▶ ベーリンガー・インゲルハイム・イオ・カナダ・インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-09
(54)【発明の名称】ＦＬＴ３アゴニスト抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220202BHJP
C07K 16/40 20060101ALI20220202BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20220202BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20220202BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20220202BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20220202BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20220202BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220202BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220202BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220202BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20220202BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/40 ZNA
C07K16/46
C07K16/28
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K39/395 P
A61K39/395 D
A61P35/00
A61K47/68
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021534690
(86)(22)【出願日】2019-12-17
(85)【翻訳文提出日】2021-08-16
(86)【国際出願番号】 IB2019001437
(87)【国際公開番号】W WO2020128638
(87)【国際公開日】2020-06-25
(31)【優先権主張番号】62/781,213
(32)【優先日】2018-12-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】521258005
【氏名又は名称】ベーリンガー・インゲルハイム・イオ・カナダ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＢＯＥＨＲＩＮＧＥＲ ＩＮＧＥＬＨＥＩＭ ＩＯ ＣＡＮＡＤＡ ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】110001508
【氏名又は名称】特許業務法人 津国
(72)【発明者】
【氏名】ジェサ，アリフ
(72)【発明者】
【氏名】ゴベイル，フィル
(72)【発明者】
【氏名】バイルシュミット，メリッサ
(72)【発明者】
【氏名】マエツェル，ドロテア
(72)【発明者】
【氏名】フランソン，ヨハン
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C076AA95
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE59
4C085AA13
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB11
4C085DD62
4C085GG01
4C085GG02
4C085GG04
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045FA74
(57)【要約】
本明細書には、抗ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体が記載されている。このようなアゴニスト作用抗体は、樹状細胞の増幅及びがんの処置に有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に結合する、組換え抗体又はその抗原結合断片であって、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ａ）配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号６～１０（RASEGIHXGLA）のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１０（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１１（QQYYDYPLT）のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）
を含み、ここでのＸは任意のアミノ酸残基である、該組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項2】
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に結合する、組換え抗体又はその抗原結合断片であって、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ａ）配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；
ｂ）配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；
ｃ）配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）；
ｄ）配列番号６～１０（RASEGIHXGLA）のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；
ｅ）配列番号１０（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；及び
ｆ）配列番号１１（QQYYDYPLT）のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）
のいずれか１個、２個、３個、４個、又は５個を含み、ここでのＸは任意のアミノ酸残基である、該組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項3】
ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号７（RASEGIHDGLA)；配列番号８（RASEGIHSGLA）；配列番号９（RASEGIHTGLA）；及び配列番号１０（RASEGIHLGLA）からなるリストから選択されたアミノ酸配列を含む、請求項１又は請求項２の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項4】
ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号８（RASEGIHSGLA）に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１又は請求項２の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項5】
ａ）配列番号１５、１７、１９、２１、及び２３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及びｂ）配列番号１６、１８、２０、２２、２４、２５、２６、２７及び２８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列
を含む、請求項１～４のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項6】
ａ）免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）が、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及びｂ）免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、請求項５の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項7】
ａ）免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）が、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及びｂ）免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、請求項５の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項8】
ａ）配列番号１５、１７、１９、２１、及び２３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及びｂ）配列番号１６、１８、２０、２２、２４、２６、２７及び２８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列
を含む、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に特異的に結合する組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項9】
ａ）免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）が、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及びｂ）免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、請求項８の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項10】
ａ）免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）が、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及びｂ）免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、請求項８の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項11】
前記組換え抗体又はその抗原結合断片が、キメラであるか又はヒト化されている、請求項１～１０のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項12】
前記組換え抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧ抗体である、請求項１～１１のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項13】
前記組換え抗体又はその抗原結合断片が、該組換え抗体又はその抗原結合断片の１つ以上のエフェクター機能を減少させるための１つ以上の突然変異を含む、請求項１～１２のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項14】
前記組換え抗体又はその抗原結合断片の重鎖定常領域が、ＥＵ番号付け体系による、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５０Ｆ、Ｍ４２８Ｌ、Ｍ４２８Ｆ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ、Ｖ３０８Ｗ、Ｖ３０８Ｙ、Ｖ３０８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ／Ｍ４２８Ｌ、Ｄ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｖ３０８Ｆ、Ｑ３１１Ｖ／Ｎ４３４Ｓ、Ｔ３０７Ｑ／Ｎ４３４Ａ、Ｅ２５８Ｆ／Ｖ４２７Ｔ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｒ４０９Ｋ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３７０Ｅ、Ｇ４４６の欠失、Ｋ４４７の欠失、及びＩｇＧ４の修飾の任意のその組合せから選択された、以上のいずれかのアミノ酸修飾又は修飾のセットを含む、ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、請求項１～１３のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項15】
前記組換え抗体又はその抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、又は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１～１４のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項16】
前記組換え抗体又はその抗原結合断片が、ヒト末梢血単核細胞及び／又は骨髄由来細胞と接触すると、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量を増加させる、請求項１～１５のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項17】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量の増加についてのＥＣ５０が、約２００ピコモル（pM）より低い、請求項１６の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項18】
前記組換え抗体又はその抗原結合断片が、ＦＬＴ３を発現している細胞において、ＳＴＡＴ５発現を増加させる、請求項１～１７のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項19】
ＦＬＴ３を発現している細胞におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０が、ヒトＦＬＴ３リガンドによって誘導されたＦＬＴ３を発現している細胞におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０と等しいか又はそれより低い、請求項１８の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項20】
免疫調節部分を含む、請求項１～１９の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項21】
免疫調節部分が、インターフェロン遺伝子刺激タンパク質（ＳＴＩＮＧ）アゴニストである、請求項２０の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項22】
請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを含む、医薬組成物。
【請求項23】
静脈内投与用に製剤化された、請求項２２の医薬組成物。
【請求項24】
皮下投与用に製剤化された、請求項２２の医薬組成物。
【請求項25】
腫瘍内投与用に製剤化された、請求項２２の医薬組成物。
【請求項26】
がんの処置に使用するための、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物。
【請求項27】
がんが、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む、請求項２６の組換え抗体又はその抗原結合断片。
【請求項28】
請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物を、がんを患う個体に投与する工程を含む、がんに罹患した個体におけるがんを処置する方法。
【請求項29】
がんが、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む、請求項２８の方法。
【請求項30】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させるのに使用するための、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物。
【請求項31】
請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物を個体に投与する工程を含む、個体における樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる方法。
【請求項32】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞が、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む、請求項３１の方法。
【請求項33】
請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物の有効量を、腫瘍またはがんを患う個体に投与する工程を含む、腫瘍またはがんを患う個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員又は増幅する方法。
【請求項34】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞が、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む、請求項３３の方法。
【請求項35】
請求項１～１９のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸。
【請求項36】
請求項３５の核酸を含む細胞。
【請求項37】
前記細胞が真核細胞である、請求項３６の細胞。
【請求項38】
前記細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項３７の細胞。
【請求項39】
請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片を培養培地に分泌するのに十分な条件下で、培養培地中で請求項３６～３８のいずれか一項の細胞をインキュベートする工程を含む、がん処置を行なう方法。
【請求項40】
培養培地を少なくとも１回の精製工程にかける工程をさらに含む、請求項３９の方法。
【請求項41】
請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを混合する工程を含む、がん処置を行なう方法。
【請求項42】
がん処置法における、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物の使用。
【請求項43】
がんが、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む、請求項４２の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の使用。
【請求項44】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化における、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物の使用。
【請求項45】
個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化における、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物の使用。
【請求項46】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞が、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む、請求項４４又は４５の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の使用。
【請求項47】
個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する際の、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物の使用。
【請求項48】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞が、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む、請求項４７の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の使用。
【請求項49】
がんの処置のための医薬品の製造における、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体又はその抗原結合断片、及び薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤の使用。
【請求項50】
がんが、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む、請求項４９の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の使用。
【請求項51】
がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体を処置するための医薬品の製造における、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物の使用。
【請求項52】
がんが、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む、請求項５１の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の使用。
【請求項53】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物の使用。
【請求項54】
がんに罹患した個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物の使用。
