特表 2022-512538 ＥＢＶ関連がんの処置のための抗ＬＭＰ２ ＴＣＲ－Ｔ細胞療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-07

(54)【発明の名称】ＥＢＶ関連がんの処置のための抗ＬＭＰ２ ＴＣＲ－Ｔ細胞療法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20220131BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20220131BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 15/861 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 15/869 20060101ALI20220131BHJP

   C07K 14/725 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220131BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20220131BHJP

   A61K 35/761 20150101ALI20220131BHJP

   A61K 35/763 20150101ALI20220131BHJP

   C07K 14/55 20060101ALN20220131BHJP

   C07K 14/57 20060101ALN20220131BHJP

   C07K 14/525 20060101ALN20220131BHJP

   C07K 14/535 20060101ALN20220131BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20220131BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12

C12N5/10 ZNA

C12N5/0783

C12N15/867 Z

C12N15/861 Z

C12N15/864 100Z

C12N15/869 Z

C07K14/725

A61P35/00

A61K35/17 A

A61P35/02

A61K45/00 101

A61P43/00 121

A61K35/76

A61K35/761

A61K35/763

C07K14/55

C07K14/57

C07K14/525

C07K14/535

C07K16/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021510452

(86)(22)【出願日】2019-11-26

(85)【翻訳文提出日】2021-05-26

(86)【国際出願番号】 US2019063310

(87)【国際公開番号】W WO2020112815

(87)【国際公開日】2020-06-04

(31)【優先権主張番号】62/771,653

(32)【優先日】2018-11-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】507189666

【氏名又は名称】デューク ユニバーシティ

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(72)【発明者】

【氏名】ワン， シャオ－ファン

(72)【発明者】

【氏名】アレクサンダー， ピーター

(72)【発明者】

【氏名】リー， チー－ジン

(72)【発明者】

【氏名】ワン， グオピン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

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4B065CA25

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4C087BC83

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4C087NA14

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4C087ZB27

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

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4H045DA12

4H045DA14

4H045DA18

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、抗ＬＭＰ２ ＴＣＲ－Ｔ細胞集団を含む、ＥＢＶ関連がんの処置のための組成物、ならびにそれを作製および使用する方法を提供する。本開示は、がんを処置する方法を提供する。より詳細には、本開示は、潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）に対して特異的な操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を含むＴ細胞を含む組成物、ならびにこれを作製および使用する方法、ならびにＬＭＰ２抗原を標的化するＴＣＲを含む組成物を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を含むＴ細胞の集団であって、ここで前記操作されたＴＣＲは、潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）抗原に応答して、Ｔ細胞を活性化する、Ｔ細胞の集団。

【請求項2】

前記操作されたＴＣＲは、配列番号０３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＴ細胞の集団。

【請求項3】

前記操作されたＴＣＲは、配列番号０９のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＴ細胞の集団。

【請求項4】

前記ＬＭＰ２抗原は、ＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫ（配列番号０１）の配列を含む、請求項１～３のいずれかに記載のＴ細胞の集団。

【請求項5】

前記Ｔ細胞の集団は、治療上有効な量の、被験体においてＬＭＰ２を含むがんの処置のための細胞を含む、請求項１～４のいずれかに記載のＴ細胞の集団。

【請求項6】

前記被験体は、ヒト白血球抗原サブタイプＡ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）を発現する、請求項１～５のいずれかに記載のＴ細胞の集団。

【請求項7】

前記Ｔ細胞の集団のうちの少なくとも一部は、１種またはこれより多くのサイトカインを生成するかまたは生成する能力を有する、請求項１～６のいずれかに記載のＴ細胞の集団。

【請求項8】

前記１種またはこれより多くのサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、グランザイムＡ、グランザイムＢ、およびＧＭ－ＣＳＦからなる群より選択される、請求項７に記載のＴ細胞の集団。

【請求項9】

前記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）、リンパ腫、胃がん、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞癌、卵巣がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、および白血病からなる群より選択される、請求項６～８のいずれかに記載のＴ細胞の集団。

【請求項10】

前記がんは、ＥＢＶ関連がんである、請求項９に記載のＴ細胞の集団。

【請求項11】

前記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）である、請求項９に記載のＴ細胞の集団。

【請求項12】

前記がんは、リンパ腫である、請求項９に記載のＴ細胞の集団。

【請求項13】

前記がんは、胃がんである、請求項９に記載のＴ細胞の集団。

【請求項14】

請求項１～１３のいずれかに記載のＴ細胞の集団、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。

【請求項15】

前記薬学的に受容可能なキャリアは、治療上有効な量の、ＬＭＰ２を含むがんの処置のための細胞の維持を支援する、請求項１４に記載の薬学的組成物。

【請求項16】

少なくとも１種の治療剤をさらに含む、請求項１４または１５に記載の薬学的組成物。

【請求項17】

ＬＭＰ２を含むがんに罹患している被験体を処置する方法であって、ここで前記方法は、前記被験体に、治療上有効な量の、請求項１～１３のいずれかに記載のＴ細胞の集団または請求項１４～１６のいずれかに記載の薬学的組成物を投与する工程を包含し、ここで前記投与は、前記がんに対する抗腫瘍応答を誘導する、方法。

【請求項18】

前記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）、リンパ腫、胃がん、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞癌、卵巣がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、および白血病からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記がんは、ＥＢＶ関連がんである、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）である、請求項１８に記載の方法。

【請求項21】

前記がんは、リンパ腫である、請求項１８に記載の方法。

【請求項22】

前記がんは、胃がんである、請求項１８に記載の方法。

【請求項23】

前記抗腫瘍応答は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％、腫瘍容積の低減を生じる、請求項１７～２２のいずれかに記載の方法。

【請求項24】

配列番号０３のアミノ酸配列を含む操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子。

【請求項25】

前記ポリヌクレオチドは、配列番号０８の核酸配列を含む、請求項２４に記載の単離された核酸。

【請求項26】

請求項２５に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項27】

配列番号０９のアミノ酸配列を含む操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸。

【請求項28】

前記ポリヌクレオチドは、配列番号１４の核酸配列を含む、請求項２７に記載の単離された核酸。

【請求項29】

請求項２８に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項30】

前記ベクターは、プラスミド、コスミド、人工染色体（例えば、酵母人工染色体（ＹＡＣ）または細菌人工染色体（ＢＡＣ））、およびウイルス（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、およびヘルペスウイルス）からなる群より選択される、請求項２６または請求項２９に記載のベクター。

【請求項31】

Ｔ細胞の集団を調製する方法であって、前記方法は、
（１）単離されたＴ細胞を、請求項２４もしくは２７に記載の単離された核酸または請求項２６もしくは２９に記載のベクターでトランスフェクトまたは形質導入する工程；および
（２）トランスフェクションまたは形質導入後の前記Ｔ細胞を拡大増殖する工程であって、ここで前記Ｔ細胞は、人工ＡＰＣによって提示される抗ＣＤ３、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８、またはＬＭＰタンパク質の存在下で培養することによって拡大増殖される、工程、
を包含する、方法。

【請求項32】

前記単離されたＴ細胞は、ヒトから単離される、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記ヒトは、ＬＭＰ２を含むがんに罹患している被験体である、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

ＬＭＰ２を含む前記がんに罹患している前記被験体は、ヒト白血球抗原サブタイプＡ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）を発現する、請求項３１～３３のいずれかに記載の方法。

【請求項35】

潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）抗原を含む腫瘍の増殖の阻害を、それを必要とする患者において行う方法であって、ここで前記方法は、前記患者に、治療上有効な量の、配列番号４または１０の配列を有するＴＣＲα鎖、および配列番号６または１２の配列を有するＴＣＲβ鎖を有する操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を含むＴ細胞の集団を投与する工程を包含し、ここで前記ＬＭＰ２抗原を含む前記腫瘍の増殖は阻害される、方法。

【請求項36】

前記腫瘍は、ヒト白血球抗原サブタイプＡ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）を含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記腫瘍は、ＥＢＶ関連がんに由来する、請求項３５に記載の方法。

【請求項38】

前記がんは、鼻咽腔癌、リンパ腫、または胃がんである、請求項３５または３６に記載の方法。

【請求項39】

前記操作されたＴＣＲは、配列番号４のＴＣＲα鎖および配列番号６のＴＣＲβ鎖を含む、請求項３５～３８のいずれかに記載の方法。

【請求項40】

前記ＴＣＲα鎖は、配列 ＡＶＶＮＮＮＤＭＲＦＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ３αを含み、前記ＴＣＲβ鎖は、配列 ＡＳＳＰＧＲＷＹＥＱＦ（配列番号７）を含むＣＤＲ３βを含む、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記操作されたＴＣＲは、配列番号１０のＴＣＲα鎖および配列番号１２のＴＣＲβ鎖を含む、請求項３５～３８のいずれかに記載の方法。

【請求項42】

前記ＴＣＲα鎖は、配列 ＡＶＬＮＮＮＤＭＲＦＧ（配列番号１１）を含むＣＤＲ３αを含み、前記ＴＣＲβ鎖は、配列 ＡＳＳＱＧＲＷＹＥＡＦ（配列番号１３）を含むＣＤＲ３βを含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

配列番号０３に示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を共有するアミノ酸を含む、操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）。

【請求項44】

前記ＴＣＲは、配列番号４のＴＣＲα鎖および配列番号６のＴＣＲβ鎖を含む、請求項４３に記載の操作されたＴＣＲ。

【請求項45】

前記ＴＣＲα鎖は、配列 ＡＶＶＮＮＮＤＭＲＦＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ３αを含み、前記ＴＣＲβ鎖は、配列 ＡＳＳＰＧＲＷＹＥＱＦ（配列番号７）を含むＣＤＲ３βを含む、請求項４４に記載の操作されたＴＣＲ。

【請求項46】

配列番号０９に示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を共有するアミノ酸を含む、操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）。

【請求項47】

前記ＴＣＲは、配列番号１０のＴＣＲα鎖および配列番号１２のＴＣＲβ鎖を含む、請求項４６に記載の操作されたＴＣＲ。

【請求項48】

前記ＴＣＲα鎖は、配列 ＡＶＬＮＮＮＤＭＲＦＧ（配列番号１１）を含むＣＤＲ３αを含み、前記ＴＣＲβ鎖は、配列 ＡＳＳＱＧＲＷＹＥＡＦ（配列番号１３）を含むＣＤＲ３βを含む、請求項４７に記載の操作されたＴＣＲ。

【請求項49】

前記操作されたＴＣＲは、ＬＭＰ２抗原に特異的に結合する、請求項４３～４８のいずれかに記載の操作されたＴＣＲ。

【請求項50】

前記ＬＭＰ２抗原は、ＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫ（配列番号１）を含む、請求項４９に記載の操作されたＴＣＲ。

【請求項51】

請求項４３～５０のいずれかに記載の操作されたＴＣＲを発現するＴ細胞の集団、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。

