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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-16
(54)【発明の名称】抗ＩＬ－３６抗体およびその使用方法
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220208BHJP
C07K 16/24 20060101ALI20220208BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220208BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20220208BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220208BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20220208BHJP
A61P 17/08 20060101ALI20220208BHJP
A61P 17/10 20060101ALI20220208BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220208BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20220208BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20220208BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20220208BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20220208BHJP
A61P 19/00 20060101ALI20220208BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20220208BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20220208BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20220208BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/24 ZNA
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 U
A61P17/02
A61P17/08
A61P17/10
A61P1/04
A61P11/00
A61P1/02
A61P37/02
A61P17/04
A61P19/00
A61P27/02
C07K16/46
C12N15/63
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021536364
(86)(22)【出願日】2019-12-19
(85)【翻訳文提出日】2021-08-17
(86)【国際出願番号】 US2019067435
(87)【国際公開番号】W WO2020132220
(87)【国際公開日】2020-06-25
(31)【優先権主張番号】62/784,316
(32)【優先日】2018-12-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521269861
【氏名又は名称】２３アンドミー・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】２３ａｎｄＭＥ，Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100106518
【弁理士】
【氏名又は名称】松谷 道子
(72)【発明者】
【氏名】リー，チンウェイ ビビアン
(72)【発明者】
【氏名】フー－ケリー，ジャーメイン
(72)【発明者】
【氏名】シャーフ，ルイーズ
(72)【発明者】
【氏名】サイ，ティナ
(72)【発明者】
【氏名】パテル，アシュカ
(72)【発明者】
【氏名】バリル，シャシャンク
(72)【発明者】
【氏名】カラー，エリック エドワード
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA44
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB18
4C085CC08
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA09
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、ヒトＩＬ－３６サイトカイン、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γに特異的に結合し、ＩＬ－３６により刺激されたシグナル伝達経路を遮断する結合タンパク質、例えば、抗体および抗原結合性断片を提供する。また、そのような結合タンパク質を含む組成物、ならびにそのような結合タンパク質を作製および使用する方法も提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）第１の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ１）、第２の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ２）および第３の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ３）ならびに／または（ｉｉ）第１の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ１）、第２の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ２）および第３の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ３）を含む抗ＩＬ－３６抗体であって、（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、TGSSSNIGAHYDVH（配列番号１８）、TGSSSNIGAGYDVH（配列番号２２）、RASQSVSSNYLA（配列番号３８）、またはRASQTIYKYLN（配列番号４２）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、SNNNRPS（配列番号１５）、GNDNRPS（配列番号１９）、GNTNRPS（配列番号２３）、GNRNRPS（配列番号２７）、SASSLQS（配列番号３９）、またはAASSLQS（配列番号４３）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、QSYDYSLRGYV（配列番号１６）、QSYDYSLSGYV（配列番号２０）、QSYDYSLRVYV（配列番号２８）、QSYDYSLKAYV（配列番号３２）、QSYDISLSGWV（配列番号３６）、QQTYSYPPT（配列番号４０）、またはQQSSIPYT（配列番号４４）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、SAYAMHW（配列番号４６）、STSSYYW（配列番号５０）、SSTSYYW（配列番号５４）、GSRSYYW（配列番号５８）、STYAMSW（配列番号６２）、TSSNYYW（配列番号６６）、SSYGMH（配列番号７０）、SNYAIS（配列番号７４）、TSTNYYW（配列番号８２）、TSSNAYW（配列番号８６）、TASNYYW（配列番号９０）、TASNTYW（配列番号１０６）、SDSSYYW（配列番号１２２）、SESSYYW（配列番号１２６）、STSSDYW（配列番号１３０）、SNSSYYW（配列番号１３４）、STSSYHW（配列番号１４２）、SRSSYYW（配列番号１４６）、XXXNXYX（配列番号２５１）（ここで、１位のＸは、Ｔ、Ｄ、ＥまたはＮであり；２位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｑ、ＲまたはＴであり；３位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、ＱまたはＴであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；７位のＸは、Ｗ、Ｆ、Ｉ、ＶまたはＹである）またはＸＸＸＸＸＸＷ（配列番号３３６）（ここで、１位のＸは、ＳまたはＤであり；２位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、ＲまたはＳであり；３位のＸは、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＲであり；４位のＸは、Ｓ、Ｇ、Ｋ、ＮまたはＰであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＷであり；６位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、ＮまたはＱである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、VISYDGTNEYYAD（配列番号４７）、SIYYTGNTYYNP（配列番号５１）、SIHYSGNTYYNP（配列番号５５）、SIHYSGTTYYNP（配列番号５９）、GISGGSGYTYYAD（配列番号６３）、SIDYTGSTYYNP（配列番号６７）、VISYGGSERYYAD（配列番号７１）、GILPILGTVDYAQ（配列番号７５）、NIDYTGSTYYNA（配列番号８３）、SIDYTGSTAYNP（配列番号８７）、SIDYTGSTYYNT（配列番号９１）、SIDYTGSTYYEP（配列番号９９）、SIDYTGSTYYEP（配列番号１０３）、SIDYTGSTYYQP（配列番号１１９）、SIYYTGNTYYNS（配列番号１２３）、SIYYTGNTYYLP（配列番号１３１）、SIYYTGNTYYMP（配列番号１４３）、SIYYTGNTYYWP（配列番号１４７）、SIYYTGETYYAP（配列番号１５１）、XXDXXXXXXYXX（配列番号２８４）（ここで、１位のＸは、Ｓ、ＮまたはＴであり；２位のＸは、Ｉ、ＭまたはＶであり；４位のＸは、ＹまたはＨであり；５位のＸは、Ｔ、Ｈ、ＬまたはＮであり；６位のＸは、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、ＳまたはＴであり；７位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、ＱまたはＴであり；８位のＸは、Ｔ、Ａ、ＤまたはＥであり；９位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｑ、ＳまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、ＰまたはＱであり；１２位のＸは、Ｐ、ＡまたはＥである）またはXXXXXXXXXYXP（配列番号３７９）（ここで、１位のＸは、Ｓ、Ｆ、Ｉ、ＭまたはＱであり；２位のＸは、Ｉ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＶであり；３位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；４位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；５位のＸは、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＱであり；６位のＸは、ＧまたはＱであり；７位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｐ、ＲまたはＳであり；８位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、ＷまたはＹであり；９位のＸは、ＹまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、ＳまたはＴである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、ARGIRIFTSYFDS（配列番号４８）、ARVRYGVGVPRYFDP（配列番号５２）、ARVHYGGYIPRRFDH（配列番号５６）、ARVAPSYPRVFDY（配列番号６０）、ARVVTYRDPPASFDY（配列番号６４）、ARGKYYETYLGFDV（配列番号６８）、AREPWYSSRGWTGYGFDV（配列番号７２）、AREPWYRLGAFDV（配列番号７６）、ATGKYYETYLGFDV（配列番号８４）、AHGKYYETYLGFDV（配列番号８８）、ATGSYYETYLGFDV（配列番号１００）、ATGNYYETYLGFDV（配列番号１０４）、ASGKYYETYLGFDV（配列番号１１２）、ARGNYYETYLGFDV（配列番号１２０）、AGVRYGVGVPRYFDP（配列番号１２８）、SRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１３２）、VRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４４）、TRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４８）、ARLRYGVGVPRYFDP（配列番号１５２）、ARVKYGVGVPRYFDP（配列番号１５６）、ARVRYGVGVPRHFDP（配列番号１６０）、AXGXYYXTYLGFDV（配列番号３２２）（ここで、２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＹであり；４位のＸは、Ｋ、ＡまたはＳであり；７位のＸは、ＥまたはＴである）またはXXXXXGXXVPRXFDP（配列番号４６２）（ここで、１位のＸは、ＡまたはＶであり；２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｎ、ＱまたはＴであり；３位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＳであり；４位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；５位のＸは、Ｙ、Ｈ、Ｉ、ＬまたはＶであり；７位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＷまたはＹであり；８位のＸは、Ｇ、Ｎ、Ｒ、ＳまたはＴであり；１２位のＸは、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＲである）から選択されるアミノ酸配列を含む、
抗ＩＬ－３６抗体。
【請求項2】
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗体。
【請求項3】
（ａ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号６６、８２、８６、９０または２５２～２８３から選択されるアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３、１１９または２８５～３２１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２、１２０または３２３～３３５から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１または２に記載の抗体。
【請求項4】
（ａ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６または３３７～３７８から選択されるアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号５１、１２３、１３１、１４３、１４７、１５１または３８０～４６１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０または４６３～５１３から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１または２に記載の抗体。
【請求項5】
配列番号１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、７７もしくは７８から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項6】
配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、６５、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列、
配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列、または
配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列
を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項7】
配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号１７０～２０２、２４８～２５０、５１８～６１６および７４３～７５１から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、または配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号２０３～２４１および６１７～７３３から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列
を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項8】
抗体が、（ａ）各々、配列番号１８のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号１９のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号２０のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６６、８２、８６、９０または１０６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３または１１９から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２または１２０から選択されるＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１４２または１４６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号５１、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７または１５１から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６または１６０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖と
を含む多重特異性抗体であり、適宜、
重鎖のうちの１つが、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、他方の重鎖が、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含み、かつ／または
抗体が、
（ａ）各々、配列番号１７もしくは７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と
を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項9】
ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／もしくはｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合し、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合し、
ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合し、
ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％減少し；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γ濃度において、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく、
ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激されたヒト初代ケラチノサイト（ＰＨＫ）からのＩＬ－８の放出を阻害し；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく、かつ／または
配列番号５、６もしくは７のカニクイザルのＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βもしくはＩＬ－３６γと交差反応する、
請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項10】
ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に結合する多重特異性抗体であって、抗体が、ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合してもよく、結合親和性が、配列番号１のｈｕ－ＩＬ－３６α、配列番号２のｈｕ－ＩＬ－３６βおよび配列番号３のｈｕ－ＩＬ－３６γについての平衡解離定数（ＫＤ）によって測定されてもよく、（ａ）抗体が、１つのアームにおいてＩＬ－３６αおよび／もしくはＩＬ－３６γについての特異性、ならびに他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性を含んでもよく；１つのアームが、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよく、他方のアームが、ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよく、
（ｂ）抗体が、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％減少してもよく；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体が、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく、
（ｃ）抗体が、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γによって刺激されたヒト初代ケラチノサイト（ＰＨＫ）からのＩＬ－８の放出を阻害してもよく、およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体が、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく、
（ｄ）抗体が、カニクイザルのＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γと交差反応してもよく、かつ／または
（ｅ）抗体が、カニクイザルＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合してもよく、結合親和性が、配列番号５のｃｙ－ＩＬ－３６α、配列番号６のｃｙ－ＩＬ－３６βおよび配列番号７のｃｙ－ＩＬ－３６γについての平衡解離定数（ＫＤ）によって測定されてもよい、
多重特異性抗体。
【請求項11】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離されたポリヌクレオチドもしくはベクター、またはポリヌクレオチドもしくはベクターを含む単離された宿主細胞であって、宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、骨髄腫細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０）、サル腎臓細胞（ＣＯＳ－７）、ヒト胚腎臓系（２９３）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍細胞、ＴＲ１細胞、メディカルリサーチカウンシル５（ＭＲＣ５）細胞および包皮４（ＦＳ４）細胞から選択されてもよい、ポリヌクレオチドもしくはベクター、または宿主細胞。
【請求項12】
抗体が産生されるように、請求項１１に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
【請求項13】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項14】
対象を処置する方法であって、対象に、治療有効量の請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体、または治療有効量の請求項１３に記載の医薬組成物を投与することを含み、疾患が、上皮増殖因子受容体阻害剤に起因するざ瘡、ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＳＨ）、急性汎発性発疹性膿疱症（ＡＧＥＰ）、皺の無微生物膿疱症、頭皮／脚の無微生物膿疱症、無微生物角層下膿疱症、無菌膿瘍症候群、ベーチェット病、腸バイパス症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、小児膿疱性皮膚症、クローン病、インターロイキン－１受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＲＡ）、インターロイキン－３６受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＴＲＡ）、湿疹、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、持久性隆起性紅斑、化膿性汗腺炎、ＩｇＡ天疱瘡、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、好中球性脂肪織炎、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）、乾癬、乾癬性関節炎、膿疱性乾癬（ＤＩＲＡ、ＤＩＴＲＡ）、壊疽性膿皮症、化膿性関節炎壊疽性膿皮症およびざ瘡（ＰＡＰＡ）、化膿性関節炎壊疽性膿皮症ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＰＡＳＨ）、リウマチ様好中球性皮膚症、滑膜炎ざ瘡膿疱症骨増殖症および骨炎（ＳＡＰＨＯ）、クローン病患者におけるＴＮＦ誘導性乾癬型皮膚病変、シェーグレン症候群、スイート症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎ならびにがんから選択されてもよく、がんが、乳がん、結腸直腸がん、非小細胞肺がん、膵がんから選択されてもよい、方法。
【請求項15】
医薬としての使用のため、適宜、炎症性状態の処置における使用のための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、概して、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γに結合する結合タンパク質、例えば、抗体および抗原結合性断片、ならびにそのような結合タンパク質を使用する方法に関する。
【0002】
配列表の参照
配列表の公式の複写は、「０９４０２－００４ＷＯ１＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」のファイル名、２０１９年１２月９日の作成日および１，３８６，６４５バイトのサイズにより、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式のテキストファイルとして本明細書と同時に提出する。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表の公式の複写は、「０９４０２－００４ＷＯ１＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」のファイル名、２０１９年１２月９日の作成日および１，３８６，６４５バイトのサイズにより、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式のテキストファイルとして本明細書と同時に提出する。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0003】
インターロイキン－１（ＩＬ－１）ファミリーのサイトカインリガンドおよび受容体は、炎症、自己免疫、免疫調節、細胞増殖および宿主防御と関連付けられ、炎症性疾患および障害、自己免疫疾患および障害、免疫調節疾患および障害、変性疾患および障害、ならびに細胞増殖（例えば、がん）疾患および障害の病理に寄与し、そのサイトカインおよび受容体は、そのような疾患および障害の病原性メディエーターとして働く。例えば、Cecilia Garlanda et al., Immunity 39:1003-1018 (2013)を参照されたい。ＩＬ－１ファミリーのサイトカインには、炎症促進性サイトカイン、インターロイキン－３６アルファ（ＩＬ－３６アルファまたはＩＬ－３６α）、インターロイキン－３６ベータ（ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６ｂ）およびインターロイキン－３６ガンマ（ＩＬ－３６ガンマまたはＩＬ－３６γ）が含まれる。これらのＩＬ－３６サイトカインの各々は、皮膚、食道、扁桃腺、肺、腸、脳の細胞、およびＴ細胞を含む免疫細胞を含む、ある特定の細胞の表面上に発現する同族受容体ＩＬ－３６Ｒ（「ＩＬ１ＲＬ２」とも呼ばれる）に結合することができるリガンドとして働く。ＩＬ－３６サイトカインの、ＩＬ－３６Ｒへの結合に際して、補助タンパク質共受容体ＩＬ１ＲＡＰが動員されて、ＩＬ－３６サイトカインと、ＩＬ－３６Ｒと、ＩＬ１ＲＡＰとを含む三元複合体が形成される。この三元複合体は、細胞内シグナル伝達、ならびにＮＦ－κＢおよびＡＰ－１を含む一連の転写因子ならびにマイトジェン活性化タンパク質キナーゼの活性化を促進し、これは、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ８およびＣＣＬ２０を含む下流の多くのサイトカイン、ケモカイン、酵素および接着分子の産生を含む炎症応答および免疫応答のカスケードを誘発する。
【0004】
ＩＬ－３６サイトカイン、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６ｙは、病原体に曝露された皮膚および内上皮組織を含む、いくつかの組織において高く発現することが公知である。例えば、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６ｙの発現は、ＴＮＦ－αにより刺激されたヒトケラチノサイトにおいて顕著にアップレギュレートされ［Carrier, et al. (2011) Journal of Investigative Dermatology］、ＩＬ－３６γ ｍＲＮＡは、乾癬皮膚病変において過剰発現される［D'Erme, et al. (2015) Journal of Investigative Dermatology］。また、ＩＬ－３６α ｍＲＮＡおよびタンパク質発現の上昇が、慢性腎疾患において観察されている［Ichii et al, Lab Invest., 90(3): 459-475 (2010)］。加えて、マウス骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）およびＣＤ４＋Ｔ細胞は、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＴＮＦ－αおよびＩＬ－２３）を産生することによってＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６ｙに応答し、それによって、他のＩＬ－１サイトカインよりも強力に炎症促進効果を誘導する［Vigne et al, Blood, 118(22): 5813-5823 (2011)］。
【0005】
ケラチノサイトにおいてＩＬ－３６αを過剰発現するトランスジェニックマウスは、出生時に一過性の炎症性皮膚障害を示し、そのため、マウスは、ヒト乾癬に似ている１２－０－テトラデカノイルホルボール１３－アセテート誘導性皮膚病理に非常にかかりやすい［Blumberg et al, J. Exp. Med., 204(1 1): 2603-2614 (2007)；およびBlumberg et al, J. Immunol, 755(7):4354- 4362 (2010)］。さらに、ＩＬ－３６Ｒ欠損マウスは、イミキモド誘導性乾癬様皮膚炎から保護される［Tortola et al, J. Clin. Invest., 122(11): 3965-3976 (2012)］。これらの結果は、皮膚のある特定の炎症性障害におけるＩＬ－３６の役割を強く示唆する。
【0006】
ＩＬ－３６サイトカインは、膿疱性乾癬、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）および掌蹠膿疱症（ＰＰＰ）を含む、ある特定の重度の型の乾癬において関係付けられている［例えば、Town, IE. and Sims, IE., Curr. Opin. Pharmacol, 12(4): 486-90 (2012)；およびNaik, H.B. and Cowen, E.W., Dermatol Clin., 31(3): 405-425 (2013)を参照されたい］。膿疱性乾癬は、赤色の皮膚によって囲まれた白色の膿疱によって特徴付けられる稀な型の乾癬である。汎発性膿疱性乾癬は、高リスクの致死率を有する重度の全身型の膿疱性乾癬であり、一方で、掌蹠膿疱症は、掌および足の裏に影響を及ぼす慢性型の膿疱性乾癬である。膿疱性乾癬、ＧＰＰおよびＰＰＰのための現在の処置は、経口レチノイドおよびステロイド外用薬を含むが、これらの処置は、乏しい有効性および重度の副作用を示す。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本開示は、ＩＬ－３６サイトカインに高親和性により特異的に結合する抗体を提供する。抗体は、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γの、それらの同族受容体ＩＬ－３６Ｒへの結合によって刺激されたシグナル伝達を減少、阻害および／または完全に遮断することができる。また、本開示は、ＩＬ－３６媒介疾患、例えば、非限定的に、急性汎発性発疹性膿疱症（ＡＧＥＰ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、小児膿疱性皮膚症、湿疹、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、掌蹠膿疱性乾癬（ｐａｌｍｏｐｌａｎｔａｒ ｐｕｓｔｕｌａｒ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）（ＰＰＰ）、乾癬、クローン病患者におけるＴＮＦ誘導性乾癬型皮膚病変、シェーグレン症候群およびブドウ膜炎を含む、炎症性疾患、自己免疫疾患およびがんを処置する方法における抗ＩＬ－３６抗体の使用を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0008】
一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）第１の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ１）、第２の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ２）および第３の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ３）ならびに／または（ｉｉ）第１の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ１）、第２の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ２）および第３の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ３）を含む抗ＩＬ－３６抗体であって、
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、TGSSSNIGAHYDVH（配列番号１８）、TGSSSNIGAGYDVH（配列番号２２）、RASQSVSSNYLA（配列番号３８）、またはRASQTIYKYLN（配列番号４２）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、SNNNRPS（配列番号１５）、GNDNRPS（配列番号１９）、GNTNRPS（配列番号２３）、GNRNRPS（配列番号２７）、SASSLQS（配列番号３９）、またはAASSLQS（配列番号４３）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、QSYDYSLRGYV（配列番号１６）、QSYDYSLSGYV（配列番号２０）、QSYDYSLRVYV（配列番号２８）、QSYDYSLKAYV（配列番号３２）、QSYDISLSGWV（配列番号３６）、QQTYSYPPT（配列番号４０）、またはQQSSIPYT（配列番号４４）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、SAYAMHW（配列番号４６）、STSSYYW（配列番号５０）、SSTSYYW（配列番号５４）、GSRSYYW（配列番号５８）、STYAMSW（配列番号６２）、TSSNYYW（配列番号６６）、SSYGMH（配列番号７０）、SNYAIS（配列番号７４）、TSTNYYW（配列番号８２）、TSSNAYW（配列番号８６）、TASNYYW（配列番号９０）、TASNTYW（配列番号１０６）、SDSSYYW（配列番号１２２）、SESSYYW（配列番号１２６）、STSSDYW（配列番号１３０）、SNSSYYW（配列番号１３４）、STSSYHW（配列番号１４２）、SRSSYYW（配列番号１４６）、XXXNXYX（配列番号２５１）（ここで、１位のＸは、Ｔ、Ｄ、ＥまたはＮであり；２位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｑ、ＲまたはＴであり；３位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、ＱまたはＴであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；７位のＸは、Ｗ、Ｆ、Ｉ、ＶまたはＹである）またはXXXXXXW（配列番号３３６）（ここで、１位のＸは、ＳまたはＤであり；２位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、ＲまたはＳであり；３位のＸは、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＲである；４位のＸは、Ｓ、Ｇ、Ｋ、ＮまたはＰであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＷであり；６位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、ＮまたはＱである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、VISYDGTNEYYAD（配列番号４７）、SIYYTGNTYYNP（配列番号５１）、SIHYSGNTYYNP（配列番号５５）、SIHYSGTTYYNP（配列番号５９）、GISGGSGYTYYAD（配列番号６３）、SIDYTGSTYYNP（配列番号６７）、VISYGGSERYYAD（配列番号７１）、GILPILGTVDYAQ（配列番号７５）、NIDYTGSTYYNA（配列番号８３）、SIDYTGSTAYNP（配列番号８７）、SIDYTGSTYYNT（配列番号９１）、SIDYTGSTYYEP（配列番号９９）、SIDYTGSTYYEP（配列番号１０３）、SIDYTGSTYYQP（配列番号１１９）、SIYYTGNTYYNS（配列番号１２３）、SIYYTGNTYYLP（配列番号１３１）、SIYYTGNTYYMP（配列番号１４３）、SIYYTGNTYYWP（配列番号１４７）、SIYYTGETYYAP（配列番号１５１）、XXDXXXXXXYXX（配列番号２８４)（ここで、１位のＸは、Ｓ、ＮまたはＴであり；２位のＸは、Ｉ、ＭまたはＶであり；４位のＸは、ＹまたはＨであり；５位のＸは、Ｔ、Ｈ、ＬまたはＮであり；６位のＸは、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、ＳまたはＴであり；７位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、ＱまたはＴである；８位のＸは、Ｔ、Ａ、ＤまたはＥであり；９位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｑ、ＳまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、ＰまたはＱであり；１２位のＸは、Ｐ、ＡまたはＥである）またはXXXXXXXXXYXP（配列番号３７９）（ここで、１位のＸは、Ｓ、Ｆ、Ｉ、ＭまたはＱであり；２位のＸは、Ｉ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＶであり；３位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；４位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；５位のＸは、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＱであり；６位のＸは、ＧまたはＱであり；７位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｐ、ＲまたはＳであり；８位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、ＷまたはＹである；９位のＸは、ＹまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、ＳまたはＴである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、ARGIRIFTSYFDS（配列番号４８）、ARVRYGVGVPRYFDP（配列番号５２）、ARVHYGGYIPRRFDH（配列番号５６）、ARVAPSYPRVFDY（配列番号６０）、ARVVTYRDPPASFDY（配列番号６４）、ARGKYYETYLGFDV（配列番号６８）、AREPWYSSRGWTGYGFDV（配列番号７２）、AREPWYRLGAFDV（配列番号７６）、ATGKYYETYLGFDV（配列番号８４）、AHGKYYETYLGFDV（配列番号８８）、ATGSYYETYLGFDV（配列番号１００）、ATGNYYETYLGFDV（配列番号１０４）、ASGKYYETYLGFDV（配列番号１１２）、ARGNYYETYLGFDV（配列番号１２０）、AGVRYGVGVPRYFDP（配列番号１２８）、SRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１３２）、VRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４４）、TRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４８）、ARLRYGVGVPRYFDP（配列番号１５２）、ARVKYGVGVPRYFDP（配列番号１５６）、ARVRYGVGVPRHFDP（配列番号１６０）、AXGXYYXTYLGFDV（配列番号３２２）（ここで、２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＹであり；４位のＸは、Ｋ、ＡまたはＳであり；７位のＸは、ＥまたはＴである）またはXXXXXGXXVPRXFDP（配列番号４６２）（ここで、１位のＸは、ＡまたはＶであり；２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｎ、ＱまたはＴであり；３位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＳであり；４位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；５位のＸは、Ｙ、Ｈ、Ｉ、ＬまたはＶであり；７位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＷまたはＹであり；８位のＸは、Ｇ、Ｎ、Ｒ、ＳまたはＴであり；１２位のＸは、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＲである）から選択されるアミノ酸配列を含む、
抗ＩＬ－３６抗体を提供する。
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、TGSSSNIGAHYDVH（配列番号１８）、TGSSSNIGAGYDVH（配列番号２２）、RASQSVSSNYLA（配列番号３８）、またはRASQTIYKYLN（配列番号４２）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、SNNNRPS（配列番号１５）、GNDNRPS（配列番号１９）、GNTNRPS（配列番号２３）、GNRNRPS（配列番号２７）、SASSLQS（配列番号３９）、またはAASSLQS（配列番号４３）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、QSYDYSLRGYV（配列番号１６）、QSYDYSLSGYV（配列番号２０）、QSYDYSLRVYV（配列番号２８）、QSYDYSLKAYV（配列番号３２）、QSYDISLSGWV（配列番号３６）、QQTYSYPPT（配列番号４０）、またはQQSSIPYT（配列番号４４）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、SAYAMHW（配列番号４６）、STSSYYW（配列番号５０）、SSTSYYW（配列番号５４）、GSRSYYW（配列番号５８）、STYAMSW（配列番号６２）、TSSNYYW（配列番号６６）、SSYGMH（配列番号７０）、SNYAIS（配列番号７４）、TSTNYYW（配列番号８２）、TSSNAYW（配列番号８６）、TASNYYW（配列番号９０）、TASNTYW（配列番号１０６）、SDSSYYW（配列番号１２２）、SESSYYW（配列番号１２６）、STSSDYW（配列番号１３０）、SNSSYYW（配列番号１３４）、STSSYHW（配列番号１４２）、SRSSYYW（配列番号１４６）、XXXNXYX（配列番号２５１）（ここで、１位のＸは、Ｔ、Ｄ、ＥまたはＮであり；２位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｑ、ＲまたはＴであり；３位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、ＱまたはＴであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；７位のＸは、Ｗ、Ｆ、Ｉ、ＶまたはＹである）またはXXXXXXW（配列番号３３６）（ここで、１位のＸは、ＳまたはＤであり；２位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、ＲまたはＳであり；３位のＸは、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＲである；４位のＸは、Ｓ、Ｇ、Ｋ、ＮまたはＰであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＷであり；６位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、ＮまたはＱである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、VISYDGTNEYYAD（配列番号４７）、SIYYTGNTYYNP（配列番号５１）、SIHYSGNTYYNP（配列番号５５）、SIHYSGTTYYNP（配列番号５９）、GISGGSGYTYYAD（配列番号６３）、SIDYTGSTYYNP（配列番号６７）、VISYGGSERYYAD（配列番号７１）、GILPILGTVDYAQ（配列番号７５）、NIDYTGSTYYNA（配列番号８３）、SIDYTGSTAYNP（配列番号８７）、SIDYTGSTYYNT（配列番号９１）、SIDYTGSTYYEP（配列番号９９）、SIDYTGSTYYEP（配列番号１０３）、SIDYTGSTYYQP（配列番号１１９）、SIYYTGNTYYNS（配列番号１２３）、SIYYTGNTYYLP（配列番号１３１）、SIYYTGNTYYMP（配列番号１４３）、SIYYTGNTYYWP（配列番号１４７）、SIYYTGETYYAP（配列番号１５１）、XXDXXXXXXYXX（配列番号２８４)（ここで、１位のＸは、Ｓ、ＮまたはＴであり；２位のＸは、Ｉ、ＭまたはＶであり；４位のＸは、ＹまたはＨであり；５位のＸは、Ｔ、Ｈ、ＬまたはＮであり；６位のＸは、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、ＳまたはＴであり；７位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、ＱまたはＴである；８位のＸは、Ｔ、Ａ、ＤまたはＥであり；９位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｑ、ＳまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、ＰまたはＱであり；１２位のＸは、Ｐ、ＡまたはＥである）またはXXXXXXXXXYXP（配列番号３７９）（ここで、１位のＸは、Ｓ、Ｆ、Ｉ、ＭまたはＱであり；２位のＸは、Ｉ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＶであり；３位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；４位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；５位のＸは、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＱであり；６位のＸは、ＧまたはＱであり；７位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｐ、ＲまたはＳであり；８位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、ＷまたはＹである；９位のＸは、ＹまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、ＳまたはＴである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、ARGIRIFTSYFDS（配列番号４８）、ARVRYGVGVPRYFDP（配列番号５２）、ARVHYGGYIPRRFDH（配列番号５６）、ARVAPSYPRVFDY（配列番号６０）、ARVVTYRDPPASFDY（配列番号６４）、ARGKYYETYLGFDV（配列番号６８）、AREPWYSSRGWTGYGFDV（配列番号７２）、AREPWYRLGAFDV（配列番号７６）、ATGKYYETYLGFDV（配列番号８４）、AHGKYYETYLGFDV（配列番号８８）、ATGSYYETYLGFDV（配列番号１００）、ATGNYYETYLGFDV（配列番号１０４）、ASGKYYETYLGFDV（配列番号１１２）、ARGNYYETYLGFDV（配列番号１２０）、AGVRYGVGVPRYFDP（配列番号１２８）、SRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１３２）、VRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４４）、TRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４８）、ARLRYGVGVPRYFDP（配列番号１５２）、ARVKYGVGVPRYFDP（配列番号１５６）、ARVRYGVGVPRHFDP（配列番号１６０）、AXGXYYXTYLGFDV（配列番号３２２）（ここで、２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＹであり；４位のＸは、Ｋ、ＡまたはＳであり；７位のＸは、ＥまたはＴである）またはXXXXXGXXVPRXFDP（配列番号４６２）（ここで、１位のＸは、ＡまたはＶであり；２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｎ、ＱまたはＴであり；３位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＳであり；４位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；５位のＸは、Ｙ、Ｈ、Ｉ、ＬまたはＶであり；７位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＷまたはＹであり；８位のＸは、Ｇ、Ｎ、Ｒ、ＳまたはＴであり；１２位のＸは、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＲである）から選択されるアミノ酸配列を含む、
抗ＩＬ－３６抗体を提供する。
【0009】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む。
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、および
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む。
【0010】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号６６、８２、８６、９０または２５２～２８３から選択されるアミノ酸配列を含むこと、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３、１１９または２８５～３２１から選択されるアミノ酸配列を含むこと、および
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２、１２０または３２３～３３５から選択されるアミノ酸配列を含むこと
を含む。
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号６６、８２、８６、９０または２５２～２８３から選択されるアミノ酸配列を含むこと、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３、１１９または２８５～３２１から選択されるアミノ酸配列を含むこと、および
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２、１２０または３２３～３３５から選択されるアミノ酸配列を含むこと
を含む。
【0011】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６または３３７～３７８から選択されるアミノ酸配列を含むこと、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号５１、１２３、１３１、１４３、１４７、１５１または３８０～４６１から選択されるアミノ酸配列を含むこと、および
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０または４６３～５１３から選択されるアミノ酸配列を含むこと
を含む。
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６または３３７～３７８から選択されるアミノ酸配列を含むこと、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号５１、１２３、１３１、１４３、１４７、１５１または３８０～４６１から選択されるアミノ酸配列を含むこと、および
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０または４６３～５１３から選択されるアミノ酸配列を含むこと
を含む。
【0012】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むこと、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含むこと、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むこと、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号６６、８２、８６、９０または２５２～２８３から選択されるアミノ酸配列を含むこと、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３、１１９または２８５～３２１から選択されるアミノ酸配列を含むこと、および
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２、１２０または３２３～３３５から選択されるアミノ酸配列を含むこと
を含む。
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むこと、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含むこと、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むこと、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号６６、８２、８６、９０または２５２～２８３から選択されるアミノ酸配列を含むこと、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３、１１９または２８５～３２１から選択されるアミノ酸配列を含むこと、および