【請求項55】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞が、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む、請求項５４の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の使用。
【請求項56】
がんを患う個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員するための医薬品の製造における、請求項１～２１のいずれか一項の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項２２～２５のいずれか一項の医薬組成物の使用。
【請求項57】
樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞が、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む、請求項５６の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
相互参照
本出願は、２０１８年１２月１８日に出願された米国仮特許出願番号第６２／７８１，２１３号の恩典を主張し、それらは全て、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
本出願は、２０１８年１２月１８日に出願された米国仮特許出願番号第６２／７８１，２１３号の恩典を主張し、それらは全て、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【0002】
背景
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、ＣＤ１３５としても知られているが、これは造血幹細胞、成熟樹状細胞（ＤＣ）、及び樹状前駆細胞上に発現されるクラスＩＩＩチロシンキナーゼ受容体である。そのリガンドであるＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）を介したＦＬＴ３のシグナル伝達により、これらの細胞の増幅及び分化が起こる。この受容体の突然変異は、リガンドによるシグナル伝達から細胞増殖を脱共役させ、これは、病的新生物、特に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に関連している。逆に、外来の可溶性ＦＬＴ３Ｌによる処置を介したＦＬＴ３のアゴニスト作用が、現在、固形腫瘍療法について診療所で調査中であり、ここでのその樹状細胞増幅特性は、ペプチドワクチン接種療法のためのアジュバントとして、並びにがん免疫療法及び放射線療法と組み合わせた抗腫瘍免疫応答をブーストするように働く。しかしながら、ＦＬＴ３Ｌ療法は、薬物動態の利用可能性が限定されていること、及び複雑な投薬必要条件に苦しむ。
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、ＣＤ１３５としても知られているが、これは造血幹細胞、成熟樹状細胞（ＤＣ）、及び樹状前駆細胞上に発現されるクラスＩＩＩチロシンキナーゼ受容体である。そのリガンドであるＦＬＴ３リガンド（ＦＬＴ３Ｌ）を介したＦＬＴ３のシグナル伝達により、これらの細胞の増幅及び分化が起こる。この受容体の突然変異は、リガンドによるシグナル伝達から細胞増殖を脱共役させ、これは、病的新生物、特に急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に関連している。逆に、外来の可溶性ＦＬＴ３Ｌによる処置を介したＦＬＴ３のアゴニスト作用が、現在、固形腫瘍療法について診療所で調査中であり、ここでのその樹状細胞増幅特性は、ペプチドワクチン接種療法のためのアジュバントとして、並びにがん免疫療法及び放射線療法と組み合わせた抗腫瘍免疫応答をブーストするように働く。しかしながら、ＦＬＴ３Ｌ療法は、薬物動態の利用可能性が限定されていること、及び複雑な投薬必要条件に苦しむ。
【0003】
要約
本明細書において、樹状細胞及びその前駆細胞の増幅及び分化を誘導し、リガンドの制限されたバイオアベイラビリティを克服しつつ、腫瘍による抗原提示を改善する、ＦＬＴ３アゴニスト抗体の開発が記載されている。これらの抗体は、がんの処置法において有用である。
本明細書において、樹状細胞及びその前駆細胞の増幅及び分化を誘導し、リガンドの制限されたバイオアベイラビリティを克服しつつ、腫瘍による抗原提示を改善する、ＦＬＴ３アゴニスト抗体の開発が記載されている。これらの抗体は、がんの処置法において有用である。
【0004】
本明細書に記載の態様は、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に結合する組換え抗体又はその抗原結合断片を含み、ここでの組換え抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）；配列番号６～１０（RASEGIHXGLA）のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；配列番号１０（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；及び配列番号１１（QQYYDYPLT）のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）を含み、ここでのＸは任意のアミノ酸残基である。いくつかの実施態様では、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号７（RASEGIHDGLA)；配列番号８（RASEGIHSGLA）；配列番号９（RASEGIHTGLA）；及び配列番号１０（RASEGIHLGLA）からなるリストから選択されたアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号８（RASEGIHSGLA）に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１５、１７、１９、２１、及び２３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；並びに配列番号１６、１８、２０、２２、２４、２５、２６、２７及び２８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。いくつかの実施態様では、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及び免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、キメラであるか又はヒト化されている。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ抗体である。
いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、該組換え抗体又はその抗原結合断片の１つ以上のエフェクター機能を減少させるための１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片の重鎖定常領域は、ＥＵ番号付け体系による、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５０Ｆ、Ｍ４２８Ｌ、Ｍ４２８Ｆ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ、Ｖ３０８Ｗ、Ｖ３０８Ｙ、Ｖ３０８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ／Ｍ４２８Ｌ、Ｄ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｖ３０８Ｆ、Ｑ３１１Ｖ／Ｎ４３４Ｓ、Ｔ３０７Ｑ／Ｎ４３４Ａ、Ｅ２５８Ｆ／Ｖ４２７Ｔ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｒ４０９Ｋ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３７０Ｅ、Ｇ４４６の欠失、Ｋ４４７の欠失、及びＩｇＧ４の修飾の任意のその組合せから選択された、以上のいずれかのアミノ酸修飾又は修飾のセットを含む、ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、又は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ヒト末梢血単核細胞及び／又は骨髄由来細胞と接触すると、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量を増加させる。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量の増加についてのＥＣ５０は、約２００ピコモル（pM）より低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ＦＬＴ３を発現している細胞株において、ＳＴＡＴ５発現を増加させる。いくつかの実施態様では、ＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０は、ヒトＦＬＴ３リガンドによって誘導されたＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０と等しいか又はそれより低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、免疫調節部分を含む。いくつかの実施態様では、該免疫調節部分は、インターフェロン遺伝子刺激タンパク質（ＳＴＩＮＧ）アゴニストである。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを含む、医薬組成物が記載されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、皮下投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、腫瘍内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体におけるがんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させるのに使用するためのものである。
いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、個体における樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片又は本明細書に記載の医薬組成物の有効量を、腫瘍またはがんを患う個体に投与する工程を含む、腫瘍またはがんを患う個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員及び／又は増幅する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の核酸を含む細胞が記載されている。いくつかの実施態様では、該細胞は真核細胞である。いくつかの実施態様では、該細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片を培養培地に分泌するのに十分な条件下で、培養培地中で本明細書に記載の細胞をインキュベートする工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、がん処置を行なう方法は、培養培地を少なくとも１回の精製工程にかける工程をさらに含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを混合する工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がん処置を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片、及び薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。
いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、該組換え抗体又はその抗原結合断片の１つ以上のエフェクター機能を減少させるための１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片の重鎖定常領域は、ＥＵ番号付け体系による、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５０Ｆ、Ｍ４２８Ｌ、Ｍ４２８Ｆ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ、Ｖ３０８Ｗ、Ｖ３０８Ｙ、Ｖ３０８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ／Ｍ４２８Ｌ、Ｄ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｖ３０８Ｆ、Ｑ３１１Ｖ／Ｎ４３４Ｓ、Ｔ３０７Ｑ／Ｎ４３４Ａ、Ｅ２５８Ｆ／Ｖ４２７Ｔ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｒ４０９Ｋ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３７０Ｅ、Ｇ４４６の欠失、Ｋ４４７の欠失、及びＩｇＧ４の修飾の任意のその組合せから選択された、以上のいずれかのアミノ酸修飾又は修飾のセットを含む、ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、又は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ヒト末梢血単核細胞及び／又は骨髄由来細胞と接触すると、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量を増加させる。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量の増加についてのＥＣ５０は、約２００ピコモル（pM）より低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ＦＬＴ３を発現している細胞株において、ＳＴＡＴ５発現を増加させる。いくつかの実施態様では、ＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０は、ヒトＦＬＴ３リガンドによって誘導されたＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０と等しいか又はそれより低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、免疫調節部分を含む。いくつかの実施態様では、該免疫調節部分は、インターフェロン遺伝子刺激タンパク質（ＳＴＩＮＧ）アゴニストである。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを含む、医薬組成物が記載されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、皮下投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、腫瘍内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体におけるがんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させるのに使用するためのものである。
いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、個体における樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片又は本明細書に記載の医薬組成物の有効量を、腫瘍またはがんを患う個体に投与する工程を含む、腫瘍またはがんを患う個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員及び／又は増幅する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の核酸を含む細胞が記載されている。いくつかの実施態様では、該細胞は真核細胞である。いくつかの実施態様では、該細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片を培養培地に分泌するのに十分な条件下で、培養培地中で本明細書に記載の細胞をインキュベートする工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、がん処置を行なう方法は、培養培地を少なくとも１回の精製工程にかける工程をさらに含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを混合する工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がん処置を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片、及び薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。
【0005】
本明細書に記載の別の態様は、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に結合する、組換え抗体又はその抗原結合断片を含み、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）；配列番号６～１０（RASEGIHXGLA）のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；配列番号１０（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；又は配列番号１１（QQYYDYPLT）のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）のいずれか１つを含み、ここでのＸは任意のアミノ酸残基である。いくつかの実施態様では、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号７（RASEGIHDGLA)；配列番号８（RASEGIHSGLA）；配列番号９（RASEGIHTGLA）；及び配列番号１０（RASEGIHLGLA）からなるリストから選択されたアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号８（RASEGIHSGLA）に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１５、１７、１９、２１、及び２３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；並びに、配列番号１６、１８、２０、２２、２４、２５、２６、２７及び２８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。いくつかの実施態様では、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及び、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及び、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、キメラであるか又はヒト化されている。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、該組換え抗体又はその抗原結合断片の１つ以上のエフェクター機能を減少させるための１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片の重鎖定常領域は、ＥＵ番号付け体系による、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５０Ｆ、Ｍ４２８Ｌ、Ｍ４２８Ｆ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ、Ｖ３０８Ｗ、Ｖ３０８Ｙ、Ｖ３０８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ／Ｍ４２８Ｌ、Ｄ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｖ３０８Ｆ、Ｑ３１１Ｖ／Ｎ４３４Ｓ、Ｔ３０７Ｑ／Ｎ４３４Ａ、Ｅ２５８Ｆ／Ｖ４２７Ｔ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｒ４０９Ｋ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３７０Ｅ、Ｇ４４６の欠失、Ｋ４４７の欠失、及びＩｇＧ４の修飾の任意のその組合せから選択された、以上のいずれかのアミノ酸修飾又は修飾のセットを含む、ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、又は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ヒト末梢血単核細胞及び／又は骨髄由来細胞と接触すると、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量を増加させる。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量の増加についてのＥＣ５０は、約２００ピコモル（pM）より低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ＦＬＴ３を発現している細胞株において、ＳＴＡＴ５発現を増加させる。いくつかの実施態様では、ＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０は、ヒトＦＬＴ３リガンドによって誘導されたＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０より低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は免疫調節部分を含む。いくつかの実施態様では、該免疫調節部分は、インターフェロン遺伝子刺激タンパク質（ＳＴＩＮＧ）アゴニストである。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを含む、医薬組成物が記載されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、皮下投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、腫瘍内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体におけるがんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させるのに使用するためのものである。
いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、個体における樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片又は本明細書に記載の医薬組成物の有効量を、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に投与する工程を含む、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、個体に投与される場合、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の核酸を含む細胞が記載されている。いくつかの実施態様では、該細胞は真核細胞である。いくつかの実施態様では、該細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片を培養培地に分泌するのに十分な条件下で、培養培地中で本明細書に記載の細胞をインキュベートする工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、がん処置を行なう方法は、培養培地を少なくとも１回の精製工程にかける工程をさらに含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを混合する工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がん処置を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片、及び薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。
いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、個体における樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片又は本明細書に記載の医薬組成物の有効量を、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に投与する工程を含む、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、個体に投与される場合、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の核酸を含む細胞が記載されている。いくつかの実施態様では、該細胞は真核細胞である。いくつかの実施態様では、該細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片を培養培地に分泌するのに十分な条件下で、培養培地中で本明細書に記載の細胞をインキュベートする工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、がん処置を行なう方法は、培養培地を少なくとも１回の精製工程にかける工程をさらに含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを混合する工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がん処置を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片、及び薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。
【0006】
本明細書に記載の別の態様は、配列番号１５、１７、１９、２１、及び２３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；並びに、配列番号１６、１８、２０、２２、２４、２６、２７及び２８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に特異的に結合する組換え抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施態様では、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及び、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含み；及び、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％同一であるか、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、キメラであるか又はヒト化されている。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、該組換え抗体又はその抗原結合断片の１つ以上のエフェクター機能を減少させるための１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片の重鎖定常領域は、ＥＵ番号付け体系による、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５０Ｆ、Ｍ４２８Ｌ、Ｍ４２８Ｆ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ、Ｖ３０８Ｗ、Ｖ３０８Ｙ、Ｖ３０８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ／Ｍ４２８Ｌ、Ｄ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｖ３０８Ｆ、Ｑ３１１Ｖ／Ｎ４３４Ｓ、Ｔ３０７Ｑ／Ｎ４３４Ａ、Ｅ２５８Ｆ／Ｖ４２７Ｔ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｒ４０９Ｋ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３７０Ｅ、Ｇ４４６の欠失、Ｋ４４７の欠失、及びＩｇＧ４の修飾の任意のその組合せから選択された、以上のいずれかのアミノ酸修飾又は修飾のセットを含む、ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、又は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ヒト末梢血単核細胞及び／又は骨髄由来細胞と接触すると、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量を増加させる。
いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量の増加についてのＥＣ５０は、約２００ピコモル（pM）より低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ＦＬＴ３を発現している細胞株において、ＳＴＡＴ５発現を増加させる。いくつかの実施態様では、ＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０は、ヒトＦＬＴ３リガンドによって誘導されたＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０より低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は免疫調節部分を含む。いくつかの実施態様では、該免疫調節部分は、インターフェロン遺伝子刺激タンパク質（ＳＴＩＮＧ）アゴニストである。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを含む、医薬組成物が記載されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、皮下投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、腫瘍内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体におけるがんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させるのに使用するためのものである。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、個体における樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片又は本明細書に記載の医薬組成物の有効量を、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に投与する工程を含む、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、個体に投与される場合、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の核酸を含む細胞が記載されている。いくつかの実施態様では、該細胞は真核細胞である。いくつかの実施態様では、該細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片を培養培地に分泌するのに十分な条件下で、培養培地中で本明細書に記載の細胞をインキュベートする工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、がん処置を行なう方法は、培養培地を少なくとも１回の精製工程にかける工程をさらに含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを混合する工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。
いくつかの実施態様では、本明細書には、がん処置を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片、及び薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。
いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量の増加についてのＥＣ５０は、約２００ピコモル（pM）より低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は、ＦＬＴ３を発現している細胞株において、ＳＴＡＴ５発現を増加させる。いくつかの実施態様では、ＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０は、ヒトＦＬＴ３リガンドによって誘導されたＦＬＴ３を発現している細胞株におけるＳＴＡＴ５発現の増加についてのＥＣ５０より低い。いくつかの実施態様では、該組換え抗体又はその抗原結合断片は免疫調節部分を含む。いくつかの実施態様では、該免疫調節部分は、インターフェロン遺伝子刺激タンパク質（ＳＴＩＮＧ）アゴニストである。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを含む、医薬組成物が記載されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、皮下投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、該医薬組成物は、腫瘍内投与用に製剤化されている。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体におけるがんの処置に使用するためのものである。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物は、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させるのに使用するためのものである。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、個体における樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片又は本明細書に記載の医薬組成物の有効量を、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体に投与する工程を含む、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する方法が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、個体に投与される場合、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の核酸を含む細胞が記載されている。いくつかの実施態様では、該細胞は真核細胞である。いくつかの実施態様では、該細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片を培養培地に分泌するのに十分な条件下で、培養培地中で本明細書に記載の細胞をインキュベートする工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、がん処置を行なう方法は、培養培地を少なくとも１回の精製工程にかける工程をさらに含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片と薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤とを混合する工程を含む、がん処置を行なう方法が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、がんの処置における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団を増幅又は分化させる際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員する際の、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。
いくつかの実施態様では、本明細書には、がん処置を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体又はその抗原結合断片、及び薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんの処置のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、がんは、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体における、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の集団の増幅又は分化のための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。いくつかの実施態様では、本明細書には、がんと診断されたか又はがんに罹患していることが疑われる個体の腫瘍微小環境に、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を動員するための医薬品の製造における、本明細書に記載の組換え抗体若しくはその抗原結合断片、又は本明細書に記載の医薬組成物の使用が記載されている。いくつかの実施態様では、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞は、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを含む。
【図面の簡単な説明】
【0007】
本明細書に記載の新規特色は、添付の請求項に特に示されている。本明細書に記載の特色及び特色の利点のより良い理解は、例示的な実施例（本明細書に記載の特色の原理が利用されている）を示す以下の詳細な説明、及び添付の図面を参照することによって得られるであろう。
【図1】図１は、１回量のＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼリポーターアッセイにおけるＦＬＴ３抗体の活性を示す。数値は、５００ng/mlで試験されたＦＬＴ３Ｌ（灰色の棒グラフ）に標準化されている。一番上のクローン（＊によって示される６Ｂ２）は、さらなるスクリーニングに進めた。
【0008】
詳細な説明
以下の説明において、様々な実施態様の完全な理解を提供するために、ある具体的な詳細が示されている。しかしながら、当業者は、提供された実施例が、これらの詳細を用いることなく実践され得ることを理解するだろう。内容からそうではない必要がない限り、明細書及びそれに続く請求項を通して、「含む（comprise）」という単語及びその変化形、例えば「含む（comprises）」及び「含んでいる」は、制限のない包括的な意味で、すなわち、「を含むがこれらに限定されない」として解釈されるものである。本明細書及び添付の請求項に使用されているような単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（an）」及び「その（the）」は、内容から明らかにそうではないことが示されない限り、複数の対象物を含む。また、「又は」という用語は一般的に、内容から明らかにそうではないことが示されない限り、「及び／又は」を含むその意味で使用されることが注記されるべきである。さらに、本明細書に提供される見出しは、単に便宜のためであって、請求されている実施態様の範囲又は意味を解釈するものではない。
以下の説明において、様々な実施態様の完全な理解を提供するために、ある具体的な詳細が示されている。しかしながら、当業者は、提供された実施例が、これらの詳細を用いることなく実践され得ることを理解するだろう。内容からそうではない必要がない限り、明細書及びそれに続く請求項を通して、「含む（comprise）」という単語及びその変化形、例えば「含む（comprises）」及び「含んでいる」は、制限のない包括的な意味で、すなわち、「を含むがこれらに限定されない」として解釈されるものである。本明細書及び添付の請求項に使用されているような単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（an）」及び「その（the）」は、内容から明らかにそうではないことが示されない限り、複数の対象物を含む。また、「又は」という用語は一般的に、内容から明らかにそうではないことが示されない限り、「及び／又は」を含むその意味で使用されることが注記されるべきである。さらに、本明細書に提供される見出しは、単に便宜のためであって、請求されている実施態様の範囲又は意味を解釈するものではない。
【0009】
本明細書において使用する「約」という用語は、記載されている量に１０％以下だけ近い、量を指す。
【0010】
本明細書において使用する「個体」、「患者」又は「被験者」という用語は、記載の組成物及び方法が処置に有用である、少なくとも１つの疾患と診断されたか、罹患していると疑われるか、又は発症するリスクがある、個体を指す。特定の実施態様では、個体は哺乳動物である。特定の実施態様では、哺乳動物は、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ラマ、アルパカ、又はヤクである。特定の実施態様では、個体はヒトである。
【0011】
本明細書において使用される場合の「特異的結合」又は「結合」という用語は、言及されている抗体若しくは断片のＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基、又は言及されている抗体若しくは断片の１つ以上の可変領域アミノ酸残基によって媒介される、結合を指す。特異的な標的への抗体の結合又は結合していることに関連した、本明細書において使用する「接触する」又は「接触」という用語は、列挙されている接触している残基の５Å、４Å、３Å、又はそれ以下の範囲内にある可変領域又はＣＤＲのアミノ酸残基を指す。接触には、水素結合、ファンデルワールス相互作用、及び抗体の可変領域又はＣＤＲのアミノ酸残基と列挙された残基との間の塩橋形成を含む。
【0012】
提供された抗体の中には、モノクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体及び多重反応性抗体）、及び抗体断片がある。該抗体は、抗体コンジュゲート、及び抗体を含む分子、例えばキメラ分子を含む。したがって、抗体は、完全長抗体及び天然抗体、並びに、その結合特異性を保持したその断片及び部分、例えば、任意の数の免疫グロブリンクラス及び／又はアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ）；並びに、その生物学的に関連した（抗原結合性）断片又は特異的結合部分（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ（一本鎖又は関連した実体）を含むがこれらに限定されない）を含む、その任意の特異的な結合部分を含むがこれらに限定されない。モノクロ―ナル抗体は一般的に、実質的に均一な抗体の組成物内にある抗体であり；したがって、モノクロ―ナル抗体組成物内に含まれる任意の個々の抗体は、少量存在する可能性のある天然に存在する可能性のある突然変異を除いて同一である。モノクロ―ナル抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み得る。モノクロ―ナル抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含み得る。
【0013】
本明細書における「抗体」という用語は、最も広義な意味で使用され、これには、ポリクローナル抗体及びモノクロ―ナル抗体、例えばインタクトな抗体及びその機能的な（抗原結合性の）抗体断片、例えば抗原結合性断片（Ｆａｂ）の断片、Ｆ（ａｂ'）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、一本鎖抗体断片、例えば一本鎖可変断片（ｓＦｖ又はｓｃＦｖ）、及び単一ドメイン抗体（例えばｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）断片が含まれる。該用語は、遺伝子工学操作された及び／又は他の方法で修飾された形態の免疫グロブリン、例えば細胞内抗体、ペプチド抗体、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、及びヘテロコンジュゲート抗体、多重特異的抗体、例えば二重特異的抗体、ディアボディーズ、トリアボディーズ、及びテトラボディーズ、直列型ジ－ｓｃＦｖ、直列型トリ－ｓｃＦｖを包含する。特記されない限り、「抗体」という用語は、その機能的抗体断片を包含すると理解されるべきである。該用語はまた、インタクトな抗体又は完全長抗体、例えば、任意のクラス又はサブクラスの抗体、例えばＩｇＧ及びそのサブクラスであるＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＤも包含する。該抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み得る。該抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含み得る。
