特表 2022-509975 プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤及びその製造と使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-01-25

(54)【発明の名称】プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤及びその製造と使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/5575 20060101AFI20220118BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20220118BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20220118BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20220118BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20220118BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20220118BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20220118BHJP

   A61P 9/04 20060101ALI20220118BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20220118BHJP

   A61K 47/44 20170101ALI20220118BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20220118BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20220118BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20220118BHJP

   A61K 47/10 20060101ALI20220118BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220118BHJP

【ＦＩ】

A61K31/5575

A61P9/10 103

A61P9/10

A61P7/02

A61P9/10 101

A61P3/10

A61P17/02

A61P17/00

A61P9/00

A61P9/04

A61K9/19

A61K47/44

A61K47/24

A61K47/12

A61K47/26

A61K47/10

A61K9/08

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021529847

(86)(22)【出願日】2019-10-28

(85)【翻訳文提出日】2021-06-09

(86)【国際出願番号】 CN2019113557

(87)【国際公開番号】W WO2020108193

(87)【国際公開日】2020-06-04

(31)【優先権主張番号】201811423561.7

(32)【優先日】2018-11-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521083865

【氏名又は名称】シーアン リーバン ジャオシン バイオテクノロジー カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000914

【氏名又は名称】特許業務法人 安富国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ワン， ルータオ

(72)【発明者】

【氏名】アン， ロン

(72)【発明者】

【氏名】ジャオ， イー

(72)【発明者】

【氏名】パン， ジンファ

(72)【発明者】

【氏名】チェン， タオ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076AA29

4C076BB11

4C076CC11

4C076CC14

4C076CC18

4C076CC21

4C076DD38

4C076DD41F

4C076DD43Z

4C076DD63F

4C076DD67Q

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4C076GG06

4C086AA01

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4C086MA03

4C086MA05

4C086MA17

4C086MA44

4C086MA66

4C086NA03

4C086NA05

4C086ZA36

4C086ZA37

4C086ZA40

4C086ZA45

4C086ZA54

4C086ZA89

4C086ZC35

(57)【要約】

【課題】プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤及びその製造と使用。
【解決手段】本発明は、プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤及びその製造と使用を提供する。前記凍結乾燥製剤は、重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０部、注射用オイル５００～４０００部、乳化剤５００～２０００部、共乳化剤０～１０部、凍結乾燥保護剤５０００～５００００部およびグリセリン２００～１５００部を成分として含有する。本発明のプロスタグランジンＥ１メチルエステル凍結乾燥製剤は血管刺激が小さく、薬物安定性が良く、医薬活性および治療効果が同種のプロスタグランジンＥ１の製品に比べて優れている。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０部、注射用オイル（前記注射用オイルは、大豆油、中鎖油、オリーブ油、茶油、トウモロコシ油、またはヒマシ油のうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）５００～４０００部、乳化剤（前記乳化剤は、卵黄レシチン及び／又は大豆レシチンから選択されることが好ましい）５００～２０００部、共乳化剤（前記共乳化剤は、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノレン酸、リノール酸、及びオレイン酸ナトリウムのうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）０～１０部、凍結乾燥保護剤（前記凍結乾燥保護剤は、ラクトース、スクロース、トレハロース、マンニトール、グルコース、およびマルトースのうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）５０００～５００００部およびグリセリン２００～１５００部を成分として含有する、プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤。

【請求項2】

重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０部、注射用オイル５００～４０００部、乳化剤５００～１５００部、共乳化剤０～１０部、凍結乾燥保護剤５０００～２００００部およびグリセリン２００～１５００部を成分として含有する、請求項１に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項3】

凍結乾燥前に１００ｍｌあたり、重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０ｍｇ、大豆油０．５～４ｇ、卵黄レシチン０．５～１．５ｇ、オレイン酸ナトリウム０～０．０１ｇ、ラクトース５～２０ｇおよびグリセロール０．２～１．５ｇを成分として含有する、請求項１に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項4】

前記凍結乾燥保護剤とプロスタグランジンＥ１メチルエステルとの重量比は２０～５００：０．０１である、請求項１～３のいずれか１項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項5】

重量％で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．０００１～０．０１％、注射用オイル（前記注射用オイルは、大豆油、中鎖油、オリーブ油、茶油、トウモロコシ油、またはヒマシ油のうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）０．５～４％、乳化剤（前記乳化剤は、卵黄レシチン及び／又は大豆レシチンから選択されることが好ましい）０．５～２％、共乳化剤（前記共乳化剤は、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノレン酸、リノール酸、及びオレイン酸ナトリウムのうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）０～０．０１％、凍結乾燥保護剤（前記凍結乾燥保護剤は、ラクトース、スクロース、トレハロース、マンニトール、グルコース、およびマルトースのうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）５～５０％、グリセリン０．２～１．５％、ｐＨ調整剤適量を含み、残部が注射用水である成分を原料として前記凍結乾燥製剤を製造する、プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤の製造方法。

【請求項6】

重量％で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．０００１～０．０１％、注射用オイル０．５～４％、乳化剤０．５～１．５％、共乳化剤０～０．０１％、凍結乾燥保護剤５～２０％、グリセリン０．２～１．５％、ｐＨ調整剤適量を含み、残部が注射用水である成分を原料として前記凍結乾燥製剤を製造することを含む、請求項５に記載の製造方法。

【請求項7】

重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０重量部、大豆油５００～４０００重量部、卵黄レシチン５００～１５００重量部、オレイン酸ナトリウム０～１０重量部、乳糖５０００～２００００重量部、グリセリン２０～１５００重量部、クエン酸ナトリウムまたは塩酸適量を含み、残部が原料の総重量を１００×１０^３部とする注射用水である成分を原料として前記凍結乾燥製剤を製造することを含む、請求項５に記載の製造方法。

