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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-27
(54)【発明の名称】神経障害の治療方法
(51)【国際特許分類】
A61K 38/48 20060101AFI20220120BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220120BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20220120BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20220120BHJP
A61P 21/02 20060101ALI20220120BHJP
C12M 1/00 20060101ALI20220120BHJP
C12M 1/34 20060101ALI20220120BHJP
C12Q 1/02 20060101ALI20220120BHJP
C12Q 1/37 20060101ALI20220120BHJP
C12Q 1/6813 20180101ALI20220120BHJP
C12Q 1/6851 20180101ALI20220120BHJP
C12Q 1/686 20180101ALI20220120BHJP
C12Q 1/6869 20180101ALI20220120BHJP
G01N 33/68 20060101ALI20220120BHJP
【ＦＩ】
A61K38/48
A61P25/00
A61P25/28
A61P25/16
A61P21/02
A61K38/48 100
A61K38/48 110
C12M1/00 A ZNA
C12M1/34 Z
C12Q1/02
C12Q1/37
C12Q1/6813 Z
C12Q1/6851 Z
C12Q1/686 Z
C12Q1/6869 Z
G01N33/68
【審査請求】未請求
【予備審査請求】有
(21)【出願番号】P 2021527004
(86)(22)【出願日】2019-07-22
(85)【翻訳文提出日】2021-03-22
(86)【国際出願番号】 US2019042879
(87)【国際公開番号】W WO2020023417
(87)【国際公開日】2020-01-30
(31)【優先権主張番号】62/815,123
(32)【優先日】2019-03-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/702,191
(32)【優先日】2018-07-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/702,188
(32)【優先日】2018-07-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521034041
【氏名又は名称】エンクリアー セラピーズ， インク．
【氏名又は名称原語表記】ＥｎＣｌｅａｒ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ， Ｉｎｃ．
【住所又は居所原語表記】６５ Ｐａｒｋｅｒ Ｓｔｒｅｅｔ， ＃３Ａ， Ｎｅｗｂｕｒｙｐｏｒｔ， ＭＡ ０１９５０， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ
(74)【代理人】
【識別番号】100114890
【弁理士】
【氏名又は名称】アインゼル・フェリックス＝ラインハルト
(74)【代理人】
【識別番号】100098501
【弁理士】
【氏名又は名称】森田 拓
(74)【代理人】
【識別番号】100116403
【弁理士】
【氏名又は名称】前川 純一
(74)【代理人】
【識別番号】100134315
【弁理士】
【氏名又は名称】永島 秀郎
(74)【代理人】
【識別番号】100135633
【弁理士】
【氏名又は名称】二宮 浩康
(74)【代理人】
【識別番号】100162880
【弁理士】
【氏名又は名称】上島 類
(72)【発明者】
【氏名】マニュエル エイ． ナヴィア
(72)【発明者】
【氏名】カスパー ロエ
(72)【発明者】
【氏名】ジョナサン ジェイ． フレミング
【テーマコード（参考）】
2G045
4B029
4B063
4C084
【Ｆターム（参考）】
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2G045BB02
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2G045DA36
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4C084ZA942
(57)【要約】
毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤と対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）とを接触させることを含む、毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害を有する対象の治療方法を開示する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
治療を必要とする対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）を、毒性タンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと原位置で接触させることを含む、ＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法。
【請求項2】
前記毒性タンパク質が、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、およびＦＵＳからなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項3】
前記毒性タンパク質がタウである、請求項２記載の方法。
【請求項4】
前記タウタンパク質が過剰リン酸化されている、請求項３記載の方法。
【請求項5】
前記タウタンパク質が、タンパク質二量体、タンパク質オリゴマー、またはタンパク質凝集体の形態で存在する、請求項３または４記載の方法。
【請求項6】
前記タウタンパク質が可溶性である、請求項３から５までのいずれか１項記載の方法。
【請求項7】
前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）から選択される、請求項１から６までのいずれか１項記載の方法。
【請求項8】
神経障害がＰＳＰである、請求項７記載の方法。
【請求項9】
前記神経障害がＦＴＬＤである、請求項７記載の方法。
【請求項10】
前記神経障害がＡＤである、請求項７記載の方法。
【請求項11】
前記プロテアーゼがセリンプロテアーゼである、請求項１から１０までのいずれか１項記載の方法。
【請求項12】
前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、またはカリクレイン－６である、請求項１１記載の方法。
【請求項13】
前記毒性タンパク質がタウであり、前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、またはカリクレイン－６である、請求項１２記載の方法。
【請求項14】
前記毒性タンパク質がα－シヌクレインであり、前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、またはカリクレイン－６である、請求項１２記載の方法。
【請求項15】
前記毒性タンパク質がＴＤＰ－４３であり、前記プロテアーゼが、カリクレイン－５またはカリクレイン－６である、請求項１２記載の方法。
【請求項16】
前記プロテアーゼが、固体基材に固定化されている、請求項１から１５までのいずれか１項記載の方法。
【請求項17】
前記固体基材が、多孔質固体基材を含む、請求項１６記載の方法。
【請求項18】
前記固体基材が、架橋樹脂を含む、請求項１６記載の方法。
【請求項19】
前記架橋樹脂が、アガロース樹脂を含む、請求項１８記載の方法。
【請求項20】
前記プロテアーゼが前記固体基材への共有結合架橋によって固定化されている、請求項１６から１９までのいずれか１項記載の方法。
【請求項21】
前記固体基材が、対象に埋め込まれた装置に収容されている、請求項１６から２０までのいずれか１項記載の方法。
【請求項22】
前記装置が前記対象のくも膜下腔に埋め込まれている、請求項２１記載の方法。
【請求項23】
前記装置がさらに、大きな生体分子を除去する分級フィルターを含む、請求項２１または２２記載の方法。
【請求項24】
前記対象のＣＳＦから前記毒性タンパク質を検出する工程をさらに含む、請求項１から２３までのいずれか１項記載の方法。
【請求項25】
前記検出する工程が接触させる工程の前に行われ、それによって前記対象が治療に適しているかを特定する、請求項２４記載の方法。
【請求項26】
前記対象のＣＳＦからタウタンパク質を検出する工程をさらに含む、請求項３から１３までおよび１６から２５までのいずれか１項記載の方法。
【請求項27】
前記検出する工程が接触させる工程の前に行われ、それによって前記対象が治療に適しているかを特定する、請求項２６記載の方法。
【請求項28】
治療に適すると特定される対象は、神経障害を全く有さない対象と比較して、ＣＳＦ中のタウタンパク質のレベルが上昇している、請求項２７記載の方法。
【請求項29】
治療に適すると特定される対象は、神経障害を全く有さない対象と比較して、ＣＳＦ中の過剰リン酸化タウタンパク質のレベルが上昇している、請求項２７記載の方法。
【請求項30】
治療に適すると特定される対象は、神経障害を全く有さない対象と比較して、タンパク質二量体、タンパク質オリゴマー、またはタンパク質凝集体の形態であるタウタンパク質のレベルが上昇している、請求項２７記載の方法。
【請求項31】
前記対象がヒトである、請求項１から３０までのいずれか１項記載の方法。
【請求項32】
治療を必要とする対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）を有効量のプロテアーゼと原位置で接触させることを含む、ＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法での、毒性タンパク質を除去または分解できるプロテアーゼの使用。
【請求項33】
前記毒性タンパク質が、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、およびＦＵＳからなる群より選択される、請求項３２記載の使用。
【請求項34】
前記毒性タンパク質がタウである、請求項３３記載の使用。
【請求項35】
前記タウタンパク質が過剰リン酸化されている、請求項３４記載の使用。
【請求項36】
前記タウタンパク質が、タンパク質二量体、タンパク質オリゴマー、またはタンパク質凝集体の形態で存在する、請求項３４または３５記載の使用。
【請求項37】
前記タウタンパク質が可溶性である、請求項３４から３６までのいずれか１項記載の使用。
【請求項38】
前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）から選択される、請求項３２から３７までのいずれか１項記載の使用。
【請求項39】
前記神経障害がＰＳＰである、請求項３８記載の使用。
【請求項40】
前記神経障害がＦＴＬＤである、請求項３８記載の使用。
【請求項41】
前記神経障害がＡＤである、請求項３８記載の使用。
【請求項42】
前記プロテアーゼがセリンプロテアーゼである、請求項３２から４１までのいずれか１項記載の使用。
【請求項43】
前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、またはカリクレイン－６である、請求項４２記載の使用。
【請求項44】
前記毒性タンパク質がタウであり、前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、またはカリクレイン－６である、請求項４３記載の使用。
【請求項45】
前記毒性タンパク質がα－シヌクレインであり、前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、またはカリクレイン－６である、請求項４３記載の使用。
【請求項46】
前記毒性タンパク質がＴＤＰ－４３であり、前記プロテアーゼが、カリクレイン－５またはカリクレイン－６である、請求項４３記載の使用。
【請求項47】
前記プロテアーゼが、固体基材に固定化されている、請求項３２から４６までのいずれか１項記載の使用。
【請求項48】
前記固体基材が、多孔質固体基材を含む、請求項４７記載の使用。
【請求項49】
前記固体基材が、架橋樹脂を含む、請求項４７記載の使用。
【請求項50】
前記架橋樹脂が、アガロース樹脂を含む、請求項４９記載の使用。
【請求項51】
前記プロテアーゼが、前記固体基材への共有結合架橋によって固定化されている、請求項４７から５０までのいずれか１項記載の使用。
【請求項52】
前記固体基材が、対象に埋め込まれた装置に収容されている、請求項４７から５１までのいずれか１項記載の使用。
【請求項53】
前記装置が前記対象のくも膜下腔に埋め込まれている、請求項５２記載の使用。
【請求項54】
前記装置がさらに、大きな生体分子を除去する分級フィルターを含む、請求項５２または５３記載の使用。
【請求項55】
前記対象のＣＳＦから前記毒性タンパク質を検出する工程をさらに含む、請求項３２から５４までのいずれか１項記載の使用。
【請求項56】
前記検出する工程が接触させる工程の前に行われ、それによって前記対象が治療に適しているかを特定する、請求項５５記載の使用。
【請求項57】
前記対象のＣＳＦからタウタンパク質を検出する工程をさらに含む、請求項３４から４４までおよび４７から５６までのいずれか１項記載の使用。
【請求項58】
前記検出する工程が接触させる工程の前に行われ、それによって前記対象が治療に適しているかを特定する、請求項５７記載の使用。
【請求項59】
治療に適すると特定される対象は、神経障害を全く有さない対象と比較して、ＣＳＦ中のタウタンパク質のレベルが上昇している、請求項５８記載の使用。
【請求項60】
治療に適すると特定される対象は、神経障害を全く有さない対象と比較して、ＣＳＦ中の過剰リン酸化タウタンパク質のレベルが上昇している、請求項５８記載の使用。
【請求項61】
治療に適すると特定される対象は、神経障害を全く有さない対象と比較して、タンパク質二量体、タンパク質オリゴマー、またはタンパク質凝集体の形態であるタウタンパク質のレベルが上昇している、請求項５８記載の使用。
【請求項62】
前記対象がヒトである、請求項３２から６１までのいずれか１項記載の使用。
【請求項63】
請求項１から３１までのいずれか１項記載の方法による対象の神経疾患または神経障害の治療に使用される、それを必要とする対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質を除去または分解できるプロテアーゼを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年７月２３日に出願された米国仮出願第６２／７０２，１８８号；２０１８年７月２３日に出願された同第６２／７０２，１９１号；および２０１９年３月７日に出願された同第６２／８１５，１２３号の利益およびそれらに対する優先権を主張するものであり、それぞれの開示内容全体が目的を問わず参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１８年７月２３日に出願された米国仮出願第６２／７０２，１８８号；２０１８年７月２３日に出願された同第６２／７０２，１９１号；および２０１９年３月７日に出願された同第６２／８１５，１２３号の利益およびそれらに対する優先権を主張するものであり、それぞれの開示内容全体が目的を問わず参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１９年７月２２日作成のＡＳＣＩＩコピーは、ＥＣＴ－００３ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名称であり、そのサイズは２６，３７３バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１９年７月２２日作成のＡＳＣＩＩコピーは、ＥＣＴ－００３ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名称であり、そのサイズは２６，３７３バイトである。
【0003】
発明の分野
本発明は一般に、毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤と対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）とを接触させることを含む、毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害を有すると診断された対象の治療方法に関する。
本発明は一般に、毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤と対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）とを接触させることを含む、毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害を有すると診断された対象の治療方法に関する。
【0004】
背景
凝集タンパク質の沈着は、ほぼすべての神経変性疾患を特徴付けるものであり、このような疾患として、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（Kaufman et al., Neurotherapeutics 2013, 10, 371-382）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）（Wray et al., Journal of Neurochemistry, 2008, 105, 2343-2352）、および大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）（Narasimhan at al, The Journal of Neuroscience, 2017, 37 (47), 11406-11423）が挙げられる。
凝集タンパク質の沈着は、ほぼすべての神経変性疾患を特徴付けるものであり、このような疾患として、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（Kaufman et al., Neurotherapeutics 2013, 10, 371-382）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）（Wray et al., Journal of Neurochemistry, 2008, 105, 2343-2352）、および大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）（Narasimhan at al, The Journal of Neuroscience, 2017, 37 (47), 11406-11423）が挙げられる。
【0005】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（例えば、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））は進行性の末期神経疾患である。１００，０００人に２人が罹患するＡＬＳは、過去の症例から脳および脊髄における運動ニューロンの変性を特徴としており、進行性の痙縮、筋力の低下と消耗を経て、症状発症から通常３年以内に、呼吸不全により最終的に死に至る。最近では、認知および行動などの前頭側頭機能障害を伴う多系統障害がＡＬＳ患者の最大５０％に認められるようになっている（Giordana et al., Neurol. Sci., 2001 32, 9-16；Lomen-Hoerth et al., Neurology, 2003, 59, 1077-1079；およびPhukan et al., Lancet Neurol., 2007, 6, 994-1003）。
【0006】
前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（臨床的には前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）とも称され、行動障害型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）、意味障害型原発性進行性失語症（ｓｖＰＰＡ）、および非流暢／失文法型原発性進行性失語症（ｎｆｖＰＰＡ）を含む）は、初老期認知症の原因で２番目に多く、脳の前頭側頭葉の変性を特徴とし、知覚および記憶は比較的保持されるものの、言語機能障害を伴う人格および行動の進行性変化をもたらす（Graff-Radford and Woodruf, Neurol. 2007, 27, 48-57）。
【0007】
いずれの疾患も病因が複雑であり、遺伝的要因に加えて、環境要因がその発症に寄与する可能性が高い（Andersen and Al-Chalabi, Nat. Rev. Neurol. 2011, 7, 603-615；Paulson and Igo, Semin Neurol., 2011, 31, 449-360）。
【0008】
その病理生物学に基づけば、ＡＬＳはタンパク質のミスフォールディング障害と考えられており、他の神経変性疾患と同様にそれ自体はタンパク質異常に分類される（Grad and Cashman, Prion, 2014, 8, 33-41）。このようなタンパク質が蓄積して、運動ニューロンの病理検査で観察される凝集体となり、プリオン様の機構を介して拡散する可能性について検討されている。
【0009】
ＦＴＬＤ／ＦＴＤの変異型はすべて、ニューロンおよびグリア細胞に異常なタンパク質封入体（例えば、ＦＴＬＤ－タウ（例えば、ＦＴＤ－タウまたはピック病）におけるタウ陽性封入体、ＦＴＬＤ－ＴＤＰ（例えば、ＦＴＤ－ＴＤＰ）におけるユビキチン複合体化ＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ－４３）を含有するα－シヌクレイン陰性封入体、およびＦＴＬＤ－ＦＵＳ（例えばＦＴＤ－ＦＵＳ）における融合肉腫タンパク質封入体）を示している。
【0010】
ＴＤＰ－４３は、ＡＬＳおよびＦＴＬＤを有する患者の脳に見られる封入体の主成分であると同定された（Arai et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006, 351, 602；Neumann et al. Science, 2006314, 130-133）。こうした疾患を有する患者には、主にＣ末端のグリシンリッチ領域に位置するＴＡＲＤＢＰ遺伝子に常染色体優性ミスセンス変異が認められる（Pesiridis et al., 2009）。病理学的ＴＤＰ－４３は過剰リン酸化、ユビキチン化、および異常切断により易凝集性のＣ末端断片を生成する（Arai et al., Neuropathology, 2010, 30, 170-181；Hasegawa et al., Ann. Neurol., 2008, 64, 60-7；Hasegawa et al., J. Mol. Neurosci., 2011, 45, 480-485）。
【0011】
ＡＬＳの家族性症例で同定された他の注目すべき突然変異は、主に、Ｃｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ１）およびｆｕｓｅｄ ｉｎ ｓａｒｃｏｍａ／ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｄ ｉｎ ｌｉｐｏｓａｒｃｏｍａ（ＦＵＳ／ＴＬＳ）をコードする遺伝子のメンデル遺伝性突然変異に関連する。最近の研究では、変異型と野生型との双方のＳＯＤ１において、タンパク質ミスフォールディング特性の伝播が同定されている。
【0012】
進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）またはスティール・リチャードソン・オルゼウスキー病は、臨床的特徴としてパーキンソン病症状とともに姿勢反射障害、下方注視核上性麻痺、構音障害、および嚥下障害を含む他の特徴を呈する成人発症運動障害である（Steele et al. Arch. Neurol. 1964, 10, 333-359）。
【0013】
病理学的に、ＰＳＰを有する患者の脳は、対照脳の可溶性タウと比較して過剰リン酸化されている微小管関連タンパク質タウの沈着物を含んでいる。タウの過剰リン酸化と凝集はＰＳＰに特異的なものではなく、タウオパチーとして知られる広範な障害すべてに存在し、中でもアルツハイマー病は最も一般的であり、特性が明らかにされている（Buee et al. Brain Res. Brain Res. Rev., 2000, 33, 95-130）。タウは通常、高可溶性のタンパク質であるが、タウオパチーでは過剰リン酸化およびミスフォールドになり、細胞内封入体として大型の凝集体を形成する。
【0014】