【請求項52】

ＬＭＰ２を含むがんに罹患している被験体においてＴ細胞応答を誘導する方法であって、ここで前記方法は、前記被験体に、治療上有効な量の、請求項４３～５０のいずれかに記載の操作されたＴＣＲを含むＴ細胞の集団または請求項５１に記載の薬学的組成物を投与する工程を包含し、ここで前記投与は、前記がんに対する抗腫瘍応答を誘導する、方法。

【請求項53】

前記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）、リンパ腫、胃がん、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞癌、卵巣がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、および白血病からなる群より選択される、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記がんは、ＥＢＶ関連がんである、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）である、請求項５２に記載の方法。

【請求項56】

前記がんは、リンパ腫である、請求項５２に記載の方法。

【請求項57】

前記がんは、胃がんである、請求項５２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

優先権
本出願は、２０１８年１１月２７日出願の米国仮特許出願第６２／７７１，６５３号（これは、その全体において本明細書に参考として援用される）の利益を主張する。

【0002】

発明の背景
発明の分野
本開示は、がんを処置する方法を提供する。より詳細には、本開示は、潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）に対して特異的な操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を含むＴ細胞を含む組成物、ならびにこれを作製および使用する方法、ならびにＬＭＰ２抗原を標的化するＴＣＲを含む組成物を提供する。

【背景技術】

【0003】

関連技術の説明
Ｔ細胞レセプター操作Ｔ細胞療法は、Ｔ細胞を遺伝的に改変してがんを処置する養子Ｔ細胞免疫療法の１タイプである。Ｔ細胞レセプター操作Ｔ細胞療法は、固形腫瘍を処置するにあたって有望であると示されている。１つの固形腫瘍タイプである鼻咽腔癌（ＮＰＣ）は、中国南部および南アジアにおいて有病率が高く、後期ステージに関しては、処置選択肢がほとんどない。現在の標準治療は、非特異的毒性によって制限されている一方で、ＮＰＣはしばしば、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）感染と関連しており、これは、養子免疫療法の優れた標的となる。

【0004】

エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）は、エプスタインバーウイルスのウイルスタンパク質である。ＬＭＰ２抗原は、潜在的ＴＣＲ Ｔ細胞標的であるので、ＬＭＰ２抗原を含む細胞の標的化された排除は、正常細胞に対する毒性が制限された状態で、強い抗腫瘍特性を有し得る。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

要旨
以下の詳細な説明においてさらに記載される概念の選択を導入するために、要旨が提供される。この要旨は、特許請求された主題の重要なまたは本質的な特徴を特定することを意図せず、特許請求された主題の範囲を限定する助けとして使用されることも意図されない。

【0006】

ＴＣＲ Ｔ細胞療法は、Ｔ細胞が単離および改変され、その結果、改変されたＴ細胞ががん細胞を攻撃する処置の１タイプである。単離されたＴ細胞は、患者のがん細胞上のＬＭＰ２を特異的に認識するＴＣＲを発現するように操作される。複数のＴＣＲ Ｔ細胞が、研究室の中で増殖され、患者に、代表的には注入によって与えられる。本発明者らは、抗原特異性を再指向したＴ細胞での次世代免疫細胞療法を実行して、免疫療法において使用され得るＴ細胞集団を生成するために必要とされる時間を短縮した。

【0007】

一局面において、本開示は、操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を含むＴ細胞の集団であって、ここで上記操作されたＴＣＲは、潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）抗原に応じてＴ細胞を活性化するＴ細胞の集団を提供する。ある特定の実施形態において、上記操作されたＴＣＲは、配列番号０３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、上記操作されたＴＣＲは、配列番号０９のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、上記ＬＭＰ２抗原は、ＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫ（配列番号０１）の配列を含む。

【0008】

ある特定の実施形態において、上記Ｔ細胞の集団は、治療上有効な量の、被験体においてＬＭＰ２を含むがんの処置のための細胞を含む。いくつかの実施形態において、上記被験体は、ヒト白血球抗原サブタイプＡ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）を発現する。

【0009】

ある特定の実施形態において、上記Ｔ細胞の集団のうちの少なくとも一部は、１種またはこれより多くのサイトカインを生成するかまたは生成する能力を有する。いくつかの実施形態において、上記１種またはこれより多くのサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、グランザイムＡ、グランザイムＢ、およびＧＭ－ＣＳＦからなる群より選択される。

【0010】

ある特定の実施形態において、上記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）、リンパ腫、胃がん、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞癌、卵巣がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、および白血病からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、上記がんは、ＥＢＶ関連がんである。ある特定の実施形態において、上記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）である。ある特定の実施形態において、上記がんは、リンパ腫である。ある特定の実施形態において、上記がんは、胃がんである。

【0011】

別の局面において、本開示は、本明細書で開示されるとおりのＴ細胞の集団および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を提供する。ある特定の実施形態において、上記薬学的に受容可能なキャリアは、治療上有効な量の、ＬＭＰ２を含むがんの処置のための細胞の維持を支援する。いくつかの実施形態において、上記薬学的組成物は、少なくとも１種の治療剤をさらに含む。

【0012】

なお別の局面において、本開示は、ＬＭＰ２を含むがんに罹患している被験体を処置する方法であって、ここで上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、本明細書で開示されるとおりのＴ細胞の集団または本明細書で開示されるとおりの薬学的組成物を投与する工程を包含し、ここで上記投与は、がんに対する抗腫瘍応答を誘導する、方法を提供する。ある特定の実施形態において、上記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）、リンパ腫、胃がん、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞癌、卵巣がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、および白血病からなる群より選択される。ある特定の実施形態において、上記がんは、ＥＢＶ関連がんである。ある特定の実施形態において、上記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）である。ある特定の実施形態において、上記がんは、リンパ腫である。ある特定の実施形態において、上記がんは、胃がんである。ある特定の実施形態において、上記抗腫瘍応答は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％， 少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％、腫瘍容積の低減を生じる。

【0013】

別の局面において、本開示は、配列番号０３のアミノ酸配列を含む操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。ある特定の実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、配列番号０８の核酸配列を含む。

【0014】

別の局面において、本開示は、配列番号０９のアミノ酸配列を含む操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸を提供する。ある特定の実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、配列番号１４の核酸配列を含む。

【0015】

なお別の局面において、本開示は、本明細書で開示されるとおりの核酸を含むベクターを提供する。ある特定の実施形態において、上記ベクターは、プラスミド、コスミド、人工染色体（例えば、酵母人工染色体（ＹＡＣ）または細菌人工染色体（ＢＡＣ））、およびウイルス（例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、およびヘルペスウイルス）からなる群より選択される。

【0016】

一局面において、本開示は、Ｔ細胞の集団を調製する方法であって、ここで上記方法は、（１）単離されたＴ細胞を、本明細書で開示されるとおりの単離された核酸またはベクターでトランスフェクトまたは形質導入する工程；および（２）上記トランスフェクションまたは形質導入後のＴ細胞を拡大増殖する工程であって、ここで上記Ｔ細胞は、人工ＡＰＣによって提示される抗ＣＤ３、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８、またはＬＭＰタンパク質の存在下で培養することによって拡大増殖される工程、を包含する方法を提供する。ある特定の実施形態において、上記単離されたＴ細胞は、ヒトから単離される。ある特定の実施形態において、上記ヒトは、ＬＭＰ２を含むがんに罹患している被験体である。ある特定の実施形態において、上記ＬＭＰ２を含むがんに罹患している被験体は、ヒト白血球抗原サブタイプＡ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）を発現する。

【0017】

別の局面において、本開示は、潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）抗原を含む腫瘍の増殖の阻害を、それを必要性とする患者において行う方法であって、ここで上記方法は、上記患者に、治療上有効な量の、配列番号４または１０の配列を有するＴＣＲα鎖および配列番号６または１２の配列を有するＴＣＲβ鎖を有する操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を含むＴ細胞の集団を投与する工程を包含し、ここで上記ＬＭＰ２抗原を含む腫瘍の増殖は、阻害される方法を提供する。ある特定の実施形態において、上記腫瘍は、ヒト白血球抗原サブタイプＡ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）を含む。ある特定の実施形態において、上記腫瘍は、ＥＢＶ関連がんに由来する。ある特定の実施形態において、上記がんは、鼻咽腔癌、リンパ腫、または胃がんである。

【0018】

ある特定の実施形態において、上記操作されたＴＣＲは、配列番号４のＴＣＲα鎖および配列番号６のＴＣＲβ鎖を含む。ある特定の実施形態において、上記ＴＣＲα鎖は、配列 ＡＶＶＮＮＮＤＭＲＦＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ３αを含み、上記ＴＣＲβ鎖は、配列 ＡＳＳＰＧＲＷＹＥＱＦ（配列番号７）を含むＣＤＲ３βを含む。

【0019】

ある特定の実施形態において、上記操作されたＴＣＲは、配列番号１０のＴＣＲα鎖および配列番号１２のＴＣＲβ鎖を含む。ある特定の実施形態において、上記ＴＣＲα鎖は、配列 ＡＶＬＮＮＮＤＭＲＦＧ（配列番号１１）を含むＣＤＲ３αを含み、上記ＴＣＲβ鎖は、配列 ＡＳＳＱＧＲＷＹＥＡＦ（配列番号１３）を含むＣＤＲ３βを含む。

【0020】

なお別の局面において、本開示は、操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）であって、ここで上記ＴＣＲは、配列番号０３に示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を共有するアミノ酸を含む操作されたＴＣＲを提供する。ある特定の実施形態において、上記ＴＣＲは、配列番号４のＴＣＲα鎖および配列番号６のＴＣＲβ鎖を含む。ある特定の実施形態において、上記ＴＣＲα鎖は、配列 ＡＶＶＮＮＮＤＭＲＦＧ（配列番号５）を含むＣＤＲ３αを含み、上記ＴＣＲβ鎖は、配列 ＡＳＳＰＧＲＷＹＥＱＦ（配列番号７）を含むＣＤＲ３βを含む。

【0021】

なお別の局面において、本開示は、操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）であって、ここで上記ＴＣＲは、配列番号０９に示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を共有するアミノ酸を含む操作されたＴＣＲを提供する。ある特定の実施形態において、上記ＴＣＲは、配列番号１０のＴＣＲα鎖および配列番号１２のＴＣＲβ鎖を含む。ある特定の実施形態において、上記ＴＣＲα鎖は、配列ＡＶＬＮＮＮＤＭＲＦＧ（配列番号１１）を含むＣＤＲ３αを含み、上記ＴＣＲβ鎖は、配列 ＡＳＳＱＧＲＷＹＥＡＦ（配列番号１３）を含むＣＤＲ３βを含む。

【0022】

ある特定の実施形態において、本明細書で開示されるとおりの操作されたＴＣＲは、ＬＭＰ２抗原に特異的に結合する。ある特定の実施形態において、上記ＬＭＰ２抗原は、ＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫ（配列番号１）を含む。

【0023】

一局面において、本開示は、本明細書で開示されるとおりの操作されたＴＣＲを発現するＴ細胞の集団および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を提供する。

