▶ シャンドン ダンホン ファーマスーティカル カンパニー リミテッドの特許一覧
特表2022-514714式（ＩＶ）で表される化合物の製造工程経路、結晶形及びその製造方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-14
(54)【発明の名称】式（ＩＶ）で表される化合物の製造工程経路、結晶形及びその製造方法
(51)【国際特許分類】
C07D 249/08 20060101AFI20220204BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20220204BHJP
A61K 31/4196 20060101ALI20220204BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220204BHJP
【ＦＩ】
C07D249/08 535
C07D249/08 CSP
A61P1/16
A61K31/4196
A61P43/00 111
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021536243
(86)(22)【出願日】2019-12-20
(85)【翻訳文提出日】2021-06-21
(86)【国際出願番号】 CN2019127155
(87)【国際公開番号】W WO2020125776
(87)【国際公開日】2020-06-25
(31)【優先権主張番号】201811565301.3
(32)【優先日】2018-12-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517429008
【氏名又は名称】シャンドン ダンホン ファーマスーティカル カンパニー リミテッド
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＡＮＤＯＮＧ ＤＡＮＨＯＮＧ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】110000578
【氏名又は名称】名古屋国際特許業務法人
(72)【発明者】
【氏名】ルオ ジー
(72)【発明者】
【氏名】リー シァオリン
(72)【発明者】
【氏名】ヤン ヤーシュン
(72)【発明者】
【氏名】ヤン ルールー
(72)【発明者】
【氏名】リー ペン
(72)【発明者】
【氏名】フー ハイイン
(72)【発明者】
【氏名】リー ジアン
(72)【発明者】
【氏名】チェン シューフイ
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BC60
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA75
4C086ZC02
4C086ZC51
(57)【要約】
式（ＩＶ）で表される化合物の製造経路、結晶形及びその製造方法を開示し、更に、ＳＳＡＯ関連疾患を治療する医薬の製造における前記結晶形の使用を開示する。
【化１】
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．０５±０．２°、１２．３４±０．２°、２２．５２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。【化1】
【請求項2】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．０５±０．２°、１２．３４±０．２°、１６．６０±０．２°、１７．１７±０．２°、１７．８３±０．２°、２０．８２±０．２°、２２．５２±０．２°、２６．０３±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。
【請求項3】
ＸＲＰＤスペクトルが図１に示された通りである、請求項２に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。
【請求項4】
示差走査熱量曲線が２２３．０℃±３．０℃において吸熱ピークのピーク値を有する、請求項１～３のいずれか１項に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。
【請求項5】
ＤＳＣスペクトルが図２に示された通りである、請求項４に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。
【請求項6】
熱重量分析曲線が１５０．０℃±３℃の際に重量が３．７８％減少する、請求項１～３のいずれか１項に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。
【請求項7】
ＴＧＡスペクトルが図３に示された通りである、請求項６に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。
【請求項8】
式（ＩＶ）で表される化合物のいずれかの形態をエステル系、エーテル系溶媒に添加してスラリー化させて製造する工程を含み、ここで、スラリー化温度は２０℃～４０℃から選択される、式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形の製造方法。
【請求項9】
エステル系溶媒は酢酸エチルから選択され、エーテル系溶媒はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルから選択される、請求項８に記載の製造方法。
【請求項10】
スラリー化時間は３０時間～６０時間から選択される、請求項８に記載の製造方法。
【請求項11】
式（ＩＶ）で表される化合物と有機溶媒の重量比が１：５～４０から選択される、請求項８に記載の製造方法。
【請求項12】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１１．２７±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項13】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１１．２７±０．２°、１２．４６±０．２°、１８．４４±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°、２５．５１±０．２°、２５．９４±０．２°、２６．４９±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１２に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項14】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１１．２７±０．２°、１２．４６±０．２°、１８．４４±０．２°、２０．０３±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°、２３．３７±０．２°、２４．１９±０．２°、２５．５１±０．２°、２５．９４±０．２°、２６．４９±０．２°、２８．１２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項１３に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項15】
ＸＲＰＤスペクトルが図４に示された通りである、請求項１４に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項16】
示差走査熱量曲線が２２１．９℃±３．０℃において吸熱ピークのピーク値を有する、請求項１２～１５のいずれか１項に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項17】
ＤＳＣスペクトルは図５に示された通りである、請求項１６に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項18】
熱重量分析曲線が１５０．０℃±３℃の際に重量が１．０５％減少する、請求項１２～１５のいずれか１項に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項19】
ＴＧＡスペクトルが図６に示された通りである、請求項１８に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項20】
式（ＩＶ）で表される化合物のいずれかの形態をエステル系、エーテル系、アルコール系、アセトン、アセトニトリル、ｎ－ヘプタン、水、有機混合物溶媒及び水と有機混合溶媒に添加してスラリー化させて製造する工程を含み、ここで、スラリー化温度は４０℃～６０℃から選択される、式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法。
【請求項21】
エステル系溶媒は酢酸エチルから選択され、エーテル系溶媒はテトラヒドロフランとメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルから選択され、アルコール系溶媒はエタノールから選択され、有機混合物溶媒は体積比が９５：５であるメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルとメタノールの混合物溶媒、及び体積比が９５：５であるメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルとエタノールの混合物溶媒から選択され、水と有機混合溶媒は体積比が５：９５である水とアセトンの混合物溶媒、体積比が５：９５である水とアセトニトリルの混合物溶媒及び体積比が５：９５である水とテトラヒドロフランの混合物溶媒から選択さる、請求項２０に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法。
【請求項22】
スラリー化時間は３０時間～６０時間から選択される、請求項１９に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法。
【請求項23】
式（ＩＶ）で表される化合物と有機混合溶媒の重量体積比が１：５～４０から選択される、請求項１９に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法。
【請求項24】
ＳＳＡＯ関連疾患を治療する医薬の製造における、請求項１～７のいずれか一項に記載のＡ結晶形又は請求項１２～１９のいずれか一項に記載の結晶形Ｂの使用。
【請求項25】
ＳＳＡＯ関連疾患が非アルコール性脂肪性肝炎である、請求項２４に記載の使用。
【請求項26】
以下の工程を含む：【化2】
【化3】
溶媒ａは酢酸から選択され；
試薬ｂは塩酸から選択される。）
【請求項27】
溶媒ａとＳＭ１の体積：質量は３．０～３．５：１であり、試薬ｂとＳＭ１の体積：質量は３．０～１０：１である、請求項２６に記載の式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法。
【請求項28】
反応の内部温度を７５～８０℃に制御する、請求項２７に記載の式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法。
【請求項29】
以下の工程を含む、請求項２８に記載の式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法。【化4】
【請求項30】
試薬ｃはピリジンから選択され；化合物Ｄは、アルカリ条件下での加水分解反応により製造され；試薬ｄは臭化カリウムから選択され；試薬ｅは次亜塩素酸ナトリウムから選択され、試薬ｆは酢酸銀から選択される、請求項２９に記載の式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
本出願は以下の優先権を主張する：
ＣＮ２０１８１１５６５３０１．３、出願日は２０１８年１２月２０日である。
［技術分野］
本発明は式（ＩＶ）で表される化合物の製造経路、結晶形及びその製造方法を開示し、更に、ＳＳＡＯ関連疾患を治療する医薬の製造における前記結晶形の使用を含む。
ＣＮ２０１８１１５６５３０１．３、出願日は２０１８年１２月２０日である。
［技術分野］
本発明は式（ＩＶ）で表される化合物の製造経路、結晶形及びその製造方法を開示し、更に、ＳＳＡＯ関連疾患を治療する医薬の製造における前記結晶形の使用を含む。
【0002】
［背景技術］
ヒトを含むほとんどの生物では、２つの群の哺乳類のアミンオキシダーゼは、内因的に生成又は外因的に吸収された様々なモノアミン－、ジアミン－、及びポリアミンを代謝する。これらには、ほとんどの細胞型のミトコンドリアに存在し、補因子として共有結合したフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）を使用するモノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ－Ａ及びＭＡＯ－Ｂ）が含まれる。ポリアミンオキシダーゼは、脱アミノ化されたスペルミンとスペルミジンを酸化するもう１つのＦＡＤ依存性アミンオキシダーゼである。ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１は、銅依存性の２番目のグループに属し、ＦＡＤに加えて、酸化型チロシン残基（ＴＰＱ又はＬＴＱと略される）等の他の補因子を使用する。ＭＡＯ及びＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１の酸化的脱アミノ化には、ドーパミン、チラミン、ベンジルアミンなどのモノアミンの一般的な基質が含まれる。ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１は、内因性メチルアミンとアミノアセトンも酸化する。