ＡＤでは、タウ凝集体の蓄積量が、ニューロン死および認知機能低下と密接に相関しており、他のタウオパチーではタウ凝集体が神経変性の原因となる（Arriagada et al., Neurology, 1992, 42, 631- 639；Gomez-Isla et al., Ann. Neurol. 1997, 41, 17-24；Giannakopoulos et al., Neurology, 2003, 60, 1495-1500）。ＡＤは初期の記憶喪失と最終的な認知症とを臨床的特徴とする（Lee et al., Annu. Rev. Neurosci., 2001, 24, 1121-1159）。ＡＤにおいてタウ凝集体は定型的に、移行嗅内野から新皮質領域に至る解剖学的な連携ネットワークに沿って沈着する（Braak and Braak, 1991；Braak et al., 2011；Braak and Del Tredici, 2012；Cho et al., 2016b）。ＡＤおよび他のいくつかのタウオパチーでは、タウ凝集体は、主に神経細胞体（神経原線維変化（ＮＦＴ））および軸索（ニューロピルスレッド）に存在するタウの全６種のアイソフォーム（３Ｒタウと４Ｒタウとの両方）で構成される（Lee et al., 2001）。
【0015】
対照的に、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）患者および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）患者は、ＡＤ患者よりも早期に発症し、疾患の期間は短く、主に運動機能障害を示す（Lee et al., 2001）。ＣＢＤでは、タウ凝集体は大脳皮質、大脳基底核、深部小脳核、および黒質に見られる。それらは主に、ＣＢＤのニューロンとグリアとの両方に存在する４Ｒタウアイソフォームで構成され、これにはアストロサイト斑およびオリゴデンドログリアコイル小体が含まれる（Lee et al., 2001）。
【0016】
古典的なＰＳＰは、中脳および大脳基底核などの主に皮質下領域に存在するタウ凝集体を特徴とする（Williams and Lees, 2009）。ＣＢＤと同様に、ＰＳＰタウ凝集体は、ニューロンとグリアとの両方に存在する４Ｒタウアイソフォームで構成されおり、これには房状アストロサイトおよびオリゴデンドログリアコイル小体が含まれる（Lee et al., 2001）。ＰＳＰは当初、単一の症候群として示されたが、最近のエビデンスによれば、ＰＳＰは複数の臨床サブタイプを構成している可能性があることが示唆されている（Williams and Lees, 2009）。ＣＢＤおよびＰＳＰの徴候にはいくつかの重複も存在する（Sha et al., 2006）。
【0017】
パーキンソン病（ＰＤ）は、主に運動系に影響を与える中枢神経系の長期変性障害である。一般的に症状は、時間の経過につれて徐々に出現する。タウとαシヌクレインとの間の毒性相互作用は、タウの過剰リン酸化を引き起こし、最終的に両方のタンパク質の沈着により疾患に至る可能性がある（Lei et al. Int. J. Biochem. Cell Biol. 2010, 42 (11), pp. 1775-1778）。
【0018】
原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）は近年示された神経病理学的呼称であり、一般的に正常な高齢者の脳で観察され、アルツハイマー病（ＡＤ）のアミロイド斑とは独立して発生する可能性がある神経原線維変化（ＮＦＴ）を表す際に使用される。ＰＡＲＴを有する個人の症状は通常、正常から健忘性に至る認知変化であり、深刻な障害を示すものは少数にすぎない。
【0019】
慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）は、多発性頭部外傷の傷病者に見られる神経変性疾患である。ＣＴＥの症状として、行動および気分の変化、記憶喪失、認知障害、ならびに認知症が挙げられる。ＣＴＥは、過剰リン酸化タウタンパク質の沈着による皮質小血管周囲でのＮＦＴ、アストロサイトのタングル、および神経突起の顕著なクラスター化を特徴とするタウオパチーである。重度罹患症例は、脳全体にタウ病変が現れる。４３ｋＤａ ＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質のリン酸化異常は、大半のＣＴＥ症例に見られ、老化に伴うベータアミロイドは４３％に認められている（McKee et al., Brain Pathol, 2015, 25(3), pp. 350-364）。
【0020】
染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）は、前頭側頭葉と呼ばれる脳の領域における神経細胞（ニューロン）の消失を特徴とする常染色体優性神経変性障害である。このような細胞の消失は、経時的に人格、行動、言語、および運動に影響を及ぼし得る。ＦＴＤＰ－１７は、タウの正常な構造と機能の破壊をもたらすＭＡＰＴタウ遺伝子の突然変異を原因とする。障害の基となる病理機序は、タウアイソフォームの比率変化、またはタウが微小管に結合して微小管の集合を促進する能力に関連すると考えられている（Wszolek, Z. et al., Orphanet J. Rare Dis., 2006, 1, pp 30）。
【0021】
リティコ・ボディグ（Lytico-bodig）病（Lytigo-bodigと表記する場合もある）または筋萎縮性側索硬化症－パーキンソニズム認知症複合（ＡＬＳ－ＰＤＣ）は、西太平洋諸島地域固有の神経変性障害であり、グアム諸島、日本の紀伊半島、およびインドネシアの西パプアといった島々でのみ発症が確認されている。これは、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソニズム、および認知症の特徴を含み得る広範な臨床症状を伴う緩徐進行性変性疾患である。その特徴は、筋萎縮性側索硬化症の病理学的所見に加えて、タウで構成された神経原線維変化の広範囲な分布という独特な神経病理学的特質を有することである。
【0022】
神経節膠腫は、希少な緩徐成長性の原発性中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍であり、小児および若年成人の側頭葉で最も頻繁に発生する。この病変内の神経節細胞は、場合によりアルツハイマー病のものと同様の神経原線維変化（ＮＦＴ）を含む神経変性変化を呈することがある（Brat DJ et al., Neuropathol. Appl. Neurobiol., 2001, 27 (3), pp 197-205）。
【0023】
髄膜血管腫症は、脳の希少疾患である。その特徴は、通常は大脳皮質に関係する軟髄膜の良性病変、および軟髄膜と髄膜血管の増殖を有することである。神経原線維変化は、疾患病変の特徴である皮質間の斑と周囲皮質との双方に頻繁に存在するが、老人斑と顆粒空砲変性は一般的ではない（Laws, Journal of Neuropathology and Experimental Neurology, 1986, 45 (4) pp 426-446）。
【0024】
脳炎後パーキンソニズムは、黒質の神経細胞の変性を引き起こすウイルス性疾患が原因であると考えられている疾患である。総じてこの変性は臨床的なパーキンソニズムをもたらす。罹患した脳領域には、アルツハイマー病で見られるものと同様の神経原線維変化が含まれている。しかしながら、アルツハイマー病において一般的である老人斑は見られない（Evidente, V. et al. J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry, 1998, 64 (1) pp 5）。
【0025】
亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）は、麻疹ウイルスによる持続的な感染（ウイルス自体の突然変異に起因し得る）を原因とする、希少かつ慢性的な形態の進行性脳炎症である。この病態は主に小児と若年成人が罹患する。麻疹感染者１０，０００人のうち約１人が最終的にＳＳＰＥを発症すると推定されている。
【0026】
概要
本発明の一態様は、脳脊髄液（ＣＳＦ）中のタウタンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法を提供する。当該方法は、治療を必要とする対象のＣＳＦを、タウタンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと原位置で接触させることを含む。
本発明の一態様は、脳脊髄液（ＣＳＦ）中のタウタンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法を提供する。当該方法は、治療を必要とする対象のＣＳＦを、タウタンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと原位置で接触させることを含む。
【0027】
ある特定の実施形態では、毒性タンパク質は、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、およびＦＵＳからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質はタウである。ある特定の実施形態では、タウタンパク質は過剰リン酸化されている。ある特定の実施形態では、タウタンパク質は、タンパク質二量体、タンパク質オリゴマー、またはタンパク質凝集体の形態で存在する。ある特定の実施形態では、タウタンパク質は可溶性である。
【0028】
ある特定の実施形態では、神経障害は、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、および亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）から選択されるタウオパチーである。ある特定の実施形態では、神経障害はＰＳＰである。ある特定の実施形態では、神経障害はＦＴＬＤである。ある特定の実施形態では、神経障害はＡＤである。
【0029】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはセリンプロテアーゼである。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、またはカリクレイン－６である。
【0030】
ある特定の実施形態では、毒性タンパク質はタウであり、プロテアーゼは、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、またはカリクレイン－６である。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質はα－シヌクレインであり、プロテアーゼは、トリプシン、エラスターゼ、またはカリクレイン－６である。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質はＴＤＰ－４３であり、プロテアーゼは、カリクレイン－５またはカリクレイン－６である。
【0031】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは固体基材に固定化されている。ある特定の実施形態では、固体基材は多孔質固体基材を含む。ある特定の実施形態では、固体基材は架橋樹脂を含む。ある特定の実施形態では、架橋樹脂はアガロース樹脂を含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは固体基材への共有結合架橋によって固定化されている。ある特定の実施形態では、固体基材は、対象に埋め込まれた装置に収容されている。ある特定の実施形態では、対象のくも膜下腔に装置が埋め込まれている。ある特定の実施形態では、装置はさらに、大きな生体分子を除去する分級フィルターを含む。
【0032】
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される方法は、対象のＣＳＦからタウタンパク質を検出する工程をさらに含む。ある特定の実施形態では、検出する工程は、接触させる工程の前に行われ、それによって対象が治療に適しているかを特定する。
【0033】
ある特定の実施形態では、本方法は、対象のＣＳＦからタウタンパク質を検出する工程をさらに含む。ある特定の実施形態では、検出する工程は、接触させる工程の前に行われ、それによって対象が治療に適しているかを特定する。ある特定の実施形態では、治療に適すると特定された対象は、神経障害を全く有さない対象と比較して、ＣＳＦ中のタウタンパク質のレベルが上昇している。ある特定の実施形態では、治療に適すると特定された対象は、神経障害を全く有さない対象と比較して、ＣＳＦ中の過剰リン酸化タウタンパク質のレベルが上昇している。ある特定の実施形態では、治療に適すると特定された対象は、神経障害を全く有さない対象と比較して、タンパク質二量体、タンパク質オリゴマー、またはタンパク質凝集体の形態であるタウタンパク質のレベルが上昇している。
【0034】
ある特定の実施形態では、対象はヒトである。
【0035】
上記以外の目的および利点は、以降の詳細な説明、実施例、および特許請求の範囲の考察から当業者に明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【0036】
【図1】Ｂｏｄｉｐｙ（登録商標）標識カゼインを基質として用いたエラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンのプロテアーゼ活性を示す折れ線グラフである。ＲＦＵは、相対蛍光単位を表す。
【図2A】アガロース樹脂カラムに固定化したエラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンのカゼイン消化活性を示す棒グラフである。ＲＦＵは、相対蛍光単位を表す。
【図2B】アガロース樹脂カラムに固定化したエラスターゼおよびトリプシンのカゼイン消化活性を示す棒グラフである。結果は、対照（プロテアーゼなし）樹脂群を基に補正されている。ＲＦＵは、相対蛍光単位を表す。
【図2C】アガロース樹脂カラムに固定化したトリプシン、エラスターゼ、カリクレイン－５（ＫＬＫ５）、またはリシルエンドペプチダーゼによって活性化されたカリクレイン－６（ＫＬＫ６）（図ではＫＬＫ６＊と表記）のカゼイン消化活性を示す折れ線グラフである。結果は、対照（プロテアーゼなし）樹脂群を基に補正されている。ＲＦＵは、相対蛍光単位を表す。
【図2D】アガロース樹脂カラムに固定化したＫＬＫ５およびリシルエンドペプチダーゼによって活性化されたＫＬＫ６（図ではＫＬＫ６＊と表記）がそれぞれペプチド基質Ｂｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣ（ＥＳ０１１）およびＢｏｃ－ＱＡＲ－ＡＭＣ（ＥＳ０１４）を消化する活性を示す折れ線グラフである。ＲＦＵは、相対蛍光単位を表す。
【図3A】アガロース樹脂カラムに固定化したエラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンによるタウ－４４１（Ｐ３０１Ｌ）の消化を示す銀染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルである。
【図3B】アガロース樹脂カラムに固定化したエラスターゼおよびトリプシンによるタウ－４１０の消化を示す銀染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの写真である。
【図3C】アガロース樹脂カラムに固定化したエラスターゼおよびトリプシンによるｐ－タウ－４４１の消化を示す銀染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの写真である。
【図3D】アガロース樹脂カラムに固定化したエラスターゼおよびトリプシンによるα－シヌクレインの消化を示す銀染色ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの写真である。「空のカラム」とは、いずれのカラムにも基質タンパク質試料が添加されていないことを意味する。「Ｔ＝０分＊」とは、基質タンパク質試料がカラムに加えられてすぐに、カラム遠心によって回収されたことを意味する。図３Ｄに示すゲルの最後の２レーンは底部が破損したため、５分および６０分の時点でのエラスターゼによるα－シヌクレインの消化データが欠落している。
【図4】アガロースカラムに固定化したプロテアーゼを収容したデバイス１００との接触後に、毒性タンパク質を含有するＣＳＦを除去し、ＣＳＦを再導入する例示的なデバイスを示す模式図である。
【0037】
詳細な説明
定義
投与が企図される「対象」として、ヒト（すなわち、あらゆる年齢層の男性または女性、例えば小児対象（例えば、乳児、子供、青年）または成人対象（例えば、若年成人、中年成人、または高齢成人））、ならびに／または非ヒト動物、例えば、霊長類（例えば、カニクイザル、アカゲザル）、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、齧歯類、ネコ、および／もしくはイヌなどの哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。ある特定の実施形態では、対象は非ヒト動物である。「ヒト」、「患者」、および「対象」という用語は、本明細書で同義に使用される。
定義
投与が企図される「対象」として、ヒト（すなわち、あらゆる年齢層の男性または女性、例えば小児対象（例えば、乳児、子供、青年）または成人対象（例えば、若年成人、中年成人、または高齢成人））、ならびに／または非ヒト動物、例えば、霊長類（例えば、カニクイザル、アカゲザル）、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、齧歯類、ネコ、および／もしくはイヌなどの哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。ある特定の実施形態では、対象は非ヒト動物である。「ヒト」、「患者」、および「対象」という用語は、本明細書で同義に使用される。
【0038】
疾患、障害、および病態は、本明細書で同義に使用される。
【0039】
本明細書で使用される場合、特に指定のない限り、「治療する」、「治療すること」、および「治療」という用語は、対象が特定の疾患、障害、または病態を有すると診断されている期間に行われる、疾患、障害、もしくは病態の重篤度を軽減する、疾患、障害、もしくは病態の少なくとも１種の症状の重篤度を軽減する、または疾患、障害、もしくは病態の進行を抑制もしくは遅延させる処置（「治癒的治療」）を企図するとともに、対象が特定の疾患、障害、もしくは病態を患い始める前に行われる処置（「予防的治療」）も企図する。
【0040】
一般に、薬剤の「有効量」とは、目的とする生物学的反応を誘発するのに十分な量を指す。当業者であれば理解されるであろうが、本発明の薬剤の有効量は、目的とする生物学的エンドポイント、薬剤の薬物動態、治療される疾患、投与様式、ならびに対象の年齢、健康状態、および病態のような要因に応じて変更することができる。有効量は治癒的治療および予防的治療を達成する。
【0041】
本明細書で使用される場合、特に指定のない限り、薬剤の「治療有効量」は、疾患、障害、もしくは病態の治療において治療的利益を提供するか、または疾患、障害、もしくは病態と関連する１種以上の症状を遅延させるまたは最小限度にするために十分な量である。薬剤の治療有効量とは、単独でまたは他の治療法と組み合わせて、疾患、障害、もしくは病態の治療において治療的利益を提供する治療薬の量を意味する。「治療有効量」という用語は、治療法全体を改善する量、疾患もしくは病態の症状もしくは原因を軽減もしくは回避する量、または別の治療薬の治療有効性を増強する量を包含することができる。
【0042】
本明細書で使用される場合、「毒性タンパク質」という用語は、（ａ）異常なタンパク質（例えば、天然タンパク質の異常な変異体または突然変異体）、もしくは標的組織（例えば、脳または神経組織）の健常性および生存に悪影響を及ぼす異常に大量の天然タンパク質、すなわち毒性形態であるか；または（ｂ）病態生理学的条件下で（例えば、ミスフォールディング、凝集、翻訳後修飾、またはタンパク質分解切断によって）（ａ）に記載のタンパク質に転位され得るタンパク質、すなわち前毒性の形態であるものを指す。例えば、毒性形態のタウタンパク質は、標的組織の健常性および生存に悪影響を及ぼす任意のタウタンパク質（例えば、タウタンパク質種）であり得る（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、異所性タウ、立体構造が変化したタウ、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、またはタウ二量体）。
【0043】
本明細書で使用される場合、「有意な効果」という用語は、測定可能であり、測定の誤差の範囲外である（すなわち、統計的有意である）大きさを有し、対象に臨床的に有意義な影響を及ぼすことが公知であるかまたは予測される（例えば、症状または副作用の重篤度に臨床的に有意な増加または減少を生じさせること、または以前は対象に存在しなかった症状または副作用の発症を生じさせるもしくは寄与することが公知であるかまたは予測される）効果を指す。
【0044】
本明細書で使用される場合、「固定化」という用語は、薬剤（例えば、抗体または酵素）が不活性の不溶性材料に結合されているか、それ以外では、沈殿物（例えば非晶質沈殿物、例えば結晶性沈殿物）、架橋沈殿物（例えば非晶質架橋沈殿物、例えば結晶性架橋沈殿物）として、または封入（例えば多孔質容器への封入）により不溶性にされていることを指す。
【0045】
脳脊髄液（ＣＳＦ）の処理方法
本発明は、脳脊髄液（ＣＳＦ）中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法を提供する。当該方法は、治療を必要とする対象のＣＳＦを、毒性タンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと接触させることを含む。
本発明は、脳脊髄液（ＣＳＦ）中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法を提供する。当該方法は、治療を必要とする対象のＣＳＦを、毒性タンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと接触させることを含む。
【0046】
本発明はまた、
ａ）脳脊髄液（ＣＳＦ）中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害を有する対象のＣＳＦと、
ｂ）毒性タンパク質を分解または除去することができるプロテアーゼと、を含む組成物を提供する。
ａ）脳脊髄液（ＣＳＦ）中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害を有する対象のＣＳＦと、
ｂ）毒性タンパク質を分解または除去することができるプロテアーゼと、を含む組成物を提供する。
【0047】
ある特定の実施形態では、毒性タンパク質はタウである（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）。一実施形態では、毒性タンパク質は、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートをもつ）、またはプリオンタンパク質である。毒性タンパク質の存在または毒性タンパク質をコードする遺伝子の突然変異を特徴とする場合、神経疾患を毒性タンパク質陽性と称する。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質は、ＣＳＦ中に毒性形態で存在する（例えば、タンパク質凝集体、タンパク質のタングル、タンパク質オリゴマー、タンパク質原繊維、過剰リン酸化タンパク質、またはミスフォールドタンパク質）。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質はＣＳＦ中に前毒性形態で存在する。
【0048】
ある特定の実施形態では、神経障害は前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）である。ある特定の実施形態では、ＦＴＬＤは前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）である。ある特定の実施形態では、神経障害はＦＴＬＤ－タウ（例えばＦＴＤ－タウ、例えばピック病）である。
【0049】
ある特定の実施形態では、神経障害はタウオパチーである。例示的なタウオパチーとして、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）（別称、大脳皮質基底核神経節変性症（ＣＢＧＤ））、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、および亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0050】
ある特定の実施形態では、神経障害は、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）（別称、大脳皮質基底核神経節変性症（ＣＢＧＤ））、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、ハンチントン病（ＨＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）から選択される。
【0051】
ある特定の実施形態では、神経障害は、ＴＤＰ－４３陽性ＡＬＳ、ＳＯＤ１陽性ＡＬＳ、ＦＵＳ陽性ＡＬＳ、ＴＤＰ－４３陽性前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＳＯＤ１陽性ＦＴＤ、ＦＵＳ陽性ＦＴＤ、ＴＤＰ－４３陽性前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ＳＯＤ１陽性ＦＴＬＤ、ＦＵＳ陽性ＦＴＬＤ、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（例えばタウ凝集体を伴うＦＴＤ）、または進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）からなる群より選択される。
