特表 2022-512999 拡張型心筋症の細胞療法に対する応答性を判定する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-07

(54)【発明の名称】拡張型心筋症の細胞療法に対する応答性を判定する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/28 20150101AFI20220131BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 9/04 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 35/34 20150101ALI20220131BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20220131BHJP

   C12N 5/0735 20100101ALN20220131BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20220131BHJP

   C12N 5/074 20100101ALN20220131BHJP

   C12N 5/0775 20100101ALN20220131BHJP

   C12Q 1/68 20180101ALN20220131BHJP

【ＦＩ】

A61K35/28

A61P9/00

A61P9/04

A61K35/34

A61K35/545

C12N5/0735

C12N5/10

C12N5/074

C12N5/0775

C12Q1/68

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021525336

(86)(22)【出願日】2019-11-08

(85)【翻訳文提出日】2021-06-29

(86)【国際出願番号】 US2019060562

(87)【国際公開番号】W WO2020097525

(87)【国際公開日】2020-05-14

(31)【優先権主張番号】62/757,745

(32)【優先日】2018-11-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/758,467

(32)【優先日】2018-11-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】515354830

【氏名又は名称】ユニヴァーシティー オブ マイアミ

【氏名又は名称原語表記】Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉａｍｉ

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100151301

【弁理士】

【氏名又は名称】戸崎 富哉

(72)【発明者】

【氏名】ヘアー、ジョシュア、エム．

【テーマコード（参考）】

4B063

4B065

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B063QA01

4B063QA13

4B063QA18

4B063QA19

4B063QQ02

4B063QQ08

4B063QQ42

4B063QQ52

4B063QR32

4B063QR35

4B063QR72

4B063QR77

4B063QS34

4B063QX01

4B065AA87

4B065AA87X

4B065AA90X

4B065AA93X

4B065AA93Y

4B065AB01

4B065CA44

4C087AA01

4C087BB65

4C087MA16

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZA36

(57)【要約】

本開示は、心血管障害（例えば、心筋症）を患う対象において細胞療法に対する応答性を判定する方法、および心血管障害を患う対象を治療する方法を対象とする。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

心血管障害の治療を必要とする対象においてそれを治療する方法であって、
細胞療法に対するハイパーレスポンダーとして同定された対象に、前記対象において前記心血管障害を治療するのに有効な量の細胞を投与することを含む、方法。

【請求項2】

前記細胞療法が、間葉系幹細胞療法、心臓幹細胞療法、人工多能性幹細胞療法、または胚性幹細胞療法である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記細胞療法が、間葉系幹細胞療法である、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記細胞療法が、同種間葉系幹細胞療法である、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記細胞療法が、自己間葉系幹細胞療法である、請求項３に記載の方法。

【請求項6】

前記方法が、前記対象の試料における心血管障害に関連する１つ以上の遺伝子における病的変異の有無を判定することを含み、前記病的遺伝子変異（複数可）の欠如により、前記対象を細胞療法に対するハイパーレスポンダーと同定する、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記１つ以上の遺伝子が、ＡＣＴＣ、ＮＹＨ７、ＭＹＨ６、ＭＹＢＰＣ３、ＴＮＮＴ２、ＴＮＮＣ１、ＴＮＮＩ３、ＴＰＭ１、ＴＴＮ、ＤＭＤ、ＤＥＳ、ＬＤＢ３、ＳＧＣＤ、ＰＤＬＩＭ３、ＶＣＬ、ＲＹＡＢ、ＩＬＫ、ＬＡＭＡ４、ＦＬＮＣ、ＴＣＡＰ、ＣＳＲＰ３、ＡＣＴＮ２、ＭＹＰＮ、ＡＮＫＲＤ１、ＢＡＧ３、ＬＭＮＡ、ＴＭＰＯ、ＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２、ＰＬＮ、ＥＹＡ４、ＴＡＺ／Ｇ４．５、ＣＰＴ２、ＡＣＡＤＶＬ、ＲＢＭ２０、ＡＢＣＣ、ＳＣＮ５Ａ、ＧＡＴＡＤ１、ＰＲＤＭ１６、ＧＡＡ、ＦＫＲＰ、ＣＴＮＮＡ３、ＤＳＰ、ＰＫＰ２、ＳＯＳ２、およびＡＬＭＳ１ならびにそれらの組み合わせから選択される、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記１つ以上の遺伝子が、ＡＮＫＲＤ、ＢＡＧ３、ＤＭＤ、ＧＡＴＡＤ１、ＬＤＢ３、ＬＭＮＡ、ＭＹＢＰＣ３、ＭＹＨ６、ＲＢＭ２０、ＴＮＮＴ２、ＴＴＮおよびＲＢＭ２０、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

前記心血管障害が、心不全、アドリアマイシン誘発性心筋症、特発性拡張型心筋症、虚血性心筋症、心筋炎、虚血性心疾患、浸潤性心筋症による心筋症、アミロイドーシスによる心筋症、サルコイドーシスによる心筋症、ヘモクロマトーシスによる心筋症、周産期心筋症、高血圧による心筋症、ヒト免疫不全ウイルス感染による心筋症、結合組織疾患による心筋症、強皮症による心筋症、全身性紅斑性狼瘡による心筋症、マルファン症候群による心筋症、結節性多発動脈炎による心筋症、非特異的結合組織疾患による心筋症、強直性脊椎炎による心筋症、リウマチ性関節炎による心筋症、再発性多発軟骨炎による心筋症、ウェゲナー肉芽腫症による心筋症、混合性結合組織疾患による心筋症、物質乱用による心筋症、慢性アルコール乱用による心筋症、コカイン乱用による心筋症、ドキソルビシン療法による心筋症、拘束性心筋症、家族性心筋症、心臓弁疾患による心筋症、内分泌機能障害による心筋症、甲状腺疾患による心筋症、カルシノイドによる心筋症、褐色細胞腫による心筋症、末端肥大症による心筋症、神経筋疾患による心筋症、腫瘍性心疾患による心筋症、先天性心疾患による心筋症、冠動脈バイパス手術の合併症による心筋症、放射線による心筋症、重症疾患による心筋症、心内膜線維弾性症による心筋症、血栓性血小板減少性紫斑病による心筋症、リウマチ性心炎による心筋症、ロイコトリエン療法による心筋症、リチウム療法による心筋症、またはプレドニゾン療法による心筋症である、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記細胞が、局所投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

前記細胞が、経心内膜注射によって投与される、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記細胞が、約２０００万～約１０^９個の細胞の範囲の量で投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記細胞が、前記対象の心室の１つ以上の部位に、１回以上の経心内膜注射によって投与される、請求項１１または請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記細胞が、前記対象の左心室の１０の部位に、１０回の経心内膜注射によって投与される、請求項１１に記載の方法。

【請求項15】

前記細胞が、前記対象の左心室の１５の部位に、１５回の経心内膜注射によって投与される、請求項１１に記載の方法。

【請求項16】

前記細胞が、前記対象の左心室の２０の部位に、２０回の経心内膜注射によって投与される、請求項１１に記載の方法。

【請求項17】

前記細胞が、約４億個の細胞の量で投与される、請求項１１または請求項１２に記載の方法。

【請求項18】

前記細胞の投与が、前記対象における血流依存性血管拡張（ＦＭＤ）の少なくとも３％の増加をもたらす、請求項１に記載の方法。

【請求項19】

前記細胞の前記投与が、前記細胞による治療前の前記対象の駆出率と比較して、前記対象における駆出率の増加をもたらす、請求項１に記載の方法。

【請求項20】

前記細胞の前記投与が、前記細胞による治療前の６分間歩行距離と比較して、前記対象の前記６分間歩行距離の増加をもたらす、請求項１に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

米国政府の利益に関する陳述
本発明は、国立衛生研究所、心肺血液研究所によって授与された助成金番号Ｒ０１ ＨＬ １１０７３７－０１の下で米国政府の支援を受けて行われた。米国政府は、本発明においてある特定の権利を有する。

【0002】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１１月８日に出願された米国仮特許出願第６２／７５７，７４８号および２０１８年１１月９日に出願された米国仮特許出願第６２／７５８，４６７号の利益を主張するものであり、その全内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる。

【0003】

本開示は、細胞療法から利益を受ける対象を同定する材料および方法、ならびにそのような対象を治療するための方法を対象とする。

【背景技術】

【0004】

左心室機能（ＬＶ）の改善および／またはＬＶ形状の回復は、逆リモデリングと呼ばれ、生活の質の向上（４）、ならびに死亡率（５）、ＬＶＡＤ移植、心臓移植および入院（６）の減少に関連している。駆出率が低下した心不全（ＨＦｒｅｃＥＦ）の治療効果は、持続的に駆出率（ＥＦ）が低下したＨＦと比較して、予後が改善されると認められた転帰である。（７）したがって、心筋症患者のＬＶ機能の回復は、駆出率が低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）治療の重要な目標である。

