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特表2022-512944別の薬理学的に活性な薬剤と組み合わせた長時間作用型インターロイキン－１５受容体作動薬
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-07
(54)【発明の名称】別の薬理学的に活性な薬剤と組み合わせた長時間作用型インターロイキン－１５受容体作動薬
(51)【国際特許分類】
A61K 47/60 20170101AFI20220131BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220131BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220131BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220131BHJP
A61K 38/20 20060101ALI20220131BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220131BHJP
C07K 14/54 20060101ALN20220131BHJP
【ＦＩ】
A61K47/60
A61P35/00 ZNA
A61P43/00 121
A61P35/02
A61K38/20
A61K39/395 N
C07K14/54
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021524370
(86)(22)【出願日】2019-11-08
(85)【翻訳文提出日】2021-06-02
(86)【国際出願番号】 US2019060609
(87)【国際公開番号】W WO2020097556
(87)【国際公開日】2020-05-14
(31)【優先権主張番号】62/825,437
(32)【優先日】2019-03-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/924,015
(32)【優先日】2019-10-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/848,372
(32)【優先日】2019-05-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/789,924
(32)【優先日】2019-01-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/818,003
(32)【優先日】2019-03-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/758,344
(32)【優先日】2018-11-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/843,036
(32)【優先日】2019-05-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】597148884
【氏名又は名称】ネクター セラピューティクス
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】宮崎 宇広
(72)【発明者】
【氏名】マダカムティル， ルイ
(72)【発明者】
【氏名】キヴィメイ， サウル
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA94
4C076BB16
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE23
4C076EE23M
4C076EE59
4C076EE59M
4C084AA02
4C084AA03
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA21
4C084BA23
4C084BA37
4C084CA18
4C084DA12
4C084MA02
4C084MA66
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZB271
4C084ZB272
4C084ZC751
4C085AA14
4C085BB36
4C085CC23
4C085EE03
4C085GG02
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA57
4H045CA42
4H045DA02
4H045EA28
4H045FA10
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、例えば、例示すれば免疫活性化及び抗腫瘍活性の持続を提供するのに有効な治療法に対して応答性の状態の治療における、（ａ）長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、（ｂ）腫瘍抗原を標的にする１種以上の抗体（ｍＡｂ）とを含む、組み合わせ治療、組成物、及びキット、並びに関連する調製及び使用の方法を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
癌を有する対象を治療する方法であって、（ａ）次の構造を有する長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬：
【化19】
（式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、ｎは約１５０～約３，０００の整数であり、ｍは２、３、４、及び５から選択される整数であり、ｎ’は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す）；及び
（ｂ）リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子から選択される腫瘍抗原と特異的に結合するモノクローナル抗体であって、作用機序としての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有するモノクローナル抗体；
（ここでは、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に又は連続的に、任意の順序で実施される）
を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項2】
前記長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、薬学的に許容し得る塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
式（Ｉ）中の（ｍ）が、２又は３である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
式（Ｉ）中の（ｍ）が、３である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
式（Ｉ）中の（ｎ）が、約９０９という値を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記癌が、固形癌である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記固形癌が、乳癌、卵巣癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、悪性黒色腫、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、甲状腺癌、腎癌、胆管の癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病、及び副腎皮質癌、前述のもののいずれかの転移型が含まれる、からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記癌が、造血器腫瘍である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記造血器腫瘍が、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、白血病、及びリンパ腫からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
ステップ（ａ）が、ステップ（ｂ）の前に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
ステップ（ａ）及びステップ（ｂ）が、同時に又は実質的に同時に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記投与することが、好適な動物モデルにおいて測定される場合に、ＮＫ活性化を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が単剤として投与される場合に観察されるよりも大きな程度で刺激するのに有効である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記投与することが、好適な動物モデルにおいて測定される場合に、ＮＫ増殖を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が単剤として投与される場合に観察されるよりも大きな程度で刺激するのに有効である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記投与することが、好適な動物モデルにおいて測定される場合に、ＣＤ８＋Ｔ細胞生存及びメモリー形成を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が単剤として投与される場合に観察されるよりも大きな程度で補助するのに有効である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、皮下に投与される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記モノクローナル抗体が、静脈内に投与される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記モノクローナル抗体が、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、及び抗ＣＤ３８抗体から選択される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記糖タンパク質と特異的に結合するモノクローナル抗体が、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＥｐＣＡＭ抗体、抗ｇｐＡ３抗体３、及び抗ＦＢＰ抗体から選択される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記成長因子と特異的に結合するモノクローナル抗体が、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ抗体、及び抗ＥＧＦＲ抗体から選択される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記モノクローナル抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記モノクローナル抗体が、ダラツムマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、及びトラスツズマブからなる群から選択される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
（ａ）次の構造を有する長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬：【化20】
（式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、ｎは約１５０～約３，０００の整数であり、ｍは２、３、４、及び５から選択される整数であり、ｎ’は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す）；及び
（ｂ）リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子から選択される腫瘍抗原と特異的に結合するモノクローナル抗体であって、作用機序としての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を含むモノクローナル抗体
を含む、癌を治療するのに使用するための治療的組み合わせ。
【請求項24】
前記長時間作用型受容体作動薬が、薬学的に許容し得る塩である、請求項２３に記載の治療的組み合わせ。
【請求項25】
前記長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、請求項３、４、又は５のいずれか一項に記載された通りの構造を有する、請求項２３又は２４に記載の治療的組み合わせ。
【請求項26】
使用のための説明書を伴う、請求項２３～２５のいずれか一項に記載の治療的組み合わせを含むキットであって、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及びモノクローナル抗体は、それぞれ、１つ以上の個々の単位剤形内に含有される、キット。
【請求項27】
抗腫瘍抗体と共に投与された場合の、ＮＫ細胞媒介性の抗体依存性細胞傷害を増強するための長時間作用型受容体作動薬の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願に対する相互参照
本願は、３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）の下で２０１８年１１月９日出願の米国仮特許出願第６２／７５８，３４４号；２０１９年１月８日出願の米国仮特許出願第６２／７８９，９２４号；２０１９年３月１３日出願の米国仮特許出願第６２／８１８，００３号；２０１９年３月２８日出願の米国仮特許出願第６２／８２５，４３７号；２０１９年５月３日出願の米国仮特許出願第６２／８４３，０３６号；２０１９年５月１５日出願の米国仮特許出願第６２／８４８，３７２号；２０１９年１０月２１日出願の米国仮特許出願第６２／９２４，０１５号による利益を主張し、これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
本願は、３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１９（ｅ）の下で２０１８年１１月９日出願の米国仮特許出願第６２／７５８，３４４号；２０１９年１月８日出願の米国仮特許出願第６２／７８９，９２４号；２０１９年３月１３日出願の米国仮特許出願第６２／８１８，００３号；２０１９年３月２８日出願の米国仮特許出願第６２／８２５，４３７号；２０１９年５月３日出願の米国仮特許出願第６２／８４３，０３６号；２０１９年５月１５日出願の米国仮特許出願第６２／８４８，３７２号；２０１９年１０月２１日出願の米国仮特許出願第６２／９２４，０１５号による利益を主張し、これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本開示は、（数あるものの中でも特に）、長時間作用型インターロイキン－１５（「ＩＬ－１５」）受容体作動薬と、別の薬理学的に活性な薬剤、すなわちモノクローナル抗体などの抗体とを含む治療的組み合わせ及び組成物、並びに、例えば、例えば免疫活性化及び抗腫瘍活性の持続を提供するのに有効な治療法に対して応答性の状態の治療における、関連する使用方法を対象とする。
【背景技術】
【0003】
インターロイキン－１５（「ＩＬ－１５」）は、Ｇｒａｂｓｔｅｉｎら（Ｇｒａｂｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：９６５－９６８）によって初めて報告された多面的サイトカインである。１６２アミノ酸前駆体として分泌されるヒトＩＬ－１５は、２９アミノ酸リーダー配列と１９アミノ酸プロ配列とを含む；従って成熟タンパク質は１１４アミノ酸長である。４本のα－ヘリックス束のサイトカインファミリーに属するＩＬ－１５はヘテロ三量体受容体に結合し、ここでユニークなαサブユニット（ＩＬ－１５Ｒα）はＩＬ－１５に受容体特異性を付与し、及びこの受容体のβ及びγサブユニットは１つ以上の他のサイトカイン受容体と共通する特徴を有する。Ｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＥＭＢＯ Ｊ．１４：３６５４－３６６３。
【0004】
サイトカインとしては、ＩＬ－１５は自然免疫系及び適応免疫系の両方に効果を及ぼす（ＤｉＳａｂｉｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２２：１９－３３）。自然免疫系（これは外来性の侵入者から宿主を全般的に防御する）に関して、ＩＬ－１５は、他の特性に加えて、ナチュラルキラー細胞（「ＮＫ細胞」）及びナチュラルキラーＴ細胞（「ＮＫ－Ｔ細胞」）の発生を生じさせ、且つそれらの生存を維持する。自然免疫系におけるその役割と一致して、ＮＫ細胞は侵入病原体を特異的に攻撃することはない；むしろ、ＮＫ細胞は易感染性宿主細胞（腫瘍細胞又はウイルス感染細胞など）を破壊する。ＮＫ－Ｔ細胞は免疫調節性サイトカイン、特にインターフェロン－γを産生し、これにより免疫応答の全般的な活性化がもたらされる。
【0005】
適応免疫系（これは特定の病原体と最初に遭遇した後、当該の特異的な外来性の侵入者から宿主を防御する）に関して、ＩＬ－１５は免疫調節性サイトカイン産生ヘルパーＴ細胞の維持に必要である。重要なことに、ＩＬ－１５は「抗原を経験した」メモリーＴ細胞の長期維持も支え、メモリーＴ細胞は急激に複製する能力を有するため、宿主に侵入する特定の外来性病原体に再曝露したときに一層迅速で強力な免疫応答を生じさせる。
【0006】
最後に、自然免疫系及び適応免疫系の両方の内でのその特異的な役割にも関わらず、ＩＬ－１５は、免疫系の両カテゴリーにわたって重要で広範な効果を及ぼす。詳細には、ＩＬ－１５は、免疫系の両カテゴリーに関連する幾つもの細胞型（樹状細胞、好中球、好酸球、肥満細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞、及びＢ細胞を含む）のアポトーシス（又は細胞死）を阻害し又は低減する。ＩＬ－１５を介した応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞及び腸上皮内リンパ球の発生、機能、及び生存に役割を果たすことも示されている。
【0007】
ＩＬ－１５は、宿主にとって外来性（又は「非自己」）に見える細胞と闘うことのできる免疫系内の多くの細胞の増殖及び維持を刺激するため、癌罹患者の治療におけるＩＬ－１５の利用が提案されている（Ｓｔｅｅｌ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３３（１）：３５－４１）。例えば、ＩＬ－１５ベースの作動薬が骨髄腫の治療に提案されている（Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２（１１），ｅ２６４４２：１－３）。加えて、ＩＬ－１５薬物療法がＨＩＶ感染症などのウイルス感染症罹患者の治療に提案されている。
【0008】
ＩＬ－１５アミノ基に安定に共有結合した少なくとも１種の水溶性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）部分を含む長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、ＩＬ－１５及び他のＩＬ－１５受容体作動薬と比較して、他にもある改善の中で特に、例えば、強力な免疫刺激効果、低い全身毒性、安定性及び／又は改善された薬物動態、改善された治療効果などの、改善された特性及びインビボプロファイルを提供するものとして記載されている（参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願第２０１８／０３２８１７号明細書）。
【0009】
造血器腫瘍と固形腫瘍の両方を含めたある種の癌を治療するためのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の産生及び使用は、確立されている（Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ｖｏｌ．１２，ｐ．１４）。腫瘍関連ｍＡｂの作用機序には、次のものの１つ以上が含まれる：腫瘍細胞上での直接的作用、免疫介在性作用、及び血管及び間質除去。ｍＡｂによって標的にされる腫瘍関連抗原には、分化抗原群（ＣＤ）抗原（例えば、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２）、糖タンパク質（例えば、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ムチンなど）、糖脂質（例えば、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＧＭ２などのガングリオシド）、血管標的（例えば、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ）、成長因子（例えば、ＥｒｂＢ１／ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２／ＨＥＲ２、ＥｒｂＢ３、ｃ－ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ）、並びに間質の細胞外マトリックス抗原（例えば、ＦＡＰ、テネイシン）が含まれる。いくつかのｍＡｂ（例えば、リツキシマブ、オファツムマブ、ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン、セツキシマブ、及びパニツムマブ）は、腫瘍研究に使用するために、Ｕ．Ｓ．ＦＤＡによって承認されているが、ある種の型の癌細胞は、他の癌細胞よりも、モノクローナル抗体に基づく治療法に対して弱点がある。
しかし、前述の手法にもかかわらず、改善された抗癌免疫療法の必要性が存在するままである。本開示は、特に、新規であり且つ当技術分野によって完全には提案されていないと考えられる、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、腫瘍抗原に誘導される少なくとも１種のｍＡｂとを含む組み合わせ療法（以下でより詳細に説明されるいくつかの好都合な特徴を有する組み合わせ）、並びにこうした組み合わせを含む組成物及びキット、並びに調製及び使用の関連する方法を提供することによって、これらの及び他の必要性に対処する。
しかし、前述の手法にもかかわらず、改善された抗癌免疫療法の必要性が存在するままである。本開示は、特に、新規であり且つ当技術分野によって完全には提案されていないと考えられる、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、腫瘍抗原に誘導される少なくとも１種のｍＡｂとを含む組み合わせ療法（以下でより詳細に説明されるいくつかの好都合な特徴を有する組み合わせ）、並びにこうした組み合わせを含む組成物及びキット、並びに調製及び使用の関連する方法を提供することによって、これらの及び他の必要性に対処する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0010】
【非特許文献1】Ｇｒａｂｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：９６５－９６８
【非特許文献2】Ｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＥＭＢＯ Ｊ．１４：３６５４－３６６３
【非特許文献3】ＤｉＳａｂｉｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２２：１９－３３
【非特許文献4】Ｓｔｅｅｌ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３３（１）：３５－４１
【非特許文献5】Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２（１１），ｅ２６４４２：１－３
【非特許文献6】Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ｖｏｌ．１２，ｐ．１
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0011】
第１の態様では、癌を有する対象を治療する方法が、本明細書で提供される。具体的には、この方法は、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、（ｂ）モノクローナル抗体、例えば、腫瘍細胞を標的にする、すなわち腫瘍細胞と結合するモノクローナル抗体を、対象に投与することを含む。ここでは、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に又は連続的に、任意の順序で実施される。いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、次の構造を有する：
ここでは、この構造は、［ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ］ｎ’－ＩＬ－１５として表すこともでき、
式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、（ｎ）は約１５０～約３，０００の整数であり、（ｍ）は２、３、４、及び５から選択される整数であり、（ｎ’）は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す；又はその薬学的に許容し得る塩の形態である。いくつかの特定の実施形態では、式（Ｉ）中の（ｍ）は、２又は３である。好ましい実施形態では、式（Ｉ）中の（ｍ）は、３である。いくつかの特定の実施形態では、式（Ｉ）中の（ｎ）は、約２２７という平均値、又は約３４０という平均値、又は約４５４という平均値、又は約６８１という平均値、又は約９０９という平均値を有する。１つ以上の実施形態では、（ｎ）は、約９０９という値を有する。
【化1】
ここでは、この構造は、［ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ］ｎ’－ＩＬ－１５として表すこともでき、
式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、（ｎ）は約１５０～約３，０００の整数であり、（ｍ）は２、３、４、及び５から選択される整数であり、（ｎ’）は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す；又はその薬学的に許容し得る塩の形態である。いくつかの特定の実施形態では、式（Ｉ）中の（ｍ）は、２又は３である。好ましい実施形態では、式（Ｉ）中の（ｍ）は、３である。いくつかの特定の実施形態では、式（Ｉ）中の（ｎ）は、約２２７という平均値、又は約３４０という平均値、又は約４５４という平均値、又は約６８１という平均値、又は約９０９という平均値を有する。１つ以上の実施形態では、（ｎ）は、約９０９という値を有する。
【0012】
いくつかの実施形態では、抗体は、リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子から選択される腫瘍抗原と特異的に結合する抗体である。
【0013】
この方法のさらなる実施形態では、対象は、固形癌を有する。いくつかの実施形態では、固形癌は、乳癌、卵巣癌、結腸癌、結腸直腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ）、胃癌、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、肝癌、リンパ腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、甲状腺癌、腎癌、胆管の癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病、及び副腎皮質癌（前述のもののいずれかの転移型が含まれる）からなる群から選択される。
【0014】
いくつかの他の実施形態では、対象は、リンパ腫又は白血病を有する。
【0015】
いくつかのさらなる実施形態では、対象は、多発性骨髄腫を有する。
【0016】
この方法のいくつかの実施形態では、ステップ（ａ）は、ステップ（ｂ）の前に実施される。他の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）の前に実施される。いっそうさらなる実施形態では、ステップ（ａ）及びステップ（ｂ）は、同時に又は実質的に同時に実施される。この方法は、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とモノクローナル抗体の一方又は両方の１つ以上の追加の投薬サイクルをさらに含む。
【0017】
いくつかの実施形態では、投与することは、好適な動物モデルにおいて測定される場合に、ＮＫ活性化及び増殖を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が単剤として投与される場合に観察されるよりも大きな程度で刺激するのに有効である。いくつかの追加の実施形態では、投与することは、好適な動物モデルにおいて測定される場合に、ＣＤ８ Ｔ細胞生存及びメモリー形成を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が単剤として投与される場合に観察されるよりも大きな程度で補助するのに有効である。いくつかのさらなる実施形態では、投与することは、好適な動物モデルにおいて測定される場合に、単剤として（すなわち、単独療法として）投与される長時間作用型受容体作動薬の投与時に観察されるよりも大きい、且つ単剤としてのモノクローナル抗体の投与時に観察されるよりも大きい、腫瘍細胞の数の減少をもたらすのに有効である（その例を、本明細書に提供する）。いくつかの関連する実施形態では、投与することは、対象における腫瘍細胞の数の、単剤としての同等の用量の長時間作用型受容体作動薬の投与と比較した場合の３倍以上の低下、より好ましくは５倍以上の低下、より好ましくは７倍以上の低下をもたらす。いくつかのさらなる実施形態では、投与することは、ＮＫ細胞の増殖を誘発する（すなわち、ＮＫ細胞の数を増大させる）のに、及び、例えば骨髄組織におけるその腫瘍細胞致死能力を活性化させるのに有効である。
【0018】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、皮下投与される。追加の実施形態では、モノクローナル抗体は、静脈内投与される。
【0019】
１つ以上の実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ、抗体依存性細胞介在性細胞傷害とも称される）作用機序を利用する、標的化されたモノクローナル抗体である。
【0020】
いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、及び抗ＣＤ３８抗体から選択される。さらなる実施形態では、糖タンパク質と特異的に結合するモノクローナル抗体は、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＥｐＣＡＭ抗体、抗ｇｐＡ３抗体３、及び抗ＦＢＰ抗体から選択される。追加の実施形態では、成長因子と特異的に結合するモノクローナル抗体は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ抗体、及び抗ＥＧＦＲ抗体から選択される。さらにいくつかの追加の実施形態では、抗体は、抗ＢＣＭＡ抗体である。いくつかの追加の実施形態では、抗体は、多発性骨髄腫を標的にする抗体である。
【0021】
第２の態様では、癌などの状態を治療するのに使用するための治療的組み合わせが、本明細書で提供される。この組み合わせは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、モノクローナル抗体、例えば、腫瘍細胞を標的にする、すなわち腫瘍細胞と結合するモノクローナル抗体（限定はされないが、本明細書に記載されるモノクローナル抗体が含まれる）とを含む。
【0022】
いくつかの関連する実施形態及びより具体的な実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、次の構造を有する：
式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、（ｎ）は約１５０～約３，０００の整数であり、（ｍ）は２、３、４、及び５から選択される整数であり、（ｎ’）は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す；又はその薬学的に許容し得る塩の形態である。さらにいくつかの追加の実施形態では、モノクローナル抗体は、リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子から選択される腫瘍抗原と特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）中の（ｍ）は、２又は３である。いくつかの特定の実施形態では、式（Ｉ）中の（ｍ）は、３である。いくつかのさらなる実施形態では、式（Ｉ）中の（ｎ）は、約２２７、又は約３４０、又は約４５４、又は約６８１、又は約９０９という値を有する。１つ以上の実施形態では、（ｎ）は、約９０９という値を有する。
【化2】
式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、（ｎ）は約１５０～約３，０００の整数であり、（ｍ）は２、３、４、及び５から選択される整数であり、（ｎ’）は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す；又はその薬学的に許容し得る塩の形態である。さらにいくつかの追加の実施形態では、モノクローナル抗体は、リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子から選択される腫瘍抗原と特異的に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）中の（ｍ）は、２又は３である。いくつかの特定の実施形態では、式（Ｉ）中の（ｍ）は、３である。いくつかのさらなる実施形態では、式（Ｉ）中の（ｎ）は、約２２７、又は約３４０、又は約４５４、又は約６８１、又は約９０９という値を有する。１つ以上の実施形態では、（ｎ）は、約９０９という値を有する。
【0023】
第３の態様では、キットが、本明細書で提供される。実施形態では、キットは、使用のための説明書を伴う、本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とモノクローナル抗体との治療的組み合わせを含み、ここでは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及びモノクローナル抗体は、それぞれ、１つ以上の個々の単位剤形内に含有される。このキット及び治療的組み合わせは、例えば癌を有する対象を治療するために、有用である。
【0024】
追加の態様及び実施形態を、以下の説明及び特許請求の範囲に示す。本明細書に記載される実施形態は、本明細書に記載される態様のそれぞれに等しく適用されることが意図され、また、適用できる場合、他に指示されない限り、単独でも組み合わせでもあるとみなされるべきである。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【図2】図２は、実施例１に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂリンパ腫細胞を接種され、且つ以下で治療されたマウスの生存率（パーセント）を示すグラフである：（ｉ）アイソタイプ対照、（ｉｉ）４０ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、（ｉｉｉ）０．３ｍｇ／ｋｇの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、又は（ｉｖ）４０ｍｇ／ｋｇのリツキシマブと０．３ｍｇ／ｋｇの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬との組み合わせ。
【図3】図３は、実施例２に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を接種されたマウスの、以下のものでの治療後の骨髄組織におけるＮＫ細胞数を示すグラフである：（ｉ）ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、すなわち、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）、（ｉｉ）単剤ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、（ｉｉｉ）単剤モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後）、比較される場合（ｉｖ）未治療対照群。
【図4】図４は、実施例２に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を接種されたマウスの、以下のものでの治療後の骨髄組織におけるＤａｕｄｉ Ｂ細胞の数を示すグラフである：（ｉ）ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）、（ｉｉ）単剤ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、（ｉｉｉ）単剤モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後）、比較される場合（ｉｖ）未治療対照群。
【図5】図５は、実施例３に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂリンパ腫細胞を接種され、それに続いて以下での治療を受けたマウスの生存率（パーセント）を示すグラフである：（ｉ）アイソタイプ対照、（ｉｉ）０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰのダラツムマブ、（ｉｉｉ）０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５、又は（ｉｖ）０．３ｍｇ／ｋｇの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と０．５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣのダラツムマブとの組み合わせ。
【図6】図６は、実施例２に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を接種されたマウスの、以下での治療後の骨髄ＮＫ細胞におけるグランザイムＢ誘発を示すグラフである：（ｉ）ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）、（ｉｉ）単剤ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、（ｉｉｉ）単剤モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後）、比較される場合（ｉｖ）未治療対照群。
