特表 2022-510387 ガンマデルタＴ細胞集団の選択的生体内増殖方法及びその組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-01-26

(54)【発明の名称】ガンマデルタＴ細胞集団の選択的生体内増殖方法及びその組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20220119BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220119BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20220119BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20220119BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20220119BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20220119BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220119BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20220119BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220119BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20220119BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220119BHJP

   A61K 31/675 20060101ALI20220119BHJP

   A61K 31/663 20060101ALI20220119BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220119BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P35/00

A61P31/00

A61P29/00

A61P37/02

A61K45/06

A61P43/00 121

A61P43/00 111

A61K38/19

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61K39/395 D

A61K39/395 E

A61K38/20

A61K35/17 Z

A61K31/675

A61K31/663

A61K48/00 ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021531558

(86)(22)【出願日】2019-12-03

(85)【翻訳文提出日】2021-07-29

(86)【国際出願番号】 US2019064319

(87)【国際公開番号】W WO2020117862

(87)【国際公開日】2020-06-11

(31)【優先権主張番号】62/774,817

(32)【優先日】2018-12-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517171347

【氏名又は名称】アディセット バイオ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林特許業務法人

(72)【発明者】

【氏名】ヤコボヴィッツ， アヤ

(72)【発明者】

【氏名】サトパエフ， ダウレット

(72)【発明者】

【氏名】フォード， オリット

(72)【発明者】

【氏名】ジン， イフォン フランク

(72)【発明者】

【氏名】シャオ， フイ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA13

4C084AA17

4C084AA18

4C084BA44

4C084DA01

4C084DA12

4C084DA14

4C084DA16

4C084MA02

4C084MA35

4C084MA52

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB071

4C084ZB072

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB351

4C084ZB352

4C084ZC021

4C084ZC022

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG08

4C086AA01

4C086AA02

4C086DA34

4C086DA38

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA04

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB07

4C086ZB11

4C086ZB26

4C086ZB35

4C086ZC02

4C086ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB43

4C087MA02

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB07

4C087ZB11

4C087ZB26

4C087ZB35

4C087ZC02

4C087ZC75

(57)【要約】

本発明は、γδＴ細胞集団（複数可）の選択的生体内活性化、増殖、及び／または維持方法、その組成物及び混合物、ならびにそれを治療薬として使用する方法に関する。本開示の方法及び組成物は、様々ながん、感染性疾患、及び免疫障害の治療に有用である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるγδＴ細胞集団を活性化、増殖、及び／または維持するための生体内方法であって、前記対象に、有効量の、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することを含み、
δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記１つ以上の薬剤が、δ１ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合し、
δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記１つ以上の薬剤が、δ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合し、
δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記１つ以上の薬剤が、δ３ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合し、
それによって前記対象における前記γδＴ細胞集団を活性化、増殖、及び／または維持する、前記方法。

【請求項2】

前記方法が、前記対象に、有効量の、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、ＴＳ－１及びＴＳ８．２から選択される抗体と同じエピトープに結合する薬剤から選択される、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、ＴＳ－１、ＴＳ８．２、またはＲ９．１２と競合しない薬剤から選択される、請求項２に記載の方法。

【請求項5】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ１可変領域を含むエピトープに特異的に結合する薬剤から選択される、請求項２に記載の方法。

【請求項6】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ１可変領域の残基Ａｒｇ７１、Ａｓｐ７２、及びＬｙｓ１２０を含むエピトープに結合する、請求項２に記載の方法。

【請求項7】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、デルタＪ１及びデルタＪ２のＫ１２０に突然変異を含む突然変異体δ１ＴＣＲポリペプチドに対する低減された結合を有する、請求項２に記載の方法。

【請求項8】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、ヒトδ１ＴＣＲのδ１ＴＣＲビン１δ１エピトープ、ビン１ｂδ１エピトープ、ビン２δ１エピトープ、ビン２ｂδ１エピトープ、ビン２ｃδ１エピトープ、ビン３δ１エピトープ、ビン４δ１エピトープ、ビン５δ１エピトープ、ビン６δ１エピトープ、ビン７δ１エピトープ、ビン８δ１エピトープ、またはビン９δ１エピトープに結合する薬剤である、請求項２に記載の方法。

【請求項9】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ１－０５、δ１－０８、δ１－１８、δ１－２２、δ１－２３、δ１－２６、δ１－３５、δ１－３７、δ１－３９、δ１－１１３、δ１－１４３、δ１－１４９、δ１－１５５、δ１－１８２、δ１－１８３、δ１－１９１、δ１－１９２、δ１－１９５、δ１－１９７、δ１－１９９、δ１－２０１、δ１－２０３、δ１－２３９、δ１－２５３、δ１－２５７、δ１－２７８、δ１－２８２、及びδ１－２８５からなる群から選択される抗体と同じ、もしくは本質的に同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する薬剤から選択される、請求項２に記載の方法。

【請求項10】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ１－０５、δ１－０８、δ１－１８、δ１－２２、δ１－２３、δ１－２６、δ１－３５、δ１－３７、δ１－３９、δ１－１１３、δ１－１４３、δ１－１４９、δ１－１５５、δ１－１８２、δ１－１８３、δ１－１９１、δ１－１９２、δ１－１９５、δ１－１９７、δ１－１９９、δ１－２０１、δ１－２０３、δ１－２３９、δ１－２５３、δ１－２５７、δ１－２７８、δ１－２８２、及びδ１－２８５からなる群から選択される抗体である、請求項２に記載の方法。

【請求項11】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ１Ｔ細胞及びδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる、請求項２に記載の方法。

【請求項12】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、抗体δ１－３５もしくはδ１－０８のＣＤＲを含むか、または抗体δ１－０８もしくはδ１－３５と同じエピトープに結合する、請求項２に記載の方法。

【請求項13】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、抗体δ１－３５のＣＤＲを含む、請求項２に記載の方法。

【請求項14】

δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ１、δ３、δ４、及びδ５γδＴ細胞を選択的に増殖させる、請求項２に記載の方法。

【請求項15】

前記方法が、前記対象に、有効量の、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項16】

δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、１５Ｄ及びＢ６から選択される抗体と同じエピトープに結合する薬剤から選択される、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ２可変領域を含むエピトープに特異的に結合する薬剤から選択される、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ２可変領域のＧ３５に突然変異を含む突然変異体δ２ＴＣＲポリペプチドに対する低減された結合を有する、請求項１５に記載の方法。

【請求項19】

δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、ヒトδ２ＴＣＲのδ２ＴＣＲビン１δ２エピトープ、ビン２δ２エピトープ、ビン３δ２エピトープまたはビン４δ２エピトープに結合する、請求項１５に記載の方法。

【請求項20】

δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ２－１４、δ２－１７、δ２－２２、δ２－３０、δ２－３１、δ２－３２、δ２－３３、δ２－３５、δ２－３６、及びδ２－３７からなる群から選択される抗体と同じ、もしくは本質的に同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する薬剤である、請求項１５に記載の方法。

【請求項21】

δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ２－１４、δ２－１７、δ２－２２、δ２－３０、δ２－３１、δ２－３２、δ２－３３、δ２－３５、δ２－３６、及びδ２－３７からなる群から選択される抗体である、請求項１５に記載の方法。

【請求項22】

δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、抗体δ２－３７のＣＤＲを含むか、または抗体δ２－３７と同じエピトープに結合する、請求項１５に記載の方法。

【請求項23】

前記方法が、前記対象に、有効量の、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項24】

δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ３－０８、δ３－２０、δ３－２３、δ３－３１、δ３－４２、δ３－４７、及びδ３－５８からなる群から選択される抗体と同じ、もしくは本質的に同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する薬剤から選択される、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、δ３－０８、δ３－２０、δ３－２３、δ３－３１、δ３－４２、δ３－４７、及びδ３－５８からなる群から選択される抗体である、請求項２３に記載の方法。

【請求項26】

δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記薬剤が、抗体δ３－２３のＣＤＲを含むか、または抗体δ３－２３と同じエピトープに結合する、請求項２３に記載の方法。

【請求項27】

前記方法が、前記患者に操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の集団を投与することを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記方法が、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記１つ以上の薬剤を投与する前に、前記操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の集団を投与することを含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団が、前記対象に対して自家性の細胞の集団である、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

前記操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団が、前記対象に対して同種異系の細胞の集団である、請求項２７に記載の方法。

【請求項31】

前記操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団が、少なくとも６０％のδ１γδＴ細胞を含む集団であり、前記方法が、前記γδＴ細胞を投与することと、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記１つ以上の薬剤を順次または同時に投与することと、を含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項32】

前記操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団が、少なくとも６０％のδ２γδＴ細胞を含む集団であり、前記方法が、γδＴ細胞を投与することと、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を順次または同時に投与することと、を含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項33】

前記操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団が、少なくとも６０％のδ３γδＴ細胞を含む集団であり、前記方法が、γδＴ細胞を投与することと、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を順次または同時に投与することと、を含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項34】

前記方法が、アミノホスホネートまたはプレニルホスホネートを投与することを含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記方法が、アミノホスホネートを投与することを含み、前記アミノホスホネートが、ゾレドロネート、パミドロン酸、アレンドロン酸、リセドロン酸、イバンドロン酸、及びインカドロン酸、もしくはそれらの塩、ならびに／またはそれらの水和物からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる前記薬剤が、多価であり、好ましくは多価薬剤が、同じ抗原に特異的に結合する少なくとも２つの抗原結合部位を含むか、または前記多価薬剤が、同じ抗原の同じエピトープに特異的に結合する少なくとも２つの抗原結合部位を含む、請求項１～９、１２～２４、または２５～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる前記薬剤が、二価、三価、もしくは四価であるか、または少なくとも二価、三価、もしくは四価である、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記方法が、サイトカインを前記対象に同時または順次に投与することを含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記方法が、操作型γδＴ細胞を前記対象に投与することを含み、前記操作型γδＴ細胞が、分泌サイトカインをコードする導入遺伝子を含む、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記サイトカインが、一般的なガンマ鎖サイトカイン、またはＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－４からなる群から選択されるサイトカインであり、好ましくは前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－４である、請求項３８または３９に記載の方法。

【請求項41】

前記方法が、リンパ球枯渇プロトコルを前記対象に、γδＴ細胞を投与する前に投与することを含む、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記方法が、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、及び／またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記１つ以上の薬剤を繰り返し投与することを含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記方法が、前記対象における投与されたγδＴ細胞の集団を増殖または維持することを含む、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記方法が、前記対象における内因性γδＴ細胞の集団を増殖または維持することを含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記方法が、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、及び／またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記１つ以上の薬剤を投与されていない対象におけるγδＴ細胞の量に対して少なくとも１０％、前記対象における内因性及び／または投与されたγδＴ細胞の集団を増殖させることを含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記方法が、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、及び／またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる前記１つ以上の薬剤を投与されていない対象におけるγδＴ細胞の数に対して少なくとも１０％大きな、前記対象における内因性及び／または投与されたγδＴ細胞の集団を維持することを含む、請求項１～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

請求項１～４６に記載の方法のうちのいずれか１つを実施することによって、がん、感染性疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患の治療を必要とする対象において前記がん、前記感染性疾患、前記炎症性疾患、または前記自己免疫疾患を治療する方法。

【請求項48】

δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤の、それを必要とする対象におけるγδＴ細胞の生体内増殖のための医薬品の製造における使用。

【請求項49】

対象における前記γδＴ細胞の生体内増殖が、前記対象におけるがん、感染性疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患を治療することを含む、請求項４８に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、２０１８年１２月３日に出願された米国仮特許出願第６２／７７４，８１７号の優先権の利益を主張するものであり、これを以て参照によりその内容をあらゆる目的のために全体的に援用する。

【背景技術】

【0002】

Ｔリンパ球による抗原認識は、多様性に富む異種二量体受容体であるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって成し遂げられ得る。血液及びリンパ器官の中のヒトＴ細胞のおよそ９５％は、異種二量体αβＴＣＲ受容体（αβＴ細胞系統）を発現する。血液及びリンパ器官の中のヒトＴ細胞のおよそ５％は、異種二量体γδＴＣＲ受容体（γδＴ細胞系統）を発現する。これらのＴ細胞サブセットはそれぞれ「αβ」及び「γδ」Ｔ細胞と呼称されることがある。αβ及びγδＴ細胞は機能が異なる。しかも、αβＴ細胞の活性化は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）が抗原をクラスＩ／ＩＩのＭＨＣと関連付けて提示するときに起こる。αβＴ細胞とは対照的に、γδＴ細胞は、ＭＨＣ拘束とは無関係に抗原を認識することができる。さらに、γδＴ細胞は、自然免疫及び養子免疫による認識及び応答を両方とも併せ持っている。

【0003】

γδＴ細胞は、体細胞再構成された別個の可変遺伝子（Ｖ）、多様性遺伝子（Ｄ）、結合遺伝子（Ｊ）及び定常遺伝子（Ｃ）の組を利用する。γδＴ細胞は、αβＴ細胞よりも少ないＶ、Ｄ及びＪセグメントを含有する。生殖細胞系のＶγ及びＶδ遺伝子の数には、Ｖα及びＶβＴＣＲ遺伝子のレパートリーよりも限りがあるが、ＴＣＲのγ鎖及びδ鎖の再構成中に接合部の多様化プロセスがより大々的であることによって、潜在的なγδＴＣＲレパートリーはαβＴＣＲのそれよりも広くなる（Ｃａｒｄｉｎｇ ａｎｄ Ｅｇａｎ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００２）２：３３６）。

【0004】

ヒトγδＴ細胞は、３つの主要なＶδ（Ｖδ１、Ｖδ２、Ｖδ３）領域遺伝子と、多くて６つのＶγ領域遺伝子とを使用してそれらのＴＣＲを作る（Ｈａｙｄａｙ ＡＣ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００；１８，９７５－１０２６）。２つの主要なＶδサブセットは、Ｖδ１及びＶδ２のγδＴ細胞である。種々のＶγを有するＶδ１Ｔ細胞は、粘膜γδＴ細胞の上皮内サブセットの多数を占め、この場合、ＴＣＲは上皮細胞上のストレス分子を認識するようである（Ｂｅａｇｌｅｙ ＫＷ，Ｈｕｓｂａｎｄ ＡＪ．Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８；１８（３）：２３７－２５４）。Ｖγ９を共発現するのが一般的であるＶδ２Ｔ細胞は、末梢血及びリンパ系に豊富に存在している。

【0005】

疾患細胞上の抗原を直接認識し、腫瘍細胞を殺傷する本来備わっている能力を発揮する、γδＴ細胞の能力は、γδＴ細胞を魅力的な治療ツールにする。γδＴ細胞の豊富なＶγ９Ｖδ２サブタイプは、微生物化合物（Ｅ）－４－ヒドロキシ－３－メチル－ブタ－２－エニルピロリン酸などのピロリン酸化合物を認識する。しかしながら、他のγδＴ細胞サブタイプによって認識されるリガンドは不明である。

【0006】

Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞の養子移入は、研究段階でのがんの治療において限られた目標臨床応答をもたらし（Ｋｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ，Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ，１０：８４２－８５６，２００８、Ｌａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：ＣＩＩ，６０：１４４７－１４６０，２０１１、Ｎａｇａｍｉｎｅ ｅｔ ａｌ，２００９、Ｎｉｃｏｌ ｅｔ ａｌ，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，１０５：７７８－７８６，２０１１、Ｗｉｌｈｅｌｍ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ．２００３ Ｊｕｌ １；１０２（１）：２００－６）、新たなγδＴ細胞集団を単離して臨床において試験する必要性を示唆した。

【0007】

強力な抗腫瘍活性を有するγδＴ細胞サブセット集団を、向上した純度及び臨床上妥当なレベルで選択的に増殖させる能力は、非常に望ましいものである。抗体とサイトカインとのカクテルは、γδＴ細胞のより多様な組を増殖させるために使用されてきたが、特定のγδＴ細胞サブセットを十分な純度及び臨床上妥当なレベルにまで活性化させることは成し遂げられなかった（Ｄｏｋｏｕｈａｋｉ ｅｔ ａｌ，２０１０、Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ，２００９、Ｌｏｐｅｚ ｅｔ ａｌ，２０００、Ｋｒｅｓｓ，２００６）。

【0008】

γδＴ細胞サブタイプの選択的増殖は、Ｖγ９Ｖδ２の既知のリガンドの使用によって生体外及び生体内で実証されている。例えば、Ｐｒｅｓｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）．２０１６ Ｓｅｐ；９５（３９）：ｅ４９０９は、静脈内ゾレドロネート、合成ピロリン酸模倣物、及び皮下ＩＬ－２を使用したＶγ９Ｖδ２の生体内増殖を報告する。選択的に結合及び架橋する固定化抗体、例えば、δ１、δ２、及びδ３サブタイプを使用して、他のγδＴ細胞サブタイプの選択的増殖が生体外で実証されている。ＷＯ２０１６／０８１５１８、ＷＯ２０１７／１９７３４７、及びＷＯ２０１９／０９９７４４を参照されたく、これらの内容は全体が組み込まれる。しかしながら、残念ながら、生体内固定化は、典型的には、抗体を細胞表面のＦｃ受容体に結合させることによって行われ、これは一般に、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）効果を誘導し、それによって抗体によって認識されるγδＴ細胞の集団を減少させることが予想されるであろう。同様に、Ｆｃ受容体と抗体との間の相互作用を低下させる方法もまた、固定化を低下させるため、堅牢な生体内増殖を達成することも期待されない。したがって、特定のγδＴ細胞サブセットを生体内で増殖させる臨床上妥当な方法及びそれによって製造された細胞は、大いに必要とされている。

【発明の概要】

【0009】

本発明者らは、ｉ）δ１ＴＣＲに特異的な活性化エピトープに結合することによってδ１Ｔ細胞を選択的に活性化及び増殖させる活性化剤、ｉｉ）δ２ＴＣＲに特異的な活性化エピトープに結合することによってδ２Ｔ細胞を選択的に活性化及び増殖させる活性化剤、ならびにδ３ＴＣＲに特異的な活性化エピトープに結合することによってδ３Ｔ細胞を選択的に活性化及び増殖させる活性化剤を特定した。本発明者らは驚くべきことに、生理学的に適切な環境において、かかる抗体が、生体内で養子移入キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）γδＴ細胞及び／または内因性γδＴ細胞を効果的に活性化し、増殖し、かつその持続性を支持することができることを見出した。

【0010】

γδＴ細胞の生体内増殖のために、これらの活性化剤を個別に、または組み合わせて使用するための方法及び組成物が本明細書に記載される。これらの方法及び組成物は、１つ以上のγδＴ細胞亜集団の選択的活性化及び増殖に好適であり得る。生体内増殖方法及び組成物は、内因性γδＴ細胞またはその亜集団を維持及び／または増殖させるために好適であり得る。加えて、またはあるいは、生体内増殖方法及び組成物は、対象に投与されたγδＴ細胞またはその亜集団を維持及び／または増殖させるために好適であり得る。

【0011】

第１の態様では、本発明は、対象におけるＴ細胞集団を活性化、増殖、及び／または維持するための生体内方法を提供し、方法は、対象に、有効量の、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することを含み、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤は、δ１ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合し、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤は、δ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合し、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤は、δ３ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合し、それによって対象におけるγδＴ細胞集団を活性化、増殖、または維持する。

【0012】

いくつかの実施形態では、方法は、対象に、有効量の、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、ＴＳ－１及びＴＳ８．２から選択される抗体と同じエピトープに結合する薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＳ－１及びＴＳ８．２から選択される抗体と同じエピトープに結合する薬剤は、ＴＳ－１もしくはＴＳ８．２のＣＤＲを含み、及び／またはヒト化ＴＳ－１もしくはＴＳ８．２である。いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、ＴＳ－１、ＴＳ８．２、またはＲ９．１２と競合しない薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ１可変領域を含むエピトープに特異的に結合する薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ１可変領域の残基Ａｒｇ７１、Ａｓｐ７２、及びＬｙｓ１２０を含むエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、デルタＪ１及びデルタＪ２のＫ１２０に突然変異を含む突然変異体δ１ＴＣＲポリペプチドに対する低減された結合を有する。

【0013】

いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、ヒトδ１ＴＣＲのδ１ＴＣＲビン１δ１エピトープ、ビン１ｂδ１エピトープ、ビン２δ１エピトープ、ビン２ｂδ１エピトープ、ビン２ｃδ１エピトープ、ビン３δ１エピトープ、ビン４δ１エピトープ、ビン５δ１エピトープ、ビン６δ１エピトープ、ビン７δ１エピトープ、ビン８δ１エピトープ、またはビン９δ１エピトープに結合する薬剤である。いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ１－０５、δ１－０８、δ１－１８、δ１－２２、δ１－２３、δ１－２６、δ１－３５、δ１－３７、δ１－３９、δ１－１１３、δ１－１４３、δ１－１４９、δ１－１５５、δ１－１８２、δ１－１８３、δ１－１９１、δ１－１９２、δ１－１９５、δ１－１９７、δ１－１９９、δ１－２０１、δ１－２０３、δ１－２３９、δ１－２５３、δ１－２５７、δ１－２７８、δ１－２８２、及びδ１－２８５からなる群から選択される抗体と同じ、もしくは本質的に同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する薬剤から選択される。

【0014】

いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ１－０５、δ１－０８、δ１－１８、δ１－２２、δ１－２３、δ１－２６、δ１－３５、δ１－３７、δ１－３９、δ１－１１３、δ１－１４３、δ１－１４９、δ１－１５５、δ１－１８２、δ１－１８３、δ１－１９１、δ１－１９２、δ１－１９５、δ１－１９７、δ１－１９９、δ１－２０１、δ１－２０３、δ１－２３９、δ１－２５３、δ１－２５７、δ１－２７８、δ１－２８２、及びδ１－２８５からなる群から選択される抗体である。いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ１Ｔ細胞及びδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる。いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ１、δ３、δ４、及びδ５γδＴ細胞を選択的に増殖させる。

【0015】

いくつかの実施形態では、方法は、対象に、有効量の、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、１５Ｄ及びＢ６から選択される抗体と同じエピトープに結合する薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、１５Ｄ及びＢ６から選択される抗体と同じエピトープに結合する薬剤は、１５ＤもしくはＢ６のＣＤＲを含み、及び／またはヒト化１５Ｄ及びＢ６である。いくつかの実施形態では、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、抗体１５Ｄ及び／またはＢ６とは異なるエピトープに結合する薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ２可変領域を含むエピトープに特異的に結合する薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ２可変領域のＧ３５に突然変異を含む突然変異体δ２ＴＣＲポリペプチドに対する低減された結合を有する。いくつかの実施形態では、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、ヒトδ２ＴＣＲのδ２ＴＣＲビン１δ２エピトープ、ビン２δ２エピトープ、ビン３δ２エピトープ、またはビン４δ２エピトープに結合する。

【0016】

いくつかの実施形態では、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ２－１４、δ２－１７、δ２－２２、δ２－３０、δ２－３１、δ２－３２、δ２－３３、δ２－３５、δ２－３６、及びδ２－３７からなる群から選択される抗体と同じ、もしくは本質的に同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する薬剤である。いくつかの実施形態では、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ２－１４、δ２－１７、δ２－２２、δ２－３０、δ２－３１、δ２－３２、δ２－３３、δ２－３５、δ２－３６、及びδ２－３７からなる群から選択される抗体である。

【0017】

いくつかの実施形態では、方法は、対象に、有効量の、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ３－０８、δ３－２０、δ３－２３、δ３－３１、δ３－４２、δ３－４７、及びδ３－５８からなる群から選択される抗体と同じ、もしくは本質的に同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ３－０８、δ３－２３、δ３－３１、δ３－４２、δ３－４７、及びδ３－５８からなる群から選択される抗体と同じ、もしくは本質的に同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する薬剤から選択される。いくつかの実施形態では、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ３－２３、δ３－３１、δ３－４２、δ３－４７、及びδ３－５８からなる群から選択される抗体と同じ、もしくは本質的に同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する薬剤から選択される。

【0018】

いくつかの実施形態では、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ３－０８、δ３－２０、δ３－２３、δ３－３１、δ３－４２、δ３－４７、及びδ３－５８からなる群から選択される抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ３－０８、δ３－２３、δ３－３１、δ３－４２、δ３－４７、及びδ３－５８からなる群から選択される抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤は、δ３－２３、δ３－３１、δ３－４２、δ３－４７、及びδ３－５８からなる群から選択される抗体またはその断片である。

【0019】

一般に、薬剤は、ヒトもしくはヒト化薬剤、例えば、ヒト抗体もしくはその断片、またはヒト化抗体もしくはその断片である。いくつかの事例では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、多価であり、好ましくは、多価薬剤は、同じ抗原に特異的に結合する少なくとも２つ以上の抗原結合部位を含むか、または多価薬剤は、同じ抗原の同じエピトープに特異的に結合する少なくとも２つ以上の抗原結合部位を含む。いくつかの事例では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、三価、四価、もしくは五価であるか、または少なくとも三価、四価、もしくは五価である。いくつかの事例では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、三価、四価、もしくは五価であるか、または少なくとも三価、四価、もしくは五価であり、かつ単一特異性である。

【0020】

いくつかの実施形態では、方法は、患者に操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の集団を投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与する前に、操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の集団を投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与した後に、操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の集団を投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象にδ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することと、対象から生体内増殖γδＴ細胞を含む試料を単離することと、任意に１つ以上の単離されたγδＴ細胞を操作することと、任意に１つ以上の単離（例えば、及び操作型）γδＴ細胞を生体外で増殖させることと、次いで、単離、操作型、及び／または非操作型、及び／または生体外増殖γδＴ細胞の集団を同じまたは異なる対象に投与することと、を含む。いくつかの実施形態では、操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団は、対象に対して自家性の細胞の集団である。

【0021】

いくつかの実施形態では、操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団は、対象に対して同種異系の細胞の集団である。いくつかの実施形態では、操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団は、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、８０％、もしくは９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約９０％）のδ１γδＴ細胞を含む集団であり、方法は、γδＴ細胞を投与することと、δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を順次または同時に投与することと、を含む。

【0022】

いくつかの実施形態では、操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団は、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、８０％、もしくは９０％、約６０％～約８０％、または約６０％～約９０％）のδ２γδＴ細胞を含む集団であり、方法は、γδＴ細胞を投与することと、δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を順次または同時に投与することと、を含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の投与集団は、少なくとも１０％（例えば、少なくとも１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、もしくは９０％、約１０％～約８０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、または約２０％～約６０％）のδ３γδＴ細胞を含む集団であり、方法は、γδＴ細胞を投与することと、δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を順次または同時に投与することと、を含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、方法は、アミノホスホネート（例えば、アミノビスホスホネート）またはプレニルホスホネートを投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ゾレドロネート、パミドロン酸、アレンドロン酸、リセドロン酸、イバンドロン酸、及びインカドロン酸、もしくはそれらの塩、ならびに／またはそれらの水和物からなる群から選択される、アミノホスホネートを投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、及び／またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を繰り返し投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象における投与されたγδＴ細胞の集団を増殖または維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象における内因性γδＴ細胞の集団を増殖または維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象における内因性γδＴ細胞の集団を活性化、増殖、または維持することと、対象から内因性γδＴ細胞を含有する試料を単離することと、単離された試料のγδＴ細胞を（例えば、精製、生体外増殖、及び／または操作によって）操作することと、操作されたγδＴ細胞を同じまたは異なる対象に投与することと、次いで１つ以上の選択的生体内活性化剤を投与することによって、同じまたは異なる対象における投与されたγδＴ細胞の集団を活性化、増殖、または維持することと、を含む。

【0025】

いくつかの実施形態では、方法は、対象における内因性及び／または投与されたγδＴ細胞の集団を、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、及び／またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与されていない対象におけるγδＴ細胞の量に対して、検出可能な量（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、２倍、１０倍、もしくは５０倍、または約１０％～約２０％、約１０％～約５０％、約１０％～約７５％、約１０％～約２倍、約１０％～約１０倍、約２倍～約１０倍、または約１０倍～約５０倍）で増殖させることを含む。いくつかの実施形態では、方法は、対象における内因性及び／または投与されたγδＴ細胞のより大きな集団を、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、及び／またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与されていない対象におけるγδＴ細胞の数に対して、検出可能な量（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、２倍、１０倍、もしくは５０倍、または約１０％～約２０％、約１０％～約５０％、約１０％～約７５％、約１０％～約２倍、約１０％～約１０倍、約２倍～約１０倍、または約１０倍～約５０倍）で維持することを含む。

【0026】

いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、多価であり、好ましくは、多価薬剤は、同じ抗原に特異的に結合する少なくとも２つの抗原結合部位を含むか、または多価薬剤は、同じ抗原の同じエピトープに特異的に結合する少なくとも２つの抗原結合部位を含む。いくつかの実施形態では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、多価であり、好ましくは、多価薬剤は、同じ抗原に特異的に結合する少なくとも３つの抗原結合部位を含むか、または多価薬剤は、同じ抗原の同じエピトープに特異的に結合する少なくとも３つの抗原結合部位を含む。いくつかの事例では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、二価、三価、四価、もしくは五価であるか、または少なくとも二価、三価、四価、もしくは五価である。いくつかの事例では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、三価、四価、もしくは五価であるか、または少なくとも三価、四価、もしくは五価である。いくつかの事例では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、四価であるか、または少なくとも四価である。

【0027】

いくつかの実施形態では、方法は、サイトカインを対象に同時または順次に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、操作型γδＴ細胞を対象に投与することを含み、操作型γδＴ細胞は、分泌サイトカインをコードする導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、一般的なガンマ鎖サイトカイン、またはＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－４からなる群から選択されるサイトカインであり、好ましくはサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－４である。いくつかの実施形態では、方法は、リンパ球枯渇プロトコルを対象に、γδＴ細胞を投与する前に投与することを含む。

【0028】

第２の態様では、本発明は、それを必要とする対象におけるがん、感染性疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患を治療する方法を提供し、方法は、前述の生体内増殖方法のうちのいずれか１つを行うこと、及び／またはそれを必要とする対象におけるγδＴ細胞の生体内増殖のために本明細書に記載のγδＴ細胞活性化剤のうちのいずれか１つ以上を使用することを含む。

【0029】

第３の態様では、本発明は、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる薬剤の、それを必要とする対象におけるγδＴ細胞の生体内増殖のための医薬品の製造における使用を提供する。いくつかの実施形態では、対象におけるγδＴ細胞の生体内増殖は、対象におけるがん、感染性疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患を治療することを含む。

【0030】

参照による組込み
本明細書において言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、個々の刊行物、特許及び特許出願を参照により援用することを具体的かつ個別に示したのと同じ程度に、参照により本明細書に援用される。

【0031】

本発明の新規な特徴は別記の特許請求の範囲において詳しく明示されている。本発明の特徴及び利点についてのよりよい理解は、本発明の原理が利用されている例示的実施形態を示す以下の詳細な説明、及び添付の図面（さらに、本明細書中の「図（ｆｉｇｕｒｅ）」及び「図（Ｆｉｇ．）」）を参照することによって得られよう。