【0014】
「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」という用語は、「超可変領域」すなわち「ＨＶＲ」と同義語であるが、これは、抗原特異性及び／又は結合親和性を付与する、抗体可変領域内の非連続的なアミノ酸配列を指すことが当技術分野において公知である。一般的には、各々の重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）が存在し、各々の軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）が存在する。「フレームワーク領域」及び「ＦＲ」は、重鎖及び軽鎖の可変領域のＣＤＲではない部分を指すことが当技術分野において公知である。一般的には、各々の完全長重鎖可変領域には４つのＦＲ（ＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、及びＦＲ－Ｈ４）が存在し、各々の完全長軽鎖可変領域には４つのＦＲ（ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、及びＦＲ－Ｌ４）が存在する。所与のＣＤＲ又はＦＲの正確なアミノ酸配列の境界は、Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (“Kabat” numbering scheme), Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (“Chothia” numbering scheme); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745.” (“Contact” numbering scheme); Lefranc MP et al.,“IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (“IMGT” numbering scheme); Honegger A and Pluckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, (“Aho” numbering scheme); and Whitelegg NR and Rees AR, “WAM: an improved algorithm for modelling antibodies on the WEB,” Protein Eng. 2000 Dec;13(12):819-24（“AbM” numbering scheme）によって記載のスキームを含む、多くの周知のスキームのいずれかを使用して容易に決定され得る。
【0015】
所与のＣＤＲ又はＦＲの境界は、同定のために使用されるスキームに応じて変化し得る。例えば、Ｋａｂａｔスキームは構造的アラインメントに基づき、一方、Ｃｈｏｔｈｉａスキームは構造的情報に基づく。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方のスキームの番号付けは、最も一般的な抗体領域の配列長に基づき、これは挿入文字、例えば「３０ａ」によって収容される挿入、及びいくつかの抗体内に出現する欠失を伴う。２つのスキームは異なる位置に特定の挿入及び欠失（「挿入欠失」）を配置し、その結果、異なる番号付けとなる。Ｃｏｎｔａｃｔスキームは、複雑な結晶構造の分析に基づき、多くの点においてＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに類似している。
【0016】
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に関与する、抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は一般的に、類似した構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つのＣＤＲを含んでいる（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91（2007）参照）。単一のＶＨドメイン又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体に由来するＶＨドメイン又はＶＬドメインを使用して、それぞれ、相補的なＶＬドメイン又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る（例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628（1991）参照）。
【0017】
提供された抗体の中には、抗体断片がある。「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体の部分を含む、インタクトな抗体ではない分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、 Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ディアボディーズ；鎖状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ又はｓｃＦｖ）；及び、抗体断片から形成された多重特異的抗体が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施態様では、該抗体は、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む一本鎖抗体断片、例えばｓｃＦｖである。
【0018】
抗体断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解、並びに、組換え宿主細胞の産生を含むがこれらに限定されない、様々な技術によって作製され得る。いくつかの実施態様では、該抗体は、組換え産生された断片、例えば、天然には起こらない整列を含む断片、例えば、合成リンカー、例えばポリペプチドリンカーによって接続された２つ以上の抗体領域又は抗体鎖を有する断片、及び／又は、天然に存在するインタクトな抗体の酵素消化によって産生されない断片である。いくつかの態様では、抗体断片はｓｃＦｖである。
【0019】
「ヒト化」抗体は、全て又は実質的に全てのＣＤＲアミノ酸残基が非ヒトＣＤＲに由来し、全て又は実質的に全てのＦＲアミノ酸残基がヒトＦＲに由来する、抗体である。ヒト化抗体は場合により、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも部分を含んでいてもよい。「ヒト化形態」の非ヒト抗体は、典型的には親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しつつ、ヒトに対する免疫原性を低減するために、ヒト化を受けている、非ヒト抗体の変異体を指す。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体内のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）に由来する対応する残基で置換されている。
【0020】
提供される抗体の中にはヒト抗体がある。「ヒト抗体」は、ヒト、又はヒト細胞、又は、ヒト抗体レパートリー又は他のヒト抗体コード配列、例えばヒト抗体ライブラリーを利用するヒト以外の起源によって産生される抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有する抗体である。該用語は、非ヒト抗原結合領域を含むヒト化形態の非ヒト抗体、例えば全て又は実質的に全てのＣＤＲが非ヒトである抗体を除外する。
【0021】
ヒト抗体は、抗原による攻撃に応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物に免疫源を投与することによって調製され得る。このような動物は典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えているか、又は染色体外に存在するか、又は動物の染色体に無作為に組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有している。このようなトランスジェニック動物では、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般的に不活性化されている。ヒト抗体はまた、ヒトレパートリーに由来する抗体コード配列を含有している、ファージディスプレイライブラリー及び無細胞ライブラリーを含む、ヒト抗体ライブラリーに由来していてもよい。
【0022】
いくつかの実施態様では、工学操作されたヒト抗体分子の軽鎖又は重鎖の可変ドメインを、適宜、ヒト軽鎖又は重鎖の定常ドメインに融合させてもよい。工学操作されたヒト抗体分子のヒト定常ドメインは、存在する場合、提案されている抗体の機能に関して、特に必要とされ得るエフェクター機能の欠如に関して選択され得る。例えば、重鎖可変領域に融合させた重鎖定常ドメインは、ヒトＩｇＡ、ＩｇＧ、又はＩｇＭドメインであり得る。好ましくは、ヒトＩｇＧドメインが使用される。ヒト定常ドメインの選択に応じて、任意の望ましくないエフェクター機能を除去して、天然アイソタイプの抗体を産生するために、例えば、部位特異的突然変異誘発又はオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発を使用して、特定のアミノ酸残基を改変することが必要であり得る。軽鎖可変領域に融合させ得る、軽鎖ヒト定常ドメインとしては、ヒトラムダ鎖又はヒトカッパ鎖が挙げられる。
【0023】
いくつかの実施態様では、ヒト定常ドメインの類似体が代替的には有利には使用されてもよい。これらは、対応するヒトドメインよりも１つ以上追加のアミノ酸を含有しているそうした定常ドメイン、又は対応するヒトドメインの１つ以上の既存のアミノ酸が置換、付加、欠失、又は改変されているそうした定常ドメインを含む。このようなドメインは、例えば、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発によって得られ得る。
【0024】
「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、同義語として使用され、アミノ酸残基のポリマーを指し、最小の長さに限定されない。ポリペプチド（提供される抗体及び抗体鎖及び他のペプチド、例えばリンカー及び結合性ペプチドを含む）は、天然及び／又は非天然アミノ酸残基を含む、アミノ酸残基を含み得る。該用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えばグリコシル化、シアル化、アセチル化、リン酸化などを含み得る。いくつかの態様では、該ポリペプチドは、該タンパク質が所望の活性を維持する限りにおいて、生得の又は天然の配列に関して修飾を含有していてもよい。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発などを通した意図的なものであっても、又は、タンパク質を産生する宿主の突然変異、若しくはＰＣＲ増幅に起因するエラーなどを通した偶発的なものであってもよい。
【0025】
基準ポリペプチド配列に関する配列同一率（％）は、配列をアラインさせ、必要であれば、最大の配列同一率を達成するためにギャップを導入した後、配列同一性の一部として保存的な置換を全く考慮せずに、基準ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である、候補配列内のアミノ酸残基の比率である。アミノ酸配列同一率を決定する目的でのアラインメントは、公知である様々な方法で、例えば公共的に利用できるコンピューターソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成され得る。比較する配列の完全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要とされるアルゴリズムを含む、配列をアラインさせるための適切なパラメーターを決定することができる。しかしながら、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一率値％は、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して算出される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータープログラムは、ジェネンテック社によって作成され、ソースコードがユーザー文書と共にワシントンＤ.Ｃ.２０５５９のアメリカ合衆国著作権局に提出され、そこでアメリカ合衆国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、ジェネンテック社（サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州）から公共的に入手可能であるか、又は、ソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標） Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメーターはＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変更されない。
【0026】
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列の比較のために使用される状況では、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂに対するアミノ酸配列同一率％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂに対して、特定のアミノ酸配列同一率％を有する又は含む、所与のアミノ酸配列Ａとして表現されてもよい）は、以下のように計算され：Ｘ／Ｙの分率×１００、ここで、Ｘは、プログラムによるＡとＢのアラインメントにおいて、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって同一な一致としてスコアリングされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ内のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さとは等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一率％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一率％とは等しくないであろうことが理解されるだろう。具体的に特記しない限り、本明細書において使用する全てのアミノ酸配列同一率値％は、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータープログラムを使用して直前の段落で記載されているように得られる。
【0027】
いくつかの実施態様では、本明細書において提供される抗体のアミノ酸配列変異体が考えられる。変異体は典型的には、１つ以上の置換、欠失、付加、及び／又は挿入において、本明細書において具体的に開示されたポリペプチドとは異なる。このような変異体は、天然に起こるものであっても、又は例えば本発明の上記の１つ以上のポリペプチド配列を修飾し、本明細書に記載のように及び／又は多くの公知の技術のいずれかを使用して、該ポリペプチドの１つ以上の生物学的活性を評価することによって、合成的に作製されてもよい。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましくあり得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、該抗体をコードしているヌクレオチド配列に適切な改変を導入することによって、又はペプチド合成によって調製され得る。このような改変としては、例えば、該抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は該残基への挿入、及び／又は該残基の置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換のあらゆる組合せを行なって最終構築物に到達することができる。ただし、最終構築物は、所望の特徴、例えば抗原への結合を有する。
【0028】
いくつかの実施態様では、１つ以上のアミノ酸の置換を有する抗体変異体が提供される。置換による突然変異誘発のための関心対象の部位はＣＤＲ及びＦＲを含む。アミノ酸の置換を関心対象の抗体に導入し得、産物を所望の活性、例えば保持された／改善された抗原への結合、低減された免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞障害）若しくはＣＤＣ（補体依存性細胞障害）についてスクリーニングし得る。
【0029】
いくつかの実施態様では、置換、挿入、又は欠失は、１つ以上のＣＤＲ内で起こり得、ここでの置換、挿入、又は欠失は、抗原に対する抗体の結合を実質的に低減させない。例えば、実質的に結合親和性を低減させない保存的置換は、ＣＤＲ内で起こり得る。このような改変は、ＣＤＲの「ホットスポット」の外にあり得る。変異体のＶＨ配列及びＶＬ配列のいくつかの実施態様では、各ＣＤＲは改変されていない。
【0030】
改変（例えば置換）は、例えば抗体の親和性を改善するために、ＣＤＲ内で行なわれ得る。このような改変は、体細胞の成熟中に高い突然変異率を有する、ＣＤＲをコードするコドンにおいて行なわれ得（例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196（2008）参照）、結果として得られた変異体を結合親和性について試験することができる。親和性成熟（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、ＣＤＲの無作為化、又はオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発を使用した）を使用して、抗体の親和性を改善することができる（例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37（2001）参照）。抗原との結合に関与するＣＤＲ残基を、例えば、アラニン走査突然変異誘発又はモデリングを使用して具体的に同定し得る（例えば、Cunningham and Wells Science, 244:1081-1085（1989）参照）。ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が特に標的化されることが多い。代わりに又は追加して、抗体と抗原との間の接触点を同定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。このような接触残基及び隣接残基を、置換のための候補として標的化又は排除し得る。変異体をスクリーニングして、それらが所望の特性を含有しているかどうかを決定し得る。
【0031】
アミノ酸配列の挿入及び欠失は、１残基から１００以上の残基を含有しているポリペプチドまでの長さにおよぶアミノ末端及び／又はカルボキシル末端への融合、並びに、１つ又は複数のアミノ酸残基の配列間への挿入及び欠失を含む。末端への挿入例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体としては、抗体のＮ末端又はＣ末端への酵素（例えばＡＤＥＰＴ）又は抗体の血清中半減期を延長させるポリペプチドへの融合が挙げられる。抗体分子の配列内挿入変異体の例としては、軽鎖への３アミノ酸の挿入が挙げられる。末端欠失の例としては、軽鎖の末端における７個以下のアミノ酸の欠失を有する抗体が挙げられる。
【0032】
いくつかの実施態様では、抗体はそのグリコシル化を増加又は減少させるために、改変されている（例えば、１つ以上のグリコシル化部位が作り出されるか又は除去されるように、アミノ酸配列を改変することによって）。抗体のＦｃ領域に付着した糖鎖が改変されてもよい。哺乳動物細胞に由来する天然抗体は典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって付着している分岐した、二分岐のオリゴ糖を含む（例えば、Wright et al. TIBTECH 15:26-32（1997）参照）。オリゴ糖は、様々な糖鎖、例えばマンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、二分岐オリゴ糖構造の「基部」にあるＧｌｃＮＡｃに付着したフコースであり得る。抗体内のオリゴ糖の修飾は、例えば、特定の改善された特性を有する抗体変異体を作製するために行なわれ得る。抗体グリコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ機能を有し得る。いくつかの実施態様では、Ｆｃ領域に（直接的に又は間接的に）付着したフコースを欠失している糖鎖構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、このような抗体内のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、又は２０％～４０％であり得る。フコースの量は、Ａｓｎ２９７に付着した全ての糖構造の合計と比較した、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される（例えば、国際公開公報第０８/０７７５４６号参照）。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内のおよそ２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け；例えば、Edelman et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 1969 May; 63(1):78-85参照）。しかしながら、Ａｓｎ２９７はまた、抗体内の小さな配列の変化に因り、２９７位の上流又は下流の約±３アミノ酸、すなわち、２９４位から３００位に位置し得る。このようなフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る（例えば、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；及びYamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614（2004）参照）。細胞株、例えばノックアウト細胞株、例えば、タンパク質フコシル化の欠失したＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞、及びα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）ノックアウトＣＨＯ細胞、及びそれらの使用法を使用して、脱フコシル化抗体を産生することができる（例えば、Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688（2006）参照）。他の抗体グルコシル化変異体も含まれる（例えば、米国特許第６，６０２，６８４号参照）。