【図7A-7B】図７Ａ及び７Ｂは、実施例４に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を接種されたマウスの、以下での治療後の、細胞表面上にＮＫＧ２Ａ（図７Ａ）又はＮＫＧ２Ｄ（図７Ｂ）を発現している骨髄区画におけるＮＫ細胞の割合を示すグラフである：（ｉ）ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与のコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．０３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）、（ｉｉ）単剤ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、（ｉｉｉ）単剤化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後）、比較される場合（ｉｖ）未治療対照群又は（ｖ）アイソタイプ対照（０．５ｍｇ／ｋｇ）。
【図8A-8D】図８Ａ～８Ｄは、実施例５に詳細に記載する通りの、（ｉ）化合物１単独（図８Ｃ）、（ｉｉ）ｈＩｇＧ単独（図８Ｂ）、（ｉｉｉ）化合物１＋ｈＩｇＧ（図８Ｄ）、又は（ｉｖ）未治療対照（図８Ａ）を用いる、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）調製物内のヒトＮＫ細胞の増殖（％）を示すヒストグラムである。
【図9A】図９Ａは、実施例６に詳細に記載する通りの、（ｉ）ｈＩｇＧコーティングプレート、（ｉｉ）化合物１（１μｇ／ｍｌ）、（ｉｉｉ）ｈＩｇＧコーティングプレート＋化合物１（１μｇ／ｍｌ）、又は（ｉｉ）ＮＫ細胞活性化を示す対照と共に一晩培養したＰＢＭＣ調製物内のＣＤ５６＋ＮＫ細胞の表面上の抗体を検出するＣＤ６９についての蛍光強度中央値（ＭＦＩ）シグナルを示すグラフである。
【図9B】図９Ｂは、実施例６に詳細に記載する通りの、（ｉ）ｈＩｇＧコーティングプレート、（ｉｉ）化合物１（１μｇ／ｍｌ）、（ｉｉｉ）ｈＩｇＧコーティングプレート＋化合物１（１μｇ／ｍｌ）、又は（ｉｉ）ＮＫ細胞活性化を示す対照と共に一晩培養したＰＢＭＣ調製物内のＣＤ５６＋ＮＫ細胞の表面上の抗体を検出するＣＤ１０７ａについての蛍光強度中央値（ＭＦＩ）シグナルを示すグラフである。
【図9C】図９Ｃは、実施例６に詳細に記載する通りの、以下への曝露後の、ヒトＰＢＭＣにおけるグランザイムＢ誘発を示すグラフである：（ｉ）ｈＩｇＧコーティングプレート、（ｉｉ）化合物１（１μｇ／ｍｌ）、ｈＩｇＧコーティングプレート＋化合物１（１μｇ／ｍｌ）、又は（ｉｉ）対照。このグラフは、４つの治療のそれぞれについての、分泌されたグランザイムＢの濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【図10A-10B】図１０Ａは、実施例７に詳細に記載する通りの、ＩＬ－１５又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）とのインキュベーション後の、ＫＨＹＧ－１細胞内のｐＳＴＡＴ５陽性率（パーセント）を示すグラフである。図１０Ｂは、実施例７に詳細に記載する通りの、ＩＬ－１５又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）とのインキュベーション後の、ＫＨＹＧ－１細胞の最大増殖（％）のグラフである。
【図11】図１１は、実施例８に詳細に記載する通りの、ＩＬ－１５又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）とのインキュベーション後の、ＣＤ５６＋ヒトＮＫ細胞の最大増殖（％）を示すグラフである。
【図12】図１２は、実施例９に詳細に記載する通りの、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）（＋）での刺激又は未治療（－）後の、ダラツムマブ（＋）であらかじめコーティングされたヒト多発性骨髄腫細胞についての７－ＡＡＤ＋標的細胞（％）を示すグラフである。
【図13A】図１３Ａは、実施例１０に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を接種されたマウスの、以下での治療後の、細胞表面上にＣＤ１６（図１３Ａ）を発現している骨髄区画におけるＮＫ細胞の割合（全ＮＫ細胞中でＣＤ１６を発現している細胞の％）を示すグラフである：（ｉ）ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与のコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．０３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）、（ｉｉ）単剤ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、（ｉｉｉ）単剤化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後）、比較される場合（ｉｖ）未治療対照群又は（ｖ）アイソタイプ対照（０．５ｍｇ／ｋｇ）。
【図13B】図１３Ｂは、実施例１０に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を接種されたマウスの、以下での治療後の、蛍光強度中央値（ＭＦＩ）シグナルによって測定される、ＣＤ１６＋骨髄ＮＫ細胞についての細胞ごとに基づくＣＤ１６発現変化（化合物１治療群における増大）を示すグラフである：（ｉ）ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与のコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．０３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）、（ｉｉ）単剤ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、（ｉｉｉ）単剤化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後）、比較される場合（ｉｖ）未治療対照群又は（ｖ）アイソタイプ対照（０．５ｍｇ／ｋｇ）。
【図14】図１４は、実施例１１に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を接種されたマウスの、以下での治療後の、蛍光強度中央値（ＭＦＩ）シグナルによって測定される、個々の骨髄ＮＫ細胞におけるグランザイムＢ発現を示すグラフである：（ｉ）ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与の化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．０３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与、（ｉｉ）単剤ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、（ｉｉｉ）単剤化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後）、比較される場合（ｉｖ）未治療対照群又は（ｖ）アイソタイプ対照（０．５ｍｇ／ｋｇ）。
【図15A-15B】図１５Ａ及び１５Ｂは、実施例１２に詳細に記載する通りの、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）（＋）での刺激又は未治療（－）後の、ダラツムマブ（＋）（図１５Ａ）又はリツキシマブ（＋）（図１５Ｂ）であらかじめコーティングされたヒト多発性骨髄腫細胞についての７－ＡＡＤ＋標的細胞（％）を示すグラフである。
【図16】図１６は、実施例１３に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫細胞を接種され、それに続いて以下での治療を受けたＳＣＩＤ又はＳＣＩＤベージュ（ｂｅｉｇｅ）マウスの生存率（パーセント）を示すグラフである：（ｉ）ＳＣＩＤについての未治療対照（□）、（ｉｉ）ＳＣＩＤベージュマウスについての未治療対照（○）、（ｉｉｉ）ＳＣＩＤマウスについての、０．３ｍｇ／ｋｇの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、０．５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣのダラツムマブとの組み合わせ（■）；及び（ｉｖ）ＳＣＩＤベージュマウスについての、０．３ｍｇ／ｋｇの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、０．５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣのダラツムマブとの組み合わせ（●）。
【図17A】図１７Ａは、実施例１４に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を接種されたマウスの、以下のものでの治療後の骨髄組織におけるＤａｕｄｉ細胞数を示すグラフである：（ｉ）高用量ダラツムマブ（５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の低用量の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、すなわち、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．０３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）（◆）、（ｉｉ）単剤・高用量ダラツムマブ（５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）（▼）、（ｉｉｉ）単剤・低用量モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．０３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ、接種の１４及び２１日後）（▲）、比較される場合（ｉｖ）未治療対照群（●）。
【図17B】図１７Ｂは、実施例１４に詳細に記載する通り、Ｄａｕｄｉ Ｂ細胞を接種されたマウスの、以下のものでの治療後の骨髄組織におけるＤａｕｄｉ細胞数を示すグラフである：（ｉ）低用量ダラツムマブ（０．０５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の高用量の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、すなわち、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．６ｍｇ／ｋｇ ＩＶ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）（◆）、（ｉｉ）単剤・低用量ダラツムマブ（０．０５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）（▼）、（ｉｉｉ）単剤・高用量モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．６ｍｇ／ｋｇ ＩＶ、接種の１４及び２１日後）（▲）、比較される場合（ｉｖ）未治療対照群（●）。
【図18A-18D】図１８Ａは、実施例１５に詳細に記載する通り、皮下のＨＣＴ－１１６結腸・結腸直腸細胞腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の３日目又は５日目での、賦形剤対照と比較したＮＫ細胞の腫瘍内の割合を示すグラフである。図１８Ｂは、実施例１５に詳細に記載する通り、皮下のＨＣＴ－１１６腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の３日目又は５日目での、賦形剤対照と比較した腫瘍内ＮＫ細胞数を示すグラフである。図１８Ｃは、実施例１５に詳細に記載する通り、皮下のＨＣＴ－１１６腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の、賦形剤対照と比較した、血液又は腫瘍細胞におけるＫｉ６７陽性率（％）によって示されるＮＫ細胞増殖を示すグラフである。図１８Ｄは、実施例１５に詳細に記載する通り、皮下のＨＣＴ－１１６腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の、賦形剤対照と比較した、血液又は腫瘍細胞におけるグランザイムＢ発現（ＧｚｍＢ＋（％））を示すグラフである。
【図18E-18F】図１８Ｅは、実施例１５に詳細に記載する通り、皮下のＨＣＴ－１１６腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の、賦形剤対照と比較した、蛍光強度中央値（ＭＦＩ）シグナルによって測定されるＮＫ細胞上のＣＤ１６細胞表面発現を示すグラフである。図１８Ｆは、実施例１５に詳細に記載する通り、皮下のＨＣＴ－１１６腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の、賦形剤対照と比較した、細胞表面上にＮＫＧ２Ｄを発現しているＮＫ細胞の腫瘍内の割合（ＮＫＧ２Ｄ＋（％））を示すグラフである。
【図19A-19B】図１９Ａは、実施例１６に詳細に記載する通り、皮下のＦａＤｕ扁平上皮癌腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の３日目又は５日目での、賦形剤対照と比較したＮＫ細胞の腫瘍内の割合を示すグラフである。図１９Ｂは、実施例１６に詳細に記載する通り、皮下のＦａＤｕ腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の３日目又は５日目での、賦形剤対照と比較した腫瘍内ＮＫ細胞数を示すグラフである。
【図19C-19F】図１９Ｃは、実施例１６に詳細に記載する通り、皮下のＦａＤｕ腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の、賦形剤対照と比較した、血液又は腫瘍細胞におけるＫｉ６７陽性率（％）によって示されるＮＫ細胞増殖を示すグラフである。図１９Ｄは、実施例１６に詳細に記載する通り、皮下のＦａＤｕ腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の、賦形剤対照と比較した、血液又は腫瘍細胞におけるグランザイムＢ発現（ＧｚｍＢ＋（％））を示すグラフである。図１９Ｅは、実施例１６に詳細に記載する通り、皮下のＦａＤｕ腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の、賦形剤対照と比較した、蛍光強度中央値（ＭＦＩ）シグナルによって測定されるＮＫ細胞上のＣＤ１６細胞表面発現を示すグラフである。図１９Ｆは、実施例１６に詳細に記載する通り、皮下のＦａＤｕ腫瘍を受けているマウスの、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）及びコンジュゲート１（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）での治療後の、賦形剤対照と比較した、細胞表面上にＮＫＧ２Ｄを発現しているＮＫ細胞の腫瘍内の割合（ＮＫＧ２Ｄ＋（％））を示すグラフである。
【図20】図２０は、実施例１７に詳細に記載する通り、Ｈ１９７５肺癌細胞を接種されたマウスの、賦形剤対照（●）と比較される、以下のものでの治療後の０～２７日間の相対腫瘍体積を示すグラフである：（ｉ）腫瘍接種後の９、１２、及び１６日目に投与されるセツキシマブ（０．２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）、及び接種後の９、１６、及び２３日目に投与される化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ）（△）、（ｉｉ）単剤セツキシマブ（０．２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＢＩＷ×３）（▲）、（ｉｉｉ）単剤化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ７ｄ×３）（▼）。
【図21A】図２１Ａは、実施例１８に詳細に記載する通り、ＨＴ－２９結腸直腸癌腫（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）細胞を接種されたマウスの、賦形剤対照（●）と比較される、以下のものでの治療後の０～２１日間の相対腫瘍体積を示すグラフである：（ｉ）セツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＢＩＷ×３）及び化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ７ｄ×３）（△）、（ｉｉ）単剤セツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＢＩＷ×３）（▲）、（ｉｉｉ）単剤化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ７ｄ×３）（▼）。
【図21B】図２１Ｂは、実施例１８に詳細に記載する通り、ＨＴ－２９結腸直腸癌腫細胞を接種され、且つ以下のもので治療されたマウスの生存率（パーセント）としての、賦形剤対照（●）と比較される、治療開始（約１５０ｍｍ３の平均腫瘍体積）後の０～２３日間の腫瘍成長遅延（ＴＶＱＴ）を示すグラフである：（ｉ）セツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＢＩＷ×３）及び化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ７ｄ×３）（▼）、（ｉｉ）単剤セツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＢＩＷ×３）（■）、（ｉｉｉ）単剤化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ７ｄ×３）（▲）。
【図22A】図２２Ａは、実施例１９に詳細に記載する通り、ＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫細胞を接種されたマウスの、ＰＢＳ賦形剤対照（ＯＰ、ＢＩＷ×３）（●）と比較される、以下のものでの治療後の０～１９日間の相対腫瘍体積を示すグラフである：（ｉ）セツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＢＩＷ×３）及び化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ７ｄ×３）（▲）、（ｉｉ）単剤セツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＢＩＷ×３）（▲）、（ｉｉｉ）単剤化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ７ｄ×３）（▼）。
【図22B】図２２Ｂは、実施例１９に詳細に記載する通り、ＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫細胞を接種され、且つ以下のもので治療されたマウスの生存率（パーセント）としての、ＰＢＳ賦形剤対照（ＩＰ、ＢＩＷ×３）（●）と比較される、腫瘍成長遅延（ＴＶＱＴ）を示すグラフである：（ｉ）セツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＢＩＷ×３）及び化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ７ｄ×３）（△）、（ｉｉ）単剤セツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＢＩＷ×３）（▲）、（ｉｉｉ）単剤化合物１（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ７ｄ×３）（▼）。
【図23A】図２３Ａは、実施例２０に詳細に記載する通りの、セツキシマブ（＋）単独であらかじめコーティングされた、又は化合物１（＋）での、アイソタイプ対照（＋）での刺激、又は未治療（－）後の、ＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫細胞についてのＣＤ４５－ＥｐＣＡＭ＋７－ＡＡＤ＋標的細胞（％）を示すグラフである。
【図23B】図２３Ｂは、実施例２０に詳細に記載する通りの、セツキシマブ（＋）単独であらかじめコーティングされた、又は化合物１（＋）での、アイソタイプ対照（＋）での刺激、又は未治療（－）後の、ＦａＤｕ扁平上皮癌細胞（ＨＮＳＣＣ）についてのＣＤ４５－７－ＡＡＤ＋標的細胞（％）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0026】
本開示の１つ以上の態様又は実施形態を詳細に説明する前に、本開示は、特定の合成技術、ＩＬ－１５部分などに限定されることを意図するものではないことに留意するべきであり、それは、それらが、本開示が適合する技術分野の当業者により理解されうるように変動し得るためである。
【0027】
本開示の特定の特徴を説明及び特許請求する際に、以下の専門用語は、別に示さない限り、下記に記載される定義に従って使用される。
【0028】
本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈によって他に明確に指示されない限り、複数の指示対象が含まれる。
【0029】
「水溶性の非ペプチド性ポリマー」は、室温で、水に対して少なくとも３５（重量）％の溶解度、好ましくは７０（重量）％を超える、より好ましくは９５（重量）％を超える溶解度であるポリマーを指す。典型的には、「水溶性」ポリマーの濾過されていない調製物水溶液は、濾過された後の同じ溶液を透過する光の量の、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも９５％を透過させる。しかし、水溶性のポリマーは、水に対して少なくとも９５（重量）％の溶解度である、又は水に完全に溶解することが最も好ましい。「非ペプチド性」であることに関しては、ポリマーは、３５（重量）％未満のアミノ酸残基を有する場合に非ペプチド性である。
【0030】
「ＰＥＧ」又は「ポリエチレングリコール」は、本明細書で使用する場合、あらゆる水溶性のポリ（エチレンオキシド）を包含することが意図される。他に指示されない限り、「ＰＥＧポリマー」又はポリエチレングリコールは、実質的にすべての（好ましくはすべての）単量体サブユニットがエチレンオキシドサブユニットであるが、そのポリマーは例えばコンジュゲート形成のための別のエンドキャッピング（ｅｎｄ ｃａｐｐｉｎｇ）部分又は官能基を含有する可能性があるものである。本開示に使用するためのＰＥＧポリマーは、例えば合成的変換中に、末端の酸素が置換されているかどうかに応じて、２つの次の構造：「－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－」又は「－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－１ＣＨ２ＣＨ２－」のうちの１つを含むこととなる。上述の通り、ＰＥＧポリマーについては、変数（ｎ）は、約３から４０００まで変動する可能性があり、ＰＥＧ全体の末端基及び構造も変わり得る。しかし、例示的な又は好ましいＰＥＧを含む分子は、１個以上の特定のＰＥＧ構造及び／又はリンカー、及び／又は分子量範囲を含むことができる。
【0031】
ＰＥＧなどの水溶性ポリマーの文脈における分子量は、数平均分子量又は重量平均分子量として表すことができる。他に指示されない限り、本明細書での分子量に対するすべての言及は、重量平均分子量を指す。数平均と重量平均、どちらの分子量決定も、ゲル浸透クロマトグラフィー又は他の液体クロマトグラフィー技術（例えばゲル濾過クロマトグラフィー）を使用して測定することができる。最も一般的に用いられるものは、ゲル浸透クロマトグラフィー及びゲル濾過クロマトグラフィーである。分子量を決定するための他の方法には、数平均分子量を決定するための束一的な特性（例えば、凝固点降下、沸点上昇、若しくは浸透圧）の末端基分析若しくは測定、又は重量平均分子量を決定するための光散乱技術、超遠心分離、ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ、若しくは粘度計の使用が含まれる。ＰＥＧポリマーは、典型的には、多分散系であり（すなわち、ポリマーの数平均分子量と重量平均分子量が等しくない）、好ましくは約１．２未満、より好ましくは約１．１５未満、さらに好ましくは約１．１０未満、いっそうさらに好ましくは約１．０５未満、最も好ましくは約１．０３未満という低い多分散値を有する。
【0032】
「生理学的に切断可能な」又は「加水分解性」又は「分解性」結合は、生理学的条件下で水と反応する（すなわち、加水分解される）比較的不安定な結合である。結合が水中で加水分解される傾向は、所定の分子中の２つの原子を連結する結合の一般的なタイプのみに依存するのではなく、それらの原子に結合する置換基にも依存し得る。適切な加水分解的に不安定な又は弱い結合としては、カルボン酸エステル、リン酸エステル、無水物、アセタール、ケタール、アシルオキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステル、ペプチド、オリゴヌクレオチド、チオエステル、及びカーボネートを挙げることができるが、これらに限定されない。
【0033】
「遊離可能な」共有結合は、例えばインターロイキン－１５などの活性な部分と共有結合することができるポリエチレングリコールの文脈では、生理学的条件下で、例えばいずれかの好適な機構によって、臨床的に有用である速度で、活性な部分からポリエチレングリコールポリマーを放出又は脱離するものであり、例えば、限定はされないが、加水分解可能な結合及び酵素によって分解可能な結合が含まれる。
【0034】
「酵素的に分解可能な結合」は、１つ以上の酵素による分解に供される結合を意味する。
【0035】
「安定な」結合（ｌｉｎｋａｇｅ）又は結合（ｂｏｎｄ）は、水中で実質的に安定な、すなわち、長期間にわたり、認識できる任意の程度まで、生理学的条件下で加水分解を受けない化学結合を指す。加水分解的に安定な結合の例としては、一般に以下が挙げられるがこれらに限定されない：炭素－炭素結合（例えば、脂肪鎖における）、エーテル、アミド、アミンなど。一般に、安定な結合は、生理学的条件下で、１日当たり約１～２％未満の加水分解率を示すものである。代表的な化学結合の加水分解率は、最も標準的な化学テキストに見出すことができる。
【0036】
「実質的に」又は「本質的に」は、ほぼ全体的に又は完全に（例えば９５％以上の所定の量）を意味する。
【0037】
同様に、本明細書で使用される「約（ａｂｏｕｔ）」又は「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、所定の量の±５％以内を意味する。
【0038】
「任意選択の」又は「任意選択的」は、続いて記載される状況が生じ得るが、必ずしも生じる必要がないことを意味し、従って、この記載は、その状況が生じる場合と生じない場合とを含む。
【0039】
「薬学的に許容可能な賦形剤」又は「薬学的に許容可能な担体」は、本明細書に記載される組成物に含まれ、対象に有意な有害な毒性学的効果を生じ得ない成分を指す。
【0040】
表現「薬学的に有効な量」及び「薬理学的に有効な量」及び「治療的有効量」及び「生理学的に有効な量」は、本明細書で交換可能に使用され、血液流又は標的組織中で物質の所望のレベルを提供して、所望の生物学的応答又は薬物応答を引き起こすのに必要な、本明細書に提供される長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の量又は本明細書に提供されるモノクローナル抗体の量を指す。例えば、そのような応答は、対象において標的癌細胞を破壊し、及び／又は癌の進行を遅延若しくは抑止し、及び／又は患者のＮＫ細胞の数を増やすことができる。この用語は、標的細胞における特定の応答を誘導する用量にも適用される。正確な量は、例えば、処置される特定の状態、意図される患者集団、個々の患者の考慮事項、投与される治療組成物及び特定の組み合わせの成分及び物理学的特性などの多数の因子に依存し、当業者によって容易に決定され得る。
【0041】
用語「ＩＬ－１５部分」は、本明細書で使用する場合、ヒトＩＬ－１５活性を有するペプチド又はタンパク質部分を指す。さらに、用語「ＩＬ－１５部分」は、コンジュゲート形成前のＩＬ－１５部分とコンジュゲート形成後のＩＬ－１５部分残基の両方を包含する。以下でさらに詳細に説明する通り、当業者は、いずれかの所与の部分がＩＬ－１５活性を有するかどうかを決定することができる。配列番号１～３のいずれか１つに相当するアミノ酸配列を含むタンパク質が、ＩＬ－１５部分、並びにそれと実質的に相同のいずれかのタンパク質又はポリペプチドである。本明細書で使用する場合、用語「ＩＬ－１５部分」には、例えば部位特異的変異誘発によって計画的に又は突然変異を介して偶発的に改変されたペプチド及びタンパク質が含まれる。これらの用語には、１～６個の追加のグリコシル化部位を有する類似体、ペプチド又はタンパク質のカルボキシ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸を有する類似体（ここでは、追加のアミノ酸は、少なくとも１つのグリコシル化部位を含む）、及び少なくとも１つのグリコシル化部位を含むアミノ酸配列を有する類似体も含まれる。この用語には、自然に、組換えによって、及び合成によって生成されるＩＬ－１５部分が含まれる。ＩＬ－１５部分は、当技術分野で公知の任意の好適な方法によって生成することができる。実施形態では、ＩＬ－１５部分は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）発現系において、組換えによって生成される。本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬に対する言及は、その薬学的に許容し得る塩形態を包含することが意図される。
【0042】
本明細書で使用される「抗体」は、広義であると意図され、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属する糖タンパク質が含まれる。抗体には、抗原（例えば腫瘍抗原）と特異的に結合する、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（例えば、マウス、ヒト、ヒトに適合させた、ヒト化、及びキメラ）、抗体断片、及び単鎖抗体が含まれるものとする。断片、抗原結合（Ｆａｂ）領域は、重鎖及び軽鎖のそれぞれに由来する定常ドメインと少なくとも１つの可変ドメインを含む。本明細書に記載される抗体は、少なくとも、作用機序としての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する。
【0043】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、その抗体分子が、微量で存在する可能性がある天然に存在する変異を除いて本質的に同一である一次配列を有するような、実質的に均質な分子の集団から得られる、天然には存在しない抗体分子を指す。モノクローナル抗体は、単一の結合部位又は特定のエピトープに対して高度に特異的である。モノクローナル抗体は、単離された抗体の例である。モノクローナル抗体は、限定はされないが、ハイブリドーマ培養技術、組換え方法、及び遺伝子導入方法を含めた、当技術分野で公知の任意の手段によって産生することができる。
【0044】
抗体の標的結合配列を、数ある中でも特に、標的への親和性を改善するために、標的結合配列をヒト化するために、細胞培養における抗体の産生を改善するために、インビボでの抗体の免疫原性を低下させるために、多重特異性抗体を作製するために、変化させる又は改変することができることを理解するべきである。こうした変化された抗体は、本明細書で特に企図される。
【0045】
「単離された」抗体は、同定及び分離されている、及び／又はその天然の環境の構成要素から回収されているものである。
【0046】
本明細書で使用される「結合親和性」は、抗体の抗原結合部位とその結合相手（例えば、抗原）との間の相互作用の強度を指す。抗体の、その抗原に対する親和性は、一般に、親和定数（ＫＡ）、平衡状態での抗体－抗原複合体の量、又は平衡解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、限定はされないが、ＥＬＩＳＡ、ゲルシフト解析、プルダウンアッセイ、平衡透析、分析用超遠心分離、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、及び分光学的測定を含めた、当技術分野で公知の任意の方法によって測定することができる。
【0047】
本明細書で使用される用語「患者」又は「対象」は、本明細書に提供される化合物又は組成物の投与により予防又は処置され得る状態を患う又は該状態に罹り易い生物を指す。対象は、哺乳動物（例えば、ハツカネズミ、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）を含むがこれらに限定されず、好ましくはヒトである。
【0048】
用語「実質的に相同な」又は「実質的に同一な」とは、特定の対象配列、例えば突然変異配列が、１つ又は複数の置換、欠失、又は付加だけ基準配列と異なるが、その正味の効果としては、基準配列と対象配列との間に機能上の有害な相違は生じないことを意味する。本発明の目的上、９５パーセントを超える相同性（同一性）、所定の配列に対する等価な生物活性（必須ではないが等価な生物活性強度）、及び等価な発現特性を有する配列が、実質的に相同（同一）であると見なされる。相同性を決定する目的では、天然配列のトランケーションは無視する必要がある。本明細書で使用される例示的なＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号１に対して実質的に相同な配列を含む。配列番号２は配列番号１とほぼ同一であるが、配列番号２は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において翻訳の開始に必要なメチオニンを配列の最初に有する。
【0049】
用語「断片」は、タンパク質又はポリペプチド、例えばＩＬ－１５部分の一部分又は断片のアミノ酸配列を有し、タンパク質又はポリペプチド、例えばＩＬ－１５の生物活性、又は実質的に生物活性を有する任意のタンパク質又はポリペプチドを意味する。断片は、タンパク質分解により生成されるタンパク質又はポリペプチド、及び当技術分野で日常的な方法による化学合成によって生成されるタンパク質又はポリペプチドを含む。
【0050】
ペプチド中のアミノ酸残基は、以下のとおり略記される：フェニルアラニンはＰｈｅ又はＦであり；ロイシンはＬｅｕ又はＬであり；イソロイシンはＩｌｅ又はＩであり；メチオニンはＭｅｔ又はＭであり；バリンはＶａｌ又はＶであり；セリンはＳｅｒ又はＳであり；プロリンはＰｒｏ又はＰであり；スレオニンはＴｈｒ又はＴであり；アラニンはＡｌａ又はＡであり；チロシンはＴｙｒ又はＹであり；ヒスチジンはＨｉｓ又はＨであり；グルタミンはＧｌｎ又はＱであり；アスパラギンはＡｓｎ又はＮであり；リジンはＬｙｓ又はＫであり；アスパラギン酸はＡｓｐ又はＤであり；グルタミン酸はＧｌｕ又はＥであり；システインはＣｙｓ又はＣであり；トリプトファンはＴｒｐ又はＷであり；アルギニンはＡｒｇ又はＲであり；及びグリシンはＧｌｙ又はＧである。
【0051】
概要
本開示は、（数あるものの中でも特に）、（ａ）長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、（ｂ）腫瘍抗原に誘導される抗体（ここでは、腫瘍に誘導される抗体は、作用機序としての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を含む）とを含む、癌などの状態の治療に関連する組み合わせ、組成物、方法、及びキットを提供することを対象とする。こうした組成物及び方法は、理想的には、いくつかの好都合な予想外の特徴、例えば、以下のうちの少なくとも１つ、もしかするとそれ以上を有することとなる：腫瘍クリアランスの増大；患者の生存の増大及び／又は患者の長期の生存；組み合わせで投与された場合の、単独で投与された一方の活性な薬剤と比較した場合の、特に標的組織区画内での、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗体の一方又は両方の活性の増大；ＮＫ細胞の脱顆粒の増強；ＮＫ細胞増殖の増大；ＮＫ細胞生存能の増大；Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の増大、及び／又はＴ細胞、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞生存能の増大。驚いたことに、本出願人等は、以下でより詳細に説明される且つ裏付けとなる実施例で例示される好都合な特性の唯一無二の組み合わせを有する、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、腫瘍抗原に誘導される少なくとも１種の抗体（モノクローナル抗体など）との組み合わせに到達した。
本開示は、（数あるものの中でも特に）、（ａ）長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、（ｂ）腫瘍抗原に誘導される抗体（ここでは、腫瘍に誘導される抗体は、作用機序としての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を含む）とを含む、癌などの状態の治療に関連する組み合わせ、組成物、方法、及びキットを提供することを対象とする。こうした組成物及び方法は、理想的には、いくつかの好都合な予想外の特徴、例えば、以下のうちの少なくとも１つ、もしかするとそれ以上を有することとなる：腫瘍クリアランスの増大；患者の生存の増大及び／又は患者の長期の生存；組み合わせで投与された場合の、単独で投与された一方の活性な薬剤と比較した場合の、特に標的組織区画内での、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗体の一方又は両方の活性の増大；ＮＫ細胞の脱顆粒の増強；ＮＫ細胞増殖の増大；ＮＫ細胞生存能の増大；Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞増殖の増大、及び／又はＴ細胞、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞生存能の増大。驚いたことに、本出願人等は、以下でより詳細に説明される且つ裏付けとなる実施例で例示される好都合な特性の唯一無二の組み合わせを有する、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、腫瘍抗原に誘導される少なくとも１種の抗体（モノクローナル抗体など）との組み合わせに到達した。
【0052】
