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▶ レ‐ヴァーナ セラピューティクス エルティーディーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-15
(54)【発明の名称】眼用組成物
(51)【国際特許分類】
A61L 27/18 20060101AFI20220207BHJP
A61L 27/16 20060101ALI20220207BHJP
A61L 27/58 20060101ALI20220207BHJP
A61L 27/54 20060101ALI20220207BHJP
【ＦＩ】
A61L27/18
A61L27/16
A61L27/58
A61L27/54
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021536088
(86)(22)【出願日】2019-12-20
(85)【翻訳文提出日】2021-08-04
(86)【国際出願番号】 EP2019086829
(87)【国際公開番号】W WO2020128062
(87)【国際公開日】2020-06-25
(31)【優先権主張番号】18215025.0
(32)【優先日】2018-12-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】521267834
【氏名又は名称】レ‐ヴァーナ セラピューティクス エルティーディー
【氏名又は名称原語表記】ＲＥ－ＶＡＮＡ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＬＴＤ
(74)【代理人】
【識別番号】100133503
【弁理士】
【氏名又は名称】関口 一哉
(72)【発明者】
【氏名】タクール， ラグー ラジ シン
(72)【発明者】
【氏名】ジョーンズ， デイヴィッド
(72)【発明者】
【氏名】ソリマン， カリム
(72)【発明者】
【氏名】ソナウェイン， ラウル
(72)【発明者】
【氏名】ワン， ユージン
【テーマコード（参考）】
4C081
【Ｆターム（参考）】
4C081AB21
4C081BA16
4C081CA081
4C081CA171
4C081CB031
4C081CE02
4C081DA01
(57)【要約】
本発明は、治療剤の制御放出のための眼用組成物に関する。本眼用組成物は、少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤；と、ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、及びポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、５～７５ｗ／ｗ％の光重合性組成物；と、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマー；と、光開始剤と、を含む。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
眼用組成物であって、（ａ）少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤；と、
（ｂ）ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレート、及びポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、５～７５ｗ／ｗ％の光重合性組成物；と、
（ｃ）ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマー；と、
（ｄ）光開始剤と、
を含む、眼用組成物。
【請求項2】
前記治療剤が、２０～７０ｗ／ｗ％の量で存在する、請求項１に記載の眼用組成物。
【請求項3】
前記光重合性組成物が、ポリエチレングリコールジアクリレート、ジエチレングリコールジアクリレート、ポリエチレングリコールジメタクリレート、ジエチレングリコールジメタクリレート、ポリプロピレングリコールジアクリレート、ジプロピレングリコールジアクリレート、ジプロピレングリコールジメタクリレート、及びポリプロピレングリコールジメタクリレート、又はこれらの混合物、コポリマー若しくはブロックコポリマーからなる群から選択される、請求項１～２のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【請求項4】
前記光重合性組成物が、ポリエチレングリコールジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）である、請求項３に記載の眼用組成物。
【請求項5】
前記生分解性ポリマーが、５～１０ｗ／ｗ％の量で存在する、請求項１～４のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【請求項6】
前記生分解性ポリマーが、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－乳酸）（ＰＤＬ）、及びラクチド／カプロラクトンコポリマー（ＰＬＣ）である、請求項１～５のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【請求項7】
前記光開始剤が、１－［４－（２－ヒドロキシエトキシ）－フェニル］－２－ヒドロキシ－２－メチル－１－プロパノン、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、ジフェニル（２，４，６－トリメチルベンゾイル）ホスフィンオキシド（ＤＰＰＯ）、又はリボフラビンである、請求項１～６のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【請求項8】
放出調節剤を更に含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【請求項9】
前記放出調節剤が、キトサンを含む多糖類及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を含むセルロース系材料；ヒアルロン酸；ポロキサマー；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むポリエーテル；ゼラチン；ポリビニルピロリドン；ポリビニルアルコール、ラクトース、マルトース、グルコース、マンニトール、塩化ナトリウム、炭酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、塩化カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素アンモニウム、炭酸水素カリウム、アガロース、スクロース、並びにこれらの混合物から選択される、請求項８に記載の眼用組成物。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の眼用組成物を作製する方法であって、（ａ）前記治療剤を溶媒中へ溶解して溶液を得ることと、
（ｂ）工程（ａ）で得られた前記溶液を、前記重合性組成物、前記生分解性ポリマー、前記光開始剤、及び任意に前記放出調節剤と混合することと、
を含む、方法。
【請求項11】
前記溶媒が、水系溶媒である、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
眼用インプラントを作製する方法であって、（ａ）請求項１～９のいずれか一項に記載の眼用組成物を提供することと、
（ｂ）前記眼用インプラントを形成するために、１秒～６０分の間に２００～５５０ｎｍの波長の光を前記眼用組成物に照射することと、
を含む、方法。
【請求項13】
工程（ｂ）で形成された前記眼用インプラントが、対象の眼領域に投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
請求項１２又は１３に記載の方法によって得ることができる、眼用インプラント。
【請求項15】
眼用インプラントであって、少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤と、５～７５ｗ／ｗ％の架橋ポリマーマトリックスと、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマーと、を含み、（ａ）前記架橋ポリマーマトリックスが、ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、及びポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される光重合性組成物を架橋することによって得られることと、
（ｂ）前記治療剤及び前記生分解性ポリマーが、前記ポリマーマトリックスに埋め込まれることと、を特徴とする、眼用インプラント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、治療剤の制御放出のための眼用組成物及び眼用インプラントに関する。
【背景技術】
【0002】
慢性網膜疾患は世界中で視覚障害及び失明の主な原因である。視力の喪失は人々の日常生活に大きな個人的影響を及ぼし、個人、家族、公衆衛生及び社会に甚大な経済的影響を及ぼす。世界保健機関の推定によれば、世界で約２億８５００万人の人々が視覚障害を患っており、そのうち３９００万人は盲目であり、２億４６００万人は視力が低い。後眼部（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ：ＰＳ）又は眼の後ろに由来する疾患は、未処置のまま放置すると永久的な視力喪失をもたらし、加齢黄斑変性（ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ：ＤＲ）、糖尿病性黄斑浮腫（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ：ＤＭＥ）、サイトメガロウイルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ：ＣＭＶ）性網膜炎、網膜色素変性症、ブドウ膜炎、及び緑内障などの、ほとんどの失明の原因となる。網膜、脈絡膜、及び硝子体を含む眼の後眼部は、眼窩内の凹んだ位置のためにアクセスが困難である。したがって、眼の後眼部への治療剤の送達は、製薬科学者及び網膜専門家にとって最も困難な課題の１つのままである。
【0003】
全身、局所、眼周囲（又は経強膜）及び硝子体内といった眼の後眼部に治療剤を送達するために、複数のアプローチが使われている。局所的（例えば、点眼剤）経路及び全身的（例えば、経口錠剤）経路は、複数の眼のバリアに起因し低薬剤レベル又は治療量以下の薬剤レベルをもたらして、治療剤関連毒性を引き起こし、低治療有効性の原因となる不必要に高い濃度の治療剤の投与を必要とする。
【0004】
国際公開第２０１７０８１１５４Ａ１号は、治療剤の制御放出を達成するために様々な形態で眼に投与することができる、眼用組成物を開示している。これらの組成物は、患者の眼に注射した後にインサイチュで処方物を架橋することで眼用インプラントを形成するために使用することができるか、又は眼に注射する前に予め形成することもできる。
【0005】
治療剤の眼内送達のための代替システムが必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】国際公開第２０１７０８１１５４Ａ１号
【発明の概要】
【0007】
第１の態様では、本発明は、治療剤の制御放出を達成するために様々な形態で眼に投与することができる、眼用組成物に関する。このような眼用組成物は、
（ａ）少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤；と、
（ｂ）ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、５～７５ｗ／ｗ％の光重合性組成物；と、
（ｃ）ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマー；と、
（ｄ）光開始剤と、
を含む。
（ａ）少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤；と、
（ｂ）ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、５～７５ｗ／ｗ％の光重合性組成物；と、
（ｃ）ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマー；と、
（ｄ）光開始剤と、
を含む。
【0008】
更なる態様では、本発明は、上記眼用組成物を作製する方法に関する。
【0009】
また更なる態様では、本発明は、眼用インプラントの調製に使用するための上記眼用組成物に関する。
【0010】
また更なる態様では、本発明は、このような眼用インプラントの作製方法に関する。
【0011】
また更なる態様では、本発明は、このような方法によって得ることができる眼用インプラントに関する。
【0012】
また更なる態様では、本発明は、少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤と、５～７５ｗ／ｗ％の架橋ポリマーマトリックスと、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマーと、を含む眼用インプラントに関し、
（ａ）架橋ポリマーマトリックスが、ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、光重合性組成物を架橋することによって得られること；と、
（ｂ）治療剤及び生分解性ポリマーが、架橋ポリマーマトリックスに埋め込まれていることと、を特徴とする。
（ａ）架橋ポリマーマトリックスが、ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、光重合性組成物を架橋することによって得られること；と、
（ｂ）治療剤及び生分解性ポリマーが、架橋ポリマーマトリックスに埋め込まれていることと、を特徴とする。
【0013】
本発明は、治療剤の制御放出を達成するために様々な形態で眼に投与することができる、眼用組成物及びインプラントを提供する。本発明は、タンパク質、ペプチド及び遺伝子治療薬を含む広範な小型及び大型治療用分子を投与し、それらの活性を制御された期間維持する柔軟性を可能にする。
【0014】
本発明にかかる眼用組成物及びインプラントは、２０ｗ／ｗ％以上の量の治療剤を含むことを可能にし、したがって、許容できないバースト放出に直面することなく高負荷治療送達インプラントの製造を可能にする。更に、本発明のインプラントの全体的なサイズは、長期間にわたる治療剤放出プロファイルの有効性を損なうことなく、実質的に縮小することができる。サイズの縮小を考慮すると、患者の認容性、耐容性、及び快適性は、全体的かつ一般的に改善される。
【0015】
本発明の眼用組成物及びインプラント中の高濃度な治療剤はまた、治療剤自体のバイオアベイラビリティを増加させることを可能にし、したがって、全期間にわたる治療の有効性を保証する。
【0016】
更に、縮小された寸法及び高い薬物負荷を有するインプラントは、小ゲージ針による投与を可能にし、眼組織外傷をあまり引き起こさない。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【発明を実施するための形態】
