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特表2022-513321固形腫瘍を治療するための遺伝子操作しているγδ－Ｔ細胞及び遺伝子操作していないγδ－Ｔ細胞に関する組成物及び方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-07
(54)【発明の名称】固形腫瘍を治療するための遺伝子操作しているγδ－Ｔ細胞及び遺伝子操作していないγδ－Ｔ細胞に関する組成物及び方法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/62 20060101AFI20220131BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20220131BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20220131BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20220131BHJP
C07K 16/30 20060101ALI20220131BHJP
C07K 14/705 20060101ALI20220131BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20220131BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220131BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220131BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220131BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220131BHJP
A61K 38/20 20060101ALI20220131BHJP
A61K 39/00 20060101ALI20220131BHJP
A61K 35/17 20150101ALN20220131BHJP
【ＦＩ】
C12N15/62 Z ZNA
C12N15/12
C12N15/13
C07K19/00
C07K16/30
C07K14/705
C12N5/0783
C12N5/10
A61P35/00
A61P43/00 121
A61K45/00
A61K38/20
A61K39/00 H
A61K35/17 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021542091
(86)(22)【出願日】2019-10-01
(85)【翻訳文提出日】2021-05-28
(86)【国際出願番号】 US2019054144
(87)【国際公開番号】W WO2020072546
(87)【国際公開日】2020-04-09
(31)【優先権主張番号】62/739,826
(32)【優先日】2018-10-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517171347
【氏名又は名称】アディセット バイオ， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110002077
【氏名又は名称】園田・小林特許業務法人
(72)【発明者】
【氏名】サトパエフ， ダウレット カディル
(72)【発明者】
【氏名】ヘルマン， マリッサ アン
(72)【発明者】
【氏名】ロメロ， ジェーソン マイケル
(72)【発明者】
【氏名】ジン， イフォン フランク
(72)【発明者】
【氏名】アン， ジリ
(72)【発明者】
【氏名】ヤコボヴィッツ， アヤ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA94X
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA19
4C084BA44
4C084CA18
4C084DA12
4C084DA14
4C084MA02
4C084NA05
4C084ZB072
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZC751
4C085AA03
4C085BB01
4C085EE01
4C085EE03
4C085GG02
4C085GG04
4C085GG08
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB65
4C087CA04
4C087CA12
4C087MA02
4C087NA05
4C087ZB26
4C087ZC75
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA42
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
本発明の態様は、遺伝子操作しているγδ－Ｔ細胞または遺伝子操作していないγδ－Ｔ細胞を用いて固形腫瘍を治療するための組成物及び方法を含む。いくつかの実施形態において、γδ－Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）コンストラクトを含む。このＣＡＲコンストラクトは、抗ＴｒｙＤ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、それらの組み合わせ、またはそれらの全てを含むことが可能である。このＣＡＲコンストラクトは、抗ＧＰＣ３結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、それらの組み合わせ、またはそれらの全てを含むことが可能である。ＣＡＲコンストラクトには、ｓＩＬ１５ドメインなどの分泌した一般的なガンマ鎖サイトカインをコードするドメインを含み得る。
【選択図】図３
【選択図】図３
【特許請求の範囲】
【請求項1】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離した核酸配列であって、そこにおいて前記ＣＡＲが、ａ．腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含むタンパク質－ペプチド複合体に特異的に結合する結合ドメインであって、そこにおいて、前記複合体が固形腫瘍細胞の表面で発現され、任意で、そこにおいて前記結合ドメインが、ＨＬＡに制限された上で前記複合体と結合する、前記結合ドメインと、
ｂ．ＣＤ８αヒンジドメインと、
ｃ．ＣＤ８α膜貫通ドメインと、
ｄ．４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域及びＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域から選択される、共刺激シグナル伝達領域と、
ｅ．ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインと、を含む、前記核酸配列。
【請求項2】
前記（ａ）～（ｅ）が、５’から３’の順序である、請求項１に記載の単離した核酸配列。
【請求項3】
前記ＴＡＡがＴｙｒＤの隣接領域を含む、請求項１または２に記載の単離した核酸配列。
【請求項4】
前記ＴｙｒＤの隣接領域が、少なくとも４、または少なくとも約４及び１２以下、または約１２以下のＴｙｒＤの隣接するアミノ酸、好ましくは７、８または９の、または好ましくは約７、８または９のＴｙｒＤの隣接するアミノ酸を含む、請求項３に記載の単離した核酸配列。
【請求項5】
前記ＴｙｒＤの隣接領域が、ＴｙｒＤ３６９－３７７である、請求項４に記載の単離した核酸配列。
【請求項6】
前記ＴＡＡペプチドＭＨＣ複合体に特異的に結合する前記結合ドメインが、ＨＬＡ－Ａ２／ＴｙｒＤ３６９－３７７に特異的に結合する、請求項１から５のいずれか１項に記載の単離した核酸配列。
【請求項7】
前記結合ドメインが、ａ．ＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号３３）を含むＣＤＲＨ１と、
ｂ．ＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３４）を含むＣＤＲＨ２と、
ｃ．ＫＤＹＧＳＳＦＹＡＭＨＹ（配列番号３５）を含むＣＤＲＨ３と、
ｄ．ＫＡＳＱＤＩＨＮＹＩＡ（配列番号３６）を含むＣＤＲＬ１と、
ｅ．ＹＴＳＴＬＱＰ（配列番号３７）を含むＣＤＲＬ１と、
ｆ．ＬＱＹＤＮＬＷＴ（配列番号３８）を含むＣＤＲＬ２と
を含む抗体によって結合されるエピトープと特異的に結合する、または前記抗体と競合する、請求項１から６のいずれか１項に記載の単離した核酸配列。
【請求項8】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離した核酸配列であって、そこにおいて前記ＣＡＲが、ａ．固形腫瘍細胞の表面で発現される腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）と特異的に結合する結合ドメインであって、任意で、そこにおいて前記抗原がタンパク質－ペプチド複合体であり、そこにおいて前記タンパク質がＭＨＣタンパク質であり、そこにおいて前記結合ドメインがＨＬＡに制限された上で前記タンパク質－ペプチド複合体と結合する、前記結合ドメインと、
ｂ．ＣＤ８αヒンジドメインと、
ｃ．ＣＤ８α膜貫通ドメインと、
ｄ．４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域及びＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域から選択される、共刺激シグナル伝達領域と、
ｅ．ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインと、を含む、前記核酸配列。
【請求項9】
前記結合ドメインが、固形腫瘍細胞の表面で発現されるＧＰＣ３内のエピトープに特異的に結合する、請求項８に記載の単離した核酸配列。
【請求項10】
前記結合ドメインが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：ａ．ＤＹＥＭＨ（配列番号３９）（もしくはＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨ（配列番号４０））の配列を含むＣＤＲＨ１、
ｂ．ＡＬＤＰＫＴＧＤＴＡＹＳＱＫＦＫＧ（配列番号４１）の配列を含むＣＤＲＨ２、
ｃ．ＦＹＳＹＴＹ（配列番号４２）の配列を含むＣＤＲＨ３、
ｄ．ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＲＮＴＹＬＨ（配列番号４３）の配列を含むＣＤＲＬ１、
ｅ．ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４４）の配列を含むＣＤＲＬ２及び／または
ｆ．ＳＱＮＴＨＶＰＰＴ（配列番号４５）の配列を含むＣＤＲＬ３
を含む抗体と同じＧＰＣ３エピトープと結合する、及び／または前記抗体とＧＰＣ３のエピトープへの結合のために競合する、
前記ＣＤＲを含む、請求項９に記載の単離した核酸配列。
【請求項11】
請求項１から１０のいずれか１項に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいて前記ＣＡＲが、ａ．配列番号１（ＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ）もしくは配列番号２（ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ）を含むＣＤ８αヒンジドメイン、
ｂ．配列番号３（ＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ）を含むＣＤ８α膜貫通ドメイン及び／または
ｃ．
（ｉ）配列番号４（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ）もしくは、
（ｉｉ）配列番号５（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ）を含むＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン
を含む、前記核酸配列。
【請求項12】
請求項１１に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいて前記ＣＡＲが、ａ．配列番号６（ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ）を含む４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域もしくは
ｂ．配列番号７（ＱＲＲＫＹＲＳＮＫＧＥＳＰＶＥＰＡＥＰＣＨＹＳＣＰＲＥＥＥＧＳＴＩＰＩＱＥＤＹＲＫＰＥＰＡＣＳＰ）を含むＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域を含み、または、
そこにおいて、前記単離した核酸が、配列番号６を含む前記４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域及び配列番号７を含む前記ＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域をコードする、前記核酸配列。
【請求項13】
請求項１から１２のいずれか１項に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいて前記核酸が、さらにａ．分泌されたサイトカインあるいは
ｂ．分泌された一般的なガンマ鎖インターロイキンあるいは
ｃ．分泌されたＩＬ－１５であって、好ましくは、そこにおいて前記ＩＬ－１５が、配列番号１４の配列を含む、より好ましくは、そこにおいて前記ＩＬ－１５が、配列番号１２の分泌シグナル配列に動作可能に連結された配列番号１４の配列を含む、もしくはそこにおいて前記ＩＬ－１５が、配列番号２６の分泌シグナル配列に動作可能に連結された配列番号１４の配列を含む、前記分泌されたＩＬ－１５あるいは、
ｄ．分泌された共通ガンマ鎖インターロイキンであって、好ましくはＩＬ－１５及び前記インターロイキンまたはインターロイキン分泌シグナルのアミノ末端のマルチシストロン性リンカー領域であり、好ましくは、そこにおいて前記マルチシストロン性リンカー領域が、配列番号１５～１７、２５もしくは、２７～３０もしくはそれらの組み合わせのいずれか１つの配列を含む、または、配列番号３１または３２などの内部リボソーム侵入部位をコードする、前記分泌された共通ガンマ鎖インターロイキン
をコードする、前記核酸配列。
【請求項14】
請求項１３に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいてａ．前記分泌シグナルが、配列番号１２もしくは配列番号２６の配列、好ましくは配列番号１２を含み、及び／または
ｂ．前記ｓＩＬ１５ドメインが、配列番号１４の配列を含み、及び／または
ｃ．前記Ｐ２Ａ切断配列が、配列番号１５もしくは配列番号２５の配列を含み、及び／または
ｄ．前記フューリン切断配列が、配列番号１６の配列を含み、及び／または
ｅ．前記ＣＡＲが、アミノからカルボキシの順序で、配列番号１７、配列番号１２及び配列番号１４の配列を含む、
前記核酸配列。
【請求項15】
請求項１から１４のいずれか１項に記載の単離した核酸配列であって、そこにおいてａ．前記結合ドメインが、ＨＬＡ－Ａ２／ＴｙｒＤ３６９－３７７に特異的に結合し、前記核酸が、配列番号８または配列番号１８をコードし、
ｂ．前記結合ドメインがＧＰＣ３に特異的に結合し、前記核酸が配列番号２０または２２をコードする、前記核酸配列。
【請求項16】
前記核酸が、配列番号９、配列番号１９、配列番号２１、２３または２４の配列を含む、請求項１５に記載の単離した核酸配列。
【請求項17】
請求項１から１６に記載の先行する単離した核酸のいずれか１つによりコードされるアミノ酸配列を含むキメラ抗原受容体を含むポリペプチド。
【請求項18】
請求項１７に記載のポリペプチドを含む、または請求項１から１６のいずれか１項に記載のＣＡＲコンストラクトをコードする核酸を含むγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞が、前記ポリペプチドの結合ドメインまたは前記γδＴ細胞の表面上でＣＡＲをコードする核酸を機能的に発現する、前記γδＴ細胞。
【請求項19】
請求項１８に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞が、前記腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞に対して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏの細胞傷害活性を示す、前記γδＴ細胞。
【請求項20】
請求項１９に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞の前記固形腫瘍細胞傷害活性が、ＣＡＲコンストラクトを含まない対照γδＴ細胞において、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏの固形腫瘍細胞傷害活性の生来のレベルよりも大きい、前記γδＴ細胞。
【請求項21】
請求項２０に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞が、ＨＬＡクラスＩ＋の固形腫瘍細胞に対して固形腫瘍細胞傷害活性の増大を示す、前記γδＴ細胞。
【請求項22】
請求項１９から２１のいずれか１項に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記固形腫瘍細胞傷害活性または固形腫瘍細胞傷害活性の増大が、前記固形腫瘍細胞との最初の接触後、約、少なくとも、または少なくとも約６日から１８０日間持続する、前記γδＴ細胞。
【請求項23】
請求項１８から２２のいずれか１項に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞が、前記腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞との接触に応答して増殖する、前記γδＴ細胞。
【請求項24】
請求項１８から２２のいずれか１項に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞が、前記δＴ細胞の表面上でＣＡＲをコードする前記核酸を機能的に発現しない対照γδＴ細胞と比較して、前記腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞との接触に応答して増殖が増大する、前記γδＴ細胞。
【請求項25】
請求項１８から２４のいずれか１項に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞が、前記腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す前記固形腫瘍細胞を含む宿主生物中で増殖する、前記γδＴ細胞。
【請求項26】
請求項１８から２５のいずれか１項に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞の増殖またはγδＴ細胞の増殖の増大が、前記固形腫瘍細胞との最初の接触後、約、少なくとも、または少なくとも約６日から１８０日間持続する、前記γδＴ細胞。
【請求項27】
請求項１８から２６のいずれか１項に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞が、前記固形腫瘍細胞との接触後に腫瘍壊死因子アルファまたはインターフェロンガンマを含む炎症誘発性サイトカインを発現する、前記γδＴ細胞。
【請求項28】
請求項１８から２７のいずれか１項に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて同種異系宿主に投与されたαβＴ細胞によって示された移植片対宿主応答と比較して、同種異系宿主に導入された場合、前記γδＴ細胞が示す移植片対宿主応答が、低下、実質的な低下、実質的にない、またはなくなる、前記γδＴ細胞。
【請求項29】
請求項１８から２８のいずれか１項に記載のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記γδＴ細胞が、δ１、δ２、δ３、またはδ４γδＴ細胞、好ましくはδ２－γδＴ細胞、より好ましくはδ１γδＴ細胞である、前記γδＴ細胞。
【請求項30】
請求項１８から２９のいずれか１項に記載の複数のγδＴ細胞。
【請求項31】
請求項３０に記載の複数のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記複数が、少なくとも約１０８γδＴ細胞、好ましくは約１０８γδＴ細胞から約１０１１のγδＴ細胞を含む、前記複数のγδＴ細胞。
【請求項32】
請求項３０または３１に記載の複数のγδＴ細胞であって、そこにおいて前記複数が、少なくとも６０％、８０％、または約６０％もしくは８０％から約９０％もしくは９５％のδ１、δ２、δ３、またはδ４γδＴ細胞、好ましくはδ１またはδ２γδＴ細胞、より好ましくはδ２－γδＴ細胞、最も好ましくはδ１γδＴ細胞である組成物を含む、前記複数のγδＴ細胞。
【請求項33】
請求項１８から２９のいずれか１項に記載のγδＴ細胞または請求項３０から３２のいずれか１項に記載の複数のγδＴ細胞を作製する方法であって、そこにおいて前記方法が、請求項１から１６のいずれか１項に記載の単離した核酸配列を含むコンストラクトでγδＴ細胞（複数可）をトランスフェクトすることを含む、前記方法。
【請求項34】
前記方法がレトロウイルス形質導入、好ましくはガンマレトロウイルス形質導入を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
請求項３３または３４に記載の方法であって、そこにおいて前記方法がｅｘ ｖｉｖｏでの前記γδＴ細胞（複数可）の増殖を含み、そこにおいて前記ｅｘ ｖｉｖｏでの増殖が、前記単離した核酸配列のトランスフェクションの前及び／または後に実施される、前記方法。
【請求項36】
薬学的に受容可能な賦形剤と、請求項１８から２９のいずれか１項に記載のγδＴ細胞、または請求項３０から３２のいずれか１項に記載の複数のγδＴ細胞とを含む医薬組成物。
【請求項37】
固形腫瘍細胞を殺傷する方法であって、前記方法が、腫瘍細胞の殺傷に有効な量である、請求項１８から２９のいずれか１項に記載のγδＴ細胞、請求項３０から３２のいずれか１項に記載の複数のγδＴ細胞または請求項３６に記載の医薬組成物と、前記固形腫瘍細胞を接触させることを含む、前記方法。
【請求項38】
請求項３７に記載の方法であって、そこにおいて前記方法が、治療上有効な量である、前記γδＴ細胞（複数可）または前記医薬組成物を、前記固形腫瘍細胞を含む宿主生物に導入することを含む、前記方法。
【請求項39】
請求項３８に記載の方法であって、そこにおいて前記方法が、前記固形腫瘍細胞を含む宿主生物に、治療上有効な量である、前記γδＴ細胞（複数可）または前記医薬組成物を導入することと、同時にまたは連続して、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法を投与することとを含む、前記方法。
