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特表2022-511234新規なｐ６２リガンド化合物、これを含むタンパク質異常疾患の予防、改善または治療用組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-01-31
(54)【発明の名称】新規なｐ６２リガンド化合物、これを含むタンパク質異常疾患の予防、改善または治療用組成物
(51)【国際特許分類】
C07C 217/58 20060101AFI20220124BHJP
C07C 279/12 20060101ALI20220124BHJP
C07C 229/20 20060101ALI20220124BHJP
C07C 237/06 20060101ALI20220124BHJP
C07C 275/24 20060101ALI20220124BHJP
C07C 235/08 20060101ALI20220124BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20220124BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20220124BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220124BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220124BHJP
A61P 25/08 20060101ALI20220124BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20220124BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20220124BHJP
A61P 25/14 20060101ALI20220124BHJP
A61P 25/02 20060101ALI20220124BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20220124BHJP
A61K 31/137 20060101ALI20220124BHJP
A61K 31/155 20060101ALI20220124BHJP
A61K 31/17 20060101ALI20220124BHJP
A61K 31/165 20060101ALI20220124BHJP
A61K 31/198 20060101ALI20220124BHJP
A61K 31/16 20060101ALI20220124BHJP
A23L 33/10 20160101ALI20220124BHJP
【ＦＩ】
C07C217/58 CSP
C07C279/12
C07C229/20
C07C237/06
C07C275/24
C07C235/08
A61P25/28
A61P27/02
A61P3/10
A61P43/00 105
A61P25/08
A61P25/16
A61P9/10
A61P25/14
A61P25/02
A61P21/00
A61K31/137
A61K31/155
A61K31/17
A61K31/165
A61K31/198
A61K31/16
A23L33/10
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021503886
(86)(22)【出願日】2019-07-24
(85)【翻訳文提出日】2021-01-22
(86)【国際出願番号】 KR2019009204
(87)【国際公開番号】W WO2020022784
(87)【国際公開日】2020-01-30
(31)【優先権主張番号】62/702,473
(32)【優先日】2018-07-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】520373796
【氏名又は名称】プロテック・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＰＲＯＴＥＣＨ ＩＮＣ．
【住所又は居所原語表記】＃４０８， １０３， ＤＡＥＨＡＫ‐ＲＯ， ＪＯＮＧＮＯ‐ＧＵ， ＳＥＯＵＬ ０３０８０， ＲＥＰＵＢＬＩＣ ＯＦ ＫＯＲＥＡ
(74)【代理人】
【識別番号】110001818
【氏名又は名称】特許業務法人Ｒ＆Ｃ
(72)【発明者】
【氏名】クォン，ヨン・テ
(72)【発明者】
【氏名】ジ，チャン・フン
(72)【発明者】
【氏名】ガニピセッティ，スリニヴァスラオ
(72)【発明者】
【氏名】キム，ヒ・イオン
(72)【発明者】
【氏名】ムン，ス・ラン
(72)【発明者】
【氏名】ジョン，チャン・フン
(72)【発明者】
【氏名】ジョン，ウィ・ジョン
(72)【発明者】
【氏名】ソン，ギ・ウン
【テーマコード（参考）】
4B018
4C206
4H006
【Ｆターム（参考）】
4B018LB01
4B018LB02
4B018LB06
4B018LB07
4B018LB08
4B018LB10
4B018MD08
4B018MD18
4B018ME14
4B018MF10
4B018MF14
4C206AA01
4C206AA02
4C206AA03
4C206FA11
4C206FA53
4C206GA04
4C206GA07
4C206GA22
4C206GA28
4C206HA29
4C206HA31
4C206KA01
4C206KA17
4C206MA01
4C206MA04
4C206NA14
4C206ZA06
4C206ZA15
4C206ZA16
4C206ZA22
4C206ZA33
4C206ZA94
4C206ZB21
4C206ZC35
4H006AA01
4H006AB20
4H006BJ50
4H006BM30
4H006BM71
4H006BM72
4H006BP30
4H006BU38
4H006RA10
(57)【要約】
本発明は、新規なｐ６２リガンド化合物、その立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグ、これを有効性分として含む変形タンパク疾患の予防または治療用薬学的または食品組成物に関し、本発明によるｐ６２リガンド化合物は、細胞内選択的オートファジーを活性化して体内タンパク質、小器官および凝集体を選択的に除去することによって、多様なタンパク質異常疾患の予防、改善または治療用薬学的組成物として有用に使用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式１で表されるｐ６２リガンド化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグ。【化1】
Ｗは炭素数６～１０のアリールであり、
ｍは０～２の整数であり、
ＲａはＲ１または－ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または－（ＣＨ２）ｎ１－Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ１は１～６の整数であり、
Ｒｂは－ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または－（ＣＨ２）ｎ２－Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ２は１～６の整数であり、
Ｒｃは－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｎ３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、炭素数１～６のアルキル、－ＣＨ（Ｒ３）－ＣＯＯ－Ｒ４、または－ＣＨ（ＣＯＯ－Ｒ４）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯ（ＣＨ２）ｎ４－ＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＯＮＨＲ４であり、
ｎ３は２～４の整数であり、
ｎ４は１～４の整数であり、
Ｒ３は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒ４は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒｄは水素、ハロゲン、炭素数１～４のアルコキシまたは炭素数１～４のアルキルであり、
この時、前記化学式１の化合物は、下記化合物からなる群の中から選択される化合物でない。
１）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０５）
２）２－（３，４－ジフェネトキシベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－２２０５）
３）２－（３，４－ビス（３－フェニルプロポキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－３３０５）
４）２－（３，４－ビス（４－フェニルブトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－４４０５）
５）２－（ベンジルオキシ）－５－（（２－ヒドロキシエチルアミノ）メチル）フェノール（ＹＴＫ－１００５）
６）２－（４－（ベンジルオキシ）－３－フェネトキシベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－１２０５）
７）２－（４－（ベンジルオキシ）－３－（３－フェニルプロポキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－１３０５）
８）２－（４－（ベンジルオキシ）－３－（４－フェニルブトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－１４０５）
９）２－（（３－（フェネトキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－２０５）
１０）２－（（３－（３－フェニルプロポキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－３０５）
１１）２－（３，４－ビス（（４－クロロフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－１）
１２）２－（３，４－ビス（（４－フルオロフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－２）
１３）２－（３，４－ビス（（４－ジメチルアミノフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－３）
１４）２－（３，４－ビス（４－ニトロフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－４）
１５）２－（３，４－ビス（４－メトキシフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－５）
１６）２－（３，４－ビス（４－ヒドロキシフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－６）
１７）２－（（３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－７）
１８）２－（（３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－８）
１９）２－（（３－（（４－ニトロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－１０）
２０）２－（３，４－ジベンジルオキシ）ベンジルアミノ）プロパノール（ＹｔＫ－１１－Ａ５４）
２１）２－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１０８）
２２）２－（（２－（（３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－７）；および
２３）２－（（２－（（３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－８）。
【請求項2】
前記Ｗはフェニルである、請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグ。
【請求項3】
前記Ｒａは水素、または－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｒ’１であり、Ｒ’１は非置換；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであり、ｎ１は１～４の整数である、請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグ。
【請求項4】
前記Ｒｂはヒドロキシ、または－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｒ’２であり、Ｒ’２は非置換；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであり、ｎ２は１～４の整数である、請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグ。
【請求項5】
前記Ｒｃは－（ＣＨ２）２－ＯＨ、－（ＣＨ２）２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、メチル、エチル、イソプロピル、－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ３、－ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ３、－ＣＯ（ＣＨ２）ｎ４－ＯＲ３、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＲ３、または－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＯＮＨＲ３であり、ｎ３は２～３の整数であり、ｎ４は１～２の整数であり、Ｒ３は水素または炭素数１～２のアルキルであり、Ｒｄは水素、ハロゲン、炭素数１～２のアルコキシまたは炭素数１～２のアルキルである、請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグ。
【請求項6】
前記化学式１の化合物が下記化合物からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグ。１）２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１０５）；
２）２－（（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０８）；
３）１－（２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹｔＫ－１０７）；
４）１－（２－（（３－（フェネトキシベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹｔＫ－２０７）；
５）２－（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エタン－１－オール（ＹｔＫ－１１－Ａ７６）；
６）１－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－３－（２－ヒドロキシエチル）ウレア（ＡＴＢ１００４１）；
７）Ｎ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－２－ヒドロキシアセトアミド（ＡＴＢ１００４２）；
８）（Ｒ）－２－アミノ－３－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）プロパン酸（ＡＴＢ１００４３）；
９）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）アセトアミド（ＡＴＢ１００４４）；
１０）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－メトキシベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４５）；および
１１）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４６）。
【請求項7】
下記化学式１ａの化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む、タンパク質異常疾患の予防、改善または治療用薬学的組成物。【化2】
Ｗは炭素数６～１０のアリールであり、
ｍは０～２の整数であり、
ＲａはＲ１または－ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または－（ＣＨ２）ｎ１－Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換、またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ１は１～６の整数であり、
Ｒｂは－ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または－（ＣＨ２）ｎ２－Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ２は１～６の整数であり、
Ｒｃは－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｎ３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、炭素数１～６のアルキル、－ＣＨ（Ｒ３）－ＣＯＯ－Ｒ４、または－ＣＨ（ＣＯＯ－Ｒ４）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯ（ＣＨ２）ｎ４－ＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＯＮＨＲ４であり、
ｎ３は２～４の整数であり、
ｎ４は１～４の整数であり、
Ｒ３は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒ４は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒｄは水素、ハロゲン、炭素数１～４のアルコキシまたは炭素数１～４のアルキルである。
【請求項8】
前記タンパク質異常疾患は、神経変性疾患、アルファ１－アンチトリプシン欠乏症、角膜症、色素性網膜症、２型糖尿病および嚢胞性線維症である、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項9】
前記神経変性疾患は、ライム病（Ｌｙｍｅ ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｉｓ）、致死性家族性不眠症（Ｆａｔａｌ ｆａｍｉｌｉａｌ ｉｎｓｏｍｎｉａ）、クロイツフェルト－ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｋｏｂ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＪＤ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）、認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ）、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、てんかん（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、ハンチントン病（ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、ピック病（Ｐｉｃｋｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、ＡＬＳ）脊髄小脳失調症、その他ポリ－Ｑ疾患、遺伝性脳アミロイド血管病症、家族性アミロイド多発神経病症、１次全身アミロイド症（ＡＬアミロイド症）、反応性全身アミロイド症（ＡＡアミロイド症）、アルファ１－アンチトリプシン欠乏症、アレキサンダー病、角膜症、色素性網膜症、２型糖尿病、嚢胞性線維症、注射－局所化アミロイド症、ベータ－２マイクログロブリンアミロイド症、遺伝性非－神経病アミロイド症、およびフィンランド遺伝性全身アミロイド症からなる群から選択される１種以上である、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項10】
下記化学式１ａの化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む、変性タンパク質のオートファジー活性増加用の薬学的組成物。【化3】
Ｗは炭素数６～１０のアリールであり、
ｍは０～２の整数であり、
ＲａはＲ１または－ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または－（ＣＨ２）ｎ１－Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ１は１～６の整数であり、
Ｒｂは－ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または－（ＣＨ２）ｎ２－Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ２は１～６の整数であり、
Ｒｃは－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｎ３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、炭素数１～６のアルキル、－ＣＨ（Ｒ３）－ＣＯＯ－Ｒ４、または－ＣＨ（ＣＯＯ－Ｒ４）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯ（ＣＨ２）ｎ４－ＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＯＮＨＲ４であり、
ｎ３は２～４の整数であり、
ｎ４は１～４の整数であり、
Ｒ３は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒ４は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒｄは水素、ハロゲン、炭素数１～４のアルコキシまたは炭素数１～４のアルキルである。
【請求項11】
前記タンパク質は、癌誘発タンパク質、プリオンタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、アルファ－シヌクレイン、スーパーオキシドディスムターゼ、タウ、免疫グロブリン、アミロイド－Ａ、トランスサイレチン、ベータ２－マイクログロブリン、シスタチンＣ、アポリポタンパク質（Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅ）Ａ１、ＴＤＰ－４３、島アミロイドポリペプチド（ｉｓｌｅｔ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、ＡＮＦ、ゲルゾリン（ｇｅｌｓｏｌｉｎ）、インスリン、リゾチーム、フィブリノゲン、ハンチンチン（ｈｕｎｔｉｎｇｔｉｎ）アルファ－１－アンチトリプシンＺ、クリスタリン（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ）、ｃ９オープンリーディングフレーム７２（ｃ９ｏｒｆ７２）、グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子タンパク質（ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ロドプシン（ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ）およびアタキシンと、Ｐｏｌｙ－Ｑ延伸を有するその他タンパク質からなる群から選択される１種以上である、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項12】
下記化学式１ａの化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグを含む、タンパク質異常疾患の予防または改善用食品組成物。【化4】
Ｗは炭素数６～１０のアリールであり、
ｍは０～２の整数であり、
ＲａはＲ１または－ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または－（ＣＨ２）ｎ１－Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ１は１～６の整数であり、
Ｒｂは－ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または－（ＣＨ２）ｎ２－Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換、またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ２は１～６の整数であり、
Ｒｃは－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｎ３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、炭素数１～６のアルキル、－ＣＨ（Ｒ３）－ＣＯＯ－Ｒ４、または－ＣＨ（ＣＯＯ－Ｒ４）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯ（ＣＨ２）ｎ４－ＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＯＮＨＲ４であり、
ｎ３は２～４の整数であり、
ｎ４は１～４の整数であり、
Ｒ３は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒ４は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒｄは水素、ハロゲン、炭素数１～４のアルコキシまたは炭素数１～４のアルキルである。
【請求項13】
前記タンパク質異常疾患は、神経変性疾患、アルファ１－アンチトリプシン欠乏症、角膜症、色素性網膜症、２型糖尿病および嚢胞性線維症である、請求項１２に記載の食品組成物。
【請求項14】
