のうちの１つ、またはそれらのいずれかの対応するｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡ配列を含むか、あるいはそれからなる核酸を含み得る。ｓｈｍｉＲ２～ｓｈｍｉＲ７、ｓｈｍｉＲ９、ｓｈｍｉＲ１１、またはｓｈｍｉＲ１３～ｓｈｍｉＲ１６と呼ばれるｓｈｍｉＲをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0181】
本明細書に記載されるような複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物の任意の例に従って、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、核酸のうちの少なくとも１つが本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードするという条件で、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする２、または３、または４、または５、または６、または７、または８、または９、または１０の核酸などの、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする２つ以上の核酸を含み得る。
【0182】
一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする２つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする３つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする４つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする５つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする６つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする７つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする８つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする９つの核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする１０の核酸を含み、ただし、核酸のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲをコードする。
【0183】
開示の例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は少なくとも２つの核酸を含み、各々は開示のｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含み、各ｓｈｍｉＲは異なるエフェクター配列を含む。一例では、少なくとも２つの核酸の各々は、配列番号１、２、４、７、９、１０、及び１３のうちの１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする。配列番号１、２、４、７、９、１０、及び１３に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする開示の例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0184】
一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、
例えば、配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ２）である、配列番号１５に定められたエフェクター配列と、配列番号１４に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ５）である、配列番号２１に定められたエフェクター配列と、配列番号２０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ９）である、配列番号２７に定められたエフェクター配列と、配列番号２６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸からなる群から選択される少なくとも２つの核酸を含む。
例えば、配列番号５６に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ２）である、配列番号１５に定められたエフェクター配列と、配列番号１４に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号５９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ５）である、配列番号２１に定められたエフェクター配列と、配列番号２０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ９）である、配列番号２７に定められたエフェクター配列と、配列番号２６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸からなる群から選択される少なくとも２つの核酸を含む。
【0185】
一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物における少なくとも２つの核酸の各々は、配列番号２、９、１０、及び１３のうちの１つに定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする。配列番号２、９、１０、及び１３に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする開示の例示的な核酸は、本明細書に記載され、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0186】
一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、
例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸からなる群から選択される少なくとも２つの核酸を含む。
例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、
例えば、配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸からなる群から選択される少なくとも２つの核酸を含む。
【0187】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号９に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする核酸、及び配列番号１３に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、
（ａ）例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
（ｂ）例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸を含み得る。
（ａ）例えば、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）である、配列番号３１に定められたエフェクター配列と、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
（ｂ）例えば、配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）である、配列番号３９に定められたエフェクター配列と、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸を含み得る。
【0188】
開示の例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）を含む。
【0189】
一例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号２に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする核酸、及び配列番号１０に定められたＲＮＡ転写物における対応する長さの領域に対して実質的に相補的であるエフェクター配列を含むｓｈｍｉＲをコードする核酸を含む。例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、
（ａ）例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
（ｂ）例えば、配列番号６５に定められた配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸を含み得る。
（ａ）例えば、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）である、配列番号１７に定められたエフェクター配列と、配列番号１６に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸、及び
（ｂ）例えば、配列番号６５に定められた配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）である、配列番号３３に定められたエフェクター配列と、配列番号３２に定められたエフェクター相補配列と、を含む、ｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる、核酸を含み得る。
【0190】
開示の例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ３）、及び配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１４）を含む。
【0191】
開示のｄｄＲＮＡｉ構築物を記載する前述の例の各々では、それに含まれる該または各核酸は、プロモーターに作動可能に連結され得る。例えば、本明細書に記載されるｄｄＲＮＡｉ構築物は、例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物からの１つ以上のｓｈｍｉＲ及び／またはｓｈＲＮＡの発現を駆動するために、それに含まれる該または各核酸に作動可能に連結される単一のプロモーターを含み得る。
【0192】
別の例では、ｄｄＲＮＡｉ構築物に含まれる開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする各核酸は、別々のプロモーターに作動可能に連結される。
【0193】
複数のプロモーターが存在する例に従って、プロモーターは同じであっても異なっていてもよい。例えば、構築物は、開示の異なる核酸に作動可能に連結された各コピーを有する同じプロモーターの複数のコピーを含み得る。別の例では、開示の核酸に作動可能に連結された各プロモーターは、異なる。例えば、２つのｓｈｍｉＲをコードするｄｄＲＮＡｉ構築物では、ｓｈｍｉＲをコードする２つの核酸は、各々、異なるプロモーターに作動可能に連結される。同じように、ｄｄＲＮＡｉ構築物が１つのｓｈｍｉＲ及び１つのｓｈＲＮＡをコードする例では、ｓｈｍｉＲ及びｓｈＲＮＡをコードするそれぞれの核酸は、各々、異なるプロモーターに作動可能に連結される。
【0194】
一例では、プロモーターは、構成的プロモーターである。プロモーターを参照する場合の用語「構成的」は、プロモーターが、具体的な刺激（例えば、熱ショック、化学物質、光など）の不在下で、作動可能に連結された核酸配列の転写を誘導することができることを意味する。典型的には、構成的プロモーターは、実質的に任意の細胞及び任意の組織においてコード配列の発現を誘導することができる。開示の核酸（複数可）からｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡを転写するために使用されるプロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによって制御されるユビキチン、ＣＭＶ、β－アクチン、ヒストンＨ４、ＥＦ－１α、もしくはｐｇｋ遺伝子に対するプロモーター、またはＲＮＡポリメラーゼＩによって制御されるプロモーター要素を含む。
【0195】
一例では、ＣＭＶ、ＳＶ４０、Ｕ１、β－アクチンなどのＰｏｌ ＩＩプロモーター、またはハイブリッドＰｏｌ ＩＩプロモーターが用いられる。他の好適なＰｏｌ ＩＩプロモーターは、当該技術分野で既知であり、開示のこの例に従って使用され得る。例えば、Ｐｏｌ ＩＩプロモーターシステムは、酵素Ｄｒｏｓｈａ及びＰａｓｈａの作用によって１つ以上のｓｈｍｉＲにプロセシングされるｐｒｉ－ｍｉＲＮＡを発現する開示のｄｄＲＮＡｉ構築物において好まれ得る。Ｐｏｌ ＩＩプロモーターシステムは、単一のプロモーターの制御下にある複数のｓｈＲＮＡまたはｓｈｍｉＲをコードする配列を含む開示のｄｄＲＮＡｉ構築物においても好まれ得る。Ｐｏｌ ＩＩプロモーターシステムは、組織特異性が望まれる場合にも好まれ得る。
【0196】
