特表 2022-512958 トランス共刺激分子と組み合わされた抗ＧＰＣ３キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びその治療的用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-07

(54)【発明の名称】トランス共刺激分子と組み合わされた抗ＧＰＣ３キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びその治療的用途

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20220131BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 5/078 20100101ALI20220131BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220131BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20220131BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 15/86 20060101ALN20220131BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/13

C12N15/12

C12N5/10

C12N5/078

A61K35/17 Z

A61K35/28

A61P37/04

A61P35/00

C12N15/86 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021524959

(86)(22)【出願日】2019-11-07

(85)【翻訳文提出日】2021-06-15

(86)【国際出願番号】 US2019060287

(87)【国際公開番号】W WO2020097346

(87)【国際公開日】2020-05-14

(31)【優先権主張番号】62/756,683

(32)【優先日】2018-11-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521000758

【氏名又は名称】ソティオ，リミティド ライアビリティ カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(74)【代理人】

【識別番号】100203828

【弁理士】

【氏名又は名称】喜多村 久美

(72)【発明者】

【氏名】キャスリーン マクギネス

(72)【発明者】

【氏名】チャールズ ウィルソン

(72)【発明者】

【氏名】ブラント ヘリン

(72)【発明者】

【氏名】グレゴリー モッツ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB64

4C087BB65

4C087CA04

4C087NA05

4C087ZB02

4C087ZB09

4C087ZB26

(57)【要約】

１つ以上の共刺激ポリペプチドと抗ＧＰＣ３キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）とが共発現する遺伝子操作型造血細胞（例えば遺伝子操作型造血幹細胞または遺伝子操作型免疫細胞）、及び治療を必要とする対象においてＴ細胞の抗腫瘍活性を増強するためのその使用を本明細書に開示する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

遺伝子操作型造血細胞であって、
（ｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドと、
（ｉｉ）共刺激ポリペプチドと
を共発現し、
前記ＣＡＲポリペプチドが、
（ａ）細胞外抗原結合ドメインであってグリピカン－３（ＧＰＣ３）に対して特異的である前記細胞外結合ドメイン、
（ｂ）膜貫通ドメイン、及び
（ｃ）細胞質側シグナル伝達ドメイン
を含むものであり、
前記共刺激ポリペプチドが、Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、またはそのリガンドであり、前記共刺激ポリペプチドが外来核酸にコードされている、前記造血細胞。

【請求項2】

前記共刺激ポリペプチドが、
ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＴＭＩＧＤ２、Ｂ７－Ｈ６、及びＢ７－Ｈ７
からなる群から選択されるＢ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバーまたはそのリガンドである、請求項１に記載の造血細胞。

【請求項3】

前記共刺激ポリペプチドが、
４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦベータ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＲＥＬＴ、ＴＡＣＩ、ＴＬ１Ａ、ＴＮＦアルファ、ＴＮＦＲＩＩ、ＢＣＭＡ、ＥＤＡＲ２、ＴＲＯＹ、ＬＴＢＲ、ＥＤＡＲ、ＮＧＦＲ、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＤＣＲ３、ＴＮＦＲ１、ＦＮ１４（ＴｗｅａｋＲ）、ＡＰＲＩＬ、ＥＤＡ－Ａ２、ＴＷＥＡＫ、ＬＴｂ（ＴＮＦ－Ｃ）、ＮＧＦ、ＥＤＡ－Ａ１、ＡＰＰアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、及びＴＲＡＩＬ
からなる群から選択されるＴＮＦスーパーファミリーのメンバーまたはそのリガンドである、請求項１に記載の造血細胞。

【請求項4】

前記ＣＡＲポリペプチドが少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項5】

前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインが、
４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２８_LL→GG変異体、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１及びＣＤ２
からなる群から選択される共刺激分子のものである、請求項４に記載の造血細胞。

【請求項6】

（ｉ）前記ＣＡＲポリペプチドがＣＤ２８共刺激分子の共刺激ドメインを含み、かつ
（ｉｉ）前記共刺激ポリペプチドがＢＡＦＦＲまたはＣＤ２７である、
請求項４に記載の造血細胞。

【請求項7】

前記ＣＤ２８共刺激分子が配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の造血細胞。

【請求項8】

（ｉ）前記ＣＡＲポリペプチドが４－１ＢＢ共刺激分子の共刺激ドメインを含み、かつ
（ｉｉ）前記共刺激ポリペプチドがＣＤ７０、ＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌである、
請求項４に記載の造血細胞。

【請求項9】

前記４－１ＢＢ共刺激分子が配列番号２２のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の造血細胞。

【請求項10】

前記ＣＤ７０が配列番号３４のアミノ酸配列を含み、前記ＬＩＧＨＴが配列番号４３のアミノ酸配列を含み、前記ＯＸ４０Ｌが配列番号４７のアミノ酸配列を含む、請求項８または請求項９に記載の造血細胞。

【請求項11】

前記（ａ）の細胞外抗原結合ドメインが、ＧＰＣ３に対して特異的な一本鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項12】

前記ｓｃＦｖが、配列番号７４として示される重鎖可変領域、及び配列番号７５として示される軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の造血細胞。

【請求項13】

前記（ｂ）の膜貫通ドメインが１回貫通型膜タンパク質のものである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項14】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６Ａ、ＯＸ４０、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ及びＦＧＦＲ２Ｂからなる群から選択される膜タンパク質である、請求項１３に記載の造血細胞。

【請求項15】

前記（ｂ）の膜貫通ドメインが、天然に存在しない疎水性タンパク質セグメントである、請求項１～１４のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項16】

前記（ｃ）中の細胞質側シグナル伝達ドメインが免疫受容体チロシン依存性活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項17】

前記（ｃ）の細胞質側シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζまたはＦｃεＲ１γの細胞質側ドメインである、請求項１６に記載の造血細胞。

【請求項18】

前記ＣＡＲポリペプチドが、前記（ａ）のＣ末端及び前記（ｂ）のＮ末端に位置するヒンジドメインをさらに含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項19】

前記ヒンジドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ８αまたはＩｇＧのものである、請求項１８に記載の造血細胞。

【請求項20】

前記ヒンジドメインが、天然に存在しないペプチドである、請求項１８または請求項１９に記載の造血細胞。

【請求項21】

前記ＣＡＲポリペプチドがそのＮ末端にシグナルペプチドをさらに含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項22】

前記造血細胞が造血幹細胞または免疫細胞であり、任意選択的に前記免疫細胞が、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、好酸球またはＴ細胞である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項23】

前記免疫細胞が、
内在性Ｔ細胞受容体、内在性主要組織適合性複合体、内在性ベータ－２－ミクログロブリンまたはその組合せ
の発現が阻害または排除されたＴ細胞である、請求項２２に記載の造血細胞。

【請求項24】

前記造血細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来する、請求項１～２３のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項25】

前記造血細胞が、
（Ａ）前記共刺激ポリペプチドをコードする第１外来ヌクレオチド配列、及び
（Ｂ）前記ＣＡＲポリペプチドをコードする第２外来ヌクレオチド配列
を全体として含んだ核酸または核酸セットを含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項26】

前記核酸または前記核酸セットがＲＮＡ分子またはＲＮＡ分子のセットである、請求項２５に記載の造血細胞。

【請求項27】

前記造血細胞が、前記第１外来ヌクレオチド配列と前記第２外来ヌクレオチド配列とを両方含んだ前記核酸を含む、請求項２５または請求項２６に記載の造血細胞。

【請求項28】

前記核酸が、前記第１外来ヌクレオチド配列と前記第２外来ヌクレオチド配列との間に位置する第３外来ヌクレオチド配列をさらに含み、前記第３外来ヌクレオチド配列が、リボソームスキッピング部位、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）または第２プロモーターをコードする、請求項２７に記載の造血細胞。

【請求項29】

前記第３外来ヌクレオチド配列が、Ｐ２Ａペプチドであるリボソームスキッピング部位をコードする、請求項３０に記載の造血細胞。

【請求項30】

前記核酸または前記核酸セットが、ベクターまたはベクターのセットの中に含まれている、請求項２５～２９のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項31】

前記ベクターまたはベクターのセットが、発現ベクターまたは発現ベクターのセットである、請求項３０に記載の造血細胞。

【請求項32】

前記ベクターまたはベクターのセットが、１つ以上のウイルスベクターを含む、請求項３０または請求項３１に記載の造血細胞。

【請求項33】

前記１つ以上のウイルスベクターが、
レトロウイルスベクターであって、任意選択的にレンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、レトロウイルスベクター
である、請求項３２に記載の造血細胞。

【請求項34】

（ｉ）前記ＣＡＲポリペプチド及び（ｉｉ）前記共刺激ポリペプチドをコードする前記核酸または前記核酸セットが、トランスポゾンまたは遺伝子編集によって前記造血細胞内に送達される、請求項２５～２９のいずれか１項に記載の造血細胞。

【請求項35】

請求項１～３４のいずれか１項に記載の造血細胞、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項36】

対象においてＧＰＣ３が発現している細胞を阻害する方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～３４のいずれか１項に記載の造血細胞の集団または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項37】

前記造血細胞が自家性である、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記造血細胞が同種異系である、請求項３６に記載の方法。

【請求項39】

エクスビボで前記造血細胞を活性化させる、増殖させる、またはその両方を行う、請求項３７または請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記対象が、ＧＰＣ３⁺がん細胞に関連するがんを患っているヒト患者である、請求項３６～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記がんが、乳癌、胃癌、肺癌、皮膚癌、前立腺癌、大腸癌、腎細胞癌腫、卵巣癌、横紋筋肉腫、胚細胞癌、肝芽腫、中皮腫、膵臓癌、頭頸部癌、神経膠腫、神経膠芽腫、甲状腺癌、肝細胞癌、食道癌または子宮頸癌である、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記がんが、肝細胞癌腫、胃癌、乳癌または肺癌である、請求項４０に記載の方法。

【請求項43】

前記造血細胞が、
抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、ＩＬ－２、フィトヘマグルチニン、及び操作型人工刺激細胞または粒子
のうちの１つ以上の存在下で活性化されたＴ細胞を含む免疫細胞である、請求項３６～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記造血細胞が、
４－１ＢＢリガンド、抗４－１ＢＢ抗体、ＩＬ－１５、抗ＩＬ－１５受容体抗体、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１及びＫ５６２細胞
のうちの１つ以上の存在下で活性化されたナチュラルキラー細胞を含む免疫細胞である、請求項３６～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記ヒト患者が、抗がん療法を受けている、または治療されたことがある、請求項４０～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

前記対象に抗がん剤を投与することをさらに含む、請求項４０～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

（Ａ）請求項１及び請求項４～２２のいずれか１項に記載のＣＡＲポリペプチドをコードする第１ヌクレオチド配列、ならびに
（Ｂ）請求項１～３及び請求項６～１１のいずれか１項に記載の共刺激ポリペプチドをコードする第２ヌクレオチド配列
を全体として含む、核酸または核酸セット。

【請求項48】

前記核酸または前記核酸セットが、ＲＮＡ分子またはＲＮＡ分子のセットである、請求項４７に記載の核酸または核酸セット。

【請求項49】

前記核酸が、前記第１ヌクレオチド配列と前記第２ヌクレオチド配列とを両方含み、ここで、前記核酸が、前記第１ヌクレオチド配列と前記第２ヌクレオチド配列との間に位置する第３ヌクレオチド配列をさらに含み、前記第３ヌクレオチド配列が、リボソームスキッピング部位、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）または第２プロモーターをコードする、請求項４７または請求項４８に記載の核酸または核酸セット。

【請求項50】

前記リボソームスキッピング部位がＰ２Ａペプチドである、請求項４９に記載の核酸または核酸セット。

【請求項51】

前記核酸または前記核酸セットが、ベクターまたはベクターのセットの中に含まれている、請求項４７～５０のいずれか１項に記載の核酸または核酸セット。

【請求項52】

前記ベクターまたはベクターのセットが、発現ベクターまたは発現ベクターのセットである、請求項５１に記載の核酸または核酸セット。

【請求項53】

前記ベクターまたはベクターのセットが、１つ以上のウイルスベクターを含む、請求項５１または請求項５２に記載の核酸または核酸セット。

【請求項54】

前記１つ以上のウイルスベクターが、
レトロウイルスベクターであって、任意選択的にレンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、レトロウイルスベクター
である、請求項５３に記載の核酸または核酸セット。

【請求項55】

インビボで改変型造血細胞を生み出す方法であって、それを必要とする対象に請求項４７～５４のいずれか１項に記載の核酸または核酸セットを投与することを含む、前記方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０１８年１１月７日に出願された米国仮出願第６２／７５６，６８３号の出願日の利益を主張するものである。参照により、先の出願の内容全体を本明細書に援用する。

【背景技術】

【0002】

細胞療法を含めてがん免疫療法は、正常組織を温存しつつも腫瘍細胞を攻撃する免疫応答を惹起するために用いられる。それは、遺伝子関連及び細胞関連の薬物耐性機序を回避する、ならびに正常組織を温存しつつも腫瘍細胞を標的とするその潜在能力ゆえに、様々な種類のがんを治療するための有望な選択肢である。

【0003】

細胞療法は、がん細胞の方へ偏った反応性を有する細胞傷害性Ｔ細胞を必要とし得る。Ｅｓｈｈａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．；１９９３；９０（２）：７２０－７２４、Ｇｅｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９；１６２（１０）：５９３１－５９３９、Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００３；９（３）：２７９－２８６、Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００３；１０１（４）：１６３７－１６４４、及びＩｍａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２００４；１８：６７６－６８４。１つの手法は、１つ以上のＴ細胞活性化シグナル伝達ドメインと融合した抗原結合ドメインを有するキメラ受容体を発現させることである。抗原結合ドメインを介したがん抗原の結合は、Ｔ細胞活性化をもたらし、細胞傷害を誘発する。前駆Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療において、キメラ受容体が発現している自家Ｔリンパ球の有効性が臨床試験で実証された。Ｐｕｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００８；１４（１１）：１２６４－１２７０、Ｐｏｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ；２０１１；２５；３６５（８）：７２５－７３３、Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１１；１１８（１８）：４８１７－４８２８、Ｔｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（１７）：３９４０－３９５０、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（１２）：２７０９－２７２０、及びＢｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１３；５（１７７）：１７７ｒａ１３８。

【0004】

細胞免疫療法の有効性を増強する新たな方策を開発することは、非常に興味深いことである。

【発明の概要】

【0005】

本開示は、細胞免疫療法に用いるための、共刺激ポリペプチドと抗ＧＰＣ３キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）とを共発現させる（つまり２つの別個のポリペプチドを発現させる）方策の開発に基づく。共刺激経路の調節は、造血細胞（例えば、造血幹細胞、免疫細胞、例えばＴ細胞またはナチュラルキラー細胞）において１つ以上の共刺激ポリペプチド、例えば本明細書に記載のものを発現（例えば過剰発現）させることによって成し遂げられ得る。ある場合には、１つ以上の共刺激ポリペプチドと、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとが共発現する造血細胞は、優れた生物活性、例えば、細胞増殖、活性化（例えば、サイトカイン産生、例えばＩＬ－２またはＩＦＮ－γ産生の増加）、細胞傷害、及び／またはインビボでの抗腫瘍活性を発揮すると期待されよう。

【0006】

したがって、同じ種類の野生型造血細胞と比較して共刺激経路の調節のための能力を有している改変型（例えば遺伝子改変型）造血細胞（例えば、造血幹細胞、免疫細胞、例えばＴ細胞またはナチュラルキラー細胞）を本明細書に提供する。ある場合には、改変型造血細胞は、共刺激ポリペプチドを発現または過剰発現するものであり得る。共刺激ポリペプチドは、Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、またはそのリガンドであり得る。Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバーまたはそのリガンドの例としては、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＴＭＩＧＤ２、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、及びそれらの変異体が挙げられるが、これらに限定されない。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーまたはそのリガンドの例としては、４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦベータ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＲＥＬＴ、ＴＡＣＩ、ＴＬ１Ａ、ＴＮＦアルファ、及びＴＮＦＲＩＩが挙げられるが、これらに限定されない。さらなる例としては、ＢＣＭＡ、ＥＤＡＲ２、ＴＲＯＹ、ＬＴＢＲ、ＥＤＡＲ、ＮＧＦＲ、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＤＣＲ３、ＴＮＦＲ１、ＦＮ１４（ＴｗｅａｋＲ）、ＡＰＲＩＬ、ＥＤＡ－Ａ２、ＴＷＥＡＫ、ＬＴｂ（ＴＮＦ－Ｃ）、ＮＧＦ、ＥＤＡ－Ａ１、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、ＴＲＡＩＬが挙げられる。

【0007】

いくつかの実施形態では、Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、またはそのリガンドは、野生型配列である。いくつかの実施形態では、Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、またはそのリガンドは、変異体配列である（つまり、野生型配列と比較して１つ以上の挿入、欠失または突然変異を含む）。例えば４－１ＢＢＬは、４－１ＢＢＬ Ｑ８９Ａ、４－１ＢＢＬ Ｌ１１５Ａ、４－１ＢＢＬ Ｋ１２７Ａ、または４－１ＢＢＬ Ｑ２２７Ａであり得る。いくつかの実施形態では、Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、またはそのリガンドは、細胞質側ドメインが欠損したものであり得る。例示的実施形態において、４－１ＢＢＬは細胞質側ドメインが欠損している。いくつかの実施形態では、ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーまたはそのリガンドは４－１ＢＢＬでない。

【0008】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＰＣ３ ＣＡＲのいずれかと一緒に共発現する共刺激ポリペプチドはＦＫＢＰｖ３６などのＦ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）を何ら含まない。いくつかの例では、共刺激ポリペプチドは、ＭｙＤ８８に由来するシグナル伝達ドメインを含まない。

【0009】

改変型造血細胞はさらに抗ＧＰＣ３ ＣＡＲを発現し得、当該ＣＡＲは、（ａ）細胞外抗原結合ドメインであってＧＰＣ３に結合する当該細胞外結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、及び（ｃ）細胞質側シグナル伝達ドメインを含むものであり得る。いくつかの例では、（ｃ）は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲのＣ末端に位置している。ある場合には、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含み得る。他の例では、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、共刺激シグナル伝達ドメインを含まないものであり得る。

【0010】

いくつかの例では、（ａ）の細胞外抗原結合ドメインは、ＧＰＣ３に対して特異的な（つまりそれに結合する）一本鎖抗体断片である。

【0011】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドのいずれかの中の（ｂ）の膜貫通ドメインは、１回貫通型膜タンパク質のもの、例えば、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６Ａ、ＯＸ４０、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ及びＦＧＦＲ２Ｂのものであり得る。あるいは、（ｂ）の膜貫通ドメインは、天然に存在しない疎水性タンパク質セグメントであり得る。

【0012】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドの少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインは、妥当な場合には共刺激分子のものであり得、当該共刺激分子は、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ２８_LL→GG変異体、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１及びＣＤ２であり得る。いくつかの例では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインまたは４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインである。ある場合には、ＣＡＲポリペプチドは２つの共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。ある場合には、一方の共刺激シグナル伝達ドメインはＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインであり、もう一方の共刺激ドメインは、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０共刺激シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７共刺激シグナル伝達ドメインまたはＩＣＯＳ共刺激シグナル伝達ドメインであり得る。具体例としては、ＣＤ２８と４－１ＢＢ；またはＣＤ２８_LL→GG変異体と４－１ＢＢが挙げられるが、これらに限定されない。

【0013】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドのいずれかの中の（ｃ）の細胞質側シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζまたはＦｃεＲ１γの細胞質側ドメインであり得る。

【0014】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドのいずれかのヒンジドメインは、妥当な場合、ＣＤ２８、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ８αまたはＩｇＧのものであり得る。他の例では、ヒンジドメインは、天然に存在しないペプチドである。例えば、天然に存在しないペプチドは延長組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）または（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）_nポリペプチドであってもよく、式中のｎは、端点を含む３～１２の整数である。いくつかの例では、ヒンジドメインは、６０個以下のアミノ酸残基を含有し得る短いセグメントである。

【0015】

具体例において、ＣＡＲポリペプチドは、（ｉ）ＣＤ２８共刺激ドメインまたは４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及び（ｉｉ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメインまたはその組合せを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、（ｉ）ＣＤ２８共刺激ドメインまたは４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及び（ｉｉ）ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ８ヒンジドメインまたはその組合せを含む。例えば、ＣＡＲポリペプチドは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列を含んでいてもよい。

【0016】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作型造血細胞はＣＡＲポリペプチドと共刺激ポリペプチドを共発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドはＣＤ２８共刺激分子の共刺激ドメインを含み、共刺激ポリペプチドはＢＡＦＦＲまたはＣＤ２７である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドはＣＤ２８共刺激分子の共刺激ドメインを含み、共刺激ポリペプチドはＢＡＦＦＲである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドはＣＤ２８共刺激分子の共刺激ドメインを含み、共刺激ポリペプチドはＣＤ２７である。ＣＤ２８共刺激分子は配列番号１２のアミノ酸配列を含み得る。ＢＡＦＦＲは配列番号６２のアミノ酸配列を含み得、ＣＤ２７は配列番号３３のアミノ酸配列を含み得る。他の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは４－１ＢＢ共刺激分子の共刺激ドメインを含み、共刺激ポリペプチドはＣＤ７０、ＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌである。４－１ＢＢ共刺激分子は配列番号２２のアミノ酸配列を含み得る。ＣＤ７０は配列番号３４のアミノ酸配列を含み得、ＬＩＧＨＴは配列番号４３のアミノ酸配列を含み得、ＯＸ４０Ｌは配列番号４７のアミノ酸配列を含み得る。

【0017】

共刺激ポリペプチド及び抗ＧＰＣ３ ＣＡＲが発現している本明細書に記載の造血細胞は、造血幹細胞またはその子孫であり得る。いくつかの実施形態では、造血細胞は、免疫細胞、例えば、ナチュラルキラー細胞、単球／マクロファージ、好中球、好酸球またはＴ細胞であり得る。免疫細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来し得る。いくつかの例では、免疫細胞は、内在性Ｔ細胞受容体、内在性主要組織適合性複合体、内在性ベータ－２－ミクログロブリンまたはその組合せの発現が阻害または排除されたＴ細胞である。

【0018】

本明細書に記載の造血細胞のいずれかは、（ａ）共刺激ポリペプチドをコードする第１ヌクレオチド配列、及び（ｂ）ＣＡＲポリペプチドをコードする第２ヌクレオチド配列を全体として含んだ核酸または核酸セットを含み得る。いくつかの実施形態では、核酸または核酸セットはＲＮＡ分子またはＲＮＡ分子のセットである。ある場合には、免疫細胞は、第１ヌクレオチド配列と第２ヌクレオチド配列とを両方含んだ核酸を含む。いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチドのコード配列は、ＣＡＲポリペプチドのそれの上流にある。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドのコード配列は、共刺激ポリペプチドのそれの上流にある。そのような核酸は、第１ヌクレオチド配列と第２ヌクレオチド配列との間に位置する第３ヌクレオチド配列をさらに含み得、第３ヌクレオチド配列はリボソームスキッピング部位（例えばＰ２Ａペプチド）、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）または第２プロモーターをコードする。

【0019】

いくつかの例では、核酸または核酸セットは、発現ベクターまたは発現ベクターのセットであってもよいベクターまたはベクターのセット（例えばウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクターであって任意選択的にレンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである当該レトロウイルスベクター）の中に含まれている。核酸セットまたはベクターセットは、関心対象のポリペプチド（すなわち共刺激ポリペプチド及びＣＡＲポリペプチド）の１つを各々がコードしたものである２つ以上の核酸分子または２つ以上のベクターの群を指す。本明細書に記載の核酸はどれも本開示の範囲に含まれる。

【0020】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の造血細胞及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0021】

本明細書ではさらに、対象においてＧＰＣ３が発現している細胞を阻害する（例えば、そのような細胞の数を減らす、細胞増殖を阻止する、及び／または細胞活性を抑制する）方法であって、それを必要とする対象に、共刺激ポリペプチドとＣＡＲポリペプチドとが共発現し得る本明細書に記載の造血細胞の集団、及び／または本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む、当該方法を提供する。

【0022】

いくつかの例では、造血細胞は自家性である。他の例では、造血細胞は同種異系である。本明細書に記載の方法のいずれかでは、エクスビボで造血細胞を活性化させる、増殖させる、またはその両方を行う。ある場合には、造血細胞は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、ＩＬ－２、フィトヘマグルチニン、及び操作型人工刺激細胞または粒子のうちの１つ以上の存在下で活性化されたＴ細胞を含む免疫細胞を含む。他の例では、免疫細胞は、４－１ＢＢリガンド、抗４－１ＢＢ抗体、ＩＬ－１５、抗ＩＬ－１５受容体抗体、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、Ｋ５６２細胞、及び操作型人工刺激細胞または粒子のうちの１つ以上の存在下で活性化されたナチュラルキラー細胞を含む。

【0023】

いくつかの例では、本明細書に記載の方法によって治療される対象は、がんを患っているヒト患者であり得る。本開示の方法によって治療され得るがんの非限定的な具体例としては、例えば、乳癌、胃癌、神経芽腫、骨肉腫、肺癌、皮膚癌、前立腺癌、大腸癌、腎細胞癌腫、卵巣癌、横紋筋肉腫、白血病、中皮腫、膵臓癌、頭頸部癌、網膜芽細胞腫、神経膠腫、神経膠芽腫、甲状腺癌、肝細胞癌、食道癌及び子宮頸癌が挙げられる。特定の実施形態では、がんは固形腫瘍であり得る。

【0024】

本開示の１つ以上の実施形態の詳細を以下の説明に示す。本開示の他の特徴または利点は、いくつかの実施形態の詳細な説明及び別記の特許請求の範囲から明らかとなろう。

【0025】

以下の図面は本明細書の一部をなし、本開示の特定の態様をさらに示すために含まれており、本開示は、本明細書に示される具体的な実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面の１つ以上を参照することによってよりよく理解され得る。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】ＧＰＣ３発現Ｈｅｐ３Ｂ細胞で刺激した後のＴ細胞について、前の時間点に対するＴ細胞の増殖倍率を示した一連のグラフである。この実験で評価したＴ細胞は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（配列番号１）を単独で（Ａ、Ｂ及びＣ）、またはＣＤ７０（Ａ、配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（Ｂ、配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（Ｃ、配列番号４７）と組み合わせて発現したか、あるいはＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（配列番号２）を単独で（Ａ、Ｂ、及びＣ）、またはＣＤ７０（Ａ、配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（Ｂ、配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（Ｃ、配列番号４７）と組み合わせて発現した。

【図2】ＧＰＣ３発現ＪＨＨ７細胞で刺激した後のＴ細胞について、前の時間点に対するＴ細胞の増殖倍率を刺激回数の関数として示した（パネルＡ）、ならびに２回目の刺激の後のサイトカイン産生をＩＬ－２（パネルＢ）、ＩＦＮ－γ（パネルＣ）及びＩＬ－１７Ａ（パネルＤ）について示した、一連のグラフである。４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（配列番号１）が単独でまたはＣＤ７０（配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）と組み合わせて発現しているＴ細胞についてのデータを示す。

【図3】４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ、配列番号１）を発現しているＴ細胞、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０（配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）またはＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）を共発現しているＴ細胞の、増強されたＩＬ－２産生（パネルＡ）及び増殖（パネルＢ）を示した一連のグラフである。

【図4】４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ、配列番号１）を発現している、またはＣＤ７０（配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）と組み合わせてＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢを発現しているＴ細胞の機能を実証する一連のグラフである。Ｔ細胞を、長期にわたる刺激の下でのそのＩＬ－１７Ａ産生能力（パネルＡ）及び増殖能力（パネルＢ）について評価した。加えて、Ｔ細胞を単回刺激後のその増殖能力について評価した（パネルＣ）。

【図5】ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８、配列番号２）が発現している、またはＣＤ２７（配列番号３３）と組み合わせてＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が発現しているＴ細胞の機能を実証する一連のグラフである。Ｔ細胞をその増殖能力（パネルＡ及びＢ）及びサイトカイン産生能力（パネルＣ及びＤ）について評価した。

【図6】ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８、配列番号２）を発現している、またはＣＤ２７（配列番号３３）と組み合わせてＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８を発現しているＴ細胞の機能を実証する一連のグラフである。Ｔ細胞を、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ、パネルＡ）または制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、パネルＢ）の存在下でのその増殖能力について評価した。

【図7】４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ、配列番号１）を発現している、またはＣＤ７０（配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）と組み合わせてＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢを発現しているＴ細胞の抗腫瘍活性を示した一連のグラフである。ＮＳＧマウスにおいてＨｅｐＧ２（パネルＡ）、Ｈｅｐ３Ｂ（パネルＢ）及びＪＨＨ７（パネルＣ）腫瘍異種移植モデルを評価した。

【図8】ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８、配列番号２）を発現している、またはＣＤ２７（配列番号３３）と組み合わせてＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８を発現しているＴ細胞の、ＮＳＧマウスのＪＨＨ７腫瘍異種移植モデルにおける抗腫瘍活性を示したグラフである。

【図9】ＮＳＧマウスのＨｅｐＧ２（パネルＡ）及びＨｅｐ３Ｂ（パネルＢ）腫瘍異種移植モデルからのマウス血液中のＴ細胞の量を示した一連のグラフである。４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（配列番号１）を単独でまたはＣＤ７０（配列番号３４）と組み合わせて発現しているＴ細胞（パネルＡ）、及びＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（配列番号２）を単独でまたはＣＤ２７（配列番号３３）と組み合わせて発現しているＴ細胞（パネルＢ）についてのデータを示す。

【図10】４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（配列番号１）を単独でもしくはＣＤ７０（配列番号３４）と組み合わせて発現しているＴ細胞でのＣＤ７０発現（パネルＡ及びＢ）、またはＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（配列番号２）を単独でもしくはＣＤ２７（配列番号３３）と組み合わせて発現しているＴ細胞でのＣＤ２７発現（パネルＣまたはＤ）を示した一連のグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0027】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、そのようなものを発現している免疫細胞（例えばＴ細胞）の結合特異性をがん細胞などの疾患細胞へと向け変える人工の細胞表面受容体であり、それによって標的疾患細胞は例えば免疫細胞のエフェクター活性によって排除される。ＣＡＲ構築物は、少なくとも細胞内シグナル伝達ドメインと融合した細胞外抗原結合ドメインを含むことが多い。細胞外抗原結合ドメイン（例えば一本鎖抗体断片）は、関心対象の抗原（例えば腫瘍抗原）に対して特異的であり、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞の活性化につながる細胞シグナル伝達を媒介することができる。かくして、ＣＡＲ構築物が発現している免疫細胞は、標的抗原が発現している疾患細胞（例えば腫瘍細胞）に結合して免疫細胞の活性化及び疾患細胞の排除をもたらすことができる。

【0028】

本開示は、抗グリピカン－３（ＧＰＣ３）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを共発現するエフェクター免疫細胞の活性を増強する方策の開発に少なくとも部分的に基づく。詳しくは、本開示は、好適な共刺激経路をエフェクター免疫細胞によって調節する能力を付与してそれによってそれらの成長及び生物活性を増強する方法を特徴とする。例えば、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと、特定の共刺激分子（例えば、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０Ｌ）を共発現しているＴ細胞、ならびにＣＤ２８共刺激ドメインを含む抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと、特定の共刺激分子（例えばＣＤ２７）を共発現しているＴ細胞は、増強された細胞増殖及びサイトカイン産生を示した。固形腫瘍内での免疫抑制的特徴は操作型Ｔ細胞療法の成功を制限する可能性がある。抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと、（トランスで共刺激シグナルを提供する）共刺激ポリペプチドとの共発現を伴う本明細書に開示される手法は、腫瘍治療、特に固形腫瘍治療におけるこの肝要な難題を少なくとも部分的に克服することを目標とする。

【0029】

ある場合には、共刺激経路を調節するエフェクター免疫細胞の能力は正常な細胞環境に認められ得る。他の例では、エフェクター免疫細胞の共刺激経路調節能力は、腫瘍微小環境にみられ得る条件の下で認められることがある。本開示は、共刺激経路を調節（例えば刺激）するための、例えば共刺激ポリペプチドを発現または過剰発現させることによるものを含めた様々な手法を提供する。本開示に用いられる共刺激ポリペプチドは、１種類以上の免疫細胞において共刺激因子として機能するＢ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、またはそのリガンドであり得る。共刺激因子は、抗原特異的な主シグナルを増強して免疫細胞を完全に活性化させる受容体またはそのリガンドを指す。

【0030】

かくして、本開示は、調節（例えば増進）された共刺激経路を有する能力がある、改変型（例えば遺伝子操作型）造血細胞（例えば、造血幹細胞、免疫細胞、例えばＴ細胞またはナチュラルキラー細胞）を提供する。いくつかの実施形態では、改変されていない造血細胞と比較してそのような改変型造血細胞には、共刺激経路を調節する能力を付与する１つ以上の共刺激ポリペプチド、例えば本明細書に記載されているものを発現し得る。そのような遺伝子操作型造血細胞にはさらに、ＣＡＲポリペプチド（共刺激ポリペプチドとは別のポリペプチド）が発現し得る。遺伝子操作型造血細胞に発現するＣＡＲポリペプチド及び共刺激ポリペプチドは両方とも、免疫細胞に対して外来性である（つまり組換え技術によって免疫細胞に導入された）核酸にコードされる。それらは、遺伝子操作の関与がない造血細胞の内在性遺伝子にはコードされていない。本開示はまた、記載される遺伝子操作型造血細胞を含んだ医薬組成物及びキットも提供する。

【0031】

共刺激ペプチドを発現する（例えば過剰発現する）本明細書に記載の遺伝子操作型造血細胞は、少なくとも、以下の利点をもたらし得る。共刺激ポリペプチドの発現は、共刺激経路を調節する能力を有するであろう。そのため、遺伝子操作型造血細胞は、共刺激ポリペプチドを発現しない（または過剰発現しない）造血細胞に比べてより良好に増殖し得、より多くのサイトカインを産生し得、より強い抗腫瘍細胞傷害を呈し得、及び／またはより多くのＴ細胞生存を呈し得、結果としてサイトカイン産生、生存率、細胞傷害及び／または抗腫瘍活性が増強され得る。

