ホーム > 特許ランキング > ペンアケム・エウロパ
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-03
(54)【発明の名称】固体／液体抽出法によるオイル及び脱脂粉末の製造方法
(51)【国際特許分類】
C11B 1/10 20060101AFI20220127BHJP
C11B 11/00 20060101ALI20220127BHJP
C12P 7/64 20220101ALI20220127BHJP
C12P 17/06 20060101ALI20220127BHJP
【ＦＩ】
C11B1/10 ZAB
C11B11/00
C12P7/64
C12P17/06
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021518189
(86)(22)【出願日】2019-12-17
(85)【翻訳文提出日】2021-05-26
(86)【国際出願番号】 FR2019053125
(87)【国際公開番号】W WO2020128307
(87)【国際公開日】2020-06-25
(31)【優先権主張番号】1873103
(32)【優先日】2018-12-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521131753
【氏名又は名称】ペンアケム・エウロパ
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】ヴァンサン・ラピネル
(72)【発明者】
【氏名】ノルベール・パトゥイラール
(72)【発明者】
【氏名】ファリド・チェマット
(72)【発明者】
【氏名】アンヌ－シルヴィ・ファビアーノ・ティクシエ
(72)【発明者】
【氏名】カリーヌ・ルイス
(72)【発明者】
【氏名】ロランス・ジャック
【テーマコード（参考）】
4B064
4H059
【Ｆターム（参考）】
4B064AD85
4B064AE46
4B064CA01
4B064CE08
4B064DA10
4H059BB22
4H059BB57
4H059BC13
4H059BC15
4H059BC44
4H059BC48
4H059CA13
4H059CA72
4H059CA73
(57)【要約】
本発明は、固体／液体抽出によるオイル及び脱脂ケーキの製造方法に関する。本方法は、２－メチルオキソラン及び水を含む溶媒を使用した固体／液体抽出の工程を含む。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ）溶媒で生体基質を固体／液体抽出し、一方は粗製オイル及び溶媒を含む液体画分、並びにもう一方は固体残留物を得る工程を含む、生体基質由来のポリフェノール豊富な粗製オイルを製造する方法であって、前記溶媒が２－メチルオキソラン及び水を含み、かつ
抽出工程ａ）における溶媒中の水の質量パーセントは、０．３％～２０％であることを特徴とする、方法。
【請求項2】
前記生体基質が、植物、藻、微生物及びそれらの混合物から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記生体基質が、アーモンド、アマランス、ピーナッツ、アルガン、シーバックソーン、カシューの木、アボカド、エン麦、ルリジサ、ベニバナ、カメリナ（camelina）、ニンジン、ココア、カシュー、麻、セイヨウアブラナ、コプラ、ウリ科植物、綿、クロトン、ローズヒップ、イチジク、ウチワサボテン、ザクロ、ホップ、イリペ（illipe）、ホホバ、カリテ、アマ、ルピナス、トウモロコシ、ハシバミ、クルミ、ココヤシ、ケシ、オリーブ、マツヨイグサ、キャベツヤシ、パプリカ、ピスタチオ、トウガラシ、トウゴマ、米、マスクローズブッシュ（musk rose bush）、ゴマ、大豆、マリーゴールド、ヒマワリ、テリハボク（Calophyllum inophyllum）、モワ、クイーンズランドクルミ、ラズベリー、クロフサスグリ、メロン、グレープ、トマト、バオバブ、ババス、クランベリー、シア、カボチャ、マスタード、ニーム、ニオイクロタネソウ（Nigella sativa）、クロタネソウ（niger）、ケシ、ピーカン、エゴマ（Perilla）、サチャインチ（Plukenetia volubilis）、カボチャ、アナトー、タラミラ（Taramira）、アンズ、プラム、モモ、コムギから選択される植物である、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記抽出工程ａ）が２０℃～１００℃の温度で行われる、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記抽出工程ａ）に加えて：ｂ）粗製オイル及び溶媒を含む液体画分を回収する工程、及び
ｃ）粗製オイル及び溶媒を液体画分から分離して、一方は粗製オイル、もう一方は溶媒を回収する工程を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
請求項５に規定した粗製オイルを製造する方法の工程ｃ）において回収された粗製オイルを精製する工程を含む精製オイルを製造する方法。
【請求項7】
請求項１～５のいずれか一項において規定した方法の固体／液体抽出の工程ａ）において得られる固体残留物を回収する工程ｅ）を含む固体残留物を製造する方法。
【請求項8】
請求項７に規定した方法の工程ｅ）において回収された固体残留物を脱溶媒して、一方は溶媒及びもう一方は脱溶媒された固体残留物を回収する工程ｆ）を更に含む脱溶媒された固体残留物を製造する方法。
【請求項9】
請求項８に規定した方法の工程ｆ）において回収された脱溶媒された固体残留物を変換して副生成物を得る工程ｇ）を含む副生成物を製造する方法。
【請求項10】
前記副生成物が、粉末、タンパク質濃縮物、タンパク質分離物、組織状タンパク質及びそれらの混合物から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
生体基質由来の粗製オイルであって、ポリフェノール及び２－メチルオキソランを含み、ポリフェノールの質量濃度が、１００ｐｐｍ以上であることを特徴とする、粗製オイル。
【請求項12】
２－メチルオキソランの質量濃度が、０．５ｐｐｍ～５００ｐｐｍである、請求項１１に記載の粗製オイル。
【請求項13】
トコフェロールを含む生体基質由来の精製オイルであって、トコフェロールの質量濃度が３５０ｐｐｍ以上であることを特徴とする、精製オイル。
【請求項14】
２－メチルオキソランを更に含む、請求項１３に記載の精製オイル。
【請求項15】
生体基質由来の固体残留物であって、ポリフェノール及び残留オイルを含み、ポリフェノールの質量濃度が３０００ｐｐｍ以下であり、残留オイルの濃度が５質量％以下であることを特徴とする、固体残留物。
【請求項16】
２－メチルオキソランを更に含む、請求項１５に記載の固体残留物。
【請求項17】
２－メチルオキソランを含む生体基質由来の脱溶媒された固体残留物であって、２－メチルオキソランの質量濃度が１０００ｐｐｍ未満であることを特徴とする、脱溶媒された固体残留物。
【請求項18】
２－メチルオキソランを含む生体基質由来の副生成物であって、２－メチルオキソランの質量濃度が１０００ｐｐｍ未満であることを特徴とする、副生成物。
【請求項19】
粉末、タンパク質濃縮物、タンパク質分離物、組織状タンパク質及びそれらの混合物から選択される、請求項１８に記載の副生成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、固体／液体抽出法により生体基質からオイル及び脱脂ケーキを製造する分野に関する。
【背景技術】
【0002】
オイルは、食物、医薬、栄養補助食品及び化粧品の産業において重要な立場を有する。最近、ポリフェノールが豊富であるオイルの製造に注目が集中している。実際、最近の研究によると、ポリフェノールが豊富であるオイルは、健康、特に皮膚及び心臓血管の疾患及びがんに対して、有益な効果を有する。最近の産業発展は、したがってポリフェノールが豊富なオイルの製造に関係している。
【0003】
オイルの製造方法には二つの広いカテゴリーが知られている：バージンオイルを得ることを可能にする機械的方法及び、オイルが固体基質から出発して製造され得る、固体／液体抽出による方法である。慣例的に、固体／液体抽出による方法は、溶媒を使用してオイル及び溶媒を含む液体画分を得る、固体／液体抽出の工程を含む。
【0004】
機械的及び固体／液体抽出の二つの方法は、組み合わされてもよく、すなわち、第一に機械方法、その後に、固体／液体抽出を組み合わされてもよく、固体は、機械方法に由来する固体残留物からなる。
【0005】
固体残留物、又はケーキと呼ばれるものは、主に動物試料として、次第に、人間栄養、主にタンパク質サプリメントとしてだけでなく代謝可能なエネルギー源として使用される。
【0006】
これらの脱脂されたケーキは、長期の貯蔵（酸敗味のリスクの制限）を促進し、動物栄養のためのタンパク質の単離を促進するため重要である。更に、脂質は、動物、とくにウシ属において消化を悪くする。
【0007】
近年、いくつかの有利な特性を有するため、ヘキサンは、固体／液体抽出方法において最も使用される溶媒である。実際、ヘキサンはオイルの高収率抽出（＞９７％）を可能にし、固体基質中に３％未満の残留オイルを残すことを可能にし、後者が悪臭を放つことを抑制する。ヘキサンは抽出オイルからの分離が容易であり、適切な沸点（すなわち、抽出時の損失を抑えるのに十分な高さであるが、抽出されたオイルとの分離及びリサイクル時のエネルギー消費を抑えるのに十分な低さである）を有し、適切で良好な液体選択性を有する。
【0008】
しかしながら、ヘキサンは重大な欠点を有する。それは石油由来であり、神経毒であり、生殖毒性でカテゴリー２に分類されている。また、水性環境の毒性についてもカテゴリー２である。
【0009】
更に、ヘキサンでの固体／液体抽出によって得られたオイルの分析は、ヘキサンを使用した方法が、ポリフェノールが豊富なオイルを得ることを可能にしないことを示した。
【0010】
ヘキサンに代替する溶媒が試験された。例えば、「Alternative Solvents for Natural Products Extraction」の２５３～２６８ページのAnne-Gaelle Sicaireらの「2-Methyltetrahydrofuran: Main Properties, Production Processes, and Application in Extraction of Natural Products」の論文には、染料及び香味料を得るために無水２－メチルオキソランでクロフサスグリの芽の固体／液体抽出が記載されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0011】
【非特許文献1】Alternative Solvents for Natural Products Extractionの２５３～２６８ページ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0012】
本発明は、従って、ポリフェノール豊富な粗製オイル及び／又は脱脂ケーキを製造することを可能にする固体／液体抽出の産業的な方法を提供することを狙っている。
【0013】
驚くことに、出願人は、このニーズを満たす方法を開発した。
【課題を解決するための手段】
【0014】
第一の態様によると、本発明は、生体基質由来のポリフェノール豊富な粗製オイルを製造する方法に関し、
ａ）溶媒で生体基質を固体／液体抽出して、一方は粗製オイル及び溶媒を含む液体画分、もう一方は固体残留物を得る工程を含み、溶媒が２－メチルオキソラン及び水を含み、抽出工程ａ）において溶媒中の水の質量パーセントは、０．３％～２０％であることを特徴とする。
ａ）溶媒で生体基質を固体／液体抽出して、一方は粗製オイル及び溶媒を含む液体画分、もう一方は固体残留物を得る工程を含み、溶媒が２－メチルオキソラン及び水を含み、抽出工程ａ）において溶媒中の水の質量パーセントは、０．３％～２０％であることを特徴とする。
【発明を実施するための形態】
【0015】
本発明の意味において、「固体／液体抽出」は、抽出溶媒として液体溶媒を使用して、固体の生体基質から液体画分及び固体残留物を得ることを意味する。典型的に、固体／液体抽出は、浸出（decoction）、注入(infusion)、温浸（digestion）、浸透（percolation）、浸出（lixiviation）、又は冷浸（maceration）によって行われてもよい。固体生体基質を使用せず；さらに、固体／液体抽出工程及び液体／液体抽出工程に関する物理化学特性は、異なるため、液体／液体抽出の工程は、本発明の意味において、固体／液体抽出の工程ではない。