【0018】
本明細書で使用される場合、用語「ｗ／ｗ％」とは、場合によっては、コポリマー、組成物、又はそのような構成要素を含むインプラントの総重量に対する、所与の構成要素の重量パーセンテージを意味する。
【0019】
本明細書で使用される場合、「生分解性」とは、生物学的手段による化学分解である。いくつかの実施形態では、生分解は、組成物、モノマー、オリゴマー、フラグメント、ポリマー、光開始剤、溶媒、共溶媒、又は共開始剤の１つ以上の１００％、９８％、９０％、８５％、８０％、６０％、５０％、又は４５％の分解である。
【0020】
本明細書で使用される場合、「コポリマー」とは、２つ以上の異なるタイプのモノマー単位の混合物である。本明細書で使用される場合、「ブロックコポリマー」とは、２つ以上のホモポリマーサブユニットの混合物である。
【0021】
本発明の組成物の治療剤は、広範囲の小分子及び大分子から選択することができる。例示的な治療剤としては、ポリペプチド、核酸、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ及びｓｉＲＮＡ、増殖因子、ステロイド剤、抗体療法、抗菌剤、抗生物質、抗レトロウイルス治療剤、抗炎症化合物、抗腫瘍剤、抗血管新生剤（ａｎｔｉ－ａｎｇｉｏｇｅｎｅｉｃ ａｇｅｎｔ）、抗ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）剤、及び化学療法剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【0022】
一実施形態では、本発明の治療剤としては、ケトロラック、ナファゾリン、リドカイン、ベバシズマブ、アフリベルセプト、ペガプタニブ、酒石酸ブリモニジン、ドルゾラミド、ブロムフェナクナトリウム、アジスロマイシン、ラパマイシン、ベシル酸ベポタスチン、ジクロフェナク、ベシフロキサシン、システアミン塩酸塩、フルオシノロンアセトニド、ジフルプレドナート、タシメルテオン、オクリプラスミン、エノキサパリンナトリウム、ラニビズマブ、ラタノプロスト、マレイン酸チモロール、ビマトプロスト、オフロキサシン、セファゾリン、フェニレフリン、デキサメタゾン、トリアムシノロンアセトニド、レボフロキサシン、シクロホスファミド、メルファランシクロスポリン、メトトレキサート、アザチオプリン、トラボプロスト、ベルテポルフィン、タフルプロスト、フマル酸ケトチフェン、ホスカルネット、アムホテリシンＢ、フルコナゾール、ボリコナゾール、ガンシクロビル、アシクロビル、ガチフロキサシン、マイトマイシンＣ、プレドニゾロン、プレドニゾン、ビタミン（ビタミンＡ、ビタミンＣ、及びビタミンＥ）、亜鉛、銅、ルテイン、ゼアキサンチン、又はこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【0023】
別の実施形態では、本発明の治療剤は、デキサメタゾン、マレイン酸チモロール、酒石酸ブリモニジン、トリアムシノロンアセトニド、ブロムフェナクナトリウム、ラタノプロスト、又はこれらの混合物である。
【0024】
一実施形態では、本発明の組成物又はインプラントは、生物活性剤、大分子量治療剤、例えばアフリベルセプト、ペガプタニブなど、又は抗体治療薬、例えばラニビズマブ、ベバシズマブ、トラスツズマブ、リツキシマブ、ゲンツズマブ、オザガマイシン、ブロルシズマブ、若しくはセツキシマブなどを送達することができる。
【0025】
いくつかの実施形態では、治療剤の分子量は、２００Ｄａ、５００Ｄａ、１０００Ｄａ、１０ｋＤａ、３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、７５ｋＤａ、１００ｋＤａ、１５０ｋＤａ、２００ｋＤａ、及び２５０ｋＤａより大きい。
【0026】
本発明の他の実施形態によれば、治療剤は、眼用組成物の総重量の２０～７０ｗ／ｗ％の間、３０～７０ｗ／ｗ％の間、４０～７０ｗ／ｗ％の間、及び５０～７０ｗ／ｗ％の間の量で存在する。
【0027】
治療剤は、そのまま、又はある量の治療剤が適切な溶媒中に溶解された溶液の形態で、使用することができる。治療剤はまた、高濃度の治療剤のインプラントへの組込みを容易にするために、本発明の眼用組成物の調製で使用する前に凍結乾燥又は噴霧乾燥することもできる。溶解される治療剤の量は、眼用組成物又はインプラントが有するべき最終的な負荷に依存する。溶媒の選択は治療剤の極性に依存する。
【0028】
本発明の一実施形態によれば、溶媒は、水、ジメチルスルホキシド、デシルメチルスルホキシド、２－ピロリドン、１－メチル－２－ピロリドン、Ｎ－ビニル－ピロリジン、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、Ｎ－エチル－ピロリドン、グリセロールホルマール、グリセロール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、安息香酸エチル、トリアセチン、クエン酸トリエチル、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、及びテトラヒドロフランから選択することができる。
【0029】
一実施形態では、共溶媒を使用してもよく、これは、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、酢酸、メタノール、エタノール、イソプロパノール、グリコフロール、又はブタノールから選択することができる。
【0030】
親水性治療剤の場合、溶媒は、水又はリン酸緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ：ＰＢＳ）溶液などの水性溶媒であり得る。
【0031】
別の実施形態によれば、溶媒は、ジメチルスルホキシド、デシルメチルスルホキシド、２－ピロリドン、１－メチル－２－ピロリドン、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、及びグリセロールホルマールから選択され得る。
【0032】
更に、上記の溶媒及び共溶媒は、本明細書に記載の他の光重合性組成物、生分解性ポリマー、光開始剤、細孔形成剤、及び共開始剤のいずれかと組み合わせて、本発明の組成物及びインプラントのいずれかの調製で使用することができる。
【0033】
一実施形態では、生分解性ポリマーが、ＰＬＧＡ、ＰＣＬ、ＰＬＣ及び／又はＰＬＡである場合、溶媒が使用される。一実施形態では、生分解性ポリマーが、ＰＬＧＡ、ＰＣＬ、ＰＬＣ及び／又はＰＬＡである場合、溶媒はＮ－メチル－２－ピロリドン及びＮ－ビニル－２－ピロリジンである。別の実施形態では、光重合性組成物がＰＥＧＤＡである場合、溶媒が使用される。
【0034】
本発明の光重合性フラグメント又はモノマーは、本発明の組成物及びインプラントのいずれかにおいて、本明細書に記載の又は共通の一般知識において公知の他の生分解性ポリマー、治療剤、光開始剤、溶媒、共溶媒、薬物調節剤、及び共開始剤のいずれかと組み合わせて、使用することができる。
【0035】
一実施形態では、本発明の光重合性組成物は、生分解性であり得る。いくつかの実施形態では、生分解は、１分、１０分、２０分、２時間、６時間、１２時間、２４時間、２日間、５日間、１週間、１ヶ月、２ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、８ヶ月、又は１２ヶ月にわたって起こる。いくつかの実施形態では、生分解は、１ヶ月～１２ヶ月の間、６ヶ月～１２ヶ月の間、又は８ヶ月～１２ヶ月の間で起こる。
【0036】
本明細書で使用される場合、用語「光重合性組成物」とは、光、特にＵＶ光に曝露されると架橋ポリマーネットワークを形成することができる組成物である。本明細書で使用される場合、光重合性組成物は、光重合性モノマー及びオリゴマー（例えば、二量体、三量体、及び四量体）を含む。用語「オリゴマー」及び「フラグメント」とは、２～２０個のモノマー、任意には２～１０個のモノマー、更に任意選択的には２～５個のモノマー、又は２～４個のモノマーを意味するために、互換的に使用することができる。「光重合性モノマー」とは、他のモノマーに化学的に結合してポリマーを形成することができる、光重合性ポリマーの単一単位である。
【0037】
本発明の光重合性組成物は、本発明の眼用インプラントの架橋ポリマーマトリックスを形成するために、ＵＶ照射で架橋することができる。
【0038】
一実施形態では、光重合性組成物は、ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される。
【0039】
一実施形態では、光重合性組成物は、ポリエーテルフラグメント若しくはモノマー、ポリエステルフラグメント若しくはモノマー、ポリカーボネートフラグメント若しくはモノマー、又はこれらの混合物、コポリマー若しくはブロックコポリマーを含む群から選択されるジアクリレート末端単位を組み込む、ポリアルキレングリコールジアクリレートフラグメント又はモノマーである。
【0040】
一実施形態では、光重合性組成物は、４アーム又は８アームＰＥＧアクリレートなどのジアクリレート末端単位を組み込むモノマーを含む。
【0041】
別の実施形態では、光重合性組成物は、ポリエチレングリコールジアクリレート、ジエチレングリコールジアクリレート、ポリエチレングリコールジメタクリレート、ジエチレングリコールジメタクリレート、ポリプロピレングリコールジアクリレート、ジプロピレングリコールジアクリレート、ジプロピレングリコールジメタクリレート、及びポリプロピレングリコールジメタクリレート、又はこれらの混合物、コポリマー若しくはブロックコポリマーである。
【0042】
別の実施形態では、光重合性組成物は、ポリエチレングリコールジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）、ポリエチレングリコールモノアクリレート（ＰＥＧＭｏＡ）、又はポリエチレングリコールジメタクリレート（ＰＥＧＤＭＡ）である。
【0043】
更に別の実施形態では、光重合性組成物は、ポリエチレングリコールジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）である。
【0044】
更に別の実施形態では、光重合性組成物は、ポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧＭＡ）、又はＰＥＧＭＡと他のポリアルキレングリコールモノアクリレート、ジアクリレート、メタクリレート及び／若しくはジメタクリレートとの混合物である。一実施形態では、重合性組成物は、ＰＥＧＤＡ、ＰＥＧＭｏＡ、及び／又はＰＥＧＭＡの混合物である。
【0045】
ＰＥＧＤＡは様々な分子量で入手可能な合成ポリマーである。ＰＥＧＤＡは、機械的、構造的、及び化学的変化に極めて適しており、そのため、薬物送達及び他の生物医学的用途に関して様々な特性を有するヒドロゲルをもたらす。ＰＥＧＤＡはアクリレート基による各ＰＥＧ分子の末端の官能化によって形成される。ＰＥＧＤＡはまた非毒性であり、最小限の免疫原性応答しか誘発しない。ＰＥＧＤＡは、適切な開始剤の存在下において光に曝露された場合に迅速な重合を示してヒドロゲルネットワークを生成する、二重結合含有アクリレート末端基を有する。
【0046】
本発明の光重合性組成物の平均分子量は、典型的には、１００～３００，０００Ｄａ、２００～１００，０００Ｄａ、２００～５０，０００Ｄａ、２００～２０，０００Ｄａ、２００～１０，０００Ｄａ、２００～８，０００Ｄａ、２００～５，０００Ｄａ、又は２００～１，０００Ｄａである。
【0047】
本発明の組成物及びインプラントについて、光重合性組成物の分子量の増加は、治療剤放出速度の増加をもたらすことが見出されている。理論に拘束されることを望むものではないが、より低い分子量を有する光重合性組成物は、より高い架橋密度を有し、したがってより遅い治療剤放出速度を有すると考えられる。
【0048】
本発明の光重合性組成物は、典型的には、０．１～７ｄＬ／ｇ、０．２～５ｄＬ／ｇ、又は０．５～２ｄＬ／ｇの粘度を有する。
【0049】
一実施形態では、光重合性組成物は、１０～７５ｗ／ｗ％、２０～７５ｗ／ｗ、３０～７５ｗ／ｗ％、４０～７５ｗ／ｗ％及び４５～７５ｗ／ｗ％の量で存在する。
【0050】
本発明の生分解性ポリマーは、本発明の組成物及びインプラントのいずれかにおいて、本明細書に記載の又は共通の一般知識において公知の他の光重合性組成物、治療剤、光開始剤、溶媒、共溶媒、治療剤放出調節剤、及び共開始剤のいずれかと組み合わせて、使用することができる。
【0051】
本発明の生分解性ポリマーは生分解性であるが、光重合性ではない。
【0052】
本発明の一実施形態では、生分解性ポリマーは、脂肪族ポリエステル系ポリウレタン、ポリラクチド、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、又はこれらの混合物、コポリマー若しくはブロックコポリマーである。
【0053】
本発明の別の実施形態では、生分解性ポリマーは、キトサン、ポリ（プロピレンフマレート）、ラクチド／グリコリドコポリマー（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー（ＰＬＣ）、ポリヒドロキシブチレート、天然生分解性ポリマー、例えばコラーゲン及びヒアルロン酸、又はこれらの混合物、コポリマー若しくはブロックコポリマーである。
【0054】
別の実施形態では、生分解性ポリマーは、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される。
【0055】
一実施形態では、生分解性ポリマーは、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、及びラクチド／カプロラクトンコポリマー（ＰＬＣ）である。
【0056】
特定の実施形態では、生分解性ポリマーは、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）である。
【0057】
ＰＬＧＡは、典型的には、乳酸及びグリコール酸モノマーの重合によって調製される。ＰＬＧＡコポリマーのガラス転移温度（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：Ｔｇ）は、３７℃の生理的温度より高く、適度に剛性な鎖配置をもたらし、したがって周囲温度での機械的強度を付与する。異なるラクチド（ＬＡ）対グリコリド（ＧＡ）比及び分子量でのＰＬＧＡの使用は、異なる薬物放出プロファイルを可能にする。ＧＡ含量の増加はＰＬＧＡの水取込みを増大させ、したがってより急速な分解をもたらす。ＬＡ／ＧＡ ５０／５０を用いたＰＬＧＡの分解は、典型的には、１～３ヶ月である。一実施形態では、ＰＬＧＡにおける乳酸対グリコール酸のモル比は、９０％乳酸対１０％グリコール酸、８５％乳酸対１５％グリコール酸、７５％乳酸対２５％グリコール酸、６５％乳酸対３５％グリコール酸、５０％乳酸対５０％グリコール酸、３５％乳酸対６５％グリコール酸、２５％乳酸対７５％グリコール酸、１５％乳酸対８５％グリコール酸、及び１０％乳酸対９０％グリコール酸である。
【0058】
別の実施形態では、生分解性ポリマーは、ＰＣＬ、ＰＬＣ、ＰＬＡ、又はこれらの混合物、コポリマー若しくはブロックコポリマーである。
【0059】
一実施形態では、生分解性ポリマーは、１～４０ｗ／ｗ％、１～３０ｗ／ｗ％、１～２０ｗ／ｗ％、２～１０ｗ／ｗ％、５～１０ｗ／ｗ％の量で存在する。
【0060】
