特表 2022-513053 Ｂ７－Ｈ３のＩｇＶドメインに対するモノクローナル抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-07

(54)【発明の名称】Ｂ７－Ｈ３のＩｇＶドメインに対するモノクローナル抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20220131BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20220131BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20220131BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 33/00 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 33/10 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 47/68 20170101ALN20220131BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/395 T

A61K39/395 L

A61P35/00

A61P35/02

A61P37/04

A61P31/00

A61P31/12

A61P31/04

A61P33/00

A61P33/10

A61P31/10

A61K47/68

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021526660

(86)(22)【出願日】2019-11-15

(85)【翻訳文提出日】2021-06-18

(86)【国際出願番号】 US2019061887

(87)【国際公開番号】W WO2020102779

(87)【国際公開日】2020-05-22

(31)【優先権主張番号】62/768,128

(32)【優先日】2018-11-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520224085

【氏名又は名称】アルバート アインシュタイン カレッジ オブ メディスン

【氏名又は名称原語表記】ＡＬＢＥＲＴ ＥＩＮＳＴＥＩＮ ＣＯＬＬＥＧＥ ＯＦ ＭＥＤＩＣＩＮＥ

(74)【代理人】

【識別番号】100108855

【弁理士】

【氏名又は名称】蔵田 昌俊

(74)【代理人】

【識別番号】100103034

【弁理士】

【氏名又は名称】野河 信久

(74)【代理人】

【識別番号】100179062

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 正

(74)【代理人】

【識別番号】100199565

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 茂

(74)【代理人】

【識別番号】100219542

【弁理士】

【氏名又は名称】大宅 郁治

(74)【代理人】

【識別番号】100153051

【弁理士】

【氏名又は名称】河野 直樹

(74)【代理人】

【識別番号】100162570

【弁理士】

【氏名又は名称】金子 早苗

(72)【発明者】

【氏名】ジャン、シンシン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C076EE60

4C085AA14

4C085AA21

4C085BB01

4C085CC23

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA30

4H045DA76

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ヒトＢ７-Ｈ３のＩｇＶドメインに結合するモノクローナル抗体に関する。また、本発明は、がん及び感染症の治療並びにＢ７-Ｈ３陽性細胞の画像化のためにこれらの抗体を使用する方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｂ７-Ｈ３タンパク質のＩｇＶドメインに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

(a) (i) 配列番号１及び７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、(ii) 配列番号２及び８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、並びに (iii) 配列番号３、９及び１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域；並びに、
(b) (i) 配列番号４、１０及び１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、(ii) 配列番号５、１１及び１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、並びに (iii) 配列番号６、１２及び１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域
を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

(a) 配列番号１、２、３、７、８、９又は１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である少なくとも１つのＣＤＲを含むＶＨ領域；及び、
(b) 配列番号４、５、６、１０、１１、１２、１３、１４又は１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である少なくとも１つのＣＤＲを含むＶＬ領域
を含む、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項4】

前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項5】

前記抗体はキメラ抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体である、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項6】

(a) 配列番号１９で示されるアミノ酸配列の残基２０～１３９；
(b) 配列番号２１で示されるアミノ酸配列の残基２０～１３５；
(c) 配列番号２３で示されるアミノ酸配列の残基２０～１３８；
(d) 配列番号２５で示されるアミノ酸配列の残基２３～１３１；
(e) 配列番号２７で示されるアミノ酸配列の残基２０～１３３；又は
(f) 配列番号２９で示されるアミノ酸配列の残基２１～１２９、
から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

前記抗体はモノクローナル抗体８Ｂ１２、モノクローナル抗体１２Ｂ４又はモノクローナル抗体２４Ｄ１２である、請求項４に記載の抗体。

【請求項8】

前記抗体はヒト化８Ｂ１２、ヒト化１２Ｂ４又はヒト化２４Ｄ１２である、請求項５に記載の抗体。

【請求項9】

(a) 重鎖はIGHV1-46*01、IGHV1-46*02、IGHV1-46*03、IGHD1-1*01、IGHD1-26*01、IGHD2-8*01、IGHD3-10*01、IGHD3-22*01、IGHD4-23*01、IGHJ3*01、IGHJ4*01、IGHJ4*03、IGHJ6*01若しくはIGHJ6*02から選択されるヒト生殖細胞系列のフレームワーク配列を含み；又は
(b) 軽鎖はIGKV2-18*01、IGKV2D-29*02、IGKV2-29*03、IGKV3-11*01、IGKV3-15*01、IGKV3-20*02、IGKJ1*01、IGKJ2*01、IGKJ4*01若しくはIGKJ4*02から選択されるヒト生殖細胞系列のフレームワーク配列を含む、
請求項３に記載の抗体。

【請求項10】

Ｔ細胞のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のＣＤ３成分に結合するモノクローナル抗体の抗原結合断片をさらに含む、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項11】

検出可能なマーカーをさらに含む、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項12】

前記抗体に結合した細胞毒性剤をさらに含む、請求項３に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項13】

医薬の製造に使用するための請求項３に記載の抗体又はその抗原結合断片。

【請求項14】

請求項２に記載の抗体又はその抗原結合断片のＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸を含有する組成物。

【請求項15】

請求項１４に記載の単離された核酸を含有する宿主細胞又はベクターをさらに含む、請求項１４に記載の組成物。

【請求項16】

疾患に罹患した対象に治療有効量の請求項２に記載の抗体又はその免疫原性の断片を投与することを含む前記対象を治療する方法であって、前記疾患は、前記対象の免疫機能を強化することにより前記対象が利益を得る疾患である、方法。