【0052】
ある特定の実施形態では、対象はヒトである。ある特定の実施形態では、対象は非ヒト動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、または非ヒト霊長類）である。
【0053】
ある特定の実施形態では、薬剤との接触前にＣＳＦを対象から取り出し、治療を有効にするために必要な時間、薬剤と接触させた後、対象に再導入する。例えば、図４の流れ図に従って蠕動ポンプによってＣＳＦを取り出し、アガロースカラムに固定化されたプロテアーゼを収容するデバイスにＣＳＦを接触させた後、対象に再導入してもよい。
【0054】
ある特定の実施形態では、本開示は、対象（例えば、ヒト）のＣＳＦを、固体表面、例えば、対象の身体に埋め込まれたデバイス（例えば、図４のカートリッジ１００）の内面に固定化または結合されたプロテアーゼと接触させる方法を提供する。ある特定の実施形態では、薬剤の使用中または使用後に、薬剤、またはプロテアーゼが固定化された固体表面を抽出し、プロテアーゼの新たなバッチまたはプロテアーゼの新たなバッチが固体化された固体支持体（例えば樹脂）を、対象に埋め込まれたデバイスに注入して再導入する。ある特定の実施形態では、ＣＳＦをプロテアーゼと接触させることにより毒性タンパク質を除去または分解すると、デバイス内に毒性タンパク質（例えばタウ）の濃度勾配が生じる。例示的な実施形態では、濃度勾配の方向は、デバイスの入力端側から出力端側であり、入力端側が高濃度である。
【0055】
ある特定の他の実施形態では、本開示は、ＣＳＦをプロテアーゼと接触させる前に対象（例えば、非ヒト哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、または非ヒト霊長類））からＣＳＦを取り出す工程と、ＣＳＦをプロテアーゼと接触させた後、それを対象に再導入する工程とを含む方法を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本方法は、アガロースカラムに固定化された薬剤を収容するデバイスにＣＳＦを接触させる前に、対象からＣＳＦを取り出す工程と、ＣＳＦをデバイスと接触させた後、ＣＳＦを対象に再導入する工程とを含む。
【0056】
ある特定の実施形態では、方法を実施する際に使用されるプロテアーゼは固定化されている（例えば、固体基材上に固定化される）。さらなる実施形態では、薬剤は、多孔質ビーズまたは多孔質膜への架橋により固定化される。ある特定の実施形態では、ある濃度勾配のプロテアーゼとＣＳＦとを接触させることにより毒性タンパク質を除去または分解する。
【0057】
いくつかの実施形態では、プロテアーゼは固体支持体上に固定化される。さらなる実施形態では、固体支持体は多孔質固体支持体である。本発明のいくつかの実施形態では、プロテアーゼは、共有結合によって支持体に結合される。ある特定の実施形態では、支持体は架橋樹脂である。さらなる実施形態では、架橋樹脂はアガロース樹脂である。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で固体支持体に固定化される。
【0058】
さらなる実施形態では、プロテアーゼと接触させる前または接触させた後に、ＣＳＦを濾過して治療薬を除去した後、対象に再導入する。
【0059】
ある特定の実施形態では、ＣＳＦは、治療薬を含有するエクスビボ区画と患者との間を継続して循環する。
【0060】
本発明の他の実施形態では、プロテアーゼは、原位置でＣＳＦと接触させられる。ｉｎ ｓｉｔｕ法は、本明細書に開示される薬剤を収容する装置を、対象に、例えば対象のくも膜下腔に埋め込むことによって実施することができる。このような埋め込みにより、ＣＳＦから毒性タンパク質を継続的に分解および除去することができ、体外法の反復よりもＣＮＳの感染リスクを低下させることができる。したがって、ある特定の実施形態では、この方法は、対象に埋め込まれたデバイスとＣＳＦとを接触させることを含み、当該デバイスには基材に固定化された薬剤が収容されている。ある特定の実施形態では、（例えば、皮下注射ポート経由での）注入によって、対象に埋め込まれたデバイスに薬剤を送達することも、デバイスから薬剤を抽出することもできる。
【0061】
さらなる実施形態では、この方法は、毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤を患者のＣＳＦに直接投与することを含む。
【0062】
ある特定の実施形態では、ある濃度勾配のプロテアーゼとＣＳＦとを接触させる（例えば、基材上に固定化されたある濃度勾配のプロテアーゼとＣＳＦとを接触させる）ことにより毒性タンパク質を除去または分解する。ある特定の実施形態では、固定化されたプロテアーゼとＣＳＦとを接触させる（例えば、基材上に固定化されたプロテアーゼとＣＳＦとを接触させる）ことによりタンパク質を除去または分解する。
【0063】
毒性タンパク質の除去および／または分解
本発明は、ＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法を提供する。当該方法は、治療を必要とする対象のＣＳＦを、毒性タンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと原位置で接触させることを含む。
本発明は、ＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法を提供する。当該方法は、治療を必要とする対象のＣＳＦを、毒性タンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと原位置で接触させることを含む。
【0064】
ある特定の実施形態では、毒性タンパク質はタウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）である。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質はＴＤＰ－４３タンパク質（例えばミスフォールドＴＤＰ－４３タンパク質、例えば変異型ＴＤＰ－４３タンパク質）である。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質は変異型またはミスフォールド野生型ＳＯＤ１タンパク質である。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質は変異型ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質である。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質は毒性形態である。
【0065】
微小管結合タンパク質タウは、タウの過剰リン酸化および凝集を特徴とするＡＤおよびタウオパチーと関連する神経原線維変化（ＮＦＴ）の主成分である。タウは、疎水性含有率が極めて低いため、本質的に非構造化タンパク質であり、突起ドメイン、塩基性プロリンリッチ領域、およびアセンブリドメインで構成されている。タウは、アセチル化、脱アミド化、糖化、グリコシル化、異性化、メチル化、ニトロ化、リン酸化、タンパク質分解、ＳＵＭＯ化、およびユビキチン化など、種々の翻訳後修飾を受けることが知られている（Martin et al. (2011) Neurochem. Int. 58, 458-71を参照）。特にアセンブリドメインでのタウの過剰リン酸化は、微小管に対するタウの親和性を低下させ、微小管運動および軸索輸送を調節する能力を損なう。加えて、塩基性プロリンリッチドメインの一部および疑似リピートも、負電荷表面との相互作用により微小管を安定化している。２つのＮ末端挿入領域の選択的スプライシング、ならびにタウの第２番、第３番、および第１０番のエクソンの選択的スプライシングにより、長さが異なる６種のタウアイソフォームがＣＮＳに生成される（Quinn et al. (2018) J. Alzheimers Dis. 63(1):13-33を参照）。タンパク質のカルボキシル末端部分にあるアセンブリドメインには、エクソン１０の選択的スプライシングに応じて、３リピートまたは４リピート（３Ｒまたは４Ｒ）いずれかの保存的チューブリン結合モチーフが含まれる。タウの４Ｒアイソフォームは、微小管の結合および安定化の能力が３Ｒアイソフォームよりも大きい。ヒト成人脳では、３Ｒアイソフォームと４Ｒアイソフォームとのレベルは同等であるが、胎児段階では３Ｒタウのみが発現している。タウオパチーにおいては、タウ転写物のスプライシング、およびタウの３Ｒアイソフォームと４Ｒアイソフォームとの比率を変化させる変異が、神経変性疾患を引き起こすほどに過度である。全長タウタンパク質のアイソフォームに加えて、特定のタウ断片（例えば、内因性プロテアーゼ切断により生じる断片）もまた、重合または凝集する傾向、別のタウアイソフォームもしくは断片の重合もしくは凝集を促進する能力、および／またはタウの重合もしくは凝集を他の細胞に増殖させる能力を呈することができ、それにより神経毒性を生じさせる。そのようなタウ断片として、断片１４－４４１、２６－２３０、１－３１４、２６－４４、１－４４、１－１５６、４５－２３０、２４３－４４１、２５６－４４１、２５６－３６８、１－３６８、１－４２１、１５１－４２１、１－３９１、およびＸ－４４１（Ｘは１８２から１９４までの任意の整数）が挙げられるが、これらに限定されない（アミノ酸位置は、２Ｎ４Ｒアイソフォームの配列に従う番号）。これらのタウ断片に加えて、断片１２４－４４１および１－４０２（アミノ酸位置は、２Ｎ４Ｒアイソフォームの配列に従う番号）のような特定の他の断片は、神経障害の診断のためのバイオマーカー、または患者の進行もしく治療に対する反応のモニタリングのためのバイオマーカーとして有用であり得る。その他のタウ断片が、Quinn et al. (2018) J. Alzheimers Dis. 63(1):13-33で概説されている。上記の観点から、ヒトの脳組織におけるタウには、種々の異なる長さおよび形態が、複数の翻訳後修飾を伴って存在する可能性がある。本明細書で使用される場合、「タウ」という用語は、１つ以上の翻訳後修飾を有し、あらゆる折り畳み状態であるタウタンパク質の様々なアイソフォームおよび断片を含む。正常からＮＦＴへと進行する過程で、タウは「可溶性」状態を経る。このとき、タンパク質はまだ原線維ではないものの、過剰リン酸化、異所局在化、立体構造変化、および／またはオリゴマー化し得る。
【0066】
ＡＤの病因解明にタウは重要な役割を果たしており、ＡＤ動物モデルにおけるタウレベルの低下が疾患表現型を逆転させること、Ａβの過剰発現を原因とするＡＤモデルにおける認知障害の発症にタウが必要であることが複数の研究により示されている。神経原線維変化（ＮＦＴ）は、ＡＤおよびタウオパチーにおける神経変性の介在に関与しているが、タウオパチーの動物モデルによると、記憶障害およびニューロン消失はＮＦＴの蓄積と完全には関連していないことが示されている。ＡＤの進行と最も密接に関連するタウの病理学的構造はタウオリゴマーであり、タウのタングルには急性神経毒性はなく、むしろプレタングルのオリゴマータウ種が、オリゴマーＡβ種の毒性関与と同様に、神経変性表現型に関与することが示唆されている（Kopeikina et al., Transl. Neurosci. 2012 September;3(3): 223-233）。
【0067】
疾患進行の「感染性」モデルを通じて、細胞外タウ種が神経毒性に寄与することが多数の研究で示唆されている（Narasimhan et al., The Journal of Neuroscience, 2017, 37(47), 11406-11423）。例えば、タウ病変は疾患初期から疾患後期まで脳全体に連続して拡散し、細胞外タウ凝集体は細胞の外側から内側へとタウミスフォールディングを伝播でき、変異型ヒトタウの凝集したトランスジェニックマウスからの脳抽出物は、正常なヒトタウを発現するマウスの脳全体にタウ病変を移行し、凝集促進ヒトタウの誘導は、ヒトタウと正常なマウスタウとの両方からなるタウの凝集体およびタングルの形成（共凝集）を誘導し、ＡＤのＣＳＦにおいてタウのレベルは上昇するが、Ａβレベルは低下する（Kaufman at al, Neurotherapeutics, 2013, 10, 371-382）。
【0068】
プロテアーゼ
本発明は、ＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法を提供する。当該方法は、治療を必要とする対象のＣＳＦを、毒性タンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと接触させることを含む。
本発明は、ＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害の治療方法を提供する。当該方法は、治療を必要とする対象のＣＳＦを、毒性タンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと接触させることを含む。
【0069】
本発明はまた、
ａ）脳脊髄液（ＣＳＦ）中の毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害を有する対象のＣＳＦと、
ｂ）毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質を分解または除去することができるプロテアーゼと、を含む組成物を提供する。
ａ）脳脊髄液（ＣＳＦ）中の毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害を有する対象のＣＳＦと、
ｂ）毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質を分解または除去することができるプロテアーゼと、を含む組成物を提供する。
【0070】
本発明のプロテアーゼによる、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質の選択的分解は、基質選択性（プロテアーゼが、毒性形態タンパク質または前毒性形態タンパク質である毒性タンパク質を優先的に認識する）、切断部位特異性（プロテアーゼが、毒性形態または前毒性形態である毒性タンパク質に遭遇した残基モチーフのペプチド結合を切断する特異性を有する）、基質親和性（結合動態に基づく）、および切断効率（切断反応率）の組み合わせにより達成される。本発明の特定の実施形態では、プロテアーゼは、哺乳動物、微生物（例えば、真菌、細菌、またはウイルス）、または植物のプロテアーゼである。
【0071】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはセリンプロテアーゼである。例示的な哺乳動物セリンプロテアーゼとして、トリプシン、トロンビン、エラスターゼ、カリクレイン（ＫＬＫ１－ＫＬＫ１５）、トリプターゼａ／ｂ１、キモトリプシン、カテプシンＧ、グランザイムＡ、グランザイムＢ、グランザイムＧ、グランザイムＮ、グランザイムＯ、グランザイムＤ、グランザイムＥ、グランザイムＦ、ｈｉｇｈ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ Ａ１（ＨＴＲＡ１）、マトリプターゼ１、マトリプターゼ２、マトリプターゼ３、およびヘプシンが挙げられる。例示的な細菌セリンプロテアーゼとして、サブチリシンｎｏｖｏ、サブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、アルカラーゼ、グルタミルエンドペプチダーゼ、エンドプロテアーゼＧｌｕ－Ｃ、サビラーゼ（Savirase）、およびエンドプロテアーゼＬｙｓ－Ｃが挙げられる。例示的な真菌セリンプロテアーゼとして、プロテイナーゼＫ、およびde Souza et al., Brazilian J. of Microbiol., 46(2): 337-346 (2015)に記載の真菌プロテアーゼのいずれか１種が挙げられ、これは、本開示のジペプチド反復タンパク質を消化することができる。例示的な植物セリンプロテアーゼとして、ベンガレンシン、ＨｂＳＰＡ、ＨｂＳＰＢ、およびＨｂＳＰＣが挙げられる。例示的なウイルスセリンプロテアーゼとして、ＨＲＶ３Ｃが挙げられる。例えば、セリンプロテアーゼは、キモトリプシンＡ、グルタミルエンドペプチダーゼＩ、ＤｅｇＰペプチダーゼ、リシルエンドペプチダーゼ、ストレプトグリシンＡ、アストロウイルスセリンペプチダーゼトガビリン、ＩｇＡ１特異的セリンペプチダーゼ、フラビビリン、サブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、ケキシン、プロリルオリゴペプチダーゼ、ジペプチジル－ペプチダーゼＩＶ、アシルアミノアシル－ペプチダーゼ、グルタミルエンドペプチダーゼＣ、カルボキシペプチダーゼＹ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－ＡｌａカルボキシペプチダーゼＡ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－ＡｌａカルボキシペプチダーゼＢ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－ＡｌａペプチダーゼＣ、ペプチダーゼＣｌｐ、Ｘａａ－Ｐｒｏジペプチジル－ペプチダーゼ、Ｌｏｎ－Ａペプチダーゼ、サイトメガロウイルスアセンブリ、抑制因子ＬｅｘＡ、シグナルペプチダーゼＩ、シグナラーゼ２１ｋＤａ成分、ＴｒａＦペプチダーゼ、リソソームＰｒｏ－Ｘａａカルボキシペプチダーゼ、ヘパシビリン、ポチウイルスＰ１ペプチダーゼ、ペスチウイルスＮＳ３ポリプロテインペプチダーゼ、ウマ動脈炎ウイルスセリンペプチダーゼ、プロリルアミノペプチダーゼ、ＰＳ－１０ペプチダーゼ、ソベモウイルスペプチダーゼ、ルテオウイルスペプチダーゼ、Ｃ末端プロセシングペプチダーゼ－１、トリコーンコアペプチダーゼ、ペニシリンＧアシラーゼ前駆体、ジペプチジルペプチダーゼ７、ＨｅｔＲ推定ペプチダーゼ、シグナルペプチドペプチダーゼＡ、プロテインＣ、古細菌シグナルペプチドペプチダーゼ１、感染性膵臓壊死ビルナウイルスＶｐ４ペプチダーゼ、ジペプチダーゼＥ、セドリシン、ロンボイド－１、ＳｐｏＩＶＢペプチダーゼ、ヌクレオポリン１４５、Ａ型インフルエンザＰＡペプチダーゼ、Ｓｓｙ５ペプチダーゼ、ピコルナイン様セリンペプチダーゼ、ムレインテトラペプチダーゼＬＤ－カルボキシペプチダーゼ、ＰＩＤＤ自己プロセシングタンパク質ユニット１、ニッコウガイウイルス１ ＶＰ４、ＭＵＣ１自己切断、ジストログリカン、ｇｐＯペプチダーゼ、大腸菌ファージＫ１ＦエンドシアリダーゼＣＩＭＣＤ自己切断タンパク質、ブリッカウイルスセリンペプチダーゼ、頭部前駆体ペプチダーゼｇｐ２１、頭部前駆体ペプチダーゼ、ＣＡＲＤ８自己切断タンパク質頭部前駆体ペプチダーゼｇｐ１７５、デスタビラーゼ、またはオートクリン増殖抑制因子タンパク質Ａであり得る。例えば、ある特定の実施形態では、セリンプロテアーゼは、トリプシン、エラスターゼ、またはトロンビンである。
【0072】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはトレオニンプロテアーゼである。例示的な哺乳動物トレオニンプロテアーゼとして、プロテアソーム触媒サブユニット（１、２、３、１ｉ、２ｉ、３ｉ）、プロテアソームベータ（１、２、３、４、３様）サブユニット、プロテアソームアルファ（１－８、３様）サブユニット、タスパーゼ、およびグリコシルアスパラギナーゼが挙げられる。
【0073】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはアスパラギン酸プロテアーゼである。例示的な哺乳動物アスパラギン酸プロテアーゼとして、ペプシンＡ、ペプシンＣ、キモシン、カテプシンＤ、カテプシンＥ、ナプシンＡ、ナプシンＢ、ｂ－セクレターゼ１、ｂ－セクレターゼ２、プレセニリン１、およびプレセニリン２が挙げられる。例示的な細菌アスパラギン酸プロテアーゼとして、シグナルペプチダーゼＩＩおよびプレピリンが挙げられる。例示的な真菌アスパラギン酸プロテアーゼとして、ペプシン（Ａ１）、レトロペプシン（Ａ２）、およびサッカロペプシンが挙げられる。例示的な植物アスパラギン酸プロテアーゼとして、ネペンテシンが挙げられる。例示的なウイルスアスパラギン酸プロテアーゼとして、レトロペプシンが挙げられる。例えば、アスパラギン酸プロテアーゼは、ペプシン、エンドチアペプシン、カテプシンＤ、カテプシンＥ、ＢＡＣＥ１、ＢＡＣＥ２、レニン、ナプシン－Ａ、ネペンテシン、シグナルペプチダーゼＩＩ、プレセニリン、ＧＰＲエンドペプチダーゼ、オムプチン、ＨＩＶ－１レトロペプシン、Ｔｙ３トランスポゾンペプチダーゼ、Ｇｙｐｓｙトランスポゾンペプチダーゼ、Ｏｓｖａｌｄｏレトロトランスポゾンペプチダーゼ、カリフラワーモザイクウイルス型ペプチダーゼ、バチルス状ウイルスペプチダーゼ、サーモプシン、スプマペプシン、Ｃｏｐｉａトランスポゾンペプチダーゼ、Ｔｙ１トランスポゾンペプチダーゼ、ｉｍｐａｓ１ペプチダーゼ、４型プレピリンペプチダーゼ１、ＦｌａＫペプチダーゼ、ＤＮＡ損傷誘導性タンパク質１、皮膚ＳＡＳＰａｓｅ、ＨｙｂＤペプチダーゼ、ＰｅｒＰペプチダーゼ、胞子形成因子ＳｐｏＩＩＧＡ、またはｓｓｏ１１７５ｇ．ｐ．であり得る。例えば、ある特定の実施形態では、アスパラギン酸プロテアーゼは、ペプシンまたはエンドチアペプシンである。
【0074】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはシステインプロテアーゼである。例示的な哺乳動物システインプロテアーゼとして、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＦ、カテプシンＨ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＬ２、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カテプシンＷ、カテプシンＺ、カテプシンＭ、カテプシンＱ、カルパイン１、カルパイン２、カルパイン３、カルパイン５、カルパイン６、カルパイン７、カルパイン８、カルパイン９、カルパイン１０、カルパイン１１、カルパイン１２、カルパイン１３、カルパイン１４、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、カスパーゼ１２、カスパーゼ１３、カスパーゼ１４、およびアスパラギンエンドペプチダーゼＡＥＰが挙げられる。例示的な細菌システインプロテアーゼとして、クロストリパイン（エンドプロテアーゼＡｒｇ－Ｃ）およびジンジパイン（gingapain）が挙げられる。例示的な真菌システインプロテアーゼとして、マクロサイピン（macrocypin）が挙げられる。例示的な植物システインプロテアーゼとして、パパインおよびブロメラインが挙げられる。例示的なウイルスシステインプロテアーゼとして、アデノウイルスプロテイナーゼが挙げられる。ある特定のシステインプロテアーゼの触媒活性は、酸化還元状態に依存する場合がある。ある特定の実施形態では、システインプロテアーゼは酸化状態にある（例えば、酸化剤の近傍に配置されることによる）。ある特定の実施形態では、システインプロテアーゼは還元状態にある（例えば、還元剤の近傍に配置されることによる）。酸化酵素は、特に、化学／酵素反応の時間枠が非常に短い（マイクロ秒から長くて数秒）場合と比較して、実施に用いられ得る処理時間が非常に長い（例えば数時間または数日）場合、ならびに基質と比較して大量の酵素を得ることができる場合（対基質化学論量に近似）、有効となるのに十分な残基活性を保持することができる。ある特定の実施形態では、酸化時間は、有意なレベルの還元酵素を保持するに足る程度に遅くなる場合がある。
【0075】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはグルタミン酸プロテアーゼである。例示的な細菌グルタミン酸プロテアーゼとして、ｐｅｐＧ１が挙げられる。例示的な真菌グルタミン酸プロテアーゼとして、Ｅｑｏｌｏｓｉｎ系統のプロテアーゼ（例えば、ＳｃｙｔａｌｉｄｏｇｌｕｔａｍｉｃペプチダーゼＢ）が挙げられる。
【0076】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはメタロプロテアーゼである。例示的な哺乳動物メタロプロテアーゼとして、アミノペプチダーゼＡ、アミノペプチダーゼＢ、アミノペプチダーゼＮ、アミノペプチダーゼＰＩＬＳ、アミノペプチダーゼＯ、アミノペプチダーゼＱ、アミノペプチダーゼＢ様１、ストロメリシン１、マトリリシン、メプリン、ＡＤＡＭ（１－３３）、およびネプリライシンが挙げられる。例示的な細菌メタロプロテアーゼとして、サーモリシン、ニュートラーゼ、およびエンドペプチダーゼＡｓｐ－Ｎが挙げられる。例示的な真菌メタロプロテアーゼとして、フンガリシン（fungalysin）およびＭｐｒ１が挙げられる。例示的な植物メタロプロテアーゼとして、メトジンシンが挙げられる。メタロプロテアーゼの触媒活性は、プロテアーゼ中の金属イオンの存在に依存しており、ｉｎ ｓｉｔｕ法では、金属イオンの浸出が活性損失をもたらす可能性がある。したがって、ある特定の実施形態では、メタロプロテアーゼは、解離定数（ＫＤ）１×１０－１１Ｍ、１×１０－１２Ｍ、または１×１０－１３Ｍ未満（すなわち、それより大きい親和性）で金属イオンを結合する。