【0024】

別の局面において、本開示は、ＬＭＰ２を含むがんに罹患している被験体においてＴ細胞応答を誘導する方法であって、ここで上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、本明細書で開示されるとおりの操作されたＴＣＲを含むＴ細胞の集団、または本明細書で開示されるとおりの薬学的組成物を投与する工程を包含し、ここで上記投与は、上記がんに対する抗腫瘍応答を誘導する、方法を提供する。ある特定の実施形態において、上記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）、リンパ腫、胃がん、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞癌、卵巣がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、および白血病からなる群より選択される。ある特定の実施形態において、上記がんは、ＥＢＶ関連がんである。ある特定の実施形態において、上記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）である。ある特定の実施形態において、上記がんは、リンパ腫である。ある特定の実施形態において、上記がんは、胃がんである。

【0025】

本開示の別の局面は、本明細書で記載および例証される全てを提供する。

【0026】

本開示の前述の局面および他の特長は、本明細書において添付の図面とともに考慮して、以下の説明において説明される。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】図１Ａ～１Ｂは、候補ＬＭＰ２－Ａ１１ ＴＣＲの発現および活性を示すフローサイトメトリーの結果である。（Ａ）候補ＴＣＲ配列をレトロウイルスベクターにクローニングし、そのベクターをＪｕｒｋａｔ細胞に形質導入した。ＴＣＲｂ陽性細胞のパーセンテージを示す。（Ｂ）図１ＡにおけるＪｕｒｋａｔ細胞株を、ＨＬＡ－Ａ１１－ＬＭＰ２ペプチドリンカーを発現するように操作したＲａｍｏｓリンパ腫細胞と共培養した。Ｔ細胞活性化を、ＣＤ６９発現を測定することによって定量した。ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－０３として同定されるＴＣＲを、ＬＭＰ２特異的として同定した。

【0028】

【図2】図２Ａ～２Ｂは、候補ＬＭＰ２－Ａ１１ ＴＣＲの発現および活性を示すフローサイトメトリーの結果である。（Ａ）候補ＴＣＲ配列をレトロウイルスベクターにクローニングし、そのベクターをＪｕｒｋａｔ細胞に形質導入した。ＴＣＲｂ陽性細胞のパーセンテージを示す。（Ｂ）１ＡにおけるＪｕｒｋａｔ細胞株を、ＨＬＡ－Ａ１１－ＬＭＰ２ペプチドリンカーを発現するように操作したＲａｍｏｓリンパ腫細胞と共培養した。Ｔ細胞活性化を、ＣＤ６９発現を測定することによって定量した。ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５として同定されるＴＣＲを、ＬＭＰ２特異的として同定した。

【0029】

【図3】図３Ａ～３Ｂは、ＬＭＰ２－Ａ１１ ＴＣＲ－Ｔ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示すグラフである。ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－０３（Ａ）またはＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５（Ｂ）を発現するように操作したＰＢＭＣを、ＨＬＡ－Ａ１１またはＨＬＡ－Ａ２４に連結したＬＭＰ２ペプチドを発現するＲａｍｏｓ細胞の混合集団と共培養した。競合的殺滅パーセンテージを、（１－Ａ１１：Ａ２４）×１００として計算した。

【0030】

【図4】図４Ａ～４Ｃは、ＬＭＰ２－Ａ１１ ＴＣＲ－Ｔ細胞のインビボ抗腫瘍活性を示すグラフである。Ｒａｍｏｓ（Ａ１１）リンパ腫細胞（５×１０^６）を、ＮＳＧマウスに皮下接種した。１３日後、１×１０^７ ＴＣＲ陽性ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－０３またはＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５ ＴＣＲ－Ｔ細胞を、示されるように、尾静脈を介して注射した。腫瘍容積をモニターし、個々に（Ａ）または平均として（Ｂ）プロットした。各群の動物の生存曲線を、（Ｃ）に示す。

【0031】

【図5-1】図５Ａ～５Ｅは、ヒト初回投与（ｆｉｒｓｔ－ｉｎｈｕｍａｎ）Ａｄ５ｆ３５－ＬＭＰ１－２アデノウイルスベクター形質導入ＤＣワクチン治験を示す（Ａ）グラフおよび模式図、ならびにカプラン・マイアー生存分析（Ｂ）である。処置された１６名の進行性ＮＰＣ患者のうち、ＤＣワクチン接種療法は、２名の患者（１２．５％）において＞１８週間の疾患安定化および１名の患者において部分奏効を生じた。（Ｃ～Ｅ） ＥＢＶ拡大増殖Ｔ細胞療法治験の模式図（Ｃ）、患者サンプル収集手順（Ｄ）、およびカプラン・マイアー生存分析。化学療法と養子ＥＢＶ特異的Ｔ細胞療法とを組み合わせる進行性ＮＰＣに関するこのフェーズＩＩ臨床試験は、本開示の１つの実施形態によれば、３名の完全奏効および２２名の部分奏効を伴って、７１．４％という奏効率を達成した。

【図5-2】同上。

【図5-3】同上。

【図5-4】同上。

【図5-5】同上。

【0032】

【図6-1】図６Ａ～６Ｂは、腫瘍抗原特異的ＴＣＲを詳細に吟味するために使用される実験プラットフォームおよびコンピュータープラットフォームを示すグラフおよび画像である。（Ａ）患者由来のＰＢＭＣを、腫瘍抗原が増殖を刺激した後に、直接レパートリー配列決定（ｄｉｒｅｃｔ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）またはＴＣＲ分析のためにアリコートに分けた。これらの２つのデータセットを、それらのモチーフ類似性に基づいて、ＴＣＲを一緒に偏りなくクラスター化するＭｏｔｉｆ分析に供した。このようにして、別個のＴＣＲ配列を用いてすら、刺激していないプールからの試験した腫瘍抗原を認識するＴＣＲを、公知の腫瘍抗原特異性を有するＴＣＲに関連付けた。（Ｂ）共有したＭｏｔｉｆを有する特異的クラスターに由来する腫瘍抗原特異的ＴＣＲの多様性および頻度を、定量化した。この手順およびＢＭＳ ＣｈｅｃｋＭａｔｅ １４３ Ｔｒｉａｌから集めた縦断的サンプル（ｌｏｎｇｉｔｕｄｅ ｓａｍｐｌｅ）を用いて、本発明者らは、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－１＋抗ＣＴＬＡ４処置で処置した膠芽腫患者におけるＴ細胞クローン性拡大増殖の動態をモニターした。ＥＧＦＲエピトープを、腫瘍関連抗原の代表として使用し、ＣＭＶ ｐｐ６５エピトープは、外因性抗原を代表した。

【図6-2】同上。

【0033】

【図7-1】図７Ａ～７Ｄは、ＰＥＰＣＭＶ－ＨＬＡ－Ａ２特異的ＴＣＲクローニングおよびＴＣＲ－Ｔ検証を示すグラフおよびフローサイトメトリー分析である。単一Ｔ細胞ＲＮＡＳｅｑを行って、ＨＬＡ－Ａ２ドナーによって提示されるＣＭＶｐｐ６５エピトープを認識するＴＣＲをクローニングした。（Ａ）クローニングしたＴＣＲα鎖およびβ鎖のＶセグメント利用。（Ｂ）レトロウイルス形質導入によって生成されるヒトＴＣＲ－Ｔ細胞。（Ｃ）ＣＭＶｐｐ６５－ＴＣＲ－Ｔ細胞の抗原特異的活性化。左，刺激していない； 右， 抗原刺激した。ＣＤ１０７は、抗原誘導性脱顆粒（Ｔ細胞媒介性細胞溶解において重要な工程）のマーカーとして使用される。（Ｄ）Ａ２－Ｐ８－０３６ ＴＣＲ－Ｔによる抗原特異的殺滅。マウスＯＴ－１トランスジェニックＴ細胞を、陽性コントロールとして使用した；ＣＭＶｐｐ６５ペプチド抗原負荷なしの標的細胞を、陰性コントロールとして使用した。

【図7-2】同上。

【図7-3】同上。

【発明を実施するための形態】

【0034】

詳細な説明
本開示の原理の理解を促進する目的で、好ましい実施形態に対する参照がここで行われ、具体的文言が、その実施形態を説明するために使用される。にもかかわらず、本開示の範囲の限定がそれによって意図されず、本明細書で例証されるような本開示の変更およびさらなる改変は、本開示が関連する分野の当業者に通常想起されると企図されることは理解される。

【0035】

冠詞「１つの、ある（ａ）」および「１つの、ある（ａｎ）」は、その冠詞の文法上の対象が１または１より多い（すなわち、少なくとも１）ことに言及するために本明細書で使用される。例示によれば、「１つの要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」とは、少なくとも１つの要素を意味し、１より多くの要素を含み得る。

【0036】

用語「約（ａｂｏｕｔ）」とは、望ましい結果に影響を及ぼすことなく、数値範囲の端点を「わずかに上回る（ｓｌｉｇｈｔｌｙ ａｂｏｖｅ）」または「わずかに下回る（ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｂｅｌｏｗ）」可能性があるということを提供することによって、その端点に融通性をもたらすために使用される。

【0037】

本明細書全体を通じて、別段文脈が要求しなければ、語句「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む、包含する、が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｅ）」およびバリエーション（例えば、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む、包含する、が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む、包含する、が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」）は、述べられた構成要素、特徴、要素もしくは工程、または構成要素、特徴、要素もしくは工程の群の包含を暗示するが、いかなる他の完全体もしくは工程の、または他の完全体もしくは工程の群の排除をも暗示しないことが理解される。ある特定の要素を「含む、包含する、が挙げられる」、「含む、包含する」または「有する（ｈａｖｉｎｇ）」として記載される実施形態はまた、それらある特定の要素「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」として企図される。

【0038】

本明細書中の値の範囲の記載は、本明細書で別段記載されなければ、その範囲内に入る各別個の値に個々に言及する簡略表記法として働くことが意図されるに過ぎず、各別個の値は、それが、本明細書で個々に記載されているかのように本明細書に組み込まれる。例えば、濃度範囲が、１％～５０％として述べられる場合、２％～４０％、１０％～３０％、または１％～３％などのような値が、本明細書中で明示的に挙げられていることが意図される。これらは、具体的に何が意図されているかの例に過ぎず、挙げられる最低値と最高値との間ならびにその最高値および最低値を含む数値の全ての考えられる組み合わせが、本開示において明示的に述べられているとみなされるべきである。

【0039】

別段定義されなければ、本明細書で使用される全ての技術用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。

【0040】

定義
本明細書で使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療（ｔｈｅｒａｐｙ）」および／または「治療レジメン（ｔｈｅｒａｐｙ ｒｅｇｉｍｅｎ）」とは、患者が示すかまたは患者が感受性のあり得る、疾患、障害または生理学的状態に対する応答においてなされる臨床的介入に言及する。処置の目的としては、疾患、障害もしくは状態の症状の緩和もしくは防止、上記疾患、障害もしくは状態の進行もしくは増悪を遅らせるもしくは停止する、および／または上記疾患、障害もしくは状態の寛解が挙げられる。