ヒトを含むほとんどの生物では、２つの群の哺乳類のアミンオキシダーゼは、内因的に生成又は外因的に吸収された様々なモノアミン－、ジアミン－、及びポリアミンを代謝する。これらには、ほとんどの細胞型のミトコンドリアに存在し、補因子として共有結合したフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）を使用するモノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ－Ａ及びＭＡＯ－Ｂ）が含まれる。ポリアミンオキシダーゼは、脱アミノ化されたスペルミンとスペルミジンを酸化するもう１つのＦＡＤ依存性アミンオキシダーゼである。ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１は、銅依存性の２番目のグループに属し、ＦＡＤに加えて、酸化型チロシン残基（ＴＰＱ又はＬＴＱと略される）等の他の補因子を使用する。ＭＡＯ及びＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１の酸化的脱アミノ化には、ドーパミン、チラミン、ベンジルアミンなどのモノアミンの一般的な基質が含まれる。ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１は、内因性メチルアミンとアミノアセトンも酸化する。
【0003】
セミカルバジド感受性アミンオキシダーゼ（ＳＳＡＯ）は、第一級アミンオキシダーゼ、血漿アミンオキシダーゼ、ベンジルアミンオキシダーゼとも呼ばれ、構造上では血管接着タンパク質－１（ＶＡＰ－１）と同じである。ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１は、タンパク質の説明に使用される。
【0004】
最初は、いくつかの化合物がその酵素活性を阻害する能力によってこれらの酵素の幾つかを定義した。例えば、クロルギリンもＬ－デプレニルもＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１のアミンオキシダーゼ活性を阻害することはできないが、ＭＡＯ－Ａはクロルギリンによって選択的に阻害され、ＭＡＯ－ＢはＬ－デプレニルによって選択的に阻害される。ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１はセミカルバジドによって阻害できるため、セミカルバジド感受性アミンオキシダーゼと呼ばれる。
【0005】
ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１は細胞外酵素であり、それは非常に短い細胞質尾部、単一の膜貫通ドメイン、及びアミンオキシダーゼ活性の活性中心を含む大きくて高度にグリコシル化された細胞外ドメインを含む。ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１は、一部の動物の血漿中を循環する溶解形態でも存在する。当該形態は、膜結合ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１の断片化生成物であることは既に示された。
【0006】
ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１は２つの生理機能を持っているようで：１つは前記のアミンオキシダーゼ活性であり、もう１つは細胞接着活性である。二つの活性は炎症過程に関連している。ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１が炎症部位からの炎症細胞の循環血管外遊出において重要な役割を果たしていることが示された。ＶＡＰ－１抗体は、ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１タンパク質の接着部位をブロックすることによって炎症過程を軽減することが確認され、大量の生体外及び生体内でのノックアウトの証拠を提供し、ＳＳＡＯ／ＶＡＰ－１が重要な炎症細胞メディエーターであることは現在明らかになった。
【0007】
ＷＯ２０１３１６３６７５は化合物ＰＸＳ－４７２８Ａを報道し、その構造は
【0008】
【化1】
【0009】
［発明の開示］
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．０５±０．２°、１２．３４±０．２°、２２．５２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形を提供する。
本発明は粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．０５±０．２°、１２．３４±０．２°、２２．５２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形を提供する。
【0010】
【化2】
【0011】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：９．０５±０．２°、１２．３４±０．２°、１６．６０±０．２°、１７．１７±０．２°、１７．８３±０．２°、２０．８２±０．２°、２２．５２±０．２°、２６．０３±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【0012】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形のＸＲＰＤスペクトルは図１に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表１に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形のＸＲＰＤスペクトル解析データは表１に示された通りである。
【0013】
【表1】
【0014】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形の示差走査熱量曲線は２２３．０℃±３．０℃において吸熱ピークのピーク値を有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形のＤＳＣスペクトルは図２に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形のＤＳＣスペクトルは図２に示された通りである。
【0015】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形の熱重量分析曲線は１５０．０℃±３℃の際に重量が３．７８％減少する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形のＴＧＡスペクトルは図３に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形のＴＧＡスペクトルは図３に示された通りである。
【0016】
本発明は、更に式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形の製造方法を提供し、式（ＩＶ）で表される化合物のいずれかの形態をエステル系、エーテル系溶媒に添加してスラリー化させて製造する工程を含み、ここで、スラリー化温度は２０℃～４０℃から選択される。
【0017】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記エステル系溶媒は酢酸エチルから選択され、エーテル系溶媒はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルから選択される。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記スラリー化時間は３０時間～６０時間から選択される。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記スラリー化時間は３０時間～６０時間から選択される。
【0018】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物と有機溶媒の重量体積比は１：５～４０から選択される。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１１．２７±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形を提供する。
本発明は、更に、粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１１．２７±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形を提供する。
【0019】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルは以下の２θ角：１１．２７±０．２°、１２．４６±０．２°、１８．４４±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°、２５．５１±０．２°、２５．９４±０．２°、２６．４９±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【0020】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１１．２７±０．２°、１２．４６±０．２°、１８．４４±０．２°、２０．０３±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°、２３．３７±０．２°、２４．１９±０．２°、２５．５１±０．２°、２５．９４±０．２°、２６．４９±０．２°、２８．１２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する。
【0021】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形のＸＲＰＤスペクトルは図４に示された通りである。
【0022】
【表2】
【0023】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の示差走査熱量曲線は２２１．９℃±３．０℃において吸熱ピークのピーク値を有する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形のＤＳＣスペクトルは図５に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形のＤＳＣスペクトルは図５に示された通りである。
【0024】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の熱重量分析曲線は１５０．０℃±３℃の際に重量が１．０５％減少する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形のＴＧＡスペクトルは図６に示された通りである。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形のＴＧＡスペクトルは図６に示された通りである。
【0025】
本発明は、更に、式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法を提供し、式（ＩＶ）で表される化合物のいずれかの形態をエステル系、エーテル系、アルコール系、アセトン、アセトニトリル、ｎ－ヘプタン、水、有機混合物溶媒及び水と有機混合溶媒に添加してスラリー化させて製造する工程を含み、ここで、スラリー化温度は４０℃～６０℃から選択される。
【0026】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法であって、ここで、前記エステル系溶媒は酢酸エチルから選択され、エーテル系溶媒はテトラヒドロフランとメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルから選択され、アルコール系溶媒はエタノールから選択され、有機混合物溶媒は体積比が９５：５であるメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルとメタノールの混合物溶媒、及び体積比が９５：５であるメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルとエタノールの混合物溶媒から選択され、水と有機混合溶媒は体積比が５：９５である水とアセトンの混合物溶媒、体積比が５：９５である水とアセトニトリルの混合物溶媒及び体積比が５：９５である水とテトラヒドロフランの混合物溶媒から選択さる。
【0027】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法であって、ここで、スラリー化時間は３０時間～６０時間から選択される。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法であって、ここで、式（ＩＶ）で表される化合物と有機溶媒の重量体積比は１：５～４０から選択される。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法であって、ここで、式（ＩＶ）で表される化合物と有機溶媒の重量体積比は１：５～４０から選択される。
