特表 2022-514144 細胞治療のための移植可能なデバイス、及び関連する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-10

(54)【発明の名称】細胞治療のための移植可能なデバイス、及び関連する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 9/50 20060101AFI20220203BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20220203BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20220203BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220203BHJP

   A61L 27/38 20060101ALI20220203BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20220203BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20220203BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220203BHJP

   C07K 7/06 20060101ALI20220203BHJP

   A61P 7/04 20060101ALN20220203BHJP

   A61K 38/37 20060101ALN20220203BHJP

   A61K 38/36 20060101ALN20220203BHJP

   C07K 14/745 20060101ALN20220203BHJP

【ＦＩ】

A61K9/50

A61K9/06

A61K47/36

A61K48/00

A61L27/38

A61K47/42

A61K35/12

C12N5/10 ZNA

C07K7/06

A61P7/04

A61K38/37

A61K38/36

C07K14/745

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021517306

(86)(22)【出願日】2019-09-27

(85)【翻訳文提出日】2021-05-21

(86)【国際出願番号】 US2019053637

(87)【国際公開番号】W WO2020069429

(87)【国際公開日】2020-04-02

(31)【優先権主張番号】62/737,835

(32)【優先日】2018-09-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】62/824,768

(32)【優先日】2019-03-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519118164

【氏名又は名称】シギロン セラピューティクス， インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＩＧＩＬＯＮ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】バーニー， ローレン， エミリー

(72)【発明者】

【氏名】ハイデブレクト， リチャード

(72)【発明者】

【氏名】ミラー， ロバート， ジェームズ

(72)【発明者】

【氏名】オベルリ， マティアス， アレクサンダー

(72)【発明者】

【氏名】イン， ゾエ

(72)【発明者】

【氏名】ボウレガード， マイケル

(72)【発明者】

【氏名】ジョンストン， エリカ エレン

(72)【発明者】

【氏名】オコナー， オーウェン

(72)【発明者】

【氏名】ヴィーシャ， オミド

(72)【発明者】

【氏名】カルモナ， ギヨーム

(72)【発明者】

【氏名】ゴンザレス， フランシスコ キャバレロ

(72)【発明者】

【氏名】ペリット， デイビッド

(72)【発明者】

【氏名】スミス， デヴィン マッキンリー

(72)【発明者】

【氏名】ウォットン， ポール ケヴィン

(72)【発明者】

【氏名】スウェル， ジャレッド エー．

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C081

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA01

4B065BD06

4B065BD41

4B065CA24

4B065CA44

4C076AA09

4C076AA53

4C076AA63

4C076AA95

4C076BB21

4C076CC14

4C076EE36

4C076EE41

4C081AB11

4C081CD34

4C081CE02

4C081CE03

4C081DA12

4C081DB02

4C081DC04

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA44

4C084DC14

4C084DC15

4C084DC16

4C084MA38

4C084MA65

4C084NA03

4C084NA05

4C084NA13

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087MA38

4C087MA65

4C087NA03

4C087NA05

4C087NA13

4C087ZA53

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA12

4H045BA13

4H045BA14

4H045BA56

4H045CA40

4H045DA65

4H045DA66

4H045EA20

4H045EA65

(57)【要約】

本出願で説明されているのは、異物反応（ＦＢＲ）を軽減するための手段と、細胞結合物質（ＣＢＳ）を含むポリマー組成物中でカプセル化された複数の細胞（例えば生細胞）を含む少なくとも１個の細胞含有区画とを含む移植可能なデバイス、並びにこのデバイスを製造するための及び使用するための組成物及び方法である。この細胞は、本出願で説明されている疾患、障害、又は状態の処置に有用な治療薬を発現し得る。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒドロゲルカプセルであって、
（ａ）リンカーを介して細胞結合ペプチド（ＣＢＰ）で共有結合的に修飾されたアルギン酸塩を含む第１のポリマー組成物中でカプセル化された複数の組み換えＲＰＥ細胞を含む細胞含有区画であって、任意選択的に、前記リンカーは、前記ＣＢＰのアミン末端に連結されている、細胞含有区画と、
（ｂ）前記細胞結合区画を取り囲み且つ第２のポリマー組成物を含むバリア区画であって、前記第２のポリマー組成物は、表４で示されている化合物１０１、化合物１００、化合物１１０、化合物１１２、化合物１１３、及び化合物１１４からなる群から選択される少なくとも１種の化合物で共有結合的に修飾されたアルギン酸塩を含む、バリア区画と
を含み、
前記ヒドロゲルカプセルは、球状の形状であり、且つ直径が０．７ミリメートル～３．０ミリメートルであり、
前記細胞含有区画は、いかなる抗線維性化合物も実質的に含まず、前記バリア区画は、細胞を実質的に含まず、且つ前記ＣＢＰを実質的に含まず、
前記組み換えＲＰＥ細胞は、治療用ポリペプチドをコードする外因性のヌクレオチド配列を含み、
前記ＣＢＰペプチドは、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９）を含み、前記リンカーは、１個のグリシン残基、２個のグリシン残基、３個のグリシン残基、１個のベータ－アラニン残基、２個のベータ－アラニン残基、及び３個のベータ－アラニン残基から本質的になる、
ヒドロゲルカプセル。

【請求項2】

前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩上の前記ＣＢＰの密度は、ＣＢＰなしの参照ヒドロゲルカプセルと比較して、マウスへの前記カプセルの移植後１週間、２週間、４週間、８週間、又は１２週間で、インビボでの前記治療用ポリペプチドの産生を少なくとも１．２５倍増加させるのに十分な量であり、任意選択的に、前記産生の増加は、少なくとも１．５倍、２倍、５倍、又はより高い、請求項１に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項3】

前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩上の前記ＣＢＰの密度は、ＣＢＰなしの参照ヒドロゲルカプセルと比較して、マウスへの前記カプセルの移植後１週間、２週間、４週間、８週間、又は１２週間で、前記組み換えＲＰＥ細胞の生存率を少なくとも１０％増加させるのに十分な量であり、任意選択的に、前記細胞の生存率の増加は、少なくとも２５％、５０％、又はより高い、請求項１又は２に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項4】

前記ＣＢＰは、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９）であり、前記リンカーは、前記ＣＢＰのアミン末端に連結された１個のグリシン残基から本質的になる、請求項１～３のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項5】

前記第１のポリマー組成物中の前記アルギン酸塩は、分子量が７５ｋＤａ～１５０ｋＤａであり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上である、請求項１～４のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項6】

前記バリア区画中における前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩中の前記アルギン酸塩は、分子量が７５ｋＤａ未満であり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上であり、前記第２のポリマー組成物は、非修飾アルギン酸塩をさらに含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項7】

前記バリア区画中の前記非修飾アルギン酸塩は、分子量が１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａであり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上である、請求項６に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項8】

化合物１０１は、前記第２のポリマー組成物中における前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩中の化合物である、請求項１～７のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項9】

前記治療用ポリペプチドは、第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド、第ＶＩＩ因子ポリペプチド、及びＦＩＸポリペプチドからなる群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項10】

前記組み換えＲＰＥ細胞は、ＡＲＰＥ－１９細胞に由来しており、任意選択的に、前記ＡＲＰＥ－１９細胞は、前記第１のポリマー組成物 １ミリリットル当たり約２５００万～３５００万個、約３５００万～約４５００万個、又は約４０００万個の細胞の濃度で存在し、前記細胞含有区画中における前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩中の前記アルギン酸塩は、分子量が７５ｋＤａ～１５０ｋＤａであり、Ｇ：Ｍ比が１：５以上であり、且つＧＲＧＤＳＰで共有結合的に修飾されており、任意選択的に、前記アルギン酸塩上のＧＲＧＤＳＰの密度は、定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイにより決定した場合に、粘度が８０～１２０ｃＰである生理食塩水中の前記ＧＲＧＤＳＰ－アルギン酸塩１グラム当たりＧＲＧＤＳＰ約０．１～約１．０マイクロモルである、請求項１～９のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項11】

前記治療用ポリペプチドは、第ＶＩＩＩ因子－ＢＤＤポリペプチドであり、前記外因性のヌクレオチド配列は、配列番号１５を含み、前記第１のポリマー組成物中の前記アルギン酸塩は、分子量が７５ｋＤａ～１５０ｋＤａであり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上であり、前記アルギン酸塩上のＧＲＧＤＳＰの密度は、定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイにより決定した場合に、粘度が８０～１２０ｃＰである生理食塩水中の前記ＧＲＧＤＳＰ－アルギン酸塩１グラム当たりＧＲＧＤＳＰ約０．３～約０．６マイクロモルである、請求項１～１０のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項12】

前記バリア区画中の前記第２のポリマー組成物は、分子量が１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上である非修飾アルギン酸塩をさらに含み、
前記バリア区画中における前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩中の前記アルギン酸塩は、分子量が７５ｋＤａ未満であり、Ｇ：Ｍ比が１．５以上であり、且つ前記化合物が化合物１０１であり、
前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩中の化合物１０１のコンジュゲーション密度は、窒素パーセントに関する燃焼分析により決定した場合に、少なくとも２．０％の窒素且つ９．０％未満の窒素であるか、又は３．０％～８．０％、４．０％～７．０％、５．０％～７．０％、若しくは６．０％～７．０％の窒素である、
請求項１～１１のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項13】

前記ヒドロゲルカプセルは、直径が約１．５ｍｍであり、前記バリア区画の厚さは、約１８０μｍ～２６０μｍであるか、又は約３１０μｍ～４４０μｍである、請求項１～１２のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項14】

球状の形状であり、且つ直径が約１．５ｍｍであるヒドロゲルカプセルであって、
（ａ）ＧＲＧＤＳＰで共有結合的に修飾されたアルギン酸塩中でカプセル化された複数の組み換えＲＰＥ細胞を含む細胞含有区画であって、前記組み換えＲＰＥ細胞は、ＡＲＰＥ－１９細胞に由来しており、且つ外因性のヌクレオチド配列を含み、前記外因性のヌクレオチド配列は、第ＶＩＩＩ因子－ＢＤＤタンパク質をコードするコドン最適化配列に動作可能に連結されたプロモーター配列と、ポリＡ配列とを含み、前記アルギン酸塩は、分子量が７５ｋＤａ～１５０ｋＤａであり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上である、細胞含有区画と、
（ｂ）前記細胞結合区画を取り囲み、且つ表４で示されている化合物１０１で共有結合的に修飾されたアルギン酸塩と非修飾アルギン酸塩との混合物を含むバリア区画であって、前記供給結合的に修飾されたアルギン酸塩中の前記アルギン酸塩は、分子量が７５ｋＤａ未満であり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上であり、前記非修飾アルギン酸塩は、分子量が１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａであり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上である、バリア区画と
を含むヒドロゲルカプセル。

【請求項15】

前記プロモーター配列は、配列番号２３から本質的になり、前記コドン最適化配列は、配列番号１５から本質的になり、前記ポリＡ配列は、配列番号２４から本質的になる、請求項１４に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項16】

前記アルギン酸塩上のＧＲＧＤＳＰの密度は、定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイにより決定した場合に、粘度が８０～１２０ｃＰである生理食塩水中の前記ＧＲＧＤＳＰ－アルギン酸塩１グラム当たりＧＲＧＤＳＰ約０．３～約０．６マイクロモルである、請求項１４又は１５に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項17】

デバイスであって、
（ｃ）ポリマー組成物を含む少なくとも１個の細胞含有区画であって、前記ポリマー組成物は、第１の細胞結合物質（ＣＢＳ）を含み、且つ前記デバイスが対象（例えばヒト）に移植された場合に治療薬を発現し得る複数の細胞をカプセル化しており、前記細胞は、膵島細胞ではない、細胞含有区画と、
（ｄ）前記デバイスが前記対象に移植された場合に異物反応（ＦＢＲ）を軽減するための手段と
を含むデバイス。

【請求項18】

デバイスであって、
（ａ）ポリマー組成物、例えばポリマーマトリックス、例えばヒドロゲルマトリックス、であって、
（ｉ）第１の細胞結合物質（ＣＢＳ）と、
（ｉｉ）治療薬を提供し得る、例えば、産生し得るか、発現し得るか、又は放出し得る複数の細胞であって、膵島細胞ではない細胞と
を含むポリマー組成物を含み、下記の特性：
（ｂ）球状の形状と、少なくとも１．０ｍｍ、１．３ｍｍ、１．５ｍｍ、２．０ｍｍ、２．５ｍｍ、若しくは３．０ｍｍの線形寸法、例えば直径との組み合わせを含むか；
（ｃ）前記ポリマー組成物は、区画内に配置されており、例えば、前記ポリマー組成物を取り囲む生体適合性ポリマーを含む区画内に若しくはマトリックス内に配置されているか；
（ｄ）いくつかの実施形態において前記デバイスの外面上に配置された実体、例えば、ＦＢＲを軽減する化合物、例えば、本明細書で定義されている抗線維性化合物を含むか；
又は
（ｅ）前記デバイスは、抗線維性化合物、例えば、本明細書で説明されている抗線維性化合物、例えば、前記デバイスの外側に配置された抗線維性化合物を含む
の内の１つを含むデバイス。

【請求項19】

前記第１のＣＢＳは、第１のリンカーを介して第１のポリマーに共有結合的に付着した第１のＣＢＰ（「第１のＣＢＰ－ポリマー」）を含む、請求項１７又は１８に記載のデバイス。

【請求項20】

前記第１のＣＢＰは、ＤＧＥＡ、ＦＹＦＤＬＲ、ＨＡＶＤＩ、ＰＨＳＲＮ、ＲＥＤＶ、ＲＧＤ、ＲＧＤＳＰ、ＹＩＧＳＲ、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、及び配列番号５８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載のデバイス。

【請求項21】

前記第１のリンカーは、１個、２個、若しくは３個のグリシン残基から本質的になるか又は１個のベータ－アラニン残基から本質的になる直鎖アミノ酸リンカーである、請求項１９又は２０に記載のデバイス。

【請求項22】

前記第１のＣＰＢは、ＲＧＤ又はＲＧＤＳＰから本質的になる、請求項２１に記載のデバイス。

【請求項23】

前記複数の細胞は、組み換えＲＰＥ細胞である、請求項１７～２２のいずれか一項に記載のデバイス。

【請求項24】

前記組み換えＲＰＥ細胞は、ＡＲＰＥ－１９細胞に由来しており、且つ外因性の核酸配列を含み、前記外因性の核酸配列は、ポリペプチドのコード配列に動作可能に連結されたプロモーター配列を含み、前記プロモーター配列は、配列番号２３から本質的になるか、又はからなる、請求項２３に記載のデバイス。

【請求項25】

前記コード配列は、配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、及び１７からなる群から選択されるコドン最適化ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤコード配列であるか、又は配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるコドン最適化ＦＩＸ－ｐａｄｕａコード配列である、請求項２４に記載のデバイス。

【請求項26】

デバイスの調製物であって、前記調製物中の各デバイスは、請求項１７～２５のいずれか一項に記載のデバイスである、デバイスの調製物。

【請求項27】

対象の体内に入れるのに適した医薬組成物である請求項２６に記載のデバイスの調製物。

【請求項28】

ヒドロゲルカプセルであって、
（ｃ）第１のＲＧＤ－ポリマーを含む第１のポリマー組成物中でカプセル化された複数の細胞を含む細胞含有区画と、
（ｄ）前記細胞結合区画を取り囲み且つ第２のポリマー組成物を含むバリア区画であり、前記第２のポリマー組成物は、非修飾アルギン酸塩と、（ｅ）表４で示されているｌｅ ４からなる群から選択される少なくとも１種の化合物で共有結合的に修飾されたアルギン酸塩との混合物を含み、
前記ヒドロゲルカプセルは、球状の形状であり、且つ直径が０．５ミリメートル～５ミリメトールであり、前記細胞は、膵島細胞ではない、
ヒドロゲルカプセル。

【請求項29】

前記複数の細胞は、組み換えＡＲＰＥ－１９細胞である、請求項２８に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項30】

前記組み換えＡＲＰＥ－１９細胞は、外因性の核酸配列を含み、前記外因性の核酸配列は、ポリペプチドのコード配列に動作可能に連結されたプロモーター配列を含み、前記プロモーター配列は、配列番号２３から本質的になるか、又はからなる、請求項２９に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項31】

前記コード配列は、配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、及び１７からなる群から選択されるコドン最適化ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤコード配列であるか、又は配列番号１９、２０、及び２１からなる群から選択されるコドン最適化ＦＩＸ－ｐａｄｕａコード配列である、請求項３０に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項32】

前記ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤコード配列は、配列番号１５であり、前記第１のＲＧＤ－ポリマーは、Ｇ_１～３ＲＧＤ又はＧ_１～３ＲＧＤＳＰと共有結合的にコンジュゲートしたアルギン酸塩から本質的になり、任意選択的に、前記細胞含有区画中における前記複数の細胞の濃度は、前記第１ポリマー組成物１ミリリットル当たり約３５００万～約４５００万個の細胞である、請求項３１に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項33】

前記アルギン酸塩は、ＧＲＧＤＳＰとコンジュゲートしている、請求項３２に記載のヒドロゲルカプセル。

【請求項34】

ヒドロゲルカプセルの調製物であって、前記調製物中の各カプセルは、請求項１～１６のいずれか一項又は請求項２８～３３のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセルである、ヒドロゲルカプセルの調製物。

【請求項35】

前記調製物中の各カプセルは、直径が１．４～１．６ミリメートルである、請求項３４に記載のヒドロゲルカプセルの調製物。

【請求項36】

対象の腹膜腔に入れるか又は移植するのに適した薬学的に許容可能な組成物である請求項３４又は３５に記載のヒドロゲルカプセルの調製物。

【請求項37】

治療薬が必要な対象の処置での使用のための組成物であって、前記処置は、
請求項２６若しくは２７に記載のデバイスの調製物を準備するか、又は請求項３～３６のいずれか一項に記載のヒドロゲルカプセルの調製物を準備すること、
及び
前記調製物を対象の体腔に移植すること
を含む、使用のための組成物。

【請求項38】

前記治療薬は、血液凝固因子である、請求項３７に記載の使用のための組成物。

【請求項39】

前記血液凝固因子は、第ＶＩＩＩ因子－ＢＤＤタンパク質であり、前記第ＶＩＩＩ因子－ＢＤＤタンパク質は、配列番号１から本質的になる、請求項３８に記載の使用のための組成物。

【請求項40】

前記血液凝固因子は、第ＩＸ因子－ｐａｄｕａタンパク質であり、前記第ＩＸ因子－ｐａｄｕａタンパク質は、配列番号３６を含む、請求項３８に記載の使用のための組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

優先権の主張
本出願は、２０１８年９月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／７３７，８３５号；及び２０１９年３月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／８２４，７６８号に対する優先権を主張するものである。上記の仮出願のそれぞれの開示内容は、全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、全体が参照により本明細書に援用される配列表を含む。２０１９年９月２０日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｓ２２２５－７０２６ＷＯ＿ＳＬという名称であり、サイズは２１３，２０９バイトである。

【背景技術】

【0003】

慢性疾患及び遺伝性疾患を処置し得る治療剤を産生するように組み換えられている細胞を移植することによるそのような疾患の処置には、そのような疾患の患者の健康を改善するという刺激的な可能性がある。この可能性を完全に達成するためには、移植された細胞は、生存できるように患者の免疫反応から保護されなければならず、且つ移植された細胞はまた、数週間、数ヶ月、又はさらに長い期間にわたり、所望の治療剤の治療レベルを産生する能力も有しなければならない。そのような細胞治療を送達するための一つの探索的アプローチは、デバイス構造がこの細胞を免疫系細胞から単離する一方で、この細胞のための栄養素の進入及び産生された治療剤の排出を可能にすることを目的として、組み換え細胞を半透過性のデバイス（例えばヒドロゲルカプセル）にカプセル化することである。移植可能なデバイスに含まれる生細胞の生存率及び／又は産生性の増加を達成するために、この一般的なアプローチを改善することが必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0004】

本明細書で説明されているのは、（ｉ）第１の細胞結合物質（ＣＢＳ）と複数の細胞とを含むポリマー組成物を含む少なくとも１個の細胞含有区画を含むデバイスである。ある実施形態において、このポリマー組成物は、第１のＣＢＳと同一であるか又は異なる１種又は複数種の追加の細胞結合物質を含む。ある実施形態において、この細胞含有区画中における細胞結合物質の量は、（例えば、このデバイスが細胞培養培地中でインキュベートされた場合に）インビトロで、又は（例えば、このデバイスが試験対象に移植されるか若しくは他の方法で投与された場合に）インビボで、細胞の生存率を増加させるのに及び／又は細胞の産生性を増加させるのに有効な量である。

【0005】

ある実施形態において、ＣＢＳは、細胞結合ペプチド（ＣＢＰ）又は細胞結合ポリペプチド（ＣＢＰＰ）である。ある実施形態において、ＣＢＳは、リンカーを介してポリマー分子に共有結合的に付着したＣＢＰ（「ＣＢＰ－ポリマー」）を含む。ある実施形態において、ＣＢＳは、リンカーを使用することなくポリマー分子に共有結合的に付着したＣＢＰを含む。ある実施形態において、細胞含有区画中のポリマー組成物は、第１のＣＢＰ－ポリマー中に存在する同一の又は異なるポリマー型に共有結合に付着している様々な細胞結合ペプチドを含む１種又は複数種の追加のＣＢＰ－ポリマーを含む。ある実施形態において、本明細書で説明されているデバイス中でカプセル化された細胞は、細胞結合ペプチドを欠く実質的に同様のデバイス（即ち、本明細書で定義されているようなＣＢＳなしの参照カプセル又は参照粒子）中でカプセル化された場合と比べて、移植後の１つ又は複数の時点で、少なくとも１．２５倍、１．５倍、２倍、５倍、８倍、又は１０倍多い量の治療薬を発現する。

【0006】

本明細書では、本開示のデバイスでの使用のための様々な細胞結合ペプチドが説明されている。ある実施形態において、この細胞結合ペプチドは、４０個以下（例えば、３５個、３０個、若しくはより少ない）のアミノ酸の長さであるか、又は２５個以下（例えば、２０個、１５個、１０個、若しくはより少ない）のアミノ酸の長さであり、且つ細胞付着分子（ＣＡＭ）のリガンドの細胞結合配列を含む。ある実施形態において、この細胞結合ペプチドは、本明細書の表１で示されている細胞結合配列から本質的になる。ある実施形態において、この細胞結合配列は、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９）である。ある実施形態において、この細胞結合ペプチドのアミノ末端は、アミノ酸リンカーを介してポリマーに共有結合的に付着している。ある実施形態において、このリンカー中のアミノ酸は、アキラルである。ある実施形態において、このアミノ酸リンカーは、１～３個のグリシン残基から本質的なるか、又は１～３個のベータ－アラニン残基から本質的になる。ある実施形態において、この細胞結合ペプチドは、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９）から本質的になり、このリンカーは、単一のグリシン残基から本質的になるか又は単一のベータ－アラニン残基から本質的になる。

【0007】

一態様において、第１のＣＢＰ－ポリマー中のポリマーは、多糖又は他のヒドロゲル形成ポリマーである。ある実施形態において、第２のＣＢＰ－ポリマー中のポリマー、及び存在する任意の他のＣＢＰ－ポリマーも、ヒドロゲル形成ポリマーである。いくつかの実施形態において、細胞含有区画中における各ＣＢＰ－ポリマー中のヒドロゲル形成ポリマーは、多糖である。いくつかの実施形態において、細胞含有区画中における各ＣＢＰ－ポリマー中のヒドロゲル形成ポリマーは、アルギン酸塩である。いくつかの実施形態において、各ＣＢＰ－ポリマー中のアルギン酸塩は、分子量が７５ｋＤａ超（例えば７５ｋＤａ～２５０ｋＤａ）であり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上である。

【0008】

ある実施形態において、第１の区画中に（例えば、第１の区画を形成するために使用されるポリマー溶液中に）存在する各ＣＢＰ－ポリマーは、細胞結合ペプチド密度（例えば本明細書の実施例１で説明されているような燃焼分析で決定された％窒素）が、少なくとも約０．０５％の窒素（例えば、約０．１％、０．２％、及び０．３％の窒素）であるか、又は下限値としての約０．０５％、０．１％、０．２％、及び０．３％の窒素のいずれかと、上限値としての約４％、３％、２％、及び１％の窒素のいずれかとの間の範囲内である。ある実施形態において、第１の区画中のＣＢＰ－ポリマーは、ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）で共有結合的に修飾されているアルギン酸塩（おおよその分子量が７５ｋＤａ～１５０ｋＤであり、Ｇ：Ｍ比が≧１．５である）である。

【0009】

他の実施形態において、第１の区画中における（例えば、第１の区画を形成するために使用されるポリマー溶液中における）各ＣＢＰ－ポリマー（例えばＧＲＧＤＳＰ－アルギン酸塩）中のリンカー－ＲＧＤ部分（例えばＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０））の密度は、定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイで決定され、例えば、本明細書で説明されている定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイで決定される。ある実施形態において、細胞は、組み換えＡＲＰＥ－１９細胞であり、ＣＢＰ－ポリマー中のリンカー－ＲＧＤ部分は、ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）であり、ポリマーは、おおよその分子量が７５ｋＤａ～１５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が≧１．５であるアルギン酸塩（例えばアルギン酸ナトリウム）であり、決定されたコンジュゲーション密度は、ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）のマイクロモル／粘度が８０～１２０ｃＰである溶液（例えば生理食塩水）中のＧＲＧＤＳＰ－アルギン酸塩のｇで表される。ある実施形態において、そのようなＧＲＧＤＳＰ－アルギン酸塩溶液（ＭＭＷ－Ａｌｇ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）のコンジュゲーション密度は、約０．１～１．０マイクロモル／ｇであるか、又は約０．２～約０．８、約０．３～約０．７、若しくは約０．３～約０．６マイクロモル／ｇの内のいずれかである。ある実施形態において、この組み換えＡＲＰＥ－１９細胞は、ＦＶＩＩＩ ＢＤＤタンパク質の外因性のコード配列（例えば配列番号１５）を含む。ある実施形態において、この外因性のコード配列は、プロモーター配列（例えば、配列番号２６のヌクレオチド３３７～２０６９）に動作可能に連結されている。

【0010】

ある実施形態において、細胞含有区画はまた、ＣＢＰ－ポリマー中のポリマーと同一であるか又は異なる非修飾ヒドロゲル形成ポリマーも含む。ある実施形態において、このＣＢＰ－ポリマー及び非修飾ポリマーは両方とも、分子量が７５ｋＤａ（例えば約７５ｋＤａ～１５０ｋＤａ）であり且つＧ：Ｍ比が１．５以上であるアルギン酸塩である。

【0011】

この細胞含有区画中の複数の細胞（例えば生細胞）（例えば生存細胞）は、単一の細胞として存在してもよいし、細胞クラスタとして（例えばスフェロイドとして）存在してもよいし、マイクロキャリアに付着していてもよい。いくつかの実施形態において、第１の区画中の複数の生細胞は、少なくとも１００個、２５０個、５００個、７５０個、１，０００個、２，５００個、５，０００個、１０，０００個、２５，０００個、又は５０，０００個の細胞である。ある実施形態において、この複数は、細胞株に由来し且つ治療薬を発現するように組み換えられた細胞を含む。ある実施形態において、この細胞株は、内皮細胞株、上皮細胞株、線維芽細胞株、ケラチン生成細胞株、又は間葉細胞株であり、例えば、本明細書の表５で列挙されている市販の細胞株である。ある実施形態において、この複数の細胞は、組み換えられた網膜色素上皮（ＲＰＥ細胞）であり、例えば、ＡＲＰＥ－１９細胞株から組み換えられた細胞である。いくつかの実施形態において、この複数の細胞は、例えばデバイスが対象に移植された場合に、治療薬を発現し得る。

【0012】

ある態様では、複数の細胞により発現される治療薬は、デバイスが対象（例えばヒト）に移植された場合に治療効果を直接的に又は間接的に付与し得る生体分子又は化学分子（例えば、核酸、ポリペプチド、脂質、糖、又は小分子）である。ある実施形態において、この治療薬は、細胞から分泌されており且つ対象で欠いているか又は不足している内因性のタンパク質を補充するか又は増強するタンパク質であり、例えば、血友病患者で血液凝固を改善する血液凝固タンパク質であるか、又は身体中に蓄積するであろう毒性代謝産物の除去を媒介する酵素である。別の実施形態において、この治療薬は、細胞から分泌されており且つ対象に治療効果をもたらす機能を実施するか又は媒介する物質であり、例えば、対象の内因性の細胞による１種又は複数種のタンパク質の発現を阻害して治療効果を生じる阻害性ＲＮＡ分子である。いくつかの実施形態において、この治療薬は、例えば対象の血液凝固障害又はライソゾーム蓄積症の処置に有用な補充療法又は補充タンパク質である。いくつかの実施形態において、この治療薬は、血液凝固障害の処置に有用なポリペプチドであり、例えば、第ＶＩＩＩ因子タンパク質若しくはその変異体、第ＩＸ因子タンパク質若しくはその変異体、又は第ＶＩＩ因子タンパク質若しくはその変異体である。

【0013】

いくつかの実施形態において、デバイスは、異物反応（ＦＢＲ）を軽減するための（例えば、このデバイスが対象中に移植されたか対象上に移植された場合にＦＢＲを軽減するための）少なくとも１つの手段をさらに含む。本明細書では、デバイスの、ＦＢＲを軽減するための様々な手段が説明されている。ある実施形態において、ＦＢＲを軽減するための手段は、球状の形状と、少なくとも１ミリメートル（ｍｍ）（例えば、約１．２５ｍｍ、約１．５ｍｍ、約２．０ｍｍ、約２．５ｍｍ、約３．０ｍｍ）の線形寸法（例えば直径）との組み合わせを含む。ある実施形態において、この手段は、細胞含有区画を取り囲む生体適合性ポリマーで形成されたバリア区画と、任意選択的な、このバリア区画を取り囲む生体適合性ポリマーで形成された第３の区画とを含み、第１の区画中の細胞と、対象の免疫系との間に生態適合性の物理的バリアをさらに設ける。ある実施形態において、この生体適合性ポリマーは、アルギン酸塩である。

【0014】

別の実施形態において、ＦＢＲを軽減するための手段は、ＦＢＲを軽減する化合物（例えば、本明細書で定義されている抗線維性（ａｆｉｂｒｏｔｉｃ）化合物）を含む。ある実施形態において、この抗線維性化合物は、デバイス表面の外面上に配置されている。別の実施形態において、この手段は、バリア区画を含み、このバリア区画は、第１の区画を取り囲み、且つ抗線維性化合物で共有結合的に修飾されているポリマー（本明細書で定義されている「抗線維性ポリマー」）を含む。いくつかの実施形態において、抗線維性化合物は、外部デバイス面に共有結合的に付着しており、このバリア区画内のポリマーに共有結合的に付着しており、且つ、任意選択的に、細胞含有区画内のポリマーに共有結合的に付着している。ある実施形態において、このバリア区画は、この抗線維性ポリマー中のポリマーと同一であるか又は異なる非修飾ポリマーを含む。

【0015】

ある実施形態において、この抗線維性化合物は、式（Ｉ）：

【化1】

の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、変数Ａ、Ｌ^１、Ｍ、Ｌ^２、Ｐ、Ｌ^３、及びＺ、並びに関連するサブ変数は、本明細書で定義されている。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩（例えば、式（Ｉ－ａ）、（ＩＩ）、（ＩＩ－ａ）、（ＩＩ－ｂ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ－ａ）、（ＩＩＩ－ｂ）、（ＩＩＩ－ｃ）、（ＩＩＩ－ｄ）、又は（ＩＩＩ－ｅ））は、本明細書で説明されている化合物であり、例えば、本明細書の表４で示されている化合物の内の１つが挙げられる。ある実施形態において、この抗線維性化合物は、表４で示されている化合物１００、化合物１０１、又は化合物１０２である。

【0016】

一態様において、本開示のデバイスは、２区画ヒドロゲルカプセル（例えば、マイクロカプセル（直径が１ｍｍ未満）又はミリカプセル（ｍｉｌｌｉｃａｐｓｕｌｅ）（直径が少なくとも１ｍｍ））であり、この２区画ヒドロゲルカプセルでは、複数の細胞（例えば生細胞）と１種又は複数種のＣＢＰ－ポリマーとを含む細胞含有区画（例えば内側区画）が、抗線維性ポリマーを含むバリア区画（例えば外側区画）で取り囲まれている。ある実施形態において、抗線維性化合物は、式（Ｉ）の化合物である。ある実施形態において、このバリア区画は、異なる式（Ｉ）の化合物で修飾されており且つ同一の又は異なるヒドロゲル形成ポリマーを含む２種以上の抗線維性ポリマーを含む。いくつかの実施形態において、内側の細胞含有区画は、（ｉ）外側のバリア区画中の抗線維性化合物と同一であるか又は異なる式（Ｉ）の化合物と、（ｉｉ）内側の区画中のＣＢＰ－ポリマー中と又はバリア区画中の抗線維性ポリマー中と同一であるか又は異なるポリマーとを含む抗線維性ポリマーを含む。ある実施形態において、このバリア区画は、抗線維性ポリマーと、非修飾ヒドロゲル形成ポリマーとの混合物を含む。ある実施形態において、この非修飾ヒドロゲル形成ポリマーは、分子量が１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上であるアルギン酸塩である。

【0017】

ある実施形態において、本開示の複数区画ヒドロゲルカプセル中の区画は、体積がほぼ等しく、例えば、変動が２０％、１０％、又は５％未満である。ある実施形態において、本開示のヒドロゲルカプセルは、２個の区画を有し、且つ直径が約０．５ｍｍ～約１．５ｍｍ、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍ、又は約１．０ｍｍ～約１．５ｍｍである球状である。ある実施形態において、第２の区画の厚さは、約１０～約５００ミクロン、１０～約３００ミクロン、約２０～約１５０ミクロン、又は約４０～約７５ミクロンである。

【0018】

別の態様において、本開示のデバイスは、第１の細胞含有区画中でカプセル化されているか又は第２の細胞含有区画中でカプセル化されている第２の複数の細胞を含む。ある実施形態において、第２の複数の細胞は、第１の複数と同一の細胞株から組み換えられているが、異なる治療薬を発現する。別の実施形態において、第２の複数の細胞は、第１の複数とは異なる細胞株から組み換えられているが、第１の複数と同一の治療薬を発現する。

【0019】

別の態様において、本開示は、本明細書で説明されている複数（３個、６個、１２個、２５個、５０個、又はより多くの内の少なくともいずれか）の細胞含有デバイスを含む調製物（例えば組成物）を特徴とする。一実施形態において、この複数のデバイスの内の１つ又は複数は、（ｉ）第１の細胞結合ペプチドで共有結合的に修飾された第１のポリマー（第１のＣＢＰ－ポリマー）を含むポリマー組成物中でカプセル化された複数の細胞（例えば生細胞）を含む細胞含有区画であって、この細胞は、このデバイスが対象に移植された場合に治療薬を発現し得る、細胞含有区画と、このデバイスが対象に移植された場合に異物反応（ＦＢＲ）を軽減するための手段とを含むデバイスである。いくつかの実施形態において、この複数のデバイスの内の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、又はより多くは、球状のヒドロゲルカプセルである。いくつかの実施形態において、この調製物は、薬学的に許容可能な組成物である。

【0020】

別の態様において、本開示は、本明細書で説明されているデバイス又はデバイス調製物を対象に移植する方法を特徴とする。別の態様において、本開示は、対象に治療薬を提供する方法であって、本明細書で説明されているデバイスの内の１つ又は複数を対象に投与することであり、投与されるデバイス中の複数の細胞は、投与後に治療薬を産生する能力を有する、投与することを含む方法を特徴とする。別の態様において、本開示は、治療薬が必要な対象を処置する方法であって、本明細書で説明されているデバイスの内の１つ又は複数を対象に投与することであり、投与されるデバイスは、治療薬を産生する能力を有する、投与することを含む方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、投与する工程は、複数のデバイスを含む薬学的に許容可能な調製物を対象に移植することを含み、これらのデバイスの各々は、治療薬を産生する能力を有する。いくつかの実施形態において、この対象は、哺乳動物（例えばヒト）である。

【0021】

別の態様において、本開示は、本明細書で説明されているデバイスを評価する方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、この方法は、本明細書で説明されているデバイスを準備すること、及びこのデバイスの構造パラメータ又は機能パラメータを評価することを含む。いくつかの実施形態において、この方法は、ａ）細胞生存率、及びｂ）産生された治療薬の量の内の１つ又は複数に関して、本明細書で説明されているデバイス又は調製物内のデバイスを評価することを含む。いくつかの実施形態において、この評価を、（ｉ）デバイス（若しくはデバイスの調製物）の形成後又は（ｉｉ）対象へのデバイス（若しくはデバイスの調製物）の投与後少なくとも１、５、１０、２０、３０、６０、９０、又は１２０日で実施する。ある実施形態において、この評価は、対象への移植後少なくとも１０、２０、３０、６０、９０、又は１２０日でデバイス（又は調製物内のデバイス）の線維化の量及び／又は構造的完全性を評価することをさらに含む。いくつかの実施形態において、この対象は、哺乳動物（例えば、マウス（例えば免疫適格性マウス）、非ヒト霊長類、ヒト）である。

【0022】

本開示の１つ又は複数の実施形態の詳細が本明細書において記載されている。本開示の他の特徴、対象及び利点は、発明を実施するための形態、図面、実施例及び特許請求の範囲から明らかであろう。

【図面の簡単な説明】

【0023】

【図1】本開示の例示的な球状ヒドロゲル２区画カプセルを示し、線は下記を示す：細胞結合ペプチドに共有結合的に付着したポリマーと、このポリマー中でカプセル化された細胞とから形成された第１の内側区画；第２の区画；並びに第２の区画内及びこのカプセルの表面上の両方に配置された抗線維性化合物。図１は、配列番号６０として「ＧＲＧＤＳＰ」を開示する。

【図2】ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質を発現するように組み換えられ、次いで、下記の実施例２で説明するように、細胞結合部位を含まない（対照）か又は細胞結合部位を含むアルギン酸塩溶液から形成された単一区画ヒドロゲルカプセル中でカプセル化されたＡＲＰＥ１９細胞（ＡＲＰＥ－１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞）のインビトロでの産生性を示す棒グラフである。

【図3】２区画ヒドロゲルカプセルのヌードマウスへの移植後２週間での血漿ＦＶＩＩＩＩ－ＢＤＤレベルを示す棒グラフであり、このカプセルでは、第２の区画が、抗線維性アルギン酸塩と非修飾アルギン酸塩との混合物から形成され、第１の区画が、本明細書の実施例で説明されている試験ＣＢＰ－アルギン酸塩溶液（ＶＬＶＧ－４ＧＲＧＤＳＰ、１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１）中のＡＲＰＥ－１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液から形成されたか、又は抗線維性アルギン酸塩＋非修飾アルギン酸塩の混合物から形成された（対照）。

【図4A】２区画ヒドロゲルカプセルの移植前（初期）及びマウスへのＩＰ移植後１ヶ月（最終）での細胞／カプセルの数（図４Ａ）及び機械的強度（図４Ｂ）を示す棒グラフであり、このカプセルでは、第２の区画は、抗線維性アルギン酸塩と非修飾アルギン酸塩との混合物から形成され、第１の区画は、ＣＢＰ－アルギン酸塩（ＶＬＶＧ－４ＧＲＧＤＳＰ、１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１）、ＨＡ、若しくはコラーゲンＩを含む試験アルギン酸塩溶液中のＡＲＰＥ－１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液から形成されたか、又は抗線維性アルギン酸塩＋非修飾アルギン酸塩混合物から形成された（対照）。

【図4B】２区画ヒドロゲルカプセルの移植前（初期）及びマウスへのＩＰ移植後１ヶ月（最終）での細胞／カプセルの数（図４Ａ）及び機械的強度（図４Ｂ）を示す棒グラフであり、このカプセルでは、第２の区画は、抗線維性アルギン酸塩と非修飾アルギン酸塩との混合物から形成され、第１の区画は、ＣＢＰ－アルギン酸塩（ＶＬＶＧ－４ＧＲＧＤＳＰ、１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１）、ＨＡ、若しくはコラーゲンＩを含む試験アルギン酸塩溶液中のＡＲＰＥ－１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液から形成されたか、又は抗線維性アルギン酸塩＋非修飾アルギン酸塩混合物から形成された（対照）。

【図5】２区画ヒドロゲルカプセルのヌードマウスへの移植後２週間での血漿ＦＶＩＩＩＩ－ＢＤＤレベルを示す棒グラフであり、このカプセルでは、第２の区画は、抗線維性アルギン酸塩と非修飾アルギン酸塩との混合物から形成され、第１の区画は、本明細書の実施例で説明されている試験ＣＢＰ－アルギン酸塩溶液（１Ｇ ＲＧＤ：０．４１、ＭＶＧ－ＧＲＧＤＳＰ、４Ｇ－ＲＧＤ：０．５３）中のＡＲＰＥ－１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液から形成されたか、又は抗線維性アルギン酸塩＋非修飾アルギン酸塩混合物から形成された（対照）。

【図6】内側区画：外側区画が５０：５０の体積比である２区画ヒドロゲルミリカプセルの明視野画像を示す。第２の（外側）区画は、中程度の又は高いコンジュゲーションの抗線維性アルギン酸塩を含む。内側区画は、中程度のコンジュゲーションの抗線維性アルギン酸塩（対照）、又は外因性のタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を含むか若しくは含まない（ＲＧＤ、空）ＣＢＰ－アルギン酸塩（ＲＧＤ）のいずれかを含む。カプセルを、線維化の存在に関して、Ｃ５７／ＢＬ６マウスでの移植の１１日後に撮像した。

【図7】ＦＩＸタンパク質を発現するように組み換えられたＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後２週間でのヌードマウスにおけるＦＩＸの血漿レベルを示す棒グラフである。ＲＰＥ細胞は、下記の様々なアルギン酸塩組成物の第１の区画中でカプセル化された：細胞結合ペプチドなし（対照）、単一のグリシン残基を有するリンカー（１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１又は４Ｇリンカー（配列番号６１）を介して様々な密度のＲＧＤペプチドで修飾されたアルギン酸塩（４Ｇ－ＲＧＤ：０．５３、０．９６、１．７７、及び２．９５）。

【図8】ＦＩＸタンパク質を発現するように組み換えられたＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後２週間でのヌードマウスにおけるＦＩＸの血漿レベルを示す棒グラフである。ＲＰＥ細胞は、下記の様々なアルギン酸塩組成物の第１の区画中でカプセル化された：細胞結合ペプチドなし（対照）、１Ｇ－ＲＧＤ、４Ｇ－ＤＧＥＡ、若しくは４Ｇ－ＰＨＳＲＮで修飾されたアルギン酸塩、又は他のＣＢＰアルギン酸塩とブレンドされた１Ｇ－ＲＧＤの組み合わせ（１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１、４Ｇ－ＤＧＥＡ、１：１ １Ｇ－ＲＧＤ：０．４１／４Ｇ－ＤＧＥＡ、１：１ １Ｇ－ＲＧＤ：０．４１／４Ｇ－ＰＨＳＲＮ、１：１：１ １Ｇ－ＲＧＤ：０．４１／４Ｇ－ＤＧＥＡ／４Ｇ－ＰＨＳＲＮ）。

【図9】ＦＩＸタンパク質を発現するように組み換えられたＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後２週間でのヌードマウスにおけるＦＩＸの血漿レベルを示す棒グラフである。ＲＰＥ細胞は、様々な１Ｇ－ＲＧＤ密度（０、０．２２、０．３３、０．７２、及び１．４７％のＮ）の第１の区画中でカプセル化された。

【図10】ＰＴＨタンパク質を発現するように組み換えられたＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後２週間でのヌードマウスにおけるＰＴＨの血漿レベルを示す棒グラフである。ＲＰＥ細胞は、対照又は１Ｇ－ＲＧＤ：０．７２ポリマーのいずれかの第１の区画中でカプセル化された。

【図11】第２の（外側）区画が中程度の又は高いコンジュゲーションの抗線維性アルギン酸塩を含む２区画ヒドロゲルミリカプセルの明視野画像を示す。内側区画は、中程度のコンジュゲーションの抗線維性アルギン酸塩（対照）を含むか、又は外因性のタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を含むか若しくは含まない（ＲＧＤ、空）ＣＢＰ－アルギン酸塩（ＲＧＤ）を含む。

【図12】第２の（外側）区画が中程度の又は高いコンジュゲーションの抗線維性アルギン酸塩を含む２区画ヒドロゲルミリカプセルの明視野画像を示す。内側区画は、中程度のコンジュゲーションの抗線維性アルギン酸塩（対照）又はマウス由来のＢａｌｂ／３Ｔ３細胞を有するか若しくは有しない（ＲＧＤ、空）ＣＢＰ－アルギン酸塩（ＲＧＤ）を含む。

【図13A】様々なポリマーの同一性及び溶液粘度の１Ｇ－ＲＧＤポリマーで調製されたカプセルの初期破壊（図１３Ａ）及び血漿中のＦＩＸレベル（図１３Ｂ）を示す棒グラフである。

【図13B】様々なポリマーの同一性及び溶液粘度の１Ｇ－ＲＧＤポリマーで調製されたカプセルの初期破壊（図１３Ａ）及び血漿中のＦＩＸレベル（図１３Ｂ）を示す棒グラフである。

【図14】ＦＩＸタンパク質を発現するように組み換えられたＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後２週間でのヌードマウスにおけるＦＩＸの血漿レベルを示す棒グラフである。ＲＰＥ細胞は、対照又は１Ｇ－ＨＡＶＤＩポリマーのいずれかの第１の区画中でカプセル化された。

【図15A】ＩＰ部位又はＳｕｂＱ部位に移植された第１の区画中の対照又は１Ｇ－ＲＧＤポリマーで調製されたカプセルのＦＩＸ－ｐａｄｕａレベル及び１個のカプセル当たりの生存細胞の数を示す棒グラフである。

【図15B】ＩＰ部位又はＳｕｂＱ部位に移植された第１の区画中の対照又は１Ｇ－ＲＧＤポリマーで調製されたカプセルのＦＩＸ－ｐａｄｕａレベル及び１個のカプセル当たりの生存細胞の数を示す棒グラフである。

【図16】未処理ヌードマウス、又は第１の区画中に１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３と共にＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩを含むカプセルによるマウスのＦＶＩＩ－ｐａｄｕａの血漿レベルを示す棒グラフである。

【図17】ＦＩＸタンパク質を発現するように組み換えられたＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後２週間でのヌードマウスにおけるＦＩＸの血漿レベルを示す棒グラフである。ＲＰＥ細胞は、非修飾ＳＬＧ２０ポリマーとの１Ｇ－ＲＧＤ：６．０４の１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３又は１：５５、１：３０又は１：５０ブレンドのいずれかの第１の区画中でカプセル化された。

【図18】第１又は第２の区画上で対照又はＲＧＤ－コンジュゲートアルギン酸塩を有する２区画カプセルの蛍光画像の白黒写真である。カプセルは、このカプセルの表面に付着したマウスマクロファージを同定するためにＦ４／８０に関して染色されており、通常は緑色の蛍光で現れるが、この写真では白色で示される。

【図19】ＦＩＸタンパク質を発現するように組み換えられたＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後２週間でのヌードマウスにおけるＦＩＸ－ｐａｄｕａの血漿レベルを示す棒グラフである。ＲＰＥ細胞は、一緒にブレンドされたか又は両方とも同一のポリマーにコンジュゲートした様々なポリマー上で１Ｇ－ＲＧＤペプチド及びＧ－ＰＨＳＲＮペプチドの両方を含む第１の区画中でカプセル化された。

【図20】ＦＶＩＩＩタンパク質（配列番号８によりコードされる配列番号１）を発現するように組み換えられたＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後１１日でのヌードマウスにおけるＦＶＩＩＩ－ＢＤＤの血漿レベル（１つの群当たり５匹のマウス）を示す棒グラフである。

【図21】組み換えＲＰＥ細胞を生成するのに有用なＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン発現ベクターを示す。

【図22】ＦＩＸタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後１２日でのヌードマウスにおけるＦＩＸタンパク質の血漿レベル（１つの群当たり３匹のマウス）を示す棒グラフである。組み換えＲＰＥ細胞を、様々なリンカーの長さ及び配列を含むＣＢＰ－ポリマーで修飾されたカプセルの第１の区画中でカプセル化した。図２２は、配列番号５９としての「ＲＤＧＳＰ」を開示する。

【図23】ＦＩＸタンパク質を発現するように組み換えられた例示的なＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルの移植後１８日でのヌードマウスにおけるＦＩＸタンパク質の血漿レベル（１つの群当たり４匹のマウス）を示す棒グラフである。組み換えＲＰＥ細胞を、様々な溶液粘度のＣＢＰ修飾アルギン酸塩で調製したカプセルの第１の区画中でカプセル化した。

【図24】表７～１１中に、例示的なアミノ酸配列（配列番号１、３～７、２９～３６）及び治療用ポリペプチドのコード配列（配列番号８～２１）、及びＲＰＥ細胞を組み換えるのに有用な例示的な発現ベクター（配列番号２２～２８）内のヌクレオチド配列を示す。