【請求項17】

前記疾患はがんである、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記がんが、前立腺癌、肝癌、黒色腫、白血病、乳癌、卵巣癌、膵癌、大腸癌、肺癌、膀胱癌、腎癌、脳のがん、骨肉腫、副腎癌、肛門管癌、基底細胞及び扁平上皮細胞の皮膚癌、胆管癌、膀胱癌、骨がん、脳及び脊髄の腫瘍、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼のがん（眼内黒色腫）、胆のう癌、胃腸神経内分泌（カルチノイド）腫瘍、胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性トロホブラスト疾患、カポジ肉腫、腎癌、喉頭及び下咽頭の癌、肝癌、肺癌、肺のカルチノイド腫瘍、悪性中皮腫、メラノーマ皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、鼻腔及び副鼻腔の癌、鼻咽頭の癌、神経芽腫、非小細胞肺癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、口腔及び中咽頭の癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、膵神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、扁平上皮癌、環境が誘発したがん、がんの組合せ、がんの転移性病変、骨髄系腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、反復性の遺伝的異常を伴うＡＭＬ、骨髄異形成変化を伴うＡＭＬ、治療関連ＡＭＬ、あいまいな系統の急性白血病、骨髄増殖性腫瘍、本態性血小板血症、真性赤血球増加症、骨髄線維症（ＭＦ）、原発性骨髄線維症、全身性肥満細胞症、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性／骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、環状鉄芽球を伴う不応性貧血、多系統形成異常を伴う不応性血球減少症、芽球増加を伴う不応性貧血（１型）、芽球増加を伴う不応性貧血（２型）、（５ｑ）単独欠失を伴うＭＤＳ、分類不能型ＭＤＳ、骨髄増殖性／骨髄異形成症候群、慢性骨髄単球性白血病、異型性慢性骨髄性白血病、若年性骨髄単球性白血病、分類不能型骨髄増殖性／骨髄異形成症候群、リンパ性新生物、前駆リンパ性新生物、Ｂ細胞リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫、成熟Ｂ細胞新生物、びまん性大細胞性Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、ろ胞性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、辺縁層リンパ腫、移植後リンパ増殖異常症、ＨＩＶ関連リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、血管内大細胞性Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、多発性骨髄腫、意義不明な単クローン性異常免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型多発性骨髄腫又は孤立性形質細胞腫（孤立性の骨及び髄外）からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。

【請求項19】

前記疾患は感染である、請求項１６に記載の方法。

【請求項20】

前記感染は、ウイルス、ウイロイド、細菌、プリオン、線虫、節足動物、真菌又は原生動物によって引き起こされる、請求項１９に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
この出願は米国仮特許出願第62/768,128号（出願日：2018年11月16日）の利益を主張し、その内容は全体がこの出願に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、ASCII形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が本明細書に組み込まれる。2019年11月15日に作成された上記ASCII形式の配列表の写しは、ファイル名がSequenceListing.txtで、サイズは19,181バイトである。

【背景技術】

【0003】

この明細書全体を通して、さまざまな文献を括弧内の数字により参照する。これらの参考文献の書誌事項を明細書の最後に示す。これらの文献の内容は、本発明が関係する技術をより完全に説明するために、それらの全体がこの出願に組み込まれる。

【0004】

Ｂ７-Ｈ３はＩ型膜貫通タンパク質であり、Ｂ７ファミリーに属する。Ｂ７-Ｈ３は、前立腺癌(3)、肝癌(4)、黒色腫(5)、白血病(6)、乳癌(7)、卵巣癌(8)、膵癌(9)、大腸癌(10)、肺癌(11)、膀胱癌(12)、腎癌(13)、脳のがん(14)及び骨肉腫(15)を含むヒトの悪性腫瘍(1,2)において過剰に発現している。いくつかの研究は、Ｂ７-Ｈ３の高発現と予後の不良に相関があることを示している(1,2)。これらの研究は、Ｂ７-Ｈ３がヒトのがん細胞が免疫細胞の機能を阻害するために使用する免疫チェックポイントであることを示唆する(1,2)。Ｂ７-Ｈ３の細胞外領域は、ＩｇＶ－ＩｇＣ－ＩｇＶ－ＩｇＣ又はＩｇＶ－ＩｇＣで構成されている。Ｂ７-Ｈ３のＩｇＶドメインのＦＧループがＢ７-Ｈ３によるＴ細胞抑制において重要な役割を果たすことを、以前の研究は示した(16)。

【0005】

がん及び感染症は、米国や他の国々において深刻な公衆衛生上の問題である。本発明は、これらの疾患の治療に使用することができる抗体に関する。

【発明の開示】

【0006】

本発明は、ヒトＢ７-Ｈ３のＩｇＶドメインに特異的に結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0007】

いくつかの態様では、抗体は、(a) ＧＹＴＦＴＳＹＷＩＴ（配列番号１）を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＤＩＹＰＧＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号２）を含むＣＤＲ２、及び／若しくはＡＲＧＧＴＲＦＳＰＦＡＹ（配列番号３）を含むＣＤＲ３（ＣＤＲ３）を有する重鎖；並びに／又は、(b) ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４）を含むＣＤＲ１、ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号５）を含むＣＤＲ２、及び／若しくはＦＱＧＳＨＶＰＷＴ（配列番号６）を含むＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。別の態様では、抗体は、配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び／又は配列番号１６で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、これらの配列はリーダー配列を含んでいない。

【0008】

いくつかの態様では、抗体は、(a) ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号７）を含むＣＤＲ１、ＭＩＨＰＮＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号８）を含むＣＤＲ２、及び／若しくはＹＹＹＧＳＳＹＡＭＤＹ（配列番号９）を含むＣＤＲ３を有する重鎖；並びに／又は、(b) ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１０）を含むＣＤＲ１、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）を含むＣＤＲ２、及び／若しくはＱＱＲＳＳＹＰＹＴ（配列番号１２）を含むＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。別の態様では、抗体は、配列番号１８で示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び／又は配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含み、これらの配列はリーダー配列を含んでいない。

【0009】

いくつかの態様では、抗体は、(a) ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号７）を含むＣＤＲ１；ＭＩＨＰＮＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号８）を含むＣＤＲ２、及び／若しくはＹＹＧＴＮＶ（配列番号１５）を含むＣＤＲ３を有する重鎖；並びに／又は、(b) ＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨ（配列番号１３）を含むＣＤＲ１、ＬＶＳＮＬＥＳ（配列番号１４）を含むＣＤＲ２、及び／若しくはＱＨＩＲＥＡＹＴ（配列番号１６）を含むＣＤＲ３を有する軽鎖を含む。別の態様では、抗体は、配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及び／又は配列番号２５で示されるアミノ酸配列を含むＶＬを含み、これらの配列はリーダー配列を含んでいない。

【0010】

いくつかの態様では、抗体は、ヒトＢ７-Ｈ３のＩｇＶドメインへの結合に関し、上記抗体又はその断片と競合する。

【0011】

ある態様では、抗体はヒト化抗体又はキメラ抗体である。

【0012】

また、本発明はがん及び感染症の治療並びにＢ７-Ｈ３陽性細胞の画像化のための抗体又は断片の使用に関する。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】ＦＡＣＳは、ｍＡｂ ８Ｂ１２（図１Ａ）及び１２Ｂ４（図１Ｂ）がヒトがん細胞株ＰＣ３（左）及びＭＤＡ-ＭＢ２３１（右）が発現する内因性のＢ７-Ｈ３に結合することを示す。いずれの図も、右のヒストグラムが８Ｂ１２又は１２Ｂ４で、左のヒストグラムがマウスＩｇＧアイソタイプ対照抗体である。