【請求項8】

ａ．プロスタグランジンＥ１メチルエステルと乳化剤を油性溶媒中に均一に分散して油相とする工程、
ｂ．グリセリンおよび凍結乾燥保護剤を、適量の注射用水に溶解して水相とする工程、
ｃ．共乳化剤を油相又は水相に溶解する工程、
ｄ．油相を水相に撹拌しながら添加するか、又は水相を油相に撹拌しながら添加し、剪断して初乳を得る工程（２０℃～５０℃の一定温度条件下で剪断して初乳を取得することが好ましい）、
ｅ．初乳を均質化して均一なエマルジョンを得た後、注射用水で全量にメスアップし、ｐＨ調整剤でｐＨを４．５～６．５に調整する工程、
ｆ．得られたエマルジョンに凍結乾燥保護剤を加えて、攪拌・溶解、濾過・除菌、分注、凍結乾燥（凍結乾燥過程は、－５０℃～－３５℃で１００～２００分間予備凍結し、次いで－２５℃～－１５℃、７０～９０ｍＴｏｒｒの条件で４２０～５４０分間真空引きし、次いで５～１５℃、５０～７０ｍＴｏｒｒの条件で２４０～３６０分間真空引きし、次いで３５℃～４５℃、３５～４５ｍＴｏｒｒの条件で３００～４２０分間真空引きすることを含むことが好ましい）、シーリングを行い、凍結乾燥剤を得る工程、を含む、請求項５～７のいずれか１項に記載の製造方法。

【請求項9】

請求項５～８のいずれか１項に記載の製造方法で製造したプロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤。

【請求項10】

請求項１～４又は請求項９のいずれか１項に記載のプロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤の血管拡張薬の製造における使用（前記血管拡張薬は、微小循環障害（前記微小循環障害は、閉塞性血栓性血管炎、閉塞性動脈硬化症、糖尿病、凍傷、火傷、又は床擦れに起因することが好ましい）、冠動脈心疾患、狭心症、心不全、肺性心疾患、脳梗塞、羊水塞栓症、または強皮症を治療することが好ましい）。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は医薬分野に関し、具体的には、本発明はプロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤及びその製造と使用に関する。

【背景技術】

【0002】

プロスタグランジンＥ１（ＰＧＥ１）は天然の内因性血管拡張薬であり、ヒト細胞で合成可能であり、細胞機能を調節する重要な物質であり、生体内で蓄積することがなく、耐性を生じさせることがなく、無毒で、侵襲性の副作用がなく、治療効果が確実であり、外因性薬物より優れている。ＰＧＥ１は生理活性が極めて強く、広い薬理活性を有しており、臨床的には心脳血管疾患、糖尿病合併症、呼吸器疾患、肺高血圧症、肝腎症候群（ＨＲＳ）、肝不全、腎症等に応用できるが、血管を拡張して心臓負荷を軽減する作用だけでなく、ナトリウム排出、利尿、強心、冠動脈循環改善、心筋保護、微小循環改善等の効能を併せて有することが研究により見出されている。

【0003】

しかしながら、現在市販されている一般的なプロスタグランジンＥ１の脂肪乳注射液自体は、化学的安定性が悪く、高温滅菌によりプロスタグランジンＥ１の含有量が低下するとともに、分解産物であるＰＧＡ１の含有量が著しく上昇し、且つ製品の保存条件が過酷であり（０～５℃）、有効期間が短くて僅か１年であるという明らかな欠点を有する。プロスタグランジンＥ１自体が炎症誘発物質であるため、臨床現場でヒトに応用すると強い痛みを感じさせ、静脈炎を引き起こすことにより、本品の普及が制限されている。

【0004】

上記欠点に対して、重慶薬友は優帝爾というプロスタグランジンＥ１凍結乾燥エマルション（特許文献１）を開発した。この市販品は濾過除菌により高温滅菌による含有量の損失を回避し、且つプロスタグランジンＥ１が水性製剤において安定性が悪いという欠点を克服し、有効期間を延長したものではあるが、その処方においてシクロデキストリンを凍結乾燥保護剤として採用しており、シクロデキストリンが注射用補助剤として一定の安全リスクを有し、特にβ－シクロデキストリン注射投与により明らかな腎毒性、溶血及び注射部位壊死を引き起こすため、製剤の安全リスクが大きく、且つ注射痛の問題が解決されていない（優帝爾明細書）。

【0005】

現在、プロスタグランジンＥ１アルキルエステルは、プロスタグランジンＥ１のプロドラッグと考えられている。例えば、特許文献２には、プロスタグランジンＥ１アルキルエステル（Ｃ１～４）をインポテンスの治療に用いることが開示されており、プロスタグランジンＥ１アルキルエステルは脂溶性を高めることにより皮膚を通してより良く吸収され、その後、加水分解酵素によりプロスタグランジンＥ１に分解されて効果を発揮するため、プロドラッグに属すると考えられている。特許文献３には、プロドラッグであるプロスタグランジンＥ１アルキルエステルと、油性担体と、皮膚浸透促進剤と、抗炎症剤とを含むプロスタグランジンＥ１アルキルエステル（Ｃ１～５）外用製剤が開示されている。

【0006】

しかし、発明者らの検討の結果、プロスタグランジンＥ１メチルエステル自体が強い生物活性を有し、良好な薬剤の利用が期待されていることを意外にも発見した。特許文献４には、プロスタジルの脂肪乳製剤が開示されているが、我々は研究過程において、その実施例に基づいて調製したプロスタジルの脂肪乳は、米国薬局方によるエマルション滴粒径測定に関する新方法であるフォトレジスト法（元の常用の動的光散乱法では５μｍ以上の大きな粒径粒子の数を正確に測定できない）を用いて測定した後、その大きな粒径（＞５μｍ）のエマルション滴が著しく多く、エマルション滴粒径の要件を満たさず、大きなエマルション滴（＞５μｍ）が毛細血管を詰まらせ、塞栓を引き起こし、大きな安全リスクがある。米国では、脂肪乳大粒子を注射して患者を死亡させる医療事故が発生したことがあり、調査研究により、乳剤中に存在する５μｍ以上のエマルション滴が招いたことが証明されたので、２００４年に米国薬局方で乳剤の大きな粒径を測定するための検出方法及び基準が規定された。従来製品に存在する欠点及び不足に鑑みて、本発明は、新規で安定性がよく、安全リスクが少なく、より薬効に優れたプロスタグランジンＥ１メチルエステル製品を提供することを目的とする。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0007】