別の例では、Ｕ６プロモーター（Ｕ６－１、Ｕ６－８、Ｕ６－９）、Ｈ１プロモーター、７ＳＬプロモーター、ヒトＹプロモーター（ｈＹ１、ｈＹ３、ｈＹ４（Ｍａｒａｉａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２２（１５）：３０４５－５２（１９９４）を参照されたい）及びｈＹ５（Ｍａｒａｉａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２４（１８）：３５５２－５９（１９９４）を参照されたい））、ヒトＭＲＰ－７－２プロモーター、アデノウイルスＶＡ１プロモーター、ヒトｔＲＮＡプロモーター、または５ｓリボソームＲＮＡプロモーターなどの、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩによって制御されるプロモーターが使用される。
【0197】
開示のｄｄＲＮＡｉ構築物における使用のための好適なプロモーターは、米国特許第８，００８，４６８号及び米国特許第８，１２９，５１０号に記載される。
【0198】
一例では、プロモーターは、ＲＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターである。例えば、プロモーターは、Ｕ６プロモーター（例えば、Ｕ６－１、Ｕ６－８、またはＵ６－９プロモーター）である。別の例では、プロモーターは、Ｈ１プロモーターである。
【0199】
本明細書に記載されるような、複数のｓｈｍｉＲをコードするか、または１つ以上のｓｈｍｉＲ及びｓｈＲＮＡをコードする開示のｄｄＲＮＡｉ構築物の場合では、ｄｄＲＮＡｉ構築物における核酸の各々は、Ｕ６プロモーター、例えば、別々のＵ６プロモーターに作動可能に連結される。
【0200】
一例では、構築物におけるプロモーターは、Ｕ６プロモーターである。例えば、プロモーターは、Ｕ６－１プロモーターである。例えば、プロモーターは、Ｕ６－８プロモーターである。例えば、プロモーターは、Ｕ６－９プロモーターである。
【0201】
いくつかの例では、可変強度のプロモーターが、用いられる。例えば、２つ以上の強力なプロモーター（Ｐｏｌ ＩＩＩ型プロモーターなどの）の使用は、例えば、転写に必要な利用可能なヌクレオチドまたは他の細胞成分のプールを枯渇させることによって、細胞に負担をかける場合がある。加えて、または代替的に、いくつかの強力なプロモーターの使用は、細胞において、ＲＮＡｉ薬剤、例えば、ｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡの毒性レベルの発現を引き起こす場合がある。したがって、いくつかの例では、複数プロモーターｄｄＲＮＡｉ構築物におけるプロモーターのうちの１つ以上は構築物における他のプロモーターよりも弱いか、または構築物における全てのプロモーターは最大速度未満でｓｈｍｉＲもしくはｓｈＲＮＡを発現し得る。プロモーターは、様々な分子技法を使用して、またはそうでなければ、例えば、様々な調節要素の修飾を通じて、より弱いレベルまたはより強いレベルの転写を達成するためにも修飾され得る。低減した転写を達成する１つの手段は、プロモーター活性を制御することが知られているプロモーター内の配列要素を修飾することである。例えば、近位配列要素（ＰＳＥ）は、ヒトＵ６プロモーターの活性に影響することが知られている（Ｄｏｍｉｔｒｏｖｉｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３１：２３４４－２３５２（２００３））。ヒトＵ６－１、Ｕ６－８、またはＵ６－９プロモーターなどの強力なプロモーターに存在するＰＳＥ要素を、ヒトＵ６－７プロモーターなどの弱いプロモーターの要素で置換することは、ハイブリッドＵ６－１、Ｕ６－８、またはＵ６－９プロモーターの活性を低減する。このアプローチは、この用途に記載された例において使用されているが、このアウトカムを達成するための他の手段は、当該技術分野において既知である。
【0202】
本開示のいくつかの例において有用なプロモーターは、組織特異的または細胞特異的であり得る。プロモーターに適用されるような用語「組織特異的」は、異なる型の組織（例えば、肝臓）における目的の同じヌクレオチド配列の発現の相対的不在下で、具体的な型の組織（例えば、眼または筋の組織）に目的の核酸の選択的転写を誘導することができるプロモーターを指す。プロモーターに適用されるような用語「細胞特異的」は、同じ組織内の異なる型の組織における目的の同じヌクレオチド配列の発現の相対的不在下で、具体的な型の細胞における目的の核酸の選択的転写を誘導することができるプロモーターを指す。一例に従って、Ｓｐｃ５１２またはＣＫ８などの筋特異的プロモーターが、使用される。しかしながら、他の筋特異的プロモーターは、当該技術分野で既知であり、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物における使用のために企図される。
【0203】
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載される核酸によってコードされたｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡの発現を増加させるための１つ以上のエンハンサーを追加的に含み得る。本開示の例における使用に適切なエンハンサーは、Ａｐｏ Ｅ ＨＣＲエンハンサー、ＣＭＶエンハンサー（Ｘｉａ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３１－１７（２００３））、及び当業者に既知の他のエンハンサーを含む。開示のｄｄＲＮＡｉ構築物における使用のための好適なエンハンサーは、米国特許第８，００８，４６８号に記載される。
【0204】
さらなる例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡをコードする核酸に連結された転写ターミネーターを含み得る。本明細書に記載される複数の核酸を含む、すなわち、複数のｓｈｍｉＲ及び／またはｓｈＲＮＡをコードするｄｄＲＮＡｉ構築物の場合では、各核酸に連結されたターミネーターは、同じであっても異なっていてもよい。例えば、ＲＮＡ ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターが用いられる開示のｄｄＲＮＡｉ構築物では、ターミネーターは、４つ以上、または５つ以上、または６つ以上のＴ残基の連続的な範囲であり得る。しかしながら、異なるプロモーターが使用される場合、ターミネーターは、異なる可能性があり、ターミネーターが由来する遺伝子からのプロモーターに一致する。かかるターミネーターは、ＳＶ４０ポリＡ、ＡｄＶ ＶＡ１遺伝子、５ＳリボソームＲＮＡ遺伝子、及びヒトｔ－ＲＮＡに対するターミネーターを含むが、これらに限定されない。他のプロモーター及びターミネーターの組み合わせは、当該技術分野で既知であり、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物における使用のために企図される。
【0205】
加えて、プロモーター及びターミネーターは、ＲＮＡ ｐｏｌ ＩＩプロモーター及びターミネーターで一般的に行われているように、混合し一致する場合がある。
【0206】
一例では、複数の核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物における各核酸のために使用されるプロモーター及びターミネーターの組み合わせは、成分間のＤＮＡ組換え事象の可能性を減少するように異なる。
【0207】
開示の１つの例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１３をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びプロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１７をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、開示の例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーターに作動可能に連結された配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びプロモーターに作動可能に連結された配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。一例では、ｓｈｍｉＲをコードするｄｄＲＮＡｉ構築物における各核酸は、別々のプロモーターに作動可能に連結される。別の例では、ｓｈｍｉＲをコードするｄｄＲＮＡｉ構築物における各核酸は、同じプロモーターに作動可能に連結される。例えば、該または各プロモーターは、例えば、Ｕ６－１、Ｕ６－８、またはＵ６－９プロモーターである、Ｕ６プロモーターであり得る。例えば、該または各プロモーターは、例えば、Ｓｐｃ５１２またはＣＫ８プロモーターである、筋特異的プロモーターであり得る。
【0208】
ｓｈｍｉＲ１３及びｓｈｍｉＲ１７をコードするｄｄＲＮＡｉ構築物における核酸が同じＳｐｃ５１２プロモーターに作動可能に連結される例に従って、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号７２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる。ｓｈｍｉＲ１３及びｓｈｍｉＲ１７をコードするｄｄＲＮＡｉ構築物における核酸が同じＣＫ８プロモーターに作動可能に連結される例に従って、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号７０に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる。
【0209】
開示の別の例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ３をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びプロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１４をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。例えば、開示の例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーターに作動可能に連結された配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸、及びプロモーターに作動可能に連結された配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含む。一例では、ｓｈｍｉＲをコードするｄｄＲＮＡｉ構築物における各核酸は、別々のプロモーターに作動可能に連結される。別の例では、ｓｈｍｉＲをコードするｄｄＲＮＡｉ構築物における各核酸は、同じプロモーターに作動可能に連結される。例えば、該または各プロモーターは、例えば、Ｕ６－１、Ｕ６－８、またはＵ６－９プロモーターである、Ｕ６プロモーターであり得る。例えば、該または各プロモーターは、例えば、Ｓｐｃ５１２またはＣＫ８プロモーターである、筋特異的プロモーターであり得る。
【0210】
ｓｈｍｉＲ３及びｓｈｍｉＲ１４をコードするｄｄＲＮＡｉ構築物における核酸が同じＳｐｃ５１２プロモーターに作動可能に連結される例に従って、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号７１に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる。ｓｈｍｉＲ３及びｓｈｍｉＲ１４をコードするｄｄＲＮＡｉ構築物における核酸が同じＣＫ８プロモーターに作動可能に連結される例に従って、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６９に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる。
【0211】
複数のｄｄＲＮＡｉ構築物も、提供される。例えば、本明細書に記載されるｓｈｍｉＲをコードする複数の核酸は、複数のｄｄＲＮＡｉ構築物内に提供され得、各ｄｄＲＮＡｉ構築物は、本明細書に記載される複数の核酸のうちの１つ以上を含む。ｓｈｍｉＲをコードする核酸の組み合わせは、記載されており、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。一例では、本明細書に記載される複数の核酸における各核酸は、それ自体のｄｄＲＮＡｉ構築物内に提供される。
【0212】
複数のｄｄＲＮＡｉ構築物が提供される任意の例に従って、各ｄｄＲＮＡｉ構築物は、それに含まれるｓｈｍｉＲ（複数可）をコードする核酸（複数可）に作動可能に連結された１つ以上のプロモーターも含み得る。一例では、各ｄｄＲＮＡｉ構築物は、ｓｈｍｉＲをコードする単一の核酸、及びそれに作動可能に連結されたプロモーターを含む。複数のｄｄＲＮＡｉ構築物のうちの１つ以上がｓｈｍｉＲをコードする２つ以上の核酸を含む例に従って、１つ以上のｄｄＲＮＡｉ構築物における各核酸は、別々のプロモーターに作動可能に連結される。複数のｄｄＲＮＡｉ構築物のうちの１つ以上がｓｈｍｉＲをコードする２つ以上の核酸を含む別の例では、２つ以上の核酸は、ｄｄＲＮＡｉ構築物における同じプロモーターに作動可能に連結される。
【0213】