【0041】

用語「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」または「治療上有効な量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」とは、有益なまたは望ましい生物学的および／または臨床的結果をもたらすために十分な量に言及する。「有効量」または「治療上有効な量」は、医療従事者の熟練チームによって決定され得、画像検査、生体マーカー検査、またはさらなる検査の使用を含み得る。がんに関しては、治療上有効な量の投与は、がんの転移を防止するか、固形腫瘍のサイズもしくは質量の減少を生じるか、がんの増殖もしくは成長を阻害するか、または腫瘍の壊死を生じる。

【0042】

用語「疾患」とは、本明細書で使用される場合、生物の一部に影響を及ぼす、構造もしくは機能の任意の異常な状態および／または障害が挙げられるが、これらに限定されない。それは、外部因子（例えば、感染性疾患）によって、または内部の機能障害（例えば、がん、がんの転移など）によって引き起こされ得る。

【0043】

当該分野で公知であるように、がんは、一般に、制御されない細胞増殖と考えられる。本発明の組成物および方法は、ＬＭＰ２を発現する任意のがん、およびその任意の転移を処置するために使用され得る。例としては、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）、リンパ腫、胃がん、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞癌、卵巣がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、上記がんは、鼻咽腔癌である。いくつかの実施形態において、上記がんは、リンパ腫である。いくつかの実施形態において、上記がんは、胃がんである。ある特定の実施形態において、上記がんは、ＥＢＶ関連がんまたはＥＢＶ陽性がん、例えば、ＥＢＶ陽性ホジキンリンパ腫、ＥＢＶ陽性バーキットリンパ腫、ＥＢＶ陽性鼻咽腔癌、またはＥＢＶ陽性胃がんである。

【0044】

鼻咽腔癌（ＮＰＣ）は、遺伝的因子および環境的因子（例えば、エプスタインバーウイルスが関わるとされている）の両方と関連する多因子の悪性疾患である。ウイルスの影響は、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ；ヒトヘルペスウイルス４ともいわれる）による感染と関連し、ＥＢＶは、最も一般的なウイルスのうちの１つである（例えば、米国にいる全人口のうちの約９５％が、彼らが３０～４０歳になるときまでにこのウイルスに曝される）。従って、ＮＰＣが東南アジアの個体、特に、広東系中国人の祖先をもつ個人において高頻度であるのは、上記障害の発生の素因になる強い遺伝的因子があることを示唆する。高発生率を有する地方において、ＮＰＣは家族でクラスターを形成し、これは、地理および遺伝的特質の両方が疾患のリスクに影響を与え得ることを示唆する。ＮＰＣは、外科手術によって、化学療法によって、または放射線療法によって処置され得る。三次元原体放射線療法、強度変調放射線療法、粒子線療法および近接照射療法を含む種々の形態の放射線療法が存在する。その放射線療法は、頭頚部のがんの処置において一般に使用される。未分化鼻咽腔癌内のＥＢＶ潜伏タンパク質の発現は、本明細書で開示されるとおりの免疫ベースの治療に関して潜在的に利用され得る。

【0045】

本明細書で使用される場合、用語「被験体」および「患者」とは、本明細書で交換可能に使用され、ヒトおよび非ヒト動物の両方に言及する。本開示の用語「非ヒト動物」としては、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物（例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類など）が挙げられる。ある特定の実施形態において、上記被験体は、がんを有すると疑われるか、がんを有するか、またはがんに罹患しているヒト患者である。一実施形態において、上記ヒトは、ＬＭＰ２を含むがんを有すると疑われる被験体である。別の実施形態において、上記ヒトは、ＬＭＰ２を含むがんを有する被験体である。さらに別の実施形態において、上記ヒトは、ＬＭＰ２を含むがんに罹患している被験体である。ある特定の実施形態において、上記被験体は、ＬＭＰ２関連がんに罹患しているヒトである。ある特定の実施形態において、上記被験体は、ＥＢＶ関連がんに罹患しているヒトである。ある特定の実施形態において、上記患者は、ＥＢＶ血清陽性である。ある特定の実施形態において、上記ＬＭＰ２抗原は、ヒト白血球抗原サブタイプＡ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）を有するＭＨＣクラスＩ分子との複合体の状態にある。

【0046】

本明細書で使用される場合、用語「潜伏膜タンパク質２（ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ２）」および「ＬＭＰ２」とは、ＥＢＶ抗原潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）をいう。ＬＭＰ２は、多くのＥＢＶ関連がんにおいて発現される。ある特定の実施形態において、上記ＬＭＰ２抗原は、ヒト白血球抗原サブタイプＡ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）を有するＭＨＣクラスＩ分子との複合体の状態にある。ＬＭＰ２は、２つのアイソフォーム、ＬＭＰ２ＡまたはＬＭＰ２Ｂで存在し得る。ＬＭＰ２Ａは、３つのドメイン：（ａ）Ｎ末端細胞質ドメイン（これは、ＷＷドメイン含有Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合するＰＹモチーフおよびＳＨ２ドメイン含有タンパク質に結合するＩＴＡＭを有する）、（ｂ）細胞膜においてＬＭＰ２Ａを局在させる１２の膜貫通セグメントを有する膜貫通ドメイン、ならびに（ｃ）ＬＭＰ２タンパク質アイソフォームのホモダイマー化およびヘテロダイマー化を媒介する２７アミノ酸のＣ末端ドメイン、を有するＥＢＶがコードするタンパク質である。ＬＭＰ２Ｂは、ＬＭＰ２Ａとは異なり、細胞質シグナル伝達ドメインのＮ末端の１～１１９アミノ酸を含まない。いくつかの実施形態において、上記ＬＭＰ２抗原は、配列番号０２のアミノ酸配列に由来するフラグメントであり得る。いくつかの実施形態において、上記ＬＭＰ２抗原は、ＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫ（配列番号０１）であり得る。

【化1】

【0047】

用語「Ｔ細胞レセプター」または「ＴＣＲ」または「操作されたＴＣＲ」とは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に示された抗原の認識を担うＴ細胞の表面で見出される分子をいう。各Ｔ細胞は、遺伝子をランダムに取りそろえることによって生成される特有のＴＣＲを発現し、これは、Ｔ細胞がほぼ任意の感染に応答し得ることを確実にする。ＴＣＲはまた、細胞の内部の腫瘍特異的タンパク質（抗原）を認識し得る。腫瘍特異的タンパク質（すなわち、ＬＭＰ２）がフラグメントへと分解される場合、それらは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）とともに細胞表面に現れる。ＭＨＣクラスＩ分子は、細胞内タンパク質に由来するペプチド抗原を提示する。ＴＣＲは、腫瘍特異的タンパク質フラグメント／ＭＨＣの組み合わせを認識するように操作され得る。ある特定の実施形態において、ＬＭＰ２抗原は、ヒト白血球抗原サブタイプＡ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）を有するＭＨＣクラスＩ分子との複合体の状態にある。ＴＣＲ構造は、アルファ（α）鎖およびベータ（β）鎖を含む２つの異なるタンパク質鎖から構成される。ある特定の実施形態において、上記ＴＣＲは、ＴＣＲがトランスフェクトされたＴ細胞においてＴＣＲを形成するその能力を保持し、ＬＭＰ２抗原を認識する能力を維持し、免疫学的に関連するサイトカインシグナル伝達に関与する限りにおいて、天然に存在する配列と比較して、１またはこれより多くのアミノ酸置換、欠失、挿入、または改変を有し得る。上記操作されたＴＣＲは好ましくは、高いアビディティを有する関連する腫瘍関連ペプチドを示す標的細胞をも結合し、必要に応じて、関連する抗原（ＬＭＰ２）を提示する標的細胞の効率的殺滅を媒介する。ヘテロダイマーＴＣＲタンパク質は、不変のＣＤ３鎖分子との複合体の一部として発現された高度に可変性のα鎖およびβ鎖から通常はなる。ＴＣＲ α鎖およびβ鎖両方の可変ドメインは、各々、３個の超可変領域また相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する。１つの実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３を含む。別の実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５を含む。

【化2-1】

【化2-2】

【化2-3】

【化2-4】

【0048】

用語「ＴＣＲ－Ｔ細胞」とは、本明細書で使用される場合、目的の抗原に応答して活性化され得る、本明細書で開示されるとおりの操作されたＴ細胞レセプターを発現するために、分子生物学的方法を通じて選択、単離および／または特徴付けされているＴ細胞またはＴ細胞の集団に言及する。いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞集団は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含み、これは、丸い核を有する任意の末梢血細胞である。ＰＢＭＣは、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）、単球、および顆粒球（好中球、好塩基球および好酸球）から構成され得る。ヒトにおいて、リンパ球は、ＰＢＭＣ集団の大部分を構成し、続いて、単球、およびごく小さいパーセンテージの樹状細胞を構成する。いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞集団は、ＰＢＭＣから単離される。いくつかの実施形態において、上記ＴＣＲは、例えば、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、およびγδＴ細胞を含む、ＴＣＲを含む任意の細胞上で改変され得る。ある特定の実施形態において、Ｔ細胞レセプターは、ＬＭＰ２抗原に応じて活性化し得る配列を含む。一実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３を含む。別の実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５を含む。Ｔ細胞レセプターを操作し、発現させるための技術としては、それぞれのサブユニットを連結する天然のジスルフィド架橋を含むＴＣＲヘテロダイマーの生成が挙げられるが、これらに限定されない（Ｇａｒｂｏｃｚｉら， （１９９６）， Ｎａｔｕｒｅ ３８４（６６０５）： １３４－４１； Ｇａｒｂｏｃｚｉら， （１９９６）， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７（１２）： ５４０３－１０； Ｃｈａｎｇら， （１９９４）， ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９１： １１４０８－１１４１２； Ｄａｖｏｄｅａｕら， （１９９３）， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６８（２１）： １５４５５－１５４６０； Ｇｏｌｄｅｎら， （１９９７）， Ｊ． Ｉｍｍ． Ｍｅｔｈ． ２０６： １６３－１６９； 米国特許第６，０８０，８４０号）。

【0049】

用語「抗原」または「Ａｇ」とは、本明細書で使用される場合、免疫応答を誘起する分子として定義される。この免疫応答は、抗体生成、特異的な免疫学的能力のある細胞の活性化のいずれか、または両方を含み得る。当業者は、実質的に全てのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が、抗原として働き得ることを理解する。さらに、当業者は、抗原が、必ずしも遺伝子の全長ヌクレオチド配列によってのみコードされないことを理解する。抗原が、合成して生成され得るか、生物学的サンプルに由来し得ることは、容易に明らかである。このような生物学的サンプルとしては、組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞または生物学的流体が挙げられる得が、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、目的の抗原は、ＬＭＰ２タンパク質のフラグメント（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態において、目的の抗原は、ＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫ（配列番号１）を含む。

