(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-01
(54)【発明の名称】トリプルネガティブ乳癌治療のための併用免疫療法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20220125BHJP
A61K 38/08 20190101ALI20220125BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220125BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220125BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220125BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20220125BHJP
C07K 7/06 20060101ALI20220125BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 T
A61K39/395 N
A61K38/08
A61K45/00
A61P35/00
A61P43/00 121
C12N15/12 ZNA
C07K7/06
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021547041
(86)(22)【出願日】2019-10-19
(85)【翻訳文提出日】2021-06-21
(86)【国際出願番号】 US2019057095
(87)【国際公開番号】W WO2020086412
(87)【国際公開日】2020-04-30
(31)【優先権主張番号】62/855,650
(32)【優先日】2019-05-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/748,511
(32)【優先日】2018-10-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521172848
【氏名又は名称】エスエルエスジー リミテッド エルエルシー
(74)【代理人】
【識別番号】100104215
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 純一
(74)【代理人】
【識別番号】100196575
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 満
(74)【代理人】
【識別番号】100168181
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 哲平
(74)【代理人】
【識別番号】100160989
【弁理士】
【氏名又は名称】関根 正好
(74)【代理人】
【識別番号】100117330
【弁理士】
【氏名又は名称】折居 章
(74)【代理人】
【識別番号】100168745
【弁理士】
【氏名又は名称】金子 彩子
(74)【代理人】
【識別番号】100176131
【弁理士】
【氏名又は名称】金山 慎太郎
(74)【代理人】
【識別番号】100197398
【弁理士】
【氏名又は名称】千葉 絢子
(74)【代理人】
【識別番号】100197619
【弁理士】
【氏名又は名称】白鹿 智久
(74)【代理人】
【識別番号】100201938
【弁理士】
【氏名又は名称】杉山 静可
(72)【発明者】
【氏名】ピープルズ，ジョージ イー．
(72)【発明者】
【氏名】ステルギオウ，アンジェロス エム．
(72)【発明者】
【氏名】サーリス，ニコラス ジェイ．
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA22
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA17
4C084BA23
4C084DA01
4C084MA02
4C084MA55
4C084MA66
4C084NA05
4C084ZB26
4C084ZC75
4C085AA14
4C085BB01
4C085CC23
4C085EE03
4C085FF13
4C085GG02
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA15
4H045CA41
4H045DA86
4H045EA28
(57)【要約】
本発明は、個体においてトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための、及び／又は低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するトリプルネガティブ乳癌を有する個体においてＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導するための方法であって、（ａ）有効量のトラスツズマブ又はその誘導体；及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を、任意に免疫学的アジュバントと共に個体に投与することを含む方法に関する。好ましくは、この方法が患者の免疫系に対するＨＥＲ２ペプチドフラグメントの主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）媒介提示を実質的に増加させるのに十分な、トラスツズマブ又はトラスツズマブ誘導体投与の頻度及び持続時間を含む、準備相又はプライミング相を含む。本発明はまた、個体においてＴＮＢＣを治療するための、及び／又はＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するＴＮＢＣを有する個体においてＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導するための薬物及びキットを含む。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ａ）有効量のトラスツズマブ又はその誘導体、及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を個体に投与することを含む、個体におけるトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための方法。
【請求項2】
前記トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を間隔をあけて投与し、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の投与は、前記トラスツズマブ又はその誘導体の投与の開始後に開始される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記方法は、ネリペピムト-Ｓ又は変異体なしで、前記トラスツズマブ又は誘導体の用量の定期的投与を含む準備相の開始、続いて、前記トラスツズマブ又は誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又は変異体の両方の用量の定期的投与を含む組み合わせ相を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記準備相は、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の前記投与後の前記個体の乳癌細胞上のＨＥＲ２抗原の主要組織適合性複合体タイプＩ媒介提示を増加させるのに十分なトラスツズマブ又はその誘導体の投与の頻度及び期間を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
初期免疫化相中の前記ネリペピムト-Ｓ又は変異体の投与は、トラスツズマブ又はその誘導体の第３、第４、又は第５の投与の完了後に開始される、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記トラスツズマブ又はその誘導体は、８ｍｇ／ｋｇの初期負荷用量及び３週間ごと（ｑ３ｗｋ）の６ｍｇ／ｋｇの維持用量で投与され、１，０００ｍｃｇの用量のネリペピムト-Ｓ又は変異体が投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項7】
前記ＴＮＢＣは、免疫組織化学（ＩＨＣ）による１＋又は２＋のＨＥＲ２発現を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
前記個体は、ＨＬＡ－Ａ２陽性、ＨＬＡ－Ａ３陽性、ＨＬＡ－Ａ２４陽性、又はＨＬＡ－Ａ２６陽性である、請求項１に記載の方法。
【請求項9】
前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する標準的な治療療法（例えば、化学療法、手術原発性腫瘍摘出、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与時に臨床的に無病である、請求項１に記載の方法。
【請求項10】
トラスツズマブ又はその誘導体の投与は、標準的なケア療法の完了後３週間から１２週間の間に開始される、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記ＴＮＢＣは、前記投与の時点でリンパ節転移陰性（例えば、ＡＪＣＣ Ｎ０又はＮ０（ｉ＋））である、請求項１に記載の方法。
【請求項12】
前記トラスツズマブ又はその誘導体は、静脈内に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項13】
前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、皮内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項14】
免疫学的アジュバントを個体に投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項15】
前記免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
２５０ｍｃｇのＧＭ－ＣＳＦの用量が、１日当たり投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記免疫アジュバントは、３週間（ｑ３ｗｋ）ごとに投与される、請求項１４～１６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項18】
１，０００ｍｃｇの前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体及び２５０ｍｃｇの前記ＧＭ-ＣＳＦは、トラスツズマブ又はその誘導体の注入の完了後３０～１２０分後に、３週間ごとに皮内投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項19】
前記免疫学的アジュバントは、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体と共に、同一又は別個の処方で投与される、実施形態１４に記載の方法。
【請求項20】
前記ネリペピムト-Ｓは、アミノ酸配列ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ（配列番号１）からなるＨＥＲ２／ｎｅｕペプチドを含み、前記変異体は、配列番号１の４位にアルファ-アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、配列番号１の７位にアルファ－アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、あるいは、配列番号１の８位にイソフェニルアラニンを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項21】
前記ネリペピムト-Ｓの変異体が投与され、変異体は、ＫＩＦＡｂｕＳＬＡＦＬ（配列番号：２）、
ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ（配列番号：３）、
ＫＩＦＮｌｅＳＬＡＦＬ（配列番号４）、
ＫＩＦＧＳＬＡｂｕＦＬ（配列番号：５）、
ＫＩＦＧＳＬＮｖａＦＬ（配列番号：６）、
ＫＩＦＧＳＬＮｌｅＦＬ（配列番号：７）、及び
ＫＩＦＧＳＬＡイソＦＬ（配列番号：８）の中から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
前記トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、追加の治療薬を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項23】
前記追加の治療剤は、免疫療法薬である、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記免疫療法薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記投与は、腫瘍サイズを減少させ、及び／又は個体の無病生存（無再発生存）を増加させる、請求項１に記載の方法。
【請求項26】
トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、前記個体に対して相乗効果を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項27】
前記方法は、トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、追加の治療薬を個体に投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項28】
前記追加の治療剤は、免疫療法薬である、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記免疫療法薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する治療（例えば、化学療法、手術原発性腫瘍摘出、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与の時点で臨床的に無病であり、前記方法は、前記個体における前記ＴＮＢＣの再発を遅延又は防止する、請求項１に記載の方法。
【請求項31】
トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、前記個体に対して相乗効果を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項32】
有効量のトラスツズマブ及び有効量のネリペピムト-Ｓが前記個体に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項33】
低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するトリプルネガティブ乳癌を有する個体において、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導する方法であって、（ａ）有効量のトラスツズマブ又はその誘導体、及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を個体に投与することを含む、方法。
【請求項34】
前記トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を間隔をあけて投与し、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の投与は、前記トラスツズマブ又はその誘導体の投与の開始後に開始される、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
前記方法は、ネリペピムト-Ｓ又は変異体なしで、前記トラスツズマブ又は誘導体の用量の定期的投与を含む準備相の開始、続いて、前記トラスツズマブ又は誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又は変異体の両方の用量の定期的投与を含む組み合わせ相を含む、請求項３３又は３４に記載の方法。
【請求項36】
前記準備相は、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の前記投与後の前記個体の乳癌細胞上のＨＥＲ２抗原の主要組織適合性複合体タイプＩ媒介提示を増加させるのに十分なトラスツズマブ又はその誘導体の投与の頻度及び期間を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記ネリペピムト-Ｓ又は変異体の投与は、トラスツズマブ又はその誘導体の第３、第４、又は第５の投与の完了後に開始される、請求項３３に記載の方法。
【請求項38】
前記トラスツズマブ又はその誘導体は、８ｍｇ／ｋｇの初期負荷用量及び３週間ごと（ｑ３ｗｋ）の６ｍｇ／ｋｇの維持用量で投与され、１，０００ｍｃｇの用量のネリペピムト-Ｓ又は変異体が投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項39】
前記ＴＮＢＣは、免疫組織化学（ＩＨＣ）による１＋又は２＋のＨＥＲ２発現を有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項40】
前記個体は、ＨＬＡ－Ａ２陽性、ＨＬＡ－Ａ３陽性、ＨＬＡ－Ａ２４陽性、又はＨＬＡ－Ａ２６陽性である、請求項３３に記載の方法。
【請求項41】
前記個体は、ＨＬＡ－Ａ２４陽性である、請求項３３に記載の方法。
【請求項42】
前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する標準的な治療療法（例えば、手術原発性腫瘍摘出、化学療法、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与の時点で臨床的に無病である、請求項３３に記載の方法。
【請求項43】
トラスツズマブ又はその誘導体の投与は、標準的なケア療法の完了後３週間から１２週間の間に開始される、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
前記ＴＮＢＣは、前記投与の時点でリンパ節転移陰性（例えば、ＡＪＣＣ Ｎ０又はＮ０（ｉ＋））である、請求項３３に記載の方法。
【請求項45】
前記トラスツズマブ又はその誘導体は、静脈内に投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項46】
前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、皮内投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項47】
免疫学的アジュバントを投与することをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項48】
前記免疫アジュバントは、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体と共に、同一又は別個の処方で投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項49】
前記免疫アジュバントは、皮内投与される、請求項４７又は４８に記載の方法。
【請求項50】
前記免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、請求項４７又は４８に記載の方法。
【請求項51】
２５０ｍｃｇのＧＭ－ＣＳＦの用量が、１日当たり投与される、請求項５０に記載の方法。
【請求項52】
前記免疫アジュバントは、３週間（ｑ３ｗｋ）ごとに投与される、請求項４７に記載の方法。
【請求項53】
１，０００ｍｃｇの前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体及び２５０ｍｃｇの前記ＧＭ-ＣＳＦは、トラスツズマブ又はその誘導体の注入の完了後３０～１２０分後に、３週間ごとに皮内投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項54】
前記ネリペピムト-Ｓは、アミノ酸配列ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ（配列番号１）からなるＨＥＲ２／ｎｅｕペプチドを含み、前記変異体は、配列番号１の４位にアルファ-アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、配列番号１の７位にアルファ－アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、あるいは、配列番号１の８位にイソフェニルアラニンを有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項55】
前記ネリペピムト-Ｓの変異体が投与され、変異体は、ＫＩＦＡｂｕＳＬＡＦＬ（配列番号：２）、
ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ（配列番号：３）、
ＫＩＦＮｌｅＳＬＡＦＬ（配列番号：４）、
ＫＩＦＧＳＬＡｂｕＦＬ（配列番号：５）、
ＫＩＦＧＳＬＮｖａＦＬ（配列番号：６）、
ＫＩＦＧＳＬＮｌｅＦＬ（配列番号：７）、及び
ＫＩＦＧＳＬＡイソＦＬ（配列番号：８）の中から選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項56】
ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、一次ワクチン接種を表し、前記一次ワクチン接種の完了後に、１、２、３、４、又はそれ以上の追加用量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を、３０ヶ月以上、任意で免疫学的アジュバント（例えば、ＧＭ-ＣＳＦ）と共に、前記一次ワクチン接種よりも少ない周期で投与することをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項57】
２つ以上の追加用量のネリペピムト－Ｓ又はその変異体が投与され、１つの追加用量が６ヶ月ごとに投与される、請求項５６に記載の方法。
【請求項58】
前記方法がトラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、追加の治療薬を個体に投与することをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項59】
前記追加の治療剤は、免疫療法薬である、請求項５８に記載の方法。
【請求項60】
前記免疫療法薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項61】
前記投与は、腫瘍サイズを減少させ、及び／又は個体の無病生存（無再発生存）を増加させる、請求項３３に記載の方法。
【請求項62】
前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する治療（例えば、化学療法、手術原発性腫瘍摘出、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与の時点で臨床的に無病であり、前記方法は、前記個体における前記ＴＮＢＣの再発を遅延又は防止する、請求項３３に記載の方法。
【請求項63】
トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、前記個体に対して相乗効果を有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項64】
有効量のトラスツズマブ及び有効量のネリペピムト-Ｓが前記個体に投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項65】
個体におけるトリプルネガティブ乳癌を治療するための、トラスツズマブ又はその誘導体と併用するための、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体を含む薬剤。
【請求項66】
免疫アジュバントをさらに含む、請求項６５に記載の薬剤。
【請求項67】
前記免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、請求項６６に記載の薬剤。
【請求項68】
個体におけるトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体と併用するための、トラスツズマブ又はその誘導体を含む薬剤。
【請求項69】
第１の容器、第２の容器及び添付文書を含むキットであって、前記第１の容器は、トラスツズマブ又はその誘導体を含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、前記第２の容器は、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、前記添付文書は、前記薬剤を使用してトリプルネガティブ乳癌の個体を治療するための説明書を含む、キット。
【請求項70】
免疫アジュバントをさらに含み、前記免疫アジュバントは、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体と共に、第３の容器内にあるか、又は第２の容器内にある、請求項６９に記載のキット。
【請求項71】
免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、請求項７０に記載のキット。
【請求項72】
前記キットは、トラスツズマブ及びネリペピムト-Ｓを含む、請求項６９又は７０に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願を相互参照
本出願は、２０１９年５月３１日出願の米国仮出願第６２／８５５，６５０号及び２０１８年１０月２１日出願の米国仮出願第６２／７４８，５１１号の優先権を主張するものであり、図表、核酸配列、アミノ酸配列や図面を含む内容を参照することにより組み込まれる。
本出願は、２０１９年５月３１日出願の米国仮出願第６２／８５５，６５０号及び２０１８年１０月２１日出願の米国仮出願第６２／７４８，５１１号の優先権を主張するものであり、図表、核酸配列、アミノ酸配列や図面を含む内容を参照することにより組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
現在の乳癌の標準治療には、ホルモン受容体、エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、及びヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）キナーゼの発現レベルに関する腫瘍のスクリーニングが含まれる。乳癌と診断された女性は、標的療法を開始する前に、手術、化学療法（一部の症例では任意）、放射線療法で予備的に治療されることがある。
【0003】
ホルモン受容体陽性乳癌は、選択的エストロゲン受容体モジュレーター又はＳＥＲＭ（例、タモキシフェン、トレミフェン）、アロマターゼ阻害薬（例、アナストロゾール）、又は選択的エストロゲン受容体分解薬又はＳＥＲＤ（例、フルベストラント）によるホルモン療法の影響を受けやすい。アロマターゼ阻害薬（ＡＩ）等のホルモン療法は、体内でのエストロゲンの産生を遮断するが（典型的には閉経後の女性に使用される）、ＳＥＲＭ及びＳＥＲＤは、乳癌細胞に対するエストロゲンの増殖作用を遮断する。初期ホルモン療法に失敗したホルモン受容体陽性及びＨＥＲ２陰性の患者は、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）４型及び６型の阻害剤（ＣＤＫ４／６阻害剤）パルボシクリブ（イブランス）と、レトロゾール又はフルベストラントのいずれかとの併用で治療されることが多い。ＨＥＲ２－陽性乳癌は、ＨＥＲ２キナーゼ阻害薬（例、トラスツズマブ及びラパチニブ）に感受性があり、一般的に、転移性疾患に用いられる。これらの複数ある標的治療があるにもかかわらず、患者は難治型の乳癌であったり、これを発症することが多い。
【0004】
難治性乳癌の例には、トリプルネガティブ（ＥＲ、ＰＲ、及びＨＥＲ２を欠く）、ホルモン抵抗性（ＳＥＲＭ、ＳＥＲＤ、又はＡＩ抵抗性）、キナーゼ阻害剤抵抗性、又は転移性乳癌腫瘍である原発性腫瘍が含まれる。いったん標的療法が失敗したり、腫瘍が転移すると、難治性乳癌腫瘍を除去するために放射線療法と大量化学療法が必要となる。難治性乳癌の治療に利用可能な化学療法には、アントラサイクリン系薬剤、タキサン系薬剤、エポチロン系薬剤等があるが、有害で、リスクを伴い、費用がかかり、特に転移性疾患の治療には効果がないことが多い。
【0005】
ＨＥＲ２免疫組織化学検査（ＩＨＣ）で１＋又は２＋と定義されるＨＥＲ２低発現乳癌の患者は、現在のところトラスツズマブによる補助療法に適格ではない。無作為の相ＩＩＩ全国手術アジュバント乳腺腸プロジェクト（ＮＳＡＢＰ）Ｂ－４７によると、標準アジュバント化学療法に、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）として米国で現在市販されている）を追加しても、ＨＥＲ２レベルが低いことが判明した早期乳癌患者の浸潤性無病生存率は改善されなかった。従って、ＨＥＲ２低発現乳癌患者は、現在、トラスツズマブ単剤療法によるＨＥＲ２指向性治療に不適格である。現在のガイドラインでは、免疫組織化学（ＩＨＣ）検査でＩＨＣ３＋と定義されるＨＥＲ２蛋白が高値であることが示された場合、又は蛍光ベースのin situハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）でＦＩＳＨ陽性と定義されるＨＥＲ２遺伝子のコピー数が増加していることが示された場合に、乳癌を「ＨＥＲ２陽性」と分類している。
【0006】
乳癌の大半はホルモン受容体陽性（ＥＲ、ＰＲ）又はＨＥＲ２陽性と考えられているが、乳癌と診断された女性の１５～２０％はＥＲ、ＰＲの発現の欠如、又はＨＥＲ２の高レベルの発現を特徴とするトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を有する。ＴＮＢＣはより若い患者（５０歳未満）により頻繁に発生し、一般的に、より攻撃的な挙動を示す。進行性ＴＮＢＣ患者に対する標準緩和的治療の選択肢は、細胞傷害性化学療法に限られている。しかしながら、化学療法に対する最初の反応後であっても、反応の持続期間は短く、ホルモン陽性乳癌と比較して内臓転移、急速進行性疾患、及び生存率が劣る可能性が高い。注目すべきことに、標準フロントライン治療後の初期ＴＮＢＣ患者では再発率が高く、現在では、典型的に、術前又は術後アジュバント化学療法、外科的腫瘍摘出術、及び選択された症例では放射線療法が含まれる。それにもかかわらず、アジュバント／維持療法の設定（すなわち、フロントライン治療の完了後）において、このような再発の遅延や予防に有効であることが証明されている標的療法、化学療法又は免疫療法はない。従って、ＴＮＢＣ等の治療困難な癌に罹患した患者には転移性癌においても新たな治療アプローチが必要であるが、重要なことは、早期疾患におけるアジュバント療法の設定である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Fehrenbacher, L. et al. SABCS, 2017; Abstract GS1-02.
【非特許文献2】Mittendorf, E. et al. Ann Oncol., 2014, 25:1735-1742.
【非特許文献3】Gall, V. et al. Cancer Res., 2017, 77:5374-5383.