【図2】ＦＡＣＳは、樹状細胞（左）及び活性化Ｔ細胞（右）はＢ７-Ｈ３を発現していることを示す。いずれの図も、右のヒストグラムがＢ７-Ｈ３に対するｍＡｂで、左のヒストグラムがマウスＩｇＧアイソタイプ対照抗体である。

【図3】ｍＡｂ ８Ｂ１２（図３Ａ）及び１２Ｂ４（図３Ｂ）は、混合リンパ球反応アッセイにおいてＴ細胞のサイトカイン産生を調節することができる。Ｎ＝２～４。

【発明を実施するための最良の形態】

【0014】

本発明は、
I) a) ＧＹＴＦＴＳＹＷＩＴ（配列番号１）（相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＣＤＲ１）、
ＤＩＹＰＧＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号２）（ＣＤＲ２）、若しくは
ＡＲＧＧＴＲＦＳＰＦＡＹ（配列番号３）（ＣＤＲ３）
の１つ以上を含む重鎖；及び
b) ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４）（ＣＤＲ１）、
ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号５）（ＣＤＲ２）、若しくは
ＦＱＧＳＨＶＰＷＴ（配列番号６）（ＣＤＲ３）
の１つ以上を含む軽鎖；
II) a) ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号７）（ＣＤＲ１）、
ＭＩＨＰＮＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号８）（ＣＤＲ２）、若しくは
ＹＹＹＧＳＳＹＡＭＤＹ（配列番号９）（ＣＤＲ３）
の１つ以上を含む重鎖；及び
b) ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１０）（ＣＤＲ１）、
ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）（ＣＤＲ２）、若しくは
ＱＱＲＳＳＹＰＹＴ（配列番号１２）（ＣＤＲ３）
の１つ以上を含む軽鎖；又は、
III) ヒトＢ７-Ｈ３のＩｇＶドメインへの結合に関し、I) 若しくはII) の抗体若しくは断片と競合する抗体若しくはその断片
を含む、ヒトＢ７-Ｈ３のＩｇＶドメインに結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0015】

Ｂ７-Ｈ３ ＩｇＶドメインに結合する断片は、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２又はｓｃＦｖである可能性がある。

【0016】

いくつかの態様では、抗体又は断片は、
ＧＹＴＦＴＳＹＷＩＴ（配列番号１）（ＣＤＲ１）、
ＤＩＹＰＧＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号２）（ＣＤＲ２）及び
ＡＲＧＧＴＲＦＳＰＦＡＹ（配列番号３）（ＣＤＲ３）を含む重鎖；並びに
ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４）（ＣＤＲ１）、
ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号５）（ＣＤＲ２）及び
ＦＱＧＳＨＶＰＷＴ（配列番号６）（ＣＤＲ３）を含む軽鎖、
を含む。

【0017】

いくつかの態様では、抗体又は断片は、
a) ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号７）（ＣＤＲ１）、
ＭＩＨＰＮＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号８）（ＣＤＲ２）、及び
ＹＹＹＧＳＳＹＡＭＤＹ（配列番号９）（ＣＤＲ３）を含む重鎖；並びに
b) ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１０）（ＣＤＲ１）、
ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）（ＣＤＲ２）、及び
ＱＱＲＳＳＹＰＹＴ（配列番号１２）（ＣＤＲ３）を含む軽鎖、
を含む。

【0018】

ある態様では、軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域はヒトフレームワーク領域であるか、又はヒトフレームワーク領域に対して８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％以上の同一性を有する。ある態様では、抗Ｂ７-Ｈ３抗体又はそのＢ７-Ｈ３結合断片は、(i) ヒト生殖細胞系列GHV1-46*01、IGHV1-46*02、IGHV1-46*03、IGHD1-1*01、IGHD1-26*01、IGHD2-8*01、IGHD3-10*01、IGHD3-22*01、IGHD4-23*01、IGHJ3*01、IGHJ4*01、IGHJ4*03、IGHJ6*01若しくはIGHJ6*02のフレームワーク配列を含むＶＨフレームワーク；及び／又は、(ii) ヒト生殖細胞系列IGKV2-18*01、IGKV2D-29*02、IGKV2-29*03、IGKV3-11*01、IGKV3-15*01、IGKV3-20*02、IGKJ1*01、IGKJ2*01、IGKJ4*01若しくはIGKJ4*02のフレームワーク配列を含むＶＬフレームワークを含む。

【0019】

ある態様では、抗体又は断片は、ヒト重鎖定常ドメイン、例えばヒトＦｃ領域を有する。いくつかの態様では、ヒト重鎖定常ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４などのヒトＩｇＧから誘導される。いくつかの態様では、抗体又は断片は、ヒトκ軽鎖定常ドメインを含む。

【0020】

特定の態様では、抗体又は断片は、ブロッキング抗体若しくは断片、又は阻害抗体若しくは断片であり、Ｂ７-Ｈ３の生物学的活性に拮抗する。

【0021】

また、本発明は、本明細書に記載された抗Ｂ７-Ｈ３抗体の抗原結合ドメインを含有する二重特異性抗体、及びＴ細胞のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のＣＤ３成分に結合するモノクローナル抗体の抗原結合ドメインに関する。

【0022】

また、本発明は、
ＧＹＴＦＴＳＹＷＩＴ（配列番号１）（重鎖ＣＤＲ１）、
ＤＩＹＰＧＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号２）（重鎖ＣＤＲ２）、
ＡＲＧＧＴＲＦＳＰＦＡＹ（配列番号３）（重鎖ＣＤＲ３）、
ＲＳＳＱＳＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号４）（軽鎖ＣＤＲ１）、
ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号５）（軽鎖ＣＤＲ２）、及び
ＦＱＧＳＨＶＰＷＴ（配列番号６）（軽鎖ＣＤＲ３）
の１つ以上を含む抗Ｂ７-Ｈ３抗体の相補性決定領域をコードする単離された核酸又はｃＤＮＡに関する。

【0023】

また、本発明は、
ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号７）（重鎖ＣＤＲ１）、
ＭＩＨＰＮＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号８）（重鎖ＣＤＲ２）、
ＹＹＹＧＳＳＹＡＭＤＹ（配列番号９）（重鎖ＣＤＲ３）、
ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１０）（軽鎖ＣＤＲ１）、
ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号１１）（軽鎖ＣＤＲ２）、及び
ＱＱＲＳＳＹＰＹＴ（配列番号１２）（軽鎖ＣＤＲ３）
の１つ以上を含む抗Ｂ７-Ｈ３抗体の相補性決定領域をコードする単離された核酸又はｃＤＮＡに関する。