【発明を実施するための形態】

【0024】

本開示は、ポリマー組成物によりカプセル化された複数の細胞（例えば生細胞）を含む少なくとも１個の区画を含むデバイスを特徴とする。このカプセル化ポリマー組成物は、少なくとも１種の細胞結合物質（ＣＢＳ）を含み、例えば、細胞結合ペプチド（ＣＢＰ）又は細胞結合ポリペプチド（ＣＢＰＰ）を含む。この細胞は、このデバイスが対象（例えばヒト）に移植された場合に治療薬を発現し得、このデバイスは、このデバイスが対象に移植された場合に異物反応（ＦＢＲ）を軽減するための手段をさらに含む。ある実施形態において、ＦＢＲを軽減するための手段は、このデバイスの表面上に配置された式（Ｉ）の化合物を含む。本開示はまた、本明細書で説明されている複数のデバイスを含む調製物と、この調製物を製造する方法及び使用する方法も提供する。いくつかの実施形態において、本明細書で説明されているデバイス及びその調製物又は組成物は、治療薬のインビボでの発現により予防され得るか又は処置され得る疾患、障害、又は状態の予防又は処置に有用である。いくつかの実施形態において、これらのデバイス及び調製物は、有利な特性を有し、例えば、カプセル化された細胞は、ＣＢＳを含まない実質的に同一のデバイス（例えば、ＣＢＳなしの参照デバイス）中に移植された実質的に同一の細胞と比べて、高いインビボでの産生性及び／又は生存率を有する。

【0025】

略語及び定義
本開示の詳細な説明及び実施例の全体を通して、下記の略語が使用される。
ＣＢＰ：細胞結合ペプチド
ＣＢＰＰ：細胞結合ポリペプチド
ＣＢＰ－ポリマー：リンカーを介してＣＢＰで共有結合的に修飾されたポリマー
ＣＢＳ：細胞結合物質
ＣＭ－Ａｌｇ：化学修飾アルギン酸塩
ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ：化学修飾された、低分子量アルギン酸塩
ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：表４に示される化合物１０１で化学修飾された、低分子量アルギン酸塩
ＣＭ－ＨＭＷ－Ａｌｇ：化学修飾された、高分子量アルギン酸塩
ＣＭ－ＨＭＷ－Ａｌｇ－１０１：表４に示される化合物１０１で化学修飾された、高分子量アルギン酸塩
ＣＭ－ＭＭＷ－Ａｌｇ：化学修飾された、中間分子量アルギン酸塩
ＣＭ－ＭＭＷ－Ａｌｇ－１０１：表４に示される化合物１０１で化学修飾された、中間分子量アルギン酸塩
ＨＭＷ－Ａｌｇ：高分子量アルギン酸塩
ＭＭＷ－Ａｌｇ：中間分子量アルギン酸塩
ＲＧＤ－アルギン酸塩：アミノ酸配列ＲＧＤ（配列番号４３）を含むペプチドで共有結合的に修飾されたアルギン酸塩
Ｕ－Ａｌｇ：非修飾アルギン酸塩
Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ：非修飾高分子量アルギン酸塩
Ｕ－ＬＭＷ－Ａｌｇ：非修飾低分子量アルギン酸塩
Ｕ－ＭＭＷ－Ａｌｇ：非修飾中間分子量アルギン酸塩
７０：３０のＣＭ－Ａｌｇ：Ｕ－Ａｌｇ：化学修飾アルギン酸塩及び非修飾アルギン酸塩の７０：３０混合物（Ｖ：Ｖ）、例えば、実施例２に記載のとおり

【0026】

本開示が、より容易に理解され得るように、本明細書において使用されるいくつかの専門用語及び科学用語が、以下に具体的に定義される。本明細書において他の箇所に特に定義されない限り、本明細書において使用される全ての他の専門用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。

【0027】

添付の特許請求の範囲を含め、本明細書において用いられるところ、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの単数形の用語は、文脈上特に明記されない限り、それらの対応する複数の指示対象を含む。

【0028】

「約」又は「おおよそ」は、数値として定義されたパラメータ（例えば、ヒドロゲルカプセルの物理的性質、例えば、直径、球形度、このカプセル中でカプセル化された細胞の数、調製物中のカプセルの数）を修飾するために本明細書で使用される場合には、引用された数値が、当業者により決定された場合に、定義されたパラメータの許容可能な機能的範囲内であることを意味し、この機能的範囲は、この数値がどのように測定されるか又は決定されるかに部分的に依存し、例えば、この測定システムの許容可能な誤差範囲等の測定システムの限界に部分的に依存する。例えば、「約」は、引用された数値の２０％上下の範囲を意味し得る。非限定的な例として、直径が約１．５ミリメートル（ｍｍ）であり且つ約５００万（Ｍ）個の細胞をカプセル化すると定義されたヒドロゲルカプセルは、直径が１．２～１．８ｍｍであり得、且つ４Ｍ～６Ｍ個の細胞をカプセル化し得る。別の非限定的な例として、約１００個のデバイス（例えばヒドロゲルカプセル）の調製物として８０～１２０個のデバイスを有する調製物が挙げられる。いくつかの実施形態において、用語「約」は、修飾されたパラメータが、このパラメータに関して述べられた数値の１５％、１０％、又は５％上下だけ変動し得ることを意味する。或いは、特に、本明細書で説明されているデバイスのある特定の特性（例えば、細胞産生性、又はＣＢＰ若しくは抗線維性化合物の密度）に関して、用語「約」は、引用された値の一桁内（例えば、５倍、４倍、３倍、２倍、又は１倍以内）の上下を意味し得る。

【0029】

本明細書において用いられるところ、「取得する（Ａｃｑｕｉｒｅ）」又は「取得している（ａｃｑｕｉｒｉｎｇ）」は、値又は物理的エンティティを「直接的に取得する」又は「間接的に取得する」ことによる、値（例えば数値若しくはイメージ）、又は、物理的エンティティ（例えばサンプル）の入手を達成することを指す。「直接的に取得する」とは、プロセスを実施（例えば分析方法又はプロトコルの実施）して、値又は物理的エンティティを得ることを意味する。「間接的に取得する」とは、他の団体又は提供者（例えば、物理的エンティティ又は値を直接的に取得した第三者の実験室）から値又は物理的エンティティを受け取ることを指す。値又は物理的エンティティを直接的に取得するステップは、物理的な物質における物理的な変更、又は、機器若しくはデバイスの使用を含むプロセスの実施を含む。値を直接的に取得するステップの例としては、ヒト対象からのサンプルの入手が挙げられる。値を直接的に取得するステップは、例えば、蛍光顕微鏡データを取得する蛍光顕微鏡の使用といった、機器又はデバイスを使用するプロセスの実施を含む。

【0030】

「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、又は「投与」は、本明細書で使用される場合、本明細書で説明されている実体（例えば、デバイス、若しくはデバイスの調製物）を対象に移植するか、吸収させるか、摂取させるか、注射するか、若しくは別の方法で導入することを指すか、又は投与のためにそのような実体を対象に提供することを指す。

【0031】

「抗線維性」は、本明細書で使用される場合、異物反応（ＦＢＲ）を軽減する化合物又は物質を意味する。例えば、抗線維性化合物を含むデバイス（例えばヒドロゲルカプセル）（例えば、表４で列挙される化合物で共有結合的に修飾されたポリマーを含むヒドロゲルカプセル）の組織への移植により誘発される生体組織中でのＦＢＲの量は、抗線維性なしの参照デバイス（即ち、あらゆる抗線維性化合物を欠くが、組成（例えば、同一のＣＢＰ－ポリマー、同一の細胞型）及び構造（例えば、サイズ、形状、区画の数）が実質的に同一のデバイス）の移植により誘発されるＦＢＲと比べて少ない。実施形態において、ＦＢＲの程度は、例えば、国際公開第２０１７／０７５６３０号パンフレットに記載される当該技術分野において公知のアッセイを用いて、又はＶｅｇａｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（上掲）に記載されるアッセイ／方法（例えば、移植されたカプセルの皮下カテプシン測定、組織切片のマッソンのトリクローム（ＭＴ）、ヘマトキシリン又はエオジン染色、コラーゲン密度の定量化、マクロファージ（ＣＤ６８又はＦ４／８０）細胞染色及び共焦点顕微鏡検査、筋線維芽細胞（α平滑筋アクチン（ａｌｐｈａ－ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ）、ＳＭＡ）又は一般的な細胞付着、公知の炎症因子及び免疫細胞マーカーの７９ＲＮＡ配列の定量化、又は好適な被験体、例えば、免疫応答性マウスの腹腔内で１４日後に回収されたデバイス（例えば、カプセル）におけるマクロファージ及び好中球についてのＦＡＣＳ分析のうちの１つ又は複数を用いて、例えば、タンパク質吸着、マクロファージ、多核異物巨細胞、線維芽細胞、及び血管新生を含み得る移植されたデバイス（例えば、ヒドロゲルカプセル）を含む組織における免疫応答によって評価される。実施形態において、ＦＢＲは、免疫応答の１つ又は複数のバイオマーカー、例えば、カテプシン、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１３、ＩＬ－６、Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＣＣＬ２、又はＣＣＬ４の移植を含む組織におけるレベルを測定することによって評価される。いくつかの実施形態において、本発明のデバイス（例えば、外面上に配置された抗線維性化合物を含むヒドロゲルカプセル）により誘発されたＦＢＲは、ＦＢＲなしの参照デバイス（例えば、ＦＢＲを軽減するための手段を欠く以外は試験デバイス又は特許請求されているデバイスと実質的に同一であるデバイス（例えば、抗線維性化合物を含まないが、それ以外は特許請求されているカプセルと実質的に同一であるヒドロゲルカプセル））により誘発されたＦＢＲと比べて少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、又は約１００％低い。いくつかの実施形態において、ＦＢＲ（例えば、バイオマーカーのレベル）は、約３０分、約１時間、約６時間、約１２時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約１週間、約２週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約６ヶ月、又は約より長い後に測定されている。

【0032】

「細胞」は、本明細書で使用される場合、組み換えられた細胞を指すか、又は組み換えられていない細胞を指す。ある実施形態において、細胞は、不死化細胞であるか、又は不死化細胞に由来する組み換え細胞である。ある実施形態において、細胞は、生細胞であり、例えば、本明細書で説明されているか又は当該技術分野で既知の任意の技術により測定した場合に生存している。

【0033】

「細胞結合ペプチド（ＣＢＰ）」は、本明細書で使用される場合、細胞付着分子（ＣＡＭ）（例えば、細胞－マトリックス接合又は細胞－細胞接合を媒介するＣＡＭ）のリガンドの細胞結合ドメインに由来するアミノ酸配列を含む直鎖状又は環状のペプチドを意味する。ＣＢＰは、５０個、４０個、３０個、２５個、２０個、１５個、又は１０個未満のアミノ酸の長さである。ある実施形態において、ＣＢＰは、３～１２個のアミノ酸の長さであるか、４～１０個のアミノ酸の長さであるか、又は３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の長さである。ＣＢＰのアミノ酸配列は、天然に存在する結合ドメイン配列と同一であってもよいし、その保存的に置換された変異体であってもよい。ある実施形態において、ＣＡＭリガンドは、哺乳動物タンパク質である。ある実施形態において、ＣＡＭリガンドは、下記の表１で列挙されているタンパク質の群から選択されるヒトタンパク質である。ある実施形態において、ＣＢＰは、下記の表１で列挙されている細胞結合配列、又はその保存的に置換された変異体を含む。ある実施形態において、ＣＢＰは、下記の表１で列挙されている細胞結合配列の内の少なくとも１つを含む。ある実施形態において、ＣＢＰは、下記の表１で列挙されている細胞結合配列から本質的になる。ある実施形態において、ＣＢＰは、ＲＧＤペプチドであり、これは、このペプチドが、アミノ酸配列ＲＧＤ（配列番号４３）を含み、任意選択的に、Ｎ末端及びＣ末端の内の一方又は両方に位置する１つ又は複数の追加のアミノ酸を含むことを意味する。ある実施形態において、ＣＢＰは、ＲＧＤ（配列番号４３）を含む環状ペプチドであり、例えば、Ｖｉｌａｃａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ７０（３５）：５４２０－５４２７（２０１４）で説明されている環状ＲＧＤペプチドの内の１つである。ある実施形態において、ＣＢＰは、ＲＧＤ（配列番号４３）を含む直鎖状ペプチドであり、且つ６個未満のアミノ酸の長さである。ある実施形態において、ＣＢＰは、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９）から本質的になる直鎖状ペプチドである。

【0034】

【表1】

【0035】

「ＣＢＰ－ポリマー」は、本明細書で使用される場合、ポリマーであって、リンカーを介してこのポリマーに共有結合的に付着している少なくとも１つの細胞結合ペプチド分子を含むポリマーを意味する。ある実施形態において、このポリマーは、ペプチドでもポリペプチドでもない。ある実施形態において、ＣＢＰ－ポリマー中のポリマーは、あらゆるアミノ酸を含まない。ある実施形態において、ＣＢＰ－ポリマー中のポリマーは、合成の又は天然に存在する多糖であり、例えばアルギン酸塩であり、例えばアルギン酸ナトリウムである。ある実施形態において、リンカーは、アミノ酸リンカーであり（即ち、単一のアミノ酸から本質的になるか、又はいくつかの同一の若しくは異なるアミノ酸のペプチドから本質的になり）、このアミノ酸リンカーは、ＣＢＰのＮ末端又はＣ末端に結合したペプチドを介して連結されている。ある実施形態において、アミノ酸リンカーのＣ末端は、ＣＢＰのＮ末端に連結されており、アミノ酸リンカーのＮ末端は、アミド結合を介して多糖中の少なくとも１つのペンダントカルボキシル基に連結されている。ある実施形態において、リンカー－ＣＢＰの構造は、リンカーが１個、２個、３個、又は４個のグリシン残基を有することを意味するＧ（１～４）－ＣＢＰと表される（「Ｇ（１～４）」は、配列番号７０として開示されている）。ある実施形態において、ＣＢＰ－多糖、例えばＣＢＰ－アルギン酸塩）中の単糖部分の内の１つ又は複数は、ＣＢＰで修飾されておらず、例えば、この非修飾部分は、遊離カルボキシル基を有するか、又は修飾可能なペンダントカルボキシル基を欠いている。ある実施形態において、ＣＢＰが共有結合的に付着している多糖部分の数は、下記の値の内のいずれか未満である：９９％、９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％。

【0036】

ある実施形態において、ＣＢＰ－ポリマー中のＣＢＰ修飾の密度は、例えば下記の実施例で説明されているように、窒素パーセントに関する燃焼分析により推定される。ある実施形態において、ＣＢＰ－ポリマーは、ＲＧＤ－ポリマー（例えばＲＧＤ－アルギン酸塩）であり、このＲＧＤ－ポリマーは、リンカーＲＧＤ分子（例えば、ＧＲＧＤ（配列番号６２）又はＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）から本質的になるペプチド）で共有結合的に修飾されたポリマー（例えばアルギン酸塩）であり、リンカー－ＲＧＤ分子修飾の密度（例えばコンジュゲーション密度）は、本明細書で説明されているアッセイを使用して決定した場合に、約０．０５％の窒素（Ｎ）～１．００％のＮ、約０．１０％のＮ～約０．７５％のＮ、約０．２０％のＮ～約０．５０％のＮ、又は約０．３０％のＮ～約０．４０％のＮである。ある実施形態において、ＲＧＤ－アルギン酸塩（例えば、ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）で共有結合的に修飾されたＭＭＷアルギン酸塩）中のリンカー－ＲＧＤ修飾のコンジュゲーション密度は、ポリマーにコンジュゲートされたペプチドの量を定量し得る任意のアッセイ（例えば、本明細書で説明されている定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイ）により決定した場合に、粘度が８０～１２０ｃＰである溶液（例えば生理食塩水）中のＲＧＤ－ポリマー１ｇ当たりリンカー－ＲＧＤ部分０．１～１．０、０．２～０．８、０．３～０．７、０．３～０．６、０．４～０．６マイクロモルである。別途明示的に述べられていない限り、又は文脈から明らかでない限り、ＣＢＰ－ポリマー中のＣＢＰに関する具体的に列挙された数値濃度、濃度範囲、密度、又は密度範囲は、コンジュゲートしたＣＢＰ分子の濃度又は密度を指し、即ち、ＣＢＰ－ポリマー中に存在し得るいかなる残留遊離（例えばコンジュゲートしていない）ＣＢＰも含まない。

【0037】

「細胞結合ポリペプチド（ＣＢＰＰ）」は、本明細書で使用される場合、少なくとも５０個、少なくとも７５個、又は少なくとも１００個のアミノ酸の長さであり且つＣＡＭリガンドの細胞結合ドメインのアミノ酸配列又はその保存的に置換された変異体を含むポリペプチドを意味する。ある実施形態において、ＣＡＭリガンドは、哺乳動物タンパク質である。ある実施形態において、ＣＢＰＰアミノ酸は、完全長ＣＡＭリガンドの天然に存在するアミノ酸配列を含み、例えば、表１で列挙されているタンパク質の内の１つ又はその保存的に置換されている変異体を含む。

【0038】

「ＣＢＰ密度」は、本明細書で使用される場合、別途本明細書で明示的に述べられていない限り、ＣＢＰ－ポリマー（例えば、Ｇ１～３ＲＧＤ（配列番号６３）又はＧ１～３ＲＧＤＳＰ（配列番号６４）で修飾されたアルギン酸塩）中のリンカー－ＣＢＰ部分の量又は濃度を指す。

【0039】

「細胞結合物質（ＣＢＳ）」は、本明細書で使用される場合、細胞－マトリックス接合若しくは細胞－細胞接合又は他のレセプター媒介シグナル伝達を媒介する細胞付着分子（ＣＡＭ）又は他の細胞表面分子のリガンドの少なくとも１種の活性を模倣し得るあらゆる化学物質、生物学的物質、又は他のタイプの物質（例えば、小有機化合物、ペプチド、ポリペプチド）を意味する。ある実施形態において、細胞をカプセル化するポリマー組成物中に存在する場合には、ＣＢＳは、１つ又は複数の細胞との一過性の又は永続的な結合又は接触を形成し得る。ある実施形態において、ＣＢＳは、ポリマー組成物中でカプセル化された２個以上の生細胞間の相互作用を促進する。ある実施形態において、複数の細胞（例えば生細胞）をカプセル化するポリマー組成物中のＣＢＳの存在は、カプセル化された細胞が試験対象（例えばマウス）に移植された場合の細胞産生性（例えば、治療薬の発現）の増加、及び細胞の生存率の増加の内の一方又他は両方と相関する。ある実施形態において、ＣＢＳは、ポリマー組成物中の１つ又は複数のポリマー分子に物理的に付着している。ある実施形態において、ＣＢＳは、本明細書で定義されているように、細胞結合ペプチド又は細胞結合ポリペプチドである。

【0040】

本明細書において用いられるところ、「保存的に修飾された変異体」又は保存的置換」は、そのアミノ酸配列中に１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有することを除いて、参照分子と同一である参照ペプチド又はポリペプチドの変異体を指す。実施形態において、保存的に修飾された変異体は、参照アミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一のアミノ酸配列からなる。保存的アミノ酸置換は、同様の特徴（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格構造及び剛性など）を有し、且つ得られる置換ペプチド又はポリペプチドの生物活性に最小限の影響を与えるアミノ酸による、アミノ酸の置換を指す。機能的に類似したアミノ酸の保存的置換の表は、当該技術分野において周知であり、機能的特徴によって分類された例示的な置換が、以下の表２に記載されている。

【0041】

【表2】

【0042】

本明細書及び特許請求の範囲を通して用いられるところの「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」又は「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」などの変化形は、任意の記載される要素又は要素の群の包含、及び規定の分子、組成物、デバイス、又は方法の基本的又は新規な性質を実質的に変化させない、記載される要素と類似の又は異なる性質の他の要素の任意選択の包含を示す。非限定的な例として、列挙されたアミノ酸配列から本質的になる細胞結合ペプチド又は治療用タンパク質はまた、それぞれ、この細胞結合ペプチド又は治療用タンパク質の関連する生物学的活性に実質的に影響を及ぼさない１つ又は複数のアミノ酸残基のこの列挙されたアミノ酸配列中の置換を含む１つ又は複数のアミノ酸も含み得る。別の非限定的な例として、列挙されたアミノ酸配列から本質的になる細胞結合ペプチドは、この細胞結合ペプチドの関連する生物学的活性（例えば、本明細書で説明されているカプセル化された細胞の生存率又は産生性を増加させる能力）を実質的に変化させない、１つ又は複数の共有結合的に付着した部分（例えば、放射性標識又は蛍光標識）を含み得る。

【0043】

「に由来する」は、細胞に関して本明細書で使用される場合、組織、細胞株、又は細胞から得られる細胞を指し、この細胞は、次いで任意選択的に、例えば、培養され、継代され、分化され、誘導されて、由来細胞を生じる。例えば、間葉系幹細胞は、間葉系組織に由来し得、次いで、様々な細胞型に分化され得る。

【0044】

「デバイス」は、本明細書で使用される場合、あらゆる移植可能な物体（例えば、粒子、ヒドロゲルカプセル、移植片、医療機器）を指し、この物体は、このデバイスの移植後に治療薬を発現し得る細胞（例えば生細胞）を含み、且つこのデバイスに細胞栄養素が入ることを可能にすることにより、この細胞の生存率を支える構造を有する。いくつかの実施形態において、このデバイスは、生細胞により生成された代謝副産物及び／又は治療薬のこのデバイスからの放出が可能である。

【0045】

本明細書において用いられるところ、「差分体積」は、別の区画に占有される空間を除く、本明細書に記載のデバイス内の１つの区画の体積を指す。例えば、内側及び外側区画を有する２区画デバイス中の第２の（例えば、外側）区画の差分体積は、第１（内側）の区画に占有される空間を除く、第２の区画内の体積を指す。

【0046】

「有効量」は、本明細書で使用される場合、例えば疾患、障害、又は状態を処置するために生物学的反応を誘発するのに十分な、デバイス、デバイス組成物、又はデバイス若しくはデバイス組成物の成分、例えば、細胞（例えば、組み換え細胞）を含む複数のヒドロゲルカプセル、又は細胞（例えば、組み換えＲＰＥ細胞）により産生された薬剤（例えば治療薬）の量を指す。いくつかの実施形態において、用語「有効量」は、デバイスの成分の量を指し、例えば、このデバイス中の細胞の数、このデバイスの表面上に及び／又はバリア区画中に配置された抗線維性化合物の密度、細胞含有区画中のＣＢＳの密度を指す。当業者に認識されるように、有効量は、所望される生物学的エンドポイント、治療薬、組成物、又はデバイス（例えば、カプセル、粒子）の薬物動態、処置される状態、投与様式、並びに対象の年齢及び健康状態等の因子に応じて変動し得る。有効量は、治療的処置及び予防的処置を包含する。例えば、ＦＢＲを軽減するために、式（Ｉ）の化合物の有効量は、線維化を低減し得るか、又は移植されたデバイス上の若しくはこのデバイス付近の線維化組織の増殖若しくは拡散を停止させ得る。別の例として、ＣＢＳの有効量は、デバイス中の細胞の生存率（例えば、生細胞の数）を改善させ得、並びに／又はこの細胞により発現される及び／若しくは分泌される治療薬のレベルを上昇させ得る。デバイス、組成物、又は成分（例えば、抗線維性化合物若しくはＣＢＳ）の有効量は、当該技術分野で既知であるか又は本明細書で説明されている任意の技術により決定され得る。

【0047】

本明細書において用いられるところ、「内因性の核酸」とは、対象の細胞内で自然に生じる核酸である。

【0048】

本明細書において用いられるところ、「内因性のポリペプチド」とは、対象の細胞内で自然に生じるポリペプチドである。

【0049】

本明細書において用いられるところ、「組み換え細胞」とは、天然のものではない改変を有する細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）であり、典型的には、同様の条件下で組み換えがなされていない他の同様の細胞中に存在していない（又は、異なるレベルで存在する）核酸配列（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）又はポリペプチドを含む（外因性の核酸配列）。実施形態において、組み換え細胞は外因性の核酸を含む（例えば、ベクター又は改変染色体配列）。実施形態において、組み換え細胞は、外因性のポリペプチドを含む。実施形態において、組み換え細胞は、組み換えがなされていない同様の細胞に存在しない外因性の核酸配列、例えば配列、例えばＤＮＡ又はＲＮＡを含む。実施形態において、外因性の核酸配列は染色体性であり、例えば、外因性の核酸配列は、内因性の染色体配列中に配置された外因性の配列である。実施形態において、外因性の核酸配列は、染色体性又は染色体外性である、例えば非組み込み型ベクターである。実施形態において、外因性の核酸配列は、ＲＮＡ配列、例えば、ｍＲＮＡを含む。実施形態において、外因性の核酸配列は、ＲＮＡとして発現される配列、例えばｍＲＮＡ又は調節ＲＮＡを含む染色体性又は染色体外性の外因性の核酸配列を含む。実施形態において、外因性の核酸配列は、ポリペプチドをコードする配列、又は、ポリペプチドとして発現される配列を含む染色体性又は染色体外性の核酸配列を含む。実施形態において、外因性の核酸配列は、第２の核酸配列の立体構造又は発現を調節する第１の染色体性又は染色体外性の外因性の核酸配列を含み、ここで、第２のアミノ酸配列は外因性又は内因性であることが可能である。例えば、組み換え細胞は、内因性の配列の発現を制御する外因性の核酸を含んでいることが可能である。実施形態において、組み換え細胞は、組み換えがなされていない同様の細胞において見出されるレベルとは異なるレベル又は分布で存在するポリペプチドを含み得る。実施形態において、組み換え細胞は、ＲＮＡ又はポリペプチドを生成するために組み替えられたＲＰＥを含む。実施形態において、組み換え細胞は、ＲＮＡとして発現される配列、例えばｍＲＮＡ又は調節ＲＮＡを含む配列を含む染色体性又は染色体外性の外因性の核酸配列を含む外因性の核酸配列を含み得る。実施形態において、組み換え細胞（例えば、ＲＰＥ細胞）は、ポリペプチドをコードする配列、又はポリペプチドとして発現される配列を含む染色体性又は染色体外性の核酸配列を含む外因性の核酸配列を含む。ある実施形態において、ポリペプチドは、天然に存在するコード配列と比べてポリペプチドの高い発現を達成するために、コドン最適化配列でコードされている。このコドン最適化配列は、市販のアルゴリズムを使用して生成され得、例えば、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ ＵＳＡ）、ＧｅｎｅＧＰＳ（登録商標）（ＡＴＵＭ，Ｎｅｗａｒｋ，ＣＡ ＵＳＡ）、又はＪａｖａ（登録商標） Ｃｏｄｏｎ Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ Ｔｏｏｌ（ＪＣａｔ，ｗｗｗ．ｊｃａｔ．ｄｅ，Ｇｒｏｔｅ、Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ ３３，Ｉｓｓｕｅ ｓｕｐｐｌ＿２，ｐｐ．Ｗ５２６－Ｗ５３１（２００５）を使用して生成され得る。ある実施形態において、組み換え細胞（例えばＲＰＥ細胞）は、内因性の配列の高次構造又は発現を制御する外因性の核酸配列を含む。ある実施形態において、組み換え細胞（例えばＲＰＥ細胞）は、安定的にトランスフェクトされた細胞の集団から培養されるか、又はモノクローナル細胞株から培養される。

【0050】

「外因性の核酸」とは、本明細書で使用される場合、対象細胞中に天然には存在しない核酸のことである。

【0051】

「外因性のポリペプチド」とは、本明細書で使用される場合、対象細胞（例えば組み換え細胞）中に天然には存在しないポリペプチドのことである。特定の配列のアミノ酸位置への言及は、（別途述べられていない限り）参照アミノ酸配列（例えば、完全長の成熟（シグナルペプチド開裂後）野生型タンパク質の配列）中での前記アミノ酸の位置を意味しており、且つ参照アミノ酸配列中の他の位置での変異（例えば、欠失、挿入、及び／又は置換）の存在を排除しない。

【0052】

本明細書において用いられるところ、「第ＶＩＩ因子タンパク質」又は「ＦＶＩＩタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＦＶＩＩ生物活性、例えば、血液凝固の促進を有する、天然の第ＶＩＩ因子タンパク質又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。天然のＦＶＩＩは、一本鎖酵素前駆体、酵素前駆体様の二本鎖ポリペプチド及び完全に活性化された二本鎖形態（ＦＶＩＩａ）として存在する。いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩへの言及は、酵素前駆体様及びＦＶＩＩａを含む、その一本鎖及び二本鎖形態を含む。本明細書に記載のデバイス、例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含むデバイスによって生成され得るＦＶＩＩタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びに１つ又は複数のアミノ酸置換及び／又は欠失を有する断片、突然変異体、変異体を含む、このような野生型タンパク質の変異体を含む。いくつかの実施形態において、変異体ＦＶＩＩタンパク質は、野生型第ＶＩＩａ因子の活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する完全に活性化された二本鎖形態（第ＶＩＩａ因子）へと活性化されることが可能である。ＦＶＩＩ及びＦＶＩＩａの変異体は公知であり、例えば、マルゼプタコグアルファ（ｍａｒｚｅｐｔａｃｏｇ ａｌｆａ）（活性化）（ＭａｒｚＡＡ）並びに欧州特許第１３７３４９３号明細書、米国特許第７７７１９９６号明細書、米国特許第９４７６０３７号明細書及び米国特許出願公開第２００８００５８２５５号明細書に記載されている変異体である。

【0053】

ＦＶＩＩ因子生物活性は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって定量化され得る。例えば、生体液、例えば、血漿のサンプルのＦＶＩＩ生物活性は、（ｉ）脂質膜及び第Ｘ因子に埋め込まれた組織因子（ＴＦ）を含むシステムにおいて生成された第Ｘａ因子の量を測定すること（Ｐｅｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１９９１９－１９９２４，１９９７）；（ｉｉ）水性系における第Ｘ因子加水分解を測定すること；（ｉｉｉ）表面プラズモン共鳴に基づいて機器を用いてＴＦへのその物理的結合を測定すること（Ｐｅｒｓｓｏｎ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｓ．４１３：３５９－３６３，１９９７）；又は（ｉｖ）合成基質の加水分解を測定すること；及び／又は（ｖ）ＴＦ非依存性インビトロ系におけるトロンビンの生成を測定することによって定量化され得る。実施形態において、ＦＶＩＩ活性は、市販の発色アッセイ（ＢＩＯＰＨＥＮ ＦＶＩＩ，ＨＹＰＨＥＮ ＢｉｏＭｅｄ Ｎｅｕｖｉｌｌｅ ｓｕｒ Ｏｉｓｅ，Ｆｒａｎｃｅ）によって評価され、ここで、ＦＶＩＩを含有する生体サンプルが、トロンボプラスチンカルシウム、第Ｘ及びＳＸａ－１１因子（第Ｘａ因子に特異的な発色性基質と混合される。

【0054】

本明細書において用いられるところ、「第ＶＩＩＩ因子タンパク質」又は「ＦＶＩＩＩタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＦＶＩＩＩ生物活性、例えば、凝固活性を有する、天然の第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本明細書に記載のデバイス、例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含むデバイスによって発現され得るＦＶＩＩＩタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びに１つ又は複数のアミノ酸置換及び／又は欠失、Ｂドメイン欠失（ＢＤＤ）変異体、一本鎖変異体及び半減期延長ポリペプチドを有する上記の野生型又は変異体のいずれかの融合を有する断片、突然変異体、変異体を含む、このような野生型タンパク質の変異体を含む。実施形態において、細胞は、Ｂドメインの完全又は部分的な欠失を有する前駆体第ＶＩＩＩ因子ポリペプチド（例えば、シグナル配列を有する）をコードするように組み換えられる。実施形態において、細胞は、一本鎖第ＶＩＩＩ因子ポリペプチドをコードするように組み換えられ、変異体ＦＶＩＩＩタンパク質は、好ましくは、対応する野生型第ＶＩＩＩ因子の凝固活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＦＶＩＩＩタンパク質の凝固活性を測定するためのアッセイは、一段階又は二段階凝固アッセイ（Ｒｉｚｚａ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｏｆ ＦＶＩＩＩ：Ｃ ａｎｄ ＦＩＸａ ｉｎ Ｂｌｏｏｍ ｅｄ．Ｔｈｅ Ｈｅｍｏｐｈｅｌｉａｓ．ＮＹ Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ １９９２）又は発色性基質ＦＶＩＩＩ：Ｃアッセイ（Ｒｏｓｅｎ，Ｓ．１９８４．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ ３３：１３９－１４５、補遺）を含む。

【0055】

いくつかのＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ変異体が公知であり、例えば、以下の米国特許第４，８６８，１１２号明細書（例えば、第２欄、２行から第１９欄、２１行及び表２）；同第５，１１２，９５０号明細書（例えば、第２欄、５５～６８行、図２、及び実施例１）；同第５，１７１，８４４号明細書（例えば、第４欄、１２２行から第５欄、３６行）；同第５，５４３，５０２号明細書（例えば、第２欄、１７～４６行）；同第５，５９５，８８６号明細書；同第５，６１０，２７８号明細書；同第５，７８９，２０３号明細書（例えば、第２欄、２６～５１行及び実施例５～８）；同第５，９７２，８８５号明細書（例えば、第１欄、２５行から第２欄、４０行）；同第６，０４８，７２０号明細書（例えば、第６欄、１～２２行及び実施例１）；同第６，０６０，４４７号明細書；同第６，２２８，６２０号明細書；同第６，３１６，２２６号明細書（例えば、第４欄、４行から第５欄、２８行及び実施例１～５）；同第６，３４６，５１３号明細書；同第６，４５８，５６３号明細書（例えば、第４欄、２５～５３行）及び同第７，０４１，６３５号明細書（例えば、第２欄、１行から第３欄、１９行、第３欄、４０行から第４欄、６７行、第７欄、４３行から第８欄、２６行、及び第１１欄、５行から第１３欄、３９行）のいずれかに開示されている完全又は部分的なＢドメイン欠失を有する変異体が挙げられる。

【0056】

いくつかの実施形態において、（例えば、デバイスに含まれる組み換え細胞によって発現される）本明細書に記載のデバイスより生成されるＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質は、Ｂドメインにおけるアミノ酸の以下の欠失の１つ又は複数を有する：（ｉ）２つのポリペプチド鎖への一次翻訳産物の細胞内プロセシングに不可欠なアミノ末端Ｂドメイン配列を除くＢドメインの大部分（国際公開第９１／０９１２２号パンフレット）；（ｉｉ）アミノ酸７４７～１６３８（Ｈｏｅｂｅｎ Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５（１３）：７３１８－７３２３（１９９０））；アミノ酸７７１～１６６６又はアミノ酸８６８～１５６２（Ｍｅｕｌｉｅｎ Ｐ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．２（４）：３０１－６（１９８８）；アミノ酸９８２～１５６２又は７６０～１６３９（Ｔｏｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：５９３９－５９４２（１９８６））；アミノ酸７９７～１５６２（Ｅａｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２５：８３４３－８３４７（１９８６））；７４１～１６４６（Ｋａｕｆｍａｎ、国際公開第８７／０４１８７号パンフレット））、７４７～１５６０（Ｓａｒｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＤＮＡ ６：５５３－５６４（１９８７））；アミノ酸７４１～１６４８（Ｐａｓｅｋ、国際公開第８８／００８３１号パンフレット））、アミノ酸８１６～１５９８又は７４１～１６８９（Ｌａｇｎｅｒ（Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓｔ．Ｍｉｔｔ．（１９８８）Ｎｏ ８２：１６－２５、ＥＰ２９５５９７号明細書）の欠失；フーリンプロテアーゼ認識配列における１つ又は複数の残基を含む欠失、例えば、米国特許第９，９５６，２６９号明細書、第１０欄、６５行から第１１欄、３６行に記載されている特定の欠失のいずれかを含む、アミノ酸１６４３～１６４８におけるＬＫＲＨＱＲ（配列番号６５）。

【0057】

他の実施形態において、ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質は、以下のＢドメインアミノ酸又はアミノ酸配列のいずれかを保持する：（ｉ）Ｂドメインにおける１つ又は複数のＮ－連結されたグリコシル化部位、例えば、残基７５７、７８４、８２８、９００、９６３、又は任意選択により９４３、最初の２２６アミノ酸又は最初の１６３アミノ酸（Ｍｉａｏ，Ｈ．Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３（ａ）：３４１２－３４１９（２００４）、Ｋａｓｕｄａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．６：１３５２－１３５９（２００８）、及びＰｉｐｅ，Ｓ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．９：２２３５－２２４２（２０１１）。

【0058】

いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質は、米国特許第１０，０２３，６２８号明細書、同第９，３９４，３５３号明細書及び同第９，６７０，２６７号明細書に記載されているＲ１６４５及び／又はＲ１６４８位置における置換のいずれかを含む、この部位におけるタンパク質分解による切断を防ぐフーリンプロテアーゼ認識配列における１つ又は複数のアミノ酸の置換（アミノ酸１６４３～１６４８におけるＬＫＲＨＱＲ（配列番号６５））によって生成される一本鎖変異体である。

【0059】

いくつかの実施形態において、上記のＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質のいずれかは、以下の変位の１つ又は複数をさらに含み得る：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質の発現を改善するためのＦ３０９Ｓ置換（Ｍｉａｏ，Ｈ．Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０３（ａ）：３４１２－３４１９（２００４）；アルブミン融合（国際公開第２０１１／０２０８６６号パンフレット）；及びＦｃ融合（国際公開第０４／１０１７４０号パンフレット）。

【0060】

別段の定めがある場合を除き、本明細書において言及される全てのＦＶＩＩＩ－ＢＤＤアミノ酸位置は、完全長ヒトＦＶＩＩＩにおける位置を指す。

【0061】

本明細書において用いられるところ、「第ＩＸ因子タンパク質」又は「ＦＩＸタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＦＩＸ生物活性、例えば、凝固活性を有する天然の第ＩＸ因子タンパク質又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。ＦＩＸは、不活性な酵素前駆体として生成され、これは、活性化ペプチドの第ＸＩａ因子除去によって活性な形態に転化されて、１つ又は複数のジスルフィド結合によって一緒に保持された重鎖及び軽鎖が生成される。（例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含むデバイス）本明細書に記載のデバイスによって生成され得るＦＩＸタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びに半減期延長ポリペプチドを有する上記の野生型又は変異体タンパク質のいずれかの１つ又は複数のアミノ酸置換及び／又は欠失及び融合を有する断片、突然変異体、変異体を含む、このような野生型タンパク質の変異体を含む。実施形態において、細胞は、完全長野生型ヒト第ＩＸ因子ポリペプチド（例えば、シグナル配列を有する）又はその機能的変異体をコードするように組み換えられる。変異体ＦＩＸタンパク質は、好ましくは、野生型第ＶＩＸ因子の凝固活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＦＩＸタンパク質の凝固活性を測定するためのアッセイとしては、Ｂｉｏｐｈｅｎ第ＩＸ因子アッセイ（Ｈｙｐｈｅｎ ＢｉｏＭｅｄ）及び一段階凝固アッセイ（活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）（例えば、欧州特許第２０３２ ６０７号明細書に記載される）、トロンビン生成時間アッセイ（ＴＧＡ）及び回転式トロンボエラストメトリー（例えば、国際公開第２０１２／００６６２４号パンフレットに記載される）が挙げられる。

【0062】

いくつかの機能的ＦＩＸ変異体が公知であり、以下の国際特許公報：国際公開第０２／０４０５４４号パンフレット、４頁、９～３０行及び１５頁、６～３１行；国際公開第０３／０２０７６４ Ａ２号パンフレット、１４～２４頁の表２及び３、及び１２頁、１～２７行；国際公開第２００７／１４９４０６号パンフレット、４頁、１行から１９頁、１１行；国際公開第２００７／１４９４０６号パンフレット、１９頁、１２行から２０頁、９行；国際公開第０８／１１８５０７号パンフレット、５頁、１４行から６頁、５行；国際公開第０９／０５１７１７号パンフレット、９頁、１１行から２０頁、２行；国際公開第０９／１３７２５４号パンフレット、２頁、段落［００６］から５頁、段落［０１１］及び１６頁、段落［０４４］から２４頁、段落［０５７］；国際公開第０９／１３０１９８ Ａ２号パンフレット、４頁、２６行から１２頁、６行；国際公開第０９／１４００１５号パンフレット、１１頁、段落［００４３］から１３頁、段落［００５３］；国際公開第２０１２／００６６２４号パンフレット；国際公開第２０１５／０８６４０６号パンフレットに記載されている機能的ＦＩＸ変異体のいずれかを含む本発明に記載のデバイスに封入される組み換え細胞によって発現され得る。

【0063】

一定の実施形態において、ＦＩＸポリペプチドは、ＦＩＸタンパク質の半減期を延長する異種ポリペプチド又は非ポリペプチド部分に融合された野生型又は変異体配列を含む。例示的な半減期延長部分としては、Ｆｃ、アルブミン、ＰＡＳ配列、トランスフェリン、ＣＴＰ（その４つのＯ－グリカンを有するヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の２８アミノ酸Ｃ末端ペプチド（ＣＴＰ））、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミン結合ポリペプチド、アルブミン結合小分子、又はこれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。例示的なＦＩＸポリペプチドは、国際公開第２０１２／００６６２４号パンフレットに記載されているｒＦＩＸＦｃタンパク質であり、これは、Ｆｃのヒンジ領域における２つのジスルフィド結合を介して一緒に結合されたＦＩＸＦｃ一本鎖（ＦＩＸＦ ｃ－ｓｃ）及びＦｃ一本鎖（Ｆｃ－ｓｃ）である。

【0064】

ＦＩＸ変異体は、機能獲得及び機能喪失変異体も含む。機能獲得変異体の例は、ヒトＦＩＸの「Ｐａｄｕａ」変異体であり、これは、Ｒ（アルギニン）（配列番号２のアミノ酸位置３８４に対応する）の代わりに成熟タンパク質の位置３３８におけるＬ（ロイシン）を有し、野生型ヒトＦＩＸと比較してより高い触媒及び凝固活性を有する（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７３：１２０８９－９４（１９９８））。機能喪失変異体の例は、成熟タンパク質の開始から５番目のアミノ酸位置におけるリジンと置換されるアラニンであり、これは、コラーゲンＩＶへの結合の低下（例えば、機能喪失）を有するタンパク質をもたらす。

【0065】

本明細書において用いられるところ、「インターロイキン２タンパク質」又は「ＩＬ－２タンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＩＬ－２生物活性を有する、例えば、Ｔｒｅｇ細胞におけるＩＬ－２受容体シグナル伝達を活性化する、天然のＩＬ－２タンパク質又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。本明細書に記載のデバイス、例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含むデバイスによって生成され得るＩＬ－２タンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びにこのような野生型タンパク質の変異体を含む。変異体ＩＬ－２タンパク質は、好ましくは、対応する野生型ＩＬ－２の生物活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＩＬ－２タンパク質のための生物活性アッセイが、米国特許第１０，０３５，８３６号明細書に記載されており、例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５－／低Ｔ細胞又はＮＫ細胞と比較して、Ｔｒｅｇ細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ５タンパク質のレベルを測定することを含む。本開示のデバイス（例えば、組み換えＲＰＥ細胞を含むデバイス）によって生成され得る変異体ＩＬ－２タンパク質は、以下のアミノ酸置換：Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｆ、及びＣ１２５Ｓ又はＣ１２５Ａの１つ又は複数を有するタンパク質を含む。

【0066】

本明細書において用いられるところ、「膵島細胞」は、任意の天然の又は任意の合成的に生成された、又は修飾された細胞であって、膵臓ランゲルハンス島の細胞の部分的若しくは全体的な機能を部分的若しくは全体的に再現する、模倣する又は他の形で発現することを意図された細胞を含む細胞を意味する。「膵島細胞」という用語は、幹細胞、例えば、人工多能性幹細胞に由来するグルコース応答的なインスリン産生細胞を含む。

【0067】

本明細書において用いられるところ、「マンニトール」は、特に明記されない限り、Ｄ－マンニトールを指す。

【0068】

「中間分子量アルギン酸塩」又は「ＭＭＷ－Ａｌｇ」は、本明細書で使用される場合、おおよその分子量が７５ｋＤａ～１５０ｋＤａであるアルギン酸塩を意味する。

【0069】

「間葉系幹機能細胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｃｅｌｌ）」又は「ＭＳＦＣ」は、それらの用語が本明細書において用いられるところ、中胚葉系統に由来するか、又は中胚葉系統の細胞に特有の少なくとも１つの特徴を有する細胞を指し、ここで、ＭＳＦＣは、ｉ）分化の末期状態でなく、ｉｉ）１つ又は複数の細胞型へと最終的に分化し得る。ＭＳＦＣは、内胚葉由来の細胞、例えば、腸細胞、又は外胚葉由来の細胞、例えば、皮膚に由来する細胞、ＣＮＳ、又は神経細胞を含まない。実施形態において、ＭＳＦＣは、多能性である。実施形態において、ＭＳＦＣは、分化全能性でない。実施形態において、ＭＳＦＣは、以下の特徴の１つ又は複数を含む：
ａ）それは、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）又はそれに由来する細胞を含み、このような細胞としては、ＭＳＣの一次細胞培養物に由来する細胞、天然のＭＳＣ（例えばヒト又は他の哺乳動物由来）から直接単離された細胞（長期の培養を伴わない、例えば、細胞分裂が単離から５又は１０継代又は回未満）、形質転換、多能性、不死化、又は長期（例えば、細胞分裂から５又は１０継代又は回超）ＭＳＣ培養物に由来する細胞が挙げられる。；
ｂ）それは、低分化細胞から得られた細胞、例えば、ＭＳＣに発生、プログラム、若しくは再プログラム（例えばインビトロで）された細胞、又はいずれかの遺伝子組み換えを除き、１種以上の天然ＭＳＣと実質的に同様である細胞又はＭＳＣの一次若しくは長期培養物由来の細胞、又は上のａ）に記載される細胞を含む。ＭＳＦＣが由来し得る低分化細胞の例としては、ＩＰＳ細胞、胚性幹細胞、又は他の分化全能性又は多能性細胞が挙げられ；例えば、Ｃｈｅｎ，Ｙ．Ｓ．ｅｔ ａｌ（２０１２）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ １（８３－９５）；Ｆｒｏｂｅｌ，Ｊ ｅｔ ａｌ（２０１４）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ３（３）：４１４－４２２；Ｚｏｕ，Ｌ ｅｔ ａｌ（２０１３）Ｓｃｉ Ｒｅｐ ３：２２４３を参照されたい；
ｃ）例えば、細胞の多能性についての情報を提供することが可能な任意のアッセイ、例えば、顕微鏡検査によって測定した際に、それは多能性であり；
ｄ）それは、円形ないし楕円形の核と共に、特徴的な単核の卵形、星形又は紡錘形を示す。楕円形の細長い核は、隆起した核小体及びヘテロクロマチンとユークロマチンとの混合物を有し得る。ＭＳＦＣ（例えば、ＭＳＣ）は、細胞質をほとんど含まないが、核から伸びているように見える多くの薄い突起（ｐｒｏｃｅｓｓ）を有し得る；
ｅ）例えば、細胞分裂についての情報を提供することが可能な任意のアッセイ、例えば、顕微鏡検査によって測定した際に、それは細胞分裂が可能である。実施形態において、ＭＳＦＣは、（例えば、デバイス内にカプセル化されるか又は組み込まれる前に）培養物中で細胞分裂が可能である。実施形態において、それは、デバイス（例えば、本明細書に記載のデバイス）内にカプセル化された、例えば、本明細書に記載されるようにカプセル化されたか、又は組み込まれた後、細胞分裂が可能である。実施形態において、それは、コンフルエンスに達した後、細胞分裂することができない；
ｆ）それは、間葉細胞系統、例えば、骨芽細胞、軟骨芽細胞、脂肪細胞、又は線維芽細胞へと分化することが可能である；
ｇ）それは、間葉細胞マーカー、例えば、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ７３、ＣＤ９０、Ｓｔｒｏ－１、ＣＤ４９ａ、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ１４６、ＣＤ１６６、ＴＮＡＰ＋、ＴＨＹ－１＋、Ｓｔｒｏ－２、Ｓｔｒｏ－４、及びアルカリホスファターゼのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は全てを発現する；
ｈ）それは、ＣＤ３４、ＣＤ３１、ＶＥ－カドヘリン、ＣＤ４５、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ１１ｂ及びグリコホリン又は白血球分化抗原、例えば、ＣＤ１４、ＣＤ３３、ＣＤ３及びＣＤ１９のうちの１つ、２つ、３つ、又はいずれかの有意なレベルを発現しない；
ｉ）それは、ＣＤ７５、ＣＤ９０、及びＣＤ１０５のうちの１つ、２つ、又は全てを発現し、ＣＤ４５、ＣＤ３４、及びＣＤ１４のうちの１つ、２つ、又はいずれかを発現しない；
ｊ）例えば、炎症に関連する情報を提供することが可能な任意の方法、例えば、Ｔ細胞増殖のインビボ阻害によって測定した際に、それは、抗炎症性又は免疫減衰性（ｉｍｍｕｎｅ－ｄａｍｐｅｎｉｎｇ）である；
ｋ）例えば、目視検査などによって決定した際に、それは、付着性、例えば、プラスチック付着性であることが可能である；又は
ｌ）例えば、目視検査などによって決定した際に、３次元で成長し得る。