【図面の簡単な説明】

【0032】

【図1】δ１特異的ＭＡｂの重鎖のフレームワーク及び相補性決定領域のアミノ酸配列を描写する。

【図2】図１に記載のδ１特異的ＭＡｂの軽鎖のフレームワーク及び相補性決定領域のアミノ酸配列を描写する。

【図3】δ２特異的ＭＡｂの重鎖のフレームワーク及び相補性決定領域のアミノ酸配列を描写する。

【図4】図３に記載のδ２特異的ＭＡｂの軽鎖のフレームワーク及び相補性決定領域のアミノ酸配列を描写する。

【図5】δ３特異的抗γδＴＣＲ抗体の可変領域配列を示す。重鎖可変領域の上の配列。軽鎖可変領域の下の配列。

【図6】ヒトγδＴ細胞をマウスに養子移植した後、マウス血液、骨髄、肺、及び脾臓で検出された総ヒトＣＤ４５＋細胞の数に対するγδＴ細胞サブタイプ特異的活性化剤の生体内効果を示す。未処置マウスは、活性化剤で処置されなかった。処置済みマウスは、示されるように、３または１０μｇの活性化剤で処置された。Ｄ１－３５は、本明細書に記載のδ１γδＴ細胞特異的抗体δ１－３５を指す。いくつかの動物はまた、細胞の投与の４～５時間前に、非特異的マウスＩｇＧ画分の腹腔内注射を受けて、占有されていないＦｃ受容体を飽和させた。

【図7A】３及び１０μｇ用量レベルの両方での細胞子孫における色素希釈に起因して、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔトレースが減少したＭＦＩに向かって左にシフトすることによって証明されるように、活性化剤での処置の５日後までに、血液、骨髄、及び脾臓中の養子移入されたヒトγδＴ細胞の増殖を示す。

【図7B】３及び１０μｇ用量レベルの両方での細胞子孫における色素希釈に起因して、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔトレースが減少したＭＦＩに向かって左にシフトすることによって証明されるように、活性化剤での処置の５日後までに、血液、骨髄、及び脾臓中の養子移入されたヒトγδＴ細胞の増殖を示す。

【図8】ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔによって検出されるように、示される活性化抗体Ｄ１－３５及びＤ１－０８（δ１－０８）の生体内活性化効果を示す。１行目、マウスは活性化剤で処置されなかった。２行目、マウスは活性化剤Ｄ１－３５で処置された。３行目、マウスは活性化剤で処置され、非特異的マウスＩｇＧで処置されなかった。４行目、マウスはｈＩｇＧ４アイソタイプバージョンのＤ１－３５活性化剤で処置された。５行目、マウスは活性化剤Ｄ１－０８で処置された。

【図9A】ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ色素希釈によって検出される、それぞれＤ２－３７（δ２－３７）及びＤ３－２３（δ３－２３）活性化抗体で処置された動物の骨髄及び脾臓で検出されたＶδ２及びＶδ３細胞の生体内増殖を示す。

【図9B】ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ色素希釈によって検出される、それぞれＤ２－３７（δ２－３７）及びＤ３－２３（δ３－２３）活性化抗体で処置された動物の骨髄及び脾臓で検出されたＶδ２及びＶδ３細胞の生体内増殖を示す。

【発明を実施するための形態】

【0033】

本明細書には本発明の様々な実施形態が示され記載されているが、当業者であれば、そのような実施形態が単に例として提供されているに過ぎないことは明らかであろう。当業者であれば、本発明から逸脱することなく多くの変型、変更及び代用を着想し得る。本発明の実施形態の様々な代替策を採用してもよいことは理解されるべきである。

【0034】

定義
特に定義されない限り、本明細書中で使用する全ての科学技術用語は、本明細書に記載の本発明が属する分野において通常の技量を有する者に普通に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書を解説する目的のために以下の定義を適用することとし、適当と認められる場合には、単数形で使用される用語に複数形も含めることとし、その逆もまた同様である。明示されている何らかの定義が、参照により本明細書に援用される何らかの文献と矛盾する場合、以下に明示する定義が優先されることとする。

【0035】

本明細書中で使用する「γδＴ細胞（ガンマデルタＴ細胞）」という用語は、１つのγ鎖と１つのδ鎖とからなる独特のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であるγδＴＣＲを表面に発現するＴ細胞のサブセットを指す。「γδＴ細胞」という用語は、具体的には、限定することなくＶδ１、Ｖδ２、及びＶδ３γδＴ細胞、ならびにナイーブ、エフェクターメモリー、セントラルメモリー、及び終末分化γδＴ細胞を含めた、γδＴ細胞及びそれらの組み合わせの全てのサブセットを含む。さらに例を挙げると、「γδＴ細胞」という用語は、Ｖδ４、Ｖδ５、Ｖδ７及びＶδ８γδＴ細胞、ならびにＶγ２、Ｖγ３、Ｖγ５、Ｖγ８、Ｖγ９、Ｖγ１０、Ｖγ１１γδＴ細胞を含む。

【0036】

本明細書中で使用される場合、「Ｔリンパ球」または「Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ３を発現しており（ＣＤ３＋）かつＴ細胞受容体を発現している（ＴＣＲ＋）免疫細胞を指す。Ｔ細胞は、細胞性免疫において中心的な役割を果たす。

【0037】

本明細書中で使用される場合、「ＴＣＲ」または「Ｔ細胞受容体」という用語は、アルファ－ベータまたはガンマ－デルタ受容体を形成している異種二量体型の細胞表面シグナル伝達タンパク質を指す。αβＴＣＲが、ＭＨＣ分子によって提示される抗原を認識するのに対して、γδＴＣＲは、ＭＨＣ提示とは無関係に抗原を認識する。

【0038】

「ＭＨＣ」（主要組織適合性複合体）という用語は、細胞表面抗原提示タンパク質をコードする遺伝子のサブセットを指す。ヒトにおいてはこれらの遺伝子はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）遺伝子と呼ばれる。本明細書において、略語ＭＨＣまたはＨＬＡは互換的に使用される。

【0039】

本明細書中で使用される場合、「末梢血リンパ球（複数可）」または「ＰＢＬ（複数可）」という用語は、最も広い意味で使用され、幅広い分化段階及び機能的段階のＴ細胞及びＢ細胞、形質細胞、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、好塩基球、好酸球などを含めた白血球細胞（複数可）を指す。末梢血中のＴリンパ球の範囲は約２０～８０％である。

【0040】

本明細書中で使用される場合、「細胞集団」という用語は、適切な供給源から（大抵、哺乳動物から）直接単離によって得られた多くの細胞を指す。単離された細胞集団は、その後、試験管内で培養され得る。当業者であれば、本発明と共に用いられる、細胞集団を単離及び培養する様々な方法、ならびに本発明で用いられるのに適する、細胞集団中の細胞の様々な数を熟知していよう。細胞集団は、種々の培養技術及び／または特定の細胞型の陰性もしくは陽性選択によって、均質性、実質的な均質性、または１つ以上の細胞型（例えば、αβＴ細胞）を枯渇するように精製され得る。細胞集団は、例えば、末梢血試料、臍帯血試料、腫瘍、幹細胞前駆体、腫瘍生検、組織、リンパ、皮膚、腫瘍浸潤リンパ球の、もしくはこれを含有する試料、または外部環境に直接接触している対象の上皮部位に由来するか、あるいは幹前駆細胞に由来する、混合異種細胞集団であり得る。あるいは、混合細胞集団は、末梢血試料、臍帯血試料、腫瘍、幹細胞前駆体、腫瘍生検、組織、リンパ、皮膚、腫瘍浸潤リンパ球の、もしくはこれを含有する試料から、または外部環境に直接接触している対象の上皮部位から確立される、哺乳動物細胞の試験管内培養物に由来するか、または幹前駆細胞に由来し得る。

【0041】

「濃縮」細胞集団または製剤は、出発混合細胞集団に由来する、含有している特定細胞種の百分率が出発集団中のその細胞種の百分率よりも高い細胞集団を指す。例えば、出発混合細胞集団を特定γδＴ細胞集団に関して濃縮することができる。一実施形態では、濃縮γδＴ細胞集団は、含有しているδ１細胞の百分率が出発集団中の細胞種の百分率よりも高い。別の例を挙げると、濃縮γδＴ細胞集団は、含有しているδ１細胞の百分率及びδ３細胞の百分率が出発集団中のそれぞれの細胞種の百分率よりも高いものであり得る。さらに別の例を挙げると、濃縮γδＴ細胞集団は、含有しているδ１細胞の百分率及びδ４細胞の百分率が出発集団中のそれぞれの細胞種の百分率よりも高いものであり得る。別の例を挙げると、濃縮γδＴ細胞集団は、含有しているδ１細胞の百分率及びδ５細胞の百分率が出発集団中のそれぞれの細胞種の百分率よりも高いものであり得る。さらに別の例を挙げると、濃縮γδＴ細胞集団は、含有しているδ１Ｔ細胞、δ３Ｔ細胞、δ４Ｔ細胞及びδ５Ｔ細胞の百分率が出発集団中のそれぞれの細胞種の各々の百分率よりも高いものであり得る。別の実施形態では、濃縮γδＴ細胞集団は、含有しているδ２細胞の百分率が出発集団中のその細胞種の百分率よりも高い。別の実施形態では、濃縮γδＴ細胞集団は、含有しているδ３細胞の百分率が出発集団中のその細胞種の百分率よりも高い。さらに別の実施形態では、濃縮γδＴ細胞集団は、含有しているδ１細胞及びδ２細胞の百分率が両方とも出発集団中のそれぞれの細胞種の百分率よりも高い。さらに別の実施形態では、濃縮γδＴ細胞集団は、含有しているδ１細胞、δ２細胞、及びδ３細胞の百分率が出発集団中のそれぞれの細胞種の百分率よりも高い。全ての実施形態において、濃縮γδＴ細胞集団は、αβＴ細胞集団をより低い百分率で含有する。

【0042】

本明細書中で使用する「増殖済み」とは、濃縮済み製剤中の所望の細胞種すなわち標的細胞種（例えば、δ１及び／またはδ２Ｔ細胞及び／またはδ３Ｔ細胞）の数が、初期細胞集団中すなわち出発細胞集団中での数よりも大きいことを意味する。

【0043】

「選択的に増殖させる」とは、標的細胞種（例えば、δ１、δ２、またはδ３Ｔ細胞）を他の非標的細胞種、例えば、αβＴ細胞もしくはＮＫ細胞、またはγδＴ細胞の未標的化亜集団よりも優先的に増殖させることを意味する。特定の実施形態では、本発明の活性化剤は、αβＴ細胞の増殖を伴わずに、またはαβＴ細胞の顕著な増殖を伴わずに、例えば、操作型または非操作型δ１、δ２、及び／またはδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる。特定の実施形態では、本発明の活性化剤は、δ２Ｔ細胞の増殖を伴わずに、またはδ２Ｔ細胞の顕著な増殖を伴わずに、例えば、操作型または非操作型δ１Ｔ細胞を選択的に増殖させる。他の実施形態では、本発明の活性化剤は、δ１Ｔ細胞の増殖を伴わずに、またはδ１Ｔ細胞の顕著な増殖を伴わずに、例えば、操作型または非操作型δ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる。特定の実施形態では、本発明の活性化剤は、δ２Ｔ細胞の増殖を伴わずに、またはδ２Ｔ細胞の顕著な増殖を伴わずに、δ１Ｔ細胞の増殖を伴わずに、またはδ１Ｔ細胞の顕著な増殖を伴わずに、例えば、操作型または非操作型δ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる。特定の実施形態では、本発明の活性化剤は、δ２Ｔ細胞の増殖を伴わずに、またはδ２Ｔ細胞の顕著な増殖を伴わずに、例えば操作型または非操作型の、δ１及びδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる。特定の実施形態では、本発明の活性化剤は、δ２Ｔ細胞の増殖を伴わずに、またはδ２Ｔ細胞の顕著な増殖を伴わずに、例えば操作型または非操作型の、δ１及びδ４Ｔ細胞を選択的に増殖させる。特定の実施形態では、本発明の活性化剤は、δ２Ｔ細胞の増殖を伴わずに、またはδ２Ｔ細胞の顕著な増殖を伴わずに、例えば操作型または非操作型の、δ１及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させる。特定の実施形態では、本発明の活性化剤は、δ２Ｔ細胞の増殖を伴わずに、またはδ２Ｔ細胞の顕著な増殖を伴わずに、例えば操作型または非操作型の、δ１、δ３、δ４及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させる。これとの関連において、「顕著な増殖を伴わずに」という用語は、優先的に増殖した細胞集団が基準細胞集団よりも少なくとも１０倍、好ましくは１００倍、より好ましくは１，０００倍多く増殖させられていることを意味する。

【0044】

本明細書中で使用する「混合物」という用語は、混合異種細胞集団に由来する２つ以上の単離された濃縮細胞集団の組み合わせを指す。特定の実施形態によれば、本発明の細胞集団は、単離されたγδＴ細胞集団である。特定の実施形態によれば、本発明の細胞集団は、生体外で増殖され、及び／または生体内で提供され、対象に投与され、それにより、生体内γδＴ細胞集団になる。特定の実施形態によれば、本発明の細胞集団は、γδＴ細胞集団を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することによって、生体内で増殖される。

【0045】

細胞集団に対して適用される「単離された」という用語は、生体内または試験管内で上記細胞集団に関連付けられる１つ以上の細胞集団を実質的に含まない、ヒトまたは動物の体から単離された細胞集団を指す。

【0046】

細胞集団との関連において、「接触させること」という用語は、本明細書中で使用される場合、単離された細胞集団を試薬、例えば、ビーズか細胞かのどちらかに繋げられることができる抗体、サイトカイン、リガンド、マイトジェンまたは共刺激分子と共にインキュベートすることを指す。抗体またはサイトカインは、可溶性形態であってもよいし、または固定されていてもよい。一実施形態では、固定されている抗体またはサイトカインは、ビーズまたはプレートに緊密に結合または共有結合している。一実施形態では、抗体はＦｃ被覆ウェルに固定されている。望ましい実施形態では、接触は、生体内で起こる。

【0047】

本明細書中で使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子及び、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的活性部分、すなわち抗原と特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含有する分子を指す。「特異的に結合する」または「免疫反応する」または「指向する」とは、抗体が、所望の抗原の１つ以上の抗原決定基とは反応するが、他のポリペプチドとは反応しないかまたははるかに低い親和性（ＫＤ＞１０^－６モル）で結合する、ということを意味する。抗体としては、限定されないが例えば、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ｓｄＡｂ（重鎖または軽鎖単一ドメイン抗体）、一本鎖のＦ_ａｂ、Ｆ_ａｂ’及びＦ_{（ａｂ’）２}断片、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、ならびにＦ_ａｂ発現ライブラリーが挙げられる。

【0048】

対象におけるγδＴ細胞の生体内集団を増殖または維持する生体内方法の文脈における「有効量」とは、対象におけるγδＴ細胞の生体内集団の増殖または維持の確かめられる増加をもたらす用量を指す。一例として、有効用量は、投与されたγδＴ細胞の標的集団を検出可能な量（例えば、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも２倍、または約１％～約１０％、または約１０％～約２倍）で選択的に増殖させ得る。別の例として、有効用量は、内因性生体内γδＴ細胞の標的集団を検出可能な量（例えば、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも２倍、または約１％～約１０％、または約１０％～約２倍）で選択的に増殖させ得る。別の例として、有効用量は、γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与されない対照対象と比較して、対象中または対象の組織（例えば、腫瘍組織）中のより大きな数の生存標的γδＴ細胞を維持し得る。

【0049】

それを必要とする対象におけるがん、感染性疾患、炎症性疾患、または自己免疫疾患を治療する生体内方法の文脈で本明細書中で使用する「有効量」という用語は、治療される疾患、障害、または状態の症状のうちの１つ以上を治癒させるか、もしくは少なくとも部分的に停止させるか、またはある程度緩和するために十分な、疾患、状態、または障害を既に患っている対象、例えば、ヒト患者に投与されるγδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を含有する組成物の量を指す。そのような組成物の有効性は、限定されないが、疾患、障害、または状態の重症度及び経過、以前の療法、患者の健康状態及び薬物への応答、ならびに処置する医師の判断を含む、条件に依存する。単なる例を示すと、治療的有効量は、慣習的な実験、限定されないが例えば、用量漸増治験によって決定され得る。

【0050】

本明細書中で使用する「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」という用語は、人工Ｔ細胞受容体、Ｔボディ、一本鎖免疫受容体、キメラＴ細胞受容体、またはキメラ免疫受容体を指し得、例えば、特定の免疫エフェクター細胞に人工的な特異性を融合させる操作型受容体を包含し得る。ＣＡＲは、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞に付与してそれによって例えば養子細胞療法用の多数の特異的Ｔ細胞を生じさせるために採用され得る。具体的な実施形態において、ＣＡＲは、細胞の特異性を例えば腫瘍関連抗原へ差し向ける。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（標的指向性部分と標的腫瘍細胞などの標的細胞との係合に際してＴ細胞を活性化させる）細胞内活性化ドメインと、膜貫通ドメインと、疾患または障害関連抗原結合領域、例えば腫瘍抗原結合領域を含んでおり長さが様々であり得る細胞外ドメインとを含む。詳しい態様において、ＣＡＲは、ＣＤ３－ゼータ膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインと融合した、モノクローナル抗体に由来する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の融合体を含む。他のＣＡＲ設計の特異性は、受容体（例えばペプチド）のリガンド、またはデクチンなどのパターン認識受容体に由来し得る。特定の事例では、抗原認識ドメインの間隔を調整して活性化誘導細胞死を低減することができる。特定の事例では、ＣＡＲは、追加の共刺激シグナル伝達のためのドメイン、例えばＣＤ３－ゼータ、ＦｃＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＤＡＰ１０／１２、及び／またはＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＴＬＲなどを含む。いくつかの事例では、共刺激分子、造影用（例えばポジトロン断層撮影用）のレポーター遺伝子、プロドラッグの添加によってＴ細胞を条件的に取り除く遺伝子産物、帰巣受容体、ケモカイン、ケモカイン受容体、サイトカイン及びサイトカイン受容体を含めた分子をＣＡＲと一緒に共発現させることができる。

【0051】

基本的な抗体構造単位は、四量体を含むことが知られている。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一対からなり、各対は１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）と１つの「重鎖」（約５０～７０ｋＤａ）とを有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識を主として担う、約１００～１１０またはそれより多いアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主として担う定常領域を画定している。一般に、ヒトから得られた抗体分子は、クラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤのいずれかに関係しており、それらは分子中に存在する重鎖の性質が互いに異なっている。特定のクラスは、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２などといったサブクラスも有する。さらに、ヒトにおいては、軽鎖はカッパ鎖またはラムダ鎖であり得る。

【0052】

「Ｆａｂ」という用語は、Ｌ鎖全体（Ｖ_Ｌ及びＣ_Ｌ）に加えてＨ鎖の可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）と１本の重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）とから構成される抗体断片を指す。完全抗体のパパイン消化を用いて２つのＦａｂ断片を生じさせることができ、その各々は、１つの抗原結合部位を含有する。典型的には、パパイン消化によって生成するＦａｂのＬ鎖とＨ鎖断片は鎖間ジスルフィド結合によって繋がっている。

【0053】

「Ｆｃ」という用語は、スルフィド結合によってまとめ合わされた、両Ｈ鎖のカルボキシ末端部分（ＣＨ２及びＣＨ３）とジヒンジ領域の一部とを含む、抗体断片を指す。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決まり、この領域は、特定の種類の細胞上に見受けられるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される部分でもある。１つのＦｃ断片は、完全抗体のパパイン消化によって得られる。

【0054】

「Ｆ（ａｂ’）_２」という用語は、完全抗体のペプシン消化によって生成する抗体断片を指す。Ｆ（ａｂ’）_２断片は、ジスルフィド結合によってまとめ合わされた、２つのＦａｂ断片とヒンジ領域の一部とを含有する。Ｆ（ａｂ’）_２断片は、二価の抗原結合活性を有し、抗原を架橋することができる。

【0055】

Ｆａｂ’という用語は、Ｆ（ａｂ’）_２断片の還元の生成物である抗体断片を指す。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含んでいるＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に少数の追加残基を有する点においてＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有しているＦａｂ’に対する本明細書中での呼称である。

【0056】

「Ｆｖ」という用語は、緊密に非共有結合的に会合している１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとの二量体から構成される抗体断片を指す。これらの２つのドメインの折りたたみによって、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与しかつ抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つずつのループ）が生まれる。しかしながら、一本の可変ドメイン（または抗原に対して特異的であるＣＤＲを３つしか含んでいないＦｖの半分）であっても、完全な結合部位よりも親和性が大抵低いものの、抗原を認識して抗原に結合する能力は有している。

【0057】

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」という用語は、１本のポリペプチド鎖として連結されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片を指す。典型的には、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、抗原結合のための所望の構造をｓｃＦｖが形成することを可能にするものであるポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）、及びＭａｌｍｂｏｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８３：７－１３，１９９５を参照されたい。

【0058】

「直鎖状抗体」という表現は、１対の抗原結合領域を形成する１対のタンデムＶ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１セグメント（Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１－Ｖ_Ｈ－Ｃ_Ｈ１）を含むポリペプチドを指して使用される。直鎖状抗体は、二重特異性または単一特異性であり得、例えば、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）において記載がなされている。

【0059】

「可変」という用語は、可変ドメインの特定部分が、抗体間での配列の違いを広範囲に有しており、各特定抗体のその特定抗原に対する結合性及び特異性において使用される、という事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって一様に分布してはいない。それは、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの両方において、超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。より高度に保存されている可変ドメインの部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、概ねベータシート配置を採っている４つのＦＲを含み、それらは、ベータシート構造を連結しかついくつかの事例においてはベータシート構造の一部を形成するループを形成している３つの超可変領域によって連結されている。各鎖の中の超可変領域は、ＦＲによってごく近傍にまとめ合わされており、他方の鎖からの超可変領域と共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．を参照のこと）。定常ドメインは、抗体を抗原と結合させるのに直接関与しないが、様々なエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）における抗体の関与を呈する。

【0060】

「抗原結合部位」または「結合部分」という用語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分を指す。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖及び軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端の可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。重軽鎖のＶ領域内の差異の大きい３つの範囲は、「超可変領域」と呼ばれており、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として知られる両脇のより保存された範囲の間に挟まれている。このように、「ＦＲ」という用語は、免疫グロブリンの超可変領域同士の間でそれらに隣接して天然に見受けられるアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域と、重鎖の３つの超可変領域は、互いに関して三次元空間に配置されて抗原結合表面を形成している。抗原結合表面は、結合した抗原の三次元表面に対して相補的であり、重軽鎖の各々の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７ ａｎｄ １９９１））、またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７），Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３（１９８９）の定義による。

【0061】

「超可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」という用語は、配列が超可変性であり、かつ／または構造的に画定されたループを形成する、抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つと、ＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つとの、６つのＨＶＲを含む。天然抗体においては、６つのＨＶＲの中ではＨ３及びＬ３が最大の多様性を呈し、特にＨ３は、抗体に微妙な特異性を付与する独特の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：３７－４５（２０００）、Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｗｕ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１－２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３）を参照されたい。実際、重鎖のみから構成される天然に存在するラクダ抗体は軽鎖の非存在下で機能的かつ安定である。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）、Ｓｈｅｒｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３－７３６（１９９６）を参照されたい。

【0062】

「フレームワーク領域」（ＦＲ）は、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。各可変ドメインは、典型的には、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４として同定される４つのＦＲを有する。ＣＤＲがＫａｂａｔによって定義される場合、軽鎖ＦＲ残基は、残基約１～２３（ＬＣＦＲ１）、３５～４９（ＬＣＦＲ２）、５７～８８（ＬＣＦＲ３）及び９８～１０７（ＬＣＦＲ４）のところに位置しており、重鎖ＦＲ残基は、重鎖残基の残基約１～３０（ＨＣＦＲ１）、３６～４９（ＨＣＦＲ２）、６６～９４（ＨＣＦＲ３）、及び１０３～１１３（ＨＣＦＲ４）のところに位置している。ＣＤＲが超可変ループからのアミノ酸残基を含む場合、軽鎖ＦＲ残基は、軽鎖の残基約１～２５（ＬＣＦＲ１）、３３～４９（ＬＣＦＲ２）、５３～９０（ＬＣＦＲ３）及び９７～１０７（ＬＣＦＲ４）のところに位置しており、重鎖ＦＲ残基は、重鎖残基の残基約１～２５（ＨＣＦＲ１）、３３～５２（ＨＣＦＲ２）、５６～９５（ＨＣＦＲ３）、及び１０２～１１３（ＨＣＦＲ４）のところに位置している。ある場合には、ＣＤＲがＫａｂａｔによって定義されるＣＤＲと超可変ループのそれとの両方からのアミノ酸を含む場合、ＦＲ残基はそれに応じて調節されるであろう。例えば、ＣＤＲＨ１がアミノ酸Ｈ２６～Ｈ３５を含む場合、重鎖ＦＲ１残基は位置１～２５にあり、ＦＲ２残基は位置３６～４９にある。

【0063】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンのＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択肢のうち最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。通常、ヒト免疫グロブリンのＶＬまたはＶＨ配列の選択肢は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。通常、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔにおけるようなサブグループである。ある場合では、ＶＬについて、サブグループは、ＫａｂａｔにおけるようなサブグループカッパＩである。ある場合では、ＶＨについて、サブグループは、ＫａｂａｔにおけるようなサブグループＩＩＩである。

【0064】

本明細書に記載の抗体は、ヒト化されることができる。非ヒト（例えば、齧歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の抗体特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置き換えられる、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある場合では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体性能をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むであろう。ヒト化抗体はまた、任意に免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含むであろう。さらなる詳細について、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。以下の総説論文及びその中で引用される参考文献も参照されたい：Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１：１０５－１１５（１９９８）、Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，２３：１０３５－１０３８（１９９５）、Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，５：４２８－４３３（１９９４）。

【0065】

「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものであり、かつ／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製するための技法のいずれかを使用して作製されたものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特異的に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。ヒトモノクローナル抗体の調製には、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）に記載される方法も利用可能である。またｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８－７４（２００１）を参照されたい。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、免疫化異種マウスに抗原を投与することによって調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体に関して、例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）も参照されたい。

【0066】

例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片などのγδＴ細胞の活性化に有用な本明細書に記載の抗原結合部分は、多価であり得る。例えば、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、二価の抗原結合活性を有し、抗原を架橋することができる。同様に、抗原結合部分、例えば、ＩｇＧまたは他のカノニカル抗体アーキテクチャは、二価構造を有し得る。いくつかの事例では、抗原結合部分は、二価よりも大きい。いくつかの事例では、抗原結合部分は、三価抗体などの三価部分であり得る。いくつかの事例では、抗原結合部分は、四価抗体などの四価、例えば、ＩｇＡ抗体であり得る。いくつかの事例では、抗原結合部分は、１０の価を有することができる。例えば、抗原結合部分は、ＩｇＭ抗体であり得る。本明細書に記載の好ましい多価抗原結合部分、例えば、抗体またはその断片は、典型的には、各抗原結合部位において、同じ抗原、ある場合では同じ抗原の同じエピトープに結合する。いくつかの事例では、多価抗原結合部分は、多価抗原結合部分の１つの他の抗原結合部位とは異なる少なくとも１つの抗原結合部位を含む。

【0067】

本明細書中で使用する場合、「Ｋｄ」または「Ｋｄ値」は、表面プラズモン共鳴アッセイを用いて、例えばＢＩＡｃｏｒｅ．ＴＭ．－２０００またはＢＩＡｃｏｒｅ．ＴＭ．－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用して、約１０応答ユニット（ＲＵ）の抗原または抗体が固定されたＣＭ５チップによって２５℃で測定される、解離定数を指す。二価抗体または他の多価抗体の場合には、アビディティーによって誘導される解離定数の測定結果との干渉を回避するために抗体を固定するのが典型的である。さらなる詳細については例えばＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照されたい。

【0068】

結合親和性を指すために本明細書で使用される場合、「～以上」とは、分子とその結合パートナーとの間のより強い結合を指す。本明細書で使用される場合、「～以上」とは、より小さい数値Ｋ_Ｄ値によって表される、より強い結合を指す。例えば、抗体は「０．６ｎＭ以上」の抗原に対する親和性を有し、抗原に対する抗体の親和性は、≦０．６ｎＭ、すなわち、０．５９ｎＭ、０．５８ｎＭ、０．５７ｎＭなど、または０．６ｎＭ以下の任意の値である。

【0069】

「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体と特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基、脂質または炭化水素決定基を含む。エピトープ決定基は大抵、アミノ酸、脂質または糖側鎖などの分子の活性表面群から構成され、大抵、特有の三次元構造特徴及び特有の電荷特徴を有する。抗体は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）が１０^－６～１０^－１２Ｍ、またはそれ以上の範囲内である場合、抗原に特異的に結合するとされる。特異的結合は、他の非標的エピトープに結合するための解離定数と比較して、少なくとも１０倍、好ましくは１００倍、またはより好ましくは１，０００倍より厳しい解離定数（より低いＫ_Ｄ）を有する標的エピトープへの結合を指し得る。いくつかの事例では、標的エピトープは、デルタ３ＴＣＲのδ１、δ２、またはδ３鎖のエピトープである。いくつかの事例では、非標的エピトープは、αβＴＣＲである。いくつかの事例では、非標的エピトープは、異なるサブタイプのデルタ鎖である。結合の特異性は、（例えば、ＥＬＩＳＡプレート上に固定化されたＦｃ融合物として、または細胞上に発現されるように）γδ－ＴＣＲ及び／またはαβ－ＴＣＲの細胞外領域への結合の文脈で決定することができる。

【0070】

「活性化エピトープ」は、結合によって特定のγδＴ細胞集団を活性化させることができる。Ｔ細胞増殖は、Ｔ細胞活性化及び増殖を示す。

【0071】

抗体が基準抗体と「本質的に同じエピトープ」に結合するというのは、２つの抗体が同一または立体的に重複するエピトープを認識する場合である。２つのエピトープが同一または立体的に重複するエピトープと結合するか否かを判定するための最も広く用いられている迅速な方法は、標識抗原か標識抗体かのどちらかを使用する、多種多様な方式で構成され得る競合アッセイである。いくつかの実施形態では、抗原を９６ウェルプレートに固定し、標識抗体の結合を遮断する未標識抗体の能力を、放射性標識または酵素標識を使用して測定する。あるいは、標識抗体及び未標識抗体を使用する競合試験は、抗原発現細胞に対するフローサイトメトリーを用いて実施する。

【0072】

「エピトープ位置特定」は、抗体の標的抗原にある、抗体の結合部位またはエピトープを特定するプロセスである。抗体エピトープは、直鎖状エピトープまたは配座エピトープであり得る。直鎖状エピトープは、プロテイン中のアミノ酸の連続配列によって形成される。配座エピトープは、タンパク質配列中では不連続であるがタンパク質のその三次元構造体への折りたたみによって寄せ集められるアミノ酸から形成される。

【0073】

本明細書において定義されるところの「エピトープビニング」は、抗体が認識するエピトープに基づいて抗体を分類するプロセスである。より詳しくは、エピトープビニングは、抗体のエピトープ認識特性に基づいて抗体をクラスター化するため及び別個の結合特異性を有する抗体を同定するためのコンピュータプロセスと組み合わせられた、異なる抗体のエピトープ認識特性を区別するための方法及びシステムを含む。