【0077】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはメタロプロテアーゼではない。例えば、ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、サーモリシン、カルボキシペプチダーゼＡ１、アンジオテンシン変換酵素、アミノペプチダーゼＮ、マトリックスメタロプロテイナーゼ－１、サイトゾルカルボキシペプチダーゼ６、ユートリリシン（eutrilysin）、アミノペプチダーゼＰ、グルタミン酸カルボジペプチダーゼ（carbodypeptidase）ＩＩ、パパリシン－１、サイト２ペプチダーゼ、Ａｔｐ２３ペプチダーゼ、クロライドチャネルアクセサリータンパク質１、Ｔｉｋｉ１ペプチダーゼ、またはＳｐａｒｔａｎペプチダーゼではない。
【0078】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはシステインプロテアーゼではない。例えば、ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、パパイン、ブロメライン、クロストリパイン、カテプシンＢ、カテプシンＣ、カテプシンＦ、カテプシンＨ、カテプシンＫ、カテプシンＬ１、カテプシンＬ２、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カテプシンＷ、カテプシンＺ、カテプカルパイン（catepcalpain）２、ユビキチニルヒドロラーゼ－Ｌ１、ストレプトパイン、ユビキチニルヒドロラーゼ－Ｌ１、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１４、アミノホスホリボシルトランスフェラーゼ前駆体、オートファジン－１、Ｃｅｚａｎｎｅペプチダーゼ、オツバイン、ＣｙＩＤペプチダーゼ、カスパーゼ－１、ＯＴＬＤ１脱ユビキチン化酵素、アタキシン－３、酸性セラミダーゼ前駆体、ＵＳＰＬ１ペプチダーゼ、ＯＴＵＬＩＮペプチダーゼ、凝固因子ＸＩＩＩａ、またはＭＩＮＤＹ－１タンパク質ではない。
【0079】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、タンパク質分解活性について非共有結合補因子に依存する酵素ではない。例えば、ある特定の実施形態では、プロテアーゼはセリンプロテアーゼ因子ＶＩＩａではない。
【0080】
表１は、本明細書に開示される方法に使用することができる例示的なプロテアーゼを列挙したものである。
【0081】
【表1】
【0082】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号１～１３のうちいずれか１つと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号１～１３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼのアミノ酸配列は、配列番号１～１３からなる群より選択される配列からなる。
【0083】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはトリプシンである。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号１、配列番号２、または配列番号３に指定されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼのアミノ酸配列は、配列番号１、配列番号２、または配列番号３に指定される配列からなる。
【0084】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはエラスターゼである。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、または配列番号９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、または配列番号９に指定されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼのアミノ酸配列は、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、または配列番号９に指定される配列からなる。
【0085】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはカテプシンＤである。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号１０と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号１１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖とを含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号１０に指定されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド鎖と、配列番号１１に指定されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド鎖とを含む。ある特定の実施形態では、第１のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１０に指定される配列からなり、第２のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１１に指定される配列からなる。
【0086】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼはカリクレインである。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号１２または配列番号１３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号１２または配列番号１３に指定されるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼのアミノ酸配列は、配列番号１２または配列番号１３に指定される配列からなる。
【0087】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、１～９ｍｇ／ｍｌ、１～８ｍｇ／ｍｌ、１～７ｍｇ／ｍｌ、１～６ｍｇ／ｍｌ、１～５ｍｇ／ｍｌ、１～４ｍｇ／ｍｌ、１～３ｍｇ／ｍｌ、１～２ｍｇ／ｍｌ、２～１０ｍｇ／ｍｌ、３～１０ｍｇ／ｍｌ、４～１０ｍｇ／ｍｌ、５～１０ｍｇ／ｍｌ、６～１０ｍｇ／ｍｌ、７～１０ｍｇ／ｍｌ、８～１０ｍｇ／ｍｌ、９～１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、または約１０ｍｇ／ｍｌ）の濃度で固体支持体上に固定化される。
【0088】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）のＣＳＦ中濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で２０％以上（例えば、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９９％以上）減少させることができる。
【0089】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む、またはプリオンタンパク質）の濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で１０００ｎｇ／ｍＬ未満（例えば、１００ｎｇ／ｍＬ未満、１０ｎｇ／ｍＬ未満、２．５ｎｇ／ｍＬ未満、２ｎｇ／ｍＬ未満、１．５ｎｇ／ｍＬ未満、１ｎｇ／ｍＬ未満、０．５ｎｇ／ｍＬ未満、０．２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．１ｎｇ／ｍＬ未満、０．０５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０１ｎｇ／ｍＬ未満、０．００５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００１ｎｇ／ｍＬ未満）に低減することができる。
【0090】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、ＣＳＦ中に自然に存在するタンパク質の濃度に著しい影響を及ぼすことなく、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の分解を行うことができる。本発明のプロテアーゼによる、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質の選択的分解は、基質選択性（プロテアーゼが、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質を優先的に認識する）、切断部位特異性（プロテアーゼが、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質に遭遇した残基モチーフのペプチド結合を切断する特異性を有する）、基質親和性（結合動態に基づく）、および切断効率（切断反応率）の組み合わせにより達成される。
【0091】
ある特定の実施形態では、方法の実施に使用されるプロテアーゼは、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）のペプチド配列を、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的に認識できる活性部位を特徴とする。
【0092】
ある特定の実施形態では、本発明のプロテアーゼはさらに、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の少なくとも１つのペプチド結合を、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合の切断よりも高特異性で切断することができる。
【0093】
当技術分野において、異なるペプチド基質に対するプロテアーゼの特異性評価に利用可能な方法は多数あり、これには、Ｆｏｅｒｓｔｅｒ／蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、免疫捕捉、ＦＲＥＴと酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）に基づくアッセイとの組み合わせ、クロマトグラフィー、コンビナトリアル基質ライブラリー、蛍光基質の使用、および標識技術が含まれる。プロテアーゼの特異性評価に利用可能な技術に関する概説については、例えば、Poreba and Drag, Curr. Med. Chem. 2010, 17 (33), 3968-3995およびDiamond, Curr. Opin. Chem. Biol. 2007, 11 (1), 46-51を参照のこと。
【0094】
本発明の特定の実施形態では、プロテアーゼは、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）に対して高特異性かつ低親和性を有する。
【0095】
別の実施形態では、プロテアーゼは、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）に対して高特異性かつ高親和性を有する。
【0096】
基質に対するプロテアーゼの親和性は、当技術分野において周知の方法、例えば、表面プラズモン共鳴を使用したＫｏｎ速度およびＫ０ｆｆ速度の決定により測定することができる。
【0097】
本発明の特定の実施形態では、プロテアーゼは、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合と比較して、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の少なくとも１つのペプチド結合を高効率で切断する。
【0098】
プロテアーゼの効率（ｋｃａｔ／Ｋｍ）は、当技術分野において周知の酵素反応速度アッセイ、例えば、分光光度アッセイ、放射線測定アッセイ、蛍光測定アッセイ、熱量測定アッセイ、光散乱アッセイ、マイクロスケール熱泳動、およびクロマトグラフィーアッセイによって決定することができる。酵素（例えばプロテアーゼ）反応速度の決定に使用することができる酵素アッセイの概要については、例えば、Bisswanger, Practical Enzymology (2nd edition), Wiley-Blackwell, Weinheim, 2001を参照のこと。
【0099】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）での切断に関して、他のタンパク質（例えば、ＣＳＦに通常存在するタンパク質）よりも高選択性ではない。
【0100】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、エンドペプチダーゼ（例えば、エンドペプチダーゼＫ）、マトリックスメタロペプチダーゼ（ＭＭＰ）（例えば、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－９、ＭＭＰ－１０）、マトリックスグルタミルエンドペプチダーゼ（例えば、マトリックスグルタミルエンドペプチダーゼＩ）、トリプシン、トロンビン、プロテイナーゼＫ、エラスターゼ、第Ｘａ因子、カリクレイン（例えば、カリクレイン－６、カリクレイン－５）、クロストリパイン、カルパイン（例えば、カルパイン－１、カルパイン－２）、カテプシン（例えば、カテプシン－Ｂ、カテプシン－Ｄ、カテプシンＧ、カテプシンＬ、カテプシンＳ）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－１２）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ、グランザイムＭ）、メプリンアルファ、メプリンベータ、アスタシン、ＲＣ１３３９、ペプチジル－ＬＹＳメタロペプチダーゼ、ＬＡＳＴペプチダーゼ（例えば、リムルス型）、ＬＡＳＴ ＭＡＭペプチダーゼ（例えば、リムルス型）、キモトリプシン（例えば、ウシ型）、ＨＩＶ－１レトロペプシン、およびサーモリシンからなる群より選択される。一実施形態では（例えば、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質がα－シヌクレインである場合）、プロテアーゼは、エンドペプチダーゼ（例えば、エンドペプチダーゼＫ）、マトリックスメタロペプチダーゼ（ＭＭＰ）（例えば、ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－３、ＭＭＰ－９）、カルパイン（例えば、カルパイン－１、カルパイン－２）、トリプシン、カテプシン（例えば、カテプシン－Ｄ）から選択される。一実施形態では（例えば、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質がハンチンチンである場合）、プロテアーゼは、マトリックスメタロペプチダーゼ（ＭＭＰ）（例えば、ＭＭＰ－１０）、カルパイン（例えば、カルパイン－１、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６）から選択される。一実施形態では（例えば、タンパク質が毒性ＦＵＳである場合）、プロテアーゼは、カテプシン（例えば、カテプシンＢ、カテプシンＬ）、グランザイム（例えば、グランザイムＭ）、アスタシン、ＲＣ１３３９（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｃｏｎｏｒｉｉ）、ペプチジル－ＬＹＳメタロペプチダーゼ、トリプシン、およびメプリンベータからなる群より選択される。一実施形態では（例えば、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質がＴＤＰ－４３タンパク質である場合）、プロテアーゼは、カテプシン（例えば、カテプシンＬ、カテプシンＳ）、マトリックスメタロペプチダーゼ（ＭＭＰ）（例えば、ＭＭＰ－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－３、カスパーゼ－７、カスパーゼ１２）、グランザイム（例えば、グランザイムＭ）、およびトリプシンからなる群より選択される。一実施形態では（例えば、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質がＳＯＤタンパク質である場合）、プロテアーゼは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）（例えば、ＭＭＰ－２）、カテプシン（例えば、カテプシンＢ、カテプシンＧ、カテプシンＬ、カテプシンＳ）、ＬＡＳＴペプチダーゼ（例えば、リムルス型）、ＬＡＳＴ ＭＡＭペプチダーゼ（例えば、リムルス型）、グルタミルエンドペプチダーゼ（例えば、グルタミルエンドペプチダーゼＩ）、ペプチジル－Ｌｙｓメタロペプチダーゼ、ＨＩＶ－１レトロペプシン、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２）、トリプシン、キモトリプシン（例えば、ウシ型）、エラスターゼ、およびメプリンアルファからなる群より選択される。一実施形態では（例えば、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質がタウタンパク質である場合）、プロテアーゼは、カルパイン（例えば、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ）、トリプシン、およびメプリンアルファからなる群より選択される。
【0101】
本発明の特定の実施形態では、毒性タンパク質（毒性形態または前毒性形態）はタウであり、プロテアーゼは、トリプシン、トロンビン、プロテイナーゼＫ、エラスターゼ、第Ｘａ因子、カリクレイン（例えば、カリクレイン－６、カリクレイン－５）、クロストリパイン、カルパイン、カテプシン（例えば、カテプシン－Ｂ）、およびサーモリシンからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質（毒性形態または前毒性形態）はタウであり、プロテアーゼは、カルパイン（例えば、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ）、トリプシン、およびメプリンアルファからなる群より選択される。
【0102】
本発明の特定の実施形態では、毒性タンパク質（毒性形態または前毒性形態）はα－シヌクレインであり、プロテアーゼは、トリプシン、トロンビン、プロテイナーゼＫ、エラスターゼ、第Ｘａ因子、カリクレイン（例えば、カリクレイン－６、カリクレイン－５）、クロストリパイン、カルパイン、カテプシン（例えば、カテプシン－Ｂ）、およびサーモリシンからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質（毒性形態または前毒性形態）はα－シヌクレインであり、プロテアーゼは、カルパイン（例えば、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ）、トリプシン、およびメプリンアルファからなる群より選択される。
【0103】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、還元剤（例えば、ＤＴＴ）で活性化されたシステインプロテアーゼ（例えば、クロストリパイン、カテプシン、およびカルパイン）である。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、還元剤の非存在下でのシステインプロテアーゼ（例えば、クロストリパイン、カテプシン、およびカルパイン）である。
【0104】
本発明の特定の実施形態では、治療方法のプロテアーゼは、ＣＳＦに自然に存在するプロテアーゼである。さらなる実施形態では、プロテアーゼは、カリクレイン（例えば、カリクレイン－６（ニューロシン）またはカリクレイン－５）である。ある特定の実施形態では、カリクレイン－６は前駆形態であり、本開示の治療方法での使用前または使用中に、リシルエンドペプチダーゼによって活性化される。
【0105】
固体支持体
本発明のいくつかの実施形態は、固定化薬剤（例えば、固定化酵素、例えば、固定化プロテアーゼ）を使用して提供される。固定化薬剤を使用する利点は、当業者には容易に明らかであり、操作の容易さ、熱安定性と操作安定性の増加、反応条件（例えば、ｐＨおよび温度）に対する感度の低下、凝集に対する耐性、自己消化および他のプロテアーゼによる消化に対する耐性、ならびに反応混合物からの分離の容易さが含まれる。
本発明のいくつかの実施形態は、固定化薬剤（例えば、固定化酵素、例えば、固定化プロテアーゼ）を使用して提供される。固定化薬剤を使用する利点は、当業者には容易に明らかであり、操作の容易さ、熱安定性と操作安定性の増加、反応条件（例えば、ｐＨおよび温度）に対する感度の低下、凝集に対する耐性、自己消化および他のプロテアーゼによる消化に対する耐性、ならびに反応混合物からの分離の容易さが含まれる。
【0106】
生物学的薬剤（例えば酵素、例えばプロテアーゼ）を固定化するための種々の様式が当技術分野において公知であり、これには、限定されないが、タンパク質タグを使用するビーズおよび膜などの多孔質材料への親和性結合、多孔質ビーズ（例えば、ガラスまたはアルギン酸ビーズ）への吸着、膜への吸着、マトリックスへの吸着、および不溶性支持体（例えばシリカゲル、例えば樹脂）、多孔質支持体（例えば多孔質ビーズ）、または膜への共有結合が含まれる。ある特定の実施形態では、生物学的薬剤（例えば酵素、例えばプロテアーゼ）は、架橋樹脂上に（例えば、共有結合によって）固定化される。ある特定の実施形態では、生物学的薬剤（例えば酵素、例えばプロテアーゼ）は、多孔質ビーズ（例えば、多孔質樹脂ビーズ）上に（例えば、共有結合によって）固定化される。さらなる実施形態では、生物学的薬剤（例えば酵素、例えばプロテアーゼ）は、架橋アガロース樹脂（例えば、４％または６％の架橋アガロース樹脂）上に（例えば、共有結合によって）固定化される。例えば、生物学的薬剤（例えば酵素、例えばプロテアーゼ）は、多孔質架橋アガロース樹脂ビーズ上に固定化することができる。ある特定の実施形態では、アガロース樹脂は、第一級アミンに共有結合できるＮＨＳ活性化アガロースである。別の実施形態では、アガロース樹脂は、第一級アミンを介した共有結合のためのアルデヒド活性化アガロースビーズ（例えば、ＡｍｉｎｏＬｉｎｋ（商標）Ｐｌｕｓ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｒｅｓｉｎ）を含む。別の実施形態では、アガロース樹脂は、Ｎ－求核試薬；ｐＨ９－１１ Ｏ／Ｎ反応を含有する、タンパク質を固定化できるＣＤＩ活性化アガロース樹脂（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）樹脂）である。別の実施形態では、アガロース樹脂は、スルフヒドリル基と反応して不可逆的なチオエーテル結合を形成できる樹脂である（例えば、ＳｕｌｆｏＬｉｎｋ（商標）Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｒｅｓｉｎ）。ある特定の実施形態では、生物学的薬剤（例えば酵素（例えばプロテアーゼ））は、反応性エポキシド官能基によりアミンまたは活性化アミンと反応して酵素（例えばプロテアーゼ）を共有結合させるビーズ上に固定化される。ビーズは、特にエポキシドまたはスクシンイミドなどの反応性要素により官能化でき、遊離アミン基を含有する酵素と反応して、活性安定な共有結合された固定化酵素生成物を形成することができる。
【0107】
ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、１～９ｍｇ／ｍｌ、１～８ｍｇ／ｍｌ、１～７ｍｇ／ｍｌ、１～６ｍｇ／ｍｌ、１～５ｍｇ／ｍｌ、１～４ｍｇ／ｍｌ、１～３ｍｇ／ｍｌ、１～２ｍｇ／ｍｌ、２～１０ｍｇ／ｍｌ、３～１０ｍｇ／ｍｌ、４～１０ｍｇ／ｍｌ、５～１０ｍｇ／ｍｌ、６～１０ｍｇ／ｍｌ、７～１０ｍｇ／ｍｌ、８～１０ｍｇ／ｍｌ、９～１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、または約１０ｍｇ／ｍｌ）の濃度で固体支持体（例えばビーズ）上に固定化することができる。例えば、ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、約１ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、または約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で固体支持体上に固定化することができる。ある特定の実施形態では、生物学的薬剤（例えば酵素（例えばプロテアーゼ））は、反応性エポキシド官能基によりアミンまたは活性化アミンと反応して酵素（例えばプロテアーゼ）を共有結合させるビーズ上に、（約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌ（例えば、１～９ｍｇ／ｍｌ、１～８ｍｇ／ｍｌ、１～７ｍｇ／ｍｌ、１～６ｍｇ／ｍｌ、１～５ｍｇ／ｍｌ、１～４ｍｇ／ｍｌ、１～３ｍｇ／ｍｌ、１～２ｍｇ／ｍｌ、２～１０ｍｇ／ｍｌ、３～１０ｍｇ／ｍｌ、４～１０ｍｇ／ｍｌ、５～１０ｍｇ／ｍｌ、６～１０ｍｇ／ｍｌ、７～１０ｍｇ／ｍｌ、８～１０ｍｇ／ｍｌ、９～１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約６ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、または約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で）固定化される。
【0108】