【0016】
本発明の意味において、「粗製オイル」は未精製のオイルを意味し、すなわち固体／液体工程によって抽出された後に、化学精製又は機械精製、いわゆる物理精製の工程を経ていないことを意味する。
【0017】
有利には、本発明による方法は、ヘキサン又は無水２－メチルオキソランを使用した方法によって製造された粗製オイルよりポリフェノールが豊富である粗製オイルを製造することを可能にする。
【0018】
本発明の意味において、「ポリフェノール豊富な粗製オイル」は１種以上のポリフェノールを含み、そのポリフェノールの質量濃度が、１００ｐｐｍ以上、特に３２０ｐｐｍ～２０００ｐｐｍ、より具体的には３５０ｐｐｍ～１５００ｐｐｍ、更に具体的には４００ｐｐｍから１２００ｐｐｍである粗製オイルを意味する。
【0019】
本発明の意味において、「ポリフェノール」は、複雑な構造中に配置されたいくつかのフェノール基の存在によって特徴づけられる分子の種類を意味する。
【0020】
粗製オイルは、トコフェロールを含んでもよい。
【0021】
トコフェロールは、有利には、粗製オイルを酸化に対して保護し、したがって、酸敗臭に対して保護することを可能にする酸化防止特性を有する。更に、トコフェロールは、健康影響、特に心臓血管の疾患に対する予防において有益な効果を有する。トコフェロールを含む粗製オイルは、それ故、健康影響、特に心臓血管の疾患に対する予防において有益な効果を有する。
【0022】
粗製オイル中のトコフェロールの質量濃度は、３５０ｐｐｍ以上、特に８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には、１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、更により具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍであってもよい。１つ及び同じ生体基質に対して、このトコフェロールの質量濃度は、ヘキサン又は無水２－メチルオキソランを使用した方法によって製造される粗製オイル中のトコフェロールの質量濃度より大きい。
【0023】
きわめて特定の実施態様によると、８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には、１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、更により具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍのトコフェロールの質量濃度で存在し得るセイヨウアブラナの生体基質から製造される粗製オイルを例外として、粗製オイル中のトコフェロールの質量濃度は、３５０ｐｐｍ以上、特に８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には、１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、更により具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍであってもよい。
【0024】
粗製オイルは２－メチルオキソランを含んでもよい。
【0025】
典型的には、粗製オイル中の２－メチルオキソランの質量濃度は、０．５ｐｐｍ～５００ｐｐｍ、具体的には５０ｐｐｍ～３００ｐｐｍであってもよい。
【0026】
本発明による方法は、２－メチルオキソラン（CAS No.96-47-9）及び水を含む溶媒を使用する。有利には、２－メチルオキソランは、環境に対して毒物と分類されておらず、その原料が典型的には、サトウキビの搾りかす又はトウモロコシの穂軸由来であるため、生体起源由来である。更に、２－メチルオキソランは、摂取において予想される量に対して非毒性である。実際、ラットに３ヵ月摂取させた実験では、ヘキサンが２３ｍｇ／ｋｇ体重／日であるのに対し、NOAEL（無毒性量；Non Observed Adverse Effect Limit）の２５０ｍｇ／ｋｇ体重／日での服用であったと発表されています（Parrisら Regulatory Toxicology and Pharmacology 87 (2017) 54-63および1994年6月17日に発行されたNotice of the European Scientific Committee for Food）。
【0027】
特定の実施態様によると、抽出工程ａ）における溶媒中の水の質量パーセントは、１％～１５％、より具体的には４％～６％である。
【0028】
本発明の意味において、「溶媒中の水の質量パーセント」は、抽出工程ａ）が行われる抽出装置の注入口で、溶媒中の水の質量を溶媒の総質量で割ったものに相当する。典型的には、溶媒中の水の質量パーセントは、カールフィッシャー法によって決定されもよい。
【0029】
ある条件において、特に、上記溶媒中の水の質量パーセントの範囲において、２－メチルオキソラン及び水は均一な液体混合物を形成し得る。
【0030】
実際、８９．４質量％の２－メチルオキソラン及び１０．６質量％の水を含む共沸混合物は７１℃で形成する。更に、水は２－メチルオキソラン中に部分的に溶解し、その２メチルオキソランへの水の溶解性は、２０℃で４．１質量％及び６０℃で４．６質量%である。
【0031】
有利には、本発明による方法は、溶媒が２相の液体混合物であるときよりは、溶媒が均一な液体混合物であるときに行われやすい。これは本発明による方法の抽出工程ａ）の典型的な例である。
【0032】
本発明の意味において、「生体基質」は植物、藻類、微生物及びそれらの混合物、特に植物から選択される固体材料を意味する。
【0033】
生体基質が植物である場合、本発明による方法によって得られる粗製オイルは粗製植物オイルと呼ばれる。
【0034】
例えば、植物は、油糧種子、タンパク質作物又はそれらの混合物であってもよい。
【0035】
油糧種子として、セイヨウアブラナ、ヒマワリ、大豆、ピーナッツ、ゴマ、クルミ、アーモンド、綿、アマ又はそれらの混合物、特にセイヨウアブラナ、ヒマワリ、大豆又はそれらの混合物が挙げられる。
【0036】
タンパク質作物の例は、えんどう豆、豆類、ルピナス（lupins）及びそれらの混合物である。
【0037】
典型的には、生体基質は、アーモンド、アマランス、ピーナッツ、アルガン、シーバックソーン、カシューの木、アボカド、エン麦、ルリジサ、ベニバナ、カメリナ（camelina）、ニンジン、ココア、カシュー、麻、セイヨウアブラナ、コプラ、ウリ科植物、綿、クロトン、ローズヒップ、イチジク、ウチワサボテン、ザクロ、ホップ、イリペ（illipe）、ホホバ、カリテ、アマ、ルピナス、トウモロコシ、ハシバミ、クルミ、ココヤシ、ケシ、オリーブ、マツヨイグサ、キャベツヤシ、パプリカ、ピーカン、ピスタチオ、トウガラシ、トウゴマ、米、マスクローズブッシュ（musk rose bush）、ゴマ、大豆、マリーゴールド、ヒマワリ、テリハボク（Calophyllum inophyllum）、モワ、クイーンズランドクルミ、ラズベリー、クロフサスグリ、メロン、グレープ、トマト、バオバブ、ババス、クランベリー、シア、カボチャ、マスタード、ニーム、ニオイクロタネソウ（Nigella sativa）、クロタネソウ（niger）、ケシ、エゴマ（Perilla）、サチャインチ（Plukenetia volubilis）、カボチャ、アナトー、タラミラ（Taramira）、アンズ、プラム、モモ、コムギ、特に、大豆、セイヨウアブラナ、ヒマワリ、バオバブ、トウモロコシ、ピーナッツ、ココヤシ、キャベツヤシ、綿、より具体的には、大豆、セイヨウアブラナ、ヒマワリ、バオバブ、並びにそれの混合物から選択される植物であってもよい。
【0038】
生体基質が植物である場合、抽出工程ａ）は、植物全体又は植物の１以上の部分、特に、根、茎、樹皮、花、種子、芽、葉、ふすま、果実、木の実、小さな種、核から選択される部分から出発して行われてもよい。
【0039】
当業者は、選択される部分は、植物に依存することを知っているだろう。
【0040】
典型的には、生体基質は、エン麦のふすま、ラズベリーの小さな種、クロフサスグリの小さな種、ザクロの小さな種、メロンの小さな種、グレープの小さな種、トマトの小さな種、バオバブの種子、ババスの種子、クランベリーの種子、シアの種子、トウモロコシの種子、綿の種子、ピーナッツの種子、セイヨウアブラナの種子、ウリ科植物の種子、モワの種子、マスタードの種子、ニームの種子、ニオイクロタネソウの種子、クロタネソウの種子、ケシの種子、エゴマの種子、サチャインチの種子、カボチャの種子、アナトーの種子、米のふすま、大豆、タラミラの種子、ヒマワリの種子、アンズの核、プラムの核、モモの核、テリハボクの果実、クルミ、カシューナッツ、マカダミアナッツ、ココナッツ、ピーカンナッツ、特に大豆、トウモロコシの種子、ヒマワリの種子、バオバブの種子及びそれらの混合物から選択されてもよい。
【0041】
特に具体的な実施態様によると、生体基質は、大豆、トウモロコシの種子、ヒマワリの種子及びそれらの混合物から選択される。
【0042】
生体基質が藻類である場合、アルトロスピラ（Arthrospira）、ヘマトコッカス（Haematococcus）、ドナリエラ（Dunaliella）、クロレラ（Chlorella）、ナンノクロロプシス（Nannochloropsis）、シゾキトリウム（Schizochytrium）、クリプテコディニウム（Crypthecodinium）、シリンドロテカ（Culindrotheca）、イソクリシス（Isochrysis）、ナンノクロリス（Nannochloris）、ササノハケイソウ（Nitzchia）、フェオダクチラム（Phaeodactylum）、キートケロス（Chaetoceros）の属及びそれらの混合物から選択されてもよい。
【0043】
生体基質が微生物である場合、酵母、カビ、バクテリア、真菌又はそれらの混合物から選択されてもよい。酵母は、典型的には、クリプトコッカス（Cryptococcus）、カンジダ（Candida）、リポマイセス（Lipomyces）、ロドトルラ（Rhodotorula）、サッカロミケス（Saccharomyces）、トリコスポロン（Trichosporon）、ヤロウイア（Yarrowia）の属及びそれらの混合物から選択されてもよい。
【0044】
典型的には、生体基質は、抽出工程ａ）の前に調製の準備の工程を経てもよい。この調製の工程は、例えば、フラットニング（flattening）いわゆるフレークを得るためのフレーク化、すりつぶし、薄片を得るための機械的抽出、圧縮、遠心分離、クッキング、凍結乾燥、酵素分解、機械的分解、冷浸、ケーキを得るための粉砕（trituration）、超音波処理、マイクロ波処理、乾燥、またはこれらの混合、あるいは前記調製の任意の組み合わせであってもよい。
【0045】
抽出工程は、バッチ方式又は連続で典型的に行われてもよい。
【0046】
抽出工程ａ）がバッチ方式で行われる場合、生体基質は有利には、固定層抽出器又は分散充填抽出器などの抽出器において混合される。抽出工程ａ）がバッチ方式において行われる場合、生体基質対溶媒の質量比は、１：１～１：５０、特に１：２～１：２０、より具体的には、１：５～１：１０であってもよい。
【0047】
抽出工程ａ）が連続で行われる場合、生体基質は、移動区画を備えた、移動かごを備えた、コンベヤー鎖又はコンベヤーベルトを備えた抽出器などの、移動層抽出器に連続的に供給される。溶媒は、循環またはパーコレーションによって、典型的には生体基質と逆流しながら、生体基質と接触する。抽出工程ａ）が連続で行われる場合、生体基質対溶媒の質量比は、有利には１：０．５～１：５、特に１：０．７５～１：３、より具体的には１：１～１：１．３であってもよい。
【0048】
典型的には、抽出工程ａ）は、有利には、２０℃～１００℃、特に４０℃～８０℃、より具体的には５５℃～７５℃の温度で行われる。７１℃である、２－メチルオキソラン／水の共沸混合物の沸点と両立するため、有利には、抽出工程ａ）は、これらの温度範囲で促進される。
【0049】
一実施態様によると、本発明の方法は、粗製オイル及び溶媒を含む液体画分の回収工程ｂ）を含む。
【0050】
典型的には、本発明による方法は、抽出工程ａ）に加えて、下記工程を含んでもよい：
ｂ）粗製オイル及び溶媒を含む液体画分を回収する工程、及び
ｃ）液体画分から粗製オイル及び溶媒を分離して、一方は粗製オイル及びもう一方は溶媒を回収する工程。
ｂ）粗製オイル及び溶媒を含む液体画分を回収する工程、及び
ｃ）液体画分から粗製オイル及び溶媒を分離して、一方は粗製オイル及びもう一方は溶媒を回収する工程。