【請求項40】
請求項３９に記載の方法であって、そこにおいて前記一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の投与方法が、前記γδＴ細胞（複数可）の導入と同時に、または一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）の有効量を連続して投与することで、前記導入したγδＴ細胞（複数可）の増殖、細胞毒性活性、持続性、またはその組み合わせを増大させることを含み、好ましくは、そこにおいて前記方法がＩＬ－２を投与することを含み、より好ましくは、そこにおいて前記方法がＩＬ－１５を投与することを含む、前記方法。
【請求項41】
請求項４０に記載の方法であって、そこにおいて前記一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法が、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）の有効な量を投与することで、前記γδＴ細胞（複数可）を導入する前及び／または導入後に、前記導入したγδＴ細胞（複数可）の増殖、細胞毒性活性、持続性、またはその組み合わせを増大させることを含む、前記方法。
【請求項42】
請求項３９から４１のいずれか１項に記載の方法であって、そこにおいて前記一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法が、前記γδＴ細胞（複数可）を導入する前のリンパ球の枯渇化を含む、前記方法。
【請求項43】
請求項３９から４１のいずれか１項に記載の方法であって、そこにおいて前記一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法が、前記導入したγδＴ細胞（複数可）からの１種または複数種の一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）の分泌を含む、前記方法。
【請求項44】
請求項３８から４３のいずれか１項に記載の方法であって、そこにおいて前記方法が、対照の生物と比較して、前記宿主生物のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍量を減少させ、及び／または前記宿主生物の平均生存時間を増加させ、そこにおいて前記対照の生物が、前記γδＴ細胞（複数可）または前記医薬組成物とともに処置しない、前記方法。
【請求項45】
前記方法が、治療が必要な対象のがんを治療する方法である、請求項３７から４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項46】
腫瘍細胞の殺傷に有効な量である、請求項１８から２９のいずれか１項に記載のγδＴ細胞、請求項３０から３２のいずれか１項に記載の複数のγδＴ細胞または、治療が必要な対象の固形腫瘍細胞癌を治療する薬物の製造における請求項３６に記載の医薬組成物の利用。
【請求項47】
治療が必要な対象のがんを治療する方法であって、前記方法が、治療上有効量のγδＴ細胞を投与することを含み、そこにおいて、前記がんが、ＴｙｒＤまたはＧＰＣ３の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞を含む、前記方法。
【請求項48】
請求項４７に記載の方法であって、そこにおいて前記方法が、γδＴ細胞の投与と同時に、または連続して一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法を投与することを含む、前記方法。
【請求項49】
請求項４７または４８に記載の方法であって、そこにおいて前記方法が、前記γδＴ細胞の複数回投与を実施することを含み、そこにおいて前記複数回投与の間の間隔が、少なくとも約１週間、好ましくは少なくとも約２、３、４、５、６、７、８または１２週間、及び／または６か月または１２か月に１回以下である、前記方法。
【請求項50】
請求項４７から４９のいずれか１項に記載の方法で用いる医薬組成物。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月１日出願の米国仮出願第６２／７３９８２６号の優先権を主張し、その内容は、あらゆる目的のために本明細書全体に組み込まれる。
本出願は、２０１８年１０月１日出願の米国仮出願第６２／７３９８２６号の優先権を主張し、その内容は、あらゆる目的のために本明細書全体に組み込まれる。
【0002】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２０年１月８日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、ＡＤＣ－０００６－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは４８４０６バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２０年１月８日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、ＡＤＣ－０００６－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは４８４０６バイトである。
【背景技術】
【0003】
養子免疫細胞療法は、基本的なリンホカイン活性化及び／または腫瘍浸潤に焦点を当てた初期から、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの遺伝子操作された抗原受容体を発現させるために、これらの免疫細胞を遺伝子操作するようなごく最近の戦略まで、３０年間以上、絶え間なく繰り返し受けられてきた。その中で、これらのアプローチの治癒上の可能性についていくつかのヒント及び兆候が見られていたが、まだ行うべきことが多く存在している。特に、ＣＡＲ－Ｔリンパ球による腫瘍根絶の成功は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の持続性及びエフェクター機能に依存するが、そのどちらかが過剰になると、患者の移植片対宿主効果が誘発される可能性がある。さらに、特に固形組織には、利用可能な陽性刺激がなく、阻害性環境が存在するという問題がある。したがって、当技術分野では、有効性と安全性のバランスをとることを目的として、Ｔ細胞とＮＫ細胞の両方、特にαβＴ細胞で無数の共刺激戦略を試験している。注目すべきことに、αβＴ細胞と比較して、γδＴ細胞の共刺激要件に関する現状の理解の欠如を考慮すると、γδＴ細胞へのこれらの様々なアプローチの任意の実際の翻訳は、よく見ても不確実である。例えば、Ｒｉｂｏｔ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｅａｒｃｈｉｎｇ ｆｏｒ“ｓｉｇｎａｌ ２”：ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ γδ Ｔ ｃｅｌｌｓ」、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．（２０１１）６８：２３４５－２３５５を参照のこと。
【0004】
したがって、細胞の特異性または選択性を改善するために、例えば移植片対宿主（ＧＶＨ）効果を低減または回避することにより、細胞の安全性を改善するために、例えばエフェクター機能の抑制を回避して、固形腫瘍細胞に対する有効性を改善するためにならびに対象への投与時の細胞の活性及び／または生存を改善するために、改善された戦略が依然として必要である。そのようなニーズを満たす方法、細胞、組成物、キット及びシステムを提供する。
【発明の概要】
【0005】
本発明の態様は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離した核酸配列であって、そこにおいてＣＡＲが、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含むタンパク質－ペプチド複合体と特異的に結合する結合ドメインを含み、そこにおいてこの複合体は、固形腫瘍細胞の表面上で発現され、任意で、そこにおいて、この結合ドメインは、ＨＬＡ制限された上で、複合体と結合する単離した核酸配列と、ＣＤ８αヒンジドメインと、ＣＤ８α膜貫通ドメインと、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域及びＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域から選択される共刺激シグナル伝達領域と、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインとを含む。本発明の態様は、本明細書に記載の遺伝子操作していないγδＴ細胞、ならびに本明細書に記載されるＣＡＲコンストラクトをコードする核酸を含む遺伝子操作しているγδＴ細胞をさらに含み、そこにおいてγδＴ細胞は、γδＴ細胞の表面上のＣＡＲをコードする核酸を機能的に発現する。
【0006】
本発明の態様は、本明細書に記載される通りの複数のγδＴ細胞をさらに含む。本発明の態様は、本明細書に記載のγδＴ細胞または複数のγδＴ細胞を作製する方法をさらに含む。本発明の態様は、本明細書に記載される、薬学的に受容可能な賦形剤及びγδＴ細胞または複数のγδＴ細胞を含む医薬組成物をさらに含む。本発明の態様は、本明細書に記載される通りの腫瘍細胞傷害に有効な量であるγδＴ細胞または本明細書に記載される複数のγδＴ細胞と、固形腫瘍細胞を接触させることをさらに含む。
【0007】
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする単離した核酸配列を提供し、そこにおいて、ＣＡＲは、（ａ）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含むタンパク質―ペプチド複合体と特異的に結合する結合ドメインであって、そこにおいて、複合体が固形腫瘍細胞の表面で発現し、任意で、そこにおいて結合ドメインがＨＬＡ制限された上で複合体と結合する結合ドメインと、（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメインなどのヒンジドメインと、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメインなどの膜貫通ドメインと、（ｄ）共刺激シグナル伝達領域または共刺激シグナル伝達領域の組み合わせであって、任意で、そこにおいて、共刺激シグナル伝達領域（複数可）が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達領域及びＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域から選択される共刺激シグナル伝達領域（複数可）と、（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、前述のエレメント（ａ）～（ｅ）は、単離した核酸のセンス鎖上に５’から３’の順でコードされている。
【0008】
いくつかの実施形態において、ＴＡＡは、ＴｙｒＤの隣接領域を含む。いくつかの実施形態において、ＴｙｒＤの隣接領域は、少なくとも４、または少なくとも約４及び１２以下、または約１２以下のＴｙｒＤの隣接するアミノ酸、好ましくは７、８または９または好ましくは約７、８または９のＴｙｒＤの隣接するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、ＴｙｒＤの隣接領域は、ＴｙｒＤ３６９－３７７である。いくつかの実施形態において、ＴＡＡペプチドＭＨＣ複合体に特異的に結合する結合ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２／ＴｙｒＤ３６９－３７７に特異的に結合する。
【0009】
いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号３３）を含むＣＤＲＨ１、ＨＩＹＷＤＤＫＲＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３４）を含むＣＤＲＨ２、ＫＤＹＧＳＳＦＹＡＭＨＹ（配列番号３５）を含むＣＤＲＨ３、ＫＡＳＱＤＩＨＮＹＩＡ（配列番号３６）を含むＣＤＲＬ１、ＹＴＳＴＬＱＰ（配列番号３７）を含むＣＤＲＬ１及びＬＱＹＤＮＬＷＴ（配列番号３８）を含むＣＤＲＬ２を含む抗体に結合したエピトープと特異的に結合する、またはその抗体と競合する。
【0010】
別の態様において、結合ドメインは、固形腫瘍細胞の表面で発現する腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）と特異的に結合し、任意で、そこにおいて、この抗原は、タンパク質－ペプチド複合体であり、そこにおいて、タンパク質はＭＨＣタンパク質であり、そこにおいて、結合ドメインは、ＨＬＡに制限された上でタンパク質－ペプチド複合体と結合し、さらに、単離した核酸配列のコードされたＣＡＲは、（ｂ）ＣＤ８αヒンジドメインなどのヒンジドメインと、（ｃ）ＣＤ８α膜貫通ドメインなどの膜貫通ドメインと、（ｄ）共刺激シグナル伝達領域または共刺激シグナル伝達領域の組み合わせであって、任意で、そこにおいて、共刺激シグナル伝達領域が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達領域及びＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域から選択される、共刺激シグナル伝達領域または共刺激シグナル伝達領域の組み合わせと、（ｅ）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインなどのシグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、前述のエレメント（ａ）～（ｅ）は、単離した核酸のセンス鎖上に５’から３’の順でコードされている。
【0011】
いくつかの実施形態において、結合ドメインは、固形腫瘍細胞の表面で発現するＧＰＣ３内のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体と同じＧＰＣ３エピトープと結合する以下のＣＤＲを含み、及び／または以下のＣＤＲ：ＤＹＥＭＨ（配列番号３９）（またはＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨ（配列番号４０））の配列を含むＣＤＲＨ１、ＡＬＤＰＫＴＧＤＴＡＹＳＱＫＦＫＧ（配列番号４１）の配列を含むＣＤＲＨ２、ＦＹＳＹＴＹ（配列番号４２）の配列を含むＣＤＲＨ３、ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＲＮＴＹＬＨ（配列番号４３）の配列を含むＣＤＲＬ１、ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４４）の配列を含むＣＤＲＬ２及び／またはＳＱＮＴＨＶＰＰＴ（配列番号４５）の配列を含むＣＤＲＬ３を含む抗体とＧＰＣ３のエピトープに結合するために競合する。
【0012】
いずれか１つの前述の態様のいくつかの実施形態または本明細書に記載されるＣＡＲコード核酸の実施形態またはそのいずれかにおいて、コードしたＣＡＲは、配列番号１（ＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ）もしくは配列番号２（ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ）を含むＣＤ８αヒンジドメインまたは配列番号３（ＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ）を含むＣＤ８α膜貫通ドメイン及び／またはＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。場合によっては、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号４（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧ ＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ）または配列番号５（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤ ＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ）の配列を含む。
【0013】
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列番号６（ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ）を含む４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域または、配列番号７（ＱＲＲＫＹＲＳＮＫＧＥＳＰＶＥＰＡＥＰＣＨＹＳＣＰＲＥＥＥＧＳＴＩＰＩＱＥＤＹＲＫＰＥＰＡＣＳＰ）を含むＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域または、配列番号６を含む４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域及び配列番号７を含むＣＤ２７共刺激シグナル伝達領域をコードする核酸配列を含む。
【0014】
前述のいずれか１つまたは本明細書に記載される通りのいくつかの実施形態において、単離した核酸は、分泌されたサイトカイン、もしくは分泌された一般的なガンマ鎖インターロイキンまたは、ＩＬ－１５などの分泌された一般的なガンマ鎖インターロイキンをコードし、好ましくは、ＩＬ－１５などのこの分泌された一般的なガンマ鎖インターロイキンは、分泌シグナル配列（例えば、配列番号１２または２６の分泌シグナル）に動作可能に連結されたインターロイキンポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、単離した核酸は、分泌されたＩＬ－１５をコードし、好ましくは、そこにおいてＩＬ－１５は、配列番号１４の配列を含み、より好ましくは、そこにおいてＩＬ－１５は、配列番号１２の分泌シグナル配列に動作可能に連結された１４の配列を含む、またはそこにおいてＩＬ－１５は、配列番号２６の分泌シグナル配列に動作可能に連結された配列番号１４の配列を含む。場合によっては、分泌されたサイトカイン、一般的なガンマ鎖インターロイキン及び／またはＩＬ－１５は、結合領域、ヒンジ及び膜貫通ドメイン、シグナル伝達ドメイン及び／または共刺激エンドドメインにカルボキシ末端がコードされている。場合によっては、分泌されたサイトカイン、一般的なガンマ鎖インターロイキン及び／またはＩＬ－１５は、結合領域、ヒンジ及び膜貫通ドメイン、シグナル伝達ドメイン及び／または共刺激エンドドメインのセンス鎖３’にコードされる。
【0015】
いくつかの実施形態において、核酸は、ＣＡＲ及び分泌されたサイトカイン、一般的なガンマ鎖サイトカイン、または別々のポリペプチドとしてＩＬ－１５の翻訳を容易にするように構成されたマルチシストロン性リンカー領域をコードする。いくつかの実施形態において、マルチシストロン性リンカー領域は、自己切断配列及び／または切断ポリペプチド配列をコードする。場合によっては、自己切断配列は、Ｐ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｔ２Ａ、またはＥ２Ａ自己切断配列である。場合によっては、切断配列は、フューリン切断配列である。場合によっては、切断配列（例えば、フューリン切断配列）は、自己切断配列のアミノ末端である。いくつかの実施形態において、マルチシストロン性リンカー領域は、内部リボソーム侵入部位をコードする。いくつかの実施形態において、核酸は、インターロイキンもしくはサイトカインまたはインターロイキンもしくはサイトカイン分泌シグナルに、マルチシストロン性リンカー領域のアミノ末端をコードし、好ましくは、そこにおいてこのマルチシストロン性リンカー領域は、配列番号１５～１７、２５もしくは２７～３０またはそれらの組み合わせのいずれか１つの配列を含む、または例えば配列番号３１もしくは３２の内部リボソーム侵入部位をコードする。
【0016】
いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、配列番号１２または配列番号２６の配列、好ましくは配列番号１２を含み、及び／またはｓＩＬ１５ドメインは、配列番号１４の配列を含み、及び／またはＰ２Ａ切断配列は、配列番号１５または配列番号２５の配列を含み、及び／またはフューリン切断配列は、配列番号１６の配列を含み、及び／またはＣＡＲは、アミノからカルボキシの順序で、配列番号１７、配列番号１２、及び配列番号１４の配列を含む。
【0017】
いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ＨＬＡ－Ａ２／ＴｙｒＤ３６９－３７７に特異的に結合し、核酸は、配列番号８または配列番号１８をコードする。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ＧＰＣ３に特異的に結合し、核酸は、配列番号２０または２２をコードする。いくつかの実施形態において、核酸は、配列番号９、配列番号１９、配列番号２１、２３または２４の配列を含む。
【0018】
別の態様において、本発明は、前述の核酸のいずれか１つによりコードされるポリペプチドの１つなどのＣＡＲ結合ドメインを含むポリペプチド、または本明細書に記載のポリペプチドを提供する。
【0019】
別の態様において、本発明は、例えば、前述のポリペプチドを含むまたは本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を含む、γδ、Ｔ細胞を提供し、そこにおいて、細胞は、ポリペプチドの結合ドメインまたは細胞の表面上でＣＡＲをコードする核酸を機能的に発現する。いくつかの実施形態において、細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞に対して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏの細胞傷害活性を示す。いくつかの実施形態において、これらの細胞の固形腫瘍細胞傷害活性は、ＣＡＲコンストラクトを含まない対照の細胞において、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏの固形腫瘍細胞傷害活性の生来のレベルよりも大きい。いくつかの実施形態において、細胞は、ＨＬＡクラスＩ＋固形腫瘍細胞に対して固形腫瘍細胞傷害活性が増大する。いくつかの実施形態において、固形腫瘍細胞傷害活性または固形腫瘍細胞傷害活性の増大は、固形腫瘍細胞との最初の接触後、約、少なくとも、または少なくとも約６日から１８０日間持続する。
【0020】