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２、１２０または３２３～３３５から選択されるアミノ酸配列を含むこと
を含む。
【0013】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むこと、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含むこと、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むこと、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６または３３７～３７８から選択されるアミノ酸配列を含むこと、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号５１、１２３、１３１、１４３、１４７、１５１または３８０～４６１から選択されるアミノ酸配列を含むこと、および
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０または４６３～５１３から選択されるアミノ酸配列を含むこと
を含む。
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むこと、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含むこと、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むこと、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６または３３７～３７８から選択されるアミノ酸配列を含むこと、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号５１、１２３、１３１、１４３、１４７、１５１または３８０～４６１から選択されるアミノ酸配列を含むこと、および
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０または４６３～５１３から選択されるアミノ酸配列を含むこと
を含む。
【0014】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、７７もしくは７８から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、７７もしくは７８から選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む。
【0015】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、６５、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１７または７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、６５、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む。
【0016】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１７または７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１７もしくは７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む。
【0017】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１７または７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１７または７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む。
【0018】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１６９または２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；および／または配列番号１７０～２０２、２４８、２４９もしくは２５０から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１６９または２４２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；および／または配列番号１７０～２０２、２４８、２４９もしくは２５０から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む。
【0019】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１６９または２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号５１８～６１６および７４３～７５１から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１６９または２４２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号５１８～６１６および７４３～７５１の重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む。
【0020】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１６９または２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；および／または配列番号２０３～２４１から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１６９または２４２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；および／または配列番号２０３～２４１から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む。
【0021】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１６９または２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；および／または配列番号６１７～７３３から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１６９または２４２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；および／または配列番号６１７～７３３から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む。
【0022】
一部の実施形態では、本開示は、
（ａ）各々、配列番号１８のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号１９のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号２０のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６６、８２、８６、９０または１０６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３または１１９から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２または１２０から選択されるＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１４２または１４６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号５１、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７または１５１から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６または１６０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体を提供する。
（ａ）各々、配列番号１８のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号１９のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号２０のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６６、８２、８６、９０または１０６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３または１１９から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２または１２０から選択されるＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１４２または１４６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号５１、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７または１５１から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６または１６０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体を提供する。
【0023】
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、
アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含む重鎖のうちの１つと、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む他方の重鎖と
を含む。
アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含む重鎖のうちの１つと、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む他方の重鎖と
を含む。
【0024】
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、
（ａ）各々、配列番号１７または７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３または１１７から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１または１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と
を含む。
（ａ）各々、配列番号１７または７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３または１１７から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１または１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と
を含む。
【0025】
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、
（ａ）配列番号１６９および２４２の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１７１、１７４、１７７、１８０、１８３、１８６、１８９、１９２、１９５、１９８、２０１、２４９、５２１、５２２、５２３、５３０、５３１、５３２、５３９、５４０、５４１、５４８、５４９、５５０、５５７、５５８、５５９、５６６、５６７、５６８、５７５、５７６、５７７、５８４、５８５、５８６、５９３、５９４、５９５、６０２、６０３、６０４、６１１、６１２および６１３から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８、２４１、６３２、６３３、６３４、６４１、６４２、６４３、６５０、６５１、６５２、６５９、６６０、６６１、６６８、６６９、６７０、６７７、６７８、６７９、６８６、６８７、６８８、６９５、６９６、６９７、７０４、７０５、７０６、７１３、７１４、７１５、７２２、７２３、７２４、７３１、７３２および７３３から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と
を含む。
（ａ）配列番号１６９および２４２の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１７１、１７４、１７７、１８０、１８３、１８６、１８９、１９２、１９５、１９８、２０１、２４９、５２１、５２２、５２３、５３０、５３１、５３２、５３９、５４０、５４１、５４８、５４９、５５０、５５７、５５８、５５９、５６６、５６７、５６８、５７５、５７６、５７７、５８４、５８５、５８６、５９３、５９４、５９５、６０２、６０３、６０４、６１１、６１２および６１３から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８、２４１、６３２、６３３、６３４、６４１、６４２、６４３、６５０、６５１、６５２、６５９、６６０、６６１、６６８、６６９、６７０、６７７、６７８、６７９、６８６、６８７、６８８、６９５、６９６、６９７、７０４、７０５、７０６、７１３、７１４、７１５、７２２、７２３、７２４、７３１、７３２および７３３から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と
を含む。
【0026】
一部の実施形態では、多重特異性抗体は、
（ａ）配列番号１６９および２４２の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１７２、１７５、１７８、１８１、１８４、１８７、１９０、１９３、１９６、１９９、２０２、２５０、５２４、５２５、５２６、５３３、５３４、５３５、５４２、５４３、５４４、５５１、５５２、５５３、５６０、５６１、５６２、５６９、５７０、５７１、５７８、５７９、５８０、５８７、５８８、５８９、５９６、５９７、５９８、６０５、６０６、６０７、６１４、６１５、６１６、７４９、７５０および７５１から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７、２４０、６２９、６３０、６３１、６３８、６３９、６４０、６４７、６４８、６４９、６５６、６５７、６５８、６６５、６６６、６６７、６７４、６７５、６７６、６８３、６８４、６８５、６９２、６９３、６９４、７０１、７０２、７０３、７１０、７１１、７１２、７１９、７２０、７２１、７２８、７２９および７３０から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と
を含む。
（ａ）配列番号１６９および２４２の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１７２、１７５、１７８、１８１、１８４、１８７、１９０、１９３、１９６、１９９、２０２、２５０、５２４、５２５、５２６、５３３、５３４、５３５、５４２、５４３、５４４、５５１、５５２、５５３、５６０、５６１、５６２、５６９、５７０、５７１、５７８、５７９、５８０、５８７、５８８、５８９、５９６、５９７、５９８、６０５、６０６、６０７、６１４、６１５、６１６、７４９、７５０および７５１から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７、２４０、６２９、６３０、６３１、６３８、６３９、６４０、６４７、６４８、６４９、６５６、６５７、６５８、６６５、６６６、６６７、６７４、６７５、６７６、６８３、６８４、６８５、６９２、６９３、６９４、７０１、７０２、７０３、７１０、７１１、７１２、７１９、７２０、７２１、７２８、７２９および７３０から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と
を含む。
【0027】
一部の実施形態では、本開示は、配列番号１６９の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、配列番号１９２、５８４、５８５および５８６から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、配列番号２３５、７１３、７１４および７１５から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列とを含む、多重特異性抗ＩＬ－３６抗体を提供する。
【0028】
本開示によって提供される抗ＩＬ－３６抗体の様々な実施形態では、抗体は、以下の特性：
（ａ）ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／もしくはｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合し；抗体は、多重特異性であってもよい、
（ｂ）ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、
（ｃ）ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、
（ｄ）多重特異性であり、１つのアームにおいてＩＬ－３６αおよび／もしくはＩＬ－３６γについての特異性と、他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性とを含み；１つのアームは、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよく、他方のアームは、ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよい、
（ｅ）ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％減少し；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体は、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく；抗体は、多重特異性であってもよい、
（ｆ）ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γによって刺激されたヒト初代ケラチノサイト（ＰＨＫ）からのＩＬ－８の放出を阻害し、およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体は、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく；抗体は、多重特異性であってもよい、ならびに／または
（ｇ）配列番号５、６もしくは７のカニクイザルのＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βもしくはＩＬ－３６γと交差反応し；抗体は、多重特異性であってもよい
のうちの１つまたは複数によって特徴付けられる。
（ａ）ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／もしくはｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合し；抗体は、多重特異性であってもよい、
（ｂ）ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、
（ｃ）ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、
（ｄ）多重特異性であり、１つのアームにおいてＩＬ－３６αおよび／もしくはＩＬ－３６γについての特異性と、他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性とを含み；１つのアームは、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよく、他方のアームは、ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよい、
（ｅ）ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％もしくは１００％減少し；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体は、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく；抗体は、多重特異性であってもよい、
（ｆ）ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γによって刺激されたヒト初代ケラチノサイト（ＰＨＫ）からのＩＬ－８の放出を阻害し、およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体は、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく；抗体は、多重特異性であってもよい、ならびに／または
（ｇ）配列番号５、６もしくは７のカニクイザルのＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βもしくはＩＬ－３６γと交差反応し；抗体は、多重特異性であってもよい
のうちの１つまたは複数によって特徴付けられる。
【0029】
また、本開示は、抗ＩＬ－３６抗体の実施形態であって、（ｉ）抗体は、モノクローナル抗体であり；（ｉｉ）抗体は、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体であり；（ｉｉｉ）抗体は、ＩｇＧクラスの全長抗体であり、ＩｇＧクラス抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択されるアイソタイプを有してもよく；（ｉｖ）抗体は、Ｆｃ領域変異型、適宜、エフェクター機能を変更するＦｃ領域変異型（例えば、エフェクター機能のない抗体をもたらす変異型）、または抗体半減期を変更するＦｃ領域変異型であり；（ｖ）抗体は、適宜、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）およびｓｃＦｖからなる群から選択される、抗体断片であり；（ｖｉ）抗体は、イムノコンジュゲートであり、イムノコンジュゲートは、ＩＬ－３６媒介疾患の処置のための治療剤を含んでもよく；（ｖｉｉ）抗体は、多重的な特異性抗体、適宜、多重特異性抗体であり；（ｖｉｉｉ）抗体は、合成抗体であり、ＨＶＲは、免疫グロブリンスキャフォールドまたはフレームワーク以外のスキャフォールドまたはフレームワーク、適宜、代替タンパク質スキャフォールドおよび人工ポリマースキャフォールドから選択されるスキャフォールド上にグラフト化される、実施形態を提供する。
【0030】
他の実施形態では、本開示は、本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体をコードする単離された核酸を提供する。一部の実施形態では、また、本開示は、本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を提供する。また、本開示は、抗ＩＬ－３６抗体を産生する方法であって、抗ＩＬ－３６抗体をコードする核酸（またはベクター）を含む宿主細胞を、抗体が産生されるように培養することを含む方法を提供する。
【0031】
一部の実施形態では、本開示は、本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、医薬組成物は、抗ＩＬ－３６抗体を唯一の活性剤として含み；抗ＩＬ－３６抗体は、１つのアームにおいてＩＬ－３６αおよび／またはＩＬ－３６γについての特異性と、他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性とを含む多重特異性抗体であってもよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＩＬ－３６媒介疾患または状態の処置のための治療剤をさらに含む。
【0032】
一部の実施形態では、本開示は、対象においてＩＬ－３６媒介疾患または状態を処置する方法であって、対象に、治療有効量の本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体、または治療有効量の本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、処置の使用および方法は、抗ＩＬ－３６抗体を唯一の活性剤として含む医薬組成物を投与することを含み；抗ＩＬ－３６抗体は、１つのアームにおいてＩＬ－３６αおよび／またはＩＬ－３６γについての特異性と、他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性とを含む多重特異性抗体であってもよい。
【0033】
本明細書で開示される処置の使用および方法の一部の実施形態では、ＩＬ－３６媒介疾患は、炎症性疾患、自己免疫疾患およびがんから選択される。一部の実施形態では、ＩＬ－３６媒介疾患は、上皮増殖因子受容体阻害剤に起因するざ瘡、ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＳＨ）、急性汎発性発疹性膿疱症（ＡＧＥＰ）、皺の無微生物膿疱症、頭皮／脚の無微生物膿疱症、無微生物角層下膿疱症、無菌膿瘍症候群、ベーチェット病、腸バイパス症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、小児膿疱性皮膚症、クローン病、インターロイキン－１受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＲＡ）、インターロイキン－３６受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＴＲＡ）、湿疹、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、持久性隆起性紅斑、化膿性汗腺炎（ｈｉｄｒａｄｅｎｉｔｉｓ ｓｕｐｐｕｒａｔｉｖａ）、ＩｇＡ天疱瘡、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、好中球性脂肪織炎、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）、乾癬、乾癬性関節炎、膿疱性乾癬（ＤＩＲＡ、ＤＩＴＲＡ）、壊疽性膿皮症、化膿性関節炎壊疽性膿皮症およびざ瘡（ＰＡＰＡ）、化膿性関節炎壊疽性膿皮症ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＰＡＳＨ）、リウマチ様好中球性皮膚症、滑膜炎ざ瘡膿疱症骨増殖症および骨炎（ＳＡＰＨＯ）、クローン病患者におけるＴＮＦ誘導性乾癬型皮膚病変、シェーグレン症候群、スイート症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、潰瘍性大腸炎ならびにブドウ膜炎から選択される。一部の実施形態では、ＩＬ－３６媒介疾患は、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）および乾癬から選択される。一部の実施形態では、ＩＬ－３６媒介疾患は、がん；適宜、乳がん、結腸直腸がん、非小細胞肺がんおよび膵がんから選択されるがんである。
【図面の簡単な説明】
【0034】
【図1】図１Ａ、図１Ｂおよび図１Ｃは、ＨａＣａｔヒトケラチノサイト細胞系におけるＩＬ－３６により刺激された細胞内シグナル伝達の阻害アッセイにおける、酵母ディスプレイ由来抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体ｍＡｂ２．０およびｍＡｂ６．０についての結果のプロットを示す。図１Ａ：ＨａＣａｔ細胞のＩＬ－３６α刺激（［ＩＬ－３６α］＝１．２ｎＭ）のｍＡｂ２．０阻害；ＩＣ５０＝０．２８ｎＭ。図１Ｂ：ＨａＣａｔ細胞のＩＬ－３６β刺激（［ＩＬ－３６β］＝０．１７５ｎＭ）のｍＡｂ６．０阻害；ＩＣ５０＝０．０８２ｎＭ。図１Ｃ：ＨａＣａｔ細胞のＩＬ－３６γ刺激（［ＩＬ－３６γ］＝４ｎＭ）のｍＡｂ２．０阻害；ＩＣ５０＝１．２３ｎＭ。全てのアッセイを、およそＥＣ５０のアゴニスト濃度において行った；示されるエラーバーは、２回繰り返した試料からの標準偏差を表す。陰性対照（ＮＣ、灰色点線として示される）は、増殖培地のみに曝露された細胞を表し、一方で、陽性対照（ＰＣ、灰色破線として示される）は、アゴニストのみに曝露された（アンタゴニスト抗体または対照抗体の非存在下における）細胞を表す。
【図2】図２Ａ、図２Ｂおよび図２Ｃは、プールしたヒト初代新生児ケラチノサイト（ＨＥＫｎ）におけるＩＬ－３６により刺激された細胞内シグナル伝達の阻害アッセイにおける、酵母ディスプレイ由来抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体ｍＡｂ２．０およびｍＡｂ６．０についての結果のプロットを示す。図２Ａ：ＨＥＫｎ細胞のＩＬ－３６α刺激（［ＩＬ－３６α］＝１．２ｎＭ）のｍＡｂ２．０阻害；ＩＣ５０＝０．３３ｎＭ。図２Ｂ：ＨＥＫｎ細胞のＩＬ－３６β刺激（［ＩＬ－３６β］＝０．３ｎＭ）のｍＡｂ６．０阻害；ＩＣ５０＝１．７５ｎＭ。図２Ｃ：ＨＥＫｎ細胞のＩＬ－３６γ刺激（［ＩＬ－３６γ］＝７ｎＭ）のｍＡｂ２．０阻害；ＩＣ５０＝２．２７ｎＭ。全てのアッセイを、およそＥＣ５０のアゴニスト濃度において行い；示されるエラーバーは、２回繰り返した試料からの標準偏差を表す。陰性対照（ＮＣ、灰色点線として示される）は、増殖培地のみに曝露された細胞を表し、一方で、陽性対照（ＰＣ、灰色破線として示される）は、アゴニストのみに曝露された（アンタゴニスト抗体または対照抗体の非存在下における）細胞を表す。
【図3】図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃは、ＨａＣａｔヒトケラチノサイト細胞系におけるＩＬ－３６により刺激された細胞内シグナル伝達の阻害アッセイにおける、抗ｈｕ－ＩＬ－３６多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７についての結果のプロットを示す。図３Ａ：ＨａＣａｔ細胞のＩＬ－３６α刺激（［ＩＬ－３６α］＝０．８ｎＭ）のｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７阻害；ＩＣ５０＝０．３８ｎＭ。図３Ｂ：ＨａＣａｔ細胞のＩＬ－３６β刺激（［ＩＬ－３６β］＝０．１５ｎＭ）のｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７阻害；ＩＣ５０＝０．１３ｎＭ。図３Ｃ：ＨａＣａｔ細胞のＩＬ－３６γ刺激（［ＩＬ－３６γ］＝２ｎＭ）のｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７阻害；ＩＣ５０＝１．１ｎＭ。全てのアッセイを、およそＥＣ５０のアゴニスト濃度において行い；示されるエラーバーは、２回繰り返した試料からの標準偏差を表す。陰性対照（ＮＣ、灰色点線として示される）は、増殖培地のみに曝露された細胞を表し、一方で、陽性対照（ＰＣ、灰色破線して示される）は、アゴニストのみに曝露された（アンタゴニスト抗体または対照抗体の非存在下における）細胞を表す。
【図4】図４Ａ、図４Ｂおよび図４Ｃは、ヒト初代成人ケラチノサイト（ＨＥＫａ）におけるＩＬ－３６により刺激された細胞内シグナル伝達の阻害アッセイにおける、抗ｈｕ－ＩＬ－３６多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７についての結果のプロットを示す。図４Ａ：ＨＥＫａ細胞のＩＬ－３６α刺激（［ＩＬ－３６α］＝１．１ｎＭ）のｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７阻害；ＩＣ５０＝０．５６ｎＭ。図４Ｂ：ＨＥＫａ細胞のＩＬ－３６β刺激（［ＩＬ－３６β］＝０．１５ｎＭ）のｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７阻害；ＩＣ５０＝０．１１ｎＭ。図４Ｃ：ＨＥＫａ細胞のＩＬ－３６γ刺激（［ＩＬ－３６γ］＝３．６ｎＭ）のｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７阻害；ＩＣ５０＝２．７ｎＭ。全てのアッセイを、およそＥＣ５０のアゴニスト濃度において行った；示されるエラーバーは、２回繰り返した試料からの標準偏差を表す。陰性対照（ＮＣ、灰色点線として示される）は、増殖培地のみに曝露された細胞を表し、一方で、陽性対照（ＰＣ、灰色破線として示される）は、アゴニストのみに曝露された（アンタゴニスト抗体または対照抗体の非存在下における）細胞を表す。
【発明を実施するための形態】
【0035】
本開示は、ヒトｈｕ－ＩＬ－３６サイトカイン、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γに高親和性により特異的に結合する多重特異性抗体を含む、抗体を提供する。開示される抗ＩＬ－３６抗体は、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γの、その同族受容体、ＩＬ－３６Ｒへの結合によって刺激されたシグナル伝達を含む、ＩＬ－３６媒介経路による細胞内シグナル伝達を減少、阻害および／または完全に遮断することができる。また、本開示は、ＩＬ－３６媒介疾患、例えば、非限定的に、急性汎発性発疹性膿疱症（ＡＧＥＰ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、小児膿疱性皮膚症、湿疹、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）、乾癬、クローン病患者におけるＴＮＦ誘導性乾癬型皮膚病変、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎を特に含む、炎症性疾患、自己免疫疾患およびがんを処置する方法における、抗ＩＬ－３６抗体の使用を提供する。
【0036】
用語および技法の概略
本明細書の説明および添付の特許請求の範囲について、単数形「1つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、文脈が明らかに別のように示さない限り、複数の指示物を含む。したがって、例えば、「タンパク質（ａ ｐｒｏｔｅｉｎ）」についての言及は、２つ以上のタンパク質を含み、「化合物（ａ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」についての言及は、２つ以上の化合物を指す。特許請求の範囲は、任意の適宜の要素を除外するように起草され得ることがさらに留意される。そのため、この記載は、特許請求の範囲の要素の列挙と関連して「単独で（ｓｏｌｅｌｙ）」、「～のみ（ｏｎｌｙ）」などのそのような排他的な用語の使用、または「消極的」限定の使用について先行する基礎として働くことが意図される。「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「～を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、互換的であり、限定的であるとは意図されない。様々な実施形態の説明が「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を使用する場合、当業者は、一部の特定の場合、実施形態が、あるいは、「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という言語を使用して代替的に説明され得ることを理解し得ることがさらに理解されるべきである。
本明細書の説明および添付の特許請求の範囲について、単数形「1つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、文脈が明らかに別のように示さない限り、複数の指示物を含む。したがって、例えば、「タンパク質（ａ ｐｒｏｔｅｉｎ）」についての言及は、２つ以上のタンパク質を含み、「化合物（ａ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」についての言及は、２つ以上の化合物を指す。特許請求の範囲は、任意の適宜の要素を除外するように起草され得ることがさらに留意される。そのため、この記載は、特許請求の範囲の要素の列挙と関連して「単独で（ｓｏｌｅｌｙ）」、「～のみ（ｏｎｌｙ）」などのそのような排他的な用語の使用、または「消極的」限定の使用について先行する基礎として働くことが意図される。「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「～を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、互換的であり、限定的であるとは意図されない。様々な実施形態の説明が「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を使用する場合、当業者は、一部の特定の場合、実施形態が、あるいは、「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という言語を使用して代替的に説明され得ることを理解し得ることがさらに理解されるべきである。
【0037】
ある範囲の値が提供される場合、文脈が明らかに別のように示さない限り、その範囲の上限および下限の間の、値の各間の整数、および値の各間の整数の１０分の１の各々、ならびに示される範囲内の他の任意の、示されるか、または間にある値は、本発明に包含されることが、文脈が明らかに別のように示さない限り、理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、独立して、より小さい範囲に含まれることがあり、また、本発明に包含され、示される範囲内の任意の特に除外される限界に供される。示される範囲が、これらの限界のうちの１つまたは両方を含む場合、また、それらの含まれる限界の（ｉ）いずれかまたは（ｉｉ）両方を除外する範囲は、本発明に含まれる。例えば、「１～５０」は、「２～２５」、「５～２０」、「２５～５０」、「１～１０」などを含む。
【0038】
一般的に、本明細書で使用される命名法、ならびに本明細書で説明される技法および手順は、当業者によって十分に理解され、一般に用いられるもの、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning-A Laboratory Manual (2nd Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989（以下「Sambrook」)；Current Protocols in Molecular Biology, F. M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc.（２０１１年まで補足）（以下、「Ausubel」)；Antibody Engineering, Vols. 1 and 2, R. Kontermann and S. Dubel, eds., Springer-Verlag, Berlin and Heidelberg (2010)；Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, V. Ossipow and N. Fischer, eds., 2nd Ed., Humana Press (2014)；Therapeutic Antibodies: From Bench to Clinic, Z. An, ed., J. Wiley & Sons, Hoboken, N.J. (2009)；およびPhage Display, Tim Clackson and Henry B. Lowman, eds., Oxford University Press, United Kingdom (2004)において説明されている一般技法および方法論を含む。
【0039】
本開示において参照される全ての出版物、特許、特許出願および他の文書は、各個々の出版物、特許、特許出願または他の文書が、全ての目的について参照により本明細書に組み込まれることが個々に示されているのと同程度に、全ての目的についてそれらを全体として参照によりこれにより本明細書に組み込まれる。
【0040】
別に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのみであり、限定であるとは意図されないことが理解されるべきである。本開示を解釈する目的のために、以下の用語の説明が適用され、該当する場合、また、単数形で使用される用語は、複数形を含み、その逆も同様である。
【0041】
「ＩＬ－３６」は、本明細書で使用される場合、インターロイキン－３６サイトカインＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γを集合的に指す。
【0042】
「ＩＬ－３６α」または「ＩＬ－３６ａ」は、本明細書で使用される場合、インターロイキン－３６αサイトカインが発生する任意の種からのインターロイキン－３６αサイトカインを指す。「ｈｕ－ＩＬ－３６α」および「ｃｙ－ＩＬ－３６α」は、それぞれ、ヒトおよびカニクイザルからのＩＬ－３６αサイトカインを指す。
【0043】
「ＩＬ－３６β」または「ＩＬ－３６ｂ」は、本明細書で使用される場合、インターロイキン－３６βサイトカインが発生する任意の種からのインターロイキン－３６βサイトカインを指す。「ｈｕ－ＩＬ－３６β」および「ｃｙ－ＩＬ－３６β」は、それぞれ、ヒトおよびカニクイザルからのＩＬ－３６βサイトカインを指す。
【0044】
「ＩＬ－３６γ」または「ＩＬ－３６ｇ」は、本明細書で使用される場合、インターロイキン－３６γサイトカインが発生する任意の種からのインターロイキン－３６γサイトカインを指す。「ｈｕ－ＩＬ－３６γ」および「ｃｙ－ＩＬ－３６γ」は、それぞれ、ヒトおよびカニクイザルからのＩＬ－３６γサイトカインを指す。
【0045】
「ＩＬ－３６媒介状態」または「ＩＬ－３６媒介疾患」は、本明細書で使用される場合、非限定的に、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ８およびＣＣＬ２０を含む、サイトカイン、ケモカイン、酵素および接着分子の産生をもたらす、ＩＬ－３６サイトカインによって刺激されることが公知の下流経路を非限定的に含む、ＩＬ－３６サイトカイン、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γのうちのいずれかの、それらの同族受容体ＩＬ－３６Ｒへの結合によって媒介されるシグナル伝達経路の異常な機能と関連付けられる任意の医学的状態を包含する。例えば、ＩＬ－３６媒介疾患は、非限定的に、炎症性疾患、自己免疫疾患およびがんを含む、ＩＬ－３６シグナル伝達経路のアンタゴニストまたは阻害剤によって媒介される疾患、および／またはそれに応答性の疾患を含み得る。より特に、ＩＬ－３６媒介疾患は、非限定的に、上皮増殖因子受容体阻害剤に起因するざ瘡、ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＳＨ）、急性汎発性発疹性膿疱症（ＡＧＥＰ）、皺の無微生物膿疱症、頭皮／脚の無微生物膿疱症、無微生物角層下膿疱症、無菌膿瘍症候群、ベーチェット病、腸バイパス症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、小児膿疱性皮膚症、クローン病、インターロイキン－１受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＲＡ）、インターロイキン－３６受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＴＲＡ）、湿疹、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、持久性隆起性紅斑、化膿性汗腺炎、ＩｇＡ天疱瘡、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、好中球性脂肪織炎、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）、乾癬、乾癬性関節炎、膿疱性乾癬（ＤＩＲＡ、ＤＩＴＲＡ）、壊疽性膿皮症、化膿性関節炎壊疽性膿皮症およびざ瘡（ＰＡＰＡ）、化膿性関節炎壊疽性膿皮症ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＰＡＳＨ）、リウマチ様好中球性皮膚症、滑膜炎ざ瘡膿疱症骨増殖症および骨炎（ＳＡＰＨＯ）、クローン病患者におけるＴＮＦ誘導性乾癬型皮膚病変、シェーグレン症候群、スイート症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、潰瘍性大腸炎ならびにブドウ膜炎を含み得る。
【0046】
「ＩＬ－３６により刺激されたシグナル」とは、本明細書で使用される場合、ＩＬ－３６サイトカインであるＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γのうちのいずれかの、その同族受容体、ＩＬ－３６Ｒへの結合によって開始される細胞内シグナルを指す。例示的なＩＬ－３６により刺激されたシグナルには、ＨａＣａｔ細胞および／またはヒト初代成人もしくは新生児ケラチノサイト（ＨＥＫｎまたはＨＥＫａ）細胞からのＩＬ－８の放出、ならびに代用細胞ベースの遮断アッセイ、例えば、本明細書の実施例において開示されるＨＥＫ－ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ－３６応答性細胞ベースのアッセイを使用して測定されるシグナルが含まれる。
【0047】
「細胞ベースの遮断アッセイ」とは、抗体の、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害または低減する能力を測定することができるアッセイを指す。例えば、細胞ベースの遮断アッセイは、特定の生物機能または生化学機能、例えば、ＩＬ－３６サイトカイン媒介細胞内シグナル伝達を阻害するために必要とされる抗体濃度を測定するために使用することができる。一部の実施形態では、抗体（例えば、本開示の抗ＩＬ－３６抗体）の最大半量の阻害濃度（ＩＣ５０）および／または９０％阻害濃度（ＩＣ９０）を、細胞ベースの遮断アッセイを使用して測定する。一部の実施形態では、細胞ベースの遮断アッセイは、抗体がアゴニスト（例えば、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、ＩＬ－３６γ）とその同族受容体との間の相互作用を遮断するかどうかを決定するために使用される。本開示の抗体について有用な細胞ベースの遮断アッセイには、細胞系ベースのアッセイ（例えば、ＨａＣａｔ細胞）または初代細胞アッセイ（例えば、ヒト初代ケラチノサイト）、およびレポーターまたはセンサー細胞アッセイ［例えば、ＨＥＫ－ＢＬＵＥ（商標）レポーター細胞アッセイ］が含まれ得る。ＩＬ－３６シグナル伝達経路についての例示的な細胞ベースの遮断アッセイは、本明細書で提供される実施例において説明される。
【0048】
「抗体」とは、本明細書で使用される場合、特定の抗原に特異的に結合するか、または特定の抗原と免疫学的に反応性である１つまたは複数のポリペプチド鎖を含む分子を指す。本開示の例示的な抗体には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、多重特異性抗体（またはヘテロコンジュゲート）抗体（例えば、三重特異性抗体、二重特異性抗体など）、一価抗体（例えば、単一アーム抗体）、多価抗体、抗原結合性断片［例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒＩｇＧおよびｓｃＦｖ断片］、抗体融合物および合成抗体（または抗体ミメティック）が含まれる。
【0049】
「抗ＩＬ－３６抗体」または「ＩＬ－３６に結合する抗体」とは、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γのうちの１つまたは複数を含むＩＬ－３６に、抗体がＩＬ－３６、すなわち、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γのうちの１つまたは複数をターゲティングすることにおいて診断剤および／または治療剤として有用であるのに十分な親和性により結合する抗体を指す。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体の、非関連非ＩＬ－３６抗原への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）その他によって測定される場合、抗体の、ＩＬ－３６への結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、ＩＬ－３６に結合する抗体は、１μＭ未満、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０１ｎＭ未満または１ｐＭ未満（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。
【0050】
「全長抗体」、「インタクトな抗体」または「抗体全体」は、本明細書で互換的に使用されて、ネイティブ抗体構造に実質的に類似する構造を有する抗体、または本明細書で定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。
【0051】
「抗体断片」とは、全長抗体と同じ抗原に結合することができる全長抗体の一部を指す。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；一価または単一アーム抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；および抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【0052】
抗体の「クラス」とは、抗体の重鎖によって所有される定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。５つの主要なクラスの抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分割される。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。
【0053】
「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の、抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。ネイティブ抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）は、一般的に、類似する構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）および３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む（例えば、Kindt et al., Kuby Immunology, 6thed., W.H. Freeman and Co., page 91を参照されたい）。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を与えるのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離して、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることができる（例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993)；Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照されたい）。
【0054】
「超可変領域」または「ＨＶＲ」とは、本明細書で使用される場合、配列が超可変性である抗体可変ドメインの領域の各々、および／または構造的に定義されるループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般的に、ネイティブ抗体は、６つのＨＶＲ；重鎖可変ドメインＶＨ内の３つ（ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２、ＨＶＲ－Ｈ３）、および軽鎖可変ドメインＶＬ内の３つ（ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２、ＨＶＲ－Ｌ３）を伴う４つの鎖を含む。ＨＶＲは、一般的に、超可変ループからのアミノ酸残基、および／または「相補性決定領域（ＣＤＲ）」からのアミノ酸残基を含む。いくつかの超可変領域の描写が使用されており、本明細書に包含される。カバット（Ｋａｂａｔ）相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列変動性に基づき、最も一般に使用されている［Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)］。チョティア（Ｃｈｏｔｈｉａ）は、代わりに、構造ループの場所について言及している［Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)］。ＡｂＭ超可変領域は、カバットＣＤＲとチョティア構造ループとの間の折衷案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。「接触」超可変領域は、使用可能な複雑な結晶構造の解析に基づく。これらの超可変領域の各々からの残基を、以下の表に示す。
【0055】
【表1】
【0056】
別に示さない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基および他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、Ｋａｂａｔら（上記）に従って本明細書で番号付けされる。
【0057】
超可変領域は、本明細書で使用される場合、以下の通り、延長された超可変領域または代替の超可変領域を含み得る：ＶＬドメイン内の２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）および８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、ならびにＶＨドメイン内の２６～３５、３０～３５、３０～３５Ａ、３０～３５Ｂまたは３１～３５Ｂ（Ｈ１）、５０～６１、５０～６５または４９～６５（Ｈ２）および９３～１０２、９４～１０２または９５～１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの定義の各々について、Ｋａｂａｔら（上記）に従って番号付けされる。
【0058】
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、本明細書で使用される場合、最も高い配列変動性を有する可変ドメインのＨＶＲ内の領域、および／または抗原認識に関与する可変ドメインのＨＶＲ内の領域を指す。一般的に、ネイティブ抗体は、６つのＣＤＲ；重鎖可変ドメインＶＨ内の３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、および軽鎖可変ドメインＶＬ内の３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を伴う４つの鎖を含む。本開示の例示的な抗ＩＬ－３６抗体のＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４～３４、Ｌ２の５０～５６、Ｌ３の８９～９７、Ｈ１の３０～３５Ａ、Ｈ２の５０～６１およびＨ３の９３～１０２において起こる［Ｋａｂａｔら（上記）による番号付け］。
【0059】
「フレームワーク」または「ＦＲ」とは、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲおよびＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（またはＶＬ）において以下の配列：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４で現れる。
【0060】
「ネイティブ抗体」とは、天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、ネイティブＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合した２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖とから構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端へ、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端へ、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類のうちの１つに割り当てることができる。
【0061】
「モノクローナル抗体」とは、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、可能な変異型抗体（例えば、変異型抗体は、天然に起こるか、またはモノクローナル抗体の産生中に生ずる突然変異を含有し、一般的に、少量で存在する）を除いては、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象とする。したがって、「モノクローナル」という用語は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈されるべきではない。例えば、使用されるモノクローナル抗体は、非限定的に、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは部分を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含む、様々な技法によって作製されることがあり、そのような方法およびモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法は、本明細書で説明されている。
【0062】
「キメラ抗体」とは、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の供給源または種に由来し、一方で、重鎖および／または軽鎖の残りが、異なる供給源または種に由来する抗体を指す。
【0063】