開示の１つの例示的な複数のｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１３をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物、及びプロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１７をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を含む。例えば、開示の例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーターに作動可能に連結された配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物、及びプロモーターに作動可能に連結された配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を含む。一例では、プロモーターは、例えば、Ｕ６－１、Ｕ６－８、またはＵ６－９プロモーターから選択されるＵ６プロモーターである。別の例では、プロモーターは、例えば、Ｓｐｃ５１２またはＣＫ８プロモーターである、筋特異的プロモーターである。
【0214】
開示の別の例示的な複数のｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ３をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物、及びプロモーターに作動可能に連結された本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１４をコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を含む。例えば、開示の例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーターに作動可能に連結された配列番号５７に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物、及びプロモーターに作動可能に連結された配列番号６５に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸を含むｄｄＲＮＡｉ構築物を含む。一例では、プロモーターは、例えば、Ｕ６－１、Ｕ６－８、またはＵ６－９プロモーターから選択されるＵ６プロモーターである。別の例では、プロモーターは、例えば、Ｓｐｃ５１２またはＣＫ８プロモーターである、筋特異的プロモーターである。
【0215】
加えて、該または各ｄｄＲＮＡｉ構築物は、プロモーター、ｓｈｍｉＲもしくはｓｈＲＮＡをコードする核酸及び／または他の調節要素が簡単に除去または置換されるように、戦略的に位置する１つ以上の複数のクローニング部位及び／または固有の制限部位を含むことができる。該または各ｄｄＲＮＡｉ構築物は、戦略的に位置する制限部位及び／または相補的な粘着末端を使用して、より小さなオリゴヌクレオチド成分から組み立てられ得る。本開示に従う１つのアプローチのための基礎ベクターは、全ての部位が固有であるマルチリンカーを有するプラスミドを含む（このことは絶対的な要件ではないが）。続いて、各プロモーターは、その指定された固有部位の間に挿入され、その全てが可変配向を有し得る１つ以上のプロモーターを有する基礎カセットを生じる。続いて、再び、アニーリングされたプライマー対は、個々のプロモーターの各々の下流の固有部位に挿入され、単一、二重、または複数の発現カセット構築物を生じる。挿入物は、単一、二重、または複数の発現カセット挿入物に隣接する２つの固有の制限酵素部位（同じまたは異なるもの）を使用して、例えば、ＡｄＶ骨格またはＡＡＶ骨格に移動され得る。
【0216】
該または各ｄｄＲＮＡｉ構築物の生成は、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成、制限エンドヌクレアーゼ消化、ライゲーション、形質転換、プラスミド精製、及びＤＮＡ配列決定の標準的な技法を限定なく含む、当該技術分野で既知の任意の好適な遺伝子工学技法を使用して達成され得る。該または各構築物がウイルス構築物である場合、構築物は、例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物をウイルス粒子にパッケージ化するために必要な配列、及び／またはｄｄＲＮＡｉ構築物の標的細胞ゲノムへの組み込みを可能にする配列を含む。いくつかの例では、該または各ウイルス構築物は、ウイルスの複製及び増殖を可能にする遺伝子を追加的に含むが、かかる遺伝子は、トランスで供給されるであろう。追加的に、該または各ウイルス構築物は、天然の形態で組み込まれた、もしくは改変された任意の既知の生物のゲノムからの遺伝子または遺伝子配列を含むことができる。例えば、ウイルス構築物は、細菌における構築物の複製に有用な配列を含み得る。
【0217】
該または各構築物は、追加の遺伝的要素も含み得る。構築物に含まれ得る要素の型は、いかなる方法でも限定されず、当業者によって選択され得る。例えば、追加の遺伝的要素は、ＧＦＰもしくはＲＦＰなどの蛍光マーカータンパク質、ベータ－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、ベータ－グルクロニダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、もしくは分泌型胚性アルカリホスファターゼなどの簡単にアッセイされる酵素、または、ホルモンもしくはサイトカインなどのイムノアッセイが容易に利用可能であるタンパク質に対する１つ以上の遺伝子などのレポーター遺伝子を含み得る。
【0218】
本開示の実施形態において使用が見出され得る他の遺伝的要素は、アデノシンデアミナーゼ、アミノグリコディックホスホトランスフェラーゼ、ジヒドロ葉酸レダクターゼ、ハイグロマイシン－Ｂ－ホスホトランスフェラーゼ、薬剤抵抗性などの細胞に選択的成長の利点を付与するタンパク質をコードするもの、または栄養要求体に欠けている生合成能力を提供するタンパク質をコードするそれらの遺伝子を含む。レポーター遺伝子が該または各構築物と共に含まれる場合、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列が、含まれ得る。一例では、追加の遺伝的要素は、独立したプロモーター／エンハンサーを用いて作動可能に連結され、それによって制御される。加えて、細菌における構築物の増殖のための好適な複製起点が、用いられ得る。複製起点の配列は、一般に、ｄｄＲＮＡｉ構築物及び他の遺伝子配列から分離される。かかる複製起点は、当該技術分野で既知であり、ｐＵＣ、ＣｏｌＥ１、２ミクロン、またはＳＶ４０の複製起点を含む。
【0219】
発現ベクター
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、発現ベクター内に含まれる。
一例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物は、発現ベクター内に含まれる。
【0220】
一例では、発現ベクターは、例えば、当該技術分野で既知であるような、プラスミドである。一例では、好適なプラスミド発現ベクターは、ｐＡＡＶベクター、例えば、自己相補的ｐＡＡＶ（ｐｓｃＡＡＶ）プラスミドベクターまたは１本鎖ｐＡＡＶ（ｐｓｓＡＡＶ）プラスミドベクターである。本明細書に記載されるように、プラスミドは、開示の１つ以上のｓｈｍｉＲの発現を駆動するための１つ以上のプロモーター（その好適な例は記載される）を含み得る。
【0221】
一例では、発現ベクターは、ミニサークルＤＮＡである。ミニサークルＤＮＡは、米国特許公開第２００４／０２１４３２９号に記載される。ミニサークルＤＮＡは、持続的な高レベルの核酸転写に有用である。環状ベクターは、発現サイレンシング細菌配列を欠いていることによって特徴付けられる。例えば、ミニサークルベクターは、複製起点を欠き、細菌プラスミドに一般的に見いだされる薬物選択マーカー、例えば、β－ラクタマーゼ、ｔｅｔなどを欠くという点で細菌プラスミドベクターとは異なる。その結果、ミニサークルＤＮＡは、より小さなサイズになり、より効率的な送達を可能にする。
【0222】
一例では、発現ベクターは、ウイルスベクターである。
【0223】
任意の適切なウイルスに基づくウイルスベクターは、開示のｄｄＲＮＡｉを送達するために使用され得る。加えて、ハイブリッドウイルスシステムが、役立つ場合がある。ウイルス送達システムの選択は、送達のために標的化される組織、システムの形質導入効率、病原性、免疫学的かつ毒性の懸念などの、様々なパラメータに依存するであろう。
【0224】
遺伝子療法において使用されるウイルスシステムの一般的に使用されるクラスは、それらのゲノムが宿主細胞クロマチン（オンコレトロウイルス及びレンチウイルス）に組み込まれるか、または主に染色体外エピソーム（アデノ随伴ウイルス、アデノウイルス、及びヘルペスウイルス）として細胞核において存続するかに従って、２つの群に分類され得る。一例では、開示のウイルスベクターは、宿主細胞のクロマチンに組み込む。別の例では、開示のウイルスベクターは、染色体外エピソームとして宿主細胞の核において存続する。
【0225】
一例では、ウイルスベクターは、アデノウイルス（ＡｄＶ）ベクターである。アデノウイルスは、２６～４８Ｋｂｐである線状ゲノムを有する中型の２本鎖非エンベロープＤＮＡウイルスである。アデノウイルスは、受容体媒介性の結合及び内部移行によって標的細胞へ入り込み、非分裂細胞及び分裂細胞の両方において核に侵入する。アデノウイルスは、生存及び複製について宿主細胞に重度に依存しており、宿主の複製機構を使用して脊椎動物の核において複製することができる。
【0226】
一例では、ウイルスベクターは、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科からのものである。Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科は、およそ５０００ヌクレオチド長のゲノムを有する小さな１本鎖の非エンベロープＤＮＡウイルスの科である。科のメンバーの中には、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）が含まれる。一例では、開示のウイルスベクターは、ＡＡＶである。ＡＡＶは、生産的な感染サイクルを開始及び維持するために、別のウイルス（典型的には、アデノウイルスまたはヘルペスウイルス）との同時感染を一般に必要とする依存的パルボウイルスである。かかるヘルパーウイルスの不在下で、ＡＡＶは、未だにコンピテントであり、受容体媒介性の結合及び内部移行によって標的細胞に感染するか、または標的細胞を形質導入し、非分裂細胞及び分裂細胞の両方において核に侵入する。後代ウイルスがヘルパーウイルスの不在下でＡＡＶ感染から産生されないため、形質導入の程度は、ウイルスに感染している始原細胞のみに制限される。ＡＡＶを本開示のための望ましいベクターにするのは、この特徴である。さらに、レトロウイルス、アデノウイルス、及び単純ヘルペスウイルスとは異なり、ＡＡＶは、ヒトの病原性及び毒性を欠くように思われる（Ｋａｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４２４：２５１（２００３））。ゲノムは通常２つの遺伝子のみをコードするため、送達媒体として、ＡＡＶが４．５の１本鎖キロベース（ｋｂ）のパッケージ化能力によって限定されることは驚くべきことではない。しかしながら、このサイズ制限は、置換遺伝子療法のために送達され得る遺伝子を限定し得るが、ｓｈｍｉＲ及びｓｈＲＮＡなどのより短い配列のパッケージ化及び発現に悪い影響を与えない。好ましくは、発現ベクター及び送達システムとして使用されるＡＡＶは、ヒトに感染することができる血清型、例えば、ＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３からなる群から選択されるＡＡＶからのものである。１つの特定の例では、血清型８または９のＡＡＶは、ベクターとして使用される。一例では、ＡＡＶは血清型８からのものである。別の例では、ＡＡＶは血清型９からのものである。ＡＡＶが血清型２以外の血清型からのものである任意の例に従って、ＡＡＶは、ＡＡＶ血清型２逆位末端反復（ＩＴＲ）を、例えば、ＡＡＶの形質導入効率を改善するように含み得る。代替的には、または加えて、ＡＡＶは、例えば、バキュロウイルスシステムを使用して昆虫細胞におけるＡＡＶの産生を支援するように、修飾されたキャプシドタンパク質を含み得る。例えば、ＡＡＶは、修飾されたホスホリパーゼ（ＰＬ）ドメイン配列を有するサブユニット１（ＶＰ１）を含むウイルスキャプシドタンパク質を含み得る。例えば、ＶＰ１のＰＬドメインは、位置１でセリン、位置２６でグルタミン酸、位置４０でアルギニン、位置４３でアスパラギン酸、位置４４でセリン、及び位置６４でリジンを含む配列を含み得、アミノ酸位置は、配列番号８８に定められた未修飾配列に対して定義され、位置１、２６、４０、４３、４４、及び６４のうちの任意の１つ以上でのアミノ酸は、対応する野生型配列に対して修飾される。
【0227】
一例では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ血清型２からのＩＴＲを含む、血清型８からのＡＡＶ、または血清型８のキャプシドでシュードタイプ化されたＡＡＶであり、ＶＰ１がＰＬドメイン配列を含む修飾されたキャプシドタンパク質は、位置１でセリン、位置２６でグルタミン酸、位置４０でアルギニン、位置４３でアスパラギン酸、位置４４でセリン、及び位置６４でリジンを含み、アミノ酸位置は、配列番号８８に定められた配列に対して定義される。例えば、ＡＡＶ８からの修飾されたキャプシドタンパク質は、配列番号８９に定められた配列を含むＰＬドメインを含むＶＰ１を含み得る。別の例では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ血清型２からのＩＴＲを含む、血清型９からのＡＡＶ、または血清型９のキャプシドでシュードタイプ化されたＡＡＶであり、ＶＰ１がＰＬドメイン配列を含む修飾されたキャプシドタンパク質は、位置１でセリン、位置２６でグルタミン酸、位置４０でアルギニン、位置４３でアスパラギン酸、及び位置４４でセリン、及び位置６４でリジンを含み、アミノ酸位置は、配列番号８８に定められた未修飾配列に対して定義される。例えば、ＡＡＶ９からの修飾されたキャプシドタンパク質は、配列番号９０に定められた配列を含むＰＬドメインを含むＶＰ１を含み得る。