【0005】

早期診断および効果的な神経ホルモン治療（Ｇｒｏｅｎｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，３６：２０７２－２０８０，２０００、ＤｉＬｅｎａｒｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．，７２：Ｓ４６－Ｓ５１，１９９４）およびデバイス療法の導入により、拡張型心筋症（ＤＣＭ）患者の予後は過去１０年間で改善された。しかし、ＤＣＭは依然として心臓移植にいたる主要な状態である（Ｍｅｒｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌ．，５７：１４６８－１４７６、２０１１）。ＭＡＣＥ事象は、診断後の早期に発症し、予測できないままである。

【発明の概要】

【0006】

一態様では、本明細書に記載されるのは、心血管障害の治療を必要とする対象においてそれを治療する方法であり、本方法は、細胞療法に対するハイパーレスポンダーとして同定された対象に、対象において心血管障害を治療するためのある量の細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象は、心血管障害、例えば、心不全、アドリアマイシン誘発性心筋症、特発性拡張型心筋症、虚血性心筋症、心筋炎、虚血性心疾患、浸潤性心筋症による心筋症、アミロイドーシスによる心筋症、サルコイドーシスによる心筋症、ヘモクロマトーシスによる心筋症、周産期心筋症、高血圧による心筋症、ヒト免疫不全ウイルス感染による心筋症、結合組織疾患による心筋症、強皮症による心筋症、全身性紅斑性狼瘡による心筋症、マルファン症候群による心筋症、結節性多発動脈炎による心筋症、非特異的結合組織疾患による心筋症、強直性脊椎炎による心筋症、リウマチ性関節炎による心筋症、再発性多発軟骨炎による心筋症、ウェゲナー肉芽腫症による心筋症、混合性結合組織疾患による心筋症、物質乱用による心筋症、慢性アルコール乱用による心筋症、コカイン乱用による心筋症、ドキソルビシン療法による心筋症、拘束性心筋症、家族性心筋症、心臓弁疾患による心筋症、内分泌機能障害による心筋症、甲状腺疾患による心筋症、カルシノイドによる心筋症、褐色細胞腫による心筋症、末端肥大症による心筋症、神経筋疾患による心筋症、腫瘍性心疾患による心筋症、先天性心疾患による心筋症、冠動脈バイパス手術の合併症による心筋症、放射線による心筋症、重症疾患による心筋症、心内膜線維弾性症による心筋症、血栓性血小板減少性紫斑病による心筋症、リウマチ性心炎による心筋症、ロイコトリエン療法による心筋症、リチウム療法による心筋症、またはプレドニゾン療法による心筋症などに罹患している。様々な実施形態において、本方法は血管緊張を改善する。

【0007】

いくつかの実施形態において、細胞は、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞および／または心臓幹細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、同種細胞（例えば、同種ＭＳＣ）である。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、自己細胞（例えば、自己ＭＳＣ）である。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、骨髄、臍帯血、脂肪組織、ウォートンゼリーまたは羊水から得られる。

【0008】

いくつかの実施形態において、本方法は、対象の試料における心血管障害に関連する遺伝子における１つ以上の病的変異の有無を判定することを含み、病的遺伝子変異（複数可）の欠如により、対象を細胞療法に対するハイパーレスポンダーとして同定する。いくつかの実施形態において、対象は、図１に示される１つ以上の病的遺伝子変異についてスクリーニングされる（すなわち、対象が図１の１つ以上の遺伝子に変異を含むか否かが判定される）。いくつかの実施形態において、対象は、以下の遺伝子のうちの１つ以上で１つ以上の病的遺伝子変異についてスクリーニングされる。ＡＣＴＣ、ＮＹＨ７、ＭＹＨ６、ＭＹＢＰＣ３、ＴＮＮＴ２、ＴＮＮＣ１、ＴＮＮＩ３、ＴＰＭ１、ＴＴＮ、ＤＭＤ、ＤＥＳ、ＬＤＢ３、ＳＧＣＤ、ＰＤＬＩＭ３、ＶＣＬ、ＲＹＡＢ、ＩＬＫ、ＬＡＭＡ４、ＦＬＮＣ、ＴＣＡＰ、ＣＳＲＰ３、ＡＣＴＮ２、ＭＹＰＮ、ＡＮＫＲＤ１、ＢＡＧ３、ＬＭＮＡ、ＴＭＰＯ、ＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２、ＰＬＮ、ＥＹＡ４、ＴＡＺ／Ｇ４．５、ＣＰＴ２、ＡＣＡＤＶＬ、ＲＢＭ２０、ＡＢＣＣ、ＳＣＮ５Ａ、ＧＡＴＡＤ１、ＰＲＤＭ１６、ＧＡＡ、ＦＫＲＰ、ＣＴＮＮＡ３、ＤＳＰ、ＰＫＰ２、ＳＯＳ２、およびＡＬＭＳ１（すなわち、参照遺伝子の任意の組み合わせが企図される）。したがって、いくつかの実施形態において、対象（例えば、心血管障害を呈する対象）は、図１に示される遺伝子のうちの１つ以上で病的遺伝子変異を欠いている（例えば、ＡＣＴＣ、ＮＹＨ７、ＭＹＨ６、ＭＹＢＰＣ３、ＴＮＮＴ２、ＴＮＮＣ１、ＴＮＮＩ３、ＴＰＭ１、ＴＴＮ、ＤＭＤ、ＤＥＳ、ＬＤＢ３、ＳＧＣＤ、ＰＤＬＩＭ３、ＶＣＬ、ＲＹＡＢ、ＩＬＫ、ＬＡＭＡ４、ＦＬＮＣ、ＴＣＡＰ、ＣＳＲＰ３、ＡＣＴＮ２、ＭＹＰＮ、ＡＮＫＲＤ１、ＢＡＧ３、ＬＭＮＡ、ＴＭＰＯ、ＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２、ＰＬＮ、ＥＹＡ４、ＴＡＺ／Ｇ４．５、ＣＰＴ２、ＡＣＡＤＶＬ、ＲＢＭ２０、ＡＢＣＣ、ＳＣＮ５Ａ、ＧＡＴＡＤ１、ＰＲＤＭ１６、ＧＡＡ、ＦＫＲＰ、ＣＴＮＮＡ３、ＤＳＰ、ＰＫＰ２、ＳＯＳ２、および／またはＡＬＭＳ１）。いくつかの実施形態において、対象は、以下の遺伝子のうちの１つ以上で病的変異を欠いている。ＡＮＫＲＤ、ＢＡＧ３、ＤＭＤ、ＧＡＴＡＤ１、ＬＤＢ３、ＬＭＮＡ、ＭＹＢＰＣ３、ＭＹＨ６、ＲＢＭ２０、ＴＮＮＴ２、ＴＴＮおよびＲＢＭ２０。必要に応じて、対象は、ＡＮＫＲＤ、ＢＡＧ３、ＤＭＤ、ＧＡＴＡＤ１、ＬＤＢ３、ＬＭＮＡ、ＭＹＢＰＣ３、ＭＹＨ６、ＲＢＭ２０、ＴＮＮＴ２、ＴＴＮ、およびＲＢＭ２０のすべてに病的変異を欠いている。

【0009】

細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞、または心臓幹細胞）は、当技術分野で既知の方法を含む任意の適切な方法に従って投与される。いくつかの実施形態において、細胞は局所投与される。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）は、経心内膜注射によって投与される。

【0010】

細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）は、必要に応じて、約２０００万～約１００億個の細胞の範囲の量で投与される。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）は、約２０００万～約３０００万個の細胞、または約２０００万～約４０００万個の細胞、または約２０００万～約５０００万個の細胞、または約２０００万～約６０００万個の細胞、または約２０００万～約７０００万個の細胞、または約２０００万～約８０００万個の細胞、または約２０００万～約９０００万個の細胞、または約３０００万～約５０００万個の細胞、または約３０００万～約７０００万、または約３０００万～約９０００万個の細胞、または約５０００万～約１億個の細胞、または約１億～約３億個の細胞、または約２億～約４億個の細胞、または約５億～約１０億個の細胞、または約５億～約１００億個の細胞の範囲の量で投与される。いくつかの実施形態において、約２，０００万、または約２，５００万、または約３，０００万、または約３，５００万、または約４，０００万、または約４，５００万、または約５，０００万、または約５，５００万、または約５，０００万、または約５５００万、または約６０００万、または約６５００万、または約７０００万、または約７５００万、または約８０００万、または約８５００万、または約９０００万、または約９５００万、または約１億、または約２億、または約３億、または約４億、または約５億、または約６億、または約７億、または約８億、または約９億、または約１０億、または約２０億、または約３０億、または約４０億、または約５０億、または約６０億、または約７０億、または約８０億、または約９０億、または約１００億個の細胞が対象に投与される。

【0011】

いくつかの実施形態において、細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）の対象への投与は、対象における血流依存性血管拡張（ＦＭＤ）の少なくとも３％の増加をもたらす。