「ヒト化抗体」とは、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸配列とヒトＦＲからのアミノ酸配列とを含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および典型的に２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、全てまたは実質的に全てのＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）は、非ヒト抗体のＨＶＲに対応し、全てまたは実質的に全てのＦＲは、ヒト抗体のＦＲに対応する。ヒト化抗体は、適宜、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
【0064】
「ヒト抗体」とは、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を所有する抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト供給源に由来する抗体を指す。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【0065】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般的に、配列のサブグループは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91- 3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3にあるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬについて、サブグループは、Kabat et al.（上記）にあるようなサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨについて、サブグループは、Kabat et al.（上記）にあるようなサブグループＩＩＩである。
【0066】
「アクセプターヒトフレームワーク」は、本明細書で使用される場合、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれは、アミノ酸配列変化を含有してもよい。一部の実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。一部の実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
【0067】
「Ｆｃ領域」とは、免疫グロブリン重鎖のＣ末端ポリペプチド配列を含む二量体複合体を指し、Ｃ末端ポリペプチド配列は、インタクトな抗体のパパイン消化によって得ることが可能な配列である。Ｆｃ領域は、ネイティブまたは変異型Ｆｃ配列を含み得る。免疫グロブリン重鎖のＦｃ配列の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ配列は、通常、およそＣｙｓ２２６の位置におけるアミノ酸残基から、またはおよそＰｒｏ２３０の位置から、Ｆｃ配列のカルボキシル末端までに及ぶと定義される。しかしながら、Ｆｃ配列のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても、存在しなくてもよい。免疫グロブリンのＦｃ配列は、一般的に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含み、ＣＨ４ドメインを含んでもよい。
【0068】
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」とは、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指す。一部の実施形態では、ＦｃＲは、ネイティブヒトＦｃＲである。一部の実施形態では、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）を結合するＦｃＲであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体（それらの受容体の対立遺伝子変異型およびあるいは、切断型を含む）を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）を含み、これらは、主にそれらの細胞質ドメインにおいて異なる、類似するアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインにおいて免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインにおいて免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する［例えば、Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)を参照されたい］。また、ＦｃＲは、本明細書で使用される場合、母体ＩｇＧの胎児への移行［Guyer et al, J. Immunol. 1 17:587 (1976)およびKim et al, J. Immunol. 24:249 (1994)］および免疫グロブリンのホメオスタシスの調節の原因である新生児受容体ＦｃＲｎを含む。ＦｃＲは、例えば、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)；Capel et al, Immunomethods 4:25-34 (1994)；およびde Haas et al, J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)において概説されている。
【0069】
「多価抗体」は、本明細書で使用される場合、３つ以上の抗原結合部位を含む抗体である。多価抗体は、好ましくは、３つ以上の抗原結合部位を有するように操作され、一般的に、ネイティブ配列ＩｇＭまたはＩｇＡ抗体ではない。
【0070】
「多重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なる結合部位を有する抗体であり、各部位は、異なる結合特異性を有する。多重特異性抗体は、全長抗体であっても、抗体断片であってもよく、異なる結合部位は、各々、異なる抗原に結合してもよく、または異なる結合部位は、同じ抗原の２つの異なるエピトープに結合してもよい。
【0071】
「Ｆｖ断片」とは、完全な抗原認識および結合部位を含有する抗体断片を指す。この領域は、例えばｓｃＦｖにおけるように共有結合性であり得る堅い会合における、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。各可変ドメインの３つのＨＶＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定するのは、この構成である。集合的に、６つのＨＶＲまたはそのサブセットは、抗体に抗原結合特異性を与える。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、通常は結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識および結合する能力を有する。
【0072】
「Ｆａｂ断片」とは、軽鎖の可変および定常ドメインと、重鎖の可変ドメインおよび第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とを含有する抗体断片を指す。「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、一般的に、Ｆａｂ断片間のヒンジシステインによってそれらのカルボキシ末端の近くで共有結合している一対のＦａｂ断片を含む。また、抗体断片の他の化学カップリングは、当該技術分野において公知である。
【0073】
「抗原結合性アーム」とは、本明細書で使用される場合、目的の標的分子に特異的に結合する能力を有する抗体の成分を指す。典型的に、抗原結合性アームは、免疫グロブリンポリペプチド配列、例えば、免疫グロブリン軽鎖および重鎖のＨＶＲおよび／または可変ドメイン配列の複合体である。
【0074】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」とは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体断片を指し、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖で存在する。一般的に、Ｆｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが所望の抗原結合構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。
【0075】
「ダイアボディ」とは、２つの抗原結合部位を有する小抗体断片を指し、その断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨおよびＶＬ）内の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対形成することを強いられ、２つの抗原結合部位を作出する。
【0076】
「直鎖状抗体」とは、Zapata et al., Protein Eng., 8(10): 1057-1062 (1995)で説明されている抗体を指す。簡潔に説明すると、これらの抗体は、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒に一対の抗原結合領域を形成する、一対のタンデムＦｄ領域（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む。直鎖状抗体は、多重特異性、例えば、三重特異性または二重特異性であってもよく、単一特異性であってもよい。
【0077】
「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。
【0078】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用全体の強度を指す。「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体および抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹについての親和性は、一般的に、平衡解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書で説明される方法を含む、当該技術分野において公知の一般法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の説明的および例示的な実施形態を、以下に説明する。
【0079】
「特異的に結合する」または「特異的結合」とは、抗体の、抗原への、約１ｘ１０－７Ｍ以下の親和性の値による結合を指す。
【0080】
「親和性成熟した」抗体とは、変更を所有していない親抗体と比較して、１つまたは複数のＨＶＲにおける１つまたは複数の変更を有する抗体を指し、そのような変更は、抗体の、抗原についての親和性における改善をもたらす。
【0081】
抗体の「機能的抗原結合部位」は、標的抗原に結合することができる部位である。抗原結合部位の抗原結合親和性は、必ずしも抗原結合部位が由来する親抗体と同じくらい強いわけではないが、抗原に結合する能力は、抗原への抗体結合を評価することについて公知の様々な方法のうちのいずれか１つを使用して測定可能でなければならない。
【0082】
「単離された抗体」とは、抗体の天然環境の成分から分離されている抗体を指す。一部の実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動［例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動］またはクロマトグラフィー法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定されるように９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体純度の評定のための方法の概説については、例えば、Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87を参照されたい。
【0083】
「実質的に同様の」または「実質的に同じ」とは、本明細書で使用される場合、当業者が、２つの値間の差が、前記値（例えば、ＫＤ値）によって測定される生物学的特徴の関係内で生物学的有意性および／または統計的有意性がほとんどまたは全くないものと考え得るような、２つの数値（例えば、試験抗体と関連付けられる値、および参照抗体と関連付けられる他方の値）間の十分に高い程度の類似性を指す。
【0084】
「実質的に異なる」とは、本明細書で使用される場合、当業者が、２つの値間の差が、前記値（例えば、ＫＤ値）によって測定される生物学的特徴の関係内で統計的有意性があるものと考え得るような、２つの数値（一般的に、分子と関連付けられる値、および参照分子と関連付けられる他方の値）間の十分に高い程度の差を指す。
【0085】
「エフェクター機能」とは、抗体アイソタイプによって変動する、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例には、Ｃｌｑ結合および補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；およびＢ細胞活性化が含まれる。
【0086】
「イムノコンジュゲート」とは、非限定的に、細胞傷害剤を含む、１つまたは複数の異種の分子にコンジュゲートされた抗体を指す。
【0087】
「処置」、「処置する」または「処置すること」とは、処置される個体における障害の自然な過程を変更する試みの臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程中に行われ得る。所望の処置結果は、障害の発症または再発の予防、症状の軽減、障害の任意の直接的または間接的な病理学的結果の縮減、転移の予防、進行速度の減少、疾患状態の改善または寛解、および緩和または予後の改善を含み得るが、これらに限定されない。例えば、処置は、ＩＬ－３６によって媒介される疾患もしくは状態、またはＩＬ－３６もしくはＩＬ－３６サイトカインによって刺激される下流経路が病因および／もしくは進行において役割を果たし得る疾患もしくは状態の発症を遅延させるか、または進行を遅らせるための、治療有効量の、抗ＩＬ－３６抗体を含む医薬製剤の、対象への投与を含み得る。
【0088】
「医薬製剤」とは、活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にし、かつ製剤が投与される対象に毒性である追加の成分を含有しない形態の調製物を指す。医薬製剤は、１つまたは複数の活性剤を含み得る。例えば、医薬製剤は、抗ＩＬ－３６抗体を、製剤の唯一の活性剤として含んでもよく、抗ＩＬ－３６抗体と１つまたは複数の追加の活性剤とを含んでもよい。
【0089】
「唯一の活性剤」により、本明細書で使用される場合、本明細書で提供される「処置」の説明と一致して、言及される薬剤が、状態について対象を処置するための関連する薬理学的効果を提供するか、または提供することが予測され得る、製剤中に存在するか、または治療において使用されるただ１つの薬剤であることを意味する。唯一の活性剤を含む医薬製剤は、製剤中の１つまたは複数の非活性剤、例えば、薬学的に許容される担体の存在を除外しない。「非活性剤」は、状態について対象を処置することを意図する関連する薬理学効果を提供するとは予測されないか、または別の方法でそのような薬理学効果に顕著に寄与するとは予測されない薬剤である。
【0090】
「薬学的に許容される担体」とは、医薬製剤が投与される対象にとって非毒性である、活性成分以外の、医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。
【0091】
「治療有効量」とは、対象において所望の治療結果または予防結果を達成するための、例えば、疾患、障害または状態を処置または予防するための活性成分または薬剤（例えば、医薬製剤）の量を指す。ＩＬ－３６媒介疾患または状態の場合、治療剤の治療有効量は、疾患、障害または状態と関連付けられる症状のうちの１つまたは複数をある程度まで低減、予防、阻害および／または軽減する量である。炎症性状態、例えば、皮膚炎症性状態（例えば、湿疹、乾癬、酒さ、脂漏性皮膚炎）の処置について、インビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）有効性は、例えば、症状の持続期間、重症度および／もしくは再発、応答速度（ＲＲ）、応答持続期間ならびに／またはクオリティ・オブ・ライフを評定することによって測定することができる。
【0092】
「同時に」とは、本明細書で使用される場合、投与の少なくとも部分が時間において重複する、２以上の治療剤の投与を指す。したがって、同時投与は、１つまたは複数の剤の投与が、１つまたは複数の他の薬剤の投与を中断した後に継続する、投薬レジメンを含む。
【0093】
「個体」または「対象」とは、非限定的に、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌおよびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよび非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギおよびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）を含む哺乳動物を指す。
【0094】
様々な実施形態の詳細な説明
Ｉ．ＩＬ－３６サイトカイン
アゴニストサイトカインＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々は、同族受容体、ＩＬ－３６Ｒ（またはＩＬ１ＲＬ２）に結合することによって細胞内シグナル伝達を誘導する。これらのＩＬ－３６サイトカインのうちのいずれかによるＩＬ－３６Ｒ受容体への結合は、共受容体ＩＬ１ＲＡＰの動員および係合を引き起こし、ＩＬ－３６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、およびシグナル伝達事象を開始した各々のＩＬ－３６サイトカインを含む三元シグナル伝達複合体の形成をもたらす。ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γによって刺激されたシグナル伝達は、標的細胞におけるＮＫ－κＢ転写因子およびＡＰ－１経路の活性化を引き起こし、様々な炎症性、増殖性および病原性免疫応答を誘導する。例えば、Jennifer Towne et al., J. Biol. Chem. 279(14):13677-13688 (2004)；Sebastian Gunther et al., J. Immunol. 193(2):921-930 (2014)を参照されたい。
Ｉ．ＩＬ－３６サイトカイン
アゴニストサイトカインＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々は、同族受容体、ＩＬ－３６Ｒ（またはＩＬ１ＲＬ２）に結合することによって細胞内シグナル伝達を誘導する。これらのＩＬ－３６サイトカインのうちのいずれかによるＩＬ－３６Ｒ受容体への結合は、共受容体ＩＬ１ＲＡＰの動員および係合を引き起こし、ＩＬ－３６Ｒ、ＩＬ１ＲＡＰ、およびシグナル伝達事象を開始した各々のＩＬ－３６サイトカインを含む三元シグナル伝達複合体の形成をもたらす。ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γによって刺激されたシグナル伝達は、標的細胞におけるＮＫ－κＢ転写因子およびＡＰ－１経路の活性化を引き起こし、様々な炎症性、増殖性および病原性免疫応答を誘導する。例えば、Jennifer Towne et al., J. Biol. Chem. 279(14):13677-13688 (2004)；Sebastian Gunther et al., J. Immunol. 193(2):921-930 (2014)を参照されたい。
【0095】
ＩＬ－３６サイトカイン、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γは、受容体ＩＬ－３６Ｒに結合し、受容体ＩＬ－３６Ｒのアゴニストとして作用する比較的短いタンパク質である。インビボで、ＩＬ－３６サイトカインは、Ｎ末端切断をもたらすタンパク質分解プロセッシングを受ける。この切断は、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γがＩＬ－３６Ｒに対するそれらの完全アゴニスト活性を達成するために必要である。同様に、ＩＬ－３６Ｒアンタゴニスト、ＩＬ－３６Ｒａは、それが完全アンタゴニスト活性を達成するためにＮ末端切断を必要とする。ヒト型のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、ＩＬ－３６γ（本明細書で「ｈｕ－ＩＬ－３６α」、「ｈｕ－ＩＬ－３６β」および「ｈｕ－ＩＬ－３６γ」とも呼ばれる）およびＩＬ－３６Ｒａのアミノ酸およびヌクレオチド配列ならびに注釈は、公に入手可能である。例えば、それぞれ、ユニプロット（ＵｎｉＰｒｏｔ）エントリー番号Ｑ９ＵＨＡ７、Ｑ９ＮＺＨ７－２、Ｑ９ＮＺＨ８およびＱ９ＵＢＨ０の全長アミノ酸配列を参照されたい。同様に、本明細書で「ｃｙ－ＩＬ－３６α」、「ｃｙ－ＩＬ－３６β」および「ｃｙ－ＩＬ－３６γ」と呼ばれる、カニクイザルからの３種のＩＬ－３６サイトカインの型のバリエーションのアミノ酸およびヌクレオチド配列もまた、ユニプロットエントリー番号Ａ０Ａ２Ｋ５ＵＴＧ０、Ａ０Ａ２Ｋ５ＵＶ６３－１およびＡ０Ａ２Ｋ５ＶＹＶ６において公に入手可能である。
【0096】
ｈｕ－ＩＬ－３６およびｃｙ－ＩＬ－３６サイトカインタンパク質の部分に対応するポリペプチドコンストラクトを、抗原として使用して、ヒトおよび／またはカニクイザル型の特異的ＩＬ－３６サイトカイン、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γについて結合親和性を有する抗ＩＬ－３６抗体を誘発することができる。本明細書中の別の箇所で開示される通り、これらの抗ＩＬ－３６抗体は、特異的サイトカイン、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γのうちの１つまたは複数の、その同族受容体への結合を部分的または完全に遮断し、それによって、この結合によって開始される細胞内シグナルを減少することができる。ＩＬ－３６抗原による免疫化によって産生される抗体を、例えば、本明細書で説明されるように、改変して、抗体のある特定の特性をモジュレート（増強または低減）してもよく、これは、例えば、ＩＬ－３６抗原についての親和性を増強させること、別のＩＬ－３６抗原についての親和性を増強させること、交差反応性を増強させること、交差反応性を低減することなどを含むが、これらに限定されない。
【0097】
以下の表１は、本開示の抗ＩＬ－３６抗体を生成するために使用されたヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６ポリペプチドコンストラクトの配列の説明の要約、ならびにそれらの配列識別子を示す。また、タンパク質のユニプロットデータベースエントリー識別子、および全長タンパク質と比較したコンストラクト配列のドメイン境界が含まれる。ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、ＩＬ－３６γまたはＩＬ－３６Ｒａポリペプチドコンストラクトの各々の配列は、最も高いアゴニスト活性、またはＩＬ－３６Ｒａの場合、アンタゴニスト活性を有するＮ末端切断型に対応する。例えば、表１に示されるＮ末端切断型ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γアミノ酸配列は、それぞれ、Ｎ末端のＫ６、Ｒ５およびＳ１８位で始まる。加えて、本明細書中の別の箇所で説明される通り、精製タグ配列は、容易に精製可能な型のＩＬ－３６タンパク質を作製するために使用される。また、配列は、附属の配列表に含まれる。
【0098】
【表2】
【0099】
ＩＩ．抗ＩＬ－３６抗体
一部の実施形態では、本開示は、様々な周知の免疫グロブリン特色（例えば、ＣＤＲ、ＨＶＲ、ＦＲ、ＶＨおよびＶＬドメイン）のアミノ酸およびコードヌクレオチド配列についての抗ＩＬ－３６抗体の構造を提供する。以下の表２は、本開示の例示的な抗ＩＬ－３６抗体配列の説明の要約、およびそれらの配列識別子を示す。これらの配列およびその他は、附属の配列表に含まれる。
一部の実施形態では、本開示は、様々な周知の免疫グロブリン特色（例えば、ＣＤＲ、ＨＶＲ、ＦＲ、ＶＨおよびＶＬドメイン）のアミノ酸およびコードヌクレオチド配列についての抗ＩＬ－３６抗体の構造を提供する。以下の表２は、本開示の例示的な抗ＩＬ－３６抗体配列の説明の要約、およびそれらの配列識別子を示す。これらの配列およびその他は、附属の配列表に含まれる。
【0100】
【表3-1】
【表3-2】
【表3-3】
【表3-4】
【表3-5】
【表3-6】
【表3-7】
【表3-8】
【表3-9】
【表3-10】
【表3-11】
【表3-12】
【表3-13】
【表3-14】
【表3-15】
【表3-16】
【表3-17】
【表3-18】
【表3-19】
【表3-20】
【表3-21】
【表3-22】
【表3-23】
【表3-24】
【表3-25】
【表3-26】
【表3-27】
【表3-28】
【表3-29】
【表3-30】
【表3-31】
【表3-32】
【表3-33】
【表3-34】
【表3-35】
【表3-36】
【表3-37】
【表3-38】
【0101】
１．抗ＩＬ－３６抗体の結合親和性および細胞シグナル伝達阻害
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＬ－３６抗体は、ヒトサイトカイン、ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／またはｈｕ－ＩＬ－３６γの結合についての、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０１ｎＭ未満または０．００１ｎＭ未満（例えば、１０－８Ｍ以下、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の平衡解離定数（ＫＤ）を有する。より特に、一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／またはｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍもしくはそれ未満、１ｘ１０－１０Ｍもしくはそれ未満、または１ｘ１０－１１Ｍもしくはそれ未満の結合親和性により結合する。一部の実施形態では、結合親和性は、それぞれ、配列番号１、２および３のｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βまたはｈｕ－ＩＬ－３６γポリペプチドコンストラクトへの結合についての平衡解離定数（ＫＤ）として測定される。
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＬ－３６抗体は、ヒトサイトカイン、ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／またはｈｕ－ＩＬ－３６γの結合についての、１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０１ｎＭ未満または０．００１ｎＭ未満（例えば、１０－８Ｍ以下、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の平衡解離定数（ＫＤ）を有する。より特に、一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／またはｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍもしくはそれ未満、１ｘ１０－１０Ｍもしくはそれ未満、または１ｘ１０－１１Ｍもしくはそれ未満の結合親和性により結合する。一部の実施形態では、結合親和性は、それぞれ、配列番号１、２および３のｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βまたはｈｕ－ＩＬ－３６γポリペプチドコンストラクトへの結合についての平衡解離定数（ＫＤ）として測定される。
【0102】
一般的に、リガンドの、その受容体への結合親和性は、様々なアッセイのうちのいずれかを使用して決定し、様々な定量的値に関して表すことができる。抗体の親和性を決定することにおいて有用な特定のＩＬ－３６結合アッセイは、本明細書中の実施例において開示される。加えて、非限定的に、ウェスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、「サンドウィッチ」イムノアッセイ、表面プラズモン共鳴ベースのアッセイ（例えば、ＷＯ２００５／０１２３５９で説明されるＢＩＡｃｏｒｅアッセイ）、免疫沈降アッセイ、蛍光イムノアッセイおよびタンパク質Ａイムノアッセイなどの技法を使用する任意の直接的または競合的結合アッセイを含む、抗原結合アッセイは、当該技術分野において公知であり、本明細書で使用され得る。
【0103】
一部の実施形態では、結合親和性は、ＫＤ値として表され、固有の結合親和性（例えば、最小化した結合活性効果を伴う）を反映する。本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、配列番号１、２および３の、それぞれ、ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／またはｈｕ－ＩＬ－３６γポリペプチドコンストラクトについて強い結合親和性を示し、例えば、１０ｎＭ～１ｐＭのＫＤ値を示す。
【0104】
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＩＬ－３６抗体は、ＩＬ－３６媒介経路による細胞内シグナル伝達、特に、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γのＩＬ－３６Ｒへの結合によって刺激されるシグナル伝達経路を減少、阻害および／または完全に遮断する。抗体の、これらのＩＬ－３６媒介シグナル伝達経路を阻害する能力は、本開示の実施例で説明されるＨＥＫ－ＢＬＵＥ（商標）レポーター細胞アッセイおよび初代細胞ベースの遮断アッセイを含む、公知の細胞ベースの遮断アッセイを使用してインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）でアッセイすることができる。一部の場合、ＩＬ－８発現は、ＩＬ－３６媒介経路を通したシグナル伝達の指標として用いることができ、これは、例えば、ＩＬ－８レベルの低減が、１つまたは複数のＩＬ－３６媒介経路の遮断を示す場合を含む。
【0105】
一部の実施形態では、抗体の、ＩＬ－３６により刺激されたシグナル伝達を減少、阻害および／または完全に遮断する能力は、およそＥＣ５０の濃度におけるアゴニストサイトカインＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによるレポーター細胞ベースの遮断アッセイを使用して、抗体のＩＣ５０として決定される。アゴニストＥＣ５０は、多くの場合、アッセイ前は見積もるだけでもよく、データの非線形回帰解析を使用して、アッセイが完了した後に決定される。そのようなアッセイにおいては、およそＥＣ５０の値は、典型的に、ＥＣ４０～４５～ＥＣ５５～６０の範囲内である。
【0106】
したがって、一部の実施形態では、本開示のＩＬ－３６抗体は、ＩＬ－３６媒介経路による細胞内シグナル伝達を減少、阻害および／または完全に遮断する能力に基づく、以下の機能特性のうちの１つまたは複数によって特徴付けられる。
【0107】
抗ＩＬ－３６抗体の一部の実施形態では、抗体は、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γのうちのいずれかによって刺激される（またはそれによって開始される）シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％減少する。一部の実施形態では、シグナルの減少は、細胞ベースのアッセイを使用して測定することができる。当業者は、ＩＬ－３６により刺激された経路の細胞シグナル伝達の阻害を決定することにおける使用について知られる、公知の細胞ベースのアッセイのいずれかを選択することができる。一般的に、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、およそＥＣ５０（例えば、ＥＣ４０～ＥＣ６０）の濃度におけるアゴニストサイトカインＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γの結合によって開始されるＩＬ－３６媒介細胞内シグナルを、１０ｎＭもしくはそれ未満、５ｎＭもしくはそれ未満、または１ｎＭの抗体についてのＩＣ５０値により減少する。
【0108】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、ＩＬ－３６により刺激されたシグナルを、少なくとも９５％または少なくとも９９％減少し；ＩＬ－３６により刺激されたシグナルは、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γから選択されるアゴニストサイトカインによって刺激されてもよく；およそＥＣ５０のアゴニストサイトカイン濃度において、抗体は、１０ｎＭもしくはそれ未満、５ｎＭもしくはそれ未満、または１ｎＭもしくはそれ未満のＩＣ５０を有してもよい。
【0109】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γアゴニストのうちの１つまたは複数の、その同族受容体への結合によって開始される細胞内シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％減少する。
【0110】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、ヒト初代ケラチノサイト細胞および／またはＨａＣＡＴ細胞からの、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γにより刺激されたＩＬ－８の放出を阻害し；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γ濃度において、抗体は、１０ｎＭもしくはそれ未満、５ｎＭもしくはそれ未満、または１ｎＭもしくはそれ未満のＩＣ５０を有してもよい。
【0111】
２．抗体断片
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、抗体断片であってもよい。本開示の結合決定基を伴って有用な抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一価の一アーム（または単一アーム）抗体、ｓｃＦｖ断片、および本明細書で説明され、当該技術分野で公知の他の断片を含むが、これらに限定されない。様々な抗体断片の概説については、例えば、Hudson et al. Nat. Med. 9: 129-134 (2003)を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照されたく；また、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期の増大を有する、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。他の一価の抗体形態は、例えば、ＷＯ２００７／０４８０３７、ＷＯ２００８／１４５１３７、ＷＯ２００８／１４５１３８およびＷＯ２００７／０５９７８２で説明されている。一価の単一アーム抗体は、例えば、ＷＯ２００５／０６３８１６で説明されている。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である（例えば、ＥＰ０４０４０９７；ＷＯ９３／０１１６１；Hudson et al., Nat. Med. 9: 129-134 (2003)；およびHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照されたい）。
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、抗体断片であってもよい。本開示の結合決定基を伴って有用な抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一価の一アーム（または単一アーム）抗体、ｓｃＦｖ断片、および本明細書で説明され、当該技術分野で公知の他の断片を含むが、これらに限定されない。様々な抗体断片の概説については、例えば、Hudson et al. Nat. Med. 9: 129-134 (2003)を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照されたく；また、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期の増大を有する、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。他の一価の抗体形態は、例えば、ＷＯ２００７／０４８０３７、ＷＯ２００８／１４５１３７、ＷＯ２００８／１４５１３８およびＷＯ２００７／０５９７８２で説明されている。一価の単一アーム抗体は、例えば、ＷＯ２００５／０６３８１６で説明されている。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である（例えば、ＥＰ０４０４０９７；ＷＯ９３／０１１６１；Hudson et al., Nat. Med. 9: 129-134 (2003)；およびHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照されたい）。
【0112】
一部の実施形態では、抗体断片は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む単一ドメイン抗体である。一部の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Domantis, Inc., Waltham, MA；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）。
【0113】
抗体断片は、本明細書で説明される通り、非限定的に、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、および組換え宿主細胞［例えば、イー・コリ（Ｅ． ｃｏｌｉ）またはファージ］による産生を含む、様々な技法によって作製することができる。
【0114】
本開示の抗ＩＬ－３６抗体のうちのいずれかは、当該技術分野において公知の方法および技法ならびに／または本明細書で説明される方法および技法を使用して、抗体断片として調製することができることが企図される。例えば、本開示の様々な抗ＩＬ－３６抗体のＦａｂ型の調製および解析を、以下の実施例で説明する。
【0115】
３．キメラおよびヒト化抗体
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、キメラ抗体であり得る。（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984)において説明されるキメラ抗体を参照されたい）。一実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギまたは非ヒト霊長類、例えばサル由来の可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。一部の実施形態では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスとは変えられた「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合性断片を含み得ることが企図される。
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、キメラ抗体であり得る。（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984)において説明されるキメラ抗体を参照されたい）。一実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギまたは非ヒト霊長類、例えばサル由来の可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。一部の実施形態では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスとは変えられた「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合性断片を含み得ることが企図される。
【0116】
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、ヒトへの免疫原性を低減するためにヒト化され、一方で、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持する。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその部分）がヒト抗体配列に由来する１つまたは複数の可変ドメインを含む。また、ヒト化抗体は、ヒト定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。一部の実施形態では、ヒト化抗体における一部のＦＲ残基は、抗体特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基により置換される。
【0117】
ヒト化抗体およびそれらを作製する方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619-1633 (2008)において概説されており、例えば、Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 10029-10033 (1989)；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号；Kashmiri et al, Methods 36:25-34 (2005)［ＳＤＲ（ａ－ＨＶＲ）グラフト化を説明している］；Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)［「リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を説明している］；Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)（「ＦＲシャッフリング」を説明している）；ならびにOsbourn et al., Methods 36:61 -68 (2005)およびKlimka et al., Br. J. Cancer, 83 :252-260 (2000)［ＦＲシャッフリングのための「ガイド選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」手法を説明している］においてさらに説明されている。
【0118】
ヒト化に有用なヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット（ｂｅｓｔ－ｆｉｔ）」法を使用して選択されたフレームワーク領域［例えば、Sims et al. J. Immunol. 151 :2296 (1993)を参照されたい］；特定のサブグループの軽鎖または重鎖可変領域のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域［例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；およびPresta et al. J. Immunol, 151 :2623 (1993)を参照されたい］；ヒト成熟（体細胞的に成熟した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域［例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13: 1619- 1633 (2008)を参照されたい］；およびスクリーニングＦＲライブラリー由来のフレームワーク領域［例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272: 10678- 10684 (1997)およびRosok et al., J. Biol. Chem. 271 :2261 1 -22618 (1996)を参照されたい］が含まれるが、これらに限定されない。
【0119】
本開示の抗ＩＬ－３６抗体のうちのいずれかは、当該技術分野において公知の方法および技法ならびに／または本明細書で説明される方法および技法を使用して、ヒト化抗体として調製することができることが企図される。
【0120】
４．ヒト抗体
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、ヒト抗体であり得る。ヒト抗体は、当該技術分野において公知の様々な技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般的に、van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)およびLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)において説明されている。ヒト抗体は、免疫原を、抗原性負荷に応答して、インタクトなヒト抗体、またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に投与することによって調製され得る。そのような動物は、典型的に、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有し、それは、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、またはそれは、染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体にランダムに統合される。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117- 1125 (2005)を参照されたい。また、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術；米国特許第５，７７０，４２９号のＨＵＭＡＢ（登録商標）技術；米国特許第７，０４１，８７０号のＫ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術；ならびに米国特許出願公開番号２００７／００６１９００のＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を参照されたい。そのような動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに改変され得る。
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、ヒト抗体であり得る。ヒト抗体は、当該技術分野において公知の様々な技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般的に、van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)およびLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)において説明されている。ヒト抗体は、免疫原を、抗原性負荷に応答して、インタクトなヒト抗体、またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に投与することによって調製され得る。そのような動物は、典型的に、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有し、それは、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、またはそれは、染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体にランダムに統合される。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117- 1125 (2005)を参照されたい。また、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号のＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術；米国特許第５，７７０，４２９号のＨＵＭＡＢ（登録商標）技術；米国特許第７，０４１，８７０号のＫ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術；ならびに米国特許出願公開番号２００７／００６１９００のＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を参照されたい。そのような動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに改変され得る。
【0121】
また、ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞系が説明されている。例えば、Kozbor J. Immunol, 133: 3001 (1984)；Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51 -63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；およびBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照されたい。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されたヒト抗体は、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103 :3557- 3562 (2006)において説明されている。ハイブリドーマ細胞系からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を説明する追加の方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号において説明されている方法を含む。ヒトハイブリドーマ技術（すなわち、トリオーマ技法）は、例えば、Vollmers et al., Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005)およびVollmers et al., and Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3): 185-91 (2005)で説明されている。
【0122】
また、ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成され得る。そのような可変ドメイン配列は、その後、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技法は、以下に説明される。
【0123】
本開示の抗ＩＬ－３６抗体のうちのいずれかは、当該技術分野において公知の方法および技法、ならびに／または実施例を含む本明細書で説明される方法および技法を使用して、ヒト抗体として調製することができることが企図される。
【0124】
５．ライブラリー由来抗体
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてのコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、方法を使用して、ファージディスプレイライブラリーを生成してもよく、ライブラリーを、所望の結合特徴を所有する抗体についてスクリーニングしてもよい。本開示の抗ＩＬ－３６抗体のヒト化型の親和性成熟変異型の調製のためのファージディスプレイの使用は、本明細書で開示される実施例において説明される。そのようなライブラリー由来抗体を産生するための他の方法は、例えば、Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)；McCafferty et al., Nature 348:552-554；Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991)；Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)；Marks and Bradbury, m Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)；Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)；Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)；Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)；およびLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 1 19-132(2004)において見出すことができる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、所望の活性（単数または複数）を有する抗体についてのコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、方法を使用して、ファージディスプレイライブラリーを生成してもよく、ライブラリーを、所望の結合特徴を所有する抗体についてスクリーニングしてもよい。本開示の抗ＩＬ－３６抗体のヒト化型の親和性成熟変異型の調製のためのファージディスプレイの使用は、本明細書で開示される実施例において説明される。そのようなライブラリー由来抗体を産生するための他の方法は、例えば、Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)；McCafferty et al., Nature 348:552-554；Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991)；Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)；Marks and Bradbury, m Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)；Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)；Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)；Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)；およびLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 1 19-132(2004)において見出すことができる。
【0125】
コンビナトリアルライブラリースクリーニングは、当該技術分野において公知の方法および技法を、本明細書で説明される方法および技法と共に使用および／または適合して、本開示の抗ＩＬ－３６抗体の変異型を生成するために使用することができることが企図される。例えば、本開示の抗ＩＬ－３６抗体の広範な親和性成熟変異型を調製するためのファージディスプレイライブラリー生成およびスクリーニングの使用は、実施例で説明される。
【0126】
６．多重特異性抗体
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、多重特異性抗体、例えば、三重特異性または二重特異性抗体である。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる結合部位を有するモノクローナル抗体であり、各結合部位は、異なる抗原についての結合特異性を有し、そのうちの少なくとも１つは、ＩＬ－３６に特異的に結合する。一般的に、本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体のうちのいずれかの結合特異性は、ＩＬ－３６媒介疾患を処置するために有用な多重特異性抗体に組み込むことができることが企図される。例えば、一部の実施形態では、多重特異性抗体の結合部位のうちの少なくとも１つは、ＩＬ－３６（例えば、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γ）に特異的に結合し、多重特異性抗体の別の結合部位は、ＩＬ－３６媒介疾患の処置に関連する異なる抗原に結合する。
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、多重特異性抗体、例えば、三重特異性または二重特異性抗体である。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる結合部位を有するモノクローナル抗体であり、各結合部位は、異なる抗原についての結合特異性を有し、そのうちの少なくとも１つは、ＩＬ－３６に特異的に結合する。一般的に、本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体のうちのいずれかの結合特異性は、ＩＬ－３６媒介疾患を処置するために有用な多重特異性抗体に組み込むことができることが企図される。例えば、一部の実施形態では、多重特異性抗体の結合部位のうちの少なくとも１つは、ＩＬ－３６（例えば、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γ）に特異的に結合し、多重特異性抗体の別の結合部位は、ＩＬ－３６媒介疾患の処置に関連する異なる抗原に結合する。
【0127】
一部の実施形態では、本明細書中の別の箇所で説明される通り、ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に高い結合親和性（例えば、３ｎＭ以下）により結合する多重特異性抗体が企図される。そのような結合親和性は、配列番号１のｈｕ－ＩＬ－３６α、配列番号２のｈｕ－ＩＬ－３６βおよび配列番号３のｈｕ－ＩＬ－３６γについての平衡解離定数（ＫＤ）として測定することができる。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、１つのアームにおいてＩＬ－３６αおよび／またはＩＬ－３６γについての特異性、ならびに他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性を含み得ることがさらに企図される。