【0228】
遺伝子療法における使用に好適なＡＡＶ（例えば、複製不全ＡＡＶ）を産生する方法は、当該技術分野で周知であり、本明細書で企図される。例えば、ＡＡＶは、例えば、その内容は本明細書に参照により記載される、ＵＳ２０１２００２８３５７Ａ１、ＷＯ２００７０４６７０３、ＵＳ２００３０１４８５０６Ａ１、ＷＯ２０１７１８４８７９、ＵＳ２００４０１９７８９５Ａ１、及びＷＯ２００７１４８９７１に記載されるように、バキュロウイルスシステムを使用して昆虫細胞において産生され得る。組換えＡＡＶは、付着細胞及び浮遊細胞の両方の哺乳動物細胞においても産生され得、その方法は、その内容が参照により本明細書に記載される、ＷＯ２０１５０３１６８６、ＷＯ２００９０９７１２９、ＷＯ２００７１２７２６４、ＷＯ１９９７００９４４１、及びＷＯ２００１０４９８２９に記載される。遺伝子療法における使用のための組換えＡＡＶを産生する方法は、Ｂｅｒｎｓ ＫＩ ａｎｄ Ｇｉｒａｕｄ Ｃ（１９９６）Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ．Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１８：１－２３、Ｓｎｙｄｅｒ ａｎｄ Ｆｌｏｔｔｅ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１３：４１８－４２３、及びＳｙｎｄｅｒ ＲＯ ａｎｄ Ｍｏｕｌｌｉｅｒ Ｐ，Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ；ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（２０１１）においても記載され、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【0229】
開示のｄｄＲＮＡｉ構築物と共に有用な別のウイルス送達システムは、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ科からのウイルスに基づくシステムである。レトロウイルスは、２つの固有の特徴によって特徴付けられる１本鎖ＲＮＡ動物ウイルスを含む。第一に、レトロウイルスのゲノムは二倍体であり、ＲＮＡの２つのコピーからなる。第二に、このＲＮＡは、ビリオン関連酵素逆転写酵素によって２本鎖ＤＮＡに転写される。次に、この２本鎖ＤＮＡまたはプロウイルスは、宿主ゲノムに組み込まれ、宿主ゲノムの安定的に組み込まれた成分として親細胞から後代細胞に受け継がれる。
【0230】
いくつかの例では、ウイルスベクターは、レンチウイルスである。レンチウイルスベクターは、水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）で多くの場合シュードタイプ化され、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒツジに脳炎（ビスナ）または肺炎を引き起こすビスナ－マエディ、ウマに自己免疫性溶血性貧血及び脳症を引き起こすウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコに免疫不全を引き起こすネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシにリンパ節腫脹及びリンパ球増加症を引き起こすウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ならびに非ヒト霊長類に免疫不全及び脳症を引き起こすサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）に由来している。ＨＩＶに基づくベクターは、親ゲノムの５％未満を一般に保持し、ゲノムの２５％未満は、複製可能なＨＩＶを復帰させる可能性を最小化する、パッケージ化構築物に組み込まれる。バイオセーフティは、下流の長末端反復配列における調節要素の欠失を含む自己不活化ベクターの開発によってさらに増加しており、この修飾は、ベクターの可動化に必要とされる組み込まれたプロウイルスからの転写を排除する。レンチウイルスベクターの使用に対する主な利点のうちの１つは、形質導入された細胞の細胞分裂に続いても、遺伝子導入がほとんどの組織または細胞型において持続することである。
【0231】
開示の核酸及びｄｄＲＮＡｉ構築物からのｓｈｍｉＲ及び／またはｓｈＲＮＡを発現するために使用されるレンチウイルスベースの構築物は、レンチウイルスの５’及び３’長末端反復（ＬＴＲ）からの配列を含む。一例では、ウイルス構築物は、レンチウイルスからの不活化または自己不活化３’ＬＴＲを含む。３’ＬＴＲは、当該技術分野で既知の任意の方法によって自己不活化するようにされ得る。例えば、３’ＬＴＲのＵ３要素は、そのエンハンサー配列、例えば、ＴＡＴＡボックス、Ｓｐ１、及びＮＦ－カッパＢ部位の欠失を含む。自己不活化３’ＬＴＲの結果として、宿主ゲノムに組み込まれるプロウイルスは、不活化５’ＬＴＲを含むであろう。ＬＴＲ配列は、任意の種からの任意のレンチウイルスからのＬＴＲ配列であり得る。レンチウイルスベースの構築物はまた、ＭＭＬＶまたはＭＳＣＶ、ＲＳＶまたは哺乳動物遺伝子に対する配列も組み込み得る。加えて、レンチウイルス５’ＬＴＲからのＵ３配列は、ウイルス構築物のプロモーター配列で置換され得る。このことは、パッケージ化細胞株から回収されたウイルスの力価を増加し得る。エンハンサー配列も、含まれ得る。
【0232】
当業者に既知の他のウイルスまたは非ウイルスシステムは、限定されないが、遺伝子欠失アデノウイルス－トランスポゾンベクター（Ｙａｎｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：９９９－１００４（２００２）を参照されたい）、シンドビスウイルスまたはセムリキ森林ウイルスに由来するシステム（Ｐｅｒｒｉ，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４（２０）：９８０２－０７（２００２）を参照されたい）、ニューカッスル病ウイルスまたはセンダイウイルスに由来するシステムを含む、本発明のｄｄＲＮＡｉまたは核酸を目的の細胞に送達するために使用され得る。
【0233】
開示のｓｈｍｉＲまたはｄｄＲＮＡｉ構築物を試験する
細胞培養モデル
ＯＰＭＤに対する細胞培養モデルとして有用な細胞株の例は、正常なＡｌａ１０－ヒトＰＡＢＰＮ１－ＦＬＡＧ（Ａｌａ１０）または変異体Ａｌａ１７－ヒトＰＡＢＰＮ１－ＦＬＡＧ（Ａｌａ１７）を発現するベクターでトランスフェクトされているＨＥＫ２９３Ｔ細胞株（ＨＥＫ２９３Ｔ，ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＵＳＡ）であり、後者は、ＯＰＭＤの特徴である。
細胞培養モデル
ＯＰＭＤに対する細胞培養モデルとして有用な細胞株の例は、正常なＡｌａ１０－ヒトＰＡＢＰＮ１－ＦＬＡＧ（Ａｌａ１０）または変異体Ａｌａ１７－ヒトＰＡＢＰＮ１－ＦＬＡＧ（Ａｌａ１７）を発現するベクターでトランスフェクトされているＨＥＫ２９３Ｔ細胞株（ＨＥＫ２９３Ｔ，ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＵＳＡ）であり、後者は、ＯＰＭＤの特徴である。
【0234】
ＯＰＭＤに対する細胞培養モデルとして有用な細胞株のさらなる例は、Ｃ２Ｃ１２マウス筋細胞及びＡＲＰＥ－１９ヒト網膜細胞である。
【0235】
ＯＰＭＤに対する細胞培養モデルとして有用な細胞株の別の例は、正常なＡｌａ１０－ヒトＰＡＢＰＮ１－ＦＬＡＧ（Ａｌａ１０）または変異体Ａｌａ１７－ヒトＰＡＢＰＮ１－ＦＬＡＧ（Ａｌａ１７）のいずれかを発現するように安定的にトランスフェクトされた初代マウス筋芽細胞（ＩＭ２）細胞株である。変異体Ａｌａ１７－ヒトＰＡＢＰＮ１－ＦＬＡＧ（Ａｌａ１７）を安定的に発現する例示的なＩＭ２由来細胞株は、Ｈ２ｋＢ－Ｄ７ｅ細胞株である。Ｈ２ｋＢ－Ｄ７ｅ細胞株は、Ｒａｚ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１７９（４）：１９８８－２０００にも記載される。
【0236】
ＯＰＭＤの細胞培養モデルに好適な他の細胞株は、Ｆａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１０：２３４１－２３５１、Ｂａｏ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７７：１２２６３－１２２６９、及びＡｂｕ－Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１２：２６０９－２６２３に記載されているように、など、当該分野で既知である。
【0237】
本明細書に例示されるように、本開示のｓｈｍｉＲの活性は、ｓｈｍｉＲをコードする核酸、またはそれを含むｄｄＲＮＡｉ構築物または発現ベクターを細胞に投与し、続いて、ＰＡＢＰＮ１遺伝子によってコードされたＲＮＡまたはタンパク質の発現のレベルを測定することによって決定される。例えば、細胞内ＰＡＢＰＮ１遺伝子発現は、ＰＡＢＰＮ１に特異的である１つ以上のプローブまたはプライマーを使用する、ＲＴ－ＰＣＲ、定量的ＰＣＲ、半定量的ＰＣＲ、またはストリンジェントな条件下でのインサイツハイブリダイゼーションのうちのいずれか１つ以上によってアッセイされ得る。ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡまたはＤＮＡは、ＰＡＢＰＮ１に特異的である１つ以上のプローブもしくはプライマーを使用するＰＣＲのいずれかによってもアッセイされるか、またはウエスタンブロットもしくはＥＬＩＳＡは、ＰＡＢＰＮ１タンパク質を検出するために使用され得る。
【0238】
ＰＡＢＰＮ１発現を検出するためのＲＴ－ＰＣＲ、定量的ＰＣＲ、または半定量的ＰＣＲ技法において使用され得るポリヌクレオチドは、既知であり、市販されている（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）。しかしながら、ＰＣＲベースの検出方法に有用なポリヌクレオチドは、当該技術分野で既知の方法及び／またはソフトウェアを使用して、ＰＡＢＰＮ１についての利用可能な配列情報に基づいて設計され得る。一例では、ＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡの存在または不在は、当該技術分野で既知の標準的な方法論を使用するＲＴ－ＰＣＲを使用して検出され得る。一例では、ＰＡＢＰＮ１ポリペプチドまたはタンパク質の存在または不在または相対量は、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、あるいは当該技術分野で利用可能な他の標準的な定量的もしくは半定量的技法のうちのいずれか１つ以上、またはかかる技法の組み合わせを使用して検出され得る。ＰＡＢＰＮ１の抗体認識に依存する技法は、企図され、本明細書に記載される。一例では、ＰＡＢＰＮ１ポリペプチドの存在または不在または相対的存在量は、例えば、Ｉｓｏｎｏｓｔｉｃ（商標）アッセイ（Ｔａｒｇｅｔ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｉｎｃ．）を使用して、捕捉されたＰＡＢＰＮ１ポリペプチドの電気泳動分解と組み合わせてＰＡＢＰＮ１ポリペプチドの抗体捕捉を含む技法で検出され得る。ＰＡＢＰＮ１タンパク質に対する抗体は、市販されている。
【0239】
トランスフェクションまたは形質導入効率及び試料回収の差異を正規化するための様々な手段は、当該技術分野で既知である。
【0240】
ＰＡＢＰＮ１によってコードされたｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を低減するか、あるいは開示のＲＮＡの不在下でＰＡＢＰＮ１によってコードされたｍＲＮＡ発現もしくはタンパク質のレベル、またはＰＡＢＰＮ１タンパク質の核凝集体の量に対して、ＰＡＢＰＮ１タンパク質の核凝集体の存在を低減する、開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、あるいは発現ベクターは、例えば、内因性ＰＡＢＰＮ１の発現を低減し内因性ＰＡＢＰＮ１の一部または全てを本明細書に記載されているようなＯＰＭＤの原因とならないＰＡＢＰＮ１タンパク質で置換することによってＯＰＭＤを治療することなどの治療用途に有用であるように考えられる。
【0241】
動物モデル