本明細書に記載の光開始剤は、本明細書に記載の他の光重合性組成物、生分解性ポリマー、治療剤、光開始剤、溶媒、共溶媒、及び共開始剤のいずれかと組み合わせて、本発明の組成物及びインプラントのいずれかで、使用することができる。
【0061】
ある特定の実施形態では、光開始剤は、２００～５５０ｎｍの光を用いて作用するように設計される。いくつかの実施形態では、光開始剤は、２００～５００ｎｍのＵＶ光を用いて作用するように設計される。他の実施形態では、光開始剤は、２００～４２５ｎｍのＵＶ光を用いて作用するように設計される。
【0062】
ある特定の実施形態では、光源は、光の波長及び／又は光の強度の変化を可能にすることができる。本発明において有用な光源としては、レーザダイオード及びランプが挙げられるが、これらに限定されない。光ファイバ装置を使用して光を伝送することができる。
【0063】
一実施形態では、光開始剤は、ケトンである（すなわち、ＲＣＯＲ’）。一実施形態では、化合物は、アゾ化合物である（すなわち、－Ｎ＝Ｎ－基を有する化合物）。一実施形態では、光開始剤は、アシルホスフィンオキシドである。一実施形態では、光開始剤は、硫黄含有化合物である。一実施形態では、開始剤は、キノンである。ある特定の実施形態では、光開始剤の組合せが使用される。
【0064】
別の実施形態では、光開始剤は、ヒドロキシケトン光開始剤、アミノケトン光開始剤、ヒドロキシケトン／ベンゾフェノン光開始剤、ベンジルジメチルケタール光開始剤、フェニルグリオキシレート光開始剤、アシルホスフィンオキシド光開始剤、アシルホスフィンオキシド／アルファヒドロキシケトン光開始剤、ベンゾフェノン光開始剤、リビチルイソアロキサジン光開始剤、過酸化物光開始剤、過硫酸塩光開始剤、若しくはフェニルグリオキシレート光開始剤、又はこれらの任意の組合せから選択され得る。場合により、光開始剤は、２－ヒドロキシ－４’－（２－ヒドロキシエトキシ）－２－メチルプロピオフェノン、１－［４－（２－ヒドロキシエトキシ）－フェニル］－２－ヒドロキシ－２－メチル－１－プロパノン、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、ジフェニル（２，４，６トリメチルベンゾイル）ホスフィンオキシド（ＤＰＰＯ）、又はリボフラビンである。別の実施形態では、光開始剤は、過酸化ベンゾイル、２，２’’－アゾビスイソブチロニトリル、過酸化ジクミル、過酸化ラウロイル、及び／又はカンファキノンである。
【0065】
一実施形態では、本発明の組成物は、共開始剤を更に含む。一実施形態では、共開始剤は、エオシンＹ、トリエタノールアミン、カンファキノン、１－ビニル－２ピロリジノン（ＮＶＰ）、エオシン、ジメチルアミノ安息香酸（ＤＭＡＢ）、Ｉｒｇａｃｕｒｅ（登録商標）Ｄ－２９５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）、Ｉｒｇａｃｕｒｅ（登録商標）９０７（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）、Ｉｒｇａｃｕｒｅ（登録商標）６５１（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）、ジフェニル（２，４，６－トリメチルベンゾイル）ホスフィンオキシド（ＤＰＰＯ／Ｄａｒｏｃｕｒ ＴＰＯ）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）、又はエチル－４－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ安息香酸（４ＥＤＭＡＢ）である。場合により、光開始剤はリボフラビンであり、共開始剤はＬ－アルギニンである。
【0066】
一実施形態では、本発明の組成物は、放出調節剤を含む。適切な放出調節剤は、特定の治療剤及びインプラントの組成、並びに所望の溶出プロファイル又は放出速度を考慮して選択され得る。放出調節剤は、天然に存在する薬剤若しくはポリマー、又は合成薬剤若しくはポリマーであり得る。
【0067】
本明細書に記載の全ての放出調節剤は、本明細書に記載の他の光重合性組成物、生分解性ポリマー、治療剤、光開始剤、溶媒、共溶媒、及び共開始剤のいずれかと組み合わせて、本発明のインプラント及び組成物のいずれかで、使用することができる。
【0068】
放出調節剤は、０．１～４０ｗ／ｗ％、１～３０ｗ／ｗ％、１～２０ｗ／ｗ％、１～１０ｗ／ｗ％、５～１０ｗ／ｗ％の量で存在し得る。
【0069】
場合により、放出調節剤は、インプラントマトリックスへの吸水を変化させ、したがって治療剤の放出速度及びインプラント分解を制御する。一実施形態では、適切な吸水調節剤は、例えば、キトサン及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を含むセルロース系材料；ヒアルロン酸；ポロキサマー；ポリエーテル、例えばポリエチレングリコールなど；ゼラチン；ポリビニルピロリドン；ポリビニルアルコール、及びこれらの混合物のような、１つ以上の多糖類である。一実施形態では、適切な吸水調節剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
【0070】
一実施形態では、放出調節剤は、細孔形成剤及び／又は安定性向上剤である。場合により、これは、ラクトース、マルトース、グルコース、マンニトール、塩化ナトリウム、炭酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、塩化カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素アンモニウム、炭酸水素カリウム、アガロース、又はスクロースである。
【0071】
別の実施形態では、放出調節剤は、本発明の眼用組成物又はインプラントに２つ以上の機能性を提供するために、上記の２つ以上の調節剤の混合物である。任意に、放出調節剤は、ポリエチレングリコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、又はこれらの混合物である。
【0072】
任意に、インプラントの多孔性は、分散した水溶性ポロシノゲンの存在下でインプラントを調製することによって調節することができ、これは、後に水で洗浄して除去して、相互接続された網目構造（すなわち、多孔質ヒドロゲル）を残すことができる。ポロシノゲン技術によって調製されたヒドロゲルの孔径はポロシノゲンのサイズに依存する。
【0073】
本発明の別の実施形態では、眼用組成物は、放出調節剤を含有しない。
【0074】
本発明の別の態様は、上記の眼用組成物の作製方法である。この方法は、治療剤を溶媒／共溶媒中に溶解して溶液を得る工程と、続いて任意の添加順序で、そのようにして得られた治療剤溶液を、重合性組成物、生分解性ポリマー、光開始剤、及び任意に放出調節剤と混合する工程とを含む。任意に、治療剤は最初に光重合性組成物と混合され、そのようにして得られた混合物は、任意の添加順序で、生分解性ポリマー、光開始剤、及び任意に放出調節剤と混合される。あるいは、治療剤は最初に光重合性組成物の一部と混合され、光重合性組成物の別の部分は、生分解性ポリマー、光開始剤、及び任意に放出調節剤と混合される。
【0075】
本発明に従って使用することができる溶媒の選択は、治療剤の極性に依存する。
【0076】
任意に、溶媒は、水、ジメチルスルホキシド、デシルメチルスルホキシド、２－ピロリドン、１－メチル－２－ピロリドン、Ｎ－ビニル－ピロリジン、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、Ｎ－エチル－ピロリドン、グリセロールホルマール、グリセロール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、安息香酸エチル、トリアセチン、クエン酸トリエチル、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル、ジクロロメタン及びテトラヒドロフランから選択することができる。
【0077】
一実施形態では、共溶媒を使用してもよく、これは、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、酢酸、メタノール、エタノール、イソプロパノール、グリコフロール、又はブタノールから選択することができる。
【0078】
親水性治療剤の場合、溶媒は、水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液などの水性溶媒であり得る。
【0079】
別の実施形態によれば、溶媒は、ジメチルスルホキシド、デシルメチルスルホキシド、アセトニトリル、２－ピロリドン、１－メチル－２－ピロリドン、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、及びグリセロールホルマールから選択され得る。
【0080】
あるいは、治療剤は、他の成分と混合する前に溶媒中へ溶解されない。したがって、治療剤、重合性組成物、生分解性ポリマー、光開始剤、及び場合により放出調節剤は、任意の添加順序で一緒に混合される。あるいは、治療剤は最初に光重合性組成物の一部と混合され、光重合性組成物の別の部分は、生分解性ポリマー、光開始剤、及び任意に放出制御剤と混合される。
【0081】
本発明の別の態様は、眼用インプラントの調製に使用するための上記の眼用組成物を提供することである。あるいは、本発明の眼用組成物は、眼用インプラント又は眼用インプラント支持体をコーティングするために使用される。
【0082】
本発明の更なる態様は、本発明の眼用インプラントを作製する方法であって、本発明の眼用組成物を提供する工程と、続いて眼用組成物に、２００～５５０ｎｍ、２００～５００ｎｍ、２００～４９０ｎｍ、又は２００～４２５ｎｍの波長の光を、１秒～６０分、３０秒～３０分、２．５分～２０分、５分～１０分の間照射する工程と、を含む方法である。一実施形態では、架橋は、３秒間、６秒間、９秒間、１５秒間、３０秒間、１分間、２．５分間、５分間、１０分間、２０分間、又は３０分間である。
【0083】
本発明の更なる態様は、上述の方法によって得ることができる眼用インプラントである。
【0084】
一実施形態では、ポリマー分子量、タイプ及びコポリマー比、薬物のタイプ及び負荷、インプラントサイズ、ＵＶ架橋の時間及び程度、光開始剤、放出調節剤、溶媒及び／又は共溶媒の量及びタイプを変更して、薬物放出の速度及び程度を制御することができる。これらの因子の変化により、様々な眼疾患の治療における特定の臨床的／患者のニーズに対処するために、所望の薬物放出期間をもたらすように容易に調整することができる、本発明の組成物が提供される。
【0085】
本発明の眼用組成物は、
（ｉ）眼に注射した後、短時間のＵＶ光を照射してインサイチュ光架橋を誘導し、インサイチュ光架橋インプラント（Ｉｎ Ｓｉｔｕ Ｐｈｏｔｏｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｐｌａｎｔ：ＩＳＰｃＩ）と呼ばれるインプラント形成をもたらすこと；と、
（ｉｉ）眼に適用する前に光架橋して所望の形状及びサイズのインプラント（例えば、フィルム、ロッド又はナノ／マイクロ粒子）を形成し、これを眼内投与して、事前形成光架橋インプラント（Ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ Ｐｈｏｔｏｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｐｌａｎｔ：ＰＰｃＩ）と呼ばれる所望の薬物送達期間を提供することと、ができる。
（ｉ）眼に注射した後、短時間のＵＶ光を照射してインサイチュ光架橋を誘導し、インサイチュ光架橋インプラント（Ｉｎ Ｓｉｔｕ Ｐｈｏｔｏｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｐｌａｎｔ：ＩＳＰｃＩ）と呼ばれるインプラント形成をもたらすこと；と、
（ｉｉ）眼に適用する前に光架橋して所望の形状及びサイズのインプラント（例えば、フィルム、ロッド又はナノ／マイクロ粒子）を形成し、これを眼内投与して、事前形成光架橋インプラント（Ｐｒｅｆｏｒｍｅｄ Ｐｈｏｔｏｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｐｌａｎｔ：ＰＰｃＩ）と呼ばれる所望の薬物送達期間を提供することと、ができる。
【0086】
あるいは、本発明の組成物は、インサイチュ及び事前成形眼用装置の両方を含む眼用装置をコーティングするために、使用することができる。
【0087】
本発明のインプラントは、長方形、正方形、球形、円筒形、円形、楕円形、フィルム、ダンベル型、ロッド、及びビーズなどの任意の所望の形状であってもよいが、これらに限定されない。
【0088】
本発明のインプラントは任意の所望のサイズを有することができ、例えば、マクロ、マイクロ又はナノ粒子サイズ範囲であり得る。
【0089】
本発明の一実施形態では、眼用インプラントは、寸法の一方が、１０ｍｍ未満、又は５ｍｍ未満、又は３ｍｍ未満のインプラントである。一実施形態では、インプラントは、寸法１０×５×０．５ｍｍの長方形インプラントである。一実施形態では、インプラント（ＩＳＰｃＩ）は、１０ｍｍ未満、又は５ｍｍ未満、又は３ｍｍ未満の直径の球形インプラントである。本発明の一実施形態では、眼用インプラントは、ナノ粒子又は微粒子である。
【0090】
一実施形態では、ナノ粒子の眼用インプラントは、１，０００ｎｍ未満、９００ｎｍ未満、７５０ｎｍ未満、５００ｎｍ未満、又は１００ｎｍ未満である。
【0091】
一実施形態では、微粒子の眼用インプラントは、１，０００μｍ未満、９００μｍ未満、７５０μｍ未満、５００μｍ未満、又は２５μｍ未満である。
【0092】
任意に、インプラントは、インサイチュ形成された眼用インプラントである。あるいは、インプラントは、予め形成された眼用インプラントである。
【0093】
本発明にかかるインサイチュ光架橋インプラント（ＩＳＰｃＩ）は、体内に挿入されると、最終的な局所的構造を形成してふさぐものである。ＩＳＰｃＩが不規則な欠損を満たす能力は、これらの利点の１つである。本発明のＩＳＰｃＩはまた、比較的容易で低侵襲性の適用による部位特異的作用、特定の組織への局所送達、送達時間の延長、全身送達に関連する副作用の減少、並びにまた、優れた患者の快適性及びコンプライアンスを含む、追加の利点も有する。本発明のＩＳＰｃＩの更なる利点は、タンパク質、ペプチド又は遺伝子材料のような温度又はｐＨの不安定な薬物で作業する場合、問題を引き起こす可能性がある、処理中の極端なｐＨ条件又は高温を必要としないことである。更に、生理的温度での迅速な架橋は、薬物分子を素早く捕捉することができ、長期制御された薬物放出を提供するＩＳＰｃＩをもたらすことができる。光架橋はまた、プロセスの開始が光源に曝露されたときにのみ引き起こされるので、自発的架橋（例えば、酵素的、自己組織化、マイケル付加）と比較して有益であり、したがって、早すぎるゲル化は、材料形成の優れた制御をもたらす問題ではない。更に、ＵＶ光は角膜架橋のために臨床的に使用されるので、ＵＶ光の短期適用は眼用途に安全であると考えられるため、安全性の問題は起こらない。重要なことに、この方法による投与は、比較的低粘度の材料の体内への注射を可能にし、次いで、これは転相によって凝固し、架橋時に薬物送達を制御する半固体デポーを形成して、短期又は長期の治療作用を提供する。
【0094】
