特表 2022-512756 ＲＧＭｃ選択的阻害剤およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-07

(54)【発明の名称】ＲＧＭｃ選択的阻害剤およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/18 20060101AFI20220131BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20220131BHJP

   A61P 13/12 20060101ALN20220131BHJP

【ＦＩ】

C07K16/18 ZNA

A61P7/06

A61K39/395 D

A61K39/395 N

C12N15/12

A61P13/12

【審査請求】未請求

【予備審査請求】有

(21)【出願番号】P 2021521334

(86)(22)【出願日】2019-10-23

(85)【翻訳文提出日】2021-06-15

(86)【国際出願番号】 US2019057687

(87)【国際公開番号】W WO2020086736

(87)【国際公開日】2020-04-30

(31)【優先権主張番号】62/749,469

(32)【優先日】2018-10-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】515120006

【氏名又は名称】スカラー ロック インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＣＨＯＬＡＲ ＲＯＣＫ，ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100113376

【弁理士】

【氏名又は名称】南条 雅裕

(74)【代理人】

【識別番号】100179394

【弁理士】

【氏名又は名称】瀬田 あや子

(74)【代理人】

【識別番号】100185384

【弁理士】

【氏名又は名称】伊波 興一朗

(74)【代理人】

【識別番号】100137811

【弁理士】

【氏名又は名称】原 秀貢人

(72)【発明者】

【氏名】ニコルズ サマンサ

(72)【発明者】

【氏名】ドノヴァン アドリアーナ

(72)【発明者】

【氏名】マクドナルド メーガン

(72)【発明者】

【氏名】ダッタ アビシェック

(72)【発明者】

【氏名】カピリ アラン

(72)【発明者】

【氏名】ダグベイ ケヴィン ビー．

(72)【発明者】

【氏名】レルナー ロレナ

(72)【発明者】

【氏名】ゾン レオナルド イラ

(72)【発明者】

【氏名】ジャクソン ジャスティン ダブリュ．

(72)【発明者】

【氏名】シュッツ ケヴィン

(72)【発明者】

【氏名】ブコウスキー ジョン

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085BB36

4C085GG02

4C085GG04

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

反発性ガイダンス分子Ｃ（ＲＧＭｃ）の選択的阻害剤が記載される。作製方法、ならびに、貧血のような障害の治療におけるこれらの阻害剤の治療的使用を含む関連する方法も提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト反発性ガイダンス分子Ｃ（ＲＧＭｃ）に特異的に結合する単離された抗体であって、
ａ）前記抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり；
ｂ）前記抗体は、ヒト反発性ガイダンス分子Ａ（ＲＧＭａ）およびヒト反発性ガイダンス分子Ｂ（ＲＧＭｂ）に結合せず；および
ｃ）前記抗体は、ＢＭＰ６とＲＧＭｃの相互作用を阻害または減少させる、
抗体。

【請求項2】

ヒトＲＧＭｃ内のエピトープに結合する単離された抗体であって、
ａ）前記抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり；および
ｂ）前記抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基および／またはＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むエピトープに結合し、ここで前記エピトープは、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基およびＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含んでいてもよい、
抗体。

【請求項3】

請求項１または２に記載の抗体であって、
前記抗体は、配列番号３０、３１、および３２にそれぞれ示されるＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、およびＨ－ＣＤＲ３配列、ならびに、配列番号３３、３４、および３５にそれぞれ示されるＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、およびＬ－ＣＤＲ３配列を含み；
ここで、
前記Ｈ－ＣＤＲ１の４位のＲ残基はＫまたはＳで置換されてもよく；前記Ｈ－ＣＤＲ１の５位のＳ残基はＴで置換されてもよく；前記Ｈ－ＣＤＲ１の７位のＳ残基はＡで置換されてもよく；および／または、前記Ｈ－ＣＤＲ１の９位のＳ残基はＱで置換されてもよく；
さらに：
前記Ｈ－ＣＤＲ２の８位のＶ残基はＨまたはＴで置換されてもよく；および／または前記Ｈ－ＣＤＲ２の１０位のＮ残基はＳ、ＴまたはＥで置換されてもよい、
抗体。

【請求項4】

請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体であって、
前記抗体は、
ａ）配列番号３６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および／または
ｂ）配列番号３７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変の軽鎖可変領域を含み、
ここで、前記抗体は、
ｃ）配列番号３６に示される重鎖可変領域配列；および
ｄ）配列番号３７に示される軽鎖可変領域配列を含んでもよい、
抗体。

【請求項5】

請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体であって、
前記抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体であり、
ここで前記抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体であってもよく、ここで前記抗体は、ヒトＩｇＧ４抗体であってもよく、さらに前記ヒトＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ_１様ヒンジを生じさせるＳｅｒからＰｒｏへの主鎖置換を含んでいてもよい、
抗体。

【請求項6】

請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体であって、
前記抗体は、０．１×１０^－９（０．１ｎＭ）未満のＫ_Ｄ値でＲＧＭｃに結合し、ここで前記抗体は、抗体抗原複合体の内部移行を誘導してもよい、
抗体。

【請求項7】

ヒトＲＧＭｃに特異的に結合する単離された抗体であって、
前記抗体は、請求項２の抗体と、ヒトＲＧＭｃに対する結合に関して競合（例えば交差競合）する、および／または、同一のエピトープに結合する、
抗体。

【請求項8】

請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体および薬学的に許容できる担体を含む、
医薬組成物。

【請求項9】

ヒト対象における貧血の治療のための方法での使用のための請求項８の組成物であって、
前記治療は、前記貧血を治療するのに効果的な量での前記対象への前記組成物の投与を含み、
ここで前記貧血は、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）または慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）であってもよい、
組成物。

【請求項10】

請求項９に記載の使用のための組成物であって、
前記貧血は、がん関連の貧血または化学療法によって誘導される貧血である、
組成物。

【請求項11】

請求項９に記載の使用のための組成物であって、
前記ＡＣＤは、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の貧血であり、
前記対象は、透析依存性または非透析依存性であってもよい、
組成物。

【請求項12】

請求項９から１１のいずれか一項に記載の使用のための組成物であって、
前記組成物は、さらなる治療的薬剤と組み合わせて投与されて、
ここで前記のさらなる治療的薬剤は、エリスロポエチン刺激剤（ＥＳＡ）、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤または輸血であってもよい、
組成物。

【請求項13】

請求項１２に記載の使用のための組成物であって、
前記方法は、ＥＳＡ、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤または輸血と関連する毒性を減少させて、ここで前記毒性は、鉄過剰またはがんリスクを含んでもよい、
組成物。

【請求項14】

請求項９から１３のいずれか一項に記載の使用のための組成物であって、
前記対象は、
ａ）鉄療法中であるが鉄療法の用量減少が有利である；
ｂ）鉄療法を受けたことがあるが毒性のせいで中断している；
ｃ）鉄療法を受けたことがあり、鉄療法の用量減少が有利である；
ｄ）がんリスクがある；および／または
ｅ）がんと診断されたことがある、
組成物。

【請求項15】

対象における血清鉄レベルを増大させる方法であって、
前記方法は、請求項８の医薬組成物を、
ｉ）前記対象における血清鉄レベルを増大させる；
ｉｉ）前記対象におけるヘプシジンを下方調節する；
ｉｉｉ）肝臓ヘプシジンｍＲＮＡレベルを減少させる；
ｉｖ）肝臓ヘプシジンタンパク質レベル、血清（循環）ヘプシジンタンパク質レベル、またはその両方を減少させる；
ｖ）前記対象におけるトランスフェリン飽和度を増大させる；
ｖｉ）前記対象における赤血球産生を増大させる；
ｖｉｉ）前記対象における不飽和鉄結合能を低減させる；
ｖｉｉｉ）前記対象における総鉄結合能を低減させる；および／または、
ｉｘ）前記対象における血清フェリチンレベルを増大させる
のに効果的な量で前記対象へ投与するステップを含み、ここで前記量は、血液のミリリットルあたり≧２０ナノグラムの血清フェリチンレベルを達成するのに効果的な量であってもよい、
方法。

【請求項16】

請求項９から１４のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物または請求項１５に記載の方法であって、
前記対象は、エリスロポエチン（ＥＰＯ／ＥＳＡ）療法、ＨＩＦ安定剤療法、ＩＶ鉄補給、またはそれらの組み合わせを受けたことがあり、
ここで前記対象は、ＥＰＯ療法、ＨＩＦ安定剤療法またはＩＶ鉄補給と関連する有害事象が現れたことがある対象であってもよく、または、そのリスクがある対象であってもよい、
医薬組成物または方法。

【請求項17】

ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、中和抗体）を含んでいる医薬組成物を作製する方法であって、
前記方法は、以下のステップ：
ｉ）ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに選択的に結合する能力に関して、抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ；
ｉｉ）ステップ（ｉ）に基づいて、ＲＧＭｃ活性をインビボで阻害／中和する能力に関して、抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ；
ｉｉｉ）ステップ（ｉ）および（ｉｉ）に基づいて、医薬組成物への製剤化に関して、阻害／中和抗体を選択するステップ
を含み、
ここでステップ（ｉ）は、ポジティブ選択を含んでもよく、さらに、ネガティブ選択を含んでもよい、
方法。

【請求項18】

請求項１７のいずれか１つの方法であって、
同定ステップ（ｉ）は、ライブラリーをスクリーニングするステップを含み、
ここで前記ライブラリーは、ファージライブラリーまたは酵母ライブラリーであってもよく；
ここで同定ステップ（ｉｉ）は、血清鉄、総鉄結合能（ＴＩＢＣ）、不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）、およびトランスフェリン飽和度からなる群より選択される鉄パラメータを測定するステップを含んでもよく、
さらに、ステップ（ｉｉ）は、ヘプシジン発現を測定するステップを含んでもよく、ここで前記ヘプシジン発現は、肝臓ヘプシジンレベルおよび／または血清ヘプシジンレベルであってもよく、
さらに、ステップ（ｉｉ）は、インビボで血清鉄レベルを上昇および／またはヘプシジン発現を抑制することが可能な中和抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップを含んでもよく、
さらに、前記医薬組成物は、静脈内または皮下投与のために製剤化されてもよく、
さらに、ステップ（ｉ）は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに関して選択的に確認するステップを含んでもよい、
方法。

【請求項19】

対象における鉄障害を治療するための方法での使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、
ＲＧＭｃ特異的阻害剤は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂを阻害せず、ここで前記鉄障害は、前記対象において貧血を生じさせる、
ＲＧＭｃ選択的阻害剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願］
この国際特許出願は、２０１８年１０月２３日に出願された米国仮出願番号６２／７４９，４６９の利益および優先権を主張し、その内容は、それらの全体で参照により本明細書中に援用される。

【0002】

［本発明の分野］
本発明は概して、ＲＧＭｃを特異的および選択的に阻害するがＲＧＭａまたはＲＧＭｂを阻害しない、ＲＧＭｃ結合剤（例えば、抗体および抗原結合フラグメントを含む分子）に関する。

【背景技術】

【0003】

［背景］
鉄恒常性の異常は、治療が困難であり得る複数の疾患と関連する。かかる障害は、２つのカテゴリー：ｉ）硬変、心筋症、糖尿病などを含む鉄過剰疾患；および、ｉｉ）鉄制限性の貧血、慢性疾患の貧血（「ＡＣＤ」）などを含む鉄欠乏性疾患に広く分類することができる。

【0004】

ヘプシジンは、全身性鉄恒常性の主要な調節因子であり、その発現は主に肝臓に限定されている。ヘプシジンは、プロペプチドとして産生され、フューリンまたはフューリン様プロテアーゼによって成熟した活性ペプチドにプロセッシングされる。ヘプシジンは、その受容体フェロポーチン（唯一の細胞の鉄排出輸送体）に結合することによって鉄利用率を負に調節し、両者の内部移行および分解を引き起こす。したがって、ヘプシジンは、食物由来の鉄吸収のための主要な細胞（腸細胞）、ヘモグロビン鉄の再生（マクロファージ）および肝細胞からの貯蔵鉄の放出による鉄排出をブロックして、全身性の鉄利用率の減少をもたらす。全身性鉄恒常性におけるヘプシジンの中心的な役割は、その遺伝子の不活性化が、肝臓および膵臓における重度の鉄過剰と関連するという知見によってすぐに明確に認識された。

【0005】

ＢＭＰ６およびＢＭＰ２発現が、マウスにおける鉄恒常性の維持に必要であることが示されている。骨形態形成タンパク質６および２（それぞれＢＭＰ６およびＢＭＰ２）はいずれも、鉄代謝／恒常性を含む様々な生物学的プロセスに関与することが知られる成長因子のＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーである。ＢＭＰ６およびＢＭＰ２発現は、マウスにおける鉄恒常性の維持に必要であることが示されている。鉄調節に関与するという概念と一致して、ＢＭＰ６の遺伝子機能障害は、重度の組織鉄過剰を引き起こす。同様に、ＢＭＰ６突然変異は、遺伝性ヘマクロマトーシスを有する患者（実質の鉄過剰を特徴とする遺伝的障害の異種群）において見られている。

【0006】

ＢＭＰ６は、Ｉ型およびＩＩ型セリントレオニンキナーゼ受容体（例えば、Ａｌｋ２、Ａｌｋ３、ＢＭＰＲ２、およびＡｃｔＲＩＩＡ）に結合する。さらに、ＢＭＰ６は、その共受容体、反発性ガイダンス分子ＣすなわちＲＧＭｃ（ヘモジュベリンまたはＨＪＶとしても知られる）に直接結合することも示されている。ＢＭＰ６がその受容体に結合して、次いで、ＨＪＶ、ＨＦＥ、ＴＦＲ２、およびネオゲニンを含むより大きな多量体複合体が、細胞内ＳＭＡＤリン酸化を活性化し、それにより、核移行およびヘプシジン転写の増大を誘導する。したがって、ＢＭＰ６／ＨＪＶ／ＳＭＡＤ軸は、鉄状態に応答するヘプシジン発現の主要な調節因子である。

【0007】

化学療法によって誘導される貧血および慢性腎疾患の貧血のような貧血を含む臨床徴候の治療のために現在利用可能な治療は、静脈内鉄（例えば、鉄補給剤および輸血）および赤血球産生刺激剤（ＥＳＡ）を含む。ＥＳＡの例は、エリスロポエチン（Ｅｐｏ）；エポエチンα（Ｐｒｏｃｒｉｔ／Ｅｐｏｇｅｎ）；エポエチンβ（ＮｅｏＲｅｃｏｒｍｏｎ）；ダルベポエチンα（Ａｒａｎｅｓｐ）；および、メトキシポリエチレングリコール－エポエチンβ（Ｍｉｒｃｅｒａ）を含む。これらの治療は最適以下であり、不要な副作用または有害事象、例えば、鉄過剰、心血管系および発がんのリスクとも関連し得る。

【0008】

鉄補給剤、例えばＩＶ鉄を頻繁に摂取する貧血患者における鉄過剰は、危険な副作用である。過剰な体内の鉄は非常に毒性であり得て、複数の臓器に影響し得て、肝臓疾患、心疾患、糖尿病、ホルモン異常、および機能障害性免疫系などの様々な重篤な疾患をもたらす。同様に、輸血を受ける患者は、鉄過剰と関連する毒性のリスクがある。例えば、１単位の輸血血液は、およそ２５０ｍｇの鉄を含む。非常に多くの輸血を受ける患者、とりわけ、重症型サラセミア、鎌状赤血球症、骨髄異形成症候群、再生不良性貧血、溶血性貧血、および難治性鉄芽球性貧血の患者であって、輸血依存性になり得る患者においては、輸血される赤血球による過剰鉄は、様々な組織において次第に蓄積して、罹患および死亡を引き起こす。したがって、治療によって誘導される体内の過剰鉄は、心血管系、胃腸系、免疫系、骨／軟骨系、生殖系、および腎臓系に対する毒性を含む重度の有害反応を引き起こし得る。ＩＶ鉄に対する追加または代替の治療選択肢として、ＥＳＡ（例えば、ＡｍｇｅｎによるＥｐｏｇｅｎ（登録商標）などのＥＰＯ）療法が、患者におけるがん関連および化学療法によって誘導される貧血を患っている者を含む広範な患者集団に広く施されている。しかしながら逆説的に、前臨床および臨床試験は、ＥＳＡ（例えば、ＥＰＯ）が、がん患者において潜在的に腫瘍増殖を加速させて生存を脅かし得ることを示している。

【0009】

外因的に投与されるＥＳＡおよび鉄補給剤（例えば輸血）と関連するこれらの不要な副作用の少なくとも一部を回避する試みにおいて、低酸素誘導因子プロリルヒドロキシラーゼ（ＨＩＦ－ＰＨ）が、内因性ＥＰＯ産生を促進することを目的とする潜在的な治療的標的として大きな注目を得ている。この目的を達成するために、最近では、複数のＨＩＦ安定剤（例えば、ＨＩＦ－ＰＨ阻害剤）が開発中である。これらは、例えば、ｒｏｘａｄｕｓｔａｔ（Ｆｉｂｒｏｇｅｎ）、ｄａｐｒｏｄｕｓｔａｔ（ＧＳＫ）、ｖａｄａｄｕｓｔａｔ（Ａｋｅｂｉａ）およびｍｏｌｉｄｕｓｔａｔ（Ｂａｙｅｒ）を含む。初期の効能データでは、ＥＳＡ治療よりも優れたまたは劣らないことが示されたにもかかわらず、主な負の心血管イベントのリスクおよびがんリスクの増大に対して長期の不安が残る。特に、ＨＩＦ軸は、幅広い本質的なインビボの生物学的機能（例えば血管新生）を調節するので、このパスウェイの全身的介入は、赤血球産生に対して意図された効果を超える望ましくない効果をもたらし得る。

【0010】

代替のアプローチとして、中和抗体を含むＢＭＰ６阻害剤が、貧血患者を治療する試みにおいて数社によって探求されている（例えば抗－ＢＭＰ６抗体（例えば、ＷＯ２０１６／０９８０７９、Ｎｏｖａｒｔｉｓ；および、ＫＹ－１０７０、ＫｙＭａｂ）。しかしながら、これらの阻害剤は、骨および軟骨の形成、卵巣機能、ならびに脂質代謝を含むＢＭＰ６シグナリングの他の側面を不利に調整するリスクがある。

【0011】

それとは別に、２０１５年の論文（Ｔｈｅ ＡＡＰＳ Ｊｏｕｒｎａｌ １７（４）：９３０－９３８）において、Ｂｏｓｅｒら（ＡｂｂＶｉｅ）は、２つの前臨床モデルを用いて、ヘプシジン調節不全と関連する貧血状態の治療において、ＲＧＭａおよびＲＧＭｃ（すなわち、ＲＧＭａ／ｃ）の両方に結合する２つの抗体の治療的使用を記載しており、非選択的ＲＧＭａ／ｃ抗体によるインビボでの鉄の可動化の増大を示した。しかしながら、ＲＧＭａは、腫瘍抑制因子、ならびに免疫調整剤として機能することが推測されるが、ＲＧＭａパスウェイの阻害の潜在的な長期のリスクについてはこの論文では議論されなかった。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

したがって、鉄関連の疾患、特に、過剰なヘプシジンに起因する鉄抑制性の障害、例えば、慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）および慢性腎疾患（ＣＫＤ）の貧血のための改善された治療を提供する重大な未解決の必要性が残っている。

【課題を解決するための手段】

【0013】

本開示の発明者らは、潜在的な不要な全身性効果を最小限にしながら、鉄恒常性を調節するシグナリング経路をより特異的に阻害するために、より高いレベルの選択性を達成することの利益を認識した。その目的のために、本発明者らは、反発性ガイダンス分子ｃ（ＲＧＭｃ）（ヘモジュベリン（ＨＪＶ）またはヘマクロマトーシス２型タンパク質（ＨＦＥ２）としても知られる）を特異的に標的化することにより、肝臓に選択的な様式でＢＭＰ６シグナリングを阻害することを探求した。その理由は、このようにして、ＲＧＭｃ選択的阻害剤が、他の生物学的機能に必要なさらなるパスウェイに影響する既存のアプローチと比較して改善された安全性プロファイルを達成しながら、鉄制限性の障害の治療に関する効能を提供し得るからであった。したがって、本開示に係るＲＧＭｃ選択的阻害剤は、改善された安全性プロファイル（例えば、毒性または有害事象／効果の減少）、例えば、主な負の心臓イベント（例えば、脳卒中）のリスクの減少および／またはがん進行のリスクの減少を達成し得ると考えられる。有利に、ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、外因的に投与される鉄（例えば、ＩＶ鉄または輸血）と関連する鉄過剰のリスクを減少させ得る。ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、鉄制限性の貧血患者が、より少ない用量のＥＳＡおよび／または鉄補給剤の療法、例えば、より少ない頻度のＩＶ鉄または輸血を必要とするのを可能にし得る。

【0014】

ＲＧＭｃは、ＲＧＭクラスのタンパク質、すなわち、ＲＧＭａ、ＲＧＭｂおよびＲＧＭｃのメンバーである。ＲＧＭは、ＢＭＰ６を含む成長因子のＢＭＰクラスの複数のメンバーと相互作用することが報告されている。ＲＧＭｃは、哺乳類において膜結合型および可溶型として発現され、ＢＭＰ６軸内の鉄恒常性／代謝において役割を果たす。

【0015】

ＲＧＭａおよびＲＧＭｂはいずれも神経系および免疫系に見られ、一方で、ＲＧＭｃは骨格筋に見られるが、主に肝臓に見られる。これらのファミリーメンバーのそれぞれは、大きな構造相同性を、特にそれらのＢＭＰ結合ドメインにわたって共有するが、それらの生理学的な役割はかなり異なる。ＲＧＭａおよびＲＧＭｂは、神経系生物学、免疫、炎症、血管新生、および増殖における役割を有することが報告されている。ＲＧＭａおよびＲＧＭｂとは異なり、ＲＧＭｃの公知の機能は、主に肝細胞に局在化している。したがって、ＲＧＭａまたはＲＧＭｂに結合しないＲＧＭｃ選択的抗体の同定は、ＢＭＰ６生物学の肝臓特異的な調整に関する潜在性を提供し得る。

【0016】

したがって、ＲＧＭｃは、ＢＭＰ６のような特定のＢＭＰに関する肝臓に発現される偏性共受容体であり、ヘプシジン発現を増大させ、その結果として鉄輸送を阻害する。換言すれば、ＲＧＭａ、ＲＧＭｂ、およびＢＭＰ６よりも発現が限定的であるＲＧＭｃを標的化することによって、より組織特異的な効果が、オフターゲット効果を減少させながら達成され得る。この手法は、体全体にわたってＲＧＭおよびＢＭＰ６機能を広く阻害することなく、鉄制限性の貧血および鉄過剰状態の両方を対処する潜在性を提供する。

【0017】

したがって、本発明は、ＲＧＭｃの選択的な標的化が、直接的なＢＭＰ６拮抗薬およびＲＧＭｃ／ＲＧＭａ／ＲＧＭｂ非選択的阻害剤のような従来の手法と比較して効能および安全性（毒性の減少）の両方を達成するための有利な手法を提供するという認識を含む。有利に、ＲＧＭｃに非選択的に結合する従来技術の抗体（例えば、ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６９５８６を参照）とは異なり、本発明の抗体は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに選択的である。

【0018】

したがって、一態様では、本発明は、ＲＧＭｃに選択的に結合するという点で特徴付けられる、ＲＧＭｃ特異的抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、ヒトＲＧＭｃに選択的に結合し、ヒトＲＧＭａおよびヒトＲＧＭｂには結合しないか、または結合が減少する、単離された抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＢＭＰ（例えば、ＢＭＰ６）とＲＧＭｃの相互作用を阻害または減少させる。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ネオゲニンとのＲＧＭｃの相互作用を阻害または減少させない。

【0019】

他の態様では、本発明は、ＲＧＭｃ上の特定の部分（単数または複数）に結合し、それによりＲＧＭａ／ｂよりもＲＧＭｃに対する特に有利な選択性を提供し得る、ＲＧＭｃ特異的抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施態様では、本発明に包含されるＲＧＭｃ特異的抗体は、ヒトＲＧＭｃの第１および／または第２の結合領域に結合し、ここで、第１の結合領域はα１ヘリックス・ドメイン内のＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）であり、第２の結合領域はα３ヘリックス・ドメイン内のＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）である。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、第１の結合領域内の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合し、および／または、第２の結合領域内の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。

【0020】

したがって、本開示は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の１つまたは複数のアミノ酸残基を含み、さらに、ＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の１つまたは複数のアミノ酸残基を含んでもよいエピトープに結合する、ＲＧＭｃ選択的抗体を提供する。

【0021】

本開示は、ＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の１つまたは複数のアミノ酸残基を含み、さらにＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の１つまたは複数のアミノ酸残基を含んでもよいエピトープに結合する、ＲＧＭｃ選択的抗体を提供する。

【0022】

一部の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の１つまたは複数のアミノ酸残基およびＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。

【0023】

他の態様では、本発明は、ＲＧＭｃ特異的抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで抗体は、その相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列、および変異体によって定義される。例えば、抗体は、配列番号６～１１、配列番号１４～１９、配列番号２２～２７、配列番号３０～３５、および配列番号３８～４３から選択される１つまたは複数のＣＤＲ配列を含んでよい。一部の実施態様では、それぞれのＣＤＲは、対応するＣＤＲ配列と比較して、１、２、３、４、または、５個までのアミノ酸残基の変動を含む。

【0024】

他の態様では、本発明は、ＲＧＭｃ特異的抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで抗体は、その重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域の配列によって定義される。例えば、一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２、配列番号２０、配列番号２８、配列番号３６、または配列番号４４に示されるアミノ酸を有する重鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３、配列番号２１、配列番号２９、配列番号３７、または配列番号４５に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、本明細書において開示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域は、本明細書において開示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有する。

【0025】

他の態様では、本発明は、ヒトＲＧＭｃに対する結合に関して競合し、および／または本明細書において開示される抗体と同一のエピトープに結合する、ＲＧＭｃ特異的抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0026】

一部の実施態様では、本開示に係る好ましい抗体は、以下のプロファイルを有する：ｉ）かかる抗体の作用機序は、抗体がＲＧＭｃに結合して、それにより、ＢＭＰ６－ヘプシジンのシグナリング軸においてＢＭＰ６結合に直接競合するものである；ｉｉ）かかる抗体は、ＲＧＭａまたはＲＧＭｂよりもＲＧＭｃの選択的結合剤であり、好ましくは、検出可能な交差反応性を伴わない；ｉｉｉ）かかる抗体は、ヒトＲＧＭｃ、齧歯類（マウスおよびラット）および非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル（ｃｙｎｏ））に対して種交差反応性を示す；ｉｖ）かかる抗体は、１ｎＭ以下のＫ_Ｄ（すなわち、Ｋ_Ｄ≦１ｎＭ）、より好ましくは≦０．１ｎＭの、ヒトＲＧＭｃに対する（好ましくは齧歯類にも）親和性を有する；ｖ）かかる抗体は、２４～４８時間後（好ましくは２４時間後）に、１０ｍｇ／ｋｇの用量またはより少ない用量（好ましくは５ｍｇ／ｋｇ以下、例えば、１ｍｇ／ｋｇ以下）で、１つまたは複数の適切な前臨床モデル（例えば、ラット）におけるインビボ効能を示す；および／または、ｖｉ）かかる抗体は、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは≧１００ｍｇ／ｍＬの溶解度での製剤化が可能である（潜在的な皮下投与のため）。特に好ましい実施態様では、上記基準（ｉ）～（ｖｉ）の全てが満たされる。

【0027】

他の態様では、本明細書において開示される抗体を含んでいる医薬組成物、および、かかる抗体／組成物の治療的使用が提供される。かかる抗体および組成物は、ヒト対象におけるＲＧＭｃと関連する疾患を治療する方法において用いられ得る。一部の実施態様では、ＲＧＭｃと関連する疾患は、貧血、例えば、鉄制限性の貧血（または機能性鉄欠乏症）である。一部の実施態様では、貧血は、鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）、慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）、治療によって誘導される貧血（例えば、化学療法によって誘導される貧血）、がん関連の貧血、または慢性腎疾患（ＣＫＤ）と関連する貧血であってよい。ＣＫＤは、透析依存性ＣＫＤであってよい。ＣＫＤは、非透析依存性ＣＫＤであってよい。

【0028】

一部の実施態様では、医薬組成物／抗体は、他の治療的薬剤（例えば、エリスロポエチン刺激剤、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤、鉄輸血、抗がん剤、および／または抗炎症剤）を受けている患者または受けたことのある患者へ投与されてよい。一部の実施態様では、当該方法は、ＥＳＡ、鉄補給剤または鉄輸血に関連する毒性を減少させる。

【0029】

したがって、貧血のための他の療法（例えば、エリスロポエチン刺激剤、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤、鉄輸血、抗がん剤、および／または抗炎症剤）とともに用いられる場合、本明細書において開示されるＲＧＭｃ選択的阻害剤は、その療法に関する必要性を低減させ得て、したがって、その療法の用量および／または頻度は減少され得る。

【0030】

一部の実施態様では、医薬組成物／抗体は、対象において、貧血のための他の療法（例えば、エリスロポエチン刺激剤、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤、鉄輸血、抗がん剤、および／または抗炎症剤）とともに用いられた場合、貧血のより早い軽減を達成するために用いられ得る。

【0031】

一部の実施態様では、医薬組成物／抗体は、患者における輸血およびＩＶ鉄のような鉄療法と関連する鉄過剰を減少させるために用いられ得る。

【0032】

一部の実施態様では、医薬組成物／抗体は、ＥＳＡ反応性低下の貧血を感受性にさせるために用いられ得る。例えば、ＥＳＡ療法を受けたことのある、ＣＫＤを有する患者のおよそ５～１０％が、ＥＳＡに対する反応性低下（ＥＳＡ抵抗性）を示す。本明細書において開示されるＲＧＭｃ選択的阻害剤は、このタイプの貧血を、ＥＳＡ療法に対してより応答性にさせるために用いられ得る。

【0033】

本発明によれば、本明細書中に包含されるＲＧＭｃ選択的阻害剤は、以下：対象における血清鉄の増大、対象におけるヘプシジン発現の下方調節、対象におけるトランスフェリン飽和度の増大、対象における赤血球産生の増大、対象における不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）の低減、対象における総鉄結合能（ＴＩＢＣ）の低減、および／または対象における血清フェリチンレベルの増大の、１つまたは複数を達成するのに効果的な量で、貧血の治療において用いることができる。

【0034】

他の態様では、本発明は、ＲＧＭｃ選択的阻害剤を含んでいる医薬組成物を作製する方法を提供し、当該方法は、ｉ）ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに選択的に結合する能力に関して、抗体またはその抗原結合フラグメントを同定するステップ；ｉｉ）ステップ（ｉ）に基づいて、ＲＧＭｃ活性をインビボで阻害／中和する能力に関して、抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ；および、ｉｉｉ）ステップ（ｉ）と（ｉｉ）に基づいて、医薬組成物への製剤化に関して、阻害／中和抗体を選択するステップを含む。一部の実施態様では、作製方法は、さらにポジティブ選択のステップを含み、ネガティブ選択のステップを含んでもよい。一部の実施態様では、同定ステップ（ｉｉ）は、血清鉄、ＴＩＢＣ、ＵＩＢＣ、ヘプシジン発現、およびトランスフェリン飽和度からなる群より選択される鉄パラメータを測定するステップをさらに含む。

【図面の簡単な説明】

【0035】

【図1】炎症／慢性疾患の貧血における、ヘプシジンと血清鉄レベルの間の関係を示す。図は、ＲＧＭｃ拮抗薬（例えば、ＲＧＭｃ特異的抗体）が、どのようにヘプシジンレベルを減少させ、血清鉄を増大させると予想されるのかについても示す。

【図2】ＲＧＭａ、ＲＧＭｂ、およびＲＧＭｃに対する第１世代のＲＧＭｃ特異的抗体のＯｃｔｅｔ（登録商標）結合親和性を示すグラフである。

【図3】図３Ａは、ＨｅｐＧ２細胞を用いたインビトロＢＭＰ６活性アッセイの図である。ＢＭＰ６活性の増大（平均±ＳＤ）は、抗体によって仲介される、ＲＧＭｃに対するＢＭＰ６結合の阻害を示す。図３Ｂは、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３およびＳＲ－ＲＣ－ＡＢ４の存在下でのＢＭＰ６活性の増大（平均±ＳＤ）を示す図である。高親和性の非特異的なＲＧＭ結合タンパク質をポジティブ・コントロールとして、ネガティブのアイソタイプ・コントロールとともに用いた。

【図4】図４Ａは、ＲＧＭａ－ｈｉｓ（一価形態）またはＲＧＭａ－Ｆｃ（ａｖｉｄ形態）に対する親和性成熟ＲＧＭｃ抗体の結合を示すグラフである。ＲＧＭ０１（高親和性の非特異的なＲＧＭ結合タンパク質）をポジティブ・コントロールとして用いた。図４Ｂは、ヒトおよびマウスＲＧＭｃ抗原の両方に対する交差反応性が、親和性成熟プロセスの全体にわたって維持されたことを示す。

【図5】図５Ａは、インビトロＢＭＰ６アッセイにおける親和性成熟抗体のＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３ファミリーの活性（平均±ＳＤ）を示すグラフである。図５Ｂは、インビトロＢＭＰ６アッセイにおける親和性成熟抗体のＳＲ－ＲＣ－ＡＢ４ファミリーの活性（平均±ＳＤ）を示すグラフである。高親和性の非特異的なＲＧＭ結合タンパク質をポジティブ・コントロールとして、ネガティブのアイソタイプ・コントロールとともに用いた。

【図6】図６Ａは、ラットにおける血清鉄レベル（平均±ＳＤ）に対する親和性成熟抗体の効果を示すグラフである。図６Ｂは、ラットにおける非結合の（ｕｎｂｏｕｎｄ）鉄結合能（ＵＩＢＣ）（平均±ＳＤ）に対する親和性成熟抗体の効果を示すグラフである。高親和性の非特異的なＲＧＭ結合タンパク質をポジティブ・コントロールとして、ネガティブのアイソタイプ・コントロールとともに用いた。有意性を、アイソタイプ・コントロールに対する１－ｗａｙ ＡＮＯＶＡによって判定した；^＊ｐ値＜０．０５、^＊＊ｐ値＜０．０１、^＊＊＊ｐ値＜０．００１。

【図7】図７Ａは、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８またはＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９（２０ｍｇ／ｋｇ）の単回用量で処置した場合の、経時的な雌Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおける血清鉄レベル（平均±ＳＥＭ）を示すグラフである。アイソタイプ抗体をコントロールとして用いた。図７Ｂは、ＰＫ／ＰＤ試験における血清鉄（上）およびＵＩＢＣ（下）の測定（平均±ＳＥＭ）を示し、ここで雌Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットは、単回ＩＶ用量のＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８（０．６ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ）が投与された（ｎ＝５～１１匹の動物／群）。図７Ｃは、図７Ｂと同一の動物における抗体血清濃度（平均±ＳＥＭ）を示す。図７Ｄは、２０ｍｇ／ｋｇにおける抗体曝露（ＰＫ）と鉄パラメータ（ＰＤ）の間の関係を示す（全ての値は平均±ＳＥＭである）。

【図8A】ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９ Ｆａｂの存在下での、ＲＧＭｃ領域ＡおよびＢを表わすペプチドにおける、重水素取り込みの減少を示すグラフである。

【図8B】ＲＧＭファミリータンパク質にわたって並べられた、重水素保護領域ＡおよびＢのアミノ酸配列を示す。

【図8C】ＢＭＰ２存在下のＲＧＭｃの構造をモデル化する図解である。Ｈ／Ｄ交換保護領域ＡおよびＢが強調されている。

【図8D】ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９ ｆａｂエピトープをＢＭＰ２結合部位上にマップ化し、Ｈ／Ｄ交換保護領域Ｂ内の潜在的な接触残基を強調している図解である。

【図8E】ＲＧＭａ／ｂ／ｃのαヘリックス１／２／３内のＨ／Ｄ交換保護領域Ａの構造相同性を示し、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに対するＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９特異性の潜在的な構造決定因子を強調している図解である。

【図8F】ＲＧＭｃの結合領域ＡおよびＢの表面に及ぶことのできるＣＤＲ Ｈ１～Ｈ３を強調している、抗体のＦａｂフラグメントの典型的な構造を示す図解である。

【図9】図９Ａは、雌カニクイザル・マカクにおける、単回Ｉ．Ｖ．用量のＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８（１０ｍｇ／ｋｇ）の後の経時的な血清鉄パラメータ（血清鉄およびＵＩＢＣ、平均±ＳＥＭ））を示す。図９Ｂは、投与の１０週後までの、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８の平均血清濃度（平均±ＳＥＭ）を示す。図９Ｃは、抗体曝露（ＰＫ）と血清鉄パラメータ（ＰＤ）の間の関係を示す。全ての値は平均±ＳＤである。

【図10】図１０Ａは、雌Ｌｅｗｉｓラットにおける慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）のＰＧＰＳモデルにおいて、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８（２０ｍｇ／ｋｇ）を単独またはエポエチン（ｅｐｏｉｅｔｉｎ）α（ＥＰＯ）（１０μｇ／ｋｇ）と組み合わせて毎週注入した、ベースライン（－３日目）からの血清鉄の変化（平均±ＳＥＭ）を示す。図１０Ｂ（平均±ＳＤ）は、２４日目における絶対的血清鉄レベルを示す。有意性を、ＡＣＤアイソタイプ・コントロールに対する１－ｗａｙ ＡＮＯＶＡによって判定した；^＊＊ｐ値＜０．０１。図１０Ｃは、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８（２０ｍｇ／ｋｇ）、ＥＰＯ（１０μｇ／ｋｇ）または両方の毎週の投与に応答した、ベースライン測定値（－３日目）からのヘモグロビンの変化（平均±ＳＥＭ）を示す。２４日目における絶対的ヘモグロビンレベル（平均±ＳＤ）を図１０Ｄに示す。有意性をＡＣＤアイソタイプ・コントロールに対する１－ｗａｙ ＡＮＯＶＡによって判定した；^＊＊ｐ値＜０．０１。

【発明を実施するための形態】

【0036】

［定義］
本開示がより容易に理解され得るように、特定の用語が最初に定義される。これらの定義は、本開示の残部に照らして、当業者によって理解されるように読まれるべきである。別段の定義がない限り、本明細書において用いられる全ての技術的および科学的用語は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。さらなる定義が、詳細な説明の全体にわたって示される。

【0037】

親和性：親和性は、分子（例えば抗体）の、そのリガンド（例えば抗原）に対する結合の強度である。それは典型的に、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）によって測定および報告される。Ｋ_Ｄは、抗体の、抗体会合速度（「ｏｎ ｒａｔｅ」またはＫ_ｏｎ）（その抗原にどれくらい速く結合するか）に対する、抗体解離速度（「ｏｆｆ ｒａｔｅ」またはＫ_ｏｆｆ）（その抗原からどれくらい速く解離するか）の比である。例えば、≦５ｎＭの親和性を有する抗体は、適切なインビトロ結合アッセイ、例えば、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）に基づくアッセイ（例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標））、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）および溶液平衡滴定に基づくアッセイ（例えば、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ ＤｉｓｃｏｖｅｒｙまたはＭＤＳ）によって決定される、５ｎＭ以下のＫ_Ｄ値（すなわち、５ｎＭ以上の親和性）を有する。

【0038】

貧血：貧血は、赤血球カウントまたはヘモグロビンが正常よりも少ない医学的状態である。男性については、貧血は典型的に、１３．５グラム／１００ｍｌよりも低いヘモグロビンレベルとして定義され、女性については、１２．０グラム／１００ｍｌよりも低いヘモグロビンとして定義される。貧血は、赤血球またはヘモグロビンの産生の低減、または損失の増大（通常は出血に起因する）もしくは赤血球の破壊によって引き起こされ得る。貧血は、例えば血清鉄パラメータを測定することによって診断され得て、それは、正常範囲から逸脱した場合に貧血を表わし得る。有用な鉄パラメータは、血清鉄、総鉄結合能（ＴＩＢＣ）、不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）、およびトランスフェリン飽和度を含む。トランスフェリン飽和度は、血清鉄を総鉄結合能（ＴＩＢＣ）で割ることによって計算することができ、パーセンテージとして表される。

【0039】

慢性疾患の貧血：本明細書において用いられる用語「慢性疾患の貧血」または「ＡＣＤ」は、別の症状の結果である貧血の形態を指す。かかる症状は、慢性の感染、慢性の免疫活性化、および／または悪性腫瘍（例えば、慢性腎疾患またはがん）と関連し得る。

