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特表2022-513544ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その調製方法及び用途
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-09
(54)【発明の名称】ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その調製方法及び用途
(51)【国際特許分類】
C07D 249/08 20060101AFI20220202BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220202BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220202BHJP
C07D 413/14 20060101ALI20220202BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20220202BHJP
C07D 413/04 20060101ALI20220202BHJP
C07D 405/14 20060101ALI20220202BHJP
A61K 31/454 20060101ALI20220202BHJP
C07D 401/14 20060101ALI20220202BHJP
C07D 405/04 20060101ALI20220202BHJP
A61K 31/4196 20060101ALI20220202BHJP
C07B 61/00 20060101ALN20220202BHJP
【ＦＩ】
C07D249/08 535
A61P43/00 111
A61P35/00
C07D413/14 CSP
A61K31/5377
C07D413/04
C07D405/14
A61K31/454
C07D401/14
C07D405/04
A61K31/4196
C07B61/00 300
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2020567253
(86)(22)【出願日】2019-12-05
(85)【翻訳文提出日】2020-11-27
(86)【国際出願番号】 CN2019123383
(87)【国際公開番号】W WO2021082181
(87)【国際公開日】2021-05-06
(31)【優先権主張番号】201911060493.7
(32)【優先日】2019-11-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520468173
【氏名又は名称】海南一齢医療産業発展有限公司
(71)【出願人】
【識別番号】520468184
【氏名又は名称】蘇 学明
(71)【出願人】
【識別番号】520468195
【氏名又は名称】李 ▲ウェ－▼
(71)【出願人】
【識別番号】520468209
【氏名又は名称】楊 超
(74)【代理人】
【識別番号】100130111
【弁理士】
【氏名又は名称】新保 斉
(72)【発明者】
【氏名】蘇 学明
(72)【発明者】
【氏名】李 ▲ウェ－▼
(72)【発明者】
【氏名】楊 超
【テーマコード（参考）】
4C063
4C086
4H039
【Ｆターム（参考）】
4C063AA01
4C063AA03
4C063BB01
4C063BB02
4C063CC41
4C063CC54
4C063CC78
4C063DD10
4C063DD41
4C063EE01
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086BC60
4C086BC73
4C086GA02
4C086GA07
4C086GA08
4C086GA09
4C086GA13
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA35
4C086MA37
4C086MA41
4C086MA52
4C086MA66
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC20
4H039CA42
4H039CA71
4H039CD10
4H039CH10
(57)【要約】
ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その調製方法と用途を提供し、その阻害剤の一般構造式は、
【化１】
となる。本阻害剤は、リジンメチルトランスフェラーゼＳＥＴ８に対して顕著な阻害作用を有し、腫瘍細胞の増殖に対して顕著な阻害効果を有する。
【選択図】なし
【化１】
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式Ｉ：【化1】
Ｘ、Ｙは、独立してＣＨ又はＮから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、フェニル、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジル、ヘテロシクリル、又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換Ｃ１－Ｃ６アルキルは、独立して、ハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、又はシアノから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換シクロアルキル、置換フェニル又は置換ベンジルは、各々独立して、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ６アルカノイルアミノ、シアノ、Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ又はＣ１－Ｃ６アルコキシアシルから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチル、フェニル、ベンジル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ６アルカノイルアミノ、シアノ、Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ又はＣ１－Ｃ６アルコキシアシルから選択される１つ以上の置換基で置換される
ことを特徴とするＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
Ｘ、ＹはいずれもＮである請求項１に記載のＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
Ｒ１は、Ｃ１－Ｃ４アルキル、置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ５－Ｃ８シクロアルキル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換Ｃ１－Ｃ４アルキルは、独立して、ハロゲン、ニトロ、アミノ又はシアノから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はベンジルから選択される１つ以上の置換基で置換され、好ましくは、Ｒ２は、フェニル、置換フェニル、ベンジル又は置換ベンジルから選択され、前記置換フェニル又は置換ベンジルは、それぞれ独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はＣ１－Ｃ４アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換され、
好ましくは、Ｒ３は、Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ５－Ｃ８シクロアルキル、フェニル、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換フェニル又は置換ベンジルは、それぞれ独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はＣ１－Ｃ４アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換される
請求項２に記載のＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｒ１は、Ｃ１－Ｃ４アルキル、置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、シクロヘキセニル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換Ｃ１－Ｃ４アルキルは、独立して１つのアミノで置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はベンジルから選択される１つの置換基で置換され、前記ヘテロシクリルは、モルホリニル又はテトラヒドロピラニルである請求項３に記載のＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項5】
Ｒ３は、Ｃ１－Ｃ４アルキル、シクロヘキシル、フェニル、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換フェニル又は置換ヘテロシクリルは、それぞれ独立して、１つのＣ１－Ｃ４アルキルで置換され、前記置換ベンジルは、１つのＣ１－Ｃ４アルコキシで置換され、前記ヘテロシクリルは、ピラジニル、ピペリジニル又はピリジニルから選択される請求項４に記載のＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
Ｒ１は、メチル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換ヘテロシクリルは、１つのメチルかベンジルで置換され、前記ヘテロシクリルは、モルホリニル又はテトラヒドロピラニルであり、好ましくは、Ｒ２は、フェニル、置換フェニル、ベンジル又は置換ベンジルから選択され、前記置換フェニルは、１つのメチルで置換され、前記置換ベンジルは、１つのメトキシで置換され、
好ましくは、Ｒ３は、メチル、シクロヘキシル、フェニル、置換フェニル、置換ベンジル、ヘテロシクリル、又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換フェニル又は置換ヘテロシクリルは、それぞれ独立して、１つのメチルで置換され、前記置換ベンジルは、１つのメトキシで置換され、前記ヘテロシクリルは、ピラジニル、ピペリジニル、又はピリジニルから選択される
請求項５に記載のＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項7】
式Ｉで示される阻害剤は、１）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
２）２－（１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
３）２－（１－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
４）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
５）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
６）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
７）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピラジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
８）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
９）４－ベンジル－２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１０）４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
１１）３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）メタンアミン、
１２）１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール、
１３）２－（１－（４－メトキシベンジル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１４）２－（３－ベンジル－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１５）２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１６）２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｐ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１７）２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１８）４－（５－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