【0028】
本発明は、更に、ＳＳＡＯ関連疾患を治療する医薬の製造における、前記Ａ結晶形又は前記Ｂ結晶形の使用を提供する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記ＳＳＡＯ関連疾患は非アルコール性脂肪性肝炎である。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記ＳＳＡＯ関連疾患は非アルコール性脂肪性肝炎である。
【0029】
本発明は、更に、式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法を提供し、
【0030】
【化3】
【0031】
【化4】
ここで、
溶媒ａは酢酸から選択され；
試薬ｂは塩酸から選択される。
【0032】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法であって、ここで、溶媒ａとＳＭ１の体積：質量は３．０～３．５：１であり、試薬ｂとＳＭ１の体積：質量は３．０～１０：１である
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法であって、ここで、反応の内部温度を７５～８０℃に制御する。
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法であって、ここで、反応の内部温度を７５～８０℃に制御する。
【0033】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法であって、それは以下の工程を含む。
【0034】
【化5】
【0035】
本発明の幾つかの実施の態様において、前記式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法であって、ここで、試薬ｃはピリジンから選択され；化合物Ｄは、アルカリ条件下での加水分解反応により製造され；試薬ｄは臭化カリウムから選択され；試薬ｅは次亜塩素酸ナトリウムから選択され、前記試薬ｆは酢酸銀から選択される。
【0036】
［技術的効果］
本発明の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形及びＢ結晶形は、良好な安定性を有する。式（ＩＶ）で表される化合物及び式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形は、生体外試験において、ヒト組換えＶＡＰ－１／ＳＳＡＯの酵素活性を阻害する、及びＶＡＰ－１／ＳＳＡＯ細胞を阻害する非常に強い活性を示した。
本発明の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形及びＢ結晶形は、良好な安定性を有する。式（ＩＶ）で表される化合物及び式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形は、生体外試験において、ヒト組換えＶＡＰ－１／ＳＳＡＯの酵素活性を阻害する、及びＶＡＰ－１／ＳＳＡＯ細胞を阻害する非常に強い活性を示した。
【0037】
［定義と説明］
特に断りのない限り、本明細書に用いられる以下の用語と句は下記の意味を含む。一つの特定の句又は用語は、特に定義されていない場合、不確定か不明であると考えられるものではなく、一般的な意味で理解すべきである。本明細書に商品名が現れる場合、その対応する商品又はその活性成分を表すことが意図される。
特に断りのない限り、本明細書に用いられる以下の用語と句は下記の意味を含む。一つの特定の句又は用語は、特に定義されていない場合、不確定か不明であると考えられるものではなく、一般的な意味で理解すべきである。本明細書に商品名が現れる場合、その対応する商品又はその活性成分を表すことが意図される。
【0038】
本発明の中間体化合物は、以下に挙げられる具体的な実施の態様、他の化学合成法と組み合わせた実施の態様、及び当業者に周知である等価の置き換え方式を含む、当業者に周知である複数の合成方法により調製することができる。好ましい実施の態様は、本発明の実施例が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【0039】
本発明の具体的な実施の態様の化学反応は適当な溶剤において完成されるものであり、前記溶剤は本発明の化学変化及びその必要な試薬及び材料に適しなければならない。本発明の化合物を得るために、当業者は従来の実施の態様に基づき合成ステップ又は反応フローを変形又は選択する必要があることがある。
【0040】
以下に実施の形態により本発明を詳しく説明するが、これらの実施の形態は本発明を何らか制限するものではない。
本発明の化合物の、当業者に周知の通常の方法により構造を確認することができ、例えば、本発明が化合物の絶対配置に関するものである場合、当該絶対配置は当該分野における通常の技術的手段により確認することができる。例えば、単結晶Ｘ線回折法（ＳＸＲＤ）では、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回折計を使用して、培養した単結晶の回折強度データを収集し、光源はＣｕＫα線であり、走査方式はφ／ω走査であり、関連データを収集した後、更に、直接法（Ｓｈｅｌｘｓ９７）を利用して結晶形の構造を解析し、これにより、化合物の絶対配置を確認できる。
本発明の化合物の、当業者に周知の通常の方法により構造を確認することができ、例えば、本発明が化合物の絶対配置に関するものである場合、当該絶対配置は当該分野における通常の技術的手段により確認することができる。例えば、単結晶Ｘ線回折法（ＳＸＲＤ）では、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ８ ｖｅｎｔｕｒｅ回折計を使用して、培養した単結晶の回折強度データを収集し、光源はＣｕＫα線であり、走査方式はφ／ω走査であり、関連データを収集した後、更に、直接法（Ｓｈｅｌｘｓ９７）を利用して結晶形の構造を解析し、これにより、化合物の絶対配置を確認できる。
【0041】
本発明に用いられる全ての溶剤は市販されるものであり、更に精製することなく使用できる。
本発明は下記の略語を用いる：ＤＭＦはジメチルホルムアミドを表し；ＤＣＭはジクロロメタンを表し；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し；ＭｅＯＨはメタノールを表し；ＭｓＯＨはメタンスルホン酸を表し；ＥｔＯＨはエタノールを表し；ＮａＯＨは水酸化ナトリウムを表し；ＴＥＡはトリエチルアミンを表し；ＨＣｌは塩酸を表し；Ｔｏｌはトルエンを表し；ＫＯＨは水酸化カリウムを表し；ＴＥＢＡＣはベンジルトリエチルアンモニウムクロリドを表し；ＫＢｒは臭化カリウムを表し；ＮａＨＣＯ３は炭酸水素ナトリウムを表し；ＮａＣｌＯは次亜塩素酸ナトリウムを表し；ＴＥＭＰＯは２，２，６，６－テトラメチルピペリジンオキシドを表し；Ｎａ２Ｓ２Ｏ３はチオ硫酸ナトリウムを表し；ＡｃＯＨは酢酸を表し；ＮＭＰはＮ－メチルピロリドンを表し；ＡｇＯＡｃは酢酸銀を表し；２－ＭｅＴＨＦは２－メチルテトラヒドロフランを表し；ＤＡＳＴはジエチルアミノサルファートリフルオリドを表し；ＴＢＳＣｌはｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシランを表し；ＤＭＰはフタル酸ジメチルを表し；ＮａＨＭＤＳはナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドを表し；ＴＢＡＦはフッ化テトラブチルアンモニウムを表し；ＭｇＥｔＢｒは臭化エチルマグネシウムを表す。
本発明は下記の略語を用いる：ＤＭＦはジメチルホルムアミドを表し；ＤＣＭはジクロロメタンを表し；ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドを表し；ＭｅＯＨはメタノールを表し；ＭｓＯＨはメタンスルホン酸を表し；ＥｔＯＨはエタノールを表し；ＮａＯＨは水酸化ナトリウムを表し；ＴＥＡはトリエチルアミンを表し；ＨＣｌは塩酸を表し；Ｔｏｌはトルエンを表し；ＫＯＨは水酸化カリウムを表し；ＴＥＢＡＣはベンジルトリエチルアンモニウムクロリドを表し；ＫＢｒは臭化カリウムを表し；ＮａＨＣＯ３は炭酸水素ナトリウムを表し；ＮａＣｌＯは次亜塩素酸ナトリウムを表し；ＴＥＭＰＯは２，２，６，６－テトラメチルピペリジンオキシドを表し；Ｎａ２Ｓ２Ｏ３はチオ硫酸ナトリウムを表し；ＡｃＯＨは酢酸を表し；ＮＭＰはＮ－メチルピロリドンを表し；ＡｇＯＡｃは酢酸銀を表し；２－ＭｅＴＨＦは２－メチルテトラヒドロフランを表し；ＤＡＳＴはジエチルアミノサルファートリフルオリドを表し；ＴＢＳＣｌはｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシランを表し；ＤＭＰはフタル酸ジメチルを表し；ＮａＨＭＤＳはナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドを表し；ＴＢＡＦはフッ化テトラブチルアンモニウムを表し；ＭｇＥｔＢｒは臭化エチルマグネシウムを表す。
【0042】
化合物は手動で名付けられ、又はＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）ソフトウェアで名付けられ、市販化合物はベンダー名を用いる。
本発明の粉末Ｘ線回折（Ｘ－ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）方法
計器の型番：ブルカーＤ８ ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折計
測定方法：約１０～２０ｍｇの試料をＸＲＰＤの検出に使用する。
本発明の粉末Ｘ線回折（Ｘ－ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ、ＸＲＰＤ）方法
計器の型番：ブルカーＤ８ ａｄｖａｎｃｅ Ｘ線回折計
測定方法：約１０～２０ｍｇの試料をＸＲＰＤの検出に使用する。
【0043】
詳細なＸＲＰＤパラメータは下記の通りである：
Ｘ線管：Ｃｕ、ｋα、（λ＝１．５４０５６Ａ）。
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４～４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１２秒
サンプルパン回転数：１５ｒｐｍ
本発明の示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）方法
計器の型番：ＴＡ Ｑ２０００示差走査熱量計
測定方法：試料（約１ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム製坩堝に量り取って測定を行い、５０ｍＬ／ｍｉｎ、Ｎ２の条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を３０℃（室温）から３００℃（又は３５０℃）まで加熱する。
Ｘ線管：Ｃｕ、ｋα、（λ＝１．５４０５６Ａ）。
管電圧：４０ｋＶ、管電流：４０ｍＡ
発散スリット：０．６０ｍｍ
センサスリット：１０．５０ｍｍ
散乱防止スリット：７．１０ｍｍ
走査範囲：４～４０ｄｅｇ
ステップ角：０．０２ｄｅｇ
ステップ幅：０．１２秒
サンプルパン回転数：１５ｒｐｍ
本発明の示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒ、ＤＳＣ）方法
計器の型番：ＴＡ Ｑ２０００示差走査熱量計
測定方法：試料（約１ｍｇ）をＤＳＣアルミニウム製坩堝に量り取って測定を行い、５０ｍＬ／ｍｉｎ、Ｎ２の条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を３０℃（室温）から３００℃（又は３５０℃）まで加熱する。
【0044】
本発明の熱重量分析（Ｔｈｅｒｍａｌ ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ、ＴＧＡ）方法
計器の型番：ＴＡ Ｑ５０００ＩＲ熱重量分析計
測定方法：試料（２～５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に量り取って測定を行い、２５ｍＬ／ｍｉｎ、Ｎ２の条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温から３５０℃まで、又は重量が２０％減少するまで加熱する。
計器の型番：ＴＡ Ｑ５０００ＩＲ熱重量分析計
測定方法：試料（２～５ｍｇ）をＴＧＡ白金坩堝に量り取って測定を行い、２５ｍＬ／ｍｉｎ、Ｎ２の条件で、１０℃／ｍｉｎの昇温速度で、試料を室温から３５０℃まで、又は重量が２０％減少するまで加熱する。
【0045】
本発明のＸ線単結晶回折方法
計器の型番：Ｒｉｇａｋｕ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ ＸｔａＬＡＢ Ｓｙｎｅｒｇｙ－Ｓ
測定方法：試料を室温の条件下で１ｍＬのジクロロメタン／メタノール（１：１）に溶解させる。試料溶液を４ｍＬの半密閉バイアルに置き、室温でゆっくりと蒸発させる。翌日、無色の塊状結晶形が得られる。回折実験温度はＴ＝９９．９９（１１）Ｋである。
計器の型番：Ｒｉｇａｋｕ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ ＸｔａＬＡＢ Ｓｙｎｅｒｇｙ－Ｓ