【0051】
液体画分の回収工程ｂ）は、固体残留物から液体画分を分離することを可能にする。典型的には、この工程ｂ）は、ろ過によって行われてもよい。
【0052】
分離工程ｃ）は、水蒸気蒸留、加熱、蒸留又はそれらの組み合わせによる、特に水蒸気蒸留、蒸留、又はそれらの組み合わせによる、特に具体的には、蒸留による、液体／液体抽出によって行われてもよい。
【0053】
典型的には、分離工程ｃ）は、バッチ方式又は連続で行われてもよい。
【0054】
工程ｂ）及びｃ）は、固体／液体抽出によるオイルの製造方法の従来の工程である。当業者は、これらを行うためにこれらの工程の条件を操作して適応させることができるだろう。
【0055】
典型的には、本発明による方法は、工程ｃ）の後に、工程ｃ）の終了時に回収された溶媒の全て又は一部を抽出工程ａ）にリサイクルする工程ｄ）を含んでもよい。
【0056】
有利には、工程ｃ）の終了時に回収された溶媒のリサイクルは、本発明による方法の原材料において、経済的なコストを低減することを可能にし、従って、産業の実行可能性を向上させる。
【0057】
第一の変更によると、工程ｃ）の終了時に回収された溶媒の全て又は一部は、リサイクル工程ｄ）の前に、水の質量パーセントを低減する工程ｄ’）を経る。この第一の変更は、工程ｃ）の終了時に回収される溶媒中の水の質量パーセントが、２０％超、特に１５％超、特に具体的には６％超である場合に、特に有利である。
【0058】
第二の変更によると、工程ｃ）の終了時に回収される溶媒の全て又は一部は、リサイクル工程ｄ）において抽出工程ａ）に直接リサイクルされる。したがって、この第二の変更は、工程ｃ）と工程ｄ）の間に、水の質量パーセントを減少させる工程ｄ’）を含まない。この第二の変更は、工程ｃ）の終了時に回収される水の質量パーセントが０．３～２０％、特に１％～１５％、より具体的には４％～６％である場合に、特に有利である。
【0059】
一実施態様によると、水の質量パーセントを減少させる工程ｄ’）は、濃縮、デカンテーション、蒸留又はそれらの組み合わせにより、特に濃縮、デカンテーション又はそれらの組み合わせにより、より具体的には、デカンテーションの後の蒸留によって行われてもよい。
【0060】
溶媒リサイクルを促進するため、濃縮の間に、７１℃で、８９．４質量％の２－メチルオキソラン及び１０．６質量％の水を含む共沸混合物を形成することが有利であってもよい。この場合、溶媒中の水の質量パーセントは、濃縮の後に、１％～２５％、５％～２０％及びより具体的には１０％～１２％であってもよい。濃縮の間又は任意でデカンテーションの間に、直接２－メチルオキソラン中に水を溶解させることも有利であり、２－メチルオキソラン中の水の溶解性は、２０℃で４．１％および６０℃で４．６％である。この場合、溶媒中の水の質量パーセントは、濃縮又は任意のデカンテーションの後に、０．３％～２０％、特に１％～１５％、より具体的には４％～６％であってもよい。
【0061】
当業者は、共沸混合物を形成する及び／又は２－メチルオキソラン中への水を溶解させる濃度条件を操作して適応させることができるだろう。
【0062】
当業者は、２－メチルオキソラン中に水を溶解させるため、任意のデカンテーションの条件を操作して適応させることができるだろう。
【0063】
特定の実施態様によると、水の質量パーセントを減少させる工程ｄ”）が、濃縮の後にデカンテーションによって行われてもよく：
－濃縮後の溶媒中の水の質量パーセントは、１％～２５％、特に、５％～２０％、より具体的には１０％～１２％であり、
－デカンテーション後の溶媒中の水の質量パーセントは、０．３％～２０％、特に１％～１５％、より具体的には４％～６％である。
－濃縮後の溶媒中の水の質量パーセントは、１％～２５％、特に、５％～２０％、より具体的には１０％～１２％であり、
－デカンテーション後の溶媒中の水の質量パーセントは、０．３％～２０％、特に１％～１５％、より具体的には４％～６％である。
【0064】
粗製オイルは、ゴム、ワックス、遊離脂肪酸、顔料、微量の金属、揮発性臭気化合物及びそれらの混合物などの不純物を含んでもよい。粗製オイルは、それ故、粗製オイルからこれら不純物の少なくとも一つを取り除き、精製オイルを回収する精製工程を経る。有利には、この精製オイルは、例えば、食物への使用、化粧品への使用、医薬への使用及び／又は産業への使用に適していてもよい。
【0065】
本発明の一実施態様は、本発明による粗製オイルを製造するための方法の工程ｃ）で回収された粗製オイルを精製する工程を含む、精製オイルを製造する方法である。
【0066】
本発明による精製オイルを製造する方法によって製造された精製オイルは、トコフェロールを含んでいてもよい。有利には、トコフェロールを含む精製オイルは、健康影響に有益であってもよい。
【0067】
精製オイル中のトコフェロールの質量濃度は３５０ｐｐｍ以上、特に８２５ｐｐｍから１００００ｐｐｍ、より具体的には１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、さらにより具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍであってもよい。一つ及び同じ生体基質について、この質量濃度は、ヘキサン又は無水２－メチルオキソランを使用した方法によって製造された精製オイル中のトコフェロールの質量濃度より大きい。
【0068】
きわめて特定の実施態様によると、精製オイル中のトコフェロールの質量濃度は、８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、更に具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍのトコフェロールの質量濃度で存在するセイヨウアブラナの生体基質から製造される精製オイルを除いて、３５０ｐｐｍ以上、特に８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、更により具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍであってもよい。
【0069】
本発明による精製オイルを製造する方法によって製造された精製オイルは２－メチルオキソランを含んでもよい。
【0070】
粗製オイル中の２－メチルオキソランの質量濃度は、精製工程の間に減少する。したがって、精製オイル中の２－メチルオキソランンの質量濃度は極めて低い。典型的には、精製オイル中の２－メチルオキソランンの濃度は５ｐｐｍ以下、特に０．０１ｐｐｍ～３ｐｐｍ、より具体的には０．１ｐｐｍ～１ｐｐｍであってもよい。
【0071】
有利には、本発明による精製オイルを製造する方法によって製造された精製オイルは、ヘキサンを含まない。したがって、２－メチルオキソランと対照的に、ヘキサンは神経毒であり、生殖毒性でカテゴリー２に分類されるため、この精製オイルは、ヘキサンを使用した従来法によって得られた精製オイルより安全である。
【0072】
５ｐｐｍ超の２－メチルオキソランの質量濃度である精製オイルは、感覚刺激性の特性を低下させる。本発明による精製オイルを製造する方法によって製造された精製オイルは、それ故、有利に、感覚刺激性の特性を満足させる。
【0073】
一実施態様によると、精製工程は、化学精製及び／又は物理精製の工程であってもよい。
【0074】
化学精製の工程は以下のサブ工程の少なくとも一つを含んでもよい：
－ゴムを除去して、レシチンとも呼ばれるゴムを取り除き回収する工程、
－特にソーダによって、塩基化学中和をして、遊離脂肪酸を取り除く工程、
－漂白して、顔料を取り除き、脱色オイルを回収する工程、及び
－脱臭して、揮発性臭気化合物を取り除き、蒸留物を回収する工程。
－ゴムを除去して、レシチンとも呼ばれるゴムを取り除き回収する工程、
－特にソーダによって、塩基化学中和をして、遊離脂肪酸を取り除く工程、
－漂白して、顔料を取り除き、脱色オイルを回収する工程、及び
－脱臭して、揮発性臭気化合物を取り除き、蒸留物を回収する工程。
【0075】
物理精製の工程は、以下のサブ工程の少なくとも一つを含んでもよい：
－ゴムを除去して、レシチンとも呼ばれるゴムを取り除き回収する工程、
－漂白して、顔料を取り除き、脱色オイルを回収する工程、及び
－蒸留、特にスチーム注入して真空蒸留して、揮発性臭気化合物及び遊離脂肪酸を取り除き、蒸留物の形態で回収する工程。
－ゴムを除去して、レシチンとも呼ばれるゴムを取り除き回収する工程、
－漂白して、顔料を取り除き、脱色オイルを回収する工程、及び
－蒸留、特にスチーム注入して真空蒸留して、揮発性臭気化合物及び遊離脂肪酸を取り除き、蒸留物の形態で回収する工程。
【0076】
化学精製及び物理精製のこれらのサブ工程は、固体／液体抽出によって精製オイルを製造する方法の従来のサブ工程である。当業者は、これらを行うためにこれらのサブ工程の条件を操作して適応させることができるだろう。
【0077】
有利には、ゴム除去のサブ工程中に回収されたレシチン及び蒸留工程で回収された蒸留物は、ポリフェノールを含む。これらは、それ故、健康に有益である。
【0078】
ゴム除去のサブ工程中に回収されたレシチンは、とりわけ、界面活性剤として使用されてもよい。
【0079】
蒸留工程で回収された蒸留物は、例えば、医薬、栄養補助食品、又は化粧品組成物に使用されてもよい。また、食品サプリメントとして使用されてもよい。
【0080】
本発明の方法は、固体残留物を製造することも可能にする。
【0081】
第二の態様によると、本発明は、本発明によるポリフェノール豊富な粗製オイルを製造する方法の固体／液体抽出工程のａ）で得られた固体残留物の回収工程ｅ）を含む固体残留物の製造方法に関する。
【0082】
本発明の意味において、「固体残留物」は、生体基質から出発して本発明による固体残留物を製造する方法によって製造された脱脂固体を意味する。固体残留物はケーキとも呼ばれる。
【0083】
本発明による方法は、生体基質から出発してポリフェノール豊富な粗製オイルを製造することを可能にする；したがって、固体残留物はポリフェノールが枯渇している。
【0084】
本発明による固体残留物を製造する方法によって製造された固体残留物中のポリフェノールの質量濃度は、ヘキサンを使用した従来法によって製造された固体残留物中のポリフェノールの質量濃度より低い。
【0085】
本発明による固体残留物の製造方法によって製造された固体残留物は、ポリフェノール及び残留オイルを含み、固体残留物中のポリフェノールの質量濃度は、３０００ｐｐｍ以下、特に１０ｐｐｍ～１５００ｐｐｍ、より具体的には５０ｐｐｍ～５００ｐｐｍであり、固体残留物中の残留オイルの質量濃度は、５％以下、特に０．１％～３％、より具体的に０．３％～２％である。
【0086】
有利には、ポリフェノールの質量濃度をこれらの範囲の値内にすることによって、これらの固体残留物由来の粉末、タンパク質分離物及びタンパク質濃縮物中の感覚刺激性の問題、例えば、暗い色及び／又は苦みの出現の問題を、減少又はさらには避けることも可能にする。
【0087】
更に、一つ及び同一の生体基質に対して、本発明による固体残留物を製造する方法によって製造された固体残留物は、ヘキサン又は無水２－メチルオキソランを使用した従来法によって製造された固体残留物より、低い残留オイルの質量濃度を有する。
【0088】
本発明の意味において、固体残留物に含まれる「残留オイル」は、規格NF EN ISO 734：2016年２月に記載される方法によって抽出されるオイルである。
【0089】
固体残留物の回収工程ｅ）は、固体残留物から液体画分を分離することを可能にする。典型的には、本工程ｅ）は、ろ過によって行われてもよい。
【0090】
固体残留物は、本発明による方法の溶媒、特に２－メチルオキソランを含んでもよい。固体残留物は、それ故、工程ｅ）の後に、一方は溶媒、及びもう一方は脱溶媒された固体残留物を回収するために、脱溶媒する工程ｆ）を経てもよい。
【0091】
したがって、本発明の別の実施態様は、一方は溶媒及びもう一方は脱溶媒された固体残留物を回収するために、本発明による固体残留物の製造方法の工程ｅ）で回収された固体残留物の脱溶媒の工程ｆ）を含む脱溶媒された固体残留物を製造する方法である。
【0092】
一実施態様によると、脱溶媒工程ｆ）は、固体残留物を加熱して、その後加熱された固体残留物に蒸気を注入することによって、任意選択で真空にすることを伴って、行われてもよい。
【0093】
例えば、蒸気は、本発明による溶媒の蒸気、本発明による溶媒の過熱蒸気、無水２－メチルオキソランの蒸気、無水２－メチルオキソランの過熱蒸気、スチーム、過熱スチーム及びそれらの混合物であってもよく、特に本発明による溶媒の過熱蒸気又は無水２－メチルオキソランの過熱蒸気、より具体的には、本発明による溶媒の過熱蒸気であってもよい。