１９）４－（５－（ｔｅｒｔ－ブチル）－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
２０）４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
２１）５－シクロヘキシル－１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール、と化合物から選択される
請求項１に記載のＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項8】
反応式：【化2】
１）式Ａで示されるカルボン酸又は式Ｄで示される酸クロリドと式Ｂで示されるチオアミドとを触媒存在下で縮合反応させて式Ｃで示されるチオイミド中間体を生成させるステップ、と、
２）式Ｃで示されるチオイミド中間体と式Ｅで示されるヒドラジン又はその塩とを塩基触媒下で環化させて、前記式１で示されるＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を生成させるステップ、とを含む
ことを特徴とするＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩の調製方法。
【請求項9】
医薬組成物であって、請求項１ないし７のいずれかに記載のＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項10】
請求項１ないし７のいずれかに記載のＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩の、腫瘍治療薬の調製への応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医薬品化学の分野に属し、具体的にはＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その調製方法及び用途に関する。
【背景技術】
【0002】
エピジェネティックとは、遺伝子発現の変化が遺伝子配列の変化に依存しないで、ＤＮＡメチル化及びヒストンの化学修飾に依存することである。遺伝子突然変異、エピジェネティック突然変異、ライフスタイル及び環境因子は、ヒトの健康及び疾患に共同で影響する。エピジェネティック制御遺伝子をコードする突然変異は、腫瘍の発達の間にヒストン修飾が変化し、ＤＮＡプロモーターの高メチル化、ＤＮＡの広範な低メチル化、及びクロマチン構造の異常の４つの方面において主に現れる。ＤＮＡの異常メチル化は、癌抑制遺伝子の転写の阻害、ゲノムの不安定性、及び癌遺伝子の異常な活性化をもたらす可能性が高い。ヒストン修飾酵素の腫瘍内での突然変異は、ヒストンメチル化酵素、脱メチル化酵素、アセチル化酵素突然変異などを含み、遺伝子発現の異常を引き起こし、腫瘍細胞の表現型を決定する。これらのエピジェネティックな変化は、腫瘍細胞の成長、免疫回避、転移、不均一性、及び耐性などに直接関連し、さらには腫瘍の発生をもたらす。エピジェネティック突然変異に対する治療戦略は、新しい腫瘍治療の方向になり、様々なエピジェネティック薬が臨床試験を開始した。また、その治療戦略は自己免疫、心血管疾患、神経、発生、エイジングなどの分野での応用も大いに期待されている。
【0003】
ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼは、ＳＥＴＤ８、ＰＲ－ＳＥＴ７、ＫＭＴ５ａとも呼ばれ、現在発見されたヒストンＨ４リジン２０位（ｈｉｓｔｏｎ Ｈ４ ｌｙｓｉｎｅ２０，Ｈ４Ｋ２０）を特異的にモノメチル化できる唯一のジンメチルトランスフェラーゼである。ＳＥＴ８は、ヒストンメチル化の修飾を介して、インビボでの遺伝子転写の調節、ゲノムの安定化、細胞周期の進行、及び胚の発生などの生物学的プロセスに関与する。現在、ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼが腫瘍発達を制御する作用機序について、国内外の多数の研究が報告している。例えば、ＳＥＴ８が非ヒストンＮｕｍｂのメチル化を介して細胞のアポトーシス及び増殖を調節し得ることを研究で報告されている。Ｌｉらは、ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼがＷｎｔシグナル伝達経路の伝達媒介であることを見出し、哺乳動物細胞及びゼブラフィッシュにおいてＷｎｔレポーター及び標的遺伝子を活性化するのに重要である。Ｃｈｅｎらは、ホットスポットｍｉＲＮＡを研究し、ＳＥＴ８を直接標的とすることにより細胞増殖及び細胞周期を調節することを見出した。ＳＥＴ８は、Ｗｎｔ標的遺伝子発現の調節に関与し、Ｗｎｔ３ａ媒介胚発生に影響を及ぼすだけでなく、Ｔｗｉｓｔによって上皮間葉転換の調節にも関与し、したがって腫瘍の形成及び発達に影響を及ぼす。２０１６年Ｍｏｒｅａｕｘらは、ＳＥＴ８が多発性骨髄腫細胞の生存に重要であることを初めて実証しており、ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼの阻害が多発性骨髄腫の治療を改善するための潜在戦略であることを示唆している。さらに、ＳＥＴ８の発現が胃癌患者の独立した予後マーカーであることを示す研究もあり、ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼの発現レベルは、患者が有害疾患のリスクを判定するのに役立ち得る。つまり、ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼは、生体の生命過程において重要な役割を果たしており、体内の細胞周期、細胞増殖及びアポトーシスなどの過程を制御することに関与し、多くの腫瘍の発生、成長、転移などに密接に関与している。しかしながら、ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼを標的とする化合物は報告が少ないため、ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼを標的とする新規な化合物の研究は、現在の研究の困難点及びホットスポットである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
本発明は、従来技術の有する技術的課題を解決するために、新規なＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その調製方法と用途を研究する。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本発明の一つの技術的解決手段は、式Ｉで示されるＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩を提供し、
【0006】
【化1】
【0007】
そのうち、
Ｘ、Ｙは、独立してＣＨ又はＮから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、フェニル、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジル、ヘテロシクリル、又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換Ｃ１－Ｃ６アルキルは、独立して、ハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、又はシアノから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換シクロアルキル、置換フェニル又は置換ベンジルは、各々独立して、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ６アルカノイルアミノ、シアノ、Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ又はＣ１－Ｃ６アルコキシアシルから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチル、フェニル、ベンジル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ６アルカノイルアミノ、シアノ、Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ又はＣ１－Ｃ６アルコキシアシルから選択される１つ以上の置換基で置換される。
Ｘ、Ｙは、独立してＣＨ又はＮから選択され、
Ｒ１、Ｒ２、又はＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１－Ｃ６アルキル、置換Ｃ１－Ｃ６アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、フェニル、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジル、ヘテロシクリル、又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換Ｃ１－Ｃ６アルキルは、独立して、ハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、又はシアノから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換シクロアルキル、置換フェニル又は置換ベンジルは、各々独立して、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ６アルカノイルアミノ、シアノ、Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ又はＣ１－Ｃ６アルコキシアシルから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、ハロゲン、Ｃ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロメチル、フェニル、ベンジル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ１－Ｃ６アルカノイルアミノ、シアノ、Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ又はＣ１－Ｃ６アルコキシアシルから選択される１つ以上の置換基で置換される。
【0008】
更なる改良された手段では、Ｘ、ＹはいずれもＮである。
【0009】
更なる改良された手段では、Ｒ１は、Ｃ１－Ｃ４アルキル、置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ５－Ｃ８シクロアルキル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換Ｃ１－Ｃ４アルキルは、独立して、ハロゲン、ニトロ、アミノ又はシアノから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はベンジルから選択される１つ以上の置換基で置換され、
好ましくは、Ｒ２は、フェニル、置換フェニル、ベンジル又は置換ベンジルから選択され、前記置換フェニル又は置換ベンジルは、それぞれ独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はＣ１－Ｃ４アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換され、
好ましくは、Ｒ３は、Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ５－Ｃ８シクロアルキル、フェニル、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換フェニル又は置換ベンジルは、それぞれ独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はＣ１－Ｃ４アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換される。
好ましくは、Ｒ２は、フェニル、置換フェニル、ベンジル又は置換ベンジルから選択され、前記置換フェニル又は置換ベンジルは、それぞれ独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はＣ１－Ｃ４アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換され、