【0070】

本明細書において用いられるところ、「副甲状腺ホルモン」又は「ＰＴＨ」は、例えば、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＰＴＨ生物活性を有する、天然の副甲状腺ホルモンポリペプチド又はペプチド又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はペプチドを意味する。本明細書に記載の封入細胞によって発現され得るＰＴＨポリペプチド及びペプチドは、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びにこのような野生型タンパク質の変異体を含む。このようなＰＴＨポリペプチド及びペプチドは、プレプロ－ＰＴＨポリペプチド（１１５アミノ酸）、プロ－ＰＴＨポリペプチド（９０アミノ酸）、成熟８４－アミノ酸ペプチド（ＰＴＨ（１－８４））、及び生物学的に活性なその変異体、例えば、切断型変異体ペプチドＰＴＨ（１－３４）のための野生型ヒト配列から本質的になり得る。ヒト野生型配列における１つ又は複数のアミノ酸置換を有するＰＴＨペプチド変異体が、例えば、米国特許第７４１０９４８号明細書及び８５６３５１３号明細書並びに米国特許出願公開第２０１３０２１７６３０号明細書に記載されている。ＰＴＨ変異体は、好ましくは、対応する野生型ＰＴＨの生物活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。タンデム質量分析法による特定のＰＴＨ変異体を検出するためのアッセイが、米国特許第８３８３４１７号明細書に記載されている。ＰＴＨペプチド変異体のための生物活性アッセイ、ｃＡＭＰレベルを測定することによって決定される際、アデニル酸シクラーゼの刺激が、米国特許第７４１０９４８号明細書に記載されている。

【0071】

本明細書において用いられるところ、「ポロキサマー」は、２つのポリオキシエチレン（ポリ（エチレンオキシド））部分が横に配置されたポリオキシプロピレン（ポリ（プロピレンオキシド））の中心の疎水性鎖から構成される非イオン性トリブロック直鎖コポリマーの種類に対する標準的な総称を指す。

【0072】

本明細書において用いられるところ、「ポロキサマー１８８」又は「Ｐ １８８」は、ポリオキシプロピレンコアについて１８００ｇ／モルのおよその分子量及び約８０％重量パーセント、例えば、７９．０～８３．７パーセントのオキシエチレン含量を有するポロキサマーを指す。実施形態において、ポロキサマー１８８は、８３５０ｇ／モルの平均分子量を有する。実施形態において、ポロキサマー１８８は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定した際に、７６８０ｇ／モル～９５１０ｇ／モルの平均分子量、及び８１．８±１．９％重量パーセントのオキシエチレン含量を有する。実施形態において、ポロキサマー１８８中の各ポリオキシエチレン鎖は、７５～８５（例えば、８０）のエチレンオキシドモノマーを有し、ポリオキシプロピレンコアは、２５～３０（例えば、２７）のプロピレンオキシドモノマーを有する。実施形態において、本明細書に記載の方法において使用されるポロキサマー１８８は、この方法が行われる時点で公式である、米国薬局方－国民医薬品集（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ－Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ）（ＵＳＰ－ＮＦ）又は欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）（Ｐｈ．Ｅｕｒ．）によって公表されるポロキサマーの研究論文に記載される規格を実質的に満たす。

【0073】

「ポリマー組成物」とは、本明細書で使用される場合、１種又は複数種のポリマーを含む組成物（例えば、溶液、混合物）のことである。クラスとして、「ポリマー」は、ホモポリマー、ヘテロポリマー、コポリマー、ブロックポリマー、ブロックコポリマーを含み、天然及び合成の両方であり得る。ホモポリマーは、１種類のビルディングブロック（即ちモノマー）を含むが、コポリマーは、複数種類のモノマーを含む。

【0074】

本明細書において用いられるところ、「ポリペプチド」は、ペプチド結合を介して結合されたアミノ酸残基を含み、少なくとも２、いくつかの実施形態において、少なくとも１０、５０、７５、１００、１５０又は２００のアミノ酸残基を有するポリマーを指す。

【0075】

本明細書において用いられるところ、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、及び「予防している（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、投与又は治療の適用を含む処置であって、例えば、封入細胞の組成物（例えば、本明細書に記載の）を、疾病、障害、又は状態の発症の前に、前記疾病、障害、又は状態に係る物理的徴候を妨げるために投与するステップを含む処置を指す。いくつかの実施形態において、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」及び「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」は、疾病、障害又は状態の兆候又は症状が未だ発生していないか、又は、実測されていないことが必要とされる。いくつかの実施形態において、処置は、予防を含み、他の実施形態においては含まない。

【0076】

「置換治療」又は「置換タンパク質」は、タンパク質の減少、変性又は欠乏に関連する疾病又は状態にある対象において減少している、不十分な量で存在している、変性した（例えば、変異した）、又は、欠乏しているタンパク質の有益な機能を置換又は増大させる治療用タンパク質又はその機能性画分である。例は、一定の血液凝固障害における一定の血液凝固因子、又は、一定のライソゾーム蓄積症における一定のライソゾーム酵素である。実施形態において、置換治療又は置換タンパク質は、内因性のタンパク質の機能が提供される。実施形態において、置換治療又は置換タンパク質は、置換されるタンパク質の、例えば野生型対立遺伝子又は障害に関連していない対立遺伝子といった天然の変異体と同一のアミノ酸配列を有する。実施形態において、又は置換治療若しくは置換タンパク質は、例えば野生型対立遺伝子又は障害に関連していない対立遺伝子であって、例えば対象が有する対立遺伝子といった天然変異体とは、アミノ酸残基の約１、２、３、４、５、１０、１５又は２０％以下でアミノ酸配列が異なる。

【0077】

「参照デバイス」は、特許請求されているデバイス（例えばヒドロゲルカプセル）に関して本明細書で使用される場合、（ｉ）特定の特徴を欠き、例えば、ＦＢＲ軽減手段（例えば、抗線維性化合物（本明細書で定義されている）又はＣＢＳ（本明細書で定義されている）（例えばＲＧＤポリマー）を含むバリア区画）を欠き、（ｉｉ）特許請求されているデバイス中と同一の細胞型のほぼ同量の細胞を細胞含有区画中でカプセル化し、（ｉｉｉ）特定の特徴（例えば抗線維性化合物又はＣＢＳ）を欠く以外は、特許請求されているデバイス中と実質的に同様のポリマー組成及び構造を有するデバイス（例えばヒドロゲルカプセル）を意味する。ある実施形態において、参照デバイスの細胞含有区画中の生細胞の数は、特許請求されているデバイスの細胞含有区画中の生細胞の数の８０～１２０％以内であるか、又は９０％～１１０％以内である。ある実施形態において、参照デバイス中の細胞及び特許請求されているデバイス中の細胞は、同一の細胞培養物から得られる。ある実施形態において、実質的に同様のポリマー組成は、参照デバイス中の及び特許請求されているデバイス中の全てのポリマー（例えば、任意のＣＢＰ－ポリマー及び抗線維性ポリマーのポリマー成分）が、該当する場合には、化学クラス及び分子量クラスが同一である（例えば、Ｇ含有量が高く且つ分子量範囲が同一であるアルギン酸塩）ことを意味する。例えば、ある実施形態において、ＣＢＰなしの参照デバイスの細胞含有区画は、特許請求されているデバイスの細胞含有区画を形成するために使用されるＣＢＰ－ポリマー中のポリマー（例えばアルギン酸塩）の非修飾バージョンから形成されている。特許請求されている２区画ヒドロゲルミリカプセルが、（ｉ）複数の細胞をカプセル化するＣＢＰ－ポリマーから形成された内側区画と、（ｉｉ）化学的に修飾されたポリマー（例えば、本明細書で説明されているＣＭ－ＬＭＷ－アルギン酸塩）及び非修飾ポリマー（例えば、本明細書で説明されているＵ－ＨＭＷ－アルギン酸塩）の混合物から形成された外側区画とを有するいくつかの実施形態において、参照カプセル及び特許請求されているカプセルの外側区画は、同一のポリマー混合物から形成されているが、参照カプセルの内側区画は、外側区画のために使用された同一のポリマー混合物中の細胞の懸濁液から形成される。ある実施形態において、実質的に同様の構造は、参照デバイスと特許請求されているデバイスとが、同数の区画（例えば、１個、２個、３個等）並びにほほ同一のサイズ及び形状を有することを意味する。

【0078】

「ＲＰＥ細胞」は、本明細書で使用される場合、下記の特徴の内の１つ又は複数を有する細胞を指す：ａ）網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）（例えば、ＡＲＰＥ－１９細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２３０２（商標））を使用して培養される）、又は、例えば、治療用タンパク質をコードする外因性の配列で、ＡＲＰＥ－１９細胞株から培養された細胞を安定的にトランスフェクトすることによるか、又は別の方法で、そのように培養されたＡＲＰＥ－１９細胞を、外因性のタンパク質若しくは他の外因性の物質を発現するように組み換えることによる、このＲＰＥに由来する細胞、ＲＰＥ細胞の初代細胞培養物に由来する細胞、（例えば、ヒト又は他の哺乳動物からの）天然に存在するＲＰＥ細胞から直接単離された細胞（長期の培養を伴わない、例えば、単離から５又は１０回未満の継代又はラウンドの細胞分裂）、形質転換されたか、不死化されたか、又は長期（例えば、５若しくは１０回超の継代若しくはラウンドの細胞分裂）にわたるＲＰＥ細胞培養物に由来する細胞を含む；ｂ）低分化細胞から得られている細胞、例えば、ＲＰＥ細胞へと発生したか、プログラムされたか、若しくは（例えばインビトロで）再プログラムされた細胞、又は、任意の遺伝子組み換えを除いて、１種若しくは複数種の天然に存在するＲＰＥ細胞と実質的に同様である細胞、又はＲＰＥ細胞の初代培養物若しくは長期培養物からの細胞（例えば、この細胞は、ＩＰＳ細胞から由来し得る）；又はｃ）下記の特性の内の１つ又は複数を有する細胞：ｉ）バイオマーカーＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ－６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、若しくはαＢ－クリスタリンの内の１つ若しくは複数を発現するか；ｉｉ）バイオマーカーＣＲＡＬＢＰ、ＲＰＥ－６５、ＲＬＢＰ、ＢＥＳＴ１、若しくはαＢ－クリスタリンの内の１つ若しくは複数を発現しないか；ｉｉｉ）網膜中に天然に見出され、且つブルッフ膜中の脈絡膜血管上に単一層を形成するか；ｉｖ）網膜における上皮輸送、光吸収、分泌、及び免疫調節に関与するか、又はｖ）不死化ＲＰＥ細胞株（例えば、ＡＲＰＥ－１９細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２３０２（商標）））と同一の若しくは実質的に同一の遺伝的内容、及び任意選択的に同一の若しくは実質的に同一の後成的内容を有するように、合成により生成されているか、若しくは天然に存在する細胞から修飾されている。ある実施形態において、本明細書で説明されているＲＰＥ細胞は、例えば新たな特性を有するように組み換えられており、例えば、この細胞は、ＣＢＰ又はＣＢＳを含むポリマー組成物中でカプセル化された場合に、治療薬を発現するように組み換えられている。他の実施形態において、ＲＰＥ細胞は組み換えられていない。

【0079】

「生理食塩水」は、本明細書で使用される場合、別途明記されない限り、通常の生理食塩水を意味しており、即ち、０．９％ ＮａＣｌを含む水を意味する。

【0080】

「配列同一性」又は「パーセント同一」は、本明細書において、２つのヌクレオチド配列又は２つのアミノ酸配列を指すために用いられる場合、２つの配列が比較され、比較ウィンドウ（ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｎｄｏｗ）又は指定される領域にわたって最大の一致のために整列される場合、２つの配列が規定の領域内で同じであるか、又は規定の領域内のヌクレオチド又はアミノ酸位置の規定のパーセンテージの同じヌクレオチド又はアミノ酸を有することを意味する。配列同一性は、限定されないが、米国特許出願公開第２０１７／０２３３４４５５号明細書に記載されているアルゴリズムのいずれかを含む、当該技術分野において公知の標準的な技術を用いて決定され得る。実施形態において、同一のヌクレオチド又はアミノ酸位置の規定のパーセンテージは、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上である。

【0081】

「球状」は、本明細書で使用される場合、例えば表面上で波及び起状を有する場合がある球体（例えば、完全に円形の球）又は球体様の形状を形成する曲面を有するデバイス（例えば、ヒドロゲルカプセル又は他の粒子）を意味する。球体及び球体様の物体は、３つの垂直軸、ａ、ｂ、及びｃのそれぞれの周りの円、楕円、又は組み合わせの回転によって数学的に定義され得る。球体については、３つの軸が同じ長さである。一般に、球体様の形状は、互いに１０％、又は５％、又は２．５％以内である半主軸（ｓｅｍｉ－ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ａｘｅｓ）を有する楕円体（その平均面について）である。球体又は球体様の形状の直径は、半主軸の平均などの平均直径である。

【0082】

「スフェロイド」は、この用語が、デバイス（例えば、ヒドロゲルカプセル又は他の粒子）を指すために本明細書で使用される場合、このデバイスが、（ｉ）完全な若しくは古典的な扁平スフェロイド若しくは扁長スフェロイドの形状を有するか又は（ｉｉ）スフェロイドを大まかに形成する表面を有し、例えば、波及び起状を有し得、及び／又は半主軸が互いに１００％内である楕円体（平均的な表面）であり得ることを意味する。

【0083】

本明細書において用いられるところ、「対象」は、ヒト又は非ヒト動物を指す。実施形態において、対象は、例えば任意の年齢群のヒト（すなわち、男性又は女性）、小児科の対象（例えば乳児、小児、青年）又は成人対象（例えば、若年成人、中年成人、又は老人）である。実施形態において、対象は、非ヒト動物、例えば哺乳動物（例えば、マウス、イヌ、霊長類（例えばカニクイザル又はアカゲザル）である。実施形態において、対象は、（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、又はイヌ）の商業的に関連する哺乳動物）又は鳥類（例えば、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、又はシチメンチョウなどの商業的に関連する鳥類）である。一定の実施形態において、動物は哺乳動物である。動物は、オス又はメスであり得、任意の成長段階であり得る。非ヒト動物は遺伝子組み換え動物であり得る。

【0084】

本明細書において用いられるところ、「総体積」は、別の区画に占有される空間を含む多区画デバイスの１つの区画内の体積を指す。例えば、２区画デバイスの第２の（例えば、外側）区画の総体積は、第１の区画に占有される空間を含む第２の区画内の体積を指す。

【0085】

本明細書において用いられるところ、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、及び「処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾病、障害、若しくは状態の発症の低減、逆転、緩和、遅延の１つ又は複数、又は疾病、障害、若しくは状態の症状、兆候、若しくは基礎原因の１つ又は複数の進行の阻害を指す。実施形態において、処置は、疾病、障害若しくは状態の発症の低減、逆転、緩和、遅延、又は、疾病、障害若しくは状態の症状の進行の阻害を含む。実施形態において、処置は、疾病、障害若しくは状態の発症の低減、逆転、緩和、遅延、又は、疾病、障害若しくは状態の兆候の進行の阻害を含む。実施形態において、処置は、疾病、障害又は状態の基礎原因の発症の低減、逆転、緩和、低減又は遅延を含む。いくつかの実施形態において、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」及び「処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、疾病、障害又は状態の兆候又は症状が発生しているか、又は、実測されていることを必要とする。他の実施形態において、処置は、疾病又は状態の兆候又は症状が不在でも、例えば予防的処置で投与されてもよい。例えば、処置は、症状の発症（例えば、症状の履歴を鑑みて、及び／又は、遺伝的又は他の感受性要因を鑑みて）の前に感受性の個体に投与され得る。処置はまた、例えば再発を遅延又は予防するために、症状が回復した後も継続してもよい。いくつかの実施形態において、処置は予防を含み、他の実施形態においては含まない。

【0086】

本明細書において用いられるところ、「フォン・ヴィレブランド因子タンパク質」又は「ＶＷＦタンパク質」は、別段の定めがある場合を除き、当該技術分野において認識されているアッセイによって決定される際、ＶＷＦ生物活性、例えば、ＦＶＩＩＩ結合活性を有する天然のＶＷＦポリペプチド又はその変異体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを意味する。（例えば、デバイスに含まれる組み換え細胞によって発現される）本明細書に記載のデバイスによって生成され得るＶＷＦタンパク質は、野生型霊長類（例えば、ヒト）、ブタ、イヌ、及びマウスタンパク質、並びにこのような野生型タンパク質の変異体を含む。封入細胞は、以下のＶＷＦポリペプチドのいずれかをコードするように組み換えられ得る：２８１３アミノ酸の前駆体ＶＷＦ、２２アミノ酸のシグナルペプチドを欠くＶＷＦ、及び任意選択により、７４１アミノ酸のプレプロペプチド、２０５０アミノ酸の成熟ＶＷＦタンパク質、及びその切断型変異体、例えば、ＶＷＦ欠損マウスにおける内因性のＦＶＩＩＩレベルを安定させるのに十分なＶＷＦ断片、例えば、Ｄ’Ｄ３領域（アミノ酸７６４～１２４７）又はＤ１Ｄ２Ｄ’Ｄ３領域を含有する切断型変異体；及び例えば、米国特許第９４５８２２３号明細書に記載されているように、Ｄ’領域における１つ又は複数のアミノ酸置換を有するＶＷＦ変異体。変異体ＶＷＦタンパク質は、好ましくは、対応する野生型ＶＷＦタンパク質の生物活性の少なくとも５０％、７５％、９０％又はそれ以上（＞１００％を含む）を有する。ＶＷＦの生物活性を決定するための当該技術分野において認識されているアッセイは、リストセチン補因子活性（Ｆｅｄｅｒｉｃｉ Ａ Ｂ ｅｔ ａｌ．２００４．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ８９：７７－８５）、血小板糖タンパク質複合体Ｉｂ－Ｖ－ＩＸのＧＰ ＩｂαへのＶＷＦの結合（Ｓｕｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．２００６．Ｃｌｉｎ Ａｐｐｌ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓｔ．１２：３０５－３１０）、及びコラーゲン結合（Ｋａｌｌａｓ ＆ Ｔａｌｐｓｅｐ．２００１．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ８０：４６６－４７１）を含む。

【0087】

いくつかの実施形態において、本開示のデバイスによって産生されるＶＷＦタンパク質は、ＶＷＦタンパク質の半減期を延長する異種ポリペプチド又は非ポリペプチド部分に融合された天然又は変異体ＶＷＦアミノ酸配列を含む。例示的な半減期延長部分としては、Ｆｃ、アルブミン、ＰＡＳ配列、トランスフェリン、ＣＴＰ（その４つのＯ－グリカンを有するヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の２８アミノ酸Ｃ末端ペプチド（ＣＴＰ））、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、アルブミン結合ポリペプチド、アルブミン結合小分子、又はこれらのいずれかの組み合わせが挙げられる。

【0088】

選択される化学的定義
特定の官能基及び化学用語の定義を以下により詳細に記載する。化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ Ｅｄ．の内表紙のＰｅｒｉｏｄｏｉｃ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ ｖｅｒｓｉｏｎに従って識別し、特定の官能基は、ここに記載されているとおり通常どおり定義している。また、有機化学の一般原則、並びに特定の官能基部分及び反応性は、Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ、１９９９；Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８９；及びＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ Ｍｏｄｅｒｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７に記載されている。

【0089】

本明細書で用いている略語は、化学及び生物学の技術分野におけるその従来の意味を有する。本明細書に記載の化学構造及び式は、化学技術分野において既知である化学原子価に係る標準的な規則に従って構成されている。

【0090】

値の範囲が列挙されている場合、範囲中の各値及び部分範囲が包含されることが意図されている。例えば「Ｃ１～Ｃ６アルキル」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ１～Ｃ６、Ｃ１～Ｃ５、Ｃ１～Ｃ４、Ｃ１～Ｃ３、Ｃ１～Ｃ２、Ｃ２～Ｃ６、Ｃ２～Ｃ５、Ｃ２～Ｃ４、Ｃ２～Ｃ３、Ｃ３～Ｃ６、Ｃ３～Ｃ５、Ｃ３～Ｃ４、Ｃ４～Ｃ６、Ｃ４～Ｃ５、及びＣ５～Ｃ６アルキルを包含することが意図されている。

【0091】

本明細書において用いられるところ、「アルキル」は、１～２４個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ２４アルキル」）を有する直鎖又は分岐飽和炭化水素基のラジカルを指す。いくつかの実施形態において、アルキル基は、１～１２個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ１２アルキル」）、１～１０個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ１２アルキル」）、１～８個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ８アルキル」）、１～６個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ６アルキル」）、１～５個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ５アルキル」）、１～４個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ４アルキル」）、１～３個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ３アルキル」）、１～２個の炭素原子（「Ｃ１～Ｃ２アルキル」）、又は１個の炭素原子を有する（「Ｃ１アルキル」）。いくつかの実施形態において、アルキル基は、２～６個の炭素原子を有する（「Ｃ２～Ｃ６アルキル」）。Ｃ１～Ｃ６アルキル基の例としては、メチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、ｎ－プロピル（Ｃ３）、イソプロピル（Ｃ３）、ｎ－ブチル（Ｃ４）、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃ４）、ｓｅｃ－ブチル（Ｃ４）、イソ－ブチル（Ｃ４）、ｎ－ペンチル（Ｃ５）、３－ペンタニル（Ｃ５）、アミル（Ｃ５）、ネオペンチル（Ｃ５）、３－メチル－２－ブタニル（Ｃ５）、第三級アミル（Ｃ５）、及びｎ－ヘキシル（Ｃ６）が挙げられる。アルキル基の追加の例としては、ｎ－ヘプチル（Ｃ７）、ｎ－オクチル（Ｃ８）などが挙げられる。アルキル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アルキル」）又は１個以上の置換基（例えば、実例として、１～５個の置換基、１～３個の置換基、又は１個の置換基）で置換されている（「置換アルキル」）。

【0092】

本明細書において用いられるところ、「アルケニル」は、２～２４個の炭素原子、１つ又は複数の炭素－炭素二重結合を有し、及び三重結合を有さない直鎖又は分岐炭化水素基のラジカル（「Ｃ２～Ｃ２４アルケニル」）を指す。いくつかの実施形態において、アルケニル基は、２～１０個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ１０アルケニル」）、２～８個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ８アルケニル」）、２～６個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ６アルケニル」）、２～５個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ５アルケニル」）、２～４個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ４アルケニル」）、２～３個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ３アルケニル」）、又は２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルケニル」）。１つ又は複数の炭素－炭素二重結合は、中間（２－ブテニルにおけるものなど）又は末端（１－ブテニルにおけるものなど）であることが可能である。Ｃ２～Ｃ４アルケニル基の例としては、エテニル（Ｃ２）、１－プロペニル（Ｃ３）、２－プロペニル（Ｃ３）、１－ブテニル（Ｃ４）、２－ブテニル（Ｃ４）、ブタジエニル（Ｃ４）などが挙げられる。Ｃ２～Ｃ６アルケニル基の例としては、前述のＣ２～４アルケニル基並びにペンテニル（Ｃ５）、ペンタジエニル（Ｃ５）、ヘキセニル（Ｃ６）などが挙げられる。アルケニル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アルケニル」）又は１個以上の置換基（例えば、実例として、１～５個の置換基、１～３個の置換基、又は１個の置換基）で置換されている（「置換アルケニル」）。

【0093】

本明細書において用いられるところ、「アルキニル」という用語は、２～２４個の炭素原子、１つ又は複数の炭素－炭素三重結合を有する直鎖又は分岐炭化水素基のラジカル（「Ｃ２～Ｃ２４アルケニル」）を指す。いくつかの実施形態において、アルキニル基は、２～１０個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ１０アルキニル」）、２～８個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ８アルキニル」）、２～６個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ６アルキニル」）、２～５個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ５アルキニル」）、２～４個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ４アルキニル」）、２～３個の炭素原子（「Ｃ２～Ｃ３アルキニル」）、又は２個の炭素原子を有する（「Ｃ２アルキニル」）。１つ又は複数の炭素－炭素三重結合は、中間（２－ブチニルにおけるものなど）又は末端（１－ブチニルにおけるものなど）であることが可能である。Ｃ２～Ｃ４アルキニル基の例としては、エチニル（Ｃ２）、１－プロピニル（Ｃ３）、２－プロピニル（Ｃ３）、１－ブチニル（Ｃ４）、２－ブチニル（Ｃ４）などが挙げられる。アルキニル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アルキニル」）又は１個以上の置換基（例えば、実例として、１～５個の置換基、１～３個の置換基、又は１個の置換基）で置換されている（「置換アルキニル」）。

【0094】

本明細書において用いられるところ、「ヘテロアルキル」という用語は、非環式の安定な直鎖若しくは分岐鎖、又はこれらの組み合わせであって、少なくとも１個の炭素原子と、Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ、及びＳからなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子とを含むものを指し、ここで、窒素原子及び硫黄原子は任意選択により酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意選択により四級化されていてもよい。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、及びＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の位置に配置されていてもよい。例示的なヘテロアルキル基としては、これらに限定されないが：－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ３、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２、－Ｓ（Ｏ）－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２－ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｏ－ＣＨ３、－Ｓｉ（ＣＨ３）３、－ＣＨ２－ＣＨ＝Ｎ－ＯＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ３、－Ｏ－ＣＨ３、及び－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ３が挙げられる。２個又は３個以下のヘテロ原子が連続していてもよい（例えば－ＣＨ２－ＮＨ－ＯＣＨ３及び－ＣＨ２－Ｏ－Ｓｉ（ＣＨ３）３など）。「ヘテロアルキル」が引用され、続いて、特定のヘテロアルキル基が引用されている場合（－ＣＨ２Ｏ、－ＮＲＣＲＤなど）、用語ヘテロアルキル及び－ＣＨ２Ｏ又は－ＮＲＣＲＤは、重複していないか、又は相互に排他的ではないことが理解されるであろう。むしろ、特定のヘテロアルキル基が追加的な明確さのために引用されている。それ故、「ヘテロアルキル」という用語は、－ＣＨ２Ｏ、－ＮＲＣＲＤなどの特定のヘテロアルキル基を排除していると本明細書において解釈されるべきではない。ヘテロアルキル基の各実例は、独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換ヘテロアルキル」）又は例えば１個以上の置換基、例えば１～５個の置換基、１～３個の置換基、若しくは１個の置換基で置換されている（「置換ヘテロアルキル」）。

【0095】

「アルキレン」、「アルケニレン」、「アルキニレン」、又は「ヘテロアルキレン」という用語は、単独で、又は他の置換基の一部として、別段の定めがある場合を除き、それぞれ、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はヘテロアルキルから誘導される二価ラジカルを意味する。アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、又はヘテロアルキレン基は、例えば、Ｃ１～Ｃ６員アルキレン、Ｃ２～Ｃ６員アルケニレン、Ｃ２～Ｃ６員アルキニレン、又はＣ１～Ｃ６員ヘテロアルキレンと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素原子を指す。ヘテロアルキレン基の場合、ヘテロ原子は、鎖終端の一方又は両方を占有することも可能である（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。さらに、アルキレン及びヘテロアルキレン連結基について、連結基の式が書かれている方向によって連結基の向きは示唆されていない。例えば、式－Ｃ（Ｏ）２Ｒ’－は、－Ｃ（Ｏ）２Ｒ’－及び－Ｒ’Ｃ（Ｏ）２－の両方を表し得る。

【0096】

本明細書において用いられるところ、「アリール」は、６～１４個の環炭素原子及びゼロ個のヘテロ原子を芳香族環系中に有する（「Ｃ６～Ｃ１４アリール」）、単環式又は多環式（例えば、二環式又は三環式）４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環式アレイにおいて共有される６、１０、又は１４個のπ電子を有する）のラジカルを指す。いくつかの実施形態において、アリール基は６個の環炭素原子を有する（「Ｃ６アリール」；例えば、フェニル）。いくつかの実施形態において、アリール基は１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ１０アリール」；例えば、１－ナフチル及び２－ナフチルなどのナフチル）。いくつかの実施形態において、アリール基は１４個の環炭素原子を有する（「Ｃ１４アリール」；例えば、アントラシル）。アリール基は、例えば、Ｃ６～Ｃ１０員アリールと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素環原子を指す。アリール基としては、フェニル、ナフチル、インデニル、及びテトラヒドロナフチルが挙げられる。アリール基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換アリール」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換アリール」）。

【0097】

本明細書において用いられるところ、「ヘテロアリール」は、環炭素原子及び１～４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５～１０員単環式又は二環式４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環式アレイにおいて共有される６又は１０個のπ電子を有する）のラジカルを指し、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される（「５～１０員ヘテロアリール」）。１個以上の窒素原子を含有するヘテロアリール基において、結合点は、原子価的に許容されるとおり、炭素又は窒素原子であることが可能である。ヘテロアリール二環系は、１個以上のヘテロ原子を一方又は両方の環中に含んでいることが可能である。「ヘテロアリール」はまた、上記に定義されているヘテロアリール環が、１個以上のアリール基と縮合しており、結合点がアリール又はヘテロアリール環のいずれかにある環系を含み、このような実例において、環員の数は、縮合（アリール／ヘテロアリール）環系中の環員の数を示す。一方の環がヘテロ原子を含有しない二環式ヘテロアリール基（例えば、インドリル、キノリニル、カルバゾリルなど）において、結合点は、いずれかの環にあることが可能であり、すなわち、結合点は、ヘテロ原子を有する環（例えば、２－インドリル）又はヘテロ原子を含有しない環（例えば、５－インドリル）のいずれかにあることが可能である。ヘテロアリール基は、例えば６～１０員ヘテロアリールと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素環原子を指す。

【0098】

いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、環炭素原子及び１～４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５～１０員芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５～１０員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、環炭素原子及び１～４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５～８員芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５～８員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、ヘテロアリール基は、環炭素原子及び１～４個の環ヘテロ原子を芳香族環系中に有する５～６員芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５～６員ヘテロアリール」）。いくつかの実施形態において、５～６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１～３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５～６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１～２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５～６員ヘテロアリールは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。ヘテロアリール基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換ヘテロアリール」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換ヘテロアリール」）。

【0099】

１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、ピロリル、フラニル及びチオフェニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、及びイソチアゾリルが挙げられる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、トリアゾリル、オキサジアゾリル、及びチアジアゾリルが挙げられる。４個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基としては、限定されないが、テトラゾリルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、限定されないが、ピリジニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、限定されないが、ピリダジニル、ピリミジニル、及びピラジニルが挙げられる。３又は４個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基としては、限定されないが、それぞれトリアジニル及びテトラジニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員ヘテロアリール基としては、限定されないが、アゼピニル、オキセピニル、及びチエピニルが挙げられる。例示的な５，６－二環式ヘテロアリール基としては、限定されないが、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾイソフラニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンズチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズチアジアゾリル、インドリジニル、及びプリニルが挙げられる。例示的な６，６－二環式ヘテロアリール基としては、限定されないが、ナフチリジニル、プテリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キノキサリニル、フタラジニル、及びキナゾリニルが挙げられる。他の例示的なヘテロアリール基としては、ヘム及びヘム誘導体が挙げられる。

【0100】

本明細書において用いられるところ、「アリーレン」及び「ヘテロアリーレン」という用語は、単独で、又は他の置換基の一部として、それぞれ、アリール及びヘテロアリールから誘導される二価ラジカルを意味する。

【0101】

本明細書において用いられるところ、「シクロアルキル」は、３～１０個の環炭素原子（「Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル」）及びゼロ個のヘテロ原子を非芳香族環系中に有する非芳香族環状炭化水素基のラジカルを指す。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、３～８個の環炭素原子（「Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル」）、３～６個の環炭素原子（「Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル」）、又は５～１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ５～Ｃ１０シクロアルキル」）。シクロアルキル基は、例えば、Ｃ４～Ｃ７員シクロアルキルと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中の非水素環原子を指す。例示的なＣ３～Ｃ６シクロアルキル基としては、限定されないが、シクロプロピル（Ｃ３）、シクロプロペニル（Ｃ３）、シクロブチル（Ｃ４）、シクロブテニル（Ｃ４）、シクロペンチル（Ｃ５）、シクロペンテニル（Ｃ５）、シクロヘキシル（Ｃ６）、シクロヘキセニル（Ｃ６）、シクロヘキサジエニル（Ｃ６）などが挙げられる。例示的なＣ３～Ｃ８シクロアルキル基としては、限定されないが、前述のＣ３～Ｃ６シクロアルキル基並びにシクロヘプチル（Ｃ７）、シクロヘプテニル（Ｃ７）、シクロヘプタジエニル（Ｃ７）、シクロヘプタトリエニル（Ｃ７）、シクロオクチル（Ｃ８）、シクロオクテニル（Ｃ８）、クバニル（Ｃ８）、ビシクロ［１．１．１］ペンタニル（Ｃ５）、ビシクロ［２．２．２］オクタニル（Ｃ８）、ビシクロ［２．１．１］ヘキサニル（Ｃ６）、ビシクロ［３．１．１］ヘプタニル（Ｃ７）などが挙げられる。例示的なＣ３～Ｃ１０シクロアルキル基としては、限定されないが、前述のＣ３～Ｃ８シクロアルキル基並びにシクロノニル（Ｃ９）、シクロノネニル（Ｃ９）、シクロデシル（Ｃ１０）、シクロデセニル（Ｃ１０）、オクタヒドロ－１Ｈ－インデニル（Ｃ９）、デカヒドロナフタレニル（Ｃ１０）、スピロ［４．５］デカニル（Ｃ１０）などが挙げられる。前述の例に例示されているとおり、一定の実施形態において、シクロアルキル基は、単環式（「単環式シクロアルキル」）であるか、又は二環系などの縮合、架橋若しくはスピロ環系を含有し（「二環式シクロアルキル」）、また、飽和であることが可能であり、又は部分不飽和であることが可能である。「シクロアルキル」はまた、上記に定義されているシクロアルキル環が、１個以上のアリール基と縮合しており、結合点がシクロアルキル環にある環系を含み、このような実例において、炭素の数は引き続きシクロアルキル環系中の炭素の数を示す。シクロアルキル基の各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換シクロアルキル」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換シクロアルキル」）。

【0102】

本明細書において用いられるところ、「ヘテロシクリル」は、環炭素原子及び１～４個の環ヘテロ原子を有する３～１０員非芳香族環系のラジカルを指し、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素から独立して選択される（「３～１０員ヘテロシクリル」）。１個以上の窒素原子を含有するヘテロシクリル基において、結合点は、原子価的に許容されるとおり、炭素又は窒素原子であることが可能である。ヘテロシクリル基は、単環式（「単環式ヘテロシクリル」）又は二環系などの縮合、架橋若しくはスピロ環系（「二環式ヘテロシクリル」）であることが可能であり、また、飽和であることが可能であり、又は部分不飽和であることが可能である。ヘテロシクリル二環系は、１個以上のヘテロ原子を一方又は両方の環中に含んでいることが可能である。「ヘテロシクリル」はまた、上記に定義されているヘテロシクリル環が、１個以上のシクロアルキル基と縮合しており、結合点がシクロアルキル又はヘテロシクリル環のいずれかにある環系、又は上記に定義されているヘテロシクリル環が、１個以上のアリール又はヘテロアリール基と縮合しており、結合点がヘテロシクリル環にある環系を含み、このような実例において、環員の数は引き続きヘテロシクリル環系中の環員の数を示す。ヘテロシクリル基は、例えば、３～７員ヘテロシクリルと記載され得、ここで、「員」という用語は、部分中における、非水素環原子、すなわち、炭素、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素を指す。ヘテロシクリルの各実例は独立して任意選択により置換され得、すなわち、非置換であるか（「非置換ヘテロシクリル」）又は１個以上の置換基で置換されている（「置換ヘテロシクリル」）。一定の実施形態において、ヘテロシクリル基は非置換３～１０員ヘテロシクリルである。一定の実施形態において、ヘテロシクリル基は置換３～１０員ヘテロシクリルである。

【0103】

いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１～４個の環ヘテロ原子を有する５～１０員非芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、及びケイ素から独立して選択される（「５～１０員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１～４個の環ヘテロ原子を有する５～８員非芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５～８員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、環炭素原子及び１～４個の環ヘテロ原子を有する５～６員非芳香族環系であり、ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択される（「５～６員ヘテロシクリル」）。いくつかの実施形態において、５～６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１～３個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５～６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１～２個の環ヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態において、５～６員ヘテロシクリルは、窒素、酸素、及び硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。

【0104】

１個のヘテロ原子を含有する例示的な３員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アジルジニル（ａｚｉｒｄｉｎｙｌ）、オキシラニル、チオレニル（ｔｈｉｏｒｅｎｙｌ）が挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な４員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゼチジニル、オキセタニル及びチエタニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリル及びピロリル－２，５－ジオンが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、ジオキソラニル、オキサスルフラニル、ジスルフラニル、及びオキサゾリジン－２－オンが挙げられる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、トリアゾリニル、オキサジアゾリニル、及びチアジアゾリニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニル、及びチアニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニル、ジオキサニルが挙げられる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、トリアジナニル又はチオモルホリニル－１，１－ジオキシドが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゼパニル、オキセパニル及びチエパニルが挙げられる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な８員ヘテロシクリル基としては、限定されないが、アゾカニル、オキセカニル及びチオカニルが挙げられる。Ｃ６アリール環に縮合した例示的な５員ヘテロシクリル基（本明細書において、５，６－二環式複素環とも称される）としては、限定されないが、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリノニルなどが挙げられる。アリール環に縮合した例示的な６員ヘテロシクリル基（本明細書において、６，６－二環式複素環とも称される）としては、限定されないが、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルなどが挙げられる。

【0105】

本明細書において用いられるところ、「アミノ」は、ラジカル－ＮＲ７０Ｒ７１を指し、ここで、Ｒ７０及びＲ７１は各々独立して、水素、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ４～Ｃ１０ヘテロシクリル、Ｃ６～Ｃ１０アリール、及びＣ５～Ｃ１０ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、アミノはＮＨ２を指す。

【0106】

本明細書において用いられるところ、「シアノ」はラジカル－ＣＮを指す。

【0107】

本明細書において用いられるところ、「ハロ」又は「ハロゲン」は、独立して、又は他の置換基の一部として、別段の定めがある場合を除き、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、又はヨウ素（Ｉ）原子を意味する。

【0108】

本明細書において用いられるところ、「ヒドロキシ」はラジカル－ＯＨを指す。

【0109】

本明細書において定義されるところ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリール基は、任意選択により置換されている（例えば、「置換」若しくは「非置換」アルキル、「置換」若しくは「非置換」アルケニル、「置換」若しくは「非置換」アルキニル、「置換」若しくは「非置換」ヘテロアルキル、「置換」若しくは「非置換」シクロアルキル、「置換」若しくは「非置換」ヘテロシクリル、「置換」若しくは「非置換」アリール又は「置換」若しくは「非置換」ヘテロアリール基）。一般に、「置換されている」という用語は、用語「任意選択により」が先行しているか否かに関わらず、ある基（例えば炭素又は窒素原子）に存在する少なくとも１個の水素が許容される置換基で置き換えられることを意味し、この置換基は、例えば、置換により安定な化合物（例えば、再配列、環化、脱離、又は他の反応などによって自発的な変換を起こさない化合物）をもたらすものである。別段の定めがある場合を除き、「置換されている」基は、その基の１つ又は複数の置換可能な位置に置換基を有し、また、いずれかの所与の構造における２つ以上の位置が置換されている場合、この置換基は各位置において同一であるか又は異なる。「置換されている」という用語は、安定な化合物が形成される本明細書に記載の置換基のいずれかなどの、有機化合物の全ての許容可能な置換基による置換を含むことが想定される。本開示は、安定な化合物を得るためのあらゆるこのような組み合わせを想定する。本開示の目的のために、窒素などのヘテロ原子は、ヘテロ原子の原子価を満たすと共に、安定な部分の形成をもたらす、水素置換基及び／又は本明細書に記載のいずれかの好適な置換基を有し得る。

【0110】

２個以上の置換基は、任意選択により結合されて、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、又はヘテロシクリル基を形成し得る。このようないわゆる環形成置換基は、典型的には、必須ではないが、環基礎構造に結合して見出される。一実施形態において、環形成置換基は基礎構造の隣接する構成員に結合している。例えば、環基礎構造の隣接する構成員に結合する２個の環形成置換基が、縮合環構造を形成する。他の実施形態において、環形成置換基は、基礎構造の単一の構成員に結合している。例えば、環基礎構造の単一の構成員に結合する２個の環形成置換基が、スピロ環式構造を形成する。さらに他の実施形態において、環形成置換基は、基礎構造の隣接していない構成員に結合している。

【0111】

本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物は１つ又は複数の不斉中心を含んでいることが可能であり、それ故、例えば、鏡像異性体及び／又はジアステレオマーといった種々の異性形態で存在することが可能である。例えば、本明細書に記載の化合物は個々の鏡像異性体、ジアステレオマー若しくは幾何異性体の形態であることが可能であり、又はラセミ混合物及び１種以上の立体異性体が富化された混合物を含む立体異性体の混合物の形態であることが可能である。異性体は、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、並びにキラル塩の形成及び結晶化を含む当業者に公知の方法によって混合物から単離可能であり；又は好ましい異性体は、不斉合成により調製可能である。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）；及びＷｉｌｅｎ，Ｔａｂｌｅｓ ｏｆ Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｏｐｔｉｃａｌ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ Ｄａｍｅ，ＩＮ １９７２）を参照のこと。本開示はさらに、他の異性体を実質的に含まない個々の異性体として、及び代わりに、種々の異性体の混合物として、本明細書に記載の化合物を含む。

【0112】

本明細書において用いられるところ、純粋な鏡像異性化合物は、化合物の他の鏡像異性体又は立体異性体を実質的に含まない（すなわち鏡像体過剰量である）。換言すると、「Ｓ」形態の化合物は「Ｒ」形態の化合物を実質的に含まず、それ故、「Ｒ」形態が鏡像体過剰量である。「鏡像異性体的に純粋な」又は「純粋な鏡像異性体」という用語は、化合物が、７５重量％超、８０重量％超、８５重量％超、９０重量％超、９１重量％超、９２重量％超、９３重量％超、９４重量％超、９５重量％超、９６重量％超、９７重量％超、９８重量％超、９９重量％超、９９．５重量％超、又は９９．９重量％超の鏡像異性体を含むことを示す。一定の実施形態において、重量は、化合物の全ての鏡像異性体又は立体異性体の総重量に基づく。

【0113】

本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物はまた、１つ又は複数の同位体置換を含んでいてもよい。例えば、Ｈは、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ又は重水素）、及び３Ｈ（Ｔ又は三重水素）を含むいずれかの同位体形態であり得；Ｃは、１２Ｃ、１３Ｃ、及び１４Ｃを含むいずれかの同位体形態であり得；Ｏは、１６Ｏ及び１８Ｏなどを含むいずれかの同位体形態であり得る。

【0114】

「薬学的に許容可能な塩」という用語は、本明細書に記載の化合物に見出される特定の置換基に応じて、比較的無毒の酸又は塩基を伴って調製される有効な化合物の塩を含むことを意味する。本開示のデバイスの提供において使用される式（Ｉ）の化合物が比較的酸性の官能基を含有する場合、塩基付加塩は、このような中性型の化合物を、十分な量の所望の塩基と、そのまま、又は好適な不活性溶剤中において接触させることにより得ることが可能である。薬学的に許容可能な塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、若しくはマグネシウム塩、又は同様の塩が挙げられる。本開示において使用される化合物が比較的塩基性の官能基を含有する場合、酸付加塩は、このような中性型の化合物を、十分な量の所望の酸と、そのまま、又は好適な不活性溶剤中において接触させることにより得ることが可能である。薬学的に許容可能な酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、又は亜リン酸などのような無機酸から誘導されるものが挙げられ、並びに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などのような有機酸から誘導される塩が挙げられる。また、アルギニン酸塩などのアミノ酸の塩、及びグルクロン酸又はガラクツロン酸などのような有機酸の塩が含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６６：１－１９（１９７７）を参照のこと）。一定の特定の本開示のデバイスにおいて使用される化合物（例えば、粒子、ヒドロゲルカプセル）は、塩基又は酸付加塩への化合物の転換を可能とする塩基性及び酸性官能基の両方を含有する。これらの塩は、当業者に公知の方法によって調製され得る。当業者に公知である他の薬学的に許容可能なキャリアが本開示において使用するのに好適である。

【0115】

本開示のデバイスは、プロドラッグ形態の式（Ｉ）の化合物を含み得る。プロドラッグは、生理学的状態で化学変化を容易に生起して本開示においてデバイスを提供するために使用される化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、エキソビボ環境における化学的又は生化学的方法によって式（Ｉ）の有用な化合物に転換されることが可能である。

【0116】

一定の式（Ｉ）の化合物は、非溶媒和形態、並びに水和物形態を含む溶媒和形態で存在することが可能である。一般に、溶媒和形態は非溶媒和形態と同等であり、本開示の範囲内に包含される。一定の式（Ｉ）の化合物は、多数の結晶性又はアモルファス形態で存在し得る。一般に、全ての物理的形態が本開示によって想定される使用について同等であり、本開示の範囲内であることが意図されている。

【0117】

「溶媒和物」という用語は、通常は加溶剤分解反応による、溶剤に付随する化合物の形態を指す。この物理的な付随は水素結合を含み得る。従来の溶剤としては、水、メタノール、エタノール、酢酸、ＤＭＳＯ、ＴＨＦ、ジエチルエーテルなどが挙げられる。本明細書に記載の化合物は、例えば結晶形態で調製され得、溶媒和され得る。好適な溶媒和物としては、薬学的に許容可能な溶媒和物が挙げられ、さらに、化学量論的溶媒和物及び非化学量論的溶媒和物の両方が挙げられる。

【0118】

「水和物」という用語は、水に付随している化合物を指す。典型的には、化合物の水和物に含有される水分子の数は、水和物中の化合物分子の数に対する確定された割合である。従って、化合物の水和物は、例えば一般式Ｒ・ｘ Ｈ２Ｏ（式中、Ｒは化合物であり、ｘは０超の数字である）によって表され得る。

【0119】

「互変異性体」という用語は、本明細書において用いられるところ、化合物構造の相互変換可能な形態であって、水素原子及び電子の変位が様々である化合物を指す。それ故、２つの構造が、π電子及び原子（通常はＨ）の移動を介して平衡状態にあり得る。例えば、酸又は塩基のいずれかを伴う処理によって急速に相互変換されるため、エノール及びケトンは互変異性体である。互変異性体は、対象となる化合物の最適な化学反応性及び生物活性の獲得と関連性があり得る。

【0120】

本明細書において用いられるところ、記号

【化2】

は、エンティティ、例えば、ポリマー（例えば、アルギン酸塩などのヒドロゲル形成ポリマー）又は移植可能なデバイス、例えば、粒子、ヒドロゲルカプセルの表面への結合を指す。

【化3】

によって表される結合は、エンティティ、例えば、ポリマー又は移植可能な要素への直接結合を指してもよく、又は結合基を介したエンティティへの連結を指し得る。本明細書において用いられるところ、「結合基」は、エンティティ（例えば、本明細書に記載のポリマー又は移植可能な要素（例えば、デバイス））への式（Ｉ）の化合物の連結のための部分を指し、当該技術分野において公知であるいずれかの結合化学を含み得る。例示的な結合基の列挙は、本明細書において参照によりその全体が援用される、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（３ｒｄ ｅｄ，Ｇｒｅｇ Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｉｎｃ，２０１３）に概説されている。いくつかの実施形態において、結合基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｎ（ＲＣ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）－、－ＮＣＮ－、－Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－ＯＳ（Ｏ）ｘ－、－Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）－、－Ｐ（ＲＦ）ｙ－、－Ｓｉ（ＯＲＡ）２－、－Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）－、－Ｂ（ＯＲＡ）－、又は金属を含み、ここで、ＲＡ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＦ、ＲＧ、ｘ及びｙの各々は、独立して本明細書に記載されているとおりである。いくつかの実施形態において、結合基は、アミン、ケトン、エステル、アミド、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はチオールを含む。いくつかの実施形態において、結合基は架橋剤である。いくつかの実施形態において、結合基は－Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルキレン）－であり、ここで、アルキレンはＲ１で置換され、Ｒ１は本明細書に記載されているとおりである。いくつかの実施形態において、結合基は－Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルキレン）－であり、ここで、アルキレンは、１～２個のアルキル基（例えば、１～２個のメチル基）で置換される。いくつかの実施形態において、結合基は－Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）２－である。いくつかの実施形態において、結合基は－Ｃ（Ｏ）（メチレン）－であり、ここで、アルキレンは、１～２個のアルキル基（例えば、１～２個のメチル基）で置換される。いくつかの実施形態において、結合基は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）－である。いくつかの実施形態において、結合基は－Ｃ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）－である。

【0121】

デバイスの特徴
本開示は、少なくとも１種の細胞結合物質（ＣＢＳ）（本明細書で定義されている）を含むポリマー組成物により第１の細胞含有区画中でカプセル化されている複数の細胞（例えば生細胞）を含む移植可能なデバイスを特徴とする。この細胞は、対象（例えば、ヒト対象又は他の哺乳動物対象）へのこのデバイスの移植時に治療薬を発現し得る。加えて、このデバイスは、ＦＢＲを軽減するための少なくとも１種の手段（本明細書で定義されている）を含む。