【0094】
従来では、脱溶媒工程は、固体残留物に存在する２－メチルオキソランの質量濃度を低減する。したがって、脱溶媒された固体残留物は、２メチルオキソランを含み、２－メチルオキソランの質量濃度は、典型的には、１０００ｐｐｍ未満、特に１０ｐｐｍ～５００ｐｐｍ、特に具体的には１００ｐｐｍ～３００ｐｐｍであってもよい。
【0095】
典型的には、脱溶媒された固体残留物中の残留オイルの質量濃度は、５％以下、特に０．１％～３％、より具体的には０．３％～２％である。
【0096】
一実施態様によると、固体残留物は、脱溶媒工程ｆ）の前に、固体残留物の水含有量を調整するための追加の湿らせる工程などの前処理の工程を経てもよい。有利には、この追加の湿らせる工程は、固体残留物の脱溶媒を促進させてもよい。当業者は、固体残留物の所望の水含有量の機能として追加の湿らせる工程を適応させることができるであろう。
【0097】
脱溶媒された固体残留物は、例えば、動物試料又は人間への栄養を対象とした副生成物に変換されてもよい。
【0098】
本発明の別の実施態様は、したがって、本発明による脱溶媒された固体残留物の製造方法の工程ｆ）において回収された脱溶媒された固体残留物を変換して副生成物を製造する工程ｇ）を含む副生成物を製造する方法である。
【0099】
有利には、本発明による副生成物の製造方法によって製造された副生成物は、特に動物試料、特に牛属の試料に適している。実際、固体残留物から得られるため、それは脱脂であり、動物、とくに牛属の消化を乱さない。更に、この副生成物は、２－メチルオキソランとは対照的に、ヘキサンは神経毒であり、生殖毒性のカテゴリー２に分類されるため、ヘキサンを使用した従来の方法によって得られた副生成物より安全である。
【0100】
一実施態様によると、副生成物は、粉末、タンパク質濃縮物、タンパク質分離物、組織状タンパク質及びそれらの混合物から選択されもよい。
【0101】
本発明の意味において、「粉末」は、固体残留物から粉末を得るために、それらをすりつぶし、ミル又は微粉砕して得られた副生成物を意味する。
【0102】
本発明の意味において、「タンパク質濃縮物」は、糖及び非栄養因子を取り除き、６０～７０％のタンパク質を含有する固体画分を得るために、固体液体抽出によって固体残留物の処理由来の副生成物を意味する。
【0103】
本発明の意味において、「タンパク質分離物」は、約９０％のタンパク質を含有する固体画分を得るために、連続の工程によって、水性媒体中の固体残留物の処理由来の副生成物を意味する。
【0104】
本発明の意味において、「組織状タンパク質」は、押出によって、粉末又はタンパク質濃縮物の処理由来の副生成物である。
【0105】
一実施態様によると、変換工程ｇ）は、すりつぶし工程、固体－液体抽出工程、タンパク質可溶化工程、タンパク質沈殿工程、遠心分離工程、押出工程、タンパク質変性工程、タンパク質機能化工程、またはそれらの混合から選択されてもよい。
【0106】
当業者は、得たい副生成物の機能に応じて変換工程ｇ）を選択し、適応することができるだろう。
【0107】
例えば、粉末を製造するために、変換工程ｇ）は、すりつぶし工程であってもよい。
【0108】
例えば、タンパク質濃縮物を製造するために、変換工程ｇ）は水－アルコール混合物を使用して固体－液体抽出の工程であってもよい。
【0109】
例えば、タンパク質分離物を製造するために、変換工程ｇ）は固体残留物に最初に存在する糖及び繊維の選択的な除去のため、特定のｐＨ値でタンパク質を可溶化及び沈殿させる連続工程であってもよい。
【0110】
例えば、組織状タンパク質製造のために、変換工程ｇ）は、粉末又はタンパク質濃縮物から出発した押出工程であってもよい。
【0111】
変換工程ｇ）は、２－メチルオキソランの質量濃度を減少させてもよい。したがって、副生成物は、２－メチルオキソランを含み、その２メチルオキソランの質量濃度は１０００ｐｐｍ未満、特に５００ｐｐｍ未満、特に具体的には０．５ｐｐｍ～５０ｐｐｍである。
【0112】
副生成物中の２－メチルオキソランの質量濃度は、副生成物に依存し得る。
【0113】
例えば、粉末中の２－メチルオキソランの質量濃度は、１０００ｐｐｍ未満、特に５００ｐｐｍ未満、特に具体的には５ｐｐｍ～５０ｐｐｍであってもよい。
【0114】
タンパク質濃縮物中、タンパク質分離物中、又は組織状タンパク質中の２－メチルオキソランの質量濃度は、典型的には３０ｐｐｍ未満、特に０．５ｐｐｍ～２０ｐｐｍ、特に具体的には８ｐｐｍ～１２ｐｐｍであってもよい。
【0115】
典型的には、副生成物中の残留オイルの質量濃度は５％以下、特に０．１％～３％、より具体的には０．３％～２％である。
【0116】
一実施態様によると、本発明による方法は、脱溶媒の工程ｆ）で回収された溶媒の全て又は一部を抽出工程ａ）にリサイクルする工程ｈ）を更に含んでもよい。
【0117】
有利には、脱溶媒の工程ｆ）で回収された溶媒のリサイクルは、本発明による方法の原材料における経済的なコストを低減し、それ故、その産業実行可能性を向上させることを可能にする
【0118】
第一の変更によると、脱溶媒された工程ｆ）の終了時に回収されたすべて又は一部の溶媒は、リサイクル工程ｈ）の前に、水の質量パーセントを減少させる工程ｈ’）を経る。この第一の変更は、脱溶媒工程ｆ）の終了時に回収された溶媒中の水の質量パーセントが２０％超、特に１５％超、特に具体的には６％超である場合、特に有利である。
【0119】
第２の変更によると、脱溶媒工程ｆ）の終了時に回収された全て又は一部の溶媒は、リサイクル工程ｈ）において、抽出工程ａ）に直接リサイクルされる。従って、第二の変更において、本方法は、脱溶媒工程ｆ）とリサイクル工程ｈ）の間に、水の質量パーセントを減少させる工程ｈ’）を含まない。この第二の変更は、脱溶媒工程ｆ）の終了時に回収される溶媒中の水の質量パーセントが０．３％から２０％、特に１％～１５％、より具体的には４％～６％である場合に、特に有利である。
【0120】
水の質量パーセントを減少させる工程ｈ’）は、水の質量パーセントを減少させる工程ｄ’）と同じ条件で行われる。
【0121】
具体的な実施態様によると、工程ｃ）及びｆ）において回収されるすべて又は一部の溶媒は、混合されてもよく、いくつか又はすべての混合物は、リサイクル工程ｉ）において、抽出工程ａ）にリサイクルされてもよい。
【0122】
第一の変更によると、工程ｃ）及びｆ）において回収された全て又は一部の溶媒は、混合され、いくつか又はすべての混合物が、リサイクル工程ｉ）において抽出工程ａ）にリサイクルされる前に、水の質量パーセントを減少させる工程ｉ’）を経てもよい。
【0123】
第二の変更によると、工程ｃ）及びｆ）で回収された溶媒の全て又は一部は混合され、いくつか又はすべての混合物は、リサイクル工程ｉ）において、抽出工程ａ）に直接リサイクルされてもよい。従って、この第二の変更において、本方法は、工程ｃ）及びｆ）並びに工程ｉ）の間に、水の質量パーセントを減少させる工程ｉ’）を含まない。
【0124】
水の質量パーセントを減少させる工程ｉ’）は、水の質量パーセントを減少させる工程ｄ’）と同じ条件で行われる。
【0125】
特に具体的な実施態様によると、本発明による粗製オイルの製造方法は、以下の工程を含む：
ａ）生体基質を溶媒で固体／液体抽出して、一方は粗製オイル及び溶媒を含む液体画分並びにもう一方は固体残留物を得る工程、
ｂ）粗製オイル及び溶媒を含む液体画分を回収する工程、
ｃ）スチーム蒸留によって液体画分から粗製オイル及び溶媒を分離し、一方は粗製オイル、もう一方は溶媒を回収する工程、および
ｄ）濃縮の後にデカンテーションによって工程ｃ）の終了時に回収された全て又は一部の溶媒中の水の質量パーセントを減少させ、
－濃縮の後の溶媒中の水の質量パーセントが、１％～２５％、特に５％～２０％、及びより具体的に１０％～１２％であり、且つ
－デカンテーションの後の溶媒中の水の質量パーセントが、０．３％～２０％、特に１％～１５％、より具体的には４％～６％である
工程ｄ’）の後に、工程ａ）に、工程ｃ）で回収された全て又は一部の溶媒をリサイクルする工程。
ａ）生体基質を溶媒で固体／液体抽出して、一方は粗製オイル及び溶媒を含む液体画分並びにもう一方は固体残留物を得る工程、
ｂ）粗製オイル及び溶媒を含む液体画分を回収する工程、
ｃ）スチーム蒸留によって液体画分から粗製オイル及び溶媒を分離し、一方は粗製オイル、もう一方は溶媒を回収する工程、および
ｄ）濃縮の後にデカンテーションによって工程ｃ）の終了時に回収された全て又は一部の溶媒中の水の質量パーセントを減少させ、
－濃縮の後の溶媒中の水の質量パーセントが、１％～２５％、特に５％～２０％、及びより具体的に１０％～１２％であり、且つ
－デカンテーションの後の溶媒中の水の質量パーセントが、０．３％～２０％、特に１％～１５％、より具体的には４％～６％である
工程ｄ’）の後に、工程ａ）に、工程ｃ）で回収された全て又は一部の溶媒をリサイクルする工程。
【0126】
特に具体的な実施態様によると、本発明による脱溶媒された固体残留物の製造方法は以下の工程を含む：
ａ）生体基質を溶媒で固体／液体抽出して、一方は粗製オイル及び溶媒を含む液体画分、並びにもう一方は固体残留物を得る工程、
ｂ）液体画分と固体残留物を分離する工程、
ｅ）固体残留物を回収する工程、
ｆ）工程ｅ）で回収された固体残留物を脱溶媒して、一方は溶媒、もう一方は脱溶媒された固体残留物を得る工程、
ｈ）工程ｆ）で回収された全て又は一部の溶媒を工程ａ）をリサイクルする工程。
ａ）生体基質を溶媒で固体／液体抽出して、一方は粗製オイル及び溶媒を含む液体画分、並びにもう一方は固体残留物を得る工程、
ｂ）液体画分と固体残留物を分離する工程、
ｅ）固体残留物を回収する工程、
ｆ）工程ｅ）で回収された固体残留物を脱溶媒して、一方は溶媒、もう一方は脱溶媒された固体残留物を得る工程、
ｈ）工程ｆ）で回収された全て又は一部の溶媒を工程ａ）をリサイクルする工程。
【0127】
特に具体的な実施態様によると、本発明による副生成物の製造方法は以下の工程を含む：
ａ）生体基質を溶媒で固体／液体抽出して、一方は粗製オイル及び溶媒を含む液体画分、並びにもう一方は固体残留物を得る工程、
ｂ）液体画分と固体残留物を分離する工程、
ｅ）固体残留物を回収する工程、
ｆ）工程ｅ）で回収された固体残留物を脱溶媒して、一方は溶媒、もう一方は脱溶媒された固体残留物を得る工程、
ｇ）工程ｆ）において回収された脱溶媒された固体残留物を変換して、副生成物を製造する工程、並びに
ｈ）工程ｆ）で回収された全て又は一部の溶媒を工程ａ）をリサイクルする工程。
ａ）生体基質を溶媒で固体／液体抽出して、一方は粗製オイル及び溶媒を含む液体画分、並びにもう一方は固体残留物を得る工程、
ｂ）液体画分と固体残留物を分離する工程、
ｅ）固体残留物を回収する工程、
ｆ）工程ｅ）で回収された固体残留物を脱溶媒して、一方は溶媒、もう一方は脱溶媒された固体残留物を得る工程、
ｇ）工程ｆ）において回収された脱溶媒された固体残留物を変換して、副生成物を製造する工程、並びに
ｈ）工程ｆ）で回収された全て又は一部の溶媒を工程ａ）をリサイクルする工程。
【0128】
上記説明したように、本発明による粗製オイルの製造方法は、有利には、２－メチルオキソランを含んでもよく、ポリフェノールが豊富な粗製オイルを製造することを可能にする。
【0129】
したがって、本発明は、生体基質由来のポリフェノール豊富な粗製オイルにも関し、前記粗製オイルは、１種以上のポリフェノール、２－メチルオキソランを含み、ポリフェノールの質量濃度は、１００ｐｐｍ以上であること、特に前記粗製オイルは、本発明による粗製オイルの製造方法によって得ることが可能であることを特徴とする。
【0130】
本発明の意味において、「ポリフェノール豊富な粗製オイル」は、１種以上のポリフェノールを含む組成オイルを意味し、そのポリフェノールの質量濃度は、１００ｐｐｍ以上、特に３２０ｐｐｍ～２０００ｐｐｍ、より具体的には３５０ｐｐｍ～１５００ｐｐｍ、更により具体的には、４００ｐｐｍ～１２００ｐｐｍである。
【0131】
典型的には、粗製オイル中の２－メチルオキソランの質量濃度は、０．５ｐｐｍ～５００ｐｐｍ、特に５０ｐｐｍ～３００ｐｐｍであってもよい。
【0132】
粗製オイルはトコフェロールを含んでもよい。
【0133】
粗製オイル中のトコフェロールの質量濃度は、３５０ｐｐｍ以上、特に８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、更により具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍであってもよい。一つ及び同じ生体基質について、このトコフェロールの質量濃度は、ヘキサン又は無水２－メチルオキソランを使用した方法によって製造された粗製オイル中のトコフェロールの質量濃度より大きい。