好ましくは、Ｒ３は、Ｃ１－Ｃ４アルキル、Ｃ５－Ｃ８シクロアルキル、フェニル、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換フェニル又は置換ベンジルは、それぞれ独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はＣ１－Ｃ４アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換される。
【0010】
更なる改良された手段では、Ｒ１は、Ｃ１－Ｃ４アルキル、置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、シクロヘキサン、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換Ｃ１－Ｃ４アルキルは、独立して１つのアミノで置換され、前記置換ヘテロシクリルは、独立して、Ｃ１－Ｃ４アルキル又はベンジルから選択される１つの置換基で置換され、前記ヘテロシクリルは、モルホリニル又はテトラヒドロピラニルである。
【0011】
更なる改良された手段では、Ｒ３は、Ｃ１－Ｃ４アルキル、シクロヘキシル、フェニル、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換フェニル又は置換ヘテロシクリルは、それぞれ独立して、１つのＣ１－Ｃ４アルキルで置換され、前記置換ベンジルは、１つのＣ１－Ｃ４アルコキシで置換され、前記ヘテロシクリルは、ピラジニル、ピペリジニル又はピリジニルから選択される。
【0012】
更なる改良された手段では、Ｒ１は、メチル、ヘテロシクリル又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換ヘテロシクリルは、１つのベンジルで置換され、前記ヘテロシクリルは、モルホリニル又はテトラヒドロピラニルであり、
好ましくは、Ｒ２は、フェニル、置換フェニル、ベンジル又は置換ベンジルから選択され、前記置換フェニルは、１つのメチルで置換され、前記置換ベンジルは、１つのメトキシで置換され、
好ましくは、Ｒ３は、メチル、シクロヘキシル、フェニル、置換フェニル、置換ベンジル、ヘテロシクリル、又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換フェニル又は置換ヘテロシクリルは、それぞれ独立して、１つのメチルで置換され、前記置換ベンジルは、１つのメトキシで置換され、前記ヘテロシクリルは、ピラジニル、ピペリジニル、又はピリジニルから選択される。
好ましくは、Ｒ２は、フェニル、置換フェニル、ベンジル又は置換ベンジルから選択され、前記置換フェニルは、１つのメチルで置換され、前記置換ベンジルは、１つのメトキシで置換され、
好ましくは、Ｒ３は、メチル、シクロヘキシル、フェニル、置換フェニル、置換ベンジル、ヘテロシクリル、又は置換ヘテロシクリルから選択され、前記置換フェニル又は置換ヘテロシクリルは、それぞれ独立して、１つのメチルで置換され、前記置換ベンジルは、１つのメトキシで置換され、前記ヘテロシクリルは、ピラジニル、ピペリジニル、又はピリジニルから選択される。
【0013】
更なる改良された手段では、式Ｉで示される阻害剤は、以下の化合物から選択され、
１）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
２）２－（１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
３）２－（１－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
４）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
５）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
６）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
７）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピラジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
８）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
９）４－ベンジル－２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１０）４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
１１）３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）メタンアミン、
１２）１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール、
１３）２－（１－（４－メトキシベンジル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１４）２－（３－ベンジル－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１５）２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１６）２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｐ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１７）２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１８）４－（５－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
１９）４－（５－（ｔｅｒｔ－ブチル）－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
２０）４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
２１）５－シクロヘキシル－１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール。
１）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
２）２－（１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
３）２－（１－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
４）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
５）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
６）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
７）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピラジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
８）２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
９）４－ベンジル－２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１０）４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
１１）３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）メタンアミン、
１２）１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール、
１３）２－（１－（４－メトキシベンジル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１４）２－（３－ベンジル－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１５）２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１６）２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｐ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１７）２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン、
１８）４－（５－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
１９）４－（５－（ｔｅｒｔ－ブチル）－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
２０）４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン、
２１）５－シクロヘキシル－１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール。
【0014】
用語の解釈：
本発明で使用される用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素などを含むが、これらに限定されない。
本発明で使用される用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素などを含むが、これらに限定されない。
【0015】
本発明で使用される場合、「アルキル」という用語は、Ｃ１－Ｃ１０アルキル、Ｃ１－Ｃ６アルキル、又はＣ１－Ｃ４アルキルなどの直鎖又は分岐鎖の飽和ヒドロキシを指す。アルキルの非限定的な例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチルなどが挙げられる。
【0016】
本発明で使用される場合、「アルコキシ」という用語は、「Ｗ－Ｏ－」構造を有する基を指し、Ｗは、アルキル、例えば、Ｃ１－Ｃ１０アルコキシ、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、又はＣ１－Ｃ４アルコキシであり、アルコキシの非限定的な例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、及びｔｅｒｔ－ブトキシなどが挙げられる。
【0017】
本発明で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、飽和又は部分飽和の環状ヒドロキシを指し、シクロアルキルを構成する炭素数は３－１５個、例えば３－１０個であってもよい。具体例としては、シクロプロピルアルキル、シクロブタニル、シクロペンチルアルキル、シクロヘキシルアルキル、シクロヘプチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【0018】
本発明で使用される場合、「ヘテロシクリル」とは、環を構成する原子が炭素原子以外にＮ、Ｏ又はＳから選ばれる少なくとも１つのヘテロ原子を含むことを意味し、具体例としては、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリル、チエニル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピペリジニル、トリアジニル、モルホリニル、チオジアゾールなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【0019】
本発明の別の手段は、式Ｉで示されるＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩の調製方法を提供し、この調製方法は、
１）式Ａで示されるカルボン酸又は式Ｄで示される酸クロリドと式Ｂで示されるチオアミドとを触媒存在下で縮合反応させて式Ｃで示されるチオイミド中間体を生成させ、と
２）式Ｃで示されるチオイミド中間体と式Ｅで示されるヒドラジン又はその塩とを塩基触媒下で環化させて式１で示されるＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を生成させ、とのステップを含み、
反応式は以下のとおりである。
１）式Ａで示されるカルボン酸又は式Ｄで示される酸クロリドと式Ｂで示されるチオアミドとを触媒存在下で縮合反応させて式Ｃで示されるチオイミド中間体を生成させ、と
２）式Ｃで示されるチオイミド中間体と式Ｅで示されるヒドラジン又はその塩とを塩基触媒下で環化させて式１で示されるＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を生成させ、とのステップを含み、
反応式は以下のとおりである。
【0020】
【化2】
【0021】