【0012】

本明細書に記載される方法のいずれかにおいて、対象はヒト対象である。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】個々の患者の遺伝子プロファイルを提供する表である。色付きのセルは、ＰＶ－（（患者６、１０、１８、２２、２８、および３４）、ＶＵＳ（患者１（ＴＴＮ）、患者２（ＧＡＴＡＤ１、ＧＡＡ）、患者３（ＬＤＢ３）、患者４（ＬＭＮＡ、ＰＲＤＭ１６）、患者５（ＦＫＲＰ）、患者７（ＡＣＡＤＶＬ）、患者９（ＣＴＮＮＡ３、ＤＳＰ、ＳＯＳ２、ＡＬＭＳ１）、患者１１（ＡＮＫＲＤ１）、患者１３（ＴＮＮＴ２）、患者１４（ＤＭＤ、ＣＰＴ２）、患者１５（ＦＬＮＣ）、患者１７（ＴＴＮ）、患者１９（ＴＮＮＴ２）、患者２１（ＴＮＮＴ２、ＦＬＮＣ、ＭＹＰＮ、ＰＫＰ２）、患者２５（ＭＹＨ６、ＰＳＥＮ１）、患者２６（ＴＮＮＴ２）、患者２７（ＭＹＰＮ）、患者２９（ＴＴＮ）、患者３０（ＭＹＨ６、ＲＢＭ２０）、および患者３１（ＢＡＧ３））、またはＰＶ＋（患者８（ＬＭＮＡ）、患者１２（ＤＳＰ）、患者１６（ＴＴＮ）、患者２０（ＴＴＮ）、患者２３（ＴＴＮ）、患者２４ ＬＭＮＡ）、患者３２（ＭＹＮＰＣ３）および患者３３（ＤＳＰ））、心筋症に関連しない変異（患者１０（ＣＰＴ２）および患者２８（ＧＡＡ））を表す。患者１０および２８は、ＤＣＭに関連する可能性のあるＰＶが陰性であるために重複したボックスを有するが、遺伝子データの完全性のために遺伝子に存在すると報告される。

【図2-1】図２Ａ－２Ｅ：図２Ａは、Ｖ－患者がＶＵＳと比較して１２ヶ月の駆出率（ＥＦ）の増加が最も大きく、ＰＶ＋患者では減少したことを示すグラフである。図２Ｂは、６分間の歩行距離がＶＵＳおよびＰＶ＋に対してＶ－患者で増加したことを示すグラフである。図２Ｃは、ミネソタ心不全生活質問票（ＭＬＨＦＱ）でＶ－患者が大幅に改善したことを示すグラフであり、ＶＵＳとＰＶ＋を対比した。図２Ｄは、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）の変化率を示すグラフであり、群間で有意差が示される。Ｖ－は、５３％のＶＵＳおよび２５％のＰＶ＋とは対照的に６０％向上した。図２Ｅは、内皮前コロニー（ＥＰＣ）がＶ－群のみ経時的に有意に増加したことを示すグラフである。Ｖ－＝任意の病的変異群に対して陰性（左端バー）、ＶＵＳ＝有意性が不明な群の変異（中央バー）、ＰＶ＋＝病的変異群／おそらく病的変異群に対して陽性（右端バー）。^＊ｐ＝＜０．０５、^＊＊ｐ＝０．０１ ^＊＊＊ｐ＝０．００１ ^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【図2-2】図２Ａ－２Ｅ：図２Ａは、Ｖ－患者がＶＵＳと比較して１２ヶ月の駆出率（ＥＦ）の増加が最も大きく、ＰＶ＋患者では減少したことを示すグラフである。図２Ｂは、６分間の歩行距離がＶＵＳおよびＰＶ＋に対してＶ－患者で増加したことを示すグラフである。図２Ｃは、ミネソタ心不全生活質問票（ＭＬＨＦＱ）でＶ－患者が大幅に改善したことを示すグラフであり、ＶＵＳとＰＶ＋を対比した。図２Ｄは、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）の変化率を示すグラフであり、群間で有意差が示される。Ｖ－は、５３％のＶＵＳおよび２５％のＰＶ＋とは対照的に６０％向上した。図２Ｅは、内皮前コロニー（ＥＰＣ）がＶ－群のみ経時的に有意に増加したことを示すグラフである。Ｖ－＝任意の病的変異群に対して陰性（左端バー）、ＶＵＳ＝有意性が不明な群の変異（中央バー）、ＰＶ＋＝病的変異群／おそらく病的変異群に対して陽性（右端バー）。^＊ｐ＝＜０．０５、^＊＊ｐ＝０．０１ ^＊＊＊ｐ＝０．００１ ^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【図3A-3B】遺伝的変異は、ＭＳＣ送達に応答してＭＡＣＥおよび生存に影響を及ぼす。図３Ａ：ＰＶ－患者は１００％の生存率、ＶＵＳは８５％、ＰＶ＋は４０％の生存率であった。ログ－ランク（マンテル－コックス）検定、ｐ＝０．０１５。全体として、ＰＶ＋患者の死亡、移植、またはＬＶＡＤリスクは１年間の追跡調査で実質的に増加した。図３Ｂ：ＭＡＣＥ事象は、Ｖ－患者０事象間で異なり、ＶＵＳは７事象あり、ＰＶ＋は４名の患者で６事象あった（ログ－ランク（マンテル－コックス）検定＝０．０２１）。Ｖ－＝任意の病的変異群に対して陰性（グラフの下線、ｘ軸と重なる）、ＶＵＳ＝有意性が不明な群の変異（グラフの中間線）、ＰＶ＋＝病的変異群／おそらく病的変異群に対して陽性（グラフの上線）。

【発明を実施するための形態】

【0014】

本開示は、少なくとも部分的に、非虚血性拡張型心筋症（ＮＩＤＣＭ）の明らかな遺伝的根拠を有するＮＩＤＣＭ患者が、関連する病的遺伝子変異を伴わない患者よりも間葉系幹細胞（ＭＳＣ）療法に対して異なった応答を示すという発見に基づいている。ＮＩＤＣＭ患者では、かなりの割合が家族集積性および同定可能な遺伝子変異を有し（Ｋａｙｖａｎｐｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｒｍａｎ Ｃａｒｄｉａｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ．２０１７；１０６（２）：１２７－３９）、変異には細胞骨格、核膜、サルコメア、ミトコンドリア、デスモソーム、およびＲＮＡ結合タンパク質が含まれる。環境要因、併存疾患、または表現型および転帰を調節する他の要因など、いくつかの二次修飾因子によって、これらの主要な病的変異が変化する可能性がある。実施例に記載されているように、同定されたＮＩＤＣＭ遺伝子型は、間葉系幹細胞療法（例えば、心筋内ＭＳＣ送達）に対する個々の患者の応答性を判定する際に主要な役割を果たす。本開示は、遺伝子検査を介して細胞（例えば、ＭＳＣ）療法に対して過敏に応答する患者を同定する方法を提供し、意外なことに、心血管疾患に関連する遺伝的判定因子を欠く個体は、細胞（例えば、ＭＳＣ）療法によりよく応答する。

【0015】

患者が細胞（例えば、ＭＳＣ）療法に対して「過敏に応答する」か否かの判定には、対象が療法に応答する程度の確率の評価が含まれる。「ハイパーレスポンダー」とは、患者が細胞（例えば、ＭＳＣ）治療に対して他の患者よりも強い応答を示すことを意味する。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、ＭＳＣ）療法に対して過敏に応答する患者は、細胞（例えば、ＭＳＣ）療法でも治療された病的遺伝子変異を有する患者と比較して、心機能および機能容量の改善、駆出率の増加、および／または６分間歩行距離の増加のうちの１つ以上を示すであろう。

【0016】

本明細書に記載されているように、心血管障害を呈しているが、心血管障害に関連する病的遺伝子変異（例えばＮＩＤＣＭ、図５で提供される関連する病的遺伝子変異）を欠く患者は、駆出率（ＥＦ）のより大きな改善を示し、Ｖ－患者の５５％は、駆出率が改善した心不全（ＨＦｒｅｃＥＦ）に移行する。ＭＳＣ療法には、強力な免疫調節性があり、全群におけるＴＮＦ－αの有意な減少という効果証拠があり、内皮機能の回復が改善され（Ｐｒｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，２：４６７－４７５，２０１４）、これはネガティブ変異の患者において始原的機構を果たし得る。これは、内皮前駆細胞コロニー（ＥＰＣ）の最大増加がＶ－患者であったという事実によって裏付けられる一方、逆に、遺伝に基づくＤＣＭが固有の細胞ベースでこれらの応答に耐性がある可能性を高めている。