いくつかの実施形態において、細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞との接触に応答して増殖する。いくつかの実施形態において、細胞の表面上でＣＡＲをコードする核酸を機能的に発現しない、対照の細胞と比較して、細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞との接触に応答して増殖が増大する。いくつかの実施形態において、細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞を含む宿主生物において増殖する。いくつかの実施形態において、細胞の細胞増殖または細胞増殖の増大は、固形腫瘍細胞との最初の接触後、約、少なくとも、または少なくとも約６日から１８０日間持続する。いくつかの実施形態において、細胞は、１種または複数種の炎症誘発性サイトカインを発現し、任意で、そこにおいて、１種または複数種の炎症誘発性サイトカインは、固形腫瘍細胞との接触後に、好ましくは細胞表面でＣＡＲをコードした核酸を機能的に発現しない対照である細胞よりも多い量の腫瘍壊死因子アルファ及び／またはインターフェロンガンマを含む。
【0021】
いくつかの実施形態において、同種異系宿主に投与されたαβＴ細胞によって示される移植片対宿主応答と比較して、同種異系宿主に導入される場合、細胞で示される移植片対宿主応答が、低下、実質的な低下、実質的にない、またはなくなる。いくつかの実施形態において、同種異系宿主が投与されたαβＴ細胞によって示された移植片対宿主応答と比較して、同種異系宿主が導入された場合、例えば、γδ、Ｔ細胞で示される移植片対宿主応答が、低下、実質的な低下、実質的にない、またはなくなる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞はγＴ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞はδＴ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞はγδＴ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、δ１、δ２、δ３またはδ４Ｔ細胞であり、好ましくはδ２－δＴ細胞、より好ましくはδ１δＴ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、δ１、δ２、δ３またはδ４γδＴ細胞であり、好ましくはδ２－γδＴ細胞、より好ましくはδ１γδＴ細胞である。
【0022】
別の態様において、本発明は、例えばγδ、Ｔ細胞などの前述の細胞のいずれか１つの複数、または本明細書に記載される通りの例えばγδ、Ｔ細胞などの複数の細胞を提供する。いくつかの実施形態において、複数は、例えば、１０８のγδ、Ｔ細胞などの少なくとも約１０８の細胞、好ましくは例えばγδ、Ｔ細胞の約１０８の細胞から、例えば、γδ、Ｔ細胞の約１０１１の細胞を含む。いくつかの実施形態において、複数は、例えばγδＴ細胞などの少なくとも６０％、８０％、または約６０％もしくは８０％から約９０％もしくは９５％のδ１、δ２、δ３、またはδ４細胞、好ましくはδ１またはδ２γδＴ細胞、より好ましくはδ２－γδＴ細胞、最も好ましくはδ１γδＴ細胞である組成物を含む。
【0023】
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載される通りの例えばγδ、Ｔ細胞、または本明細書に記載される通りのγδ、Ｔ細胞などの複数の細胞などの細胞を作製する方法を提供し、そこにおいて、この方法は、本明細書に記載される通り単離した核酸配列を含むコンストラクトを有する細胞（複数可）をトランスフェクトすることを含む。場合によっては、この方法は、例えば、ガンマ、レトロウイルス形質導入を含む。場合によっては、この方法は、ｅｘ ｖｉｖｏでの細胞（複数可）の増殖を含み、そこにおいて、このｅｘ ｖｉｖｏでの増殖は、単離した核酸配列のトランスフェクションの前及び／または後に実施される。場合によっては、この方法は、ｅｘ ｖｉｖｏでの細胞（複数可）の増殖を含み、そこにおいて、このｅｘ ｖｉｖｏでの増殖は、単離した核酸配列のトランスフェクションの前及び後に実施される。場合によっては、この方法は、ｅｘ ｖｉｖｏでの細胞（複数可）の増殖を含み、そこにおいて、このｅｘ ｖｉｖｏでの増殖は、単離した核酸配列のトランスフェクションの後に実施される。いくつかの実施形態において、この方法は、トランスフェクションの約３０日以内に、本明細書に記載のＣＡＲを機能的に発現する、例えばγδ、Ｔ細胞などの約１０８の細胞から、例えばγδ、Ｔ細胞などの約１０１１の細胞を作製することを含む。
【0024】
別の態様において、本発明は、薬学的に受容可能な賦形剤及び本明細書に記載される例えばγδ、Ｔ細胞（複数可）などの本明細書に記載される通りの細胞または複数の細胞を含む医薬組成物を提供する。
【0025】
別の態様において、本発明は、固形腫瘍細胞を殺傷する方法を提供し、この方法は、腫瘍細胞殺傷に有効な量の、上述の細胞もしくは複数の細胞または医薬組成物、または本明細書に記載される通りの細胞もしくは複数の細胞または医薬組成物と、固形腫瘍細胞を接触させることを含む。場合によっては、細胞または複数の細胞は、例えば、γδ、Ｔ細胞（複数可）である。
【0026】
いくつかの実施形態において、この方法は、固形腫瘍細胞を含む宿主生物に、治療上有効な量の、例えば、γδ、Ｔ細胞（複数可）などの細胞または医薬組成物を導入することを含む。いくつかの実施形態において、方法には、固形腫瘍細胞を含む宿主生物に、治療上有効な量である、例えば、γδ、Ｔ細胞（複数可）などの細胞またはその医薬組成物を導入し、同時にまたは連続して、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法を投与することを含む。
【0027】
いくつかの実施形態において、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の投与方法は、細胞（複数可）の導入と同時に、または一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）の有効量を連続して投与することで、その導入した細胞（複数可）の増殖、細胞毒性活性、持続性、またはその組み合わせを増大させ、好ましくは、そこにおいてこの方法はＩＬ－２を投与することを含み、より好ましくは、そこにおいて、この方法は、ＩＬ－１５を投与することを含む。いくつかの実施形態において、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法は、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）の有効な量を投与することで、細胞（複数可）を導入する前及び／または導入後に、導入した細胞（複数可）の増殖、細胞毒性活性、持続性、またはその組み合わせを増大させることを含む。
【0028】
いくつかの実施形態において、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法は、γδＴ細胞（複数可）を導入する前のリンパ球の枯渇化を含む。いくつかの実施形態において、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法は、導入した細胞（複数可）からの１種または複数種の一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）の分泌を含む。いくつかの実施形態において、この方法は、対照の生物と比較して、宿主生物のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍量を減少させ、及び／または宿主生物の平均生存時間を増加させ、そこにおいて、対照の生物は、細胞（複数可）または医薬組成物とともに処置しない。いくつかの実施形態において、この方法は、治療が必要な対象のがんを治療する方法である。
【0029】
別の態様において、本発明は、腫瘍細胞殺傷に有効な量である、上述の細胞または、本明細書に記載の通りの細胞（例えばγδＴ細胞など）、複数のそのような細胞または治療が必要な対象の固形腫瘍細胞癌を治療するための薬剤を製造する際のそのような細胞を含む医薬組成物のいずれか１つの使用を提供する。別の態様において、本発明は、治療が必要な対象のがんを治療する方法を提供し、この方法は、治療上有効量の細胞を投与することを含み、そこにおいて、がんは、ＴｙｒＤまたはＧＰＣ３の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞を含む。
【0030】
いくつかの実施形態において、この方法は、細胞の投与と同時に、または連続して、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法を投与することを含む。いくつかの実施形態において、この方法は、細胞の複数回投与を実施することを含み、そこにおいて、この複数回投与の間の間隔は、少なくとも約１週間、好ましくは少なくとも約２、３、４、５、６、７、８または１２週間、及び／または６か月または１２か月に１回以下である。
【0031】
別の実施形態において、本発明は、前述の方法または本明細書に記載の方法のいずれか１つを用いるための医薬組成物を提供する。
【0032】
参照による援用
本明細書で言及される全ての出版物、特許及び特許出願は、各出版物、特許または特許出願が、参照により組み込まれるために、個別的かつ具体的に示された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で言及される全ての出版物、特許及び特許出願は、各出版物、特許または特許出願が、参照により組み込まれるために、個別的かつ具体的に示された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【0033】
【図1】１つの共刺激シグナル伝達エンドドメイン（左）または２つの共刺激シグナル伝達エンドドメイン（右）を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の実施形態の概略図を示す。本明細書で用いる共刺激シグナル伝達エンドドメインは、共刺激エンドドメイン（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｅｎｄｏｄｏｍａｉｎ）または共刺激エンドドメイン（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｅｎｄｏｄｏｍａｉｎ）とも呼ばれる。模範的なＣＡＲにおいて有用である模範的な共刺激シグナル伝達エンドドメインには、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＴＬＲ２及びそれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。
【図2】５２６及びＷＭ２６６．１－Ｌｕｃ黒色腫細胞株に対する、本明細書に記載の遺伝子操作しているγδＴ細胞及び遺伝子操作していないγδＴ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性を示す。
【図3】皮下ＷＭ２６６．４細胞ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスモデルにおける本明細書に記載のγδＴ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの治療有効性を示す。
【図4】例えば固形腫瘍を治療するために、遺伝子操作されたγδＣＡＲ－Ｔ細胞及び遺伝子操作していないγδＣＡＲ－Ｔ細胞を製造するための製造工程を示す。
【図5】対照ＣＡＲコンストラクトまたはチロシナーゼポリペプチドを標的とするコンストラクトで形質導入したＶδ１Ｔ細胞の細胞毒性活性を示す。
【図6】可溶性ＩＬ－１５（ｓＩＬ１５）（配列番号１４）及びコドン最適化（ＷＯ２００７／０３７７８０Ａ２）ｓＩＬ１５などの抗グリピカン３（ＧＰＣ３）とのＶδ１細胞の形質導入効率を示す。
【図7】様々なレベルのＧＰＣ３発現を伴う肝臓癌細胞株パネルに対する抗ＧＰＣ３ＣＡＲコンストラクトで形質導入していないまたは形質導入しているかのどちらかのＶδ１Ｔ細胞の細胞毒性活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【0034】
定義：
本明細書を解釈する目的のために、下の定義を適用するが、適当と認められる場合には、単数形で用いられる用語はその複数形も含み、逆もまた同様である。説明される任意の定義が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合には、下記に説明する定義が優先されるものとする。別段に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。
本明細書を解釈する目的のために、下の定義を適用するが、適当と認められる場合には、単数形で用いられる用語はその複数形も含み、逆もまた同様である。説明される任意の定義が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と矛盾する場合には、下記に説明する定義が優先されるものとする。別段に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【0035】
本明細書で用いられる用語「約」は、量、時間的な持続期間などの測定可能な値を指す場合には、開示される方法を実施するためにその変動が適切であるように、特定値から±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、さらにより好ましくは±１％及びさらにいっそうより好ましくは±０．１％の変動を包含するように意図される。
【0036】
本明細書で用いられる用語「γδＴ細胞（ガンマデルタＴ細胞）」は、１つのγ鎖及び１つのδ鎖で構成される、異なるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、すなわちγδＴＣＲがそれらの表面で発現するＴ細胞のサブセットを指す。「γδＴ細胞」という用語は、ナイーブ、エフェクターメモリ、セントラルメモリ及び最終分化型γδＴ細胞と同様に、特に、Ｖδ１及びＶδ２、Ｖδ３γδＴ細胞を含むがこれらに限定されないγδＴ細胞の全てのサブセットを含む。さらなる例として、「γδＴ細胞」という用語は、Ｖγ２、Ｖγ３、Ｖγ５、Ｖγ８、Ｖγ９、Ｖγ１０及びＶγ１１γδＴ細胞と同様に、Ｖδ４、Ｖδ５、Ｖδ７及びＶδ８γδＴ細胞を含む。いくつかの実施形態において、γδＴ細胞は、Ｖδ１－、Ｖδ２－またはＶδ１－及びＶδ２－である。遺伝子操作した及び遺伝子操作していないγδＴ細胞及び／またはそれらのサブタイプを作製及び用いるための組成物及び方法には、ＵＳ２０１６／０１７５３５８、ＷＯ２０１７／１９７３４７、ＵＳ９４９９７８８、ＵＳ２０１８／０１６９１４７、ＵＳ９９０７８２０、ＵＳ２０１８／０１２５８８９及びＵＳ２０１７／０１９６９１０に記載されているものが含まれるが、これらに限定されない。これらのそれぞれの内容は、この遺伝子操作した及び遺伝子操作していないγδＴ細胞及び／またはそれらのサブタイプを作製及び用いるための組成物及び方法などが、あらゆる目的のために参照により組み込まれる。本出願はさらに、任意で機能性ＴＣＲを形成するために第２のポリペプチドと組み合わせて、１つのγ鎖または１つのδ鎖を発現するＴ細胞、または他の遺伝子操作された白血球もしくはリンパ球について考察する。１つのγ鎖または１つのδ鎖を発現するこのような遺伝子操作された白血球またはリンパ球は、本方法において用いられてもよく、または本明細書に記載の組成物中に存在してもよい。
【0037】
本明細書で用いる用語「Ｔリンパ球」または「Ｔ細胞」は、ＣＤ３（ＣＤ３＋）及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ＋）を発現する、または発現した免疫細胞を指す。Ｔ細胞は細胞性免疫において中心的な役割を果たす。ＣＤ３及びＴＣＲを「発現した」Ｔ細胞は、ＣＤ３及び／またはＴＣＲ細胞表面の発現を排除するように遺伝子操作されている。
【0038】
本明細書で用いる用語「ＴＣＲ」または「Ｔ細胞受容体」は、アルファ－ベータもしくはガンマ－デルタ受容体またはそれらの組み合わせを形成する二量体異種細胞表面シグナル伝達タンパク質を指す。αβＴＣＲは、ＭＨＣ分子により提示される抗原を認識するが、γδＴＣＲはＭＨＣの提示とは独立して抗原を認識することが可能である。
【0039】
「ＭＨＣ」（主要組織適合遺伝子複合体）という用語は、細胞表面の抗原提示タンパク質をコードする遺伝子のサブセットを指す。ヒトの場合、これらの遺伝子はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）遺伝子と言う。本明細書では、略語ＭＨＣまたはＨＬＡは、区別なく用いられる。
【0040】
本明細書で用いる「活性化」は、検出可能な細胞増殖を誘導するために十分に刺激されたＴ細胞の状態を指す。活性化は、誘導されたサイトカイン産生及び検出可能なエフェクター機能と関連している可能性もある。「活性化Ｔ細胞」という用語は、中でも、細胞分裂を起こしているＴ細胞を指す。
【0041】
本明細書で用いる用語「抗体」は、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、天然由来または組換え源由来の無処置の免疫グロブリンであり得て、さらに無処置の免疫グロブリンの免疫反応性部分であり得る。典型的には、抗体は免疫グロブリン分子の四量体である。本発明の抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ）２、ならびに一本鎖抗体及びヒト化抗体を含む様々な形態で存在し得る（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９－５８８３；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）。
【0042】
「抗体フラグメント」という用語は、無処置の抗体の一部を指し、無処置の抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント、線状抗体、ｓｃＦｖ抗体及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【0043】
本明細書で用いる「抗体重鎖」は、自然に存在するコンフォメーションで抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖のうち大きい方を指す。
【0044】
本明細書で用いる「抗体軽鎖」は、自然に存在するコンフォメーションで抗体分子に存在する２種類のポリペプチド鎖のうち小さい方を指す。κ及びλ軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。
【0045】
本明細書で用いる用語「合成抗体」は、例えば、本明細書に記載される通りバクテリオファージにより発現される抗体のように組換えＤＮＡ技術を用いて作製される抗体を意味する。また、この用語は、抗体をコードするＤＮＡ分子を合成することで作製され、そのＤＮＡ分子は抗体タンパク質または抗体を指定するアミノ酸配列を発現する抗体を意味すると解釈されるべきであり、そこにおいて、ＤＮＡまたはアミノ酸配列は、利用可能で、当技術分野で周知の合成ＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を用いて得られる。
【0046】
本明細書で用いる用語「抗原」または「Ａｇ」は、免疫応答を誘発する分子として定義される。この免疫応答には、抗体産生もしくは特定の免疫適格細胞の活性化のどちらか、またはその両方を含み得る。当業者は、タンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が抗原として役立ち得ることを理解するであろう。さらに、抗原は組換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。したがって、熟練者は、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡは、本明細書で用いられる用語「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者は、抗原が遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によりのみコードされる必要がないことを理解するであろう。本発明が、これに限定されないが、１種以上の遺伝子の部分ヌクレオチド配列の使用を含み、さらにこれらのヌクレオチド配列が、所望の免疫応答を誘発させるために様々な組み合わせで配置されることは、容易に明らかである。さらに、熟練者は、抗原が「遺伝子」によりコードされる必要が全くないことを理解するであろう。抗原が産生される、合成される、または生体試料由来であり得ることは容易に明らかである。このような生体試料には、組織試料、腫瘍試料、細胞、または生体液が含まれ得るが、これらに限定されない。
【0047】
「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することが可能な、任意のタンパク質決定因子、脂質または炭水化物決定因子を含む。エピトープ決定基は通常、アミノ酸、脂質または糖側鎖などの分子の活性表面群からなり、通常、特定の３次元構造特性ならびに特定の電荷特性を有する。平衡解離定数（ＫＤ）が１０－６～１０－１２Ｍの範囲にある場合、抗体は抗原に特異的に結合すると言われている。
【0048】
本明細書で用いる用語「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、例えば、人工Ｔ細胞受容体、Ｔ体、一本鎖免疫受容体、キメラＴ細胞受容体、またはキメラ免疫受容体を指す場合があり、また特定の免疫エフェクター細胞に人工的な特異性を移植する、遺伝子操作された受容体を包含する。ＣＡＲは、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞に付与するために用いられてもよく、それにより、例えば、養子細胞療法で用いるために、多数の特異的Ｔ細胞を産生させることが可能である。特定の実施形態において、ＣＡＲは、例えば、腫瘍関連抗原に対する細胞の特異性を方向付ける。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、細胞内活性化ドメイン（標的の腫瘍細胞などの標的細胞と標的部分の結合時にＴ細胞を活性化させることが可能になる）、膜貫通ドメイン及び長さが変化し得る細胞外ドメインを含み、さらに疾病または疾患に関連する、例えば腫瘍－抗原結合領域を含む。特定の態様において、ＣＡＲは、ＣＤ３－ゼータ膜貫通ドメイン及びエンドドメインに融合した、モノクローナル抗体由来の一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）の融合を含む。他のＣＡＲデザインの特異性は、受容体のリガンド（ペプチドなど）またはデクチンなどのパターン認識受容体に由来する場合がある。特定の場合において、抗原認識ドメインの間隔を変えて、活性化誘導細胞死を減らすことが可能である。特定の場合において、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ、ＦｃＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＤＡＰ１０／１２及び／またはＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２）などのような共刺激シグナル伝達を追加するためのドメインを含む。場合によっては、分子は、共刺激分子、イメージング（例えば、陽電子放出断層撮影）用のレポーター遺伝子、プロドラッグを付加する際に、Ｔ細胞を条件付きで切除する遺伝子産物、ホーミング受容体、ケモカイン、ケモカイン受容体、サイトカイン及びサイトカイン受容体などのＣＡＲと共に共発現され得る。さらに、当業者は、共刺激ドメインが遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によりのみコードされる必要がないことを理解するであろう。本発明が、これに限定されないが、１種以上の遺伝子の部分ヌクレオチド配列の使用を含み、さらにこれらのヌクレオチド配列が、所望の免疫応答を誘発させるために様々な組み合わせで配置されることは、容易に明らかである。