【0134】
きわめて特定に実施態様によると、８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には、１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、更により具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍのトコフェロールの質量濃度で存在し得るセイヨウアブラナの生体基質から製造される粗製オイルを例外として、粗製オイル中のトコフェロールの質量濃度は、３５０ｐｐｍ以上、特に８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には、１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、更により具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍであってもよい。
【0135】
生体基質は、上記の様に、本発明による粗製オイルを製造するための方法に関連する。
【0136】
粗製オイルは、ポリフェノール豊富であり、トコフェロールを含んでもよいため、有利には、健康に有益であってもよい。有利には、粗製オイルは、例えば、食品への使用、化粧品への使用、医薬品への使用及び／又は産業への使用に適していてもよい。
【0137】
したがって、本発明は、食品組成物、化粧品組成物、医薬品組成物等の組成物を調製するための粗製オイルの使用に関する。
【0138】
上記説明したように、本発明の一実施態様による精製オイルを製造する方法は、有利には、精製オイルが健康の影響に有益であってもよいように、トコフェロールを含む精製オイルを製造することを可能にする。
【0139】
したがって、本発明は、トコフェロールを含む生体基質由来の精製オイルに関し、精製オイル中のトコフェロールの質量濃度は、５００ｐｐｍ以上であり、特に前記精製オイルは、本発明の一実施態様による精製オイルの製造方法によって得ることが可能である。
【0140】
典型的には、精製オイル中のトコフェロールの質量濃度は３５０ｐｐｍ以上、特に８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、さらにより具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍであってもよい。一つ及び同じ生体基質について、このトコフェロールの質量濃度は、ヘキサン又は無水２－メチルオキソランを使用した方法によって製造される精製オイル中のトコフェロールの質量濃度より大きい。
【0141】
きわめて特定の実施態様によると、８２５ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には、１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、更に具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍのトコフェロールの質量濃度で存在し得るセイヨウアブラナの生体基質から製造される精製オイルを例外として、精製オイル中のトコフェロールの質量濃度は、３５０ｐｐｍ以上、特に８５０ｐｐｍ～１００００ｐｐｍ、より具体的には１５００ｐｐｍ～５０００ｐｐｍ、さらにより具体的には２０００ｐｐｍ～３０００ｐｐｍであってもよい。
【0142】
本発明の精製オイルは、２－メチルオキソランを含んでもよい。この精製オイルは、２－メチルオキソランとは対照的に、ヘキサンは神経毒であり、生殖毒性のカテゴリー２に分類されるため、ヘキサンを使用した従来方法によって製造される精製オイルより安全である。
【0143】
一実施態様によると、精製オイル中の２－メチルオキソランの質量濃度は、５ｐｐｍ以下、特に０．０１ｐｐｍ～３ｐｐｍ、より具体的には０．１ｐｐｍ～１ｐｐｍであってもよい。
【0144】
２－メチルオキソランの質量濃度が５ｐｐｍ超である精製オイルは、感覚刺激性の特性を悪化させる。本発明による精製オイルは、従って、有利には感覚刺激性の特性を満足する。
【0145】
生体基質は、上記の様に、本発明による粗製オイルの製造方法に関連する。
【0146】
トコフェロールを含む精製オイルは、有利には健康に有益であってもよい。有利には、精製オイルは、例えば、食品への使用、化粧品への使用、医薬への使用に適していてもよい。
【0147】
したがって、本発明は、食品組成物、化粧品組成物、及び医薬品組成物等の組成物の調製のためにこの精製オイルの使用に関する。
【0148】
本発明の一実施態様による精製オイルの製造方法は、レシチン及び／又はポリフェノールを含む蒸留物を製造することを可能にもする。
【0149】
したがって、本発明は、ポリフェノールを含む生体基質由来のレシチンに関し、特に前記レシチンは、本発明の一実施態様による精製オイルの製造方法によって得ることが可能である。
【0150】
生体基質は、上記の様に、本発明による粗製オイルの製造方法と関連する。
【0151】
有利には、レシチンはポリフェノールを含む。それらはしたがって健康に有益である。
【0152】
これらのレシチンは、特に界面活性剤として使用されもよい。
【0153】
したがって、本発明は界面活性剤としてのこれらのレシチンの使用に関する。
【0154】
本発明は、ポリフェノールを含む生体基質由来の蒸留物に関し、特に前記蒸留物は、本発明の一実施態様による精製オイルの製造方法によって得ることが可能である。
【0155】
生体基質は、上記の様に本発明による粗製オイルの製造方法と関連する。
【0156】
蒸留物は、例えば、医薬品、栄養補助食品、又は化粧品組成物に使用されてもよい。それは、食品サプリメントとして使用されてもよい。
【0157】
したがって、本発明は、医薬組成物、栄養補助食品組成物、又は化粧品組成物等の組成物の調製のためにこの蒸留物の使用に関する。本発明は、食品サプリメントとしてのこの蒸留物の使用に関する。
【0158】
上記説明したように、本発明の一実施態様による固体残留物の製造方法は、有利には、ポリフェノールが枯渇して、低い質量濃度の残留オイルを含む固体残留物を製造することを可能にする。
【0159】
したがって、本発明の一実施態様は、ポリフェノール及び残留オイルを含む生体基質由来の固体残留物であって、そのポリフェノールの質量濃度が、３０００ｐｐｍ以下、特に１０～１５００ｐｐｍ、より具体的には５０～５００ｐｐｍであって、その残留オイルの質量濃度は、５％以下、特に、０．１％～３％、より具体的には０．３％～２％であり、特に、前記固体残留物は、本発明の一実施態様による固体残留物の製造方法によって得ることが可能である。
【0160】
有利には、ポリフェノールの質量濃度をこの範囲の値内にすることによって、これらの固体残留物由来の粉末、タンパク質分離物及びタンパク質濃縮物中の、暗い色及び／又は苦みの出現などの感覚刺激性の問題を減少又はさらは避けることを可能にする。
【0161】
生体基質は、上記の様に、本発明の粗製オイルの製造方法と関係する。
【0162】
固体残留物に含まれる残留オイルは、上記定義するように、固体残留物の製造方法と関係する。
【0163】
一実施態様によると、固体残留物は、２－メチルオキソランを含んでもよい。
【0164】
一実施態様によると、固体残留物は、ヘキサンを含まない。
【0165】
固体残留物は、その後、例えば動物試料又は人間への栄養を目的として副生成物に変換されてもよい。
【0166】
本発明は、動物又は人間のための食品組成物を調製するためのこの固体残留物の使用にも関する。
【0167】
有利には、上記脱溶媒された固体残留物の製造方法で脱溶媒された固体残留物を製造することを可能にする。
【0168】
したがって、本発明の一実施態様は、２－メチルオキソランを含む生体基質由来の脱溶媒された固体残留物であり、その２－メチルオキソランの質量濃度は、１０００ｐｐｍ未満、特に１０ｐｐｍ～５００ｐｐｍ、特に具体的には１００ｐｐｍ～３００ｐｐｍであり、特に前記脱溶媒された固体残留物は、本発明の一実施態様による脱溶媒された固体残留物の製造方法によって得ることが可能である。
【0169】
典型的には、脱溶媒された固体残留物中の残留オイルの質量濃度が５％以下、特に０．１％～３％、より具体的には０．３％～２％である。
【0170】
一実施態様によると、脱溶媒された固体残留物はヘキサンを含まない。
【0171】
生体基質は、上記の様に本発明による粗製オイルの製造方法に関係する。
【0172】
脱溶媒された固体残留物は、その後、例えば動物試料又は人間への栄養を目的とした副生成物に変換されてもよい。
【0173】
本発明は、動物又は人間のための食品組成物を調製するためにこの脱溶媒された固体残留物の使用にも関する。
【0174】
有利には、栄養吸収、特に動物の栄養吸収に特に適切な副生成物を、上記の副生成物の製造方法で製造することも可能である。
【0175】
したがって、本発明は、２－メチルオキソランを含む生体基質由来の副生成物にも関し、その２－メチルオキソランの質量濃度は、１０００ｐｐｍ未満、特に５００ｐｐｍ未満、特に具体的には０．５ｐｐｍ～５０ｐｐｍであり、特に前記副生成物は、本発明の一実施態様による副生成物の製造方法によって得ることが可能である。
【0176】
一実施態様によると、副生成物は、粉末、タンパク質濃縮物、タンパク質分離物、組織状タンパク質及びそれらの混合物から選択されてもよい。
【0177】
副生成物中の２－メチルオキソランの質量濃度は、副生成物に依存してもよい。
【0178】
例えば、粉末中の２－メチルオキソランの質量濃度は、１０００ｐｐｍ未満、特に５００ｐｐｍ未満、特に具体的には５ｐｐｍ～５０ｐｐｍであってもよい。
【0179】
タンパク質濃縮物中、タンパク質分離物中、又は組織状タンパク質中の２－メチルオキソランの質量濃度は、典型的には、３０ｐｐｍ未満、特に５ｐｐｍ～２０ｐｐｍ、特に具体的には８ｐｐｍ～１２ｐｐｍであってもよい。
【0180】
典型的には、副生成物中の残留オイルの質量濃度は、５％以下、特に０．１％～３％、より具体的には０．３％～２％である。
【0181】
一実施態様によると、副生成物はヘキサンを含まない。
【0182】
生体基質は、上記のように本発明による粗製オイルの製造方法に関係する。
【0183】
副生成物は、特に栄養摂取、特に動物の栄養摂取に適しているため、本発明は、食品組成物、特に動物向けの食品組成物を調製するためのこの副生成物の使用にも関する。
【0184】
典型的には、粗製オイル中、固体残留物中、レシチン中、及び蒸留物中のポリフェノールの質量濃度は、「American Journal of Enology and Viticulture 28, No. 1 (1977年1月1日): 49-55」のレビュー中に見られる「Total Phenol Analysis: Automation and Comparison with Manual Methods」の研究中にSlinkard及びSingletonによって記載されるいわゆる「Folin Ciocalteu」法によって決定される。当業者は、サンプルにこの方法を、９６－ウェルマイクロプレートリーダーにそれらを適用するために、どのように適応させて分析されるか知っている（FLUOstar Omega, BMG LABTECH, フランス）。
【0185】
典型的には、粗製オイル中及び精製オイル中のトコフェロールの質量濃度は、規格NF EN ISO 9936:2016年6月によって決定される。
【0186】
粗製オイル、精製オイル、固体残留物、脱溶媒された固体残留物、粉末、組織状タンパク質、タンパク質濃縮物及びタンパク質分離物中の２－メチルオキソランの質量濃度は、いわゆる「GC－ヘッドスペース」（ヘッドペースからのサンプリングでのガスクロマトグラフィー）の従来の分析化学技術を使用して測定される。この分析技術は、オイル上のマトリックス中及び固体マトリックス中に含有される揮発性化合物に分析に適していることが当業者に知られる。操作条件はサンプルに依存し、当業者はこのサンプルを適応させることができるだろう。
【0187】