更なる改良された手段では、ステップ１）に記載の触媒が、ＨＡＴＵとＤＩＥＡ、又はピリジンと４－ジメチルアミノピリジンであり、式Ａで示されるカルボン酸又は式Ｄで示される酸塩化物と式Ｂで示されるチオアミドとＨＡＴＵ及びＤＩＥＡのモル比が１：１．０５－１．２：１．０５－１．２：１．０５－１．２であり、
好ましくは、ステップ２）に記載の塩基は酢酸ナトリウムであり、式Ｃで示されるチオイミド中間体と、式Ｅで示されるヒドラジン又はその塩、塩基とのモル比が１：１．１－１．３：１．２５－２．６である。
好ましくは、ステップ２）に記載の塩基は酢酸ナトリウムであり、式Ｃで示されるチオイミド中間体と、式Ｅで示されるヒドラジン又はその塩、塩基とのモル比が１：１．１－１．３：１．２５－２．６である。
【0022】
更なる改良された手段では、ステップ２）に記載の反応溶媒は、酢酸と１，４－ジオキサンとの体積比が１：０．８～２の混合溶媒である。
【0023】
本発明の別の態様は、式Ｉで示されるＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【0024】
医薬組成物は、局所、静脈内、経口、皮下などの投与経路により、投与経路に応じて種々の適切な剤形に製剤化することができる。経口投与の場合、本発明の化合物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤を含むが、これらに限定されない、経口的に許容される任意の製剤形態にすることができる。ここで、担体又は賦形剤としては、限定されないが、充填剤としてラクトース、グルコース、微結晶セルロースなど、バインダーとしてカルボキシメチルセルロース、ポビドン、メチルセルロースなど、崩壊剤としてのカルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスポビドンなど、滑沢剤としてはステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカなどが挙げられる。皮膚に局所的に適用する場合、本発明化合物は、適当な軟膏などの製剤形態に製剤化することができ、担体又は賦形剤は、ワセリン、プロピレングリコール、ポリエチレンオキシドなどから選択される。
【0025】
本発明にて提供される式Ｉで示されるＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、その光学異性体、溶媒和物又はその薬学的に許容される塩は、腫瘍、例えば、肝癌、神経膠腫、結腸直腸癌、胃癌、乳癌、黒色腫、肺癌、前立腺癌、膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌、多発性骨髄腫、子宮頸癌などの治療に用いることができる。
【発明の効果】
【0026】
本発明は、ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤を初めて合成及び同定し、インビトロ活性評価の結果により、この阻害剤はＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼに対して有意な阻害活性を有すると同時に有意なインビトロ抗腫瘍活性を有し、毒性が低く、ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼを標的とする標的化抗腫瘍薬として更に開発可能であることが示される。
【発明を実施するための形態】
【0027】
以下、実施例を挙げて本発明の実施形態を詳細に説明するが、当業者であれば、下記の実施例は、本発明を説明するに用いるだけで、本発明の範囲が限定されるものではないことを理解できるであろう。実施例に具体的な条件を明記していないものは、通常の条件又はメーカーの推奨する条件に従って行った。使用する試薬や機器は、メーカーに特定されない場合、いずれも市販で入手可能な通常のものである。また、各物質の使用量又は収率を算出する際には、部分データは繰り上げ処理されている。
［実施例１］ ２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１）塩酸塩の調製
［実施例１］ ２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１）塩酸塩の調製
【0028】
【化3】
【0029】
ステップ１：２－（（２－（４－メトキシフェニル）チオアセチル）カルバモイル）モルホリン－４－カルボキシレート（化合物１－３）を調製する。
反応式は以下のとおりである。
反応式は以下のとおりである。
【0030】
【化4】
【0031】
式１－１で示される４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）モルホリン－２－カルボン酸（１．０ｍｍｏｌ、２３１ｍｇ）、２－（７－ベンゾトリアザゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、１．１ｍｍｏｌ、４１８ｍｇ）を４ｍＬの乾燥ジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶解し、窒素保護して室温で２０分間撹拌した後、上記系に式１－２で示される２－（４－メトキシフェニル）チオアセトアミド（１．１ｍｍｏｌ、１９９ｍｇ）を加え、１時間撹拌を続けた後、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、１．１ｍｍｏｌ、１４２ｍｇ）を上記反応系に滴下した後、窒素保護して室温で２日間撹拌反応を続け、反応液を酢酸エチル５０ｍＬで希釈した後、水２０ｍＬ、飽和塩化ナトリウム溶液で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、反応液を濃縮した後、［Ｖ（石油エーテル）：Ｖ（酢酸エチル）＝５：１－２：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、１３４ｍｇの淡黄色油状物１－３を収率３４％で得る。
【0032】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１０．２５（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）．，４．６１-４．５２（ｍ，２Ｈ），４．２８（ｂｒｓ，１Ｈ），４．００-３．９３（ｍ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．５８（ｔｄ，Ｊ＝１１．８，２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．９１－２．７９（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）。
【0033】
ステップ２：２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン－４－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物１－５）を調製する。
【0034】
反応式は以下のとおりである。
【0035】
【化5】
【0036】
化合物１－３（０．１５ｍｍｏｌ，５９ｍｇ）、式１－４で示される４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジン（０．１８ｍｍｏｌ，２３ｍｇ）、酢酸ナトリウム（０．１９５ｍｍｏｌ，１６ｍｇ）を、１ｍＬの酢酸と１ｍＬの１，４－ジオキサンの混合溶媒に順次溶解した後、キャッピングを行い、次いで、８０℃の加熱下で化合物１－３が完全に反応するまで反応させ、反応液を酢酸エチル３０ｍＬで希釈した後、飽和炭酸ナトリウム溶液２０ｍＬ、飽和塩化ナトリウム溶液で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、反応液を濃縮した後、［Ｖ（アンモニアのジクロロメタン溶液）：Ｖ（メタノール）＝２５：１－２０：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、６３ｍｇの淡黄色油状物１－５を収率８９％で得た。
【0037】
ステップ３：２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１）塩酸塩を調製する。
【0038】
反応式は以下のとおりである。
【0039】
【化6】
【0040】
化合物１－５（０．１３ｍｍｏｌ、６１ｍｇ）、アニソール（０．１３ｍｍｏｌ、１４ｍｇ）、０．４ｍＬの塩化水素１，４－ジオキサン溶液（４Ｍ）をジクロロメタン３ｍＬに順次溶解した後、化合物１－５が完全に反応するまで、密閉反応を２日間行った。反応液を蒸発乾固することにより白色固体を得て、固体を石油エーテルと酢酸エチル（３：１）との混合溶媒１０ｍＬで３回洗浄した後、抽出乾固することにより５０ｍｇの白色固体１を収率８７％で得る。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ７．１８－７．１６（ｍ，２Ｈ），６．８５－６．８２（ｍ，２Ｈ），５．４８－５．４５（ｍ，１Ｈ），５．０４－４．９９（ｍ，１Ｈ），４．２２－４．１３（ｍ，２Ｈ），４．００（ｓ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．６９－３．５２（ｍ，６Ｈ），３．４２－３．３５（ｍ，３Ｈ），２．９４（ｓ，３Ｈ），２．５３－２．２３（ｍ，５Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１６２．７，１６０．１，１５１．９，１３０．９，１３０．８，１３０．４，１３０．１，１１５．０，６８．１，６７．２，６４．８，５５．７，５４．３，５４．３，５４．２，４５．６，４３．９，３３．８，３０．９，３０．２．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３７２．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例２］ ２－（１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物２）の調製
［実施例２］ ２－（１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物２）の調製
【0041】
【化7】
【0042】
ステップ１：２－（１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン－４－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物２－１）を調製する。
【0043】
【化8】
【0044】
化合物１－３（０．１５ｍｍｏｌ，５９ｍｇ）、（４－メトキシベンジル）ヒドラジン塩酸塩（０．１８ｍｍｏｌ，３４ｍｇ）、酢酸ナトリウム（０．３６ｍｍｏｌ，３０ｍｇ）を、酢酸１ｍＬと１，４－ジオキサン１ｍＬの混合溶媒に順次溶解した後、密栓し、次いで、８０℃に加熱しながら化合物１－３の反応が完了するまで反応させた。反応液を酢酸エチル３０ｍＬで希釈した後、飽和炭酸ナトリウム溶液２０ｍＬ、飽和塩化ナトリウム溶液で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、［Ｖ（石油エーテル）：Ｖ（酢酸エチル）＝３：１－１：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、５０ｍｇの淡黄色油状物２－１を収率６８％で得る。
【0045】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２５-７．１６（ｍ，４Ｈ），６．８７-６．８２（ｍ，４Ｈ），５．３２（ｓ，２Ｈ），４．４３（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２２-４．０６（ｍ，１Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．６２－３．５６（ｍ，１Ｈ），３．２１（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．００（ｓ，１Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。
【0046】
ステップ２：２－（１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物２）を調製する。
【0047】
化合物２－１（０．１ｍｍｏｌ、４９ｍｇ）、アニソール（０．１ｍｍｏｌ、１１ｍｇ）、塩化水素の１，４－ジオキサン溶液（４Ｍ）０．５ｍＬをジクロロメタン３ｍＬに順次溶解した後、３日間密栓し、化合物２－１が完全に反応するまで反応させた。反応液を蒸発乾固して黄色油状物を得て、油状物を酢酸エチル３０ｍＬで希釈し、飽和炭酸ナトリウム溶液２０ｍＬで洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、［Ｖ（アンモニアのジクロロメタン溶液）：Ｖ（メタノール）＝２５：１～２０：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、２６ｍｇの黄色油状物２を収率６６％で得る。