【特許文献1】中国特許第２０１０１０１６８５９７．２号明細書

【特許文献2】米国特許第５６８１８５０号明細書

【特許文献3】米国特許第６６７３８４１号明細書

【特許文献4】米国特許第４８４９４５１号明細書

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

本発明は、プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤を提供することを目的の一つとする。

【0009】

本発明は、プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤の製造方法を提供することを別の目的とする。

【0010】

本発明は、前記製造方法で製造したプロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤を提供することをさらに別の目的とする。

【0011】

本発明は、前記プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤の使用を提供することをさらに別の目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0012】

上記目的を奏するために、一方では、本発明は、重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０部、注射用オイル５００～４０００部、乳化剤５００～２０００部、共乳化剤０～１０部、凍結乾燥保護剤５０００～５００００部およびグリセリン２００～１５００部を成分として含有する、プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤を提供する。

【0013】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記注射用オイルは、大豆油、中鎖油、オリーブ油、茶油、トウモロコシ油、またはヒマシ油のうちの１つ又はその複数の組合せから選択される。

【0014】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記乳化剤は、卵黄レシチン及び／又は大豆レシチンから選択される。

【0015】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記共乳化剤は、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノレン酸、リノール酸、及びオレイン酸ナトリウムのうちの１つ又はその複数の組合せから選択される。

【0016】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記凍結乾燥保護剤は、ラクトース、スクロース、トレハロース、マンニトール、グルコース、およびマルトースのうちの１つ又はその複数の組合せから選択される。

【0017】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記凍結乾燥製剤は、重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０部、注射用オイル５００～４０００部、乳化剤５００～１５００部、共乳化剤０～１０部、凍結乾燥保護剤５０００～２００００部およびグリセリン２００～１５００部を成分として含有する。

【0018】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記凍結乾燥製剤は、凍結乾燥前に１００ｍｌあたり、重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０ｍｇ、大豆油０．５～４ｇ、卵黄レシチン０．５～１．５ｇ、オレイン酸ナトリウム０～０．０１ｇ、ラクトース５～２０ｇおよびグリセロール０．２～１．５ｇを成分として含有する。

【0019】

なお、本発明に記載の「前記凍結乾燥製剤は、凍結乾燥前に１００ｍｌあたり、重量部で、…を成分として含有する」における「１００ｍｌあたり」とは、凍結乾燥前に調製した１００ｍｌ当たりの溶液、すなわち各成分を含有する水溶液を意味する。

【0020】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記凍結乾燥保護剤とプロスタグランジンＥ１メチルエステルとの重量比は２０～５００：０．０１である。

【0021】

また、本発明は、重量％で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．０００１～０．０１％、注射用オイル０．５～４％、乳化剤０．５～２％、共乳化剤０～０．０１％、凍結乾燥保護剤５～５０％、グリセリン０．２～１．５％、ｐＨ調整剤適量を含み、残部が注射用水である成分を原料として前記凍結乾燥製剤を製造する、プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤の製造方法を更に提供する。

【0022】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記注射用オイルは、大豆油、中鎖油、オリーブ油、茶油、トウモロコシ油、またはヒマシ油のうちの１つ又はその複数の組合せから選択される。

【0023】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記乳化剤は、卵黄レシチン及び／又は大豆レシチンから選択される。

【0024】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記共乳化剤は、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノレン酸、リノール酸、及びオレイン酸ナトリウムのうちの１つ又はその複数の組合せから選択される。

【0025】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記凍結乾燥保護剤は、ラクトース、スクロース、トレハロース、マンニトール、グルコース、およびマルトースのうちの１つ又はその複数の組合せから選択される。

【0026】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記方法は、重量％で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．０００１～０．０１％、注射用オイル０．５～４％、乳化剤０．５～１．５％、共乳化剤０～０．０１％、凍結乾燥保護剤５～２０％、グリセリン０．２～１．５％、ｐＨ調整剤適量を含み、残部が注射用水である成分を原料として前記凍結乾燥製剤を製造することを含む。

【0027】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記方法は、重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０重量部、大豆油５００～４０００重量部、卵黄レシチン５００～１５００重量部、オレイン酸ナトリウム０～１０重量部、乳糖５０００～２００００重量部、グリセリン２０～１５００重量部、クエン酸ナトリウムまたは塩酸適量を含み、残部が原料の総重量を１００×１０^３部とする注射用水である成分を原料として前記凍結乾燥製剤を製造することを含む。

【0028】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記ｐＨ調整剤の使用量は、注射用水で全量にメスアップして混合液を調製した後、混合溶液のｐＨを４．５～６．５に調整する量である。

【0029】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記方法は、以下の工程：
ａ．プロスタグランジンＥ１メチルエステルと乳化剤を油性溶媒中に均一に分散して油相とする工程、
ｂ．浸透圧調整剤および凍結乾燥保護剤を、適量の注射用水に溶解して水相とする工程、
ｃ．共乳化剤を油相又は水相に溶解する工程、
ｄ．油相を水相に撹拌しながら添加するか、又は水相を油相に撹拌しながら添加し、剪断して初乳を得る工程、
ｅ．初乳を均質化して均一なエマルジョンを得た後、注射用水で全量にメスアップし、ｐＨ調整剤でｐＨを４．５～６．５に調整する工程、
ｆ．得られたエマルジョンに凍結乾燥保護剤を加えて、攪拌・溶解、濾過・除菌、分注、凍結乾燥、シーリングを行い、凍結乾燥剤を得る工程、を含む。

【0030】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、工程ｄでは、２０℃～５０℃の一定温度条件下で剪断して初乳を取得する。