【0128】
多重特異性抗体を作製するための技法は、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現［例えば、Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)、ＷＯ ９３／０８８２９およびTraunecker et al., EMBOJ. 10: 3655 (1991)を参照されたい］を含むが、これらに限定されない。また、「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）」操作を使用することができる（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）。
【0129】
また、多重特異性抗体は、ホモ二量体ではなくＦｃヘテロ二量体抗体分子の形成を好む「静電ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ）」効果を操作すること（ＷＯ ２００９／０８９００４Ａ１）；２以上の抗体または断片を架橋結合すること[例えば、米国特許第４，６７６，９８０号およびBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照されたい］；ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること［例えば、Kostelny et al., J. Immunol, 148(5): 1547-1553 (1992)を参照されたい］；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術を使用すること［例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照されたい］；単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用すること［例えば、Gruber et al., J. Immunol, 152:5368 (1994)を参照されたい］；または三重特異性抗体［例えば、Tutt et al., J. Immunol. 147: 60 (1991)を参照されたい］によって作製することができる。
【0130】
本開示の抗ＩＬ－３６抗体のうちのいずれかは、当該技術分野において公知の方法および技法、ならびに／または本明細書で説明される方法および技法を使用して、多重特異性抗体として調製することができることが企図される。
【0131】
本開示の一部の実施形態では、別個のＩＬ－３６サイトカイン、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γのうちの１つまたは複数についての別々の結合特異性を含む多重特異性ＩＬ－３６抗体が、企図される。例えば、多重特異性抗体は、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γに、３ｎＭ以下の親和性により結合し；かつ／またはＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナルを、少なくとも９０％減少し；かつ／またはおよそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において１０ｎＭ以下のＩＣ５０を有し得る。本明細書中の別の箇所で説明される通り、ＩＬ－３６αおよびＩＬ－３６γについて高親和性を有するが、ＩＬ－３６βについてより低い親和性を有するヒトＩＬ－３６抗体が単離され、ＩＬ－３６βについて高親和性を有するが、ＩＬ－３６αおよびＩＬ－３６γについてより低い親和性を有する他のヒトＩＬ－３６抗体が単離された。これらの異なるヒトＩＬ－３６サイトカインについてのこれらの特異性を、親和性成熟させ、単一の多重特異性ＩＬ－３６抗体に組み合わせた。したがって、一部の実施形態では、本開示は、１つのアームにおいてＩＬ－３６α／ＩＬ－３６γについての標的特異性および高親和性（例えば、１ｎＭ以下）、ならびに他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての標的特異性および高親和性（例えば、１ｎＭ以下）を有する多重特異性抗ＩＬ－３６抗体を提供する。そのような多重特異性抗ＩＬ－３６抗体の調製および使用は、実施例において詳述される。
【0132】
７．抗体変異型
一部の実施形態では、また、本開示の抗ＩＬ－３６抗体の変異型が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性の改善を有する抗体は、適切な改変を、抗体をコードするヌクレオチド配列に導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。そのような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの欠失および／またはアミノ酸配列への挿入および／またはアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入および置換の任意の組合せは、最終コンストラクトが、ＩＬ－３６抗原結合の所望の特徴を所有する限り、最終コンストラクトに到達するために行われ得る。非限定的に、（ｉ）アミノ酸置換、挿入および／または欠失変異型；（ｉｉ）糖鎖付加変異型；（ｉｉｉ）Ｆｃ領域変異型；（ｉｖ）システイン操作変異型；および（ｖ）誘導体化変異型を含む、本開示の抗ＩＬ－３６抗体の広範な変異型は、当該技術分野において公知の方法および技法、ならびに／または本明細書で説明される方法および技法を使用して、調製することができることが企図される。
一部の実施形態では、また、本開示の抗ＩＬ－３６抗体の変異型が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性の改善を有する抗体は、適切な改変を、抗体をコードするヌクレオチド配列に導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。そのような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの欠失および／またはアミノ酸配列への挿入および／またはアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入および置換の任意の組合せは、最終コンストラクトが、ＩＬ－３６抗原結合の所望の特徴を所有する限り、最終コンストラクトに到達するために行われ得る。非限定的に、（ｉ）アミノ酸置換、挿入および／または欠失変異型；（ｉｉ）糖鎖付加変異型；（ｉｉｉ）Ｆｃ領域変異型；（ｉｖ）システイン操作変異型；および（ｖ）誘導体化変異型を含む、本開示の抗ＩＬ－３６抗体の広範な変異型は、当該技術分野において公知の方法および技法、ならびに／または本明細書で説明される方法および技法を使用して、調製することができることが企図される。
【0133】
本開示の実施例、表２および配列表は、２つの特定の抗ＩＬ－３６抗体「ｍＡｂ２」および「ｍＡｂ６＿２」の多数の例示的な変異型を示す。例示される変異型は、以下のもの：ＩＬ－３６α／γもしくはＩＬ－３６βについての特異的親和性および／またはＩＬ－３６媒介シグナル伝達に関連する細胞ベースの遮断活性を増大するＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２およびＨＶＲ－Ｈ３におけるある範囲の単一、二重、三重アミノ酸置換；エフェクター機能のない機能を与えるＦｃ領域変異型（例えば、Ｎ２９７Ｇ）；ならびに多重特異性抗体形成を可能にする「ノブ」および「ホール」構造をもたらす重鎖置換のうちの１つまたは複数を含む。例えば、表２で開示される重鎖抗体配列は、カルボキシ末端リジン（すなわち、「Ｃ末端Ｌｙｓ」または「Ｃ末端Ｋ」）；２５２位、２５４位および２５６位のＹＴＥ突然変異（すなわち、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）；またはＣ末端ＫおよびＹＴＥ突然変異の両方をさらに含んでもよい。配列番号１７０～２４１、２４３～２４５、２４８～２５０の重鎖配列のそのような変異型は、表２（および付属の配列表）で配列番号５１８～７５１として示される。
【0134】
Ａ．置換、挿入および欠失変異型
一部の実施形態では、本明細書で説明されるアミノ酸置換に加えて１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗ＩＬ－３６抗体変異型が提供される。突然変異誘発のための部位は、ＨＶＲおよびＦＲを含み得る。典型的な「保存的」アミノ酸置換および／または一般の側鎖クラスもしくは特性に基づく置換は、当該技術分野において周知であり、本開示の実施形態において使用することができる。また、本開示は、アミノ酸側鎖クラスのうちの１つのメンバーが別のクラスからのアミノ酸に交換される非保存的アミノ酸置換に基づく変異型を企図する。
一部の実施形態では、本明細書で説明されるアミノ酸置換に加えて１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗ＩＬ－３６抗体変異型が提供される。突然変異誘発のための部位は、ＨＶＲおよびＦＲを含み得る。典型的な「保存的」アミノ酸置換および／または一般の側鎖クラスもしくは特性に基づく置換は、当該技術分野において周知であり、本開示の実施形態において使用することができる。また、本開示は、アミノ酸側鎖クラスのうちの１つのメンバーが別のクラスからのアミノ酸に交換される非保存的アミノ酸置換に基づく変異型を企図する。
【0135】
アミノ酸側鎖は、典型的に、以下のクラスまたは一般特性：（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ノルロイシン；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖の向きに影響を及ぼす：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅに従ってグループ化される。
【0136】
抗体へのアミノ酸置換、および後続の、所望の機能、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善についてのスクリーニングのための技法は、当該技術分野において周知である。
【0137】
アミノ酸置換変異型は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基を置換することを含み得る。一般的に、さらなる研究のために選択される、得られた変異型は、親抗体と比較してある特定の生物学的特性における改変（例えば、親和性の増大、免疫原性の低減）を有し、かつ／または実質的に保持された親抗体のある特定の生物学的特性を有する。例示的な置換変異型は、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟技法、例えば、本明細書の実施例で説明される技法を使用して、便利に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔に説明すると、１つまたは複数のＨＶＲ残基が突然変異され、変異型抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【0138】
突然変異誘発にターゲティングされ得る、抗体の残基または領域を特定するための有用な方法は、「アラニンスキャニング突然変異誘発」である［例えば、Cunningham and Wells (1989) Science, 244: 1081-1085を参照されたい］。この方法では、残基または標的残基の群（例えば、荷電残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＧｌｕ）を特定し、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、Ａｌａまたはポリアラニン）によって置き換えて、抗体の抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。最初の置換への機能的感受性を実証するアミノ酸の場所において、さらなる置換を導入してもよい。あるいは、または加えて、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原－抗体複合体の結晶構造が決定され得る。そのような接触残基および近隣の残基は、置換の候補としてターゲティングまたは除去され得る。変異型は、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【0139】
アミノ酸配列挿入は、長さが１残基～１００以上の残基を含有するポリペプチドに及ぶアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または多数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体を含む。抗体分子の他の挿入変異型は、抗体の血清半減期を増大する酵素またはポリペプチドへの、抗体のＮまたはＣ末端への融合を含む。
【0140】
置換は、抗体親和性を改善するためにＨＶＲにおいて行われ得る。そのような変更は、「ホットスポット（ｈｏｔｓｐｏｔ）」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基において行われることがあり［例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207: 179-196 (2008)を参照されたい］、得られた変異型ＶＨおよびＶＬは、結合親和性について試験される。一実施形態では、親和性成熟は、二次ライブラリーから構築および再選択することによって行われ得る［例えば、Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)を参照されたい］。多様性を導入する別の方法は、ＨＶＲを対象とする手法を含み、ここでは、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６残基）がランダム化される。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３は、多くの場合、ターゲティングされる。
【0141】
一部の実施形態では、置換、挿入または欠失は、そのような変更が抗体の、抗原を結合する能力を実質的に低減しない限り、１つまたは複数のＨＶＲ内で起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的変更（例えば、本明細書で提供される保存的置換）は、ＨＶＲにおいて行われ得る。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」外であってもよい。上記に提供される変異型ＶＨおよびＶＬ配列の一部の実施形態では、各ＨＶＲは変更されないか、または１、２もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
【0142】
Ｂ．糖鎖付加変異型
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、抗体が糖鎖付加される程度を増大または減少するように変更される。抗体の糖鎖付加部位の付加または欠失は、１つまたは複数の糖鎖付加部位が作出または除去されるように、アミノ酸配列を変更することによって行われ得る。
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、抗体が糖鎖付加される程度を増大または減少するように変更される。抗体の糖鎖付加部位の付加または欠失は、１つまたは複数の糖鎖付加部位が作出または除去されるように、アミノ酸配列を変更することによって行われ得る。
【0143】
抗体がＦｃ領域を含む実施形態では、Ｆｃ領域に取り付けられる炭水化物を変更してもよい。典型的に、哺乳動物細胞によって産生されるネイティブ抗体は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ連結によって取り付けられた分岐、二分岐オリゴ糖を含む［例えば、Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照されたい］。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「ステム（ｓｔｅｍ）」のＧｌｃＮＡｃに取り付けられたフコースを含み得る。一部の実施形態では、抗体のＦｃ領域のオリゴ糖の改変は、ある特定の特性の改善を有する変異型を作出することができる。
【0144】
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、親抗体の変異型であってもよく、変異型は、Ｆｃ領域に取り付けられた（直接的または間接的に）フコースを欠く炭水化物構造を含む。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、約１％～約８０％、約１％～約６５％、約５％～約６５％、または約２０％～約４０％であってもよい。フコースの量は、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法によって測定される、Ａｓｎ２９７に取り付けられた全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定することができる（例えば、ＷＯ ２００８／０７７５４６を参照されたい）。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域のおよそ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、しかしながら、また、Ａｓｎ２９７は、抗体における小さい配列変動のために、２９７位の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４～３００位の間に位置することがある。
【0145】
一部の実施形態では、フコシル化変異型は、ＡＤＣＣ機能の改善を有することがある。例えば、米国特許公開番号ＵＳ２００３／０１５７１０８号または同ＵＳ２００４／００９３６２１を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体の例、およびそれらを調製するための関連する方法は、例えば、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)で開示されている。
【0146】
脱フコシル化抗体を産生するために有用な細胞系は、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｄ ３ ＣＨＯ細胞［例えば、Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；ＵＳ２００３／０１５７１０８およびＷＯ２００４／０５６３１２を参照されたい］、およびノックアウト細胞系、例えば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞［例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；およびＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい］を含む。
【0147】
Ｃ．Ｆｃ領域変異型
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、Ｆｃ領域において１つまたは複数のアミノ酸改変を含み得る（すなわち、Ｆｃ領域変異型）。Ｆｃ領域変異型は、１つまたは複数のアミノ酸残基位置においてアミノ酸置換を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでもよい。本開示の抗ＩＬ－３６抗体と共に有用な当該技術分野において公知の広範なＦｃ領域変異型を、以下に説明する。
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、Ｆｃ領域において１つまたは複数のアミノ酸改変を含み得る（すなわち、Ｆｃ領域変異型）。Ｆｃ領域変異型は、１つまたは複数のアミノ酸残基位置においてアミノ酸置換を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含んでもよい。本開示の抗ＩＬ－３６抗体と共に有用な当該技術分野において公知の広範なＦｃ領域変異型を、以下に説明する。
【0148】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、エフェクター機能の変更を有するＦｃ領域変異型である。一部の実施形態では、エフェクター機能の変更を有する抗体は、親抗体のエフェクター機能の一部（しかし、全てではない）を所有するか、減少したエフェクター機能を所有するか、またはエフェクター機能を所有しない（例えば、エフェクター機能がない）。エフェクター機能のないＦｃ領域変異型は、エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ）が不必要もしくは有害である、ある特定の適用、および／または抗体のインビボ半減期が重要である、ある特定の適用のためにより望ましい。
【0149】
エフェクター機能の低減を有するＦｃ領域変異型抗体、またはエフェクター機能のないＦｃ領域変異型抗体は、以下のＦｃ領域：２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９位のうちの１つまたは複数においてアミノ酸置換を含み得る（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号を参照されたい）。そのようなＦｃ領域変異型は、２６５、２６９、２７０、２９７および３２７位のうちの２つ以上においてアミノ酸置換を含み得る。また、そのようなＦｃ領域変異型は、残基２６５および２９７の両方のアラニンへの置換を含み得る（例えば、米国特許第７，３３２，５８１号を参照されたい）。本明細書中の実施例および別の箇所で開示される通り、一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、エフェクター機能のないＦｃ領域変異型である。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体のエフェクター機能のないＦｃ領域変異型は、アミノ酸置換Ｎ２９７Ｇを含む。
【0150】
ＦｃＲへの結合の改善または縮減を有するＦｃ領域変異型は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２；およびShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591- 6604 (2001)で開示されている。ＡＤＣＣの改善を有するＦｃ領域変異型は、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３および／または３３４位（ＥＵ番号付けに基づく）において１つまたは複数のアミノ酸置換を含み得る。Ｃｌｑ結合および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の変更（すなわち、改善または縮減のいずれか）を有するＦｃ領域変異型は、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２およびIdusogie et al., J. Immunol. 164: 4178- 4184 (2000)において説明される通りである。半減期の増大、および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合の改善を有するＦｃ領域変異型は、例えば、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）において開示されている。そのようなＦｃ領域変異型は、２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４および４３４位のうちの１つまたは複数においてアミノ酸置換を含む。半減期の増大を有する他のＦｃ領域変異型は、例えば、ＵＳ７６５８９２１Ｂ２（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら）において説明される２５２、２５４および２５６位におけるＹＴＥ突然変異の組（すなわち、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）を含む。Ｆｃ領域変異型の他の例は、例えば、米国特許第５，６４８，２６０号および同第５，６２４，８２１号、ならびにＷＯ９４／２９３５１において見出すことができる。
【0151】
一般的に、インビトロおよび／またはインビボ細胞傷害性アッセイは、Ｆｃ領域変異型におけるＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認するために行われ得る。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（それゆえ、ＡＤＣＣ活性を欠きやすい）が、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確実にするために行われ得る。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評定するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号［例えば、Hellstrom, et al., Proc. Nat 'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照されたい］およびHellstrom, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502 (1985)；米国特許第５，８２１，３３７号［Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166: 1351-1361 (1987)を参照されたい］で説明されている。あるいは、非放射活性アッセイ法を用いてもよい［例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射活性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ． Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）；およびＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射活性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照されたい］。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、動物モデル、例えば、Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652- 656 (1998)において開示される動物モデルにおいて評定され得る。また、Ｃｌｑ結合アッセイは、抗体がＣｌｑに結合できず、それゆえＣＤＣ活性を欠くことを確認するために行われ得る。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２におけるＣｌｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評定するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい［例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)；Cragg, M.S. et al., Blood 101 : 1045-1052 (2003)；およびCragg, M.S. and M.J. Glennie, SW 103:2738-2743 (2004)を参照されたい］。当該技術分野において公知の方法を使用して、ＦｃＲｎ結合およびインビボクリアランス／半減期決定を行うことができる［例えば、Petkova, et al., Intl. Immunol. 18(12): 1759-1769 (2006)を参照されたい］。
【0152】
本開示の抗ＩＬ－３６抗体の広範囲のＦｃ領域変異型は、当該技術分野において公知の方法および技法、ならびに／または本明細書で説明される方法および技法を使用して調製することができることが企図される。例えば、Ｎ２９７Ｇアミノ酸置換を伴って調製されたＦｃ領域変異型は、実施例２、３および８で説明される通り、抗ＩＬ－３６抗体にエフェクター機能のない機能を与え、細胞ベースの遮断活性を保持する。
【0153】
Ｄ．システイン操作変異型
一部の実施形態では、本明細書で説明される抗ＩＬ－３６抗体は、反応性チオール基を作出するために、特定の非ＣＤＲ位置においてシステイン残基により置換され得ることが企図される。そのような操作された「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」は、本明細書中の別の箇所で説明される通り、抗体を、例えば、薬物部分またはリンカー－薬物部分にコンジュゲートするために使用され、それによって、イムノコンジュゲートを作出することができる。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号で説明されるように生成することができる。一部の実施形態では、以下の抗体残基のうちの任意の１つまたは複数：軽鎖のＶ２０５（カバット番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）は、システインで置換することができる。
一部の実施形態では、本明細書で説明される抗ＩＬ－３６抗体は、反応性チオール基を作出するために、特定の非ＣＤＲ位置においてシステイン残基により置換され得ることが企図される。そのような操作された「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」は、本明細書中の別の箇所で説明される通り、抗体を、例えば、薬物部分またはリンカー－薬物部分にコンジュゲートするために使用され、それによって、イムノコンジュゲートを作出することができる。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号で説明されるように生成することができる。一部の実施形態では、以下の抗体残基のうちの任意の１つまたは複数：軽鎖のＶ２０５（カバット番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）は、システインで置換することができる。
【0154】
Ｅ．誘導体化変異型
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、非タンパク質性部分によりさらに改変（すなわち、誘導体化）してもよい。抗体の誘導体化に好適な非タンパク質性部分には、水溶性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸ホモポリマーまたはランダムコポリマー、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコールならびにそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、抗体の改変は、メトキシポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドを使用して行うことができる。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐であっても、非分岐であってもよい。抗体に結合されるポリマーの数は、変動してもよく、２つ以上のポリマーが結合される場合、それらは同じ分子であっても、異なる分子であってもよい。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、非限定的に、抗体の特定の特性または機能を含む考慮、例えば、抗体誘導体が規定条件下の治療において使用されるかどうかに基づいて決定することができる。
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、非タンパク質性部分によりさらに改変（すなわち、誘導体化）してもよい。抗体の誘導体化に好適な非タンパク質性部分には、水溶性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸ホモポリマーまたはランダムコポリマー、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコールならびにそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、抗体の改変は、メトキシポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドを使用して行うことができる。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐であっても、非分岐であってもよい。抗体に結合されるポリマーの数は、変動してもよく、２つ以上のポリマーが結合される場合、それらは同じ分子であっても、異なる分子であってもよい。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、非限定的に、抗体の特定の特性または機能を含む考慮、例えば、抗体誘導体が規定条件下の治療において使用されるかどうかに基づいて決定することができる。
【0155】
８．イムノコンジュゲート
一部の実施形態では、また、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、イムノコンジュゲートであってもよく、イムノコンジュゲートは、１つまたは複数の細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗ＩＬ－３６抗体を含む。本開示によって企図される好適な細胞傷害剤には、化学療法剤、薬物、増殖阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物起源のタンパク質毒素、酵素的に活性な毒素、またはそれらの断片）または放射活性同位体が含まれる。
一部の実施形態では、また、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、イムノコンジュゲートであってもよく、イムノコンジュゲートは、１つまたは複数の細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗ＩＬ－３６抗体を含む。本開示によって企図される好適な細胞傷害剤には、化学療法剤、薬物、増殖阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物起源のタンパク質毒素、酵素的に活性な毒素、またはそれらの断片）または放射活性同位体が含まれる。
【0156】
一部の実施形態では、イムノコンジュゲートは、本明細書で説明される抗ＩＬ－３６抗体が１つまたは複数の薬物にコンジュゲートされている、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。
【0157】
一部の実施形態では、本開示のイムノコンジュゲートは、ＩＬ－３６媒介疾患または状態の処置のための薬物または治療剤にコンジュゲートされた、本明細書で説明される抗ＩＬ－３６抗体を含む。
【0158】
一部の実施形態では、本明細書で説明される抗ＩＬ－３６抗体は、非限定的に、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ鎖［緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の］、リシン（ｒｉｃｉｎ）Ａ鎖、アブリン（ａｂｒｉｎ）Ａ鎖、モデッシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、アルファ－サルシン（ｓａｒｃｉｎ）、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質、ニガウリ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サボンソウ（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）を含む、酵素的に活性な毒素またはその断片にコンジュゲートすることができる。
【0159】
一部の実施形態では、本開示のイムノコンジュゲートは、放射活性同位体にコンジュゲートされた、本明細書で説明される抗ＩＬ－３６抗体（すなわち、放射性コンジュゲート）を含む。様々な放射活性同位体は、そのような放射性コンジュゲートの産生のために使用可能である。例には、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、２１２Ｐｂ、およびＬｕの放射活性同位体が含まれる。一部の実施形態では、イムノコンジュゲートは、シンチグラフィー検出のための放射性同位体、またはＮＭＲ検出もしくはＭＲＩのためのスピン標識を含み得る。好適な放射性同位体またはスピン標識には、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１３Ｃ、１９Ｆ、１５Ｎ、１７Ｏ；Ｇｄ、ＭｎおよびＦｅの様々な同位体が含まれ得る。
【0160】
抗ＩＬ－３６抗体と細胞傷害剤とのイムノコンジュゲートは、タンパク質にコンジュゲートするために好適な様々な周知の二官能性試薬および化学を使用して作製することができる。そのような試薬には、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体［例えば、ジメチルアジプイミデート（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ）ＨＱ］、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス－アジド化合物［例えば、ビス－（ｐ－アジドベンゾイル）－ヘキサンジアミン］、ビス－ジアゾニウム誘導体［例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン］、ジイソシアネート（例えば、トルエン－２，６－ジイソシアネート）およびビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）が含まれるが、これらに限定されない。
【0161】
また、本開示のイムノコンジュゲートを調製するための試薬には、市販されている「架橋結合」試薬、例えば、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣおよびスルホ－ＳＭＰＢならびにＳＶＳＢ［スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート］（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ．、米国を参照されたい）が含まれ得る。
【0162】
９．合成抗体
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、免疫グロブリンスキャフォールドまたはフレームワーク以外のスキャフォールドまたはフレームワーク、例えば、代替タンパク質スキャフォールドまたは人工ポリマースキャフォールド上にグラフト化された、抗ＩＬ－３６免疫グロブリンからの１組のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ－Ｌ１など）を含む合成抗体であってもよい。
一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、免疫グロブリンスキャフォールドまたはフレームワーク以外のスキャフォールドまたはフレームワーク、例えば、代替タンパク質スキャフォールドまたは人工ポリマースキャフォールド上にグラフト化された、抗ＩＬ－３６免疫グロブリンからの１組のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ－Ｌ１など）を含む合成抗体であってもよい。
【0163】
本開示の合成抗体の調製のために企図される例示的な代替タンパク質スキャフォールドには、フィブロネクチン、ネオカルジノスタチン（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）ＣＢＭ４－２、リポカリン（ｌｉｐｏｃａｌｉｎ）、Ｔ細胞受容体、タンパク質－Ａドメイン（タンパク質Ｚ）、Ｉｍ９、ＴＰＲタンパク質、ジンクフィンガードメイン、ｐＶＩＩＩ、鳥類膵臓ポリペプチド、ＧＣＮ４、ＷＷドメインＳｒｃホモロジードメイン３、ＰＤＺドメイン、ＴＥＭ－１ベータ－ラクタマーゼ、チオレドキシン（ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ）、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、ＰＨＤ－フィンガードメイン、ＣＬ－２、ＢＰＴＩ、ＡＰＰＩ、ＨＰＳＴＩ、エコチン（ｅｃｏｔｉｎ）、ＬＡＣＩ－Ｄ１、ＬＤＴＩ、ＭＴＩ－ＩＩ、サソリ毒、昆虫デフェンシン－Ａペプチド、ＥＥＴＩ－ＩＩ、Ｍｉｎ－２３、ＣＢＤ、ＰＢＰ、チトクロムｂ－５６２、Ｌｄｌ受容体ドメイン、ガンマ－クリスタリン（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎ）、ユビキチン、トランスフェリンおよび／またはＣ型レクチン様ドメインが含まれ得るが、これらに限定されない。
【0164】
合成抗体に有用な例示的な人工ポリマー（非タンパク質）スキャフォールドは、例えば、Fiedler et al., (2014) "Non-Antibody Scaffolds as Alternative Therapeutic Agents," in Handbook of Therapeutic Antibodies (eds. S. Duebel and J. M. Reichert), Wiley-VCH Verlag GmbH & Co.；Gebauer et al., Curr. Opin. Chem. Biol., 13:245-255 (2009)；Binz et al, Nat. Biotech., 23(10): 1257-1268 (2005)において説明されている。
【0165】
ＩＶ．組換え法および組成物
本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、抗体産生の分野において周知の組換え法および材料を使用して産生することができる。一部の実施形態では、本開示は、抗ＩＬ－３６抗体をコードする単離された核酸を提供する。核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードし得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体をコードする核酸配列を含む１つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体をコードする核酸配列を含む宿主細胞が提供される。一実施形態では、宿主細胞は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列と、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列とをコードする核酸を含むベクターにより形質転換されている。別の実施形態では、宿主細胞は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターと、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターとにより形質転換されている。
本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、抗体産生の分野において周知の組換え法および材料を使用して産生することができる。一部の実施形態では、本開示は、抗ＩＬ－３６抗体をコードする単離された核酸を提供する。核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードし得る。一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体をコードする核酸配列を含む１つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体をコードする核酸配列を含む宿主細胞が提供される。一実施形態では、宿主細胞は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列と、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列とをコードする核酸を含むベクターにより形質転換されている。別の実施形態では、宿主細胞は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターと、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターとにより形質転換されている。
【0166】
組換え法の一部の実施形態では、使用される宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０）である。一実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体を作製する方法であって、上記に提供される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下において培養すること、および適宜、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することを含む方法が提供される。
【0167】
簡潔に説明すると、抗ＩＬ－３６抗体の組換え産生は、抗体（例えば、本明細書で説明される抗体）をコードする核酸を単離し、さらなるクローニングおよび／または宿主細胞における発現のためにこの核酸を１つまたは複数のベクターに挿入することによって行われる。そのような核酸は、当該技術分野において周知の従来の手順を使用して（例えば、所望の抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離およびシークエンシングされる。抗体をコードするベクターをクローニングまたは発現するのに好適な宿主細胞および培養方法は、当該技術分野において周知であり、原核細胞または真核細胞を含む。典型的に、発現後、抗体を、可溶性画分中の細胞ペーストから単離し、さらに精製してもよい。原核生物に加えて、真核微生物、例えば、糖鎖付加経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒト糖鎖付加パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌株および酵母株を含む、糸状菌または酵母は、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主である［例えば、Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004)およびLi et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照されたい］。
【0168】
また、本開示の糖鎖付加抗ＩＬ－３６抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）に由来してもよい。無脊椎細胞の例には、植物および昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞と関連して、特にヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために、使用され得る多くのバキュロウイルス株が、特定されている。また、植物細胞培養物は、宿主として利用することができる（例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号および同第７，１２５，９７８号を参照されたい）。
【0169】
本開示の抗ＩＬ－３６抗体の産生に有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞［例えば、Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)を参照されたい］；骨髄腫細胞系、例えば、Ｙ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶｌ系（ＣＯＳ－７）；ヒト胚腎臓系［例えば、Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)において説明される２９３または２９３細胞］；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ（Ｓｅｒｔｏｌｉ）細胞［例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)で説明されるＴＭ４細胞］；サル腎臓細胞（ＣＶｌ）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝臓細胞［ＢＲＬ ３Ａ］；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍［ＭＭＴ ０６０５６２］；ＴＲ１細胞［例えば、Mather et al., Annals N Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)およびＵＳ６，２３５，４９８を参照されたい］；メディカルリサーチカウンシル５（ＭＲＣ ５）細胞（例えば、ＡＴＣＣから入手可能、かつＣＣＬ－１７１とも呼ばれる細胞)；ならびに包皮４（ＦＳ ４）細胞［例えば、Vilcek et al. Ann. N. Y. Acad. Sci. 284:703-710 (1977)、Gardner & Vilcek. J. Gen. Virol. 44:161-168 (1979)、およびPang et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 77:5341-5345 (1980)を参照されたい］を含む。抗体産生に好適な有用な哺乳動物宿主細胞系の一般的概説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照されたい。
【0170】
Ｖ．抗ＩＬ－３６抗体の医薬組成物および製剤
また、本開示は、抗ＩＬ－３６抗体を含む医薬組成物および医薬製剤を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書で説明される抗ＩＬ－３６抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤を提供する。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、医薬組成物の唯一の活性剤である。そのような医薬製剤は、所望の程度の純度を有する抗ＩＬ－３６抗体を、１つまたは複数の薬学的に許容される担体と混合することによって調製することができる。典型的に、そのような抗体製剤は、水溶液として（例えば、米国特許第６，１７１，５８６号およびＷＯ２００６／０４４９０８を参照されたい）または凍結乾燥製剤として（例えば、米国特許第６，２６７，９５８号を参照されたい）調製することができる。
また、本開示は、抗ＩＬ－３６抗体を含む医薬組成物および医薬製剤を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書で説明される抗ＩＬ－３６抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬製剤を提供する。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、医薬組成物の唯一の活性剤である。そのような医薬製剤は、所望の程度の純度を有する抗ＩＬ－３６抗体を、１つまたは複数の薬学的に許容される担体と混合することによって調製することができる。典型的に、そのような抗体製剤は、水溶液として（例えば、米国特許第６，１７１，５８６号およびＷＯ２００６／０４４９０８を参照されたい）または凍結乾燥製剤として（例えば、米国特許第６，２６７，９５８号を参照されたい）調製することができる。
【0171】
また、本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体を含む組成物および製剤は、抗ＩＬ－３６に加えて、製剤が投与される対象において処置される特定の適応症に有用な他の活性成分（すなわち、治療剤）をさらに含有してもよいことが企図される。好ましくは、任意の追加の治療剤は、抗ＩＬ－３６抗体活性の活性に相補的な活性を有し、それらの活性は、互いに有害に影響を及ぼさない。したがって、一部の実施形態では、本開示は、本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供し、ＩＬ－３６媒介疾患または状態の処置に有用な治療剤をさらに含む。一部の実施形態では、例えば、疾患適応症ががんである場合、治療剤は、特定のがんに適切な化学療法剤である。一部の実施形態では、組成物中のさらなる治療剤は、ＩＬ－１、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６シグナル伝達経路のアンタゴニストである。
【0172】
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、抗ＩＬ－３６抗体を唯一の活性剤として含み、抗ＩＬ－３６抗体は、ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合する多重特異性抗体であり、結合親和性は、配列番号１のｈｕ－ＩＬ－３６α、配列番号２のｈｕ－ＩＬ－３６βおよび配列番号３のｈｕ－ＩＬ－３６γについての平衡解離定数（ＫＤ）によって測定してもよい。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、１つのアームにおいてＩＬ－３６αおよび／またはＩＬ－３６γについての特異性、ならびに他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性を含み；１つのアームは、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよく、他方のアームは、ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよい。
【0173】
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合する単一の多重特異性抗体を含み、他の任意の抗ＩＬ－３６抗体、またはＩＬ－３６に結合することができる他の任意の抗体を含まない。
【0174】
薬学的に許容される担体は、一般的に、用いられる投与量および濃度においてレシピエントにとって非毒性である。広範なそのような薬学的に許容される担体は、当該技術分野において周知である［例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)を参照されたい］。本開示の製剤において有用な、例示的な薬学的に許容される担体には、緩衝液、例えば、ホスフェート、シトレートおよび他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化物質；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む単糖、二糖および他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；および／または非イオン性界面活性物質、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれ得るが、これらに限定されない。
【0175】
また、本開示の製剤において有用な薬学的に許容される担体は、介在性薬物分散剤、例えば、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）（例えば、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号を参照されたい）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質［例えば、ｒＨｕＰＨ２０またはＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．］を含み得る。
【0176】
追加の治療剤および活性成分は、コロイド薬物デリバリー系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）において、またはマクロエマルションにおいて、例えば、コアセルベーション（ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ）技法によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル内に封入され得る［それぞれ、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセル剤およびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル剤］。そのような技法は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)において開示されている。
【0177】
一部の実施形態では、製剤は、抗体および／または他の活性成分の持続放出調製物であってもよい。持続放出調製物の好適な例には、抗体を含有する固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
【0178】
典型的に、対象に投与される本開示の製剤は、無菌である。滅菌製剤は、周知の技法を使用して、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって、容易に調製することができる。
【0179】
ＩＶ．使用および処置方法
本開示の抗ＩＬ－３６抗体を含む組成物または製剤のうちのいずれかは、ＩＬ－３６に特異的に結合し、かつ／またはＩＬ－３６の活性を遮断する、特に、ＩＬ－３６の、サイトカインＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによる細胞内シグナル伝達を媒介する能力を遮断する、抗ＩＬ－３６抗体の能力を利用する任意の方法または使用のために、例えば、治療方法において使用することができることが企図される。ＩＬ－３６によって媒介される細胞内シグナル伝達経路は、少なくとも、サイトカインアゴニストＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激されるシグナル伝達経路を含む。ＩＬ－３６媒介シグナル伝達経路の阻害は、本開示の実施例で説明されるＨＥＫ－ＢＬＵＥ（商標）レポーター細胞アッセイおよび初代細胞ベースの遮断アッセイを含む、公知の細胞ベースの遮断アッセイを使用してインビトロでアッセイすることができる。