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明は、個体においてトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための、及び／又はトリプルネガティブ乳癌、すなわちホルモン受容体陰性であるが低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕ（例えば、ＩＨＣによる１＋又は２＋）も発現している癌を有する個体において、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導するための方法であって、（ａ）有効量のトラスツズマブ（ＴＺ）又はその誘導体、及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ（ＮＰＳ）又はその変異体を個体に投与することを含む方法に関する。ある実施形態において、この方法はさらに、免疫学的アジュバント、例えば、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ-ＣＳＦ）、を個体に投与することを包む。本発明はまた、個体においてＴＮＢＣを治療するための、及び／又は低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕ（例えば、ＩＨＣによる１＋又は２＋）を発現するＴＮＢＣを有する個体において、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導するための薬剤及びキットを含む。
【0009】
本発明の一態様は、（ａ）有効量のトラスツズマブ又はその誘導体、及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を個体に投与することを含む、個体におけるトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための方法に関する。ある実施形態において、トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、間隔をおいて投与され、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、トラスツズマブ又はその誘導体の投与の開始後に開始される。ある実施形態において、この方法は、ネリペピムト-Ｓ又は変異体なしで、トラスツズマブ又はその誘導体の用量の定期的投与を含む準備相の開始、続いて、トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又は変異体の両方の用量の定期的投与を含む組み合わせ相を含む。ある実施形態において、個体はリンパ節転移陰性であり、及び／又はＴＮＢＣはＩＨＣによる１-２＋のＨＥＲ２発現を有する。ある実施形態において、この方法は、免疫学的アジュバント（例えば、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ-ＣＳＦ））を投与する工程をさらに含む。この免疫学的アジュバントは、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体と同じ処方、又は別の処方で投与される。任意で、３０ヶ月以上の期間、ネリペピムト-Ｓによる追加接種を使用することができ、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、一次ワクチン接種相を表すものであり、本方法は、一次ワクチン接種の完了後に、１、２、３、４、又はそれ以上の用量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体（追加投与相）を、任意で、免疫学的アジュバント（例えば、ＧＭ-ＣＳＦ）と共に、一次ワクチン接種よりも少ない周期で投与することをさらに含む。例えば、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の２つ以上の追加用量を投与することができ、この場合、６ヶ月ごとに１回の追加用量が投与される。図２は、免疫学的アジュバント（ＧＭ-ＣＳＦ）及び追加用量が使用される実施形態による治療レジメンの概略を示す（ＮｅｕＶａｘ（ＮＰＳ＋ＧＭ-ＣＳＦ）＋ＴＺの治療群を参照されたい）。
【0010】
本発明の他の態様は、低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するトリプルネガティブ乳癌を有する個体において、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導する方法に関し、この方法は、（ａ）有効量のトラスツズマブ又はその誘導体、及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を個体に投与する工程を含む。ある実施形態において、トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体は間隔をおいて投与され、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、トラスツズマブ又はその誘導体の投与の開始後に開始される。ある実施形態において、本方法は、ネリペピムト－Ｓ又は変異体を含まない、トラスツズマブ又はその誘導体の用量の周期的投与、続いて、トラスツズマブ又は誘導体及びネリペピムト－Ｓ又は変異体の両方の用量の周期的投与を含む組み合わせ相を含む、準備相の開始を含む。ある実施形態において、個体はリンパ節転移陰性であり、及び／又はＴＮＢＣはＩＨＣによる１＋又は２＋のＨＥＲ２発現を有する。ある実施形態において、この方法は、免疫学的アジュバント、例えば、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ-ＣＳＦ）、を投与する工程をさらに含み、この免疫学的アジュバントは、ネリペピムト-Ｓと同じ処方又はその変異体において、又は別の処方で投与される。任意で、ＮＰＳ又はその変異体の３０ヶ月以上の期間、追加接種を用いてもよく、ここで、ＮＰＳ又はその変異体の投与は、一次ワクチン接種相を表し、そしてこの方法は、一次ワクチン接種の完了後に、１、２、３、４又はそれ以上の用量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体（追加投与相）を、任意で、免疫学的アジュバント（例えば、ＧＭ-ＣＳＦ）と共に、一次ワクチン接種よりも少ない周期で投与することをさらに含む。例えば、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の２つ以上の追加用量を投与することができ、この場合、６ヶ月ごとに１回の追加用量が投与される。図２は、免疫学的アジュバント（ＧＭ-ＣＳＦ）及び追加用量が使用される実施形態による治療レジメンの概略を示す（ＮｅｕＶａｘ（ＮＰＳ＋ＧＭ-ＣＳＦ）＋ＴＺの治療群を参照されたい）。
【0011】
本発明の方法のある実施形態において、個体は、ＨＬＡ-Ａ２陽性、ＨＬＡ-Ａ３陽性、ＨＬＡ-Ａ２４陽性、又はＨＬＡ-Ａ２６陽性である。
【0012】
本発明の他の態様は、個体におけるトリプルネガティブ乳癌を治療するための、トラスツズマブ又はその誘導体と併用するための、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体を含む薬剤に関する。任意で、薬剤は、ＧＭ-ＣＳＦ等の免疫学的アジュバントをさらに含むことができる。
【0013】
本発明の他の態様は、個体におけるトリプルネガティブ乳癌を治療するための、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体と併用するための、トラスツズマブ又はその誘導体を含む薬剤に関する。
【0014】
本発明の他の態様は、第１の容器、第２の容器、及び添付文書を有するキットに関し、ここで、第１の容器はトラスツズマブ又はその誘導体を含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、第２の容器はネリペピムト－Ｓ又はその変異体を含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、添付文書は、薬剤を使用してトリプルネガティブ乳癌の個体を治療するための説明書を含む。任意で、キットは免疫学的アジュバント、例えば、ＧＭ-ＣＳＦ、をさらに含み、ここで、免疫学的アジュバントは、又はネリペピムト-Ｓ又はその変異体とともに第３の容器内にあるか、第２の容器内にある。
【0015】
特許出願書類は、色付で作成された少なくとも１の図面を含んでいる。本特許出願又は公開の写しで色付のものは要求があり、かつ、必要な手数料が納付されたときは特許庁により提供される。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1】ＨＥＲ２タンパク質及び９量体ネリペピムト-Ｓペプチド（ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ）が誘導される領域（アミノ酸３６９～３７７）の概略を示す。ＮｅｕＶａｘ（商標）ＨＥＲ-２／ｎｅｕペプチドワクチンは、ネリペピムト-Ｓペプチド及び免疫学的アジュバントＧＭ-CSF（Mittendorf Eet alAnn Oncol、2014、25:1735-42）を含む。ａａ-アミノ酸、ＧＭ-ＣＳＦ-顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ＨＥＲ２-ヒト上皮成長因子受容体２、ＨＬＡ-ヒト白血球抗原、ＭＨＣ-主要組織適合性複合体、ＴＺ-トラスツズマブ。
【図2】ＴＮＢＣ腫瘍を含むＨＥＲ２低発現腫瘍を有する患者において、トラスツズマブとＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチン（ネリペピムト－Ｓ＋ＧＭ－ＣＳＦ）の併用により、疾患の再発を遅延又は予防できるかどうかを検討するヒト臨床試験の研究デザインを示す。この研究デザインは、ＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチン（ＮＰＳ＋ＧＭ-ＣＳＦ）とトラスツズマブ（ＴＺ）の併用する投与群を含み、これは、トリプルネガティブ乳癌の治療のための、及び／又はトリプルネガティブ乳癌を有する個体におけるＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導するための、本発明の方法の実施形態を表す。ＤＦＳ－無病生存期間、ＤＰ－病勢進行、ＧＭ－ＣＳＦ－顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ＨＥＲ２－ヒト上皮成長因子受容体２、ＩＨＣ－免疫組織化学、ＮＰＳ－ネリペピムト－Ｓ、ｑ３ ｗｋｓ－３週ごと、ＴＺ－トラスツズマブ。
【図3】治療関連有害事象の棒グラフを示す。介入を受けた患者の９３．１％（２４３／２６１）が少なくとも１件のＴＲＡＥを経験した。群間でＴＲＡＥに差はなかった。ＴＲＡＥの大半はグレード１又は２であり、その内容は局所注射部位反応、皮膚硬結、そう痒症及び疲労であった。ＴＲＡＥ：治療関連有害事象、ＴＺ：トラスツズマブ。
【図4】心臓毒性の線グラフを示す。心駆出率の経時変化（ｐ＝０．５５８）及び各時点において、投与群間に差は認められなかった。トラスツズマブにＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチンを添加しても、トラスツズマブ単独と比較して心毒性が付加されることはなかった。ＴＺ、トラスツズマブ。
【図5】無病生存期間のグラフを示しており、ＩＴＴ（治療意図）全試験集団において、併用療法群（ＮｅｕＶａｘ＋ＴＺ）を支持する臨床的に意味のあるＤＦＳ中央値の差を示す。ＮｅｕＶａｘ＋ＴＺ（Ｎ＝１３６）、３６ヵ月ＤＦＳ＝８３．１％、２４ヵ月ＤＦＳ＝８８．６％、ＴＺ（Ｎ＝１３９）、３６ヵ月ＤＦＳ＝８２．５％、２４ヵ月ＤＦＳ＝８２．５％、追跡期間中央値１９．６（ＩＱＲ１２．５－２８．３）月、Ｐ値＝０．２５７、ハザード比（ＨＲ）＝０．６７（ＣＩ０．３３－１．３５）、最終解析：追跡期間中央値２５．７月、Ｐ値＝０．１７５、ＨＲ＝０．６２（０．３１～１．２５）、ＣＩ：信頼区間、ＤＦＳ：無病生存期間、ＩＴＴ：治療意図、ＩＱＲ：四分位範囲、ＴＺ：トラスツズマブ。
【図6】ＩＴＴ集団内のホルモン受容体陽性（ＨＲ＋）患者における無病生存期間のグラフを示しており、ＤＦＳ平均に群間差はないことが示されている。ＤＦＳはＮＳＡＰＢ－４７試験（８９％）と同等であったほか、この疾患の自然史を標準一次治療後に追跡する初期ＴＮＢＣ試験に関する最近のいくつかの発表もあった。ＮｅｕＶａｘ＋ＴＺ（Ｎ＝８２）：３６か月ＤＦＳ＝８７．１％、２４か月ＤＦＳ＝８７．１％、ＴＺ（Ｎ＝９２）：３６か月ＤＦＳ＝８９．７％、２４か月ＤＦＳ＝８９．７％、追跡期間中央値１９．５（ＩＱＲ１５．４）月、Ｐ値＝０．５６７、ＨＲ＝０．５５（ＣＩ０．２７－１．１０、最終解析：追跡期間中央値２５．４か月、Ｐ値－０．７１４、ＨＲ＝１．１９（０．４６－３．０１）、ＣＩ：信頼区間、ＤＦＳ：無病生存期間、ＨＲ：ホルモン受容体、ＩＴＴ：治療意図、ＩＱＲ：四分位範囲、ＴＺ：トラスツズマブ。
【図7】ＴＮＢＣ患者（ＨＲ陰性、ＨＥＲ２ ＩＨＣ１＋又は２＋と定義）における無病生存率のグラフを示しており、併用群（ＮｅｕＶａｘ（商標）＋ＴＺ）を支持する臨床的に意味のある統計的有意差がＤＦＳ平均で示されている。ＮｅｕＶａｘ＋ＴＺ（Ｎ＝５３）：３６ヵ月ＤＦＳ＝７２．９％、２４ヵ月ＤＦＳ＝９１．１％、ＴＺ（Ｎ＝４５）：３６ヵ月ＤＦＳ＝６９．９％、２４ヵ月ＤＦＳ＝６９．９％、追跡期間中央値１９．３（ＩＱＲ１２．８－２８．０）月、Ｐ値＝０．０２３、ＨＲ＝０．２６（Ｃｌ０．０９－０．９０）。最終解析：追跡期間中央値２６．１月、Ｐ値＝０．０１３、ＨＲ：０．２６（０．０８－０．８１）、ＤＦＳ：無病生存期間、ＩＱＲ：四分位範囲、ＴＮＢＣ：トリプルネガティブ乳癌、ＴＺ：トラスツズマブ。
【図8】ＴＮＢＣ患者における全てのＨＬＡ型に対する相対的有益性を示すＦｏｒｒｅｓｔプロットを示す。
【図9】ＨＬＡ－Ａ２４＋ＴＮＢＣ患者に対するＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法による推定ＤＦＳを示す。
【図10】全ＨＬＡ－Ａ２４＋患者に対するＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ推定ＤＦＳを示す。
【発明を実施するための形態】
【0017】
本発明は、個体においてトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための、及び／又はＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するＴＮＢＣを有する個体においてＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導するための方法であって、（ａ）有効量のトラスツズマブ又はその誘導体、及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を個体に投与することを含む方法に関する。ある実施形態において、トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体は間隔をおいて投与され、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、トラスツズマブ又はその誘導体の投与の開始後に開始される。例えば、この方法は、ネリペピムト-Ｓ又は変異体なしで、トラスツズマブ又はその誘導体の用量の定期的投与を含む準備相の開始、続いて、トラスツズマブ又は誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又は変異体の両方の用量の定期的投与を含む組み合わせ相を含んでもよい。ある実施形態において、ネリペピムト-Ｓ又は変異体の投与は、トラスツズマブ又は誘導体の３回目、４回目、又は５回目の投与の完了後に開始される。ある実施形態において、トラスツズマブ又はその誘導体は、８ｍｇ／ｋｇの初期負荷用量及び３週間ごと（ｑ３ｗｋ）の６ｍｇ／ｋｇの維持用量で投与され、１，０００ｍｃｇの用量のネリペピムト-Ｓ又は変異体が投与される。
【0018】
ある実施形態において、準備相は、各種ＨＥＲ２タンパク質ペプチド断片（ネリペピムト-Ｓ又はその変異体のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有するペプチド、すなわちワクチンの抗原対象を含む）の、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）タイプＩコンテキストにおける、乳癌細胞膜（ヒト白血球抗原［ＨＬＡ］分子に結合した）上の宿主（患者）の免疫系への提示を増加させるのに十分な、トラスツズマブ又はその誘導体（ネリペピムト-Ｓでのワクチン接種前）の投与の頻度及び持続時間を含む。このトラスツズマブ誘導、又は誘導体により誘導される、ＨＥＲ２抗原提示が、患者の乳癌細胞上で実質的に増加してから、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を（抗原提示細胞の活性化及び患者の免疫シナプス上のナイーブＣＤ８＋Ｔ－リンパ球の結合により）投与すると、患者の乳癌細胞上のこの抗原に対する細胞毒性Ｔ－リンパ球（ＣＴＬ）の誘導、活性化、及び増殖につながる。これにより、患者のＨＥＲ２発現乳癌細胞が免疫学的に媒介されて死滅する。従って、これらの２つの薬剤（まずトラスツズマブ又はその誘導体、続いてネリペピムト－Ｓ又はその変異体）の投与順序又はスケジュールを用いた準備相を用いることによって、これらの２つの薬剤が最適に相乗的であること、すなわち、トラスツズマブ又は誘導体による抗原性及び免疫原性を促進し、従って、個体におけるネリペピムト－Ｓ又はその変異体の免疫学的に媒介される作用の薬力学的エンハンサーとして確実に作用する。
【0019】
図２に示す、ＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチン（ＮＰＳ＋ＧＭ－ＣＳＦ）及びトラスツズマブ（ＴＺ）を併用する、本明細書の材料及び方法及び実施例に記載される研究デザインにおける併用療法群は、トリプルネガティブ乳癌の治療のための、及び／又はトリプルネガティブ乳癌を有する個体におけるＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導するための、本発明の方法の実施形態を表す。他の用量、用量の頻度、及び治療期間を決定することができる。例えば、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）の本質的に変異体であるex vivoアッセイを使用して、所与の患者又は患者群におけるプライミング相に十分なトラスツズマブ又はその誘導体の他の用量、頻度、及び持続時間を決定することができる。抗原特異的Ｔリンパ球を含む末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、インキュベーション培地中の様々な濃度のトラスツズマブの存在下でＨＥＲ２を発現する乳癌細胞株とコインキュベートすることができる。実験で用いたin vitroトラスツズマブ用量と活性化ＣＴＬを介した乳癌細胞溶解との間には用量関係がある。これらのアッセイのin vitro法は、Gall VAら、Cancer Res、2017 Oct 1;77(19):5374-5383、及びMittendorf EAら、Ann Surg Oncol、2006 Aug;13(8):1085-98の「方法」の項に記載されており、これらの全体は参照により本明細書に組み込まれる。これらの試験では、ＰＢＭＣはワクチン接種した患者由来であり、ＮｅｕＶａｘワクチンのみの治療（すなわち、単独療法）を受けた患者の臨床試験ではワクチンの開始後６～８週間に相当する早期免疫相相応の約３回又は４回の初回ワクチン接種を受けていると仮定している。
【0020】
ex vivoでのＭＬＲの要素を以下に簡単に記載する。
（１）ＨＥＲ２低発現乳癌細胞株（ＴＮＢＣ表現型乳癌細胞株を含む）、
（２）細胞培養培地中のトラスツズマブ又は誘導体（様々な濃度のトラスツズマブ）溶液、及び
（３）ＰＢＭＣ（本質的には、ＮＰＳ又は変異体ワクチン接種患者由来のＴリンパ球）。
（１）ＨＥＲ２低発現乳癌細胞株（ＴＮＢＣ表現型乳癌細胞株を含む）、
（２）細胞培養培地中のトラスツズマブ又は誘導体（様々な濃度のトラスツズマブ）溶液、及び
（３）ＰＢＭＣ（本質的には、ＮＰＳ又は変異体ワクチン接種患者由来のＴリンパ球）。
【0021】
（１）＋（２）を、種々のin vitro濃度／用量で、コインキュベートする。次に、（３）を種々の存在レベルのＴリンパ球に添加する。これは、トラスツズマブ又はその誘導体、続いてＮＰＳ又はその変異体の臨床的な投与順序に対応／シミュレートするものである。
【0022】
別の選択肢は、（１）＋（３）、続いて（２）を実行することである。これは、ＮＰＳ又はその変異体、続いてトラスツズマブ又はその誘導体の投与の臨床シーケンスに対応／シミュレートするものである。
【0023】
別の選択肢は、（１）＋（２）＋（３）を同時に実行し、次いで（２）を実行することである。これは、トラスツズマブ又はその誘導体とＮＰＳ又はその変異体との同時投与に対応／シミュレートするものである。
【0024】
本発明の方法のある実施形態において、ＴＮＢＣは、ＩＨＣによる１＋又は２＋のＨＥＲ２発現を有する。
【0025】
本発明の方法のある実施形態において、個体は、ＨＬＡ-Ａ２陽性、ＨＬＡ-Ａ３陽性、ＨＬＡ-Ａ２４陽性、又はＨＬＡ-Ａ２６陽性である。
【0026】
本発明の方法のある実施形態において、個体はＨＬＡ-Ａ２４陽性である。実施例２に記載されているように、ＨＬＡ－Ａ２４＋ＴＮＢＣ患者は、Ｅ７５とこのＨＬＡ－型との間の最低予測結合能にもかかわらず、無病生存において有意な改善を有した。実際、ＮＰＳ＋トラスツズマブ併用でこれまでにみられた最も強力な臨床効果は、ＴＮＢＣコホート及びＩＴＴ集団（後者はホルモン受容体の状態に関係なくＨＥＲ２ ＩＨＣ １＋／２＋）のいずれについてもＨＬＡ－Ａ２４＋患者であった。ＨＬＡ－Ａ２４は、アジア／太平洋流域に住む集団で最も多く発現するＨＬＡ型である。
【0027】
本発明の方法のある実施形態において、個体はＴＮＢＣのための治療、例えば、標準的なケア療法（例えば、手術、化学療法、放射線療法、又は上記の２つ以上の組み合わせ））を受けた後に、投与の時点で臨床的に疾患（癌）を有していない。ある実施形態において、トラスツズマブ又はその誘導体の投与は、標準的なケア療法の完了後３週間～１２週間の間に開始される。ＴＮＢＣは、リンパ節陽性又はリンパ節陰性であってよい。ある実施形態において、ＴＮＢＣが投与の時点にリンパ節転移陰性（例えば、ＡＪＣＣ Ｎ０又はＮ０（ｉ＋））である。
【0028】
他の実施形態では、個体が投与の時点で癌でないわけではない。
【0029】
ある実施形態において、トラスツズマブが投与される。ある実施形態において、トラスツズマブの誘導体が投与される。トラスツズマブ又はその誘導体は、任意の有効な方法によって個体に投与される。ある実施形態において、トラスツズマブ又はその誘導体は、静脈内に投与される。
【0030】
ネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、任意の有効な方法及び経路によって個体に投与することができる。ネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）におけるその後の発現のために、ペプチドの形成で、又はペプチドをエンコードする核酸の形成において投与することができる。ネリペピムト-Ｓ又はその変異体をエンコードする核酸を投与する場合、核酸は、ネイキッドＤＮＡ又はＲＮＡとして投与するか、又はウイルス又は非ウイルスベクター中で投与することができる。ある実施形態において、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体（ペプチド又は核酸）は個体に皮内投与される。
【0031】
ＮＰＳ又はその変異体をコードする遺伝子配列の導入は、様々な手段によって達成することができる。この方法は、ＮＰＳ又はその変異体をコードするヌクレオチド配列を含むベクターを個体に投与することを含む（Tindle, R.W.ら、Virology、1994、200:54）。他の実施形態において、本方法は、ＮＰＳ又はその変異体をコードするネイキッド核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）を、又は他の実施形態において、このようなペプチドの２つ以上のペプチドを投与することを含む（Nabelら、PNAS-USA、1990、90: 11307）。他の実施形態において、マルチエピトープ、アナログベースの癌ワクチンが利用される。それぞれ、本発明の別個の実施形態に相当する。
【0032】
核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）は、当該分野で公知の任意の手段（皮内、非経口、又は静脈内投与を含む）を介して、又は他の実施形態においては、遺伝子銃を用いて個体に投与される。他の実施形態において、核酸は組成物で投与され、他の実施形態において本明細書に列挙される任意の実施形態に対応する。ＤＮＡ又はＲＮＡは、ネイキッド核酸として個体に投与され得るか、又はベクターによって運ばれる。
【0033】
本発明の方法に従う使用されるベクターは、他の実施形態において、in vivoでの個体におけるペプチド（例えば、ＮＰＳペプチド又はその変異体）の発現を容易にするか、又は可能にする任意のベクターを含み得る。「ベクター」という用語は、コード配列情報（例えば、ＮＰＳペプチド又はその変異体をコードする核酸配列）を細胞又は個体に転移するために使用可能な任意の分子（例えば、核酸、プラスミド、ウイルス、粒子）を指すのに使用される。いくつかの癌を対象とした核酸ワクチンは、臨床試験に入っている（Wahren Bら、"DNA vaccines: Recent Developments and Future"、Vaccines、2014、2:785-796; Fioretti Dら、"DNA vaccines: Developing New Strategies Against Cance, Journal of Biomedicine and Biotechnology、2010、2010(938):174378）。
【0034】
一実施形態において、ベクターはウイルスベクターである。他の実施例において、ベクターは非ウイルスベクターである。一実施形態において、非ウイルスベクターは、プラスミドＤＮＡ又はｍＲＮＡベクターのような核酸ベクターである（例えば、Weide B.ら、"plasmid DNA- and messenger RNA-based Anti-Cancer Vaccination"、Immunol Lett、2008、115(1):33-42); Kim H.ら、"Self-Assembled Messenger RNA Nanoparticles(mRNA-NP) for Efficient Gene Expression"、Sci Rep、2015、5:12737); Ulmer J.B.ら、"RNA-based Vaccines"、Vaccine、2012、30:4414-4418を参照のこと）。他の実施形態において、ベクターは、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第４，７２２，８４８号に記載されているような、ワクシニアや鶏痘のような弱毒ウイルスを含む。他の実施形態において、ベクターは、
Stoverら、Nature,1991,351:456-460に記載されるようなＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ Ｇｕｅｒｉｎ）である。
Stoverら、Nature,1991,351:456-460に記載されるようなＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ Ｇｕｅｒｉｎ）である。
【0035】
ＮＰＳペプチド又は変異体ペプチド、例えば、Salmonella typhiベクター、Listeria monocytogenesベクター等の治療的投与又は免疫化に有用な他のベクターは、本明細書の記載から当業者に明らかであろう。in vivoで対象に、かつin vitroで細胞に核酸分子を投与するために使用されるベクターとしては、これらに限られるものではないが、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス（例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ））、レンチウイルス、痘そうウイルス（例えば、ワクシニアウイルス、修飾ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ））、ヘルペスウイルス（例えば、サイトメガロウイルス）、センダイウイルス、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、プラスミド、カチオン性脂質、リポソーム、及びナノ粒子が挙げられる。
【0036】
「コード配列」は、ｍＲＮＡに転写及び／又はポリペプチドに翻訳される核酸配列である。コード配列の境界は、５'末端にある翻訳開始コドンと３'末端にある翻訳終結コドンとによって決定される。コード配列としては、これらに限定されるものでないが、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、及び組換えポリヌクレオチド配列が挙げられる。変異体又は類似体は、コード配列の一部の欠失によって、配列の挿入によって、及び／又は配列内の１つ以上のヌクレオチドの置換によって作製される。部位特異的突然変異誘発のような核酸配列を修飾するための技術は当業者に周知である（例えば、Sambrookら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual、Second Edition,1989; DNA Cloning、Vols .I and II, D. N. Glover編,1985を参照のこと）。任意で、本発明の核酸配列、そのようなポリヌクレオチドを利用する本発明の組成物及び方法は、非コード配列を含むことができる。
【0037】
「操作可能に連結された」という用語は、本明細書中ではこのように記載されたフランキング配列がそれらの通常の機能を実行するように構成又は組み立てられる、フランキング制御配列の配置を指すために使用される。従って、コード配列に操作可能に連結されたフランキング制御配列は、制御配列と適合する条件下で、コード配列の複製、転写及び／又は翻訳に影響を及ぼし得る。例えば、プロモーターがそのコード配列の転写を指示することができる場合、コード配列はプロモーターに操作可能に連結される。フランキング配列はそれが正しく機能する限り、コード配列と連続している必要はない。従って、例えば、介在する非翻訳ではあるが転写されている配列がプロモーター配列とコード配列との間に存在することができ、プロモーター配列はなおコード配列と「操作可能に連結されている」と考えることができる。ペプチド（例えば、ＮＰＳペプチド又は変異体ＮＰＳペプチド）をコードする各核酸配列は、典型的にはそれ自体操作可能に連結されたプロモーター配列を有する。
【0038】
他の実施形態において、ベクターは本明細書に記載されているように、免疫調節化合物をさらにコードする。他の実施形態において、個体は、ＮＰＳペプチド又は変異体ペプチドをコードするベクターの個体への投与と同じ、同時、前、又は後に、さらなるベクターをコードする追加のベクターを投与される。
【0039】
任意で、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、ネリペピムト-Ｓ又は変異体が、別のネリペピムト-Ｓ又は変異体アミノ酸配列、又は異なるペプチドの配列に直接的又は間接的に融合される、融合ポリペプチドの形態で投与されてもよい。任意で、ネリペピムト－Ｓをコード化する核酸又はその変異体は、ネリペピムト－Ｓの複数のコピーをコード化する核酸、又は変異体アミノ酸配列（複数量体として）を含む遺伝的構築物の形態で投与されてもよい。任意で、遺伝子構築物は、他のペプチドをコードするさらなる核酸を含むことができる。
【0040】
好ましくは、治療には、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体と共に、同じ又は別の処方内で投与される、免疫学的アジュバント、例えば、ＧＭ-ＣＳＦ、の投与が含まれる。アジュバントは、任意の有効な方法によって個体に投与される。ある実施形態において、アジュバントは、皮内投与される。
【0041】
ＮＰＳ又はその変異体は、免疫学的アジュバント又はアジュバントの組み合わせと共に投与することができる。ＮＰＳ又はその変異体を含有する免疫原又は組成物は、本明細書ではワクチン、ペプチドワクチン等と呼ばれる。
【0042】
アジュバントは、ミョウバン塩及び他のミネラルアジュバント、細菌産物又は細菌由来アジュバント、テンソアクティブ剤（例えば、サポニン）、水中油（ｏ／ｗ）及び油中水（ｗ／ｏ）エマルジョン、リポソームアジュバント、サイトカイン（例えば、ＩＬ-２、ＧＭ-ＣＳＦ、ＩＬ-１２、及びＩＦＮ-γ）、ならびにアルファ－ガラクトシルセラミド類似体のような任意の部類のものであってよい。アジュバントとしては、これらに限られるものではないが、モンタニド乳剤、ＱＳ２１、フロイント完全又は不完全アジュバント、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ-Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）、及びミョウバンが例示される。一実施形態において、アジュバントは、ＮＰＳ又はその変異体に対する免疫系のＣＴＬ応答を増強する薬剤である。アジュバントは、ＮＰＳもしくはその変異体と同じ組成で、又は１つ以上のトラスツズマブもしくはその誘導体と同じ組成で、又はＮＰＳもしくはその変異体とトラスツズマブもしくはその誘導体の両方と同じ組成物で、又はＮＰＳもしくはその変異体とトラスツズマブもしくはその誘導体とは別の組成で投与することができる。
【0043】
ある実施形態において、アジュバントは、ＧＭ-ＣＳＦであり、２５０ｍｃｇの用量のＧＭ-ＣＳＦが１日当たり投与される。アジュバントは、３週間ごと（ｑ３ｗｋ）等の間隔で投与してもよい。ある実施形態において、１，０００ｍｃｇのネリペピムト-Ｓ又はその変異体、及び２５０ｍｃｇのＧＭ-ＣＳＦを、トラスツズマブ又はその誘導体の注入完了後３０～１２０分の３週間ごとに皮内投与する。
【0044】
ネリペピムト-Ｓ（ＮＰＳ）は、アミノ酸配列ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ（配列番号１）からなるＨＥＲ２／ｎｅｕペプチドを含み、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の特定ＨＬＡ分子への結合後に特定ＣＤ８＋ＣＴＬを刺激する。ＮＰＳ及び／又はＮＰＳの変異体を個体に投与することができる。ＮＰＳ変異体は、１つ以上のアミノ酸置換を有する。ＮＰＳのアミノ酸は、天然に存在するアミノ酸又は修飾されたアミノ酸で置換されてもよい。ＮＰＳ変異体ペプチド及びそれらの製造については、米国特許第８，８０２，６１８号に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態において、ＮＰＳ変異体は、配列番号１の４位にアルファ－アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、配列番号１の７位にアルファ－アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、又は配列番号１の８位にイソフェニルアラニンを有する。ある実施形態において、ＮＰＳ変異体は、ＫＩＦＡｂｕＳＬＡＦＬ（配列番号：２）、ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ（配列番号：３）、ＫＩＦＮｌｅＳＬＡＦＬ（配列番号：４）、ＫＩＦＧＳＬＡｂｕＦＬ（配列番号：５）、ＫＩＦＧＳＬＮｖａＦＬ（配列番号：６）、ＫＩＦＧＳＬＮｌｅＦＬ（配列番号：７）、及びＫＩＦＧＳＬＡイソＦＬ（配列番号：８）の中から選択される。ＮＰＳ及びＮＰＳ変異体は当該技術分野において公知の方法により製造される。従って、ペプチドは、合成、組換え的に産生されるか、又は公知の供給源から精製される。
【0045】
トラスツズマブは、ヒト上皮成長因子受容体タンパク質（ＨＥＲ２）の細胞外ドメインに高い親和性で選択的に結合する、ヒト化モノクローナル抗体である組換えＩｇＧ１カッパである。トラスツズマブは米国特許第５，８２１，３３７号に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。トラスツズマブの軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列は、配列番号９及び配列番号１０に規定されている。
【0046】
トラスツズマブの軽鎖のアミノ酸配列：DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASFLYSGVPS RFSGSRSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYTTPPTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC（配列番号９）。
トラスツズマブの重鎖のアミノ酸配列：EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR IYPTNGYTRY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCSRWG GDGFYAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG（配列番号１０）。
トラスツズマブの重鎖のアミノ酸配列：EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR IYPTNGYTRY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCSRWG GDGFYAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG（配列番号１０）。
【0047】
本明細書中の方法及び組成物のある実施形態において、トラスツズマブ－アン（Ｋａｎｊｉｎｔｉ（商標）Ａｍｇｅｎ及びＡｌｌｅｒｇａｎ）、トラスツズマブ－ｑｙｙｐ（Ｔｒａｚｉｍｅｒａ（商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）、トラスツズマブ－ｄｔｂ（Ｏｎｔｒｕｚａｎｔ（商標）、Ｓａｍｓｕｎｇ Ｂｉｏｅｐｉｓ）、トラスツズマブ－ｐｋｒｂ（Ｈｅｒｚｕｍａ（商標）、Ｃｅｌｌｔｒｉｏｎ）、トラスツズマブ－ｄｋｓｔ（Ｏｇｉｖｒｉ（商標）、Ｍｙｌａｎ ＧｍｂＨ）、又は上記のいずれかの誘導体が投与される。
【0048】
任意で、本明細書中の方法及び組成物の種々の実施形態において、トラスツズマブ誘導体は、トラスツズマブの代わりに使用される。トラスツズマブの誘導体を使用する場合、ＨＥＲ２の細胞外ドメインに対する結合特異性を保持する。好ましくは、トラスツズマブが細胞ベースのアッセイにおいて高い親和性（例えば、Ｋｄ≦５ｎＭ）でＨＥＲ２に選択的に結合する。
【0049】
トラスツズマブ誘導体の例にはSelis Fら、Int J Mol Sci、2016 Apr; 17(4): 491の表１及び２に列挙されるものが含まれるが、これらに限定されるものではない（例えば、ＴｒａｓｔＦａｂ、ＴｒａｓｔＦａｂ（ａｂ'）２、ＴｒａｓｔＦａｂ'、ＴｒａｓｔＦａｂ'－Ｃｙｓ－ＰＥＧ（２×１０ｋＤａ）、ＴｒａｓｔＦａｂ'－Ｃｙｓ－ＰＥＧ（２×２０ｋＤａ）、及びＴｒａｓｔＦａｂ－（Ｎ－Ｔｅｒｍ）－ＰＥＧ２０ｋＤａ）。トラスツズマブ又はトラスツズマブ誘導体は、修飾されていても修飾されていなくてもよく、コンジュゲートされていてもコンジュゲートされていなくてもよい。
【0050】
ＮＰＳ等のペプチド又はトラスツズマブ等の抗体の断片及び変異体を生成し、当技術分野で知られている標準的な技法を使用して、その標的に対する免疫原性活性又は親和性の有無について試験することができる。本発明の範囲内で意図されるポリヌクレオチド、ペプチド、キメラ、及びコンジュゲートされたポリヌクレオチドはまた、本明細書中に特に例示される本発明の配列とのより特定の同一性及び／又は類似性の範囲に関して定義される。配列同一性は、典型的には６０％超、好ましくは７５％超、より好ましくは８０％超、さらにより好ましくは９０％超であり、９５％超である。配列の同一性及び／又は類似性は、本明細書に例示される配列と比較して、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８又は９９％である。特に明記しない限り、本明細書で使用されるように、２つの配列のパーセント配列同一性及び／又は類似性は、KarlinとAltschul(1990)のアルゴリズム（Karlin、S.とAltschul、SF(1990) "Methods for Assessing Statistical Significance of Molecular Sequence Features by Using General Scoring Schemes"、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268）を使用して決定され、KarlinとAltschul(1993)において改変される（Karlin、S.とAltschul、S. "Applications and Statistics for Multiple High-Scoring Segments in Molecular Sequences," Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877。このようなアルゴリズムは、Altschulら（1990)のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。所望のパーセント配列同一性を有する配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム（スコア＝１００、ワード長＝１２）を用いてＢＬＡＳＴ検索を行うことができる。比較目的で、ギャップアラインメントを得るために、Altschulら(1997)に記載されるように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを使用することができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。ワールドワイドウェブサイト: ncbi.nlm.nih.govを参照のこと。
【0051】
ある実施形態において、トラスツズマブ誘導体は、それぞれ配列番号９及び／又は配列番号１０と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖及び重鎖を含む。
【0052】
トラスツズマブの誘導体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、ミニボディ、二機能性抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、可変領域断片（Ｆｖ又はＦｄ）、Ｆａｂ又はＦ（ａｂ）２等の、全抗体又はその抗原結合断片であってもよい。ある実施形態において、トラスツズマブの誘導体は、ａｄｏ-トラスツズマブエムタンシンである（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ／２００１／０００２４４号を参照のこと）。
【0053】
好ましくは、ＮＰＳ及び／又はＮＰＳ変異体の追加ドーズ量が使用される。ある実施形態において、ＮＰＳ又はその変異体の投与は、一次ワクチン接種相を表し、方法は、一次ワクチン接種の完了後に、１、２、３、４、又はそれ以上の追加ドーズ量のＮＰＳ又はその変異体を、３０ヶ月以上の期間、任意で免疫学的アジュバント（例えば、ＧＭ-ＣＳＦ）と共に、一次ワクチン接種よりも少ない周期で投与することをさらに含む。
【0054】
ある実施形態において、ＮＰＳ又はその変異体の２つ以上の追加用量が投与され、１つの追加用量が６ヶ月ごとに投与される。各追加ドーズ量は、一次ドーズ量で送達されるのと同じ量のＮＰＳ及び／又はＮＰＳ変異体であってもよく、又は異なる量（多少）であってもよい。
【0055】
トラスツズマブ及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、１つ以上の追加の治療薬を個体に投与することができる。追加の治療剤は、免疫療法薬、標的化剤、又は化学療法剤等の抗癌剤を含むことができる。ある実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤が投与される。
【0056】
追加の治療薬は、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、皮内、腹腔内、眼窩内、移植、吸入、髄腔内、脳室内、又は鼻腔内等、使用される薬剤の機能に適した任意の経路によって投与することができる。
【0057】
本発明の種々の方法のある実施形態において、個体に投与されるさらなる治療薬は免疫療法である。本明細書中で使用される場合、「免疫療法」という用語は、癌又は他の有害なタンパク質、細胞又は組織に対する適応免疫又は自然免疫（能動的又は受動的）を誘発又は増幅するための、対象の免疫系の刺激、誘導、破壊、模倣、増強、増加又は任意の他の調節を介する疾患の治療をいう。免疫療法（すなわち、免疫療法剤）には、癌ワクチン、免疫調節剤、チェックポイント阻害剤、腫瘍微小環境モジュレーター、モノクローナル抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体）が含まれ、既存の癌を治療するため、又は癌の発生を予防するため、又は癌の再発の可能性を低下させるためのアジュバント設定での使用のために設計されているかにかかわらず、二重特異的抗体、免疫刺激薬、樹状細胞、及びウイルス療法が含まれる。
【0058】