【0074】

本発明による「薬剤」または「化合物」は、小分子、ポリペプチド、タンパク質、抗体または抗体断片を含む。小分子は、本発明との関連において、一実施形態では分子量１０００ダルトン未満、詳しくは８００ダルトン未満、より詳しくは５００ダルトン未満の化学物質を意味する。「治療剤」という用語は、生物学的活性を有する薬剤を指す。「抗がん剤」という用語は、がん細胞に対する生物学的活性を有する薬剤を指す。

【0075】

本明細書中で使用する場合、「細胞培養物」という用語は、細胞の任意の試験管内培養物を指す。この用語には、（例えば、不死化表現型を有する）連続細胞株、初代細胞培養物、有限細胞株（例えば、非形質転換細胞）、及び試験管内で維持される他の細胞集団、例えば、幹細胞、血液細胞、胚性臍帯血細胞、腫瘍細胞、形質導入細胞などが含まれる。

【0076】

「処置する」または「処置」という用語は、望ましくない生理学的変化または障害を防止するかまたは鈍化（減少）させることを目的とする、治療的処置と予防的または防止的手段との両方を指す。有益な、または所望の臨床結果としては、限定されないが例えば、検出可能であるか検出不能であるかにかかわらず、症候の軽減、疾患度合いの減弱（例えば、腫瘍の大きさ、腫瘍負荷または腫瘍分布の低減）、安定化された（つまり、悪化していない）疾患状態、疾患進行の遅延または鈍化、疾患状態の改善または緩和、及び（部分的であるか完全であるかにかかわらない）寛解が挙げられる。「処置」は、生存期間を、処置を受けていない場合に予想される生存期間よりも長くすることも意味し得る。処置を必要とする者には、症状または障害を既に有する者の他に、症状もしくは障害を有する傾向にある者または症状または障害が防止されるべき者が含まれる。

【0077】

１つ以上のさらなる治療剤「と組み合わせた」投与は、同時（同時発生的）投与及び任意の順序での連続投与を含む。

【0078】

「同一」という用語は、本明細書中で使用される場合、同じである２つ以上の配列または小配列を指す。さらに、「実質的に同一」という用語は、本明細書中で使用される場合、比較窓または比較アルゴリズムを使用するかもしくは手動での整列及び目視検査によって測定される指定領域にわたって最大の一致が得られるように比較及び整列されたときに同じである配列単位の百分率を有する２つ以上の配列を指す。単なる例を示すと、２つ以上の配列は、配列単位が特定領域にわたって約６０％同一、約６５％同一、約７０％同一、約７５％同一、約８０％同一、約８５％同一、約９０％同一または約９５％同一である場合に「実質的に同一」であり得る。そのような百分率は、２つ以上の配列の「同一性パーセント」を表現する。配列の同一性は、長さが少なくとも約７５～１００配列単位である領域、長さが少なくとも約５０配列単位である領域または、指定のない場合には配列全体にわたって、存在し得る。この定義は、試験配列の相補体にも言及するものである。さらに、単なる例を示すと、２つ以上のポリヌクレオチド配列は、核酸残基が同じである場合には同一であるが、２つ以上のポリヌクレオチド配列は、核酸残基が特定領域にわたって約６０％同一、約６５％同一、約７０％同一、約７５％同一、約８０％同一、約８５％同一、約９０％同一、または約９５％同一である場合には「実質的に同一」である。同一性は、少なくとも約７５～約１００核酸の長さの領域、約５０核酸の長さの領域、または、指定のない場合には、ポリヌクレオチド配列の配列全体にわたって、存在し得る。

【0079】

「薬学的に許容できる」という用語は、本明細書中で使用される場合、化合物の生物学的活性または特性を無効にせずしかも比較的無毒である材料、すなわち、望ましくない生物学的作用を引き起こすことまたは組成物中に含まれているいずれかの成分と有害な相互作用をすることを伴わずに個体に投与され得る、材料、限定されないが例えば、塩、担体または希釈剤を指す。

【0080】

「対象」または「患者」という用語は、本明細書中で使用される場合、脊椎動物を指す。特定の実施形態では、脊椎動物は哺乳動物である。哺乳動物としては、限定されないが例えば、ヒト、非ヒト霊長類、家畜動物（例えばウシ）、競技用動物、及びペット（例えば、ネコ、イヌ及びウマ）が挙げられる。特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。

【0081】

抗原提示細胞（ＡＰＣ）という用語は、野生型ＡＰＣまたは、操作型もしくは人工の抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を指す。ＡＰＣは、ＡＰＣの照射済み集団として提供されることができる。ＡＰＣは、固定化細胞株から提供されることができ（例えば、固定化細胞株に由来するＫ５６２または操作型ａＡＰＣ）、または、ドナーからの細胞の画分として提供されることができる（例えば、ＰＢＭＣ）。

【0082】

本明細書中で使用する場合、タンパク質もしくはそのポリペプチド断片またはエピトープに関して「構造的に異なる」及び「構造的に別個」という用語は、少なくとも２つの異なるタンパク質、そのポリペプチド断片またはエピトープの間での共有結合的な（つまり構造的な）差異を指す。例えば、２つの構造的に異なるタンパク質（例えば抗体）は、異なる一次アミノ酸配列を有する２つのタンパク質を指し得る。いくつかの事例では、構造的に異なる活性化剤は、構造的に異なるエピトープ、例えば異なる一次アミノ酸配列を有するエピトープに結合する。

【0083】

本明細書中で使用する場合、特定受容体活性（例えば、ＮＫｐ３０活性、ＮＫｐ４４活性及び／またはＮＫｐ４６活性）とは「無関係」な「抗腫瘍性細胞傷害性」という用語は、特定受容体または受容体の特定の組み合わせが細胞で発現するかまたは機能的であるか否かにかかわらず発揮される抗腫瘍性細胞傷害性を指す。このように、ＮＫｐ３０活性、ＮＫｐ４４活性及び／またはＮＫｐ４６活性とは無関係な抗腫瘍性細胞傷害性を呈するγδＴ細胞は、ＮＫｐ３０活性依存性の抗腫瘍性細胞傷害性、ＮＫｐ４４活性依存性の抗腫瘍性細胞傷害性及び／またはＮＫｐ４６活性依存性の抗腫瘍性細胞傷害性を呈するものでもあり得る。

【0084】

本明細書中で使用する場合、「ＮＫｐ３０活性依存性の抗腫瘍性細胞傷害性」、「ＮＫｐ４４活性依存性の抗腫瘍性細胞傷害性」及び「ＮＫｐ４６活性依存性の抗腫瘍性細胞傷害性」という用語は、特定受容体の機能的発現を必要とする抗腫瘍性細胞傷害性を指す。そのような受容体依存性の抗腫瘍性細胞傷害性の存否は、ＰＣＴ／ＵＳ１７／３２５３０の実施例４８で実施するような標準的な試験管内細胞傷害性アッセイを特定受容体に対する拮抗薬の存在下または非存在下で実施することによって判定することができる。例えば、ＮＫｐ３０活性依存性の抗腫瘍性細胞傷害性の存否は、試験管内細胞傷害性アッセイの抗ＮＫｐ３０拮抗薬の存在下での結果と、抗ＮＫｐ３０拮抗薬の非存在下で得られた結果とを比較することによって判定することができる。

【0085】

さらに、１つ以上の細胞傷害性受容体ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、及び／またはＮＫｐ４６のｍＲＮＡ発現について、γδＴ細胞またはγδＴ細胞集団をアッセイすることができることが理解される。そのような事例では、発現アッセイは、受容体依存性抗腫瘍性細胞傷害性の存在または非存在を示すことができる。例えば、γδＴ細胞またはγδＴ細胞集団の測定されたｍＲＮＡ発現は、（例えば、アンタゴニストの存在下及び非存在下での試験管内細胞傷害性アッセイによって検証されるような）特定の受容体依存性細胞傷害性を示さない細胞または細胞株を使用して陽性対照と比較することができる。

【0086】

抗腫瘍性細胞傷害性の少なくとも特定「％」分が特定受容体活性（例えば、ＮＫｐ３０活性、ＮＫｐ４４活性及び／またはＮＫｐ４６活性）と「無関係」である、抗腫瘍性細胞傷害性を含むγδＴ細胞集団は、本明細書中で使用される場合、特定受容体を遮断することによって測定抗腫瘍性細胞傷害性がその数値％値分より大きく低下することがない細胞を指す。したがって、抗腫瘍性細胞傷害性のうち少なくとも５０％がＮＫｐ３０活性とは無関係である、抗腫瘍性細胞傷害性を含むγδＴ細胞集団は、ＮＫｐ３０拮抗薬の存在下では、ＮＫｐ３０拮抗薬の非存在下と比べて試験管内抗腫瘍性細胞傷害性の５０％以下の低下を示すであろう。

【0087】

概説
ヒトにおいて、γδＴ細胞（複数可）は、自然免疫応答と適応免疫応答との関連性を提供するＴ細胞のサブセットである。これらの細胞は、Ｖ－（Ｄ）－Ｊセグメント再構成を経て抗原特異的なγδＴ細胞受容体（γδＴＣＲ）を生み出し、γδＴ細胞（複数可）は、γδＴＣＲか、独立もしくは協働して作用してγδＴ細胞エフェクター機能を活性化させる他の非ＴＣＲタンパク質かのどちらかによる抗原認識によって直接活性化されることができる。γδＴ細胞は、哺乳類においてＴ細胞集団全体の小画分を占め、末梢血中及びリンパ器官中のＴ細胞のおよそ１～５％を占めており、またそれらは、皮膚、肝臓、消化管、気道及び生殖管のような上皮細胞に富む区画に主として存在しているようである。主要組織適合性複合体分子（ＭＨＣ）に結合している抗原を認識するαβＴＣＲとは違い、γδＴＣＲは、細菌抗原、ウイルス抗原、疾患細胞で発現するストレス抗原、及び完全タンパク質または非ペプチド化合物の形態の腫瘍抗原を直接認識することができる。

【0088】

ＴＳ－１、ＴＳ８．２、Ｂ６及び１５Ｄは、γδＴ細胞を活性化させることができる。理論に拘泥しないが、異なるドナーから生じる培養物の活性化及び増殖の異なるレベルは、ドナーのγδ可変ＴＣＲレパートリー、及び抗体結合エピトープに起因するものであり得る。特定のγδＴ細胞サブセットに結合する全ての薬剤が、特定のγδＴ細胞を活性化させること、特に、濃縮培養物中の特定のγδＴ細胞集団を臨床上妥当なレベル、すなわち１０^８個超の標的γδＴ細胞にまで活性化させることができるわけでない、ということが発見された。同様に、γδＴ細胞集団の全ての結合エピトープが、活性化エピトープである、つまり結合によって特定のγδＴ細胞集団を活性化させることができる、というわけではない。

【0089】

本発明者らは、特定のγδＴ細胞サブタイプの強力な活性化に関連する特定のγδ可変ＴＣＲ結合領域を同定し、したがって、γδＴ細胞サブタイプの生体内または生体外活性化及び増殖を可能にした。同定されたＴＣＲ結合領域への結合による生体外活性化及び増殖を使用して、患者に投与されることができる、純度の向上した臨床上妥当なレベルの高濃縮γδＴ細胞集団及びその混合物を生じさせることができる。生体内活性化を使用して、投与されたγδＴ細胞集団（またはその１つ以上のサブタイプ）を増殖及び／または維持し、内因性γδＴ細胞集団（またはその１つ以上のサブタイプ）、またはそれらの組み合わせの増殖を誘導することができる。いくつかの事例では、生体内活性化は、生体内で内因性γδＴ細胞集団を増殖させるために使用することができ、増殖した集団の一部分は、本明細書に記載の方法を使用して生体外で単離及び増殖させることができる。生体内増殖、単離、及び生体外増殖されたγδＴ細胞は、それを必要とする対象に貯蔵されるか、任意に操作されるか、及び／または投与されることができる。操作は、生体外増殖前または生体外増殖後に実施することができる。投与された細胞は、γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を対象に投与することによって、生体内で増殖及び／または維持することができる。

【0090】

γδＴ細胞サブタイプの強化された活性化及び増殖を誘導することができる活性化エピトープに特異的に結合する、抗体または他の結合剤を含めた活性化リガンドも企図され、本明細書にさらに記載される。いくつかの実施形態では、γδＴ細胞の生体内増殖及び／またはそれを必要とする対象に投与する方法を含む、本明細書に記載の方法及び組成物において使用される活性化剤は、生体外増殖のためのＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０６１１８９及び／またはＰＣＴ／ＵＳ１７／３２５３０に記載される薬剤である。いくつかの実施形態では、γδＴ細胞の生体内増殖及び／またはそれを必要とする対象に投与する方法を含む、本明細書に記載の方法及び組成物において使用される活性化剤は、生体外増殖のためのＰＣＴ／ＵＳ１８／０６１３８４に記載されるδ３特異的活性化剤である。ＰＣＴ／ＵＳ１７／３２５３０及びＰＣＴ／ＵＳ１８／０６１３８４は、γδＴ細胞活性化剤、γδＴ細胞組成物、ならびにγδＴ細胞活性化、γδＴ細胞増殖、治療、投与、及び投薬の方法に関する全ての開示を含むあらゆる目的のために参照により全体的に援用される。

【0091】

いくつかの態様では、本発明は、操作型または非操作型γδＴ細胞を増殖させる生体外方法を提供する。一般に、生体外増殖方法は、本明細書に記載の操作型または非操作型γδＴ細胞の増殖のために生体内増殖及び／または維持方法と組み合わせて使用される。例えば、γδＴ細胞またはその１つ以上の亜集団を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤の投与によって、γδＴ細胞を生体内で選択的に増殖させることができる。生体内で選択的に増殖させたγδＴ細胞の一部分を単離し、次いでさらに、例えば、選択的に、生体外で増殖させることができる。いくつかの事例では、生体外増殖γδＴ細胞は、以前に生体内増殖したか否かにかかわらず、それを必要とする対象に投与されることができる。いくつかの事例では、生体外増殖γδＴ細胞、またはその一部分は、初期集団が単離された同じ対象に投与される。いくつかの事例では、生体外増殖γδＴ細胞、またはその一部分は、初期集団が単離された異なる対象に投与される。いくつかの事例では、投与された生体外増殖γδＴ細胞は、対象にγδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することによって、生体内でさらに増殖または維持される。

【0092】

γδＴ細胞の生体内増殖
本開示は、非操作型及び操作型γδＴ細胞の集団の生体内増殖及び／または維持方法を提供する。本開示の非操作型または操作型γδＴ細胞は、生体内増殖または維持の前及び／または後に、生体外で追加的に活性化及び／または増殖させられ得る。いくつかの実施形態では、本開示の非操作型または操作型γδＴ細胞の生体内活性化、増殖、及び／または維持は、アミノホスホネートまたはプレニルホスホネートを投与することなく行うことができる。いくつかの実施形態では、本開示の非操作型または操作型γδＴ細胞の生体内活性化、増殖、及び／または維持は、少なくとも部分的に、アミノホスホネートまたはプレニルホスホネートを投与することによって、行うことができる。例えば、生体内活性化及び／または増殖は、δ１、δ２、もしくはδ３γδＴ細胞、またはそれらの組み合わせに特有のエピトープに結合することによって、本開示の非操作型または操作型γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することを含む方法によって行うことができ、方法は、アミノホスホネートまたはプレニルホスホネートを投与することをさらに含む。

【0093】

一般に、方法は、対象にγδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を対象に有効量で投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、γδＴ細胞集団及びγδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を含む薬学的組成物を提供することと、提供された薬学的組成物を対象に投与することと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、γδＴ細胞を対象に投与することと、次いでγδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を投与することと、次いでγδＴ細胞を対象に投与することと、を含む。特定の実施形態では、γδＴ細胞は、１回以上投与され、γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤は、投与されたγδＴ細胞を増殖させるか、または維持するために有効量で対象に定期的に投与される。

【0094】

いくつかの事例では、方法は、γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を対象に多回、例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、または少なくとも４回投与することを含む。いくつかの事例では、方法は、γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を対象に１～２回、１～３回、１～５回、１～１０回、２～４回、２～１０回、または５～１０回投与することを含む。いくつかの事例では、方法は、γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を対象に２～４週間、２～６週間、１ヶ月（例えば、約３０日）、２ヶ月、または１～２ヶ月の投薬期間で投与することを含む。いくつかの事例では、方法は、γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を対象に周期的に少なくとも２ヶ月（例えば、約６０日）、少なくとも３ヶ月（例えば、約９０日）、少なくとも４ヶ月（例えば、約１２０日）、または少なくとも６ヶ月（例えば、約１８０日）間投与することを含む。

【0095】

本発明の方法は、様々なγδＴ細胞集団、例えば、Ｖγ１^＋、Ｖγ２^＋、またはＶγ３^＋γδＴ細胞集団を生体内で増殖させることができる。いくつかの事例では、本発明の方法は、Ｖδ１^＋Ｔ細胞集団；Ｖδ１^＋及びＶδ３^＋Ｔ細胞集団；Ｖδ１^＋及びＶδ４^＋Ｔ細胞集団；Ｖδ１^＋及びＶδ２^＋Ｔ細胞集団；またはＶδ１^＋、Ｖδ３^＋、Ｖδ４^＋及びＶδ５^＋Ｔ細胞集団を増殖させることができる。

【0096】

ある場合では、γδＴ細胞集団は、４５日未満、４０日未満、３５日未満、または３０日未満で、検出可能な量（例えば、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも２倍、または約１０％～約２倍）生体内増殖させることができる。ある場合では、γδＴ細胞集団は、４５日未満、４０日未満、３５日未満、または３０日未満で、約１０％～約１０倍、約５０％～約１０倍以上に生体内増殖させることができる。ある場合では、γδＴ細胞集団は、４５日未満、４０日未満、３５日未満、または３０日未満で、約１０～約５０倍に生体内増殖させることができる。

【0097】

いくつかの態様では、γδＴ細胞を活性化剤と接触させることによって操作型及び非操作型γδＴ細胞を含め、様々なγδＴ細胞を生体内で選択的に増殖させる方法が提供される。いくつかの事例では、活性化（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）または活性化（ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ）剤は、γδＴ細胞の細胞表面受容体上の特有のエピトープに結合する。活性化剤は、抗体、例えばモノクローナル抗体であり得る。活性化剤は、１つ以上のタイプのγδＴ細胞、例えば、δ１；δ２；δ３；δ１及びδ３；δ１及びδ４；δ１及びδ５；δ１、δ３、及びδ４；もしくはδ１、δ３、δ４、及びδ５細胞集団、またはこれらの組み合わせの成長を特異的に活性化させることができる。いくつかの実施形態では、活性化剤は、δ１細胞集団の成長を特異的に活性化させて、δ１Ｔ細胞集団を生体内で増殖または維持させる。他の事例では、活性化剤は、δ２細胞集団の成長を特異的に活性化させて、δ２Ｔ細胞集団を生体内で増殖または維持させる。他の事例では、活性化剤は、δ３細胞集団の成長を特異的に活性化させて、δ３Ｔ細胞集団を生体内で増殖または維持させる。他の事例では、活性化剤は、δ１及びδ３細胞集団の成長を特異的に活性化させて、δ１及びδ３Ｔ細胞集団を生体内で増殖または維持させる。他の事例では、活性化剤は、δ１及びδ４細胞集団の成長を特異的に活性化させて、δ１及びδ３Ｔ細胞集団を生体内で増殖または維持させる。他の事例では、活性化剤は、δ１及びδ５細胞集団の成長を特異的に活性化させて、δ１及びδ５Ｔ細胞集団を生体内で増殖または維持させる。

【0098】

いくつかの事例では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、多価であり、好ましくは、多価薬剤は、同じ抗原に特異的に結合する少なくとも２つの抗原結合部位を含むか、または多価薬剤は、同じ抗原の同じエピトープに特異的に結合する少なくとも２つの抗原結合部位を含む。いくつかの事例では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、同じ抗原に特異的に結合する少なくとも３つの抗原結合部位を含むか、または多価薬剤は、同じ抗原の同じエピトープに特異的に結合する少なくとも３つの抗原結合部位を含む。いくつかの事例では、δ１Ｔ細胞、δ２Ｔ細胞、もしくはδ３Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせを選択的に増殖させる薬剤は、二価、三価、四価、もしくは五価であるか、または少なくとも二価、三価、四価、もしくは五価である。

【0099】

１つ以上の活性化剤が生体内でγδＴ細胞（例えば、活性化物質γδＴ細胞天然受容体）に接触し得、同時または順次に共刺激分子がγδＴ細胞に接触してさらなる刺激を提供し得、かつγδＴ細胞を増殖させ得る。いくつかの実施形態では、活性化剤及び／または共刺激剤は、植物及び非植物に由来するレクチン、γδＴ細胞を活性化させるモノクローナル抗体、及びその他の非レクチン／非抗体剤であり得る。他の事例では植物レクチンはコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）であり得るが、他の植物レクチンなどが使用されてもよい。レクチンの他の例としては、ピーナッツ凝集素タンパク質（ＰＮＡ）、ダイズ凝集素（ＳＢＡ）、ｌｅｓ ｃｕｌｉｎａｒｉｓ凝集素（ＬＣＡ）、ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ凝集素（ＰＳＡ）、Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａｔｉａ凝集素（ＨＰＡ）、Ｖｉｃｉａ ｇｒａｍｉｎｅａレクチン（ＶＧＡ）、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ Ｖｕｌｇａｒｉｓエリスロアグルチニン（ＰＨＡ－Ｅ）、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ Ｖｕｌｇａｒｉｓロイコアグルチニン（ＰＨＡ－Ｌ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓ Ｎｉｇｒａレクチン（ＳＮＡ、ＥＢＬ）、Ｍａａｃｋｉａ Ａｍｕｒｅｎｓｉｓ，レクチンＩＩ（ＭＡＬ ＩＩ）、Ｓｏｐｈｏｒａ Ｊａｐｏｎｉｃａ凝集素（ＳＪＡ）、Ｄｏｌｉｃｈｏｓ Ｂｉｆｌｏｒｕｓ凝集素（ＤＢＡ）、Ｌｅｎｓ Ｃｕｌｉｎａｒｉｓ凝集素（ＬＣＡ）、Ｗｉｓｔｅｒｉａ Ｆｌｏｒｉｂｕｎｄａレクチン（ＷＦＡ、ＷＦＬ）が挙げられる。

【0100】

活性化剤及び共刺激分子の非限定的な例としては、本明細書に記載のδもしくはγ鎖またはそれらのサブタイプに対して選択的である任意の１つ以上の抗体、５Ａ６．Ｅ９、Ｂ１、ＴＳ８．２、１５Ｄ、Ｂ６、Ｂ３、ＴＳ－１、γ３．２０、７Ａ５、ＩＭＭＵ５１０、Ｒ９．１２、１１Ｆ２などの抗体、またはそれらの組み合わせが挙げられる。活性化剤及び共刺激分子の他の例としては、ゾレドロネート、ホルボール １２－ミリステート－１３－アセテート（ＴＰＡ）、メゼレイン、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）、連鎖球菌プロテインＡまたはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0101】

他の事例では、活性化剤及び／または共刺激剤は、αＴＣＲ、βＴＣＲ、γＴＣＲ、δＴＣＲ、ＣＤ２７７、ＣＤ２８、ＣＤ４６、ＣＤ８１、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、ＣＤ３０、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ａ、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＤＡＰ、ＣＤ１２２、ＧＩＴＲ、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１、ＣＤ１６、ＣＤ１６１、ＤＮＡＸ、補助分子－１（ＤＮＡＭ－１）、１つ以上のＮＣＲ（例えば、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６）、ＳＬＡＭ、コクサッキーウイルス及びアデノウイルス受容体、またはそれらの組み合わせに対する抗体またはリガンドであり得る。

【0102】

本明細書に記載の活性化剤及び共刺激剤を使用してγδＴ細胞の生体内活性化、増殖及び／または維持を実施して、特異的γδＴ細胞増殖及び持続性の集団を誘発することができる。一態様では、特異的γδＴ細胞活性化シグナルをもたらす薬剤は、γδＴＣＲを指向する種々のモノクローナル抗体（ＭＡｂ）であり得る。

【0103】

一態様では、ＭＡｂはδＴＣＲ及び／またはγＴＣＲの定常または可変領域上の異なるエピトープに結合することができる。一態様では、ＭＡｂはγδＴＣＲ汎ＭＡｂを含み得る。一態様では、γδＴＣＲ汎ＭＡｂは、δ１、δ２、及びδ３Ｔ細胞集団を含めたγ鎖上かδ鎖上かのどちらかまたは両鎖上の種々のγ及びδＴＣＲに共通しているドメインを認識し得る。一態様では、抗体は、５Ａ６．Ｅ９（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｂ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＩＭＭＵ５１０及び／または１１Ｆ２（１１Ｆ２）（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）であり得る。

【0104】

一態様では、ＭＡｂを、γ鎖の可変領域に固有の特定ドメイン（Ｖγ９ＴＣＲを指向する７Ａ５Ｍａｂ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ＴＣＲ１７２０））、またはＶδ１可変領域上のドメイン（Ｍａｂ ＴＳ８．２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ＴＣＲ１７３０；ＭＡｂ ＴＳ－１（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＃ＴＣＲ １０５５）、ＭＡｂ Ｒ９．１２（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＃ＩＭ１７６１））、またはＶδ２鎖（ＭＡｂ １５Ｄ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ＴＣＲ１７３２またはＬｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃ＴＣＲ２７３２）、Ｂ６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ＃３３１４０２）、図１～２に記載されているδ１－＃抗体のうちの１つ、図３～４に記載されているδ２－＃抗体のうちの１つ、または図５に記載されているδ３－＃抗体のうちの１つに差し向けることができる。

【0105】

特定の実施形態では、活性化剤は、図１～２に記載されるδ１－＃抗体のうちの１つ、図３～４に記載されるδ２－＃抗体のうちの１つ、または図５に記載されるδ３－＃抗体のうちの１つと同じか、または本質的に同じエピトープに結合する薬剤である。特定の実施形態では、活性化剤は、図１～２に記載されるδ１－＃抗体のうちの１つ、図３～４に記載されるδ２－＃抗体のうちの１つ、または図５に記載されるδ３－＃抗体のうちの１つと競合する薬剤である。追加の活性化剤は、本明細書、ならびに２０１７年５月１２日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１７／３２５３０、及び代理人整理番号ＡＤＣ－０００３－ＰＲ１、米国仮特許出願第６２／５８６，７８２号に記載されており、これは本明細書と同時出願された。

【0106】

特定の実施形態では、生体内活性化、増殖、及び／または維持は、サイトカインまたはＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２１、ＩＬ２３、ＩＬ－３３、ＩＦＮγ、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、または顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）などの他の刺激剤を同時または順次に投与することによってさらに支持され得る。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、またはＩＬ－２１である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－２である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－１５である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－４である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される一般的なガンマ鎖サイトカインである。

【0107】

特定の実施形態では、活性化剤を投与する前に、及び／またはγδＴ細胞（例えば、γδＣＡＲ－Ｔ細胞）を投与する前に、対象にリンパ球枯渇プロトコルを投与することによって、生体内増殖または維持をさらに支持することができる。いくつかの事例では、リンパ球枯渇プロトコルは、フルダラビン及びシクロホスファミドを投与することを含む。いくつかの事例では、リンパ球枯渇は、白血球除去輸血を含むか、またはさらに含む。いくつかの事例では、リンパ球枯渇は、ベンダムスチンを含むか、またはさらに含む。いくつかの事例では、リンパ球枯渇は、ＣＡＲＴ細胞が投与される時点でリンパ球減少症と診断されるか、またはその疑いのある患者には投与されない。

【0108】

γδＴ細胞の単離
いくつかの実施形態では、本発明は、単離された混合細胞集団から濃縮γδＴ細胞集団を製造する生体外方法であって、δ１ＴＣＲ；δ１及びδ４ＴＣＲ；またはδ１、δ３、δ４及びδ５ＴＣＲに特有のエピトープに結合することによってそれぞれδ１Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ３Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞；またはδ１、δ３、δ４及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤に、混合細胞集団を接触させて、濃縮γδＴ細胞集団をもたらすことを含む、当該方法を提供する。他の態様では、本発明は、単離された混合細胞集団から濃縮γδ２Ｔ細胞集団を製造する生体外方法であって、δ２ＴＣＲに特有のエピトープに結合することによってδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤と、混合細胞集団を接触させて、濃縮γδ２Ｔ細胞集団をもたらすことを含む、方法を提供する。他の態様では、本発明は、単離された混合細胞集団から濃縮γδ３Ｔ細胞集団を製造する生体外方法であって、δ３ＴＣＲに特有のエピトープに結合することによってδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤と、混合細胞集団を接触させて、濃縮γδ３Ｔ細胞集団をもたらすことを含む、方法を提供する。

【0109】

他の態様では、本開示は、対象から単離されたγδＴ細胞を遺伝子操作する方法を提供する。濃縮、増殖、例えば、陽性及び／もしくは陰性選択による精製、または遺伝子操作の方法は、単独で、または組み合わせて、任意の順序で実施することができる。一実施形態では、γδＴ細胞は、対象において生体内で増殖させ、対象から単離し、遺伝子操作し、次いで生体外で増殖させ、任意に対象に投与することができる。別の実施形態では、γδＴ細胞は、対象から単離し、遺伝子操作し、任意に生体外で活性化及び増殖させ、対象に投与し、次いで生体内で増殖または維持することができる。いくつかの事例では、γδＴ細胞が単離される対象及びγδＴ細胞が投与される対象は、同じ対象である。いくつかの事例では、γδＴ細胞が単離される対象及びγδＴ細胞が投与される対象は、異なる対象である。

【0110】

操作型または非操作型の、γδＴ細胞集団を、例えば、直接、対象の複合試料から増殖させることができる。いくつかの事例では、複合試料は、標的γδＴ細胞集団を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤と複合試料を直接接触させることによって単離され、生体外で増殖させる。いくつかの事例では、複合試料は、単離され、次いで生体外増殖が実施される前に陽性または陰性選択によって精製される。

【0111】

複合試料は、末梢血試料（例えば、ＰＢＬまたはＰＢＭＣ）、白血球アフェレーシス試料、臍帯血試料、腫瘍、幹細胞前駆体、腫瘍生検材料、組織、リンパ、または外部環境に直接接している対象の上皮部位からのもの、または幹前駆細胞に由来するものであり得る。いくつかの事例では、本開示は、Ｖδ１^＋細胞、Ｖδ２^＋細胞、Ｖδ３^＋細胞、Ｖδ１^＋細胞及びＶδ３^＋細胞、Ｖδ１^＋細胞及びＶδ４^＋細胞、Ｖδ１^＋細胞、Ｖδ３^＋細胞、Ｖδ４^＋細胞及びＶδ５^＋細胞、またはそれらの任意の組み合わせを選択的に増殖させる方法を提供する。

【0112】

末梢血単核細胞は、例えばＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（商標）ＰＬＵＳ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）システムまたは別の適切な装置／システムを含めたアフェレーシス機械で、対象から採集することができる。採集した試料からγδＴ細胞（複数可）、またはγδＴ細胞（複数可）の所望の亜集団を例えばフローサイトメトリー技術によって精製することができる。対象が誕生する間に臍帯血から臍帯血細胞を得ることもできる。ＰＢＭＣ単離、γδＴ細胞活性化ならびにγδＴ細胞活性化剤の製造及び使用のための方法及び組成物を含めるが限定はされないあらゆる目的のために参照により本明細書に援用される、ＷＯ２０１６／０８１５１８を参照されたい。

