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特表2022-512455シュードモナス・バレアリカ及びそのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-03
(54)【発明の名称】シュードモナス・バレアリカ及びそのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用
(51)【国際特許分類】
C12N 1/20 20060101AFI20220127BHJP
C02F 3/00 20060101ALI20220127BHJP
C02F 3/28 20060101ALI20220127BHJP
C02F 3/34 20060101ALI20220127BHJP
B09B 3/65 20220101ALI20220127BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20220127BHJP
【ＦＩ】
C12N1/20 A ZNA
C12N1/20 D
C02F3/00 G
C02F3/28 A
C02F3/34 101A
C02F3/34 101B
C02F3/34 Z
B09B3/00 C
C12N15/09 Z
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021544869
(86)(22)【出願日】2019-10-30
(85)【翻訳文提出日】2021-08-02
(86)【国際出願番号】 CN2019114170
(87)【国際公開番号】W WO2021077452
(87)【国際公開日】2021-04-29
(31)【優先権主張番号】201911015527.0
(32)【優先日】2019-10-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】510115007
【氏名又は名称】南京大学
【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＪＩＮＧ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
【住所又は居所原語表記】２２ Ｈａｎｋｏｕ Ｒｏａｄ，Ｎａｎｊｉｎｇ，ｊｉａｎｇｓｕ ２１００９３ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】110000291
【氏名又は名称】特許業務法人コスモス国際特許商標事務所
(72)【発明者】
【氏名】黄 開龍
(72)【発明者】
【氏名】張 徐祥
(72)【発明者】
【氏名】叶 林
(72)【発明者】
【氏名】任 洪強
【テーマコード（参考）】
4B065
4D004
4D040
【Ｆターム（参考）】
4B065AA41X
4B065AC20
4B065BB03
4B065BB26
4B065BB29
4B065BC02
4B065BC50
4B065CA55
4D004AA03
4D004CA18
4D040AA01
4D040AA31
4D040AA61
4D040DD03
4D040DD14
(57)【要約】
本発明は、シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１と命名され、２０１９年９月１７日に中国典型培養物寄託センターに寄託され、寄託番号がＣＣＴＣＣ Ｍ ２０１９７３０であるシュードモナス・バレアリカを開示する。本発明は、上記シュードモナス・バレアリカの、ゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用をさらに開示する。本発明はゴミ浸出液の膜濃縮液を段階的に馴養することで、高耐塩性シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を得て、該シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１はゴミ浸出液の膜濃縮液中の総窒素含有量を効果的に除去できる。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
シュードモナス・バレアリカであって、シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１と命名され、２０１９年９月１７日に中国典型培養物寄託センターに寄託され、寄託番号がＣＣＴＣＣ Ｍ ２０１９７３０である、ことを特徴とするシュードモナス・バレアリカ。
【請求項2】
請求項１に記載のシュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【請求項3】
シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を培地に接種し、３０～３５℃で２４～３２ｈ好気的培養し、ＥＢＴ－１拡大培養生成物を得て、次に、ゴミ浸出液の膜濃縮液に接種して処理を行う、ことを特徴とする請求項２に記載のシュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【請求項4】
シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を培地に接種して培養するときの接種量が３％～５％である、ことを特徴とする請求項３に記載のシュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【請求項5】
培地１Ｌあたり、成分として、コーンスティープリカー１０質量部、酵母エキス５質量部、リン酸水素二カリウム１質量部、塩化ナトリウム１０質量部、無水酢酸ナトリウム２．５質量部、及び硫酸マグネシウム０．０３質量部が含有される、ことを特徴とする請求項３に記載のシュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【請求項6】
前記培地の初期ｐＨが６．５～７．５である、ことを特徴とする請求項３に記載のシュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【請求項7】
シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は、ゴミ浸出液の膜濃縮液中の窒素含有化合物の分解に用いられ、窒素含有化合物は硝酸態窒素、亜硝酸態窒素及びアンモニア態窒素を含む、ことを特徴とする請求項２に記載のシュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【請求項8】
シュードモナス・バレアリカによるゴミ浸出液の膜濃縮液中の窒素含有化合物の分解は嫌気性／低酸素条件下で行われる、ことを特徴とする請求項７に記載のシュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【請求項9】
シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１がゴミ浸出液の膜濃縮液中の窒素含有化合物を分解するときに、０．２％～０．４％の接種量で菌液をゴミ浸出液の膜濃縮液の嫌気性／低酸素処理反応器に添加し、反応器中の廃水のＣＯＤ／Ｎが４：１～６：１である、ことを特徴とする請求項７に記載のシュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【請求項10】
ゴミ浸出液の膜濃縮液の塩分が３％以上である、ことを特徴とする請求項７に記載のシュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、シュードモナス・バレアリカに関し、さらに上記シュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用に関し、汚水処理の分野に属する。
【背景技術】
【0002】
ゴミ浸出液は、成分が複雑な高濃度有機性廃水であり、生分解性が悪く、アンモニア態窒素の濃度が高く、有毒有害物質の含有量が高いなどを特徴とする。環境水質管理基準がますます激しくなるに伴い、特に２００９年１０月に『家庭ゴミ埋立処分場の浸出液処理工事技術仕様（公開草案）』が公布されると、高度処理が膜処理プロセスを主とするべきであることが提案され、膜プロセスの標準化傾向がさらに決定され、主流プロセスである膜法による高度処理において約１５％～３０％の膜濃縮液が生じる。ゴミ浸出液の膜濃縮液は腐植質類物質を主成分とし、茶色黒（黄）色であり、ＣＯＤが通常１０００～５０００ｍｇ／Ｌであり、全窒素濃度が５００～２５００ｍｇ／Ｌであり、大量の無機イオンを含有し、ＴＤＳが２００００～６００００ｍｇ／Ｌであり、導電率が４００００～５００００ｕｓ／ｃｍであり、ゴミ埋立処分場の浸出液の膜濃縮液における塩分が３％以上に達し得、廃水の塩分が微生物内部の浸透圧に大きな影響を与え、高塩分により物質の吸収が阻害され、微生物の生長速度が低くなり、一部の微生物が大量に死亡し、このような廃水の生化学的処理効果を深刻に損なう。
【0003】
ゴミ浸出液の膜濃縮液中の全窒素は、主にゴミ浸出液の生化学的処理廃水が多段膜を通過した濃縮液に由来する。原水中のほとんどのアンモニア態窒素は硝化作用により硝酸態窒素に変換され、濃縮液全窒素中に占める硝酸態窒素の割合が９０％以上に達し得る。このような高塩分、高窒素の濃縮液については焼却処置が一般的であるが、ゴミ埋立処分場の含水量が大きいことにより、廃水の焼却発熱量が低く、濃縮液に廃水処理を行うことで基準に達させて排出する必要がある。このような廃水は、高塩分、高毒性、高窒素のため、一般的な微生物で処理すると、基準に達することができず、濃縮液に適した高度な生物学的脱窒法が期待される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
発明の目的：本発明が解決しようとする技術的課題は、ゴミ浸出液の膜濃縮液中の総窒素含有量を効果的に除去できるシュードモナス・バレアリカを提供することである。