【0048】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２６－７．１７（ｍ，４Ｈ），６．８６－６．８１（ｍ，４Ｈ），５．３８－５．２９（ｍ，２Ｈ），４．５７－４．５４（ｍ，１Ｈ），３．９８（ｓ，２Ｈ），３．８８－３．８４（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．６８－３．６２（ｍ，１Ｈ），３．１７－３．１０（ｍ，２Ｈ），２．９７－２．８４（ｍ，２Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６２．３，１５９．６，１５８．３，１５３．１，１３０．６，１３０．０，１２９．２，１２８．１，１１４．３，１１４．０，７０．８，６７．６，５５．５，５５．４６，５２．４，４８．８，４５．６，３４．０．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３９５．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例３］：２－（１－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物３）の調製
［実施例３］：２－（１－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物３）の調製
【0049】
【化9】
【0050】
ステップ１：２－（１－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン－４－カルボキシレート（化合物３－１）を調製する。
【0051】
【化10】
【0052】
化合物１－３（０．１６ｍｍｏｌ，６３ｍｇ）、シクロヘキシルヒドラジン塩酸塩（０．２ｍｍｏｌ，３０ｍｇ）、酢酸ナトリウム（０．３６ｍｍｏｌ，３０ｍｇ）を酢酸１ｍＬと１，４－ジオキサン１ｍＬの混合溶媒に順次溶解した後、密栓を行い、次いで、８０℃に加熱しながら化合物１－３を完全に反応させた。反応液を酢酸エチル３０ｍＬで希釈した後、飽和炭酸ナトリウム溶液２０ｍＬ、飽和塩化ナトリウム溶液で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、反応液を濃縮した後、［Ｖ（石油エーテル）：Ｖ（酢酸エチル）＝３：１－１：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、４０ｍｇの淡黄色油状物３－１を収率５５％で得る。
【0053】
ステップ２：２－（１－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物３）を調製する。
【0054】
化合物３－１（０．０９ｍｍｏｌ、４１ｍｇ）、アニソール（０．１ｍｍｏｌ、１１ｍｇ）、塩化水素０．５ｍＬの１，４－ジオキサン溶液（４Ｍ）をジクロロメタン３ｍＬに順次溶解した後、３日間密栓し、化合物３－１が完全に反応するまで反応させた。反応液を蒸発乾固して黄色油状物を得て、油状物を酢酸エチル３０ｍＬで希釈し、飽和炭酸ナトリウム溶液２０ｍＬで洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、反応液を濃縮した後、［Ｖ（アンモニアのジクロロメタン溶液）：Ｖ（メタノール）＝２５：１－２０：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、２６ｍｇの黄色油状物３を収率８１％で得る。
【0055】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２５－７．２３（ｍ，２Ｈ），６．８２－６．８０（ｍ，２Ｈ），４．６７－４．６４（ｍ，２Ｈ），４．２８－４．２１（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｓ，２Ｈ），３．８５－３．７９（ｍ，１Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．７３－３．６７（ｍ，１Ｈ），３．３１－３．２５（ｍ，１Ｈ），３．１９－３．１５（ｍ，１Ｈ），３．０１－２．８７（ｍ，２Ｈ），１．９８－２．８５（ｍ，６Ｈ），１．７３－１．７０（ｍ，１Ｈ），１．４０－１．２６（ｍ，４Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６１．８，１５８．１，１５２．０，１３０．７，１２９．９，１１３．８，７０．０，６７．４，５８．０，５５．３，４８．９，４５．６，３３．９，３３．０，３２．９，２５．７，２５．１．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３５７．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例４］：２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物４）塩酸塩の調製
［実施例４］：２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物４）塩酸塩の調製
【0056】
【化11】
【0057】
実施例１の方法に基づき、化合物１－３とフェニルヒドラジンを反応させ、中間体（７５ｍｇ、収率７６％）を調製した後、塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物４の塩酸塩（３０ｍｇ、収率７７％）を白色固体粉末として調製する。
【0058】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ９．３３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．６２－７．５９（ｍ，５Ｈ），７．２５－７．２３（ｍ，２Ｈ），６．８８－６．８６（ｍ，２Ｈ），４．８９－４．８７（ｍ，１Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．８３－３．８１（ｍ，２Ｈ），３．７２（ｓ，２Ｈ），３．５０（ｓ，２Ｈ），３．２４－３．１８（ｍ，２Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１６４．１，１５９．５，１５１．８，１３０．９，１３０．７，１３０．３，１２５．８，１２４．９，１２３．４，１１５．０，６６．５，６４．３，５５．７，４５．６，４２．８，３４．０．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３５１．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例５］：２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物５）塩酸塩の調製
［実施例５］：２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物５）塩酸塩の調製
【0059】
【化12】
【0060】
実施例１の方法に基づき、化合物１－３と３－メチルベンゾヒドラジンを反応させ、中間体（８０ｍｇ，収率７８％）を調製した後、さらに塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物５の塩酸塩（３２ｍｇ，収率７５％）を白色固体粉末として調製する。
【0061】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ９．４３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．５７－７．４８（ｍ，４Ｈ），７．２４－７．２２（ｍ，２Ｈ），６．８７－６．８６（ｍ，２Ｈ），４．８９－４．８６（ｍ，１Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ），３．８２－３．８１（ｍ，２Ｈ），３．７２（ｓ，２Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ），３．２２－３．１９（ｍ，２Ｈ），２．４３（ｍ，３Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１６４．５，１６０．０，１５２．２，１４１．３，１３７．８，１３１．４，１３０．８４，１３０．８２，１３０．６，１２６．３，１２２．８，１１４．９，６６．８，６４．１，５５．７，４５．７，４３．９，３４．３，２１．３．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３６５．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例６］ ２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物６）の調製
［実施例６］ ２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物６）の調製
【0062】
【化13】
【0063】
実施例１の方法に基づき、化合物１－３を２－ヒドラジンピリジンと反応させ、中間体（２５ｍｇ、収率４４％）を調製した後、塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物６（１８ｍｇ、収率９０％）を淡黄色油状物として調製する。
【0064】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．４９（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３２－７．２７（ｍ，３Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），５．５６（ｄｄ，Ｊ＝９．３，２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．３０（ｓ，３Ｈ），４．０９（ｓ，２Ｈ），４．０１（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８６-３．６７（ｍ，４Ｈ），３．４３（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｄｄｄ，Ｊ＝１８．７，１３．２，６．３Ｈｚ，２Ｈ），２．９０（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６３．２，１５８．２，１５４．７，１５０．７，１４８．０，１３８．８，１２９．９，１２２．６，１１６．４，１１３．８，７１．９，６７．９，５５．２，５３．４，４９．２，４５．２，３３．８，２９．８．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３５２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例７］ ２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピラジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物７）の調製
［実施例７］ ２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（ピラジン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物７）の調製
【0065】
【化14】
【0066】
実施例１の方法に基づき、化合物１－３と２－ヒドラジノピラジンを反応させ、中間体（３６ｍｇ、収率６３％）を調製した後、塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物７（２０ｍｇ、収率７１％）を淡黄色油状物として調製する。
【0067】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ９．２０（ｓ，１Ｈ），８．５７（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｓ，１Ｈ），７．３５-７．２５（ｍ，２Ｈ），６．８５（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），５．４７（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｓ，２Ｈ），３．９７（ｄｔ，Ｊ＝１１．４，２．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８１-３．６６（ｍ，４Ｈ），３．３６（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２３-３．０２（ｍ，２Ｈ），２．９０（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，１Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６４．０，１５８．３，１５５．６，１４６．９，１４２．９，１４１．６，１３８．７，１２９．９，１２９．４，１１３．８，７１．５，６７．９，５５．２，４９．０，４５．３，３３．７，２９．６．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３５３．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例８］ ２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物８）