【0122】

ある実施形態において、細胞含有区画中のＣＢＳは、本明細書において上記で定義されているＣＢＳなしの参照デバイスと比較して、デバイスが免疫無防備動物又は免疫適格性動物（例えば、免疫適格性マウス（例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ ＵＳＡから入手可能なＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス株））に移植された後の時点で細胞の生存率を増加させるのに及び／又は細胞の産生性を増加させるのに有効な量で存在する。ある実施形態において、細胞の生存率及び／又は産生性の増加は、移植後の所望の時点で検出可能であり、例えば、１日、３日、５日、１週間、２週間、４週間、８週間、１２週間、２４週間、３６週間、及び４８週間の内の１つ又は複数で検出可能である。ある実施形態において、ＣＢＳの有効量は、（ｉ）移植後１週間、２週間、４週間、又は１２週間で測定した場合の細胞生存率の少なくとも１０％、２５％、５０％、又は１００％の増加、及び（ｉｉ）移植後１週間、２週間、４週間、又は１２週間で測定した場合の細胞産生性の少なくとも１．２５倍、１．５倍、２倍、５倍、８倍、又は１０倍の増加の内の一方又は両方をもたらす。ある実施形態において、細胞含有区画中のＣＢＳの有効量は、最小有効量と、ＣＢＳなしの参照デバイスと比較して又は細胞含有区画中のＣＢＳの最大有効量（例えば最適量）を含むデバイスと比較して細胞の生存率及び／又は産生性が低下しているより高い量との間の範囲内である。ある実施形態において、細胞含有区画中のＣＢＳの量は、最適量（例えば、ＣＢＳなしの参照デバイスと比較して細胞の生存率及び／又は産生性の最大の増加をもたらす量）を５０％、２５％、１０％、又は５％以下上回るか、又は下回る。ある実施形態において、移植後の産生性の改善を達成するためのＣＢＰの有効量は、細胞、ＣＢＳ、細胞（例えば組み換えＡＲＰＥ－１９細胞）により発現された治療用タンパク質、特定のポリペプチド（例えば、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＶＩＩ因子）、及び任意選択的に治療用タンパク質の特定のコード配列を含む所望の組み合わせに対して決定される。

【0123】

本明細書で説明されているデバイス中の生存細胞（及び任意選択的な死滅細胞）の数を、当該技術分野で既知の任意の技術（例えば、２種の蛍光色素で生細胞及び死滅細胞を別個に標識し、続いて蛍光顕微鏡を使用して標識細胞を検出して任意選択的に定量するアッセイ）を使用して推定し得る。細胞生存率を、他の細胞生存率の指標を評価する（例えば、エステラーゼ活性を測定するか、又は細胞中のＡＴＰの量を定量する）ことによっても評価し得る。

【0124】

ある実施形態において、細胞産生性の移植後の増加を、インビボで細胞により発現されたか又はエクスビボで細胞により発現された（例えば、デバイスを動物から回収した後の細胞発現）治療薬のレベルに関してアッセイすることにより検出する。治療薬の性質に応じて、この治療薬の発現を、細胞内で測定し得、細胞外ではあるがデバイス内部で測定し得、及び／又はデバイスの外部（例えば、本明細書で説明されているデバイス又はデバイス調製物で処置された動物（例えば非ヒト動物）から摘出された組織サンプル中）で測定し得る。ある実施形態において、細胞産生性は、投与されたデバイスの数（例えば、動物中に配置されたカプセルの数）で除算され、及び／又は投与された細胞の数（例えば、例えば本明細書の下記の実施例で説明されるように決定された、投与されたカプセル調製物中の１個のカプセル当たりのおおよその数）で除算された、治療薬又は薬剤活性の測定量として表される。ある実施形態において、決定された量（例えば、治療薬の決定された量、又は活性の量）を、目的の２つの時点の間の時間（例えば、投与と測定との間の時間、例えば、数時間、数日、又は数週間）で除算することにより、細胞産生性の増加をさらに正規化する。ある実施形態では、治療薬はタンパク質であり、動物から摘出された組織サンプル（例えば、動物から採取された血液サンプルから分離された血漿）中のタンパク質の量及び／又は活性を測定し、この測定された量及び／又は活性を、投与されたデバイスの数（例えば、移植された２区画カプセルの数）で除算し、任意選択的に、この結果を、投与と組織サンプルの摘出との間の日数で除算することにより、産生性の増加を決定する。

【0125】

ＣＢＳは、カプセル化ポリマー組成物内に存在するポリペプチドポリマー（例えば、フィブロネクチン又はラミニン等のＣＢＰＰ）を含んでもよいし、無関係なアミノ酸ポリマー（例えばシルクポリマー）に共有結合的に付着しているか、又は天然に存在するポリマー（例えば、アルギン酸塩、キチン、綿）に共有結合的に付着しているか、又は合成ポリマー（例えば、下記のクラスの内のいずれかのポリマー：アクリル、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアセトニトリル、ポリエチレンテレフタレート、ナイロン、ポリアミド、ポリウレタン、ポリブトエステル（ｐｏｌｙｂｕｔｅｓｔｅｒ））に共有結合的に付着しているＣＢＰであってもよい。ＣＢＳに加えて、細胞含有区画中のポリマー組成物は、上記で列挙されたポリマークラスの内のいずれかの１種又は複数種の非修飾の天然に存在するか又は合成のポリマーを含み、この区画に構造的完全性を提供するのに役立ち得、及び／又は細胞を支持する足場を提供するのに役立ち得る。

【0126】

いくつかの実施形態において、ＣＢＳは、１種又は複数種のＣＢＰで共有結合的に修飾されたアルギン酸塩を含み、ＣＢＰとして、ＲＧＤ（配列番号４３）、ＲＧＤＳＰ（配列番号５９）、ＤＧＥＡ（配列番号３９）、ＦＹＦＤＬＲ（配列番号４０）、ＰＨＳＲＮ（配列番号４６）、ＹＩＧＳＲ（配列番号５０）、本明細書の表１で列挙されている細胞結合配列の内のいずれかを含むか若しくはから本質的になるペプチド、又はこれらのＣＢＰの内の２つ、３つ、若しくはより多くの混合物（例えば、ＲＧＤ＋ＤＧＥＡ（それぞれ配列番号４３及び３９）、ＲＧＤ＋ＰＨＳＲＮ（それぞれ配列番号４３及び４６）、ＲＧＤ＋ＤＧＥＡ＋ＰＨＳＲＮ（それぞれ配列番号４３、３９、及び４６））が挙げられる。アルギン酸塩は、β－Ｄ－マンヌロン酸（Ｍ）及びα－Ｌ－グルロン酸（Ｇ）で構成された多糖である。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は、高グルロン酸（Ｇ）アルギン酸塩であり、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％超、又はより多くのグルロン酸（Ｇ）を含む。いくつかの実施形態において、Ｇ：Ｍの比は、少なくとも１．３、１．５、又は１．５超である。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は、高マンヌロン酸（Ｍ）アルギン酸塩であり、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％超、又はより多くのマンヌロン酸（Ｍ）を含む。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比は、１である。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比は、１未満である。

【0127】

ある実施形態において、各ＣＢＰは、アミノ酸リンカー（例えば、１個、２個、又は３個のグリシン残基から本質的になるアミノ酸リンカー）を介してアルギン酸塩に付着している。ある実施形態において、このリンカーは、ＣＢＰのＮ末端に付着した単一のグリシン残基である。ある実施形態において、第１のＣＢＳは、ＲＧＤペプチドで共有結合的に修飾されたポリマーである。ある実施形態において、第１のＣＢＳは、分子量が７５～１５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上であるアルギン酸であり、ＧＲＧＤ（配列番号６２）又はＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）から本質的になるリンカー－ＣＢＰで共有結合的に修飾されている。

【0128】

ある実施形態において、各ＣＢＰは、ＣＢＰの遊離末端（例えば、ＣＢＰの非リンカー末端）上で末端のキャッピング基又は保護基をさらに含み得る。末端のキャッピング基又は保護基は、末端のアミノ酸残基が不要な若しくは不必要な反応を受けることを防止し得、及び／又はＣＢＰの分解若しくは修飾を減少させるか若しくは防止し得る。例示的なキャッピング基として、アルキル基、エーテル、アミド、及び同類のものが挙げられる。ある実施形態において、リンカー－ＣＢＰは、ＧＲＧＤ又はＧＲＧＤＳＰと、末端キャッピング基とを含む。ある実施形態において、リンカー－ＣＢＰは、ＧＲＧＤ又はＧＲＧＤＳＰを含み、且つ末端キャッピング基は含まない。

【0129】

ある実施形態において、細胞含有区画中のカプセル化ポリマー組成物は、１種又は複数種の追加の細胞結合物質を含み得、この細胞結合物質は、ＣＢＰで共有結合的に修飾されたＣＢＰＰ又はポリマーであり得る。ある実施形態において、このポリマー組成物はまた、第２のＣＢＰ－アルギン酸塩も含み、例えば、Ｇ（１～３）ＤＧＥＡ（配列番号６６）、Ｇ（１～３）ＰＨＲＳＮ（配列番号６７）、又はＧ（１～３）ＲＥＤＶ（配列番号６８）からなる群から選択されるリンカー－ＣＢＰで共有結合的に修飾されたアルギン酸塩も含む。ある実施形態においては、第２のＣＢＰ－アルギン酸塩中のアルギン酸塩はまた、分子量が７５～１５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上である。

【0130】

本明細書の下記の実施例で説明されるように、２区画ヒドロゲルカプセルの内側区画中において、ＲＧＤ修飾アルギン酸塩を使用して組み換えＲＰＥ細胞がカプセル化される場合には、カプセル化細胞の産生性は、修飾アルギン酸塩中のＲＧＤペプチドの密度による影響を有意に受け得るということが、驚くべきことに発見されている。そのため、いくつかの実施形態において、細胞含有区画を形成するために使用されるＣＢＰ－ポリマー中の細胞結合ペプチド（例えば、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９））の密度は、（ａ）０．１０％の窒素（Ｎ）～１．００％のＮ、約０．２０％のＮ～約０．８０％のＮ、約０．３０％のＮ～約０．６０％のＮ、約０．３０％～約０．５０％、若しくは０．３３％のＮ～０．４６％のＮであるか、又は（ｂ）定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイ（例えば、本明細書で説明されているアッセイ）により決定した場合に、溶液中のＣＢＰ－ポリマー（例えば、ＲＧＤ（配列番号４３）若しくはＲＧＤＳＰ（配列番号５９）で共有結合的に修飾されたＭＭＷ－アルギン酸塩）１ｇ当たりＣＢＰ約０．１～約１．０マイクロモルである。ある実施形態において、カプセル化細胞は、組み換えＡＲＰＥ－１９細胞である。ある実施形態において、組み換えＡＲＰＥ－１９細胞は、安定的にトランスフェクトされた細胞、又はＡＴＣＣに由来するモノクローナル細胞株（ＣＲＬ－２３０２）である。ある実施形態において、組み換えＡＲＰＥ－１９細胞は、第ＶＩＩＩ因子タンパク質又は第ＩＸ因子タンパク質を発現する。デバイスが細胞含有区画中で様々なＣＢＰ－ポリマーの混合物を含むいくつかの実施形態において、この細胞含有区画中の細胞結合ペプチドの総密度は、０．１％の窒素（Ｎ）～１．００％のＮ、約０．２０％のＮ～約０．８０％のＮ、約０．３０％のＮ～約０．６０％のＮ、若しくは約０．３０％のＮ～約０．５０％のＮであるか、又は定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイ（例えば、本明細書で説明されているアッセイ）により決定した場合に、溶液中のＣＢＰ－ポリマー１ｇ当たりＣＢＰ約０．１～約１．０マイクロモルである。

【0131】

ある実施形態において、定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイは、ＣＰＢ－ポリマーのサンプルを酸性加水分解に供して、コンジュゲートペプチド（及びＣＢＰ－ポリマー中の任意の残留非コンジュゲートペプチド）から個々のアミノ酸を生成すること、これら個々のアミノ酸を定量すること、各アミノ酸のモル濃度を平均化すること、並びにサンプル中の総ペプチド濃度を算出することを含む。ある実施形態において、定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイを、本明細書の実施例２５で説明されているプロセスと実質的に同様に実施する。ある実施形態において、定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイはまた、総ペプチド濃度からサンプル中の任意の残留非コンジュゲートペプチドの濃度を減算することも含む。ＣＢＰ－ポリマー組成物中の非コンジュゲートペプチドの濃度を、当該技術分野で既知の任意の適切なアッセイを使用して決定し得、例えば、本明細書の実施例２６で説明されているＬＣ－ＭＳにより決定し得る。典型的には、定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイを、デバイスを調製するために使用されるＣＢＰ－ポリマーの生理食塩水溶液のサンプルに対して実施するが、ＣＢＰ－ポリマーの凍結乾燥サンプルに対して実施してもよい。

【0132】

ポリマーを、当該技術分野で既知の様々な方法の内のいずれかを使用して、ＣＢＰで共有結合的に修飾し得、例えば、Ｊｅｏｎ Ｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ，ｐｈｏｔｏｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ ａｌｇｉｎａｔｅ ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ ｗｉｔｈ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｔａｉｌｏｒａｂｌｅ ｐｈｙｓｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｖｉｔｙ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ．Ｐａｒｔ Ａ １６：２９１５－２９２５（２０１０）；Ｒｏｗｌｅｙ，Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０：４５－５３（１９９９）を参照されたい。例えば、修飾するポリマーがアルギン酸塩である場合には、本明細書の下記の実施例１Ｂで説明されているものと類似のアプローチを使用して、アミノ酸リンカー配列（１～数個のアミノ酸）と細胞結合アミノ酸配列とから本質的になるペプチドのＮ末端を、アルギン酸塩に共有結合的に付着し得る。

【0133】

細胞含有区画中のポリマー組成物に加えて、デバイス（例えば、マクロデバイス、粒子、ヒドロゲルカプセル）は、金属、金属合金、セラミック、ポリマー、繊維、不活性材料、及びこれらの組み合わせ等の材料を含み得るか、又はこの材料から形成され得る。デバイスは、１種の材料で完全に構成されてもよいし、細胞含有区画内に及び任意の他の区画内に他の材料を含んでもよい。

【0134】

本開示のデバイスにおけるＦＢＲを軽減するための手段は、当該技術分野で既知の様々なアプローチの内の１つ又は複数を含み得る。

【0135】

例えば、本明細書で開示されているデバイスにおけるＦＢＲを軽減するための手段は、半透過性の生体適合膜であって、細胞の生存及び機能に重要な酸素及び他の分子がこの半透膜を通って移動することを可能にするが、免疫細胞が孔を通過することを防止するように選択されている孔径を有する半透過性の生体適合膜で細胞を取り囲むことを含み得る。ある実施形態において、この半透膜は、分子量カットオフが１０００ｋＤ未満であるか、又は５０～７００ｋＤ、７０～３００ｋＤ、若しくは７０～１５０ｋＤ、若しくは７０～１３０ｋＤである。

【0136】

別のＦＢＲ軽減手段は、細胞フリー生体適合材料から形成されたバリア区画で細胞含有区画を取り囲むことを含む（例えば、Ｍａ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｈｅａｌｔｈｃ Ｍａｔｅｒ．，２（５）：６６７－６７２（２０１２）で説明されているコア－シェルマイクロカプセル）。そのようなバリア区画は、半透膜手段と共に使用されるか又は半透膜手段なしで使用される可能性がある。ＦＢＲ軽減手段は、例えば米国特許第９，８６７，７８１号明細書で説明されているように、ＦＢＲを阻害するために、移植されたデバイスから放出される抗炎症剤をこのデバイス上に又はこのデバイス内に配置することを含み得る。他のＦＢＲ軽減手段は、国際公開第２０１７／１７６７９２号パンフレット及び同第２０１７／１７６８０４号パンフレットで説明されているように、デバイス表面上に配置されているか又はデバイス内にカプセル化されているＣＳＦ－１Ｒ阻害剤を用いる。他のＦＢＲ軽減手段は、Ｖｅｉｓｅｈ，Ｏ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ １４：６４３－６５２（２０１５）で説明されているように、直径が１ｍｍ超である球状の形状にデバイスを構成することを用いる。いくつかの実施形態において、ＦＢＲを軽減するための手段は、デバイスの外面上に及び／又は細胞含有区画を取り囲むバリア区画内に抗線維性化合物を配置することを含む。例示的な抗線維性化合物を、本明細書の下記で説明する。いくつかの実施形態において、デバイスは、上記ＦＢＲ軽減手段の内の２つ以上の組み合わせを含み得る。

【0137】

デバイス（例えば粒子）は、意図された標的位置への移植後にカプセル化細胞の生存率及び産生性を支持するのに適した任意の構成及び形状を有し得る。非限定的な例として、デバイスの形状は、円柱、長方形、円盤、卵形、星形、又は球状であり得る。デバイスは、網状又は入れ子の構造で構成され得る。いくつかの実施形態において、デバイスは、ある特定のサイズを超える物質が孔又は開口を通過することを防止し得る。いくつかの実施形態において、デバイス（例えば粒子）は、５０ｋＤ、７５ｋＤ、１００ｋＤ、１２５ｋＤ、１５０ｋＤ、１７５ｋＤ、２００ｋＤ、２５０ｋＤ、３００ｋＤ、４００ｋＤ、５００ｋＤ、７５０ｋＤ、又は１，０００ｋＤ超の物質が通過することを防止し得る。

【0138】

ある実施形態において、デバイスは、マクロカプセル化デバイスである。マクロデバイスの非限定的な例は、米国特許第９，５２６，８８０号明細書、同第９７２４４３０号明細書、及び同第８２７８１０６号明細書；欧州特許第７４２８１８Ｂ１号明細書、並びにＳａｎｇ，Ｓ．ａｎｄ Ｒｏｙ，Ｓ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．１１３（７）：１３８１－１４０２（２０１６）で説明されている。

【0139】

いくつかの実施形態において、デバイス（例えば、粒子）は、少なくとも約０．５ミリメートル（ｍｍ）、好ましくは、約１．０ｍｍ、約１．５ｍｍ以上の最大線形寸法（ＬＬＤ）、例えば、平均直径、又はサイズを有する。いくつかの実施形態において、デバイス、又は粒子デバイスは、直径又はサイズが１０ｍｍ程度であり得る。例えば、本明細書に記載の粒子は、０．５ｍｍ～１０ｍｍ、１ｍｍ～１０ｍｍ、１ｍｍ～８ｍｍ、１ｍｍ～６ｍｍ、１ｍｍ～５ｍｍ、１ｍｍ～４ｍｍ、１ｍｍ～３ｍｍ、１ｍｍ～２ｍｍ、１ｍｍ～１．５ｍｍ、１．５ｍｍ～８ｍｍ、１．５ｍｍ～６ｍｍ、１．５ｍｍ～５ｍｍ、１．５ｍｍ～４ｍｍ、１．５ｍｍ～３ｍｍ、１．５ｍｍ～２ｍｍ、２ｍｍ～８ｍｍ、２ｍｍ～７ｍｍ、２ｍｍ～６ｍｍ、２ｍｍ～５ｍｍ、２ｍｍ～４ｍｍ、２ｍｍ～３ｍｍ、２．５ｍｍ～８ｍｍ、２．５ｍｍ～７ｍｍ、２．５ｍｍ～６ｍｍ、２．５ｍｍ～５ｍｍ、２．５ｍｍ～４ｍｍ、２．５ｍｍ～３ｍｍ、３ｍｍ～８ｍｍ、３ｍｍ～７ｍｍ、３ｍｍ～６ｍｍ、３ｍｍ～５ｍｍ、３ｍｍ～４ｍｍ、３．５ｍｍ～８ｍｍ、３．５ｍｍ～７ｍｍ、３．５ｍｍ～６ｍｍ、３．５ｍｍ～５ｍｍ、３．５ｍｍ～４ｍｍ、４ｍｍ～８ｍｍ、４ｍｍ～７ｍｍ、４ｍｍ～６ｍｍ、４ｍｍ～５ｍｍ、４．５ｍｍ～８ｍｍ、４．５ｍｍ～７ｍｍ、４．５ｍｍ～６ｍｍ、４．５ｍｍ～５ｍｍ、５ｍｍ～８ｍｍ、５ｍｍ～７ｍｍ、５ｍｍ～６ｍｍ、５．５ｍｍ～８ｍｍ、５．５ｍｍ～７ｍｍ、５．５ｍｍ～６ｍｍ、６ｍｍ～８ｍｍ、６ｍｍ～７ｍｍ、６．５ｍｍ～８ｍｍ、６．５ｍｍ～７ｍｍ、７ｍｍ～８ｍｍ、又は７．５ｍｍ～８ｍｍのサイズ範囲内である。

【0140】

本デバイスは、調製物（例えば組成物）中の複数の実質的に同一のデバイスの一部を形成し得る。いくつかの実施形態において、この調製物中のデバイス（例えば、粒子、ヒドロゲルカプセル）は、平均直径又はサイズが約０．５ｍｍ～約８ｍｍである。いくつかの実施形態において、この調製物中のデバイスの平均直径又はサイズは、約０．５ｍｍ～約４ｍｍ又は約０．５ｍｍ～約２ｍｍである。いくつかの実施形態において、この調製物中のデバイスは、２区画ヒドロゲルカプセルであり、且つ平均直径又はサイズが約０．７ｍｍ～約１．３ｍｍ又は約１．２ｍｍ～約１．８ｍｍである。

【0141】

いくつかの実施形態において、デバイスは、２個のヒドロゲル区画を有し、これら２個のヒドロゲル区画では、内側の細胞含有区画が、第２の外側の（例えばバリア）区画で完全に取り囲まれている。ある実施形態において、第２の区画の内側の境界は、例えば図１で示されているように、第１の区画の外側の境界と界面を形成する。そのような実施形態において、第２の（外側）区画の厚さは、第２の区画の外側の境界と、これら２個の区画の間の界面との平均距離を意味しており、例えば、外側の区画で視覚的に観察された最薄点と最厚点とのそれぞれで測定された距離の平均を意味する。いくつかの実施形態（例えば、デバイスは約１．５ｍｍの直径である）において、外側区画の最薄の距離及び最厚の距離は、それぞれ２５～１１０マイクロメータ（μｍ）及び２７０～４８０μｍである。いくつかの実施形態において、外側区画の厚さは、約１０ナノメートル（ｎｍ）超であり、好ましくは１００ｎｍ以上であり、１ミリメートル（ｍｍ）と同程度であり得る。例えば、本明細書で説明されているヒドロゲルカプセルデバイス中の外側区画の厚さ（例えば平均距離）は、１０ｎｍ～１ｍｍ、１００ｎｍ～１ｍｍ、５００ｎｍ～１ミリメートル、１マイクロメータ（μｍ）～１ｍｍ、１μｍ～１ｍｍ、１μｍ～５００μｍ、１μｍ～２５０μｍ、１μｍ～１ｍｍ、５μｍ～５００μｍ、５μｍ～２５０μｍ、１０μｍ～１ｍｍ、１０μｍ～５００μｍ、又は１０μｍ～２５０μｍであり得る。いくつかの実施形態において、外側区画の厚さ（例えば平均距離）は、１００ｎｍ～１ｍｍ、１μｍ～１ｍｍ、１μｍ～５００μｍ、又は５μｍ～１ｍｍである。いくつかの実施形態において、外側区画の厚さ（例えば平均距離）は、約５０μｍ～約１００μｍである。いくつかの実施形態（例えば、デバイスは約１．５ｍｍの直径である）において、外側区画の厚さ（例えば平均距離）は、約１８０μｍ～２６０μｍ又は約３１０μｍ～４４０μｍである。

【0142】

いくつかの実施形態において、本開示のデバイス（例えば、粒子、カプセル）は、例えば、材料の自由な流動を可能にするために、少なくとも１つの孔又は開口を含む。いくつかの実施形態において、デバイスの平均孔径は、約０．１μｍ～約１０μｍである。例えば、平均孔径は、０．１μｍ～１０μｍ、０．１μｍ～５μｍ、０．１μｍ～２μｍ、０．１５μｍ～１０μｍ、０．１５μｍ～５μｍ、０．１５μｍ～２μｍ、０．２μｍ～１０μｍ、０．２μｍ～５μｍ、０．２５μｍ～１０μｍ、０．２５μｍ～５μｍ、０．５μｍ～１０μｍ、０．７５μｍ～１０μｍ、１μｍ～１０μｍ、１μｍ～５μｍ、１μｍ～２μｍ、２μｍ～１０μｍ、２μｍ～５μｍ、又は５μｍ～１０μｍである。いくつかの実施形態において、デバイスの平均孔径は、約０．１μｍ～１０μｍである。いくつかの実施形態において、デバイスの平均孔径は、約０．１μｍ～５μｍである。いくつかの実施形態において、デバイスの平均孔径は、約０．１μｍ～１μｍである。２区画ヒドロゲルカプセルデバイスのいくつかの実施形態において、細胞含有内側区画及び外側区画の平均孔径は、実質的に同じである。いくつかの実施形態において、内側区画及び第２の区画の平均孔径は、約１．５％、２％、５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、又はそれ以上異なる。いくつかの実施形態において、デバイスの平均孔径（例えば、第１の区画の平均孔径及び／又は第２の区画の平均孔径）は、各区画内の材料並びに式（Ｉ）の化合物の存在及び密度などのいくつかの要因に依存する。

【0143】

いくつかの実施形態において、デバイスは、金属又は金属合金を含む。実施形態において、デバイス中の１つ又は複数の区画（例えば、第１の区画、第２の区画、又は全ての区画）は、金属又は金属合金を含む。例示的な金属又は金属合金としては、チタン及びチタン族合金（例えば、ニチノール、ニッケルチタン合金、熱記憶合金材料）、白金、白金族合金、ステンレス鋼、タンタル、パラジウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、ニッケル－クロム、クロムモリブデン合金、又は特定のコバルト合金（例えば、コバルト－クロム及びコバルト－クロム－ニッケル合金、例えば、ＥＬＧＩＬＯＹ（登録商標）及びＰＨＹＮＯＸ（登録商標））が挙げられる。例えば、金属材料は、ステンレス鋼グレード３１６（ＳＳ ３１６Ｌ）（Ｆｅ、＜０．３％のＣ、１６～１８．５％のＣｒ、１０～１４％のＮｉ、２～３％のＭｏ、＜２％のＭｎ、＜１％のＳｉ、＜０．４５％のＰ、及び＜０．０３％のＳから構成される）であり得る。金属含有デバイスにおいて、金属の量（例えば、重量％、実際の重量）は、少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上（例えば、ｗ／ｗ）；２０％未満、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満、又はそれ以下であり得る。

【0144】

いくつかの実施形態において、デバイスは、セラミックを含む。実施形態において、デバイス中の１つ又は複数の区画（例えば、第１の区画、第２の区画、又は全ての区画）は、セラミックを含む。例示的なセラミック材料としては、酸化チタン、酸化ハフニウム、酸化イリジウム、酸化クロム、酸化アルミニウム、及び酸化ジルコニウムなどの、遷移元素の酸化物、炭化物、又は窒化物が挙げられる。シリカなどのケイ素系材料も使用され得る。セラミック含有デバイスにおいて、セラミックの量（例えば、重量％、実際の重量）は、少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上（例えば、ｗ／ｗ）；２０％未満、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満、又はそれ以下であり得る。

【0145】

いくつかの実施形態において、デバイス中の１つ又は複数の区画は、抗線維性ポリマーを含み、例えば、ＣＢＰ－ポリマー中のポリマーと同一であるか又は異なるポリマーに共有結合的に付着した式（Ｉ）の抗線維性化合物を含む。ある実施形態において、この抗線維性ポリマー中の一部又は全てのモノマーは、式（Ｉ）の同一の化合物で修飾されている。いくつかの実施形態において、この抗線維性ポリマー中の一部又は全てのモノマーは、式（Ｉ）の様々な化合物で修飾されている。デバイスが２区画ヒドロゲルカプセルであるいくつかの実施形態において、この抗線維性ポリマーは、外側のバリア区画中にのみ存在する。

【0146】

デバイス中の１つ又は複数の区画は、ＣＢＰ－ポリマー中のポリマー及びこのデバイス中に存在する任意の抗線維性ポリマー中のポリマーと同一か又は異なる非修飾ポリマーを含み得る。ある実施形態において、デバイス中の第１の区画、第２の区画、又は全ての区画は、非修飾ポリマーを含む。

【0147】

デバイス中の修飾及び非修飾ポリマーのそれぞれは、直鎖、分岐、若しくは架橋ポリマー、又は選択された分子量範囲、重合度、粘度若しくはメルトフローレートのポリマーであり得る。分岐ポリマーは、以下のタイプ：星型ポリマー、櫛型ポリマー、ブラシ型ポリマー、デンドロン化ポリマー、ラダー、及びデンドリマーの１つ又は複数を含み得る。ポリマーは、熱応答性ポリマー、例えば、ゲル（例えば、熱若しくは特定の温度への曝露により固体若しくは液体になる）又は光架橋性ポリマーであり得る。例示的なポリマーとしては、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアセチレン、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）、ポリオレフィンコポリマー、ポリ（ウレタン）、ポリアクリレート及びポリメタクリレート、ポリアクリルアミド及びポリメタクリルアミド、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリエステル、ポリシロキサン、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリエーテル、ポリ（オルトエステル）、ポリ（カーボネート）、ポリ（ヒドロキシアルカノエート）、ポリフルオロカーボン、ＰＥＥＫ（登録商標）、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）（ポリテトラフルオロエチレン、ＰＴＦＥ）、ＰＥＥＫ、シリコーン、エポキシ樹脂、Ｋｅｖｌａｒ（登録商標）、Ｄａｃｒｏｎ（登録商標）（エチレングリコール及びテレフタル酸から得られる縮合ポリマー）、ポリエチレングリコール、ナイロン、ポリアルケン、フェノール樹脂、天然及び合成エラストマー、接着剤及びシーラント、ポリオレフィン、ポリスルホン、ポリアクリロニトリル、多糖類及び天然ラテックスなどのバイオポリマー、コラーゲン、セルロースポリマー（例えば、アルキルセルロースなど）、ポリエチレングリコール及び２－ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）、多糖類、ポリ（グリコール酸）、ポリ（Ｌ－乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（乳酸グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリジオキサノン（ＰＤＡ）、又はラセミポリ（乳酸）、ポリカーボネート、（例えば、ポリアミド（例えば、ナイロン））、フッ素樹脂、炭素繊維、アガロース、アルギン酸塩、キトサン、並びにこれらのブレンド又はコポリマーが挙げられる。ポリマー含有デバイスにおいて、ポリマーの量（例えば、デバイスにおける重量％、ポリマーの実際の重量）は、少なくとも５％、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又はそれ以上（例えば、ｗ／ｗ）；２０％未満、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％未満、又はそれ以下であり得る。

【0148】

いくつかの実施形態において、デバイス中の修飾及び非修飾ポリマーの１つ又は複数は、ポリエチレンを含む。例示的なポリエチレンとしては、超低密度ポリエチレン（ＵＬＤＰＥ）（例えば、コモノマーを含む、０．８９０～０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含む）；超低密度ポリエチレン（ＶＬＤＰＥ）（例えば、コモノマーを含む、０．９０５～０．９１５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含む）；直鎖低密度ポリエチレン（ＬＬＤＰＥ）（例えば、０．９１５～０．９３５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含み、コモノマーを含む）；低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）（例えば、約０．９１５～０．９３５ｇ／ｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含む）；中密度ポリエチレン（ＭＤＰＥ）（例えば、０．９２６～０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含み、コモノマーを含んでいても又は含まなくてもよい）；高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）（例えば、０．９４０～０．９７０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリマーを含み、コモノマーを含んでいても又は含まなくてもよい）及びポリエチレングリコールが挙げられる。

【0149】

いくつかの実施形態において、デバイス中の修飾及び非修飾ポリマーの１つ又は複数は、ポリプロピレンを含む。例示的なポリプロピレンとしては、例えば、本明細書において参照によりその全体が援用される、ＭｃＫｅｅｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｖｉｃｅｓ，３－Ｐｌａｓｔｉｃｓ Ｕｓｅｄ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｖｉｃｅｓ，（２０１４）：２１－５３に記載されるように、ホモポリマー、ランダムコポリマー（ホモ相コポリマー）、及びインパクトコポリマー（ヘテロ相コポリマー）が挙げられる。

【0150】

いくつかの実施形態において、デバイス中の修飾及び非修飾ポリマーの１つ又は複数は、ポリプロピレンを含む。例示的なポリスチレンとしては、汎用性又は結晶（ＰＳ又はＧＰＰＳ）、ハイインパクト（ＨＩＰＳ）、及びシンジオタクチック（ＳＰＳ）ポリスチレンが挙げられる。

【0151】

いくつかの実施形態において、デバイス中の修飾及び非修飾ポリマーの１つ又は複数は、熱可塑性エラストマー（ＴＰＥ）を含む。例示的なＴＰＥとしては、（ｉ）ＴＰＡ－ポリアミドＴＰＥであって、交互するハード及びソフトセグメントのブロックコポリマーを含み、ハードブロック中にアミド化学結合並びにソフトブロック中にエーテル及び／又はエステル結合を有するもの；（ｉｉ）ＴＰＣ－コ－ポリエステルＴＰＥであって、交互するハードセグメント及びソフトセグメントのブロックコポリマーからなり、主鎖中の化学結合はエステル及び／又はエーテルであるもの；（ｉｉｉ）ＴＰＯ－オレフィン系ＴＰＥであって、ポリオレフィン及び従来のゴムのブレンドからなり、ブレンド中のゴム相は架橋をほとんど又は全く有さないもの；（ｉｖ）ＴＰＳ－スチレン系ＴＰＥであって、少なくとも、スチレン及び特定のジエンのトリブロックコポリマーからなり、ここで、２つの末端ブロック（ハードブロック）はポリスチレンであり、内部ブロック（１つ又は複数のソフトブロック）はポリジエン又は水素化ポリジエンであるもの；（ｖ）ＴＰＵ－ウレタンＴＰＥであって、交互するハード及びソフトセグメントのブロックコポリマーからなり、ハードブロック中にウレタン化学結合、及びソフトブロック中にエーテル、エステル又は炭酸結合又はこれらの混合物を有するもの；（ｖｉ）ＴＰＶ－熱可塑性ゴム加硫物であって、熱可塑性材料及び従来のゴムのブレンドからなり、ここで、ゴムは、ブレンド及び混合ステップ中の動的加硫プロセスにより架橋されているもの；並びに（ｖｉｉ）ＴＰＡ、ＴＰＣ、ＴＰＯ、ＴＰＳ、ＴＰＵ、及びＴＰＶに分類されるもの以外のいずれかの組成物又は構造を含むＴＰＺ－未分類ＴＰＥが挙げられる。

【0152】

いくつかの実施形態において、非修飾ポリマーは非修飾アルギン酸塩である。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は、高グルロン酸（Ｇ）アルギン酸塩であり、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％超、又はそれ以上のグルロン酸（Ｇ）を含む。いくつかの実施形態において、アルギン酸塩は、高マンヌロン酸（Ｍ）アルギン酸塩であり、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％超、又はそれ以上のマンヌロン酸（Ｍ）を含む。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比率は約１である。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比率は１未満である。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比率は１超である。いくつかの実施形態において、Ｍ：Ｇの比は、１超である。ある実施形態において、非修飾アルギン酸塩は、分子量が１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａであり、且つＧ：Ｍ比が≧１．５である。

【0153】

いくつかの実施形態において、抗線維性ポリマーは、式（Ｉ）の化合物で化学的に修飾されたアルギン酸塩を含む。この抗線維性ポリマー中のアルギン酸塩は、デバイス中に存在する任意の非修飾アルギン酸塩と同一であってもよいし異なっていてもよい。ある実施形態において、抗線維性アルギン酸塩中の式（Ｉ）の化合物の密度（例えば、コンジュゲーションの量）は、約４．０％～約８．０％、約５．０％～約７．０％、又は約６．０％～約７．０％の窒素（例えば、窒素パーセントに関する燃焼分析より決定される場合）である。実施形態において、化合物１０１の量は、約０．５％～２％、２％～４％のＮ、約４％～６％のＮ、約６％～８％、又は約８％～１０％のＮ）の、（非修飾アルギン酸塩と比した）％ Ｎの増加をもたらし、ここで、％ Ｎは、燃焼分析によって決定され、修飾アルギン酸塩中の化合物１０１の量に相当する。

【0154】

他の実施形態において、抗線維性アルギン酸塩中の式（Ｉ）の化合物（例えば化合物１０１）の密度（例えば濃度）は、ｗ／ｗ％として定義され、例えば、適切な定量的アミンコンジュゲーションアッセイ（例えば、本明細書で説明されているアッセイ）により決定した場合のアミンの重量／溶液（例えば生理食塩水）中の抗線維性アルギン酸塩の量の％として定義され、一定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物（例えば化合物１０１）の密度は、約１．０ｗ／ｗ％～約３．０ｗ／ｗ％、約１．３ｗ／ｗ％～約２．５ｗ／ｗ％、又は約１．５ｗ／ｗ％～２．２ｗ／ｗ％である。ある実施形態において、定量的アミンコンジュゲーションアッセイは、化学修飾ポリマー（例えば、式（Ｉ）の化合物で修飾されたアルギン酸塩、例えばＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１）のサンプルを酸性加水分解に供して遊離アミンを生成すること、及びサンプル中の全遊離アミンを定量することを含む。ある実施形態において、定量的アミンコンジュゲーションアッセイはまた、総アミン濃度から、非加水分解サンプル中の非コンジュゲートアミン（例えば、式（Ｉ）の化合物）の濃度を減算することも含む。定量的アミンコンジュゲーションアッセイを、典型的には、デバイスを調製するために使用される化学修飾アルギン酸塩の生理食塩水溶液のサンプルに対して実施するが、化学修飾アルギン酸塩の凍結乾燥サンプルに対して実施してもよい。ある実施形態において、定量的アミンコンジュゲーションアッセイを、本明細書の実施例２７で説明されているプロセスと実質的に同様に実施する。ある実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、表４で示されている化合物１０１である。

【0155】

アルギン酸塩含有デバイスにおいて、修飾アルギン酸塩及び非修飾アルギン酸塩の量（例えば、デバイスの重量％、アルギン酸塩の実際の重量）は、少なくとも５％であり得、例えば、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又はより多くあり得（例えばｗ／ｗ）；２０％未満であり得、例えば、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％、又はより少なくあり得る。

【0156】

抗線維性ポリマー中のアルギン酸塩は、当該技術分野において公知の任意の好適な方法を用いて、式（Ｉ）の化合物で化学修飾され得る。例えば、アルギン酸塩カルボン酸部分は、式（Ｉ）の化合物で修飾されたアルギン酸塩を得るために、１つ又は複数のアミン官能化化合物への結合のために活性化され得る。アルギン酸塩ポリマーは、水（ポリマーのグラム当たり３０ｍＬ）に溶解され、２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（０．５当量）及びＮ－メチルモルホリン（１当量）で処理され得る。この混合物に、アセトニトリル（０．３Ｍ）中の式（Ｉ）の化合物の溶液が加えられ得る。反応物が、例えば、１６時間にわたって５５℃に温められ、次に、室温に冷却され、回転蒸発によって徐々に濃縮され得る。次に、残渣が、例えば水に溶解され得る。次に、混合物は、例えば、シアノ修飾シリカゲル（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ）の床に通してろ過され得、ろ過ケーキが水で洗浄され得る。次に、得られた溶液が、２４時間にわたって水に対して透析され得（１０，０００ ＭＷＣＯ膜）、例えば、水を２回交換する。得られた溶液が、例えば、凍結乾燥によって濃縮されて、所望の化学修飾アルギン酸塩が得られる。

【0157】

本明細書で説明されている各デバイスは、少なくとも１個の細胞含有区画を含む。ある実施形態において、デバイスは、２個、３個、４個、又はより多くの細胞含有区画を含む。各細胞含有区画は、複数の細胞（例えば生細胞）を含み、これらの区画の内の少なくとも１個中の細胞は、デバイスが対象に移植された場合に治療薬を発現し得る。いくつかの実施形態において、この治療薬は、タンパク質又はポリペプチドであり、例えば、抗体、タンパク質、酵素、又は増殖因子）である。

【0158】

ある実施形態において、細胞含有区画中の全ての細胞は、単一の親細胞型又は少なくとも２種の異なる親細胞型の混合物に由来する。ある実施形態において、細胞含有区画中の細胞は全て、同一の親細胞型に由来するが、第１の複数の由来細胞は、第１の治療薬を発現するように組み換えられており、第２の複数の由来細胞は、第２の治療薬を発現するように組み換えられている。２個以上の細胞含有区画を有するデバイスにおいて、細胞及びこの細胞により産生される治療薬は、各細胞含有区画で同一であってもよいし異なっていてもよい。いくつかの実施形態において、細胞含有区画は全て、単一のバリア区画で取り囲まれている。いくつかの実施形態において、このバリア区画は、細胞を実質的に含まない。

【0159】

カプセル化細胞により発現される治療薬に加えて、デバイス（例えば、カプセル、粒子）は、この細胞により発現されない１種又は複数種の外因性の薬剤を含み得、この薬剤として、例えば、核酸（例えばＲＮＡ若しくはＤＮＡ分子）、タンパク質（例えば、ホルモン、酵素（例えば、グルコースオキシダーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、オキシゲナーゼ、ヒドロゲナーゼ、レダクターゼ）、抗体、抗体断片、抗原、若しくはエピトープ））、小分子、脂質、薬物、ワクチン、又はこれらの任意の誘導体、小分子、タンパク質若しくはポリペプチドの活性な若しくは不活性な断片が挙げられ得る。ある実施形態において、デバイスは、そのような外因性の薬剤を放出するように構成されている。

【0160】

本明細書で説明されているデバイスは、対象への移植用か又は投与用の調製物又は組成物（即ち、デバイス調製物又はデバイス組成物）として提供され得る。いくつかの実施形態において、デバイス調製物又はデバイス組成物は、少なくとも２個、４個、８個、１６個、６４個、又はより多くのデバイスを含み、この調製物中の又は組成物中のデバイスの少なくとも２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％は、本明細書で説明されている特徴（例えば、平均直径、又は平均孔径、又は細胞密度）を有する。

【0161】

いくつかの実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、身体のある特定の系（例えば、神経系（例えば、末梢神経系（ＰＮＳ）若しくは中枢神経系（ＣＮＳ））、血管系、骨格系、呼吸器系、内分泌系、リンパ系、生殖器系、又は消化管）を標的とするか、又はこの系用に設計されている。いくつかの実施形態において、デバイス、調製物、又は組成物は、ＣＮＳを標的とする。いくつかの実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、身体のある特定の部分（例えば、血液、目、脳、皮膚、肺、胃、口、耳、脚、足、手、肝臓、心臓、腎臓、骨、膵臓、脾臓、大腸、小腸、脊髄、筋肉、卵巣、子宮、膣、又は陰茎）を対象とするか、又はこの部分用に設計されている。

【0162】

デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、身体の任意の部位内又は部位上へのインプラント、又は移植又は配置のために構成され得る。いくつかの実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、対象の網、対象の皮下脂肪、又は対象の筋肉組織内へのインプラント、移植、又は配置のために構成される。デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、皮膚上又は中；粘膜表面、体腔、腹膜腔（例えば、網嚢）；中枢神経系、例えば、腸又は脊髄；臓器、例えば、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺、リンパ系、血管系、口腔、鼻腔、歯、歯茎、胃腸管；骨；股関節；脂肪組織；筋肉組織；循環血液；眼（例えば、眼内）；乳房、膣；子宮、関節、例えば、膝関節若しくは股関節、又は脊椎へのインプラント、又は移植、又は配置のために構成され得る。

【0163】

いくつかの実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、腹膜腔（例えば、網）内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。いくつかの実施形態において、デバイスは、網嚢（ｌｅｓｓｅｒ ｓａｃ）（網嚢（ｏｍｅｎｔａｌ ｂｕｒｓａ）又は網嚢（ｂｕｒｓａｌｉｓ ｏｍｅｎｔｕｍ）としても知られている）内又は上へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。網嚢は、網によって形成される、腹部に位置する空間を指し、例えば、大網、小網、胃、小腸、大腸、肝臓、脾臓、胃脾間膜、副腎、及び膵臓にごく近接している。典型的には、網嚢は、網嚢孔（すなわち、ウィンズロー孔）を介して大嚢に結合されている。いくつかの実施形態において、網嚢は、高濃度の脂肪組織を含む。デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、腹膜腔（例えば、網、例えば、網嚢）内に移植されるか、又は注入若しくはカテーテルによって腹膜腔（例えば、網、例えば、網嚢）内の表面に配置され得る。網（例えば、網嚢）内へのデバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物のインプラント又は配置についてのさらなる検討が、本明細書において参照によりその全体が援用される、Ｍ．Ｐｅｌｌｉｃｃｉａｒｏ ｅｔ ａｌ．（２０１７）ＣｅｌｌＲ４ ５（３）：ｅ２４１０に示されている。

【0164】

いくつかの実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、中枢神経系（ＣＮＳ）、例えば、脳又は脊髄及びそれらの対応する組織及び体腔内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。脊椎動物において、ＣＮＳは、頭蓋腔及び脊柱管を含む背測腔内に含まれる。いくつかの実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、脳内腔、例えば、実質内腔、脳室内腔、又は硬膜下腔内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、ＣＮＳ内に移植されるか、又は頭蓋骨内に形成された孔を通してＣＮＳ内の表面に配置され、注入若しくはカテーテルによって送達され得る。

【0165】

いくつかの実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、眼内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。デバイスのインプラント又は配置に好適な例示的な領域としては、網膜、角膜、上皮、房水、又は硝子体腔（ｖｉｔｒｅａｌ ｓｐａｃｅ）などの、眼内の任意の表面又は空間が挙げられる。いくつかの実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、硝子体腔内へのインプラント又は移植又は配置のために構成される。デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、眼内に移植されるか、又は切開及び／又は注入によって、眼内の表面に配置され得る。

【0166】

いくつかの実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、例えば、対象の損傷を生じずに、又は周囲組織の崩壊をあまり生じずに、対象から容易に取り外し可能である。実施形態において、デバイス、デバイス調製物、又はデバイス組成物は、例えば、低侵襲手術によるアプローチ、摘出、又は切除によって、周囲組織からのデバイスの最小限の分離を伴って又は手術による分離を伴わずに取り外し可能である。

【0167】

デバイス、デバイス組成物、又はデバイス調製物は、哺乳動物レシピエントへの移植後の様々な露出用に構成され得、この露出として、限定的な露出（例えば２日未満、例えば、２日、１日、２４時間、２０時間、１６時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、５時間、４時間、３時間、２時間、１時間未満、又はより短い）；長期の露出（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２４ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、又はより長い）、及び永続的な露出（例えば、少なくとも６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２１ヶ月、２２ヶ月、２３ヶ月、２４ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、又はより長い）が挙げられる。

【0168】

いくつかの実施形態において、デバイスは、国際公開第２０１２／１１２９８２号パンフレット、同第２０１２／１６７２２３号パンフレット、同第２０１４／１５３１２６号パンフレット、同第２０１６／０１９３９１号パンフレット、同第２０１６／１８７２２５号パンフレット、米国特許出願公開第２０１２－０２１３７０８号明細書、同第２０１６－００３０３５９号明細書、及び同第２０１６－００３０３６０号明細書の内のいずれかで開示されている任意のカプセル、デバイス、移植片、又は他の物体ではない。

【0169】

小分子化合物
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のデバイスは、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を含む。：

【化4】

又はその薬学的に許容可能な塩を含み、式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｎ（ＲＣ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルキレン）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルケニレン）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）－、－ＮＣＮ－、－Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－ＯＳ（Ｏ）ｘ－、－Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）－、－Ｐ（ＲＦ）ｙ－、－Ｓｉ（ＯＲＡ）２－、－Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）－、－Ｂ（ＯＲＡ）－、又は金属であり、これらの各々は、結合基（例えば、本明細書に記載の結合基）に任意選択により結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
Ｌ２は結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、不在であるか、各々が１個以上のＲ４で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり；
Ｚは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、－ＯＲＡ、－Ｃ（Ｏ）ＲＡ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ）、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）ＲＡ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ５で任意選択により置換されており；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
又はＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５～７員環）を形成し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、－Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、－Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、－ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、－Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、－Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、－Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは１又は２であり；
ｙは２、３、又は４である。

【0170】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－ａ）：

【化5】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｎ（ＲＣ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）－、Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルキレン）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルケニレン）－、－ＮＣＮ－、－Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－ＯＳ（Ｏ）ｘ－、－Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）－、－Ｐ（ＲＦ）ｙ－、－Ｓｉ（ＯＲＡ）２－、－Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）－、－Ｂ（ＯＲＡ）－、又は金属であり、これらの各々は、結合基（例えば、本明細書に記載の結合基）に任意選択により結合され、１個以上のＲ１で任意選択により置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されており；
Ｌ２は結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、１個以上のＲ４で任意選択により置換されているヘテロアリールであり；
Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ６で任意選択により置換されており；
又はＲＣ及びＲＤは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、１個以上のＲ６で任意選択により置換されている環（例えば５～７員環）を形成し；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、－Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、－Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、－ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、－Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、－Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、－Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１個以上のＲ７で任意選択により置換されており；
各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは１又は２であり；
ｙは２、３、又は４である。