【0017】

実施例１で提供された遺伝子データは、有意性が不明な変異（ＶＵＳ）および病的変異／おそらく病的変異が陽性（ＰＶ＋）の患者が軽度から消失の応答を示し、駆出率の低下した心不全（ＨＦｒＥＦ）として維持されることを示し、駆出率が改善した心不全（ＨＦｒｅｃＥＦ，Ｋａｌｏｇｅｒｏｐｏｕｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，１：５１０－５１８，２０１６）と比較して高い死亡率、ＬＶＡＤ要件、移植およびＭＡＣＥ事象を示す。鈍化した応答に関連する独立要因には、長い心不全（ＨＦ）期間、より大きな拡張末期容積（ＥＤＶ）、ニューヨーク心不全協会（ＮＹＨＡ）のクラスＩＩＩ～ＩＶ、および収縮期血圧の低下が含まれる（Ｍｅｒｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６：４２４－４２８，２０１３）。

【0018】

いくつかの単一施設研究およびメタ分析は、特定遺伝子の変異に関連する症状および転帰の表現型の関係を評価している。ほとんどは男性の罹患で４０代および５０代で臨床症状を示した。より一般的な関連性には、ＬＭＮＡ、ＲＢＭ２０、ならびにＴＴＮ、ＭＹＨ６、ＭＹＢＰＣ３、およびＴＮＮＴ（２４）を含むサルコメア遺伝子変異の変異が含まれ、本発明者らの集団における以前記載したものと同様である。興味深いことに、ＬＭＮＡ、ＰＬＮ、ＲＢＭ２０の変異がある患者は、本発明者らの移植集団と同様に、移植率が高く、転帰が不良であった。Ｔｏｂｉｔａらは、ＤＣＭ患者の左心室機能および遺伝子変異に関連する逆リモデリングの有無を評価した。ＴＴＮ切断変異が最も一般的であり（１５）、ベースライン駆出率（ＥＦ）の低下と関連していた。本発明者らの研究におけるＴＴＮ切断変異の患者（Ｎ＝６）も、Ｔｏｂｉｔａのデータとは対照的に、ベースライン駆出率が低いことを示した一方、実施例に記載のこれらの変異を保有する対象は、左心室機能を経時的に改善しなかった。それにもかかわらず、ＬＭＮＡ切断変異の患者と比較して、治療後のＴＴＮ切断変異の患者では、移植および死亡率の低下によって示される良好な予後が認められた（Ｔｏｂｉｔａ、前出）。以前の研究と同様に、ＬＭＮＡ ＰＶ＋切断変異をもつ患者は、転帰が悪く、より多くの心臓移植を受けた（１００％）。（ｖａｎ Ｒｉｊｓｉｎｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅｓ，１５：３７６－３８４，２０１３、Ｈａｓｓｅｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．，３９：８５３－８６０，２０１８）。細胞送達への応答性で評価された別の要因は、複数の陽性病的変異が悪い転帰に寄与することであった。実施例２で提供されたデータは、複数のＶＵＳが予後不良に関連するという証拠を示さなかった。心臓の構造タンパク質の遺伝的欠損は、好ましい遺伝背景と比較して、細胞送達の応答性に影響を及ぼす可能性がある。

【0019】

本明細書に記載されるように、心血管障害に関連する病的変異が陰性である患者は、駆出率（ＥＦ）において大きな改善を示し、ＭＳＣ治療でＶ－患者の５５％がＨＦｒｅｃＥＦに移行した。これは、以前に同定されていなかった特定のＮＩＤＣＭ亜集団が細胞（例えば、ＭＳＣ）療法から優先的な利益を示し、意外にも、これらの患者には障害に関連する病的遺伝子変異が欠如することを示す。

【0020】

本明細書に記載されている遺伝子データは、ＶＵＳおよびＰＶ＋患者が軽度から消失の応答を示し、ＨＦｒｅｃＥＦと比較して高い死亡率、ＬＶＡＤ要件、移植およびＭＡＣＥ事象によって表されるＨＦｒＥＦとして持続するという証拠を提供する。鈍化した応答に関連する独立要因には、長いＨＦ期間、より大きいＥＤＶ、ＮＹＨＡクラスＩＩＩ～ＩＶ、および収縮期血圧の低下が含まれる。したがって、様々な態様では、本開示は、ＭＳＣ療法に対する応答が低下した対象を同定する方法を提供し、これにより、臨床医は、他の治療とともにＭＳＣ療法を含む代替治療または併用療法を選択することができる。本方法は、図５に示される遺伝子パネルの１つ以上の病的変異を同定することを含む（例えば、ＡＣＴＣ、ＮＹＨ７、ＭＹＨ６、ＭＹＢＰＣ３、ＴＮＮＴ２、ＴＮＮＣ１、ＴＮＮＩ３、ＴＰＭ１、ＴＴＮ、ＤＭＤ、ＤＥＳ、ＬＤＢ３、ＳＧＣＤ、ＰＤＬＩＭ３、ＶＣＬ、ＲＹＡＢ、ＩＬＫ、ＬＡＭＡ４、ＦＬＮＣ、ＴＣＡＰ、ＣＳＲＰ３、ＡＣＴＮ２、ＭＹＰＮ、ＡＮＫＲＤ１、ＢＡＧ３、ＬＭＮＡ、ＴＭＰＯ、ＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２、ＰＬＮ、ＥＹＡ４、ＴＡＺ／Ｇ４．５、ＣＰＴ２、ＡＣＡＤＶＬ、ＲＢＭ２０、ＡＢＣＣ、ＳＣＮ５Ａ、ＧＡＴＡＤ１、ＰＲＤＭ１６、ＧＡＡ、ＦＫＲＰ、ＣＴＮＮＡ３、ＤＳＰ、ＰＫＰ２、ＳＯＳ２、および／またはＡＬＭＳ１）。いくつかの実施形態において、本方法は、以下の遺伝子のうちの１つ以上で１つ以上の病的変異を同定することを含む。ＡＮＫＲＤ、ＢＡＧ３、ＤＭＤ、ＧＡＴＡＤ１、ＬＤＢ３、ＬＭＮＡ、ＭＹＢＰＣ３、ＭＹＨ６、ＲＢＭ２０、ＴＮＮＴ２、ＴＴＮおよびＲＢＭ２０。必要に応じて、対象は、ＡＮＫＲＤ、ＢＡＧ３、ＤＭＤ、ＧＡＴＡＤ１、ＬＤＢ３、ＬＭＮＡ、ＭＹＢＰＣ３、ＭＹＨ６、ＲＢＭ２０、ＴＮＮＴ２、ＴＴＮ、およびＲＢＭ２０のすべてに病的変異を含む。

【0021】

Ｖ－患者は、ＰＶ＋患者と比較してＥＦが有意に増加し、生存率が大幅に増加した。興味深いことに、Ｖ－患者は生存率が高いだけでなく、１年間の追跡調査後に細胞送達後のＭＡＣＥ事象が有意に減少した。死亡率が高く、ＭＡＣＥ事象があった患者では、関連する遺伝子変異が同定された。この知見は、幹細胞送達の利益を受ける患者を同定する明確さ、およびＮＩＤＣＭなどの心血管疾患の治療における有意義な影響を改善する可能性がある。

【0022】

遺伝子変異の同定
個体の核酸における本明細書に記載の方法による遺伝子変異の分析は、多型部位に存在するヌクレオチドを判定できる任意の方法または技術によって行うことができる。対象から生体試料（例えば、尿、唾液、血漿、血清などの体液、または頬組織試料もしくは頬細胞などの組織試料）が得られると、配列バリエーションまたは対立遺伝子変異ＳＮＰの検出が通常行われる。いくつかの実施形態において、本方法は、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡのいずれかの配列を判定することと、およびこれらの配列を遺伝子の既知の対立遺伝子ＳＮＰと比較することと、を含む。配列変異を検出するために存在する様々な方法のいずれも、本発明の方法で使用することができる。

【0023】

例えば、Ｉｌｌｕｍｉｎａ’ｓ Ｖｅｒａｃｏｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、およびＫＡＳＰａｒ ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙの直接シークエンシング技術を使用しない高処理ＳＮＰ同定用に他の市販の方法がある。

