特表 2022-515961 ミトコンドリア機能が改善されたＴ細胞

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-24

(54)【発明の名称】ミトコンドリア機能が改善されたＴ細胞

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/0783 20100101AFI20220216BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20220216BHJP

   C12N 5/0793 20100101ALI20220216BHJP

   C12N 5/0775 20100101ALI20220216BHJP

   C12N 5/09 20100101ALI20220216BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20220216BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220216BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20220216BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20220216BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20220216BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20220216BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20220216BHJP

   A61K 35/28 20150101ALN20220216BHJP

   A61K 35/51 20150101ALN20220216BHJP

【ＦＩ】

C12N5/0783

C12N5/10

C12N5/0793

C12N5/0775

C12N5/09

A61K35/17 Z

A61K45/00

A61P29/00

A61P37/02

C12N15/13

C12N15/12

C12N15/62 Z

A61K35/28

A61K35/51

【審査請求】未請求

【予備審査請求】有

(21)【出願番号】P 2021523501

(86)(22)【出願日】2019-11-13

(85)【翻訳文提出日】2021-06-02

(86)【国際出願番号】 US2019061140

(87)【国際公開番号】W WO2020102321

(87)【国際公開日】2020-05-22

(31)【優先権主張番号】62/760,392

(32)【優先日】2018-11-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521174912

【氏名又は名称】アブラハム ジェイ アンド フィリス カッツ コード ブラッド ファウンデーション

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】ラフリン，メアリー

(72)【発明者】

【氏名】ド，ジョン ス

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA91X

4B065AA92X

4B065AC12

4B065AC14

4B065AC20

4B065BB04

4B065BB13

4B065BB19

4B065BC12

4B065CA23

4C084AA17

4C084NA14

4C084ZB211

4C084ZB212

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087BB44

4C087BB59

4C087BB64

4C087CA04

4C087DA20

4C087DA32

4C087MA66

4C087NA20

4C087ZB07

4C087ZB11

4C087ZB26

(57)【要約】

臍帯血から治療用Ｔ細胞を産生するための方法が提供される。臍帯血由来の治療用Ｔ細胞を使用して免疫関連疾患または状態（例えば、自己免疫疾患、移植片拒絶、癌）を治療するための方法も提供される。臍帯血由来の治療用Ｔ細胞を含む組成物も提供される。ミトコンドリア移行の誘導または阻害を介して、疾患を治療するための方法および増殖細胞内で利用可能なＡＴＰを増加または減少させるための方法も提供される。
【選択図】図３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

血液から誘導性調節性Ｔ細胞（ｉＴｒｅｇ）を産生するための方法であって、
血液を準備することと、
ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞を前記血液から単離することと、
前記ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞を誘導してｉＴｒｅｇを含む第１の組成物に分化させることと、
前記ｉＴｒｅｇを前記第１の組成物から分離して、実質的に精製されたｉＴｒｅｇ組成物を形成することと、
前記精製されたｉＴｒｅｇ組成物を間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上で増殖（ｅｘｐａｎｄｉｎｇ）させることと、
ミトコンドリア移行を増加させるために前記ＭＳＣフィーダー層でトンネルナノチューブ（ＴＮＴ）の形成を誘導し、持続的なＦｏｘＰ３発現および炎症状態における抑制機能を備えた増殖ｉＴｒｅｇ組成物を産生することと、を含む、方法。

【請求項2】

前記血液がヒト臍帯血である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記誘導ステップが、前記ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞をＴＧＦ－βで処置することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記ｉＴｒｅｇが、フローサイトメトリーのセルソーティングまたは磁気セルソーティングを使用して、前記第１の組成物から分離される、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記精製されたｉＴｒｅｇ組成物が、少なくとも９０％純粋である、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記ｉＴｒｅｇが、ＣＤ４^＋、ＣＤ２５^＋、およびＦｏｘＰ３^＋タンパク質を発現する、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

ＦｏｘＰ３発現のＢＡＣＨ２転写調節を増加させることによって、前記精製されたｉＴｒｅｇ組成物を増殖させることをさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記ミトコンドリア移行が、増殖中のｉＴｒｅｇ上のＣＤ３９および／またはＣＤ７３経路を上方調節することによって促進される、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか１項によって産生された増殖されたｉＴｒｅｇ組成物を含む、誘導性調節性Ｔ細胞組成物。