本開示の抗ＩＬ－３６抗体を含む組成物または製剤のうちのいずれかは、ＩＬ－３６に特異的に結合し、かつ／またはＩＬ－３６の活性を遮断する、特に、ＩＬ－３６の、サイトカインＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによる細胞内シグナル伝達を媒介する能力を遮断する、抗ＩＬ－３６抗体の能力を利用する任意の方法または使用のために、例えば、治療方法において使用することができることが企図される。ＩＬ－３６によって媒介される細胞内シグナル伝達経路は、少なくとも、サイトカインアゴニストＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激されるシグナル伝達経路を含む。ＩＬ－３６媒介シグナル伝達経路の阻害は、本開示の実施例で説明されるＨＥＫ－ＢＬＵＥ（商標）レポーター細胞アッセイおよび初代細胞ベースの遮断アッセイを含む、公知の細胞ベースの遮断アッセイを使用してインビトロでアッセイすることができる。
【0180】
ＩＬ－３６媒介疾患は、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γを含む、ＩＬ－３６Ｒが受容体として作用するＩＬ－１ファミリーのサイトカインの異常な機能と関連付けられる任意の疾患または状態を含み得る。一部の場合、そのような異常な機能は、体液または組織における高レベルのＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γと関連付けられ、例えば、特定の細胞もしくは組織において通常見出されるレベルを超えるレベルを含んでもよく、またはこれらのサイトカインを通常発現しない細胞もしくは組織における任意の検出可能なレベルであってもよい。典型的に、ＩＬ－３６媒介状態または疾患は、以下の特徴：（１）状態または疾患と関連付けられる病理が、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γの投与によって、ならびに／またはＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γの発現のアップレギュレーションによって、動物において実験的に誘導することができること；ならびに（２）実験動物モデルにおいて生成された状態または疾患と関連付けられる病理が、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γの作用を阻害することが公知である薬剤によって阻害することができることを示す。
【0181】
ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γは、炎症促進性サイトカインであることが公知であるが、しかしながら、ＩＬ－３６Ｒによって媒介されるこれらのサイトカインによって刺激されるＩＬ－３６シグナル伝達経路の異常な機能は、非限定的に、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、感染症およびがんを一般的に含む、広範な疾患および状態と関連付けられることが公知である。例えば、ＩＬ－３６シグナル伝達の異常な機能と関連付けられる状態および疾患の範囲は、急性汎発性発疹性膿疱症（ＡＧＥＰ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、小児膿疱性皮膚症、クローン病、湿疹、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）、乾癬、乾癬性関節炎、クローン病患者におけるＴＮＦ誘導性乾癬型皮膚病変、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、潰瘍性大腸炎およびブドウ膜炎を含むが、これらに限定されない。
【0182】
ＩＬ－３６Ｒを遮断することによってＩＬ－３６シグナル伝達経路をターゲティングする薬剤は、非限定的に、以下のもの：ＧＰＰ、ＰＰＰおよび潰瘍性大腸炎を含む、ある範囲の疾患および状態の処置のために臨床開発中である。
【0183】
本開示の抗ＩＬ－３６抗体を含む組成物または製剤のうちのいずれかは、ＩＬ－３６シグナル伝達経路の異常な機能と関連付けられる上記に列挙する疾患または状態のうちのいずれかの処置のための方法または使用において使用することができることが企図される。一般的に、これらの状態および疾患には、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、代謝障害、感染症およびがんが含まれるが、これらに限定されない。
【0184】
したがって、一部の実施形態では、本開示の抗ＩＬ－３６抗体を含む組成物または製剤は、上皮増殖因子受容体阻害剤に起因するざ瘡、ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＳＨ）、急性汎発性発疹性膿疱症（ＡＧＥＰ）、皺の無微生物膿疱症、頭皮／脚の無微生物膿疱症、無微生物角層下膿疱症、無菌膿瘍症候群、ベーチェット病、腸バイパス症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、小児膿疱性皮膚症、クローン病、インターロイキン－１受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＲＡ）、インターロイキン－３６受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＴＲＡ）、湿疹、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、持久性隆起性紅斑、化膿性汗腺炎、ＩｇＡ天疱瘡、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、好中球性脂肪織炎、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）、乾癬、乾癬性関節炎、膿疱性乾癬（ＤＩＲＡ、ＤＩＴＲＡ）、壊疽性膿皮症、化膿性関節炎壊疽性膿皮症およびざ瘡（ＰＡＰＡ）、化膿性関節炎壊疽性膿皮症ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＰＡＳＨ）、リウマチ様好中球性皮膚症、滑膜炎ざ瘡膿疱症骨増殖症および骨炎（ＳＡＰＨＯ）、クローン病患者におけるＴＮＦ誘導性乾癬型皮膚病変、シェーグレン症候群、スイート症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、潰瘍性大腸炎ならびにブドウ膜炎から選択される状態または疾患の処置における使用のための方法、治療、医薬、診断または使用において使用することができる。
【0185】
以下の実施例を含む本明細書で開示される通り、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、ＩＬ－３６によって媒介される細胞内シグナル伝達を減少、阻害および／または遮断する能力を有する。したがって、一部の実施形態では、本開示は、対象においてＩＬ－３６媒介疾患または状態を処置する方法であって、対象に、治療有効量の本開示の抗ＩＬ－３６抗体を投与すること、またはそれを必要とする対象に、本開示の抗ＩＬ－３６抗体と薬学的に許容される担体とを含む治療有効量の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【0186】
本明細書中の別の箇所で開示される通り、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、ＩＬ－３６シグナル伝達経路を減少、阻害および／または遮断する能力を有する。したがって、また、本開示は、ＩＬ－３６シグナル伝達経路の減少、阻害および／または遮断に応答性の疾患および状態を処置する方法を提供する。
【0187】
加えて、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、アゴニストＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナル伝達を減少、阻害および／または遮断する能力を有する。したがって、また、本開示は、アゴニストＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナル伝達の減少、阻害および／または遮断に応答性の疾患および状態を処置する方法を提供する。
【0188】
ＩＬ－３６サイトカイン、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γを含むＩＬ－１ファミリーサイトカインは、腫瘍形成および多くの型のがんの発症に影響を及ぼす炎症性免疫応答に関与する。したがって、一部の実施形態では、本開示は、対象においてがんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の本開示の抗ＩＬ－３６抗体を投与すること、または対象に、本開示の抗ＩＬ－３６抗体と薬学的に許容される担体とを含む治療有効量の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【0189】
ＩＬ－３６シグナル伝達経路は、乾癬と関連付けられている。したがって、一部の実施形態では、本開示は、対象において乾癬を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の本開示の抗ＩＬ－３６抗体を投与すること、または対象に、本開示の抗ＩＬ－３６抗体と薬学的に許容される担体とを含む治療有効量の医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
【0190】
一部の実施形態では、本開示は、ＩＬ－３６媒介疾患、ＩＬ－３６シグナル伝達経路媒介疾患、ならびに／またはアゴニストＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナル伝達によって媒介される疾患を処置および／または予防する方法を提供する。そのような処置方法の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の本明細書で説明される抗ＩＬ－３６抗体、または抗ＩＬ－３６抗体を含む組成物もしくは医薬製剤を投与することを含む。処置方法による抗体、組成物または医薬製剤の投与は、対象において対象をＩＬ－３６媒介疾患の進行から保護し、かつ／またはＩＬ－３６媒介疾患の進行を処置する抗体誘導性治療効果を提供する。
【0191】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、対象に投与される唯一の活性剤である。抗ＩＬ－３６抗体が唯一の活性剤である一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体は、ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合する多重特異性抗体である。単一の抗ＩＬ－３６抗体を唯一の活性剤として使用するそのような方法は、多数の抗ＩＬ－３６抗体（例えば、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γに結合する２つ以上の異なる抗体の混合物を含む組成物）および／または他の抗原に結合する他の抗体の使用を必要とする方法に優る利点を提供する。単一の抗体により全ての３種のＩＬ－３６抗原に結合する能力は、単一用量または複数用量の単一の組成物または製剤を含む、単一の組成物または製剤の、対象への投与を可能にする。加えて、多重特異性抗体を使用して投与される用量の数は、多数の異なる抗ＩＬ－３６抗体、または抗ＩＬ－３６および／もしくは他の抗体の混合物を投与する場合よりも少ないことが企図される。
【0192】
一部の実施形態では、処置方法は、ＩＬ－３６媒介疾患または状態を予防および／または処置するための当業者に公知の１つまたは複数の追加の治療剤または処置の投与をさらに含み得る。１つまたは複数の追加の薬剤の投与を含むそのような方法は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が、同じ、または別々の製剤に含まれる）および別々の投与を包含することがあり、別々の投与の場合、抗体組成物または製剤の投与は、追加の治療剤の投与の前、同時、および／または後に起こり得る。
【0193】
本開示の処置方法の一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体または抗ＩＬ－３６抗体を含む医薬製剤は、薬剤を全身的に、または所望の標的組織にデリバリーする任意の投与様式によって対象に投与される。全身性投与は、一般的に、抗体またはその製剤が、対象の循環系に入り、したがって、代謝および他の同様のプロセスに供されるような、所望の標的部位、組織または器官への直接の投与以外の部位における抗体の対象への任意の投与様式を指す。
【0194】
したがって、本開示の処置方法において有用な投与様式には、注射、点滴、滴下注入および吸入が含まれ得るが、これらに限定されない。注射による投与には、静脈内、筋内、動脈内、くも膜下腔内、脳室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、脳脊髄内ならびに胸骨内注射および点滴が含まれ得る。
【0195】
一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体の医薬製剤は、抗体が、腸における不活性化から保護されるように製剤化される。したがって、処置方法は、製剤の経口投与を含み得る。
【0196】
一部の実施形態では、また、本開示の抗ＩＬ－３６抗体を含む組成物または製剤の医薬としての使用が提供される。加えて、一部の実施形態では、また、本開示は、医薬、特に、ＩＬ－３６媒介疾患を処置、予防または阻害するための医薬の製造または調製における、抗ＩＬ－３６抗体を含む組成物または製剤の使用を提供する。さらなる実施形態では、医薬は、ＩＬ－３６媒介疾患を有する個体に、有効量の医薬を投与することを含む、ＩＬ－３６媒介疾患を処置、予防または阻害するための方法における使用のためのものである。
【0197】
一部の実施形態では、医薬として、または医薬の調製において有用な組成物および製剤は、抗ＩＬ－３６抗体を唯一の活性剤として含む。一部の実施形態では、医薬として、または医薬の調製において有用な抗ＩＬ－３６抗体は、ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合する多重特異性抗体である。そのような実施形態では、医薬における、または医薬の調製における単一の多重特異性抗ＩＬ－３６抗体の唯一の活性剤としての使用は、多数の抗ＩＬ－３６または他の抗体を必要とする使用に優る、明確な利点を提供する。ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γについての結合特異性を含む単一の多重特異性抗ＩＬ－３６抗体の使用は、単一の活性剤のみが、使用される組成物または製剤に含まれるので、単純化された使用を可能にする。
【0198】
ある特定の実施形態では、医薬は、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤または処置をさらに含む。
【0199】
さらなる実施形態では、医薬は、対象に、ＩＬ－３６媒介疾患を処置、阻害または予防するための有効量の医薬を投与することを含む、対象においてＩＬ－３６媒介疾患を処置、阻害または予防することにおける使用のためのものである。
【0200】
ＩＬ－３６媒介疾患または状態の予防または処置のために、本開示の組成物および製剤中に含有される抗ＩＬ－３６抗体の適切な投与量（単独で、または１つもしくは複数の他の追加の治療剤と併用して使用される場合）は、処置される特定の疾患または状態、疾患の重症度および過程、抗体が予防目的のために投与されるか、治療目的のために投与されるか、患者に投与された以前の治療、患者の病歴および抗体への応答、ならびに主治医の裁量に依存する。本明細書で説明される組成物および製剤中に含まれる抗ＩＬ－３６抗体は、患者に一度に、または一連の処置にわたり好適に投与してもよい。非限定的に、単回投与または様々な時点にわたる多数回投与、ボーラス投与、およびパルス点滴を含む、様々な投薬スケジュールが、本明細書で企図される。
【0201】
疾患の種類および重症度に依存して、本開示の製剤中の約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ－３６抗体が、例えば、１つまたは複数の別々の投与によるか、連続点滴によるかにかかわらず、ヒト対象への投与のための最初の候補投与量である。一般的に、投与される抗体の投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。一部の実施形態では、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組合せ）の１つまたは複数の用量が、患者に投与され得る。
【0202】
投与量の投与は、対象の状態に依存して、数日またはそれよりも長くにわたり維持してもよく、例えば、投与は、ＩＬ－３６媒介疾患が、当該技術分野において公知の方法によって決定されて、十分に処置されるまで、継続してもよい。一部の実施形態では、最初のより高いロード用量が投与され、続いて１つまたは複数のより低い用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投与量レジメンは有用であり得る。投与量投与の治療効果の進行は、従来型技法およびアッセイによってモニターすることができる。
【0203】
したがって、本開示の方法の一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体の投与は、約１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの毎日の投与量を含む。一部の実施形態では、抗ＩＬ－３６抗体の投与量は、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約３０ｍｇ／ｋｇの毎日の投与量を含む。
【0204】
加えて、本開示の抗ＩＬ－３６抗体は、ＩＬ－３６の検出のためのアッセイ方法において使用され得る。ヒトＩＬ－３６に高親和性により結合する本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体の能力のために、抗ＩＬ－３６抗体は、広範なアッセイ方法および形式に適切である。抗ＩＬ－３６抗体は、ＩＬ－３６の検出および定量のための、公知の任意のアッセイ方法、例えば、競合的結合アッセイ、直接および間接的サンドウィッチアッセイ、免疫沈降アッセイならびに酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）において用いることができることが企図される（Sola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158, CRC Press, Inc.を参照されたい）。したがって、一部の実施形態では、本開示は、生物試料中のＩＬ－３６のレベルを検出するための方法であって、試料を本明細書で開示される抗ＩＬ－３６抗体と接触させる工程を含む方法を提供する。さらに、一部の実施形態では、生物試料中のＩＬ－３６のレベルを検出する方法は、生物試料、例えば、ヒト対象からの生物試料においてＩＬ－３６媒介状態または疾患を検出および／または診断するために使用することができることが企図される。
【実施例】
【0205】
本開示の様々な特色および実施形態は、以下の代表的な実施例において例示され、代表的な実施例は、例示であることが意図され、限定であるとは意図されない。当業者は、特定の実施例は、後続の特許請求の範囲においてより完全に説明される通り、単に本発明の例示であることを容易に理解する。本出願において説明されるどの実施形態および特色も、含有されるどの実施形態とも互換的かつ組合せ可能であることが理解されるべきである。
【実施例1】
【0206】
ＩＬ－３６ポリペプチドの生成
本実施例は、本開示の抗ＩＬ－３６抗体を誘発およびスクリーニングすることにおいて抗原として使用される様々なＩＬ－３６ポリペプチドコンストラクトの調製を例示する。
本実施例は、本開示の抗ＩＬ－３６抗体を誘発およびスクリーニングすることにおいて抗原として使用される様々なＩＬ－３６ポリペプチドコンストラクトの調製を例示する。
【0207】
ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－３６Ｒａ（ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６β、ｈｕ－ＩＬ－３６γ、ｈｕ－ＩＬ－３６Ｒａ）およびカニクイザルＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、ＩＬ－３６γ（ｃｙ－ＩＬ－３６α、ｃｙ－ＩＬ－３６β、ｃｙ－ＩＬ－３６γ）の活性化Ｎ末端切断型を、Towne et al., (2011)における情報に基づいて組換え産生した。発現コンストラクトのアミノ酸配列境界を、上記の表１および付属の配列表に示す。組換えＩＬ－３６αおよびＩＬ－３６βポリペプチドコンストラクトの全ては、精製目的のためのＮ末端「１２ｘＨｉｓ－ＳＵＭＯ」タグ（配列番号８）を有した。ＩＬ－３６γのコンストラクトは、精製目的のための以下の「１２ｘＨｉｓ－ＴＥＶ」Ｎ末端タグ：HHHHHHHHHHHHENLYFQS（配列番号９）を有した。ＩＬ－３６Ｒａのコンストラクトは、精製目的のための以下のＣ末端「ＧＳ－ＴＥＶ－ＧＳ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ－ＦＬＡＧ」タグ（配列番号１２）、および哺乳動物細胞発現のためのＮ末端分泌シグナル配列：MGWSCIILFLVATATGVHS（配列番号１１）を有した。本明細書中の別の箇所で示される通り、一部の適用について、ＩＬ－３６コンストラクトは、検出または捕捉目的のための以下のＣ末端「ＧＳ－ＡｖｉＴａｇ」（ＩＬ－３６－Ａｖｉ）：GGGGSGLNDIFEAQKIEWHE（配列番号１０）を含んだ。
【0208】
ＩＬ－３６コンストラクトタンパク質を、Ｏｎｅ Ｓｈｏｔ ＢＬ２１（ＤＥ３）化学的コンピテント・イー・コリ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、米国）において、製造業者のプロトコールに従って発現させた。標準のＩＰＴＧ（１ｍＭ）誘導プロトコールを、カナマイシン（２５μｇ／ｍＬ）選択を伴うＬＢブロス中で行った。誘導後、細胞を２５℃で２０～２４時間増殖させ、ペレットとして採取した。リゾチーム（１００μｇ／ｍＬ）およびプロテアーゼ阻害剤中での標準の超音波手順を行って、イー・コリペレットから可溶性タンパク質を抽出した。清澄な上清を、２０ｍＭイミダゾール（ｐＨ７．５）で補完し、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ（ＴＢＳ）、２０ｍＭイミダゾール（ｐＨ７．５）中で平衡化したＨｉｓＴｒａｐ ＦＦクルード（ｃｒｕｄｅ）カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）に適用した。タンパク質を、１００％ＴＢＳ、５００ｍＭイミダゾール（ｐＨ７．５）への１０ＣＶ勾配により溶出した。Ｈｉｓ－ＳＵＭＯプロテアーゼ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、米国）またはＨｉｓ－ＴＥＶプロテアーゼ（ＡＴＵＭ、Ｎｅｗａｒｋ、ＣＡ、米国）のいずれかによって製造業者のプロトコールに従って、以下の改変を伴って、Ｎ末端融合タグを切断した後、ＩＬ－３６タンパク質コンストラクトの成熟型が生成された：ＳＵＭＯプロテアーゼを、１０ｍＭ ＤＴＴにより５分間事前処理し、その後、１０ｍＭ ＤＴＴを伴うＴＢＳ（ｐＨ７．５）を含有する、２５℃で１８～２４時間の反応物において使用した（１μｇの基質につき約０．０２ユニット）；ＴＥＶプロテアーゼを、２５℃で２時間の反応において使用した（５０μｇ／ｍＬ）。プロテアーゼ処理後、ＨｉｓＴｒａｐ ＦＦカラムを使用して親和性精製を行って、切断されたタグを除去し、素通り画分を保持し、その後、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５インクリーズ（ｉｎｃｒｅａｓｅ）カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）上にロードした。単量体タンパク質を含有するピーク画分をプールし、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ（ＨＢＳ）、ｐＨ７．５、０．０２％ＮａＮ３中に保存した。
【0209】
Ｃ末端Ｆｃ融合ＩＬ－３６Ｒａタンパク質を、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、米国）において製造業者のプロトコールに従って発現させた。細胞を６日後に採取し、清澄な上清を、ＴＢＳ中で平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）に適用した。タンパク質を、２０ｍＭシトレート（ｐＨ２．９５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ（ＣＢＳ）中に溶出し、１／２５容量の１．５Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．８）により即座に中和した。Ｃ末端Ｆｃタグを、Ｈｉｓ－ＴＥＶプロテアーゼを以前に説明したように使用して除去し、続いて、ＨｉｓＴｒａｐ ＦＦとＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラムとの組合せを使用して親和性精製して、精製タグおよびＨｉｓ－ＴＥＶプロテアーゼを除去した。次なる、素通り画分の精製を、以前にＩＬ－３６タンパク質について説明したように進めた。
【0210】
一部の適用について、ＩＬ－３６タンパク質を、ランダムに、または部位特異的にビオチニル化した。ＩＬ－３６タンパク質のランダムビオチニル化のために、ＮＨＳ－ＰＥＧ４－ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、米国）を製造業者の説明書に従って使用した。ＩＬ－３６－Ａｖｉタンパク質の部位特異的ビオチニル化のために、イー・コリを、ＩＬ－３６－ＡｖｉとＢｉｒＡビオチンリガーゼとを発現するプラスミド（Ａｖｉｄｉｔｙ、Ａｕｒｏｒａ、ＣＯ製、米国のｐＢｉｒＡｃｍプラスミド）により共形質転換した。開始培養工程中にクロラムフェニコール（１０ｕｇ／ｍＬ）の添加を伴って、ＩＰＴＧ誘導を以前に説明されるように行い、インビボビオチニル化のための誘導工程中のＢｉｒＡ遺伝子および５０ｕＭ ｄ－ビオチンによる二重選択を行った。
【実施例2】
【0211】
酵母ディスプレイ法を使用する抗ヒトＩＬ－３６抗体の生成、スクリーニングおよびさらなる特徴付けのための選択
酵母ディスプレイによる抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体の選択
ヒトＩＬ－３６α（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ヒトＩＬ－３６β（Ｎｏｖｕｓ）およびヒトＩＬ－３６γ（Ｎｏｖｕｓ）の市販品を、Ｎ末端切断（活性）型として得た。酵母選択およびスクリーニング目的のために、これらのＩＬ－３６タンパク質を、ＮＨＳ－ＰＥＧ４－ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用してビオチニル化するか、またはＮＨＳ－４ｘＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してＤｙＬｉｇｈｔ－６５０により、製造業者のプロトコールに従って１～３：１の標識：タンパク質の比を目標にして標識化した。
酵母ディスプレイによる抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体の選択
ヒトＩＬ－３６α（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ヒトＩＬ－３６β（Ｎｏｖｕｓ）およびヒトＩＬ－３６γ（Ｎｏｖｕｓ）の市販品を、Ｎ末端切断（活性）型として得た。酵母選択およびスクリーニング目的のために、これらのＩＬ－３６タンパク質を、ＮＨＳ－ＰＥＧ４－ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用してビオチニル化するか、またはＮＨＳ－４ｘＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してＤｙＬｉｇｈｔ－６５０により、製造業者のプロトコールに従って１～３：１の標識：タンパク質の比を目標にして標識化した。
【0212】
酵母の表面上にディスプレイしたヒト抗体ライブラリー（米国特許第１０，０１１，８２９号）を使用して、ｈｕ－ＩＬ－３６を認識する抗体を生成した。米国特許第１０，０１１，８２９号（これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる）で説明される方法に従って、酵母ディスプレイライブラリーを生成して、５つのＶＨ、４つのＶκおよび１つのＶλ遺伝子セグメントに基づくＦａｂ断片をディスプレイした。ＣＤＲにおけるアミノ酸多様性を改善し、一方で、抗体フレームワーク領域における生殖系配列を保持するために、２５個のサブライブラリーを合理的に設計した。操作したＣＤＲにおけるアミノ酸利用は、３５０，０００個を超える天然に存在するヒト抗体クローンによるディープシークエンシングデータセットから生成したヒト抗体データベースにおけるそれらの可変領域サブファミリーについて観察されるアミノ酸利用に適合した。ライブラリーを、ｈｕ－ＩＬ－３６を結合することができる抗体を特定するために使用するための方法は、富化またはソーティングプロセスから採取したライブラリーまたは酵母細胞を増幅すること、および抗原によるＦＡＣＳソーティングのための酵母の表面上の抗体発現の誘導のための方法を含み、米国特許第１０，０１１，８２９号で説明されるように行った。
【0213】
異なるＶＨ－ＶκまたはＶＨ－Ｖλの組合せに基づく個々のライブラリーからなるマスターヒト抗体ライブラリーを、２つのプール（ライブラリー１～１３およびライブラリー１４～２５）に分けて、磁気活性化細胞ソーティング（ＭＡＣＳ）によるｈｕ－ＩＬ－３６を認識するクローンについての効率的な初期富化を可能にした。ライブラリーを、元のライブラリータイターの３倍まで増殖させ、酵母を、２％ガラクトースを含有する誘導培地により２０℃で増殖させることによって抗体発現について誘導した。３回のＭＡＣＳを行い、各回から採取した細胞を、採取した酵母細胞の数の１０倍が次の回のＭＡＣＳに使用されるように、増幅した。
【0214】
ＭＡＣＳ選択のために、ビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよびｈｕ－ＩＬ－３６γタンパク質を、共にプールした。逐次的な３回のＭＡＣＳ富化において、各ライブラリー酵母細胞プールを、それぞれ３００ｎＭのビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよびｈｕ－ＩＬ－３６γと共にインキュベートした。４℃において回転しながら２時間インキュベートした後、細胞を洗浄し、３ｍＬのストレプトアビジンコーティングした磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）を、各プールに添加した。４℃において回転しながら１時間インキュベートした後、抗原結合細胞を、ＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）を使用して磁気活性化ビーズソーティングによってソーティングした。２つのライブラリープールから採取した細胞を、収集し、プールし、１０倍に一晩増幅し、その後、第２のＭＡＣＳ選択に供し、これは、バキュロウイルスおよびストレプトアビジンコーティングしたビーズによる事前除去のための枯渇、ならびにその後、残りの酵母細胞を、３００ｎＭの３種のビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６サイトカインの各々とインキュベートすることを含んだ。第３回のＭＡＣＳから採取した入力プールのパーセントは、９．７％であった。
【0215】
ｈｕ－ＩＬ－３６タンパク質についての高親和性酵母クローンを特定するためのＦＡＣＳソーティング実験を行う前に、非特異的結合を最小限にするために、異なる結合緩衝液を試験した。ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６βのための最も優れた結合緩衝液は、０．５％ウシ血清アルブミン（ＶＷＲ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｒａｄｎｏｒ、ＰＡ、米国）を含有するＰＢＳであり、一方で、ｈｕ－ＩＬ－３６γによる実験は、バックグラウンド結合を最小限にするために濾過済み可溶化５％粉乳（ＬａｂＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｈｉｇｈｌａｎｄｓ、ＮＪ、米国）を含有するＰＢＳを必要とした。
【0216】
選択された結合緩衝液を含有する別々のアリコート中の１５０ｎＭの各ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６サイトカインを使用して、かつストレプトアビジン－ＰＥを二次検出試薬として使用して、ＦＡＣＳ１を行った。抗原陽性細胞を収集し、１０倍増幅し、ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０により標識したｈｕ－ＩＬ－３６タンパク質およびＦＡＣＳ１と同じ緩衝液条件を使用する追加の２回のＦＡＣＳ（ＦＡＣＳ２およびＦＡＣＳ３）に使用した。ＦＡＣＳ３において採取した抗原陽性細胞のパーセントは、ｈｕ－ＩＬ－３６αについて２．３％、ｈｕ－ＩＬ－３６βについて１．０％、およびｈｕ－ＩＬ－３６γについて１１．４％であった。最も高い蛍光強度平均値を有する抗原陽性細胞の０．２％を播き、個々のクローンを選択して、深型ウェルプレートに入れ、誘導培地により４８時間培養して、Ｆａｂ断片の培養上清への分泌を誘導した。酵母培養物を採取し、細胞を遠心分離によって除去し、その後、Ｆａｂ含有上清を、ＥＬＩＳＡによりそれらの各々の抗原への結合活性について試験した。
【0217】
酵母培養上清によるＥＬＩＳＡのために、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、２５０ｎｇ／ウェルのニュートラアビジン（ｎｅｕｔｒａｖｉｄｉｎ）によりコーティングし、０．５％ＢＳＡを含有するＰＢＳ（「ブロッキング緩衝液」）によりブロックし、その後、１ウェルにつき２５０ｎｇのビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βまたはｈｕ－ＩＬ－３６γを添加した。洗浄後、２０μＬの培養培地および３０μＬのブロッキング緩衝液を添加し、プレートを室温で１時間揺らしながらインキュベートし、洗浄し、結合したＦａｂを抗ヒト－Ｆａｂ ＨＲＰにより検出した。これらの単一のサイトカインソーティングからのクローンの大多数は、この一次ＥＬＩＳＡにおいてそれらが選択されたｈｕ－ＩＬ－３６サイトカインへの結合活性を示した。全ての３種のｈｕ－ＩＬ－３６サイトカインについての結合親和性を試験する二次ＥＬＩＳＡにおいて、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γの両方に結合する（が、ｈｕ－ＩＬ－３６βには結合しない）クローンが観察された。それゆえ、２回のＦＡＣＳソーティング策を遂行して、ｈｕ－ＩＬ－３６α／γ－交差反応性クローンを特定した。
【0218】
ｈｕ－ＩＬ－３６α／ｈｕ－ＩＬ－３６γ－交差反応性抗体の特定および選択
ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γの両方を認識することができるクローンを選択するために使用された第１のソーティング策において、１５０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６αによるＦＡＣＳ３において得られた細胞（２．３％抗原陽性）を、１０倍増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６αによりソーティングし、１５．５％の抗原陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ４）。これらの細胞を増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６γにより染色し、２９．１％の抗原陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ５ＡＧ）。ＦＡＣＳ５ＡＧにおいて回収した細胞を、１０倍増幅し、１０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６γおよび１０ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６α（ストレプトアビジン－ＰＥにより検出される）により染色し、７．３％のＩＬ－３６α／γ二重陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ６ＡＧ）。ＦＡＣＳ６ＡＧにおいて回収した細胞を、１０倍増幅し、１０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６αおよび１０ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６γ（ストレプトアビジン－ＰＥにより検出される）により染色し、１．０％のＩＬ－３６α／γ二重陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ７ＡＧ）。
ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γの両方を認識することができるクローンを選択するために使用された第１のソーティング策において、１５０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６αによるＦＡＣＳ３において得られた細胞（２．３％抗原陽性）を、１０倍増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６αによりソーティングし、１５．５％の抗原陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ４）。これらの細胞を増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６γにより染色し、２９．１％の抗原陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ５ＡＧ）。ＦＡＣＳ５ＡＧにおいて回収した細胞を、１０倍増幅し、１０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６γおよび１０ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６α（ストレプトアビジン－ＰＥにより検出される）により染色し、７．３％のＩＬ－３６α／γ二重陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ６ＡＧ）。ＦＡＣＳ６ＡＧにおいて回収した細胞を、１０倍増幅し、１０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６αおよび１０ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６γ（ストレプトアビジン－ＰＥにより検出される）により染色し、１．０％のＩＬ－３６α／γ二重陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ７ＡＧ）。
【0219】
ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γの両方を認識することができるクローンを選択するために使用された第２のソーティング策において、１５０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６γによるＦＡＣＳ３において得られた細胞（１１．４％抗原陽性）を、１０倍増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６αによりソーティングし、抗原陽性細胞を選択した（ＦＡＣＳ４ＧＡ）。これらの細胞を増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６αおよび１００ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６γ（ストレプトアビジン－ＰＥにより検出される）により染色し、１．０％のＩＬ－３６α／γ二重陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ５ＧＡ）。ＦＡＣＳ５ＧＡにおいて回収した細胞を、１０倍増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ｈｕＩＬ－３６α（ストレプトアビジン－ＰＥにより検出される）および１００ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６γにより染色し、８．０％のＩＬ－３６α／γ二重陽性細胞を得た（ＲＦＡＣＳ６ＧＡ）。ＲＦＡＣＳ６ＧＡにおいて回収した細胞を、１０倍増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６αおよび１００ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６γ（ストレプトアビジン－ＰＥにより検出される）で染色し、１．３％のＩＬ－３６α／γ二重陽性細胞を得た（ＲＦＡＣＳ７ＧＡ）。
【0220】
最も高い蛍光強度平均値を有するＦＡＣＳ７ＡＧおよびＲＦＡＣＳ７ＧＡからのＩＬ－３６α／γ二重陽性細胞の０．２％を播き、個々のクローンを選択し、培養し、その後、Ｆａｂ含有上清を、上記に説明される通り、ＥＬＩＳＡによって、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γへの結合活性について試験した。ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γの両方に結合する８７個のクローンを、シークエンシングに選択した。
【0221】
選択した酵母クローンについての抗体配列を得るために、酵母クローンからプラスミドＤＮＡを抽出し、酵母プロモーター領域に結合するフォワードプライマーと、重鎖についてヒトＩｇＧ１－ＣＨ１領域の定常領域および軽鎖についてカッパまたはラムダ鎖の定常領域に結合するリバースプライマーとを使用するＰＣＲに使用した。その後、ＰＣＲ産物を、ＰＣＲ反応に使用したのと同じプライマーを使用して、サンガー（Ｓａｎｇｅｒ）シークエンシングによってシークエンシングした。
【0222】
８７個のｈｕ－ＩＬ－３６α／γ交差反応性クローンは、配列によって３０個の独特なクローンを示した。
【0223】
ｈｕ－ＩＬ－３６β反応性抗体の特定および選択
ｈｕ－ＩＬ－３６βを認識することができるクローンを選択するために使用されたソーティング策において、１５０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６βによるＦＡＣＳ３において得られた細胞（１．０％抗原陽性）を、１０倍増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６βによりソーティングし、ストレプトアビジン－ＰＥにより検出し、１３．１％の抗原陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ４Ｂ）。これらの細胞を増幅し、２０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６βにより染色し、５．８％のＩＬ－３６β陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ５Ｂ）。
ｈｕ－ＩＬ－３６βを認識することができるクローンを選択するために使用されたソーティング策において、１５０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６βによるＦＡＣＳ３において得られた細胞（１．０％抗原陽性）を、１０倍増幅し、１００ｎＭ ＰＥＧ４－ビオチン－ＩＬ－３６βによりソーティングし、ストレプトアビジン－ＰＥにより検出し、１３．１％の抗原陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ４Ｂ）。これらの細胞を増幅し、２０ｎＭ ＰＥＧ－Ｄｙｌｉｇｈｔ－６５０－ｈｕＩＬ－３６βにより染色し、５．８％のＩＬ－３６β陽性細胞を得た（ＦＡＣＳ５Ｂ）。
【0224】
最も高い蛍光強度平均値を有するＦＡＣＳ５ＢからのＩＬ－３６β陽性細胞の０．２％を播き、個々のクローンを選択し、培養し、その後、Ｆａｂ含有上清を、上記に説明される通り、ＥＬＩＳＡによって、それらの各々の抗原への結合活性について試験した。このソーティングからのクローンの大多数は、ＩＬ－３６βへの結合活性を示した。
【0225】
全部で８３個のＩＬ３６ＢＳ７クローンを、上記に説明されるようにシークエンシングし、８個の独特なクローンを得た。
【0226】
Ｂ．抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体を含有する酵母細胞上清のインビトロスクリーニング
目的の酵母クローンからの細胞上清を、上記に説明される通り、ＥＬＩＳＡによってヒトＩＬ－３６への結合について試験した。これらの上清のヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６への結合を比較するために、ＩＬ－３６タンパク質により、９６ウェルＮｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を２．５μｇ／ｍＬでコーティングし、プレートをＰＢＳ中の５％ヤギ血清によりブロックした。酵母上清を、１％ｗ／ｖ ＢＳＡを含有するＰＢＳＴにより１：１希釈し、ＥＬＩＳＡプレートに攪拌しながら１～１．５時間添加した。プレートをＦ（ａｂ’）２－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を伴ってインキュベートすることによって、結合したＦａｂを検出した。ＥＬＩＳＡを、５０μＬ／ウェルのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）マイクロウェルペルオキシダーゼ基質（Ｓｃｙｔｅｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ、米国）の添加によって３～１０分間現像し、酵素による発色現像を、５０μＬ／ウェルの２Ｎ Ｈ２ＳＯ４（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、米国）による酸化によって停止した。４５０ｎｍの波長（ＯＤ４５０）における試料の光学密度を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３Ｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＬＬＣ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ、米国）により解析した。このアッセイにおける各クローンの、カニクイザルＩＬ－３６およびヒトＩＬ－３６についての相対的親和性を見積もるために、ＯＤ４５０の比（ＯＤ４５０ｃｙＩＬ－３６／ＯＤ４５０ｈｕＩＬ－３６）を各クローンおよびＩＬ－３６サイトカインについて計算した。８つの抗ＩＬ－３６Ｆａｂクローン（ｍＡｂ１．０～ｍＡｂ８．０）をさらなる特徴付けのために選択し、結果を表３に示す。
目的の酵母クローンからの細胞上清を、上記に説明される通り、ＥＬＩＳＡによってヒトＩＬ－３６への結合について試験した。これらの上清のヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６への結合を比較するために、ＩＬ－３６タンパク質により、９６ウェルＮｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を２．５μｇ／ｍＬでコーティングし、プレートをＰＢＳ中の５％ヤギ血清によりブロックした。酵母上清を、１％ｗ／ｖ ＢＳＡを含有するＰＢＳＴにより１：１希釈し、ＥＬＩＳＡプレートに攪拌しながら１～１．５時間添加した。プレートをＦ（ａｂ’）２－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を伴ってインキュベートすることによって、結合したＦａｂを検出した。ＥＬＩＳＡを、５０μＬ／ウェルのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）マイクロウェルペルオキシダーゼ基質（Ｓｃｙｔｅｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ、米国）の添加によって３～１０分間現像し、酵素による発色現像を、５０μＬ／ウェルの２Ｎ Ｈ２ＳＯ４（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、米国）による酸化によって停止した。４５０ｎｍの波長（ＯＤ４５０）における試料の光学密度を、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３Ｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＬＬＣ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ、米国）により解析した。このアッセイにおける各クローンの、カニクイザルＩＬ－３６およびヒトＩＬ－３６についての相対的親和性を見積もるために、ＯＤ４５０の比（ＯＤ４５０ｃｙＩＬ－３６／ＯＤ４５０ｈｕＩＬ－３６）を各クローンおよびＩＬ－３６サイトカインについて計算した。８つの抗ＩＬ－３６Ｆａｂクローン（ｍＡｂ１．０～ｍＡｂ８．０）をさらなる特徴付けのために選択し、結果を表３に示す。
【0227】
【表4】
【0228】
Ｃ．Ｆａｂ上清の遮断効力を決定するための細胞ベースのアッセイ
本実施例および以下の実施例において説明されるＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞系は、ＨＥＫ－２９３細胞系（ヒト胚腎臓上皮細胞）を元の親系統として使用する。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞を、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、米国；カタログ番号ｈｋｂ－ｉｌ３３）から得た。これらのＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βセンサー細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ；カタログ番号ｈｋｂ－ｉｌ１ｂ）の、ＩＬ－３３受容体ＳＴ２を発現するヒトＳＴ２遺伝子による安定なトランスフェクションによって生成された。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１β細胞は、ＮＦ－κＢ／ＡＰ－１ ＳＥＡＰ（分泌性胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を発現し、不活性化ＴＮＦ－α応答を含有して、ＳＥＡＰ産生がＩＬ－１またはＩＬ－３３経路活性化の表示であることを確実にする。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３応答細胞は、製造業者のガイドラインに従って維持した。簡潔に説明すると、細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｆｌｏｗｅｒｙ Ｂｒａｎｃｈ、ＧＡ、米国）、１００ＩＵ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンで補完したＤＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、米国）からなる標準の増殖培地中で維持した。増殖培地を、ＳＥＡＰをコードするプラスミドを維持するための１００μｇ／ｍＬゼオシン（ｚｅｏｃｉｎ）、ＩＬ－１特異性を維持するための２００μｇ／ｍＬハイグロマイシンＢ、およびＳＴ２をコードするプラスミドを維持するための１００μｇ／ｍＬブラストサイジンでさらに補完した。ＩＬ－３６受容体をコードする、ヒトＩＬ１ＲＬ２遺伝子を含有するプラスミドは、ＡｖａｎｔＧｅｎによって生成された（特別注文）。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞を、ＬｙｏＶｅｃ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を使用して製造業者のガイドラインに従って一過性にトランスフェクトした。簡潔に説明すると、ＬｙｏＶｅｃ－ＤＮＡ複合体を、標準の増殖培地中に懸濁した細胞に、トランスフェクション２４時間後に最低で８０％のコンフルエンシーを産生し得る濃度において直接添加し、９６ウェル平底プレートに即座に播いた。トランスフェクション２４時間後、細胞を、標準のＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＳＥＡＰアッセイ内で使用した。
本実施例および以下の実施例において説明されるＨＥＫ－Ｂｌｕｅ細胞系は、ＨＥＫ－２９３細胞系（ヒト胚腎臓上皮細胞）を元の親系統として使用する。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞を、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、米国；カタログ番号ｈｋｂ－ｉｌ３３）から得た。これらのＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１βセンサー細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ；カタログ番号ｈｋｂ－ｉｌ１ｂ）の、ＩＬ－３３受容体ＳＴ２を発現するヒトＳＴ２遺伝子による安定なトランスフェクションによって生成された。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１β細胞は、ＮＦ－κＢ／ＡＰ－１ ＳＥＡＰ（分泌性胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を発現し、不活性化ＴＮＦ－α応答を含有して、ＳＥＡＰ産生がＩＬ－１またはＩＬ－３３経路活性化の表示であることを確実にする。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３応答細胞は、製造業者のガイドラインに従って維持した。簡潔に説明すると、細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｆｌｏｗｅｒｙ Ｂｒａｎｃｈ、ＧＡ、米国）、１００ＩＵ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンで補完したＤＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ、米国）からなる標準の増殖培地中で維持した。増殖培地を、ＳＥＡＰをコードするプラスミドを維持するための１００μｇ／ｍＬゼオシン（ｚｅｏｃｉｎ）、ＩＬ－１特異性を維持するための２００μｇ／ｍＬハイグロマイシンＢ、およびＳＴ２をコードするプラスミドを維持するための１００μｇ／ｍＬブラストサイジンでさらに補完した。ＩＬ－３６受容体をコードする、ヒトＩＬ１ＲＬ２遺伝子を含有するプラスミドは、ＡｖａｎｔＧｅｎによって生成された（特別注文）。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞を、ＬｙｏＶｅｃ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を使用して製造業者のガイドラインに従って一過性にトランスフェクトした。簡潔に説明すると、ＬｙｏＶｅｃ－ＤＮＡ複合体を、標準の増殖培地中に懸濁した細胞に、トランスフェクション２４時間後に最低で８０％のコンフルエンシーを産生し得る濃度において直接添加し、９６ウェル平底プレートに即座に播いた。トランスフェクション２４時間後、細胞を、標準のＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＳＥＡＰアッセイ内で使用した。
【0229】
連続希釈系列からなるアゴニスト用量応答曲線を生成して、アッセイにおいて使用されるアゴニストの最大半量の有効濃度（ＥＣ５０）の見積もりを得た。以下の市販のヒトサイトカイン：ＩＬ－３６α（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＩＬ－３６β（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）およびＩＬ－３６γ（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）を、一部のＨＥＫ－Ｂｌｕｅアッセイにおいてアゴニストとして使用した。実験使用の２４時間前に、一過性にトランスフェクトした細胞を、９６ウェル平底プレートに、使用時に最低で８０％のコンフルエンシーをもたらす濃度において播いた。所望のアゴニストを、細胞に、最終容量が２００μＬになるように添加し、細胞を３７℃において５％ＣＯ２にて２４時間インキュベートした。ＳＥＡＰ産生を、ＳＥＡＰ検出アッセイを使用して定量した。ＳＥＡＰ検出媒体ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を使用して、示される様々な条件内で、かつ製造業者の一般ガイドラインに従ってＳＥＡＰのレベルを決定した。特に、２０μＬの細胞培養上清（アゴニスト添加２４時間後に収集した）を、１３０μＬのＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ検出媒体に添加した。反応を、３７℃において１時間進行させ、この点で、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）分光光度計を、ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）と共に使用して、６５０ｎｍの波長の吸光度を測定した。生アッセイデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ソフトウェアを使用して解析して、アッセイにおけるアゴニストＥＣ５０値の非線形回帰決定を行った。