【0024】

直接配列判定法のバリエーションは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘから入手可能なＧｅｎｅ Ｃｈｉｐ（商標）法である。あるいは、ＤＮＡ配列バリエーションを検出する堅牢で安価な方法も市販されている。例えば、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒは、そのＴＡＱｍａｎ Ａｓｓａｙ（商標）を採用して、配列バリエーションを検出した。Ｏｒｃｈｉｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓには、ＳＮＰ－ＩＴ（商標）（ＳＮＰ－同定技術）と呼ばれる方法があり、標識ヌクレオチド類似体によるプライマー伸長を使用して、オリゴヌクレオチドプローブのすぐ３’の位置に発生するヌクレオチドを判定し、次いで直接蛍光、間接比色アッセイ、質量分析、または蛍光偏光を使用して伸長塩基を同定する。Ｓｅｑｕｅｎｏｍは、ハイブリダイゼーションキャプチャ技術とＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ（マトリックス支援レーザー脱離／イオン化－飛行時間型質量分析）を使用して、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ（商標）システムでＳＮＰ遺伝子型を検出する。Ｐｒｏｍｅｇａは、ＲＥＡＤＩＴ（商標）ＳＮＰ／Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（米国特許第６，１５９，６９３号）を提供する。この方法では、ＤＮＡまたはＲＮＡプローブが標的核酸配列にハイブリダイズする。各塩基の標的配列に相補的なプローブは、独自の酵素混合物で解重合される一方、照合位置の標的と異なるプローブはそのまま残る。本方法は、ルシフェラーゼ検出と組み合わせたピロリン酸化学を使用して、高感度で適応性の高いＳＮＰスコアリングシステムを提供する。Ｔｈｉｒｄ Ｗａｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓには、独自の開裂酵素を使用するＩｎｖａｄｅｒ ＯＳ（商標）方法があり、Ｉｎｖａｄｅｒプロセス中に形成された特定の構造のみを認識して切断する。Ｉｎｖａｄｅｒ ＯＳは、標的の指数関数的増幅ではなく、Ｉｎｖａｄｅｒプロセスによって生成したシグナルの線形増幅に依存する。Ｉｎｖａｄｅｒ ＯＳアッセイは、アッセイのどの部分でもＰＣＲを利用しない。さらに、遺伝子特異的ＰＣＲを使用し、続いて制限酵素消化およびゲル電気泳動（または他のサイズ分離技術）により制限断片長多型（ＲＦＬＰ）を検出するいくつかの法医学的ＤＮＡ試験研究所および多くの研究所がある。

【0025】

いくつかの実施形態において、病的遺伝子変異の存在は、次世代シークエンシングによって判定される。（例えば、Ｓｒｉｖａｔｓａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔ ４：ｅ１００１３９（２００８）、Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４６３：７５７－７６２（２０１０）、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４６３：３１１－３１７（２０１０）、Ｐｅｌａｋ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔ ６： ｅ１００１１１１（２０１０）、Ｒａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｓｔ Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ Ｍｅｄ （５７（３）：１１７－１１８（２０１１）、ＭｃＥｌｌｉｓｔｒｅｍ，Ｆｕｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ４：８５７－８６５（２００９）、Ｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ５５：６０７－６０８（２００９）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ １１：１４４（２０１０）、およびＡｒａｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｄｏｉ１０．１０１６．ｊ．ｔｉｂｔｅｃｈ．２０１１．０４．００３（２０１１）を参照）。例えば、そのような技術は、ゲノム核酸試料の断片化と、それに続く断片の並行シークエンシング、および元の配列を再構築するための配列決定された断片のアラインメントを含み得る。ここで、目的のゲノム核酸は断片に剪断され、「アダプター」（既知配列の短い核酸）が断片に連結される。アダプターで修飾された断片は、ＰＣＲにより濃縮できる。アダプターで修飾された断片（および存在する場合はその増幅コピー）をフローセルに流し、セルの表面に固定されたプライマーに断片をハイブリダイズさせる。次に、断片は等温ブリッジ増幅によって増幅され、元の分子と同一の何千もの分子からなるクラスターになる。次に、シークエンシングプライマーをクラスターの一方の鎖の末端にハイブリダイズさせ、可逆的に遮断し、標識ヌクレオチドを添加し得る。特定の各ヌクレオチドの添加は、標識によって同定でき、次に標識を除去し、ヌクレオチドの遮断を解除して、別の遮断および標識ヌクレオチドを添加して、核酸配列の次の位置を同定することができる。添加、検出、および遮断解除の必要な巡回数が行われると、得られる配列を整列させることができる。

【0026】

細胞療法
本明細書に記載の方法は、細胞療法に対するハイパーレスポンダーであると同定された対象に細胞療法を施すことを含む。企図する細胞療法には、間葉系幹細胞療法、心臓幹細胞療法、人工多能性幹細胞療法、および胚性幹細胞療法が含まれるが、これらに限定されない。

【0027】

いくつかの実施形態において、細胞療法は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）療法を含む。ＭＳＣは、骨髄に原型的に見られる成体幹細胞であり、複数の細胞型に分化する能力を有する。臍帯血、脂肪組織、ウォートンゼリーまたは羊水から得られたＭＳＣも企図される。

【0028】

ＭＳＣは、内因性前駆細胞の増殖および分化を刺激し、幹細胞微小環境を維持する上で重要な役割を果たす^２７。さらに、ＭＳＣは、血管新生、心筋形成、新生血管形成、他の内因性幹細胞の刺激、および免疫系の調節に関与する傍分泌因子を分泌する^{２８，２９}。ＭＳＣは、心臓前駆細胞および心臓の細胞周期活性を刺激することが知られている一方、他の内因性前駆体集団を刺激する際の役割はこれまで知られていなかった。本明細書で提供されるデータは、ＭＳＣが内因性ＥＰＣ活性化を刺激し、機能的ＥＰＣの数および質を高めることを立証している。これらの知見は、ＥＰＣの増強が、ＭＳＣが好ましい生物学的効果を発揮する新規の作用機序を表す可能性があることを示唆している。

【0029】

過去１０年間で、ＣＶ障害におけるＭＳＣの使用に関心が生じている^３０。臨床試験では、ＭＳＣ投与の主要な安全性プロファイルが実証されており、ＨＦの患者における有効性が示唆されている^{３０～３２}が、根底にある作用機序（複数可）は、引き続き活発に議論されている。虚血性心不全および非虚血性心不全の両患者における同種ＭＳＣ注射が、特にＥＰＣ機能、ＦＭＤを回復させ、ＶＥＧＦレベルを正常レベルへと低下させることにより、内皮機能の改善をもたらすという本知見は、ＭＳＣの作用機序に対する主要な新しい洞察を提供する。研究集団では、血清ＶＥＧＦの増加は、ＥＰＣ－ＣＦＵの減少と相関し、これはＶＥＧＦが代償的な役割を果たすという考えと一致しており、この知見は脳動脈瘤患者でも報告された^２６。本明細書で提供される知見は、同種ＭＳＣを使用して、ＥＰＣ生物活性を刺激し、動脈生理学的血管拡張応答を改善し、ＣＶ疾患および内皮機能不全に関連する他の障害を有する患者において好ましくないサイトカイン動員を減少させることができることを立証している。

【0030】

いくつかの実施形態において、細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞、または心臓幹細胞）は、細胞療法に対して過敏に応答すると同定された対象に、当技術分野で既知の方法を含む任意の適切な方法に従って投与される。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）は、局所投与される。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）は、経心内膜注射によって投与される。いくつかの実施形態において、細胞は間葉系幹細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、同種または自己の間葉系幹細胞のいずれかである。

【0031】

細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）は、必要に応じて、約２０００万～約１０^９個の細胞の範囲の量で投与される。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）は、約２０００万～約３０００万個の細胞、または約２０００万～約４０００万個の細胞、または約２０００万～約５０００万個の細胞、または約２０００万～約６０００万個の細胞、または約２０００万～約７０００万個の細胞、または約２０００万～約８０００万個の細胞、または約２０００万～約９０００万個の細胞、または約３０００万～約５０００万個の細胞、または約３０００万～約７０００万、または約３０００万～約９０００万個の細胞、または約５０００万～約１億個の細胞、または約１億～約３億個の細胞、または約２億～約４億個の細胞、または約５億～約１０億個の細胞、または約５億～約１００億個の細胞の範囲の量で投与される。いくつかの実施形態において、約２，０００万、または約２，５００万、または約３，０００万、または約３，５００万、または約４，０００万、または約４，５００万、または約５，０００万、または約５，５００万、または約５，０００万、または約５５００万、または約６０００万、または約６５００万、または約７０００万、または約７５００万、または約８０００万、または約８５００万、または約９０００万、または約９５００万、または約１億、または約２億、または約３億、または約４億、または約５億、または約６億、または約７億、または約８億、または約９億、または約１０億、または約２０億、または約３０億、または約４０億、または約５０億、または約６０億、または約７０億、または約８０億、または約９０億、または約１００億個の細胞が対象に投与される。

【0032】

本開示は、細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）を含む医薬組成物などの組成物を調製する方法、および／または少なくとも例えば、心血管障害、心不全、または他の心臓の状態を治療するための開示方法で使用するための方法も提供する。例示的な心血管障害には、心不全、アドリアマイシン誘発性心筋症、特発性拡張型心筋症、虚血性心筋症、心筋炎、虚血性心疾患、浸潤性心筋症による心筋症、アミロイドーシスによる心筋症、サルコイドーシスによる心筋症、ヘモクロマトーシスによる心筋症、周産期心筋症、高血圧による心筋症、ヒト免疫不全ウイルス感染による心筋症、結合組織疾患による心筋症、強皮症による心筋症、全身性紅斑性狼瘡による心筋症、マルファン症候群による心筋症、結節性多発動脈炎による心筋症、非特異的結合組織疾患による心筋症、強直性脊椎炎による心筋症、リウマチ性関節炎による心筋症、再発性多発軟骨炎による心筋症、ウェゲナー肉芽腫症による心筋症、混合性結合組織疾患による心筋症、物質乱用による心筋症、慢性アルコール乱用による心筋症、コカイン乱用による心筋症、ドキソルビシン療法による心筋症、拘束性心筋症、家族性心筋症、心臓弁疾患による心筋症、内分泌機能障害による心筋症、甲状腺疾患による心筋症、カルシノイドによる心筋症、褐色細胞腫による心筋症、末端肥大症による心筋症、神経筋疾患による心筋症、腫瘍性心疾患による心筋症、先天性心疾患による心筋症、冠動脈バイパス手術の合併症による心筋症、放射線による心筋症、重症疾患による心筋症、心内膜線維弾性症による心筋症、血栓性血小板減少性紫斑病による心筋症、リウマチ性心炎による心筋症、ロイコトリエン療法による心筋症、リチウム療法による心筋症、およびプレドニゾン療法による心筋症が含まれるが、これらに限定されない。