測定方法：試料を室温の条件下で１ｍＬのジクロロメタン／メタノール（１：１）に溶解させる。試料溶液を４ｍＬの半密閉バイアルに置き、室温でゆっくりと蒸発させる。翌日、無色の塊状結晶形が得られる。回折実験温度はＴ＝９９．９９（１１）Ｋである。
【0046】
計器のパラメータ：
Ｒｉｇａｋｕ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ ＸｔａＬＡＢ Ｓｙｎｅｒｇｙ ｆｏｕｒ－ｃｉｒｃｌｅ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ ｅｑｕｉｐｐｅｄ ｗｉｔｈ ａ ＨｙＰｉｘ－６０００ＨＥ ａｒｅａ ｄｅｔｅｃｔｏｒ。
Ｒｉｇａｋｕ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ ＸｔａＬＡＢ Ｓｙｎｅｒｇｙ ｆｏｕｒ－ｃｉｒｃｌｅ ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ ｅｑｕｉｐｐｅｄ ｗｉｔｈ ａ ＨｙＰｉｘ－６０００ＨＥ ａｒｅａ ｄｅｔｅｃｔｏｒ。
【0047】
吹付低温装置：Ｏｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｔｒｅａｍ ８００。
Ｃｕ：λ＝１．５４１８４Ａ、５０Ｗ、多層膜ミラー付きマイクロフォーカス光源（μ－ＣＭＦ）。
Ｃｕ：λ＝１．５４１８４Ａ、５０Ｗ、多層膜ミラー付きマイクロフォーカス光源（μ－ＣＭＦ）。
【0048】
結晶形からＣＣＤ検出器までの距離：ｄ＝３５ｍｍ
管電圧：５０ｋＶ
管電流：１ｍＡ
管電圧：５０ｋＶ
管電流：１ｍＡ
【図面の簡単な説明】
【0049】
【発明を実施するための形態】
【0050】
本発明の内容がよりよく分かるように、以下に具体的な実施の形態を参照しながら更に説明するが、具体的な実施の態様は本発明の内容を制限するものではない。
実施例１：式（ＩＶ）で表される化合物の製造
実施例１：式（ＩＶ）で表される化合物の製造
【0051】
【化6】
【0052】
工程１：
清潔で乾燥した５０Ｌの三ツ口フラスコにＭｅＯＨ（２．５Ｌ）を添加し、攪拌を開始させた後、ＳＭＡ（５７２ｇ、４．８０ｍｏｌ）を添加した。氷水浴で、反応系の温度を０～３０℃に制御し、反応系にゆっくりと塩化アセチル（２．２６ｋｇ、２８．８１ｍｏｌ、２．０６Ｌ）を滴下し、当該段階で熱を激しく放出するため、滴下速度を注意深く制御した。３時間滴下して滴下を完了させた。添加完了後、氷水浴を移り去り、反応系の温度を２０～３０℃に制御しながら続いて１６時間攪拌した。攪拌を停止し、反応溶液を卓上吸引フィルターに移して吸引濾過し、１ＬのＭｅＯＨで１回すすぎ、ケーキを収集した。ケーキを吸引乾燥させた後、清潔なトレーに移し、室温で２４時間以上放置して乾燥させた。材料を収集し、化合物Ａを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．１８（ｂｒｓ、１Ｈ）、１０．５９～１０．５３（ｍ、１Ｈ）、８．０８～７．９７（ｍ、２Ｈ）、７．０４～６．９６（ｍ、２Ｈ）、４．２４（ｓ、３Ｈ）。
清潔で乾燥した５０Ｌの三ツ口フラスコにＭｅＯＨ（２．５Ｌ）を添加し、攪拌を開始させた後、ＳＭＡ（５７２ｇ、４．８０ｍｏｌ）を添加した。氷水浴で、反応系の温度を０～３０℃に制御し、反応系にゆっくりと塩化アセチル（２．２６ｋｇ、２８．８１ｍｏｌ、２．０６Ｌ）を滴下し、当該段階で熱を激しく放出するため、滴下速度を注意深く制御した。３時間滴下して滴下を完了させた。添加完了後、氷水浴を移り去り、反応系の温度を２０～３０℃に制御しながら続いて１６時間攪拌した。攪拌を停止し、反応溶液を卓上吸引フィルターに移して吸引濾過し、１ＬのＭｅＯＨで１回すすぎ、ケーキを収集した。ケーキを吸引乾燥させた後、清潔なトレーに移し、室温で２４時間以上放置して乾燥させた。材料を収集し、化合物Ａを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ １１．１８（ｂｒｓ、１Ｈ）、１０．５９～１０．５３（ｍ、１Ｈ）、８．０８～７．９７（ｍ、２Ｈ）、７．０４～６．９６（ｍ、２Ｈ）、４．２４（ｓ、３Ｈ）。
【0053】
工程２：
化合物Ａ（５００ｇ、２．６６ｍｏｌのＨＣｌ）をＤＣＭ（３Ｌ）に溶解させた。ＴＥＡ（４０４．４９ｇ、４．００ｍｏｌ、５５６．３９ｍＬ）を添加して３０分間攪拌した。その後、ピリジン（４２１．５９ｇ、５．３３ｍｏｌ、４３０．１９ｍＬ）を前記反応系に添加した。反応系の温度を１０～３０℃に制御しながらゆっくりとＳＭＢ（６１２．８７ｇ、５．８６ｍｏｌ、５３２．９３ｍＬ）を滴下した。反応を２０℃で１時間攪拌した。１．５Ｌの水を添加し、その後、０．５ＭのＨＣｌ（１．４Ｌ）を添加して反応系のｐＨを５～６に調節し、水相を１．５ＬのＤＣＭで１回抽出し、有機相を合わせ、４Ｌの水を添加して洗浄し、有機相を分層させ、３Ｌの飽和食塩水で洗浄し、分層させた。有機相を無水硫酸酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物に２２００ｍＬ（ｎ－ヘプタン：酢酸エチル＝１０：１）を添加し、２５℃で４時間スラリー化させ、濾過し、化合物Ｂを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ７．７７～７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．１９～７．１２（ｍ、２Ｈ）、３．８９（ｓ、３Ｈ）、１．８９～１．８０（ｍ、１Ｈ）、１．７２～１．６２（ｍ、１Ｈ）、１．２１～１．１４（ｍ、２Ｈ）、１．１０～１．０１（ｍ、４Ｈ）、０．８９（ｑｄ、Ｊ＝３．７、７．７Ｈｚ、２Ｈ）。
化合物Ａ（５００ｇ、２．６６ｍｏｌのＨＣｌ）をＤＣＭ（３Ｌ）に溶解させた。ＴＥＡ（４０４．４９ｇ、４．００ｍｏｌ、５５６．３９ｍＬ）を添加して３０分間攪拌した。その後、ピリジン（４２１．５９ｇ、５．３３ｍｏｌ、４３０．１９ｍＬ）を前記反応系に添加した。反応系の温度を１０～３０℃に制御しながらゆっくりとＳＭＢ（６１２．８７ｇ、５．８６ｍｏｌ、５３２．９３ｍＬ）を滴下した。反応を２０℃で１時間攪拌した。１．５Ｌの水を添加し、その後、０．５ＭのＨＣｌ（１．４Ｌ）を添加して反応系のｐＨを５～６に調節し、水相を１．５ＬのＤＣＭで１回抽出し、有機相を合わせ、４Ｌの水を添加して洗浄し、有機相を分層させ、３Ｌの飽和食塩水で洗浄し、分層させた。有機相を無水硫酸酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物に２２００ｍＬ（ｎ－ヘプタン：酢酸エチル＝１０：１）を添加し、２５℃で４時間スラリー化させ、濾過し、化合物Ｂを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３） δ ７．７７～７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．１９～７．１２（ｍ、２Ｈ）、３．８９（ｓ、３Ｈ）、１．８９～１．８０（ｍ、１Ｈ）、１．７２～１．６２（ｍ、１Ｈ）、１．２１～１．１４（ｍ、２Ｈ）、１．１０～１．０１（ｍ、４Ｈ）、０．８９（ｑｄ、Ｊ＝３．７、７．７Ｈｚ、２Ｈ）。
【0054】
工程３：
乾燥した三ツ口フラスコにＳＭＣ（２３０．９４ｇ、２．０９ｍｏｌ）とトルエン（３０００ｍＬ）を添加した。その後、ＴＥＡ（２１１．３２ｇ、２．０９ｍｏｌ、２９０．６７ｍＬ、１ｅｑ）を添加し、攪拌を開始させ、外部温度を８０℃～９０℃に昇温させ、内部温度は７２℃で安定させた。バッチで化合物Ｂ（６００ｇ、２．０９ｍｏｌ）を添加し（半分添加した時、温度を７８℃に昇温させた）、添加する過程で、温度を７０～８０℃の間に制御した。添加した後、内部温度は７４℃で安定し、２時間攪拌した。２Ｌの水を添加し、分層させた。水相を酢酸エチル（１Ｌ×２）で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水（２Ｌ×２）で洗浄し、分層させた。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物に２Ｌ（ｎ－ヘプタン：酢酸エチル＝１０：１）を添加し、２５℃で２時間スラリー化させた。化合物Ｃを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９３（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．１７（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．９０～４．７７（ｍ、１Ｈ）、２．２２～２．１２（ｍ、１Ｈ）、１．９５～１．８３（ｍ、１Ｈ）、１．４６（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．０４（ｄｔｄ、Ｊ＝３．０、５．０、９．８Ｈｚ、６Ｈ）、１．００～０．９６（ｍ、２Ｈ）。
乾燥した三ツ口フラスコにＳＭＣ（２３０．９４ｇ、２．０９ｍｏｌ）とトルエン（３０００ｍＬ）を添加した。その後、ＴＥＡ（２１１．３２ｇ、２．０９ｍｏｌ、２９０．６７ｍＬ、１ｅｑ）を添加し、攪拌を開始させ、外部温度を８０℃～９０℃に昇温させ、内部温度は７２℃で安定させた。バッチで化合物Ｂ（６００ｇ、２．０９ｍｏｌ）を添加し（半分添加した時、温度を７８℃に昇温させた）、添加する過程で、温度を７０～８０℃の間に制御した。添加した後、内部温度は７４℃で安定し、２時間攪拌した。２Ｌの水を添加し、分層させた。水相を酢酸エチル（１Ｌ×２）で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水（２Ｌ×２）で洗浄し、分層させた。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮して粗生成物を得た。粗生成物に２Ｌ（ｎ－ヘプタン：酢酸エチル＝１０：１）を添加し、２５℃で２時間スラリー化させた。化合物Ｃを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９３（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．１７（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．９０～４．７７（ｍ、１Ｈ）、２．２２～２．１２（ｍ、１Ｈ）、１．９５～１．８３（ｍ、１Ｈ）、１．４６（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．０４（ｄｔｄ、Ｊ＝３．０、５．０、９．８Ｈｚ、６Ｈ）、１．００～０．９６（ｍ、２Ｈ）。
【0055】
工程４：
バッチで、乾燥した５０Ｌの高低温循環浴の中でＥｔＯＨ（１０Ｌ）を添加し、その後、反応ケトルに化合物Ｃ（３．３ｋｇ、１０．６ｍｏｌ）を添加し、攪拌を開始させた。内部温度を０～４０℃に制御し、ＮａＯＨ（０．８６０ｋｇ、２１．５ｍｏｌ）と水（１０Ｌ）の混合溶液を添加した。試料を添加する過程で、温度を激しくなく、ゆっくりと昇温させた。添加し完了後、反応を２５～３５℃で１７～１８時間攪拌した。反応液の温度を制御し、反応液に１２ＮのＨＣｌを添加してｐＨ＝３～４に調整し、固体が析出した。反応液を卓上型フィルターに移し、濾過し、ケーキを収集し、粗生成物を得た。５つのバッチの２０ｋｇの粗生成物を合わせ、２体積のアセトニトリルで、２５℃で１時間スラリー化して精製し、混合溶液を卓上型フィルターで濾過し、ケーキをアセトニトリルですすぎ、ケーキを収集した。きれいなトレーに移し、２４時間以上自然乾燥させた。化合物Ｄを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．６０（ｓ、１Ｈ）、７．７３（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．７８（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、４．８１（ｑｕｉｎ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．２０～２．０９（ｍ、１Ｈ）、１．４４（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、６Ｈ）、１．０９～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９８～０．９２（ｍ、２Ｈ）。
バッチで、乾燥した５０Ｌの高低温循環浴の中でＥｔＯＨ（１０Ｌ）を添加し、その後、反応ケトルに化合物Ｃ（３．３ｋｇ、１０．６ｍｏｌ）を添加し、攪拌を開始させた。内部温度を０～４０℃に制御し、ＮａＯＨ（０．８６０ｋｇ、２１．５ｍｏｌ）と水（１０Ｌ）の混合溶液を添加した。試料を添加する過程で、温度を激しくなく、ゆっくりと昇温させた。添加し完了後、反応を２５～３５℃で１７～１８時間攪拌した。反応液の温度を制御し、反応液に１２ＮのＨＣｌを添加してｐＨ＝３～４に調整し、固体が析出した。反応液を卓上型フィルターに移し、濾過し、ケーキを収集し、粗生成物を得た。５つのバッチの２０ｋｇの粗生成物を合わせ、２体積のアセトニトリルで、２５℃で１時間スラリー化して精製し、混合溶液を卓上型フィルターで濾過し、ケーキをアセトニトリルですすぎ、ケーキを収集した。きれいなトレーに移し、２４時間以上自然乾燥させた。化合物Ｄを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．６０（ｓ、１Ｈ）、７．７３（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．７８（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、４．８１（ｑｕｉｎ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．２０～２．０９（ｍ、１Ｈ）、１．４４（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、６Ｈ）、１．０９～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９８～０．９２（ｍ、２Ｈ）。