本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬と、ＡＤＣＣによって腫瘍致死を媒介する標的化抗体との組み合わせは、増強された免疫治療効果を呈することが発見されている。ＡＤＣＣは、ある種の腫瘍標的化抗体による腫瘍消失（ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）における重要な機構であり、ここでは、ＮＫ細胞上の受容体が、腫瘍細胞結合抗体を認識する。ＮＫ細胞受容体の抗体への再結合は、細胞傷害性顆粒及び／又はサイトカインの放出を誘発して、腫瘍細胞を殺す。本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、細胞傷害性及び／又は他の機能的活性化が増したＮＫ細胞を増加させることによって、ＡＤＣＣ作用機序を用いる腫瘍標的抗体療法の有効性を増大させるのに有効であることが発見されている。
【0053】
治療的組み合わせ、組成物、及び使用方法
第１の態様では、癌又は腫瘍に悩む対象を治療するための方法が、本明細書に記載される。この方法は、腫瘍抗原と特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分と、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とを、一緒に又は別々に投与することを含む。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬がＮＫ細胞の増殖を誘発する、及びＮＫ細胞の腫瘍細胞致死能力を活性化する能力に起因して、組み合わせ治療手法が開発された。この組み合わせ治療手法では、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）インターロイキン－１５、モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５、又はモノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－ＩＬ１５とも称される）などの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、腫瘍細胞を認識する治療用モノクローナル抗体と組み合わせられ、それによって、細胞致死活性化ＮＫ細胞の数の増加がもたらされ、このＮＫ細胞はまた、抗体分子に効率的に結合することができ、次いで、抗体によって腫瘍細胞に誘導されることができ、相乗的な腫瘍細胞致死の増進が促進される。例えば、随伴する本明細書の実施例に記載した結果を参照のこと。
第１の態様では、癌又は腫瘍に悩む対象を治療するための方法が、本明細書に記載される。この方法は、腫瘍抗原と特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分と、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とを、一緒に又は別々に投与することを含む。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬がＮＫ細胞の増殖を誘発する、及びＮＫ細胞の腫瘍細胞致死能力を活性化する能力に起因して、組み合わせ治療手法が開発された。この組み合わせ治療手法では、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）インターロイキン－１５、モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５、又はモノ－ｍＰＥＧ－ＳＢＡ－ＩＬ１５とも称される）などの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、腫瘍細胞を認識する治療用モノクローナル抗体と組み合わせられ、それによって、細胞致死活性化ＮＫ細胞の数の増加がもたらされ、このＮＫ細胞はまた、抗体分子に効率的に結合することができ、次いで、抗体によって腫瘍細胞に誘導されることができ、相乗的な腫瘍細胞致死の増進が促進される。例えば、随伴する本明細書の実施例に記載した結果を参照のこと。
【0054】
明確性の目的で、投与すること（ここでは、用語「投与すること」は、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は腫瘍に誘導される抗体の送達を指す場合に使用される）の順序に関して、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と腫瘍に誘導される抗体は、同時に又は連続的に、また、いかなる順序でも投与することができる。さらに、組み合わせのいずれかの構成成分の治療は、単一のサイクルの治療法を含むこともできるし、複数のサイクルを含むこともできる。すなわち、長時間作用型ＩＬ－１５作動薬の投与及び腫瘍に誘導される抗体の投与の後に、追加のラウンドの治療法は、腫瘍に誘導される抗体の投与と組み合わせた長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与、腫瘍に誘導される抗体のさらなる投与を伴わない長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与、若しくは長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬のさらなる投与を伴わない腫瘍に誘導される抗体の投与、又は上述の投与のあらゆる組み合わせを含むことができる。
【0055】
第２の態様では、腫瘍抗原と特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分と、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とを含む組成物（単数）（又は組成物（複数））が、本明細書に記載される。
【0056】
一般に、本明細書に記載される抗体は、以下では癌抗原又は腫瘍抗原と称される、癌又は腫瘍細胞の細胞表面上に発現されるタンパク質に誘導される。いくつかの癌又は腫瘍抗原が、当技術分野で公知である。非限定的な例としては、リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子が挙げられる。所与の化合物が、本明細書に記載される抗原又は標的のいずれかに対する抗体として作用することができるかどうかを決定するためのアッセイは、当業者によって、慣例的な実験を介して決定することができる。
【0057】
いくつかの実施形態では、抗体は、典型的にはヒト血液循環に見られる、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）型の抗体である。
【0058】
いくつかの実施形態では、抗体は、抗ＣＤ１６、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、又は抗ＣＤ３８抗体、すなわち、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３８、又はＣＤ５２と特異的に結合する抗体である。
【0059】
ヒトＣＤ１９抗原は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーに属する９５ｋＤａ糖タンパク質である。ＣＤ１９は、正常及び腫瘍性Ｂ細胞に対する、また濾胞樹状細胞に対するバイオマーカーである。ＣＤ１９は、プレＢ細胞発生の初期段階から、最終分化まで発現され、Ｂリンパ球の発生及び機能を調節する。ＣＤ１９の発現は、非ホジキンリンパ腫などのＢ細胞リンパ腫を含めた大抵のＢ細胞腫瘍上で高度に保存される。ＣＤ１９はまた、Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）を含めた大抵の型の白血病において発現される。Ｂ細胞悪性腫瘍（リンパ腫及び白血病）の大部分は、通常～高いレベルでＣＤ１９を発現する。実施形態では、抗体は、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体である。本明細書の方法及び組成物に使用するために企図されるいくつかの例示的な抗ＣＤ１９抗体には、限定はされないが、例えば、抗Ｂ４－ｂＲ、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞誘導（ｂｉ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｉｎｇ）抗体）、ＭＥＤＩ－５５１（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，ＬＬＣ）、ＭＯＲ－２０８（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ ＡＧ）、ブリナツモマブ、二重特異性抗ＣＤ１９／ＣＤ３ ＢｉＴＥ（登録商標）抗体（Ｂｌｉｎｃｙｔｏ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、コルツキシマブ・ラブタンシン（ｃｏｌｔｕｘｉｍａｂ ｒａｖｔａｎｓｉｎｅ）（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ Ｉｎｃ．及びＳａｎｏｆｉ）、デニンツズマブ・マホドチン（ｄｅｎｉｎｔｕｚｕｍａｂ ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、タプリツモマブ・パプトクス（ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ ｐａｐｔｏｘ）（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ＸｍＡｂ ５８７１（Ａｍｇｅｎ及びＸｅｎｃｏｒ Ｉｎｃ．）、ＭＤＸ－１３４２（Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＡＦＭ１１（Ａｆｆｉｍｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、及び米国特許第８，６９１，９５２号明細書に記載されている抗ＣＤ１９抗体（ｈｕＢ４、ＤＩ Ｂ４、Ｍｅｒｃｋ）が含まれる。１つ以上の実施形態では、限定はされないが、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）を含めたＢ細胞悪性腫瘍の治療において、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＣＤ１９抗体との組み合わせが使用される。
【0060】
ＣＤ２０は、ほとんどすべての正常及び悪性Ｂ細胞の表面上に発現される、およそ３３～３７ｋＤの非グリコシル化リン酸化タンパク質である。ＣＤ２０ ｍＡｂは、エフェクター機構の活性化を含むＦａｂ媒介性の効果を介して抗腫瘍効果を発揮することができる（Ｂｏｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２（６）：６７６－６９０，２０１２）。１つ以上の実施形態では、本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と共に投与される抗体は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。本明細書の方法及び組成物に使用するために企図されるいくつかの例示的な抗ＣＤ２０抗体には、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）、Ｇｅｎｍａｂ ＡＣ）、オクレリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ベルツズマブ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、ＡＭＥ－１３３Ｖ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＰＲＯ１３１９２１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＧＡ１０１（Ｇｌｙｃａｒｔ／Ｒｏｃｈｅ）、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ）、及びオビヌツズマブ（Ｇａｚｙｖａ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が含まれる。実施形態では、本明細書に記載されるものなどの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＣＤ２０抗体との組み合わせが、限定はされないが、非ホジキンリンパ腫、ＣＬＬ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、及び濾胞性リンパ腫を含めたＢ細胞悪性腫瘍の治療に使用される。
【0061】
ＣＤ３８は、受容体機能と酵素機能を有する４５ｋＤａのタイプＩＩ膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８は、一般に、様々な血液及び固形組織上で低レベルで発現されるが、形質細胞によって高レベルで発現される（多発性骨髄腫（ＭＭ）などの形質細胞腫において、特に広く高い発現レベルを示す）。ＣＤ３８はまた、血液腫瘍の一部においても発現される。いくつかのさらなる実施形態では、本発明の組み合わせは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＣＤ３８モノクローナル抗体との投与を含む。本明細書で提供される方法及び組成物に使用するために企図されるいくつかの例示的な抗ＣＤ３８抗体には、ダラツムマブ（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、イサツキシマブ（ＳＡＲ６５０９８４、Ｓａｎｏｆｉ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、及びＭＯＲ２０２（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）が含まれる。いくつかのさらなる実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＣＤ３８抗体との組み合わせが、多発性骨髄腫、ＣＤ３８＋非ホジキンリンパ腫、ＣＤＣＬＬ、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、原発性全身性アミロイドーシス、マントル細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、ＮＫ細胞白血病、ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、及び形質細胞性白血病から選択される状態の治療に使用される。
【0062】
いくつかの追加の実施形態では、がん免疫学に基づく治療的組み合わせは、本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、限定はされないが、ＳＬＡＭＦ７、ＥｐＣＡＭ、ｇｐＡ３、又は葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）から選択される糖タンパク質に誘導される抗体とを含む。実施形態では、抗体は、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＥｐＣＡＭ抗体、抗ｇｐＡ３抗体、又は抗ＦＢＰ抗体である。
【0063】
シグナル伝達リンパ球活性化分子ファミリーメンバー（Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｆａｍｉｌｙ Ｍｅｍｂｅｒ）７（ＳＬＡＭＦ７、以前はＣＳ１、ＣＤ３１９、ＣＲＡＣＣとして公知であった）は、シグナル伝達リンパ球活性化分子ファミリーのメンバーである。ＳＬＡＭＦ７は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、ＮＫ Ｔ細胞、及び単球などの免疫細胞上で、並びに多発性骨髄腫細胞上で発現される。本発明の組み合わせの実施形態では、抗体は、抗ＳＬＡＭＦ７モノクローナル抗体である。本明細書の方法及び組成物に使用するために企図される、ある例示的な抗ＳＬＡＭＦ７抗体は、エロツズマブ（Ｅｍｐｌｉｃｉｔｙ（商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＳＬＡＭＦ７抗体との組み合わせが、多発性骨髄腫の治療に使用される。
【0064】
上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）は、胃腸起源の腫瘍及び泌尿生殖器のいくつかの癌を含めたいくつかの上皮癌細胞によって発現される膜貫通糖タンパク質である。ＥｐＣＡＭは、例えば、ヒト結腸癌、転移性乳癌、胆嚢癌、卵巣癌、及び膵癌において発現される。本明細書で提供される治療的組み合わせの実施形態では、抗体は、抗ＥｐＣＡＭモノクローナル抗体である。本明細書の方法及び組成物に使用するために企図されるいくつかの例示的な抗ＥｐＣＡＭ抗体には、エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ）、ＩＮＧ－１（Ｘｏｍａ）、３６２２Ｗ９４（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ）、及びアデカツムマブ（Ａｍｇｅｎ）が含まれる。１つ以上の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＥｐＣＡＭ抗体との組み合わせが、ヒト結腸癌、転移性乳癌、胆嚢癌、卵巣癌、腺癌、及び膵癌の治療に使用される。
【0065】
いくつかのさらなる実施形態では、抗体は、限定はされないが、例えば、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）から選択される成長因子に誘導される。いくつかの実施形態では、抗体は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ抗体、及び抗ＥＧＦＲ抗体から選択される。
【0066】
血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、２７ｋＤａの血管新生シグナル伝達タンパク質である。ＶＥＧＦは、膵癌、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、及び肺癌を含めた大抵の型の非消化器癌及び消化器癌において発現される。本明細書の方法及び組成物に使用するために企図されるいくつかの例示的な抗ＶＥＧＦ抗体には、ベバシズマブ（Ａｖａｓａｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、ラニビズマブ、２Ｃ３及びｒ８４（ＡＴ００１、Ａｆｆｉｔｅｃｈ ＡＳ）、及びＶＥＧＦ－Ｔｒａｐ（アフリベルセプト、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）が含まれる。１つ以上の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＶＥＧＦ抗体との組み合わせが、例えば、膵癌、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、転移性腎細胞癌、及び非小細胞肺癌などの癌の治療に使用される。
【0067】
血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）は、血管新生を誘発する、細胞成長及び転移を増大させることなどができる、受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。ＶＥＧＦＲファミリーは、３つの主なサブタイプ：ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、及びＶＥＧＦＲ－３を有する。本明細書の方法及び組成物に使用するために企図されるいくつかの例示的な抗ＶＥＧＦＲ抗体には、ＭＦ１／ＩＭＣ－１８Ｆ１（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）；ＩＭＣ－１１２１Ｂ ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、及びＤＣ１０１／ＩＭＣ－１Ｃ１１が含まれる。いくつかのさらなる実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＶＥＧＦＲ抗体との組み合わせが、例えば乳癌又は非小細胞肺癌などの、癌の治療に使用される。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ抗体は、抗ＶＥＧＦ抗体について上で列挙した適応症のために使用される。
【0068】
上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、乳、肺、食道、転移性結腸直腸、及び頭頸部を含めたいくつかの型の癌において発現される、受容体型チロシンキナーゼの大きなファミリーである。本明細書の方法及び組成物に使用するために企図されるいくつかの例示的な抗ＥＧＦＲ抗体には、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）、Ｌｉｌｌｙ ＵＳＡ）及びパニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）が含まれる。１つ以上の特定の実施形態では、抗体は、抗ヒト上皮成長因子受容体２抗体（抗ＨＥＲ２）である。本明細書の方法及び組成物に使用するために企図されるいくつかの例示的な抗ＨＥＲ２抗体には、ヒト化モノクローナル抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）及び／又はペルツズマブ（Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）が含まれる。いくつかの関連する実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＥＧＦＲ抗体との組み合わせが、乳（例えば転移性乳癌）、肺、食道、転移性結腸直腸、及び頭頸部癌などの癌の治療に使用される。
【0069】
本明細書で提供される方法及び組み合わせに使用するために企図されるものはまた、抗ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原、ＣＤ２６９とも称される）抗体である。ＢＣＭＡは、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。ＢＣＭＡはＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）と結合する。非悪性細胞の中では、ＢＣＭＡは、大抵、形質細胞及び一部の成熟Ｂ細胞において発現されることが報告されている。ＢＣＭＡ ＲＮＡは、多発性骨髄腫細胞において検出されており、ＢＣＭＡタンパク質は、多発性骨髄腫患者からの形質細胞の表面上で検出されている。ＢＣＭＡは、様々なヒト癌によって発現又は過剰発現される。ＢＣＭＡを発現又は過剰発現する癌の例としては、限定はされないが、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）リンパ腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）リンパ腫、ホジキンリンパ腫、及び多発性骨髄腫が含まれる。例示的な抗ＢＣＭＡ抗体は、例えば、米国特許出願公開第２０１２００８２６６１号明細書、同第２０１７００５１０６８号明細書、及び同第２０１８０３１８４３５号明細書（その内容全体を参照によって本明細書に組み込む）に記載されている。例示的な抗ＢＣＭＡ抗体には、Ｐｉｌｌａｒｉｓｅｔｔｉ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１６，１２８：２１１６に記載されるＢＣＭＡ×ＸＤ３、及び抗ＢＣＭＡ抗体薬物コンジュゲート、ＧＳＫ２８５７９１６のヒト化抗体部分が含まれる。
【0070】
いくつかの実施形態では、抗体は、２種以上の特異的な抗原、例えば二重特異性抗体と同時に結合することができる。
【0071】
いくつかの実施形態では、抗体は、上に記載した抗体のいずれかとの結合について交差競合するものである。上に言及した抗体のいずれかと交差競合する抗体は、類似の又は同じ機能特性を有することが期待される。
【0072】
抗体の抗原結合作用が、全長抗体の断片によって実施され得ることが当技術分野で周知であるので、いくつかの実施形態では、本明細書の使用のための抗体は、上に記載された抗体のいずれかの抗原結合部分である。
【0073】
次に見るべきことは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体（ＩＬ－１５Ｒ）作動薬、一般に、好ましい長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又はその薬学的に許容し得る塩形態が、アミド結合を介してＩＬ－１５アミノ基に安定に共有結合される単一の直鎖ポリアルキレンオキシド（例えばポリエチレングリコール又は「ＰＥＧ」）部分を含むことである。ＰＥＧ部分と、ＩＬ－１５アミノ基への安定なアミド結合との間に介在するのは、２～５個の炭素原子を有する（すなわち、ｍは２、３、４、又は５である）直鎖の非置換アルキレン基（～ＣＨ２～）ｍである。１つ以上の好ましい実施形態では、ｍは３であり、その結果、安定なアミド結合はブタンアミドとなる。
【0074】
１つ以上の好ましい実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－６０ｋＤインターロイキン－１５、より好ましくは（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－４０ｋＤインターロイキン－１５、さらにいっそう好ましくは（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５である。１つ以上の好ましい実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－６０ｋＤインターロイキン－１５、より好ましくはモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－４０ｋＤインターロイキン－１５、さらにいっそう好ましくはモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５である。ある好ましい実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５である。
【0075】
式（Ｉ）によって包含される構造を有する本明細書に記載されるＩＬ－１５Ｒ作動薬、特に、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５は、ＩＬ－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒα）サブユニット、並びにベータ（β）及びガンマ（γ）サブユニットに対する結合親和性を保持する。本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、ＩＬ－２／ＩＬ－１５Ｒβγ複合体に対して、同じ（シス）又は隣接する細胞（トランス）上となる。本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬によるＩＬ－２／ＩＬ－１５Ｒβγ複合体の結合は、Ｔ細胞増殖、生存、及び／又は活性を増大させるヤヌスキナーゼ／シグナル伝達性転写因子－５（ＪＡＫ－ＳＴＡＴ５）経路を誘発することができる。長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、さらに、ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖及び活性化を有意に増強する。長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、好ましくは、相当する改変されていないＩＬ－１５Ｒ作動薬と比較して低下されたクリアランスを有する。理論によって制限されないが、ＰＥＧの付着が、ＩＬ－１５部分の流体力学的体積を大きくして、コンジュゲート化されていないｒｈＩＬ－１５と比較して長い有効な半減期、低い最大ピーク濃度（Ｃｍａｘ）、及び／又は低下されたクリアランスをもたらすと推論される。本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、持続されるＩＬ－１５生物活性を提供し、毎日の投薬の必要性がない。
【0076】
ＩＬ－１５部分を考察する場合、用語「ＩＬ－１５部分」は、コンジュゲーション前のＩＬ－１５部分、及びＰＥＧなどの非ペプチド性の水溶性ポリマーへの結合後のＩＬ－１５部分を指す。以後、ＰＥＧを非ペプチド性の水溶性ポリマーとして以下に特に参照するが、本開示は一般に、非ペプチド性の水溶性ポリマー又はポリ（アルキレングリコール）に関連することが理解されるであろう。しかしながら、元のＩＬ－１５部分がポリエチレングリコール部分に結合された場合、ＩＬ－１５部分は、ポリマーに対する結合に関連した１つ以上の共有結合の存在に起因して、僅かに変更されていることが理解されるであろう。
【0077】
ＩＬ－１５部分は、非組換え方法からも、及び組換え方法からも得ることができ、本開示はこの点について限定されない。加えて、ＩＬ－１５部分は、ヒト供給源にも、動物供給源（昆虫を含む）にも、菌類供給源（イーストを含む）にも及び植物供給源にも由来し得る。
【0078】
代替的に、ＩＬ－１５部分は、例えばＧｒａｂｓｔｅｉｎらによって記載される手順に従い得ることができる。（Ｇｒａｂｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：９６５－９６８）。ＩＬ－１５部分は、例えば、Ｉｍｍｕｎｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎへの欧州特許第０７７２６２４ Ｂ２号明細書に記載されているものなどの組換え方法を用いて調製することもできる。ＩＬ－１５部分は、例えば、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ ＵＳＡ Ｉｎｃ．（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ ＮＪ）及びＰｅｐｒｏｔｅｃｈ（Ｒｏｃｋｙｈｉｌｌ，ＮＪ）から市販品を購入することができる。
【0079】
ＩＬ－１５部分は、細菌（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１（３）：２９５－３１１を参照）、哺乳動物（例えば、Ｋｒｏｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｇｅｎｅ １２１：２９５－３０４を参照）、酵母（例えば、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３２８（１）：１２１－１２９を参照）、及び植物（例えば、Ｍｏｒ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７５（３）：２５９－２６６を参照）の発現系で発現させることができる。発現は、外因性発現によっても（宿主細胞が天然で所望の遺伝コードを含む場合）又は内因性発現によっても起こり得る。
【0080】
ＩＬ－１５部分の調製及び／又は精製のさらなる方法は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願／米国特許出願公開第２０１８／０３２８１７号明細書に記載されている。
【0081】
ＩＬ－１５活性を有するタンパク質の発現に用いられる系に応じて、ＩＬ－１５部分はグリコシル化されていなくても、又はグリコシル化されていてもよく、いずれも使用することができる。１つ又は複数の実施形態では、ＩＬ－１５部分はグリコシル化されていない。
【0082】
ＩＬ－１５部分は、有利には、１つ又は複数のアミノ酸残基、例えば、リジン、システイン及び／又はアルギニンを含む及び／又は置換するように修飾することができ、それによりポリマーがそのアミノ酸の側鎖内の原子と結合し易くなる。ＩＬ－１５部分の置換の例は、米国特許第６，１７７，０７９号明細書に記載される。加えて、ＩＬ－１５部分は、天然に存在しないアミノ酸残基を含むように修飾することができる。アミノ酸残基及び天然に存在しないアミノ酸残基を付加する方法は、当業者に公知である。Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４ｔｈ Ｅｄ．（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２），ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｉｓｔｓ（ｅｄｓ．Ｍｉｃｈａｅｌ Ｒ．Ｂａｒｎｅｓ ａｎｄ Ｉａｎ Ｃ Ｇｒａｙ），２００３ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｌｔｄ，Ｃｈａｐｔｅｒ １４，Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ，Ｂｅｔｔｓ，Ｍ．Ｊ．，ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｒ．Ｂ．を参照されたい。
【0083】
ＩＬ－１５部分の追加の好適な改変及びこうした改変のための方法は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願／米国特許出願公開第２０１８／０３２８１７号明細書に記載されている。例示的な改変は、官能基の結合（官能基を含むアミノ酸残基の付加によるものは除く）を含む。例えば、チオール基、Ｎ末端のα炭素、１つ又は複数の炭水化物部分、アルデヒド基又はケトン基を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－１５部分は、チオール基、Ｎ末端のα炭素、炭水化物、アルデヒド基又はケトン基のうちの１つ又は複数を含むようには修飾されないことが好ましい。
【0084】
例示的ＩＬ－１５部分は、本明細書、文献、並びに例えば米国特許出願公開第２００６／０１０４９４５号明細書、Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（４）：２３１２－２３１８、Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２（１１），ｅ２６４４２：１－３、及びＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３２８１７号明細書に記載されその全体が参照により本明細書に組み込まれる。好ましいＩＬ－１５部分には、配列番号１～３からなる群から選択される配列、及びそれと実質的に相同の配列を含むアミノ酸配列を有するものが含まれる（ここで、配列番号２及び３、及びそれらと実質的に相同の配列が本明細書に提供されるＩＬ－１５部分のインビトロ活性基準を満たさない場合であっても、本発明の目的上、それらの配列もまた「ＩＬ－１５部分」であると理解されることは理解されるであろう）。好ましいＩＬ－１５部分は、配列番号１に対応するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５部分は、配列番号１～３のいずれか１つと少なくとも約８５％又は少なくとも約９０％同一性を有する機能的相同体である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５部分は、配列番号１～３のいずれか１つと少なくとも約９５％、９８％又は９９％同一性を有する機能的相同体である。
【0085】
場合によっては、ＩＬ－１５部分は、対応するペプチドの単一の発現が個別の単位として体系付けられる「単量体」形態であり得る。他の場合には、ＩＬ－１５部分は、２つの単量体形態のタンパク質が互いに会合している「二量体」の形態（例えば、組換えＩＬ－１５の二量体）であり得る。
【0086】
加えて、前駆体形態のＩＬ－１５をＩＬ－１５部分として使用することができる。例示的な前駆体形態のＩＬ－１５は配列番号３の配列を有する。
【0087】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、米国特許出願公開第２０１８／０３６０９７７号明細書に記載されているＰＥＧ化されたＩＬ－１５分子、特に、その中に記載されているマルチアームＰＥＧ ＩＬ－１５である。
【0088】
いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５部分は、米国特許第１０，３５０，２７０号明細書に記載されているＩＬ－１５変異タンパク質又は他のＩＬ－１５関連分子である。
【0089】
前述の配列のいずれかのトランケート型、ハイブリッド変異体、及びペプチド模倣物もまた、ＩＬ－１５部分として働き得る。少なくともある程度のＩＬ－１５活性を維持する前述のいずれかの生物学的に活性な断片、欠失変異体、置換変異体又は付加変異体もまた、ＩＬ－１５部分として働き得る。
【0090】
所与のペプチド、タンパク質部分又はコンジュゲートについて、当該のペプチド、タンパク質部分又はコンジュゲートがＩＬ－１５活性を有するかどうかを決定することが可能である。インビトロＩＬ－１５活性を決定するための様々な方法が当該技術分野において記載されている。例示的手法はｐＳＴＡＴアッセイに基づく。簡潔に言えば、ＩＬ－１５依存性ＣＴＬＬ－２細胞がＩＬ－１５活性を有する被験物質に曝露された場合、結果として、定量的に計測することのできるチロシン残基６９４（Ｔｙｒ６９４）におけるＳＴＡＴ５のリン酸化を含むシグナル伝達カスケードが惹起される。アッセイプロトコル及びキットは公知であり、例えば、ＭＳＤ Ｐｈｏｓｐｈｏ（Ｔｙｒ６９４）／Ｔｏｔａｌ ＳＴＡＴａ，ｂ全細胞ライセートキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，ＬＬＣ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）が含まれる；例えばこの手法を用いて、５分又は１０分の少なくとも一方の時点で約３００ｎｇ／ｍＬ以下（より好ましくは約１５０ｎｇ／ｍＬ以下）のｐＳＴＡＴ５ ＥＣ５０値を呈する候補ＩＬ－１５部分が、本開示に関連した「ＩＬ－１５部分」であると見なされる。しかしながら、使用されるＩＬ－１５部分はより強力である（例えば、５分又は１０分の少なくとも一方の時点で１５０ｎｇ／ｍＬ未満、例えば５分又は１０分の少なくとも一方の時点で約１ｎｇ／ｍＬ未満、さらにより好ましくは０．５ｎｇ／ｍＬ未満のｐＳＴＡＴ５ ＥＣ５０値を有する）ことが好ましい。
【0091】
電位測定法、分光測定法、クロマトグラフィー法、及び放射測定法を含めた当該技術分野において公知の他の方法もまた、ＩＬ－１５機能の評価に用いることができる。一つのかかる別のタイプのアッセイについては、例えば、Ｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（１２）：１１８７－１１９５を参照のこと。
【0092】
ＩＬ－１５部分の活性の測定に関連して使用されるアッセイは、本明細書に記載される長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の活性の測定にも使用することができる。例えば、本明細書に提供される支持実施例を参照されたい。