【0032】

Ｉ．共刺激ポリペプチド
本明細書中で使用する場合、共刺激ポリペプチドは、共刺激経路を調節（例えば刺激）する能力を有するポリペプチドを指す。そのようなポリペプチドは、共刺激経路を任意の機序によって調節（例えば増進）し得る。いくつかの例では、共刺激ポリペプチドは、共刺激受容体またはその共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。他の例では、共刺激ポリペプチドは、妥当な場合には共刺激受容体またはそのシグナル伝達ドメインのリガンドを含み得る。そのようなリガンドは、同属の共刺激受容体に結合すると共刺激シグナル伝達経路を誘発し得る。あるいは、共刺激ポリペプチドは、本明細書に開示される共刺激受容体のいずれかに対する天然に存在するリガンドの活性を模倣した天然に存在しないポリペプチドであり得る。そのような天然に存在しないポリペプチドは、共刺激受容体に対して特異的な一本鎖作動性抗体、例えば、４－１ＢＢに対して特異的であり４－１ＢＢＬの活性を模倣したｓｃＦｖであり得る。

【0033】

例示的な共刺激ポリペプチドには、Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、またはそのリガンド（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＴＭＩＧＤ２、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦＲ、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦベータ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＲＥＬＴ、ＴＡＣＩ、ＴＬ１Ａ、ＴＮＦアルファ、またはＴＮＦＲＩＩ）が含まれ得るが、これらに限定されない。別の例としては、ＢＣＭＡ、ＥＤＡＲ２、ＴＲＯＹ、ＬＴＢＲ、ＥＤＡＲ、ＮＧＦＲ、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＤＣＲ３、ＴＮＦＲ１、ＦＮ１４（ＴｗｅａｋＲ）、ＡＰＲＩＬ、ＥＤＡ－Ａ２、ＴＷＥＡＫ、ＬＴｂ（ＴＮＦ－Ｃ）、ＮＧＦ、ＥＤＡ－Ａ１、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、ＴＲＡＩＬが挙げられる。任意の好適な種（例えば哺乳動物、例えばヒト）からの任意のそのようなポリペプチドが、本明細書に記載の組成物及び方法に関して用いるために企図され得る。いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチドはＣＤ４０及びＭｙＤ８８を含まない。

【0034】

本明細書中で使用する場合、Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバーまたはＴＮＦスーパーファミリーのメンバーである共刺激ポリペプチドは、任意の種類の免疫細胞の活性化において共刺激の役割を果たすどちらかのスーパーファミリーのメンバーを指す。そのようなメンバーは、どちらかのスーパーファミリーの天然に存在する受容体またはリガンドであり得る。あるいは、そのようなメンバーは、天然に存在する受容体またはリガンドの変異体であり得る。変異体は、天然の対応物に比べて上昇または低下した活性を有し得る。いくつかの例では、変異体は天然の対応物と比較して細胞質側ドメインまたはその一部が欠損している。以下に、本開示において使用され得る例示的な共刺激ポリペプチドについて説明する。

【0035】

ＣＤ２８（分化抗原２８）は、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要とされる共刺激シグナルを提供する、Ｔ細胞上に発現するタンパク質である。それはＣＤ８０及びＣＤ８６タンパク質の受容体であり、ナイーブＴ細胞上に恒常的に発現する唯一のＢ７受容体である。例示的なヒトＣＤ２８のアミノ酸配列を以下に示す：
ＣＤ２８（配列番号１２）
ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ

【0036】

ＣＤ８０（分化抗原８０、Ｂ７－１）は、樹状細胞上、活性化Ｂ細胞上、及び単球上にみられるタンパク質である。それは、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要とされる共刺激シグナルを提供する。ＣＤ８０はＣＤ２８とＣＴＬＡ－４との両方のリガンドである。例示的なヒトＣＤ８０のアミノ酸配列を以下に示す：
ＣＤ８０（配列番号１３）
ＭＧＨＴＲＲＱＧＴＳＰＳＫＣＰＹＬＮＦＦＱＬＬＶＬＡＧＬＳＨＦＣＳＧＶＩＨＶＴＫＥＶＫＥＶＡＴＬＳＣＧＨＮＶＳＶＥＥＬＡＱＴＲＩＹＷＱＫＥＫＫＭＶＬＴＭＭＳＧＤＭＮＩＷＰＥＹＫＮＲＴＩＦＤＩＴＮＮＬＳＩＶＩＬＡＬＲＰＳＤＥＧＴＹＥＣＶＶＬＫＹＥＫＤＡＦＫＲＥＨＬＡＥＶＴＬＳＶＫＡＤＦＰＴＰＳＩＳＤＦＥＩＰＴＳＮＩＲＲＩＩＣＳＴＳＧＧＦＰＥＰＨＬＳＷＬＥＮＧＥＥＬＮＡＩＮＴＴＶＳＱＤＰＥＴＥＬＹＡＶＳＳＫＬＤＦＮＭＴＴＮＨＳＦＭＣＬＩＫＹＧＨＬＲＶＮＱＴＦＮＷＮＴＴＫＱＥＨＦＰＤＮＬＬＰＳＷＡＩＴＬＩＳＶＮＧＩＦＶＩＣＣＬＴＹＣＦＡＰＲＣＲＥＲＲＲＮＥＲＬＲＲＥＳＶＲＰＶ

【0037】

ＣＤ８６（分化抗原８６、Ｂ７－２）は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであるＩ型膜タンパク質である。ＣＤ８６は、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要とされる共刺激シグナルを提供する抗原提示細胞上に発現する。ＣＤ８６はＣＤ２８とＣＴＬＡ－４との両方のリガンドである。例示的なヒトＣＤ８６のアミノ酸配列を以下に示す：
ＣＤ８６（配列番号１４）
ＭＤＰＱＣＴＭＧＬＳＮＩＬＦＶＭＡＦＬＬＳＧＡＡＰＬＫＩＱＡＹＦＮＥＴＡＤＬＰＣＱＦＡＮＳＱＮＱＳＬＳＥＬＶＶＦＷＱＤＱＥＮＬＶＬＮＥＶＹＬＧＫＥＫＦＤＳＶＨＳＫＹＭＧＲＴＳＦＤＳＤＳＷＴＬＲＬＨＮＬＱＩＫＤＫＧＬＹＱＣＩＩＨＨＫＫＰＴＧＭＩＲＩＨＱＭＮＳＥＬＳＶＬＡＮＦＳＱＰＥＩＶＰＩＳＮＩＴＥＮＶＹＩＮＬＴＣＳＳＩＨＧＹＰＥＰＫＫＭＳＶＬＬＲＴＫＮＳＴＩＥＹＤＧＶＭＱＫＳＱＤＮＶＴＥＬＹＤＶＳＩＳＬＳＶＳＦＰＤＶＴＳＮＭＴＩＦＣＩＬＥＴＤＫＴＲＬＬＳＳＰＦＳＩＥＬＥＤＰＱＰＰＰＤＨＩＰＷＩＴＡＶＬＰＴＶＩＩＣＶＭＶＦＣＬＩＬＷＫＷＫＫＫＫＲＰＲＮＳＹＫＣＧＴＮＴＭＥＲＥＥＳＥＱＴＫＫＲＥＫＩＨＩＰＥＲＳＤＥＡＱＲＶＦＫＳＳＫＴＳＳＣＤＫＳＤＴＣＦ

【0038】

ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８、誘導性Ｔ細胞共刺激因子、またはＣＶＩＤ１）は、ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバーである。ＩＣＯＳは活性化Ｔ細胞上に発現する。例示的なヒトＩＣＯＳのアミノ酸配列を以下に示す：
ＩＣＯＳ（配列番号１５）
ＭＫＳＧＬＷＹＦＦＬＦＣＬＲＩＫＶＬＴＧＥＩＮＧＳＡＮＹＥＭＦＩＦＨＮＧＧＶＱＩＬＣＫＹＰＤＩＶＱＱＦＫＭＱＬＬＫＧＧＱＩＬＣＤＬＴＫＴＫＧＳＧＮＴＶＳＩＫＳＬＫＦＣＨＳＱＬＳＮＮＳＶＳＦＦＬＹＮＬＤＨＳＨＡＮＹＹＦＣＮＬＳＩＦＤＰＰＰＦＫＶＴＬＴＧＧＹＬＨＩＹＥＳＱＬＣＣＱＬＫＦＷＬＰＩＧＣＡＡＦＶＶＶＣＩＬＧＣＩＬＩＣＷＬＴＫＫＫＹＳＳＳＶＨＤＰＮＧＥＹＭＦＭＲＡＶＮＴＡＫＫＳＲＬＴＤＶＴＬ

【0039】

ＩＣＯＳＬ（ＩＣＯＳＬＧ、Ｂ７－Ｈ２、ＣＤ２７５）は、Ｔ細胞特異的タンパク質ＩＣＯＳのリガンドであるタンパク質である。ＩＣＯＳＬはＴ細胞増殖及びサイトカイン分泌の共刺激シグナルとして作用する。例示的なヒトＩＣＯＳＬのアミノ酸配列を以下に示す：
ＩＣＯＳＬ（配列番号１６）
ＭＲＬＧＳＰＧＬＬＦＬＬＦＳＳＬＲＡＤＴＱＥＫＥＶＲＡＭＶＧＳＤＶＥＬＳＣＡＣＰＥＧＳＲＦＤＬＮＤＶＹＶＹＷＱＴＳＥＳＫＴＶＶＴＹＨＩＰＱＮＳＳＬＥＮＶＤＳＲＹＲＮＲＡＬＭＳＰＡＧＭＬＲＧＤＦＳＬＲＬＦＮＶＴＰＱＤＥＱＫＦＨＣＬＶＬＳＱＳＬＧＦＱＥＶＬＳＶＥＶＴＬＨＶＡＡＮＦＳＶＰＶＶＳＡＰＨＳＰＳＱＤＥＬＴＦＴＣＴＳＩＮＧＹＰＲＰＮＶＹＷＩＮＫＴＤＮＳＬＬＤＱＡＬＱＮＤＴＶＦＬＮＭＲＧＬＹＤＶＶＳＶＬＲＩＡＲＴＰＳＶＮＩＧＣＣＩＥＮＶＬＬＱＱＮＬＴＶＧＳＱＴＧＮＤＩＧＥＲＤＫＩＴＥＮＰＶＳＴＧＥＫＮＡＡＴＷＳＩＬＡＶＬＣＬＬＶＶＶＡＶＡＩＧＷＶＣＲＤＲＣＬＱＨＳＹＡＧＡＷＡＶＳＰＥＴＥＬＴＧＨＶ

【0040】

Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６、分化抗原２７６）は、Ｔ細胞媒介免疫応答の調節に関与すると考えられている免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。例示的なヒトＢ７－Ｈ３のアミノ酸配列を以下に示す：
Ｂ７－Ｈ３（配列番号１７）
ＭＬＲＲＲＧＳＰＧＭＧＶＨＶＧＡＡＬＧＡＬＷＦＣＬＴＧＡＬＥＶＱＶＰＥＤＰＶＶＡＬＶＧＴＤＡＴＬＣＣＳＦＳＰＥＰＧＦＳＬＡＱＬＮＬＩＷＱＬＴＤＴＫＱＬＶＨＳＦＡＥＧＱＤＱＧＳＡＹＡＮＲＴＡＬＦＰＤＬＬＡＱＧＮＡＳＬＲＬＱＲＶＲＶＡＤＥＧＳＦＴＣＦＶＳＩＲＤＦＧＳＡＡＶＳＬＱＶＡＡＰＹＳＫＰＳＭＴＬＥＰＮＫＤＬＲＰＧＤＴＶＴＩＴＣＳＳＹＱＧＹＰＥＡＥＶＦＷＱＤＧＱＧＶＰＬＴＧＮＶＴＴＳＱＭＡＮＥＱＧＬＦＤＶＨＳＩＬＲＶＶＬＧＡＮＧＴＹＳＣＬＶＲＮＰＶＬＱＱＤＡＨＳＳＶＴＩＴＰＱＲＳＰＴＧＡＶＥＶＱＶＰＥＤＰＶＶＡＬＶＧＴＤＡＴＬＲＣＳＦＳＰＥＰＧＦＳＬＡＱＬＮＬＩＷＱＬＴＤＴＫＱＬＶＨＳＦＴＥＧＲＤＱＧＳＡＹＡＮＲＴＡＬＦＰＤＬＬＡＱＧＮＡＳＬＲＬＱＲＶＲＶＡＤＥＧＳＦＴＣＦＶＳＩＲＤＦＧＳＡＡＶＳＬＱＶＡＡＰＹＳＫＰＳＭＴＬＥＰＮＫＤＬＲＰＧＤＴＶＴＩＴＣＳＳＹＲＧＹＰＥＡＥＶＦＷＱＤＧＱＧＶＰＬＴＧＮＶＴＴＳＱＭＡＮＥＱＧＬＦＤＶＨＳＶＬＲＶＶＬＧＡＮＧＴＹＳＣＬＶＲＮＰＶＬＱＱＤＡＨＧＳＶＴＩＴＧＱＰＭＴＦＰＰＥＡＬＷＶＴＶＧＬＳＶＣＬＩＡＬＬＶＡＬＡＦＶＣＷＲＫＩＫＱＳＣＥＥＥＮＡＧＡＥＤＱＤＧＥＧＥＧＳＫＴＡＬＱＰＬＫＨＳＤＳＫＥＤＤＧＱＥＩＡ

【0041】

ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子、Ｂ７－Ｈ５、ＰＤ－１Ｈ）は、免疫チェックポイントとして機能するＩ型膜貫通タンパク質である。ＶＩＳＴＡはＴＭＩＧＤ２（ＣＤ２８Ｈ）を介してＴ細胞を共刺激する。例示的なヒトＶＩＳＴＡのアミノ酸配列を以下に示す：
ＶＩＳＴＡ（配列番号１８）
ＭＧＶＰＴＡＬＥＡＧＳＷＲＷＧＳＬＬＦＡＬＦＬＡＡＳＬＧＰＶＡＡＦＫＶＡＴＰＹＳＬＹＶＣＰＥＧＱＮＶＴＬＴＣＲＬＬＧＰＶＤＫＧＨＤＶＴＦＹＫＴＷＹＲＳＳＲＧＥＶＱＴＣＳＥＲＲＰＩＲＮＬＴＦＱＤＬＨＬＨＨＧＧＨＱＡＡＮＴＳＨＤＬＡＱＲＨＧＬＥＳＡＳＤＨＨＧＮＦＳＩＴＭＲＮＬＴＬＬＤＳＧＬＹＣＣＬＶＶＥＩＲＨＨＨＳＥＨＲＶＨＧＡＭＥＬＱＶＱＴＧＫＤＡＰＳＮＣＶＶＹＰＳＳＳＱＤＳＥＮＩＴＡＡＡＬＡＴＧＡＣＩＶＧＩＬＣＬＰＬＩＬＬＬＶＹＫＱＲＱＡＡＳＮＲＲＡＱＥＬＶＲＭＤＳＮＩＱＧＩＥＮＰＧＦＥＡＳＰＰＡＱＧＩＰＥＡＫＶＲＨＰＬＳＹＶＡＱＲＱＰＳＥＳＧＲＨＬＬＳＥＰＳＴＰＬＳＰＰＧＰＧＤＶＦＦＰＳＬＤＰＶＰＤＳＰＮＦＥＶＩ

【0042】

ＴＭＩＧＤ２（膜貫通及び免疫グロブリンドメイン含有２；ＣＤ２８Ｈ）は、ＴＭＩＧＤ２であり、ＡＫＴ依存性シグナル伝達カスケードによってＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を増強すると考えられている。例示的なヒトＴＭＩＧＤ２のアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＭＩＧＤ２（配列番号１９）
ＭＧＳＰＧＭＶＬＧＬＬＶＱＩＷＡＬＱＥＡＳＳＬＳＶＱＱＧＰＮＬＬＱＶＲＱＧＳＱＡＴＬＶＣＱＶＤＱＡＴＡＷＥＲＬＲＶＫＷＴＫＤＧＡＩＬＣＱＰＹＩＴＮＧＳＬＳＬＧＶＣＧＰＱＧＲＬＳＷＱＡＰＳＨＬＴＬＱＬＤＰＶＳＬＮＨＳＧＡＹＶＣＷＡＡＶＥＩＰＥＬＥＥＡＥＧＮＩＴＲＬＦＶＤＰＤＤＰＴＱＮＲＮＲＩＡＳＦＰＧＦＬＦＶＬＬＧＶＧＳＭＧＶＡＡＩＶＷＧＡＷＦＷＧＲＲＳＣＱＱＲＤＳＧＮＳＰＧＮＡＦＹＳＮＶＬＹＲＰＲＧＡＰＫＫＳＥＤＣＳＧＥＧＫＤＱＲＧＱＳＩＹＳＴＳＦＰＱＰＡＰＲＱＰＨＬＡＳＲＰＣＰＳＰＲＰＣＰＳＰＲＰＧＨＰＶＳＭＶＲＶＳＰＲＰＳＰＴＱＱＰＲＰＫＧＦＰＫＶＧＥＥ

【0043】

Ｂ７－Ｈ６（ＮＣＲ３ＬＧ１、ナチュラルキラー細胞細胞傷害受容体３リガンド１）は、腫瘍細胞上に選択的に発現するＢ７ファミリーのメンバーである。Ｂ７－Ｈ６はＮＫｐ３０と相互作用してナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性化及び細胞傷害をもたらす。例示的なヒトＢ７－Ｈ６のアミノ酸配列を以下に示す：
Ｂ７－Ｈ６（配列番号２０）
ＭＴＷＲＡＡＡＳＴＣＡＡＬＬＩＬＬＷＡＬＴＴＥＧＤＬＫＶＥＭＭＡＧＧＴＱＩＴＰＬＮＤＮＶＴＩＦＣＮＩＦＹＳＱＰＬＮＩＴＳＭＧＩＴＷＦＷＫＳＬＴＦＤＫＥＶＫＶＦＥＦＦＧＤＨＱＥＡＦＲＰＧＡＩＶＳＰＷＲＬＫＳＧＤＡＳＬＲＬＰＧＩＱＬＥＥＡＧＥＹＲＣＥＶＶＶＴＰＬＫＡＱＧＴＶＱＬＥＶＶＡＳＰＡＳＲＬＬＬＤＱＶＧＭＫＥＮＥＤＫＹＭＣＥＳＳＧＦＹＰＥＡＩＮＩＴＷＥＫＱＴＱＫＦＰＨＰＩＥＩＳＥＤＶＩＴＧＰＴＩＫＮＭＤＧＴＦＮＶＴＳＣＬＫＬＮＳＳＱＥＤＰＧＴＶＹＱＣＶＶＲＨＡＳＬＨＴＰＬＲＳＮＦＴＬＴＡＡＲＨＳＬＳＥＴＥＫＴＤＮＦＳＩＨＷＷＰＩＳＦＩＧＶＧＬＶＬＬＩＶＬＩＰＷＫＫＩＣＮＫＳＳＳＡＹＴＰＬＫＣＩＬＫＨＷＮＳＦＤＴＱＴＬＫＫＥＨＬＩＦＦＣＴＲＡＷＰＳＹＱＬＱＤＧＥＡＷＰＰＥＧＳＶＮＩＮＴＩＱＱＬＤＶＦＣＲＱＥＧＫＷＳＥＶＰＹＶＱＡＦＦＡＬＲＤＮＰＤＬＣＱＣＣＲＩＤＰＡＬＬＴＶＴＳＧＫＳＩＤＤＮＳＴＫＳＥＫＱＴＰＲＥＨＳＤＡＶＰＤＡＰＩＬＰＶＳＰＩＷＥＰＰＰＡＴＴＳＴＴＰＶＬＳＳＱＰＰＴＬＬＬＰＬＱ

【0044】

Ｂ７－Ｈ７（ＨＨＬＡ２、ＨＥＲＶ－Ｈ ＬＴＲ関連２）は、単球の表面にみられるタンパク質リガンドである。Ｂ７－Ｈ７は、Ｔリンパ球上の受容体と結合すること及びその増殖を阻害することによって細胞媒介免疫性を調節すると考えられている。例示的なヒトＢ７－Ｈ７のアミノ酸配列を以下に示す：
Ｂ７－Ｈ７（配列番号２１）
ＭＫＡＱＴＡＬＳＦＦＬＩＬＩＴＳＬＳＧＳＱＧＩＦＰＬＡＦＦＩＹＶＰＭＮＥＱＩＶＩＧＲＬＤＥＤＩＩＬＰＳＳＦＥＲＧＳＥＶＶＩＨＷＫＹＱＤＳＹＫＶＨＳＹＹＫＧＳＤＨＬＥＳＱＤＰＲＹＡＮＲＴＳＬＦＹＮＥＩＱＮＧＮＡＳＬＦＦＲＲＶＳＬＬＤＥＧＩＹＴＣＹＶＧＴＡＩＱＶＩＴＮＫＶＶＬＫＶＧＶＦＬＴＰＶＭＫＹＥＫＲＮＴＮＳＦＬＩＣＳＶＬＳＶＹＰＲＰＩＩＴＷＫＭＤＮＴＰＩＳＥＮＮＭＥＥＴＧＳＬＤＳＦＳＩＮＳＰＬＮＩＴＧＳＮＳＳＹＥＣＴＩＥＮＳＬＬＫＱＴＷＴＧＲＷＴＭＫＤＧＬＨＫＭＱＳＥＨＶＳＬＳＣＱＰＶＮＤＹＦＳＰＮＱＤＦＫＶＴＷＳＲＭＫＳＧＴＦＳＶＬＡＹＹＬＳＳＳＱＮＴＩＩＮＥＳＲＦＳＷＮＫＥＬＩＮＱＳＤＦＳＭＮＬＭＤＬＮＬＳＤＳＧＥＹＬＣＮＩＳＳＤＥＹＴＬＬＴＩＨＴＶＨＶＥＰＳＱＥＴＡＳＨＮＫＧＬＷＩＬＶＰＳＡＩＬＡＡＦＬＬＩＷＳＶＫＣＣＲＡＱＬＥＡＲＲＳＲＨＰＡＤＧＡＱＱＥＲＣＣＶＰＰＧＥＲＣＰＳＡＰＤＮＧＥＥＮＶＰＬＳＧＫＶ

【0045】

４－１ＢＢ（ＣＤ１３７；ＴＮＦＲＳＦ９）は、活性化Ｔ細胞によって発現する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーメンバーである。４－１ＢＢの架橋は、Ｔ細胞増殖、ＩＬ－２分泌、生存及び細胞溶解活性を増強する。例示的なヒト４－１ＢＢのアミノ酸配列を以下に示す：
４－１ＢＢ（配列番号２２）
ＭＧＮＳＣＹＮＩＶＡＴＬＬＬＶＬＮＦＥＲＴＲＳＬＱＤＰＣＳＮＣＰＡＧＴＦＣＤＮＮＲＮＱＩＣＳＰＣＰＰＮＳＦＳＳＡＧＧＱＲＴＣＤＩＣＲＱＣＫＧＶＦＲＴＲＫＥＣＳＳＴＳＮＡＥＣＤＣＴＰＧＦＨＣＬＧＡＧＣＳＭＣＥＱＤＣＫＱＧＱＥＬＴＫＫＧＣＫＤＣＣＦＧＴＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬＤＧＫＳＶＬＶＮＧＴＫＥＲＤＶＶＣＧＰＳＰＡＤＬＳＰＧＡＳＳＶＴＰＰＡＰＡＲＥＰＧＨＳＰＱＩＩＳＦＦＬＡＬＴＳＴＡＬＬＦＬＬＦＦＬＴＬＲＦＳＶＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ

【0046】

４－１ＢＢＬ（ＴＮＦＳＦ９、４－１ＢＢリガンド）は、ＴＮＦスーパーファミリーに属する２型膜貫通糖タンパク質受容体である。４－１ＢＢＬは、活性化Ｔリンパ球上に発現し、４－１ＢＢに結合する。特定の（天然のもの及び変異体を含めた）例示的なヒト４－１ＢＢＬポリペプチドのアミノ酸配列を以下に示す：
４－１ＢＢＬ（配列番号２３）
ＭＥＹＡＳＤＡＳＬＤＰＥＡＰＷＰＰＡＰＲＡＲＡＣＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ
４－１ＢＢＬ－ＣＤ（細胞質側ドメインが欠損したもの、配列番号２４）
ＭＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ
４－１ＢＢＬ Ｑ８９Ａ（配列番号２５）
ＭＥＹＡＳＤＡＳＬＤＰＥＡＰＷＰＰＡＰＲＡＲＡＣＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＡＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ
４－１ＢＢＬ Ｑ８９Ａ／ＣＤ（細胞質側ドメインが欠損したもの）（配列番号２６）
ＭＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＡＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ
４－１ＢＢＬ Ｌ１１５Ａ（配列番号２７）
ＭＥＹＡＳＤＡＳＬＤＰＥＡＰＷＰＰＡＰＲＡＲＡＣＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＡＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ
４－１ＢＢＬ Ｌ１１５Ａ／ＣＤ（配列番号２８）
ＭＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＡＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ
４－１ＢＢＬ Ｋ１２７Ａ（配列番号２９）
ＭＥＹＡＳＤＡＳＬＤＰＥＡＰＷＰＰＡＰＲＡＲＡＣＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＡＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ
４－１ＢＢＬ Ｑ２２７Ａ（配列番号３０）
ＭＥＹＡＳＤＡＳＬＤＰＥＡＰＷＰＰＡＰＲＡＲＡＣＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＡＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ

【0047】

ＢＡＦＦ（Ｂ細胞活性化因子、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ）は、ＴＮＦリガンドファミリーのメンバーであり、受容体ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ／ＴＡＣＩ、ＴＮＦＲＳＦ１７／ＢＣＭＡ、及びＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ／ＢＡＦＦ－Ｒのリガンドとしての役割を果たす。ＢＡＦＦは、強力なＢ細胞活性化因子であり、Ｂ細胞の増殖及び分化において重要な役割を果たす。例示的なヒトＢＡＦＦのアミノ酸配列を以下に示す：
ＢＡＦＦ（配列番号３１）
ＭＤＤＳＴＥＲＥＱＳＲＬＴＳＣＬＫＫＲＥＥＭＫＬＫＥＣＶＳＩＬＰＲＫＥＳＰＳＶＲＳＳＫＤＧＫＬＬＡＡＴＬＬＬＡＬＬＳＣＣＬＴＶＶＳＦＹＱＶＡＡＬＱＧＤＬＡＳＬＲＡＥＬＱＧＨＨＡＥＫＬＰＡＧＡＧＡＰＫＡＧＬＥＥＡＰＡＶＴＡＧＬＫＩＦＥＰＰＡＰＧＥＧＮＳＳＱＮＳＲＮＫＲＡＶＱＧＰＥＥＴＶＴＱＤＣＬＱＬＩＡＤＳＥＴＰＴＩＱＫＧＳＹＴＦＶＰＷＬＬＳＦＫＲＧＳＡＬＥＥＫＥＮＫＩＬＶＫＥＴＧＹＦＦＩＹＧＱＶＬＹＴＤＫＴＹＡＭＧＨＬＩＱＲＫＫＶＨＶＦＧＤＥＬＳＬＶＴＬＦＲＣＩＱＮＭＰＥＴＬＰＮＮＳＣＹＳＡＧＩＡＫＬＥＥＧＤＥＬＱＬＡＩＰＲＥＮＡＱＩＳＬＤＧＤＶＴＦＦＧＡＬＫＬＬ

【0048】

ＢＡＦＦＲ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーの膜タンパク質であり、ＢＡＦＦの受容体として作用する。ＢＡＦＦＲは、Ｂ細胞生存を増強するものであり、末梢Ｂ細胞集団の調節因子である。例示的なヒトＢＡＦＦＲのアミノ酸配列を以下に示す：
ＢＡＦＦＲ（配列番号３２）
ＭＲＲＧＰＲＳＬＲＧＲＤＡＰＡＰＴＰＣＶＰＡＥＣＦＤＬＬＶＲＨＣＶＡＣＧＬＬＲＴＰＲＰＫＰＡＧＡＳＳＰＡＰＲＴＡＬＱＰＱＥＳＶＧＡＧＡＧＥＡＡＬＰＬＰＧＬＬＦＧＡＰＡＬＬＧＬＡＬＶＬＡＬＶＬＶＧＬＶＳＷＲＲＲＱＲＲＬＲＧＡＳＳＡＥＡＰＤＧＤＫＤＡＰＥＰＬＤＫＶＩＩＬＳＰＧＩＳＤＡＴＡＰＡＷＰＰＰＧＥＤＰＧＴＴＰＰＧＨＳＶＰＶＰＡＴＥＬＧＳＴＥＬＶＴＴＫＴＡＧＰＥＱＱ

【0049】

ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーであり、Ｔ細胞免疫性の発生及び長期的維持のために必要とされる。ＣＤ２７はＣＤ７０に結合し、また、Ｂ細胞活性化及び免疫グロブリン合成の調節において役割を果たす。例示的なヒトＣＤ２７のアミノ酸配列を以下に示す：
ＣＤ２７（配列番号３３）
ＭＡＲＰＨＰＷＷＬＣＶＬＧＴＬＶＧＬＳＡＴＰＡＰＫＳＣＰＥＲＨＹＷＡＱＧＫＬＣＣＱＭＣＥＰＧＴＦＬＶＫＤＣＤＱＨＲＫＡＡＱＣＤＰＣＩＰＧＶＳＦＳＰＤＨＨＴＲＰＨＣＥＳＣＲＨＣＮＳＧＬＬＶＲＮＣＴＩＴＡＮＡＥＣＡＣＲＮＧＷＱＣＲＤＫＥＣＴＥＣＤＰＬＰＮＰＳＬＴＡＲＳＳＱＡＬＳＰＨＰＱＰＴＨＬＰＹＶＳＥＭＬＥＡＲＴＡＧＨＭＱＴＬＡＤＦＲＱＬＰＡＲＴＬＳＴＨＷＰＰＱＲＳＬＣＳＳＤＦＩＲＩＬＶＩＦＳＧＭＦＬＶＦＴＬＡＧＡＬＦＬＨＱＲＲＫＹＲＳＮＫＧＥＳＰＶＥＰＡＥＰＣＨＹＳＣＰＲＥＥＥＧＳＴＩＰＩＱＥＤＹＲＫＰＥＰＡＣＳＰ

【0050】

ＣＤ７０（ＣＤ２７ＬＧ、ＴＮＦＳＦ７）は、高度に活性化されたリンパ球に発現するタンパク質である。ＣＤ７０はＣＤ２７のリガンドとして作用する。例示的なヒトＣＤ７０のアミノ酸配列を以下に示す：
ＣＤ７０（配列番号３４）
ＭＰＥＥＧＳＧＣＳＶＲＲＲＰＹＧＣＶＬＲＡＡＬＶＰＬＶＡＧＬＶＩＣＬＶＶＣＩＱＲＦＡＱＡＱＱＱＬＰＬＥＳＬＧＷＤＶＡＥＬＱＬＮＨＴＧＰＱＱＤＰＲＬＹＷＱＧＧＰＡＬＧＲＳＦＬＨＧＰＥＬＤＫＧＱＬＲＩＨＲＤＧＩＹＭＶＨＩＱＶＴＬＡＩＣＳＳＴＴＡＳＲＨＨＰＴＴＬＡＶＧＩＣＳＰＡＳＲＳＩＳＬＬＲＬＳＦＨＱＧＣＴＩＶＳＱＲＬＴＰＬＡＲＧＤＴＬＣＴＮＬＴＧＴＬＬＰＳＲＮＴＤＥＴＦＦＧＶＱＷＶＲＰ

【0051】

ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）は、活性化Ｔ細胞及びＢ細胞によって発現するＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ３０は、ＣＤ３０Ｌ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３及びＴＲＡＦ５と相互作用することが示されている細胞膜タンパク質である。例示的なヒトＣＤ３０のアミノ酸配列を以下に示す：
ＣＤ３０（配列番号３５）
ＭＲＶＬＬＡＡＬＧＬＬＦＬＧＡＬＲＡＦＰＱＤＲＰＦＥＤＴＣＨＧＮＰＳＨＹＹＤＫＡＶＲＲＣＣＹＲＣＰＭＧＬＦＰＴＱＱＣＰＱＲＰＴＤＣＲＫＱＣＥＰＤＹＹＬＤＥＡＤＲＣＴＡＣＶＴＣＳＲＤＤＬＶＥＫＴＰＣＡＷＮＳＳＲＶＣＥＣＲＰＧＭＦＣＳＴＳＡＶＮＳＣＡＲＣＦＦＨＳＶＣＰＡＧＭＩＶＫＦＰＧＴＡＱＫＮＴＶＣＥＰＡＳＰＧＶＳＰＡＣＡＳＰＥＮＣＫＥＰＳＳＧＴＩＰＱＡＫＰＴＰＶＳＰＡＴＳＳＡＳＴＭＰＶＲＧＧＴＲＬＡＱＥＡＡＳＫＬＴＲＡＰＤＳＰＳＳＶＧＲＰＳＳＤＰＧＬＳＰＴＱＰＣＰＥＧＳＧＤＣＲＫＱＣＥＰＤＹＹＬＤＥＡＧＲＣＴＡＣＶＳＣＳＲＤＤＬＶＥＫＴＰＣＡＷＮＳＳＲＴＣＥＣＲＰＧＭＩＣＡＴＳＡＴＮＳＣＡＲＣＶＰＹＰＩＣＡＡＥＴＶＴＫＰＱＤＭＡＥＫＤＴＴＦＥＡＰＰＬＧＴＱＰＤＣＮＰＴＰＥＮＧＥＡＰＡＳＴＳＰＴＱＳＬＬＶＤＳＱＡＳＫＴＬＰＩＰＴＳＡＰＶＡＬＳＳＴＧＫＰＶＬＤＡＧＰＶＬＦＷＶＩＬＶＬＶＶＶＶＧＳＳＡＦＬＬＣＨＲＲＡＣＲＫＲＩＲＱＫＬＨＬＣＹＰＶＱＴＳＱＰＫＬＥＬＶＤＳＲＰＲＲＳＳＴＱＬＲＳＧＡＳＶＴＥＰＶＡＥＥＲＧＬＭＳＱＰＬＭＥＴＣＨＳＶＧＡＡＹＬＥＳＬＰＬＱＤＡＳＰＡＧＧＰＳＳＰＲＤＬＰＥＰＲＶＳＴＥＨＴＮＮＫＩＥＫＩＹＩＭＫＡＤＴＶＩＶＧＴＶＫＡＥＬＰＥＧＲＧＬＡＧＰＡＥＰＥＬＥＥＥＬＥＡＤＨＴＰＨＹＰＥＱＥＴＥＰＰＬＧＳＣＳＤＶＭＬＳＶＥＥＥＧＫＥＤＰＬＰＴＡＡＳＧＫ