【0171】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ－ａ）について、Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルキレン）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルケニレン）－、又は－Ｎ（ＲＣ）－である。いくつかの実施形態において、Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－、又は－Ｎ（ＲＣ）－である。いくつかの実施形態において、Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ－、又は－Ｎ（ＲＣ）－である。いくつかの実施形態において、Ａは、アルキル、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）、又は－Ｎ（ＲＣ）－である。いくつかの実施形態において、Ａは、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルキレン）－、又は－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルケニレン）－である。いくつかの実施形態において、Ａは－Ｎ（ＲＣ）－である。いくつかの実施形態において、Ａは－Ｎ（ＲＣ）－であり、ＲＣ及びＲＤは独立して、水素又はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ａは－ＮＨ－である。いくつかの実施形態において、Ａは－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルキレン）－であり、ここで、アルキレンはＲ１で置換されている。いくつかの実施形態において、Ａは－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルキレン）－であり、Ｒ１はアルキル（例えば、メチル）である。いくつかの実施形態において、Ａは－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）２－である。いくつかの実施形態において、Ａは－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（メチレン）－であり、Ｒ１はアルキル（例えば、メチル）である。いくつかの実施形態において、Ａは－ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（ＣＨ３）－である。いくつかの実施形態において、Ａは－ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）－である。

【0172】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ－ａ）について、Ｌ１は結合、アルキル、又はヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１は結合又はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１は結合である。いくつかの実施形態において、Ｌ１はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１はＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ１は、－ＣＨ２－、－ＣＨ（ＣＨ３）－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、又は－ＣＨ２ＣＨ２－である。いくつかの実施形態において、Ｌ１は、－ＣＨ２－又は－ＣＨ２ＣＨ２－である。

【0173】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ－ａ）について、Ｌ３は結合、アルキル、又はヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は結合である。いくつかの実施形態において、Ｌ３はアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３はＣ１～Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３はＣ１～Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は－ＣＨ２－である。いくつかの実施形態において、Ｌ３はヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は、１個以上のＲ２（例えば、オキソ）で任意選択により置換されているＣ１～Ｃ１２ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は、１個以上のＲ２（例えば、オキソ）で任意選択により置換されているＣ１～Ｃ６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ３は、－Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２－、－ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）２－、－ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）３－、ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－、又は－ＣＨ２Ｏ－である。いくつかの実施形態において、Ｌ３は－ＣＨ２Ｏ－である。

【0174】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ－ａ）について、Ｍは、不在、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｍはヘテロアルキル、アリール、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｍは不在である。いくつかの実施形態において、Ｍはアルキル（例えば、Ｃ１～Ｃ６アルキル）である。いくつかの実施形態において、Ｍは－ＣＨ２－である。いくつかの実施形態において、Ｍはヘテロアルキル（例えば、Ｃ１～Ｃ６ヘテロアルキル）である。いくつかの実施形態において、Ｍは（－ＯＣＨ２ＣＨ２－）ｚであり、ここで、ｚは、１～１０から選択される整数である。いくつかの実施形態において、ｚは、１～５から選択される整数である。いくつかの実施形態において、Ｍは、－ＯＣＨ２ＣＨ２－、（－ＯＣＨ２ＣＨ２－）２、（－ＯＣＨ２ＣＨ２－）３、（－ＯＣＨ２ＣＨ２－）４、又は（－ＯＣＨ２ＣＨ２－）５である。いくつかの実施形態において、Ｍは、－ＯＣＨ２ＣＨ２－、（－ＯＣＨ２ＣＨ２－）２、（－ＯＣＨ２ＣＨ２－）３、又は（－ＯＣＨ２ＣＨ２－）４である。いくつかの実施形態において、Ｍは（－ＯＣＨ２ＣＨ２－）３である。いくつかの実施形態において、Ｍはアリールである。いくつかの実施形態において、Ｍはフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｍは非置換フェニルである。いくつかの実施形態において、Ｍは

【化6】

である。いくつかの実施形態において、Ｍは、Ｒ７（例えば、１個のＲ７）で置換されているフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｍは

【化7】

である。いくつかの実施形態において、Ｒ７はＣＦ３である。

【0175】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ－ａ）について、Ｐは、不在、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは不在である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ－ａ）について、Ｐは、三環式、二環式、又は単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは窒素含有ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは、単環式、窒素含有ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは５員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは５員窒素含有ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｐは、テトラゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、又はトリアゾリル、ピロリル、オキサゾリル、又はチアゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは、テトラゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、又はトリアゾリル、又はピロリルである。いくつかの実施形態において、Ｐはイミダゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは

【化8】

である。いくつかの実施形態において、Ｐはトリアゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは１，２，３－トリアゾリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは

【化9】

である。

【0176】

いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｐは、５員ヘテロシクリル又は６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｐはイミダゾリジノニル（ｉｍｉｄａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｙｌ）である。いくつかの実施形態において、Ｐは

【化10】

である。

【0177】

いくつかの実施形態において、Ｐはチオモルホリニル－１，１－ジオキシジルである。いくつかの実施形態において、Ｐは

【化11】

である。

【0178】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）又は（Ｉ－ａ）について、Ｚは、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｚはヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、単環式又は二環式ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、４員ヘテロシクリル、５員ヘテロシクリル、又は６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、６員酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚはテトラヒドロピラニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは

【化12】

である。いくつかの実施形態において、Ｚは、４員酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは

【化13】

である。

【0179】

いくつかの実施形態において、Ｚは、二環式酸素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは無水フタル酸（ｐｈｔｈａｌｉｃ ａｎｈｙｄｒｉｄｙｌ）である。いくつかの実施形態において、Ｚは、硫黄含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、６員硫黄含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、窒素原子及び硫黄原子を含有する６員ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚはチオモルホリニル－１，１－ジオキシジルである。いくつかの実施形態において、Ｚは

【化14】

である。いくつかの実施形態において、Ｚは窒素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは６員窒素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは

【化15】

である。

【0180】

いくつかの実施形態において、Ｚは二環式ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個以上のＲ５で任意選択により置換されている二環式窒素含有ヘテロシクリルである。いくつかの実施形態において、Ｚは２－オキサ－７－アザスピロ［３．５］ノナニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは

【化16】

である。いくつかの実施形態において、Ｚは１－オキサ－３，８－ジアザスピロ［４．５］デカン－２－オンである。いくつかの実施形態において、Ｚは

【化17】

である。

【0181】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ－ａ）について、Ｚはアリールである。いくつかの実施形態において、Ｚは単環式アリールである。いくつかの実施形態において、Ｚはフェニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニル（例えば、１個のＲ５により）である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５は窒素含有基である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はＮＨ２である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５は酸素含有基である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５は酸素含有ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はＯＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はオルト位にある。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はメタ位にある。いくつかの実施形態において、Ｚは単置換フェニルであり、ここで、１個のＲ５はパラ位にある。

【0182】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ－ａ）について、Ｚはアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１～Ｃ１２アルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１～Ｃ１０アルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１～Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１～５個のＲ５で置換されたＣ１～Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１～Ｃ８アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１～Ｃ８アルキルであり、ここで、Ｒ５は、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、又は－Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）である。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１～Ｃ８アルキルであり、ここで、Ｒ５は、－ＯＲＡ１又は－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１である。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個のＲ５で置換されたＣ１～Ｃ８アルキルであり、ここで、Ｒ５は、－ＯＲＡ１又は－Ｃ（Ｏ）ＯＨである。いくつかの実施形態において、Ｚは－ＣＨ３である。

【0183】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）及び（Ｉ－ａ）について、Ｚはヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１～Ｃ１２ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１～Ｃ１０ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１～Ｃ８ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、ＺはＣ１～Ｃ６ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１個以上のＲ５で任意選択により置換された窒素含有ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、１～５個のＲ５で置換された窒素及び硫黄含有ヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、Ｎ－メチル－２－（メチルスルホニル）エタン－１－アミニルである。

【0184】

いくつかの実施形態において、Ｚは、－ＯＲＡ又は－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡである。いくつかの実施形態において、Ｚは、－ＯＲＡ（例えば、－ＯＨ又は－ＯＣＨ３）である。いくつかの実施形態において、Ｚは、ＯＣＨ３である。いくつかの実施形態において、Ｚは、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ）である。

【0185】

いくつかの実施形態において、Ｚは水素である。

【0186】

いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐ及びＬ３は独立して、不在である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３は結合であり、Ｚは水素である。いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３はヘテロアルキルであり、Ｚはアルキルである。

【0187】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－ｂ）：

【化18】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｍ１は、各々が１～５個のＲ３で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；環Ｚ１は、１～５個のＲ５で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；Ｘは、不在、Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ、又はＳであり；ＲＣは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールの各々は、１～６個のＲ６で任意選択により置換されており；Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、－Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、－Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ１０及びＲ１１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、及びＲＥ１の各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールの各々は、１～６個のＲ７で任意選択により置換されており；各Ｒ７は独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；各ｍ及びｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；

【化19】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。いくつかの実施形態において、各Ｒ３及びＲ５について、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールの各々は、ハロゲン、オキソ、シアノ、シクロアルキル、又はヘテロシクリルで任意選択により及び独立して置換されている。

【0188】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ－ｂ）の化合物は、式（Ｉ－ｂ－ｉ）：

【化20】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｍ２は、１個以上のＲ３で任意選択により置換されている、アリール又はヘテロアリールであり；環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、ハロゲンで任意選択により置換されており；又は２個のＲ５は一緒になって、環Ｚ２に縮合した５～６員環を形成し；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、５、又は６であり；

【化21】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0189】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ－ｂ－ｉ）の化合物は、式（Ｉ－ｂ－ｉｉ）：

【化22】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、ハロゲンで任意選択により置換されており；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｐ及びｑは各々独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；

【化23】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0190】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－ｃ）：

【化24】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ３及びＲ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、ハロゲンで任意選択により置換されており；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍは、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐ及びｑは各々独立して、０、１、２、３、４、５、又は６であり；

【化25】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0191】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－ｄ）：

【化26】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルの各々は、ハロゲンで任意選択により置換されており；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、５、又は６であり；

【化27】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0192】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－ｅ）：

【化28】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり；Ｘは、不在、Ｏ、又はＳであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄの各々は一緒になってオキソ基を形成し；各Ｒ５は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、５、又は６であり；

【化29】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0193】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－ｆ）：

【化30】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｍは、１個以上のＲ３で任意選択により置換されているアルキルであり；環Ｐは、１個以上のＲ４で任意選択により置換されているヘテロアリールであり；Ｌ３は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；Ｚは、各々が１個以上のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；

【化31】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0194】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）：

【化32】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｍは、結合、アルキル又はアリールであり、ここで、アルキル及びアリールは、１個以上のＲ３で任意選択により置換されており；Ｌ３は、１個以上のＲ２で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；Ｚは、水素、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール又は－ＯＲＡであり、ここで、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、１個以上のＲ５で任意選択により置換されており；ＲＡは水素であり；Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；

【化33】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0195】

いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩ－ａ）：

【化34】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｌ３は、各々が１個以上のＲ２で任意選択により置換されている、アルキル又はヘテロアルキルであり；Ｚは、水素、アルキル、ヘテロアルキル、又は－ＯＲＡであり、ここで、アルキル及びヘテロアルキルは、１個以上のＲ５で任意選択により置換されており；Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり、又はＲ２ａ及びＲ２ｂは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；ＲＡは水素であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｎは独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；

【化35】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0196】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩＩ）：

【化36】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｚ１は、各々が１～５個のＲ５で任意選択により置換されている、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、アミノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；ＲＣは、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はヘテロアルキルであり、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、又はヘテロアルキルの各々は、１～６個のＲ６で任意選択により置換されており；Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｑは、０～２５の整数であり；

【化37】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0197】

いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ－ａ）：

【化38】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、各々が１～５個のＲ５で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、ハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｏ及びｐは各々独立して、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０～２５の整数であり；

【化39】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0198】

いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ－ａ）の化合物は、式（ＩＩＩ－ｂ）：

【化40】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、環Ｚ２は、各々が１～５個のＲ５で任意選択により置換されている、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、ハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｏ及びｐは各々独立して、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０～２５の整数であり；

【化41】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0199】

いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ－ａ）の化合物は、式（ＩＩＩ－ｃ）：

【化42】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｘは、Ｃ（Ｒ’）（Ｒ”）、Ｎ（Ｒ’）、又はＳ（Ｏ）ｘであり；Ｒ’及びＲ”の各々は独立して、水素、アルキル、ハロゲン、又はシクロアルキルであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、又はハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０～２５の整数であり；ｘは、０、１、又は２であり；

【化43】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0200】

いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ－ｃ）の化合物は、式（ＩＩＩ－ｄ）：

【化44】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、Ｘは、Ｃ（Ｒ’）（Ｒ”）、Ｎ（Ｒ’）、又はＳ（Ｏ）ｘであり；Ｒ’及びＲ”の各々は独立して、水素、アルキル、ハロゲン、又はシクロアルキルであり；Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素、アルキル、ヘテロアルキル、又はハロであり；又はＲ２ａ及びＲ２ｂ又はＲ２ｃ及びＲ２ｄは一緒になってオキソ基を形成し；Ｒ３及びＲ５の各々は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ハロゲン、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、又は－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１であり；各ＲＡ１及びＲＢ１は独立して、水素、アルキル、又はヘテロアルキルであり；ｍ及びｎは各々独立して、１、２、３、４、５、又は６であり；ｐは、０、１、２、３、４、又は５であり；ｑは、０～２５の整数であり；ｘは、０、１、又は２であり；

【化45】

は、本明細書に記載の結合基又はポリマーに対する結合を指す。

【0201】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ）の化合物である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐ及びＬ３は独立して、不在である。

【0202】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ａ）の化合物である。式（ＩＩ－ａ）のいくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３は結合であり、Ｚは水素である。いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３はヘテロアルキルであり、Ｚはアルキルである。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐ及びＬ３は独立して、不在である。いくつかの実施形態において、Ｌ２は結合であり、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３は結合であり、Ｚは水素である。いくつかの実施形態において、Ｐはヘテロアリールであり、Ｌ３はヘテロアルキルであり、Ｚはアルキルである。

【0203】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｂ）の化合物である。いくつかの実施形態において、Ｐは不在であり、Ｌ１は－ＮＨＣＨ２であり、Ｌ２は結合であり、Ｍはアリール（例えば、フェニル）であり、Ｌ３は－ＣＨ２Ｏであり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロシクリル、例えば、チオモルホリニル－１，１－ジオキシド）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ－ｂ）の化合物は、化合物１１６である。

【0204】

式（Ｉ－ｂ）のいくつかの実施形態において、Ｐは不在であり、Ｌ１は－ＮＨＣＨ２であり、Ｌ２は結合であり、Ｍは不在であり、Ｌ３は結合であり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル、例えば、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキセタニル、又はオキシラニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ－ｂ）の化合物は、化合物１０５である。

【0205】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｂ－ｉ）の化合物である。式（Ｉ－ｂ－ｉ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素又はＣＨ３であり、Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１又は２であり、ｎは１であり、ＸはＯであり、ｐは０であり、Ｍ２は、１個以上のＲ３で任意選択により置換されているフェニルであり、Ｒ３は－ＣＦ３であり、Ｚ２はヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル、例えば、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキセタニル、又はオキシラニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ－ｂ－ｉ）の化合物は、化合物１００、化合物１０６、化合物１０７、化合物１０８、化合物１０９、又は化合物１１１である。

【0206】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｂ－ｉｉ）の化合物である。式（Ｉ－ｂ－ｉｉ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｑは０であり、ｐは０であり、ｍは１であり、Ｚ２はヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル、例えば、テトラヒドロピラニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ－ｂ－ｉｉ）の化合物は、化合物１００である。

【0207】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｃ）の化合物である。式（Ｉ－ｃ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ｃ及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｐは１であり、ｑは０であり、Ｒ５は－ＣＨ３であり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロシクリル、例えば、ピペラジニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ－ｃ）の化合物は、化合物１１３である。

【0208】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｄ）の化合物である。式（Ｉ－ｄ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは３であり、ＸはＯであり、ｐは０であり、Ｚはヘテロシクリル（例えば、酸素含有ヘテロシクリル、例えば、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキセタニル、又はオキシラニル）である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ－ｄ）の化合物は、化合物１１０又は化合物１１４である。

【0209】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｆ）の化合物である。式（Ｉ－ｆ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素であり、ｎは１であり、Ｍは－ＣＨ２－であり、Ｐは、窒素含有ヘテロアリール（例えば、イミダゾリル）であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２－であり、ＺはＣＨ３である。いくつかの実施形態において、式（Ｉ－ｆ）の化合物は、化合物１１５である。

【0210】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩ－ａ）の化合物である。式（ＩＩ－ａ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素であり、ｎは１であり、ｑは０であり、Ｌ３は－ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）２であり、Ｚは－ＯＣＨ３である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩ－ａ）の化合物は、化合物１１２である。

【0211】

式（ＩＩ－ａ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素であり、ｎは１であり、Ｌ３は結合又は－ＣＨ２であり、Ｚは水素又は－ＯＨである。いくつかの実施形態において、式（ＩＩ－ａ）の化合物は、化合物１０３又は化合物１０４である。

【0212】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物である。式（ＩＩＩ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは２であり、ｑは３であり、ｐは０であり、ＲＣは水素であり、Ｚ１は、Ｒ５（例えば、－Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２）Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３）で任意選択により置換されているヘテロアルキルである。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ）の化合物は、化合物１２０である。

【0213】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩＩ－ｂ）の化合物である。式（ＩＩＩ－ｂ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは０であり、ｎは２であり、ｑは３であり、ｐは０であり、Ｚ２は、１個のＲ５（例えば、－ＮＨ２）で置換されたアリール（例えば、フェニル）である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ－ｂ）の化合物は、化合物１０２である。

【0214】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩＩ－ｂ）の化合物である。式（ＩＩＩ－ｂ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは２であり、ｑは３であり、ｐは０であり、ＲＣは水素であり、Ｚ２はヘテロシクリル（例えば、窒素含有ヘテロシクリル、例えば、窒素含有スピロヘテロシクリル、例えば、２－オキサ－７－アザスピロ［３．５］ノナニル）である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ－ｂ）の化合物は、化合物１２１である。

【0215】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（ＩＩＩ－ｄ）の化合物である。式（ＩＩＩ－ｄ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、及びＲ２ｄの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは２であり、ｑは、１、２、３、又は４であり、ｐは０であり、ＸはＳ（Ｏ）２である。式（ＩＩＩ－ｄ）のいくつかの実施形態において、Ｒ２ａ及びＲ２ｂの各々は独立して、水素であり、ｍは１であり、ｎは２であり、ｑは、１、２、３、又は４であり、ｐは０であり、ＸはＳ（Ｏ）２である。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ－ｄ）の化合物は、化合物１０１、化合物１１７、化合物１１８、又は化合物１１９である。

【0216】

いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｂ）、（Ｉ－ｄ）、又は（Ｉ－ｅ）の化合物である。いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｂ）、（Ｉ－ｄ）、又は（ＩＩ）の化合物である。いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｂ）、（Ｉ－ｄ）、又は（Ｉ－ｆ）の化合物である。いくつかの実施形態において、化合物は、式（Ｉ－ｂ）、（Ｉ－ｄ）、又は（ＩＩＩ）の化合物である。

【0217】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、国際公開第２０１２／１１２９８２号パンフレット、国際公開第２０１２／１６７２２３号パンフレット、国際公開第２０１４／１５３１２６号パンフレット、国際公開第２０１６／０１９３９１号パンフレット、国際公開第２０１７／０７５６３０号パンフレット、米国特許出願公開第２０１２－０２１３７０８号明細書、米国特許出願公開第２０１６－００３０３５９号明細書又は米国特許出願公開第２０１６－００３０３６０号明細書に開示されている化合物でない。

【0218】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、表４で示されている化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む。いくつかの実施形態において、本明細書で説明されているデバイス内の外面及び／又は１個若しくは複数個の区画は、表４で示されている小分子化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含む。

【0219】

【表3】

【0220】

【表4】

【0221】

【表5】

【0222】

いくつかの実施形態において、この化合物は、式（Ｉ）（例えば、式（Ｉ－ａ）、（Ｉ－ｂ）、（Ｉ－ｃ）、（Ｉ－ｄ）、（Ｉ－ｅ）、（Ｉ－ｆ）、（ＩＩ）、（ＩＩ－ａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ－ａ）、（ＩＩＩ－ｂ）、（ＩＩＩ－ｃ）、若しくは（ＩＩＩ－ｄ））の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、且つ

【化46】

又はその薬学的に許容可能な塩から選択される。

【0223】

いくつかの実施形態において、本明細書で説明されているデバイスは、

【化47】

の化合物又はいずれかの化合物の薬学的に許容可能な塩を含む。

【0224】

いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の化合物（例えば、表４中の化合物１０１）は、以下の実施例に記載される窒素パーセントの燃焼分析によって決定した際に、少なくとも２．０％且つ９．０％未満、又は３．０％～８．０％、４．０～７．０、５．０～７．０、又は６．０～７．０又は約６．８の結合密度で、アルギン酸塩（例えば、およそのＭＷ＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５を有するアルギン酸塩）に共有結合される。

【0225】

細胞
本開示のデバイスは、複数の細胞（例えば生細胞）を含む少なくとも１個の細胞含有区画を含む。この細胞は、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、間葉系幹細胞、ケラチン生成細胞、及び膵島細胞等の様々な異なる細胞型（例えばヒト細胞）であり得る。例示的な細胞型として、国際公開第２０１７／０７５６３１号パンフレットで列挙されている細胞型が挙げられる。いくつかの実施形態では、この細胞は、下記の表５で示されている細胞株に由来する。

【0226】

【表6】

【0227】

いくつかの実施形態において、デバイスは、本明細書において定義されるような膵島細胞を含まない。実施形態において、本開示のデバイスに含まれる細胞、例えば、ＲＰＥ細胞、ＭＳＦＣ（組み換えＲＰＥ細胞及びＭＳＦＣを含む）は、以下の特徴の１つ又は複数を有する：（ｉ）糖尿病又はインスリンで処置され得る別の疾病若しくは状態を処置するのに有効な量で、インスリン（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）を産生することが可能でない；（ｉｉ）グルコース応答的にインスリンを産生することが可能でない；又は（ｉｉｉ）インスリン産生膵β細胞へと組み換えられた又は分化した誘導多能性幹細胞由来でない。

【0228】

実施形態において、複数の細胞は、本明細書に記載のデバイス、例えば、ヒドロゲルカプセル内にカプセル化される前に、細胞懸濁液の形態である。懸濁液中の細胞は、（例えば、単層細胞培養物からの）単一細胞の形態を取り得、又は例えば、マイクロキャリア（例えば、ビーズ若しくはマトリックス）上に配置された、又は細胞の３次元凝集体（例えば、細胞クラスター又はスフェロイド）としての別の形態で提供され得る。細胞懸濁液は、複数の細胞クラスター（例えば、スフェロイドとして）又はマイクロキャリアを含み得る。

【0229】

いくつかの実施形態において、複数の細胞は、治療薬を産生するように組み換えられている。ある実施形態において、この治療薬は、疾患、障害、又は状態（例えば、国際公開第２０１７／０７５６３１号パンフレットで説明されているもの）の予防用か又は処置用である。この治療薬は、任意の生物学的物質であり得、例えば、核酸（例えば、ヌクレオチド、ＤＮＡ、若しくはＲＮＡ）、ポリペプチド、脂質、糖（例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、若しくは多糖）、又は小分子であり得る。例示的な治療薬として、国際公開第２０１７／０７５６３１号パンフレットで列挙されている薬剤が挙げられる。

【0230】

いくつかの実施形態において、治療薬は、ペプチド又はポリペプチド（例えば、タンパク質）、例えば、ホルモン、酵素、サイトカイン（例えば、炎症性サイトカイン又は抗炎症性サイトカイン）、増殖因子、凝固因子、又はリポタンパク質である。組み換え細胞によって産生される、ペプチド又はポリペプチド（例えば、タンパク質、例えば、ホルモン、増殖因子、凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）又は凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）、抗体分子、酵素、サイトカイン、サイトカイン受容体、又はサイトカイン若しくはサイトカイン受容体を含むキメラタンパク質）は、天然のアミノ酸配列を有することができ、又は天然の配列の変異体を含み得る。変異体は、基準の配列、例えば、天然の配列に対する、天然又は非天然のアミノ酸置換、突然変異、欠失又は付加であり得る。天然のアミノ酸配列は、多型変異体であり得る。天然のアミノ酸配列は、ヒト又は非ヒトアミノ酸配列であり得る。いくつかの実施形態において、天然のアミノ酸配列又はその天然の変異体は、ヒト配列である。さらに、本開示と共に使用するためのペプチド又はポリペプチド（例えば、タンパク質）は、何らかの方法で、例えば、化学又は酵素修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化）によって修飾され得る。いくつかの実施形態において、ペプチドは、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０未満のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態において、タンパク質は、５ｋＤ、１０ｋＤ、２５ｋＤ、５０ｋＤ、１００ｋＤ、１５０ｋＤ、２００ｋＤ、２５０ｋＤ、５００ｋＤ、又はそれ以上の平均分子量を有する。

【0231】

いくつかの実施形態において、タンパク質はホルモンである。例示的なホルモンとしては、抗利尿剤ホルモン（ＡＤＨ）、オキシトシン、成長ホルモン（ＧＨ）、プロラクチン、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、サイロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、チロキシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、アルドステロン、コルチゾール、エピネフリン、グルカゴン、インスリン、エストロゲン、プロゲステロン、及びテストステロンが挙げられる。いくつかの実施形態において、タンパク質は、インスリン（例えば、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、又はプロインスリン）である。いくつかの実施形態において、タンパク質は、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、組み換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ウシ成長ホルモン、メチオニン－ヒト成長ホルモン、ｄｅｓ－フェニルアラニンヒト成長ホルモン、及びブタ成長ホルモンである。

【0232】

いくつかの実施形態において、タンパク質は、増殖因子、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）、及びインスリン様増殖因子－Ｉ及び－ＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）である。

【0233】

いくつかの実施形態において、タンパク質は、凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）又は凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）、例えば、血液凝固因子（ｂｌｏｏｄ ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）又は血液凝固因子（ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）である。いくつかの実施形態において、タンパク質は、凝固、すなわち、血液が液体から固体又はゲルへと変換される過程に関与するタンパク質である。例示的な凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）及び凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）としては、第Ｉ因子（例えば、フィブリノゲン）、第ＩＩ因子（例えば、プロトロンビン）、第ＩＩＩ因子（例えば、組織因子）、第Ｖ因子（例えば、プロアクセレリン、不安定因子）、第ＶＩ因子、第ＶＩＩ因子（例えば、安定因子、プロコンバーチン）、第ＶＩＩＩ因子（例えば、抗血友病因子Ａ）、第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子（例えば、抗血友病因子Ｂ）、第Ｘ因子（例えば、スチュアート・プロワー因子）、第ＸＩ因子（例えば、血漿トロンボプラスチン前駆物質）、第ＸＩＩ因子（例えば、ハーゲマン因子）、第ＸＩＩＩ因子（例えば、フィブリン安定化因子）、フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）、プレカリクレイン、ヘパリン補因子ＩＩ、高分子量キニノーゲン（例えば、フィッツジェラルド因子）、抗トロンビンＩＩＩ、及びフィブロネクチンが挙げられる。いくつかの実施形態において、タンパク質は、プロテインＣなどの抗凝固因子である。

【0234】

いくつかの実施形態において、タンパク質は抗体分子である。本明細書において用いられるところ、「抗体分子」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、タンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖又はその断片を指す。「抗体分子」という用語は、例えば、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）を含む。実施形態において、抗体分子は、完全長抗体、又は完全長免疫グロブリン鎖を含む。実施形態において、抗体分子は、完全長抗体、又は完全長免疫グロブリン鎖の抗原結合若しくは機能的断片を含む。実施形態において、抗体分子は、単一特異性抗体分子であり、単一のエピトープに結合し、例えば、それぞれが同じエピトープに結合する複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を有する単一特異性抗体分子である。実施形態において、抗体分子は、多特異性抗体分子であり、例えば、それは、複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、ここで、複数のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対する結合特異性を有し、複数のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対する結合特異性を有する。実施形態において、第１及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にある。実施形態において、多特異性抗体分子は、第３、第４又は第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。実施形態において、多特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、又は四重特異性抗体分子である。

【0235】

任意のクラスの全免疫グロブリン、その断片、及び抗体の抗原結合可変ドメインを少なくとも含む合成タンパク質を含む様々なタイプの抗体分子が、カプセル化組み換え細胞によって産生され得る。抗体分子は、抗体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４などのＩｇＧ抗体であり得る。抗体分子は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一本鎖可変領域などを含む抗原結合断片の形態であり得る。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル（ｍＡｂ）であり得る。モノクローナル抗体は、それらが標的抗原に特異的に結合し、及び／又は所望の生物学的活性を示す限り、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来するか又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は同種である一方、鎖の残りの部分が、別の種に由来するか又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一又は同種である「キメラ」抗体、並びにこのような抗体の断片を含み得る。いくつかの実施形態において、抗体分子は、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディ）である。記載される抗体はまた、所望の機能を仲介する際の抗体の有効性を高めるために、組み換え手段、例えばアミノ酸の欠失、付加又は置換によって修飾され得る。例示的な抗体としては、抗β－ガラクトシダーゼ、抗コラーゲン、抗ＣＤ１４、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ４０、抗ＨＥＲ２、抗ＩＬ－１、抗ＩＬ－４、抗ＩＬ６、抗ＩＬ－１３、抗ＩＬ１７、抗ＩＬ１８、抗ＩＬ－２３、抗ＩＬ－２８、抗ＩＬ－２９、抗ＩＬ－３３、抗ＥＧＦＲ、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤＦ、抗フラジェリン、抗ＩＦＮ－α、抗ＩＦＮ－β、抗ＩＦＮ－γ、抗マンノース受容体、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＬＲ１、抗ＴＬＲ２、抗ＴＬＲ３、抗ＴＬＲ４、抗ＴＬＲ５、抗ＴＬＲ６、抗ＴＬＲ９、抗ＰＤＦ、抗ＰＤ１（抗ＰＤ－１としてもしれれる）、抗ＰＤ－Ｌ１、又は抗神経増殖因子抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、抗体は、抗神経増殖因子抗体（例えば、フルラヌマブ、ファシヌマブ、タネズマブ）である。

【0236】

いくつかの実施形態において、タンパク質は、例えば腫瘍壊死因子α及びβ、それらの受容体及びそれらの誘導体、レニンを含む、サイトカイン若しくはサイトカイン受容体、又はサイトカイン若しくはそれらの受容体を含むキメラタンパク質；リポタンパク質；コルヒチン；コルチコトロピン；バソプレシン；ソマトスタチン；リプレシン；パンクレオザイミン；ロイプロリド；α－１－アンチトリプシン；心房性ナトリウム利尿因子；肺表面活性剤；組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ－ＰＡ）以外のプラスミノーゲン活性化因子、例えばウロキナーゼ；ボンベシン；トロンビン；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性化正常Ｔ細胞における発現及び分泌調節性（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｎｏｒｍａｌｌｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅｄ））；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ－１－α）；ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン；ミュラー管抑制因子；レラキシンＡ鎖；レラキシンＢ鎖；プロリラキシン（ｐｒｏｒｅｌａｘｉｎ）；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；絨毛性ゴナドトロピン；β－ラクタマーゼなどの微生物タンパク質；ＤＮａｓｅ；インヒビン；アクチビン；ホルモン又は増殖因子の受容体；インテグリン；プロテインＡ又はＤ；リウマチ因子；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）；上皮増殖因子（ＥＧＦ）；ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４、又はＴＧＦ－β５を含むＴＧＦ－α及びＴＧＦ－βなどの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子－Ｉ及び－ＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）；ｄｅｓ（１－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－Ｉ）、インスリン様増殖因子結合タンパク質；ＣＤ－３、ＣＤ－４、ＣＤ－８、及びＣＤ－１９などのＣＤタンパク質；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；インターフェロン－α（例えば、インターフェロン．α．２Ａ）、－β、－γ、－λ及びコンセンサスインターフェロンなどのインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、及びＧ－ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２～ＩＬ－１０；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；プロスタグランジンなどの生殖阻害剤；生殖促進剤；調節タンパク質；イムノアドヘシンなどの、抗体（その断片を含む）及びキメラタンパク質；これらの化合物の前駆体、誘導体、プロドラッグ及び類似体、並びにこれらの化合物、又はそれらの前駆体、誘導体、プロドラッグ及び類似体の薬学的に許容可能な塩である。好適なタンパク質又はペプチドは、天然又は組み換えであってもよく、例えば、融合タンパク質が挙げられる。

【0237】

本明細書に記載のデバイスによって産生されるポリペプチド（例えば、タンパク質）の例としては、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１α）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１β）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９（ＣＣＬ１０）、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１（ＫＣ）、ＣＸＣＬ２（ＳＤＦ１ａ）、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８（ＩＬ８）、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ１７、ＣＸ３ＣＬ１、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＴＮＦＡ、ＴＮＦＢ（ＬＴＡ）、ＴＮＦＣ（ＬＴＢ）、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０ＬＧ）、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦＳＦ７、ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦＳＦ１１、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＥＤＡ、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＩＬ７、ＩＬ９、ＩＬ２１、ＩＬ３、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ１１、ＩＬ２７、ＩＬ３０、ＩＬ３１、ＯＳＭ、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、ＣＴＦ１、ＩＬ１２ａ、ＩＬ１２ｂ、ＩＬ２３、ＩＬ２７、ＩＬ３５、ＩＬ１４、ＩＬ１６、ＩＬ３２、ＩＬ３４、ＩＬ１０、ＩＬ２２、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２９、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＬ２８、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＷ１、ＩＦＮＧ、ＩＬ１Ａ（ＩＬ１Ｆ１）、ＩＬ１Ｂ（ＩＬ１Ｆ２）、ＩＬ１Ｒａ（ＩＬ１Ｆ３）、ＩＬ１Ｆ５（ＩＬ３６ＲＮ）、ＩＬ１Ｆ６（ＩＬ３６Ａ）、ＩＬ１Ｆ７（ＩＬ３７）、ＩＬ１Ｆ８（ＩＬ３６Ｂ）、ＩＬ１Ｆ９（ＩＬ３６Ｇ）、ＩＬ１Ｆ１０（ＩＬ３８）、ＩＬ３３（ＩＬ１Ｆ１１）、ＩＬ１８（ＩＬ１Ｇ）、ＩＬ１７、ＫＩＴＬＧ、ＩＬ２５（ＩＬ１７Ｅ）、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ－ＣＳＦ）、ＳＰＰ１、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＣＣＬ３Ｌ１、ＣＣＬ３Ｌ２、ＣＣＬ３Ｌ３、ＣＣＬ４Ｌ１、ＣＣＬ４Ｌ２、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｄ、ＩＬ１７Ｆ、ＡＩＭＰ１（ＳＣＹＥ１）、ＭＩＦ、Ａｒｅｇ、ＢＣ０９６４４１、Ｂｍｐ１、Ｂｍｐ１０、Ｂｍｐ１５、Ｂｍｐ２、Ｂｍｐ３、Ｂｍｐ４、Ｂｍｐ５、Ｂｍｐ６、Ｂｍｐ７、Ｂｍｐ８ａ、Ｂｍｐ８ｂ、Ｃ１ｑｔｎｆ４、Ｃｃｌ２１ａ、Ｃｃｌ２７ａ、Ｃｄ７０、Ｃｅｒ１、Ｃｋｌｆ、Ｃｌｃｆ１、Ｃｍｔｍ２ａ、Ｃｍｔｍ２ｂ、Ｃｍｔｍ３、Ｃｍｔｍ４、Ｃｍｔｍ５、Ｃｍｔｍ６、Ｃｍｔｍ７、Ｃｍｔｍ８、Ｃｒｌｆ１、Ｃｔｆ２、Ｅｂｉ３、Ｅｄｎ１、Ｆａｍ３ｂ、Ｆａｓｌ、Ｆｇｆ２、Ｆｌｔ３ｌ、Ｇｄｆ１０、Ｇｄｆ１１、Ｇｄｆ１５、Ｇｄｆ２、Ｇｄｆ３、Ｇｄｆ５、Ｇｄｆ６、Ｇｄｆ７、Ｇｄｆ９、Ｇｍ１２５９７、Ｇｍ１３２７１、Ｇｍ１３２７５、Ｇｍ１３２７６、Ｇｍ１３２８０、Ｇｍ１３２８３、Ｇｍ２５６４、Ｇｐｉ１、Ｇｒｅｍ１、Ｇｒｅｍ２、Ｇｒｎ、Ｈｍｇｂ１、Ｉｆｎａ１１、Ｉｆｎａ１２、Ｉｆｎａ９、Ｉｆｎａｂ、Ｉｆｎｅ、Ｉｌ１７ａ、Ｉｌ２３ａ、Ｉｌ２５、Ｉｌ３１、Ｉｌｔｉｆｂ、Ｉｎｈｂａ、Ｌｅｆｔｙ１、Ｌｅｆｔｙ２、Ｍｓｔｎ、Ｎａｍｐｔ、Ｎｄｐ、Ｎｏｄａｌ、Ｐｆ４、Ｐｇｌｙｒｐ１、Ｐｒｌ７ｄ１、Ｓｃｇ２、Ｓｃｇｂ３ａ１、Ｓｌｕｒｐ１、Ｓｐｐ１、Ｔｈｐｏ、Ｔｎｆｓｆ１０、Ｔｎｆｓｆ１１、Ｔｎｆｓｆ１２、Ｔｎｆｓｆ１３、Ｔｎｆｓｆ１３ｂ、Ｔｎｆｓｆ１４、Ｔｎｆｓｆ１５、Ｔｎｆｓｆ１８、Ｔｎｆｓｆ４、Ｔｎｆｓｆ８、Ｔｎｆｓｆ９、Ｔｓｌｐ、Ｖｅｇｆａ、Ｗｎｔ１、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ５ａ、Ｗｎｔ７ａ、Ｘｃｌ１、エピネフリン、メラトニン、トリヨードチロニン、プロスタグランジン、ロイコトリエン、プロスタサイクリン、トロンボキサン、膵島アミロイドポリペプチド、ミュラー管抑制因子又はホルモン、アディポネクチン、コルチコトロピン、アンジオテンシン、バソプレシン、アルギニンバソプレシン、アトリオペプチン、脳性ナトリウム利尿ペプチド、カルシトニン、コレシストキニン、コルチスタチン、エンケファリン、エンドセリン、エリスロポエチン、卵胞刺激ホルモン、ガラニン、消化管抑制ポリペプチド、ガストリン、グレリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド－１、ゴナドトロピン放出ホルモン、ヘプシジン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ヒト胎盤性ラクトーゲン、インヒビン、ソマトメジン、レプチン、リポトロピン、メラノサイト刺激ホルモン、モチリン、オレキシン、オキシトシン、膵臓ポリペプチド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド、レラキシン、レニン、セクレチン、ソマトスタチン、トロンボポエチン、サイロトロピン、サイロトロピン放出ホルモン、血管作動性腸管ペプチド、アンドロゲン、α－グルコシダーゼ（酸性マルターゼとしても知られている）、グリコーゲンホスホリラーゼ、グリコーゲン脱分枝酵素、ホスホフルクトキナーゼ、ホスホグリセリン酸キナーゼ、ホスホグリセリン酸ムターゼ、乳酸脱水素酵素、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ、カルニチン、及びミオアデニル酸デアミナーゼも挙げられる。

【0238】

いくつかの実施形態において、タンパク質は、補充療法又は補充タンパク質である。いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）又は凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）、例えば、第ＶＩＩＩ因子（例えば、天然のヒト第ＶＩＩＩ因子アミノ酸配列若しくはその変異体を含む）又は第ＩＸ因子（例えば、天然のヒト第ＩＸ因子アミノ酸配列若しくはその変異体を含む）である。

【0239】

いくつかの実施形態において、複数の細胞は、ヒト第ＶＩＩＩ因子タンパク質（例えば組み換え第ＶＩＩＩ因子）を発現するように組み換えられている。いくつかの実施形態において、この組み換え第ＶＩＩＩ因子は、Ｂドメイン欠失組み換え第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ）である。いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質は、図２０で示されているＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質である。ある実施形態において、ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質は、配列番号１を含むか、配列番号１から本質的になるか、又は配列番号１からなる。

【0240】

いくつかの実施形態において、細胞は、第ＩＸ因子（例えば、ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）タンパク質）を発現するように組み換えられている。いくつかの実施形態において、ＦＩＸタンパク質は、ＦＩＸ－ｐａｄｕａタンパク質であり、且つ配列番号３６を含むか、配列番号３６から本質的になるか、又は配列番号３６からなる。

【0241】

いくつかの実施形態において、カプセル化細胞は、ヒトＲＰＥ細胞株に由来し、ポリペプチドのためのコード配列に動作可能に連結されるプロモーター配列（例えば、配列番号２６又は配列番号２３のヌクレオチド３３７～２０６９）を含む外因性の核酸配列を含む。実施形態において、コード配列は、図２４に示されるコドン最適化ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤコード配列（配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６若しくは１７）又は図２４に示されるコドン最適化ＦＩＸ－ｐａｄｕａコード配列（配列番号１９、２０若しくは２１）である。

【0242】

いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、酵素であり、例えば、アルファ－ガラクトシダーゼＡ（ＧＬＡ）、アルファ－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、グルコセレブロシダーゼ、Ｎ－スルホグルコサミンスルホヒドロラーゼ（ＳＧＳＨ）、Ｎ－アセチル－アルファ－ｄ－グルコサミニダーゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン４－スルファターゼ、尿酸オキシダーゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、又はフェニルアラニンアンモニアリアーゼである。いくつかの実施形態において、補充療法又は補充タンパク質は、サイトカイン又は抗体である。

【0243】

いくつかの実施形態において、治療薬は、糖、例えば、単糖、二糖、オリゴ糖、又は多糖である。いくつかの実施形態において、糖は、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、又はヘプトース部分を含む。いくつかの実施形態において、糖は、直鎖単糖又は環化単糖を含む。いくつかの実施形態において、糖は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、ラムノース、マンノース、アラビノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、マンノサミン、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、又はグルロン酸部分を含む。いくつかの実施形態において、糖は、タンパク質に結合される（例えば、Ｎ－結合型グリカン又はＯ－結合型グリカン）。例示的な糖としては、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース、ラムノース、スクロース、リボース、キシロース、シアル酸、マルトース、アミロース、イヌリン、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、マンナン、レクチン、ペクチン、デンプン、セルロース、ヘパリン、ヒアルロン酸、キチン、アミロペクチン、又はグリコーゲンが挙げられる。いくつかの実施形態において、治療薬は、糖アルコールである。

【0244】

いくつかの実施形態において、治療薬は脂質である。脂質は、疎水性又は両親媒性であってもよく、リポソーム、小胞、若しくは膜などの三次構造を形成するか又はリポソーム、小胞、若しくは膜に挿入され得る。脂質は、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、ステロール脂質、プレノール脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、ポリケチド、又はスフィンゴ脂質を含み得る。カプセル化細胞によって産生される脂質の例としては、アナンダミド、ドコサヘキサエン酸、プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサン、エイコサノイド、トリグリセリド、カンナビノイド、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、ガングリオシド、エストロゲン、アンドロステロン、テストステロン、コレステロール、カロテノイド、キノン、ヒドロキノン、又はユビキノンが挙げられる。

【0245】

いくつかの実施形態において、治療薬は小分子である。小分子は、細胞によって産生される天然産物を含み得る。いくつかの実施形態において、小分子は、利用可能性が不十分であり、又はリピンスキーのルールオブファイブと適合しない（小分子がヒトにおける経口で有効な薬物である見込みがあるかどうかを推定するのに使用される一連の指針；例えば、Ｌｉｐｉｎｓｋｉ，Ｃ．Ａ．ｅｔ ａｌ（２００１）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ ４６：２－３６を参照）。例示的な小分子天然産物としては、抗菌薬（例えば、カルモナム、ダプトマイシン、フィダキソマイシン、ホスホマイシン、イセパマイシン、ミクロノマイシン硫酸塩、ミオカマイシン、ムピロシン、ネチルマイシン硫酸塩、テイコプラニン、チエナマイシン、リファマイシン、エリスロマイシン、バンコマイシン）、抗寄生虫薬（例えば、アルテミシニン、イベルメクチン）、抗癌剤（例えば、ドキソルビシン、アクラルビシン、アミノレブリン酸、アルグラビン、オマセタキシンメペスクシナート、パクリタキセル、ペントスタチン、ペプロマイシン、ロミデプシン、トラベクテジン、アクチノマイシンＤ、ブレオマイシン、クロモマイシンＡ、ダウノルビシン、ロイコボリン、ネオカルジノスタチン、ストレプトゾシン、トラベクテジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン）、抗糖尿病薬（例えば、ボグリボース）、中枢神経系薬剤（例えば、Ｌ－ドパ、ガランタミン、ジコノチド）、スタチン（例えば、メバスタチン）、抗真菌薬（例えば、フマギリン、シクロスポリン）、１－デオキシノジリマイシン、及びテオフィリン、ステロール（コレステロール、エストロゲン、テストステロン）が挙げられる。さらなる小分子天然産物が、本明細書において参照によりその全体が援用される、Ｎｅｗｍａｎ，Ｄ．Ｊ．ａｎｄ Ｃｒａｇｇ，Ｍ．（２０１６）Ｊ Ｎａｔ Ｐｒｏｄ ７９：６２９－６６１及びＢｕｔｌｅｒ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ（２０１４）Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｒｅｐ ３１：１６１２－１６６１に記載されている。

【0246】

いくつかの実施形態において、細胞は、非タンパク質又は非ペプチド小分子を合成するように組み換えられる。例えば、実施形態において、組み換え細胞は、スタチン（例えば、タウロスタチン（ｔａｕｒｏｓｔａｔｉｎ）、プラバスタチン、フルバスタチン、又はアトルバスタチン）を産生し得る。

【0247】

いくつかの実施形態において、治療薬は、抗原（例えば、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、植物抗原、環境抗原、又は腫瘍抗原）である。抗原は、免疫賦活性である、すなわち、免疫応答を刺激するか又はそれが由来する生物又は分子に対して有効な免疫を提供することが可能であると当業者によって認識される。抗原は、核酸、ペプチド、タンパク質、糖、脂質、又はこれらの組み合わせであり得る。

【0248】

本明細書に記載のデバイス中の細胞は、単一の治療薬又は複数の治療薬を産生し得る。複数の治療薬は、関連し得るか又は複合体を形成し得る。いくつかの実施形態において、デバイスから分泌又は放出される治療薬は、活性形態である。いくつかの実施形態において、治療薬は、不活性形態で、例えば、プロドラッグとして、デバイスから分泌又は放出される。後者の場合、治療薬は、酵素などの下流の薬剤によって活性化され得る。

【0249】

処置方法
本明細書で説明されているのは、治療薬を生じる本明細書で説明されているデバイス又はデバイスの調製物の投与又は移植により対象の疾患、障害、又は状態を予防するか又は処置する方法であって、この治療薬は、この疾患、障害、又は状態を処置する、方法である。この方法は、デバイス、又は複数のデバイスを含むデバイス調製物を投与するか又は移植することを含み、このデバイスは、（ｉ）第１の細胞結合物質（ＣＢＳ）を含み且つこのデバイス又はデバイス調製物が対象に移植された場合に治療薬を発現し得る複数の細胞（例えば生細胞）をカプセル化するポリマー組成物を含む少なくとも１個の細胞含有区画と、（ｉｉ）このデバイス又はデバイス調製物が対象に移植された場合にＦＢＲを軽減するための手段とを含む。ある実施形態において、この手段は、細胞含有区画を取り囲み且つ式（Ｉ）の化合物（例えば本明細書で説明されている）を含むバリア区画を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、疾病、障害、又は状態の少なくとも１つの症状を直接又は間接的に低減又は軽減する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、疾病、障害、又は状態の発症を予防するか又は遅らせる。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。

【0250】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば神経系（例えば、末梢神経系（ＰＮＳ）又は中枢神経系（ＣＮＳ））、脈管系、骨格系、呼吸器系、内分泌系、リンパ系、生殖器系又は胃腸管といった身体の系に影響を及ぼす。いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、血液、眼、脳、皮膚、肺、胃、口、耳、脚、足、手、肝臓、心臓、腎臓、骨、膵臓、脾臓、大腸、小腸、脊髄、筋肉、卵巣、子宮、膣又はペニスといった身体の一部に影響を及ぼす。

【0251】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、神経変性疾患、糖尿病、心臓病、自己免疫疾患、癌、肝疾患、ライソゾーム蓄積症、血液凝固障害又は凝固障害、整形外科状態、アミノ酸代謝障害である。

【0252】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は神経変性疾患である。例示的な神経変性疾患としては、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病（ＰＤ）筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）及び脳性麻痺（ＣＰ）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症（ＤＲＰＬＡ）、神経核内封入体病（ＮＩＨＩＤ）、レビー小体型認知症、ダウン症候群、ハラーフォルデン・シュパッツ症候群、プリオン病、嗜銀顆粒性認知症、大脳皮質基底核変性症、パンチドランカー、びまん性神経原線維変化病、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、クロイツフェルト・ヤコブ病、ニーマン・ピック病３型、進行性核上性麻痺、亜急性硬化性全脳炎、脊髄小脳失調症、ピック病及び歯状核赤核・淡蒼球ルイ体萎縮症が挙げられる。