追加の治療剤は、免疫療法、すなわち免疫療法剤であってもよい。例えば、免疫療法はチェックポイント阻害剤（免疫チェックポイント阻害剤としても知られる）であってもよく、これは免疫チェックポイントタンパク質をブロック又は阻害する（すなわち、チェックポイントレセプター又はチェックポイントレセプターリガンドをブロック又は阻害する）化合物又は薬剤である。チェックポイント阻害剤である化合物又は薬剤、又は使用されるチェックポイント阻害剤の活性を調節する化合物又は薬剤としては、これらに限られるものではないが、小分子、ペプチド、及び抗体が挙げられる。抗体としては、これらに限られるものではないが、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＭＥＤＩ６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、ＡＵＮＰ－１２、ＢＭＳ９３６５５９、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＭＳ９３５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ｒＨＩｇＭ１２Ｂ７、ＢＭＳ－９８６０１６、ＧＳＫ２８３１７８１、ＩＭＰ３２１、リルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）、ＩＰＨ２１０１（１－７Ｆ９）、ＰＦ－０５０８２５６６、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）、及びＭＥＤＩ６４６９が挙げられ、小分子としては、これらに限られるものではないが、インドキシモド（ＮＬＧ９１８９）、ＮＬＧ９１９及びエパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０）が挙げられる。
【0059】
変調の標的となり得るチェックポイントタンパク質の例としては、これらに限られるものではないが、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、２Ｂ４（ＣＤ２系列の分子に属し、全てのＮＫ細胞、及びメモリＣＤ８＋Ｔ細胞上に発現する）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも呼ばれる）、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１及びＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、ならびに種々のＢ－７系列配位子が挙げられる。陰性の免疫規制性ヒト細胞表面受容体プログラム死－１（ＰＤ‐１）は、Ｔ細胞活性化の規制に関与する分子の免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩＧＳＦ）の一員である。ＰＤ－１は、細胞死を受けるＴ細胞ハイブリドーマでアップレギュレートされる遺伝子として１９９２年に同定された時に、「プログラム死」と名付けられた。ＰＤ―１の構造は１つのＩＧＳＦドメイン、膜貫通ドメイン、及び免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）と免疫受容体チロシンベーススイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含む細胞内ドメインから構成される。ＰＤ－１は、２つの結合相手を有する。ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１、ＣＤ２７４）とＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ、ＣＤ２７３）である。ＰＤ－Ｌ１は、造血系及び非造血系の両方の系統に広く発現される。ＰＤ－１は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、ＤＣ、肥満細胞のほか、末梢組織にも認められる。ＰＤ－１結合は、腫瘍が免疫監視及びクリアランスを回避する１つの手段を意味する。ニボルマブによりＰＤ－１経路の遮断が示されている。
【0060】
追加の治療薬は、カペシタビン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン（リポソーム又は非リポソーム）、エピルビシン、エリブリオン、５－フルオロウラシル（５ＦＵ）、ゲムシタビン、イキサベピリン、メトトレキサート、パクリタキセル（アルブミン結合又は非アルブミン結合）、及びビノレルビンの１つ又は複数のような化学療法剤である。ドキソルビシン及びシクロホスファミド；又はドキソルビシン及びシクロホスファミドの後に、パクリタキセル又はドセタキセル；又はドキソルビシン及びシクロホスファミド；又はシクロホスファミド及びドセタキセル；又はシクロホスファミド、メトトレキサート及び５－ＦＵ（ＣＭＦ）；又は５－ＦＵ、ドキソルビシン及びシクロホスファミド（ＦＡＣ）；又は５－ＦＵ、エピルビシン及びシクロホスファミド（ＦＥＣ）；ドセタキセル、カルボプラチン及びトラスツズマブ；又はドセタキセル、カルボプラチン、トラスツズマブ及びペルツズマブ；又はパクリタキセル及びトラスツズマブ；又はパクリタキセル、トラスツズマブ、及びペルツズマブ；といった化学療法剤の組み合わせを投与してもよい。
【0061】
ある実施形態において、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体、トラスツズマブ又はその誘導体、免疫アジュバント（使用する場合）、及び追加の治療薬（使用する場合）を、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、皮内、腹腔内、眼窩内、移植、吸入、髄腔内、脳室内、又は鼻腔内によって投与する。
【0062】
ある実施形態において、トラスツズマブ又はその誘導体を静脈内投与し、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体を皮内投与する。ある実施形態において、ＮＰＳ又はその変異体、及び免疫学的アジュバントを皮内投与し、トラスツズマブ又はその誘導体を静脈内投与する。
【0063】
ある実施形態において、個体はＴＮＢＣを有しており、ＴＮＢＣの治療（標準的なケア治療等）を受けた後、ＴＺ又はその誘導体、及びＮＰＳ又はその変異体の投与の時点で臨床的に無病であり、本発明の方法は、個体におけるＴＮＢＣの再発を遅延又は防止する。
【0064】
本発明の方法は、腫瘍サイズを減少させることができ、及び／又は個体の無病生存（無再発生存）を増加させることができる。ある実施形態において、トラスツズマブ及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体は個体に対して相乗効果を有する。
【0065】
本発明の他の態様は、本発明の方法におけるように、低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するＴＮＢＣを有する個体において、ＴＮＢＣを治療するため、及び／又はＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導するために有用な薬物及びキットに関する。本発明の１つの態様は、個体におけるトリプルネガティブ乳癌を治療するためのトラスツズマブと併用するための、ネリペピムト-Ｓ又はその修飾体を含む薬剤に関する。薬剤は、ＧＭ-ＣＳＦ等の免疫学的アジュバントをさらに含んでもよい。
【0066】
本発明の別の態様は、個体におけるトリプルネガティブ乳癌を治療するための、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体と併用するための、トラスツズマブを含む医薬に関する。
【0067】
本発明の別の態様は、第１の容器、第２の容器、及び添付文書を含むキットであって、第１の容器は、トラスツズマブを含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、第２の容器は、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、添付文書は薬剤を使用してトリプルネガティブ乳癌の個体を治療するための説明書を含むキットである。キットは、ＧＭ-ＣＳＦ等の免疫学的アジュバントをさらに含んでもよい。免疫学的アジュバントは、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体と共に容器内に、又は別個の容器内に保持することができる。キットは、追加の治療薬（すなわち、トラスツズマブ又はトラスツズマブ誘導体、及びＮＰＳ又はＮＰＳ変異体に加えて）を含むことができる。
【0068】
キットは、好ましくは包装材料を含む。本明細書で使用される「包装材料」という用語は、キットの要素を収容する物理的な構造を指す。包装材料は、要素を無菌状態に維持することができ、そのような目的に一般的に使用される材料（例えば、紙、波形ファイバ、ガラス、プラスチック、箔、アンプル等）から作製することができる。ラベル又は包装挿入物は、例えば、本発明の方法を実施するための、例えば、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための、適切に印刷された、及び／又はデジタル指示書を含む。従って、追加の実施形態において、キットは、溶液中で本発明の方法を実施するための説明書を含むラベル又は包装挿入物を含む。
【0069】
従って、説明書は、本明細書に記載の本発明の方法のいずれかを実施するための説明書を含むことができる。例えば、医薬組成物は、ＴＮＢＣ（例えば、低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するＴＮＢＣ）を治療するために対象に投与するための説明書と共に、容器、パック、又はディスペンサーに含めることができる。説明書は、十分な臨床エンドポイント又は起こり得る有害な症状の徴候、貯蔵情報、有効期限、又は個体における使用のために食品医薬品局もしくは欧州医薬品局のような規制当局によって必要とされる任意の情報をさらに含み得る。
【0070】
説明書は、デジタル又は「印刷物」、例えば、キット内の紙又は厚紙、キット又は包装材料に貼付されたラベル、又はキットの要素を含むバイアル又は管に貼付されたものであってもよい。説明書は、音声又はビデオテープを含んでもよく、さらに、ディスク（ディスケット又はハードディスク）、ＣＤ又はＤＶＤ-ＲＯＭ／ＲＡＭ等の光ＣＤ、磁気テープ、ＲＡＭ及びＲＯＭ等の電気記憶媒体、ならびに磁気／光記憶媒体等のこれらのハイブリッドに含まれてもよい。
【0071】
キットは、本発明の方法において使用される少なくとも１つの化合物を安定化するための緩衝剤、防腐剤、又は薬剤をさらに含むことができる。キットの各要素は、個々の容器内に、又は混合物中に封入することができ、様々な容器の全ては、単一又は複数の包装内とすることができる。
【0072】
キットは、バイアル、管等の１つ又は複数の容器を受け入れるように区画化された包装材料を含むことができ、各容器は、本明細書に記載の方法で使用される別個の要素の１つを含む。医薬品を包装する際に使用するための包装材料には、例として、米国特許第５，３２３，９０７号、第５，０５２，５５８号、第５，０５２，５５８号及び第５，０３３，２５２号に記載のものが含まれる。医薬包装材料の例としては、ブリスターパック、瓶、管、ポンプ、バッグ、バイアル、遮光密閉容器、シリンジ、瓶、及び選択された処方ならびに投与及び治療の意図されるモードに適切な任意の包装材料が挙げられるが、これらに限定されない。
【0073】
キットは、ＴＮＢＣの治療及び／又は所望の免疫応答の誘導に使用される化合物の使用のために商業的及び使用者の観点から望ましい種々の材料の１つ以上を有する、１つ以上の追加の容器を含む。このような材料の非限定的な例には内容物及び／又は使用説明書を列挙する緩衝液、希釈剤、キャリア、包装、容器、バイアル及び／又はチューブラベル、ならびに使用説明書を伴う添付文書が含まれるが、これらに限定されない。
【0074】
ラベルは、本発明の方法で使用される化合物を含有する容器上又は関連付けることができる。ラベルを形成する文字、数字、又は他の文字が容器自体に取り付けられ、成形され、又はエッチングされる場合、ラベルは容器上に付けることができ、例えば、包装挿入物として保持する容器又はキャリア内に存在する場合、ラベルは容器と関連付けることができる。ラベルは、内容物が特定の治療用途に使用されることを示すために使用することができる。また、ラベルは本明細書に記載の方法におけるように、内容物の使用のための指示を示すこともできる。
【0075】
キットのある実施形態において、本発明の方法において使用される化合物は、本明細書に開示される化合物を含有する１つ以上の単位剤形を含有することができるパック又はディスペンサーデバイスに提示することができる。パックは、例えば、ブリスターパック等の金属又はプラスチック箔を含む。パック又はディスペンサ装置には、投与のための指示書を添付することができる。パック又はディスペンサには、医薬品の製造、使用、又は販売を規制する政府機関によって規定された形態の容器に関連する通知を添付することもでき、この通知はヒト又は獣医学的投与のための医薬品の形態の機関による承認を反映する。このような通知は、例えば、米国食品医薬品局によって処方薬品について承認されたラベル、又は承認された製品挿入物である。適合する薬学的担体中に処方された本明細書中に提供される化合物を含有する組成物はまた、調製され、適切な容器内に配置され、示された状態の治療のために標識される。
【0076】
本発明の方法において有用な、化合物、及びそれらを含む組成物は、薬学的に有用な組成物を調製するための公知の方法に従って処方される。トラスツズマブ、トラスツズマブ誘導体、ＮＰＳ、ＮＰＳ変異体、免疫学的アジュバント、及び追加の治療剤の各々は、担体、希釈剤又は賦形剤と組み合わせて投与される。処方は、当業者に周知であり、容易に利用可能な多数の出典に詳細に記載されている。例えば、E.WMartinによるRemington's Pharmaceutical Scienceには、本発明に関連して使用することができる処方が記載されている。一般に、本発明の組成物は、組成物の効果的な投与を容易にするために、本発明の少なくとも１つの化合物の有効量が適切な担体又は希釈剤と組み合わせられるように処方される。本方法において使用される組成物はまた、種々の形態とすることができる。例えば、錠剤、丸剤、粉末、液体溶液又は懸濁液、坐剤、注射用及び注入可能用溶液、及びスプレー等の固体、半固体、及び液体投与形態が挙げられる。好ましい形態は、投与方法及び治療適用内容に基づいて決められる。組成物はまた、好ましくは、当業者に公知の従来の薬学的に受容可能なキャリア及び希釈剤を含む。対象のペプチド及びポリヌクレオチドと共に使用するための担体又は希釈剤の例としては水、生理食塩水、鉱油を含む油、エタノール、ジメチルスルホキシド、ゼラチン、シクロデキストラン、ステアリン酸マグネシウム、デキストロース、セルロース、糖、炭酸カルシウム、グリセロール、アルミナ、澱粉、ならびに同等のキャリア及び希釈剤、又はこれらのいずれかの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物の処方はまた、懸濁剤、保護剤、潤滑剤、緩衝剤、防腐剤、及び安定剤を含むことができる。
【0077】
実施例１及び２、材料及び方法、図に開示された試験において、治験者はＨＥＲ２の低レベル（１＋）又は中間レベル（２＋）を発現する腫瘍を有する乳癌患者において、ＮＰ（又はエストロゲン（ＥＲ）受容体及びプロゲステロン（ＰＲ）受容体の両方に陰性の場合、ＮＮ）における再発を防止するために、補助療法で投与されるハーセプチン（登録商標）抗体（トラスツズマブ）及びＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチン（ＨＥＲ２タンパク質Ｅ７５ペプチド）の組合せの能力を評価した。登録された患者は、トラスツズマブ及びＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチンを受ける群と、ＧＭ－ＣＳＦ単独（ＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチンなし）でトラスツズマブを受ける群に無作為に割り付けられた。併用療法の安全性が実証され、特に、ＨＥＲ２を標的とした併用療法による相添加剤心毒性が生じないことを確認した。有効性は、ＤＦＳ及び免疫学的応答を治療群間で比較することにより立証された。有効性のプライマリーエンドポイントは、２４ヵ月時点のＤＦＳを治療群間で比較することである。安全性の主な課題は、ＨＥＲ２を標的とした併用療法による添加剤心毒性がないことを証明することである。この試験の副次的評価項目は、３６ヵ月時点でのＤＦＳを比較することである。ワクチンに対する免疫学的応答も立証され、臨床的利益と相関していた。
【0078】
試験は、ハーセプチン（登録商標）抗体＋ＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチン対ハーセプチン（登録商標）抗体＋ＧＭ－ＣＳＦ単独の多施設、プロスペクティブ、無作為化、単盲検、プラセボ対照、第ＩＩ相試験である。対象となる試験集団は、標準治療後に無病状態であるＨＥＲ２１＋及び２＋発現腫瘍を有するＮＰ（又はＥＲとＰＲの両方が陰性の場合はＮＮ）乳癌患者である。標準治療の集学的治療後の無病対象をスクリーニングし、ＨＬＡ型を判定した。ネリペピムト－Ｓ（以前はＥ７５ペプチドと呼ばれていた）は、ＣＤ８誘発ペプチドワクチンで、ＣＤ８誘発ペプチドワクチンはＨＬＡ－Ａ２＋又はＨＬＡ－Ａ３＋患者（米国人口の約３分の２）に限定され、ＨＬＡ－Ａ２４＋及びＨＬＡ－Ａ２６＋にも拡大されている。
【0079】
他の適格基準を全て満たすＨＬＡ－Ａ２＋／Ａ３＋／Ａ２４＋／又はＡ２６＋患者を、トラスツズマブ＋ＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチン群又はトラスツズマブ＋ＧＭ－ＣＳＦ単独群に無作為に割り付けた。両群とも、トラスツズマブは単剤療法として３週間ごとに１年間投与され、標準治療である化学療法／放射線療法の終了時に投与された。トラスツズマブの初回注入は、化学療法／放射線療法終了後３週間以内に実施し、１２週間以内に実施した。トラスツズマブは、推奨初期負荷用量である８ｍｇ／ｋｇ及び推奨維持用量である６ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに投与した。トラスツズマブは、４．３節で述べたように投与した。ＮｅｕＶａｘワクチン群に無作為に割り付けられた患者は、トラスツズマブ注入完了の３０～１２０分後に、ネリペピムト－Ｓペプチド（１０００ｍｃｇ）及びＧＭ－ＣＳＦ（２５０ｍｃｇ）のワクチン接種を３週間ごとに計６回、皮内投与された。ＮｅｕＶａｘワクチンシリーズは、３回目のトラスツズマブ注入終了直後から開始する。状況に応じて、トラスツズマブの初回接種は、治験責任医師の事前承認を得た上で、４回目又は５回目の投与まで延期してもよい。ＧＭ－ＣＳＦ単独群に無作為に割り付けられた患者は、ＮｅｕＶａｘワクチンを受けた患者と同じ方法でＧＭ－ＣＳＦ（２５０ｍｃｇ）のワクチン接種を受けた。患者は、ＮｅｕＶａｘワクチン又はＧＭ－ＣＳＦの単独投与を受けているかどうかについて盲検化された。
【0080】
ワクチン接種シリーズが完了した時点で、追加接種（同じ用量及び経路）を６ヵ月ごとに４回、合計組み合わせ（トラスツズマブ及びＮＰＳワクチン）治療期間３０ヵ月間にわたり実施した。初回の追加接種はトラスツズマブの最終注入時に行い、その後の追加接種は初回の追加接種から６ヵ月ごとに実施した。ネリペピムツト－Ｓ／ＧＭ－ＣＳＦ投与に無作為に割り付けられた患者のほか、ＧＭ－ＣＳＦ単独投与に無作為に割り付けられた患者に追加接種が行われ、同じ処理及び投与から構成された（すなわち、ネリペピムツト－Ｓ／ＧＭ－ＣＳＦ患者にはネリペピムツト－Ｓ／ＧＭ－ＣＳＦを追加接種し、一方、ＧＭ－ＣＳＦ単独患者にはＧＭ－ＣＳＦ単独を追加接種した）。盲検化は、患者、臨床担当者（臨床医Ｍ．Ｄ．、看護及び補助職員）、ならびに臨床試験コーディネーター、データマネジャー、統計家、及び臨床試験組織のリーダーシップにおいて、試験期間を通じて維持された。ただし、盲検化された材料の用量及びラベル貼付を準備している試験薬剤師は例外であった。
【0081】
安全性の問題、免疫学的応答及び臨床的再発について対象者を追跡調査した。各接種から４８～７２時間後に患者をモニタリングし、接種に対する反応のほか、経験されたあらゆる有害作用の記録を得る。免疫学的応答はin vivo遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応であり、in vitro表現型及び機能アッセイでも立証される予定である。全患者について、無病状態を記録するために、計３６カ月間追跡することにしていた。
【0082】
定義
本発明のいくつかの態様を、例示目的のみのために実施例を参照して以下に記載する。本発明の完全な理解を提供するために、多数の具体的な詳細、関係、及び方法が記載されていることを理解されたい。しかし、当業者は、本発明が１つ以上の特定の詳細なしに実施され得るか、又は他の方法、プロトコル、試薬、細胞株、及び動物で実施され得ることは容易に認識される。本発明は、いくつかの行為が異なる順序で、及び／又は他の行為又は事象と同時に起こり得るので、行為又は事象の図示された順序によって限定されない。さらに、本発明による方法を実施するために、図示された全ての動作、ステップ、又は事象が必要とされるわけではない。本明細書に記載された、又は参照された技術及び手順の多くは、当業者によって、従来の方法を使用してよく理解され、一般に使用される。
本発明のいくつかの態様を、例示目的のみのために実施例を参照して以下に記載する。本発明の完全な理解を提供するために、多数の具体的な詳細、関係、及び方法が記載されていることを理解されたい。しかし、当業者は、本発明が１つ以上の特定の詳細なしに実施され得るか、又は他の方法、プロトコル、試薬、細胞株、及び動物で実施され得ることは容易に認識される。本発明は、いくつかの行為が異なる順序で、及び／又は他の行為又は事象と同時に起こり得るので、行為又は事象の図示された順序によって限定されない。さらに、本発明による方法を実施するために、図示された全ての動作、ステップ、又は事象が必要とされるわけではない。本明細書に記載された、又は参照された技術及び手順の多くは、当業者によって、従来の方法を使用してよく理解され、一般に使用される。
【0083】
本発明を詳細に説明した後、いくつかの用語を定義することは本発明の理解に役立つことがあり、従って、これらは以下の次のセクションで説明される。別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語、表記、及び他の科学用語又は用語は、本発明が関係する技術分野の当業者によって一般に理解される意味を有することが意図される。場合によっては一般に理解される意味を有する用語が明確にするために、及び／又は容易に参照するために本明細書で定義され、本明細書にそのような定義を含めることは当技術分野で一般に理解されるものに対して実質的な差を表すと必ずしも解釈されるべきではない。さらに、一般的に使用される辞書で定義されるような用語は関連技術の文脈において、及び／又は本明細書で別に定義されるように、それらの意味と一致する意味を有するものとして解釈されるべきであることが理解されるものとする。
【0084】