【0052】

ＣＤ３０Ｌ（ＣＤ３０ＬＧ、ＴＮＦＳＦ８）は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ３０Ｌは、ＣＤ３０のリガンドとして作用するものであり、誘導性Ｔ細胞及び単球／マクロファージに発現する。例示的なヒトＣＤ３０Ｌのアミノ酸配列を以下に示す：
ＣＤ３０Ｌ（配列番号３６）
ＭＤＰＧＬＱＱＡＬＮＧＭＡＰＰＧＤＴＡＭＨＶＰＡＧＳＶＡＳＨＬＧＴＴＳＲＳＹＦＹＬＴＴＡＴＬＡＬＣＬＶＦＴＶＡＴＩＭＶＬＶＶＱＲＴＤＳＩＰＮＳＰＤＮＶＰＬＫＧＧＮＣＳＥＤＬＬＣＩＬＫＲＡＰＦＫＫＳＷＡＹＬＱＶＡＫＨＬＮＫＴＫＬＳＷＮＫＤＧＩＬＨＧＶＲＹＱＤＧＮＬＶＩＱＦＰＧＬＹＦＩＩＣＱＬＱＦＬＶＱＣＰＮＮＳＶＤＬＫＬＥＬＬＩＮＫＨＩＫＫＱＡＬＶＴＶＣＥＳＧＭＱＴＫＨＶＹＱＮＬＳＱＦＬＬＤＹＬＱＶＮＴＴＩＳＶＮＶＤＴＦＱＹＩＤＴＳＴＦＰＬＥＮＶＬＳＩＦＬＹＳＮＳＤ

【0053】

ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）は、Ｂ細胞、単球、樹状細胞、内皮細胞及び上皮細胞の表面に発現する細胞表面受容体である。ＣＤ４０は、Ｔ細胞依存性免疫グロブリンクラススイッチ、メモリーＢ細胞の発達及び胚中心形成に関与することが示されている。例示的なヒトＣＤ４０のアミノ酸配列を以下に示す：
ＣＤ４０（配列番号３７）
ＭＶＲＬＰＬＱＣＶＬＷＧＣＬＬＴＡＶＨＰＥＰＰＴＡＣＲＥＫＱＹＬＩＮＳＱＣＣＳＬＣＱＰＧＱＫＬＶＳＤＣＴＥＦＴＥＴＥＣＬＰＣＧＥＳＥＦＬＤＴＷＮＲＥＴＨＣＨＱＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴＣＥＥＧＷＨＣＴＳＥＡＣＥＳＣＶＬＨＲＳＣＳＰＧＦＧＶＫＱＩＡＴＧＶＳＤＴＩＣＥＰＣＰＶＧＦＦＳＮＶＳＳＡＦＥＫＣＨＰＷＴＳＣＥＴＫＤＬＶＶＱＱＡＧＴＮＫＴＤＶＶＣＧＰＱＤＲＬＲＡＬＶＶＩＰＩＩＦＧＩＬＦＡＩＬＬＶＬＶＦＩＫＫＶＡＫＫＰＴＮＫＡＰＨＰＫＱＥＰＱＥＩＮＦＰＤＤＬＰＧＳＮＴＡＡＰＶＱＥＴＬＨＧＣＱＰＶＴＱＥＤＧＫＥＳＲＩＳＶＱＥＲＱ

【0054】

ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０ＬＧ、ＴＲＡＰ、ＴＮＦＳＦ５）は、Ｂリンパ球、上皮細胞及びいくつかの癌腫細胞に発現するＴＮＦスーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ４０Ｌは、Ｂ細胞増殖、接着及び分化を媒介するためにＣＤ４０と相互作用することが知られている膜貫通タンパク質である。例示的なヒトＣＤ４０Ｌのアミノ酸配列を以下に示す：
ＣＤ４０Ｌ（配列番号３８）
ＭＩＥＴＹＮＱＴＳＰＲＳＡＡＴＧＬＰＩＳＭＫＩＦＭＹＬＬＴＶＦＬＩＴＱＭＩＧＳＡＬＦＡＶＹＬＨＲＲＬＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱＲＣＮＴＧＥＲＳＬＳＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬＮＫＥＥＴＫＫＥＮＳＦＥＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ

【0055】

ＤＲ３（ＴＮＦＲ２５、ＡＰＯ３、ＴＲＡＭＰ、ＬＡＲＤ、ＷＳＬ－１，）は、リンパ球に発現するＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーである。ＤＲ３は、ＴＬ１Ａ誘導性Ｔ細胞共刺激を担う受容体であると考えられている。例示的なヒトＤＲ３のアミノ酸配列を以下に示す：
ＤＲ３（配列番号３９）
ＭＥＱＲＰＲＧＣＡＡＶＡＡＡＬＬＬＶＬＬＧＡＲＡＱＧＧＴＲＳＰＲＣＤＣＡＧＤＦＨＫＫＩＧＬＦＣＣＲＧＣＰＡＧＨＹＬＫＡＰＣＴＥＰＣＧＮＳＴＣＬＶＣＰＱＤＴＦＬＡＷＥＮＨＨＮＳＥＣＡＲＣＱＡＣＤＥＱＡＳＱＶＡＬＥＮＣＳＡＶＡＤＴＲＣＧＣＫＰＧＷＦＶＥＣＱＶＳＱＣＶＳＳＳＰＦＹＣＱＰＣＬＤＣＧＡＬＨＲＨＴＲＬＬＣＳＲＲＤＴＤＣＧＴＣＬＰＧＦＹＥＨＧＤＧＣＶＳＣＰＴＳＴＬＧＳＣＰＥＲＣＡＡＶＣＧＷＲＱＭＦＷＶＱＶＬＬＡＧＬＶＶＰＬＬＬＧＡＴＬＴＹＴＹＲＨＣＷＰＨＫＰＬＶＴＡＤＥＡＧＭＥＡＬＴＰＰＰＡＴＨＬＳＰＬＤＳＡＨＴＬＬＡＰＰＤＳＳＥＫＩＣＴＶＱＬＶＧＮＳＷＴＰＧＹＰＥＴＱＥＡＬＣＰＱＶＴＷＳＷＤＱＬＰＳＲＡＬＧＰＡＡＡＰＴＬＳＰＥＳＰＡＧＳＰＡＭＭＬＱＰＧＰＱＬＹＤＶＭＤＡＶＰＡＲＲＷＫＥＦＶＲＴＬＧＬＲＥＡＥＩＥＡＶＥＶＥＩＧＲＦＲＤＱＱＹＥＭＬＫＲＷＲＱＱＱＰＡＧＬＧＡＶＹＡＡＬＥＲＭＧＬＤＧＣＶＥＤＬＲＳＲＬＱＲＧＰ

【0056】

ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質、ＡＩＴＲ、ＴＮＦＲＳＦ１８）は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーであり、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞及び抗原提示細胞を含めたいくつかの細胞及び組織に発現する。ＧＩＴＲとそのリガンド（ＧＩＴＲＬ）との相互作用は共活性化シグナルを誘発する。例示的なヒトＧＩＴＲのアミノ酸配列を以下に示す：
ＧＩＴＲ（配列番号４０）
ＭＡＱＨＧＡＭＧＡＦＲＡＬＣＧＬＡＬＬＣＡＬＳＬＧＱＲＰＴＧＧＰＧＣＧＰＧＲＬＬＬＧＴＧＴＤＡＲＣＣＲＶＨＴＴＲＣＣＲＤＹＰＧＥＥＣＣＳＥＷＤＣＭＣＶＱＰＥＦＨＣＧＤＰＣＣＴＴＣＲＨＨＰＣＰＰＧＱＧＶＱＳＱＧＫＦＳＦＧＦＱＣＩＤＣＡＳＧＴＦＳＧＧＨＥＧＨＣＫＰＷＴＤＣＴＱＦＧＦＬＴＶＦＰＧＮＫＴＨＮＡＶＣＶＰＧＳＰＰＡＥＰＬＧＷＬＴＶＶＬＬＡＶＡＡＣＶＬＬＬＴＳＡＱＬＧＬＨＩＷＱＬＲＳＱＣＭＷＰＲＥＴＱＬＬＬＥＶＰＰＳＴＥＤＡＲＳＣＱＦＰＥＥＥＲＧＥＲＳＡＥＥＫＧＲＬＧＤＬＷ

【0057】

ＧＩＴＲＬ（ＴＮＦＳＦ１８）は、ＴＮＦリガンドファミリーに属するサイトカインであり、ＧＩＴＲの受容体として作用する。ＧＩＴＲとそのリガンド（ＧＩＴＲＬ）との相互作用は、共活性化シグナルを誘発し、末梢組織におけるＴリンパ球生存を調節することが示されている。例示的なヒトＧＩＴＲＬのアミノ酸配列を以下に示す：
ＧＩＴＲＬ（配列番号４１）
ＭＴＬＨＰＳＰＩＴＣＥＦＬＦＳＴＡＬＩＳＰＫＭＣＬＳＨＬＥＮＭＰＬＳＨＳＲＴＱＧＡＱＲＳＳＷＫＬＷＬＦＣＳＩＶＭＬＬＦＬＣＳＦＳＷＬＩＦＩＦＬＱＬＥＴＡＫＥＰＣＭＡＫＦＧＰＬＰＳＫＷＱＭＡＳＳＥＰＰＣＶＮＫＶＳＤＷＫＬＥＩＬＱＮＧＬＹＬＩＹＧＱＶＡＰＮＡＮＹＮＤＶＡＰＦＥＶＲＬＹＫＮＫＤＭＩＱＴＬＴＮＫＳＫＩＱＮＶＧＧＴＹＥＬＨＶＧＤＴＩＤＬＩＦＮＳＥＨＱＶＬＫＮＮＴＹＷＧＩＩＬＬＡＮＰＱＦＩＳ

【0058】

ＨＶＥＭ（ヘルペスウイルス侵入メディエーター、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＣＤ２７０）は、細胞表面受容体であり、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＨＶＥＭは、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）と係合した後にＴ細胞に刺激シグナルを提供するか、または免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのリガンドメンバーであるＢ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）に結合した場合にＴ細胞に抑制シグナルを提供する。例示的なヒトＨＶＥＭのアミノ酸配列を以下に示す：
ＨＶＥＭ（配列番号４２）
ＭＥＰＰＧＤＷＧＰＰＰＷＲＳＴＰＫＴＤＶＬＲＬＶＬＹＬＴＦＬＧＡＰＣＹＡＰＡＬＰＳＣＫＥＤＥＹＰＶＧＳＥＣＣＰＫＣＳＰＧＹＲＶＫＥＡＣＧＥＬＴＧＴＶＣＥＰＣＰＰＧＴＹＩＡＨＬＮＧＬＳＫＣＬＱＣＱＭＣＤＰＡＭＧＬＲＡＳＲＮＣＳＲＴＥＮＡＶＣＧＣＳＰＧＨＦＣＩＶＱＤＧＤＨＣＡＡＣＲＡＹＡＴＳＳＰＧＱＲＶＱＫＧＧＴＥＳＱＤＴＬＣＱＮＣＰＰＧＴＦＳＰＮＧＴＬＥＥＣＱＨＱＴＫＣＳＷＬＶＴＫＡＧＡＧＴＳＳＳＨＷＶＷＷＦＬＳＧＳＬＶＩＶＩＶＣＳＴＶＧＬＩＩＣＶＫＲＲＫＰＲＧＤＶＶＫＶＩＶＳＶＱＲＫＲＱＥＡＥＧＥＡＴＶＩＥＡＬＱＡＰＰＤＶＴＴＶＡＶＥＥＴＩＰＳＦＴＧＲＳＰＮＨ

【0059】

ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４、ＣＤ２５８、ＨＶＥＭＬ）は、ＨＶＥＭと一緒に共刺激因子として機能するＴＮＦリガンドファミリーのメンバーである。ＬＩＧＨＴは、Ｔ細胞の増殖を刺激して様々な腫瘍細胞のアポトーシスを誘発することが示されている。例示的なヒトＬＩＧＨＴのアミノ酸配列を以下に示す：
ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）
ＭＥＥＳＶＶＲＰＳＶＦＶＶＤＧＱＴＤＩＰＦＴＲＬＧＲＳＨＲＲＱＳＣＳＶＡＲＶＧＬＧＬＬＬＬＬＭＧＡＧＬＡＶＱＧＷＦＬＬＱＬＨＷＲＬＧＥＭＶＴＲＬＰＤＧＰＡＧＳＷＥＱＬＩＱＥＲＲＳＨＥＶＮＰＡＡＨＬＴＧＡＮＳＳＬＴＧＳＧＧＰＬＬＷＥＴＱＬＧＬＡＦＬＲＧＬＳＹＨＤＧＡＬＶＶＴＫＡＧＹＹＹＩＹＳＫＶＱＬＧＧＶＧＣＰＬＧＬＡＳＴＩＴＨＧＬＹＫＲＴＰＲＹＰＥＥＬＥＬＬＶＳＱＱＳＰＣＧＲＡＴＳＳＳＲＶＷＷＤＳＳＦＬＧＧＶＶＨＬＥＡＧＥＥＶＶＶＲＶＬＤＥＲＬＶＲＬＲＤＧＴＲＳＹＦＧＡＦＭＶ

【0060】

ＴＮＦアルファ（ＴＮＦＳＦ２）は、例えばマクロファージ及び活性化ＣＤ４陽性Ｔ細胞によって分泌されることが知られているＴＮＦリガンドスーパーファミリーのメンバーである。ＴＮＦアルファは、特定の共刺激分子、例えばＢ７ｈ及びＴＮＦＲＩＩを誘導することが知られている。例示的なヒトＴＮＦアルファのアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＮＦアルファ（配列番号４４）
ＭＳＴＥＳＭＩＲＤＶＥＬＡＥＥＡＬＰＫＫＴＧＧＰＱＧＳＲＲＣＬＦＬＳＬＦＳＦＬＩＶＡＧＡＴＴＬＦＣＬＬＨＦＧＶＩＧＰＱＲＥＥＦＰＲＤＬＳＬＩＳＰＬＡＱＡＶＲＳＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＰＱＡＥＧＱＬＱＷＬＮＲＲＡＮＡＬＬＡＮＧＶＥＬＲＤＮＱＬＶＶＰＳＥＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＳＴＨＶＬＬＴＨＴＩＳＲＩＡＶＳＹＱＴＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＡＥＩＮＲＰＤＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ

【0061】

ＴＮＦベータ（ＴＮＦＳＦ１、リンホトキシンアルファ）は、細胞の生存、増殖、分化及びアポトーシスの調節に関与するＴＮＦスーパーファミリーのメンバーである。例示的なヒトＴＮＦベータのアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＮＦベータ（配列番号４５）
ＭＴＰＰＥＲＬＦＬＰＲＶＣＧＴＴＬＨＬＬＬＬＧＬＬＬＶＬＬＰＧＡＱＧＬＰＧＶＧＬＴＰＳＡＡＱＴＡＲＱＨＰＫＭＨＬＡＨＳＴＬＫＰＡＡＨＬＩＧＤＰＳＫＱＮＳＬＬＷＲＡＮＴＤＲＡＦＬＱＤＧＦＳＬＳＮＮＳＬＬＶＰＴＳＧＩＹＦＶＹＳＱＶＶＦＳＧＫＡＹＳＰＫＡＴＳＳＰＬＹＬＡＨＥＶＱＬＦＳＳＱＹＰＦＨＶＰＬＬＳＳＱＫＭＶＹＰＧＬＱＥＰＷＬＨＳＭＹＨＧＡＡＦＱＬＴＱＧＤＱＬＳＴＨＴＤＧＩＰＨＬＶＬＳＰＳＴＶＦＦＧＡＦＡＬ

【0062】

ＯＸ４０（ＴＮＦＲＳＦ４、ＣＤ１３４）は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＯＸ４０は、ＯＸ４０Ｌに結合し、Ｔ細胞の増殖、生存及びサイトカイン産生に寄与する。例示的なヒトＯＸ４０のアミノ酸配列を以下に示す：
ＯＸ４０（配列番号４６）
ＭＣＶＧＡＲＲＬＧＲＧＰＣＡＡＬＬＬＬＧＬＧＬＳＴＶＴＧＬＨＣＶＧＤＴＹＰＳＮＤＲＣＣＨＥＣＲＰＧＮＧＭＶＳＲＣＳＲＳＱＮＴＶＣＲＰＣＧＰＧＦＹＮＤＶＶＳＳＫＰＣＫＰＣＴＷＣＮＬＲＳＧＳＥＲＫＱＬＣＴＡＴＱＤＴＶＣＲＣＲＡＧＴＱＰＬＤＳＹＫＰＧＶＤＣＡＰＣＰＰＧＨＦＳＰＧＤＮＱＡＣＫＰＷＴＮＣＴＬＡＧＫＨＴＬＱＰＡＳＮＳＳＤＡＩＣＥＤＲＤＰＰＡＴＱＰＱＥＴＱＧＰＰＡＲＰＩＴＶＱＰＴＥＡＷＰＲＴＳＱＧＰＳＴＲＰＶＥＶＰＧＧＲＡＶＡＡＩＬＧＬＧＬＶＬＧＬＬＧＰＬＡＩＬＬＡＬＹＬＬＲＲＤＱＲＬＰＰＤＡＨＫＰＰＧＧＧＳＦＲＴＰＩＱＥＥＱＡＤＡＨＳＴＬＡＫＩ

【0063】

ＯＸ４０Ｌ（ＴＮＦＳＦ４、ＣＤ２５２）は、ＴＮＦリガンドスーパーファミリーのメンバーであり、例えば、活性化されたＣＤ４ Ｔ細胞及びＣＤ８ Ｔ細胞、ならびに他のいくつかのリンパ系細胞及び非リンパ系細胞に発現する。ＯＸ４０Ｌは、例えばＴ細胞の増殖、生存及びサイトカイン産生を調節するためにＯＸ４０と相互作用する。例示的なヒトＯＸ４０Ｌのアミノ酸配列を以下に示す：
ＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）
ＭＥＲＶＱＰＬＥＥＮＶＧＮＡＡＲＰＲＦＥＲＮＫＬＬＬＶＡＳＶＩＱＧＬＧＬＬＬＣＦＴＹＩＣＬＨＦＳＡＬＱＶＳＨＲＹＰＲＩＱＳＩＫＶＱＦＴＥＹＫＫＥＫＧＦＩＬＴＳＱＫＥＤＥＩＭＫＶＱＮＮＳＶＩＩＮＣＤＧＦＹＬＩＳＬＫＧＹＦＳＱＥＶＮＩＳＬＨＹＱＫＤＥＥＰＬＦＱＬＫＫＶＲＳＶＮＳＬＭＶＡＳＬＴＹＫＤＫＶＹＬＮＶＴＴＤＮＴＳＬＤＤＦＨＶＮＧＧＥＬＩＬＩＨＱＮＰＧＥＦＣＶＬ

【0064】

ＲＥＬＴ（ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ）は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＲＥＬＴは、Ｉ型膜貫通糖タンパク質であり、ＣＤ３シグナル伝達の存在下でＴ細胞増殖を共刺激できると考えられている。例示的なヒトＲＥＬＴのアミノ酸配列を以下に示す：
ＲＥＬＴ（配列番号４８）
ＭＫＰＳＬＬＣＲＰＬＳＣＦＬＭＬＬＰＷＰＬＡＴＬＴＳＴＴＬＷＱＣＰＰＧＥＥＰＤＬＤＰＧＱＧＴＬＣＲＰＣＰＰＧＴＦＳＡＡＷＧＳＳＰＣＱＰＨＡＲＣＳＬＷＲＲＬＥＡＱＶＧＭＡＴＲＤＴＬＣＧＤＣＷＰＧＷＦＧＰＷＧＶＰＲＶＰＣＱＰＣＳＷＡＰＬＧＴＨＧＣＤＥＷＧＲＲＡＲＲＧＶＥＶＡＡＧＡＳＳＧＧＥＴＲＱＰＧＮＧＴＲＡＧＧＰＥＥＴＡＡＱＹＡＶＩＡＩＶＰＶＦＣＬＭＧＬＬＧＩＬＶＣＮＬＬＫＲＫＧＹＨＣＴＡＨＫＥＶＧＰＧＰＧＧＧＧＳＧＩＮＰＡＹＲＴＥＤＡＮＥＤＴＩＧＶＬＶＲＬＩＴＥＫＫＥＮＡＡＡＬＥＥＬＬＫＥＹＨＳＫＱＬＶＱＴＳＨＲＰＶＳＫＬＰＰＡＰＰＮＶＰＨＩＣＰＨＲＨＨＬＨＴＶＱＧＬＡＳＬＳＧＰＣＣＳＲＣＳＱＫＫＷＰＥＶＬＬＳＰＥＡＶＡＡＴＴＰＶＰＳＬＬＰＮＰＴＲＶＰＫＡＧＡＫＡＧＲＱＧＥＩＴＩＬＳＶＧＲＦＲＶＡＲＩＰＥＱＲＴＳＳＭＶＳＥＶＫＴＩＴＥＡＧＰＳＷＧＤＬＰＤＳＰＱＰＧＬＰＰＥＱＱＡＬＬＧＳＧＧＳＲＴＫＷＬＫＰＰＡＥＮＫＡＥＥＮＲＹＶＶＲＬＳＥＳＮＬＶＩ

【0065】

ＴＡＣＩ（膜貫通型活性化因子及びＣＡＭＬ相互作用因子、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＣＤ２６７）は、例えばＢ細胞の表面にみられるＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーである。ＴＡＣＩは、リガンドであるＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬと相互作用することが知られている。例示的なヒトＴＡＣＩのアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＡＣＩ（配列番号４９）
ＭＳＧＬＧＲＳＲＲＧＧＲＳＲＶＤＱＥＥＲＦＰＱＧＬＷＴＧＶＡＭＲＳＣＰＥＥＱＹＷＤＰＬＬＧＴＣＭＳＣＫＴＩＣＮＨＱＳＱＲＴＣＡＡＦＣＲＳＬＳＣＲＫＥＱＧＫＦＹＤＨＬＬＲＤＣＩＳＣＡＳＩＣＧＱＨＰＫＱＣＡＹＦＣＥＮＫＬＲＳＰＶＮＬＰＰＥＬＲＲＱＲＳＧＥＶＥＮＮＳＤＮＳＧＲＹＱＧＬＥＨＲＧＳＥＡＳＰＡＬＰＧＬＫＬＳＡＤＱＶＡＬＶＹＳＴＬＧＬＣＬＣＡＶＬＣＣＦＬＶＡＶＡＣＦＬＫＫＲＧＤＰＣＳＣＱＰＲＳＲＰＲＱＳＰＡＫＳＳＱＤＨＡＭＥＡＧＳＰＶＳＴＳＰＥＰＶＥＴＣＳＦＣＦＰＥＣＲＡＰＴＱＥＳＡＶＴＰＧＴＰＤＰＴＣＡＧＲＷＧＣＨＴＲＴＴＶＬＱＰＣＰＨＩＰＤＳＧＬＧＩＶＣＶＰＡＱＥＧＧＰＧＡ

【0066】

ＴＬ１Ａ（ＴＮＦＳＦ１５）は、ＤＲ３に結合することが知られているＴＮＦリガンドスーパーファミリーのメンバーである。ＴＬ１Ａは、Ｔ細胞増殖及びＴ細胞のサイトカイン産生を増強するように作用し得る。例示的なヒトＴＬ１Ａのアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＬ１Ａ（配列番号５０）
ＭＡＥＤＬＧＬＳＦＧＥＴＡＳＶＥＭＬＰＥＨＧＳＣＲＰＫＡＲＳＳＳＡＲＷＡＬＴＣＣＬＶＬＬＰＦＬＡＧＬＴＴＹＬＬＶＳＱＬＲＡＱＧＥＡＣＶＱＦＱＡＬＫＧＱＥＦＡＰＳＨＱＱＶＹＡＰＬＲＡＤＧＤＫＰＲＡＨＬＴＶＶＲＱＴＰＴＱＨＦＫＮＱＦＰＡＬＨＷＥＨＥＬＧＬＡＦＴＫＮＲＭＮＹＴＮＫＦＬＬＩＰＥＳＧＤＹＦＩＹＳＱＶＴＦＲＧＭＴＳＥＣＳＥＩＲＱＡＧＲＰＮＫＰＤＳＩＴＶＶＩＴＫＶＴＤＳＹＰＥＰＴＱＬＬＭＧＴＫＳＶＣＥＶＧＳＮＷＦＱＰＩＹＬＧＡＭＦＳＬＱＥＧＤＫＬＭＶＮＶＳＤＩＳＬＶＤＹＴＫＥＤＫＴＦＦＧＡＦＬＬ

【0067】

ＴＮＦＲＩＩ（ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）は、ＴＮＦアルファに結合するＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーである。ＴＮＦＲＩＩは、Ｔ細胞に対する共刺激受容体として、ならびに制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）及び骨髄系抑制細胞の発達における決定的因子として作用することが示されている。例示的なヒトＴＮＦＲＩＩのアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＮＦＲＩＩ（配列番号５１）
ＭＡＰＶＡＶＷＡＡＬＡＶＧＬＥＬＷＡＡＡＨＡＬＰＡＱＶＡＦＴＰＹＡＰＥＰＧＳＴＣＲＬＲＥＹＹＤＱＴＡＱＭＣＣＳＫＣＳＰＧＱＨＡＫＶＦＣＴＫＴＳＤＴＶＣＤＳＣＥＤＳＴＹＴＱＬＷＮＷＶＰＥＣＬＳＣＧＳＲＣＳＳＤＱＶＥＴＱＡＣＴＲＥＱＮＲＩＣＴＣＲＰＧＷＹＣＡＬＳＫＱＥＧＣＲＬＣＡＰＬＲＫＣＲＰＧＦＧＶＡＲＰＧＴＥＴＳＤＶＶＣＫＰＣＡＰＧＴＦＳＮＴＴＳＳＴＤＩＣＲＰＨＱＩＣＮＶＶＡＩＰＧＮＡＳＭＤＡＶＣＴＳＴＳＰＴＲＳＭＡＰＧＡＶＨＬＰＱＰＶＳＴＲＳＱＨＴＱＰＴＰＥＰＳＴＡＰＳＴＳＦＬＬＰＭＧＰＳＰＰＡＥＧＳＴＧＤＦＡＬＰＶＧＬＩＶＧＶＴＡＬＧＬＬＩＩＧＶＶＮＣＶＩＭＴＱＶＫＫＫＰＬＣＬＱＲＥＡＫＶＰＨＬＰＡＤＫＡＲＧＴＱＧＰＥＱＱＨＬＬＩＴＡＰＳＳＳＳＳＳＬＥＳＳＡＳＡＬＤＲＲＡＰＴＲＮＱＰＱＡＰＧＶＥＡＳＧＡＧＥＡＲＡＳＴＧＳＳＤＳＳＰＧＧＨＧＴＱＶＮＶＴＣＩＶＮＶＣＳＳＳＤＨＳＳＱＣＳＳＱＡＳＳＴＭＧＤＴＤＳＳＰＳＥＳＰＫＤＥＱＶＰＦＳＫＥＥＣＡＦＲＳＱＬＥＴＰＥＴＬＬＧＳＴＥＥＫＰＬＰＬＧＶＰＤＡＧＭＫＰＳ

【0068】

ＢＣＭＡは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーの細胞表面受容体であり、腫瘍壊死因子スーパーファミリーのメンバー１３ｂ（ＴＮＦＳＦ１３Ｂ）に結合してＮＦカッパＢ及びＭＡＰＫ８／ＪＮＫの活性化をもたらす。それは成熟Ｂリンパ球上に優先的に発現し、Ｂ細胞の発達、機能及び調節において枢軸的な役割を果たす。例示的なヒトＢＣＭＡのアミノ酸配列を以下に示す：
ＢＣＭＡ（配列番号５２）
ＭＬＱＭＡＧＱＣＳＱＮＥＹＦＤＳＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬＲＣＳＳＮＴＰＰＬＴＣＱＲＹＣＮＡＳＶＴＮＳＶＫＧＴＮＡＩＬＷＴＣＬＧＬＳＬＩＩＳＬＡＶＦＶＬＭＦＬＬＲＫＩＮＳＥＰＬＫＤＥＦＫＮＴＧＳＧＬＬＧＭＡＮＩＤＬＥＫＳＲＴＧＤＥＩＩＬＰＲＧＬＥＹＴＶＥＥＣＴＣＥＤＣＩＫＳＫＰＫＶＤＳＤＨＣＦＰＬＰＡＭＥＥＧＡＴＩＬＶＴＴＫＴＮＤＹＣＫＳＬＰＡＡＬＳＡＴＥＩＥＫＳＩＳＡＲ

【0069】

ＥＤＡ２Ｒは、ＴＮＦＲ（腫瘍壊死因子受容体）スーパーファミリーのＩＩＩ型膜貫通タンパク質であり、３つのシステインリッチリピート及び１つの膜貫通ドメインを含有する。それはエクトジスプラシンのＥＤＡ－Ａ２アイソフォームに結合して毛髪及び歯の維持に重要な役割を果たす。例示的なヒトＥＤＡ２Ｒのアミノ酸配列を以下に示す：
ＥＤＡ２Ｒ（配列番号５３）
ＭＤＣＱＥＮＥＹＷＤＱＷＧＲＣＶＴＣＱＲＣＧＰＧＱＥＬＳＫＤＣＧＹＧＥＧＧＤＡＹＣＴＡＣＰＰＲＲＹＫＳＳＷＧＨＨＲＣＱＳＣＩＴＣＡＶＩＮＲＶＱＫＶＮＣＴＡＴＳＮＡＶＣＧＤＣＬＰＲＦＹＲＫＴＲＩＧＧＬＱＤＱＥＣＩＰＣＴＫＱＴＰＴＳＥＶＱＣＡＦＱＬＳＬＶＥＡＤＴＰＴＶＰＰＱＥＡＴＬＶＡＬＶＳＳＬＬＶＶＦＴＬＡＦＬＧＬＦＦＬＹＣＫＱＦＦＮＲＨＣＱＲＧＧＬＬＱＦＥＡＤＫＴＡＫＥＥＳＬＦＰＶＰＰＳＫＥＴＳＡＥＳＱＶＳＥＮＩＦＱＴＱＰＬＮＰＩＬＥＤＤＣＳＳＴＳＧＦＰＴＱＥＳＦＴＭＡＳＣＴＳＥＳＨＳＨＷＶＨＳＰＩＥＣＴＥＬＤＬＱＫＦＳＳＳＡＳＹＴＧＡＥＴＬＧＧＮＴＶＥＳＴＧＤＲＬＥＬＮＶＰＦＥＶＰＳＰ

【0070】

ＴＲＯＹまたはＴＮＦＲ（腫瘍壊死因子受容体）スーパーファミリーメンバー１９は、胎児及び成人のＣＮＳならびに発達中の毛包に高発現するＩ型細胞表面受容体である。それは、細胞に過剰発現した場合にＪＮＫシグナル伝達経路を活性化させ、ＴＲＡＦファミリーメンバーと相互作用し、カスパーゼ非依存的な機序によってアポトーシスを誘発し得る。例示的なヒトＴＲＯＹのアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＲＯＹ（配列番号５４）
ＭＡＬＫＶＬＬＥＱＥＫＴＦＦＴＬＬＶＬＬＧＹＬＳＣＫＶＴＣＥＳＧＤＣＲＱＱＥＦＲＤＲＳＧＮＣＶＰＣＮＱＣＧＰＧＭＥＬＳＫＥＣＧＦＧＹＧＥＤＡＱＣＶＴＣＲＬＨＲＦＫＥＤＷＧＦＱＫＣＫＰＣＬＤＣＡＶＶＮＲＦＱＫＡＮＣＳＡＴＳＤＡＩＣＧＤＣＬＰＧＦＹＲＫＴＫＬＶＧＦＱＤＭＥＣＶＰＣＧＤＰＰＰＰＹＥＰＨＣＡＳＫＶＮＬＶＫＩＡＳＴＡＳＳＰＲＤＴＡＬＡＡＶＩＣＳＡＬＡＴＶＬＬＡＬＬＩＬＣＶＩＹＣＫＲＱＦＭＥＫＫＰＳＷＳＬＲＳＱＤＩＱＹＮＧＳＥＬＳＣＦＤＲＰＱＬＨＥＹＡＨＲＡＣＣＱＣＲＲＤＳＶＱＴＣＧＰＶＲＬＬＰＳＭＣＣＥＥＡＣＳＰＮＰＡＴＬＧＣＧＶＨＳＡＡＳＬＱＡＲＮＡＧＰＡＧＥＭＶＰＴＦＦＧＳＬＴＱＳＩＣＧＥＦＳＤＡＷＰＬＭＱＮＰＭＧＧＤＮＩＳＦＣＤＳＹＰＥＬＴＧＥＤＩＨＳＬＮＰＥＬＥＳＳＴＳＬＤＳＮＳＳＱＤＬＶＧＧＡＶＰＶＱＳＨＳＥＮＦＴＡＡＴＤＬＳＲＹＮＮＴＬＶＥＳＡＳＴＱＤＡＬＴＭＲＳＱＬＤＱＥＳＧＡＶＩＨＰＡＴＱＴＳＬＱＶＲＱＲＬＧＳＬ