【0093】
化合物は、対象への投与後、作動薬が、ＩＬ－１５の投与の場合よりも長い時間、インビボでのＩＬ－１５受容体活性化作用を示す限り、本開示による長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬と見なされる。例えば化合物を放射性標識し、化合物をインビボで投与し、そのクリアランスを決定することを含む従来の手法を用いて、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬として提案される化合物が「長時間作用型」である（すなわち、同じインビボ系に投与されたＩＬ－１５よりも長いクリアランスを有する）か否かを評価することができる。本発明の目的上、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の長時間作用の性質は、フローサイトメトリーを用いて、評価されるべき作動薬をマウスに投与後の様々な時点で、リンパ球におけるＳＴＡＴ５リン酸化を測定して決定され得、又は典型的には決定される。参照として、シグナルはＩＬ－１５によってほぼ２４時間で喪失するが、長時間作用型ＩＬ－１５作動薬の場合は、ある期間を超えて持続性である。
【0094】
好ましい長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、一般に、アミド結合を介してＩＬ－１５アミノ基に安定して共有結合した単一直鎖ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）部分を含むであろう。ＰＥＧ部分と、ＩＬ－１５アミノ基に対する安定なアミド結合との間に、２～５個の炭素原子を有する直鎖非置換アルキレン基（～ＣＨ２～）ｍ（すなわち、ｍ＝２、３、４、又は５）が介在する。
【0095】
例えば、いくつかの実施形態では、非置換アルキレン基は（～ＣＨ２～）２であり；又は、いくつかの追加の実施形態では、非置換アルキレン基は（～ＣＨ２～）３であり；いくつかのなおさらなる実施形態では、非置換アルキレン基は（～ＣＨ２～）４であり；いくつかのなおさらなる実施形態では、非置換アルキレン基は（～ＣＨ２～）５である。
【0096】
例えば、いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、以下の構造を有する：
式中、ＩＬ－１５は、インターロイキン－１５部分であり、ｎは、約１５０～約３，０００の整数であり；ｍは、２～５の整数（例えば、２、３、４、又は５）であり、ｎ’は１である。式Ｉ（及び本明細書に提供される類似の式）において、構造中の～ＮＨ～は、ＩＬ－１５部分のアミノ基を表す。式（Ｉ）は、以下のように示すこともでき、
ここで括弧は末端ＰＥＧメトキシ基を反映するように移動され、２つの式は、交換可能に使用され得る。例示的な化合物の例としては、式（Ｉ）により包含される以下が挙げられる：
【化3】
式中、ＩＬ－１５は、インターロイキン－１５部分であり、ｎは、約１５０～約３，０００の整数であり；ｍは、２～５の整数（例えば、２、３、４、又は５）であり、ｎ’は１である。式Ｉ（及び本明細書に提供される類似の式）において、構造中の～ＮＨ～は、ＩＬ－１５部分のアミノ基を表す。式（Ｉ）は、以下のように示すこともでき、
【化4】
ここで括弧は末端ＰＥＧメトキシ基を反映するように移動され、２つの式は、交換可能に使用され得る。例示的な化合物の例としては、式（Ｉ）により包含される以下が挙げられる：
【化5】
【0097】
いくつかの好ましい実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）に対応する。いくつかの特に好ましい実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、式（Ｉｂ）に対応する。
【0098】
本明細書に記載される構造及び式に関連したいくつかのさらなる実施形態では、ｎは、約２００～約２０００、又は約４００～約１３００、又は約４５０～約１２００の整数である。すなわち、いくつかの実施形態では、ｎは、約２００～約２０００の整数である。いくつかのなおさらなる実施形態では、ｎは、約４００～約１３００の整数である。いくつかのなおさらなる実施形態では、ｎは、約４５０～約１２００の整数である。
【0099】
前述のｎ値の範囲のいずれかに対応する分子量を有するＰＥＧが一般に好ましい。
【0100】
１つ以上の追加の実施形態では、ｎは、約１０，０００ダルトン（ここでｎは約２２７である）、又は約１５，０００ダルトン（ここでｎは約３４０である）、又は約２０，０００ダルトン（ここでｎは約４５４である）、又は約２５，０００ダルトン（ここでｎは約５６８である）、又は約３０，０００ダルトン（ここでｎは約６８１である）、又は約４０，０００ダルトン（ここでｎは約９０７～９０９、例えば約９０９である）、又は約５０，０００ダルトン（ここでｎは約１１３６である）又はさらには約６０，０００ダルトン（ここでｎは約１３６４である）以上からなる群から選択される重量平均分子量を有するポリエチレングリコールポリマーに対応する値を有する整数である。
【0101】
化合物のポリエチレングリコール部分に関するさらなる例示的な重量平均分子量は、前述に加えて、約１１，０００ダルトン、約１２，０００ダルトン、約１３，０００ダルトン、約１４，０００ダルトン、約２２，５００ダルトン、約３５，０００ダルトン、約４０，０００ダルトン、約４５，０００ダルトン、約５５，０００ダルトン、約６５，０００ダルトン、約７０，０００ダルトン、及び約７５，０００ダルトンを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５コンジュゲートのポリエチレングリコール部分の重量平均分子量は、約３７，０００～約４５，０００ダルトンである。
【0102】
いくつかの好ましい実施形態では、ＩＬ－１５コンジュゲートのポリエチレングリコールポリマー部分の重量平均分子量は、約４０，０００ダルトンである。それに対するあらゆる部分式（ｓｕｂ－ｆｏｒｍｕｌａ）を含めた本明細書に記載される式（Ｉ）及び（ＩＩ）のそれぞれに関して、４０，０００ダルトンのＰＥＧの重量平均分子量が好ましい。
【0103】
ＰＥＧ部分は、好ましくは、式（Ｉ）において上記に示すように、メトキシ基で末端キャップされるが、ＰＥＧ部分は、その末端を任意の低級Ｃ１－６アルコキシ基でキャップされてもよく、又はヒドロキシル基若しくは他の好適な末端キャップ基で終結してもよい。
【0104】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、集合的に考えた場合、下記の式：
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉ）に関して提供したとおりである）により包含される、約２０モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。すなわち、例えば長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬化合物の組成物中に含まれる場合、例えば式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、及び（Ｉｄ）のいずれかの、例えば式（Ｉｂ）の、例えば、インターロイキン－１５部分に共有結合した異なる数のＰＥＧ部分を有する（例えば、２量体、３量体など）が、同じ化学式の、モノＰＥＧ化された長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、多くとも約２０モルパーセントの式（ＩＩ）の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含む。
【化6】
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉ）に関して提供したとおりである）により包含される、約２０モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。すなわち、例えば長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬化合物の組成物中に含まれる場合、例えば式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、及び（Ｉｄ）のいずれかの、例えば式（Ｉｂ）の、例えば、インターロイキン－１５部分に共有結合した異なる数のＰＥＧ部分を有する（例えば、２量体、３量体など）が、同じ化学式の、モノＰＥＧ化された長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、多くとも約２０モルパーセントの式（ＩＩ）の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含む。
【0105】
いくつかの追加の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えた場合、下記の式：
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉ）に関して提供したとおりである。すなわち、そのような組成物の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬成分の観点から、組成物に含まれる約１５ｍｏｌ％以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、式（ＩＩ）のものである。いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、約０．１～２０ｍｏｌ％以下の式（ＩＩ）の化合物を含む。実施形態では、組成物は、約０．１～１５、０．１～１０、０．１～５、０．１～１、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～２０、１０～１５、又は１５～２０ｍｏｌ％以下の式（ＩＩ）の化合物を含む）により包含される、約１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。好ましい実施形態は、式（ＩＩ）の「ｍ」が３である実施形態である。
【化7】
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉ）に関して提供したとおりである。すなわち、そのような組成物の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬成分の観点から、組成物に含まれる約１５ｍｏｌ％以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、式（ＩＩ）のものである。いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、約０．１～２０ｍｏｌ％以下の式（ＩＩ）の化合物を含む。実施形態では、組成物は、約０．１～１５、０．１～１０、０．１～５、０．１～１、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～２０、１０～１５、又は１５～２０ｍｏｌ％以下の式（ＩＩ）の化合物を含む）により包含される、約１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。好ましい実施形態は、式（ＩＩ）の「ｍ」が３である実施形態である。
【0106】
前述に関連したいくつかの特定の実施形態では、式（Ｉａ）に関連した長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えた場合、下記の式：
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉａ）に関して提供したとおりである）により包含される、約１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。
【化8】
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉａ）に関して提供したとおりである）により包含される、約１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。
【0107】
いくつかの特定の好ましい実施形態では、式（Ｉｂ）に関連した長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えた場合、下記の式：
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉｂ）に関して提供したとおりである）により包含される、１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。
【化9】
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉｂ）に関して提供したとおりである）により包含される、１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。
【0108】
いくつかの別の実施形態では、式（Ｉｃ）に関連した長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えた場合、下記の式：
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉｃ）に関して提供したとおりである）により包含される、約１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。
【化10】
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉｃ）に関して提供したとおりである）により包含される、約１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。
【0109】
いくつかの別の実施形態では、式（Ｉｄ）に関連した長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えた場合、下記の式：
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉｄ）に関して提供したとおりである）により包含される、約１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。
【化11】
（式中、ｎ及びｍの値は、上記の式（Ｉｄ）に関して提供したとおりである）により包含される、約１５モルパーセント（ｍｏｌ％）以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。
【0110】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、約０．１～２０ｍｏｌ％以下の式（ＩＩ）の化合物（式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、及び（ＩＩｄ）の化合物を含む）を含む。いくつかの追加の実施形態では、組成物は、約０．１～１５、０．１～１０、０．１～５、０．１～１、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～２０、１０～１５、又は１５～２０ｍｏｌ％以下の式（ＩＩ）の化合物（式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、及び（ＩＩｄ）の化合物を含む）を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．１、１、５、１０、１５、又は２０ｍｏｌ％以下の式（ＩＩ）の化合物（式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、及び（ＩＩｄ）の化合物を含む）を含む。組成物は、式（Ｉ）の化合物に関して当技術分野で既知の方法により精製され、その結果、式（ＩＩ）の化合物が組成物中に存在しない、微量存在する、又は実質的に存在し得ないことを認識するであろう。
【0111】
例えば、いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えた場合、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、及び（ＩＩｄ）の化合物を含む式（ＩＩ）により包含される、約１２モルパーセント以下、又は約１０モルパーセント以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含む。
【0112】
前述のいくつかの追加の実施形態では、組成物は、２、３に等しい、又は３を超えるｎ’を有する（すなわち、より高級のＰＥＧｍｅｒ）、約７ｍｏｌ％以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含む。さらなるいくつかの他の実施形態では、組成物は、２、３に等しい、又は３を超える（すなわち、２以上の）ｎ’を有する、約５ｍｏｌ％以下の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含む。
【0113】
いくつかのさらなる実施形態では、組成物は、式（Ｉ）、
（式中、ｎ及びｍは上述したとおりであり、ｎ’は、ＩＬ－１５アミノ基に共有結合したポリエチレングリコール部分の平均数を表し（組成物に関して）、組成物に関するｎ’は、１．０～約１．３の範囲内である。例えば、ＩＬ－１５部分当たりのポリエチレングリコール部分の平均数は、約１．０、１．１、１．２及び約１．３から選択される。すなわち、式（Ｉ）による好ましい長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、本明細書では「モノペグ化」と称され得、ここで、上述したように、ペグ化度には幾分かの可変性が存在することを理解するべきである。本明細書に記載される式に関連した、いくつかの好ましい実施形態では、「ｍ」は３に等しい）による長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含む。
【化12】
（式中、ｎ及びｍは上述したとおりであり、ｎ’は、ＩＬ－１５アミノ基に共有結合したポリエチレングリコール部分の平均数を表し（組成物に関して）、組成物に関するｎ’は、１．０～約１．３の範囲内である。例えば、ＩＬ－１５部分当たりのポリエチレングリコール部分の平均数は、約１．０、１．１、１．２及び約１．３から選択される。すなわち、式（Ｉ）による好ましい長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、本明細書では「モノペグ化」と称され得、ここで、上述したように、ペグ化度には幾分かの可変性が存在することを理解するべきである。本明細書に記載される式に関連した、いくつかの好ましい実施形態では、「ｍ」は３に等しい）による長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含む。
【0114】
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の組成物は、ｎ’が約１に等しく、ＰＥＧ部分が、組成物中の実質的に全てのＩＬ－１５コンジュゲートに関して同じ位置に結合している単一種を含んでもよく、又は代替的に、直鎖ポリエチレングリコール部分の結合が、インターロイキン－１５部分上の異なる部位に生じる、すなわち、特定の結合部位が、組成物中に含まれるモノペグ化ＩＬ－１５種の全てに関して同じではない、モノペグ化コンジュゲート種の混合物を含んでもよい）。従って、そのような組成物は、ＩＬ－１５に結合したＰＥＧ部分の数の観点から実質的に均一であるが（例えば、１－ｍｅｒ）、ＩＬ－１５分子上のアミノ基結合の位置の観点からは不均一である。
【0115】
追加のＰＥＧ構築及び結合化学を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬に到達するために使用することができるが、支持実施例に鑑みて考慮する場合に明らかとなるように、前述したような化合物は、１つ以上の実施形態において好ましい。しかしながら、本明細書に提供される構造を有する、追加の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬も想定される。
【0116】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えた場合、式（Ｉａ～ｄ）を含む式（Ｉ）により包含される、少なくとも約８０ｍｏｌ％の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。１つ以上の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、少なくとも約８５ｍｏｌ％、９０ｍｏｌ％、９５ｍｏｌ％、９８ｍｏｌ％又は９９ｍｏｌ％の式（Ｉ）の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を含み、ここで、特に好ましい式は式（Ｉｂ）の式である。
。
。
【0117】
本明細書において、長時間作用型ＩＬ－１５受容体アゴニストを含む上記のすべての化合物は、そのような化合物を薬学的に許容される塩の形態で明示的に含むことを意味する。典型的には、そのような塩（例えば、塩基性化合物の）は、薬学的に許容可能な酸又は酸等価物との反応によって形成される。これに関連して用語「薬学的に許容可能な塩」は、一般に、比較的無毒の無機又は有機酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクル若しくは剤形製造プロセスにおいてインサイチューで、又は、本明細書に記載される長時間作用型インターロイキン－１５受容体作動薬を、好適な有機若しくは無機酸と別々に反応させ、そのように形成された塩を単離することによって調製され得る。代替的な塩としては、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩（ｎａｐｔｈｙｌａｔｅ）、オキシル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、及びラウリルスルホン酸塩などが挙げられるがそれらに限定されない。（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９７７）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１－１９参照）。従って、記載される塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機塩から誘導され；又は酢酸、プロピオン、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリシリック酸（ｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ）、スルファニル酸、２－アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イソチオン酸（ｉｓｏｔｈｉｏｎｉｃ）などの有機酸から調製され得る。
【0118】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬組成物は、集合的に考えた場合、約１～５ｍｏｌ％以下の遊離ＩＬ－１５タンパク質（組成物中のＩＬ－１５含有分子の）を含む。いくつかのさらなる実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５作動薬組成物は、約０．５ｍｏｌ％、１ｍｏｌ％、２ｍｏｌ％、３ｍｏｌ％、４ｍｏｌ％、又は５ｍｏｌ％以下の遊離（すなわち、非コンジュゲート化）ＩＬ－１５を含む。
【0119】
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を調製するために、ＩＬ－１５部分を例えばそのアミノ基（例えばリシン又はＮ－末端）において、スクシンイミジル基（又は他の活性化エステルグループ）で官能化されたＰＥＧ試薬にコンジュゲートし得る。この手法を用いて、スクシンイミジル活性化ＰＥＧは、水性媒体中でｐＨ約７．０～９．０で、ＩＬ－１５部分のアミノ基に結合することができるが、異なる反応条件（例えば、６～７若しくは７～８などのより低いｐＨ、又は異なる温度及び／若しくは１５℃未満の温度）の使用により、ＩＬ－１５部分の異なる位置へのＰＥＧ部分の結合がもたらされ得る。
【0120】
長時間作用型ＩＬ－１５受容体アゴニストを調製するための例示的な方法は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３２８１７号明細書、例えば実施例１～２に記載されていて、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。１つの例示的実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、実施例１に記載するように調製することができる。例えば、長時間作用型ＩＬ－１５ Ｒ作動薬は、一般に、インターロイキン－１５、例えば、組換えＩＬ－１５などの精製ＩＬ－１５を、活性化エステル、メトキシＰＥＧ－スクシンイミジルブタノエート、ｍＰＥＧ－ＳＢＡなどの活性化ＰＥＧ試薬と反応させることによって調製することができる。他の好適な活性化ＰＥＧ試薬としては、メトキシＰＥＧ－スクシンイミジルプロピオネート、メトキシＰＥＧ－スクシンイミジルペンタノエート、及びメトキシＰＥＧ－スクシンイミジルヘキサノエートが挙げられる。スクシンイミジル活性化基が典型的には使用されるが、任意の好適な活性エステル又は活性化基を使用することができ、そのような反応性基は、所望の安定なアミド結合の形成に好適である。次いで、ペグ化ＩＬ－１５反応生成物は、一般に、任意の好適な方法、例えばイオン交換クロマトグラフィーにより精製されて、所望の生成物を得ることができる。例えば、陰イオン交換クロマトグラフィーを用いることができる。次いで、クロマトグラフィー生成物プールを濃縮し、例えばタンジェント流ろ過（ＴＦＦ）を用いて好適な製剤緩衝液（例えば、ショ糖を含む酢酸ナトリウム緩衝液）中に透析ろ過し得る。分析は、例えばＳＤＳ－ＰＡＧＥ、逆相ＨＰＬＣなどの任意の好適な方法、又は任意の他の好適な分析方法により行うことができる。
【0121】
以前に記載したように、ＩＬ－１５部分上のアミノ基は、ＩＬ－１５部分とポリエチレングリコール部分との間の結合の部位を提供して、式（Ｉ）により包含される長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を提供する。本明細書に提供される例示的なＩＬ－１５アミノ酸配列を考慮すると、少なくとも配列番号１及び２についてのコンジュゲーションに利用可能であり得るε－アミノ酸を各々有する７つのリシン残基が存在することが明らかである。さらに、メチオニンのＮ末端アミンも、ＰＥＧ部分に対する結合地点としての役割を果たし得る。ポリエチレングリコール部分は、リシン又はＮ－末端アミン位置の任意の１つ以上において結合し得ることを認識するであろう。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコール部分結合部位は、Ｌｙｓ１０及びＬｙｓ１１の１つ以上にある（一例として配列番号２に示される番号付けを使用、又は配列番号１を使用してＬｙｓ１１及びＬｙｓ１２）。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコール部分は、Ｎ－末端アミンにおいて結合する。リシン部位のいずれも、ＰＥＧ部分の結合部位（例えば配列番号１のＬｙｓ３７又はＬｙｓ４２）として好適であり得ることを認識するであろう。いくつかの実施形態では、長時間作用型インターロイキン－１５受容体作動薬は、ポリエチレングリコール部分の共有結合が主にＮ－末端にある（すなわち、位置異性体の集合のうち、Ｎ－末端で結合するＰＥＧ部分を有する異性体が、他の位置異性体と比較した場合に最大量で存在する）位置異性体の混合物を含む。
【0122】
所望であれば、生成物プールは、さらに、好適なカラム（例えば、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ又はＶｙｄａｃなどの会社から市販されているＣ１８カラム又はＣ３カラム）を使用する逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を用いた逆相クロマトグラフィーによって、又はイオン交換カラム、例えばＡｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能なＳｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）イオン交換カラムを使用するイオン交換クロマトグラフィーによって、位置異性体に分離されてもよい。同じ分子量を有する（すなわち、位置アイソフォーム）ＰＥＧ－インターロイキン－１５位置異性体を分離するために、いずれの手法も使用することができる。
【0123】
本発明の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、特定の顕著な及び有利な特徴を有することが発見されている。下記に記載する特徴は、一般に、本明細書に提供され及び式（Ｉ）により包含される化合物に適用されると考えられるが、以下の１つ以上の特徴は、特に、式（Ｉｂ）による化合物、及びその延長の式（ＩＩｂ）による化合物により示され得る。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、以下の特徴の１つ以上を有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、非修飾ＩＬ－１５と比較した場合、ＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ、ＣＴＬＬ－２ ｐＳＴＡＴ５）における約７倍以下の低下を示す。例えば、１つ以上の関連実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、ＩＬ－１５と比較した場合、ＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ、ＣＴＬＬ－２ ｐＳＴＡＴ５）における約６．５倍以下の低下、又はＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ、ＣＴＬＬ－２ ｐＳＴＡＴ５）における約６倍以下の低下、又はＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ、ＣＴＬＬ－２ ｐＳＴＡＴ５）における約５．５倍以下の低下、又はＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ、ＣＴＬＬ－２ ｐＳＴＡＴ５）における約５倍以下の低下、又はＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ、ＣＴＬＬ－２ ｐＳＴＡＴ５）における約４．５倍以下の低下、又はＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ、ＣＴＬＬ－２ ｐＳＴＡＴ５）における約４倍以下の低下、又はＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ、ＣＴＬＬ－２ ｐＳＴＡＴ５）における約３．５倍以下の低下、又はさらにはＥＣ５０値（ｎｇ／ｍＬ、ＣＴＬＬ－２ ｐＳＴＡＴ５）における約３倍以下の低下を示す。前述の特徴に従った例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、本明細書及びＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３２８１７号明細書に記載されており、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0124】
当該の組成物に含まれる長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の量は、いくつかの因子に応じて変動することとなるが、組成物が単位用量容器（例えば、バイアル）内に保管される場合、最適には、治療的に有効な用量となる。さらに、医薬調製物は、シリンジ内に収めることができる。本明細書に記載される臨床的に所望されるエンドポイントをもたらす量を決定するために、治療的に有効な用量は、漸増量の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の反復投与によって、実験によって決定することができる。組成物中のあらゆる個々の賦形剤の量は、賦形剤の活性及び組成物の固有の必要性に応じて変動することとなる。典型的には、あらゆる個々の賦形剤の最適な量は、慣例的な実験法を介して、すなわち、様々な量の（低から高までの範囲にわたる）賦形剤を含有する組成物を調製し、安定性及び他のパラメータを検討し、次いで、有意な有害作用を伴わずに最適な性能が得られる範囲を決定することによって決定される。
【0125】
この方法のそれぞれの薬理学的構成成分は、別々に投与することができる。或いは、２種の薬理学的構成成分の投与が同時であることが所望される－－且つ２種の薬理学的構成成分が所与の製剤中で共に適合性がある－－ならば、単一剤形／製剤の投与を介する同時投与（例えば、両方の薬理学的に活性な薬剤を含有する静脈内製剤の静脈内投与）を実現することができる。当業者は、慣例的な試験を介して、２種の所与の薬理学的構成成分が所与の製剤中で共に適合性があるかどうかを決定することができる。抗体と、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬とを、任意の順序で投与することができるということを理解されたい。さらに、抗体と、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬との投与は、必要に応じて、数分、数時間、又は数日、隔てることができる。
【0126】
長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬を投与することの頻度に関して、当業者は、適切な頻度を決定できることとなる。例えば、臨床医は、長時間作用型のＩＬ－１５受容体作動薬を比較的低頻度で（例えば、２又は３週に１回）投与する、また、患者によって許容される場合に投薬の間隔を徐々に短くすることを決定することができる。抗体を投与することの頻度に関して、これらの薬剤の頻度は、同様の様式で決定することができる。さらに、本明細書に記載されるいくつかの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及び抗体は、臨床検査進行中である又は市販品として入手可能であるので、投与の適切な頻度を得るために文献を参照することも可能である（治療レジメンの組み合わせられた効果を考慮して、いくらかの調整が必要であり得ることに留意されたい）。
【0127】
いくつかの治療レジメンでは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、治療の開始時に単回投与として投与される。抗体は、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と同時に、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与の前に、又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与の後に投与される。例えば、いくつかの治療様式では、抗体は、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬投与の（前後の）７～１４日以内に（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４日目のいずれかに）（ここでは、１日目は、治療の開始を示す）投与される。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の長時間作用的性質に基づくと、こうした化合物は、比較的低頻度で（例えば、３週に１回、２週に１回、８～１０日に１回、週に１回、３日に１回など）投与することができる。さらに、抗体は、承認されたスケジュール（例えば、毎日、週２又は３回、毎週、２週ごと、など）に従って投与することができる。ある例示的なスケジュールでは、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、１日目、及びその後２１日ごとに投与される。抗体は、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬の投与の７～１４日後に開始して、毎週、２週ごと、又は毎月投与される。長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬と抗体の一方又は両方についての投薬スケジュールは、治療期間中に調整することができるということを理解されたい。一例として、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬及び／又は抗体を、ある期間（例えば４～８週）の間毎週、次いで、その後の期間の間、２週ごとに又は毎月投与することができる。
【0128】
本明細書に記載される治療方法は、患者のケアを監督する臨床医が、その治療方法が有効であると考える限り、継続することができる。治療方法が有効であることを示す非限定的なパラメータには、以下が含まれる：腫瘍縮小（重量及び／又は体積に関して）；個々の腫瘍コロニーの数の減少；腫瘍消失；及び無増悪生存期間。
【0129】
本明細書に記載される治療のクールに関する例示的な時間の長さには、約１週；２週；約３週；約４週；約５週；約６週；約７週；約８週；約９週；約１０週；約１１週；約１２週；約１３週；約１４週；約１５週；約１６週；約１７週；約１８週；約１９週；約２０週；約２１週；約２２週；約２３週；約２４週；約７か月；約８か月；約９か月；約１０か月；約１１か月；約１２か月；約１３か月；約１４か月；約１５か月；約１６か月；約１７か月；約１８か月；約１９か月；約２０か月；約２１か月；約２２か月；約２３か月；約２４か月；約３０か月；約３年；約４年、及び約５年が含まれる。抗体と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投薬頻度は、同じでも異なってもよいということを理解されたい。さらに、抗体及び／又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投薬頻度又はスケジュールは、それぞれに見合った受容体の占有の持続／抗原への結合の持続を達成するように設計することができる。
【0130】
場合によっては、抗体及び／又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、１種以上の薬学的に許容し得る賦形剤も含む組成物中に含まれる。例示的な賦形剤としては、限定なしに、炭水化物、無機塩類、抗菌剤、抗酸化剤、界面活性剤、緩衝剤、酸、塩基、アミノ酸、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるものが挙げられる。
【0131】