【0005】
本発明がまた解決しようとする技術的課題は、上記シュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0006】
上記技術的課題を解決するために、本発明が採用する技術的手段は以下のとおりである。
【0007】
本発明のシュードモナス・バレアリカは、シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１と命名され、シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）と分類して命名され、菌株番号がＥＢＴ－１であり、２０１９年９月１７日に中国武漢大学の中国典型培養物寄託センターに寄託され、寄託番号がＣＣＴＣＣ Ｍ ２０１９７３０である。
【0008】
ゴミ浸出液処理プラントの活性汚泥を収集し、高塩分のゴミ浸出液の膜濃縮液を段階的に馴養すると、本発明のシュードモナス・バレアリカを得る。
【0009】
該菌株の生物学的性質は以下のとおりである。本発明のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１菌株は高塩分ゴミ浸出液（塩分＞３％）汚水処理システムにおける活性汚泥に由来し、分離精製後、ＬＢ培地にて３５℃の好気性条件下で良好に成長しており、コロニーは不規則な円形をしており、直径が２～５ｍｍであり、白色で不透明であり、表面に外部から内部へ皺があり、グラム染色したところ陰性を示し、顕微鏡で観察すると細胞の形状が棒状である。
【0010】
本発明で得られた菌株ＥＢＴ－１について、１６Ｓ ｒＲＮＡでシーケンシングし、ＢＬＡＳＴ分析を行い、本発明で得たシュードモナス株ＥＢＴ－１遺伝子配列をＮＣＢＩにおいて検出したところ、その遺伝子配列はシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）との類似性が９９％以上と高く、このため、得られた菌株がシュードモナス・バレアリカであると同定される。
【0011】
上記シュードモナス・バレアリカのゴミ浸出液の膜濃縮液の処理における使用。
【0012】
シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を培地に接種し、３０～３５℃で２４～３２ｈ好気的培養し、ＥＢＴ－１拡大培養生成物を得て、次に、ゴミ浸出液の膜濃縮液に接種して処理を行う。
【0013】
シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を培地に接種して培養するときの接種量が３％～５％である。
【0014】
培地（水）１Ｌは、成分として、コーンスティープリカー（乾燥粉末）１０～１２．５質量部、酵母エキス５質量部、リン酸水素二カリウム１質量部、塩化ナトリウム１０質量部、無水酢酸ナトリウム２．５質量部及び硫酸マグネシウム０．０３質量部を含む。
【0015】
シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は、ゴミ浸出液の膜濃縮液中の窒素含有化合物の分解に用いられ、窒素含有化合物は硝酸態窒素、亜硝酸態窒素、及びアンモニア態窒素を含む。
【0016】
シュードモナス・バレアリカによるゴミ浸出液の膜濃縮液中の窒素含有化合物の分解は、嫌気性／低酸素条件下で行われる。
【0017】
シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１がゴミ浸出液の膜濃縮液中の窒素含有化合物を分解するときに、０．２％～０．４％の接種量で菌液をゴミ浸出液の膜濃縮液の嫌気性／低酸素処理反応器に添加し、反応器中の廃水のＣＯＤ／Ｎが４：１～６：１である。
【0018】
ゴミ浸出液の膜濃縮液の塩分が３％以上である。
【0019】
培養して得たシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１拡大培養生成物を遠心分離し、菌体固体を得る。０．４％の接種量で遠心分離後の固体を塩分の異なる測定給水に接種し、３０℃、１５０ｒｐｍで振とう処理を行い、異なる塩分で窒素含有化合物に対するシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１の分解速度を追跡した結果、シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は７％以下（７％含有）塩分の範囲の廃水に適用できる。
【0020】
塩分測定給水１Ｌあたり、質量分率で、グルコース ６．１ｇ、ＫＮＯ３ ６．０７ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏ ６．０ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ １．０ｇ及び所望の塩分に応じて添加されるＮａＣｌが成分として添加される。
【0021】