【0031】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、工程ｆの凍結乾燥過程は、－５０℃～－３５℃で１００～２００分間予備凍結し、次いで－２５℃～－１５℃、７０～９０ｍＴｏｒｒの条件で４２０～５４０分間真空引きし、次いで５～１５℃、５０～７０ｍＴｏｒｒの条件で２４０～３６０分間真空引きし、次いで３５℃～４５℃、３５～４５ｍＴｏｒｒの条件で３００～４２０分間真空引きすることを含む。

【0032】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、工程ｆの凍結乾燥過程は、－４０℃で１５０分間予備凍結し、次いで－２０℃、８０ｍＴｏｒｒの条件で４８０分間真空引きし、次いで１０℃、６０ｍＴｏｒｒの条件で３００分間真空引きし、次いで４０℃、４０ｍＴｏｒｒの条件で３６０分間真空引きすることを含む。

【0033】

更に、本発明は、本発明に記載の製造方法で製造したプロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤を更に提供する。

【0034】

更に、本発明は、本発明に記載のプロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤の血管拡張薬の製造における使用を更に提供する。

【0035】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記血管拡張薬は、微小循環障害、冠動脈心疾患、狭心症、心不全、肺性心疾患、脳梗塞、羊水塞栓症、または強皮症を治療する。

【0036】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、微小循環障害は、閉塞性血栓性血管炎、閉塞性動脈硬化症、糖尿病、凍傷、火傷、又は床擦れに起因する。

【0037】

発明者らの研究の結果、プロスタグランジンＥ１メチルエステル自体が強い生物活性を有し、プロスタグランジンＥ１より抗凝固作用および血管拡張作用に優れ、良好な薬物開発潜在力を有することを意外にも発見した。発明者らはさらに製剤研究を行って、プロスタグランジンＥ１メチルエステルの製剤形態として凍結乾燥製剤を選択することにより、本発明により調製したプロスタグランジンＥ１メチルエステル凍結乾燥製剤が、従来の製剤と比較して以下のような顕著な特徴を有することを意外にも発見した。
１．本発明のプロスタグランジンＥ１メチルエステル凍結乾燥製剤は、具体的な実験例によれば、医薬活性および治療効果が優帝爾よりも優れる。
２．本発明のプロスタグランジンＥ１メチルエステル凍結乾燥製剤は、脂肪乳剤に比べて、エマルション滴の平均粒子径が著しく小さく、大粒子径のエマルション滴の割合が減少し、薬物動態学挙動が予想外に改善されるため、薬効が向上する。
３．凍結乾燥製剤の再溶解後の遊離薬物の含有量を顕著に低減し、特に、明細書の投与方法に従って１０倍希釈後に遊離薬物の明らかな増加が見られず、血管内注射の刺激が回避される。
４．製剤の安定性が著しく向上し、製造、輸送および保存条件に対する要求が減少し、有効期間が延長される。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】実験例１の化合物のＡＤＰ誘導血小板凝集に対する抑制率とインキュベーション時間との関係を示すグラフである。

【図2】実験例２の血管環の拡張効能とプロスタグランジンＥ１濃度との関係を示すグラフである。

【図3】実験例３の腸間膜微小動脈の管径と投与時間との関係を示すグラフである。

【図4】ラットにおける４０μｇ／ｋｇのアルプロスタジルの静脈内注射後のアルプロスタジルの血漿中濃度－時間グラフである。

【発明を実施するための形態】

【0039】

以下、本発明の実施の形態を図面及び実施例に基づいて詳しく説明するが、本発明の保護範囲はこれらに限定されるものではない。

【0040】

実施例１
本発明化合物１（［（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－（Ｓ，Ｅ）－３－ヒドロキシ－１－エニル）－５－オキソシクロペンチル］ヘプタン酸メチル）の合成（プロスタグランジンＥ１メチルエステル）

【0041】

【化1】

【0042】

原料であるＰＧＥ１（６３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を三口フラスコに加え、続いて、調製した１Ｍの乾燥ＴＨＦ／Ｅｔ_２Ｏ溶液を加えて撹拌し溶解させ、氷浴条件下、反応液にＭｅＩ（２６ｍｇ、１Ｍ）溶液をゆっくり滴下し、滴下終了後、ＫＯＨ（１０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びＢｕ_４ＮＢｒ（６ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を加えた。１時間撹拌して反応した後、室温まで加熱し、反応が終了するまでＴＬＣでモニターした。水２０ｍＬを添加してクエンチさせ、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液がｎ－ヘキサン／ＥＡ＝１／１）により精製して、白色固体生成物（２４．８ｍｇ、収率３８％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＭＳ Ｆｏｕｎｄ：３９１．３［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＤＭＳＯ）（ｐｐｍ）：５．４６（ｓ，２Ｈ）、５．０１（ｓ，１Ｈ）、４．５７（ｓ，１Ｈ）、３．８８（ｓ，２Ｈ）、３．５７（ｓ，３Ｈ）、１．９～２．３（ｍ，５Ｈ）１．２～１．４８（ｍ，１９Ｈ）、０．８５（ｓ，３Ｈ）。

【0043】

実施例２
化合物２（［（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ）－３－ヒドロキシ－２－（Ｓ，Ｅ）－３－ヒドロキシ－１－エニル）－５－オキソシクロペンチル］ヘプタン酸エチル）の合成（プロスタグランジンＥ１エチルエステル）

【0044】

【化2】

【0045】

原料であるＰＧＥ１（６３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を三口フラスコに加え、続いて、調製した１Ｍの乾燥ＴＨＦ／Ｅｔ_２Ｏ溶液を加えて撹拌し溶解させ、氷浴条件下、反応液にＥｔＢｒ（２０ｍｇ、１Ｍ）溶液をゆっくり滴下し、滴下終了後、ＫＯＨ（１０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びＢｕ_４ＮＢｒ（６ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を加えた。１時間撹拌して反応した後、室温まで加熱し、反応が終了するまでＴＬＣでモニターした。水２０ｍＬを添加してクエンチさせ、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（溶離液がｎ－ヘキサン／ＥＡ＝１／１）により精製して、白色固体生成物（２０．５ｍｇ、収率２９．８％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＭＳ Ｆｏｕｎｄ：４０５［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨＺ，ＤＭＳＯ）（ｐｐｍ）：５．４６（ｓ，２Ｈ）、５．０１（ｓ，１Ｈ）、４．５７（ｓ，１Ｈ）、３．８８（ｓ，２Ｈ）、３．５７（ｓ，３Ｈ）、１．９～２．３（ｍ，７Ｈ）１．２～１．４８（ｍ，１９Ｈ）、０．８５（ｓ，３Ｈ）。