【0033】
いくつかの実施態様では、１つ以上のアミノ酸の改変を、本明細書において提供された抗体のＦｃ領域に導入し得、これによりＦｃ領域変異体を作製し得る。本明細書のＦｃ領域は、定常領域の少なくとも部分を含有している、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域である。Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域及び変異Ｆｃ領域を含む。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置においてアミノ酸の改変（例えば置換）を含む、ヒトＦｃ領域の配列（例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
【0034】
本明細書において使用する「エフェクター機能」という語句は、ＦｃγＲに結合した時にＦｃ含有タンパク質によって付与される機能的能力を含むことを意味する。いずれか１つの理論に拘るものではないが、Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の形成は、様々なエフェクター細胞を、結合した抗原の部位に動員し、典型的にはその結果として、細胞内に多様なシグナル伝達事象及び重要な後続の免疫応答が起こる。
【0035】
本明細書において使用する「抗体依存性細胞媒介性細胞障害」及び「ＡＤＣＣ」という語句は、ＦｃＲを発現する非特異的な細胞障害性細胞（例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介するための主な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、一方、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。
【0036】
本明細書において使用する「抗体依存性細胞貪食」及び「ＡＤＣＰ」という語句は、抗体でコーティングされた細胞が、全体的に又は部分的に、免疫グロブリンＦｃ領域に結合する貪食性免疫細胞（例えばマクロファージ、好中球、及び樹状細胞）によって内部移行するプロセスを指す。
【0037】
「補体依存性細胞障害」すなわち「ＣＤＣ」という語句は、抗体のＦｃ領域が補体の活性化をトリガーする能力を指し、その結果、標的化された細胞の表面上に膜侵襲複合体が形成される。
【0038】
いくつかの実施態様では、この開示の抗体は、いくつかであるが全てではないエフェクター機能を有する変異体を含み、これは、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣ）は不必要であるか又は有害である適用にとって望ましい候補となる。インビトロ及び／又はインビボでの細胞障害アッセイを実施することによって、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／消失を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施することにより、抗体がＦｃγＲとの結合を欠失しているが（よってＡＤＣＣ活性を欠失している可能性がある）、ＦｃＲｎ結合能を保持していることを確かめることができる。関心対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するインビトロアッセイの非制限的な例は、米国特許第５，５００，３６２号及び第５，８２１，３３７号に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を使用してもよい（例えば、ＡＣＴＩ（商標）及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞障害アッセイ）。このようなアッセイのために有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、単球、マクロファージ、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。
【0039】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、野生型Ｆｃを含む抗体と比較して、エフェクター機能を調節することができる。この調節は、Ｆｃ領域の選択の結果であり得る（例えば、ＩｇＧ４は、ＩｇＧ１よりも、もともと低いエフェクター機能を有する）。この調節は、Ｆｃ領域（ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のＦｃ領域のいずれか）に１つ以上の変異体を導入した結果であり得る。いくつかの実施態様では、調節は、ＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣ（補体依存性細胞障害）の調節である。いくつかの実施態様では、調節は、効果の抑制的調節又は低減である。いくつかの実施態様では、調節は、ＡＤＣＣの調節であり；いくつかの実施態様では、調節は、ＡＤＣＣの抑制的調節である。いくつかの実施態様では、調節は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣの抑制的調節である。いくつかの実施態様では、調節は、ＡＤＣＣのみの抑制的調節である。いくつかの実施態様では、調節は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ及び／又はＡＤＣＰの抑制的調節である。いくつかの実施態様では、抗体は、ＡＤＣＣ／ＣＤＣ及びＡＤＣＰを抑制的調節又は低減する。いくつかの実施態様では、Ｆｃ変異体を含む抗体によって誘導されるＡＤＣＣ又はＣＤＣ又はＡＤＣＰの低減又は抑制的調節は、野生型Ｆｃ領域を含んでいる抗体による、ＡＤＣＣ、又はＣＤＣ、又はＡＤＣＰの誘導について観察された数値の０、２．５、５、１０、２０、５０、又は７５％への減少である。いくつかの実施態様では、該抗体によって誘導されたＡＤＣＣの調節は、該Ｆｃ変異体のＥＣ５０が、野生型Ｆｃ領域を含んでいる抗体と比較して、およそ１０倍を超えて減少しているような、効力の減少である。いくつかの実施態様では、該抗体は、野生型Ｆｃ領域を含んでいる抗体と比較して、ヒトエフェクター細胞の存在下において、あらゆる実質的なＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ及び／又はＡＤＣＰを欠失している。いくつかの実施態様では、該抗体は、低減した、例えば少なくとも２０％低減した、又は強く低減した、例えば少なくとも５０％低減したエフェクター機能を示し、これはＡＤＣＣ（抑制的調節）、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＰの低減であり得る。
【0040】
インビトロ及び／又はインビボでの細胞障害アッセイを実施することにより、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／消失を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施することにより、抗体がＦｃγＲとの結合を欠失しているが（よってＡＤＣＣ活性を欠失している可能性がある）、ＦｃＲｎ結合能を保持していることを確かめることができる。
【0041】
補体活性化経路は、同族抗原と複合体を形成した分子、例えば抗体への、補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）の結合によって開始される。Ｃ１ｑに対する様々な変異体の結合特性は、ＥＬＩＳＡサンドイッチ型イムノアッセイによって分析され得る。最大値の半分の応答における抗体濃度が、ＥＣ５０値を決める。この解読値は、試料及び基準物質の変動係数と共に、同じプレート上で測定された基準標準物質に対する相対的な差として報告される。
【0042】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体と比較して、Ｃ１ｑに対して低下した親和性を示す。いくつかの実施態様では、抗体は、対応する野生型抗体よりも少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低い、Ｃ１ｑ受容体に対する親和性を示す。
【0043】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体よりも少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３０％、少なくとも２０％、少なくとも１０％、又は少なくとも５％低い、Ｃ１ｑに対する親和性を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、約１００nM～約１００μM、又は約１００nM～約１０μM、又は約１００nM～約１μM、又は約１nM～約１００μM、又は約１０nM～約１００μM、又は約１μM～約１００μM、又は約１０μM～約１００μMである、Ｃ１ｑに対する親和性を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、１μMより高い、５μMより高い、１０μMより高い、２５μMより高い、５０μMより高い、又は１００μMより高い、Ｃ１ｑに対する親和性を示す。
【0044】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型Ｆｃ抗体と比較して、低減したＣＤＣ活性を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体よりも少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍低い、ＣＤＣ活性を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体と比較して、少なくとも１０％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも２００％、又は少なくとも３００％、又は少なくとも４００％、又は少なくとも５００％低減した、ＣＤＣ活性を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、検出可能なＣＤＣ活性を全く示さない。いくつかの実施態様では、ＣＤＣ活性の低減及び／又は消失は、Ｆｃリガンド及び／又は受容体に対する本明細書に記載の抗体の低減した親和性に起因し得る。
【0045】
当技術分野において、生物学的療法は、望んでいない細胞及び／又は標的を認識し攻撃するように免疫系が指令するという複雑な性質に伴う、有害毒性問題を有し得ることが理解される。処置が必要とされる場所で攻撃のための認識及び／又は標的化が行なわれない場合、有害毒性などの結果が起こり得る。例えば、非標的化組織の抗体による染色は、毒性問題の可能性を示し得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体と比較して低減した非標的化組織の染色を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体よりも少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低い、低減した非標的化組織の染色を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体と比較して、少なくとも１０％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも２００％、又は少なくとも３００％、又は少なくとも４００％、又は少なくとも５００％低減した、低減した非標的化組織の染色を示す。
【0046】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体と比較して、低減した抗体に関連した毒性を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体よりも少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低い毒性を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体と比較して、少なくとも１０％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも２００％、又は少なくとも３００％、又は少なくとも４００％、又は少なくとも５００％低減した毒性を示す。
【0047】
当技術分野において、生物学的療法は、有害作用の血小板凝集を有し得ることが理解される。インビトロ及びインビボでのアッセイを、血小板凝集の測定のために使用することができる。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、インビトロアッセイにおいて、対応する野生型抗体と比較して低減した血小板凝集を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、インビトロアッセイにおいて、対応する野生型抗体よりも少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低い、低減した血小板凝集を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、インビトロアッセイにおいて、対応する野生型抗体と比較して、少なくとも１０％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも２００％、又は少なくとも３００％、又は少なくとも４００％、又は少なくとも５００％低減した、低減した血小板凝集を示す。
【0048】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体と比較して、低減したインビボでの血小板凝集を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、インビボアッセイにおいて、対応する野生型抗体よりも少なくとも２倍、又は少なくとも３倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍、又は少なくとも２０倍、又は少なくとも３０倍、又は少なくとも４０倍、又は少なくとも５０倍、又は少なくとも６０倍、又は少なくとも７０倍、又は少なくとも８０倍、又は少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍、又は少なくとも２００倍低い、低減した血小板凝集を示す。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、インビボアッセイにおいて、対応する野生型抗体と比較して、少なくとも１０％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも１００％、又は少なくとも２００％、又は少なくとも３００％、又は少なくとも４００％、又は少なくとも５００％低減した、低減した血小板凝集を示す。
【0049】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、対応する野生型抗体と比較して、低減した血小板活性化及び／又は血小板凝集を示す。
【0050】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ＦＬＴ３を標的化する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、Ｆｃ領域（例えば（Ｆａｂ'）２断片）を欠失している。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、Ｎ－グリコシル化部位に又はその近くに突然変異した残基を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ＥＵ番号付け体系による、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５０Ｆ、Ｍ４２８Ｌ、Ｍ４２８Ｆ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ、Ｖ３０８Ｗ、Ｖ３０８Ｙ、Ｖ３０８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ／Ｍ４２８Ｌ、Ｄ２５９Ｉ／Ｖ３０８Ｆ、Ｍ４２８Ｌ／Ｖ３０８Ｆ、Ｑ３１１Ｖ／Ｎ４３４Ｓ、Ｔ３０７Ｑ／Ｎ４３４Ａ、Ｅ２５８Ｆ／Ｖ４２７Ｔ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ／Ｒ４０９Ｋ、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３７０Ｅ、Ｇ４４６の欠失、Ｋ４４７の欠失、及びＩｇＧ４の任意のその組合せから選択された、アミノ酸修飾又は修飾のセットを有する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ４を含む。いくつかの実施態様では、該抗体は、修飾されたＩｇＧ４を含み、ここでのＩｇＧ２（Ｔ２６０までの）はＩｇＧ４ Ｆｃの末端と接続している。
【0051】
抗体は、延長された半減期及び改善された新生仔Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を有し得る（例えば米国特許出願第２００５/００１４９３４号参照）。このような抗体は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合を改善する１つ以上の置換をＦｃ領域内に有するＦｃ領域を含み得、これには、Ｆｃ領域残基（ＥＵ番号付け体系による、２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４）の１つ以上において置換を有するものが含まれる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号参照）。Ｆｃ領域変異体の他の例も考えられる（例えばDuncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５，６４８，２６０号及び第５，６２４，８２１号；及び国際公開公報第９４／２９３５１号参照）。
【0052】
いくつかの実施態様では、システインで工学操作された抗体、例えば「チオモノクロ―ナル抗体」（ここでは抗体の１つ以上の残基が、システイン残基で置換されている）を作製することが望ましくあり得る。いくつかの実施態様では、置換された残基は、抗体が近づくことのできる部位で起こる。反応性チオール基は、他の部分、例えば薬物部分又はリンカー薬物部分へのコンジュゲーションのための部位に位置し得、これにより免疫コンジュゲートが作製され得る。いくつかの実施態様では、以下の残基のいずれか１つ以上がシステインで置換されていてもよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔの番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。
【0053】
いくつかの実施態様では、本明細書に提供された抗体は、公知であり入手可能である、追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾されていてもよい。抗体の誘導体化に適した部分としては水溶性ポリマーが挙げられるがこれらに限定されない。水溶性ポリマーの非制限的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、及びその混合物が挙げられるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中におけるその安定性に因り、製造において利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であり得、分岐していても分岐していなくてもよい。抗体に付着したポリマーの数は変更され得、２つ以上のポリマーが付着している場合、それらは同じ分子であっても、又は異なる分子であってもよい。
【0054】
本明細書に記載の抗体は、核酸によってコードされ得る。核酸は、２つ以上のヌクレオチド塩基を含んでいる、一種のポリヌクレオチドである。特定の実施態様では、核酸は、ポリヌクレオチドをコードしているポリペプチドを細胞内に導入するために使用され得る、ベクターの成分である。本明細書において使用する「ベクター」という用語は、核酸分子に連結されている別の核酸を輸送することのできる、該核酸分子を指す。ある種類のベクターは、ゲノムに組み込まれるベクター、すなわち「組込み型ベクター」であり、これは、宿主細胞の染色体ＤＮＡに組み込まれるようになることが可能である。別の種類のベクターは、「エピソーム」ベクター、例えば、染色体外での複製が可能な核酸である。作動可能に連結されている遺伝子の発現を指令することのできるベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。適切なベクターは、プラスミド、細菌人工染色体、酵母人工染色体、ウイルスベクターなどを含む。発現ベクター内における、転写の制御に使用するための、調節配列、例えばプロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化シグナルは、哺乳動物、微生物、ウイルス、又は昆虫の遺伝子に由来し得る。通常、複製起点によって付与される、宿主における複製能、及び形質転換体の認識を容易にする選択用遺伝子が追加的に取り込まれてもよい。ウイルス、例えばレンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスなどに由来するベクターが使用され得る。プラスミドベクターは、染色体の位置への組込みのために鎖状化されていてもよい。ベクターは、ゲノム内の所定の位置又は限定された部位のセットへの部位特異的組込みを指令する配列を含み得る（例えばＡｔｔＰ－ＡｔｔＢの組換え）。さらに、ベクターは、転移因子に由来する配列を含み得る。
【0055】
本明細書において基準配列と比較してアミノ酸配列又は核酸配列を記載するために使用される場合の、本明細書において使用する「相同な」、「相同性」又は「相同率」という用語は、Karlin及びAltschul（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268, 1990, modified as in Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877, 1993）によって記載される式を使用して決定され得る。このような式は、Altschul et al.（J. Mol. Biol. 215: 403-410, 1990）の基本的な局所的アラインメント探索ツール（ＢＬＡＳＴ）プログラムに取り込まれる。配列の相同率は、本出願の出願日の日付において、最新版のＢＬＡＳＴを使用して決定され得る。