【0024】

また、本発明は、
ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ（配列番号７）（重鎖ＣＤＲ１）、
ＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨ（配列番号１３）（軽鎖ＣＤＲ１）、
ＭＩＨＰＮＳＧＳＴＮＹＮＥＫＦＫＳ（配列番号８）（重鎖ＣＤＲ２）、
ＬＶＳＮＬＥＳ（配列番号１４）（軽鎖ＣＤＲ２）、
ＹＹＧＴＮＶ（配列番号１５）（重鎖ＣＤＲ３）、及び
ＱＨＩＲＥＡＹＴ（配列番号１６）（軽鎖ＣＤＲ３）
の１つ以上を含む抗Ｂ７-Ｈ３抗体の相補性決定領域をコードする単離された核酸又はｃＤＮＡに関する。

【0025】

上述した態様のいずれの場合も、核酸を単離してもよい。本明細書において「単離された」又は「精製された」核酸は、(1) ゲノムＤＮＡ若しくは細胞内ＲＮＡから分離された、及び／又は、(2) 天然には存在しない、核酸である。

【0026】

また、本発明は単離された核酸（例．ｃＤＮＡ）を含むベクター又は宿主細胞に関する。

【0027】

また、本発明は、本明細書に記載された宿主細胞が抗Ｂ７-Ｈ３ ＩｇＶドメイン抗体又はそのＢ７-Ｈ３ ＩｇＶドメイン結合断片を産生する条件で宿主細胞を培養することを含む、抗Ｂ７-Ｈ３ ＩｇＶドメイン抗体又はそのＢ７-Ｈ３ ＩｇＶドメイン結合断片を製造する方法に関する。

【0028】

さらに、本発明は、本明細書に記載された抗体又はその断片及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。薬学的に許容される担体の例には、添加剤溶液-３（ＡＳ-３）、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、乳酸リンゲル溶液、ロック・リンゲル溶液、クレブス・リンゲル溶液、ハルトマンの平衡生理食塩水及びヘパリン化クエン酸ナトリウムデキストロース溶液があるが、これらに限定されるものではない。

【0029】

本明細書に記載された抗体又は抗体の断片を含む組成物又は医薬組成物は、好ましくは、貯蔵及び輸送中の変性、酸化又は凝集によるタンパク質の活性又は構造的完全性の喪失を防ぐための安定剤を含む。組成物又は医薬組成物は、凝集抑制に寄与することができる、塩、界面活性剤、ｐＨ及び糖などの等張化剤の組合せのうちの１つ以上を含むことができる。本発明の組成物又は医薬組成物が注射剤である場合、ほぼ中性のｐＨであることが望ましい。界面活性剤の量を最小限にして、注射において有害な製剤中の気泡の生成を回避することも有利である。いくつかの態様では、組成物又は医薬組成物は液体であり、生物活性な抗体が高濃度で安定しており、吸入又は非経口での投与に適している。

【0030】

使用する薬学的に許容される担体は、投与経路に依存することができる。医薬組成物は、当該技術分野において公知の方法で投与するために製剤化することができる。いくつかの態様では、組成物又は医薬組成物は、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内及び／又は皮下注射に適している。いくつかの態様では、組成物又は医薬組成物は液体であり、泡の形成とアナフィラキシーの危険性が最小限となっている。いくつかの態様では、組成物又は医薬組成物は等張である。いくつかの態様では、組成物又は医薬組成物のｐＨは、６．８～７．４である。

【0031】

本発明はまた、免疫機能を強化するのに有効な量の本明細書に記載された抗体又はその断片を対象に投与することを含む、対象の免疫機能を強化する方法に関する。対象は、例えば、がん又は感染症に罹患している可能性がある。

【0032】

本発明はさらに、がんを治療するのに有効な量の本明細書に記載された抗体又はその断片を対象に投与することを含む、対象のがんを治療する方法に関する。がんは、例えば、前立腺癌、肝癌、黒色腫、白血病、乳癌、卵巣癌、膵癌、大腸癌、肺癌、膀胱癌、腎癌、脳のがん、骨肉腫、副腎癌、肛門管癌、基底細胞及び扁平上皮細胞の皮膚癌、胆管癌、膀胱癌、骨がん、脳及び脊髄の腫瘍、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼のがん（眼内黒色腫）、胆のう癌、胃腸神経内分泌（カルチノイド）腫瘍、胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性トロホブラスト疾患、カポジ肉腫、腎癌、喉頭及び下咽頭の癌、肝癌、肺癌、肺のカルチノイド腫瘍、悪性中皮腫、メラノーマ皮膚癌、メルケル細胞皮膚癌、鼻腔及び副鼻腔の癌、鼻咽頭の癌、神経芽腫、非小細胞肺癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、口腔及び中咽頭の癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、膵神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、扁平上皮癌、環境が誘発したがん、がんの組合せ、がんの転移性病変、骨髄系腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、反復性の遺伝的異常を伴うＡＭＬ、骨髄異形成変化を伴うＡＭＬ、治療関連ＡＭＬ、あいまいな系統の急性白血病、骨髄増殖性腫瘍、本態性血小板血症、真性赤血球増加症、骨髄線維症（ＭＦ）、原発性骨髄線維症、全身性肥満細胞症、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性／骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、環状鉄芽球を伴う不応性貧血、多系統形成異常を伴う不応性血球減少症、芽球増加を伴う不応性貧血（１型）、芽球増加を伴う不応性貧血（２型）、（５ｑ）単独欠失を伴うＭＤＳ、分類不能型ＭＤＳ、骨髄増殖性／骨髄異形成症候群、慢性骨髄単球性白血病、異型性慢性骨髄性白血病、若年性骨髄単球性白血病、分類不能型骨髄増殖性／骨髄異形成症候群、リンパ性新生物、前駆リンパ性新生物、Ｂ細胞リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞リンパ芽球性リンパ腫、成熟Ｂ細胞新生物、びまん性大細胞性Ｂ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、ろ胞性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫、辺縁層リンパ腫、移植後リンパ増殖異常症、ＨＩＶ関連リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、血管内大細胞性Ｂ細胞リンパ腫、原発性皮膚Ｂ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、多発性骨髄腫、意義不明な単クローン性異常免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型多発性骨髄腫又は孤立性形質細胞腫（孤立性の骨及び髄外）であってもよい。がんは、例えば、初期、中期、後期、局所において進行又は転移の段階であってもよく、再発若しくは他の治療法に対して不応性であるか、又は標準治療法が確立していないものであってもよい。本明細書において、がんの「治療」とは、臓器若しくは組織内のがん細胞若しくは転移した細胞の数を減らすこと、腫瘍の増殖を遅らせること、腫瘍細胞、転移した腫瘍細胞若しくは転移する可能性のある腫瘍細胞を殺すこと、体内の元の部位から別の部位への癌性細胞の拡散を防止若しくは低減すること、転移したがんの進行を阻止すること、転移の再発を防ぐこと、疾病の進行を遅らせる若しくは減らすこと、及び／又は、生存率を高めることを意味する。