培養して得たシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１拡大培養生成物を遠心分離し、菌体固体を得る。遠心分離固体を、ゴミ浸出液の膜濃縮液を入れた低酸素瓶に０．４％の接種量で接種し、３０℃、１５０ｒｐｍで振とう処理を行ったところ、ゴミ浸出液の膜濃縮液に対するシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１の全窒素除去率が９９％と高い。
【0022】
ゴミ浸出液の膜濃縮液の嫌気性／低酸素処理反応器の有効体積は２Ｌであり、反応器中の元の汚泥は、濃度が６００００～８００００ｍｇ／Ｌであり、水理学的滞留時間が１２ｈであり、炭素源を外添することにより炭素と窒素の比率を４：１とし、培養して得たシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１拡大培養菌液を０．２％の接種量でゴミ浸出液の膜濃縮液の嫌気性／低酸素処理反応器に添加すると、反応器中の汚泥活性が効果的に向上し、全窒素除去率が３０％から９８．８９％に効果的に上がり、且つ排出水の水質が安定して基準に達する。本発明のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を既存の汚泥システムに添加することにより、汚泥システムの脱窒効率を効果的に向上できることが示される。
【発明の効果】
【0023】
有益な効果
本発明は、ゴミ浸出液の膜濃縮液を段階的に馴養して、高耐塩性シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を得て、該シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は、ゴミ浸出液の膜濃縮液に対する効率的な生物脱窒を実現でき、また、既存の活性汚泥の脱窒速度を効果的に向上させ、汚泥の脱窒効果を高めることができ、排出水の水質が安定的である。
本発明は、ゴミ浸出液の膜濃縮液を段階的に馴養して、高耐塩性シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を得て、該シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は、ゴミ浸出液の膜濃縮液に対する効率的な生物脱窒を実現でき、また、既存の活性汚泥の脱窒速度を効果的に向上させ、汚泥の脱窒効果を高めることができ、排出水の水質が安定的である。
【図面の簡単な説明】
【0024】
【図1】実施例３におけるＥＢＴ－１の塩分適応的脱窒効果図である。
【図2】実施例４におけるＥＢＴ－１のゴミ浸出液の膜濃縮液に対する高度脱窒効率図である。
【図3】ゴミ浸出液の膜濃縮液の嫌気性／低酸素処理反応器の構造模式図である。
【図4】実施例５におけるＥＢＴ－１のゴミ浸出液の膜濃縮液反応器に対する脱窒強化効率図である。
【発明を実施するための形態】
【0025】
以下、図面及び具体的な実施例を参照して本発明の技術案をさらに説明する。
【0026】
実施例１：菌株の分離及び同定
菌株ＥＢＴ－１は、ゴミ焼却プラントのゴミ浸出液汚水処理システムの活性汚泥からスクリーニングされた、脱窒活性を有する好気性脱窒細菌である。
菌株ＥＢＴ－１は、ゴミ焼却プラントのゴミ浸出液汚水処理システムの活性汚泥からスクリーニングされた、脱窒活性を有する好気性脱窒細菌である。
【0027】
分離スクリーニング方法：ゴミ浸出液（高塩分）汚水処理生化学システムから活性汚泥を取り出し、活性汚泥５ｇを硝酸態窒素濃度１００ｍｇ／ＬのＤＭ無機塩培地（培地中の塩分＞３％）に接種し、温度３５℃、回転数１５０ｒｐｍの振とう機にて１日間培養し、第一菌液を得て、５％（体積分率）の接種量で第一菌液を硝酸態窒素濃度２００ｍｇ／ＬのＤＭ無機塩培地（培地中の塩分＞３％）に接種し、温度３５℃、回転数１５０ｒｐｍの振とう機にて１日間培養し、第二菌液を得て、５％の接種量で第二菌液を硝酸態窒素濃度３００ｍｇ／ＬのＤＭ無機塩培地に接種し、温度３５℃、回転数１５０ｒｐｍの振とう機にて１日間培養し、第三菌液を得て、第三菌液を吸い取り、ＤＭ無機塩固体培地（培地中の塩分＞３％）に塗布し、３５℃で静置して培養し、生長速度が速い菌株を選択し、生長速度が速い菌株を、ブロモチモールブルーを含有するＤＭ無機塩固体培地（培地中の塩分＞３％）にてストリークし、３５℃で静置して培養し、平板が青くなった菌株を得て、スクリーニングした菌株をＤＭ無機塩固体培地（培地中の塩分＞３％）にてさらにストリークして精製し、単一コロニーを選択し、このコロニーは本発明のシュードモナス・バレアリカであり、菌株番号がＥＢＴ－１であり、該菌株ＥＢＴ－１は、高塩分のゴミ浸出液の膜濃縮液に対する効率的な生物脱窒を実現できる。
【0028】
菌株ＥＢＴ－１のコロニーの特徴は以下のとおりである。分離精製後、ＬＢ培地にて、３５℃の好気性条件下で生長が良好であり、コロニーは不規則的な円形をしており、直径が２～５ｍｍであり、白色で不透明であり、表面に外部から内部への皺があり、グラム染色したところ陰性を示し、顕微鏡で観察すると細胞の形状が棒状である。