［実施例８］ ２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物８）
【0068】
【化15】
【0069】
実施例１の方法に基づき、化合物１－３をメチルヒドラジン硫酸塩と反応させ、中間体（２４ｍｇ，収率５１％）を調製した後、塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物８（１４ｍｇ，収率８０％）を淡黄色油状物として調製する。
【0070】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．０７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．６４（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１０-３．９７（ｍ，４Ｈ），３．８７-３．６９（ｍ，５Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），３．２４（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，２．３Ｈｚ，１Ｈ），３．１５-２．９６（ｍ，２Ｈ），２．８７（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６０．８，１５８．６，１５４．７，１２９．３，１２７．１，１１４．２，７３．３，６８．１，５５．２，４９．９，４５．５，３５．４，３１．５．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ２８９．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例９］：４－ベンジル－２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物９）の調製
［実施例９］：４－ベンジル－２－（３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物９）の調製
【0071】
【化16】
【0072】
実施例１の方法に基づき、４－ベンジルモルホリン－２－カルボン酸と式１－２で示される２－（４－メトキシフェニル）チオアセトアミドを反応させ、チオイミド中間体（２０ｍｇ，収率１０％）を調製した後、４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジンと反応させ、化合物９（１６ｍｇ，収率６９％）を淡黄色油状物として調製する
【0073】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４０-７．２８（ｍ，５Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．７２（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｔ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０３－３．９１（ｍ，３Ｈ），３．８７－３．７４（ｍ，４Ｈ），３．５８（ｄｄ，Ｊ＝２６．３，１２．９Ｈｚ，２Ｈ），３．０７－３．０１（ｍ，３Ｈ），２．７４（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．６７－２．５２（ｍ，１Ｈ），２．３８-２．３０（ｍ，４Ｈ），２．２９-２．２０（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），１．９１（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），１．８０（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６１．７，１５８．０，１５２．０，１３７．５，１３０．４，１２９．８，１２９．１，１２８．３，１２７．３，１１３．６，７０．１，６７．３，６３．０，５６．０，５５．２，５５．０，５２．５，４６．１，３３．８，３１．９．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ４６２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１０］ ４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－テトラヒドロピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物１０）の調製
［実施例１０］ ４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－テトラヒドロピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物１０）の調製
【0074】
【化17】
【0075】
実施例１の方法に基づき、テトラヒドロピラン－２－カルボン酸と式１－２で示される２－（４－メトキシフェニル）チオアセトアミドを反応させ、チオイミド中間体（３００ｍｇ，収率２６％）を調製した後、４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジンと反応させ、化合物１０（３３ｍｇ，収率６５％）を淡黄色油状物として調製する。
【0076】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．５３（ｄｄ，Ｊ＝９．８，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３２－４．２４（ｍ，１Ｈ），４．０３（ｄｄ，Ｊ＝７．９，５．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｓ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．５７（ｔｄ，Ｊ＝１１．４，２．１Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３８-２．１８（ｍ，５Ｈ），２．０８（ｔ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，２Ｈ），２．０２-１．８１（ｍ，５Ｈ），１．７８-１．５１（ｍ，３Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６１．５，１５４．０，１３０．６，１２９．８，１１３．６，７２．０，６８．７，５５．２，５４．９，４６．１，３３．８，３１．９，２９．８，２５．５，２２．９．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３７１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１１］ （３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）メタンアミン（化合物１１）の調製
［実施例１１］ （３－（４－メトキシベンジル）－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）メタンアミン（化合物１１）の調製
【0077】
【化18】
【0078】
実施例１の方法に基づき、２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ酢酸と式１－２で示される２－（４－メトキシフェニル）チオアセトアミドを反応させ、チオイミド中間体（５３ｍｇ、収率３１％）を調製した後、４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジンを反応させ、中間体（４０ｍｇ、収率６１％）を調製し、塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物１１（１２ｍｇ、収率４２％）を淡黄色油状物として調製する。
【0079】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１５－４．０９（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｓ，２Ｈ），３．９３（ｓ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．４８（ｓ，１Ｈ），３．０３（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｓ，３Ｈ），２．３０－２．１６（ｍ，４Ｈ），１．９４－１．９１（ｍ，４Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６１．７，１５８．１，１５５．２，１３０．４，１２９．８，１１３．７，５４．９，５０．７，４５．９，３７．６，３３．９，３１．６．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３１６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１２］ １，３－ビス（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール（化合物１２）の調製
［実施例１２］ １，３－ビス（４－メトキシベンジル）－５－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール（化合物１２）の調製
【0080】
【化19】
【0081】
実施例１の方法に基づき、テトラヒドロピラン－２－カルボン酸と、式１－２で示される２－（４－メトキシフェニル）チオアセトアミドを反応させ、チオイミド中間体（３００ｍｇ，収率２６％）を調製した後、４－メトキシベンジルヒドラジニウム塩と反応させ、化合物１２（１１０ｍｇ，収率６７％）を淡黄色油状物として調製する。
【0082】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．５３（ｄｄ，Ｊ＝９．８，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．４，７．３，４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０５－４．０２（ｍ，１Ｈ），３．９６（ｓ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．５７（ｔｄ，Ｊ＝１１．４，２．１Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．３０-２．２３（ｍ，２Ｈ），２．１１-２．０５（ｍ，２Ｈ），２．００－１．８３（ｍ，５Ｈ），１．７１-１．５７（ｍ，３Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６１．５，１５７．９，１５４．０，１３０．６，１２９．８，１１３．６，７２．０，６８．７，５５．７，５５．２，５４．９，５４．８８，４６．１，３３．８，３１．９，２９．８，２５．５，２２．９．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３９４．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１３］ ２－（１－（４－メトキシベンジル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１３）の調製
［実施例１３］ ２－（１－（４－メトキシベンジル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１３）の調製
【0083】
【化20】
【0084】
実施例１の方法に基づき、式１－１で示される４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）モルホリン－２－カルボン酸と２－フェニルチオカルボキサミドを反応させ、チオイミド中間体（２１７ｍｇ，収率６２％）を調製した後、４－メトキシベンジルヒドラジン酸塩と反応させ、中間体（３３ｍｇ，収率６０％）を調製し、さらに塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物１３（１４．１ｍｇ，収率５６％）を淡黄色油状物として調製する。