【0050】

本明細書で使用される場合、用語「特異的に結合する」または「選択的に結合する」とは、抗体／抗原、ＴＣＲ／エピトープ、リガンド／レセプター、核酸／相補的核酸、または他の結合対（例えば、サイトカインに対してサイトカインレセプター）に言及する場合、タンパク質および他の生物製剤の不均質な集団中のタンパク質の存在を決定する結合反応を示す。従って、指定された条件下では、特定されたＴＣＲまたはその結合ドメインは、特定の抗原に結合し、サンプル中に存在する他のタンパク質に対して、顕著な量で結合しない。特に、本明細書で開示されるとおりの操作されたＴＣＲは、好ましくは唯一の特異的エピトープ（ＬＭＰ２抗原）を選択的に認識または結合し、好ましくは、別のエピトープに対して交差反応性を全くまたは実質的に全く示さず、ここで上記エピトープは、１つのタンパク質（ＬＭＰ２）に対して固有であり、その結果、その抗原認識構築物は、別のエピトープおよび別のタンパク質に対して交差反応性を全くまたは実質的に全く示さない。特異的結合はまた、例えば、企図した方法の、その結合する化合物、核酸リガンド、抗体、または抗体の抗原結合部位に由来する結合組成物が、任意の他の結合する化合物との親和性より、しばしば少なくとも２５％大きい、よりしばしば少なくとも５０％大きい、最もしばしば少なくとも１００％（２倍）大きい、通常少なくとも１０倍大きい、より通常少なくとも２０倍大きい、および最も通常少なくとも１００倍大きい親和性でその標的に結合することを意味し得る。ある特定の実施形態において、上記操作されたＴ細胞レセプターまたはその誘導体もしくはフラグメントは、ＬＭＰ２抗原を特異的に結合する。ＴＣＲの誘導体またはフラグメントは、その親分子の抗原結合／認識能力、特に、その特異性および／または選択性を保持する。このような結合機能性は、ＣＤＲ３領域の存在によって保持され得る。

【0051】

用語「投与」とは、この用語がヒト、霊長類、哺乳動物、哺乳動物被験体、動物、獣医学的被験体、プラシーボ被験体、研究用被験体、実験用被験体、細胞、組織、器官、または生物学的流体に適用される場合、上記被験体、細胞、組織、器官、または生物学的流体などへの外因性リガンド、試薬、プラシーボ、低分子、薬学的薬剤、治療剤、診断剤、または組成物の接触に言及するが、これらに限定されない。「投与」はまた、例えば、治療的方法、薬物動態的方法、診断的方法、研究方法、プラシーボ方法、および実験方法に言及し得る。細胞の処理は、上記細胞への試薬の接触、および流体への試薬の接触を包含し、この場合、流体は、上記細胞と接触した状態にある。「投与」はまた、例えば、細胞の、試薬、診断薬、結合組成物による、または別の細胞による、インビトロおよびエキソビボ処理を包含し得る。投与経路としては、静脈内投与または注入技術が挙げられ得るが、これらに限定されない。注入技術は、針またはカテーテルを経て上記活性化Ｔ細胞の集団の投与を包含し得る。代表的には、注入は、上記活性化Ｔ細胞の集団が、静脈内投与または皮下投与されることを意味する。ある特定の実施形態において、上記活性化Ｔ細胞の集団は、全身投与される。ある特定の実施形態において、上記活性化Ｔ細胞の集団は、静脈内投与される（すなわち、静脈内（ＩＶ）注射によって）。好ましい投与経路は、腹腔内または静脈内である。

【0052】

ＴＣＲ－Ｔ細胞
本開示は部分的に、目的の抗原（例えば、ＬＭＰ２）に応じて活性化され得るＴＣＲ－Ｔ細胞由来エフェクター細胞の調製およびレシピエントにおける使用に関する。本開示の１つの局面は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞の集団（上記ＴＣＲは、ＬＭＰ２抗原に応じて活性化し得る配列を含む）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＴＣＲ－Ｔ細胞由来エフェクター細胞集団を提供する。１つの実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３を含む。別の実施形態において、上記ＴＣＲは、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５を含む。

【0053】

本明細書で開示される方法において使用されるＴ細胞は、商業的に利用可能な単離方法を含め、当該分野で公知の方法によって単離され得る。Ｔ細胞の供給源としては、末梢血、臍帯血、骨髄、または造血幹細胞の他の供給源が挙げられるが、これらに限定されない。種々の技術が、細胞を分離して、所望のＴ細胞を単離または富化するために使用され得る。さらに、Ｔ細胞を拡大増殖するための方法は、当該分野で周知である（例えば、Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉら， Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｅｘ Ｖｉｖｏ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｅｎｇｒａｆｔｅｄ Ｈｕｍａｎ Ｔ Ｃｅｌｌｓ， ２０１４を参照のこと）。調節性Ｔ細胞を単離および拡大増殖するための方法はまた、商業的に利用可能である（例えば、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｓａｎ Ｊｏｓｅ， Ｃａｌｉｆ．； ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ， Ｃａｎａｄａ； ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， Ｃａｌｉｆ．； Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｃａｒｌｓｂａｄ， Ｃａｌｉｆ．を参照のこと）。用語「拡大増殖する（ｅｘｐａｎｄ）」とは、本明細書で使用される場合、Ｔ細胞の数の増大におけるように、数の増大に言及する。一実施形態において、Ｔ細胞は、培養物中に本来存在する数に対して数が増大するように、エキソビボで拡大増殖され得る。別の実施形態において、Ｔ細胞は、培養物中の他の細胞タイプに対して数が増大するように、エキソビボで拡大増殖され得る。用語「エキソビボ」とは、本明細書で使用される場合、生きている生物（例えば、ヒト）から除去され、その生物の外側で（例えば、培養ディッシュ、試験管、またはバイオリアクター中で）増殖させられている細胞に言及する。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＩＬ－２の存在下で培養することによって拡大増殖され得る。ある特定の実施形態において、Ｔ細胞は、抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体の存在下で培養することによって拡大増殖され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＩＬ－２の存在下で培養することによって、ならびに抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体の存在下で培養することによって、拡大増殖され得る。

【0054】

細胞を分離する手順としては、密度勾配遠心分離、細胞密度を改変する粒子への連結、抗体被覆磁性ビーズでの磁性分離、アフィニティクロマトグラフィー；モノクローナル抗体（ｍＡｂ）に結合されるかまたはともに使用される細胞傷害性薬剤（補体および細胞毒素が挙げられるが、これらに限定されない）、ならびに固体マトリクス（例えば、プレートまたはチップ）に結合される抗体でのパニング、水ひ、フローサイトメトリー、または任意の他の簡便な技術が挙げられるが、これらに限定されない。

【0055】

上記単離されたＴ細胞は、これらが本明細書で開示されるとおりの処置の方法において投与される被験体に対して自家または非自家であり得る。自家細胞は、操作されたＴＣＲを含むＴ細胞の集団が投与されるべき被験体から単離される。ある特定の実施形態において、自家細胞は、操作されたＴＣＲを含む単離されかつ拡大増殖された細胞が投与されるべき被験体から単離される。いくつかの実施形態において、上記細胞は、白血球除去法によって得られ得る。ここで白血球は、採られた血液から選択的に除去され、組み換えられ、次いで、ドナー被験体に再度輸液される。あるいは、被験体ではない非自家ドナーに由来する同種異系細胞が使用され得る。非自家ドナーの場合、上記細胞は、当該分野で周知であるように、適切なレベルの適合性を決定するために、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）についてタイプ決定され、そしてマッチングされる。一実施形態において、上記Ｔ細胞の集団は、ヒト白血球抗原Ａ１１（ＨＬＡ－Ａ１１）に対してマッチングされる。自家および非自家細胞の両方に関して、上記細胞は、当該分野で周知の方法を使用して、遺伝子操作および／または被験体への投与のために使用され得る準備ができるまで、必要に応じて低温保存され得る。

【0056】

サイトカイン放出は、有効なＴＣＲ Ｔ細胞ベースの療法のために、Ｔ細胞活性化および有効性の必要な結論であることから、上記活性化Ｔ細胞のうちの少なくとも一部が１もしくはこれより多くのサイトカインを生成するかまたは１もしくはこれより多くのサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α（アルファ）、およびＩＦＮ－γ（ガンマ）、グランザイムＡ、グランザイムＢ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－１０、およびＩＬ－１βからなる群より選択される１またはこれより多くのサイトカイン）を生成し得ることは好ましい。さらに、上記Ｔ細胞の集団のうちの少なくとも一部は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＣＤ１６／ＣＤ５６、ＣＤ１８、ＣＤ２５、ＣＤ４０リガンド（ｇｐ３９）、ＣＤ６９、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤ５４、ＬＦＡ－１、およびＶＬＡ－４からなる群より選択される１またはこれより多くの表面マーカーを発現する。

【0057】

治療用組成物
本明細書で記載されるＴ細胞集団の細胞組成物は、単独で、または薬学的に受容可能なキャリアとの組み合わせのいずれかにおいて、適切な抗腫瘍応答を誘導するために十分な量で被験体に投与され得る。上記応答は、特異的免疫応答、非特異的免疫応答、特異的および非特異的応答の両方、先天的応答、一次免疫応答、適応免疫、二次免疫応答、記憶免疫応答、免疫細胞活性化、免疫細胞増殖、免疫細胞分化、およびサイトカイン発現を含み得るが、これらに限定されない。

【0058】

本開示は、ＴＣＲ Ｔ細胞集団の有効な量を被験体に投与することによって、上記被験体において抗腫瘍免疫を生成する方法を提供する。「有効量」は、本明細書で使用される場合、治療上または予防上の利益を提供する量を意味する。ＴＣＲ Ｔ細胞の有効量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染もしくは転移の程度、および患者（被験体）の状態における個々の差異を考慮して、医師によって決定され得る。本明細書で記載されるとおりの抗ＬＭＰ２操作されたＴＣＲを含むＴ細胞の集団を含む薬学的組成物が、１０^４～１０^１１ 細胞／ｋｇ 体重、好ましくは１０^５～１０^１０ 細胞／ｋｇ 体重（それら範囲内の全ての整数値を含む）の投与量において投与され得ることが、一般に述べられ得る。いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞の集団は、約２×１０^８ ＴＣＲ－Ｔ細胞の注入によって投与される。いくつかの実施形態において、患者の１ｋｇあたり約５×１０^６～約５×１０^７ ＴＣＲ－Ｔ細胞が投与される。Ｔ細胞組成物およびＴ細胞集団はまた、これらの投与量において複数回投与され得る。上記細胞は、免疫療法において一般に公知である注入技術を使用することによって投与され得る（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら， Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ． ｏｆ Ｍｅｄ． ３１９： １６７６， １９８８を参照のこと）。特定の患者にとっての最適な投与量および処置レジメンは、上記患者を、疾患の徴候に関してモニターし、それに応じて上記処置を調節することによって、医療分野の当業者によって容易に決定され得る。