【0113】

γδＴ細胞は、例えば第１増殖ステップにおいて、γδＴＣＲのエピトープに特異的に結合することによってγδＴ細胞を増殖させる１つ以上の薬剤に混合細胞集団を接触させることによって試験管内で培養される単離された複合試料または混合細胞集団から増殖させられて、濃縮γδＴ細胞集団をもたし得る。いくつかの実施形態では、全ＰＢＭＣ集団中に含まれているγδＴ細胞を、１つ以上の特定細胞集団、例えば、次の非γδＴ細胞単球：αβＴ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞のうちの１つ以上または全ての事前の除去を伴うことなく活性化及び増殖させることができ、結果として濃縮γδＴ細胞集団が得られる。いくつかの態様では、γδＴ細胞の活性化及び増殖は、天然型または操作型ＡＰＣの存在を伴わずに実施される。いくつかの態様では、γδＴ細胞の単離及び増殖は、本明細書において提供されるγδＴＣＲの活性化エピトープに結合する固定化γδＴ細胞マイトジェン、例えば、γδＴＣＲの活性化エピトープに特異的な抗体及びレクチンを含めた他の活性化剤を使用して実施することができる。

【0114】

特定の実施形態では、単離された混合細胞集団は、例えば、陽性及び／または陰性選択によって、任意に精製され、γδＴ細胞を増殖させる１つ以上の薬剤と、約もしくは少なくとも約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１７日間、約１９日間、約２１日間、約２５日間、約２９日間、約３０日間、またはその中の任意の範囲にわたって接触させる。例えば、単離された混合細胞集団は、γδＴ細胞を増殖させる１つ以上の薬剤と、約１～約４日間、約２～約４日間、約２～約５日間、約３～約５日間、約５～約２１日間、約５～約１９日間、約５～約１５日間、約５～約１０日間、または約５～約７日間にわたって接触させて、第１の濃縮γδＴ細胞集団をもたらす。別の例では、単離された混合細胞集団は、γδＴ細胞を増殖させる１つ以上の薬剤と、約７～約２１日間、約７～約１９日間、約７～約２３日間、または約７～約１５日間にわたって接触させて、第１の濃縮γδＴ細胞集団をもたらす。

【0115】

いくつかの事例では、第１増殖ステップと第２増殖ステップとの間で精製または単離ステップを実施する。いくつかの事例では、単離ステップは１つ以上の活性化剤の除去を含む。いくつかの事例では、単離ステップは、γδＴ細胞またはそのサブタイプの特異的な単離を含む。いくつかの事例では、１つ以上（例えば全て）の活性化剤（例えば、細胞培養用培地の一般的成分でない全ての活性化剤、例えば血清成分及び／またはＩＬ－２）が第１増殖ステップと第２増殖ステップとの間で除去されるが、γδＴ細胞は他の細胞種（αβＴ細胞）から特異的に単離されない。

【0116】

いくつかの実施形態では、第１濃縮ステップ及び場合によっては第２濃縮ステップにおいてγδＴＣＲの活性化エピトープに結合する活性化剤を使用してγδＴ細胞を活性化及び増殖させた後、第２、第３、第４、第５などの濃縮ステップにおいて当技術分野で知られている技術を用いて本発明の例えば第１の濃縮γδＴ細胞集団（複数可）をさらに濃縮または精製して第２またはさらなる濃縮γδＴ細胞集団（複数可）を得てもよい。例えば、例えば、第１の、濃縮γδＴ細胞集団（複数可）は、αβＴ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞が枯渇してもよい。採集されたγδＴ細胞（複数可）上に発現される細胞表面マーカーの正及び／または負の選択を用いて例えば第１の濃縮γδＴ細胞集団（複数可）から、同様の細胞表面マーカーを発現しているγδＴ細胞またはγδＴ細胞（複数可）の集団を直接単離することができる。例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ４４、Ｋｉｔ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ（１つ以上のＴＣＲγサブタイプを含む）、ＴＣＲδ（１つ以上のＴＣＲδサブタイプを含む）、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ１６、ＯＸ４０、ＣＤ４６、ＣＤ１６１、ＣＣＲ７、ＣＣＲ４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＤＮＡＭ－１、ＣＤ２４２、ＪＡＭＬ及びその他の適切な細胞表面マーカーなどのマーカーの陽性または陰性発現に基づいてγδＴ細胞を（例えば第１及び／または第２増殖ステップの後の）濃縮γδＴ細胞集団から単離することができる。

【0117】

いくつかの実施形態では、第１増殖ステップの後（例えば、第１増殖ステップに続いて実施される単離ステップの後）に、増殖済み細胞を場合によって希釈し、第２増殖ステップにおいて培養する。好ましい実施形態では、第２増殖ステップは、培養用培地が第２増殖ステップにおいて約１～２日、約１～３日、約１～４日、約１～５日、約２～５日、約２～４日または約２～３日ごとに補給される条件下で実施される。いくつかの実施形態では、第２増殖ステップは、γδＴ細胞のさらなる１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍またはそれ以上の増殖を支援する密度に細胞が希釈または調節される条件下で実施される。いくつかの事例では、細胞密度調節は、培養用培地の補給と同時期（すなわち、同日または同時）に実施される。例えば、細胞密度は第２増殖ステップにおいて１～２日、１～３日、１～４日、１～５日、２～５日、２～４日または２～３日ごとに調節され得る。γδＴ細胞のさらなる増殖を支援する典型的な細胞密度としては、限定されないが例えば、培養物に対して約１×１０^５、２×１０^５、３×１０^５、４×１０^５、５×１０^５、６×１０^５、７×１０^５、８×１０^５、９×１０^５、１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６細胞／ｍＬ、１０×１０^６細胞／ｍＬ、１５×１０^６細胞／ｍＬ、２０×１０^６細胞／ｍＬ、または３０×１０^６細胞／ｍＬが挙げられる。

【0118】

いくつかの実施形態では、細胞密度は、約０．５×１０^６～約１×１０^６細胞／ｍＬ、約０．５×１０^６～約１．５×１０^６細胞／ｍＬ、約０．５×１０^６～約２×１０^６細胞／ｍＬ、約０．７５×１０^６～約１×１０^６細胞／ｍＬ、約０．７５×１０^６～約１．５×１０^６細胞／ｍＬ、約０．７５×１０^６～約２×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約２×１０^６細胞／ｍＬ、または約１×１０^６～約１．５×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約２×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約３×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約４×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約５×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約１０×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約１５×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約２０×１０^６細胞／ｍＬ、または約１×１０^６～約３０×１０^６細胞／ｍＬの密度に調節される。

【0119】

いくつかの実施形態では、第２増殖ステップは、細胞を監視して所定細胞密度（または密度区間）に維持する条件、及び／または所定グルコース含有量を有する培養用培地中に細胞を維持する条件のもとに実施される。例えば、細胞は、約０．５×１０^６～約１×１０^６細胞／ｍＬ、約０．５×１０^６～約１．５×１０^６細胞／ｍＬ、約０．５×１０^６～約２×１０^６細胞／ｍＬ、約０．７５×１０^６～約１×１０^６細胞／ｍＬ、約０．７５×１０^６～約１．５×１０^６細胞／ｍＬ、約０．７５×１０^６～約２×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約２×１０^６細胞／ｍＬ、または約１×１０^６～約１．５×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約３×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約４×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約５×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約１０×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約１５×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約２０×１０^６細胞／ｍＬ、約１×１０^６～約３０×１０^６細胞／ｍＬの生細胞密度に維持され得る。

【0120】

いくつかの事例では、細胞は、増殖の少なくとも一部にわたってより高い濃度で維持され得る。例えば、第１または第２増殖の第１部分にわたって細胞の生存能はより高い細胞濃度で増強される可能性がある。別の例を挙げると、第１または第２増殖の最終部分にわたってより高い細胞濃度で最も効率的に培養物体積が利用される可能性がある。したがって、いくつかの実施形態では、第１もしくは第２増殖培養の少なくとも一部または第１もしくは第２増殖培養の全体にわたって細胞は約１×１０^６～約２０×１０^６細胞／ｍＬの生細胞密度で維持され得る。

【0121】

別の例を挙げると、細胞は、約０．５ｇ／Ｌ～約１ｇ／Ｌ、約０．５ｇ／Ｌ～約１．５ｇ／Ｌ、約０．５ｇ／Ｌ～約２ｇ／Ｌ、約０．７５ｇ／Ｌ～約１ｇ／Ｌ、約０．７５ｇ／Ｌ～約１．５ｇ／Ｌ、約０．７５ｇ／Ｌ～約２ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ～約１．５ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ～約２ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ～約３ｇ／Ｌ、または約１ｇ／Ｌ～約４ｇ／Ｌのグルコース含有量を有する培養用培地中で維持され得る。いくつかの実施形態では、細胞は、約１．２５ｇ／Ｌのグルコース含有量を有する培養用培地中で維持され得る。いくつかの事例、例えば、高細胞密度培養を維持する場合において、細胞は、約１ｇ／Ｌ～約５ｇ／Ｌ、約１ｇ／Ｌ～約４ｇ／Ｌ、約２ｇ／Ｌ～約５ｇ／Ｌ、または約２ｇ／Ｌ～約４ｇ／Ｌのグルコース含有量を有する培養用培地中で維持され得る。

【0122】

典型的には、グルコース含有量は、新鮮な血清を含有する培養用培地、または無血清培養用培地を培養物に添加することによって維持される。いくつかの実施形態では、細胞は、例えば各パラメータを監視すること及び新鮮な培地を添加してパラメータを所定限界内に維持することによって、所定の生細胞密度区間で、所定のグルコース含有量区間を有する培養用培地中で維持され得る。いくつかの実施形態では、グルコース含有量は、灌流バイオリアクターで細胞を内部に保持しつつ使用済み培地を除去する間に、新鮮な血清を含有する培養用培地、または無血清培養用培地を培養物に添加することによって、維持される。いくつかの実施形態では、γδＴ細胞増殖（例えば、選択的γδＴ細胞増殖）中、または本明細書に記載の第１もしくは第２γδＴ細胞増殖（例えば、選択的γδＴ細胞増殖）ステップ中に、ｐＨ、Ｏ_２の分圧、Ｏ_２飽和度、ＣＯ_２の分圧、ＣＯ_２飽和度、ラクテート、グルタミン、グルタメート、アンモニウム、ナトリウム、カリウム及びカルシウムのうちの１つ以上を非限定的に含めた追加パラメータを監視及び／または維持する。

【0123】

γδＴ細胞サブタイプは、
ｉ）δ１ＴＣＲのエピトープに特異的に結合することによってδ１Ｔ細胞を選択的に増殖させるか、
ｉｉ）δ２ＴＣＲのエピトープに特異的に結合することによってδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させるか、
ｉｉｉ）δ１及びδ４ＴＣＲのエピトープに特異的に結合することによってδ１及びδ４Ｔ細胞を選択的に増殖させるか、
ｉｖ）δ１、δ３、δ４及びδ５ＴＣＲのエピトープに特異的に結合することによってδ１、δ３、δ４及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させるか、または
ｖ）δ３ＴＣＲのエピトープに特異的に結合することによってδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる、１つ以上の薬剤と、混合細胞集団を接触させることによって、試験管内で培養される単離された複合試料または混合細胞集団から選択的に増殖されて、
例えば、第１の濃縮ステップにおいて、濃縮γδＴ細胞集団を提供し得る。

【0124】

いくつかの事例では、１つ以上の薬剤は、δ１Ｊ１、δ１Ｊ２もしくはδ１Ｊ３ ＴＣＲ、またはそれらのうちの２つ、またはそれらの全てに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、全ＰＢＭＣ集団中のγδ細胞を、特定の細胞集団、例えば、単球、αβＴ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞の事前の除去を伴わずに活性化及び増殖させることができ、その結果として濃縮γδＴ細胞集団を生じさせることができる。いくつかの態様では、γδＴ細胞の活性化及び増殖は、天然型または操作型ＡＰＣの存在を伴わずに実施される。いくつかの態様では、腫瘍検体からのγδＴ細胞の活性化及び増殖は、δ１ＴＣＲ；δ１、δ３、δ４、及びδ５ＴＣＲ；δ１及びδ４ＴＣＲ；δ３ＴＣＲ；またはδ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに対して特異的である抗体ならびに、δ１ＴＣＲ；δ１、δ３、δ４、及びδ５ＴＣＲ；δ１及びδ４ＴＣＲ；δ３ＴＣＲ；またはδ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合するレクチンを含めた他の活性化剤を含む固定化γδＴ細胞マイトジェンを使用して実施され得る。

【0125】

特定の実施形態では、δ１、δ１及びδ４、δ２、δ３、δ１及びδ２、またはδ１、δ２、及びδ３Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤に、単離された混合細胞集団を約５日間、６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間またはそれらの間の任意の範囲にわたって接触させる。例えば、δ１またはδ２Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤に、単離された混合細胞集団を約１～約３日間、約１～約４日間、約１～約５日間、約２～約３日間、約２～約４日間、約２～約５日間、約３～約４日間、約３～約５日間、約４～約５日間、約５～約１５日間、または約５～約７日間にわたって接触させて、第１濃縮γδＴ細胞集団をもたらす。いくつかの実施形態では、選択的に増殖させたδ１、δ１及びδ３、δ１及びδ４、δ２、δ３、δ１及びδ２、またはδ１、δ２及びδ３Ｔ細胞は、本明細書に記載されているように第２の増殖ステップにおいてさらに増殖させる。

【0126】

特定の実施形態では、単離された出発混合細胞集団、例えば、末梢血試料は、約２０～８０％の範囲のＴリンパ球を含む。特定の実施形態では、本発明の濃縮γδＴ細胞集団（複数可）中の残留αβＴ細胞及びＮＫ細胞のパーセントはそれぞれ、約２．５％またはそれ未満、及び約１％またはそれ未満である。本発明の濃縮γδＴ細胞集団（複数可）中の残留αβＴ細胞またはＮＫ細胞のパーセントは、約１％もしくはそれ未満、約０．５％もしくはそれ未満、約０．４％もしくはそれ未満、約０．２％もしくはそれ未満、約０．１％もしくはそれ未満、または約０．０１％もしくはそれ未満である。特定の実施形態では、本発明の濃縮γδＴ細胞集団（複数可）中の残留αβＴ細胞のパーセントは、（例えば、γδＴ細胞もしくはそのサブタイプの正の選択のステップの後、またはαβＴ細胞の除去の後で）約０．４％もしくはそれ未満、約０．２％もしくはそれ未満、約０．１％もしくはそれ未満、または約０．０１％もしくはそれ未満である。いくつかの実施形態では、第１及び／または第２γδＴ細胞増殖の前または後に、αβＴ細胞は除去されるが、ＮＫ細胞は除去されない。特定の態様では、単離された混合細胞集団は、単一ドナーに由来する。他の態様では、単離された混合細胞集団は、１より多い数のドナーまたは多数のドナー（例えば、２、３、４、５、または２～５、２～１０、または５～１０、またはそれより多い数のドナー）に由来する。

【0127】

かくして、いくつかの実施形態において本発明の方法は、臨床上妥当な数（１０^８超、１０^９超、１０^１０超、１０^１１超または１０^１２超、または約１０^８～約１０^１２）の増殖済みγδＴ細胞をたったの１ドナーからもたらすことができる。いくつかの事例では、本発明の方法は、臨床上妥当な数（１０^８超、１０^９超、１０^１０超、１０^１１超または１０^１２超、または約１０^８～約１０^１２）の増殖済みγδＴ細胞を、ドナー試料を得た時から１９日未満または２１日未満のうちにもたらすことができる。

【0128】

δ１、δ１及びδ３ＴＣＲ、δ１及びδ４ＴＣＲ、またはδ２ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合する活性化剤を使用する第１濃縮ステップにおける特定γδＴ細胞サブセットの特異的活性化及び増殖に続いて、第２、第３、第４、第５などの濃縮ステップにおいて当技術分野で知られている技術を用いて本発明の第１濃縮γδＴ細胞集団（複数可）をさらに濃縮または精製して第２またはさらなる濃縮γδＴ細胞集団（複数可）を得てもよい。例えば、第１の濃縮γδＴ細胞集団（複数可）は、αβＴ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞が枯渇してもよい。採集されたγδＴ細胞（複数可）上に発現される細胞表面マーカーの正及び／または負の選択を用いて第１濃縮γδＴ細胞集団（複数可）から、同様の細胞表面マーカーを発現しているγδＴ細胞またはγδＴ細胞（複数可）の集団を直接単離することができる。例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ４４、Ｋｉｔ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ（またはその１つ以上のサブタイプ）、ＴＣＲδ（またはその１つ以上のサブタイプ）、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ１６、ＯＸ４０、ＣＤ４６、ＣＤ１６１、ＣＣＲ７、ＣＣＲ４、ＤＮＡＭ－１、ＪＡＭＬ及びその他の適切な細胞表面マーカーなどのマーカーの陽性または陰性発現に基づいてγδＴ細胞を第１濃縮γδＴ細胞集団から単離することができる。

【0129】

いくつかの実施形態では、本発明の第１γδＴ細胞増殖、第１濃縮ステップ、第２γδＴ細胞増殖及び／または第２濃縮ステップの後に濃縮γδＴ細胞集団は、例えば１０ｍＬ未満、２５ｍＬ未満、５０ｍＬ未満、１００ｍＬ未満、１５０ｍＬ未満、２００ｍＬ未満、５００ｍＬ未満、７５０ｍＬ未満、１Ｌ未満、２Ｌ未満、３Ｌ未満、４Ｌ未満、５Ｌ未満、１０Ｌ未満、２０Ｌ未満または２５Ｌ未満の培養物体積において臨床上妥当なレベルの、１０８細胞より多いγδＴ細胞サブセットを含む。例えば、本発明の方法は、１０～１００ｍＬ、２５～１００ｍＬ、５０～１００ｍＬ、７５～１００ｍＬ、１０～１５０ｍＬ、２５～１５０ｍＬ、５０～１５０ｍＬ、７５～１５０ｍＬ、１００～１５０ｍＬ、１０～２００ｍＬ、２５～２００ｍＬ、５０～２００ｍＬ、７５～２００ｍＬ、１００～２００ｍＬ、１０～２５０ｍＬ、２５～２５０ｍＬ、５０～２５０ｍＬ、７５～２５０ｍＬ、１００～２５０ｍＬ、１５０～２５０ｍＬ、５～１，０００ｍＬ、１０～１，０００ｍＬ、または１００～１，０００ｍＬ、１５０～１，０００ｍＬ、２００～１，０００ｍＬ、２５０～１，０００ｍＬ、４００ｍＬ～１Ｌ、１Ｌ～２Ｌ、２Ｌ～５Ｌ、２Ｌ～１０Ｌ、４Ｌ～１０Ｌ、４Ｌ～１５Ｌ、４Ｌ～２０Ｌ、または４Ｌ～２５Ｌの体積を有する増殖培養物中の＞１０^８細胞の臨床上妥当なレベルのγδＴ細胞サブセットを提供することができる。他の実施形態では、本発明の第２、第３、第４、第５などの濃縮ステップ後、濃縮されたγδＴ細胞集団は、＞１０^８の臨床上妥当なレベルのγδＴ細胞サブセットを含む。

【0130】

いくつかの実施形態では、γδＴ細胞（複数可）は、１つ以上の抗原との接触に応答して急速に増殖することができる。いくつかのγδＴ細胞（複数可）、例えばＶγ９Ｖδ２＋のγδＴ細胞（複数可）は、プレニルピロリン酸、アルキルアミン、及び組織培養中の代謝産物または微生物抽出物のようないくつかの抗原との接触に応答して試験管内で急速に増殖する。さらに、いくつかの野生型γδＴ細胞（複数可）、例えばＶγ２Ｖδ２＋のγδＴ細胞（複数可）は、特定種類のワクチン接種（複数可）に応答してヒトの生体内で急速に増殖する。刺激されたγδＴ細胞は、数々の抗原提示、共刺激及び、複合試料からのγδＴ細胞（複数可）の単離を容易にすることができる接着分子を呈することができる。例えば抗体または固定化抗体などの本明細書に記載の選択的γδＴ細胞増殖剤による増殖との組み合わせ、その前、またはその後において、複合試料中のγδＴ細胞（複数可）を少なくとも１つの抗原で１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、約５～１５日間、５～１０日間または５～７日間、または別の適切な期間にわたって試験管内で刺激することができる。適切な抗原によるγδＴ細胞の刺激は、対象に１つ以上の適切な薬剤を投与することによって生体内で、または試験管内で、γδＴ細胞集団を増殖させることができる。

【0131】

複合試料からのγδＴ細胞（複数可）の試験管内での増殖を刺激するために使用され得る抗原の非限定的な例としては、プレニルピロリン酸、例えばイソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）、アルキルアミン、ヒト微生物病原体の代謝産物、共生細菌の代謝産物、－メチル－３－ブテニル－１－ピロリン酸（２Ｍ３Ｂ１ＰＰ）、（Ｅ）－４－ヒドロキシ－３－メチル－ブタ－２－エニルピロリン酸（ＨＭＢ－ＰＰ）、エチルピロリン酸（ＥＰＰ）、ファルネシルピロリン酸（ＦＰＰ）、ジメチルアリルリン酸（ＤＭＡＰ）、ジメチルアリルピロリン酸（ＤＭＡＰＰ）、エチル－アデノシン三リン酸（ＥＰＰＰＡ）、ゲラニルピロリン酸（ＧＰＰ）、ゲラニルゲラニルピロリン酸（ＧＧＰＰ）、イソペンテニル－アデノシン三リン酸（ＩＰＰＰＡ）、モノエチルリン酸（ＭＥＰ）、モノエチルピロリン酸（ＭＥＰＰ）、３－ホルミル－１－ブチル－ピロリン酸（ＴＵＢＡｇ１）、Ｘ－ピロリン酸（ＴＵＢＡｇ２）、３－ホルミル－１－ブチル－ウリジン三リン酸（ＴＵＢＡｇ３）、３－ホルミル－１－ブチル－デオキシチミジン三リン酸（ＴＵＢＡｇ４）、モノエチルアルキルアミン、アリルピロリン酸、クロトイルピロリン酸、ジメチルアリル－γ－ウリジン三リン酸、クロトイル－γ－ウリジン三リン酸、アリル－γ－ウリジン三リン酸、エチルアミン、イソブチルアミン、ｓｅｃ－ブチルアミン、イソアミルアミン、及び窒素を含有するビスホスホネート（例えば、アミノホスホネート）が挙げられる。

【0132】

本明細書に記載の活性化剤及び共刺激剤を使用してγδＴ細胞の活性化及び増殖を実施して、特異的γδＴ細胞増殖及び持続性の集団を誘発することができる。いくつかの実施形態では、異なる培養物からのγδＴ細胞の活性化及び増殖は、別個のクローン性または混合ポリクローン性の集団サブセットを実現することができる。いくつかの実施形態では、種々の作動薬を使用して、特異的γδ活性化シグナルをもたらす薬剤を同定することができる。一態様では、特異的γδ活性化シグナルをもたらす薬剤は、γδＴＣＲを指向する種々のモノクローナル抗体（ＭＡｂ）であり得る。

【0133】

一態様では、ＭＡｂはγＴＣＲ及び／またはδＴＣＲの定常または可変領域上の異なるエピトープに結合することができる。一態様では、ＭＡｂはγδＴＣＲ汎ＭＡｂを含み得る。一態様では、γδＴＣＲ汎ＭＡｂは、δ３細胞集団を含めたγ鎖上かδ鎖上かのどちらかまたは両鎖上の種々のγ及びδＴＣＲに共通しているドメインを認識し得る。一態様では、抗体は、５Ａ６．Ｅ９（Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｂ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＩＭＭＵ５１０及び／または１１Ｆ２（１１Ｆ２）（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）であり得る。一態様では、ＭＡｂを、γ鎖の可変領域に固有の特定ドメイン（Ｖγ９ＴＣＲ類似体を指向する７Ａ５ ＭＡｂ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ＴＣＲ１７２０））、またはＶδ１可変領域上のドメイン（Ｍａｂ ＴＳ８．２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ＴＣＲ１７３０）；ＭＡｂ ＴＳ－１（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＃ＴＣＲ１０５５）、ＭＡｂ Ｒ９．１２（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＃ＩＭ１７６１））、またはＶδ２鎖（ＭＡｂ １５Ｄ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ＴＣＲ１７３２またはＬｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃ＴＣＲ２７３２）、Ｂ６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ＃３３１４０２）、図１～２中に記載されているδ１－＃抗体のうちの１つ以上、図３～４中に記載されているδ２－＃抗体のうちの１つ以上、または図５中に記載されているδ３－０８、δ３－２０、δ３－２３、δ３－３１、δ３－４２、δ３－４７、及びδ３－５８のうちの１つ以上に差し向けることができる。

【0134】

いくつかの実施形態では、γδＴＣＲの種々のドメインに対する抗体（汎抗体及び、サブセット集団上の特有の可変領域エピトープを認識する抗体）を組み合わせて、γδＴ細胞の活性化を強化するそれらの能力を評価することができる。いくつかの実施形態では、γδＴ細胞活性化物質は、γδＴＣＲ結合剤、例えばＭＩＣＡ、ＮＫＧ２Ｄに対する作動薬抗体、ＭＩＣＡと例えばＦｃタグとの融合タンパク質、ＵＬＢＰ１、またはＵＬＢＰ３（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）ＵＬＢＰ２、またはＵＬＢＰ６（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞のアネルギー及びアポトーシスを誘導することなく特異的γδＴ細胞増殖を誘発するのを支援するコンパニオン共刺激剤を同定することができる。これらの共刺激剤は、γδ細胞上に発現する受容体に対するリガンド、例えば、以下のうちの１つ以上に対するリガンド（複数可）を含み得る：ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６１、ＣＤ７０、ＪＡＭＬ、ＤＮＡＸ、ＣＤ８１補助分子－１（ＤＮＡＭ－１）、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ１３７、ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＳＬＡＭ、ＣＤ１２２、ＤＡＰ、及びＣＤ２８。いくつかの態様では、共刺激剤は、ＣＤ２及びＣＤ３分子上の独特のエピトープに対する特異的抗体であり得る。ＣＤ２及びＣＤ３は、αβまたはγδＴ細胞（複数可）上で発現する場合に異なる配座構造を有し得、いくつかの事例では、ＣＤ３及びＣＤ２に対する特異的抗体はγδＴ細胞の選択的活性化をもたらすことができる。

【0135】

γδＴ細胞（複数可）の集団を、γδＴ細胞（複数可）の操作に先立って生体外で増殖させてもよい。γδＴ細胞集団の試験管内での増殖を促進するために使用することができる試薬の非限定的な例としては、抗ＣＤ３または抗ＣＤ２、抗ＣＤ２７、抗ＣＤ３０、抗ＣＤ７０、抗ＯＸ４０抗体、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２１、ＩＬ２３、ＩＬ－３３、ＩＦＮγ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、ＣＤ７０（ＣＤ２７リガンド）、コンカバリンＡ（ＣｏｎＡ）、ポークウィード（ＰＷＭ）、ピーナッツ凝集素タンパク質（ＰＮＡ）、ダイズ凝集素（ＳＢＡ）、Ｌｅｓ Ｃｕｌｉｎａｒｉｓ凝集素（ＬＣＡ）、Ｐｉｓｕｍ Ｓａｔｉｖｕｍ凝集素（ＰＳＡ）、Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａｔｉａ凝集素（ＨＰＡ）、Ｖｉｃｉａ ｇｒａｍｉｎｅａレクチン（ＶＧＡ）、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ Ｖｕｌｇａｒｉｓエリスロアグルチニン（ＰＨＡ－Ｅ）、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ Ｖｕｌｇａｒｉｓロイコアグルチニン（ＰＨＡ－Ｌ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓ Ｎｉｇｒａレクチン（ＳＮＡ、ＥＢＬ）、Ｍａａｃｋｉａ Ａｍｕｒｅｎｓｉｓ，レクチンＩＩ（ＭＡＬ ＩＩ）、Ｓｏｐｈｏｒａ Ｊａｐｏｎｉｃａ凝集素（ＳＪＡ）、Ｄｏｌｉｃｈｏｓ Ｂｉｆｌｏｒｕｓ凝集素（ＤＢＡ）、Ｌｅｎｓ Ｃｕｌｉｎａｒｉｓ凝集素（ＬＣＡ）、Ｗｉｓｔｅｒｉａ Ｆｌｏｒｉｂｕｎｄａレクチン（ＷＦＡ、ＷＦＬ）、またはＴ細胞増殖を刺激することができる別の適切なマイトジェンが挙げられる。

【0136】

γδＴ細胞（複数可）の遺伝子操作は、αβＴＣＲや、γδＴＣＲや、抗体、その抗原結合断片またはリンパ球活性化ドメインをコードするＣＡＲなどの腫瘍認識部分を発現する構築物を、単離されたγδＴ細胞（複数可）のゲノムの中に安定的に組み込むことを含み得、Ｔ細胞の生体外及び生体内での増殖、生存及び機能を強化するサイトカイン（例えば、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－３３、ＩＬ－４、ＩＬ－９、ＩＬ－２３またはＩＬ１β）を含み得る。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、またはＩＬ－２１である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－２である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－１５である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－４である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される一般的なガンマ鎖サイトカインである。単離されたγδＴ細胞の遺伝子操作はまた、単離されたγδＴ細胞のゲノム中の１つ以上の内在性遺伝子、例えば、ＭＨＣ遺伝子座（複数可）からの遺伝子発現を欠失させるか、または妨害することを含み得る。

【0137】

γδＴ細胞の生体外増殖
他の態様では、本開示は、養子移入療法のために非操作型及び操作型γδＴ細胞の集団を生体外で増殖させる方法を提供する。本開示の非操作型または操作型γδＴ細胞は、生体外で増殖させられ得る。生体外増殖は、生体内増殖、単離、及び任意の精製後に実施することができる。生体外増殖は、生体内増殖の前に追加的または代替的に実施されて、γδＴ細胞集団を提供することができ、それは次いで対象に投与され、本明細書に記載の１つ以上の生体内増殖または維持方法に供される。生体外増殖は、例えば、γδＴ細胞を含有する単離された試料を、γδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤と直接接触させることによって、混合細胞集団で行うことができる。追加的または代替的には、生体外増殖は、γδＴ細胞もしくはその１つ以上のサブタイプについての陽性選択、及び／またはαβＴ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞のうちの１つ以上を除去するための陰性選択の後に行われ得る。

【0138】

本開示の非操作型または操作型γδＴ細胞は、ＡＰＣによる活性化を伴わずに、またはＡＰＣ及び／またはアミノホスホネートとの共培養を伴わずに、試験管内で増殖させられることができる。さらに、またはあるいは、本開示の非操作型または操作型γδＴ細胞は、ＡＰＣ及び／または１つ以上のアミノホスホネートによる活性化またはそれとの共培養を含む少なくとも１つの増殖ステップによって試験管内で増殖させられることができる。