例えば、タンパク質分離物に対する操作条件は、以下のとおりである：分析される０．５０±０．０１ｇのサンプルを、「ヘッドスペース」技術に特別に設計された２０ｍLのボトル（２３×７７ｍｍ）に量り入れ、その後７．０ｍLの超純水及び１．０ｍLのDMF（N，N－ジメチルホルムアミド）をボトルに加える。ボトルを、その後適切なセプタムが装備されたストッパーで封印する。ボトルをその後分析の前に３０秒間激しく撹拌する。ヘッドスペースへのサンプリング及びインジェクションの工程の操作条件は、以下のとおりである：機器＝HeadSpace module 7697A；脱着＝１００℃２０分；移送ライン温度＝１６０℃；インジェクションループ温度＝１３０℃；インジェクション体積＝１μL、ヘリウム圧＝１２PSI。クロマトグラフィーの分離の工程の操作条件は以下のとおりである：機器＝GC 7890A (Agilent)；カラム＝DB624－60m－320μm－1.8μm；ライナー＝Agilent 5190-6168 (UltraInert, スプリットレス, ストレート, 2 mm id)；インジェクター温度＝２５０℃；キャリアガスの性質及び流量＝He，１．３ｍＬ／分；加熱炉の温度プロファイル＝60°C(3分)－傾斜5°C/分70°Cまで－傾斜10°C/分220°Cまで－220°C (2 分)。検出工程の操作条件は以下のとおりである；検出の種類＝マススペクトロメーター（ＭＳ）；同定及び定量のための総イオン電流について、イオン化＝ＥＩ，ＳＩＭモード（イオン56, 71 及び 86 Da）；ソースの温度＝２３０℃；四極子の温度＝１５０℃。すべての試薬、溶媒及び材料は適切な分析グレードを使用した。
分析されるタンパク質分離物のサンプル中の２メチルオキソランの質量濃度は、適切な範囲の２－メチルオキソランの質量濃度に対する較正曲線を使用して決定される。
分析されるタンパク質分離物のサンプル中の２メチルオキソランの質量濃度は、適切な範囲の２－メチルオキソランの質量濃度に対する較正曲線を使用して決定される。
【0188】
固体残留物には、操作条件は以下のとおりである；最初にすべての固体残留物を、０．２ｍｍの篩を装備したＺＭ２００の遠心すりつぶしミル（Retsch GmbH）中ですりつぶす。分析される０．５±０．０１ｇのすりつぶされたサンプルを、「ヘッドスペース」技術に特別に設計された２０ｍLのボトル（２３×７７ｍｍ）内に量り入れる。その後正確に２．０ｍLの水をボトルに加え、その後セプタムが装備されたストッパーで封印する。ボトルを分析の前に少なくとも５分間立てたままにする。ヘッドスペースへのサンプリング及びインジェクションの工程の操作条件は、以下のとおりである：機器＝「Turbomatrix HS40」 (Perkin Elmer)；脱着＝８０℃６０分；移送ライン温度＝１２０℃；ニードル温度＝１１０℃；インジェクション体積＝０．２μＬ、水素圧＝２０ＰＳＩ。クロマトグラフィーの分離の工程の操作条件は以下のとおりである：機器＝Clarus 500 (Perkin Elmer)；カラム＝DB1－30m－0.32mm－3.0μm；インジェクター温度＝１１０℃；加熱炉温度＝４０℃（７分、等温）。検出工程の操作条件は以下のとおりである；検出の種類＝水素炎イオン検出器（ＦＩＤ）；検出器温度＝２５０℃；水素圧＝２０ＰＳＩ。すべての試薬、溶媒及び材料は適切な分析グレードを使用した。
事前にプロットされた較正曲線が、分析される固体残留物のサンプル中の２－メチルオキソランの質量濃度の決定を可能にし、以下の式による：Ｃｉ＝ｋｉ*Ａｉ、ここでＣｉは２メチルオキソランの質量濃度であり、Ａｉは２－メチルオキソランに対応するピーク面積であり、Ｋｉは２－メチルオキソランの較正曲線の傾きである。
事前にプロットされた較正曲線が、分析される固体残留物のサンプル中の２－メチルオキソランの質量濃度の決定を可能にし、以下の式による：Ｃｉ＝ｋｉ*Ａｉ、ここでＣｉは２メチルオキソランの質量濃度であり、Ａｉは２－メチルオキソランに対応するピーク面積であり、Ｋｉは２－メチルオキソランの較正曲線の傾きである。
【0189】
固体残留物中の残留オイルの質量濃度は、規格NF EN ISO 734：２０１６年２月によって決定される。
【実施例】
【0190】
以下に示す実施例では、粗製オイル中のポリフェノールの質量濃度を決定する方法は、９６－ウェルマイクロプレートリーダー（FLUOstar Omega, BMG LABTECH, フランス）にそれを使用するための以下に記載される変更を伴って、「American Journal of Enology and Viticulture 28, No. 1 (1977年1月1日): 49-55」のレビュー中に見られる「Total Phenol Analysis: Automation and Comparison with Manual Methods」の研究中にSlinkard及びSingletonによって記載されるいわゆる「Folin Ciocalteu」法である。
すべての試薬及び溶媒が、適切な分析グレードを使用する。
以下の方法によって、事前に粗製オイル中に含まれるポリフェノールを抽出する：１ｇのオイルを１ｍＬのヘキサン中に希釈し、その後溶液を３ｍＬのメタノール／水混合物（６０体積％／４０体積％）で３連続抽出によって抽出する。それぞれの抽出の後、２相を撹拌してその後遠心分離によって分離し、（１００００rev.min-1／10分／２０℃）液体水－アルコール相を収集する（任意の潜在的に形成される堆積、沈殿又は固体粒子を扱わない）。３つの水－アルコール相が収集され、その後１ｍＬのヘキサンで洗浄される。相を遠心分離によって分離し、その後水－アルコール相を１０ｍＬの目盛り付きフラスコに移し、体積をメタノール／水混合物（６０体積％／４０体積％）で標点した。
マイクロピペットを使用して、溶液の２０μＬをマイクロプレートウェルに落とし、７５ｇ／Ｌで８０μＬのＮａ２ＣＯ３（無水、Acros Organics）の水溶液を加えた。同じ混合を７つの他のウェルで繰り返し、すなわち分析される粗製オイル１サンプル当たり合計８ウェルであった。その後、事前に蒸留水中の１／１０（ｖ／ｖ）に希釈された１００μＬのFolin Ciocalteu試薬（Panreac AppliChem, 参照251567.1609）をそれぞれのウェルにマイクロプレートリーダーの自動インジェクターによって自動で加える。装置中で暗い条件で１時間撹拌後に、それぞれのウェルの吸光度の読み取りを、７５０ｎｍでのマイクロプレートリーダーのＵＶ－可視検出器によって行った。平行して、較正曲線を、０～１００ｍｇ／Ｌの没食子酸の濃度範囲で、相及びメタノール／水混合物を含む溶液が、没食子酸の８種の水性溶液の一つで置き換えられたことを除いて、サンプルに対して記載された同じ分析方法により、没食子酸（Sigma-Aldrich）の８種の水性溶液を使用して作る。
第二に、（糖、タンパク質等を還元する）Folin Ciocalteu試薬と反応性しているかもしれないオイル中に存在する非フェノール性化合物を取り除くため、粗製オイルから事前に得られた５ｍＬのポリフェノールの溶液を０．１ＮのＨＣＬ溶液でｐＨ＝３．５に酸性化する。その後５ｍＬの蒸留水及び１ｇのポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ、粒子径約１１０μｍ、Sigma-Aldrich）を、ポリフェノールを捕捉するために、混合物に加える。混合物を２５℃で１０分間機械的に撹拌した後、１００００rev.min-1で１０分間20℃で遠心分離する。上澄みをその後取り、その後フィルターシリンジ（０．２５μｍ）を使用してろ過し、その後PVPPで処理されていない溶液と同じ方法で分析する。
PVPPで処理されたこの溶液の吸光度を、「ブランク」として使用し、事前に得られた値から引く。
したがって得られた吸光度の値は、非フェノール性化合物の寄与が引かれた８種のウェルの吸光度測定からの平均値から引かれ、較正曲線の式からのサンプル中のポリフェノールの質量濃度の計算に役に立つ。分析に最初に使用されたオイルの質量を考慮して、サンプル中のポリフェノールの質量濃度は、没食子酸のμｇ（EAGと略される）／粗製オイルのｇ、又は同等の方法で、ｐｐｍで表される。
すべての試薬及び溶媒が、適切な分析グレードを使用する。
以下の方法によって、事前に粗製オイル中に含まれるポリフェノールを抽出する：１ｇのオイルを１ｍＬのヘキサン中に希釈し、その後溶液を３ｍＬのメタノール／水混合物（６０体積％／４０体積％）で３連続抽出によって抽出する。それぞれの抽出の後、２相を撹拌してその後遠心分離によって分離し、（１００００rev.min-1／10分／２０℃）液体水－アルコール相を収集する（任意の潜在的に形成される堆積、沈殿又は固体粒子を扱わない）。３つの水－アルコール相が収集され、その後１ｍＬのヘキサンで洗浄される。相を遠心分離によって分離し、その後水－アルコール相を１０ｍＬの目盛り付きフラスコに移し、体積をメタノール／水混合物（６０体積％／４０体積％）で標点した。
マイクロピペットを使用して、溶液の２０μＬをマイクロプレートウェルに落とし、７５ｇ／Ｌで８０μＬのＮａ２ＣＯ３（無水、Acros Organics）の水溶液を加えた。同じ混合を７つの他のウェルで繰り返し、すなわち分析される粗製オイル１サンプル当たり合計８ウェルであった。その後、事前に蒸留水中の１／１０（ｖ／ｖ）に希釈された１００μＬのFolin Ciocalteu試薬（Panreac AppliChem, 参照251567.1609）をそれぞれのウェルにマイクロプレートリーダーの自動インジェクターによって自動で加える。装置中で暗い条件で１時間撹拌後に、それぞれのウェルの吸光度の読み取りを、７５０ｎｍでのマイクロプレートリーダーのＵＶ－可視検出器によって行った。平行して、較正曲線を、０～１００ｍｇ／Ｌの没食子酸の濃度範囲で、相及びメタノール／水混合物を含む溶液が、没食子酸の８種の水性溶液の一つで置き換えられたことを除いて、サンプルに対して記載された同じ分析方法により、没食子酸（Sigma-Aldrich）の８種の水性溶液を使用して作る。
第二に、（糖、タンパク質等を還元する）Folin Ciocalteu試薬と反応性しているかもしれないオイル中に存在する非フェノール性化合物を取り除くため、粗製オイルから事前に得られた５ｍＬのポリフェノールの溶液を０．１ＮのＨＣＬ溶液でｐＨ＝３．５に酸性化する。その後５ｍＬの蒸留水及び１ｇのポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ、粒子径約１１０μｍ、Sigma-Aldrich）を、ポリフェノールを捕捉するために、混合物に加える。混合物を２５℃で１０分間機械的に撹拌した後、１００００rev.min-1で１０分間20℃で遠心分離する。上澄みをその後取り、その後フィルターシリンジ（０．２５μｍ）を使用してろ過し、その後PVPPで処理されていない溶液と同じ方法で分析する。
PVPPで処理されたこの溶液の吸光度を、「ブランク」として使用し、事前に得られた値から引く。
したがって得られた吸光度の値は、非フェノール性化合物の寄与が引かれた８種のウェルの吸光度測定からの平均値から引かれ、較正曲線の式からのサンプル中のポリフェノールの質量濃度の計算に役に立つ。分析に最初に使用されたオイルの質量を考慮して、サンプル中のポリフェノールの質量濃度は、没食子酸のμｇ（EAGと略される）／粗製オイルのｇ、又は同等の方法で、ｐｐｍで表される。
【0191】
以下に示す実施例において、粗製オイル中及び精製オイル中のトコフェロールの質量濃度の決定方法は、規格NF EN ISO 9936:2016年6月である。
【0192】
以下に示すサンプルにおいて、精製オイル中の２－メチルオキソランの質量濃度の決定方法が、以下に記載する条件によって、従来の分析化学技術、いわゆる「GC－ヘッドスペース」（ヘッドスペースからのサンプリングでのガスクロマトグラフィー）を使用して適用される。この分析技術は、オイル状のマトリックス中に含有される揮発性化合物の分析に適していることが当業者に知られる。
すべての試薬、溶媒及び材料が適切な分析グレートを使用した。最初に、分析される５±０．０１ｇの精製オイルを、「ヘッドスペース」技術に特別に設計された２０ｍLのボトル（２３×７７ｍｍ）に量り入れる。その後正確に１５μＬの標準溶液（オクタン中に４０％体積／体積のヘプタン）を２０ｍＬのボトルに加え、セプタムが装備されたストッパーで封印する。２０ｍＬのボトルを、分析の前に５分間激しく撹拌される（Ｖｏｌｔｅｘ）。ヘッドスペースへのサンプリング及びインジェクションの工程の操作条件は、以下のとおりである：機器＝「Turbomatrix HS40」 (Perkin Elmer)；脱着＝８０℃６０分；移送ライン温度＝１２０℃；ニードル温度＝１１０℃；インジェクション体積＝０．２ｍＬ、水素圧＝２０ＰＳＩ。クロマトグラフィーの分離の工程の操作条件は以下のとおりである：機器＝Clarus 500 (Perkin Elmer)；カラム＝DB1－30m－0.32mm－3.0μm；インジェクター温度＝１５０℃；加熱炉温度＝４０℃（３分）、及びその後傾斜１０℃／分で１１０℃まで（０分）。検出工程の操作条件は以下のとおりである；検出の種類＝水素炎イオン検出器（ＦＩＤ）；検出器温度＝２５０℃；水素圧＝１１ＰＳＩ。