「ポリヌクレオチド」又は「核酸」という用語は、本明細書中で区別なく用いられ、任意の長さのヌクレオチドのポリマーをいい、そしてＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／又はそれらの類似体、又はＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによってポリマーに組み込まれ得る任意の塩基である。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドは、例えば、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体を含む。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマーの組立体の前又は後に行われる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断されてもよい。ポリヌクレオチドは、重合後に、例えば、標識成分とのコンジュゲーションによって、さらに修飾されてもよい。他のタイプの修飾例には、例えば、「キャップ」、類似体による１つ以上の天然に存在するヌクレオチドの置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電結合によるもの（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメート等）及び荷電結合によるもの（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等）、懸垂部分を含有するもの、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ-Ｌ-リジン等）等）、インターカレーターによるもの（例えば、アクリジン、ソラレン等）、キレート剤を含むもの（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属等）、アルキル化剤を含有するもの、修飾結合を有するもの（例えば、アルファアノマー核酸等）、ならびにポリヌクレオチドの未修飾形態が含まれる。さらに、糖中に通常存在する任意のヒドロキシル基は、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基によって置換されてもよく、標準的な保護基によって保護されてもよく、又は追加のヌクレオチドへのさらなる連結をつくるために活性化されてもよく、又は固体支持体にコンジュゲートされてもよい。５'及び３'端末ＯＨは、リン酸化されるか、又は１～２０個の炭素原子のアミン又は有機キャッピング基部分で置換することができる。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化される。ポリヌクレオチドはまた、例えば、２'－Ｏ－メチル－２'－Ｏ－アリル、２'－フルオロ－又は２'－アジド－リボース、炭素環式糖類似体、ａ－アノマー糖、アラビノースのようなエピマー糖、キシロース又はリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプタロース、非環式類似体、ならびにメチルリボシドのような非塩基ヌクレオシドアナログを含む、当該分野で一般に公知である類似の形態のリボース又はデオキシリボース糖を含むことができる。１つ以上のホスホジエステル結合は、代替結合基によって置換される。これらの代替結合基としては、これらに限られるものではないが、リン酸塩がＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）（「ジチオエート」）、「（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ'、ＣＯ又はＣＨ２（「ホルムアセタール」）によって置換される実施形態が含まれ、式中、各Ｒ又はＲ'は、独立して、Ｈ又は置換又は非置換アルキル（１～２０Ｃ）であり、任意で、エーテル（-Ｏ-）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル又はアラルキルを任意で含有する。ポリヌクレオチド中の全ての結合が同一である必要はない。上記の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書中で言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。
【0085】
本明細書で使用される「発現」という用語は、ｍＲＮＡの産生及びｍＲＮＡのタンパク質への翻訳を指す。
【0086】
本明細書中で使用される「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、区別なく用いられ、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸残基を含む任意の長さのポリマーを指す。
【0087】
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのものであり、本発明を限定することを意図するものではない。本明細書で使用される、「１つ」及び「その」は文脈が別段の明確な指示をしない限り、複数の参照を含むものとする。
【0088】
本明細書で使用される「含有する」、「有する」、又はそれらの変形の用語は、「含む」と包括的に同様とする。
【0089】
本明細書中で使用される「個体」、「対象」及び「患者」とう用語は区別なく用いられ、トリプルネガティブ乳癌に罹患する可能性のある任意の性別のヒトをいう。ある実施形態において、個体は、１８歳以上の女性である。ある実施形態において、対象は、ＨＥＲ２低発現（ＩＨＣ１＋／２＋、ＦＩＳＨ非増幅）乳癌を有するか、又は有していた。
【0090】
本明細書で使用される「及び／又は」という語句は、結合した要素の「いずれか又は両方」、すなわち、ある場合においては結合して存在し、他の場合には分離して存在する要素を意味すると理解されるべきである。
【0091】
本明細書で使用される場合、「又は」は上記で定義される「及び／又は」と同一の意味を有するものとする。例えば、項目のリストを分けるとき、「及び／又は」、「又は」は、包含する、すなわち、少なくとも１つ、２つ以上、数多くの項目を含み、任意で追加のリストされていない項目を含むものと解釈される。「１つのみ」又は「正確に１つ」のように、又は「から成る」のように請求項において使用される場合、反義的に明確に示される用語のみが、複数の要素又は要素のリストの正確に１つの要素を包含することを意味する。
【0092】
本明細書中で使用される場合、「治療」は治療される個体又は細胞の自然経過を変化させる試みにおける臨床的介入をいい、臨床病理学の経過前又はその間に実施される。治療の望ましい効果は、トリプルネガティブ乳癌のような疾患又は状態の発生又は再発の遅延又は予防、又はその症状、疾患又は状態の発症の遅延、疾患の状態又は症状の軽減、疾患の直接的又は間接的な病理学的結果の減少、疾患進行速度の低下、疾患状態の改善又は緩和、寛解の達成又は予後の改善、及び無病生存の増加を含む。ＴＮＢＣの治療において、トラスツズマブ又はその誘導体、及びＮＰＳ又はその変異体の組み合わせは、治療有効量で投与される。
【0093】
「有効量」とは、ヒトにおけるＴＮＢＣの有害な影響を予防又は遅延させ、再発を予防又は遅延させ、除去し、減少させ、又は遅延させる、トラスツズマブ又はその誘導体、及びＮＰＳ又はその変異体の量を意味する。投与される用量は、患者、病理学、投与モードに従って、当業者によって適合されるものと考えられる。
【0094】
本明細書で使用する「腫瘍」という用語は、悪性であるか良性であるかにかかわらず、全ての新生物細胞の成長及び増殖を指し、全ての前癌性及び癌性細胞及び組織を指す。例えば、特定の癌は、固形塊腫瘍又は非固形腫瘍によって特徴付けられる。固形腫瘍の塊は、存在する場合、原発腫瘍塊のことがある。原発性腫瘍塊とは、その組織の正常細胞の形質転換により生じる組織中の癌細胞の成長物をさす。多くの場合、原発性腫瘍塊は、目視若しくは触診法を通じて、又は組織の形状の不規則性、質感、若しくは重量により見出される嚢腫の存在により識別される。しかしながら、いくつかの原発腫瘍は触知できず、Ｘ線（例えば、マンモグラフィー）又は磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）のような医学的画像化技術、又は針吸引によってのみ検出することができる。これら後者の技術の使用は、早期発見においてより一般的である。組織内の癌細胞の分子的及び表現型解析は、通常、癌が組織に内因性であるかどうか、又は病変が別の部位からの転移によるものかどうかを確認するために用いることができる。切除不能な腫瘍もある（例えば、転移巣の数のため、又は手術危険域にあるため、外科的に切除できない）。本発明の方法は、早期、中期、又は後期の疾患、及び急性又は慢性の疾患に利用することができる。
【0095】
ＭＨＣクラスＩペプチドワクチンはＨＬＡ制限であるが、複数のＨＬＡ型に結合することができる。ＨＬＡ型は、チェックポイント阻害剤を含む複数の免疫療法に対する応答と関連している。ＨＬＡ型、予測されるペプチド結合能、及び臨床反応の関係は、能動的免疫療法の設計及び開発に影響を及ぼす。リンパ節陽性及び／又はＥＲ－／ＰＲ－陰性のＨＥＲ２低発現乳癌患者における再発を予防するために、ＭＨＣクラスＩペプチド、Ｅ７５（ＨＥＲ２３６９－３７７）＋ＧＭ－ＣＳＦ（ＮｅｕＶａｘ）＋トラスツズマブ対ＧＭ－ＣＳＦ＋トラスツズマブの無作為第ＩＩｂ相試験が実施されている。計画された中間解析では、特にＴＮＢＣ患者において、ＮｅｕＶａｘ＋トラスツズマブに対する有意な無病生存利益が実証された。実施例１及び２の分析では、ＨＬＡ型が試験転帰に及ぼす影響を検討する。
【0096】
標準治療後の臨床的無病、ＨＥＲ２低発現（ＩＨＣ１＋／２＋、ＦＩＳＨ非増幅）、リンパ節陽性（ＡＪＣＣ Ｎ１、Ｎ２、又はＮ３）及び／又はトリプルネガティブ乳癌患者を対象に、フローサイトメトリーによりＡ２、Ａ３、Ａ２４、及びＡ２６アレルの有無を検査した。ＨＬＡ－Ａ２、Ａ３、Ａ２４、及び／又はＡ２６＋患者をトラスツズマブ＋ＮｅｕＶａｘ投与群（ワクチン群）又はトラスツズマブ＋ＧＭ－ＣＳＦ投与群（対照群）に無作為に割り付けた。全患者に標準治療あたり１年間のトラスツズマブを投与した。ＮｅｕＶａｘ又はＧＭ－ＣＳＦは３回目のトラスツズマブ投与から開始して３週間ごとに６回投与し、その後は６ヵ月ごとに４回追加投与した。事前に規定した中間解析は、最終患者登録から６ヵ月後に実施した。主要評価項目はログランクで評価した無病生存期間とした。ＭＨＣクラスＩ結合予測は、ＩＥＤＢアナリシスリソースコンセンサスツールを使用して行った。
【0097】
材料及び方法
実験：ハーセプチン＋ＮｅｕＶａｘワクチン試験群
この試験群に無作為に割り付けられた患者にはハーセプチン（登録商標）抗体（トラスツズマブ）を単剤療法として３週間ごとに１年間投与し、初回のトラスツズマブ注入は標準治療化学療法／放射線療法の完了後３週間以内かつ１２週間以内に行った。トラスツズマブは、推奨初期負荷用量である８ｍｇ／ｋｇ及び推奨維持用量である６ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに投与した。患者には、トラスツズマブの注入終了後３０～１２０分後に、ＮｅｕＶａｘワクチンを３週間ごとに６回、全ワクチン接種した。一連のＮＰＳワクチンは、３回目のトラスツズマブ注入終了直後から開始されたが、ＰＩの事前承認を得て４回目又は５回目のトラスツズマブ注入まで延期可能であった。割り付けられた治療群に関して患者を盲検化した。一連の一次ワクチン完了後、患者にＮｅｕＶａｘワクチン追加接種を４回、６ヵ月ごとに４回、合計３０ヵ月間実施した。
実験：ハーセプチン＋ＮｅｕＶａｘワクチン試験群
この試験群に無作為に割り付けられた患者にはハーセプチン（登録商標）抗体（トラスツズマブ）を単剤療法として３週間ごとに１年間投与し、初回のトラスツズマブ注入は標準治療化学療法／放射線療法の完了後３週間以内かつ１２週間以内に行った。トラスツズマブは、推奨初期負荷用量である８ｍｇ／ｋｇ及び推奨維持用量である６ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに投与した。患者には、トラスツズマブの注入終了後３０～１２０分後に、ＮｅｕＶａｘワクチンを３週間ごとに６回、全ワクチン接種した。一連のＮＰＳワクチンは、３回目のトラスツズマブ注入終了直後から開始されたが、ＰＩの事前承認を得て４回目又は５回目のトラスツズマブ注入まで延期可能であった。割り付けられた治療群に関して患者を盲検化した。一連の一次ワクチン完了後、患者にＮｅｕＶａｘワクチン追加接種を４回、６ヵ月ごとに４回、合計３０ヵ月間実施した。
【0098】
実験：実薬対照：ハーセプチン＋ＧＭ－ＣＳＦ単独試験群
この試験群に無作為に割り付けられた患者には、ハーセプチン（登録商標）抗体（トラスツズマブ）を３週間ごとに単剤療法として１年間投与した。トラスツズマブの初回注入は標準治療である化学療法／放射線療法の終了後３週間以内に実施し、１２週間以内に実施した。トラスツズマブは、推奨初期負荷用量である８ｍｇ／ｋｇ及び推奨維持用量である６ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに投与した。患者には、トラスツズマブ注入完了から３０～１２０分後に、３週間ごとに計６回、ＧＭ－ＣＳＦのみ（２５０ｍｃｇ）を皮内投与した。一連のＧＭ－ＣＳＦのみの接種は、３回目のトラスツズマブ注入終了直後から開始した。患者は、ＮｅｕＶａｘワクチン又はＧＭ－ＣＳＦのみを投与されているかどうかについて盲検化された。６回接種の一連の一次ワクチン接種完了後、患者は、合計４回のＧＭ－ＣＳＦ単独の追加接種を受け、トラスツズマブの初回注入日から１２、１８、２４、及び３０ヵ月後に投与された。
この試験群に無作為に割り付けられた患者には、ハーセプチン（登録商標）抗体（トラスツズマブ）を３週間ごとに単剤療法として１年間投与した。トラスツズマブの初回注入は標準治療である化学療法／放射線療法の終了後３週間以内に実施し、１２週間以内に実施した。トラスツズマブは、推奨初期負荷用量である８ｍｇ／ｋｇ及び推奨維持用量である６ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに投与した。患者には、トラスツズマブ注入完了から３０～１２０分後に、３週間ごとに計６回、ＧＭ－ＣＳＦのみ（２５０ｍｃｇ）を皮内投与した。一連のＧＭ－ＣＳＦのみの接種は、３回目のトラスツズマブ注入終了直後から開始した。患者は、ＮｅｕＶａｘワクチン又はＧＭ－ＣＳＦのみを投与されているかどうかについて盲検化された。６回接種の一連の一次ワクチン接種完了後、患者は、合計４回のＧＭ－ＣＳＦ単独の追加接種を受け、トラスツズマブの初回注入日から１２、１８、２４、及び３０ヵ月後に投与された。
【0099】
トラスツズマブ介入
トラスツズマブは、標準治療である化学療法／放射線療法の完了時に投与され、１年間、単剤療法として３週間ごとに患者に投与された。トラスツズマブの初回注入は化学療法／放射線療法終了後３週間から１２週間以内に実施した。トラスツズマブは、推奨初期負荷用量である８ｍｇ／ｋｇ及び推奨維持用量である６ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに投与した。
トラスツズマブは、標準治療である化学療法／放射線療法の完了時に投与され、１年間、単剤療法として３週間ごとに患者に投与された。トラスツズマブの初回注入は化学療法／放射線療法終了後３週間から１２週間以内に実施した。トラスツズマブは、推奨初期負荷用量である８ｍｇ／ｋｇ及び推奨維持用量である６ｍｇ／ｋｇを３週間ごとに投与した。
【0100】
ネリペピムト－Ｓ介入
ワクチン投与時に、Ｅ７５酢酸塩の凍結溶液（１．５ｍｇ／ｍｌ）を解凍し、１０００ｍｃｇのＥ７５ペプチド（ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ（配列番号１）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、３６９-３７７）を２５０ｍｃｇのＧＭ-ＣＳＦ（サルグラモスチム）と完全に混合した。ＮｅｕＶａｘワクチンをこのように構成した。トラスツズマブ＋ＮｅｕＶａｘワクチン群に無作為に割り付けられた患者については、トラスツズマブ単剤療法を開始し、３回目のトラスツズマブ注入終了直後に一連のＮｅｕＶａｘワクチンを開始した。一連のワクチンは３週間ごとに６回の全ワクチン接種を行うＮｅｕＶａｘワクチンを皮内投与し、トラスツズマブ注入終了後３０～１２０分とした。
ワクチン投与時に、Ｅ７５酢酸塩の凍結溶液（１．５ｍｇ／ｍｌ）を解凍し、１０００ｍｃｇのＥ７５ペプチド（ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ（配列番号１）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、３６９-３７７）を２５０ｍｃｇのＧＭ-ＣＳＦ（サルグラモスチム）と完全に混合した。ＮｅｕＶａｘワクチンをこのように構成した。トラスツズマブ＋ＮｅｕＶａｘワクチン群に無作為に割り付けられた患者については、トラスツズマブ単剤療法を開始し、３回目のトラスツズマブ注入終了直後に一連のＮｅｕＶａｘワクチンを開始した。一連のワクチンは３週間ごとに６回の全ワクチン接種を行うＮｅｕＶａｘワクチンを皮内投与し、トラスツズマブ注入終了後３０～１２０分とした。
【0101】
ＧＭ－ＣＳＦ介入
トラスツズマブ＋ＧＭ－ＣＳＦ単独療法群に無作為に割り付けられた患者については、トラスツズマブ単独療法を開始し、３回目のトラスツズマブ注入終了直後に、一連のＧＭ－ＣＳＦ（サルグラモスチム）接種を開始した。一連のＧＭ－ＣＳＦ接種で、ＧＭ－ＣＳＦ２５０ｍｃｇを３週間ごとに６回の全ワクチン接種、トラスツズマブ注入完了３０～１２０分後に皮内投与した。
トラスツズマブ＋ＧＭ－ＣＳＦ単独療法群に無作為に割り付けられた患者については、トラスツズマブ単独療法を開始し、３回目のトラスツズマブ注入終了直後に、一連のＧＭ－ＣＳＦ（サルグラモスチム）接種を開始した。一連のＧＭ－ＣＳＦ接種で、ＧＭ－ＣＳＦ２５０ｍｃｇを３週間ごとに６回の全ワクチン接種、トラスツズマブ注入完了３０～１２０分後に皮内投与した。
【0102】
試験基準：選択基準
患者は以下の基準に基づいて試験に組み入れられた。
・１８歳以上の女性
・リンパ節転移陽性乳癌（ＡＪＣＣ Ｎ１、Ｎ２、又はＮ３）
・エストロゲン（ＥＲ）受容体とプロゲステロン（ＰＲ）受容体の両方が陰性で、標準治療として化学療法を受けている場合は、リンパ節転移陰性乳癌
・標準治療（手術、化学療法、放射線療法、ＮＣＣＮガイドラインによる指示）後に臨床的に無癌（疾患の証拠なし）。標準治療に従ってホルモン療法を継続した。術前化学療法は許可された。
・先行する補助療法に関連するあらゆる毒性からの回復。
・ＩＨＣによる１＋又は２＋のＨＥＲ２発現。ＦＩＳＨ（又はＤｕａｌ－ＩＳＨ）検査はＩＨＣ２＋腫瘍に対して実施し、ＦＩＳＨ（≦２．０）（又はＤｕａｌ－ＩＳＨ、≦２．０）で非増幅であることが示されなければならない。
・ＨＬＡ－Ａ２、Ａ３、Ａ２４、又はＡ２６陽性
・ＬＶＥＦが５０％を超える、又は施設の特定の検査（マルチゲート収集法［ＭＵＧＡ］心臓スキャン又は心臓エコー図［エコー］）の正常範囲内のＬＶＥＦ
・米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータス０又は１
・署名されたインフォームド・コンセント
・適切な避妊（禁欲、子宮摘出、両側卵巣摘出、両側卵管結紮、経口避妊、子宮内避妊具（ＩＵＤ）、又はコンドームやペッサリーの使用）
・標準治療の終了から３～１２週間の間に治験薬の投与を開始する（トラスツズマブの療法注入を受ける）。
患者は以下の基準に基づいて試験に組み入れられた。
・１８歳以上の女性
・リンパ節転移陽性乳癌（ＡＪＣＣ Ｎ１、Ｎ２、又はＮ３）
・エストロゲン（ＥＲ）受容体とプロゲステロン（ＰＲ）受容体の両方が陰性で、標準治療として化学療法を受けている場合は、リンパ節転移陰性乳癌
・標準治療（手術、化学療法、放射線療法、ＮＣＣＮガイドラインによる指示）後に臨床的に無癌（疾患の証拠なし）。標準治療に従ってホルモン療法を継続した。術前化学療法は許可された。
・先行する補助療法に関連するあらゆる毒性からの回復。
・ＩＨＣによる１＋又は２＋のＨＥＲ２発現。ＦＩＳＨ（又はＤｕａｌ－ＩＳＨ）検査はＩＨＣ２＋腫瘍に対して実施し、ＦＩＳＨ（≦２．０）（又はＤｕａｌ－ＩＳＨ、≦２．０）で非増幅であることが示されなければならない。
・ＨＬＡ－Ａ２、Ａ３、Ａ２４、又はＡ２６陽性
・ＬＶＥＦが５０％を超える、又は施設の特定の検査（マルチゲート収集法［ＭＵＧＡ］心臓スキャン又は心臓エコー図［エコー］）の正常範囲内のＬＶＥＦ
・米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータス０又は１
・署名されたインフォームド・コンセント
・適切な避妊（禁欲、子宮摘出、両側卵巣摘出、両側卵管結紮、経口避妊、子宮内避妊具（ＩＵＤ）、又はコンドームやペッサリーの使用）
・標準治療の終了から３～１２週間の間に治験薬の投与を開始する（トラスツズマブの療法注入を受ける）。
【0103】
試験基準：除外基準
患者は、以下の基準に基づいて試験から除外された。
・エストロゲン（ＥＲ）受容体とプロゲステロン（ＰＲ）受容体の両方が陰性で、標準治療として化学療法を受けていない限り、リンパ節転移陰性乳癌（米国癌合同委員会［ＡＪＣＣ］Ｎ０又はＮ０（ｉ＋））
・遠隔又は残留乳癌の臨床的又はＸ線撮影による証拠
・ＨＥＲ２陰性（ＩＨＣ ０）又はＨＥＲ２ ３＋又はＦＩＳＨ又はＤｕａｌ－ＩＳＨ増幅（ＦＩＳＨ＞２．０、Ｄｕａｌ－ＩＳＨ＞２．０）
・ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－Ａ２、Ａ３、Ａ２４、Ａ２６陰性
・トラスツズマブによる前治療歴
・ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）のステージ３又は４の心疾患
・左室駆出率（ＬＶＥＦ）<５０％、又は施設の特異的検査（ＭＵＧＡ又はＥｃｈｏ）の正常限界未満
・免疫不全症又はＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ
・化学療法、慢性ステロイド、メトトレキサート、又は他の既知の免疫抑制剤を含む免疫抑制療法を受けていること
・ＥＣＯＧパフォーマンスステータス≧２
・総（血清）ビリルビン＞１．８ｍｇ／ｄＬ、クレアチニン＞２．０ｍｇ／ｄＬ、ヘモグロビン＜１０ｇ／Ｌ、血小板＜５０，０００／ｕＬ、ＷＢＣ＜２，０００／ｕＬ
・妊娠（尿中ＨＣＧで評価）
・母乳栄養
・白斑を除き、処理を必要とするあらゆる活性自己免疫疾患
・複数の吸入器を含む薬剤を必要とする活動性肺疾患
・他の実験プロトコル（他の試験ＰＩの許可を除いて）に関与
患者は、以下の基準に基づいて試験から除外された。
・エストロゲン（ＥＲ）受容体とプロゲステロン（ＰＲ）受容体の両方が陰性で、標準治療として化学療法を受けていない限り、リンパ節転移陰性乳癌（米国癌合同委員会［ＡＪＣＣ］Ｎ０又はＮ０（ｉ＋））
・遠隔又は残留乳癌の臨床的又はＸ線撮影による証拠
・ＨＥＲ２陰性（ＩＨＣ ０）又はＨＥＲ２ ３＋又はＦＩＳＨ又はＤｕａｌ－ＩＳＨ増幅（ＦＩＳＨ＞２．０、Ｄｕａｌ－ＩＳＨ＞２．０）
・ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－Ａ２、Ａ３、Ａ２４、Ａ２６陰性
・トラスツズマブによる前治療歴
・ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）のステージ３又は４の心疾患
・左室駆出率（ＬＶＥＦ）<５０％、又は施設の特異的検査（ＭＵＧＡ又はＥｃｈｏ）の正常限界未満
・免疫不全症又はＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ
・化学療法、慢性ステロイド、メトトレキサート、又は他の既知の免疫抑制剤を含む免疫抑制療法を受けていること
・ＥＣＯＧパフォーマンスステータス≧２
・総（血清）ビリルビン＞１．８ｍｇ／ｄＬ、クレアチニン＞２．０ｍｇ／ｄＬ、ヘモグロビン＜１０ｇ／Ｌ、血小板＜５０，０００／ｕＬ、ＷＢＣ＜２，０００／ｕＬ
・妊娠（尿中ＨＣＧで評価）
・母乳栄養
・白斑を除き、処理を必要とするあらゆる活性自己免疫疾患
・複数の吸入器を含む薬剤を必要とする活動性肺疾患