ある特定の実施形態では、生物学的薬剤（例えば酵素、例えばプロテアーゼ）は、沈殿により非晶質沈殿物または結晶性沈殿物のいずれかとして固定化することができる。さらに、この沈殿物が架橋されて、例えば、架橋酵素（例えばプロテアーゼ）結晶または架橋非晶質沈殿物を形成することができる。
【0109】
ある特定の実施形態では、沈殿物（例えば非晶質沈殿物、例えば結晶性沈殿物）および架橋沈殿物（例えば架橋非晶質沈殿物、例えば架橋結晶性沈殿物）は、細孔径が制御された多孔質マトリックスを形成することができ、この細孔がサイズ排除フィルターとして機能することで、ＣＮＳに自然に存在する他のタンパク質よりも、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）に対する薬剤（例えば、プロテアーゼ）の選択性をさらに増強させることができる。
【0110】
ある特定の実施形態では、基質に浸透するように設計された多孔質コーティング内に凍結乾燥剤（例えば、凍結乾燥酵素、例えば、凍結乾燥プロテアーゼ）を封入し、薬剤含有「ビーズ」を生成する。ある特定の実施形態では、多孔質コーティングの細孔径は、ＣＮＳに自然に存在する他のタンパク質よりも、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体））に対する薬剤（例えばプロテアーゼ）の選択性をさらに増強させるサイズ排除フィルターとして機能するように設計される。
【0111】
患者の診断とモニタリング
本発明は、治療に対して感受性のある対象の神経障害を診断するための方法であって、当該治療が毒性形態または前毒性形態である毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤（例えば酵素、例えば抗体）と対象のＣＳＦとを接触させることを含み、上記方法が
ａ）．対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在、量、および／または形態に関する情報を測定、判定、または受信することと、
ｂ）．対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質（例えば、健常対象と比較して多量または高濃度で存在する）の存在、量、および／または形態の情報を測定、判定、または受信して、対象が治療に対して感受性があるかを診断することとを含む方法を提供する。
本発明は、治療に対して感受性のある対象の神経障害を診断するための方法であって、当該治療が毒性形態または前毒性形態である毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤（例えば酵素、例えば抗体）と対象のＣＳＦとを接触させることを含み、上記方法が
ａ）．対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在、量、および／または形態に関する情報を測定、判定、または受信することと、
ｂ）．対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質（例えば、健常対象と比較して多量または高濃度で存在する）の存在、量、および／または形態の情報を測定、判定、または受信して、対象が治療に対して感受性があるかを診断することとを含む方法を提供する。
【0112】
対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在および／または量は、当技術分野における公知の方法（例えば、抗体に基づく検出方法（例えば、イムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、ＬＣ／ＭＳ法と連動した免疫親和性、ターゲット質量分析法（例えば、プロテオティピックペプチド（例えば、タウプロテオティピックペプチド）の質量分析検出）によって評価することができる。対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質の形態（例えば、アイソフォーム、翻訳後修飾、可溶性タンパク質、不溶性タンパク質、タンパク質単量体、タンパク質凝集体、タンパク質のタングル、タンパク質オリゴマー、タンパク質原繊維、過剰リン酸化タンパク質、またはミスフォールドタンパク質のアミノ酸配列）はまた、当技術分野における公知の方法（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、ウエスタンブロッティング（過剰リン酸化などの特定の翻訳後修飾を検出する）、およびイムノアッセイ）によって評価することができる。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質は、毒性形態（例えば、タンパク質凝集体、タンパク質のタングル、タンパク質オリゴマー、タンパク質原繊維、過剰リン酸化タンパク質、またはミスフォールドタンパク質）で検出される。ある特定の実施形態では、毒性タンパク質は前毒性形態で検出される。
【0113】
本発明はまた、対象における神経障害の治療の有効性を予測するための方法であって、当該治療が、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）を除去または分解できる薬剤（例えば酵素、例えば抗体）と対象のＣＳＦとを接触させることを含み、上記方法が、
対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在、量、および／または形態に関する情報を測定、判定、または受信することを含み、対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在、量、および／または形態の情報の上記測定、判定、または受信により、治療の有効性が予測される方法を提供する。
対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在、量、および／または形態に関する情報を測定、判定、または受信することを含み、対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在、量、および／または形態の情報の上記測定、判定、または受信により、治療の有効性が予測される方法を提供する。
【0114】
本発明はさらに、対象における神経障害を診断および治療するための方法であって、
ａ）対象のＣＳＦ中の毒性形態または前毒性形態である毒性タンパク質の存在に関する情報を測定、判定、または受信し、
対象がＣＳＦ中に特定量または特定形態の毒性タンパク質を有すると判定された場合に、対象を工程ｂの治療に対して感受性があると診断することと、
ｂ）毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質を除去または分解できるプロテアーゼと対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）とを接触させることにより、工程ａ）において感受性であると診断された対象を治療することとを含む、上記方法を提供する。
ａ）対象のＣＳＦ中の毒性形態または前毒性形態である毒性タンパク質の存在に関する情報を測定、判定、または受信し、
対象がＣＳＦ中に特定量または特定形態の毒性タンパク質を有すると判定された場合に、対象を工程ｂの治療に対して感受性があると診断することと、
ｂ）毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質を除去または分解できるプロテアーゼと対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）とを接触させることにより、工程ａ）において感受性であると診断された対象を治療することとを含む、上記方法を提供する。
【0115】
ある特定の実施形態では、毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在、量、および／または形態は、対象からの生体試料（例えば、ＣＳＦ試料）を分析することにより測定される。さらなる実施形態では、生体試料中のタンパク質の存在および／または量は、抗体に基づく検出方法（例えば、イムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、ＬＣ／ＭＳ法と連動した免疫親和性、ターゲット質量分析法（例えば、プロテオティピックペプチド（例えば、タウプロテオティピックペプチド）の質量分析検出）などの方法によって測定される。対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質の形態（例えば、アイソフォーム、翻訳後修飾、可溶性タンパク質、不溶性タンパク質、タンパク質単量体、タンパク質凝集体、タンパク質のタングル、タンパク質オリゴマー、タンパク質原繊維、過剰リン酸化タンパク質、またはミスフォールドタンパク質のアミノ酸配列）はまた、当技術分野における公知の方法（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、ウエスタンブロッティング（過剰リン酸化などの特定の翻訳後修飾を検出する）、およびイムノアッセイ）によって評価することができる。
【0116】
患者試料
「患者試料」、「対象試料」、「生体試料」、および「試料」という用語は、本明細書で同義に使用される。対象試料は、組織、または体液、または身体生成物であり得る。組織試料には、固定試料、パラフィン包埋試料、新鮮試料、または凍結試料を含み得る。例えば、組織試料には、生検または口腔粘膜採取を含み得る。例示的な組織として、神経組織、脳、皮膚および毛包が挙げられる。例示的な試料として、血液試料および脳脊髄液試料が挙げられる。
「患者試料」、「対象試料」、「生体試料」、および「試料」という用語は、本明細書で同義に使用される。対象試料は、組織、または体液、または身体生成物であり得る。組織試料には、固定試料、パラフィン包埋試料、新鮮試料、または凍結試料を含み得る。例えば、組織試料には、生検または口腔粘膜採取を含み得る。例示的な組織として、神経組織、脳、皮膚および毛包が挙げられる。例示的な試料として、血液試料および脳脊髄液試料が挙げられる。
【0117】
例示的な体液として、血液、血漿、尿、リンパ液、涙液、汗、唾液、精液、および脳脊髄液が挙げられる。例示的な身体生成物として、呼気が挙げられる。
【0118】
組織、液、または生成物を患者から採取して分析することができる。評価には、組織、液、もしくは生成物の分析を実施すること；組織液もしくは生成物の分析を要求すること；組織、液、もしくは生成物の分析から得た結果を要求すること；または組織、液、もしくは生成物の分析から得た結果を受信することのうち１つ以上を含み得る。
【0119】
毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在、量、および／または形態について試料、組織、液、または生成物を分析することができる。
【0120】
試料の評価方法
試料の遺伝的突然変異に関する評価
神経障害に関連する遺伝子に突然変異が存在するかどうかは、転写分子、遺伝子、タンパク質、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはｃＤＮＡの発現を検出する多種多様な周知の方法のいずれかを使用して評価することができる。そのような方法の非限定的な例として、核酸ハイブリダイゼーションに基づく方法、増幅による方法、マイクロアレイ分析、フローサイトメトリー分析、ＤＮＡシーケンシング、次世代シーケンシング、ｒｅｐｅａｔ－ｐｒｉｍｅｄ ＰＣＲ、蛍光断片長アッセイ、キャピラリーシーケンシング、プライマー伸長、ＰＣＲ、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ドットブロット法、およびサザンブロット法が挙げられる。
試料の遺伝的突然変異に関する評価
神経障害に関連する遺伝子に突然変異が存在するかどうかは、転写分子、遺伝子、タンパク質、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはｃＤＮＡの発現を検出する多種多様な周知の方法のいずれかを使用して評価することができる。そのような方法の非限定的な例として、核酸ハイブリダイゼーションに基づく方法、増幅による方法、マイクロアレイ分析、フローサイトメトリー分析、ＤＮＡシーケンシング、次世代シーケンシング、ｒｅｐｅａｔ－ｐｒｉｍｅｄ ＰＣＲ、蛍光断片長アッセイ、キャピラリーシーケンシング、プライマー伸長、ＰＣＲ、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ドットブロット法、およびサザンブロット法が挙げられる。
【0121】
毒性タンパク質の存在についての試料の評価
本明細書に記載の方法は、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在についての患者試料の評価に関連し得る。神経障害（例えば、ＡＬＳ、ＦＴＬＤ、ＦＴＤ）に関連する毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質の存在および量は、タンパク質および／またはタンパク質断片を検出および定量するための当技術分野において利用可能な種々の方法のいずれかを使用して評価することができ、これには、抗体に基づく検出方法（例えば、イムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、ＬＣ／ＭＳ法と連動した免疫親和性、ターゲット質量分析法（例えば、プロテオティピックペプチド（例えば、タウプロテオティピックペプチド）の質量分析検出）が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書に記載の方法は、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在についての患者試料の評価に関連し得る。神経障害（例えば、ＡＬＳ、ＦＴＬＤ、ＦＴＤ）に関連する毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質の存在および量は、タンパク質および／またはタンパク質断片を検出および定量するための当技術分野において利用可能な種々の方法のいずれかを使用して評価することができ、これには、抗体に基づく検出方法（例えば、イムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、ＬＣ／ＭＳ法と連動した免疫親和性、ターゲット質量分析法（例えば、プロテオティピックペプチド（例えば、タウプロテオティピックペプチド）の質量分析検出）が含まれるが、これらに限定されない。
【0122】
ある特定の実施形態では、分析対象の試料は脳脊髄液（ＣＳＦ）である。
【0123】
ある特定の実施形態では、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質は、イムノアッセイを使用して検出することができる。本明細書で使用される場合、イムノアッセイは、タンパク質またはポリペプチドに特異的に結合する抗体を利用するアッセイを含む。ポリペプチドは、適切な承認を得たいくつかの免疫学的結合アッセイのうち、いずれを使用しても検出および／または定量することができる（例えば、米国特許第４，３６６，２４１号明細書；同第４，３７６，１１０号明細書；同第４，５１７，２８８号明細書；および同第４，８３７，１６８号明細書を参照）。一般的なイムノアッセイの概説については、Asai (1993) Methods in Cell Biology Volume 37: Antibodies in Cell Biology, Academic Press, Inc. New York; Stites & Terr (1991) Basic and Clinical Immunology 7th Editionも参照のこと。タンパク質またはポリペプチドの検出および／または定量のためのイムノアッセイは、当業者に周知の多種多様な形式をとることができる。
【0124】
タンパク質またはポリペプチドに結合できる抗体、例えば、検出可能な標識（直接標識または間接標識のいずれか）を有する抗体を使用して、毒性形態または前毒性形態である毒性タンパク質を検出することができる。
【0125】
ある特定の実施形態では、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）を、全長タンパク質またはタンパク質消化産物（例えば、プロテオティピックペプチド（例えば、タウプロテオティピックペプチド））のいずれかとして、液体クロマトグラフィーと連動した質量分析によって検出および定量することができる。
【0126】
キット
本明細書に開示されるのは、毒性形態または前毒性形態である毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在を特徴とする神経障害を有すると診断された対象のＣＳＦを処理する手段を含むキットである。例えば、キットは、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質を対象のＣＳＦから分解または除去することができる、適切に製剤化されたプロテアーゼを含み得る。キットはまた、薬剤と接触させる目的で対象からＣＳＦを取り出す手段、治療の完了後に薬剤をＣＳＦから分離する手段、および処理したＣＳＦを対象に再導入する手段を含み得る。キットには、提供された薬剤でＣＳＦの処理を実施するための説明書も含まれる場合がある。
本明細書に開示されるのは、毒性形態または前毒性形態である毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在を特徴とする神経障害を有すると診断された対象のＣＳＦを処理する手段を含むキットである。例えば、キットは、毒性形態または前毒性形態の毒性タンパク質を対象のＣＳＦから分解または除去することができる、適切に製剤化されたプロテアーゼを含み得る。キットはまた、薬剤と接触させる目的で対象からＣＳＦを取り出す手段、治療の完了後に薬剤をＣＳＦから分離する手段、および処理したＣＳＦを対象に再導入する手段を含み得る。キットには、提供された薬剤でＣＳＦの処理を実施するための説明書も含まれる場合がある。
【0127】
本明細書にはまた、対象のＣＳＦ中の毒性形態または前毒性形態である毒性タンパク質（例えば、タウ（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、ＦＵＳ／ＴＬＳ、ＳＯＤ１、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、グルタミン酸リピートを含む）、またはプリオンタンパク質）の存在をアッセイする手段を含むキットも記載される。例えば、キットは、１つ以上の毒性タンパク質（毒性形態または前毒性形態）と特異的に相互作用できる１種の薬剤または複数種の薬剤（例えば、検出可能な標識を有する１種のモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体、または複数種のモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体）と、標識抗体－タンパク質複合体の存在を検出する手段とを含み得る。
【0128】
実施例
実施例１－プロテアーゼ活性の滴定
本実施例では、反応基質としてカゼインを使用した、エラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンでのプロテアーゼ活性の滴定を示す。
実施例１－プロテアーゼ活性の滴定
本実施例では、反応基質としてカゼインを使用した、エラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンでのプロテアーゼ活性の滴定を示す。
【0129】
Ｂｏｄｉｐｙ（登録商標）標識カゼインの１．０ｍｇ／ｍｌストック溶液をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で調製した後、消化緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．８、０．１ｍＭ ＮａＮ３）で１０μｇ／ｍｌに希釈した。エラスターゼ、カテプシンＧ、またはトリプシンを消化緩衝液で種々の濃度に希釈し、希釈プロテアーゼ１００μｌを９６ウェルマイクロプレートの各ウェルに加えた。１０μｇ／ｍｌのＢｏｄｉｐｙ（登録商標）標識カゼイン１００μｌを、各サンプルウェルに加え、光から保護して１時間インキュベートした。インキュベーション後、マイクロプレートを、蛍光マイクロプレートリーダーを使用して読み取った。
【0130】
図１に示すように、エラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンの酵素調製物は、各プロテアーゼが約６μｇ／ｍｌまで、線形反応速度を有するカゼイン消化活性を示した。
【0131】
実施例２－アガロース樹脂カラムに固定化したプロテアーゼの消化活性
本実施例では、反応基質としてカゼインを使用した、ＮＨＳ活性化アガロース樹脂に固定化したエラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンでのプロテアーゼ活性を示す。
本実施例では、反応基質としてカゼインを使用した、ＮＨＳ活性化アガロース樹脂に固定化したエラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンでのプロテアーゼ活性を示す。
【0132】
ＮＨＳ活性化アガロース樹脂カラムは、製造業者の説明書に従って調製した。予め洗浄したアガロース樹脂１００μｌと、対照緩衝液２００μｌ、またはエラスターゼ、カテプシンＧ、トリプシン、カリクレイン－５（ＫＬＫ５）、もしくはリシルエンドペプチダーゼで活性化したカリクレイン－６（ＫＬＫ６）２ｍｇ／ｍｌをカラムに入れた。カラムを遠心し、フロースルーを回収して、プロテアーゼ固定化の効率を測定した。ブラッドフォードアッセイで測定したところ、フロースルーにタンパク質は検出されなかった（データは示さず）。フロースルーに検出されたプロテアーゼ活性は低く（実施例１に記載のプロテアーゼ活性アッセイによって測定）、結合効率９９．９％超を示した。ＰＢＳ中１Ｍエタノールアミンを添加して残余の空いたＮＧＳ部位をブロックした。
【0133】
アガロース樹脂に固定化したプロテアーゼの活性を測定するため、１０μｇ／ｍｌのＢｏｄｉｐｙ（登録商標）標識カゼイン１００μｌを各カラムに加え、反転させて室温で５分間、６０分間、または１２０分間インキュベートした。インキュベーションに続き、カラムを遠心分離し、試料を取り出して蛍光測定を行った。図２Ａに示すように、固定化したエラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンは、５分間および６０分間のインキュベーション時間でカゼイン消化活性を示した。図２Ｂに示すように、エラスターゼおよびトリプシンは、６０分間および１２０分間のインキュベーション時間でカゼイン消化活性を示した。図２Ｃに示すように、ＫＬＫ５およびＫＬＫ６も、１２０分間のインキュベーション時間でカゼイン消化活性を示した。
【0134】
蛍光ペプチド基質Ｂｏｃ－ＶＰＲ－ＡＭＣ（ＥＳ０１１）およびＢｏｃ－ＱＡＲ－ＡＭＣ（ＥＳ０１４）を使用して、ＫＬＫ５およびＫＬＫ６の活性をさらに確認した。これらのペプチド基質は、それぞれＫＬＫ５およびＫＬＫ６に対する切断部位を含んでいる。プロテアーゼをそれぞれの基質とともにＨＢＳＳ緩衝液中で３０分間、６０分間、または１２０分間インキュベーションした後、カラムを遠心分離し、試料を取り出して蛍光測定を行った。図２Ｄに示すように、ＫＬＫ５およびＫＬＫ６は、試験したすべての時点でプロテアーゼ活性を示した。
【0135】
実施例３－アガロース樹脂カラムに固定化したプロテアーゼによるタウ、α－シヌクレイン、およびＴＤＰ－４３の消化
本実施例では、反応基質としてタウおよびα－シヌクレインを使用した、樹脂に固定化したエラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンのプロテアーゼ活性を示す。試験したタウタンパク質の形態は、Ｐ３０１Ｌ置換のある２Ｎ４Ｒアイソフォーム（「タウ－４４１（Ｐ３０１Ｌ）」）、２Ｎ３Ｒアイソフォーム（「タウ－４１０」）、およびＧＳＫ３βでリン酸化された２Ｎ４Ｒアイソフォーム（「ｐ－タウ－４４１」）であった。
本実施例では、反応基質としてタウおよびα－シヌクレインを使用した、樹脂に固定化したエラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンのプロテアーゼ活性を示す。試験したタウタンパク質の形態は、Ｐ３０１Ｌ置換のある２Ｎ４Ｒアイソフォーム（「タウ－４４１（Ｐ３０１Ｌ）」）、２Ｎ３Ｒアイソフォーム（「タウ－４１０」）、およびＧＳＫ３βでリン酸化された２Ｎ４Ｒアイソフォーム（「ｐ－タウ－４４１」）であった。
【0136】
タウ－４４１（Ｐ３０１Ｌ）に対するプロテアーゼ活性を評価するため、５０μｇ／ｍｌタウ（Ｐ３０１Ｌ）溶液１００μｌを空のカラムまたはエラスターゼ、カテプシンＧ、もしくはトリプシンを固定化したカラム（実施例２に記載のように調製）に加えた。回転台上にて室温で、または温度制御ミキサー内にて３７℃でカラムをインキュベートした。インキュベーション時間２分、１０分、および２０分で、カラムを１０秒間遠心分離し、試料２０μｌを移してＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を行った。１６μｌ／０．８μｇのタンパク質を１０％ポリアクリルアミドゲルにロードし、電気泳動後、銀染色によってタンパク質のバンドを可視化した。
【0137】