【0040】

抗体：用語「抗体」は、本明細書中の他のどこかにさらに説明される、任意の天然起源、組み換え、改変または操作された免疫グロブリンもしくは免疫グロブリン様構造、またはそれらの抗原結合フラグメントもしくは部分、またはそれらの誘導体を包含する。したがって、その用語は、標的抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子を指し、例えば、キメラ、ヒト化、完全ヒト、および二重特異性抗体を含む。無傷の抗体は、一般に、少なくとも２つの全長重鎖および２つの全長軽鎖を含むが、場合によっては、重鎖のみを含み得るラクダ類の天然起源抗体のように、より少ない鎖を含んでよい。抗体は、単一の由来単独から得てよく、または、「キメラ」であってよく、すなわち、抗体の異なる部分が２つの異なる抗体に由来してよい。抗体、またはその抗原結合部分は、組み換えＤＮＡ技術によって、または無傷の抗体の酵素的もしくは化学的切断によって、ハイブリドーマにおいて産生され得る。本明細書において用いられる用語「抗体」は、それぞれ、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書において「抗体模倣物」と呼ぶことがある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体融合物（本明細書において「抗体コンジュゲート」と呼ぶことがある）を含む。一部の実施態様では、その用語は、ぺプチボディも包含する。

【0041】

抗原：用語「抗原」は、抗体またはフラグメントが特異的に結合する結合領域（単数または複数）内の抗原性決定因子を含んでいる任意の分子を広く含む。抗原は、単一単位分子（例えばタンパク質単量体またはフラグメント）、または、複数の構成要素で構成される複合体であってよい。抗原は、選択的結合剤、例えば抗原結合タンパク質（例えば抗体を含む）による結合が可能な、エピトープ、例えば、分子もしくは分子の部分、または、分子もしくは分子の部分の複合体を提供する。したがって、選択的結合剤は、複合体において２以上の構成要素によって形成される抗原に特異的に結合し得る。一部の実施態様では、抗原は、その抗原に結合することが可能な抗体を産生するために動物において用いられ得る。抗原は、異なる抗原結合タンパク質、例えば抗体と、相互作用することが可能な１つまたは複数のエピトープを保有してよい。

【0042】

抗原結合部分／フラグメント：本明細書において用いられる用語、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合フラグメント」は、抗原（例えば、ＲＧＭｃ／ＨＪＶ）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数のフラグメントを指す。抗原結合部分は、限定されないが、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然起源の、酵素的に得ることのできる、合成の、または遺伝学的に操作された、ポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。一部の実施態様では、抗体の抗原結合部分は、例えば、抗体の可変（定常でもよい）ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む、タンパク質分解または組み換え遺伝子工学技術のような任意の適切な標準的技術を用いて、完全な抗体分子から取得してよい。抗原結合部分の非限定的な例は、（ｉ）Ｆａｂフラグメント（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント）；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＳＣＩＥＮＣＥ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＰＲＯＣ．ＮＡＴ’Ｌ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照）；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント（例えば、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８９）ＮＡＴＵＲＥ ３４１：５４４－５４６を参照）；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を含む。単鎖抗体の他の形態、例えばダイアボディも包含される。抗体の抗原結合部分という用語は、他には、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）およびリンカーを含んでいる「ｓｃＦａｂ」として知られる「単鎖Ｆａｂフラグメント」を含み、ここで、前記抗体ドメインおよび前記リンカーは、Ｎ末端からＣ末端の方向で、以下の順番の１つ：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１またはｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬを有し；ここで前記リンカーは、少なくとも３０個のアミノ酸、好ましくは３２～５０個のアミノ酸のポリペプチドである。

【0043】

結合領域：本明細書において用いられる「結合領域」は、抗体またはそのフラグメントに結合した場合に、抗体と抗原の相互作用の界面を形成することのできる抗原の部分である。抗体結合の際、結合領域は、表面露出から保護されて、それは、水素重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）のような適切な技術によって検出することができる。抗体と抗原の相互作用は、複数（例えば２以上）の結合領域を介して仲介され得る。結合領域は、抗原性決定因子、すなわちエピトープを含んでよい。

【0044】

バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）：ＢＬＩは、例えば、バイオセンサーチップ表面上に固定化されたリガンドと溶液中の分析物の間の、生体分子の相互作用を光学的に測定するための、標識フリーの技術であり、抗体の親和性のリアルタイムの測定が可能である。ＢＬＩは、結合特異性、会合速度（例えば、「ｏｎ」ｒａｔｅ）および解離速度（例えば、「ｏｆｆ」ｒａｔｅ）、または濃度を、精密および正確にモニターする能力を提供する。ＢＬＩプラットフォーム機器は、例えばＦｏｒｔｅＢｉｏによって市販され、一般にＯｃｔｅｔ（登録商標）Ｓｙｓｔｅｍと呼ばれる。

【0045】

ＢＭＰ６／ＢＭＰ－６：本明細書において用いられる用語「骨形成タンパク質６」、「ＢＭＰ６（またはＢＭＰ－６）」、「ＶＧＲ」、および「ＶＧＲ１」は全て、共受容体としてＲＧＭｃ分子と相互作用するタンパク質の骨形態形成ファミリーのメンバーであるタンパク質を指し、例えば、ヒトＢＭＰ６アクセッション番号ＮＰ＿００１７０９である。

【0046】

がん関連の貧血：用語「がん関連の貧血」またはＣＲＡは、「がんと関係がある貧血」とも呼ばれ得て、がんの存在と関連する、がんの存在によって引き起こされる、および／または、がんの存在によって悪化される、貧血を意味する。

【0047】

化学療法によって誘導される貧血：用語「化学療法によって誘導される貧血」、またはＣＩＡは、「化学療法と関係がある貧血」とも呼ばれ、治療によって誘導される貧血の１つのタイプであり、化学療法によって引き起こされる、および／または、化学療法によって悪化される、貧血を指す。本開示の文脈における用語「化学療法」は、患者におけるがんの治療（例えば、悪性細胞の死滅化）を目的とする、任意の抗がん剤、薬物および治療を包含し、それは、造血を減じさせるものである。

【0048】

慢性腎疾患：用語「慢性腎疾患」（ＣＫＤ）は、何ヶ月から何年もの期間にわたって腎機能が徐々に失われる腎疾患を指す。例えば、かかる腎疾患は、糖尿病、高血圧、糸球体腎炎、および多発性嚢胞腎疾患によって引き起こされ得る。ＣＫＤは、腎細胞によるエリスロポエチン（ＥＰＯ）の不十分な産生と関連し、それにより、骨髄において産生される赤血球がより少なくなり、最終的に貧血をもたらす。

【0049】

臨床利益：本明細書において用いられる用語「臨床利益」は、療法の効能および安全性の両方を含むことが意図される。したがって、望ましい臨床利益を達成する治療的処置は、有効かつ安全である（例えば、耐容または許容できる毒性または有害事象を有する）。

【0050】

併用療法：「併用療法」は、２以上の治療的薬剤を含む臨床徴候のための治療レジメンを指す。したがって、その用語は、第１の組成物（例えば、活性成分）を含んでいる第１の療法が、第２の組成物（活性成分）を含んでいる第２の療法とともに対象に施される治療的レジメンを指し、同一または重複する疾患または臨床状態を治療することが意図される。第１および第２の組成物はいずれも同一の細胞標的、または別々の細胞標的に対して作用し得る。語句「とともに」は、併用療法の文脈において、併用療法を受ける対象において第１の療法の治療的効果が第２の療法の治療的効果と時間的および／または空間的に重複することを意味する。したがって、併用療法は、治療の同時的な投与のための単一の製剤として、または連続的な投与のための別個の製剤として、製剤化されてよい。

【0051】

組合せ（Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｙ）またはコンビナトリアル（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ）エピトープ：コンビナトリアル・エピトープは、抗原の構成要素（単数または複数）の非連続部分によって形成されていて、三次元構造において、ごく接近してエピトープを形成する部位（すなわち、抗原性決定因子）における、コンビナトリアル抗体によって認識および結合されるエピトープである。コンビナトリアル・エピトープは、不連続エピトープとも呼ばれる。したがって、本発明の抗体は、ＲＧＭｃの２以上の構成要素（例えば、部分または区分）によって形成されたエピトープに結合してよい。組合せエピトープは、ＲＧＭｃの第１の部分／構成要素由来のアミノ酸残基（単数または複数）およびＲＧＭｃの第２の部分／構成要素由来のアミノ酸残基（単数または複数）などを含んでよい。それぞれの部分／構成要素は、抗原性複合体の単一のタンパク質または２以上のタンパク質のものであってよい。組合せエピトープは、抗原または抗原複合体の２以上の構成要素（例えば部分または区分、例えばアミノ酸残基）による構造寄与によって形成される。

【0052】

競合または交差競合：用語「競合する」は、同一のエピトープに関して競合する抗原結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）の関連において用いられる場合、抗原結合タンパク質が試験されるアッセイによって判定される抗原結合タンパク質間の競合が、共通抗原（例えば、ＲＧＭｃまたはそのフラグメント）への参照抗原結合タンパク質の特異的な結合を妨げること、または阻害する（例えば減少させる）ことを意味する。ある抗原結合タンパク質が他と競合するかどうか決定するために、非常に多くのタイプの競合結合アッセイ、例えば：固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ；固相直接標識アッセイ、および固相直接標識サンドイッチアッセイを用いることができる。通常、競合する抗原結合タンパク質が過剰に存在する場合、共通抗原への参照抗原結合タンパク質の特異的な結合を、少なくとも４０～４５％、４５～５０％、５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％、７０～７５％または７５％以上阻害する（例えば減少させる）。場合によっては、結合は、少なくとも８０～８５％、８５～９０％、９０～９５％、９５～９７％、または９７％以上阻害される。一部の実施態様では、第１の抗体またはその抗原結合フラグメントおよび第２の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、ＢｉａｃｏｒまたはＯｃｔｅｔによって、例えば製造元の説明書に従って標準的な試験条件を用いてアッセイして（例えば、結合は、室温、約２０～２５℃でアッセイされる）、同一抗原に関して互いに交差阻害（ｃｒｏｓｓ－ｂｌｏｃｋ）する。一部の実施態様では、第１の抗体またはそのフラグメントおよび第２の抗体またはそのフラグメントは、同一のエピトープを有してよい。他の実施態様では、第１の抗体またはそのフラグメントおよび第２の抗体またはそのフラグメントは、同一ではないが重複するエピトープを有してよい。さらなる実施態様では、第１の抗体またはそのフラグメントおよび第２の抗体またはそのフラグメントは、三次元空間において極めて接近している別個の（異なる）エピトープを有してよく、それにより、立体障害を介して抗体結合が交差阻害される。「交差阻害」は、抗原への第１の抗体の結合が、同一抗原への第２の抗体の結合を妨げ、同様に、抗原への第２の抗体の結合が、同一抗原への第１の抗体の結合を妨げることを意味する。

【0053】

相補性決定領域：本明細書において用いられる、用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれにおいて３つのＣＤＲが存在し、可変領域のそれぞれに関して、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と指定される。本明細書において用いられる用語「ＣＤＲセット」は、抗原に結合することのできる単一の可変領域内に生じる３つのＣＤＲのグループを指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムによって異なって定義されている。Ｋａｂａｔによって記載されるシステム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９８７；１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明白な残基ナンバリングシステムを提供するだけでなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと呼ばれ得る。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；およびＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３）は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の特定のサブ部分が、アミノ酸配列レベルで高い多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド主鎖コンフォメーションを取ることを見いだした。これらのサブ部分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と指定された（ここで「Ｌ」および「Ｈ」は、それぞれ軽鎖領域および重鎖領域を指定する）。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと呼ばれ得て、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（１９９５）ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－１３９およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２（５）：７３２－４５によって記載されている。さらに他のＣＤＲ境界の定義は、本明細書におけるシステムの１つに厳密に従わなくてよいが、それでもなおＫａｂａｔ ＣＤＲと重複するが、特定の残基もしくは残基群またはＣＤＲ全体でさえも抗原結合に著しく影響を与えないという予測または実験的知見に照らすと、それらは短くまたは長くされ得る。本明細書において用いられる方法は、任意のこれらのシステムに従って定義されるＣＤＲを利用し得るが、特定の実施態様は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを用いる。

【0054】

立体構造的エピトープ：立体構造的エピトープは、三次元コンフォメーションで立体構造的抗体によって認識および結合されるが、同一のアミノ酸配列の折りたたまれていないペプチドでは認識および結合されないエピトープである。立体構造的エピトープは、コンフォメーション特異的エピトープ、コンフォメーション依存性エピトープ、またはコンフォメーション感受性エピトープと呼ばれ得る。そのようなエピトープに特異的に結合する対応する抗体またはそのフラグメントは、コンフォメーション特異的抗体、コンフォメーション選択的抗体、またはコンフォメーション依存性抗体と呼ばれ得る。立体構造的エピトープへの抗原の結合は、抗原または抗原複合体の三次元構造（コンフォメーション）に依存する。

【0055】

定常領域：免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖および軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、当技術分野で知られている。

【0056】

有効量：「有効量」（または治療的有効量）は、患者集団において統計的に有意な臨床利益を達成する用量または投与レジメンである。

【0057】

エピトープ：用語「エピトープ」は、抗原性決定因子とも呼ばれてよく、結合剤、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体によって特異的に結合され得る、分子決定因子（例えば、ポリペプチド決定因子）である。エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルのような分子の化学的に活性の表面グループを含み、特定の実施態様では、特定の三次元構造の特性、および／または特定の電荷特性を有してよい。抗体または抗体の抗原結合フラグメントによって認識されるエピトープは、抗体またはフラグメントのＣＤＲ（例えば相補部位）と相互作用する抗原の構造要素である。エピトープは、数個のアミノ酸残基の寄与によって形成されてよく、それが抗体のＣＤＲと相互作用して、特異性を生じさせる。抗原性フラグメントは、１つよりも多いエピトープを含んでよい。特定の実施態様では、抗体は、タンパク質および／または高分子の複合体混合物におけるその標的抗原を認識する場合に、抗原に特異的に結合すると言われる（ｉｓ ｔｈｅ ｔｏ）。例えば、抗体は、抗体が交差競合する（一方が、他方の結合または調整効果を妨げる）場合、「同一のエピトープに結合する」と言われる。

【0058】

赤血球産生刺激剤：本明細書において用いられる用語「赤血球産生刺激剤」または「ＥＳＡ」は、骨髄が赤血球を産生するように刺激する薬物を指す。エリスロポエチンまたはＥＰＯは、ＥＳＡの１つの例であり、エリスロポエチンα、δ、ω、およびζを含んでよく、エリスロポエチンの操作された形態、例えば、ダルベポエチンαを含む。用語「ＥＰＯ療法」は、１つまたは複数のＥＳＡ薬剤を用いる療法を広く包含するために用いられ得る。

【0059】

ヒト抗体：本明細書において用いられる用語「ヒト抗体」（または「完全ヒト抗体」）は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来の可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本開示のヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３内に、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムまたは部位特異的突然変異誘発によって、またはインビボで体細胞突然変異によって、導入された突然変異）を含んでよい。しかしながら、本明細書において用いられる用語「ヒト抗体」は、マウスのような別の哺乳類種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列中にグラフトされている抗体を含むことを意図しない。

【0060】

ヒト化抗体：用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）由来の重鎖および軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨおよび／またはＶＬ配列の少なくとも一部は、より「ヒト様」に、すなわち、ヒト生殖細胞系可変配列により似ているように変更されている抗体を指す。ヒト化抗体の１つのタイプは、ＣＤＲグラフト抗体であり、ヒトＣＤＲ配列が非ヒトＶＨおよびＶＬ配列内に導入されて、対応する非ヒトＣＤＲ配列を置き換える。また、「ヒト化抗体」は、目的の抗原に免疫特異的に結合する抗体、またはその変異体、誘導体、アナログまたはフラグメントであり、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するＦＲ領域および実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有するＣＤＲ領域を含む。本明細書において用いられる、ＣＤＲの文脈における用語「実質的に」は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的に２つの、可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全てを含み、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。一実施態様では、ヒト化抗体は、免疫グロブリンＦｃ領域（典型的にヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部も含む。一部の実施態様では、ヒト化抗体は、軽鎖、ならびに、重鎖の少なくとも可変ドメインを含む。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域も含んでよい。一部の実施態様では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含む。一部の実施態様では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含む。特定の実施態様では、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメインおよび／またはヒト化重鎖のみを含む。

【0061】

水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）：ＨＤＸ－ＭＳは、溶媒露出度の程度を測定することによって溶液中のタンパク質の確認（ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ）およびタンパク質間相互作用を調べるために用いられるよく知られた技術である。例えば、Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ １９（１）：９５－１０２．「Ｈｙｄｒｏｇｅｎ／ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｆｏｒ ｐｒｏｂｉｎｇ ｈｉｇｈｅｒ ｏｒｄｅｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．」を参照。

【0062】

低酸素誘導因子（ＨＩＦ）安定剤：ＨＩＦプロリル－ヒドロキシラーゼ（ＨＩＦ－ＰＨ）阻害剤は、ＨＩＦ（例えば、ＨＩＦ－２α）を安定化することができ、それにより、エリスロポエチン（ＥＰＯ）のインビボでの内因性の産生を増大させ得る。これらの薬剤は、「ＨＩＦアクチベーター」と呼ばれてもよい。ＨＩＦ安定剤の例は、限定されないが：Ｒｏｘａｄｕｓｔａｔ（ＦＧ－４５９２）；Ｖａｄａｄｕｓｔａｔ（ＡＫＢ－６５４８）、Ｄａｐｒｏｄｕｓｔａｔ（ＧＳＫ１２７８８６３）、Ｄｓｉｄｕｓｔａｔ（ＺＹＡＮ－１）、Ｍｏｌｉｄｕｓｔａｔ（Ｂａｙ ８５－３９３４）；ＭＫ－８６１７、ＹＣ－１、ＩＯＸ－２、２－メトキシエストラジオール、ＧＮ－４４０２８、ＡＫＢ－４９２４、Ｂａｙ ８７－２２４３、ＦＧ－２２１６およびＦＧ－４４９７を含む。

【0063】

鉄療法：本明細書において用いられる「鉄療法」は、鉄補給剤（例えば、経口または静脈内投与（ｉ．ｖ．）の鉄）を含む治療的処置を指す。

【0064】

単離された：本明細書において用いられる「単離された」抗体は、異なる抗原性特異性を有する他の抗体から実質的にフリーである抗体を指す。一部の実施態様では、単離された抗体は、他の意図しない細胞物質および／または化学物質から実質的にフリーである。

【0065】

力価（Ｐｏｔｅｎｃｙ）：本明細書において用いられる用語「力価」は、規定の効果を生じる薬物の濃度または量に関する、薬物（例えば、阻害活性を有する阻害抗体（またはフラグメント））の活性を指す。例えば、所定の用量で特定の効果を生じることが可能な抗体は、同等の効果を生じるために２倍の量（用量）を必要とする他の抗体よりも、強力（ｐｏｔｅｎｔ）である。力価は、例えば、本明細書において記載されるように、ＢＭＰ６活性化／阻害アッセイのようなインビトロアッセイによって測定され得る。力価は、本明細書において記載されるように、ヘプシジン発現、血清鉄、フェリチン発現、および鉄結合能を測定するもののようなインビボアッセイによっても測定され得る。典型的に、より高い親和性を有する抗体は、より低い親和性を有する抗体よりも高い力価を示す傾向がある。

【0066】

（溶媒曝露からの）保護：タンパク質間相互作用（例えば抗体抗原結合）のＨＤＸ－ＭＳに基づく評価の関連において、タンパク質（例えば、エピトープを含んでいるタンパク質の領域）が溶媒に曝露されて、それによりプロトン交換を生じさせる程度は、結合／相互作用の程度と逆相関である。したがって、本明細書中に記載の抗体が抗原の領域に結合する場合、タンパク質間相互作用によって、結合領域に周囲溶媒がアクセスするのを妨げるので、結合領域は、溶媒に対する曝露から「保護」される。したがって、保護領域は、相互作用の部位を表わしている。典型的に、適切な溶媒は生理学的バッファーである。

【0067】

ＲＧＭ：本明細書において用いられる「ＲＧＭ」は、反発性ガイダンス分子ファミリーに属するタンパク質のクラスを指す。

【0068】

ＲＧＭｃ：本明細書において用いられる用語「反発性ガイダンス分子Ｃ」、「ＲＧＭｃ」、「ヘモジュベリン」、「ＨＪＶ」、「ヘマクロマトーシス２型タンパク質」、および「ＨＦＥ２Ａ」は全て、共受容体としてＢＭＰ分子と相互作用するタンパク質の反発性ガイダンス分子ファミリーのメンバーであるタンパク質を指し、例えば、ヒトＲＧＭｃアクセッション番号ＮＰ＿９９８８１８；配列番号１である。

【0069】

ＲＧＭｃと関係がある障害：「ＲＧＭｃと関係がある障害」は、ｉ）病因および／または進行の少なくとも一部がＲＧＭｃシグナリングまたはその調節不全に起因し得る任意の疾患または障害、および／または、ｉｉ）ＲＧＭｃの阻害が臨床利益を提供し得る症状を意味する。ＲＧＭｃ障害は、例えば：炎症／慢性疾患と関連する貧血（例えば、キャッスルマン症候群、慢性腎疾患、糖尿病、心不全／心疾患、特発性自己免疫性溶血性貧血、特発性肺動脈性高血圧、炎症性腸疾患、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、全身性若年性特発性関節炎）、がん／増殖性障害と関連する貧血（例えば、急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、頭頚部がん、肝細胞がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、および腎がん）、感染と関連する貧血（例えば、心内膜炎、ヘリコバクター・ピロリ感染、肝炎、ヒト免疫不全ウイルス、マラリア）、神経障害と関連する貧血（例えば、急性虚血性脳卒中、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、限局性脳虚血／再灌流、頭蓋内脳出血、およびくも膜下出血）、治療によって誘導される、または治療と関係がある貧血（例えば、抗生物質によって誘導される、肥満外科的処置と関係がある、化学療法によって誘導される、二次的な鉄過剰）、遺伝的障害または他の状態と関連する貧血（例えば、年齢と関係がある（高齢者の貧血）、重病の貧血、外科的処置の貧血、失血／出血、カルシフィラキシー、セリアック病、銅欠乏症、ファンコニー貧血、遺伝性ヘマクロマトーシス（４型）、遺伝性球状赤血球症、ＩＲＩＤＡ、肥満、臓器移植、発作性夜間ヘモグロビン尿症、鎌状赤血球貧血、スポーツ／エクササイズによって誘導される貧血、サラセミア、血栓性血小板減少性紫斑病）を含んでよい。

【0070】

ＲＧＭ阻害剤：用語「ＲＧＭ阻害剤」または「ＲＧＭ拮抗薬」は、ＲＧＭ（例えば、ＲＧＭａ、ＲＧＭｂ、および／またはＲＧＭｃ）の生物学的活性または機能に拮抗することが可能な任意の薬剤を指す。その用語は、その作用機序を限定することを意図せず、例えば、中和抗体、競合阻害剤、受容体拮抗薬、フューリンおよび／またはＴＭＰＲＳＳ６切断エンハンサー、および可溶性ＲＧＭペプチドを含む。

【0071】

ＲＧＭｃ選択的阻害剤：用語「ＲＧＭｃ選択的」（または「ＲＧＭｃ特異的」）阻害剤は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃの生物学的活性または機能を選択的に拮抗することが可能な薬剤（小分子および生物製剤、例えば、抗体を含む）を指す。明確性のために、ＲＧＭａおよびＲＧＭｃの両方に結合および阻害／中和するモノクローナル抗体は、ＲＧＭｃ選択的阻害剤ではない。

【0072】

特異的結合：本明細書において用いられる用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、抗原と抗体またはその抗原結合フラグメントの相互作用が、特定の構造（例えば、抗原性決定因子またはエピトープ）の存在に依存していることを意味する。例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、タンパク質一般ではなく、特定のタンパク質に結合する。

【0073】

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、抗体の標的に関するＫ_Ｄが、少なくとも、約１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、１０^－１２Ｍ、１０^－１３Ｍ、またはそれよりも低い場合に、標的、例えば、ＲＧＭｃに特異的に結合する。一部の実施態様では、本明細書において用いられる用語「ＲＧＭｃのエピトープに対する特異的な結合」、「ＲＧＭｃのエピトープに特異的に結合する」、「ＲＧＭｃに対する特異的な結合」、または「ＲＧＭｃに特異的に結合する」は、ＲＧＭｃに結合し、適切なインビトロ結合アッセイ、例えば表面プラズモン共鳴およびバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって判定して１．０×１０^－７Ｍまたはそれよりも低い解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する、抗体、またはその抗原結合フラグメントを指す。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＲＧＭｃのヒトおよび非ヒト（例えば、マウス）相同分子種の両方に特異的に結合し得る。例えば、一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒト、マウス、ラット（ｒａｔｅ）および／またはカニクイザルのＲＧＭｃに対する交差反応性の違いが５倍未満である。

【0074】

抗体、またはその抗原結合フラグメントは、他のＲＧＭファミリーメンバー（例えば、ヒトＲＧＭａおよびヒトＲＧＭｂ）と低い交差反応性を有してもよい。したがって、一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＲＧＭａおよび／またはヒトＲＧＭｂよりも高い親和性でヒトＲＧＭｃに結合する（すなわち、交差反応性が低い）。例えば、一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＲＧＭａおよび／またはヒトＲＧＭｂよりも少なくとも１０００倍高い親和性（すなわち、１０００倍低いＫ_Ｄ）で、ヒトＲＧＭｃに結合する。

【0075】

対象：治療的適用の文脈における用語「対象」は、臨床ケアまたは介入、例えば治療、診断などを受ける個体を指す。適切な対象は、制限されないが、哺乳類（例えば、ヒトおよび非ヒト哺乳類）を含む脊椎動物を含む。対象がヒト対象である場合、用語「患者」は相互交換可能に用いられてよい。臨床文脈では、用語「患者集団」または「患者亜集団」は、臨床基準のような基準（例えば、症状（ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ）、疾患ステージ、特定の状態に対する感受性、治療に対する反応性など）、病歴、健康状態、性別、年齢群、遺伝子基準（例えば、特定の突然変異、多型、遺伝子重複、ＤＮＡ配列反復などのキャリア）およびライフスタイル因子（例えば、喫煙、アルコール消費量、運動など）のセットに入る個体の群を指すために用いられる。

【0076】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）：表面プラズモン共鳴は、標識していない相互作用物をリアルタイムで検出することが可能な光学的現象である。Ｂｉａｃｏｒｅによって市販されるもののようなＳＰＲに基づくバイオセンサーを用いて、抗原抗体結合のようなタンパク質間相互作用を含む、生体分子の相互作用を測定することができる。その技術は当技術分野で広く知られており、結合親和性、運動速度定数および熱力学のようなパラメータの決定に有用である。

【0077】

総鉄結合能：本明細書において用いられる用語「総鉄結合能」、「ＴＩＢＣ」、または「トランスフェリン鉄結合能」は、鉄をトランスフェリンと結合させる血液の能力を測定する実験試験を指す。ＴＩＢＣは、血液が運搬することのできる鉄の最大量を測定することによって決定され、それはトランスフェリンの間接的な測定である。典型的に、ＴＩＢＣは、血清鉄および血清不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）を測定することによって計算されて、その２つの値が足される。あるいは、ＴＩＢＣは、過剰量の鉄をサンプルに加えて、結合しない鉄を除去して、トランスフェリンから解離した鉄を測定することによって、直接測定することができる。一般に、ＴＩＢＣの「正常な」範囲は、例えば、２５５～４５０ｕｇ／ｄＬ）であるが、測定値は集団の間で異なってよい。

【0078】

毒性：本明細書において用いられる用語「毒性（単数または複数）」は、患者に施された療法と関連する患者における不要なインビボ効果、例えば、望ましくない副作用および有害事象を指す。「耐容性」は、毒性のせいで療法を中断せずに患者によって合理的に耐容され得る、療法または治療的レジメンと関連する毒性のレベルを指す。本開示の文脈において、毒性は、限定されないが：死亡、不利な心血管系の応答および／または脳卒中に関するより高いリスク（慢性腎疾患（ＣＫＤ）などの慢性疾患と関連し得る）、および、全生存期間の短縮、がん患者における腫瘍進行または再発のリスク増大を含んでよい。

【0079】

治療する（Ｔｒｅａｔ）／治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）：用語「治療する」または「治療」は、治療的治療、予防的治療、および、対象が障害または他の危険因子を発症するリスクを減少させる適用を含む。したがって、その用語は、例えば、体の免疫を高めるまたはブーストすることによって；免疫抑制を減少または反転させることによって；体から有害な細胞または物質を減少、除去または根絶させることによって；疾患負荷（例えば、腫瘍負荷）を減少させることによって；再発またはぶり返しを防止することによって；不応期を延長させることによって、および／または、他の方法で生存を改善することによって、患者において治療的利益を引き起こすことを広く意味することが意図される。その用語は、治療的治療、予防的治療、および、対象が障害または他の危険因子を発症するリスクを減少させる適用を含む。治療は、障害の完全な治癒を必要とせず、症候または根底にある危険因子を減少させる実施態様を包含する。併用療法の文脈において、その用語は、ｉ）第２の治療が、第１の治療の効果的な用量を減少させて、それにより副作用を減少させて耐容性を増大させる能力；ｉｉ）第２の療法が、第１の療法に対して患者をより応答性（例えば感受性）にさせる能力；ｉｉｉ）相加的または相乗的な臨床利益を実現する能力；および／または、ｉｖ）軽減（例えば、治療的利益）のより早い発生を達成する能力を指してもよい。

【0080】

非結合の（ｕｎｂｏｕｎｄ）鉄結合能：本明細書において用いられる用語「非結合の（ｕｎｂｏｕｎｄ）鉄結合能」または「ＵＩＢＣ」は、トランスフェリンの利用可能な鉄の結合能の量を指す。ＵＩＢＣは、しばしば、ＴＩＢＣと血清鉄の量との間の違いを評価することによって計算される。あるいは、ＵＩＢＣは、公知量の過剰鉄をサンプルに添加して、残っている非結合の鉄を引くことによって、直接計算することができる。一般に、測定値は集団または個体の間で異なってよいが、ＵＩＢＣに関する「正常の」範囲は、例えば、１２０～４７０ｕｇ／ｄＬ（２１～８４ｕｍｏｌ／Ｌ）である。

【0081】

可変領域：用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の軽鎖および／または重鎖の部分を指し、典型的に、重鎖内のおよそアミノ末端１２０～１３０アミノ酸および軽鎖内の約１００～１１０アミノ末端アミノ酸を含む。特定の実施態様では、異なる抗体の可変領域は、同一種の抗体の間でさえ、アミノ酸配列が広範囲に異なる。抗体の可変領域は典型的に、その標的に関する特定の抗体の特異性を決定する。

【0082】

実施例以外、または別段の指示がない場合、本明細書中で用いられる成分の量または反応条件を表わす全ての数字は、全ての例において用語「約」によって修飾されると理解されるべきである。

【0083】

明細書および特許請求の範囲において、本明細書において用いられる不定冠詞「ａ」および「ａｎ」は、明確に逆が指示されない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきである。

【0084】

明細書および特許請求の範囲において、本明細書において用いられる語句「および／または」は、そのように結合されたエレメントの「いずれかまたは両方」、すなわち、ある場合には結合的に存在し、他の場合では分離して存在するエレメントを意味すると理解されるべきである。「および／または」節によって明確に特定されるエレメント以外の他のエレメントは、明確に逆が指示されない限り、具体的に特定されるこれらのエレメントと関係するまたは関係しないにかかわらず、存在してもよい。したがって、非限定的な例として、「Ａおよび／またはＢ」という言及は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のようなオープンエンド言語とともに用いられる場合、一実施態様では、Ｂを伴わずにＡを指してよく（Ｂ以外のエレメントを含んでもよい）；別の実施態様では、Ａを伴わずにＢを指してよく（Ａ以外のエレメントを含んでもよい）；さらに別の実施態様では、ＡおよびＢの両方を指してよい（他のエレメントを含んでもよい）；などである。

【0085】

明細書および特許請求の範囲において、本明細書において用いられるように、１つまたは複数のエレメントのリストに対する言及における語句「少なくとも１つ」は、エレメントのリスト内の任意の１つまたは複数のエレメントから選択される少なくとも１つのエレメントを意味すると理解されるべきであるが、エレメントのリスト内に具体的に挙げられる１つ１つのエレメントの少なくとも１つを必ずしも含むのではなく、エレメントのリスト内のエレメントの任意の組み合わせを除外しない。この定義は、語句「少なくとも１つ」が指すエレメントのリスト内に具体的に特定されるエレメント以外のエレメントが（具体的に特定されるこれらのエレメントに関係するまたは関係しないにかかわらず）存在してもよいことも許容する。したがって、非限定的な例として、「ＡおよびＢの少なくとも１つ」（または同等に、「ＡまたはＢの少なくとも１つ」、または同等に、「Ａおよび／またはＢの少なくとも１つ」）は、一実施態様では、少なくとも１つの（１つよりも多くを含んでもよい）Ａを、Ｂは存在せずに指してよく（Ｂ以外のエレメントを含んでもよい）；別の実施態様では、少なくとも１つの（１つよりも多くを含んでもよい）Ｂを、Ａは存在せずに指してよい（Ａ以外のエレメントを含んでもよい）；さらに別の実施態様では、少なくとも１つの（１つよりも多くを含んでもよい）Ａ、および、少なくとも１つの（１つよりも多くを含んでもよい）Ｂ（他のエレメントを含んでもよい）；などを指してよい。

【0086】

請求項エレメントを修飾するための特許請求の範囲における、順序を表わす用語、例えば、「第１」、「第２」、「第３」などの使用は、それ自体では、一方のクレームエレメントの他方に対するいかなる優先、先行、もしくは順序、または方法の行為が行なわれる時間的順序を含意しないが、請求項エレメントを区別するために、特定の名称を有する一方の請求項エレメントを、（順序を表わす用語を使用しなければ請求項エレメントを区別できない）同一の名称を有する別のエレメントから、区別するためのラベルとして単に用いられる。

【0087】

本明細書において提供される範囲は、範囲内の全ての値に関する省略表現であると理解される。例えば、１～５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または、サブ範囲、例えば、１０～２０、１～１０、３０～４０などを含むと理解される。

【0088】

［ＢＭＰ６／ヘプシジン軸を介した鉄恒常性の調節］
ヘプシジンは、肝臓によって分泌される小ペプチドであり、体内の鉄恒常性の中心的な調節因子である。その主な機能は、３つの主な由来（十二指腸の腸細胞を通した食物由来の鉄の吸収、再生赤血球からのヘモグロビン鉄の放出、および、肝細胞からの貯蔵鉄の放出）による、細胞から血液の血漿区画への鉄の輸送を阻害することである。鉄の調節は、十二指腸の腸細胞、肝臓および脾臓に常在性の細網内皮系マクロファージ、および肝細胞の表面上にある鉄排出輸送体フェロポーチンの、ヘプシジン介在性の分解によって達成される。フェロポーチンが分解されるので、マクロファージおよび十二指腸の腸細胞は、もはや鉄を血中に放出することができず、その結果として、トランスフェリンへの鉄運搬は減少する。したがって、図１に示されるように、ヘプシジンの発現が増大すると、鉄排出は低減する。反対に、ヘプシジンの発現が低減すると、鉄排出は増大する。したがって、正常なヘプシジン産生を狂わす遺伝性および後天性の障害は、鉄欠乏（高レベルのヘプシジン）または鉄過剰（ヘプシジン欠乏）をもたらし得る。

【0089】

鉄恒常性を維持する主な因子として、ヘプシジン合成が、細胞内および細胞外鉄濃度、赤血球形成の需要（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｅｉｔｉｃ ｄｅｍａｎｄ）、および炎症を含むいくつかの刺激によって、転写的に調節される。健康な個体では、ヘプシジンは、鉄調節複合体内の調和（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｎｇ）タンパク質のグループの活性に起因して恒常レベルで維持される。遺伝子突然変異が組織／臓器毒性を伴って過剰の食物由来鉄吸収および周辺における貯蔵を引き起こす遺伝性ヘマクロマトーシス（ＨＨ）を患っている患者の遺伝子解析により、鉄恒常性を調節している主要なタンパク質が同定された。ＨＨの最も一般的なタイプは、トランスフェリンとトランスフェリン受容体の結合を妨げる異型ＭＨＣクラスタンパク質をコードするＨＦＥ遺伝子における突然変異に起因する。ＨＨのより稀な形態は、ＴＦＲ２、ヘプシジン、およびＨＪＶ（以降、「ＲＧＭｃ」と呼ぶ）に突然変異を有する患者で生じる。これらの稀な形態はそれぞれ、不適切に低いヘプシジンレベルによって特徴付けられ、ヘプシジン発現の上流調節におけるＲＧＭｃ、ＨＦＥ、およびＴＦＲ２に関する役割を支持している。興味深いことに、ＲＧＭｃにおける突然変異は、若年性ＨＨの重度の形態の最も一般的な原因であり、治療しないままでいると致命的となり得る。

【0090】

ヘプシジン発現は、炎症性シグナルＩＬ－６、および発達上のシグナリング（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を含む、細胞外刺激によって刺激される。ＢＭＰシグナリング構成要素（特異的なリガンド、受容体、および共受容体）の欠失が標的化されたマウスは、鉄過剰の表現型によって特徴付けられ、ヘプシジン発現におけるＢＭＰシグナリングの重要な役割を強調する。ＢＭＰシグナリングの調節は、シグナルの特異性および微調整をもたらすために複数レベルで生じ；共受容体の増大またはリガンドと受容体の相互作用の妨害が、ＢＭＰシグナリング調節に関する主なメカニズムである。ＲＧＭｃは、ＢＭＰが介在する肝臓におけるヘプシジン発現の増大に関する重要な共受容体であり、正常な生理学的条件下で肝細胞を低いＢＭＰレベルに対して感受性にさせて、それにより、ヘプシジン発現を増大させ、鉄恒常性を調節すると考えられる。ＲＧＭｃは、鉄調節におけるその力価および限られた役割に起因して、ヘプシジン関連の鉄制限が重要な役割を果たす障害、例えば慢性疾患の貧血のための、魅力的な治療的ターゲットである。

【0091】

ＢＭＰは、もともとは骨および軟骨の形成を誘導する能力によって発見されたＴＧＦβスーパーファミリー内の成長因子の広範なサブファミリーである。骨との関連性以外に、多くの他の成長因子と同様、ＢＭＰは、生物学的プロセスの様々なセットに関与する。例えば、ＢＭＰ６は、脂質代謝および卵巣生理機能を含む多くの異なる生物学における役割があるが、肝臓においては、鉄恒常性の中心的な調節因子であるヘプシジンの調節を介して、ヒトでの鉄調整における重要な制御ポイントとして機能する。

【0092】

したがって、ＢＭＰ６は、鉄調節不全を伴う疾患および障害を治療するための代替的な治療的ターゲットとなっている。Ｅｌｉ ＬｉｌｌｙおよびＮｏｖａｒｔｉｓを含む複数のグループが、ＢＭＰ６に特異的に結合して中和する抗体を開発して、貧血のような症状を治療するための、かかる抗体の治療的使用を提案した。しかしながら、ＢＭＰ６シグナリングを全身性に直接阻害することを目的とするこれらの手法は、ＢＭＰ６が関与している非常に多くの異なる生理学的プロセスをかき乱す可能性があり、意図しない不要な効果（例えば、毒性）を生じさせるリスクが高くなる。

【0093】

最近では、反発性ガイダンス分子（ＲＧＭ）が、ＢＭＰに相互作用するタンパク質として同定されている。タンパク質のＲＧＭファミリーは、少なくとも３つの公知のメンバー、すなわち、ＲＧＭａ、ＲＧＭｂ、およびＲＧＭｃを含み、胚形成中の軸索成長をガイドする最初のメンバー（ｆｏｕｎｄｉｎｇ ｍｅｍｂｅｒ）であるＲＧＭａの役割に起因してそのように呼ばれている。

【0094】

構造的に、ＲＧＭは、Ｎ末端シグナル配列、ＲＧＤモチーフ（ＲＧＭａおよびＲＧＭｃ）、部分的フォンビルブラントＤ型（ｖＷＦＤ）ドメイン、および自己触媒的Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｈｉｓ（ＧＤＰＨ）切断部位からなる、グリコシルホスファチジル－イノシトール（ＧＰＩ）アンカータンパク質である。ＲＧＭは、共受容体として、ＢＭＰ６を含む成長因子のＢＭＰクラスの複数のメンバーと相互作用することが報告されている。ＲＧＭファミリーメンバーのそれぞれは、特にそれらのＢＭＰ結合ドメインにわたって大きな構造相同性を共有している（表１参照）。ＲＧＭａおよびＲＧＭｃは特に、高い配列相同性を共有している。