【0033】

いくつかの実施形態において、医薬組成物は、単離された細胞（例えば、間葉系幹細胞、人工多能性幹細胞、胚性幹細胞または心臓幹細胞）および薬学的に許容される担体を含む。

【0034】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、注射により送達される。これらの投与（送達）経路には、静脈内、動脈内（冠動脈内）、筋肉内、腹腔内、心筋内、経心内膜、経心外膜、鼻腔内投与、ならびに髄腔内および注入技術を含む皮下または非経口が含まれるが、これらに限定されない。したがって、医薬組成物は、注射に適した形態であることが好ましい。組成物を非経口投与する場合、一般に、単位投与量の注射剤型（溶液、懸濁液、乳濁液）で製剤化されるであろう。注射に適した医薬製剤には、滅菌の水溶液または分散液、および滅菌の注射液または分散液に再構成するための滅菌粉末が含まれる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、および植物油を含む溶媒または分散媒であり得る。

【0035】

適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。綿実油、ゴマ油、オリーブ油、大豆油、コーン油、ヒマワリ油、またはピーナッツ油などの非水性媒体、およびミリスチン酸イソプロピルなどのエステルも、化合物組成物の溶媒系として使用することができる。さらに、抗菌防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝剤を含む、組成物の安定性、滅菌性、および等張性を高める様々な添加剤を添加することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確保され得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましいだろう。注射可能な医薬剤型の長期吸収は、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。しかし、本発明によれば、使用される賦形剤、希釈剤、または添加剤は、化合物と適合しなければならない。滅菌注射溶液は、本発明の実施において利用される化合物を、必要に応じて、各種量の他の成分とともに必要量の適切な溶媒に組み込むことによって調製することができる。

【0036】

例えば、ある量の間葉系幹細胞を含む本開示の医薬組成物は、様々な賦形剤、アジュバント、添加剤、および希釈剤などの任意の適合担体を含む注射製剤で対象に投与することができる。

【0037】

本開示の様々な実施形態を以上で説明してきたが、それらは、限定ではなく例として提示されたに過ぎないことを理解されたい。本発明の精神または範囲から逸脱することなく、本明細書の開示に従って、開示された実施形態に対して多くの変更を行うことができる。したがって、本開示の幅および範囲は、上記の実施形態のいずれにも限定されるべきではない。

【0038】

本明細書で言及されるすべての文書は、参照により本書に組み込まれる。本出願で引用されたすべての刊行物および特許文書は、個々の刊行物または特許文書が個別に示されている場合と同程度にあらゆる目的のために参照により組み込まれる。出願人は、本書において様々な参考文献を引用することにより、任意の特定の参考文献が本発明の「先行技術」であることを認めているわけではない。本発明の組成物および方法の実施形態は、以下の実施例に示される。

【実施例】

【0039】

実施例１－細胞療法に対して過敏に応答する患者の同定
以下の実施例で提供されるデータは、１つ以上の病的遺伝子変異を欠いているとも判断された拡張型心筋症の患者が、間葉系幹細胞療法に対して過敏に応答することを示している。

【0040】

方法
前向き設計された経皮的幹細胞注入送達効果が拡張型心筋症の新筋形成に及ぼす影響（ＰＯＳＥＩＤＯＮ－ＤＣＭ、ＮＣＴ０１３９２６２５）（１）は、患者の転帰について自己起源対同種起源の１億個のＭＳＣ細胞を無作為に試験した。患者は、ＮＩＤＣＭに関連する遺伝子変異の遺伝子検査に同意した。細胞は、Ｂｉｏｓｅｎｓｅ Ｗｅｂｓｔｅｒ ＭｙｏＳｔａｒ ＮＯＧＡ Ｃａｔｈｅｔｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）を使用して、１０回の経心内膜幹細胞注射（ＴＥＳＩ）によって１０個の左心室部位に送達され、均一なパターンで分布した。

【0041】

心臓機能および解剖所見は、植込み型心臓デバイスに応じて、心臓ＣＴまたはＭＲＩによって評価された。機能容量は、６分間歩行距離試験（６ＭＷＴ）および努力性呼気１秒量（ＦＥＶ１）によって評価された。生活の質（ＱＯＬ）評価には、ミネソタ心不全生活質問票（ＭＬＨＦＱ）総合得点およびニューヨーク心不全協会（ＮＹＨＡ）機能クラスが含まれた。全対象は、書面によるインフォームドコンセントを提出した。この研究は、マイアミ大学ミラー医学部の施設内審査委員会（ＩＲＢ）によって承認された。

【0042】

心臓のＣＴまたはＭＲＩによって測定されるように、駆出率（ＥＦ）、拡張末期（ＥＤＶ）および収縮末期（ＥＳＶ）の容積、球形度指標（ＳＩ）を含む画像パラメーターをベースライン時およびＭＳＣ注射の１２ヵ月後に測定した。ＭＬＨＦＱ得点、６ＭＷＴ、ＮＹＨＡ分類などの機能パラメーターも、細胞送達の３ヵ月および６ヵ月後に評価した。内皮前駆体コロニー（ＥＰＣ）形成および血流依存性血管拡張（ＦＭＤ）としての内皮機能パラメーターは、細胞送達の３ヵ月後に評価された。死亡（ｎ＝２、治療に関係なし）、心臓移植（ｎ＝３）、自動植込み型除細動器の留置（ＬＶＡＤ）（ｎ＝２）および研究からの脱落（ｎ＝３）により、１０名の患者は１年間の画像パラメーターを受けておらず、８名の患者は機能パラメーターの評価を受けなかった。データ測定は、記載の通りに実行され、中央電子データシステムを使用して収集された（１）。

【0043】

遺伝子検査：ＰＯＳＥＩＤＯＮ－ＤＣＭ患者（ｎ＝３４）は、遺伝子分析を受け、ＡＣＭＧガイドラインに従って、病的変異群／おそらく病的変異群に対して陽性（ＰＶ＋、ｎ＝８）、任意の関連する可能性がある変異に対して陰性（Ｖ－、ｎ＝６）、または有意性が不明な変異として同定された患者（ＶＵＳ、ｎ＝２０）を含む群に分類された。分析は、遺伝性心筋症に関連する５０個の遺伝子、心筋症に関連する予備的証拠のある３０個の遺伝子、常染色体劣性症候性小児心筋症に関連する８個の遺伝子、およびＲａｓ－ＭＡＰＫ経路の遺伝子変異によって影響を受ける症候群であるＲＡＳ病に関連する１７個の遺伝子からなる１０５個の遺伝子を含む包括的な心筋症パネルに基づくものであった。本分析には、遺伝子シークエンシングおよび欠失／重複試験の両方が含まれた。（１１、１２）

【0044】

ＤＮＡ抽出
ＰＡＸｇｅｎｅ ＤＮＡ採血管からのＤＮＡ抽出：ＤＮＡは、ＦｌｅｘＳｔａｒ＋自動ＤＮＡ抽出システムでＱｉａｇｅｎのＦｌｅｘｉＧｅｎｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙを利用して、ＰＡＸｇｅｎｅ ＤＮＡ採血管から抽出された。Ｆｌｅｘｉｇｅｎｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙでは、高分子量ＤＮＡを単離するために沈殿法を利用している。ＤＮＡの品質は、０．８％アガロースゲルで評価した。試料量は、ＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）ＮＤ－８０００分光光度計で、１ｕｌの試料容量を使用し、標準プロトコルに従って分光光度計により測定される。試料測定は、１．７～２．０の許容Ａ２６０／２８０範囲および３回の測定全体で１５の標準偏差で３回実行される。試料量は、標的に結合した場合にのみ発光する蛍光色素を利用するＱｕｂｉｔ ｄｓＤＮＡ ＢＲアッセイによっても測定される。発光強度は蛍光光度計によって捕捉され、既知の濃度の試料を測定することによって生成される標準曲線を使用して、未知の濃度が内挿または外挿される。試料濃度、総量、およびＡ２６０／２８０比は、Ｎａｕｔｉｌｕｓ ＬＩＭＳ（商標）内で計算および記録される。