【0139】

いくつかの実施形態では、本開示の非操作型または操作型γδＴ細胞は、第１γδＴ細胞増殖においてＡＰＣによる活性化を伴わずに試験管内で増殖させられることができ、その後、第２γδＴ細胞増殖においてＡＰＣによる活性化を伴って試験管内で増殖させられることができる。いくつかの事例では、第１γδＴ細胞増殖は、（ａ）γδＴ細胞を増殖させるか、または（ｂ）δ１ＴＣＲ；δ２ＴＣＲ；δ１及びδ４ＴＣＲ；もしくはδ１、δ３、δ４及びδ５ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってそれぞれδ１Ｔ細胞；δ２Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ３Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞；もしくはδ１、δ３、δ４及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させる、１つ以上の薬剤に、γδＴ細胞を接触させることを含む。

【0140】

いくつかの事例では、第２γδＴ細胞増殖は、第１γδＴ細胞増殖で使用される１つ以上の薬剤を含まない培養用培地中で実施される。いくつかの事例では、第２γδＴ細胞増殖は、（ａ）Ｔ細胞を増殖させるか、（ｂ）γδＴ細胞を増殖させるか、または（ｃ）δ１ＴＣＲ；δ２ＴＣＲ；δ１及びδ４ＴＣＲ；もしくはδ１、δ３、δ４及びδ５ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってそれぞれδ１Ｔ細胞；δ２Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ３Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞；もしくはδ１、δ３、δ４及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の第２薬剤を含有する培養用培地中で実施される。

【0141】

いくつかの事例では、第２薬剤は、第１γδＴ細胞増殖で使用される薬剤と比べて異なっている（例えば、異なる一次アミノ酸配列を有し、かつ／または構造的に異なるγδＴＣＲエピトープに結合する）。いくつかの事例では、第２薬剤は、第１γδＴ細胞増殖で使用される薬剤と重複するγδＴＣＲエピトープもしくは同じγδＴＣＲエピトープに結合するものであるか、またはγδＴＣＲへの結合を当該薬剤と競合することができるものである。いくつかの事例では、第２薬剤はＡＰＣの細胞表面に発現する。いくつかの事例では、第２薬剤は、例えば第２薬剤の定常領域とＡＰＣの表面上のＦｃ受容体との結合相互作用によって、ＡＰＣの表面に結合している。いくつかの事例では、第２薬剤は可溶性である。いくつかの事例では、第２γδＴ細胞増殖は、可溶性の第２薬剤とＡＰＣとを含有する培養用培地中で実施され、場合によってＡＰＣは、γδＴ細胞集団を増殖または選択的に増殖させる薬剤をその細胞表面上に発現するかまたはその表面に結合させる。

【0142】

いくつかの事例では、第１γδＴ細胞増殖は、ＡＰＣを伴わずに実施され、第２γδＴ細胞増殖は、ＡＰＣを伴って実施される。いくつかの事例では、第２γδＴ細胞増殖は、ＡＰＣと、（ａ）Ｔ細胞を増殖させるか、（ｂ）γδＴ細胞を増殖させるか、または（ｃ）δ１ＴＣＲ；δ２ＴＣＲ；δ１及びδ４ＴＣＲ；もしくはδ１、δ３、δ４及びδ５ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってそれぞれδ１Ｔ細胞；δ２Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ３Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞；もしくはδ１、δ３、δ４及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の第２薬剤とを使用して実施される。

【0143】

当業者であれば、特定の実施形態では本明細書に記載の第２増殖ステップの方法を第１増殖ステップとして実施してもよく、本明細書に記載の第１ステップの方法を第２増殖ステップとして実施してもよいということを理解するであろう。限定することなく一例を挙げると、いくつかの実施形態では、細胞の混合集団（例えばＰＢＭＣ）を、第１ステップにおいてＡＰＣと接触させることによって増殖させることができ、その後、例えばδ１ＴＣＲ；δ２ＴＣＲ；δ１及びδ４ＴＣＲ；またはδ１、δ３、δ４及びδ５ＴＣＲに特有の活性化エピトープに結合することによってそれぞれδ１Ｔ細胞；δ２Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ３Ｔ細胞；δ１Ｔ細胞及びδ４Ｔ細胞；またはδ１、δ３、δ４及びδ５Ｔ細胞を選択的に増殖させる固定化薬剤に第１増殖ステップからの増殖済み集団を接触させることによって、ＡＰＣの非存在下で増殖させることができる。

【0144】

本発明の方法は、様々なγδＴ細胞（複数可）集団、例えば、Ｖγ１^＋、Ｖγ２^＋またはＶγ３^＋γδＴ細胞集団を増殖させることができる。いくつかの事例では、本発明の方法は、Ｖδ１^＋Ｔ細胞集団；Ｖδ１^＋及びＶδ３^＋Ｔ細胞集団；Ｖδ１^＋及びＶδ４^＋Ｔ細胞集団；Ｖδ１^＋及びＶδ２^＋Ｔ細胞集団；またはＶδ１^＋、Ｖδ３^＋、Ｖδ４^＋及びＶδ５^＋Ｔ細胞集団を増殖させることができる。

【0145】

ある場合には、γδＴ細胞集団を３６日未満、３５日未満、３４日未満、３３日未満、３２日未満、３１日未満、３０日未満、２９日未満、２８日未満、２７日未満、２６日未満、２５日未満、２４日未満、２３日未満、２２日未満、２１日未満、２０日未満、１９日未満、１８日未満、１７日未満、１６日未満、１５日未満、１４日未満、１３日未満、１２日未満、１１日未満、１０日未満、９日未満、８日未満、７日未満、６日未満、５日未満、４日未満または３日未満の間、試験管内で増殖させることができる

【0146】

いくつかの態様では、混合細胞集団からのγδＴ細胞を活性化剤と接触させることによって操作型及び非操作型γδＴ細胞を含めた様々なγδＴ細胞を選択的に増殖させる方法が提供される。いくつかの事例では、活性化（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）または活性化（ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ）剤は、γδＴ細胞の細胞表面受容体上の特有のエピトープに結合する。活性化剤は、抗体、例えばモノクローナル抗体であり得る。活性化剤は、１種類以上のγδＴ細胞、例えば、δ１、δ２、δ１及びδ３、またはδ１及びδ４細胞集団の成長を特異的に活性化させることができる。いくつかの実施形態では、活性化剤はδ１細胞集団の成長を特異的に活性化させて濃縮δ１Ｔ細胞集団をもたらす。他の事例では、活性化剤はδ２細胞集団の成長を特異的に活性化させて濃縮δ２Ｔ細胞集団をもたらす。他の事例では、活性化剤はδ３細胞集団の成長を特異的に活性化させて濃縮δ３Ｔ細胞集団をもたらす。

【0147】

活性化剤は、操作型及び非操作型γδＴ細胞の増殖を速い成長速度で刺激し得る。例えば、薬剤は、３０時間未満に１回の細胞分裂、２９時間未満に１回の細胞分裂、２８時間未満に１回の細胞分裂、２７時間未満に１回の細胞分裂、２６時間未満に１回の細胞分裂、２５時間未満に１回の細胞分裂、２４時間未満に１回の細胞分裂、２３時間未満に１回の細胞分裂、２２時間未満に１回の細胞分裂、２１時間未満に１回の細胞分裂、２０時間未満に１回の細胞分裂、１９時間未満に１回の細胞分裂、１８時間未満に１回の細胞分裂、１７時間未満に１回の細胞分裂、１６時間未満に１回の細胞分裂、１５時間未満に１回の細胞分裂、１４時間未満に１回の細胞分裂、１３時間未満に１回の細胞分裂、１２時間未満に１回の細胞分裂、１１時間未満に１回の細胞分裂、１０時間未満に１回の細胞分裂、９時間未満に１回の細胞分裂、８時間未満に１回の細胞分裂、７時間未満に１回の細胞分裂、６時間未満に１回の細胞分裂、５時間未満に１回の細胞分裂、４時間未満に１回の細胞分裂、３時間未満に１回の細胞分裂、２時間未満に１回の細胞分裂の平均速度でγδＴ細胞集団の増殖を刺激する。

【0148】

いくつかの事例では、活性化剤は、約４時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約５時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約６時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約７時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約８時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約９時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１０時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１１時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１２時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１３時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１４時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１５時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１６時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１７時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１８時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約１９時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約２０時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約２１時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約２２時間ごとに約１回の分裂の速度、約２３時間ごとに約１回の分裂の速度、約２４時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約２５時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約２６時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約２７時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約２８時間ごとに約１回の分裂の速度、約２９時間ごとに約１回の分裂の速度、約３０時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約３１時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約３２時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約３３時間ごとに約１回の分裂の平均速度、約３４時間ごとに約１回の分裂の速度、約３５時間ごとに約１回の分裂の速度、約３６時間ごとに約１回の分裂の平均速度で操作型及び非操作型γδＴ細胞の増殖を刺激し得る。

【0149】

いくつかの事例では、活性化剤はγδＴ細胞増殖培養物における操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の急速な増殖を刺激し得、当該急速な増殖は、細胞分裂の上記平均速度のいずれか１つで約１連続日～約１９連続日、約１連続日～約１４連続日、約１連続日～約７連続日、約１連続日～約５連続日、約２連続日～約１９連続日、約２連続日～約１４連続日、約２連続日～約７連続日、約２連続日～約５連続日、約４連続日～約１９連続日、約４連続日～約１４連続日、約４連続日～約７連続日、または約４連続日～約５連続日にわたって維持されるものである。

【0150】

いくつかの事例では、活性化剤は、約２連続日～約７連続日、または約２～約５連続日にわたって維持されているγδＴ細胞増殖培養物において約１２時間（例えば１０～１２時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１３時間（例えば１０～１３時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１４時間（例えば１０～１４時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１５時間（例えば１０～１５時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１６時間（例えば１０～１６時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１７時間（例えば１０～１７時間または１２～１７時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１８時間（例えば１０～１８時間または１２～１８時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１９時間（例えば１０～１９時間または１２～１９時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２０時間（例えば、１２～２０時間、１６～２０時間または１８～２０時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２１時間（例えば、１２～２１時間、１６～２１時間または１８～２１時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２２時間（例えば、１２～２２時間、１６～２２時間または１８～２２時間）ごとに約１回の分裂の速度、約２３時間以下（例えば、１２～２３時間、１６～２３時間または１８～２３時間）ごとに約１回の分裂の速度、約２４時間（例えば、１２～２４時間、１６～２４時間または１８～２４時間）ごとに約１回の分裂の平均速度で操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の増殖を刺激し得る。

【0151】

いくつかの事例では、活性化剤は、約２連続日～約７連続日、または約２～約５連続日にわたって維持されているγδＴ細胞増殖培養物において約２５時間（例えば、１２～２５時間、１６～２５時間、１８～２５時間または２０～２５時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２６時間（例えば、１２～２６時間、１６～２６時間、１８～２６時間または２０～２６時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２７時間（例えば、１２～２７時間、１６～２７時間、１８～２７時間または２０～２７時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２８時間（例えば、１２～２８時間、１６～２８時間、１８～２８時間、２０～２８時間または２２～２８時間）ごとに約１回の分裂の速度、約２９時間（例えば、１６～２９時間、１８～２９時間、２０～２９時間または２２～２９時間）ごとに約１回の分裂の速度、約３０時間（例えば、１６～３０時間、１８～３０時間、２０～３０時間または２２～３０時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３１時間（例えば、１６～３１時間、１８～３１時間、２０～３１時間、２２～３１時間または２４～３１時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３２時間（例えば、１８～３２時間、２０～３２時間、２２～３２時間または２４～３２時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３３時間（例えば、１８～３３時間、２０～３３時間、２２～３３時間または２４～３３時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３４時間（例えば、１８～３４時間、２０～３４時間、２２～３４時間または２４～３４時間）ごとに約１回の分裂の速度、約３５時間（例えば、１８～３５時間、２０～３５時間、２２～３５時間または２４～３５時間）ごとに約１回の分裂の速度、約３６時間（例えば、１８～３６時間、２０～３６時間、２２～３６時間または２４～３６時間）ごとに約１回の分裂の平均速度で操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の増殖を刺激し得る。

【0152】

いくつかの事例では、活性化剤は、少なくとも１４連続日にわたって維持されているγδＴ細胞増殖培養物において約１２時間（例えば１０～１２時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１３時間（例えば１０～１３時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１４時間（例えば１０～１４時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１５時間（例えば１０～１５時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１６時間（例えば１０～１６時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１７時間（例えば１０～１７時間または１２～１７時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１８時間（例えば１０～１８時間または１２～１８時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１９時間（例えば１０～１９時間または１２～１９時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２０時間（例えば、１２～２０時間、１６～２０時間または１８～２０時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２１時間（例えば、１２～２１時間、１６～２１時間または１８～２１時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２２時間（例えば、１２～２２時間、１６～２２時間または１８～２２時間）ごとに約１回の分裂の速度、約２３時間以下（例えば、１２～２３時間、１６～２３時間または１８～２３時間）ごとに約１回の分裂の速度、約２４時間（例えば、１２～２４時間、１６～２４時間または１８～２４時間）ごとに約１回の分裂の平均速度で操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の増殖を刺激し得る。

【0153】

いくつかの事例では、活性化剤は、少なくとも１４連続日にわたって維持されているγδＴ細胞増殖培養物において約２５時間（例えば、１２～２５時間、１６～２５時間、１８～２５時間または２０～２５時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２６時間（例えば、１２～２６時間、１６～２６時間、１８～２６時間または２０～２６時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２７時間（例えば、１２～２７時間、１６～２７時間、１８～２７時間または２０～２７時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２８時間（例えば、１２～２８時間、１６～２８時間、１８～２８時間、２０～２８時間または２２～２８時間）ごとに約１回の分裂の速度、約２９時間（例えば、１６～２９時間、１８～２９時間、２０～２９時間または２２～２９時間）ごとに約１回の分裂の速度、約３０時間（例えば、１６～３０時間、１８～３０時間、２０～３０時間または２２～３０時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３１時間（例えば、１６～３１時間、１８～３１時間、２０～３１時間、２２～３１時間または２４～３１時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３２時間（例えば、１８～３２時間、２０～３２時間、２２～３２時間または２４～３２時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３３時間（例えば、１８～３３時間、２０～３３時間、２２～３３時間または２４～３３時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３４時間（例えば、１８～３４時間、２０～３４時間、２２～３４時間または２４～３４時間）ごとに約１回の分裂の速度、約３５時間（例えば、１８～３５時間、２０～３５時間、２２～３５時間または２４～３５時間）ごとに約１回の分裂の速度、約３６時間（例えば、１８～３６時間、２０～３６時間、２２～３６時間または２４～３６時間）ごとに約１回の分裂の平均速度で操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の増殖を刺激し得る。

【0154】

いくつかの事例では、活性化剤は、少なくとも１９連続日にわたって維持されているγδＴ細胞増殖培養物において約１２時間（例えば１０～１２時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１３時間（例えば１０～１３時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１４時間（例えば１０～１４時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１５時間（例えば１０～１５時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１６時間（例えば１０～１６時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１７時間（例えば１０～１７時間または１２～１７時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１８時間（例えば１０～１８時間または１２～１８時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約１９時間（例えば１０～１９時間または１２～１９時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２０時間（例えば、１２～２０時間、１６～２０時間または１８～２０時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２１時間（例えば、１２～２１時間、１６～２１時間または１８～２１時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２２時間（例えば、１２～２２時間、１６～２２時間または１８～２２時間）ごとに約１回の分裂の速度、約２３時間以下（例えば、１２～２３時間、１６～２３時間または１８～２３時間）ごとに約１回の分裂の速度、約２４時間（例えば、１２～２４時間、１６～２４時間または１８～２４時間）ごとに約１回の分裂の平均速度で操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の増殖を刺激し得る。

【0155】

いくつかの事例では、活性化剤は、少なくとも１９連続日にわたって維持されているγδＴ細胞増殖培養物において約２５時間（例えば、１２～２５時間、１６～２５時間、１８～２５時間または２０～２５時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２６時間（例えば、１２～２６時間、１６～２６時間、１８～２６時間または２０～２６時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２７時間（例えば、１２～２７時間、１６～２７時間、１８～２７時間または２０～２７時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約２８時間（例えば、１２～２８時間、１６～２８時間、１８～２８時間、２０～２８時間または２２～２８時間）ごとに約１回の分裂の速度、約２９時間（例えば、１６～２９時間、１８～２９時間、２０～２９時間または２２～２９時間）ごとに約１回の分裂の速度、約３０時間（例えば、１６～３０時間、１８～３０時間、２０～３０時間または２２～３０時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３１時間（例えば、１６～３１時間、１８～３１時間、２０～３１時間、２２～３１時間または２４～３１時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３２時間（例えば、１８～３２時間、２０～３２時間、２２～３２時間または２４～３２時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３３時間（例えば、１８～３３時間、２０～３３時間、２２～３３時間または２４～３３時間）ごとに約１回の分裂の平均速度、約３４時間（例えば、１８～３４時間、２０～３４時間、２２～３４時間または２４～３４時間）ごとに約１回の分裂の速度、約３５時間（例えば、１８～３５時間、２０～３５時間、２２～３５時間または２４～３５時間）ごとに約１回の分裂の速度、約３６時間（例えば、１８～３６時間、２０～３６時間、２２～３６時間または２４～３６時間）ごとに約１回の分裂の平均速度で操作型及び／または非操作型γδＴ細胞の増殖を刺激し得る。

【0156】

活性化剤は、操作型または非操作型γδＴ細胞の亜集団の増殖を様々な成長速度で刺激し得る。例えば、薬剤はδ１細胞集団の成長を、１日～９０日の培養（例えば、約１日～約１９、２１または２３日の培養）の期間にわたる増殖が別のγδＴ細胞集団、例えばδ２またはδ３集団よりも；増殖前のγδＴ細胞の開始時個数よりも；増殖前のγδ１Ｔ細胞の開始時個数よりも；または培養物中のαβＴ細胞集団よりも約１０倍超、約１００倍超、約２００倍超、約３００倍超、約４００倍超、約５００倍超、約６００倍超、約７００倍超、約８００倍超、約９００倍超、約１，０００倍超、約１０，０００倍超、約２０，０００倍超、約３０，０００倍超、約５０，０００倍超、約７０，０００倍超、約１００，０００倍超または約１，０００，０００倍超だけ大きい増殖をもたらすようなより速い速度で刺激し得る。

【0157】

他の事例では、薬剤はδ１及びδ４集団の成長を、１日～９０日の培養（例えば、約１日～約１９、２１または２３日の培養）の期間にわたる増殖がδ２Ｔ細胞集団よりも；別のγδＴ細胞亜集団よりも；増殖前のγδＴ細胞の開始時個数よりも；増殖前のγδ１Ｔ細胞の開始時個数よりも；増殖前のγδ１及びγδ３Ｔ細胞の開始時個数よりも；または培養物中のαβＴ細胞集団よりも１０倍超、１００倍超、２００倍超、３００倍超、４００倍超、５００倍超、６００倍超、７００倍超、８００倍超、９００倍超、１，０００倍超、１０，０００倍超、２０，０００倍超、３０，０００倍超、５０，０００倍超、７０，０００倍超、１００，０００倍超または１，０００，０００倍超だけ大きい増殖をもたらすようなより速い速度で刺激し得る。

【0158】

他の事例では、薬剤はδ１及びδ４集団の成長を、１日～９０日の培養（例えば、約１日～約１９、２１または２３日の培養）の期間にわたる増殖がδ２Ｔ細胞集団よりも；別のγδＴ細胞亜集団よりも；増殖前のγδＴ細胞の開始時個数よりも；増殖前のγδ１Ｔ細胞の開始時個数よりも；増殖前のγδ１及びγδ４Ｔ細胞の開始時個数よりも；または培養物中のαβＴ細胞集団よりも１０倍超、１００倍超、２００倍超、３００倍超、４００倍超、５００倍超、６００倍超、７００倍超、８００倍超、９００倍超、１，０００倍超、１０，０００倍超、２０，０００倍超、３０，０００倍超、５０，０００倍超、７０，０００倍超、１００，０００倍超または１，０００，０００倍超だけ大きい増殖をもたらすようなより速い速度で刺激し得る。

【0159】

他の事例では、薬剤はδ１、δ３、δ４及びδ５集団の成長を、１日～９０日の培養（例えば、約１日～約１９、２１または２３日の培養）の期間にわたる増殖がδ２Ｔ細胞集団よりも；別のγδＴ細胞亜集団よりも；増殖前のγδＴ細胞の開始時個数よりも；増殖前のγδ１Ｔ細胞の開始時個数よりも；増殖前のγδ１及びγδ３Ｔ細胞の開始時個数よりも；増殖前のγδ１、γδ３、γδ４及びγδ５Ｔ細胞の開始時個数よりも；または培養物中のαβＴ細胞集団よりも１０倍超、１００倍超、２００倍超、３００倍超、４００倍超、５００倍超、６００倍超、７００倍超、８００倍超、９００倍超、１，０００倍超、１０，０００倍超、２０，０００倍超、３０，０００倍超、５０，０００倍超、７０，０００倍超、１００，０００倍超または１，０００，０００倍超だけ大きい増殖をもたらすようなより速い速度で刺激し得る。

【0160】

他の事例では、薬剤はδ２集団の成長を、１日～９０日の培養（例えば、約１日～約１９、２１または２３日の培養）の期間にわたる増殖がδ１Ｔ細胞集団よりも；δ３Ｔ細胞集団よりも；別のγδＴ細胞亜集団よりも；増殖前のγδＴ細胞の開始時個数よりも、増殖前のγδ２Ｔ細胞の開始時個数よりも、またはαβＴ細胞よりも１０倍超、１００倍超、２００倍超、３００倍超、４００倍超、５００倍超、６００倍超、７００倍超、８００倍超、９００倍超、１，０００倍超、１０，０００倍超、２０，０００倍超、３０，０００倍超、５０，０００倍超、７０，０００倍超、１００，０００倍超または１，０００，０００倍超だけ大きい増殖をもたらすようなより速い速度で刺激し得る。

【0161】

いくつかの態様では、本開示は、急速な速度、例えば、３０時間ごとに約１回の細胞分裂、またはそれより速い速度でγδＴ細胞集団の増殖を刺激する薬剤に接触している操作型または非操作型γδＴ細胞集団を提供する。いくつかの事例では、薬剤は、δ１；δ２；δ１及びδ４；またはδ１、δ３、δ４及びδ５Ｔ細胞のいずれかの増殖を選択的に刺激する。γδＴ細胞集団は、ある量の非操作型γδＴ細胞及びある量の操作型γδＴ細胞を含み得る。いくつかの事例では、γδＴ細胞集団は、δ１、δ２、δ３及びδ４Ｔ細胞を異なる百分率で含む。操作型または非操作型γδＴ細胞集団は、例えば、９０％未満のδ１Ｔ細胞、８０％未満のδ１Ｔ細胞、７０％未満のδ１Ｔ細胞、６０％未満のδ１Ｔ細胞、５０％未満のδ１Ｔ細胞、４０％未満のδ１Ｔ細胞、３０％未満のδ１Ｔ細胞、２０％未満のδ１Ｔ細胞、１０％未満のδ１Ｔ細胞または５％未満のδ１Ｔ細胞を含み得る。あるいは、操作型または非操作型γδＴ細胞集団は、５％超のδ１Ｔ細胞、１０％超のδ１Ｔ細胞、２０％超のδ１Ｔ細胞、３０％超のδ１Ｔ細胞、４０％超のδ１Ｔ細胞、５０％超のδ１Ｔ細胞、６０％超のδ１Ｔ細胞、７０％超のδ１Ｔ細胞、８０％超のδ１Ｔ細胞または９０％超のδ１Ｔ細胞を含み得る。いくつかの事例では、薬剤は、本明細書に記載の選択的増殖剤のうちの１つである。いくつかの事例では、薬剤は、細胞培養表面またはＡＰＣの表面などの表面に固定されている（例えば、ＡＰＣの表面に発現しているかまたは、ＡＰＣの表面に発現したＦｃ受容体と結合している）。

【0162】

操作型または非操作型γδＴ細胞集団は、例えば、９０％未満のδ２Ｔ細胞、８０％未満のδ２Ｔ細胞、７０％未満のδ２Ｔ細胞、６０％未満のδ２Ｔ細胞、５０％未満のδ２Ｔ細胞、４０％未満のδ２Ｔ細胞、３０％未満のδ２Ｔ細胞、２０％未満のδ２Ｔ細胞、１０％未満のδ２Ｔ細胞または５％未満のδ２Ｔ細胞を含み得る。あるいは、操作型または非操作型γδＴ細胞集団は、５％超のδ２Ｔ細胞、１０％超のδ２Ｔ細胞、２０％超のδ２Ｔ細胞、３０％超のδ２Ｔ細胞、４０％超のδ２Ｔ細胞、５０％超のδ２Ｔ細胞、６０％超のδ２Ｔ細胞、７０％超のδ２Ｔ細胞、８０％超のδ２Ｔ細胞または９０％超のδ２Ｔ細胞を含み得る。

【0163】

操作型または非操作型γδＴ細胞集団は、例えば、９０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、８０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、７０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、６０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、５０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、４０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、３０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、２０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、１０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞または５％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞を含み得る。あるいは、操作型または非操作型γδＴ細胞集団は、５％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、１０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、２０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、３０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、４０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、５０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、６０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、７０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、８０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞または９０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞を含み得る。

【0164】

操作型または非操作型γδＴ細胞集団は、例えば、９０％未満のδ４Ｔ細胞、８０％未満のδ４Ｔ細胞、７０％未満のδ４Ｔ細胞、６０％未満のδ４Ｔ細胞、５０％未満のδ４Ｔ細胞、４０％未満のδ４Ｔ細胞、３０％未満のδ４Ｔ細胞、２０％未満のδ４Ｔ細胞、１０％未満のδ４Ｔ細胞または５％未満のδ４Ｔ細胞を含み得る。あるいは、操作型または非操作型γδＴ細胞集団は、５％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、１０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、２０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、３０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、４０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、５０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、６０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、７０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞、８０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞または９０％超のδ１及びδ４Ｔ細胞を含み得る。操作型または非操作型γδＴ細胞集団は、例えば、９０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、８０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、７０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、６０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、５０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、４０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、３０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、２０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞、１０％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞または５％未満のδ１及びδ４Ｔ細胞を含み得る。

【0165】

特定の実施形態では、本発明は、１０～９０％のδ１Ｔ細胞及び９０～１０％のδ２Ｔ細胞を含む増殖済みγδＴ細胞集団の混合物を提供する。特定の実施形態では、本発明は、１０～９０％のδ１及びδ３Ｔ細胞ならびに９０～１０％のδ２Ｔ細胞を含む増殖済みγδＴ細胞集団の混合物を提供する。特定の実施形態では、本発明は、１０～９０％のδ１及びδ４Ｔ細胞ならびに９０～１０％のδ２Ｔ細胞を含む増殖済みγδＴ細胞集団の混合物を提供する。特定の実施形態では、本発明は、１０～９０％のδ１、δ３、δ４及びδ５Ｔ細胞ならびに９０～１０％のδ２Ｔ細胞を含む増殖済みγδＴ細胞集団の混合物を提供する。

【0166】

１つ以上の活性化剤がγδＴ細胞（例えば、活性化物質γδＴ細胞天然受容体）に接触し得、その後、共刺激分子がγδＴ細胞に接触してさらなる刺激を提供し得、かつγδＴ細胞を増殖させ得る。いくつかの実施形態では、活性化剤及び／または共刺激剤は、植物及び非植物に由来するレクチン、γδＴ細胞を活性化させるモノクローナル抗体、及びその他の非レクチン／非抗体剤であり得る。他の事例では植物レクチンはコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）であり得るが、他の植物レクチンなどが使用されてもよい。レクチンの他の例としては、ピーナッツ凝集素タンパク質（ＰＮＡ）、ダイズ凝集素（ＳＢＡ）、ｌｅｓ ｃｕｌｉｎａｒｉｓ凝集素（ＬＣＡ）、ｐｉｓｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ凝集素（ＰＳＡ）、Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａｔｉａ凝集素（ＨＰＡ）、Ｖｉｃｉａ ｇｒａｍｉｎｅａレクチン（ＶＧＡ）、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ Ｖｕｌｇａｒｉｓエリスロアグルチニン（ＰＨＡ－Ｅ）、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ Ｖｕｌｇａｒｉｓロイコアグルチニン（ＰＨＡ－Ｌ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓ Ｎｉｇｒａレクチン（ＳＮＡ、ＥＢＬ）、Ｍａａｃｋｉａ Ａｍｕｒｅｎｓｉｓ，レクチンＩＩ（ＭＡＬ ＩＩ）、Ｓｏｐｈｏｒａ Ｊａｐｏｎｉｃａ凝集素（ＳＪＡ）、Ｄｏｌｉｃｈｏｓ Ｂｉｆｌｏｒｕｓ凝集素（ＤＢＡ）、Ｌｅｎｓ Ｃｕｌｉｎａｒｉｓ凝集素（ＬＣＡ）、Ｗｉｓｔｅｒｉａ Ｆｌｏｒｉｂｕｎｄａレクチン（ＷＦＡ、ＷＦＬ）が挙げられる。

【0167】

活性化剤及び共刺激分子の非限定的な例としては、本明細書に記載のδもしくはγ鎖またはそれらのサブタイプに対して選択的である任意の１つ以上の抗体、５Ａ６．Ｅ９、Ｂ１、ＴＳ８．２、１５Ｄ、Ｂ６、Ｂ３、ＴＳ－１、γ３．２０、７Ａ５、ＩＭＭＵ５１０、Ｒ９．１２、１１Ｆ２などの抗体、またはそれらの組み合わせが挙げられる。活性化剤及び共刺激分子の他の例としては、ゾレドロネート、ホルボール １２－ミリステート－１３－アセテート（ＴＰＡ）、メゼレイン、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）、連鎖球菌プロテインＡまたはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0168】

他の事例では、活性化剤及び／または共刺激剤は、αＴＣＲ、βＴＣＲ、γＴＣＲ、δＴＣＲ、ＣＤ２７７、ＣＤ２８、ＣＤ４６、ＣＤ８１、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、ＣＤ３０、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ａ、ＨＶＥＭ、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＤＡＰ、ＣＤ１２２、ＧＩＴＲ、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１、ＣＤ１６、ＣＤ１６１、ＤＮＡＸ、補助分子－１（ＤＮＡＭ－１）、１つ以上のＮＣＲ（例えば、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６）、ＳＬＡＭ、コクサッキーウイルス及びアデノウイルス受容体、またはそれらの組み合わせに対する抗体またはリガンドであり得る。