前記神経変性疾患は、ライム病（Ｌｙｍｅ ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｉｓ）、致死性家族性不眠症（Ｆａｔａｌ ｆａｍｉｌｉａｌ ｉｎｓｏｍｎｉａ）、クロイツフェルト－ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｋｏｂ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＪＤ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）、認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ）、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、てんかん（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、ハンチントン病（ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、ピック病（Ｐｉｃｋｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、ＡＬＳ）脊髄小脳失調症、その他、ポリ－Ｑ疾患、遺伝性脳アミロイド血管病症、家族性アミロイド多発神経病症、１次全身アミロイド症（ＡＬアミロイド症）、反応性全身アミロイド症（ＡＡアミロイド症）、アルファ１－アンチトリプシン欠乏症、アレキサンダー病、角膜症、色素性網膜症、２型糖尿病、嚢胞性線維症、注射－局所化アミロイド症、ベータ－２マイクログロブリンアミロイド症、遺伝性非－神経病アミロイド症、およびフィンランド遺伝性全身アミロイド症からなる群から選択される１種以上である、請求項１３に記載の食品組成物。
【請求項15】
請求項１～６のいずれか一項に記載のｐ６２リガンド化合物を細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、タンパク質凝集体の分解を増大させる方法。
【請求項16】
請求項１～６のいずれか一項に記載のｐ６２リガンド化合物を細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、選択的オートファジーの活性化方法。
【請求項17】
請求項１～６のいずれか一項に記載のｐ６２リガンド化合物を個体に投与する段階を含む、細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、タンパク質異常疾患を予防、改善または治療する方法。
【請求項18】
前記タンパク質異常疾患は、神経変性疾患、アルファ１－アンチトリプシン欠乏症、角膜症、色素性網膜塩、２型糖尿病および嚢胞性線維症である、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
前記神経変性疾患は、ライム病（Ｌｙｍｅ ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｉｓ）、致死性家族性不眠症（Ｆａｔａｌ ｆａｍｉｌｉａｌ ｉｎｓｏｍｎｉａ）、クロイツフェルト－ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｋｏｂ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＪＤ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）、認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ）、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、てんかん（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、ハンチントン病（ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、ピック病（Ｐｉｃｋｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、ＡＬＳ）脊髄小脳失調症、その他、ポリ－Ｑ疾患、遺伝性脳アミロイド血管病症、家族性アミロイド多発神経病症、１次全身アミロイド症（ＡＬアミロイド症）、反応性全身アミロイド症（ＡＡアミロイド症）、アルファ１－アンチトリプシン欠乏症、アレキサンダー病、角膜症、色素性網膜症、２型糖尿病、嚢胞性線維症、注射－局所化アミロイド症、ベータ－２マイクログロブリンアミロイド症、遺伝性非－神経病アミロイド症およびフィンランド遺伝性全身アミロイド症からなる群から選択される１種以上である、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、新規なｐ６２リガンド化合物、これを含むタンパク質異常疾患の予防または治療用薬学的または食品組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
Ｎ－末端則（Ｎ－ｅｎｄ ｒｕｌｅ）経路は特定のタンパク質のＮ－末端を分解信号として用いるタンパク質分解システムである（図１）。Ｎ－末端則分解信号には、タイプ１であるＮ－末端アルギニン（Ｎｔ－Ａｒｇ）、リシン（Ｎｔ－Ｌｙｓ）およびヒスチジン（Ｎｔ－Ｈｉｓ）を有する塩基残基と、タイプ２であるフェニルアラニン（Ｎｔ－Ｐｈｅ）、ロイシン（Ｎｔ－Ｌｅｕ）、トリプトファン（Ｎｔ－Ｔｒｐ）、チロシン（Ｎｔ－Ｔｙｒ）およびイソロイシン（Ｎｔ－Ｉｌｅ）の疎水性残基とがある。これらのＮ－末端残基は特定の認識要素（Ｎ－ｒｅｃｏｇｎｉｎｓ；Ｎ－レコグニン）のリガンド（Ｎ－リガンドと名付ける）に結合する。
【0003】
本発明者らは、かつて知られているＮ－レコグニン、すなわち、ＵＢＲ１、ＵＢＲ２、ＵＢＲ４、およびＵＢＲ５を最初に発見またはクローニングし、これらが基質認識ドメインとしてＵＢＲ ｂｏｘを有していることを究明した（Ｔａｓａｋｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ２５，７１２０－３６（２００５）：非特許文献１）。また、ＵＢＲ ｂｏｘがＮ－末端Ａｒｇ残基などのｔｙｐｅ－１ Ｎ－末端則リガンド（Ｎｔ－Ａｒｇ、Ｎｔ－Ｌｙｓ、Ｎｔ－Ｈｉｓ）を結合して基質を認識し、基質にユビキチン鎖を付加したことを究明した。ＵＢＲ１とＵＢＲ２がさらにＮ－ドメインを有しており、Ｎ－ドメインはｔｙｐｅ－２ Ｎ－末端則リガンド（Ｎｔ－Ｔｒｐ、Ｎｔ－Ｐｈｅ、Ｎｔ－Ｔｙｒ、Ｎｔ－Ｌｅｕ、Ｎｔ－Ｉｌｅ）と結合するのに重要な役割を果たすとの事実も究明した（Ｓｒｉｒａｍ，Ｓ．Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｂ．Ｙ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １２，７３５－４７（２０１１）：非特許文献２）。Ｎ－レコグニンがＮ－末端則リガンドと結合することによって作られたユビキチン化された基質は、プロテアソームに伝達されて短いペプチドに分解される。この過程で、特定のＮ－末端残基（Ｎｔ－Ａｒｇ、Ｎｔ－Ｈｉｓ、Ｎｔ－Ｌｙｓ、Ｎｔ－Ｔｒｐ、Ｎｔ－Ｐｈｅ、Ｎｔ－Ｔｙｒ、Ｎｔ－Ｌｅｕ、Ｎｔ－Ｌｅｕ）は、Ｎ－レコグニンがＮ－末端則基質をターゲッティングする時に必要な水素結合（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｂｏｎｄ）を大部分提供するため、結合に必ず必要な決定因子である（Ｓｒｉｒａｍ，Ｓ．Ｍ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １７，１１６４－５（２０１０）：非特許文献３）。
【0004】
細胞内にミスフォールド（ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ）タンパク質が長時間放置されると、凝集して（ａｇｇｒｅｇａｔｅｄ）プロテアソームを阻害するか、または他の細胞機能を低下するなど細胞毒性物質になるため、ユビキチンリガーゼ（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ ｌｉｇａｓｅ）がユビキチン化させることでプロテアソームに伝達させて分解される（Ｊｉ，Ｃ．Ｈ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌｓ ４０，４４１－４４９（２０１７）：非特許文献４）。正常な細胞ではこのような過程が円滑で変性タンパク質による被害を最小化するのに対し、老人の神経細胞は当該過程が遅くなってユビキチン化された変性タンパク質が累積され、これらの余剰タンパク質ゴミは再び凝集体に転換される（Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ，Ａ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ４７，ｅ１４７（２０１５）：非特許文献５）。また、タンパク質異常疾患の中でも、ハンチントン病、パーキンソン病、ヒト狂牛病、ルーゲーリック病などの退行性脳疾患を病んでいる患者の神経細胞には特定の突然変異タンパク質が凝集体に変形する性質が強くて、前記説明したプロテアソームで分解されない。なぜなら、プロテアソームは内径が１３オングストローム（ａｎｇｓｔｒｏｍ）程度と狭いため、変性タンパク質がほどけなければならない（ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ）が、タンパク質が凝集するとほどけないからである。
【0005】
一方、オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）は、ユビキチン－プロテアソームシステム（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ ｓｙｓｔｅｍ）とともに細胞内の主要タンパク質分解システムである。オートファジーは、老化したり本来の機能を果たせなくなった細胞小器官、および損傷するか、またはミスフォールドタンパク質を分解することによって、細胞の恒常性と遺伝的な安定性を維持するために欠かせないタンパク質分解過程である（Ｊｉ，Ｃ．Ｈ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌｓ ４０，４４１－４４９（２０１７）：非特許文献４）。特に、細胞質に変性タンパク質凝集体が累積される場合は細胞毒性物質になるため、これらをオートファジーが受け入れて分解しなければならない。オートファジーの機序は、大きく、マクロオートファジー（ｍａｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ）、マイクロオートファジー（ｍｉｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ）とシャペロン媒介オートファジー（ｃｈａｐｅｒｏｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ）に分けられ、どのような目的のために細胞内基質を分解するかによって、非選択的オートファジー（ｂｕｌｋ ａｕｔｏｐｈａｇｙ）と選択的オートファジー（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｕｔｏｐｈａｇｙ）に分けられる（Ｄｉｋｉｃ，Ｉ．＆Ｅｌａｚａｒ，Ｚ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９，３４９－３６４（２０１８）：非特許文献６）。このうち、選択的オートファジーとシャペロン媒介オートファジーは、細胞内機能異常小器官や不要なタンパク質の選択的分解を起こす。選択的オートファジーを誘導することで、悪性病因タンパク質の蓄積および機能不能小器官ベースの疾患に対する新規治療法の開発が、現在新たなパラダイムを構築している状況である。ｐ６２／ＳＱＳＴＭ１／Ｓｅｑｕｅｓｔｏｓｏｍｅ－１タンパク質は、選択的オートファジー機序において媒介物のオートファゴソームの形成開始と内容物の伝達に重要である。この時、ｐ６２／ＳＱＲＳＭ１／Ｓｅｑｕｅｓｔｏｓｏｍｅ－１が変性タンパク質およびその凝集体と結合して、これらをオートファゴソーム（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）に伝達する。変性タンパク質をオートファゴソームに伝達する時、核心的な過程としてｐ６２が自己オリゴマー化（ｓｅｌｆ－ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を経る（Ｊｉ，Ｃ．Ｈ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌｓ ４０，４４１－４４９（２０１７）：非特許文献４）。この時、変性タンパク質は一緒に濃縮されて体積が減少し、オートファジーによる分解が容易になる。ｐ６２が自己オリゴマー化を媒介するのはＰＢ１ドメインであるが、その調節メカニズムはよく知られていない。オートファゴソームに伝達された変性タンパク質－ｐ６２結合体は、オートファゴソームがリソソームと結合するにつれ、リソソームの酵素によって分解される。このようなメカニズムにより、オートファジーは損傷したタンパク質および細胞小器官の細胞内変動による細胞恒常性の維持のために重要であるが、オートファジーが低下する場合、変性タンパク質（ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）の蓄積と凝集がもたらされ、これによってタンパク質異常疾患（ｐｒｏｔｅｉｎｏｐａｔｈｙ）が発生したりもする（Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ，Ａ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ４７，ｅ１４７（２０１５）：非特許文献５）。本発明の核心的な技術は、タンパク質異常疾患の原因になる変性タンパク質やその凝集体を効果的に除去する方法を提供することである。このために、多様な生物学的経路に広範囲な影響を及ぼす非選択的オートファジーは活性化せず、選択的オートファジーのみ活性化することが必要である。
【0006】
タンパク質異常疾患を治療するためにオートファジーを活性化する研究が活発に進められてきている。非選択的オートファジーを平常時に抑制する調節因子がｍＴＯＲであるが、ｍＴＯＲ阻害剤を用いてオートファジーを活性化する方法が最も広範囲に使用される（Ｊｕｎｇ，Ｃ．Ｈ．，Ｒｏ，Ｓ．Ｈ．，Ｃａｏ，Ｊ．，Ｏｔｔｏ，Ｎ．Ｍ．＆Ｋｉｍ，Ｄ．Ｈ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５８４，１２８７－９５（２０１０）：非特許文献７）。具体的には、ラパマイシンを用いてＡＰＰを過剰発現するＡＤ動物モデルでアミロイドベータ（Ａｂ）およびタウ（ｔａｕ）を除去すると同時に認知力を増進させ（Ｃａｃｃａｍｏ，Ａ．，Ｍａｊｕｍｄｅｒ，Ｓ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ａ．，Ｓｔｒｏｎｇ，Ｒ．＆Ｏｄｄｏ，Ｓ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８５，１３１０７－２０（２０１０）：非特許文献８）、ｔａｕを過剰発現するＡＤ動物モデルでｔａｕを除去し（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｎａｖａｒｒｏ，Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ ３９，４２３－３８（２０１０）：非特許文献９）、ＰＤマウスモデルで過剰発現した突然変異アルファ－シヌクレイン（α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ）タンパク質凝集体を除去した（Ｗｅｂｂ，Ｊ．Ｌ．，Ｒａｖｉｋｕｍａｒ，Ｂ．，Ａｔｋｉｎｓ，Ｊ．，Ｓｋｅｐｐｅｒ，Ｊ．Ｎ．＆Ｒｕｂｉｎｓｚｔｅｉｎ，Ｄ．Ｃ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８，２５００９－１３（２００３）：非特許文献１０）。ラパマイシン類似物質のＣＣＩ－７７９を用いて前記ＨＤマウスにおいてハンチンチン凝集体を効果的に除去し、動物の行動や認知力も改善させることを確認した（Ｒａｖｉｋｕｍａｒ，Ｂ．，Ｄｕｄｅｎ，Ｒ．＆Ｒｕｂｉｎｓｚｔｅｉｎ，Ｄ．Ｃ．，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ １１，１１０７－１７（２００２）：非特許文献１１）。しかし、ｍＴＯＲがＮＦ－ｋＢなどの非常に多様な細胞内経路において非常に重要な役割を果たし、よって、タンパク質異常疾患の変性タンパク質凝集体を除去する優れた活性を示しているにもかかわらず、非選択的オートファジーを調節するｍＴＯＲを薬物ターゲットとすることが知られたこれらのオートファジー活性剤を治療剤として使用するには限界があった。
【0007】
以上のように、現在、大部分のタンパク質異常疾患に対する治療剤は皆無であり、主な原因となる変性タンパク質の除去のためのユビキチンリガーゼリガンドの場合、変性タンパク質が凝集する場合は除去が困難であり、また、非選択的オートファジー活性剤として最も多く使用される化合物であるｍＴＯＲ阻害剤は、オートファジーの調節以外にも、多様な外部環境からの刺激に対して細胞内の全般的な遺伝子発現を調節する広範囲な役割を果たすため、治療剤としては不適であるという不都合があった。したがって、非選択的オートファジーの調節因子であるｍＴＯＲの活性を低下することなく、選択的オートファジーの核心調節因子であるｐ６２を活性化して変性タンパク質凝集体を除去する方法の開発が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0008】
【非特許文献1】Ｔａｓａｋｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ２５，７１２０－３６（２００５）
【非特許文献2】Ｓｒｉｒａｍ，Ｓ．Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｂ．Ｙ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １２，７３５－４７（２０１１）
【非特許文献3】Ｓｒｉｒａｍ，Ｓ．Ｍ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １７，１１６４－５（２０１０）
【非特許文献4】Ｊｉ，Ｃ．Ｈ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌｓ ４０，４４１－４４９（２０１７）
【非特許文献5】Ｃｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ，Ａ．＆ Ｋｗｏｎ，Ｙ．Ｔ．，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ４７，ｅ１４７（２０１５）
【非特許文献6】Ｄｉｋｉｃ，Ｉ．＆Ｅｌａｚａｒ，Ｚ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９，３４９－３６４（２０１８）
【非特許文献7】Ｊｕｎｇ，Ｃ．Ｈ．，Ｒｏ，Ｓ．Ｈ．，Ｃａｏ，Ｊ．，Ｏｔｔｏ，Ｎ．Ｍ．＆Ｋｉｍ，Ｄ．Ｈ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ５８４，１２８７－９５（２０１０）
【非特許文献8】Ｃａｃｃａｍｏ，Ａ．，Ｍａｊｕｍｄｅｒ，Ｓ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ａ．，Ｓｔｒｏｎｇ，Ｒ．＆Ｏｄｄｏ，Ｓ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８５，１３１０７－２０（２０１０）
【非特許文献9】Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｎａｖａｒｒｏ，Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ ３９，４２３－３８（２０１０）：非特許文献１１
【非特許文献10】Ｗｅｂｂ，Ｊ．Ｌ．，Ｒａｖｉｋｕｍａｒ，Ｂ．，Ａｔｋｉｎｓ，Ｊ．，Ｓｋｅｐｐｅｒ，Ｊ．Ｎ．＆Ｒｕｂｉｎｓｚｔｅｉｎ，Ｄ．Ｃ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８，２５００９－１３（２００３）
【非特許文献11】Ｒａｖｉｋｕｍａｒ，Ｂ．，Ｄｕｄｅｎ，Ｒ．＆Ｒｕｂｉｎｓｚｔｅｉｎ，Ｄ．Ｃ．，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ １１，１１０７－１７（２００２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
上記の背景の下、本発明者らは、ｍＴＯＲ非依存的にオートファジーを活性化する物質を用いてタンパク質異常疾患（ｐｒｏｔｅｉｎｏｐａｔｈｙ）に対する予防および治療剤を開発するために重ねて努力した結果、ｐ６２、より詳しくは、ｐ６２のＺＺドメインと結合するリガンドがＬＣ３と結合し、オートファジーを活性化させて突然変異ハンチンチンやアルファ－シヌクレインなどのタンパク質の悪性凝集体（ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ）などを効果的に除去することによって、多様なタンパク質異常疾患の予防、改善または治療に使用できることを確認して、本発明を完成した。
【0010】
本発明の目的は、ｐ６２タンパク質の活性化およびオリゴマー化を誘発する新規なｐ６２リガンド化合物を提供することである。
【0011】
また、本発明の目的は、前記新規化合物を用いてｐ６２およびｐ６２が結合した変性タンパク質をオートファゴソームに伝達し、最終的にリソソームに伝達して除去する方法を提供することである。
【0012】
本発明の他の目的は、前記新規化合物を用いてｐ６２タンパク質によるマクロオートファジー活性を増大させる方法を提供することである。
【0013】
また、本発明の目的は、前記新規化合物を有効成分として含む変性タンパク質凝集体除去用薬学的または食品組成物を提供することである。
【0014】
本発明のさらに他の目的は、前記新規化合物を有効成分として含むタンパク質異常疾患の予防、改善または治療用薬学的または食品組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0015】
上記の目的を解決するために、本発明は、ｐ６２タンパク質のリガンドとして作用する新規な化合物を提供する。好ましくは、本発明による新規なｐ６２リガンドは、ｐ６２タンパク質のＺＺドメインと結合する。
【0016】
また、本発明は、ｐ６２タンパク質のＺＺドメインと結合するリガンドを有効成分として含有する、神経変性疾患などのタンパク質異常疾患の予防または治療用薬学的組成物、またはタンパク質異常疾患の予防または改善用健康機能食品を提供する。
【0017】
また、本発明は、ｐ６２のＺＺドメインと結合するリガンドを細胞またはｐ６２タンパク質に処理する段階を含む、（１）ｐ６２オリゴマー化および構造的活性化を誘導する方法、（２）ｐ６２のＬＣ３との結合を増大させる方法、（３）ｐ６２のオートファゴソーム（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）への伝達を増大させる方法、（４）オートファジーを活性化する方法、および（５）変性タンパク質凝集体を除去する方法を提供する。
【0018】
本発明では、変性タンパク質凝集体を直接オートファゴソームに伝達するｐ６２を活性化することによって、退行性脳疾患の原因因子である変性タンパク質凝集体を除去する技術を提供する。
【0019】
本発明において、核心的な技術は、ｐ６２とオートファジーを同時に活性化することによって、退行性脳疾患の原因となる変性タンパク質凝集体を効果的に除去することである。
【0020】
本発明の薬物作用機序および核心的な技術は図１にまとめられている。
【0021】
具体的には、図１に示すように、突然変異ハンチンチンやアルファ－シヌクレインなどのタンパク質異常疾患の主な病因タンパク質は、水に溶けない変性体（ｍｉｓｆｏｌｄｅｄ）に変換された後、互いに凝り固まってオリゴマー形態の凝集体に成長する。これらの変性体は、神経細胞において細胞毒性物質として作用しながらさらに成長して、大きなオリゴマーや繊維質（ｆｉｂｒｉｌｌａｒ）凝集体に成長した後、窮極的にインクルージョン（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ）ボディが形成される。前記過程で、ＢｉＰなどの小胞体シャペロン（１）がＡＴＥ１ Ｒ－トランスフェラーゼ（Ｒ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）によるＮ－末端アルギニン化（２）によりＮｔ－Ａｒｇを多量作り出し、以降、アルギニン化されたＢｉＰ（Ｒ－ＢｉＰ）は細胞質に出て変性したハンチンチンやアルファ－シヌクレインと結合する（３）。Ｒ－ＢｉＰのＮｔ－Ａｒｇは、リガンドとしてｐ６２のＺＺドメインに結合する。前記結合によって、平常時には閉じられている不活性形態のｐ６２が開かれた形態に変わり構造的な活性化が誘導されることによって（４）、ＰＢ１およびＬＣ３－結合ドメインが露出する。この活性化によって、ｐ６２のジスルフィドボンド（ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄ）によるオリゴマーおよび高分子量凝集体が形成され（５）、オートファゴソーム標識子であるＬＣ３との結合が増加することによって、最終的にオートリソソームに伝達される（６）。追加的に、Ｎ－末端アルギニンと結合したｐ６２は小胞体膜に移動して、ＰＩ３Ｐで媒介されるオートファゴソーム形成（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）を活性化（７）させることによって、細胞内オートファジーを増加させる（８）。
【0022】
ｐ６２は、本発明者らが提案したオートファジー活性剤の革新的な新薬（ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｃｌａｓｓ）ターゲットである（図１、８）。また、ｐ６２をオートファジー活性剤の開発や退行性脳疾患などの変形蛋白疾患に凝集体除去のための薬物ターゲットとして研究した例は皆無である。
【0023】
オートファジーは、細胞内に不要であったり機能を全うした細胞構成成分を分解したり再利用するのに作用するメカニズムであって、栄養素やエネルギー欠乏などの状態では、エネルギーあるいは生合成過程に用いる代謝産物の生産のために作用できる。オートファジーの機序は、大きく、マクロオートファジー（ｍａｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ）、マイクロオートファジー（ｍｉｃｒｏａｕｔｏｐｈａｇｙ）とシャペロン媒介オートファジー（ｃｈａｐｅｒｏｎｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｕｔｏｐｈａｇｙ）に分けられ、どのような目的のために細胞内基質を分解するかによって、非選択的オートファジー（ｂｕｌｋ ａｕｔｏｐｈａｇｙ）と選択的オートファジー（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｕｔｏｐｈａｇｙ）に分けられる。このうち、選択的オートファジーとシャペロン媒介オートファジーは、細胞内機能異常小器官や不要なタンパク質の選択的分解を起こす。選択的オートファジーを誘導することで、悪性タンパク質の蓄積および機能不能小器官ベースの疾患に対する新規治療法の開発が、現在、新たなパラダイムを構築している状況である。
【0024】
ｐ６２タンパク質は、選択的オートファジー機序において媒介物であるオートファゴソームの形成開始と内容物の伝達に重要である。本発明による新規ｐ６２リガンドの有意なｐ６２活性化は、ｐ６２の自己オリゴマー化を誘発することが観察された。また、このような自己オリゴマー化によるｐ６２のオートファゴソームターゲッティングが増加することからみて、本発明による新規ｐ６２リガンドがｐ６２タンパク質を細胞内オートファジーによるターゲッティングおよび分解を誘導できるとの証拠である。このような結果は、本発明による新規ｐ６２リガンド化合物が既存の抗蛋白体疾患薬物に対するより効果的または補充的な代案として活用できることを意味する。