糖、誘導体化された糖、例えば、アルジトール、アルドン酸、エステル化された糖、及び／又は糖ポリマーなどの炭水化物が、賦形剤として存在し得る。具体的な炭水化物賦形剤としては、例えば：フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ－マンノース、ソルボースなどの単糖類；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどの二糖類；ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなどの多糖類；及びマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトール、シクロデキストリンなどのアルジトールが挙げられる。
【0132】
賦形剤としてはまた、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせなどの無機塩又は緩衝剤も挙げることができる。
【0133】
１つ又は複数の組成物はまた、微生物の繁殖を防止又は抑止するための抗菌剤も含むことができる。本開示の１つ又は複数の実施形態に好適な抗菌剤の非限定的な例としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チメルソール（ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【0134】
抗酸化剤も同様に組成物中に存在し得る。抗酸化剤を使用すると酸化が防止され、それによりコンジュゲート又は調製物の他の構成成分の劣化が防止される。本開示の１つ又は複数の実施形態での使用に好適な抗酸化剤としては、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、亜硫酸水素ナトリウム、スルホキシル酸ナトリウムホルムアルデヒド、メタ重亜硫酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
【0135】
賦形剤として界面活性剤が存在してもよい。例示的な界面活性剤としては、「Ｔｗｅｅｎ ２０」及び「Ｔｗｅｅｎ ８０」などのポリソルベート、並びにＦ６８及びＦ８８（双方とも、ＢＡＳＦ、Ｍｏｕｎｔ Ｏｌｉｖｅ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙから入手可能）などのプルロニック（登録商標）；ソルビタンエステル；レシチン及び他のホスファチジルコリンなどのリン脂質、ホスファチジルエタノールアミン（但し、リポソーム形態ではないことが好ましい）、脂肪酸、並びに脂肪酸エステルなどの脂質；コレステロールなどのステロイド；並びにＥＤＴＡ、亜鉛及び他のかかる好適な陽イオンなどのＩＬ－１５キレート剤が挙げられる。
【0136】
酸又は塩基が組成物中に賦形剤として存在してもよい。使用することのできる酸の非限定的な例としては、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される酸が挙げられる。好適な塩基の例としては、限定なしに、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、フマル酸カリウム、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される塩基が挙げられる。
【0137】
１つ又は複数のアミノ酸は、本明細書に記載される組成物中に賦形剤として存在することができる。この関連における例示的なアミノ酸としては、アルギニン、リジン及びグリシンが挙げられる。好適な薬学的に許容可能な追加の賦形剤は、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、７ｔｈ ｅｄ．、Ｒｏｗｅ、Ｒ．Ｃ．、Ｅｄ．、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、２０１２に記載されているものを含む。
【0138】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、リン酸カリウム及びトレハロースを含む組成物中に含まれる。いくつかの実施形態では、組成物は、注射用の滅菌水を含む液体製剤である。いくつかの他の実施形態では、組成物は、再構成に適した凍結乾燥粉末である。
【0139】
本明細書に記載される方法に従って、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗体は、治療有効量で患者に投与される。当業者は、どの程度の所与の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及び／又は抗体が、臨床的に妥当な量（例えば、それぞれ、ＩＬ－１５受容体での拮抗する活性、又は所望される受容体／抗原に対する抗体結合）を提供するのに十分であるかを決定することができる。例えば、当業者は、文献を参照すること、及び／又は一連の漸増量の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を投与し、ＩＬ－１５の臨床的に拮抗する活性を提供する量（単数）又は量（複数）を決定することができる。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗体の一方又は両方の治療的量は、単独で投与される場合の一方の構成成分の治療有効量よりも低い可能性があるということを理解されたい。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬を、本明細書に記載される抗体と組み合わせて投与することの相乗作用によって、投与されるべきいずれかの（組み合わせの構成成分の一方又は両方についての）用量をより低くすることができる、又は別々に決定されたいずれかの構成成分の用量での有効性をより大きくすることができる。一般に、抗体の治療有効量は、約０．０１～約１００ｍｇ／ｋｇ（端値を含む）の範囲となる。いくつかの特定の、ただし非限定的な実施形態では、抗体は、約０．０１～５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５～５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１～５０ｍｇ／ｋｇ、約０．５～５０ｍｇ／ｋｇ、約１～５０ｍｇ／ｋｇ、約５～５０ｍｇ／ｋｇ、約１０～５０ｍｇ／ｋｇ、約１５～５０ｍｇ／ｋｇ、約２０～５０ｍｇ／ｋｇ、約３０～５０ｍｇ／ｋｇ、約４０～５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５～４０ｍｇ／ｋｇ、約０．１～４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５～４０ｍｇ／ｋｇ、約１～４０ｍｇ／ｋｇ、約５～４０ｍｇ／ｋｇ、約１０～４０ｍｇ／ｋｇ、約１５～４０ｍｇ／ｋｇ、約２０～４０ｍｇ／ｋｇ、約３０～４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５～３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１～３０ｍｇ／ｋｇ、約０．５～３０ｍｇ／ｋｇ、約１～３０ｍｇ／ｋｇ、約５～３０ｍｇ／ｋｇ、約１０～３０ｍｇ／ｋｇ、約１５～３０ｍｇ／ｋｇ、約２０～３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５～２５ｍｇ／ｋｇ、約０．１～２５ｍｇ／ｋｇ、約０．５～２５ｍｇ／ｋｇ、約１～２５ｍｇ／ｋｇ、約５～２５ｍｇ／ｋｇ、約１０～２５ｍｇ／ｋｇ、約１５～２５ｍｇ／ｋｇ、約２０～２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５～２０ｍｇ／ｋｇ、約０．１～２０ｍｇ／ｋｇ、約０．５～２０ｍｇ／ｋｇ、約１～２０ｍｇ／ｋｇ、約５～２０ｍｇ／ｋｇ、約１０～２０ｍｇ／ｋｇ、約１５～２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５～１５ｍｇ／ｋｇ、約０．１～１５ｍｇ／ｋｇ、約０．５～１５ｍｇ／ｋｇ、約１～１５ｍｇ／ｋｇ、約５～１５ｍｇ／ｋｇ、約１０～１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．５～１０ｍｇ／ｋｇ、約１～１０ｍｇ／ｋｇ、約５～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１～５ｍｇ／ｋｇ、約０．５～５ｍｇ／ｋｇ、約１～５ｍｇ／ｋｇ、約０．１～１ｍｇ／ｋｇ、約０．５～１ｍｇ／ｋｇ、又は約０．１～０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される又は組成物に含められる。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、又は約５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。抗体の治療有効量は、政府規制機関によって承認されたあらゆる用量であり得るということを理解されたい。
【0140】
いくつかの実施形態では、抗体は、リツキシマブであり、治療有効量は、約１００ｍｇ／ｍ２～７５０ｍｇ／ｍ２／投与（端値を含む）の範囲である。実施形態では、治療有効量は、約１００ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、約１５０ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、約２００ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、約３７５ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、又は約４００ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２／投与の範囲である。いくつかの実施形態では、抗体は、約１００ｍｇ／ｍ２、約１５０ｍｇ／ｍ２、約２００ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２、約３７５ｍｇ／ｍ２、約４００ｍｇ／ｍ２、約５００ｍｇ／ｍ２、又は約７５０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【0141】
いくつかの実施形態では、抗体は、ダラツムマブであり、治療有効量は、約１０ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ／投与（端値を含む）の範囲である。実施形態では、治療有効量は、約１０～２５ｍｇ／ｋｇ、約１０～２０ｍｇ／ｋｇ、約１０～１６ｍｇ／ｋｇ、約１０～１５ｍｇ／ｋｇ、約１５～５０ｍｇ／ｋｇ、約１５～２５ｍｇ／ｋｇ、約１５～２０ｍｇ／ｋｇ、約１６～５０ｍｇ／ｋｇ、約１６～２５ｍｇ／ｋｇ、又は約１６～２０ｍｇ／ｋｇ／投与の範囲である。いくつかの実施形態では、抗体は、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、又は約５０ｍｇ／ｋｇ／投与の用量で投与される。
【0142】
いくつかの実施形態では、抗体は、セツキシマブであり、治療有効量は、約１００ｍｇ／ｍ２～７５０ｍｇ／ｍ２／投与（端値を含む）の範囲である。実施形態では、治療有効量は、約１００ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、約１５０ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、約２００ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、約４００ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、約２００ｍｇ／ｍ２～４００ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２～４００ｍｇ／ｍ２、又は約３００ｍｇ／ｍ２～４００ｍｇ／ｍ２／投与の範囲である。いくつかの実施形態では、抗体は、約１００ｍｇ／ｍ２、約１５０ｍｇ／ｍ２、約２００ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２、約４００ｍｇ／ｍ２、約５００ｍｇ／ｍ２、又は約７５０ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【0143】
いくつかの実施形態では、抗体は、トラスツズマブであり、治療有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ／投与の範囲である。実施形態では、治療有効量は、約２～２０ｍｇ／ｋｇ、約２～１５ｍｇ／ｋｇ、約２～１０ｍｇ／ｋｇ、約２～８ｍｇ／ｋｇ、約２～６ｍｇ／ｋｇ、約２～４ｍｇ／ｋｇ、約４～１０ｍｇ／ｋｇ、約４～８ｍｇ／ｋｇ、約４～６ｍｇ／ｋｇ、約６～１０ｍｇ／ｋｇ、約６～８ｍｇ／ｋｇ、又は約８～１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態では、抗体は、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、又は約２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【0144】
用量は、当技術分野における公知の方法によって決定することができ、具体的な用量は、規制機関によって設定される可能性があるということを理解されたい。所与の用量は、例えば、臨床医が、適切なエンドポイント（例えば、治癒、退縮、部分退縮、その他）が達成されたと決定するまで周期的に投与することができる。
【0145】
一般に、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の治療有効量は、約０．０００１ｍｇ～約１００ｍｇ、又は約０．００１ｍｇ～約１００ｍｇ、好ましくは約０．０１ｍｇ／日～約７５ｍｇ／日の用量、より好ましくは約０．１０ｍｇ／日～約５０ｍｇ／日の範囲の用量となる。所与の用量は、例えば、臨床医が、適切なエンドポイント（例えば、治癒、退縮、部分退縮、その他）が達成されたと決定するまで周期的に投与することができる。
【0146】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬の治療有効量は、約０．２５～２５μｇ／ｋｇの範囲である。他の実施形態では、治療的に有効な用量は、（例えば１日あたり）約０．２５μｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３７５μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約０．３７５μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約０．３７５μｇ／ｋｇ～約１０μｇ／ｋｇ、約０．３７５μｇ／ｋｇ～約５．０μｇ／ｋｇ、約０．３７５μｇ／ｋｇ～約１．５μｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ～約１０μｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ～約５．０μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ～約１．５μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ～約１０μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ～約５．０μｇ／ｋｇ、約５．０μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約５．０μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約５．０μｇ／ｋｇ～約１０μｇ／ｋｇ、約１０約１．５μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約１５μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ～約２０μｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ／日、又は約０．０３ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。他の実施形態では、治療的に有効な用量は、約１～１０μｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの具体的な、ただし非限定的な実施形態では、治療的に有効な用量は、約０．２５μｇ／ｋｇ、約０．３μｇ／ｋｇ、約０．３７５μｇ／ｋｇ、約０．５μｇ／ｋｇ、約０．７５μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇ、約３μｇ／ｋｇ、約４μｇ／ｋｇ、約４．５μｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ、約６μｇ／ｋｇ、約７μｇ／ｋｇ、約８μｇ／ｋｇ、約９μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．１ｍｇ／ｋｇ／日である。
【0147】
上に記載した長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬の用量は、コンジュゲート又はタンパク質等価物のものを指すことができることを理解されたい。いくつかの好ましい実施形態では、用量は、タンパク質等価物におけるものである。
【0148】
実施形態では、抗体又は長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬の用量の増大をそれぞれ伴う場合に、抗体及び／又は長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬の用量レベルを低下させることができる。実施例１４に示す通り、抗体治療又は長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬についての用量レベルの低下は、それぞれ、マウス腫瘍モデルにおける、ＩＬ－１５Ｒ作動薬又は抗体の用量レベルの関連する増大によって相殺された。したがって、高用量の長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬と組み合わせた低用量の抗体の投与、並びに低用量の長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬と組み合わせた高用量の抗体の投与は、どちらも、マウス腫瘍モデルの骨髄におけるＤａｕｄｉ細胞数を減少させる。
【0149】
本明細書の実施例において言及される用量に関して、当業者は、動物の用量（例えばマウス）を、当技術分野で公知の変換（例えば、Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０１６）７：２７－３１）を使用して、ヒトにおける対応する用量に変換することができるであろう。
【0150】
単位投薬量の任意の抗体及び／又はコンジュゲート（やはり、好ましくは医薬調製物の一部として提供される）は、臨床医の判断、患者の必要性、その他に応じて様々な投薬スケジュールで投与することができる。具体的な投薬スケジュールは、当業者によって知られることとなり、慣例的な方法を使用して、実験によって決定することができる。例示的な投薬スケジュールには、限定はされないが、１日１回、週３回、週２回、週１回、月２回（例えばｑ／１４日）、月１回（例えばｑ／３０又は３１日、ｑ／２８日又はｑ／２１日）投与、及びその任意の組み合わせが含まれる。投薬スケジュールは、必要に応じて調整する、例えば、一定期間、週１回の投与を行い、次いで、必要に応じてより短い又はより長いスケジュールに調整することができるということを理解されたい。所望される臨床エンドポイントが達成されたら、組成物の投薬は、停止又は減量される。いくつかの実施形態では、単位用量の任意のコンジュゲートを一回投与して、効果の持続を提供することができる。
【0151】
投与されることとなる抗体及び／又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の実際の用量は、対象の年齢、体重、及び全身状態、並びに治療される状態の重症度、医療従事者の判断、及び投与されるコンジュゲートに応じて変わることとなる。治療有効量は、当業者に公知である、及び／又は関連する参照テキスト及び文献に記載されている。
【0152】
抗体と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬との組み合わせは、癌又は腫瘍を患う患者に投与するのに適している。この方法は、腫瘍抗原に誘導される治療有効量の抗体と、一般に非経口的に、治療有効量の長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とを、患者に投与する（好ましくは、同じ又は異なる医薬組成物の一部として提供される）ことを含む。
【0153】
抗体及び／又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、当技術分野で公知のあらゆる好適な手段によって投与することができる。いくつかの実施形態では、抗体と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の一方又は両方を、非経口的に（これには、皮下、静脈内、動脈内、腹腔内、心臓内、髄腔内、及び筋肉内注射、並びに注入注射（ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）が含まれる）投与することができる。非経口投与に好適な製剤タイプは、中でも、注射準備完了注射溶液、使用前に溶媒と組み合わされる乾燥粉末、注射準備完了の縣濁液、使用前にビヒクルと組み合わされる乾燥不溶性組成物、並びに投与前に希釈される乳剤及び液体濃縮物を含む。いくつかの特定の実施形態では、抗体及び／又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、静脈内投与に好適な製剤で提供され、静脈内に投与される。いくつかの別の実施形態では、抗体及び／又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、皮下投与に好適な製剤で提供され、皮下に投与される。いくつかの追加の実施形態では、抗体と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の一方又は両方を、腫瘍内投与することができる。肺内、経鼻、頬側、直腸内、舌下、及び経皮などの他の投与様式も企図される。
【0154】
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（例えば、医薬組成物の一部として提供される）の投与方法は、場合により、特定の範囲に局在化させるように行われ得る。例えば、作動薬を含む液体、ゲル及び固体製剤はまた、疾患範囲内（例えば腫瘍内、腫瘍付近、炎症範囲内、及び炎症範囲付近など）に外科的に移植され得る。器官及び組織は、所望の位置がコンジュゲートにより良好に暴露されることを確実にするように、画像化できることも都合がよい。
【0155】
本明細書に記載される通り、本開示の一態様は、これらの化合物の片方又は両方での治療に対して応答性である状態を患う患者を治療するための、（数あるものの中でも特に）有用である方法を提供する。例えば、患者は、個々の薬剤単独並びに組み合わせに対して応答性であり得るが、組み合わせに対して、より応答性である。さらなる例として、患者は、個々の薬剤の一方に対して応答性ではない可能性があるが、組み合わせに対して応答性である。さらなる例として、患者は、個々の薬剤単独のいずれかに対して応答性ではない可能性があるが、組み合わせに対して応答性である。
【0156】
癌を有する対象の処置に関連して本明細書で使用されるとき、用語「処置」、「処置する」、及び「処置している」は、癌の１つ以上の症状を軽減、遅延、停止、若しくは逆行させ、又は癌が実際には除去されていない場合であっても、癌の進行を遅延させるための、対象が患っている癌の介入の全領域、例えば組み合わせの投与を含むことが意図される。処置としては、例えば、症状の重症度、症状の数、又は再発の頻度の低下、例えば腫瘍成長の阻害、腫瘍成長の抑止、又は既存の腫瘍の退行を挙げることができる。さらに、用語「癌を治療すること」は、絶対的な用語であることを意図しておらず、例えば、腫瘍の大きさ又は癌細胞の数を低下させること、癌を寛解の状態にさせること、又は癌細胞の大きさ又は数の成長を阻止することなどが含まれ得る。いくつかの状況では、本開示に従う治療は、予後の改善をもたらす。
【0157】
例えば、癌又は癌関連疾患の改善は、完全又は部分的な応答として特徴付けることができる。「完全応答」は、任意の以前の異常なＸ線検査試験、骨髄、及び脳脊髄液（ＣＳＦ）又は異常なモノクローナルタンパク質測定値の正常化を伴う、臨床的に検出可能な疾患の非存在を指す。「部分的応答」は、新たな病変の非存在下での（で＿）、全ての測定可能な腫瘍負荷（すなわち、対象内に存在する悪性細胞の数、又は測定された腫瘍塊の容積、又は異常なモノクローナルタンパク質の量）における少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％の低下を指す。用語「処置」は、完全及び部分的応答の両方を想定している。
【0158】
用語「癌」及び「癌性」は、典型的には無秩序な細胞成長により特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態を指す又は記載する。
【0159】
本明細書で使用される「腫瘍」及び「固形腫瘍」は、悪性又は良性のいずれかの全ての病変及び腫瘍性細胞成長及び増殖、並びに全ての前癌性及び癌性細胞及び組織を指す。
【0160】
本明細書で使用する場合、用語「増強される」又は「増強すること」は、例えば応答の増強という文脈では、例えば、本明細書に開示される場合の、対象の又は腫瘍細胞の、治療に応答する能力の、所与のベースライン又は基準治療法と比較した場合の改善を指す。例えば、応答の増強は、治療に対する応答性のいずれかの１つ以上の指標に基づく、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９８％、又はそれ以上の応答性の増大を含むことができる。本明細書で使用する場合、「増強される」又は「増強すること」はまた、治療に好都合に応答する対象の数を、例えば、こうした比較のための所与の基準と比較した場合に増すことを指すことができる。
【0161】
例示的な状態は、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉種（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、扁平細胞癌、基底細胞癌、頭頸部癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、睾丸癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、上皮癌、グリア細胞腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴覚神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫（例えば、ぶどう膜黒色腫、粘膜黒色腫、及び軟膜黒色腫を含む）、神経芽腫、網膜芽細胞腫、頭頸部の扁平上皮がん、白血病、及びリンパ腫などの癌である。さらなる例示的な状態は、限定はされないが非ホジキンリンパ腫及び多発性骨髄腫を含めた造血器腫瘍である。
【0162】
特定の一方法では、モノクローナル抗体及び長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、白血病又はリンパ腫などの血液系悪性腫瘍を処置するために使用される。さらなる別の方法では、モノクローナル抗体及び長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、固形癌を処置するために使用される。いくつかの実施形態では、固形癌は、限定はされないが、結腸癌、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、頭頸部癌、腎細胞癌、子宮頸癌、及び小細胞肺癌、非小細胞肺癌から選択される。
【0163】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体と、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（又は関連する組成物）との組み合わせは、治療的に有効な用量で対象に投与される場合、例えば好適な動物モデルにおいて、ＮＫ活性化及び／又は増殖を、単独で且つ同等の用量で投与されるいずれかの薬剤について観察されるよりも大きな程度で刺激するのに有効である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるモノクローナル抗体と、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は組成物との組み合わせは、治療的に有効な用量で対象に投与される場合、例えば好適な動物モデルにおいて評価される場合に、単独で且つ同等の用量で投与されるいずれかの薬剤について観察されるよりも増大された腫瘍クリアランスを提供するのに有効である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるモノクローナル抗体と、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は組成物との組み合わせは、治療的に有効な用量で対象に投与される場合、例えば好適な動物モデルにおいて評価される場合に、単独で且つ同等の用量で投与されるいずれかの薬剤について観察されるよりも増大された及び／又は長期の対象の生存、例えば生存率の増大、又はより大きい程度の腫瘍退縮を提供するのに有効である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体と、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は組成物との組み合わせは、治療的に有効な用量で対象に投与される場合、特に、例えば骨髄などの組織区画内での、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗体の一方又は両方の活性の増大を提供するのに有効である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体と、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は組成物との組み合わせは、治療的に有効な用量で対象に投与される場合、ＮＫ細胞の脱顆粒の増強及び／又はＮＫ細胞生存能の増大を提供するのに有効である。実施形態では、本明細書に記載される抗体と、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は組成物との投与は、治療的に有効な用量で対象に投与される場合、モノクローナル抗体単独による治療に対して抵抗性である癌を治療するのに有効である。
【0164】
本明細書に記載される組み合わせ療法に関する注目すべき発見を、以下で明らかにし、本明細書に含まれる実例においてさらに詳述する。実施例１に記載した例示的なＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫マウスモデルでは、例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＣＤ２０モノクローナル抗体リツキシマブとの投与は、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は抗体単独の投与と比較した場合に、生存を延長させるのに有効であった。図１に示す通り、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブで治療されたマウスは、約４５日後に１００％の生存率を有していた。アイソタイプ対照又はリツキシマブ単独で治療されたマウスは、約３０日後に０％の生存率を有していた。アイソタイプ対照と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬で治療されたマウスは、約３５日後に０％の生存率を有していた。実施例２に記載したさらなる例示的なマウスモデルでは、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬（例えばモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与は、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は抗体単独の投与と比較した場合に、生存を延長させるのに有効であった。図５に示す通り、実例となる長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と、抗ＣＤ３８抗体、ダラツムマブで治療されたマウスは、抗体単剤の２８．５日と比較して、（腫瘍注射後）５５日という生存中央値を有していた。実施例１３に記載される通り、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬（例えば、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と抗ＣＤ３８モノクローナル抗体ダラツムマブとの、ＳＣＩＤマウスへの投与は、２倍を超える生存の増大をもたらした。対照的に、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬と抗ＣＤ３８モノクローナル抗体ダラツムマブとの、ＮＫ細胞機能性の低下を有するＳＣＩＤベージュマウスへの投与は、生存の増大が低下していた。これらの結果は、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬と抗ＣＤ３８モノクローナル抗体ダラツムマブとの投与による、ＮＫ細胞機能性に対する効果が、より長い生存をもたらすことを示す。実施例１８及び１９は、２つの例示的な結腸直腸癌腫マウスモデル（ＨＴ－２９結腸直腸癌腫細胞モデル及びＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫異種移植モデル）における、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬（例えばモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与での生存の増大を示す。
【0165】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と本明細書に記載される抗体との投与は、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及び／又は抗体単独の治療に対する、対象の生存期間の増大を提供するのに有効である。いくつかの他の実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と本明細書に記載される抗体との投与は、従来の治療に対する、対象の生存期間の増大を提供するのに有効である。１つ以上の実施形態では、生存期間は、本明細書によって記載された組み合わせの構成成分のうちの１つのみ、又は同じ適応症に対する従来の治療法で治療された対象と比較した場合に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４か月、又はそれ以上増大される。いくつかの実施形態では、生存期間は、少なくとも約１、２、３、４、５年、又はそれ以上である。
【0166】
いくつかの実施形態では、本発明の組み合わせ治療は、対象の無増悪生存期間（治療される疾患の実質的な進行を伴わない生存）を増大させるのに有効である。実施形態では、無増悪生存期間は、本明細書によって記載された組み合わせの構成成分のうちの１つのみ、又は同じ適応症に対する従来の治療法で治療された対象と比較した場合に、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４か月、又はそれ以上増大される。いくつかの実施形態では、無増悪生存期間は、少なくとも約１、２、３、４、５年、又はそれ以上である。
【0167】
ある種の実施形態では、本発明の組み合わせ治療は、この組み合わせで治療された対象の奏効率を増大させるのに有効である。実施形態では、本発明の組み合わせは、治療される対象の応答を、本明細書によって記載された組み合わせの構成成分のうちの１つのみ、又は同じ適応症に対する従来の治療法で治療された対象と比較した場合に、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、又は１００％増大させるのに有効である。
【0168】
この組み合わせ療法はまた、対象におけるＮＫ細胞増加を、単独で投与されるいずれかの薬剤又は未治療対象と比較して著しく増強される程度に促進するのに有効である。実施例２に記載した通りの、例示的なＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫異種移植マウスモデルでは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬、より具体的にはモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５と、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与は、治療されたマウスの骨髄におけるＮＫ細胞の有意な増加をもたらした。図３に見られる通り、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブで治療されたマウスは、未治療マウス又はいずれかの薬剤単独で治療されたマウスと比較した場合に、骨髄におけるＮＫ細胞増殖（細胞数）の有意な増大を呈した。図４に見られる通り、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＣＤ３８抗体ダラツムマブで治療されたマウスは、未治療マウス又はいずれかの薬剤単独で治療されたマウスと比較した場合に、骨髄におけるＢ細胞リンパ腫細胞の数が有意に減少していた。実施例１６は、ヒト頭頸部扁平上皮癌についての例示的なＦａＤｕマウスモデルにおける、例示的な長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬（例えば、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後の、腫瘍組織におけるＮＫ細胞の増殖の増大を示す。
【0169】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と本明細書に記載される抗体との投与は、ＮＫ細胞増加及び増殖の増大を提供するのに有効である。いくつかのさらなる実施形態では、本発明の組み合わせは、治療される対象のＮＫ細胞の増殖又は増加を、本明細書によって記載された組み合わせの構成成分のうちの１つのみ、又は同じ適応症に対する従来の治療法で治療された対象と比較した場合に、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、又は１００％増大させるのに有効である。実施形態では、本発明の組み合わせは、治療される対象のＮＫ細胞の増殖又は増加を、本明細書によって記載された組み合わせの構成成分のうちの１つのみ、又は同じ適応症に対する従来の治療法で治療された対象と比較した場合に、少なくとも約５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、又はそれ以上増大させるのに有効である。