一実施形態では、ＩＳＰｃＩは、本発明の眼用組成物をそれを必要とする対象に注射し、続いて、所望の期間にわたって薬物放出を制御する固体インプラントの形成を引き起こすＵＶ光の外部源を用いて架橋することによって、形成される。
【0095】
本発明のＩＳＰｃＩの場合、光重合性組成物の分子量は、典型的には、１００～６，０００Ｄａ、２００～３，０００Ｄａ、又は２００～１，０００Ｄａである。
【0096】
本発明の事前形成光架橋インプラント（ＰＰｃＩ）は、眼の前部又は眼の後部の疾患を治療するために、眼、例えば、円蓋、結膜下、前房内、基質内／角膜内、経強膜／眼周囲、強膜内、又は硝子体内、網膜下に挿入することができる。ＰＰｃＩは、ロッド、フィルム、円筒形又は円形、及びマイクロ又はナノ粒子の形態を含むサイズを含むが、これらに限定されない、様々な形状で製造することができる。
【0097】
一実施形態では、ＰＰｃＩナノ粒子及び微粒子は、治療剤、光重合性組成物、生分解性ポリマー、光開始剤、及び任意に放出調節剤の混合物を、水性媒体中で超音波処理することによって得られる。一実施形態では、水性媒体は、水とリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）との組合せである。照射は、超音波処理中、すなわちＵＶ光下で混合物を超音波処理する間に適用することができるか、あるいは超音波処理工程後に行うことができる。
【0098】
本発明のＰＰｃＩは、薬物放出を制御し、及び／又はバースト放出を排除するように構成することができる、高い架橋密度及び／又はタイトなポリマーネットワーク構造の利点を有する。
【0099】
本発明のＰＰｃＩは、異なる放出プロファイル又は放出速度で２つ以上の薬物又は同じ薬物の負荷を可能にする単層及び／又は多層を有するように、製造することができる。
【0100】
更に、インプラントの分解速度は本発明のＩＳＰｃＩよりもＰＰｃＩの方が遅くすることができ、治療される特定の疾患又は障害の機能において制御することができる。
【0101】
本発明のＰＰｃＩの場合、光重合性ポリマーの平均分子量は、典型的には、１００～３００，０００Ｄａ、２００～１００，０００Ｄａ、２００～５０，０００Ｄａ、２００～２０，０００Ｄａ、又は２００～１０，０００Ｄａである。
【0102】
一実施形態では、本発明は、ＰＬＧＡ／ＰＥＧＤＡ ＰＰｃＩである。別の実施形態では、本発明は、ＰＬＧＡ／ＰＥＧＤＡ ＩＳＰｃＩである。
【0103】
一実施形態では、生分解性ポリマーは、光重合性組成物のマトリックス内に本質的に含まれる。任意に、生分解性ポリマーは、混合時にゲルを形成する光重合性組成物のマトリックス内に本質的に含まれる。一実施形態では、光重合性ポリマーは、光開始剤及び生分解性ポリマー並びに治療剤（複数可）の存在下において架橋される。一実施形態では、生分解性ポリマーは事実上疎水性であり、光重合性ポリマーは事実上親水性である。一実施形態では、複合インプラントの架橋度が、治療剤の放出の速度及び程度を支配する。
【0104】
本発明の別の態様は、少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤と、５～７５ｗ／ｗ％の架橋ポリマーマトリックスと、を含む眼用インプラントに関し、０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマーは、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択され、
（ａ）架橋ポリマーマトリックスが、ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、及びポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、光重合性組成物を架橋することによって得られること；と、
（ｂ）治療剤及び生分解性ポリマーが、ポリマーマトリックスに埋め込まれていることと、を特徴とする。
（ａ）架橋ポリマーマトリックスが、ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、及びポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、光重合性組成物を架橋することによって得られること；と、
（ｂ）治療剤及び生分解性ポリマーが、ポリマーマトリックスに埋め込まれていることと、を特徴とする。
【0105】
本明細書で使用される場合、「埋め込まれた（ｅｍｂｅｄｄｅｄ）」とは、治療剤が架橋ポリマーマトリックス内に本質的に捕捉され、架橋ポリマーマトリックス及び／又は生分解性ポリマー中に均一に分散又は溶解されることを意味する。
【0106】
本発明の組成物及びインプラントでは、ＵＶ架橋時間を変えることにより、薬物放出の速度及び持続時間を制御することができる。いくつかの実施形態では、ＵＶ架橋時間の増加は、薬物放出の減少を引き起こす。更に、光開始剤の濃度を変えることにより、薬物放出の速度及び持続時間を制御することができる。更に、ＵＶ架橋時間及び光開始剤の濃度の両方を変えることにより、薬物放出の速度及び持続時間を制御することができる。一実施形態では、生分解性ポリマー（ＰＬＧＡなど）の濃度を低下させると、薬物放出速度が増加する。一実施形態では、細孔形成剤（例えば、ＭｇＣＯ３）を添加すると、薬物放出速度が増加する。一実施形態では、より長いＵＶ架橋時間及びより高い濃度の光開始剤により、より長期間にわたって薬物放出を持続することができる。一実施形態では、薬物放出は、１日、２日、１週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、又は９ヶ月を超える期間持続し得る。
【0107】
いくつかの実施形態では、本発明のＩＳＰｃＩ及びＰＰｃＩの遅い分解速度により、ペプチド及びタンパク質などの感受性分子は保護される。
【0108】
いくつかの実施形態では、バースト放出は、ＵＶ架橋時間を変え、処方物組成、インプラント体積を変えることによって、排除又は制御することができる。
【0109】
一実施形態では、本発明は、バースト放出のない又は低いＰＰｃＩである。一実施形態では、本発明は、薬物拡散を有意に遅らせる高い架橋密度を有するＰＰｃＩである。
【0110】
一実施形態では、本発明の眼用インプラントは、２００μｇ～２０００μｇ／μｍ３、１０００μｇ～２０００μｇ／μｍ３、１２００μｇ～１８００μｇ／μｍ３、１２００μｇ～１５００μｇ／μｍ３の濃度で治療剤を含む。
【0111】
本明細書に記載のインプラント及び組成物のいずれかは、本明細書に記載の本発明の方法のいずれかにおける使用に適している。
【0112】
一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象の眼の疾患又は障害を治療する方法であって、本発明の組成物又はインプラントを対象の眼領域に投与することを含む、方法である。
【0113】
一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象の眼の疾患又は障害の治療に使用するための本発明の組成物又はインプラントである。
【0114】
本明細書で使用される場合、「眼領域」とは、対象の眼の内側、外側、又は隣接する領域である。一実施形態では、眼領域は、強膜（強膜内）、強膜外（経強膜）、硝子体、脈絡膜、角膜、角膜実質、前房内、房水、水晶体、円蓋、又は視神経である。
【0115】
一実施形態では、組成物及びインプラントは、硝子体内、結膜下、眼球周囲、テノン嚢下、又は球後注射を含む注射によって、角膜上に投与することができる。
【0116】
いくつかの実施形態では、インプラントは、外科手技により投与される。いくつかの実施形態では、インプラントは、外科的移植後に、接着又は縫合により定位置に固定される。
【0117】
用語「対象」とは、動物（例えば、ニワトリ、ウズラ若しくはシチメンチョウなどの鳥、又は哺乳動物）、具体的には非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ウサギ、モルモット、ラット、ネコ、イヌ及びマウス）及び霊長類（例えば、サル、チンパンジー及びヒト）を含む「哺乳動物」、より具体的にはヒトを指す。一実施形態では、対象は、家畜（例えば、ウマ、ウシ、ブタ又はヒツジ）又はペット（例えば、イヌ、ネコ、モルモット又はウサギ）などの非ヒト動物である。別の実施形態では、対象は、「ヒト」である。
【0118】
本明細書で使用される場合、用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」及び「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」とは、本発明の組成物又はインプラントの投与から生じる、疾患、障害若しくは状態の進行、重症度及び／若しくは持続時間の減少若しくは回復、又は疾患、障害若しくは状態の１つ以上の症状（具体的には、１つ又は複数の識別可能な症状）の回復を含む、治療的処置を指す。特定の実施形態では、治療的処置は、疾患、障害又は状態の少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの回復を含む。他の実施形態では、治療的処置は、例えば識別可能な症状の安定化による物理的状態、例えば身体的パラメータの安定化による生理学的状態のいずれか、又はこれら両方による状態の進行の阻害を含む。他の実施形態では、治療的処置は、疾患、障害又は状態の軽減又は安定化を含む。
【0119】
一実施形態では、疾患又は障害は、疼痛、炎症、感染症、白内障、アレルギー、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、網膜炎、網膜色素変性症、ブドウ膜炎、ドライアイ症候群、角膜炎、緑内障、眼瞼炎、眼瞼結膜炎（ｂｌｅｐｈａｒｉｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｔｉｓ）、高眼圧症、結膜炎、シスチン症、硝子体黄斑癒着、角膜血管新生、角膜潰瘍及び術後の眼炎症／創傷治癒である。
【0120】
以下の番号付けされた項目のリストは、本発明に含まれる実施形態である。
【0121】
１．眼用組成物であって、
（ａ）少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤；と、
（ｂ）ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、５～７５ｗ／ｗ％の光重合性組成物；と、
（ｃ）０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマーが、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択されること；と、
（ｄ）光開始剤と、
を含む、眼用組成物。
（ａ）少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤；と、
（ｂ）ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、５～７５ｗ／ｗ％の光重合性組成物；と、
（ｃ）０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマーが、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択されること；と、
（ｄ）光開始剤と、
を含む、眼用組成物。
【0122】
２．該治療剤が、２０～７０ｗ／ｗ％の量で存在する、実施形態１に記載の眼用組成物。
【0123】
３．該治療剤が、４０～７０ｗ／ｗ％の量で存在する、実施形態２に記載の眼用組成物。
【0124】
４．該治療剤が、５０～７０ｗ／ｗ％の量で存在する、実施形態３に記載の眼用組成物。
【0125】
５．光重合性組成物が、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、実施形態１～４のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【0126】
６．該光重合性組成物が、ポリエチレングリコールジアクリレート、ジエチレングリコールジアクリレート、ポリエチレングリコールジメタクリレート、ジエチレングリコールジメタクリレート、ポリプロピレングリコールジアクリレート、ジプロピレングリコールジアクリレート、ジプロピレングリコールジメタクリレート、及びポリプロピレングリコールジメタクリレート、又はこれらの混合物、コポリマー若しくはブロックコポリマーからなる群から選択される、実施形態１～５のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【0127】
７．該光重合性組成物が、ポリエチレングリコールジアクリレート（ＰＥＧＤＡ）である、実施形態６に記載の眼用組成物。
【0128】
８．該生分解性ポリマーが、５～１０ｗ／ｗ％の量で存在する、実施形態１～７のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【0129】
９．該生分解性ポリマーが、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、及びラクチド／カプロラクトンコポリマー（ＰＬＣ）である、実施形態１～８のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【0130】
１０．該生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）である、実施形態９に記載の眼用組成物。
【0131】
１１．該光開始剤が、ヒドロキシケトン光開始剤、アミノケトン光開始剤、ヒドロキシケトン／ベンゾフェノン光開始剤、ベンジルジメチルケタール光開始剤、フェニルグリオキシレート光開始剤、アシルホスフィンオキシド光開始剤、アシルホスフィンオキシド／アルファヒドロキシケトン光開始剤、ベンゾフェノン光開始剤、リビチルイソアロキサジン光開始剤、若しくはフェニルグリオキシレート光開始剤、又はこれらの任意の組合せである、実施形態１～１０のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【0132】
１２．該光開始剤が、１－［４－（２－ヒドロキシエトキシ）－フェニル］－２－ヒドロキシ－２－メチル－１－プロパノン、２，２－ジメトキシ－２－フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、ジフェニル（２，４，６－トリメチルベンゾイル）ホスフィンオキシド（ＤＰＰＯ）、又はリボフラビンである、実施形態１１に記載の眼用組成物。
【0133】
１３．放出調節剤を更に含む、実施形態１～１２のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【0134】
１４．該放出調節剤が、キトサンを含む多糖類及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を含むセルロース系材料；ヒアルロン酸；ポロキサマー；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むポリエーテル；ゼラチン；ポリビニルピロリドン；ポリビニルアルコール、ラクトース、マルトース、グルコース、マンニトール、塩化ナトリウム、炭酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、塩化カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素アンモニウム、炭酸水素カリウム、アガロース、スクロース、並びにこれらの混合物から選択される、実施形態１３に記載の眼用組成物。