【0025】
プロタック（ＰＲＯＴＡＣ－ＰＲＯｔｅｏｌｙｓｉｓ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｃｈｉｍｅｒａ）は、ターゲットタンパク質を認識するリガンドとＥ３ユビキチン酵素を認識するリガンドとの化合物キメラである。現存する疾患治療剤のパラダイムはタンパク質酵素の抑制であるので、治療剤のターゲットが不可能なタンパク質に対する新規治療剤の開発が非常に重要な状況である。その観点から、プロタックは、既存の酵素抑制方式でターゲッティングが不可能なタンパク質のユビキチン－プロテアソームシステム下での選択的な分解を可能にすることで魅力的な新規治療剤の開発方法である。しかし、今のところ、プロタックに関する研究は、Ｅ３ユビキチン酵素を認識するリガンドだけを活用することでユビキチン－プロテアソームシステムのみに制限されており、よって、先に言及したプロテアソームシステムにおける変性タンパク質のフォールディングに関する問題点を有している。しかし、本発明による新規ｐ６２リガンドは、細胞内オートファジーを誘発できるだけでなく、ｐ６２と相互作用するカーゴ基質（ｃａｒｇｏ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）タンパク質のオートファゴソーム標的化（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）を誘導可能で、既存の酵素抑制方式で標的化が不可能なタンパク質のオートファジー機序下での選択的な分解を可能にする新規治療剤を提供することができる。
【発明の効果】
【0026】
本発明による新規化合物は、ｐ６２タンパク質のＺＺドメインと結合するリガンドとして作用して、ｐ６２のオートファゴソームへの伝達を増大させ、オートファジーを活性化させて変性タンパク質凝集体を除去するため、多様なタンパク質異常疾患の予防、改善および治療剤としての有用性を有する。
【図面の簡単な説明】
【0027】
【図1】Ｎ－末端法則によってアルギニン化されたタンパク質がｐ６２のＺＺドメインに結合して、細胞内オートファジー活性によりタンパク質などの細胞内物質を分解することを示す模式図である。
【図2】免疫ブロッティング法を利用して、本発明によるｐ６２リガンド化合物（ＹＴ５－１、ＹＴ５－２、ＹＴ５－７、ＹＴ５－８、ＹＴ９－１、ＹＴ９－２、ＹＴ８－２、ＹＴ８－１、ＹＴＫ－１０７、ＹＴＫ－２０７、ＡＴＢ１００４１、ＡＴＢ１００４２、ＡＴＢ１００４３、ＡＴＢ１００４４、ＡＴＢ１００４５、ＡＴＢ１００４６）がｐ６２タンパク質のオリゴマー化活性を増加させる効果を示す結果である。
【図3】免疫ブロッティング法を利用して、本発明によるｐ６２リガンド化合物（ＹＴＫ－ＨＣｌ－１００５、ＹＴＫ－１１０５、ＹＴＫ－１２０５、ＹＴＫ－１３０５、ＹＴＫ－２２０５、ＹＴＫ－３３０５、ＹＴＫ－１０５、ＹＴＫ－２０５、ＹＴＫ－１１０８、ＹＴ５－７、ＹＴ５－８）がオートファジー活性を増大させる効能を示す結果である。
【図4】免疫ブロッティング法を利用して、本発明によるｐ６２リガンド化合物（ＹＴＫ－ＨＣｌ－１００５、ＹＴＫ－ＨＣｌ－１２０５、ＹＴＫ－ＨＣｌ－１３０５、ＹＴＫ－ＨＣｌ－２２０５、ＹＴＫ－ＨＣｌ－３３０５、ＹＴＫ－ＨＣｌ－１１０８、ＹＴＫ－１０５、ＹＴＫ－２０５、ＹＴ－５－１、ＹＴ－５－２、ＹＴ－８－１、ＹＴ－８－２、ＹＴ－９－２、ＹＴＫ－１０７、ＹＴＫ－２０７、ＡＴＢ１００４１、ＡＴＢ１００４２、ＡＴＢ１００４３、ＡＴＢ１００４４、ＡＴＢ１００４５、ＡＴＢ１００４６）がオートファジー活性を増大させる効能を示す結果である。
【図5】免疫ブロッティング法を利用して、対照群化合物（１１０１、１１０２、１１０３、１２０１、１２０２、１２０３、１３０１、１３０２、ＹＴＫ－１１０５－１、４４０２、１４０１、１４０２、２２０１、２２０２）がオートファジー活性を増大させないことを示す結果である。
【図6a】免疫蛍光染色法を利用して、本発明によるｐ６２リガンド化合物（ＹＴＫ－１２０５、ＹＴＫ－１３０５、ＹＴＫ－２２０５、ＹＴＫ－３３０５、ＹＴＫ－１０５、ＹＴＫ－２０５、ＹＴ－５－１、ＹＴ－５－２、ＹＴ－８－１、ＹＴ－８－２、ＹＴ－９－１、ＹＴＫ－１０７、ＹＴＫ－２０７）がｐ６２タンパク質を活性化およびオリゴマー化させた後、オートファゴソームに伝達させ、同時にオートファジー活性を増大させる効能を奏するかを確認した結果である。
【図6b】免疫蛍光染色法を利用して、本発明によるｐ６２リガンド化合物（ＹＴＫ－１２０５、ＹＴＫ－１３０５、ＹＴＫ－２２０５、ＹＴＫ－３３０５、ＹＴＫ－１０５、ＹＴＫ－２０５、ＹＴ－５－１、ＹＴ－５－２、ＹＴ－８－１、ＹＴ－８－２、ＹＴ－９－１、ＹＴＫ－１０７、ＹＴＫ－２０７）がｐ６２タンパク質を活性化およびオリゴマー化させた後、オートファゴソームに伝達させ、同時にオートファジー活性を増大させる効能を奏するかを確認した結果である。
【図7】免疫蛍光染色法を利用して、対照群化合物（ＹＯＫ ＡＬＡ－１１０４、ＹＯＫ Ｒ－Ｇｌｙ－１１０４、ＹＴＫ ＨＣｌ－１００５、ＹＴＫ ＨＣｌ－１１０５－１）がｐ６２タンパク質を活性化およびオリゴマー化させた後、オートファゴソームに伝達させ、同時にオートファジー活性を増大させる効能を奏するかを確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【0028】
以下、本発明を詳細に説明する。
【0029】
本明細書で使用される各基の定義について詳しく説明する。明示しない限り、各基は下記の定義を有する。
【0030】
本明細書において、「ハロゲン」の例は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを含む。
【0031】
本明細書において、「アルキル」は、直鎖または分枝鎖の脂肪族飽和炭化水素基を意味し、好ましくは、炭素数１～６のアルキル、さらに好ましくは、炭素数１～４のアルキルであり得る。このようなアルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、１－エチルプロピル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチルおよび２－エチルブチルを含む。
【0032】
一つの態様として、本発明は、下記化学式１で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、溶媒和物、水和物またはプロドラッグに関する：
上記化学式１中、
Ｗは炭素数６～１０のアリールであり；
ｍは０～２の整数であり；
ＲａはＲ１または－ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または－（ＣＨ２）ｎ１－Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ１は１～６の整数であり；
Ｒｂは－ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または－（ＣＨ２）ｎ２－Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ２は１～６の整数であり；
Ｒｃは－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｎ３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、炭素数１～６のアルキル、－ＣＨ（Ｒ３）－ＣＯＯ－Ｒ４、または－ＣＨ（ＣＯＯ－Ｒ４）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯ（ＣＨ２）ｎ４－ＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＯＮＨＲ４であり、
ｎ３は２～４の整数であり、
ｎ４は１～４の整数であり、
Ｒ３は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒ４は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒｄは水素、ハロゲン、炭素数１～４のアルコキシまたは炭素数１～４のアルキルであり、
この時、前記化学式１の化合物は、また好ましくは、下記化合物からなる群の中から選択される化合物でない：
１）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０５）
２）２－（３，４－ジフェネトキシベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－２２０５）
３）２－（３，４－ビス（３－フェニルプロポキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－３３０５）
４）２－（３，４－ビス（４－フェニルブトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－４４０５）
５）２－（ベンジルオキシ）－５－（（２－ヒドロキシエチルアミノ）メチル）フェノール（ＹＴＫ－１００５）
６）２－（４－（ベンジルオキシ）－３－フェネトキシベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－１２０５）
７）２－（４－（ベンジルオキシ）－３－（３－フェニルプロポキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－１３０５）
８）２－（４－（ベンジルオキシ）－３－（４－フェニルブトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－１４０５）
９）２－（（３－（フェネトキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－２０５）
１０）２－（（３－（３－フェニルプロポキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－３０５）
１１）２－（３，４－ビス（（４－クロロフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－１）
１２）２－（３，４－ビス（（４－フルオロフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－２）
１３）２－（３，４－ビス（（４－ジメチルアミノフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－３）
１４）２－（３，４－ビス（４－ニトロフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－４）
１５）２－（３，４－ビス（４－メトキシフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－５）
１６）２－（３，４－ビス（４－ヒドロキシフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－６）
１７）２－（（３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－７）
１８）２－（（３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－８）
１９）２－（（３－（（４－ニトロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－１０）
２０）２－（３，４－ジベンジルオキシ）ベンジルアミノ）プロパノール（ＹｔＫ－１１－Ａ５４）
２１）２－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１０８）
２２）２－（（２－（（３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－７）；および
２３）２－（（２－（（３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－８）。
【化1】
Ｗは炭素数６～１０のアリールであり；
ｍは０～２の整数であり；
ＲａはＲ１または－ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または－（ＣＨ２）ｎ１－Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ１は１～６の整数であり；
Ｒｂは－ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または－（ＣＨ２）ｎ２－Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ２は１～６の整数であり；
Ｒｃは－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｎ３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、炭素数１～６のアルキル、－ＣＨ（Ｒ３）－ＣＯＯ－Ｒ４、または－ＣＨ（ＣＯＯ－Ｒ４）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯ（ＣＨ２）ｎ４－ＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＯＮＨＲ４であり、
ｎ３は２～４の整数であり、
ｎ４は１～４の整数であり、
Ｒ３は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒ４は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒｄは水素、ハロゲン、炭素数１～４のアルコキシまたは炭素数１～４のアルキルであり、
この時、前記化学式１の化合物は、また好ましくは、下記化合物からなる群の中から選択される化合物でない：
１）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０５）
２）２－（３，４－ジフェネトキシベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－２２０５）
３）２－（３，４－ビス（３－フェニルプロポキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－３３０５）
４）２－（３，４－ビス（４－フェニルブトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－４４０５）
５）２－（ベンジルオキシ）－５－（（２－ヒドロキシエチルアミノ）メチル）フェノール（ＹＴＫ－１００５）
６）２－（４－（ベンジルオキシ）－３－フェネトキシベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－１２０５）
７）２－（４－（ベンジルオキシ）－３－（３－フェニルプロポキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－１３０５）
８）２－（４－（ベンジルオキシ）－３－（４－フェニルブトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴＫ－１４０５）
９）２－（（３－（フェネトキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－２０５）
１０）２－（（３－（３－フェニルプロポキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－３０５）
１１）２－（３，４－ビス（（４－クロロフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－１）
１２）２－（３，４－ビス（（４－フルオロフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－２）
１３）２－（３，４－ビス（（４－ジメチルアミノフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－３）
１４）２－（３，４－ビス（４－ニトロフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－４）
１５）２－（３，４－ビス（４－メトキシフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－５）
１６）２－（３，４－ビス（４－ヒドロキシフェニル）メトキシ）ベンジルアミノ）エタノール（ＹＴ－５－６）
１７）２－（（３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－７）
１８）２－（（３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－８）
１９）２－（（３－（（４－ニトロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－１０）
２０）２－（３，４－ジベンジルオキシ）ベンジルアミノ）プロパノール（ＹｔＫ－１１－Ａ５４）
２１）２－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１０８）
２２）２－（（２－（（３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－７）；および
２３）２－（（２－（（３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－８）。
【0033】
好ましくは、前記Ｗはフェニルであり得る。
【0034】
好ましくは、前記ｎ１は１または２であり得る。
【0035】
好ましくは、前記Ｒａは水素、または－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｒ’１であり得る。
【0036】
好ましくは、前記Ｒ’１は非置換；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであり得る。
【0037】
好ましくは、前記ｎ１は１～４の整数である。
【0038】
好ましくは、前記Ｒｂはヒドロキシ、または－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｒ’２であり得る。
【0039】
好ましくは、前記Ｒ’２は非置換；またはヒドロキシ、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、メトキシ、エトキシ、ニトロ、アミノまたはジメチルアミノで置換されたフェニルであり得る。
【0040】
好ましくは、前記ｎ２は１～４の整数である。
【0041】
好ましくは、前記Ｒｃは－（ＣＨ２）２－ＯＨ、－（ＣＨ２）２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、メチル、エチル、イソプロピル、－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ３、－ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ３、－ＣＯ（ＣＨ２）ｎ４－ＯＲ３、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＲ３、または－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＯＮＨＲ３であり得る。
【0042】
好ましくは、前記ｎ３は２～３の整数である。
【0043】
好ましくは、前記ｎ４は１～２の整数である。
【0044】
好ましくは、前記Ｒ３は水素、または炭素数１～２のアルキルであり得る。
【0045】
好ましくは、前記Ｒ４は水素、または炭素数１～２のアルキルであり得る。
【0046】
好ましくは、前記Ｒｄは水素、ハロゲン、炭素数１～２のアルコキシまたは炭素数１～２のアルキルであり得る。
【0047】
具体的には、前記化学式１で表される化合物の代表的な例は下記の通りである：
１）２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１０５）；
２）２－（（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０８）；
３）１－（２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹｔＫ－１０７）；
４）１－（２－（（３－（フェネトキシベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹｔＫ－２０７）；
５）２－（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エタン－１－オール（ＹｔＫ－１１－Ａ７６）；
６）１－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－３－（２－ヒドロキシエチル）ウレア（ＡＴＢ１００４１）；
７）Ｎ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－２－ヒドロキシアセトアミド（ＡＴＢ１００４２）；
８）（Ｒ）－２－アミノ－３－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）プロパン酸（ＡＴＢ１００４３）；
９）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）アセトアミド（ＡＴＢ１００４４）；
１０）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－メトキシベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４５）；および
１１）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４６）。
１）２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１０５）；
２）２－（（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０８）；
３）１－（２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹｔＫ－１０７）；
４）１－（２－（（３－（フェネトキシベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹｔＫ－２０７）；
５）２－（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エタン－１－オール（ＹｔＫ－１１－Ａ７６）；
６）１－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－３－（２－ヒドロキシエチル）ウレア（ＡＴＢ１００４１）；
７）Ｎ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－２－ヒドロキシアセトアミド（ＡＴＢ１００４２）；
８）（Ｒ）－２－アミノ－３－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）プロパン酸（ＡＴＢ１００４３）；
９）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）アセトアミド（ＡＴＢ１００４４）；
１０）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－メトキシベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４５）；および
１１）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４６）。
【0048】
一方、本発明の化合物は、薬学的に許容可能な塩の形態で存在し得る。前記塩としては、薬学的に許容可能な遊離酸（ｆｒｅｅ ａｃｉｄ）によって形成された酸付加塩が有用である。本発明の用語「薬学的に許容可能な塩」とは、患者に比較的非毒性であり無害な有効作用を有する濃度として、この塩に起因した副作用が化学式１で表される化合物の有利な効能を低下させない前記化合物の任意のすべての有機または無機付加塩を意味する。
【0049】
酸付加塩は、通常の方法、例えば、化合物を過剰の酸水溶液に溶解させ、この塩を水混和性有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、アセトンまたはアセトニトリルを用いて沈殿させて製造する。同モル量の化合物および水中の酸またはアルコール（例、グリコールモノメチルエーテル）を加熱し、次いで、前記混合物を蒸発させて乾燥させるか、または析出した塩を吸引ろ過させることができる。
【0050】
この時、遊離酸としては、有機酸と無機酸を使用することができ、無機酸としては、塩酸、リン酸、硫酸、硝酸、酒石酸などを使用することができ、有機酸としては、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸（ｍａｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、コハク酸、シュウ酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸（ｆｕｍａｒｉｃ ａｃｉｄ）、マンデル酸、プロピオン酸（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、クエン酸（ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄ）、乳酸（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ）、グリコール酸（ｇｌｙｃｏｌｌｉｃ ａｃｉｄ）、グルコン酸（ｇｌｕｃｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタル酸（ｇｌｕｔａｒｉｃ ａｃｉｄ）、グルクロン酸（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、アスパラギン酸、アスコルビン酸、カルボン酸、バニリン酸、ヨウ化水素酸（ｈｙｄｒｏｉｏｄｉｃ ａｃｉｄ）などを使用することができ、これらに限定されない。
【0051】
また、塩基を用いて薬学的に許容可能な金属塩を作ることができる。アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩は、例えば、化合物を過剰のアルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水酸化物溶液中に溶解させ、非溶解化合物塩をろ過した後、ろ液を蒸発、乾燥させて得る。この時、金属塩としては、特に、ナトリウム、カリウム、またはカルシウム塩を製造することが製薬上適合するが、これらに限定されるものではない。また、これに対応する銀塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩を適当な銀塩（例、硝酸銀）と反応させて得ることができる。
【0052】