【請求項10】

炎症性または自己免疫状態の治療を必要とするヒト対象における、炎症性または自己免疫状態を治療するための方法であって、
間葉系間質細胞上で増殖し、ＴＮＴ形成が誘導された、治療有効用量の臍帯血由来のｉＴｒｅｇを含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項11】

前記臍帯血ｉＴｒｅｇが、ＦｏｘＰ３発現のＢＡＣＨ２転写調節を誘導することによって分化されている、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記ｉＴｒｅｇが自家である、請求項１０に記載の方法。

【請求項13】

前記ｉＴｒｅｇが同種異系である、請求項１０に記載の方法。

【請求項14】

前記ｉＴｒｅｇが単一の抗原に特異的である、請求項１０に記載の方法。

【請求項15】

前記ｉＴｒｅｇがポリクローナルである、請求項１０に記載の方法。

【請求項16】

前記対象が糖尿病合併症に罹患している、請求項１０に記載の方法。

【請求項17】

間葉系間質細胞上で増殖し、ＴＮＴ形成が誘導された、有効用量の臍帯血由来のｉＴｒｅｇを含む治療用調節性Ｔ細胞組成物。

【請求項18】

前記臍帯血ｉＴｒｅｇが、ＦｏｘＰ３発現のＢＡＣＨ２転写調節を誘導することによって分化されている、請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

免疫関連の疾患または状態の治療を必要とする対象における、免疫関連の疾患または状態を治療するための方法であって、有効量の請求項１７に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項20】

前記治療用Ｔ細胞組成物が誘導性調節性Ｔ細胞を含む、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記治療用Ｔ細胞組成物が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞を含む、請求項１９に記載の方法。

【請求項22】

前記治療用Ｔ細胞組成物が、ウイルス特異的エフェクターＴ細胞を含む、請求項１９に記載の方法。

【請求項23】

前記対象が癌に罹患している、請求項１９に記載の方法。

【請求項24】

細胞内で利用可能なＡＴＰを増加させる方法であって、第１の細胞、および前記第１の細胞から第２の増殖細胞へのミトコンドリア移行を促進する有効量の薬剤を投与することを含む、方法。

【請求項25】

前記第１の細胞がＭＳＣである、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記第２の細胞がニューロンである、請求項２４に記載の方法。

【請求項27】

前記第２の細胞がＴ細胞である、請求項２４に記載の方法。

【請求項28】

前記第２の細胞が癌細胞である、請求項２４に記載の方法。

【請求項29】

前記ミトコンドリア移行が、前記増殖細胞上のＣＤ３９および／またはＣＤ７３を上方調節する薬剤によって促進される、請求項２４に記載の方法。

【請求項30】

前記ＣＤ３９またはＣＤ７３上方調節剤が、１型ＩＦＮ、ＴＮＦａ、ＩＬ－１ｂ、プロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２、ＴＧＦ－β、ｗｎｔシグナル伝達経路のアゴニスト、Ｅ２Ｆ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｐ１、ＨＩＦ１－ａ、Ｓｔａｔ３、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

ミトコンドリア移行が、ＴＮＴ形成を誘導する薬剤によって促進される、請求項２４に記載の方法。

【請求項32】

ＴＮＴ形成を誘導する前記薬剤が、Ｍ－Ｓｅｃ、Ｒｈｏ ＧＴＰアーゼファミリーＲａｃ１およびＣｄｃ４２に含まれるアクチン重合因子、またはそれらの下流エフェクターＷＡＶＥおよびＷＡＳＰ、白血球特異的転写物１（ＬＳＴ１）、ドキソルビシンもしくは別のアントラサイクリン類似体、または細胞ストレス応答を引き起こす別の薬剤である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

細胞内で利用可能なＡＴＰを減少させる方法であって、第１の細胞、および前記第１の細胞から第２の増殖細胞へのミトコンドリア移行を防止する有効量の薬剤を投与することを含む、方法。