【0071】

ＬＴＢＲまたは腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー３（ＴＮＦＲＳＦ３）は、リンホトキシン膜形態（リンホトキシンアルファとリンホトキシンベータとの複合体）に結合する細胞表面受容体である。それは、アポトーシス、脂質代謝、ならびにリンパ組織及び形質転換細胞の発達及び組織化において役割を果たす。例示的なヒトＬＴＢＲのアミノ酸配列を以下に示す：
ＬＴＢＲ（配列番号５５）
ＭＬＬＰＷＡＴＳＡＰＧＬＡＷＧＰＬＶＬＧＬＦＧＬＬＡＡＳＱＰＱＡＶＰＰＹＡＳＥＮＱＴＣＲＤＱＥＫＥＹＹＥＰＱＨＲＩＣＣＳＲＣＰＰＧＴＹＶＳＡＫＣＳＲＩＲＤＴＶＣＡＴＣＡＥＮＳＹＮＥＨＷＮＹＬＴＩＣＱＬＣＲＰＣＤＰＶＭＧＬＥＥＩＡＰＣＴＳＫＲＫＴＱＣＲＣＱＰＧＭＦＣＡＡＷＡＬＥＣＴＨＣＥＬＬＳＤＣＰＰＧＴＥＡＥＬＫＤＥＶＧＫＧＮＮＨＣＶＰＣＫＡＧＨＦＱＮＴＳＳＰＳＡＲＣＱＰＨＴＲＣＥＮＱＧＬＶＥＡＡＰＧＴＡＱＳＤＴＴＣＫＮＰＬＥＰＬＰＰＥＭＳＧＴＭＬＭＬＡＶＬＬＰＬＡＦＦＬＬＬＡＴＶＦＳＣＩＷＫＳＨＰＳＬＣＲＫＬＧＳＬＬＫＲＲＰＱＧＥＧＰＮＰＶＡＧＳＷＥＰＰＫＡＨＰＹＦＰＤＬＶＱＰＬＬＰＩＳＧＤＶＳＰＶＳＴＧＬＰＡＡＰＶＬＥＡＧＶＰＱＱＱＳＰＬＤＬＴＲＥＰＱＬＥＰＧＥＱＳＱＶＡＨＧＴＮＧＩＨＶＴＧＧＳＭＴＩＴＧＮＩＹＩＹＮＧＰＶＬＧＧＰＰＧＰＧＤＬＰＡＴＰＥＰＰＹＰＩＰＥＥＧＤＰＧＰＰＧＬＳＴＰＨＱＥＤＧＫＡＷＨＬＡＥＴＥＨＣＧＡＴＰＳＮＲＧＰＲＮＱＦＩＴＨＤ

【0072】

ＥＤＡＲ（エクトジスプラシンＡ受容体）は、エクトジスプラシンＡに対する細胞表面受容体であり、胎児発達、ならびに毛髪、歯及び他の外胚葉派生物の発達において枢軸的な役割を果たす。それは、核因子カッパＢ、ＪＮＫ、及びカスパーゼ非依存的細胞死経路を活性化させ得る。例示的なヒトＥＤＡＲのアミノ酸配列を以下に示す：
ＥＤＡＲ（配列番号５６）
ＭＡＨＶＧＤＣＴＱＴＰＷＬＰＶＬＶＶＳＬＭＣＳＡＲＡＥＹＳＮＣＧＥＮＥＹＹＮＱＴＴＧＬＣＱＥＣＰＰＣＧＰＧＥＥＰＹＬＳＣＧＹＧＴＫＤＥＤＹＧＣＶＰＣＰＡＥＫＦＳＫＧＧＹＱＩＣＲＲＨＫＤＣＥＧＦＦＲＡＴＶＬＴＰＧＤＭＥＮＤＡＥＣＧＰＣＬＰＧＹＹＭＬＥＮＲＰＲＮＩＹＧＭＶＣＹＳＣＬＬＡＰＰＮＴＫＥＣＶＧＡＴＳＧＡＳＡＮＦＰＧＴＳＧＳＳＴＬＳＰＦＱＨＡＨＫＥＬＳＧＱＧＨＬＡＴＡＬＩＩＡＭＳＴＩＦＩＭＡＩＡＩＶＬＩＩＭＦＹＩＬＫＴＫＰＳＡＰＡＣＣＴＳＨＰＧＫＳＶＥＡＱＶＳＫＤＥＥＫＫＥＡＰＤＮＶＶＭＦＳＥＫＤＥＦＥＫＬＴＡＴＰＡＫＰＴＫＳＥＮＤＡＳＳＥＮＥＱＬＬＳＲＳＶＤＳＤＥＥＰＡＰＤＫＱＧＳＰＥＬＣＬＬＳＬＶＨＬＡＲＥＫＳＡＴＳＮＫＳＡＧＩＱＳＲＲＫＫＩＬＤＶＹＡＮＶＣＧＶＶＥＧＬＳＰＴＥＬＰＦＤＣＬＥＫＴＳＲＭＬＳＳＴＹＮＳＥＫＡＶＶＫＴＷＲＨＬＡＥＳＦＧＬＫＲＤＥＩＧＧＭＴＤＧＭＱＬＦＤＲＩＳＴＡＧＹＳＩＰＥＬＬＴＫＬＶＱＩＥＲＬＤＡＶＥＳＬＣＡＤＩＬＥＷＡＧＶＶＰＰＡＳＱＰＨＡＡＳ

【0073】

ＮＧＦＲ（神経成長因子受容体）は、神経細胞の生存及び分化を刺激するタンパク質成長因子であるニューロトロフィンに対する低親和性の細胞表面受容体である。ＮＧＦＲはプロニューロトロフィンにも結合し、ＳＯＲＴ１（ソルチリン）、ＬＩＮＧＯ１及びＲＴＮ４Ｒを含めた他の受容体パートナーとの共受容体として機能する。それは、数ある組織の中でも脾臓、副腎及び脳において広範に発現する。例示的なヒトＮＧＦＲのアミノ酸配列を以下に示す：
ＮＧＦＲ（配列番号５７）
ＭＧＡＧＡＴＧＲＡＭＤＧＰＲＬＬＬＬＬＬＬＧＶＳＬＧＧＡＫＥＡＣＰＴＧＬＹＴＨＳＧＥＣＣＫＡＣＮＬＧＥＧＶＡＱＰＣＧＡＮＱＴＶＣＥＰＣＬＤＳＶＴＦＳＤＶＶＳＡＴＥＰＣＫＰＣＴＥＣＶＧＬＱＳＭＳＡＰＣＶＥＡＤＤＡＶＣＲＣＡＹＧＹＹＱＤＥＴＴＧＲＣＥＡＣＲＶＣＥＡＧＳＧＬＶＦＳＣＱＤＫＱＮＴＶＣＥＥＣＰＤＧＴＹＳＤＥＡＮＨＶＤＰＣＬＰＣＴＶＣＥＤＴＥＲＱＬＲＥＣＴＲＷＡＤＡＥＣＥＥＩＰＧＲＷＩＴＲＳＴＰＰＥＧＳＤＳＴＡＰＳＴＱＥＰＥＡＰＰＥＱＤＬＩＡＳＴＶＡＧＶＶＴＴＶＭＧＳＳＱＰＶＶＴＲＧＴＴＤＮＬＩＰＶＹＣＳＩＬＡＡＶＶＶＧＬＶＡＹＩＡＦＫＲＷＮＳＣＫＱＮＫＱＧＡＮＳＲＰＶＮＱＴＰＰＰＥＧＥＫＬＨＳＤＳＧＩＳＶＤＳＱＳＬＨＤＱＱＰＨＴＱＴＡＳＧＱＡＬＫＧＤＧＧＬＹＳＳＬＰＰＡＫＲＥＥＶＥＫＬＬＮＧＳＡＧＤＴＷＲＨＬＡＧＥＬＧＹＱＰＥＨＩＤＳＦＴＨＥＡＣＰＶＲＡＬＬＡＳＷＡＴＱＤＳＡＴＬＤＡＬＬＡＡＬＲＲＩＱＲＡＤＬＶＥＳＬＣＳＥＳＴＡＴＳＰＶ

【0074】

ＯＰＧ（オステオプロテゲリン）は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）に結合して腫瘍細胞を含めた特定の細胞のＴＲＡＩＬ誘導性アポトーシスを阻害するＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ遺伝子にコードされる腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーのサイトカイン受容体である。それは骨再吸収の負の調節因子として機能し、破骨細胞発達、腫瘍成長及び転移、心疾患、免疫系発達及びシグナル伝達、精神衛生、糖尿病、ならびに妊娠中の子癇前症及び骨粗鬆症に重要な役割を果たす。例示的なヒトＯＰＧのアミノ酸配列を以下に示す：
ＯＰＧ（配列番号５８）
ＭＮＮＬＬＣＣＡＬＶＦＬＤＩＳＩＫＷＴＴＱＥＴＦＰＰＫＹＬＨＹＤＥＥＴＳＨＱＬＬＣＤＫＣＰＰＧＴＹＬＫＱＨＣＴＡＫＷＫＴＶＣＡＰＣＰＤＨＹＹＴＤＳＷＨＴＳＤＥＣＬＹＣＳＰＶＣＫＥＬＱＹＶＫＱＥＣＮＲＴＨＮＲＶＣＥＣＫＥＧＲＹＬＥＩＥＦＣＬＫＨＲＳＣＰＰＧＦＧＶＶＱＡＧＴＰＥＲＮＴＶＣＫＲＣＰＤＧＦＦＳＮＥＴＳＳＫＡＰＣＲＫＨＴＮＣＳＶＦＧＬＬＬＴＱＫＧＮＡＴＨＤＮＩＣＳＧＮＳＥＳＴＱＫＣＧＩＤＶＴＬＣＥＥＡＦＦＲＦＡＶＰＴＫＦＴＰＮＷＬＳＶＬＶＤＮＬＰＧＴＫＶＮＡＥＳＶＥＲＩＫＲＱＨＳＳＱＥＱＴＦＱＬＬＫＬＷＫＨＱＮＫＤＱＤＩＶＫＫＩＩＱＤＩＤＬＣＥＮＳＶＱＲＨＩＧＨＡＮＬＴＦＥＱＬＲＳＬＭＥＳＬＰＧＫＫＶＧＡＥＤＩＥＫＴＩＫＡＣＫＰＳＤＱＩＬＫＬＬＳＬＷＲＩＫＮＧＤＱＤＴＬＫＧＬＭＨＡＬＫＨＳＫＴＹＨＦＰＫＴＶＴＱＳＬＫＫＴＩＲＦＬＨＳＦＴＭＹＫＬＹＱＫＬＦＬＥＭＩＧＮＱＶＱＳＶＫＩＳＣＬ

【0075】

ＲＡＮＫ（核因子κＢの受容体活性化因子）はＲＡＮＫリガンド（ＲＡＮＫＬ）の受容体であり、破骨細胞の分化及び活性化を調節するＲＡＮＫ／ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧシグナル伝達経路の一部である。それは、Ｔ細胞と樹状細胞との相互作用の重要な調節因子であり、それは骨の再構築及び修復、免疫細胞機能、リンパ節発達、体温調節、ならびに乳腺発達において重要な役割を果たす。例示的なヒトＲＡＮＫのアミノ酸配列を以下に示す：
ＲＡＮＫ（配列番号５９）
ＭＡＰＲＡＲＲＲＲＰＬＦＡＬＬＬＬＣＡＬＬＡＲＬＱＶＡＬＱＩＡＰＰＣＴＳＥＫＨＹＥＨＬＧＲＣＣＮＫＣＥＰＧＫＹＭＳＳＫＣＴＴＴＳＤＳＶＣＬＰＣＧＰＤＥＹＬＤＳＷＮＥＥＤＫＣＬＬＨＫＶＣＤＴＧＫＡＬＶＡＶＶＡＧＮＳＴＴＰＲＲＣＡＣＴＡＧＹＨＷＳＱＤＣＥＣＣＲＲＮＴＥＣＡＰＧＬＧＡＱＨＰＬＱＬＮＫＤＴＶＣＫＰＣＬＡＧＹＦＳＤＡＦＳＳＴＤＫＣＲＰＷＴＮＣＴＦＬＧＫＲＶＥＨＨＧＴＥＫＳＤＡＶＣＳＳＳＬＰＡＲＫＰＰＮＥＰＨＶＹＬＰＧＬＩＩＬＬＬＦＡＳＶＡＬＶＡＡＩＩＦＧＶＣＹＲＫＫＧＫＡＬＴＡＮＬＷＨＷＩＮＥＡＣＧＲＬＳＧＤＫＥＳＳＧＤＳＣＶＳＴＨＴＡＮＦＧＱＱＧＡＣＥＧＶＬＬＬＴＬＥＥＫＴＦＰＥＤＭＣＹＰＤＱＧＧＶＣＱＧＴＣＶＧＧＧＰＹＡＱＧＥＤＡＲＭＬＳＬＶＳＫＴＥＩＥＥＤＳＦＲＱＭＰＴＥＤＥＹＭＤＲＰＳＱＰＴＤＱＬＬＦＬＴＥＰＧＳＫＳＴＰＰＦＳＥＰＬＥＶＧＥＮＤＳＬＳＱＣＦＴＧＴＱＳＴＶＧＳＥＳＣＮＣＴＥＰＬＣＲＴＤＷＴＰＭＳＳＥＮＹＬＱＫＥＶＤＳＧＨＣＰＨＷＡＡＳＰＳＰＮＷＡＤＶＣＴＧＣＲＮＰＰＧＥＤＣＥＰＬＶＧＳＰＫＲＧＰＬＰＱＣＡＹＧＭＧＬＰＰＥＥＥＡＳＲＴＥＡＲＤＱＰＥＤＧＡＤＧＲＬＰＳＳＡＲＡＧＡＧＳＧＳＳＰＧＧＱＳＰＡＳＧＮＶＴＧＮＳＮＳＴＦＩＳＳＧＱＶＭＮＦＫＧＤＩＩＶＶＹＶＳＱＴＳＱＥＧＡＡＡＡＡＥＰＭＧＲＰＶＱＥＥＴＬＡＲＲＤＳＦＡＧＮＧＰＲＦＰＤＰＣＧＧＰＥＧＬＲＥＰＥＫＡＳＲＰＶＱＥＱＧＧＡＫＡ

【0076】

ＤＣＲ３（デコイ受容体３）は、ＦａｓＬ及びＬＩＧＨＴに媒介される細胞死を抑制することにおいて調節的な役割を果たす腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーの可溶性タンパク質であり、リガンド結合において細胞死受容体と競合するデコイ受容体である。それは消化管腫瘍に過剰発現する。例示的なヒトＤＣＲ３のアミノ酸配列を以下に示す：
ＤＣＲ３（配列番号６０）
ＭＲＡＬＥＧＰＧＬＳＬＬＣＬＶＬＡＬＰＡＬＬＰＶＰＡＶＲＧＶＡＥＴＰＴＹＰＷＲＤＡＥＴＧＥＲＬＶＣＡＱＣＰＰＧＴＦＶＱＲＰＣＲＲＤＳＰＴＴＣＧＰＣＰＰＲＨＹＴＱＦＷＮＹＬＥＲＣＲＹＣＮＶＬＣＧＥＲＥＥＥＡＲＡＣＨＡＴＨＮＲＡＣＲＣＲＴＧＦＦＡＨＡＧＦＣＬＥＨＡＳＣＰＰＧＡＧＶＩＡＰＧＴＰＳＱＮＴＱＣＱＰＣＰＰＧＴＦＳＡＳＳＳＳＳＥＱＣＱＰＨＲＮＣＴＡＬＧＬＡＬＮＶＰＧＳＳＳＨＤＴＬＣＴＳＣＴＧＦＰＬＳＴＲＶＰＧＡＥＥＣＥＲＡＶＩＤＦＶＡＦＱＤＩＳＩＫＲＬＱＲＬＬＱＡＬＥＡＰＥＧＷＧＰＴＰＲＡＧＲＡＡＬＱＬＫＬＲＲＲＬＴＥＬＬＧＡＱＤＧＡＬＬＶＲＬＬＱＡＬＲＶＡＲＭＰＧＬＥＲＳＶＲＥＲＦＬＰＶＨ

【0077】

ＴＮＦＲ１（腫瘍壊死因子受容体１）は、転写因子ＮＦ－κＢを活性化させること、アポトーシスを媒介すること及び炎症の調節因子として機能することができるものである腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）に結合する、遍在する膜受容体である。例示的なヒトＴＮＦＲ１のアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＮＦＲ１（配列番号６１）
ＭＧＬＳＴＶＰＤＬＬＬＰＬＶＬＬＥＬＬＶＧＩＹＰＳＧＶＩＧＬＶＰＨＬＧＤＲＥＫＲＤＳＶＣＰＱＧＫＹＩＨＰＱＮＮＳＩＣＣＴＫＣＨＫＧＴＹＬＹＮＤＣＰＧＰＧＱＤＴＤＣＲＥＣＥＳＧＳＦＴＡＳＥＮＨＬＲＨＣＬＳＣＳＫＣＲＫＥＭＧＱＶＥＩＳＳＣＴＶＤＲＤＴＶＣＧＣＲＫＮＱＹＲＨＹＷＳＥＮＬＦＱＣＦＮＣＳＬＣＬＮＧＴＶＨＬＳＣＱＥＫＱＮＴＶＣＴＣＨＡＧＦＦＬＲＥＮＥＣＶＳＣＳＮＣＫＫＳＬＥＣＴＫＬＣＬＰＱＩＥＮＶＫＧＴＥＤＳＧＴＴＶＬＬＰＬＶＩＦＦＧＬＣＬＬＳＬＬＦＩＧＬＭＹＲＹＱＲＷＫＳＫＬＹＳＩＶＣＧＫＳＴＰＥＫＥＧＥＬＥＧＴＴＴＫＰＬＡＰＮＰＳＦＳＰＴＰＧＦＴＰＴＬＧＦＳＰＶＰＳＳＴＦＴＳＳＳＴＹＴＰＧＤＣＰＮＦＡＡＰＲＲＥＶＡＰＰＹＱＧＡＤＰＩＬＡＴＡＬＡＳＤＰＩＰＮＰＬＱＫＷＥＤＳＡＨＫＰＱＳＬＤＴＤＤＰＡＴＬＹＡＶＶＥＮＶＰＰＬＲＷＫＥＦＶＲＲＬＧＬＳＤＨＥＩＤＲＬＥＬＱＮＧＲＣＬＲＥＡＱＹＳＭＬＡＴＷＲＲＲＴＰＲＲＥＡＴＬＥＬＬＧＲＶＬＲＤＭＤＬＬＧＣＬＥＤＩＥＥＡＬＣＧＰＡＡＬＰＰＡＰＳＬＬＲ

【0078】

ＦＮ１４（線維芽細胞成長因子誘導性１４）は、様々な細胞種において組織損傷の状況下で誘導されるものであり、増殖、遊走、分化、アポトーシス、血管新生及び炎症を含めた多くの細胞活動を制御するＴＮＦリガンドファミリーのメンバーであるＴＮＦ様アポトーシス弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）によって活性化される。ＮＦＡＴ１はリポカリン２によってＦＮ１４及びそのリガンドＴＷＥＡＫの発現を調節して、乳癌細胞浸潤を増進する。例示的なヒトＦＮ１４のアミノ酸配列を以下に示す：
ＦＮ１４（配列番号６２）
ＭＡＲＧＳＬＲＲＬＬＲＬＬＶＬＧＬＷＬＡＬＬＲＳＶＡＧＥＱＡＰＧＴＡＰＣＳＲＧＳＳＷＳＡＤＬＤＫＣＭＤＣＡＳＣＲＡＲＰＨＳＤＦＣＬＧＣＡＡＡＰＰＡＰＦＲＬＬＷＰＩＬＧＧＡＬＳＬＴＦＶＬＧＬＬＳＧＦＬＶＷＲＲＣＲＲＲＥＫＦＴＴＰＩＥＥＴＧＧＥＧＣＰＡＶＡＬＩＱ

【0079】

ＡＰＲＩＬ（増殖誘導性リガンド）は、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーであるＴＮＦＲＳＦ１７／ＢＣＭＡに対するリガンドである。ＡＰＲＩＬ及びその受容体は両方ともＢ細胞発達に重要である。それはリンパ組織に低レベルで発現し、いくつかの腫瘍によって過剰発現する。例示的なヒトＡＰＲＩＬのアミノ酸配列を以下に示す：
ＡＰＲＩＬ（配列番号６３）
ＭＰＡＳＳＰＦＬＬＡＰＫＧＰＰＧＮＭＧＧＰＶＲＥＰＡＬＳＶＡＬＷＬＳＷＧＡＡＬＧＡＶＡＣＡＭＡＬＬＴＱＱＴＥＬＱＳＬＲＲＥＶＳＲＬＱＧＴＧＧＰＳＱＮＧＥＧＹＰＷＱＳＬＰＥＱＳＳＤＡＬＥＡＷＥＮＧＥＲＳＲＫＲＲＡＶＬＴＱＫＱＫＫＱＨＳＶＬＨＬＶＰＩＮＡＴＳＫＤＤＳＤＶＴＥＶＭＷＱＰＡＬＲＲＧＲＧＬＱＡＱＧＹＧＶＲＩＱＤＡＧＶＹＬＬＹＳＱＶＬＦＱＤＶＴＦＴＭＧＱＶＶＳＲＥＧＱＧＲＱＥＴＬＦＲＣＩＲＳＭＰＳＨＰＤＲＡＹＮＳＣＹＳＡＧＶＦＨＬＨＱＧＤＩＬＳＶＩＩＰＲＡＲＡＫＬＮＬＳＰＨＧＴＦＬＧＦＶＫＬ

【0080】

ＥＤＡ－Ａ２は、ＴＮＦスーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）のメンバーであり、外胚葉性器官の発達中に細胞間シグナル伝達に関与し得るホモ三量体として作用する、ＩＩ型膜貫通タンパク質である。この遺伝子の欠陥は、Ｘ連鎖性低汗性外胚葉形成不全症としても知られる無汗性外胚葉形成不全症の原因である。例示的なヒトＥＤＡ－Ａ２のアミノ酸配列を以下に示す：
ＥＤＡ－Ａ２（配列番号６４）
ＭＧＹＰＥＶＥＲＲＥＬＬＰＡＡＡＰＲＥＲＧＳＱＧＣＧＣＧＧＡＰＡＲＡＧＥＧＮＳＣＬＬＦＬＧＦＦＧＬＳＬＡＬＨＬＬＴＬＣＣＹＬＥＬＲＳＥＬＲＲＥＲＧＡＥＳＲＬＧＧＳＧＴＰＧＴＳＧＴＬＳＳＬＧＧＬＤＰＤＳＰＩＴＳＨＬＧＱＰＳＰＫＱＱＰＬＥＰＧＥＡＡＬＨＳＤＳＱＤＧＨＱＭＡＬＬＮＦＦＦＰＤＥＫＰＹＳＥＥＥＳＲＲＶＲＲＮＫＲＳＫＳＮＥＧＡＤＧＰＶＫＮＫＫＫＧＫＫＡＧＰＰＧＰＮＧＰＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＩＰＧＩＰＧＩＰＧＴＴＶＭＧＰＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＬＱＧＰＳＧＡＡＤＫＡＧＴＲＥＮＱＰＡＶＶＨＬＱＧＱＧＳＡＩＱＶＫＮＤＬＳＧＧＶＬＮＤＷＳＲＩＴＭＮＰＫＶＦＫＬＨＰＲＳＧＥＬＥＶＬＶＤＧＴＹＦＩＹＳＱＶＹＹＩＮＦＴＤＦＡＳＹＥＶＶＶＤＥＫＰＦＬＱＣＴＲＳＩＥＴＧＫＴＮＹＮＴＣＹＴＡＧＶＣＬＬＫＡＲＱＫＩＡＶＫＭＶＨＡＤＩＳＩＮＭＳＫＨＴＴＦＦＧＡＩＲＬＧＥＡＰＡＳ

【0081】

ＴＷＥＡＫ（ＴＮＦ関連アポトーシス弱誘導因子）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドファミリーに属するサイトカインであり、ＦＮ１４／ＴＷＥＡＫＲ受容体のリガンドである。それはＴＮＦと重複したシグナル伝達機能を有するが、はるかに広範な組織分布を呈する。それは、内皮細胞のアポトーシス、増殖及び遊走、ならびに血管新生において重要な役割を果たす。例示的なヒトＴＷＥＡＫのアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＷＥＡＫ（配列番号６５）
ＭＡＡＲＲＳＱＲＲＲＧＲＲＧＥＰＧＴＡＬＬＶＰＬＡＬＧＬＧＬＡＬＡＣＬＧＬＬＬＡＶＶＳＬＧＳＲＡＳＬＳＡＱＥＰＡＱＥＥＬＶＡＥＥＤＱＤＰＳＥＬＮＰＱＴＥＥＳＱＤＰＡＰＦＬＮＲＬＶＲＰＲＲＳＡＰＫＧＲＫＴＲＡＲＲＡＩＡＡＨＹＥＶＨＰＲＰＧＱＤＧＡＱＡＧＶＤＧＴＶＳＧＷＥＥＡＲＩＮＳＳＳＰＬＲＹＮＲＱＩＧＥＦＩＶＴＲＡＧＬＹＹＬＹＣＱＶＨＦＤＥＧＫＡＶＹＬＫＬＤＬＬＶＤＧＶＬＡＬＲＣＬＥＥＦＳＡＴＡＡＳＳＬＧＰＱＬＲＬＣＱＶＳＧＬＬＡＬＲＰＧＳＳＬＲＩＲＴＬＰＷＡＨＬＫＡＡＰＦＬＴＹＦＧＬＦＱＶＨ

【0082】

ＬＴＡ（リンホトキシンアルファ）は、リンパ球によって産生されるサイトカインであり、膜結合状態と可溶性状態との両方で存在する。それは、リンホトキシンアルファを細胞表面に繋ぎ止めるリンホトキシンベータとのヘテロ三量体を形成し、二次リンパ器官の形成に関与し、多種多様な炎症性、免疫刺激性及び抗ウイルス性の応答を媒介する。例示的なヒトＬＴＡのアミノ酸配列を以下に示す：
ＬＴＢ（配列番号６６）
ＭＧＡＬＧＬＥＧＲＧＧＲＬＱＧＲＧＳＬＬＬＡＶＡＧＡＴＳＬＶＴＬＬＬＡＶＰＩＴＶＬＡＶＬＡＬＶＰＱＤＱＧＧＬＶＴＥＴＡＤＰＧＡＱＡＱＱＧＬＧＦＱＫＬＰＥＥＥＰＥＴＤＬＳＰＧＬＰＡＡＨＬＩＧＡＰＬＫＧＱＧＬＧＷＥＴＴＫＥＱＡＦＬＴＳＧＴＱＦＳＤＡＥＧＬＡＬＰＱＤＧＬＹＹＬＹＣＬＶＧＹＲＧＲＡＰＰＧＧＧＤＰＱＧＲＳＶＴＬＲＳＳＬＹＲＡＧＧＡＹＧＰＧＴＰＥＬＬＬＥＧＡＥＴＶＴＰＶＬＤＰＡＲＲＱＧＹＧＰＬＷＹＴＳＶＧＦＧＧＬＶＱＬＲＲＧＥＲＶＹＶＮＩＳＨＰＤＭＶＤＦＡＲＧＫＴＦＦＧＡＶＭＶＧ

【0083】

ＮＧＦ（神経成長因子）は神経栄養因子であり、主として特定の標的ニューロンの成長の調節、維持、増殖及び生存に関与する神経ペプチドである。より具体的には、ＮＧＦは、交感神経及び感覚ニューロンの生存のためになくてはならないものである。例示的なヒトＮＧＦのアミノ酸配列を以下に示す：
ＮＧＦ（配列番号６７）
ＭＳＭＬＦＹＴＬＩＴＡＦＬＩＧＩＱＡＥＰＨＳＥＳＮＶＰＡＧＨＴＩＰＱＡＨＷＴＫＬＱＨＳＬＤＴＡＬＲＲＡＲＳＡＰＡＡＡＩＡＡＲＶＡＧＱＴＲＮＩＴＶＤＰＲＬＦＫＫＲＲＬＲＳＰＲＶＬＦＳＴＱＰＰＲＥＡＡＤＴＱＤＬＤＦＥＶＧＧＡＡＰＦＮＲＴＨＲＳＫＲＳＳＳＨＰＩＦＨＲＧＥＦＳＶＣＤＳＶＳＶＷＶＧＤＫＴＴＡＴＤＩＫＧＫＥＶＭＶＬＧＥＶＮＩＮＮＳＶＦＫＱＹＦＦＥＴＫＣＲＤＰＮＰＶＤＳＧＣＲＧＩＤＳＫＨＷＮＳＹＣＴＴＴＨＴＦＶＫＡＬＴＭＤＧＫＱＡＡＷＲＦＩＲＩＤＴＡＣＶＣＶＬＳＲＫＡＶＲＲＡ

【0084】

ＥＤＡ－Ａ１は、ホモ三量体として作用し、外胚葉性器官の発達中に細胞間シグナル伝達に関与し得る、ＴＮＦスーパーファミリーに属するＩＩ型膜貫通タンパク質である。ＥＤＡ－Ａ１とエクトジスプラシンＡ受容体との結合は、分裂、成長及び成熟などの細胞活動に影響を及ぼす一連の化学的シグナルを誘発する。例示的なヒトＥＤＡ－Ａ１のアミノ酸配列を以下に示す：
ＥＤＡ－Ａ１（配列番号６８）
ＭＧＹＰＥＶＥＲＲＥＬＬＰＡＡＡＰＲＥＲＧＳＱＧＣＧＣＧＧＡＰＡＲＡＧＥＧＮＳＣＬＬＦＬＧＦＦＧＬＳＬＡＬＨＬＬＴＬＣＣＹＬＥＬＲＳＥＬＲＲＥＲＧＡＥＳＲＬＧＧＳＧＴＰＧＴＳＧＴＬＳＳＬＧＧＬＤＰＤＳＰＩＴＳＨＬＧＱＰＳＰＫＱＱＰＬＥＰＧＥＡＡＬＨＳＤＳＱＤＧＨＱＭＡＬＬＮＦＦＦＰＤＥＫＰＹＳＥＥＥＳＲＲＶＲＲＮＫＲＳＫＳＮＥＧＡＤＧＰＶＫＮＫＫＫＧＫＫＡＧＰＰＧＰＮＧＰＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＩＰＧＩＰＧＩＰＧＴＴＶＭＧＰＰＧＰＰＧＰＰＧＰＱＧＰＰＧＬＱＧＰＳＧＡＡＤＫＡＧＴＲＥＮＱＰＡＶＶＨＬＱＧＱＧＳＡＩＱＶＫＮＤＬＳＧＧＶＬＮＤＷＳＲＩＴＭＮＰＫＶＦＫＬＨＰＲＳＧＥＬＥＶＬＶＤＧＴＹＦＩＹＳＱＶＥＶＹＹＩＮＦＴＤＦＡＳＹＥＶＶＶＤＥＫＰＦＬＱＣＴＲＳＩＥＴＧＫＴＮＹＮＴＣＹＴＡＧＶＣＬＬＫＡＲＱＫＩＡＶＫＭＶＨＡＤＩＳＩＮＭＳＫＨＴＴＦＦＧＡＩＲＬＧＥＡＰＡＳ

【0085】

ＡＰＰ（アミロイド前駆体タンパク質）は、多くの組織に発現し、ニューロンのシナプスに集中している、内在性膜タンパク質である。それは、脳及び脊髄を含めた多くの組織に発現し、膜中のγ－セレクターゼ複合体を含めた一連の連続的なプロテアーゼによって非常に複雑な方法で速やかに代謝されるが、当該プロテアーゼは他の肝要な調節分子のプロセシングも行うものである。例示的なヒトＡＰＰのアミノ酸配列を以下に示す：
ＡＰＰ（配列番号６９）
ＭＬＰＧＬＡＬＬＬＬＡＡＷＴＡＲＡＬＥＶＰＴＤＧＮＡＧＬＬＡＥＰＱＩＡＭＦＣＧＲＬＮＭＨＭＮＶＱＮＧＫＷＤＳＤＰＳＧＴＫＴＣＩＤＴＫＥＧＩＬＱＹＣＱＥＶＹＰＥＬＱＩＴＮＶＶＥＡＮＱＰＶＴＩＱＮＷＣＫＲＧＲＫＱＣＫＴＨＰＨＦＶＩＰＹＲＣＬＶＧＥＦＶＳＤＡＬＬＶＰＤＫＣＫＦＬＨＱＥＲＭＤＶＣＥＴＨＬＨＷＨＴＶＡＫＥＴＣＳＥＫＳＴＮＬＨＤＹＧＭＬＬＰＣＧＩＤＫＦＲＧＶＥＦＶＣＣＰＬＡＥＥＳＤＮＶＤＳＡＤＡＥＥＤＤＳＤＶＷＷＧＧＡＤＴＤＹＡＤＧＳＥＤＫＶＶＥＶＡＥＥＥＥＶＡＥＶＥＥＥＥＡＤＤＤＥＤＤＥＤＧＤＥＶＥＥＥＡＥＥＰＹＥＥＡＴＥＲＴＴＳＩＡＴＴＴＴＴＴＴＥＳＶＥＥＶＶＲＥＶＣＳＥＱＡＥＴＧＰＣＲＡＭＩＳＲＷＹＦＤＶＴＥＧＫＣＡＰＦＦＹＧＧＣＧＧＮＲＮＮＦＤＴＥＥＹＣＭＡＶＣＧＳＡＭＳＱＳＬＬＫＴＴＱＥＰＬＡＲＤＰＶＫＬＰＴＴＡＡＳＴＰＤＡＶＤＫＹＬＥＴＰＧＤＥＮＥＨＡＨＦＱＫＡＫＥＲＬＥＡＫＨＲＥＲＭＳＱＶＭＲＥＷＥＥＡＥＲＱＡＫＮＬＰＫＡＤＫＫＡＶＩＱＨＦＱＥＫＶＥＳＬＥＱＥＡＡＮＥＲＱＱＬＶＥＴＨＭＡＲＶＥＡＭＬＮＤＲＲＲＬＡＬＥＮＹＩＴＡＬＱＡＶＰＰＲＰＲＨＶＦＮＭＬＫＫＹＶＲＡＥＱＫＤＲＱＨＴＬＫＨＦＥＨＶＲＭＶＤＰＫＫＡＡＱＩＲＳＱＶＭＴＨＬＲＶＩＹＥＲＭＮＱＳＬＳＬＬＹＮＶＰＡＶＡＥＥＩＱＤＥＶＤＥＬＬＱＫＥＱＮＹＳＤＤＶＬＡＮＭＩＳＥＰＲＩＳＹＧＮＤＡＬＭＰＳＬＴＥＴＫＴＴＶＥＬＬＰＶＮＧＥＦＳＬＤＤＬＱＰＷＨＳＦＧＡＤＳＶＰＡＮＴＥＮＥＶＥＰＶＤＡＲＰＡＡＤＲＧＬＴＴＲＰＧＳＧＬＴＮＩＫＴＥＥＩＳＥＶＫＭＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡＴＶＩＶＩＴＬＶＭＬＫＫＫＱＹＴＳＩＨＨＧＶＶＥＶＤＡＡＶＴＰＥＥＲＨＬＳＫＭＱＱＮＧＹＥＮＰＴＹＫＦＦＥＱＭＱＮ