【0169】

操作型γδＴ細胞
操作型γδＴ細胞は、当技術分野で知られている様々な方法によって生成され得る。操作型γδＴ細胞は、特定の腫瘍認識部分を安定的に発現するように設計され得る。腫瘍認識部分または別のタイプの認識部分を含む発現カセットをコードするポリヌクレオチドは、トランスポゾン／トランスポゼース系またはウイルスに基づく遺伝子移入系、例えばレンチウイルスもしくはレトロウイルス系、または別の適切な方法、例えばトランスフェクション、電気穿孔、形質導入、リポフェクション、リン酸カルシウム（ＣａＰＯ_４）、ナノ操作型物質、例えばＯｒｍｏｓｉｌ、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノ随伴ウイルスを含めたウイルス送達方法、または別の適切な方法によってγδＴ細胞内へ安定的に導入され得る。αβまたはγδのいずれかである抗原特異的ＴＣＲは、抗原特異的ＴＣＲの遺伝コードを含むポリヌクレオチドをγδＴ細胞のゲノムの中に安定的に挿入することによって、操作型γδＴ細胞内に導入されることができる。腫瘍認識部分を有するＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドをγδＴ細胞のゲノムの中に安定的に挿入することによって操作型γδＴ細胞内に導入され得る。いくつかの事例では、操作された腫瘍認識部分は操作型Ｔ細胞受容体であり、操作型γδＴ細胞のゲノムの中に組み込まれる発現カセットは、操作されたＴＣＲα（ＴＣＲアルファ）遺伝子、操作されたＴＣＲβ（ＴＣＲベータ）遺伝子、ＴＣＲδ（ＴＣＲデルタ）遺伝子または操作されたＴＣＲγ（ＴＣＲガンマ）遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞のゲノムの中に組み込まれる発現カセットは、抗体断片またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの事例では、抗体断片またはその抗原結合断片は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物の、またはＣＡＲとＴ細胞受容体（ＴＣＲ）とを含んでいるかもしくは異なる抗原を指向する抗体を有するＣＡＲを含んでいる二重特異性構築物の一部として、細胞表面腫瘍抗原に結合する、全抗体、抗体断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆｃ、抗体上の軽鎖もしくは重鎖、抗体の可変もしくは定常領域、またはそれらの任意の組み合わせをコードする、ポリヌクレオチドである。いくつかの事例では、ポリヌクレオチドは、ヒトに由来するか、または別の種に由来する。非ヒト種に由来する抗体断片または抗原結合断片のポリヌクレオチドは、ヒトにおいて天然に産生する抗体変異型とそれらとの類似性を向上させるように改変されることができ、抗体断片または抗原結合断片は、部分的または完全にヒト化されることができる。抗体断片または抗原結合断片のポリヌクレオチドは、キメラ、例えばマウス－ヒト抗体キメラであることもできる。ＣＡＲを発現する操作型γδＴ細胞は、腫瘍認識部分によって認識される抗原に対するリガンドを発現するように操作されることもできる。

【0170】

当技術分野で知られている様々な技術を使用して、腫瘍認識部分の遺伝コードを含んでいるクローニングされたかまたは合成的に操作された核酸を操作型γδＴ細胞のゲノム内の特定位置に導入することができる。ＷＯ２０１４０９３７０、ＷＯ２００３０８７３４１、ＷＯ２０１４１３４４１２及びＷＯ２０１１０９０８０４（参照によりそれらの各々の全体を本明細書に援用する）にそれぞれ記載されている、微生物の規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）システムからのＲＮＡガイドＣａｓ９ヌクレアーゼ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びメガヌクレアーゼの技術を用いてγδＴ細胞（複数可）における効率的なゲノム操作をもたらすことができる。本明細書に記載の技術は、ある遺伝子のノックアウトと別の遺伝子のノックインとを同時にもたらすゲノム位置へ発現カセットを挿入するために用いられることもできる。例えば、ＭＨＣ遺伝子をコードするゲノム領域内に、本開示の発現カセットを含むポリヌクレオチドを挿入することができる。そのような操作は、１つ以上の遺伝子、例えば発現カセット内に含まれている遺伝子のノックインと、別の遺伝子、例えばＭＨＣ遺伝子座のノックアウトとを同時にもたらすことができる。

【0171】

１つの事例では、腫瘍認識部分をコードする核酸を含むＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンを、操作されようとしているγδＴ細胞の細胞内に導入する。野生型Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙと比較して強化された組込みを提供する突然変異体Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゼース、例えばＵＳ７，９８５，７３９（参照によりその全体を本明細書に援用する）に記載されているトランスポゼースを使用してポリヌクレオチドを操作型γδＴ細胞に導入してもよい。

【0172】

いくつかの事例では、ウイルスによる方法を用いて操作型γδＴ細胞のゲノムの中に、腫瘍認識部分を含むポリヌクレオチドを導入する。ウイルスによる多くの方法、例えばＷＯ１９９３０２０２２１（参照によりその全体を本明細書に援用する）に記載されている方法がヒト遺伝子療法のために使用されている。γδＴ細胞を操作するために用いることができる、ウイルスによる方法の非限定的な例としては、レトロウイルス、アデノウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクチニアウイルス、ポックスウイルスまたはアデノウイルス随伴ウイルスによる方法が挙げられる。

【0173】

腫瘍認識部分の遺伝コードを含有するポリヌクレオチドは、操作型γδＴ細胞の成長、増殖、活性化状態に影響を与える突然変異もしくはその他の導入遺伝子、または精巣特異的がん抗原などの腫瘍細胞特異的な抗原を含み得る。本開示のγδＴ細胞は、抗原認識部分に繋げられた活性化ドメイン、例えば、ＴＣＲ－ＣＤ３複合体中の分子、または共刺激因子を含んでいるポリヌクレオチドを発現するように操作され得る。操作型γδＴ細胞は、Ｔリンパ球活性化ドメインである細胞内シグナル伝達ドメインを発現することができる。γδＴ細胞は、細胞内活性化ドメイン遺伝子または細胞内シグナル伝達ドメインを発現するように操作され得る。細胞内シグナル伝達ドメイン遺伝子は、例えば、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＩＣＯＳ、ＪＡＭＬ、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＯＸ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ４、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＦｃεＲＩγ、ＩＬ－２ＲＢ／ＣＤ１２２、ＩＬ－２ＲＧ／ＣＤ１３２、ＤＡＰ分子、ＣＤ７０、サイトカイン受容体、ＣＤ４０、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞は、サイトカイン、抗原、細胞受容体、または他の免疫調節分子を発現するようにさらに操作される。

【0174】

操作型γδＴ細胞で発現させる適切な腫瘍認識部分は、処置すべき疾患に基づいて選択することができる。例えば、いくつかの事例では、腫瘍認識部分はＴＣＲである。いくつかの事例では、腫瘍認識部分は、がん細胞上に発現するリガンドに対する受容体である。適切な受容体の非限定的な例としては、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｆ、ＬＬＴ１、ＡＩＣＬ、ＣＤ２６、ＮＫＲＰ１、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、ＤＮＡＭ－１、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６及びＮＫｐ８０が挙げられる。いくつかの事例では、腫瘍認識部分は、リガンド、例えばＩＬ－１３リガンド、または腫瘍抗原に対するリガンド模倣体、例えばＩＬ１３Ｒに対するＩＬ－１３模倣体を含むことができる。

【0175】

γδＴ細胞は、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｆ、ＬＬＴ１、ＡＩＣＬ、ＣＤ２６、ＮＫＲＰ１、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、ＤＮＡＭ－１、または抗腫瘍抗体、例えば抗Ｈｅｒ２ｎｅｕもしくは抗ＥＧＦＲに由来するリガンド結合ドメインと、ＣＤ３－ζ、Ｄａｐ１０、Ｄａｐ１２、ＣＤ２８、４１ＢＢ及びＣＤ４０Ｌから得られるシグナル伝達ドメインとを含むキメラ腫瘍認識部分を発現するように操作され得る。いくつかの例では、キメラ受容体は、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、Ｈｅｒ２ｎｅｕ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソテリン、ＣＤ３８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＰＳＡ、ＲＯＮ、ＣＤ３０、ＣＤ２２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５６、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７０、ＣＤ７５、ＣＡ６、ＧＤ２、アルファフェトタンパク質（ＡＦＰ）、ＣＳ１、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１６、５Ｔ４、ＮａＰｉ２ｂ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＰＬＩＦ、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＰＭＮＢ、ＬＩＶ－１、糖脂質Ｆ７７、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴＥＡＰ－２、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＤ４４ｖ６、ＰＶＲＬ－４、ＶＥＧＦＲ２、Ｃ４．４ａ、ＰＳＣＡ、葉酸結合タンパク質／受容体、ＳＬＣ４４Ａ４、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＡＸＬ、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＬ－３Ｒ、ＩＬ－３、ＥＰＨＡ３、ＳＬＴＲＫ６、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、チロシナーゼ、ＳＳＸ２、ＳＳＸ４、ＮＹＥＳＯ－１、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、ＭＡＧＥＡファミリー遺伝子（例えば、ＭＡＧＥＡ３．ＭＡＧＥＡ４）、ＫＫＬＣ１、突然変異型ｒａｓ（Ｈ、Ｎ、Ｋ）、ＢＲａｆ、ｐ５３、β－カテニン、ＥＧＦＲＴ７９０、ＭＨＣクラスＩ鎖関連分子Ａ（ＭＩＣＡ）もしくはＭＨＣクラスＩ鎖関連分子Ｂ（ＭＩＣＢ）、またはＨＰＶ、ＣＭＶ、もしくはＥＢＶのうちの１つ以上の抗原に結合する。

【0176】

いくつかの事例では、腫瘍認識部分は、腫瘍関連ペプチドと複合体化したＭＨＣクラスＩ分子（ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＢまたはＨＬＡ－Ｃ）を標的とする。ＭＨＣクラスＩ分子と複合体化した腫瘍関連ペプチドを標的とする腫瘍認識部分を生成及び使用するための方法及び組成物としては、例えば、Ｗｅｉｄａｎｚ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：３２８－４０，２０１１、Ｓｃｈｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．４（５）：６４７－８，２０１３、Ｃｈｅｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５（１７）：５３２３－３７，２００９、Ｄｏｈａｎ＆Ｒｅｉｔｅｒ Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．１４：ｅ６，２０１２、Ｄａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１３ Ｍａｒ １３；５（１７６）：１７６ｒａ３３、Ｕ．Ｓ．９，５４０，４４８、及びＷＯ２０１７／０１１８０４に記載されているものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ペプチドＭＨＣ複合体の標的化腫瘍関連ペプチドは、ウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、サバイビン、マウス二重微小染色体２相同体（ＭＤＭ２）、シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ１Ｂ）、ＫＲＡＳ、またはＢＲＡＦのペプチドである。

【0177】

遺伝学的に異なるか実質的に異なるかもしくは実質的に同一である、操作型γδＴ細胞から安定的に発現するαβＴＣＲポリヌクレオチドから、または操作型γδＴ細胞に安定的に組み込まれた遺伝学的に別個のαβＴＣＲポリヌクレオチドから、２つ以上の腫瘍認識部分をγδＴ細胞で発現させてもよい。遺伝学的に別個のαβＴＣＲ（複数可）の事例では、同じ症状に関連している異なる抗原を認識するαβＴＣＲ（複数可）を利用してもよい。１つの好ましい実施形態では、γδＴ細胞は、異なるＭＨＣハプロタイプとの関連において同じ抗原を認識する１つ以上の発現カセットから、ヒトまたはマウスを起源とする異なるＴＣＲを発現するように操作される。別の好ましい実施形態では、γδＴ細胞は、１つのＴＣＲと、異なるＭＨＣハプロタイプと複合体化している所与の抗原からの同じまたは異なるペプチドを指向する２つ以上の抗体とを発現するように操作される。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞による単一のＴＣＲの発現は、適切なＴＣＲ対合を促進する。異なるＴＣＲを発現する操作型γδＴ細胞は、普遍的な同種異系操作型γδＴ細胞を提供することができる。もう１つの好ましい実施形態では、γδＴ細胞は、ペプチド－ＭＨＣ複合体を指向する１つ以上の異なる抗体を発現するように操作され、各抗体は、同じまたは異なるＭＨＣハプロタイプと複合体化した同じまたは異なるペプチドを指向するものである。いくつかの事例では、腫瘍認識部分は、ペプチド－ＭＨＣ複合体に結合する抗体であり得る。

【0178】

γδＴ細胞は、異なるＭＨＣハプロタイプとの関連において同じ抗原を認識する１つ以上の発現カセットからのＴＣＲを発現するように操作され得る。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞は、操作型細胞内でのＴＣＲ誤対合の可能性を最小限に抑えるために、単一のＴＣＲまたは、ＣＡＲと組み合わせたＴＣＲを発現するように設計される。２つ以上の発現カセットから発現する腫瘍認識部分は、好ましくは、異なるポリヌクレオチド配列を有し、例えば異なるＨＬＡハプロタイプとの関連において同じ標的の異なるエピトープを認識する腫瘍認識部分をコードする。そのような異なるＴＣＲまたはＣＡＲを発現する操作型γδＴ細胞は、普遍的な同種異系操作型γδＴ細胞を提供することができる。

【0179】

いくつかの事例では、γδＴ細胞は、１つ以上の腫瘍認識部分を発現するように設計される。γδＴ細胞において操作された遺伝学的に同一または実質的に同一の抗原特異的キメラ（ＣＡＲ）ポリヌクレオチドから、２つ以上の腫瘍認識部分を発現させてもよい。γδＴ細胞において操作された遺伝学的に別個のＣＡＲポリヌクレオチドから２つ以上の腫瘍認識部分を発現させてもよい。遺伝学的に別個のＣＡＲ（複数可）は、同じ症状に関連している異なる抗原を認識するように設計されてもよい。

【0180】

γδＴ細胞は、あるいは二重特異性であってもよい。二重特異性操作型γδＴ細胞は、２つ以上の腫瘍認識部分を発現することができる。二重特異性操作型γδＴ細胞は、ＴＣＲ腫瘍認識部分とＣＡＲ腫瘍認識部分との両方を発現することができる。二重特異性操作型γδＴ細胞は、同じ症状に関連している異なる抗原を認識するように設計されることができる。操作型γδＴ細胞は、同一または実質的に同一の抗原を認識する２つ以上のＣＡＲ／ＴＣＲ（複数可）二重特異性ポリヌクレオチドを発現することができる。操作型γδＴ細胞は、別個の抗原を認識する２つ以上のＣＡＲ／ＴＣＲ（複数可）二重特異性構築物を発現することができる。いくつかの事例では、本開示の二重特異性構築物は、標的細胞の活性化及び不活性化ドメインに結合し、それにより、向上した標的特異性を提供する。γδＴ細胞は、少なくとも１個の腫瘍認識部分、少なくとも２個の腫瘍認識部分、少なくとも３個の腫瘍認識部分、少なくとも４個の腫瘍認識部分、少なくとも５個の腫瘍認識部分、少なくとも６個の腫瘍認識部分、少なくとも７個の腫瘍認識部分、少なくとも８個の腫瘍認識部分、少なくとも９個の腫瘍認識部分、少なくとも１０個の腫瘍認識部分、少なくとも１１個の腫瘍認識部分、少なくとも１２個の腫瘍認識部分、または別の適切な数の腫瘍認識部分を発現するように操作され得る。

【0181】

適切なＴＣＲ機能は、ＩＴＡＭモチーフを含む２つの機能性ζ（ゼータ）タンパク質によって強化され得る。適切なＴＣＲ機能は、αβまたはγδ活性化ドメイン、例えば、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＪＡＭＬ、ＰＤ－１、ＣＤ２７、ＣＤ３０、４１－ＢＢ、ＯＸ４０、ＮＫＧ２Ｄ、ＨＶＥＭ、ＣＤ４６、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＩＬ－２ＲＢ／ＣＤ１２２、ＩＬ－２ＲＧ／ＣＤ１３２、ＤＡＰ分子、及びＣＤ７０によっても強化され得る。発現したポリヌクレオチドは、腫瘍認識部分、リンカー部分及び活性化ドメインの遺伝コードを含み得る。操作型γδＴ細胞によるポリヌクレオチドの翻訳は、タンパク質リンカーによって繋ぎ合わされた腫瘍認識部分と活性化ドメインとを提供し得る。大抵、リンカーは、腫瘍認識部分及び活性化ドメイン折りたたみを妨げないアミノ酸を含む。リンカー分子は、長さが少なくとも約５アミノ酸、約６アミノ酸、約７アミノ酸、約８アミノ酸、約９アミノ酸、約１０アミノ酸、約１１アミノ酸、約１２アミノ酸、約１３アミノ酸、約１４アミノ酸、約１５アミノ酸、約１６アミノ酸、約１７アミノ酸、約１８アミノ酸、約１９アミノ酸または約２０アミノ酸であり得る。いくつかの事例では、リンカー中のアミノ酸のうちの少なくとも５０％、少なくとも７０％、または少なくとも９０％は、セリンまたはグリシンである。

【0182】

いくつかの事例では、活性化ドメインは１つ以上の突然変異を含み得る。適する突然変異は、例えば、活性化ドメインを恒常的に活性にする突然変異であり得る。１つ以上の核酸の同一性を変更することは、翻訳されるアミノ酸のアミノ酸配列を変化させる。コードされるアミノ酸を極性、無極性、塩基性または酸性のアミノ酸に改変するような核酸突然変異をもたらすことができる。腫瘍からのエピトープを認識するように腫瘍認識部分を最適化するような核酸突然変異をもたらすことができる。操作された腫瘍認識部分、操作された活性化ドメイン、またはγδＴ細胞の別の操作された構成要素は、１個より多いアミノ酸突然変異、２個のアミノ酸突然変異、３個のアミノ酸突然変異、４個のアミノ酸突然変異、５個のアミノ酸突然変異、６個のアミノ酸突然変異、７個のアミノ酸突然変異、８個のアミノ酸突然変異、９個のアミノ酸突然変異、１０個のアミノ酸突然変異、１１個のアミノ酸突然変異、１２個のアミノ酸突然変異、１３個のアミノ酸突然変異、１４個のアミノ酸突然変異、１５個のアミノ酸突然変異、１６個のアミノ酸突然変異、１７個のアミノ酸突然変異、１８個のアミノ酸突然変異、１９個のアミノ酸突然変異、２０個のアミノ酸突然変異、２１個のアミノ酸突然変異、２２個のアミノ酸突然変異、２３個のアミノ酸突然変異、２４個のアミノ酸突然変異、２５個のアミノ酸突然変異、２６個のアミノ酸突然変異、２７個のアミノ酸突然変異、２８個のアミノ酸突然変異、２９個のアミノ酸突然変異、３０個のアミノ酸突然変異、３１個のアミノ酸突然変異、３２個のアミノ酸突然変異、３３個のアミノ酸突然変異、３４個のアミノ酸突然変異、３５個のアミノ酸突然変異、３６個のアミノ酸突然変異、３７個のアミノ酸突然変異、３８個のアミノ酸突然変異、３９個のアミノ酸突然変異、４０個のアミノ酸突然変異、４１個のアミノ酸突然変異、４２個のアミノ酸突然変異、４３個のアミノ酸突然変異、４４個のアミノ酸突然変異、４５個のアミノ酸突然変異、４６個のアミノ酸突然変異、４７個のアミノ酸突然変異、４８個のアミノ酸突然変異、４９個のアミノ酸突然変異、または５０個のアミノ酸突然変異を含み得る。

【0183】

いくつかの事例では、本開示のγδＴ細胞は１つ以上のＭＨＣ分子を発現しない。操作型γδＴ細胞における１つ以上のＭＨＣ遺伝子座の欠失は、宿主免疫系によって操作型γδＴ細胞が認識される可能性を低減することができる。ヒトの主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）遺伝子座は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）系として知られ、γδＴ細胞を含めた抗原提示細胞において発現する大きな遺伝子ファミリーを構成する。ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃ分子は、抗原としての細胞内ペプチドを抗原提示細胞に提示するように機能する。ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＭ、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＨＬＡ－ＤＱ及びＨＬＡ－ＤＲ分子は、抗原としての細胞外ペプチドを抗原提示細胞に提示するように機能する。ＨＬＡ遺伝子のいくつかの対立遺伝子は、ＧＶＨＤ、自己免疫障害及びがんと関連付けられてきた。本明細書に記載の操作型γδＴ細胞は、１つ以上のＨＬＡ遺伝子の遺伝子発現が欠如するかまたは妨害されるようにさらに操作されることができる。本明細書に記載の操作型γδＴ細胞は、ＭＨＣ複合体の１つ以上の構成要素の遺伝子発現が欠如するかまたは妨害されるように、例えば、ＭＨＣ遺伝子のうちの１つ以上が完全に欠失するか、特定のエクソンが欠失するかまたはβ２マイクログロブリン（Ｂ２ｍ）が欠失するように、さらに操作されることができる。少なくとも１つのＨＬＡ遺伝子の遺伝子切除または遺伝子妨害は、宿主対移植片疾患を引き起こすことなく任意のＨＬＡハプロタイプを有する対象に投与されることができる臨床上治療的なγδＴ細胞をもたらすことができる。本明細書に記載の操作型γδＴ細胞は、任意のＨＬＡハプロタイプを有するヒト対象のための普遍的ドナーとなることができる。

【0184】

γδＴ細胞は、１つまたは様々なＨＬＡ遺伝子座（複数可）が欠如するように操作されることができる。操作されたγδＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ対立遺伝子、ＨＬＡ－Ｂ対立遺伝子、ＨＬＡ－Ｃ対立遺伝子、ＨＬＡ－ＤＲ対立遺伝子、ＨＬＡ－ＤＱ対立遺伝子またはＨＬＡ－ＤＰ対立遺伝子が欠如するように操作されることができる。いくつかの事例では、ＨＬＡ対立遺伝子は、ヒトの症状、例えば自己免疫症状に関連している。例えば、ＨＬＡ－Ｂ２７対立遺伝子は関節炎及びぶどう膜炎と関連付けられており、ＨＬＡ－ＤＲ２対立遺伝子は全身性紅斑性狼瘡及び多発性硬化症に関連付けられており、ＨＬＡ－ＤＲ３対立遺伝子は２１－水酸化酵素欠損症に関連付けられており、ＨＬＡ－ＤＲ４は関節リウマチ及び１型糖尿病に関連付けられている。例えばＨＬＡ－Ｂ２７対立遺伝子が欠如している操作型γδＴ細胞は、対象の免疫系によってすぐに認識されることなく、関節炎を患う対象に投与されることができる。いくつかの事例では、１つ以上のＨＬＡ遺伝子座の欠失は、任意のＨＬＡハプロタイプを有する任意の対象のための普遍的ドナーである操作型γδＴ細胞をもたらす。

【0185】

いくつかの事例では、γδＴ細胞を操作することは、γδＴ細胞ゲノムの一部の欠失を必要とする。いくつかの事例では、ゲノムの欠失部分は、ＭＨＣ遺伝子座（複数可）の一部を含む。ある場合には、操作型γδＴ細胞は野生型ヒトγδＴ細胞に由来し、ＭＨＣ遺伝子座はＨＬＡ遺伝子座である。いくつかの事例では、ゲノムの欠失部分は、ＭＨＣ複合体中のタンパク質に対応する遺伝子の一部を含む。いくつかの事例では、ゲノムの欠失部分は、β２マイクログロブリン遺伝子を含む。ある場合には、ゲノムの欠失部分は、免疫チェックポイント遺伝子、例えば、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４及びＣＥＣＡＭ－１を含む。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞は、Ｔ細胞の活性化及び細胞傷害性を強化する活性化ドメインを発現するように設計されることができる。操作型γδＴ細胞で発現させることができる活性化ドメインの非限定的な例としては、ＣＤ２、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＤＡＰ分子、ＣＤ１２２、ＧＩＴＲ、ＦｃεＲＩγが挙げられる。

【0186】

操作型γδＴ細胞のゲノムの任意の部分を欠失させて内在性γδＴ細胞遺伝子の発現を妨害することができる。γδＴ細胞のゲノムにおいて欠失させるかまたは妨害することができるゲノム領域の非限定的な例としては、プロモーター、アクチベーター、エンハンサー、エクソン、イントロン、非コードＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、核内低分子ＲＮＡ、可変数縦列型反復配列（ＶＮＴＲ）、短鎖縦列型反復配列（ＳＴＲ）、ＳＮＰパターン、超可変領域、ミニサテライト、ジヌクレオチド反復配列、トリヌクレオチド反復配列、テトラヌクレオチド反復配列、または単純反復配列が挙げられる。いくつかの事例では、ゲノムの欠失部分は、１核酸～約１０核酸、１核酸～約１００核酸、１核酸～約１，０００核酸、１核酸～約１０，０００核酸、１核酸～約１００，０００核酸、１核酸～約１，０００，０００核酸の範囲、または他の適切な範囲である。

【0187】

操作型γδＴ細胞におけるＨＬＡ遺伝子発現は、当技術分野で知られている様々な技術を用いて妨害することもできる。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞ゲノムから遺伝子を切除するかまたは操作型γδＴ細胞における少なくとも１つのＨＬＡ遺伝子座の遺伝子発現を妨害するために、広い遺伝子座の遺伝子編集技術が用いられる。操作型γδＴ細胞のゲノム上の所望の遺伝子座を編集するために用いることができる遺伝子編集技術の非限定的な例としては、ＷＯ２０１４０９３７０、ＷＯ２００３０８７３４１、ＷＯ２０１４１３４４１２及びＷＯ２０１１０９０８０４（参照によりそれらの各々の全体を本明細書に援用する）にそれぞれ記載されている、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）－Ｃａｓ、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びメガヌクレアーゼの技術が挙げられる。

【0188】

γδＴ細胞は、腫瘍認識部分を既に発現する単離された非操作型γδＴ細胞から操作されてもよい。操作型γδＴ細胞は、単離された、例えば腫瘍試料の腫瘍内浸潤リンパ球から単離された野生型γδＴ細胞で内在的に発現する腫瘍細胞認識部分を保持することができる。いくつかの事例では、野生型γδＴＣＲが操作型γδＴ細胞の腫瘍細胞認識部分で置き換えられる。

【0189】

γδＴ細胞は、１つ以上の帰巣分子、例えばリンパ球帰巣分子を発現するように操作されることができる。帰巣分子は、例えば、リンパ球帰巣受容体または細胞接着分子であり得る。帰巣分子は、操作型γδＴ細胞を対象に投与した時に操作型γδＴ細胞が遊走して標的化固形腫瘍を含めた固形腫瘍に浸潤することを助けることができる。帰巣受容体の非限定的な例としては、ＣＣＲファミリーのメンバー、例えば、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＬＡ、ＣＤ４４、ＣＤ１０３、ＣＤ６２Ｌ、Ｅ－セレクチン、Ｐ－セレクチン、Ｌ－セレクチン、インテグリン、例えばＶＬＡ－４及びＬＦＡ－１が挙げられる。細胞接着分子の非限定的な例としては、ＩＣＡＭ、Ｎ－ＣＡＭ、ＶＣＡＭ、ＰＥ－ＣＡＭ、Ｌ１－ＣＡＭ、ネクチン（ＰＶＲＬ１、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＬ３）、ＬＦＡ－１、インテグリン アルファＸベータ２、アルファｖベータ７、マクロファージ－１抗原、ＣＬＡ－４、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａが挙げられる。細胞接着分子のさらなる例としては、Ｔ－カドヘリンなどのカルシウム依存分子及び、ＭＭＰ９またはＭＭＰ２などのマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）に対する抗体が挙げられる。

【0190】

Ｔ細胞の成熟、活性化、増殖及び機能に関係するステップは、免疫チェックポイントタンパク質を介する共刺激性及び抑制性のシグナルによって調節され得る。免疫チェックポイントは、免疫系に本来備わっている共刺激性及び抑制性の要素である。免疫チェックポイントは、疾患症状、例えば細胞形質転換または感染に免疫系が応答するときに組織に対する損傷を防止すべく自己寛容を維持しかつ生理学的免疫応答の持続期間及び大きさを調節するのを助ける。γδＴ細胞かαβＴ細胞かのどちらかからの免疫応答を制御するために用いられる共刺激シグナルと抑制シグナルとの平衡は、免疫チェックポイントタンパク質によって調節され得る。免疫チェックポイントタンパク質、例えばＰＤ１及びＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞の表面に存在しており、免疫応答の「入」または「切」を切り替えるために使用され得る。腫瘍は、とりわけ腫瘍抗原に特異的なＴ細胞に対して、チェックポイントタンパク質機能を免疫耐性機序として調節不全にし得る。本開示の操作型γδＴ細胞は、１つ以上の免疫チェックポイント遺伝子座（複数可）、例えば、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＣＥＡＣＡＭ１、Ｂ７－Ｈ３、及びＢ７－Ｈ４が欠如するようにさらに操作されることができる。あるいは、本開示の操作型γδＴ細胞における内在性免疫チェックポイント遺伝子の発現を遺伝子編集技術によって妨害することができる。

【0191】

免疫学的チェックポイントは、本開示の操作型γδＴ細胞において抑制シグナル伝達経路を調節する分子（例を挙げると、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１及びＬＡＧ３）または刺激シグナル伝達経路を調節する分子（例を挙げると、ＩＣＯＳ）であり得る。幅広い免疫グロブリンスーパーファミリー内のいくつかのタンパク質は、免疫学的チェックポイントのリガンドとなり得る。免疫チェックポイントリガンドタンパク質の非限定的な例としては、Ｂ７－Ｈ４、ＩＣＯＳＬ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＭｅｇａＣＤ４０Ｌ、ＭｅｇａＯＸ４０Ｌ、及びＣＤ１３７Ｌが挙げられる。いくつかの事例では、免疫チェックポイントタンパク質は、腫瘍で発現する抗原である。いくつかの事例では、免疫チェックポイント遺伝子はＣＴＬＡ－４遺伝子である。いくつかの事例では、免疫チェックポイント遺伝子はＰＤ－１遺伝子である。

【0192】

ＰＤ１は、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４ファミリーに属する抑制性受容体であり、活性化されたＴリンパ球、Ｂ細胞、単球、ＤＣ及びＴ－ｒｅｇにおいて発現する。ＰＤ１に対する２つの既知のリガンド、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２が存在し、それらはＴ細胞、ＡＰＣ及び悪性細胞において発現するものであり、自己反応性リンパ球を抑制しかつＴＡＡ特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）のエフェクター機能を抑制するように機能する。したがって、ＰＤ１が欠如している操作型γδＴ細胞はその細胞傷害活性を、腫瘍細胞によるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の発現に関係なく保持することができる。いくつかの事例では、本開示の操作型γδＴ細胞にはＰＤ－１遺伝子の遺伝子座が欠如している。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞におけるＰＤ－１遺伝子の発現は遺伝子編集技術によって妨害される。

【0193】

ＣＴＬＡ４（細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４）は、ＣＤ１５２（分化抗原１５２）としても知られている。ＣＴＬＡ４は、配列相同性及びリガンド（ＣＤ８０／Ｂ７－１及びＣＤ８６／Ｂ７－２）を共刺激分子ＣＤ２８と共有しているものの、ＣＴＬＡ４を受容体として発現しているＴ細胞に抑制シグナルを送達する点で異なる。ＣＴＬＡ４は、両リガンドに対する全親和性がよりはるかに高く、リガンド密度が限られている場合に結合に関してＣＤ２８を凌駕することができる。ＣＴＬＡ４は、ＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞の表面に発現することが多く、ナイーブ及びメモリーＴ細胞の両方の初期活性化段階において機能的役割を果たす。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞活性化の初期段階の間、ＣＤ８０及びＣＤ８６に対する増加した親和性によってＣＤ２８の活性を打ち消す。ＣＴＬＡ４の主要な機能には、ヘルパーＴ細胞の下方制御及び調節性Ｔ細胞の免疫抑制活性の強化が含まれる。ある場合には、本開示の操作型γδＴ細胞にはＣＴＬＡ４遺伝子が欠如している。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞におけるＣＴＬＡ４遺伝子の発現は遺伝子編集技術によって妨害される。