・他の実験プロトコル（他の試験ＰＩの許可を除いて）に関与
【0104】
評価：２４ヵ月時点での無病生存（ＤＦＳ）
無作為化にかかわらず、全患者のＤＦＳは、ルーチンの追跡スクリーニング中に個々の試験施設の患者自身の医師により決定された。これは、一次治療終了後の最初の２４ヵ月間は３ヵ月ごとに、その後は６ヵ月ごとに、臨床検査、臨床検査及びＸ線検査によるサーベイランスを実施した。本試験の主な目的は、２４カ月時点での無病生存期間（ＤＦＳ）であった。
無作為化にかかわらず、全患者のＤＦＳは、ルーチンの追跡スクリーニング中に個々の試験施設の患者自身の医師により決定された。これは、一次治療終了後の最初の２４ヵ月間は３ヵ月ごとに、その後は６ヵ月ごとに、臨床検査、臨床検査及びＸ線検査によるサーベイランスを実施した。本試験の主な目的は、２４カ月時点での無病生存期間（ＤＦＳ）であった。
【0105】
評価：３６カ月時点での無病生存期間（ＤＦＳ）
無作為化にかかわらず、全患者のＤＦＳは、ルーチンの追跡スクリーニング中に個々の試験施設の患者自身の医師により決定された。これは、臨床検査、臨床検査及びＸ線サーベイランスによる一次治療終了後３０ヵ月目と３６ヵ月目に実施した。本試験の副次的目的は、３６カ月時点での無病生存期間（ＤＦＳ）であった。
無作為化にかかわらず、全患者のＤＦＳは、ルーチンの追跡スクリーニング中に個々の試験施設の患者自身の医師により決定された。これは、臨床検査、臨床検査及びＸ線サーベイランスによる一次治療終了後３０ヵ月目と３６ヵ月目に実施した。本試験の副次的目的は、３６カ月時点での無病生存期間（ＤＦＳ）であった。
【0106】
評価：２４ヵ月時点での心毒性
無作為化にかかわらず、各患者は、ベースラインのマルチゲートアクイジションスキャ（ＭＵＧＡ）が望ましい、心エコー図（ＥＣＨＯ）が許可、一貫性が必要）、３、６、１２、２４ヵ月時に、心臓評価（駆出率）を受けた。治験期間中又は消失まで、患者がベースラインから１０％を超える低下を示した場合は、６ヵ月ごとに心臓の評価を継続した。
無作為化にかかわらず、各患者は、ベースラインのマルチゲートアクイジションスキャ（ＭＵＧＡ）が望ましい、心エコー図（ＥＣＨＯ）が許可、一貫性が必要）、３、６、１２、２４ヵ月時に、心臓評価（駆出率）を受けた。治験期間中又は消失まで、患者がベースラインから１０％を超える低下を示した場合は、６ヵ月ごとに心臓の評価を継続した。
【0107】
一連のワクチン又は接種及び一連の追加の期間における局所及び全身毒性
標準局所毒性及び全身毒性を集め、米国国立癌研究所有害事象共通用語規準（ＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ）、バージョン４．０３毒性規模に従って等級付けした。定期接種、追加接種ともに、接種後１時間、問診、連続検査及びバイタルサインを１５分ごとに綿密にモニタリングし、過敏反応の有無を観察した。また、全身毒性に関する質問及び接種部位の局所反応の検査・測定のため、各接種から４８～７２時間後に患者は診療所に戻った。
標準局所毒性及び全身毒性を集め、米国国立癌研究所有害事象共通用語規準（ＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ）、バージョン４．０３毒性規模に従って等級付けした。定期接種、追加接種ともに、接種後１時間、問診、連続検査及びバイタルサインを１５分ごとに綿密にモニタリングし、過敏反応の有無を観察した。また、全身毒性に関する質問及び接種部位の局所反応の検査・測定のため、各接種から４８～７２時間後に患者は診療所に戻った。
【0108】
本明細書に言及又は引用した全特許、特許出願、仮出願、及び刊行物はそれらが本明細書の明白な開示と矛盾しない限り、その図面及び表を含む全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【0109】
以下は、本発明を実施するための手順を例示する。これらの実施例は限定とはみなされない。全てのパーセンテージは重量で表示されており、全ての混合比率は特に注意がない限り体積比である。
【0110】
実施例１－再発予防を目的としたトラスツズマブ＋ネリペピムト－Ｓ（ＮＥＵＶＡＸ）併用療法対トラスツズマブの無作為相２ｂ試験の事前に規定された中間解析により、トリプルネガティブ（ＨＥＲ２低発現）乳癌患者における有益性を実証する
ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）低発現乳癌（免疫組織化学（ＩＨＣ）１～２＋）は、アジュバントトラスツズマブ（ＴＺ）による治療に適格ではない。ＮＳＡＢＰ Ｂ－４７により確認されたトラスツズマブは、ＨＥＲ２低発現乳癌の転帰を改善しない（Fehrenbacherら、SABCS、2017、Abstract GS1-02）。これらの患者は現在、ＨＥＲ２指向療法に不適格である。ＴＺは、癌について成功した標的療法として周知されている。１５－２０％のＢＣ患者は、ＨＥＲ２過剰発現（ＩＨＣ３＋又はＦＩＳＨ増幅）であるため、ＴＺの投与に適格である。
ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）低発現乳癌（免疫組織化学（ＩＨＣ）１～２＋）は、アジュバントトラスツズマブ（ＴＺ）による治療に適格ではない。ＮＳＡＢＰ Ｂ－４７により確認されたトラスツズマブは、ＨＥＲ２低発現乳癌の転帰を改善しない（Fehrenbacherら、SABCS、2017、Abstract GS1-02）。これらの患者は現在、ＨＥＲ２指向療法に不適格である。ＴＺは、癌について成功した標的療法として周知されている。１５－２０％のＢＣ患者は、ＨＥＲ２過剰発現（ＩＨＣ３＋又はＦＩＳＨ増幅）であるため、ＴＺの投与に適格である。
【0111】
トラスツズマブの適用を拡大する取り組みが以前からなされてき。ＮＳＡＢＰ Ｂ－４７試験は、最近、ＴＺがこの集団において転帰を改善しないことを確認した（Fehrenbacherら、2017）。ＨＥＲ２陰性、ＥＲ陽性の患者は非常に良好であり、ホルモン療法以外の標的療法を必要としない可能性が高い。しかし、ＴＮＢＣ患者は長期生存率が最も悪く、治療選択肢もほとんどない。従って、ＴＮＢＣ患者に対する新規治療法が必要とされている。
【0112】
ＨＥＲ２は、トラスツズマブの標的でもあり、乳癌患者の２０人％が投与対象となる。ＮｅｕＶａｘは、ＨＥＲ２標的ワクチンであり、当初、ＨＥＲ２が「低発現」である乳癌患者の５０～６０％のより広いベースに利用できるように準備されていた。図１に示すように、ネリペピムト－Ｓは、乳癌患者におけるワクチン接種の有望な標的であるＨＥＲ２タンパク質の細胞外ドメインに由来する免疫優性ペプチドである。ネリペピムツト－Ｓは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の特定ＨＬＡ分子に結合した後、特定ＣＤ８＋ＣＴＬを刺激する。
【0113】
アジュバントネリペピムツト-Ｓ＋ＧＭ-ＣＳＦ（ＮｅｕＶａｘ）の第１／２相試験は安全かつ免疫原性のプロファイルを実証し、臨床的有効性を示唆した（Gallら、Cancer Res.,2017,77:5374-83）。このワクチンを使用する目的は乳癌で見つかったＨＥＲ２タンパク質を認識し攻撃するように免疫系をプライミングすることであり、その結果、初期乳癌患者が初期治療終了後に再発のリスクがある場合、その免疫系はネリペピムト－Ｓ投与後にＨＥＲ２を認識し、作用することで、再発の臨床的出現を遅らせるか、又は防止する。これは臨床では無病生存期間（ＤＦＳ）、最終的には全生存期間（ＯＳ）の延長と考えられる。
【0114】
ハーセプチン（登録商標）抗体＋ＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチン（ネリペピムト－Ｓ（ＮＰＳ、Ｅ７５ペプチドとしても知られる）＋顆粒球マクロファージ－コロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ））とハーセプチン（登録商標）抗体＋ＧＭ－ＣＳＦ単独との多施設、プロスペクティブ、無作為化、単盲検、プラセボ対照、第ＩＩ相試験が実施された。対象試験集団は、標準治療後に無病であったＨＥＲ２ １＋及び２＋発現腫瘍を有する乳癌患者で、リンパ節転移陽性（ＮＰ）（又はＥＲとＰＲの両方が陰性の場合はリンパ節転移陰性［ＮＮ］）であった。標準治療の集学的治療後の無病対象者をスクリーニングし、ＨＬＡ型を判定した。ＮｅｕＶａｘ（商標）ワクチンはＣＤ８誘発ペプチドワクチンで、ＨＬＡ－Ａ２＋又はＨＬＡ－Ａ３＋患者（米国人口の約３分の２）に限定され、ＨＬＡ－Ａ２４＋及びＨＬＡ－Ａ２６＋にも拡大されている。試験デザインを図２に示す。
【0115】
主要選択基準
・女性＞１８才
・ＩＨＣで１－２＋のＨＥＲ２発現を認めた高リスク浸潤性乳癌
・標準治療を受けた後の臨床的無病状態
・ＨＬＡ－Ａ２、Ａ３、Ａ２４、又はＡ２６陽性
・女性＞１８才
・ＩＨＣで１－２＋のＨＥＲ２発現を認めた高リスク浸潤性乳癌
・標準治療を受けた後の臨床的無病状態
・ＨＬＡ－Ａ２、Ａ３、Ａ２４、又はＡ２６陽性
【0116】
評価
・局所及び全身毒性
・心毒性
・免疫学的in vivo応答
・無病生存率
・局所及び全身毒性
・心毒性
・免疫学的in vivo応答
・無病生存率
【0117】
詳細な選択基準
・１８歳以上の女性、ＥＣＯＧ ＰＳ０－１
・リンパ節転移陽性（ＨＲ＋／－）又はリンパ節転移陰性（ＨＲ－）で、ＩＨＣによりＨＥＲ２発現が１－２＋であることが組織学的に証明された浸潤性乳癌＊
－ＩＨＣ２＋腫瘍については、ＦＩＳＨ又はＤｕａｌ－ｉｓｈ ＨＥＲ２：ＣＥＰ１７≦２．０（非増幅）
・手術、アジュバント化学療法又はネオアジュバント化学療法及び放射線療法を受けた後の臨床的無病状態
・ＨＬＡ－Ａ２、Ａ３、Ａ２４、又はＡ２６陽性
・ＨＲ－及びＨＥＲ２ １＋／２＋の患者は現在、ＴＮＢＣ患者と定義されている。
・１８歳以上の女性、ＥＣＯＧ ＰＳ０－１
・リンパ節転移陽性（ＨＲ＋／－）又はリンパ節転移陰性（ＨＲ－）で、ＩＨＣによりＨＥＲ２発現が１－２＋であることが組織学的に証明された浸潤性乳癌＊
－ＩＨＣ２＋腫瘍については、ＦＩＳＨ又はＤｕａｌ－ｉｓｈ ＨＥＲ２：ＣＥＰ１７≦２．０（非増幅）
・手術、アジュバント化学療法又はネオアジュバント化学療法及び放射線療法を受けた後の臨床的無病状態
・ＨＬＡ－Ａ２、Ａ３、Ａ２４、又はＡ２６陽性
・ＨＲ－及びＨＥＲ２ １＋／２＋の患者は現在、ＴＮＢＣ患者と定義されている。
【0118】
詳細な評価：
・局所及び全身毒性（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン４．０３）
・心毒性：心駆出率（ＭＵＧＡ又は心エコー）：ベースライン、３、６、１２、及び２４ヵ月
・遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応（感受性ボールペン法）：接種前及び接種後の測定時点
・ＤＦＳ：初回治療終了後の最初の２４ヵ月間は３ヵ月ごとに、その後は６ヵ月ごとに評価した再発
・略号：ＣＥＰ：染色体数測定プローブ、ＤＦＳ：無病生存期間、ＤＴＨ：遅延型過敏症、ＥＣＯＧ ＰＳ：米国東海岸癌臨床試験グループ、ＦＩＳＨ：蛍光in situハイブリダイゼーション、ＨＥＲ２：ヒト上皮成長因子受容体２、ＨＬＡ：ヒト白血球抗原、ＨＲ：ホルモン受容体、ＩＨＣ：免疫組織化学、ＭＵＧＡ：マルチゲート収集走査、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ：米国国立癌研究所有害事象共通用語規準。
・局所及び全身毒性（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥバージョン４．０３）
・心毒性：心駆出率（ＭＵＧＡ又は心エコー）：ベースライン、３、６、１２、及び２４ヵ月
・遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応（感受性ボールペン法）：接種前及び接種後の測定時点
・ＤＦＳ：初回治療終了後の最初の２４ヵ月間は３ヵ月ごとに、その後は６ヵ月ごとに評価した再発
・略号：ＣＥＰ：染色体数測定プローブ、ＤＦＳ：無病生存期間、ＤＴＨ：遅延型過敏症、ＥＣＯＧ ＰＳ：米国東海岸癌臨床試験グループ、ＦＩＳＨ：蛍光in situハイブリダイゼーション、ＨＥＲ２：ヒト上皮成長因子受容体２、ＨＬＡ：ヒト白血球抗原、ＨＲ：ホルモン受容体、ＩＨＣ：免疫組織化学、ＭＵＧＡ：マルチゲート収集走査、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ：米国国立癌研究所有害事象共通用語規準。
【0119】
所定の中間解析の結果を得た。
・最後の患者が登録されてから６ヵ月後
・安全性及び有効性を評価した
以下の表１及び表２に患者背景（ＩＴＴ）を示す。
・最後の患者が登録されてから６ヵ月後
・安全性及び有効性を評価した
以下の表１及び表２に患者背景（ＩＴＴ）を示す。
【0120】
【表1】
【0121】
【表2】
【0122】
５８９人の患者がスクリーニングを受け、ＨＬＡタイピングに同意し、ＨＬＡの状態に基づいて適格でなかったのはわずか１６．６％であった。２１６人は適切なＨＬＡ型であったが、スクリーニングの障害又は患者の選択は登録しなかった。２７５の患者が登録された。治療群間（ＡＪＣＣ７ステージ）で臨床病理学的な差は認められなかった。
【0123】
図３に、患者当たりの最大段階的毒性のグラフを示す。各群７例は割り付けられた治療を開始せず、安全性解析から除外した。患者が経験した関連毒性又は最大毒性の分布又は重症度に差はなかった。ＮｅｕＶａｘグループでグレード１／２の限局性そう痒及び疼痛がわずかに多かったことを除いて、個々の局所毒性又は全身毒性に差はなかった。ＴＲＡＥは、主に管理可能な局所注射部位反応、皮膚硬結、そう痒症及び疲労から構成された。グレード４／５のＴＲＡＥは認められなかった。
【0124】
図４は、同図心駆出率（ＬＶＥＦ）のグラフである。心臓関連の有害事象の発現率には、治療群間で有意差は認められなかった（表２）。ＬＶＥＦの平均値は、事前に設定した３、６、１２ヵ月目の評価時に両群ともベースラインからわずかに低下したが（ｐ＜０．０２）、２４ヵ月目にトラスツズマブを中止した後には差が認められなかった（ｐ＞０．５８、図３）。ＬＶＥＦを線形混合回帰モデルで評価した全ての時点を評価したところ、心駆出率の経時的変化（ｐ＝０．６５）、無作為化群間（ｐ＝０．９１）、治療群間の経時変化（ｐ＝０．８１、図４）に有意差は認められなかった。
【0125】
【表3】
【0126】
図７に、ＴＮＢＣ患者の無病生存率のグラフを示す。事前に規定したサブグループ解析では、トリプルネガティブ集団内ではるかに強い臨床的有益性が認められた。
【0127】
この患者集団は、乳癌に対する効果的な標的療法の時代において、これらの患者は有効な治療法が極めて少なく放置されているため、特に関心が必要である。すでに述べたように、乳癌患者のおよそ８０％は現在、有効なＨＥＲ２標的分子療法（トラスツズマブや他のＨＥＲ２結合高分子／抗体等）に適格ではないが、これらの患者のおよそ４分の３はＥＲ陽性疾患であり、これは比較的攻撃性が低く、確実にホルモン療法が受けられ、非常に有効である。ホルモン受容体陽性、ＨＥＲ２陰性（ホルモン受容体陽性、ＨＥＲ２「低発現」を含む）疾患を有するこれらの患者は非常に良好な予後を有するが、トリプルネガティブ疾患患者の約２０％は、現在、乳癌患者の最もリスクの高い生物学的サブセットであり、特に予後不良で、治療の中心として細胞毒性化学療法のみに頼っている。重要なのは、これは転移性及び初期の設定のほか、初期治療に対する一次治療が成功した後の補助／維持療法の設定においても当てはまることである。従って、ＴＮＢＣ患者は、新しい治療法を必要とする、十分に治療されていない乳癌患者集団である。
【0128】
この試験では、ＮｅｕＶａｘ＋トラスツズマブの併用が安全であることが明らかにされ、治療群間で安全性に顕著な差は認められなかった。心毒性は追加されなかった。ＮｅｕＶａｘ＋トラスツズマブは、ＨＥＲ２低発現乳癌患者に臨床的に意義のある利益をもたらす可能性がある。最も重要なことは、ＮｅｕＶａｘ＋トラスツズマブの併用により、ＴＮＢＣ患者におけるＤＦＳの統計的に有意な改善が実証されたことである。
【0129】
実施例２－ＨＬＡ－Ａ２４＋トリプルネガティブ（ＨＥＲ２低発現）乳癌患者におけるＮＰＳの活性
本試験のトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）コホート（ｎ＝９７）の患者において（実施例１）、実薬治療（ＮＰＳ＋トラスツズマブ）は全てのＨＬＡタイプに利益をもたらした（図８参照、試験した患者の各種ＨＬＡサブタイプのハザード比についてのフォレストプロットを示す。ＴＮＢＣコホート全体のハザード比［Ｈ．Ｒ．］は、ＨＬＡタイプ間で非常に強い、０．２９）。しかし、このフォレストプロットサブグループ分析は、ＨＬＡ－Ａ２４＋の患者で達成された最低のＨ．Ｒ．を示し、顕著なＨ．Ｒ．値は０．０８、ｐ値は０．００３であった。ＨＬＡ－Ａ２４陽性率は、特にアジア／太平洋流域の個体群に関連している。
本試験のトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）コホート（ｎ＝９７）の患者において（実施例１）、実薬治療（ＮＰＳ＋トラスツズマブ）は全てのＨＬＡタイプに利益をもたらした（図８参照、試験した患者の各種ＨＬＡサブタイプのハザード比についてのフォレストプロットを示す。ＴＮＢＣコホート全体のハザード比［Ｈ．Ｒ．］は、ＨＬＡタイプ間で非常に強い、０．２９）。しかし、このフォレストプロットサブグループ分析は、ＨＬＡ－Ａ２４＋の患者で達成された最低のＨ．Ｒ．を示し、顕著なＨ．Ｒ．値は０．０８、ｐ値は０．００３であった。ＨＬＡ－Ａ２４陽性率は、特にアジア／太平洋流域の個体群に関連している。
【0130】
図９に、ＨＬＡ－Ａ２４＋ＴＮＢＣ患者に対するＤＦＳを示す。ＴＮＢＣ患者の後者のサブグループでは、ＮＰＳ＋トラスツズマブの併用により、２４ヵ月ＤＦＳランドマーク解析において、対照（トラスツズマブ単独）群と比較して２４ヵ月時点での再発又は死亡の相対リスクが顕著に９０．６％低下する。
【0131】
図８及び９のデータによれば、ＴＮＢＣ患者のＨＬＡ－Ａ２４＋サブグループが試験された全ての他のサブグループ（各種ベースラインの患者及び疾患の特徴及びデータ層別化パラメータに従って定義されるこのようなサブグループ）の中で、観察されたことのある最高の臨床活性（実薬（コンボＮＰＳ＋トラスツズマブ）と対照（トラスツズマブ単独）の間のデルタ（ＤＦＳ）によって評価される）を示すことが確認される。
【0132】
さらに、ＨＬＡ－Ａ２４＋患者は、試験全体（すなわち、ＴＮＢＣ患者と非ＴＮＢＣ患者の両方を含むＩＴＴ集団のＨＬＡ－Ａ２４＋部分）においても、ＤＦＳの改善傾向を示した（図１０参照）。ＩＴＴ内のＨＬＡ－Ａ２４＋患者（大規模な試験集団）を対象としたこの解析では、Ｈ．Ｒ．が０．４３で、その値は０．０７であったことが示され、２４ヵ月ＤＦＳのランドマーク解析において、併用（ＮＰＳ＋トラスツズマブ）群ｖｓ対照（トラスツズマブのみ）群では２４ヵ月時点での再発又は死亡の相対リスクが６１．２％低下したことに相当した。
【0133】
このように、ＮＰＳ＋トラスツズマブの併用でこれまでにみられた最も強力な臨床効果は、ＴＮＢＣコホート及びＩＴＴ集団（後者はホルモン受容体の状態に関係なくＨＥＲ２ ＩＨＣ１＋／２＋）のいずれについてもＨＬＡ－Ａ２４＋患者であった。この監察結果は、少なくとも２つの理由で非常に興味深い。
【0134】
第一に、ＨＬＡ－Ａ２４は、アジア／太平洋流域地域に生息する集団において最も強く発現されるＨＬＡ型であり、次の点で、アジア市場に非常に適切であるという知見を与える。アジアにおけるＨＬＡ－Ａ２４対立遺伝子の非常に高い有病率を考慮して、世界中で依然として活性である一方で、ＮＰＳを、これらの領域において（トラスツズマブと併用して）最適に使用され得る薬剤として、これらのデータが強く位置づけている。
【0135】
第二に、Ｅ７５（ＮＰＳ）ペプチドに対する種々のＨＬＡサブタイプの結合親和性を見ると、この知見は予測できなかった。実際、ＨＬＡ－Ａ２４（及びＡ２６）分子（アジア人患者で高頻度に発現）は、ＮＰＳペプチドに対する結合活性が最も低いが（表４参照）、最も強力な臨床反応と尚関連している（上記のＤＦＳ臨床転帰データによる）。
【0136】
以下の表４において、人工ニューラルネットワーク（ＡＮＮ）ＩＣ５０は、ＭＨＣクラスＩとの５０％結合に必要なタンパク質の濃度を示す。低いＩＣ５０値は、所与のＨＬＡ分子の抗原認識生物物理学的「ポケット」への強い結合を示し、逆に高いＩＣ５０値は、この「ポケット」への弱い結合を示す。
【0137】
【表4】
【0138】
【表5】
【0139】
表４から明らかなように、ペプチド結合についての最高のＩＣ５０値は、対立遺伝子ＨＬＡ-Ａ２４（及びＡ-２６）について得られる。モデリングによる結合の強さの順位（ＩＣ５０の上に追加因子を含む）で評価すると、４つの主要なＨＬＡクラスＩ対立遺伝子（Ａ０２、Ａ０３、Ａ２４［この場合、Ａ２６］）の中でＮＰＳペプチドとの最も弱い関連を示すのはＨＬＡ－Ａ２４サブタイプである。
【0140】
以上を総合すると、ＮＰＳは、高親和性コンホメーション、すなわちＡ０２及びＡ０３に加えて、特にアジア集団において、より低親和性のＭＨＣ－Ｉコンホメーション（Ａ２４）の両方に結合できることが示唆される。実際、生物物理学的／分子レベルでこれら両方のＨＬＡコンホメーションと会合するこの能力は、少なくとも一部、ワクチン接種している抗原（ＮＰＳ）に対する最適に好ましい免疫応答の生成に役立つ可能性があり、これは、他のＨＥＲ２断片全体で可能性が最も高い。これは、いくつかのさらなるＨＥＲ２エピトープにわたる場合である可能性が最も高いと予想され、ＮＰＳワクチン接種後に広がるエピトープが以前の研究で繰り返し示されている（Conrad Hら、J Immunol. 2008;180:8135-45; Emens LAら、Endocr Relat Cancer. 2005;12:1-17; Mittendorf EAら、Surgery. 2006;139:407-18; Disis MLら、J Clin Oncol. 2002;20:2624-32; Brossart P ら Blood. 2000;96:3102-8; Disis MLら、Clin Cancer Res. 1999;5:1289-97）。
【0141】
実際のＨＬＡ－Ａ２４分子に対するＮＰＳの親和性が低い（見かけのパラドックス）にもかかわらず、ＮＰＳ接種後のＨＬＡ－Ａ２４＋患者において深い臨床反応がみられるという事実は、宿主の抗原提示細胞（抗原提示細胞（ＡＰＣ）、すなわちマクロファージ及び単球）－及び、最終的には、ＨＬＡ－Ａ２４個体におけるＮＰＳエピトープに対するＣＤ８ Ｔ細胞－の「露出」の減少（免疫系による抗原認識「事象」の頻度が低いため）に起因する可能性が最も高い。従って、この効果は、この重要なエピトープ（ＮＰＳ）に対する公差出現率の減少に起因するものと思われる。言い換えれば、ペプチド結合のより低い親和性は、アジア集団における多くのＨＬＡ-Ａ２４結合自己ペプチド（ＮＰＳを含む）に対する非効率的な寛容化の基礎である。このことは重要である。なぜなら、ＨＬＡ－Ａ２４に高い親和性をもつＮＰＳ以外のペプチドワクチン（特に一価ワクチン）は（初期免疫反応性の「緩慢な」レベルの誘導にもかかわらず）急速に寛容原性を獲得し、経時的に免疫原性を徐々に減弱させることができるからである。さらに、この効果はＨＬＡ－Ａ２４＋の個体でより増強される可能性がある。このことは、特にアジアの集団において、ＮＰＳで予測外の効果であり、これはＮＰＳの非常に肯定的な顕著に区別される属性情報である。
【0142】