【0135】
１５．該放出調節剤が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、又はこれらの混合物である、実施形態１４に記載の眼用組成物。
【0136】
１６．該組成物が、いかなる放出調節剤も含有しない、実施形態１～１２のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【0137】
１７．眼用インプラントの調製に使用するための、実施形態１～１６のいずれか一項に記載の眼用組成物。
【0138】
１８．
（ａ）該治療剤を溶媒中に溶解して溶液を得る工程と、
（ｂ）工程（ａ）で得られた該溶液を、該重合性組成物、該生分解性ポリマー、該光開始剤、及び場合により該放出調節剤と混合する工程と、を含む、実施形態１～１７のいずれか一項に記載の眼用組成物を作製する方法。
（ａ）該治療剤を溶媒中に溶解して溶液を得る工程と、
（ｂ）工程（ａ）で得られた該溶液を、該重合性組成物、該生分解性ポリマー、該光開始剤、及び場合により該放出調節剤と混合する工程と、を含む、実施形態１～１７のいずれか一項に記載の眼用組成物を作製する方法。
【0139】
１９．該溶媒が、水系溶媒である、実施形態１８に記載の方法。
【0140】
２０．眼用インプラントを作製する方法であって、
（ａ）請求項１～１７のいずれか一項に記載の眼用組成物を提供すること；と、
（ｂ）該眼用インプラントを形成するために、１秒～６０分の間に２００～５５０ｎｍの波長の光を該眼用組成物に照射すること；と、を含む、方法。
（ａ）請求項１～１７のいずれか一項に記載の眼用組成物を提供すること；と、
（ｂ）該眼用インプラントを形成するために、１秒～６０分の間に２００～５５０ｎｍの波長の光を該眼用組成物に照射すること；と、を含む、方法。
【0141】
２１．工程（ａ）で提供される該眼用組成物が、工程（ｂ）に従ってそれに照射をする前に、対象の眼領域へ投与される、実施形態２０に記載の方法。
【0142】
２２．工程（ｂ）で形成された該眼用インプラントが、対象の眼領域に投与される、実施形態２０に記載の方法。
【0143】
２３．実施形態２０～２２のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる、眼用インプラント。
【0144】
２４．眼用インプラントであって、少なくとも２０ｗ／ｗ％の治療剤と、５～７５ｗ／ｗ％の架橋ポリマーマトリックスと、ラクチド／グリコリドコポリマー（ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリヒドロキシブチレートを含むポリヒドロキシアルカノエート、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ（ＤＬ－ラクチド）（ＰＤＬ）、ポリ（Ｄ－ラクチド）、ラクチド／カプロラクトンコポリマー、ポリ－Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン（ＰＬＣ）、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、０．１～４０ｗ／ｗ％の生分解性ポリマーと、を含み、
（ａ）架橋ポリマーマトリックスが、ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、光重合性組成物を架橋することによって得られること；と、
（ｂ）治療剤及び生分解性ポリマーが、ポリマーマトリックスに埋め込まれていることと、を特徴とする、眼用インプラント。
（ａ）架橋ポリマーマトリックスが、ポリアルキレングリコールモノアクリレート、ポリアルキレングリコールジアクリレート、ポリアルキレングリコールメタクリレート、ポリアルキレングリコールジメタクリレートのフラグメント又はモノマー、並びにこれらの混合物、コポリマー及びブロックコポリマーからなる群から選択される、光重合性組成物を架橋することによって得られること；と、
（ｂ）治療剤及び生分解性ポリマーが、ポリマーマトリックスに埋め込まれていることと、を特徴とする、眼用インプラント。
【0145】
２５．マクロ、マイクロ又はナノ粒子である、実施形態２３又は２４に記載の眼用インプラント。
【0146】
２６．該治療剤が、眼用インプラント１μｍ３当たり２００μｇ～２０００μｇの濃度で存在する、実施形態２３～２５のいずれか一項に記載の眼用インプラント。
【実施例】
【0147】
実施例１：ベバシズマブ（ＢＥＺ）、分子量１５０ｋＤａ
１．１ 材料
ポリ（エチレングリコール）ジアクリレート（Ｍｎ＝７５０、ＰＥＧＤＡ ７００）、Ｉｒｇａｃｕｒｅ ２９５９（１－［４－（２－ヒドロキシエトキシ）－フェニル］－２－ヒドロキシ－２－メチル－１－プロパノン）、リン酸緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ：ＰＢＳ）溶液錠剤、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ、１０，０００Ｄａ）は、Ｓｉｇｍａ（Ｄｏｒｓｅｔ、英国）から購入した。ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＵＲＡＳＯＲＢ（登録商標）ＰＤＬＧ ７５０２Ａ、７５：２５、ＰＬＧＡ ７５／２５）を、Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）から得た。
１．１ 材料
ポリ（エチレングリコール）ジアクリレート（Ｍｎ＝７５０、ＰＥＧＤＡ ７００）、Ｉｒｇａｃｕｒｅ ２９５９（１－［４－（２－ヒドロキシエトキシ）－フェニル］－２－ヒドロキシ－２－メチル－１－プロパノン）、リン酸緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ：ＰＢＳ）溶液錠剤、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ、１０，０００Ｄａ）は、Ｓｉｇｍａ（Ｄｏｒｓｅｔ、英国）から購入した。ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＵＲＡＳＯＲＢ（登録商標）ＰＤＬＧ ７５０２Ａ、７５：２５、ＰＬＧＡ ７５／２５）を、Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）から得た。
【0148】
ベバシズマブ（ＢＥＺ）（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））は、地元薬局から購入した（スイスのＲｏｃｈｅ製；各バイアルは４ｍＬ中１００ｍｇのＢＥＺ、すなわち２５ｍｇ／ｍＬからなる）。
【0149】
１．２ ＢＥＺ負荷インプラントの調製
１．２．１ ＰＰｃＩインプラントＦ１８（３０ｗ／ｗ％のＢＥＺ及び３０ｗ／ｗ％のＨＰＭＣ）の調製
５０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）を６５０ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００中に溶解して、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。５０ｍｇのＨＰＭＣ １０，０００Ｄａを１ｍＬの溶液Ｂ中に溶解して、溶液Ｃを調製した。５２．５ｍｇの溶液Ｃを２ｍＬエッペンドルフチューブに入れた。続いて、１５ｍｇのＢＥＺをエッペンドルフチューブに加え、撹拌子を用いて２５０ｒｐｍで３０秒間撹拌した。このようにして得られた混合物を、４～７℃で３０分間放置して溶解させ、続いて２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、気泡を除去した。このようにして得られた混合物に、３２．５ｍｇの溶液Ａ、１０μＬの溶液Ｂを添加し、続いて２５０ｒｐｍで３０分間撹拌した。次いで、これを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して気泡を除去し、続いて２５０ｒｐｍで更に１０分間撹拌した。最終的に得られた混合物をシリコンチューブ（内径：０．６３５ｍｍ）中に取り出し、ライトハンマー（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度（３６５ｎｍ）を５０％に設定し、シリコーンチューブを１５秒間ＵＶ光に曝露した（５回）。棒状のインプラントをシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。乾燥したインプラントを５ｍｍの長さに切断した。
１．２．１ ＰＰｃＩインプラントＦ１８（３０ｗ／ｗ％のＢＥＺ及び３０ｗ／ｗ％のＨＰＭＣ）の調製
５０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）を６５０ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００中に溶解して、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。５０ｍｇのＨＰＭＣ １０，０００Ｄａを１ｍＬの溶液Ｂ中に溶解して、溶液Ｃを調製した。５２．５ｍｇの溶液Ｃを２ｍＬエッペンドルフチューブに入れた。続いて、１５ｍｇのＢＥＺをエッペンドルフチューブに加え、撹拌子を用いて２５０ｒｐｍで３０秒間撹拌した。このようにして得られた混合物を、４～７℃で３０分間放置して溶解させ、続いて２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、気泡を除去した。このようにして得られた混合物に、３２．５ｍｇの溶液Ａ、１０μＬの溶液Ｂを添加し、続いて２５０ｒｐｍで３０分間撹拌した。次いで、これを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して気泡を除去し、続いて２５０ｒｐｍで更に１０分間撹拌した。最終的に得られた混合物をシリコンチューブ（内径：０．６３５ｍｍ）中に取り出し、ライトハンマー（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度（３６５ｎｍ）を５０％に設定し、シリコーンチューブを１５秒間ＵＶ光に曝露した（５回）。棒状のインプラントをシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。乾燥したインプラントを５ｍｍの長さに切断した。
【0150】
得られたインプラントの平均直径は０．５ｍｍ、長さは５ｍｍであった。
【0151】
１．２．２ ＰＰｃＩインプラントＦ１９（５０ｗ／ｗ％のＢＥＺ）の調製
５０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）を４５０ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００中に溶解して、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。６２．５μＬの溶液Ｂを２ｍＬエッペンドルフチューブに入れた。続いて、２５ｍｇのＢＥＺをエッペンドルフチューブに加え、撹拌子を用いて２５０ｒｐｍで３０秒間撹拌した。このようにして得られた混合物を、４～７℃で３０分間放置して溶解させ、続いて２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、気泡を除去した。このようにして得られた混合物に、２５ｍｇの溶液Ａを添加し、続いて２５０ｒｐｍで３０分間撹拌した。次いで、これを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して気泡を除去し、続いて２５０ｒｐｍで更に１０分間撹拌した。最終的に得られた混合物をシリコンチューブ（内径：０．６３５ｍｍ）中に取り出し、ライトハンマー（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度（３６５ｎｍ）を５０％に設定し、シリコーンチューブを１５秒間ＵＶ光に曝露した（５回）。棒状のインプラントをシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。乾燥したインプラントを５ｍｍの長さに切断した。得られたインプラントの直径は０．４９９７＋／－０．００２ｍｍ、長さは５ｍｍであった。
５０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）を４５０ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００中に溶解して、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。６２．５μＬの溶液Ｂを２ｍＬエッペンドルフチューブに入れた。続いて、２５ｍｇのＢＥＺをエッペンドルフチューブに加え、撹拌子を用いて２５０ｒｐｍで３０秒間撹拌した。このようにして得られた混合物を、４～７℃で３０分間放置して溶解させ、続いて２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、気泡を除去した。このようにして得られた混合物に、２５ｍｇの溶液Ａを添加し、続いて２５０ｒｐｍで３０分間撹拌した。次いで、これを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して気泡を除去し、続いて２５０ｒｐｍで更に１０分間撹拌した。最終的に得られた混合物をシリコンチューブ（内径：０．６３５ｍｍ）中に取り出し、ライトハンマー（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度（３６５ｎｍ）を５０％に設定し、シリコーンチューブを１５秒間ＵＶ光に曝露した（５回）。棒状のインプラントをシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。乾燥したインプラントを５ｍｍの長さに切断した。得られたインプラントの直径は０．４９９７＋／－０．００２ｍｍ、長さは５ｍｍであった。
【0152】
１．２．３ ＰＰｃＩインプラントＦ７（６ｗ／ｗ％のＢＥＺ及び４ｗ／ｗ％のＨＰＭＣ）の調製
２０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）を１６０ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００中に溶解して、溶液Ａを調製した。
６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９を１ｍＬのＰＢＳ（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。
８０ｍｇのＨＰＭＣ １０，０００Ｄａを１ｍＬの溶液Ｂ中に溶解して、溶液Ｃを調製した。
２０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）を１６０ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００中に溶解して、溶液Ａを調製した。