【0253】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、強皮症、多発性硬化症、狼瘡又は過敏症といった自己免疫疾患である。

【0254】

いくつかの実施形態において、疾病は、例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝硬変、ＮＡＳＨといった肝臓病である。

【0255】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は癌である。例示的な癌としては、白血病、リンパ腫、メラノーマ、肺癌、脳癌（例えば、グリア芽細胞腫）、肉腫、膵癌、腎臓癌、肝臓癌、精巣癌、前立腺癌又は子宮癌が挙げられる。

【0256】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は整形外科状態である。例示的な整形外科状態としては、骨粗鬆症、骨壊死、パジェット病又は骨折が挙げられる。

【0257】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態はライソゾーム蓄積症である。例示的なライソゾーム蓄積症としては、ゴーシェ病（例えば、タイプＩ、タイプＩＩ、タイプＩＩＩ）、テイザックス病、ファブリー病、ファーバー病、ハーラー症候群（ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）としても知られる）、ハンター症候群、ライソゾーム酸性リパーゼ欠損症、ニーマン・ピック病、サラ病、サンフィリポ症候群（ムコ多糖症ＩＩＩＡ型（ＭＰＳ３Ａ）としても知られる）、多発性スルファターゼ欠損症、マロトー・ラミー症候群、異染性白質萎縮症、クラッベ病、シャイエ症候群、ハーラー・シャイエ症候群、スライ症候群、ヒアルロニダーゼ欠損症、ポンペ病、ダノン病、ガングリオシド蓄積症又はモルキオ症候群が挙げられる。

【0258】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、血液凝固障害又は凝固障害である。例示的な血液凝固障害又は凝固障害としては、血友病（例えば、血友病Ａ又は血友病Ｂ）、ヴォン・ヴィレブランド病、血小板減少症、尿毒症、ベルナール・スーリエ症候群、第ＸＩＩ因子欠乏症、ビタミンＫ欠乏症又は先天性無フィブリノゲン血症が挙げられる。

【0259】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、フェニルケトン尿症、チロシン血症（例えば、タイプ１又はタイプ２）、アルカプトン尿症、ホモシスチン尿症、高ホモシステイン血症、カエデ糖症といったアミノ酸代謝障害である。

【0260】

いくつかの実施形態において、疾病、障害又は状態は、例えば、高脂血症、高コレステロール血症、ガラクトース血症といった脂肪酸代謝疾患である。

【0261】

いくつかの実施形態において、疾病、障害、又は状態は、プリン又はピリミジン代謝障害、例えば、レッシュ・ナイハン症候群である。

【0262】

いくつかの実施形態において、疾病、障害、又は状態は、糖尿病（例えば、１型又は２型糖尿病）である。

【0263】

本開示は、本明細書で説明されている疾患、障害、又は状態を有するか又は有する疑いがある対象を同定し、そのような同定時に、細胞結合ペプチドで共有結合的に修飾されたアルギン酸塩を含む内側区画と、式（Ｉ）の化合物（例えば本明細書で説明されている）を含む外側区画とを含むデバイス、又は複数のそのようなデバイスを含む組成物を、この対象に投与する方法をさらに含む。ある実施形態において、この対象は、ヒトである。

【0264】

医薬組成物、キット、及び投与
本開示は、本明細書で説明されているデバイスを含む医薬組成物、及びそのキットをさらに含む。

【0265】

いくつかの実施形態において、医薬組成物は、デバイス又は複数のデバイスを含み、このデバイスは、細胞結合物質を含み且つ複数の細胞（例えば生細胞）をカプセル化するポリマー組成物を含む少なくとも１個の細胞含有区画と、異物反応（ＦＢＲ）を軽減するための手段と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む。この生細胞は、この組成物が対象に投与された（例えば移植された）場合に治療薬を発現する。いくつかの実施形態において、この医薬組成物は、有効量のデバイス（例えば、ヒドロゲルカプセルの量、例えば、１００個、２００個、４００個、８００個、２，０００個、又はより多くのカプセル）を含む。いくつかの実施形態において、有効量は治療的有効量である。いくつかの実施形態において、有効量は予防的有効量である。

【0266】

本明細書に記載の医薬組成物は、薬理学の技術分野において公知であるいずれかの方法によって調製可能である。一般に、このような調製方法は、「有効成分」のようなデバイス（例えば、ヒドロゲルカプセル、粒子）と、キャリア、及び／又は１種以上の他の補助成分とを付随させるステップ、並びに次いで、必要である及び／又は所望される場合、生成物を所望の単一投与又は多投与量単位に成型及び／又はパッケージングするステップを含む。

【0267】

薬学組成物は、単一の単位投与量及び／又は複数の単一単位投与量として、調製、パッケージ化、及び／又は、原体で販売されることが可能である。本明細書において用いられるところ、「単位投与量」は、所定の量の活性成分（すなわち、ヒドロゲルカプセル、粒子の数）を含む薬学組成物の個別の量である。所定の量は一般に、対象に投与されることとなる活性成分の投与量、及び／又は、このような投与量の簡便な画分（例えばこのような投与量の半分若しくは三分の一など）と等しい。

【0268】

本開示の薬学組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な賦形剤、及び／又は、いずれかの追加の成分の相対量は、処置される対象のアイデンティティ、サイズ及び／又は状態に応じて、並びに、さらに、組成物が投与される経路に応じて様々であろう。一例として、組成物は、０．１％～１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。

【0269】

「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、一緒に配合されるデバイスの薬理学的活性を破壊しない無毒性のキャリア、助剤、希釈剤、又はビヒクルを指す。本開示の医薬組成物の製造に有用な薬学的に許容可能な賦形剤は、医薬製剤の技術分野において周知であるもののいずれかであり、不活性希釈剤、分散剤及び／又は造粒剤、表面活性剤及び／又は乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、平滑剤、及び／又は油が挙げられる。本開示の医薬組成物の製造に有用な薬学的に許容可能な賦形剤としては、限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば、プロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。

【0270】

本明細書に記載のデバイス及び関連する組成物は、経口的、非経口的（皮下、筋肉内、及び皮内を含む）、局所的、直腸的、経鼻的、腫瘍内、髄腔内、眼内、硝子体内、口腔内、腟内に、又は移植されたレザバーを介して、投与され得る。いくつかの実施形態において、提供されるデバイス又は組成物は、皮下に又はインプラントによって投与可能である。

【0271】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のデバイス及び関連する組成物は、粘膜表面又は体腔などの、身体の特定の領域内又は領域上に投与又は移植され得る。投与又は移植の例示的な部位としては、腹膜腔（例えば、小腹膜嚢）、脂肪組織、心臓、眼（例えば、網膜）、筋肉、脾臓、リンパ節、食道、鼻、副鼻腔、歯、歯茎、舌、口、のど、小腸、大腸、甲状腺、骨（例えば、股関節又は関節）、乳房、軟骨、膣、子宮、卵管、卵巣、陰茎、精巣、血管、肝臓、腎臓、中枢神経系（例えば、脳、脊髄、神経）、又は耳（例えば、蝸牛）が挙げられる。

【0272】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のデバイス及び関連する組成物は、中枢神経系、例えば、脳、脊髄、神経以外の部位において投与又は移植される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のデバイス及び関連する組成物は、眼以外の部位において投与又は移植される。

【0273】

本開示の組成物の無菌注射液形態は、水性又は油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、技術分野において公知である技術に従い、好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて配合され得る。無菌注射調製物はまた、無毒性で許容可能な非経口希釈剤又は溶剤中の無菌注射溶液又は懸濁液（例えば１，３－ブタンジオール中の溶液として）であり得る。ビヒクル及び溶剤のうち、利用され得る許容可能なものは、水、リンゲル溶液及び等張性の塩化ナトリウム溶液である。加えて、無菌の不揮発性油が、溶剤又は懸濁媒として簡便に利用される。

【0274】

眼科用途のためには、提供される薬学的に許容可能な組成物は、微粉化懸濁液として配合され得るか、又はワセリンなどの軟膏剤中に配合され得る。

【0275】

本明細書において提供される薬学組成物の説明は主にヒトへの投与に好適である薬学組成物に関するものであるが、このような組成物は一般に、全ての種類の対象に対する投与に好適であることは当業者によって理解されるであろう。組成物を種々の動物への投与に好適なものとするためのヒトへの投与に好適な薬学組成物の変更は十分に理解されており、通常の知識を有する獣医学薬理学者は、通常の実験によってこのような変更を設計及び／又は実施することが可能である。

【0276】

本明細書に記載のデバイス及び関連する組成物は、投与の容易さ及び投与量の均一性のために、投与量単位形態（例えば、単一単位剤形）で配合され得る。しかしながら、本開示の組成物の合計投与量及び使用レジメンは、担当医師によって適切な医学的良識の範囲内で決定されることとなることが理解されるであろう。任意の特定の対象又は生体に関する具体的な治療的に有効な投与量レベルは、様々な要因に依存し、例えば、処置される疾患、及び障害の重症度；利用される具体的なデバイスの産生性、及びこのデバイスにより産生される治療薬の活性；利用される具体的な成分；対象の年齢、体重、全体的な健康状態、性別、及び食事；投与されたデバイスにより分泌される具体的な治療薬の投与時間、投与経路、及び半減期；処置の持続時間；デバイスにより発現される具体的な治療薬と組み合わせて使用されるか又は同時に使用される薬物；並びに医学的技術分野で公知である同様の要因に依存する。

【0277】

有効量を達成するために必要とされる治療の正確な量は、例えば対象の種、年齢及び全体的な状態、副作用又は疾患の重症度、特定のデバイスのアイデンティティ、投与形態等に応じて、対象毎に様々となる。所望される投与量は、１日に３回、１日に２回、１日に１回、２日に１回、３日に１回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、送達可能である。いくつかの実施形態において、所望される投与量は、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、若しくは１２ヶ月に１回送達されるか、又は１年、２年、３年、若しくはより多くの年数に１回送達される。一定の実施形態において、複数回の投与（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、又はより多くの投与）を使用して、所望される投与量を送達し得る。いくつかの実施形態において、デバイス又は関連する組成物の各次の投与又は移植を、先行する投与又は移植の除去後に実施する。

【0278】

本明細書で説明されているデバイス及び関連する組成物を、１種又は複数種の追加の薬学的薬剤と組み合わせて投与し得ることが理解されるだろう。そのような薬学的薬剤は、治療薬のバイオアベイラビリティを改善し得、治療薬の代謝を低減し得、及び／若しくは調節し得、移植されたデバイスのＦＢＲを阻害し得、並びに／又は身体内での治療薬の分布を調節し得る。用いられる療法が、同一の障害に対して望ましい効果を達成し得ること、及び／又は異なる効果を達成し得ることも理解されるだろう。

【0279】

キット（例えば、医薬品包装）も本開示によって包含される。本発明に係るキットは、本明細書に記載の疾病、障害又は状態のいずれかを予防及び／又は処置するのに有用であり得る。提供されるキットは、本発明に記載の医薬組成物又は粒子及び容器（例えば、バイアル、アンプル、瓶、シリンジ、及び／又はディスペンサーパッケージ、又は他の好適な容器）を含み得る。いくつかの実施形態において、提供されるキットは、本発明に係る医薬組成物又は本発明に記載の粒子の希釈又は懸濁のための医薬品用賦形剤を含む第２の容器を任意選択によりさらに含み得る。いくつかの実施形態において、容器及び第２の容器中で提供される本発明に係る医薬組成物又は本発明に記載の粒子は、組み合わされて、１つの単位剤形が形成される。

【0280】

デバイスを作製する方法
本開示は、本明細書で説明されているデバイス（例えば、細胞結合物質を含むポリマー組成物中でカプセル化された複数の細胞を含む細胞含有区画、及びとＦＢＲを軽減するための手段）を作製する方法をさらに含む。

【0281】

デバイスが単一区画ヒドロゲルカプセルの調製物を含む実施形態では、このデバイスを下記の通りに作製し得る。簡潔に説明すると、抗線維性ポリマー（例えば、式（Ｉ）の化合物で修飾されたアルギン酸塩）を含むヒドロゲル形成ポリマー溶液のある量を、シリンジ（例えば、後に平滑先端針でキャップされるシリンジ）に充填し得る。次いで、このシリンジを、架橋剤、緩衝液、浸透圧調整剤を含む水性架橋溶液が入った容器の上で垂直に配向されたシリンジポンプに入れ得る。次いで、針に高電圧発電機を接続し得る。次いで、これらシリンジポンプ及び発電機を使用して、架橋溶液中へのポリマー溶液の所望の液滴速度を達成するように決定された設定で、シリンジを通してポリマー溶液を押し出す。この量のポリウマ－溶液を排出した後、数分にわたり（例えば約５分にわたり）架橋溶液中で液滴を架橋させる。ある実施形態において、架橋溶液の表面上の非カプセル破片の数を決定する。次いで、例えば、ヒドロゲルカプセルを含む架橋溶液を別の容器に移し、元の可溶容器中の溶液表面上のあらゆる非カプセル破片を残すことにより、架橋容器の底に落下しているヒドロゲルカプセルを回収し得る。次いで、取り出されたヒドロゲルカプセルを沈降させ得、架橋溶液を除去し得、次いで、カプセルを、緩衝液（例えばＨＥＰＥＳ緩衝液）で１回又は複数回洗浄し得る。ある実施形態において、得られたヒドロゲルカプセル組成物の１つ又は複数のアリコートを顕微鏡で調べて、この組成物の品質（例えば、カプセル欠陥及びサテライトカプセルの数）を評価する。

【0282】

デバイスが２個のヒドロゲル区画を有するヒドロゲルカプセルを含むか、又は２区画ヒドロゲルカプセルの調製物を含むいくつかの実施形態では、デバイスを作製する方法は、第１及び第２のポリマー溶液（例えば、ヒドロゲル形成ポリマーを含む各溶液）を含む複数の液滴と、水性架橋溶液とを接触させることを含む。この液滴を、当該技術分野で既知の任意の技術を使用して形成し得る。

【0283】

簡潔に説明すると、２区画ヒドロゲルカプセルの組成物を作製する方法の実施において、第１のポリマー溶液（例えば、細胞結合ペプチドで修飾されたポリマー中に懸濁された複数の細胞（例えば生細胞）を含み、任意選択で非修飾ポリマーとブレンドされている）のある量を、同心針の内腔に接続された第１のシリンジに充填する。次に、第１のシリンジは、架橋剤、緩衝液、及び浸透圧調整剤を含む水性架橋溶液を含む容器の上に垂直に配向されたシリンジポンプに連結され得る。ある体積の第２のポリマー溶液（例えば、非修飾ポリマー、式（Ｉ）の化合物で修飾されたポリマー、又はそのブレンドを含む）が、同心針の外腔に連結される第２のシリンジに充填される。次に、第２のシリンジは、架橋溶液を含む容器に対して水平に配向されたシリンジポンプに連結され得る。次に、高電圧発電機が、針に連結され得る。次に、シリンジポンプ及び発電機を用いて、ポリマー溶液の所望の滴下速度を達成するように決定された設定で、シリンジを通して第１及び第２のポリマー溶液を架橋溶液中に押し出すことができる。第１及び第２の体積のポリマー溶液を使い果たした後、液滴は、一定の時間、例えば、約５分間にわたって、架橋溶液中で架橋させられ得る。実施形態において、架橋溶液の表面上の非カプセル破片の数が決定される。次に、例えば、元の架橋容器の溶液表面上に非カプセル破片を残して、カプセルを含む架橋溶液を別の容器に移すことによって、架橋容器の底に落下したカプセルが収集され得る。次に、取り出されたカプセルが、沈降され得、架橋溶液が除去され得、次に、カプセルは、緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ緩衝液）で１回以上洗浄され得る。実施形態において、得られたデバイス組成物の１つ又は複数のアリコートが、組成物の品質、例えば、カプセル欠陥及びカプセルの数を評価するために、顕微鏡検査によって調べられる。

【0284】

いくつかの実施形態において、単一区画カプセル又は２区画カプセルを作製するためのプロセスで使用される架橋溶液は、プロセス添加剤（例えば、親水性の非イオン性界面活性剤）をさらに含む。このプロセス添加剤は、架橋溶液の表面張力を低減し得る。本開示のプロセス添加剤として有用な薬剤として、ポリソルベート系界面活性剤、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）及びポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）のコポリマー、ポリ（エチレンオキシド）－ポリ（プロピレンオキシド）－ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ－ＰＰＯ－ＰＥＯ）トリブロックコポリマー、及び非イオン性界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００、ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ－６３０、ポロキサマー１８８、又はポロキサマー４０７が挙げられる。いくつかの実施形態において、プロセス添加剤は、非イオン性界面活性剤である。実施形態において、プロセス添加剤は、２つ以上の界面活性剤、例えば、２つ以上の親水性界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、プロセス添加剤は、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０又はＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００を含まない。実施形態において、プロセス添加剤は、ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ－６３０である。いくつかの実施形態において、プロセス添加剤は、ポロキサマー１８８である。

【0285】

いくつかの実施形態において、プロセス添加剤（例えば、界面活性剤）は、少なくとも０．０００１％以上の濃度で架橋溶液中に存在する。いくつかの実施形態において、架橋溶液は、少なくとも０．００１％、０．０１％、又は０．１％のプロセス添加剤を含む。いくつかの実施形態において、プロセス添加剤は、約０．００１％～約０．１％、約０．００５％～約０．０５％、約０．００５％～約０．０１％、及び約０．０１％～約０．５％から選択される濃度で存在する。実施形態において、プロセス添加剤は、界面活性剤であり、この界面活性剤の臨界ミセル濃度未満の濃度で存在する。

【0286】

いくつかの実施形態において、架橋剤は、単一のタイプ又は異なるタイプの混合の二価カチオン、例えば、Ｂａ２＋、Ｃａ２＋、Ｓｒ２＋の１つ又は複数を含む。いくつかの実施形態において、架橋剤は、例えば、１ｍＭ～１００ｍＭ、２．５ｍＭ～７５ｍＭ、５ｍＭ～５０ｍＭ、７．５ｍＭ～２５ｍＭ、又は約２０ｍＭの濃度のＢａＣｌ２である。いくつかの実施形態において、架橋剤は、例えば、５０ｍＭ～１５０ｍＭ、又は約１００ｍＭの濃度のＣａＣｌ２である。いくつかの実施形態において、架橋剤は、例えば、３７．５ｍＭ～１００ｍＭの濃度のＳｒＣｌ２である。いくつかの実施形態において、架橋剤は、ＢａＣｌ２（例えば、５ｍＭ～２０ｍＭ）及びＣａＣｌ２（例えば、３７．５ｍＭ～１２．５ｍＭ）の混合物、又はＢａＣｌ２（例えば、５ｍＭ～２０ｍＭ）及びＳｒＣｌ２（例えば、３７．５ｍＭ～１２．５ｍＭ）の混合物である。

【0287】

水性架橋溶液中の緩衝液の種類及び濃度は、カプセル化される細胞と適合するように且つ溶液ｐＨをほぼ中性（例えば、約６．５～約７．５、約７．０～約７．５、又は約７．０）で維持するように選択される。いくつかの実施形態において、水性架橋溶液中の緩衝液は、ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）を含む。

【0288】

水性架橋溶液中の浸透圧調整剤は、細胞（例えば、生細胞）の懸濁液を含む第１のポリマー溶液の浸透圧、例えば、最大で２０％、１０％又は５％の上変動又は下変動を有する浸透圧と同様の値に溶液浸透圧を維持するように選択される。いくつかの実施形態において、浸透圧剤は、０．１Ｍ～０．３Ｍの濃度のマンニトールである。

【0289】

ある実施形態において、プロセス添加剤は、ポロキサマー１８８である。ある実施形態において、ポロキサマー１８８は、洗浄工程後に検出可能な量でカプセル組成物中に存在する。ポロキサマー１８８を、当該技術分野で既知の任意に技術により検出し得、例えば、カプセルのアリコートを取り出し、硫酸ナトリウム溶液を添加してアリコート中のカプセルを部分的に又は完全に溶解させ、得られた溶液をＬＣ／ＭＳで分析することにより検出し得る。

【0290】

架橋溶液の表面張力の低下は、当該技術分野において公知の任意の方法によって、例えば、接触角ゴニオメータ又は張力計の使用、例えば、デュノイリング法によって評価され得る（例えば、Ｄａｖａｒｃｉ ｅｔ ａｌ（２０１７）Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ ６２：１１９－１２７を参照）。

【0291】

列挙される例示的な実施形態
１．デバイスであって、
（ａ）ポリマー組成物を含む少なくとも１個の細胞含有区画であって、前記ポリマー組成物は、第１の細胞結合物質（ＣＢＳ）を含み、且つ前記デバイスが対象に移植された場合に治療薬を発現し得る複数の細胞をカプセル化し得る、細胞含有区画と、
（ｂ）前記デバイスが前記対象に移植された場合に異物反応（ＦＢＲ）を軽減するための手段と
を含むデバイス。

【0292】

２．デバイスであって、
（ａ）ポリマー組成物、例えばポリマーマトリックス、例えばヒドロゲルマトリックスであり、
（ｉ）第１の細胞結合物質（ＣＢＳ）と、
（ｉｉ）治療薬を提供し得る、例えば、産生し得るか、発現し得るか、又は放出し得る複数の細胞
を含むポリマー組成物を含み、
下記の特性：
（ｂ）球状の形状と、少なくとも１．０ｍｍ、１．３ｍｍ、１．５ｍｍ、２．０ｍｍ、２．５ｍｍ、若しくは３．０ｍｍの線形寸法、例えば直径との組み合わせを含むか；
（ｃ）前記ポリマー組成物は、区画内に配置されており、例えば、前記ポリマー組成物を取り囲む生体適合性ポリマーを含む区画内に若しくはマトリックス内に配置されているか；
（ｄ）いくつかの実施形態において前記デバイスの外面上に配置された実体、例えば、ＦＢＲを軽減する化合物、例えば、本明細書で定義されている抗線維性化合物を含むか；
又は
（ｅ）前記デバイスは、抗線維性化合物、例えば、本明細書で説明されている抗線維性化合物、例えば、前記デバイスの外側に配置された抗線維性化合物を含む
の内の１つを含むデバイス。

【0293】

３．特性（ｂ）を含む実施形態２に記載のデバイス。

【0294】

４．特性（ｃ）を含む実施形態２又は３に記載のデバイス。

【0295】

５．特性（ｄ）を含む実施形態２～４のいずれか一つに記載のデバイス。

【0296】

６．特性（ｅ）を含む実施形態２～５のいずれか一つに記載のデバイス。

【0297】

７．特性（ｂ）～（ｅ）の内の２つを含む実施形態２に記載のデバイス。

【0298】

８．特性（ｂ）～（ｅ）の内の３つを含む実施形態２に記載のデバイス。

【0299】

９．特性（ｂ）～（ｅ）の全てを含む実施形態２に記載のデバイス。

【0300】

１０．前記デバイスの別の成分、例えばポリマーに共有結合している、ＦＢＲを軽減する化合物を含む実施形態２～９のいずれか一つに記載のデバイス。

【0301】

１１．前記デバイスの別の成分、例えばポリマーに共有結合している抗線維性化合物、例えば本明細書で説明されている抗線維性化合物を含む実施形態２～９のいずれか一つに記載のデバイス。

【0302】

１２．前記第１のＣＢＳは、細胞結合ペプチド（ＣＢＰ）又は細胞結合ポリペプチド（ＣＢＰＰ）を含む、実施形態１～１１のいずれか一つに記載のデバイス。

【0303】

１３．前記ポリマー組成物は、前記第１のＣＢＳとは異なる第２のＣＢＳを含む、実施形態１～１２のいずれか一つに記載のデバイス。

【0304】

１４．前記第１のＣＢＳ及び第２のＣＢＳの内の一方又は両方は、細胞結合ペプチド（ＣＢＰ）又は細胞結合ポリペプチド（ＣＢＰＰ）を含む、実施形態１３に記載のデバイス。

【0305】

１５．前記第１のＣＢＳは、第１のリンカーを介して第１のポリマーに共有結合的に付着した第１のＣＢＰ（「第１のＣＢＰ－ポリマー」）を含む、実施形態１～１４のいずれか一つに記載のデバイス。

【0306】

１６．前記第２のＣＢＳは、第２のリンカー介して第２のポリマーに共有結合的に付着した第２のＣＢＰ（「第２のＣＢＰ－ポリマー」）を含み、第２のＣＢＰ、第２のリンカー、及び第２のポリマーの内の少なくとも１つの化学組成は、前記第１のＣＢＰ－ポリマー中の対応する構成成分と異なる、実施形態１２～１５のいずれか一つに記載のデバイス。

【0307】

１７．前記ポリマー組成物は、第３のＣＢＳをさらに含む、実施形態１２～１６のいずれか一つに記載のデバイス。

【0308】

１８．前記第３のＣＢＳは、第３のリンカーを介して第３のポリマーに共有結合的に付着した第３のＣＢＰ（「第３のＣＢＰ－ポリマー」）を含み、第３のＣＢＰ、第３のリンカー、及び第３のポリマーの内の少なくとも１つの化学組成は、前記第１及び第２のＣＢＰ－ポリマー中の対応する構成成分と異なる、実施形態１７に記載のデバイス。

【0309】

１９．前記第１のＣＢＳは、ＤＧＥＡ（配列番号３９）、ＦＹＦＤＬＲ（配列番号４０）、ＨＡＶＤＩ（配列番号３８）、ＰＨＳＲＮ（配列番号４６）、ＲＥＤＶ（配列番号４７）、ＲＧＤ（配列番号４３）、ＲＧＤＳＰ（配列番号５９）、及びＹＩＧＳＲ（配列番号５０）、又は前記配列の内のいずれかの保存的置換変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第１のＣＢＰ－ポリマーである、実施形態１～１８のいずれか一つに記載のデバイス。

【0310】

２０．前記第１のＣＢＰは、１０個未満のアミノ酸の長さの直鎖状又は環状のペプチドである、実施形態１２～１９のいずれか一つに記載のデバイス。

【0311】

２１．前記第２のＣＢＰは、１０個未満のアミノ酸の長さの直鎖状又は環状のペプチドである、実施形態１４～２０のいずれか一つに記載のデバイス。

【0312】

２２．前記ポリマー組成物は、第１のＣＢＰ－ポリマー、第２のＣＢＰ－ポリマー、及びに任意選択的な第３のＣＢＰ－ポリマーを含み、前記第１のＣＢＰ－ポリマーは、ＲＧＤポリマーであり、前記第２のＣＢＰ－ポリマー及び第３のＣＢＰ－ポリマー（存在する場合）の少なくとも一方は、ＤＧＥＡ（配列番号３９）、ＦＹＦＤＬＲ（配列番号４０）、ＨＡＶＤＩ（配列番号３８）、ＰＨＳＲＮ（配列番号４６）、ＰＨＳＲＮＧＧＧＧＧＧＲＧＤＳ（配列番号５５）、ＲＥＤＶ（配列番号４７）、ＧＦＯＧＥＲ（配列番号４１）、Ｐ（ＧＰＰ）５ＧＦＯＧＥＲ（ＧＰＰ）５（配列番号５４）、及びＹＩＧＳＲ（配列番号５０）、又は前記配列の内のいずれかの保存的置換変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１２～２１のいずれか一つに記載のデバイス。

【0313】

２３．前記第１のＣＢＳは、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９）を含む１０個未満のアミノ酸の長さの直鎖ＣＢＰである、実施形態１～２２のいずれか一つに記載のデバイス。

【0314】

２４．前記第１のＣＢＳは、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９）から本質的になる直鎖ＣＢＰである、実施形態１～２２のいずれか一つに記載のデバイス。

【0315】

２５．前記ポリマー組成物は、第２のＣＢＰ－ポリマーを含む第２のＣＢＳを含み、前記第１のＣＢＰ－ポリマー中の前記ＣＢＰは、前記第２のＣＢＰ－ポリマー中の前記ＣＢＰと異なり、前記第１のＣＢＰ－ポリマー中の前記ポリマーは、前記第２のＣＢＰ－ポリマー中の前記ポリマーと同一であるか又は異なる、実施形態１～２４のいずれか一つに記載のデバイス。

【0316】

２６．前記ポリマー組成物は、第１のＣＢＰ－ポリマー、任意選択的な第２のＣＢＰ－ポリマー、及び任意選択的な第３のＣＢＰ－ポリマーを含み、前記ポリマー組成物中における各ＣＢＰ－ポリマー中の前記リンカーは、
（ａ）グリシン及び／又はベータ－アラニンの１～１０個、１～６個、又は１～４個の残基から本質的になる直鎖アミン酸リンカー；
（ｂ）１個、２個、又は３個のグリシン残基から本質的になる直鎖アミノ酸リンカー；
（ｃ）エチレンオキシド、又は２～４個のエチレンオキシドモノマーのオリゴマー；
並びに
（ｄ）アミノカルボキシレート
からなる群から選択される、実施形態１～２５のいずれか一つに記載のデバイス。

【0317】

２７．前記第１のＣＢＰは、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９）から本質的になり、前記リンカーは、単一のグリシン残基から本質的になる、実施形態２６に記載のデバイス。

【0318】

２８．前記ポリマー組成物は、第１のＣＢＰ－ポリマー、及び任意選択的な第２のＣＢＰ－ポリマー、及び任意選択的な第３のＣＢＰ－ポリマーを含み、前記ポリマー組成物中における各ＣＢＰ－ポリマー中の前記ポリマーは、アルギン酸塩、キトサン、ヒアルロン酸塩、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリアクリルアミド、ゼラチン、ポリ（Ｌ－乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（乳酸グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、カルボキシメチルセルロース、又はカルボキシメチルキトサンである、実施形態１～２７のいずれか一つに記載のデバイス。

【0319】

２９．前記第１のＣＢＰ－ポリマー中の前記ポリマーは、アルギン酸塩である、実施形態２８に記載のデバイス。

【0320】

３０．前記アルギン酸塩は、前記第２のＣＢＰ－ポリマー及び前記第３のＣＢＰ－ポリマーの内の一方中の又は両方中の前記ポリマーである、実施形態２８又は２９に記載のデバイス。

【0321】

３１．前記アルギン酸塩は、分子量が７５～１５０ｋＤａであり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上である、実施形態２８～３０のいずれか一つに記載のデバイス。

【0322】

３２．前記細胞含有区画は、前記第１のポリマーと同一であるか又は異なる非修飾ポリマーをさらに含む、実施形態１又は１２～３１のいずれか一つに記載のデバイス。

【0323】

３３．前記細胞含有区画中の前記非修飾ポリマーは、アルギン酸塩、キトサン、ヒアルロン酸塩、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリアクリルアミド、ゼラチン、ポリ（Ｌ－乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（乳酸グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、カルボキシメチルセルロース、又はカルボキシメチルキトサンである、実施形態３２に記載のデバイス。

【0324】

３４．前記ＦＢＲを軽減するための手段は、前記細胞含有区画を取り囲むバリア区画を含む、実施形態１～３３のいずれか一つに記載のデバイス。

【0325】

３５．前記ＦＢＲを軽減するための手段は、前記デバイスの外面上に配置されている第１の抗線維性化合物を含む、実施形態１～３４のいずれか一つに記載のデバイス。

【0326】

３６．前記ＦＢＲを軽減するための手段は、前記細胞含有区画を取り囲むバリア区画を含み、前記バリア区画は、ポリマー（抗線維性ポリマー）に共有結合的に付着した抗線維性化合物を含み、前記抗線維性ポリマー中の前記ポリマーは、前記細胞含有区画中に存在する各ポリマーと同一であるか又は異なる、実施形態１～３５のいずれか一つに記載のデバイス。

【0327】

３７．前記ＦＢＲを軽減するための手段は、前記細胞含有区画を取り囲むバリア区画をさらに含み、前記バリア区画は、ポリマー（抗線維性ポリマー）に共有結合的に付着した第２の抗線維性化合物を含み、前記抗線維性ポリマー中の前記ポリマーは、前記細胞含有区画中に存在する各ポリマーと同一であるか又は異なり、前記第２の抗線維性化合物は、前記第１の抗線維性化合物と同一であるか又は異なる、実施形態３５に記載のデバイス。

【0328】

３８．前記バリア区画は、前記バリア区画中における前記抗線維性ポリマー中の前記ポリマー及び前記細胞含有区画中に存在する各ポリマーと同一であるか又は異なる非修飾ポリマーをさらに含む、実施形態３６又は３７に記載のデバイス。

【0329】

３９．前記バリア区画は、前記非修飾ポリマーと前記抗線維性ポリマーとの混合物を使用して形成されており、任意選択的に、前記抗線維性ポリマー中の前記抗線維性化合物のコンジュゲーション密度は、窒素パーセントに関する燃焼分析（例えば、本明細書の下記の実施例１Ａで説明されている）により決定され、決定された窒素パーセントは、少なくとも２．０％及び９．０％未満であるか、又は３．０％～８．０％、４．０％～７．０％、５．０％～７．０％、若しくは６．０％～７．０％であるか、又は約６．８％である、実施形態３８に記載のデバイス。

【0330】

４０．前記第１及び第２の抗線維性化合物の内の一方又は両方は、式（Ｉ－ａ）：

【化48】

の化合物又はその薬学的に許容可能な塩であり、式中、
Ａは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｎ（ＲＣ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｎ（ＲＤ）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルキレン）－、－Ｎ（ＲＣ）Ｃ（Ｏ）（Ｃ１～Ｃ６－アルケニレン）－、－ＮＣＮ－、－Ｃ（＝Ｎ（ＲＣ）（ＲＤ））Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）ｘ－、－ＯＳ（Ｏ）ｘ－、－Ｎ（ＲＣ）Ｓ（Ｏ）ｘ－、－Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ）－、－Ｐ（ＲＦ）ｙ－、－Ｓｉ（ＯＲＡ）２－、－Ｓｉ（ＲＧ）（ＯＲＡ）－、－Ｂ（ＯＲＡ）－、又は金属であり、これらの各々は、付着基（例えば、本明細書に記載されている付着基）に任意選択的に連結されており、且つ１つ又は複数のＲ１で任意選択的に置換されており；
Ｌ１及びＬ３の各々は、独立して、結合、アルキル、又はヘテロアルキルであり、各アルキル及びヘテロアルキルは、１つ又は複数のＲ２で任意選択的に置換されており；
Ｌ２は、結合であり；
Ｍは、不在であるか、各々が１つ又は複数のＲ３で任意選択的に置換されているアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり；
Ｐは、１つ又は複数のＲ４で任意選択的に置換されているヘテロアリールであり；
Ｚは、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、これらの各々は、１つ又は複数のＲ５で任意選択的に置換されており；
各ＲＡ、ＲＢ、ＲＣ、ＲＤ、ＲＥ、ＲＦ、及びＲＧは、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、アジド、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、１つ又は複数のＲ６で任意選択により置換されているか；
又は
ＲＣ及びＲＤは、これらが付着している窒素原子と一緒に、１つ又は複数のＲ６で任意選択的に置換されている環（例えば５～７員環）を形成し；
各Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は、独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、アジド、オキソ、－ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ１、－Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－ＯＣ（Ｏ）ＲＢ１、－Ｎ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、－Ｎ（ＲＣ１）Ｃ（Ｏ）ＲＢ１、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＣ１）、ＳＲＥ１、Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、－ＯＳ（Ｏ）ｘＲＥ１、－Ｎ（ＲＣ１）Ｓ（Ｏ）ｘＲＥ１、－Ｓ（Ｏ）ｘＮ（ＲＣ１）（ＲＤ１）、－Ｐ（ＲＦ１）ｙ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールであり、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、１つ又は複数のＲ７で任意選択的に置換されており；
各ＲＡ１、ＲＢ１、ＲＣ１、ＲＤ１、ＲＥ１、及びＲＦ１は、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、又はヘテロアリールであり、各アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールは、１つ又は複数のＲ７で任意選択的に置換されており；
各Ｒ７は、独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、ハロゲン、シアノ、オキソ、ヒドロキシル、シクロアルキル、又はヘテロシクリルであり；
ｘは、１又は２であり；
ｙは、２、３、又は４である、
実施形態３６～３９のいずれか一つに記載のデバイス。

【0331】

４１．式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ－ｂ）、（Ｉ－ｃ）、（Ｉ－ｄ）、（Ｉ－ｅ）、（Ｉ－ｆ）、（ＩＩ）、（ＩＩ－ａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ－ａ）、（ＩＩＩ－ｂ）、（ＩＩＩ－ｃ）、又は（ＩＩＩ－ｄ）の内のいずれか一つの化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である、実施形態１～３９のいずれか一つに記載のデバイス。

【0332】

４２．前記第１の抗線維性化合物は、表４で示されている化合物１００、化合物１０１、化合物１１０、化合物１１２、化合物１１３、又は化合物１１４であり、任意選択的に、前記抗線維性ポリマー中の前記第１の抗線維性化合物のコンジュゲーション密度は、
（ａ）例えば本明細書の下記の実施例１Ａで説明されている、窒素パーセントに関する燃焼分析により決定され、決定された窒素パーセントは、少なくとも２．０％及び９．０％未満であるか、又は３．０％～８．０％、４．０％～７．０％、５．０％～７．０％、若しくは６．０％～７．０％であるか、又は約６．８％であるか、
又は
（ｂ）例えば本明細書の下記の実施例２６で説明されている、定量的遊離アミン分析により決定され、決定されたコンジュゲーション密度は、１．０ｗ／ｗ％～３．０ｗ／ｗ％、１．３ｗ／ｗ％～２．８ｗ／ｗ％、１．３ｗ／ｗ％～２．６ｗ／ｗ％、１．５ｗ／ｗ％～２．４ｗ／ｗ％、１．５ｗ／ｗ％～２．２ｗ／ｗ％、若しくは１．７ｗ／ｗ％～２．２ｗ／ｗ％である、
実施形態３５～４１のいずれか一つに記載のデバイス。

【0333】

４３．前記第２の抗線維性化合物は、表４で示されている化合物１００、化合物１０１、化合物１１０、化合物１１２、化合物１１３、又は化合物１１４である、実施形態３７～４２のいずれか一つに記載のデバイス。

【0334】

４４．前記第１の抗線維性化合物は、表４で示されている化合物１００である、実施形態３５～４３のいずれか一つに記載のデバイス。

【0335】

４５．前記第１の抗線維性化合物は、表４で示されている化合物１００ではない、実施形態３５～４３のいずれか一つに記載のデバイス。

【0336】

４６．前記第１及び第２の抗線維性化合物の各々は、表４で示されている化合物１０１である、実施形態３７～４３のいずれか一つに記載のデバイス。

【0337】

４７．前記バリア区画中に存在する各ポリマーは、アルギン酸塩、キトサン、ヒアルロン酸塩、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリアクリルアミド、ゼラチン、ポリ（Ｌ－乳酸）（ＰＬＬＡ）、又はポリ（乳酸グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルキトサンである、実施形態３７～４６のいずれか一つに記載のデバイス。

【0338】

４８．前記バリア区画中における各抗線維性ポリマー中の前記ポリマーは、分子量が＜７５ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上であるアルギン酸塩である、実施形態３６～４７のいずれか一つに記載のデバイス。

【0339】

４９．前記バリア区画中の前記非修飾ポリマーは、分子量が１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上であるアルギン酸塩である、実施形態３８～４８のいずれか一つに記載のデバイス。

【0340】

５０．前記細胞含有区画は、ＣＢＰ－ポリマーから形成されており、前記ＣＢＰ－ポリマーは、分子量が７５ｋＤａ～１５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上であるアルギン酸塩に共有結合的にコンジュゲートしたＧ１～３ＲＧＤ（配列番号６３）又はＧ１～３ＲＧＤＳＰ（配列番号６４）から本質的になり、且つＣＢＰ－コンジュゲーション密度が、
（ａ）例えば本明細書で説明されているアッセイにより決定した場合に、前記細胞の生存率を増加させるのに十分な量（任意選択的に、前記量は、最適な量である）；
（ｂ）例えば本明細書で説明されているアッセイにより決定した場合に、前記細胞の産生性を増加させるのに十分な量（任意選択的に、前記量は、最適な量である）；
（ｃ）例えば本明細書の下記の実施例１Ｂで説明されている、一定重量に凍結乾燥されている前記ＣＢＰ－ポリマーの燃焼分析により決定した場合に、０．１０％の窒素（Ｎ）～１．００％のＮ、約０．２０％のＮ～約０．８０％のＮ、約０．３０％のＮ～約０．６０％のＮ、約０．３０％～約０．５０％、若しくは０．３３％のＮ～０．４６％のＮ；
（ｄ）溶液中の前記ＣＢＰ－ポリマー１グラム当たりＧ１～３ＲＧＤ（配列番号６３）若しくはＧ１～３ＲＧＤＳＰ（配列番号６４）０．１～１．０、０．２～０．８、０．３～０．７、若しくは０．３～０．６マイクロモル；
又は
（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）の内の２つ以上の任意の組み合わせ
の内の少なくとも１つである、実施形態１又は１１～４９のいずれか一つに記載のデバイス。

【0341】

５１．前記細胞含有区画及びバリア区画は、２区画ヒドロゲルカプセルを形成する、実施形態３４～４９のいずれか一つに記載のデバイス。

【0342】

５２．前記細胞含有区画及びバリア区画は、体積がほぼ等しい、実施形態５０又は５１に記載のデバイス。

【0343】

５３．前記バリア区画の厚さは、
（ａ）１ナノメートル及び１ミリメートル；
（ｂ）１００ナノメートル及び１ミリメートル；
並びに
（ｃ）５００ナノメートル及び５００マイクロメートル
からなる群から選択される範囲内である、実施形態３４～５１のいずれか一つに記載のデバイス。

【0344】

５４．前記デバイスは、最大線形寸法（ＬＬＤ）（例えば直径）が５００ナノメートル～５ミリメートルである、実施形態１～５３のいずれか一つに記載のデバイス。

【0345】

５５．前記デバイスは、球状の形状を有し、且つ最大線形寸法（ＬＬＤ）（例えば直径）が０．５ミリメトール～５ミリメートルであり、例えば、０．７５ミリメートル～４ミリメートル、１ミリメートル～３ミリメートル、１ミリメートル～２ミリメートル、約１．５ミリメートル～２ミリメートル、又は約１．５ミリメートルである、実施形態１～５４のいずれか一つに記載のデバイス。

【0346】

５６．下記：
ａ）前記細胞含有区画中の前記複数の細胞（例えば生細胞）は、少なくとも１００個；２５０個；５００個；７５０個；１，０００個；２，５００個；５，０００個；１０，０００個；２５，０００個；又は５０，０００個の細胞である；
ｂ）前記バリア区画は、前記ＣＢＳ及び前記細胞を実質的に含まない；
並びに
ｃ）前記細胞含有区画は、あらゆる抗線維性化合物を実質的に含まない
から選択される１つ又は複数の特性を含む実施形態３５～５５のいずれか一つに記載のデバイス。

【0347】

５７．
（ａ）前記細胞含有区画及び前記バリア区画は、２区画ヒドロゲルカプセルを形成し；
（ｂ）前記細胞含有区画中の前記第１のＣＢＰポリマーは、前記第１のポリマーとしての、分子量が１５０～２５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上であるアルギン酸塩と、前記リンカーとしての単一のグリシン残基と、前記第１のＣＢＰとしての、ＲＧＤＳＰ（配列番号５９）からなる直鎖ペプチドとから本質的になり；
（ｃ）前記バリア区画中における前記抗線維性ポリマー中の前記ポリマーは、分子量が７５ｋＤａ未満であり且つＧ：Ｍ比が１．５以上であるアルギン酸塩であり、前記抗線維性化合物は、表４で示されている化合物１０１であり；
並びに
（ｄ）前記バリア区画は、分子量が１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上である非修飾アルギン酸塩をさらに含む、
実施形態３５～５６のいずれか一つに記載のデバイス。

【0348】

５８．前記バリア区画は、７０：３０の比の（ｉ）０．９％生理食塩水に５重量／体積％で溶解した前記抗線維性アルギン酸塩及び（ｉｉ）０．９％生理食塩水に３重量／体積％で溶解した前記非修飾アルギン酸塩から本質的になるアルギン酸塩溶液から形成されている、実施形態５６に記載のデバイス。

【0349】

５９．前記複数の細胞は、前記治療薬を発現するように、細胞株から組み換えられており、前記細胞株は、内皮細胞株、上皮細胞株、線維芽細胞株、ケラチン生成細胞株、又は間葉細胞株である、実施形態１～５８のいずれか一つに記載のデバイス。

【0350】

６０．前記細胞株は、表５で列挙されている細胞株から選択される、実施形態４６に記載のデバイス。

【0351】

６１．前記複数の細胞は、組み換えＲＰＥ細胞である、実施形態１～５８のいずれか一つに記載のデバイス。

【0352】

６２．前記複数の細胞は、組み換えＡＲＰＥ－１９細胞である、実施形態１～５８のいずれか一つに記載のデバイス。

【0353】

６３．前記治療薬は、第ＶＩＩＩ因子タンパク質若しくはその変異体、又は第ＩＸ因子タンパク質若しくはその変異体である、実施形態１～６２のいずれか一つに記載のデバイス。

【0354】

６４．前記デバイスは、２個以上の細胞含有区画を含む、実施形態１～６３のいずれか一つに記載のデバイス。

【0355】

６５．移植後第１の時点（例えば、少なくとも７日、２週間、４週間、８週間、又は１６週間）で前記細胞により発現された前記治療薬の量は、同一の治療薬を発現し得るＣＢＣなしの参照デバイスによりその時点で発現された場合と比べて少なくとも１．２５倍、１．５倍、２倍（４倍、６倍、８倍、又は１０倍）多い、実施形態１～６４のいずれか一つに記載のデバイス。

【0356】

６６．ヒドロゲルカプセルであって、
（ａ）第１のＲＧＤ－ポリマーを含む第１のポリマー組成物中でカプセル化された複数の細胞（例えば生細胞）を含む細胞含有区画であって、前記カプセル化細胞は、外因性のポリペプチドを発現し、任意選択的に、前記複数の細胞の濃度は、前記第１のポリマー組成物１ｍｌ当たり４千万個の細胞である、細胞含有区画と、
（ｂ）前記細胞結合区画を取り囲み且つ第２のポリマー組成物を含むバリア区画であって、前記第２のポリマー組成物は、非修飾アルギン酸塩と、表４で示されている化合物１００、化合物１０１、化合物１１０、化合物１１２、化合物１１３、及び化合物１１４からなる群から選択される少なくとも１種の化合物で共有結合的に修飾されたアルギン酸塩との混合物を含む、バリア区画と
を含み、
前記ヒドロゲルカプセルは、球状の形状であり、且つ直径が０．５ミリメートル～５ミリメートルであり、任意選択的に、前記バリア区画の平均厚は、約１０～約３００ミクロン、約２０～約１５０ミクロン、又は約４０～約７５ミクロンである、
ヒドロゲルカプセル。

【0357】

６７．前記外因性のポリペプチドの発現の増加に有効な量の前記第１のＲＧＤ－ポリマーを含み、前記第１のＲＧＤ－ポリマーは、リンカーを介してＲＧＤペプチドで共有結合的に修飾されたアルギン酸塩から本質的になり、前記細胞含有区画は、あらゆる抗線維性化合物を実質的に含まず、前記バリア区画は、細胞及びＲＧＤペプチドを実質的に含まず、任意選択的に、前記ＲＧＤ－ポリマーの有効量は、最適な量である、実施形態６６に記載のヒドロゲルカプセル。

【0358】

６８．前記ＲＧＤペプチドは、ＲＧＤ（配列番号４３）又はＲＧＤＳＰ（配列番号５９）のアミノ酸配列から本質的になり、前記リンカーは、前記ＲＧＤペプチドのＮ末端に付着している単一のグリシン残基又は単一のベータ－アラニン残基である、実施形態６６又は６７に記載のヒドロゲルカプセル。

【0359】

６９．
（ａ）前記第１のＲＧＤ－ポリマー中の前記ポリマーは、アルギン酸塩であり、分子量が１５０～２５０ｋＤａであり且つＧ：Ｍ比が１．５以上であり、任意選択的に、前記細胞含有区画は、約９０ｃＰと、約２３０ｃＰ～約３００、３５０、若しくは４００ｃＰとの間、又は約８０～約１２０ｃＰの粘度のアルギン酸塩溶液から形成されており；
（ｂ）前記バリア区画中における前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩中の前記アルギン酸塩は、分子量が＜７５ｋＤａであり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上であり；
（ｃ）前記バリア区画中の前記非修飾アルギン酸塩は、分子量が１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａであり、且つＧ：Ｍ比が１．５以上であり、
（ｄ）任意選択的に、前記バリア区画は、前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩と非修飾アルギン酸塩との混合物を含み且つ粘度が２５０～３５０ｃＰであるアルギン酸塩溶液から形成されている、
実施形態６７又は６８に記載のヒドロゲルカプセル。