【0194】

ＬＡＧ３（リンパ球活性化遺伝子３）は、活性化された抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞上に発現し、調節性Ｔ細胞の機能を強化することができ、独立してＣＤ８^＋エフェクターＴ細胞活性を抑制することができる。ＬＡＧ３は、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質に対する高い結合親和性を有するＣＤ４様の負の調節性タンパク質であり、いくつかの上皮癌では上方制御されており、Ｔ細胞増殖及び恒常性の寛容をもたらす。ＬＡＧ－３－ＩＧ融合タンパク質を使用するＬＡＧ－３／クラスＩＩ相互作用の軽減は、抗腫瘍免疫応答を強化し得る。いくつかの事例では、本開示の操作型γδＴ細胞にはＬＡＧ３遺伝子の遺伝子座が欠如している。ある場合には、操作型γδＴ細胞におけるＬＡＧ３遺伝子の発現は遺伝子編集技術によって妨害される。

【0195】

非操作型及び操作型γδＴ細胞の表現型
操作型γδＴ細胞は、対象の体の特定の身体位置に帰巣し得る。操作型γδＴ細胞の遊走及び帰巣は、特定のケモカイン及び／または接着分子の発現と作用との複合に依存し得る。操作型γδＴ細胞の帰巣は、ケモカインとその受容体との相互作用によって制御され得る。例えば、限定されないがＣＸＣＲ３（そのリガンドはＩＰ－１０／ＣＸＣＬ１０及び６Ｃｋｉｎｅ／ＳＬＣ／ＣＣＬ２１で表される）、ＣＣＲ４＋ＣＸＣＲ５＋（ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１βの受容体）、ＣＣＲ６＋及びＣＣＲ７を含めてサイトカインは操作型γδＴ細胞の帰巣に影響を与え得る。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞は、炎症及び損傷の部位ならびに疾患細胞に帰巣して修復機能を発揮し得る。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞はがんに帰巣することができる。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞は、胸腺、骨髄、皮膚、喉頭、気管、胸膜、肺、食道、腹部、胃、小腸、大腸、肝臓、膵臓、腎臓、尿道、膀胱、精巣、前立腺、精管、卵巣、尿管（ｕｒｅｔｕｓ）、乳腺、副甲状腺、脾臓または対象の体の別の部位に帰巣し得る。操作型γδＴ細胞は、１つ以上の帰巣部分、例えば、特定のＴＣＲ対立遺伝子及び／またはリンパ球帰巣分子を発現することができる。

【0196】

操作型γδＴ細胞は特定の表現型を有し得、表現型は細胞表面マーカー発現の観点から表されることができる。様々なタイプのγδＴ細胞を本明細書で記載されているとおりに操作することができる。好ましい実施形態では操作型γδＴ細胞はヒトに由来するが、操作型γδＴ細胞が別の供給源、例えば哺乳動物または合成細胞に由来するものであってもよい。

【0197】

活性化及び／または増殖済み細胞集団の免疫表現型は、限定されないがＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌを含めたマーカーを使用して決定され得る（Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２１１：２１４ ２００６）。ＣＤ１３７、または４－１ＢＢは、活性化誘導共刺激分子であり、免疫応答の重要な調節因子である。Ｐｏｌｌｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０，７７１－８１（１９９３）。ＣＤ４５ＲＡは、ナイーブＴリンパ球上に発現し、抗原との遭遇によりＣＤ４５ＲＯに置き換えられるが、後のエフェクター細胞において再発現し（Ｍｉｃｈｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６０，２６４－２６５（１９９２）、ＣＤ６２Ｌは、二次リンパ組織に進入する帰巣分子として作用する細胞接着分子であり、Ｔ細胞がエフェクター機能を獲得する場合、Ｔ細胞活性化の後に消失する（Ｓａｌｌｕｓｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４０１：７０８（１９９９））。ＣＤ２７は、Ｔ細胞分化中に消失する共刺激マーカーである（Ａｐｐａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ．８：３７９（２００２）、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２１１：２１４ ２００６）。追加的または代替的な活性化マーカーには、ＣＤ２５、ＰＤ－１、及びＣＤ６９のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。

【0198】

抗原
本明細書において開示される本発明は、抗原認識部分を発現する操作型γδＴ細胞を提供し、この場合、抗原認識部分は、疾患に特有のエピトープを認識する。抗原は、免疫応答を惹起する分子であり得る。この免疫応答は、抗体産生か、免疫応答能を有する特定細胞の活性化かのどちらか、またはその両方を伴い得る。抗原は、例えば、ペプチド、タンパク質、ハプテン、脂質、炭水化物、細菌、病原体またはウイルスであり得る。抗原は腫瘍抗原であり得る。腫瘍エピトープは、ＭＨＣＩまたはＭＨＣＩＩ複合体によって腫瘍細胞の表面に提示され得る。エピトープは、細胞表面に発現して腫瘍認識部分によって認識される、抗原の一部であり得る。

【0199】

操作型γδＴ細胞によって認識される抗原の非限定的な例としては、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ２２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５６、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１２３、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７０、ＣＤ７５、ＣＡ６、ＧＤ２、アルファフェトタンパク質（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＲＯＮ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１６、５Ｔ４、ＮａＰｉ２ｂ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＰＬＩＦ、Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＰＭＮＢ、ＬＩＶ－１、糖脂質Ｆ７７、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ－１、ＳＴＥＡＰ－２、メソテリン、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＰＶＲＬ－４、ＶＥＧＦＲ２、ＰＳＣＡ、ＣＬＥＣ１２ａ、Ｌ１ＣＡＭ、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、葉酸結合タンパク質／受容体、ＳＬＣ４４Ａ４、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＡＸＬ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－３Ｒα２、ＳＬＴＲＫ６、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、チロシナーゼ、ＳＳＸ２、ＳＳＸ４、ＮＹＥＳＯ－１、ＷＴ－１、ＰＲＡＭＥ、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、ＭＡＧＥＡファミリー遺伝子（例えば、ＭＡＧＥＡ３．ＭＡＧＥＡ４）、ＫＫＬＣ１、突然変異型ｒａｓ、ＶＲａｆ、ｐ５３、ＭＨＣクラスＩ鎖関連分子Ａ（ＭＩＣＡ）もしくはＭＨＣクラスＩ鎖関連分子Ｂ（ＭＩＣＢ）または、ＨＰＶ、ＣＭＶもしくはＥＢＶの１つ以上の抗原が挙げられる。

【0200】

抗原は細胞の細胞内区画または細胞外区画において発現し得、操作型γδＴ細胞は細胞内または細胞外腫瘍抗原を認識することができる。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞のαβＴＣＲは、細胞内腫瘍抗原か細胞外腫瘍抗原かのどちらかに由来するペプチドを認識する。例えば、抗原は、ウイルスに感染した細胞によって細胞内または細胞外に産生されるタンパク質、例えば、ＨＩＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶまたはＨＰＶタンパク質であり得る。抗原は、がん細胞で細胞内または細胞外に発現するタンパク質であってもよい。

【0201】

抗原認識部分は、ストレス下にある細胞、例えば、がん細胞またはウイルスに感染している細胞からの抗原を認識し得る。例えば、ヒトＭＨＣクラスＩ鎖関連遺伝子（ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢ）は６番染色体のＨＬＡクラスＩ領域内に位置している。ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢタンパク質は、ヒト上皮での「ストレス」のマーカーであると考えられ、一般的なナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＧ２Ｄ）を発現する細胞にとってのリガンドとして作用する。ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢは、がん細胞からストレスマーカーとして高発現し得る。操作型γδＴ細胞はＭＩＣＡまたはＭＩＣＢ腫瘍エピトープを認識することができる。

【0202】

腫瘍認識部分は、特定のアビディティーで抗原を認識するように操作され得る。例えば、ＴＣＲまたはＣＡＲ構築物によってコードされる腫瘍認識部分は、少なくとも少なくとも１０ｆＭ、少なくとも１００ｆＭ、少なくとも１ピコモル（ｐＭ）、少なくとも１０ｐＭ、少なくとも２０ｐＭ、少なくとも３０ｐＭ、少なくとも４０ｐＭ、少なくとも５０ｐＭ、少なくとも６０ｐＭ、少なくとも７ｐＭ、少なくとも８０ｐＭ、少なくとも９０ｐＭ、少なくとも１００ｐＭ、少なくとも２００ｐＭ、少なくとも３００ｐＭ、少なくとも４００ｐＭ、少なくとも５００ｐＭ、少なくとも６００ｐＭ、少なくとも７００ｐＭ、少なくとも８００ｐＭ、少なくとも９００ｐＭ、少なくとも１ナノモル（ｎＭ）、少なくとも２ｎＭ、少なくとも３ｎＭ、少なくとも４ｎＭ、少なくとも５ｎＭ、少なくとも６ｎＭ、少なくとも７ｎＭ、少なくとも８ｎＭ、少なくとも９ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、少なくとも２０ｎＭ、少なくとも３０ｎＭ、少なくとも４０ｎＭ、少なくとも５０ｎＭ、少なくとも６０ｎＭ、少なくとも７０ｎＭ、少なくとも８０ｎＭ、少なくとも９０ｎＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも２００ｎＭ、少なくとも３００ｎＭ、少なくとも４００ｎＭ、少なくとも５００ｎＭ、少なくとも６００ｎＭ、少なくとも７００ｎＭ、少なくとも８００ｎＭ、少なくとも９００ｎＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも２μＭ、少なくとも３μＭ、少なくとも４μＭ、少なくとも５μＭ、少なくとも６μＭ、少なくとも７μＭ、少なくとも８μＭ、少なくとも９μＭ、少なくとも１０μＭ、少なくとも２０μＭ、少なくとも３０μＭ、少なくとも４０μＭ、少なくとも５０μＭ、少なくとも６０μＭ、少なくとも７０μＭ、少なくとも８０μＭ、少なくとも９０μＭまたは少なくとも１００μＭの解離定数で抗原を認識し得る。

【0203】

ある場合には、腫瘍認識部分は、１０ｆＭ以下、１００ｆＭ以下、１ピコモル（ｐＭ）以下、１０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、７ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、９０ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、５００ｐＭ以下、６００ｐＭ以下、７００ｐＭ以下、８００ｐＭ以下、９００ｐＭ以下、１ナノモル（ｎＭ）以下、２ｎＭ以下、３ｎＭ以下、４ｎＭ以下、５ｎＭ以下、６ｎＭ以下、７ｎＭ以下、８ｎＭ以下、９ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、９００ｎＭ以下、１μＭ以下、２μＭ以下、３μＭ以下、４μＭ以下、５μＭ以下、６μＭ以下、７μＭ以下、８μＭ以下、９μＭ以下、１０μＭ以下、２０μＭ以下、３０μＭ以下、４０μＭ以下、５０μＭ以下、６０μＭ以下、７０μＭ以下、８０μＭ以下、９０μＭ以下または１００μＭ以下の解離定数で抗原を認識するように操作され得る。

【0204】

処置方法
非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物を含有する、本明細書に記載の医薬組成物は、予防及び／または治療処置のために投与され得る。追加または代替的に、本明細書に記載のγδＴ細胞集団を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を含有する医薬組成物は、予防及び／または治療処置のために投与され得る。治療用途では、疾患または症状を既に患っている対象に、疾患または症状の症候を治癒させるかまたは少なくとも部分的に阻止するのに十分な量の組成物を投与することができる。組成物は、状態の発症、罹患、または悪化の可能性を低くするために投与することもできる。治療に使用する非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団、その混合物、及び／またはγδＴ細胞集団を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤の有効量は、疾患もしくは状態の重症度及び経過、以前の療法、対象の健康状態、体重、ならびに／または薬物への応答、ならびに／または処置する医師の判断に基づいて様々であり得る。

【0205】

本開示の組成物は、症状の処置を必要とする対象を処置するために使用されることができる。症状の例としては、がん、感染性疾患、自己免疫障害、及び敗血症が挙げられる。対象は、ヒト、非ヒト霊長類、例えばチンパンジー及びその他の類人猿ならびにサル種；畜産動物、例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ；飼育動物、例えば、ウサギ、イヌ及びネコ；実験動物、例えば齧歯動物、例えば、ラット、マウス及びモルモットなどであり得る。対象は任意の年齢であり得る。対象は、例えば、高齢成体、成体、青年、少年、小児、幼年、乳児であり得る。

【0206】

本開示の組成物及びその組み合わせは、様々なレジメン（例えば、タイミング、濃度、投薬量、処置間隔、及び／または剤形）で投与され得る。対象は、本開示の生体内増殖剤及び／もしくは濃縮γδＴ細胞集団、またはその混合物を受ける前に、例えば、化学療法、放射線、または両方の組み合わせによって前処置することもできる。処置の一部として、組成物を対象に第１レジメンにおいて投与してもよく、第１レジメンにおいて処置が治療有効性の所与のレベルを満たしているかを判定すべく対象を監視してもよい。いくつかの事例では、操作型γδＴ細胞または別の操作型γδＴ細胞を第２レジメンにおいて対象に投与してもよい。

【0207】

いくつかの実施形態では、第１操作では、所与の症状（例えば、がん）を有するかまたはその疑いのある対象に本明細書に記載の少なくとも１つの組成物を投与する。第１レジメンにおいて組成物を投与してもよい。第２操作では、対象は例えば医療提供者（例えば、処置する医師または看護師）によって監視され得る。ある例においては、対象は、対象の症状の処置における組成物の有効性を決定または測定するために監視される。ある状況では、対象におけるγδＴ細胞集団の生体内活性化、増殖、または細胞数を判定するために対象を監視してもよい。次に、第３操作では、本明細書に記載の少なくとも１つの組成物を第２レジメンにおいて対象に投与する。第２レジメンは、第１レジメンと同じであってもよいし、または第１レジメンとは異なっていてもよい。ある状況においては、例えば第１操作における組成物の投与が効果的である（例えば、症状を処置するのに１回目の投与で十分であり得る）と判明している場合には、第３操作を実施しない。同種異系で普遍的なドナー特性ゆえに、操作型γδＴ細胞の集団は、種々のＭＨＣハプロタイプを有する様々な対象に投与され得る。操作型γδＴ細胞は、対象に投与される前に冷凍または凍結保存され得る。

【0208】

γδＴ細胞（すなわち、操作型または非操作型）の濃縮集団及び／またはその混合物は、対象に投与される前に冷凍または凍結保存されてもよく、任意に投与されたγδＴ細胞を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤の投与によってさらに生体内で活性化及び増殖、ならびに／または維持されてもよい。特定の実施形態では、操作型濃縮γδＴ細胞の集団は、同一の腫瘍認識部分、異なる腫瘍認識部分、または同一の腫瘍認識部分と異なる腫瘍認識部分との組み合わせを発現する２つ以上の細胞を含み得る。

【0209】

例えば、操作型濃縮γδＴ細胞の集団は、異なる抗原、または同じ抗原の異なるエピトープを認識するように設計されたいくつかの別個の操作型γδＴ細胞を含み得る。例えば、メラノーマに罹患しているヒト細胞は、ＮＹ－ＥＳＯ－１がん遺伝子を発現し得る。ヒトの中の感染細胞は、ＮＹ－ＥＳＯ－１腫瘍性タンパク質をより小さい断片にプロセシングすることができ、ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質の様々な部分を抗原認識のために提示することができる。操作型濃縮γδＴ細胞の集団は、ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質の異なる部分を認識するように設計された異なる腫瘍認識部分を発現する様々な操作型γδＴ細胞を含むことができる。

【0210】

いくつかの実施形態では、本発明は、メラノーマ抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１の異なるエピトープを認識する操作型γδＴ細胞の集団によって対象を処置する方法を提供する。第１操作では、同じ抗原の異なるエピトープを認識する操作型γδＴ細胞の集団を選択する。例えば、操作型γδＴ細胞の集団は、ＮＹ－ＥＳＯ－１タンパク質の異なる部分を認識する異なる腫瘍認識部分を発現している２つ以上の細胞を含み得る。第２操作では、操作型γδＴ細胞の集団が第１レジメンにおいて投与され得る。第２操作では、対象は例えば医療提供者（例えば、処置する医師または看護師）によって監視され得る。第３操作では、対象は、生体内で投与されたγδＴ細胞を選択的に増殖させ、それによって生体内で投与されたγδＴ細胞集団を増殖及び／または維持する１つ以上の薬剤を投与され得る。第４操作では、対象は、生体内増殖及び／または維持の有効性を判定するために、監視され得る。いくつかの実施形態では、第２操作は行われない。いくつかの実施形態では、第４操作は行われない。

【0211】

本開示の１つ以上の組成物は、様々な状態を処置するために使用され得る。いくつかの事例では、本開示の組成物は、固形腫瘍及び血液悪性腫瘍を含む、がんを治療するために使用され得る。がんの非限定的な例としては、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌腫、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門癌、虫垂癌、星細胞腫、神経芽腫、基底細胞癌腫、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、例えば、小脳星細胞腫、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉腫瘍、視路視床下部神経膠腫、乳癌、気管支腺腫、バーキットリンパ腫、原発不明の癌腫、中枢神経リンパ腫、小脳星細胞腫、子宮頸癌、小児癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性障害、結腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、胚細胞腫瘍、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内メラノーマ、膵島細胞癌腫、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌、口唇及び口腔癌、脂肪肉腫、肝臓癌、肺癌、例えば非小細胞及び小細胞肺癌、リンパ腫、白血病、マクログロブリン血症、骨の悪性線維組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、メラノーマ、中皮腫、原発不明の転移性扁平頸部癌、口腔癌、多発性内分泌腫瘍症候群、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌腫、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、口腔癌、中咽頭癌、骨肉腫／骨の悪性線維組織球腫、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、膵臓癌、膵島細胞癌、副鼻腔及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、クロム親和性細胞腫、松果体星細胞腫、松果体胚腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽腫、形質細胞性新生物、中枢神経原発リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌腫、腎盂及び尿管移行上皮癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、皮膚メルケル細胞癌腫、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮癌腫、胃癌、Ｔ細胞リンパ腫、咽喉癌、胸腺腫、胸腺癌腫、甲状腺癌、栄養膜腫瘍（妊娠性）、原発部位不明のがん、尿道癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ならびにウィルムス腫瘍が挙げられる。

【0212】

いくつかの事例では、本開示の組成物は、感染性疾患を治療するために使用され得る。感染性疾患は、例えば、病原性細菌またはウイルスによって引き起こされ得る。様々な病原性タンパク質、核酸、脂質またはその断片が疾患細胞で発現し得る。抗原提示細胞は、そのような病原性分子を例えば食作用または受容体媒介性エンドサイトーシスによって内在化させることができ、適切なＭＨＣ分子に結合した抗原断片を提示することができる。例えば、病原性タンパク質の様々な９ｍｅｒ断片がＡＰＣによって提示され得る。本開示の操作型濃縮γδＴ細胞は、病原性細菌またはウイルスの様々な抗原及び抗原断片を認識し得る。病原性細菌の非限定的な例は、ａ）Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ属、例えばＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ種；ｂ）Ｂｏｒｒｅｌｉａ属、例えばＢｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ種；ｃ）Ｂｒｕｃｅｌｉａ属、例えばＢｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｃａｎｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌａ ｍｅｌｉｔｅｒｉｓｉｓ、及び／またはＢｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ種；ｄ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、例えばＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ種；ｅ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａ及びＣｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ属、例えばＣｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、及び／またはＣｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｓｉｔｔａｃｉ種；ｆ）Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、例えばＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ種；ｇ）Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、例えばＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ種；ｈ）Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、例えばＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、及び／またはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ種；ｉ）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属、例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ種；ｊ）Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ属、例えばＦｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ種；ｋ）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ属、例えばＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ種など；ｌ）Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ属、例えばＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ種；ｍ）Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ属、例えばＬｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ種；ｎ）Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ属、例えばＬｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ種；ｏ）Ｌｉｓｔｅｒｉａ属、例えばＬｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ種；ｐ）Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、例えばＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、及び／またはｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ種；ｑ）Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ属、例えばＭｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ種；ｒ）Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属、例えばＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ及び／またはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉａ種；ｓ）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、例えばＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ種；ｔ）Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属、例えばＲｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ種；ｕ）Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、例えばＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ及び／またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ種；ｖ）Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、例えばＳｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ種；ｗ）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、例えばＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、及び／またはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ種；ｘ）Ｓｔｒｅｐｔｐｃｏｃｃｕｓ属、例えばＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、及び／またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ種；ｙ）Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ属、例えばＴｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ種；ｚ）Ｖｉｂｒｉｏ属、例えばＶｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ；及び／またはａａ）Ｙｅｒｓｉｎｉａ属、例えばＹｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ種に見出すことができる。

【0213】

いくつかの事例では、本開示の組成物は、感染性疾患を治療するために使用され得、感染性疾患は、ウイルスによって引き起こされ得る。ウイルスの非限定的な例は、以下のウイルスの科に見出すことができ、典型的な種と共に示す：ａ）Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ科、例えばアデノウイルス種；ｂ）Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ科、例えば、単純ヘルペス１型、単純ヘルペス２型、水痘帯状疱疹ウイルス、エプスタイン・バールウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型種；ｃ）Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｉｄａｅ科、例えばヒトパピローマウイルス種；ｄ）Ｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｉｄａｅ科、例えば、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス種；ｅ）Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ科、例えば天然痘種；ｆ）Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ科、例えばＢ型肝炎ウイルス種；ｇ）Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科、例えば、ヒトボカウイルス、パルボウイルスＢ１９種；ｈ）Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ科、例えば、ヒトアストロウイルス種；ｉ）Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ科、例えばノーウォークウイルス種；ｊ）Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ科、例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱ウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス種；ｋ）Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ科、例えば風疹ウイルス種；ｌ）Ｈｅｐｅｖｉｒｉｄａｅ科、例えばＥ型肝炎ウイルス種；ｍ）Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ科、例えばヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）種；ｎ）Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｗ科、例えばインフルエンザウイルス種；ｏ）Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ科、例えば、グアナリトウイルス、フニンウイルス、ラッサウイルス、マチュポウイルス、及び／またはサビアウイルス種；ｐ）Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ科、例えばクリミア・コンゴ出血熱ウイルス種；ｑ）Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ科、例えばエボラウイルス及び／またはマールブルグウイルス種；Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科、例えば、麻疹ウイルス、おたふく風邪ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヘンドラウイルス及び／またはニパウイルス種；ｒ）Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ属、例えば狂犬病ウイルス種；ｓ）Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ科、例えばロタウイルス、オルビウイルス、コルチウイルス及び／またはバンナウイルス種。いくつかの例では、ウイルスは、Ｄ型肝炎など、ウイルス科に割り当てられないものである。

【0214】

いくつかの事例では、本開示の組成物は、免疫疾患、例えば、自己免疫疾患を治療するために使用され得る。自己免疫疾患を含めた炎症性疾患は、Ｂ細胞障害に関連する疾患の部類でもある。自己免疫状態を含めた免疫疾患または状態の例としては、関節リウマチ、リウマチ熱、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳脊髄炎、乾癬、ぶどう膜炎、真性糖尿病、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、狼瘡腎炎、湿疹、強皮症、多発性筋炎／強皮症、多発性筋炎／皮膚筋炎、潰瘍性直腸炎、潰瘍性大腸炎、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ディ・ジョージ症候群、毛細血管拡張性運動失調症、季節性アレルギー、通年性アレルギー、食物アレルギー、アナフィラキシー、肥満細胞症、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、パーキンソン病、アルツハイマー病、脾機能亢進症、白血球接着不全症、Ｘ連鎖リンパ増殖性疾患、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、選択的免疫グロブリンＡ欠損症、高ＩｇＭ症候群、ＨＩＶ、自己免疫性リンパ増殖症候群、ウィスコット・アルドリッチ症候群、慢性肉芽腫症、分類不能型免疫不全症（ＣＶＩＤ）、高免疫グロブリンＥ症候群、橋本甲状腺炎、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シデナム舞踏病、重症筋無力症、多腺性症候群、水疱性類天疱瘡、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、連鎖球菌感染後腎炎、結節性紅斑、多形性紅斑、ｇＡ腎症、高安動脈炎、アジソン病、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓性血管炎（ｔｈｒｏｍｂｏａｎｇｉｔｉｓｕｂｉｔｅｒａｎｓ）、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、慢性活動性肝炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡（ｐａｍｐｈｉｇｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）、ウェゲナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄癆、巨細胞性動脈炎／多発筋痛症、悪性貧血（ｐｅｒａｉｃｉｏｕｓａｎｅｍｉａ）、急速進行性糸球体腎炎、乾癬、線維化肺胞炎、及びがんが挙げられる。

【0215】

本開示の組成物による処置は、症状の臨床的発症の前、間及び後に対象に提供され得る。処置は、疾患の臨床的発症から１日後、１週間、６ヶ月後、１２ヶ月後または２年後に対象に提供され得る。処置は、疾患の臨床的発症の後、１日間、１週間、１ヶ月間、６ヶ月間、１２ヶ月間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間またはそれ以上にわたって対象に提供され得る。処置は、疾患の臨床的発症の後、１日未満、１週間未満、１ヶ月未満、６ヶ月未満、１２ヶ月未満または２年未満にわたって対象に提供され得る。処置は治験でヒトを処置することも含み得る。処置は、γδＴ細胞集団を選択的に増殖させる１つ以上の薬剤を含む医薬組成物を対象に投与することを含むことができる。処置は、本開示の非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物を対象に投与することを含むことができる。いくつかの事例では、医薬組成物は、本開示のγδＴ細胞集団及び非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団、ならびに／またはその混合物を選択的に増殖させる本開示の１つ以上の薬剤を含む。

【0216】

いくつかの事例では、本開示の組成物の対象への投与は、対象の体内での内因性リンパ球の活性を調節する。いくつかの事例では、本開示の組成物の対象への投与は、内因性Ｔ細胞に抗原を提供し、免疫応答を増強し得る。いくつかの事例では、メモリーＴ細胞はＣＤ４^＋Ｔ細胞である。いくつかの事例では、メモリーＴ細胞はＣＤ８^＋Ｔ細胞である。いくつかの事例では、本開示の組成物の対象への投与は、別の免疫細胞の細胞傷害性を活性化させる。いくつかの事例では、他の免疫細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの事例では、他の免疫細胞は、ナチュラルキラーＴ細胞である。いくつかの事例では、組成物の対象への投与は、調節性Ｔ細胞を抑制する。いくつかの事例では、調節性Ｔ細胞は、Ｆｏｘ３＋Ｔｒｅｇ細胞である。いくつかの事例では、調節性Ｔ細胞は、Ｆｏｘ３－Ｔｒｅｇ細胞である。γδＴ細胞集団によって活性を調節されることができる細胞の非限定的な例としては、造血幹細胞、Ｂ細胞、ＣＤ４、ＣＤ８、赤血球、白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ）、樹状細胞、例えば樹状抗原提示細胞、白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ）、マクロファージ、メモリーＢ細胞、メモリーＴ細胞、単球、ナチュラルキラー細胞、好中性顆粒球、Ｔヘルパー細胞、及びＴキラー細胞が挙げられる。

【0217】

大抵の骨髄移植の間、対象の免疫系による移植物中の造血幹細胞（ＨＳＣ）の拒絶反応を防止するためにシクロホスファミドと全身照射との組合せが慣例的に採用される。いくつかの事例では、生体外でのドナー骨髄とインターロイキン－２（ＩＬ－２）とのインキュベーションを実施して骨髄でのキラーリンパ球の産生を強化する。インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、野生型リンパ球の成長、増殖及び分化に必要とされるサイトカインである。ヒトにγδＴ細胞を養子移入する現在の研究は、γδＴ細胞とインターロイキン－２との共投与を要求し得る。しかしながら、低投薬量及び高投薬量のＩＬ－２はどちらも有毒な副作用を有し得る。ＩＬ－２毒性は、多数の臓器／系、最も顕著には心臓、肺、腎臓及び中枢神経系において顕在化し得る。いくつかの事例では、本開示は、サイトカイン、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２またはＩＬ－２１の共投与を伴わずに非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物を対象に投与する方法を提供する。いくつかの事例では、非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物は、ＩＬ－２の共投与を伴わずに対象へ投与されることができる。いくつかの事例では、非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物は、骨髄移植などの手順の間に、ＩＬ－２の共投与を伴わずに対象へ投与される。

【0218】

いくつかの事例では、本開示は、非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団、及び／またはその混合物を、対象に、サイトカインまたは他の刺激剤、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２１、ＩＬ２３、ＩＬ－３３、ＩＦＮγ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、または顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）の同時または連続共投与と共に投与する方法を提供する。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、またはＩＬ－２１である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－２である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－１５である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－４である。いくつかの事例では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される一般的なガンマ鎖サイトカインである。

【0219】

投与方法
選択的増殖剤、非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団、及び／またはその混合物を含む本発明の１つまたは複数の組成物は、任意の順序で、または同時に対象に投与されることができる。同時の場合、組成物は、静脈注射などの単回一体化形態で、または多回形態として、例えば、多回静脈内注入、ｓ．ｃ、注射、もしくは錠剤として提供することができる。組成物は、単一のパッケージまたは複数のパッケージに、一緒または別々に包装することができる。本発明の組成物のうちの１つまたは全てを多回用量で与えることができる。同時でない場合、多回用量間のタイミングは、約１週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月または約１年もの長さまで様々であり得る。いくつかの事例では、投与されたγδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団、及び／またはその混合物は、対象への投与後に、生体内で、対象の体内で増殖することができる。γδＴ細胞及び／または活性化剤を含む医薬組成物は、キットとして包装されることができる。キットは、本明細書に記載の組成物のうちの１つ以上に加えて、組成物の使用に関する説明（例えば、説明書）を含み得る。

【0220】

いくつかの事例では、がんを治療する方法は、本明細書に記載の組成物を投与することを含み、当該投与によってがんが治療される。いくつかの実施形態では、治療的有効量の組成物は、少なくとも約１０秒間、３０秒間、１分間、１０分間、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間または１年間にわたって投与される。

【0221】

本明細書に記載の１つ以上の組成物は、疾患または症状の発生の前、間または後に投与されることができ、医薬組成物を投与するタイミングは様々であり得る。例えば、１つ以上の組成物は、予防薬として使用されることができ、疾患または状態の発生の可能性を低くするために状態または疾患の傾向を有する対象に継続的に投与されることができる。１つ以上の組成物は、症候の発症の間、またはその後できるだけ早く、対象へ投与され得る。１つ以上の組成物の投与は、症候発症時まで、症候発症後の最初の３時間以内、症候発症後の最初の６時間以内、症候発症後の最初の２４時間以内、症候発症から４８時間以内、または症候発症から任意の時間までに、早急に開始され得る。初回投与は、任意の実用的な経路を介して、例えば、本明細書に記載の任意の製剤を使用して本明細書に記載の任意の経路によって行うことができる。いくつかの例では、本開示の１つ以上の組成物の投与は、静脈内投与である。１つ以上の組成物の１回分または多回分の投薬量は、がん、感染性疾患、免疫疾患、敗血症の発症後に実施可能になり次第、または骨髄移植と共に、かつ免疫疾患の治療に必要な長さの時間にわたって、例えば、約２４時間～約４８時間、約４８時間～約１週間、約１週間～約２週間、約２週間～約１ヶ月間、約１ヶ月間～約３ヶ月間にわたって、投与され得る。がんの治療のためには、１つ以上の組成物の１回または複数回の投薬量を、がんの発症から数年後、かつ他の治療の前または後に投与することができる。いくつかの例では、本明細書に記載の１つ以上の組成物を少なくとも約１０分間、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間、２４時間、少なくとも４８時間、少なくとも７２時間、少なくとも９６時間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも２年間、少なくとも３年間、少なくとも４年間、または少なくとも５年間にわたって投与することができる。処置の長さは各対象で異なり得る。