【0170】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と本明細書に記載される抗体との投与は、癌細胞消失／癌細胞数の減少の増大を提供するのに有効である。いくつかの実施形態では、本発明の組み合わせは、治療される対象の癌細胞の消失を、本明細書によって記載された組み合わせの構成成分のうちの１つのみ、又は同じ適応症に対する従来の治療法で治療された対象と比較した場合に、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、又は１００％増大させるのに有効である。実施形態では、本発明の組み合わせは、治療される対象の癌細胞の消失を、本明細書によって記載された組み合わせの構成成分のうちの１つのみ、又は同じ適応症に対する従来の治療法で治療された対象と比較した場合に、少なくとも約５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、又はそれ以上増大させるのに有効である。
【0171】
実施例２に記載した通りの、例示的なＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫異種移植マウスモデルでは、例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（例えば、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与は、治療されたマウスの骨髄ＮＫ細胞におけるグランザイムＢ発現の有意な増大をもたらした。図６に見られる通り、例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（例えば、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と、抗ＣＤ３８抗体、ダラツムマブで治療されたマウスの大部分は、未治療マウス又は抗体単独で治療されたマウスと比較した場合に、骨髄におけるＮＫ細胞におけるグランザイムＢ発現の増大を呈した。図６にさらに見られる通り、この組み合わせ治療は、グランザイムＢ（細胞傷害性プロテアーゼ）マーカーの増大によって示される通り、ＮＫ細胞の大部分における機能を活性化した。図１４に示す、また実施例１１に記載する通り、例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（例えば、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与は、骨髄におけるＮＫ細胞についてのグランザイムＢ発現を、未治療マウス又は抗体単独で治療されたマウスと比較した場合に、細胞ごとに基づいて増大させるのに有効である。実施例１６に記載した通りの、例示的なＦａＤｕヒト頭頸部扁平上皮癌マウスモデルでは、例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（例えば、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与は、血液及び腫瘍試料中に存在するＮＫ細胞におけるグランザイムＢ発現を、未治療マウスと比較した場合に増大させるのに有効である。
【0172】
いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と本明細書に記載される抗体との投与は、ＮＫ細胞におけるグランザイムＢ発現の増大を提供するのに有効である。１つ以上の実施形態では、本発明の組み合わせは、治療され対象のＮＫ細胞におけるグランザイムＢ発現を、本明細書によって記載された組み合わせの構成成分のうちの１つのみ、又は同じ適応症に対する従来の治療法で治療された対象と比較した場合に、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、又は１００％増大させるのに有効である。実施形態では、本発明の組み合わせは、治療される対象のＮＫ細胞におけるグランザイムＢ発現を、本明細書によって記載された組み合わせの構成成分のうちの１つのみ、又は同じ適応症に対する従来の治療法で治療された対象と比較した場合に、少なくとも約５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、又はそれ以上増大させるのに有効である。
【0173】
実施例１０に記載した通りの、例示的なマウスモデルでは、例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５）と、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与は、細胞表面ＣＤ１６受容体を発現しているＮＫ細胞の割合を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は抗体単独の投与と比較した場合に増大させるのに有効である。実施例１５に記載した通りの、さらなる例示的な結腸直腸癌腫マウスモデルでは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブとの投与は、血液及び腫瘍試料中のＣＤ１６細胞表面発現を、未治療マウスと比較した場合に増大させるのに有効である。いくつかの実施形態では、長時間作用型ＩＬ－１５Ｒ作動薬は、ＣＤ１６に誘導され、且つＡＤＣＣ作用機序を有する抗体と組み合わせて使用される場合、低親和性Ｆｃ受容体ＣＤ１６の表面発現の増強を提供して、さらなる免疫治療効果を提供する。
【0174】
第３の態様では、上に記載した通りの、抗体と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とを含むキットが、本明細書で提供される。キットは、使用のための説明書、並びに、場合によっては、必要に応じて抗体及び長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の投与のための任意の医療用品又は装置をさらに含むことができる。
【0175】
方法、組み合わせ、キットなどは、その好ましい具体的な実施形態に関連して説明されているが、前述の説明並びに以下の実施例は例示を目的としており、開示された方法、組み合わせ、キットなどの範囲を限定する意図はないことが理解されるべきである。本開示の範囲内における他の態様、利点及び変更は、当該技術分野の当業者には明らかであろう。
【0176】
本明細書で参照される論文、著作、特許及び他の刊行物は全て、全体として参照により本明細書に援用される。本明細書の教示と、参照により組み込まれる技術との間に矛盾がある場合、この明細書における教示及び定義の意味が優先するものとする（特に、本明細書に添付の特許請求の範囲に使用されている用語に関して）。例えば、本願及び参照により組み込まれる刊行物が、同じ用語を異なるように定義する場合、用語の定義は、定義が位置する文書の教示の範囲内で保たれるものとする。
【実施例】
【0177】
前述の記載及び続く実施例は、本明細書に提供される方法、組み合わせ、キットなどを説明するものであり、範囲を限定するものではないことを理解するべきである。他の態様、利点及び修正は、本開示が関係する当業者に明らかである。
【0178】
以下の実施例では、使用される数（例えば、量、温度等）に関する正確性を確保するように努めたが、いくらかの実験誤差及び偏差は考慮しなければならない。特に指示がない限り、温度は摂氏温度であり、圧力は海上気圧又はその近傍におけるものである。以下の例の各々は、当業者が本明細書に記載される実施形態の１つ又は複数を実行するための教示と見なされる。
【0179】
材料及び方法
以下の実施例で使用される例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、他に指示されない限り、一般に次の構造：
（ここでは、ｎは、約９０９という値を有する（その結果、この分子のポリエチレングリコール部分は、約４０キロダルトンの重量平均分子量を有する））
によって説明され、［ｍＰＥＧ４０ｋＤ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ］－ＩＬ－１５とも称される、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５である。この例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、コンジュゲート１又は化合物１（これらの用語は、以下の実施例で互換的に使用される）として本明細書に記載される。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の調製は、ＰＣＴ出願／米国特許出願公開第２０１８／０３２８１７号明細書（国際公開第２０１８／２１３３４１号パンフレット）の実施例１に記載されている。これらの実施例中の用量及び濃度は、ＩＬ－１５タンパク質含量に基づいている。
以下の実施例で使用される例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、他に指示されない限り、一般に次の構造：
【化13】
（ここでは、ｎは、約９０９という値を有する（その結果、この分子のポリエチレングリコール部分は、約４０キロダルトンの重量平均分子量を有する））
によって説明され、［ｍＰＥＧ４０ｋＤ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ］－ＩＬ－１５とも称される、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５である。この例示的な長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、コンジュゲート１又は化合物１（これらの用語は、以下の実施例で互換的に使用される）として本明細書に記載される。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５の調製は、ＰＣＴ出願／米国特許出願公開第２０１８／０３２８１７号明細書（国際公開第２０１８／２１３３４１号パンフレット）の実施例１に記載されている。これらの実施例中の用量及び濃度は、ＩＬ－１５タンパク質含量に基づいている。
【0180】
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析
試料はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎゲル電気泳動システム（ＸＣｅｌｌ ＳｕｒｅＬｏｃｋ Ｍｉｎｉ－Ｃｅｌｌ）を使用してドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって分析してもよい。試料を試料緩衝液と混合し、調製した試料をＮｕＰＡＧＥ Ｎｏｖｅｘプレキャストゲルにロードし、約３０分間泳動した。
試料はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎゲル電気泳動システム（ＸＣｅｌｌ ＳｕｒｅＬｏｃｋ Ｍｉｎｉ－Ｃｅｌｌ）を使用してドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって分析してもよい。試料を試料緩衝液と混合し、調製した試料をＮｕＰＡＧＥ Ｎｏｖｅｘプレキャストゲルにロードし、約３０分間泳動した。
【0181】
ＲＰ－ＨＰＬＣ分析
逆相クロマトグラフィー（ＲＰ ＨＰＬＣ）分析をＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ）上で行ってもよい。サンプルをＰｏｒｏｓｈｅｌｌ ３００ＳＢ－Ｃ３カラム（２．１ｘ７５ｍＭ、Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して６０℃で分析してもよい。使用した移動相は０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（Ａ）及び０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ（Ｂ）でもよい。カラムの流速は０．５ｍｌ／分でもよい。溶出したタンパク質及びＰＥＧ－タンパク質コンジュゲートは、２８０ｎｍのＵＶを使用して検出する。
逆相クロマトグラフィー（ＲＰ ＨＰＬＣ）分析をＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ）上で行ってもよい。サンプルをＰｏｒｏｓｈｅｌｌ ３００ＳＢ－Ｃ３カラム（２．１ｘ７５ｍＭ、Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して６０℃で分析してもよい。使用した移動相は０．１％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（Ａ）及び０．１％ＴＦＡ／ＣＨ３ＣＮ（Ｂ）でもよい。カラムの流速は０．５ｍｌ／分でもよい。溶出したタンパク質及びＰＥＧ－タンパク質コンジュゲートは、２８０ｎｍのＵＶを使用して検出する。
【0182】
バイオアッセイ
ＣＴＬＬ－２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化に基づく効力アッセイ（マウスＴ細胞）
受容体結合後のホスホ－ＳＴＡＴ５アッセイにおいて、次いで下流細胞シグナル伝達は、リン酸化を介して転写５（ＳＴＡＴ５）のシグナルトランスデューサー及び活性化因子を活性化して遺伝子発現を促進し、細胞増殖を誘導することができる。参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３２８１７号明細書に記載されている通り、ホスホ－ＳＴＡＴ５の活性化は、適切な細胞株内で、ホスホＳＴＡＴ５／総ＳＴＡＴ５多重アッセイ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、ＭＤ）を用いて、サンプル及び参照処置に対する約１０分間の応答により測定する。
ＣＴＬＬ－２細胞におけるＳＴＡＴ５リン酸化に基づく効力アッセイ（マウスＴ細胞）
受容体結合後のホスホ－ＳＴＡＴ５アッセイにおいて、次いで下流細胞シグナル伝達は、リン酸化を介して転写５（ＳＴＡＴ５）のシグナルトランスデューサー及び活性化因子を活性化して遺伝子発現を促進し、細胞増殖を誘導することができる。参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３２８１７号明細書に記載されている通り、ホスホ－ＳＴＡＴ５の活性化は、適切な細胞株内で、ホスホＳＴＡＴ５／総ＳＴＡＴ５多重アッセイ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、ＭＤ）を用いて、サンプル及び参照処置に対する約１０分間の応答により測定する。
【0183】
ＨｕＰＢＭＣ－ｐＳｔａｔ５アッセイ
様々な細胞に対するＩＬ－１５又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の効力は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３２８１７号明細書にさらに記載されているように、ホスホ－ＳＴＡＴ５（Ｙ６９４）用量応答アッセイによって決定することができる。
様々な細胞に対するＩＬ－１５又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬の効力は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３２８１７号明細書にさらに記載されているように、ホスホ－ＳＴＡＴ５（Ｙ６９４）用量応答アッセイによって決定することができる。
【0184】
実施例１
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＣＤ－２０モノクローナル抗体、リツキシマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける生存の評価
０日目に、ＳＣＩＤマウスに、１×１０７個のＤａｕｄｉ細胞を静脈内注射した。これらのマウスを、４つの群に分けた。Ｄａｕｄｉ細胞注射後の１４及び１７日目に、これらの群を、次の通りの注射によって治療した：第１群：アイソタイプ対照抗体、第２群：４０ｍｇ／ｋｇ ＩＰリツキシマブ、第３群：０．３ｍｇ／ｋｇモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬）、第４群：４０ｍｇ／ｋｇ ＩＰリツキシマブ及び０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（組み合わせ）。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＣＤ－２０モノクローナル抗体、リツキシマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける生存の評価
０日目に、ＳＣＩＤマウスに、１×１０７個のＤａｕｄｉ細胞を静脈内注射した。これらのマウスを、４つの群に分けた。Ｄａｕｄｉ細胞注射後の１４及び１７日目に、これらの群を、次の通りの注射によって治療した：第１群：アイソタイプ対照抗体、第２群：４０ｍｇ／ｋｇ ＩＰリツキシマブ、第３群：０．３ｍｇ／ｋｇモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬）、第４群：４０ｍｇ／ｋｇ ＩＰリツキシマブ及び０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（組み合わせ）。
【0185】
代替パラメータとして後肢麻痺の開始を測定することによって、生存率を決定した。結果を、図２に示す。
【0186】
図２に見られる通り、リツキシマブとモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（図２では「ＩＬ－１５受容体作動薬」として示される）との組み合わせられた投与は、単剤療法として投与された場合のいずれかの構成成分の投与と比較した場合の、長期の生存の有意な増大を提供した（「組み合わせ」と記した水平線を参照のこと）。この結果は、長時間作用型受容体作動薬、ｍＰＥＧ－ＢＡ－ＩＬ－１５が、実例となる抗ＣＤ－２０モノクローナル抗体、例えばリツキシマブと組み合わせて投与された場合に、インビボリンパ腫モデルにおいて評価された場合のマウスにおける生存時間を有意に増強する能力を示す。
【0187】
実施例２
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける骨髄における細胞数及びグランザイムＢ発現の評価
０日目に、ＳＣＩＤマウス（Ｎ＝６／群）に、１×１０７個のＤａｕｄｉ細胞を静脈内接種し、単回投与の抗ヒトＣＤ３８抗体、ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）で治療した。マウスをまた、単剤療法：ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、又は２回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後）で治療した。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける骨髄における細胞数及びグランザイムＢ発現の評価
０日目に、ＳＣＩＤマウス（Ｎ＝６／群）に、１×１０７個のＤａｕｄｉ細胞を静脈内接種し、単回投与の抗ヒトＣＤ３８抗体、ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）で治療した。マウスをまた、単剤療法：ダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、又は２回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ ＳＣ、接種の１４及び２１日後）で治療した。
【0188】
骨髄におけるＮＫ細胞増加及び活性化並びにリンパ腫減少を、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５の第２の投与の３日後（２４日目）に、図３及び４にそれぞれ示す通り、フローサイトメトリーによって評価した。図３に示す通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５とダラツムマブとの組み合わせは、単剤療法としてのモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５及びダラツムマブで治療されたマウスと比較して（それぞれ、ｐ＝０．００２６及びｐ＜０．０００１）、また、未治療対照と比較して（ｐ＜０．０００１）、治療されたマウスの骨髄におけるＮＫ細胞の有意な増加をもたらした。（一元配置ＡＮＯＶＡ、テューキーの多重比較検定）。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５単独療法についての１０倍の増加に対して、組み合わせ療法についてのＮＫ細胞数の１９倍の増加が認められ、骨髄組織内部の例示的なモノクローナル抗体とモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５との間の相乗作用が示された。
【0189】
図４に示す通り、ダラツムマブと組み合わせたモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５は、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５及びダラツムマブ単剤治療と比較して（それぞれ、ｐ＝０．０２及びｐ＝０．００１）、また、未治療対照と比較して（ｐ＜０．０００１）、Ｂ細胞リンパ腫減少を有意に向上させた。（一元配置ＡＮＯＶＡ、テューキーの多重比較検定）。
【0190】
グランザイムＢ発現を、図６に示す通り、骨髄ＮＫ細胞において測定した。図６中に示される通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５は、高度に特殊化された免疫区画においても、ＮＫ細胞動態を制御するのに有効であり、また、単独で又はダラツムマブなどのモノクローナル抗体と組み合わせて、治療されたマウスの骨髄におけるグランザイムＢ発現を増大させるのに有効である。したがって、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５と、ダラツムマブなどの腫瘍結合抗体との組み合わせは、図６におけるグランザイムＢ（細胞傷害性プロテアーゼ）マーカーによって示される通り骨髄におけるＮＫ細胞数を有意に増加するだけでなく、これらのＮＫ細胞の大部分（＞７０％）における致死機能を活性化するのにも有効である。
【0191】
これらの結果は、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５が、抗腫瘍抗体と共に投与された場合に、ＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣを実質的に増強するのに有効であることをさらに示す。
【0192】
実施例３
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける生存の評価
１×１０７個のＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫細胞を静脈内接種したＳＣＩＤマウス（Ｎ＝８／群）を、単回投与のダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の１４日後）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、腫瘍接種の１４、２１、及び２８日後に投与される）で治療した。対照としての未治療マウス、及び単剤療法としてのダラツムマブで治療されたマウスも評価した。腫瘍を接種されたマウスの生存を、エンドポイントマーカーとしてのボディコンディションスコアリングによって測定した。結果を、図によって図５に提供する。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける生存の評価
１×１０７個のＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫細胞を静脈内接種したＳＣＩＤマウス（Ｎ＝８／群）を、単回投与のダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の１４日後）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、腫瘍接種の１４、２１、及び２８日後に投与される）で治療した。対照としての未治療マウス、及び単剤療法としてのダラツムマブで治療されたマウスも評価した。腫瘍を接種されたマウスの生存を、エンドポイントマーカーとしてのボディコンディションスコアリングによって測定した。結果を、図によって図５に提供する。
【0193】
図５に示す通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のダラツムマブとの組み合わせは、ダラツムマブ単剤治療と比較して、生存中央値を有意に増大させる（ｐ＜０．０５、ログランク検定）。組み合わせ療法によって治療された群についての生存中央値は、腫瘍注射の５５日後であったのに対して、ダラツムマブ単剤治療群についての生存中央値は、２８．５日であった。
【0194】
実施例４
腫瘍標的治療抗体及び長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のＮＫ細胞活性化及び抑制性受容体細胞表面発現調節
骨髄内にＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝６／群）に、Ｄａｕｄｉ細胞静脈内接種後の１４日目に、単回の０．５ｍｇ／ｋｇ用量の、ヒトＣＤ３８タンパク質を標的にする臨床抗体ダラツムマブ（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）又は適合するアイソタイプを有する非特異的な対照抗体を腹腔内投与した。さらなる群に、Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に、単剤として、０．３ｍｇ／ｋｇの用量の、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）を皮下投与した、又はＤａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与されるコンジュゲート１と、Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４日目に０．５ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与されるダラツムマブとの組み合わせ治療を施した。
腫瘍標的治療抗体及び長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のＮＫ細胞活性化及び抑制性受容体細胞表面発現調節
骨髄内にＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝６／群）に、Ｄａｕｄｉ細胞静脈内接種後の１４日目に、単回の０．５ｍｇ／ｋｇ用量の、ヒトＣＤ３８タンパク質を標的にする臨床抗体ダラツムマブ（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）又は適合するアイソタイプを有する非特異的な対照抗体を腹腔内投与した。さらなる群に、Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に、単剤として、０．３ｍｇ／ｋｇの用量の、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）を皮下投与した、又はＤａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与されるコンジュゲート１と、Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４日目に０．５ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与されるダラツムマブとの組み合わせ治療を施した。
【0195】
第２のコンジュゲート１投与の３日後（Ｄａｕｄｉ接種後２４日目）、骨髄を収集し、ＮＫ細胞の割合を、骨髄全体において、フローサイトメトリーによって測定した。細胞表面活性化受容体ＮＫＧ２Ｄ及び抑制性チェックポイント受容体ＮＫＧ２Ａの発現を、それぞれ図７Ａ及び７Ｂに示す。
【0196】
結果を、表１及び図７Ａ～７Ｂに提供する。単剤としての又はダラツムマブと組み合わせた治療用量のコンジュゲート１を受けたすべての群は、コンジュゲート１を含まないすべての治療と比較した場合に、細胞表面上にＮＫＧ２Ａを発現するＮＫ細胞の割合の増大（図７Ａ）、及び細胞表面上にＮＫＧ２Ｄを発現するＮＫ細胞の割合の低下（図７Ｂ）を示した。それぞれの抑制性チェックポイント受容体活性化の増大及び活性化受容体を発現しているＮＫ細胞の減少は、この実施例ではダラツムマブによって例示される治療用腫瘍標的抗体の存在下での、コンジュゲート１によるＮＫ細胞活性化を示唆していた。
【0197】
【表1】
【0198】
実施例５
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及び免疫グロブリンでの治療後のヒトＮＫ細胞増殖の誘発
ＣＦＳＥ調製物で標識された、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）内のＮＫ細胞増殖を、インビトロで誘発した。ＣＦＳＥ標識されたＰＢＭＣを、（ｉ）１００ｎｇ／ｍｌの濃度のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）の存在下で；（ｉｉ）０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト全免疫グロブリンＧ（ｈＩｇＧ）溶液で事前に一晩コーティングされた細胞培養プラスチック上で、（ｉｉｉ）０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト全免疫グロブリンＧ（ｈＩｇＧ）溶液で事前に一晩コーティングされた細胞培養プラスチック上で、且つ１００ｎｇ／ｍｌの濃度のコンジュゲート１の存在下で；又は（ｉｖ）通常の細胞培養プラスチック上で、インビトロで５日間インキュベートした。インキュベーション期間後、細胞倍化を経た細胞におけるＣＦＳＥの減少によって示される細胞増殖を、４つのインキュベーション条件のそれぞれにおいて、ＰＢＭＣ調製物内のＣＤ５６＋ヒトＮＫ細胞におけるＣＦＳＥレベルを測定するフローサイトメトリーを用いて測定した（図８Ａ～８Ｄ）。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及び免疫グロブリンでの治療後のヒトＮＫ細胞増殖の誘発
ＣＦＳＥ調製物で標識された、ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）内のＮＫ細胞増殖を、インビトロで誘発した。ＣＦＳＥ標識されたＰＢＭＣを、（ｉ）１００ｎｇ／ｍｌの濃度のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）の存在下で；（ｉｉ）０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト全免疫グロブリンＧ（ｈＩｇＧ）溶液で事前に一晩コーティングされた細胞培養プラスチック上で、（ｉｉｉ）０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト全免疫グロブリンＧ（ｈＩｇＧ）溶液で事前に一晩コーティングされた細胞培養プラスチック上で、且つ１００ｎｇ／ｍｌの濃度のコンジュゲート１の存在下で；又は（ｉｖ）通常の細胞培養プラスチック上で、インビトロで５日間インキュベートした。インキュベーション期間後、細胞倍化を経た細胞におけるＣＦＳＥの減少によって示される細胞増殖を、４つのインキュベーション条件のそれぞれにおいて、ＰＢＭＣ調製物内のＣＤ５６＋ヒトＮＫ細胞におけるＣＦＳＥレベルを測定するフローサイトメトリーを用いて測定した（図８Ａ～８Ｄ）。
【0199】
結果を、表２及び図８Ａ～８Ｄに提供する。データは、コンジュゲート１とｈＩｇＧのどちらもＰＢＭＣに曝露されなかった場合、ＮＫ細胞の２．２５％しか増殖しなかったことを示す。ｈＩｇＧ単独の存在下では、ＮＫ細胞の３．９２％が増殖した。コンジュゲート１の曝露は、ＮＫ細胞の４９．７％の増殖をもたらした。しかし、ＰＢＭＣがｈＩｇＧとコンジュゲート１の両方に曝露された場合、ＮＫ細胞の７２％が増殖し、これは、ｈＩｇＧとコンジュゲート１の組み合わせ治療が、ｈＩｇＧとコンジュゲート１単剤治療単独の合計よりも有意に多い細胞を増殖させたことを示していた。
【0200】
【表2】
【0201】
実施例６
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と免疫グロブリンの投与後のヒトＮＫ細胞の機能的活性化
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）調製物内でのヒトＮＫ細胞の機能的活性化を、インビトロで誘発した。２人のドナーからのＰＢＭＣを、（ｉ）１μｇ／ｍｌの濃度のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）の存在下で；（ｉｉ）０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト全免疫グロブリンＧ（ｈＩｇＧ）溶液で事前に一晩コーティングされた細胞培養プラスチック上で、（ｉｉｉ）０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト全免疫グロブリンＧ（ｈＩｇＧ）溶液で事前に一晩コーティングされた細胞培養プラスチック上で、且つ１μｇ／ｍｌの濃度のコンジュゲート１の存在下で；又は（ｉｖ）通常の細胞培養プラスチック上で、一晩インキュベートした。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と免疫グロブリンの投与後のヒトＮＫ細胞の機能的活性化
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）調製物内でのヒトＮＫ細胞の機能的活性化を、インビトロで誘発した。２人のドナーからのＰＢＭＣを、（ｉ）１μｇ／ｍｌの濃度のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）の存在下で；（ｉｉ）０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト全免疫グロブリンＧ（ｈＩｇＧ）溶液で事前に一晩コーティングされた細胞培養プラスチック上で、（ｉｉｉ）０．１ｍｇ／ｍｌの濃度のヒト全免疫グロブリンＧ（ｈＩｇＧ）溶液で事前に一晩コーティングされた細胞培養プラスチック上で、且つ１μｇ／ｍｌの濃度のコンジュゲート１の存在下で；又は（ｉｖ）通常の細胞培養プラスチック上で、一晩インキュベートした。
【0202】
インキュベーション期間の後、ＰＢＭＣ内のＣＤ５６＋ヒトＮＫ細胞の表面上のＣＤ６９（図９Ａ）及びＣＤ１０７ａ（図９Ｂ）検出抗体の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）シグナルの増大を測定することによって、フローサイトメトリーを用いてＮＫ細胞活性化を測定した。ＮＫ細胞の機能的活性化を、細胞がｈＩｇＧとコンジュゲート１のどちらにも曝露されていない対照条件と比較した場合のＭＦＩの変化の倍数を算出することによって評価した。活性化マーカーＭＦＩの変化の倍数の増大は、ＮＫ細胞の機能的活性化を示す、個々のＮＫ細胞上のこれらのマーカータンパク質の増大を示した。実験の最後の培養培地中の、ＮＫ細胞活性化をやはり示唆する分泌されたグランザイムＢ濃度を、ＥＬＩＳＡによって測定した（図９Ｃ）。
【0203】
結果を、表３及び図９Ａ～９Ｃに提供する。このデータは、ＮＫ細胞上のＣＤ６９ ＭＦＩが、ｈＩｇＧの存在下で１．４倍増大したことを示す。コンジュゲート１の曝露は、１．８倍のＣＤ６９ ＭＦＩ増大をもたらした。しかし、ＰＢＭＣが、ｈＩｇＧとコンジュゲート１との両方に曝露された場合、ＣＤ６９ ＭＦＩは、ＮＫ細胞上で、それぞれ個々の治療よりも大きく、３．２倍増大した。ＮＫ細胞上のＣＤ１０７ａ ＭＦＩは、ｈＩｇＧの存在下で、１．８倍増大した。コンジュゲート１の曝露は、２．６倍のＣＤ１０７ａ ＭＦＩ増大をもたらした。しかし、ＰＢＭＣが、ｈＩｇＧとコンジュゲート１との両方に曝露された場合、ＣＤ１０７ａ ＭＦＩは、ＮＫ細胞上で、それぞれ個々の治療よりも大きく、４．３倍増大した。分泌されたグランザイムＢ濃度は、ｈＩｇＧの存在下で、対照条件と比較して増大しなかった。コンジュゲート１の曝露は、培養培地中のグランザイムＢ濃度の４．１倍の増大をもたらした。しかし、ＰＢＭＣが、ｈＩｇＧとコンジュゲート１との両方に曝露された場合、グランザイムＢ濃度は、それぞれ個々の治療よりも有意に大きく、培養培地中で１８．７倍増大した。
【0204】
【表3】
【0205】
実施例７
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬のインビトロシグナル伝達、及び増殖に対する効果
ＫＨＹＧ－１細胞を、２０％ ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、及び２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２を添加したＲＰＭＩ－１６４０培地（完全増殖培地）中で、３７℃且つ５％ ＣＯ２の加湿型インキュベータ内で培養した。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬のインビトロシグナル伝達、及び増殖に対する効果
ＫＨＹＧ－１細胞を、２０％ ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、及び２０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２を添加したＲＰＭＩ－１６４０培地（完全増殖培地）中で、３７℃且つ５％ ＣＯ２の加湿型インキュベータ内で培養した。
【0206】
試験化合物での治療の１日前、細胞を、完全増殖培地中に５００，０００個の生細胞／ｍｌの密度で播種し、通常の成長条件下で一晩インキュベートした。アッセイの当日に、ＫＨＹＧ－１細胞を、ＤＰＢＳで３回洗浄し、アッセイ培地（２０％ ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミンを添加したＲＰＭＩ－１６４０培地）に再懸濁し、３７℃、５％ ＣＯ２で４～５時間インキュベートした。細胞を、アッセイ培地で、適切な密度（８×１０５細胞／ｍＬ）に調整し、５０，０００細胞／ウェルを、９６ウェルプレート（Ｖｉｅｗ－Ｐｌａｔｅ ９６、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）のウェルに分注した。