【0230】
酵母細胞培養上清（ＳＮ）中の非精製抗ｈｕ－ＩＬ－３６Ｆａｂ断片のＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＳＥＡＰアッセイを、上記に説明される通りであるが、以下の改変を伴って行った。抗ｈｕ－ＩＬ－３６Ｆａｂ断片を含有する非精製酵母細胞培養物ＳＮを、２０倍濃縮し、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＳＥＡＰアッセイにおけるバックグラウンドノイズを低減するためにＰＢＳに緩衝液交換した（１：２０）。４０μＬのＰＢＳ、および抗ｈｕ－ＩＬ－３６Ｆａｂ断片を含有する１０μＬの濃縮および緩衝液交換した酵母細胞培養物ＳＮを、ＩＬ－３６ＲをトランスフェクトしたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３細胞に添加した。細胞および抗体含有ハイブリドーマ細胞培養物ＳＮを、３７℃において５％ＣＯ２にて１時間インキュベートした。１時間の抗体インキュベーション後、アゴニストを、所望の濃度の４倍で、かつ２００μＬの全容量内で最終的な所望の濃度の１倍をもたらすように、細胞および抗体を含有するウェルに添加した。試料（この場合、抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体含有酵母細胞培養物ＳＮ）から得た吸光度値の、陽性対照（無関係のＦａｂを含有する酵母細胞培養物ＳＮの存在下においてのみアゴニストに曝露した細胞）に関する比を決定し、この比を１００倍することによって、阻害パーセントを計算した。
【0231】
さらなる特徴付けのために選択した８つの抗ＩＬ－３６Ｆａｂクローン（ｍＡｂ１．０～ｍＡｂ８．０）についての結果を、以下の表４に示す。また、選択したクローンの配列を、表２および付属の配列表において開示する。
【0232】
【表5】
【0233】
表３および４において要約される、抗体の観察された結合および遮断活性に基づいて、ＩＬ－３６α／ＩＬ－３６γ交差反応性抗体のうちの５つ（ｍＡｂ１．０～ｍＡｂ５．０）、およびＩＬ－３６β反応性抗体のうちの３つ（ｍＡｂ６．０～ｍＡｂ８．０）を、さらなる特徴付けのために、組換えヒトＩｇＧ１および切断型Ｆａｂ断片として産生した。製造業者の説明書に従って、ＩｇＧを、Ｅｘｐｉ２９３またはＥｘｐｉＣＨＯ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）における、それらの重鎖および軽鎖をコードする哺乳動物発現プラスミドの一過性コトランスフェクションによって産生した。細胞を５～７日後に採取し、清澄な上清を、ＴＢＳ中で平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）に適用した。タンパク質を２０ｍＭシトレート（ｐＨ２．９５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ（ＣＢＳ）中で溶出し、１／２５容量の１．５Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ ８．８）により即座に中和した。Ｆａｂ断片を、ｌｙｓｙｌ－Ｃ（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）切断によって産生した。簡潔に説明すると、Ｌｙｓｙｌ－Ｃ切断を、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ８．０）を含有するＰＢＳ中で３７℃において穏やかに攪拌しながら１時間行い、反応を５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）中へ１０倍希釈することによって停止させた。試料を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）中で平衡化したＳＰ－ＨＰカチオン交換カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）に適用し、１００％１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）、１Ｍ ＮａＣｌへの３０カラム容量勾配により溶出することによって、Ｆａｂ断片を精製した。Ｆａｂを含有する画分をプールし、濃縮し、ＰＢＳに緩衝液交換した。
【0234】
Ｄ．選択した抗ＩＬ－３６抗体の結合速度論解析
ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を使用して、精製したｍＡｂ２．０ Ｆａｂのｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γについての結合親和性；ならびに精製したｍＡｂ６．０ Ｆａｂのｈｕ－ＩＬ－３６βについての結合親和性を決定した。簡潔に説明すると、Ｂｉｏｔｉｎ ＣＡＰｔｕｒｅ試薬（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）の、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国；０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）への１：４希釈液を、ＣＡＰセンサーチップに２μＬ／分の流速において適用した。速度論測定のために、１２．５ｎＭのビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γ；６ｎＭのビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６βを、１０μＬ／分で捕捉して、第２のフローセル（ＦＣ２）における２５～４０応答単位を達成した。ＦＣ１を標準として維持した。次に、低（０．７８ｎＭのｍＡｂ２．０ Ｆａｂ、１．５６ｎＭのｍＡｂ６．０ Ｆａｂ）～高（１００ｎＭのｍＡｂ２．０ Ｆａｂ、２００ｎＭのｍＡｂ６．０ Ｆａｂ）の、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国；０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）中のＦａｂタンパク質の２倍連続希釈液を、２５℃または３７℃のいずれかにおいて注入した（流速：３０μＬ／分）。センサー図を記録し、標準および緩衝液減算に供し、その後、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ評価ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国；第１．１．１．７４４２版）によりデータ解析した。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算した。
ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を使用して、精製したｍＡｂ２．０ Ｆａｂのｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γについての結合親和性；ならびに精製したｍＡｂ６．０ Ｆａｂのｈｕ－ＩＬ－３６βについての結合親和性を決定した。簡潔に説明すると、Ｂｉｏｔｉｎ ＣＡＰｔｕｒｅ試薬（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）の、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国；０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）への１：４希釈液を、ＣＡＰセンサーチップに２μＬ／分の流速において適用した。速度論測定のために、１２．５ｎＭのビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γ；６ｎＭのビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６βを、１０μＬ／分で捕捉して、第２のフローセル（ＦＣ２）における２５～４０応答単位を達成した。ＦＣ１を標準として維持した。次に、低（０．７８ｎＭのｍＡｂ２．０ Ｆａｂ、１．５６ｎＭのｍＡｂ６．０ Ｆａｂ）～高（１００ｎＭのｍＡｂ２．０ Ｆａｂ、２００ｎＭのｍＡｂ６．０ Ｆａｂ）の、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国；０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）中のＦａｂタンパク質の２倍連続希釈液を、２５℃または３７℃のいずれかにおいて注入した（流速：３０μＬ／分）。センサー図を記録し、標準および緩衝液減算に供し、その後、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ評価ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国；第１．１．１．７４４２版）によりデータ解析した。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア（Ｌａｎｇｍｕｉｒ）結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算した。
【0235】
ｍＡｂ２．０ ＦａｂおよびｍＡｂ６．０ ＦａｂについてのＢｉａｃｏｒｅ親和性結果を、以下の表５に要約する。
【0236】
【表6】
【0237】
Ｅ．細胞ベースのアッセイにおける組換え抗ＩＬ－３６抗体の機能活性
ＨＥＫ Ｂｌｕｅレポーターアッセイにおける抗体のｈｕ－ＩＬ－３６遮断活性
８つの親酵母クローンに由来する組換え抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体、ｍＡｂ１．０～ｍＡｂ８．０を、ＩＬ－３６受容体、ＩＬ１ＲＬ２を一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞を使用して、ＩＬ１ＲＬ２／ＩＬ１ＲＡＰ経路のｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよびｈｕ－ＩＬ－３６γ媒介活性化を遮断する抗体の能力を決定するために試験した。
ＨＥＫ Ｂｌｕｅレポーターアッセイにおける抗体のｈｕ－ＩＬ－３６遮断活性
８つの親酵母クローンに由来する組換え抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体、ｍＡｂ１．０～ｍＡｂ８．０を、ＩＬ－３６受容体、ＩＬ１ＲＬ２を一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞を使用して、ＩＬ１ＲＬ２／ＩＬ１ＲＡＰ経路のｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよびｈｕ－ＩＬ－３６γ媒介活性化を遮断する抗体の能力を決定するために試験した。
【0238】
組換え抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体を使用するＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＳＥＡＰアッセイを、酵母細胞培養物ＳＮについて上記に説明されるアッセイと同様に行った。簡潔に説明すると、抗体を、標準の増殖培地内でアゴニストの非存在下において、細胞と３７℃で５％ＣＯ２にて１時間インキュベートした。１時間のインキュベーション後、見積もったＥＣ５０濃度の所望のアゴニストを、最終容量が２００μＬになるように添加し、実験をさらに２４時間進めた。陰性対照（ＮＣ）は、増殖培地のみに曝露された細胞を表し、一方で、陽性対照（ＰＣ）は、アゴニストのみ（アンタゴニスト抗体または対照抗体の非存在下において）に曝露された細胞を表す。
【0239】
抗体（以下の実施例で説明されるＦａｂを含む）の最大半量の阻害濃度（ＩＣ５０）を決定するために、７点連続希釈系列（示される濃度で開始して）を使用した。本明細書で説明されるアゴニスト用量応答曲線と同様に、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ソフトウェアを使用して非線形回帰解析を行って、アッセイ結果からＩＣ５０値を決定した。
【0240】
ｈｕ－ＩＬ－３６α（配列番号１）、ｈｕ－ＩＬ－３６β（配列番号２）およびｈｕ－ＩＬ－３６γ（配列番号３）を、以下のＨＥＫ－Ｂｌｕｅアッセイにおいてアゴニストとして使用した。用量応答を、ｍＡｂの全てについて行った。これらのＨＥＫ Ｂｌｕｅアッセイの結果を、以下の表６に示す。
【0241】
【表7】
【0242】
表６のＨＥＫ Ｂｌｕｅアッセイ結果によって示される通り、試験した全ての抗体のうち、ｍＡｂ２．０は、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γの両方について最も強力な遮断活性を実証し、一方で、ｍＡｂ６．０は、ｈｕ－ＩＬ－３６βについて強力な遮断活性を実証した。
【0243】
ＨＥＫ Ｂｌｕｅレポーターアッセイにおける抗体のｃｙ－ＩＬ－３６遮断活性
組換え抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体ｍＡｂ２．０およびｍＡｂ６．０を、ヒトＩＬ－３６受容体ＩＬ１ＲＬ２を一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞を使用して、ＩＬ１ＲＬ２／ＩＬ１ＲＡＰ経路のカニクイザルＩＬ－３６（ｃｙ－ＩＬ－３６α、ｃｙ－ＩＬ－３６βおよびｃｙ－ＩＬ－３６γ）媒介活性化を遮断する抗体の能力を決定するために試験した。カニクイザルＩＬ－３６を使用して行ったＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＳＥＡＰアッセイは、ヒトＩＬ－３６サイトカインについて上記に説明されるアッセイと同様に行った。ｃｙ－ＩＬ－３６α、ｃｙ－ＩＬ－３６βおよびｃｙ－ＩＬ－３６γを、このＨＥＫ－Ｂｌｕｅアッセイにおいてアゴニストとして使用した。１２点連続希釈系列からなるアゴニスト用量応答曲線を生成して、ヒトＩＬ１ＲＬ２／ＩＬ１ＲＡＰ経路を通したｃｙ－ＩＬ－３６サイトカインの強力なシグナル伝達を実証し、アッセイにおいて使用されるアゴニストの最大半量の有効濃度（ＥＣ５０）の見積もりを得た。抗体の最大半量の阻害濃度（ＩＣ５０）を決定するために、１１点連続希釈系列を使用した。以前に挙げるアゴニスト用量応答曲線と同様に、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ソフトウェアを使用して非線形回帰解析を行って、アッセイ結果からＩＣ５０値を決定した。用量応答を、全てのｍＡｂについて行った。ｍＡｂ２．０は、ｃｙ－ＩＬ－３６αおよびｃｙ－ＩＬ－３６γについて強力な遮断活性を実証し（それぞれ、ＩＣ５０ ０．５６ｎＭおよび１．７１ｎＭ）、一方で、ｍＡｂ６．０は、ｃｙ－ＩＬ－３６βについて強力な遮断活性を実証した（ＩＣ５０ １．９６ｎＭ）。
組換え抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体ｍＡｂ２．０およびｍＡｂ６．０を、ヒトＩＬ－３６受容体ＩＬ１ＲＬ２を一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１／ＩＬ－３３センサー細胞を使用して、ＩＬ１ＲＬ２／ＩＬ１ＲＡＰ経路のカニクイザルＩＬ－３６（ｃｙ－ＩＬ－３６α、ｃｙ－ＩＬ－３６βおよびｃｙ－ＩＬ－３６γ）媒介活性化を遮断する抗体の能力を決定するために試験した。カニクイザルＩＬ－３６を使用して行ったＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＳＥＡＰアッセイは、ヒトＩＬ－３６サイトカインについて上記に説明されるアッセイと同様に行った。ｃｙ－ＩＬ－３６α、ｃｙ－ＩＬ－３６βおよびｃｙ－ＩＬ－３６γを、このＨＥＫ－Ｂｌｕｅアッセイにおいてアゴニストとして使用した。１２点連続希釈系列からなるアゴニスト用量応答曲線を生成して、ヒトＩＬ１ＲＬ２／ＩＬ１ＲＡＰ経路を通したｃｙ－ＩＬ－３６サイトカインの強力なシグナル伝達を実証し、アッセイにおいて使用されるアゴニストの最大半量の有効濃度（ＥＣ５０）の見積もりを得た。抗体の最大半量の阻害濃度（ＩＣ５０）を決定するために、１１点連続希釈系列を使用した。以前に挙げるアゴニスト用量応答曲線と同様に、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ソフトウェアを使用して非線形回帰解析を行って、アッセイ結果からＩＣ５０値を決定した。用量応答を、全てのｍＡｂについて行った。ｍＡｂ２．０は、ｃｙ－ＩＬ－３６αおよびｃｙ－ＩＬ－３６γについて強力な遮断活性を実証し（それぞれ、ＩＣ５０ ０．５６ｎＭおよび１．７１ｎＭ）、一方で、ｍＡｂ６．０は、ｃｙ－ＩＬ－３６βについて強力な遮断活性を実証した（ＩＣ５０ １．９６ｎＭ）。
【0244】
ＨａＣａｔ細胞によるＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌における、抗ｈｕ－ＩＬ－３６抗体の遮断活性
ヒトケラチノサイト細胞系ＨａＣａｔは、組織学的に正常な皮膚からの、インビトロで自発的に形質転換されたケラチノサイトに由来する。ＨａＣａｔ細胞系は市販されており、ＡｄｄｅｘＢｉｏ（カタログ番号Ｔ００２０００）から得た。製造業者によって推奨される一般ガイドラインを使用して、低温保存された細胞を解凍し、維持した。ＨａＣａｔ細胞を、使用前に熱不活性化した（５６℃にて３０分間）１０％ウシ胎児血清（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、１００ＩＵ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で補完した、Ｌ－グルタミン、４．５ｇ／Ｌグルコースおよびピルビン酸ナトリウムを含むＤＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）からなる増殖培地において維持した。実験使用の前日に、ＨａＣａｔ細胞を、平底９６ウェルプレートに、使用日に約８０～８５％コンフルエンシーになるように細胞１０，０００個／ウェルにて播種した。
ヒトケラチノサイト細胞系ＨａＣａｔは、組織学的に正常な皮膚からの、インビトロで自発的に形質転換されたケラチノサイトに由来する。ＨａＣａｔ細胞系は市販されており、ＡｄｄｅｘＢｉｏ（カタログ番号Ｔ００２０００）から得た。製造業者によって推奨される一般ガイドラインを使用して、低温保存された細胞を解凍し、維持した。ＨａＣａｔ細胞を、使用前に熱不活性化した（５６℃にて３０分間）１０％ウシ胎児血清（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、１００ＩＵ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で補完した、Ｌ－グルタミン、４．５ｇ／Ｌグルコースおよびピルビン酸ナトリウムを含むＤＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）からなる増殖培地において維持した。実験使用の前日に、ＨａＣａｔ細胞を、平底９６ウェルプレートに、使用日に約８０～８５％コンフルエンシーになるように細胞１０，０００個／ウェルにて播種した。
【0245】
抗体遮断アッセイにおける使用前に、ＨＥＫ Ｂｌｕｅ細胞について実施例２において説明されるのと同様の様式であるが、以下の改変を伴って、アゴニスト用量応答曲線を行うことによって、アゴニスＥＣ５０を決定した。ＨａＣａｔ細胞増殖培地のみを含有するウェル内のＨａＣａｔ細胞へのアゴニストの添加（最終容量２００μＬ）後、細胞を、組織培養インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２にて）に２４時間戻した。その後、組織培養上清を回収し、－２０℃において保存した。
【0246】
抗体遮断アッセイを、ＨＥＫ Ｂｌｕｅ細胞についての上記の通りであるが、ＩＣ５０値を得るための様式で、特にＨａＣａｔ細胞利用を考慮する改変を伴って行った。簡潔に説明すると、抗ｈｕ－ＩＬ－３６ ＩｇＧ抗体、天然ＩＬ－３６アンタゴニストＩＬ－３６Ｒａまたは適切な抗体対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１ 対照）を、ＨａＣａｔ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いてアゴニスト（ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γ）を添加した。実験をさらに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２にて）進め、細胞培養上清を回収し、ＩＬ－８の定量を以下に説明されるように行った。
【0247】
ヒトＩＬ－８ ＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、製造業者のガイドラインに従って、上清内のＩＬ－８のレベルを定量した。得た生データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して解析し、線形回帰解析を使用して補間を行った。その後、補間したデータを、非線形回帰３パラメーター解析を使用して解析して、アゴニストＥＣ５０および抗体ＩＣ５０値を導いた。
【0248】
図１Ａおよび図１Ｃの結果によって示される通り、ＨａＣａｔヒトケラチノサイト細胞系において、ｍＡｂ２．０は、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γについて強力な遮断活性を実証し（それぞれ、ＩＣ５０ ０．２８ｎＭおよび１．２３ｎＭ）、一方で、図１Ｂで示される通り、ｍＡｂ６．０は、ｈｕ－ＩＬ－３６βについて強力な遮断活性を実証した（ＩＣ５０ ０．０８２ｎＭ）。ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γについてのｍＡｂ２．０の遮断効力は、天然アンタゴニストＩＬ－３６Ｒａの遮断効力よりも優れており（それぞれ、１００倍および１２倍）、ｈｕ－ＩＬ－３６βについてのｍＡｂ６．０の遮断効力は、ＩＬ－３６Ｒａの遮断効力よりも優れていた（１０００倍）。
【0249】
ヒト初代ケラチノサイトによるＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌を遮断することにおける、抗ＩＬ－３６抗体の活性
プールしたヒト初代新生児ケラチノサイト（ＨＥＫｎ）は、市販されており、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ（カタログ番号Ａ１３４０１）から得た。製造業者によって、細胞は、提供された正常な（疾患を有しない）ヒト組織から単離され、低温保存されていた。製造業者によって推奨される一般ガイドラインを使用して、細胞を解凍し、維持した。ＨＥＫｎ細胞を、ヒトケラチノサイト増殖補助物質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、１００ＩＵ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを伴うＥｐｉＬｉｆｅ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）からなる増殖培地において維持した。実験使用の前日に、ＨＥＫｎ細胞を、平底９６ウェルプレートに、使用日に約８０～８５％コンフルエンシーになるように細胞１０，０００個／ウェルにて播種した。
プールしたヒト初代新生児ケラチノサイト（ＨＥＫｎ）は、市販されており、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ（カタログ番号Ａ１３４０１）から得た。製造業者によって、細胞は、提供された正常な（疾患を有しない）ヒト組織から単離され、低温保存されていた。製造業者によって推奨される一般ガイドラインを使用して、細胞を解凍し、維持した。ＨＥＫｎ細胞を、ヒトケラチノサイト増殖補助物質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、１００ＩＵ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを伴うＥｐｉＬｉｆｅ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）からなる増殖培地において維持した。実験使用の前日に、ＨＥＫｎ細胞を、平底９６ウェルプレートに、使用日に約８０～８５％コンフルエンシーになるように細胞１０，０００個／ウェルにて播種した。
【0250】
抗体遮断アッセイにおける使用前に、ＨａＣａｔ細胞について実施例２において説明されるのと同様の様式であるが、以下の改変を伴って、アゴニスト用量応答曲線を行うことによって、アゴニスＥＣ５０を決定した。細胞増殖培地のみを含有するウェル内のＨＥＫｎ細胞へのアゴニストの添加（最終容量２００μＬ）後、細胞を、組織培養インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２にて）に２４時間戻した。その後、組織培養上清を回収し、－２０℃において保存した。
【0251】
抗体遮断アッセイを、ＨａＣａｔ細胞についての上記のように行った。簡潔に説明すると、ｘＩＬ－３６ ＩｇＧまたは適切な抗体対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨＥＫｎ細胞と、示される通り、３７℃において１時間インキュベートし、続いてアゴニスト（ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γ）を添加した。実験をさらに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２にて）進め、細胞培養上清を回収し、ＩＬ－８の定量を以下に説明されるように行った。
【0252】
ヒトＩＬ－８ ＥＬＩＳＡキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、製造業者のガイドラインに従って、上清内のＩＬ－８のレベルを定量した。得た生データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して解析し、線形回帰解析を使用して補間を行った。その後、補間したデータを、標準の非線形回帰３パラメーター解析を使用して解析して、アゴニストＥＣ５０および抗体ＩＣ５０値を導いた。
【0253】
図２Ａおよび図２ＣのＨＥＫｎアッセイ結果によって示される通り、ヒト初代成人ケラチノサイトにおいて、ｍＡｂ２．０は、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γについて強力な遮断活性を実証し（それぞれ、ＩＣ５０ ０．３３ｎＭおよび２．２７ｎＭ）、一方で、図２Ｂで示される通り、ｍＡｂ６．０は、ｈｕ－ＩＬ－３６βについて強力な遮断活性を実証した（ＩＣ５０ １．７５ｎＭ）。
【実施例3】
【0254】
ｈｕ－ＩＬ－３６βを結合および遮断することにおけるｍＡｂ６．０ ＨＣ／ｍＡｂ２．０ ＬＣキメラｍＡｂ６．０＿２．０の活性
ｍＡｂ６．０＿２．０を、ｍＡｂ６．０の重鎖とｍＡｂ２．０の軽鎖とをコトランスフェクトすることによって生成したことを除いては、上記の実施例２において説明される他のＩｇＧと同様に生成した。
ｍＡｂ６．０＿２．０を、ｍＡｂ６．０の重鎖とｍＡｂ２．０の軽鎖とをコトランスフェクトすることによって生成したことを除いては、上記の実施例２において説明される他のＩｇＧと同様に生成した。
【0255】
ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を使用して、ｍＡｂ６．０＿２．０ ＩｇＧのｈｕ－ＩＬ－３６βについての結合親和性を決定した。簡潔に説明すると、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国；０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）中の６ｎＭ ｍＡｂ６．０＿２．０ ＩｇＧまたはｍＡｂ６．０ ＩｇＧを、タンパク質Ａセンサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）上に１０μＬ／分で捕捉して、第２のフローセル（ＦＣ２）における５０～６０応答単位を達成した。ＦＣ１を標準として維持した。次に、低（０．０４６ｎＭのｈｕ－ＩＬ－３６β）～高（１００ｎＭのｈｕ－ＩＬ－３６β）の、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液中のｈｕ－ＩＬ－３６βの３倍連続希釈液を、３７℃のいずれかにおいて注入した（流速：３０μＬ／分）。センサー図を記録し、標準および緩衝液減算に供し、その後、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ評価ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国；第１．１．１．７４４２版）によりデータ解析した。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算した。
【0256】
ｍＡｂ６．０＿２．０ ＩｇＧは、ｈｕ－ＩＬ－３６βに６．７ｎＭのＫＤにより結合し（ｋｏｎ＝３．２０ｘ１０５ １／Ｍｓ、ｋｏｆｆ＝２．１４ｘ１０－３ １／ｓ）、一方で、ｍＡｂ６．０ ＩｇＧは、ｈｕ－ＩＬ－３６βに０．４２ｎＭのＫＤにより結合した（ｋｏｎ＝３．６２ｘ１０５ １／Ｍｓ、ｋｏｆｆ＝１．１５ｘ１０－４ １／ｓ）。したがって、ｍＡｂ６．０＿２．０は、ｈｕ－ＩＬ－３６βに、ｍＡｂ６．０の１６分の１の親和性により結合した。
【0257】
インビトロでのｍＡｂ６．０＿２．０ ＩｇＧの遮断効力および有効性を決定するために、本発明者らは、ＨａＣａｔ細胞によるｈｕ－ＩＬ－３６βにより刺激されたＩＬ－８分泌を阻害するＩｇＧの能力を評価した。ＨａＣａｔ細胞アッセイを、実施例２で説明されるように行った。簡潔に説明すると、ｍＡｂ６．０＿２．０ ＩｇＧ、ｍＡｂ６．０ ＩｇＧまたは適切な抗体対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨａＣａｔ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いて、ｈｕ－ＩＬ－３６βアゴニストを添加した。実験をさらに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２にて）進め、細胞培養上清を回収し、ＩＬ－８の定量を実施例２で説明されるように行った。その後、補間したデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアにおいて、標準の非線形回帰解析を使用して解析して、抗体ＩＣ５０値を導いた。
【0258】
ｍＡｂ６．０＿２．０ ＩｇＧは、ＨａＣａｔケラチノサイト細胞系によるｈｕ－ＩＬ－３６βにより刺激されたＩＬ－８分泌を、ｍＡｂ６．０ ＩｇＧの１６分の１の効力により阻害することが分かった（ｍＡｂ６．０＿２．０ ＩＣ５０＝１２．７ｎＭ；ｍＡｂ６．０ ＩＣ５０＝０．８ｎＭ）。
【実施例4】
【0259】
ファージライブラリーパニングを使用した抗ＩＬ－３６抗体の親和性成熟
この実施例は、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６α／γについての親和性が改善された、ｍＡｂ６．０＿２．０およびｍＡｂ２．０抗体の親和性成熟型の調製を例示する。
この実施例は、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６α／γについての親和性が改善された、ｍＡｂ６．０＿２．０およびｍＡｂ２．０抗体の親和性成熟型の調製を例示する。
【0260】
ピログルタメート変換を防ぐための突然変異
ピログルタメート変異型の形成を防ぐために、グルタミン（ＱまたはＧｌｎ）を、グルタメート（ＥまたはＧｌｕ）に突然変異させてもよい［Amphlett, G. et al., Pharm. Biotechnol., 9:1-140 (1996)］。ｍＡｂ２．０およびｍＡｂ６．０の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの１位（カバットの番号付けによる）を、遺伝子合成によってグルタミン（Ｑ）からグルタメート（Ｅ）に突然変異させ、抗体ｍＡｂ２、ｍＡｂ６およびｍＡｂ６＿２を得た。可変ドメインを、８ｘＨｉｓタグを含有する哺乳動物Ｆａｂ発現コンストラクトにクローニングして、Ｆａｂタンパク質を生成した。また、１位における同様の突然変異は、ｍＡｂ１．０、ｍＡｂ３．０、ｍＡｂ４．０、ｍＡｂ５．０、ｍＡｂ７．０およびｍＡｂ８．０において作製され得る。
ピログルタメート変異型の形成を防ぐために、グルタミン（ＱまたはＧｌｎ）を、グルタメート（ＥまたはＧｌｕ）に突然変異させてもよい［Amphlett, G. et al., Pharm. Biotechnol., 9:1-140 (1996)］。ｍＡｂ２．０およびｍＡｂ６．０の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインの１位（カバットの番号付けによる）を、遺伝子合成によってグルタミン（Ｑ）からグルタメート（Ｅ）に突然変異させ、抗体ｍＡｂ２、ｍＡｂ６およびｍＡｂ６＿２を得た。可変ドメインを、８ｘＨｉｓタグを含有する哺乳動物Ｆａｂ発現コンストラクトにクローニングして、Ｆａｂタンパク質を生成した。また、１位における同様の突然変異は、ｍＡｂ１．０、ｍＡｂ３．０、ｍＡｂ４．０、ｍＡｂ５．０、ｍＡｂ７．０およびｍＡｂ８．０において作製され得る。
【0261】
Ｂ． ｍＡｂ６＿２親和性成熟ＮＮＫライブラリー構築およびパニング
ｍＡｂ２軽鎖と対形成したｍＡｂ６重鎖（ｍＡｂ６＿２、１つのアームは、一般の軽鎖二重特異性分子用）の、ヒトＩＬ－３６βに対する親和性を改善するために、３２個のコドンにより全ての２０個のアミノ酸をコードするＮＮＫ縮重コドンを使用してランダム化した重鎖ＨＶＲ残基（すなわち、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２およびＨＶＲ－Ｈ３）により、一価のＦａｂファージディスプレイのためのＦａｂ－アンバー形式のｍＡｂ６＿２から、ファージライブラリーを構築した（Ｂｒｅｎｎｅｒら、１９９２）（ｍＡｂ２軽鎖残基は、変更されないままである）。３つの重鎖ＨＶＲのうちの各々において１つのＮＮＫ突然変異を可能にするようにライブラリーを設計した。その後、クンケル（Ｋｕｎｋｅｌ）突然変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌら、１９８７）を使用して、合成した突然変異誘発オリゴヌクレオチドを使用して、重鎖ライブラリーを構築した。得られたライブラリーＤＮＡを、電気穿孔によりイー・コリＸＬ１細胞に入れ、約４Ｘ１０９個の形質転換体を得た。ファージライブラリーを、ＳＵＰＥＲＢＬＯＣＫ（商標）ＰＢＳ緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ）および０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０中で３０分間インキュベートし、その後、第１回のパニングのためにヒトＩＬ－３６βでコーティングしたプレートに適用した。後続の２～３回において、ファージライブラリーを、溶液中において減少濃度のビオチニル化ヒトＩＬ－３６βと、１０００ｘ非ビオチニル化ヒトＩＬ－３６βを競合物質として伴ってインキュベートして、選択厳密性を増大させた。
ｍＡｂ２軽鎖と対形成したｍＡｂ６重鎖（ｍＡｂ６＿２、１つのアームは、一般の軽鎖二重特異性分子用）の、ヒトＩＬ－３６βに対する親和性を改善するために、３２個のコドンにより全ての２０個のアミノ酸をコードするＮＮＫ縮重コドンを使用してランダム化した重鎖ＨＶＲ残基（すなわち、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２およびＨＶＲ－Ｈ３）により、一価のＦａｂファージディスプレイのためのＦａｂ－アンバー形式のｍＡｂ６＿２から、ファージライブラリーを構築した（Ｂｒｅｎｎｅｒら、１９９２）（ｍＡｂ２軽鎖残基は、変更されないままである）。３つの重鎖ＨＶＲのうちの各々において１つのＮＮＫ突然変異を可能にするようにライブラリーを設計した。その後、クンケル（Ｋｕｎｋｅｌ）突然変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌら、１９８７）を使用して、合成した突然変異誘発オリゴヌクレオチドを使用して、重鎖ライブラリーを構築した。得られたライブラリーＤＮＡを、電気穿孔によりイー・コリＸＬ１細胞に入れ、約４Ｘ１０９個の形質転換体を得た。ファージライブラリーを、ＳＵＰＥＲＢＬＯＣＫ（商標）ＰＢＳ緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ）および０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０中で３０分間インキュベートし、その後、第１回のパニングのためにヒトＩＬ－３６βでコーティングしたプレートに適用した。後続の２～３回において、ファージライブラリーを、溶液中において減少濃度のビオチニル化ヒトＩＬ－３６βと、１０００ｘ非ビオチニル化ヒトＩＬ－３６βを競合物質として伴ってインキュベートして、選択厳密性を増大させた。
【0262】
Ｃ．親和性成熟ＮＮＫライブラリーからのｍＡｂ６＿２ファージ変異型の特徴付け
最上位の結合シグナルを有する選択されたファージを精製して、ファージ競合ＥＬＩＳＡを行った。最適ファージ濃度を、ＮＵＮＣ ＦプレートにおいてＥＬＩＳＡ緩衝液［ＰＢＳ中の０．５％ＢＳＡおよび０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］中で、連続希釈したヒトＩＬ－３６βと２時間インキュベートした。８０μＬの混合物を、ヒトＩＬ－３６βでコーティングしたウェルに１５分間移して、非結合ファージを捕捉した。プレートを洗浄緩衝液［ＰＢＳ中の０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］により洗浄し、ＨＲＰコンジュゲートした抗Ｍ１３抗体（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号１１９７３－ＭＭ０５－Ｈ－５０）を、ＥＬＩＳＡ緩衝液中に３０分間添加した。プレートを、室温において攪拌しながら１時間インキュベートし、洗浄緩衝液により６回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１ Ｓｔｅｐ Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号３４０２２）の添加によって１５分間現像した。酵素反応を、５０μＬ／ウェルの２Ｎ Ｈ２ＳＯ４を使用して停止した。プレートを、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒプレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０３多標識リーダー）を使用して４５０ｎｍにおいて解析した。４５０ｎｍにおける吸光度を、溶液中の抗原濃度の関数としてプロットして、ファージＩＣ５０を決定した。これを、ファージの表面上にディスプレイされたＦａｂクローンについての親和性見積もりとして使用した。また、ファージ変異型についての精製したＦａｂ分子の実際の親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ（以下の節Ｅにおいて詳細に説明されている方法）を使用して測定した。変異型ＨＶＲ配列、ファージＩＣ５０要約およびＫＤ値を、以下の表７に示す。
最上位の結合シグナルを有する選択されたファージを精製して、ファージ競合ＥＬＩＳＡを行った。最適ファージ濃度を、ＮＵＮＣ ＦプレートにおいてＥＬＩＳＡ緩衝液［ＰＢＳ中の０．５％ＢＳＡおよび０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］中で、連続希釈したヒトＩＬ－３６βと２時間インキュベートした。８０μＬの混合物を、ヒトＩＬ－３６βでコーティングしたウェルに１５分間移して、非結合ファージを捕捉した。プレートを洗浄緩衝液［ＰＢＳ中の０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］により洗浄し、ＨＲＰコンジュゲートした抗Ｍ１３抗体（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号１１９７３－ＭＭ０５－Ｈ－５０）を、ＥＬＩＳＡ緩衝液中に３０分間添加した。プレートを、室温において攪拌しながら１時間インキュベートし、洗浄緩衝液により６回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１ Ｓｔｅｐ Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号３４０２２）の添加によって１５分間現像した。酵素反応を、５０μＬ／ウェルの２Ｎ Ｈ２ＳＯ４を使用して停止した。プレートを、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒプレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０３多標識リーダー）を使用して４５０ｎｍにおいて解析した。４５０ｎｍにおける吸光度を、溶液中の抗原濃度の関数としてプロットして、ファージＩＣ５０を決定した。これを、ファージの表面上にディスプレイされたＦａｂクローンについての親和性見積もりとして使用した。また、ファージ変異型についての精製したＦａｂ分子の実際の親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ（以下の節Ｅにおいて詳細に説明されている方法）を使用して測定した。変異型ＨＶＲ配列、ファージＩＣ５０要約およびＫＤ値を、以下の表７に示す。
【0263】
【表8】
【0264】
Ｄ．ｍＡｂ６＿２親和性成熟ライブラリーの次世代シークエンシング
ｍＡｂ６＿２の親和性をさらに改善するために、ｍＡｂ６＿２親和性成熟ライブラリーの次世代シークエンシング（ＮＧＳ）を行った。最初のファージライブラリー（ソーティングしていないライブラリー）からの、ならびに第２および第３回の溶液選択（ソーティングしたライブラリー）からのファージミドを有するイー・コリＸＬ－１細胞から、ファージミド二本鎖ＤＮＡを単離した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ １６ｓライブラリー調製プロトコールを使用して、精製したＤＮＡを鋳型として使用して、ＶＨ領域のアンプリコンを生成した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｎｅｘｔｅｒａ ＸＴ Ｉｎｄｅｘキットを使用して、シークエンシングアダプターおよび二重インデックスバーコードを添加した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑ機器（Ｉｌｌｕｍｉｎａ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、米国）におけるシークエンシングのための調製において、アダプターとライゲーションしたアンプリコンを、ＭｉＳｅｑ試薬キットｖ３（６００周期）を使用する標準のＩｌｌｕｍｉｎａライブラリー変性および試料ローディングプロトコールに供した。２００ｂｐ～３００ｂｐのインサートサイズを有するアンプリコンの全長を包含するように、ペアードエンド（ｐａｉｒｅｄ－ｅｎｄ）シークエンシングを行った。
ｍＡｂ６＿２の親和性をさらに改善するために、ｍＡｂ６＿２親和性成熟ライブラリーの次世代シークエンシング（ＮＧＳ）を行った。最初のファージライブラリー（ソーティングしていないライブラリー）からの、ならびに第２および第３回の溶液選択（ソーティングしたライブラリー）からのファージミドを有するイー・コリＸＬ－１細胞から、ファージミド二本鎖ＤＮＡを単離した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ １６ｓライブラリー調製プロトコールを使用して、精製したＤＮＡを鋳型として使用して、ＶＨ領域のアンプリコンを生成した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｎｅｘｔｅｒａ ＸＴ Ｉｎｄｅｘキットを使用して、シークエンシングアダプターおよび二重インデックスバーコードを添加した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑ機器（Ｉｌｌｕｍｉｎａ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、米国）におけるシークエンシングのための調製において、アダプターとライゲーションしたアンプリコンを、ＭｉＳｅｑ試薬キットｖ３（６００周期）を使用する標準のＩｌｌｕｍｉｎａライブラリー変性および試料ローディングプロトコールに供した。２００ｂｐ～３００ｂｐのインサートサイズを有するアンプリコンの全長を包含するように、ペアードエンド（ｐａｉｒｅｄ－ｅｎｄ）シークエンシングを行った。
【0265】
ペアードエンドシークエンシングデータを、最初にペアードエンドアセンブラー（ｐａｉｒｅｄ－ｅｎｄ ａｓｓｅｍｂｌｅｒ）ＰＡＮＤＡｓｅｑ（Ｍａｓｅｌｌａら、２０１２）を使用してアセンブルして、完全なアンプリコンを得た。その後、特定したアンプリコンについて品質管理（ＱＣ）を行い、各アンプリコンを配列挿入または欠失および停止コドンの非存在についてチェックし、各ＣＤＲ配列は、最高で１つのＮＮＫ突然変異のみを有すること、および非ＮＮＫ突然変異を有しないことを許容された。ランダム化した位置毎の全ての突然変異の頻度を計算することによって、位置の重みマトリックスを生成した。以前に説明される通り（Ｋｏｅｎｉｇら、２０１５）、ソーティングした試料中の所与の位置における所与の突然変異の頻度を、ソーティングしていない試料中の全く同じ突然変異の頻度で割ることによって、各突然変異についての富化比を計算した。ｍＡｂ６＿２の、ｈｕ－ＩＬ－３６βへの結合の改善を支持したＨＶＲにおける予測された突然変異を、以下の表８に要約する。
【0266】
【表9】
【0267】
Ｅ．ｍＡｂ６＿２親和性改善ＮＧＳ変異型の特徴付け
ｍＡｂ６＿２親和性改善ＮＧＳ Ｆａｂ変異型の生成
ＮＧＳ解析からの、予測された突然変異（上記の表８に示される）に従って、変異型ＨＶＲ配列（以下の表９に示される）を伴う選択されたｍＡｂ６＿２ＮＧＳ Ｆａｂを合成し、８ｘＨｉｓタグを含有する哺乳動物Ｆａｂ発現コンストラクトにクローニングして、Ｆａｂタンパク質を生成した。重鎖または軽鎖をコードするプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に製造業者のプロトコールに従って、１：１のＨＣ：ＬＣの比を使用して一過性にトランスフェクトした。上清を１ｘリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．２）（ＰＢＳ）により１．５倍希釈し、１０ｍＭイミダゾールを添加し、バッチ様式で樹脂に２時間結合することによって、ＦａｂをＨｉｓＰｕｒ Ｎｉ－ＮＴＡカラムにより精製した。樹脂を、カラムに満たし、２０ＣＶ ＰＢＳ＋２０ｍＭイミダゾールにより洗浄し、５ＣＶ ＰＢＳ＋２５０ｍＭイミダゾールにより溶出した。ＰＤ１０カラム（ＧＥ）を使用して、試料をＰＢＳに緩衝液交換した。
ｍＡｂ６＿２親和性改善ＮＧＳ Ｆａｂ変異型の生成
ＮＧＳ解析からの、予測された突然変異（上記の表８に示される）に従って、変異型ＨＶＲ配列（以下の表９に示される）を伴う選択されたｍＡｂ６＿２ＮＧＳ Ｆａｂを合成し、８ｘＨｉｓタグを含有する哺乳動物Ｆａｂ発現コンストラクトにクローニングして、Ｆａｂタンパク質を生成した。重鎖または軽鎖をコードするプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に製造業者のプロトコールに従って、１：１のＨＣ：ＬＣの比を使用して一過性にトランスフェクトした。上清を１ｘリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．２）（ＰＢＳ）により１．５倍希釈し、１０ｍＭイミダゾールを添加し、バッチ様式で樹脂に２時間結合することによって、ＦａｂをＨｉｓＰｕｒ Ｎｉ－ＮＴＡカラムにより精製した。樹脂を、カラムに満たし、２０ＣＶ ＰＢＳ＋２０ｍＭイミダゾールにより洗浄し、５ＣＶ ＰＢＳ＋２５０ｍＭイミダゾールにより溶出した。ＰＤ１０カラム（ＧＥ）を使用して、試料をＰＢＳに緩衝液交換した。
【0268】
ＳＰＲを使用したｍＡｂ６＿２親和性改善ＮＧＳ Ｆａｂ変異型の親和性決定
組換えｍＡｂ６＿２ ＮＧＳ Ｆａｂ変異型のヒトＩＬ－３６βへの３７℃における結合親和性を決定するために、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器によるＳＰＲ測定を行った。簡潔に説明すると、Ｂｉｏｔｉｎ ＣＡＰｔｕｒｅ試薬（ＧＥ）の、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）への１：４希釈液を、ＣＡＰセンサーチップに２μＬ／分の流速において適用した。速度論測定のために、６ｎＭのビオチニル化ヒトＩＬ－３６βを、１０μＬ／分で捕捉して、第２のフローセル（ＦＣ２）における約５０応答単位を達成した。ＦＣ１を標準として維持した。次に、低（３．１２５ｎＭ）～高（２００ｎＭ）の、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）中のＦａｂの３倍連続希釈液を、３７℃において注入した（流速：１０μＬ／分）。センサー図を記録し、標準および緩衝液減算に供し、その後、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ評価ソフトウェア（第１．１．１．７４４２版）によって評価した。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、表９に要約する、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算した。
組換えｍＡｂ６＿２ ＮＧＳ Ｆａｂ変異型のヒトＩＬ－３６βへの３７℃における結合親和性を決定するために、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器によるＳＰＲ測定を行った。簡潔に説明すると、Ｂｉｏｔｉｎ ＣＡＰｔｕｒｅ試薬（ＧＥ）の、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）への１：４希釈液を、ＣＡＰセンサーチップに２μＬ／分の流速において適用した。速度論測定のために、６ｎＭのビオチニル化ヒトＩＬ－３６βを、１０μＬ／分で捕捉して、第２のフローセル（ＦＣ２）における約５０応答単位を達成した。ＦＣ１を標準として維持した。次に、低（３．１２５ｎＭ）～高（２００ｎＭ）の、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）中のＦａｂの３倍連続希釈液を、３７℃において注入した（流速：１０μＬ／分）。センサー図を記録し、標準および緩衝液減算に供し、その後、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ評価ソフトウェア（第１．１．１．７４４２版）によって評価した。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、表９に要約する、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算した。
【0269】
【表10】
【0270】
Ｆ．ｍＡｂ２親和性成熟ＮＮＫライブラリー構築およびパニング
抗ＩＬ－３６ｍＡｂ２のヒトＩＬ－３６αおよびヒトＩＬ－３６γ親和性をさらに改善するために、３２個のコドンにより全ての２０個のアミノ酸をコードするＮＮＫ縮重コドンを使用してランダム化した重鎖ＨＶＲ残基（すなわち、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２およびＨＶＲ－Ｈ３）により、一価のＦａｂファージディスプレイのためのＦａｂ－アンバー形式のｍＡｂ２から、ファージライブラリーを構築した（Ｂｒｅｎｎｅｒら、１９９２）（ｍＡｂ２軽鎖残基は、変更されないままである）。３つの重鎖ＨＶＲのうちの各々において１つのＮＮＫ突然変異を可能にするようにライブラリーを設計した。その後、クンケル突然変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌら、１９８７）を使用して、合成した突然変異誘発オリゴヌクレオチドを使用して、重鎖ライブラリーを構築した。得られたライブラリーＤＮＡを、電気穿孔によりイー・コリＸＬ１細胞に入れ、約４Ｘ１０９個の形質転換体を得た。ファージライブラリーを、ＳＵＰＥＲＢＬＯＣＫ（商標）ＰＢＳ緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ）および０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０中で３０分間インキュベートし、その後、第１回のパニングのためにヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γでコーティングしたプレートに適用した。後続の２～３回において、ファージライブラリーを、溶液中において減少濃度のビオチニル化ヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γと、１０００ｘ非ビオチニル化ヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γを競合物質として伴ってインキュベートして、選択厳密性を増大させた。
抗ＩＬ－３６ｍＡｂ２のヒトＩＬ－３６αおよびヒトＩＬ－３６γ親和性をさらに改善するために、３２個のコドンにより全ての２０個のアミノ酸をコードするＮＮＫ縮重コドンを使用してランダム化した重鎖ＨＶＲ残基（すなわち、ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２およびＨＶＲ－Ｈ３）により、一価のＦａｂファージディスプレイのためのＦａｂ－アンバー形式のｍＡｂ２から、ファージライブラリーを構築した（Ｂｒｅｎｎｅｒら、１９９２）（ｍＡｂ２軽鎖残基は、変更されないままである）。３つの重鎖ＨＶＲのうちの各々において１つのＮＮＫ突然変異を可能にするようにライブラリーを設計した。その後、クンケル突然変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌら、１９８７）を使用して、合成した突然変異誘発オリゴヌクレオチドを使用して、重鎖ライブラリーを構築した。得られたライブラリーＤＮＡを、電気穿孔によりイー・コリＸＬ１細胞に入れ、約４Ｘ１０９個の形質転換体を得た。ファージライブラリーを、ＳＵＰＥＲＢＬＯＣＫ（商標）ＰＢＳ緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ）および０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０中で３０分間インキュベートし、その後、第１回のパニングのためにヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γでコーティングしたプレートに適用した。後続の２～３回において、ファージライブラリーを、溶液中において減少濃度のビオチニル化ヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γと、１０００ｘ非ビオチニル化ヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γを競合物質として伴ってインキュベートして、選択厳密性を増大させた。
【0271】
Ｇ．親和性成熟ＮＮＫライブラリーからのｍＡｂ２ファージ変異型の特徴付け
最上位の結合シグナルを有する選択されたファージを精製して、ファージ競合ＥＬＩＳＡを行った。最適ファージ濃度を、ＮＵＮＣ ＦプレートにおいてＥＬＩＳＡ緩衝液中で連続希釈したヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γと２時間インキュベートした。８０μｌの混合物を、ヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γでコーティングしたウェルに１５分間移して、非結合ファージを捕捉した。プレートを洗浄緩衝液［ＰＢＳ中の０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］により洗浄し、ＨＲＰコンジュゲートした抗Ｍ１３抗体（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号１１９７３－ＭＭ０５－Ｈ－５０）を、ＥＬＩＳＡ緩衝液中に３０分間添加した。プレートを、上記に説明されるように洗浄および現像した。４５０ｎｍにおける吸光度を、溶液中の抗原濃度の関数としてプロットして、ファージＩＣ５０を決定した。これを、ファージの表面上にディスプレイされたＦａｂクローンについての親和性見積もりとして使用した。変異型ＨＶＲ配列およびファージＩＣ５０の要約について、以下の表１０を参照されたい。
最上位の結合シグナルを有する選択されたファージを精製して、ファージ競合ＥＬＩＳＡを行った。最適ファージ濃度を、ＮＵＮＣ ＦプレートにおいてＥＬＩＳＡ緩衝液中で連続希釈したヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γと２時間インキュベートした。８０μｌの混合物を、ヒトＩＬ－３６αまたはヒトＩＬ－３６γでコーティングしたウェルに１５分間移して、非結合ファージを捕捉した。プレートを洗浄緩衝液［ＰＢＳ中の０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］により洗浄し、ＨＲＰコンジュゲートした抗Ｍ１３抗体（Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号１１９７３－ＭＭ０５－Ｈ－５０）を、ＥＬＩＳＡ緩衝液中に３０分間添加した。プレートを、上記に説明されるように洗浄および現像した。４５０ｎｍにおける吸光度を、溶液中の抗原濃度の関数としてプロットして、ファージＩＣ５０を決定した。これを、ファージの表面上にディスプレイされたＦａｂクローンについての親和性見積もりとして使用した。変異型ＨＶＲ配列およびファージＩＣ５０の要約について、以下の表１０を参照されたい。
【0272】
【表11】
【0273】
Ｈ．ｍＡｂ２親和性成熟ライブラリーの次世代シークエンシング