【0056】
工程５：
乾燥した５０Ｌの高低温循環浴の中でエピクロロヒドリン（６．６００ｋｇ）を添加した。次に、ＤＭＳＯ（６Ｌ）を添加し、攪拌を開始させ、化合物Ｄ（３．２００ｋｇ）を添加し、ＤＭＳＯ（３Ｌ）で残りの試料をすすいだ。内部温度を（２０～３０℃）に制御し、ＫＯＨ（０．８８９ｋｇ）を添加して、大幅ではなく、わずかに昇温した。添加完了後、内部温度は（２７～３０）℃で安定させ、１８時間攪拌した。反応溶液を排出し、ケトルに８Ｌの水を添加し、攪拌を開始させ、温度を０～３０℃に制御し、反応溶液を蠕動運動ポンプでゆっくりと反応ケトルに移した。その後、８Ｌのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルを添加し、１５分間攪拌し、１５分間静置し、分層させ、有機相を収集し、水相を再び抽出し、有機相を収集した。２回の有機相を合わせた。攪拌下で、有機相に１ｋｇの無水硫酸ナトリウムを添加して有機相を乾燥させ、減圧濃縮し、ウォーターバスの温度を４５℃未満に制御し、ロータリーエバポレーター真空度を－０．０８ＭＰａ未満に制御して濃縮した。オイルポンプで更に減圧濃縮し、理論量の１０５％になるまでウォーターバスの温度を７０℃未満に制御し、ロータリーエバポレーター真空度を－０．０８Ｍｐａ未満に制御して濃縮し、濃縮溶液を直接的に次の反応に使用した。化合物Ｅを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．８８～７．８０（ｍ、２Ｈ）、６．９９（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．８３（ｑｕｉｎ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．３５（ｄｄ、Ｊ＝２．６、１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．８５（ｄｄ、Ｊ＝６．４、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．３６～３．３４（ｍ、１Ｈ）、２．８５（ｔ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．７２（ｄｄ、Ｊ＝２．６、４．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．２３～２．０７（ｍ、１Ｈ）、１．４５（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．０７～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９９～０．９４（ｍ、２Ｈ）。
乾燥した５０Ｌの高低温循環浴の中でエピクロロヒドリン（６．６００ｋｇ）を添加した。次に、ＤＭＳＯ（６Ｌ）を添加し、攪拌を開始させ、化合物Ｄ（３．２００ｋｇ）を添加し、ＤＭＳＯ（３Ｌ）で残りの試料をすすいだ。内部温度を（２０～３０℃）に制御し、ＫＯＨ（０．８８９ｋｇ）を添加して、大幅ではなく、わずかに昇温した。添加完了後、内部温度は（２７～３０）℃で安定させ、１８時間攪拌した。反応溶液を排出し、ケトルに８Ｌの水を添加し、攪拌を開始させ、温度を０～３０℃に制御し、反応溶液を蠕動運動ポンプでゆっくりと反応ケトルに移した。その後、８Ｌのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルを添加し、１５分間攪拌し、１５分間静置し、分層させ、有機相を収集し、水相を再び抽出し、有機相を収集した。２回の有機相を合わせた。攪拌下で、有機相に１ｋｇの無水硫酸ナトリウムを添加して有機相を乾燥させ、減圧濃縮し、ウォーターバスの温度を４５℃未満に制御し、ロータリーエバポレーター真空度を－０．０８ＭＰａ未満に制御して濃縮した。オイルポンプで更に減圧濃縮し、理論量の１０５％になるまでウォーターバスの温度を７０℃未満に制御し、ロータリーエバポレーター真空度を－０．０８Ｍｐａ未満に制御して濃縮し、濃縮溶液を直接的に次の反応に使用した。化合物Ｅを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．８８～７．８０（ｍ、２Ｈ）、６．９９（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．８３（ｑｕｉｎ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．３５（ｄｄ、Ｊ＝２．６、１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．８５（ｄｄ、Ｊ＝６．４、１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．３６～３．３４（ｍ、１Ｈ）、２．８５（ｔ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、１Ｈ）、２．７２（ｄｄ、Ｊ＝２．６、４．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．２３～２．０７（ｍ、１Ｈ）、１．４５（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．０７～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９９～０．９４（ｍ、２Ｈ）。
【0057】
工程６：
化合物Ｅ（３．８６ｋｇ）をイソプロパノール（１５Ｌ）に溶解させ、混合溶液を５０Ｌの乾燥した高低温循環浴の中に添加し、攪拌を開始させた。ＴＥＢＡＣ（０．５９２ｋｇ）を添加した後、ＳＭＥ（２．２９５ｋｇ）を添加し、最後に５Ｌのイソプロパノールを添加し、反応ケトルの壁を洗い流した。温度を８０～９０℃に制御し、２２時間反応させた。反応系に１５Ｌのｎ－ヘプタンを添加し、攪拌速度を落とし、ゆっくりと冷却させ、温度を２０～２５℃に制御し、１時間攪拌して固体が析出した。蠕動運動ポンプで反応溶液を卓上型フィルターに移し、吸引濾過し、ケーキを５Ｌのｎ－ヘプタンで洗浄した。ケーキをきれいなトレーに収集し、２４時間以上自然乾燥させた。化合物Ｆを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９０～７．８３（ｍ、４Ｈ）、７．８１（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．９０（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、２Ｈ）、５．４０（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．８８～４．７５（ｍ、１Ｈ）、４．２５～４．１１（ｍ、１Ｈ）、３．９９（ｂｒｓ、２Ｈ）、３．７３（ｓ、２Ｈ）、２．２２～２．０７（ｍ、１Ｈ）、１．４５（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、６Ｈ）、１．０７～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９６（ｂｒｓ、２Ｈ）。
化合物Ｅ（３．８６ｋｇ）をイソプロパノール（１５Ｌ）に溶解させ、混合溶液を５０Ｌの乾燥した高低温循環浴の中に添加し、攪拌を開始させた。ＴＥＢＡＣ（０．５９２ｋｇ）を添加した後、ＳＭＥ（２．２９５ｋｇ）を添加し、最後に５Ｌのイソプロパノールを添加し、反応ケトルの壁を洗い流した。温度を８０～９０℃に制御し、２２時間反応させた。反応系に１５Ｌのｎ－ヘプタンを添加し、攪拌速度を落とし、ゆっくりと冷却させ、温度を２０～２５℃に制御し、１時間攪拌して固体が析出した。蠕動運動ポンプで反応溶液を卓上型フィルターに移し、吸引濾過し、ケーキを５Ｌのｎ－ヘプタンで洗浄した。ケーキをきれいなトレーに収集し、２４時間以上自然乾燥させた。化合物Ｆを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９０～７．８３（ｍ、４Ｈ）、７．８１（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．９０（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、２Ｈ）、５．４０（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．８８～４．７５（ｍ、１Ｈ）、４．２５～４．１１（ｍ、１Ｈ）、３．９９（ｂｒｓ、２Ｈ）、３．７３（ｓ、２Ｈ）、２．２２～２．０７（ｍ、１Ｈ）、１．４５（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、６Ｈ）、１．０７～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９６（ｂｒｓ、２Ｈ）。
【0058】
工程７：
化合物Ｆ（３．０１ｋｇ）を取ってＤＣＭ（１５Ｌ）に溶解させ、混合溶液を乾燥した高低温循環浴に添加し、攪拌を開始させた。ＫＢｒ（０．９７ｋｇ）を添加し、その後、ＮａＨＣＯ３（２．８３ｋｇ）とＨ２Ｏ（１００ｍＬ）の混合溶液を添加した後、ＴＥＭＰＯ（５４．００ｇ）を添加した。内部温度を０～５℃に制御し、ＮａＣｌＯ（１６．４ｋｇ、６％の質量含有量）を滴下した。反応系の温度を２０～２５℃以下に制御し、２時間攪拌した。反応を停止し、１５分間静置し、分層させ、有機相を収集し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（ａｑ）を添加して洗浄し（１５Ｌ）、５分間攪拌し、１５分間静置し、分層させた。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、ウォーターバスの温度を４５℃未満に制御し、ロータリーエバポレーター真空度を－０．０８ＭＰａ未満に制御し、固体が析出するまで濃縮した。５Ｌの酢酸エチルを添加し、５０Ｌの球形反応ケトルに移し、更に、１０Ｌのｎ－ヘプタンを添加し、１６時間スラリー化させた。濾過し、ケーキをきれいなトレーに収集し、２４時間以上自然乾燥させた。化合物Ｇを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９５～７．８７（ｍ、４Ｈ）、７．８４（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、５．１３（ｓ、２Ｈ）、４．９０～４．８０（ｍ、１Ｈ）、４．７８（ｓ、２Ｈ）、２．２２～２．１２（ｍ、１Ｈ）、１．４６（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．０８～１．０１（ｍ、２Ｈ）、１．００～０．９３（ｍ、２Ｈ）。
化合物Ｆ（３．０１ｋｇ）を取ってＤＣＭ（１５Ｌ）に溶解させ、混合溶液を乾燥した高低温循環浴に添加し、攪拌を開始させた。ＫＢｒ（０．９７ｋｇ）を添加し、その後、ＮａＨＣＯ３（２．８３ｋｇ）とＨ２Ｏ（１００ｍＬ）の混合溶液を添加した後、ＴＥＭＰＯ（５４．００ｇ）を添加した。内部温度を０～５℃に制御し、ＮａＣｌＯ（１６．４ｋｇ、６％の質量含有量）を滴下した。反応系の温度を２０～２５℃以下に制御し、２時間攪拌した。反応を停止し、１５分間静置し、分層させ、有機相を収集し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（ａｑ）を添加して洗浄し（１５Ｌ）、５分間攪拌し、１５分間静置し、分層させた。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、ウォーターバスの温度を４５℃未満に制御し、ロータリーエバポレーター真空度を－０．０８ＭＰａ未満に制御し、固体が析出するまで濃縮した。５Ｌの酢酸エチルを添加し、５０Ｌの球形反応ケトルに移し、更に、１０Ｌのｎ－ヘプタンを添加し、１６時間スラリー化させた。濾過し、ケーキをきれいなトレーに収集し、２４時間以上自然乾燥させた。化合物Ｇを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９５～７．８７（ｍ、４Ｈ）、７．８４（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．００（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、５．１３（ｓ、２Ｈ）、４．９０～４．８０（ｍ、１Ｈ）、４．７８（ｓ、２Ｈ）、２．２２～２．１２（ｍ、１Ｈ）、１．４６（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．０８～１．０１（ｍ、２Ｈ）、１．００～０．９３（ｍ、２Ｈ）。
【0059】
工程８：