【0086】

ＴＲＡＩＬ（ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド）は、アポトーシスを誘発するサイトカインである。それは、２つの細胞死受容体ＤＲ４（ＴＲＡＩＬ－ＲＩ）及びＤＲ５（ＴＲＡＩＬ－ＲＩＩ）、ならびに２つのデコイ受容体ＤｃＲ１及びＤｃＲ２に結合する。ＴＲＡＩＬは、細胞死受容体に結合すること、ＦＡＳ関連細胞死ドメインを動員すること、及びカスパーゼ８及び１０を活性化させることによって機能し、この結果としてアポトーシスが起こる。例示的なヒトＴＲＡＩＬのアミノ酸配列を以下に示す：
ＴＲＡＩＬ（配列番号７０）
ＭＡＭＭＥＶＱＧＧＰＳＬＧＱＴＣＶＬＩＶＩＦＴＶＬＬＱＳＬＣＶＡＶＴＹＶＹＦＴＮＥＬＫＱＭＱＤＫＹＳＫＳＧＩＡＣＦＬＫＥＤＤＳＹＷＤＰＮＤＥＥＳＭＮＳＰＣＷＱＶＫＷＱＬＲＱＬＶＲＫＭＩＬＲＴＳＥＥＴＩＳＴＶＱＥＫＱＱＮＩＳＰＬＶＲＥＲＧＰＱＲＶＡＡＨＩＴＧＴＲＧＲＳＮＴＬＳＳＰＮＳＫＮＥＫＡＬＧＲＫＩＮＳＷＥＳＳＲＳＧＨＳＦＬＳＮＬＨＬＲＮＧＥＬＶＩＨＥＫＧＦＹＹＩＹＳＱＴＹＦＲＦＱＥＥＩＫＥＮＴＫＮＤＫＱＭＶＱＹＩＹＫＹＴＳＹＰＤＰＩＬＬＭＫＳＡＲＮＳＣＷＳＫＤＡＥＹＧＬＹＳＩＹＱＧＧＩＦＥＬＫＥＮＤＲＩＦＶＳＶＴＮＥＨＬＩＤＭＤＨＥＡＳＦＦＧＡＦＬＶＧ

【0087】

Ｂ７－Ｈ４は、Ｖセットドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害因子１（ＶＴＣＮ１）としても知られ、Ｂ７ファミリーのメンバーである。このタンパク質は、抗原提示細胞の表面に発現すること、及びＴ細胞上のＣＤ２８またはＭＩＭ１８６７６０などのリガンドと相互作用することが分かっている。例示的なヒトＢ７－Ｈ４のアミノ酸配列を以下に示す：
Ｂ７－Ｈ４（配列番号７１）
ＭＡＳＬＧＱＩＬＦＷＳＩＩＳＩＩＩＩＬＡＧＡＩＡＬＩＩＧＦＧＩＳＧＲＨＳＩＴＶＴＴＶＡＳＡＧＮＩＧＥＤＧＩＬＳＣＴＦＥＰＤＩＫＬＳＤＩＶＩＱＷＬＫＥＧＶＬＧＬＶＨＥＦＫＥＧＫＤＥＬＳＥＱＤＥＭＦＲＧＲＴＡＶＦＡＤＱＶＩＶＧＮＡＳＬＲＬＫＮＶＱＬＴＤＡＧＴＹＫＣＹＩＩＴＳＫＧＫＧＮＡＮＬＥＹＫＴＧＡＦＳＭＰＥＶＮＶＤＹＮＡＳＳＥＴＬＲＣＥＡＰＲＷＦＰＱＰＴＶＶＷＡＳＱＶＤＱＧＡＮＦＳＥＶＳＮＴＳＦＥＬＮＳＥＮＶＴＭＫＶＶＳＶＬＹＮＶＴＩＮＮＴＹＳＣＭＩＥＮＤＩＡＫＡＴＧＤＩＫＶＴＥＳＥＩＫＲＲＳＨＬＱＬＬＮＳＫＡＳＬＣＶＳＳＦＦＡＩＳＷＡＬＬＰＬＳＰＹＬＭＬＫ

【0088】

具体例において、本開示に使用するための共刺激ポリペプチドとしては、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＢＡＦＦＲ、４－１ＢＢ、または４－１ＢＢＬが挙げられる。ある場合には、本開示に使用するための共刺激ポリペプチドはＣＤ８０でもＣＤ８６でもない。

【0089】

共刺激ポリペプチドは、好適な種からの天然に存在するポリペプチド、例えば哺乳動物共刺激ポリペプチド、例えばヒトまたは非ヒト霊長類に由来するものであり得る。そのような天然に存在するポリペプチドは当技術分野で知られており、例えば、公的に利用できる遺伝子データベース、例えばＧｅｎＢａｎｋを検索するためのクエリーとして上記アミノ酸配列のいずれかを使用して得ることができる。本開示に使用するための共刺激ポリペプチドは、上記の例示的タンパク質のいずれかとの少なくとも８５％の（例えば、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％の、またはそれを上回る）配列同一性を共有し得る。いくつかの実施形態では、Ｂ７／ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、またはそのリガンドは、細胞質側ドメインが欠損したものであり得る。例示的な実施形態において、４－１ＢＢＬは細胞質側ドメインが欠損している。いくつかの実施形態では、ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーまたはそのリガンドは４－１ＢＢＬでない。

【0090】

２つのアミノ酸配列の「同一性パーセント」は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４－６８，１９９０のアルゴリズムをＫａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－７７，１９９３に記されているように改造したものを使用して決定される。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）の中に組み込まれている。本発明のタンパク質分子と相同であるアミノ酸配列を得るためにＢＬＡＳＴタンパク質検索をＸＢＬＡＳＴプログラムでスコア＝５０、ワード長さ＝３で実施することができる。２つの配列の間にギャップが存在する場合、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２，１９９７に記載されているようにＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えばＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）の初期設定パラメータが使用され得る。

【0091】

あるいは、共刺激ポリペプチドは天然の対応物の機能性変異体であり得る。そのような機能性変異体は、天然の対応物の機能性ドメイン（複数可）の中に（例えば酵素の活性部位の中に）１つ以上の突然変異を含有し得る。そのような機能性変異体は、１つ以上の突然変異を天然の対応物の機能性ドメイン（複数可）の外側に含有し得る。天然の共刺激ポリペプチドの機能性ドメインは、当技術分野で知られている場合があり、またはそのアミノ酸配列に基づいて予測することができる。機能性ドメイン（複数可）の外側の突然変異は、タンパク質の生物学的活性に実質的に影響を及ぼすとは予想されないであろう。ある場合には、機能性変異体は、天然の対応物と比較して、共刺激経路を調節（つまり刺激）する能力を有し得る。

【0092】

あるいは、またはさらに、機能性変異体は、天然の対応物の中の１つ以上の位置（例えば、２０個以下の位置、１５個以下の位置、１０個以下の位置、５個以下、４個、３個、２個、１個の位置（複数可））に保存的突然変異（複数可）を含有し得る。本明細書中で使用する場合、「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換がなされるタンパク質の相対的な電荷または大きさの特徴を変化させないアミノ酸置換を意味する。変異体は、ポリペプチド配列を変化させるための当業者に知られている方法、例えば、そのような方法をまとめた参考文献、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９、またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋの中に見つかるような方法に従って調製され得る。アミノ酸の保存的置換としては、以下の群の中のアミノ酸の間でなされる置換が挙げられる：（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、Ｎ；及び（ｇ）Ｅ、Ｄ。

【0093】

本明細書に記載の共刺激ポリペプチドは、そのようなものが発現している免疫細胞の活性を調節する上で、化学物質で誘導される（例えばリミドゥシドによって誘導される）二量体化が必要とならないものであり得る。例えば、共刺激ポリペプチドは、リミドゥシドによって誘導される二量体化を可能にするＦ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）またはその断片（例えばＦＫＢＰｖ３６ドメイン）を含まないものであり得る。

【0094】

ＩＩ．抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド
本明細書中で使用する場合、ＣＡＲポリペプチド（ＣＡＲ構築物としても知られる）は、宿主細胞の表面に発現し得る、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞質側シグナル伝達ドメインを含む天然に存在しない分子を指す。細胞外抗原結合ドメインは、医学的状態（例えば疾患）に関連する天然に存在する抗原を含めた標的抗原との、または疾患関連抗原を標的とした治療剤に複合している抗原部分との特異的な結合をする（つまりそれに対して特異的である）任意のペプチドまたはポリペプチドであり得る。

【0095】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含み得る。ＣＡＲポリペプチドは、宿主細胞上に発現したときに細胞外抗原結合ドメインが標的分子及び細胞質側シグナル伝達ドメインとの結合のために細胞外に位置するように構成される。任意選択の共刺激シグナル伝達ドメインは、活性化及び／またはエフェクターシグナル伝達を誘発すべく細胞質中に位置し得る。

【0096】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞質側シグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメイン、及び細胞質側シグナル伝達ドメインを含む。他の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞質側シグナル伝達ドメイン、及び少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。

【0097】

本明細書中で使用する場合、「タンパク質Ｘ膜貫通ドメイン」（例えば、ＣＤ８膜貫通ドメイン）という語句は、所与のタンパク質の、つまり膜を横切って延在しているタンパク質Ｘの、膜中で熱力学的に安定な任意の部分を指す。

【0098】

本明細書中で使用する場合、「タンパク質Ｘ細胞質側シグナル伝達ドメイン」、例えばＣＤ３ζ細胞質側シグナル伝達ドメインという語句は、細胞または細胞小器官の内部と相互作用し、免疫細胞の増殖及び／または活性化につながる主シグナルを伝え送ることができる、当技術分野で知られているタンパク質（タンパク質Ｘ）の任意の部分を指す。本明細書に記載の細胞質側シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を完全に活性化させるための副シグナルを伝え送る共刺激シグナル伝達ドメインとは異なる。

【0099】

本明細書中で使用する場合、「タンパク質Ｘ共刺激シグナル伝達ドメイン」、例えばＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインという語句は、共刺激シグナル（副シグナル）を免疫細胞（例えばＴ細胞）内に送り込んで免疫細胞の完全な活性化をもたらすことができる、所与の共刺激タンパク質（タンパク質Ｘ、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７またはＩＣＯＳ）の部分を指す。

【0100】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは、抗原結合ドメインのＣ末端及び膜貫通ドメインのＮ末端に位置し得るヒンジドメインをさらに含み得る。ヒンジは、任意の好適な長さのものであり得る。他の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは、ヒンジドメインを全く有さないものであり得る。さらに他の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは、短くした（例えば２５個以下のアミノ酸残基を含む）ヒンジドメインを有し得る。

【0101】

本明細書及び別記の特許請求の範囲の中で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は複数形の意味を含むが、但し、そうでないことが文脈から明らかである場合を除く。

【0102】

Ａ．細胞外抗原結合ドメイン
本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは細胞外抗原結合ドメインを含むが、このドメインは、ＣＡＲポリペプチドが発現している免疫細胞の特異性を向け変えるものである。本明細書中で使用する場合、「細胞外抗原結合ドメイン」は、関心対象の標的抗原（例えばＧＰＣ３）に対する結合特異性を有するペプチドまたはポリペプチドを指す。本明細書に記載の細胞外抗原結合ドメインは、Ｆｃ受容体の細胞外ドメインを含まないものであり、また、免疫グロブリンのＦｃ部分に結合しないものであり得る。Ｆｃ断片に結合しない細胞外ドメインは、２つのもの同士の結合活性が、従来のアッセイを用いて検出できないか、または従来のアッセイを用いてバックグラインドのもしくは生物学的に重要でない結合活性しか検出されないことを意味する。

【0103】

ある場合には、細胞外抗原結合ドメインは一本鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）であり得るが、これは、標的細胞表面抗原に高い結合親和性で結合する抗体に由来するものであり得る。細胞外抗原結合ドメインは、既知の抗ＧＰＣ３抗体（例えばコドリツズマブ）に由来する抗原結合断片（例えばｓｃＦｖ）を含んでいてもよい。

【0104】

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＬＤＰＫＴＧＤＴＡＹＳＱＫＦＫＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＦＹＳＹＴＹＷＧＱＧＴＬＶ（配列番号７４）
のアミノ酸配列を含んだ重鎖可変領域を含む。

【0105】

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＲＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＳＱＮＴＨＶＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩ （配列番号７５）
のアミノ酸配列を含んだ軽鎖可変領域を含む。

【0106】

本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドのいずれかの細胞外抗原結合ドメインは、ＧＰＣ３に適した結合親和性を有し得る。本明細書中で使用する場合、「結合親和性」は、見掛けの会合定数またはＫ_Aを指す。Ｋ_Aは解離定数（Ｋ_D）の逆数である。本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドに使用するための細胞外抗原結合ドメインは、標的抗原または抗原エピトープに対する少なくとも１０^-5、１０^-6、１０^-7、１０^-8、１０^-9、１０^-10Ｍ以下の結合親和性（Ｋ_D）を有し得る。結合親和性の上昇はＫ_Dの低下に対応する。細胞外抗原結合ドメインが第１抗原に第２抗原よりも高い親和性で結合することは、第２抗原との結合のＫ_A（または数値Ｋ_D）と比較して第１抗原との結合のＫ_Aがより高い（またはＫ_Dの数値がより小さい）ことによって表され得る。そのような場合、細胞外抗原結合ドメインは第１抗原（例えば、第１配座を有する第１タンパク質またはその模倣体）に対する特異性を、第２抗原（例えば、第２配座を有する同じ第１タンパク質もしくはその模倣体、または第２タンパク質）に比べて有している。（例えば特異性または他の比較に関して）結合親和性の差は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、１０，０００または１０⁵倍であり得る。

【0107】

結合親和性（または結合特異性）は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または（例えば蛍光アッセイを用いる）分光法を含めた様々な方法によって決定され得る。結合親和性を評価するための例示的な条件は、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液中（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤Ｐ２０）である。これらの技術を用いて、結合した結合タンパク質の濃度を標的タンパク質濃度の関数として測定することができる。結合した結合タンパク質の濃度（［結合］）は、以下の等式によって遊離標的タンパク質（［遊離］）に概して関係付けられる：
［結合］＝［遊離］／（Ｋｄ＋［遊離］）

【0108】

しかしながら、必ずしもＫ_Aの正確な決定を行う必要はない、というのも、例えばＥＬＩＳＡもしくはＦＡＣＳ分析などの方法を用いて決定され、Ｋ_Aに比例し、それゆえ比較、例えばより高い親和性が例えば２倍高いか否かについての判定に用いることができる親和性の定量的測定結果を得ること、親和性の定性的測定結果を得ること、または親和性の推定を例えば機能性アッセイ、例えば試験管内もしくはインビボアッセイにおける活性によって得ることで事足りる場合があるからである。

【0109】

Ｂ．膜貫通ドメイン
本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドの膜貫通ドメインは、当技術分野で知られている任意の形態であり得る。本明細書中で使用する場合、「膜貫通ドメイン」は、細胞膜中、好ましくは真核生物細胞膜中で熱力学的に安定な任意のタンパク質構造を指す。本明細書において使用されるＣＡＲポリペプチドにおける使用に適合する膜貫通ドメインは、天然に存在するタンパク質から得られ得る。あるいはそれは、合成の天然に存在しないタンパク質セグメント、例えば、細胞膜中で熱力学的に安定な疎水性タンパク質セグメントであってもよい。

【0110】

膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインの三次元構造に基づいて分類される。例えば、膜貫通ドメインは、アルファヘリックス、１つより多いアルファヘリックスの複合体、ベータバレル、または細胞のリン脂質二重層を横切って延在することができる他の任意の安定な構造を形成し得る。さらに、膜貫通ドメインは、さらに、または代わりに、膜貫通ドメインが膜を横切って行う貫通の回数及びタンパク質の配向を含めた膜貫通ドメインのトポロジーに基づいて分類されることもある。例えば、１回貫通型膜タンパク質は細胞膜を１回横切り、多回貫通型膜タンパク質は細胞膜を少なくとも２回（例えば、２、３、４、５、６、７回、またはそれを上回る回数で）横切る。

【0111】

膜タンパク質は、細胞の内側及び外側に対するその末端及び膜貫通セグメント（複数可）のトポロジーに応じてＩ型、ＩＩ型またはＩＩＩ型と定義され得る。Ｉ型膜タンパク質は単一の膜貫通領域を有し、タンパク質のＮ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に存在するように及びタンパク質のＣ末端が細胞質側に存在するように配向している。ＩＩ型膜タンパク質も単一の膜貫通領域を有するが、タンパク質のＣ末端が細胞の脂質二重層の細胞外側に存在するように及びタンパク質のＮ末端が細胞質側に存在するように配向している。ＩＩＩ型膜タンパク質は複数の膜貫通セグメントを有し、膜貫通セグメントの数ならびにＮ末端及びＣ末端の位置に基づいてさらに下位分類され得る。

【0112】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドの膜貫通ドメインは、Ｉ型１回貫通型膜タンパク質に由来する。１回貫通型膜タンパク質としては、ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲζ、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ２２、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ１５４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ及びＦＧＦＲ２Ｂが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、以下から選択される膜タンパク質からのものである：ＣＤ８α、ＣＤ８β、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ４、ＦｃεＲＩγ、ＣＤ１６、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲα、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＶＥＧＦＲ２、ＦＡＳ及びＦＧＦＲ２Ｂ。いくつかの例では、膜貫通ドメインはＣＤ８のもの（例えばＣＤ８αの膜貫通ドメイン）である。いくつかの例では、膜貫通ドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７のものである。他の例では、膜貫通ドメインはＣＤ２８のものである。ある場合には、そのようなＣＡＲポリペプチドはヒンジドメインを何ら含まないものであり得る。あるいは、またはさらに、そのようなＣＡＲポリペプチドは、本明細書に記載の共刺激領域を２つ以上含み得る。他の例では、膜貫通ドメインはＣＤ３４のものである。さらに他の例では、膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ８αに由来するものではない。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドの膜貫通ドメインは１回貫通型アルファヘリックスである。

【0113】

多回貫通型膜タンパク質からの膜貫通ドメインも、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドにおける使用に適合し得る。多回貫通型膜タンパク質は、複雑なアルファヘリックス構造（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７個の、またはそれより多いアルファヘリックス）またはベータシート構造を含み得る。好ましくは、多回貫通型膜タンパク質のＮ末端及びＣ末端は脂質二重層の対向側面上に存在し、例えば、タンパク質のＮ末端は脂質二重層の細胞質側に存在し、タンパク質のＣ末端は細胞外側に存在する。本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドを構築するために多回貫通型膜タンパク質からの１回か複数回かのどちらかのヘリックス貫通が用いられ得る。

【0114】

本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドに使用するための膜貫通ドメインは、合成の天然に存在しないタンパク質セグメントの少なくとも一部を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、合成の天然に存在しないアルファヘリックスまたはベータシートである。いくつかの実施形態では、タンパク質セグメントは少なくともおよそ２０アミノ酸、例えば、少なくとも１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０アミノ酸であるかまたはそれを上回る。合成の膜貫通ドメインの例は、当技術分野、例えば米国特許第７，０５２，９０６Ｂ１号及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０００／０３２７７６Ａ２号において既知であり、参照によりこれらの各々の関連する開示内容を本明細書に援用する。

【0115】

いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインのアミノ酸配列はシステイン残基を含まない。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は１つのシステイン残基を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は２つのシステイン残基を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は２つより多い（例えば、３、４、５個またはそれより多い）システイン残基を含む。

【0116】

膜貫通ドメインは、膜貫通領域、及び膜貫通ドメインのＣ末端側に位置する細胞質側領域を含み得る。膜貫通ドメインの細胞質側領域は３つ以上のアミノ酸を含み得、いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインを脂質二重層の中に配向させるのに役立つ。いくつかの実施形態では、１つ以上のシステイン残基が膜貫通ドメインの膜貫通領域に存在する。いくつかの実施形態では、１つ以上のシステイン残基が膜貫通ドメインの細胞質側領域に存在する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインの細胞質側領域は、正に帯電したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインの細胞質側領域は、アミノ酸であるアルギニン、セリン及びリジンを含む。

【0117】

いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインの膜貫通領域は疎水性アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、大部分が疎水性であるアミノ酸残基、例えば、アラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファンまたはバリンを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は疎水性である。いくつかの実施形態では、膜貫通領域はポリ－ロイシン－アラニン配列を含む。

【0118】

タンパク質またはタンパク質セグメントの疎水親水度、疎水性または親水性の特徴は、当技術分野で知られている例えばＫｙｔｅとＤｏｏｌｉｔｔｌｅの疎水性分析を含めた任意の方法によって評価され得る。

【0119】

Ｃ．共刺激シグナル伝達ドメイン
多くの免疫細胞は、細胞の増殖、分化及び生存を促進するためならびに細胞のエフェクター機能を活性化させるために抗原特異的シグナルの刺激に加えて共刺激を必要とする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメイン、または４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインを含有し得る。本明細書中で使用される「共刺激シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能などの免疫応答を誘導する細胞内でのシグナル伝達（副シグナル）を媒介する共刺激シグナル伝達タンパク質の少なくとも断片を指す。当技術分野で知られているように、Ｔ細胞などの免疫細胞の活性化には２つのシグナルが必要となることが多い：（１）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と抗原提示細胞によって提示される抗原ペプチド／ＭＨＣ複合体との係合が典型的にはＴＣＲ複合体の構成要素としてのＣＤ３ζに促されて起こることによって誘発される、抗原特異的なシグナル（主シグナル）、及び（ｉｉ）共刺激受容体とそのリガンドとの相互作用によって誘発される共刺激シグナル（副シグナル）。共刺激受容体は、ＴＣＲによって誘発されるシグナル伝達に対する付加として共刺激シグナル（副シグナル）を伝達し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球または好酸球などの免疫細胞によって媒介される応答を調節する。

【0120】

宿主細胞（例えば免疫細胞）における共刺激シグナル伝達ドメインの活性化は、細胞がサイトカインの産生及び分泌、食細胞特性、増殖、分化、生存及び／または細胞傷害を増進または減退させることを引き起こし得る。任意の共刺激分子の共刺激シグナル伝達ドメインが、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドにおける使用に適合し得る。共刺激シグナル伝達ドメインの種類（複数可）は、ＣＡＲポリペプチドを発現させることになる免疫細胞の種類（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球または好酸球）、及び望まれる免疫エフェクター機能などの因子に基づいて選択される。ＣＡＲポリペプチドに使用される共刺激シグナル伝達ドメインの例は、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリーのメンバー（例えば、Ｂ７－１／ＣＤ８０、Ｂ７－２／ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ、及びＰＤＣＤ６）；ＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（例えば、４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシンアルファ／ＴＮＦベータ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦアルファ、及びＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）；ＳＬＡＭファミリーのメンバー（例えば、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ－３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、及びＳＬＡＭ／ＣＤ１５０）；及び他の任意の共刺激分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ５３、ＣＤ８２／Ｋａｉ－１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｉｋａｒｏｓ、インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ－１、ＬＡＧ－３、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ－４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ Ｒ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、及びＮＫＧ２Ｃを含むがこれらに限定されない共刺激タンパク質の細胞質側シグナル伝達ドメインであり得る。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１（ＣＤ１１ａ）もしくはＣＤ２、またはその任意の変異体のものである。

【0121】

共刺激シグナル伝達ドメインによって免疫細胞の免疫応答を調節することができるような、本明細書に記載の共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかの変異体も、本開示の範囲に含まれる。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、野生型対応物と比較して１０個以下（例えば、１、２、３、４、５または８個）のアミノ酸残基突然変異、例えば、アミノ酸置換、欠失または付加を含む。１つ以上のアミノ酸変異（例えば、アミノ酸置換、欠失または付加）を含むそのような共刺激シグナル伝達ドメインは変異体と呼称され得る。

【0122】

共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の突然変異は、突然変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比較してシグナル伝達の増進及び免疫応答の刺激の増強をもたらすことがある。共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の突然変異は、突然変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比較してシグナル伝達の減退及び免疫応答の刺激の減弱をもたらすことがある。例えば、天然ＣＤ２８アミノ酸配列の残基１８６及び１８７の突然変異は、ＣＡＲポリペプチドの共刺激ドメインによる共刺激活性の上昇及び免疫応答の誘導をもたらし得る。いくつかの実施形態では、突然変異は、ＣＤ２８共刺激ドメインのグリシン残基による位置１８６及び１８７の各々におけるリジンの置換であり、これはＣＤ２８_LL→GG変異体と呼称される。共刺激シグナル伝達ドメインになされ得る、ドメインの共刺激活性を増強または低減し得るさらなる突然変異は当業者にとって明白であろう。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、またはＣＤ２８_LL→GG変異体のものである。

【0123】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、単一の共刺激ドメイン、例えば、ＣＤ２７共刺激ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、ＩＣＯＳ共刺激ドメインまたはＯＸ４０共刺激ドメインを含有し得る。

【0124】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、１つより多い（例えば、２、３個またはそれより多い）共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、２つ以上の同じ共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインの２つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、異なる共刺激タンパク質、例えば、本明細書に記載の任意の２つ以上の共刺激タンパク質からの２つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。共刺激シグナル伝達ドメインの種類（複数可）の選択は、ＣＡＲポリペプチドと共に使用されることになる宿主細胞の種類（例えばＴ細胞またはＮＫ細胞）、及び望まれる免疫エフェクター機能などの因子に基づいて行われ得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、２つの共刺激シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインの２つのコピーを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、異なる共刺激受容体、例えば、本明細書に記載の任意の２つ以上の共刺激受容体、例えば、ＣＤ２８と４－１ＢＢ、ＣＤ２８とＣＤ２７、ＣＤ２８とＩＣＯＳ、ＣＤ２８_LL→GG変異体と４－１ＢＢ、ＣＤ２８とＯＸ４０、またはＣＤ２８_LL→GG変異体とＯＸ４０からの、２つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、２つの共刺激シグナル伝達ドメインはＣＤ２８と４－１ＢＢである。いくつかの実施形態では、２つの共刺激シグナル伝達ドメインはＣＤ２８_LL→GG変異体と４－１ＢＢである。いくつかの実施形態では、２つの共刺激シグナル伝達ドメインはＣＤ２８とＯＸ４０である。いくつかの実施形態では、２つの共刺激シグナル伝達ドメインはＣＤ２８_LL→GG変異体とＯＸ４０である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ構築物は、ＣＤ２８とＩＣＯＳＬとの組合せを含有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ構築物は、ＣＤ２８とＣＤ２７との組合せを含有し得る。特定の実施形態では、４－１ＢＢ共刺激ドメインはＣＤ２８またはＣＤ２８_LL→GG変異体共刺激シグナル伝達ドメインのＮ末端に位置する。

【0125】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは共刺激シグナル伝達ドメインを含まない。

【0126】

Ｄ．細胞質側シグナル伝達ドメイン
任意の細胞質側シグナル伝達ドメインを使用して本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドを作り出すことができる。そのような細胞質側ドメインは、免疫細胞の増殖及び／または活性化につながる細胞シグナル伝達（主シグナル伝達）の誘発に関与する任意のシグナル伝達ドメインであり得る。本明細書に記載の細胞質側シグナル伝達ドメインは、当技術分野で知られているように免疫細胞を完全に活性化させるために共刺激または副シグナルを伝え送るものである共刺激シグナル伝達ドメインではない。

【0127】

本明細書に記載の細胞質側ドメインは、免疫受容体チロシン依存性活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）ドメインを含んでいてもよいし、またはＩＴＡＭを含んでいなくてもよい。本明細書中で使用する場合、「ＩＴＡＭ」は、多くの免疫細胞に発現したシグナル伝達分子の尾部に通常存在している保存されたタンパク質モチーフである。当該モチーフは、６～８アミノ酸によって隔てられた、アミノ酸配列ＹｘｘＬ／Ｉの２回の繰返しを含み得、式中の各ｘは独立して任意のアミノ酸であり、これらは、保存されたモチーフＹｘｘＬ／Ｉｘ_(6-8)ＹｘｘＬ／Ｉを作り出している。シグナル伝達分子中のＩＴＡＭは、シグナル伝達分子が活性化された後のＩＴＡＭ中のチロシン残基のリン酸化によって少なくとも部分的に媒介される細胞内でのシグナル伝達において、重要なものである。ＩＴＡＭは、シグナル伝達経路に関与する他のタンパク質に対するドッキング部位としても機能し得る。

【0128】

いくつかの例では、細胞質側シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζまたはＦｃεＲ１γのものである。他の例では、細胞質側シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ζに由来するものではない。

【0129】

１つの具体的な実施形態では、いくつかのシグナル伝達ドメインを相加または相乗効果のために融合させ得る。有用な付加的シグナル伝達ドメインの非限定的な例としては、ＴＣＲゼータ鎖、ＣＤ２８、ＯＸ４０／ＣＤ１３４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＦｃεＲＩｙ、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＩＬ２Ｒ－ベータ／ＣＤ１２２、ＩＬ－２Ｒ－ガンマ／ＣＤ１３２、及びＣＤ４０のうちの１つ以上の一部または全てが挙げられる。

【0130】

他の実施形態では、本明細書に記載の細胞質側シグナル伝達ドメインはＩＴＡＭモチーフを含まない。例としては、Ｊａｋ／ＳＴＡＴ、Ｔｏｌｌ－インターロイキン受容体（ＴＩＲ）、及びチロシンキナーゼの細胞質側シグナル伝達ドメインが挙げられるが、これらに限定されない。

【0131】

Ｅ．ヒンジドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドは、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置するヒンジドメインをさらに含む。ヒンジドメインは、タンパク質の２つのドメインの間に通常みられるアミノ酸セグメントであり、タンパク質の柔軟性及び互いに対する片方または両方のドメインの運動を可能にし得る。ＣＡＲポリペプチドの膜貫通ドメインに対する細胞外抗原結合ドメインのそのような柔軟性及び運動を提供する任意のアミノ酸配列を使用することができる。

【0132】

ヒンジドメインを含むことが当技術分野で知られている任意のタンパク質のヒンジドメインが、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドにおける使用に適合している。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、天然に存在するタンパク質のヒンジドメインの少なくとも一部であり、ＣＡＲポリペプチドに柔軟性を付与する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインはＣＤ８のものである。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８のヒンジドメインの一部、例えば、ＣＤ８のヒンジドメインの少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０、３５または４０）連続アミノ酸を含有する断片である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインはＣＤ２８のものである。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８のヒンジドメインの一部、例えば、ＣＤ２８のヒンジドメインの少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０、３５または４０）連続アミノ酸を含有する断片である。

【0133】

抗体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ抗体のヒンジドメインも、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドにおける使用に適合している。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗体の定常ドメインＣＨ１及びＣＨ２を繋ぎ合わせているヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは抗体のものであり、抗体のヒンジドメイン及び抗体の１つ以上の定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは抗体のヒンジドメイン及び抗体のＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは抗体のヒンジドメイン及び抗体のＣＨ２定常領域及びＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域ならびにＣＨ２及びＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域及びＣＨ３定常領域を含む。

【0134】

天然に存在しないペプチドを本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドのためのヒンジドメインとして使用してもよい。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間のヒンジドメインはペプチドリンカー、例えば（Ｇｌｙ_xＳｅｒ）_nリンカーであり、式中のｘ及びｎは独立して３～１２の、例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２の、またはそれより大きい整数であり得る。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）_n（配列番号３）であり、式中のｎは３～６０の、例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９または６０の整数であり得る。特定の実施形態では、ｎは６０より大きい整数であり得る。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）₃（配列番号４）である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）₆（配列番号５）である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）₉（配列番号６）である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）₁₂（配列番号７）である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）₁₅（配列番号８）である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）₃₀（配列番号９）である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）₄₅（配列番号１０）である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは（Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ）₆₀（配列番号１１）である。

【0135】

他の実施形態では、ヒンジドメインは、様々な長さ（例えば１０～８０アミノ酸残基）の親水性残基からなる非構造化ポリペプチドである延長組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）である。ＸＴＥＮペプチドのアミノ酸配列は、当業者にとって明白であろうし、例えば米国特許第８，６７３，８６０号の中に見つけることができ、参照によりその関連する開示内容を本明細書に援用する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインはＸＴＥＮペプチドであり、６０アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインはＸＴＥＮペプチドであり、３０アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインはＸＴＥＮペプチドであり、４５アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインはＸＴＥＮペプチドであり、１５アミノ酸を含む。

【0136】

本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドを作るために使用されるヒンジドメインのいずれかは、２５０個以下のアミノ酸残基を含有し得る。ある場合には、ＣＡＲポリペプチドは、比較的長い、例えば１５０～２５０アミノ酸残基（例えば、１５０～１８０アミノ酸残基、１８０～２００アミノ酸残基、または２００～２５０アミノ酸残基）を含有するヒンジドメインを含有し得る。他の例では、ＣＡＲポリペプチドは中くらいの大きさのヒンジドメインを含有し得、ヒンジドメインが６０～１５０アミノ酸残基（例えば、６０～８０、８０～１００、１００～１２０、または１２０～１５０アミノ酸残基）を含有し得る。あるいは、ＣＡＲポリペプチドは短いヒンジドメインを含有し得、ヒンジドメインが６０未満のアミノ酸残基（例えば、１～３０アミノ酸、または３１～６０アミノ酸）を含有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ構築物はヒンジドメインを全く含有しない。

【0137】

Ｆ．シグナルペプチド
いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端にシグナルペプチド（シグナル配列としても知られる）も含む。一般に、シグナル配列は、ポリペプチドを細胞内の所望の部位に指向するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、シグナル配列はＣＡＲポリペプチドを細胞の分泌経路に指向し、脂質二重層内へのＣＡＲポリペプチドの組込み及び係留を可能にすることになる。本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドにおける使用に適合した、天然に存在するタンパク質のシグナル配列または合成の天然に存在しないシグナル配列を含むシグナル配列は、当業者にとって明白であろう。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αからのシグナル配列である。いくつかの実施形態では、シグナル配列はＣＤ２８からのものである。いくつかの実施形態では、シグナル配列は、ネズミカッパ鎖からのものである。さらに他の実施形態では、シグナル配列はＣＤ１６からのものである。

【0138】

Ｇ．ＣＡＲポリペプチドの例
表１は、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチドの例を示す。これらの例示的な構築物は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に、シグナル配列、抗原結合ドメイン（例えば、ＧＰＣ３に対して特異的であるｓｃＦｖ断片）、ヒンジドメイン及び膜貫通部分を有する一方で、任意選択の共刺激ドメイン及び細胞質側シグナル伝達ドメインの位置については入れ替えができる。