本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩は、別途に指示されない限り、前記化学式１の化合物に存在し得る酸性または塩基性基の塩を含む。例えば、薬学的に許容可能な塩としては、ヒドロキシ基のナトリウム、カルシウムおよびカリウム塩などが含まれ、アミノ基のその他薬学的に許容可能な塩としては、ヒドロ臭化物、硫酸塩、水素硫酸塩、リン酸塩、水素リン酸塩、二水素リン酸塩、アセテート、スクシネート、シトレート、タートレート、ラクテート、マンデレート、メタンスルホネート（メシレート）およびｐ－トルエンスルホネート（トシレート）塩などがあり、当業界で知られた塩の製造方法により製造できる。
【0053】
本発明の化学式１の化合物の塩としては、薬学的に許容可能な塩として、化学式１の化合物と同等の薬理活性を示す、例えば、ｐ６２のリガンドで細胞内神経変性疾患および腫瘍関連タンパク質のオートファジーによる分解を誘導し、神経変性疾患を予防または治療できる化学式１の化合物の塩であれば制限なくすべて使用可能である。
【0054】
また、本発明による前記化学式１で表される化合物は、その薬学的に許容可能な塩のみならず、これから製造できる可能な水和物などの溶媒和物および可能なすべての立体異性体を制限なく含む。鏡像異性体形態および部分立体異性体形態を含む、本発明のすべての立体異性体（例えば、多様な置換体において非対称炭素に起因して存在し得るもの）が本発明の範囲に含まれる。本発明の化合物の個別的な立体異性体は、例えば、実質的に異なる異性体がなかったり（例えば、特定の活性を有する純粋または実質的に純粋な光学異性体として）、あるいは例えば、ラセミ体としてまたはすべての他の、または他の選択された立体異性体と混合され得る。本発明の化合物のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ１９７４勧告によって定義されているＳまたはＲ構造を有することができる。ラセミ形態は、キラルカラムクロマトグラフィーによる分離または部分立体異性体誘導体の分離または結晶化、分別形状結晶化のような物理的方法によって分析できる。個別的な光学異性体は、これに限定されるものではないが、光学的に活性である酸との塩形成に続いて、結晶化を含む任意の適した方法によってラセミ体から得ることができる。
【0055】
前記化学式１で表される化合物の溶媒和物および立体異性体は、当業界で公知の方法を用いて化学式１で表される化合物から製造することができる。
【0056】
さらに、本発明による前記化学式１で表される化合物は、結晶形態または非結晶形態に製造可能であり、結晶形態に製造される場合、任意に水和または溶媒和されてもよい。本発明では、前記化学式１で表される化合物の化学量論的水和物のみならず、多様な量の水を含有する化合物が含まれる。本発明による前記化学式１で表される化合物の溶媒和物は、化学量論的溶媒和物および非化学量論的溶媒和物のすべてを含む。
【0057】
本発明による化学式１の化合物は、下記の例示的な方法で製造可能であり、具体的な一例は、以下、実施例に記載された反応式１、３、３－１、６および７の通りである。
【0058】
【化2】
【0059】
【化3】
【0060】
【化4】
【0061】
【化5】
【0062】
【化6】
【0063】
本発明の製造方法は、前記反応式に使用される反応物として、市販の化合物を購入してそのまま使用するか、または当業界で公知の１つ以上の反応をそのまままたは適切に変更して行うことによって合成して使用することができる。例えば、骨格構造に含まれている反応性官能基および／またはヘテロ元素の存在、種類および／または位置を考慮して１つ以上の反応を一連の順序で行って合成することができるが、これに限定されない。
【0064】
本発明による化学式１の化合物は、ｐ６２のＺＺドメインと結合するリガンドとして作用して、ｐ６２の機能を活性化させることを特徴とする。このようなｐ６２の機能を活性化することによって、本発明による化学式１の化合物はオートファジーを活性化させることができる。
【0065】
したがって、他の態様として、本発明は、化学式１の化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、水和物、溶媒和物またはプロドラッグを含むオートファジー活性用薬学的組成物を提供する。
【0066】
本発明による化学式１の化合物は、オートファジーの活性化作用によって変性タンパク質の凝集に関連づけられた疾患に関連する凝集タンパク質を除去することができる。同時に、前記化学式１の化合物は、ｐ６２リガンドとしてｐ６２のＺＺドメインに結合して、ｐ６２タンパク質のＰＢ１ドメインおよびＬＩＲドメインを活性化させてｐ６２のオリゴ化および凝集体を誘導し、ｐ６２凝集体の誘導によるオートファゴソーム（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）形成を増大させることを特徴とする。上記過程により変性タンパク質凝集体が円滑に除去される（図１参照）。このようなタンパク質は、タンパク質異常疾患の主要タンパク質であってもよく、より好ましくは、プリオンタンパク質、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、アルファ－シヌクレイン（ａｌｐｈａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ）、スーパーオキシドディスムターゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ １）、タウ（ｔａｕ）、免疫グロブリン、アミロイド－Ａ、トランスサイレチン、ベータ２－マイクログロブリン、シスタチンＣ、アポリポタンパク質（Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｅ）Ａ１、ＴＤＰ－４３、島アミロイドポリペプチド（ｉｓｌｅｔ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）、ＡＮＦ、ゲルゾリン（ｇｅｌｓｏｌｉｎ）、インスリン、リゾチーム、フィブリノゲン、ハンチンチン（ｈｕｎｔｉｎｇｔｉｎ）、アルファ－１－アンチトリプシンＺ、クリスタリン（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ）、ｃ９オープンリーディングフレーム７２（ｃ９ｏｒｆ７２）、グリア原線維性酸性タンパク質（ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ）、嚢胞性線維症膜通過伝導率制御タンパク質（ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）、ロドプシン（ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ）およびアタキシンと、Ｐｏｌｙ－Ｑ延伸を有するその他タンパク質からなる群から選択される１種以上のものであってもよい。
したがって、さらに他の態様として、本発明は、下記化学式１ａのｐ６２リガンド化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、水和物、溶媒和物またはプロドラッグを含む変形蛋白疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
したがって、さらに他の態様として、本発明は、下記化学式１ａのｐ６２リガンド化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、水和物、溶媒和物またはプロドラッグを含む変形蛋白疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。
【0067】
【化7】
Ｗは炭素数６～１０のアリールであり；
ｍは０～２の整数であり；
ＲａはＲ１または－ＯＲ１であり、
この時、Ｒ１は水素、または－（ＣＨ２）ｎ１－Ｒ’１であり、
Ｒ’１は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり
ｎ１は１～６の整数であり；
Ｒｂは－ＯＲ２であり、
この時、Ｒ２は水素、または－（ＣＨ２）ｎ２－Ｒ’２であり、
Ｒ’２は非置換；またはヒドロキシ、ハロゲン、炭素数１～４のアルキル、炭素数１～４のアルコキシ、ニトロ、アミノ、（炭素数１～４のアルキル）アミノ、またはジ（炭素数１～４のアルキル）アミノで置換されたフェニルであり、
ｎ２は１～６の整数であり；
Ｒｃは－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｎ３－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、炭素数１～６のアルキル、－ＣＨ（Ｒ３）－ＣＯＯ－Ｒ４、－ＣＨ（ＣＯＯ－Ｒ４）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、－（ＣＨ２）ｎ３－Ｏ－（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ３－ＯＲ４、－ＣＯ（ＣＨ２）ｎ４－ＯＲ４、－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＨ（ＮＨ２）－ＣＯＯＲ４、または－（ＣＨ２）ｎ４－ＣＯＮＨＲ４であり、
ｎ３は２～４の整数であり、
ｎ４は１～４の整数であり、
Ｒ３は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒ４は水素、または炭素数１～４のアルキルであり、
Ｒｄは水素、ハロゲン、炭素数１～４のアルコキシまたは炭素数１～４のアルキルである。
【0068】
本発明により、用語「凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）」は、複合体内に炭水化物、核酸および脂質などの追加的な生体分子の統合と伴うことができる、典型的に１つ以上のタンパク質のオリゴマーまたは多量体複合体の形成を示す。当該凝集されたタンパク質は、特定の組織、より好ましくは、神経組織または脳組織に沈着物を形成し得る。凝集の程度は当該疾患に依存する。
【0069】
ここで使用された用語「タンパク質異常疾患」または「タンパク質の凝集に関連する疾患」は、凝集されたタンパク質の存在を特徴とする疾患を意味し、例えば、神経変性疾患、アルファ１－アンチトリプシン欠乏症、角膜症、色素性網膜症、２型糖尿病、嚢胞性線維症などを意味するが、これらに限定されるものではない。
【0070】
前記神経変性疾患は、ライム病（Ｌｙｍｅ ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｉｓ）、致死性家族性不眠症（Ｆａｔａｌ ｆａｍｉｌｉａｌ ｉｎｓｏｍｎｉａ）、クロイツフェルト－ヤコブ病（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ－Ｊａｋｏｂ Ｄｉｓｅａｓｅ；ＣＪＤ）、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＭＳ）、認知症（ｄｅｍｅｎｔｉａ）、アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、てんかん（ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、パーキンソン病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）、ハンチントン病（ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、ピック病（Ｐｉｃｋｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、ＡＬＳ）脊髄小脳失調症、その他ポリ－Ｑ疾患、遺伝性脳アミロイド血管病症、家族性アミロイド多発神経病症、１次全身アミロイド症（ＡＬアミロイド症）、反応性全身アミロイド症（ＡＡアミロイド症）、注射－局所化アミロイド症、ベータ－２マイクログロブリンアミロイド症、遺伝性非－神経病アミロイド症、アレキサンダー症およびフィンランド遺伝性全身アミロイド症からなる群から選択されることが好ましい。
【0071】
本発明の薬学的組成物の投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食事、投与時間、投与方法、排泄率および疾患の重症度などによってその範囲が多様であり得るが、有効投与量は、通常、成人（６０ｋｇ）の場合、約１ｎｇ～１０ｍｇ／日、特に約１ｇ～１ｍｇ／日である。投与量は様々な条件に応じて変動可能なため、前記投与量に加減があり得ることは当業者にとって自明であり、よって、前記投与量はいかなる面でも本発明の範囲を限定するものではない。投与回数は、所望の範囲内で１日に１回、または数回に分けて投与可能であり、投与期間も特に限定されない。
【0072】
本発明の用語「治療」とは、本発明の薬学的組成物の投与で変性タンパク質の凝集に関連する多様な疾患、例えば、癌または神経変性疾患が好転または有利に変化するすべての行為を意味する。
【0073】
上記したように、本発明の化合物は、（１）ｐ６２オリゴマー化および構造的活性化を誘導して、（２）ｐ６２のＬＣ３との結合を増大させ、（３）ｐ６２のオートファゴソーム（ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ）への伝達を増大させて、（４）オートファジーを活性化し、最終的に（５）変性タンパク質凝集体を除去する効果を奏するので、これを有効成分として含む薬学的組成物は、多様な変性タンパク質の凝集に関連する疾患の予防、改善または治療に使用できる。
【0074】
例えば、本発明の組成物は、薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤をさらに含むことができ、それぞれの使用目的に合わせて、通常の方法により、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、エマルジョン、シロップ、エアゾールなどの経口剤形、滅菌注射溶液の注射剤などの多様な形態で剤形化して使用することができ、経口投与、または静脈内、腹腔内、皮下、直腸、局所投与などを含む多様な経路により投与可能である。このような組成物に含まれる好適な担体、賦形剤または希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアガム、アルギネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレートおよび鉱物油などが挙げられる。また、本発明の組成物は、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤、防腐剤などをさらに含むことができる。
【0075】
経口投与のための固形製剤では、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、前記組成物に少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、ゼラチンなどを混合して剤形化する。また、単純な賦形剤のほか、マグネシウムステアレート、タルクなどの潤滑剤が使用できる。
【0076】
経口用液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが例示され、よく使用される単純希釈剤である水、液体パラフィンのほか、様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれる。
【0077】
非経口投与のための製剤では、滅菌された水溶液剤、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物性油、エチルオレートなどの注射可能なエステルなどが使用できる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール、マクロゴール、トゥイーン６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用できる。一方、注射剤には、溶解剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、防腐剤などの従来の添加剤が含まれる。
【0078】
前記剤形は、通常の混合、顆粒化またはコーティング方法によって製造可能であり、活性成分を医学的治療、具体的には、変性タンパク質の凝集に関連する疾患の予防、改善または治療に有効な量で含む。
【0079】
この時、本発明の組成物は、薬学的に有効な量で投与する。本発明の用語「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的な恩恵／危険の比率で、疾患を治療するのに十分で副作用を起こさない程度の量を意味し、有効用量の水準は、患者の健康状態、疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与方法、投与時間、投与経路および排出比率、治療期間、配合または同時使用される薬物を含む要素およびその他医学分野でよく知られた要素に応じて決定可能である。本発明の組成物は、個別治療剤として投与するか、または他の治療剤と併用して投与され、従来の治療剤と順次いで、または同時に投与されてもよいし、単一または多重投与されてもよい。前記要素をすべて考慮して副作用なしに最小限の量で最大効果が得られる量を投与することが重要であり、これは当業者によって容易に決定可能である。
【0080】
例えば、投与経路、疾病の重症度、性別、体重、年齢などに応じて増減できるため、前記投与量がいかなる方法でも本発明の範囲を限定するものではない。
【0081】
本発明の化合物の好ましい投与量は、患者の状態および体重、疾病の程度、薬物の形態、投与経路および期間に応じて異なるが、当業者によって適宜選択可能である。
【0082】
さらに他の態様として、本発明は、化学式１ａのｐ６２リガンド化合物、またはこれを含む薬学的組成物を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、変性タンパク質凝集体の分解を増大させる方法、オートファジーの活性化の方法、タンパク質異常疾患を予防、改善または治療する方法を提供する。
【0083】
本発明の用語「個体」とは、癌の転移および浸潤の可能性があるか、あるいは転移および浸潤するか、変性タンパク質の凝集に関連する疾患が発病したヒトを含むサル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、ネコ、イヌ、マウス、ネズミ、ウサギまたはギニアピッグを含むすべての動物を意味し、本発明の薬学的組成物を個体に投与することによって、変性タンパク質の凝集に関連する疾患を効果的に予防、改善または治療することができる。また、本発明の薬学的組成物は、ｐ６２リガンドとして作用してオートファジーを活性化し、このようなオートファジーの活性化によって癌誘発タンパク質または変性タンパク質の凝集体を除去して当該凝集タンパク質と関連する疾患の予防または治療効果を奏するため、既存の治療剤と並行して投与することによってシナジー効果を奏することができる。
【0084】
本発明の用語「投与」とは、任意の適切な方法で患者に所定の物質を提供することを意味し、本発明の組成物の投与経路は、目的の組織に到達できる限り、いかなる一般的な経路を通して投与可能である。腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与できるが、これらに限定されない。また、本発明の薬学的組成物は、活性物質が標的細胞に移動できる任意の装置によって投与されてもよい。好ましい投与方式および製剤は、静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤などである。注射剤は、生理食塩液、リンゲル液などの水性溶剤、植物油、高級脂肪酸エステル（例、オレイン酸エチルなど）、アルコール類（例、エタノール、ベンジルアルコール、プロピレングリコール、グリセリンなど）などの非水性溶剤などを用いて製造することができ、変質防止のための安定化剤（例、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＢＨＡ、トコフェロール、ＥＤＴＡなど）、乳化剤、ｐＨ調節のための緩衝剤、微生物の発育を阻止するための保存剤（例、硝酸フェニル水銀、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、フェノール、クレゾール、ベンジルアルコールなど）などの薬学的担体を含むことができる。
【0085】
さらに他の態様として、本発明は、化学式１ａのｐ６２リガンド化合物、その薬学的に許容可能な塩、立体異性体、水和物、溶媒和物またはプロドラッグを含むタンパク質異常疾患の予防または改善用食品組成物を提供する。前記食品用組成物は、健康機能食品としてそれ自体で剤形化を経て使用されるか、または健康機能食品の添加物として他の健康機能食品に含まれる。健康機能食品とは、疾病の予防または改善、生体防御、免疫、病後の回復、老化抑制などの生体調節機能を有する食品をいうもので、長期的に服用した時、人体に無害でなければならない。有効成分の混合量は、使用目的（予防、健康または治療的処置）に応じて適宜決定可能である。
【0086】
前記食品の種類には特に制限はない。前記物質を添加可能な食品の例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディー類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料水、お茶、ドリンク剤、アルコール飲料およびビタミン複合剤などがあり、通常の意味での健康機能食品をすべて含む。
【0087】
本発明の食品用組成物は、食品または食品添加物の製造に使用される通常の成分、具体的には、香味剤；天然炭水化物として、ブドウ糖、果糖などのモノサッカライド、マルトース、スクロースなどのジサッカライド、およびデキストリン、シクロデキストリンなどの天然甘味剤や、サッカリン、アスパルテームなどの合成甘味剤；栄養剤；ビタミン；電解質；着色剤；有機酸；保護性コロイド増粘剤；ｐＨ調整剤；安定化剤；防腐剤；グリセリン；アルコール；炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含むことができる。
【0088】
本発明の具体的な実施例では、化学式１で表される新規なｐ６２リガンドの実施例１～２５の化合物を新たに合成した。また、本発明による新規なｐ６２リガンド化合物が培養された細胞内に自食現象が増加するかどうかを評価するために、免疫ブロッティング法により、子宮頸癌患者由来の細胞株であるＨｅｌａ細胞株に、本発明による新規なｐ６２リガンド化合物を処理して培養した後、培養細胞内でのオートファジー活性を確認した。その結果、本発明によるｐ６２リガンド化合物を処理した時間に応じて漸増的にオートファジー活性の標識子であるＬＣ３の水準が増加することを確認して、本発明によるｐ６２リガンド化合物は、ｐ６２タンパク質を活性化およびオリゴマー化させてオートファゴソームに伝達させると同時に、オートファジー活性を増大させて変性タンパク質の凝集体を効果的に除去することを確認した。
【実施例】
【0089】
以下、実施例を通じて本発明をより詳しく説明する。これらの実施例は本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではない。
【0090】
下記表１の化合物を以下の実施例１～実施例２５による方法により製造した。
【0091】
【表1】
【0092】
本発明の化合物を合成するための出発物質の場合、多様な合成法が知られており、前記出発物質が市販されている場合は供給先から購入して使用可能である。試薬供給先としては、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｉｇｍａ、ＴＣＩ、Ｗａｋｏ、Ｋａｎｔｏ、Ｆｌｕｏｒｃｈｅｍ、Ａｃｒｏｓ、Ａｌｆａ、Ｆｌｕｋａなどの会社があるが、これらに限定されるものではない。
【0093】
本発明の化合物は、下記の一般的な方法および過程を用いて容易に利用可能な出発物質から製造できる。典型的なまたは好ましい工程条件（すなわち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力）などとしては、別途に言及しない限り、他の工程条件も使用可能である。最適な反応状態は、使用された特定の反応物または溶媒に応じて変化できるが、その状態は通常の最適化過程によって本技術分野における熟練者によって決定可能である。
【0094】
以下、前記実施例１～実施例２５の製造方法について記述する。
【0095】
（製造例１）
下記反応式１に開示された方法により、実施例１、２、３、４、１０、１１、１４および１９の化合物を合成した。
下記反応式１に開示された方法により、実施例１、２、３、４、１０、１１、１４および１９の化合物を合成した。
【0096】
【化8】
【0097】
実施例１：２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０５）の製造
（段階１）３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１）の製造
３，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド（０．５０ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した後、Ｋ２ＣＯ３（１．５０ｇ、１０．８６ｍｍｏｌ）を入れて、次いで、ベンジルブロミド（０．９２ｍＬ、７．９６ｍｍｏｌ）を反応物に徐々に添加し６０℃で４時間攪拌した。反応が終了すると、反応物を室温で冷却した後、精製水で希釈してジエチルエーテル（５０ｍｌ）で２回抽出した。有機層を精製水（５０ｍｌ）で２回洗浄した後、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）でもう一度洗浄した。次いで、有機層に無水硫酸ナトリウムを入れて攪拌した後、減圧ろ過した。ろ過した溶液を濃縮した後、カラムクロマトグラフィーにより精製して、３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、１．０４ｇ、収率９０％）を得た。
（段階１）３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１）の製造
３，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド（０．５０ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した後、Ｋ２ＣＯ３（１．５０ｇ、１０．８６ｍｍｏｌ）を入れて、次いで、ベンジルブロミド（０．９２ｍＬ、７．９６ｍｍｏｌ）を反応物に徐々に添加し６０℃で４時間攪拌した。反応が終了すると、反応物を室温で冷却した後、精製水で希釈してジエチルエーテル（５０ｍｌ）で２回抽出した。有機層を精製水（５０ｍｌ）で２回洗浄した後、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）でもう一度洗浄した。次いで、有機層に無水硫酸ナトリウムを入れて攪拌した後、減圧ろ過した。ろ過した溶液を濃縮した後、カラムクロマトグラフィーにより精製して、３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、１．０４ｇ、収率９０％）を得た。