【請求項34】

前記第２の細胞が癌性細胞である、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記癌性細胞が白血病細胞である、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

ミトコンドリア移行を防止する前記薬剤がＴＮＴ形成を阻害する、請求項３３に記載の方法。

【請求項37】

ＴＮＴ形成を阻害する前記薬剤が、サイトカラシンＢ、サイトカラシンＤ、またはシタラビンなどのヌクレオシド類似体である、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

ミトコンドリア移行を防止する前記薬剤が、前記ＣＤ３９および／またはＣＤ７３シグナル伝達経路を阻害する、請求項３３に記載の方法。

【請求項39】

前記ＣＤ３９および／またはＣＤ７３シグナル伝達経路を阻害する前記薬剤が表面遮断薬である、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記ＣＤ３９および／またはＣＤ７３シグナル伝達経路を阻害する前記薬剤が、Ｇｆｉ－１、ＣＤ３９／ＣＤ７３遮断抗体、Ｅ－ＮＴＰＤアーゼ阻害剤、またはアデノシン５’－（α、β－メチレン）二リン酸である、請求項３８または３９に記載の方法。

【請求項41】

対象における低ＡＴＰを特徴とする疾患を治療する方法であって、第１の細胞型から第２の増殖細胞型へのミトコンドリア移行を促進する有効量の薬剤を必要とする対象に投与することを含む、方法。

【請求項42】

対象における高ＡＴＰを特徴とする疾患を治療する方法であって、第１の細胞型から第２の増殖細胞型へのミトコンドリア移行を防止する有効量の薬剤を必要とする対象に投与することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１１月１３日に提出された米国仮出願第６２／７６０，３９２号の優先権の利益を主張し、その出願は参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、一般に、Ｔ細胞を製造するための方法およびそれに関する組成物に関する。本開示はまた、免疫関連の疾患または状態を治療するためにＴ細胞を養子移入するための方法、およびそれを含む組成物に関する。

【背景技術】

【0003】

養子細胞免疫療法は、様々な免疫関連の疾患および状態を治療するための新たな戦略であり、免疫機能および特徴を改善することを目的として、免疫系由来の細胞を投与することを含む。養子Ｔ細胞免疫療法は、通常、対象からＴ細胞を抽出し、エクスビボで細胞を改変および／または増殖し、次に改変および／または増殖されたＴ細胞を患者に導入することを必要とする。養子細胞免疫療法の適用は、エクスビボで所望の表現型および特徴を有する機能的Ｔ細胞を単離、分化、改変、および／または増殖する能力によって制約されてきた。したがって、有望な実験レジメンから確立された標準治療への養子Ｔ細胞免疫療法の移行は、安全、効率的、堅牢、かつ費用効果の高い細胞製造プロトコルの開発に大きく依存している。養子Ｔ細胞免疫療法での使用に適している、誘導性調節性Ｔ細胞、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、Ｔ細胞受容体修飾およびウイルス特異的エフェクターＴ細胞など、多くの種類のＴ細胞集団が存在するため、一般的な適用性を有するＴ細胞製造プロトコルが特に望ましい。

【0004】

現在の背景は、治療用Ｔ細胞の代表的な例としての誘導性調節性Ｔ細胞、および養子細胞免疫療法での使用に適した治療用Ｔ細胞を産生する改善された方法の必要性について論じている。キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ウイルス特異的エフェクターＴ細胞など、養子細胞免疫療法での使用に適した他の種類の治療用Ｔ細胞がある。これらの他の種類の治療用Ｔ細胞はまた、治療用Ｔ細胞を製造する改善された方法から利益を得ることができ、現在開示されている方法および組成物に含まれる。

【0005】

免疫系は、自己に対する反応を避けながら、多種多様な病原体を効率的に標的とし、癌細胞を抑制し続けるように微調整されている。自己免疫を制御するために、すべての哺乳動物と同様に、ヒトは多くのサプレッサー細胞集団を発生した。これらの中で、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、および樹状細胞などの他の免疫細胞の活性化およびエフェクター機能を強力に抑制する能力を備えた、耐性を維持する主要な細胞サブセットとして浮上している。