分析される精製オイルのサンプル中の２－メチルオキソランの質量濃度は、以下の式から決定される：ＣＭｅＯｘ＝a*（ＡＭｅＯｘ／Ａｈｅｐｔａｎｅ）、ここでＣＭｅＯｘは２メチルオキソランの質量濃度であり、ＡＭｅＯｘは２－メチルオキソランに対応するピーク面積であり、Ａｈｅｐｔａｎｅはヘプタン（内部標準）に対応するピーク面積であり、「ａ」は事前に設定された２－メチルオキソランの較正曲線の傾きである。
２メチルオキソラン及びヘプタンを含む既知の量の溶液を、２－メチルオキソランを含まない精製オイルに加えて、０．５１、１．０２、２．０５、５．１２及び１０．２５μｇ／ｇのオイルの質量濃度を得て、溶液分析化学の標準的なな原理によって、較正曲線をプロットした。
すべての試薬、溶媒及び材料が適切な分析グレートを使用した。最初に、分析される５±０．０１ｇの精製オイルを、「ヘッドスペース」技術に特別に設計された２０ｍLのボトル（２３×７７ｍｍ）に量り入れる。その後正確に１５μＬの標準溶液（オクタン中に４０％体積／体積のヘプタン）を２０ｍＬのボトルに加え、セプタムが装備されたストッパーで封印する。２０ｍＬのボトルを、分析の前に５分間激しく撹拌される（Ｖｏｌｔｅｘ）。ヘッドスペースへのサンプリング及びインジェクションの工程の操作条件は、以下のとおりである：機器＝「Turbomatrix HS40」 (Perkin Elmer)；脱着＝８０℃６０分；移送ライン温度＝１２０℃；ニードル温度＝１１０℃；インジェクション体積＝０．２ｍＬ、水素圧＝２０ＰＳＩ。クロマトグラフィーの分離の工程の操作条件は以下のとおりである：機器＝Clarus 500 (Perkin Elmer)；カラム＝DB1－30m－0.32mm－3.0μm；インジェクター温度＝１５０℃；加熱炉温度＝４０℃（３分）、及びその後傾斜１０℃／分で１１０℃まで（０分）。検出工程の操作条件は以下のとおりである；検出の種類＝水素炎イオン検出器（ＦＩＤ）；検出器温度＝２５０℃；水素圧＝１１ＰＳＩ。
分析される精製オイルのサンプル中の２－メチルオキソランの質量濃度は、以下の式から決定される：ＣＭｅＯｘ＝a*（ＡＭｅＯｘ／Ａｈｅｐｔａｎｅ）、ここでＣＭｅＯｘは２メチルオキソランの質量濃度であり、ＡＭｅＯｘは２－メチルオキソランに対応するピーク面積であり、Ａｈｅｐｔａｎｅはヘプタン（内部標準）に対応するピーク面積であり、「ａ」は事前に設定された２－メチルオキソランの較正曲線の傾きである。
２メチルオキソラン及びヘプタンを含む既知の量の溶液を、２－メチルオキソランを含まない精製オイルに加えて、０．５１、１．０２、２．０５、５．１２及び１０．２５μｇ／ｇのオイルの質量濃度を得て、溶液分析化学の標準的なな原理によって、較正曲線をプロットした。
【0193】
本発明による実施例１：２メチルオキソラン及び水を含む溶媒
【0194】
実施例１－１：大豆の基質
【0195】
粗製大豆油を、ソックスレー型（抽出システムＢ-811、Ｂｕｃｈｉ）の自動抽出システムを使用して外皮を除去した大豆から抽出した（供給者：OLEAD, 種類: ES PALLADOR, 収穫: フランス, 2017年, 水含有量: 8.5% ± 0.3）。使用された溶媒は、１００ｇの溶媒当たり４．５ｇの蒸留水を含む２メチルオキソラン（ＢＨＴで安定化される、Sigma Aldrich）の混合物である。
【0196】
約５０ｇの大豆をカッティングミルを使用してすりつぶし、１ｍｍより小さい粒子を得た。
得られた約３０ｇの粉末を装置（Ｂｕｃｈｉ）に適したガラス抽出カートリッジに量って入れた。カートリッジをその後ソックスレーチャンバーに置き、装置に対するユーザーマニュアルに記載される指示に従って、安全を担保した。
その後１７０ｍＬの溶媒を、この目的のために提供される２５０ｍＬの受けビーカーに入れた。その後装置を、洗浄又は乾燥がなく、サイクル数を２０に固定し、加熱力を１０に固定して、「Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｓｏｘｈｌｅｔ」モードによって操作を始めた。
最終的に、高さ検出器を、「高い」高さの植物基質の約１ｃｍ上に置いて、コンデンサに冷水を供給した（8℃）。
溶媒を、その後統合された加熱プレートにより沸騰させた。２０サイクルの終了時に、抽出オイルを含有するすべての溶媒を受けビーカーに収集し、一方、固体残留物を抽出カートリッジの中に入れたままにした。
抽出されたオイルを含む溶媒を２０分間室温で冷却したままにして、その後２５０ｍＬのフラスコに移送した。溶媒を、減圧下で、その後ロータリーエバポレーターを使用して揮発させた（１５０rev／分、５０℃、180ｍｂａｒ、その後１ｍｂａｒにして終了）。
したがって、得られた粗製オイルの重さを量り、その後１０分間窒素の軽い気流下で冷却し、封印されたチューブに移し、その後分析まで－２０℃の冷凍庫で貯蔵した。
得られた約３０ｇの粉末を装置（Ｂｕｃｈｉ）に適したガラス抽出カートリッジに量って入れた。カートリッジをその後ソックスレーチャンバーに置き、装置に対するユーザーマニュアルに記載される指示に従って、安全を担保した。
その後１７０ｍＬの溶媒を、この目的のために提供される２５０ｍＬの受けビーカーに入れた。その後装置を、洗浄又は乾燥がなく、サイクル数を２０に固定し、加熱力を１０に固定して、「Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｓｏｘｈｌｅｔ」モードによって操作を始めた。
最終的に、高さ検出器を、「高い」高さの植物基質の約１ｃｍ上に置いて、コンデンサに冷水を供給した（8℃）。
溶媒を、その後統合された加熱プレートにより沸騰させた。２０サイクルの終了時に、抽出オイルを含有するすべての溶媒を受けビーカーに収集し、一方、固体残留物を抽出カートリッジの中に入れたままにした。
抽出されたオイルを含む溶媒を２０分間室温で冷却したままにして、その後２５０ｍＬのフラスコに移送した。溶媒を、減圧下で、その後ロータリーエバポレーターを使用して揮発させた（１５０rev／分、５０℃、180ｍｂａｒ、その後１ｍｂａｒにして終了）。
したがって、得られた粗製オイルの重さを量り、その後１０分間窒素の軽い気流下で冷却し、封印されたチューブに移し、その後分析まで－２０℃の冷凍庫で貯蔵した。
【0197】
粗製オイル中のポリフェノールの質量濃度は表１に示される。
【0198】
実施例１－２：セイヨウアブラナの基質
【0199】
操作方法は、出発基質がホールのセイヨウアブラナ種子（供給者: OLEAD; 原産地: ジロンド(フランス); 収穫: 2016年; 水含有量: 5.2% ± 0.15）であり、使用したソックスレー抽出カートリッジがグラスではなくセルロース製であることを除いて、実施例１－１と同じであった。
【0200】
粗製オイル中のポリフェノールの質量濃度は、表１に示される。
【0201】
実施例１－３：トウモロコシ種子の基質
【0202】
操作方法は、出発基質がトウモロコシ種子（供給者: Avignon大学; 原産地: フランス; 水含有量 = 7.25%）であり、ソックスレー抽出カートリッジが、ガラスではなくセルロース製であり、センサーの高さを、抽出チャンバーの体積が約１７５ｍｌとなるように固定し、抽出時間を、サイクル回数を設定しないで１時間に固定し、加熱強さを１２で固定したことを除いて、実施例１－１と同じであった。
【0203】
粗製オイル中のポリフェノールの質量濃度は表１に示される。
【0204】
実施例１－４：綿の種子の基質
【0205】
操作方法は、出発基質が綿の種子（供給者: Avignon大学; 原産地:トルコ; 水含有量 = 7.99%）であり、種子を事前にすりつぶし、綿繊維のない、穀粒の実のみを回収するようように篩にかけたことを除いて、実施例１－３と同じであった
【0206】
粗製オイル中のポリフェノールの質量濃度は表１に示される。
【0207】
比較例２：ヘキサン又は無水２－メチルオキソランの溶媒
【0208】
比較例２－１：ヘキサン
【0209】
操作方法及び生体基質が、溶媒がヘキサンであることを除いて、実施例１－１及び１－４と同じであった。
【0210】
ポリフェノールの質量濃度は表１に示される。
【0211】
比較例２－２：無水２－メチルオキソラン
【0212】
操作方法及び生体基質が、溶媒が無水２－メチルオキソランであることを除いて、実施例１－１及び１－４と同じであった。
【0213】
ポリフェノールの質量濃度は表１に示される。
【0214】
表１中の結果は、２－メチルオキソラン及び水を含む溶媒を使用した本発明による方法が、ヘキサン（参照溶媒）及び無水２－メチルオキソランで得られたオイルよりポリフェノールが豊富であるオイルを製造することを可能にすることを示す。
【0215】
【表1】
【0216】
実施例３：溶媒中の水の質量濃度の影響
【0217】
本実施例では、粗製オイルを、３種類の異なる生体基質から出発して、２－メチルオキソラン（BHTで安定化される、Sigma Aldrich）及び蒸留水を、それぞれの溶媒中、水の質量パーセントが、１％、４．５％、１０％又は２０％で含む異なる溶媒で固体／液体抽出することによって得た。
【0218】
３種類の生体基質は：
－大豆（供給者：OLEAD, 種類: ES PALLADOR,収穫: フランス, 2017年, 水含有量: 8.5% ± 0.3）
－セイヨウアブラナ種子（供給者: OLEAD; 原産地: ジロンド(フランス); 収穫: 2016年; 水含有量: 5.2% ± 0.15）および
－ヒマワリ種子（原産地: スペイン; 供給者: Lile aux epices; バッチ: LPR22-1017; 水含有量: 2.54% ± 0.12）である。
これらの３種の油性の種子から抽出された食物オイルは、パーム油は別として世界で最も生産されているものの一つである。
－大豆（供給者：OLEAD, 種類: ES PALLADOR,収穫: フランス, 2017年, 水含有量: 8.5% ± 0.3）
－セイヨウアブラナ種子（供給者: OLEAD; 原産地: ジロンド(フランス); 収穫: 2016年; 水含有量: 5.2% ± 0.15）および
－ヒマワリ種子（原産地: スペイン; 供給者: Lile aux epices; バッチ: LPR22-1017; 水含有量: 2.54% ± 0.12）である。
これらの３種の油性の種子から抽出された食物オイルは、パーム油は別として世界で最も生産されているものの一つである。
【0219】
実施例３において、固体／液体抽出は、還流下で冷浸と呼ばれる抽出方法によって行ったのは、この方法は、「ソックスレー」抽出法より二相の溶媒に対してより適しているためである。
【0220】
本発明による実施例３－１：大豆の基質
【0221】
実施例３－１では、生体基質が大豆であった。
【0222】
約５０ｇの外皮を除去した大豆を、カッティングミルを使用して、１ｍｍより小さい粒子を得るため、すりつぶした。３０gの得られた粉末の重さを量り、還流下で抽出できるようにするため、コンデンサを取り付けた２５０ｍLのガラスフラスコに入れた。
１７０ｍＬのそれぞれの溶媒を、フラスコに導入し、その後、フラスコの内容物をフラスコヒーターを使用して還流させた。
抽出時間は、最初の還流のしるしから開始して２時間に固定した。２時間の終了時に、加熱のスイッチを切り、混合物を室温で２０分間冷却させたままにした。
次に、フラスコの内容物を、コットンの層上にろ過し、オイルを含有する溶媒の固体残留物を一方に分離し、新しい２５０－ｍＬのフラスコに回収した。その後溶媒を、減圧下でロータリーエバポレーターを使用して揮発させた（１５０ｒｅｖ／分；５０℃；１８０ｍｂａｒ；その後終了時１ｍｂａｒ）。そのようにして得られた粗製オイルの重さを量り、その後微量の残留溶媒を、窒素の軽い気流によって１０分間で除去した。オイルを、封印されたチューブに移し、その後分析まで－２０℃の冷凍庫に貯蔵した。
１７０ｍＬのそれぞれの溶媒を、フラスコに導入し、その後、フラスコの内容物をフラスコヒーターを使用して還流させた。
抽出時間は、最初の還流のしるしから開始して２時間に固定した。２時間の終了時に、加熱のスイッチを切り、混合物を室温で２０分間冷却させたままにした。
次に、フラスコの内容物を、コットンの層上にろ過し、オイルを含有する溶媒の固体残留物を一方に分離し、新しい２５０－ｍＬのフラスコに回収した。その後溶媒を、減圧下でロータリーエバポレーターを使用して揮発させた（１５０ｒｅｖ／分；５０℃；１８０ｍｂａｒ；その後終了時１ｍｂａｒ）。そのようにして得られた粗製オイルの重さを量り、その後微量の残留溶媒を、窒素の軽い気流によって１０分間で除去した。オイルを、封印されたチューブに移し、その後分析まで－２０℃の冷凍庫に貯蔵した。