０℃で、ＳＭＦ（４６．３１ｇ、１９１．２３ｍｍｏｌ、３８．９２ｍＬ）の２－ＭｅＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液にＭｇＥｔＢｒ（３Ｍ、６３．７４ｍＬ）を添加し、０～１０℃で２０時間反応させた後、化合物Ｇ（５０ｇ、１１２．４９１１２．４９ｍｍｏｌ）を添加し、試料の添加が完了した後、反応溶液を４０℃に昇温させ、１時間反応させた。反応溶液に飽和クエン酸溶液（２００ｍＬ）を添加し、１０分間攪拌し、有機相を分離した。有機相を１ＭのＮａＯＨ水溶液で洗浄し（２００ｍＬ）、１０分間攪拌し、有機相を分離した。有機相をスピン乾燥させ、１００ｍＬのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル：イソプロパノール＝１：１（２Ｖ）で、２５℃で１６時間スラリー化させ、ケーキを濾過して収集した。（有機相を直接的にスピン乾燥させ、少量の２－ＭｅＴＨＦをイソプロパノールで置き換えることにより生成物を凝集させた）。ＳＭ１を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．８７～７．７９（ｍ、４Ｈ）、７．７３（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．７３（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、２Ｈ）、４．９８（ｄ、Ｊ＝０．９Ｈｚ、２Ｈ）、４．８７～４．７７（ｍ、１Ｈ）、４．５８（ｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．２６（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．２０～２．１１（ｍ、１Ｈ）、１．４４（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．２２（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）、１．０７～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９８～０．９２（ｍ、２Ｈ）。
０℃で、ＳＭＦ（４６．３１ｇ、１９１．２３ｍｍｏｌ、３８．９２ｍＬ）の２－ＭｅＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液にＭｇＥｔＢｒ（３Ｍ、６３．７４ｍＬ）を添加し、０～１０℃で２０時間反応させた後、化合物Ｇ（５０ｇ、１１２．４９１１２．４９ｍｍｏｌ）を添加し、試料の添加が完了した後、反応溶液を４０℃に昇温させ、１時間反応させた。反応溶液に飽和クエン酸溶液（２００ｍＬ）を添加し、１０分間攪拌し、有機相を分離した。有機相を１ＭのＮａＯＨ水溶液で洗浄し（２００ｍＬ）、１０分間攪拌し、有機相を分離した。有機相をスピン乾燥させ、１００ｍＬのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル：イソプロパノール＝１：１（２Ｖ）で、２５℃で１６時間スラリー化させ、ケーキを濾過して収集した。（有機相を直接的にスピン乾燥させ、少量の２－ＭｅＴＨＦをイソプロパノールで置き換えることにより生成物を凝集させた）。ＳＭ１を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．８７～７．７９（ｍ、４Ｈ）、７．７３（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、６．７３（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、２Ｈ）、４．９８（ｄ、Ｊ＝０．９Ｈｚ、２Ｈ）、４．８７～４．７７（ｍ、１Ｈ）、４．５８（ｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．２６（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、２．２０～２．１１（ｍ、１Ｈ）、１．４４（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．２２（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）、１．０７～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９８～０．９２（ｍ、２Ｈ）。
【0060】
工程９：
２０～２５℃で、ＡｃＯＨ（８Ｌ）を乾燥した清潔な５０Ｌのジャケット付反応ケトルに添加し、攪拌しながらＳＭ１（２４５０ｇ、４．６０ｍｏｌ）を添加し、反応系は懸濁系になった。反応液に既に調製した６ＭのＨＣｌ（８Ｌ）溶液を添加し、９０～９５℃に昇温させ（内部温度を７５～８０℃に制御した）、前記混合溶液を９０～９５℃で１６時間反応させた。三ツ口フラスコを０℃の氷水浴に移して内部温度が０～１０℃になるまで冷却させた。反応系を卓上型吸引濾過用フィルターに移して吸引濾過し、ケーキを得、水（２Ｌ）でケーキ２回洗浄し、続いて濾液が生成されなくなるまで吸引濾過した。ＡｃＯＨ（１２Ｌ）を三ツ口フラスコに２回添加し、攪拌を開始させ、その後、ケーキと既に製造した６ＭのＨＣｌ（１２Ｌ）溶液を添加し、９０～９５℃に昇温させ（内部温度を７５～８０℃に制御した）、前記混合溶液を９０～９５℃で４８時間反応させ、サンプリングし、ＳＭ１の残留量が２．０％未満になった時、反応を停止した。反応溶液を０～１０℃に冷却させ、濾過し、ケーキを５Ｌの水で２回洗浄し、粗生成物を得た。粗生成物をアセトニトリル（８Ｌ）に添加し、５０～５５℃に昇温させ、３時間攪拌した。熱いうちに濾過し、ケーキを収集し、ケーキを２５～３０℃のドラフトの中に置いて２４時間乾燥させ、化合物１を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．８６～７．８０（ｍ、４Ｈ）、７．８０～７．７５（ｍ、２Ｈ）、６．７６（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、５．０２（ｓ、２Ｈ）、４．９２～４．８２（ｍ、２Ｈ）、４．５６（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．２８～２．１５（ｍ、１Ｈ）、１．４５（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、５Ｈ）、１．１２～１．０４（ｍ、４Ｈ）。
２０～２５℃で、ＡｃＯＨ（８Ｌ）を乾燥した清潔な５０Ｌのジャケット付反応ケトルに添加し、攪拌しながらＳＭ１（２４５０ｇ、４．６０ｍｏｌ）を添加し、反応系は懸濁系になった。反応液に既に調製した６ＭのＨＣｌ（８Ｌ）溶液を添加し、９０～９５℃に昇温させ（内部温度を７５～８０℃に制御した）、前記混合溶液を９０～９５℃で１６時間反応させた。三ツ口フラスコを０℃の氷水浴に移して内部温度が０～１０℃になるまで冷却させた。反応系を卓上型吸引濾過用フィルターに移して吸引濾過し、ケーキを得、水（２Ｌ）でケーキ２回洗浄し、続いて濾液が生成されなくなるまで吸引濾過した。ＡｃＯＨ（１２Ｌ）を三ツ口フラスコに２回添加し、攪拌を開始させ、その後、ケーキと既に製造した６ＭのＨＣｌ（１２Ｌ）溶液を添加し、９０～９５℃に昇温させ（内部温度を７５～８０℃に制御した）、前記混合溶液を９０～９５℃で４８時間反応させ、サンプリングし、ＳＭ１の残留量が２．０％未満になった時、反応を停止した。反応溶液を０～１０℃に冷却させ、濾過し、ケーキを５Ｌの水で２回洗浄し、粗生成物を得た。粗生成物をアセトニトリル（８Ｌ）に添加し、５０～５５℃に昇温させ、３時間攪拌した。熱いうちに濾過し、ケーキを収集し、ケーキを２５～３０℃のドラフトの中に置いて２４時間乾燥させ、化合物１を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．８６～７．８０（ｍ、４Ｈ）、７．８０～７．７５（ｍ、２Ｈ）、６．７６（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、５．０２（ｓ、２Ｈ）、４．９２～４．８２（ｍ、２Ｈ）、４．５６（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、２Ｈ）、２．２８～２．１５（ｍ、１Ｈ）、１．４５（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、５Ｈ）、１．１２～１．０４（ｍ、４Ｈ）。
【0061】
工程１０：
２０～２５℃でＮＭＰ（１．３４Ｌ）を５Ｌの三ツ口フラスコに添加し、攪拌しながら化合物１（１３４ｋｇ、２．６６ｍｏｌ）を添加し、反応系は懸濁系になり、反応系を１３５～１４０℃に昇温させた（内部温度を１２０～１２５℃に制御した）。前記混合溶液にＡｇＯＡｃ（４３３．９８ｇ、２．６６ｍｏｌ）を添加し、１３５～１４０℃（内部温度を１２０～１２５℃に制御した）で１６時間反応させた。０．２ｅｑの酢酸銀（８８．８０ｇ、０．４８ ｍｏｌ）補充し、反応が終了するまで続いて１３５～１４０℃（内部温度を１２０～１２５℃に制御した）に維持させた。反応溶液を２０～２５℃に冷却させ、反応溶液に酢酸エチル（６．８５Ｌ）を添加して希釈し、活性炭（５４３ｇ）及び珪藻土（５４３ｇ）を添加し、２０分間攪拌した後、シリカゲル（５４３ｇ）で濾過し、酢酸エチル（６．８５Ｌ）でケーキを３回洗浄した。濾液を１０％のチオ硫酸ナトリウム溶液（６．８５Ｌ）で２回洗浄し、０．５Ｍの水酸化ナトリウム溶液（６．８５Ｌ）で１回洗浄し、水（６．８５Ｌ）で２回洗浄し、有機相を減圧してスピン乾燥させ、粗生成物を得た。２０～２５℃で、酢酸エチル（２．６４Ｌ）、ｎ－ヘプタン（１３．２Ｌ）を２５Ｌのドラムに添加し、その後、粗生成物（２．６４ｋｇ、５．７３ｍｏｌ）を添加し、２０～２５℃で１６時間スラリー化させ、濾過してケーキを収集し、化合物２を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９１～７．７９（ｍ、４Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．３８～７．０８（ｍ、１Ｈ）、６．７３～６．６５（ｍ、２Ｈ）、４．８２（ｑｕｉｎ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．４９～４．３８（ｍ、４Ｈ）、２．２１～２．０９（ｍ、１Ｈ）、１．４４（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．０６～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９７～０．９１（ｍ、２Ｈ）。
２０～２５℃でＮＭＰ（１．３４Ｌ）を５Ｌの三ツ口フラスコに添加し、攪拌しながら化合物１（１３４ｋｇ、２．６６ｍｏｌ）を添加し、反応系は懸濁系になり、反応系を１３５～１４０℃に昇温させた（内部温度を１２０～１２５℃に制御した）。前記混合溶液にＡｇＯＡｃ（４３３．９８ｇ、２．６６ｍｏｌ）を添加し、１３５～１４０℃（内部温度を１２０～１２５℃に制御した）で１６時間反応させた。０．２ｅｑの酢酸銀（８８．８０ｇ、０．４８ ｍｏｌ）補充し、反応が終了するまで続いて１３５～１４０℃（内部温度を１２０～１２５℃に制御した）に維持させた。反応溶液を２０～２５℃に冷却させ、反応溶液に酢酸エチル（６．８５Ｌ）を添加して希釈し、活性炭（５４３ｇ）及び珪藻土（５４３ｇ）を添加し、２０分間攪拌した後、シリカゲル（５４３ｇ）で濾過し、酢酸エチル（６．８５Ｌ）でケーキを３回洗浄した。濾液を１０％のチオ硫酸ナトリウム溶液（６．８５Ｌ）で２回洗浄し、０．５Ｍの水酸化ナトリウム溶液（６．８５Ｌ）で１回洗浄し、水（６．８５Ｌ）で２回洗浄し、有機相を減圧してスピン乾燥させ、粗生成物を得た。２０～２５℃で、酢酸エチル（２．６４Ｌ）、ｎ－ヘプタン（１３．２Ｌ）を２５Ｌのドラムに添加し、その後、粗生成物（２．６４ｋｇ、５．７３ｍｏｌ）を添加し、２０～２５℃で１６時間スラリー化させ、濾過してケーキを収集し、化合物２を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（３９９ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９１～７．７９（ｍ、４Ｈ）、７．７０（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．３８～７．０８（ｍ、１Ｈ）、６．７３～６．６５（ｍ、２Ｈ）、４．８２（ｑｕｉｎ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．４９～４．３８（ｍ、４Ｈ）、２．２１～２．０９（ｍ、１Ｈ）、１．４４（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、６Ｈ）、１．０６～１．００（ｍ、２Ｈ）、０．９７～０．９１（ｍ、２Ｈ）。
【0062】
工程１１：