【0095】

ファミリーメンバー間のかなりの相同性にもかかわらず、それらの発現および生物学的機能は全く異なって見える。ＲＧＭａおよびＲＧＭｂは、神経系生物学、免疫、炎症、血管新生、および増殖における役割を有していると報告されているが、ＲＧＭｃは肝臓（例えば、肝細胞）において主に発現され、それはヘプシジン合成の主な部位であり、鉄代謝の調節に関与している。

【0096】

証拠は、ＢＭＰ６／ＲＧＭｃ軸の阻害が、鉄調節不全を治療するための魅力的な治療的アプローチであり得るという概念を支持する。例えば、ＵＳ２０１３／０３３０３４３Ａ１は、ＲＧＭａ／ｃに結合して中和するモノクローナル抗体が、処置された動物において、１）ヘプシジンレベルを低減させ、２）血清鉄レベルおよびトランスフェリン飽和度を増大させ、３）不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）を低減させることが可能であると開示した。

【0097】

本開示の発明者らは、ＲＧＭｃ選択的阻害が、改善された安全性プロファイルを提供し得ることを認識した。その理由は、かかる阻害剤が、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂの正常な生物学的機能をそのままで維持しながら、肝臓によって発現されるＲＧＭｃのみを標的化するはずであるからであった。したがって、本発明者らは、ＢＭＰ６活性の肝臓特異的な調整を達成するために、ＲＧＭａまたはＲＧＭｂに結合しないＲＧＭｃ選択的抗体を同定することを探求した。

【0098】

【0099】

［ＲＧＭｃ／ヘモジュベリン（ＨＪＶ）］
ヒトＲＧＭｃの少なくとも３つのアイソフォームが存在し、前駆体タンパク質（アイソフォームａ；配列番号１）および２つのスプライス変異体（アイソフォームｂおよびアイソフォームｃ；それぞれ配列番号２および３）を含む。主要アイソフォームであるヒトＲＧＭｃアイソフォーム「ａ」は、４２６アミノ酸からなり、最も長い転写産物を代表している。本明細書において別段の指示がない限り、用語「ＲＧＭｃ」は、ＲＧＭｃアイソフォームａの全長タンパク質、ヘテロ二量体、または切断産物を指す。以下は、ＲＧＭｃアイソフォーム、ＲＧＭａ、およびＲＧＭｂのアミノ酸配列である。

【0100】

【0101】

【0102】

【0103】

【0104】

【0105】

ＲＧＭｃは、ＢＭＰ６、ＢＭＰ６結合Ｉ型およびＩＩ型セリントレオニンキナーゼ受容体（例えば、Ａｌｋ２、Ａｌｋ３、ＢＭＰＲ２、およびＡｃｔＲＩＩＡ）、ネオゲニン、ＲＧＭｃ（ＨＪＶ）、ＨＦＥ、およびＴＦＲ２を含むより大きな多量体タンパク質複合体の一部である、ＢＭＰ６に関する共受容体である。ＢＭＰ６のその受容体への結合、次いで、より大きな多量体複合体は、下流ＳＭＡＤリン酸化を誘導し、ヘプシジン転写の増大を仲介する転写因子の核移行を誘導する。したがって、ＢＭＰ６シグナリングは、ヘプシジン発現の調節を通して鉄恒常性を直接調整することが示されている。

【0106】

ＲＧＭｃは、哺乳類において膜結合型および可溶型で発現される。膜結合型ＲＧＭｃは、２つの異なる形態、単鎖全長形態、およびジスルフィド結合した２つの鎖（ヘテロ二量体）形態で、細胞表面上に見られる。ＲＧＭｃのヘテロ二量体の形態は、約３５ｋＤのＣ末端フラグメントおよび約２０ｋＤのＮ末端フラグメントを産出する、ＦＧＤＰＨモチーフにおいて生じる自己タンパク分解の結果であり、ジスルフィド結合によって結合したままである。単鎖、全長ＲＧＭｃは、ＢＭＰ２と相互作用することが示されたが、以前の研究は、自己タンパク分解がタンパク質の正しい折りたたみに重要であること、および、自己触媒的プロセッシングがＲＧＭの一般的かつ重要な特色であることを示唆している。例えば、ＲＧＭｃのヘテロ二量体形態のみが、ヘプシジン発現をインビトロで活性化し、ＲＧＭａの自己触媒的プロセッシングは、軸索に対するその増殖阻害作用に必要であることが示されている。さらに、いくつかのＪＨＨと関係がある突然変異が、ＲＧＭｃ自己触媒的切断部位の近くにあり、これらの突然変異は、シグナリング活性が低く、しばしばＥＲにおいて保持されている。

【0107】

さらに、少なくとも２つのプロテアーゼ、フューリンおよびＴＭＰＲＳＳ６が、ＲＧＭｃを切断してＲＧＭｃのいくつかの可溶型（ｓ－ＲＧＭｃまたはｓ－ＨＪＶ）を産生することが示されている。特に、フューリンの切断は、約４０ｋＤのｓ－ＲＧＭｃフラグメントを産生する。このフラグメントは、ＢＭＰリガンドに対する結合に関して膜結合型ＲＧＭｃと競合するデコイ受容体として作用して、それにより、ヘプシジン発現を減少させ、血清鉄レベルを増大させることが示されている。興味深いことに、フューリン活性は、鉄欠乏症および低酸素症において増大することが示されている。しかしながら、フューリンは、プロ－ヘプシジンのプロセッシングにも関与しているので、ヘプシジン発現に対するフューリンの効果は複雑であり得て、特定の細胞状態に依存する可能性が最も高い。

【0108】

一方で、ＴＭＰＲＳＳ６は、複数の部位でＲＧＭｃを切断することができ、様々な機能を有する切断フラグメントをもたらす。ヘプシジン発現を調節するＴＭＰＲＳＳ６の役割は、マウスにおけるその不活性化が、ヘプシジンレベルの増大、鉄吸収のブロック、および貧血をもたらすことを示している研究によって示された。さらに、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）は、ＴＭＰＲＳＳ６／マトリプターゼ－２をコードする遺伝子における突然変異によって引き起こされ得る。しかしながら、ＴＭＰＲＳＳ６によってシェディングされたＲＧＭｃフラグメントは、ＢＭＰに結合する能力が減少することも示されている。

【0109】

上述のように、ヘプシジンは、全身性の鉄の可動化の主要な調節因子であり、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）が介在するシグナリング（特にＢＭＰ６）によって調節される。ＲＧＭｃは、ＢＭＰ６に結合して、Ｓｍａｄが介在するパスウェイを調節し、ヘプシジン発現の調節をもたらし、次いで、フェロポーチン（鉄輸送体タンパク質）の分解をもたらし、それにより、マクロファージおよび腸細胞から循環中への鉄放出をブロックする。したがって、ＲＧＭｃ活性の増大は、ヘプシジン発現を増大させ、細胞からの鉄放出の減少をもたらすと考えられる。この状況では、ＲＧＭｃ活性は、全身性の鉄枯渇に起因して鉄恒常性の不均衡を生じさせ得て、鉄関連の疾患をもたらす。換言すれば、ＲＧＭｃが介在するヘプシジンレベルの増大は貧血をもたらし得て、一方で、その発現の低減は、多くのヘモクロマトーシス（鉄過剰）疾患における原因となる特徴であり得る。

【0110】

したがって、本出願は、特異的に結合して、ＲＧＭａまたはＲＧＭｂと交差反応せずにＲＧＭｃ活性をインビボで阻害する、ＲＧＭｃ選択的モノクローナル抗体およびそのフラグメントを提供する。出願人が知っている限り、これらの抗体およびフラグメントは、かかる阻害剤の新規のクラスを代表する。この手法に関する理論的根拠は以下を含む。第１に、ヘプシジンが鉄恒常性の主要な調節因子であり、ＢＭＰ６がそのプロセスに必要であるという認識に基づいて、このシグナリング軸をブロックする阻害剤が望ましい。第２に、ＢＭＰ６は広く発現され、様々な範囲の生物学的役割を果たすので、ＢＭＰ６の直接的な標的化を避けることが有利である。タンパク質のＲＧＭファミリーは、ＢＭＰ６、ＢＭＰ２およびＢＭＰ４のようなＢＭＰと相互作用し、それらの共受容体であることが知られているので、共受容体の標的化は、シグナリングをブロックしてヘプシジンを調節する代替的および魅力的な手法を提供し得る。しかしながら、第３に、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂは全く異なる生物学的機能を発揮するという認識があるので、かかる阻害剤は、ＲＧＭａ／ｂに影響せずにＲＧＭｃを選択的に阻害するべきである。このようにして、肝臓ＲＧＭｃの選択的阻害は、ＢＭＰ６、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂの正常な機能を不注意および全身的にブロックすることから生じ得る潜在的な不要な副作用を最小限にしながら達成され得る。

【0111】

本開示は、ＲＧＭｃまたはＲＧＭｃ含有複合体に特異的に結合してその機能を阻害するが、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂには結合せず、または機能を阻害しない、抗体、およびその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、およびその抗原結合フラグメントは、ＢＭＰ（例えばＢＭＰ６）とＲＧＭｃの相互作用を阻害する。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体またはフラグメントは、ネオゲニンとＲＧＭｃの相互作用を阻害しない。任意の実施態様において、本発明によって包含される抗体およびフラグメントは、ＲＧＭｃパスウェイの絶妙な特異性および標的化を提供する。有利に、かかる抗体またはフラグメントは、毒性の低減を達成し得る。重要なことに、ＲＧＭｃ発現は組織のサブセットに限定されるので、ＲＧＭｃが介在するＢＭＰ６パスウェイの阻害は、ＢＭＰ６自体との直接拮抗またはＲＧＭファミリーの広範な阻害とは違い、組織選択的な効果を達成するはずであり、それ故に、全身性効果に由来する毒性を減少させる。

【0112】

したがって、本発明は、ＲＧＭｃの選択的阻害剤の使用が、非選択的阻害剤と比較して、鉄調節不全を伴う症状の治療のための有利な手法を提供するという認識を包含する。この目的を達成するために、本開示の発明者らは、インビボで、ＲＧＭａまたはＲＧＭｂを標的化せずにＲＧＭｃを特異的および選択的に標的化する抗体またはそのフラグメントを設計および生産することを探求した。これは、選択性が、かかる阻害剤のインビボ投与に関して改善された安全性プロファイル（例えば、毒性または副作用の減少）を提供するという概念に少なくとも一部基づく。

【0113】

例えば、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂとともにＲＧＭｃを標的化することは、ＲＧＭａ／ｂの広範囲の非肝臓組織発現およびそれらの公知の役割 様々な生理学的プロセスと関連する潜在的な毒性を増大させ得る。特に、ＲＧＭａは、胚発生に重大であることが示されており、成体マウスの脳、皮膚、心臓、肝臓、肺、腎臓、精巣、および消化管を含む複数の組織において発現される。これらのデータと一致して、ＲＧＭａ遺伝子が欠損したマウスのおよそ半数が、外脳症のような（ｅｘａｎｃｅｐｈａｌｉｃ）表現型および主な形態学上および発達上の欠点を有して子宮内で死亡する。ＲＧＭａは、損傷後のニューロンの再生、回復および生存において重要な役割を果たすことも示されている。病理学的に、ＲＧＭａレベルの上昇は、損傷および虚血性脳卒中による脳病変；アルツハイマー病アミロイド斑；およびパーキンソン病患者の黒質において観察される。しかしながら、減少したＲＧＭａ発現および増大したプロモーターメチル化状態は、結腸直腸がんの起源および進行と密接に関連することが示されている（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ ２０１２；２７（５）：１６５３－９）。これらの証拠は、ＲＧＭａ／ｃ交差反応性抗体が、例えば、がん進行の原因となり得て、または悪化させ得ることを示唆している。

【0114】

胚発生およびニューロン再生に加えて、ＲＧＭａは、損傷に対する免疫応答を調節することも示されていて；それは、脳および脊髄病変において樹状細胞によって発現され、Ｔ細胞応答を調整する。特に、ＲＧＭａの阻害は、多発性硬化症（実験的な自己免疫性脳脊髄炎；ＥＡＥ）のマウスモデルにおいてＴ細胞応答を抑制することが示されている。ヒトでは、ＲＧＭａ阻害は、Ｔ細胞増殖および末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における炎症促進性サイトカインの産生を減少させる。さらに、Ｔ細胞サブセットの中では、ＲＧＭａは、Ｔｈ１７細胞上に高発現されることが示されている。Ｔｈ１７細胞は、とりわけ、感染組織へ好中球およびマクロファージを動員することによって感染に対する宿主防御において重要な役割を果たすので、正常な免疫機能の薬理学的混乱は望ましくない。有利に、ＲＧＭｃを選択的に標的化および阻害し、ＲＧＭａについてはしないことにより、そのような副作用を効果的に避けることができる。

【0115】

これらの機能の多くは損傷に関するものであるが、ＲＧＭａは、健康な個体におけるニューロン再生も調整し得る。損傷に対するＣＮＳ応答の調節におけるその重要な役割、免疫応答、および様々な臓器における未知の役割を考慮すると、ＲＧＭａ活性の阻害は、潜在的なオフターゲット副作用のリスクのため望ましくない。

【0116】

また、ＲＧＭｂは、成体マウスにおける脳、骨、心臓、肺、肝臓、腎臓、精巣、卵巣、子宮、精巣上体および下垂体を含む複数の組織内に発現されることが示されている。ＲＧＭｂノックアウトマウスは、出生後１２日目までに死亡し、発育が妨げられる。ＲＧＭｂは、ＲＧＭａ同様に、免疫応答における役割も有している。特に、ＲＧＭｂは、肺マクロファージおよび樹状細胞において高レベルで発現される。それが不存在の場合、ＩＬ－６レベルがこれらの細胞型において上昇し、炎症を調節する役割を示唆している。ＲＧＭｂは、神経突起伸長を促進することも示されている。最近では、ＲＧＭｂは、肺におけるＰＤ－Ｌ２に関する結合パートナーとして説明され、この相互作用のブロックは呼吸器耐性の発達を妨げ、肺免疫におけるＲＧＭｂに関する役割が強調された。そのことは、ＲＧＭｂ機能を妨げる阻害剤が、免疫応答の調節不全を引き起こし得る可能性を高める。

【0117】

さらに、ＲＧＭｂは、場合によりＳＭＡＤ活性化を阻害することにより、腫瘍抑制因子として作用し得ることが示唆されている。実際に、ＲＧＭｂの発現減少は、非小細胞肺癌腫における予後不良と関連する。ＲＧＭｂ遺伝子は、結腸直腸がんのサブタイプにおいて不活化され、ＲＧＭｂは、インビトロで、乳がん増殖の負の調節因子であることが示されている。したがって、ＲＧＭｂの阻害は、免疫系および神経系に対する効果があり得るだけでなく、そのような阻害は、がんの進行および／または発達も増大させ得る。

【0118】

要約すると、関連するファミリーメンバーＲＧＭａおよびＲＧＭｂの様々な生物学的プロセスにおける広範な発現パターンおよび多面的機能は、ＲＧＭｃの限定された発現パターンおよび鉄恒常性の維持における集中した役割とは対照的である。このことは、オフターゲット効果を悪化させずに鉄制限性の貧血のための新規の治療学の発見へ向けてＲＧＭｃ特異的手法を取る重要性を強調する。

【0119】

したがって、一態様では、本発明は、インビボで、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂ活性の妨害と関連する潜在的な副作用または毒性を引き起こさずにＲＧＭｃ機能を阻害することを目的とする。ＲＧＭｃ機能の介入によるＢＭＰ６シグナリングの肝臓選択的阻害は、慢性腎疾患の貧血、がんの貧血および慢性炎症の貧血を含む様々な鉄制限性の貧血を標的化する方法を提供し得ると考えられる。

【0120】

本発明によれば、ＲＧＭｃの選択的阻害剤は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂのような他の密接に関連した因子を阻害しない。かかる阻害剤は、様々な形態の貧血または鉄制限性の貧血を伴う疾患の治療を含む、鉄恒常性を正常化するために用いることができる。実際に、本明細書中に説明されるように、ＲＧＭｃ特異的抗体は、骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）－ヘプシジン軸を選択的に抑制し、赤血球産生のための鉄利用率を増大させることが示されている。

【0121】

［ＲＧＭｃ阻害剤］
本発明の方法を実施するために、ＲＧＭ／ＨＪＶの任意の適切な阻害剤を、かかる薬剤がＲＧＭｃアイソフォームに関して十分な選択性でＲＧＭを阻害または拮抗するのであれば用いてよい。好ましくは、かかるＲＧＭｃ阻害剤は、ヒト対象へ投与した場合に臨床利益（例えば、治療的効能および許容できる毒性プロファイル）を提供する用量で、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂに対して測定可能な阻害活性を有さない。

【0122】

本明細書において用いられる用語「阻害剤」は、ＲＧＭｃシグナリングをブロックまたは拮抗することが可能な任意の薬剤を指す。適切な阻害剤は、小分子、核酸に基づく薬剤、生物製剤（例えば、ポリペプチドに基づく薬剤、例えば抗体および他の発見薬剤）、およびそれらの任意の組み合わせを含む。

【0123】

一部の実施態様では、かかる薬剤は、ＢＭＰ受容体複合体とＲＧＭｃの関連を阻害することにより、ＲＧＭｃ活性を妨げることができ、または減少させることができる。一部の実施態様では、かかる薬剤は、ＢＭＰへのＲＧＭｃの結合を阻害することにより、ＲＧＭｃ活性を妨げることができ、または減少させることができる。一部の実施態様では、かかる薬剤は、ＢＭＰ６へのＲＧＭｃの結合を阻害することにより、ＲＧＭｃ活性を妨げることができ、または減少させることができる。一部の実施態様では、かかる薬剤は、ネオゲニンへのＲＧＭｃの結合を阻害することにより、ＲＧＭｃ活性を妨げることができ、または減少させることができる。一部の実施態様では、かかる薬剤は、ＲＧＭｃ／ＢＭＰ６結合の競合阻害剤である。一部の実施態様では、かかる薬剤は、ＲＧＭｃ／ネオゲニン結合の競合阻害剤である。

【0124】

一部の実施態様では、阻害剤は、抗体（そのフラグメント、例えば、米国特許６，２９１，１５８；６，５８２，９１５；６，５９３，０８１；６，１７２，１９７；および６，６９６，２４５に記載されるようなドメイン抗体（ｄＡｂ）を含む）、小分子阻害剤、Ａｄｎｅｃｔｉｎ、Ａｆｆｉｂｏｄｙ、ＤＡＲＰｉｎ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ、Ａｖｉｍｅｒ、Ｖｅｒｓａｂｏｄｙまたは遺伝子療法であってよい。本発明によって包含される阻害剤の使用は、抗体模倣物、例えばモノボディおよび単一ドメイン抗体も含む。モノボディは、典型的に分子足場としてフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（ＦＮ３）を用いる合成の結合タンパク質である。モノボディは、１０番目のフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインに基づくＡｄｎｅｃｔｉｎｓ（商標）を含む。

【0125】

［ＲＧＭｃ特異的抗体］
最近では、ＲＧＭａ／ＲＧＭｃに特異的に結合するモノクローナル抗体が、ラットおよびカニクイザルにおいてヘプシジンを下方調節することによって血清鉄を増大させることが示された（Ｂｏｓｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＡＡＰＳ Ｊ．２０１５ Ｊｕｌ；１７（４）：９３０－９３８）。この事例において、研究者らは、ＲＧＭａ／ＲＧＭｃ抗体を受け取った健康な動物における明らかな毒性は報告しておらず、血液パラメータの正常化が投与期間後の回復期間（約１２週）後に見られた。しかしながら、例えば神経系に対する、ＲＧＭａの同時的な阻害と関連する潜在的リスクは、公表された研究からは分からない。さらに、ＲＧＭａの肝細胞ではない発現と関連する毒性（例えば、脳、皮膚、心臓、肺、腎臓、精巣、および消化管と関連する毒性）のような、非常に多くの他の毒性が、上記に概説されるように、ヒトではあり得る。ＲＧＭａ発現の減少は、結腸直腸がんの起源および進行と関連することも示されている。さらに、ＲＧＭａ発現は、損傷に対する免疫応答を調節することが示されている。したがって、本発明は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂ活性／機能に結合および阻害しない、新規のＲＧＭｃ選択的阻害剤を提供する。

【0126】

本発明の一部の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、ＢＭＰとＲＧＭｃの相互作用を阻害または減少させる。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、ＢＭＰ６とＲＧＭｃの相互作用を阻害または減少させる。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、ネオゲニンとの相互作用を阻害または減少させない。

【0127】

一部の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、以下の相互作用タンパク質；ＨＦＥ、ＴＦＲ２、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、ＢＭＰＲ２、ＡＣＶＲ２ＡおよびＴＭＰＲＳＳ６のうちの１つまたは複数とＲＧＭｃの相互作用を調整する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、以下の相互作用タンパク質；ＨＦＥ、ＴＦＲ２、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、ＢＭＰＲ２、ＡＣＶＲ２ＡおよびＴＭＰＲＳＳ６のうちの１つまたは複数とＲＧＭｃの相互作用を阻害する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、ＨＦＥとＲＧＭｃの相互作用を阻害する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、ＴＦＲ２とＲＧＭｃの相互作用を阻害する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、ＡＬＫ２とＲＧＭｃの相互作用を阻害する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、ＡＬＫ３とＲＧＭｃの相互作用を阻害する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、ＢＭＰＲ２とＲＧＭｃの相互作用を阻害する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、ＡＣＶＲ２ＡとＲＧＭｃの相互作用を阻害する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、抗体）は、ＴＭＰＲＳＳ６とＲＧＭｃの相互作用を阻害する。

【0128】

一部の実施態様では、ＲＧＭｃは、天然起源の哺乳類アミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＲＧＭｃは、天然起源のヒトアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＲＧＭｃは、ヒト、サル、ラットまたはマウスのアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＲＧＭｃは、配列番号１に示されるヒトＲＧＭｃ配列、またはそのフラグメントである。一部の実施態様では、ＲＧＭａは、ＲＧＭｃの可溶型である。

【0129】

一部の実施態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）またはＭＳＤのような適切なインビトロ結合アッセイにおいて、≦５ｎＭ（例えば、≦０．１ｎＭ）のＫ_ＤでＲＧＭｃに結合する。一方で、以前に記載されたＲＧＭｃ抗体とは異なり、これらのＲＧＭｃ特異的抗体は、同一のアッセイ条件下でＲＧＭａまたはＲＧＭｂに対していかなる検出可能な結合も示さない。例えば、ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、≦０．１ｎＭのＫ_ＤでＲＧＭｃに結合し得るが、同一のアッセイ条件下でＭＳＤによってＲＧＭａまたはＲＧＭｂに対していかなる検出可能な結合も示さない。

【0130】

一部の実施態様では、ＲＧＭａは、天然起源の哺乳類アミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＲＧＭａは、天然起源のヒトアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＲＧＭａは、ヒト、サル、ラットまたはマウスのアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＲＧＭａは、配列番号４に示されるヒトＲＧＭａ配列、またはそのフラグメントである。一部の実施態様では、ＲＧＭａは、ＲＧＭａの可溶型である。

【0131】

一部の実施態様では、ＲＧＭｂは、天然起源の哺乳類アミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＲＧＭｂは、天然起源のヒトアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＲＧＭｂは、ヒト、サル、ラットまたはマウスのアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、ＲＧＭｂは、配列番号５に示されるヒトＲＧＭｂ配列、またはそのフラグメントである。一部の実施態様では、ＲＧＭｂは、ＲＧＭｂの可溶型である。

【0132】

本発明の態様は、ＲＧＭｃに選択的に結合し、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む、単離されたモノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。

【0133】

一態様では、ＲＧＭｃに選択的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、対応するＣＤＲ領域を比較してＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、および／またはＣＤＲＬ３と実質的に類似する１つまたは複数のＣＤＲ配列を有する。例えば、抗体は、配列番号６～１１、配列番号１４～１９、配列番号２２～２７、配列番号３０～３５、または配列番号３８～４３の任意の１つにおける対応するＣＤＲ領域と比較して１、２、３、４、または、５個までのアミノ酸残基変動をそれぞれ含んでいる１つまたは複数のＣＤＲ配列（例えば、配列番号６～１１、配列番号１４～１９、配列番号２２～２７、配列番号３０～３５、または配列番号３８～４３）を含んでよい。

【0134】

本明細書において用いられる語句「アミノ酸変動」または「アミノ酸変更」または「アミノ酸残基の変更」は、アミノ酸置換および／または欠失を含む。

【0135】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下から選択される少なくとも３つのＣＤＲ（ＣＤＲのそれぞれに関して３個までのアミノ酸変更、例えば１、２、または３個のアミノ酸変更を含んでもよい）：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号６；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号７；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号８；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号９；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１０；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１１を含む。

【0136】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下から選択される少なくとも３つのＣＤＲ（ＣＤＲのそれぞれに関して３個までのアミノ酸変更、例えば１、２、または３個のアミノ酸変更を含んでもよい）：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１４；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１５；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１６；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１７；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１８；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１９を含む。

【0137】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下から選択される少なくとも３つのＣＤＲ（ＣＤＲのそれぞれに関して３個までのアミノ酸変更、例えば１、２、または３個のアミノ酸変更を含んでもよい）：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号２２；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号２３；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号２４；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号２５；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号２６；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号２７を含む。

【0138】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下から選択される少なくとも３個（例えば、３、４、５個、または好ましくは６個すべて）のＣＤＲ（ＣＤＲのそれぞれに関して３個までのアミノ酸変更、例えば１、２、または３個のアミノ酸変更を含んでもよい）：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号３０；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号３１；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号３２；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号３３；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号３４；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号３５を含む。

【0139】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、以下から選択される少なくとも３つのＣＤＲ（ＣＤＲのそれぞれに関して３個までのアミノ酸変更、例えば１、２、または３個のアミノ酸変更を含んでもよい）：ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号３８；ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号３９；ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号４０；ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号４１；ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号４２；および、ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号４３を含む。

【0140】

別の態様では、本発明は、特定のアミノ酸変更を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、および／またはＣＤＲ－Ｈ３を含んでいる重鎖可変領域を含む、抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0141】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１４の４位のセリン残基はアルギニンで置換されてよいという条件で、配列番号１４に示されるＣＤＲ－Ｈ１を含む。別の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１４の７位のアラニン残基はセリンで置換されてよいという条件で、配列番号１４に示されるＣＤＲ－Ｈ１を含む。別の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１４の９位のセリン残基はグルタミンで置換されてよいという条件で、配列番号１４に示されるＣＤＲ－Ｈ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１４の４位のセリン残基はアルギニンで置換されてよい；（ｉｉ）配列番号１４の７位のアラニン残基はセリンで置換されてよい；および／または（ｉｉ）配列番号１４の９位のセリン残基はグルタミンで置換されてよいという条件で、配列番号１４に示されるＣＤＲ－Ｈ１を含む。

【0142】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１５の８位のトレオニン残基はバリンで置換されてよいという条件で、配列番号１５に示されるＣＤＲ－Ｈ２を含む。別の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１５の１０位のアスパラギン残基はセリンで置換されてよいという条件で、配列番号１５に示されるＣＤＲ－Ｈ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１５の８位のトレオニン残基はバリンで置換されてよい；および／または（ｉｉ）配列番号１５の１０位のアスパラギン残基はセリンで置換されてよいという条件で、配列番号１５に示されるＣＤＲ－Ｈ２を含む。

【0143】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１６の５位のイソロイシン残基はチロシンで置換されてよいという条件で、配列番号１６に示されるＣＤＲ－Ｈ３を含む。別の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１６の６位のアラニン残基はバリンで置換されてよいという条件で、配列番号１６に示されるＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、（ｉ）配列番号１６の５位のイソロイシン残基はチロシンで置換されてよい；および／または（ｉｉ）配列番号１６の６位のアラニン残基はバリンで置換されてよいという条件で、配列番号１６に示されるＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0144】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１７に示されるＣＤＲ－Ｌ１を含み、３個までのアミノ酸変更を含んでもよい。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１８に示されるＣＤＲ－Ｌ２を含み、３個までのアミノ酸変更を含んでもよい。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１９に示されるＣＤＲ－Ｌ３を含み、３個までのアミノ酸変更を含んでもよい。

【0145】

特定の実施態様では、本発明は、ヒトＲＧＭｃに特異的に結合する単離された抗体を提供し、ここで抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうち少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１４：
ｉ）配列番号１４の４位のセリン残基はアルギニンで置換されてよい；
ｉｉ）配列番号１４の７位のアラニン残基はセリンで置換されてよい；および／または
ｉｉｉ）配列番号１４の９位のセリン残基はグルタミンで置換されてよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１５：
ｉ）配列番号１５の８位のトレオニン残基はバリンで置換されてよい；および／または
ｉｉ）配列番号１５の１０位のアスパラギン残基はセリンで置換されてよい；
ｃ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１６：
ｉ）配列番号１６の５位のイソロイシン残基はチロシンで置換されてよい；および／または
ｉｉ）配列番号１６の６位のアラニン残基はバリンで置換されてよい；
ｄ）ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１７；
ｅ）ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１８；および
ｆ）ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１９。

【0146】

一部の実施態様では、かかる抗体は、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）またはＭＳＤのような適切なインビトロ結合アッセイにおいて測定して＜１ｎＭ（好ましくは＜０．１ｎＭ）のＫ_ＤでヒトＲＧＭｃに結合する。好ましい実施態様では、かかる抗体は、ＲＧＭｃに選択的に結合して活性を阻害し、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂには結合せず活性を阻害しないという点で、アイソフォーム特異的でもある。

【0147】

一部の実施態様では、重鎖ＣＤＲおよび／または軽鎖ＣＤＲ配列は、いかなるアミノ酸変更も含まない。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号６に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号７に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号８に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号９に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１０に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１１に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0148】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含んでいる重鎖可変領域および配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ２を含んでいる重鎖可変領域および配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１を含んでいる重鎖可変領域および配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

【0149】

特定の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号６、７、および８にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに、配列番号９、１０、および１１にそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0150】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１４に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１５に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１６に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１７に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１８に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１９に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0151】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含んでいる重鎖可変領域および配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ２を含んでいる重鎖可変領域および配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１を含んでいる重鎖可変領域および配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

【0152】

特定の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１４、１５、および１６にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに、配列番号１７、１８、および１９にそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0153】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２２に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２３に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２４に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２５に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２６に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２７に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0154】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含んでいる重鎖可変領域および配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ２を含んでいる重鎖可変領域および配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１を含んでいる重鎖可変領域および配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

【0155】

特定の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２２、２３、および２４にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに、配列番号２５、２６、および２７にそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0156】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３０に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３１に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３２に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３３に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３４に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３５に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0157】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含んでいる重鎖可変領域および配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ２を含んでいる重鎖可変領域および配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１を含んでいる重鎖可変領域および配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

【0158】

特定の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３０、３１、および３２にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに、配列番号３３、３４、および３５にそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0159】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３８に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３９に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４０に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｈ３を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４１に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ１を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４２に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ２を含む。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４３に示される配列を含んでいるＣＤＲ－Ｌ３を含む。

【0160】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含んでいる重鎖可変領域および配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ２を含んでいる重鎖可変領域および配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ２を含んでいる軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１を含んでいる重鎖可変領域および配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１を含んでいる軽鎖可変領域を含む。

【0161】

特定の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３８、３９、および４０にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３配列、ならびに、配列番号４１、４２、および４３にそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３配列を含む。

【0162】

本発明の態様は、ＲＧＭｃに選択的に結合し、重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列を含む、モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントに関する。

【0163】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２、配列番号２０、配列番号２８、配列番号３６、または配列番号４４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３、配列番号２１、配列番号２９、配列番号３７、または配列番号４５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0164】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号１３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変、または、配列番号１３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号１３と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0165】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号２１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号２１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２１と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0166】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号２９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号２９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２８と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号２９と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0167】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号３７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号３７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号３７と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0168】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または、配列番号４５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、または、配列番号４５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４４と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および、配列番号４５と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。

【0169】

一部の実施態様では、重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域配列は、本明細書中に提供される任意のＣＤＲ配列において異ならない。例えば、一部の実施態様では、配列変動の程度（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）が、本明細書中に提供される任意のＣＤＲ配列を除き、重鎖可変および／または軽鎖可変アミノ酸配列内に生じてよい。

【0170】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインまたは配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

【0171】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび／または配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインまたは配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

【0172】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび／または配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインまたは配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

【0173】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび／または配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインまたは配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

【0174】

一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび／または配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインまたは配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含んでいる重鎖可変ドメインおよび配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含んでいる軽鎖可変ドメインを含む。

【0175】

一部の実施態様では、２つのアミノ酸配列の「同一性パーセント」は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４－６８，１９９０（Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７３－７７，１９９３で改変）のアルゴリズムを用いて決定される。かかるアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で行なって、目的のタンパク質分子と相同のアミノ酸配列を得ることができる。２つの配列間にギャップが存在する場合は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２，１９９７に記載のようにＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが使用され得る。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合は、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターが用いられ得る。

【0176】

本明細書に記載の任意の抗体または抗原結合フラグメントにおいて、１つまたは複数の保存的突然変異が、残基が抗体抗原相互作用に関与する可能性がない位置においてＣＤＲまたはフレームワーク配列内に導入され得る。一部の実施態様では、そのような保存的突然変異（単数または複数）は、結晶構造に基づいて決定されるように、残基が、ＲＧＭｃとの相互作用に関与する可能性がない位置（単数または複数）においてＣＤＲまたはフレームワーク配列内に導入され得る。一部の実施態様では、同様の界面（例えば、抗原抗体相互作用に関与する残基）は、構造類似性を共有する他の抗原に関する公知の構造情報から推定され得る。

【0177】

本明細書において用いられる「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換がなされるタンパク質の相対的な電荷またはサイズ特性を変更しないアミノ酸置換を指す。変異は、そのような方法を集める参考文献（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９、または、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に見られるような、当業者に公知のポリペプチド配列を変更するための方法に従って調製され得る。アミノ酸の保存的置換は、以下の群：（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、Ｎ；および（ｇ）Ｅ、Ｄ内のアミノ酸の間でなされる置換を含む。

【0178】

一部の実施態様では、本明細書において提供される抗体は、望ましい特性を抗体に与える突然変異を含む。例えば、Ｆａｂアーム交換（ネイティブＩｇＧ４ ｍＡｂで生じることが知られる）に起因する潜在的な合併症を避けるために、本明細書において提供される抗体は、安定化「Ａｄａｉｒ」突然変異を含んでよく（Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．，「Ａ ｓｉｎｇｌｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ａｂｏｌｉｓｈｅｓ ｔｈｅ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｏｆ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｍｏｕｓｅ／ｈｕｍａｎ（ＩｇＧ４）ａｎｔｉｂｏｄｙ」，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０，１０５－１０８；１９９３）、ここで、セリン２２８（ＥＵナンバリング；残基２４１ Ｋａｂａｔナンバリング）は、プロリンに転換されて、ＩｇＧ１様（ＣＰＰＣＰ（配列番号４８））ヒンジ配列をもたらす。したがって、任意の抗体は、安定化「Ａｄａｉｒ」突然変異またはアミノ酸配列ＣＰＰＣＰ（配列番号４８）を含んでよい。一実施態様では、本明細書中に記載の抗体は、ＩｇＧ_１様ヒンジを生じさせて鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にするＳｅｒからＰｒｏへの主鎖置換を有するヒトＩｇＧ_４の重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。

【0179】

ＲＧＭｃに選択的に結合する本開示の抗体は、抗体定常領域またはその部分を含んでもよい。例えば、Ｖ_Ｌドメインは、そのＣ末端においてＣκまたはＣλのような軽鎖定常ドメインに付着されてよい。同様に、Ｖ_Ｈドメインまたはそのフラグメントは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのような重鎖、ならびに任意のアイソタイプサブクラスの全てまたは部分に付着されてよい。抗体は、適切な定常領域を含んでよい（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎｏ．９１－３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）を参照）。したがって、本開示の範囲内の抗体は、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメイン、またはその抗原結合フラグメントを、任意の適切な定常領域と組み合わせて含んでよい。例示的な実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ_１またはヒトＩｇＧ_４定常ドメインの全てまたはフラグメントを含んでいる重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇλ定常ドメインまたはヒトＩｇκ定常ドメインの全てまたはフラグメントを含んでいる軽鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。

【0180】

一部の実施態様では、ＲＧＭｃに選択的に結合する抗体は、本明細書中に開示される抗体のフレームワーク領域を含んでよく、または含まなくてよい。一部の実施態様では、ＲＧＭｃに選択的に結合する抗体はミューリン抗体であり、ミューリンフレームワーク領域配列を含む。他の実施態様では、抗体は、キメラ抗体、またはその抗原結合フラグメントである。別の実施態様では、抗体は、ヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントである。別の実施態様では、抗体は、完全ヒト抗体、またはその抗原結合フラグメントである。一実施態様では、抗体は、ヒト生殖細胞系アミノ酸配列を含んでいるフレームワーク領域を含む。

【0181】

本明細書中に記載の抗体、およびその抗原結合フラグメントは、抗原に結合するのに適切な任意の構造を有してよい。例えば、一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、２つの重鎖可変領域と２つの軽鎖可変領域を含んでいる４つのポリペプチド鎖を含む。別の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、１つの重鎖可変領域および１つの軽鎖可変領域を含む。例示的な実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦａｂフラグメント、ｓｃＦｖ、またはダイアボディである。

【0182】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ_１定常ドメインまたはヒトＩｇＧ_４定常ドメインの重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。例示的な実施態様では、重鎖免疫グロブリン定常ドメインは、ヒトＩｇＧ_４定常ドメインである。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、立体構造的エピトープに結合する。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、コンビナトリアルまたは不連続のエピトープに結合する。

【0183】

一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ_１様ヒンジを生じさせて鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にするＳｅｒからＰｒｏへの主鎖置換を有するヒトＩｇＧ_４定常ドメインの重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。一実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇλ定常ドメイン、またはヒトＩｇκ定常ドメインを含んでいる軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む。

【0184】

一実施態様では、抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖である４つのポリペプチド鎖を有するＩｇＧである。例示的な実施態様では、抗体は、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはキメラ抗体であってよい。一実施態様では、抗体は、ヒト生殖細胞系アミノ酸配列を有するフレームワークを含む。

【0185】

一実施態様では、本発明は、本明細書中に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと結合に関して競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、本明細書中に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと同一のエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0186】

本発明の別の態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体のクラスが提供され、それぞれ、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂに結合しない。ＲＧＭｃに特異的に結合する抗体（例えば本明細書中に記載の抗体）は、≦５ｎＭ（例えば、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．５ｎＭ、≦０．１ｎＭ、および≦０．０５ｎＭ）のＫ_Ｄで結合する。一実施態様では、抗体は、≦５ｎＭのＫ_ＤでヒトＲＧＭｃに結合する。別の実施態様では、抗体は、≦４ｎＭのＫ_ＤでヒトＲＧＭｃに結合する。別の実施態様では、抗体は、≦３ｎＭのＫ_ＤでヒトＲＧＭｃに結合する。別の実施態様では、抗体は、≦２ｎＭのＫ_ＤでヒトＲＧＭｃに結合する。別の実施態様では、抗体は、≦１ｎＭのＫ_ＤでヒトＲＧＭｃに結合する。別の実施態様では、抗体は、≦０．５ｎＭのＫ_ＤでヒトＲＧＭｃに結合する。別の実施態様では、抗体は、≦０．１ｎＭのＫ_ＤでヒトＲＧＭｃに結合する。別の実施態様では、抗体は、≦０．０５ｎＭのＫ_ＤでヒトＲＧＭｃに結合する。当該分野は、インビトロで結合活性を決定するために用いられ得る適切な技術およびアッセイに精通している。

【0187】

好ましい実施態様では、抗体のその抗原（単数または複数）に対する親和性を測定する適切な手段は、限定されないが、いわゆるバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）技術および表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイを含む。前者はＯｃｔｅｔ（登録商標）システムを含み、後者はＢｉａｃｏｒｅシステムを含む。別の実施態様では、抗体のその抗原（単数または複数）に対する親和性を測定する適切な手段は、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）を含む。

【0188】

本開示の態様は、本明細書において提供される特異的抗体、またはその抗原結合フラグメント、例えば、上述の１つまたは複数のＣＤＲ配列（１、２、３、４、５、または６個のＣＤＲ配列）を有する抗体のいずれかと、競合または交差競合する抗体に関する。一実施態様では、本発明は、配列番号６、配列番号７、および配列番号８に示される重鎖ＣＤＲ配列、および／または配列番号９、配列番号１０、および配列番号１１に示される軽鎖ＣＤＲ配列を有する抗体と競合または交差競合する抗体、およびその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号１２を含む重鎖可変領域配列、および／または配列番号１３を含む軽鎖可変領域配列を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントと競合または交差競合する抗体を提供する。