【0045】

ＰＢＭＣからのＤＮＡ抽出：ＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ標準プロトコルを利用して、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からＤＮＡを抽出した。ＱＩＡａｍｐ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔは、細胞からのシリカ膜に基づくＤＮＡ単離法を利用している。ＤＮＡの品質は、０．８％アガロースゲルで評価した。試料量は、ＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）ＮＤ－８０００分光光度計で、１ｕｌの試料容量を使用し、標準プロトコルに従って分光光度計により測定される。試料測定は、１．７～２．０の許容Ａ２６０／２８０範囲および３回の測定全体で１５の標準偏差で３回実行される。試料量は、標的に結合した場合にのみ発光する蛍光色素を利用するＱｕｂｉｔ ｄｓＤＮＡ ＢＲアッセイによっても測定される。発光強度は蛍光光度計によって捕捉され、既知の濃度の試料を測定することによって生成される標準曲線を使用して、未知の濃度が内挿または外挿される。試料濃度、総量、およびＡ２６０／２８０比は、Ｎａｕｔｉｌｕｓ ＬＩＭＳ（商標）内で計算および記録される。

【0046】

次世代シークエンシングおよびバイオインフォマティクス：遺伝子検査は、前述のようにＩｎｖｉｔａｅ（カリフォルニア州サンフランシスコ）で実施された（１３）。簡潔に述べると、血液試料から得られたゲノムＤＮＡは、カスタムベイトプールを備えるハイブリダイゼーション捕捉を使用して標的濃縮に曝露され、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙを使用して配列決定された。コミュニティ標準およびカスタムアルゴリズムを組み込んだ検証済みのバイオインフォマティクスパイプラインを使用して、配列変化およびエキソン欠失／重複を同時に同定した。第一度近親者において個別に検証された変異および以前に確認された変異を除いて、直交技術によって臨床的に重要な観察が確認された。変異の種類に応じて、確認技術には次のいずれかが含まれ得る。Ｓａｎｇｅｒシークエンシング、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＳＭＲＴシークエンシング、ＭＬＰＡ、ＭＬＰＡ－ｓｅｑ、アレイＣＧＨ。

【0047】

統計分析：データ分布は、連続測定のためにピアソン正規性検定を使用して評価された。正規分布の連続変数を二元ＡＮＯＶＡによって評価し、ボンフェローニ補正とテューキー補正を使用して多重比較を行い、平均値±ＳＥとして表した。非正規分布変数は、マン－ホイットニー検定によって評価され、中央値および四分位範囲［ＩＱＲ］によって報告された。正規分布のデータ内で、対応ｔ検定によって分析し、そうでない場合はウィルコクソンのマッチドペアによって分析した。カテゴリ変数は、ピアソンのカイ二乗検定およびフィッシャーの直接検定によって対応するものとして分析された。カプラン－マイヤー曲線は、全死因死亡、心臓移植、またはＬＶＡＤ留置の複合終末事象の生存分布の評価に使用された。欠測データの補完は行われなかった。全統計は、アルファ＝０．０５で両側を使用して検定された。分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州ラホーヤ）を使用して行われた。

【0048】

結果
患者の特徴：３４名のＮＩＤＣＭ患者が無作為化され、自己ＭＳＣおよび同種ＭＳＣで治療された。患者集団は７０．６％が男性であった。細胞送達時の平均年齢は、５５．１２±１．９２歳であり、細胞送達前の疾患期間は、４．６８（１．９３、９．２３）年であった。８名の対象（２３．５％）で病的変異が同定され、そのうち６名は心不全の家族歴が陽性であり、２名はＤＣＭの家族歴が文書化または報告されていないにもかかわらず、ＤＣＭ表現型が同定された。任意の病的変異が陰性である遺伝的サブ集団（Ｖ－）、有意性が不明な変異（ＶＵＳ）、および既知の病的変異／おそらく病的変異をもつ患者（ＰＶ＋）のベースライン特徴を下の表１に示す。

【0049】

【表1-1】

【0050】

【表1-2】

【0051】

ＴＮＦ－α、ＢＮＰ前駆体、血中尿素、ＣＲＰ、腎機能、電解質、ヘモグロビン、赤血球、血小板、およびコレステロール値などの細胞送達前の血液化学およびバイオマーカーは、群間で類似していた。アルドステロン遮断薬、アンギオテンシン受容体遮断薬、ベータ遮断薬、およびスタチンなどの細胞送達前の投薬は、全群で類似していた。同様に、植込み型除細動器（ＩＣＤ）の存在は、群間で類似していた。

【0052】

シークエンシングの概要および遺伝的根拠：変異は、サルコメアおよびｚ板を含む器質的心筋をコードする遺伝子および核膜（ｎｕｃｌｅａｒ ｅｎｖｅｌｏｐｅ）で主に検出された。この患者集団では、イオンチャネルおよびミトコンドリアのコーディング遺伝子は検出されなかった。ＡＮＫＲＤ、ＢＡＧ３、ＤＭＤ、ＧＡＴＡＤ１、ＬＤＢ３、ＬＭＮＡ、ＭＹＢＰＣ３、ＭＹＨ６、ＲＢＭ２０、ＴＮＮＴ２、ＴＴＮを含む、拡張型心筋症（ＤＣＭ）に関連する１１の遺伝子の多重変異が観察された。ＤＣＭに関連する８つの陽性病的変異が同定され、ＴＴＮで３変異、ＬＭＮＡで２変異、ＤＳＰで２変異、およびＭＹＢＰＣ３で１変異が含まれた。さらに、ＡＮＫＲＤ、ＢＡＧ３、ＭＹＨ６、ＲＢＭ２０、ＴＮＮＴ２およびＴＴＮにおいて、病的関連にとって有意であり得る、有意性が不明な９つの変異が同定された（図１）。

【0053】

３４名の患者のうち、合計１０５の遺伝子が配列決定され、２８名の対象において３９の陽性病的変異または有意性が不明な変異が、ＡＣＭＧガイドラインに従って同定された。８名の患者（１００％）のうち、３つの遺伝子に８つの陽性病的変異があり、２０名の患者のうち、２３の遺伝子に３１の有意性が不明な変異があった。コホート全体で、２１名の患者（６１．８％）が単一の陽性病的変異または有意性が不明な変異を有し、５名が２つの陽性病的変異（１５％）を有し、２名が同一対象において４つ以上（６％）の陽性病的変異または有意性が不明な変異を有した。

【0054】

最も一般的に影響を受ける遺伝子はＴＴＮであり、６名の患者で変異が観察され、そのうち３名（５０％）がＰＶ＋であった。重要なことには、ＴＴＮイントロン２４８での有意性が不明な唯一の変異は、正常またはＤＣＭの患者ではこれまで報告されていなかった一方、他のＴＴＮ ＶＵＳは、ＤＣＭおよび正常の両患者で報告されている。主に男性患者に影響を及ぼすＴＴＮサブ集団は、重い心機能障害に関連しており、ＥＦは３０％未満であった。ＴＮＮＴ２は、本発明者らの研究で２番目に頻度の高い変異であり、４名の患者で見出された。重要なことに、ＴＮＮＴ２［ｐ．Ａｒｇ１５１Ｃｙｓ］での有意性が不明な唯一の変異は、２名の無関係な患者で共発現し、その病的関連性に大きな可能性を与える。ＬＭＮＡは３番目に頻度の高い遺伝子であり、３名の男性患者で変異が見つかり、その全員がＭＳＣ療法に応答しない疾患の進行により心臓移植を受けたため、１２ヵ月の追跡調査を受けなかった。

【0055】

患者の転帰：合計３４名のＮＩＤＣＭ患者のうち、Ｖ－である患者の５５％はＨＦｒｅｃＥＦに改善し、ＶＵＳ患者の５５％は非ＨＦｒｅｃＥＦ群にとどまり、ＰＶ＋患者の６２．５％は、心血管状態の有意な利益なしまたは悪化、ＬＶＡＤもしくは心臓移植の必要性、または死亡として定義される有害転帰があった。

【0056】

これらの臨床転帰の特定の測定値の中で、Ｖ－患者は１２ヵ月でＥＦが有意に増加し、変化の中央値＋１３．６％（ＩＱＲ＝７．８、２０．５；ｐ＝０．００２）であった。これは、ＶＵＳカテゴリの＋６．５％（０．９、１１．１；ｐ＝０．００５）と比較して、ＰＶ＋患者の減少傾向であり、変化の中央値は－５．９％であった（ＩＱＲ＝－１２．７、＋１．０；ｐ＝０．２；群間でｐ＝０．０１）（図６Ａ）。ＥＤＶおよびＥＳＶを含む心臓容積は、群間で有意差を示さなかった。ＥＳＶは、ＰＶ＋：＋２７．９ｍＬ（１７．０、４０．９；ｐ＝０．２５；群間でｐ＝０．２６）と比較して、ＶＵＳ－２４ｍＬ（－５４．５、１４．１；ｐ＝０．０４）およびＶ－：－３８．５ｍＬ（－９７．１、０．８；ｐ＝０．３１）で類似していた。同様に、ＰＶ＋群（群間でｐ＝０．７４）の＋４３．３ｍＬ（－３７．７、４５．７；ｐ＝０．５）に対して、Ｖ－のＥＤＶは－４２．８ｍＬ（－８１．７、４８．２；ｐ＝０．６）であり、ＶＵＳ－は１０．３ｍＬ（－３８．６、２４．７；ｐ＝０．５）であった。逆心臓リモデリングは、群間で経時的に差異はなかった。