【0098】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）δ９．８１（ｓ、１Ｈ）、７．４９－７．３１（ｍ、１２Ｈ）、７．０４（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．２７（ｓ、２Ｈ）、５．２２（ｓ、２Ｈ）；ＥＳＩＭＳｍ／ｚ：３１９．３３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0099】
（段階２）２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０５）の製造
３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、３３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に無水エタノール（５ｍｌ）を入れて希釈した後、エタノールアミン（３０μＬ、０．５ｍｍｏｌ）を入れて、６０～７０℃で４時間攪拌した。反応物を室温で冷却してイミンが生成されたことをＴＬＣで確認した後、ＮａＢＨ４（７．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を徐々に反応物に入れて、さらに４時間攪拌した。反応溶媒を減圧して濃縮した後、水と酢酸エチルで抽出した。抽出した有機層を塩水で１回洗浄した後、有機層を取り、無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧ろ過した。ろ過された有機層を濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１９：１）で精製して、純粋な白い固体の２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０５、３２ｍｇ、収率８５％）を得た。
３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、３３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に無水エタノール（５ｍｌ）を入れて希釈した後、エタノールアミン（３０μＬ、０．５ｍｍｏｌ）を入れて、６０～７０℃で４時間攪拌した。反応物を室温で冷却してイミンが生成されたことをＴＬＣで確認した後、ＮａＢＨ４（７．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を徐々に反応物に入れて、さらに４時間攪拌した。反応溶媒を減圧して濃縮した後、水と酢酸エチルで抽出した。抽出した有機層を塩水で１回洗浄した後、有機層を取り、無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧ろ過した。ろ過された有機層を濃縮した後、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１９：１）で精製して、純粋な白い固体の２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０５、３２ｍｇ、収率８５％）を得た。
【0100】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）２．５２（ｍ、２Ｈ）、３．００（ｑ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、４Ｈ）、３．４４（ｍ、２Ｈ）、３．５８（ｓ、２Ｈ）、４．１１（ｑ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、４Ｈ）、４．４２（ｍ、１Ｈ）、６．７８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．９３（ｓ、１Ｈ）、７．２６（ｍ、１０Ｈ）。
【0101】
実施例２：２－（（３，４－ジフェネトキシベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－２２０５）の製造
段階１でベンジルブロミドの代わりに（２－ブロモエチル）ベンゼンを使用して実施例１と同様の方法で製造した。
段階１でベンジルブロミドの代わりに（２－ブロモエチル）ベンゼンを使用して実施例１と同様の方法で製造した。
【0102】
（段階１）２２０１の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δ９．８４（ｓ、１Ｈ）、７．２６－７．４３（ｍ、７Ｈ）、６．９６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．０Ｈｚ）、５．６２（ｓ、１Ｈ）、４．３６（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、３．１７（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）。
【0103】
（段階２）実施例２（ＹＴＫ－２２０５）の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）２．５２（ｍ、２Ｈ）、３．００（ｑ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、４Ｈ）、３．４４（ｍ、２Ｈ）、３．５８（ｓ、２Ｈ）、４．１１（ｑ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、４Ｈ）、４．４２（ｍ、１Ｈ）、６．７８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．９３（ｓ、１Ｈ）、７．２６（ｍ、１０Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ２５Ｈ２９ＮＯ３［Ｍ＋Ｈ］＋３９２．１０ Ｆｏｕｎｄ ３９１．５１。
【0104】
実施例３：２－（（３，４－ビス（３－フェニルプロポキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－３３０５）の製造
段階１でベンジルブロミドの代わりに（３－ブロモプロピル）ベンゼンを使用して実施例１と同様の方法で製造した。
段階１でベンジルブロミドの代わりに（３－ブロモプロピル）ベンゼンを使用して実施例１と同様の方法で製造した。
【0105】
（段階１）３３０１の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δ９．８６（ｓ、１Ｈ）、７．４５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．０ ａｎｄ ９．０Ｈｚ）、７．４１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．０Ｈｚ）、７．２２－７．３４（ｍ、１０Ｈ）６．９５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．０Ｈｚ）、４．１２（ｔｄ、４Ｈ、Ｊ＝３．０ ａｎｄ ９．０Ｈｚ）、２．８７（ｔｄ、４Ｈ、Ｊ＝３．０ ａｎｄ ９．０Ｈｚ）、２．１７－２．２８（ｍ、４Ｈ）。
【0106】
（段階２）実施例３（ＹＴＫ－３３０５）の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．４５（ｍ、３Ｈ）、３．２５（ｍ、４Ｈ）、３．６５（ｍ、４Ｈ）、４．０５（ｔ、Ｊ＝３Ｈｚ、１Ｈ）、４．２５（ｓ、１Ｈ）、４．７５（ｍ、３Ｈ）、５．３０（ｓ、３Ｈ）、５．６５（ｓ、２Ｈ）、７．２５（ｍ、２Ｈ）、７．７０（ｍ、８Ｈ）。
【0107】
実施例４：２－（（３，４－ビス（４－フェニルブトキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－４４０５）の製造
段階１でベンジルブロミドの代わりに（４－ブロモブチル）ベンゼンを使用して実施例１と同様の方法で製造した。
段階１でベンジルブロミドの代わりに（４－ブロモブチル）ベンゼンを使用して実施例１と同様の方法で製造した。
【0108】
（段階１）４４０１の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６、３００ＭＨｚ）：δ９．８５（ｓ、１Ｈ）、７．５６（ｄ、１Ｈ）、７．３５（ｓ、１Ｈ）、７．２４－７．１７（ｍ、１１Ｈ）、４．０６（ｔ、４Ｈ）、２．６４（ｔ、４Ｈ）、１．７５（ｍ、４Ｈ）、１．５９（ｍ、４Ｈ）。
【0109】
（段階２）実施例４（ＹＴＫ－４４０５）の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）１．５９－１．７５（ｍ、８Ｈ）、２．６４（ｍ、４Ｈ）、２．７４（ｍ、２Ｈ）、３．４８－３．７６（ｍ、４Ｈ）、４．０５（ｍ、４Ｈ）、４．２５（ｓ、１Ｈ）、５．３０（ｓ、１Ｈ）、６．８０－６．８７（ｍ、２Ｈ）、６．９８（ｓ、１Ｈ）、７．１９－７．２５（ｍ、１０Ｈ）。
【0110】
実施例１０：２－（（３，４－ビス（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－１）の製造
段階１でベンジルブロミドの代わりに１－（ブロモメチル）－４－クロロベンゼンを使用し、実施例１と同様の方法で製造した。
段階１でベンジルブロミドの代わりに１－（ブロモメチル）－４－クロロベンゼンを使用し、実施例１と同様の方法で製造した。
【0111】
（段階１）１１０１－１の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６、４００ＭＨｚ）δ９．８２（ｓ、１Ｈ）、７．５１－７．２９（ｍ、１１Ｈ）、５．２７（ｓ、２Ｈ）、５．２１（ｓ、２Ｈ）。
【0112】
（段階２）実施例１０（ＹＴ－５－１）の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）３．４０（ｍ、４Ｈ）、３．５９（ｓ、２Ｈ）、５．１０（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、４Ｈ）、６．８２（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ ａｎｄ １．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．０５（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．４６（ｍ、８Ｈ）。
【0113】
実施例１１：２－（（３，４－ビス（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－２）の製造
段階１でベンジルブロミドの代わりに１－（ブロモメチル）－４－フルオロベンゼンを使用し、実施例１と同様の方法で製造した。
段階１でベンジルブロミドの代わりに１－（ブロモメチル）－４－フルオロベンゼンを使用し、実施例１と同様の方法で製造した。
【0114】
（段階１）１１０１－２の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６、４００ＭＨｚ）δ９．８２（ｓ、１Ｈ）、７．５１－７．４９（ｍ、６Ｈ）、７．２４－７．２２（ｍ、５Ｈ）、５．２５（ｓ、２Ｈ）、５．１９（ｓ、２Ｈ）。
【0115】
（段階２）実施例１１（ＹＴ－５－２）の分析データ：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）１．９９（ｂ、２Ｈ）、２．７７（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．６４（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．７２（ｓ、２Ｈ）、５．０８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、４Ｈ）、６．８５（ｍ、２Ｈ）、６．９４（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．０４（ｍ、４Ｈ）、７．３８（ｍ、４Ｈ）。
【0116】
実施例１４：２－（（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０８）の製造
３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、３３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を無水エタノール（５ｍｌ）に溶解した後、２－（（２－アミノエチル）アミノ）エタン－１－オール（５０μＬ、０．５ｍｍｏｌ）を入れて、４時間還流攪拌した。室温で冷却した後、ＴＬＣでイミンが生成されたことを確認した後、ＮａＢＨ４（７．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を入れて、さらに４時間攪拌した。反応溶媒を減圧して濃縮した後、水を入れて酢酸エチルで抽出した。分離された有機層を塩水でもう一度洗浄した後、分液して無水硫酸ナトリウムで脱水した後、ろ過して濾液を減圧濃縮した。濃縮された混合物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、白い固体の２－（（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０８、収率８４％）を得た。
３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、３３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を無水エタノール（５ｍｌ）に溶解した後、２－（（２－アミノエチル）アミノ）エタン－１－オール（５０μＬ、０．５ｍｍｏｌ）を入れて、４時間還流攪拌した。室温で冷却した後、ＴＬＣでイミンが生成されたことを確認した後、ＮａＢＨ４（７．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を入れて、さらに４時間攪拌した。反応溶媒を減圧して濃縮した後、水を入れて酢酸エチルで抽出した。分離された有機層を塩水でもう一度洗浄した後、分液して無水硫酸ナトリウムで脱水した後、ろ過して濾液を減圧濃縮した。濃縮された混合物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、白い固体の２－（（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１０８、収率８４％）を得た。
【0117】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δ７．４７－７．４３（ｍ、４Ｈ）、７．３８－７．２６（ｍ、６Ｈ）、６．９４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．０Ｈｚ）、６．８８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、６．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．０ ａｎｄ ８．４Ｈｚ）、５．１６（ｄ、４Ｈ、Ｊ＝６．９Ｈｚ）、３．６７（ｓ、２Ｈ）、３．６２（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．１Ｈｚ）、２．７４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．４Ｈｚ）、２．６９（ｄｑ、４Ｈ、Ｊ＝２．１ ａｎｄ ５．４Ｈｚ）、２．９３（ｂｒ ｓ、３Ｈ）；ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：４０７．５１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0118】
実施例１９：２－（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１－Ａ７６）の製造
前記実施例１４の製造方法で、２－（（２－アミノエチル）アミノ）エタン－１－オールの代わりに２－（２－アミノエトキシ）エタン－１－オールを使用し、同様の製造方法で合成して、２－（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１－Ａ７６、収率７８％）を得た。
前記実施例１４の製造方法で、２－（（２－アミノエチル）アミノ）エタン－１－オールの代わりに２－（２－アミノエトキシ）エタン－１－オールを使用し、同様の製造方法で合成して、２－（２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エトキシ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１１－Ａ７６、収率７８％）を得た。
【0119】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．７２（ｍ、２Ｈ）、３．５２－３．５５（ｍ、４Ｈ）、３．７０（ｍ、２Ｈ）、３．７６（ｄ、２Ｈ）、５．１６（ｓ、４Ｈ）、５．４（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、６．３６（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、６．８０－６．８７（ｍ、２Ｈ）、６．９８（ｄ、１Ｈ）、７．３２－７．４８（ｍ、１０Ｈ）
【0120】
（製造例２）下記反応式２に開示された方法で実施例５、６および７の化合物を合成した。
【0121】
【化9】
【0122】
実施例５：２－（ベンジルオキシ）５－（（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）メチル）フェノール（ＹＴＫ－１００５）の製造
（段階１）３，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド（２．５ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（３０ｍｌ）に溶解した後、Ｋ２ＣＯ３（２．５ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、ベンジルブロミド（３．４４ｍＬ、２９．０ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。反応物を２時間還流攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮した。冷たい１０％ＮａＯＨ水溶液を添加して１０分間攪拌した後、酢酸エチル（１００ｍｌ）で抽出した。水層を４Ｎ ＨＣｌで酸性化した後、ジクロロメタン（３００ｍｌ）で３回抽出した。有機層を塩水でもう一度洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水およびろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、酢酸エチルで結晶化して精製することにより、白い粉末の４－ベンジルオキシ－３－ヒドロキシベンズアルデヒド（１００１、２．９０ｇ、収率７０％）を製造した。
（段階１）３，４－ジヒドロキシベンズアルデヒド（２．５ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（３０ｍｌ）に溶解した後、Ｋ２ＣＯ３（２．５ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、ベンジルブロミド（３．４４ｍＬ、２９．０ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。反応物を２時間還流攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮した。冷たい１０％ＮａＯＨ水溶液を添加して１０分間攪拌した後、酢酸エチル（１００ｍｌ）で抽出した。水層を４Ｎ ＨＣｌで酸性化した後、ジクロロメタン（３００ｍｌ）で３回抽出した。有機層を塩水でもう一度洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水およびろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、酢酸エチルで結晶化して精製することにより、白い粉末の４－ベンジルオキシ－３－ヒドロキシベンズアルデヒド（１００１、２．９０ｇ、収率７０％）を製造した。
【0123】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ９．８３（ｓ、１Ｈ、ＣＨＯ）、７．３９－７．４６（ｍ、７Ｈ、ＡｒＨ）、７．０３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、ＡｒＨ）、５．８８（ｓ、１Ｈ、ＯＨ）、５．２０（ｓ、２Ｈ、ＯＣＨ２Ｐｈ）；ＥＳＩＭＳ：ｍ／ｚ ２２９．２５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0124】
（段階２）４－ベンジルオキシ－３－ヒドロキシベンズアルデヒド（１００１、２００ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍｌ）に溶解した後、２－アミノエタノール（８１ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で１２時間攪拌した後、室温で冷却した。反応物にＮａＢＨ４（５０ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を徐々に添加し、さらに１２時間攪拌した。反応物を減圧濃縮した後、再び水で希釈して酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水しろ過した後、ろ過物を減圧濃縮した。濃縮された混合物をカラムクロマトグラフィーで精製して、２－（ベンジルオキシ）－５－（（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）メチル）フェノール（ＹＴＫ－１００５、０．２２ｇ、収率９２％）を合成した。
【0125】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．７４（ｍ、２Ｈ）、３．４８－３．７６（ｍ、４Ｈ）、４．８１（ｂｒ ｓ、１ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、６．３６（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、６．６８－６．７０（ｍ、２Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、７．３２－７．４８（ｍ、５Ｈ）、９．４８（ｂｒ ｓ、１Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ１６Ｈ１９ＮＯ３［Ｍ＋Ｈ］＋２７４．７５ Ｆｏｕｎｄ ２７３．３３。
【0126】
実施例６：２－（（４－（ベンジルオキシ）－３－フェネトキシベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１２０５）の製造
（段階１）４－ベンジルオキシ－３－ヒドロキシベンズアルデヒド（１００１、０．５０ｇ、２．１９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）で希釈し、無水Ｋ２ＣＯ３（６０４ｍｇ、４．３８ｍｍｏｌ）および（２－ブロモエチル）ベンゼン（０．３６ｍＬ、２．６３ｍｍｏｌ）を順次に徐々に添加した。混合物を７０℃で２時間加熱した後、室温で冷却した。混合物を水で希釈した後、エーテルで抽出して有機層を分離し、水層を再びエーテルで３回抽出した。抽出された有機層を水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、ＮａＣｌ水溶液（２０ｍＬ）でもう一度洗浄した。薄い淡黄色の抽出物を無水硫酸ナトリウムで脱水しろ過した後、減圧して濃縮した。濃縮液をエタノールアセテート：ヘキサン（１：９）を用いてカラムクロマトグラフィーで精製して、クリーム色固体の４－（ベンジルオキシ）－３－フェネトキシベンズアルデヒド（１２０１、０．６６ｇ、収率９０％）を製造した。
（段階１）４－ベンジルオキシ－３－ヒドロキシベンズアルデヒド（１００１、０．５０ｇ、２．１９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）で希釈し、無水Ｋ２ＣＯ３（６０４ｍｇ、４．３８ｍｍｏｌ）および（２－ブロモエチル）ベンゼン（０．３６ｍＬ、２．６３ｍｍｏｌ）を順次に徐々に添加した。混合物を７０℃で２時間加熱した後、室温で冷却した。混合物を水で希釈した後、エーテルで抽出して有機層を分離し、水層を再びエーテルで３回抽出した。抽出された有機層を水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、ＮａＣｌ水溶液（２０ｍＬ）でもう一度洗浄した。薄い淡黄色の抽出物を無水硫酸ナトリウムで脱水しろ過した後、減圧して濃縮した。濃縮液をエタノールアセテート：ヘキサン（１：９）を用いてカラムクロマトグラフィーで精製して、クリーム色固体の４－（ベンジルオキシ）－３－フェネトキシベンズアルデヒド（１２０１、０．６６ｇ、収率９０％）を製造した。
【0127】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δ９．８０（ｓ、１Ｈ）、７．２１－７．３９（ｍ、１２Ｈ）、６．９８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、５．１７（ｓ、２Ｈ）、４．２７（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、３．１４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）。
【0128】
（段階２）４－（ベンジルオキシ）－３－フェネトキシベンズアルデヒド（１２０１、１００ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍｌ）に溶かした後、２－アミノエタノール（２２ｍｇ（２２μＬ）、０．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６０℃で１２時間攪拌し、室温で冷却させた後、ＮａＢＨ４（１７．１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を徐々に反応物に添加し、さらに１２時間攪拌した。反応溶媒を減圧して除去した後、濃縮物を水に溶解させて酢酸エチルで抽出した。Ｎａ２ＳＯ４で有機層を脱水しろ過した後、減圧して濃縮した。濃縮物をカラムクロマトグラフィーで精製して、２－（（４－（ベンジルオキシ）－３－フェネトキシベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１２０５、０．１０ｇ、収率９０％）を製造した。