【0046】

主要薬物含量が異なるプロスタグランジンＥ１メチルエステル凍結乾燥製剤

【0047】

実施例３

【0048】

【表A】

【0049】

調製プロセスは以下のとおりである。

【0050】

油相：大豆油２ｇを秤取り、卵黄レシチン０．５ｇ、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．５ｍｇを加え、５０℃で溶解するまで剪断した。

【0051】

水相：注射用水９０ｇを秤取し、グリセリン０．７５ｇ、乳糖１２．５ｇ、オレイン酸ナトリウム０．０１ｇを加え、剪断して均一に混合し、０．１Ｍクエン酸ナトリウムを加えてｐＨを６．５に調節し、さらにレシチン２ｇを加え、１０分間剪断し続けた。

【0052】

油相を水相にゆっくりと添加し、５０℃で１０分間剪断し続けて、初乳を得、１００ｍＬになるまで水を添加した。

【0053】

初乳を均質化機に通し、８５０ｂａｒの圧力で８回均質化した。

【0054】

均質化した乳剤を無菌濾過し、分注し、－４０℃で１５０分間予備凍結し、次いで－２０℃、８０ｍＴｏｒｒで４８０分間真空引きし、１０℃、６０ｍＴｏｒｒで３００分間真空引きし、４０℃、４０ｍＴｏｒｒで３６０分間真空引きし、真空引きでキャッピングして凍結乾燥粉末注射剤を得た。

【0055】

実施例４

【0056】

【表B】

【0057】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0058】

実施例５

【0059】

【表C】

【0060】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0061】

注射液用オイル、レシチンおよび含有量が異なるプロスタグランジンＥ１メチルエステル凍結乾燥剤

【0062】

実施例６

【0063】

【表D】

【0064】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0065】

実施例７

【0066】

【表E】

【0067】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0068】

実施例８

【0069】

【表F】

【0070】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0071】

実施例９

【0072】

【表G】

【0073】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0074】

実施例１０

【0075】

【表H】

【0076】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0077】

共乳化剤および含有量が異なるプロスタグランジンＥ１メチルエステル凍結乾燥製剤

【0078】

実施例１１

【0079】

【表I】

【0080】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0081】

実施例１２

【0082】

【表J】

【0083】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0084】

実施例１３

【0085】

【表K】

【0086】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0087】

実施例１４

【0088】

【表L】

【0089】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0090】

凍結乾燥保護剤および含有量が異なるプロスタグランジンＥ１メチルエステル凍結乾燥製剤

【0091】

実施例１５

【0092】

【表M】

【0093】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0094】

実施例１６

【0095】

【表N】

【0096】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0097】

実施例１７

【0098】

【表O】

【0099】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0100】

実施例１８

【0101】

【表P】

【0102】

製造プロセスは実施例３と同一であった。

【0103】

比較例１
米国特許ＵＳ４８４９４５１における実施例２に従って調製した。

【0104】

比較例２
比較例１で調製された製剤に本発明の処方で使用する凍結乾燥保護剤を添加して、凍結乾燥を行った。

【0105】

実験例１
インビトロ抗血小板凝集試験における作用
健常成年ＳＤラットを腹腔に１０％抱水クロラールを注射して麻酔した後、腹部大動脈で採取したラットの新鮮な全血を３．８％クエン酸ナトリウム溶液で凝結させる遠心管に入れ、９００回転で１０ｍｉｎ遠心して、上層の血小板リッチ血漿（ＰＲＰ）を採取して用意した。ＰＲＰの試験管を取り出して４０００回転で１０分間遠心し続けて、上層澄血漿（ＰＰＰ）を採取して用意した。実験では、泰利康信ＬＢＹ－ＮＪ４型４チャネル血小板凝集装置を用いて、各化合物の抗凝集効能を測定した。

【0106】

３００μＬのＰＲＰサンプルを含むカップに、２μＬ、１００μＭのＰＧＥ１、実施例化合物１、実施例化合物２、およびメタノール（溶媒）を先に加え、異なる時間（０、１、２、４、７、１０、１５ｍｉｎ）インキュベートした後、凝集誘導剤である１８０μＭのＡＤＰ溶液を２０μＬ加え、各サンプルの凝集率を測定し、ＡＤＰによる血小板凝集に対する化合物の抑制率を計算した。
抑制率％＝（溶媒における凝集率－化合物における凝集率）／溶媒における凝集率×１００％

【0107】

結果（図１示す）から分かるように、ＰＲＰにＰＧＥ１と実施例化合物１を加えるとすぐに発効し、抑制率が同程度であり、インキュベーション時間の経過につれて実施例の化合物の抗凝集効能が徐々に低下するが、１０分後も抑制率が４３．６６％であるのに対して、ＰＧＥ１は４分間インキュベーションした後の抑制率が僅かに４．９３％であった。実施例化合物２は、添加後すぐに発効しないが、時間の経過につれて効能が徐々に強くなり、１０分間インキュベーションした後に最大抑制率５１．８６％に達した。故に、実施例化合物１は、活性を有する非プロドラッグ化合物であり、ＰＧＥ１と比較して２倍を超える抗凝集作用を有するものであり、一方、実施例化合物２は、典型的なプロドラッグ型化合物であることが分かる。