【0189】

一実施態様では、本発明は、配列番号１４、配列番号１５、および配列番号１６に示される重鎖ＣＤＲ配列、および／または配列番号１７、配列番号１８、および配列番号１９に示される軽鎖ＣＤＲ配列を有する抗体と競合または交差競合する抗体、およびその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号２０を含む重鎖可変領域配列、および／または配列番号２１を含む軽鎖可変領域配列を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントと競合または交差競合する抗体を提供する。

【0190】

一実施態様では、本発明は、配列番号２２、配列番号２３、および配列番号２４に示される重鎖ＣＤＲ配列、および／または配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７に示される軽鎖ＣＤＲ配列を有する抗体と競合または交差競合する抗体、およびその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号２８を含む重鎖可変領域配列、および／または配列番号２９を含む軽鎖可変領域配列を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントと競合または交差競合する抗体を提供する。

【0191】

一実施態様では、本発明は、配列番号３０、配列番号３１、および配列番号３２に示される重鎖ＣＤＲ配列、および／または配列番号３３、配列番号３４、および配列番号３５に示される軽鎖ＣＤＲ配列を有する抗体と競合または交差競合する抗体、およびその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号３６を含む重鎖可変領域配列、および／または配列番号３７を含む軽鎖可変領域配列を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントと競合または交差競合する抗体を提供する。

【0192】

一実施態様では、本発明は、配列番号３８、配列番号３９、および配列番号４０に示される重鎖ＣＤＲ配列、および／または配列番号４１、配列番号４２、および配列番号４３に示される軽鎖ＣＤＲ配列を有する抗体と競合または交差競合する抗体、およびその抗原結合フラグメントを提供する。一実施態様では、本発明は、配列番号４４を含む重鎖可変領域配列、および／または配列番号４５を含む軽鎖可変領域配列を有する抗体、またはその抗原結合フラグメントと競合または交差競合する抗体を提供する。

【0193】

一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、本明細書中に提供される抗体のいずれかと同一のエピトープにおいて、またはその付近に結合する。一部の実施態様では、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、エピトープの１５個以内のアミノ酸残基の範囲内で結合する場合は、エピトープの付近に結合する。一部の実施態様では、本明細書中に提供される任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントは、本明細書中に提供される抗体のいずれかによって結合されるエピトープの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸残基の範囲内で結合する。

【0194】

別の実施態様では、抗体とタンパク質の間の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）が１０^－８Ｍ未満で、本明細書中に提供される抗原のいずれか（例えばヒトＲＧＭｃ）に対する結合に関して競合または交差競合する、抗体、またはその抗原結合フラグメントが本明細書において提供される。他の実施態様では、抗体は、１０^－１１Ｍ～１０^－８Ｍの範囲内のＫ_ＤでＲＧＭｃに対する結合に関して競合または交差競合する。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと結合に関して競合する、ＲＧＭｃ特異的抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書において提供される。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと同一のエピトープに結合する、ＲＧＭｃ特異的抗体またはその抗原結合フラグメントが本明細書において提供される。

【0195】

本明細書において提供される抗体は、任意の適切な方法を用いて特徴付けられ得る。例えば、１つの方法は、抗原が結合するエピトープを同定すること、すなわち「エピトープマッピング」である。タンパク質上のエピトープの位置をマッピングおよび特徴付けるための多くの適切な方法が存在し、抗体抗原複合体の結晶構造解析、競合アッセイ、遺伝子フラグメント発現アッセイ、および合成ペプチドに基づくアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９９の第１１章に記載）を含む。さらなる例では、エピトープマッピングは、抗体が結合する配列を決定するために用いられ得る。エピトープは、線形エピトープであってよく、すなわち、一続きのアミノ酸で含まれてよく、または、アミノ酸の三次元相互作用によって形成された立体構造的エピトープであってよく、それは一続き（一次構造の線形配列）で必ずしも含まれなくてよい。

【0196】

異なる長さ（例えば、少なくとも４～６アミノ酸長）のペプチドは、単離または（例えば、組換えによって）合成されてよく、抗体による結合アッセイに用いられてよい。別の例では、抗体が結合するエピトープは、標的抗原配列に由来する重複するペプチドを用いることによって、そして、抗体による結合を決定することによって、体系的なスクリーニングにおいて決定され得る。遺伝子フラグメント発現アッセイによれば、標的抗原をコードするオープンリーディングフレームは、無作為に、または特異的な遺伝子構築のいずれかによってフラグメント化されて、試験されるべき抗体と発現された抗原フラグメントの反応度が決定される。遺伝子フラグメントは、例えば、ＰＣＲによって生産されてよく、それから、放射性アミノ酸の存在下で、インビトロで転写およびタンパク質に翻訳されてよい。放射能標識された抗原フラグメントに対する抗体の結合は、それから、免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定される。特定のエピトープは、ファージ粒子の表面上にディスプレイされたランダムペプチド配列の大きなライブラリー（ファージライブラリー）を用いることによって同定されてもよい。あるいは、重複ペプチドフラグメントの定義されたライブラリーは、単純な結合アッセイにおいて試験抗体に対する結合に関して試験されてよい。さらなる例では、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメインスワップ実験およびアラニンスキャニング突然変異誘発を行なって、エピトープ結合に必要な、十分な、および／または必須の、残基を同定することができる。例えば、ドメインスワップ実験は、ＲＧＭｃの様々なフラグメントが、密接に関連するが抗原性が異なるタンパク質、例えばＲＧＭｃタンパク質ファミリーの別のメンバー（例えば、ＲＧＭａまたはＲＧＭｂ）由来の配列で置換（スワップ）されている標的抗原の突然変異体を用いて行なうことができる。突然変異体ＲＧＭｃに対する抗体の結合を評価することにより、抗体結合に対する特定の抗原フラグメントの重要性を評価することができる。

【0197】

あるいは、競合アッセイは、一方の抗体が他方の抗体と同一のエピトープに結合するかどうか決定するために、同一抗原に結合することが知られている他の抗体を用いて行なうことができる。競合アッセイは、当業者によく知られている。

【0198】

さらに、ＲＧＭｃ内の１つまたは複数の残基と本明細書において提供される任意の抗体の相互作用は、日常的な技術によって決定することができる。例えば、結晶構造を決定することができ、それにより、ＲＧＭｃ内の残基および抗体（または抗原結合フラグメント）内の１つまたは複数の残基の間の距離を決定することができる。かかる距離に基づいて、ＲＧＭｃ内の特定の残基が抗体内の１つまたは複数の残基と相互作用するかどうか判定することができる。さらに、競合アッセイおよび標的突然変異誘発アッセイのような適切な方法を用いて、候補抗体の優先的な結合を判定することができる。

【0199】

一部の実施態様では、ＲＧＭｃに選択的に結合する本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書中に記載の相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つまたは複数を含む。一部の実施態様では、本発明は、本明細書中に記載のＲＧＭｃに選択的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子を提供する。一実施態様では、核酸分子は、本明細書中に記載のＣＤＲ配列の１つまたは複数をコードする。

【0200】

［Ｈ／ＤＸ－ＭＳによるＲＧＭｃ特異的抗体結合領域］
本開示の文脈において、抗原の「結合領域（単数または複数）」は、抗体抗原相互作用のための構造基礎を提供する。本明細書において用いられる「結合領域」は、生理学的溶液中でＲＧＭｃに結合した場合に、抗体またはフラグメントが結合領域を溶媒曝露から保護する（水素／重水素交換質量分析（Ｈ／ＤＸ－ＭＳ）のような適切な技術によって決定される）、抗体と抗原の間の界面領域を指す。

【0201】

当該分野は、溶液におけるタンパク質コンフォメーションまたはタンパク質間相互作用を調べるために広く用いられる技術であるＨ／ＤＸ－ＭＳに精通している。この方法は、タンパク質主鎖アミド内の水素を溶液中に存在する重水素と交換することに依拠する。水素－重水素交換速度を測定することにより、タンパク質の動態およびコンフォメーションに関する情報を得ることができる（Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ．（２０１４）「Ｈｙｄｒｏｇｅｎ／ｄｅｕｔｅｒｉｕｍｅｘ ｃｈａｎｇｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｆｏｒ ｐｒｏｂｉｎｇ ｈｉｇｈｅｒ ｏｒｄｅｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．」Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏ Ｔｏｄａｙ．１９（１）：９５－１０２に概説され；参照により援用される）。この技術の適用は、抗体抗原複合体が形成すると、結合パートナー間の界面が溶媒を塞ぎ得て、それにより、溶媒の立体障害に起因してＨ／Ｄ交換速度を減少させ、または妨げるという前提に基づく。

【0202】

この技術を用いて、抗体（またはＦａｂのようなフラグメント）によるＲＧＭｃの結合領域を決定することができる。一部の実施態様では、本明細書中に示される選択基準を満たす抗体またはフラグメントに結合するのに重要であることが特定されたヒトＲＧＭｃ上の部分は、ＲＧＭｃのα－１ヘリックス・ドメイン内に存在するアミノ酸ストレッチＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも一部を含む。同じ領域は、全長ＲＧＭｃ（配列番号１）上のアミノ酸残基４６～５３として特定され得る。図８Ｂに示されるように、この結合領域は、ＲＧＭファミリーメンバー間の配列多様性を示す。したがって、特定の理論によって拘束されずに、この第１の結合領域（領域Ａ）は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂを上回るＲＧＭｃの特異性に寄与し得ると考えられる。一部の実施態様では、抗体（または抗原結合フラグメント）に関するエピトープは、結合領域、ＹＶＳＳＴＬＳＬの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。一部の実施態様では、抗体（または抗原結合フラグメント）に関するエピトープは、結合領域の２以上のアミノ酸残基を含む。

【0203】

一部の実施態様では、本明細書中に示される選択基準を満たす抗体またはフラグメントに結合するのに重要であることが特定されたヒトＲＧＭｃ上の部分は、ＲＧＭｃのα－３ヘリックス・ドメイン内に存在するアミノ酸ストレッチＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも一部を含む。ＲＧＭｃ／ＢＭＰ２構造モデルに示されるように（図８Ｃ）、α－３ヘリックスは、ＢＭＰ２にごく接近している。したがって、特定の理論によって拘束されずに、この第２の結合領域（領域Ｂ）は、本明細書中に記載のＢＭＰ競合抗体の機能性（例えば、阻害）効果に寄与し得ると考えられる。一部の実施態様では、抗体（または抗原結合フラグメント）に関するエピトープは、結合領域、ＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬの少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。一部の実施態様では、抗体（または抗原結合フラグメント）に関するエピトープは、結合領域の２以上のアミノ酸残基を含む。

【0204】

いくつかの観察は、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３－由来抗体（例えば、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９）が、ＲＧＭｃの領域Ａおよび／または領域Ｂ内の少なくとも１つのアミノ酸に結合するという概念を支持する。

【0205】

第１に、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９ ＦａｂとＲＧＭｃのＨＤＸ－ＭＳデータに基づき、領域ＡおよびＢは、相対的に柔軟であり、かつ、溶媒によるアクセスが可能である。したがって、それらは抗体への結合に利用可能であり得る。ＲＧＭｃの非結合形態におけるこれらの領域の相対的重水素取り込みは、約５０～６０％の相対的重水素取り込みを示した。よりアクセスしにくい領域は通常、３０％未満の相対的重水素取り込みである。ＲＧＭｃのＮ末端ドメインの高い立体構造的動力学を考慮すれば、ドメインは、抗体結合の可能性を増大させるいくつかのコンフォメーションを取ることができると考えられる（例えば、図８Ｃ，ＰＤＢ ＩＤ ４ＵＩ１，ＢＭＰ２に結合したＲＧＭｃを参照）。

【0206】

第２に、領域ＡおよびＢは、ＢＭＰ２のためのいくつかの接触ポイントも有しており（図８Ｄおよび図８Ｅを参照）、これらの領域が結合相互作用のための「ホットスポット」であることを示唆している。さらに、領域ＡおよびＢにより近づいて見てみると、いくつかの残基は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂを上回るＲＧＭｃ特異性の構造決定因子として働き得る（図８Ｅを参照）。

【0207】

第３に、抗体のＣＤＲ（Ｈ１～Ｈ３）は、ＲＧＭｃのＮ末端ドメインの領域ＡおよびＢの表面に及ぶことができる（図８Ｆを参照）。このことは、それぞれの領域の少なくとも１つ（例えば、１つまたは複数）の残基が、抗体結合のためのエピトープとして関与することを示唆し得る。さらに、重水素取り込み曲線の形（図８Ａ）は、時間ポイントにわたり有意なＨ／Ｄ交換を示し、領域ＡおよびＢ内の抗体抗原相互作用がかなり安定していることを示唆した。

【0208】

最後に、ＲＧＭｃ ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９ ｆａｂとＲＧＭｃのＮ末端に関する結合データは、両方のヘリックス（１＆３）が抗体結合に必要であり得るという考えも明らかにし得る。特に、ＲＧＭｃに対するＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９の高い結合親和性は、抗原／抗体相互作用のかなりの界面埋没表面（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ ｂｕｒｉｅｄ ｓｕｒｆａｃｅ）が存在するはずであることを示唆する。これらの非常に埋没した（ｈｉｇｈｌｙ ｂｕｒｉｅｄ）表面領域は、領域Ａ（ヘリックス１）およびＢ（ヘリックス３）の両方が抗体に対する結合に関与する場合に可能であり得る。

【0209】

したがって、一実施態様では、本発明のＲＧＭｃ特異的抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基（ｒｅｓｉｄｅ）に結合する。別の実施態様では、本発明のＲＧＭｃ特異的抗体は、ＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。別の実施態様では、本発明のＲＧＭｃ特異的抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基および／またはＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。別の実施態様では、本発明のＲＧＭｃ特異的抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基およびＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、ヒトＲＧＭｃ内の第１および第２の結合領域のそれぞれの少なくとも１つのアミノ酸を含む不連続のエピトープに結合し、ここで第１の結合領域は、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含み；および／または、第２の結合領域は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、ヒトＲＧＭｃ内の第１および第２の結合領域のそれぞれの少なくとも１つのアミノ酸を含む不連続のエピトープに結合し、ここで第１の結合領域は、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含み；および、第２の結合領域は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を含む。

【0210】

一部の実施態様では、本明細書において提供されるヒトＲＧＭｃ特異的抗体は、アミノ酸配列ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）を有する結合領域（領域Ａ）の少なくとも一部に結合する。別の実施態様では、本明細書において提供されるＲＧＭｃ特異的抗体は、アミノ酸配列ＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）を有する結合領域（領域Ｂ）の少なくとも一部に結合する。別の実施態様では、本明細書において提供されるＲＧＭｃ特異的抗体は、アミノ酸配列ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）を有する結合領域の少なくとも一部、および／またはアミノ酸配列ＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）を有する結合領域の少なくとも一部に結合する。別の実施態様では、本明細書において提供されるＲＧＭｃ特異的抗体は、アミノ酸配列ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）を有する結合領域の少なくとも一部、およびアミノ酸配列ＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）を有する結合領域の少なくとも一部、またはそれらの一部に結合する。別の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、ヒトＲＧＭｃ内の第１および第２の結合領域の少なくとも一部を含む不連続のエピトープに結合し、ここで第１の結合領域は、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含み；および／または、第２の結合領域は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、ヒトＲＧＭｃ内の第１および第２の結合領域の少なくとも一部を含む不連続のエピトープに結合し、ここで第１の結合領域は、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含み；および、第２の結合領域は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を含む。

【0211】

一部の実施態様では、本発明のＲＧＭｃ特異的抗体は、ヒトＲＧＭｃ内の不連続のエピトープに結合し、ここでａ）抗体は全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり；ｂ）抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含む第１の結合領域に結合する。別の実施態様では、本発明のＲＧＭｃ特異的抗体は、ヒトＲＧＭｃ内の不連続のエピトープに結合し、ここでａ）抗体は全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり；ｂ）抗体は、ＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含む第２の結合領域に結合する。別の実施態様では、本発明のＲＧＭｃ特異的抗体は、ヒトＲＧＭｃ内の不連続のエピトープに結合し、ここでａ）抗体は全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり；ｂ）抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含む第１の結合領域に結合し；および、ｃ）抗体は、ＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含む第２の結合領域に結合する。

【0212】

［核酸］
一部の実施態様では、本開示の抗体、その抗原結合フラグメント、および／または組成物は、核酸分子によってコードされてよい。かかる核酸分子は、制限されずに、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ｍＲＮＡ分子、ベクター、プラスミドなどを含む。一部の実施態様では、本開示は、本開示の化合物および／または組成物をコードする核酸分子を発現するようにプログラムまたは生産される細胞を含んでよい。

【0213】

一部の実施態様では、本発明は、前述の抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子を提供する。例えば、一実施態様では、本発明は、本明細書中に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、もしくはＣＤＲＬ３、またはそれらの組み合わせを含むポリペプチドをコードする核酸分子を提供する。核酸分子は、一部の実施態様では、本明細書中に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含むポリペプチドをコードしてよい。一部の実施態様では、核酸分子は、本明細書中に記載のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含むポリペプチドをコードしてよい。一部の実施態様では、核酸分子は、本明細書中に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、もしくはＣＤＲＬ３、またはそれらの組み合わせのいずれか１つにおける対応するＣＤＲ領域と比較して、５、４、３、２、または１個までのアミノ酸残基変動を含んでよいポリペプチドをコードする。

【0214】

１つの実施態様では、核酸分子は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。１つの実施態様では、核酸分子は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または配列番号２１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。１つの実施態様では、核酸分子は、配列番号２８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または配列番号２９に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。１つの実施態様では、核酸分子は、配列番号３６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または配列番号３７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。１つの実施態様では、核酸分子は、配列番号４４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する重鎖可変ドメイン、および／または配列番号４５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドをコードする。

【0215】

一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号１２、配列番号２０、配列番号２８、配列番号３６、配列番号４４に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号１３、配列番号２１、配列番号２９、配列番号３７、または配列番号４５に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号１２に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号１３に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号２０に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号２１に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号２８に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号２９に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号３６に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号３７に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする。一部の実施態様では、核酸分子は、配列番号４４に示される重鎖可変ドメインアミノ酸配列、および配列番号４５に示される軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする。

【0216】

場合によっては、本開示の核酸は、コドン最適化核酸を含む。コドン最適化核酸を作製する方法は当技術分野で知られており、限定されないが、米国特許番号５，７８６，４６４および６，１１４，１４８に記載されるものを含んでよく、それぞれの内容はそれらの全体で参照により本明細書中に援用される。

【0217】

［ＲＧＭｃに結合する抗体の産生］
本発明は、高親和性でＲＧＭｃに結合しＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂには結合しない抗体またはそのフラグメントのスクリーニング方法、生産方法および製造プロセス、ならびに、それを含んでいる医薬組成物および関連するキットを包含する。当該分野は、本開示の抗体、またはその抗原結合フラグメントを取得するために用いられ得る様々な技術および方法に精通している。例えば、抗体は、組み換えＤＮＡ方法、ハイブリドーマ技術、ファージまたは酵母ディスプレイ技術、トランスジェニック動物（例えば、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標））またはそれらの何らかの組合せを用いて生産することができる。

【0218】

ｉ．免疫化およびハイブリドーマ
本明細書中に記載される一部の方法では、特定の抗原（例えば、ＲＧＭｃペプチドまたはタンパク質、例えば、可溶性ＲＧＭｃペプチドまたはタンパク質）を用いて、非ヒト動物（「宿主」）、例えば、齧歯類、例えば、マウス、ハムスター、またはラットに免疫付与することができる。一実施態様では、非ヒト動物はマウスである。別の実施態様では、宿主はラクダ類であってよい。さらなる実施態様では、宿主はサメであってよい。

【0219】

免疫付与（抗原曝露（例えば注入）の単一または多数のステップを含んでもよい）後、脾細胞を動物から採取して、関係があるＢ細胞を不死化骨髄腫細胞と融合して抗体産生のためのハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは、公知の方法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－４９９を参照）に従って生産され得る。それから、この様式で形成されたハイブリドーマを、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒ干渉法（ＢＬＩ）技術（例えば、ＯＣＴＥＴ）および表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）分析のような標準的な方法を用いてスクリーニングして、特定の抗原に特異的に結合する抗体を産生する１つまたは複数のハイブリドーマを同定する。組み換え抗原、天然起源形態、それらの任意の変異体またはフラグメント、ならびにそれらの抗原性ペプチド（例えば、線形エピトープとして本明細書中に記載される任意のエピトープまたは立体構造的エピトープとして足場内）のような、任意の形態の特定の抗原を免疫原として用いてよい。

【0220】

ｉｉ．スクリーニングライブラリー（単数／複数）
一部の実施態様では、抗体を作製または同定する方法またはプロセスは、抗体またはそのフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）を発現するタンパク質発現ライブラリー、例えば、ファージ、酵母、またはリボソーム・ディスプレイ・ライブラリーをスクリーニングするステップを含む。例えば、ヒトコンビナトリアル抗体またはｓｃＦｖフラグメントのライブラリーを、ファージまたは酵母上に合成することができ、それから、そのライブラリーを、目的の抗原またはその抗体結合フラグメントを用いてスクリーニングして、抗原に結合するファージまたは酵母を単離して、そこから抗体または免疫反応性フラグメントを取得してよい（Ｖａｕｇｈａｎら，１９９６，ＰＭＩＤ：９６３０８９１；Ｓｈｅｅｔｓら，１９９８、ＰＭＩＤ：９６００９３４；Ｂｏｄｅｒら，１９９７，ＰＭＩＤ：９１８１５７８；Ｐｅｐｐｅｒら，２００８，ＰＭＩＤ：１８３３６２０６）。

【0221】

ファージディスプレイは、例えば、Ｌａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，米国特許番号５，２２３，４０９；Ｓｍｉｔｈ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１３１５－１３１７；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；およびＷＯ９０／０２８０９にさらに記載される。酵母ディスプレイは、例えば、ＵＳ７，７００，３０２およびＵＳ８，８７７，６８８にさらに記載される。特定の方法では、酵母ディスプレイ・ライブラリーは全長抗体を発現する。

【0222】

ファージまたは酵母ディスプレイ・ライブラリーを作製するためのキットは市販されている。抗体ディスプレイ・ライブラリーの作製およびスクリーニングにおいて用いることのできる他の方法および試薬も存在する（ＵＳ５，２２３，４０９；ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９１／１７２７１、ＷＯ９２／２０７９１、ＷＯ９２／１５６７９、ＷＯ９３／０１２８８、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／０９６９０；およびＢａｒｂａｓら，１９９１，ＰＭＩＤ：１８９６４４５を参照）。かかる技術は、大量の候補抗体のスクリーニングを有利に可能にする。

【0223】

どのように取得するかには関係なく、抗体産生細胞（例えば、酵母コロニー、ハイブリドーマなど）は、例えば、強い増殖、高い抗体産生、ならびに、目的抗原に対する高親和性および特異的結合のような望ましい抗体の特徴／特性を含む望ましい特徴について、選択されてよく、クローニングされてよく、さらにスクリーニングされてよい。好ましくは、かかる抗体は、≦５ｎＭ、好ましくは≦１ｎＭ、より好ましくは≦０．１ｎＭのＫ_Ｄ値を有するインビトロ結合活性を示す。したがって、本明細書において本発明によって包含されるＲＧＭｃ抗体は、組み換えＲＧＭｃに対して、≦５ｎＭ、好ましくは≦１ｎＭ、より好ましくは≦０．１ｎＭのＫ_Ｄ値を有する。

【0224】

他の選択基準は、多特異性試薬（ＰＳＲ）スコアおよび／または疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）保持時間を含んでよい。ＰＳＲスコアは、タンパク質に対する一般的な結合（すなわち、非特異的な結合）の程度／度合を決定する１つの方法である。例えば、場合によっては、多特異性試薬（ＰＳＲ）は、２９３および／またはＣＨＯ細胞由来の可溶性膜の調製物である。低い（０．１～０．３３）またはゼロの（０～０．１０）ＰＳＲスコアが最も望ましいプロファイルであり、中程度（０．３３～０．６６）または高い（０．６６～１．００）スコアは望ましくない。ＰＳＲスコアを決定する方法は当業者によく知られている。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体またはその抗－結合フラグメントは、＜０．１のＰＳＲスコアを有する。他の実施態様では、本明細書中に記載の抗体またはその抗－結合フラグメントは、０のＰＳＲスコアを有する。

【0225】

一方で、ＨＩＣ保持時間は、抗体が自己相互作用する成功（ｐｒｏｓｐｅｒｉｔｙ）を判定する１つの方法であり、それにより、抗体が溶液中で可溶性／単分散性のままかどうかが予測される（凝集傾向とも呼ばれる）。高いＨＩＣ保持時間は、より大きな凝集傾向を示す。この特性は、抗体内の疎水性残基／アミノ酸のパッチに起因し得る。あるいは、翻訳後の修飾（特に糖類）の存在は、低いＨＩＣ保持時間を有する抗体を生じさせ得る。したがって、一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体または抗原結合フラグメントは、低いＨＩＣ保持時間（例えば、１０．５分未満）を有する。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体または抗原結合フラグメントは、中程度のＨＩＣ保持時間（例えば、１０．５分以上１１．５分未満）を有する。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体または抗原結合フラグメントは、高いＨＩＣ保持時間（例えば１１．５分以上）を有する。

【0226】

コロニーおよび／またはハイブリドーマを選択、クローニングおよび拡張する方法は、当業者によく知られている。所望の抗体が同定された時点で、関連のある遺伝物質が、一般的な、当該分野で認識されている分子生物学および生化学的技術を用いて、単離、操作および発現され得る。

【0227】

ｉｉｉ．ヒト化
本発明の抗体またはフラグメントは、好ましくは完全ヒト抗体またはヒト化抗体である。したがって、由来が何であれ、当該方法は、１つまたは複数の抗体またはそのフラグメントをヒト化するステップを含んでよく、ここでヒト抗体配列は、当該分野で公知の分子工学技術を用いて作製され得て、本明細書中に記載の発現系および宿主細胞内に導入され得ることが理解されよう。そのような非天然の組み換えによって生産されたヒト抗体（および対象組成物）は、本開示の教示と完全に適合し、本発明の範囲内に明白に含まれる。特定の選択態様では、本発明のＲＧＭｃ抗体は、組み換えによって生産されたヒト抗体を含む。

【0228】

ｉｖ．親和性成熟および最適化
一部の実施態様では、上述の方法によって生産される抗体は、中程度の親和性（例えば、約１０^６～１０^７Ｍ^－１のＫａまたは約１０^－６～１０^－７ＭのＫ_Ｄ）であってよい。したがって、抗体またはそのフラグメントは、必要に応じて、最適化の一部として親和性成熟のプロセスに供されてよい。用語「親和性成熟」は、当業者によって容易に理解される意味を有する。手短には、候補抗体またはフラグメントのアミノ酸配列（しばしば「親（ｐａｒｅｎｔ）」または「親の（ｐａｒｅｎｔａｌ）」と呼ばれる）をさらに改変して、特定の抗原に対して改善された結合プロファイルを達成することを指す。典型的に、親の抗体および親和性成熟の相対物（しばしば「子孫（ｐｒｏｇｅｎｙ）」または「子（ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ）」と呼ばれる）は、同一のエピトープを保持する。適切なインビトロ結合アッセイが、親和性成熟プロセス中の適切なステップ（単数または複数）において、改善されたバインダーに関するスクリーニングのために行なわれてよい。任意選択で、一部の実施態様では、機能性アッセイ（例えば、細胞に基づく力価アッセイ、インビトロ機能性アッセイなど）が、所望の機能を確認するために行なわれてもよい。

【0229】

親和性成熟は、配列多様化および／または突然変異誘発を典型的に含むが、突然変異または配列変更を導入または作製する正確な手段は限定されない。一部の実施態様では、突然変異誘発は、１つまたは複数のＣＤＲのアミノ酸残基における１つまたは複数の変更（例えば、置換または欠失）の導入を含む。したがって、一部の実施態様では、本明細書中に記載のＶＲまたはＣＤＲ配列は、参照配列（例えば親配列のもの）と比較して、１、２、３、または４個までのアミノ酸変更を含んでよい。一部の実施態様では、本明細書中に記載のＶＲまたはＣＤＲ配列は、１、２、３、または４個までのアミノ酸置換を含んでよい。一部の実施態様では、本明細書中に記載のＶＲまたはＣＤＲ配列は、１、２、３、または４個までの欠失を含んでよい。追加または代替で、突然変異誘発のプロセスは、可変領域またはＣＤＲのいわゆるオリゴ－ウォーキングを含んでよい。

【0230】

例えば、抗体の親和性成熟は、ランダム突然変異誘発（Ｇｒａｍ Ｈ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９２）８９，３５７６－３５８０、およびＨａｗｋｉｎｓ Ｒ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９２）２２６，８８９－８９６）、ＣＤＲ配列のランダム突然変異誘発、例えば、ＣＤＲウォーキング（Ｙａｎｇ Ｗ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９５）２５４、３９２－４０３）、残基の方向付けられた突然変異誘発（Ｈｏ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００５）２８０，６０７－６１７およびＨｏ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２００６）１０３，９６３７－９６４２）、および、体細胞高頻度突然変異（ＳＨＭ）をインビトロで再現する手法（Ｂｏｗｅｒｓ Ｐ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（２０１１）１０８，２０４５５－２０４６０）を含む、複数の方法によって達成することができる。

【0231】

一実施態様では、抗体は、可変重鎖または可変軽鎖領域に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。別の実施態様では、抗体は、可変重鎖ＣＤＲまたは可変軽鎖ＣＤＲのいずれか一方に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。別の実施態様では、抗体は、可変重鎖ＣＤＲ３に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。別の実施態様では、抗体は、可変重鎖ＣＤＲ２に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。別の実施態様では、抗体は、可変重鎖ＣＤＲ１に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。別の実施態様では、抗体は、可変軽鎖ＣＤＲ３に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。別の実施態様では、抗体は、可変軽鎖ＣＤＲ２に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。別の実施態様では、抗体は、可変軽鎖ＣＤＲ１に対して突然変異誘発を行なうことによって親和性成熟され得る。

【0232】

一部の実施態様では、親和性成熟は、１つまたは複数のＣＤＲの変異体を含んでいる抗体ライブラリ（「レパートリー」）をスクリーニングするステップを含み、それを親抗体の少なくとも１つのＣＤＲと組み合わせてよい。このプロセスはしばしばＣＤＲシャッフルまたはＣＤＲ多様化と呼ばれる。一部の実施態様では、可変重鎖ＣＤＲ３（例えば、ＣＤＲ－Ｈ３）を用いて、可変重鎖ＣＤＲ１およびＣＤＲ２（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１およびＣＤＲ－Ｈ２）変異体レパートリーを含むライブラリーをスクリーニングしてよい（ＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化とも呼ばれる）。一部の実施態様では、可変軽鎖ＣＤＲ３（例えば、ＣＤＲ－Ｌ３）を用いて、可変軽鎖ＣＤＲ１およびＣＤＲ２（例えば、ＣＤＲ－Ｌ１およびＣＤＲ－Ｌ２）変異体レパートリーを含むライブラリーをスクリーニングしてよい（ＣＤＲ－Ｌ１／Ｌ２多様化とも呼ばれる）。

【0233】

一部の実施態様では、親和性成熟は、軽鎖変異体を含む抗体ライブラリー（「レパートリー」）をスクリーニングするステップを含み、それを親抗体の重鎖と組み合わせてよい（軽鎖シャッフル）。例えば、一部の実施態様では、選択された重鎖が、軽鎖変異体を含んでいる抗体ライブラリーに導入されて、それにより、改善された親和性に関してスクリーニングされ得る新たな抗体ライブラリーが作製される。一部の実施態様では、天然起源の可変領域変異体のレパートリーを、免疫付与されていないドナーから得てよい。重鎖または軽鎖シャッフルの例は、以下の文献：Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １０：７７９－７８；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５５，２８－４３；Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）ＢＢＲＣ．２７５．５５３－５５７；およびＣｈａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１１１０－１１１８に記載される。一部の実施態様では、軽鎖ライブラリーは、λ軽鎖の変異体を含む。一部の実施態様では、軽鎖ライブラリーは、κ軽鎖の変異体を含む。一部の実施態様では、軽鎖ライブラリーは、λおよびκ軽鎖の変異体の両方を含む。

【0234】

親和性成熟のための様々な方法は、任意の順序で組み合わせられ得ることが理解されるべきである。例えば、一実施態様では、選択抗体は、重鎖ＣＤＲ多様化されて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発されてよい。別の実施態様では、選択抗体は、重鎖ＣＤＲ多様化されて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発されて、その後に軽鎖シャッフルされてよい。別の実施態様では、選択抗体は、重鎖ＣＤＲシャッフルされて、その後に軽鎖シャッフルされて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発されてよい。好ましい実施態様では、選択抗体は、軽鎖シャッフルされて、その後にＣＤＲ－Ｈ１／Ｈ２多様化されて、その後にＣＤＲ－Ｈ３突然変異誘発されてよい。

【0235】

上述の親和性成熟に関する任意の方法において、生じる新規の抗体は、公知技術（例えば、ＦＡＣＳ）を用いて、標的抗原（例えば、可溶性ＲＧＭｃ）への結合に関して選択され得る。ＦＡＣＳを用いて、結合特異性および親和性が、異なる抗原濃度および／または非標識（冷式）抗原に関する競合によって試験され得る。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、ＢＬＩ（例えば、ＯＣＴＥＴ）、およびＳＰＲ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ）のような当技術分野で知られている他の技術を用いてさらに評価され得る。

【0236】

上述の親和性成熟プロセスに加えて、さらなる最適化が行なわれて所望の産物プロファイルが達成され得る。したがって、抗体は、最適化のステップにさらに供されてよく、特定の有利な物理化学的特性に基づいて選択されてよい。治療的抗体（生物製剤）については、評価され得る開発可能性に関する物理化学的基準は、限定されないが：溶解度、安定性、免疫原性、自己会合または凝集しないこと、Ｆｃ機能、内部移行プロファイル、ｐＨ感受性、グリコシル化および製造可能性、例えば細胞生存能力および／または遺伝子発現を含む。一部の実施態様では、最適化のプロセスは、定常領域内の１つまたは複数のアミノ酸配列の突然変異誘発を含む。

【0237】

一態様では、本発明は、ヒトＲＧＭｃに特異的に結合し、ヒトＲＧＭａまたはヒトＲＧＭｂには結合しない、抗体、またはその抗原結合フラグメントを含んでいる医薬組成物を作製する方法を提供し；ここで抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＲＧＭｃを阻害するがＲＧＭａまたはＲＧＭｂを阻害せず、当該方法は、ｉ）ヒトＲＧＭｃ（例えば可溶性ヒトＲＧＭｃ）を含む少なくとも１つの抗原を提供するステップ、ｉｉ）ヒトＲＧＭｃに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１のプールを選択して、それにより、ヒトＲＧＭｃの特異的なバインダーを提供するステップ；ｉｉｉ）ＲＧＭｃと関係があるＢＭＰ６シグナリングを阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントの第２のプールを選択して、それにより、ＲＧＭｃ／ＢＭＰ６活性の特異的な阻害剤を生産するステップ；ｉｖ）抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントを医薬組成物に製剤化して、それにより、抗体、またはその抗原結合フラグメントを含んでいる組成物を作製するステップを含む。

【0238】

好ましい実施態様では、当該方法は、抗体、またはその抗原結合フラグメントの第１のプールから、ヒトＲＧＭａおよび／またはヒトＲＧＭｂに結合する任意の抗体、またはその抗原結合フラグメントを除去するステップをさらに含む。一実施態様では、当該方法は、ステップ（ｉｉ）および／または（ｉｉｉ）において選択された抗体、またはその抗原結合フラグメントの特異性を判定または確認するステップをさらに含む。一実施態様では、当該方法は、ヒトおよび齧歯類の抗原に対して交差反応性である抗体、またはその抗原結合フラグメントについて選択するステップをさらに含む。一実施態様では、当該方法は、抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントの、完全ヒトまたはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントを作製するステップをさらに含む。一実施態様では、当該方法は、抗体の第１のプールおよび抗体の第２のプール内に存在する抗体、またはその抗原結合フラグメントを、親和性成熟および／または最適化に供して、それにより、親和性成熟および／または最適化された抗体またはそのフラグメントを提供するステップをさらに含む。

【0239】

一部の実施態様では、医薬組成物を作製する方法は、１つまたは複数の候補ＲＧＭｃ阻害剤（単数または複数）を少なくとも１つのインビボ・モデルにおいて試験して、鉄調節を達成または修正する効能を評価または確認するステップをさらに含む。一部の実施態様では、医薬組成物を作製する方法は、１つまたは複数の候補ＲＧＭｃ阻害剤（単数または複数）（例えば、インビボで効能を示す抗体）を少なくとも１つのインビボ・モデルにおいて試験して、治療的に効果的な用量またはそれよりも高い用量における安全性／耐容性を評価するステップをさらに含む。適切な治療的抗体は、動物モデルにおいて有効な用量よりも十分に高い用量において許容できる毒性を示すべきである。一部の実施態様では、インビボの効能およびまたは安全性の試験は、前臨床試験において用いられる特定の種により適合する（ｍｏｒｅ ｃｌｏｓｅｌｙ ｍａｔｃｈ）非ＣＤＲ部分（単数または複数）を含む抗体（単数または複数）の使用によって行なってよい（例えば、ミューリン相対物など）。

【0240】

別の実施態様では、モノクローナル抗体は非ヒト動物から得られて、それから、適切な組み換えＤＮＡ技術を用いて改変される（例えば、キメラが作製される）。キメラ抗体を作製するための様々な手法が説明されている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６８５１，１９８５；Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２，１９８５，Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，米国特許番号４，８１６，５６７；Ｂｏｓｓ ｅｔ ａｌ．，米国特許番号４，８１６，３９７；Ｔａｎａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，欧州特許公報ＥＰ１７１４９６；欧州特許公報０１７３４９４、英国特許ＧＢ２１７７０９６Ｂを参照。

【0241】

さらなる抗体生産技術については、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｅｄｓ．Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照。本開示は、抗体の任意の特定の由来、生産方法、または他の特別な特徴に必ずしも制限されない。

【0242】

本開示の一部の態様は、ポリヌクレオチドまたはベクターによって形質転換された宿主細胞に関する。宿主細胞は、原核生物または真核生物細胞であってよい。宿主細胞内に存在するポリヌクレオチドまたはベクターは、宿主細胞のゲノム中に組み込まれてよく、または、染色体外に維持されてよい。宿主細胞は、任意の原核生物または真核生物細胞、例えば、細菌、昆虫、真菌、植物、動物またはヒト細胞であってよい。一部の実施態様では、真菌細胞は、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属のもの、特にＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種のものである。用語「原核生物」は、抗体または対応する免疫グロブリン鎖の発現のためにＤＮＡまたはＲＮＡ分子によって形質転換またはトランスフェクトされ得る全ての細菌を含む。原核生物宿主は、グラム陰性ならびにグラム陽性細菌、例えば、大腸菌、ネズミチフス菌、霊菌および枯草菌を含んでよい。用語「真核生物」は、酵母、高等植物、昆虫および脊椎動物細胞、例えば、ＮＳＯおよびＣＨＯ細胞のような哺乳類細胞を含む。組換え生産手順に用いられる宿主に応じて、ポリヌクレオチドによってコードされる抗体または免疫グロブリン鎖は、グリコシル化されてよく、または、グリコシル化されなくてよい。抗体または対応する免疫グロブリン鎖は、最初のメチオニンアミノ酸残基を含んでもよい。

【0243】

一部の実施態様では、ベクターが適切な宿主内に組み込まれた時点で、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベルの発現に適切な条件下で維持されてよく、必要に応じて、免疫グロブリン軽鎖、重鎖、軽／重鎖ダイマーまたは無傷の抗体、抗原結合フラグメントまたは他の免疫グロブリン形態の回収および精製が続いてよい；Ｂｅｙｃｈｏｋ，Ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，（１９７９）を参照。したがって、ポリヌクレオチドまたはベクターが細胞内に導入されて、次いで、抗体または抗原結合フラグメントが生産される。さらに、トランスジェニック動物、好ましくは前述の宿主細胞を含む哺乳類は、抗体または抗体フラグメントの大スケールの生産のために用いられてよい。

【0244】

形質転換された宿主細胞は、発酵槽内で増殖され得て、任意の適切な技術を用いて培養され得て、最適な細胞増殖を達成する。発現された時点で、抗体全体、それらのダイマー、個々の軽鎖および重鎖、他の免疫グロブリン形態、または抗原結合フラグメントは、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティカラム、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当該分野の標準的な手順に従って精製されてよい；Ｓｃｏｐｅｓ，「Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（１９８２）を参照。抗体または抗原結合フラグメントは、それから、増殖培地、細胞溶解物、または細胞膜画分から単離されてよい。例えば微生物によって発現された抗体または抗原結合フラグメントの単離および精製は、予備クロマトグラフィー分離および免疫学的分離（例えば抗体の定常領域に対して方向付けられたモノクローナルまたはポリクローナル抗体の使用を伴うもの）のような任意の従来の手段によるものであってよい。