【0139】

【表1】

【0140】

例としてのＣＡＲポリペプチドのアミノ酸配列を以下に示す（シグナル配列を斜体で示す）。
配列番号１

【化1】

配列番号２

【化2】

【0141】

ＩＩＩ．共刺激ポリペプチド及び抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドが発現している造血細胞
本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び同じく本明細書に記載される抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＣＡＲ発現細胞、例えばＣＡＲ Ｔ細胞）の１つ以上が発現している遺伝子操作型宿主細胞（造血細胞、例えば、造血幹細胞及び免疫細胞、例えばＴ細胞またはＮＫ細胞）を、本明細書に提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は造血細胞またはその子孫である。いくつかの実施形態では、造血細胞は造血幹細胞であり得る。他の実施形態では、宿主細胞は免疫細胞、例えばＴ細胞またはＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＮＫ細胞である。他の実施形態では、免疫細胞は、樹立された細胞株、例えばＮＫ－９２細胞であり得る。

【0142】

ある場合には、宿主細胞に導入される共刺激ポリペプチドは、宿主細胞の内在性タンパク質と同一である。共刺激ポリペプチドのコード配列の付加的コピーを宿主細胞に導入することで、天然の対応物と比較してポリペプチドの発現レベルが増強される（つまり過剰発現する）であろう。ある場合には、宿主細胞に導入される共刺激ポリペプチドは宿主細胞に対して異種であり、つまり、宿主細胞に存在していない、または発現しない。そのような異種共刺激ポリペプチドは、宿主細胞に発現しない天然に存在する（例えば異なる種からの）タンパク質であり得る。あるいは、異種共刺激ポリペプチドは天然のタンパク質の変異体、例えば本明細書に記載のものであり得る。いくつかの例では、外来性の（つまり、宿主細胞に元来存在していない）コード核酸コピーは染色体外に存在し得る。他の例では、外来性のコード配列コピーは宿主細胞の染色体の中に組み込まれ得、内在性遺伝子の天然の遺伝子座とは異なる部位に位置し得る、

【0143】

そのような遺伝子操作型宿主細胞には、調節された共刺激経路を有する能力がある。予想されるそれらの高い増殖速度、生物活性及び／または生存率を仮定すれば、遺伝子操作型細胞、例えばＴ細胞及びＮＫ細胞は、共刺激ポリペプチドが発現しないかまたはそれがより低いレベルで発現するもしくはそのより低活性な形態が発現するＣＡＲ Ｔ細胞に比べて、より高い治療有効性を有すると予想されよう。

【0144】

免疫細胞の集団は、任意の供給源、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄または組織、例えば、脾臓、リンパ節、胸腺、幹細胞または腫瘍組織から得ることができる。あるいは、免疫細胞集団は、幹細胞、例えば造血幹細胞及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来するものであり得る。所望の種類の宿主細胞を得るのに適した供給源は、当業者にとって明白であろう。いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団は、本明細書に記載の治療を必要とする患者（例えばヒト患者）から得られ得るＰＢＭＣに由来する。望ましい種類の宿主細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞）を、細胞と刺激分子との共インキュベーションによって得られた細胞集団の中で増殖させてもよい。非限定的な例を挙げると、Ｔ細胞の増殖のために抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体が使用され得る。

【0145】

本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び抗ＧＰＣ３ポリペプチドのいずれかが発現する免疫細胞を構築するためには、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの安定的または一過的な発現のための発現ベクターが、本明細書に記載の従来の方法によって作り出され得、免疫宿主細胞に導入され得る。例えば、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドをコードする核酸を、１つまたは２つの好適な発現ベクター、例えば、好適なプロモーターに機能可能に繋げられたウイルスベクターまたは非ウイルスベクターにクローニングしてもよい。ある場合には、ＣＡＲポリペプチド及び共刺激ポリペプチドのための各コード配列は２つの別個の核酸分子の上にあり、２つの別個のベクターにクローニングされ得、これらが同時に、または順次、好適な宿主細胞に導入され得る。あるいは、ＣＡＲポリペプチド及び共刺激ポリペプチドのためのコード配列は１つの核酸分子の上にあり、１つのベクターにクローニングされ得る。ＣＡＲポリペプチド及び共刺激ポリペプチドのコード配列は、２つのポリペプチドの発現が異なるプロモーターによって制御されるような２つの別個なプロモーターに機能可能に繋げられ得る。あるいは、ＣＡＲポリペプチド及び共刺激ポリペプチドのコード配列は、２つのポリペプチドの発現が単一のプロモーターによって制御されるような、１つのプロモーターに機能可能に繋げられ得る。１つのｍＲＮＡ分子から２つの別個のポリペプチドが翻訳され得るように、２つのポリペプチドのコード配列の間に好適な配列が挿入され得る。そのような配列、例えばＩＲＥＳまたはリボソームスキッピング部位は当技術分野でよく知られている。さらなる説明を以下に提供する。

【0146】

好適な条件の下で核酸及びベクター（複数可）を制限酵素と接触させて各分子上に、互いに対合し得る及びリガーゼで繋ぎ合わされ得る相補的端部を作り出すことができる。あるいは、合成核酸リンカーを、共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸の末端にライゲートすることができる。合成リンカーは、ベクター内の特定の制限部位に対応する核酸配列を含有し得る。発現ベクター／プラスミド／ウイルスベクターの選択は共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの発現のための宿主細胞の種類に依拠することになるが、真核細胞内における組込み及び複製に適したものとすべきである。

【0147】

本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドの発現のために、様々なプロモーター、例えば、限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）中間早期プロモーター（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｅａｒｌｙ ｐｒｏｍｏｔｅｒ）、ウイルスＬＴＲ、例えば、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ、ＨＩＶ－ＬＴＲ、ＨＴＬＶ－１ ＬＴＲ、サルウイルス４０（ＳＶ４０）早期プロモーター、ヒトＥＦ１アルファプロモーター、または単純ヘルペスｔｋウイルスプロモーターを使用することができる。共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの発現のためのさらなるプロモーターとしては、免疫細胞において恒常的に活性である任意のプロモーターが挙げられる。あるいは、免疫細胞内で発現が調節され得るような任意の調節可能なプロモーターを使用してもよい。

【0148】

加えて、ベクターは例えば以下のいくつかまたは全てを含有し得る：選択マーカー遺伝子、例えば、宿主細胞における安定的または一過的形質移入体の選択のためのネオマイシン遺伝子またはカナマイシン遺伝子；高レベルの転写のためのヒトＣＭＶの即時早期遺伝子からのエンハンサー／プロモーター配列；ヒトＥＦ１アルファ遺伝子のイントロン配列；ｍＲＮＡ安定性のためのＳＶ４０からの転写終結及びＲＮＡプロセシングシグナル；適切なエピソーム複製のためのＳＶ４０ポリオーマウイルス複製起点及びＣｏｌＥ１；配列内リボソーム結合部位（ＩＲＥＳ）、多目的な複数のクローニング部位；試験管内でのセンス及びアンチセンス鎖ＲＮＡの転写のためのＴ７及びＳＰ６ ＲＮＡプロモーター；誘因があるとベクターを保有する細胞の死滅を引き起こす「自殺スイッチ」または「自殺遺伝子」（例えば、ＨＳＶチミジンキナーゼまたは誘導性カスパーゼ、例えばｉＣａｓｐ９）、及び共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドの発現を評価するためのレポーター遺伝子。

【0149】

１つの具体的実施形態において、そのようなベクターは自殺遺伝子も含む。本明細書中で使用する場合、「自殺遺伝子」という用語は、自殺遺伝子が発現している細胞の死滅を引き起こす遺伝子を指す。自殺遺伝子は、当該遺伝子が発現する細胞に薬剤、例えば薬物に対する感受性を付与する遺伝子であり得、細胞を薬剤と接触させるかまたはそれに曝露した場合に細胞の死滅を引き起こす。自殺遺伝子は当技術分野において既知であり（例えば、Ｓｕｉｃｉｄｅ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃａｒｏｌｉｎｅ Ｊ．（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＵＫ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ａｔ ｔｈｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｕｔｔｏｎ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，２００４を参照されたい）、それには例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ニトロレダクターゼ、及びカスパーゼ、例えばカスパーゼ８が含まれる。

【0150】

導入遺伝子を含有するベクターの製造に適したベクター及び方法は当技術分野でよく知られており利用可能である。共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドの発現のためのベクターの作製の例は、例えばＵＳ２０１４／０１０６４４９の中に見つけることができ、参照によりこの全体を本明細書に援用する。

【0151】

本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸配列を含んでいるどのベクターも、本開示の範囲内に含まれる。そのようなベクター、またはその中に含まれている共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドをコードする配列は、宿主細胞内、例えば宿主免疫細胞内に任意の好適な方法によって送達され得る。ベクターを免疫細胞に送達する方法は当技術分野でよく知られており、これには、ＤＮＡ電気穿孔、ＲＮＡ電気穿孔、リポソームなどの試薬を使用するトランスフェクション、またはウイルス形質導入（例えば、レトロウイルス形質導入、例えばレンチウイルス形質導入）が含まれ得る。

【0152】

いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドの発現のためのベクターは、ウイルス形質導入（例えば、レトロウイルス形質導入、例えばレンチウイルスまたはガンマレトロウイルス形質導入）によって宿主細胞に送達される。ウイルスによる送達方法の例としては、組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０７９３６号、第ＷＯ９４／０３６２２号、第ＷＯ９３／２５６９８号、第ＷＯ９３／２５２３４号、第ＷＯ９３／１１２３０号、第ＷＯ９３／１０２１８号及び第ＷＯ９１／０２８０５号；米国特許第５，２１９，７４０号及び第４，７７７，１２７号；英国特許第２，２００，６５１号；ならびに欧州特許第０ ３４５ ２４２号を参照されたい）、アルファウイルス系ベクター、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／１２６４９号、第ＷＯ９３／０３７６９号、第ＷＯ９３／１９１９１号、第ＷＯ９４／２８９３８号、第ＷＯ９５／１１９８４号及び第ＷＯ９５／００６５５号を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの発現のためのベクターはレトロウイルスである。いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの発現のためのベクターはレンチウイルスである。

【0153】

レトロウイルス形質導入について記載した参考文献の例としては、Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，３９９，３４６号、Ｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ３３：１５３（１９８３）、Ｔｅｍｉｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，６５０，７６４号、Ｔｅｍｉｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，９８０，２８９号、Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：１１２０（１９８８）、Ｔｅｍｉｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，１２４，２６３号、１９９５年３月１６日公開のＤｏｕｇｈｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．による国際特許公開第ＷＯ９５／０７３５８号、及びＫｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８２：８４５（１９９３）が挙げられる。ＷＯ９５／０７３５８では、初代Ｂリンパ球の高効率の形質導入について記載されている。ＷＯ２０１６０４０４４１Ａ１も参照されたく、参照によりこれを、本明細書中で言及される目的及び主題のために援用する。

【0154】

共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドをコードするベクターを宿主細胞にウイルスベクターを使用して導入する例では、免疫細胞に感染できベクターを保有するウイルス粒子は、当技術分野で知られており例えばＷＯ１９９１／００２８０５Ａ２、ＷＯ１９９８／００９２７１Ａ１及び米国特許第６，１９４，１９１号の中に見つかり得る任意の方法によって製造され得る。ウイルス粒子は細胞培養上清から採集され、ウイルス粒子を免疫細胞に接触させる前に単離及び／または精製され得る。

【0155】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドのいずれかをコードするＲＮＡ分子は、従来の方法（例えば試験管内での転写）によって調製され得、その後、好適な宿主細胞、例えば本明細書に記載のものの中に既知の方法、例えば、Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １７：１０２７－１０３５によって導入され得る。

【0156】

ある場合には、共刺激ポリペプチドをコードする核酸、及び好適な抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸は別個の発現ベクターにクローニングされ得、これらが同時に、または順次、好適な宿主細胞に導入され得る。例えば、共刺激ポリペプチドを発現させるための発現ベクター（またはＲＮＡ分子）をまず宿主細胞に導入してもよく、共刺激ポリペプチドが発現しているトランスフェクトされた宿主細胞を試験管内で単離及び培養してもよい。その後、共刺激ポリペプチドが発現する宿主細胞に、好適なＣＡＲポリペプチドを発現させるための発現ベクター（またはＲＮＡ分子）が導入され得、両ポリペプチドが発現しているトランスフェクトされた細胞が単離され得る。別の例では、共刺激ポリペプチド及びＣＡＲポリペプチドを発現させるための各々の発現ベクター（例えばＲＮＡ分子）が同時に宿主細胞に導入され得、両ポリペプチドが発現しているトランスフェクトされた宿主細胞が慣例的方法論によって単離され得る。

【0157】

他の例では、共刺激ポリペプチドをコードする核酸、及び抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸は同じ発現ベクターにクローニングされ得る。ＣＡＲ及び共刺激ポリペプチドの発現のためのポリヌクレオチドも、（中でそのようなポリヌクレオチドが少なくとも１つの調節エレメントに機能可能に繋げられているベクターを含めて）本開示の範囲内に含まれる。本開示の有用なベクターの非限定的な例としては、例えばガンマレトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）及びレンチウイルスベクターを含めたレトロウイルスベクターなどのウイルスベクターが挙げられる。

【0158】

ある場合には、共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸（複数可）は、トランスポゾンによって宿主細胞内に送達され得る。ある場合には、コード核酸（複数可）は、遺伝子編集、例えば、ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮまたはメガヌクレアーゼによって宿主細胞内に送達され得る。

【0159】

ある場合には、本明細書に記載の核酸は２つのコード配列を含み得、片方は本明細書に記載の抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドをコードしており、もう片方は、共刺激経路を調節することができるポリペプチド（すなわち共刺激ポリペプチド）をコードしている。本明細書に記載の２つのコード配列を含む核酸は、２つのコード配列にコードされるポリペプチドが、独立した（及び物理的に別個の）ポリペプチドとして発現し得るように、構成され得る。この目的を達成するために、本明細書に記載の核酸は、第１及び第２コード配列の間に位置する第３ヌクレオチド配列を含有し得る。この第３ヌクレオチド配列は例えばリボソームスキッピング部位をコードし得る。リボソームスキッピング部位は、正常なペプチド結合形成を減じる配列である。この機序の結果として、１つのメッセンジャーＲＮＡからさらなるオープンリーディングフレームが翻訳される。この第３ヌクレオチド配列は、例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２ＡまたはＦ２Ａペプチドをコードし得る（例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１１；６（４）：ｅ１８５５６を参照されたい）。非限定的な例を挙げると、例示的なＰ２Ａペプチドは、
ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ 配列番号７２
のアミノ酸配列を有し得る。

【0160】

別の実施形態では、第３ヌクレオチド配列は配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードし得る。ＩＲＥＳは、末端依存的な方法で翻訳開始を可能にするＲＮＡエレメントであり、同じく１つのメッセンジャーＲＮＡからのさらなるオープンリーディングフレームの翻訳を可能にしている。あるいは、第３ヌクレオチド配列は、第２ポリペプチドの発現を制御する第２プロモーターをコードし得る。第３ヌクレオチド配列はまた、１つより多いリボソームスキッピング配列、ＩＲＥＳ配列、付加的プロモーター配列またはその組合せをコードするものであってもよい。

【0161】

核酸は、（限定されないが第４及び第５コード配列を含む）付加的コード配列も含み得、付加的コード配列にコードされるポリペプチドがさらなる独立した及び物理的に別個になったポリペプチドとして発現するように構成され得る。この目的のために、付加的コード配列は、１つ以上のリボソームスキッピング配列、ＩＲＥＳ配列または付加的プロモーター配列をコードする１つ以上のヌクレオチド配列によって他のコード配列から隔てられ得る。

【0162】

いくつかの例では、核酸（例えば本明細書に記載の発現ベクターまたはＲＮＡ分子）は、共刺激ポリペプチド（例えば本明細書に記載のもの）と好適な抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドとの両方のためのコード配列を含み得、２つのコード配列は任意の順序で、Ｐ２Ａペプチド（例えば、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ；配列番号７２）をコードする第３ヌクレオチド配列によって隔てられている。結果として、２つの別個のポリペプチドである共刺激ポリペプチドとＣＡＲとがそのような核酸から生成し得、この場合、Ｐ２Ａ部分であるＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号７３）は（上流のコード配列にコードされる）上流のポリペプチドと繋がっており、Ｐ２Ａペプチドからの残基Ｐは（下流のコード配列にコードされる）下流のポリペプチドと繋がっている。いくつかの例では、ＣＡＲポリペプチドが上流のものであり、共刺激ポリペプチドが下流のものである。他の例では、共刺激ポリペプチドが上流のものであり、ＣＡＲポリペプチドが下流のものである。

【0163】

いくつかの例では、上記核酸はさらに、コード配列の２つのセグメントの間、例えば上流のポリペプチドとＰ２Ａペプチドとの間にリンカー（例えばＧＳＧリンカー）をコードし得る。

【0164】

具体例において、本明細書に記載の核酸は、核酸がトランスフェクトされた宿主細胞の中でそれが２つの別個のポリペプチドを発現させるように構成される：（ｉ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、好適な抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（例えば配列番号１または配列番号２）、ペプチドリンカー（例えばＧＳＧリンカー）、及びＰ２Ａペプチド由来のＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧ（配列番号７３）セグメントを含有する、第１ポリペプチド、ならびに（ｉｉ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、Ｐ２Ａペプチド由来のＰ残基、及び共刺激ポリペプチド（例えば配列番号１２～７１のいずれか）を含有する、第２ポリペプチド。

【0165】

いくつかの例では、４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ（例えば、天然４－１ＢＢＬの変異体、例えば本明細書に記載のもの）、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ３０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＢＡＦＦＲまたはＣＤ２７などの共刺激ポリペプチドと組み合わせて抗ＧＰＣ３ ＣＡＲが遺伝子操作型免疫細胞に共発現する。他の例では、４－１ＢＢＬ（例えば、天然４－１ＢＢＬの変異体、例えば本明細書に記載のもの）、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０ＬまたはＴＬ１Ａなどの共刺激ポリペプチドと組み合わせてＣＡＲ構築物が遺伝子操作型免疫細胞に共発現する。あるいは、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＡＲが、同じくＣＤ２８共刺激ドメインを含む共刺激ポリペプチドと組み合わされて遺伝子操作型免疫細胞に共発現し得る。

【0166】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドはＣＤ２８共刺激分子の共刺激ドメインを含み、共刺激ポリペプチドは、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＢＡＦＦＲ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２７、４－１ＢＢ、またはＩＣＯＳである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチドはＣＤ２８共刺激分子の共刺激ドメインを含み、共刺激ポリペプチドはＢＡＦＦＲまたはＣＤ２７である。ＣＤ２８共刺激分子は配列番号１２のアミノ酸配列を含み得る。ＢＡＦＦＲは配列番号３１のアミノ酸配列を含み得、ＣＤ２７は配列番号３３のアミノ酸配列を含み得る。

【0167】

他の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは４－１ＢＢ共刺激分子の共刺激ドメインを含み、共刺激ポリペプチドは、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０Ｌ、ＢＡＦＦＲ、ＣＤ２７またはＯＸ４０である。他の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは４－１ＢＢ共刺激分子の共刺激ドメインを含み、共刺激ポリペプチドは、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌである。４－１ＢＢ共刺激分子は配列番号２２のアミノ酸配列を含み得る。ＣＤ７０は配列番号３４のアミノ酸配列を含み得、ＬＩＧＨＴは配列番号４３のアミノ酸配列を含み得、ＯＸ４０Ｌは配列番号４７のアミノ酸配列を含み得る。

【0168】

他の実施形態では、４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ（例えば、天然４－１ＢＢＬの変異体、例えば本明細書に記載のもの）、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ３０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＢＡＦＦＲ（例えば、天然ＢＡＦＦＲの変異体、例えば本明細書に記載のもの）またはＣＤ２７などの共刺激ポリペプチドと組み合わせて、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ、例えば配列番号１が遺伝子操作型免疫細胞に共発現する。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳＬ、ＢＡＦＦＲ（例えば、天然ＢＡＦＦＲの変異体、例えば本明細書に記載のもの）、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ３０ＬまたはＣＤ２７の共刺激ポリペプチドと組み合わせて、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ、例えば配列番号１が遺伝子操作型免疫細胞に共発現する。

【0169】

さらに他の実施形態では、４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ（例えば、天然４－１ＢＢＬの変異体、例えば本明細書に記載のもの）、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ３０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＢＡＦＦＲ（例えば、天然ＢＡＦＦＲの変異体、例えば本明細書に記載のもの）またはＣＤ２７などの共刺激ポリペプチドと組み合わされた、ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ、例えば配列番号２が遺伝子操作型免疫細胞に共発現する。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳＬ、ＢＡＦＦＲ（例えば、天然ＢＡＦＦＲの変異体、例えば本明細書に記載のもの）、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ３０ＬまたはＣＤ２７の共刺激ポリペプチドと組み合わせて、ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ、例えば配列番号２が遺伝子操作型免疫細胞に共発現する。

【0170】

あるいは、４－１ＢＢまたはＣＤ２８などの共刺激ドメインを含むＣＡＲが、同じく上記共刺激ドメインを含む共刺激ポリペプチドと組み合わされて遺伝子操作型免疫細胞に共発現し得る。他の実施形態では、４－１ＢＢまたはＣＤ２８などの共刺激ドメインを含むＣＡＲが、異なる共刺激ポリペプチド、例えば、４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ（例えば、天然４－１ＢＢＬの変異体、例えば本明細書に記載のもの）、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ３０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＢＡＦＦＲまたはＣＤ２７と組み合わされて遺伝子操作型免疫細胞に共発現し得る。

【0171】

いくつかの実施形態では、４－１ＢＢまたはＣＤ２８などの共刺激ドメイン及びヒンジドメインを含むＣＡＲが、同じく共刺激ドメインを含む共刺激ポリペプチドと組み合わされて遺伝子操作型免疫細胞に共発現し得る。いくつかの実施形態では、共刺激ドメイン、ヒンジドメイン及び共刺激ポリペプチドは、同じ共刺激分子、例えば４－１ＢＢまたはＣＤ２８からのものである。いくつかの実施形態では、共刺激ドメイン、ヒンジドメイン及び共刺激ポリペプチドは、異なる共刺激分子からのものである。あるいは、またはさらに、本明細書に開示されるＣＡＲ構築物は、ＣＤ８の膜貫通ドメインまたはその一部を含み得る。

【0172】

いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチド、例えば、４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ（例えば、天然４－１ＢＢＬの変異体、例えば本明細書に記載のもの）、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ３０Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＢＡＦＦＲ（例えば、天然ＢＡＦＦＲの変異体、例えば本明細書に記載のもの）またはＣＤ２７と組み合わせて、いかなるヒンジドメインも含まないＣＡＲが遺伝子操作型免疫細胞に共発現し得る。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳＬ、ＢＡＦＦＲ（例えば、天然ＢＡＦＦＲの変異体、例えば本明細書に記載のもの）、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ３０ＬまたはＣＤ２７の共刺激ポリペプチドと組み合わせて、いかなるヒンジドメインも含まないＣＡＲが遺伝子操作型免疫細胞に共発現し得る。

【0173】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ（例えば本明細書に記載のもの）、及び４－１ＢＢＬである共刺激ポリペプチドが遺伝子操作型免疫細胞に共発現し得る。ある場合には、４－１ＢＢＬは、天然に存在する４－１ＢＢＬ（例えばヒト４－１ＢＢＬ）の機能性変異体、例えば本明細書に開示される変異体のいずれか（例えば、４－１ＢＢＬ Ｑ８９Ａ、４－１ＢＢＬ Ｌ１１５Ａ、４－１ＢＢＬ Ｋ１２７Ａ、または４－１ＢＢＬ Ｑ２２７Ａ）であり得る。いくつかの例では、４－１ＢＢＬポリペプチドは、天然に存在する対応物の短縮型変異体であって細胞質側断片が欠損した当該短縮型変異体である。

【0174】

いくつかの実施形態では、遺伝子操作型免疫細胞（例えばＴ細胞）は、（ａ）４－１ＢＢ共刺激ドメイン（例えば配列番号１）またはＣＤ２８共刺激ドメイン（例えば配列番号２）を含むＣＡＲ構築物、及び（ｂ）（外来）共刺激分子、例えば本明細書に開示されるもの（例えば、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０ＬまたはＣＤ２７）が共発現するものであり、同じＣＡＲが発現するが外来共刺激分子が発現しない免疫細胞に比べてより高い生物活性（これはより高いＩＬ－２分泌によって証明され得る）及び／またはより高い増殖活性を発揮する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作型免疫細胞（例えばＴ細胞）は、（ａ）４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲを含むＣＡＲ構築物（例えば、配列番号１を含むＣＡＲ構築物）、及び（ｂ）ＣＤ７０が共発現するものである。いくつかの実施形態では、遺伝子操作型免疫細胞（例えばＴ細胞）は、（ａ）４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲを含むＣＡＲ構築物（例えば、配列番号１を含むＣＡＲ構築物）、及び（ｂ）ＬＩＧＨＴが共発現するものである。いくつかの実施形態では、遺伝子操作型免疫細胞（例えばＴ細胞）は、（ａ）４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲを含むＣＡＲ構築物（例えば、配列番号１を含むＣＡＲ構築物）、及び（ｂ）ＯＸ４０Ｌが共発現するものである。いくつかの実施形態では、遺伝子操作型免疫細胞（例えばＴ細胞）は、（ａ）ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＡＲ構築物（例えば、配列番号２を含むＣＡＲ構築物）、及び（ｂ）ＣＤ２７が共発現するものである。

【0175】

以下の実施例が示すように、共刺激分子と共に発現する場合にそのようなＣＡＲ構築物は、そのそれぞれの親ＣＡＲ構築物に比べて、改善された増殖；改善されたサイトカイン産生；インビボマウス腫瘍モデルにおける向上した有効性；高められたＴ細胞持続性；ＭＤＳＣ抑制に対する向上した耐性；及び／またはＴｒｅｇ抑制に対する向上した耐性を発揮する。ある場合には、関心対象の付加的ポリペプチドも宿主免疫細胞内に導入され得る。

【0176】

本明細書に提供される共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドのいずれかをコードするベクター、または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド及び／または共刺激ポリペプチド（例えばＲＮＡ分子）をコードする核酸を宿主細胞内に導入した後、細胞は、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの発現を可能にする条件の下で培養され得る。共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドをコードする核酸が調節可能なプロモーターによって調節される例では、宿主細胞は、調節可能なプロモーターが活性化される条件の下で培養され得る。いくつかの実施形態では、プロモーターは誘導性プロモーターであり、免疫細胞は誘導性分子の存在下、または誘導性分子が生成する条件の下で培養される。共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドが発現するか否かを判定することは、当業者にとって明白なことであろうし、既知の任意の方法、例えば、定量的逆転写酵素ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）による共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドをコードするｍＲＮＡの検出、またはウェスタンブロッティング、蛍光顕微鏡法及びフローサイトメトリーを含めた方法による共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドタンパク質の検出によって評価され得る。

【0177】

あるいは、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドの発現は、免疫細胞を対象に投与した後にインビボで起こり得る。本明細書中で使用する場合、「対象」という用語は、任意の哺乳動物、例えば、ヒト、サル、マウス、ウサギまたは飼育哺乳動物を指す。例えば、対象は霊長類であり得る。好ましい実施形態では、対象はヒトである。

【0178】

あるいは、本明細書に開示される免疫細胞のいずれかにおける共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ポリペプチドの発現は、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドをコードするＲＮＡ分子を導入することによって成し遂げられ得る。そのようなＲＮＡ分子は、試験管内での転写、または化学合成によって調製され得る。その後、ＲＮＡ分子は好適な宿主細胞、例えば免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞との両方）の中に例えば電気穿孔によって導入され得る。例えば、Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１７：１０２７－１０３５、及びＷＯ ＷＯ２０１３／０４０５５７に記載されている方法に従ってＲＮＡ分子を合成して宿主免疫細胞内に導入することができる。

【0179】

特定の実施形態では、共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドを含むベクター（複数可）またはＲＮＡ分子（複数可）はインビボで宿主細胞または免疫細胞に導入され得る。非限定的な例を挙げると、これは、本明細書に記載の１つ以上の共刺激ポリペプチド及び／または１つ以上のＣＡＲポリペプチドをコードするベクターまたはＲＮＡ分子を対象に（例えば静脈内投与によって）直接投与してインビボで共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドを含む宿主細胞を作り出すことによって成し遂げられ得る。

【0180】

本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドのいずれかが発現している宿主細胞を調製する方法は、宿主細胞をエクスビボで活性化させることも含み得る。宿主細胞を活性化させることは、宿主細胞を、細胞がエフェクター機能（例えば細胞傷害）を行うことができ得る活性化状態に刺激することを意味する。宿主細胞を活性化させる方法は、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの発現のために使用される宿主細胞の種類によって決まるであろう。例えば、エクスビボでＴ細胞を、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、ＩＬ－２、フィトヘマグルチニン、操作型人工刺激細胞もしくは粒子、またはその組合せを含むがこれらに限定されない１つ以上の分子の存在下で活性化させてもよい。操作型人工刺激細胞は、当技術分野で知られている人工の抗原提示細胞であり得る。例えば、Ｎｅａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．２０１７，２（１）：６８－７９、及びＴｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．２０１０，１６（４）：３７４－３８１を参照されたく、これをもって参照によりこれらの各々の関連する開示内容を本明細書中で言及される目的及び主題のために援用する。

【0181】

他の例では、ＮＫ細胞は、エクスビボで１つ以上の分子、例えば、４－１ＢＢリガンド、抗４－１ＢＢ抗体、ＩＬ－１５、抗ＩＬ－１５受容体抗体、ＩＬ－２、ＩＬ１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、Ｋ５６２細胞、及び／または操作型人工刺激細胞もしくは粒子の存在下で活性化され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドのいずれかが発現している宿主細胞（ＣＡＲ及び／または共刺激ポリペプチド発現細胞）を、対象への投与の前にエクスビボで活性化させる。宿主細胞が活性化されているか否かを判定することは、当業者にとって明白なことであろうし、細胞活性化、サイトカインの発現または分泌、及び細胞形態学に関連する１つ以上の細胞表面マーカーの発現を評価することを含み得る。

【0182】

本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドのいずれかが発現している宿主細胞を作製する方法は、宿主細胞をエクスビボで増殖させることを含み得る。宿主細胞を増殖させることは、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドが発現している細胞の数の増加をもたらす任意の方法、例えば、宿主細胞が増殖するのを可能にすること、または宿主細胞を刺激して増殖させることを伴い得る。宿主細胞の増殖を刺激する方法は、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの発現のために使用される宿主細胞の種類によって決まるであろうし、当業者にとって明白であろう。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドのいずれかが発現している宿主細胞を対象への投与の前にエクスビボで増殖させる。

【0183】

いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドが発現している宿主細胞を、対象への細胞の投与の前にエクスビボで増殖及び活性化させる。宿主細胞の活性化及び増殖は、ゲノム中へのウイルスベクターの組込み、ならびに本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドをコードする遺伝子の発現を可能にするために用いられ得る。ｍＲＮＡ電気穿孔を用いる場合は活性化及び／または増殖を必要としなくてもよいものの、活性化された細胞に電気穿孔を実施する方がより効果的であり得る。ある場合には、好適な宿主細胞において一過的に（例えば３～５日間）共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドを発現させる。一過的発現は、毒性の可能性がある場合に有益であり得、副作用の可能性についての初期段階の臨床試験において役立つはずである。

【0184】

共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドが発現している宿主細胞のいずれかを薬学的に許容される担体と混合して医薬組成物を形成してもよく、これも本開示の範囲内に含まれる。

【0185】

本開示の組成物に関連して使用する場合、「薬学的に許容される」という語句は、哺乳動物（例えばヒト）に投与した場合に生理学的に忍容され、通常は望ましくない反応を生じない、分子実体及びそのような組成物の他の成分を意味する。好ましくは、「薬学的に許容される」という用語は、本明細書中で使用される場合、連邦または州政府の規制機関によって承認されていること、または哺乳動物、より詳しくはヒトにおける使用に関して米国薬局方もしくは他の一般に認知される薬局方に載録されていることを意味する。「許容される」は、担体が組成物の活性成分（例えば、核酸、ベクター、細胞または治療抗体）に適合しており、組成物（複数可）が投与される対象に悪影響を及ぼさないことを意味する。本発明において使用される医薬組成物のいずれかは、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤を凍結乾燥製剤または水溶液の形態で含み得る。

【0186】

薬学的に許容される担体は、緩衝剤を含めて、当技術分野でよく知られており、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含めた酸化防止剤；保存剤；低分子量ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；アミノ酸；疎水性ポリマー；単糖類；二糖類；及び他の炭水化物；金属錯体；及び／または非イオン性界面活性剤を含み得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０^th Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒを参照されたい。

【0187】

本開示の医薬組成物は、治療する特定の適応症のために必要な１つ以上の付加的活性化合物、好ましくは、互いに対する悪影響がなく相補的な活性を有するものを含有していてもよい。考えられる付加的活性化合物の非限定的な例としては、例えば、ＩＬ－２、ならびに当技術分野で知られている及び以下の併用治療についての記述の中で列挙される様々な薬剤が挙げられる。

【0188】

ＩＶ．本明細書に記載の遺伝子操作型造血細胞を使用する免疫療法
共刺激ポリペプチド及び抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドが共発現している遺伝子操作型宿主細胞、例えば造血細胞、例えば本明細書に記載の免疫細胞を、ＣＡＲポリペプチドの標的となる抗原が発現している疾患細胞を直接的または間接的に（例えば、ＣＡＲポリペプチドが結合するタグに複合した治療剤によって）阻害するための免疫療法、例えばＴ細胞療法またはＮＫ細胞療法に使用することができる。免疫細胞にＣＡＲポリペプチドと共に共発現した共刺激ポリペプチドは、腫瘍微小環境において低グルコース、低アミノ酸、低ｐＨ及び／または低酸素環境下で細胞が効果的に成長及び／または機能するのを可能にすることによって細胞免疫療法を容易にするであろう。非腫瘍特異的な反応の可能性を制限するためにｍＲＮＡ電気穿孔を用いて共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドを一過的に発現させることによって、臨床上の安全性がさらに強化され得る。

【0189】

本明細書に記載の方法は、治療的有効量の、本開示の共刺激ポリペプチド及びＣＡＲポリペプチドが共発現する遺伝子操作型宿主細胞、例えば免疫細胞（例えばＴリンパ球またはＮＫ細胞）を対象に導入することを含み得る。対象（例えば、ヒト患者、例えばヒトがん患者）は、抗がん療法剤を含むがこれに限定されない抗がん療法で付加的に治療されたことがあってもよいし、またはそれで治療されていてもよい。