【0056】
本明細書に記載の抗体をコードしている核酸を使用して、適した細胞に感染させるか、トランスフェクトさせるか、形質転換させるか、又は別の方法で核酸の遺伝子を導入させることができ、よって、商業的使用又は治療的使用のための抗体の産生が可能となる。標準的な細胞株、及び大規模細胞培養液からの抗体の産生法は当技術分野において公知である。例えば、Li et al., “Cell culture processes for monoclonal antibody production.” Mabs. 2010 Sep-Oct; 2(5): 466-477を参照されたい。特定の実施態様では、該細胞は真核細胞である。特定の実施態様では、該真核細胞は哺乳動物細胞である。特定の実施態様では、該哺乳動物細胞は、抗体の産生に有用な細胞株であり、これはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＶＨＯ）細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、又はＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞である。特定の実施態様では、抗体をコードしている核酸は、抗体の産生に有用な細胞のゲノム遺伝子座に組み込まれる。特定の実施態様では、本明細書には、抗体の産生及び分泌を可能とするに十分なインビトロでの条件下で、該抗体をコードしている核酸を含む細胞を培養する工程を含む、抗体の作製法が記載されている。
【0057】
特定の実施態様では、本明細書には、（ａ）ゲノム位置に組み込まれた本明細書に記載の抗体をコードしている核酸を含む哺乳動物細胞株；及び（ｂ）凍結保護剤を含む、マスターセルバンクが記載されている。特定の実施態様では、凍結保護剤は、グリセロール又はＤＭＳＯを含む。特定の実施態様では、マスターセルバンクは、（ａ）（ｉ）配列番号１１、１３、１５、１７、又は１９のいずれか１つによって示される重鎖アミノ酸配列；及び（ｉｉ）ゲノム位置に組み込まれた、配列番号１２、１４、１６、１８、又は２０のいずれか１つによって示される軽鎖アミノ酸配列、を有する抗体をコードしている核酸を含むＣＨＯ細胞株；及び（ｂ）凍結保護剤を含む。特定の実施態様では、凍結保護剤は、グリセロール又はＤＭＳＯを含む。特定の実施態様では、マスターセルバンクは、液体窒素による凍結に耐えることのできる適切なバイアル又は容器に含まれる。
【0058】
また本明細書には、本明細書に記載の抗体を産生する方法が記載されている。このような方法は、抗体をコードしている核酸を含む細胞又は細胞株を、該抗体の発現及び分泌を可能とするに十分な条件下で細胞培養培地中でインキュベートし、細胞培養培地から抗体をさらに収集する工程を含む。収集はさらに、生細胞、細胞片、非抗体タンパク質又はポリペプチド、所望ではない塩、緩衝液、及び培地成分を除去するための、１回以上の精製工程を含み得る。特定の実施態様では、追加の精製工程（群）としては、遠心分離、超遠心分離、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ/Ｇ、若しくはプロテインＬによる精製、及び／又はイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。
【0059】
ＦＬＴ３アゴニスト抗体
本明細書には、ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体及びその抗原結合断片が記載されている。これらの抗体及び抗原結合断片は、ＦＬＴ３受容体を通してシグナル伝達を増加させる効果を有する。特定の実施態様では、本明細書に記載の抗体及び抗原結合断片は、アイソタイプ対照と比較して、ＳＴＡＴ５の転写を少なくとも約２倍、３倍、５倍、又は１０倍活性化する。特定の実施態様では、本明細書に記載の抗体及び抗原結合断片は、ヒト末梢血単核細胞及び／又は骨髄細胞と共に培養した場合、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量を、少なくとも約１．２５倍、１．５倍、２倍、又は３倍増加させる。樹状細胞は、ＣＤ１１ｃ陽性細胞、又はＣＤ１１ｃ陽性と高いレベルのＭＨＣクラスＩＩ発現の組合せによって同定され得る。特定の実施態様では、ヒト末梢血単核細胞及び／又は骨髄由来細胞と接触させた場合の、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量の増加のＥＣ５０は、約２００ピコモル（pM）、１５０pM、１４０pM、１３０pM、１２６pM、１２０pM、１１０pM、又は１００pM未満である。
本明細書には、ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体及びその抗原結合断片が記載されている。これらの抗体及び抗原結合断片は、ＦＬＴ３受容体を通してシグナル伝達を増加させる効果を有する。特定の実施態様では、本明細書に記載の抗体及び抗原結合断片は、アイソタイプ対照と比較して、ＳＴＡＴ５の転写を少なくとも約２倍、３倍、５倍、又は１０倍活性化する。特定の実施態様では、本明細書に記載の抗体及び抗原結合断片は、ヒト末梢血単核細胞及び／又は骨髄細胞と共に培養した場合、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量を、少なくとも約１．２５倍、１．５倍、２倍、又は３倍増加させる。樹状細胞は、ＣＤ１１ｃ陽性細胞、又はＣＤ１１ｃ陽性と高いレベルのＭＨＣクラスＩＩ発現の組合せによって同定され得る。特定の実施態様では、ヒト末梢血単核細胞及び／又は骨髄由来細胞と接触させた場合の、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の量の増加のＥＣ５０は、約２００ピコモル（pM）、１５０pM、１４０pM、１３０pM、１２６pM、１２０pM、１１０pM、又は１００pM未満である。
【0060】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ＦＬＴ３に結合する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ＦＬＴ３に結合すると、ＦＬＴ３のリン酸化を誘導する。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、２つのＦＬＴ３受容体を架橋又は二量体化し、その結果、２つのＦＬＴ３受容体のリン酸化及び活性化が起こる。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ＦＬＴ３を発現している細胞を、該ＦＬＴ３に結合した場合に、内部移行させ、該ＦＬＴ３を分解するように誘導する。
【0061】
特定の態様では、ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体又は抗原結合断片は、キメラＮＢ１０１６、ヒト化１０６３、又は脱アミド化変異体ＮＢ１１２、ＮＢ１１３、ＮＢ１１４、若しくはＮＢ１１５の相補性決定領域を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施態様では、ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、ここでの免疫グロブリン重鎖可変領域は、（ａ）配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；及び（ｃ）配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）を含み；免疫グロブリン軽鎖可変領域は、（ｄ）配列番号６（RASEGIHNGLA）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１２（QQYYDYPLT）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）を含む。ＮＢ１０１６及びＮＢ１０６３のＶＬ－ＣＤＲ１に「ＮＧ」脱アミド化部位候補が存在する。これにより、下流プロセシングにおいて不均一な産物がもたらされ得る。それ故、本明細書には、配列番号６の８位にアスパラギンを有さないＶＬ－ＣＤＲの変異体を含み、依然としてＦＬＴ３結合活性を保持している、抗体が開示されている。特定の実施態様では、組換え抗体はさらに、ヒト軽鎖定常領域及びヒト重鎖定常領域を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はヒト化されている。
【0062】
キメラＮＢ１０１６クローン及びヒト化ＮＢ１０６３クローンの軽鎖可変領域相補性決定領域１におけるアスパラギンは、脱アミド化部位候補である。脱アミド化は、抗体の不均一性を増加させ、抗体の安定性を低減させるので、脱アミド化は、治療薬として使用される抗体にとって有害であり得る。それ故、本明細書において、アスパラギンを別のアミノ酸で置換した、ＮＢ１０１６及びＮＢ１０６３のＣＤＲ領域の突然変異体が考えられる。特定の実施態様では、異なるアミノ酸を用いての置換により、ＮＢ１０１６及びＮＢ１０６３と比較して、標的への結合若しくはＳＴＡＴ５の発現の誘導によって定義されるような親和性若しくは機能的活性は全く減少しないか、又はほんの無視できる程度にしか減少しない。特定の実施態様では、本明細書には、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に特異的に結合する組換え抗体が記載され、ここでの免疫グロブリン重鎖可変領域は、（ａ）配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；（ｃ）配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）を含み；免疫グロブリン軽鎖可変領域は、（ｄ）（RASEGIHXGLA）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１２（QQYYDYPLT）のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）を含む。特定の実施態様では、RASEGIHXGLAのＸは、ＮＢ１０１６又はＮＢ１０６３と比較して、標的との結合又はＳＴＡＴ５発現の誘導の減少が全く起こらない、任意のアミノ酸である。特定の実施態様では、RASEGIHXGLAのＸは、ＮＢ１０１６又はＮＢ１０６３と比較して、標的との結合又はＳＴＡＴ５発現の誘導の約２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％未満の減少がもたらされる任意のアミノ酸である。特定の実施態様では、RASEGIHXGLAのＸは、アスパラギン酸、セリン、トレオニン、又はロイシンから選択されたアミノ酸である。特定の実施態様では、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号７（RASEGIHDGLA）、配列番号８（RASEGIHSGLA）、配列番号９（RASEGIHTGLA）、及び配列番号１０（RASEGIHLGLA）からなるリストから選択されたアミノ酸配列を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はさらに、ヒト軽鎖定常領域及びヒト重鎖定常領域を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はヒト化されている。
【0063】
特定の実施態様では、ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、ここでの免疫グロブリン重鎖可変領域は、（ａ）配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；及び（ｃ）配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）を含み；免疫グロブリン軽鎖可変領域は、（ｄ）配列番号７（RASEGIHDGLA）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１２（QQYYDYPLT）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はさらに、ヒト軽鎖定常領域及びヒト重鎖定常領域を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はヒト化されている。
【0064】
特定の実施態様では、ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、ここでの免疫グロブリン重鎖可変領域は、（ａ）配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；及び（ｃ）配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）を含み；免疫グロブリン軽鎖可変領域は、（ｄ）配列番号８（RASEGIHSGLA）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１２（QQYYDYPLT）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はさらに、ヒト軽鎖定常領域及びヒト重鎖定常領域を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はヒト化されている。
【0065】
特定の実施態様では、ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、ここでの免疫グロブリン重鎖可変領域は、（ａ）配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；及び（ｃ）配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）を含み；免疫グロブリン軽鎖可変領域は、（ｄ）配列番号９（RASEGIHTGLA）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１２（QQYYDYPLT）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はさらに、ヒト軽鎖定常領域及びヒト重鎖定常領域を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はヒト化されている。
【0066】
特定の実施態様では、ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体は、免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域を含み、ここでの免疫グロブリン重鎖可変領域は、（ａ）配列番号１（GFTFSNY）；２（NYGMA）；又は２９（GFTFSNYGMA）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＨ－ＣＤＲ１）；（ｂ）配列番号３（HSGGGD）又は４（SIHSGGGDTYYRDSVKG）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＨ－ＣＤＲ２）；及び（ｃ）配列番号５（GRTPTGYYFDH）に示されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＨ－ＣＤＲ３）を含み；免疫グロブリン軽鎖可変領域は、（ｄ）配列番号１０（RASEGIHLGLA）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域１（ＶＬ－ＣＤＲ１）；（ｅ）配列番号１１（NANSLHS）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域２（ＶＬ－ＣＤＲ２）；及び（ｆ）配列番号１２（QQYYDYPLT）に示されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域相補性決定領域３（ＶＬ－ＣＤＲ３）を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はさらに、ヒト軽鎖定常領域及びヒト重鎖定常領域を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体はヒト化されている。
【0067】
また、本明細書には、ＦＬＴ３に対するアゴニスト活性を有する抗体に由来する免疫グロブリン重鎖可変領域及び免疫グロブリン軽鎖可変領域が記載されている。
【0068】
特定の実施態様では、本明細書には、（ａ）配列番号１５、１７、１９、２１、又は２３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号１６；１８；２０；２２；２４；２５；２６；２７；及び２８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に特異的に結合する組換え抗体が記載されている。特定の実施態様では、該組換え抗体は、（ａ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；及び（ｂ）配列番号１６のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。配列番号１６；１８；２０；２２；又は２４のいずれか１つのＶＬ領域の軽鎖可変領域相補性決定領域１におけるアスパラギンは、脱アミド化部位候補である。それ故、本明細書において、アスパラギンを別のアミノ酸で置換したＶＬ－ＣＤＲ領域の突然変異体が考えられる。特定の実施態様では、異なるアミノ酸を用いての置換により、ＮＢ１０１６又はＮＢ１０６３と比較して、標的への結合若しくはＳＴＡＴ５の発現の誘導によって定義されるような親和性若しくは機能的活性は全く減少しないか、又はほんの無視できる程度にしか減少しない。特定の実施態様では、異なるアミノ酸を用いての置換により、ＮＢ１０１６又はＮＢ１０６３と比較して、標的への結合若しくはＳＴＡＴ５の発現の誘導の約２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％未満の減少が起こる。特定の実施態様では、記載の抗体のＶＬは、ＶＬ－ＣＤＲ１の脱アミド化反応を減少させる突然変異を保持しつつ、配列番号２５；２６；２７；及び２８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む。
【0069】
特定の実施態様では、本明細書には、（ａ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号２５、２６、２７又は２８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）に特異的に結合する組換え抗体が記載されている。特定の実施態様では、該組換え抗体は、（ａ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号２５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体は、（ａ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号２６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体は、（ａ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号２７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。特定の実施態様では、該組換え抗体は、（ａ）配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）配列；及び（ｂ）配列番号２８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である、アミノ酸配列を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む。
【0070】
いくつかの実施態様では、本明細書のＦＬＴ３アゴニスト抗体が、個体に投与されると、腫瘍微小環境への、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞の動員及び／又は増幅が起こる。いくつかの実施態様では、本明細書のＦＬＴ３アゴニスト抗体は、個体に投与されると、樹状細胞を動員及び／又は増幅する。いくつかの実施態様では、本明細書のＦＬＴ３アゴニスト抗体は、樹状細胞を動員及び／又は増幅し、樹状細胞は、細胞表面マーカーＣＤ１１ｃについての陽性によって同定され得る。いくつかの実施態様では、本明細書のＦＬＴ３アゴニスト抗体は、個体に投与されると、通常型の樹状細胞（ｃＤＣ）サブセット（ｃＤＣ１及びｃＤＣ２）を動員及び／又は増幅する。いくつかの実施態様では、本明細書のＦＬＴ３アゴニスト抗体は、個体に投与されると、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を動員及び／又は増幅する。いくつかの実施態様では、本明細書のＦＬＴ３アゴニスト抗体は、個体に投与されると、樹状細胞、通常型樹状細胞サブセットｃＤＣ１、ｃＤＣ２、形質細胞様樹状細胞、又はその任意の組合せを動員する。ｃＤＣ１樹状細胞は、Ｌｉｎ-ＨＬＡ-ＤＲ+ＣＤ１１ｃ+ＢＤＣＡ-３+を含む細胞表面発現パターンによって同定され得る。形質細胞様樹状細胞は、Ｌｉｎ-ＨＬＡ-ＤＲ+ＣＤ１２３+ＢＤＣＡ-２+を含む細胞表面発現パターンによって同定され得る。
【0071】
本明細書に記載のＦＬＴ３アゴニスト抗体をさらに、免疫調節部分にコンジュゲートさせることができる。該免疫調節部分は、樹状細胞又は血液学的樹状前駆細胞を増幅及び／又は活性化することのできる任意の部分を含み得る。特定の実施態様では、該免疫調節部分は、ＳＴＩＮＧアゴニストを含む。インターフェロン遺伝子刺激因子（ＳＴＩＮＧ）は、膜貫通タンパク質１７３（ＴＭＥＭ１７３）としても知られているが、これは転写因子を活性化する、免疫シグナル伝達経路の強力な活性化因子、例えばＳＴＡＴ６及びＩＲＦ３であり、これにより、Ｉ型インターフェロンの転写及び分泌が起こる。特定の実施態様では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、２’，３’－ｃＧＡＭＰ（ＣＡＳ番号、１４４１１９０－６６－４）、４－［（２－クロロ－６－フルオロフェニル）メチル］－Ｎ－（フラン－２－イルメチル）－３－オキソ－１，４－ベンゾチアジン－６－カルボキシアミド、ＭＫ－１４５４、ＡＤＵ－Ｓ１００／ＭＩＷ８１５、ＳＲＣＢ－００７４、ＳＹＮＢ１８９１、Ｅ－７７６６又はＳＢ１１２８５を含む。ＳＴＩＮＧアゴニストを、当技術分野において公知である適切な技術を使用して、今回の開示の組換え抗体又は抗原結合断片に共有結合させることができる。ＳＴＩＮＧアゴニストを、適切な薬物対抗体の比、例えば１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、又は７：１の比で、今回の開示の組換え抗体又は抗原結合断片に共有結合させることができる。