【0033】

本発明はさらに、感染症を治療するのに有効な量の本明細書に記載された抗体又はその断片を対象に投与することを含む、対象の感染症を治療する方法に関する。感染は、例えば、ウイルス、ウイロイド、細菌、プリオン、線虫、節足動物、真菌又は原生動物によって引き起こされる可能性がある。本明細書において、感染症の「治療」とは、感染症の兆候若しくは症状を軽減すること、及び／又は、対象中の感染病原体の数を減らすことを意味する。

【0034】

本発明は、ＣＡＲ-Ｔ技術で使用することができるキメラ抗原受容体の製造における本明細書に記載された抗体又は断片の配列（例．６つのＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬの配列）の使用も予定されている。

【0035】

本発明の抗体及びその断片、組成物、並びに二重特異的結合分子は、本明細書に記載された治療方法で使用してもよく、本明細書に記載された治療に使用するためのものであってもよく、及び／又は、本明細書に記載された治療を行うための医薬の製造において使用するためのものであってもよいことが理解される。本発明はまた、本明細書に記載された抗体及びその抗原結合部分、組成物、並びに二重特異的結合分子を含むキット及び製造物品に関する。

【0036】

本明細書に記載された抗Ｂ７-Ｈ３抗体又はその断片は、蛍光標識又は放射性標識といった検出可能なマーカーがさらに結合していてもよい。また、本発明は、Ｂ７-Ｈ３陽性細胞に検出可能に結合するのに有効な量の（例えば、検出可能なマーカーで標識された）抗体又は断片を対象に投与し、次いで抗体又は断片を検出し、それによりＢ７-Ｈ３陽性細胞を検出することを含む、対象におけるＢ７-Ｈ３陽性細胞を検出する方法に関する。標識は、例えば画像化により検知することができる。Ｂ７-Ｈ３陽性細胞は、例えば、癌細胞である可能性がある。

【0037】

さらに、本明細書に記載された抗Ｂ７-Ｈ３抗体又はその断片は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の一部とすることができる。本発明によるＡＤＣ組成物は、例えば、細胞毒性剤及びリンカーと組み合わせた、本発明の抗体又はその断片を含んでいてもよい。用いてもよい細胞毒性剤には、アルキル化剤、二官能性アルキル化剤、単官能性アルキル化剤、アントラサイクリン類、細胞骨格破壊剤、タキサン類、エポチロン類、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、キナーゼ阻害剤、ヌクレオチド類似体、ヌクレオチド前駆体類似体、ペプチド抗生物質、白金ベースの薬剤、レチノイド類、ビンカアルカロイド類及びその誘導体、アクチノマイシン、オールトランスレチノイン酸、アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イマチニブ、イリノテカン、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、バルルビシン、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン又はビンデシンが含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明によるＡＤＣは、小分子又は薬物に（例えば、共有結合で）結合した本発明の抗体又はその断片を含んでいてもよい。

【0038】

本明細書において、用語「抗体」は、インタクトな抗体、すなわち完全なＦｃ及びＦｖ領域を有する抗体を指す。成熟した軽鎖と重鎖の可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端方向に、領域ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４で構成される。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991))、Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)又はChothia et al., Nature 342:878-883 (1989)の定義に従う。「断片」は、限定するものではない例として、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２又は一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）などの抗体の一部分又は連結した抗体の一部分を指し、これは、抗体全体ではなく抗原結合部分であって、特異的な結合についてインタクトな抗体と競合する。この場合、抗原はヒトＢ７-Ｈ３のＩｇＶドメインである。そのような断片は、例えば、インタクトな抗体の切断、又は組換えによって製造することができる。Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989))を参照。抗原結合断片は、ＤＮＡ組換え技術、インタクトな抗体の酵素的若しくは化学的切断、又は分子生物学の手法によって製造してもよい。

【0039】

いくつかの態様では、断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ペプチドリンカーを介して連結した軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ）又はダイアボディを含む、ヒトＢ７-Ｈ３のＩｇＶドメインと特異的に結合するのに十分な、抗体の少なくとも一部分を含むポリペプチドである。本明細書において、Ｆｄ断片はＶＨ及びＣＨ１ドメインからなる抗体の断片を意味し；Ｆｖ断片は抗体の一本鎖のＶ１及びＶＨドメインからなり；ｄＡｂ断片（Ward et al., Nature 341:544-546 (1989)、全体が本明細書に組み込まれる）はＶＨドメインからなる。いくつかの態様では、断片のアミノ酸長は少なくとも５、６、８又は１０である。別の態様では、断片のアミノ酸長は、少なくとも１４、少なくとも２０、少なくとも５０、又は、少なくとも７０、８０、９０、１００、１５０若しくは２００である。

【0040】

いくつかの態様では、本明細書に記載されたｓｃＦｖは、ヒト可変ドメインＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及び／又はＦＲ４と同じ配列を有する可変ドメインのフレームワーク配列を含む。いくつかの態様では、ｓｃＦｖは、５～３０アミノ酸長のリンカーペプチドを含む。いくつかの態様では、ｓｃＦｖは、グリシン、セリン及びスレオニンの１つ以上を含むリンカーペプチドを含む。いくつかの態様では、ｓｃＦｖのリンカーのアミノ酸長は１０～２５である。ある態様では、ペプチドリンカーは、グリシン、セリン及び／又はスレオニンを含む。例えば、Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988)及びHuston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883 (1988)を参照。

【0041】

用語「モノクローナル抗体」は、本明細書では、実質的に均質な抗体集団における抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、わずかに存在する可能性のある突然変異体、例えば、自然に発生した突然変異体を除いて同一である。したがって、修飾語「モノクローナル」は、異なる抗体の混合物ではないという特性を示す。ある態様では、そのようなモノクローナル抗体には、通常、ヒトＢ７-Ｈ３のＩｇＶドメインに結合するポリペプチド配列を含む抗体が含まれる。異なる決定基（エピトープ）に対する抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的に、モノクローナル抗体は、通常、抗原の単一の決定基に結合する抗体である。その特異性に加え、モノクローナル抗体は、通常、他の免疫グロブリンで汚染されていないという点で有利である。したがって、モノクローナル抗体は、その配列が特定された後は、非ハイブリドーマ技術、例えば、適当な組換え手段によって製造することができる。