２０～２５℃で２－ＭｅＴＨＦ溶液（６Ｌ）を５０Ｌの高低温ジャケット付反応ケトルに添加し、攪拌しながら化合物２（２ｋｇ、４．３４３ｍｏｌ）を添加し、反応系が全部溶解し、反応系に水（３Ｌ）及びエタノールアミン（２．６５２ｋｇ、４３．４３ｍｏｌ）を添加し、７５～８０℃に昇温させ（内部温度を６５～７０℃に制御した）、前記混合溶液を７５～８０℃（内部温度を６５～７０℃に制御した）で１６時間反応させた。反応溶液を２０～２５℃に冷却させ、分層させ、有機相を収集し、水相を２－ＭｅＴＨＦ溶液（６Ｌ）で１回抽出し、有機相を合わせ、減圧してスピン乾燥させた。粗生成物を３Ｎの塩酸（６Ｌ）で全部溶解させ、水溶液をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（６Ｌ）で１回抽出し、酢酸エチル（６Ｌ）で２回抽出した。１Ｍの水酸化ナトリウム溶液で水溶液のｐＨを１０以上に調整し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（６Ｌ）で２回抽出し、有機相を合わせ、有機相の不溶物を濾過し、有機相を減圧してスピン乾燥させた。有機相を２－ＭｅＴＨＦ溶液（６Ｌ）に全部溶解させ、０．５Ｍの水酸化ナトリウム溶液（６Ｌ）で１回洗浄し、水（６Ｌ）で２回洗浄し、有機相を収集し、有機相を減圧してスピン乾燥させた。粗生成物を５Ｌの一口フラスコに添加し、その後、酢酸エチル（２．８６Ｌ）、イソプロパノール（２．８６Ｌ）を添加し、外部温度を７０～７５℃に制御し、１０分間攪拌して溶解させ、熱いうちに濾過し、不溶物を除去し、濾液を収集した。７０～７５℃で、濾液に酢酸エチル（１．４３Ｌ）、イソプロパノール（１．４３Ｌ）を添加し、イソプロパノール塩酸塩溶液（１．０８６Ｌ）を滴下し、滴下完了後、５０～５５℃に冷却させ、５０～５５℃で２時間反応させた。反応を停止させ、反応溶液を２０～２５℃に冷却させ、濾過し、ケーキを酢酸エチル（１．４３Ｌ）で２回洗浄し、粗生成物を得た。２０～２５℃で、固体、酢酸エチル（４．２９Ｌ）を３Ｌの三ツ口フラスコに添加し、２０～２５℃で１６時間攪拌した。濾過して固体を得た。２０～２５℃で、固体、酢酸エチル（２．１５Ｌ）、メタノール（２．１５Ｌ）を３Ｌ三ツ口フラスコに添加し、２０～２５℃で１６時間攪拌した。濾過して式（ＩＶ）で表される化合物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．４６（ｂｒｓ、３Ｈ）、８．００（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．４７～７．１９（ｍ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、２Ｈ）、４．９２（ｔｄ、Ｊ＝６．６、１３．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．７１（ｄ、Ｊ＝３．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．５９（ｂｒｄ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．３６～２．２６（ｍ、１Ｈ）、１．４７（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、５Ｈ）、１．２２（ｂｒｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、２Ｈ）、１．１７～１．０９（ｍ、２Ｈ）。
２０～２５℃で２－ＭｅＴＨＦ溶液（６Ｌ）を５０Ｌの高低温ジャケット付反応ケトルに添加し、攪拌しながら化合物２（２ｋｇ、４．３４３ｍｏｌ）を添加し、反応系が全部溶解し、反応系に水（３Ｌ）及びエタノールアミン（２．６５２ｋｇ、４３．４３ｍｏｌ）を添加し、７５～８０℃に昇温させ（内部温度を６５～７０℃に制御した）、前記混合溶液を７５～８０℃（内部温度を６５～７０℃に制御した）で１６時間反応させた。反応溶液を２０～２５℃に冷却させ、分層させ、有機相を収集し、水相を２－ＭｅＴＨＦ溶液（６Ｌ）で１回抽出し、有機相を合わせ、減圧してスピン乾燥させた。粗生成物を３Ｎの塩酸（６Ｌ）で全部溶解させ、水溶液をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（６Ｌ）で１回抽出し、酢酸エチル（６Ｌ）で２回抽出した。１Ｍの水酸化ナトリウム溶液で水溶液のｐＨを１０以上に調整し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（６Ｌ）で２回抽出し、有機相を合わせ、有機相の不溶物を濾過し、有機相を減圧してスピン乾燥させた。有機相を２－ＭｅＴＨＦ溶液（６Ｌ）に全部溶解させ、０．５Ｍの水酸化ナトリウム溶液（６Ｌ）で１回洗浄し、水（６Ｌ）で２回洗浄し、有機相を収集し、有機相を減圧してスピン乾燥させた。粗生成物を５Ｌの一口フラスコに添加し、その後、酢酸エチル（２．８６Ｌ）、イソプロパノール（２．８６Ｌ）を添加し、外部温度を７０～７５℃に制御し、１０分間攪拌して溶解させ、熱いうちに濾過し、不溶物を除去し、濾液を収集した。７０～７５℃で、濾液に酢酸エチル（１．４３Ｌ）、イソプロパノール（１．４３Ｌ）を添加し、イソプロパノール塩酸塩溶液（１．０８６Ｌ）を滴下し、滴下完了後、５０～５５℃に冷却させ、５０～５５℃で２時間反応させた。反応を停止させ、反応溶液を２０～２５℃に冷却させ、濾過し、ケーキを酢酸エチル（１．４３Ｌ）で２回洗浄し、粗生成物を得た。２０～２５℃で、固体、酢酸エチル（４．２９Ｌ）を３Ｌの三ツ口フラスコに添加し、２０～２５℃で１６時間攪拌した。濾過して固体を得た。２０～２５℃で、固体、酢酸エチル（２．１５Ｌ）、メタノール（２．１５Ｌ）を３Ｌ三ツ口フラスコに添加し、２０～２５℃で１６時間攪拌した。濾過して式（ＩＶ）で表される化合物を得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ８．４６（ｂｒｓ、３Ｈ）、８．００（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．４７～７．１９（ｍ、１Ｈ）、７．１０（ｄ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、２Ｈ）、４．９２（ｔｄ、Ｊ＝６．６、１３．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．７１（ｄ、Ｊ＝３．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．５９（ｂｒｄ、Ｊ＝４．６Ｈｚ、２Ｈ）、２．３６～２．２６（ｍ、１Ｈ）、１．４７（ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、５Ｈ）、１．２２（ｂｒｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、２Ｈ）、１．１７～１．０９（ｍ、２Ｈ）。
【0063】
実施例２：式（ＩＶ）で表される化合物の単結晶のＸ線回折検出の分析
単結晶の培養工程：試料を室温で１ｍｌのジクロロメタン／メタノール（１：１）に溶解させた。試料溶液を４ｍｌの半密閉バイアルに置き、室温でゆっくりと蒸発させた。翌日、無色の塊状結晶形を得た。式（ＩＶ）で表される化合物の立体構造の楕円体図は図７に示された通りであった。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形の構造データとパラメータは表３、４、５、６及び７を参照する。
単結晶の培養工程：試料を室温で１ｍｌのジクロロメタン／メタノール（１：１）に溶解させた。試料溶液を４ｍｌの半密閉バイアルに置き、室温でゆっくりと蒸発させた。翌日、無色の塊状結晶形を得た。式（ＩＶ）で表される化合物の立体構造の楕円体図は図７に示された通りであった。式（Ｉ）で表される化合物の結晶形の構造データとパラメータは表３、４、５、６及び７を参照する。
【0064】
【表3】
【0065】
【表4】
【0066】
【表5】
【0067】
【表6】
【0068】
【表7】
【0069】
実施例３：式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形の製造
式（ＩＶ）で表される化合物（５０ｍｇ）に酢酸エチル（１ｍＬ）を添加し、４０℃で４８時間スラリー化させ、２０～２５℃に冷却させた後、濾過し、固体を収集し、４０℃で真空で４８時間乾燥させ、式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形を得た。
式（ＩＶ）で表される化合物（５０ｍｇ）に酢酸エチル（１ｍＬ）を添加し、４０℃で４８時間スラリー化させ、２０～２５℃に冷却させた後、濾過し、固体を収集し、４０℃で真空で４８時間乾燥させ、式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形を得た。
【0070】
実施例４：式（ＩＶ）で表される化合物的Ｂ結晶形の製造
式（ＩＶ）で表される化合物（５０ｍｇ）にメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１ｍＬ）を添加し、５０℃で４８時間スラリー化させ、２０～２５℃に冷却させた後、濾過し、固体を収集し、４０℃で真空で４８時間乾燥させ、式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形を得た。
式（ＩＶ）で表される化合物（５０ｍｇ）にメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１ｍＬ）を添加し、５０℃で４８時間スラリー化させ、２０～２５℃に冷却させた後、濾過し、固体を収集し、４０℃で真空で４８時間乾燥させ、式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形を得た。
【0071】
実施例５：式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の安定性研究
電子天秤で（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の各６０ｍｇの試料を正確に秤量し（各安定性試験条件について３つの試料を平行に秤量した）、それぞれ乾燥した清潔な５ｍＬのビーカーに添加し、薄い層に広げ、アルミホイルに穴をあけ、ビーカーに被せ、輪ゴムで固定し、ビーカーを各安定性試験条件の環境に置き、調査時点になったらサンプリングして分析した。それぞれの試料の、６０℃（５日目、１０日目）、２５℃／９２．５％のＲＨ（５日目、１０日目）、４０℃／７５％のＲＨ（１か月目、２か月目、３か月目）、６０℃／７５％のＲＨ（１か月目、２か月目）及び光照射（１０日目）等の条件下での安定性状況を調査した。Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）を使用して、各条件下での固体に特徴付けた。
電子天秤で（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の各６０ｍｇの試料を正確に秤量し（各安定性試験条件について３つの試料を平行に秤量した）、それぞれ乾燥した清潔な５ｍＬのビーカーに添加し、薄い層に広げ、アルミホイルに穴をあけ、ビーカーに被せ、輪ゴムで固定し、ビーカーを各安定性試験条件の環境に置き、調査時点になったらサンプリングして分析した。それぞれの試料の、６０℃（５日目、１０日目）、２５℃／９２．５％のＲＨ（５日目、１０日目）、４０℃／７５％のＲＨ（１か月目、２か月目、３か月目）、６０℃／７５％のＲＨ（１か月目、２か月目）及び光照射（１０日目）等の条件下での安定性状況を調査した。Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）を使用して、各条件下での固体に特徴付けた。
【0072】
【表8】
【0073】
結論：式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形は高温、高湿、強い光照射の条件で良好な安定性を有した。
実験例１：生体外評価
ヒトＶＡＰ－１酵素活性測定試験：
Ａｍｐｌｅｘ（登録商標） Ｒｅｄ Ｍｏｎｏａｍｉｎｅ Ｏｘｉｄａｓｅ キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ａ１２２１４）を使用して、ＶＡＰ－１酵素活性に対する試料の阻害効果を測定した。３８４ウェルプレートに、１００ｎＬの勾配希釈した試験化合物（溶媒はＤＭＳＯ）を添加した。２５μＬの１０ｎＭのＶＡＰ－１酵素溶液を添加し、室温で３０分間インキュベーションした。ＶＡＰ－１酵素の基質混合物（２００μＭのＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ、１Ｕ／ｍＬのＨＲＰ、１ｍＭのＢｅｎｚｙｌａｍｉｎｅ）を添加し、室温で６０分間インキュベーションした。インキュベーション完了後、マイクロプレートリーダーＥｎｖｉｓｉｏｎ（励起光波長は５３０～５６０ｎｍであり、発光波長は５９０ｎｍであった）で蛍光シグナルを読み取った。Ｐｒｉｓｍソフトウェアを利用してバックグラウンド信号を除去した後の蛍光信号値を分析し、ＶＡＰ－１酵素に対する試料のＩＣ５０を計算した。
実験例１：生体外評価
ヒトＶＡＰ－１酵素活性測定試験：
Ａｍｐｌｅｘ（登録商標） Ｒｅｄ Ｍｏｎｏａｍｉｎｅ Ｏｘｉｄａｓｅ キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ａ１２２１４）を使用して、ＶＡＰ－１酵素活性に対する試料の阻害効果を測定した。３８４ウェルプレートに、１００ｎＬの勾配希釈した試験化合物（溶媒はＤＭＳＯ）を添加した。２５μＬの１０ｎＭのＶＡＰ－１酵素溶液を添加し、室温で３０分間インキュベーションした。ＶＡＰ－１酵素の基質混合物（２００μＭのＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ、１Ｕ／ｍＬのＨＲＰ、１ｍＭのＢｅｎｚｙｌａｍｉｎｅ）を添加し、室温で６０分間インキュベーションした。インキュベーション完了後、マイクロプレートリーダーＥｎｖｉｓｉｏｎ（励起光波長は５３０～５６０ｎｍであり、発光波長は５９０ｎｍであった）で蛍光シグナルを読み取った。Ｐｒｉｓｍソフトウェアを利用してバックグラウンド信号を除去した後の蛍光信号値を分析し、ＶＡＰ－１酵素に対する試料のＩＣ５０を計算した。