【0029】
ＰＣＲ増幅を行って得たＥＢＴ－１菌１６Ｓ ｒＲＮＡフルシーケンスは以下のとおりである（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１）。
【0030】
gcttgcggcagactacacatgcagtcgagcggcagcgggtccttcgggatgccggcgagcggcggacgggtgagtaatgcctaggaatctgcctggtagtgggggataactcggggaaactcgagctaataccgcatacgtcctacgggagaaagcgggggatcttcggacctcgcgctaccagatgagcctaggtcggattagctagttggtgaggtaaaggctcaccaaggcgacgatccgtagctggtctgagaggatgatcagccacactggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattggacaatgggcgaaagcctgatccagccatgccgcgtgtgtgaagaaggtcttcggattgtaaagcactttaagttgggaggaagggcagtaagctaatatcttgctgttttgacgttaccgacagaataagcaccggctaacttcgtgccagcagccgcggtaatacgaagggtgcaagcgttaatcggaattactgggcgtaaagcgcgcgtaggtggtttgataagttggatgtgaaagccccgggctcaacctgggaattgcatccaaaactgtctgactagagtatggcagagggtggtggaatttcctgtgtagcggtgaaatgcgtagatataggaaggaacaccagtggcgaaggcgaccatctgggctaatactgacactgaggtgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgtcgactagccgttgggatccttgagatcttagtggcgcagctaacgcattaagtcgaccgcctggggagtacggccgcaaggttaaaactcaaatgaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggccttgacatgcagagaactttccagagatggattggtgccttcgggaactctgacacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgtaacgagcgcaacccttgtccttagttaccagcacgttaaggtgggcactctaaggagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcatcatggcccttacggcctgggctacacacgtgctacaatggtcggtacaaagggttgccaagccgcgaggtggagctaatcccataaaaccgatcgtagtccggatcgcagtctgcaactcgactgcgtgaagtcggaatcgctagtaatcgtgaatcagaatgtcacggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgggtagtgggttgctccagaagtaagcgaagtctaaccttcggggggacggtaccacggagatactg
【0031】
比較したところ、その遺伝子配列はシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）との類似性が９９％以上と高く、このため、得られた菌株がシュードモナス・バレアリカであると同定される。
【0032】
実施例２：本発明のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１の拡大培養
拡大培養に使用される培地は、成分として、水１Ｌあたりコーンスティープリカー（乾燥粉末）１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム１０ｇ、無水酢酸ナトリウム２．５ｇ、リン酸水素二カリウム１ｇ及び硫酸マグネシウム０．０３ｇを含み、培地の初期ｐＨが６．５である。
拡大培養に使用される培地は、成分として、水１Ｌあたりコーンスティープリカー（乾燥粉末）１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム１０ｇ、無水酢酸ナトリウム２．５ｇ、リン酸水素二カリウム１ｇ及び硫酸マグネシウム０．０３ｇを含み、培地の初期ｐＨが６．５である。
【0033】