【0129】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．７１（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、３．０７（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、３．３０（ｔ、Ｊ＝３Ｈｚ、３Ｈ）、３．６６（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、３．７１（ｓ、２Ｈ）、４．２４（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、５．００（ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、６Ｈ）、６．８３（ｄｄ、Ｊ＝６Ｈｚ ａｎｄ ３Ｈｚ、１Ｈ）、６．９５（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、１Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝３Ｈｚ、１Ｈ）、７．２７（ｍ、１０Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ２４Ｈ２７ＮＯ３［Ｍ＋Ｈ］＋３７８．９２ Ｆｏｕｎｄ ３７７．４８。
【0130】
実施例７：２－（（４－（ベンジルオキシ）－３－（３－フェニルプロポキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１３０５）の製造
（段階１）１３０１の製造：（２－ブロモエチル）ベンゼンの代わりに（３－ブロモプロピル）ベンゼンを使用して実施例６の段階１と同様の製造方法で合成した。
（段階１）１３０１の製造：（２－ブロモエチル）ベンゼンの代わりに（３－ブロモプロピル）ベンゼンを使用して実施例６の段階１と同様の製造方法で合成した。
【0131】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δ９．８１（ｓ、１Ｈ）、７．１８－７．３８（ｍ、１２Ｈ）、７．００（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．０Ｈｚ）、５．２３（ｓ、２Ｈ）、４．０９（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、３．１４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．０Ｈｚ）、２．１２－２．２２（ｍ、２Ｈ）。
【0132】
（段階２）ＹＴＫ－１３０５の製造：１３０１を反応物質として使用して実施例６の段階２と同様の製造方法で製造した。
【0133】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．４０（ｍ、２Ｈ）、３．１０（ｔ、Ｊ＝３Ｈｚ、２Ｈ）、３．３０（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、３．６５（ｔ、Ｊ＝３Ｈｚ、７Ｈ）、４．０５（ｍ、４Ｈ）、４．３８（ｔ、Ｊ＝３Ｈｚ、２Ｈ）、５．３５（ｓ、６Ｈ）、５．４５（ｓ、２Ｈ）、７．２８（ｄｄ、Ｊ＝６Ｈｚ ａｎｄ ３Ｈｚ、１Ｈ）、７．３５（ｍ、２Ｈ）、７．６０（ｍ、８Ｈ）、７．７５（ｄ、Ｊ＝３Ｈｚ、２Ｈ）；ＥＳＩ ＭＳ：ｍ／ｚ ３９２．９２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0134】
（製造例３）下記反応式３に開示された方法で実施例８、９、１２、１３、１５、１６、１７および１８の化合物を合成した。
【0135】
【化10】
【0136】
実施例８：２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１０５）の製造
（段階１）３－ヒドロキシベンズアルデヒド（０．４４ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍｌ）に溶かした後、Ｋ２ＣＯ３を入れて、次いで、ベンジルブロミド（０．５０ｍｌ、４．３４ｍｍｏｌ）を添加した後、６０℃で４時間攪拌した。反応が終了すると、室温で冷却した後、水を添加した後、ジエチルエーテルで抽出した。水層をジエチルエーテルで２回さらで抽出した後、有機層を水と塩水でもう一度洗浄した。有機層に無水硫酸ナトリウムを入れて脱水した後、減圧ろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで精製（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）して、純粋な３－（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０１、０．７０ｇ、収率９２％）を得た。
（段階１）３－ヒドロキシベンズアルデヒド（０．４４ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍｌ）に溶かした後、Ｋ２ＣＯ３を入れて、次いで、ベンジルブロミド（０．５０ｍｌ、４．３４ｍｍｏｌ）を添加した後、６０℃で４時間攪拌した。反応が終了すると、室温で冷却した後、水を添加した後、ジエチルエーテルで抽出した。水層をジエチルエーテルで２回さらで抽出した後、有機層を水と塩水でもう一度洗浄した。有機層に無水硫酸ナトリウムを入れて脱水した後、減圧ろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで精製（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）して、純粋な３－（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０１、０．７０ｇ、収率９２％）を得た。
【0137】
（段階２）３－（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０１、１０．６ｍｇ、５０ｎｍｏｌ）を無水エタノール（１ｍｌ）に溶解した後、エタノールアミン（１５μＬ、２５０ｎｍｏｌ）を入れて、４時間還流攪拌した。室温で冷却した後、ＮａＢＨ４（７．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を反応物に徐々に添加した後、４時間攪拌した。反応溶媒を減圧して除去した後、再び水で希釈して酢酸エチルで抽出した。抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧ろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、カラムクロマトグラフィーで精製（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）して、純粋な２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－１０５、収率８１％）を合成した。
【0138】
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．９５（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．８９（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、４．１３（ｓ、２Ｈ）、５．０６（ｓ、２Ｈ）、５．４５（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．１１（ｍ、１Ｈ）、７．３３－７．２３（ｍ、５Ｈ）、７．４０－７．３８（ｍ、２Ｈ）。
【0139】
実施例９：２－（（３－（フェネトキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－２０５）の製造
ベンジルブロミドの代わりにフェネチルブロミドを使用して実施例８の段階１と同様の製造方法により３－フェネトキシベンズアルデヒド（２０１）を製造し、これを出発物質として使用して実施例８の段階２と同様の製造方法により、純粋な２－（（３－（フェネトキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－２０５、収率８０％）を合成した。
ベンジルブロミドの代わりにフェネチルブロミドを使用して実施例８の段階１と同様の製造方法により３－フェネトキシベンズアルデヒド（２０１）を製造し、これを出発物質として使用して実施例８の段階２と同様の製造方法により、純粋な２－（（３－（フェネトキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴＫ－２０５、収率８０％）を合成した。
【0140】
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．９５（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、３．０５（ｓ、２Ｈ）、３．９０（ｂｒ ｓ、２Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ）、４．１９（ｓ、２Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９（ｓ、１Ｈ）、７．２９－７．１７（ｍ、８Ｈ）、９．３８（ｂｒ ｓ、１Ｈ）。
【0141】
実施例１２：２－（（３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－７）の製造
ベンジルブロミドの代わりに１－（ブロモメチル）－４－クロロベンゼンを使用して実施例８の段階１と同様の製造方法により３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（１０１－１）を製造し、これを出発物質として使用して実施例８の段階２と同様の製造方法により、純粋な２－（（３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－７）を合成した。
ベンジルブロミドの代わりに１－（ブロモメチル）－４－クロロベンゼンを使用して実施例８の段階１と同様の製造方法により３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（１０１－１）を製造し、これを出発物質として使用して実施例８の段階２と同様の製造方法により、純粋な２－（（３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－７）を合成した。
【0142】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．７４（ｍ、２Ｈ）、３．４６－３．７５（ｍ、４Ｈ）、４．８０（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、６．９１（ｄ、１Ｈ）、６．９７－６．９９（ｍ、２Ｈ）、７．２２－７．３８（ｍ、５Ｈ）。
【0143】
実施例１３：２－（（３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－８）の製造
ベンジルブロミドの代わりに１－（ブロモメチル）－４－フルオロベンゼンを使用して実施例８の段階１と同様の製造方法により３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（１０１－２）を製造し、これを出発物質として使用して実施例８の段階２と同様の製造方法により、純粋な２－（（３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－８）を合成した。
ベンジルブロミドの代わりに１－（ブロモメチル）－４－フルオロベンゼンを使用して実施例８の段階１と同様の製造方法により３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（１０１－２）を製造し、これを出発物質として使用して実施例８の段階２と同様の製造方法により、純粋な２－（（３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－５－８）を合成した。
【0144】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）２．７４（ｍ、２Ｈ）、３．４８－３．７６（ｍ、４Ｈ）、４．８１（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、５．１４（ｓ、２Ｈ）、６．３６（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、６．９１（ｄ、１Ｈ）、６．９７－７．１９（４Ｈ）、７．２５－７．２７（ｍ、３Ｈ）。
【0145】
実施例１５：２－（（２－（（３，４－ビス（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－７）の製造
３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（１０１－１、３００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した後、２－（２－アミノエチルアミノ）エタノール（１３３ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加し、６５℃で６時間攪拌した。イミンが生成されると反応物を０℃に冷却した後、ＮａＢＨ４を添加し、１時間室温でさらに攪拌した。反応後、反応溶媒を減圧して除去した後、再び水で希釈して酢酸エチルで抽出した。抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧ろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、高分解能液体クロマトグラフィーにより精製して、白い固体の２－（（２－（（３，４－ビス（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－７、２５ｍｇ）を合成した。
３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（１０１－１、３００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した後、２－（２－アミノエチルアミノ）エタノール（１３３ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加し、６５℃で６時間攪拌した。イミンが生成されると反応物を０℃に冷却した後、ＮａＢＨ４を添加し、１時間室温でさらに攪拌した。反応後、反応溶媒を減圧して除去した後、再び水で希釈して酢酸エチルで抽出した。抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧ろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、高分解能液体クロマトグラフィーにより精製して、白い固体の２－（（２－（（３，４－ビス（４－クロロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－７、２５ｍｇ）を合成した。
【0146】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６＋Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）３．０７（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．３１（ｓ、４Ｈ）、３．６５（ｓ、２Ｈ）、４．１８（ｓ、２Ｈ）、５．１２（ｓ、２Ｈ）、７．０９（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、７．１７（ｓ、１Ｈ）、７．４０（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．４７（ｓ、４Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ１８Ｈ２３ＣｌＮ２Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋３３５．１０ Ｆｏｕｎｄ ３３４．８４。
【0147】
実施例１６：２－（（２－（（３，４－ビス（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンジル）アミノ）エチル）アミノ）エタン－１－オール（ＹＴ－８－８）の製造
３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒドの代わりに３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（１０１－２）を出発物質として使用して実施例１５の製造方法と同様の方法で製造した。
３－（（４－クロロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒドの代わりに３－（（４－フルオロベンジル）オキシ）ベンズアルデヒド（１０１－２）を出発物質として使用して実施例１５の製造方法と同様の方法で製造した。
【0148】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ ｄ６＋Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）３．０７（ｔ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．３３（ｓ、４Ｈ）、３．６６（ｔ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、２Ｈ）、４．１９（ｓ、２Ｈ）、５．１０（ｓ、２Ｈ）、７．０９（ｍ、２Ｈ）、７．２１（ｍ、３Ｈ）、７．３９（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．５０（ｍ、２Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ１８Ｈ２３ＦＮ２Ｏ２［Ｍ＋Ｈ］＋３１９．１０ Ｆｏｕｎｄ ３１８．３９
【0149】
（製造例４）実施例１７および実施例１８は、さらに下記反応式３－１の製造工程に従う。
【0150】
【化11】
【0151】
実施例１７：１－（２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹＴＫ－１０７）の製造
（段階１）３－（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０１、１．０ｇ、４．７ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍｌ）に溶解した後、ｔｅｒｔ－ブチル－２－アミノエチルカルバメート（０．７９ｇ、４．９ｍｍｏｌ）を反応物に入れて、６５℃で６時間攪拌した。０℃に冷却した後、ＮａＢＨ４を反応物に徐々に入れた後、１時間さらに室温で攪拌した。反応溶媒を減圧して除去した後、再び水で希釈して酢酸エチルで抽出した。抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧ろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、高分解能液体クロマトグラフィーにより精製して、明るい黄色の固体（１１１、１．３ｇ）を得た。
（段階１）３－（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０１、１．０ｇ、４．７ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍｌ）に溶解した後、ｔｅｒｔ－ブチル－２－アミノエチルカルバメート（０．７９ｇ、４．９ｍｍｏｌ）を反応物に入れて、６５℃で６時間攪拌した。０℃に冷却した後、ＮａＢＨ４を反応物に徐々に入れた後、１時間さらに室温で攪拌した。反応溶媒を減圧して除去した後、再び水で希釈して酢酸エチルで抽出した。抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧ろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、高分解能液体クロマトグラフィーにより精製して、明るい黄色の固体（１１１、１．３ｇ）を得た。
【0152】
（段階２）１１１（３００ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１０ｍｌ）に溶解した後、１Ｎ塩酸／アセテート（２ｍｌ）を入れて室温で２時間攪拌した。反応物を減圧濃縮した後、精製せず次の反応の出発物質（１１３）として用いた。
【0153】
（段階３）１１３（２７０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍｌ）に溶解した後、ジイソプロピルエチルアミン（５２９ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）を添加した後、次いで、１Ｈ－ピラゾール－１－カルボキサミジン塩酸塩（１８５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１６時間攪拌した後、反応溶媒を水で希釈して酢酸エチルで抽出した。抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧ろ過した。ろ過された有機層を減圧濃縮した後、高分解能液体クロマトグラフィーにより精製して、白い固体の１－（２－（（３－（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹＴＫ－１０７、２５ｍｇ）を合成した。
【0154】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６＋Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）３．０９（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、３．４６（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、４．１６（ｓ、２Ｈ）、５．１２（ｓ、２Ｈ）、７．０９（ｍ、２Ｈ）、７．１８（ｓ、１Ｈ）、７．４０（ｍ、６Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ１７Ｈ２２Ｎ４Ｏ［Ｍ＋Ｈ］＋２９９．１０ Ｆｏｕｎｄ ２９８．３９。
【0155】
実施例１８：１－（２－（（３－（フェネトキシベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹＴＫ－２０７）の製造
３－（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０１）の代わりに３－フェネトキシベンズアルデヒド（２０１）を出発物質として使用して実施例１７の製造方法と同様の方法で、１－（２－（（３－（フェネトキシベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹＴＫ－２０７、２２ｍｇ）を合成した。
３－（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１０１）の代わりに３－フェネトキシベンズアルデヒド（２０１）を出発物質として使用して実施例１７の製造方法と同様の方法で、１－（２－（（３－（フェネトキシベンジル）アミノ）エチル）グアニジン（ＹＴＫ－２０７、２２ｍｇ）を合成した。
【0156】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６＋Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）３．０７（ｍ、４Ｈ）、３．４６（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、４．１４（ｓ、２Ｈ）、４．２１（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．０５（ｍ、３Ｈ）、７．２４（ｍ、１Ｈ）、７．３４（ｍ、５Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ１８Ｈ２４Ｎ４Ｏ［Ｍ＋Ｈ］＋３１３．１０ Ｆｏｕｎｄ ３１２．４２。
【0157】
（製造例５）下記反応式４に開示された方法で実施例２０および２１の化合物を合成した。
【0158】
【化12】
【0159】
実施例２０：１－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－３－（２－ヒドロキシエチル）ウレア（ＡＴＢ１００４１）の製造
（段階１）３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、４ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、４０ｍｌ）に溶解した後、チタンイソプロポキシド（（Ｔｉ（ＯｉＰｒ）４、７．１５ｇ、２５．１ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。約５分間２０℃で攪拌した後、２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（３．７１ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）を徐々に反応物に添加した。反応物を２０℃で５時間攪拌した後、ａｑ．ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍｌ）を反応物に徐々に添加した。反応溶液を酢酸エチル（５０ｍｌ）で３回抽出した後、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過された液を減圧濃縮して、Ｎ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジリデン）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（１１０８、４ｇ）を得た。ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：４２２．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
（段階１）３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、４ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、４０ｍｌ）に溶解した後、チタンイソプロポキシド（（Ｔｉ（ＯｉＰｒ）４、７．１５ｇ、２５．１ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。約５分間２０℃で攪拌した後、２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（３．７１ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）を徐々に反応物に添加した。反応物を２０℃で５時間攪拌した後、ａｑ．ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍｌ）を反応物に徐々に添加した。反応溶液を酢酸エチル（５０ｍｌ）で３回抽出した後、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過された液を減圧濃縮して、Ｎ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジリデン）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（１１０８、４ｇ）を得た。ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：４２２．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0160】