【0222】

投薬量
本明細書において開示される非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物は、正確な投薬量の単回投与に適した単位剤形として製剤化され得る。いくつかの事例では、単位剤形はさらなるリンパ球を含む。単位剤形では製剤が、１つ以上の化合物を適切な量で含有する単位用量に分割されている。単位投薬量は、製剤の個々の量を含有するパッケージの形態とすることができる。非限定的な例は、包装された錠剤またはカプセル、及びバイアルまたはアンプルに入った粉末である。水性懸濁液組成物は単回用量の再封不可能容器に入れることができる。多回用量の再封可能容器を、例えば保存料と組み合わせて、または保存料なしで使用することができる。いくつかの例では、医薬組成物は保存料を含まない。非経口注射用製剤は、単位剤形、例えばアンプルで、または保存料と共に多回用量容器で提供することができる。

【0223】

本明細書に記載の非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物は、少なくとも５細胞、少なくとも１０細胞、少なくとも２０細胞、少なくとも３０細胞、少なくとも４０細胞、少なくとも５０細胞、少なくとも６０細胞、少なくとも７０細胞、少なくとも８０細胞、少なくとも９０細胞、少なくとも１００細胞、少なくとも２００細胞、少なくとも３００細胞、少なくとも４００細胞、少なくとも５００細胞、少なくとも６００細胞、少なくとも７００細胞、少なくとも８００細胞、少なくとも９００細胞、少なくとも１×１０^３細胞、少なくとも２×１０^３細胞、少なくとも３×１０^３細胞、少なくとも４×１０^３細胞、少なくとも５×１０^３細胞、少なくとも６×１０^３細胞、少なくとも７×１０^３細胞、少なくとも８×１０^３細胞、少なくとも９×１０^３細胞、少なくとも１×１０^４細胞、少なくとも２×１０^４細胞、少なくとも３×１０^４細胞、少なくとも４×１０^４細胞、少なくとも５×１０^４細胞、少なくとも６×１０^４細胞、少なくとも７×１０^４細胞、少なくとも８×１０^４細胞、少なくとも９×１０^４細胞、少なくとも１×１０^５細胞、少なくとも２×１０^５細胞、少なくとも３×１０^５細胞、少なくとも４×１０^５細胞、少なくとも５×１０^５細胞、少なくとも６×１０^５細胞、少なくとも７×１０^５細胞、少なくとも８×１０^５細胞、少なくとも９×１０^５細胞、少なくとも１×１０^６細胞、少なくとも２×１０^６細胞、少なくとも３×１０^６細胞、少なくとも４×１０^６細胞、少なくとも５×１０^６細胞、少なくとも６×１０^６細胞、少なくとも７×１０^６細胞、少なくとも８×１０^６細胞、少なくとも９×１０^６細胞、少なくとも１×１０^７細胞、少なくとも２×１０^７細胞、少なくとも３×１０^７細胞、少なくとも４×１０^７細胞、少なくとも５×１０^７細胞、少なくとも６×１０^７細胞、少なくとも７×１０^７細胞、少なくとも８×１０^７細胞、少なくとも９×１０^７細胞、少なくとも１×１０^８細胞、少なくとも２×１０^８細胞、少なくとも３×１０^８細胞、少なくとも４×１０^８細胞、少なくとも５×１０^８細胞、少なくとも６×１０^８細胞、少なくとも７×１０^８細胞、少なくとも８×１０^８細胞、少なくとも９×１０^８細胞、少なくとも１×１０^９細胞またはそれより多い量で組成物中に存在し得る。

【0224】

本発明の非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物の治療的有効用量は、約１細胞～約１０細胞、約１細胞～約１００細胞、約１細胞～約１０細胞、約１細胞～約２０細胞、約１細胞～約３０細胞、約１細胞～約４０細胞、約１細胞～約５０細胞、約１細胞～約６０細胞、約１細胞～約７０細胞、約１細胞～約８０細胞、約１細胞～約９０細胞、約１細胞～約１００細胞、約１細胞～約１×１０^３細胞、約１細胞～約２×１０^３細胞、約１細胞～約３×１０^３細胞、約１細胞～約４×１０^３細胞、約１細胞～約５×１０^３細胞、約１細胞～約６×１０^３細胞、約１細胞～約７×１０^３細胞、約１細胞～約８×１０^３細胞、約１細胞～約９×１０^３細胞、約１細胞～約１×１０^４細胞、約１細胞～約２×１０^４細胞、約１細胞～約３×１０^４細胞、約１細胞～約４×１０^４細胞、約１細胞～約５×１０^４細胞、約１細胞～約６×１０^４細胞、約１細胞～約７×１０^４細胞、約１細胞～約８×１０^４細胞、約１細胞～約９×１０^４細胞、約１細胞～約１×１０^５細胞、約１細胞～約２×１０^５細胞、約１細胞～約３×１０^５細胞、約１細胞～約４×１０^５細胞、約１細胞～約５×１０^５細胞、約１細胞～約６×１０^５細胞、約１細胞～約７×１０^５細胞、約１細胞～約８×１０^５細胞、約１細胞～約９×１０^５細胞、約１細胞～約１×１０^６細胞、約１細胞～約２×１０^６細胞、約１細胞～約３×１０^６細胞、約１細胞～約４×１０^６細胞、約１細胞～約５×１０^６細胞、約１細胞～約６×１０^６細胞、約１細胞～約７×１０^６細胞、約１細胞～約８×１０^６細胞、約１細胞～約９×１０^６細胞、約１細胞～約１×１０^７細胞、約１細胞～約２×１０^７細胞、約１細胞～約３×１０^７細胞、約１細胞～約４×１０^７細胞、約１細胞～約５×１０^７細胞、約１細胞～約６×１０^７細胞、約１細胞～約７×１０^７細胞、約１細胞～約８×１０^７細胞、約１細胞～約９×１０^７細胞、約１細胞～約１×１０^８細胞、約１細胞～約２×１０^８細胞、約１細胞～約３×１０^８細胞、約１細胞～約４×１０^８細胞、約１細胞～約５×１０^８細胞、約１細胞～約６×１０^８細胞、約１細胞～約７×１０^８細胞、約１細胞～約８×１０^８細胞、約１細胞～約９×１０^８細胞、または約１細胞～約１×１０^９細胞であり得る。

【0225】

いくつかの事例では、本発明の非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物の治療的有効用量は、約１×１０^３細胞～約２×１０^３細胞、約１×１０^３細胞～約３×１０^３細胞、約１×１０^３細胞～約４×１０^３細胞、約１×１０^３細胞～約５×１０^３細胞、約１×１０^３細胞～約６×１０^３細胞、約１×１０^３細胞～約７×１０^３細胞、約１×１０^３細胞～約８×１０^３細胞、約１×１０^３細胞～約９×１０^３細胞、約１×１０^３細胞～約１×１０^４細胞、約１×１０^３細胞～約２×１０^４細胞、約１×１０^３細胞～約３×１０^４細胞、約１×１０^３細胞～約４×１０^４細胞、約１×１０^３細胞～約５×１０^４細胞、約１×１０^３細胞～約６×１０^４細胞、約１×１０^３細胞～約７×１０^４細胞、約１×１０^３細胞～約８×１０^４細胞、約１×１０^３細胞～約９×１０^４細胞、約１×１０^３細胞～約１×１０^５細胞、約１×１０^３細胞～約２×１０^５細胞、約１×１０^３細胞～約３×１０^５細胞、約１×１０^３細胞～約４×１０^５細胞、約１×１０^３細胞～約５×１０^５細胞、約１×１０^３細胞～約６×１０^５細胞、約１×１０^３細胞～約７×１０^５細胞、約１×１０^３細胞～約８×１０^５細胞、約１×１０^３細胞～約９×１０^５細胞、約１×１０^３細胞～約１×１０^６細胞、約１×１０^３細胞～約２×１０^６細胞、約１×１０^３細胞～約３×１０^６細胞、約１×１０^３細胞～約４×１０^６細胞、約１×１０^３細胞～約５×１０^６細胞、約１×１０^３細胞～約６×１０^６細胞、約１×１０^３細胞～約７×１０^６細胞、約１×１０^３細胞～約８×１０^６細胞、約１×１０^３細胞～約９×１０^６細胞、約１×１０^３細胞～約１×１０^７細胞、約１×１０^３細胞～約２×１０^７細胞、約１×１０^３細胞～約３×１０^７細胞、約１×１０^３細胞～約４×１０^７細胞、約１×１０^３細胞～約５×１０^７細胞、約１×１０^３細胞～約６×１０^７細胞、約１×１０^３細胞～約７×１０^７細胞、約１×１０^３細胞～約８×１０^７細胞、約１×１０^３細胞～約９×１０^７細胞、約１×１０^３細胞～約１×１０^８細胞、約１×１０^３細胞～約２×１０^８細胞、約１×１０^３細胞～約３×１０^８細胞、約１×１０^３細胞～約４×１０^８細胞、約１×１０^３細胞～約５×１０^８細胞、約１×１０^３細胞～約６×１０^８細胞、約１×１０^３細胞～約７×１０^８細胞、約１×１０^３細胞～約８×１０^８細胞、約１×１０^３細胞～約９×１０^８細胞、約１×１０^３細胞～約１×１０^９細胞であり得る。

【0226】

いくつかの事例では、本発明の非操作型濃縮γδＴ細胞集団、操作型濃縮γδＴ細胞集団及び／またはその混合物の治療的有効用量は、約１×１０^６細胞～約２×１０^６細胞、約１×１０^６細胞～約３×１０^６細胞、約１×１０^６細胞～約４×１０^６細胞、約１×１０^６細胞～約５×１０^６細胞、約１×１０^６細胞～約６×１０^６細胞、約１×１０^６細胞～約７×１０^６細胞、約１×１０^６細胞～約８×１０^６細胞、約１×１０^６細胞～約９×１０^６細胞、約１×１０^６細胞～約１×１０^７細胞、約１×１０^６細胞～約２×１０^７細胞、約１×１０^６細胞～約３×１０^７細胞、約１×１０^６細胞～約４×１０^７細胞、約１×１０^６細胞～約５×１０^７細胞、約１×１０^６細胞～約６×１０^７細胞、約１×１０^６細胞～約７×１０^７細胞、約１×１０^６細胞～約８×１０^７細胞、約１×１０^６細胞～約９×１０^７細胞、約１×１０^６細胞～約１×１０^８細胞、約１×１０^６細胞～約２×１０^８細胞、約１×１０^６細胞～約３×１０^８細胞、約１×１０^６細胞～約４×１０^８細胞、約１×１０^６細胞～約５×１０^８細胞、約１×１０^６細胞～約６×１０^８細胞、約１×１０^６細胞～約７×１０^８細胞、約１×１０^６細胞～約８×１０^８細胞、約１×１０^６細胞～約９×１０^８細胞、約１×１０^６細胞～約１×１０^９細胞、約１×１０^６細胞～約２×１０^９細胞、約１×１０^６細胞～約３×１０^９細胞、約１×１０^６細胞～約４×１０^９細胞、約１×１０^６細胞～約５×１０^９細胞、約１×１０^６細胞～約６×１０^９細胞、約１×１０^６細胞～約７×１０^９細胞、約１×１０^６細胞～約８×１０^９細胞、約１×１０^６細胞～約９×１０^９細胞、約１×１０^７細胞～約１×１０^９細胞、約１×１０^７細胞～約２×１０^９細胞、約１×１０^７細胞～約３×１０^９細胞、約１×１０^７細胞～約４×１０^９細胞、約１×１０^７細胞～約５×１０^９細胞、約１×１０^７細胞～約６×１０^９細胞、約１×１０^７細胞～約７×１０^９細胞、約１×１０^７細胞～約８×１０^９細胞、約１×１０^７細胞～約９×１０^９細胞、約１×１０^８細胞～約１×１０^９細胞、約１×１０^８細胞～約２×１０^９細胞、約１×１０^８細胞～約３×１０^９細胞、約１×１０^８細胞～約４×１０^９細胞、約１×１０^８細胞～約５×１０^９細胞、約１×１０^８細胞～約６×１０^９細胞、約１×１０^８細胞～約７×１０^９細胞、約１×１０^８細胞～約８×１０^９細胞、約１×１０^８細胞～約９×１０^９細胞、または約１×１０^９細胞～約１×１０^１０細胞であり得る。

【0227】

抗体または他の活性化剤、例えば、図１～５のいずれか１つに記載の抗体と同じもしくは本質的に同じエピトープに結合するか、またはそれと競合する薬剤が投与される場合、通常の投薬量は、投与経路に応じて、１日当たり哺乳動物体重の約１０ｎｇ／ｋｇ～最大１００ｍｇ／ｋｇ以上、好ましくは約１μｇ／ｋｇ／日～１０ｍｇ／ｋｇ／日で変化し得る。特定の投薬量及び送達方法に関するガイダンスが文献に提供され、例えば、米国特許第４，６５７，７６０号、同第５，２０６，３４４号、または同第５，２２５，２１２号を参照されたい。異なる製剤が、異なる処置用化合物及び異なる障害に有効であり、例えば、ある臓器または組織を標的とする投与が、それとは異なる様式で別の臓器または組織への送達を必要とし得ることが予想される。

【0228】

免疫関連疾患の治療または重症度の低減のために、本発明の組成物の適切な投薬量は、上で定義されるように、処置される疾患の種類、疾患の重症度及び経過、薬剤が予防または治療目的で投与されるか、以前の療法、患者の臨床履歴及び化合物への応答、ならびに主治医の裁量に依存するであろう。組成物は、対象に、一度で、または一連の処置にわたって適切に投与することができる。

【0229】

例えば、疾患の種類及び重症度に応じて、約１ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１～２０ｍｇ／ｋｇ）の活性化剤（例えば、ポリペプチドまたは抗体）は、例えば、１回以上の別個の投与によって、または連続注入によってにかかわらず、対象への投与のための初期候補投薬量である。典型的な１日の投薬量は、上述の因子に応じて、約１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であってもよい。数日以上にわたる繰り返し投与については、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで処置を維持する。しかしながら、他の投薬レジメンが有用であり得る。この療法の進捗は、従来の技法及びアッセイによって容易に監視される。

【0230】

保存
いくつかの実施形態では、生体内活性化または増殖γδＴ細胞集団の生体外増殖によって得られる濃縮γδＴ細胞集団、及び／またはその混合物は、冷凍用培地で製剤化され、少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年、または少なくとも５年の長期保存のために液体窒素冷凍庫（－１９５℃）または超低温冷凍庫（－６５℃、－８０℃、または－１２０℃）などの凍結保存ユニット内に置かれ得る。冷凍用培地は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、及び／または塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、及び／またはデキストロース、及び／または硫酸デキストラン、及び／またはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を生理学的ｐＨ緩衝剤と共に含有して、約６．０～約６．５、約６．５～約７．０、約７．０～約７．５、約７．５～約８．０、または約６．５～約７．５のｐＨを維持することができる。凍結保存されたγδＴ細胞は、解凍され、本明細書に記載の抗体、タンパク質、ペプチド、及び／またはサイトカインによる刺激によってさらに処理されることができる。凍結保存されたγδＴ細胞は、解凍されて、本明細書に記載のウイルスベクター（レトロウイルス及びレンチウイルスベクターを含む）または非ウイルス的手段（ＲＮＡ、ＤＮＡ及びタンパク質を含む）によって遺伝子改変されることができる。いくつかの事例では、非操作型γδＴ細胞は、本明細書に記載の方法によって増殖させることができ、方法は、生体内増殖のステップを含み、遺伝子改変して、凍結保存することができる。

【0231】

このようにして、遺伝子操作型及び／または非操作型γδＴ細胞をさらに凍結保存して、凍結溶媒地中１ｍＬ当たり少なくとも約１０^１、１０^２、１０^３、１０^４、１０^５、１０^６、１０^７、１０^８、１０^９または少なくとも約１０^１０細胞の、少なくとも１、５、１０、１００、１５０、２００、５００バイアルの量の細胞バンクを生成することができる。凍結保存された細胞バンクは、その機能性を保持し得、解凍されてさらに刺激され増殖することができる。いくつかの態様では、解凍された細胞を細胞培養バッグ及び／またはバイオリアクターなどの適切な閉鎖容器内で刺激して増殖させて、多量の細胞を同種異系細胞製品として作り出すことができる。凍結保存されたγδＴ細胞は、凍結保管条件下でその生物学的機能を少なくとも約６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、１３ヶ月間、１５ヶ月間、１８ヶ月間、２０ヶ月間、２４ヶ月間、３０ヶ月間、３６ヶ月間、４０ヶ月間、５０ヶ月間または少なくとも約６０ヶ月間にわたって維持することができる。いくつかの態様では、製剤に保存料を使用しない。凍結保存されたγδＴ細胞は、解凍され、同種異系の市販細胞製品として複数の患者に投与（例えば、注入）されることができる。γδＴ細胞を選択的に増殖させる本明細書に記載の１つ以上の薬剤を投与することによって、投与された対象（複数可）において、注入細胞を増殖及び／または維持することができる。

【0232】

本明細書中で言及する全ての刊行物及び特許は、参照によりそれらの全体が、例えば本明細書に記載の本発明に関連して用いられる可能性のある当該刊行物に記載の構築物及び方法論を記述及び開示することを目的として本明細書に援用される。本明細書において述べられている刊行物は、単に本願の出願日の前でのその開示のために提供されているに過ぎない。本明細書中のいかなるものも、本明細書に記載の本発明者らが先行発明またはその他任意の理由のためにそのような開示に先行する権利を有さないということの承認として解釈されるべきではない。

【実施例】

【0233】

実施例１．δ１ＴＣＲ、δ２ＴＣＲ、及び／またはδ３ＴＣＲに選択的に結合する１つ以上の薬剤でのγδＴ細胞の生体内増殖による腫瘍の処置
γδＴ細胞活性化剤の投与がヒトγδＴ細胞の増殖及び活性化ならびに腫瘍の処置に及ぼす効果を異種移植マウスモデルにおいて試験する。異なる血液腫瘍細胞株（例えば、Ｒａｊｉ、Ｄａｕｄｉ、Ｍｉｎｏ、ＮＡＬＭ６、ＪＶＭ－２、ＨＬ－６０、ＭＯＬＭ－１３、Ｋ５６２、ＫＧ－１ａ、Ｍｖ４－１１、ＭＯＬＴ－４、または他）及び固形腫瘍細胞株（例えば、ＨＣＴ１１６、結腸癌ＣＯＬＯ２０５、メラノーマＳＫ－ＭＥＬ５、膵臓ＢｃＰＣ３またはＡＳＰＣ－１、乳癌、例えば、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、前立腺癌、例えば、ＰＣ３またはＬＮＣＡＰ、肝臓癌ＨｅｐＧ２及びＨｕｈ７など）は、ＳＣＩＤ／ＳＣＩＤ、ＮＯＤーＳＣＩＤ、ＮＳＧ、ＮＯＧ（登録商標）（Ｔａｃｏｎｉｃ）、ＮＣＧ（登録商標）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、またはＣＤ３４ｈｕ－ＮＳＧ（登録商標）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）マウスに皮下、腹腔内、同所、または静脈内（例えば、１×１０^５～１×１０^７細胞）に注射される。皮下、同所性、または播種性腫瘍成長は、キャリパーまたはイメージングによって１週間に２回測定する。腫瘍細胞投与の日、または腫瘍が確立されたとき（５０～２００ｍｍ^３）、またはバイオマーカーの出現によって見られるように、本明細書に記載される非操作型または操作型の、δ１、δ２、またはδ３γδＴ細胞（１～１００×１０^６細胞）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、またはＩＬ－７などのサイトカインの非存在または存在下で、腫瘍担持マウスへの尾静脈または腹腔内注射を介してＰＢＳ中で養子移入する。各群の動物は、処置群（異なる活性化剤で処置）またはビヒクル対照群に分ける。γδＴ細胞養子移入の前または後の所定の時点で（例えば、－１日目、０日目、１日目、２日目、３日目以降）、動物に、ビヒクル対照またはδ１もしくはδ２もしくはδ３特異的活性化剤を投与する。（同じまたは異なる用量及び／または投薬スケジュールで）アミノビスホスホネートと組み合わされた活性化剤の効果も試験する。活性化剤は、試験終了までの１サイクル以上で、マウスにおける薬剤半減期及び効力に基づいて１週間に１～２回投与される。活性化剤は、動物当たり０．００１～１ｍｇの用量で１週間に１～４回与えることができる。

【0234】

生まれたときに生着ＣＤ３４＋前駆細胞によってヒト化されたＣＤ３４＋ｈｕ－ＮＳＧ（登録商標）または同等のマウスを使用することは、ヒト異種移植腫瘍の存在下または非存在下でそのようなモデル動物において発生する内因性γδＴ細胞集団に対する活性化剤の効果を示す。

【0235】

実施例２．生体内でのγδＴ細胞集団の増殖
活性化剤は、例えば、生体外増殖後に、非操作型または操作型細胞として、対象に投与される対象の内因性γδＴ細胞及び／またはγδＴ細胞の異なるγδＴ細胞集団を活性化及び増殖させるために使用される。

【0236】

生体内増殖γδ１Ｔ細胞集団について、対象は、１つ以上のδ１γδＴ細胞活性化剤を受ける。生体内増殖γδ２Ｔ細胞集団について、患者は、１つ以上のδ２γδＴ細胞活性化剤を受け、生体内増殖γδ３Ｔ細胞集団について、患者は、１つ以上のδ３γδ細胞活性化剤を受ける。ＭＡｂなどの活性化剤は、γδＴ細胞集団が存在する血液、腫瘍組織、及び他の組織に抗体を送達することができる任意の経路を介して投与されるように製剤化される。投与経路としては、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、皮内などが挙げられるが、これらに限定されない。処置は、一般に、許容可能な投与経路を介して、典型的には、０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、または２５ｍｇ／体重ｋｇを含むが、これらに限定されない範囲の用量で、活性化ＭＡｂ調製物の繰り返し投与を伴う。一般に、１週間当たり１０～１０００ｍｇのＭＡｂの範囲の用量は、有効であり、十分に忍容される。好ましくは、初期負荷用量は、９０分以上の注入として投与される。定期的な維持用量は、初回用量が十分に忍容されたことを条件として、３０分以上の注入として投与される。当業者には理解されるように、様々な因子は、特定の事例における理想的な用量レジメンに影響を及ぼし得る。そのような因子としては、例えば、使用されるＭＡｂの結合親和性及び半減期、対象における循環または標的組織常在γδＴ細胞の数、ＭＡｂアイソタイプ、所望の定常状態抗体濃度レベル、処置頻度、ならびに本発明の生体内増殖方法と併用される化学療法剤または他の薬剤の影響、ならびに特定の患者の健康状態が挙げられる。

【0237】

約４ｍｇ／患者体重ｋｇのＩＶの初回負荷用量、続いて約２ｍｇ／ＭＡｂ調製物ｋｇのＩＶの週次用量は、例示的な投薬レジメンを表す。１つ以上の活性化剤は、処置の１つ以上のサイクルについて、上記に列挙される考慮事項に基づいて毎週、隔週、または毎月投与される。非限定的な好ましいヒト単位用量は、例えば、５００μｇ～１ｍｇ、１ｍｇ～５０ｍｇ、５０ｍｇ～１００ｍｇ、１００ｍｇ～２００ｍｇ、２００ｍｇ～３００ｍｇ、４００ｍｇ～５００ｍｇ、５００ｍｇ～６００ｍｇ、６００ｍｇ～７００ｍｇ、７００ｍｇ～８００ｍｇ、８００ｍｇ～９００ｍｇ、９００ｍｇ～１ｇ、または１ｍｇ～７００ｍｇである。特定の実施形態では、用量は、２～５ｍｇ／体重ｋｇの範囲であり、例えば、１～３ｍｇ／ｋｇの週次用量、続いて、例えば、週次用量よる２、３、または４週間で、０．５ｍｇ、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０ｍｇ／体重ｋｇ、例えば、続いて週次用量による２、３、または４週間で、０．５～１０ｍｇ／体重ｋｇ、毎週２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００ｍｇ／体表面積ｍ^２、毎週１～６００ｍｇ／体表面積ｍ^２、毎週２２５～４００ｍｇ／体表面積ｍ^２に続き、これらの用量には、２、３、４、５、６、７、８、９、１９、１１、または１２週間以上の週次用量に続くことができる。

【0238】

用量及び投与頻度は、妥当なγδＴ細胞集団の増殖または維持を支持するように選択される。患者の循環γδＴ細胞の頻度、表現型、及び活性化状態に対する効果を、活性化剤投与の１、２、３、７、１４、または２８日後に試験する。加えて、αβＴ細胞、ＮＫ細胞、及び／または樹状細胞の頻度、表現型、及び活性化状態に対する効果を試験することができる。

【0239】

いくつかの処置レジメンでは、活性化剤は、ＩＬ－２、またはＩＬ－１５を含むが、これに限定されない、他のサイトカインと併せて投与される。活性化剤がアミノビスホスホネートと共に投与される場合、アミノビスホスホネート（例えば、パミドロネートまたはゾレドロン酸）は、活性化剤投与の前に、それと併せて、またはその後に投与される。

【0240】

活性化剤の治療効果は、臨床応答に基づいて評価される。例えば、固形腫瘍の処置のために、Ｒｅｃｉｓｔ基準を使用することができる。応答は、処置開始後１、３、６、９、及び１２ヶ月で測定される。バイタルサイン、心電図、臨床検査結果、及び有害事象を使用して安全性を評価する。コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンなどの腫瘍評価は、ベースライン及び対象が試験に参加している間８週間毎に実施される。注入細胞の存在について各対象から連続血液試料を採取する。有効性及び安全性データの分析に使用される全ての統計的試験は、両側であり、０．０５レベルの有意性で実施され、９０％信頼区間が計算される。

【0241】

記載された研究は、多施設試験で実施され、以前に処置されているか、または有効な標準処置が利用可能でない局所進行性及び／もしくは転移性血液もしくは固形癌を有する対象で実施される。非操作型または操作型γδＴ細胞（各用量レベルで１×１０^８、２×１０^８、５×１０^８、及び１×１０^９－１コホート）を、４時間にわたって１回、または各サイクルの１日目に４週間毎に静脈内投与する。

【0242】

実施例３．生体内でのγδＴ細胞集団の増殖
ｈＩＬ－１５導入遺伝子を発現するＮＯＧ非担腫瘍マウスは、Ｔａｃｏｎｉｃ（ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩＬ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｓｕｇ}Ｔｇ（ＣＭＶ－ＩＬ２／ＩＬ１５）１－１Ｊｉｃ／ＪｉｃＴａｃ）から得られ、ＷＯ２０１７／１９７３４７またはＷＯ２０１９／０９９７４４に記載されるように増殖したＶδ１、Ｖδ２、またはＶδ３γδＣＡＲ－Ｔ細胞を接種した。細胞を増殖後に凍結保存し、ＩＬ－２を含有する細胞培養培地への投与の１日前に解凍した。投与当日、製造業者の説明書に従って、細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌａｔｅで３０分間標識し、２０×１０^６細胞／動物でｉｖ投与した。動物のサブセットはまた、細胞の投与の４～５時間前に非特異的マウスＩｇＧ画分のｉｐ注射を受けた。

【0243】

細胞投与後の２日目に、示されるように、動物にＶδサブタイプ特異的活性化剤を投与した。対照動物に活性化剤を投与しなかった。４日目または５日目に、動物を出血させ、同定、活性化マーカー、及び増殖について循環ヒトγδＴ細胞を特徴付けた。細胞投与後７日目に、動物を屠殺し、種々の臓器を採取した。脾臓及び骨髄をＧｅｎｔｌｅＭａｘ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）デバイスを使用して崩壊させ、単一細胞懸濁液をフローサイトメトリーで分析した。

【0244】

図６に示すように、活性化剤の両方の用量で対照未処置動物と比較して、循環中及び肺中の総ヒトＣＤ４５^＋細胞の検出数が減少した（動物当たり３及び１０μｇ）。試験した他の組織（骨髄、脾臓）で見出された細胞の数は、有意な減少を経験しなかった。

【0245】

図７に示すように、血液、骨髄、及び脾臓中の細胞は、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔプロファイルが、両方の用量レベルでの細胞子孫における色素希釈に起因して減少した蛍光強度に向かって左にシフトすることによって証明されるように、活性化剤での処置後５日目までに増殖している。Ｄ１～３５ＭＡｂ活性化剤で処置した循環細胞におけるＣＤ１３７上方調節も検出し、活性化のさらなる指標を提供した。

【0246】

図８に示すように、Ｄ１－３５活性化ＭＡｂを投与されたが、ＩｇＧ画分を投与されなかった動物（３行目）は、ＩｇＧ画分及びＤ１－３５の両方を投与された動物（２行目）と比較して増加した活性化を示した。同様に、Ｄ１－３５とは異なるエピトープに結合するＶδ１特異的抗体である活性化剤Ｄ１－０８ＭＡｂ（５行目）も、生体内で活性化特性を有し、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔによって検出されるように細胞増殖を誘導する。対照的に、Ｄ１－３５抗体のアイソタイプをｈＩｇＧ４に変更することは、ＭＡｂが細胞増殖を誘導する能力を有意に損なった（４行目）。ｈＩｇＧ４は、Ｆｃ受容体に対する有意に低減した親和性を示す。したがって、細胞増殖を誘導する能力の低下は、Ｆｃ受容体への固定化の低下に起因し得る。理論に拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、Ｆｃ受容体を発現する細胞の表面上に固定化することが、おそらく固定化抗体と架橋することによってＴＣＲ凝集を増加させることによって、投与されたγδＴ細胞に対して投与された抗体によって提供される活性化効果を増加させると仮定する。本発明者らはさらに、高い価、例えば、ＩｇＧより高い価を有する抗原結合部分を使用して、この増加したＴＣＲ凝集を達成することもできると仮定する。したがって、本発明の１つの目的は、例えば、単一特異性で、非常に多価のγδＴ細胞活性化剤である。例えば、堅牢なγδＴ細胞活性化、増殖、及び／または維持は、γδＴ細胞を、例えば、三価、四価、五価などの活性化剤と接触させることによって得ることができる。いくつかの事例では、接触は、生体内で（例えば、活性化剤を対象に投与することによって）実施される。

【0247】

図９Ａ～Ｂに示すように、Ｖδ２及びＶδ３細胞の増殖は、それぞれ、ＣｅｌｌＴｅｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ色素希釈によって検出されるように、Ｄ２－３７及びＤ３－２３ＭＡｂで処置した動物の骨髄及び脾臓において検出された。

【0248】

本発明の好ましい実施形態を本明細書において示し記載してきたが、当業者にはそのような実施形態が単なる例として提供されているに過ぎないことが明らかであろう。今や当業者は、本発明から逸脱することなく数値の変動、変化及び置換を思い付くであろう。本発明の実施において本明細書に記載の本発明の実施形態に対する様々な変更が採用され得ることは理解されるべきである。以下の請求項によって本発明の範囲が画定されること、ならびにそれによってこれらの請求項の範囲内にある方法及び構造体とそれらの均等物とを包含することが意図される。

【図1-1】

【図1-2】

【図2-1】

【図2-2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4-1】

【図4-2】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【配列表】

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【国際調査報告】