【0042】

本明細書に記載されたいくつかの態様では、抗体又は断片は単離されている。本明細書において、用語「単離された抗体」又は「単離された抗原結合断片」は、その起源又は派生源のため、以下の特性の１つ以上を有する抗体又は断片を指す：(1) 天然の状態で含まれる成分を含んでいない、(2) 同じ種のタンパク質を含まない、(3) 異なる種の細胞が発現した、(4) 人間の手を介さなければ天然では生じない。

【0043】

ある態様では、抗体はヒト化されている。非ヒト（例．マウス）抗体の「ヒト化」形態は、最小限の非ヒト免疫グロブリンの配列を含むキメラ抗体である。いくつかの態様では、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＨＶＲ）（又はＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性及び／又は能力を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲの残基によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。実施の形態においては、抗体は、本明細書に記載されたマウス抗体の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ全てのＣＤＲ（重鎖と軽鎖のＣＤＲ１～３）を有する。ある態様では、マウスｍＡｂのフレームワーク（ＦＲ）の残基は、対応するヒト免疫グロブリン可変ドメインのフレームワーク（ＦＲ）の残基に置き換えられる。これらは、抗体の性能をさらに洗練するために、発明の実施において改変してもよい。さらに、特定の態様では、ヒト化抗体はレシピエント抗体又はドナー抗体に存在しない残基を含んでいてもよい。いくつかの態様では、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体に存在しない残基を含まない。一般に、ヒト化抗体は少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインを実質的に含み、当該可変ドメイン中の超可変ループの全て、又はある態様では実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのループに対応し、かつ、ＦＲの全て、又はある態様では実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、場合によっては、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常、ヒト免疫グロブリンのＦｃも含むであろう。例えば、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)；Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998)；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995)；Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)並びに米国特許第6,982,321号及び第7,087,409号を参照；これらの文献及び明細書は全体が本明細書に組み込まれる。ヒト化抗体がレシピエント抗体又はドナー抗体に存在しない残基を含む態様では、抗体のＦｃ領域は、国際公開第99/58572号に記載のとおりに改変してもよい；ここで、前記明細書の内容は、全体が本明細書に組み込まれる。

【0044】

モノクローナル抗体をヒト化する技術は周知で、例えば、米国特許第4,816,567号；第5,807,715号；第5,866,692号；第6,331,415号；第5,530,101号；第5,693,761号；第5,693,762号；第5,585,089号及び第6,180,370号に記載されている；ここで、これらの明細書はその全体が本明細書に組み込まれる。非ヒト免疫グロブリンの抗原結合部位を含む多くの「ヒト化」抗体、例えば、ヒト定常ドメインに融合したげっ歯類又は改変されたげっ歯類のＶ領域とその相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する抗体が知られている。例えば、Winter et al. Nature 349: 293-299 (1991)；Lobuglio et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86: 4220-4224 (1989)；Shaw et al. J. Immunol. 138: 4534-4538 (1987)；Brown et al. Cancer Res. 47: 3577-3583 (1987)を参照。他の参考文献には、適切なヒト抗体の定常ドメインとの融合の前にヒトのフレームワーク領域（ＦＲ）に移植された、げっ歯類の超可変領域又はＣＤＲが記載されている。例えば、Riechmann et al., Nature 332: 323-327 (1988)；Verhoeyen et al., Science 239: 1534-1536 (1988)；Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986)を参照。別の参考文献は、組換えの加工されたげっ歯動物フレームワーク領域を有するげっ歯動物のＣＤＲを記載している－欧州特許出願公開第0519596号（全体が組み込まれる）。これらの「ヒト化」分子は、げっ歯類の抗ヒト抗体による、ヒトレシピエントでの治療の期間と有効性を制限する望ましくない免疫応答を最小限とするように設計されている。抗体の定常領域は、免疫学的に不活性である（例．補体溶解を引き起こさない）ように改変することができる。例えば、国際公開第99/58572号；UK Patent Application No.9809951.8を参照。抗体をヒト化する他の方法は、Daugherty et al., Nucl. Acids Res. 19: 2471-2476 (1991)、米国特許第6,180,377号、第6,054,297号、第5,997,867号、第5,866,692号、第6,210,671号及び第6,350,861号；並びに国際公開第01/27160号参照（全体が本明細書に組み込まれる）。

【0045】

いくつかの態様では、本明細書の抗体又は断片は、組換えで製造することができる；例えば、宿主細胞にトランスフェクトさせた組換え発現ベクターを使用して発現させた抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離した抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子を導入した動物（例．マウス）から単離した抗体など。

【0046】

用語「Ｋ_ｄ」は、本明細書では、抗体－抗原相互作用の解離定数を指すことを意図している。親和定数は解離定数の逆数である。Ｂ７-Ｈ３のＩｇＶドメインに対する抗体のＫ_ｄ又は結合親和性を決定する１つの方法は、抗体の単機能のＦａｂ断片の結合親和性を測定することである。単機能のＦａｂ断片を得るためには、抗体（例．ＩｇＧ）をパパインで切断するか、組換え的に発現させることができる。抗ヒトＢ７-Ｈ３ ＩｇＶドメイン抗体の断片の親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴（BIAcore3000（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、BIAcore Inc., Piscataway N.J.）により決定することができる。ＣＭ５チップは、供給者の指示に従い、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイニド塩酸塩（ＥＤＣ）及びN-ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化することができる。抗原はｐＨ４．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウムに希釈し、濃度０．００５ｍｇ／ｍＬで活性化チップに注入できる。個々のチップチャネル全体の可変フロー時間を使用して、詳細な速度論的研究では１００～２００応答単位（ＲＵ）、スクリーニングアッセイでは５００～６００ＲＵという２つの抗原密度を実現できる。精製し、段階希釈（推定Ｋ_ｄの０．１～１０倍）したＦａｂを１００ｍＬ／分で１分間注入し、最大で２時間の解離時間を許容する。Ｆａｂタンパク質の濃度は、（アミノ酸分析によって決定した）既知の濃度のＦａｂを使用するＥＬＩＳＡ及び／又はＳＤＳ-ＰＡＧＥ電気泳動によって決定する。会合速度（ｋ_ｏｎ）及び解離速度（ｋ_ｏｆｆ）は、ＢＩＡ評価プログラムを使用してデータを１：１ラングミュア結合モデル（Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B. (1994). Methods Enzymology 6. 99-110、その内容は全体が本明細書に組み込まれる）にフィッティングすることによって同時に取得できる。平衡解離定数（Ｋ_ｄ）の値は、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎとして計算される。この手順は、抗原に対する抗体又は断片の結合親和性を求めるのに適している。当該技術分野において公知の他の方法も使用することができる（例えば、ＥＬＩＳＡ）。