【0006】

調節性Ｔ細胞には、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の様々なサブセットが含まれる。一般に、これらのサブセットは、それらの発生部位および／またはそれらが産生するサイトカインに従って分類される。調節性Ｔ細胞の１つのサブセットは胸腺で発生し（天然の調節性Ｔ細胞または「ｎＴｒｅｇ」）、同時に、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞が抗原に遭遇し、ＴＧＦ－β、ＩＬ－１０およびＩＬ－２の存在下で誘導性調節性Ｔ細胞（「ｉＴｒｅｇ」）に分化すると、別のサブセットが末梢で発生する。調節性Ｔ細胞集団は両方とも、直接的な細胞間相互作用から可溶性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、およびＴＧＦ－β）によって媒介される間接的な抑制、および代謝制御に至るまで、多くの独立した経路を通じてナイーブおよび進行中の免疫応答を制御する。これらの活動の結果は、エフェクターＴ細胞の機能を低減させ、免疫調節および耐性を促進する（ｐｒｏｍｏｔｅ）ことである。

【0007】

調節性Ｔ細胞は病原性自己反応性細胞を制御するため、自己免疫疾患の治療だけでなく、炎症状態（幹細胞、組織、臓器移植における免疫拒絶、ならびに移植片対宿主病の有害性）の抑制にも治療の可能性がある。調節性Ｔ細胞サブセットの中で、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇは、自己免疫の防止および耐性の増強における役割のために、有望な免疫調節治療戦略を提供する。ヒト末梢血中のｎＴｒｅｇの数が少ないこと、およびｎＴｒｅｇの増殖能が低いことは、養子Ｔ細胞療法における幅広い臨床応用への重要な課題であり、ｉＴｒｅｇよりも望ましくない。

【0008】

誘導性Ｔｒｅｇ（ｉＴｒｅｇ）は、ｎＴｒｅｇが減少したり、欠陥があったりした場合に、許容範囲を再確立できる。しかしながら、自家（自己）および同種異系（その他）のｉＴｒｅｇのインビボ投与の回収、製造、および投与量および頻度による強力な免疫調節活性の臨床的実施は困難であることが証明されている。より具体的には、自家ｉＴｒｅｇのこれまでの経験は、末梢血から一般的に単離できる少数から増殖するのが困難であり、エクスビボでの増殖中にそれらの機能特性が低下するという課題があった。さらに、ｉＴｒｅｇの分化および機能に重要なフォークヘッドボックスＰ３（ＦＯＸＰ３、別名ＦｏｘＰ３およびＦｏｘｐ３）転写因子の発現の不安定性は、これまでｉＴｒｅｇの臨床応用に重大な障壁をもたらしてきた。

【0009】

ＦＯＸＰ３は、ＤＮＡ結合転写因子のフォークヘッド／翼状ヘリックスファミリーのメンバーであり、調節性ＣＤ４^＋２５^高Ｔｒｅｇの発生および維持のための主な（ｍａｓｔｅｒ）調節因子である。マウスまたはヒトのいずれかにおけるＦＯＸＰ３遺伝子の欠失または変異は、Ｔｒｅｇ欠損症に起因する重度の自己免疫疾患を引き起こす可能性がある。活性化プロテイン１（ＡＰ－１）、活性化Ｔ細胞の核因子１（ＮＦＡＴ１）、核因子－κＢ（ＮＦ－ｋＢ）、デカペンタプレジック２に対する小さな母親（ｓｍａｄ２）、ｓｍａｄ３、ならびにシグナル伝達物質および転写活性化因子５（ＳＴＡＴ５）はすべて、ＦＯＸＰ３ｍＲＮＡ発現の調節因子として同定されている。加えて、安定したＦＯＸＰ３の発現は、マウスにおけるエピジェネティックな調節制御に関連している。

【0010】

ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＦＯＸＰ３発現の調節は完全には解明されていない。ヒトＦＯＸＰ３は、活性化されたＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔ細胞によって、サイトカイン産生に対する負のフィードバックループの可能性として発現される。加えて、ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞にはＦＯＸＰ３ｍＲＮＡの２つのスプライス変異体があるが、マウスには１つのバージョンしかない。両方のヒトＦＯＸＰ３スプライス変異体は共発現しており、既知の機能の違いは確認されていない。