ＯＰＭＤを研究するために利用可能ないくつかの小動物モデルがあり、その例は、Ｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ａｃｔａ Ｍｙｏｌｏｇｉｃａ，２４（２）：８４－８８及びＣｈａｒｔｉｅｒ ａｎｄ Ｓｉｍｏｎｅｌｉｇ（２０１３）Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ：ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１０：ｅ１０３－１０７に記載される。例示的な動物モデルは、Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１１：６７２－６７７及びＴｒｏｌｌｅｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９（１１）：２１９１－２２０７．に以前に記載されているＡ１７．１トランスジェニックマウスモデルである。
ＯＰＭＤを研究するために利用可能ないくつかの小動物モデルがあり、その例は、Ｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ａｃｔａ Ｍｙｏｌｏｇｉｃａ，２４（２）：８４－８８及びＣｈａｒｔｉｅｒ ａｎｄ Ｓｉｍｏｎｅｌｉｇ（２０１３）Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ：ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１０：ｅ１０３－１０７に記載される。例示的な動物モデルは、Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１１：６７２－６７７及びＴｒｏｌｌｅｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９（１１）：２１９１－２２０７．に以前に記載されているＡ１７．１トランスジェニックマウスモデルである。
【0242】
前述の動物モデルのうちのいずれかは、ＰＡＢＰＮ１遺伝子によってコードされたＲＮＡまたはタンパク質の発現をノックダウン、低減、または阻害するための、開示のｓｈｍｉＲまたはｄｄＲＮＡｉ構築物の有効性を決定するために使用され得る。
【0243】
ＰＡＢＰＮ１遺伝子発現をアッセイするための方法は、細胞モデルに関して本明細書に記載されており、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0244】
機能的ＰＡＢＰＮ１の置換のための薬剤
一例では、本開示は、例えば、細胞または動物への機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質の置換のための薬剤を提供する。機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質は、ＯＰＭＤの原因となることはなく、開示のｓｈｍｉＲ（複数可）またはｓｈＲＮＡ（複数可）によって標的化されるｍＲＮＡ転写物によってコードされることもない。
一例では、本開示は、例えば、細胞または動物への機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質の置換のための薬剤を提供する。機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質は、ＯＰＭＤの原因となることはなく、開示のｓｈｍｉＲ（複数可）またはｓｈＲＮＡ（複数可）によって標的化されるｍＲＮＡ転写物によってコードされることもない。
【0245】
一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質の細胞または動物への置換のための薬剤は、例えば、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡまたはｃＤＮＡなどの核酸である。例えば、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸は、コドン最適化され得、例えば、野生型ＰＡＢＰＮ１核酸に対して１つ以上の縮重またはゆらぎ塩基を含むが、同一のアミノ酸をコードするため、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする対応するｍＲＮＡ配列は、開示のｓｈｍｉＲ（複数可）またはｓｈＲＮＡ（複数可）によって認識されない。例えば、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸は、開示のｓｈｍｉＲ（複数可）またはｓｈＲＮＡ（複数可）によって標的化された領域内の野生型ＰＡＢＰＮ１核酸と比較して１つ以上の縮重またはゆらぎ塩基を含み得る。一例では、１つ以上の縮重またはゆらぎ塩基は、開示のｓｈｍｉＲまたはｓｈＲＮＡのエフェクター配列のシード領域内に存在する。
【0246】
一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸は、その対応するｍＲＮＡ配列が開示のｓｈｍｉＲ（複数可）またはｓｈＲＮＡ（複数可）によって認識されないようにコドン最適化される。好ましくは、コドン最適化核酸配列によってコードされた機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質は、配列番号７４に定められたアミノ酸配列、すなわち、野生型ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質のアミノ酸配列を含む。当業者であれば、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコード化するために使用され得る多くのヌクレオチド配列の組み合わせがあり、ヌクレオチド配列の選択は、最終的にはｓｈｍｉＲ（複数可）またはｓｈＲＮＡ（複数可）のエフェクター配列に依存するものとする、すなわち、コドン最適化核酸がｓｈｍｉＲ（複数可）またはｓｈＲＮＡ（複数可）によって認識されないようなことを理解するであろう。一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質の置換のための薬剤は、配列番号７３に定められた配列を含む核酸である。一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸はまた、コザック配列を含み得る。
【0247】
一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸は、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現に好適なプロモーターに作動可能に連結される。筋における機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質の発現に好適なプロモーターは、特に好適であり得る。機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸を用いた使用に好適な１つの例示的なプロモーターは、Ｓｐｃ５１２プロモーターである。機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸を用いた使用に好適な別の例示的なプロモーターは、ＣＫ８プロモーターである。しかしながら、当該技術分野で既知の任意の好適なプロモーターが、使用され得る。例えば、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸を用いた使用のための他の好適なプロモーターは、ＵＳ２０１１０２１２５２９Ａ１に記載される。
【0248】
本明細書に記載されるように、本開示のいくつかの例において有用なプロモーターは、組織特異的または細胞特異的であり得る。
【0249】
一例では、開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸は、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質及びその対応するｍＲＮＡ転写物の発現を増加させるための１つ以上のエンハンサーを追加的に含み得る。本開示のこの例における使用に適切なエンハンサーは、当業者に既知であろう。
【0250】
機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸は、発現ベクター内に含まれ得る。例示的な発現ベクターは、開示の核酸及びｄｄＲＮＡｉ構築物の文脈において記載されており、必要な変更を考慮してこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0251】
したがって、一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質の細胞または動物への置換のための薬剤は、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸を含む発現ベクターであり得る。例えば、開示の発現ベクターは、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質と、それに対する発現のためのプロモーター、例えば、ＳｐＣ５１２プロモーターまたはＣＫ８プロモーターと、をコードするコドン最適化核酸を含み得る。一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸は、コザック配列も含み得る。
【0252】
一例では、本明細書に記載されるような機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸は、プラスミド発現ベクター内に含まれ得る。好適なプラスミド発現ベクターは、本明細書に記載されており、当該技術分野で既知であろう。一例では、好適なプラスミド発現ベクターは、ｐＡＡＶベクター、例えば、ｐｓｃＡＡＶプラスミドベクターまたはｐｓｓＡＡＶプラスミドベクターである。
【0253】
一例では、発現ベクターは、ミニサークルＤＮＡである。ミニサークルＤＮＡベクターは、本明細書に記載されている。
【0254】
一例では、発現ベクターは、ウイルスベクターである。例えば、任意の適切なウイルスに基づくウイルスベクターは、開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸を送達するために使用され得る。加えて、ハイブリッドウイルスシステムが、役立つ場合がある。ウイルス送達システムの選択は、送達のために標的化される組織、システムの形質導入効率、病原性、免疫学的かつ毒性の懸念などの、様々なパラメータに依存するであろう。
【0255】
細胞または動物への遺伝材料の送達のための例示的なウイルスシステムは、開示のＲＮＡ及びｄｄＲＮＡｉ構築物の文脈において説明されており、必要な変更を考慮してこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0256】
一例では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９または修飾されたＡＡＶ９）である。
【0257】
一例では、ウイルスベクターは、ＡｄＶベクターである。
【0258】
一例では、ウイルスベクターは、レンチウイルスである。
【0259】
当業者に既知の他のウイルスまたは非ウイルスシステムは、限定されないが、遺伝子欠失アデノウイルス－トランスポゾンベクター（Ｙａｎｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：９９９－１００４（２００２）を参照されたい）、シンドビスウイルスまたはセムリキ森林ウイルスに由来するシステム（Ｐｅｒｒｉ，ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４（２０）：９８０２－０７（２００２）を参照されたい）、ニューカッスル病ウイルスまたはセンダイウイルスに由来するシステムを含む、本開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸を目的の細胞に送達するために使用され得る。
【0260】
本明細書に記載されるような機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸が、開示の核酸、ｄｄＲＮＡｉ構築物、または発現ベクターと共に提供される例に従って、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸は、核酸またはｄｄＲＮＡｉ構築物と同じ発現ベクター内に含まれ得る。したがって、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸及び開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉ構築物は、例えば、発現ベクター内で単一のＤＮＡ構築物として提供され得る。
【0261】
本開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸及び開示の核酸またはｄｄＲＮＡｉ構築物が共に提供される代替的な例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸及び核酸またはｄｄＲＮＡｉ構築物は、異なる発現ベクター内に含まれ得る。機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸及び核酸またはｄｄＲＮＡｉ構築物が異なる発現ベクター内に含まれる場合、それぞれの発現ベクターは、同じ型のベクターであり得るか、または異なる型のベクターであり得る。
【0262】
機能的ＰＡＢＰＮ１に対する試験
動物モデル
ＯＰＭＤを研究するための例示的な動物モデルが記載されている。
動物モデル
ＯＰＭＤを研究するための例示的な動物モデルが記載されている。
【0263】