【0049】
本明細書で用いる用語「抗腫瘍効果」は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の増加または、がん状態に関連する様々な生理的症状の改善により、明らかになり得る生物学的効果を指す。また、「抗腫瘍効果」は、そもそも腫瘍の発生を予防する本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞及び抗体の能力によって明らかにされ得る。
【0050】
「自己抗原」という用語は、本発明では、免疫系により異物であると誤って認識される任意の自己抗原を意味する。自己抗原は、細胞タンパク質、リン酸化タンパク質、細胞表面タンパク質、細胞脂質、核酸、細胞表面受容体を含む糖タンパク質を含むが、これらに限定されない。
【0051】
本明細書で用いる用語「自己由来」は、後に再導入される個体と同じ個体に由来する任意の材料を指すように意図される。
【0052】
本明細書で用いる用語「同種異系」は、後に同じ種の別の動物に導入される、動物に由来する任意の材料を指すように意図される。
【0053】
「治療上有効な量」という用語は、研究者、獣医師、医師または他の臨床医に求められている、組織、系または対象の生物学的または医学的応答を誘発する、組成物の量を指す。「治療上有効な量」という用語は、投与された場合に、治療中の疾患または疾病（例えば、固形癌）の兆候または症状について、その発症を予防するため、またはその兆候もしくは症状の１つもしくは複数をある程度緩和するために十分な組成物の量を含む。治療上有効な量は、組成物、疾病及びその重症度ならびに治療される対象の年齢、体重などに依存して変化する。
【0054】
本明細書で用いる用語である、疾病を「治療する」とは、対象が経験する疾病または疾患の少なくとも１つの兆候または症状について、頻度または重症度を低下させることを意味する。
【0055】
１種または複数種の治療薬と「併用した場合の」投与は、同時（併用）及び任意の順序の連続した投与を含む。
【0056】
本明細書で用いる用語「薬学的に受容可能な」は、化合物の生物学的活性または特性を抑制せず、かつ比較的無毒性である塩、担体または希釈剤などの材料を指すが、これらに限定されない。換言すれば、この材料は、所望されない生物学的効果を引き起こすこと、またはそれが含まれる組成物の構成成分のいずれとも有害な形で作用することもなく、個体に投与され得る。
【0057】
「コードする」は、ヌクレオチドの定義される配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）またはアミノ酸の定義された配列のどちらかを有する生物学的方法で、他のポリマー及び高分子を合成するためのテンプレートとしての役割を果たすための遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性と、それから得られる生物学的特性とを指す。したがって、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が、細胞または他の生物学的システムにおいてタンパク質を作製する場合、その遺伝子はタンパク質をコードする。ｍＲＮＡの配列と同一で、通常、配列表で提供されるヌクレオチド配列であるコード鎖と、遺伝子またはｃＤＮＡの転写のテンプレートとして使用される非コード鎖の両方が、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると言うことが可能である。
【0058】
「単離した」とは、自然状態から変化または除去したことを意味する。例えば、生きている動物中に自然に存在する核酸またはペプチドは「単離」されないが、その自然状態の共存物質から部分的または完全に分離された同じ核酸またはペプチドは「単離」される。単離した核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形態で存在することができ、または、例えば、宿主細胞などの非天然環境に存在し得る。
【0059】
特に明記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、相互の縮重バージョンでありかつ同じアミノ酸配列をコードする全ヌクレオチド配列を含む。タンパク質及びＲＮＡをコードするヌクレオチド配列はイントロンを含み得る。
【0060】
「患者」、「対象」、「個体」などの用語は、本明細書では区別なく用いられ、本明細書に記載の方法に従順な任意の動物を指す。特定の非限定的実施形態において、患者、対象または個体は、ヒトである。
【0061】
抗体に関して、本明細書で用いられる用語「特異的に結合する」は、特定の抗原を認識するが、試料中の他の分子を実質的に認識または結合しない抗体を意味する。例えば、１つの種から得た抗原に特異的に結合する抗体は、１種または複数種の種から得たその抗原とも結合し得る。しかし、そのような異種間の反応性は、それ自体が特性に応じた抗体の分類を変えるものではない。別の例において、抗原に特異的に結合する抗体は、抗原の様々な対立遺伝子と結合し得る。しかし、このような交差反応性は、それ自体が特性に応じた抗体の分類を変えるものではない。場合によっては、「特異的結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ）」または「特異的に結合すること（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｉｎｇ）」という用語は、抗体、タンパク質またはペプチドと第２の化学種との相互作用に関して用いられ得るが、この相互作用は、化学種の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存する、例えば、抗体は、通常タンパク質というよりは特定のタンパク質構造を認識及び結合することを意味する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識した「Ａ」及び抗体を含む反応において、エピトープＡ（または、遊離の非標識のＡ）を含む分子が存在すると、抗体に結合する標識Ａの量は減少する。
【0062】
いくつかの実施形態において、特異的結合は、少なくとも約１ｘ１０－８Ｍ以下の平衡解離定数によって特徴付けられ得る（例えば、ＫＤが小さいほど結合は強くなる）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが含まれる。さらに、第１の抗原及び１種もしくは複数種の付加的抗原に結合する多重特異性抗体、または抗原の２つの異なる領域に結合する二重特異性抗体は、それにもかかわらず、本明細書で使用される「特異的に結合する」抗体と見なされる。
【0063】
固形腫瘍は、少なくとも約１０または少なくとも約１００の腫瘍細胞の腫瘍塊を含む腫瘍である。固形腫瘍には、軟部組織腫瘍、原発性固形腫瘍、または転移性病変が含まれる。
【0064】
固形腫瘍の例には、例えば、肝臓、肺、乳房、リンパ、胃腸（結腸など）、尿生殖路（腎臓、尿路上皮細胞など）、前立腺及び咽頭などに影響を及ぼすものなどの様々な臓器系の肉腫、腺癌及び細胞癌を含む。腺癌には、ほとんどの結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸癌及び食道癌などの悪性腫瘍が含まれる。一実施形態において、がんは、進行期黒色腫などの黒色腫である。前述のがんの転移性病変も、本発明の方法及び組成物を用いて治療または予防することが可能である。治療され得る他のがんの例には、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、食道癌、小腸癌、内分泌癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎皮質癌、軟部肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、膀胱癌、腎臓癌または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸椎腫瘍、脳幹膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類上皮癌、扁平細胞癌、アスベストに起因するものを含む環境に起因するがん及びこれらのがんの組み合わせが含まれる。好ましい実施形態において、固形腫瘍細胞は、ＴｙｒＤまたはそのフラグメントを発現、または過剰発現する。いくつかの実施形態において、固形腫瘍細胞は、ＴｙｒＤフラグメントを含むＨＬＡ：ペプチド複合体を発現または過剰発現する。いくつかの実施形態において、ＴｙｒＤフラグメントは、ＴｙｒＤ３６９－３７７である。いくつかの実施形態において、ＨＬＡは、ＨＬＡ－Ａ２などのクラスＩのＨＬＡである。いくつかの実施形態において、固形腫瘍細胞は、ＨＬＡ－Ａ２／ＴｙｒＤ３６９－３７７を発現または過剰発現する。
【0065】
いくつかの実施形態において、固形腫瘍細胞は、グリピカン３（ＧＰＣ３）を発現または過剰発現する。いくつかの実施形態において、固形腫瘍細胞は、ＵＳ７９１９０８６、ＷＯ２０１４／１８０３０６、ＷＯ２０１８／０１９７７２、ＷＯ２０１６／０４９４５９、ＷＯ２００３／０００８８３、ＷＯ２００６／０４６７５１、ＷＯ２００７／０４７２９１、ＷＯ２０１６／０８６８１３、ＷＯ２０１６／０４７７２２、ＷＯ２０１６／０３６９７３、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００８；６８：９８３２－９８３８、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１３ Ｍａｒ １９；１１０（１２）：Ｅ１０８３－９１で記載の抗ＧＰＣ３抗体、Ｔ細胞受容体またはキメラ抗原受容体により特異的に結合されるＧＰＣ３のエピトープを発現または過剰発現するが、これらのそれぞれの内容は、あらゆる目的のために、全体が特に結合ドメイン、抗体、抗体フラグメント、相補性決定領域、この相補性決定領域を含むポリペプチド、この相補性決定領域をコードする核酸及びエピトープ特異性、ならびにそこに記載されているエピトープ特異性を決定するためのアッセイが参照により組み込まれる。いくつかの実施形態において、固形腫瘍細胞は、抗ＧＰＣ３抗体ＧＣ３３によって特異的に結合されるグリピカン３のエピトープを発現または過剰発現する。いくつかの実施形態において、固形腫瘍は、ＧＰＣ３フラグメントを含むＨＬＡ：ペプチド複合体を発現または過剰発現する。いくつかの実施形態において、ＨＬＡは、ＨＬＡ－Ａ２などのクラスＩのＨＬＡである。いくつかの実施形態において、固形腫瘍は、ＧＰＣ３１４４－１５２ペプチドを含むＨＬＡ：ペプチド複合体を発現または過剰発現する。いくつかの実施形態において、固形腫瘍は、ＧＰＣ３２９８－３０６ペプチドを含むＨＬＡ：ペプチド複合体を発現または過剰発現する。Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１２ Ｎｏｖ １；１（８）：１４４８－１４５０を参照のこと。
【0066】
「発現カセット」は、発現される転写物またはポリペプチドをコードする核酸に操作可能に連結された発現制御配列を含む核酸を指す。発現カセットは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞により、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ発現システムにおいて供給され得る。発現カセットは、コスミド、プラスミド（例えば、リポソーム中のネイキッドもしくはリポソームに含まれるもの）、またはウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）などのベクターの構成成分であり得る。発現カセットは、γδＴ細胞などの宿主細胞に存在し得る。
【0067】
範囲：本開示全体を通して、本発明の様々な態様は、範囲形式で提示され得る。範囲形式での説明は、単に便宜上及び簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、その範囲内の個々の数値だけでなく、全ての可能な部分範囲を具体的に開示していると見なされるべきである。例えば、１から６などの範囲の記述は、１から３、１から４、１から５、２から４、２から６、３から６などの部分範囲、ならびに、１、２、２．７、３、４、５、５．３及び６などの範囲内の個々の数字を具体的に開示していると見なされるべきである。これは、範囲の幅に関係なく適用される。
【0068】
キメラ抗原受容体コンストラクト：
本発明の態様には、ＣＡＲをコードする核酸、ならびにそのような核酸を含むコンストラクト及びベクターが含まれる。場合によっては、核酸は、例えば、異種性の、発現カセットの構成成分である。いくつかの実施形態において、核酸は、例えば、異種性の、レトロウイルスベクターの構成成分である。いくつかの実施形態において、核酸は、例えば異種性の、αβまたはγδＴ細胞、好ましくは、γδＴ細胞の構成成分である。いくつかの実施形態において、核酸は、例えば異種性の、γ＋Ｔ細胞及び／またはδ＋Ｔ細胞の構成成分である。いくつかの実施形態において、核酸は、例えば異種性の、α－Ｔ細胞及び／またはβ－Ｔ細胞の構成成分である。
本発明の態様には、ＣＡＲをコードする核酸、ならびにそのような核酸を含むコンストラクト及びベクターが含まれる。場合によっては、核酸は、例えば、異種性の、発現カセットの構成成分である。いくつかの実施形態において、核酸は、例えば、異種性の、レトロウイルスベクターの構成成分である。いくつかの実施形態において、核酸は、例えば異種性の、αβまたはγδＴ細胞、好ましくは、γδＴ細胞の構成成分である。いくつかの実施形態において、核酸は、例えば異種性の、γ＋Ｔ細胞及び／またはδ＋Ｔ細胞の構成成分である。いくつかの実施形態において、核酸は、例えば異種性の、α－Ｔ細胞及び／またはβ－Ｔ細胞の構成成分である。
【0069】
本明細書に記載されているのは、固形腫瘍細胞の表面で発現される腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的に結合するＣＡＲ結合ドメインをコードする核酸である。模範的なＴＡＡは、チロシナーゼ（ＴｙｒＤ）またはそのペプチドフラグメントである。場合によっては、ＴＡＡはグリピカン３またはそのペプチドフラグメントである。場合によっては、ＴＡＡはクラスＩのＨＬＡ分子などのＨＬＡ分子に結合したペプチドである。クラスＩのＨＬＡ分子（本明細書ではＨＬＡ制限チロシナーゼエピトープ、ＨＬＡ制限チロシナーゼエピトープ及びＭＨＣ制限チロシナーゼ抗原とも互換的に呼ぶ）に結合するチロシナーゼペプチドは、チロシナーゼ酵素（Ｇｅｎｅｂａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＰ＿０００３６３．１）由来であり、通常は８～１０のアミノ酸の長さで、ＨＬＡ分子中の対応する結合ポケットと相互作用する２または３のアンカー残基を介して重鎖α１～α２の溝に結合する。
【0070】
チロシナーゼは、膜に結合するＮ－結合型糖タンパク質であり、メラニン合成の重要な酵素である。これは、全ての正常なメラノサイト及びほぼ全ての黒色腫の腫瘍試料で発現する（Ｈ．Ｔａｋｅｕｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．，２００３；Ｓ．Ｒｅｉｎｋｅ，ｅｔ ａｌ．，２００５）。この酵素に由来するペプチドは、ＭＨＣクラスＩ分子に提示され、黒色腫患者の自己由来の細胞溶解性Ｔリンパ球によって認識される［Ｔ．Ｗｏｌｆｅｌ，ｅｔ ａｌ．，１９９４；Ｂｒｉｃｈａｒｄ，ｅｔ ａｌ．，１９９３；Ｒｅｎｋｖｉｓｔ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ２００１ ５０：３－１５；Ｎｏｖｅｌｌｉｎｏ Ｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍａｒｃｈ ２００４ ｕｐｄａｔｅ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．５４：１８７－２０７，２００５］。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に由来する別の腫瘍チロシナーゼＨＬＡ制限ペプチドは、Ｉｓｔｉｔｕｔｏ Ｎａｚｉｏｎａｌｅ ｐｅｒ ｌｏ Ｓｔｕｄｉｏ ｅ ｌａ Ｃｕｒａ ｄｅｉ ＴｕｍｏｒｉのＷｅｂサイト（ｗｗｗ．ｉｓｔｉｔｕｔｏｔｕｍｏｒｉ．ｍｉ．ｉｔ）で確認が可能である。
【0071】
ＭＨＣクラスＩ制限チロシナーゼの抗原ペプチドの非限定的な例は、ＷＯ２００８／１２０２０２で提供されており、ＷＯ２００８／１２０２０２の表１３９などのその全体が、参照により本明細書に組み込まれる。本発明のいくつかの実施形態によれば、チロシナーゼ抗原ペプチドは、ＴｙｒＤ３６９－３７７ペプチドである。ＴｙｒＤ内のエピトープであるＴｙｒＤに特異的に結合する結合ドメインは、ＨＬＡ（クラスＩのＨＬＡなど）に制限された上で結合するものを含むがこれらに限定されず、ＷＯ２０１６／１９９１４０、ＷＯ２０１６／１９９１４１、ＵＳ９６８８７３９、同時係属出願中のＰＣＴ／ＩＢ２０１７／０５３５３９で記載されているものを含むが、これらに限定されない。このそれぞれの内容は、例えば、ＨＬＡ制限またはＨＬＡ非依存で、ＴｙｒＤまたはＴｙｒＤ内のエピトープに特異的に結合する結合ドメインを同定、作製及び用いるための組成物及び方法を含むがこれらに限定されない全体が、あらゆる目的のために参照により組み込まれる。
【0072】
クラスＩのＨＬＡ分子（本明細書ではＨＬＡ制限ＧＰＣ３エピトープ、ＨＬＡ制限ＧＰＣ３エピトープ及びＭＨＣ制限ＧＰＣ３抗原とも互換的に呼ぶ）に結合するＧＰＣ３ペプチドは、グリピカン３タンパク質（Ｇｅｎｅｂａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ：ＮＭ＿００１１６４６１７．２）由来であり、通常は８～１０のアミノ酸の長さで、ＨＬＡ分子中の対応する結合ポケットと相互作用する２または３のアンカー残基を介して重鎖α１～α２の溝に結合する。
【0073】
本明細書で使用される場合、ＴｙｒＤに特異的に結合する、及び／またはＴｙｒＤ内のエピトープに特異的に結合する、結合ドメイン、ＣＡＲ、またはＣＡＲ Ｔ細胞には、ＴｙｒＤペプチドフラグメントに特異的に結合する結合ドメイン、ＣＡＲ、またはＣＡＲ Ｔ細胞が含まれるが、これらに限定されない。ＴｙｒＤペプチドフラグメントに特異的に結合する結合ドメイン、ＣＡＲ、またはＣＡＲ Ｔ細胞は、ＨＬＡ制限された上で参照のＴｙｒＤペプチドフラグメントに特異的に結合することが可能である。同様に、本明細書で使用される場合、細胞の表面でＴｙｒＤを発現する細胞は、ペプチド：ＨＬＡ複合体などの細胞の表面でＴｙｒＤペプチドフラグメントを発現または過剰発現する細胞を含む。
【0074】
本明細書で使用される場合、ＧＰＣ３に特異的に結合する、及び／またはＧＰＣ３内のエピトープに特異的に結合する結合ドメイン、ＣＡＲ、またはＣＡＲ Ｔ細胞には、ＧＰＣ３ペプチドフラグメントに特異的に結合する結合ドメイン、ＣＡＲ、またはＣＡＲ Ｔ細胞が含まれるが、これらに限定されない。ＧＰＣ３ペプチドフラグメントに特異的に結合する結合ドメイン、ＣＡＲ、またはＣＡＲ Ｔ細胞は、ＨＬＡ制限された上で参照のＧＰＣ３ペプチドフラグメントに特異的に結合することが可能である。同様に、本明細書で使用される場合、細胞の表面でＴｙｒＤを発現する細胞は、ペプチド：ＨＬＡ複合体などの細胞の表面でＧＰＣ３ペプチドフラグメントを発現または過剰発現する細胞を含む。
【0075】
いくつかの実施形態において、結合ドメインは、細胞の表面上で完全長の機能的ポリペプチドで発現されるように抗原に結合する。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ＭＨＣ：抗原複合体において提示されるように、抗原に結合する。いくつかの実施形態において、結合ドメインは、ＨＬＡに制限された上で抗原に結合する。ＭＨＣ：抗原複合体に対して特異性を示す結合ドメインは、例えば、ＷＯ／２０１６／１９９１４０及びＷＯ／２０１６／１９９１４１に記載されている。
【0076】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、ＴＳＧＭＧＶＳ（配列番号３３）を含むＣＤＲＨ１、ＨＩＹＷＤＤＫＲＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３４）を含むＣＤＲＨ２、ＫＤＹＧＳＳＦＹＡＭＨＹ（配列番号３５）を含むＣＤＲＨ３、ＫＡＳＱＤＩＨＮＹＩＡ（配列番号３６）を含むＣＤＲＬ１、ＹＴＳＴＬＱＰ（配列番号３７）を含むＣＤＲＬ１、及び／またはＬＱＹＤＮＬＷＴ（配列番号３８）を含むＣＤＲＬ２を有する抗ＴｙｒＤ結合ドメインをコードする。
【0077】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、ＤＹＥＭＨ（配列番号３９）（またはＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨ（配列番号４０））を含むＣＤＲＨ１、ＡＬＤＰＫＴＧＤＴＡＹＳＱＫＦＫＧ（配列番号４１）を含むＣＤＲＨ２、ＦＹＳＹＴＹ（配列番号４２）を含むＣＤＲＨ３、ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＲＮＴＹＬＨ（配列番号４３）を含むＣＤＲＬ１、ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号４４）を含むＣＤＲＬ２、及び／またはＳＱＮＴＨＶＰＰＴ（配列番号４５）を含むＣＤＲＬ３を有する抗ＧＰＣ３結合ドメインをコードする。
【0078】
本開示は、本明細書で提供される配列と結合するために競合する抗ＴｙｒＤ結合ドメインまたは抗ＧＰＣ３結合ドメインについても考察する。既知の方法を用いることにより、抗ＴｙｒＤ結合ドメインが、参照抗体もしくは結合ドメインと同じエピトープに結合する、またはその参照抗体もしくは結合ドメインと結合するために競合するかどうかを決定することが可能である。例えば、試験抗体が参照結合ドメインと同じエピトープに結合するかどうかを決定するためには、参照結合ドメインを飽和条件下でＴｙｒＤに結合させることで可能になる。次に、ＴｙｒＤ分子に結合する試験結合ドメインの能力を評価することが可能である。この試験する結合ドメインが、参照結合ドメインとの飽和結合に続いてＴｙｒＤに結合することが可能である場合、この試験結合ドメインは、参照結合ドメインとは異なるエピトープに結合すると結論付けられる。一方で、試験結合ドメインが、参照結合ドメインとの飽和結合に続いてＴｙｒＤに結合できない場合、この試験結合ドメインは、参照結合ドメインにより結合されるエピトープと同じエピトープに結合し得る。