【0072】
がんの処置
ＦＬＴ３Ｌは、インビボにおいて樹状細胞の数の増加をもたらし、インビボでのメチルコラントレン（ＭＣＡ）誘発の同系線維肉腫マウスモデルにおいて腫瘍退縮及び抗腫瘍免疫応答を誘導することが示された（Lynch, D. H., et al. “Flt3 ligand induces tumor regression and antitumor immune responses in vivo.” Nature Medicine, 3(6), 625-631.(1997)参照）。しかしながら、ＦＬＴ３Ｌ療法は、薬物動態の利用可能性が限定されていること、及び複雑な投薬必要条件に苦しむ。試験は、少なくとも１０回の１日１回のＦＬＴ３Ｌの注射が、腫瘍増殖速度の実質的な減少、及び腫瘍退縮の誘導に必要とされたことを示すが、１４日間から１９日間の処置が最適であるようであった。
ＦＬＴ３Ｌは、インビボにおいて樹状細胞の数の増加をもたらし、インビボでのメチルコラントレン（ＭＣＡ）誘発の同系線維肉腫マウスモデルにおいて腫瘍退縮及び抗腫瘍免疫応答を誘導することが示された（Lynch, D. H., et al. “Flt3 ligand induces tumor regression and antitumor immune responses in vivo.” Nature Medicine, 3(6), 625-631.(1997)参照）。しかしながら、ＦＬＴ３Ｌ療法は、薬物動態の利用可能性が限定されていること、及び複雑な投薬必要条件に苦しむ。試験は、少なくとも１０回の１日１回のＦＬＴ３Ｌの注射が、腫瘍増殖速度の実質的な減少、及び腫瘍退縮の誘導に必要とされたことを示すが、１４日間から１９日間の処置が最適であるようであった。
【0073】
腫瘍による攻撃後の最大７日間の１日１回のＦＬＴ３Ｌによる処置が、ＭＣＡにより誘発された線維肉腫マウスモデルにおいて、腫瘍の拒絶をもたらすことが示された（Lynch, D. H., et al. 1997参照）。
【0074】
特定の実施態様では、本明細書に、がん又は腫瘍の処置に有用な抗体が開示されている。処置は、処置される容態を改善又は寛解することを探究した方法を指す。がんに関して、処置は、腫瘍体積の減少、腫瘍体積の増殖の減少、無進行生存期間又は全生存期間の延長を含むがこれらに限定されない。特定の実施態様では、処置は、処置されるがんの寛解を奏功するだろう。特定の実施態様では、処置は、以前に処置されたがん又は腫瘍の再発又は進行を予防することを目的とした、予防用量又は維持用量としての使用を包含する。当業者によって、全ての個体が投与される処置に等しく又は完全に応答するわけでないであろうことが理解され、それにも関わらず、これらの個体は、処置されることができると考えられる。
【0075】
特定の実施態様では、がん又は腫瘍は、固形癌又は腫瘍である。特定の実施態様では、がん又は腫瘍は、血液がん又は腫瘍である。特定の実施態様では、がん又は腫瘍は、乳腺、心臓、肺、小腸、大腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭部、頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、骨髄、血液、胸腺、子宮、精巣、及び肝臓の腫瘍を含む。特定の実施態様では、本発明の抗体を用いて処置され得る腫瘍は、腺腫、腺癌、血管肉腫、星状細胞腫、上皮癌、胚細胞腫、神経膠芽腫、神経膠腫、血管内皮腫、血管肉腫、血腫、肝芽腫、白血病、リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、神経芽細胞腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、及び／又は奇形腫を含む。特定の実施態様では、腫瘍／がんは、末端黒子型黒色腫、日光角化症、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮癌、星細胞腫、バルトリン腺癌、基底細胞癌、気管支腺癌、毛細血管カルチノイド、細胞癌、癌肉腫、胆管細胞癌、軟骨肉腫、嚢胞腺腫、卵黄嚢腫瘍、子宮内膜増殖症、子宮内膜間質肉腫、類内膜腺癌、上衣腫、ユーイング肉腫、限局性結節性過形成、ガストリン産生腫瘍、生殖系列腫瘍、神経膠腫、グルカゴン産生腫瘍、血管芽腫、血管内皮腫、血管腫、肝腺腫、肝腺腫症、肝細胞癌、インスリナイト（insulinite）、上皮内腫瘍、上皮内扁平細胞腫瘍、浸潤性扁平細胞癌、大細胞癌、脂肪肉腫、肺癌、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、平滑筋肉腫、黒色腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、神経鞘腫、髄芽腫、髄上皮腫、中皮腫、粘表皮癌、骨髄性白血病、神経芽細胞腫、神経上皮腺癌、結節性黒色腫、骨肉腫、卵巣癌、漿液性乳頭状腺癌、下垂体腫瘍、形質細胞腫、偽肉腫、前立腺癌、肺芽腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液性癌、扁平細胞癌、小細胞癌、軟組織癌、ソマトスタチン分泌腫瘍、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、未分化癌、ぶどう膜黒色腫、疣状癌、膣／外陰部癌、ＶＩＰ（血管作動性腸管ペプチド）産生腫瘍、及びウィルムス腫瘍の群から選択される。特定の実施態様では、本発明の１つ以上の抗体を用いて処置される予定の腫瘍／がんは、脳癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、急性骨髄性白血病、前駆Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、膀胱癌、星細胞腫、好ましくはグレードＩＩ、ＩＩＩ、又はＩＶの星細胞腫、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、小細胞癌、及び非小細胞癌、好ましくは非小細胞肺癌、肺腺癌、転移性黒色腫、アンドロゲン非依存性転移性前立腺癌、アンドロゲン依存性転移性前立腺癌、前立腺腺癌、及び乳癌、好ましくは乳管癌、及び／又は乳癌を含む。特定の実施態様では、この開示の抗体を用いて処置されるがんは、神経膠芽腫を含む。特定の実施態様では、この開示の１つ以上の抗体を用いて処置されるがんは、膵臓癌を含む。特定の実施態様では、この開示の１つ以上の抗体を用いて処置されるがんは、卵巣癌を含む。特定の実施態様では、この開示の１つ以上の抗体を用いて処置されるがんは、肺癌を含む。特定の実施態様では、この開示の１つ以上の抗体を用いて処置されるがんは、前立腺癌を含む。特定の実施態様では、この開示の１つ以上の抗体を用いて処置されるがんは、大腸癌を含む。特定の実施態様では、処置されるがんは、神経膠芽腫、膵臓癌、卵巣癌、大腸癌、前立腺癌、又は肺癌を含む。特定の実施態様では、がんは、他の処置に対して難治性である。特定の実施態様では、処置されるがんは、再発している。特定の実施態様では、がんは、再発した／難治性の神経膠芽腫、膵臓癌、卵巣癌、大腸癌、前立腺癌、又は肺癌である。
【0076】
治療法
特定の実施態様では、本明細書に記載の抗体は、それを必要とする被験者に、抗体を含有している医薬組成物の投与に適した任意の経路、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、又は脳内などの経路によって投与され得る。特定の実施態様では、該抗体は静脈内に投与される。特定の実施態様では、該抗体は、適切な投薬計画で、例えば週１回、週２回、月１回、月２回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、又は月１回などで投与される。特定の実施態様では、該抗体は３週間毎に１回投与される。該抗体は、任意の治療有効量で投与され得る。特定の実施態様では、治療に許容される量は、約０．１mg/kgから約５０mg/kgである。特定の実施態様では、治療に許容される量は、約１mg/kgから約４０mg/kgである。特定の実施態様では、治療に許容される量は、約５mg/kgから約３０mg/kgである。
特定の実施態様では、本明細書に記載の抗体は、それを必要とする被験者に、抗体を含有している医薬組成物の投与に適した任意の経路、例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、又は脳内などの経路によって投与され得る。特定の実施態様では、該抗体は静脈内に投与される。特定の実施態様では、該抗体は、適切な投薬計画で、例えば週１回、週２回、月１回、月２回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、又は月１回などで投与される。特定の実施態様では、該抗体は３週間毎に１回投与される。該抗体は、任意の治療有効量で投与され得る。特定の実施態様では、治療に許容される量は、約０．１mg/kgから約５０mg/kgである。特定の実施態様では、治療に許容される量は、約１mg/kgから約４０mg/kgである。特定の実施態様では、治療に許容される量は、約５mg/kgから約３０mg/kgである。
【0077】
本明細書に記載のＦＬＴ３アゴニスト作用抗体は、可溶性リガンドよりもより好ましいＰＫ（薬物動態）／ＰＤ（薬力学）特徴を有し、これにより、毎日の投与を必要としない投薬計画が可能となる。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いての個体への投薬間隔は、約２日間から約１４日間であり得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いての個体への投薬間隔は、約２日間から約３日間、約２日間から約４日間、約２日間から約５日間、約２日間から約６日間、約２日間から約７日間、約２日間から約８日間、約２日間から約９日間、約２日間から約１０日間、約２日間から約１１日間、約２日間から約１２日間、約２日間から約１４日間、約３日間から約４日間、約３日間から約５日間、約３日間から約６日間、約３日間から約７日間、約３日間から約８日間、約３日間から約９日間、約３日間から約１０日間、約３日間から約１１日間、約３日間から約１２日間、約３日間から約１４日間、約４日間から約５日間、約４日間から約６日間、約４日間から約７日間、約４日間から約８日間、約４日間から約９日間、約４日間から約１０日間、約４日間から約１１日間、約４日間から約１２日間、約４日間から約１４日間、約５日間から約６日間、約５日間から約７日間、約５日間から約８日間、約５日間から約９日間、約５日間から約１０日間、約５日間から約１１日間、約５日間から約１２日間、約５日間から約１４日間、約６日間から約７日間、約６日間から約８日間、約６日間から約９日間、約６日間から約１０日間、約６日間から約１１日間、約６日間から約１２日間、約６日間から約１４日間、約７日間から約８日間、約７日間から約９日間、約７日間から約１０日間、約７日間から約１１日間、約７日間から約１２日間、約７日間から約１４日間、約８日間から約９日間、約８日間から約１０日間、約８日間から約１１日間、約８日間から約１２日間、約８日間から約１４日間、約９日間から約１０日間、約９日間から約１１日間、約９日間から約１２日間、約９日間から約１４日間、約１０日間から約１１日間、約１０日間から約１２日間、約１０日間から約１４日間、約１１日間から約１２日間、約１１日間から約１４日間、又は約１２日間から約１４日間であり得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いた個体への投薬間隔は、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、又は約１４日間であり得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いた個体への投薬間隔は、少なくとも約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、又は約１２日間であり得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いた個体への投薬間隔は、最大で約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、又は約１４日間であり得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いた個体への投薬間隔は、約１週間から約５週間であり得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いた個体への投薬間隔は、約１週間から約２週間、約１週間から約３週間、約１週間から約４週間、約１週間から約５週間、約２週間から約３週間、約２週間から約４週間、約２週間から約５週間、約３週間から約４週間、約３週間から約５週間、又は約４週間から約５週間であり得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いた個体への投薬間隔は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、又は約５週間であり得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いた個体への投薬間隔は、少なくとも約１週間、約２週間、約３週間、又は約４週間であり得る。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を用いた個体への投薬間隔は、最大で約２週間、約３週間、約４週間、又は約５週間であり得る。
【0078】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、がんを発症するリスクのある個体に、又は臨床的寛解まで処置されていた癌若しくは最小残留疾患を有する癌を含む、癌について以前に成功裡に処置されていた個体に、投与され得る。
【0079】
薬学的に許容される賦形剤、担体、及び希釈剤
特定の実施態様では、今回の開示のアゴニストＦＬＴ３抗体は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含む医薬組成物に含まれる。特定の実施態様では、今回の開示の抗体は、無菌溶液中に懸濁して投与される。特定の実施態様では、該溶液は、約０．９％のＮａＣｌ又は約５％のデキストロース、グルコース、又はショ糖を含む。特定の実施態様では、該溶液はさらに、緩衝液、例えば酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、及びヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）；界面活性剤、例えばポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）、及びポロキサマー１８８；ポリオール／二糖／多糖、例えばグルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、トレハロース、及びデキストラン４０；アミノ酸、例えば、グリシン又はアルギニン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、メチオニン；又は、キレート剤、例えばＥＤＴＡ又はＥＧＴＡ、の中の１つ以上を含む。特定の実施態様では、今回の開示の抗体は、凍結乾燥して発送／保存され、投与前に復元される。特定の実施態様では、凍結乾燥した抗体製剤は、増量剤、例えばマンニトール、ソルビトール、ショ糖、トレハロース、及びデキストラン４０を含む。凍結乾燥製剤は、ガラスのバイアルに含まれて含有され得る。製剤化された場合、復元されるか否かに関わらず、該抗体は、特定のｐＨで、一般的には７．０未満で緩衝化され得る。特定の実施態様では、ｐＨは、４．５～６．５、４．５～６．０、４．５～５．５、４．５～５．０、又は５．０～６．０であり得る。
特定の実施態様では、今回の開示のアゴニストＦＬＴ３抗体は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤を含む医薬組成物に含まれる。特定の実施態様では、今回の開示の抗体は、無菌溶液中に懸濁して投与される。特定の実施態様では、該溶液は、約０．９％のＮａＣｌ又は約５％のデキストロース、グルコース、又はショ糖を含む。特定の実施態様では、該溶液はさらに、緩衝液、例えば酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、及びヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）；界面活性剤、例えばポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）、及びポロキサマー１８８；ポリオール／二糖／多糖、例えばグルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、トレハロース、及びデキストラン４０；アミノ酸、例えば、グリシン又はアルギニン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、メチオニン；又は、キレート剤、例えばＥＤＴＡ又はＥＧＴＡ、の中の１つ以上を含む。特定の実施態様では、今回の開示の抗体は、凍結乾燥して発送／保存され、投与前に復元される。特定の実施態様では、凍結乾燥した抗体製剤は、増量剤、例えばマンニトール、ソルビトール、ショ糖、トレハロース、及びデキストラン４０を含む。凍結乾燥製剤は、ガラスのバイアルに含まれて含有され得る。製剤化された場合、復元されるか否かに関わらず、該抗体は、特定のｐＨで、一般的には７．０未満で緩衝化され得る。特定の実施態様では、ｐＨは、４．５～６．５、４．５～６．０、４．５～５．５、４．５～５．０、又は５．０～６．０であり得る。
【0080】
本明細書には、適切な容器内の本明細書に記載の１つ以上の抗体と、使用説明書、希釈剤、賦形剤、担体、及び投与用の器具から選択された１つ以上の追加の成分とを含む、キットも記載されている。
【0081】
特定の実施態様では、本明細書には、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、又は希釈剤と、今回の開示の抗体とを混合する工程を含む、がん処置を調製する方法が記載されている。特定の実施態様では、本明細書には、今回の開示の１つ以上の抗体を凍結乾燥させる工程を含む、保存又は発送のためのがん処置を調製する方法が記載されている。
【0082】
実施例
以下の例示的な実施例は、本明細書に記載の組成物及び方法の実施態様を示し、いずれにしても限定することを意味するものではない。
以下の例示的な実施例は、本明細書に記載の組成物及び方法の実施態様を示し、いずれにしても限定することを意味するものではない。
【0083】
実施例１－ＦＬＴ３アゴニスト作用抗体の作製及びスクリーニング
特徴付けのための抗体を作製するために、ラット免疫化を行なった。レパートリーの多様性を最大限とするために、複数の抗原及びラット株を免疫化のために選択した。それ故、ウィスター系ラット及びスプラーグドーリーラットの両方が、組換えＦＬＴ３タンパク質（ＥＣＤ）、完全長ＦＬＴ３をコードしているＤＮＡ、又は、細胞内ドメインにアミノ酸が挿入され、その結果、その固有の二量体化がもたらされている完全長ＦＬＴ３をコードしているＤＮＡのいずれかを用いて免疫化された。陽性力価を有していたラットを、収集及びハイブリドーマ融合のために選択した。ハイブリドーマ上清のパネルを、ＦＬＴ３に対する結合についてスクリーニングし、選択したクローンをそのまま、ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼリポーターに基づいたアッセイにおける一次機能スクリーニングへと進めた。
特徴付けのための抗体を作製するために、ラット免疫化を行なった。レパートリーの多様性を最大限とするために、複数の抗原及びラット株を免疫化のために選択した。それ故、ウィスター系ラット及びスプラーグドーリーラットの両方が、組換えＦＬＴ３タンパク質（ＥＣＤ）、完全長ＦＬＴ３をコードしているＤＮＡ、又は、細胞内ドメインにアミノ酸が挿入され、その結果、その固有の二量体化がもたらされている完全長ＦＬＴ３をコードしているＤＮＡのいずれかを用いて免疫化された。陽性力価を有していたラットを、収集及びハイブリドーマ融合のために選択した。ハイブリドーマ上清のパネルを、ＦＬＴ３に対する結合についてスクリーニングし、選択したクローンをそのまま、ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼリポーターに基づいたアッセイにおける一次機能スクリーニングへと進めた。
【0084】
ヒトＦＬＴ３－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼを安定に発現している細胞を、９６ウェルのクリアボトム黒色ポリスチレンマイクロプレート中の１０％ＦＢＳの補充されたＤＭＥＭ中に４０，０００個の細胞/ウェルで播種した。翌日、細胞を、０．１％ＦＢＳの補充されたＤＭＥＭ中で２４時間かけて血清を枯渇させた。その後、細胞を、ＦＬＴ３Ｌ又は抗体のいずれかを用いて１８時間かけて３７℃で処理し、ＯＮＥ－Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬を使用して、ルシフェラーゼシグナルを定量した。図１に示される、１回量のスクリーニングから、ＦＬＴ３Ｌと比較して最も高い活性を有する、３つのクローンが同定され、その中の１つは６Ｂ２である（図１、アステリスク）。これらのクローンを追加のスクリーニングに進めた。下流スクリーニングには低い発現及び不十分な量に因り、６Ｂ２のＶ領域がシークエンスされ、ラット／ヒトキメラ分子（６Ｂ２－ｃｈｉｍ）として作製された。続いて、これらの３つのクローンを、同じＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼアッセイにおいて総用量反応曲線に進めて、相対的強度を決定した。このスクリーニングから、クローン６Ｂ２は、図に示されるように優れた活性を有するとして強調された。
【0085】
実施例２－キメラ６Ｂ２抗体ＮＢ１０１６及びそのヒト化変異体の作製