【0223】
それぞれの実例を挙げられた溶媒について、ポリフェノールの質量濃度が表２に示される。
【0224】
本発明による実施例３－２：セイヨウアブラナ種子の基質
【0225】
本発明による実施例３－２の方法は、基質がセイヨウアブラナ種子であることは別として、本発明による実施例３－１と同一であった。
【0226】
それぞれの実例を挙げられた溶媒について、ポリフェノールの質量濃度が表３に示された。
【0227】
本発明による実施例３－３：ヒマワリ種子の基質
【0228】
本発明による実施例３－３の方法は、基質が外皮を除去されたヒマワリ種子であることを別として、本発明による実施例３－１と同一であった。
【0229】
それぞれの実例を挙げられた溶媒について、ポリフェノールの質量濃度が、表４に示された。
【0230】
比較例３－４：ヘキサン
【0231】
操作方法及び生体基質が、溶媒がヘキサンであることを除いて、実施例３－１～３－３と同じであった。
【0232】
それぞれの生体基質について、ポリフェノールの質量濃度が、表２、３及び４に示された。
【0233】
比較例３－５：無水２－メチルオキソラン
【0234】
操作方法及び生体基質が、溶媒が無水２－メチルオキソランであることを除いて、実施例３－１～３－３と同じであった。
【0235】
それぞれの生体基質について、ポリフェノールの質量濃度が、表２、３及び４に示された。
【0236】
【表2】
【0237】
【表3】
【0238】
【表4】
【0239】
表２～４の結果は、２－メチルオキソラン及び１～２０％の水を含む溶媒を使用した本発明による粗製オイルを調製する方法が、ヘキサン（参照溶媒）及び無水２－メチルオキソランで得られるオイルよりポリフェノールが方法なオイルを製造することを可能にすることを示す。
【0240】
還流下で冷浸と呼ばれる抽出方法によって得られたポリフェノールの総質量濃度（実施例３及び４）は、「ソックスレー」抽出法によって得られるもの（実施例１及び２）より、論理的に低い。実際、当業者に知られる質量移動の法則に従って、「ソックスレー」抽出法と対照的に、還流下で冷浸と呼ばれる抽出方法で使用された溶媒は、抽出液中でだんだんと濃縮され、それ故、オイルの抽出及びポリフェノールの抽出を制限する。
【0241】
実施例４：脱脂ケーキの製造
【0242】
実施例４－１：基質が大豆フレークであり、溶媒が２－メチルオキソラン及び４．５％の水を含む
【0243】
固体／液体抽出を、大豆フレーク（供給者：OLEAD, 収穫: フランス, 2017年, 水含有量: 9.96% ± 0.20%, オイル含有量 = 19.19% ± 0.20%, 厚さ 約1 mm）から出発して、自動抽出装置（抽出装置Ｂ－８１１，Ｂｕｃｈｉ）を使用して行った。使用された溶媒は、１００ｇ当たりの溶媒に４．５ｇの蒸留水を含有する２－メチルオキソラン（ＢＨＴで安定化される、Sigma Aldrich）の混合物である。
【0244】
約１５ｇの大豆フレークの重さを量り、装置（Ｂｕｃｈｉ）に対して適切なセルロース製の抽出カートリッジ中に入れた。その後、装置のユーザーマニュアルに記載される指示に従って、カートリッジを抽出チャンバーに入れた。高さ検出器の高さを、抽出チャンバー中の溶媒の最大体積が約２２０ｍＬに相当するように固定した。
【0245】
その後、１７０ｍＬの溶媒を、この目的のために提供される２５０ｍＬの受けビーカーに入れた。その後、装置をパラメーター化して、洗浄又は乾燥なしで、時間を１時間に固定し、加熱力が１２に相当する「Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｓｏｘｈｌｅｔ」モードによって操作して、１時間当たり７±１に相当する抽出チャンバーの充填－空にするサイクル数を保証するようにした。
【0246】
溶媒を、その後、統合された加熱プレートによって沸騰させた。６０分の抽出の終了時に、抽出されたオイルを含有するすべての溶媒を受けビーカーに収集し、一方脱脂ケーキがカートリッジ中に残った。受けビーカーの内容物をその後適切なフラスコに移し、その後混合物を、前述の実施例に記載した条件のとおりに脱溶媒した。脱脂ケーキを含有するカートリッジを回収し、その後、約４５℃の温度で少なくとも１０時間操作して、どの場合においても溶媒の臭気がもはや知覚できなくなるまで、換気されたデシケーター（Biosec型, モデル= TauRo）に置いた。一度脱溶媒されると、脱脂ケーキ中の残留オイルの質量濃度は、マイクロボールミルに替えてカッティングミルを使用して分析されるサンプルが細かくすりつぶされるという、わずかな変更を伴って、「Ｔｗｉｓｓｅｌｍａｎｎ」と呼ばれる方法に相当する、「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ」モードによって自動抽出装置（抽出装置Ｂ-811，Ｂｕｃｈｉ）を使用して適用される、規格NF EN ISO 734：2016年2月によって、決定される。
【0247】
２メチルオキソラン＋水で抽出後に得られる残留オイルの質量濃度は、表５に示される。
【0248】
実施例４－２：基質がセイヨウアブラナフレークであり、溶媒が２－メチルオキソラン及び４．５％の水を含む
【0249】
固体／液体抽出を、基質がセイヨウアブラナフレーク（供給者: OLEAD; 収穫: フランス2017年; 水含有量: 8.21% ± 0.13、オイル含有量＝23.03％ ± 0.07％, 粒子径≦３ｍｍ）であり、抽出時間が９０分であることを除いて、実施例４－１と同じ方法によって行った。
【0250】
２メチルオキソラン＋水で抽出後に得られた残留オイルの質量濃度は、表５に示される。
【0251】
実施例４－３：基質がヒマワリフレークであり、溶媒が２－メチルオキソラン及び４．５％の水を含む
【0252】
固体／液体抽出を、基質がヒマワリフレーク（供給者: OLEAD; 収穫: フランス, 2017年; 水含有量: 5.38% ± 0.24、オイル含有量＝30.81％ ± 2.59％, 粒子径≦10ｍｍ）であり、抽出時間が９０分であることを除いて、実施例４－１と同じ方法によって行った。
【0253】
２メチルオキソラン＋水で抽出後に得られた残留オイルの質量濃度は、表５に示される。
【0254】
比較例４－４：ヘキサン
【0255】
操作方法及び生体基質が、溶媒がヘキサンであること及び加熱強さを９に固定して、抽出チャンバーの充填－空にするサイクルの数を１時間当たり７±１に相当するように保証することを除いて、実施例４－１～４－３と同じであった。
【0256】
それぞれの生体基質について、ヘキサンでの抽出後に得られる残留オイルの質量濃度が表５に示される。
【0257】
比較例４－５：無水２－メチルオキソラン
【0258】
操作方法及び生体基質が、溶媒が無水２－メチルオキソランであること及び加熱強さを１２に固定して、抽出チャンバーの充填－空にするサイクルの数を１時間当たり７±１に相当するように保証することを除いて、実施例４－１～４－３と同じであった。
【0259】
それぞれの生体基質について、無水２－メチルオキソランでの抽出後に得られる残留オイルの質量濃度が表５に示される。
【0260】
【表5】
【0261】
表５の結果は、２メチルオキソラン及び４．５％の水を含む溶媒を使用した本発明による固体残留物の製造方法が、ヘキサン（参照溶媒）及び無水２－メチルオキソランで得られる固体残留物より、少ない残留オイルを含む固体残留物を製造することを可能にすることを示す。
【0262】
これは、オイルの損失を制限し、固体残留物から残留溶媒の除去を促進し、固体残留物中のタンパク質濃度を増加させ、貯蔵での安定性を向上させ、動物、特に牛属による消化を促進させることを可能にするため、特に有利である。
【0263】
実施例５：大豆でのパイロットスケール試験
【0264】
本発明による実施例５－１：基質が大豆であり、溶媒が２－メチルオキソラン及び水の混合物である。
【0265】
粗製大豆油の抽出を、４８０Ｌのフィルター－ドライヤー（「Ｇｕｅｄｕ」型）内で、パイロットスケールで行った。大豆（供給者：OLEAD, 収穫: フランス, 2017年, 水含有量: 12.2%）を、粒子径を減少させ、抽出溶媒の近接性を増加させるように、外皮を除去してフレーク化する従来の工程によって抽出のために準備した。その後約６０ｋｇの大豆フレークをフィルター－ドライヤーに入れ、その後２－メチルオキソラン（供給者＝Pennakem LLC、安定化されていない）の３連続通過によって抽出した。水含有量は、それぞれの通過で異なり、それぞれ、１．４４％、２．８５％、そして４．７６％であった。
抽出温度は平均５７±６℃であり、溶媒／固体質量比を１．８ｋｇ／ｋｇに、抽出時間を１通過当たり、１５分又はトータルで３×１５分に固定した。
抽出されたオイル（ｍｉｓｃｅｌｌａと呼ばれる混合物）を含有する溶媒を、それぞれの通過後ろ過によって収集し、蒸留カラムによって濃縮し（８０～８５℃、減圧）、最終的に真空下、６０℃で溶媒の濃縮がなくなるまで、ロータリーエバポレーター（Hei-VAP ADVANTAGE, Heidolph, ドイツ）を使用して、脱溶媒され、その後１時間９０℃であった。脱溶媒された抽出物を、２－メチルオキソラン及び水の混合物で抽出された固体画分を取り除くため、その後遠心分離した（４０００ｒｐｍ／４分）が、オイル上の媒体中に不溶になっていた。得られた粗製オイルをその後精製又は分析まで２０℃で貯蔵した。
抽出温度は平均５７±６℃であり、溶媒／固体質量比を１．８ｋｇ／ｋｇに、抽出時間を１通過当たり、１５分又はトータルで３×１５分に固定した。
抽出されたオイル（ｍｉｓｃｅｌｌａと呼ばれる混合物）を含有する溶媒を、それぞれの通過後ろ過によって収集し、蒸留カラムによって濃縮し（８０～８５℃、減圧）、最終的に真空下、６０℃で溶媒の濃縮がなくなるまで、ロータリーエバポレーター（Hei-VAP ADVANTAGE, Heidolph, ドイツ）を使用して、脱溶媒され、その後１時間９０℃であった。脱溶媒された抽出物を、２－メチルオキソラン及び水の混合物で抽出された固体画分を取り除くため、その後遠心分離した（４０００ｒｐｍ／４分）が、オイル上の媒体中に不溶になっていた。得られた粗製オイルをその後精製又は分析まで２０℃で貯蔵した。
【0266】
抽出が一度終了したら、固体残留物（脱脂及びろ過されたフレーク）を同じ容器（「Ｇｕｅｄｕ」フィルター－ドライヤーで脱溶媒した。容器を真空ジェネレーターにつなぎ、脱溶媒を目的に、窒素気流（１４－１８Ｌ／ｍｉｎ）を注入しながら、５５℃で１４０分加熱した。最終的に、固体残留物を、放出し、プレート上に広げ、微量な残留溶媒を取り除くため、外気に１日間さらした。
【0267】
その後得られた粗製オイルを、中性のｐＨ及びその後酸性のｐＨで脱ゴムする工程、その後中和工程、漂白工程及びその後脱臭気工程を含む化学精製の従来工程を経て、精製オイルを得た。
【0268】
粗製オイル中のポリフェノール及びトコフェロールの質量濃度並びに精製オイル中のトコフェロール及び２－メチルオキソランの質量濃度が表６に示される。
【0269】
比較例５－２：基質が大豆であり、溶媒が無水２－メチルオキソランである
【0270】
抽出の操作方法が、以下の点を除いて本発明による実施例５－１と同一である：溶媒が無水２－メチルオキソラン（非安定化）であり、溶媒／固体比が２．９ｋｇ／ｋｇであり、抽出温度が５３±５℃である。
【0271】
粗製オイル中のポリフェノール及びトコフェロールの質量濃度並びに精製オイル中のトコフェロール及び２－メチルオキソランの質量濃度が表６に示される。
【0272】
比較例５－３：基質が大豆であり、溶媒がヘキサンである
【0273】
抽出の操作方法が、以下の点を除いて本発明による実施例５－１と同一である：溶媒がヘキサン（抽出グレード）であり、溶媒／固体比が２．２ｋｇ／ｋｇであり、抽出温度が５２±３℃である。
【0274】
粗製オイル中のポリフェノール及びトコフェロールの質量濃度並びに精製オイル中のトコフェロールの質量濃度が表６に示される。
【0275】
【表6】
【0276】
表６の結果は、２メチルオキソラン及び１．４４～４．７６％の水を含む溶媒を使用した本発明による粗製オイルの製造方法が、ヘキサン（参照溶媒）及び無水２－メチルオキソランで得られた粗製オイルよりポリフェノールが豊富な粗製オイルを製造することを可能にすることを示す。
【0277】
表６の結果は、２メチルオキソラン及び１．４４～４．７６％の水を含む溶媒を使用した本発明による粗製オイルの製造方法が、ヘキサン（参照溶媒）及び無水２－メチルオキソランで得られた精製オイルよりトコフェロールが豊富な精製オイルを製造することを可能にすることも示す。
【国際調査報告】