【0079】
結合ドメインが、参照結合ドメインと結合するために競合する場合、上述した結合方法論は、２つの方向で実施される。第１の方向では、参照結合ドメインを飽和条件下でＴｙｒＤに結合させ、続いてＴｙｒＤ分子への試験結合ドメインの結合を評価する。第２の方向では、試験結合ドメインを飽和条件下でＴｙｒＤ分子に結合させ、続いてＴｙｒＤ分子への参照結合ドメインの結合を評価する。両方の方向において、第１の（飽和）結合ドメインのみがＴｙｒＤ分子に結合可能である場合は、試験結合ドメイン及び参照結合ドメインは、ＴｙｒＤへの結合のために競合すると結論付けられる。当業者により理解されるように、参照結合ドメインと結合するために競合する結合ドメインは、必ずしも参照結合ドメインと同一のエピトープに結合し得るとは限らないが、重複するまたは隣接するエピトープに結合することにより参照結合ドメインの結合を立体的に遮断し得る。抗ＴｙｒＤ結合ドメインとの競合及びエピトープ結合を決定するための上述した方法は、同様に、抗ＴｙｒＤ結合ドメインに適用され得る。
【0080】
２つの結合ドメインが、それぞれが抗原への他方の結合を競争的に阻害（ブロック）する場合、同じまたは重複するエピトープに結合する。つまり、１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰な一方の結合ドメインは、競合的結合アッセイで測定される通り、他方の結合を少なくとも５０％、例えば７５％、９０％、さらには９９％阻害する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０ ５０：１４９５－１５０２を参照のこと）。その代わりに、一方の結合ドメインの結合を減少または排除する抗原の本質的に全てのアミノ酸変異が他方の結合を減少または排除する場合、２つの結合ドメインは同じエピトープを有する。一方の結合ドメインの結合を減少または排除するいくつかのアミノ酸変異が、他方の結合を減少または排除する場合、２つの結合ドメインは重複したエピトープを有する。
【0081】
さらに日常的な実験（例えば、ペプチド変異及び結合分析）を実施することで、観察された試験結合ドメインの結合の欠如が、実際に参照結合ドメインと同じエピトープへの結合によるものであるか、または立体的障害（または他の現象）が、観察された結合の欠如の原因であるかどうかを確かめることが可能である。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または当技術分野で利用可能な他の任意の定量的または定性的結合アッセイを用いて実施され得る。
【0082】
本開示は、ＣＤＲまたはフレームワーク領域において、本明細書で提供される配列に対して「実質的同一性」または「実質的類似性」を有する抗体及びＣＡＲを提供する。用語「実質的同一性」または「実質的に同一」は、核酸またはそのフラグメントを指す場合、他の核酸（または他の核酸の相補鎖）と至適に整列させた場合、以下で述べるようにＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧＡＰなどの任意の既知の配列同一性のアルゴリズムにより測定される通り、ヌクレオチド配列の同一性が、例えば、ヌクレオチド塩基の少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％存在することを示す。参照核酸分子と実質的同一性を有する核酸分子は、特定の例において、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。
【0083】
ポリペプチドに適用する場合、用語「実質的類似性」または「実質的類似の」は、デフォルトのギャップウエイトを用いるプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどにより至適に整列させた場合、２つのペプチド配列が少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、または１００％の配列同一性を共有していることを意味する。いくつかの態様において、同一ではない残基の位置は、保存的なアミノ酸の置換により異なる。「保存的なアミノ酸の置換」とは、アミノ酸残基が、類似した化学特性（電荷または疎水性など）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換されることである。概して、保存的なアミノ酸の置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させない。２つまたは複数のアミノ酸配列が、保存的置換により互いに異なる場合、同一性のパーセントまたは程度は、置換の保存的な性質により修復するように上方調整されてもよい。この調整を行う方法は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３３１を参照のこと。そしてこれは、本明細書に参照により組み込まれる。類似の化学特性の側鎖を有するアミノ酸基の例には、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン、２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリン及びスレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン及びヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸及びグルタミン酸ならびに７）硫黄含有側鎖：システインとメチオニンが含まれる。好ましい保存的なアミノ酸の置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタメート－アスパルテート及びアスパラギン－グルタミンである。その代わりに、保存的な置換は、Ｇｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３ ４５で開示されている、ＰＡＭ２５０対数尤度行列に正の値を有する任意の変化であり、参照により本明細書に組み込まれる。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列で負でない値を有する任意の変化である。
【0084】
ポリペプチドの配列同一性及び／または類似性は、典型的には、配列分析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的なアミノ酸の置換を含む種々の置換、削除及びその他の修飾に割り当てられた類似性を測定する際に用いる、類似する配列をマッチングさせる。例えば、ＧＣＧソフトウェアはデフォルトのパラメータを用いられ得るＧＡＰ及びＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムを含み、生命体の様々な種の相同的ポリペプチドなどの近縁種であるポリペプチドの間または、野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を測定する。例えば、ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ６．１を参照のこと。ポリペプチド配列は、デフォルトのまたは推奨のパラメータ、つまりＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ６．１のプログラムでＦＡＳＴＡを用いても比較され得る。ＦＡＳＴＡ（ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３など）は、クエリ配列と検索配列と間の最適なオーバーラップ領域のアラインメント及び配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上記）。配列は、ギャップ開始ペナルティが１２、ギャップ拡張ペナルティが２、ＢＬＯＳＵＭ行列が６２のアフィンギャップ検索を用いてＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを用いて比較し得る。様々な生命体から得た大量の配列を含むデータベースと、本明細書に開示される配列を比較する場合、他の好ましいアルゴリズムは、デフォルトのパラメータを用いるコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０及び（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２を参照のこと。この各内容は、参照により組み込まれる。
【0085】
本明細書では、１つまたは複数の置換（保存的な置換など）を有する本明細書で開示されたＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む抗ＴｙｒＤ ＣＡＲまたは抗ＧＰＣ３ＣＡＲを提供する。例えば、本開示は、本明細書で開示されたＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／またはＣＤＲ（例えばＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３）アミノ酸配列のいずれかと比較して、例えば、２０以下、１９以下、１８以下、１７以下、１６以下、１５以下、１４以下、１３以下、１２以下、１１以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下または１のアミノ酸置換を備えたＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＴｙｒＤ ＣＡＲを含む。例えば、抗ＴｙｒＤ ＣＡＲは、本明細書で開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／またはＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３）アミノ酸配列のいずれかと比べて、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１のアミノ酸置換（保存的なアミノ酸の置換など）を含み得る。
【0086】
同様に、本開示は、本明細書で開示されたＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／またはＣＤＲ（例えばＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３）アミノ酸配列のいずれかと比較して、例えば、２０以下、１９以下、１８以下、１７以下、１６以下、１５以下、１４以下、１３以下、１２以下、１１以下、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下または１のアミノ酸置換を備えたＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ及び／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＧＰＣ３ＣＡＲを含む。例えば、抗ＧＰＣ３ＣＡＲは、本明細書で開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／またはＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２またはＬＣＤＲ３）アミノ酸配列のいずれかと比べて、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１のアミノ酸置換（保存的なアミノ酸の置換など）を含み得る。
【0087】
本明細書に記載の模範的な結合ドメインは、典型的には、アミノ末端からカルボキシ末端の順に、重鎖領域とそれに続く軽鎖領域（ＶＨ－ＶＬ）を含む。結合ドメインにおけるＶＨ領域及びＶＬ領域の特定の順序が明示的または暗黙的に説明されている場合、本開示は、例えば、ｓｃＦＶまたはｓｃＦｖ結合ドメインを含むＣＡＲにおいてＶＨ及びＶＬ領域の順番が反転している代替の実施形態を記述しているようにも理解される。したがって、ＶＨ－ＶＬの順序の説明は、例えば、ｓｃＦＶまたはｓｃＦｖ結合ドメインを含むＣＡＲにおける代替のＶＬ－ＶＨの順序も説明するものである。さらに、ＶＬ－ＶＨの順序の説明は、例えば、ｓｃＦＶまたはｓｃＦｖ結合ドメインを含むＣＡＲにおける代替のＶＨ－ＶＬの順序も説明するものである。
【0088】
概して、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸は、結合ドメインを膜貫通ドメインに連結させるペプチドリンカーをコードする細胞外リンカー部を含む。模範的なリンカー部分には、ＣＤ８αヒンジドメインをコードするリンカー部分、例えば、配列番号１（ＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ）または配列番号２（ＴＴＴＰＡＰＲＰ ＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹ）が含まれるが、これらに限定されない。典型的には、ペプチドリンカーをコードする領域（例えば、ＣＤ８αヒンジドメイン）は、結合ドメインをコードする領域の３’及び膜貫通ドメインをコードする領域の５’である。
【0089】
本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸は、膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、細胞外抗原結合ドメイン、例えばヒンジを、１種または複数種の細胞内シグナル伝達成分に連結することが可能である。例えば、膜貫通ドメインは、抗原結合ドメイン、例えばヒンジを、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及び任意に１つまたは２つの共刺激エンドドメインと連結することが可能である。模範的な膜貫通ドメインには、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、例えば、配列番号３（ＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ）が含まれるが、これらに限定されない。典型的には、膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ８α膜貫通ドメイン）をコードする領域は、ペプチドリンカー（例えば、ＣＤ８αヒンジドメイン）をコードする領域の３’であり、１つまたは複数の細胞質ドメインをコードする領域の５’である。
【0090】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、１種または複数種の細胞質ドメインを含む細胞質領域をコードする。細胞質領域をコードする領域は、典型的には、膜貫通ドメインをコードする領域の３’である。細胞質ドメインは、典型的には、γδＴ細胞増殖、細胞毒性活性及び／または炎症誘発性サイトカイン発現（例えば、ＴＮＦ－αまたはＩＦＮγ）の活性化シグナルを提供するシグナル伝達ドメインである。模範的な細胞質ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態において、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号４（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲ ＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ）であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号５（ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶ ＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ）であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、細胞質領域は、例えば配列番号４及び５からそれぞれ独立して選択された、複数（例えば、２、３、４、５、または６）のＣＤ３ζシグナル伝達ドメインなどの複数（例えば、２、３、４、５、または６）のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞質領域は、複数（例えば、２、３、４、５、または６）の非ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及びＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態において、細胞質領域は、非ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン及び複数の（例えば、２、３、４、５、または６）ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。代用または追加のシグナル伝達ドメインが含まれるが、これに限定されない。
【0091】
細胞質領域は、１種または複数種の共刺激エンドドメインを含み得る。１種または複数種の共刺激エンドドメインをコードする領域は、シグナル伝達ドメインをコードする領域の５’または３’であり得る。いくつかの実施形態において、１種または複数種の共刺激エンドドメインをコードする領域は、シグナル伝達ドメインをコードする領域の５’であり得る。いくつかの実施形態において、１種または複数種の共刺激エンドドメインをコードする領域は、シグナル伝達ドメインの領域の５’であり、１種または複数種の共刺激エンドドメインをコードする付加的な領域は、シグナル伝達ドメインの３’である。模範的な共刺激エンドドメインには、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）及びＴＬＲ２共刺激エンドドメインならびにそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【0092】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のγδ－Ｔ細胞の増殖、持続性及び／または細胞毒性活性を増加させるために、追加のシグナル伝達様式を含むことが可能である。例えば、いくつかの実施形態において、ＣＡＲコンストラクトは、単離した核酸の３’末端で可溶性の一般的なガンマ鎖サイトカインをコードすることが可能である。一般的なガンマ鎖サイトカインコード領域は、Ｔ２Ａリンカーコード領域を介してＣＡＲコンストラクトの５’部に連結することができ、その結果、一般的なガンマ鎖サイトカインは、ＣＡＲポリペプチドから切断され、細胞によって分泌される。
【0093】
いくつかの実施形態において、コンストラクトは、少なくとも１種の４－１ＢＢ共刺激エンドドメインと、任意で、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８及びＣＤ２７共刺激エンドドメインから選択される第２の共刺激エンドドメインとをコードする。いくつかの実施形態において、コンストラクトは、少なくとも２種の４－１ＢＢ共刺激エンドドメインあるいは４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８及びＣＤ２７から選択される１、２、３、もしくは４またはそれ以上の共刺激エンドドメインと組み合わせた２種の４－１ＢＢ共刺激エンドドメインをコードする。いくつかの実施形態において、４－１ＢＢ共刺激エンドドメインは、配列番号６（ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴ ＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ）を含む。
【0094】
いくつかの実施形態において、コンストラクトは、１種のＣＤ２７共刺激エンドドメインと、任意で、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８及びＣＤ２７共刺激エンドドメインから選択される第２の共刺激エンドドメインとをコードする。いくつかの実施形態において、コンストラクトは、ＣＤ２７共刺激エンドドメイン及び４－１ＢＢ共刺激エンドドメインをコードする。いくつかの実施形態において、コンストラクトは、２種のＣＤ２７共刺激エンドドメインをコードする。いくつかの実施形態において、ＣＤ２７共刺激エンドドメインは、配列番号７（ＱＲＲＫＹＲＳＮＫＧＥＳＰＶＥＰＡＥＰＣＨＹＳＣＰＲＥＥＥＧＳＴＩＰＩＱＥＤ ＹＲＫＰＥＰＡＣＳＰ）を含む。
【0095】
いくつかの実施形態において、コンストラクトは、Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞など）の活性化、細胞毒性及び／または持続性を支持するサイトカインなどのＣ末端ポリペプチドの分泌を促進するように動作可能に連結された分泌シグナル、例えば、配列番号１２（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ）をコードする。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、配列番号２６（ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＫＹＬＣＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡ）の分泌シグナルである。いくつかの実施形態において、コンストラクトは、ＩＬ－１５などの一般的なガンマ鎖サイトカインまたはその活性フラグメント、例えば、配列番号１４（ＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴ ＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ）の分泌を促進するように動作可能に連結された、配列番号１２などの分泌シグナルをコードする。ｓＩＬ１５をコードするコドン最適化核酸配列を含む、他のＩＬ－１５配列は、ＷＯ２００７／０３７７８０に開示されている。模範的な一般的なガンマ鎖サイトカインには、ＩＬ－２及びＩＬ－１５が含まれる。いくつかの実施形態において、一般的なガンマ鎖サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７及びＩＬ－１５から選択される。
【0096】
いくつかの実施形態において、コンストラクトは、１種または複数種のマルチシストロン性リンカー領域を、例えば、シグナル伝達ドメイン及び／または共刺激エンドドメインと、サイトカインの分泌を促進するように動作可能に連結された分泌シグナルとの間でコードする。マルチシストロン性リンカー領域は、単一の転写産物からの複数の別個のポリペプチドの生成を容易にするポリペプチド配列またはＲＮＡ配列の領域である。いくつかの実施形態において、マルチシストロン性リンカー領域は、切断配列をコードする。好適な切断配列には、Ｐ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ、もしくはＴ２Ａ切断配列などの自己切断配列及び／またはフューリンなどの内因性プロテアーゼにより切断される配列が含まれる。