【0245】

本開示の態様は、モノクローナル抗体の無期限に長期の材料を提供するハイブリドーマに関する。ハイブリドーマの培養物から直接的に免疫グロブリンを得る代わりとして、不死化ハイブリドーマ細胞が、その後の発現および／または遺伝子操作のための再配列された重鎖および軽鎖座の材料として用いられ得る。再配列された抗体遺伝子を適切なｍＲＮＡから逆転写して、ｃＤＮＡが生産され得る。一部の実施態様では、重鎖定常領域は、異なるアイソタイプのものに交換または完全に除去されてよい。可変領域は、単鎖Ｆｖ領域をコードするように結合されてよい。複数のＦｖ領域が、１よりも多い標的に対する結合能力を与えるように結合されてよく、またはキメラ重軽鎖の組み合わせを用いてよい。任意の適切な方法が、抗体可変領域のクローニングおよび組換え抗体の産生に用いられ得る。

【0246】

一部の実施態様では、重鎖および／または軽鎖の可変領域をコードする適切な核酸が得られて、標準的な組換え宿主細胞内にトランスフェクトされ得る発現ベクター内に挿入される。様々なそのような宿主細胞が用いられ得る。一部の実施態様では、哺乳類宿主細胞は、効率的なプロセッシングおよび生産のために有利であり得る。この目的に有用である典型的な哺乳類細胞株は、ＣＨＯ細胞、２９３細胞、またはＮＳＯ細胞を含む。抗体または抗原結合フラグメントの生産は、宿主細胞の増殖およびコード配列の発現に適切な培養条件下で、改変された組換え宿主を培養することによって行われ得る。抗体または抗原結合フラグメントは、培養物からそれらを単離することによって回収され得る。発現系は、生じる抗体が培地中に分泌されるようにシグナルペプチドを含むように設計され得るが；細胞内生産も可能である。

【0247】

本開示はまた、本明細書に記載の抗体の免疫グロブリン鎖の少なくとも可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施態様では、ポリヌクレオチドによってコードされる可変領域は、上述のハイブリドーマの任意の１つによって生産される抗体の可変領域のＶＨおよび／またはＶＬの少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。

【0248】

抗体または抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、または合成的に生産されたＤＮＡもしくはＲＮＡ、または組み換えによって生産されたキメラ核酸分子（任意のこれらのポリヌクレオチドを単独または組み合わせのいずれかで含む）であってよい。一部の実施態様では、ポリヌクレオチドは、ベクターの一部である。そのようなベクターは、適切な宿主細胞内および適切な条件下でのβベクター（ｔｈｅ β ｔｈｅ ｖｅｃｔｏｒ）を可能にするマーカー遺伝子のようなさらなる遺伝子を含んでよい。

【0249】

一部の実施態様では、ポリヌクレオチドは、原核生物または真核生物細胞における発現を可能にする発現制御配列に作動可能に結合している。ポリヌクレオチドの発現は、翻訳可能なｍＲＮＡへのポリヌクレオチドの転写を含む。真核生物細胞、好ましくは哺乳類細胞における発現を確実にする調節エレメントは、当業者によく知られている。それらは、転写開始を促進する調節配列を含んでよく、転写終結および転写安定化を促進するポリ－Ａシグナルを含んでもよい。さらなる調節エレメントは、転写ならびに翻訳エンハンサー、および／または、天然に関係があるまたは異種のプロモーター領域を含んでよい。原核生物宿主細胞における発現を可能にする、あり得る調節エレメントは、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＰＬ、Ｌａｃ、ＴｒｐまたはＴａｃプロモーターを含み、真核生物宿主細胞における発現を可能にする調節エレメントの例は、ＡＯＸ１またはＧＡＬ１プロモーター（酵母）、または、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター（ラウス肉腫ウイルス）、ＣＭＶエンハンサー、ＳＶ４０エンハンサーまたはグロビンイントロン（哺乳類および他の動物細胞）である。

【0250】

転写開始を担うエレメントの他に、かかる調節エレメントはまた、ポリヌクレオチドの下流に、ＳＶ４０－ポリ－Ａ部位またはｔｋ－ポリ－Ａ部位のような転写終結シグナルを含んでもよい。さらに、用いられる発現系に応じて、ポリペプチドを細胞区画へ向けること、または、培地中へそれを分泌することが可能なリーダー配列が、ポリヌクレオチドのコード配列に追加されてよく、以前に説明されている。リーダー配列（単数または複数）は、翻訳、開始および終結配列と共に適切なフェーズにおいて集められて、および好ましくは、リーダー配列は、翻訳されたタンパク質、またはその一部を、例えば細胞外培地へ分泌するように指示することが可能である。所望の特性、例えば、発現された組換え産物の安定化または単純化された精製を与えるＣまたはＮ末端同定ペプチドを含む融合タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチド配列を用いてもよい。

【0251】

一部の実施態様では、軽鎖および／または重鎖の少なくとも可変ドメインをコードするポリヌクレオチドは、免疫グロブリン鎖の両方または片方のみの可変ドメインをコードしてよい。同様に、ポリヌクレオチドは、同一プロモーターの制御下であってよく、発現に関して別々に制御されてよい。さらに、一部の態様は、抗体または抗原結合フラグメントの免疫グロブリン鎖の可変ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む、遺伝子操作において慣習的に用いられるベクター、特にプラスミド、コスミド、ウイルスおよびバクテリオファージに関し；抗体の他方の免疫グロブリン鎖の可変ドメインをコードするポリヌクレオチドと組み合わせてもよい。

【0252】

一部の実施態様では、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクター内に真核生物プロモーター系として提供されるが、原核生物宿主に関する制御配列が用いられてもよい。レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、またはウシ乳頭腫ウイルスのようなウイルス由来の発現ベクターは、標的化された細胞集団へのポリヌクレオチドまたはベクターの送達のために用いられ得る（例えば、抗体または抗原結合フラグメントを発現するように細胞を改変するため）。様々な適切な方法を用いて、組換えウイルスベクターを構築することができる。一部の実施態様では、ポリヌクレオチドおよびベクターは、標的細胞への送達のためにリポソーム内に再構成され得る。ポリヌクレオチド（例えば、免疫グロブリン鎖の重および／または軽可変ドメイン（単数または複数）をコードする配列および発現制御配列）を含むベクターは、細胞の宿主のタイプに応じて異なる適切な方法によって宿主細胞内に移行され得る。

【0253】

したがって、本発明の一態様では、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、中和抗体）を含んでいる医薬組成物を作製する方法が提供されて、当該方法は、以下のステップ：ｉ）ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに選択的に結合する能力に関して、抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ；ｉｉ）ステップ（ｉ）に基づいて、ＲＧＭｃ活性をインビボで阻害／中和する能力に関して、抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ；ｉｉｉ）ステップ（ｉ）および（ｉｉ）に基づいて、医薬組成物への製剤化に関して、阻害／中和抗体を選択するステップを含む。一実施態様では、ステップ（ｉ）は、ポジティブ選択を含み、さらにネガティブ選択を含んでもよい。一部の実施態様では、同定ステップ（ｉ）は、ライブラリーをスクリーニングするステップを含む。一部の実施態様では、ライブラリーは、ファージライブラリーまたは酵母ライブラリーである。一部の実施態様では、同定ステップ（ｉｉ）は、血清鉄、総鉄結合能（ＴＩＢＣ）、不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）、およびトランスフェリン飽和度からなる群より選択される鉄パラメータを測定するステップを含む。一部の実施態様では、ステップ（ｉｉ）は、ヘプシジン発現を測定するステップを含む。一部の実施態様では、ヘプシジン発現は、肝臓ヘプシジンレベルおよび／または血清ヘプシジンレベルである。一部の実施態様では、ステップ（ｉｉ）は、インビボで血清鉄レベルを上昇および／またはヘプシジン発現を抑制することが可能な中和抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップを含む。一部の実施態様では、ステップ（ｉ）は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに関して選択的に確認するステップを含む。

【0254】

別の実施態様では、本明細書において開示される方法によって生産される抗体または抗原結合フラグメントは、ＢＭＰ６結合部位を除くエピトープに結合する。一部の実施態様では、エピトープは、ネオゲニン結合部位を除く。一部の実施態様では、エピトープは、ＢＭＰ６結合部位およびネオゲニン結合部位の両方を除く。一部の実施態様では、抗体または抗原結合フラグメントは、可溶性ＲＧＭｃよりも膜結合型ＲＧＭｃに優先的に結合する。一部の実施態様では、抗体は、抗体抗原複合体の内部移行を誘導する。

【0255】

別の実施態様では、本明細書において開示される方法によって生産される医薬組成物は、静脈内または皮下投与のために製剤化される。

【0256】

［改変］
本開示の抗体、またはその抗原結合フラグメントは、制限されないが、酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、放射性材料、陽電子放出金属、非放射性常磁性金属イオン、およびＲＧＭｃの検出および単離のための親和性標識を含む、検出可能な標識または検出可能な部分によって改変されてよい。検出可能な物質または部分は、本開示のポリペプチドに直接的に、または、適切な技術を用いて中間体（例えばリンカーなど（例えば、切断可能なリンカー））を通して間接的に、連結またはコンジュゲートされてよい。適切な酵素の非限定的な例は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含み；適切な補欠分子族複合体の非限定的な例は、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンを含み；適切な蛍光材料の非限定的な例は、ビオチン、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリトリンを含み；発光材料の例は、ルミノールを含み；生物発光材料の非限定的な例は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンを含み；適切な放射性材料の例は、放射性金属イオン、例えば、α－エミッターまたは他の放射性同位体、例えば、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、８６Ｒ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、およびスズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）を含む。

【0257】

検出可能な物質は、ＲＧＭｃに特異的に結合する本開示の抗体に直接的に、または、適切な技術を用いて中間体（例えばリンカーなど）を介して間接的に、連結またはコンジュゲートされてよい。検出可能な物質にコンジュゲートされた本明細書において提供される任意の抗体は、本明細書中に記載のものなどの任意の適切な診断アッセイに用いてよい。

【0258】

さらに、本開示の抗体、またはその抗原結合フラグメントは、薬物によって改変されてもよい。薬物は、本開示のポリペプチドに直接的に、または、適切な技術を用いて中間体（例えばリンカー（例えば切断可能なリンカー）など）を介して間接的に、連結またはコンジュゲートされてよい。

【0259】

［医薬組成物、製剤］
ヒトおよび非ヒト対象における投与に適切な薬品として用いられる医薬組成物／製剤がさらに提供される。例えば、本発明によって包含される１つまたは複数のＲＧＭｃ特異的拮抗薬（例えば抗体）は、薬学的に許容できる担体（賦形剤）（例えばバッファーを含む）によって製剤化または混合されて、医薬組成物を形成することができる。かかる製剤は、ＲＧＭｃシグナリングが関与する疾患または障害の治療のために用いられ得る。特に好ましい実施態様では、製剤は、本明細書中に記載の貧血の治療のために用いられ得る。

【0260】

本発明の医薬組成物は、ＲＧＭｃ関連の徴候を緩和するために患者に投与されてよい。例えば、ＲＧＭｃ関連の徴候は、鉄制限性の貧血であってよい。本発明によって包含される鉄制限性の貧血の例は、限定されないが、慢性疾患の貧血（例えば、ＣＫＤ）、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）、がんによって誘導される貧血、および／または化学療法によって誘導される貧血を含む。

【0261】

「許容できる」は、担体が組成物の活性成分と適合し（および好ましくは、活性成分を安定化することが可能である）、治療される対象にとって有害でないことを意味する。バッファーを含む薬学的に許容できる賦形剤（担体）の例は、当業者に明らかであり、以前に説明されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒを参照。

【0262】

この方法で用いられる医薬組成物は、薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定剤を、凍結乾燥された製剤または水溶液の形態で含んでよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）。

【0263】

本明細書において用いられる「薬学的に許容できる担体」は、生理的に適合する任意および全ての溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊椎または上皮投与（例えば、注入またはインフュージョンによる）に適切である。投与経路に応じて、活性化合物（例えば、抗体、免疫コンジュゲート、または二重特異性分子）は、酸作用および化合物を不活性化し得る他の自然条件から化合物を保護するために材料内に被覆されてよい。

【0264】

本明細書中に記載の医薬化合物は、１つまたは複数の薬学的に許容できる塩類を含んでよい。「薬学的に許容できる塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、いかなる望ましくない毒性学的効果も与えない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１－１９を参照）。かかる塩類の例は、酸付加塩類および塩基付加塩類を含む。酸付加塩類は、非毒性の無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などに由来するもの、ならびに、非毒性の有機酸、例えば、脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカノン酸、ヒドロキシアルカノン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などに由来するものを含む。塩基付加塩類は、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどに由来するもの、ならびに、非毒性有機アミン類、例えば、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどに由来するものを含む。

【0265】

本明細書中に記載の医薬組成物は、薬学的に許容できる抗酸化剤を含んでもよい。薬学的に許容できる抗酸化剤の例は、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、システイン塩酸塩、硫酸水素ナトリウム、二亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などを含む。

【0266】

本明細書中に記載の医薬組成物において用いられ得る適切な水性および非水性の担体の例は、水、エタノール、ポリオール類（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、オリーブオイルのような植物油、およびオレイン酸エチルのような注入可能な有機エステルを含む。適切な流動性は、例えば、レシチンのような被覆材料の使用によって、分散の場合は要求される粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。

【0267】

これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤のようなアジュバントを含んでもよい。微生物の存在の予防は、滅菌手順（上記）、および、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノールなどの包含の両方によって確実にされ得る。等張剤、例えば糖類、塩化ナトリウムなどを組成物中に含むことも望ましくあり得る。さらに、注入可能な製剤形態の延長された吸収は、モノステアレートアルミニウムおよびゼラチンのような吸収を遅らせる薬剤の包含によってもたらされ得る。

【0268】

他の許容できる担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる用量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸のようなバッファー；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンのようなアミノ酸；単糖類、二糖類、および、グルコース、マンノース、またはデキストランを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールのような糖類；ナトリウムのような塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ－タンパク質錯体）；および／または、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような非イオン性界面活性剤を含んでよい。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書においてさらに説明される。

【0269】

一部の例では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＲＧＭｃに特異的に結合する抗体を含むリポソームを含み、それは、Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４０３０（１９８０）；および米国特許番号４，４８５，０４５および４，５４４，５４５に記載されるもののような任意の適切な方法によって調製され得る。長い循環時間を有するリポソームは、米国特許番号５，０１３，５５６に開示される。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生産され得る。リポソームは、規定されたポアサイズのフィルターを通して押し出されて、所望の直径を有するリポソームを生じさせる。

【0270】

本明細書中に記載の抗体は、コロイド状薬物輸送系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルション中の、例えばコアセルベーション技術または界面重合によって調製されたマイクロカプセル（例えばそれぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ－（メタクリル酸メチル（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル）中にトラップされてもよい。例示的な技術は、以前に説明されていて、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）を参照。

【0271】

他の例では、本明細書に記載の医薬組成物は、徐放性形式で製剤化され得る。徐放性製剤の適切な例は、抗体を含む固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、そのマトリックスは、成形品、例えばフィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許番号３，７７３，９１９）、Ｌ－グルタミン酸および７エチル－Ｌ－グルタメートの共重合体、非分解性エチレン－酢酸ビニル、分解性乳酸－グリコール酸共重合体、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸共重合体およびリュープロリドアセテートからなる注入可能なマイクロスフェア）、スクロースアセテートイソブチレート、およびポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸を含む。

【0272】

インビボ投与のために用いられる医薬組成物は、滅菌されなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することによって容易に達成される。治療的抗体組成物は、一般的に、滅菌アクセスポートを有するコンテナー、例えば、皮下注入針によって突き刺すことが可能なストッパーを有する静脈内投与用の溶液バッグまたはバイアルの中に置かれる。

【0273】

本明細書に記載の医薬組成物は、経口、非経口もしくは直腸投与、または吸入もしくはガス注入による投与のための、単位投与形態、例えば、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、顆粒、溶液もしくは懸濁液、または坐薬であってよい。

【0274】

錠剤のような固形組成物を調製するために、主な活性成分は、調剤担体、例えば、従来の打錠用成分、例えばコーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガム、および、均質な本開示の化合物の混合物、またはそれらの非毒性の薬学的に許容できる塩を含む、固形予備処方組成物を形成するための他の調剤希釈剤（例えば水）と混合されてよい。これらの予備処方組成物を均質という場合、等しく効果的な単位投与形態、例えば、錠剤、丸薬およびカプセルに組成物が容易に細分され得るように、活性成分が組成物全体にわたって均等に分散されることを意味する。この固形予備処方組成物は、それから、本開示の０．１ｍｇ～約５００ｍｇの活性成分を含む上述のタイプの単位投与形態に細分化される。新規の組成物の錠剤または丸薬は、延長された作用の利益を与える剤形を提供するようにコーティングまたは他の方法で調合され得る。例えば、錠剤または丸薬は、内剤（ｉｎｎｅｒ ｄｏｓａｇｅ）および外剤（ｏｕｔｅｒ ｄｏｓａｇｅ）の構成要素を含んでよく、後者は前者の上のエンベロープの形状である。２つの構成要素は、胃内での崩壊に抵抗する役割を果たして、内側の構成要素が無傷で十二指腸へ通過すること、または放出が遅延されることを可能にする腸溶性の層によって分離され得る。様々な材料がそのような腸溶性の層またはコーティングに用いられ得て、かかる材料は、多くのポリマー酸およびシェラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような材料とポリマー酸の混合物を含む。

【0275】

適切な表面活性剤は、特に、非イオン性剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン（例えばＴｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）および他のソルビタン（例えばＳｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）を含む。表面活性剤を有する組成物は、０．０５～５％の表面活性剤を好適に含み、０．１～２．５％であってよい。他の成分、例えばマンニトールまたは他の薬学的に許容できるビヒクルが、必要ならば添加されてよいことが理解される。

【0276】

適切なエマルションは、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）のような市販される脂肪エマルションを用いて調製され得る。活性成分は、予混合エマルション組成物内に溶解されてよく、またはあるいは、油（例えば大豆油、サフラワー油、綿実油、ゴマ油、コーン油またはアーモンド油）中、および、リン脂質（例えば卵リン脂質、大豆リン脂質または大豆レシチン）と水との混合の際に形成されるエマルション中に溶解されてよい。エマルションの張性を調節するために、グリセロールまたはグルコースのような他の成分が添加され得ることが理解される。適切なエマルションは、２０％までの油（例えば５～２０％）を典型的に含む。

【0277】

エマルション組成物は、本発明の抗体をＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはその構成要素（大豆油、卵リン脂質、グリセロールおよび水）と混合することによって調製されるものであってよい。

【0278】

吸入またはガス注入のための医薬組成物は、薬学的に許容できる、水性または有機溶媒中の溶液および懸濁液、またはそれらの混合物、ならびに粉末を含む。液体または固形組成物は、上記に示された適切な薬学的に許容できる賦形剤を含んでよい。一部の実施態様では、組成物は、局所または全身性効果のために経口または経鼻的な呼吸経路によって投与される。

【0279】

好ましく滅菌された薬学的に許容できる溶媒中の組成物は、ガスの使用によって霧状化されてよい。霧状化された溶液は、霧状化デバイスから直接吸われてよく、または、霧状化デバイスは、フェイスマスク、テントまたは断続的な陽圧呼吸器に取り付けられてよい。溶液、懸濁液または粉末組成物は、適切な様式で製剤を送達するデバイスから、好ましくは経口または経鼻的に投与されてよい。

【0280】

［治療的使用、治療方法、患者集団］
鉄恒常性の異常は、診断および治療が困難であり得る複数の疾患と関連する。かかる障害は、２つのカテゴリーｉ）硬変、心筋症、糖尿病などを含む鉄過剰疾患；および、ｉｉ）貧血、慢性疾患の貧血（「ＡＣＤ」）などを含む鉄欠乏性疾患に広く分類することができる。鉄欠乏性貧血（ＩＤＡ）は、２つの主な形態：絶対的鉄欠乏症（ＡＩＤ）および機能性鉄欠乏症（ＦＩＤ）に分類することができる。ＡＩＤは、体内鉄貯蔵の低減によって定義され、一方で、ＦＩＤは、総体内鉄貯蔵は正常または増大するが、骨髄への鉄供給（例えば、鉄可動化）が調節不全または不十分である障害である。

【0281】

鉄関連の疾患のための現在の治療選択肢は、ＩＶ鉄などの外部鉄補給、およびＥＳＡ療法（例えば、ＥＰＯおよび同様の薬剤）を含む。しかしながら、これらの治療は不要な副作用と関連する。例えば、ＩＶ鉄などの頻繁な鉄補給剤を摂取する慢性貧血患者は、鉄過剰を発症し得ることが示されている。過剰な体内鉄は、非常に毒性であり得て、複数の臓器に影響し得て、肝臓疾患、心疾患、糖尿病、ホルモン異常、および機能障害性免疫系などの様々な重大な症状をもたらす。同様に、輸血を受ける患者は、鉄過剰と関連する毒性のリスクがある。例えば、非常に多くの輸血を受ける患者、とりわけ、重症型サラセミア、鎌状赤血球症、骨髄異形成症候群、再生不良性貧血、溶血性貧血、および難治性鉄芽球性貧血を有する患者であって、輸血依存性になり得る患者においては、輸血される赤血球による過剰鉄（およそ２５０ｍｇ／輸血）は、様々な組織において次第に蓄積して、罹患および死亡を引き起こす。したがって、治療によって誘導される体内の過剰鉄は、心血管系、胃腸系、免疫系、骨／軟骨系、生殖系、および腎臓系に対する毒性を含む重度の有害反応を引き起こし得る。

【0282】

ＩＶ鉄に対する追加または代替の治療選択肢として、ＥＳＡ療法（例えば、ＥＰＯ）が、患者において、がん関連および化学療法によって誘導される貧血を患っている患者を含む広範な患者集団に広く施されている。しかしながら逆説的に、最近の前臨床および臨床試験は、ＥＳＡが、がん患者において潜在的に腫瘍増殖を加速させて生存を脅かし得ることを示している。

【0283】

ＨＩＦ安定剤は、外因的に加えられるエリスロポエチンまたはその等価物の代わりに、ＨＩＦシグナリング・カスケードを通して赤血球を増大させるために内因性エリスロポエチンを産生する体の能力を刺激することを目的とする。この手法は、増大したがん進行および主な負の心臓イベント（例えば、脳卒中）のようなＥＳＡ治療と関連するリスク因子を潜在的に減少させ得るという仮説が立てられている。しかしながら、現在までに、改善された安全性はまだ明確に確立されていない。

【0284】

最近では、ＲＧＭａ／ＲＧＭｃに特異的に結合するモノクローナル抗体が、ヘプシジンを下方調節することによってラットおよびカニクイザルにおいて血清鉄を増大させることが示された（Ｂｏｓｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＡＡＰＳ Ｊ．２０１５ Ｊｕｌ；１７（４）：９３０－９３８）。この事例において、研究者らは、ＲＧＭａ／ＲＧＭｃ抗体を受け取った健康な動物における明らかな毒性を観察せず、血液パラメータの正常化が、投与期間後の回復期間（約１２週）後に見られた。しかしながら、例えば神経系および免疫調節性効果に対するＲＧＭａの同時的な阻害と関連する潜在的リスクは、公表された研究からは分からない。

【0285】

したがって、鉄恒常性の不均衡を伴う疾患および障害、例えば、貧血を有する患者を治療するために効果的かつ安全に用いることのできる、鉄恒常性を達成するための改善された治療が必要である。

【0286】

したがって、一態様では、本発明は、鉄代謝の混乱と関連する症状、特に、鉄欠乏症と関連する症状（例えば、貧血）を治療および／または予防するための改善された方法を提供する。ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、ＲＧＭｃに選択的に結合および阻害するがＲＧＭａ／ｂには結合および阻害しないモノクローナル抗体およびその抗原結合フラグメント）は、対象における機能性鉄欠乏症を伴う症状の治療において用いられ得る。治療的使用は、対象を治療するのに効果的な量での、本開示に係る１または複数のＲＧＭｃ選択的阻害剤の投与を含む。治療は、貧血の１つまたは複数の症候／パラメータ、例えば、血清鉄レベル、トランスフェリン飽和度（ＴＡＳＴ）、網状赤血球ヘモグロビン含有量（ＣＨｒ）、網状赤血球カウント、赤血球カウント、ヘモグロビン、およびヘマトクリットの軽減、緩和、正常化または維持を含んでよい。ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、かかる効果の治療的効果の程度および／またはカイネティクスまたはタイミング（例えば、より早い軽減、より長い効果など）の観点から、臨床利益を提供し得る。ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、貧血または貧血を引き起こす根底にある疾患を治療することを目的とする療法と関連する毒性または有害事象を減少させる観点から臨床利益を提供し得る。

【0287】

本発明の方法を用いて治療および／または予防され得る症状は、鉄代謝の混乱と関連する任意の疾患、障害、または症候群を含む。鉄代謝の混乱は、鉄の取り込み、鉄吸収、鉄輸送、鉄貯蔵、鉄のプロセッシング、鉄の可動化、および鉄の利用化の１つまたは複数の妨害と関連し得る。一般に、鉄代謝の混乱は、鉄過剰または鉄欠乏をもたらす。

【0288】

鉄代謝の疾患または障害は、対象において鉄恒常性が混乱する任意の疾患または障害であってよい。この恒常性は、適切な血漿鉄レベルの適切な調節に依存している。鉄は、細胞への鉄送達のためのビヒクルであるトランスフェリンに結合して血漿中を循環する。血漿トランスフェリンは通常、鉄によって約３０％飽和している。したがって、トランスフェリン飽和度は、鉄消費に関与するパスウェイからの様々なシグナルに応答して適切な生理学的レベルで維持されなければならない。

【0289】

鉄欠乏と関連する疾患は、限定されないが、慢性疾患の貧血、鉄欠乏性貧血、絶対的鉄欠乏症、機能性鉄欠乏症、および小球性貧血を含む。この鉄恒常性の崩壊は、慢性疾患の貧血も生じさせ得て、ここで疾患を有する対象は、高レベルの血液ヘプシジンを示す。用語「慢性疾患の貧血」（ＡＣＤ）は、例えば、長い感染、炎症、腫瘍性障害などの結果として発症する任意の貧血を指す。発症する貧血はしばしば、短い赤血球寿命およびマクロファージにおける鉄の隔離によって特徴付けられ、それにより、新しい赤血球を作るために利用可能な鉄の量が減少する。慢性疾患の貧血と関連する症状は、限定されないが、慢性細菌性心内膜炎、骨髄炎、リウマチ熱、潰瘍性大腸炎、慢性腎疾患、および腫瘍性障害を含む。

【0290】

さらに、鉄欠乏症と関連する疾患（例えば、ＡＣＤ）を有する対象は、疲労、関節痛、骨または関節の疾患（変形性関節症、骨粗鬆症）、関節リウマチ、炎症性腸疾患、息切れ、不整脈、肝臓病、糖尿病、不妊、虚弱、鬱病、気分または心の障害、低い認識能力または神経変性疾患、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血、慢性腎疾患の貧血、赤血球産生刺激剤に対する抵抗性、再生不良性貧血、がん、低形成性貧血、発作性夜間ヘモグロビン尿症、フォンビルブラント病、および血友病遺伝性出血性毛細血管拡張症のような疾患または障害を有してよく、またはそのリスクがあってよい。

【0291】

さらなる症状は、感染、炎症、および新生物と関連する疾患および障害を含み、例えば、炎症性感染（例えば、肺膿瘍、結核など）、炎症性非感染性障害（例えば、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、肝炎、炎症性腸疾患など）、および様々ながん、腫瘍、および悪性腫瘍（例えば、癌腫、肉腫、リンパ腫など）を含む。鉄欠乏性貧血は、化学療法処置、または、例えば妊娠、月経、幼少および幼児、損傷に起因する失血などの状態にも起因し得る。

【0292】

鉄過剰と関連する症状は、一次的および二次的の両方の、鉄過剰の疾患、症候群または障害を含み、制限されないが、遺伝性ヘマクロマトーシス、晩発性皮膚ポルフィリン症、遺伝性球状赤血球症、低色素性（ｈｙｐｒｏｃｈｒｏｍｉｃ）貧血、赤血球過形成性（ｈｙｓｅｒｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｃ）貧血（ＣＤＡＩ）、先天性赤血球異形成貧血（ＣＤＡＩＩ）、顔面生殖器異形成（ｆａｃｉｏｇｅｎｉｔａｌ ｄｙｓｐｌａｓｉａ）（ＦＧＤＹ）、アースコグ症候群、無トランスフェリン血症、鉄芽球性貧血（ＳＡ）、ピリドキシン応答性の鉄芽球性貧血、赤血球酵素異常症、例えば、グルコース－６リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）またはピルビン酸キナーゼ欠乏症（ＰＫＤ）、および異常ヘモグロビン症、例えばサラセミアおよび鎌状細胞を含む。いくつかの研究は、サラセミアおよびヘマクロマトーシスのような鉄代謝障害と、ＩＩ型（非インスリン依存性）糖尿病およびアテローム性動脈硬化のような複数の病状の間の関連性を示唆している（Ａ．Ｊ．Ｍａｔｔｈｅｗｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．，１９９７，７３：３５４０：Ｔ．Ｐ．Ｔｕｏｍａｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ，１９９７，２０：４２６－４２８）。

【0293】

研究は、鉄代謝が、心血管系疾患を含む複数の他の疾患状態において役割を果たすことも示唆している（例えば、Ｐ．Ｔｕｏ ｍａｉｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９９７，９７：１４６１－１４６６：Ｊ．Ｍ．ＭｃＣｏｒｄ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９９１，８３：１１１２－１１１４；Ｊ．Ｌ．Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．，１９９６，４９：１３４５－１３５２を参照）。

【0294】

神経学的状態におけるヘプシジンおよび鉄の役割は、最近になって提案されている。例えば、ヘプシジンレベルの増大は、例えば、限局性脳虚血／再灌流、脳内出血、くも膜下出血、急性虚血性脳卒中、虚血性脳卒中、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、および慢性の軽度のストレスを含む様々な神経疾患において示されている（Ｖｅｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１８；１６：２５）。

【0295】

さらに、鉄代謝は、下肢静止不能症候群においても重要な役割を果たし得る（Ｄａｕｂｉａｎ－Ｎｏｓｅ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｌｅｅｐ Ｓｃｉ ２０１４；７（４）：２３４－７およびＣｏｎｎｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７；３１：６１－７０）。実際に、プロ－ヘプシジンレベルの増大が、下肢静止不能症候群を有する患者の脳組織内で示されていて、一方で、プロ－ヘプシジンレベルの低減が、若年性疾患における脳脊髄液内に観察された（Ｃｌａｒｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ ２００６；２４７：１７３－９）。ＲＬＳ患者の脳内の鉄デポーは低く、脳ヘプシジンのより高い発現と関連している（Ｒｉｚｚｏ Ｇ．ｅｔ ａｌ，Ｍｏｖ Ｄｉｓｏｒｄ ２０１３；２８：１８８６－９０およびＣｌａｒｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ ２００６；２４７：１７３－９）。ＲＬＳ患者の脳内の低レベルの鉄は、ＨＨ存在下でさえ持続する（Ｈａｂａ－Ｒｕｂｉｏ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２００５；７６：１００９－１０）。さらに、ＲＬＳ患者の脳微小血管系内のトランスフェリン受容体発現は低く、ＢＢＢを通過する鉄輸送が低いことを示唆している（Ｃｏｎｎｏｒ ＪＲ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ ２０１１；１３４：９５９－６８）。興味深いことに、下肢静止不能症候群は、関節リウマチ（両方とも、鉄調節不全と関係がある疾患である）における併存症として示唆されている（Ｊｏｈｎ Ａ．Ｇｊｅｖｒｅ ａｎｄ Ｒｅｇｉｎａ Ｍ．Ｔａｙｌｏｒ Ｇｊｅｖｒｅ，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ２０１３；Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ３５２７８２）．

【0296】

ｉ．鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）
鉄剤不応性鉄欠乏性貧血は、Ｔｍｐｒｓｓ６における突然変異に起因する常染色体劣性障害である。ＴＭＰＲＳＳ６は、膜結合型ＲＧＭｃを切断して、ＢＭＰ６のためのデコイ受容体として作用する可溶性ＲＧＭｃ（ｓ－ＲＧＭｃ）を産生することによる、ヘプシジンの負の調節因子である。ＢＭＰ６シグナリングの減少は、ヘプシジン発現の減少をもたらす。したがって、ＴＭＰＲＳＳ６機能を阻害する突然変異は、膜結合型ＲＧＭｃの蓄積を促進し、それにより、ヘプシジン発現および鉄欠乏性貧血の増大をもたらす。ＩＲＩＤＡを有する患者は、血中の鉄が少なすぎて、それにより、赤血球のサイズが小さくなり（小球）、色が薄くなる（低色素）。その疾患の他の表現型は、低いトランスフェリン飽和度、低い血清フェリチン、および低い血清鉄レベルを含んでよい。残念なことに、これらの患者のヘプシジンのレベルが高いことは、経口鉄投与に対して難治性にさせる。

【0297】

膜結合型ＲＧＭｃの増大（およびヘプシジンレベルの増大）をもたらすＩＲＩＤＡの十分に定義されたメカニズムを考慮すると、ＲＧＭｃに特異的に結合してヘプシジンレベルを減少させ、一方で、関連ＲＧＭタンパク質（例えば、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂ）を標的化することによる潜在的な副作用を制限する薬剤が有益である。

【0298】

したがって、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、本明細書において開示されるモノクローナル抗体、その誘導体、それと競合するモノクローナル抗体、および、その抗原結合フラグメントを含む操作された分子）は、対象（例えば、ヒト患者）におけるＩＲＩＤＡの治療のために用いられ得る。したがって、一態様では、ＩＲＩＤＡと関連する症候を治療、予防、または寛解させるための方法が開示される。一実施態様では、当該方法は、ＩＲＩＤＡを有する患者にＲＧＭｃ拮抗薬を投与するステップを含む。別の実施態様では、当該方法は、ＩＲＩＤＡを有する患者に、ＲＧＭｃに特異的に結合してその機能を阻害する抗体を投与するステップを含む。別の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂに結合しない（または結合が少ない）。別の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的抗体またはその任意の誘導体のいずれか１つである。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的（ＲＧＭｃ選択的）抗体は、本明細書において開示されるＲＧＭｃ抗体の１つまたは複数と、抗原結合を競合（例えば、交差競合または交差阻害）する。

【0299】

ｉｉ．慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）
慢性疾患の貧血（例えば、慢性炎症の貧血）は、慢性の感染、慢性の免疫活性化（例えば炎症）、および／または悪性腫瘍などの結果である貧血の形態であり、入院患者における貧血の最も一般的な形態である。

【0300】

典型的に、ＡＣＤは、炎症性応答で始まり、その後に、疾患進行を仲介する炎症性サイトカイン放出が続く。サイトカインは、赤血球の産生を減少させ、赤血球の溶解を促進し、鉄をフェリチンとして貯蔵および保持するようにマクロファージを刺激して、最終的に不十分な鉄利用率をもたらす。さらに、インターロイキン－６（ＩＬ－６）の大きな増加があり、それによりヘプシジン発現が刺激され、その結果、フェロポーチンの分解を誘導し、それによって、マクロファージおよび腸細胞から周囲への鉄放出がブロックされる。炎症性応答に加えて、他のメカニズムも、ＡＣＤにおける役割（例えば、骨髄がエリスロポエチンに応答する能力を低減することによる、赤血球産生の減少）を果たし得る。

【0301】

上記に示唆されるように、貧血をもたらす炎症を引き起こし得る多くの症状があり、自己免疫性疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）またはループス、がん、慢性感染、例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳおよび結核、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のような胃腸の炎症状態、糖尿病、および心不全を含む。炎症性貧血は、一般に進行が遅いが、重病の貧血は、重度の急性感染、外傷、または炎症を引き起こし得る他の症状のために入院する患者において迅速に進行し得る。さらに、化学療法のような特定の薬物治療は、炎症および貧血を迅速に誘導し得る。

【0302】

他の貧血関連の炎症性疾患は、例えば、キャッスルマン症候群、慢性腎疾患、糖尿病、心不全／心疾患、特発性自己免疫性溶血性貧血、特発性肺動脈性高血圧、炎症性腸疾患、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、および全身性若年性特発性関節炎を含んでよい。貧血を引き起こす感染性疾患は、例えば、心内膜炎、ヘリコバクター・ピロリ感染、肝炎、ヒト免疫不全ウイルス、およびマラリアを含んでよい。貧血と関連する神経疾患は、例えば、急性虚血性脳卒中、筋萎縮性側索硬化症、限局性脳虚血／再灌流、頭蓋内脳出血、およびくも膜下出血を含んでよい。

【0303】

したがって、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、本明細書において開示されるモノクローナル抗体、その誘導体、それと競合するモノクローナル抗体、および、その抗原結合フラグメントを含む操作された分子）は、対象（例えば、ヒト患者）における、ＡＣＤ（例えば、本明細書に含まれるＡＣＤ徴候の１つまたは複数）の治療のために用いられ得る。したがって、一態様では、ヒト患者における慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）を治療する（例えば、予防する、またはそれと関連する症候を寛解させる）方法が開示される。一部の実施態様では、当該方法は、ＡＣＤを有する患者にＲＧＭｃ拮抗薬を投与するステップを含む。一部の実施態様では、当該方法は、ＡＣＤを有する患者に、ＲＧＭｃに特異的に結合してその機能を阻害する抗体を投与するステップを含む。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的（ＲＧＭｃ選択的）抗体は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂに結合しない（または結合が少ない）。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的抗体、またはその任意の誘導体のいずれか１つである。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的（ＲＧＭｃ選択的）抗体は、本明細書において開示されるＲＧＭｃ抗体の１つまたは複数と、抗原結合を競合（例えば、交差競合または交差阻害）する。

【0304】

ｉｉｉ．がん関連の貧血
がん患者のおよそ３０～９０％が、貧血による影響を受ける（Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ ２００４；１１６ Ｓｕｐｐ ｌ７Ａ：１１Ｓ－２６Ｓ）。例えば、非ホジキンリンパ腫患者のおよそ３２％、および婦人科がん患者の４９％が、診断において貧血を有している（Ｍｏｕｌｌｅｔ ｅｔ ａｌ．、Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ １９９８；８：１１０９－１１１５およびＬｕｄｗｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００４；４０：２２９３－２３０６）。貧血は、がん自体と関連する因子によって引き起こされ得て（がんによって誘導される貧血）、または、化学療法の結果として引き起こされ得る（化学療法によって誘導される貧血）。さらに、骨格に対する放射線療法は、血液学的毒性と関連することが示されている（Ｊｅｆｆｅｒｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒ Ｏｎｃｏｌ １９９８；４８：２３－２７）。貧血の病理学は、３つのカテゴリー：１）機能赤血球（ＲＢＣ）の産生の低減；２）ＲＢＣの破壊の増大；および３）失血に分類することができる。しかしながら、貧血の原因は多因子であり得て、評価および治療を複雑化させ得る。貧血は、出血、溶血、栄養障害、遺伝性疾患、腎不全、ホルモン機能障害および／またはそれらの組み合わせに起因し得る。さらに、がん細胞自体が、骨髄に浸潤することによって貧血をもたらし得て、および／または悪化させ得て、鉄の隔離（ＲＢＣ産生の減少をもたらす）、ＲＢＣ生存の短縮、および／または凝血の変化をもたらすサイトカインを産生し得る。

【0305】

さらに、がん患者は、血管または臓器の損傷による腫瘍部位における慢性の失血も経験し得る。がん患者における貧血に対する他の寄与因子は、食欲喪失、免疫介在性抗体による溶血、または凝血能の変化を含んでよい。

【0306】

最後に、貧血は、がん患者における反対の予後因子としても同定されている。例えば、６５％増大した死亡リスク、および、患者あたり４倍近く高い平均年間健康管理費用が存在することが予測されている。したがって、がん患者における貧血治療のゴールは、患者の生活の質（ＱｏＬ）を改善し、輸血に頼るのを減少させることである。輸血は、感染性疾患の伝染、輸血反応、肺損傷、および同種免疫の潜在的なリスクと関連する。輸血はまた、脳卒中、心筋梗塞、急性腎機能不全およびがんの再発を含む、死亡および罹患のリスクも増大させ得る（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２１（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ７）：ｖｉｉ１６７－ｖｉｉ１７２，２０１０；ＰＬＯＳ ＯＮＥ，ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１６３８１７（Ｓｅｐｔ ２８，２０１６）；Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２３：１９５４－１９６２，２０１２；および、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．４７，ｎｏ．２，２０１７）。