（段階２）Ｎ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジリデン）－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（１１０８、４ｇ、９．５ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍｌ）に溶解した後、ＮａＢＨ４（０．４ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を０℃で徐々に添加した後、室温で５時間攪拌した。反応物に精製水（５０ｍｌ）を入れて、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で３回抽出した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過液を減圧濃縮して、Ｎ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（１１０９、３ｇ）を得た。ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：４２４．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0161】
（段階３）Ｎ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル－２－メチルプロパン－２－スルフィンアミド（１１０９、３ｇ、７．１ｍｍｏｌ）を酢酸エチルに溶解した後、酢酸エチル／塩酸水溶液（１：１、１０ｍｌ）を１０℃で１０分間徐々に添加した。室温に加温した後、５時間攪拌した。固体が析出すると、反応物を減圧ろ過した後、白い固体の（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェニル）メタンアミン（１１１０、１．５ｇ）を得た。
【0162】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）８．２６（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、７．４３－７．３０（ｍ、１１Ｈ）、７．０９－６．９７（ｍ、２Ｈ）、５．１５（ｓ、２Ｈ）、５．１２（ｓ、２Ｈ）、３．９２（ｍ、２Ｈ）。
【0163】
（段階４）（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェニル）メタンアミン（１１１０、２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した後、ＤＳＣ（１７２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）とジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、２２０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を順次に添加し室温で１時間攪拌した。２－アミノエタノール（７０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を室温で反応物に添加した後、１００℃で２時間攪拌した後、室温で冷却して減圧および濃縮した。濃縮液を高分解能液体クロマトグラフィーを用いて精製して、白い固体の１－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－３－（２－ヒドロキシエチル）ウレア（ＡＴＢ１００４１、１５ｍｇ）を製造した。
【0164】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）３．０７（ｑ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．３８（ｑ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．１０（ｄ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）、４．６５（ｔ、Ｊ＝４Ｈｚ、１Ｈ）、５．０９（ｄ、Ｊ＝５．２Ｈｚ、４Ｈ）、５．９２（ｍ、１Ｈ）、６．３２（ｍ、１Ｈ）、６．７５（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ ａｎｄ １．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、７．３８（ｍ、１０Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ２４Ｈ２６Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋４０７．００ Ｆｏｕｎｄ ４０６．４８。
【0165】
実施例２１：Ｎ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－２－ヒドロキシアセトアミド（ＡＴＢ１００４２）の製造
（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェニル）メタンアミン（１１１０、２５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）に溶解した後、反応容器を０℃に冷却した後、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１６０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ、２２５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ、２４０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）および２－ヒドロキシ酢酸（７２ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を順次に添加した。室温に加温した後、１２時間攪拌した。反応物に精製水（２０ｍｌ）を入れて、酢酸エチル（２０ｍｌ）で２回抽出した後、抽出した有機層を再び水と塩水で順次に洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過液を減圧濃縮して高分解能液体クロマトグラフィーで精製して、白い固体のＮ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－２－ヒドロキシアセトアミド（ＡＴＢ１００４２、１４ｍｇ）を製造した。
（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェニル）メタンアミン（１１１０、２５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）に溶解した後、反応容器を０℃に冷却した後、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１６０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ、２２５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ、２４０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）および２－ヒドロキシ酢酸（７２ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を順次に添加した。室温に加温した後、１２時間攪拌した。反応物に精製水（２０ｍｌ）を入れて、酢酸エチル（２０ｍｌ）で２回抽出した後、抽出した有機層を再び水と塩水で順次に洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過液を減圧濃縮して高分解能液体クロマトグラフィーで精製して、白い固体のＮ－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）－２－ヒドロキシアセトアミド（ＡＴＢ１００４２、１４ｍｇ）を製造した。
【0166】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）３．８３（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．２１（ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、５．０９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、４Ｈ）、５．４７（ｔ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．７８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．０４（ｓ、１Ｈ）、７．３８（ｍ、１０Ｈ）、８．１４（ｍ、１Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ２３Ｈ２３ＮＯ４［Ｍ＋Ｈ］＋３７８．００ Ｆｏｕｎｄ ３７７．４４。
【0167】
（製造例６）下記反応式５に開示された方法で実施例２２、２３の化合物を合成した。
【0168】
【化13】
【0169】
実施例２２：（Ｒ）－２－アミノ－３－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）プロパン酸（ＡＴＢ１００４３）の製造
３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した後、（Ｒ）－３－アミノ－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（３８４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を添加した後、６５℃で６時間攪拌した。室温で冷却した後、ＮａＢＨ４（６０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を反応物に徐々に添加した後、３０℃で１２時間攪拌した。反応物に精製水（５０ｍｌ）を入れて、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で３回抽出した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過液を減圧濃縮した。濃縮された反応生成物を酢酸エチル（５ｍｌ）に溶解した後、酢酸エチル／塩酸溶液（３ｍｌ、２Ｎ）を添加した後、室温で５時間攪拌した後、溶媒を減圧濃縮して高分解能液体クロマトグラフィーで精製して、明るい灰色固体の（Ｒ）－２－アミノ－３－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）プロパン酸（ＡＴＢ１００４３，４０ｍｇ）を製造した。
３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した後、（Ｒ）－３－アミノ－２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（３８４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を添加した後、６５℃で６時間攪拌した。室温で冷却した後、ＮａＢＨ４（６０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を反応物に徐々に添加した後、３０℃で１２時間攪拌した。反応物に精製水（５０ｍｌ）を入れて、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で３回抽出した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過液を減圧濃縮した。濃縮された反応生成物を酢酸エチル（５ｍｌ）に溶解した後、酢酸エチル／塩酸溶液（３ｍｌ、２Ｎ）を添加した後、室温で５時間攪拌した後、溶媒を減圧濃縮して高分解能液体クロマトグラフィーで精製して、明るい灰色固体の（Ｒ）－２－アミノ－３－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）プロパン酸（ＡＴＢ１００４３，４０ｍｇ）を製造した。
【0170】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ＋Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）２．６７（ｍ、１Ｈ）、２．８０（ｄｄ、Ｊ＝８Ｈｚ ａｎｄ ５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）、３．６０（ｓ、２Ｈ）、５．１０（ｄ、Ｊ＝５．６Ｈｚ、４Ｈ）、６．８４（ｄｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ ａｎｄ １．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．９７（ｍ、１Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．３８（ｍ、１０Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ２４Ｈ２６Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋４０７．１０ Ｆｏｕｎｄ ４０６．４８。
【0171】
実施例２３：（Ｒ）－２－アミノ－３－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）プロパン酸（ＡＴＢ１００４４）の製造
３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した後、グリシンアミド（２０７ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ、３０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を順次に反応物に添加した。反応物を６５℃で２時間攪拌した後、室温で冷却した。室温でＮａＢＨ４（６０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を反応物に添加した後、３０℃で１２時間攪拌した。反応が終了すると、反応物に精製水（５０ｍｌ）を入れて、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で３回抽出した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過液を減圧濃縮して高分解能液体クロマトグラフィーで精製して、白い固体の（Ｒ）－２－アミノ－３－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）プロパン酸（ＡＴＢ１００４４、１４ｍｇ）を製造した。
３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンズアルデヒド（１１０１、０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した後、グリシンアミド（２０７ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ、３０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を順次に反応物に添加した。反応物を６５℃で２時間攪拌した後、室温で冷却した。室温でＮａＢＨ４（６０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を反応物に添加した後、３０℃で１２時間攪拌した。反応が終了すると、反応物に精製水（５０ｍｌ）を入れて、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で３回抽出した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過液を減圧濃縮して高分解能液体クロマトグラフィーで精製して、白い固体の（Ｒ）－２－アミノ－３－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）ベンジル）アミノ）プロパン酸（ＡＴＢ１００４４、１４ｍｇ）を製造した。
【0172】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ＋Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）３．００（ｓ、２Ｈ）、３．５６（ｓ、２Ｈ）、５．１０（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、４Ｈ）、６．８３（ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．９８（ｍ、１Ｈ）、７．０９（ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３９（ｍ、１０Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ２３Ｈ２４Ｎ２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋３７８．１０ Ｆｏｕｎｄ ３７６．４６。
【0173】
（製造例７）実施例２４は、下記反応式６の製造工程により合成した。
【0174】
【化14】
【0175】
実施例２４：２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－メトキシベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４５）の製造
（段階１）３，４－ジヒドロキシ－５－メトキシベンズアルデヒド（０．５ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（ＡＣＮ、５０ｍｌ）に溶解した後、Ｋ２ＣＯ３（１．６ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）およびベンジルブロミド（１．０９ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０℃で１２時間攪拌した後、室温で冷却した。反応物に精製水（５０ｍｌ）を入れて酢酸エチル（１００ｍｌ）で抽出した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧ろ過した。ろ過された液を減圧濃縮して、黄色液体の３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－メトキシベンズアルデヒド（１１１１、０．５ｇ）を得た。ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：３４９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
（段階１）３，４－ジヒドロキシ－５－メトキシベンズアルデヒド（０．５ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（ＡＣＮ、５０ｍｌ）に溶解した後、Ｋ２ＣＯ３（１．６ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）およびベンジルブロミド（１．０９ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０℃で１２時間攪拌した後、室温で冷却した。反応物に精製水（５０ｍｌ）を入れて酢酸エチル（１００ｍｌ）で抽出した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧ろ過した。ろ過された液を減圧濃縮して、黄色液体の３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－メトキシベンズアルデヒド（１１１１、０．５ｇ）を得た。ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：３４９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0176】
（段階２）３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－メトキシベンズアルデヒド（１１１１、５００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に溶解した後、２－アミノエタノール（１１０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を入れて、６５℃で２時間攪拌した。室温で冷却した後、ＮａＢＨ４（６０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を添加した後、３０℃で１２時間攪拌した。反応が終了すると、反応物に精製水（５０ｍｌ）を入れて、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で３回抽出した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧した。ろ過液を減圧濃縮して高分解能液体クロマトグラフィーで精製して、黄色液体の２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－メトキシベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４５、１６ｍｇ）を製造した。
【0177】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ＋Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）２．５５（ｍ、２Ｈ）、３．４７（ｓ、２Ｈ）、３．６３（ｓ、２Ｈ）、３．７７（ｓ、３Ｈ）、４．８８（ｓ、２Ｈ）、５．０８（ｓ、２Ｈ）、６．６８（ｓ、１Ｈ）、６．７７（ｓ、１Ｈ）、７．３７（ｍ、１０Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ２４Ｈ２７ＮＯ４［Ｍ＋Ｈ］＋３９４．１０ Ｆｏｕｎｄ ３９３．４８。
【0178】
（製造例８）実施例２５は、下記反応式７の製造工程により合成した。
【0179】
【化15】
【0180】
実施例２５：２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４６）の製造
（段階１）３－（ベンジルオキシ）－４－ヒドロキシベンズアルデヒド（０．５ｇ、２．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解した後、ＮａＨ（０．１ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を０℃で添加して３０分間攪拌した。Ｎ－クロロコハク酸イミド（ＮＣＳ、０．３ｇ、２．３ｍｍｏｌ）を反応物に０℃で添加した後、室温で１２時間攪拌した。反応液を酢酸エチル（１５ｍｌ）で希釈した後、アンモニウムクロリド水溶液（１０ｍｌ）で洗浄した。分液した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水およびろ過した後、濾液を減圧濃縮して、３－（ベンジルオキシ）－５－クロロ－４－ヒドロキシベンズアルデヒド（１１１２、０．２ｇ）を得た。ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：２６３．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
（段階１）３－（ベンジルオキシ）－４－ヒドロキシベンズアルデヒド（０．５ｇ、２．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解した後、ＮａＨ（０．１ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を０℃で添加して３０分間攪拌した。Ｎ－クロロコハク酸イミド（ＮＣＳ、０．３ｇ、２．３ｍｍｏｌ）を反応物に０℃で添加した後、室温で１２時間攪拌した。反応液を酢酸エチル（１５ｍｌ）で希釈した後、アンモニウムクロリド水溶液（１０ｍｌ）で洗浄した。分液した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水およびろ過した後、濾液を減圧濃縮して、３－（ベンジルオキシ）－５－クロロ－４－ヒドロキシベンズアルデヒド（１１１２、０．２ｇ）を得た。ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：２６３．５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0181】
（段階２）３－（ベンジルオキシ）－５－クロロ－４－ヒドロキシベンズアルデヒド（１１１２、０．２ｇ、０．７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（ＡＣＮ、５ｍｌ）に溶解した後、Ｋ２ＣＯ３（０．１６ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）およびベンジルブロミド（０．１２ｇ、１ｍｏｌ）を入れて、６０℃で１２時間攪拌した。室温で冷却した後、反応物に精製水（２０ｍｌ）を入れて、酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出した後、抽出した有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水および減圧ろ過した。ろ過された液を減圧濃縮して、黄色固体の３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－クロロベンズアルデヒド（１１１３、０．２ｇ）を得た。ＥＳＩＭＳ ｍ／ｚ：３５３．７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0182】
（段階３）３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－クロロベンズアルデヒド（１１１３、２００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を出発物質として使用して実施例４５の段階２と同様の方法で製造して、白い固体の２－（（３，４－ビス（ベンジルオキシ）－５－クロロベンジル）アミノ）エタン－１－オール（ＡＴＢ１００４６、１７ｍｇ）を合成した。