【0108】

実験例２
インビトロ血管ストリップ拡張試験
実験は、ニュージーランドウサギ、雄、体重（２．５±０．３）ｋｇの家兎を選択して摘出大動脈環サンプルを用意した。鈍器でウサギに気を失わせて、ウサギ解剖台に固定し、胸大動脈を迅速に分離し、３７℃の飽和クレブス液（１０００ｍＬ当たりＮａＣｌを６．９ｇ、ＫＣｌを０．３５ｇ、ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏを０．２９ｇ、ＫＨ_２ＰＯ_４を０．１６ｇ、ＮａＨＣＯ_３を２．１ｇ、ＣａＣｌ_２を０．２８ｇ、グルコースを２ｇ含む）が入り、混合ガス（９５％Ｏ_２、５％ＣＯ_２）が連続的に導入されるシャーレに入れ、血管内の残存血液を押し出し、周辺の脂肪及び結合組織を丁寧に剥がし、長さ０．５ｃｍの動脈環を数段に切り取って用意した。血管環は、２本のステンレスＬ字フックで血管腔を貫通し、２０ｍＬのバスチューブ内に横に掛けられ、下方が固定され、上方が細いワイヤーでテンショントランスデューサーに接続され、静止張力を０．００ｇに調節してから、２０ｍｉｎ安定させた後、さらに３．００ｇの張力を与え、３．００ｇ前後に維持するように張力レベルを調整し続け、２時間安定させた（１５ｍｉｎ毎に浴壁に沿ってクレブス液を交換した）。

【0109】

血管環張力の変化を、ＢＬ－４２０Ｓバイオシミュファクチャリングシステム（成都泰盟科技）を用いて記録した。血管環の収縮が安定した後、バスチューブ中のプロスタグランジンＥ１の最終質量濃度を０．０５、０．１、０．２、０．４、０．８、１．６、３．２、６．４、１２．８、２５．６ｎＭと順次増加させるようにプロスタグランジンＥ１と実施例化合物を加え、血管環の拡張効能を記録した。

【0110】

結果（図２に示す）により、本実験条件下で、家兎摘出血管に対する拡張効力は、実施例１の化合物（ＥＣ_５０＝１．０９０ｎＭ）がＰＧＥ_１（ＥＣ_５０＝９．７６７ｎＭ）よりも明らかに優れていることが分かる。

【0111】

実験例３
腸間膜微小循環障害モデル
２．５％ペントバルビタールナトリウム３０ｍｇ／ｋｇでラットをｉｐ麻酔して、背中合わせに固定し、腹正中線に長さ３～４ｃｍで切り込み、盲部の小腸間膜を軽く引き戻し、３７℃の生理食塩水を満たした有機ガラス製恒温水浴槽に入れ、腸間膜を湿潤状態に保ちながら、浴槽中央の有機凸型観察台に敷き、固定板を押しつけ、生物顕微鏡（倍率４０倍）カメラを用いて顕微鏡での映像を採取し、ＢＩ－２０００微小循環観測システムを用いて採取した鏡下映像をリアルタイムで解析した。

【0112】

視野を固定し、１０分間平衡化した後、選定領域の微小動脈及び微小静脈管径、流速を観察し、次いで選定領域に１：１００希釈塩酸アドレナリン生理食塩水を１００μＬ／匹滴下し、正常対照群に同容量の生理食塩水を滴下し、同時に尾静脈を介して直ちに１０μｇ／ｋｇの実施例製剤及び優帝爾を投与し、投与後０．５、１．２、４、６、８、１０、１２、１５ｍｉｎのタイミングで腸管間膜微小動脈の管径を測定した。

【0113】

図３に示すように、管径測量により、実施例３の製剤群は、アドレナリンによる微小循環障害が大幅に改善され、投与後０．５分～１０分で全てモデル群と有意の差がある（Ｐ＜０．０５）が、優帝爾では４分でモデル対照群と比較して有意の差がない（Ｐ＞０．０５）。アドレナリンによる循環障害の改善効能は、実施例群が優帝爾より明らかに優れており、両者を比較すると０．５～１０ｍｉｎで全て有意の差がある（Ｐ＜０．０５）。

【0114】

実験例４
製剤遊離薬物測定
サンプル処理方法：各実施例の凍結乾燥乳に各々１０ｍｌの二重エマルジョンを加え、同時に１部を採取して水で１０倍に希釈し、適量を精秤して２０ｍｌ褐色栓付きチューブに入れて、テトラヒドロフランを２．５ｍｌ加えて均一に混合し、リン酸溶液（１→１０００）を１５ｍｌ加えて均一に混合し、前処理カラム［充填物が粒径７０μｍのオクタデシルシラン結合シリカゲルであるφ１０ｍｍ×９ｍｍポリプロピレンチューブ（ＳＥＰ－ＰＡＫＣ１８カラム、Ｗａｔｅｒｓ）であって、使用前にメタノール１０ｍｌ、水１０ｍｌでリンス］に通し、試験管を１０ｍｌの水でリンスし、前処理カラムを通過させた。再び７ｍｌのメタノールで溶離し、溶離液を全量１０ｍｌの褐色レトルトに移し、５０℃で１０分間減圧蒸留し、溶媒を蒸発乾燥し、残渣を１ｍｌの内部標準溶液で溶解して、振とうしてサンプルとした。

【0115】

充填剤としてオクタデシル結合シリカゲルを用い、０．００６７ｍｏｌ／Ｌのリン酸塩緩衝液（ｐＨ＝６．３）（リン酸二水素カリウム９．０７ｇを取り、水を加えて溶解させて１０００ｍｌとし、別途、無水リン酸水素二ナトリウム９．４６ｇを取り、水を加えて溶解させて１０００ｍｌとし、ｐＨが６．３になるまで後者を前者に加えて、この液１００ｍｌに水を加えて１０００ｍｌとし、振とうして得た）－アセトニトリル（７０：３０）を移動相とした。流速は１ｍｌ／分であった。ポストカラム反応液は１ｍｏｌ・Ｌ^－１のＫＯＨ溶液であり、ポストカラム反応管はポリテトラフルオロエチレンチューブ（φ０．５ｍｍ×１０ｍ）であり、カラム温度は６０℃であり、検出波長は２７８ｎｍであった。サンプル及び対照溶液を各々２０μｌ供給し、内部標準ピーク面積法により計算した。