上記の全ては、ＮＰＳ（又はＮＰＳ変異体）対他のＨＥＲ２標的免疫療法薬（ペプチド又は他のタイプのワクチンを含む）の潜在的に強い違いを、特にアジア人患者では、提供することができ、そのような薬剤は、ＨＬＡ－Ａ２４との親和性が低すぎるかどうかを示すことができ、その場合、ＮＰＳに対する抗原性／免疫原性は低い、あるいはＨＬＡ－Ａ２４との親和性が高すぎ、その場合、免疫寛容と特定の抗原に対するアネルギーへと急速かつ決定的に導かれる。また、一般的なペプチドワクチンの文献において、Ｔ細胞を免疫するのに必要なペプチド－ＨＬＡ結合活性の閾値と比較して、免疫寛容を誘導するにはペプチド－ＨＬＡ結合活性の閾値が高くなければならないことも知られている。従って、ペプチドワクチン抗原のほとんどの場合、バランスは免疫原性対免疫寛容誘導の２つの方向のどちらかに向かう。要するに、上記の知見は驚くべきことに、そして非常に有利なことに、ＮＰＳは、最適には抗原性と抗寛容性の両方があり（特にＨＬＡ-Ａ２４を有する患者のコンテキストにおいて）、これはＮＰＳ（及びＮＰＳ変異体）に独特かつ「特異的」な特徴である。
【0143】
最後に、所与の自己抗原（すなわち、ほとんどの腫瘍関連抗原がＮＰＳを含むので、本質的に「弱い」抗原）の関連性の弱さをその同族のＨＬＡ／ＭＨＣクラスＩ「ポケット」に正に相関させる基本的／一般的（すなわち、ＮＰＳに特異的でないか、又は適切でない）文献（下記のアスタリスク［＊］で示されるリストを参照）が存在し、抗原に対する寛容性が欠如している（後者の特性は、ＮＰＳが有すると思われる抗癌ワクチンに最適な特性である）。最後に、ＮＰＳのこの抗寛容原性特性が、ワクチン接種患者におけるＮＰＳ特異的ＣＤ４（すなわち、Ｔメモリ）細胞クローンの活性化と持続にある可能性があることは非常に興味深く、ＮＰＳのまれな（臨床的観点からも非常に有益である）特性である（Peoples GEらClin Cancer Res.2008;14:797-803;これは、ＮＰＳワクチン接種後の良好なＣＤ４Ｔメモリ細胞応答を実証する主要な論文であり、主にＮＰＳのようなＣＤ８活性化短［９－アミノ酸］ペプチドでは予測されないものである）。
【0144】
*抗原のＨＬＡ結合活性と寛容原性との関係（癌免疫療法では、ＮＰＳに直接関連するものではないが）についての引用文献を以下に挙げる。
・Blum JSら Annu Rev Immunol. 2013;31:443-73.
・Janicki CNら Cancer Res. 2008;68:2993-3000.
・Gebreselassie Dら Hum Immunol. 2006;67:894-906.
・Gross DAら J Clin Invest. 2004;113:425-33.
・McMahan C and Fink P. J Immunol. 2000;165:6902-7.
・Arnold Bら Immunol Today. 1993;14:12-4.
・Nikolic-Zugic J & Carbone FR. Immunol Res. 1991;10:54-65.
・Milich DRら J Immunol. 1989;143:3148-56.
・Blum JSら Annu Rev Immunol. 2013;31:443-73.
・Janicki CNら Cancer Res. 2008;68:2993-3000.
・Gebreselassie Dら Hum Immunol. 2006;67:894-906.
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・McMahan C and Fink P. J Immunol. 2000;165:6902-7.
・Arnold Bら Immunol Today. 1993;14:12-4.
・Nikolic-Zugic J & Carbone FR. Immunol Res. 1991;10:54-65.
・Milich DRら J Immunol. 1989;143:3148-56.
【0145】
例示的な実施形態
本発明の実施形態の例には、これらに限定されないが、以下が含まれる。
本発明の実施形態の例には、これらに限定されないが、以下が含まれる。
【0146】
実施形態１ （ａ）有効量のトラスツズマブ又はその誘導体、及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を個体に投与することを含む、個体におけるトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための方法。
実施形態２ 前記トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を間隔をあけて投与し、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の投与は、前記トラスツズマブ又はその誘導体の投与の開始後に開始される、実施形態１に記載の方法。
実施形態３ 前記方法は、ネリペピムト-Ｓ又は変異体なしで、前記トラスツズマブ又は誘導体の用量の定期的投与を含む準備相の開始、続いて、前記トラスツズマブ又は誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又は変異体の両方の用量の定期的投与を含む組み合わせ相及び期間を含む、実施形態３に記載の方法。
実施形態５ 初期免疫化相中の前記ネリペピムト-Ｓ又は変異体の投与は、トラスツズマブ又はその誘導体の第３、第４、又は第５の投与の完了後に開始される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６ 前記トラスツズマブ又はその誘導体は、８ｍｇ／ｋｇの初期負荷用量及び３週間ごと（ｑ３ｗｋ）の６ｍｇ／ｋｇの維持用量で投与され、１，０００ｍｃｇの用量のネリペピムト-Ｓ又は変異体が投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態７ 前記ＴＮＢＣは、免疫組織化学（ＩＨＣ）による１＋又は２＋のＨＥＲ２発現を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態８ 前記個体は、ＨＬＡ－Ａ２陽性、ＨＬＡ－Ａ３陽性、ＨＬＡ－Ａ２４陽性、又はＨＬＡ－Ａ２６陽性である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態９ 前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する標準的な治療療法（例えば、化学療法、手術原発性腫瘍摘出、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与時に臨床的に無病である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１０ トラスツズマブ又はその誘導体の投与は、標準的なケア療法の完了後３週間から１２週間の間に開始される、実施形態９に記載の方法。
実施形態１１ 前記ＴＮＢＣは、前記投与の時点でリンパ節転移陰性（例えば、ＡＪＣＣ Ｎ０又はＮ０（ｉ＋））である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１２ 前記トラスツズマブ又はその誘導体は、静脈内に投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１３ 前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、皮内投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１４ 免疫学的アジュバントを個体に投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１５ 前記免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、実施形態１２に記載の方法。
実施形態１６ ２５０ｍｃｇのＧＭ－ＣＳＦの用量が、１日当たり投与される、実施形態１５に記載の方法。
実施形態１７ 前記免疫アジュバントは、３週間（ｑ３ｗｋ）ごとに投与される、実施形態１４～１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１８ １，０００ｍｃｇの前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体及び２５０ｍｃｇの前記ＧＭ-ＣＳＦは、トラスツズマブ又はその誘導体の注入の完了後３０～１２０分後に、３週間ごとに皮内投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１９ 前記免疫学的アジュバントは、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体と共に、同一又は別個の処方で投与される、実施形態１４～１８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２０ 前記ネリペピムト-Ｓは、アミノ酸配列ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ（配列番号１）からなるＨＥＲ２／ｎｅｕペプチドを含み、前記変異体は、配列番号１の４位にアルファ-アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、配列番号１の７位にアルファ－アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、あるいは、配列番号１の８位にイソフェニルアラニンを有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２１ 前記ネリペピムト-Ｓの変異体が投与され、変異体は、
ＫＩＦＡｂｕＳＬＡＦＬ（配列番号：２）、
ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ（配列番号：３）、
ＫＩＦＮｌｅＳＬＡＦＬ（配列番号４）、
ＫＩＦＧＳＬＡｂｕＦＬ（配列番号：５）、
ＫＩＦＧＳＬＮｖａＦＬ（配列番号：６）、
ＫＩＦＧＳＬＮｌｅＦＬ（配列番号：７）、及び
ＫＩＦＧＳＬＡイソＦＬ（配列番号：８）の中から選択される、実施形態２０に記載の方法。
実施形態２２ 前記トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、追加の治療薬を前記対象に投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２３ 前記追加の治療剤は、免疫療法薬である、実施形態２２に記載の方法。
実施形態２４ 前記免疫療法薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含む、実施形態２３に記載の方法。
実施形態２５ 前記投与は、腫瘍サイズを減少させ、及び／又は個体の無病生存（無再発生存）を増加させる、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２６ トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、前記個体に対して相乗効果を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２７ 前記方法は、トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、追加の治療薬を個体に投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２８ 前記追加の治療剤は、免疫療法薬である、実施形態２７に記載の方法。
実施形態２９ 前記免疫療法薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含む、実施形態２８に記載の方法。
実施形態３０ 前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する治療（例えば、化学療法、手術原発性腫瘍摘出、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与の時点で臨床的に無病であり、前記方法は、前記個体における前記ＴＮＢＣの再発を遅延又は防止する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３１ トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、前記個体に対して相乗効果を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３２ 有効量のトラスツズマブ及び有効量のネリペピムト-Ｓが前記個体に投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３３ 低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するトリプルネガティブ乳癌を有する個体において、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導する方法であって、（ａ）有効量のトラスツズマブ又はその誘導体、及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を個体に投与することを含む、方法。
実施形態３４ 前記トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を間隔をあけて投与し、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の投与は、前記トラスツズマブ又はその誘導体の投与の開始後に開始される、実施形態３３に記載の方法。
実施形態３５ 前記方法は、ネリペピムト-Ｓ又は変異体なしで、前記トラスツズマブ又は誘導体の用量の定期的投与を含む準備相の開始、続いて、前記トラスツズマブ又は誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又は変異体の両方の用量の定期的投与を含む組み合わせ相を含む、実施形態３３又は３４に記載の方法。
実施形態３６ 前記準備相は、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の前記投与後の前記個体の乳癌細胞上のＨＥＲ２抗原の主要組織適合性複合体タイプＩ媒介提示を増加させるのに十分なトラスツズマブ又はその誘導体の投与の頻度及び期間を含む、実施形態３５に記載の方法。
実施形態３７ 前記ネリペピムト-Ｓ又は変異体の投与は、トラスツズマブ又はその誘導体の第３、第４、又は第５の投与の完了後に開始される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３８ 前記トラスツズマブ又はその誘導体は、８ｍｇ／ｋｇの初期負荷用量及び３週間ごと（ｑ３ｗｋ）の６ｍｇ／ｋｇの維持用量で投与され、１，０００ｍｃｇの用量のネリペピムト-Ｓ又は変異体が投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３９ 前記ＴＮＢＣは、免疫組織化学（ＩＨＣ）による１＋又は２＋のＨＥＲ２発現を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４０ 前記個体は、ＨＬＡ－Ａ２陽性、ＨＬＡ－Ａ３陽性、ＨＬＡ－Ａ２４陽性、又はＨＬＡ－Ａ２６陽性である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４１ 前記個体は、ＨＬＡ－Ａ２４陽性である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４２ 前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する標準的な治療療法（例えば、手術原発性腫瘍摘出、化学療法、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与の時点で臨床的に無病である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４３ トラスツズマブ又はその誘導体の投与は、標準的なケア療法の完了後３週間から１２週間の間に開始される、実施形態４２に記載の方法。
実施形態４４ 前記ＴＮＢＣは、前記投与の時点でリンパ節転移陰性（例えば、ＡＪＣＣ Ｎ０又はＮ０（ｉ＋））である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４５ 前記トラスツズマブ又はその誘導体は、静脈内に投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４６ 前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、皮内投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４７ 免疫学的アジュバントを投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４８ 前記免疫アジュバントは、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体と共に、同一又は別個の処方で投与される、実施形態４７に記載の方法。
実施形態４９ 前記免疫アジュバントは、皮内投与される、実施形態４７又は４８に記載の方法。
実施形態５０ 前記免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、実施形態４７～４９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態５１ ２５０ｍｃｇのＧＭ－ＣＳＦの用量が、１日当たり投与される、実施形態４９に記載の方法。
実施形態５２ 前記免疫アジュバントは、３週間（ｑ３ｗｋ）ごとに投与される、実施形態１４～１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態５３ １，０００ｍｃｇの前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体及び２５０ｍｃｇの前記ＧＭ-ＣＳＦは、トラスツズマブ又はその誘導体の注入の完了後３０～１２０分後に、３週間ごとに皮内投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態５４ 前記ネリペピムト-Ｓは、アミノ酸配列ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ（配列番号１）からなるＨＥＲ２／ｎｅｕペプチドを含み、前記変異体は、配列番号１の４位にアルファ-アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、配列番号１の７位にアルファ－アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、あるいは、配列番号１の８位にイソフェニルアラニンを有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態５５ 前記ネリペピムト-Ｓの変異体が投与され、変異体は、
ＫＩＦＡｂｕＳＬＡＦＬ（配列番号：２）、
ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ（配列番号：３）、
ＫＩＦＮｌｅＳＬＡＦＬ（配列番号：４）、
ＫＩＦＧＳＬＡｂｕＦＬ（配列番号：５）、
ＫＩＦＧＳＬＮｖａＦＬ（配列番号：６）、
ＫＩＦＧＳＬＮｌｅＦＬ（配列番号：７）、及び
ＫＩＦＧＳＬＡイソＦＬ（配列番号：８）の中から選択される、実施形態５４に記載の方法。
実施形態５６ ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、一次ワクチン接種を表し、前記一次ワクチン接種の完了後に、１、２、３、４、又はそれ以上の追加用量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を、３０ヶ月以上、任意で免疫学的アジュバント（例えば、ＧＭ-ＣＳＦ）と共に、前記一次ワクチン接種よりも少ない周期で投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態５７ ２つ以上の追加用量のネリペピムト－Ｓ又はその変異体が投与され、１つの追加用量が６ヶ月ごとに投与される、実施形態５６に記載の方法。
実施形態５８ 前記方法がトラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、追加の治療薬を個体に投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態５９ 前記追加の治療剤は、免疫療法薬である、実施形態５８に記載の方法。
実施形態６０ 前記免疫療法薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含む、実施形態５９に記載の方法。
実施形態６１ 前記投与は、腫瘍サイズを減少させ、及び／又は個体の無病生存（無再発生存）を増加させる、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６２ 前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する治療（例えば、化学療法、手術原発性腫瘍摘出、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与の時点で臨床的に無病であり、前記方法は、前記個体における前記ＴＮＢＣの再発を遅延又は防止する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６３ トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、前記個体に対して相乗効果を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６４ 有効量のトラスツズマブ及び有効量のネリペピムト-Ｓが前記個体に投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６５ 個体におけるトリプルネガティブ乳癌を治療するための、トラスツズマブ又はその誘導体と併用するための、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体を含む薬剤。
実施形態６６ 免疫アジュバントをさらに含む、実施形態６５に記載の薬剤。
実施形態６７ 前記免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、実施形態６５に記載の薬剤。
実施形態６８ 個体におけるトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体と併用するための、トラスツズマブ又はその誘導体を含む薬剤。
実施形態６９ 第１の容器、第２の容器及び添付文書を含むキットであって、前記第１の容器は、トラスツズマブ又はその誘導体を含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、前記第２の容器は、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、前記添付文書は、前記薬剤を使用してトリプルネガティブ乳癌の個体を治療するための説明書を含む、キット。
実施形態７０ 免疫アジュバントをさらに含み、前記免疫アジュバントは、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体と共に、第３の容器内にあるか、又は第２の容器内にある、実施形態６９に記載のキット。