タウ－４１０、ｐ－タウ－４４１、およびα－シヌクレインに対するプロテアーゼ活性を評価するため、１０μＭ基質溶液０．５ｍＬを空のカラムまたはエラスターゼもしくはトリプシンを固定化したカラム（実施例２に記載のように調製）に加えた。示されたインキュベーション時間、室温でカラムを往復回転させた後、試料溶液１０μｌを回収し、プロテアーゼの不活化により反応を停止させた。１０％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲルでの電気泳動によって試料を分析し、銀染色によってタンパク質のバンドを可視化した。ＣｈｅｍｉＤｏｃ定量化ツールを使用してバンド強度を定量した。タウ－４１０およびα－シヌクレインについては、主たる優位なバンドの強度を定量した。ｐ－タウ－４４１については、明確なリン酸化タウパターンに対応する２つの優位なバンド（上位バンド）をまとめて定量した。空のカラムで同期間インキュベートした基質タンパク質の量で結果を正規化し、これを表２に記載し、図３Ｄ、図３Ｅ、および図３Ｆに示した。
【0138】
【表2】
【0139】
カリクレイン－５（ＫＬＫ５）およびカリクレイン－６（ＫＬＫ６）のプロテアーゼ活性を類似する方法で評価した。試験した基質溶液は、ＰＢＳ中１０μＭタウ－４４１（Ｐ３０１Ｌ）、ＰＢＳ中１０μＭ ｐ－タウ－４４１、ＰＢＳ中１０μＭ α－シヌクレイン、ならびに５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ８．０、５００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＤＴＴ、２０％（ｖ／ｖ）グリセロール、および０．４Ｍ尿素中９μＭ ＴＤＰ－４３であった。基質溶液を空のカラムまたはＫＬＫ５もしくはＫＬＫ６を固定化したカラム（実施例２に記載のように調製）に加えた。１０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲルでの電気泳動によって基質タンパク質を分析し、銀染色によってタンパク質のバンドを可視化した。ＣｈｅｍｉＤｏｃ定量化ツールを使用してバンド強度を定量した。タウ－４１０、タウ－４４１（Ｐ３０１Ｌ）、ＴＤＰ、およびα－シヌクレインについては、主たる優位なバンドの強度を定量した。ｐ－タウ－４４１については、明確なリン酸化タウパターンに対応する２つの優位なバンド（上位バンドＢ１およびＢ２）を個別に定量した。空のカラムで同期間インキュベートした基質タンパク質の量に対する、プロテアーゼによって消化された基質タンパク質の比率を表３および表４に記載する。
【0140】
【表3】
【0141】
【表4】
【0142】
図３Ａに示すように、タウ－４４１（Ｐ３０１Ｌ）は、エラスターゼ、カテプシンＧ、およびトリプシンによって室温で急速に分解された。図３Ｂ、図３Ｃ、図３Ｅ、および図３Ｆ、ならびに表２に示すように、タウ－４１０およびｐ－タウ－４４１はエラスターゼおよびトリプシンによって急速に分解された。同様に、図３Ｄおよび図３Ｇ、ならびに表２に示すように、α－シヌクレインはエラスターゼおよびトリプシンによって急速に分解された。さらに、表３に示すように、タウ－４４１（Ｐ３０１Ｌ）、ｐ－タウ－４４１、およびＴＤＰ－４３はＫＬＫ５によって分解された。表４に示すように、タウ－４１０、タウ－４４１（Ｐ３０１Ｌ）、ｐ－タウ－４４１、ＴＤＰ－４３、およびα－シヌクレインはＫＬＫ６によって分解された。
【0143】
実施例４－プロテアーゼでの処理によるタウの毒性の低下
本実施例では、インビトロ神経細胞に対するプロテアーゼ処理タウの毒性を測定するための方法を記載する。
本実施例では、インビトロ神経細胞に対するプロテアーゼ処理タウの毒性を測定するための方法を記載する。
【0144】
アガロース樹脂のみ、またはエラスターゼ、カテプシンＧ、もしくはトリプシンと結合した樹脂（実施例３の段落［０１６２］に記載のように調製）で処理したタウ（Ｐ３０１Ｌ）の試料を、ｉＣｅｌｌ（登録商標）運動ニューロン（FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc., Madison, WI）に加えてもよい。所定のインキュベーション時間後、任意の標準的な細胞生存率アッセイ（例えば、ヨウ化プロピジウム染色細胞のフローサイトメトリー分析）によって運動ニューロンの生存率を評価することができる。
【0145】
番号付き実施形態
本明細書に開示される実施形態は、本開示の番号付き実施形態に示すように、実施形態Ｐ１からＰ１０７まで、およびＱ１からＱ１０８までを含む。
本明細書に開示される実施形態は、本開示の番号付き実施形態に示すように、実施形態Ｐ１からＰ１０７まで、およびＱ１からＱ１０８までを含む。
【0146】
実施形態Ｐ１：対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）を、毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤と接触させることを含む、毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害を患う対象の治療方法。
【0147】
実施形態Ｐ２：前記神経障害がタウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の存在を特徴とする、実施形態Ｐ１の方法。
【0148】
実施形態Ｐ３：前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、すなわち大脳皮質基底核神経節変性症（ＣＢＧＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、および亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）から選択されるタウオパチーである、実施形態Ｐ２の方法。
【0149】
実施形態Ｐ４：前記神経障害が進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）である、実施形態Ｐ２の方法。
【0150】
実施形態Ｐ５：前記神経障害が前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（例えば、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））である、実施形態Ｐ２の方法。
【0151】
実施形態Ｐ６：前記神経障害がアルツハイマー病である、実施形態Ｐ２の方法。
【0152】
実施形態Ｐ７：前記薬剤が酵素である、実施形態Ｐ１からＰ６までのいずれか１つの方法。
【0153】
実施形態Ｐ８：前記酵素がプロテアーゼである、実施形態Ｐ７の方法。
【0154】
実施形態Ｐ９：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）のＣＳＦ中濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で２０％以上（例えば、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９９％以上）減少させることができる、実施形態Ｐ８の方法。
【0155】
実施形態Ｐ１０：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で１０００ｎｇ／ｍＬ未満（例えば、１００ｎｇ／ｍＬ未満、１０ｎｇ／ｍＬ未満、２．５ｎｇ／ｍＬ未満、２ｎｇ／ｍＬ未満、１．５ｎｇ／ｍＬ未満、１ｎｇ／ｍＬ未満、０．５ｎｇ／ｍＬ未満、０．２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．１ｎｇ／ｍＬ未満、０．０５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０１ｎｇ／ｍＬ未満、０．００５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００１ｎｇ／ｍＬ未満）に低減することができる、実施形態Ｐ８またはＰ９の方法。
【0156】
実施形態Ｐ１１：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）のペプチド配列を、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的に認識できる活性部位を特徴とし、さらに前記毒性タンパク質の少なくとも１つのペプチド結合を、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合の切断よりも特異的に切断できる、実施形態Ｐ８からＰ１０までのいずれか１つの方法。
【0157】
実施形態Ｐ１２：前記プロテアーゼが、ＣＳＦ中に自然に存在するタンパク質の濃度に著しい影響を及ぼすことなく、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の分解を行うことができる、実施形態Ｐ８からＰ１１までのいずれか１つの方法。
【0158】
実施形態Ｐ１３：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）に対して高特異性かつ低親和性を有する、実施形態Ｐ８からＰ１２までのいずれか１つの方法。
【0159】
実施形態Ｐ１４：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）に対して高特異性かつ高親和性を有する、実施形態Ｐ８からＰ１２までのいずれか１つの方法。
【0160】
実施形態Ｐ１５：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の少なくとも１つのペプチド結合を高効率で切断する、実施形態Ｐ８からＰ１４までのいずれか１つの方法。
【0161】
実施形態Ｐ１６：前記プロテアーゼが、カルパイン（例えば、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ）、トリプシン、およびメプリンアルファからなる群より選択される、実施形態Ｐ８からＰ１５までのいずれか１つの方法。
【0162】
実施形態Ｐ１７：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに自然に存在するプロテアーゼである、実施形態Ｐ８からＰ１６までのいずれか１つの方法。
【0163】
実施形態Ｐ１８：ＣＳＦを薬剤と接触させる前に対象から取り出す工程と、前記ＣＳＦを薬剤と接触させた後、それを対象に再導入する工程とを含むか、あるいは、対象の身体に埋め込まれたデバイス内の固体表面または固体支持体に固定化された薬剤に対象のＣＳＦを接触させることを含み、任意選択的に、薬剤または固体表面もしくは固体支持体に固定化された薬剤が抽出されて、長期間にわたる対象の治療期間（場合により、長期間とは２～１２か月の断続的な期間である）、埋込型デバイスに再導入される、実施形態Ｐ１からＰ１７までのいずれか１つの方法。
【0164】
実施形態Ｐ１９：前記薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は固体基材に固定化されたプロテアーゼである）、実施形態Ｐ１からＰ１８までのいずれか１つの方法。
【0165】
実施形態Ｐ２０：多孔質ビーズまたは膜に架橋することによって薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は多孔質ビーズまたは膜に架橋されたプロテアーゼである）、実施形態Ｐ１９の方法。
【0166】
実施形態Ｐ２１：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が固体支持体に固定化されている、実施形態Ｐ２０の方法。
【0167】
実施形態Ｐ２２：前記固体支持体が多孔質固体支持体である、実施形態Ｐ２１の方法。
【0168】
実施形態Ｐ２３：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が共有結合によって前記支持体と結合している、実施形態Ｐ２１またはＰ２２の方法。
【0169】
実施形態Ｐ２４：前記支持体が架橋樹脂である、実施形態Ｐ２１からＰ２３までのいずれか１つの方法。
【0170】
実施形態Ｐ２５：前記架橋樹脂がアガロース樹脂である、実施形態Ｐ２４の方法。
【0171】
実施形態Ｐ２６：前記薬剤が沈殿によって（例えば、非晶質沈殿物または結晶性沈殿物として）固定化されている、実施形態Ｐ２０の方法。
【0172】
実施形態Ｐ２７：沈殿した薬剤が架橋される（例えば、架橋非晶質沈殿物または架橋結晶性沈殿物、例えば、架橋プロテアーゼ結晶、例えば、架橋非晶質プロテアーゼ沈殿物を形成する）、実施形態Ｐ２６の方法。
【0173】
実施形態Ｐ２８：前記薬剤を凍結乾燥して乾燥粉末を形成し、前記粉末を多孔質コーティング内に配置してビーズを形成する、実施形態Ｐ２７の方法。
【0174】
実施形態Ｐ２９：ＣＳＦを対象に再導入する前にＣＳＦを濾過する工程をさらに含む、実施形態Ｐ１８からＰ２８のいずれか１つの方法。
【0175】
実施形態Ｐ３０：前記薬剤を対象のＣＳＦに直接導入する、実施形態Ｐ１からＰ１７までのいずれか１つの方法。
【0176】
実施形態Ｐ３１：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の分解に関して、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的でない、実施形態Ｐ８からＰ１０までおよびＰ１５からＰ３０までのいずれか１つの方法。
【0177】
実施形態Ｐ３２：（ａ）毒性タンパク質の生成を特徴とする神経障害を患う対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）と；（ｂ）前記毒性タンパク質を分解または除去できる薬剤とを含む、組成物。
【0178】
実施形態Ｐ３３：前記神経障害が毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の存在を特徴とする、実施形態Ｐ３２の組成物。
【0179】
実施形態Ｐ３４：前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、すなわち大脳皮質基底核神経節変性症（ＣＢＧＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、および亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）から選択されるタウオパチーである、実施形態Ｐ３３の組成物。
【0180】
実施形態Ｐ３５：前記神経障害が進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）である、実施形態Ｐ３３の組成物。
【0181】
実施形態Ｐ３６：前記神経障害が前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（例えば、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））である、実施形態Ｐ３３の組成物。
【0182】
実施形態Ｐ３７：前記神経障害がアルツハイマー病（ＡＤ）である、実施形態Ｐ３３の組成物。
【0183】
実施形態Ｐ３８：前記薬剤が酵素である、実施形態Ｐ３０からＰ３７までのいずれか１つの組成物。
【0184】
実施形態Ｐ３９：前記酵素がプロテアーゼである、実施形態Ｐ３８の組成物。
【0185】
実施形態Ｐ４０：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）のＣＳＦ中濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で２０％以上（例えば、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９９％以上）減少させることができる、実施形態Ｐ３９の組成物。
【0186】
実施形態Ｐ４１：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で１０００ｎｇ／ｍＬ未満（例えば、１００ｎｇ／ｍＬ未満、１０ｎｇ／ｍＬ未満、２．５ｎｇ／ｍＬ未満、２ｎｇ／ｍＬ未満、１．５ｎｇ／ｍＬ未満、１ｎｇ／ｍＬ未満、０．５ｎｇ／ｍＬ未満、０．２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．１ｎｇ／ｍＬ未満、０．０５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０１ｎｇ／ｍＬ未満、０．００５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００１ｎｇ／ｍＬ未満）に低減することができる、実施形態Ｐ３９またはＰ４０の組成物。
【0187】
実施形態Ｐ４２：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）のペプチド配列を、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的に認識できる活性部位を特徴とし、さらに前記毒性タンパク質の少なくとも１つのペプチド結合を、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合の切断よりも特異的に切断できる、実施形態Ｐ３９からＰ４１までのいずれか１つの組成物。
【0188】
実施形態Ｐ４３：前記プロテアーゼが、ＣＳＦ中に自然に存在するタンパク質の濃度に著しい影響を及ぼすことなく、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の分解を行うことができる、実施形態Ｐ３９からＰ４２までのいずれか１つの組成物。
【0189】
実施形態Ｐ４４：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）に対して高特異性かつ低親和性を有する、実施形態Ｐ３９からＰ４３までのいずれか１つの組成物。
【0190】
実施形態Ｐ４５：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）に対して高特異性かつ高親和性を有する、実施形態Ｐ３９からＰ４３までのいずれか１つの組成物。
【0191】
実施形態Ｐ４６：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の少なくとも１つのペプチド結合を高効率で切断する、実施形態Ｐ３９からＰ４５までのいずれか１つの組成物。
【0192】
実施形態Ｐ４７：前記プロテアーゼが、カルパイン（例えば、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、およびカスパーゼ－８）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ）、トリプシン、およびメプリンアルファからなる群より選択される、実施形態Ｐ３９からＰ４６までのいずれか１つの組成物。
【0193】
実施形態Ｐ４８：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに自然に存在するプロテアーゼである、実施形態Ｐ３９からＰ４７までのいずれか１つの組成物。
【0194】
実施形態Ｐ４９：前記薬剤が固定化されている（例えば、薬剤が固体基材に固定化されたプロテアーゼである）、実施形態Ｐ３９からＰ４８までのいずれか１つの組成物。
【0195】
実施形態Ｐ５０：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が固体支持体に固定化されている、実施形態Ｐ４９の組成物。
【0196】
実施形態Ｐ５１：前記固体支持体が多孔質固体支持体である、実施形態Ｐ５０の組成物。
【0197】
実施形態Ｐ５２：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が共有結合によって前記固体支持体と結合している、実施形態Ｐ５０またはＰ５１の組成物。
【0198】
実施形態Ｐ５３：前記固体支持体が架橋樹脂である、実施形態Ｐ５０からＰ５２までのいずれか１つの組成物。
【0199】
実施形態Ｐ５４：前記架橋樹脂がアガロース樹脂である、実施形態Ｐ５３の組成物。
【0200】
実施形態Ｐ５５：多孔質ビーズまたは膜に架橋することによって薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は多孔質ビーズまたは膜に架橋されたプロテアーゼである）、実施形態Ｐ４９の組成物。
【0201】
実施形態Ｐ５６：前記薬剤が沈殿によって（例えば、非晶質沈殿物または結晶性沈殿物として）固定化されている、実施形態Ｐ４９の組成物。
【0202】
実施形態Ｐ５７：沈殿した薬剤が架橋される（例えば、架橋非晶質沈殿物または架橋結晶性沈殿物、例えば、架橋プロテアーゼ結晶、例えば、架橋非晶質プロテアーゼ沈殿物を形成する）、実施形態Ｐ５６の組成物。
【0203】
実施形態Ｐ５８：前記薬剤を凍結乾燥して乾燥粉末を形成し、前記粉末を多孔質コーティング内に配置してビーズを形成する、実施形態Ｐ４９の組成物。
【0204】
実施形態Ｐ５９：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の分解に関して、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的でない、実施形態Ｐ３９からＰ４１までおよびＰ４６からＰ５８までのいずれか１つの組成物。
【0205】
実施形態Ｐ６０：（ａ）対象の脳脊髄液中の毒性タンパク質の存在に関する情報を受信し、対象がＣＳＦ中に毒性タンパク質を有すると判定された場合に、対象を工程（ｂ）の治療に対して感受性があると診断することと、ｂ）毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤（例えば酵素、例えばプロテアーゼ）と対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）とを接触させることにより、工程（ａ）において感受性であると診断された対象を治療することとを含む、毒性タンパク質の生成を特徴とする神経障害を患う対象を診断および治療する方法。
【0206】
実施形態Ｐ６１：前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、すなわち大脳皮質基底核神経節変性症（ＣＢＧＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、および亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）から選択されるタウオパチーである、実施形態Ｐ６０の方法。
【0207】
実施形態Ｐ６２：前記神経障害が進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）である、実施形態Ｐ６０の方法。
【0208】
実施形態Ｐ６３：前記神経障害が前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（例えば、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））である、実施形態Ｐ６０の方法。
【0209】
実施形態Ｐ６４：前記神経障害がアルツハイマー病である、実施形態Ｐ６０の方法。
【0210】
実施形態Ｐ６５：前記毒性タンパク質が、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）である、実施形態Ｐ６０からＰ６４までのいずれか１つの方法。
【0211】
実施形態Ｐ６６：前記薬剤が酵素である、実施形態Ｐ６０からＰ６５までのいずれか１つの方法。
【0212】
実施形態Ｐ６７：前記酵素がプロテアーゼである、実施形態Ｐ６６の方法。
【0213】
実施形態Ｐ６８：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）のＣＳＦ中濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で２０％以上（例えば、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９９％以上）減少させることができる、実施形態Ｐ６７の方法。
【0214】
実施形態Ｐ６９：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で１０００ｎｇ／ｍＬ未満（例えば、１００ｎｇ／ｍＬ未満、１０ｎｇ／ｍＬ未満、２．５ｎｇ／ｍＬ未満、２ｎｇ／ｍＬ未満、１．５ｎｇ／ｍＬ未満、１ｎｇ／ｍＬ未満、０．５ｎｇ／ｍＬ未満、０．２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．１ｎｇ／ｍＬ未満、０．０５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０１ｎｇ／ｍＬ未満、０．００５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００１ｎｇ／ｍＬ未満）に低減することができる、実施形態Ｐ６７またはＰ６８の方法。
【0215】
実施形態Ｐ７０：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）のペプチド配列を、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的に認識できる活性部位を特徴とし、さらに前記毒性タンパク質の少なくとも１つのペプチド結合を、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合の切断よりも特異的に切断できる、実施形態Ｐ６７からＰ６９までのいずれか１つの方法。
【0216】
実施形態Ｐ７１：前記プロテアーゼが、ＣＳＦ中に自然に存在するタンパク質の濃度に著しい影響を及ぼすことなく、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の分解を行うことができる、実施形態Ｐ６７からＰ７０までのいずれか１つの方法。
【0217】