【0307】

本明細書において用いられる用語「がん」は、無調節の細胞増殖および悪性腫瘍によって典型的に特徴付けられる多細胞真核生物における生理学的状態を指す。その用語は、腫瘍、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫および骨髄腫）を含む固形および液体悪性腫瘍、ならびに骨髄線維症を広く包含する。貧血を引き起こすがんは、例えば、急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、リンパ性白血病、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性障害（例えば、骨髄線維症）、非ホジキンリンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、頭頚部がん、肝細胞がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膵臓がん、脳腫瘍、肝細胞がん、腎細胞がん、精巣がん、および甲状腺がんを含んでよい（Ｍａｃｃｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ２０１５；１００（１）：１２４－１３２およびＶｅｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ＆Ｍｏｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１８；５０：ｅ４３６。

【0308】

したがって、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、本明細書において開示されるモノクローナル抗体、その誘導体、それと競合するモノクローナル抗体、および、その抗原結合フラグメントを含む操作された分子）は、対象（例えば、ヒト患者）における、がんによって誘導される貧血またはがんと関係がある貧血の治療のために用いられ得る。したがって、一態様では、がんによって誘導される貧血を治療する（例えば、予防する、または、それと関連する症候を寛解させる）ための方法。一部の実施態様では、当該方法は、ＲＧＭｃ拮抗薬を、がんによって誘導される貧血を有する患者に投与するステップを含む。一部の実施態様では、がんは、急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、リンパ性白血病、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、膀胱がん、乳がん、結腸直腸がん、胃がん、頭頚部がん、肝細胞がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、膵がん、脳腫瘍、腎細胞がん、精巣がん、甲状腺がん、または骨髄線維症である。一部の実施態様では、当該方法は、ＲＧＭｃに特異的に結合してその機能を阻害する抗体を患者に投与するステップを含む。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂに結合しない（または結合が少ない）。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的抗体またはその任意の誘導体のいずれか１つである。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的（ＲＧＭｃ選択的）抗体は、本明細書において開示されるＲＧＭｃ抗体の１つまたは複数と、抗原結合を競合（例えば、交差競合または交差阻害）する。

【0309】

ｉｖ．治療によって誘導される貧血
患者に施される様々な治療は、治療される患者における貧血を含む不要な副作用と関連する。場合によっては、患者は、貧血を既に患っていてよいが、受ける療法はその症状をさらに悪化させ得る。

【0310】

化学療法および放射線療法のようながん治療を受ける患者の大部分が、治療によって誘導される貧血を経験する。典型的に、これらの療法は、体内のがん性細胞を死滅させることを目的とするが、血液細胞（例えば、造血細胞および造血幹細胞）を含む健康な細胞にも影響し、それによって貧血を生じる。

【0311】

化学療法剤は、骨髄における造血を直接的に害することによって貧血を誘導することが示されている。さらに、腎機能に対する細胞傷害性効果は、エリスロポエチン産生の低減を通して貧血を生じさせ得る。特に、肺がん、卵巣がん、および頭頚部がんにおいて一般に用いられる白金に基づくレジメンは、骨髄および腎臓の毒性を通して貧血を誘導することが知られている（Ｇｒｏｏｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ １９９９；９１：１６１６－１６３４）。さらに、化学療法の繰り返しサイクルは、これらの患者において貧血の重症度を増大させることも示されている（Ｌｕｄｗｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００４；４０：２２９３－２３０６）。

【0312】

興味深いことに、最近のデータは、免疫療法もまた、がん患者において貧血を引き起こし得る（および／または、そのリスクを増大させる）ことを示唆している。例えば、最近の研究によって、ニボルマブ（抗－ＰＤ－１抗体）による治療の潜在的合併症として溶血性貧血が同定された（Ｐａｌｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｓｅ Ｒｅｐ Ｏｎｃｏｌ ２０１６；９：６９１－６９７）。自己免疫性溶血性貧血の他の事例がニボルマブの使用後に報告されており、イピリムマブ（抗－ＣＴＬＡ－４抗体）およびペンブロリズマブ（抗－ＰＤ－１抗体）を受けている患者における貧血の事例を含む。したがって、抗がん剤／薬物の投与（免疫療法を含む）によって引き起こされる、または、生じる機会／リスクが高い貧血は、用語「化学療法によって誘導される貧血」によって包含される。

【0313】

最後に、上記のとおり、貧血の存在は、がん生存に関する予後因子として関連付けられている（Ｃａｒｏ ＪＪ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ２００１ １５；９１（１２）：２２１４－２１）。したがって、がん患者、または化学療法を受けている患者において貧血を治療することは、改善された成果をもたらし得るので、非常に理にかなっている。さらに、がん、化学療法、および貧血の間の十分に説明された関係を考慮して、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＮＣＣＮ）は、がんおよび化学療法によって誘導される貧血の診断、評価、および治療に関するガイドラインを定期的にリリースしている（例えば、Ｒｏｄｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ－ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｎｅｍｉａ，ＪＮＣＣＮ ２０１２；１０：６２８－５３を参照）。

【0314】

したがって、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、本明細書において開示されるモノクローナル抗体、その誘導体、それと競合するモノクローナル抗体、および、その抗原結合フラグメントを含む操作された分子）は、対象（例えば、ヒト患者）における、治療によって誘導される貧血（例えば、化学療法によって誘導される貧血）の治療のために用いられ得る。

【0315】

したがって、一態様では、化学療法によって誘導される貧血と関連する症候を治療する、予防する、または寛解させるための方法が提供される。一実施態様では、当該方法は、ＲＧＭｃ拮抗薬を、化学療法によって誘導される貧血を有している患者に投与するステップを含む。

【0316】

別の実施態様では、当該方法は、ＲＧＭｃに特異的に結合してその機能を阻害する抗体を患者に投与するステップを含む。別の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂに結合しない（または結合が少ない）。別の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的抗体またはその任意の誘導体のいずれか１つである。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的（ＲＧＭｃ選択的）抗体は、本明細書において開示されるＲＧＭｃ抗体の１つまたは複数と、抗原結合を競合（例えば、交差競合または交差阻害）する。

【0317】

ｖ．慢性腎疾患（ＣＫＤ）
貧血は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）と関連する一般的な合併症である。実際に、米国の成人集団のおよそ１４％が、２００７～２０１０年にＣＫＤを有していて、貧血は、ＣＫＤを有する人々においてほぼ２倍普及していて、一般集団で８．４％に対し、ＣＫＤ患者では１５．４％であった（Ｓｔａｕｆｆｅｒ ａｎｄ Ｆａｎ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１４；９：ｅ８４９４３）。

【0318】

腎臓は、血液のフィルターとして作用し、老廃物を除去し、流体と電解質のバランスを制御することがよく知られているが、腎臓のあまり知られていない役割は、赤血球産生を刺激するエリスロポエチンを産生することである。したがって、腎機能の混乱は、貧血を生じさせる潜在性がある。さらに、ＣＫＤ患者の根底にある炎症もまた、これらの患者において貧血を生じさせ得て、および／または悪化させ得る。

【0319】

ＣＫＤは、長期間（何ヶ月も、または何年も）にわたり、腎機能が徐々に失われることによって特徴付けられる。ＣＫＤの原因は、例えば、糖尿病、高血圧、糸球体腎炎、および多発性嚢胞腎疾患を含む。しかしながら、特発性の事例（すなわち、原因が未知）も存在し、それはしばしば矮小腎と関連する。

【0320】

ＣＫＤの進行を遅くする、または止める治療は、通常、元々の疾患の治療を必然的に伴うが、アンジオテンシン変換酵素阻害剤またはアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬による血圧制御が、疾患の進行を遅らせることが見いだされているので、一般的な治療である。しかしながら、重症の事例では（例えば、末期の腎疾患）、患者は、透析または腎臓移植さえも受けなければならない。患者は透析依存性であってよく（例えば慢性血液透析患者）；患者は非透析依存性であってよい。

【0321】

貧血を有するＣＫＤ患者は、経口または静脈内投与の鉄によって治療され得る。特定の事例では、治療は、エリスロポエチン（ＥＰＯ）の遺伝学的に操作された形態の注入および／または輸血を含んでよい。しかしながら、鉄の置き換えは常に効果的であるわけではなく；例えば、一部の患者は、ＥＳＡ治療に対して反応性低下であり、または反応性低下になる。さらに、ＥＰＯ治療のようなＥＳＡは、心血管イベント、例えば心臓発作および脳卒中の機会の増大と関連している。したがって、少ない副作用で鉄レベルを調節することのできる改善された治療が必要である。

【0322】

したがって、ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、本明細書において開示されるモノクローナル抗体、その誘導体、それと競合するモノクローナル抗体、および、その抗原結合フラグメントを含む操作された分子）は、対象（例えば、ヒト患者）における、がんによって誘導される、または、がんと関係がある貧血の治療のために用いられ得る。したがって、一態様では、慢性腎疾患と関連する症候（例えば、貧血）を治療する、予防する、または寛解させるための方法が提供される。一実施態様では、当該方法は、慢性腎疾患を有する患者にＲＧＭｃ拮抗薬を投与するステップを含む。別の実施態様では、当該方法は、ＲＧＭｃに特異的に結合してその機能を阻害する抗体を患者に投与するステップを含む。別の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂに結合しない（または結合が少ない）。別の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的抗体は、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的抗体またはその任意の誘導体のいずれか１つである。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ特異的（ＲＧＭｃ選択的）抗体は、本明細書において開示されるＲＧＭｃ抗体の１つまたは複数と、抗原結合を競合（例えば、交差競合または交差阻害）する。

【0323】

貧血、または、貧血によって特徴付けられる、または関連する疾患の治療における、上記の実施態様のいずれかにおいて、本明細書中に記載のＲＧＭｃ阻害剤療法は、ＥＳＡ、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤（例えば、ＩＶ鉄）および輸血のような、患者に施される現行または標準的な療法（単数または複数）を部分的または完全に置き換え得る。一部の実施態様では、本開示に従った、治療的レジメンにおけるＲＧＭｃ阻害剤療法の追加は、減少した用量または投与頻度のかかる治療を患者が受けるのを可能にする。このことは、患者において、不要な副作用または鉄過剰のような他のリスクを緩和または回避し得る。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ阻害剤療法は、患者における貧血を治療するための他の療法を完全に置き換え得る。

【0324】

貧血、または、貧血によって特徴付けられる、または関連する疾患の治療における、上記の実施態様のいずれかにおいて、本明細書中に記載のＲＧＭｃ阻害剤療法は、アドオンまたはアジュバント療法として、別の療法とともに用いられ得る。特定の実施態様では、患者は、貧血を治療するための他の療法を受けてよく、または受け続けてよいが、より低い用量またはより少ない頻度である。一部の実施態様では、かかる療法に対して抵抗性または応答が乏しい患者は、その療法とともにＲＧＭｃ阻害剤を用いて治療した場合、その療法に対してより応答性（例えば感受性）になり得る。

【0325】

ＲＧＭｃ阻害剤を用いた治療のための対象の選択
本明細書中に記載の治療の方法は、対象における疾患（例えば、貧血）の存在および／または重症度を決定するために、１つまたは複数の因子を測定するステップを含んでもよい。一般に、貧血の定義は、女性でＨｂ＜１２ｇ／ｄｌであり、男性でＨｂ＜１３ｇ／ｄｌである。ヘモグロビンの測定は貧血の１つの測定として認められているが、貧血のタイプ（ＡＩＤまたはＦＩＤ）および原因の決定は多くの異なる試験を伴い得る。例えば、対象における貧血のタイプおよび重症度を決定するのに役立ち得るいくつかのよく知られた試験が存在し、制限されないが、ヘモグロビン（Ｈｂ）、血清フェリチン（ＳＦ）、トランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ）、可溶性トランスフェリン受容体（ｓＴｆＲ）、フェリチン・インデックス（ＦＩ＝ｓＴｆＲ／ｌｏｇＳＦ）、低色素の網状赤血球（ＣＨＲ）およびＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の測定を含む。平均赤血球容積（ＭＣＶ）または平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）も、貧血のタイプと相関し得る測定値である。

【0326】

ＡＩＤおよびＦＩＤを定義するための正確な基準は討論対象であり、試験、疾患、性別および権威によって異なる。例えば、特定の理論に拘束されずに、ＦＩＤは、１）血清トランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ）＜２０％およびフェリチン≧１００ｎｇ／ｍＬ（Ｌｕｄｗｉｇ ｅｔ ａｌ．、Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１３；２４（７）：１８８６－１８９２）；２）ＴＳＡＴ＜１６％およびフェリチン＞１００ｎｇ／ｍｌ（軽度）または血清フェリチン３０～１００ｎｇ／ｍｌ（中程度）（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ Ｉｎ Ａｇｉｎｇ ２０１４；９：１１８７－１１９６）；３）ＴＳＡＴ２０～５０％およびフェリチン３０～８００ｎｇ／ｍｌ（Ｇｉｌｒｅａｔｈ ｅｔ ａｌ．，ＡｍＪ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１４；８９（２）：２０３－２１２）；４）ＴＳＡＴ＜２０％およびフェリチン＞３０ｎｇ／ｍｌおよび＞１００ｎｇ／ｍｌ（がん患者）（Ｌｕｄｗｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｗｉｅｎ Ｋｌｉｎ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ ２０１５；１２７：９０７－９１９）または５）ＴＳＡＴ＜２０％およびフェリチン＞３０ｎｇ／ｍｌ（女性）または＞４０ｎｇ／ｍｌ（男性）（Ｈｅｄｅｎｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ Ｏｎｃｏｌ ２０１４；３１（１２）：３０２）と定義され得る。他の例では、低色素赤血球（％）を用いてＦＩＤを検出することができる（例えば、Ｂｏｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｐｌａｎｔ ２００７；２２（４）：１１５６－１１６２およびＭｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２００６；８５（７）：４５５－４５７を参照）。別の例では、ＦＩＤは、患者がＨｂ＜１１０ｇ／ｌ、鉄が制限された赤血球産生（低色素血（％）＞５）、全身性炎症（ＣＲＰ＞１０）を有する場合（３０～８００ｎｇ／ｍｌのフェリチン値を有してもよい）として定義される（Ｎｅｏｈ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｃａｒｅ Ｃａｎｃｅｒ ２０１７；２５：１２０９－１２１４）。

【0327】

一方で、特定の理論によって拘束されずに、ＡＩＤは、例えば、１）ＴＳＡＴ＜２０％およびフェリチン＜３０ｎｇ／ｍｌ（Ｌｕｄｗｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１３；２４（７）：１８８６－１８９２）；２）ＴＳＡＴ＜２０％およびフェリチン＜１００ｎｇ／ｍｌ（がん患者）（Ｌｕｄｗｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｗｉｅｎ Ｋｌｉｎ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ ２０１５；１２７：９０７－９１９）；または３）ＴＳＡＴ＜２０％およびフェリチンレベル＜４０ｕｇ／Ｌ（Ｈａｓｈｅｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２０１７；１１（３）：１９２－１９８）と定義され得る。

【0328】

治療方法は、本明細書において述べられる、および当技術分野で知られている、他のマーカーの測定を伴ってもよい。例えば、ヘプシジン（例えば、ＵＳ２０１５０２０２２２４Ａ１およびＫｒｏｏｔ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２０１１；５７（１２）：１６５０－１６６９を参照）、ネオゲニン、増殖分化因子１５（ＧＤＦ－１５）、好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）、インターロイキン６（ＩＬ－６）、および／またはＢＭＰ６の測定。

【0329】

さらに、他のリスク因子および／または疾患の同定は、貧血の存在およびタイプを判定するのに役立ち得て、例えば、患者は、感染、がん、または慢性腎疾患を有してよい。遺伝子試験もまた、特定の鉄関連の疾患、例えば、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）、サラセミア、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、無βリポタンパク質血症、鎌状赤血球貧血、先天性赤血球異形成貧血、遺伝性ヘマクロマトーシス（ＨＨ）、および若年性ヘマクロマトーシスを判定するために役に立ち得る。

【0330】

本明細書中に記載の任意の方法における対象は、鉄欠乏性の貧血、または、鉄欠乏性の貧血と関連する疾患、障害、または症状を、有する対象、その診断がされた対象、有する疑いがある対象、または、発症するリスクがある対象であってよい。対象は哺乳類であってよく、ヒトまたは非ヒトであってよい。特定の実施態様では、対象はヒト対象である。別の実施態様では、対象は、ヒト男性対象であってよい。別の実施態様では、対象は、ヒト女性対象であってよい。別の実施態様では、対象は、化学療法を受けている、外科的処置から回復中の、救命救急患者であってよく、または、感染、がん、自己免疫性の疾患もしくは障害、慢性臓器疾患および／または炎症、および／または固形臓器移植後の臓器の慢性拒絶のリスクがあってよく、または有していてよい。感染は、急性または慢性であってよい。感染は、ウイルス、細菌、寄生虫、または真菌であってよい。がんは、血液学的または固形腫瘍のような任意のがんであってよい。自己免疫性疾患は、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡および結合組織疾患、血管炎、サルコイドーシス、および炎症性腸疾患のような任意の自己免疫疾患であってよい。慢性臓器疾患は、慢性腎疾患であってよく、その対象は、透析を受けていてよく、または受けてなくてよい。ウイルス感染は、肝炎ＢもしくはＣ感染、またはヒト免疫不全ウイルス感染であってよい。任意の疾患および障害は、ＡＣＤの根本的原因であってよい。外科的処置は、周術期または術後であってよい。外科的処置は、腫瘍の外科的処置であってよい。

【0331】

治療が必要な対象は典型的に、問題となっている疾患または症状と一致する病歴および身体検査によって評価される。本明細書中に記載の方法によって治療することのできる様々な症状の診断は、当該分野の技術内である。本明細書中に記載のＲＧＭｃ拮抗薬は、鉄を送達することが臨床的に必要である対象へ、または、機能性鉄欠乏症を有する対象、例えばエリスロポエチン療法中の対象において、投与され得る。非経口またはｉ．ｖ．鉄による治療の必要性に関する決定は、当業者の能力内である。例えば、必要性は、対象の鉄状態をモニターすることによって評価することができる。鉄欠乏症の診断は、上述の適切な検査試験、例えば、表２に従ったＨｇレベルまたはベースラインよりも＞２ｇ／ｄｌ低いこと（＞２ｇ／ｄｌ ｂｅｌｏｗ ｂａｓｅｌｉｎｅ）、および／または８０フェムトリットル（ｆＬ）未満のＭＣＶを有する赤血球に基づいてよい。鉄欠乏症を診断するための他の測定は、血清フェリチン（ＳＦ）、トランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ）、可溶性トランスフェリン受容体（ｓＴｆＲ）、フェリチン・インデックス（ＦＩ＝ｓＴｆＲ／ｌｏｇＳＦ）、低色素網状赤血球（ＣＨＲ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）および／または平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）の測定に基づいてよい。

【0332】

【0333】

治療が必要な対象は、鉄欠乏性貧血と関連する疾患、障害、または症状を患っている対象の診断を通して決定してもよい。例えば、エリスロポエチンを受けている多くの慢性腎機能不全患者は、標的鉄レベルを維持するために鉄剤を必要とする。別の例としては、大部分の血液透析患者は、透析と関係がある失血および生じる負の鉄バランスに起因して、鉄剤の投与を必要とする。

【0334】

モニター頻度は、対象が悩まされている、またはリスクがある、疾患、障害、または症状に依存し得る。例えば、エリスロポエチン療法を始めている対象において、鉄インデックスは毎月モニターされる。別の例としては、標的範囲のＨｂを達成した対象または静脈内投与の鉄療法を受けている対象において、ＴＳＡＴおよびフェリチンレベルは３月ごとにモニターされ得る。

【0335】

対象の鉄状態は、絶対的鉄欠乏症（ＡＩＤ）または機能性鉄欠乏症（ＦＩＤ）を表わし得て、両方とも、本明細書中に記載の組成物および治療的方法を用いて治療することができる。絶対的鉄欠乏症は、体の要求を満たすのに利用できる鉄の量が不十分である場合に生じる。不十分であることは、不十分な鉄の取り込み、食物由来の鉄のバイオアベイラビリティーの減少、鉄利用の増大、または慢性失血に起因し得る。長い鉄欠乏は、鉄欠乏性貧血－小赤血球、低色素貧血（鉄貯蔵が不十分である）をもたらし得る。ＡＩＤは一般に、ＴＳＡＴ＜２０％およびフェリチン＜１００ｎｇ／ｍＬである場合を指す。

【0336】

ＴＳＡＴは、血清鉄と総鉄結合能の比に１００をかけたものである。ＴＳＡＴ値は、鉄を結合するのに利用可能なトランスフェリンのうち、どれくらいの血清鉄が実際に結合しているのか臨床医が知ることができるものである。例えば、１５％という値は、トランスフェリンの鉄結合部位の１５％が鉄で占められていることを意味する。

【0337】

ＦＩＤは、十分な総体内鉄貯蔵にもかかわらず赤血球産生に関する骨髄の需要に合わせるのに十分急速に鉄を放出することができない場合に生じ得る。これらの例では、フェリチンレベルは正常または高いかもしれないが、赤血球系への鉄の供給は、低いトランスフェリン飽和度および増大した数の小球性低色素赤血球によって示されるように制限される。ＦＩＤは、以下の特徴によって特徴付けることができる：エリスロポエチンに対する不十分なヘモグロビン応答；血清フェリチンは正常または高いかもしれない；トランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ）は通常＜２０％；および／または減少した平均赤血球容積（ＭＣＶ；例えば、８０ｆＬ未満）または平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ；例えば、３４±２ｇ／ｄｌ未満）（重症な事例）。機能性鉄欠乏症（すなわち、鉄貯蔵は十分であると考えられるが鉄送達に利用可能でない）は一般に、ＴＳＡＴ＜２０％およびフェリチン＞１００ｎｇ／ｍＬの場合を指す。

【0338】

鉄療法に関する必要性の評価は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｋｉｄｎｅｙ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ’ｓ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅに従ってよい。ＮＫＦ－Ｋ／ＤＯＱＩ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ Ａｎｅｍｉａ ｏｆ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓｅａｓｅ（２０００）；Ａｍ Ｊ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ（２００１）３７（ｓｕｐｐ １），Ｓ１８２－Ｓ２３８を参照。ＤＯＱＩは、慢性腎機能不全における貧血の治療のための最適な診療を提供する。ＤＯＱＩガイドラインは、ヘモグロビン、トランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ）、およびフェリチンレベルに基づき、腎疾患の静脈内鉄治療を特定化する。

【0339】

鉄管理、および、がんおよび／または化学療法患者におけるＡＩＤ対ＦＩＤの判定のためのさらなるガイドラインも示唆されており、例えば、Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１２；３（３）：１７７－９１，Ｍｉｋｈａｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｏｎｃｏｌ ２００７；１４：２０９－２１７，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ（ＥＯＲＴＣ；Ｂｏｋｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２００７；４３：２５８－２７０；および、Ａａｐｒｏ ａｎｄ Ｌｉｎｋ，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ ２００８；１３（Ｓｕｐｐｌ．３）：３３－３６）、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＳＨ）ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（ＡＳＣＯ）（例えば、Ｒｉｚｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１０；１００：２３０３－２３２０を参照）、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＮＣＣＮ）ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．２０１８ Ｃａｎｃｅｒ－ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ－ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｎｅｍｉａ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（ＥＳＭＯ）（例えば、Ａｅｐｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１８；０：１－１５を参照）、および、Ｎａｔｉｏｎａｌ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｃａｒｅ Ｅｘｃｅｌｌｅｎｃｅ（ＮＩＣＥ）（例えば、Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｐｐｒａｉｓａｌ ｇｕｉｄａｎｃｅ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２６ Ｎｏｖ ２０１４；ｎｉｃｅ．ｏｒｇ．ｕｋ／ｇｕｉｄａｎｃｅ／ｔａ３２３を参照）を参照。

【0340】

治療が必要な対象は、対象の標的鉄レベルによって決定され得る。例えば、対象の標的ヘモグロビンレベルは、１１．０ｇ／ｄＬ～１２．０ｇ／ｄＬ（ヘマトクリットおよそ３３％～３６％）として選択されてよい。最適エリスロポエチン用量で標的ヘモグロビンを達成するために、十分な鉄が、ＴＳＡＴ≧２０％およびフェリチン１００ｎｇ／ｍＬを維持するように提供されてよい。最適エリスロポエチン用量での標的ヘモグロビンレベルの達成は、２０％よりも高くＴＳＡＴを維持するのに十分な鉄の提供と関連する。

【0341】

鉄療法は、鉄欠乏を予防して鉄過剰も予防しながら、標的ヘモグロビンを維持するように与えられ得る。ヘモグロビン、ヘマトクリット、および鉄貯蔵の検査パラメータの標的レベルを維持するための鉄の用量の調節は、当該分野の通常の技術内である。例えば、対象が貧血または鉄欠乏である場合は、患者がフェリチン＜８００ｎｇ／ｍＬ、ＴＳＡＴ＜５０％、および／またはヘモグロビン＜１２ｇ／ｄＬであるときに鉄剤が投与され得る。鉄過剰は、ＴＳＡＴ＞５０％および／またはフェリチン＞８００ｎｇ／ｍＬに関して鉄を控えることによって避けることができる。

【0342】

対象が貧血または鉄欠乏ではないが、それでもなおＲＧＭｃ拮抗薬が必要である場合、例えば対象が下肢静止不能症候群を患っている場合は、ヘモグロビンおよびＴＳＡＴレベルは必ずしも関係ないが、フェリチン＞８００が、投与に関する一般的なカットオフポイントを提供し得る。

【0343】

［投与］
本明細書に開示される方法を実行するために、有効量の上述の医薬組成物は、適切な経路（例えば静脈内投与）を介して、例えばボーラスとして、または、長年にわたる連続的なインフュージョンによって、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、髄腔内、経口、吸入または局所経路により、治療を必要とする対象（例えばヒト）に投与され得る。ジェット噴霧器および超音波噴霧器を含む、液体製剤のための市販される噴霧器が、投与に有用である。液体製剤は、直接噴霧されてよく、凍結乾燥された粉末は、再構成後に噴霧されてよい。あるいは、ＲＧＭｃに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、フッ化炭素製剤および定量吸入器を用いてエアロゾル化されてよく、または、凍結乾燥および製粉された粉末として吸入されてよい。

【0344】

本明細書に記載の方法によって治療される対象は、哺乳類、より好ましくはヒトであってよい。哺乳類は、限定されないが、家畜、競技動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットを含む。治療が必要なヒト対象は、上記に記載したもの（例えば貧血）のようなＲＧＭｃ関連の徴候を有する、そのリスクがある、または有する疑いがある、ヒト患者であってよい。ＲＧＭｃ関連の徴候を有する対象は、日常的な医学的検査、例えば、検査試験、臓器機能性試験、ＣＴスキャン、または超音波によって同定され得る。任意のそのような徴候を有する疑いがある対象は、徴候の１つまたは複数の症候を示す。徴候に関するリスクがある対象は、その徴候に関する危険因子の１つまたは複数を有する対象であり得る。

【0345】

本明細書において用いられる用語「有効量」および「効果的な用量」は、その使用目的（単数または複数）、すなわち、許容できる利益／リスク比で組織または対象における所望の生物学的または医薬的（臨床）応答を満たすのに十分な化合物または組成物の任意の量または用量を指す。例えば、本発明の特定の実施態様では、使用目的は、ＲＧＭｃ活性をインビボで阻害して、ＲＧＭｃ阻害と関連する臨床的に有意義な成果を達成することであってよい。例えば、臨床的に意味のある効果は、血清鉄の増大、ヘモグロビンまたは赤血球カウントの復元または正常化、トランスフェリン飽和度の増大などを含んでよい。一部の実施態様では、臨床的に有意義な効果は、減少した毒性または心血管系リスク（例えば、脳卒中または心不全）およびがんのような害のリスクを含んでよい。一部の実施態様では、臨床的に有意義な効果は、鉄補給剤のような他の療法の必要が減ることを含んでよい。一部の実施態様では、臨床的に有意義な効果は、患者が感じとる生活の質または一般的幸福の改善を含んでよい。一部の実施態様では、臨床的に有意義な効果は、貧血を表わす１つまたは複数のパラメータの加速またはより早い軽減を含んでよい。かかる軽減は、ＲＧＭｃ阻害剤および別の療法（例えば、ＥＳＡ、ＨＩＦ安定剤など）を含むアドオンまたは併用療法によって達成され得る。例えば、典型的に、ＥＰＯ療法（例えば、単剤療法）を開始する場合、その治療が効果を示すには１～２ヶ月（例えば、６～８週）かかる。この理由から、重度の貧血を経験する患者は、その期間中、ＩＶ鉄または輸血がさらに必要であり得る。しかしながら、本明細書中に開示されるもののようなＲＧＭｃ選択的阻害剤とともに用いると、治療的効果の発生は有意により迅速（例えば、１～４週）であり得て、そのことは、さらなるＩＶ鉄または輸血の必要を減少させ得る。

【0346】

有効量は、当業者に認識されるように、治療される特定の状態、状態の重症度、年齢、健康状態、サイズ、性別および体重を含む個々の患者パラメータ、治療の持続時間、同時的な療法の性質（ある場合）、特定の投与経路、および、健康専門家の知識および経験内の同様の因子に応じて変化する。これらの因子は当業者によく知られていて、ルーチン実験の範囲内で対処され得る。個々の構成要素またはその組み合わせの最大投与量、すなわち、十分な医学的判断に従って最高の安全投与量が用いられることが一般に好ましい。しかしながら、医学的理由、心理的理由または実質的に任意の他の理由のために、患者が、より低い投与量または許容できる投与量を要求してよいことを、当業者は理解している。

【0347】

半減期のような経験的考察は、一般に、用量の決定に寄与する。例えば、ヒト化抗体または完全なヒト抗体のようなヒト免疫系と適合する抗体は、抗体の半減期を延長させるため、および抗体が宿主の免疫系によって攻撃されるのを防ぐために用いられ得る。投与頻度は、治療の工程にわたって決定および調節されてよく、一般に、必ずしもではないが、ＲＧＭｃ関連の徴候の治療および／または抑制および／または寛解および／または遅延に基づく。あるいは、ＲＧＭｃに特異的に結合する抗体の維持された連続的な放出製剤が適切であり得る。徐放性を達成するための様々な製剤およびデバイスが当業者に明らかであり、本開示の範囲内である。

【0348】

１つの例では、本明細書中に記載のＲＧＭｃに特異的に結合する抗体に関する用量は、抗体の１または複数の投与（単数または複数）が与えられたことのある個体において経験的に決定されてよい。個体は、増加的な用量のＲＧＭｃ拮抗薬が与えられる。効能を評価するために、ＲＧＭｃ関連の徴候のインディケーターが後に続いてよい。例えば、貧血を測定するための方法が当技術分野でよく知られており、本明細書においてさらに記載される。

【0349】

本発明は、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂとは対照的にＲＧＭｃシグナリングを特異的に調整することが可能な薬剤が、薬品として用いられた場合に改善された安全性プロファイルを提供し得るという認識を包含する。したがって、本発明は、ＲＧＭｃに特異的に結合してその活性化を阻害するが、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂにはせず、それにより、ＲＧＭａおよび／またはＲＧＭｂシグナリングに影響を及ぼすことによる不要な副作用を最小限にしながらインビボでＲＧＭｃシグナリングの特異的な阻害を与える、抗体およびその抗原結合フラグメントを含む。

【0350】

一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントは、対象に投与した場合に毒性でない。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＲＧＭｃおよびＲＧＭａの両方に特異的に結合する抗体と比べて、対象に投与した場合に減少した毒性を示す。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＲＧＭｃおよびＲＧＭｂの両方に特異的に結合する抗体と比べて、対象に投与した場合に減少した毒性を示す。一部の実施態様では、本明細書中に記載の抗体、またはその抗原結合フラグメントは、ＲＧＭａ、ＲＧＭｂおよびＲＧＭｃに特異的に結合する抗体と比べて、対象に投与した場合に減少した毒性を示す。

【0351】

一般に、本明細書中に記載の任意の抗体の投与に関し、最初の候補用量は、例えば、毎週、２週ごと、３週ごと、毎月、３ヶ月ごとなどで、投与あたり約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、１～２０ｍｇ／ｋｇであってよい。例えば、患者は、疾患（例えば、がん）を治療するのに効果的な量であって十分耐容性のある量（許容できる毒性または有害事象の範囲内）で、１週あたり、２週あたり、３週あたり、または４週あたりなどで、約１～１０ｍｇ／ｋｇの注入を受けてよい。

【0352】

本開示の目的のために、典型的な用量（投与、例えば注入およびインフュージョンあたり）は、上述の因子に応じて、約０．１ｍｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇまで、２ｍｇ／ｋｇまで、３ｍｇ／ｋｇまで、５ｍｇ／ｋｇまで、１０ｍｇ／ｋｇまで、２０ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、またはそれよりも多くのいずれかの範囲であってよい。数日またはそれよりも長い期間にわたる繰り返し投与については、症状に応じて、治療は、症候の所望の抑制が生じるまで、または、十分な治療的レベルが達成されてＲＧＭｃ関連の徴候、またはその症候が緩和されるまで持続する。

【0353】

例示的な投与レジメンは、最初の用量の投与の後に、１つまたは複数の維持用量を含み、ここで後者は典型的に前者よりも少ない。例えば、最初の用量は、例えば１週間に１回または１週間に２回、約２～３０ｍｇ／ｋｇであってよい。その後に、維持用量（単数または複数）が、例えば、毎週、隔週、毎月などで、例えば、約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、１、２、３、５、１０、１５ｍｇ／ｋｇ）で続けてよい。しかしながら、他の投与レジメンが、熟練者が達成しようとする薬物動態の衰退パターンに応じて有用であり得る。薬力学的（ＰＤ）実験は、前臨床動物モデル（例えばラットモデル）への本明細書において開示される抗体（例えば、Ａｂ８；２０ｍｇ／ｋｇ）の投与後少なくとも３週間、ＰＤ効果（例えば、血清鉄レベルの増大）が持続することを示した。いかなる特定の理論によっても拘束されることを望まずに、この投与後の持続した効果は、抗体が投与される対象（例えばヒト対象）において臨床的に効果的な血清濃度を維持しながら、抗体がより少ない頻度で投与され得るので、有利であり得る。一部の実施態様では、投与頻度は、１週ごと、２週ごと、３週ごと、４週ごと、５週ごと、６週ごと、７週ごと、８週ごと、９週ごと、または１０週ごとに１回；または、１ヶ月ごと、２ヶ月ごと、または３ヶ月ごと、またはより長い期間に１回である。この療法の進行は、従来の技術およびアッセイによって簡単にモニターされる。投与レジメン（用いられる抗体を含む）は、経時的に変化してよい。

【0354】

一部の実施態様では、正常体重の成人患者について、約０．３～５．００ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量が投与され得る。特定の投与レジメン、例えば、投与量、タイミングおよび反復は、特定の個体およびその個体の病歴、ならびに個々の薬剤の特性（例えば、薬剤の半減期、および他の関連のある考慮）に依存する。

【0355】

本開示の目的のために、ＲＧＭｃに特異的に結合する抗体の適切な用量は、用いられる特異的抗体（またはその組成物）、徴候のタイプおよび重症度、抗体が予防的または治療的目的のために投与されるのかどうか、以前の療法、患者の病歴および拮抗薬に対する応答、および、主治医の裁量に依存する。一部の実施態様では、臨床医は、ＲＧＭｃに特異的に結合する抗体を、所望の結果を達成する用量が到達されるまで投与する。ＲＧＭｃに特異的に結合する抗体の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与目的が治療的または予防的であるかどうか、および熟練した専門家に公知の他の因子に依存して、連続または断続してよい。ＲＧＭｃに特異的に結合する抗体の投与は、事前に選択された期間にわたって本質的に連続してよく、または、ＲＧＭｃ関連の徴候（例えば、貧血）を発症する前、発症している間、または発症した後のような、一連の間隔が空いた用量であってよい。

【0356】

本明細書において用いられる用語「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、ＲＧＭｃ関連の徴候、徴候の症候、または徴候に向かう体質を有する対象への、徴候、徴候の症候、または徴候に向かう体質を、治癒する（ｃｕｒｅ）、治す（ｈｅａｌ）、緩和する（ａｌｌｅｖｉａｔｅ）、軽減する（ｒｅｌｉｅｖｅ）、変更する（ａｌｔｅｒ）、修復する（ｒｅｍｅｄｙ）、寛解させる（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、改善する（ｉｍｐｒｏｖｅ）、または影響を及ぼす（ａｆｆｅｃｔ）目的での、１つまたは複数の活性の薬剤を含む組成物の適用または投与を指す。

【0357】

ＲＧＭｃに特異的に結合する抗体を用いてＲＧＭｃ関連の徴候を緩和するステップは、徴候の発生または進行を遅延させるステップ、または、徴候の重症度を減少させるステップを含む。徴候を緩和させるステップは、治療的な結果を必ずしも必要としない。本明細書において用いられる、ＲＧＭｃ関連の徴候と関連する徴候の発生の「遅延」は、徴候の進行を、延ばす（ｄｅｆｅｒ）、妨げる（ｈｉｎｄｅｒ）、遅らせる（ｓｌｏｗ）、妨害する（ｒｅｔａｒｄ）、安定化させる（ｓｔａｂｉｌｉｚｅ）、および／または、延期する（ｐｏｓｔｐｏｎｅ）ことを意味する。この遅延は、治療される徴候および／または個体の経歴に応じて、時間の長さが変化してよい。徴候の発生を「遅延させる」または緩和する方法、または、徴候の発症を遅延させる方法は、その方法を用いない場合に比べて、所定の時間枠内で徴候の１つまたは複数の症候が発生する可能性を減少させる、および／または、所定の時間枠内で症候の程度を減少させる方法である。そのような比較は典型的に、統計的に有意な結果を与えるのに十分多くの対象を用いた臨床試験に基づく。

【0358】

［併用療法］
本開示は、インビボでＲＧＭｃ阻害によって利益を受け得る対象を治療するための併用療法として用いられる、医薬組成物および関連方法をさらに包含する。任意のこれらの実施態様では、かかる対象は、少なくとも１つのＲＧＭｃ拮抗薬、例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む第１の組成物を、同一または重複する疾患または臨床状態を治療することが意図される少なくとも１つのさらなる治療を含む第２の組成物とともに含む、併用療法を受け得る。第１および第２の組成物は両方とも、同一の細胞標的、または別個の細胞標的に対して作用し得る。一部の実施態様では、第１および第２の組成物は、疾患または臨床状態の症候または態様の同一または重複するセットを治療または緩和し得る。一部の実施態様では、第１および第２の組成物は、疾患または臨床状態の症候または態様の別個のセットを治療または緩和し得る。一例であるが提供すると、第１の組成物は、疾患または症状（例えば、ＣＫＤまたはがん）を治療し得て、一方で、第２の組成物は、同一の疾患と関連する炎症、赤血球産生の減少、または貧血などを治療し得る。かかる併用療法は、互いとともに施されてよい。併用療法の文脈における語句「とともに」は、第１の療法の治療的効果が、併用療法を受ける対象において、第２の療法の治療的効果と時間的および／または空間的に重複することを意味する。したがって、併用療法は、同時的な投与のための単一製剤、または療法の連続的投与のための別個の製剤として、処方され得る。

【0359】

好ましい実施態様では、併用療法は、疾患の治療において相乗効果を生じる。用語「相乗」は、それぞれの単剤療法を合わせた相加的効果よりも大きな効果（例えば、より大きな効能）を指す。

【0360】

一部の実施態様では、併用療法は、単剤療法よりも早い治療的効果を達成し得る。

【0361】

一部の実施態様では、本明細書に記載の医薬組成物を含む併用療法は、別の療法（例えば、第２の薬剤の単剤療法）によって生じるものと全体的に同等の効能を生じるが、第２の薬剤の単剤療法と比較して、第２の薬剤と関連する不要な副作用がより少なく、または、毒性の重度がより低い。一部の実施態様では、かかる併用療法は、より少ない用量の第２の薬剤を可能にするが、全体的な効能を維持する。かかる併用療法は、長期の治療が保証される、および／または、小児科の患者を含む患者集団に、特に適切であり得る。