【0011】

いくつかの以前の方法は、末梢血単核細胞を血液から単離し、末梢血単核細胞集団を抗原で刺激してｉＴｒｅｇを産生し、ｉＴｒｅｇを回収および増殖することにより、エクスビボで自家ｉＴｒｅｇを産生した。これらの細胞の臨床的有効性は、患者に移入された場合、エクスビボでの増殖中の末端エフェクター分化および消耗機能の獲得によって妨げられ、したがって、インビボでのそれらの機能および持続性を防止する。具体的には、大規模なエクスビボＴ細胞の増殖およびエフェクターの分化は、強力な抗原特異的細胞溶解だけでなく、末端エフェクター分化と、インビボでさらに増殖して持続する能力の低下につながる可能性がある。蓄積された証拠は、エクスビボで生成されたＴ細胞が初期のナイーブ表現型に関連する特徴を維持するときに最適な治療効果が達成されることを示唆している。したがって、エクスビボ培養増殖期間中のＴ細胞分化を制限しながら効率的な抗原プライミングを確実にするために妥協点を探さなければならない。

【0012】

したがって、未成熟な表現型を維持する、エクスビボでの無尽蔵のｉＴｒｅｇを産生するための新しい方法が必要である。炎症性または自己免疫状態（例えば、自己免疫疾患、移植片拒絶、および移植片対宿主病）を治療するための新しい方法も必要である。新しいｉＴｒｅｇ組成物は、未成熟な表現型を維持し、消耗機能を欠きながら、インビボでの治療効果を期待できる十分な数を提供する（ｒｅｎｄｅｒ）ように、エクスビボで増殖された。

【0013】

より一般的には、好適な特徴（未成熟な表現型、消耗機能の欠如など）を有する治療用Ｔ細胞をエクスビボで産生するための新しい方法が必要である。養子移入された治療用Ｔ細胞で免疫関連の疾患または状態を治療するための新しい方法も必要である。エクスビボで製造および／または増殖され、好適な特徴（未成熟な表現型、消耗機能の欠如など）を維持しながらインビボ治療効果を有する治療用Ｔ細胞を含む新しい治療用Ｔ細胞組成物も必要である。

【発明の概要】

【0014】

本発明の実施形態において、隣接する細胞からのミトコンドリアのトンネルナノチューブ（ＴＮＴ）移行を誘導することを含む、Ｔ細胞を製造するための方法が提供される。本発明の実施形態において、隣接する細胞は、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層でよい。本発明の実施形態において、ミトコンドリア移行は、Ｔ細胞を含む目的の細胞間でＴＮＴ形成を誘導することによって増加させることができる。他の実施形態において、ミトコンドリア移行は、癌性細胞を含む目的の細胞間のＴＮＴ形成を阻害することによって減少させることができる。

【0015】

血液から誘導性調節性Ｔ細胞を産生するための方法が提供されている。実施形態において、血液は、例えば、臍帯または成人の瀉血またはアフェレーシスから供給され得る。特定の実施形態において、血液から誘導性調節性Ｔ細胞を産生するための方法は、血液を準備することと、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を血液から単離することと、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導してｉＴｒｅｇを含む第１の組成物に分化させることと、ｉＴｒｅｇを第１の組成物から分離して、実質的に精製されたｉＴｒｅｇ組成物を形成することと、精製されたｉＴｒｅｇ組成物を間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上に増殖させて、持続的なＦｏｘＰ３発現および炎症状態における抑制機能を備えた増殖ｉＴｒｅｇ組成物を形成することとを含む。実施形態において、ＭＳＣは、ＴＮＴを形成するように誘導されて、エクスビボ増殖中の持続的なＦｏｘＰ３発現および炎症状態における抑制機能を有する増殖中のＴ細胞へのミトコンドリア移行を促進する（ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ）。実施形態において、ｉＴｒｅｇは、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、およびＦｏｘＰ３＋タンパク質を発現する。いくつかの実施形態において、精製されたｉＴｒｅｇ組成物は、ＦｏｘＰ３発現のＢＡＣＨ２転写調節を増加させることによって増殖される。