【0059】

本明細書で記載されるとおりのＴ細胞レセプターを発現するＴ細胞の集団を含む細胞組成物の有効量は、上記Ｔ細胞の集団の用量の１回の投与において与えられ得るが、１用量に制限されない。従って、上記投与は、本明細書で開示されるとおりの操作されたＴＣＲを発現するＴ細胞の集団の２用量、３用量、４用量、５用量、６用量、７用量、８用量、９用量、１０用量、１１用量、１２用量、１３用量、１４用量、１５用量、１６用量、１７用量、１８用量、１９用量、２０用量、またはこれより多くの用量であり得る。ある特定の実施形態において、３用量が投与される。用量の１回より多くの投与が存在する場合、上記用量の投与は、１分間、２分間、３分間、４分間、５分間、６分間、７分間、８分間、９分間、１０分間、またはより長い時間間隔、約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間などの間隔が空けられ得る。時間（ｈｏｕｒ）の文脈において、用語「約」とは、±３０分間以内の任意の時間間隔を意味する。上記用量の投与はまた、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、またはこれより長い時間間隔、およびこれらの任意の組み合わせの時間間隔が空けられ得る。本発明は、時間において等しく空けられる投与間隔に限定されるのではなく、等しくない間隔での投与も包含し得る（例えば、１日間、４日間、７日間、および２５日間での投与からなるプライミングスケジュールのような）。

【0060】

本明細書で使用される場合、用語「薬学的に受容可能なキャリア」または「薬学的に受容可能な賦形剤」とは、操作されたＴＣＲを含むＴ細胞の集団と組み合わせた場合、上記Ｔ細胞の集団が生物学的活性を保持することを可能にする任意の物質に言及する。例としては、標準的な薬学的キャリア（例えば、リン酸緩衝化食塩溶液、水、油／水エマルジョンのようなエマルジョン、アミノ酸ベースの緩衝液、または炭酸水素緩衝化溶液、および種々のタイプの湿潤剤）のうちのいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、上記キャリアは、被験体に投与される場合に、有害反応、アレルギー反応、または他の不都合な反応を生じない。いくつかの実施形態において、上記キャリアを含む薬学的組成物は、発熱物質、ならびに被験体に有害であり得る他の不純物を含まない。薬学的に受容可能なキャリアとしては、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、被覆、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられ得る；これらの使用は、当該分野で周知である。受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、レシピエントに対して非毒性であり、好ましくは、使用される投与量および濃度において不活性であり、緩衝液（例えば、リン酸、クエン酸、または他の有機酸）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）；低分子量ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；モノサッカリド、ジサッカリド、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンが挙げられる）；キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩を形成する対イオン（例えば、ナトリウム）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））が挙げられる。このようなキャリアを含む組成物は、周知の従来の方法によって製剤化され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第１８版， Ａ． Ｇｅｎｎａｒｏ，編， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， １９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ， Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ 第２１版． Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ， ２００５を参照のこと）。選択されるキャリア、および使用されるキャリアの量は、投与様式に依存し得る。

【0061】

特定の被験体／患者に対する「有効量」は、処置されている状態またはがん、上記被験体の全体的な健康状態、投与の経路および用量、ならびに副作用の重篤度のような要因に依存して変動し得る。処置および診断の方法のガイダンスは、入手可能である（例えば、Ｍａｙｎａｒｄら， （１９９６） Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ＳＯＰｓ ｆｏｒ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ， Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌａ．； Ｄｅｎｔ （２００１） Ｇｏｏｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ， Ｕｒｃｈ Ｐｕｂｌ．， Ｌｏｎｄｏｎ， ＵＫを参照のこと）。投与されるべき細胞数の決定は、当業者によって行われ、一部は、がんの範囲および重篤度、ならびにトランスフェクトした細胞が、既存のがんの処置のために投与されているのか、またはがんの防止のために投与されているのかに依存する。上記操作されたＴＣＲを含むＴ細胞の集団を含む薬学的組成物の調製は、本開示に照らして、当業者に公知である。

【0062】

本開示の操作されたＴＣＲを発現するＴ細胞の集団は、１用量で、または複数の投与量で投与され得、ここで各用量は、少なくとも１００ 細胞／ｋｇ 体重；少なくとも１，０００ 細胞／ｋｇ 体重；少なくとも１０，０００ 細胞／ｋｇ 体重；少なくとも１００，０００ 細胞／ｋｇ 体重；少なくとも１，０００，０００ 細胞／ｋｇ 体重；少なくとも１０，０００，０００ 細胞／ｋｇ 体重；少なくとも１００，０００，０００ 細胞／ｋｇ 体重；少なくとも１×１０^９ 細胞／ｋｇ 体重；少なくとも１０×１０^９ 細胞／ｋｇ 体重；少なくとも１００×１０^９ 細胞／ｋｇ 体重；または少なくとも１×１０^１２ 細胞／ｋｇ 体重を含む。

【0063】

例えば、１回／週、２回／週、３回／週、４回／週、５回／週、６回／週、７回／週、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、５週間ごとに１回などの投与スケジュールが使用され得る。上記投与スケジュールは、例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、および１２ヶ月までまたはこれより長い合計期間にわたる投与を包含する。

【0064】

上記の投与スケジュールのサイクルが提供される。上記サイクルは、およそ、例えば、７日ごと；１４日ごと；２１日ごと；２８日ごと；３５日ごと；４２日ごと；４９日ごと；５６日ごと；６３日ごと；７０日ごとなどに反復され得る。投与しない間隔は、サイクルの間に起こり得、ここで上記間隔は、およそ、例えば、７日間；１４日間；２１日間；２８日間；３５日間；４２日間；４９日間；５６日間；６３日間；７０日間；などであり得る。この文脈において、用語「およそ」とは、±１日、±２日、±３日、±４日、±５日、±６日、または±７日を意味する。

【0065】

本開示に従うＴＣＲ Ｔ細胞はまた、１またはこれより多くのさらなる治療剤とともに投与され得る。さらなる治療剤との共投与のための方法は、当該分野で周知である（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（編） （２００１） Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， 第１０版， ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．； Ｐｏｏｌｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（編） （２００１） Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｐｈｉｌａ．， Ｐａ．； Ｃｈａｂｎｅｒ ａｎｄ Ｌｏｎｇｏ（編） （２００１） Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｐｈｉｌａ．， Ｐａ．）。例としては、化学療法剤、放射線、抗がん剤、抗炎症剤、抗感染剤、ＮＳＡＩＤＳ、鎮痛剤（ａｎｔｉ－ｐａｉｎ ａｇｅｎｔ）などが挙げられるが、これらに限定されない。さらなる治療剤はまた、異なるＴＣＲ－Ｔエフェクター集団を含み得る。他の薬剤は、上記被験体の治療レジメン（例えば、他の免疫療法、チェックポイントインヒビター、免疫－腫瘍薬物（ｉｍｍｕｎｏ－ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｄｒｕｇ）、標的化薬剤、化学療法、および／または放射線）のうちの一部であり得る。本開示の組成物と組み合わせて使用され得る薬剤／治療レジメンの例としては、ＣＴＬＡ－４インヒビター、ＰＤ－１インヒビター、および／もしくはＰＤ－Ｌ１インヒビター、ＣＳＦ－１Ｒインヒビター、ＴＬＲアゴニスト、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アレムツズマブ、アベルマブ、オファツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、リツキシマブ、デュルバルマブ、サイトカイン療法、インターフェロン、インターフェロン－α、インターロイキン、インターロイキン－２、樹状細胞療法（例えば、Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ）、ＣＨＯＰ、シクロホスファミド、フルダラビン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、ビノレルビン、ドキソルビシン、ドセタキセル、ブレオマイシン、ダカルバジン、ムスチン、プロカルバジン、プレドニゾロン、エトポシド、シスプラチン、エピルビシン、フォリン酸、およびオキサリプラチンが挙げられるが、これらに限定されない。本開示のＴ細胞集団組成物は、上記さらなる治療剤の前に、上記さらなる治療剤と同時に、または上記さらなる治療剤の後に投与され得る。

【0066】

共投与は、必ずしも個体における同時の投与をいわず、むしろ、複数の治療剤の投与が、１つの処置計画の結果である限りにおいて、数時間またはさらには数日、数週間、またはより長く間隔を空けた投与を含み得る。共投与は、本開示のＴＣＲ Ｔ細胞集団を、上記１またはこれより多くのさらなる治療剤の前に、その後に、または同時に投与することを包含し得る。共投与は、本開示のＴＣＲ Ｔ細胞集団を、別のＴＣＲ Ｔ細胞集団の前に、その後に、または同時に投与することを包含し得る。例示的処置スケジュールにおいて、本開示のＴＣＲ Ｔ細胞集団（例えば、Ａ１１－００３）は、複数日にわたるプロトコールにおける初期用量として、後の投与日に与えられる別のＴＣＲ Ｔ細胞集団（例えば、Ａ１１－１２５）とともに与えられ得るか；またはＴＣＲ Ｔ細胞（例えば、Ａ１１－１２５）は、複数日にわたるプロトコールにおける初期用量として、後の投与日に与えられるＴＣＲ Ｔ細胞（例えば、Ａ１１－００３）とともに与えられ得る。他方で、Ａ１１－００３ ＴＣＲ Ｔ細胞およびＡ－１２５ ＴＣＲ Ｔ細胞は、複数日にわたるプロトコールにおいて一日おきに投与され得る。これは、可能な投与プロトコールの限定的リストであることを意味しない。

【0067】

治療剤の有効量は、通常少なくとも１０％、より通常少なくとも２０％、最も通常少なくとも３０％、代表的には少なくとも４０％、より代表的には少なくとも５０％、最も代表的には少なくとも６０％、しばしば少なくとも７０％、よりしばしば少なくとも８０％、および最もしばしば少なくとも９０％、従来的には少なくとも９５％、より従来的には少なくとも９９％、最も従来的には少なくとも９９．９％、上記がんの症状を減少または改善する量である。例えば、本明細書で開示されるとおりの操作されたＴＣＲを含むＴ細胞の集団の投与は、他のがん処置で処置したコントロールもしくは患者、または処置前の同じ患者と比較して、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約２年、約５年、もしくは約１０年、またはより長く、約１％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％、腫瘍増殖を低減する。

【0068】

治療剤の製剤は、例えば、凍結乾燥散剤、スラリー、水性液剤または懸濁剤の形態において、生理学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または安定化剤と混合することによって、貯蔵のために調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら （２００１） Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．； Ｇｅｎｎａｒｏ （２０００） Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ， ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．； Ａｖｉｓら（編） （１９９３） Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ： Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， ＮＹ； Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編） （１９９０） Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ： Ｔａｂｌｅｔｓ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， ＮＹ； Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編） （１９９０） Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ： Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， ＮＹ； Ｗｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ （２０００） Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。