実施形態７１ 免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、実施形態６９又は７０に記載のキット。
実施形態７２ 前記キットは、トラスツズマブ及びネリペピムト-Ｓを含む、実施形態６９又は７０に記載のキット。
実施形態２ 前記トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を間隔をあけて投与し、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の投与は、前記トラスツズマブ又はその誘導体の投与の開始後に開始される、実施形態１に記載の方法。
実施形態３ 前記方法は、ネリペピムト-Ｓ又は変異体なしで、前記トラスツズマブ又は誘導体の用量の定期的投与を含む準備相の開始、続いて、前記トラスツズマブ又は誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又は変異体の両方の用量の定期的投与を含む組み合わせ相及び期間を含む、実施形態３に記載の方法。
実施形態５ 初期免疫化相中の前記ネリペピムト-Ｓ又は変異体の投与は、トラスツズマブ又はその誘導体の第３、第４、又は第５の投与の完了後に開始される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６ 前記トラスツズマブ又はその誘導体は、８ｍｇ／ｋｇの初期負荷用量及び３週間ごと（ｑ３ｗｋ）の６ｍｇ／ｋｇの維持用量で投与され、１，０００ｍｃｇの用量のネリペピムト-Ｓ又は変異体が投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態７ 前記ＴＮＢＣは、免疫組織化学（ＩＨＣ）による１＋又は２＋のＨＥＲ２発現を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態８ 前記個体は、ＨＬＡ－Ａ２陽性、ＨＬＡ－Ａ３陽性、ＨＬＡ－Ａ２４陽性、又はＨＬＡ－Ａ２６陽性である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態９ 前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する標準的な治療療法（例えば、化学療法、手術原発性腫瘍摘出、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与時に臨床的に無病である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１０ トラスツズマブ又はその誘導体の投与は、標準的なケア療法の完了後３週間から１２週間の間に開始される、実施形態９に記載の方法。
実施形態１１ 前記ＴＮＢＣは、前記投与の時点でリンパ節転移陰性（例えば、ＡＪＣＣ Ｎ０又はＮ０（ｉ＋））である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１２ 前記トラスツズマブ又はその誘導体は、静脈内に投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１３ 前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、皮内投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１４ 免疫学的アジュバントを個体に投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１５ 前記免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、実施形態１２に記載の方法。
実施形態１６ ２５０ｍｃｇのＧＭ－ＣＳＦの用量が、１日当たり投与される、実施形態１５に記載の方法。
実施形態１７ 前記免疫アジュバントは、３週間（ｑ３ｗｋ）ごとに投与される、実施形態１４～１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態１８ １，０００ｍｃｇの前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体及び２５０ｍｃｇの前記ＧＭ-ＣＳＦは、トラスツズマブ又はその誘導体の注入の完了後３０～１２０分後に、３週間ごとに皮内投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態１９ 前記免疫学的アジュバントは、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体と共に、同一又は別個の処方で投与される、実施形態１４～１８のいずれか一つに記載の方法。
実施形態２０ 前記ネリペピムト-Ｓは、アミノ酸配列ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ（配列番号１）からなるＨＥＲ２／ｎｅｕペプチドを含み、前記変異体は、配列番号１の４位にアルファ-アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、配列番号１の７位にアルファ－アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、あるいは、配列番号１の８位にイソフェニルアラニンを有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２１ 前記ネリペピムト-Ｓの変異体が投与され、変異体は、
ＫＩＦＡｂｕＳＬＡＦＬ（配列番号：２）、
ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ（配列番号：３）、
ＫＩＦＮｌｅＳＬＡＦＬ（配列番号４）、
ＫＩＦＧＳＬＡｂｕＦＬ（配列番号：５）、
ＫＩＦＧＳＬＮｖａＦＬ（配列番号：６）、
ＫＩＦＧＳＬＮｌｅＦＬ（配列番号：７）、及び
ＫＩＦＧＳＬＡイソＦＬ（配列番号：８）の中から選択される、実施形態２０に記載の方法。
実施形態２２ 前記トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、追加の治療薬を前記対象に投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２３ 前記追加の治療剤は、免疫療法薬である、実施形態２２に記載の方法。
実施形態２４ 前記免疫療法薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含む、実施形態２３に記載の方法。
実施形態２５ 前記投与は、腫瘍サイズを減少させ、及び／又は個体の無病生存（無再発生存）を増加させる、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２６ トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、前記個体に対して相乗効果を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２７ 前記方法は、トラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、追加の治療薬を個体に投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態２８ 前記追加の治療剤は、免疫療法薬である、実施形態２７に記載の方法。
実施形態２９ 前記免疫療法薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含む、実施形態２８に記載の方法。
実施形態３０ 前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する治療（例えば、化学療法、手術原発性腫瘍摘出、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与の時点で臨床的に無病であり、前記方法は、前記個体における前記ＴＮＢＣの再発を遅延又は防止する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３１ トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、前記個体に対して相乗効果を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３２ 有効量のトラスツズマブ及び有効量のネリペピムト-Ｓが前記個体に投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３３ 低レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するトリプルネガティブ乳癌を有する個体において、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対する免疫応答を誘導する方法であって、（ａ）有効量のトラスツズマブ又はその誘導体、及び（ｂ）有効量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を個体に投与することを含む、方法。
実施形態３４ 前記トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を間隔をあけて投与し、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の投与は、前記トラスツズマブ又はその誘導体の投与の開始後に開始される、実施形態３３に記載の方法。
実施形態３５ 前記方法は、ネリペピムト-Ｓ又は変異体なしで、前記トラスツズマブ又は誘導体の用量の定期的投与を含む準備相の開始、続いて、前記トラスツズマブ又は誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又は変異体の両方の用量の定期的投与を含む組み合わせ相を含む、実施形態３３又は３４に記載の方法。
実施形態３６ 前記準備相は、前記ネリペピムト－Ｓ又はその変異体の前記投与後の前記個体の乳癌細胞上のＨＥＲ２抗原の主要組織適合性複合体タイプＩ媒介提示を増加させるのに十分なトラスツズマブ又はその誘導体の投与の頻度及び期間を含む、実施形態３５に記載の方法。
実施形態３７ 前記ネリペピムト-Ｓ又は変異体の投与は、トラスツズマブ又はその誘導体の第３、第４、又は第５の投与の完了後に開始される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３８ 前記トラスツズマブ又はその誘導体は、８ｍｇ／ｋｇの初期負荷用量及び３週間ごと（ｑ３ｗｋ）の６ｍｇ／ｋｇの維持用量で投与され、１，０００ｍｃｇの用量のネリペピムト-Ｓ又は変異体が投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態３９ 前記ＴＮＢＣは、免疫組織化学（ＩＨＣ）による１＋又は２＋のＨＥＲ２発現を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４０ 前記個体は、ＨＬＡ－Ａ２陽性、ＨＬＡ－Ａ３陽性、ＨＬＡ－Ａ２４陽性、又はＨＬＡ－Ａ２６陽性である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４１ 前記個体は、ＨＬＡ－Ａ２４陽性である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４２ 前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する標準的な治療療法（例えば、手術原発性腫瘍摘出、化学療法、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与の時点で臨床的に無病である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４３ トラスツズマブ又はその誘導体の投与は、標準的なケア療法の完了後３週間から１２週間の間に開始される、実施形態４２に記載の方法。
実施形態４４ 前記ＴＮＢＣは、前記投与の時点でリンパ節転移陰性（例えば、ＡＪＣＣ Ｎ０又はＮ０（ｉ＋））である、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４５ 前記トラスツズマブ又はその誘導体は、静脈内に投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４６ 前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体は、皮内投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４７ 免疫学的アジュバントを投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態４８ 前記免疫アジュバントは、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体と共に、同一又は別個の処方で投与される、実施形態４７に記載の方法。
実施形態４９ 前記免疫アジュバントは、皮内投与される、実施形態４７又は４８に記載の方法。
実施形態５０ 前記免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、実施形態４７～４９のいずれか一つに記載の方法。
実施形態５１ ２５０ｍｃｇのＧＭ－ＣＳＦの用量が、１日当たり投与される、実施形態４９に記載の方法。
実施形態５２ 前記免疫アジュバントは、３週間（ｑ３ｗｋ）ごとに投与される、実施形態１４～１６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態５３ １，０００ｍｃｇの前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体及び２５０ｍｃｇの前記ＧＭ-ＣＳＦは、トラスツズマブ又はその誘導体の注入の完了後３０～１２０分後に、３週間ごとに皮内投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態５４ 前記ネリペピムト-Ｓは、アミノ酸配列ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ（配列番号１）からなるＨＥＲ２／ｎｅｕペプチドを含み、前記変異体は、配列番号１の４位にアルファ-アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、配列番号１の７位にアルファ－アミノ酪酸、ノルバリン又はノルロイシン、あるいは、配列番号１の８位にイソフェニルアラニンを有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態５５ 前記ネリペピムト-Ｓの変異体が投与され、変異体は、
ＫＩＦＡｂｕＳＬＡＦＬ（配列番号：２）、
ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ（配列番号：３）、
ＫＩＦＮｌｅＳＬＡＦＬ（配列番号：４）、
ＫＩＦＧＳＬＡｂｕＦＬ（配列番号：５）、
ＫＩＦＧＳＬＮｖａＦＬ（配列番号：６）、
ＫＩＦＧＳＬＮｌｅＦＬ（配列番号：７）、及び
ＫＩＦＧＳＬＡイソＦＬ（配列番号：８）の中から選択される、実施形態５４に記載の方法。
実施形態５６ ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、一次ワクチン接種を表し、前記一次ワクチン接種の完了後に、１、２、３、４、又はそれ以上の追加用量のネリペピムト-Ｓ又はその変異体を、３０ヶ月以上、任意で免疫学的アジュバント（例えば、ＧＭ-ＣＳＦ）と共に、前記一次ワクチン接種よりも少ない周期で投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態５７ ２つ以上の追加用量のネリペピムト－Ｓ又はその変異体が投与され、１つの追加用量が６ヶ月ごとに投与される、実施形態５６に記載の方法。
実施形態５８ 前記方法がトラスツズマブ又はその誘導体、及びネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与前、投与中、又は投与後に、追加の治療薬を個体に投与することをさらに含む、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態５９ 前記追加の治療剤は、免疫療法薬である、実施形態５８に記載の方法。
実施形態６０ 前記免疫療法薬は、免疫チェックポイント阻害剤を含む、実施形態５９に記載の方法。
実施形態６１ 前記投与は、腫瘍サイズを減少させ、及び／又は個体の無病生存（無再発生存）を増加させる、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６２ 前記個体は、前記ＴＮＢＣに対する治療（例えば、化学療法、手術原発性腫瘍摘出、放射線療法、又は上記のうちの２つ以上の組み合わせ）を受けた後に、前記投与の時点で臨床的に無病であり、前記方法は、前記個体における前記ＴＮＢＣの再発を遅延又は防止する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６３ トラスツズマブ又はその誘導体、及び前記ネリペピムト-Ｓ又はその変異体の投与は、前記個体に対して相乗効果を有する、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６４ 有効量のトラスツズマブ及び有効量のネリペピムト-Ｓが前記個体に投与される、先行するいずれかの実施形態に記載の方法。
実施形態６５ 個体におけるトリプルネガティブ乳癌を治療するための、トラスツズマブ又はその誘導体と併用するための、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体を含む薬剤。
実施形態６６ 免疫アジュバントをさらに含む、実施形態６５に記載の薬剤。
実施形態６７ 前記免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、実施形態６５に記載の薬剤。
実施形態６８ 個体におけるトリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するための、ネリペピムト-Ｓ又はその変異体と併用するための、トラスツズマブ又はその誘導体を含む薬剤。
実施形態６９ 第１の容器、第２の容器及び添付文書を含むキットであって、前記第１の容器は、トラスツズマブ又はその誘導体を含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、前記第２の容器は、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体を含む薬剤の少なくとも１回用量を含み、前記添付文書は、前記薬剤を使用してトリプルネガティブ乳癌の個体を治療するための説明書を含む、キット。
実施形態７０ 免疫アジュバントをさらに含み、前記免疫アジュバントは、ネリペピムト－Ｓ又はその変異体と共に、第３の容器内にあるか、又は第２の容器内にある、実施形態６９に記載のキット。
実施形態７１ 免疫アジュバントは、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、実施形態６９又は７０に記載のキット。
実施形態７２ 前記キットは、トラスツズマブ及びネリペピムト-Ｓを含む、実施形態６９又は７０に記載のキット。
【0147】
本明細書に記述の実施例及び態様は説明する目的に限られ、それに照らした様々な改変又は変更が、当業者に提案されるがそれらも本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の請求の範囲の範囲に含まれると理解すべきである。さらに、本明細書に開示された任意の発明又はその実施形態の任意の要素又は制限は本明細書に開示された任意の及び/又は全ての他の要素又は制限（個体に又は任意の組み合わせで）又は任意の他の発明又はその実施形態と組み合わせることができ、全てのそのような組み合わせは、それに限定されることなく本発明の範囲で想定される。
【配列表フリーテキスト】
【0148】
配列の簡単な説明
配列番号１は、ネリペピムト－Ｓペプチドである。：ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ
配列番号２は、４位にアルファ－アミノ酪酸を有するネリポエピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＡｂｕＳＬＡＦＬ
配列番号３は、４位にノルバリンを有する、ネリペチム－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ
配列番号４は、４位にノルロイシンを有するネリポエピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ
配列番号５は、７位にアルファ－アミノ酪酸を有するネリペピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＧＳＬＡｂｕＦＬ
配列番号６は、７位にノルバリンを有するネリペピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＧＳＬＮｖａＦＬ
配列番号７は、７位にノルロイシンを有するネリペピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＧＳＬＮｌｅＦＬ
配列番号８は、８位にイソフェニルアラニンを有するネリペピムト－Ｓペプチドの変異体である。ＫＩＦＧＳＬＡイソＦＬ
配列番号９は、トラスツズマブ軽鎖（抗ＨＥＲ２軽鎖（１及び２））のアミノ酸配列である。
配列番号１０は、アミノ酸配列トランスツズマブ重鎖（抗ＨＥＲ２重鎖（１及び２））である。
配列番号１は、ネリペピムト－Ｓペプチドである。：ＫＩＦＧＳＬＡＦＬ
配列番号２は、４位にアルファ－アミノ酪酸を有するネリポエピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＡｂｕＳＬＡＦＬ
配列番号３は、４位にノルバリンを有する、ネリペチム－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ
配列番号４は、４位にノルロイシンを有するネリポエピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＮｖａＳＬＡＦＬ
配列番号５は、７位にアルファ－アミノ酪酸を有するネリペピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＧＳＬＡｂｕＦＬ
配列番号６は、７位にノルバリンを有するネリペピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＧＳＬＮｖａＦＬ
配列番号７は、７位にノルロイシンを有するネリペピムト－Ｓペプチドの変異体である。：ＫＩＦＧＳＬＮｌｅＦＬ
配列番号８は、８位にイソフェニルアラニンを有するネリペピムト－Ｓペプチドの変異体である。ＫＩＦＧＳＬＡイソＦＬ
配列番号９は、トラスツズマブ軽鎖（抗ＨＥＲ２軽鎖（１及び２））のアミノ酸配列である。
配列番号１０は、アミノ酸配列トランスツズマブ重鎖（抗ＨＥＲ２重鎖（１及び２））である。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【配列表】
【国際調査報告】