【0360】

７０．
（ａ）前記カプセルは、直径が約１．０ミリメートル～２．０ミリメートルであり；
（ｂ）前記アルギン酸塩上の前記ＲＧＤペプチドのコンジュゲーション密度は、一定量に凍結乾燥されている前記ＲＧＤ－ポリマーの燃焼分析（例えば、本明細書の実施例１Ｂで説明されている）により決定された窒素パーセントであり、決定された窒素パーセントは、約０．１０％の窒素（Ｎ）～１．００％のＮ、約０．２０％のＮ～約０．８０％のＮ、約０．３０％のＮ～約０．６０％のＮ、約０．３０％～約０．５０％、又は０．３３％のＮ～０．４６％のＮであり；
（ｃ）前記バリア区画中の前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩は、化合物１０１のみで修飾されており、前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩中の化合物１０１の密度は、例えば本明細書の実施例１Ａで説明されている、一定量に凍結乾燥されている前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩の燃焼分析により決定された窒素パーセントであり、決定された窒素パーセントは、少なくとも２．０％及び９．０％未満であるか、又は３．０％～８．０％、４．０％～７．０％、５．０％～７．０％、若しくは６．０％～７．０％であるか、又は約６．８％である、
実施形態６９に記載のヒドロキシカプセル。

【0361】

７１．
（ａ）前記複数の細胞は、組み換えＲＰＥ細胞であり、例えば、組み換えＡＲＰＥ－１９細胞であり：
（ｂ）前記カプセルは、直径が約１．５ミリメトールであり；
（ｃ）前記ＲＧＤペプチドは、ＲＧＤＳＰ（配列番号５９）のアミノ酸配列から本質的になり、前記リンカーは、単一のグリシン残基であり；
（ｄ）前記アルギン酸塩上の前記ＲＧＤペプチドのコンジュゲーション密度は、
（ｉ）例えば本明細書で説明されているアッセイにより決定した場合に、前記細胞の生存率を増加させるのに十分な量；
（ｉｉ）例えば本明細書で説明されているアッセイにより決定した場合に、前記細胞の産生性を増加させるのに十分な量；
（ｉｉｉ）一定重量に凍結乾燥されている前記ＲＧＤ－ポリマーの燃焼分析（例えば本明細書の実施例１Ｂで説明されている）により決定され、約０．１０％の窒素（Ｎ）～１．００％のＮ、約０．２０％のＮ～約０．８０％のＮ、約０．３０％のＮ～約０．６０％のＮ、約０．３０％～約０．５０％、又は０．３３％のＮ～０．４６％のＮである決定した窒素パーセント；
（ｉｖ）例えば本明細書の実施例２５で説明されているように、溶液中のＲＧＤ－ポリマー１グラム当たりＧＲＧＤＳＰ０．１～１．０、０．２～０．８、０．３～０．７、又は０．３～０．６マイクロモル；
並びに
（ｖ）ｄ（ｉ）、ｄ（ｉｉ）、ｄ（ｉｉｉ）、及びｄ（ｉｖ）の内の２つ以上の任意の組み合わせ
からなる群から選択され、
（ｅ）前記バリア区画中の前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩は、化合物１０１のみで修飾されており、前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩中の化合物１０１の密度は、
（ｉ）例えば本明細書の実施例１Ａで説明されている、一定量に凍結乾燥されている前記共有結合的に修飾されたアルギン酸塩の燃焼分析により決定された窒素パーセントであり、決定された窒素パーセントは、少なくとも２．０％及び９．０％未満であるか、又は３．０％～８．０％、４．０％～７．０％、５．０％～７．０％、若しくは６．０％～７．０％であるか、又は約６．８％であるか；
又は
（ｉｉ）例えば本明細書の実施例２７で説明されている、定量的遊離アミン分析により決定された重量／重量ベースの％アミンであり、決定された密度は、１．０ｗ／ｗ％～３．０ｗ／ｗ％、１．３ｗ／ｗ％～２．８ｗ／ｗ％、１．３ｗ／ｗ％～２．６ｗ／ｗ％、１．５ｗ／ｗ％～２．４ｗ／ｗ％、１．５ｗ／ｗ％～２．２ｗ／ｗ％、又は１．７ｗ／ｗ％～２．２ｗ／ｗ％である、
実施形態７０に記載のヒドロゲルカプセル。

【0362】

７２．前記複数の細胞は、ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質（配列番号１）を発現するように組み換えられたＡＲＰＥ－１９細胞である、実施形態７１に記載にヒドロゲルカプセル。

【0363】

７３．前記ＡＲＰＥ－１９細胞は、配列番号１５を含み、配列番号１５は、任意選択的に、ＣＡＧプロモーターヌクレオチド配列（例えば、配列番号２６のヌクレオチド３３７～２０６９）に動作可能に連結されている、実施形態７２に記載のヒドロゲルカプセル。

【0364】

７４．前記ＲＧＤ－ポリマー中の前記アルギン酸塩上の前記ＲＧＤペプチドのコンジュゲーション密度は、溶液中のＲＧＤ－ポリマー１グラム当たりＧＲＧＤＳＰ０．３～０．６マイクロモルである、７２又は７３に記載のヒドロゲルカプセル。

【0365】

７５．前記複数の細胞は、少なくとも１，０００個、２，５００個、５，０００個、１０，０００個、２５，０００個、又は５０，０００個のＲＰＥ細胞である、実施形態６６～７４のいずれか一つに記載のヒドロゲルカプセル。

【0366】

７６．デバイスの調製物であって、前記調製物中の各デバイスは、実施形態１～６５のいずれか一つに記載のデバイスであるか、又は実施形態６６～７５のいずれか一つに記載のヒドロゲルカプセルである、調製物。

【0367】

７７．前記調製物中の各デバイスは、直径が０．５ミリメートル～２ミリメートル；０．７ミリメートル～１．８ミリメートル、１．０ミリメートル～１．８ミリメートル；１．２ミリメートル～１．７ミリメートル；１．３ミリメートル～１．７ミリメートル；及び１．４～１．６ミリメートルからなる群から選択される球状のヒドロゲルカプセルである、実施形態７６に記載の調製物。

【0368】

７８．前記調製物は、薬学的に許容可能な組成物である、実施形態７６又は７７に記載の調製物。

【0369】

７９．対象にデバイスを移植する方法であって、
本明細書で説明されているデバイス又はデバイスの調製物、例えば、実施形態１～６５のいずれか一つに記載のデバイス、実施形態６６～７５のいずれか一つに記載のヒドロゲルカプセル、又は実施形態７６～７８のいずれか一つに記載の調製物を準備すること、
及び
前記対象の身体に前記デバイス又は調製物を配置すること
を含む方法。

【0370】

８０．対象に治療薬を提供する方法であって、
本明細書で説明されているデバイス又はデバイスの調製物、例えば、実施形態１～６５のいずれか一つに記載のデバイス、実施形態６６～７５のいずれか一つに記載のヒドロゲルカプセル、又は実施形態７６～７８のいずれか一つに記載の調製物を準備すること、
及び
前記対象の身体に前記デバイス又は調製物を配置すること
を含む方法。

【0371】

８１．例えば対象においてデバイスを評価する方法であって、
本明細書で説明されているデバイス、例えば、実施形態１～６５のいずれか一つに記載のデバイス、又は実施形態６６～７５のいずれか一つに記載のヒドロゲルカプセルを準備すること、
及び
前記対象の身体に前記デバイス又は調製物を配置すること
を含む方法。

【0372】

８２．治療薬が必要な対象を処置する方法であって、
本明細書で説明されているデバイス又はデバイスの調製物、例えば、実施形態１～６５のいずれか一つに記載のデバイス、実施形態６６～７５のいずれか一つに記載のヒドロゲルカプセル、又は実施形態７６～７８のいずれか一つに記載の調製物を準備すること、
及び
前記対象の身体に前記デバイス又は調製物を配置すること
を含む方法。

【0373】

８３．本明細書で開示されているデバイス又はヒドロゲルカプセルを製造する方法であって、
前記デバイス又はヒドロゲルカプセルの第１の成分と、前記デバイス又はヒドロゲルカプセルの第２の成分とを組み合わせること
を含み、それにより、本明細書で開示されているデバイス又はヒドロゲルカプセルが製造される、方法。

【0374】

８４．本明細書で開示されているデバイス又はヒドロゲルカプセルの調製物を製造する方法であって、
デバイス又はヒドロゲルカプセルと、別の成分、例えば、緩衝液、キャリア、又は賦形剤とを組み合わせること
を含み、それにより、本明細書で開示されているデバイス又はヒドロゲルカプセルが製造される、方法。

【0375】

８５．本明細書で開示されているデバイス若しくはヒドロゲルカプセル又はそれらの調製物を製造する方法であって、
本明細書で説明されているデバイス若しくはヒドロゲルカプセル又はそれらの調製物を供給すること、
例えば測定することにより、前記デバイス若しくはヒドロゲルカプセル又はそれらの調製物の成分又は特性と関連するパラメータ（例えば、サイズ、成分の存在又は量、生物学的特性、成分の生存率）の値を求めること
を含み、それにより、本明細書で開示されているデバイス又はヒドロゲルカプセルが製造される、方法。

【0376】

８６．本明細書で開示されているデバイス若しくはヒドロゲルカプセル又はそれらの調製物を評価する方法であって、
本明細書で説明されているデバイス若しくはヒドロゲルカプセル又はそれらの調製物を供給すること、
例えば測定することにより、前記デバイス又はヒドロゲルカプセルの成分又は特性と関連するパラメータ（例えば、サイズ、成分の存在又は量、生物学的特性、成分の生存率）の値を求めること
を含み、それにより、本明細書で開示されているデバイス若しくはヒドロゲルカプセル又はそれらの調製物が評価される、方法。

【実施例】

【0377】

本明細書に記載の本開示がより完全に理解され得るよう、以下の実施例が記載されている。本出願に記載されている実施例は、本明細書において提供されているデバイス（例えば、カプセル、粒子、化学修飾、組成物及び方法を例示するために提供されており、如何様にもその範囲を限定すると解釈されるべきではない。

【0378】

実施例１：例示的な修飾ポリマーの調製
１Ａ．化学修飾ポリマー。当該技術分野で既知の方法を使用して、ポリマー材料を、本明細書で説明されているデバイス（例えば、本明細書で説明されているヒドロゲルカプセル）の形成前に、式（Ｉ）の化合物（又はその薬学的に許容可能な塩）で化学的に修飾し得る。

【0379】

例えば、アルギン酸塩の場合、アルギン酸塩カルボン酸が、抗線維化化合物（ａｆｉｂｒｏｔｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、例えば、式（Ｉ）の化合物で修飾されたアルギン酸塩を得るために１つ又は複数のアミン官能化化合物に対するカップリングのために活性化される。アルギン酸塩ポリマーを、水（３０ｍＬ／グラムポリマー）に溶解させ、２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（０．５当量）Ｎ－メチルモルホリン（１当量）で処理する。この混合物に、アセトニトリル（０．３Ｍ）中の対象とする化合物（例えば、表４に示される化合物１０１）の溶液を添加する。目的の化合物を、当該技術分野で既知の方法（例えば、全体が参照に本明細書に組み込まれる国際公開第２０１８／０６７６１５号パンフレットで説明されている）を使用して調製し得る。

【0380】

添加される化合物及びカップリング試薬の量は、アルギン酸塩に結合される化合物の所望の濃度、例えば、結合密度に応じて決まる。ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍポリマー溶液を調製するために、溶解された非修飾低分子量アルギン酸塩（およその分子量＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）を、２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（５．１ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及びＮ－メチルモルホリン（１０．２ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及び化合物１０１（５．４ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）で処理する。ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈポリマー溶液を調製するために、溶解された非修飾低分子量アルギン酸塩（およその分子量＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）を、２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（５．１ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及びＮ－メチルモルホリン（１０．２ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）及び化合物１０１（５．４ｍｍｏｌ／ｇアルギン酸塩）で処理する。

【0381】

反応を５５℃に１６時間温め、次いで室温に冷却し、ロータリー蒸発で穏やかに濃縮し、次いで、残渣を水に溶解させる。混合物をシアノ修飾シリカゲル（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ）ベッドを通してろ過し、ろ過ケーキを水で洗浄する。次いで、得られる溶液を、十分に透析し（１０，０００ＭＷＣＯメンブラン）、アルギン酸塩溶液を、凍結乾燥によって濃縮して、所望の化学修飾アルギン酸塩を固体として得るか、又は２５ｃＰ～３５ｃＰの粘度を有する化学修飾アルギン酸塩溶液を生成するのに好適な任意の技術を用いて濃縮する。

【0382】

いくつかの実施形態において、化学修飾アルギン酸塩の結合密度を、窒素パーセントの燃焼分析によって測定する。化学修飾アルギン酸塩の溶液を、水に対して２４時間透析し（１０，０００ＭＷＣＯメンブラン）、水を２回交換した後、一定重量になるまで凍結乾燥することによって、サンプルを調製する。

【0383】

別の実施形態において、化学修飾アルギン酸塩のコンジュゲーション密度を、下記の実施例２７で説明する定量的アミンアッセイを使用して決定する。

【0384】

下記の実施例で説明するヒドロゲルカプセルの生成での使用のために、化学修飾アルギン酸塩ポリマーを、窒素パーセントに関する燃焼分析により決定した場合に中程度（２％～５％のＮ）密度又は高（５．１％～８％のＮ）密度で低分子量アルギン酸塩（約ＭＷ＜７５ｋＤａ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）にコンジュゲートした化合物１０１（表４で示されている）で調製し、本明細書ではＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ及びＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈと称する。別途明記されない限り、下記の実施例で作られるカプセル中の化学修飾アルギン酸塩は、ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍである。

【0385】

１Ｂ．ＣＢＰ－アルギン酸塩。当該技術分野で既知の方法を使用して、ポリマー材料を、本明細書で説明されているデバイス（例えば、本明細書で説明されているヒドロゲルカプセル）の形成前に、ペプチドで共有結合的に修飾し得る（例えば、Ｊｅｏｎ Ｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ Ｐａｒｔ Ａ．１６：２９１５－２９２５（２０１０）及びＲｏｗｌｅｙ，Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０：４５－５３（１９９９）を参照されたい）。

【0386】

例えば、アルギン酸塩の場合には、ｐＨ６．５にて、０．５Ｍ ＮａＣｌを含む５０ｍＭの２－（Ｎ－モルホリノ）－エタンスルホン酸水和物緩衝溶液で、アルギン酸塩溶液（１％、ｗ／ｖ）を調製し、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド及び１－エチル－３－［３－（ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミド（ＥＤＣ）と順次混合する。Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド対ＥＤＣのモル比は、０．５：１．０である。このアルギン酸塩溶液に、目的のペプチドを添加する。添加するペプチド及びカップリング試薬の量は、アルギン酸塩に結合するペプチドの所望の濃度（例えば、ペプチドコンジュゲーション密度）に依存する。ペプチド及びカップリング試薬の量を増加させることにより、より高いコンジュゲーション密度を得ることができる。２４時間にわたる反応後、この反応を、３日にわたる超高純度脱イオン水（ｄｉＨ２Ｏ）（ＭＷＣＯ ３５００）に対する透析により精製し、３０分にわたり活性炭で処理し、ろ過し（０．２２ｍｍフィルタ）、所望の粘度まで濃縮する。

【0387】

ある実施形態において、ペプチド修飾アルギン酸塩のコンジュゲーション密度を、窒素パーセントに関する燃焼分析で測定する。２４時間にわたり水に対してペプチド修飾アルギン酸塩の溶液を透析し（１０，０００ ＭＷＣＯ膜）、水を２回交換し、続いて一定重量まで凍結乾燥させることにより、サンプルを調製する。

【0388】

別の実施形態において、ペプチド修飾アルギン酸塩のコンジュゲーション密度を、実施例２５及び任意選択的な２６で説明されている定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイを使用して測定する。

【0389】

実施例２：ヒドロゲルカプセルを作成するための例示的なアルギン酸塩溶液の調製
化学修飾及び非修飾アルギン酸塩の７０：３０混合物。低分子量アルギン酸塩（ＰＲＯＮＯＶＡ（商標）ＶＬＶＧアルギン酸塩、ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ（登録商標）、ｃａｔ．＃４２００５０６、およそのＭＷ＜７５ｋＤａ；Ｇ：Ｍ比≧１．５）を、表４中の化合物１０１で化学修飾して、２５ｃｐ～３５ｃＰの粘度を有する化学修飾低分子量アルギン酸塩溶液（ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１）を生成した。高分子量非修飾アルギン酸塩（Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ）の溶液を、０．９％の生理食塩水に重量体積比３％で非修飾アルギン酸塩（ＰＲＯＮＯＶＡ（商標）ＳＬＧ１００，ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ，Ｓａｎｄｖｉｋａ，Ｎｏｒｗａｙ，ｃａｔ．＃４２０２１０６、１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａのおよそのＭＷ、Ｇ：Ｍ比≧１．５）を溶解させることによって調製した。ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ溶液を、７０％のＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ対３０％のＵ－ＨＭＷ－Ａｌｇの体積比のＵ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液（本明細書において７０：３０のＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液と呼ばれる）と混合した。

【0390】

化学修飾アルギン酸塩及び非修飾アルギン酸塩の６０：４０混合物。この溶液を、６０％ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１対４０％ Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇの体積比でＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１溶液とＵ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液とをブレンドした（本明細書では、６０：４０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液と称する）ことを除いて、上記の７０：３０混合物と同一の手順を使用して調製した。

【0391】

非修飾アルギン酸塩溶液。非修飾中間分子量アルギン酸塩（ＳＬＧ２０，ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ，Ｓａｎｄｖｉｋａ，Ｎｏｒｗａｙ，ｃａｔ．＃４２０２００６、７５～１５０ｋＤａのおよその分子量）を、０．９％の生理食塩水に重量体積比１．４％で溶解させて、Ｕ－ＭＭＷ－Ａｌｇ溶液を調製した。

【0392】

細胞結合部位を含むアルギン酸塩溶液。ＣＢＰ－アルギン酸塩、又は細胞結合タンパク質と非修飾アルギン酸塩との混合物を含む様々なアルギン酸塩溶液を、下記の表６で要約するように調製した。

【0393】

【表7】

【0394】

【表8】

【0395】

全ての非修飾アルギン酸塩及びペプチド修飾アルギン酸塩を、別途述べられていない限り、ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ（登録商標），Ｓａｎｄｖｉｋａ Ｎｏｒｗａｙから購入した。コラーゲンＩを、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，カタログ番号３５４２３６（Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｔｙｐｅ Ｉ，Ｒａｔ Ｔａｉｌ），Ｏｎｅｏｎｔａ，ＮＹから購入した。ＨＡを、Ｌｉｆｅｃｏｒｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，カタログ番号ＨＡ７００Ｋ（ＭＷ＝５００ｋＤａ～７４９ｋＤａ），ＣｈａｓｋａＭＮ）から購入した。

【0396】

実施例３：１区画ヒドロゲルミリカプセル又は２区画ヒドロゲルミリカプセルでのカプセル化のための例示的細胞の調製
３Ａ．単一細胞としてのカプセル化のための組み換えＡＲＰＥ－１９細胞
治療薬（例えば、血液凝固因子（例えば、ＦＶＩＩＩタンパク質又はＦＩＸタンパク質））を発現するように組み換えられたＡＲＰＥ－１９細胞を、当該技術分野で既知の任意の方法に従って培養し得、例えば、下記のプロトコルに従って培養し得る。

【0397】

７５ｃｍ２の培養フラスコ中の組み換えＡＲＰＥ－１９細胞を吸引して、培養培地を除去し、細胞層を、０．０５％（ｗ／ｖ）のトリプシン／０．５３ｍＭのＥＤＴＡ溶液（「ＴｒｙｐｓｉｎＥＤＴＡ」）で短時間すすいで、トリプシン阻害剤を含有する血清を全て除去した。２～３ｍＬのトリプシン／ＥＤＴＡ溶液を、フラスコに添加し、細胞を、細胞層が分散されるまで、通常、５～１５分間、倒立顕微鏡で観察した。凝集を避けるために、細胞を慎重に取り扱い、分散期間中フラスコをぶつけたり又は振ったりするのを最小限に抑えた。細胞が脱離しなかった場合、フラスコを３７℃に置いて、分散を促進した。細胞が分散したら、６～８ｍＬの完全成長培地を添加し、細胞を、穏やかなピペッティングによって吸引した。細胞懸濁液を遠心分離管に移し、５～１０分間にわたって約１２５×ｇで遠沈して、ＴｒｙｐｓｉｎＥＤＴＡを除去した。上清を廃棄し、細胞を新鮮な成長培地に再懸濁させた。適切な分量の細胞懸濁液を新たな培養容器に添加し、これを３７℃でインキュベートした。培地を週に２～３回取り替えた。

【0398】

３Ｂ．クラスターとしてカプセル化するためのＡＲＰＥ－１９細胞
例示的な細胞（例えば、組み換えＡＲＰＥ－１９細胞）のスフェロイドクラスターを、ＡｇｇｒｅＷｅｌｌ（商標）スフェロイドプレート（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び本明細書に概説されるプロトコルを用いて調製した。１日目に、すすぎ液（４ｍＬ）を各プレートに添加し、プレートを大型の遠心分離機において３，０００ＲＰＭで５分間にわたって遠沈した。すすぎ液をピペットによって除去し、４ｍＬの完全成長培地を添加した。組み換えＡＲＰＥ－１９細胞を所望の細胞密度でプレートに播種し、ウェル当たり３９０万個の細胞が直径１５０μｍのクラスターを生じるという一般的な経験則を踏まえて、凝集を防ぐために直ぐにピペッティングした。プレートを８００ＲＰＭで３分間にわたって遠沈し、プレートを、３７℃で一晩、培養器に入れた。

【0399】

２日目に、プレートをインキュベーションから取り外す。広径ピペットチップを用いて、細胞を穏やかにピペッティングして、スフェロイドクラスターを取り除く。クラスターを、４０μｍ又は８０μｍのセルストレーナーに通してろ過して、外部の脱離した単一細胞を除去し、次に、２×１分間にわたって遠心分離機中で遠沈する。クラスターを、広径ピペットチップを用いて穏やかに再懸濁させ、穏やかに撹拌して、培地又は別の材料（例えば、アルギン酸塩）全体にわたってそれらを分配する。

【0400】

或いは、ＡＲＰＥ－１９スフェロイドは、以下のプロトコルを用いて調製される。１日目に、ＡｇｇｒｅＷｅｌｌ（商標）プレートを、滅菌した組織培養フード中の包装から取り出す。２ｍＬのＡｇｇｒｅｗｅｌｌ（商標）すすぎ液を各ウェルに添加する。プレートを、５分間にわたって２，０００ｇで遠心分離して、気泡を除去し、ＡｇｇｒｅＷｅｌｌ（商標）すすぎ液をウェルから除去する。各ウェルを２ｍＬの完全成長培地ですすぎ、２００万個の組み換えＡＲＰＥ－１９細胞を３．９ｍＬの完全成長培地中に、各ウェルに添加する。プレートを、３分間にわたって１００ｇで遠心分離し、次に、細胞を、３７℃で４８時間インキュベートする。３日目に、上記と同じプロトコルを用いて、スフェロイドクラスターを取り除く。

【0401】

或いは、下記のプロトコルと共にＰＢＳ ＭＩＮＩバイオリアクタ（ＰＢＳ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、ＡＲＰＥ１９スフェロイドを調製する。細胞培養培地及び２億２千万個のＡＲＰＥ１９細胞を、ＰＢＳ ０．１Ｌ容器又はＰＢＳ ０．５Ｌ容器に入れ、次いで、この容器をベースユニットに挿入して培養器に入れる。ＰＢＳ ＭＩＮＩ速度調整ダイアルを４０ｒｐｍに設定し、この容器を少なくとも４８時間にわたり３７℃でインキュベートした後、上記で説明したようにスフェロイドを採取した。

【0402】

実施例４：下記の実施例で使用するヒドロゲルカプセルの調製
単一細胞としてＲＰＥ細胞をカプセル化するカプセル。カプセル化の直前に、治療用タンパク質を発現するように組み換えられた単一ＡＲＰＥ－１９細胞を、１分にわたり１，４００ｒ．ｐ．ｍで遠心分離し、カルシウムフリーＫｒｅｂｓ－Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）緩衝液（４．７ｍＭ ＫＣｌ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１．２ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ４×７Ｈ２Ｏ、１３５ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ≒７．４、約２９０ｍＯｓｍ）で洗浄した。洗浄後、この細胞を再度遠心分離し、上清の全てを吸引した。いくつかの実験では、次いで、細胞ペレットを、アルギン酸塩溶液 １ｍｌ当たり懸濁単一細胞の所望の密度で、実施例２で説明されている７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液（対照カプセル）に再懸濁させるか、又は実施例２の表６で説明されている修飾アルギン酸塩溶液の内の１つに再懸濁させた。

【0403】

１区画ヒドロゲルカプセル及び２区画ヒドロゲルカプセルの作製の前に、緩衝液及びアルギン酸塩溶液を、無菌プロセスを使用して０．２μｍフィルタに通すろ過により滅菌した。

【0404】

細胞をカプセル化する約１．５ｍｍの直径の１区画ヒドロゲルカプセルの作製のために、所望の数の細胞を、所望のアルギン酸塩溶液（例えば、対照カプセルで使用される７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液、又は実施例２及び表６で説明されている実験的アルギン酸塩溶液の内の１つ）に懸濁させ、生じた細胞懸濁液をシリンジに充填し、１８ゲージの平滑先端針（ＳＡＩ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でキャップした。このシリンジを、架橋溶液が入っている皿の上で垂直に配向されたシリンジポンプに入れた。この針に高電圧発電機を接続し、バイオセイフティーキャビネットに接地させた。このシリンジポンプ及び発電機をオンにし、０．１６ｍＬ／分又は１０ｍＬ／時間の流量で、且つ１０秒当たり１２滴の滴下速度になるまで５～９ｋＶの範囲で電圧を調整しつつ、アルギン酸塩溶液を、針に通して押し出した。

【0405】

約１．５ｍｍの直径の２区画ヒドロゲルミリカプセルとして構成されるデバイスを調製するために、静電液滴生成装置を下記のように設定した：ＥＳシリーズ０～１００ｋＶ、２０ワット高電圧発電機（ＥＱ ｓｅｒｉｅｓ，Ｍａｔｓｕｓａｄａ，ＮＣ，ＵＳＡ）を、同心針（２２Ｇの内腔、１８Ｇの外腔、Ｒａｍｅ－Ｈａｒｔ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｓｕｃｃａｓｕｎｎａ，ＮＪ，ＵＳＡ）の上部及び下部に連結した。内腔を、ＢＤ Ｌｕｅｒ－Ｌｏｋ（商標）チップ（ＢＤ（カタログ番号３０９６４６），Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）を備えた第１のＢＤ使い捨て５ｍｌシリンジに取り付け、このシリンジを、垂直に配向されたシリンジポンプ（Ｐｕｍｐ １１ Ｐｉｃｏ Ｐｌｕｓ，Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）に接続した。外腔を、第２の５ｍｌ Ｌｕｅｒ－ｌｏｃｋシリンジにｌｕｅｒカップリングを介して接続し、このシリンジを、垂直に配向された第２のシリンジポンプ（Ｐｕｍｐ １１ Ｐｉｃｏ Ｐｌｕｓ）に接続した。第１の（内側）区画のみに細胞をカプセル化するために、（単一細胞懸濁液として）細胞を含む第１のアルギン酸塩溶液（（対照としての）７０：３０ ＣＭ－Ａｌｇ－１０１：ＵＭ－Ａｌｇ溶液、又は実施例２及び表６で説明されている実験的アルギン酸塩溶液の内の１つ）を、第１のシリンジに入れ、抗線維性化合物を含む第２の細胞フリーアルギン酸塩溶液（例えば、ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１及びＵ－ＨＭＷ－Ａｌｇ）を、第２のシリンジに入れた。下記の実施例での対照２区画ヒドロゲルカプセルの場合には、第２の（外側）区画を、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液を使用して形成した。２個のシリンジポンプは、第１及び第２のアルギン酸塩溶液を、同心針の両方の腔を通ってシリンジから移動させ、両方のアルギン酸塩溶液を含む単一の液滴が、針から、架橋溶液が入っているガラス皿へと押し出される。各Ｐｉｃｏ Ｐｌｕｓシリンジポンプの設定は、１２．０６ｍｍの直径であり、各ポンプの流量を、２種のアルギン酸塩溶液に関して１：１の流量比を達成するように調整した。そのため、１０ｍｌ／時で設定された総流量で、各アルギン酸塩溶液の流量は、約５ｍｌ／時であった。

【0406】

２区画及び１区画ミリカプセルの両方の作製のために、アルギン酸塩溶液の所望の体積の押し出しの後、アルギン酸塩液滴を、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２０ｍＭのＢａＣｌ２、０．２Ｍのマンニトール、及びポロキサマー１８８を含有する架橋溶液中で５分間にわたって架橋させた。架橋容器の底に落下したカプセルを、コニカルチューブ中にピペッティングすることによって収集した。カプセルがチューブ中で沈降した後、架橋緩衝液を除去し、カプセルを洗浄した。細胞を含まないカプセルを、ＨＥＰＥＳ緩衝液（ＮａＣｌ １５．４２８ｇ、ＫＣｌ ０．７０ｇ、ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ０．４８８ｇ、２リットルの脱イオン水中の５０ｍｌのＨＥＰＥＳ（１Ｍ）緩衝液（Ｇｉｂｃｏ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ））で４回洗浄し、使用するまで４℃で貯蔵した。細胞をカプセル化するカプセルを、ＨＥＰＥＳ緩衝液で４回、０．９％の生理食塩水で２回、及び培養培地で２回洗浄し、３７℃で培養器中に貯蔵した。

【0407】

実施例５：細胞をカプセル化する単一区画アルギン酸塩カプセル内の細胞結合部位の組み込みの、インビトロでの細胞産生性及び生存率に対する影響
単一区画ヒドロゲルミリカプセル（約１．５ｍｍの直径）を含む組成物を、細胞結合部位を欠くか又は含む実施例２で説明されているアルギン酸塩溶液を使用して、本質的には実施例４で説明されているように調製した。

【0408】

ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤタンパク質（配列番号１）を発現するように組み換えられたＡＲＰＥ－１９細胞（ＡＲＰＥ－１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞）を、対照アルギン酸塩溶液（７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ）中に又は実施例２及び表６で説明されている実験的アルギン酸塩溶液の内の１つ中に、３３０万個の細胞／ｍｌアルギン酸塩で懸濁させた。調製後、各カプセル組成物の１つのウェル当たり１つのカプセルを、９６ウェルプレートに入れた。２４時間後に上清を回収し、各上清中のＦＶＩＩＩの濃度をＥＬＩＳＡで測定した。また、このときに、各カプセル組成物に関して、１つのウェル当たり１つのカプセルの２つのアリコート中に存在する生存細胞の数を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ＵＳＡ）で測定し、産生性（ｐｇ／細胞／日）を、各アリコート中の細胞数で上清中のタンパク質のｐｇを除算することにより算出した。この分析の結果を図２に示す。

【0409】

図２に示すように、細胞結合ペプチドで共有結合的に修飾されたアルギン酸塩溶液（例えばＣＢＰ－アルギン酸塩）中でカプセル化された細胞は、対照（例えば、ＣＢＰを欠くアルギン酸塩）と比較して産生性の増加を示さなかった。加えて、コラーゲンＩ及びＨＡとのアルギン酸塩ブレンドも、カプセル化された細胞の産生性を改善しなかった。これらの結果は、カプセル化された細胞のインビトロでの産生性は、カプセル化アルギン酸塩ポリマー中の細胞結合部位の存在による影響を受けないことを示す。

【0410】

実施例６：内側カプセル区画中におけるＲＧＤ修飾アルギン酸塩中でのＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞のカプセル化により、カプセル移植後にＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ血漿レベルが上昇する
ＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞をカプセル化する対照２区画ヒドロゲルミリカプセル及びＲＧＤ修飾２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画用の溶液は、細胞フリー７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液であり、第１の（内側）区画用の溶液は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液（対照）中のＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液であるか、又は実施例２で説明したＲＧＤ修飾アルギン酸塩溶液（ＶＬＶＧ－４ＧＲＧＤ及び１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１）の内の１つ中のＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液であった。ＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞を、第１のアルギン酸塩溶液（内側区画溶液）中に１億個の細胞／ｍｌで懸濁させた。

【0411】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスの腹腔内（ＩＰ）空間に移植した（１種の組成物当たり４匹のマウス）。移植後２週間で、各マウスから、中間出血により血液サンプルを採取した。これらのサンプルにおけるＦＶＩＩＩ－ＢＤＤの血漿レベルをＥＬＩＳＡで測定し、結果を図３に示す。

【0412】

血漿ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤレベルは、対照と比較して両方のＲＧＤ修飾アルギン酸塩カプセルで高く、このことは、第１の区画内のＲＧＤ－アルギン酸塩の存在により、インビボでのＦＶＩＩＩ－血漿レベルが上昇し得ることを示す。

【0413】

実施例７：内側カプセル区画中における細胞結合部位を含むポリマー中での細胞のカプセル化は、インビボでの細胞増殖又はエクスビボでのカプセルの機械的特性に影響を及ぼさない
ＣＢＰを含み且つ第１の（内側）区画中でＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞をカプセル化する２区画対照及び２区画カプセルの組成物を、実施例６で説明したように調製した。同様の２区画カプセルも調製し、このカプセルでは、外側区画は同一であるが、内側区画は、上記の実施例２及び表６で説明されているコラーゲンＩ又はＨＡアルギン酸塩溶液から形成された。全ての対照カプセル及び試験カプセルに関して、内側区画を形成するために使用される溶液中の懸濁細胞の濃度は、１億個の細胞／ｍｌであった。

【0414】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した（１種の組成物当たり４匹のマウス）。移植の４週間後、マウスからカプセルの大部分を回収し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）３Ｄ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ＵＳＡ）を使用して、カプセル細胞数（各マウスに関して二重で１つのカプセル）を測定した。簡潔に説明すると、１つのウェル当たり１つのカプセルを二重に分析し、蒔いた細胞の標準曲線と比較した。培地１００μｌを含む各ウェルに、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）３Ｄ試薬 １００μｌを添加し、プレートを、１５分にわたり４００ｒｐｍでシェーカー上に置き、次いで発光をプレートリーダーで読み取った。また、テクスチャーアナライザーを使用して、各組成物のアリコート中のカプセルの機械的強度（初期破壊）を、移植前に及び１ヶ月間の移植期間後の回収時に測定した。細胞数及びカプセル強度の結果を、それぞれ図４Ａ及び図４Ｂに示す。実験誤差に起因して、多少のばらつきを観察した。

【0415】

対照カプセル及びＣＢＰカプセルでは、１ヶ月間の移植期間中に多少の細胞増殖を観察したが、回収したカプセル中の細胞数は、対照群及びＣＢＰ－アルギ酸塩群で同様であった。コラーゲンカプセル中の細胞数、及びＨＡカプセル中の細胞数は、１ヶ月間の移植期間中に有意に変化しなかった。増殖の大きさは群によって異なるが、他のデータ（示さない）は、開始時の細胞濃度にかかわらず、図４Ａに示すように、細胞数は約５０，０００個の細胞／カプセルでプラトーになること示唆する。そのため、図４Ａのデータは、ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）ペプチドが、対照カプセルで観察されるものを超えてインビボでの有意な増殖を刺激していないことを示唆する。

【0416】

移植前に測定した初期破壊は、カプセル組成物によって異なり、ＳＬＧ２０（即ち、１Ｇ－ＲＧＤ、ＨＡ、コラーゲンＩ）で構成された第１の（内側）区画は、対照カプセル及びＶＬＶＧ－４ＧＲＧＤカプセルと比較して強いカプセルを生成した。しかしながら、１ヶ月間の移植後の回収で測定した初期破棄強度は、対照及び全ての試験カプセル組成物でカプセルに関して同様であった。これらのデータは、カプセル内の細胞結合ドメインの存在がカプセルの機械的完全性に影響を及ぼさないことを示唆する。

【0417】

実施例８：内側カプセル区画中におけるＧ－ＲＧＤ－アルギン酸塩中でのＡＲＰＥ１９－ＦＶＩＩＩーＢＤＤ細胞のカプセル化により、カプセル移植後にＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ血漿レベルが上昇する
ＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画を、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＬＭＷ－Ａｌｇ溶液を使用して調製し、内側区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＬＭＷ－Ａｌｇ溶液（対照）を含むか、又は実施例２及び表６で説明した下記のＣＢＰ修飾アルギン酸塩溶液の内の１つを含んだ：ＭＶＧ－ＧＲＧＤＳＰ、１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１、４Ｇ－ＲＧＤ：０．５３。全ての対照カプセル及び試験カプセルに関して、内側区画を形成するために使用されるアルギン酸塩溶液中の細胞の濃度は、１億個の細胞／ｍｌであった。

【0418】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した（１種の組成物当たり４匹のマウス）。移植後１４日で、動物を屠殺し、各マウスから血液サンプルを採取した。これらのサンプルにおけるＦＶＩＩＩ－ＢＤＤの血漿レベルをＥＬＩＳＡで測定し、結果を図５に示す。

【0419】

血漿ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤレベルは、単一のＧリンカーを介してＲＧＤペプチドで共有結合的に修飾されたアルギン酸塩を含むカプセルを移植したマウスにおいて、コントロールカプセルを移植したか又は４Ｇリンカーを介して同一のＲＧＤペプチドで共有結合的に修飾されたアルギン酸塩を含むカプセルを移植したマウスと比べて高かった。同一のＲＧＤペプチドを有するがＭＷアルギン酸塩が異なる２種のＲＧＤアルギン酸塩（ＭＶＧ－ＧＲＧＤＳＰ及び１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１）の間には、又はＭＶＧ－ＧＲＧＤＳＰアルギン酸塩及びＭ ＲＥＤＶアルギン酸塩の混合物の間には、有意差がなかった。驚くべきことに、１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１アルギン酸塩と同一のＲＧＤペプチド（ＲＧＤＳＰ（配列番号５９））で修飾されたが、単一のＧリンカーの代わりに４Ｇリンカーで修飾された４Ｇ－ＲＧＤ：０．５３アルギン酸塩は、細胞産生性に対してマイナスの影響を有するように見え、血漿ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤは、４Ｇ－ＲＧＤ：０．５３カプセルが移植されたマウスでは検出不能であった。これらのデータは、単一のＧリンカーを介してＲＧＤ細胞結合ペプチドにコンジュゲートしたポリマー（例えばアルギン酸塩）中で組み換えＲＰＥ細胞をカプセル化するデバイス（例えばヒドロゲルミリカプセル）を介して細胞を移植することにより、動物モデルにおいて、移植された組み換えＲＰＥ細胞により発現される治療用タンパク質の血漿レベルが上昇し得ることを示す。

【0420】

実施例９：内側カプセル区画中でのＲＧＤ－アルギン酸塩の存在は、移植されたカプセルの線維化に影響を及ぼさない
この実験では、内側区画中の細胞結合ペプチドの存在、及び外側区画中の抗線維性化合物の中程度の又は高い密度が、動物モデルへのカプセルの移植後の線維化のレベルに影響を及ぼすかどうかを調べた。この実験で使用するカプセル組成物は、下記で説明する２区画カプセル構成を有した。
（１）対照：７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ混合物中のＡＲＰＥ１９－ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液を含む溶液から形成された内側区画、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ混合物から形成された外側区画；
（２）ＲＧＤ内側／中程度外側：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１（表６）中のＡＲＰＥ１９－ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液を含む溶液から形成された内側区画、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ混合物から形成された外側区画；
（３）ＲＧＤ内側／高外側：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１（表６）中のＡＲＰＥ１９－ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液を含む溶液から形成された内側区画、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ混合物から形成された外側区画；
（４）ＲＧＤ内側／高（６０：４０）外側：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１（表６）中のＡＲＰＥ１９－ＦＶＩＩＩ－ＢＤＤ細胞の懸濁液を含む溶液から形成された内側区画、６０：４０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ混合物から形成された外側区画；
及び
（５）ＲＧＤ、空：内側／中程度外側：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１（表６）から形成された内側区画、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ混合物から形成された外側区画、しかしながら、細胞はカプセル化されていなかった。

【0421】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、Ｃ５７／ＢＬ６マウスのＩＰ空間に移植し（１種の組成物当たり４匹のマウス）、１１日後に回収した。回収したカプセルを明視野顕微鏡で撮像し、結果を図６に示す。

【0422】

第２の（外側）区画中における中程度の密度の抗線維性化合物と、抗線維性アルギン酸塩：非修飾アルギン酸塩混合物（対照）又はＲＧＤ－アルギン酸塩中で細胞をカプセル化する第１の区画とを有するカプセルでは、線維化に差違はなかった。予想されるように、細胞を含まないカプセル（ＲＧＤ（空））の移植は、異種性ＲＰＥ細胞を含むカプセルと比べて、マウスでの少ない線維化を示した。高密度のＣＭ－ＬＭＷアルギン酸塩を使用することによる第２の（外側）区画中での抗線維性化合物の密度の変化は、線維化を減少させたが、ＣＭ－ＬＭＷ：Ｕ－ＨＭＷブレンド比の７０：３０から６０：４０への変更は、予想されるように線維化を増加させた。従って、第１の（内側）区画内での細胞結合ペプチドの存在は、カプセルの抗線維性特性に影響を及ぼさない。

【0423】

実施例１０：内側カプセル区画中におけるＧ－ＲＧＤ－アルギン酸塩中でのＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞のカプセル化により、移植後の血漿ＦＩＸｐａｄｕａレベルが上昇する
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液から形成されており、内側区画は、下記のアルギン酸塩溶液の内の１つから形成されており、これらのそれぞれは、１億個のＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞／ｍｌを含んだ：
（１）対照：７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ混合物；
（２）１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１
（３）４Ｇ－ＲＧＤ：０．５３
（４）４Ｇ－ＲＧＤ：０．９６
（５）４Ｇ－ＲＧＤ：１．７７
（６）ＲＧＤ－４Ｇ：２．９５。

【0424】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した（１種の組成物当たり４匹のマウス）。移植後１２日で、動物を屠殺し、各マウスから血液サンプルを採取した。これらのサンプルにおけるＦＩＸの血漿レベルを、ＥＬＩＳＡで測定した。

【0425】

図７に示すように、移植後の血漿ＦＩＸレベルは、内側区画中で１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１アルギン酸塩又は４Ｇ－ＲＧＤ：０．５３アルギン酸塩を含むカプセルが、対照、及び内側区画中でより高密度の４Ｇ－ＲＧＤアルギン酸塩を含むカプセルと比較して有意に高かった。驚くべきことに、１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１カプセルの移植により、４Ｇ－ＲＧＤ：０．５３カプセルの移植と比べて血漿ＦＩＸレベルが有意に高くなり、このことは、ＲＧＤリンカーの組成が、カプセルから分泌される治療用タンパク質の量に関して細胞の産生性に影響を及ぼし得ることを示す。最後に、４Ｇリンカーペプチド（配列番号６１）の濃度がより高いアルギン酸塩ポリマーを使用して調製したカプセルは全て、対照と同様のＦＩＸレベルを有した。まとめると、これらのデータは、ＦＩＸタンパク質を発現するように組み換えられ且つ第１の（内側）区画内のＲＧＤ－アルギン酸塩中でカプセル化されたＲＰＥ細胞を含む２区画ヒドロゲルカプセルを移植することにより、動物モデルにおける血漿ＦＩＸレベルが有意に上昇し得ることを示し、且つＲＧＤ密度とリンカーサイズとのいくつかの組み合わせは、約０．４１％のＮにて１Ｇ－ＲＧＤＳＰで修飾されたアルギン酸塩ほどには機能しない場合があることを示唆する。

【0426】

実施例１１：内側カプセル区画中でＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化するためにＲＧＤ－アルギン酸塩と別のＣＢＰ－アルギン酸塩とのブレンドを使用することにより、移植後の血漿ＦＩＸレベルはより高い
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液から形成されており、内側区画は、下記のアルギン酸塩溶液の内の１つから形成されており、これらのそれぞれは、１億個のＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞／ｍｌを含んだ。
（１）対照：７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ混合物；
（２）１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１（表６）
（３）４Ｇ－ＤＧＥＡ（表６）
（４）１Ｇ－ＲＧＤ／４Ｇ－ＤＧＥＡ：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１溶液と４Ｇ－ＤＧＥＡ溶液との１：１ブレンド
（５）１Ｇ－ＲＧＤ／４Ｇ－ＰＨＳＲＮ：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１溶液と４Ｇ－ＰＨＳＲＮ溶液との１：１ブレンド
（６）１Ｇ－ＲＧＤ／４Ｇ－ＤＧＥＡ／４Ｇ－ＰＨＳＲＮ：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１溶液と、４Ｇ－ＤＧＥＡ溶液と、ＰＨＳＲＮ溶液との１：１：１ブレンド。

【0427】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した（１種の組成物当たり４匹のマウス）。移植後２週間で、動物を屠殺し、各マウスから血液サンプルを採取した。これらのサンプルにおけるＦＩＸの血漿レベルを、ＥＬＩＳＡで測定した。

【0428】

図８に示すように、ＦＩＸの血漿レベルは、１Ｇ－ＲＧＤ－アルギン酸塩又はＤＧＥＡ－アルギン酸塩を含むカプセルが対照と比べて高く、ＲＧＤカプセルでのこの高いレベルは、一方向ＡＮＯＶＡで統計的有意性に達した。統計的有意性には達しなかったが、１Ｇ－ＲＧＤアルギン酸塩は、４Ｇ－ＤＧＥＡカプセルと比べてさらに大幅に高かった。ＦＩＸ血漿レベルは、別のＣＢＰ－アルギン酸塩とブレンドされたＲＧＤアルギン酸塩を含むカプセルの３つの群で最高であった。これらのデータは、ＡＲＰＥ１９－ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞と複数のＣＢＰ－アルギン酸塩の組み合わせとを含むカプセルが、単一のＣＢＰ－アルギン酸塩（ＲＧＤＳＰ（配列番号５９）又はＤＧＥＡ（配列番号３９））で生成されたカプセルと比較してＦＩＸレベルを改善し得ることを示す。

【0429】

実施例１２：ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する内側区画中のＲＧＤペプチドの密度は、移植されたヒドロゲルカプセルにより生じるＦＩＸ血漿レベルに影響を及ぼす
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液から形成されており、内側区画は、表６で説明されている下記のアルギン酸塩溶液の内の１つから形成されており、これらのそれぞれは、１億個のＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞／ｍｌを含んだ：
（１）対照：７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ混合物；
（２）１Ｇ－ＲＧＤ：０．２２
（３）１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３
（４）１Ｇ－ＲＧＤ：０．７２
（５）１Ｇ－ＲＧＤ：１．４７。

【0430】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した。移植後２週間で、動物を屠殺し、各マウスから血液サンプルを採取した。これらのサンプルにおけるＦＩＸの血漿レベルを、ＥＬＩＳＡで測定した。

【0431】

図９に示すように、第１の（内側）区画ポリマーへのＲＧＤコンジュゲーションの量は、血漿中で検出されるＦＩＸのレベルに影響を及ぼした。ＦＩＸレベルは、ＲＧＤ密度が０から１Ｇ－ＲＧＤ：５３へと増加した場合に上昇したが、驚くべきことに、ＦＩＸレベルは、１Ｇ－ＲＧＤ：０．７２カプセル及び１Ｇ－ＲＧＤ：１．４７カプセルの移植後に連続的に低かった。まとめると、これらのデータは、ＲＧＤペプチドのコンジュゲーション密度が、ヒドロゲルカプセルにより生じたＦＩＸレベルに有意な影響を有し得ることを示し、さらには、本実施例で説明されたように構成されたカプセルの場合には、内側区画中において１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３で調製されたカプセルが、最高の血漿ＦＩＸ－Ｐａｄｕａレベルを達成するのに最適であり得ることことも示す。

【0432】

実施例１３：内側カプセル区画中における１Ｇ－ＲＧＤ－アルギン酸塩中でのＡＲＰＥ１９：ＰＴＨ細胞のカプセル化により、移植後の血漿ＰＴＨレベルが上昇する
ＡＲＰＥ１９：ＰＴＨ細胞をカプセル化する対照及びＲＧＤ修飾２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画用のアルギン酸塩溶液は、細胞フリー７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液であり、第１の（内側）区画用のアルギン酸塩溶液は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液（対照）中の又は表６で説明されているＲＧＤ修飾アルギン酸塩溶液（１Ｇ－ＲＧＤ：０．７２％）中の１億個の細胞／ｍｌでのＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ－ＰＴＨ細胞の懸濁液であった。

【0433】

各カプセル組成物の０．５ｍＬのアリコートを、ヌードマウスの腹腔内（ＩＰ）空間に移植した（１種の組成物当たり４匹のマウス）。移植後１週間で、動物を屠殺し、各マウスから血液サンプルを採取した。これらのサンプルにおけるＰＴＨの血漿レベルを、ＥＬＩＳＡで測定し、結果を図１０に示す。

【0434】

血漿ＰＴＨレベルは、対照と比較してＲＧＤ修飾アルギン酸塩カプセルで約２倍高く、このことは、第１区画内のＲＧＤ－アルギン酸塩の存在によりインビボでのＰＴＨ血漿レベルが上昇し得ることを示す。

【0435】

実施例１４：内側カプセル区画中におけるＧ－ＲＧＤ－アルギン酸塩内でＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ細胞を含むカプセルは、ＲＧＤなし対照に相当する安定性を有する
ＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。カプセルの組成物を、第１の区画溶液及び第２の区画溶液の下記の組み合わせで調製した：（１）第１及び第２：ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液（対照条件）、（２）第１：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１、第２：ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液、（３）第１：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１、第２：ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液、（４）第１：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１、第２：ＣＭ－ＬＭＷ－ＡＬＧ－１０１対Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷの６０：４０の体積比で調製したＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液、及び（５）第１：１Ｇ－ＲＧＤ：０．４１、第２：ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液。ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞を、上記の条件（１～４）に関して、１億個の細胞／ｍｌにて第１の（内側）区画中でカプセル化した。各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した。移植後２ヶ月で、動物を屠殺し、各マウスからカプセルを回収した。カプセルを撮像し、生存／死滅染色を実施した。データを図１１に示す。