【0362】

したがって、一態様では、本発明は、本明細書に記載の、ＲＧＭｃ活性の減少のための併用療法での使用のための医薬組成物および方法、および、ＲＧＭｃシグナリングと関連する疾患または症状の治療または予防を提供する。したがって、当該方法または医薬組成物は、第２の療法をさらに含む。一部の実施態様では、第２の療法は、ＲＧＭｃシグナリングと関連する疾患または症状を治療または予防するのに有用であり得る。第２の療法は、標的の疾患と関連する少なくとも１つの症候（単数または複数）を減少または治療し得る。第１および第２の療法は、同様または関係のない作用機序によってそれらの生物学的効果を発揮し得て；または、第１および第２の療法のいずれか一方または両方は、作用機序の多重性によってそれらの生物学的効果を発揮し得る。例えば、貧血の関連において、ＲＧＭｃ阻害剤は、赤血球産生を増大させる第２の療法（例えば、ＥＰＯ療法、輸血など）と組み合わせて（例えば、連続してまたは同時に）投与され得る。あるいは、慢性疾患の貧血の関連において、ＲＧＭｃ阻害剤は、がんおよび免疫障害のような基礎疾患を治療する第２の療法（例えば、化学療法、放射線療法、免疫療法など）と組み合わせて（例えば、連続してまたは同時に）投与され得る。

【0363】

本明細書に記載の医薬組成物は、それぞれの記載される実施態様に関して、同一の薬学的に許容できる担体または異なる薬学的に許容できる担体中に、第１および第２の療法を有してよいことが理解されるべきである。第１および第２の療法は、記載される実施態様において、同時に、または連続して施されてよいことが、さらに理解されるべきである。

【0364】

本発明の１つまたは複数のＲＧＭｃ阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）は、１つまたは複数のさらなる治療的薬剤を受けたことのある、または受けている、患者に投与されてよい。ＲＧＭｃ抗体または本発明とともに用いることのできるさらなる治療的薬剤の例は、限定されないが、エリスロポエチン刺激剤（ＥＳＡ）、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）安定剤、ヘプシジン拮抗薬、鉄補給剤（例えば、経口または静脈内投与）、抗炎症および／または抗がん薬物を含む。

【0365】

ＥＳＡは、赤血球を作るように骨髄を刺激する薬剤であり、患者における様々なタイプの貧血を治療するのに有用である。しかしながら、増大した赤血球産生の存在下でさえも、十分な鉄がないと貧血は持続する。これは、赤血球は酸素を輸送するためにヘモグロビンを必要とし、鉄はヘモグロビン合成に重要であるからである。したがって、十分な鉄がないと、新しく産生された赤血球はヘモグロビンが不足し、低色素（赤いヘモグロビン色素の欠乏）および小球性（正常より小さい）になる。

【0366】

したがって、一実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ拮抗薬（例えば、ＲＧＭｃ抗体）は、鉄関連の疾患を治療するためにＥＳＡを受けたことがある患者または受けている患者に投与され得る。ＥＳＡの例は、限定されないが、エポエチンα、エポエチンβ、エポエチンδ（例えば、Ｄｙｎｅｐｏ（登録商標））、エポエチンω（例えば、Ｅｐｏｍａｘ（登録商標））、ダルベポエチンα（Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標））、Ｅｐｏｃｅｐｔ（登録商標）（Ｌｕｐｉｎ ｐｈａｒｍａ）、Ｎａｎｏｋｉｎｅ（登録商標）（Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、Ｅｐｏｆｉｔ（登録商標）（Ｉｎｔａｓ ｐｈａｒｍａ）、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）（Ａｍｇｅｎ製）、Ｅｐｏｇｉｎ（登録商標）（Ｃｈｕｇａｉ Ｐｈａｒｍａ）、Ｅｐｒｅｘ（登録商標）（Ｊａｎｓｓｅｎ－Ｃｉｌａｇ製）、Ｂｉｎｏｃｒｉｔ（登録商標）（Ｓａｎｄｏｚ製）、ＰＤｐｏｅｔｉｎ（登録商標）（Ｐｏｏｙｅｓｈｄａｒｏｕ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ社製）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）、Ｂｉｏｙｅｔｉｎ（登録商標）（Ｐｒｏｂｉｏｍｅｄ製）、ＮｅｏＲｅｃｏｒｍｏｎ（登録商標）（Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ製）、Ｓｉｌａｐｏ（登録商標）／Ｒｅｔａｃｒｉｔ（登録商標）（Ｓｔａｄａ／Ｈｏｓｐｉｒａ製）、ＥＰＯＴｒｕｓｔ（登録商標）（Ｐａｎａｃｅａ Ｂｉｏｔｅｃ Ｌｔｄ製）、Ｅｒｙｐｒｏ Ｓａｆｅ（商標）（Ｂｉｏｃｏｎ Ｌｔｄ．製）、Ｒｅｐｏｉｔｉｎ（登録商標）（Ｓｅｒｕｍ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｉｎｄｉａ Ｌｉｍｉｔｅｄ製）、Ｖｉｎｔｏｒ（登録商標）（Ｅｍｃｕｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ製）、Ｅｒｙｋｉｎｅ（Ｉｎｔａｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ製）、Ｗｅｐｏｘ（登録商標）（Ｗｏｃｋｈａｒｄｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ製）、Ｅｓｐｏｇｅｎ（商標）（ＬＧ ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅｓ製）、ＲｅｌｉＰｏｉｅｔｉｎ（商標）（Ｒｅｌｉａｎｃｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ製）、Ｓｈａｎｐｏｉｅｔｉｎ（商標）（Ｓｈａｎｔｈａ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃｓ Ｌｔｄ製）、Ｚｙｒｏｐ（登録商標）（Ｃａｄｉｌａ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ．製）、ＥＰＩＡＯ（登録商標）（ｒＨｕＥＰＯ）（Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｓｕｎｓｈｉｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．ＬＴＤ．製）、および、Ｃｈｉｎａ Ｃｉｎｎａｐｏｉｅｔｉｎ（登録商標）（ＣｉｎｎａＧｅｎ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｒａｎ製）を含む。

【0367】

ＥＳＡは一般に有効であるが、患者のサブセットは高用量でさえ治療に反応しないという証拠がある（Ｓｏｌａｋ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．２０１６；４２（２）：１６０－７）。さらに、いくつかの研究によって、ＥＳＡの使用は、より高い脳血管および心血管（ＣＶ）イベント率および死亡率をもたらし得ることが示されている（Ｂｉｇｇａｒ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ２０１７ Ｓｅｐ；３６（３）：２０９－２２３）。ＥＳＡは、一部の患者においてがんリスクの増大（場合によっては抗がん治療に対するより乏しい応答）とも関連し得る。したがって、特定の理論によって拘束されずに、ＥＳＡを受けたことのある患者または受けている患者におけるＲＧＭｃ阻害剤の使用は、応答率を改善し得て、効果を有するために必要とされるＥＳＡの用量を減少させ得て、それにより、不利な毒性が生じるのを減少させる。

【0368】

低酸素誘導因子（ＨＩＦ）プロリルヒドロキシラーゼ（ＰＨ）酵素阻害剤（ＨＩＦ－ＰＨＩまたはＨＩＦ安定剤としても知られる）は、貧血の治療のための薬剤の１クラスである。これらの薬剤は、ＨＩＦ複合体を安定化して、内因性エリスロポエチン産生を刺激することによって作用する。したがって、エリスロポエチン産生を増大させるＨＩＦ－ＰＨ阻害剤は、血清鉄レベルを増大させる薬物（例えばＲＧＭｃ阻害剤）によって補足（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔ）され得る。したがって、一部の実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ阻害剤（例えば、ＲＧＭｃ抗体）は、鉄関連の疾患を治療するためにＨＩＦ安定剤またはプロリルヒドロキシラーゼ（ＰＨ）酵素阻害剤を受けたことのある患者または受けている患者に投与され得る。ＨＩＦ安定剤またはＨＩＦ－ＰＨ阻害剤の例は、限定されないが、Ｒｏｘａｄｕｓｔａｔ（ＦＧ－４５９２）、Ｖａｄａｄｕｓｔａｔ（ＡＫＢ－６５４８）、Ｄａｐｒｏｄｕｓｔａｔ（ＧＳＫ－１２７８８６３）、Ｍｏｌｉｄｕｓｔａｔ（ＢＡＹ ８５－３９３４）、Ｄｅｓｉｄｕｓｔａｔ（ＺＹＡＮ１）、ＤＭＯＧ（Ｎ－（２－メトキシ－２－オキソアセチル）グリシンメチルエステル）、ＩＯＸ２（Ｎ－［［１，２－ジヒドロ－４－ヒドロキシ－２－オキソ－１－（フェニルメチル）－３－キノリニル］カルボニル］グリシン）、ＪＮＪ－４２０４１９３５（１－［６－クロロ－５－（トリフルオロメトキシ）－１Ｈ－ベンズイミダゾール－２－イル］－１Ｈ－ピラゾール－４－カルボン酸）、Ｎ－オキサリルグリシン（２－（カルボキシメチルアミノ）－２－グリオキシル酸）、１，４－ジヒドロフェノントロリン－４－オン－３－カルボン酸、および、Ａｄａｐｔａｑｕｉｎ（７－［（４－クロロフェニル）［（３－ヒドロキシ－２－ピリジニル）アミノ］メチル］－８－キノリノール）を含む。

【0369】

一部の実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、鉄補給剤（例えば、経口または静脈内投与（ｉ．ｖ．）の鉄）を受けたことのある患者または受けている患者へ投与され得る。ｉ．ｖ．鉄製剤の例は、限定されないが、鉄デキストラン、水酸化第二鉄－デキストラン複合体、水酸化第二鉄－スクロース複合体、グルコン酸第二鉄、グルコン酸第二鉄ナトリウム、鉄スクロース、Ｆｅサッカラート、フェルモキシトール、カルボキシマルトース鉄、および鉄イソマルトシドを含む。経口鉄補給剤の例は、限定されないが、ピロリン酸第二鉄、グルコン酸第一鉄、硫酸第一鉄、フマル酸第一鉄、炭酸第一鉄、およびカルボニル鉄を含んでよい。

【0370】

静脈内および経口鉄補給は一般に有効でもあるが、研究によって、鉄と関連する様々な毒性または有害事象が示されている。有害事象の例は、細胞毒性、腎尿細管不全、好中球機能の変更、アテローム性動脈硬化の促進、腫瘍増殖の促進、およびフリーラジカルの発生（Ｃａｎｃａｄｏ ａｎｄ Ｍｕｎｏｚ，Ｒｅｖ Ｂｒａｓ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｈｅｍｏｔｅｒ ２０１１；３３（６）：４６１－９）を含む。したがって、特定の理論によって拘束されずに、ｉ．ｖ．または経口の鉄とともにＲＧＭｃ特異的阻害剤を使用することは、応答率を改善させ得て、治療的効果を有するために必要とされる鉄の用量を減少させ得て、それにより、有害事象／毒性の発生および／または程度を減少させる。

【0371】

様々な疾患状態を治療するように設計された特定の薬物は、治療される患者における貧血（例えば、治療または薬物によって誘導される貧血、例えば、化学療法によって誘導される貧血および放射線療法によって誘導される貧血）を、しばしば誘導または悪化させることが認識されている。一部の実施態様では、患者は、貧血を含む副作用を生じさせ得る骨髄抑制性の薬物を用いて治療される。かかる患者は、骨髄抑制性療法とともに用いられる本開示のＲＧＭｃ阻害剤によって恩恵を受け得る。骨髄抑制性療法の例は、限定されないが：ペグインターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－ｎ３、ペグインターフェロンアルファ－２ｂ、アルデスロイキン、ゲムツズマブ オゾガマイシン、インターフェロンアルファコン－１、リツキシマブ、イブリツモマブ チウキセタン、トシツモマブ、アレムツズマブ、ベバシズマブ、Ｌ－フェニルアラニン、ボルテゾミブ、クラドリビン、カルムスチン、アムサクリン、クロラムブシル、ラルチトレキセド、マイトマイシン、ベキサロテン、ビンデシン、フロクスウリジン、チオグアニン、ビノレルビン、デクスラゾキサン、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、ゲムシタビン、テニポシド、エピルビシン、クロラムフェニコール、レナリドマイド、アルトレタミン、ジドブジン、シスプラチン、オキサリプラチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、プロピルチオウラシル、ペントスタチン、メトトレキサート、カルバマゼピン、ビンブラスチン、リネゾリド、イマチニブ、クロファラビン、ペメトレキセド、ダウノルビシン、イリノテカン、メチマゾール、エトポシド、ダカルバジン、テモゾロミド、タクロリムス、シロリムス、メクロレタミン、アザシチジン、カルボプラチン、ダクチノマイシン、シタラビン、ドキソルビシン、ヒドロキシ尿素、ブスルファン、トポテカン、メルカプトプリン、サリドマイド、メルファラン、フルダラビン、フルシトシン、カペシタビン、プロカルバジン、三酸化ヒ素、イダルビシン、イホスファミド、ミトキサントロン、ロムスチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ダサチニブ、デシタビン、ネララビン、エベロリムス、ボリノスタット、チオテパ、イキサベピロン、ニロチニブ、ベリノスタット、トラベクテジン、トラスツズマブ エムタンシン、テムシロリムス、ボスチニブ、ベンダムスチン、カバジタキセル、エリブリン、ルキソリチニブ、カーフィルゾミブ、トファシチニブ、ポナチニブ、ポマリドマイド、オビヌツズマブ、テジゾリドリン酸エステル、ブリナツモマブ、イブルチニブ、パルボシクリブ、オラパリブ、ジヌツキシマブ、およびコルヒチンを含む。

【0372】

一部の実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、がん療法を受けたことのある患者または受けている患者へ投与されてよい。かかるがん療法は、限定されないが、化学療法、放射線療法／放射線照射療法、小分子薬物、または治療的抗体、例えば、がんワクチン；操作された免疫細胞療法；化学療法；放射線照射療法（複数）；ＶＥＧＦ作動薬；ＩＧＦ１作動薬；ＦＸＲ作動薬；ＣＣＲ２阻害剤；ＣＣＲ５阻害剤；二重ＣＣＲ２／ＣＣＲ５阻害剤；リシルオキシダーゼ様－２阻害剤；ＡＳＫ１阻害剤；アセチル－ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤；ｐ３８キナーゼ阻害剤；ピルフェニドン；ニンテダニブ；Ｍ－ＣＳＦ阻害剤（例えば、Ｍ－ＣＳＦ受容体拮抗薬およびＭ－ＣＳＦ中和剤）；ＭＡＰＫ阻害剤（例えば、Ｅｒｋ阻害剤）、免疫チェックポイント作動薬または拮抗薬（例えば、抗－ＰＤ－１および抗－ＰＤ－Ｌ１）；ＩＬ－１１拮抗薬；およびＩＬ－６拮抗薬などを含んでよい。ＲＧＭｃ特異的阻害剤とともに用いることのできるさらなる治療的薬剤の他の例は、限定されないが、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、Ｓｅｒ／Ｔｈｒキナーゼ阻害剤、二重特異的キナーゼ阻害剤を含む。一部の実施態様では、かかる薬剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、またはＪＡＫ阻害剤であってよい。一部の実施態様では、ＪＡＫ阻害剤は、骨髄増殖性障害、例えば原発性の骨髄線維症の治療において用いることのできる、ＪＡＫ１阻害剤および／またはＪＡＫ２阻害剤であってよい。

【0373】

放射線療法のような他のがん治療が、がん患者において貧血を引き起こし得ることも理解されている。したがって、一実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、放射線療法とともに用いることができる。

【0374】

一部の実施態様では、併用療法として投与される、またはＲＧＭｃ阻害剤とともに用いられるさらなる薬剤は、成長因子のＴＧＦβスーパーファミリーのメンバーまたはその調節因子の阻害剤であり、または含む。一部の実施態様では、かかる阻害剤は、ＴＧＦβ中和抗体のようなＴＧＦβ阻害剤であり、または含む。一部の実施態様では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２を阻害する抗体である。一部の実施態様では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦβ１およびＴＧＦβ３を阻害する抗体である。一部の実施態様では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦβ１のアイソフォーム選択的阻害剤、例えばＴＧＦβ１活性化阻害剤である。一部の実施態様では、ＴＧＦβ阻害剤は、ＴＧＦβ３のアイソフォーム選択的阻害剤、例えばＴＧＦβ３活性化阻害剤である。

【0375】

一部の実施態様では、対象におけるがんの治療において用いられる併用療法は、がん免疫療法（例えばチェックポイント阻害剤）、ＴＧＦβ１選択的阻害剤、および本明細書において開示されるＲＧＭｃ選択的阻害剤を含み、ここで、チェックポイント阻害剤はＰＤ－（Ｌ）１抗体であってもよく、さらに、ＴＧＦβ１選択的阻害剤はＴＧＦβ１選択的活性化阻害剤であってもよい。

【0376】

一部の実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、炎症と関係がある疾患または慢性腎疾患の治療に用いられる他の化合物、薬物、および／または薬剤とともに用いることができる。かかる化合物、薬物、および／または薬剤は、限定されないが、非ステロイド系抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体ブロッカー（ＡＲＢ）、利尿剤、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、中枢交感神経遮断薬、バイカーボネート補助剤、インスリン、ビタミンＤ補助剤、尿酸減少剤（例えば、アロプリノール）、ＨＭＧ－ＣａＡ還元酵素阻害剤（スタチン系薬剤）、ピルフェニドン、ＴＧＦβパスウェイ阻害剤、抗炎症剤（非ステロイド性抗炎症薬を含む）、抗酸化炎症調整剤（例えば、バルドキソロンメチル）、エンドセリン－１拮抗薬（例えば、アボセンタンおよびアトラセンタン）、糖化最終生成物（ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔ）阻害剤、アスピリン、メトホルミン、アミノグアニジン、カルチトリオール、エリスロポエチン、アンドロゲン、リン酸結合剤、ビタミンＢ１２、ならびに、ビタミンＢ６およびその誘導体（例えば、ピリドキサミン）を含んでよい。

【0377】

一部の実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）またはその誘導体、例えば、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｇｒａｎｉｘ（登録商標）、またはＺａｒｘｉｏ（登録商標）とともに用いることができる。Ｇ－ＣＳＦは、血液細胞（例えば、白血球細胞または造血幹細胞）の産生を刺激して、それらが機能する能力を促進するために用いられる糖タンパク質である。したがって、Ｇ－ＣＳＦは、感染、貧血、および、骨髄抑制性の治療（例えば、化学療法）を受けた後の出血の問題が発生する患者のリスクを減少させるのに有用である。しかしながら、Ｇ－ＣＳＦの使用に対する副作用が存在し、それには以下が含まれる：血小板減少症、吐き気、発熱、骨の痛み、乳酸デヒドロゲナーゼの上昇、アルカリフォスファターゼの上昇、点状出血、背痛、鼻出血（鼻血）、咳、および／または呼吸困難（息切れ）。したがって、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、Ｇ－ＣＳＦの薬理学的効果を補足し得ること（例えば、貧血を減少させ、赤血球産生を促進する）、および／または、Ｇ－ＣＳＦの効果的な用量を減少させて、それにより、副作用を減少させて耐容性を増大させることが、検討される。したがって、一実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、Ｇ－ＣＳＦ療法を受けたことのある患者または受けている患者へ投与されてよい。別の実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、好都合な薬理学的効果を達成するのに必要な、例えば、血液細胞産生を促進するのに必要な、および／または、貧血を減少させるのに必要な、Ｇ－ＣＳＦの効果的な用量を減少させる。別の実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、Ｇ－ＣＳＦの効果を補足し、例えば、赤血球産生をさらに増大させ、および／または、貧血減少させる。

【0378】

本明細書において検討される併用療法は、有利に、より少ない用量の投与される治療的薬剤を利用し得て、したがって、様々な単剤療法と関連するあり得る毒性または合併症を避ける。一部の実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤の使用は、療法（例えば、標準治療）に対して応答が乏しい者または応答しない者を、より応答性にさせ得る。一部の実施態様では、本明細書中に記載のＲＧＭｃ特異的阻害剤の使用は、療法（例えば、標準治療）の用量を減少させ得て、それでもなお、患者における同等の臨床効能を生じさせるが、薬物関連の毒性または有害事象はより少ないまたはより低い程度である。

【0379】

［ＲＧＭｃ活性の阻害］
本開示の方法は、１つまたは複数の生体系におけるＲＧＭｃ活性を阻害する方法を含む。かかる方法は、本開示の抗体および／または組成物と１つまたは複数の生体系を接触させるステップを含んでよい。そのような方法に係る阻害剤（例えば、抗体）および／または組成物は、限定されないが生体分子を含んでよく、制限されないが、本明細書中に記載の組換えタンパク質、タンパク質複合体および／または抗体、またはその抗原フラグメントを含む。

【0380】

ＲＧＭｃに選択的に結合する本明細書中に記載の阻害剤、例えば、抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＲＧＭｃ活性の調整が所望である多種多様の適用において用いることができる。一実施態様では、本発明は、ＲＧＭｃペプチドまたはタンパク質を、ＲＧＭｃに選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントに曝露することにより、ＲＧＭｃ活性化を阻害する方法を提供する。前述の方法は、インビトロで、例えば、培養細胞におけるＲＧＭｃ活性を阻害するために行なうことができる。前述の方法は、インビボで、例えば、ＲＧＭｃ阻害を必要とする対象において、またはＲＧＭｃ阻害の効果が評価される動物モデルにおいて、行なうこともできる。

【0381】

ＲＧＭｃに選択的に結合する本明細書中に記載の任意の阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメント、および、かかる阻害剤または抗体を含んでいる任意の医薬組成物は、本発明の方法における使用に適切である。

【0382】

したがって、本発明の一態様では、ＲＧＭｃに選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその（ｔｈｅｒｅ）抗原結合フラグメントに対してＲＧＭｃを曝露することによりＲＧＭｃ活性を阻害する方法が提供される。一部の実施態様では、阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）は、ＲＧＭｃへの結合に関してＢＭＰと競合する。一部の実施態様では、ＢＭＰは、ＢＭＰ２および／またはＢＭＰ６である。一部の実施態様では、ＢＭＰはＢＭＰ６である。

【0383】

別の実施態様では、阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）は、ＲＧＭｃへのネオゲニンの結合を阻害する。一部の実施態様では、阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）は、ＲＧＭｃへの結合に関してネオゲニンと競合する。

【0384】

一部の実施態様では、阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）は、ＲＧＭｃへのネオゲニンの結合を阻害しない。一部の実施態様では、阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）は、ＲＧＭｃへの結合に関してネオゲニンと競合しない。

【0385】

別の実施態様では、阻害剤（例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント）は、ＲＧＭｃと複合体化する他の結合パートナーまたはタンパク質へのＲＧＭｃの結合を阻害する。例えば、ＲＧＭｃ、ＢＭＰ、および／またはネオゲニンと複合体化する他の結合パートナーは、ＨＦＥ、ＴＦＲ２、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、ＢＭＰＲ２、ＡＣＶＲ２ＡおよびＴＭＰＲＳＳ６を含む。

【0386】

別の実施態様では、ＲＧＭｃ活性を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、他の生物学的プロセス（例えば、下流の効果）を調整することもできる。例えば、ＲＧＭｃ活性を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、対象におけるヘプシジン発現を減少させる。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ活性を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、対象におけるフェロポーチン発現を増大させる。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ活性を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、対象におけるトランスフェリン飽和度を増大させる。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ活性を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、対象における赤血球産生を増大させる。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ活性を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、対象における不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）を低減させる。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ活性を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、対象における総鉄結合能（ＴＩＢＣ）を低減させる。一部の実施態様では、ＲＧＭｃ活性を阻害する抗体、またはその抗原結合フラグメントは、対象における血清フェリチンレベルを増大させる。

【0387】

一部の実施態様では、本明細書中に記載の方法は、対象において行なうことができる。本明細書中に記載の方法によって治療される対象は、哺乳類、より好ましくはヒトであってよい。哺乳類は、限定されないが、家畜、競技動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットを含む。治療が必要なヒト対象は、上述したもののような（例えば、貧血）、ＲＧＭｃ関連の徴候を有している、そのリスクがある、または有する疑いのある、ヒト患者であってよい。

【0388】

したがって、一実施態様では、対象における血清鉄レベルを増大させる方法が提供され、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、対象におけるヘプシジンを下方調節するのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。一部の実施態様では、対象におけるヘプシジンを下方調節するための方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、対象におけるヘプシジンを下方調節するのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。一部の実施態様では、医薬組成物は、肝臓ヘプシジンｍＲＮＡレベルを減少させる。一部の実施態様では、医薬組成物は、肝臓ヘプシジンタンパク質レベル、血清（循環）ヘプシジンタンパク質レベル、またはその両方を減少させる。

【0389】

一実施態様では、対象における血清鉄レベルを増大させる方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、対象におけるフェロポーチン発現をベースラインと比べて増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。一部の実施態様では、対象におけるフェロポーチン発現を増大させるための方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、対象におけるフェロポーチン発現を増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。一部の実施態様では、医薬組成物は、腸細胞（腸）フェロポーチンタンパク質レベルを増大させる。一部の実施態様では、医薬組成物は、肝細胞（肝臓）フェロポーチンタンパク質レベルを増大させる。一部の実施態様では、医薬組成物は、マクロファージのフェロポーチンタンパク質レベルを増大させる。一部の実施態様では、医薬組成物は、脂肪細胞フェロポーチンタンパク質レベルを増大させる。

【0390】

一部の実施態様では、対象におけるトランスフェリン飽和度を増大させるための方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、対象におけるトランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ）を増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度を、ベースラインと比べて≧１％、≧２％、≧３％、≧４％、≧５％、≧６％、≧７％、≧８％、≧９％、または≧１０％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度を≧１％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度をベースラインと比べて≧２％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度をベースラインと比べて≧３％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度をベースラインと比べて≧４％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度をベースラインと比べて≧５％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度をベースラインと比べて≧６％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度をベースラインと比べて≧７％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度をベースラインと比べて≧８％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度をベースラインと比べて≧９％増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、トランスフェリン飽和度をベースラインと比べて≧１０％増大させる。

【0391】

一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧１５％、≧１６％、≧１７％、≧１８％、≧１９％、≧２０％、≧２１％、≧２２％、≧２３％、≧２４％、または≧２５％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧１５％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧１６％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧１７％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧１８％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧１９％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧２０％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧２１％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧２２％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧２３％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧２４％のレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるトランスフェリン飽和度を、≧２５％のレベルまで増大させる
。

【0392】

一部の実施態様では、対象における赤血球産生を増大させるための方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、対象における赤血球産生を増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。

【0393】

一部の実施態様では、対象におけるヘモグロビン（Ｈｂ）レベルを増大させるための方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、ヘモグロビンレベルを増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。一部の実施態様では、当該方法は、Ｈｂレベルをベースラインと比べて≧１、≧２、または≧３ｇ／ｄｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、Ｈｂレベルをベースラインと比べて≧１ｇ／ｄｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、Ｈｂレベルをベースラインと比べて≧２ｇ／ｄｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、Ｈｂレベルをベースラインと比べて≧３ｇ／ｄｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象におけるＨｂを≧１０ｇ／ｄｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、Ｈｂを≧１１ｇ／ｄｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、Ｈｂを≧１２ｇ／ｄｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、Ｈｂを≧１３ｇ／ｄｌのレベルまで増大させる。

【0394】

一部の実施態様では、対象における不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）を低減させるための方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、対象における不飽和鉄結合能を低減させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。対象におけるＵＩＢＣに関する典型的な範囲は、１２０～４７０ｕｇ／ｄＬ（２１～８４ｕｍｏｌ／Ｌ）であるが、レベルは集団間で変化し得る。したがって、一部の実施態様では、対象は、≧４００、≧４５０、≧５００、≧５５０、≧６００、≧６５０、≧７００、≧７５０、または≧８００ｕｇ／ｄＬのＵＩＢＣを有する。他の実施態様では、有効量のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、対象におけるＵＩＢＣを≧５０、≧１００、≧１５０、≧２００、≧２５０、≧３００、≧３５０、または≧４５０ｕｇ／ｄＬ低減させる。

【0395】

一部の実施態様では、対象における総鉄結合能（ＴＩＢＣ）を低減させるための方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、対象における総鉄結合能を低減させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。ＴＩＢＣに関する典型的な範囲は２５５～４５０ｕｇ／ｄＬであるが、レベルは集団間で変化し得る。したがって、一部の実施態様では、対象は、≧４００、≧４５０、≧５００、≧５５０、≧６００、≧６５０、≧７００、≧７５０、または≧８００ｕｇ／ｄＬのＴＩＢＣを有する。他の実施態様では、有効量のＲＧＭｃ特異的阻害剤は、対象におけるＴＩＢＣを≧５０、≧１００、≧１５０、≧２００、≧２５０、≧３００、≧３５０、または≧４５０ｕｇ／ｄＬ低減させる。

【0396】

一部の実施態様では、対象における血清フェリチンレベルを増大させるための方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、対象における血清フェリチンレベルを増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧５、≧１０、≧１５、≧２０、≧３０、≧４０、≧５０、≧６０、≧７０、≧８０、≧９０、または≧１００ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧５ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧１０ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧１５ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧２０ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧３０ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧４０ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧５０ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧６０ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧７０ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧８０ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧９０ｎｇ／ｍｌ増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンレベルを、ベースラインと比べて≧１００ｎｇ／ｍｌ増大させる。

【0397】

一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンを、≧３０ｎｇ／ｍｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンを、≧４０ｎｇ／ｍｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンを、≧５０ｎｇ／ｍｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンを、≧６０ｎｇ／ｍｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンを、≧７０ｎｇ／ｍｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンを、≧８０ｎｇ／ｍｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンを、≧９０ｎｇ／ｍｌのレベルまで増大させる。一部の実施態様では、当該方法は、対象における血清フェリチンを、≧１００ｎｇ／ｍｌのレベルまで増大させる。

【0398】

一部の実施態様では、対象におけるＲＧＭｃと関連する疾患を治療するための方法が提供されて、当該方法は、本発明の医薬組成物（例えば、本明細書において開示されるＲＧＭｃ特異的阻害剤）を、当該疾患を治療するのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。一部の実施態様では、ＲＧＭｃと関連する疾患は貧血である。一部の実施態様では、貧血は、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）である。一部の実施態様では、貧血は、慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）である。一部の実施態様では、ＡＣＤは、がん関連の貧血である。別の実施態様では、ＡＣＤは、慢性腎疾患（ＣＫＤ）と関連する貧血である。一部の実施態様では、貧血は、化学療法によって誘導される貧血である。

【0399】

［ＲＧＭｃ関連の徴候と関連する疾患／障害の緩和における使用のためのキット］
本開示は、ＲＧＭｃ関連の徴候（例えば、貧血）と関連する疾患／障害の緩和における使用のためのキットも提供する。かかるキットは、ＲＧＭｃに選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントを含んでいる１つまたは複数のコンテナーを備えてよい。

【0400】

一部の実施態様では、当該キットは、本明細書中に記載の任意の方法に従った使用のための説明書を含んでよい。含まれる説明書は、本明細書中に記載のもののような標的疾患を、治療、発症遅延、または緩和するための、ＲＧＭｃに選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントの投与の説明を含んでよい。当該キットは、個体が標的疾患を有するかどうかの同定に基づき、治療に適切な個体を選択する説明をさらに含んでよい。さらに他の実施態様では、説明書は、標的疾患のリスクがある個体への、抗体、またはその抗原結合フラグメントの投与の説明を含む。

【0401】

ＲＧＭｃに選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントの使用に関する説明書は、一般に、意図される治療のための、用量、投与スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。コンテナーは、単位用量、バルクのパッケージ（例えば、多数回用量パッケージ）またはサブ単位用量であってよい。本開示のキットにおいて供給される説明書は、典型的に、ラベルまたは添付文書上に記載された説明書（例えば、キット内に含まれるペーパーシート）であるが、機械可読な説明書（例えば、磁気または光ディスク記憶装置上に保持される説明書）も許容される。ラベルまたは添付文書は、組成物が、ＴＧＦβ関連の徴候と関連する疾患または障害を治療、発症遅延、および／または、緩和するために用いられることを示してよい。説明書は、本明細書に記載の任意の方法を実施するために提供され得る。

【0402】

本開示のキットは、適切なパッケージ内に提供されてよい。適切なパッケージは、制限されないが、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージ（例えば、密封マイラまたはプラスチックバッグ）などを含む。特定のデバイス、例えば、吸入器、経鼻投与デバイス（例えば、噴霧器）またはミニポンプのようなインフュージョンデバイスと組み合わせた使用のためのパッケージも検討される。キットは、滅菌アクセスポートを有してよい（例えば、コンテナーは、皮下注入針によって突き刺すことが可能なストッパーを有するバイアルまたは静脈内投与用の溶液バッグであってよい）。コンテナーは、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、コンテナーは、皮下注入針によって突き刺すことが可能なストッパーを有するバイアルまたは静脈内投与用の溶液バッグであってよい）。組成物内の少なくとも１つの活性剤は、本明細書中に記載のＲＧＭｃに選択的に結合する阻害剤、例えば、抗体、またはその抗原結合フラグメントである。

【0403】

キットは、バッファーおよび解釈上の情報のような、さらなる構成要素を提供してもよい。通常、キットは、コンテナーと、コンテナー上またはそれと関連してラベルまたは添付文書（単数または複数）とを含む。一部の実施態様では、本開示は、上述のキットの内容を含む製造物を提供する。

【0404】

本開示のいくつかの実施態様が本明細書において記載および例示されているが、当業者は、機能を発揮するため、および／または、本明細書中に記載の結果および／または１つまたは複数の利点を得るための、様々な他の手段および／または構造を容易に想像し、かかるバリエーションおよび／または改変はそれぞれ、本開示の範囲内とみなされる。より一般には、当業者は、本明細書中に記載の全てのパラメータ、寸法、材料、および構造は例示的であることを意味し、実際のパラメータ、寸法、材料、および／または構造は、本開示の教示が用いられる特定の適用（単数または複数）に依存することを容易に理解する。当業者は、ルーチン実験の範囲内で、本明細書中に記載の開示の特定の実施態様に対する多くの等価物を認識し、または確認することが可能である。したがって、前述の実施態様はほんの一例として提供されること、および、添付の特許請求の範囲およびその等価物の範囲内で、本開示は、明確に記載され特許請求の範囲に記載されるのとは別の方法で実施され得ることが理解されるべきである。本開示は、本明細書中に記載のそれぞれの個々の特徴、システム、物品、材料、および／または方法に関する。さらに、かかる特徴、システム、物品、材料、および／または方法の２以上の任意の組み合わせは、かかる特徴、システム、物品、材料、および／または方法が互いに矛盾しないならば、本開示の範囲内に含まれる。

【0405】

［好ましい実施態様のリスト］
１．ヒト反発性ガイダンス分子Ｃ（ＲＧＭｃ）に特異的に結合する単離された抗体であって、
ａ）抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり；
ｂ）抗体は、ヒト反発性ガイダンス分子Ａ（ＲＧＭａ）およびヒト反発性ガイダンス分子Ｂ（ＲＧＭｂ）に結合せず；および
ｃ）抗体は、ＢＭＰ６とＲＧＭｃの相互作用を阻害または減少させる。

【0406】

３．実施態様１または実施態様２の抗体であって、抗体は、ヒトＲＧＭｃ内の第１および第２の結合領域のぞれぞれの少なくともフラグメントを含んでいる不連続エピトープに結合し、ここで、第１の結合領域は、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含み、第２の結合領域は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を含んでもよい。

【0407】

４．ヒトＲＧＭｃ内のエピトープに結合する単離された抗体であって、
ａ）抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり；および
ｂ）抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基および／またはＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含んでいるエピトープに結合する。

【0408】

５．実施態様４の抗体であって、エピトープは、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基およびＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。

【0409】

６．実施態様４または５の抗体であって、抗体は、ヒトＲＧＭａおよびヒトＲＧＭｂに結合しない。

【0410】

７．実施態様４～７６のいずれか１つの抗体であって、抗体は、ＢＭＰ６とＲＧＭｃの相互作用を阻害または減少させる。

【0411】

８．実施態様４～７のいずれか１つの抗体であって、抗体は、ネオゲニンとＲＧＭｃの相互作用を阻害または減少させない。

【0412】

９．ヒトＲＧＭｃに特異的に結合する単離された抗体であって、抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで抗体は、以下の６個のＣＤＲのうちの少なくとも３個を含む：
ａ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ１：配列番号１４：
ｉ．配列番号１４の４位のセリン残基はアルギニンで置換されてよい；
ｉｉ．配列番号１４の７位のアラニン残基はセリンで置換されてよい；および／または
ｉｉｉ．配列番号１４の９位のセリン残基はグルタミンで置換されてよい；
ｂ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ２：配列番号１５：
ｉ．配列番号１５の８位のトレオニン残基はバリンで置換されてよい；および／または
ｉｉ．配列番号１５の１０位のアスパラギン残基はセリンで置換されてよい；
ｃ）以下の条件で、ＣＤＲ－Ｈ３：配列番号１６：
ｉ．配列番号１６の５位のイソロイシン残基はチロシンで置換されてよい；および／または
ｉｉ．配列番号１６の６位のアラニン残基はバリンで置換されてよい；
ｄ）ＣＤＲ－Ｌ１：配列番号１７；
ｅ）ＣＤＲ－Ｌ２：配列番号１８；および、
ｆ）ＣＤＲ－Ｌ３：配列番号１９。

【0413】

１０．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、配列番号３０、３１、および３２にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１（Ｈ－ＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（Ｈ－ＣＤＲ２）、および重鎖ＣＤＲ３（Ｈ－ＣＤＲ３）配列、ならびに、配列番号３３、３４、および３５にそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ－ＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（Ｌ－ＣＤＲ２）、および軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ－ＣＤＲ３）配列を含み；
ここで：
Ｈ－ＣＤＲ１の４位のＲ残基はＫまたはＳで置換されてもよく；Ｈ－ＣＤＲ１の５位のＳ残基はＴで置換されてもよく；Ｈ－ＣＤＲ１の７位のＳ残基はＡで置換されてもよく；および／または、Ｈ－ＣＤＲ１の９位のＳ残基はＱで置換されてもよく；
ここでさらに：
Ｈ－ＣＤＲ２の８位のＶ残基はＨまたはＴで置換されてもよく；および／またはＨ－ＣＤＲ２の１０位のＮ残基はＳ、ＴまたはＥで置換されてもよい。

【0414】

１１．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、
ａ）配列番号３６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および／または
ｂ）配列番号３７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変の軽鎖可変領域を含む。

【0415】

１２．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、
ａ）配列番号３６に示される重鎖可変領域配列；および
ｂ）配列番号３７に示される軽鎖可変領域配列を含む。

【0416】

１３．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、配列番号３８、３９、および４０にそれぞれ示される重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびに、配列番号４１、４２、および４３にそれぞれ示される軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。

【0417】

１４．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、
ｃ）配列番号４４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および／または
ｄ）配列番号４５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する可変の軽鎖可変領域を含む。

【0418】

１５．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、
ａ）配列番号４４に示される重鎖可変領域配列；および
ｂ）配列番号４５に示される軽鎖可変領域配列を含む。

【0419】

１６．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体である。

【0420】

１７．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体である。

【0421】

１８．先行する請求項のいずれか１つの抗体であって、ヒトＩｇＧ４抗体であり、ここでヒトＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１様ヒンジを生じさせるＳｅｒからＰｒｏへの主鎖置換を含んでもよい。

【0422】

１９．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、膜結合型ヒトＲＧＭｃを発現している細胞に結合する。

【0423】

２０．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、０．１×１０^－９（０．１ｎＭ）未満のＫ_Ｄ値でＲＧＭｃに結合する。

【0424】

２１．先行する実施態様のいずれか１つの抗体であって、抗体は、以下の相互作用タンパク質；ＨＦＥ、ＴＦＲ２、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、ＢＭＰＲ２、ＡＣＶＲ２ＡおよびＴＭＰＲＳＳ６の１つまたは複数とＲＧＭｃの相互作用を調整する。

【0425】

２２．ヒトＲＧＭｃに特異的に結合する単離された抗体であって、抗体は、実施態様４～２１のいずれか１つの抗体と、ヒトＲＧＭｃへの結合に関して競合する、および／または、同一のエピトープに結合する。

【0426】

２３．先行する実施態様のいずれか１つの抗体および薬学的に許容できる担体を含んでいる、医薬組成物。

【0427】

２４．ヒト対象におけるＲＧＭｃと関連する疾患の治療のための方法での使用のための実施態様２３の組成物であって、治療は、症状を治療するのに効果的な量での対象への組成物の投与を含む。

【0428】

２５．実施態様２４に記載の使用のための組成物であって、ＲＧＭｃと関連する疾患は、貧血である。

【0429】

２６．実施態様２５に記載の使用のための組成物であって、貧血は、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）または慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）である。