【0207】
ＳＴＡＴ５のリン酸化の評価
ＫＨＹＧ－１細胞を、ＩＬ－１５又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）で刺激し、それに続いて、３７℃、５％ ＣＯ２で、１０分間のインキュベーションを行った。処理された細胞を、氷上で溶解させた。
ＫＨＹＧ－１細胞を、ＩＬ－１５又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）で刺激し、それに続いて、３７℃、５％ ＣＯ２で、１０分間のインキュベーションを行った。処理された細胞を、氷上で溶解させた。
【0208】
細胞ライセート中のｐｈｏｓｐｈｏ－ＳＴＡＴ５タンパク質レベルの検出を、Ｐｈｏｓｐｈｏ（Ｔｙｒ６９４）／Ｔｏｔａｌ ＳＴＡＴ５ａ，ｂ Ａｓｓａｙ Ｗｈｏｌｅ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓａｔｅキット（ＭＳＤ製品＃Ｋ１５１６３Ｄ）を使用して実施した。ｐｈｏｓｐｈｏｒ－ＳＴＡＴ５に対応する相対発光量（Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｌｉｇｈｔ ｕｎｉｔ）（ＲＬＵ）シグナルを、Ｓｅｃｔｏｒ（登録商標）Ｉｍａｇｅｒ ２４００プレートリーダー（ＭＳＤ）を使用して収集し、結果を図１０Ａに提供した。ＩＬ－１５と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬はどちらも、ヒトＮＫ細胞株ＫＨＹＧ－１におけるＳＴＡＴ５の用量依存性のリン酸化をもたらし、これは、これらの化合物が、インビトロでのシグナル伝達において有効であることを示した。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、ＳＴＡＴ５のリン酸化を誘発し、ＳＴＡＴ５の最大のリン酸化（パーセント）をもたらし、これは、約３倍低い効力ではあるが、ＩＬ－１５と同様であった。このデータは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、ＫＨＹＧ－１細胞株における下流のシグナル伝達に効率的に関与及び活性化することができることを示唆する。
【0209】
細胞増殖の評価
ＫＨＹＧ－１細胞の刺激は、ＩＬ－１５又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）の、細胞を含有する２連のウェルへの移動、それに続く３７℃、５％ ＣＯ２での４８時間のインキュベーションによって開始した。
ＫＨＹＧ－１細胞の刺激は、ＩＬ－１５又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）の、細胞を含有する２連のウェルへの移動、それに続く３７℃、５％ ＣＯ２での４８時間のインキュベーションによって開始した。
【0210】
各ウェルにおける細胞成長を、製造者の説明書に従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ２．０を使用してＡＴＰレベルを測定することによって測定した。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬のＫＨＹＧ－１細胞増殖に対する効果を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ２．０を使用して、４８時間の治療の後に、ＩＬ－１５と比較し、結果を図１０Ｂに示した。この図に見られる通り、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬についての最大増殖応答は、ＩＬ－１５によってもたらされる応答に匹敵していた。
【0211】
実施例８
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のヒトＮＫ細胞増殖のインビトロでの誘発
ＣＦＳＥ調製物で標識されたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、漸増用量のｒｈＩＬ－１５（用量範囲１ｎｇ／ｍｌ～１００ｎｇ／ｍｌ、５点、３倍希釈）又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）（用量範囲１０ｎｇ／ｍｌ～１０００ｎｇ／ｍｌ、５点、３倍希釈）の存在下で、インビトロで５日間インキュベートした。インキュベーション期間後、細胞倍化を経た細胞におけるＣＦＳＥの減少によって示される細胞増殖を、ＰＢＭＣ調製物内のＣＤ５６＋ヒトＮＫ細胞におけるＣＦＳＥレベルを測定するフローサイトメトリーを用いて測定した。結果を図１１及び下の表４に提供する。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のヒトＮＫ細胞増殖のインビトロでの誘発
ＣＦＳＥ調製物で標識されたヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、漸増用量のｒｈＩＬ－１５（用量範囲１ｎｇ／ｍｌ～１００ｎｇ／ｍｌ、５点、３倍希釈）又は長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）（用量範囲１０ｎｇ／ｍｌ～１０００ｎｇ／ｍｌ、５点、３倍希釈）の存在下で、インビトロで５日間インキュベートした。インキュベーション期間後、細胞倍化を経た細胞におけるＣＦＳＥの減少によって示される細胞増殖を、ＰＢＭＣ調製物内のＣＤ５６＋ヒトＮＫ細胞におけるＣＦＳＥレベルを測定するフローサイトメトリーを用いて測定した。結果を図１１及び下の表４に提供する。
【0212】
【表4】
【0213】
ｒｈＩＬ－１５と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬はどちらも、ヒトＮＫ細胞増殖を用量依存的に誘発した。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬は、ヒトＮＫ細胞増殖を誘発する強さがｒｈＩＬ－１５よりもおよそ１７倍弱い。しかし、ｒｈＩＬ－１５と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬によってもたらされる最大増殖応答は、同等である。
【0214】
実施例９
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及び免疫グロブリンでの治療後のＮＫ細胞細胞傷害性の評価
ヒトＮＫ細胞を、ネガティブセレクションを使用して、正常なドナーＰＢＭＣから磁気によって選別した。ＮＫ細胞を、４００，０００細胞／ウェルの密度で、９６ウェルＵ底プレートに播種した。ＮＫ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％抗生物質／抗真菌薬を添加したＲＰＭＩ－１６４０完全培地中で、５％ ＣＯ２中で３７℃で一晩、１０００ｎｇ／ｍＬの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）で刺激した（＋）、又は刺激しないままにした（－）。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及び免疫グロブリンでの治療後のＮＫ細胞細胞傷害性の評価
ヒトＮＫ細胞を、ネガティブセレクションを使用して、正常なドナーＰＢＭＣから磁気によって選別した。ＮＫ細胞を、４００，０００細胞／ウェルの密度で、９６ウェルＵ底プレートに播種した。ＮＫ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％抗生物質／抗真菌薬を添加したＲＰＭＩ－１６４０完全培地中で、５％ ＣＯ２中で３７℃で一晩、１０００ｎｇ／ｍＬの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）で刺激した（＋）、又は刺激しないままにした（－）。
【0215】
ヒト多発性骨髄腫ＲＰＭＩ－８２２６細胞（ＡＴＣＣ ＃ＣＣＬ－１５５）を、ＰＢＳで洗浄し、０．１５μＭ ＣＦＳＥで３７℃で５分間染色した。記載がある場合には、この腫瘍細胞を、１００ｎｇ／ｍＬダラツムマブ（＋）で、３７℃で１時間、あらかじめコーティングした。刺激されたＮＫ細胞（エフェクター細胞）と、あらかじめコーティングされたＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞（標的細胞）を、１０：１のエフェクター（Ｅ）：標的（Ｔ）比で、５％ ＣＯ２中で３７℃で３時間、共培養した。インキュベーション後、細胞を、フロー染色緩衝液で洗浄し、４℃で１５分間Ｆｃブロッキングし、表面染色した（ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ３－蛍光コンジュゲート化抗体）。これらの細胞を、ＰＢＳで洗浄し、７－アミノアクチノマイシン（７－ＡＡＤ）生死判別染色液（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｓｔａｉｎ）中で４℃で３０分間インキュベートし、その後、Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）を使用するフローサイトメトリー分析を受けた。全細胞集団からの７－ＡＡＤ＋ＣＦＳＥ＋標的細胞の割合は、死んだ腫瘍細胞についての割合である。
【0216】
結果を、図１２に提供する。このデータは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬で刺激されたヒトＮＫ細胞が、ダラツムマブであらかじめコーティングされた多発性骨髄腫細胞のＡＤＣＣを増強することを示す。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬で刺激されたＮＫ細胞は、未治療ＮＫ細胞又はダラツムマブ単独で治療されたＮＫ細胞よりも、標的細胞に対して細胞傷害性であった。
【0217】
実施例１０
腫瘍標的治療抗体と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のＮＫ細胞低親和性免疫グロブリン受容体（ＣＤ１６）細胞表面発現調節
骨髄内にＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝６／群）に、Ｄａｕｄｉ細胞静脈内接種後の１４日目に、単回の０．５ｍｇ／ｋｇ用量の、ヒトＣＤ３８タンパク質を標的にする臨床抗体ダラツムマブ（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）又は適合するアイソタイプを有する非特異的な対照抗体を腹腔内投与した。さらなる群を、（ｉ）Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に、単剤として、０．３ｍｇ／ｋｇの用量の、モノ（ｍＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）を皮下投与した、又は（ｉｉ）Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与されるコンジュゲート１と、Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４日目に０．５ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与されるダラツムマブとの組み合わせ治療で治療した。
腫瘍標的治療抗体と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のＮＫ細胞低親和性免疫グロブリン受容体（ＣＤ１６）細胞表面発現調節
骨髄内にＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝６／群）に、Ｄａｕｄｉ細胞静脈内接種後の１４日目に、単回の０．５ｍｇ／ｋｇ用量の、ヒトＣＤ３８タンパク質を標的にする臨床抗体ダラツムマブ（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）又は適合するアイソタイプを有する非特異的な対照抗体を腹腔内投与した。さらなる群を、（ｉ）Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に、単剤として、０．３ｍｇ／ｋｇの用量の、モノ（ｍＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）を皮下投与した、又は（ｉｉ）Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与されるコンジュゲート１と、Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４日目に０．５ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与されるダラツムマブとの組み合わせ治療で治療した。
【0218】
第２のコンジュゲート１投与の３日後（Ｄａｕｄｉ接種後２４日目）、骨髄を収集し、ＮＫ細胞の割合を、骨髄全体において、フローサイトメトリーによって測定した。腫瘍標的抗体の存在下で抗体依存性細胞傷害機構を媒介することが公知である細胞表面ＣＤ１６受容体を発現しているＮＫ細胞の割合、及びＮＫ細胞上の細胞ごとに基づくＣＤ１６発現の変化を、それぞれ図１３Ａ及び１３Ｂに示す。
【0219】
結果を、表５及び表６並びに図１３Ａ～１３Ｂに提供する。単剤としての又はダラツムマブと組み合わせた治療用量のコンジュゲート１を受けたすべての群は、コンジュゲート１を含まないすべての治療と比較した場合に、細胞表面上にＣＤ１６を発現するＮＫ細胞の割合の増大を示し（図１３Ａ）、また、細胞ごとに基づくＮＫ細胞上のＣＤ１６発現も増大した（図１３Ｂ）。ＣＤ１６受容体を発現しているＮＫ細胞のそれぞれの増大、並びに個々のＮＫ細胞上でのＣＤ１６発現の増大は、この実施例ではダラツムマブによって例示される治療用腫瘍標的抗体の存在下での、コンジュゲート１によるＮＫ細胞活性化を示唆していた。
【0220】
【表5】
【0221】
【表6】
【0222】
実施例１１
腫瘍標的治療抗体と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のＮＫ細胞細胞傷害性タンパク質グランザイムＢ発現調節
骨髄内にＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝６／群）に、Ｄａｕｄｉ細胞静脈内接種後の１４日目に、単回の０．５ｍｇ／ｋｇ用量の、ヒトＣＤ３８タンパク質を標的にする臨床抗体ダラツムマブ（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）又は適合するアイソタイプを有する非特異的な対照抗体を腹腔内投与した。さらなる群を、（ｉ）Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に、単剤として、０．３ｍｇ／ｋｇの用量の、モノ（ｍＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）を皮下投与した、又は（ｉｉ）Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与されるコンジュゲート１と、Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４日目に０．５ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与されるダラツムマブとの組み合わせ治療で治療した。
腫瘍標的治療抗体と長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のＮＫ細胞細胞傷害性タンパク質グランザイムＢ発現調節
骨髄内にＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝６／群）に、Ｄａｕｄｉ細胞静脈内接種後の１４日目に、単回の０．５ｍｇ／ｋｇ用量の、ヒトＣＤ３８タンパク質を標的にする臨床抗体ダラツムマブ（ＤＡＲＺＡＬＥＸ（登録商標）、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）又は適合するアイソタイプを有する非特異的な対照抗体を腹腔内投与した。さらなる群を、（ｉ）Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に、単剤として、０．３ｍｇ／ｋｇの用量の、モノ（ｍＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（コンジュゲート１）を皮下投与した、又は（ｉｉ）Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４及び２１日目に０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与されるコンジュゲート１と、Ｄａｕｄｉ細胞接種後の１４日目に０．５ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内投与されるダラツムマブとの組み合わせ治療で治療した。
【0223】
第２のコンジュゲート１投与の３日後（Ｄａｕｄｉ接種後２４日目）、骨髄を収集し、ＮＫ細胞の割合を、骨髄全体において、フローサイトメトリーによって測定した。ＮＫ細胞上の細胞ごとに基づく細胞内グランザイムＢ発現の変化を、図１４に示す。
【0224】
結果を、表７及び図１４に提供する。単剤としての又はダラツムマブと組み合わせた治療用量のコンジュゲート１を受けた群は、コンジュゲート１を含まないすべての治療と比較した場合に、ＮＫ細胞における細胞ごとに基づくグランザイムＢの発現の増大を示した（図１４）。個々のＮＫ細胞におけるグランザイムＢ発現のそれぞれの増大は、この実施例ではダラツムマブによって例示される治療用腫瘍標的抗体の存在下での、コンジュゲート１によるＮＫ細胞活性化を示唆していた。
【0225】
【表7】
【0226】
実施例１２
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のインビトロでのＢ細胞リンパ腫細胞に対する抗体媒介性の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の評価
ヒトＮＫ細胞を、ネガティブセレクションを使用して、正常なドナーＰＢＭＣから磁気によって選別した。ＮＫ細胞を、８０，０００細胞／ウェル（図１５Ａ）又は４００，０００細胞／ウェル（図１５Ｂ）の密度で、９６ウェルＵ底プレートに播種した。ＮＫ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％抗生物質／抗真菌薬を添加したＲＰＭＩ－１６４０完全培地中で、５％ ＣＯ２中で３７℃で一晩、３００ｎｇ／ｍＬの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）で刺激した（＋）、又は刺激しないままにした（－）。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬での治療後のインビトロでのＢ細胞リンパ腫細胞に対する抗体媒介性の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の評価
ヒトＮＫ細胞を、ネガティブセレクションを使用して、正常なドナーＰＢＭＣから磁気によって選別した。ＮＫ細胞を、８０，０００細胞／ウェル（図１５Ａ）又は４００，０００細胞／ウェル（図１５Ｂ）の密度で、９６ウェルＵ底プレートに播種した。ＮＫ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％抗生物質／抗真菌薬を添加したＲＰＭＩ－１６４０完全培地中で、５％ ＣＯ２中で３７℃で一晩、３００ｎｇ／ｍＬの長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬（モノ（ｍＰＥＧ－ブタンアミド）ＩＬ－１５）で刺激した（＋）、又は刺激しないままにした（－）。
【0227】
ヒト多発性骨髄腫ＲＰＭＩ－８２２６細胞（ＡＴＣＣ ＃ＣＣＬ－１５５）を、ＰＢＳで洗浄し、０．１５μＭ ＣＦＳＥで３７℃で５分間染色した。刺激されたＮＫ細胞（エフェクター細胞）と、ダラツムマブでコーティングされた（＋１μｇ／ｍＬ）ＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞（標的細胞）を、１０：１のＥ：Ｔ比で、５％ ＣＯ２中で３７℃で３時間、同時に共培養した。インキュベーション後、細胞を、フロー染色緩衝液で洗浄し、４℃で１５分間Ｆｃブロッキングし、表面染色した（ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ３－蛍光コンジュゲート化抗体）。これらの細胞を、ＰＢＳで洗浄し、７－アミノアクチノマイシン（７－ＡＡＤ）生死判別染色液中で４℃で３０分間インキュベートし、その後、Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）を使用するフローサイトメトリー分析を受けた。全細胞集団からの７－ＡＡＤ＋ＣＦＳＥ＋標的細胞の割合は、死んだ腫瘍細胞についての割合である。結果を、図１５Ａに提供する。
【0228】
或いは、ヒトＢ細胞リンパ腫（Ｄａｕｄｉ）細胞を、ＰＢＳで洗浄し、０．３μＭ ＣＦＳＥで３７℃で５分間染色した。リツキシマブでコーティングされた（＋１０ｎｇ／ｍＬ）ＣＦＳＥ標識された腫瘍細胞（標的細胞）を、２：１のＥ：Ｔ比で、５％ ＣＯ２中で３７℃で３時間、ＮＫ細胞（エフェクター細胞）と同時に共培養した。インキュベーション後、細胞を、フロー染色緩衝液で洗浄し、４℃で１５分間Ｆｃブロッキングし、表面染色した（ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ３－蛍光コンジュゲート化抗体）。これらの細胞を、ＰＢＳで洗浄し、７－アミノアクチノマイシン（７－ＡＡＤ）生死判別染色液中で４℃で３０分間インキュベートし、その後、Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）を使用するフローサイトメトリー分析を受けた。全細胞集団からの７－ＡＡＤ＋ＣＦＳＥ＋標的細胞の割合は、死んだ腫瘍細胞についての割合である。結果を、図１５Ｂに提供する。
【0229】
このデータは、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬で刺激されたヒトＮＫ細胞が、ダラツムマブでコーティングされた及びリツキシマブでコーティングされたＢ細胞リンパ腫細胞のＡＤＣＣを増強することを示す。長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬で刺激されたＮＫ細胞は、未治療ＮＫ細胞よりも、標的細胞に対して細胞傷害性である。
【0230】
実施例１３
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける生存の評価
１千万個のＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫細胞を静脈内接種したＳＣＩＤ又はＳＣＩＤベージュマウス（Ｎ＝８／群）を、単回投与のダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の１４日後）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内、腫瘍接種の１４、２１、及び２８日後に投与される）で治療した。対照としての未治療ＳＣＩＤ／ベージュ又はＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスも評価した。腫瘍を接種されたマウスの生存を、エンドポイントマーカーとしてのボディコンディションスコアリング及び後肢麻痺開始によって測定した。結果を、図によって図１６に提供する。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける生存の評価
１千万個のＤａｕｄｉ Ｂ細胞リンパ腫細胞を静脈内接種したＳＣＩＤ又はＳＣＩＤベージュマウス（Ｎ＝８／群）を、単回投与のダラツムマブ（０．５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の１４日後）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内、腫瘍接種の１４、２１、及び２８日後に投与される）で治療した。対照としての未治療ＳＣＩＤ／ベージュ又はＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスも評価した。腫瘍を接種されたマウスの生存を、エンドポイントマーカーとしてのボディコンディションスコアリング及び後肢麻痺開始によって測定した。結果を、図によって図１６に提供する。
【0231】
図１６に示す通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のダラツムマブ治療との組み合わせは、未治療対照ＳＣＩＤマウスにおける２７日という生存中央値から、組み合わせ治療されたマウスにおける６０日までの、生存率の２倍よりも大きい増大（３３日）をもたらした。対照的に、ＮＫ細胞機能性を低下させるベージュ変異を有するＳＣＩＤマウス（ＳＣＩＤベージュ）における、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のダラツムマブ治療との組み合わせは、生存率の（未治療ＳＣＩＤベージュマウスにおける２３日から、組み合わせ治療されたＳＣＩＤベージュマウスにおける３０日までの）７日の増大をもたらしたに過ぎない。これらの結果は、ＮＫ細胞活性が、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のダラツムマブ治療との組み合わせの十分な治療効果に必要とされることを示す。
【0232】
実施例１４
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける細胞数の評価
０日目に、ＳＣＩＤマウス（Ｎ＝６／群）に、１千万個のＤａｕｄｉ細胞を静脈内接種し、単回投与の低用量又は高用量のダラツムマブ（０．０５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与の低用量又は高用量のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．６ｍｇ／ｋｇ、静脈内、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）で治療した。マウスをまた、単剤療法：ダラツムマブ（０．０５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、又は２回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．６ｍｇ／ｋｇ、静脈内、接種の１４及び２１日後）で治療した。骨髄中のＤａｕｄｉ細胞数を、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５の第２の投与の３日後（２４日目）に、図１７Ａ及び１７Ｂに示す通り、フローサイトメトリーによって評価した。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＣＤ３８モノクローナル抗体、ダラツムマブとの投与後のＤＡＵＤＩ Ｂ細胞リンパ腫異種移植モデルにおける細胞数の評価
０日目に、ＳＣＩＤマウス（Ｎ＝６／群）に、１千万個のＤａｕｄｉ細胞を静脈内接種し、単回投与の低用量又は高用量のダラツムマブ（０．０５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、及び２回の投与の低用量又は高用量のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．６ｍｇ／ｋｇ、静脈内、接種の１４及び２１日後のそれぞれの時点での１回ずつの投与）で治療した。マウスをまた、単剤療法：ダラツムマブ（０．０５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、Ｄａｕｄｉ細胞接種の１４日後）、又は２回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（０．０３ｍｇ／ｋｇ又は０．６ｍｇ／ｋｇ、静脈内、接種の１４及び２１日後）で治療した。骨髄中のＤａｕｄｉ細胞数を、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５の第２の投与の３日後（２４日目）に、図１７Ａ及び１７Ｂに示す通り、フローサイトメトリーによって評価した。
【0233】
図１７Ａ～１７Ｂに示す通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）のダラツムマブとの組み合わせは、腫瘍細胞の９６％が消失する高いダラツムマブ用量レベル（５ｍｇ／ｋｇ）が低用量モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．０３ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせられる場合（図１７Ａ）と、腫瘍細胞の９２％が消失する低用量ダラツムマブ（０．０５ｍｇ／ｋｇ）が高用量モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（０．６ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせられる場合（図１７Ｂ）を比較すると、同等の有効性で、骨髄内腫瘍細胞を消失させた。単剤治療として、低用量ダラツムマブ、及びモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５は、腫瘍細胞の、それぞれわずか３０％及び４２％しか消失させなかった。単剤治療として、高用量ダラツムマブ及びモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５は、腫瘍細胞の、それぞれわずか５８％及び６９％しか消失させなかった。これらの結果は、ダラツムマブ治療における用量レベル又は組織濃度の低下を、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５用量レベル又は組織濃度の増大によって相殺し、組み合わせ治療による腫瘍細胞致死の高い有効性を維持することができることを示す。
【0234】
実施例１５
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫細胞モデルの評価
ＨＣＴ－１１６細胞を、接種前の２週間、５％ ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０中で培養した。Ｂａｌｂ／ｃ ＳＣＩＤマウス（Ｎ＝４／群）に、５百万細胞のＨＣＴ－１１６細胞を皮下接種した。腫瘍細胞接種の７日後、平均腫瘍体積約１５０ｍｍ３（０日目）で、マウスを、単回投与の抗ヒトＥＧＦＲ抗体、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ ＩＰ）、及び単回投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）で治療した。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫細胞モデルの評価
ＨＣＴ－１１６細胞を、接種前の２週間、５％ ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０中で培養した。Ｂａｌｂ／ｃ ＳＣＩＤマウス（Ｎ＝４／群）に、５百万細胞のＨＣＴ－１１６細胞を皮下接種した。腫瘍細胞接種の７日後、平均腫瘍体積約１５０ｍｍ３（０日目）で、マウスを、単回投与の抗ヒトＥＧＦＲ抗体、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ ＩＰ）、及び単回投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）で治療した。
【0235】
治療の３及び５日後、血液及び腫瘍組織を収集し、ＮＫ細胞の割合を、図１８Ａに示す通り、フローサイトメトリーによって測定した。図１８Ａに見られる通り、腫瘍における全生細胞内のＮＫ細胞の割合の増大が、この治療によって誘発された。治療の３及び５日後、血液及び腫瘍組織を収集し、ＮＫ細胞数を、図１８Ｂに示す通り、フローサイトメトリーによって測定した。図１８Ｂに示す通り、腫瘍組織におけるＮＫ細胞数の増加が、この治療によって誘発された。
【0236】
試料を、治療後の３日目に、フローサイトメトリーによるＫｉ－６７（％）についての免疫表現型検査にかけた（図１８Ｃ参照）。図１８Ｃは、経時的な細胞増殖についてのマーカーとして使用されるＫｉ－６７陽性率（％）によって測定される、ＮＫ細胞増殖のプロットである。＊Ｋｉ６７マーカー誘発は、ＮＫ細胞の大部分において観察され、これは、治療後の有効な増殖応答を示していた。
【0237】
グランザイムＢ発現を、図１８Ｄに示す通り、治療後、３日目に、フローサイトメトリーによって、血液又は腫瘍ＮＫ細胞において測定した。図１８Ｄ中に示される通り、治療後の血液と腫瘍ＮＫ細胞の両方において、ＧｚｍＢ発現の増大が観察され、これは、治療によるＮＫ細胞の細胞傷害性活性化を示していた。
【0238】
細胞表面ＣＤ１６受容体を発現している血液又は腫瘍ＮＫ細胞の割合を、図１８Ｅに示す通り、ＣＤ１６の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）シグナルの増大を測定することによって、フローサイトメトリーを用いて測定した。図１８Ｅ中に示される通り、細胞表面ＣＤ１６発現の増大は、治療によって誘発され、これは、ＮＫ細胞活性化を示していた。
【0239】
治療の３日後、血液及び腫瘍細胞を収集し、細胞表面活性化受容体ＮＫＧ２Ｄの発現をフローサイトメトリーによって測定し、結果を図１８Ｆに示した。図１８Ｆ中に示される通り、ＮＫＧ２Ｄ表面発現は、治療によるＮＫ細胞の機能的活性化と一致して低下した。
【0240】
これらの結果は、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５が、抗腫瘍抗体と共に投与された場合に、ＮＫ細胞媒介性のＡＤＣＣを実質的に増強するのに有効であることをさらに示唆する。
【0241】
実施例１６
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＦａＤｕヒト頭頸部扁平上皮癌モデルの評価
Ｂａｌｂ／ｃ ＳＣＩＤマウス（Ｎ＝４／群）に、３百万細胞のＦａＤｕ細胞を静脈内接種した。腫瘍細胞接種の７日後、平均腫瘍体積約１５０ｍｍ３（０日目）で、マウスを、単回投与の抗ヒトＥＧＦＲ抗体、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ ＩＰ）、及び単回投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）（約１５０ｍｍ３）で治療した。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＦａＤｕヒト頭頸部扁平上皮癌モデルの評価
Ｂａｌｂ／ｃ ＳＣＩＤマウス（Ｎ＝４／群）に、３百万細胞のＦａＤｕ細胞を静脈内接種した。腫瘍細胞接種の７日後、平均腫瘍体積約１５０ｍｍ３（０日目）で、マウスを、単回投与の抗ヒトＥＧＦＲ抗体、セツキシマブ（２０ｍｇ／ｋｇ ＩＰ）、及び単回投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）（約１５０ｍｍ３）で治療した。
【0242】
治療の３及び５日後、血液及び腫瘍組織を収集し、ＮＫ細胞の割合を、図１９Ａに示す通り、フローサイトメトリーによって測定した。図１９Ａに示す通り、腫瘍における全生細胞内のＮＫ細胞の割合の増大が、この治療によって誘発された。治療の３及び５日後、血液及び腫瘍組織を収集し、ＮＫ細胞数を、図１９Ｂに示す通り、フローサイトメトリーによって測定した。図１９Ｂに示す通り、腫瘍組織におけるＮＫ細胞数の増加が、この治療によって誘発された。
【0243】
試料を、治療後の３日目に、Ｋｉ－６７（％）についての免疫表現型検査にかけた（図１９Ｃ参照）。図１９Ｃは、経時的な細胞増殖についてのマーカーとして使用されるＫｉ－６７陽性率（％）によって測定される、ＮＫ細胞増殖のプロットである。Ｋｉ６７マーカー誘発は、ＮＫ細胞の大部分において観察され、これは、治療後の有効な増殖応答を示していた。
【0244】
グランザイムＢ発現を、図１９Ｄに示す通り、治療後、３日目に、フローサイトメトリーによって、血液又は腫瘍ＮＫ細胞において測定した。図１９Ｄ中に示される通り、治療後の血液と腫瘍ＮＫ細胞の両方において、ＧｚｍＢ発現の増大が観察され、これは、治療によるＮＫ細胞の細胞傷害性活性化を示していた。
【0245】
細胞表面ＣＤ１６受容体を発現している血液又は腫瘍ＮＫ細胞の割合を、図１９Ｅに示す通り、ＣＤ１６の蛍光強度中央値（ＭＦＩ）シグナルの増大を測定することによって、フローサイトメトリーを用いて測定した。図１９Ｅ中に示される通り、細胞表面ＣＤ１６発現の増大は、治療によって誘発され、これは、ＮＫ細胞活性化を示していた。
【0246】
治療の３日後、血液及び腫瘍細胞を収集し、細胞表面活性化受容体ＮＫＧ２Ｄの発現をフローサイトメトリーによって測定し、結果を図１９Ｆに示した。図１９Ｆ中に示される通り、ＮＫＧ２Ｄ表面発現は、治療によるＮＫ細胞の機能的活性化と一致して低下した。
【0247】
これらの結果は、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５が、抗腫瘍抗体と共に投与された場合に、ＮＫ細胞媒介性のＡＤＣＣを実質的に増強するのに有効であることをさらに示唆する。
【0248】
実施例１７
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨ１９７５肺腫瘍モデルにおける腫瘍成長阻害の評価
５百万個のＨ１９７５細胞を側腹部の皮下に接種したＢａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｎ＝１０／群）を、合わせて３回の投与のセツキシマブ（０．２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の９、１２、及び１６日後に投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内）（腫瘍接種の９、１６、及び２３日後に投与される）で治療した。腫瘍成長制御の喪失の遅延を、治療開始後２７日目に評価した。結果を、図によって図２０に提供する。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨ１９７５肺腫瘍モデルにおける腫瘍成長阻害の評価
５百万個のＨ１９７５細胞を側腹部の皮下に接種したＢａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｎ＝１０／群）を、合わせて３回の投与のセツキシマブ（０．２５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の９、１２、及び１６日後に投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内）（腫瘍接種の９、１６、及び２３日後に投与される）で治療した。腫瘍成長制御の喪失の遅延を、治療開始後２７日目に評価した。結果を、図によって図２０に提供する。