【0436】

全てのカプセルを無傷で回収し、生存細胞を検出した。ＧＲＧＤＳＰ含有カプセル（配列番号６０）と比較して、対照では第１の区画内の細胞の密度に目に見える差違があったが、生存細胞の総数は類似していた（データは示さない）。まとめると、これらのデータは、第１の区画内でのＲＧＤの組み込みはカプセルの完全性に悪影響を及ぼさないことを示す。

【0437】

実施例１５：内側カプセル区画中におけるＧ－ＲＧＤ－アルギン酸塩内でＢａｌｂ／３Ｔ３細胞を含むカプセルは、Ｃ５７／ＢＬ６での２ヶ月間の移植を通して、ＲＧＤなし対照と同等の抗線維性であった
ＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩＩ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。カプセルの組成物を、実施例１４で説明した第１の区画溶液及び第２の区画溶液の下記の組み合わせで調製した。Ｂａｌｂ／３Ｔ３細胞を、上記の条件（１～４）に関して、２千万個の細胞／ｍｌで第１の（内側）区画中でカプセル化した。各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、Ｃ５７／ＢＬ６マウスのＩＰ空間に移植した。移植後２ヶ月で、カプセルを回収して線維化の存在に関して明視野顕微鏡で撮像した。

【0438】

全てのカプセルを無傷で回収し、空の透明な外層が不透明な線維性沈殿物で覆われていない図１２に示すように、線維化がほとんどなかった。ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇの６０：４０ブレンドで調製されたカプセルでは、予想したように、７０：３０ブレンドと比較して多くの線維化を観察した。まとめると、これらのデーは、第１の区画内でのＲＧＤの組み込みは、抗線維性関連の中でカプセルの抗線維性に影響を及ぼすことを示す。

【0439】

実施例１６：ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する内側区画中のＧ－ＲＧＤ修飾ポリマーの同一性は、移植されたヒドロゲルカプセルにより生じたＦＩＸ血漿レベルに影響を及ぼす
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液から形成されており、内側区画は、表６で説明されている様々な初期ポリマーを使用して下記のアルギン酸塩溶液の内の１つから形成されており、これらのそれぞれは、１億個のＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞／ｍｌを含んだ：
（１）１Ｇ－ＲＧＤ：０．７２
（２）１Ｇ－ＭＶＧ：０．７１、７９ｃＰ
（３）１Ｇ－ＭＶＧ：０．７１、９７ｃＰ
（４）１Ｇ－ＭＶＧ：０．７１、１４３ｃＰ
（５）１Ｇ－ＭＶＧ：０．７１、２０２ｃＰ
（６）１Ｇ－ＳＬＧ１００：０．６５。

【0440】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した。移植後４週間で、動物を屠殺し、各マウスからカプセル及び血液サンプルを採取した。これらのサンプルにおけるＦＩＸの血漿レベルを、ＥＬＩＳＡで測定した。テクスチャーアナライザーを使用して、移植前及びエクスビボ回収時のカプセルの初期破壊を測定した。

【0441】

カプセルの初期破壊は、ポリマーの同一性及び移植前の溶液粘度により変化した。全てのカプセルを無傷で回収し、エクスビボでの機械的強度は図１３Ａで示すのと同様であった。図１３Ｂに示すように、ＦＩＸ－ｐａｄｕａの血漿レベルは、４種の粘度（７９、９７、１４３、２０２ｃＰ）のいずれでも、Ｇ－ＳＬＧ１００：０．６５又はＧ－ＭＶＧ：０．７１と比較して、Ｇ－ＲＧＤ：０．７２を含むカプセルで最高であった。まとめると、これらのデータは、コンジュゲートされたＲＧＤペプチドを有するポリマーの同一性が、ヒドロゲルカプセルにより生じたＦＩＸレベルに対して有意な影響を有し得ることを示し、さらには、本実施例で説明されているように構成されたカプセルでは、最高の血漿ＦＩＸレベルを達成するためにはＳＬＧ２０ポリマーが最適であり得ることも示す。

【0442】

実施例１７：内側カプセル区画中における１Ｇ－ＨＡＶＤＩ－アルギン酸塩中でのＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞のカプセル化により、移植後の血漿ＦＩＸレベルが上昇する
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞をカプセル化する対照及びＨＡＶＤＩ修飾（配列番号３８）２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画用のアルギン酸塩溶液は、細胞フリー７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液であり、第１の（内側）区画用のアルギン酸塩溶液は、表６で説明されている７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液（対照）又はＨＡＶＤＩ修飾アルギン酸塩溶液（Ｇ－ＨＡＶＤＩ：０．３８％）中の１億個の細胞／ｍｌでのＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞の懸濁液であった。

【0443】

各カプセル組成物の０．５ｍＬのアリコートを、ヌードマウスの腹腔内（ＩＰ）空間に移植した（１種の組成物当たり４匹のマウス）。移植後２週間で、各マウスの中間出血からサンプルを採取した。これらのサンプルにおけるＦＩＸの血漿レベルをＥＬＩＳＡで測定し、結果を図１４に示す。

【0444】

血漿ＦＩＸレベルは、対照と比較してＨＡＶＤＩ修飾アルギン酸塩カプセルで約２倍高く、このことは、第１の区画内のカドヘリンに由来するＣＢＰで修飾されたアルギン酸塩（例えばＧ－ＨＡＶＤＩ）の存在により、インビボでのＦＩＸ血漿レベルが上昇し得ることを示す。

【0445】

実施例１８：ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する内側区画中のＧ－ＲＧＤ修飾ポリマーは、ＩＰ部位及びＳｕｂＱ部位からの血漿中のＦＩＸレベルを上昇する
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液から形成され、内側区画は、表６で説明されているＧ－ＲＧＤ：０．３３から形成され、これらのそれぞれは、１億個のＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞／ｍｌを含んだ。

【0446】

カプセルを、０．２ｍＬのカプセル／動物にて、ヌードマウスのＩＰ部位及びＳｕｂＱ部位に移植した。１０日後に動物を屠殺し、血漿サンプル及びカプセルを回収した。血漿中のＦＩＸレベルをＥＬＩＳＡで決定し、１個のカプセル当たりの生存細胞の数をＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏで決定した。

【0447】

図１５Ａに示すように、全ての条件から血漿中でＦＩＸを検出したが、カプセルがＳｕｂＱではなくＩＰに移植された動物でレベルがより高かった。ＦＩＸレベルは、ＩＰ部位及びＳｕｂＱ部位の両方に関して、対照と比較してＧ－ＲＧＤ含有カプセルが高かった。図１５Ｂに示すように、１個のカプセル当たりの生存細胞の数は、ＳｕｂＱと比較してＩＰから回収したカプセルがわずかに高かった。まとめると、このことは、ＣＢＰ含有カプセルは複数の投与経路から治療用タンパク質の血清レベルを上昇させ得ることを示す。

【0448】

実施例１９：ＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩ細胞をカプセル化する内側区画中のＧ－ＲＧＤ修飾ポリマーは、ＩＰ部位及びＳｕｂＱ部位から検出可能なＦＶＩＩを引き起こす
ＡＲＰＥ１９：ＦＶＩＩ細胞をカプセル化するカプセルを、１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３で調製し、実施例１８で説明したように移植した。図１６は、ＦＶＩＩがＩＰ部位及びＳｕｂＱ部位の両方からの血漿中で検出可能であったことを示し、このことは、１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３を含むカプセルをＦＶＩＩの送達に使用し得ること、及びこのカプセルをＩＰ又はＳｕｂＱに移植し得ることを示す。

【0449】

実施例２０：高コンジュゲートＧ－ＲＧＤアルギン酸と非修飾アルギン酸塩とのブレンドで調製されたカプセルは、１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３アルギン酸塩と同様のＦＩＸレベルを達成する
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液から形成されており、内側区画は、表６で説明されている様々な初期ポリマーを使用して、下記のアルギン酸塩溶液の内の１つから形成されており、これらのそれぞれは、１億個のＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞／ｍｌを含んだ：
（１）１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３
（２）１Ｇ－ＲＧＤ：６．０４，１：５５
（３）１Ｇ－ＲＧＤ：６．０４，１：３０
（４）１Ｇ－ＲＧＤ：６．０４，１：１５。

【0450】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した。移植後２週間で、動物を屠殺し、各マウスからカプセル及び血液サンプルを回収した。これらのサンプルにおけるＦＩＸの血漿レベルを、ＥＬＩＳＡで測定した。

【0451】

図１７に示すように、ＦＩＸ－ｐａｄｕａの血漿レベルは、Ｇ－ＲＧＤ：６．０４，１：５５及びＧ－ＲＧＤ：６．０４：１：１５と比較して、１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３及びＧ－ＲＧＤ：６．０４，１：３０（０．２０％のＮ）を含むカプセルが最高であった。まとめると、これらのデータは、より高いコンジュゲートポリマーと非コンジュゲートポリマーとをブレンドすることにより、最適なＲＧＤコンジュゲーションレベルをほぼ同一レベルまで模倣し得ることを示す。加えて、本実施例で説明されたブレンド溶液により、実施例１２で説明されているものと同様の中間コンジュゲーションレベルで最高ＦＩＸレベルが存在する。

【0452】

実施例２１：線維化を予防するには第１の区画内に１Ｇ－ＲＧＤが含まれなければならない
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａをカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。カプセルの組成物を、第１の区画溶液及び第２の区画溶液の下記の組み合わせで調製し、第１の区画中で２千万個のＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞／ｍｌをカプセル化した：（１）第１：非修飾１．４ｗ／ｖ％ ＳＬＧ２０、第２：ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ、（２）：第１：１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３、第２：ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ、及び（３）：第１：溶液中の０．３３％のＮを達成するまで非コンジュゲートＧ－ＲＧＤペプチドとブレンドされた非修飾１．４ｗ／ｖ％ ＳＬＧ２０、及び（４）：第１：非修飾１．４ｗ／ｖ％ ＳＬＧ２０、第２：１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３。

【0453】

カプセルを、２週間にわたり、Ｃ５７／ＢＬ６マウスのＩＰ空間に０．５ｍＬ／動物で移植した。屠殺時に、カプセルを回収した。回収したカプセルを、抗Ｆ４／８０でマウスマクロファージに関して染色し、線維化の存在に関して蛍光顕微鏡で撮像した。

【0454】

図１８に示すように、第１の区画中に対照、コンジュゲート１Ｇ－ＲＧＤ：０．３３、又は非コンジュゲート０．３３％Ｎ Ｇ－ＲＧＤペプチドを有するカプセルに関して、同様のマクロファージ付着を観察した。特に、第１の区画内に非コンジュゲート０．３３％Ｎ Ｇ－ＲＧＤを含むカプセルは、対照と比較してマクロファージ付着が増加しておらず、このことは、非コンジュゲートＧ－ＲＧＤが線維化反応を駆動しないことを示す。重要なことに、Ｇ－ＲＧＤ：０．３３アルギン酸塩を第２の（外側）区画に使用したカプセルに関してはマクロファージ付着が増加しており、このことは、線維化を予防するためにはカプセルの第１の（内側）区画内にＣＢＰ－アルギン酸塩が含まれなければならないことを示す。

【0455】

実施例２２：２種のポリマーを一緒にブレンドした場合の、又は同一のポリマーにコンジュゲートした場合の、Ｇ－ＲＧＤ及びＧ－ＰＨＳＲＮによるＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞のカプセル化は、移植後の同様の血漿ＦＩＸレベルを生じる
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｍｅｄｉｕｍ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液から形成されており、内側区画は、表６で説明されている様々な初期ポリマーを使用して、下記のアルギン酸塩溶液の内の１つから形成されており、これらのそれぞれは、１億個のＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ－Ｐａｄｕａ細胞／ｍｌを含んだ：
（１）１Ｇ－ＲＧＤ：０．７２とＧ－ＰＨＳＲＮ：０．８３との１：１ブレンド；
及び
（２）ＰＨＳＲＮ／ＲＧＤ、同一のポリマー（全体で０．８７％のＮ）。

【0456】

各カプセル組成物の０．５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した。移植後２週間で、動物を屠殺し、各マウスからカプセル及び血液サンプルを回収した。これらのサンプルにおけるＦＩＸの血漿レベルを、ＥＬＩＳＡで測定した。

【0457】

図１９に示すように、ＦＩＸの血漿レベルは、Ｇ－ＲＧＤ及びＧ－ＰＨＳＲＮの両方を含むカプセルの両方組成物で同様であった。

【0458】

実施例２３：ＲＧＤＳＰコンジュゲートアルギン酸塩中でカプセル化されたＡＲＰＥ１９－ＦＩＸ細胞の産生性に対するリンカー組成物の評価
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液から形成されており、内側区画は、リンカーなしで、又は１個、２個、３個、４個、若しくは６個のグリシン残基（１Ｇ、２Ｇ、３Ｇ、４Ｇ（配列番号６１）、６Ｇ（配列番号６９））からなるリンカーによるか、又は１個のβ－アラニン残基からなるリンカーによりアルギン酸塩にコンジュゲートしたＲＧＤＳＰペプチド（配列番号５９）を含むＲＧＤ－アルギン酸塩溶液から形成された。ペプチドコンジュゲーションレベルを、窒素含有量パーセントに関して凍結乾燥後の元素分析により決定し、下記を得た：リンカーなしの場合は０．１９％のＮ、１Ｇリンカーの場合は０．３０％のＮ、２Ｇリンカーの場合は０．３２％のＮ、３Ｇリンカーの場合は０．２９％のＮ、４Ｇリンカー（配列番号６１）の場合は０．４８％のＮ、６Ｇリンカーの場合は０．４３％のＮ、及び１個のβ－アラニンで連結されたＲＧＤＳＰペプチド（配列番号５９）の場合は０．２８％のＮ。ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞を、１億個の細胞／ｍＬで第１の（内側）区画にカプセル化した。各カプセル組成物の０．２５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した（ｎ＝３／群）。移植後１２日で、動物を屠殺し、各マウスから血漿を採取した。これらのサンプルにおけるＦＩＸの血漿レベルを、ＥＬＩＳＡで測定した。

【0459】

図２２に示すように、第１の（内側）区画ポリマーにＲＧＤＳＰペプチド（配列番号５９）をコンジュゲートさせるために使用されるリンカーの選択は、血漿中で検出されるＦＩＸのレベルに影響を及ぼした。カプセルにより生じた血漿ＦＩＸレベルは、ペプチド修飾アルギン酸塩中のグリシンリンカー残基の数が３から４へと及び４から６へと増加した場合に、有意に低下した。対照的に、ペプチドＲＧＤＳＰ（配列番号５９）がリンカーを介することなく付着したか又は１Ｇ、２Ｇ、３Ｇ、若しくは１－β－アラニンリンカーの内のいずれかを介して付着したアルギン酸塩を含むカプセルにより生じた血漿ＦＩＸレベルは、同様のレベルであった。

【0460】

実施例２４：ＧＲＤＧＳＰコンジュゲートアルギン酸塩の低から中程度の粘度は、ＦＩＸレベルを最大化する
ＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞をカプセル化する２区画ヒドロゲルミリカプセルの組成物を、実施例４で説明したように、同心針を通して第１及び第２のアルギン酸塩溶液を押し出すことにより調製した。第２の（外側）区画は、７０：３０ ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１－Ｈｉｇｈ：Ｕ－ＨＭＷ－Ａｌｇ溶液から形成されており、内側区画は、アルギン酸塩にコンジュゲートしたＧＲＧＤＳＰペプチド（配列番号６０）を含むＲＧＤ－アルギン酸塩溶液から形成された。このＲＧＤ－アルギン酸塩溶液を、下記の様々な溶液粘度に製剤化した：９１、１１２、１４２、２２８、３６６、４５３ｃＰ。ペプチドコンジュゲーションレベルを、窒素含有量パーセントに関して凍結乾燥後の元素分析により決定し、下記を得た：それぞれ、９１ｃＰ、１４２ｃＰ、２２８ｃＰのサンプルの場合には０．３８％のＮ、並びに１１２ｃＰ、３６６ｃＰ、及び４５３ｃＰのサンプルの場合には０．３２％のＮ。これらのＲＧＤ－アルギン酸塩溶液を使用して、１億個の細胞／ｍＬで第１の（内側）区画中にＡＲＰＥ１９：ＦＩＸ細胞をカプセル化した。各カプセル組成物の０．２５ｍＬアリコートを、ヌードマウスのＩＰ空間に移植した（ｎ＝４／群）。移植後１８日で、動物を屠殺し、各マウスから血漿を採取した。これらのサンプルにおけるＦＩＸの血漿レベルを、ＥＬＩＳＡで測定した。

【0461】

図２３に示すように、第１の（内側）区画ポリマー溶液の粘度は、血漿中で検出されるＦＩＸのレベルに影響を及ぼした。ＡＲＰＥ１９：ＦＸ細胞は、より高い粘度の溶液（３６６ｃＰ及び４５３ｃＰ）中でカプセル化された場合と比べて、低から中程度の粘度の溶液（９１ｃＰ～２２８ｃＰ）中でカプセル化された場合に、高い血漿ＦＩＸレベルを生じた。

【0462】

実施例２５：例示的な定量的ペプチドコンジュゲーションアッセイ
このアッセイでは、ＣＢＰ－ポリマーのサンプルを、ＣＢＰを個々のアミノ酸として開裂する酸性加水分解にかけることにより、ＣＢＰ－ポリマー中のペプチドの量が決定される。この加水分解サンプル中の個々のアミノ酸を分離し、プレカラムオンライン誘導体化と逆相液体クロマトグラフィー－紫外線蛍光（ＬＣ－ＵＶ－ＦＬＲ）とにより、アミノ酸基準を使用して定量する（出典：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏｃｏｌｕｍｎｓ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ“Ｈｏｗ－Ｔｏ”Ｇｕｉｄｅ，Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，５９９１－７６９４ＥＮ，２０１８年３月１日刊行）。一次ＡＡ（例えば、２０種の標準的なＬ－アルファアミノ酸の内のプロリンを除く全て）を、オルト－フタルアルデヒド（ＯＰＡ）で誘導体化し、二次ＡＡ（例えばプロリン）を、９－フルオレニルメチルクロロホルメート（ＦＭＯＣ）で誘導体化する。次いで、各アミノ酸のモル濃度を平均化して、サンプル中の全ペプチドの濃度を算出する。例えば実施例２６で説明されている任意の適切な分析技術を使用して、ＣＢＰ－ポリマーの非加水分解サンプル中のペプチドの量を決定し、この量を全ペプチド量から減算することにより、ＣＢＰ－ポリマー中の任意の残留する非コンジュゲートＣＢＰの存在に関して、この濃度を補正し得る。

【0463】

このアッセイを、ＧＲＧＤＳＰ－アルギン酸塩中のペプチドコンジュゲーション密度を決定するために適用されるとして下記でさらに説明するが、当業者は、非修飾ポリマーがいかなるアミノ酸も含まない場合には、ＧＲＧＤＳＰ－アルギン酸塩又は他のペプチド修飾ポリマー中のペプチド濃度を決定するために、このアッセイを容易に変更し得る。同様に、当業者は、下記に示す任意の機器、器具、又は化学物質を、このアッセイにおいて実質的に同一の機能又は役割を実施し得るか又は果たし得る別の機器、器具、又は化学物質に容易に置き換え得る。

【0464】

定義

【0465】

【表9】

【0466】

機器、器具、及び化学物質
機器
・ Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＬＣシステム
・ Ａｇｉｌｅｎｔダイオードアレイ検出器（Ｇ１３１５Ｄ）：１３μＬ／１０ｍｍ フローセル
・ Ａｇｉｌｅｎｔ蛍光検出器（Ｇ１３２１Ｂ）
・ ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェア
・ 加熱ブロックを備えたホット／撹拌プレート、ＩＫＡ ＲＣＴ ＢＳ００１
・ 分析天秤、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＸＰＥ１０５
・ ｐＨメーター、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ Ｓ２２０ ＳｅｖｅｎＣｏｍｐａｃｔ
・ 遠心分離機、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ａｌｌｅｇｒａ ２５Ｒ
・ ボルテックスミキサ、ＶＷＲ ９７０４３－５６２
・ 加熱装置付き窒素エバポレータ（耐酸性）、Ｏｒｇａｎｏｍａｔｉｏｎ １１５６Ｙ８０

【0467】

器具
・ ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏ ＡＡ ＬＣカラム、２．７μｍ、４．６×１００ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ ６５５９５０－８０
・ ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏ ＡＡＡガードカラム、２．７μｍ、４．６×５ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ ８２０７５０－９３１
・ ＰＴＦＥ裏打ちキャップ付きマイクロ波反応バイアル、Ｃｈｅｍｇｌａｓｓ ＣＧ－４９２０－０２
・ ５０ｍＬ遠心分離管、ＶＷＲ １０１６０－１４０
・ クリンパ、Ｃｈｅｍｇｌａｓｓ ＣＧ－４９３０－２０
・ デキャッパー（Ｄｅｃａｐｐｅｒ）、ＶＷＲ １０８０６－３７２
・ メスシリンダー、クラスＡ
・ 容積測定トランスファーピペット（送達用）クラスＡ
・ メスフラスコ、クラスＡ
・ トランスファーピペット（２００μＬ可変容積）、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ３１２３００００５５
・ トランスファーピペット（１０００μＬ可変容積）、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ３１２３００００６３
・ トランスファーピペット（１０ｍＬ可変容積）、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ３１２３００００８０
・ 使い捨てトランスファーピペット、ＶＷＲ １６００１－１８０
・ 撹拌子、ＶＷＲ ５８９４８－０７８
・ ＬＣバイアル（２ｍＬ）、Ａｇｉｌｅｎｔ ５１８２－０７１６
・ ＬＣバイアルキャップ（プレスリットなし）、Ａｇｉｌｅｎｔ ５１８２－０７２１
・ ＬＣバイアルインサート（２５０μＬ）、Ａｇｉｌｅｎｔ ５１８３－２０８５
・ 様々な実験室のガラス製品

【0468】

化学物質

【0469】

【表10】

【0470】

手順
試薬調製
注記：体積を比例的に増減させて、より小さいバッチ又はより大きいバッチを作製し得る

【0471】

１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４／Ｎａ２Ｂ４Ｏ７／ｐＨ８．２（水性移動相）
・ １Ｌメスシリンダーを使用して、ＬＣＭＳグレードの水 １Ｌを測定して移動相ボトルに移す
・ Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ ２．６４±０．１０ｇを秤量する
・ Ｎａ２Ｂ４Ｏ７ ２．００±０．１０ｇを秤量する
・ 両方の塩を、水１Ｌが入った同一のボトルに入れる
・ この同一のボトルに６Ｎ ＨＣｌ ２．４ｍＬをピペットする
・ 固体が完全に溶解するまで、周囲温度にて撹拌プレートで撹拌する
・ ６Ｎ ＨＣｌで最終ｐＨを８．２０±０．０５に調整する
使用期限／貯蔵条件（周囲で１週間；２～８℃で１ヶ月）

【0472】

４５／４５／１０ ＡＣＮ／ＭｅＯＨ／水（有機移動相）
・ ５００ｍＬメスシリンダーを使用して、ＬＣＭＳグレードのＡＣＮ ４５０ｍＬを測定して移動相ボトルに移す。
・ ５００ｍＬメスシリンダーを使用して、ＬＣＭＳグレードのＭｅＯＨ ４５０ｍＬを測定して同一のボトルに移す。
・ １００ｍＬメスシリンダーを使用して、ＬＣＭＳグレードの水 １００ｍＬを測定して同一のボトルに移す。
・ 手動で反転させたり振盪させたりすることにより、十分に混合する。
使用期限／貯蔵条件（周囲で１ヶ月）

【0473】

注入用希釈剤
・ １００ｍＬメスシリンダーを使用して、水性移動相 １００ｍＬを測定して移動相ボトルに移す
・ 同一のボトルに、濃リン酸 ０．４ｍＬをピペットする
・ 手動で反転させたり振盪させたりすることにより、十分に混合する。
使用期限／貯蔵条件（２～８℃で１ヶ月）
・ この注入用希釈剤 １．５ｍＬをＬＣバイアルに移し、このバイアルを、機器分析のためにＡｇｉｌｅｎｔ ＬＣシステムの「４」の位置に置く

【0474】

誘導体化試薬：ホウ酸緩衝液
・ １．５ｍＬをＬＣバイアルに移し、機器分析のためにＡｇｉｌｅｎｔ ＬＣシステムの「１」の位置に置く

【0475】

誘導体化試薬：ＯＰＡ及びＦＭＯＣ
・ ＯＰＡ試薬及びＦＭＯＣ試薬の各々のアンプルを開封する
・ ＯＰＡ試薬又はＦＭＯＣ試薬 １００μＬ（ＮＬＴ）を、ＬＣバイアルインサートが入ったＬＣバイアルに分注し、機器分析のために、ＯＰＡ試薬が入ったＬＣバイアルをＡｇｉｌｅｎｔ ＬＣシステムの「２」の位置に置き、ＦＭＯＣ試薬が入ったＬＣバイアルをＡｇｉｌｅｎｔ ＬＣシステムの「３」（ＦＭＯＣ）の位置に置く

【0476】

凍結乾燥させたペプチド－アルギン酸塩コンジュゲートのサンプルの酸性加水分解
凍結乾燥させたコンジュゲート １２～１６ｍｇをマイクロ波反応バイアルに秤量し、底にサンプルが残っていることを確認する
下記の工程３．３．２～３．３．１９に従って加水分解する

【0477】

生理食塩水中のペプチド－アルギン酸塩コンジュゲートのサンプルの酸性加水分解
コンジュゲートの生理食塩水溶液 １０００±５０ｍｇを、マイクロ波反応バイアルに秤量する
１０ｍＬトランスファーピペット又は容積測定ピペットを使用して、このサンプルに６Ｎ ＨＣｌ １０．０ｍＬを添加する
撹拌子１個を入れる
クリンパによりＰＴＦＥ裏打ちキャップを密封する
各サンプルバイアルを、ホット／撹拌プレート上の適合する加熱ブロックに入れる
６時間にわたり、１２０℃で加熱し、４００ｒｐｍで撹拌する
熱源から取り出し、周囲温度まで冷却する
キャップを外し、使い捨てトランスファーピペットにより、溶液全体を反応バイアルから２０ｍＬメスフラスコに移す
空になった反応バイアルにＬＣＭＳグレードの水 ２ｍＬをピペットし、同一の使い捨てトランスファーピペットで内壁を十分にすすぎ、このすすぎ液を同一の２０ｍＬメスフラスコに完全に移す
上記の工程を２回繰り返す
ＬＣＭＳグレードの水でメスフラスコの目盛りに合わせる
このフラスコをキャップして複数回反転させて、十分に混合する
５０ｍＬ遠心分離管に完全に移す
１０分にわたり５０００ｒｐｍで遠心分離する
上清 １ｍＬをＬＣバイアルに正確にピペットし、乾燥するまで（例えば翌日まで）２～８℃で貯蔵する（必要に応じて、任意の再検査のために、残余の上清を２～８℃で貯蔵する）
上清 １ｍＬを、６０℃にて窒素下で完全に乾燥させ、針が、サンプルに触れないがサンプルを素早く乾燥させるために十分に低いかを確かめる
乾燥したサンプルが入ったバイアルに、０．１μｍｏｌ／ｍＬの内部標準混合物 ０．２５ｍＬをピペットする
徹底的にボルテックスする
ＬＣバイアルインサートが入ったＬＣバイアルに、ピペットで移す
ＨＰＬＣ分析まで２～８℃で貯蔵する（工程３．６）

【0478】

標準調製
ＡＡ標準ストック溶液：１０μｍｏｌ／ｍＬ
・ 各ＡＡに関して、ＭＷに基づいて、１０μｍｏｌ／ｍＬストック溶液を調製するのに必要な重量を算出する
・ 下記の例を参照されたい：

【0479】

【表11】

【0480】

・ 算出した重量を、５０ｍＬメスフラスコに秤量する
・ ０．１Ｎ ＨＣｌで溶解させて目盛りに合わせる
・ キャップして反転させるか又はボルテックスすることにより、十分に混合する
・ ＨＰＬＣ分析まで２～８℃で貯蔵する（工程３．６）

【0481】

内部標準混合物：１μｍｏｌ／ｍＬ
・ 同一の１０ｍＬメスフラスコに、ノルバリンストック溶液（１０μｍｏｌ／ｍＬ）１．０ｍＬ及びサルコシンストック溶液（１０μｍｏｌ／ｍＬ）１．０ｍＬを正確にピペットする
・ ０．１Ｎ ＨＣｌで目盛りに合わせる
・ キャップして反転させるか又はボルテックスすることにより、十分に混合する
・ ＨＰＬＣ分析まで２～８℃で貯蔵する（工程３．６）

【0482】

内部標準混合物：０．１μｍｏｌ／ｍＬ
注記：この溶液は、乾燥後のサンプルの再構成用である
・ １０ｍＬメスフラスコに、内部標準混合物（１μｍｏｌ／ｍＬ）１．０ｍＬを正確にピペットする
・ ０．１Ｎ ＨＣｌで目盛りに合わせる
・ キャップして反転させるか又はボルテックスすることにより、十分に混合する
・ ＨＰＬＣ分析まで２～８℃で貯蔵する（工程３．６）

【0483】

５ＡＡ混合物（＋ｉＳＴＤ０．１）：０．０２５／０．１／０．２５μｍｏｌ／ｍＬ
・ 同一の１０ｍＬメスフラスコに、Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｎ－ｉＳＴＤ、Ｓ－ｉＳＴＤ、及びＰ（１０μｍｏｌ／ｍＬ）溶液 ｘｘμＬ（下記の表を参照されたい）を正確にピペットする
・ ０．１Ｎ ＨＣｌで目盛りに合わせる
・ キャップして反転させるか又はボルテックスすることにより、十分に混合する
・ ＨＰＬＣ分析まで２～８℃で貯蔵する（工程３．６）

【0484】

【表12】

【0485】

１７ＡＡ標準（＋ｉＳＴＤ０．１）混合物：０．１μｍｏｌ／ｍＬ
・ ０．１μｍｏｌ／ｍＬ １７ＡＡ標準溶液のアンプルを開封する
・ このＡＡ標準混合物 ０．９ｍＬをＬＣバイアルに正確にピペットする
・ 同一のＬＣバイアルに、ｉＳＴＤ混合物（１μｍｏｌ／ｍＬ）１００μＬを正確にピペットする
・ ボルテックスすることにより十分に混合する
・ ＬＣバイアルインサートが入ったＬＣバイアルに１００μＬアリコートＮＬＴを分注する
・ ＨＰＬＣ分析まで２～８℃で貯蔵する（工程３．６）

【0486】

ＨＰＬＣ条件

【0487】

【表13】

【0488】

【表14】

【0489】

ＨＰＬＣ分析
（サンプル分析の順序の例）

【0490】

【表15】

【0491】

システムの適合性の基準
定量に使用した目的の各ＡＡ（Ｄ／Ｓ／Ｇ／Ｒ）並びに標準の注入（ＵＶ及びＦＬＲの両方）での内部標準（ノルバリン及びサルコシン）の保持時間及びピーク面積を分析する。

【0492】

【表16】

【0493】

データ解析－システムの適合性が合格した場合にのみサンプルを分析する
積分ガイドライン
・ 目的のＡＡのみを積分する
・ 「自動積分」から開始する
・ 必要に応じて積分を手動で調整する

【0494】

目的のＡＡの同定
・ 目的のＡＡ及び１７ＡＡ（＋ｉＳＴＤ）標準混合物中の内部標準のＲＴは、５ＡＡ（＋ｉＳＴＤ）標準混合物のＲＴと一致するべきである
・ 各サンプル中のＡＡのＲＴは、標準（ＵＶ／ＦＬＲ）のＲＴと一致するべきである
相対面積（Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｒ）＝面積（Ｄ、Ｓ、Ｇ、Ｒ）／面積（ノルバリン）
相対面積（Ｐ）＝面積（Ｐ）／面積（サルコシン）

【0495】

標準較正曲線
・ 分析証明書で報告されている値を使用するか、又は標準調製中の希釈係数で調整した実重量を使用して、標準溶液の濃度を算出する。
・ 下記の標準の注入からの目的の各ＡＡの濃度に対して、平均面積又は平均相対面積をプロットする：０．０２５、０．１、及び０．２５μｍｏｌ／ｍＬ。線形回帰を実施する。
濃度＝ｍ＊面積又は相対面積＋ｂ
（式中、ｍは、線形近似曲線の傾きであり、ｂは、線形近似曲線のＹ切片である）
・ ＲＳＱは、０．９９以上であるべきである。
・ 線形性が損なわれる場合には、新たな誘導体化試薬／標準溶液を調製し、システムの異常を解決して試験を繰り返す。

【0496】

サンプル分析
・ ＵＶ及びＦＬＲの両方により定量を行ない得る
・ 相対面積（内部標準に対する面積比）を使用して定量を行なう
・ 線形近似標準曲線を使用して、各サンプル中のＡＡ：Ｇ、Ｒ、Ｄ、Ｓの濃度を算出する：
濃度、ＡＡ（μｍｏｌ／ｍＬ）＝（ｍ＊面積又は相対面積＋ｂ）
・ 各ＡＡの濃度を平均化することにより、全ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）の濃度を算出する：
濃度、全ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）（μｍｏｌ／ｍＬ）＝（濃度、Ｇ／２＋濃度、Ｒ＋濃度、Ｄ＋濃度、Ｓ＋濃度、Ｐ）／５
μｍｏｌ（全ＧＲＧＤＳＰ）（配列番号６０）／ｇ（コンジュゲート）＝濃度、全ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０）（μｍｏｌ／ｍＬ）×０．２５ｍＬ／１．０ｍＬ×２０ｍＬ／重量（ｇ）
μｍｏｌ（コンジュゲートＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０））／ｇ（コンジュゲート）＝μｍｏｌ（全ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０））／ｇ（コンジュゲート）－μｍｏｌ（残留遊離ＧＲＧＤＳＰ（配列番号６０））／ｇ（コンジュゲート）

【0497】

実施例２６：ＣＢＰ－ポリマー組成物中の残留遊離ペプチドを決定するための例示的なアッセイ
このアッセイは、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）を使用して、例えば、典型的には、１つ又は複数の精製工程を実施して、非コンジュゲートペプチドの相対な割合（例えば、９５％超、９８％、９９％、又はより多く）を除去した後の、ペプチド－ポリマーコンジュゲートを含む組成物中の残留非コンジュゲートペプチドの量を決定する。簡潔には、生理食塩水中のコンジュゲートのサンプルを、ペプチドの分子量と比べて高い分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を有するＭＷＣＯチューブに入れ、このチューブを遠心分離して、このコンジュゲートから残留ペプチドを分離し、既知の濃度の同一ペプチドを含む参照組成物を標準として使用するＬＣ－ＭＳにより、ペプチドの量を定量する。

【0498】

実施例２７：式（Ｉ）の化合物で修飾された抗線維性ポリマー中のアミンコンジュゲーション密度を決定するための例示的な定量的アミンアッセイ
このアッセイにより、アミン化合物で化学的に修飾されたポリマー中のアミン含有化合物（例えば式Ｉの化合物、例えば表４中の化合物１０１）の量が決定される。化学修飾ポリマーのサンプルを酸性加水分解に供し、この酸性加水分解によりコンジュゲートアミンが開裂され、加水分解サンプル中の全アミンの重量％を、標準として非コンジュゲートアミン化合物を使用して、紫外線検出を備える逆相液体クロマトグラフィー（ＬＣ－ＵＶ）により定量する。ＬＣピークの同一性を、質量分析によりさらに確認し得る。全アミンの重量％を、化学修飾ポリマー中のアミン化合物の％コンジュゲーションとして使用し得る。任意の適切な方法（例えば下記で説明する方法）を使用して、化学修飾ポリマーの非加水分解サンプル中の任意の残留する非コンジュゲートアミン化合物の量を決定し、この量を全ペプチド量から減算することにより、より正確な結果を得ることができる。

【0499】

このアッセイを、化合物１０１で化学的に修飾されたアルギン酸塩（即ち、ＣＭ－ＬＭＷ－Ａｌｇ－１０１）中の％コンジュゲーション密度を決定するために適用されるとして下記でさらに説明するが、当業者は、アミンを含まない多糖（例えばアルギン酸塩）又は別のポリマーを化学的に修飾するために使用される任意の式Ｉの化合物のコンジュゲーション密度を決定するために、このアッセイを容易に変更し得る。同様に、当業者は、下記に示す任意の機器、器具、又は化学物質を、このアッセイにおいて実質的に同一の機能又は役割を実施し得るか又は果たし得る別の機器、器具、又は化学物質に容易に置き換え得る。

【0500】

定義

【0501】

【表17】

【0502】

機器及び器具
機器
・ Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＬＣシステム（ＤＡＤ：１３μＬ／１０ｍｍフローセル）
・ Ａｇｉｌｅｎｔ ＳＱ ＭＳ検出器（Ｇ１９５６Ｂ）
・ ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェア
・ 加熱ブロックを備えたホット／撹拌プレート、ＩＫＡ ＲＣＴ ＢＳ００１
・ 分析天秤、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＸＰＥ１０５
・ 遠心分離機、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ａｌｌｅｇｒａ ２５Ｒ
・ ボルテックスミキサ、ＶＷＲ ９７０４３－５６２

【0503】

器具
・ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８、２．５μｍ、４．６×５０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ １８６００６０３７
・ ＳＧ－ＳＭ０００１参照物質（＞９８．０％純度）
・ ２Ｎ ＨＣｌ（ＡＣＳグレード）、ＢＤＨ ７２０３－１
・ アンモニア溶液２８％－３０％（ＡＣＳグレード）、ＭｉｌｌｉＰｏｒｅ Ｓｉｇｍａ １．０５４２３．１０００
・ アセトニトリル（ＬＣＭＳグレード）、Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａ９５５－４
・ 水（ＬＣＭＳグレード）、Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｗ６－４
・ ０．９％生理食塩水、ＲＯＢｉｏ ＳＡＬ－０９０
・ ＰＴＦＥ裏打ちキャップ付きマイクロ波反応バイアル、Ｃｈｅｍｇｌａｓｓ ＣＧ－４９２０－０２
・ Ｖｉｖａｓｐｉｎ ２０ ３ｋＤａ ＭＷＣＯ濃縮器、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ２８－９３２３－５８
・ ５０ｍＬ遠心分離管、ＶＷＲ １０１６０－１４０
・ クリンパ、Ｃｈｅｍｇｌａｓｓ ＣＧ－４９３０－２０
・ デキャッパー、ＶＷＲ １０８０６－３７２
・ メスシリンダー、クラスＡ
・ 容積測定トランスファーピペット（送達用）クラスＡ
・ メスフラスコ、クラスＡ
・ ガスタイトシリンジ１ｍＬ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ８１３１６
・ トランスファーピペット（２００μＬ可変容積）、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ３１２３００００５５
・ トランスファーピペット（１０００μＬ可変容積）、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ３１２３００００６３
・ トランスファーピペット（１０ｍＬ可変容積）、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ ３１２３００００８０
・ 使い捨てトランスファーピペット、ＶＷＲ １６００１－１８０
・ 撹拌子、ＶＷＲ ５８９４８－０７８
・ ＬＣバイアル及びキャップ、ＶＷＲ ４６６１０－７２４
・ 実験室のガラス製品一式

【0504】

手順
試薬調製
注記：体積を比例的に増減させて、より小さいバッチ又はより大きいバッチを作製し得る

【0505】

０．１％アンモニア水（水性移動相）
・ １Ｌメスシリンダーを使用して、ＬＣＭＳグレードの水 １Ｌを測定して移動相ボトルに移す。
・ １ｍＬ容積測定トランスファーピペット又はＨａｍｉｌｔｏｎシリンジを使用して、濃アンモニア １．０ｍＬを測定して同一の移動相ボトルに移す。
・ 手動で反転させたり振盪させたりすることにより、十分に混合する。
・ 使用期限／貯蔵条件－周囲で１ヶ月

【0506】

ＡＣＮ中の０．１％ アンモニア（有機移動相）
・ １Ｌメスシリンダーを使用して、ＬＣＭＳグレードのＡＣＮ １Ｌを測定して移動相ボトルに移す。
・ １ｍＬ容積測定トランスファーピペット又はＨａｍｉｌｔｏｎシリンジを使用して、濃アンモニア １．０ｍＬを測定して同一の移動相ボトルに移す。
・ 手動で反転させたり振盪させたりすることにより、十分に混合する。
・ 使用期限／貯蔵条件－周囲で１ヶ月

【0507】

固体コンジュゲートサンプルの酸性加水分解
凍結乾燥させたコンジュゲート固体 ５０±５ｍｇをマイクロ波反応バイルに秤量し、このバイアルの底にコンジュゲートが残っていることを確認する
１０ｍＬトランスファーピペット又は容積測定ピペットを使用して、２Ｎ ＨＣｌ １０．０ｍＬを添加する
撹拌子１個を入れる
クリンパによりＰＴＦＥ裏打ちキャップを密封する
各サンプルバイアルを、ホット／撹拌プレート上の適合する加熱ブロックに入れる
１２０分にわたり、１２０℃で加熱し、４００ｒｐｍで撹拌する
熱源から取り出し、周囲温度まで冷却する
使い捨てトランスファーピペットにより、溶液全体を反応バイアルから２５ｍＬメスフラスコに移す
空になった反応バイアルにＬＣＭＳグレードの水 ５ｍＬをピペットし、同一の使い捨てトランスファーピペットで内壁を十分にすすぎ、このすすぎ液を同一の２５ｍＬメスフラスコに完全に移す
上記の工程を２回繰り返す
ＬＣＭＳグレードの水でメスフラスコの目盛りに合わせる
５０ｍＬ遠心分離管に完全に移す
１０分にわたり３０００ｒｐｍで遠心分離する
上清をＨＰＬＣ分析にかける
２～８℃で貯蔵する

【0508】

生理食塩水中のコンジュゲートのサンプルの酸性加水分解
コンジュゲートの生理食塩水溶液 １０００±５０ｍｇを、マイクロ波反応バイアルに秤量する
１０ｍＬトランスファーピペット又は容積測定ピペットを使用して、２Ｎ ＨＣｌ １０．０ｍＬを添加する
撹拌子１個を入れる
クリンパによりＰＴＦＥ裏打ちキャップを密封する
各サンプルバイアルを、ホット／撹拌プレート上の適合する加熱ブロックに入れる
１２０分にわたり、１２０℃で加熱し、４００ｒｐｍで撹拌する
熱源から取り出し、周囲温度まで冷却する
使い捨てトランスファーピペットにより、溶液全体を反応バイアルから２５ｍＬメスフラスコに移す
空になった反応バイアルにＬＣＭＳグレードの水 ５ｍＬをピペットし、同一の使い捨てトランスファーピペットで内壁を十分にすすぎ、このすすぎ液を同一の２５ｍＬメスフラスコに完全に移す
上記の工程を２回繰り返す
ＬＣＭＳグレードの水でメスフラスコの目盛りに合わせる
５０ｍＬ遠心分離管に完全に移す
１０分にわたり３０００ｒｐｍで遠心分離する
上清をＨＰＬＣ分析にかける
２～８℃で貯蔵する

【0509】

固体コンジュゲート中の残留遊離アミンのサンプル調製
凍結乾燥させたコンジュゲート固体 ５０±５ｍｇを、シンチレーションバイアルに秤量する
このシンチレーションバイアルに、生理食塩水５．０ｍＬをピペットする
１０分にわたり振盪させたりボルテックスしたりすることにより、完全に溶解させる
ＭＷＣＯチューブに完全に移す
６０分にわたり５０００ｒｐｍで遠心分離する（膜の平坦面を、ローターアームと並行に配置する）
このＭＷＣＯチューブの上部を取り除いて廃棄する
底部のサンプルを５ｍＬメスフラスコに完全に移す
水又は生理食塩水で目盛りに合わせ、反転させて十分に混合する
シンチレーションバイアルに移して２～８℃で貯蔵する
アリコートをＨＰＬＣ分析に移す

【0510】

生理食塩水中におけるコンジュゲート中の残留遊離アミンのサンプル調製
生理食塩水中のコンジュゲート（又は非修飾アルギン酸塩とのブレンド）１０００±５０ｍｇを、ＷＭＣＯチューブに秤量する
このＭＷＣＯチューブに生理食塩水 ４．０ｍＬをピペットする
このチューブを、５回か又は溶液が十分に混合されるまで反転させたりボルテックスしたりして、遊離アミンを完全に抽出する
９０分にわたり５０００ｒｐｍで遠心分離する
このＭＷＣＯチューブの上部を取り除いて廃棄する
底部のサンプルを５ｍＬメスフラスコに完全に移す
水で目盛りに合わせ、反転させて十分に混合する
シンチレーションバイアルに移して２～８℃で貯蔵する
アリコートをＨＰＬＣ分析に移す

【0511】

標準調製
標準溶液：１ｍｇ／ｍＬ
ＳＧ－ＳＭ０００１標準 ５０．００±５．００ｍｇを、シンチレーションバイアルに秤量する
ＬＣＭＳグレードの水 約１０ｍＬを添加し、振盪させたりボルテックスしたりして固体を完全に溶解させる
使い捨てトランスファーピペットを使用して、このシンチレーションバイアルをＬＣＭＳグレードの水で２回すすぐことにより、５０ｍＬメスフラスコに完全に移す
ＬＣＭＳグレードの水で体積を合わせ、十分に混合する
２～８℃で貯蔵する

【0512】

標準溶液：０．０１ｍｇ／ｍＬ
・ １０ｍＬメスフラスコに、この１ｍｇ／ｍＬ溶液 １００μＬをピペットする
・ ＬＣＭＳグレードの水で体積を合わせる
・ 反転させることにより十分に混合する
・ ２～８℃で貯蔵する

【0513】

ＨＰＬＣ条件

【0514】

【表18】

【0515】

ＨＰＬＣ分析
サンプル分析の順序の例

【0516】

【表19】

【0517】

システムの適合性の基準

【0518】

【表20】

【0519】

データ解析－システムの適合性が合格した場合にのみサンプルを分析する
積分ガイドライン
・ アミンピークのみを積分する
・ 「自動積分」から開始する
・ 必要に応じて積分を手動で調整する

【0520】

アミンの同定
・ （任意選択）各サンプル中のアミンピークのｍ／ｚは、３９２．１±０．５内であるべきである。
・ 各サンプルにおけるＵＶでのアミンピークのＲＴは、標準のＲＴと一致する。

【0521】

濃度、標準（ｍｇ／ｍＬ）＝
重量（ｍｇ）／５０ｍＬ／希釈係数、
ここで、１．０ｍｇ／ｍＬ 標準の場合には、希釈係数＝１；
０．０１ｍｇ／ｍＬ 標準の場合には、希釈係数＝１００

【0522】

濃度、遊離アミン（ｍｇ／ｍＬ）＝
面積、非加水分解サンプル／面積、０．０１標準×濃度、０．０１標準

【0523】

％残留遊離アミン＝
濃度、遊離アミン（ｍｇ／ｍＬ）×５ｍＬ／
重量、非加水分解コンジュゲート（ｍｇ）×１００

【0524】

濃度、全アミン（ｍｇ／ｍＬ）＝
面積、加水分解サンプル／面積、１．０標準×濃度、１．０標準

【0525】

％全アミン＝
濃度、全アミン（ｍｇ／ｍＬ）×２５ｍＬ／重量、加水分解コンジュゲート（ｍｇ）×１００

【0526】

均等物及び範囲
本出願は、それらの全体が参照により本明細書において援用されている、種々の発行された特許、公開された特許出願、学術記事、書籍、マニュアル及び他の刊行物を参照する。援用された文献のいずれかと、本明細書との間に齟齬が存在する場合、本明細書が優先されるべきである。加えて、従来技術に属する本開示の特定の実施形態のいずれかは、いずれかの１つ又は複数の請求項からは明示的に除外され得る。このような実施形態は技術分野における当業者に公知であるとみなされるため、これらは、本明細書において明示的に除外されていない場合においても除外され得る。本開示の特定の実施形態のいずれかは、従来技術の存在に関連しているかに関係なく、いかなる理由によってもいずれかの請求項から除外可能である。

【0527】

当業者は、多くのルーチン的な実験を行うことなく、本明細書に記載の特定の実施形態の均等物を認識又は確認可能である。本明細書に記載の本実施形態の範囲が上記の明細書、図面又は実施例に限定されることは意図されておらず、添付の特許請求の範囲に記載されているとおりであることが意図されている。当業者は、以下の特許請求の範囲において定義されているとおり、本開示の趣旨又は範囲を逸脱することなく、本記載に対する種々の変更及び修正が可能であり得ることを認めるであろう。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13A】

【図13B】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図24-1】

【図24-2】

【図24-3】

【図24-4】

【図24-5】

【図24-6】

【図24-7】

【図24-8】

【図24-9】

【図24-10】

【図24-11】

【図24-12】

【図24-13】

【図24-14】

【図24-15】

【図24-16】

【図24-17】

【図24-18】

【図24-19】

【図24-20】

【図24-21】

【図24-22】

【図24-23】

【図24-24】

【図24-25】

【図24-26】

【図24-27】

【図24-28】

【図24-29】

【配列表】

2022514144000001.app

【国際調査報告】