６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９を１ｍＬのＰＢＳ（０．１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。
８０ｍｇのＨＰＭＣ １０，０００Ｄａを１ｍＬの溶液Ｂ中に溶解して、溶液Ｃを調製した。
【0153】
２７．５ｍｇの溶液Ｃを２ｍＬエッペンドルフチューブに入れた。続いて、３ｍｇのＢＥＺをエッペンドルフチューブに加え、撹拌子を用いて２５０ｒｐｍで３０秒間撹拌した。このようにして得られた混合物を、４～７℃で３０分間放置して溶解させ、続いて２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、気泡を除去した。このようにして得られた混合物に、４５．０ｍｇの溶液Ａを添加し、続いて２５０ｒｐｍで３０分間撹拌した。次いで、これを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して気泡を除去し、続いて２５０ｒｐｍで更に１０分間撹拌した。最終的に得られた混合物をシリコンチューブ（内径：０．６３５ｍｍ）中に取り出し、ライトハンマー（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度（３６５ｎｍ）を５０％に設定し、シリコーンチューブを１５秒間ＵＶ光に曝露した（５回）。棒状のインプラントをシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。乾燥したインプラントを１０ｍｍの長さに切断した。
【0154】
得られたインプラントの平均直径は０．５ｍｍ、長さは１０ｍｍであった。
【0155】
１．３ インビトロ薬物放出試験（ＰＰｃＩインプラントＦ７、Ｆ１８、Ｆ１９）
薬物放出研究のために、各ＰＰｃＩインプラントＦ７、Ｆ１８及びＦ１９を、２ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４、０．０５％ＮａＮ３）を含有するガラスバイアルに入れた。ガラスバイアルを３７℃の静置インキュベータに入れた。サンプリングとこれに続くＰＢＳ放出媒体の完全な置換を、１日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。全ての実験を３連で行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下に記載されるように分析した。
薬物放出研究のために、各ＰＰｃＩインプラントＦ７、Ｆ１８及びＦ１９を、２ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４、０．０５％ＮａＮ３）を含有するガラスバイアルに入れた。ガラスバイアルを３７℃の静置インキュベータに入れた。サンプリングとこれに続くＰＢＳ放出媒体の完全な置換を、１日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。全ての実験を３連で行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下に記載されるように分析した。
【0156】
１．４ ＢＥＺのＳＥＣ－ＨＰＬＣ法
ベバシズマブ（ＢＥＺ）試料の分析は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）ＢｉｏＺｅｎ（商標）ＳＥＣ－２カラム（長さ１５０ｍｍ、内径４．６ｍｍ、及び粒径１．８μｍ）及びＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）ＢｉｏＺｅｎ（商標）ＳＥＣ－２ ０．４６ｍｍ ＳｅｃｕｒｉｔｙＧｕａｒｄ Ｕｌｔｒａ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、米国）を用いた蛍光検出によるＳＥＣ－ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して行った。ＢＥＺ試料を、３５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８、３００ｍＭ ＮａＣｌ）の移動相を用いて、１０μＬの注入量及び０．５ｍＬ／分の流速で、アイソクラティックモード（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ ｍｏｄｅ）にて分析した。カラム温度を２５℃に維持した。蛍光検出器は、励起波長２８０ｎｍ、発光波長３４０ｎｍに設定した。
ベバシズマブ（ＢＥＺ）試料の分析は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）ＢｉｏＺｅｎ（商標）ＳＥＣ－２カラム（長さ１５０ｍｍ、内径４．６ｍｍ、及び粒径１．８μｍ）及びＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）ＢｉｏＺｅｎ（商標）ＳＥＣ－２ ０．４６ｍｍ ＳｅｃｕｒｉｔｙＧｕａｒｄ Ｕｌｔｒａ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、米国）を用いた蛍光検出によるＳＥＣ－ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して行った。ＢＥＺ試料を、３５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８、３００ｍＭ ＮａＣｌ）の移動相を用いて、１０μＬの注入量及び０．５ｍＬ／分の流速で、アイソクラティックモード（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ ｍｏｄｅ）にて分析した。カラム温度を２５℃に維持した。蛍光検出器は、励起波長２８０ｎｍ、発光波長３４０ｎｍに設定した。
【0157】
１．５ ＢＥＺのＥＬＩＳＡ法
サンドイッチＥＬＩＳＡ技術を使用して、放出されたＢＥＺの生物活性を判定した。洗浄緩衝液は、０．０５ｗ／ｗ％のＴｗｅｅｎ２０を含む０．０１Ｍ ＰＢＳであった。ブロッキング緩衝液は、０．０１Ｍ ＰＢＳ、０．０５ｗ／ｗ％Ｔｗｅｅｎ ２０、及び１ｗ／ｗ％ＢＳＡから構成された。
サンドイッチＥＬＩＳＡ技術を使用して、放出されたＢＥＺの生物活性を判定した。洗浄緩衝液は、０．０５ｗ／ｗ％のＴｗｅｅｎ２０を含む０．０１Ｍ ＰＢＳであった。ブロッキング緩衝液は、０．０１Ｍ ＰＢＳ、０．０５ｗ／ｗ％Ｔｗｅｅｎ ２０、及び１ｗ／ｗ％ＢＳＡから構成された。
【0158】
一次コーティング抗体である組換えヒト血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ１６５）を、０．１Ｍ重炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．６）中に１：５０００で希釈した。この組換えヒトＶＥＧＦ１６５のアリコート（１００μＬ）を９６ウェルプレートの各ウェルに分注した。プレートをＰａｒａｆｉｌｍ（登録商標）で覆い、４℃で１６時間インキュベートした。次いで、プレートを洗浄緩衝液（２００μＬ／ウェル）で３回洗浄して、未結合の抗体を除去した。次いで、２００μＬのブロッキング緩衝液を各ウェルに加え、プレートを２５℃で２時間インキュベートした。この後、プレートを洗浄緩衝液（２００μＬ／ウェル）で３回洗浄し、１００μＬ量のＢＥＺ試料を各ウェルに分注し、各試料を三連で分析し、新たに調製した標準濃度曲線をプレーティングし（５～４００ｎｇ／ｍＬ）、２５℃で１．５時間インキュベートした。次いで、プレートを洗浄緩衝液（２００μＬ／ウェル）で３回洗浄した。これに続いて、１００μＬの二次抗体（ブロッキング緩衝液中で１：１０，０００に希釈したビオチン化ＢＥＧＦ１６５抗体）を各ウェルに添加し、２５℃で１時間インキュベートした。次いで、プレートを洗浄緩衝液（２００μＬ／ウェル）で３回洗浄した。ＰＢＳ中で１：５０００に希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｓｔｒｅｐ－ＨＲＰ）コンジュゲートである１００μＬのストレプトアビジンを、各ウェルに分注し、プレートを２５℃で暗所で３０分間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液（２００μＬ／ウェル）で３回洗浄した。抗体結合を検出するために、１００μＬの基質ＴＭＢ（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン）を各ウェルに添加し、２５℃で暗所において４５分間インキュベートし、１００μＬの４．０Ｍ塩酸を各ウェルに添加することによって反応を停止させた。光学密度は、ＦＬＵＯｓｔａｒ（登録商標）Ｏｍｅｇａマルチモードマイクロプレートリーダ（ＢＭＧ ＬＡＢＴＥＣＨ、Ｏｆｆｅｎｂｕｒｇ、ドイツ）を用いて４５０ｎｍで測定した。
【0159】
以下の表は、インプラントＦ７、Ｆ１８及びＦ１９のパラメータをまとめたものである。
【0160】
【0161】
ＢＥＺの治療関連濃度は５０ｎｇ／ｍＬであると報告されている（Ｙｕ Ｙ、Ｌａｕ ＬＣＭ、Ｌｏ ＡＣ、Ｃｈａｕ Ｙ、Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ Ｈｙｄｒｏｇｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ ｉｎ Ｖｉｔｒｅｏｕｓ：Ａ ６ Ｍｏｎｔｈ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｓｔｕｄｙ．、Ｔｒａｎｓｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１５年）、第４巻第２号第５頁、Ｄｏｉ：１０．１１６７／ｔｖｓｔ．４．２．５）。ヒト硝子体液の体積として４ｍＬを考慮すると、ヒトの眼のＢＥＺの治療レベルは０．２μｇである。ＢＥＺの上限は、片眼に対して１．２５ｍｇ、すなわち１２５０μｇである（Ｅｄｉｔｈ Ｐｏｋｕ、Ｊｏｈｎ Ｒａｔｈｂｏｎｅ、Ｅｍｍａ Ｅｖｅｒｓｏｎ－Ｈｏｃｋ、Ｍｕｎｉｒａ Ｅｓｓａｔ、Ｒｕｔｈ Ｗｏｎｇ、Ａｂｄｕｌｌａｈ Ｐａｎｄｏｒ、Ａｌｌａｎ Ｗａｉｌｏｏ、Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ Ｉｎ Ｅｙｅ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：Ｉｓｓｕｅｓ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｔｏ Ｑｕａｌｉｔｙ，Ｕｓｅ，Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ、Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ、２０１２年８月）。
【0162】
図１～図３は、本発明にかかるインプラントＦ１８及びＦ１９が、長期間（８４日間）にわたって治療的に許容される用量の治療剤を送達することができることを示す。インプラントＦ１８及びＦ１９は、比較用インプラントＦ７（５ｍｍ対１０ｍｍ）よりも５０％短い長さであり、したがって、これらにより患者の認容性、耐容性及び快適性を高めることが可能になる。更に、Ｆ１８インプラントから放出されたＢＥＺは、ＥＬＩＳＡによって推定されるように、８４日間にわたって８５％を超えるその生物活性を維持した。
【0163】
実施例２：異なる負荷のベバシズマブインプラント
【0164】
【0165】
２．１ Ｂ１及びＢ４インプラントの調製
２５ｍｇ（Ｂ１）又は５０ｍｇ（Ｂ４）のＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）を、４２５ｍｇ（Ｂ１）又は４５０ｍｇ（Ｂ４）のＰＥＧＤＡ ７００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解して、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２９５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。
２５ｍｇ（Ｂ１）又は５０ｍｇ（Ｂ４）のＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）を、４２５ｍｇ（Ｂ１）又は４５０ｍｇ（Ｂ４）のＰＥＧＤＡ ７００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解して、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２９５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。
【0166】
２５μＬの溶液Ｂを２ｍＬエッペンドルフチューブに入れた。続いて、５ｍｇ（Ｂ１）又は２５ｍｇ（Ｂ４）のＢＥＺをエッペンドルフチューブに加え、撹拌子を用いて２５０ｒｐｍで３０秒間撹拌した。このようにして得られた混合物を、４～７℃で３０分間放置して溶解させ、続いて２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、気泡を除去した。得られた混合物に、４５ｍｇ（Ｂ１）又は２５ｍｇ（Ｂ４）の溶液Ａを添加し、続いて２５０ｒｐｍで３０分間撹拌した。次いで、これを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して気泡を除去し、続いて２５０ｒｐｍで更に１０分間撹拌した。最終的に得られた混合物をシリコンチューブ（内径：０．６３５ｍｍ、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、英国）中に取り出し、ライトハンマー（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度（３６５ｎｍ）を５０％に設定し、シリコーンチューブを１５秒間ＵＶ光に曝露した（５回）。棒状のインプラントをシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。乾燥したインプラントを６．５ｍｍの長さに切断した。
【0167】
２．２ インビトロ薬物放出設定
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、Ｂ１のインプラント１つ（１）を入れることによって行った。同じインビトロ放出をインプラントＢ４についても行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するエッペンドルフチューブをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、Ｂ１のインプラント１つ（１）を入れることによって行った。同じインビトロ放出をインプラントＢ４についても行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するエッペンドルフチューブをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
【0168】
２．３ 試料分析