【0430】

２７．実施態様２６に記載の使用のための組成物であって、ＡＣＤは、がん関連の貧血である。

【0431】

２８．実施態様２５に記載の使用のための組成物であって、貧血は、化学療法によって誘導される貧血である。

【0432】

２９．実施態様２６に記載の使用のための組成物であって、ＡＣＤは、慢性腎疾患（ＣＫＤ）と関連する貧血である。

【0433】

３０．実施態様２４～２９のいずれか１つに記載の使用のための組成物であって、組成物は、さらなる治療的薬剤と組み合わせて投与される。

【0434】

３１．実施態様３０に記載の使用のための組成物であって、さらなる治療的薬剤は、エリスロポエチン刺激剤（ＥＳＡ）、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤または輸血である。

【0435】

３２．実施態様３１に記載の使用のための組成物であって、当該方法は、ＥＳＡ、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤または輸血と関連する毒性を減少させる。

【0436】

３３．実施態様３２に記載の使用のための組成物であって、毒性は、鉄過剰、がんリスクおよび／または心血管イベント（例えば、大きな心臓の有害事象、例えば脳卒中）のリスクを含む。

【0437】

３４．実施態様２４～３３のいずれか１つに記載の使用のための組成物であって、対象は、
ａ）鉄療法中であるが鉄療法の用量減少が有利である；
ｂ）鉄療法を受けたことがあるが毒性のせいで中断している；
ｃ）鉄療法を受けたことがあり、鉄療法の用量減少が有利である；
ｄ）がんリスクがある；および／または
ｅ）がんと診断されたことがある。

【0438】

３５．対象におけるＲＧＭｃと関連する疾患を治療するための方法であって、当該方法は、実施態様２３の医薬組成物を、疾患を治療するのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。

【0439】

３６．対象における血清鉄レベルを増大させる方法であって、当該方法は、実施態様２３の医薬組成物を、対象における血清鉄レベルを増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。

【0440】

３７．対象におけるヘプシジンを下方調節するための方法であって、当該方法は、実施態様２３の医薬組成物を、対象におけるヘプシジンを下方調節するのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。

【0441】

３８．実施態様３７の方法であって、医薬組成物は、肝臓ヘプシジンｍＲＮＡレベルを減少させる。

【0442】

３９．実施態様３７の方法であって、医薬組成物は、肝臓ヘプシジンタンパク質レベル、血清（循環）ヘプシジンタンパク質レベル、またはその両方を減少させる。

【0443】

４０．対象におけるトランスフェリン飽和度を増大させるための方法であって、当該方法は、実施態様２３の医薬組成物を、対象におけるトランスフェリン飽和度を増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。

【0444】

４１．対象における赤血球産生を増大させるための方法であって、当該方法は、実施態様２３または２４の医薬組成物を、対象における赤血球産生を増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。

【0445】

４２．対象における不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）を低減させるための方法であって、当該方法は、実施態様２３の医薬組成物を、対象における不飽和鉄結合能を低減させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。

【0446】

４３．対象における総鉄結合能（ＴＩＢＣ）を低減させるための方法であって、当該方法は、実施態様２３の医薬組成物を、対象における総鉄結合能を低減させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。

【0447】

４４．対象における血清フェリチンレベルを増大させるための方法であって、当該方法は、実施態様２３の医薬組成物を、対象における血清フェリチンレベルを増大させるのに効果的な量で対象へ投与するステップを含む。

【0448】

４５．実施態様４４の方法であって、量は、血液のミリリットルあたり≧２０ナノグラムの血清フェリチンレベルを達成するのに効果的な量である。

【0449】

４６．実施態様２４～３４のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物または実施態様３５～４５のいずれか１つに記載の方法であって、対象は、エリスロポエチン（例えば、ＥＰＯ）療法、ＨＩＦ安定剤療法、ＩＶ鉄補給、またはそれらの組み合わせを受けたことがある。

【0450】

４７．実施態様２４～３４のいずれか１つに記載の使用のための医薬組成物または実施態様３５～４５のいずれか１つに記載の方法であって、対象は、ＥＰＯ療法またはＩＶ鉄補給と関連する有害事象が現れたことがあり、またはそのリスクがある。

【0451】

４８．ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、中和抗体）を含んでいる医薬組成物を作製する方法であって、当該方法は、以下のステップ：
ｉ）ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに選択的に結合する能力に関して、抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ；
ｉｉ）ステップ（ｉ）に基づいて、ＲＧＭｃ活性をインビボで阻害／中和する能力に関して、抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ；
ｉｉｉ）ステップ（ｉ）および（ｉｉ）に基づいて、医薬組成物への製剤化に関して、阻害／中和抗体を選択するステップを含む。

【0452】

４９．実施態様４８の方法であって、ステップ（ｉ）は、ポジティブ選択を含み、ネガティブ選択をさらに含んでもよい。

【0453】

５０．実施態様４８または４９の方法であって、エピトープは、ネオゲニン結合部位を除く。

【0454】

５１．実施態様４８または実施態様４９の方法であって、抗体は、可溶性ＲＧＭｃよりも膜結合型ＲＧＭｃに優先的に結合する。

【0455】

５２．実施態様４８または実施態様４９の方法であって、抗体は、抗体抗原複合体の内部移行を誘導する。

【0456】

５３．実施態様４８～５２のいずれか１つの方法であって、同定ステップ（ｉ）は、ライブラリーをスクリーニングするステップを含む。

【0457】

５４．実施態様５３の方法であって、ライブラリーは、ファージライブラリーまたは酵母ライブラリーである。

【0458】

５５．実施態様４８～５４のいずれか１つの方法であって、同定ステップ（ｉｉ）は、血清鉄、総鉄結合能（ＴＩＢＣ）、不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）、およびトランスフェリン飽和度からなる群より選択される鉄パラメータを測定するステップを含む。

【0459】

５６．実施態様４８～５５のいずれか１つの方法であって、ステップ（ｉｉ）は、ヘプシジン発現を測定するステップを含む。

【0460】

５７．実施態様５６の方法であって、ヘプシジン発現は、肝臓ヘプシジンレベルおよび／または血清ヘプシジンレベルである。

【0461】

５８．実施態様４８～５７のいずれか１つの方法であって、ステップ（ｉｉ）は、インビボで血清鉄レベルを上昇および／またはヘプシジン発現を抑制することが可能な中和抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップを含む。

【0462】

５９．実施態様４８～５８のいずれか１つの方法であって、医薬組成物は、静脈内または皮下投与のために製剤化される。

【0463】

６０．実施態様４８～５９のいずれか１つの方法であって、ステップ（ｉ）は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに関して選択的に確認するステップを含む。

【0464】

６１．対象における鉄障害を治療するための方法での使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、ＲＧＭｃ特異的阻害剤は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂを阻害せず、ここで鉄障害は、対象において貧血を生じさせる。

【0465】

６２．鉄療法と関連する毒性を減少させるための方法での使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、当該方法は、有効量のＲＧＭｃ選択的阻害剤を対象へ投与するステップを含む。

【0466】

６３．実施態様６２に記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、鉄療法は、ＥＰＯ療法、鉄補給剤または輸血である。

【0467】

６４．実施態様６２または６３に記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、毒性は、鉄過剰またはがんリスクを含む。

【0468】

６５．実施態様６２～６４のいずれ１つに記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、対象は、ａ）鉄療法中であるが鉄療法の用量減少が有利である；ｂ）鉄療法を受けたことがあるが毒性のせいで中断している；ｃ）鉄療法を受けたことがあり、鉄療法の用量減少が有利である；ｄ）がんリスクがある；ｅ）がんと診断されたことがある。

【0469】

６６．実施態様６１～６５のいずれ１つに記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、ＲＧＭｃ選択的阻害剤はＲＧＭｃ選択的抗体であり、ここでＲＧＭｃ選択的抗体は中和抗体であってもよい。

【0470】

６７．実施態様６６に記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、ＲＧＭｃ選択的抗体は、ＲＧＭｃの細胞外部分またはそれを含む複合体に結合する。

【0471】

６８．実施態様６７に記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、ＲＧＭｃ選択的抗体は、ＲＧＭｃの細胞外部分またはそれを含む複合体（細胞表面上に存在）に結合する。

【0472】

６９．対象における機能性鉄欠乏症の治療での使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、対象は、ＥＳＡおよび／またはＨＩＦ安定剤を受けたことがある。

【0473】

７０．対象における機能性鉄欠乏症の治療での使用のための、ＲＧＭｃ選択的阻害剤およびエリスロポエチン療法（例えば、ＥＳＡ、ＨＩＦ安定剤）。

【0474】

７１．実施態様７０に記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤およびエリスロポエチン療法（例えば、ＥＳＡ、ＨＩＦ安定剤）であって、当該治療は、エリスロポエチン療法単独と比べて、より早い軽減または治療的利益の発生を達成し、ここで治療的利益は、血清鉄の増大、トランスフェリン飽和度の増大、ヘモグロビンの増大、またはそれらの任意の組み合わせを含んでもよい。

【0475】

７２．実施態様７０に記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、エリスロポエチン療法を感受性にさせる。

【0476】

７３．経口またはＩＶ鉄補給剤、輸血、ＥＳＡおよびＨＩＦ安定剤から選択される鉄療法の用量または頻度を減少させる使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、鉄療法とともに投与された場合に治療的利益を達成する。

【0477】

７４．がんを有する対象における貧血の治療での使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤。

【0478】

７５．実施態様７４に記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、対象は、化学療法の候補者であり、またはそれを受けている。

【0479】

７６．実施態様７４に記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、対象は、化学療法を受けたことがある。

【0480】

７７．実施態様７４に記載の使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、対象は、ＥＳＡ療法またはＨＩＦ安定剤療法を受ける候補者ではない。

【0481】

７８．エリスロポエチン療法または鉄補給剤に対して反応性低下である対象における機能性鉄欠乏症の治療での使用のための、ＲＧＭｃ選択的阻害剤。

【0482】

７９．エリスロポエチン療法または鉄補給剤に対して不耐性の対象における機能性鉄欠乏症の治療での使用のための、ＲＧＭｃ選択的阻害剤。

【0483】

本発明は、いかなる方法においても限定されることを意図しない以下の実施例によってさらに例示される。本出願の全体にわたって挙げられる全ての参考文献、特許および公開された特許出願の内容全体、ならびに図面は、参照により本明細書中に援用される。

【実施例】

【0484】

ＲＧＭｃは、ヘプシジン発現を増大させて、その結果として鉄輸送を阻害する、ＢＭＰ６のような特定のＢＭＰに関する肝臓で発現される偏性の共受容体である。一方で、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂのような他のＲＧＭファミリーメンバーは、より広範に、例えば神経系、脳、皮膚、心臓、肝臓、肺、腎臓、精巣、および消化管において発現される。さらに、ＢＭＰ６は、体中に、例えば、脳、骨、肝臓、肺、腎臓、膵臓精巣、および消化管に広く発現される。したがって、ＲＧＭａ、ＲＧＭｂ、およびＢＭＰ６よりも発現が限定的であるＲＧＭｃを標的化することにより、オフターゲット効果を減少させながら、より組織特異的な効果が達成され得る。この手法は、望ましくない毒性をもたらし得る体全体のＲＧＭおよびＢＭＰ６機能の広範な阻害をせずに鉄制限性の貧血および鉄過剰状態の両方を対処する潜在性を提供する。

【0485】

したがって、本発明は、ＲＧＭｃの選択的な標的化が、直接的なＢＭＰ６拮抗薬およびＲＧＭａ／ＲＧＭｂ／ＲＧＭｃの非選択的阻害剤のような従来の手法と比較して、効能および安全性（毒性の低減）の両方を達成するための有利な手法を提供するという認識を含む。

【0486】

［実施例１：ＲＧＭｃ特異的抗体の同定］
ＲＧＭｃに選択的である抗体を、本明細書中に記載のとおりに公知技術を用いて生産した。ＲＧＭａおよびＲＧＭｂを上回るＲＧＭｃ特異性を、インビトロ結合アッセイ（すなわち、Ｏｃｔｅｔ（登録商標））を用いて確認した。試験抗体のそれらの標的に対する結合親和性を、１×Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ｂｕｆｆｅｒ中にそれぞれの抗体を７．５ｕｇ／ｍｌ（または５０ｎＭ）で取って、Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）による抗－ｈＩｇＧ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ（ＡＨＣ）バイオセンサー上にそれをローディングすることによって行なった。ローディング後、異なる濃度（９００ｎＭ、３００ｎＭ、１００ｎＭ、および３３ｎＭ）で、ヒスチジンでタグ化したｈＲＧＭｃ、ｈＲＧＭａ、またはｈＲＧＭｂに対してそれらを提供することによって抗体のｏｎ ｒａｔｅ、または会合を計算する前に、チップを１×Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ｂｕｆｆｅｒ中に置くことによってベースラインのリーディングを得た。結合飽和に到達した後、解離ステップを行なって、チップを１×Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ｂｕｆｆｅｒ中に戻すことによってｏｆｆ ｒａｔｅを計算した。それから、結合解離速度を用いて、ＲＧＭファミリーメンバー（ＲＧＭａおよびＲＧＭｂ）に対する交差結合がないことを確認しながら、主な標的（ＲＧＭｃ）に対するそれぞれの抗体のＫ_Ｄ、すなわち結合親和性を計算することができる。

【0487】

図２は、ＲＧＭｃ特異的抗体ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ４、およびＳＲ－ＲＣ－ＡＢ５に関する結合プロファイルおよび親和性データ（Ｋ_Ｄ）を提供する。明白に、３つの抗体は全て、ナノモルの親和性でＲＧＭｃに結合するが、抗体はいずれも、ＲＧＭａまたはＲＧＭｂに対するいかなる検出可能な結合も示さなかった。

【0488】

［実施例２：ＲＧＭｃ選択的抗体は、ＢＭＰ６活性をインビトロで阻害する］
改変ＢＭＰレポーターアッセイを用いて、ＢＭＰ活性の抗体阻害を評価した。手短には、ＨＥＰＧ２ＢＲＡレポーター細胞を１０，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレート内に蒔いた。２４時間後、抗体を別個に、Ｆｃ（ＣＦ約４０ｎＭ）に融合された組み換え可溶性ヒトＲＧＭｃとともに、ＤＭＥＭ／０．１％ＢＳＡ中で１時間プレインキュベートして、その後に、ＢＭＰ６（ＣＦ＝０．２ｎＭ）を溶液に加えて１時間続けた。１００ｕＬ／ウェルの生じた抗体－ＲＧＭｃ－ＢＭＰ６複合体をＨＥＰＧ２ＢＲＡプレートに三重で加えて、１８時間、インキュベーターに戻した。１００ｕｌのＢｒｉｇｈｔＧｌｏ（商標）ルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を各ウェルに加えて、プレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ（登録商標））を用いてＲＬＵを決定した。可溶性ＲＧＭｃはＢＭＰ６を隔離してその下流の転写活性を阻害するので、可溶性ＲＧＭｃにＢＭＰ６が結合するのをブロックする抗体は、このアッセイにおいてＢＭＰ６レポーター活性を活性化し、ＢＭＰ６競合抗体と呼ばれる。ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３およびＳＲ－ＲＣ－ＡＢ４の用量応答滴定は、それらが、それぞれ６．８３ｎＭおよび１．６８ｎＭのＥＣ５０で、ＢＲＥレポーターアッセイにおいて示された力価を有することを明らかにした。

【0489】

［実施例３：親和性成熟ＲＧＭｃ選択的抗体の開発］
ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３およびＳＲ－ＲＣ－ＡＢ４を、親和性成熟のために選択した。親和性成熟を、本明細書中に記載の酵母ディスプレイなどの公知技術を用いて行なった。

【0490】

ＲＧＭａ－ｈｉｓ（一価）またはＲＧＭａ－Ｆｃ（ａｖｉｄ）に対する結合親和性を決定するために、試験抗体を抗－ヒトＦｃ捕捉バイオセンサー（ＡＨＣ）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標））の表面に固定化して、それからセンサーを過剰のネガティブコントロール抗体でブロックした。それから、Ｆｃまたはヒスチジンでタグ化したＲＧＭａに対する結合を、１００ｎＭで試験した。抗原を３分間会合させて、その後に３分解離させた。実験全体を通してＫｉｎｅｔｉｃｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標））を用い、それぞれの抗体抗原ペアに関して１：１フィッティング・モデルを用いてＫ_Ｄを決定した。いずれの抗体も、ヒスチジンでタグ化したＲＧＭａタンパク質に対する結合を示さなかったが、一部のクローンは、ａｖｉｄ（Ｆｃタグ化形態）に対する応答を示した（図４Ａ）。ＲＧＭａ－Ｆｃに対する結合を示すクローンは全て同一系統由来であり、このファミリー内の潜在的に交差反応性のエピトープを示した。ＲＧＭａ－Ｆｃに対して結合するクローンは、さらなる試験に選択しなかった。

【0491】

ＭＳＤ－ＳＥＴ（メソスケール決定－溶液平衡滴定）によって親和性を測定するために、ＲＧＭｃ特異的抗体（この例では、抗体のＦａｂ形態）の滴定を、一定濃度の抗原とともに２０～２４時間プレインキュベートして平衡に到達させた。それから、滴定を、任意のフリー抗原を溶液から枯渇させる補足抗体（ＮＨＳ－スルフォタグで事前標識）で事前にコーティングされたプレートに添加した。１５０秒のインキュベーション後、プレートを３回洗浄して、ＳＡ－スルフォタグ試薬を加えて３分間インキュベートした。さらに洗浄した後、プレートをＭｅｓｏＱｕｉｃｋＰｌｅｘ ＳＱ１２０で読み取った。ヒトおよびマウスＲＧＭｃ抗原の両方に対するＦａｂ親和性を決定した。両方の種に対する交差反応性が親和性成熟プロセス全体にわたって維持されたことを示す（図４Ｂ）。

【0492】

同様のＭＳＤ－ＳＥＴアッセイをヒトＲＧＭｃ－ｈｉｓ抗原に対する全長抗体を用いて行ない、結合親和性（Ｋ_Ｄ））を決定した。表３に示されるように、選択子孫抗体は、親抗体と比較してサブ－ナノモルの親和性に到達した。

【0493】

ＢＲＥ－ルシフェラーゼ活性（インビトロでＢＭＰ－６競合を測定する）を実施例２に上述したとおりに行なった。表４に示されるように、親和性成熟抗体は、親抗体と比較してＢＭＰ競合の改善も示した。

【0494】

【0495】

［実施例４：親和性成熟ＲＧＭｃ選択的抗体は、ＢＭＰ６活性をインビトロで阻害する］
親和性成熟ＲＧＭｃ選択的抗体がＲＧＭｃに対するＢＭＰ６の結合を阻害したかどうか決定するために、ＢＭＰ６アッセイを実施例２に上述したとおりに行なった。図５Ａに示されるように、親和性成熟抗体のＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３ファミリーは、親抗体（すなわち、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３）と比較して、ＲＧＭｃに対するＢＭＰの結合を阻害する改善された能力を示す（ＢＭＰ活性の増大によって示される）。図５Ｂに示されるように、親和性成熟抗体のＳＲ－ＲＣ－ＡＢ４ファミリーは、親抗体（すなわち、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３）と比較して、ＲＧＭｃに対するＢＭＰの結合を阻害する改善された能力を示す（相対的ＢＭＰ活性の増大によって示される）。高親和性ＲＧＭバインダーを、アイソタイプ・コントロールとともに、コントロールとして用いた。表４は、ＢＭＰ活性アッセイにおける計算されたＥＣ５０値を示す。合わせると、これらの結果は、親和性成熟抗体が、ＢＭＰを通してＲＧＭｃ活性を阻害する改善された能力を有することを示す。

【0496】

【0497】

［実施例５：親和性成熟ＲＧＭｃ選択的抗体は、鉄恒常性をインビボで調整する。］
抗体のインビボでの効果を評価するために、鉄パラメータ（血清鉄、不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）、およびトランスフェリン飽和度）を、齧歯類において、単回の抗体投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝５動物／群）の２４時間後に測定した。雌Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（７～９週齢、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、単回ｉ．ｖ．用量の抗体を投与した。２４時間後、動物を屠殺して、血清を、ＭｏｄＰまたはＣｏｂａｓ臨床化学分析器による鉄分析のために、またはヘプシジンＥＬＩＳＡのために回収して、肝臓をヘプシジンＲＮＡ発現の分析のために採取した。選択ＢＭＰ－競合抗体は、齧歯類において、ヘプシジンを強く抑制し、鉄の可動化を増大させた。より具体的には、図６Ａおよび６Ｂに示されるように、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ１、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ７、ＳＲ－ＲＣ－１１、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ２、およびＳＲ－ＲＣ－ＡＢ１０は、コントロールと比較してラットにおいて血清鉄を増大させ、健康なラットにおいて不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）を減少させた。データは、本発明に係るＲＧＭｃ選択的阻害剤が、不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）を有意に減少させることにより（図６Ｂ）、鉄をインビボで可動化させるのに効果的であり（図６Ａ）、ラットにおいて２４時間後に０．２ｍｇ／ｋｇでトランスフェリン飽和度の有意な増大を達成することを示す。

【0498】

ＲＧＭｃ選択的抗体の薬物動態（ＰＫ）と薬力学的（ＰＤ）の関係を試験するために、単回用量ＰＫ／ＰＤ試験を雌Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおいて行なった。動物に単回静脈内（ＩＶ）用量の抗体（０．６、２、６および２０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、血清鉄パラメータ（例えば、血清鉄およびＵＩＢＣレベル）を薬力学的測定値として決定し、一方で、抗体血清濃度を測定して抗体のＰＫプロファイルを決定した。血清鉄およびＵＩＢＣを、ＲＸ Ｄａｙｔｏｎａ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎａｌｙｚｅｒによって決定して、抗体濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。

【0499】

図７Ａは、単回用量のＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８（ｎ＝２）またはＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９（ｎ＝５）を２０ｍｇ／ｋｇで用いて処置した場合の、経時的な動物における血清鉄レベル（平均±ＳＥＭ）を示す。ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８およびＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９は、コントロールと比較して、血清鉄レベルを増大させ、ＵＩＢＣレベルを減少させた。図７Ｂは、フォローアップＰＫ／ＰＤ試験における血清鉄（上）およびＵＩＢＣ（下）の測定を示し、ここで雌Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙｅｒｅは、単回ＩＶ用量のＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８を０．６ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇで投与された（ｎ＝５～１１動物／群）。ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８は、評価された全ての用量で、コントロールと比較して血清鉄レベルを増大させ、ＵＩＢＣレベルを減少させた。血清鉄パラメータの変化の持続時間は用量依存的であり、効果は、２０ｍｇ／ｋｇの単回投与後、２１日も持続した。図７Ｃは、同一の動物内の抗体血清濃度を示す。ＰＫパラメータを、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアを用いて計算して表５に要約した。標的が介在する薬物配置（ＴＭＤＤ）が全ての用量レベルで観察されるが、６および２０ｍｇ／ｋｇのより高い用量では、標的は早い時点で飽和するようであり、ＴＭＤＤの観察およびクリアランスの変化のタイミングは、ＰＫプロファイルにおいてより後の時点で顕著である。最大濃度は投与後１時間で達成され、Ｃ_ｍａｘは用量に比例した増大を示した。抗体の半減期は、１．２～６．７日の範囲であり、より少ない用量で観察される、より早いクリアランスおよびより短い滞留時間を示す。このことは、標的が介在する薬物配置（ＴＭＤＤ）を有するヒトＩｇＧ４分子と一致する。最後に、ＴＭＤＤを示す分子で予想されるように、ＡＵＣ_０－８によって測定される用量比例よりも高い曝露増大が観察された。図７Ｄは、２０ｍｇ／ｋｇでの、抗体曝露（ＰＫ）と血清鉄パラメータ（ＰＤ）の間の関係を示す。データは、３μｇ／ｍＬよりも高い濃度が連続的なＰＤ効果に必要であることを示唆する。

【0500】

【0501】

合わせると、これらのデータは、ＲＧＭｃ特異的抗体によるＢＭＰ６－ヘプシジンのシグナリング経路の標的化された破壊が、インビボでの鉄利用率を増大させることを示す。これらの結果は、ＢＭＰ６シグナリングの肝臓選択的阻害が、ＣＫＤの貧血およびがんまたは化学療法によって誘導される貧血を含む様々な鉄制限性の貧血を標的化するための安全かつ効果的な方法を提供し得るという概念を支持する。

【0502】

［実施例６：ＲＧＭｃ選択的抗体の結合領域を決定するためのＨＤＸエピトープマッピング］
水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）は、溶液中のタンパク質コンフォメーションを調べるために広く用いられる技術である。ＨＤＸ－ＭＳ方法論は、Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ，２０１４ Ｊａｎｕａｒｙ；１９（１）：９５－１０２に記載され、参照によりその全体で本明細書中に援用される。手短には、ＨＤＸ－ＭＳは、溶液中の重水素とタンパク質主鎖アミド水素の交換に依拠している。弱い水素結合に関与している、またはタンパク質の表面に位置する主鎖アミド水素は、急速に交換し得て、一方で、内部に埋め込まれているものまたは水素結合の安定化に関与するものはよりゆっくり交換する。主鎖アミド水素の水素／重水素（Ｈ／Ｄ）交換速度を測定することにより、タンパク質の動態およびコンフォメーションに関する情報を得ることができる。

【0503】

ＨＤＸ－ＭＳを行なって、ＲＧＭｃ ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９内のどこが結合するのかを決定した。ＨＤＸ－ＭＳにおいては、抗体によってしっかり結合される抗原の領域は、タンパク質間相互作用に起因してＨ／Ｄ交換から保護され、一方で、溶媒に曝露される領域は、容易にＨ／Ｄ交換を受け得る。これに基づき、抗原の結合領域を同定した。図８Ａは、２つのＨ／Ｄ交換保護領域が、２つの結合領域（領域Ａおよび領域Ｂ）（それぞれＲＧＭｃのα１およびα３ヘリックス内）を含む固有のエピトープにＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９が潜在的に結合することを示唆していることを示す。α３ヘリックスは、ＢＭＰ結合ドメインの一部を含む。図８Ｂは、領域Ａおよび領域Ｂに対応するＲＧＭａ／ｂ／ｃペプチドのアライメントである。図８Ｃは、ＢＭＰ２に結合した公知のＲＧＭａ構造の後にモデル化されたＲＧＭｃの構造を示す。

【0504】

実際に、ＲＧＭｃ特異的抗体は、潜在的な接触残基の存在に基づいてα３ヘリックス（例えば、領域Ｂ）に結合し得る（例えば、図８Ｄを参照）。さらに、アイソフォーム間で、特にα１ヘリックス内に、いくつかのアミノ酸変動が存在し、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ３子孫抗体のアイソフォーム特異性に寄与すると考えられる（例えば、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８およびＳＲ－ＲＣ－ＡＢ９）。同様に、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂを上回るＲＧＭｃ特異性の構造決定因子として作用し得る領域Ａ内のいくつかの残基が存在する（図８Ｅ）。

【0505】

［実施例７：ＲＧＭＣ選択的抗体は、非ヒト霊長類における鉄恒常性を調整する］
ＲＧＭＣ選択的抗体が非ヒト霊長類における鉄恒常性を調整する能力を評価するために、雌カニクイザル・マカク（２～７年齢、Ｃｏｖａｎｃｅ）における単回Ｉ．Ｖ．用量のＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８（１０ｍｇ／ｋｇ）後に血清鉄パラメータを測定した。血清を、単回抗体投与後１０週間、定期的な間隔で動物から回収した。血清鉄およびＵＩＢＣをＣｏｂｒａｓ血液分析器で測定し、血清抗体曝露をＥＬＩＳＡによって決定した。

【0506】

ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８は、抗体投与後に、血清鉄を効果的に増大させ、ＵＩＢＣを低減させて、血清鉄レベルは、図９Ａに示されるように、投与後６週にわたって増大したままだった。８週までに、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８を投与した全ての動物における血清鉄は、ベースラインまで戻った。図９Ｂは、投与後１０週までのＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８の平均血清濃度を示す。ＰＫプロファイルは、モノクローナル抗体に関して予想されるとおりであり、２４２μｇ／ｍＬ（±２１．３）のＣ_ｍａｘを投与後１時間で達成した。血清鉄パラメータ（ＰＤ）に対して抗体曝露（ＰＫ）を比較することにより評価されるＰＫ／ＰＤの関係は、３μｇ／ｍＬよりも高い濃度が、連続的または長く続くＰＤ効果を生じさせ得ることを示唆する（図９Ｃ）。

【0507】

これらの結果により、ＲＧＭＣ選択的抗体が、抗体の単回投与後に、非ヒト霊長類において血清鉄に対する維持された効果を有し得ることが確認され、それにより、稀なＩＶインフュージョン（例えば３ヶ月ごと、または６ヶ月ごと）および／または皮下投与レジメンに関する機会を可能にし得る。

【0508】

［実施例８：ＲＧＭＣ選択的抗体は、慢性疾患の貧血のラットモデルにおいて、ＥＳＡと組み合わせて投与された場合、血清鉄を調整し、ヘモグロビンを増大させる。］
慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）のモデルにおける血清鉄および血液パラメータに対するＲＧＭＣ選択的抗体の効果を試験するために、Ｌｅｗｉｓ ＰＧ－ＡＰＳ ＡＣＤモデルを用いた。これは、ラットにおける慢性疾患の貧血の長期にわたるモデルであり、したがって、ヘプシジンを調整する薬物の、赤血球産生に対する効果の試験を可能にする。ＲＧＭＣ選択的抗体がＥＳＡの機能を高める潜在性に起因して、抗体を単独およびエポエチンα（ＥＰＯ）と組み合わせて投与した。関節炎をＰＧ－ＡＰＳ［１５ｍｇ／ｋｇ］ｉ．ｐ．でラットにおいて誘導して、１４日後、血液および血清鉄パラメータを決定した。これらの結果に基づき、ラットを投与に関してグループにランダム化して、投与の最初の日を０日目とラベルした。動物（ｎ＝６～８／群）をアイソタイプ・コントロールまたはＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８抗体（２０ｍｇ／ｋｇ）および／またはＥＰＯ（１０ｕｇ／ｋｇ）で毎週処置した。動物に合計４週間投与して（０日目、７日目、１４日目、２１日目）、血清鉄および血液パラメータを、３日目、１０日目、１７日目、２４日目および２８日目に毎週測定した。

【0509】

図１０Ａは、それぞれの投与群に関するおけるベースラインの測定値（－３日目）からの血清鉄の変化を示す。ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８単独およびＥＰＯと組み合わせた毎週の投与は、ＡＣＤ動物において、ＩｇＧ単独と比較して血清鉄を増大させた。図１０Ｂは、試験の２４日目からの絶対的血清鉄（μｇ／ｄＬ）データを示す。健康なコントロールとＡＣＤ動物の間の血清鉄の有意差およびＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８を投与された動物群における血清鉄の増大に留意する。図１０Ｃは、それぞれの投与群に関する、ベースライン測定値（－３日目）からのヘモグロビンの変化を示す。データは、ＥＰＯと組み合わせて投与した場合、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８は、ヘモグロビン増加レベルに対する強い効果（ＥＰＯまたは抗体単独よりも早くて平均が高い）を有したこと示す。２４日目からの絶対的ヘモグロビン（ｇ／ｄＬ）データのみを図１０Ｄに示す。ＡＣＤ：アイソタイプ・コントロール群と比較すると、ＡＣＤ：ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８＋ＥＰＯ投与群においてヘモグロビンが５８％増大した。合わせると、これらのデータは、ＡＣＤのモデルにおいて、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８が血清鉄を調整することができ、ＥＰＯと組み合わせて投与された場合、ＳＲ－ＲＣ－ＡＢ８は、Ｈｇｂの調整においてＥＰＯ単独よりもさらに高い効果を有し得ることを示す。

【0510】

本開示に含まれる特定の配列のリストが以下に提供される。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C-7D】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図8E】

【図8F】

【図9A】

【図9B-9C】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【配列表】

2022512756000001.app

【手続補正書】

【提出日】2021-08-20

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト反発性ガイダンス分子Ｃ（ＲＧＭｃ）に選択的に結合する単離された抗体および薬学的に許容できる担体を含んでいる医薬組成物であって、
前記抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体であり、ここで：
ａ）前記抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり；
ｂ）前記抗体は、ヒト反発性ガイダンス分子Ａ（ＲＧＭａ）およびヒト反発性ガイダンス分子Ｂ（ＲＧＭｂ）に結合せず；および
ｃ）前記抗体は、ＢＭＰ６とＲＧＭｃの相互作用を阻害または減少させる、
医薬組成物。

【請求項2】

ヒトＲＧＭｃ内のエピトープに結合する単離された抗体および薬学的に許容できる担体を含んでいる医薬組成物であって、
前記抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体であり、ここで：
ａ）前記抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであり；および
ｂ）前記抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基および／またはＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むエピトープに結合し、ここで前記エピトープは、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基およびＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含んでいてもよい、
医薬組成物。

【請求項3】

請求項１または２に記載の医薬組成物であって、
前記抗体は、配列番号３０、３１、および３２にそれぞれ示されるＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、およびＨ－ＣＤＲ３配列、ならびに、配列番号３３、３４、および３５にそれぞれ示されるＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、およびＬ－ＣＤＲ３配列を含み；
ここで、
前記Ｈ－ＣＤＲ１の４位のＲ残基はＫまたはＳで置換されてもよく；前記Ｈ－ＣＤＲ１の５位のＳ残基はＴで置換されてもよく；前記Ｈ－ＣＤＲ１の７位のＳ残基はＡで置換されてもよく；および／または、前記Ｈ－ＣＤＲ１の９位のＳ残基はＱで置換されてもよく；
さらに：
前記Ｈ－ＣＤＲ２の８位のＶ残基はＨまたはＴで置換されてもよく；および／または前記Ｈ－ＣＤＲ２の１０位のＮ残基はＳ、ＴまたはＥで置換されてもよい、
医薬組成物。

【請求項4】

請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
前記抗体は、
ａ）配列番号３６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域；および／または
ｂ）配列番号３７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する可変の軽鎖可変領域を含み、
ここで前記抗体は、
ｃ）配列番号３６に示される重鎖可変領域配列；および
ｄ）配列番号３７に示される軽鎖可変領域配列を含んでもよい、
医薬組成物。

【請求項5】

請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
前記抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４抗体であり、ここで前記抗体は、ヒトＩｇＧ４抗体であってもよく、さらに前記ヒトＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ_１様ヒンジを生じさせるＳｅｒからＰｒｏへの主鎖置換を含んでいてもよい、
医薬組成物。

【請求項6】

請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
前記抗体は、０．１×１０^－９（０．１ｎＭ）未満のＫ_Ｄ値でＲＧＭｃに結合し、ここで前記抗体は、抗体抗原複合体の内部移行を誘導してもよい、
医薬組成物。

【請求項7】

ヒトＲＧＭｃに選択的に結合する単離された抗体を含んでいる医薬組成物であって、
前記抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体であり、
ここで前記抗体は、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基および／またはＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含んでいるエピトープに結合する抗体と、ヒトＲＧＭｃに対する結合に関して競合（例えば交差競合）する、および／または、同一のエピトープに結合し、ここで前記エピトープは、ＹＶＳＳＴＬＳＬ（配列番号４６）の少なくとも１つのアミノ酸残基およびＦＨＳＡＶＨＧＩＥＤＬ（配列番号４７）の少なくとも１つのアミノ酸残基を含んでいてもよく、ここで前記抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントである、
医薬組成物。

【請求項8】

ヒト対象における貧血の治療のための方法での使用のための請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
前記治療は、前記貧血を治療するのに効果的な量での前記対象への前記組成物の投与を含み、
ここで前記貧血は、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）または慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）であってもよい、
医薬組成物。

【請求項9】

請求項８に記載の使用のための医薬組成物であって、
前記貧血は、がん関連の貧血または化学療法によって誘導される貧血である、
医薬組成物。

【請求項10】

請求項８に記載の使用のための組成物であって、
前記ＡＣＤは、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の貧血であり、
前記対象は、透析依存性または非透析依存性であってもよい、
組成物。

【請求項11】

請求項８から１０のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物であって、
前記組成物は、さらなる治療的薬剤と組み合わせて投与されて、
ここで前記のさらなる治療的薬剤は、エリスロポエチン刺激剤（ＥＳＡ）、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤または輸血であってもよい、
医薬組成物。

【請求項12】

請求項１１に記載の使用のための医薬組成物であって、
前記方法は、ＥＳＡ、ＨＩＦ安定剤、鉄補給剤または輸血と関連する毒性を減少させて、ここで前記毒性は、鉄過剰またはがんリスクを含んでもよい、
医薬組成物。

【請求項13】

請求項８から１２のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物であって、
前記対象は、
ａ）鉄療法中であるが鉄療法の用量減少が有利である；
ｂ）鉄療法を受けたことがあるが毒性のせいで中断している；
ｃ）鉄療法を受けたことがあり、鉄療法の用量減少が有利である；
ｄ）がんリスクがある；および／または
ｅ）がんと診断されたことがある、
医薬組成物。

【請求項14】

対象における血清鉄レベルを増大させる方法であって、
前記方法は、請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組成物を、
ｉ）前記対象における血清鉄レベルを増大させる；
ｉｉ）前記対象におけるヘプシジンを下方調節する；
ｉｉｉ）肝臓ヘプシジンｍＲＮＡレベルを減少させる；
ｉｖ）肝臓ヘプシジンタンパク質レベル、血清（循環）ヘプシジンタンパク質レベル、またはその両方を減少させる；
ｖ）前記対象におけるトランスフェリン飽和度を増大させる；
ｖｉ）前記対象における赤血球産生を増大させる；
ｖｉｉ）前記対象における不飽和鉄結合能を低減させる；
ｖｉｉｉ）前記対象における総鉄結合能を低減させる；および／または、
ｉｘ）前記対象における血清フェリチンレベルを増大させる
のに効果的な量で前記対象へ投与するステップを含み、ここで前記量は、血液のミリリットルあたり≧２０ナノグラムの血清フェリチンレベルを達成するのに効果的な量であってもよい、
方法。

【請求項15】

請求項８から１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物または請求項１４に記載の方法であって、
前記対象は、エリスロポエチン（ＥＰＯ／ＥＳＡ）療法、ＨＩＦ安定剤療法、ＩＶ鉄補給、またはそれらの組み合わせを受けたことがあり、
ここで前記対象は、ＥＰＯ療法、ＨＩＦ安定剤療法またはＩＶ鉄補給と関連する有害事象が現れたことがある対象であってもよく、または、そのリスクがある対象であってもよい、
医薬組成物または方法。

【請求項16】

ＲＧＭｃ選択的阻害剤（例えば、中和抗体）を含んでいる医薬組成物を作製する方法であって、
前記方法は、以下のステップ：
ｉ）ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに選択的に結合する能力に関して、抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ、ここで前記抗体は、完全ヒトまたはヒト化抗体である；
ｉｉ）ステップ（ｉ）に基づいて、ＲＧＭｃ活性をインビボで阻害／中和する能力に関して、抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップ；
ｉｉｉ）ステップ（ｉ）および（ｉｉ）に基づいて、医薬組成物への製剤化に関して、阻害／中和抗体を選択するステップ
を含み、
ここでステップ（ｉ）は、ポジティブ選択を含んでもよく、さらに、ネガティブ選択を含んでもよい、
方法。

【請求項17】

請求項１６のいずれか１つの方法であって、
同定ステップ（ｉ）は、ライブラリーをスクリーニングするステップを含み、
ここで前記ライブラリーは、ファージライブラリーまたは酵母ライブラリーであってもよく；
ここで同定ステップ（ｉｉ）は、血清鉄、総鉄結合能（ＴＩＢＣ）、不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）、およびトランスフェリン飽和度からなる群より選択される鉄パラメータを測定するステップを含んでもよく、
さらに、ステップ（ｉｉ）は、ヘプシジン発現を測定するステップを含んでもよく、ここで前記ヘプシジン発現は、肝臓ヘプシジンレベルおよび／または血清ヘプシジンレベルであってもよく、
さらに、ステップ（ｉｉ）は、インビボで血清鉄レベルを上昇および／またはヘプシジン発現を抑制することが可能な中和抗体または抗原結合フラグメントを同定するステップを含んでもよく、
さらに、前記医薬組成物は、静脈内または皮下投与のために製剤化されてもよく、
さらに、ステップ（ｉ）は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂよりもＲＧＭｃに関して選択的に確認するステップを含んでもよい、
方法。

【請求項18】

対象における鉄障害を治療するための方法での使用のためのＲＧＭｃ選択的阻害剤であって、
前記ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、ＲＧＭａおよびＲＧＭｂを阻害せず、
ここで前記ＲＧＭｃ選択的阻害剤は、完全ヒトまたはヒト化全長抗体またはそれらの抗原結合フラグメントであり、
ここで前記鉄障害は、前記対象において貧血を生じさせる、
ＲＧＭｃ選択的阻害剤。

【国際調査報告】