【0074】
【表9】
【0075】
結論：式（ＩＶ）で表される化合物と式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形は生体外スクリーニング試験において、ヒト組換えＶＡＰ－１／ＳＳＡＯ酵素を阻害する非常に強い活性を示した。
【0076】
実験例２：ＶＡＰ－１細胞活性測定試験
Ａｍｐｌｅｘ（登録商標） Ｒｅｄ Ｍｏｎｏａｍｉｎｅ Ｏｘｉｄａｓｅ キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ａ１２２１４）を使用して、ＶＡＰ－１酵素活性に対する試料の阻害効果を測定した。
Ａｍｐｌｅｘ（登録商標） Ｒｅｄ Ｍｏｎｏａｍｉｎｅ Ｏｘｉｄａｓｅ キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ａ１２２１４）を使用して、ＶＡＰ－１酵素活性に対する試料の阻害効果を測定した。
【0077】
細胞の準備
培養したＨＵＶＥＣ又はＣＨＯ細胞を０．８Ｍ／ウェールの密度で６ウェルプレートに播種し、３７℃、５％のＣＯ２のインキュベーターに置いて２４時間培養した後、Ｌｉｐｏ２０００試薬とＶＡＰ－１／ｐＣＤＮＡ（３．１）プラスミドで細胞をトランスフェクトプラスミドさせ、５時間後培地を交換し（Ｌｉｐｏ２０００は細胞に対して毒性がある）；２４時間後、細胞を消化させ、２５μｌ、１００００細胞／ウェルの密度で３８４ウェルプレートに６～７時間播種し、ＦＢＳを含まない培地で細胞培地を変更し、細胞プレートを３７℃、５％のＣＯ２のインキュベーターに置いて一晩培養した。
培養したＨＵＶＥＣ又はＣＨＯ細胞を０．８Ｍ／ウェールの密度で６ウェルプレートに播種し、３７℃、５％のＣＯ２のインキュベーターに置いて２４時間培養した後、Ｌｉｐｏ２０００試薬とＶＡＰ－１／ｐＣＤＮＡ（３．１）プラスミドで細胞をトランスフェクトプラスミドさせ、５時間後培地を交換し（Ｌｉｐｏ２０００は細胞に対して毒性がある）；２４時間後、細胞を消化させ、２５μｌ、１００００細胞／ウェルの密度で３８４ウェルプレートに６～７時間播種し、ＦＢＳを含まない培地で細胞培地を変更し、細胞プレートを３７℃、５％のＣＯ２のインキュベーターに置いて一晩培養した。
【0078】
化合物の半数阻害濃度測定
１）化合物の希釈：１００％のＤＭＳＯで１０ポイントに４倍段階希釈し、試験化合物の初期濃度は０．５ｍＭ（最終濃度は１μＭであった）であり；ＥＣＨＯを使用して１００ｎＬの化合物溶液を３８４ウェルの細胞検出プレートに移した。陰性対照ウェール：１００ｎＬのＤＭＳＯであり； バックグラウンド対照ウェール：１００ｎＬのＤＭＳＯ＋２５μＬの培地であった。
１）化合物の希釈：１００％のＤＭＳＯで１０ポイントに４倍段階希釈し、試験化合物の初期濃度は０．５ｍＭ（最終濃度は１μＭであった）であり；ＥＣＨＯを使用して１００ｎＬの化合物溶液を３８４ウェルの細胞検出プレートに移した。陰性対照ウェール：１００ｎＬのＤＭＳＯであり； バックグラウンド対照ウェール：１００ｎＬのＤＭＳＯ＋２５μＬの培地であった。
【0079】
２）室温で遮光して３０分間反応させた。
３）Ａｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ試薬＋ＨＲＰ＋ベンジルアミン基質ワーキング溶液の製造：Ａｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ試薬＋ＨＲＰ＋ベンジルアミン基質ワーキング溶液（２００μＭのＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ試薬＋１Ｕ／ｍＬのＨＲＰ＋１ｍＭのベンジルアミン）：４５μＬの２０ｍＭのＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ試薬母液、２２．５μＬの２００Ｕ／ｍＬのセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）母液と４５μＬの１００ｍＭのベンジルアミンを取って、４．３８７５ｍＬの１Ｘ反応緩衝液に添加した。
３）Ａｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ試薬＋ＨＲＰ＋ベンジルアミン基質ワーキング溶液の製造：Ａｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ試薬＋ＨＲＰ＋ベンジルアミン基質ワーキング溶液（２００μＭのＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ試薬＋１Ｕ／ｍＬのＨＲＰ＋１ｍＭのベンジルアミン）：４５μＬの２０ｍＭのＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ試薬母液、２２．５μＬの２００Ｕ／ｍＬのセイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）母液と４５μＬの１００ｍＭのベンジルアミンを取って、４．３８７５ｍＬの１Ｘ反応緩衝液に添加した。
【0080】
４）３０分後、２５μＬの基質ワーキング溶液を取って３８４ウェルプレート添加し、最終濃度はそれぞれ１００μＭのＡｍｐｌｅｘ Ｒｅｄ試薬＋０．５Ｕ／ｍＬのＨＲＰ＋０．５ｍＭのベンジルアミンであった。
【0081】
５）室温で遮光して６０分間反応させ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎで蛍光値を測定し：励起波は５３５ｎｍであり、発光波は５９０ｎｍであった。
６）阻害率の計算公式：％阻害率＝（１－（バックグラウンドを控除した試験ウェール－バックグラウンドを控除した陽性対照ウェール）／（バックグラウンドを控除した陰性対照ウェール－バックグラウンドを控除した陽性対照ウェール））×１００
７）Ｐｒｉｓｍを利用してデータを分析した。ＶＡＰ－１細胞に対する試料のＩＣ５０を計算した。
６）阻害率の計算公式：％阻害率＝（１－（バックグラウンドを控除した試験ウェール－バックグラウンドを控除した陽性対照ウェール）／（バックグラウンドを控除した陰性対照ウェール－バックグラウンドを控除した陽性対照ウェール））×１００
７）Ｐｒｉｓｍを利用してデータを分析した。ＶＡＰ－１細胞に対する試料のＩＣ５０を計算した。
【0082】
【表10】
【0083】
結論：式（ＩＶ）で表される化合物及び式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形は生体外試験で、ＶＡＰ－１／ＳＳＡＯ細胞の活性に対して非常に強い阻害効果を示した。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【手続補正書】
【提出日】2021-08-24
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．０５±０．２°、１２．３４±０．２°、２２．５２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。【化1】
【請求項2】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：９．０５±０．２°、１２．３４±０．２°、１６．６０±０．２°、１７．１７±０．２°、１７．８３±０．２°、２０．８２±０．２°、２２．５２±０．２°、２６．０３±０．２°において特徴的な回折ピークを有し、
及び／又は示差走査熱量曲線が２２３．０℃±３．０℃において吸熱ピークのピーク値を有し、
及び／又は熱重量分析曲線が１５０．０℃±３℃の際に重量が３．７８％減少する、請求項１に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。
【請求項3】
ＸＲＰＤスペクトルが図１に示された通りであり、
及び／又はＤＳＣスペクトルが図２に示された通りであり、
及び／又はＴＧＡスペクトルが図３に示された通りである、請求項２に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形。
【請求項4】
式（ＩＶ）で表される化合物のいずれかの形態をエステル又はエーテルを含む有機溶媒に添加してスラリー化させて製造する工程を含み、ここで、スラリー化温度は２０℃～４０℃から選択される、請求項１に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＡ結晶形の製造方法。
【請求項5】
前記エステルは酢酸エチルであり、前記エーテルはメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルであり、
及び／又はスラリー化時間は３０時間～６０時間から選択され、
及び／又は式（ＩＶ）で表される化合物と前記有機溶媒との重量比が１：５～４０から選択される、請求項４に記載の製造方法。
【請求項6】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１１．２７±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。【化2】
【請求項7】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１１．２７±０．２°、１２．４６±０．２°、１８．４４±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°、２５．５１±０．２°、２５．９４±０．２°、２６．４９±０．２°において特徴的な回折ピークを有する、請求項６に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項8】
粉末Ｘ線回折スペクトルが以下の２θ角：１１．２７±０．２°、１２．４６±０．２°、１８．４４±０．２°、２０．０３±０．２°、２１．４４±０．２°、２２．３２±０．２°、２３．３７±０．２°、２４．１９±０．２°、２５．５１±０．２°、２５．９４±０．２°、２６．４９±０．２°、２８．１２±０．２°において特徴的な回折ピークを有し、
及び／又は示差走査熱量曲線が２２１．９℃±３．０℃において吸熱ピークのピーク値を有し、
及び／又は熱重量分析曲線が１５０．０℃±３℃の際に重量が１．０５％減少する、請求項７に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項9】
ＸＲＰＤスペクトルが図４に示された通りであり、
及び／又はＤＳＣスペクトルは図５に示された通りであり、
及び／又はＴＧＡスペクトルが図６に示された通りである、請求項８に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形。
【請求項10】
式（ＩＶ）で表される化合物のいずれかの形態をエステル、エーテル、アルコール、アセトン、アセトニトリル、ｎ－ヘプタン、水、混合有機溶媒、あるいは水及び有機溶媒混合溶媒に添加してスラリー化させて製造する工程を含み、ここで、スラリー化温度は４０℃～６０℃から選択される、請求項６に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法。
【請求項11】
前記エステルは酢酸エチルであり、前記エーテルはテトラヒドロフラン及びメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルから選択され、前記アルコールはエタノールであり、前記混合有機溶媒は体積比が９５：５であるメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルとメタノールとの混合有機溶媒、及び体積比が９５：５であるメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルとエタノールとの混合有機溶媒から選択され、前記水及び有機溶媒混合溶媒は体積比が５：９５である水とアセトンとの混合溶媒、体積比が５：９５である水とアセトニトリルとの混合物溶媒、及び体積比が５：９５である水とテトラヒドロフランとの混合溶媒から選択され、
及び／又はスラリー化時間は３０時間～６０時間から選択され、
及び／又は式（ＩＶ）で表される化合物と前記混合有機溶媒との重量体積比が１：５～４０から選択される、請求項１０に記載の式（ＩＶ）で表される化合物のＢ結晶形の製造方法。
【請求項12】
ＳＳＡＯ関連疾患を治療するための医薬として使用される、請求項１～３のいずれか１項に記載のＡ結晶形又は請求項６～９のいずれか１項に記載の結晶形Ｂであって、
好ましくは、ＳＳＡＯ関連疾患が非アルコール性脂肪性肝炎である、Ａ結晶形又は結晶形Ｂ。
【請求項13】
以下の工程を含む：【化3】
【化4】
溶媒ａは酢酸であり、
試薬ｂは塩酸である。）
【請求項14】
溶媒ａとＳＭ１との体積：質量は３．０～３．５：１であり、試薬ｂとＳＭ１との体積：質量は３．０～１０：１であり、
及び／又は反応の内部温度は７５～８０℃に制御され、
及び／又は以下の工程を含む、請求項１３に記載の式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法。
【化5】
【請求項15】
試薬ｃはピリジンであり、化合物Ｄは、アルカリ条件下での加水分解反応により製造され、試薬ｄは臭化カリウムであり、試薬ｅは次亜塩素酸ナトリウムであり、試薬ｆは酢酸銀である、請求項１４に記載の式（ＩＶ）で表される化合物の製造方法。
【国際調査報告】