ベバシズマブのアッセイは、クォータナリポンプ、オートサンプラ、可変波長検出器（ｖａｒｉａｂｌｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｄｅｔｅｃｔｏｒ：ＶＷＤ）、及び蛍光検出器（Ａｇｉｌｅｎｔ、英国）からなるＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩシステムで行った。分離はＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）ｂｉｏＺｅｎ（商標）ＳＥＣ－２カラム（１．８μｍ、４．６×１５０ｍｍ）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、英国）によって達成した。クロマトグラフィ条件は、３５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液及び３００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．８）で構成される水性移動相を含み、０．５ｍＬ／分の流速で実行し、蛍光検出器はそれぞれ２８０及び３４０ｎｍの励起波長及び発光波長に設定した。
ベバシズマブのアッセイは、クォータナリポンプ、オートサンプラ、可変波長検出器（ｖａｒｉａｂｌｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｄｅｔｅｃｔｏｒ：ＶＷＤ）、及び蛍光検出器（Ａｇｉｌｅｎｔ、英国）からなるＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩシステムで行った。分離はＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）ｂｉｏＺｅｎ（商標）ＳＥＣ－２カラム（１．８μｍ、４．６×１５０ｍｍ）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、英国）によって達成した。クロマトグラフィ条件は、３５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液及び３００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．８）で構成される水性移動相を含み、０．５ｍＬ／分の流速で実行し、蛍光検出器はそれぞれ２８０及び３４０ｎｍの励起波長及び発光波長に設定した。
【0169】
図６及び図７は、それぞれ累積パーセンテージ及びμｇでの１日当たりの放出として表したＢ１及びＢ４のインビトロ放出を示す。これらの図から分かるように、本発明にかかるインプラントＢ４は、放出を開始した直後に許容できないバースト効果を引き起こすことなく、少なくとも５６日間にわたって治療的に許容される用量の持続的放出を可能にする。
【0170】
実施例３ Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ、分子量４２．７ｋＤａ
【0171】
【0172】
３．１ Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３及びＯ４インプラントの調製
５ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２、すなわち７５／２５（Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）を、８５ｍｇ（Ｏ１）又は７５ｍｇ（Ｏ２）又は６５ｍｇ（Ｏ３）又は４５ｍｇ（Ｏ４）のＰＥＧＤＡ ７００Ｄａ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解して、溶液Ａを調製した。５ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ中に溶解して、溶液Ｂを調製した。ニワトリ卵白由来の１０ｍｇ（Ｏ１）又は２０ｍｇ（Ｏ２）又は３０ｍｇ（Ｏ３）又は４０ｍｇ（Ｏ４）のアルブミン、すなわちＯｖａｌｂｕｍｉｎ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）をエッペンドルフチューブ中６０μＬの溶液Ｂに入れて、溶液Ｃを調製した。９０ｍｇ（Ｏ１）又は８０ｍｇ（Ｏ２）又は７０ｍｇ（Ｏ３）又は５０ｍｇ（Ｏ４）の溶液Ａをエッペンドルフチューブに加えた。６０μＬの溶液Ｃを、９００ｒｐｍで１５分間連続的に撹拌しながらエッペンドルフチューブ壁を介して混合物へゆっくり添加した。最終的に得られた混合物を、内径０．６３５ｍｍのシリコンチューブ（ポリマーシステムテクノロジー、英国）に取り出し、ＵＶ光（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度を５０％に設定し、シリコーンチューブをＵＶ光に１５秒間曝露した（すなわち、合計５回の実行）。インプラントを次いでシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。棒状のインプラントを各７．５ｍｍの長さで切断した。
５ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２、すなわち７５／２５（Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）を、８５ｍｇ（Ｏ１）又は７５ｍｇ（Ｏ２）又は６５ｍｇ（Ｏ３）又は４５ｍｇ（Ｏ４）のＰＥＧＤＡ ７００Ｄａ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解して、溶液Ａを調製した。５ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ中に溶解して、溶液Ｂを調製した。ニワトリ卵白由来の１０ｍｇ（Ｏ１）又は２０ｍｇ（Ｏ２）又は３０ｍｇ（Ｏ３）又は４０ｍｇ（Ｏ４）のアルブミン、すなわちＯｖａｌｂｕｍｉｎ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）をエッペンドルフチューブ中６０μＬの溶液Ｂに入れて、溶液Ｃを調製した。９０ｍｇ（Ｏ１）又は８０ｍｇ（Ｏ２）又は７０ｍｇ（Ｏ３）又は５０ｍｇ（Ｏ４）の溶液Ａをエッペンドルフチューブに加えた。６０μＬの溶液Ｃを、９００ｒｐｍで１５分間連続的に撹拌しながらエッペンドルフチューブ壁を介して混合物へゆっくり添加した。最終的に得られた混合物を、内径０．６３５ｍｍのシリコンチューブ（ポリマーシステムテクノロジー、英国）に取り出し、ＵＶ光（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度を５０％に設定し、シリコーンチューブをＵＶ光に１５秒間曝露した（すなわち、合計５回の実行）。インプラントを次いでシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。棒状のインプラントを各７．５ｍｍの長さで切断した。
【0173】
３．２ インビトロ薬物放出設定
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する２ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するガラスバイアル内に、Ｏ１のインプラント２つ（２）を入れることによって行った。同じインビトロ放出をインプラントＯ２、Ｏ３及びＯ４についても行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するガラスバイアルをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する２ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するガラスバイアル内に、Ｏ１のインプラント２つ（２）を入れることによって行った。同じインビトロ放出をインプラントＯ２、Ｏ３及びＯ４についても行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するガラスバイアルをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
【0174】
３．３ 試料分析
Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ（ＯＶＡ）インビトロ薬物放出試料の分析は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｂｉｏｓｅｐ－ＳＥＣ－Ｓ３００カラム（長さ３００ｍｍ、内径７．８ｍｍ、粒径５μｍ）及びＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）ＳｅｃｕｒｉｔｙＧｕａｒｄ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ ＧＦＣ ３０００の内径４×３．０ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、米国）を用いたＵＶ検出によるＳＥＣ－ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して行った。２０μＬの試料を、２７ｍＭリン酸緩衝液及び１５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ６．３５で、１．０ｍＬ／分の流速にて１４分間溶出した。検出は２１４ｎｍでＵＶ検出器によって行った。
Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ（ＯＶＡ）インビトロ薬物放出試料の分析は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｂｉｏｓｅｐ－ＳＥＣ－Ｓ３００カラム（長さ３００ｍｍ、内径７．８ｍｍ、粒径５μｍ）及びＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）ＳｅｃｕｒｉｔｙＧｕａｒｄ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ ＧＦＣ ３０００の内径４×３．０ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、米国）を用いたＵＶ検出によるＳＥＣ－ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して行った。２０μＬの試料を、２７ｍＭリン酸緩衝液及び１５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ６．３５で、１．０ｍＬ／分の流速にて１４分間溶出した。検出は２１４ｎｍでＵＶ検出器によって行った。
【0175】
図８は、累積放出パーセンテージ率として表されたＯ１、Ｏ２、及びＯ４のインビトロ放出を示す。
【0176】
これらの図から分かるように、本発明にかかるインプラントＯ２及びＯ４は、薬物の放出を開始した直後に許容できないバースト効果を引き起こすことなく、少なくとも１９６日間にわたって治療的に許容される用量の持続的放出を可能にする。
【0177】
実施例４：異なるインプラント長からのベバシズマブの放出。
【0178】
【0179】
４．１ ＢＬ１及びＢＳ４インプラントの調製
調製方法は、インプラントＢＬ１を１０ｍｍの長さに切断し、インプラントＢＳ４を３ｍｍの長さに切断したことを除いて、Ｂ１及びＢ４インプラント（実施例２．１）と同様である。
調製方法は、インプラントＢＬ１を１０ｍｍの長さに切断し、インプラントＢＳ４を３ｍｍの長さに切断したことを除いて、Ｂ１及びＢ４インプラント（実施例２．１）と同様である。
【0180】
４．２ インビトロ薬物放出設定
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、ＢＬ１のインプラント１つ（１）を入れることによって行った。ＢＳ４についてのインビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、インプラント２つ（２）を入れることによって行った。全ての実験を３連で行った。ＢＬ１インプラントを含有するエッペンドルフチューブ及び２つ（２）のＢＳ４インプラントを含有するエッペンドルフチューブをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、実施例２．３に記載されるように分析した。
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、ＢＬ１のインプラント１つ（１）を入れることによって行った。ＢＳ４についてのインビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、インプラント２つ（２）を入れることによって行った。全ての実験を３連で行った。ＢＬ１インプラントを含有するエッペンドルフチューブ及び２つ（２）のＢＳ４インプラントを含有するエッペンドルフチューブをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、実施例２．３に記載されるように分析した。
【0181】
４．３ 試料分析
試料を実施例２．３の下で分析した。
試料を実施例２．３の下で分析した。
【0182】
図９及び図１０は、それぞれ累積パーセンテージ及びμｇでの１日当たりの放出として表したＢ１、ＢＬ１及びＢＳ４のインビトロ放出を示す。これらの図から分かるように、本発明にかかるインプラントＢＳ４は、薬物の放出を開始した直後に許容できないバースト効果を引き起こすことなく、少なくとも５６日間にわたって治療的に許容される用量の持続的放出を可能にする。ＢＳ４は、Ｂ１及びＢＬ１よりも更にいっそう短く、したがって、より良好な患者コンプライアンスへ実質的に寄与する。
【0183】
実施例５：インプラント幅及びベバシズマブの放出、分子量１５０ｋＤａ。
【0184】
【0185】
５．１ ＦＮ４インプラントの調製
５０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）（Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）を４５０ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解し、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２９５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。６２．５μＬの溶液Ｂを２ｍＬのエッペンドルフチューブに入れ、続いて２５ｍｇのＢＥＺを加えた。
５０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）（Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）を４５０ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解し、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２９５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。６２．５μＬの溶液Ｂを２ｍＬのエッペンドルフチューブに入れ、続いて２５ｍｇのＢＥＺを加えた。
【0186】