【0097】
いくつかの実施形態において、切断配列はＰ２Ａ切断配列である。いくつかの実施形態において、切断配列はフューリン切断配列である。いくつかの実施形態において、切断配列はＰ２Ａ及びフューリン切断配列である。いくつかの実施形態において、切断配列は配列番号１５（ＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ）のＰ２Ａ切断配列である。いくつかの実施形態において、切断配列は配列番号１６（ＲＡＫＲ）のフューリン切断配列である。いくつかの実施形態において、切断配列は配列番号１７（ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰ ＧＰ）のＰ２Ａ＋フューリン切断配列である。いくつかの実施形態において、切断配列は配列番号２５（ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ）のＰ２Ａ切断配列である。
【0098】
いくつかの実施形態において、切断配列は配列番号２７（ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ）のＰ２Ａ切断配列であるまたはそのＰ２Ａ切断配列を含む。いくつかの実施形態において、切断配列は配列番号２８（ＶＫＱＴＬＮＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ）のＦ２Ａ切断配列であるまたはそのＦ２Ａ切断配列を含む。いくつかの実施形態において、切断配列は配列番号２９（ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ）のＥ２Ａ切断配列であるまたはそのＥ２Ａ切断配列を含む。いくつかの実施形態において、切断配列は配列番号３０（ＥＧＲＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ）のＴ２Ａ切断配列であるまたはそのＴ２Ａ切断配列を含む。ある態様において、複数の自己切断配列は、シグナル伝達及び／または共刺激ドメインのカルボキシ末端、ならびにコードされた分泌サイトカイン（例えば、ＩＬ－１５などの一般的なガンマ鎖サイトカイン）のアミノ末端をコードされ得て、そこにおいて、複数の自己切断配列は、好ましくはＰ２Ａ切断配列、Ｔ２Ａ切断配列、Ｅ２Ａ切断配列及びＦ２Ａ切断配列からなる群から独立して選択される。ある態様において、１種または複数種の自己切断配列と、内因性プロテアーゼにより切断された１種または複数種の配列は、本明細書に記載のコンストラクトでコードされる。特定の実施形態においては、内因性プロテアーゼ認識部位は、自己切断配列のアミノ末端にコードされる。
【0099】
いくつかの実施形態において、マルチシストロン性リンカー領域は、内部リボソーム侵入部位をコードする。模範的な内部リボソーム侵入部位は、配列番号３１（ＣＴＡＡＣＧＴＴＡＣＴＧＧＣＣＧＡＡＧＣＣＧＣＴＴＧＧＡＡＴＡＡＧＧＣＣＧＧＴＧＴＧＣＧＴＴＴＧＴＣＴＡＴＡＴＧＴＴＡＴＴＴＴＣＣＡＣＣＡＴＡＴＴＧＣＣＧＴＣＴＴＴＴＧＧＣＡＡＴＧＴＧＡＧＧＧＣＣＣＧＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＴＣＴＴＣＴＴＧＡＣＧＡＧＣＡＴＴＣＣＴＡＧＧＧＧＴＣＴＴＴＣＣＣＣＴＣＴＣＧＣＣＡＡＡＧＧＡＡＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＧＴＴＧＡＡＴＧＴＣＧＴＧＡＡＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＧＡＣＡＡＡＣＡＡＣＧＴＣＴＧＴＡＧＣＧＡＣＣＣＴＴＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＣＣＣＣＣＡＣＣＴＧＧＣＧＡＣＡＧＧＴＧＣＣＴＣＴＧＣＧＧＣＣＡＡＡＡＧＣＣＡＣＧＴＧＴＡＴＡＡＧＡＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＡＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＣＣＡＧＴＧＣＣＡＣＧＴＴＧＴＧＡＧＴＴＧＧＡＴＡＧＴＴＧＴＧＧＡＡＡＧＡＧＴＣＡＡＡＴＧＧＣＴＣＴＣＣＴＣＡＡＧＣＧＴＡＴＴＣＡＡＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＡＡＧＧＡＴＧＣＣＣＡＧＡＡＧＧＴＡＣＣＣＣＡＴＴＧＴＡＴＧＧＧＡＴＣＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＧＧＴＧＣＡＣＡＴＧＣＴＴＴＡＣＡＴＧＴＧＴＴＴＡＧＴＣＧＡＧＧＴＴＡＡＡＡＡＡＡＣＧＴＣＴＡＧＧＣＣＣＣＣＣＧＡＡＣＣＡＣＧＧＧＧＡＣＧＴＧＧＴＴＴＴＣＣＴＴＴＧＡＡＡＡＡＣＡＣＧＡＴＧＡＴＡ）によりコードされる。
【0100】
別の模範的な内部リボソーム侵入部位は、配列番号３２（ＡＧＣＡＧＧＴＴＴＣＣＣＣＡＡＣＴＧＡＣＡＣＡＡＡＡＣＧＴＧＣＡＡＣＴＴＧＡＡＡＣＴＣＣＧＣＣＴＧＧＴＣＴＴＴＣＣＡＧＧＴＣＴＡＧＡＧＧＧＧＴＡＡＣＡＣＴＴＴＧＴＡＣＴＧＣＧＴＴＴＧＧＣＴＣＣＡＣＧＣＴＣＧＡＴＣＣＡＣＴＧＧＣＧＡＧＴＧＴＴＡＧＴＡＡＣＡＧＣＡＣＴＧＴＴＧＣＴＴＣＧＴＡＧＣＧＧＡＧＣＡＴＧＡＣＧＧＣＣＧＴＧＧＧＡＡＣＴＣＣＴＣＣＴＴＧＧＴＡＡＣＡＡＧＧＡＣＣＣＡＣＧＧＧＧＣＣＡＡＡＡＧＣＣＡＣＧＣＣＣＡＣＡＣＧＧＧＣＣＣＧＴＣＡＴＧＴＧＴＧＣＡＡＣＣＣＣＡＧＣＡＣＧＧＣＧＡＣＴＴＴＡＣＴＧＣＧＡＡＡＣＣＣＡＣＴＴＴＡＡＡＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＣＡＣＡＣＡＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＧＣＴＡＡＧＧＡＴＧＣＣＣＴＴＣＡＧＧＴＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＡＡＣＡＣＧＣＧＡＣＡＣＴＣＧＧＧＡＴＣＴＧＡＧＡＡＧＧＧＧＡＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣＴＡＴＡＡＡＡＧＣＧＣＴＣＧＧＴＴＴＡＡＡＡＡＧＣＴＴＣＴＡＴＧＣＣＴＧＡＡＴＡＧＧＴＧＡＣＣＧＧＡＧＧＴＣＧＧＣＡＣＣＴＴＴＣＣＴＴＴＧＣＡＡＴＴＡＣＴＧＡＣＣＡＣ）によりコードされる。
【0101】
さらに好適な内部リボソーム侵入部位には、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１０ Ｊａｎ；３８（Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ１３１－６．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｐ９８１ Ｅｐｕｂ ２００９ Ｎｏｖ １６に記載されているもの、ｉｒｅｓｉｔｅ．ｏｒｇに記載されているもの、ＷＯ２０１８／２１５７８７に記載されているもの、ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＫＰ０１９３８２．１に記載されている配列及びＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＬＴ７２７３３９．１に記載されているＩＲＥＳエレメントが含まれるがこれらに限定されず、これらの内容は、あらゆる目的のために、その全体が特に、本明細書に記載の内部リボソーム侵入部位及びその使用が参照により本明細書に組み込まれる。
【0102】
切断自己切断及びＩＲＥＳエレメントなどの付加的マルチシストロン性リンカー領域は、ＵＳ２０１８／０３６０９９２及びＵＳ８８６５４６７に開示されている。
【0103】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、配列番号８（ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＨＮＹＩＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＴＬＱＰＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＬＱＹＤＮＬＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＫＤＹＧＳＳＦＹＡＭＨＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ）、ｈＤ１１抗ＴｙｒＤ結合ドメイン（抗ＴｙｒＤ３６９－３７７）、ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通領域、４－１ＢＢ共刺激エンドドメインならびにＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むｈＤ１１－ＣＤ８－ＢＢｚポリペプチドをコードする。
【0104】
いくつかの実施形態において、抗ＴｙｒＤ３６９－３７７－ＣＤ８－ＢＢｚポリペプチドをコードする単離した核酸は、配列番号：９（ＡＴＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＡＣＣＣＡＧＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＣＣＡＧＡＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＣＴＡＴＡＴＡＧＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＣＡＣＴＡＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＡＡＣＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＡＴＧＡＴＡＡＴＣＴＣＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＣＡＧＡＴＣＡＣＣＴＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＡＣＧＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＣＴＣＡＣＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＣＴＣＡＣＴＣＡＧＣＡＣＴＡＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＧＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＴＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＡＧＣＧＣＴＡＣＡＡＣＣＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＧＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＡＣＣＡＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＣＧＡＡＡＧＧＡＣＴＡＣＧＧＴＡＧＴＡＧＣＴＴＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＣＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＣＴＡＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＧＡＧＴＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＡ）の配列を含む。
【0105】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、ＣＤ８αヒンジ領域をコードするコドン最適化配列を含む。模範的なコドン最適化ＣＤ８αヒンジ領域核酸配列には、配列番号１０（ＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＧＣＣＣＣＣＧＡＣＴＣＣＣＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＡＣＡ ＧＣＣＴＣＴＴＡＧＣＣＴＧＣＧＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＴＧＣＡＧＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＧＧＧＧＧＧＧＣＣＧＴＧＣＡＴＡＣＧＡＧＡＧＧＴＴＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＣＧＡＴ）が含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、ＣＤ８αヒンジ領域は、以下の配列番号１１（ＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧ ＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴ）によりコードされる。
【0106】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、配列番号１８（ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＨＮＹＩＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨＹＴＳＴＬＱＰＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＬＱＹＤＮＬＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＨＩＹＷＤＤＤＫＲＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＫＤＹＧＳＳＦＹＡＭＨＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ＊）、抗ＴｙｒＤ ｈＤ１１（抗ＴｙｒＤ３６９－３７７）結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通領域、４－１ＢＢ共刺激エンドドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、フューリン－Ｐ２Ａ切断配列ならびにＩＬ－１５ドメインに動作可能に連結された分泌シグナルを含むｈＤ１１－ＣＤ８－ＢＢｚ－ｓＩＬ１５ポリペプチドをコードする。
【0107】
いくつかの実施形態において、ｈＤ１１－ＣＤ８－ＢＢｚ－ｓＩＬ１５ポリペプチドをコードする単離した核酸は、配列番号１９（ＡＴＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＡＣＣＣＡＧ ＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＣＣＡＧＡＴＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＣＴＡＴＡＴＡＧＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＣＡＣＴＡＴＡＣＡＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＡＡＣＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＴＡＣＡＧＴＡＴＧＡＴＡＡＴＣＴＣＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＣＡＧＡＴＣＡＣＣＴＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣＴＡＣＧＣＴＧＧＴＧＡＡＡＣＣＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＣＴＣＡＣＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＣＴＣＡＣＴＣＡＧＣＡＣＴＡＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＴＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＧＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＴＧＣＡＣＡＣＡＴＴＴＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＡＧＣＧＣＴＡＣＡＡＣＣＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＧＧＴＣＣＴＴＡＣＡＡＴＧＡＣＣＡＡＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＣＧＡＡＡＧＧＡＣＴＡＣＧＧＴＡＧＴＡＧＣＴＴＣＴＡＴＧＣＴＡＴＧＣＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＣＴＡＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＧＡＧＴＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＧＣＣＣＣＣＧＡＣＴＣＣＣＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＴＡＧＣＣＴＧＣＧＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＴＧＣＡＧＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＧＧＧＧＧＧＧＣＣＧＴＧＣＡＴＡＣＧＡＧＡＧＧＴＴＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＣＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＣＧＣＧＣＧＡＡＧＣＧＡＴＣＡＧＧＣＡＧＣＧＧＧＧＣＧＡＣＡＡＡＴＴＴＣＡＧＣＣＴＴＣＴＧＡＡＡＣＡＡＧＣＡＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＡＣＣＣＣＧＧＴＣＣＡＡＴＧＧＣＣＴＴＡＣＣＡＧＴＧＡＣＣＧＣＣＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＣＧＣＴＧＧＣＣＴＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＧＣＣＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡＡＧＴＧＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＡＴＴＣＡＡＴＣＴＡＴＧＣＡＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＡＴＡＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＴＴＧＣＡＡＡＧＴＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＧＴＴＡＣＡＡＧＴＴＡＴＴＴＣＡＣＴＴＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＡＡＧＴＡＴＴＣＡＴＧＡＴＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＡＧＣＡＡＡＣＡＡＣＡＧＴＴＴＧＴＣＴＴＣＴＡＡＴＧＧＧＡＡＴＧＴＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＡＡＴＧＴＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＴＴＴＧＣＡＧＡＧＴＴＴＴＧＴＡＣＡＴＡＴＴＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＴＣＴＴＧＡ）の配列を含む。
【0108】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、配列番号２０（ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＬＤＰＫＴＧＤＴＡＹＳＱＫＦＫＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＦＹＳＹＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＲＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＳＱＮＴＨＶＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ＊）、ＧＣ３３抗ＧＰＣ３結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通領域、４－１ＢＢ共刺激エンドドメインならびにＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むポリペプチドをコードする。
【0109】
いくつかの実施形態において、ＧＣ３３－ＣＤ８－ＢＢｚポリペプチドをコードする単離した核酸は、配列番号２１（ＡＴＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＡＣＣＣＡＧＧ ＴＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＣＣＡＧＡＴＧＣＣＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＡＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＧＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＴＡＴＡＧＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＡＧＣＴＧＡＴＡＡＧＡＧＣＡＣＡＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＡＣＡＣＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＴＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＧＣＡＡＣＣＧＧＡＡＣＡＣＡＴＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣＴＣＴＡＧＡＧＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＡＣＧＴＧＣＣＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＡ）の配列を含む。