【0047】

エピトープに「特異的に結合する」抗体又はポリペプチドは、当該技術分野においてよく理解されている用語で、そのような特異的又は優先的結合を決定する方法も当該技術分野においてよく知られている。ある分子が、別の細胞又は物質よりも、より頻繁に、より迅速に、より長い時間及び／又はより高い親和性で、特定の細胞又は物質と反応又は会合する場合、それは「特異的結合」又は「優先的結合」を示すという。抗体が、他の物質に結合するよりも、より高い親和性、結合力、より容易に、及び／又はより長い時間、結合する場合、それは標的に「特異的に結合する」又は「優先的に結合する」。例えば、ヒトＢ７-Ｈ３ ＩｇＶドメインに特異的又は優先的に結合する抗体は、Ｂ７-Ｈ３の他のエピトープ又は非Ｂ７-Ｈ３エピトープに結合するよりも、より高い親和性、結合力、より容易に、及び／又はより長い時間でこのエピトープに結合する抗体である。この定義から、例えば、第１の標的に特異的又は優先的に結合する抗体（若しくは部分又はエピトープ）は、第２の標的に特異的又は優先的に結合する場合もしない場合もあることも理解される。したがって、「特異的結合」又は「優先的結合」は、必ずしも排他的な結合である必要はない（排他的な結合を含むことは可能である）。いくつかの態様では、Ｋ_ｄが１ｍＭ以下、好ましくは１００ｎＭ以下の場合、抗体は抗原に特異的に結合するといわれる。

【0048】

重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体（免疫グロブリン）をさまざまなクラスに割り当てることができる。抗体又は断片は、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ若しくはＩｇＭ抗体又はその断片のいずれかである。いくつかの態様では、抗体は免疫グロブリンＧである。いくつかの態様では、抗体断片は免疫グロブリンＧの断片である。いくつかの態様では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４である。いくつかの態様では、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ２ａ、ヒトＩｇＧ２ｂ、ヒトＩｇＧ３又はヒトＩｇＧ４の配列を含む。これらの抗体サブタイプの組合せも使用することができる。用いる抗体の種類を選択する際に考慮すべき事項の１つは、抗体の望ましい血清半減期である。例えば、ＩｇＧの血清半減期は通常２３日、ＩｇＡは６日、ＩｇＭは５日、ＩｇＤは３日及びＩｇＥは２日である。（Abbas AK, Lichtman AH, Pober JS. Cellular and Molecular Immunology, 4th edition, W.B. Saunders Co., Philadelphia, 2000、全体が本明細書に組み込まれる。）

【0049】

抗体の「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の重鎖又は軽鎖のアミノ末端のドメインを指す。重鎖の可変ドメインは「ＶＨ」と呼ばれることがある。軽鎖の可変ドメインは「ＶＬ」と呼ばれることがある。これらのドメインは一般に抗体の最も可変的な部分で、抗原結合部位を含む。用語「可変」は、可変ドメインの特定の部分は、その配列が抗体間で大きく異なり、特定の抗原に対する抗体の結合及び特異性の発揮に寄与するという事実を指す。しかし、この変化は抗体の可変ドメイン全体に均等に分布していない。これは、軽鎖及び重鎖の可変ドメインの超可変領域（ＨＶＲ）（又はＣＤＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメイン中の高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブな重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、主にβシート構造を有する４つのＦＲ領域を含み、ループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する３つのＣＤＲで接続されている。ＦＲ領域によって互いに接近して位置する各鎖のＣＤＲは、他の鎖のＣＤＲとともに抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)参照）。定常ドメインは、抗原への結合には直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害への関与など、さまざまなエフェクター機能を示す。

【0050】

脊椎動物の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、κ及びλと呼ばれる２つの明確に異なる型のいずれかを有する。

【0051】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」の残基は、本明細書で定義されたＨＶＲ残基以外の可変ドメインの残基である。

【0052】

本明細書における用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」又は「ＣＤＲ」は、配列が超可変である及び／又は明確なループを形成する、抗体の可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の６つのＣＤＲを含む。ネイティブな抗体では、６つのＣＤＲの中でＨ３とＬ３が最も多様性を示し、特にＨ３は抗体に細かい特異性を与えるという独特の役割を果たしていると考えられている。例えば、Xu et al., Immunity 13:37-45 (2000)；Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003)を参照。実際、重鎖のみからなる天然のラクダ抗体は、軽鎖がなくても機能的で安定している。例えば、Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993)；Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)を参照。ＣＤＲを記述するいくつかの方法があり、それらは本明細書に含まれる。Kabatの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列の変化に基づいており、最も一般的に使用されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)、全体が本明細書に組み込まれる）。重鎖及び軽鎖には、それぞれにＣＤＲ１、２及び３がある。ChothiaのＣＤＲは構造ループの位置に基づく（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。ＡｂＭ ＣＤＲは、KabatのＣＤＲとChothiaの構造ループの間の折衷物で、Oxford MolecularのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアを使用する。「接触」ＣＤＲは、複雑な結晶構造の分析に基づく。ＣＤＲは、以下のような「拡張ＣＤＲ」を含む場合がある：ＶＬの２４～３６又は２４～３４（Ｌ１）、４６～５６又は５０～５６（Ｌ２）及び８９～９７又は８９～９６（Ｌ３）、並びにＶＨの２６～３５（Ｈ１）、５０～６５又は４９～６５（Ｈ２）及び９３～１０２、９４～１０２又は９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメインの残基は、上述した定義の中でKabatらの方法によりナンバリングされている。

【0053】

本明細書における用語「Ｆｃ領域」とは、免疫グロブリン重鎖のＣ末端の領域のことで、ネイティブ配列のＦｃ領域及びバリアントのＦｃ領域を含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動する場合があるが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の場合、通常、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０のアミノ酸残基からＣ末端までと定義されている。Ｆｃ領域のＣ末端リジンは、例えば、抗体の製造若しくは精製中に、又は抗体重鎖をコードする核酸を組み換えることで除去することができる。したがって、本明細書におけるインタクトな抗体は、Ｃ末端にリジンを有していても、有していなくてもよい。

【0054】

対象は哺乳動物であってもよく、好ましくはヒトである。

【0055】

いくつかの態様では、ヒトＢ７-Ｈ３のアミノ酸配列は以下に示すアミノ酸配列（GenBank：CAE47548.1、配列番号１７）で、下線部はＩｇＶドメインである。

【0056】

【化1】

【0057】

本明細書において、例えば、選択肢Ａ及び／又は選択肢Ｂを意味する「及び／又は」は、(i) 選択肢Ａ、(ii) 選択肢Ｂ、及び(iii) 選択肢Ａと選択肢Ｂのいずれがである。

【0058】

全てのサブセットを含む、本明細書に記載されたさまざまな要素の全ての組合せは、本明細書においてこれとは異なる指示がない限り、又は文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明の範囲内である。