【0085】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．０９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．４９-７．３２（ｍ，３Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），５．６３-５．２６（ｍ，２Ｈ），４．６５（ｄｄ，Ｊ＝７．９，３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９５-３．５９（ｍ，５Ｈ），３．３０－３．１９（ｍ，２Ｈ），３．０１-２．９０（ｍ，２Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６０．７，１５９．４，１５３．２，１３１．０，１２９．１，１２９．０，１２８．４，１２７．８，１２６．３，１１４．１，７０．２，６７．０，５５．２，５２．４，４８．４，４５．４，２９．７．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３５１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１４］ ２－（３－ベンジル－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１４）塩酸塩の調製
［実施例１４］ ２－（３－ベンジル－１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１４）塩酸塩の調製
【0086】
【化21】
【0087】
実施例１の方法に基づき、式１－１で示される４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）モルホリン－２－カルボン酸と２－フェニルチオアセトアミドを反応させ、チオイミド中間体（７３ｍｇ、収率４０％）を調製した後、４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジンと反応させ、中間体（７５ｍｇ、収率８５％）を調製し、塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物１４の塩酸塩（６０ｍｇ、収率７９％）を白色固体粉末として調製する。
【0088】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ６．９８－６．８７（ｍ，５Ｈ），６．５８－６．５４（ｍ，１Ｈ），５．２２－５．１９（ｍ，１Ｈ），４．７５－４．７０（ｍ，２Ｈ），３．９３－３．８１（ｍ，３Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．６７－３．５４（ｍ，６Ｈ），３．４０－３．３５（ｍ，３Ｈ），２．９６（ｓ，３Ｈ），２．５１－２．２６（ｍ，５Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１７３．４，１６１．６，１５７．８，１３７．８，１３０．４，１２９．９，１２９．８，１２９．６，１２７．９，１１４．８，６８．１，６７．２，６５．０，５８．３，５４．５，５４．２１，５４．１５，４５．６，４３．９，３４．４，３０．７，３０．２．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３４２．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１５］ ２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１５）塩酸塩の調製
［実施例１５］ ２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－フェニル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１５）塩酸塩の調製
【0089】
【化22】
【0090】
実施例１の方法に基づき、式１－１で示される４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）モルホリン－２－カルボン酸と２－フェニルチオカルボキサミドを反応させ、チオカルボキサミド中間体（２１７ｍｇ、収率６２％）を調製した後、さらに４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジンと反応させ、中間体（１９４ｍｇ、収率７３％）を調製し、さらに塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物１５の塩酸塩（４０ｍｇ、収率５０％）を白色固体粉末として調製する。
【0091】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．８９（ｂｒｓ，２Ｈ），７．２８（ｂｒｓ，３Ｈ），５．３７（ｓ，１Ｈ），４．１２－４．０（ｍ，２Ｈ），３．６１－２．８１（ｍ，１３Ｈ），２．５２－２．１６（ｍ，４Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１６１．６，１５２．４，１３１．０，１３０．９，１２９．８，１２７．５，６８．１，６７．３，６４．９，５４．６，５４．２，４５．８，４４．１，３１．１，３０．４．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３２８．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１６］ ２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｐ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１６）塩酸塩の調製
［実施例１６］ ２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｐ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１６）塩酸塩の調製
【0092】
【化23】
【0093】
実施例１の方法に基づき、式１－１で示される４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）モルホリン－２－カルボン酸と２－（４－メチルフェニル）チオカルボキサミドを反応させ、チオカルボキサミド中間体（１８０ｍｇ、収率６０％）を調製した後、４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジンと反応させ、中間体（１５０ｍｇ、収率７１％）を調製し、塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物１６の塩酸塩（５５ｍｇ、収率７６％）を白色固体粉末として調製する。
【0094】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ７．９３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝７．８，５．７Ｈｚ，１Ｈ），５．５０（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０８-５．０２（ｍ，１Ｈ），４．３４-４．０３（ｍ，２Ｈ），３．９０-３．５４（ｍ，５Ｈ），３．５４-３．２１（ｍ，５Ｈ），２．９６（ｓ，２Ｈ），２．７６-２．２０（ｍ，６Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１６１．８，１５２．４，１４１．３，１３０．４，１２７．４，１１４．８，６８．１，６７．１，６４．５，５５．５，５４．５，５４．４，５４．１，４５．７，４４．０，４３．９，３１．１，３０．４，２１．４．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３４２．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１７］ ２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１７）塩酸塩の調製
［実施例１７］ ２－（１－（１－メチルピペリジン－４－イル）－３－（ｍ－トリル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－イル）モルホリン（化合物１７）塩酸塩の調製
【0095】
【化24】
【0096】
実施例１の方法に基づき、式１－１で示される４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）モルホリン－２－カルボン酸と２－（３－メチルフェニル）チオカルボキサミドを反応させ、チオカルボキサミド中間体（１８５ｍｇ、収率６２％）を調製した後、さらに４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジンと反応させ、中間体（１４０ｍｇ、収率６８％）を調製し、さらに塩化水素の１，４－ジオキサン溶液でｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル保護基を脱離させ、化合物１７の塩酸塩（７０ｍｇ、収率９７％）を白色固体粉末として調製する。
【0097】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ８．０３-７．７２（ｍ，２Ｈ），７．３４-７．２４（ｍ，３Ｈ），５．４６（ｄｄ，Ｊ＝８．１，４．２Ｈｚ，１Ｈ），５．２２-４．９８（ｍ，１Ｈ），４．２７-４．１０（ｍ，２Ｈ），３．９６-３．５２（ｍ，５Ｈ），３．５２-３．３３（ｍ，４Ｈ），２．９７（ｓ，３Ｈ），２．６２-２．１８（ｍ，６Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ１６２．２，１５２．５，１３９．５，１３１．４，１２９．６，１２７．９，１２４．５，１１４．８，６８．１，６７．１，６４．４，５８．３，５４．５，５３．９，４５．６，４４．０，４３．９，３１．１，３０．４，２１．４，２０．５，１８．４．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３４２．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１８］ ４－（５－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物１８）の調製
［実施例１８］ ４－（５－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物１８）の調製
【0098】
【化25】
【0099】
ステップ１：Ｎ－（２－（４－メトキシフェニル）チオアセチル）シクロヘキシルカルボキサミド（化合物１８－２）を調製する。
【0100】
反応式は以下のとおりである。
【0101】
【化26】
【0102】
式１－２で示される２－（４－メトキシフェニル）チオアセトアミド（１．０ｍｍｏｌ、１８１ｍｇ）、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．１ｍｍｏｌ、１２ｍｇ）、ピリジン（ｐｙｒｉｄｉｎｅ、０．１５ｍｍｏｌ、１２ｍｇ）を８ｍＬの乾燥アセトニトリルに溶解させ、窒素保護下、室温水浴下で、上記系に式１８－１で示されるシクロヘキシルカルボニルクロリド（１．１ｍｍｏｌ、１６１ｍｇ）を滴下した後、室温で１日反応させた。反応液を酢酸エチル５０ｍＬで希釈した後、水２０ｍＬ、飽和塩化アンモニウム溶液で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、酢酸エチルを濃縮した後、［Ｖ（石油エーテル）：Ｖ（酢酸エチル）＝８：１－６：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、１３４ｍｇの淡黄色油状物１８－２として調製し、収率４６％で得る。
【0103】
ステップ２：４－（５－シクロヘキシル－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物１８）を調製する。
【0104】
反応式は以下のとおりである。
【0105】
【化27】
【0106】
化合物１８－２（０．４２ｍｍｏｌ、１２２ｍｇ）、式１－４で示される４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジン（０．５ｍｍｏｌ、６５ｍｇ）、酢酸ナトリウム（０．５ｍｍｏｌ、４１ｍｇ）を酢酸２ｍＬと１，４－ｄｉｏｘａｎｅ２ｍＬの混合溶媒に順次溶解した後、密栓し、８０℃に加熱しながら化合物１８－２が完全に反応するまで反応させた。反応液を酢酸エチル５０ｍＬで希釈した後、飽和炭酸ナトリウム溶液４０ｍＬ、飽和塩化ナトリウム溶液で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した後、［Ｖ（アンモニアの塩化メチレン溶液）：Ｖ（メタノール）＝２５：１－２０：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、淡黄色油状物１８を１００ｍｇ、収率６５％で得る。