【0116】

実施例３～１８及び優帝爾を生理食塩水で再溶解し、いずれも濃度１μｇ／ｍＬに、更に、サンプリングして１０倍希釈して０．１μｇ／ｍＬにして、前記再溶解後の各製剤を適量取り、限外濾過遠心管に入れて２８００ｒ×ｍｉｎ^－１で３０ｍｉｎ遠心限外濾過した後、濾液を１ｍｌ取って前記サンプル処理方法に従ってサンプル溶液を調製し、２０μｌをサンプリングして、各薬物含量である遊離薬物含量を測定した。

【0117】

各実施例の１ｍＬのサンプルにおける二重エマルジョン（１×）と１０倍希釈（１０×）後のサンプルの遊離率を同時に測定した。
遊離率％＝遊離薬物総量／総薬物量×１００％

【0118】

測定された各例の遊離率は、以下の表１に示す。

【0119】

【表1】

【0120】

実験結果により、実施例３～１８の薬物再溶解後の遊離薬物は、優帝爾に比べて顕著に低く、且つ優帝爾を明細書の使用方法に従って１０倍希釈した後、遊離率が顕著に向上したが、本発明実施例で製造した製剤を希釈した後、遊離薬物の明らかな増加がなかったことが分かる。

【0121】

実験例５
血管刺激試験
ニュージーランドウサギ（体重約２ｋｇ）を２０匹選び、２組に分けた。実施例製剤と優帝爾はともに生理食塩水で１μｇ／ｍｌに二重エマルジョン化し、引き続き生理食塩水で０．１μｇ／ｍｌに希釈した。プロスタグランジンＥ１臨床的使用量に応じて変換して、０．５μｇ／ｋｇで耳静脈にゆっくりと点滴し、反対側の耳静脈に同量の生理食塩水を静脈内注射し、１日１回７日間連続して点滴した。血管刺激の程度を最終投与２時間後に目視で評価し、全ての動物を殺した後に注射部位を採取して組織病理学的検査を行って、結果を下記表２及び表３に示す。

【0122】

【表2】

【0123】

その結果、実施例群では刺激性がほとんどなく（Ｐ＞０．０５）、優帝爾群では明らかな血管刺激を示した（Ｐ＜０．０５）。

【0124】

【表3】

【0125】

実験例６
製剤安定性試験
実施例３～１８、比較例１、２で作製したサンプルの外観及び粒径の測定結果を下記表４に示す。

【0126】

【表4】

【0127】

ＰＳＳ社の３８０ＺＬＳ粒度計（動的光散乱法）を用いて平均粒子径を測定し、ＰＳＳ社のＡｃｃｕｓｉｚｅｒ７８０機器（フォトレジスト法）を用いて大粒子径のエマルション滴を測定し、５μｍより大きいエマルション滴の百分率を算出した。その結果、実施例３～１８で調製したサンプルは、凍結乾燥後の外観が良好であり、再溶解後の平均粒径が比較例１よりも明らかに小さく、且つ大きいエマルション滴（＞５μｍ）の百分率が０．０５％を大幅に下回り、比較例１では大きい粒径（＞５μｍ）が基準値を超えて（＞０．０５％、ＵＳＰ標準）、比較例２では凍結乾燥成形できない。

【0128】

実施例３、５、８、１５で作製したサンプルを取り、２４時間の長期安定性試験（温度２５℃±２℃、湿度６０％±１０％）を行って、結果を下記表５に示す。

【0129】

【表5】

【0130】

その結果、本発明実施例で調製したプロスタグランジンＥ１メチルエステル凍結乾燥製剤は、２４ヶ月の長期安定試験において製品品質が安定していた。

【0131】

実験例７
実施例３、６、７、８および比較例１のラットにおける薬物動態学研究
薬物動態学実験では、ＳＤ雄ラット１２匹／群を用い、投与前に１２時間断食させ、自由飲水させた。２つの製剤を、それぞれ４０μｇ／ｋｇの投与量で静脈内投与し、投与後０．５ｍｉｎ、１．２５ｍｉｎ、３ｍｉｎ、５ｍｉｎ、８ｍｉｎ、１２ｍｉｎ、１６ｍｉｎ、２０ｍｉｎ、３０ｍｉｎ、４５ｍｉｎのタイミングで眼窩を採血し、各時点での血漿中濃度（プロスタグランジンＥ１メチルエステルとプロスタグランジンの合計）を図４に示す。

【0132】

得られた２つの製剤の薬物動態学パラメータを血漿中濃度グラフから算出したところ、実施例３では、投与後のピーク血漿中濃度が比較例１の群より明らかに高く、半減期が著しく長くなり、バイオアベイラビリティも著しく向上した（表６参照）。

【0133】

【表6】

【0134】

実施例３、６～８は、比較例１に比べて、製剤のインビボ薬物動態学挙動が著しく改善されたことが分かる。薬物の肺循環における代謝不活化が抑制されているように見られ、この現象は薬物の粒子径に関与する可能性があると思われる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【手続補正書】

【提出日】2021-06-09

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０部、注射用オイル（前記注射用オイルは、大豆油、中鎖油、オリーブ油、茶油、トウモロコシ油、またはヒマシ油のうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）５００～４０００部、乳化剤（前記乳化剤は、卵黄レシチン及び／又は大豆レシチンから選択されることが好ましい）５００～２０００部、共乳化剤（前記共乳化剤は、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノレン酸、リノール酸、及びオレイン酸ナトリウムのうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）０～１０部、凍結乾燥保護剤（前記凍結乾燥保護剤は、ラクトース、スクロース、トレハロース、マンニトール、グルコース、およびマルトースのうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）５０００～５００００部およびグリセリン２００～１５００部を成分として含有する、プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤。

【請求項2】

重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０部、注射用オイル５００～４０００部、乳化剤５００～１５００部、共乳化剤０～１０部、凍結乾燥保護剤５０００～２００００部およびグリセリン２００～１５００部を成分として含有する、請求項１に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項3】