【0110】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、配列番号２２（ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＥＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＡＬＤＰＫＴＧＤＴＡＹＳＱＫＦＫＧＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＦＹＳＹＴＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＮＲＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＳＱＮＴＨＶＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ＊）、ＧＣ３３抗ＧＰＣ３結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通領域、４－１ＢＢ共刺激エンドドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、フューリン及びＰ２Ａ切断領域ならびにＩＬ１５ドメインに動作可能に連結された分泌シグナルを含むポリペプチドをコードする。
【0111】
いくつかの実施形態において、ＧＣ３３－ＣＤ８－ＢＢｚ－ｓＩＬ１５ポリペプチドをコードする単離した核酸は、配列番号２３（ＡＴＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＡＣＣＣＡＧＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＣＣＡＧＡＴＧＣＣＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＡＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＧＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＴＡＴＡＧＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＡＧＣＴＧＡＴＡＡＧＡＧＣＡＣＡＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＡＣＡＣＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＴＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＧＣＡＡＣＣＧＧＡＡＣＡＣＡＴＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣＴＣＴＡＧＡＧＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＡＣＧＴＧＣＣＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＡＣＴＴＣＴＣＣＣＴＴＣＴＴＡＡＡＣＡＡＧＣＧＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＡＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＧＣＣＴＴＡＣＣＡＧＴＧＡＣＣＧＣＣＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＣＧＣＴＧＧＣＣＴＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＧＣＣＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡＡＧＴＧＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＡＴＴＣＡＡＴＣＴＡＴＧＣＡＴＡＴＴＧＡＴＧＣＴＡＣＴＴＴＡＴＡＴＡＣＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＧＴＴＧＣＡＡＡＧＴＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＣＴＴＧＧＡＧＴＴＡＣＡＡＧＴＴＡＴＴＴＣＡＣＴＴＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＡＡＧＴＡＴＴＣＡＴＧＡＴＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＡＧＣＡＡＡＣＡＡＣＡＧＴＴＴＧＴＣＴＴＣＴＡＡＴＧＧＧＡＡＴＧＴＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＡＡＴＧＴＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＴＴＡＡＡＧＡＡＴＴＴＴＴＧＣＡＧＡＧＴＴＴＴＧＴＡＣＡＴＡＴＴＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＴＣＴＴＧＡ）の配列を含む。
【0112】
いくつかの実施形態において、ＧＣ３３－ＣＤ８－ＢＢｚ－ｓＩＬ１５ポリペプチドをコードする単離した核酸は、配列番号２４（ＡＴＧＴＣＣＧＴＧＣＣＴＡＣＣＣＡＧＧＴＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＡＣＧＣＣＡＧＡＴＧＣＣＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＣＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＡＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＧＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＴＡＴＡＧＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＣＡＧＣＴＧＡＴＡＡＧＡＧＣＡＣＡＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＡＣＡＣＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＧＴＧＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＣＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＴＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＧＣＡＡＣＣＧＧＡＡＣＡＣＡＴＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＧＡＴＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣＴＣＴＡＧＡＧＴＧＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＡＣＧＴＧＣＣＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＧＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＣＣＡＴＣＧＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＣＧＣＣＣＡＧＡＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＣＴＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＡＣＴＴＣＴＣＣＣＴＴＣＴＴＡＡＡＣＡＡＧＣＧＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＡＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＧＣＣＴＴＡＣＣＡＧＴＧＡＣＣＧＣＣＴＴＧＣＴＣＣＴＧＣＣＧＣＴＧＧＣＣＴＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＣＧＣＣＧＣＣＡＧＧＣＣＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＴＣＴＧＡＴＣＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＴＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＴＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＴＣＣＣＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＴＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＡＴＧＧＣＡＡＴＧＴＧＡＣＣＧＡＧＴＣＧＧＧＡＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＴＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＴＧＴＡＣＡＴＡＴＴＧＴＣＣＡＡＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＴＴＣＴＴＧＡ）の配列を含む。
【0113】
いくつかの実施形態において、単離した核酸は、直鎖状核酸である。いくつかの実施形態において、単離した核酸は、プラスミドベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクター（ガンマレトロウイルスベクターなど）、またはレンチウイルスベクターなどのベクターである。いくつかの実施形態において、単離した核酸、または例えば、結合ドメイン膜貫通ドメイン及び１種または複数種のシグナル伝達及び／または共刺激エンドドメインを含む、単離した核酸の連続した一部は、宿主γδＴ細胞などの宿主細胞のゲノムに組み込まれる。模範的な実施形態において、単離した核酸はレトロウイルスベクターである。
【0114】
γδＴ細胞：
本発明の態様は、本明細書に記載の単離した核酸を機能的に発現し、それによりγδＴ細胞の表面でＣＡＲを発現するγδＴ細胞を含む。
本発明の態様は、本明細書に記載の単離した核酸を機能的に発現し、それによりγδＴ細胞の表面でＣＡＲを発現するγδＴ細胞を含む。
【0115】
本発明の態様は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す固形腫瘍細胞に対してｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏの細胞毒性活性を有するγδＴ細胞を代用的または追加的に含み得る。場合によっては、細胞毒性活性は生来の活性である。場合によっては、細胞毒性は、固形腫瘍細胞の表面で発現するＴＡＡに特異的に結合する結合ドメインを有するＣＡＲコンストラクトの存在に起因して、少なくとも部分的に、有意に（＞約２５％）、または完全にある。場合によっては、このγδＴ細胞において、γδＴ細胞の固形腫瘍細胞傷害活性が、対照γδＴ細胞におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏの固形腫瘍細胞傷害活性の生来のレベルより大きいことを示す。場合によっては、対照γδＴ細胞はＣＡＲコンストラクトを含まない。場合によっては、対照γδＴ細胞は、本明細書に記載の結合ドメイン、本明細書に記載のヒンジ領域、本明細書に記載の膜貫通ドメイン、本明細書に記載のシグナル伝達ドメイン及び／または本明細書に記載の共刺激エンドドメインを欠くＣＡＲコンストラクトを含む。
【0116】
場合によっては、細胞毒性は、ＴｙｒＤまたは、ＴｙｒＤ３６９－３７７などのＴｙｒＤ内のエピトープに特異的に結合する結合ドメインを有するＣＡＲコンストラクトの存在に起因して、少なくとも部分的に、有意に（＞約２５％）、または完全にある。場合によっては、細胞毒性は、ＨＬＡに制限された（例えばクラスＩのＨＬＡに制限された）上で、ＴｙｒＤ、またはＴｙｒＤ３６９－３７７などのＴｙｒＤ内のエピトープに特異的に結合する結合ドメインを有するＣＡＲコンストラクトの存在に起因して、少なくとも部分的に、有意に（＞約２５％）、または完全にある。場合によっては、細胞毒性は、ＨＬＡ－Ａ２／ＴｙｒＤ３６９－３７７に特異的に結合する結合ドメインを有するＣＡＲコンストラクトの存在に起因して、少なくとも部分的に、有意に（＞約２５％）、または完全にある。場合によっては、γδＴ細胞は、ＴｙｒＤまたはそのペプチドフラグメントと特異的に結合する、本明細書に記載の単離した核酸によりコードされるＣＡＲを機能的に発現する。
【0117】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のγδＴ細胞は、ＨＬＡに制限された（例えば、ＨＬＡクラスＩに制限された）細胞毒性を示し得る。他の実施形態においては、ほとんど（＞５０％）、実質的に全て（＞９０％）、または全ての細胞毒性活性は、ＨＬＡに制限（例えば、ＨＬＡクラスＩに制限）されない。ＨＬＡに制限される細胞毒性活性は、ＨＬＡ（例えば、ＨＬＡクラスＩ）（ｎｕｌｌ）腫瘍細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性を、ＨＬＡ＋（例えば、ＨＬＡクラスＩ＋）腫瘍細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性と比較することにより評価することが可能である。いくつかの実施形態において、ＨＬＡに制限される細胞毒性活性は、Ｔ細胞受容体様結合ドメインの使用により、少なくとも部分的に、有意に（＞２５％）、または完全に提供される。結合ドメインのようなＴ細胞受容体は、ＭＨＣ分子と複合体の中の細胞の表面に提示されたときに抗原を特異的に認識する結合ドメインである。Ｔ細胞受容体様結合ドメインは、例えば、ＷＯ２０１６／１９９１４１にさらに記載されている。
【0118】
本明細書に記載のγδＴ細胞は、強力及び／または持続的な固形腫瘍細胞傷害活性を示すことが可能である。場合によっては、固形腫瘍細胞傷害活性は、固形腫瘍細胞との最初の接触から少なくとも約６日から１２０日間、または少なくとも約６日から１８０日間持続する可能性がある。場合によっては、本明細書に記載のγδＴ細胞またはその子孫の固形腫瘍細胞傷害活性は、固形腫瘍細胞との最初の接触からまたは本明細書に記載のγδＴ細胞の投与から、少なくとも約６日から１２０日、または少なくとも約６日から１８０日間持続することが可能である。この持続的な固形腫瘍細胞傷害活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏの両方で示され得る。
【0119】
本発明の態様は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現または過剰発現を示す細胞との接触に応じて増殖するγδＴ細胞を代用的または追加的に含み得る。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を示す細胞は、正常な内皮細胞などの正常な細胞であってもよい。腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現または過剰発現を示す細胞は、固形腫瘍細胞であってもよい。場合によっては、増殖は生来の活性である。場合によっては、増殖は、細胞の表面で発現するＴＡＡに特異的に結合する結合ドメインを有するＣＡＲコンストラクトの存在に起因して、少なくとも部分的に、有意に（＞約２０％もしくは＞約２５％）、または完全にある。場合によっては、γδＴ細胞は、対照γδＴ細胞と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏのより高いレベルの増殖を示す。場合によっては、対照γδＴ細胞はＣＡＲコンストラクトを含まない。場合によっては、対照γδＴ細胞は、本明細書に記載の結合ドメイン、本明細書に記載のヒンジ領域、本明細書に記載の膜貫通ドメイン、本明細書に記載のシグナル伝達ドメイン及び／または本明細書に記載の共刺激エンドドメインを欠くＣＡＲコンストラクトを含む。
【0120】
場合によっては、増殖は、ＴｙｒＤまたはＴｙｒＤ内のエピトープに特異的に結合する結合ドメインを有するＣＡＲコンストラクトの存在に起因して、少なくとも部分的に、有意に（＞約２０％もしくは＞約２５％）、または完全にある。場合によっては、ＴｙｒＤの細胞表面発現を示す細胞との接触に応答して増殖を示すγδＴ細胞は、本明細書に記載の単離した核酸によりコードされるＴｙｒＤ特異的ＣＡＲを機能的に発現する。
【0121】
本明細書に記載のγδＴ細胞は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現または過剰発現を示す細胞を含む宿主生物において強力及び／または持続的な増殖を示すことが可能である。場合によっては、増殖は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現または過剰発現を示す細胞との最初の接触から、またはγδＴ細胞の宿主生物への投与日から、少なくとも約６日から１２０日間、または少なくとも約６日から１８０日間持続し得る。場合によっては、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現または過剰発現を示す細胞を含む宿主生物における、本明細書に記載のγδＴ細胞またはその子孫の増殖は、細胞との最初の接触から、またはγδＴ細胞の宿主生物への最初の投与日から、少なくとも約６日から１２０日間、または少なくとも約６日から１８０日間持続し得る。場合によっては、宿主生物中の増殖は、ＴｙｒＤまたはＴｙｒＤ内のエピトープに特異的に結合する結合ドメインを有するＣＡＲコンストラクトの存在に起因して、少なくとも部分的に、有意に（＞約２０％もしくは＞約２５％）、または完全にある。場合によっては、ＴｙｒＤの細胞表面発現を示す細胞を含む宿主生物中の増殖を示すγδＴ細胞は、本明細書に記載の単離した核酸によりコードされるＴｙｒＤ特異的ＣＡＲを機能的に発現する。
【0122】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のγδＴ細胞は、細胞表面のＴｙｒＤまたはそのペプチドフラグメントを発現または過剰発現する細胞との接触後に、腫瘍壊死因子アルファまたはインターフェロンガンマなどの炎症誘発性サイトカインを発現、または持続的に発現する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のγδＴ細胞は、例えば、細胞表面のＴｙｒＤまたはそのペプチドフラグメントを発現または過剰発現する細胞を含む宿主生物中などの、細胞表面のＴｙｒＤまたはそのペプチドフラグメントを発現または過剰発現する細胞との接触後に、腫瘍壊死因子アルファまたはインターフェロンガンマなどの炎症誘発性サイトカインを発現、または持続的に発現する。
【0123】
いくつかの実施形態において、γδＴ細胞またはγδＴ細胞を含む医薬組成物は、同種異系宿主に導入されたときに、移植片対宿主応答を実質的に示さない、または示さない。いくつかの実施形態において、γδＴ細胞またはγδＴ細胞を含む医薬組成物は、同種異系宿主に導入されたときに、移植片対宿主応答を臨床的に受容可能なレベルで示す。いくつかの実施形態において、臨床的に受容可能なレベルとは、治療上有効な治療を達成するためにγδＴ細胞治療の中止を必要としない移植片対宿主応答の量である。いくつかの実施形態において、移植片対宿主応答（ＧｖＨＤ）の臨床的に受容可能なレベルは、適用可能なＩＢＭＴＲ評価尺度により、グレードＣよりも重症度が低い急性応答である。急性移植片対宿主反応の重症度は、皮膚、肝臓及び消化管の関与の程度を評価することで決定される。個々の臓器の病変のステージが組み合わされて、予後的意義を有する全体的なグレードが作製される。グレードＩ（Ａ）ＧｖＨＤは軽度の疾病、グレードＩＩ（Ｂ）ＧｖＨＤは中等度、グレードＩＩＩ（Ｃ）は重度、グレードＩＶ（Ｄ）は生命を脅かすものと見なす。ＩＢＭＴＲグレーディングシステムでは、急性ＧｖＨＤの重症度を次のように定義している（Ｒｏｗｌｉｎｇｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ １９９７；９７：８５５）：
●グレードＡ－肝臓や胃腸の病変がなく、ステージ１の皮膚病変のみ（体の＜２５％の斑状丘疹状皮疹）
●グレードＢ－ステージ２の皮膚病変、ステージ１から２の腸または肝臓の病変
●グレードＣ－任意の臓器系のステージ３の病変（全身性紅皮症、ビリルビン６．１～１５．０ｍｇ／ｄＬ、下痢１５００～２０００ｍＬ／日）
●グレードＤ－任意の臓器系のステージ４の病変（水疱の形成を伴う全身性紅皮症、ビリルビン＞１５ｍｇ／ｄＬ、下痢＞２０００ｍＬ／日または疼痛またはイレウス）。
Ｓｃｈｏｅｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ ５３，ｐａｇｅｓ１４０１－１４１５（２０１８）の表１及び表２も参照のこと。また、これは急性ＧｖＨＤを評価及びグレーディングするための基準も開示している。
●グレードＡ－肝臓や胃腸の病変がなく、ステージ１の皮膚病変のみ（体の＜２５％の斑状丘疹状皮疹）
●グレードＢ－ステージ２の皮膚病変、ステージ１から２の腸または肝臓の病変
●グレードＣ－任意の臓器系のステージ３の病変（全身性紅皮症、ビリルビン６．１～１５．０ｍｇ／ｄＬ、下痢１５００～２０００ｍＬ／日）
●グレードＤ－任意の臓器系のステージ４の病変（水疱の形成を伴う全身性紅皮症、ビリルビン＞１５ｍｇ／ｄＬ、下痢＞２０００ｍＬ／日または疼痛またはイレウス）。
Ｓｃｈｏｅｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ ５３，ｐａｇｅｓ１４０１－１４１５（２０１８）の表１及び表２も参照のこと。また、これは急性ＧｖＨＤを評価及びグレーディングするための基準も開示している。
【0124】
いくつかの実施形態において、γδＴ細胞、またはγδＴ細胞を含む医薬組成物は、同種異系宿主に投与された、対照αβＴ細胞または対照αβＴ細胞を含む対照医薬組成物により示された移植片対宿主応答と比較して、同種異系宿主に導入された場合、移植片対宿主応答の減少または実質的な減少を示す。場合によっては、対照αβＴ細胞は、同種異系の遺伝子操作していない対照αβＴ細胞である。場合によっては、対照αβＴ細胞は、ＣＡＲを含まない、または参照γδＴ細胞と同じＣＡＲを含まない。
【0125】
本明細書に記載のγδＴ細胞は、δ１、δ２、δ３もしくはδ４γδＴ細胞、またはそれらの組み合わせであり得る。場合によっては、γδＴ細胞は、ほとんど（＞５０％）、実質的に（＞９０％）、本質的に全て、または完全にδ２－γδＴ細胞である。場合によっては、γδＴ細胞は、ほとんど（＞５０％）、実質的に（＞９０％）、本質的に全て、または完全にδ１γδＴ細胞である。
【0126】