【0249】
図２０に示す通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５治療は、治療されたマウスにおける腫瘍成長阻害をもたらさなかった。セツキシマブ治療されたマウスは、セツキシマブ治療スケジュールが完了した後、腫瘍成長の続行を示した。対照的に、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のセツキシマブ治療との組み合わせは、治療開始後２７日目まで、腫瘍成長再発の遅延をもたらし、これは、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のセツキシマブ治療との組み合わせにおける、セツキシマブ単剤治療と比較して有意に遅い腫瘍成長（ｐ＝０．０２、マン・ホイットニー検定）を示した。これらのデータは、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のセツキシマブとの組み合わせが、この腫瘍モデルにおけるセツキシマブ単剤治療と比較して優れた腫瘍成長制御をもたらすことを示す。
【0250】
実施例１８
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨＴ－２９結腸直腸癌腫細胞モデルにおける腫瘍成長阻害及び遅延の評価
５百万個のＨＴ－２９細胞を側腹部の皮下に接種したＳＣＩＤマウス（Ｎ＝８／群）を、合わせて６回の投与のセツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の７、１１、１４、１８、２１、２５日後に投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内）（腫瘍接種の７、１４、及び２１日後に投与される）で治療した。腫瘍成長阻害を、治療開始後２１日目に評価した。結果を、図によって図２１Ａに提供する。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨＴ－２９結腸直腸癌腫細胞モデルにおける腫瘍成長阻害及び遅延の評価
５百万個のＨＴ－２９細胞を側腹部の皮下に接種したＳＣＩＤマウス（Ｎ＝８／群）を、合わせて６回の投与のセツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の７、１１、１４、１８、２１、２５日後に投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内）（腫瘍接種の７、１４、及び２１日後に投与される）で治療した。腫瘍成長阻害を、治療開始後２１日目に評価した。結果を、図によって図２１Ａに提供する。
【0251】
図２１Ａに示す通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５又はセツキシマブ単剤治療は、治療されたマウスにおける腫瘍成長阻害をもたらさなかった。対照的に、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のセツキシマブ治療との組み合わせは、有意な腫瘍成長阻害をもたらした。これらのデータは、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のセツキシマブとの組み合わせが、セツキシマブ抵抗性腫瘍モデルにおける腫瘍成長阻害をもたらすことを示す。
【0252】
腫瘍成長遅延（ＴＶＱＴ）を、ベースラインからの４００％の腫瘍成長として設定したエンドポイントを用いて評価した。図２１Ｂは、治療開始日でのベースライン腫瘍体積からの腫瘍体積四倍加（ｑｕａｄｒｕｐｌｉｎｇ）時間（ＴＶＱＴ）を測定することによって、３８％の腫瘍成長遅延が誘発されたことを示す。
【0253】
実施例１９
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫異種移植モデルにおける腫瘍成長阻害及び遅延の評価
５百万個のＨＣＴ－１１６細胞を側腹部の皮下に接種したＳＣＩＤマウス（Ｎ＝８／群）を、合わせて６回の投与のセツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の７、１１、１４、１８、２１、２５日後に投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内、腫瘍接種の７、１４、及び２１日後に投与される）で治療した。腫瘍成長阻害を、治療開始後１９日目に評価した。結果を、図によって図２２Ａに提供する。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫異種移植モデルにおける腫瘍成長阻害及び遅延の評価
５百万個のＨＣＴ－１１６細胞を側腹部の皮下に接種したＳＣＩＤマウス（Ｎ＝８／群）を、合わせて６回の投与のセツキシマブ（４０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、接種の７、１１、１４、１８、２１、２５日後に投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内、腫瘍接種の７、１４、及び２１日後に投与される）で治療した。腫瘍成長阻害を、治療開始後１９日目に評価した。結果を、図によって図２２Ａに提供する。
【0254】
図２２Ａに示す通り、セツキシマブ単剤治療は、治療されたマウスにおける腫瘍成長阻害をもたらさなかった。モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５単剤治療は、３１％の腫瘍成長阻害をもたらした。対照的に、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のセツキシマブ治療との組み合わせは、４２％の腫瘍成長阻害をもたらした。これらのデータは、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のセツキシマブとの組み合わせが、セツキシマブ抵抗性腫瘍モデルにおける腫瘍成長阻害をもたらすことを示す。
【0255】
腫瘍成長遅延を、治療開始日でのベースライン腫瘍体積からの腫瘍体積四倍加時間（ＴＶＱＴ）を測定することによって評価した。図２２Ｂは、組み合わせ治療によって４２％の腫瘍成長遅延が誘発され、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）単剤治療によって２６％の腫瘍成長遅延が誘発されたが、セツキシマブ単剤治療は、腫瘍成長遅延をもたらさなかったことを示す。
【0256】
実施例２０
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫インビトロモデルにおける抗体媒介性の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の評価
ヒトＮＫ細胞を、ネガティブセレクションを使用して、正常なドナーＰＢＭＣから磁気によって選別した。ＮＫ細胞を、４００，０００細胞／ウェルの密度で、９６ウェルＵ底プレートに播種した。ＮＫ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％抗生物質／抗真菌薬を添加したＲＰＭＩ－１６４０完全培地中で、５％ ＣＯ２中で３７℃で一晩、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（３００ｎｇ／ｍＬ）で刺激した（＋）、又は刺激しないままにした（－）。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体、セツキシマブとの投与後のＨＣＴ－１１６結腸直腸癌腫インビトロモデルにおける抗体媒介性の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の評価
ヒトＮＫ細胞を、ネガティブセレクションを使用して、正常なドナーＰＢＭＣから磁気によって選別した。ＮＫ細胞を、４００，０００細胞／ウェルの密度で、９６ウェルＵ底プレートに播種した。ＮＫ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％抗生物質／抗真菌薬を添加したＲＰＭＩ－１６４０完全培地中で、５％ ＣＯ２中で３７℃で一晩、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（３００ｎｇ／ｍＬ）で刺激した（＋）、又は刺激しないままにした（－）。
【0257】
結腸ヒトＨＣＴ－１１６細胞（ＡＴＣＣ ＃ ＣＣＬ－２４７）を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％抗生物質／抗真菌薬を添加したＭｃＣｏｙ ５Ａ培地（ＡＴＣＣ＋ ３０－２００７）中で、５％ ＣＯ２中で３７℃で培養した。ＨＣＴ－１１６細胞を、０．２５％トリプシン－０．５３ｍＭ ＥＤＴＡ中で３７℃で５分間インキュベートすることによって継代培養し、滅菌ＰＢＳで洗浄し、培養培地に再懸濁し、計数し、１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）を使用して、ＮＫ細胞と共培養した。同時に、セツキシマブ（ＭｃＫｅｓｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｕｒｇｉｃａｌ ＃６６７３３－９４８－２３ ｌｏｔ＃ Ｃ１８００１１５）及びＩｇＧ１アイソタイプ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ＬＥＡＦ 精製ＩｇＧ１）を、３０μｇ／ｍＬの濃度で、対応するウェルに添加（＋）し、その後、５％ ＣＯ２中で３７℃で３時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を、フロー染色緩衝液で洗浄し、４℃で１５分間Ｆｃブロッキングし、暗所で４℃で２０分間、表面染色した（ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ３－蛍光コンジュゲート化抗体）。これらの細胞を、ＰＢＳで洗浄し、７－アミノアクチノマイシン（７－ＡＡＤ）生死判別染色液中で４℃で３０分間インキュベートし、その後、Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）を使用するフローサイトメトリー分析を受けた。全細胞集団からの７－ＡＡＤ＋ＣＤ４５－ＥｐＣＡＭ＋標的細胞の割合は、死んだ腫瘍細胞についての割合である。結果を、図２３Ａに提供する。
【0258】
上皮性／咽頭の頭頸部ヒトＦａＤｕ細胞（ＡＴＣＣ ＃ ＨＴＢ－４３）を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び１％抗生物質／抗真菌薬を添加した イーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ；ＡＴＣＣ＋ ３０－２００３）中で、５％ ＣＯ２中で３７℃で培養した。ＦａＤｕ細胞を、０．２５％トリプシン－０．５３ｍＭ ＥＤＴＡ中で３７℃で５分間インキュベートすることによって継代培養し、滅菌ＰＢＳで洗浄し、培養培地に再懸濁し、計数し、１０：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）を使用して、ＮＫ細胞と共培養した。同時に、セツキシマブ（ＭｃＫｅｓｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｕｒｇｉｃａｌ ＃６６７３３－９４８－２３ ｌｏｔ＃ Ｃ１８００１１５）及びＩｇＧ１アイソタイプ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ＬＥＡＦ 精製ＩｇＧ１）を、３００ｎｇ／ｍＬの濃度で、対応するウェルに添加（＋）し、その後、５％ ＣＯ２中で３７℃で３時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を、フロー染色緩衝液で洗浄し、４℃で１５分間Ｆｃブロッキングし、暗所で４℃で２０分間、表面染色した（ＣＤ４５、ＣＤ５６、ＣＤ３－蛍光コンジュゲート化抗体）。これらの細胞を、ＰＢＳで洗浄し、７－アミノアクチノマイシン（７－ＡＡＤ）生死判別染色液中で４℃で３０分間インキュベートし、その後、Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）を使用するフローサイトメトリー分析を受けた。全細胞集団からの７－ＡＡＤ＋ＣＤ４５－標的細胞の割合は、死んだ腫瘍細胞についての割合である。結果を、図２３Ｂに提供する。
【0259】
図２３Ａ及び２３Ｂに見られる通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５で刺激されたヒトＮＫ細胞は、セツキシマブでコーティングされたヒト固形腫瘍細胞のＡＤＣＣを増強する。
【0260】
実施例２１
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＨＥＲモノクローナル抗体、トラスツズマブとの投与後のＳＫＯＶ－３卵巣癌腫細胞モデルにおける腫瘍成長阻害の評価
マトリゲルと１：１比で混合した１千万個のＳＫＯＶ－３細胞を側腹部の皮下に接種したＢａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｎ＝１０／群）を、合わせて６回の投与のトラスツズマブ（１３．５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、接種後の６日目に開始して週２回３週間投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内）（腫瘍接種の６、１３、及び２０日後に投与される）で治療した。接種されたマウスにおける腫瘍成長阻害を、治療開始の３５日後に測定した。結果を、図によって図２４に提供する。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＨＥＲモノクローナル抗体、トラスツズマブとの投与後のＳＫＯＶ－３卵巣癌腫細胞モデルにおける腫瘍成長阻害の評価
マトリゲルと１：１比で混合した１千万個のＳＫＯＶ－３細胞を側腹部の皮下に接種したＢａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｎ＝１０／群）を、合わせて６回の投与のトラスツズマブ（１３．５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、接種後の６日目に開始して週２回３週間投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内）（腫瘍接種の６、１３、及び２０日後に投与される）で治療した。接種されたマウスにおける腫瘍成長阻害を、治療開始の３５日後に測定した。結果を、図によって図２４に提供する。
【0261】
図２４に示す通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５組み合わせ治療は、治療されたマウスにおける腫瘍成長阻害をもたらさなかった。トラスツズマブで治療されたマウスは、６１％の腫瘍成長阻害を示したが、トラスツズマブ治療によって、腫瘍のない動物は生じなかった。対照的に、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のトラスツズマブ治療との組み合わせは、治療されたすべての動物において腫瘍の完全な喪失をもたらし、動物は、腫瘍がないままであった。これらのデータは、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のトラスツズマブとの組み合わせが、この腫瘍モデルにおけるトラスツズマブ単剤治療と比較して優れた腫瘍成長阻害をもたらすことを示す。
【0262】
実施例２２
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＨＥＲモノクローナル抗体、トラスツズマブとの投与後のＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞モデルにおける腫瘍成長阻害の評価
マトリゲルと１：１比で混合した１千万個のＮＣＩ－Ｎ８７細胞を側腹部の皮下に接種したＢａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｎ＝１０／群）を、合わせて３回の投与のトラスツズマブ（初回用量３ｍｇ／ｋｇ及び後続の２回の用量１ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、接種の５、１２、及び２０日後に投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内）（腫瘍接種の５、１２、及び１９日後に投与される）で治療した。接種されたマウスにおける腫瘍成長阻害を、治療開始の２５日後に測定した。結果を、図によって図２５に提供する。
長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬と、例示的な抗ＨＥＲモノクローナル抗体、トラスツズマブとの投与後のＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞モデルにおける腫瘍成長阻害の評価
マトリゲルと１：１比で混合した１千万個のＮＣＩ－Ｎ８７細胞を側腹部の皮下に接種したＢａｌｂ／ｃヌードマウス（Ｎ＝１０／群）を、合わせて３回の投与のトラスツズマブ（初回用量３ｍｇ／ｋｇ及び後続の２回の用量１ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、接種の５、１２、及び２０日後に投与される）、及び合わせて３回の投与のモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５（化合物１）（０．３ｍｇ／ｋｇ、静脈内）（腫瘍接種の５、１２、及び１９日後に投与される）で治療した。接種されたマウスにおける腫瘍成長阻害を、治療開始の２５日後に測定した。結果を、図によって図２５に提供する。
【0263】
図２５に示す通り、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５治療は、治療されたマウスにおける腫瘍成長阻害をもたらさなかった。トラスツズマブで治療されたマウスは、２９％の腫瘍成長阻害を示した。対照的に、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のトラスツズマブ治療との組み合わせは、治療されたマウスにおける、より高い４１％の腫瘍成長阻害をもたらした。これらのデータは、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）インターロイキン－１５のトラスツズマブとの組み合わせが、この腫瘍モデルにおけるトラスツズマブ単剤治療と比較して優れた腫瘍成長阻害をもたらすことを示す。
【0264】
本発明の方法、治療的組み合わせ、及びキットの実施形態には、限定はされないが、以下が含まれる。
【0265】
実施形態１．癌を有する対象を治療する方法であって、
（ａ）次の構造を有する長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬：
（式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、ｎは約１５０～約３，０００の整数であり、ｍは２、３、４、及び５から選択される整数であり、ｎ’は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す）；及び
（ｂ）リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子から選択される腫瘍抗原と特異的に結合する腫瘍に誘導される抗体であって、作用機序としての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する抗体；
（ここでは、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に又は連続的に、任意の順序で実施される）
を対象に投与することを含む方法。
（ａ）次の構造を有する長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬：
【化14】
（式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、ｎは約１５０～約３，０００の整数であり、ｍは２、３、４、及び５から選択される整数であり、ｎ’は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す）；及び
（ｂ）リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子から選択される腫瘍抗原と特異的に結合する腫瘍に誘導される抗体であって、作用機序としての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する抗体；
（ここでは、ステップ（ａ）及び（ｂ）は、同時に又は連続的に、任意の順序で実施される）
を対象に投与することを含む方法。
【0266】
実施形態２．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、薬学的に許容し得る塩である、実施形態１の方法。
【0267】
実施形態３．式（Ｉ）中のｍが、２又は３である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～２の方法。
【0268】
実施形態４．式（Ｉ）中のｍが、３である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～３の方法。
【0269】
実施形態５．式（Ｉ）中のｎが、約９０９という値を有する、組み合わせられる又は個別の実施形態１～４の方法。
【0270】
実施形態６．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－６０ｋＤインターロイキン－１５、（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－４０ｋＤインターロイキン－１５、（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－６０ｋＤインターロイキン－１５、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－４０ｋＤインターロイキン－１５、及びモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～５の方法。
【0271】
実施形態７．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～６の方法。
【0272】
実施形態８．癌が、固形癌である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～７の方法。
【0273】
実施形態９．固形癌が、乳癌、卵巣癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、悪性黒色腫、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、甲状腺癌、腎癌、胆管の癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病、及び副腎皮質癌（前述のもののいずれかの転移型が含まれる）からなる群から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～８の方法。
【0274】
実施形態１０．癌が、造血器腫瘍である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～７の方法。
【0275】
実施形態１１．造血器腫瘍が、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、白血病、及びリンパ腫からなる群から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～７及び１０の方法。
【0276】
実施形態１２．癌が、Ｂ細胞悪性腫瘍である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～７及び１０～１１の方法。
【0277】
実施形態１３．ステップ（ａ）が、ステップ（ｂ）の前に実施される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～１２の方法。
【0278】
実施形態１４．ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前に実施される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～１２の方法。
【0279】
実施形態１５．ステップ（ａ）及びステップ（ｂ）が、同時に又は実質的に同時に実施される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～１２の方法。
【0280】
実施形態１６．前記投与することが、好適な動物モデルにおいて測定される場合に、ＮＫ活性化を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は腫瘍に誘導される抗体が単剤として投与される場合に観察されるよりも大きな程度で刺激するのに有効である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～１５の方法。
【0281】
実施形態１７．前記投与することが、好適な動物モデルにおいて測定される場合に、ＮＫ増殖を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は腫瘍に誘導される抗体が単剤として投与される場合に観察されるよりも大きな程度で刺激するのに有効である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～１６の方法。
【0282】
実施形態１８．前記投与することが、好適な動物モデルにおいて測定される場合に、ＣＤ８ Ｔ細胞生存及びメモリー形成を、長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬又は腫瘍に誘導される抗体が単剤として投与される場合に観察されるよりも大きな程度で補助するのに有効である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～１７の方法。
【0283】
実施形態１９．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、静脈内又は皮下に投与される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～１８の方法。
【0284】
実施形態２０．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、ｑ７ｄ、ｑ１４ｄ、ｑ２１ｄ、若しくは毎月、又はその任意の組み合わせで投与される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～１９の方法。
【0285】
実施形態２１．腫瘍に誘導される抗体が、静脈内又は腹腔内に投与される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～２０の方法。
【0286】
実施形態２２．腫瘍に誘導される抗体が、ｑ７ｄ、ｑ１４ｄ、ｑ２１ｄ、若しくは毎月、又はその任意の組み合わせで投与される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～２１の方法。
【0287】
実施形態２３．腫瘍に誘導される抗体が、モノクローナル抗体である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～２２の方法。
【0288】
実施形態２４．腫瘍に誘導される抗体が、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、及び抗ＣＤ３８抗体から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～２３の方法。
【0289】
実施形態２５．糖タンパク質と特異的に結合する腫瘍に誘導される抗体が、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＥｐＣＡＭ抗体、抗ｇｐＡ３抗体３、及び抗ＦＢＰ抗体から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～２３の方法。
【0290】
実施形態２６．成長因子と特異的に結合する腫瘍に誘導される抗体が、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ抗体、及び抗ＥＧＦＲ抗体から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～２３の方法。
【0291】
実施形態２７．腫瘍に誘導される抗体が、ＩｇＧ抗体である、組み合わせられる又は個別の実施形態１～２３の方法。
【0292】
実施形態２８．腫瘍に誘導される抗体が、ダラツムマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、及びトラスツズマブからなる群から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態１～２３の方法。
【0293】
実施形態２９．（ａ）次の構造を有する長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬：
（式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、ｎは約１５０～約３，０００の整数であり、ｍは２、３、４、及び５から選択される整数であり、ｎ’は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す）；及び
（ｂ）リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子から選択される腫瘍抗原と特異的に結合する腫瘍に誘導される抗体（ここでは、腫瘍に誘導される抗体は、作用機序としての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を含む）
を含む、癌を治療するのに使用するための治療的組み合わせ。
【化15】
（式中、ＩＬ－１５はインターロイキン－１５部分であり、ｎは約１５０～約３，０００の整数であり、ｍは２、３、４、及び５から選択される整数であり、ｎ’は１であり、～ＮＨ～はＩＬ－１５部分のアミノ基を表す）；及び
（ｂ）リン酸化タンパク質、膜貫通タンパク質、糖タンパク質、糖脂質、及び成長因子から選択される腫瘍抗原と特異的に結合する腫瘍に誘導される抗体（ここでは、腫瘍に誘導される抗体は、作用機序としての抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を含む）
を含む、癌を治療するのに使用するための治療的組み合わせ。
【0294】
実施形態３０．長時間作用型受容体作動薬が、薬学的に許容し得る塩である、実施形態２９の治療的組み合わせ。
【0295】
実施形態３１．式（Ｉ）中のｍが、２又は３である、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３０の治療的組み合わせ。
【0296】
実施形態３２．式（Ｉ）中のｍが、３である、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３１の治療的組み合わせ。
【0297】
実施形態３３．式（Ｉ）中のｎが、約９０９という値を有する、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３２の治療的組み合わせ。
【0298】
実施形態３４．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－６０ｋＤインターロイキン－１５、（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－４０ｋＤインターロイキン－１５、（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－６０ｋＤインターロイキン－１５、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）２０－４０ｋＤインターロイキン－１５、及びモノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３３の治療的組み合わせ。
【0299】
実施形態３５．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、モノ（メトキシＰＥＧ－Ｎ－ブタンアミド）４０ｋＤインターロイキン－１５である、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３４の治療的組み合わせ。
【0300】
実施形態３６．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、静脈内又は皮下投与のために製剤化される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３５の治療的組み合わせ。
【0301】
実施形態３７．腫瘍に誘導される抗体が、静脈内又は腹腔内投与のために製剤化される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３６の治療的組み合わせ。
【0302】
実施形態３８．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬が、静脈内又は皮下投与のために製剤化される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３７の治療的組み合わせ。
【0303】
実施形態３９．腫瘍に誘導される抗体が、静脈内又は腹腔内投与のために製剤化される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３８の治療的組み合わせ。
【0304】
実施形態４０．腫瘍に誘導される抗体が、モノクローナル抗体である、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～３９の治療的組み合わせ。
【0305】
実施形態４１．腫瘍に誘導される抗体が、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、及び抗ＣＤ３８抗体から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４０の治療的組み合わせ。
【0306】
実施形態４２．糖タンパク質と特異的に結合する腫瘍に誘導される抗体が、抗ＳＬＡＭＦ７抗体、抗ＥｐＣＡＭ抗体、抗ｇｐＡ３抗体３、及び抗ＦＢＰ抗体から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４０の治療的組み合わせ。
【0307】
実施形態４３．成長因子と特異的に結合する腫瘍に誘導される抗体が、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦＲ抗体、及び抗ＥＧＦＲ抗体から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４０の治療的組み合わせ。
【0308】
実施形態４４．腫瘍に誘導される抗体が、ＩｇＧ抗体である、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４０の治療的組み合わせ。
【0309】
実施形態４５．腫瘍に誘導される抗体が、ダラツムマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、及びトラスツズマブからなる群から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４０の治療的組み合わせ。
【0310】
実施形態４６．癌が、固形癌である、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４５の治療的組み合わせ。
【0311】
実施形態４７．固形癌が、乳癌、卵巣癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、悪性黒色腫、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、甲状腺癌、腎癌、胆管の癌、脳癌、子宮頸癌、上顎洞癌、膀胱癌、食道癌、ホジキン病、及び副腎皮質癌（前述のもののいずれかの転移型が含まれる）からなる群から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４６の治療的組み合わせ。
【0312】
実施形態４８．癌が、造血器腫瘍である、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４５の治療的組み合わせ。
【0313】
実施形態４９．造血器腫瘍が、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、白血病、及びリンパ腫からなる群から選択される、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４５及び４８の治療的組み合わせ。
【0314】
実施形態５０．癌が、Ｂ細胞悪性腫瘍である、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～４５及び４８～４９の治療的組み合わせ。
【0315】
実施形態５１．使用のための説明書を伴う、組み合わせられる又は個別の実施形態２９～５０の治療的組み合わせを含むキット。
【0316】
実施形態５２．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬及びモノクローナル抗体が、それぞれ、１つ以上の個々の単位剤形内に含有される、実施形態５１のキット。
【0317】
実施形態５３．長時間作用型ＩＬ－１５受容体作動薬とモノクローナル抗体が、それぞれ、同じ単位剤形内に含有される、実施形態５１のキット。
【0318】
配列表
配列番号１（ｒｈＩＬ－１５）
配列番号２
配列番号３
配列番号１（ｒｈＩＬ－１５）
【化16】
配列番号２
【化17】
配列番号３
【化18】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A-7B】
【図8A-8D】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図10A-10B】
【図11】
【図12】
【図13A】
【図13B】
【図14】
【図15A-15B】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図18A-18D】
【図18E-18F】
【図19A-19B】
【図19C-19F】
【図20】
【図21A】
【図21B】
【図22A】
【図22B】
【図23A】
【図23B】
【図24】
【図25】
【配列表】
【国際調査報告】