【0190】

本開示に関して、それが本明細書中に挙げられた病態のいずれかに関するものである限り、「治療する」、「治療」などの用語は、そのような症状に関連する少なくとも１つの症候を軽減もしくは緩和する、またはそのような症状の進行を減速もしくは逆転させることを意味する。本開示の趣意の範囲内で、「治療する」という用語はまた、発症（すなわち疾患の臨床的出現に先立つ期間）を阻止すること、遅らせること、及び／または疾患の発展もしくは悪化のリスクを減らすことも意味する。例えば、がんとの関連において、「治療する」という用語は、患者の腫瘍負荷をなくすかもしくは軽減すること、または転移を防止するか、遅らせるか、もしくは阻害することなどを意味し得る。

【0191】

本明細書中で使用する場合、用量または量に対して適用される「治療的に有効な」という用語は、必要とする対象に投与した時に所望の活性をもたらすのに十分な、化合物または医薬組成物のその量を意味する。活性成分の合剤（例えば、共刺激ポリペプチド及び／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物が発現するＴリンパ球またはＮＫ細胞の集団を含む医薬組成物と、付加的抗がん治療薬）を投与する場合に合剤の有効量が、個々に投与された場合に有効となるであろう各成分の量を含んでいてもいなくてもよいことに留意されたい。本開示との関連の中で、「治療的に有効な」という用語は、本開示の方法で治療する障害の出現を遅らせること、その進行を阻止すること、その少なくとも１つの症候を軽減または緩和することにおいて十分となる、化合物または医薬組成物のその量を意味する。

【0192】

Ａ．細胞免疫療法の有効性の強化
本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドが発現している宿主細胞（例えば免疫細胞、例えばＴ細胞及びＮＫ細胞）は、標的抗原が発現している細胞を阻害する及び／または例えば腫瘍微小環境において低グルコース環境、低アミノ酸環境、低ｐＨ環境及び／または低酸素環境の下で免疫細胞の成長及び／または増殖を増強するのに有用である。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物、例えば、ヒト、サル、マウス、ウサギまたは飼育哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象はヒトがん患者である。いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に記載の治療抗体のいずれかで付加的に治療されたことがある、またはそれで治療されている。

【0193】

本明細書に記載の方法を実施するために、有効量の、本明細書に記載の共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドのいずれかが発現している免疫細胞（ＮＫ細胞及び／またはＴリンパ球）またはその組成物は、治療を必要とする対象に好適な経路、例えば静脈内投与によって投与され得る。本明細書中で使用する場合、有効量は、投与された時に対象に治療効果を与える各薬剤（例えば、共刺激ポリペプチド、ＣＡＲポリペプチドが発現しているＮＫ細胞及び／またはＴリンパ球、またはその組成物）の量を指す。本明細書に記載の細胞または組成物の量が治療効果をもたらしたか否かの判定は、当業者にとって明白であろう。有効量は、当業者によって認識されるように、治療する特定の症状、症状の重症度、個々の患者のパラメータ、例えば、年齢、身体的状態、サイズ、社会的性別、性別及び体重、治療の継続期間、（もしあれば）現行の療法の性質、具体的な投与経路、ならびに医師の知識及び見解の範囲内に含まれる同様の因子によって様々である。いくつかの実施形態では、有効量は、ＧＰＣ３⁺細胞に関連のある対象における任意の疾患または障害の症候を、緩和する、軽減する、改善する、好転させる、減らす、またはその進行を遅らせる。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、治療を必要とする対象はヒトがん患者である。

【0194】

本開示の方法は任意のがんまたは任意の病原体の治療のために用いられ得る。本開示の方法によって治療され得るがんの非限定的な具体例としては、例えば、乳癌、胃癌、肺癌、皮膚癌、前立腺癌、大腸癌、腎細胞癌腫、卵巣癌、横紋筋肉腫、胚細胞癌、肝芽腫、中皮腫、膵臓癌、頭頸部癌、神経膠腫、神経膠芽腫、甲状腺癌、肝細胞癌、食道癌及び子宮頸癌が挙げられる。特定の実施形態では、がんは、固形乳癌、肺癌または肝細胞癌であり得る。特定の実施形態では、がんは固形腫瘍であり得る。

【0195】

本開示の方法は、細菌感染、ウイルス感染または真菌感染によって引き起こされ得る感染性疾患を治療するためにも用いられ得る。そのような場合、遺伝子操作型免疫細胞は、病原性抗原（例えば、感染症を引き起こす細菌、ウイルスまたは真菌に関連する抗原）を標的とするＦｃ含有治療剤（例えば抗体）と併用され得る。病原性抗原の非限定的な具体例としては、細菌性、ウイルス性及び真菌性の抗原が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例を以下に示す：インフルエンザウイルスのノイラミニダーゼ、ヘマグルチニンもしくはＭ２タンパク質、ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ｆ糖タンパク質またはＧ糖タンパク質、単純ヘルペスウイルス糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤもしくはｇＥ、クラミジアＭＯＭＰもしくはＰｏｒＢタンパク質、デングウイルスコアタンパク質、マトリックスタンパク質もしくは糖タンパク質Ｅ、麻疹ウイルスヘマグルチニン、単純ヘルペスウイルス２型糖タンパク質ｇＢ、Ｉ型ポリオウイルスＶＰ１、ＨＩＶ１のエンベロープ糖タンパク質、Ｂ型肝炎コア抗原もしくは表面抗原、ジフテリア毒素、連鎖球菌２４Ｍエピトープ、淋菌ピリン、仮性狂犬病ウイルスｇ５０（ｇｐＤ）、仮性狂犬病ウイルスＩＩ（ｇｐＢ）、仮性狂犬病ウイルスＩＩＩ（ｇｐＣ）、仮性狂犬病ウイルス糖タンパク質Ｈ、仮性狂犬病ウイルス糖タンパク質Ｅ、伝染性胃腸炎糖タンパク質１９５、伝染性胃腸炎マトリックスタンパク質、またはヒトＣ型肝炎ウイルス糖タンパク質Ｅ１もしくはＥ２。

【0196】

いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３が発現している細胞を少なくとも２０％及び／または少なくとも２倍阻害すること、例えば、標的抗原が発現している細胞を５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍またはそれ以上阻害することに有効な量の免疫細胞を、対象に投与する。

【0197】

付加的治療剤（例えば抗体系免疫療法剤）を使用して、当該治療剤が対象に有用であると考えられる任意の疾患または障害の症候を治療、緩和または軽減してもよい。

【0198】

本明細書に記載の細胞免疫療法の有効性は、当技術分野で知られており技能を有する医療従事者にとって明白であろう任意の方法によって評価され得る。例えば、細胞免疫療法の有効性は、対象の生存、あるいは対象またはその組織もしくは試料における腫瘍またはがん負荷によって評価され得る。いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドが発現している免疫細胞の非存在下での有効性と比較して細胞免疫療法の有効性を少なくとも２０％及び／または少なくとも２倍強化すること、例えば、細胞免疫療法の有効性を５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍またはそれ以上強化することに有効な量の免疫細胞を、治療を必要とする対象に投与する。

【0199】

本明細書に記載の組成物または方法のいずれかにおいて、免疫細胞（例えばＮＫ及び／またはＴ細胞）は、対象に対して自家性であり得、つまり、免疫細胞は、治療を必要とする対象から得られ得、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの発現のために遺伝子操作され得、その後、同じ対象に投与され得る。１つの具体例では、自家免疫細胞（例えばＴリンパ球またはＮＫ細胞）を、対象に再導入する前にエクスビボで活性化及び／または増殖させる。対象への自家細胞の投与は、非自家細胞の投与と比較して宿主細胞の拒絶反応の軽減をもたらし得る。

【0200】

あるいは、宿主細胞は同種異系細胞であり、つまり、細胞は第１対象から得られ、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドの発現のために遺伝子操作され、種が同じであるが第１対象とは異なる第２対象に投与される。例えば、同種異系免疫細胞は、ヒトドナーに由来するものであり得、ドナーとは異なるヒトレシピエントに投与され得る。具体的な実施形態において、Ｔリンパ球は、内在性Ｔ細胞受容体の発現が阻害または排除された同種異系Ｔリンパ球である。１つの具体例では、同種異系Ｔリンパ球を、対象に導入する前にエクスビボで活性化及び／または増殖させる。Ｔリンパ球は、当技術分野で知られている任意の方法で、例えば、抗ＣＤ３／ＣＤ２８、ＩＬ－２、フィトヘマグルチニン、操作型人工刺激細胞もしくは粒子、またはそれらの組合せの存在下で、活性化され得る。

【0201】

ＮＫ細胞は、当技術分野で知られている任意の方法で、例えば、ＣＤ１３７リガンドタンパク質、ＣＤ１３７抗体、ＩＬ－１５タンパク質、ＩＬ－１５受容体抗体、ＩＬ－２タンパク質、ＩＬ－１２タンパク質、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１タンパク質、及びＫ５６２細胞株、及び／または操作型人工刺激細胞もしくは粒子からなる群から選択される１つ以上の薬剤の存在下で、活性化され得る。ＮＫ細胞を増殖させる有用な方法の説明については、例えば、米国特許第７，４３５，５９６号及び第８，０２６，０９７号を参照されたい。例えば、本開示の組成物または方法に使用するＮＫ細胞は、好ましくは、主要組織適合性複合体Ｉ及び／またはＩＩ分子の発現が欠損しているかまたは乏しく、膜結合ＩＬ－１５及び４－１ＢＢリガンド（ＣＤＩ３７Ｌ）が発現するように遺伝子改変されている細胞への曝露によって増殖され得る。そのような細胞株としては、Ｋ５６２［ＡＴＣＣ、ＣＣＬ２４３；Ｌｏｚｚｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ４５（３）：３２１－３３４（１９７５）、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １８：４２１－４３１（１９７６）］、及びウィルムス腫瘍細胞株ＨＦＷＴ（Ｆｅｈｎｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０（３－４）：５０３－５３４（２００１）、Ｈａｒａｄａ Ｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ ３２（７）：６１４－６２１（２００４））、子宮内膜癌細胞株ＨＨＵＡ、メラノーマ細胞株ＨＭＶ－ＩＩ、肝芽腫細胞株ＨｕＨ－６、肺小細胞癌細胞株Ｌｕ－１３０及びＬｕ－１３４－Ａ、神経芽腫細胞株ＮＢ１９及びＮ１３６９、精巣由来胎児性癌細胞株ＮＥＣ１４、子宮頸癌細胞株ＴＣＯ－２、及び骨髄転移神経芽腫細胞株ＴＮＢ１［Ｈａｒａｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ９３：３１３－３１９（２００２）］が挙げられるが、必ずしもこれらに限定されない。好ましくは、使用する細胞株は、Ｋ５６２及びＨＦＷＴ細胞株のように、ＭＨＣ Ｉ及びＩＩ分子の発現が両方とも欠損しているかまたは乏しい。固体担体を細胞株の代わりに使用してもよい。好ましくは、そのような担体の表面には、ＮＫ細胞と結合することならびに一次活性化事象及び／または増殖応答を誘発することができ、またはそのような作用を有する分子と結合することができ、それによって足場の役割を果たす、少なくとも１つの分子が結合しているべきである。担体は、その表面にＣＤ１３７リガンドタンパク質、ＣＤ１３７抗体、ＩＬ－１５タンパク質またはＩＬ－１５受容体抗体が結合したものであってもよい。担体は、その表面にＩＬ－１５受容体抗体及びＣＤ１３７抗体が結合したものであることが好ましかろう。

【0202】

記載の組成物または方法の一実施形態では、対象へのＴリンパ球、ＮＫ細胞、またはＴリンパ球とＮＫ細胞の導入（または再導入）の後に、治療的有効量のＩＬ－２を対象に投与する。

【0203】

本開示によれば、患者は、体重１キログラムあたり細胞約１０⁵～１０¹⁰個またはそれ以上（細胞／Ｋｇ）の範囲の治療的有効用量の、本開示の共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドを含む免疫細胞、例えばＴリンパ球またはＮＫ細胞を輸注することによって治療され得る。輸注は、患者が忍容できる頻度及び回数で、所望の応答が得られるまで繰り返され得る。適切な輸注用量及びスケジュールは患者によって様々であろうが、特定の患者の治療医師によって決定され得る。典型的には、およそ１０⁶細胞／Ｋｇの初回用量を輸注して１０⁸細胞／Ｋｇ以上まで漸増させることになる。輸注された細胞を増殖させるためにＩＬ－２が共投与され得る。ＩＬ－２の量は、体表面１平方メートルあたり約１～５×１０⁶国際単位であり得る。

【0204】

「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内であることを意味するが、これは部分的には値の測定または決定される方法、つまり測定システムの限界によって決まるであろう。例えば、「約」は、当技術分野の慣習によれば、許容される標準偏差の範囲内に入ることを意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値の±２０％以内、好ましくは±１０％以内、より好ましくは±５％以内、さらにいっそう好ましくは±１％以内の範囲を意味し得る。あるいは、とりわけ生物学的システムまたはプロセスに関して、当該用語は値の１桁以内、好ましくは２倍以内を意味し得る。本明細書及び特許請求の範囲に特定の値を記載している場合、特に指定がない限り、「約」という用語が暗に含まれており、これに関して特定の値の許容誤差範囲内に入っていることを意味する。

【0205】

本明細書に記載の組成物または方法の有効性は、当技術分野で知られており技能を有する医療従事者にとって明白であろう任意の方法によって評価され得る。例えば、本明細書に記載の組成物または方法の有効性は、対象の生存、あるいは対象またはその組織もしくは試料におけるがんまたは病原体負荷によって評価され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、対象における療法（例えば、共刺激ポリペプチド及びＣＡＲポリペプチドが発現している免疫細胞の投与）の安全性または毒性に基づいて、例えば対象の健康全般及び／または有害事象もしくは重度の有害事象の存在によって、評価され得る。

【0206】

Ｂ．併用治療
本開示に記載の組成物及び方法は、がんのための他の種類の療法、例えば、化学療法、外科手術、放射線、遺伝子療法など、または抗感染症療法と併せて利用され得る。そのような療法は、本開示に係る免疫療法と同時に、または逐次的に（任意の順序で）施され得る。付加的治療剤と共投与する場合、各薬剤の好適な治療的有効投薬量は相加作用または相乗作用ゆえに低くなり得る。

【0207】

ある場合には、本明細書に開示される共刺激ポリペプチド及び／または抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドのいずれかが発現している免疫細胞（例えばＴリンパ球及び／またはＮＫ細胞）は、付加的治療剤（例えば付加的抗がん療法剤）で治療されたことがあるかまたはそれで治療されている対象に投与され得る。例えば、免疫細胞を付加的治療剤と同時にヒト対象に投与してもよい。あるいは、免疫細胞を付加的治療剤の前にヒト対象に投与してもよい。あるいは、免疫細胞を付加的治療剤の後にヒト対象に投与してもよい。

【0208】

共刺激ポリペプチドと、タグに対して特異的であるＣＡＲポリペプチドとが共発現する遺伝子操作型免疫細胞（例えばＴ細胞またはＮＫ細胞）を、タグに複合した治療剤と併用してもよい。腫瘍細胞などの疾患細胞に関連する抗原に結合することができる治療剤によって、そのような遺伝子操作型免疫細胞は、疾患細胞に係合してその成長を阻害することができる。

【0209】

本開示の治療は、他の免疫調節治療、例えば、（ＧＶＡＸ、ＤＣ系ワクチンなどを含むがこれらに限定されない）治療ワクチン、（ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３などを遮断する薬剤を含むがこれらに限定されない）チェックポイント阻害剤、（例えばＡＤＣＣまたはＡＤＣのための）治療抗体、または（４１ＢＢ、ＯＸ４０などを強化する薬剤を含むがこれらに限定されない）活性化剤と併用され得る。

【0210】

本開示の免疫療法と併用するのに有用な他の治療剤の非限定的な例としては、（ｉ）抗血管新生剤（例えば、ＴＮＰ－４７０、血小板第４因子、トロンボスポンジン－１、メタロプロテアーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ１及びＴＩＭＰ２）、プロラクチン（１６－Ｋｄ断片）、アンジオスタチン（プラスミノーゲンの３８－Ｋｄ断片）、エンドスタチン、ｂＦＧＦ可溶性受容体、形質転換成長因子ベータ、インターフェロンアルファ、可溶性ＫＤＲ及びＦＬＴ－１受容体、胎盤プロリフェリン関連タンパク質、及びＣａｒｍｅｌｉｅｔ ａｎｄ Ｊａｉｎ（２０００））によって列挙されているもの；（ｉｉ）ＶＥＧＦ拮抗薬またはＶＥＧＦ受容体拮抗薬、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦ変異体、可溶性ＶＥＧＦ受容体断片、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲを遮断することができるアプタマー、抗ＶＥＧＦＲ中和抗体、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼの阻害剤、及びその任意の組合せ；ならびに（ｉｉｉ）化学療法薬化合物、例えば、ピリミジン類縁体（５－フルオロウラシル、フロキシウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン及びシタラビン）、プリン類縁体、葉酸拮抗薬及び関連する阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））など；抗増殖／抗有糸分裂剤、例えば、天然物、例えば、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビン）、微小管妨害薬、例えばタキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン及びナベルビン、エピジポドフィロトキシン（エトポシド及びテニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミン オキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メルクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、トリエチレンチオホスホラミド及びエトポシド（ＶＰ１６））；抗生物質、例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）及びマイトマイシン；酵素（Ｌ－アスパラギンを全身的に代謝し、自らのアスパラギンを合成する能力を有さない細胞を除去するＬ－アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖／抗有糸分裂性アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミド及び類縁体、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミン及びメチルメラミン（ヘキサメチルメラミン及びチオテパ）、アルキルスルホナート－ブスルファン、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及び類縁体、ストレプトゾシン）、トラゼン－ダカルバジニン（ＤＴＩＣ）；抗増殖／抗有糸分裂性代謝拮抗薬、例えば、葉酸類縁体（メトトレキサート）；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類縁体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）及びアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝血剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩及び他のトロンビン阻害剤）；線維素溶解剤（例えば、組織プラスミノーゲン活性化剤、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼ）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗転移剤；抗分泌剤（ブレフェルジン）；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管新生化合物（例えば、ＴＮＰ－４７０、ゲニステイン、ベバシズマブ）及び成長因子阻害剤（例えば線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンジオテンシン受容体遮断薬；一酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ）；細胞周期阻害剤及び分化誘導剤（トレチノイン）；ＡＫＴ阻害剤（例えば、ＭＫ－２２０６ ２ＨＣｌ、ペリフォシン（ＫＲＸ－０４０１）、ＧＳＫ６９０６９３、イパタセルチブ（ＧＤＣ－００６８）、ＡＺＤ５３６３、ユプロセルチブ、アフレセルチブまたはトリシリビン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、ミトキサントロン、トポテカン及びイリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン及びプレドニゾロン）；成長因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能障害誘発剤及びカスパーゼ活性化剤；ならびにクロマチン妨害剤が挙げられる。

【0211】

さらなる有用な薬剤の例については、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５９．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，（２００５），Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｐ Ｄ Ｒ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ Ｎ．Ｊ．、Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，（２０００），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ Ｍｄ．、Ｂｒａｕｎｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１５．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，（２００１），ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ，ＮＹ、Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，（１９９２），Ｍｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒａｈｗａｙ Ｎ．Ｊ．も参照されたい。

【0212】

付加的治療剤の投与は、全身投与及び疾患部位（例えば腫瘍）への直接投与を含めた任意の好適な経路によって実施され得る。

【0213】

いくつかの実施形態では、方法は、対象に付加的治療剤を１回の用量で投与することを伴う。いくつかの実施形態では、方法は、対象に付加的治療剤を複数回の用量（例えば少なくとも２、３、４、５、６、７または８回の用量）で投与することを伴う。いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドが発現している免疫細胞の投与の約１、２、３、４、５、６または７日前に付加的治療剤の１回目の用量を対象に投与することとした複数回の用量で付加的治療剤を対象に投与する。いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドが発現している免疫細胞の投与の約２４～４８時間前の間に付加的治療剤の１回目の用量を対象に投与する。

【0214】

いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドが発現している免疫細胞の投与の前、及びその後続けて約２週間ごとに、付加的治療剤を対象に投与する。いくつかの実施形態では、付加的治療剤の最初の２回の用量を約１週間（例えば、約６、７、８または９日間）空けて投与する。特定の実施形態では、３回目及びその後の用量を約２週間ごとに投与する。

【0215】

本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、付加的治療剤の投与のタイミングはおおよそのものであり、指定日の３日前及び３日後を含む（例えば、３週間ごとの投与は、１８日目、１９日目、２０日目、２１日目、２２日目、２３日目または２４日目を包含する）。

【0216】

本明細書に記載の方法の有効性は、当技術分野で知られており技能を有する医療従事者にとって明白であろう任意の方法及び／または本明細書に記載のものによって評価され得る。例えば、細胞免疫療法の有効性は、対象の生存、あるいは対象またはその組織もしくは試料におけるがん負荷によって評価され得る。いくつかの実施形態では、細胞免疫療法は、対象における療法（例えば、共刺激ポリペプチド及び／またはＣＡＲポリペプチドが発現している免疫細胞の投与）の安全性または毒性に基づいて、例えば対象の健康全般及び／または有害事象もしくは重度の有害事象の存在によって、評価される。

【0217】

Ｖ．治療用途のためのキット
本開示は、本明細書に記載の組成物を使用するためのキットも提供する。例えば、本開示は、疾患細胞、例えば腫瘍細胞の成長を阻害する及び／または低グルコース環境、低アミノ酸環境、低ｐＨ環境及び／または低酸素環境で例えば腫瘍環境中で免疫細胞の成長及び／または増殖を増強するのに使用するための、共刺激ポリペプチドと抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドとが発現する共発現する免疫細胞（例えばＴリンパ球またはＮＫ細胞）の集団を含むキットも提供する。キットは、免疫細胞上に発現したＣＡＲポリペプチドに結合するものであるタグに複合した治療剤（例えば本明細書に記載のもの）をさらに含み得る。そのようなキットは、本明細書に記載されているような共刺激ポリペプチドとＣＡＲポリペプチドとが共発現するものである本明細書に記載の遺伝子操作型免疫細胞（例えばＴリンパ球及び／またはＮＫ細胞）の集団、及び任意選択のタグに複合した治療剤を含んだ、１つ以上の容器を含み得る。

【0218】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキットは、試験管内で増殖させるものである共刺激ポリペプチドが発現している及びＣＡＲが発現している免疫細胞、ならびに活性化Ｔ細胞上に存在する細胞表面抗体に対して特異的である抗体、例えば、抗ＣＤ５抗体、抗ＣＤ３８抗体または抗ＣＤ７抗体を含む。共刺激ポリペプチドが発現している及びＣＡＲが発現している免疫細胞には、当技術分野で知られているまたは本明細書中に開示されているＣＡＲのいずれかが発現し得る。

【0219】

あるいは、本明細書に開示されるキットは、同じく本明細書に記載されるＣＡＲポリペプチドのいずれか及び共刺激ポリペプチドのいずれかを全体としてコードする本明細書に記載の核酸または核酸セットを含み得る。

【0220】

いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法のいずれかにおける使用のための説明書をさらに含み得る。含まれる説明書は、意図した活性、例えば、対象における標的細胞成長の阻害、及び／または低グルコース環境、低アミノ酸環境（例えば低グルタミン環境）、低ｐＨ環境及び／または低酸素環境（例えば、低グルコース、低アミノ酸、低ｐＨまたは低酸素腫瘍微小環境）での免疫細胞の成長及び／または増殖の増強をもたらすための、対象への第１及び第２医薬組成物の投与についての説明を含み得る。キットはさらに、対象が治療を必要とするか否かを同定することに基づいた治療に適する対象の選択についての説明を含む。いくつかの実施形態では、説明書は、遺伝子操作型免疫細胞の集団を投与することについての説明を含み、任意選択的に、タグ複合治療剤を投与することについての説明を含む。

【0221】

本明細書に記載される免疫細胞及び任意選択のタグ複合治療剤の使用に関する説明書は大抵、投薬量、投薬スケジュール及び意図した治療のための投与経路についての情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装品（例えば複数回用量包装品）または単位未満の用量であり得る。本開示のキットの中に補充される説明書は、通常、ラベルまたは包装品添付物に記載された説明書である。ラベルまたは包装品添付物は、対象における疾患または障害を治療する、発症を遅らせる及び／または緩和するために医薬組成物が使用されることを示す。

【0222】

本明細書において提供されるキットは、好適な包装材の中に入っている。好適な包装材としては、バイアル、ボトル、広口瓶、可撓性包装材などが挙げられるが、これらに限定されない。特定の装置、例えば、吸入器、鼻腔内投与装置または輸注装置と組み合わせて使用するための包装品もさらに企図される。キットは、無菌的使用ポートを有し得る（例えば、容器は、静注液剤バッグ、または皮下注射針による穿刺が可能な栓を備えたバイアルであり得る）。容器もまた、無菌的使用ポートを有し得る。第１医薬組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載のＣＡＲポリペプチド及び共刺激ポリペプチドが発現する免疫細胞（例えばＴリンパ球またはＮＫ細胞）の集団である。

【0223】

キットは任意選択的に、付加的な構成要素、例えば、緩衝材及び解釈的情報を提供し得る。通常、キットは、容器、及び容器に付けられたかまたは関連付けられたラベルまたは包装品添付物（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、上記キットの内容物を含んだ製品を提供する。

【0224】

一般的技術
本開示の実施は、特に指定されない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来の技術を採用することになるが、これらは当業者の技量の範囲内である。そのような技術は、文献、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９８９）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）：Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．１９８５）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．（１９８５_>>；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４_>>；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８６_>>；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ｌＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６_>>；ａｎｄ Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）の中で十分に説明されている。

【0225】

さらなる労作をせずとも、当業者であれば上記説明に基づいて本開示を最大限に利用することができるものと考えられる。したがって、以下の具体的な実施形態は、単なる例示とみなされるべきであり、決して本開示の残部を限定するものではない。本明細書中で引用される全ての刊行物を参照により本明細書中で言及される目的及び主題のために援用する。

【実施例】

【0226】

実施例１：抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ変異体が発現しているＴ細胞の活性は共刺激ポリペプチドが共発現することによって増強される。
この実施例は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと組み合わせて腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ポリペプチドまたはＢ７／ＣＤ２８スーパーファミリーの共刺激ペプチドをＴ細胞に発現させることでＴ細胞の活性を抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ単独に比べて増強できることを実証する。

【0227】

これらの実験では、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ、配列番号１）のみをコードするか、ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８、配列番号１）のみをコードするか、またはこれらのＣＡＲ変異体の各々を共刺激ポリペプチドＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳＬ、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＬ１Ａ、ＢＡＦＦＲ、ＣＤ４０、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢと組み合わせてコードするウイルスをＴ細胞に形質導入した。形質導入されたＴ細胞を、増殖、サイトカイン放出、細胞傷害及び反復刺激を含む機能性アッセイのパネルで評価した（以下の実施例の中のアッセイの詳細を参照されたい）。この試験から得られた結果は、どちらかまたは両方の抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと上に列挙される共刺激ポリペプチドの１つ以上との組合せによってＴ細胞増殖が増強され、特定のサイトカインの産生が増加し、及び／または細胞傷害が増強されたことを示した。

【0228】

これらの実験は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと組み合わせて腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ポリペプチドまたはＢ７／ＣＤ２８スーパーファミリーの共刺激ペプチドをＴ細胞に発現させることでＴ細胞の活性を抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ単独に比べて増強できることを、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド及びＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドのどちらに関しても実証している。向上した活性を付与する共刺激ポリペプチドは、どのＣＡＲ変異体を同じＴ細胞に共発現させるかによって異なる。

【0229】

実施例２：反復刺激アッセイにおいて、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ及びＴＮＦ共刺激ポリペプチドが発現しているＴ細胞の活性の増強は、ＣＡＲ中の共刺激ドメインが何であるかによって決まる。
この実施例は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと組み合わせて腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ポリペプチドＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０ＬをＴ細胞に発現させることで、複数回の再刺激の条件下で標的細胞の存在下においてＴ細胞の活性が抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ単独に比べて増強されること、ならびにＣＡＲ中の共刺激ドメインが何であるかによって増強のレベルが決まることを実証する。これらの実験では、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ、配列番号１）のみ、ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８、配列番号２）のみ、またはこれらのＣＡＲ変異体の各々とＣＤ７０（配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）とがＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって隔てられたものをコードするウイルスを、Ｔ細胞に形質導入した。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが発現しているＴ細胞、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現している細胞を、抗ＣＤ７０抗体で染色することによってフローサイトメトリーでＣＤ７０の発現について評価した。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は、より高い蛍光強度によって証明される、より多くのＣＤ７０発現を示した（図１０、パネルＡ及びＢ）。

【0230】

形質導入されたＴ細胞（エフェクター）とＧＰＣ３発現Ｈｅｐ３Ｂ細胞（標的）とを２：１のエフェクター対標的比（１００，０００個のエフェクター細胞、５０，０００個の標的細胞）で、１０％のウシ胎仔血清が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中に含ませて２００μＬの反応体積でインキュベートした。反応物のインキュベーションは３７℃で５％ＣＯ₂のインキュベータ内で行った。３日または４日ごとに、（培地１００μＬ中の）５０，０００個の新鮮な標的細胞が入った新しいプレートに半量のＴ細胞を移すことによってＴ細胞を再刺激し、終体積を２００μＬに調整した。細胞の再刺激は３回行った。各時間点で、残存する細胞を抗ＣＤ３抗体及び生死判定染料で染色した。Ｔ細胞増殖の尺度としてＣＤ３陽性生細胞の数をフローサイトメトリーによって見積もった。前の時間点に対するＴ細胞増殖倍率を時間の関数としてプロットした（図１）。

【0231】

ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較して同程度のまたはより優れた増殖をどの回の刺激の後にも示した（図１、パネルＡ）。対照的に、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞と比較して同程度の増殖をどの回の刺激の後にも示した。ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢとＬＩＧＨＴとが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較して同程度のまたはより優れた増殖をどの回の刺激の後にも示した（図１、パネルＢ）。対照的に、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＣＤ２８とＬＩＧＨＴとが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞と比較して同程度の増殖をほとんどの時間点で示し、３回目の刺激の後に増殖の中等度の改善を示した。ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢとＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較して同程度のまたはより優れた増殖をどの回の刺激の後にも示した（図１、パネルＣ）。対照的に、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＣＤ２８とＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞と比較して同程度のまたは劣る増殖をほとんどの時間点で示し、３回目の刺激の後に増殖の中等度の改善を示した。

【0232】

これらの実験は、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０ＬのようなＴＮＦスーパーファミリーメンバーポリペプチドが、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲも発現するＴ細胞に共発現することで、複数回の再刺激の後にＴ細胞活性を増強できることを実証している。対照的に、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０Ｌは、抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８ ＣＡＲと共発現した場合にはＴ細胞の活性を増強しない。

【0233】

実施例３：４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＴＮＦスーパーファミリーメンバーポリペプチドＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞は反復刺激アッセイにおいて増殖及びサイトカイン放出の増強を示す。
この例は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと組み合わせて腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ポリペプチドＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０ＬをＴ細胞に発現させることでＴ細胞の活性が抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ単独に比べて増強されることを実証する。これらの実験では、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ、配列番号１）をコードするウイルス、またはＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって隔てられたＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０（配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）とをコードするウイルスを、Ｔ細胞に形質導入した。

【0234】

形質導入されたＴ細胞（エフェクター）とＧＰＣ３発現ＪＨＨ７細胞（標的）とを、２：１のエフェクター対標的比（１００，０００個のエフェクター細胞、５０，０００個の標的細胞）で、１０％のウシ胎仔血清が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中に含ませて２００μＬの反応体積でインキュベートした。反応物のインキュベーションは３７℃で５％ＣＯ₂のインキュベータ内で行った。３日または６日目に、（培地１００μＬ中の）５０，０００個の新鮮な標的細胞が入った新しいプレートに半量のＴ細胞を移すことによってＴ細胞を再刺激し、終体積を２００μＬに調整した。各時間点で、残存する細胞を抗ＣＤ３抗体及び生死判定染料で染色した。Ｔ細胞増殖の尺度としてＣＤ３陽性生細胞数をフローサイトメトリーによって見積もった。各回の再刺激の時間点で、前の時間点に対するＴ細胞増殖倍率を時間の関数としてプロットした（図２、パネルＡ）。

【0235】

２回目の刺激の２４時間後である４日目に上清を反応物から取り出し、サイトカイン産生について分析した。サイトカインの測定は、Ｕ－ＰＬＥＸアッセイキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を製造業者の説明書に従って使用して行った。ＩＬ－２、ＩＦＮ－ガンマ、及びＩＬ－１７Ａの測定結果を、３日目に測定したウェル内の細胞数を基準として正規化してｐｇ／ｍＬ／細胞の値を得、３日目の刺激の後に６日目の測定で測定して認められた増殖倍率の関数としてプロットした（図２、パネルＢ、Ｃ及びＤ）。

【0236】

ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０、ＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞は、最初の２回の刺激の後には同程度の増殖を示し、３回目の刺激の後にはより優れた増殖を示した（図２、パネルＡ）。ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３ ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０、ＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞は、より優れたＩＬ－２（図２、パネルＢ）、ＩＦＮ－ガンマ（図２、パネルＣ）及びＩＬ１７－Ａ（図２、パネルＤ）を２回目の刺激の２４時間後に示した。

【0237】

これらの実験は、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０ＬのようなＴＮＦスーパーファミリーメンバーポリペプチドが、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲも発現するＴ細胞に共発現することで、Ｔ細胞活性を増強できることを実証している。

【0238】

実施例４：４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＴＮＦスーパーファミリーメンバーポリペプチドＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞はサイトカイン放出及び増殖の増強を示す。

【0239】

この実施例は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと組み合わせて腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ポリペプチドＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０ＬをＴ細胞に発現させることでＴ細胞の活性が抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ単独に比べて増強されることを実証する。これらの実験では、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ、配列番号１）をコードするウイルス、またはＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって隔てられたＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０（配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）とをコードするウイルスを、Ｔ細胞に形質導入した。