【0059】

本発明は、以下の実施例からよく理解されるであろう。しかし、本発明は特許請求の範囲に記載されたもので、当業者は、以下の方法とその結果が本発明の単なる例示であることを容易に理解するであろう。

【実施例】

【0060】

ヒトＢ７-Ｈ３及びマウスＢ７-Ｈ３のＩｇＶドメインに対するｍＡｂの製造
ＩｇＶドメインはＢ７-Ｈ３の機能的ドメインであり、参考文献(17)に記載されたように、Ｂ７-Ｈ３ ＩｇＶコード領域（Ｅ３５～Ａ１３９）をプラスミドｐＭＴ／ＢｉＰのヒトＩｇＧ１Ｆｃタグに融合させることにより、ヒトＢ７-Ｈ３ ＩｇＶ－Ｉｇ融合タンパク質を製造した。融合タンパク質をＳ２系で発現させ、精製した。マウスをＢ７-Ｈ３ ＩｇＶ－Ｉｇ融合タンパク質で免疫し、ＮＳＯミエローマ細胞に融合した脾細胞からハイブリドーマを標準的な方法で得た。

【0061】

ｍＡｂ ８Ｂ１２及び１２Ｂ４の特徴の検討
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）８Ｂ１２及び１２Ｂ４を製造した。８Ｂ１２はκ軽鎖を有するＩｇＧ３であり、また、１２Ｂ４はκ軽鎖を有するＩｇＧ２ｂである。

【0062】

表面プラズモン共鳴法により求めたヒトＢ７-Ｈ３及びマウスＢ７-Ｈ３に対する結合親和性（Ｋ_ｄ）は、ｍＡｂ ８Ｂ１２がそれぞれ、０．３０ｎＭ及び４．０１ｎＭであり、ｍＡｂ １２Ｂ４がそれぞれ、８．２３ｎＭ及び１５．３８ｎＭであった（表１）。８Ｂ１２と１２Ｂ４の両者は、ヒトのがん細胞株ＰＣ３及びＭＤＡ-ＭＢ２３１が発現する内因性のＢ７-Ｈ３に強く結合した（図１）。

【0063】

樹状細胞と活性化Ｔ細胞はＢ７-Ｈ３を発現するので（図２）、８Ｂ１２と１２Ｂ４の拮抗活性を混合リンパ球反応で決定した。あるドナーのＰＢＭＣから単離した単球を分化させた成熟樹状細胞を、別のドナーのＰＢＭＣから得た精製Ｔ細胞とともに、８Ｂ１２、１２Ｂ４又は対照マウスＩｇＧの存在下で４日間インキュベートした。８Ｂ１２及び１２Ｂ４は、Ｔ細胞のサイトカイン産生を調節することができた（図３Ａ及び３Ｂ）。

【0064】

【表1】

【0065】

ｍＡｂ ８Ｂ１２、１２Ｂ４及び２４Ｄ１２の配列
８Ｂ１２の配列が決定され、特有のＶＨ及びＶＬ配列を有することが判明した。８Ｂ１２のポリペプチド配列及びコード配列を以下に示す。

【0066】

【化2】

【0067】

１２Ｂ４のポリペプチド配列及びコード配列を以下に示す。

【0068】

【化3】

【0069】

２４Ｄ１２のポリペプチド配列及びコード配列を以下に示す。

【0070】

【化4】

【0071】

【化5】

【0072】

参考文献
1. Picarda, E., Ohaegbulam, K.C. & Zang, X. Molecular Pathways: Targeting B7-H3 (CD276) for Human Cancer Immunotherapy. Clin Cancer Res 22, 3425-3431 (2016).
2. Zang, X. & Allison, J.P. The B7 family and cancer therapy: costimulation and coinhibition. Clin Cancer Res 13, 5271-5279 (2007).
3. Zang, X., et al. B7-H3 and B7x are highly expressed in human prostate cancer and associated with disease spread and poor outcome. Proc Natl Acad Sci U S A 104, 19458-19463 (2007).
4. Sun, T.W., et al. B7-H3 is expressed in human hepatocellular carcinoma and is associated with tumor aggressiveness and postoperative recurrence. Cancer Immunol Immunother 61, 2171-2182 (2012).
5. Wang, J., et al. B7-H3 associated with tumor progression and epigenetic regulatory activity in cutaneous melanoma. J Invest Dermatol 133, 2050-2058 (2013).
6. Hu, Y., et al. Expression of costimulatory molecule B7-H3 and its prognostic implications in human acute leukemia. Hematology 20, 187-195 (2015).
7. Sun, J., et al. B7-H3 expression in breast cancer and upregulation of VEGF through gene silence. Onco Targets Ther 7, 1979-1986 (2014).
8. Zang, X., et al. Tumor associated endothelial expression of B7-H3 predicts survival in ovarian carcinomas. Mod Pathol 23, 1104-1112 (2010).
9. Chen, Y., et al. The coexpression and clinical significance of costimulatory molecules B7-H1, B7-H3, and B7-H4 in human pancreatic cancer. Onco Targets Ther 7, 1465-1472 (2014).
10. Ingebrigtsen, V.A., et al. B7-H3 expression in colorectal cancer: associations with clinicopathological parameters and patient outcome. BMC Cancer 14, 602 (2014).
11. Sun, Y., et al. B7-H3 and B7-H4 expression in non-small-cell lung cancer. Lung Cancer 53, 143-151 (2006).
12. Xylinas, E., et al. Association of T-cell co-regulatory protein expression with clinical outcomes following radical cystectomy for urothelial carcinoma of the bladder. Eur J Surg Oncol 40, 121-127 (2014).
13. Qin, X., et al. B7-H3 is a new cancer-specific endothelial marker in clear cell renal cell carcinoma. Onco Targets Ther 6, 1667-1673 (2013).
14. Baral, A., Ye, H.X., Jiang, P.C., Yao, Y. & Mao, Y. B7-H3 and B7-H1 expression in cerebral spinal fluid and tumor tissue correlates with the malignancy grade of glioma patients. Oncol Lett 8, 1195-1201 (2014).
15. Wang, L., et al. B7-H3 is overexpressed in patients suffering osteosarcoma and associated with tumor aggressiveness and metastasis. PLoS One 8, e70689 (2013).
16. Vigdorovich, V., et al. Structure and T cell inhibition properties of B7 family member, B7-H3. Structure 21, 707-717 (2013).
17. Zhao, R., et al. HHLA2 is a member of the B7 family and inhibits human CD4 and CD8 T-cell function. Proc Natl Acad Sci U S A 110, 9879-9884 (2013).

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【配列表】

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【国際調査報告】