前述の動物モデルのいずれかは、開示の１つ以上の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、または発現ベクター（複数可）の存在下で（開示の１つ以上のｓｈｍｉＲを発現して）、インビボで機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質を置換するための開示の薬剤の有効性を決定するために使用され得る。
【0264】
ＰＡＢＰＮ１発現をアッセイするための方法は、細胞モデルに関して本明細書に記載されており、必要な変更を考慮して開示のこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0265】
一例では、組織学及び形態学的分析は、開示の１つ以上の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、または発現ベクター（複数可）の存在下で（開示の１つ以上のｓｈｍｉＲを発現して）、インビボで機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質を置換するための開示の薬剤の有効性を決定するために使用され得る。インビボで機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質を置換するための本開示の薬剤の有効性を決定するために使用され得るさらなるアッセイは、Ｔｒｏｌｌｅｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９（１１）：２１９１－２２０７に記載される。
【0266】
ｄｄＲＮＡｉ及び機能的ＰＡＢＰＮ１の置換のための単一のＤＮＡ構築物
本開示は、本明細書に記載されるような機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸、及び開示の１つ以上のｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）を含む単一のＤＮＡ構築物も提供する。機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸及び開示のｄｄＲＮＡｉ構築物を含む例示的なＤＮＡ構築物は、実施例２に記載される。一例では、ＤＮＡ構築物は、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸と組み合わせて、本明細書に記載されるような単一のｄｄＲＮＡｉ構築物を含み得る。別の例では、ＤＮＡ構築物は、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸と組み合わせて複数のｄｄＲＮＡｉ構築物を含み得る。ＤＮＡ構築物の各例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、そのｍＲＮＡ転写物がｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）のｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないように、コドン最適化される。
本開示は、本明細書に記載されるような機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸、及び開示の１つ以上のｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）を含む単一のＤＮＡ構築物も提供する。機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸及び開示のｄｄＲＮＡｉ構築物を含む例示的なＤＮＡ構築物は、実施例２に記載される。一例では、ＤＮＡ構築物は、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸と組み合わせて、本明細書に記載されるような単一のｄｄＲＮＡｉ構築物を含み得る。別の例では、ＤＮＡ構築物は、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸と組み合わせて複数のｄｄＲＮＡｉ構築物を含み得る。ＤＮＡ構築物の各例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、そのｍＲＮＡ転写物がｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）のｓｈｍｉＲ（複数可）によって標的化されないように、コドン最適化される。
【0267】
一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質は、例えば、配列番号７４に定められた配列を有する野生型ヒトＰＡＢＰＮ１タンパク質である。機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化ＤＮＡ配列は、ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲ（複数可）に応じて異なり得ることが、理解されるであろう。すなわち、修飾されるＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物内の具体的なコドンは、ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲ（複数可）のエフェクター配列（複数可）に応じて異なり得る。一例では、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化ＤＮＡ配列は、配列番号７３に定められる。
【0268】
ＤＮＡ構築物はまた、例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされた機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質及び／またはｓｈｍｉＲの発現を駆動するために、１つ以上のプロモーターも含み得る。本開示のいくつかの例において有用なプロモーターは、組織特異的または細胞特異的であり得る。開示のＤＮＡ構築物における使用のための例示的なプロモーターは、例えば、Ｓｐｃ５１２及びＣＫ８などの筋特異的プロモーターである。しかしながら、当該技術分野で既知の任意の好適なプロモーターは、例えば、ＵＳ ２０１１０２１２５２９Ａ１に記載されるものなどの、本明細書に記載されるＤＮＡ構築物における使用について企図される。
【0269】
ＤＮＡ構築物は、発現ベクターの形態で提供され得るか、または発現ベクター内に含まれ得る。好適な発現ベクターは、本明細書に記載されており、当該技術分野で既知であろう。
【0270】
一例では、発現ベクターは、ウイルスベクターである。例えば、任意の適切なウイルスに基づくウイルスベクターは、開示の単一のＤＮＡ構築物を送達するために使用され得る。加えて、ハイブリッドウイルスシステムが、役立つ場合がある。ウイルス送達システムの選択は、送達のために標的化される組織、システムの形質導入効率、病原性、免疫学的かつ毒性の懸念などの、様々なパラメータに依存するであろう。
【0271】
別の例では、好適なプラスミド発現ベクターは、ｐＡＡＶベクター、例えば、ｐｓｃＡＡＶプラスミドベクターまたはｐｓｓＡＡＶプラスミドベクターである。細胞または動物への遺伝材料の送達のための他の例示的なウイルスシステムは、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物の文脈において説明されており、必要な変更を考慮してこの例に適用するように解釈されるものとする。
【0272】
一例では、ＤＮＡ構築物は、５’から３’方向に、筋特異的プロモーター、例えば、Ｓｐｃ５１２プロモーター、本明細書に記載されるようなｄｄＲＮＡｉ構築物、及び本明細書に記載されるＰＡＢＰＮ１構築物を含むｐＡＡＶ発現ベクターの形態で提供され、例えば、ｄｄＲＮＡｉ構築物は、機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸の３’非翻訳領域（ＵＴＲ）に配置される。この例に従うＤＮＡ構築物が、図１Ａに示される。
【0273】
この例に従う例示的なＤＮＡ構築物は、５’から３’方向に、
（ａ）筋特異的プロモーター、例えば、Ｓｐｃ５１２と、
（ｂ）ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲによって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む、本明細書に記載されるようなＰＡＢＰＮ１構築物と、
（ｃ）本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１７をコードするＤＮＡ配列を含む核酸、及び本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１３をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を含む、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物と、を含む、ｐＡＡＶ発現ベクターである。
（ａ）筋特異的プロモーター、例えば、Ｓｐｃ５１２と、
（ｂ）ｄｄＲＮＡｉ構築物によってコードされたｓｈｍｉＲによって標的化されないｍＲＮＡ転写物を有する機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む、本明細書に記載されるようなＰＡＢＰＮ１構築物と、
（ｃ）本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１７をコードするＤＮＡ配列を含む核酸、及び本明細書に記載されるようなｓｈｍｉＲ１３をコードするＤＮＡ配列を含む核酸を含む、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物と、を含む、ｐＡＡＶ発現ベクターである。
【0274】
この例に従って、ＤＮＡ構築物は、配列番号７２に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなり得る。
【0275】
例えば、開示のＤＮＡ構築物の包含のためのｓｈｍｉＲ１３及びｓｈｍｉＲ１７をコードする例示的なｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号３１に定められたエフェクター配列、及び配列番号３１に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列、例えば、配列番号３０に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）と、配列番号３９に定められたエフェクター配列、及び配列番号３９に定められた配列に対して実質的に相補的であるエフェクター相補配列、例えば、配列番号３８に定められたエフェクター相補配列を含むｓｈｍｉＲをコードするＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）と、を含む。例えば、ＤＮＡ構築物のこの例に従うｄｄＲＮＡｉ構築物は、配列番号６４に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１３）、及び配列番号６８に定められたＤＮＡ配列を含むか、またはそれからなる核酸（ｓｈｍｉＲ１７）を含み得る。
【0276】
ある特定の例が記載されているが、本開示に従うＤＮＡ構築物は、１つ以上のｓｈｍｉＲをコードする本明細書に記載される任意のｄｄＲＮＡｉ構築物を含み得ることが、理解されるであろう。例えば、実施例１～５に記載されるｓｈｍｉＲをコードするｄｄＲＮＡｉ構築物は、開示のＤＮＡ構築物における包含に特に好適であり得る。
【0277】
組成物及び担体
いくつかの例では、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、または発現ベクター（複数可）は、組成物において提供される。いくつかの例では、開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸は、組成物に提供される。いくつかの例では、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、または発現ベクター（複数可）は、開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸と一緒に組成物に提供される。いくつかの例では、１つ以上の核酸（複数可）またはｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、及び機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸は、組成物内の同じ発現ベクターに（例えば、開示のＤＮＡ構築物内で）提供される。
いくつかの例では、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、または発現ベクター（複数可）は、組成物において提供される。いくつかの例では、開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸は、組成物に提供される。いくつかの例では、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、または発現ベクター（複数可）は、開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸と一緒に組成物に提供される。いくつかの例では、１つ以上の核酸（複数可）またはｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、及び機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする核酸は、組成物内の同じ発現ベクターに（例えば、開示のＤＮＡ構築物内で）提供される。