【0240】

形質導入されたＴ細胞（エフェクター）とＧＰＣ３発現Ｈｅｐ３Ｂ細胞（標的）とを２：１のエフェクター対標的比（１００，０００個のエフェクター細胞、５０，０００個の標的細胞）で播種し、３７℃で５％ＣＯ₂のインキュベータ内で２４時間インキュベートした。上清を反応物から取り出し、ヒトＩＬ－２アッセイキット（Ｃｉｓｂｉｏ）を製造業者の説明書に従って使用してＩＬ－２について分析した。上清中のＩＬ－２の濃度を、試験した変異体の関数としてプロットした（図３、パネルＡ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０、ＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞はどれもより優れたＩＬ－２産生を実証した。

【0241】

形質導入されたＴ細胞（エフェクター）とＧＰＣ３発現ＨｅｐＧ２細胞（標的）とを１：１のエフェクター対標的比で混合し、３７℃で５％ＣＯ₂のインキュベータ内で１２日間インキュベートした。６日目及び１２日目に試料を採取し、生存率色素及び抗ＣＤ３抗体で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。Ｔ細胞増殖の尺度であるＣＤ３＋生細胞の数を、試験した変異体及び時間点の関数としてプロットした（図３、パネルＢ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較して、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０、ＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞は、６日目には同程度のレベルの増殖を示し、１２日目にはより優れた増殖を示した。

【0242】

これらの実験は、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０ＬのようなＴＮＦスーパーファミリーメンバーポリペプチドが、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲも発現するＴ細胞に共発現することで、Ｔ細胞活性を増強できることを実証している。

【0243】

実施例５：４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞に比べてより優れた活性を示す。
この実施例は、４－１ＢＢ主要共刺激ドメインを含有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ、配列番号１）と組み合わせた場合に共刺激ポリペプチドＣＤ７０（配列番号３４）が他の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーメンバーと比較して実質的な機能的利点をもたらすことを実証する。これらの実験では、ＣＡＲポリペプチド（配列番号１）のみ、またはＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって隔てられたＣＡＲポリペプチドとＣＤ７０（配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）とをコードするウイルスをＴ細胞に形質導入した。

【0244】

いくつかの実験では、形質導入されたＴ細胞Ｔ（エフェクター）とＨｅｐ３Ｂ細胞（標的）とを、２：１のエフェクター対標的比（１００，０００個のエフェクター細胞、５０，０００個の標的細胞）で、１０％の熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中に含ませて播種し、３～４日ごとに５０，０００個の新鮮な標的細胞で再刺激を行った。Ｕ－ＰＬＥＸアッセイキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を製造業者の説明書に従って使用して培養物上清からのサイトカイン産生（ＩＬ－１７Ａ）を経時測定した。ＩＬ－１７Ａレベルは実験を通してｐｇ／ｍＬで表される（図４のパネルＡ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞に比べてより優れたＩＬ－１７Ａ産生を示した。

【0245】

他の実験では、形質導入されたＴ細胞Ｔ（エフェクター）とＨｅｐ３Ｂ細胞（標的）とを、２：１のエフェクター対標的比（１００，０００個のエフェクター細胞、５０，０００個の標的細胞）で、１０％の熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中に含ませて播種し、７日ごとに５０，０００個の新鮮な標的細胞で再刺激を行い、経時的なＴ細胞増殖の尺度としてＣＤ３陽性細胞の数をフローサイトメトリーによって見積もった。ＣＡＲ Ｔ細胞の増殖は前の時間点に対する倍率変化として表される（図４のパネルＢ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞に比べてより優れた増殖を示した。

【0246】

他の実験では、形質導入されたＴ細胞（エフェクター）をＨｅｐＧ２標的細胞と共に、１：１のエフェクター対標的比（３０，０００個のエフェクター細胞、３０，０００個の標的細胞）で、１０％の熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中に含ませて播種し、１２日後にＴ細胞増殖の尺度としてＣＤ３陽性細胞数をフローサイトメトリーによって見積もった。Ｔ細胞の増殖はＣＤ３＋Ｔ細胞総計数によって表される（図４のパネルＣ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞に比べてより優れた増殖を示した。

【0247】

まとめると、実験は、４－１ＢＢ主要共刺激ドメインを含有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（配列番号１）と組み合わせた場合に共刺激ポリペプチドＣＤ７０（配列番号３４）が他の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーメンバーと比較して実質的な機能的利点をもたらすことを実証している。

【0248】

実施例６：ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＴＮＦスーパーファミリーメンバーポリペプチドＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞はサイトカイン放出及び増殖の増強を示す。

【0249】

この実施例は、ＣＤ２８主要共刺激ドメインを含有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８、配列番号２）と組み合わせた場合に共刺激ポリペプチドＣＤ２７（配列番号３３）が実質的な機能的利点をＴ細胞にもたらすことを実証する。これらの実験では、ＣＡＲポリペプチド（配列番号２）のみ、またはＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって隔てられたＣＡＲポリペプチドとＣＤ２７（配列番号３３）とをコードするウイルスをＴ細胞に形質導入した。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が発現しているＴ細胞、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７とが共発現している細胞をＣＤ２７発現についてフローサイトメトリーで抗ＣＤ２７抗体による染色によって評価した。より高い平均蛍光強度によって証明されるように、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞に比べてより多くのＣＤ２７表面発現を示した（図１０、パネルＣ及びＤ）。

【0250】

いくつかの実験では、Ｔ細胞とＨｅｐ３Ｂとを２：１のＥ：Ｔ比（６０，０００個のエフェクター細胞、３０，０００個の標的細胞）で、１０％の熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中に入れて混合し、その後、７日間インキュベートした。Ｔ細胞増殖をフローサイトメトリーによって測定した。ＣＤ３陽性細胞数をＴ細胞変異体の関数としてプロットした（図５、パネルＡ）。同様に、１０％の熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中に含まれたＨｅｐＧ２標的細胞による１：１のエフェクター対標的比（３０，０００個のエフェクター細胞、３０，０００個の標的細胞）での単回刺激の後のＴ細胞増殖も評価した（図５、パネルＢ）。これらの実験は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較してＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ及びＣＤ２７配列が発現しているＴ細胞が増殖を改善したことを実証している。

【0251】

いくつかの実験では、Ｔ細胞（エフェクター）とＨｅｐ３Ｂ細胞またはＨｅｐＧ２細胞（標的）とを４：１のエフェクター対標的比（１２０，０００個のエフェクター細胞、３０，０００個の標的細胞）で、１０％の熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中に入れて播種し、その後、２４時間インキュベートした。反応物上清からのＩＬ－２（Ｈｅｐ３Ｂ、図５、パネルＣ）及びＩＦＮ－ガンマ（ＨｅｐＧ２、図５、パネルＤ）を、それぞれヒトＩＬ－２アッセイキット（Ｃｉｓｂｉｏ）またはヒトＩＦＮ－ガンマアッセイキットアッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ）を製造業者の説明書に従って使用して測定した。これらの実験は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞と比較してＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ及びＣＤ２７配列が発現しているＴ細胞がサイトカイン産生を改善したことを実証している。

【0252】

この実施例は、ＣＤ２８主要共刺激ドメインを含有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと組み合わせた場合に共刺激ポリペプチドＣＤ２７が実質的な機能的利点をＴ細胞にもたらすことを実証している。

【0253】

実施例７：ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＴＮＦスーパーファミリーメンバーポリペプチドＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞は抑制性ＭＤＳＣ及び制御性Ｔ細胞の存在下で活性の増強を示す。
この実施例は、ＣＤ２８主要共刺激ドメインを含有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８、配列番号２）と組み合わせた場合に共刺激ポリペプチドＣＤ２７（配列番号３３）が、抑制性骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）または制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を含有するアッセイにおいて実質的な機能的利点をＴ細胞にもたらすことを実証する。これらの実験では、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８（配列番号２）のみ、またはＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって隔てられＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７（配列番号３３）とをコードするウイルスをＴ細胞に形質導入した。

【0254】

いくつかの実験では、ドナーが一致するＰＢＭＣからのＣＤ１４＋単球からＭＤＳＣを生成させた。手短に述べると、ＥａｓｙＳｅｐヒトＣＤ１４陽性選択キットＩＩ（Ｇｉｂｃｏ）を製造業者のプロトコールに従って使用してＣＤ１４陽性細胞を単離した。ＧＭＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）及びＰＧＥ₂（１ｎｇ／ｍＬ）の存在下、１０％のウシ胎仔血清が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中でＣＤ１４＋細胞を培養した。細胞のインキュベーションは３７度で６日間、ＣＯ₂（５％）インキュベータ内で行った。２日目に培養物にＧＭＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）及びＰＧＥ₂（１ｎｇ／ｍＬ）を補充し、４日目に培地を除去し、１０％のウシ胎仔血清が補充された新鮮なＲＰＭＩ１６４０培地、ならびにＧＭＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）及びＰＧＥ₂（１ｎｇ／ｍＬ）を補給した。ＭＤＳＣとしてアッセイに使用するために細胞を６日目に採集した。細胞をフローサイトメトリーによって特性評価してそれがＣＤ１４_low／ＨＬＡ－ＤＲ_low／ＣＤ３３_high／ＰＤＬ１_highであることを確認した。Ｔ細胞（エフェクター）とＨｅｐ Ｇ２細胞（標的）とを２：１のエフェクター対標的比（１００，０００個のエフェクター細胞、５０，０００個の標的細胞）で、３：１のエフェクター対ＭＤＳＣの存在下で播種し、３７℃＋５％ＣＯ₂で７日間インキュベートした。培養培地は、ＭＤＳＣによる活性化Ｔ細胞の貪食を阻止するために組換えアネキシンＶタンパク質（１μｇ／ｍＬ）を含有していた。ＣＡＲ＋ＣＤ３＋細胞の数をフローサイトメトリーによって見積もり、結果を、ＭＤＳＣなしでの最大応答に対するパーセントとして表した（図６、パネルＡ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞よりも高い応答を示し、ＭＤＳＣ抑制に打ち勝つ能力がより高いことが実証された。

【0255】

いくつかの実験では、ドナーが一致するＰＢＭＣから誘導性Ｔｒｅｇをラパマイシン及びｈＴＧＦ－ｂによって生成させ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣＤ４⁺／ＣＤ２５⁺／ＣＤ１２７^dim/-ヒト制御性Ｔ細胞単離キットＩＩを使用して単離した。Ｔ細胞（エフェクター）とＨｅｐ３ｂ細胞（標的）とを２：１のエフェクター対標的比（１００，０００個のエフェクター細胞、５０，０００個の標的細胞）で、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ標識ＣＡＲ－Ｔ細胞に対する様々な比率（１：１、１：２、１：４のＴｒｅｇ対ＣＡＲ－Ｔ細胞）のＴｒｅｇの存在下で播種し、３７℃＋５％ＣＯ₂で７日間インキュベートした。増殖の尺度としてＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ標識ＣＡＲ⁺細胞の数をフローサイトメトリーによって見積もった（図６のパネルＢ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞よりも多くの増殖を示し、Ｔｒｅｇ抑制に打ち勝つ能力がより高いことが実証された。

【0256】

まとめると、これらの実験は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞と比較してＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞が、ＭＤＳＣかＴｒｅｇかのどちらかによって働く免疫抑制に打ち勝つより優れた能力を示すことを実証している。

【0257】

実施例８：４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＴＮＦスーパーファミリーメンバーポリペプチドＣＤ７０、ＬＩＧＨＴまたはＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞はマウスの腫瘍異種移植モデルにおいて活性の増強を示す。
この実施例は、マウスのＧＰＣ３発現異種移植モデルにおいてＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢでの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ペプチドＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０Ｌの発現が、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ単独と比較して抗腫瘍活性の上昇をもたらすことを実証する。皮下ヒト肝細胞癌（ＨＣＣ）異種移植モデル（Ｈｅｐ Ｇ２、Ｈｅｐ ３ｂ、及びＪＨＨ７）をＮＳＧ（商標）（ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ ＩＬ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ、００５５５７系）マウスに樹立した。

【0258】

Ｈｅｐ Ｇ２ ＨＣＣ（ＡＴＣＣ ＨＢ－８０６５）異種移植片を右側腹部での５×１０⁶個の細胞の皮下注射によって樹立した。腫瘍体積がおよそ１００ｍｍ³に達した時（接種後１９日目）にＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置を開始した。腫瘍体積に基づいてマウスを無作為に各々マウス５匹の処置群に割り当て、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ（配列番号１）のみ、またはＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０（配列番号３４）、ＬＩＧＨＴ（配列番号４３）もしくはＯＸ４０Ｌ（配列番号４７）とが発現しているＴ細胞によって静脈内への５×１０⁵個のＣＡＲ＋細胞の用量で１日目及び８日目に処置した。実験の継続期間にわたって毎週２～３回、腫瘍体積及び体重を測定した。

【0259】

ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが発現しているＴ細胞、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＬＩＧＨＴとが共発現しているＴ細胞は、評価したＣＡＲ用量でＨｅｐ Ｇ２異種移植片に対して不活性であり、腫瘍成長は未処置対照と同程度であった（図７、パネルＡ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞よりも活性がある程度大きく、５匹の動物の間で応答にばらつきがあった。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は活性が高く、４０日目までに全ての動物に完全な腫瘍退縮をもたらし、その後全ての動物で再発があった。

【0260】

Ｈｅｐ ３ｂ ＨＣＣ（ＡＴＣＣ、ＨＢ－８０６４）異種移植片を右側腹部での５×１０⁶個の細胞の皮下注射によって樹立した。腫瘍体積がおよそ１００ｍｍ³に達した時（接種後２０日目）にＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置を開始した。腫瘍体積に基づいてマウスを無作為に各々マウス５匹の処置群に割り当て、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞、またはＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＬＩＧＨＴとが共発現しているＴ細胞によって静脈内への１×１０⁶個のＣＡＲ＋細胞の用量で１日目及び８日目に処置した。実験の継続期間にわたって毎週２～３回、腫瘍体積及び体重を測定した。

【0261】

ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが発現しているＴ細胞は、評価したＣＡＲ用量でＨｅｐ ３ｂ異種移植片に対して不活性であり、腫瘍成長は未処置対照と同程度であった（図８、パネルＢ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は活性が高く、５匹中４匹の動物に完全な腫瘍退縮があり、６０日目以降に全ての腫瘍の再発があった。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＬＩＧＨＴとが共発現しているＴ細胞は試験において最も活性であり、全ての動物に完全な腫瘍退縮をもたらし、７０日目以降に５匹中２匹の動物に再発があった。

【0262】

ＪＨＨ７ ＨＣＣ（ＪＣＲＢ、１０３１）異種移植片を右側腹部での５×１０⁶個の細胞の皮下注射によって樹立した。腫瘍体積がおよそ５０ｍｍ³に達した時（接種後８日目）にＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置を開始した。腫瘍体積に基づいてマウスを無作為に各々マウス５匹の処置群に割り当て、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞、またはＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＬＩＧＨＴとが共発現しているＴ細胞によって静脈内への５×１０⁶個のＣＡＲ＋細胞の用量で１日目及び８日目に処置した。実験の継続期間にわたって毎週２～３回、腫瘍体積及び体重を測定した。

【0263】

ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが発現しているＴ細胞は、評価したＣＡＲ用量でＪＨＨ７異種移植片に対する活性が中程度であり、処置群の中で応答にばらつきがあった（図７、パネルＣ）。３匹の動物において腫瘍成長が未処置対照と同程度であった一方、５匹中２匹の動物は完全な腫瘍退縮を経験した。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＬＩＧＨＴとが共発現しているＴ細胞は活性が高く、５匹のうち、完全奏効した２匹を含めた４匹の動物に腫瘍退縮があった。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞は活性が高く、５匹中４匹の動物に完全な腫瘍退縮があった。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ処置群全体にわたって、完全な退縮があったどの動物にも腫瘍再発がなかった。

【0264】

これらの実験は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲが単独で発現しているＴ細胞と比較して、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＴＮＦスーパーファミリーメンバーＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ及びＯＸ４０Ｌとが共発現しているＴ細胞がマウスの異種移植モデルにおいて抗腫瘍活性の増強を示すことを実証している。

【0265】

実施例９：ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＴＮＦスーパーファミリーメンバーポリペプチドＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞はマウスの腫瘍異種移植モデルにおいて活性の増強を示す。
この実施例は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞と比較して、Ｔ細胞における腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ペプチドＣＤ２７とＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８との共発現が、マウスのＧＰＣ３発現異種移植モデルにおいて抗腫瘍活性の上昇をもたらすことを実証する。皮下ヒト肝細胞癌（ＨＣＣ）異種移植モデル（ＪＨＨ７）をＮＳＧ（商標）（ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ、ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ ＩＬ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ、００５５５７系）マウスに樹立した。

【0266】

ＪＨＨ７ ＨＣＣ（ＪＣＲＢ、１０３１）異種移植片を右側腹部での５×１０⁶個の細胞の皮下注射によって樹立した。腫瘍体積がおよそ５０ｍｍ³に達した時（接種後８日目）にＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置を開始した。腫瘍体積に基づいてマウスを無作為に各々マウス５匹の処置群に割り当て、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８（配列番号２）が単独で発現しているＴ細胞、またはＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７（配列番号３３）とが共発現しているＴ細胞によって静脈内への５×１０⁶個のＣＡＲ＋細胞の用量で１日目及び８日目に処置した。実験の継続期間にわたって毎週２～３回、腫瘍体積及び体重を測定した。

【0267】

ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞は、評価したＣＡＲ用量でＪＨＨ７異種移植片に対して活性が高く、１５日目までに５匹中４匹の動物に完全な腫瘍退縮をもたらし、その後に全ての腫瘍が再発した（図８）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞は活性が高く、１０日目までに全ての動物に腫瘍退縮があり、実験の残り全体を通して、腫瘍再発を伴うことなく腫瘍制御が持続した。

【0268】

これらの実験は、ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲが単独で発現しているＴ細胞と比較して、ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲとＴＮＦスーパーファミリーメンバーＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞が、マウスの異種移植モデルにおいて抗腫瘍活性の増強を示すことを実証している。

【0269】

実施例１０：抗ＧＰＣ３ ＣＡＲが単独でまたはＴＮＦスーパーファミリーポリペプチドと組み合わせて発現しているＴ細胞の、マウスの異種移植モデルにおける増殖

【0270】

この実施例は、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢでの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ペプチドＣＤ７０、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８でのＣＤ２７の発現が、腫瘍保有ＮＳＧマウスにおけるＣＡＲ－Ｔのインビボでの増殖の増強をもたらすことを実証する。

【0271】

皮下Ｈｅｐ Ｇ２異種移植片を保有する動物を、腫瘍体積がおよそ１００ｍｍ³に達した時（接種後１９日目）にＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した。各々マウス５匹の群を、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ（配列番号１）が発現しているＴ細胞、またはＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０（配列番号３４）とが共発現しているＴ細胞によって静脈内への５×１０⁵個のＣＡＲ＋細胞の用量で１日目及び８日目に処置した。７、１４、２７、４２及び５６日目に全血試料（２０μｌ）をイソフルラン麻酔下での眼窩採血によって採取し、フローサイトメトリーのために処理する時までＢａｍＢａｎｋｅｒ ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔによって冷凍した。赤血球を溶解させ、試料を生死判定染料及び抗ヒトＣＤ３で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。結果を血液１μＬあたりのＣＤ３＋生細胞の数として表す（図９、パネルＡ）。各時間点は５匹の動物の平均を表し、例外は星印とそれに続く評価試料数で示されている。

【0272】

ヒトＣＤ３＋細胞は全ての時間点で末梢血試料中に検出され、計数は７日目（２回目のＣＡＲ投薬の前に）１μＬあたりおよそ１個の範囲であり、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが発現しているＴ細胞、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞のどちらにおいても計数が経時的に増加した（図９、パネルＡ）。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢとＣＤ７０とが共発現しているＴ細胞についてＣＤ３＋細胞計数の増加が検出され、２７日目に計数がピークに達し、５６日目の測定でＴ細胞計数の持続性は維持されていたが、他方、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが単独で発現しているＴ細胞については５６日目にＣＤ３＋細胞が検出されなかった。ＣＤ７０の発現はインビボでのＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ ＣＡＲ－Ｔの増殖及び持続性に益をもたらす。

【0273】

皮下Ｈｅｐ ３ｂ異種移植片を保有する動物を、腫瘍体積がおよそ１００ｍｍ³に達した時（接種後２０日目）にＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置した。各々マウス５匹の群を、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８（配列番号２）が発現しているＴ細胞、またはＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７（配列番号３３）とが共発現しているＴ細胞によって静脈内への１×１０⁶個のＣＡＲ＋細胞の用量で１日目及び８日目に処置した。１５、２５、４０及び６０日目に全血試料（２０μｌ）をイソフルラン麻酔下での眼窩採血によって採取し、フローサイトメトリーのために処理する時までＢａｍＢａｎｋｅｒ ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔによって冷凍した。赤血球を溶解させ、試料を生死判定染料及び抗ヒトＣＤ３で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。図９のパネルＢに結果を血液１μＬあたりのＣＤ３＋生細胞の数として表す。各時間点は５匹の動物の平均を表し、例外は星印とそれに続く評価試料数で示されている。

【0274】

ヒトＣＤ３＋細胞は全ての時間点で末梢血試料中に検出され、計数は１５日目に１μＬあたりおよそ１００個の範囲であり、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞、及びＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞のどちらにおいても計数が経時的に変動した。ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８とＣＤ２７とが共発現しているＴ細胞について４０日目及び６０日目にＣＤ３＋細胞計数の増加が検出され、計数は４０日目にピークに達し、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が単独で発現しているＴ細胞に比べておよそ１０倍高いレベルであった。ＣＤ２７の発現はインビボでのＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８ ＣＡＲ－Ｔの増殖及び持続性に益をもたらす。

【0275】

これらの実験は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ変異体が単独で発現しているＴ細胞と比較して、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ変異体とＣＤ７０及びＣＤ２７のようなＴＮＦスーパーファミリーポリペプチドとが共発現しているＴ細胞がマウスの腫瘍モデルにおいてインビボでの増強されたＴ細胞増殖及び持続性を示し得ることを実証している。

【0276】

実施例１１：抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ変異体が発現しているＴ細胞の試験管内及びインビボでの活性は共刺激ポリペプチドが共発現することによって増強される。
上記実施例は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと組み合わせて腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ポリペプチドまたはＢ７／ＣＤ２８スーパーファミリー共刺激ペプチドを発現させることで試験管内及びインビボでのＴ細胞の活性を抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ単独に比べて増強できることを実証している。上記データは以下のようにまとめることができる：
●ＧＰＣ３－４－１ＢＢ ＣＡＲ＋ＣＤ７０、ＧＰＣ３－４－１ＢＢ ＣＡＲ＋ＬＩＧＨＴ、及びＧＰＣ３－４－１ＢＢ ＣＡＲ＋ＯＸ４０Ｌ
○親ＣＡＲ－４－１ＢＢに比べて改善された、親ＣＡＲ－４－１ＢＢと比較する反復刺激アッセイにおける増殖
■ＣＡＲ－４－１ＢＢ＋ＬＩＧＨＴの組合せに特異的であり、ＣＡＲ－ＣＤ２８＋ＬＩＧＨＴは、親ＣＡＲ－ＣＤ２８を上回る改善を示さない
○親ＣＡＲ－４－１ＢＢに比べて改善された、反復刺激後のＩＬ－２、ＩＦＮ－ガンマ及びＩＬ－１７Ａ産生
○親ＣＡＲ－４－１ＢＢに比べて改善された、単回刺激増殖アッセイにおける増殖
○親ＣＡＲ－４－１ＢＢに比べて改善された、刺激後のＩＬ－２産生
●ＧＰＣ３－４－１ＢＢ ＣＡＲ＋ＣＤ７０、ＧＰＣ３－４－１ＢＢ ＣＡＲ＋ＬＩＧＨＴ
○親ＣＡＲ－４－１ＢＢに比べて向上した、マウスの腫瘍モデルにおけるインビボでの有効性
●ＧＰＣ３－４－１ＢＢ ＣＡＲ＋ＣＤ７０
○親ＣＡＲ－４－１ＢＢに比べて向上した、マウスの腫瘍モデルにおけるインビボでのＴ細胞持続性
●ＧＰＣ３－ＣＤ２８ ＣＡＲ＋ＣＤ２７
○親ＣＡＲ－ＣＤ２８に比べて改善された増殖
○親ＣＡＲ－ＣＤ２８に比べて改善されたＩＬ－２産生
○親ＣＡＲ－ＣＤ２８に比べて向上した、ＭＤＳＣ抑制に対する耐性
○親ＣＡＲ－ＣＤ２８に比べて向上した、Ｔｒｅｇ抑制に対する耐性
○親ＣＡＲ－ＣＤ２８に比べて向上した、マウスの腫瘍モデルにおけるインビボでの有効性

【0277】

実施例１２：抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ変異体が発現しているＴ細胞の活性は共刺激ポリペプチドが共発現することによって増強される。
この実施例は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと組み合わせて腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ポリペプチドまたはＢ７／ＣＤ２８スーパーファミリー共刺激ペプチドをＴ細胞に発現させることでＴ細胞の活性を抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ単独に比べて増強できることを実証する。

【0278】

これらの実験では、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢ、配列番号１）のみ、ＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチド（ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８、配列番号２）のみ、またはＰ２Ａリボソームスキッピング配列によって隔てられた表２に列挙される共刺激ポリペプチドと組み合わせたこれらのＣＡＲ変異体の各々をコードするウイルスを、Ｔ細胞に形質導入した。形質導入されたＴ細胞を、ＧＰＣ３発現Ｈｅｐ ３Ｂ標的細胞と共にインキュベートした時のその増殖能力及びサイトカイン（ＩＬ－２）産生能力について評価した。形質導入されたＴ細胞Ｔ（エフェクター）及びＨｅｐ ３Ｂ細胞（標的）を２：１のエフェクター対標的比（１００，０００個のエフェクター細胞、５０，０００個の標的細胞）で、１０％の熱不活化ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地の中に含ませて播種し、１４日間のアッセイを通して３～４日ごとに５０，０００個の新鮮な標的細胞で再刺激を行った。各再刺激の時間点で、Ｔ細胞増殖の尺度としてＣＤ３陽性細胞の数をフローサイトメトリーによって見積もり、Ｍａｃ ＯＳ Ｘ用ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ バージョン７．０ａ、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、Ｌａ Ｊｏｌｌａ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ＵＳＡを使用してＣＤ３＋細胞の総計数の曲線下面積（ＡＵＣ）を計数対時間のプロットから算出した。２４時間目に、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｖ－Ｐｌｅｘ ヒトＩＬ－２キットを製造業者のプロトコールに従って使用して培養物上清からのサイトカイン産生（ＩＬ－２）を測定した。表２に示すように、各アッセイの中での付加的共刺激ポリペプチドを含んでいない対照同属ＧＰＣ３ ＣＡＲ変異体（親）の値に対するパーセントとして相対ＩＬ－２濃度及び増殖ＡＵＣ値を算出した。ある場合には、共刺激ポリペプチドと組み合わせてＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が発現しているＴ細胞の活性を、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが発現しているＴ細胞のそれと比較した。共刺激ペプチドの共発現が機能を増強したと判定されたのは、活性がＩＬ－２産生と増殖との両方に関してその同属親のそれの１１５％を上回ったかまたはこれらのアッセイの少なくとも１つにおいて１４０％を上回った場合であった。

【0279】

これらの実験は、全ての共刺激ポリペプチドが活性を増強するわけではないものの、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドとＣＤ２８共刺激ドメインを有する抗ＧＰＣ３ ＣＡＲポリペプチドとの両方に関してＴ細胞に腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー共刺激ポリペプチドまたはＢ７／ＣＤ２８スーパーファミリー共刺激ペプチドを抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと組み合わせて発現させることでＴ細胞の活性を抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ単独に比べて増強できることを実証している。ＣＤ２７共刺激ポリペプチドを共発現させることで、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－４－１ＢＢが発現しているＴ細胞の活性が増強され；ＣＤ４０Ｌ及びＴＬ１Ａ共刺激ポリペプチドを共発現させることで、ＧＰＣ３－ＣＡＲ－ＣＤ２８が発現しているＴ細胞の活性が増強された。
表２．親４－１ＢＢ含有または親ＣＤ２８含有ＣＡＲ変異体と比較したときの、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲと共刺激ポリペプチドとが共発現している変異体の試験管内での増殖及びＩＬ－２放出の採点。

【0280】

【表2】

【表3】

【0281】

他の実施形態
本明細書中に開示される特徴は全て、任意の組合せで組み合わされ得る。本明細書中に開示される各特徴を、同じ、等価な、または類似する目的に役立つ代替特徴で置き換えてもよい。したがって、開示される各特徴は、特に明記しない限り全般的な一連の均等物または類似する特徴のほんの一例であるにすぎない。

【0282】

当業者であれば上記説明から本開示の必須の特徴をその趣旨及び範囲から逸脱せずに簡単に確認することができ、本開示の様々な変更及び改変を行ってそれを様々な用途及び条件に適合させることができる。したがって、他の実施形態も特許請求の範囲に含まれる。

【0283】

均等物
いくつかの本発明の実施形態を本明細書中で説明及び例示してきたが、当業者であれば、機能を実施するための、及び／または結果及び／または本明細書に記載の利点の１つ以上を得るための他の様々な手段及び／または構造を容易に考え付くであろうし、そのような変形形態及び／または改変形態は本明細書に記載の本発明の実施形態の範囲に入るとみなされる。より広くは、当業者であれば、本明細書に記載の全てのパラメータ、寸法、材料及び配置が例示を意図したものであり、本発明の教示内容が用いられる具体的な用途または複数の用途によって実際のパラメータ、寸法、材料及び／または配置が決まるであろうことを、容易に理解するであろう。当業者であれば、慣習的な実験しか用いずに本明細書に記載の具体的な本発明の実施形態の多くの均等物を認識するかまたは見出せるであろう。したがって、上記実施形態が例としてのみ提示されていること、ならびに本発明の実施形態の具体的に記載され特許請求されている以外の実施が別記の特許請求の範囲及びその均等物の範囲の中でなされ得ることは理解されるべきである。本開示の本発明の実施形態は、本明細書に記載の各個の特徴、システム、物品、材料、キット及び／または方法に関するものである。加えて、２つ以上のそのような特徴、システム、物品、材料、キット及び／または方法の任意の組合せは、そのような特徴、システム、物品、材料、キット及び／または方法が相互に矛盾していない場合に本開示の本発明の範囲に含まれる。

【0284】

本明細書中で定義され使用される全ての定義は、定義された用語の辞書での定義、参照により援用される文書での定義、及び／または通常の意味よりも優先されると理解されるべきである。

【0285】

本明細書中に開示される全ての参考文献、特許及び特許出願は、参照により各々の引用の目的である主題に関して援用されるが、これはある場合には文書全体を包含し得る。

【0286】

不定冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、ここに本明細書及び特許請求の範囲の中で使用される場合、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきであり、但し、そうでないと明確に示されている場合は除く。

【0287】

「及び／または」という語句は、ここに本明細書及び特許請求の範囲の中で使用される場合、そのように繋ぎ合わされた要素の「どちらかまたは両方とも」、つまり、ある例では一緒に存在しており他の例では別個に存在している要素を意味すると理解されるべきである。「及び／または」によって連結された複数の要素は、同じように、つまり、そのように繋ぎ合わされた要素の「１つ以上」と解釈されるべきである。「及び／または」節によって具体的に特定された要素以外の他の要素が、具体的に特定された要素との関係があろうとなかろうと任意選択的に存在していてもよい。したがって、非限定的な例を挙げると、「Ａ及び／またはＢ」に対する言及は、開放形式の用語、例えば「含む」と併せて使用される場合、ある実施形態ではＡのみ（Ｂ以外の要素を任意選択的に含む）；別の実施形態ではＢのみ（Ａ以外の要素を任意選択的に含む）；さらに別の実施形態ではＡとＢとの両方（他の要素を任意選択的に含む）；などを意味し得る。

【0288】

ここに本明細書及び特許請求の範囲の中で使用する場合、「または」は、上に定義される「及び／または」と同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、「または」または「及び／または」は、一覧中の項目を隔てている場合、包括的である、つまり、複数または一覧の要素の少なくとも１つを包含するが１つより多くをも包含し、一覧にないさらなる項目も任意選択的に包含する、と解釈されるべきである。そうでないことを明確に示す用語、例えば、「の１つだけ」もしくは「のちょうど１つ」、または特許請求の範囲で使用される場合の「からなる」に限っては、複数または一覧の要素のちょうど１つの要素の包含を意味することになる。総じて、本明細書中で使用される「または」という用語は、「どちらか」、「の１つ」、「の１つだけ」または「のちょうど１つ」などの排他性を有する用語が後続する場合、排他的な選択肢（すなわち、「両方ではなく片方またはもう片方」）を示すものとしてのみ解釈されるべきである。「から本質的になる」は、特許請求の範囲の中で使用される場合、特許法の分野で使用されるときのその通常の意味を有すべきものである。

【0289】

ここに本明細書及び特許請求の範囲の中で使用する場合、１つ以上の要素の一覧に関して「少なくとも１つ」という語句は、要素の一覧の中の要素の任意の１つ以上から選択される少なくとも１つの要素を意味すると理解されるべきであるが、要素の一覧の中で具体的に列挙されているありとあらゆる要素の少なくとも１つを必ずしも含むわけではなく、要素の一覧の中の要素の任意の組合せを排除するわけでもない。この定義は、「少なくとも１つ」という語句が指す要素の一覧の中で具体的に特定された要素以外の要素が、具体的に特定された要素との関係があろうとなかろうと任意選択的に存在し得ることも許容する。したがって、非限定的な例を挙げると、「Ａ及びＢの少なくとも１つ」（または同義の「ＡまたはＢの少なくとも１つ」、または同義の「Ａ及び／またはＢの少なくとも１つ」）は、ある実施形態でＢが存在せず（Ｂ以外の要素を任意選択的に含んで）１つより多くを任意選択的に含んだ少なくとも１つのＡ；別の実施形態でＡが存在せず（Ａ以外の要素を任意選択的に含んで）１つより多くを任意選択的に含んだ少なくとも１つのＢ；さらに別の実施形態で、１つより多くを任意選択的に含んだ少なくとも１つのＡ、及び１つより多くを任意選択的に含んだ少なくとも１つのＢ（他の要素を任意選択的に含む）；などを意味し得る。

【0290】

本明細書中で特許請求される、１つより多いステップまたは行為を含む任意の方法において、特段の指定が明確になされていない限り方法のステップまたは行為の順序が、必ずしも方法のステップまたは行為の列挙された順序に限定されないことも、理解されるべきである。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【配列表】

2022512958000001.app

【国際調査報告】