【0016】

誘導されたＴＮＴ形成を伴う間葉系間質細胞上に増殖した血液由来の誘導性調節性Ｔ細胞を使用して炎症性または自己免疫状態（例えば、自己免疫疾患、移植片拒絶、および移植片対宿主病）を治療するための方法も提供される。特定の実施形態において、炎症性または自己免疫状態の治療を必要とする対象におけるそれを治療するための方法は、ミトコンドリア移行を提供する間葉系間質細胞上に増殖された治療有効用量の血液由来ｉＴｒｅｇを含む組成物を対象に投与することを含む。

【0017】

増強されたミトコンドリア移行ＴＮＴ活性を有する間葉系間質細胞上に増殖した臍帯血または成人血液由来の誘導性調節性Ｔ細胞を含む組成物も提供される。

【0018】

臍帯血または成人の血液から治療用Ｔ細胞を産生するための方法が提供される。特定の実施形態において、臍帯血または成人血液から治療的Ｔ細胞を産生するための方法は、臍帯血または成人血液を準備することと、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を臍帯血または成人の血液から単離することと、単離されたナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞から治療用Ｔ細胞組成物を製造することとを含む。特定の実施形態において、製造ステップは、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上で治療用Ｔ細胞組成物またはその前駆体を培養することを含む。

【0019】

特定の実施形態において、方法および製造ステップは、限定されないが、レンチウイルス形質導入またはエレクトロポレーションを介した遺伝子形質導入などの方法によって、ＦｏｘＰ３の発現を増加させるためにＢＡＣＨ２転写調節を誘導することを含む。

【0020】

免疫関連の疾患または状態を治療するための方法も提供される。特定の実施形態において、免疫関連の疾患または状態の治療を必要とする対象におけるそれを治療するための方法は、治療有効用量の血液由来治療用Ｔ細胞組成物を含む組成物を対象に投与することを含み、血液由来の治療用Ｔ細胞組成物またはその前駆体は、ミトコンドリア移行ＴＮＴ活性が増強された間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上で培養された。

【0021】

臍帯または成人血液由来の治療用Ｔ細胞を含む組成物が提供され、臍帯または成人血液由来の治療用Ｔ細胞またはその前駆体は、誘導されたＴＮＴ活性を有する間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上で培養された。神経疾患の治療などのために、ミトコンドリア移行を誘導するための方法および組成物も提供される。癌性組織の治療などのために、ミトコンドリア移行を阻害するための方法および組成物がさらに提供される。

【0022】

細胞内で利用可能なＡＴＰを増加させる方法が提供される。特定の実施形態において、細胞内のＡＴＰを増加させるための方法は、第１の細胞型と第２の増殖細胞との間のミトコンドリア移行を促進する有効量の薬剤を投与することを含む。

【0023】

細胞内で利用可能なＡＴＰを減少させる方法が提供される。特定の実施形態において、細胞中のＡＴＰを減少させるための方法は、第１の細胞から第２の増殖細胞へのミトコンドリア移行を防止／減少させる有効量の薬剤を投与することを含む。

【0024】

高または低ＡＴＰのいずれかを特徴とする疾患を治療するための方法が提供される。特定の実施形態において、高または低ＡＴＰのいずれかを特徴とする疾患を治療するための方法は、細胞間のミトコンドリア移行を促進または防止する有効量の薬剤を投与することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1A】ＩＬ－２によるエクスビボ増殖（ＩＬ－２ ｄｒｉｖｅｎ ｅｘ ｖｉｖｏ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）中に、ＭＳＣミトコンドリアが増殖中のｉＴｒｅｇに移行されることを示している。

【図1B】ＩＬ－２によるエクスビボ増殖（ＩＬ－２ ｄｒｉｖｅｎ ｅｘ ｖｉｖｏ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）中に、ＭＳＣミトコンドリアが増殖中のｉＴｒｅｇに移行されることを示している。

【図1C】ＩＬ－２によるエクスビボ増殖（ＩＬ－２ ｄｒｉｖｅｎ ｅｘ ｖｉｖｏ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）中に、ＭＳＣミトコンドリアが増殖中のｉＴｒｅｇに移行されることを示している。