凍結乾燥前に１００ｍｌあたり、重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０ｍｇ、大豆油０．５～４ｇ、卵黄レシチン０．５～１．５ｇ、オレイン酸ナトリウム０～０．０１ｇ、ラクトース５～２０ｇおよびグリセロール０．２～１．５ｇを成分として含有する、請求項１に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項4】

前記凍結乾燥保護剤とプロスタグランジンＥ１メチルエステルとの重量比は２０～５００：０．０１である、請求項１～３のいずれか１項に記載の凍結乾燥製剤。

【請求項5】

重量％で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．０００１～０．０１％、注射用オイル（前記注射用オイルは、大豆油、中鎖油、オリーブ油、茶油、トウモロコシ油、またはヒマシ油のうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）０．５～４％、乳化剤（前記乳化剤は、卵黄レシチン及び／又は大豆レシチンから選択されることが好ましい）０．５～２％、共乳化剤（前記共乳化剤は、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノレン酸、リノール酸、及びオレイン酸ナトリウムのうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）０～０．０１％、凍結乾燥保護剤（前記凍結乾燥保護剤は、ラクトース、スクロース、トレハロース、マンニトール、グルコース、およびマルトースのうちの１つ又はその複数の組合せから選択されることが好ましい）５～５０％、グリセリン０．２～１．５％、ｐＨ調整剤適量を含み、残部が注射用水である成分を原料として前記凍結乾燥製剤を製造する、プロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤の製造方法。

【請求項6】

重量％で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．０００１～０．０１％、注射用オイル０．５～４％、乳化剤０．５～１．５％、共乳化剤０～０．０１％、凍結乾燥保護剤５～２０％、グリセリン０．２～１．５％、ｐＨ調整剤適量を含み、残部が注射用水である成分を原料として前記凍結乾燥製剤を製造することを含む、請求項５に記載の製造方法。

【請求項7】

重量部で、プロスタグランジンＥ１メチルエステル０．１～１０重量部、大豆油５００～４０００重量部、卵黄レシチン５００～１５００重量部、オレイン酸ナトリウム０～１０重量部、乳糖５０００～２００００重量部、グリセリン２０～１５００重量部、クエン酸ナトリウムまたは塩酸適量を含み、残部が原料の総重量を１００×１０^３部とする注射用水である成分を原料として前記凍結乾燥製剤を製造することを含む、請求項５に記載の製造方法。

【請求項8】

ａ．プロスタグランジンＥ１メチルエステルと３分の１の乳化剤を油性溶媒中に均一に分散して油相とする工程、
ｂ．グリセリン、凍結乾燥保護剤及び残りの乳化剤を、適量の注射用水に溶解し、ｐＨ調整剤でｐＨを４．５～６．５に調整し、水相とする工程、
ｃ．共乳化剤を油相又は水相に溶解する工程、
ｄ．油相を水相に撹拌しながら添加するか、又は水相を油相に撹拌しながら添加し、剪断して初乳を得た後（２０℃～５０℃の一定温度条件下で剪断して初乳を取得することが好ましい）、注射用水で全量にメスアップする工程、
ｅ．初乳を均質化して均一なエマルジョンを得る工程、
ｆ．得られたエマルジョンに対して、攪拌・溶解、濾過・除菌、分注、凍結乾燥（凍結乾燥過程は、－５０℃～－３５℃で１００～２００分間予備凍結し、次いで－２５℃～－１５℃、７０～９０ｍＴｏｒｒの条件で４２０～５４０分間真空引きし、次いで５～１５℃、５０～７０ｍＴｏｒｒの条件で２４０～３６０分間真空引きし、次いで３５℃～４５℃、３５～４５ｍＴｏｒｒの条件で３００～４２０分間真空引きすることを含むことが好ましい）、シーリングを行い、凍結乾燥剤を得る工程、を含む、請求項５～７のいずれか１項に記載の製造方法。

【請求項9】

請求項５～８のいずれか１項に記載の製造方法で製造したプロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤。

【請求項10】

請求項１～４又は請求項９のいずれか１項に記載のプロスタグランジンＥ１メチルエステル注射用凍結乾燥製剤の血管拡張薬の製造における使用（前記血管拡張薬は、微小循環障害（前記微小循環障害は、閉塞性血栓性血管炎、閉塞性動脈硬化症、糖尿病、凍傷、火傷、又は床擦れに起因することが好ましい）、冠動脈心疾患、狭心症、心不全、肺性心疾患、脳梗塞、羊水塞栓症、または強皮症を治療することが好ましい）。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0029】

本発明のいくつかの具体的な実施形態によると、前記方法は、以下の工程：
ａ．プロスタグランジンＥ１メチルエステルと３分の１の乳化剤を油性溶媒中に均一に分散して油相とする工程、
ｂ．グリセリン、凍結乾燥保護剤及び残りの乳化剤を、適量の注射用水に溶解し、ｐＨ調整剤でｐＨを４．５～６．５に調整し、水相とする工程、
ｃ．共乳化剤を油相又は水相に溶解する工程、
ｄ．油相を水相に撹拌しながら添加するか、又は水相を油相に撹拌しながら添加し、剪断して初乳を得た後、注射用水で全量にメスアップする工程、
ｅ．初乳を均質化して均一なエマルジョンを得る工程、
ｆ．得られたエマルジョンに対して、攪拌・溶解、濾過・除菌、分注、凍結乾燥、シーリングを行い、凍結乾燥剤を得る工程、を含む。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0051】

水相：注射用水９０ｇを秤取し、グリセリン０．７５ｇ、乳糖１２．５ｇ、オレイン酸ナトリウム０．０１ｇを加え、剪断して均一に混合し、０．１Ｍクエン酸ナトリウムを加えてｐＨを６．５に調節し、さらにレシチン（卵黄レシチン）１ｇを加え、１０分間剪断し続けた。

【手続補正4】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１０４

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0104】

比較例２
比較例１で調製された製剤に本発明の処方で使用する凍結乾燥保護剤（実施例３と同一）を添加して、凍結乾燥を行った。

【国際調査報告】