【0183】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ＋Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）３．４５（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、３．５３（ｓ、２Ｈ）、３．６４（ｓ、２Ｈ）、４．９５（ｓ、２Ｈ）、５．１７（ｓ、２Ｈ）、７．０１（ｓ、１Ｈ）、７．１６（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３６（ｍ、８Ｈ）、７．５０（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ Ｃａｌｃｄ ｍ／ｚ ｆｏｒ Ｃ２３Ｈ２４ＣｌＮＯ３［Ｍ］＋３９８．００ Ｆｏｕｎｄ ３９７．９０。
【0184】
（製造例９）下記反応式８に開示された方法で比較例１および２の化合物を合成した。
【0185】
【化16】
【0186】
比較例１：メチル（Ｒ）－（３－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）－２－ヒドロキシプロピル）グリシネート（ＹＯＫ－Ｇ－１１０４）の製造
実施例１９の製造方法で、段階３で２－アミノエタン－１－オールの代わりにグリシンメチルエステルを使用したことを除いては、実施例１９の製造方法と同様の方法で、メチル（Ｒ）－（３－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）－２－ヒドロキシプロピル）グリシネート（ＹＯＫ－Ｇ－１１０４）を合成した。
実施例１９の製造方法で、段階３で２－アミノエタン－１－オールの代わりにグリシンメチルエステルを使用したことを除いては、実施例１９の製造方法と同様の方法で、メチル（Ｒ）－（３－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）－２－ヒドロキシプロピル）グリシネート（ＹＯＫ－Ｇ－１１０４）を合成した。
【0187】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）２．５５（ｍ、１Ｈ）、２．８１（ｍ、１Ｈ）、３．５１（ｓ、２Ｈ）、３．６６（ｓ、３Ｈ）、４．０５（ｍ、１Ｈ）、４．２０（ｍ、２Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、５．１８（ｓ、２Ｈ）、５．３７（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、５．５２（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、６．５７（ｓ、１Ｈ）、６．６７（ｄ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、１Ｈ）、７．３２－７．４８（ｍ、１０Ｈ）。
【0188】
比較例２：エチル（Ｒ）－（３－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）－２－ヒドロキシプロピル）アラニネート（ＹＯＫ－Ａ－１１０４）の製造
実施例１９の製造方法で、段階３で２－アミノエタン－１－オールの代わりにアラニンエチルエステルを使用したことを除いては、実施例１９の製造方法と同様の方法で、エチル（Ｒ）－（３－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）－２－ヒドロキシプロピル）アラニネート（ＹＯＫ－Ａ－１１０４）を合成した。
実施例１９の製造方法で、段階３で２－アミノエタン－１－オールの代わりにアラニンエチルエステルを使用したことを除いては、実施例１９の製造方法と同様の方法で、エチル（Ｒ）－（３－（３，４－ビス（ベンジルオキシ）フェノキシ）－２－ヒドロキシプロピル）アラニネート（ＹＯＫ－Ａ－１１０４）を合成した。
【0189】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）１．２１（ｔ、３Ｈ）、１．２７（ｍ、３Ｈ）、２．５６－２．８１（ｍ、２Ｈ）、３．５６（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｍ、１Ｈ）、３．９５－４．２０（ｍ、４Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、５．１８（ｓ、２Ｈ）、５．３７（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、６．５７（ｓ、１Ｈ）、６．６７（ｄ、１Ｈ）、６．９６（ｄ、１Ｈ）、７．３２－７．４８（ｍ、１０Ｈ）。
【0190】
実験例１．免疫ブロッティングによる培養細胞内ｐ６２タンパク質のオリゴマーと活性評価
前記化合物（実施例１－２５）のｐ６２タンパク質のオリゴマー化活性効能を評価するために、ヒト胚腎臓由来細胞のＨＥＫ２９３細胞株を収集した。本化合物中の代表化合物として実施例１、２、３、５、６、７、８、９、１２および１３の化合物（実施例１０（ＹＴ－５－１）、実施例１１（ＹＴ－５－２）、実施例１２（ＹＴ５－７）、実施例１３（ＹＴ５－８）、実施例１５（ＹＴ－８－７）、実施例１６（ＹＴ－８－８）、実施例１７（ＹＴＫ－１０７）、実施例１８（ＹＴＫ－１０７）、実施例２０（ＡＴＢ１００４１）、実施例２１（ＡＴＢ１００４２）、実施例２２（ＡＴＢ１００４３）、実施例２３（ＡＴＢ１００４４）、実施例２４（ＡＴＢ１００４５）、実施例２５（ＡＴＢ１００４６）を選択し、これらの選択された代表化合物の処理による細胞内ｐ６２タンパク質の活性化およびオリゴマー化を測定するために、１００パイのディッシュにそれぞれの細胞を分注した。細胞がプレートの表面に完全に付着するように２４時間さらに培養した後、細胞を収集し、各サンプルに１００ｕｌの溶解バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、２ｍＭ ＮａＦ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ｂｅｔａ－ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ、５ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ、１ｍＭ ＰＭＳＦ、ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ、ａｐｒｏｔｅｉｎｉｎ）を注入し、細胞を溶解させた。測定された総タンパク質の濃度に基づいて各サンプルに常温で２時間試験化合物を処理した後、サンプルバッファーを追加して、９５℃で１０分間反応させた。反応済みのサンプルから２５ｕｌを取ってアクリルアミドゲルの各ウェルに分注した後、免疫ブロッティング法を実施した。免疫ブロッティング法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。結果は図２に示す。
図２から確認できるように、本発明によるｐ６２リガンド化合物を処理した場合、化合物の処理により、ｐ６２タンパク質の単位体（ｍｏｎｏｍｅｒ）の減少とともに、オリゴマー（ｏｌｉｇｏｍｅｒ）と高分子量凝集体（ｈｉｇｈ－ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ）の増加を確認することができた。
前記化合物（実施例１－２５）のｐ６２タンパク質のオリゴマー化活性効能を評価するために、ヒト胚腎臓由来細胞のＨＥＫ２９３細胞株を収集した。本化合物中の代表化合物として実施例１、２、３、５、６、７、８、９、１２および１３の化合物（実施例１０（ＹＴ－５－１）、実施例１１（ＹＴ－５－２）、実施例１２（ＹＴ５－７）、実施例１３（ＹＴ５－８）、実施例１５（ＹＴ－８－７）、実施例１６（ＹＴ－８－８）、実施例１７（ＹＴＫ－１０７）、実施例１８（ＹＴＫ－１０７）、実施例２０（ＡＴＢ１００４１）、実施例２１（ＡＴＢ１００４２）、実施例２２（ＡＴＢ１００４３）、実施例２３（ＡＴＢ１００４４）、実施例２４（ＡＴＢ１００４５）、実施例２５（ＡＴＢ１００４６）を選択し、これらの選択された代表化合物の処理による細胞内ｐ６２タンパク質の活性化およびオリゴマー化を測定するために、１００パイのディッシュにそれぞれの細胞を分注した。細胞がプレートの表面に完全に付着するように２４時間さらに培養した後、細胞を収集し、各サンプルに１００ｕｌの溶解バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、２ｍＭ ＮａＦ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ｂｅｔａ－ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ、５ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ、１ｍＭ ＰＭＳＦ、ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ、ａｐｒｏｔｅｉｎｉｎ）を注入し、細胞を溶解させた。測定された総タンパク質の濃度に基づいて各サンプルに常温で２時間試験化合物を処理した後、サンプルバッファーを追加して、９５℃で１０分間反応させた。反応済みのサンプルから２５ｕｌを取ってアクリルアミドゲルの各ウェルに分注した後、免疫ブロッティング法を実施した。免疫ブロッティング法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。結果は図２に示す。
図２から確認できるように、本発明によるｐ６２リガンド化合物を処理した場合、化合物の処理により、ｐ６２タンパク質の単位体（ｍｏｎｏｍｅｒ）の減少とともに、オリゴマー（ｏｌｉｇｏｍｅｒ）と高分子量凝集体（ｈｉｇｈ－ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ）の増加を確認することができた。
【0191】
実験例２．免疫ブロッティングによる培養細胞内オートファジー活性評価
前記化合物（実施例１－２５）のオートファジー活性効能を評価するために、子宮頸癌患者由来細胞のＨｅｌａ細胞株を５％二酸化炭素が維持される培養器内で１０％ＦＢＳと１％ストレプトマイシン／ペニシリンを含むＤＭＥＭ培地を用いて培養した。本化合物中の代表化合物として実施例１、２、３、５、６、７、８、９、１２および１３の化合物（実施例５（ＹＴＫ－１００５）、実施例１（ＹＴＫ－１１０５）、実施例６（ＹＴＫ－１２０５）、実施例７（ＹＴＫ－１３０５）、実施例２（ＹＴＫ－２２０５）、実施例３（ＹＴＫ－３３０５）、実施例８（ＹＴＫ－１０５）、実施例９（ＹＴＫ－２０５）、実施例１４（ＹＴＫ－１１０８）、実施例１２（ＹＴ５－７）、実施例１３（ＹＴ５－８））、実施例２０（ＡＴＢ１００４１）、実施例２１（ＡＴＢ１００４２）、実施例２２（ＡＴＢ１００４３）、実施例２３（ＡＴＢ１００４４）、実施例２４（ＡＴＢ１００４５）、実施例２５（ＡＴＢ１００４６）を選択し、これらの選択された代表化合物の処理によるオートファジー活性度を測定するために、６ウェルプレートにそれぞれの細胞を分注した。細胞がプレートの表面に完全に付着するように２４時間さらに培養した。それぞれの化合物がオートファジー現象を増加させることができる濃度を見出すために、試験化合物を１、２、５、１０、２０μＭに希釈して処理した。各化合物の処理後、細胞を再び細胞培養器で２４時間培養した後、細胞を収集した。収集された細胞からタンパク質を抽出するために、各サンプルに１００ｕｌの溶解バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、２ｍＭ ＮａＦ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ｂｅｔａ－ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ、５ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ、１ｍＭ ＰＭＳＦ、ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ、ａｐｒｏｔｅｉｎｉｎ）を注入して細胞を溶解させた。測定された総タンパク質の濃度に基づいて各サンプルにサンプルバッファーを追加して、１００℃で５分間反応させた。反応済みのサンプルから５ｕｌを取ってアクリルアミドゲルの各ウェルに分注した後、免疫ブロッティング法を実施した。免疫ブロッティング法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。結果は図２に示す。
前記化合物（実施例１－２５）のオートファジー活性効能を評価するために、子宮頸癌患者由来細胞のＨｅｌａ細胞株を５％二酸化炭素が維持される培養器内で１０％ＦＢＳと１％ストレプトマイシン／ペニシリンを含むＤＭＥＭ培地を用いて培養した。本化合物中の代表化合物として実施例１、２、３、５、６、７、８、９、１２および１３の化合物（実施例５（ＹＴＫ－１００５）、実施例１（ＹＴＫ－１１０５）、実施例６（ＹＴＫ－１２０５）、実施例７（ＹＴＫ－１３０５）、実施例２（ＹＴＫ－２２０５）、実施例３（ＹＴＫ－３３０５）、実施例８（ＹＴＫ－１０５）、実施例９（ＹＴＫ－２０５）、実施例１４（ＹＴＫ－１１０８）、実施例１２（ＹＴ５－７）、実施例１３（ＹＴ５－８））、実施例２０（ＡＴＢ１００４１）、実施例２１（ＡＴＢ１００４２）、実施例２２（ＡＴＢ１００４３）、実施例２３（ＡＴＢ１００４４）、実施例２４（ＡＴＢ１００４５）、実施例２５（ＡＴＢ１００４６）を選択し、これらの選択された代表化合物の処理によるオートファジー活性度を測定するために、６ウェルプレートにそれぞれの細胞を分注した。細胞がプレートの表面に完全に付着するように２４時間さらに培養した。それぞれの化合物がオートファジー現象を増加させることができる濃度を見出すために、試験化合物を１、２、５、１０、２０μＭに希釈して処理した。各化合物の処理後、細胞を再び細胞培養器で２４時間培養した後、細胞を収集した。収集された細胞からタンパク質を抽出するために、各サンプルに１００ｕｌの溶解バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、２ｍＭ ＮａＦ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ｂｅｔａ－ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ、５ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ、１ｍＭ ＰＭＳＦ、ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ、ａｐｒｏｔｅｉｎｉｎ）を注入して細胞を溶解させた。測定された総タンパク質の濃度に基づいて各サンプルにサンプルバッファーを追加して、１００℃で５分間反応させた。反応済みのサンプルから５ｕｌを取ってアクリルアミドゲルの各ウェルに分注した後、免疫ブロッティング法を実施した。免疫ブロッティング法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。結果は図２に示す。
【0192】
図３から確認できるように、本発明によるｐ６２リガンド化合物を処理した場合、化合物の濃度に応じて漸増的にマクロオートファジー活性の標識子であるＬＣ３の水準が増加することを確認することができた。
【0193】
実験例３．免疫ブロッティングによる培養細胞内オートファジー活性評価
前記化合物（実施例１－２５）のオートファジー活性効能を調べるために、ＬＣ３をマーカーとして用いて実験例２と同様の方法で免疫ブロッティング法を行った。相違点としては、活性化に要求される処理時間および活性維持時間を評価するために、１、３、６、１２、２４、４８時間、５μＭの本化合物の中から選択された代表化合物（実施例５（ＹＴＫ－１００５）、実施例６（ＹＴＫ－１２０５）、実施例７（ＹＴＫ－１３０５）、実施例２（ＹＴＫ－２２０５）、実施例３（ＹＴＫ－３３０５）、実施例１４（ＹＴＫ－１１０８）、実施例８（ＹＴＫ－１０５）、実施例９（ＹＴＫ－２０５））を処理した。他方では、２４時間、１０μＭの本化合物の中から選択された代表化合物（実施例１０（ＹＴ５－１）、実施例１１（ＹＴ５－２）、実施例１６（ＹＴ８－８）、実施例１５（ＹＴ８－７）、実施例１７（ＹＴＫ－１０７）、実施例１８（ＹＴＫ－２０７）、実施例２０（ＡＴＢ１００４１）、実施例２１（ＡＴＢ１００４２）、実施例２２（ＡＴＢ１００４３）、実施例２３（ＡＴＢ１００４４）、実施例２４（ＡＴＢ１００４５）、実施例２５（ＡＴＢ１００４６）を処理した。免疫ブロッティング法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化し、その結果は図３に示す。図４から分かるように、本発明によるｐ６２リガンド化合物を処理した場合、化合物の処理によって漸増的にマクロオートファジー活性の標識子であるＬＣ３の水準が増加することを確認することができた。
前記化合物（実施例１－２５）のオートファジー活性効能を調べるために、ＬＣ３をマーカーとして用いて実験例２と同様の方法で免疫ブロッティング法を行った。相違点としては、活性化に要求される処理時間および活性維持時間を評価するために、１、３、６、１２、２４、４８時間、５μＭの本化合物の中から選択された代表化合物（実施例５（ＹＴＫ－１００５）、実施例６（ＹＴＫ－１２０５）、実施例７（ＹＴＫ－１３０５）、実施例２（ＹＴＫ－２２０５）、実施例３（ＹＴＫ－３３０５）、実施例１４（ＹＴＫ－１１０８）、実施例８（ＹＴＫ－１０５）、実施例９（ＹＴＫ－２０５））を処理した。他方では、２４時間、１０μＭの本化合物の中から選択された代表化合物（実施例１０（ＹＴ５－１）、実施例１１（ＹＴ５－２）、実施例１６（ＹＴ８－８）、実施例１５（ＹＴ８－７）、実施例１７（ＹＴＫ－１０７）、実施例１８（ＹＴＫ－２０７）、実施例２０（ＡＴＢ１００４１）、実施例２１（ＡＴＢ１００４２）、実施例２２（ＡＴＢ１００４３）、実施例２３（ＡＴＢ１００４４）、実施例２４（ＡＴＢ１００４５）、実施例２５（ＡＴＢ１００４６）を処理した。免疫ブロッティング法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化し、その結果は図３に示す。図４から分かるように、本発明によるｐ６２リガンド化合物を処理した場合、化合物の処理によって漸増的にマクロオートファジー活性の標識子であるＬＣ３の水準が増加することを確認することができた。
【0194】
実験例４．免疫ブロッティングによる培養細胞内オートファジー活性評価
対照群化合物のオートファジー活性効能を調べるために、ＬＣ３をマーカーとして用いて実験例２と同様の方法で免疫ブロッティングを行った。対照群化合物としては、下記の構造を有する化合物を用いた。
対照群化合物のオートファジー活性効能を調べるために、ＬＣ３をマーカーとして用いて実験例２と同様の方法で免疫ブロッティングを行った。対照群化合物としては、下記の構造を有する化合物を用いた。
【0195】
【表2】
【0196】
前記化合物を時間別または濃度別に処理して確認し、免疫ブロッティング法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。その結果を図５に示す。図５に示すように、前記対照群化合物は、処理した時間または濃度と関係なく、マクロオートファジー活性の標識子であるＬＣ３の水準が増加しないことを確認することができた。
【0197】
実験例５．免疫蛍光染色法および共焦点顕微鏡による培養細胞内オートファジー活性評価
前記化合物（実施例１－２５）のｐ６２タンパク質活性およびオートファジー現象の活性程度を把握するために、ｐ６２とＬＣ３をマーカーとして用いて免疫蛍光染色法を行った。培養された細胞内で新規ｐ６２リガンドとその異性体によるｐ６２活性およびオートファジー現象の活性程度を把握するために、子宮頸癌患者由来細胞株のＨｅｌａ細胞株に新規ｐ６２リガンド化合物（ＹＴＫ－１２０５、ＹＴＫ－１３０５、ＹＴＫ－２２０５、ＹＴＫ－３３０５、ＹＴＫ－１０５、ＹＴＫ－２０５、ＹＴ５－１、ＹＴ９－１、ＹＴ５－２、ＹＴ９－２、ＹＴ８－２、ＹＴ８－１、ＹＴＫ－１０７、ＹＴＫ－２０７）を処理して培養した後、オートファジー現象の標識子としてＬＣ３の斑点の発現程度と位置およびｐ６２との斑点位置の共存性を観察した。
前記化合物（実施例１－２５）のｐ６２タンパク質活性およびオートファジー現象の活性程度を把握するために、ｐ６２とＬＣ３をマーカーとして用いて免疫蛍光染色法を行った。培養された細胞内で新規ｐ６２リガンドとその異性体によるｐ６２活性およびオートファジー現象の活性程度を把握するために、子宮頸癌患者由来細胞株のＨｅｌａ細胞株に新規ｐ６２リガンド化合物（ＹＴＫ－１２０５、ＹＴＫ－１３０５、ＹＴＫ－２２０５、ＹＴＫ－３３０５、ＹＴＫ－１０５、ＹＴＫ－２０５、ＹＴ５－１、ＹＴ９－１、ＹＴ５－２、ＹＴ９－２、ＹＴ８－２、ＹＴ８－１、ＹＴＫ－１０７、ＹＴＫ－２０７）を処理して培養した後、オートファジー現象の標識子としてＬＣ３の斑点の発現程度と位置およびｐ６２との斑点位置の共存性を観察した。
【0198】
免疫蛍光染色のために、２４－ウェルプレートにカバーガラスを位置させ、細胞を分注して２４時間培養した後、５ｕＭの本発明による新規ｐ６２リガンドを処理した。化合物の作用のために２４時間さらに培養した後、培地を除去し、常温でホルムアルデヒドを用いて細胞を固定した。非特異的染色を防止するために、細胞を遮断溶液に常温で１時間反応させた後、遮断溶液を用いて一定比率で希釈したＬＣ３抗体を処理した後、常温で１時間反応させた。抗体処理済みの細胞はＰＢＳで３回洗浄し、遮断溶液を用いてヤギ由来二次抗体を一定比率で希釈した後、常温で３０分反応させた。再びＰＢＳで３回洗浄し、細胞内核染色のために、ＤＡＰＩ染色後、共焦点顕微鏡によりｐ６２もＬＣ３の発現程度、細胞内斑点形成および細胞内共存の程度を観察した。結果は図５に示す。免疫蛍光染色法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。
【0199】
図６から確認できるように、本発明によるｐ６２リガンド化合物を処理した後、ｐ６２タンパク質の細胞内斑点形成、オートファゴソーム標識子であるＬＣ３の細胞内斑点と位置共存性の増加およびＬＣ３の細胞内斑点形成の増加を示していることを確認することができた。
【0200】
実験例６．免疫蛍光染色法および共焦点顕微鏡による培養細胞内オートファジー活性評価
対照群化合物（ＹＯＫ－Ａ－１１０４、ＹＯＫ－Ｇ－１１０４、ＹＴＫ－１００５、ＹＴＫ－１１０５－１）のｐ６２タンパク質の活性およびオートファジー現象の活性程度を把握するために、ｐ６２とＬＣ３をマーカーとして用いて実験例４と同様の方法で免疫蛍光染色法を行った。ＹＯＫ－Ａ－１１０４、ＹＯＫ－Ｇ－１１０４は、以下の化学式を有する化合物である。
対照群化合物（ＹＯＫ－Ａ－１１０４、ＹＯＫ－Ｇ－１１０４、ＹＴＫ－１００５、ＹＴＫ－１１０５－１）のｐ６２タンパク質の活性およびオートファジー現象の活性程度を把握するために、ｐ６２とＬＣ３をマーカーとして用いて実験例４と同様の方法で免疫蛍光染色法を行った。ＹＯＫ－Ａ－１１０４、ＹＯＫ－Ｇ－１１０４は、以下の化学式を有する化合物である。
【0201】
【表3】
【0202】
化合物を濃度別に処理してｐ６２またはＬＣ３の細胞内斑点、すなわち、オートファゴソームが形成され、ｐ６２が伝達される程度を共焦点顕微鏡で観察した。結果は図７に示す。免疫蛍光染色法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。
【0203】
図７から確認できるように、対照群化合物を処理した濃度と関係なく、ｐ６２タンパク質の細胞内斑点形成、オートファゴソーム標識子であるＬＣ３の細胞内斑点と位置共存性の増加およびＬＣ３の細胞内斑点形成が増加しないことを確認することができた。
【0204】
実験例７．免疫蛍光染色法および共焦点顕微鏡による培養細胞内ユビキチン化されたタンパク質がｐ６２媒介オートファジーへの伝達活性評価
前記化合物（実施例１－２５）のユビキチン化されたタンパク質のｐ６２媒介オートファジー伝達活性程度を把握するために、ｐ６２とＦＫ２をマーカーとして用いて実験例４と同様の方法で免疫蛍光染色法を行った。化合物は実施例１５（ＹＴ－８－７）、実施例１６（ＹＴ－８－８）、実施例１７（ＹＴＫ－１０７）および実施例１８（ＹＴＫ－２０７）を処理した。化合物を処理した後、ｐ６２またはＦＫ２の細胞内斑点、すなわち、ｐ６２とユビキチン化されたタンパク質がオートファゴソームに伝達される程度を共焦点顕微鏡で観察した。結果は図８に示す。免疫蛍光染色法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。
前記化合物（実施例１－２５）のユビキチン化されたタンパク質のｐ６２媒介オートファジー伝達活性程度を把握するために、ｐ６２とＦＫ２をマーカーとして用いて実験例４と同様の方法で免疫蛍光染色法を行った。化合物は実施例１５（ＹＴ－８－７）、実施例１６（ＹＴ－８－８）、実施例１７（ＹＴＫ－１０７）および実施例１８（ＹＴＫ－２０７）を処理した。化合物を処理した後、ｐ６２またはＦＫ２の細胞内斑点、すなわち、ｐ６２とユビキチン化されたタンパク質がオートファゴソームに伝達される程度を共焦点顕微鏡で観察した。結果は図８に示す。免疫蛍光染色法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。
【0205】
図８から確認できるように、本発明によるｐ６２リガンド化合物を処理した後、ｐ６２タンパク質とユビキチン化されたタンパク質の標識子であるＦＫ２の細胞内斑点形成およびこれら斑点の位置共存性の増加を確認することができた。
【0206】
実験例８．免疫蛍光染色法および共焦点顕微鏡による培養細胞内変性ハンチンチンタンパク質がｐ６２媒介オートファジーへの伝達活性評価
前記化合物（実施例１－２５）の退行性脳疾患ハンチントン病の主要タンパク質である変性ハンチンチン（Ｈｔｔ－Ｑ１０３）がｐ６２媒介オートファジー伝達活性程度を把握するために、ｐ６２とＨｔｔ－Ｑ１０３－ＧＦＰをマーカーとして用いて実験例４と同様の方法で免疫蛍光染色法を行った。化合物は実施例１０（ＹＴ－５－１）、実施例１５（ＹＴ－８－７）、実施例１６（ＹＴ－８－８）、実施例１７（ＹＴＫ－１０５）、実施例１８（ＹＴＫ－２０７）および実施例２（ＹＴＫ－２２０５）を用いた。化合物を処理した後、ｐ６２またはＨｔｔ－Ｑ１０３－ＧＦＰの細胞内斑点、すなわち、ｐ６２と変性ハンチンチンタンパク質がオートファゴソームに伝達される程度を共焦点顕微鏡で観察した。結果は図９に示す。免疫蛍光染色法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。
前記化合物（実施例１－２５）の退行性脳疾患ハンチントン病の主要タンパク質である変性ハンチンチン（Ｈｔｔ－Ｑ１０３）がｐ６２媒介オートファジー伝達活性程度を把握するために、ｐ６２とＨｔｔ－Ｑ１０３－ＧＦＰをマーカーとして用いて実験例４と同様の方法で免疫蛍光染色法を行った。化合物は実施例１０（ＹＴ－５－１）、実施例１５（ＹＴ－８－７）、実施例１６（ＹＴ－８－８）、実施例１７（ＹＴＫ－１０５）、実施例１８（ＹＴＫ－２０７）および実施例２（ＹＴＫ－２２０５）を用いた。化合物を処理した後、ｐ６２またはＨｔｔ－Ｑ１０３－ＧＦＰの細胞内斑点、すなわち、ｐ６２と変性ハンチンチンタンパク質がオートファゴソームに伝達される程度を共焦点顕微鏡で観察した。結果は図９に示す。免疫蛍光染色法は、３回以上の独立した実験から代表的なものを図式化した。
【0207】
図９から確認できるように、本発明によるｐ６２リガンド化合物を処理した後、ｐ６２タンパク質とユビキチン化されたタンパク質の標識子であるＦＫ２の細胞内斑点形成およびこれら斑点の位置共存性の増加を確認することができた。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6a】
【図6b】
【図7】
【図8】
【図9】
【国際調査報告】