実施形態Ｐ７２：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）に対して高特異性かつ低親和性を有する、実施形態Ｐ６７からＰ７１までのいずれか１つの方法。
【0218】
実施形態Ｐ７３：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）に対して高特異性かつ高親和性を有する、実施形態Ｐ６７からＰ７１までのいずれか１つの方法。
【0219】
実施形態Ｐ７４：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の少なくとも１つのペプチド結合を高効率で切断する、実施形態Ｐ６７からＰ７３までのいずれか１つの方法。
【0220】
実施形態Ｐ７５：前記プロテアーゼが、カルパイン（例えば、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ）、トリプシン、およびメプリンアルファからなる群より選択される、実施形態Ｐ６７からＰ７４までのいずれか１つの方法。
【0221】
実施形態Ｐ７６：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに自然に存在するプロテアーゼである、実施形態Ｐ６７からＰ７５までのいずれか１つの方法。
【0222】
実施形態Ｐ７７：ＣＳＦを薬剤と接触させる前に対象から取り出す工程と、前記ＣＳＦを薬剤と接触させた後、それを対象に再導入する工程とを含むか、あるいは、対象の身体に埋め込まれたデバイス内の固体表面または固体支持体に固定化されたプロテアーゼに対象のＣＳＦを接触させることを含み、任意選択的に、プロテアーゼまたは固体表面もしくは固体支持体に固定化されたプロテアーゼが抽出されて、長期間にわたる対象の治療期間（場合により、長期間とは２～１２か月の断続的な期間である）、埋込型デバイスに再導入される、実施形態Ｐ６０からＰ７６までのいずれか１つの方法。
【0223】
実施形態Ｐ７８：前記薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は固体基材に固定化されたプロテアーゼである）、実施形態Ｐ７７の方法。
【0224】
実施形態Ｐ７９：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が固体支持体に固定化されている、実施形態Ｐ７８の方法。
【0225】
実施形態Ｐ８０：前記固体支持体が多孔質固体支持体である、実施形態Ｐ７９の方法。
【0226】
実施形態Ｐ８１：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が共有結合によって前記固体支持体と結合している、実施形態Ｐ７９またはＰ８０の方法。
【0227】
実施形態Ｐ８２：前記固体支持体が架橋樹脂である、実施形態Ｐ７８からＰ８１までのいずれか１つの方法。
【0228】
実施形態Ｐ８３：前記架橋樹脂がアガロース樹脂である、実施形態Ｐ８２の方法。
【0229】
実施形態Ｐ８４：多孔質ビーズまたは膜に架橋することによって薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は多孔質ビーズまたは膜に架橋されたプロテアーゼである）、実施形態Ｐ７８の方法。
【0230】
実施形態Ｐ８５：前記薬剤が沈殿によって（例えば、非晶質沈殿物または結晶性沈殿物として）固定化されている、実施形態Ｐ７８の方法。
【0231】
実施形態Ｐ８６：沈殿した薬剤が架橋される（例えば、架橋非晶質沈殿物または架橋結晶性沈殿物、例えば、架橋プロテアーゼ結晶、例えば、架橋非晶質プロテアーゼ沈殿物を形成する）、実施形態Ｐ８５の方法。
【0232】
実施形態Ｐ８７：前記薬剤を凍結乾燥して乾燥粉末を形成し、前記粉末を多孔質コーティング内に配置してビーズを形成する、実施形態Ｐ７８の方法。
【0233】
実施形態Ｐ８８：ＣＳＦを対象に再導入する前にＣＳＦを濾過する工程をさらに含む、実施形態Ｐ７７からＰ８７のいずれか１つの方法。
【0234】
実施形態Ｐ８９：前記薬剤を対象のＣＳＦに直接導入する、実施形態Ｐ６０からＰ７６までのいずれか１つの方法。
【0235】
実施形態Ｐ９０：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の分解に関して、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的でない、実施形態Ｐ６６からＰ６９までおよびＰ７４からＰ８９までのいずれか１つの方法。
【0236】
実施形態Ｐ９１：アガロースカラムに固定化されたプロテアーゼを含むデバイス（１００）にＣＳＦを滅菌下で接触させる前に、対象からＣＳＦを滅菌下で取り出す工程と、前記ＣＳＦをデバイス（１００）と接触させた後、前記ＣＳＦを滅菌下で対象に再導入する工程とをさらに含む、実施形態Ｐ１からＰ１７までまたはＰ６０からＰ７６までのいずれか１つの方法。
【0237】
実施形態Ｐ９２：前記対象が非ヒト動物である、実施形態Ｐ９１の方法。
【0238】
実施形態Ｐ９３：基材に固定化された薬剤が収容されている、対象に埋め込まれたデバイスと前記ＣＳＦとを接触させる、実施形態Ｐ１からＰ１７までまたはＰ６０からＰ７６までのいずれか１つの方法。
【0239】
実施形態Ｐ９４：前記薬剤が注射によってデバイスに導入されるか、またはデバイスから抽出される、実施形態Ｐ９３の方法。
【0240】
実施形態Ｐ９５：前記対象がヒトである、実施形態Ｐ９３またはＰ９４の方法。
【0241】
実施形態Ｐ９６：前記薬剤がプロテアーゼであり、前記プロテアーゼが約１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌの濃度で固定化されている、実施形態Ｐ１９からＰ２７までもしくはＰ７８からＰ８６までのいずれか１つの方法、または実施形態Ｐ４９からＰ５７までのいずれか１つの組成物。
【0242】
実施形態Ｐ９７：前記プロテアーゼがセリンプロテアーゼである、実施形態Ｐ８もしくはＰ６７の方法、または実施形態Ｐ３９の組成物。
【0243】
実施形態Ｐ９８：前記セリンプロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、およびトロンビンからなる群より選択される、実施形態Ｐ９４の方法または組成物。
【0244】
実施形態Ｐ９９：前記プロテアーゼがアスパラギン酸プロテアーゼである、実施形態Ｐ８もしくはＰ６７の方法、または実施形態Ｐ３９の組成物。
【0245】
実施形態Ｐ１００：前記アスパラギン酸プロテアーゼがペプシンまたはエンドチアペプシンである、実施形態Ｐ９９の方法または組成物。
【0246】
実施形態Ｐ１０１：前記プロテアーゼがメタロプロテアーゼではない、実施形態Ｐ８もしくはＰ６７の方法、または実施形態Ｐ３９の組成物。
【0247】
実施形態Ｐ１０２：前記プロテアーゼがシステインプロテアーゼではない、実施形態Ｐ８もしくはＰ６７の方法、または実施形態Ｐ３９の組成物。
【0248】
実施形態Ｐ１０３：前記プロテアーゼがそのタンパク質分解活性について非共有結合補因子に依存しない、実施形態Ｐ８もしくはＰ６７の方法、または実施形態Ｐ３９の組成物。
【0249】
実施形態Ｐ１０４：前記プロテアーゼが微生物プロテアーゼであり、前記微生物プロテアーゼが任意選択的にエンドチアペプシンである、実施形態Ｐ８もしくはＰ６７の方法、または実施形態Ｐ３９の組成物。
【0250】
実施形態Ｐ１０５：対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）からの毒性タンパク質を分解または除去することができる、適切に製剤化された薬剤を含む、キット。
【0251】
実施形態Ｐ１０６：ＣＳＦからの毒性タンパク質を分解または除去するために適切に製剤化された薬剤と対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）とを接触させるためのシステムを含み、任意選択的に薬剤を含む、キット。
【0252】
実施形態Ｐ１０７：前記薬剤で前記ＣＳＦを処理するための説明書をさらに含む、実施形態Ｐ１０５またはＰ１０６のキット。
【0253】
実施形態Ｑ１：対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）を、毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤と接触させることを含む、毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害を患う対象の治療方法。
【0254】
実施形態Ｑ２：前記神経障害が、ＴＡＲ－ＤＮＡ結合タンパク質４３ｋＤａ（ＴＤＰ－４３）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ１）、またはｆｕｓｅｄ ｉｎ ｓａｒｃｏｍａ（ＦＵＳ）突然変異の群より選択される遺伝子の突然変異を特徴とする（すなわち、ＴＤＰ－４３、ＳＯＤ１、ＦＵＳ陽性神経疾患）、実施形態Ｑ１の方法。
【0255】
実施形態Ｑ３：前記神経障害が、ＴＤＰ－４３陽性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ＳＯＤ１陽性ＡＬＳ、ＦＵＳ陽性ＡＬＳ、ＴＤＰ－４３陽性前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＳＯＤ１陽性ＦＴＤ、ＦＵＳ陽性ＦＴＤ、ＴＤＰ－４３陽性前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ＳＯＤ１陽性ＦＴＬＤ、およびＦＵＳ陽性ＦＴＬＤからなる群より選択される、実施形態Ｑ２の方法。
【0256】
実施形態Ｑ４：前記毒性タンパク質が、毒性ＴＤＰ－４３、毒性ＳＯＤ１、および毒性ＦＵＳ／ＴＬＳからなる群より選択される、実施形態Ｑ１からＱ３までのいずれか１つの方法。
【0257】
実施形態Ｑ５：前記神経障害が、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群より選択される、実施形態Ｑ１の方法。
【0258】
実施形態Ｑ６：前記神経障害が、α－シヌクレイン（例えば、パーキンソン病）、β－アミロイド（例えば、アルツハイマー病）、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、ハンチントン病）、グルタミン酸（例えば、筋萎縮性側索硬化症）、プリオンタンパク質（例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ））、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体の存在を特徴とする、実施形態Ｑ１の方法。
【0259】
実施形態Ｑ７：前記神経障害がタウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の存在を特徴とする、実施形態Ｑ１の方法。
【0260】
実施形態Ｑ８：前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、すなわち大脳皮質基底核神経節変性症（ＣＢＧＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、および亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）から選択されるタウオパチーである、実施形態Ｑ７の方法。
【0261】
実施形態Ｑ９：前記神経障害が進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）である、実施形態Ｑ７の方法。
【0262】
実施形態Ｑ１０：前記神経障害が前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（例えば、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））である、実施形態Ｑ７の方法。
【0263】
実施形態Ｑ１１：前記神経障害がアルツハイマー病である、実施形態Ｑ７の方法。
【0264】
実施形態Ｑ１２：前記薬剤が酵素である、実施形態Ｑ１からＱ１１までのいずれか１つの方法。
【0265】
実施形態Ｑ１３：前記酵素がプロテアーゼである、実施形態Ｑ１２の方法。
【0266】
実施形態Ｑ１４：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）のＣＳＦ中濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で２０％以上（例えば、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９９％以上）減少させることができる、実施形態Ｑ１３の方法。
【0267】
実施形態Ｑ１５：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で１０００ｎｇ／ｍＬ未満（例えば、１００ｎｇ／ｍＬ未満、１０ｎｇ／ｍＬ未満、２．５ｎｇ／ｍＬ未満、２ｎｇ／ｍＬ未満、１．５ｎｇ／ｍＬ未満、１ｎｇ／ｍＬ未満、０．５ｎｇ／ｍＬ未満、０．２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．１ｎｇ／ｍＬ未満、０．０５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０１ｎｇ／ｍＬ未満、０．００５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００１ｎｇ／ｍＬ未満）に低減することができる、実施形態Ｑ１３またはＱ１４の方法。
【0268】
実施形態Ｑ１６：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）のペプチド配列を、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的に認識できる活性部位を特徴とし、さらに前記毒性タンパク質の少なくとも１つのペプチド結合を、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合の切断よりも特異的に切断できる、実施形態Ｑ１３からＱ１５までのいずれか１つの方法。
【0269】
実施形態Ｑ１７：前記プロテアーゼが、ＣＳＦ中に自然に存在するタンパク質の濃度に著しい影響を及ぼすことなく、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の分解を行うことができる、実施形態Ｑ１３からＱ１６までのいずれか１つの方法。
【0270】
実施形態Ｑ１８：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）に対して高特異性かつ低親和性を有する、実施形態Ｑ１３からＱ１７までのいずれか１つの方法。
【0271】
実施形態Ｑ１９：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）に対して高特異性かつ高親和性を有する、実施形態Ｑ１３からＱ１７までのいずれか１つの方法。
【0272】
実施形態Ｑ２０：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の少なくとも１つのペプチド結合を高効率で切断する、実施形態Ｑ１３からＱ１９までのいずれか１つの方法。
【0273】
実施形態Ｑ２１：前記プロテアーゼが、カルパイン（例えば、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ）、トリプシン、およびメプリンアルファからなる群より選択される、実施形態Ｑ１３からＱ２０までのいずれか１つの方法。
【0274】
実施形態Ｑ２２：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに自然に存在するプロテアーゼである、実施形態Ｑ１３からＱ２０までのいずれか１つの方法。
【0275】
実施形態Ｑ２３：ＣＳＦを薬剤と接触させる前に対象から取り出す工程と、前記ＣＳＦを薬剤と接触させた後、それを対象に再導入する工程とを含む、実施形態Ｑ１からＱ２２までのいずれか１つの方法。
【0276】
実施形態Ｑ２４：前記薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は固体基材に固定化されたプロテアーゼである）、実施形態Ｑ１からＱ２３までのいずれか１つの方法。
【0277】
実施形態Ｑ２５：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が固体支持体に固定化されている、実施形態Ｑ２４の方法。
【0278】
実施形態Ｑ２６：前記固体支持体が多孔質固体支持体である、実施形態Ｑ２５の方法。
【0279】
実施形態Ｑ２７：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が共有結合によって前記支持体と結合している、実施形態Ｑ２５またはＱ２６の方法。
【0280】
実施形態Ｑ２８：前記支持体が架橋樹脂である、実施形態Ｑ２５からＱ２７までのいずれか１つの方法。
【0281】
実施形態Ｑ２９：前記架橋樹脂がアガロース樹脂である、実施形態Ｑ２８の方法。
【0282】
実施形態Ｑ３０：多孔質ビーズまたは膜に架橋することによって薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は多孔質ビーズまたは膜に架橋されたプロテアーゼである）、実施形態Ｑ２４の方法。
【0283】
実施形態Ｑ３１：前記薬剤が沈殿によって（例えば、非晶質沈殿物または結晶性沈殿物として）固定化されている、実施形態Ｑ２４からＱ２６までのいずれか１つの方法。
【0284】
実施形態Ｑ３２：沈殿した薬剤が架橋される（例えば、架橋非晶質沈殿物または架橋結晶性沈殿物、例えば、架橋プロテアーゼ結晶、例えば、架橋非晶質プロテアーゼ沈殿物を形成する）、実施形態Ｑ３１の方法。
【0285】
実施形態Ｑ３３：前記薬剤を凍結乾燥して乾燥粉末を形成し、前記粉末を多孔質コーティング内に配置してビーズを形成する、実施形態Ｑ３２の方法。
【0286】
実施形態Ｑ３４：ＣＳＦを対象に再導入する前にＣＳＦを濾過する工程をさらに含む、実施形態Ｑ２３からＱ３３のいずれか１つの方法。
【0287】
実施形態Ｑ３５：前記薬剤を対象のＣＳＦに直接導入する、実施形態Ｑ１からＱ２２までのいずれか１つの方法。
【0288】
実施形態Ｑ３６：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の分解に関して、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的でない、実施形態Ｑ１３からＱ１５までおよびＱ２１からＱ３５までのいずれか１つの方法。
【0289】
実施形態Ｑ３７：（ａ）毒性タンパク質の生成を特徴とする神経障害を患う対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）と；（ｂ）前記毒性タンパク質を分解または除去できる薬剤とを含む、組成物。
【0290】
実施形態Ｑ３８：前記神経障害が、ＴＡＲ－ＤＮＡ結合タンパク質４３ｋＤａ（ＴＤＰ－４３）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ１）、またはｆｕｓｅｄ ｉｎ ｓａｒｃｏｍａ（ＦＵＳ）突然変異の群より選択される遺伝子の突然変異を特徴とする（すなわち、ＴＤＰ－４３、ＳＯＤ１、ＦＵＳ陽性神経疾患）、実施形態Ｑ３７の組成物。
【0291】
実施形態Ｑ３９：前記神経障害が、ＴＤＰ－４３陽性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ＳＯＤ１陽性ＡＬＳ、ＦＵＳ陽性ＡＬＳ、ＴＤＰ－４３陽性前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＳＯＤ１陽性ＦＴＤ、ＦＵＳ陽性ＦＴＤ、ＴＤＰ－４３陽性前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ＳＯＤ１陽性ＦＴＬＤ、およびＦＵＳ陽性ＦＴＬＤからなる群より選択される、実施形態Ｑ３８の組成物。
【0292】
実施形態Ｑ４０．前記毒性タンパク質が、毒性ＴＤＰ－４３、毒性ＳＯＤ１、および毒性ＦＵＳ／ＴＬＳからなる群より選択される、実施形態Ｑ３７からＱ３９までの組成物。
【0293】
実施形態Ｑ４１：前記神経障害が、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群より選択される、実施形態Ｑ３７の方法。
【0294】
実施形態Ｑ４２：前記神経障害が、α－シヌクレイン（例えば、パーキンソン病）、β－アミロイド（例えば、アルツハイマー病）、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）（例えば、ハンチントン病）、グルタミン酸（例えば、筋萎縮性側索硬化症）、プリオンタンパク質（例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ））、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体の存在を特徴とする、実施形態Ｑ３７の方法。
【0295】
実施形態Ｑ４３：前記神経障害が毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）の存在を特徴とする、実施形態Ｑ３７の組成物。
【0296】
実施形態Ｑ４４：前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、すなわち大脳皮質基底核神経節変性症（ＣＢＧＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、および亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）から選択されるタウオパチーである、実施形態Ｑ４３の組成物。
【0297】
実施形態Ｑ４５：前記神経障害が進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）である、実施形態Ｑ４３の組成物。
【0298】
実施形態Ｑ４６：前記神経障害が前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（例えば、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））である、実施形態Ｑ４３の組成物。
【0299】
実施形態Ｑ４７：前記神経障害がアルツハイマー病（ＡＤ）である、実施形態Ｑ４３の組成物。
【0300】
実施形態Ｑ４８：前記薬剤が酵素である、実施形態Ｑ３７からＱ４７までのいずれか１つの組成物。
【0301】
実施形態Ｑ４９：前記酵素がプロテアーゼである、実施形態Ｑ４８の組成物。
【0302】
実施形態Ｑ５０：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）のＣＳＦ中濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で２０％以上（例えば、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９９％以上）減少させることができる、実施形態Ｑ４９の組成物。
【0303】
実施形態Ｑ５１：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で１０００ｎｇ／ｍＬ未満（例えば、１００ｎｇ／ｍＬ未満、１０ｎｇ／ｍＬ未満、２．５ｎｇ／ｍＬ未満、２ｎｇ／ｍＬ未満、１．５ｎｇ／ｍＬ未満、１ｎｇ／ｍＬ未満、０．５ｎｇ／ｍＬ未満、０．２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．１ｎｇ／ｍＬ未満、０．０５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０１ｎｇ／ｍＬ未満、０．００５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００１ｎｇ／ｍＬ未満）に低減することができる、実施形態Ｑ４９またはＱ５０の組成物。
【0304】
実施形態Ｑ５２：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）のペプチド配列を、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的に認識できる活性部位を特徴とし、さらに前記毒性タンパク質の少なくとも１つのペプチド結合を、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合の切断よりも特異的に切断できる、実施形態Ｑ４９からＱ５１までのいずれか１つの組成物。
【0305】
実施形態Ｑ５３：前記プロテアーゼが、ＣＳＦ中に自然に存在するタンパク質の濃度に著しい影響を及ぼすことなく、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の分解を行うことができる、実施形態Ｑ４９からＱ５２までのいずれか１つの組成物。
【0306】
実施形態Ｑ５４：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）に対して高特異性かつ低親和性を有する、実施形態Ｑ４９からＱ５３までのいずれか１つの組成物。
【0307】
実施形態Ｑ５５：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）に対して高特異性かつ高親和性を有する、実施形態Ｑ４９からＱ５３までのいずれか１つの組成物。
【0308】