培地の製造プロセス：コーンスティープリカー（乾燥粉末）１０ｇ、酵母エキス５ｇ、塩化ナトリウム１０ｇ、無水酢酸ナトリウム２．５ｇ、リン酸水素二カリウム１ｇ及び硫酸マグネシウム０．０３ｇを水１０００ｇに溶解し、アルカリでそのｐＨを６．５に調整し、１２１℃で２０ｍｉｎ殺菌し、培地を得た。
【0034】
シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１菌母液を３％～５％（体積分率）の接種量で培地に接種し、３０～３５℃で２８～３２ｈ培養した。
【0035】
本発明の培地を用いて拡大培養した後、拡大培養した菌液を希釈平板法でカウントしたところ、目標有効菌量が５×１０８～１×１０９ＣＦＵ／ｍＬである。
【0036】
実施例３：本発明のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１の塩分適応性の検討
実施例２で培養したシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１拡大培養液を６０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離し、上清液を捨てて、活性化した菌体固体を得た。０％、３％、７％、１０％の４つの塩分の勾配を設定した。塩分測定給水１Ｌあたり、質量分率で、グルコース６．１ｇ、ＫＮＯ３ ６．０７ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏ ６．０ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ １．０ｇ、ＮａＣｌ（所望の塩分に応じて調整される）が成分として含有される。遠心分離菌体固体を０．４％の接種量で塩分測定給水に接種し、２５０ｍＬ青蓋付瓶にて３０℃、１５０ｒｐｍで振とう処理を行う。
実施例２で培養したシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１拡大培養液を６０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離し、上清液を捨てて、活性化した菌体固体を得た。０％、３％、７％、１０％の４つの塩分の勾配を設定した。塩分測定給水１Ｌあたり、質量分率で、グルコース６．１ｇ、ＫＮＯ３ ６．０７ｇ、ＫＨ２ＰＯ４ １．５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４・３Ｈ２Ｏ ６．０ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ １．０ｇ、ＮａＣｌ（所望の塩分に応じて調整される）が成分として含有される。遠心分離菌体固体を０．４％の接種量で塩分測定給水に接種し、２５０ｍＬ青蓋付瓶にて３０℃、１５０ｒｐｍで振とう処理を行う。
【0037】
異なる塩分の条件反応における全窒素の変化を検出し、結果を図１に示す。図１に示すように、シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１の脱窒速度は、塩分の増加に伴って低下し、５％塩分以下では、全窒素除去率は９０％以上に達し、７％塩分では、全窒素除去率は５０％以上である。本特許のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は、高塩分ゴミ浸出液の生化学システムにおける汚泥から得られるものであり、それ自体は一定の耐塩特性を有しており、効率的な脱窒馴養及びスクリーニングにより得られるものであり、自体は高塩耐性、脱窒性能がある。
【0038】
実施例４：本発明のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１のゴミ浸出液の膜濃縮液に対する生物脱窒効果の分析
実施例２で培養したシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１拡大培養液の菌液を新しい遠心分離管に移し、６０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離し、上清液を捨てて、活性化した菌体固体を得て、きれいな青蓋付瓶を準備し、青蓋付瓶にゴミ浸出液の膜濃縮液（塩分３．５％）を２００ｍＬ加え、次に無水酢酸ナトリウムを炭素源として加え、廃液中の炭素と窒素の比を４：１とし、最後に、シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を０．４％の接種量で加え、３０℃、１５０ｒｐｍで振とう処理した。
実施例２で培養したシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１拡大培養液の菌液を新しい遠心分離管に移し、６０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離し、上清液を捨てて、活性化した菌体固体を得て、きれいな青蓋付瓶を準備し、青蓋付瓶にゴミ浸出液の膜濃縮液（塩分３．５％）を２００ｍＬ加え、次に無水酢酸ナトリウムを炭素源として加え、廃液中の炭素と窒素の比を４：１とし、最後に、シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１を０．４％の接種量で加え、３０℃、１５０ｒｐｍで振とう処理した。