【0107】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２７－７．２５（ｍ，２Ｈ），６．８２－６．８０（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．０２－３．００（ｍ，２Ｈ），２．６８－２．６３（ｍ，１Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），２．３１－２．１１（ｍ，４Ｈ），１．８６－１．６４（ｍ，９Ｈ），１．３８－１．２５（ｍ，４Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６１．５，１５９．１，１５８．１，１３０．９，１３０．０，１１３．７，５５．３，５４．９，４６．２，３５．５，３２．１，３１．９，２６．３，２５．７．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３６９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例１９］ ４－（５－（ｔｅｒｔ－ブチル）－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物１９）の調製
［実施例１９］ ４－（５－（ｔｅｒｔ－ブチル）－３－（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物１９）の調製
【0108】
【化28】
【0109】
実施例１８の方法に基づき、塩化ピバロイルと２－（４－メトキシフェニル）チオアセトアミドを反応させ、チオイミド中間体（２０ｍｇ、収率２３％）を調製した後、４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジンと反応させ、化合物１９（１０ｍｇ、収率４９％）を淡黄色油状物として調製する。
【0110】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２８（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｓ，１Ｈ），３．９４（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．００（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，２Ｈ），２．４４-２．２５（ｍ，５Ｈ），２．１８-１．９８（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，２Ｈ），１．４１（ｓ，９Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６１．３，１６０．５，１５８．１，１３０．８，１３０．１，１１３．７，５５．４，４６．３，３３．９，３２．４，３２．２，２９．６．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３４２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例２０］ ４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物２０）の調製
［実施例２０］ ４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物２０）の調製
【0111】
【化29】
【0112】
ステップ１：Ｎ－（２－（４－メトキシフェニル）チオアセチル）アセトアミド（化合物２０－１）を調製する。
【0113】
【化30】
【0114】
式１－２で示される原料２－（４－メトキシフェニル）チオアセトアミド（１．０ｍｍｏｌ，１８１ｍｇ）、４－ジメチルアミノピリジン（０．１ｍｍｏｌ，１２ｍｇ）、ピリジン（０．１５ｍｍｏｌ，１２ｍｇ）を８ｍＬの乾燥アセトニトリルに溶解し、窒素保護し、室温水浴下、上記系に塩化アセチル（１．１ｍｍｏｌ，８６ｍｇ）を滴下した後、室温で１日反応させた。反応液を酢酸エチル５０ｍＬで希釈した後、水２０ｍＬ、飽和塩化アンモニウム溶液で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、反応液を濃縮した後、［Ｖ（石油エーテル）：Ｖ（酢酸エチル）＝８：１－６：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、３８ｍｇの淡黄色油状物２０－１を収率１７％で得る。
【0115】
ステップ２：４－（３－（４－メトキシベンジル）－５－メチル－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－１－イル）－１－メチルピペリジン（化合物２０）を調製する。
【0116】
化合物２０－１（０．１６ｍｍｏｌ，３６ｍｇ）、４－ヒドラジノ－１－メチルピペリジン（０．１９ｍｍｏｌ，２５ｍｇ）、酢酸ナトリウム（０．２ｍｍｏｌ，１６ｍｇ）を酢酸１ｍＬと１，４－ジオキサン１ｍＬの混合溶媒に順次溶解した後、密栓し、次いで、８０℃で化合物２０－１が反応完了するまで加熱しながら反応させた。反応液を酢酸エチル２０ｍＬで希釈した後、飽和炭酸ナトリウム溶液２０ｍＬ、飽和塩化ナトリウム溶液で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、反応液を濃縮した後、［Ｖ（アンモニアの塩化メチレン溶液）：Ｖ（メタノール）＝２５：１－２０：１］をカラムクロマトグラフィーで分離し、１６ｍｇの淡黄色油状物２０を収率３３％で得る。
【0117】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．０３-３．８８（ｍ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，２Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｍ，３Ｈ），２．３１-２．１１（ｍ，４Ｈ），１．９１（ｓ，２Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６１．８，１５８．２，１５１．４，１３０．７，１２９．９，１１３．９，５５．４，５４．７，４６．１，３４．０，３１．６，２９．８，１２．３．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３０１．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実施例２１］ ５－シクロヘキシル－１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール（化合物２１）の調製
［実施例２１］ ５－シクロヘキシル－１，３－ビス（４－メトキシベンジル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール（化合物２１）の調製
【0118】
【化31】
【0119】
実施例１８の方法に基づき、化合物１８－２と（４－メトキシベンジル）ヒドラジン塩酸塩を反応させ、化合物２１（２５ｍｇ，収率４５％）を淡黄色油状物として得る。
【0120】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．８４（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，８．６Ｈｚ，４Ｈ），５．１９（ｓ，２Ｈ），４．００（ｓ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），２．６３（ｔｄ，Ｊ＝１１．０，５．６Ｈｚ，１Ｈ），１．８０－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．７３-１．５７（ｍ，５Ｈ），１．３４-１．２３（ｍ，４Ｈ）．１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６２．１，１６０．２，１５９．４，１５８．２，１３０．７，１２９．９，１２８．４，１２８．３，１１４．３，１１４．２，１１３．９，５５．４，５５．３，５１．２，３５．７，３３．９，３１．５，２６．２，２５．６．ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ３９２．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
［実験例１］ ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤インビトロにおけるリジンメチルトランスフェラーゼＳＥＴ８の活性阻害
［実験例１］ ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤インビトロにおけるリジンメチルトランスフェラーゼＳＥＴ８の活性阻害
【0121】
活性の検出のステップは、Ｃａｙｍａｎ社ＳＥＴ８メチルトランスフェラーゼ阻害剤スクリーニングキット操作に完全に従った。簡単に説明すると、下記表に従って、キット中の試薬を９６ウェルプレートに加えて試験する。
【0122】
【表1】
【0123】
その後、ＳＥＴ８タンパク質をウェル当たり１０μＬ添加し、反応を開始した。３７℃で１０分間インキュベートした後、蛍光強度（Ａ）の値を励起波長５３５ｎｍ及び吸収波長５９０ｎｍで測定した。阻害率％＝（Ａ正常－Ａ試料）／）正常＊１００％として、下記式より化合物の阻害率を算出し、各阻害剤によるリジンメチルトランスフェラーゼの阻害率を表１に示す。
【0124】
【表2】
【0125】
結果により、本発明にて提供されるＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤が、リジンメチルトランスフェラーゼＳＥＴ８に対して有意な阻害効果を有することを示す。
［実験例２］ ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤の抗腫瘍活性試験
［実験例２］ ＳＥＴ８リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤の抗腫瘍活性試験
【0126】
１、実験方法：グリオーマ細胞株ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、結腸直腸癌細胞株ＳＷ４８０、肝癌細胞株ＨｅｐＧ２を、それぞれ１０％牛血清含有のＲＰＭＩ－１６４０培地を用いて、３７℃、５％のＣＯ２インキュベーター中で培養した。ＣＣＫ－９法による細胞増殖阻害試験は、主に対数増殖期の腫瘍細胞株を採取し、０．２５％のトリプシンで消化し、１０％の新仔牛血清のＲＰＭＩ－１６４０培養液で６×１０４個／ｍＬの細胞懸濁液を調製し、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬを播種する操作で行った。３７℃、５％のＣＯ２飽和湿度条件下で１２ｈ培養した。壁付け後、ウェル内の培養上清を吸引し、１％子牛の血清含有のＲＰＭＩ－１６４０培地を用いて調製した試料液を、最終濃度がそれぞれ１００μＭ、３０μＭ、１０μＭ、３μＭ、１μＭ、０．３μＭとなるように各ウェルに加えた。各濃度について３ウェル分をパラレルに添加し、４８ｈ培養を続けた後、ＣＣＫ－８溶液（大連美倫、ＭＡ０２１８）１０μＬを各ウェルに添加し、３７℃、５％のＣＯ２条件下で４ｈインキュベートを続けた。酵素免疫測定装置に４７０ｎｍを選び、各ウェルの吸光値を測定するとともに、ブランク群（細胞を含む培養液のみを加えたもの）と対照群（培養液を薬物に置き換えたもの）をセットし、細胞増殖阻害率を算出した。阻害率（％）＝（１－実験群３ウェルＯＤ値平均値／対照群３ウェルＯＤ値平均値）×１００％。阻害率を縦軸に回帰曲線としてサンプルＩＣ５０値を算出した。Ｇｒａｐｈｐａｄｐｒｉｓｍ７．０ソフトウェアでデータ処理及び統計解析を行う。
【0127】
２、抗腫瘍活性試験結果
選択した神経膠腫細胞株ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、結腸直腸癌細胞株ＳＷ４８０、又は肝癌細胞株ＨｅｐＧ２のＩＣ５０と１００μＭ時のＩＣ％に対する各阻害剤の結果を表２に示す。
選択した神経膠腫細胞株ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、結腸直腸癌細胞株ＳＷ４８０、又は肝癌細胞株ＨｅｐＧ２のＩＣ５０と１００μＭ時のＩＣ％に対する各阻害剤の結果を表２に示す。
【0128】
【表3】
【0129】
「－」は未検出を示す。
【0130】
表から明らかなように、各化合物は神経膠腫細胞株ＳＨ－ＳＹ５Ｙに対して良好な腫瘍細胞増殖阻害活性を示し、化合物２、３及び化合物２０は結腸直腸癌細胞株ＳＷ４８０又は肝癌細胞株ＨｅｐＧ２に対して良好な腫瘍細胞増殖阻害活性を示した。
【国際調査報告】