【0278】
本明細書に記載されるように、発現ベクターは、単独で、または開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸と組み合わせて、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物を含み得る。したがって、発現ベクター及び／またはそれを含む組成物への本明細書での参照は、（ｉ）開示のｄｄＲＮＡｉ構築物もしくはそれを含む組成物を含む、発現ベクター、（ｉｉ）開示のｄｄＲＮＡｉ構築物、及び開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸、もしくはそれを含む組成物の両方を含む、発現ベクター、または（ｉｉｉ）開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸、もしくはそれを含む組成物を含む、発現ベクターを包含するように理解されるであろう。
【0279】
したがって、開示の組成物は、（ｉ）開示のｄｄＲＮＡｉ構築物を含む、発現ベクター、及び（ｉｉ）開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸を含む、発現ベクターを含み得る。代替的には、開示の組成物は、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物を含む、単一の発現ベクター、及び開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードする、コドン最適化核酸を含み得る。
【0280】
さらに別の例では、開示のｄｄＲＮＡｉ構築物を含む発現ベクターは１つの組成物に提供され得、開示の機能的ＰＡＢＰＮ１タンパク質をコードするコドン最適化核酸を含む発現ベクターは、例えば、一緒にパッケージ化される別の組成物内に提供され得る。
【0281】
開示の組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体または希釈剤も含み得る。例えば、組成物は、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、または発現ベクター（複数可）の、対象への投与に続く対象の筋への送達に好適な担体を含み得る。
【0282】
いくつかの例では、担体は、脂質ベースの担体、カチオン性脂質、またはリポソーム核酸複合体、リポソーム、ミセル、ビロソーム、脂質ナノ粒子、またはそれらの混合物である。
【0283】
いくつかの例では、担体は、カチオン性ポリマー－核酸複合体が形成されるような、生分解性ポリマーベースの担体である。例えば、担体は、開示の１つ以上の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、または発現ベクター（複数可）の、眼の筋細胞または組織への送達に好適なカチオン性ポリマー微粒子であり得る。細胞への送達組成物のためのカチオン性ポリマーの使用は、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｊｕｄｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２５：４５７－４６２（２００５）に記載されるなどの、当該技術分野で既知である。例示的なカチオン性ポリマーベースの担体は、ポリエチレンイミンなどのカチオン性ＤＮＡ結合ポリマーである。開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、または発現ベクター（複数可）との複合体形成、及びそれらの送達に好適な他のカチオン性ポリマーは、ポリ（Ｌ－リジン）（ＰＬＬ）、キトサン、ＰＡＭＡＭデンドリマー、及びポリ（２－ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ｐＤＭＡＥＭＡ）を含む。他のポリマーは、ポリベータ－アミノエステルを含む。これらの他の好適なカチオン性ポリマーは、当該技術分野で既知であり、Ｍａｓｔｒｏｂａｔｔｉｓｔａ ａｎｄ Ｈｅｎｎｉｎｋ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，１１：１０－１２（２０１２）、ＷＯ／２００３／０９７１０７、及びＷＯ／２００６／０４１６１７に記載され、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。かかる担体製剤は、非経口皮下注射、静脈内注射、及び吸入を含む様々な送達経路について開発されている。
【0284】
さらなる例では、担体は、シクロデキストリンポリマー－核酸複合体などのシクロデキストリンベースの担体である。
【0285】
さらなる例では、担体は、カチオン性ペプチド－核酸複合体などのタンパク質ベースの担体である。
【0286】
別の例では、担体は、脂質ナノ粒子である。例示的なナノ粒子は、例えば、ＵＳ７５１４０９９に記載される。
【0287】
いくつかの例では、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、または発現ベクター（複数可）は、カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ－Ｃ－ＤＭＡ／ＤＳＰＣ（例えば、４０／４８／２／１０の比率で）、カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ－ＤＭＧ／ＤＳＰＣ（例えば、４０／４８／２／１０の比率で）、またはカチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ－ＤＭＧ（例えば、６０／３８／２の比率で）を含む脂質ナノ粒子と共に製剤化される。いくつかの例では、カチオン性脂質は、ＤＭＡのオクチルＣＬ、ＤＭＡのＤＬ、Ｌ－２７８、ＤＬｉｎＫＣ２ＤＭＡ、またはＭＣ３である。
【0288】
別の例では、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、または発現ベクター（複数可）は、ＷＯ２０１０／０２１８６５、ＷＯ２０１０／０８０７２４、ＷＯ ２０１０／０４２８７７、ＷＯ２０１０／１０５２０９、またはＷＯ２０１１／０２２４６０に記載されるカチオン性脂質製剤のうちのいずれかで製剤化される。
【0289】
別の例では、開示の核酸（複数可）、またはｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、または発現ベクター（複数可）は、例えば、核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、または発現ベクター（複数可）の送達を促進するために、別の化合物にコンジュゲートするか、または別の化合物と複合体形成する。非限定的な、かかるコンジュゲートの例は、ＵＳ２００８／０１５２６６１及びＵＳ２００４／０１６２２６０（例えば、ＣＤＭ－ＬＢＡ、ＣＤＭ－Ｐｉｐ－ＬＢＡ、ＣＤＭ－ＰＥＧ、ＣＤＭ－ＮＡＧなど）に記載される。
【0290】
別の例では、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、開示の核酸、またはｄｄＲＮＡｉ構築物、またはＤＮＡ構築物、または発現ベクターに共有結合している。結合したＰＥＧは、任意の分子量、例えば、約１００～約５０，０００ダルトン（Ｄａ）であり得る。
【0291】
さらに他の例では、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、または発現ベクター（複数可）は、例えば、ＷＯ９６／１０３９１、ＷＯ９６／１０３９０、またはＷＯ９６／１０３９２に開示されるなどの、ポリ（エチレングリコール）脂質を含有する表面修飾リポソーム（ＰＥＧ修飾、もしくは長期循環リポソーム、またはステルスリポソーム）を含む担体で製剤化され得る。
【0292】
いくつかの例では、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、または発現ベクター（複数可）はまた、ポリエチレンイミン－ポリエチレングリコール－Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ－ＰＥＧ－ＧＡＬ）もしくはポリエチレンイミン－ポリエチレングリコール－トリ－Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ－ＰＥＧ－ｔｒｉＧＡＬ）誘導体などの、ポリエチレンイミンもしくはその誘導体と共に製剤化されるか、またはそれと複合体形成し得る。
【0293】
他の例では、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、または発現ベクター（複数可）は、米国特許出願公開第２００１／０００７６６６号に記載されるものなどの膜破壊剤であるか、またはそれと複合体形成する。
【0294】
他の担体は、シクロデキストリン（例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，１０，１０６８－１０７４、またはＷＯ０３／４６１８５を参照されたい）、ポリ（乳酸－コ－グリコール）酸（ＰＬＧＡ）及びＰＬＣＡミクロスフェア（例えば、ＵＳ２００２１３０４３０を参照されたい）を含む。
【0295】
組成物は、望ましくは、開示の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、もしくは発現ベクター（複数可）の生物学的安定性を増加させる材料、及び／または組成物が局在化し、及び／または筋細胞に選択的に浸透する能力を増加させる材料を含む。開示の治療用組成物は、投与の様式及び経路、ならびに標準的な薬学的慣行に基づいて選択される、薬学的に許容される担体（例えば、生理食塩水）に投与され得る。当業者は、開示の１つ以上の核酸（複数可）、ｄｄＲＮＡｉ構築物（複数可）、ＤＮＡ構築物、または発現ベクター（複数可）を含む薬学的組成物を容易に製剤化できる。いくつかの場合では、等張製剤が、使用される。一般に、等張性のための添加剤は、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、及びラクトースを含むことができる。いくつかの場合では、リン酸緩衝生理食塩水などの等張液が、好まれる。安定剤は、ゼラチン及びアルブミンを含む。いくつかの例では、血管収縮剤が、製剤に添加される。本開示に従う組成物は、無菌かつパイロジェンフリーで提供される。好適な薬学的担体、同様に薬学的製剤における使用のための薬学的必需品は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（以前のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、この分野における標準参照テキスト、及びＵＳＰ／ＮＦに記載される。
【0296】
薬学的組成物の量、濃度、及び製剤、同様に投薬レジメンは、細胞送達を最大化するように特異的に調整され得る一方で、炎症反応、例えば、比較的大量（５、１０、２０、５０ｍｌ、またはそれ以上）のような毒性を、対応する低濃度の活性成分、同様にコルチコステロイドなどの抗炎症化合物の封入体で最小化することは、所望される場合に利用され得る。
【0297】
開示の組成物は、任意の好適な経路による投与のために製剤化され得る（例えば、対象の咽頭筋への送達に好適である）。例えば、投与の経路は、筋肉内、腹腔内、皮内、皮下、静脈内、動脈内、眼内、及び経口、同様に経皮、または吸入もしくは坐剤によるものを含むが、これらに限定されない。全身投与の例は、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、腹腔内、皮下、及び皮内注射を含む。一例では、開示の組成物は、ＩＭ投与のために製剤化される（例えば、咽頭筋への投与のために製剤化される）。好まれる実施形態では、投与は、対象の咽頭筋への直接のものである。かかる組成物は、薬学的用途に有用であり、非経口投与のための、例えば、ＩＭ（例えば、咽頭筋へ直接）、静脈内（静脈内注入を含む）、ＳＣ、及び腹腔内投与のための、注射のための好適な無菌の非発熱性ビヒクル、例えば、緩衝生理食塩水に容易に製剤化され得る。好まれる実施形態では、ＩＭ（例えば、咽頭筋へ直接）などの投与の経路は、筋組織への有効な送達、ならびに開示のＰＡＢＰＮ１をコードするｄｄＲＮＡｉ構築物及び／またはコドン最適化核酸のトランスフェクション、ならびにそれらにおけるＲＮＡ及び／またはコドン最適化核酸の発現を達成する。
【表1】
【表2】
【表3】
【表4】
【実施例】
【0298】
［実施例１－ＰＡＢＰＮ１を標的化するｓｈｍｉＲの設計］