γδＴ細胞は、同種異系または自己由来ドナーから入手可能である。γδＴ細胞は、ｅｘ ｖｉｖｏで、部分的または完全的に精製または精製されないかつ増幅され得る。ｅｘ ｖｉｖｏの増殖のための方法及び組成物には、ＷＯ２０１７／１９７３４７に記載のものが含まれるが、これに限定されない。この増殖は、ＣＡＲコンストラクトがγδＴ細胞（複数可）に導入される前もしくは後、または前後に実施され得る。
【0127】
本明細書に記載のγδＴ細胞は、養子細胞移植で用いるために、例えば、凍結保存して保存され得る。
【0128】
腫瘍細胞を阻害または殺傷する方法
固形腫瘍細胞に対して細胞毒性活性を有する、１種もしくは複数種の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物を、任意の順序でまたは同時に対象に投与し得る。同時に投与される場合、本発明の複数の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物は、静脈内注射などの単一の統一された形態で、または複数の静脈内注入、皮下注射または錠剤などの複数の形態で提供され得る。本発明の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作されたγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物は、単一のパッケージまたは複数のパッケージに一緒にまたは別々に包装され得る。本発明の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作されたγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物の１つまたはその全ては、複数の用量で与えられ得る。同時に投与されない場合、複数の投与間のタイミングは、約１週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、または約１年まで変化し得る。場合によっては、本発明の遺伝子操作していない濃縮されたγδＴ細胞集団、遺伝子操作した濃縮されたγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物は、対象への投与後にｉｎ ｖｉｖｏで、対象の体内で増殖し得る。１種または複数種の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、１種または複数種の遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物を凍結して、同じ細胞調製物での複数の処置をするための細胞を提供することが可能である。本開示の１種または複数種の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、１種または複数種の遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物ならびにそれを含む医薬組成物は、キットとして包装され得る。キットは、遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物ならびにそれを含む組成物の使用に関する指示（書面による指示など）を含み得る。
固形腫瘍細胞に対して細胞毒性活性を有する、１種もしくは複数種の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物を、任意の順序でまたは同時に対象に投与し得る。同時に投与される場合、本発明の複数の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物は、静脈内注射などの単一の統一された形態で、または複数の静脈内注入、皮下注射または錠剤などの複数の形態で提供され得る。本発明の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作されたγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物は、単一のパッケージまたは複数のパッケージに一緒にまたは別々に包装され得る。本発明の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作されたγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物の１つまたはその全ては、複数の用量で与えられ得る。同時に投与されない場合、複数の投与間のタイミングは、約１週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、または約１年まで変化し得る。場合によっては、本発明の遺伝子操作していない濃縮されたγδＴ細胞集団、遺伝子操作した濃縮されたγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物は、対象への投与後にｉｎ ｖｉｖｏで、対象の体内で増殖し得る。１種または複数種の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、１種または複数種の遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物を凍結して、同じ細胞調製物での複数の処置をするための細胞を提供することが可能である。本開示の１種または複数種の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、１種または複数種の遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物ならびにそれを含む医薬組成物は、キットとして包装され得る。キットは、遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物ならびにそれを含む組成物の使用に関する指示（書面による指示など）を含み得る。
【0129】
場合によっては、固形癌を治療する方法は、遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物の治療上有効な量を対象に投与することを含み、そこにおいて、投与することで、固形癌を治療する。いくつかの実施形態において、遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物の治療上有効な量は、少なくとも約１０秒、３０秒、１分、１０分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、または１年投与される。いくつかの実施形態において、遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物の治療上有効な量は、少なくとも１週間投与される。いくつかの実施形態において、遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物の治療上有効な量は、少なくとも２週間投与される。
【0130】
本明細書に記載の遺伝子操作していないγδＴ細胞集団、遺伝子操作したγδＴ細胞集団及び／またはそれらの混合物は、疾病もしくは症状の発生前、発生中もしくは発生後に投与することが可能であり、γδＴ細胞集団を含む医薬組成物を投与するタイミングは変化し得る。例えば、γδＴ細胞集団は、予防薬として用いることが可能であり、疾病もしくは症状が発生する可能性を低減するために、症状または疾病の傾向が見られる対象に連続的に投与することが可能である。初回投与は、本明細書に記載の任意の製剤を用いる本明細書に記載の任意の経路によるなどの実用的な任意の経路を介して行われ得る。いくらかの実施例において、本開示のγδＴ細胞集団の投与は、静脈内投与である。γδＴ細胞集団の１回または複数回の投与量は、固形癌の発症後、実行可能になり次第すぐと、例えば、約２４時間から約４８時間、約４８時間から約１週間、約１週間から約２週間、約２週間から約１か月、約１か月から約３か月の免疫病を治療するために必要な時間の間投与され得る。いくつかの実施形態において、γδＴ細胞集団の１回または複数回の投与量は、がんの発症後と、他の治療の前後とに何年も投与され得る。
【0131】
いくつかの実施形態において、γδＴ細胞集団は、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法で同時にまたは連続して投与される。本明細書で使用される「一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の方法」は、少なくとも１つの一般的なガンマ鎖サイトカインのレベルが対象において上昇するように、対象の生理的状態を変化させる方法または方法の組み合わせを指す。いくつかの実施形態において、この方法は、ＩＬ－２、ＩＬ－７及びＩＬ－１５からなる群から選択される１種以上の一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）のレベルを上昇させ、好ましくは、そこにおいて、この方法は対象におけるＩＬ－１５のレベルを上昇させる。いくつかの実施形態において、この方法はリンパ球の枯渇化を含む。いくつかの実施形態において、この方法は、対象に１種または複数種の一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を投与することを含む。場合によっては、ＩＬ－２、ＩＬ－７及び／またはＩＬ－１５、好ましくはＩＬ－１５が投与される。いくつかの実施形態において、この方法は、投与されたγδＴ細胞などから、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を分泌することを含む。場合によっては、ＩＬ－２、ＩＬ－７及び／またはＩＬ－１５、好ましくはＩＬ－１５が分泌される。
【0132】
いくつかの実施形態において、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の投与方法は、γδＴ細胞（複数可）を導入する前のリンパ球の枯渇化を含む。いくつかの実施形態において、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の投与方法は、γδＴ細胞（複数可）の導入と同時に、または一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）の有効量を連続して投与することで、その導入したγδＴ細胞（複数可）の増殖、細胞毒性活性、持続性、またはその組み合わせを増大させることを含み、好ましくは、そこにおいてこの方法は、ＩＬ－２またはその１種もしくは複数種のミメティックを投与することを含み、より好ましくは、そこにおいてこの方法は、ＩＬ－１５またはその１種もしくは複数種のミメティックを投与することを含む。一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）の投与量は、γδＴ細胞（複数可）を導入する前及び／または導入後に、導入したγδＴ細胞（複数可）の増殖、細胞毒性活性、持続性、またはその組み合わせを増大し得る。ＩＬ－１５の模範的な量には、２４時間ごとに０．０１～１０μｇ／ｋｇ／用量の間が含まれるがこれに限定されない。ＩＬ－２の模範的な量には、８～４８時間ごとに約３×１０６と約２２×１０６ユニットが含まれるが、これらに限定されない。例えば、ＲＣＣでのＩＬ２の投薬計画は、最大１４回の投与で１５分間にわたって注入される６００，０００国際単位／ｋｇ（０．０３７ｍｇ／ｋｇ）静注、８時間おきである。
【0133】
いくつかの実施形態において、一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）を上昇させる１つまたは複数の投与方法は、γδＴ細胞（複数可）の投与前と、γδＴ細胞（複数可）の導入との同時の投与前と、またはその導入したγδＴ細胞（複数可）の増殖、細胞毒性活性、持続性、またはそれらの組み合わせを増大させるために有効な一般的なガンマ鎖サイトカイン（複数可）の連続した投与前とのリンパ球の枯渇化を含む。
【実施例】
【0134】
実施例１
１ｘ１０６／ｍＬのヒトＰＢＭＣを、２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）存在下で５日間、プレコートした抗Ｖδ１抗体Ｄ１－０８またはＤ１－３５でプレコートし、改変した培養培地で活性化させた。５日目に、細胞培養物を、レトロネクチンの存在下で抗ＴｙｒＤキメラ抗原受容体（配列番号８）をコードするγ－レトロウイルスコンストラクトで形質導入させた。６日目に、細胞を改変した培養培地に戻し、必要に応じてフィーディング及びＩＬ－２の補充によりさらに増殖させた。１７、１８、または１９日目に細胞を回収し、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（登録商標）キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて、残存するαβＴ細胞を枯渇させた。γδ細胞集団の純度と形質導入効率を、ＦＡＣＳにより評価した。並行して、形質導入していない細胞培養物を、レトロウイルスの上清を添加することなく、同じ方法で増殖させた。図２に示す通り、形質導入していない増殖Ｖδ１細胞は、チロシナーゼを発現し、Ｔｙｒ３６９－３７７ペプチドを提示することが知られている、５２６及びＷＭ２６６．１－Ｌｕｃ黒色腫細胞株に対してある程度の細胞毒性を誘発した。この細胞毒性は、抗ＴｙｒＤ ＣＡＲの導入によって増強された。細胞毒性は、示したＥ／Ｔ比で１８時間共培養した後に、発光基質Ｄ－ルシフェリン（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を添加後、９６ウェルプレートで全発光測定により測定した。
１ｘ１０６／ｍＬのヒトＰＢＭＣを、２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）存在下で５日間、プレコートした抗Ｖδ１抗体Ｄ１－０８またはＤ１－３５でプレコートし、改変した培養培地で活性化させた。５日目に、細胞培養物を、レトロネクチンの存在下で抗ＴｙｒＤキメラ抗原受容体（配列番号８）をコードするγ－レトロウイルスコンストラクトで形質導入させた。６日目に、細胞を改変した培養培地に戻し、必要に応じてフィーディング及びＩＬ－２の補充によりさらに増殖させた。１７、１８、または１９日目に細胞を回収し、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（登録商標）キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて、残存するαβＴ細胞を枯渇させた。γδ細胞集団の純度と形質導入効率を、ＦＡＣＳにより評価した。並行して、形質導入していない細胞培養物を、レトロウイルスの上清を添加することなく、同じ方法で増殖させた。図２に示す通り、形質導入していない増殖Ｖδ１細胞は、チロシナーゼを発現し、Ｔｙｒ３６９－３７７ペプチドを提示することが知られている、５２６及びＷＭ２６６．１－Ｌｕｃ黒色腫細胞株に対してある程度の細胞毒性を誘発した。この細胞毒性は、抗ＴｙｒＤ ＣＡＲの導入によって増強された。細胞毒性は、示したＥ／Ｔ比で１８時間共培養した後に、発光基質Ｄ－ルシフェリン（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を添加後、９６ウェルプレートで全発光測定により測定した。
【0135】
実施例２
ＷＭ２６６．４－Ｌｕｃ細胞（動物あたり４ｘ１０６）をＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）に皮下移植した。腫瘍が１００～２００ｍｍ３のサイズに達したら、動物を６ｘ１０６の抗ＴｙｒＤ ＣＡＲ＋Ｖδ１細胞で治療した。動物には、試験が終わるまで週に３回、ＩＬ－２（６００００Ｕ／用量）を同時に投与した。結果を図３に示す。図３に示す通り、抗ＴｙｒＤ ＣＡＲ＋Ｖδ１細胞を投与された動物は、腫瘍量の強力な制御を示した。
ＷＭ２６６．４－Ｌｕｃ細胞（動物あたり４ｘ１０６）をＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）に皮下移植した。腫瘍が１００～２００ｍｍ３のサイズに達したら、動物を６ｘ１０６の抗ＴｙｒＤ ＣＡＲ＋Ｖδ１細胞で治療した。動物には、試験が終わるまで週に３回、ＩＬ－２（６００００Ｕ／用量）を同時に投与した。結果を図３に示す。図３に示す通り、抗ＴｙｒＤ ＣＡＲ＋Ｖδ１細胞を投与された動物は、腫瘍量の強力な制御を示した。
【0136】
実施例３
Ｔｙｒ ＣＡＲコンストラクトを上述の通りにＶδ１Ｔ細胞に導入して、細胞を増殖させ、ＷＭ２６６．４－Ｌｕｃ細胞に対する細胞毒性アッセイで試験した。対照、非ＴｙｒＤ標的ＣＡＲコンストラクトを対照として用いた。結果は図５に示すが、抗ＴｙｒＤ ＣＡＲコンストラクトによってもたらされる細胞毒性が増大している。
Ｔｙｒ ＣＡＲコンストラクトを上述の通りにＶδ１Ｔ細胞に導入して、細胞を増殖させ、ＷＭ２６６．４－Ｌｕｃ細胞に対する細胞毒性アッセイで試験した。対照、非ＴｙｒＤ標的ＣＡＲコンストラクトを対照として用いた。結果は図５に示すが、抗ＴｙｒＤ ＣＡＲコンストラクトによってもたらされる細胞毒性が増大している。
【0137】
実施例４
ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）存在下で５日間抗Ｖδ１抗体Ｄ１－０８またはＤ１－３５でプレコートした２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）で、成長培地中の１ｘ１０６／ｍＬのヒトＰＢＭＣを活性化させた。５日目に、細胞培養物は、レトロネクチンの存在下で、抗ＧＰＣ３キメラ抗原受容体（配列番号２０（ＧＣ３３ＣＡＲ）または配列番号２２（ＧＣ３３ＣＡＲ＋ｓＩＬ１５及びＧＣ３３ＣＡＲ＋ＣＯ ｓＩＬ１５））をコードするγ－レトロウイルスコンストラクトで形質導入させた。ＧＣ３３ＣＡＲは、配列番号２１の核酸配列によってコードされる。ＧＣ３３ＣＡＲ＋ｓＩＬ１５は、配列番号２３の核酸配列によってコードされ、ＧＣ３３ＣＡＲ＋ＣＯ ｓＩＬ１５は、コドン最適化されたｓＩＬ１５コード領域を含み、配列番号２４の核酸配列によってコードされる。６日目に、細胞を成長培地に戻し、必要に応じてフィーディング及びＩＬ－２の補充によりさらに増殖させた。１７、１８、または１９日目に細胞を回収し、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（登録商標）キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて、残存するαβＴ細胞を枯渇させた。γδ細胞集団の純度と形質導入効率を、ＦＡＣＳにより評価した（図６）。手短に言えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、１μｇ／ｍＬの可溶性遺伝子組換えビオチン化ＧＰＣ３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で細胞をインキュベートすることにより染色した。結合の検出は、ストレプトアビジン－ＰＥを製造元が推奨する１：５００の希釈率で用いて実施した。
ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）存在下で５日間抗Ｖδ１抗体Ｄ１－０８またはＤ１－３５でプレコートした２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）で、成長培地中の１ｘ１０６／ｍＬのヒトＰＢＭＣを活性化させた。５日目に、細胞培養物は、レトロネクチンの存在下で、抗ＧＰＣ３キメラ抗原受容体（配列番号２０（ＧＣ３３ＣＡＲ）または配列番号２２（ＧＣ３３ＣＡＲ＋ｓＩＬ１５及びＧＣ３３ＣＡＲ＋ＣＯ ｓＩＬ１５））をコードするγ－レトロウイルスコンストラクトで形質導入させた。ＧＣ３３ＣＡＲは、配列番号２１の核酸配列によってコードされる。ＧＣ３３ＣＡＲ＋ｓＩＬ１５は、配列番号２３の核酸配列によってコードされ、ＧＣ３３ＣＡＲ＋ＣＯ ｓＩＬ１５は、コドン最適化されたｓＩＬ１５コード領域を含み、配列番号２４の核酸配列によってコードされる。６日目に、細胞を成長培地に戻し、必要に応じてフィーディング及びＩＬ－２の補充によりさらに増殖させた。１７、１８、または１９日目に細胞を回収し、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（登録商標）キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて、残存するαβＴ細胞を枯渇させた。γδ細胞集団の純度と形質導入効率を、ＦＡＣＳにより評価した（図６）。手短に言えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、１μｇ／ｍＬの可溶性遺伝子組換えビオチン化ＧＰＣ３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で細胞をインキュベートすることにより染色した。結合の検出は、ストレプトアビジン－ＰＥを製造元が推奨する１：５００の希釈率で用いて実施した。
【0138】
並行して、形質導入していない細胞培養物を、レトロウイルスの上清を添加することなく、同じ方法で増殖させた。増殖した細胞を、ＧＰＣ３陽性（ＨｅｐＧ２、Ｈｅｐ３Ｂ、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５）のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイで試験した。図７に示す通り、形質導入していない増殖Ｖδ１細胞は、ＧＰＣ３を発現することが知られている、肝臓癌に対してある程度の細胞毒性を誘発する。この細胞毒性は、タンデムに発現するように遺伝子操作したｓＩＬ１５サイトカインの有無にかかわらず、ＧＰＣ３ＣＡＲの導入によって強化される。細胞毒性は、示したＥ／Ｔ比で１８時間共培養した後に、発光基質Ｄ－ルシフェリン（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を添加後、９６ウェルプレートで全発光測定により測定した。
【0139】
前述は本発明の原理を単に例示したものに過ぎない。当業者であれば、本明細書では明示的に説明または図示していないが、本発明の原理を具体化し、その趣旨及び範囲内に含まれる様々な構成を考案することが可能であろうことが理解されよう。さらに、本明細書中に列挙した全ての実施例及び条件付き言語は、主に、本発明の原理及び本技術を促進するために本発明者らが寄与する概念への読者の理解を支援することを意図したものであり、そのような具体的に列挙した実施例及び条件に限定されるものではないと解釈すべきである。さらに、本発明の原理、態様及びそれらの特定の実施例を列挙する本明細書中の全ての記述は、その構造的等価物と機能的等価物の両方を包含することを意図している。さらに、そのような均等物は、現在公知の等価物及び将来開発される等価物の両方、すなわち構造にかかわらず同じ機能を発揮するように開発された任意の要素を含むことが意図されている。したがって、本発明の範囲は、本明細書に示し、記載した模範的な態様に限定されることを意図されてはいない。むしろ、本発明の範囲及び趣旨は、添付の特許請求の範囲により具体化される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【配列表】
【国際調査報告】