【0057】

機能容量およびＱＯＬは、Ｖ－患者で大幅に改善した。６分間歩行距離（６ＭＷＴ）は、Ｖ－：＋３３ｍ（３０、７２．５；ｐ＝０．０６）で顕著に改善したが、ＶＵＳ：３２．５ｍ（０、５３；ｐ＝０．２４）およびＰＶ＋：３９ｍ（－１７、６８；ｐ＝０．５；群間でｐ＝０．９）では改善されなかった（図２Ｂ）。Ｖ－患者は、ＶＵＳ：－１５．４±６．１（ｐ＝０．０７）およびＰＶ＋：－６．３±１１．６（ｐ＝＞０．９；群間でｐ＝０．３）と対比して、－４０．２±１４（ｐ＝０．０００５）のＭＬＨＦＱで最大の改善を示した（図２Ｃ）。興味深いことに、ＮＹＨＡクラスは、５３％のＶＵＳ患者および２５％のＰＶ＋患者と比較して、Ｖ－患者では６０％改善された（群間のデルタ％変化ｐ＝＜０．０００１）（図２Ｄ）。ＥＰＣによって評価される内皮機能は、ＶＵＳ：４．１±１．７ｕｃｆ（ｐ＝０．０７）およびＰＶ＋：３．８±２．９ｕｃｆ（ｐ＝０．４）とは対照的に、Ｖ－（ｐ＝０．００９）で９．７±１．９ｕｃｆ増加した（図２Ｅ）。重要なことに、ＴＮＦαレベルは、ベースラインから１年間の追跡調査で、全群で有意に減少した。Ｖ－患者は－６．９３±２．５９ｐｇ／ｍＬ（ｐ＝０．０４４）減少し、ＶＵＳは－８．６８±１．４７ｐｇ／ｍＬ（＜０．０００１）減少し、ＰＶ＋は－１０．７７±１．９７ｐｇ／ｍＬ（ｐ＝０．００１６）減少した。

【0058】

最長１年の追跡調査後、７名の対象に、死亡（ｎ＝２）、移植（ｎ＝３）、ＬＶＡＤの留置（ｎ＝２）などの最終的な事象があった。各群に１名ずつ、３名の患者が研究から脱落した。いずれかの変異が陰性の患者は、ＶＵＳ（８５％）およびＰＶ＋（４０％）と比較して１年生存（１００％）が高かった（ログ－ランク（マンテル－コックス）検定、ｐ＝０．０１５）（図３Ａ）。興味深いことに、移植を受けたすべての患者がＬＭＮＡに変異があった。ＰＶ＋患者は、１年間の追跡調査までに死亡、移植、またはＬＶＡＤのリスクが実質的に増加した。同様に、ＭＡＣＥ事象は、７事象のＶＵＳ（４２．２％）および第４事象のＰＶ＋患者と比較して、事象が発生しなかったＶ－患者間で異なった（６１．９％；ログ－ランク（マンテル－コックス）検定、ｐ＝０．０２１）（図３Ｂ）。

【0059】

考察
複数の第Ｉ相および第ＩＩ相の臨床試験にもかかわらず、ＭＳＣの心筋内注射に対する応答には継続的なばらつきがあり、細胞治療の理想的な患者集団については論争がある。この研究では、ＮＩＤＣＭ集団の遺伝子型を調査し、遺伝子型とＭＳＣ療法の有効性との関連を試験した。結果は、これらのサブ集団が表現型または人口統計の特徴によってベースラインで識別できないという概念を裏付けている。ただし、Ｖ－群は、ＶＵＳおよびＰＶ＋群と比較して、心機能および機能容量の改善など、有意に大きい臨床的有益性を示した。さらに、心筋症関連遺伝子に病的変異またはおそらく病的変異がある患者では、生存率が低下し、１年後のＭＡＣＥ事象が増加した。全体として、これらの知見は、ＮＩＤＣＭ遺伝子型が心筋内ＭＳＣ送達に対する個々の患者の応答性を判定する上で主要な役割を果たすという考えを強く裏付けている。したがって、これらの知見は、同様の疾患表現型をもつ患者において細胞送達に対する有益な応答の可能性を前向きに同定するために遺伝子検査を組み込むことの価値を強調している。

【0060】

概要
これらの知見は、ＮＩＤＣＭの遺伝子型がＭＳＣ細胞療法に対する患者の応答性を判定する上で主要な役割を果たし、心機能、ＭＡＣＥおよび生存率を改善することでＶ－患者に利益をもたらすという概念について説得力のある裏付けを提供する。対照的に、病的変異は、心臓の構造、機能、および長期的転帰に悪影響を及ぼすようである。重症度の低い表現型で発現する遺伝子変異（病的発現または発現のばらつきが少ない変異のため）は、細胞療法に対して異なる応答を示す可能性もある。
参考文献：
１．Ｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２０１４；１２９：ｅ２８－ｅ２９２．
２．Ｂｌｕｍ Ａ．Ｔｈｅ Ｉｓｒａｅｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｊｏｕｒｎａｌ：ＩＭＡＪ ２００９；１１：１０５－１１．
３．Ｍａｒｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ２０１２；６０：１４５５－６９．
４．Ｓａｎｔｉａｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ２００９；６：５９０－８．
５．Ｓｃｈｕｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ：ｏｆｆｉｃｉａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ２００６；２４：Ｓ４５－５０．
６．Ｐｏｌｏｖｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１４；１２６：３８－５３．
７．Ｚａｍｐｅｔａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８；７８：４１３－２１．
８．Ｒｅｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００３；１０７：１１６４－９．
９．Ｓｃｈｕｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｇｅｎ Ｍｅｄ ２０１２；７：１７－２４．
１０．Ｋａｒａｎｔａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２０１２；３０３：Ｈ２５６－７０．
１１．Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１１；１０９：９２３－４０．
１２．Ｓｕｎｃｉｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１２；１：２９－３５．
１３．Ｈａｔｚｉｓｔｅｒｇｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１０；１０７：９１３－２２．
１４．Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＰｌｏＳ ｏｎｅ ２００８；３：ｅ１８８６．
１５．Ｗｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００５；３５３：９９９－１００７．
１６．Ｓｈａｎｔｓｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ２００７；４９：７４１－５２．
１７．Ｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００３；３４８：５９３－６００．
１８．Ｃｏｒｒｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ２００２；３９：２５７－６５．
１９．Ｗｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ２００７；１０２：５６５－７１．
２０．Ｓｈａｎｔｓｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ２００７；４９：７４１－５２．
２１．Ｓｃｈｍｉｄｔ－Ｌｕｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００５；１１１：２９８１－７．
２２．Ｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ２００２；９０：１２５８－６０．
２３．Ｔｓａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００５；１０９：３９－４３．
２４．Ｓｅｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００４；１０６：４．
２５．Ｅｌｅｕｔｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ＆ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ ２０１１；１８：６０７－１４．
２６．Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１１；８９：１８２２－８．
２７．Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１１；１０９：９２３－４０．
２８．Ｇｎｅｃｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８；１０３：１２０４－１９．
２９．Ｃａｐｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００６；９８：１０７６－８４．
３０．Ｔｅｌｕｋｕｎｔｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ２０１３；２．
３１．Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ２００９；５４：２２７７－８６．
３２．Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．，ＪＡＭＡ ２０１２；３０８：２３６９－７９．
３３．Ｖａｓａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００１；８９：ｅ１－ｅ７．
３４．Ｆｒａｎｚ Ａｌｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ２００２；３９：１９５１－５．
３５．Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ ２０１３；５９：５５７－６３．
３６．Ｂｕｓｔｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１４；１８９：７８７－９８．
３７．Ｅｆｉｍｅｎｋｏ Ａ，Ｄｚｈｏｙａｓｈｖｉｌｉ Ｎ，Ｋａｌｉｎｉｎａ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ａｄｉｐｏｓｅ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｒｏｍａｌ Ｃｅｌｌｓ Ｆｒｏｍ Ａｇｅｄ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｋｅｅｐ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｒｏｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｂｕｔ Ｅｘｈｉｂｉｔ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ Ａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｈａｖｅ Ｉｍｐａｉｒｅｄ Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１３．
３８．Ａｓｕｍｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ ｔｈｅｒａｐｙ ２０１３；４：４７．
３９．Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００７；１１６：２８１８－２９．

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図3A】

【図3B】

【国際調査報告】