ｓｉＲＮＡ構築物の設計のための潜在的な標的を表す配列を、公的に利用可能なｓｉＲＮＡ設計アルゴリズム（Ａｍｂｉｏｎ、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、及びＭＷＧを含む）を使用してＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ配列から特定し、選択された配列を、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、及びマウス種において保存した。候補ｓｉＲＮＡをコードする配列を、５’隣接領域（配列番号４１）、ｓｉＲＮＡセンス鎖配列（エフェクター相補配列）、ステム／ループ接合配列（配列番号４０）、ｓｉＲＮＡアンチセンス鎖（エフェクター配列）、及び３’隣接領域（配列番号４２）を含む短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードする配列を作成するため、ｐｒｅ－ｍｉＲ３０ａスキャフォールドに組み込んだ。代表的なｓｈｍｉＲの予測された二次構造を、図１Ｃに示す。設計されたｓｈｍｉＲに対するＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の標的領域が表１に提示され、対応するｓｈｍｉＲエフェクター配列（アンチセンス鎖）が表２に提示される。
ｓｉＲＮＡ構築物の設計のための潜在的な標的を表す配列を、公的に利用可能なｓｉＲＮＡ設計アルゴリズム（Ａｍｂｉｏｎ、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｏｒｉｇｅｎｅ、及びＭＷＧを含む）を使用してＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ配列から特定し、選択された配列を、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、及びマウス種において保存した。候補ｓｉＲＮＡをコードする配列を、５’隣接領域（配列番号４１）、ｓｉＲＮＡセンス鎖配列（エフェクター相補配列）、ステム／ループ接合配列（配列番号４０）、ｓｉＲＮＡアンチセンス鎖（エフェクター配列）、及び３’隣接領域（配列番号４２）を含む短いヘアピンマイクロＲＮＡ（ｓｈｍｉＲ）をコードする配列を作成するため、ｐｒｅ－ｍｉＲ３０ａスキャフォールドに組み込んだ。代表的なｓｈｍｉＲの予測された二次構造を、図１Ｃに示す。設計されたｓｈｍｉＲに対するＰＡＢＰＮ１ ｍＲＮＡ転写物の標的領域が表１に提示され、対応するｓｈｍｉＲエフェクター配列（アンチセンス鎖）が表２に提示される。
【0299】
［実施例２－同時の内因性ＰＡＢＰＮ１の遺伝子サイレンシング及びコドン最適化ＰＡＢＰＮ１での置換のための単一の「サイレンシング及び置換構築物」の生成。］
ｏｐｔＰＡＢＰＮ１配列と組み合わせてｓｈｍｉＲ１７及びｓｈｍｉＲ１３（例えば、表３及び４に記載されるような）を発現する１本鎖アデノ随伴ウイルス２型（ｓｓＡＡＶ２）プラスミドを、作成した。
ｏｐｔＰＡＢＰＮ１配列と組み合わせてｓｈｍｉＲ１７及びｓｈｍｉＲ１３（例えば、表３及び４に記載されるような）を発現する１本鎖アデノ随伴ウイルス２型（ｓｓＡＡＶ２）プラスミドを、作成した。
【0300】
サイレンス及び置換構築物（以後「ＳＲ構築物」）を、ｓｈｍｉＲ１７及びｓｈｍｉＲ１３（表４に記載されるような）をコードするＤＮＡ配列をｐＡＡＶ２ベクター骨格（ｐＡＡＶ－ｓｈｍｉＲウイルスプラスミド）におけるｏｐｔＰＡＢＰＮ１転写物の３’非翻訳領域にサブクローニングすることによって生成した。単一の転写産物におけるｏｐｔＰＡＢＰＮ１及び２つのｓｈｍｉＲの両方の発現は、筋特異的プロモーターＳｐｃ５１２によって駆動される。ＳＲ構築物の概略図が、図１（Ａ）、図１（Ｂ）、及び図２に提供される。
【0301】
次いで、組換えシュードタイプＡＡＶベクターストックを、生成した。簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０％のＦＢＳを補充したダルベッコ改変イーグル培地中の細胞工場において培養し、３７℃及び５％のＣＯ２で培養した。ｐＡＡＶ－ｓｈｍｉＲウイルスプラスミド（ＳＲ－構築物）及びｐＡＡＶヘルパー及びｐＡＡＶｒｅｐｃａｐ８プラスミド、またはｐＡＡＶヘルパー及びｐＡＡＶ ｒｅｐｃａｐ９、またはｐＡＡＶヘルパー及びｐＡＡＶＲＨ７４プラスミド（ＷＯ２０１３１２３５０３Ａ１に記載されるような）を、製造元の指示に従ってリン酸カルシウムと複合体を形成させた。次いで、三重トランスフェクションを、ｐＡＡＶヘルパー及び以下のキャプシド、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるｐＡＡＶｒｅｐｃａｐ８、ｐＡＡＶｒｅｐｃａｐ９、またはｐＡＡＶＲＨ７４のうちの１つと組み合わせたｐＡＡＶ－ｓｈｍｉＲプラスミド（ＳＲ構築物）を用いて実施した。次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を３７℃及び５％のＣＯ２で７２時間の期間培養し、その時間の後、細胞を溶解し、ＳＲ構築物を発現する粒子をイオジキサノール（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）ステップグラジエント超遠心分離で精製し、その後に塩化セシウム超遠心分離が続いた。ベクターゲノムの数を、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（Ｑ－ＰＣＲ）によって定量化した。
【0302】
［実施例３－単一ベクトル「サイレンス及び置換」アプローチを用いたインビボ研究。］
ＯＰＭＤの関連疾患モデルにおける実施例２に記載されるＳＲ構築物のインビボ有効性を試験するために、ＳＲ構築物を、１０～１２週齢のＡ１７マウスの前脛骨筋（ＴＡ）筋への筋肉内注射を介して、用量の範囲で個別に投与した。用量を、筋あたり７．５×１０１１、２．５×１０１１、５×１０１０、１×１０１０、２×１０９、及び４×１０８ベクターゲノム（ｖｇ）に設定した。生理食塩水を注射した年齢を一致させたＡ１７マウスを、未治療群として使用した。マウスを、治療の１４または２０週間後のいずれかで犠死させた。
ＯＰＭＤの関連疾患モデルにおける実施例２に記載されるＳＲ構築物のインビボ有効性を試験するために、ＳＲ構築物を、１０～１２週齢のＡ１７マウスの前脛骨筋（ＴＡ）筋への筋肉内注射を介して、用量の範囲で個別に投与した。用量を、筋あたり７．５×１０１１、２．５×１０１１、５×１０１０、１×１０１０、２×１０９、及び４×１０８ベクターゲノム（ｖｇ）に設定した。生理食塩水を注射した年齢を一致させたＡ１７マウスを、未治療群として使用した。マウスを、治療の１４または２０週間後のいずれかで犠死させた。
【0303】
［実施例４－ＳＲ構築物で治療したＡ１７マウスにおけるｓｈｍｉＲ産生、ＰＡＢＰＮ１サイレンシング、及びコドン最適化ＰＡＢＰＮ１発現の定量的測定。］
ＳＲ構築物治療の１４週間後、実施例３のＡ１７マウスのＴＡ筋を採取し、ＲＮＡを抽出した。ＴＡ筋におけるｓｈｍｉＲのＳＲ構築物依存的発現を、定量化した（図３Ａ）。ｓｈｍｉＲの定量化された発現レベルは、ＰＡＢＰＮ１（ｅｘｐＰＡＢＰＮ１を含む）のサイレンシング（図３Ｂ）及び正常なＰＡＢＰＮ１レベルの回復（図３Ｃ）と同様に、ＳＲ構築物用量に依存していた。
ＳＲ構築物治療の１４週間後、実施例３のＡ１７マウスのＴＡ筋を採取し、ＲＮＡを抽出した。ＴＡ筋におけるｓｈｍｉＲのＳＲ構築物依存的発現を、定量化した（図３Ａ）。ｓｈｍｉＲの定量化された発現レベルは、ＰＡＢＰＮ１（ｅｘｐＰＡＢＰＮ１を含む）のサイレンシング（図３Ｂ）及び正常なＰＡＢＰＮ１レベルの回復（図３Ｃ）と同様に、ＳＲ構築物用量に依存していた。
【0304】
［実施例５－ＳＲ構築物治療したＡ１７マウスにおける核内封入体（ＩＮＩ）の低減。］
核内封入体（ＩＮＩ）の持続性に対するＳＲ構築物の影響を、実施例３の１４週目のＡ１７マウスにおいて試験した。ＦｖＢ野生型マウスも、健康な比較群として含めた。ＡＡＶ注射の１４週間後、筋肉を、組織学的研究のために回収及びマウントした。切片を、１ＭのＫＣｌで前処理して、組織から全ての可溶性ＰＡＢＰＮ１を優先的に溶出させた。ＰＡＢＰＮ１（緑）及び筋細胞の細胞外マトリックスにおいて豊富なタンパク質であるラミニン（赤）に対する免疫蛍光は、治療された筋の切片において検出され、用量効果を伴いＳＲ構築物治療筋においてＰＡＢＰＮ１陽性核内封入体（ＩＮＩ）の数の顕著な低減を示した（図４Ａ）。筋切片におけるＩＮＩを含有する核の百分率の定量化は、ＳＲ構築物での処理が、未処理のＡ１７筋と比較してＩＮＩの量を有意に低減した（ボンフェローニ事後検定での一元配置分散分析、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎｓ：有意でない）（図４Ｂ）。
核内封入体（ＩＮＩ）の持続性に対するＳＲ構築物の影響を、実施例３の１４週目のＡ１７マウスにおいて試験した。ＦｖＢ野生型マウスも、健康な比較群として含めた。ＡＡＶ注射の１４週間後、筋肉を、組織学的研究のために回収及びマウントした。切片を、１ＭのＫＣｌで前処理して、組織から全ての可溶性ＰＡＢＰＮ１を優先的に溶出させた。ＰＡＢＰＮ１（緑）及び筋細胞の細胞外マトリックスにおいて豊富なタンパク質であるラミニン（赤）に対する免疫蛍光は、治療された筋の切片において検出され、用量効果を伴いＳＲ構築物治療筋においてＰＡＢＰＮ１陽性核内封入体（ＩＮＩ）の数の顕著な低減を示した（図４Ａ）。筋切片におけるＩＮＩを含有する核の百分率の定量化は、ＳＲ構築物での処理が、未処理のＡ１７筋と比較してＩＮＩの量を有意に低減した（ボンフェローニ事後検定での一元配置分散分析、＊＊＊ｐ＜０．００１、ｎｓ：有意でない）（図４Ｂ）。
【0305】
［実施例６－ＳＲ構築物での治療は、治療された筋の生理学的特性及び機能性を改善する。］
治療された筋の生理学的特性及び機能性を、実施例３の１４週目のＡ１７マウスにおいて測定した。ＦｖＢ野生型マウスも、健康な比較群として含めた。ＴＡ筋により生成された最大力を、インサイツ筋生理学によって測定した（図５Ａ）。ＳＲ構築物は、用量依存的方式でＴＡ筋によって生成された最大力を顕著な増加させた。体重（ＢＷ）に正規化された筋重量も、ＳＲ構築物投与の１４週間後に測定した（図５Ｂ）。ＳＲ治療筋の体重に正規化された筋重量は、注射されたＴＡあたり１ｅ１０ ｖｇを超える用量で対照ＦｖＢマウスのものと同等であった（平均±ＳＥＭ ｎ＝１０、ボンフェローニ事後検定での一元配置分散分析、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、ｎｓ：有意でない）。
治療された筋の生理学的特性及び機能性を、実施例３の１４週目のＡ１７マウスにおいて測定した。ＦｖＢ野生型マウスも、健康な比較群として含めた。ＴＡ筋により生成された最大力を、インサイツ筋生理学によって測定した（図５Ａ）。ＳＲ構築物は、用量依存的方式でＴＡ筋によって生成された最大力を顕著な増加させた。体重（ＢＷ）に正規化された筋重量も、ＳＲ構築物投与の１４週間後に測定した（図５Ｂ）。ＳＲ治療筋の体重に正規化された筋重量は、注射されたＴＡあたり１ｅ１０ ｖｇを超える用量で対照ＦｖＢマウスのものと同等であった（平均±ＳＥＭ ｎ＝１０、ボンフェローニ事後検定での一元配置分散分析、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、ｎｓ：有意でない）。
【0306】
［実施例７－経時的な筋機能の回復］
ＳＲ構築物治療Ａ１７マウス及びＦｖＢ野生型マウスのＴＡ筋によって生成された最大力を、ＳＲ構築物投与の１４週間後（図６Ａ）及びＳＲ構築物投与の２０週間後（図６Ｂ）でのインサイツ筋生理学によって測定した。中間用量（ＴＡあたり１ｅ１０ｖｇ及び６ｅ１０ｖｇ）について、筋力に対する有益な効果は、注射後１４週間と比較して２０週間ではるかに顕著であった（平均±ＳＥＭ ｎ＝１０、ボンフェローニ事後検定での一元配置分散分析、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１）。
ＳＲ構築物治療Ａ１７マウス及びＦｖＢ野生型マウスのＴＡ筋によって生成された最大力を、ＳＲ構築物投与の１４週間後（図６Ａ）及びＳＲ構築物投与の２０週間後（図６Ｂ）でのインサイツ筋生理学によって測定した。中間用量（ＴＡあたり１ｅ１０ｖｇ及び６ｅ１０ｖｇ）について、筋力に対する有益な効果は、注射後１４週間と比較して２０週間ではるかに顕著であった（平均±ＳＥＭ ｎ＝１０、ボンフェローニ事後検定での一元配置分散分析、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１）。
【0307】
［実施例８－ヒツジの咽頭筋への直接投与］
ヒツジの咽頭筋へのＳＲ構築物の直接注射を試験し、ＰＡＢＰＮ１は、位置９５での１つを除く全てのアミノ酸残基を含め、ヒツジからヒトまで高度に保存される。
ヒツジの咽頭筋へのＳＲ構築物の直接注射を試験し、ＰＡＢＰＮ１は、位置９５での１つを除く全てのアミノ酸残基を含め、ヒツジからヒトまで高度に保存される。
【0308】
ＳＲ構築物を、ヒツジの咽頭筋へ直接注射した（図７Ａ）。ヒツジ研究における２匹の動物は、各々１．５ｅ１３ｖｇのＳＲ構築物を輪状咽頭筋（ＣＰ）に注射され、追加の１．０ｅ１３ｖｇのＳＲ構築物を咽頭筋（咽頭）に注射された。ＳＲ構築物（１．０ｅ１０ｖｇ～１．０ｅ１３ｖｇ）で治療された残りの１０匹の動物は、ＣＰへの注射のみを受けた。ＣＰは、総量１．５ｍｌを注射された（各々０．５ｍｌの３回の注射）。咽頭は、総量６ｍｌを注射された（右側及び左側の両方に１．５ｍｌの２回の注射）。
【0309】
放射標識されたクリームを使用するラジオイメージングは、「ファウッセ経路」のリスクを有するヒトＯＰＭＤ患者における重度の嚥下障害を示す（図７Ｂ）。
【0310】
本開示の広い一般的な範囲から逸脱することなく、多数の変形例及び／または修正例は、上記の実施形態になされ得ることが、当業者によって理解されるであろう。したがって、本実施形態は、全ての点において例示的であり、制約的ではないと考えられるべきである。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【配列表】
【国際調査報告】