【0039】
反応中のゴミ浸出液の膜濃縮液中の全窒素の変化を検出し、結果を図２に示す。図２に示すように、７２ｈ処理すると、ゴミ浸出液の膜濃縮液中の全窒素濃度は初期濃度１１１０．７４ｍｇ／Ｌから１３．３７ｍｇ／Ｌに下がり、このことから分かるように、本発明のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は、ゴミ浸出液の膜濃縮液に対する全窒素除去率が９９％と高い。シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は通性嫌気性菌であり、また好気性脱窒特性を有し、低酸素環境でも高い脱窒機能を有する。
【0040】
実施例５：本発明のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１のゴミ浸出液の膜濃縮液に対する生物脱窒の強化効果の分析
ゴミ浸出液の膜濃縮液の嫌気性／低酸素反応器の構造は図３に示される。ゴミ浸出液の膜濃縮液及び外添炭素源混合液が反応器の底部から入り、活性汚泥による嫌気性／低酸素反応を経た後、反応器の上部から流出する。反応器は、有効容積が２Ｌ、水理学的滞留時間が１２ｈ、汚泥濃度が６００００ｍｇ／Ｌ～８００００ｍｇ／Ｌ、外添の炭素源の炭素と窒素の比が４：１であり、給水と排出を連続的に行い、排出水の窒素含有化合物の指標を毎日検出し、脱窒効率を検出し、反応器からの排出水の水質が安定的になった後、実施例２において培養したシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１拡大培養液菌液を０．２％の接種量で反応器汚泥に投入し、菌剤投入前後に安定的に排出する水の脱窒効率を追跡する。
ゴミ浸出液の膜濃縮液の嫌気性／低酸素反応器の構造は図３に示される。ゴミ浸出液の膜濃縮液及び外添炭素源混合液が反応器の底部から入り、活性汚泥による嫌気性／低酸素反応を経た後、反応器の上部から流出する。反応器は、有効容積が２Ｌ、水理学的滞留時間が１２ｈ、汚泥濃度が６００００ｍｇ／Ｌ～８００００ｍｇ／Ｌ、外添の炭素源の炭素と窒素の比が４：１であり、給水と排出を連続的に行い、排出水の窒素含有化合物の指標を毎日検出し、脱窒効率を検出し、反応器からの排出水の水質が安定的になった後、実施例２において培養したシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１拡大培養液菌液を０．２％の接種量で反応器汚泥に投入し、菌剤投入前後に安定的に排出する水の脱窒効率を追跡する。
【0041】
ゴミ浸出液の膜濃縮液の嫌気性／低酸素反応器に菌剤を投入する前後に安定的に排出する水の脱窒効率の結果を図４に示す。図４に示すように、菌剤投入前（図４の第Ｉ段階）に、ゴミ浸出液の膜濃縮液の嫌気性／低酸素反応器への給水の全窒素濃度が５４７．４８ｍｇ／Ｌであり、脱窒活性汚泥が過量の炭素源によるショックを受けているので、コミュニティの構造が変わり、これにより汚泥の脱窒活性が劣り、排出水の全窒素除去率が３０％～５０％の間で変動し、投入されるシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１菌剤と反応器の汚泥が十分に混合されると（図４の第ＩＩ段階）、排出する水の全窒素除去率が効果的に向上し、適応周期の増加に伴い、全窒素除去率が明らかに向上し、最終的な排出水の全窒素除去率が９８．８９％に達し、次に、給水の全窒素濃度を１０００ｍｇ／Ｌ（図４の第ＩＩＩ段階）に向上させ、このようにしても、システムの全窒素除去率が９０％以上に安定化されている。シュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１菌剤は、高効率の脱窒性能を有し、脱窒活性汚泥システムに添加されると、該システムにおける脱窒脱窒菌群落の構造を豊富にし、汚泥の脱窒性能を大幅に向上させる。そして、該菌剤は、ゴミ浸出液の膜濃縮液に効果的に適用でき、システムにおいて生長して繁殖し、流失しにくく、それにより、排出水の水質の安定性が確保される。
【0042】
本発明のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は、ゴミ浸出液の膜濃縮液の全窒素除去効率が高く、ゴミ浸出液の膜濃縮液の高度脱窒という難問を効果的に解決できる。そして、本発明のシュードモナス・バレアリカ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｂａｌｅａｒｉｃａ）ＥＢＴ－１は、既存の汚泥システムに添加されると、汚泥システムの脱窒効率を効果的に向上できる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【配列表】
【国際調査報告】