実施形態Ｑ５６：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の少なくとも１つのペプチド結合を高効率で切断する、実施形態Ｑ４９からＱ５５までのいずれか１つの組成物。
【0309】
実施形態Ｑ５７：前記プロテアーゼが、カルパイン（例えば、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、およびカスパーゼ－８）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ）、トリプシン、およびメプリンアルファからなる群より選択される、実施形態Ｑ４９からＱ５６までのいずれか１つの組成物。
【0310】
実施形態Ｑ５８：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに自然に存在するプロテアーゼである、実施形態Ｑ４９からＱ５７までのいずれか１つの組成物。
【0311】
実施形態Ｑ５９：前記薬剤が固定化されている（例えば、薬剤が固体基材に固定化されたプロテアーゼである）、実施形態Ｑ３７からＱ５８までのいずれか１つの組成物。
【0312】
実施形態Ｑ６０：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が固体支持体に固定化されている、実施形態Ｑ５９の組成物。
【0313】
実施形態Ｑ６１：前記固体支持体が多孔質固体支持体である、実施形態Ｑ６０の組成物。
【0314】
実施形態Ｑ６２：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が共有結合によって前記固体支持体と結合している、実施形態Ｑ６０またはＱ６１の組成物。
【0315】
実施形態Ｑ６３：前記固体支持体が架橋樹脂である、実施形態Ｑ６０からＱ６２までのいずれか１つの組成物。
【0316】
実施形態Ｑ６４：前記架橋樹脂がアガロース樹脂である、実施形態Ｑ６３の組成物。
【0317】
実施形態Ｑ６５：多孔質ビーズまたは膜に架橋することによって薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は多孔質ビーズまたは膜に架橋されたプロテアーゼである）、実施形態Ｑ５９からＱ６１までのいずれか１つの組成物。
【0318】
実施形態Ｑ６６：前記薬剤が沈殿によって（例えば、非晶質沈殿物または結晶性沈殿物として）固定化されている、実施形態Ｑ５９の組成物。
【0319】
実施形態Ｑ６７：沈殿した薬剤が架橋される（例えば、架橋非晶質沈殿物または架橋結晶性沈殿物、例えば、架橋プロテアーゼ結晶、例えば、架橋非晶質プロテアーゼ沈殿物を形成する）、実施形態Ｑ６６の組成物。
【0320】
実施形態Ｑ６８：前記薬剤を凍結乾燥して乾燥粉末を形成し、前記粉末を多孔質コーティング内に配置してビーズを形成する、実施形態Ｑ５９の組成物。
【0321】
実施形態Ｑ６９：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の分解に関して、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的でない、実施形態Ｑ４９からＱ５１までおよびＱ５７からＱ６８までのいずれか１つの方法。
【0322】
実施形態Ｑ７０：（ａ）対象の脳脊髄液中の毒性タンパク質の存在に関する情報を受信するか、対象のＴＤＰ－４３、ＳＯＤ１、またはＦＵＳの状態に関する情報を受信し、対象がＣＳＦ中に毒性タンパク質を有すると判定された場合、または対象がＴＤＰ－４３、ＳＯＤ１、またはＦＵＳ陽性であると判定された場合に、対象を工程（ｂ）の治療に対して感受性があると診断することと、（ｂ）毒性タンパク質を除去または分解できる薬剤（例えば酵素、例えばプロテアーゼ）と対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）とを接触させることにより、工程（ａ）において感受性であると診断された対象を治療することとを含む、毒性タンパク質の生成を特徴とする神経障害を患う対象を診断および治療する方法。
【0323】
実施形態Ｑ７１：前記神経障害が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（例えば、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））からなる群より選択される、実施形態Ｑ７０の方法。
【0324】
実施形態Ｑ７２：前記毒性タンパク質が、毒性ＴＤＰ－４３、毒性ＳＯＤ１、および毒性ＦＵＳ／ＴＬＳからなる群より選択される、実施形態Ｑ７０またはＱ７１の方法。
【0325】
実施形態Ｑ７３：前記神経障害が、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群より選択される、実施形態Ｑ７０の方法。
【0326】
実施形態Ｑ７４：前記毒性タンパク質が、α－シヌクレイン、β－アミロイド、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、グルタミン酸、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体からなる群より選択される、実施形態Ｑ７０またはＱ７３の方法。
【0327】
実施形態Ｑ７５：前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、すなわち大脳皮質基底核神経節変性症（ＣＢＧＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、および亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）から選択されるタウオパチーである、実施形態Ｑ７０の方法。
【0328】
実施形態Ｑ７６：前記神経障害が進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）である、実施形態Ｑ７０の方法。
【0329】
実施形態Ｑ７７：前記神経障害が前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（例えば、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ））である、実施形態Ｑ７０の方法。
【0330】
実施形態Ｑ７８：前記神経障害がアルツハイマー病である、実施形態Ｑ７０の方法。
【0331】
実施形態Ｑ７９：前記毒性タンパク質が、毒性タウタンパク質（例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）である、実施形態Ｑ７０、Ｑ７３、およびＱ７５からＱ７８までのいずれか１つの方法。
【0332】
実施形態Ｑ８０：対象のＴＤＰ－４３、ＳＯＤ１、またはＦＵＳの状態が、対象からの生体試料を分析することによって決定される、実施形態Ｑ７０からＱ７３までの方法。
【0333】
実施形態Ｑ８１：前記生体試料が血液試料である、実施形態Ｑ８０の方法。
【0334】
実施形態Ｑ８２：ＴＤＰ－４３、ＳＯＤ１、またはＦＵＳ遺伝子における突然変異の存在について前記生体試料を分析する、実施形態Ｑ８０またはＱ８１の方法。
【0335】
実施形態Ｑ８３：対象の状態がＴＤＰ－４３陽性、ＳＯＤ１陽性、またはＦＵＳ陽性であると判定された場合、前記方法の工程（ａ）が、対象のＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在に関する情報を受信し、対象がＣＳＦ中に毒性タンパク質を有すると判定された場合に、対象を工程（ｂ）の治療に対して感受性があると診断することをさらに含む、実施形態Ｑ８２の方法。
【0336】
実施形態Ｑ８４：前記薬剤が酵素である、実施形態Ｑ７０からＱ８３までのいずれか１つの方法。
【0337】
実施形態Ｑ８５：前記酵素がプロテアーゼである、実施形態Ｑ８４の方法。
【0338】
実施形態Ｑ８６：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）のＣＳＦ中濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で２０％以上（例えば、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９９％以上）減少させることができる、実施形態Ｑ８５の方法。
【0339】
実施形態Ｑ８７：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の濃度を１か月未満（例えば、１週間未満、１日未満、１２時間未満、６時間未満、６０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、２分未満）で１０００ｎｇ／ｍＬ未満（例えば、１００ｎｇ／ｍＬ未満、１０ｎｇ／ｍＬ未満、２．５ｎｇ／ｍＬ未満、２ｎｇ／ｍＬ未満、１．５ｎｇ／ｍＬ未満、１ｎｇ／ｍＬ未満、０．５ｎｇ／ｍＬ未満、０．２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．１ｎｇ／ｍＬ未満、０．０５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．０１ｎｇ／ｍＬ未満、０．００５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００２５ｎｇ／ｍＬ未満、０．００１ｎｇ／ｍＬ未満）に低減することができる、実施形態Ｑ８５またはＱ８６の方法。
【0340】
実施形態Ｑ８８：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）のペプチド配列を、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的に認識できる活性部位を特徴とし、さらに前記毒性タンパク質の少なくとも１つのペプチド結合を、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合の切断よりも特異的に切断できる、実施形態Ｑ８５からＱ８７までのいずれか１つの方法。
【0341】
実施形態Ｑ８９：前記プロテアーゼが、ＣＳＦ中に自然に存在するタンパク質の濃度に著しい影響を及ぼすことなく、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の分解を行うことができる、Ｑ８５からＱ８８までのいずれか１つの方法。
【0342】
実施形態Ｑ９０：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）に対して高特異性かつ低親和性を有する、実施形態Ｑ８５からＱ８９までのいずれか１つの方法。
【0343】
実施形態Ｑ９１：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）に対して高特異性かつ高親和性を有する、実施形態Ｑ８５からＱ８９までのいずれか１つの方法。
【0344】
実施形態Ｑ９２：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに通常存在するタンパク質のペプチド結合と比較して、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の少なくとも１つのペプチド結合を高効率で切断する、実施形態Ｑ８５からＱ９１までのいずれか１つの方法。
【0345】
実施形態Ｑ９３：前記プロテアーゼが、カルパイン（例えば、カルパイン－２）、カスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－３、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８）、グランザイム（例えば、グランザイムＡ）、トリプシン、およびメプリンアルファからなる群より選択される、実施形態Ｑ８５からＱ９２までのいずれか１つの方法。
【0346】
実施形態Ｑ９４：前記プロテアーゼが、ＣＳＦに自然に存在するプロテアーゼである、実施形態Ｑ８５からＱ９３までのいずれか１つの方法。
【0347】
実施形態Ｑ９５：ＣＳＦを薬剤と接触させる前に対象から取り出す工程と、前記ＣＳＦを薬剤と接触させた後、それを対象に再導入する工程とを含む、実施形態Ｑ７０からＱ９４までのいずれか１つの方法。
【0348】
実施形態Ｑ９６：前記薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は固体基材に固定化されたプロテアーゼである）、実施形態Ｑ９５の方法。
【0349】
実施形態Ｑ９７：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が固体支持体に固定化されている、実施形態Ｑ９６の方法。
【0350】
実施形態Ｑ９８：前記固体支持体が多孔質固体支持体である、実施形態Ｑ９７の方法。
【0351】
実施形態Ｑ９９：前記薬剤（例えば、プロテアーゼ）が共有結合によって前記固体支持体と結合している、実施形態Ｑ９７またはＱ９８の方法。
【0352】
実施形態Ｑ１００：前記固体支持体が架橋樹脂である、実施形態Ｑ９７からＱ９９までの方法。
【0353】
実施形態Ｑ１０１：前記架橋樹脂がアガロース樹脂である、実施形態Ｑ１００の方法。
【0354】
実施形態Ｑ１０２：多孔質ビーズまたは膜に架橋することによって薬剤が固定化されている（例えば、薬剤は多孔質ビーズまたは膜に架橋されたプロテアーゼである）、実施形態Ｑ９６からＱ９８までのいずれか１つの方法。
【0355】
実施形態Ｑ１０３：前記薬剤が沈殿によって（例えば、非晶質沈殿物または結晶性沈殿物として）固定化されている、実施形態Ｑ９６の方法。
【0356】
実施形態Ｑ１０４：沈殿した薬剤が架橋される（例えば、架橋非晶質沈殿物または架橋結晶性沈殿物、例えば、架橋プロテアーゼ結晶、例えば、架橋非晶質プロテアーゼ沈殿物を形成する）、実施形態Ｑ１０３の方法。
【0357】
実施形態Ｑ１０５：前記薬剤を凍結乾燥して乾燥粉末を形成し、前記粉末を多孔質コーティング内に配置してビーズを形成する、実施形態Ｑ９６の方法。
【0358】
実施形態Ｑ１０６：ＣＳＦを対象に再導入する前にＣＳＦを濾過する工程をさらに含む、実施形態Ｑ９５からＱ１０５のいずれか１つの方法。
【0359】
実施形態Ｑ１０７：前記薬剤を対象のＣＳＦに直接導入する、実施形態Ｑ７０からＱ９４までのいずれか１つの方法。
【0360】
実施形態Ｑ１０８：前記プロテアーゼが、毒性タンパク質（例えば、毒性ＴＤＰ－４３タンパク質、例えば、毒性ＳＯＤ１タンパク質、例えば、毒性ＦＵＳ／ＴＬＳタンパク質、例えば、毒性タウタンパク質（例えば、タウタンパク質凝集体、タウタンパク質のタングル、タウオリゴマー、過剰リン酸化タウタンパク質、可溶性タウタンパク質、タウ二量体）、例えば、α－シヌクレイン、例えば、β－アミロイド、例えば、ハンチンチンタンパク質（ＨＴＴ）、例えば、グルタミン酸、例えば、プリオンタンパク質、例えば、サイトカイン、インターロイキン、腫瘍壊死因子などの炎症性タンパク質、例えば、他の有害な可能性があるタンパク質、ならびにバクテリア、ウイルス、およびその他の病原体）の分解に関して、ＣＳＦに通常存在する他のタンパク質よりも選択的でない、実施形態Ｑ７０からＱ８７までおよびＱ９３からＱ１０７までのいずれか１つの方法。
【0361】
等価物および範囲
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの冠詞は、それに反する記載のない限り、またはその他の方法で文脈から明らかでない限り、１つ以上を意味し得る。ある群の１つ以上の要素の間に「または」を含む請求項または記載内容は、それに反する記載のない限り、または文脈から明らかでない限り、１つ、複数、またはすべての群要素が所与の生成物または工程に存在する、用いられる、またはその他の方法で関連する場合に条件を満たすとみなされる。本発明には、その群のちょうど１つの要素が所与の生成物または工程に存在するか、用いられるか、またはその他の方法で関連する実施形態を含む。本発明にはまた、その群の複数またはすべての要素が所与の生成物または工程に存在するか、用いられるか、またはその他の方法で関連する実施形態を含む。
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの冠詞は、それに反する記載のない限り、またはその他の方法で文脈から明らかでない限り、１つ以上を意味し得る。ある群の１つ以上の要素の間に「または」を含む請求項または記載内容は、それに反する記載のない限り、または文脈から明らかでない限り、１つ、複数、またはすべての群要素が所与の生成物または工程に存在する、用いられる、またはその他の方法で関連する場合に条件を満たすとみなされる。本発明には、その群のちょうど１つの要素が所与の生成物または工程に存在するか、用いられるか、またはその他の方法で関連する実施形態を含む。本発明にはまた、その群の複数またはすべての要素が所与の生成物または工程に存在するか、用いられるか、またはその他の方法で関連する実施形態を含む。
【0362】
さらに、本発明は、列挙された請求項のうちの１つ以上からの１つ以上の限定、要素、条項、および記述用語が別の請求項に導入されている、あらゆる変形例、組み合わせ、および順列を包含する。例えば、別の請求項に従属する請求項はいずれも、同じ基本請求項に従属するいずれかの他の請求項に存在する１つ以上の限定を包含するように変更することができる。要素が列挙事項として提示されている場合、例えばマーカッシュ群形式では、要素の各部分群も開示されているものとみなされ、任意の要素を群から除外することができる。一般に、本発明または本発明の態様が特定の要素および／または特徴を含むものとして言及されている場合、本発明の特定の実施形態または本発明の態様はそのような要素および／または特徴からなる、または本質的にそれからなるものと理解されるべきである。簡潔にするために、こうした実施形態は、本明細書でその旨が具体的に記載されているわけではない。「含む」および「含有する」という用語は、非限定的であることを意図しており、追加の要素または工程の包摂も可能であることを表している。範囲が指定されている場合、両端点を包含する。さらに、特に記載のない限り、または文脈および当業者の知見から明らかでない限り、範囲として表される値は、本発明の別の実施形態で指定された範囲内の任意の具体値または部分範囲を、文脈から特に明示されない限り、その範囲の下限の単位の１０分の１までと想定することができる。
【0363】
本明細書で参照される、申請特許、公開特許出願、学会誌の記事、および他の刊行物の開示全体が参照により組み込まれる。組み込まれた参照の情報が本明細書と矛盾する場合、本明細書を優先するものとする。先行技術の範囲内である本発明のいずれか特定の実施形態が、特許請求範囲のいずれか１項以上から明示的に除外される場合がある。そのような実施形態が当業者に公知であるとみなされるとき、除外について本明細書に明示的な記載がなくとも、それらが除外されてもよい。先行技術の有無に関わらず、本発明のいずれか特定の実施形態を、理由を問わず、任意の請求項から除外することができる。
【0364】
当業者は、本明細書に記載される具体的な実施形態に対する多くの等価物を理解しているか、または日常的な実験のみを用いて確認できるはずである。本明細書に記載の本発明の実施形態の範囲は、上記の説明に限定されることを意図するものではなく、添付の特許請求の範囲に記載される通りである。以下の特許請求の範囲で定義される本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、この説明に対して種々の変更および改変がなされ得ることが当業者には明らかであろう。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図3E】
【図3F】
【図3G】
【図4】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2021-03-24
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
治療を必要とする対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）を、毒性タンパク質を除去または分解できる有効量のプロテアーゼと接触させることを含む、ＣＳＦ中の毒性タンパク質の存在を特徴とする神経障害の管理方法。
【請求項2】
前記毒性タンパク質が、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、およびＦＵＳからなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項3】
前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項4】
前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、およびカリクレイン－６からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項5】
前記プロテアーゼが、固体基材に固定化されている、請求項１記載の方法。
【請求項6】
前記固体基材が、多孔質固体基材および架橋樹脂からなる群より選択される、請求項５記載の方法。
【請求項7】
前記対象のＣＳＦから前記毒性タンパク質を検出する工程をさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項8】
前記検出する工程が接触させる工程の前に行われ、それによって前記対象が治療に適しているかを特定する、請求項７記載の方法。
【請求項9】
前記毒性タンパク質がタウである、請求項１記載の方法。
【請求項10】
前記タウが、タンパク質二量体、タンパク質オリゴマー、もしくはタンパク質凝集体の形態で存在するか、または過剰リン酸化されている、請求項９記載の方法。
【請求項11】
前記接触が、それを必要とする対象のＣＳＦを原位置で接触させることを含む、請求項１記載の方法。
【請求項12】
内部を形成するハウジングと、
前記内部の中にあるプロセアーゼと
を含むデバイスであって、
前記プロテアーゼは、それを必要とする対象の脳脊髄液（「ＣＳＦ」）中の毒性タンパク質を除去または分解できる有効量で存在する、デバイス。
【請求項13】
大きな生体分子を除去する分級フィルターをさらに含む、請求項１２記載のデバイス。
【請求項14】
前記ＣＳＦの流れを生成するように構成された少なくとも１つのポンプをさらに含む、請求項１２記載のデバイス。
【請求項15】
前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、およびカリクレイン－６からなる群より選択される、請求項１２記載のデバイス。
【請求項16】
前記毒性タンパク質が、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、およびＦＵＳからなる群より選択される、請求項１２記載のデバイス。
【請求項17】
前記対象が、神経障害を有しており、前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群より選択される、請求項１２記載のデバイス。
【請求項18】
前記対象に埋め込まれる、請求項１７記載のデバイス。
【請求項19】
前記対象のくも膜下腔に埋め込まれる、請求項１８記載のデバイス。
【請求項20】
基材と、
前記基材に固定化されたプロテアーゼと
を含む装置であって、
前記プロテアーゼは、それを必要とする対象の脳脊髄液（「ＣＳＦ」）中の毒性タンパク質を除去または分解するように構成されている、装置。
【請求項21】
大きな生体分子を除去する分級フィルターをさらに含む、請求項２０記載の装置。
【請求項22】
前記ＣＳＦの流れを生成するように構成された少なくとも１つのポンプをさらに含む、請求項２０記載の装置。
【請求項23】
前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、およびカリクレイン－６からなる群より選択される、請求項２０記載の装置。
【請求項24】
前記毒性タンパク質が、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、およびＦＵＳからなる群より選択される、請求項２０記載の装置。
【請求項25】
前記対象が、神経障害を有しており、前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群より選択される、請求項２０記載の装置。
【請求項26】
固体基材に固定化されたプロテアーゼを含む組成物であって、前記プロテアーゼは、神経障害を有する対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）中の毒性タンパク質を分解または除去できる、組成物。
【請求項27】
前記プロテアーゼが、トリプシン、エラスターゼ、カテプシンＧ、カリクレイン－５、およびカリクレイン－６からなる群より選択される、請求項２６記載の組成物。
【請求項28】
前記毒性タンパク質が、タウ、α－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、およびＦＵＳからなる群より選択される、請求項２６記載の組成物。
【請求項29】
前記神経障害が、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、染色体１７に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、リティコ・ボディグ病、神経節膠腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群より選択される、請求項２６記載の組成物。
【請求項30】
前記固体基材が、多孔質固体基材および架橋樹脂からなる群より選択される、請求項２６記載の組成物。
【請求項31】
前記毒性タンパク質がタウである、請求項２６記載の組成物。
【国際調査報告】