クローン６Ｂ２の重鎖及び軽鎖をさらに、ヒトＩｇＧ４ＰＡＡ及びヒトカッパ軽鎖骨格に移植して、第二のキメラ分子ＮＢ１０１６を作製した。「ＰＡＡ」は、（ｉ）ヒンジ領域を安定化させることによりＦａｂアームの交換を防ぐ、Ｓ２２８Ｐ突然変異（Silva et al. “The S228P mutation prevents in vivo and in vitro IgG4 Fab-arm exchange as demonstrated using a combination of novel quantitative immunoassays and physiological matrix preparation” J Biol Chem. 290(9):5462-9（2015）参照）、並びに（ｉｉ）ＦｃγＲ及びＣ１ｑへの結合を減少させ、ＡＤＣＣ機能及びＣＤＣ機能を効果的に消失させる、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ突然変異（Glaesner et al. “Engineering and characterization of the long-acting glucagon-like peptide-1 analogue LY2189265, an Fc fusion protein” Diabetes Metab Res Rev; 26: 287-296（2010）参照）を示すために使用される略称である。ヒト化ＮＢ１０１６変異体はまたＣＤＲ移植によっても作製され、ラットｍＡｂ ６Ｂ２ Ｖ領域を、ＩＭＧＴデータベースに対してＢＬＡＳＴにかけ、最も関連したＶＨ及びＶＬの生殖系列フレームワーク領域が、ＣＤＲ移植のための鋳型として選択された。ＣＤＲは、ＫＡＢＡＴ番号付けスキームに基づいて同定された。合計で、５×ＶＨ及び５×ＶＬのヒト化Ｖ領域が作製され、ヒト化ＶＨ及びＶＬの各組合せに基づいて、スクリーニングのための２５個のヒト化変異体が作製された。２５個のヒト化変異体を、ＮＢ１０１６と共に、１回の低用量のＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼアッセイでスクリーニングして、表１に示されるような相対的活性を決定した。
クローン６Ｂ２の重鎖及び軽鎖をさらに、ヒトＩｇＧ４ＰＡＡ及びヒトカッパ軽鎖骨格に移植して、第二のキメラ分子ＮＢ１０１６を作製した。「ＰＡＡ」は、（ｉ）ヒンジ領域を安定化させることによりＦａｂアームの交換を防ぐ、Ｓ２２８Ｐ突然変異（Silva et al. “The S228P mutation prevents in vivo and in vitro IgG4 Fab-arm exchange as demonstrated using a combination of novel quantitative immunoassays and physiological matrix preparation” J Biol Chem. 290(9):5462-9（2015）参照）、並びに（ｉｉ）ＦｃγＲ及びＣ１ｑへの結合を減少させ、ＡＤＣＣ機能及びＣＤＣ機能を効果的に消失させる、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ突然変異（Glaesner et al. “Engineering and characterization of the long-acting glucagon-like peptide-1 analogue LY2189265, an Fc fusion protein” Diabetes Metab Res Rev; 26: 287-296（2010）参照）を示すために使用される略称である。ヒト化ＮＢ１０１６変異体はまたＣＤＲ移植によっても作製され、ラットｍＡｂ ６Ｂ２ Ｖ領域を、ＩＭＧＴデータベースに対してＢＬＡＳＴにかけ、最も関連したＶＨ及びＶＬの生殖系列フレームワーク領域が、ＣＤＲ移植のための鋳型として選択された。ＣＤＲは、ＫＡＢＡＴ番号付けスキームに基づいて同定された。合計で、５×ＶＨ及び５×ＶＬのヒト化Ｖ領域が作製され、ヒト化ＶＨ及びＶＬの各組合せに基づいて、スクリーニングのための２５個のヒト化変異体が作製された。２５個のヒト化変異体を、ＮＢ１０１６と共に、１回の低用量のＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼアッセイでスクリーニングして、表１に示されるような相対的活性を決定した。
【0086】
【表1】
【0087】
表１のスクリーニングから、１２個のヒト化変異体が、ＡＭＬ５細胞の増殖を調べる２回目の機能スクリーニングにおける用量反応試験のために選択された。ＡＭＬ５細胞を、少なくとも１週間かけて、２０％ＦＢＳ及び２００ng/mLのＦＬＴ３Ｌを含む、α－ＭＥＭ中で培養し、その後、実験を実行した。アッセイを開始する前日に、細胞を、ＦＬＴ３Ｌを含まない、０．１％ＦＢＳで補充されたα－ＭＥＭを使用して一晩かけて血清を枯渇させた。その後、抗体又はＦＬＴ３Ｌを添加し、プレートを３７℃で７２時間インキュベートし、増殖は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬（プロメガ社）を使用して評価された。表２は、１２個の変異体が、全て非常に効力があったことを示し、互いに対して並びにキメラ分子ＮＢ１０１６に対して同等な活性を示す。それ故、ＮＢ１０６３（ヒト化ＶＨ１×ヒト化ＶＬ１（配列番号１１及び１２）を示す）が、フレームワーク使用の選択及び事前の分析特徴（サイズ排除クロマトグラフィー／疎水性相互作用クロマトグラフィー；データは示されていない）に基づいてさらなる分析のために選択された。
【0088】
【表2】
【0089】
実施例３－６Ｂ２アゴニスト作用は、受容体の二量体化を必要とし、それはＦｃＲ非依存性である。
一番上のクローン６Ｂ２がＦＬＴ３にアゴニスト作用する機序を解明するために、一価６Ｂ２Ｆａｂ及び二価６Ｂ２Ｆ（ａｂ）’２が作製され、抗体のそれぞれの機能的活性を、Ｆｃγ受容体を発現することが知られ、かつＦＬＴ３Ｌ依存性であるように馴化された、ＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞を使用して、細胞増殖アッセイにおいて測定した。ＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞を、αＭＥＭ＋２０％熱不活化ＦＢＳ及び２００ng/mLの組換えＦＬＴ３Ｌ中で２週間かけて馴化し、その後、αＭＥＭ＋０．１％熱不活化ＦＢＳ（ＦＬＴ３Ｌを含まない）中で２４時間かけて血清を枯渇させた。その後、細胞を、６Ｂ２、６Ｂ２Ｆａｂ、６Ｂ２Ｆ（Ａｂ）’２、又はアイソタイプ対照を用いて３７℃で３日間処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬（プロメガ社）を使用して、細胞生存率を測定した。図３に示されるように（左）、二価６Ｂ２Ｆ（ａｂ）’２は、６Ｂ２と等価なアゴニスト機能を保持し、このことはＦＬＴ３アゴニスト作用は、ＦｃＲの関与とは独立していることを示す。しかしながら、一価６Ｂ２Ｆａｂは、このアッセイでは機能的活性を示さず（図３右）、このことはＦＬＴ３アゴニスト作用がＦＬＴ３の二量体化を必要とすることを示す。
一番上のクローン６Ｂ２がＦＬＴ３にアゴニスト作用する機序を解明するために、一価６Ｂ２Ｆａｂ及び二価６Ｂ２Ｆ（ａｂ）’２が作製され、抗体のそれぞれの機能的活性を、Ｆｃγ受容体を発現することが知られ、かつＦＬＴ３Ｌ依存性であるように馴化された、ＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞を使用して、細胞増殖アッセイにおいて測定した。ＯＣＩ－ＡＭＬ５細胞を、αＭＥＭ＋２０％熱不活化ＦＢＳ及び２００ng/mLの組換えＦＬＴ３Ｌ中で２週間かけて馴化し、その後、αＭＥＭ＋０．１％熱不活化ＦＢＳ（ＦＬＴ３Ｌを含まない）中で２４時間かけて血清を枯渇させた。その後、細胞を、６Ｂ２、６Ｂ２Ｆａｂ、６Ｂ２Ｆ（Ａｂ）’２、又はアイソタイプ対照を用いて３７℃で３日間処理し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬（プロメガ社）を使用して、細胞生存率を測定した。図３に示されるように（左）、二価６Ｂ２Ｆ（ａｂ）’２は、６Ｂ２と等価なアゴニスト機能を保持し、このことはＦＬＴ３アゴニスト作用は、ＦｃＲの関与とは独立していることを示す。しかしながら、一価６Ｂ２Ｆａｂは、このアッセイでは機能的活性を示さず（図３右）、このことはＦＬＴ３アゴニスト作用がＦＬＴ３の二量体化を必要とすることを示す。
【0090】
実施例４－傾向の同定及びＮＢ１０６３変異体の作製
ＮＢ１０６３の軽鎖のＣＤＲ１は、「ＮＧ」アミノ酸モチーフを含有していた。このモチーフは脱アミド化部位を示し、これは下流製造における薬品の不均一性の原因となり得る。それ故、一連の軽鎖変異体を作製してこの傾向を除去し、ＮＢ１０６３と同等な活性を有する変異体を同定した。合計して、４個の変異体（Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｔ、及びＮ３１Ｌ）が作製され、ＡＭＬ５増殖アッセイの用量反応においてＮＢ１０６３と平行して試験し、この結果は表３に示されている。このスクリーニングから、ＮＢ１１１３が、ヒト一次細胞ベースアッセイにおいて、最終試験のために、脱アミド化部位の除去されたリードヒト化軽鎖変異体（Ｎ３１Ｓ）として同定された。
ＮＢ１０６３の軽鎖のＣＤＲ１は、「ＮＧ」アミノ酸モチーフを含有していた。このモチーフは脱アミド化部位を示し、これは下流製造における薬品の不均一性の原因となり得る。それ故、一連の軽鎖変異体を作製してこの傾向を除去し、ＮＢ１０６３と同等な活性を有する変異体を同定した。合計して、４個の変異体（Ｎ３１Ｄ、Ｎ３１Ｓ、Ｎ３１Ｔ、及びＮ３１Ｌ）が作製され、ＡＭＬ５増殖アッセイの用量反応においてＮＢ１０６３と平行して試験し、この結果は表３に示されている。このスクリーニングから、ＮＢ１１１３が、ヒト一次細胞ベースアッセイにおいて、最終試験のために、脱アミド化部位の除去されたリードヒト化軽鎖変異体（Ｎ３１Ｓ）として同定された。
【0091】
【表3】
【0092】
実施例５－ヒト及びカニクイザルのＦＬＴ３に対するＮＢ１１１３の結合及び機能的活性
ＮＢ１１１３はヒトＦＬＴ３に結合するがマウスＦＬＴ３には結合しないので、ＮＢ１１１３の結合及び機能的活性を、ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）の両方のＦＬＴ３発現系において評価した。ヒト及びカニクイザルのＦＬＴ３－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼを安定に発現している細胞を、結合アッセイ及び機能的アッセイの両方のために使用した。ヒト又はカニクイザルのＦＬＴ３に対するＮＢ１１１３の結合は、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中の様々な濃度のＮＢ１１１３を使用したフローサイトメトリー、続くＡＦ４８８抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体を使用した検出によって評価された。図４に示されるように、ＮＢ１１１３は、ヒト及びカニクイザルのＦＬＴ３の両方に同様に結合し、ＥＣ５０は１．３６nM（ヒト）及び０．９０nM（カニクイザル）である。これらの結果は、ＮＢ１１１３の効力も実証しつつ、ヒト及びサルのＦＬＴ３に対するＮＢ１１１３の交差反応性を実証した。
ＮＢ１１１３はヒトＦＬＴ３に結合するがマウスＦＬＴ３には結合しないので、ＮＢ１１１３の結合及び機能的活性を、ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）の両方のＦＬＴ３発現系において評価した。ヒト及びカニクイザルのＦＬＴ３－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼを安定に発現している細胞を、結合アッセイ及び機能的アッセイの両方のために使用した。ヒト又はカニクイザルのＦＬＴ３に対するＮＢ１１１３の結合は、ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ中の様々な濃度のＮＢ１１１３を使用したフローサイトメトリー、続くＡＦ４８８抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体を使用した検出によって評価された。図４に示されるように、ＮＢ１１１３は、ヒト及びカニクイザルのＦＬＴ３の両方に同様に結合し、ＥＣ５０は１．３６nM（ヒト）及び０．９０nM（カニクイザル）である。これらの結果は、ＮＢ１１１３の効力も実証しつつ、ヒト及びサルのＦＬＴ３に対するＮＢ１１１３の交差反応性を実証した。
【0093】
ＮＢ１１１３の機能的活性を評価するために、ヒト及びカニクイザルのＦＬＴ３－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼ細胞を、９６ウェルのクリアボトム黒色ポリスチレンマイクロプレート中の１０％ＦＢＳの補充されたＤＭＥＭ中に４０，０００個の細胞/ウェルで播種した。翌日、細胞を、０．１％ＦＢＳの補充されたＤＭＥＭ中で２４時間かけて血清を枯渇させた。その後、細胞を、ＮＢ１１１３を用いて１８時間かけて３７℃で処理し、ＯＮＥ－Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬（プロメガ社）を使用して、ルシフェラーゼシグナルを定量した。図５に示されるように、ＮＢ１１１３は、ヒト及びカニクイザルの両方のＦＬＴ３－ＳＴＡＴ５－ルシフェラーゼアッセイにおいて類似した活性を示し、ＥＣ５０は１．１nM（ヒト）及び１．６nM（カニクイザル）である。
【0094】
実施例６－樹状細胞（ＤＣ）増幅アッセイ
ＦＬＴ３アゴニスト作用により、樹状細胞の増幅が起こるので、ＮＢ１１１３を、関連した生理学的モデルで試験した。ヒト骨髄を商業的供給源から入手し、ＡＣＫ溶解緩衝液中への懸濁によって赤血球を枯渇させた。結果として得られた赤血球溶解骨髄細胞を、１０％ＦＢＳ、２００nMのＬ－グルタミン、及び５０μMのβ－メルカプトエタノールを有するＲＰＭＩ１６４０培地中に再懸濁し、９６ウェルの培養プレート中に１ウェルあたり１．５×１０５個の細胞で播種した。用量反応中の培養液をＦＬＴ３Ｌ又はＮＢ１１３の存在下で、１２日間インキュベートした。この期間の終了時に、細胞を、樹状細胞増殖について、標準的なフローサイトメトリー染色プロトコール、及びＣＤ１ｃとＨＬＡ－ＤＲ＋に対する抗体、並びに、生死判定染色を使用した、フローサイトメトリーによって分析した。図６に示されるように、ＮＢ１１１３は、ＦＬＴ３Ｌと同等な、樹状細胞の強力な増幅を示す。
ＦＬＴ３アゴニスト作用により、樹状細胞の増幅が起こるので、ＮＢ１１１３を、関連した生理学的モデルで試験した。ヒト骨髄を商業的供給源から入手し、ＡＣＫ溶解緩衝液中への懸濁によって赤血球を枯渇させた。結果として得られた赤血球溶解骨髄細胞を、１０％ＦＢＳ、２００nMのＬ－グルタミン、及び５０μMのβ－メルカプトエタノールを有するＲＰＭＩ１６４０培地中に再懸濁し、９６ウェルの培養プレート中に１ウェルあたり１．５×１０５個の細胞で播種した。用量反応中の培養液をＦＬＴ３Ｌ又はＮＢ１１３の存在下で、１２日間インキュベートした。この期間の終了時に、細胞を、樹状細胞増殖について、標準的なフローサイトメトリー染色プロトコール、及びＣＤ１ｃとＨＬＡ－ＤＲ＋に対する抗体、並びに、生死判定染色を使用した、フローサイトメトリーによって分析した。図６に示されるように、ＮＢ１１１３は、ＦＬＴ３Ｌと同等な、樹状細胞の強力な増幅を示す。
【0095】
実施例７－カニクイザルにおけるＮＢ１１１３及び樹状細胞の増幅の薬物動態分析。
ＮＢ１１１３はカニクイザルＦＬＴ３に結合し、それ故、ＮＢ１１１３の薬物動態及びインビボでの樹状細胞の増幅能を、雌カニクイザルにおいて評価した。アジアを起源とする雌カニクイザル（マカカ・ファシクラリス（Macaca fascicularis））は２つのグループに割り当てられ、それぞれ１mg/kg又は１０mg/kgのＮＢ１１１３のいずれかの投与を受けた。動物は、５mL/kgの容量での伏在静脈を介した静脈内ボーラス注射を介して、投薬期間の１日目に、１回量の投与を受けた。ビヒクル／希釈剤は、リン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）（１×）であった。毒性の評価は、死亡率、臨床観察、体重、食物消費の質、及び臨床病態に基づいた。カニクイザルに対する、１又は１０mg/kgのＮＢ１１１３の１回の静脈内投与は良好な耐容性を示し、ＮＢ１１１３に関連した臨床的観察は全く認められなかった。薬物動態評価用の血液試料を、投薬１日前、並びに投薬後約０．２５、２、６、１２、２４、４８、９６、１６８、３３６、５０４、及び６７２時間後に大腿静脈を介して回収した。血液を、血清分離管（抗凝固剤を含まない）に回収し、室温で凝固させ、回収から１時間以内に遠心分離にかけ、分析するまで－６０℃から－８０℃で保存した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析が、タンデム質量分析を伴う液体クロマトグラフィー（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法を使用したサル血清試料中のＮＢ１１１３の濃度を決定するために使用された。時間０におけるＮＢ１１１３の外挿の平均濃度（Ｃ０）、観察された最大濃度（Ｃｍａｘ）、及び投薬後０～６７２時間までの濃度時間曲線下面積の数値（ＡＵＣ０～６７２）によって評価されるような曝露は、１～１０mg/kgまでの用量レベルの増加と共に増加した（図７）。Ｃｍａｘ平均値及びＡＵＣ０～６７２値の増加は、ほぼ用量に比例した。１０mg/kgのＮＢ１１１３の用量レベルは、それぞれ、２５７μg/mL及び３３，３００ｈ・μg/mLという、１日目の血清中Ｃｍａｘ値及びＡＵＣ０～６７２値に相当した。
ＮＢ１１１３はカニクイザルＦＬＴ３に結合し、それ故、ＮＢ１１１３の薬物動態及びインビボでの樹状細胞の増幅能を、雌カニクイザルにおいて評価した。アジアを起源とする雌カニクイザル（マカカ・ファシクラリス（Macaca fascicularis））は２つのグループに割り当てられ、それぞれ１mg/kg又は１０mg/kgのＮＢ１１１３のいずれかの投与を受けた。動物は、５mL/kgの容量での伏在静脈を介した静脈内ボーラス注射を介して、投薬期間の１日目に、１回量の投与を受けた。ビヒクル／希釈剤は、リン酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）（１×）であった。毒性の評価は、死亡率、臨床観察、体重、食物消費の質、及び臨床病態に基づいた。カニクイザルに対する、１又は１０mg/kgのＮＢ１１１３の１回の静脈内投与は良好な耐容性を示し、ＮＢ１１１３に関連した臨床的観察は全く認められなかった。薬物動態評価用の血液試料を、投薬１日前、並びに投薬後約０．２５、２、６、１２、２４、４８、９６、１６８、３３６、５０４、及び６７２時間後に大腿静脈を介して回収した。血液を、血清分離管（抗凝固剤を含まない）に回収し、室温で凝固させ、回収から１時間以内に遠心分離にかけ、分析するまで－６０℃から－８０℃で保存した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析が、タンデム質量分析を伴う液体クロマトグラフィー（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法を使用したサル血清試料中のＮＢ１１１３の濃度を決定するために使用された。時間０におけるＮＢ１１１３の外挿の平均濃度（Ｃ０）、観察された最大濃度（Ｃｍａｘ）、及び投薬後０～６７２時間までの濃度時間曲線下面積の数値（ＡＵＣ０～６７２）によって評価されるような曝露は、１～１０mg/kgまでの用量レベルの増加と共に増加した（図７）。Ｃｍａｘ平均値及びＡＵＣ０～６７２値の増加は、ほぼ用量に比例した。１０mg/kgのＮＢ１１１３の用量レベルは、それぞれ、２５７μg/mL及び３３，３００ｈ・μg/mLという、１日目の血清中Ｃｍａｘ値及びＡＵＣ０～６７２値に相当した。
【0096】
免疫表現型検査のための血液試料を、大腿静脈を介して２回、投薬前の期間中、及び投薬期間の５日目、８日目、１５日目、２２日目、及び２８日目に回収した。血液を、抗凝固剤のエチレンジアミン四酢酸カリウム塩を使用して回収し、フローサイトメトリーを使用して直ちに分析した（表４参照）。
【0097】
１又は１０mg/kgのＮＢ１１１３の投与により、投薬期間の５日目から２２日目までの間に、全ＤＣ集団（Ｌｉｎ-ＣＤ１６-ＨＬＡ-ＤＲ+細胞として定義される）、ｃＤＣ２集団（Ｌｉｎ-ＣＤ１６-ＨＬＡ-ＤＲ+ＢＤＣＡ-１+細胞として定義される）、及びｐＤＣ集団（Ｌｉｎ-ＣＤ１６-ＨＬＡ-ＤＲ+ＣＤ１２３+/ｂｒｉｇｈｔ ＢＤＣＡ－２+細胞として定義される）の増加がもたらされた（図８）。結果は、静脈内への１回量のＮＢ１１１３が、インビボにおいて効果的に樹状細胞を増幅することができることを実証する。
【0098】
全Ｔ細胞集団（ＣＤ３＋）、ヘルパーＴ細胞集団（Ｔｈ：ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８－）、細胞障害性Ｔ細胞集団（ＣＤ３＋ＣＤ４－ＣＤ８＋）、及びＢ細胞集団（ＣＤ３－ＣＤ２０＋）に観察された小さな変化は、規模が小さく、この種において記述された生物学的ばらつきの正常範囲内にあった（図９）。ＮＫ細胞はＮＢ１１１３による処置に応答して僅かに減少したが、レベルは、全分析期間を通して投与前の数値よりも低いままであった。単球集団に観察された小さな変化は、動物群間及び投薬群間でばらつきがあった（図９）。
【0099】
血小板数に対するＮＢ１１１３の効果を試験するために、血液学的分析用の試料を、投薬期間の１日目、３日目、４日目、５日目、６日目、１１日目、及び１８日目に回収した。血液試料を、断食させた動物から大腿静脈又は橈側皮静脈を介して回収した。投薬前の期間の数値と比較して、血小板数は一般的に、２日目から６日目までに減少し（－１．１から－１７．８％へ）、８日目から２２日目まで増加し（＋１．１から＋４２．８％へ）、その後、２８日目までに基線値に戻った（図１０）。減少した血小板数は、ＦＬＴ３受容体リガンドで処置されたサルにおいて、ＮＢ１１１３に関連した所与の類似した所見であると想定された（Reeves et al. “Systemic dendritic cell mobilization associated with administration of FLT3 ligand to SIV- and SHIV-infected macaques.” AIDS Res Hum Retroviruses. Dec; 25(12): 1313-28. (2009)）。
【0100】
【表4】
【0101】
本発明の好ましい実施態様が本明細書において示され記載されているが、このような実施態様は単に例として提供されていることが当業者には明らかであろう。数多くの変種、変化、及び置換がすぐに、本発明から逸脱することなく、当業者には思いつくであろう。本明細書に記載の本発明の実施態様に対する様々な代替選択肢が、本発明を実施する際に使用され得ることが理解されるべきである。
【0102】
本明細書に言及されている全ての刊行物、特許出願、交付済み特許、及び他の文書は、各々の個々の刊行物、特許出願、交付済み特許、及び他の文書が具体的かつ個々にその全体が参照により組み込まれていると示されているかのように、参照により本明細書に組み入れられる。参照により組み込まれた文書に含まれる定義が、該定義が本開示の定義と矛盾する場合には除外される。
【0103】
【表5】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【配列表】
【国際調査報告】