ｍＡｂ２の親和性をさらに改善するために、ｍＡｂ２親和性成熟ライブラリーの次世代シークエンシング（ＮＧＳ）を行った。最初のファージライブラリー（ソーティングしていないライブラリー）からの、ならびに第２および第３回の溶液選択（ソーティングしたライブラリー）からのファージミドを有するイー・コリＸＬ－１細胞から、ファージミド二本鎖ＤＮＡを単離した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ １６ｓライブラリー調製プロトコールを使用して、精製したＤＮＡを鋳型として使用して、ＶＨ領域のアンプリコンを生成した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｎｅｘｔｅｒａ ＸＴ Ｉｎｄｅｘキットを使用して、シークエンシングアダプターおよび二重インデックスバーコードを添加した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑにおけるシークエンシングのための調製において、アダプターとライゲーションしたアンプリコンを、ＭｉＳｅｑ試薬キットｖ３（６００周期）を使用する標準のＩｌｌｕｍｉｎａライブラリー変性および試料ローディングプロトコールに供した。２００ｂｐ～３００ｂｐのインサートサイズを有するアンプリコンの全長を包含するように、ペアードエンドシークエンシングを行った。
ｍＡｂ２の親和性をさらに改善するために、ｍＡｂ２親和性成熟ライブラリーの次世代シークエンシング（ＮＧＳ）を行った。最初のファージライブラリー（ソーティングしていないライブラリー）からの、ならびに第２および第３回の溶液選択（ソーティングしたライブラリー）からのファージミドを有するイー・コリＸＬ－１細胞から、ファージミド二本鎖ＤＮＡを単離した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ １６ｓライブラリー調製プロトコールを使用して、精製したＤＮＡを鋳型として使用して、ＶＨ領域のアンプリコンを生成した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｎｅｘｔｅｒａ ＸＴ Ｉｎｄｅｘキットを使用して、シークエンシングアダプターおよび二重インデックスバーコードを添加した。Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑにおけるシークエンシングのための調製において、アダプターとライゲーションしたアンプリコンを、ＭｉＳｅｑ試薬キットｖ３（６００周期）を使用する標準のＩｌｌｕｍｉｎａライブラリー変性および試料ローディングプロトコールに供した。２００ｂｐ～３００ｂｐのインサートサイズを有するアンプリコンの全長を包含するように、ペアードエンドシークエンシングを行った。
【0274】
ペアードエンドシークエンシングデータを、最初にペアードエンドアセンブラーＰＡＮＤＡｓｅｑ（Ｍａｓｅｌｌａら、２０１２）を使用してアセンブルして、完全なアンプリコンを得た。その後、特定のアンプリコンについて品質管理（ＱＣ）を行い、各アンプリコンを配列挿入または欠失がないことおよび停止コドンがないことについてチェックし、各ＣＤＲ配列は、最高で１つのＮＮＫ突然変異のみを有すること、および非ＮＮＫ突然変異を有しないことを許容された。ランダム化した位置毎の全ての突然変異の頻度を計算することによって、位置の重みマトリックスを生成した。以前に説明される通り（Ｋｏｅｎｉｇら、２０１５）、ソーティングした試料中の所与の位置における所与の突然変異の頻度を、ソーティングしていない試料中の全く同じ突然変異の頻度で割ることによって、各突然変異についての富化比を計算した。ｍＡｂ２の、ｈｕ－ＩＬ－３６αまたはｈｕ－ＩＬ－３６γへの結合の改善を支持したＨＶＲにおける予測された突然変異を、表１１に要約する。
【0275】
【表12】
【0276】
Ｉ．ｍＡｂ２親和性改善ＮＧＳ変異型の特徴付け
ｍＡｂ２親和性改善ＮＧＳ Ｆａｂ変異型の生成
ＮＧＳ解析からの予測された突然変異（上記の表１１）に従って、選択されたｍＡｂ２ ＮＧＳ Ｆａｂ ＨＶＲ変異型配列（以下の表１２に示される）を合成し、８ｘＨｉｓタグを含有する哺乳動物Ｆａｂ発現コンストラクトにクローニングして、Ｆａｂタンパク質を生成した。重鎖または軽鎖をコードするプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に、１：１のＨＣ：ＬＣの比を使用してトランスフェクトした。上清を１ｘリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．２）（「ＰＢＳ」）により１．５倍希釈し、１０ｍＭイミダゾールを添加し、バッチ様式で樹脂に２時間結合することによって、ＦａｂをＨｉｓＰｕｒ Ｎｉ－ＮＴＡカラムにより精製した。樹脂を、カラムに満たし、２０ＣＶ ＰＢＳ＋２０ｍＭイミダゾールにより洗浄し、５ＣＶ ＰＢＳ＋２５０ｍＭイミダゾールにより溶出した。ＰＤ１０カラム（ＧＥ）を使用して、試料をＰＢＳに緩衝液交換した。
ｍＡｂ２親和性改善ＮＧＳ Ｆａｂ変異型の生成
ＮＧＳ解析からの予測された突然変異（上記の表１１）に従って、選択されたｍＡｂ２ ＮＧＳ Ｆａｂ ＨＶＲ変異型配列（以下の表１２に示される）を合成し、８ｘＨｉｓタグを含有する哺乳動物Ｆａｂ発現コンストラクトにクローニングして、Ｆａｂタンパク質を生成した。重鎖または軽鎖をコードするプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に、１：１のＨＣ：ＬＣの比を使用してトランスフェクトした。上清を１ｘリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．２）（「ＰＢＳ」）により１．５倍希釈し、１０ｍＭイミダゾールを添加し、バッチ様式で樹脂に２時間結合することによって、ＦａｂをＨｉｓＰｕｒ Ｎｉ－ＮＴＡカラムにより精製した。樹脂を、カラムに満たし、２０ＣＶ ＰＢＳ＋２０ｍＭイミダゾールにより洗浄し、５ＣＶ ＰＢＳ＋２５０ｍＭイミダゾールにより溶出した。ＰＤ１０カラム（ＧＥ）を使用して、試料をＰＢＳに緩衝液交換した。
【0277】
【表13】
【0278】
ＳＰＲを使用したｍＡｂ２親和性改善ＮＧＳ Ｆａｂ変異型の親和性決定
組換えｍＡｂ２ ＮＧＳ Ｆａｂ変異型のヒトＩＬ－３６αおよびヒトＩＬ－３６γへの３７℃における結合親和性を決定するために、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器によるＳＰＲ測定を行った。簡潔に説明すると、Ｂｉｏｔｉｎ ＣＡＰｔｕｒｅ試薬（ＧＥ）の、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）への１：４希釈液を、ＣＡＰセンサーチップに２ｕＬ／分の流速において適用した。速度論測定のために、３ｎＭのビオチニル化ヒトＩＬ－３６αおよびヒトＩＬ－３６γを、１０ｕＬ／分で捕捉して、第２のフローセル（ＦＣ２）における約５０応答単位を達成した。ＦＣ１を標準として維持した。次に、低（３．１２５ｎＭ）～高（２００ｎＭ）の、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）中のＦａｂの３倍連続希釈液を、３７℃において注入した（流速：１０ｕＬ／分）。センサー図を記録し、標準および緩衝液減算に供し、その後、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ評価ソフトウェア（第１．１．１．７４４２版）によって評価した。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、以下の表１３に要約する、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算した。
組換えｍＡｂ２ ＮＧＳ Ｆａｂ変異型のヒトＩＬ－３６αおよびヒトＩＬ－３６γへの３７℃における結合親和性を決定するために、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器によるＳＰＲ測定を行った。簡潔に説明すると、Ｂｉｏｔｉｎ ＣＡＰｔｕｒｅ試薬（ＧＥ）の、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）への１：４希釈液を、ＣＡＰセンサーチップに２ｕＬ／分の流速において適用した。速度論測定のために、３ｎＭのビオチニル化ヒトＩＬ－３６αおよびヒトＩＬ－３６γを、１０ｕＬ／分で捕捉して、第２のフローセル（ＦＣ２）における約５０応答単位を達成した。ＦＣ１を標準として維持した。次に、低（３．１２５ｎＭ）～高（２００ｎＭ）の、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）中のＦａｂの３倍連続希釈液を、３７℃において注入した（流速：１０ｕＬ／分）。センサー図を記録し、標準および緩衝液減算に供し、その後、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ評価ソフトウェア（第１．１．１．７４４２版）によって評価した。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、以下の表１３に要約する、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算した。
【0279】
【表14】
【実施例5】
【0280】
ＨａＣａｔ細胞によるｈｕ－ＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌における、抗ＩＬ－３６抗体変異型の遮断活性のインビトロ評定
インビトロでの親和性成熟ｍＡｂ２およびｍＡｂ６＿２変異型の遮断効力および有効性を決定するために、本発明者らは、ＨａＣａｔ細胞によるｈｕ－ＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌を阻害する変異型の組換え産生Ｆａｂ断片の、それらの能力を評価した。ＨａＣａｔ細胞アッセイを、組換え発現した抗ＩＬ－３６または対照抗体Ｆａｂ断片がＩｇＧの代わりにアンタゴニストとして使用されたことを除いては、実施例２で説明されるように行った。簡潔に説明すると、抗ＩＬ－３６ Ｆａｂまたは適切な抗体Ｆａｂ対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨａＣａｔ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いて、アゴニスト（ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βまたはｈｕ－ＩＬ－３６γ）を添加した。実験をさらに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２にて）進め、細胞培養上清を回収し、ＩＬ－８の定量を実施例２で説明されるように行った。その後、補間したデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアにおいて、標準の非線形回帰解析を使用して解析して、抗体ＩＣ５０値を導いた。
インビトロでの親和性成熟ｍＡｂ２およびｍＡｂ６＿２変異型の遮断効力および有効性を決定するために、本発明者らは、ＨａＣａｔ細胞によるｈｕ－ＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌を阻害する変異型の組換え産生Ｆａｂ断片の、それらの能力を評価した。ＨａＣａｔ細胞アッセイを、組換え発現した抗ＩＬ－３６または対照抗体Ｆａｂ断片がＩｇＧの代わりにアンタゴニストとして使用されたことを除いては、実施例２で説明されるように行った。簡潔に説明すると、抗ＩＬ－３６ Ｆａｂまたは適切な抗体Ｆａｂ対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨａＣａｔ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いて、アゴニスト（ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βまたはｈｕ－ＩＬ－３６γ）を添加した。実験をさらに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２にて）進め、細胞培養上清を回収し、ＩＬ－８の定量を実施例２で説明されるように行った。その後、補間したデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアにおいて、標準の非線形回帰解析を使用して解析して、抗体ＩＣ５０値を導いた。
【0281】
【表15】
【0282】
表１４において示される通り、ｍＡｂ２．１０ Ｆａｂは、ＨａＣａｔ細胞におけるｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γ媒介ＩＬ－８産生の最も強力な遮断活性を実証し、それぞれ、約０．３８ｎＭおよび１．０９ｎＭのＩＣ５０であった。表１４においてさらに示される通り、ｍＡｂ６＿２．７ Ｆａｂは、ＨａＣａｔ細胞におけるＩＬ－３６β媒介ＩＬ－８産生の遮断活性の改善を実証し、約０．２ｎＭのＩＣ５０であった。
【実施例6】
【0283】
抗ＩＬ－３６多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の生成
ｍＡｂ２．１０およびｍＡｂ６＿２．７重鎖を、２工程クローニングプロセスにおいてｐＲＫ発現ベクターへ「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）」形式（Ｒｉｄｇｗａｙ、１９９６）にてクローニングした。工程１において、ｍＡｂ２．１０を合成し、ホール突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ）および８Ｘ Ｈｉｓタグを既に含有するｐＲＫベクターへクローニングした（ＡｇｅＩおよびＢｓｔＥＩＩを使用して）。ｍＡｂ６＿２．７を合成し、ノブ突然変異（Ｔ３６６Ｗ）およびＦｌａｇタグを既に含有するｐＲＫベクターへクローニングした（ＡｇｅＩおよびＢｓｔＥＩＩを使用して）。また、ｍＡｂ２軽鎖を、余分の突然変異を伴わないｐＲＫ発現ベクターへクローニングした。タグ付けしたコンストラクトによる多重特異性抗体の最初の発現および精製試験の成功後、クローニングプロセスの工程２において、タグをｍＡｂ２．１０およびｍＡｂ６＿２．７重鎖から除去した。ｍＡｂ２．１０からの８ＸＨｉｓタグを、１組のプライマー［フォワードプライマー：5’Phos-TAAGCTTGGCCGCCATGGCC-3’（配列番号５１４）およびリバースプライマー：5’Phos-ACCCGGAGACAGGGAGAGGC-3’（配列番号５１５）］を使用して完全に除去し、一方で、停止コドンＴＡＡを、１組のプライマー［フォワードプライマー：5’-CTGTCTCCGGGTTAAGATTACAAGG-3’（配列番号５１６）およびリバースプライマー：5’-CCTTGTAATCTTAACCCGGAGACAG-3’（配列番号５１７）］を使用してｍＡｂ６＿２．７重鎖とＦｌａｇタグとの間に挿入した。
ｍＡｂ２．１０およびｍＡｂ６＿２．７重鎖を、２工程クローニングプロセスにおいてｐＲＫ発現ベクターへ「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）」形式（Ｒｉｄｇｗａｙ、１９９６）にてクローニングした。工程１において、ｍＡｂ２．１０を合成し、ホール突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ）および８Ｘ Ｈｉｓタグを既に含有するｐＲＫベクターへクローニングした（ＡｇｅＩおよびＢｓｔＥＩＩを使用して）。ｍＡｂ６＿２．７を合成し、ノブ突然変異（Ｔ３６６Ｗ）およびＦｌａｇタグを既に含有するｐＲＫベクターへクローニングした（ＡｇｅＩおよびＢｓｔＥＩＩを使用して）。また、ｍＡｂ２軽鎖を、余分の突然変異を伴わないｐＲＫ発現ベクターへクローニングした。タグ付けしたコンストラクトによる多重特異性抗体の最初の発現および精製試験の成功後、クローニングプロセスの工程２において、タグをｍＡｂ２．１０およびｍＡｂ６＿２．７重鎖から除去した。ｍＡｂ２．１０からの８ＸＨｉｓタグを、１組のプライマー［フォワードプライマー：5’Phos-TAAGCTTGGCCGCCATGGCC-3’（配列番号５１４）およびリバースプライマー：5’Phos-ACCCGGAGACAGGGAGAGGC-3’（配列番号５１５）］を使用して完全に除去し、一方で、停止コドンＴＡＡを、１組のプライマー［フォワードプライマー：5’-CTGTCTCCGGGTTAAGATTACAAGG-3’（配列番号５１６）およびリバースプライマー：5’-CCTTGTAATCTTAACCCGGAGACAG-3’（配列番号５１７）］を使用してｍＡｂ６＿２．７重鎖とＦｌａｇタグとの間に挿入した。
【0284】
多重特異性共通軽鎖抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７を、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、米国）において製造業者のプロトコールに従って、ホール突然変異およびＮ２９７Ｇを含有するｍＡｂ２．１０の重鎖（配列番号２３５）、ノブ突然変異およびＮ２９７Ｇを含有するｍＡｂ６＿２．７の重鎖（配列番号１９２）、ならびにｍＡｂ２の軽鎖（配列番号１６９）をコードするプラスミドを１：１：２の質量比においてコトランスフェクトすることによって、発現させた。細胞を４日後に採取し、清澄な上清を、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）中で平衡化したＭＡｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）に適用した。タンパク質を、１００ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ３）により溶出し、１．５Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．８）を添加することによってｐＨを中和した。タンパク質含有画分をプールし、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）、１０ｍＭ ＮａＣｌに緩衝液交換した。その後、タンパク質を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）、１０ｍＭＮａＣｌ中で平衡化したＣａｐｔｏ Ｓ Ｉｍｐａｃｔカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）上にロードし、５０ｍＭ ビス－Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．５）、１０ｍＭ ＮａＣｌの３０ＣＶ勾配により溶出した。
【0285】
精製した多重特異性抗体分子のインタクトな質量を、Ｕｌｔｉｍａｔｅ－３０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）液体クロマトグラフィー系と組み合わせたＱ Ｅｘａｃｔｉｖｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）質量分析計を使用して確認した。精製した抗体を、液体クロマトグラフィー系に接続したＰＬＲＰ－Ｓカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ）上に注入した。インタクト質量分析の解析は、観察された質量が予測されたヘテロ二量体の質量に適合することを確証した。また、ホモ二量体種の非存在は、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｃ／２断片の均一なプールを生成したＦａｂｒｉｃａｔｏｒ酵素（Ｇｅｎｏｖｉｓ）を使用することによって、確認された。各断片は、予測された質量に適合した。
【0286】
インタクトな質量分析によって特定される、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７を含有するＣａｐｔｏ Ｓ溶出画分をプールし、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ｐｇカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、米国）上にロードした。単分散タンパク質を含有するピーク画分をプールし、１Ｘ ＰＢＳ（ｐＨ７．５）中に保存した。
【実施例7】
【0287】
抗ＩＬ－３６多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の非特異的結合評定
多重特異性分子ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７ ＩｇＧの非特異的結合を、バキュロウイルスＥＬＩＳＡ（Ｈｏｔｚｅｌら、２０１２）を使用して評定した。簡潔に説明すると、バキュロウイルス粒子により、３％懸濁液において９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐプレートを４℃にて一晩コーティングした。その後、プレートを、１％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ中で室温において１時間ブロッキングした。０．５％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する１ｘＰＢＳ（ＥＬＩＳＡ緩衝液）中の３００ｎＭ、１００ｎＭおよび３３ｎＭのｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７ ＩｇＧを、プレートに１時間添加し、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１ｘＰＢＳ（洗浄緩衝液）により洗浄した。結合した抗体を、ＥＬＩＳＡ緩衝液中のセイヨウワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により検出した。プレートを、室温において攪拌しながら１時間インキュベートし、洗浄緩衝液により６回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１ Ｓｔｅｐ Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号３４０２２）の添加によって１５分間現像した。酵素反応を、５０μＬ／ウェルの２Ｎ Ｈ２ＳＯ４を使用して停止させた。プレートを、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒプレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０３多標識リーダー）を使用して４５０ｎｍにおいて解析し、標準抗体と比較した。陽性対照と比較して、多重特異性分子ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７ ＩｇＧは、検出可能なバキュロウイルスＥＬＩＳＡシグナルを示さず、バキュロウイルス粒子への非特異的結合の非存在を示した（表１５）。
多重特異性分子ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７ ＩｇＧの非特異的結合を、バキュロウイルスＥＬＩＳＡ（Ｈｏｔｚｅｌら、２０１２）を使用して評定した。簡潔に説明すると、バキュロウイルス粒子により、３％懸濁液において９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐプレートを４℃にて一晩コーティングした。その後、プレートを、１％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳ中で室温において１時間ブロッキングした。０．５％ＢＳＡおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する１ｘＰＢＳ（ＥＬＩＳＡ緩衝液）中の３００ｎＭ、１００ｎＭおよび３３ｎＭのｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７ ＩｇＧを、プレートに１時間添加し、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１ｘＰＢＳ（洗浄緩衝液）により洗浄した。結合した抗体を、ＥＬＩＳＡ緩衝液中のセイヨウワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により検出した。プレートを、室温において攪拌しながら１時間インキュベートし、洗浄緩衝液により６回洗浄し、１００μＬ／ウェルの１ Ｓｔｅｐ Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号３４０２２）の添加によって１５分間現像した。酵素反応を、５０μＬ／ウェルの２Ｎ Ｈ２ＳＯ４を使用して停止させた。プレートを、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒプレートリーダー（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０３多標識リーダー）を使用して４５０ｎｍにおいて解析し、標準抗体と比較した。陽性対照と比較して、多重特異性分子ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７ ＩｇＧは、検出可能なバキュロウイルスＥＬＩＳＡシグナルを示さず、バキュロウイルス粒子への非特異的結合の非存在を示した（表１５）。
【0288】
【表16】
【実施例8】
【0289】
抗ｈｕ－ＩＬ－３６多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７ ＩｇＧの活性のインビトロ評定
抗ＩＬ－３６多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の結合速度論
実施例２において説明されるようにＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を使用して、ヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６（それぞれ、「ｈｕ－ＩＬ－３６」および「ｃｙ－ＩＬ－３６」）についての結合親和性を決定した。インビボビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６α－Ａｖｉ、ｈｕ－ＩＬ－３６β－Ａｖｉ、ｈｕ－ＩＬ－３６γ－Ａｖｉ、ｃｙ－ＩＬ－３６α－Ａｖｉ、ｃｙ－ＩＬ－３６β－Ａｖｉまたはｃｙ－ＩＬ－３６γ－Ａｖｉを、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７への結合について別々に解析した。簡潔に説明すると、Ｂｉｏｔｉｎ ＣＡＰｔｕｒｅ試薬（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）への１：４希釈液を、ＣＡＰセンサーチップに２μＬ／分の流速において適用した。速度論測定のために、１ｎＭのビオチニル化ヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６α－Ａｖｉ、ＩＬ－３６γ－Ａｖｉ；０．８ｎＭのビオチニル化ヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６β－Ａｖｉを、１０μＬ／分で捕捉して、第２のフローセル（ＦＣ２）における１５～２５応答単位を達成した。ＦＣ１を標準として維持した。次に、低（１．５６ｎＭ）～高（２００ｎＭ）の、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）中のｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７タンパク質の２倍連続希釈液を、２５℃または３７℃のいずれかにおいて注入した（流速：３０μＬ／分）。センサー図を記録し、標準および緩衝液減算に供し、その後、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ評価ソフトウェア（第１．１．１．７４４２版）によりデータ解析した。各多重特異性ＩｇＧ抗体は、アッセイされる１つのＩＬ－３６タンパク質に結合することができる１つのＦａｂアームのみを含有するので、結合相互作用は一価である。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算した。
抗ＩＬ－３６多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の結合速度論
実施例２において説明されるようにＢＩＡＣＯＲＥ（商標）８Ｋ機器を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を使用して、ヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６（それぞれ、「ｈｕ－ＩＬ－３６」および「ｃｙ－ＩＬ－３６」）についての結合親和性を決定した。インビボビオチニル化ｈｕ－ＩＬ－３６α－Ａｖｉ、ｈｕ－ＩＬ－３６β－Ａｖｉ、ｈｕ－ＩＬ－３６γ－Ａｖｉ、ｃｙ－ＩＬ－３６α－Ａｖｉ、ｃｙ－ＩＬ－３６β－Ａｖｉまたはｃｙ－ＩＬ－３６γ－Ａｖｉを、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７への結合について別々に解析した。簡潔に説明すると、Ｂｉｏｔｉｎ ＣＡＰｔｕｒｅ試薬（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）への１：４希釈液を、ＣＡＰセンサーチップに２μＬ／分の流速において適用した。速度論測定のために、１ｎＭのビオチニル化ヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６α－Ａｖｉ、ＩＬ－３６γ－Ａｖｉ；０．８ｎＭのビオチニル化ヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６β－Ａｖｉを、１０μＬ／分で捕捉して、第２のフローセル（ＦＣ２）における１５～２５応答単位を達成した。ＦＣ１を標準として維持した。次に、低（１．５６ｎＭ）～高（２００ｎＭ）の、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）中のｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７タンパク質の２倍連続希釈液を、２５℃または３７℃のいずれかにおいて注入した（流速：３０μＬ／分）。センサー図を記録し、標準および緩衝液減算に供し、その後、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）８Ｋ評価ソフトウェア（第１．１．１．７４４２版）によりデータ解析した。各多重特異性ＩｇＧ抗体は、アッセイされる１つのＩＬ－３６タンパク質に結合することができる１つのＦａｂアームのみを含有するので、結合相互作用は一価である。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデルを使用して計算した。平衡解離定数（ＫＤ）を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算した。
【0290】
ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７についてのＢｉａｃｏｒｅ親和性結果を、以下の表１６に要約する。ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７は、全てのヒトおよびカニクイザルＩＬ－３６サイトカインに、高く、かつ同等の親和性により結合する。
【0291】
【表17】
【0292】
ＨａＣａｔ細胞によるＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌における、多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の遮断活性
多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の遮断効力および有効性を決定するために、本発明者らは、ＨａＣａｔ細胞によるｈｕ－ＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌を阻害する抗体の能力を評価した。また、ヒトＩｇＧアイソタイプ対照（「Ｈｕ ＩｇＧ１対照」）を陰性対照として使用するためにアッセイした。ＨａＣａｔ細胞アッセイを、組換え発現したｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７またはＨｕ ＩｇＧ１対照がアンタゴニストとして使用されたことを除いては、実施例２で説明されるように行った。簡潔に説明すると、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７または適切な抗体対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨａＣａｔ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いて、アゴニスト（ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βまたはｈｕ－ＩＬ－３６γ）を添加した。実験をさらに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２にて）進め、細胞培養上清を回収した。
多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の遮断効力および有効性を決定するために、本発明者らは、ＨａＣａｔ細胞によるｈｕ－ＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌を阻害する抗体の能力を評価した。また、ヒトＩｇＧアイソタイプ対照（「Ｈｕ ＩｇＧ１対照」）を陰性対照として使用するためにアッセイした。ＨａＣａｔ細胞アッセイを、組換え発現したｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７またはＨｕ ＩｇＧ１対照がアンタゴニストとして使用されたことを除いては、実施例２で説明されるように行った。簡潔に説明すると、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７または適切な抗体対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨａＣａｔ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いて、アゴニスト（ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βまたはｈｕ－ＩＬ－３６γ）を添加した。実験をさらに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２にて）進め、細胞培養上清を回収した。
【0293】
上清中のＩＬ－８の定量を、Ｃｉｓｂｉｏ ＢｉｏａｓｓａｙのＨＴＲＦ技術ベースのヒトＩＬ－８アッセイを使用して行った。アッセイを製造業者のガイドラインに従って行った。ＨＴＲＦ互換性Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、生データを得、ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を併用して、６６５ｎｍおよび６２０ｎｍにおける、それぞれ、アクセプターの、ドナーに対する放出シグナルの比を計算した。得られたデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して解析し、線形回帰解析および「１／Ｙ２の重み」によって定義される重み付けを使用して、補間を行った。その後、補間したデータを、標準の非線形回帰３パラメーター解析を使用して解析して、アゴニストＥＣ５０および抗体ＩＣ５０値を導いた。
【0294】
図３Ａ、図３Ｂおよび図３Ｃにおいて示される通り、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７は、ＨａＣａｔ細胞におけるＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γ媒介ＩＬ－８産生の強力な遮断活性を実証し、それぞれ、約０．３８ｎＭ、０．１３ｎＭおよび１．１ｎＭのＩＣ５０値であった。８ｎＭのｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７では、ＨａＣａｔ細胞におけるＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γ媒介ＩＬ－８産生の１００％が阻害された。
【0295】
ヒト初代ケラチノサイトによるＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌における、多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の遮断活性
多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７のヒト初代細胞に対する遮断効力および有効性を決定するために、本発明者らは、ヒト初代成人ケラチノサイトによるｈｕ－ＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌を阻害する抗体の能力を評価した。また、ヒトＩｇＧアイソタイプ対照（「Ｈｕ ＩｇＧ１対照」）を陰性対照として使用するためにアッセイした。ヒト成人正常上皮ケラチノサイトをＬｏｎｚａから得た。製造業者によって、細胞は、提供された正常な（疾患を有しない）ヒト組織から単離され、低温保存された。製造業者によって推奨される一般ガイドラインを使用して、細胞を解凍し、維持した。ＨＥＫａ細胞を、Ｇｏｌｄ Ｂｕｌｌｅｔキット（Ｌｏｎｚａ）からの補完したヒトケラチノサイト増殖培地からなる増殖培地において維持した。実験使用の前日に、ＨＥＫａを、平底９６ウェルプレートに、使用日に約８０～８５％コンフルエンシーになるように細胞１０，０００個／ウェルにて播種した。初代ケラチノサイト細胞アッセイを、組換え発現したｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７またはＨｕ ＩｇＧ１対照がアンタゴニストとして使用されたことを除いては、実施例２で説明されるように、ヒト成人ケラチノサイト（ＨＥＫａ）により行った。簡潔に説明すると、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７または適切な抗体対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨＥＫａ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いて、アゴニスト（ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βまたはｈｕ－ＩＬ－３６γ）を添加した。実験をさらに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２にて）進め、細胞培養上清を回収し、ＩＬ－８の定量を、上記に説明されるようにＣｉｓｂｉｏ ＢｉｏａｓｓａｙのＨＴＲＦ技術に基づくヒトＩＬ－８アッセイを使用して行った。その後、補間したデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアにおいて、標準の非線形回帰解析を使用して解析して、抗体ＩＣ５０値を導いた。
多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７のヒト初代細胞に対する遮断効力および有効性を決定するために、本発明者らは、ヒト初代成人ケラチノサイトによるｈｕ－ＩＬ－３６により刺激されたＩＬ－８分泌を阻害する抗体の能力を評価した。また、ヒトＩｇＧアイソタイプ対照（「Ｈｕ ＩｇＧ１対照」）を陰性対照として使用するためにアッセイした。ヒト成人正常上皮ケラチノサイトをＬｏｎｚａから得た。製造業者によって、細胞は、提供された正常な（疾患を有しない）ヒト組織から単離され、低温保存された。製造業者によって推奨される一般ガイドラインを使用して、細胞を解凍し、維持した。ＨＥＫａ細胞を、Ｇｏｌｄ Ｂｕｌｌｅｔキット（Ｌｏｎｚａ）からの補完したヒトケラチノサイト増殖培地からなる増殖培地において維持した。実験使用の前日に、ＨＥＫａを、平底９６ウェルプレートに、使用日に約８０～８５％コンフルエンシーになるように細胞１０，０００個／ウェルにて播種した。初代ケラチノサイト細胞アッセイを、組換え発現したｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７またはＨｕ ＩｇＧ１対照がアンタゴニストとして使用されたことを除いては、実施例２で説明されるように、ヒト成人ケラチノサイト（ＨＥＫａ）により行った。簡潔に説明すると、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７または適切な抗体対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨＥＫａ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いて、アゴニスト（ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βまたはｈｕ－ＩＬ－３６γ）を添加した。実験をさらに２４時間（３７℃、５％ＣＯ２にて）進め、細胞培養上清を回収し、ＩＬ－８の定量を、上記に説明されるようにＣｉｓｂｉｏ ＢｉｏａｓｓａｙのＨＴＲＦ技術に基づくヒトＩＬ－８アッセイを使用して行った。その後、補間したデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアにおいて、標準の非線形回帰解析を使用して解析して、抗体ＩＣ５０値を導いた。
【0296】
図４Ａ、図４Ｂおよび図４Ｃにおいて示される通り、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７は、ヒト初代成人ケラチノサイトにおけるＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γ媒介ＩＬ－８産生の強力な遮断活性を実証し、それぞれ、約０．５６ｎＭ、０．１１ｎＭおよび２．７ｎＭのＩＣ５０値であった。８ｎＭのｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７では、ヒト初代成人ケラチノサイトにおけるＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γ媒介ＩＬ－８産生の１００％が阻害された。この実施例は、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７のヒト初代細胞に対する効力は、ヒトケラチノサイト細胞系ＨａＣａｔについて観察された効力と同様であることを実証する。
【0297】
多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７のＦａｂアームの独立した遮断活性を実証するために、本発明者らは、上記に説明される方法と類似するが、以下の改変を伴う方法を使用して、ｈｕ－ＩＬ－３６αとｈｕ－ＩＬ－３６βとの混合物によって刺激されたヒト初代成人ケラチノサイトによるＩＬ－８分泌を阻害するＦａｂアームの能力を評価した。ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７または適切な抗体対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨＥＫａ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いて、アゴニストを添加した（個々にｈｕ－ＩＬ－３６α、個々にｈｕ－ＩＬ－３６β、またはｈｕ－ＩＬ－３６αとｈｕ－ＩＬ－３６βとの混合物を各サイトカインのおよそのＥＣ５０において）。ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７は、ＩＬ－３６αとＩＬ－３６βとの混合物の強力な遮断活性を実証し、約０．４４ｎＭのＩＣ５０値であった。ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の、個々のＩＬ－３６αおよびＩＬ－３６βに対するＩＣ５０値は、上記の本実施例においてヒト初代成人ケラチノサイトについて報告された遮断ＩＣ５０値と一致し、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７のＩＬ－３６α／ＩＬ－３６γおよびＩＬ－３６βターゲティングＦａｂアームは、強力に、かつ独立して、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γを中和することを実証した。
【0298】
多重特異性抗体ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の、ＩＬ－３６アゴニストサイトカインの混合物に対する効力および有効性を決定するために、本発明者らは、抗体の、初代細胞におけるＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの混合物によるシグナル伝達を遮断する能力を評価した。ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７の、ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよびｈｕ－ＩＬ－３６γの混合物によって刺激されたヒト初代成人ケラチノサイトによるＩＬ－８分泌を阻害する能力を、上記に説明される方法と同様であるが、以下の改変を伴う方法を使用して評定した。ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７または適切な抗体対照（例えば、Ｈｕ ＩｇＧ１対照）を、ＨＥＫａ細胞と３７℃において１時間インキュベートし、続いて、アゴニストの混合物（各サイトカインのおよそのＥＣ５０～ＥＣ６５おけるｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよびｈｕ－ＩＬ－３６γ）を添加した。ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７を所望のサイトカイン混合物の存在下において滴定することによって、ｍＡｂ２．１０／ｍＡｂ６＿２．７のＩＣ５０値は、１．１６ｎＭであると決定され、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－６γを含有する混合物における強力な遮断活性を実証した。
【0299】
添付の特許請求の範囲にかかわらず、本明細書で示される本開示は、以下の条項によっても定義され、それは、単独で、または１つもしくは複数の他の条項もしくは実施形態との組合せで、有益であり得る。上記の説明を限定することなく、以下のように番号付けされる本開示のある特定の非限定的な条項が示され、個々に番号付けされた条項の各々は、先行するか、または後続の条項のいずれかと共に使用するか、または組み合わせてもよい。したがって、このことは、全てのそのような組合せについての支持を提供することを意図し、以下に明確に示される特定の組合せに必ずしも限定されない。
１． （ｉ）第１の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ１）、第２の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ２）および第３の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ３）ならびに／または（ｉｉ）第１の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ１）、第２の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ２）および第３の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ３）を含む抗ＩＬ－３６抗体であって、
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、TGSSSNIGAHYDVH（配列番号１８）、TGSSSNIGAGYDVH（配列番号２２）、RASQSVSSNYLA（配列番号３８）、またはRASQTIYKYLN（配列番号４２）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、SNNNRPS（配列番号１５）、GNDNRPS（配列番号１９）、GNTNRPS（配列番号２３）、GNRNRPS（配列番号２７）、SASSLQS（配列番号３９）、またはAASSLQS（配列番号４３）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、QSYDYSLRGYV（配列番号１６）、QSYDYSLSGYV（配列番号２０）、QSYDYSLRVYV（配列番号２８）、QSYDYSLKAYV（配列番号３２）、QSYDISLSGWV（配列番号３６）、QQTYSYPPT（配列番号４０）、またはQQSSIPYT（配列番号４４）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、SAYAMHW（配列番号４６）、STSSYYW（配列番号５０）、SSTSYYW（配列番号５４）、GSRSYYW（配列番号５８）、STYAMSW（配列番号６２）、TSSNYYW（配列番号６６）、SSYGMH（配列番号７０）、SNYAIS（配列番号７４）、TSTNYYW（配列番号８２）、ＴSSNAYW（配列番号８６）、TASNYYW（配列番号９０）、TASNTYW（配列番号１０６）、SDSSYYW（配列番号１２２）、SESSYYW（配列番号１２６）、STSSDYW（配列番号１３０）、SNSSYYW（配列番号１３４）、STSSYHW（配列番号１４２）、SRSSYYW（配列番号１４６）、XXXNXYX（配列番号２５１）（ここで、１位のＸは、Ｔ、Ｄ、ＥまたはＮであり；２位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｑ、ＲまたはＴであり；３位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、ＱまたはＴであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；７位のＸは、Ｗ、Ｆ、Ｉ、ＶまたはＹである）またはXXXXXXW（配列番号３３６）（ここで、１位のＸは、ＳまたはＤであり；２位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、ＲまたはＳであり；３位のＸは、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＲであり；４位のＸは、Ｓ、Ｇ、Ｋ、ＮまたはＰであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＷであり；６位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、ＮまたはＱである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、VISYDGTNEYYAD（配列番号４７）、SIYYTGNTYYNP（配列番号５１）、SIHYSGNTYYNP（配列番号５５）、SIHYSGTTYYNP（配列番号５９）、GISGGSGYTYYAD（配列番号６３）、SIDYTGSTYYNP（配列番号６７）、VISYGGSERYYAD（配列番号７１）、GILPILGTVDYAQ（配列番号７５）、NIDYTGSTYYNA（配列番号８３）、SIDYTGSTAYNP（配列番号８７）、SIDYTGSTYYNT（配列番号９１）、SIDYTGSTYYEP（配列番号９９）、SIDYTGSTYYEP（配列番号１０３）、SIDYTGSTYYQP（配列番号１１９）、SIYYTGNTYYNS（配列番号１２３）、SIYYTGNTYYLP（配列番号１３１）、SIYYTGNTYYMP（配列番号１４３）、SIYYTGNTYYWP（配列番号１４７）、SIYYTGETYYAP（配列番号１５１）、ＸXDXXXXXXYXX（配列番号２８４）（ここで、１位のＸは、Ｓ、ＮまたはＴであり；２位のＸは、Ｉ、ＭまたはＶであり；４位のＸは、ＹまたはＨであり；５位のＸは、Ｔ、Ｈ、ＬまたはＮであり；６位のＸは、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、ＳまたはＴであり；７位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、ＱまたはＴであり；８位のＸは、Ｔ、Ａ、ＤまたはＥであり；９位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｑ、ＳまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、ＰまたはＱであり；１２位のＸは、Ｐ、ＡまたはＥである）またはXXXXXXXXXYXP（配列番号３７９）（ここで、１位のＸは、Ｓ、Ｆ、Ｉ、ＭまたはＱであり；２位のＸは、Ｉ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＶであり；３位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；４位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；５位のＸは、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＱであり；６位のＸは、ＧまたはＱであり；７位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｐ、ＲまたはＳであり；８位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、ＷまたはＹであり；９位のＸは、ＹまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、ＳまたはＴである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、ARGIRIFTSYFDS（配列番号４８）、ARVRYGVGVPRYFDP（配列番号５２）、ARVHYGGYIPRRFDH（配列番号５６）、ARVAPSYPRVFDY（配列番号６０）、ARVVTYRDPPASFDY（配列番号６４）、ARGKYYETYLGFDV（配列番号６８）、AREPWYSSRGWTGYGFDV（配列番号７２）、AREPWYRLGAFDV（配列番号７６）、ATGKYYETYLGFDV（配列番号８４）、AHGKYYETYLGFDV（配列番号８８）、ATGSYYETYLGFDV（配列番号１００）、ATGNYYETYLGFDV（配列番号１０４）、ASGKYYETYLGFDV（配列番号１１２）、ARGNYYETYLGFDV（配列番号１２０）、AGVRYGVGVPRYFDP（配列番号１２８）、SRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１３２）、VRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４４）、TRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４８）、ARLRYGVGVPRYFDP（配列番号１５２）、ARVKYGVGVPRYFDP（配列番号１５６）、ARVRYGVGVPRHFDP（配列番号１６０）、AXGXYYXTYLGFDV（配列番号３２２）（ここで、２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＹであり；４位のＸは、Ｋ、ＡまたはＳであり；７位のＸは、ＥまたはＴである）またはXXXXXGXXVPRXFDP（配列番号４６２）（ここで、１位のＸは、ＡまたはＶであり；２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｎ、ＱまたはＴであり；３位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＳであり；４位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；５位のＸは、Ｙ、Ｈ、Ｉ、ＬまたはＶであり；７位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＷまたはＹであり；８位のＸは、Ｇ、Ｎ、Ｒ、ＳまたはＴであり；１２位のＸは、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＲである）から選択されるアミノ酸配列を含む、
抗ＩＬ－３６抗体。
２． （ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、
条項１に記載の抗体。
３． （ａ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号６６、８２、８６、９０または２５２～２８３から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３、１１９または２８５～３２１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２、１２０または３２３～３３５から選択されるアミノ酸配列を含む、
条項１または２に記載の抗体。
４． （ａ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６または３３７～３７８から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号５１、１２３、１３１、１４３、１４７、１５１または３８０～４６１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０または４６３～５１３から選択されるアミノ酸配列を含む、
条項１または２に記載の抗体。
５． （ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号６６、８２、８６、９０または２５２～２８３から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３、１１９または２８５～３２１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２、１２０または３２３～３３５から選択されるアミノ酸配列を含む、
条項１に記載の抗体。
６． （ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６または３３７～３７８から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号５１、１２３、１３１、１４３、１４７、１５１または３８０～４６１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０または４６３～５１３から選択されるアミノ酸配列を含む、