【0069】

作製方法
本開示は、本明細書で開示されるとおりの操作されたＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞の集団を調製する方法であって、ここで上記方法は、（１）単離されたＴ細胞を、本明細書で開示されるとおりの操作されたＴＣＲをコードする核酸でトランスフェクトまたは形質導入する工程；ならびに（２）上記トランスフェクションまたは形質導入後の操作されたＴＣＲを発現するＴ細胞を拡大増殖する工程であって、ここで上記Ｔ細胞は、ＩＬ－２ならびに／またはＣＤ３抗体およびＣＤ２８抗体の存在下で培養することによって拡大増殖される工程、を包含する方法を提供する。ある特定の実施形態において、上記Ｔ細胞は、ＩＬ－２の存在下で培養することによって拡大増殖される。ある特定の実施形態において、上記Ｔ細胞は、抗ＣＤ３抗体の存在下で培養することによって拡大増殖される。ある特定の実施形態において、上記Ｔ細胞は、抗ＣＤ２８の存在下で培養することによって拡大増殖される。ある特定の実施形態において、上記操作されたＴＣＲを含むＴ細胞の集団を調製する方法は、約２週間、約３週間または約４週間かかる。ある特定の実施形態において、上記操作されたＴＣＲを含むＴ細胞の集団を調製する方法は、２週間未満、３週間未満、または４週間未満、かかる。ある特定の実施形態において、上記Ｔ細胞は、ＩＬ－２、抗ＣＤ３抗体、および抗ＣＤ２８抗体の存在下で培養することによって拡大増殖される。ある特定の実施形態において、上記単離されたＴ細胞は、哺乳動物から単離される。一実施形態において、上記哺乳動物はヒトである。ある特定の実施形態において、上記ヒトは、ＥＢＶに由来するＬＭＰ２を発現するがんに罹患している被験体である。上記方法の一実施形態において、上記単離されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ１１を含む。

【0070】

Ｔ細胞に核酸を導入する方法としては、物理的、生物学的および化学的方法が挙げられる。ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を宿主細胞に導入するための物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、パーティクルボンバードメント、マイクロインジェクション、またはエレクトロポレーションが挙げられる。核酸は、エレクトロポレーション、もしくはリポフェクションを使用するカチオン性リポソーム媒介性トランスフェクションを含む市販の方法を使用して、またはポリマー被包化を使用して、ペプチド媒介性トランスフェクションを使用して、または遺伝子銃のようなパーティクルガン法（ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ）を使用して、標的細胞に導入され得る。核酸を宿主細胞に導入するための生物学的方法としては、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクター、および特にレトロウイルスベクターは、核酸をヒト細胞に挿入するために広く使用される。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスに由来し得る。ベクターの例は、プラスミド、自律的に複製する配列、および転移因子である。さらなる例示的ベクターとしては、プラスミド、ファージミド、コスミド、人工染色体（例えば、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ））、バクテリオファージ（例えば、λファージまたはＭ１３ファージ）、および動物ウイルスが挙げられ得るが、これらに限定されない。ベクターとして有用な動物ウイルスの例としては、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられ得るが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、上記ＴＣＲを含むベクターは、レトロウイルスベクターであり得る。

【0071】

本開示のなお別の局面は、Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現する活性化Ｔ細胞を含む集団を含む、ＴＣＲ－Ｔ細胞由来エフェクター細胞集団を調製する方法であって、上記ＴＣＲは、ＬＭＰ２抗原に応じて活性化し得る配列を含み、上記方法は、目的のがん（例えば、ＮＰＣ）を有する１名の患者または複数の患者を処置するために使用した１またはこれより多くの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をインビトロで接触させる工程；上記Ｔ細胞を、目的の抗原（例えば、ＬＭＰ２）を発現する樹状細胞で刺激する工程；上記目的の抗原に応答するＴ細胞を単離および特徴づける工程；ならびに上記Ｔ細胞集団を拡大増殖する工程を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記方法は、治療上有効な量の単離されたＴ細胞集団、またはその薬学的組成物を、上記目的のがんに罹患している患者に投与する工程をさらに包含する。ある特定の実施形態において、上記ＴＣＲは、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３（配列番号３）を含む。別の実施形態において、上記ＴＣＲは、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５（配列番号９）を含む。いくつかの実施形態において、上記目的のがんは、ＬＭＰ２の発現によって特徴づけられる。いくつかの実施形態において、上記がんは、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）、胃がん、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞癌、卵巣がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、白血病およびリンパ腫からなる群より選択される。一実施形態において、上記がんは、ＮＰＣを含む。別の実施形態において、上記がんは、リンパ腫を含む。なお別の実施形態において、上記がんは、胃がんを含む。ある特定の実施形態において、上記がんは、ＥＢＶ関連がんまたはＥＢＶ陽性がん、例えば、ＥＢＶ陽性ホジキンリンパ腫、ＥＢＶ陽性バーキットリンパ腫、ＥＢＶ陽性鼻咽腔癌、またはＥＢＶ陽性胃がんである。

【0072】

使用方法
本開示に従うＴＣＲ－Ｔエフェクター細胞は、がんのような疾患に罹患している被験体を処置するために使用され得る。よって、本開示の別の局面は、ＬＭＰ２で特徴づけられたがんに罹患している被験体においてＴ細胞応答を誘導する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、本明細書で記載されるとおりのＴＣＲ－Ｔ細胞由来細胞集団を投与し、その結果、上記ＬＭＰ２で特徴づけられたがんに対する抗腫瘍応答を誘導する工程を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる方法を提供する。本開示のなお別の局面は、被験体においてがんを処置する方法であって、上記方法は、上記被験体に、治療上有効な量の、本明細書で提供されるとおりのＴＣＲ－Ｔ細胞に由来する集団を投与し、その結果、がんを処置する工程を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる方法を包含する。

【0073】

本開示のなお別の局面は、本明細書で開示および例証される全てを提供する。

【0074】

以下の実施例は、例証によって提供されるのであって、限定によって提供されるのではない。

【実施例】

【0075】

実施例１． ２つの新規なＴＣＲ配列は、ＬＭＰ２抗原に応じて活性化する。
ＮＰＣ患者を処置するために以前使用し、ＥＢＶ抗原潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）を提示する受容細胞で刺激した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得た。これは、ＬＭＰ２抗原に応じて活性化し得る２種の新規なＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）配列（１）ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３（ＡＡ配列番号０３； ＤＮＡ配列番号０８）（図１Ａ～１Ｂを参照のこと）、および（２）ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５（ＡＡ配列番号０９； ＤＮＡ配列番号１４）（図２Ａ～２Ｂを参照のこと）の発見をもたらした。

【0076】

実施例２． 新規なＴＣＲ配列、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３およびＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５は、ＬＭＰ２抗原を発現する細胞を殺滅する。
実施例１のＣＤ６９活性化結果と一致して、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３およびＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５はともに、ＨＬＡ－Ａ１１に（しかしＨＬＡ－Ａ２４ではない）連結したＬＭＰ２ペプチドを発現するように操作したリンパ腫細胞を特異的に殺滅し得る（図３Ａ～３Ｂを参照のこと）。

【0077】

実施例３． 新規なＴＣＲ配列、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３およびＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５は、マウスにおいてインビボで抗腫瘍活性を有する。
マウス異種移植片研究は、両方のＴＣＲが、ＬＭＰ２－Ａ１１陽性リンパ腫に対してインビボでの抗腫瘍有効性を有することを示す。Ａ１１陽性Ｒａｍｏｓリンパ腫細胞（５×１０^６）を、ＮＳＧ^ＴＭ（ＮＯＤ ＳＣＩＤ ｇａｍｍａマウス）に皮下接種した。１３日後、１×１０^７ ＴＣＲ陽性ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３またはＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５ ＴＣＲ－Ｔ細胞を、尾静脈を介して注射した。腫瘍容積は、ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３またはＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５ ＴＣＲ－Ｔ細胞を注射したマウスにおいて有意に低減し、これらのマウスはまた、処置していないマウスと比較して全生存において有意な増大を有した（図４Ａ～４Ｃを参照のこと）。

【0078】

まとめると、これらの知見は、ＬＭＰ２－Ａ１１ ＴＣＲ－Ｔ細胞を、ＬＭＰ２ ＥＢＶウイルス抗原を有する細胞を選択的に殺滅し得ると特徴づける。これらＴＣＲ（ＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－００３およびＴＣＲ－ＮＰＣ－Ａ１１－１２５）の両方が、ＨＬＡ－Ａ１１血清型を有する患者細胞から同定されたことを注記することは重要である。ＨＬＡ－Ａ１１は、東アジアにおいて特に一般的であるので、これらのＴＣＲは、ＥＢＶ関連ＮＰＣおよびリンパ腫（ホジキンリンパ腫およびバーキットリンパ腫を含む）に対する操作されたＴＣＲ－Ｔ細胞療法に有用性を有する。この治療アプローチはまた、ＥＢＶ－ＣＴＬ療法を確立するために必要とされる時間域（ｔｉｍｅ ｗｉｎｄｏｗ）を有意に減少させる。なぜなら患者特異的ＴＣＲ－Ｔ細胞生成物は今や、わずか３週間で生成され得るからである。ＨＬＡ－Ａ１１によって提示されるＬＭＰ２抗原を認識し得る他のＴＣＲ配列は以前に同定されていないので、これらの結果は、２種の新規なウイルス抗原特異的ＴＣＲを、少なくともＥＢＶ陽性ＮＰＣ、胃がん、およびリンパ腫の処置のための有望な薬剤として明らかにする。

【0079】

実施例４． 進行性ＥＢＶ特異的鼻咽腔癌における治療転帰を改善する体系的Ｔ細胞レセプターレパートリープロファイリングおよびクローニング
鼻咽腔癌（ＮＰＣ）は、中国南部および東南アジアにおいて有病率が高く、後期ステージの疾患の処置選択肢はほとんどない。現行の標準治療は、非特異的毒性によって制限されている一方で、ＮＰＣはしばしば、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）感染と関連し、これは、養子免疫療法の優れた標的となる。ステージＩＶ ＥＢＶ関連ＮＰＣに関して、最近のフェーズ２臨床試験は、インビトロで拡大増殖したＥＢＶ特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＥＢＶ－ＣＴＬ；図５Ａを参照のこと）を使用する印象的な奏効率を報告した。この研究は成功し、同じプロトコールを使用するフェーズ３治験は現在進行中であるが、登録した患者のうちのおよそ半数は、ＣＴＬ処置レジメンに応答しなかった。これは、免疫回避を付与する未知の耐性機構の関与を示唆する。さらに、免疫療法に使用されるＥＢＶ－ＣＴＬ細胞を生成する時間は、８～２２週間の範囲に及んだ。これは、進行性ＮＰＣを有する多くの患者にとっては手が出せず、抗原特異性再指向Ｔ細胞での次世代免疫細胞療法を使用して有意に短縮化され得る。

【0080】

樹状細胞（ＤＣ）ワクチン接種は、Ｔ細胞に抗原を提示するＤＣの本質的な能力を使用するがん免疫療法の１タイプである。Ｔ細胞療法より生成が概して迅速でかつ安価である一方で、ＤＣワクチンはまた、有効性においては信頼性がそれほど高くないが、ＤＣワクチン接種に対する臨床的応答性の根底にある分子的な根拠は分かりにくい。２００７年の臨床試験において、処置した１６名の進行性ＮＰＣ患者の中で、ヒト初回投与Ａｄ５ｆ３５－ＬＭＰ１－２アデノウイルスベクターで形質導入したＤＣワクチンは、２名の患者（１２．５％）において＞１８週間の疾患安定化および１名の患者において部分奏効をもたらした（図５Ｂを参照のこと）。