混合物を撹拌子を用いて２５０ｒｐｍで３０秒間撹拌した。このようにして得られた混合物を、４～７℃で３０分間放置して溶解させ、続いて２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、気泡を除去した。得られた混合物に、２５ｍｇの溶液Ａを添加し、続いて２５０ｒｐｍで３０分間撹拌した。次いで、これを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して気泡を除去し、続いて２５０ｒｐｍで更に１０分間撹拌した。最終的に得られた混合物をシリコンチューブ（内径：０．３０５ｍｍ）中に取り出し、ライトハンマー（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度（３６５ｎｍ）を５０％に設定し、シリコーンチューブを１５秒間ＵＶ光に曝露した（５回）。棒状のインプラントをシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。乾燥したインプラントを６．５ｍｍの長さに切断した。
【0187】
５．２ インビトロ薬物放出設定
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、ＦＮ４のインプラント４つ（４）を入れることによって行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するエッペンドルフチューブをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、ＦＮ４のインプラント４つ（４）を入れることによって行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するエッペンドルフチューブをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
【0188】
５．３試料分析
試料を実施例２．３の下で分析した。
試料を実施例２．３の下で分析した。
【0189】
図１１及び図１２は、それぞれ累積パーセンテージ及びμｇでの１日当たりの放出として表したＢ１、ＢＬ１及びＦＮ４のインビトロ放出を示す。これらの図から分かるように、本発明にかかるインプラントＦＮ４は、薬物の放出を開始した直後に許容できないバースト効果を引き起こすことなく、少なくとも５６日間にわたって治療的に許容される用量の持続的放出を可能にする。ＦＮ４は、Ｂ１及びＢＬ１よりも更にいっそう薄く、したがって、より良好な患者コンプライアンスへ実質的に寄与する。
【0190】
実施例６：ベバシズマブの放出に対する細孔形成／放出調節剤の効果、分子量１５０ｋＤａ
【0191】
【0192】
６．１ ＦＮ５の調製
５０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）（Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）を６００ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解し、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２９５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。５０ｍｇのＨＰＭＣ（１０，０００Ｄａ）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｄｏｒｓｅｔ、英国）を１ｍＬの溶液Ｂ中に溶解して、溶液Ｃを調製した。５２．５μＬの溶液Ｃを２ｍＬエッペンドルフチューブに入れた。続いて、１５ｍｇのＢＥＺをエッペンドルフチューブに加え、撹拌子を用いて２５０ｒｐｍで３０秒間撹拌した。このようにして得られた混合物を、４～７℃で３０分間放置して溶解させ、続いて２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、気泡を除去した。このようにして得られた混合物に、３０ｍｇの溶液Ａ及び１０μＬの溶液Ｂを添加し、続いて２５０ｒｐｍで３０分間撹拌した。次いで、これを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して気泡を除去し、続いて２５０ｒｐｍで更に１０分間撹拌した。最終的に得られた混合物をシリコンチューブ（内径：０．３０５ｍｍ）中に取り出し、ライトハンマー（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度（３６５ｎｍ）を５０％に設定し、シリコーンチューブを１５秒間ＵＶ光に曝露した（５回）。棒状のインプラントをシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。乾燥したインプラントを６．５ｍｍの長さに切断した。
５０ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）（Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）を６００ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解し、溶液Ａを調製した。６ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２９５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中に溶解して、溶液Ｂを調製した。５０ｍｇのＨＰＭＣ（１０，０００Ｄａ）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｄｏｒｓｅｔ、英国）を１ｍＬの溶液Ｂ中に溶解して、溶液Ｃを調製した。５２．５μＬの溶液Ｃを２ｍＬエッペンドルフチューブに入れた。続いて、１５ｍｇのＢＥＺをエッペンドルフチューブに加え、撹拌子を用いて２５０ｒｐｍで３０秒間撹拌した。このようにして得られた混合物を、４～７℃で３０分間放置して溶解させ、続いて２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、気泡を除去した。このようにして得られた混合物に、３０ｍｇの溶液Ａ及び１０μＬの溶液Ｂを添加し、続いて２５０ｒｐｍで３０分間撹拌した。次いで、これを２０００ｒｐｍで１分間遠心分離して気泡を除去し、続いて２５０ｒｐｍで更に１０分間撹拌した。最終的に得られた混合物をシリコンチューブ（内径：０．３０５ｍｍ）中に取り出し、ライトハンマー（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度（３６５ｎｍ）を５０％に設定し、シリコーンチューブを１５秒間ＵＶ光に曝露した（５回）。棒状のインプラントをシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。乾燥したインプラントを６．５ｍｍの長さに切断した。
【0193】
６．２ インビトロ薬物放出設定
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、ＦＮ５のインプラント４つ（４）を入れることによって行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するエッペンドルフチューブをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する１ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するエッペンドルフチューブ内に、ＦＮ５のインプラント４つ（４）を入れることによって行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するエッペンドルフチューブをインキュベータに入れ、３７℃及び０ｒｐｍでインキュベートした（ＭＩＮＩ／１００／Ｆオーブン、Ｇｅｎｌａｂ Ｌｔｄ．、英国）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
【0194】
６．３ 試料分析
ベバシズマブのアッセイを実施例２．３に記載したように行った。
ベバシズマブのアッセイを実施例２．３に記載したように行った。
【0195】
図１３は、累積パーセンテージとして表されるＦＮ２及びＦＮ５のインビトロ放出を示す。この図から分かるように、細孔形成剤の使用は、許容できないバースト放出を発生させることなく、経時的にＢＥＺ活性化合物の放出プロファイルを更に改善する。
【0196】
実施例７：Ｏｖａｌｂｕｍｉｎの放出に対する細孔形成／放出調節剤の効果、分子量４２．７ｋＤａ
【0197】
【0198】
７．１ Ｏ７インプラントの調製
１６．７ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）（Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）を１８３．３ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００Ｄａ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解し、溶液Ａを調製した。５ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ中に溶解して、溶液Ｂを調製した。ニワトリ卵白凍結乾燥粉末由来の３０ｍｇのアルブミン、すなわちＯｖａｌｂｕｍｉｎ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）をエッペンドルフチューブ中６０μＬの溶液Ｂに入れて、溶液Ｃを調製した。６０ｍｇの溶液Ａ及び１０ｍｇのＰＥＧ４００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）をエッペンドルフチューブに添加した。６０μＬの溶液Ｃを、９００ｒｐｍで１５分間連続的に撹拌しながらエッペンドルフチューブ壁を介して混合物へゆっくり添加した。最終的に得られた混合物を、内径０．６３５ｍｍのシリコンチューブ（ポリマーシステムテクノロジー、英国）に取り出し、ＵＶ光（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度を５０％に設定し、シリコーンチューブをＵＶ光に１５秒間曝露した（すなわち、合計５回の実行）。インプラントを次いでシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。棒状のインプラントを各７．５ｍｍの長さで切断した。
１６．７ｍｇのＰＬＧＡ ７５０２（７５／２５）（Ｃｏｒｂｉｏｎ Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、Ｇｏｒｉｎｃｈｅｍ、オランダ）を１８３．３ｍｇのＰＥＧＤＡ ７００Ｄａ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）中に溶解し、溶液Ａを調製した。５ｍｇのＩｒｇａｃｕｒｅ ２５５９（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を１ｍＬのＰＢＳ中に溶解して、溶液Ｂを調製した。ニワトリ卵白凍結乾燥粉末由来の３０ｍｇのアルブミン、すなわちＯｖａｌｂｕｍｉｎ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）をエッペンドルフチューブ中６０μＬの溶液Ｂに入れて、溶液Ｃを調製した。６０ｍｇの溶液Ａ及び１０ｍｇのＰＥＧ４００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）をエッペンドルフチューブに添加した。６０μＬの溶液Ｃを、９００ｒｐｍで１５分間連続的に撹拌しながらエッペンドルフチューブ壁を介して混合物へゆっくり添加した。最終的に得られた混合物を、内径０．６３５ｍｍのシリコンチューブ（ポリマーシステムテクノロジー、英国）に取り出し、ＵＶ光（ＬｉｇｈｔＨａｍｍｅｒ（登録商標）６、Ｈｅｒａｅｕｓ Ｎｏｂｌｅｌｉｇｈｔ Ｆｕｓｉｏｎ ＵＶ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を用いて架橋した。ＵＶ光の強度を５０％に設定し、シリコーンチューブをＵＶ光に１５秒間曝露した（すなわち、合計５回の実行）。インプラントを次いでシリコンチューブから取り出し、２５℃で４時間真空乾燥させた。棒状のインプラントを各７．５ｍｍの長さで切断した。
【0199】
７．２ インビトロ薬物放出設定
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する２ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するガラスバイアル内に、Ｏ７のインプラント２つ（２）を入れることによって行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するガラスバイアルを、４０ｒｐｍの速度及び３７℃である振盪オービタルインキュベータに入れた（ＧＦＬ Ｏｒｂｉｔａｌ Ｓｈａｋｉｎｇ Ｉｎｃｕｂａｔｏｒ、Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｆｕｒ Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ ｍｂＨ、ドイツ）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
インビトロ放出は、放出培地として０．０５％ＮａＮ２（ｐＨ７．４±０．２）を有する２ｍＬのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）を含有するガラスバイアル内に、Ｏ７のインプラント２つ（２）を入れることによって行った。全ての実験を３連で行った。インプラントを含有するガラスバイアルを、４０ｒｐｍの速度及び３７℃である振盪オービタルインキュベータに入れた（ＧＦＬ Ｏｒｂｉｔａｌ Ｓｈａｋｉｎｇ Ｉｎｃｕｂａｔｏｒ、Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｆｕｒ Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ ｍｂＨ、ドイツ）。サンプリングとこれに続くＰＢＳ培地の完全な置換を、１日目、３日目及びその後毎週、すなわち７日目、１４日目、２１日目、及び２８日目などに行った。ＰＢＳ試料中の放出された薬物分子の濃度を、以下の項目で記載されるように分析した。
【0200】
７．３ 試料分析
Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ（ＯＶＡ）インビトロ薬物放出試料の分析を実施例３．３で行った。
Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ（ＯＶＡ）インビトロ薬物放出試料の分析を実施例３．３で行った。
【0201】
図１４は、累積放出パーセンテージ率として表されたＯ３及びＯ７のインビトロ放出を示す。この図から分かるように、細孔形成剤の使用は、許容できないバースト放出を発生させることなく、経時的にＯｖａｌｂｕｍｉｎの放出プロファイルを更に改善する。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【国際調査報告】