条項１に記載の抗体。
７． 配列番号１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、７７もしくは７８から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、条項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
８． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、６５、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、条項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
９． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、条項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
１０． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、条項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
１１． 配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号１７０～２０２、２４８～２５０、５１８～６１６および７４３～７５１から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、条項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
１２． 配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号２０３～２４１および６１７～７３３から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、条項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
１３． 配列番号１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、７７もまたは７８から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１４． 配列番号１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、７７もしくは７８から選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１５． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、６５、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１６． 配列番号１７もしくは７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、６５、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１７． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１８． 配列番号１７または７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１９． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２０． 配列番号１７もしくは７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２１． 配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号１７０～２０２、２４８、２４９～２５０、５１８～６１６および７４３～７５１から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２２． 配列番号１６９もしくは２４２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号１７０～２０２、２４８～２５０、５１８～６１６および７４３～７５１から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２３． 配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号２０３～２４１および６１７～７３３から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２４． 配列番号１６９もしくは２４２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；および／または配列番号２０６～２４１から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２５． （ａ）各々、配列番号１８のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号１９のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号２０のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６６、８２、８６、９０または１０６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３または１１９から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２または１２０から選択されるＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１４２または１４６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号５１、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７または１５１から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６または１６０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体。
２６． 重鎖のうちの１つが、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、他方の重鎖が、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む、条項２５に記載の抗体。
２７． （ａ）各々、配列番号１７または７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３または１１７から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１または１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体。
２８． （ａ）配列番号１６９および２４２の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１７１、１７４、１７７、１８０、１８３、１８６、１８９、１９２、１９５、１９８、２０１および２４９から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８および２４１から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体。
２９． （ａ）配列番号１６９および２４２の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１７２、１７５、１７８、１８１、１８４、１８７、１９０、１９３、１９６、１９９、２０２、２５０から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７および２４０から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体。
３０． 配列番号１６９の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、配列番号１９２の重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、配列番号２３５の重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列とを含む、多重特異性抗ＩＬ－３６抗体。
３１． １つのアームにおいてＩＬ－３６αおよびＩＬ－３６γについての特異性、ならびに他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性を含む多重特異性抗体である、条項１～３０のいずれか一項に記載の抗体。
３２． ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／またはｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、条項１～３１のいずれか一項に記載の抗体。
３３． ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、条項１～３２のいずれか一項に記載の抗体。
３４． ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、条項１～３３のいずれか一項に記載の抗体。
３５． ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％減少し；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γ濃度において、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよい、条項１～３４のいずれか一項に記載の抗体。
３６． ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激されたヒト初代ケラチノサイト（ＰＨＫ）からのＩＬ－８の放出を阻害し；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γ濃度において、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよい、条項１～３５のいずれか一項に記載の抗体。
３７． 配列番号５、６または７のカニクイザルのＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γと交差反応する、条項１～３６のいずれか一項に記載の抗体。
３８． モノクローナル抗体である、条項１～３７のいずれか一項に記載の抗体。
３９． 組換え抗体である、条項１～３８のいずれか一項に記載の抗体。
４０． キメラ抗体である、条項１～３９のいずれか一項に記載の抗体。
４１． ヒト化またはヒト抗体である、条項１～３９のいずれか一項に記載の抗体。
４２． Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）、単一アーム抗体およびｓｃＦｖからなる群から選択されてもよい抗体断片である、条項１～４１のいずれか一項に記載の抗体。
４３． クラスＩｇＧの全長抗体であり、クラスＩｇＧの抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択されるアイソタイプを有してもよい、条項１～４２のいずれか一項に記載の抗体。
４４． Ｆｃ領域変異型であり、Ｆｃ領域変異型が、エフェクター機能を変更するか、または半減期を変更してもよい、条項４３に記載の抗体。
４５． Ｆｃ領域変異型が、エフェクター機能を減少し、かつ／またはエフェクター機能のない抗体をもたらし、Ｆｃ領域変異型が、エフェクター機能のない機能をもたらす２９７位におけるアミノ酸置換を含んでもよい、条項４４に記載の抗体。
４６． 免疫コンジュゲートであり、免疫コンジュゲートが、ＩＬ－３６媒介状態または疾患の処置のための治療剤を含んでもよく、治療剤が、がんの処置のための化学療法剤または細胞傷害剤であってもよい、条項１～４５のいずれか一項に記載の抗体。
４７． 免疫グロブリンスキャフォールドまたは免疫グロブリンフレームワーク以外のスキャフォールド、適宜、代替タンパク質スキャフォールドおよび人工ポリマースキャフォールドから選択されるスキャフォールド上にグラフト化されたＣＤＲを含む合成抗体である、条項１～４７のいずれか一項に記載の抗体。
４８． 条項１～４８のいずれか一項に記載の抗体と同じエピトープに特異的に結合する抗ＩＬ－３６抗体。
４９． ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に結合する多重特異性抗体であって、抗体が、ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合してもよく、結合親和性が、配列番号１のｈｕ－ＩＬ－３６α、配列番号２のｈｕ－ＩＬ－３６βおよび配列番号３のｈｕ－ＩＬ－３６γについての平衡解離定数（ＫＤ）によって測定されてもよく、
（ａ）抗体が、１つのアームにおいてＩＬ－３６αおよび／またはＩＬ－３６γについての特異性、ならびに他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性を含んでもよく；１つのアームが、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよく、他方のアームが、ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよく、
（ｂ）抗体が、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％減少してもよく；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体が、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく、
（ｃ）前記抗体が、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γによって刺激されたヒト初代ケラチノサイト（ＰＨＫ）からのＩＬ－８の放出を阻害してもよく；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体が、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく、
（ｄ）抗体が、カニクイザルのＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γと交差反応してもよく、かつ／または
（ｅ）抗体が、カニクイザルＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合してもよく；結合親和性が、配列番号５のｃｙ－ＩＬ－３６α、配列番号６のｃｙ－ＩＬ－３６βおよび配列番号７のｃｙ－ＩＬ－３６γについての平衡解離定数（ＫＤ）によって測定されてもよい、
多重特異性抗体。
５０． 条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
５１． シグナルペプチド（ＳＰ）をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、条項５０に記載のポリヌクレオチド。
５２． 軽鎖および重鎖をコードする、条項５０に記載のポリヌクレオチド。
５３． 哺乳動物細胞における抗体の最適発現のために選択される１つまたは複数のコドンを含むポリヌクレオチド配列を含む、条項５０に記載のポリヌクレオチド。
５４． ポリヌクレオチド配列が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における抗体の最適発現のために選択される１つまたは複数のコドンを含む、条項５０に記載のポリヌクレオチド。
５５． 条項５０～５４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
５６． 条項５５のベクターを含む単離された宿主細胞。
５７． 条項５０～５４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
５８． 条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体を発現する単離された宿主細胞。
５９． チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、骨髄腫細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０）、サル腎臓細胞（ＣＯＳ－７）、ヒト胚腎臓系（２９３)、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍細胞、ＴＲ１細胞、メディカルリサーチカウンシル５（ＭＲＣ５）細胞および包皮４（ＦＳ４）細胞から選択される、条項５６に記載の宿主細胞。
６０． 抗体が産生されるように、条項５６～５９のいずれか一項に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
６１． 条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体を産生するハイブリドーマ。
６２． 条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
６３． ＩＬ－３６媒介疾患または状態の処置のための治療剤をさらに含み、治療剤が、化学療法剤であってもよい、条項６２に記載の医薬組成物。
６４． 対象においてＩＬ－３６媒介疾患を処置する方法であって、対象に、治療有効量の条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体、または治療有効量の条項６２に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
６５． 対象において、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γにより刺激されたシグナル伝達によって媒介される疾患を処置する方法であって、対象に、治療有効量の条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体、または治療有効量の条項６２に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
６６． 疾患が、上皮増殖因子受容体阻害剤に起因するざ瘡、ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＳＨ）、急性汎発性発疹性膿疱症（ＡＧＥＰ）、皺の無微生物膿疱症、頭皮／脚の無微生物膿疱症、無微生物角層下膿疱症、無菌膿瘍症候群、ベーチェット病、腸バイパス症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、小児膿疱性皮膚症、クローン病、インターロイキン－１受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＲＡ）、インターロイキン－３６受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＴＲＡ）、湿疹、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、持久性隆起性紅斑、化膿性汗腺炎、ＩｇＡ天疱瘡、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、好中球性脂肪織炎、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）、乾癬、乾癬性関節炎、膿疱性乾癬（ＤＩＲＡ、ＤＩＴＲＡ）、壊疽性膿皮症、化膿性関節炎壊疽性膿皮症およびざ瘡（ＰＡＰＡ）、化膿性関節炎壊疽性膿皮症ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＰＡＳＨ）、リウマチ様好中球性皮膚症、滑膜炎ざ瘡膿疱症骨増殖症および骨炎（ＳＡＰＨＯ）、クローン病患者におけるＴＮＦ誘導性乾癬型皮膚病変、シェーグレン症候群、スイート症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、潰瘍性大腸炎ならびにブドウ膜炎から選択される、条項６４または６５に記載の方法。
６７． 疾患が、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）および乾癬から選択される、条項６６に記載の方法。
６８． 対象において乾癬を処置する方法であって、対象に、治療有効量の条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体、または治療有効量の条項６２に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
６９． 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、治療有効量の条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体、または治療有効量の条項６２に記載の医薬組成物を投与することを含み、がんが、乳がん、結腸直腸がん、非小細胞肺がん、膵がんから選択されてもよい、方法。
１． （ｉ）第１の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ１）、第２の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ２）および第３の軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ３）ならびに／または（ｉｉ）第１の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ１）、第２の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ２）および第３の重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ３）を含む抗ＩＬ－３６抗体であって、
（ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、TGSSSNIGAHYDVH（配列番号１８）、TGSSSNIGAGYDVH（配列番号２２）、RASQSVSSNYLA（配列番号３８）、またはRASQTIYKYLN（配列番号４２）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、SNNNRPS（配列番号１５）、GNDNRPS（配列番号１９）、GNTNRPS（配列番号２３）、GNRNRPS（配列番号２７）、SASSLQS（配列番号３９）、またはAASSLQS（配列番号４３）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、QSYDYSLRGYV（配列番号１６）、QSYDYSLSGYV（配列番号２０）、QSYDYSLRVYV（配列番号２８）、QSYDYSLKAYV（配列番号３２）、QSYDISLSGWV（配列番号３６）、QQTYSYPPT（配列番号４０）、またはQQSSIPYT（配列番号４４）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、SAYAMHW（配列番号４６）、STSSYYW（配列番号５０）、SSTSYYW（配列番号５４）、GSRSYYW（配列番号５８）、STYAMSW（配列番号６２）、TSSNYYW（配列番号６６）、SSYGMH（配列番号７０）、SNYAIS（配列番号７４）、TSTNYYW（配列番号８２）、ＴSSNAYW（配列番号８６）、TASNYYW（配列番号９０）、TASNTYW（配列番号１０６）、SDSSYYW（配列番号１２２）、SESSYYW（配列番号１２６）、STSSDYW（配列番号１３０）、SNSSYYW（配列番号１３４）、STSSYHW（配列番号１４２）、SRSSYYW（配列番号１４６）、XXXNXYX（配列番号２５１）（ここで、１位のＸは、Ｔ、Ｄ、ＥまたはＮであり；２位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｑ、ＲまたはＴであり；３位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、ＱまたはＴであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；７位のＸは、Ｗ、Ｆ、Ｉ、ＶまたはＹである）またはXXXXXXW（配列番号３３６）（ここで、１位のＸは、ＳまたはＤであり；２位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、ＲまたはＳであり；３位のＸは、Ｓ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＲであり；４位のＸは、Ｓ、Ｇ、Ｋ、ＮまたはＰであり；５位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＷであり；６位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、ＮまたはＱである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、VISYDGTNEYYAD（配列番号４７）、SIYYTGNTYYNP（配列番号５１）、SIHYSGNTYYNP（配列番号５５）、SIHYSGTTYYNP（配列番号５９）、GISGGSGYTYYAD（配列番号６３）、SIDYTGSTYYNP（配列番号６７）、VISYGGSERYYAD（配列番号７１）、GILPILGTVDYAQ（配列番号７５）、NIDYTGSTYYNA（配列番号８３）、SIDYTGSTAYNP（配列番号８７）、SIDYTGSTYYNT（配列番号９１）、SIDYTGSTYYEP（配列番号９９）、SIDYTGSTYYEP（配列番号１０３）、SIDYTGSTYYQP（配列番号１１９）、SIYYTGNTYYNS（配列番号１２３）、SIYYTGNTYYLP（配列番号１３１）、SIYYTGNTYYMP（配列番号１４３）、SIYYTGNTYYWP（配列番号１４７）、SIYYTGETYYAP（配列番号１５１）、ＸXDXXXXXXYXX（配列番号２８４）（ここで、１位のＸは、Ｓ、ＮまたはＴであり；２位のＸは、Ｉ、ＭまたはＶであり；４位のＸは、ＹまたはＨであり；５位のＸは、Ｔ、Ｈ、ＬまたはＮであり；６位のＸは、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、ＳまたはＴであり；７位のＸは、Ｓ、Ａ、Ｄ、ＱまたはＴであり；８位のＸは、Ｔ、Ａ、ＤまたはＥであり；９位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｆ、Ｑ、ＳまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、ＰまたはＱであり；１２位のＸは、Ｐ、ＡまたはＥである）またはXXXXXXXXXYXP（配列番号３７９）（ここで、１位のＸは、Ｓ、Ｆ、Ｉ、ＭまたはＱであり；２位のＸは、Ｉ、Ａ、Ｇ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＶであり；３位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；４位のＸは、Ｙ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、ＴまたはＷであり；５位のＸは、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｎ、ＰまたはＱであり；６位のＸは、ＧまたはＱであり；７位のＸは、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｐ、ＲまたはＳであり；８位のＸは、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、ＷまたはＹであり；９位のＸは、ＹまたはＷであり；１１位のＸは、Ｎ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、ＳまたはＴである）から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、ARGIRIFTSYFDS（配列番号４８）、ARVRYGVGVPRYFDP（配列番号５２）、ARVHYGGYIPRRFDH（配列番号５６）、ARVAPSYPRVFDY（配列番号６０）、ARVVTYRDPPASFDY（配列番号６４）、ARGKYYETYLGFDV（配列番号６８）、AREPWYSSRGWTGYGFDV（配列番号７２）、AREPWYRLGAFDV（配列番号７６）、ATGKYYETYLGFDV（配列番号８４）、AHGKYYETYLGFDV（配列番号８８）、ATGSYYETYLGFDV（配列番号１００）、ATGNYYETYLGFDV（配列番号１０４）、ASGKYYETYLGFDV（配列番号１１２）、ARGNYYETYLGFDV（配列番号１２０）、AGVRYGVGVPRYFDP（配列番号１２８）、SRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１３２）、VRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４４）、TRVRYGVGVPRYFDP（配列番号１４８）、ARLRYGVGVPRYFDP（配列番号１５２）、ARVKYGVGVPRYFDP（配列番号１５６）、ARVRYGVGVPRHFDP（配列番号１６０）、AXGXYYXTYLGFDV（配列番号３２２）（ここで、２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＹであり；４位のＸは、Ｋ、ＡまたはＳであり；７位のＸは、ＥまたはＴである）またはXXXXXGXXVPRXFDP（配列番号４６２）（ここで、１位のＸは、ＡまたはＶであり；２位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｎ、ＱまたはＴであり；３位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＳであり；４位のＸは、Ｒ、Ａ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＶであり；５位のＸは、Ｙ、Ｈ、Ｉ、ＬまたはＶであり；７位のＸは、Ｖ、Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＷまたはＹであり；８位のＸは、Ｇ、Ｎ、Ｒ、ＳまたはＴであり；１２位のＸは、Ｙ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、ＱまたはＲである）から選択されるアミノ酸配列を含む、
抗ＩＬ－３６抗体。
２． （ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、
条項１に記載の抗体。
３． （ａ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号６６、８２、８６、９０または２５２～２８３から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３、１１９または２８５～３２１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２、１２０または３２３～３３５から選択されるアミノ酸配列を含む、
条項１または２に記載の抗体。
４． （ａ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６または３３７～３７８から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号５１、１２３、１３１、１４３、１４７、１５１または３８０～４６１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０または４６３～５１３から選択されるアミノ酸配列を含む、
条項１または２に記載の抗体。
５． （ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号６６、８２、８６、９０または２５２～２８３から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３、１１９または２８５～３２１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２、１２０または３２３～３３５から選択されるアミノ酸配列を含む、
条項１に記載の抗体。
６． （ａ）ＨＶＲ－Ｌ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ－Ｌ２が、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ－Ｌ３が、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ－Ｈ１が、配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１３８、１４２、１４６または３３７～３７８から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ－Ｈ２が、配列番号５１、１２３、１３１、１４３、１４７、１５１または３８０～４６１から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ－Ｈ３が、配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６、１６０または４６３～５１３から選択されるアミノ酸配列を含む、
条項１に記載の抗体。
７． 配列番号１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、７７もしくは７８から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、条項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
８． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、６５、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、条項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
９． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、条項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
１０． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、条項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
１１． 配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号１７０～２０２、２４８～２５０、５１８～６１６および７４３～７５１から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、条項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
１２． 配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号２０３～２４１および６１７～７３３から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、条項１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
１３． 配列番号１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、７７もまたは７８から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１４． 配列番号１３、１７、２１、２５、２９、３３、３７、４１、７７もしくは７８から選択される軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４５、４９、５３、５７、６１、６５、６９、７３、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１５． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、６５、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１６． 配列番号１７もしくは７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、６５、７９、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３、１１７、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１７． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１８． 配列番号１７または７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３もしくは１１７から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
１９． 配列番号１７もしくは７７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２０． 配列番号１７もしくは７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列；および／または配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１もしくは１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２１． 配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号１７０～２０２、２４８、２４９～２５０、５１８～６１６および７４３～７５１から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２２． 配列番号１６９もしくは２４２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号１７０～２０２、２４８～２５０、５１８～６１６および７４３～７５１から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２３． 配列番号１６９もしくは２４２と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；ならびに／または配列番号２０３～２４１および６１７～７３３から選択される配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２４． 配列番号１６９もしくは２４２の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列；および／または配列番号２０６～２４１から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列を含む、抗ＩＬ－３６抗体。
２５． （ａ）各々、配列番号１８のＨＶＲ－Ｌ１配列、配列番号１９のＨＶＲ－Ｌ２配列および配列番号２０のＨＶＲ－Ｌ３配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６６、８２、８６、９０または１０６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号６７、８３、８７、９１、９９、１０３または１１９から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号６８、８４、８８、１００、１０４、１１２または１２０から選択されるＨＶＲ－Ｈ３配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号５０、１２２、１２６、１３０、１３４、１４２または１４６から選択されるＨＶＲ－Ｈ１配列；配列番号５１、１２３、１２７、１３１、１３５、１３９、１４３、１４７または１５１から選択されるＨＶＲ－Ｈ２配列；および配列番号５２、１２８、１３２、１４４、１４８、１５２、１５６または１６０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体。
２６． 重鎖のうちの１つが、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗを含み、他方の重鎖が、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む、条項２５に記載の抗体。
２７． （ａ）各々、配列番号１７または７７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）アミノ酸配列を含む一対の軽鎖と、
（ｂ）配列番号６５、８０、８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３または１１７から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｃ）配列番号４９、７９、１２１、１２５、１２９、１３３、１３７、１４１、１４５、１４９、１５３、１５７、１６１または１６５から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）アミノ酸配列を含む重鎖と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体。
２８． （ａ）配列番号１６９および２４２の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１７１、１７４、１７７、１８０、１８３、１８６、１８９、１９２、１９５、１９８、２０１および２４９から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号２０８、２１１、２１４、２１７、２２０、２２３、２２６、２２９、２３２、２３５、２３８および２４１から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体。
２９． （ａ）配列番号１６９および２４２の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、
（ｂ）配列番号１７２、１７５、１７８、１８１、１８４、１８７、１９０、１９３、１９６、１９９、２０２、２５０から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、
（ｃ）配列番号２０７、２１０、２１３、２１６、２１９、２２２、２２５、２２８、２３１、２３４、２３７および２４０から選択される重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と
を含む多重特異性抗体である、抗ＩＬ－３６抗体。
３０． 配列番号１６９の一対の軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列と、配列番号１９２の重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列と、配列番号２３５の重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列とを含む、多重特異性抗ＩＬ－３６抗体。
３１． １つのアームにおいてＩＬ－３６αおよびＩＬ－３６γについての特異性、ならびに他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性を含む多重特異性抗体である、条項１～３０のいずれか一項に記載の抗体。
３２． ｈｕ－ＩＬ－３６α、ｈｕ－ＩＬ－３６βおよび／またはｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、条項１～３１のいずれか一項に記載の抗体。
３３． ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、条項１～３２のいずれか一項に記載の抗体。
３４． ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－８Ｍ以下、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合する、条項１～３３のいずれか一項に記載の抗体。
３５． ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％減少し；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γ濃度において、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよい、条項１～３４のいずれか一項に記載の抗体。
３６． ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激されたヒト初代ケラチノサイト（ＰＨＫ）からのＩＬ－８の放出を阻害し；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γ濃度において、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよい、条項１～３５のいずれか一項に記載の抗体。
３７． 配列番号５、６または７のカニクイザルのＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βまたはＩＬ－３６γと交差反応する、条項１～３６のいずれか一項に記載の抗体。
３８． モノクローナル抗体である、条項１～３７のいずれか一項に記載の抗体。
３９． 組換え抗体である、条項１～３８のいずれか一項に記載の抗体。
４０． キメラ抗体である、条項１～３９のいずれか一項に記載の抗体。
４１． ヒト化またはヒト抗体である、条項１～３９のいずれか一項に記載の抗体。
４２． Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）、単一アーム抗体およびｓｃＦｖからなる群から選択されてもよい抗体断片である、条項１～４１のいずれか一項に記載の抗体。
４３． クラスＩｇＧの全長抗体であり、クラスＩｇＧの抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択されるアイソタイプを有してもよい、条項１～４２のいずれか一項に記載の抗体。
４４． Ｆｃ領域変異型であり、Ｆｃ領域変異型が、エフェクター機能を変更するか、または半減期を変更してもよい、条項４３に記載の抗体。
４５． Ｆｃ領域変異型が、エフェクター機能を減少し、かつ／またはエフェクター機能のない抗体をもたらし、Ｆｃ領域変異型が、エフェクター機能のない機能をもたらす２９７位におけるアミノ酸置換を含んでもよい、条項４４に記載の抗体。
４６． 免疫コンジュゲートであり、免疫コンジュゲートが、ＩＬ－３６媒介状態または疾患の処置のための治療剤を含んでもよく、治療剤が、がんの処置のための化学療法剤または細胞傷害剤であってもよい、条項１～４５のいずれか一項に記載の抗体。
４７． 免疫グロブリンスキャフォールドまたは免疫グロブリンフレームワーク以外のスキャフォールド、適宜、代替タンパク質スキャフォールドおよび人工ポリマースキャフォールドから選択されるスキャフォールド上にグラフト化されたＣＤＲを含む合成抗体である、条項１～４７のいずれか一項に記載の抗体。
４８． 条項１～４８のいずれか一項に記載の抗体と同じエピトープに特異的に結合する抗ＩＬ－３６抗体。
４９． ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に結合する多重特異性抗体であって、抗体が、ヒトＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合してもよく、結合親和性が、配列番号１のｈｕ－ＩＬ－３６α、配列番号２のｈｕ－ＩＬ－３６βおよび配列番号３のｈｕ－ＩＬ－３６γについての平衡解離定数（ＫＤ）によって測定されてもよく、
（ａ）抗体が、１つのアームにおいてＩＬ－３６αおよび／またはＩＬ－３６γについての特異性、ならびに他方のアームにおいてＩＬ－３６βについての特異性を含んでもよく；１つのアームが、ｈｕ－ＩＬ－３６αおよびｈｕ－ＩＬ－３６γに、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよく、他方のアームが、ｈｕ－ＩＬ－３６βに、１ｘ１０－９Ｍ以下、１ｘ１０－１０Ｍ以下、または１ｘ１０－１１Ｍ以下の結合親和性により結合してもよく、
（ｂ）抗体が、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γによって刺激された細胞内シグナルを、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％減少してもよく；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体が、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく、
（ｃ）前記抗体が、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γによって刺激されたヒト初代ケラチノサイト（ＰＨＫ）からのＩＬ－８の放出を阻害してもよく；およそＥＣ５０のＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／もしくはＩＬ－３６γ濃度において、抗体が、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＩＣ５０を有してもよく、
（ｄ）抗体が、カニクイザルのＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γと交差反応してもよく、かつ／または
（ｅ）抗体が、カニクイザルＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよびＩＬ－３６γの各々に、３ｎＭ以下の結合親和性により結合してもよく；結合親和性が、配列番号５のｃｙ－ＩＬ－３６α、配列番号６のｃｙ－ＩＬ－３６βおよび配列番号７のｃｙ－ＩＬ－３６γについての平衡解離定数（ＫＤ）によって測定されてもよい、
多重特異性抗体。
５０． 条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
５１． シグナルペプチド（ＳＰ）をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、条項５０に記載のポリヌクレオチド。
５２． 軽鎖および重鎖をコードする、条項５０に記載のポリヌクレオチド。
５３． 哺乳動物細胞における抗体の最適発現のために選択される１つまたは複数のコドンを含むポリヌクレオチド配列を含む、条項５０に記載のポリヌクレオチド。
５４． ポリヌクレオチド配列が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における抗体の最適発現のために選択される１つまたは複数のコドンを含む、条項５０に記載のポリヌクレオチド。
５５． 条項５０～５４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
５６． 条項５５のベクターを含む単離された宿主細胞。
５７． 条項５０～５４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
５８． 条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体を発現する単離された宿主細胞。
５９． チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、骨髄腫細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０）、サル腎臓細胞（ＣＯＳ－７）、ヒト胚腎臓系（２９３)、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍細胞、ＴＲ１細胞、メディカルリサーチカウンシル５（ＭＲＣ５）細胞および包皮４（ＦＳ４）細胞から選択される、条項５６に記載の宿主細胞。
６０． 抗体が産生されるように、条項５６～５９のいずれか一項に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
６１． 条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体を産生するハイブリドーマ。
６２． 条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
６３． ＩＬ－３６媒介疾患または状態の処置のための治療剤をさらに含み、治療剤が、化学療法剤であってもよい、条項６２に記載の医薬組成物。
６４． 対象においてＩＬ－３６媒介疾患を処置する方法であって、対象に、治療有効量の条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体、または治療有効量の条項６２に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
６５． 対象において、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６βおよび／またはＩＬ－３６γにより刺激されたシグナル伝達によって媒介される疾患を処置する方法であって、対象に、治療有効量の条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体、または治療有効量の条項６２に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
６６． 疾患が、上皮増殖因子受容体阻害剤に起因するざ瘡、ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＳＨ）、急性汎発性発疹性膿疱症（ＡＧＥＰ）、皺の無微生物膿疱症、頭皮／脚の無微生物膿疱症、無微生物角層下膿疱症、無菌膿瘍症候群、ベーチェット病、腸バイパス症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、小児膿疱性皮膚症、クローン病、インターロイキン－１受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＲＡ）、インターロイキン－３６受容体アンタゴニストの欠乏（ＤＩＴＲＡ）、湿疹、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、持久性隆起性紅斑、化膿性汗腺炎、ＩｇＡ天疱瘡、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、好中球性脂肪織炎、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）、乾癬、乾癬性関節炎、膿疱性乾癬（ＤＩＲＡ、ＤＩＴＲＡ）、壊疽性膿皮症、化膿性関節炎壊疽性膿皮症およびざ瘡（ＰＡＰＡ）、化膿性関節炎壊疽性膿皮症ざ瘡および化膿性汗腺炎（ＰＡＰＡＳＨ）、リウマチ様好中球性皮膚症、滑膜炎ざ瘡膿疱症骨増殖症および骨炎（ＳＡＰＨＯ）、クローン病患者におけるＴＮＦ誘導性乾癬型皮膚病変、シェーグレン症候群、スイート症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、潰瘍性大腸炎ならびにブドウ膜炎から選択される、条項６４または６５に記載の方法。
６７． 疾患が、汎発性膿疱性乾癬（ＧＰＰ）、掌蹠膿疱性乾癬（ＰＰＰ）および乾癬から選択される、条項６６に記載の方法。
６８． 対象において乾癬を処置する方法であって、対象に、治療有効量の条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体、または治療有効量の条項６２に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
６９． 対象においてがんを処置する方法であって、対象に、治療有効量の条項１～４９のいずれか一項に記載の抗体、または治療有効量の条項６２に記載の医薬組成物を投与することを含み、がんが、乳がん、結腸直腸がん、非小細胞肺がん、膵がんから選択されてもよい、方法。
【0300】
本発明の上記開示は、明確にする目的および理解の目的のために、例および例示としていくらか詳細に説明されているが、本明細書で説明される実施例、説明および実施形態を含む本開示は、例示の目的のためであり、例示的であると意図され、本開示を限定するとは解釈されるべきではない。本明細書で説明される実施例、説明および実施形態への様々な改変または変化は、行うことができ、本開示および添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲内に含まれるべきであることが当業者に明らかである。さらに、当業者は、本明細書で説明される方法および手技と均等ないくつかの方法および手技を認識する。全てのそのような均等物は、本開示の範囲内にあることが理解されるべきであり、添付の特許請求の範囲によって包含される。
【0301】
本発明の追加の実施形態は、以下の特許請求の範囲において示される。
【0302】
本明細書で挙げられる全ての出版物、特許出願、特許または他の文書の開示は、そのような各個々の出版物、特許、特許出願または他の文書が、全ての目的についてその全体が参照により本明細書に組み込まれていることを個々に特に示されており、本明細書においてその全体が示されているのと同様に、全ての目的についてそれらの全体が参照により本明細書に明確に組み込まれる。矛盾する場合には、特定の用語を含む本明細書が優先する。
【0303】
参考文献一覧
【図1-1】
【図1-2】
【図1-3】
【図2-1】
【図2-2】
【図2-3】
【図3-1】
【図3-2】
【図3-3】
【図4-1】
【図4-2】
【図4-3】
【配列表】
【国際調査報告】