【0081】

Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）レパートリー配列決定を行って、応答者および非応答者におけるＴＲＣ多様性を詳細に吟味する。これは、耐性機構へのさらなる見識を提供し、ＮＰＣの処置に関する改善された免疫療法アプローチの開発を導く。

【0082】

Ｉ． 免疫療法への応答の根底にある分子決定因子の同定
ａ． 偏りのないプロファイリングを介したＭＰＣ予後因子の発見
ＥＢＶ特異的ＤＣワクチン接種への応答性を支配する分子を発見するために、体系的サイトカイン／ケモカイン／増殖因子アレイを利用する。簡潔には、進行性ＮＰＣ患者から採取した末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、別個の免疫細胞集団（単球、マクロファージ、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ならびに細胞傷害性、ヘルパー、メモリー、および調節性Ｔ細胞を含むＴ細胞亜集団を含む）へとフローサイトメトリーによって選別する。選別した後に、ｍＲＮＡおよびｃＤＮＡを生成し、＞１００の分泌型タンパク質のパネルを使用する包括的なｑＰＣＲ遺伝子発現分析に供する。この手順は、合理的に標的化され得るか、またはそうでなければこの治療上の文脈において将来的な患者の転帰を改善するために利用され得る、ＤＣベースの免疫療法に対する耐性を調節する特異的タンパク質の同定を可能にする。ＥＢＶによって駆動されるがんにおいて明らかにされた分子の役割の検証を、本明細書で記載されるＥＢＶ陽性リンパ腫モデルを使用して、エキソビボでおよびマウスにおいて行い得る。

【0083】

ｉｉ． ＤＣワクチン処置した進行性ＮＰＣにおける応答者および非応答者のＴＣＲレパートリーの分析
本発明者らは、種々のヒトおよびマウス組織内のＴＣＲレパートリーを高い再現性を持ってプロファイリングするプラットフォーム／システムを開発した。そのシステムは、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑプラットフォームでのＴＣＲ配列の優先的リードアウトを可能にする多重ＰＣＲシステムを含むか、からなるか、または本質的になる。そのシステムはさらに、抗原認識を可能にする最小構造決定因子を同定し、それによって、免疫療法の間の全体的なレパートリー変化から抗原特異的Ｔ細胞応答を信頼性高く詳細に吟味する、「Ｍｏｔｉｆ Ａｎａｌｙｓｉｓ」といわれる新規なバイオインフォマティクスストラテジーを含む。これは、それらの標的化エピトープが、弱い親和性または低い存在量を有する場合に、ＴＣＲクローニングの機会を最適化するために重要である。

【0084】

本発明者らは、この新規システムを利用して、ＥＢＶ特異的ＤＣワクチン接種に応答した（ｎ＝３）または応答しなかった（ｎ＝１３）かいずれかの進行性ＮＰＣ患者からのＰＢＭＣサンプルにおいてＴＣＲレパートリーを評価した。この分析のために、以下を比較する：
ｉ）包括的なＴＣＲ多様性；
ｉｉ）ＥＢＶ特異的Ｔ細胞応答；および
ｉｉｉ）各個々の患者に対して縦断的な腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）特異的Ｔ細胞応答

【0085】

また、優勢な抗原（例えば、抗ＰＶクローン型）応答を同定する患者内レパートリー類似性を、比較する。さらに、上記方法は、以下の工程を包含する： ｉ）包括的なＴＣＲ多様性分析を、以前に発表したように行い、個々の患者内のＴ細胞クローンの動的変化の包括的な検討を提供する。ｉｉ）ＥＢＶ特異的Ｔ細胞応答に関しては、ＬＭＰ１－２アデノウイルスベクターで形質導入したＤＣを、自家Ｔ細胞と共培養する。抗原で拡大増殖したＴ細胞をＴＣＲレパートリー配列決定のために選別して、抗ＥＢＶ Ｔ細胞レパートリーの幅および強度を決定する。

【0086】

ｉｉｉ）ＴＡＡ特異的Ｔ細胞応答を評価するために、患者ＤＣ（ＰＢＭＣ由来）を、この研究において調査したＴＡＡ（例えば、ＥＧＦＲ、サバイビン）を表すペプチド／ペプチドプールに曝す。トレーニングデータセットとしての抗原で拡大増殖したＣＤ４＋およびＣＤ８＋ ＴＣＲ配列（ｉｉおよびｉｉｉから）を用いて、ＴＡＡモチーフおよびモチーフ組み合わせを、同定し得る。Ｊａｃｃａｒｄ類似性（距離）＝分析によって、ネットワークを構築し、ＴＣＲを、ＴＣＲの各対に関して計算したＪａｃｃａｒｄ距離に基づくクラスターへとアセンブリする（図６を参照のこと）。このようにして、本来の刺激されていないサンプル（ｉから）におけるＴＣＲの新規なクローン型（幅）および頻度（深度）を発見する。ＴＡＡ特異的ＴＣＲの集合的頻度を定量することによって、処置で誘起される抗腫瘍Ｔ細胞応答をモニターする。

【0087】

ＩＩ． 分子生物学プラットフォーム開発 － ＮＰＣのＴＣＲ－Ｔストラテジーを可能にするコスト効率的ＴＣＲクローニング
ａ： ＥＢＶ特異的ＴＣＲクローニング
単一Ｔ細胞ＲＮＡ－Ｓｅｑ技術を使用する原理証明研究として、本発明者らは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）特異的ＴＣＲのハイスループットクローニングを成功裡に行った。これらのＴＣＲを、レトロウイルス形質導入を通じてＰＢＭＣにおいて発現させ、それらの特異性および細胞傷害を、インビトロで検証した（図７を参照のこと）。同じ技術を使用して、本発明者らは、ＴＣＲ発現ウイルスの小さなライブラリー（２０まで）をアセンブリし、本明細書で記載されるＴＣＲ生成手順を使用して、ＥＢＶ特異的ＴＣＲ－Ｔ細胞を生成した。ＥＢＶ陽性ＮＰＣ細胞株は樹立されていないことから、ＥＢＶ陽性リンパ腫細胞を使用して、ＴＣＲ－Ｔ細胞の殺滅能力を評価する。各ＴＣＲ－Ｔ細胞株を、ＥＢＶ陽性Ｒａｊｉリンパ腫細胞を殺滅するが、ＥＢＶ陰性Ｒａｍｏｓ細胞を殺滅しないその特異性に関してインビトロで試験する。この機能的試験に不合格である、あらゆるＴＣＲを、ＲＮＡ－Ｓｅｑによって同定される場合に、類似の特徴を有する新たなＴＣＲで置き換える。

【0088】

ｂ： ＥＢＶ陽性リンパ腫を有するマウスにおけるＴＣＲ－Ｔ細胞療法の安全性の確立
ＭＨＣヒト化マウスを、ＥＢＶエピトープに対して５種のＣＤ４＋および５種のＣＤ８＋ ＴＣＲからなる混合型ＴＣＲ－Ｔ集団で処置する。このデザインにおいて、迅速なＥＢＶ特異的Ｔ細胞拡大増殖およびＣＤ８＋ Ｔ細胞を使用して、腫瘍に対する細胞溶解性活性を送達する；そしてＣＤ４＋ Ｔ細胞を、効率的なＣＤ８＋メモリーＴ細胞分化を強化して、長期間の保護を達成するために利用する。このストラテジーの臨床上の価値を、その毒性および有効性に対して形式的に試験する。潜在的な毒性を排除するために、動物毒性アッセイを行う。ＦＤＡガイドラインに従って、急性および慢性の毒性研究を、単一の齧歯類種において組織病理的毒性、発がん性、皮膚毒性、および神経毒性を評価するために、３用量レベルにおいて行う。急性研究は、静脈内（ＩＶ）注入、続いて２週間の観察期間を含む。慢性研究は、ＩＶ注入、続いて、６ヶ月間の観察期間からなる。用量レベルは、ヒト治験における灌流手順に類似の用量へと変換され、これは、将来的なヒト研究への直接的な変換を可能にする。全血球数、化学検査、酵素、および自己免疫血清学を毎週モニターし、マウスを体重および神経学的検査によって毎日評価する。マウスを、死亡時または毒性または神経学的な欠陥の規定された徴候を示す場合に剖検する。ＥＢＶ ＴＣＲ－Ｔ細胞の安全性を、以下に概説される全ての実験においても、同じ臨床的、化学的、免疫学的、組織病理的、および統計的評価を使用してモニターする。

【0089】

ｃ： ＥＢＶ陽性リンパ腫を有するマウスにおけるＴＣＲ－Ｔ細胞療法の有効性の確立
生成されたＥＢＶ ＴＣＲ－Ｔストラテジーの有効性を、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスにおける腫瘍異種移植片モデルを使用して評価する。１×１０^６ ＥＢＶ＋ Ｒａｊｉ細胞を皮下移植し、腫瘍サイズを毎日測定する。接種して３週間後、ＥＢＶ ＴＣＲ－Ｔ細胞（ＣＤ４＋ ＴＣＲ－Ｔ細胞、ＣＤ８＋ ＴＣＲ－Ｔ細胞、または組み合わせ）を、腫瘍を有するマウスに静脈内注入する。確立された腫瘍を有するマウスは、ＭＴＤのＩＶ送達後に長期の生存を示すか、または２×１０^７ ＥＢＶ特異的ＴＣＲ－Ｔ細胞という最大の実現可能な用量を評価する。２つのさらなる腫瘍を有するコホートは、コントロールのＧＦＰで形質導入したＴ細胞または腫瘍単独とともに、用量を合わせたＴ細胞を受容する。これらの腫瘍をＥＢＶ特異的ＴＣＲ－Ｔで処置することにおける成功は、同じＴＣＲクローニング原理に基づいて、ＥＢＶ陽性がんの将来の臨床試験の開発を導く。

【0090】

当業者は、本発明が、目的を果たし、言及される目的および利点、ならびにその中に内在するものを得るために十分に適合されることを容易に認識する。本明細書で記載される開示は、好ましい実施形態の現在の代表であり、例示であり、本発明の範囲に対する限定とは意図されない。その中での変更および他の使用は、当業者に想起され、それは、請求項の範囲によって規定されるとおりの本発明の趣旨の範囲内に包含される。

【0091】

本明細書で引用される任意の非特許文献または特許文献を含め、任意の参考文献が、先行技術を構成することは、認めない。特に、別段述べられなければ、本明細書中の任意の文献に対する言及は、これらの文献のうちのいずれかが米国または任意の他の国において当該分野での一般的技術常識の一部を形成するという自白を構成しないことが、理解される。上記参考文献の何らかの考察は、それらの著者らが主張することを述べ、出願人は、本明細書で引用される文献のうちのいずれかの正確さおよび適切であることに異議を唱える権利を留保する。本明細書で引用される全ての参考文献は、別段明示的に示されなければ、参考として完全に援用される。任意の定義および／または引用文献中で見出される記載との間で何らかの不一致が存在する場合には、本開示が優先するものとする。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図5-3】

【図5-4】

【図5-5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7-1】

【図7-2】

【図7-3】

【配列表】

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【国際調査報告】