【図2】ＢＭ－ＭＳＣからのミトコンドリアのＵＣＢ ｉＴｒｅｇ取り込みが、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にトンネルナノチューブを介して発生することを示している。

【図3】ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中のトンネルナノチューブを介したＢＭ－ＭＳＣからのミトコンドリアのＵＣＢ ｉＴｒｅｇ取り込みを示している。

【図4】ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中のトンネルナノチューブを介したＢＭ－ＭＳＣからのミトコンドリアのＵＣＢ ｉＴｒｅｇ取り込みを示している。

【図5A】ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中のＭＳＣからのミトコンドリアのＵＣＢ ｉＴｒｅｇ取り込みの定量化を示す。

【図5B】ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中のＭＳＣからのミトコンドリアのＵＣＢ ｉＴｒｅｇ取り込みの定量化を示す。

【図6】サイトカラシンＢが、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にＢＭ－ＭＳＣからｉＴｒｅｇへのミトコンドリア移行を遮断することを示している。

【図7A】サイトカラシンＢが、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中に、ＭＳＣからＵＣＢ ｉＴｒｅｇへのミトコンドリア移行を遮断することを示している。

【図7B】サイトカラシンＢが、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中に、ＭＳＣからＵＣＢ ｉＴｒｅｇへのミトコンドリア移行を遮断することを示している。

【図8A】サイトカラシンＢ処置が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中に増殖ｉＴｅｇへのミトコンドリア移行を有意に阻害することを示している。

【図8B】サイトカラシンＢ処置が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中に増殖ｉＴｅｇへのミトコンドリア移行を有意に阻害することを示している。

【図9A】ＲＯＳ阻害剤が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にＵＣＢ ｉＴｒｅｇを増殖させることにより、ミトコンドリアの取り込みを有意に低減させないことを示している。

【図9B】ＲＯＳ阻害剤が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にＵＣＢ ｉＴｒｅｇを増殖させることにより、ミトコンドリアの取り込みを有意に低減させないことを示している。

【図10A】ＭＳＣプラットフォーム培養でミトコンドリアを受け取るｉＴｒｅｇがＲＯＳレベルを大幅に向上させたことを示している。

【図10B】ＭＳＣプラットフォーム培養でミトコンドリアを受け取るｉＴｒｅｇがＲＯＳレベルを大幅に向上させたことを示している。

【図11A】ミトコンドリア膜電位が、ＭＳＣ上においてｉＴｒｅｇ ＩＬ－２によるエクスビボ増殖条件で増強されることを示している。

【図11B】ミトコンドリア膜電位が、ＭＳＣ上においてｉＴｒｅｇ ＩＬ－２によるエクスビボ増殖条件で増強されることを示している。

【図12A】ミトコンドリア膜電位が、ＭＳＣ上においてＩＬ－２でエクスビボ増殖したｉＴｒｅｇで増強されることを示している。

【図12B】ミトコンドリア膜電位が、ＭＳＣ上においてＩＬ－２でエクスビボ増殖したｉＴｒｅｇで増強されることを示している。

【図13】ｉＴｒｅｇ ＡＴＰが、ＢＭ ＭＳＣプラットフォーム上で、エクスビボ増殖条件で増強されたことを示している。

【図14A】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図14B】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図14C】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図14D】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図14E】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図14F】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図14G】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図14H】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図15A】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図15B】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図15C】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図15D】ＣＤ３９／ＣＤ７３経路が、増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する（ｄｒｉｖｅ）ことを示している。

【図16A】ＣＤ３９／ＣＤ７３薬理学的阻害剤が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中に、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を遮断することを示している。

【図16B】ＣＤ３９／ＣＤ７３薬理学的阻害剤が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中に、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を遮断することを示している。

【図17A】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図17B】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図17C】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図17D】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図17E】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図17F】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図17G】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図17H】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図17I】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図18A】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図18B】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図18C】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図18D】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図18E】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図18F】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図18G】ＭＳＣとｉＴｒｅｇとの共培養が、ヒト化マウスモデルにおいて異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。

【図19A】機能不全のミトコンドリアがｉＴｒｅｇに移行しないことを示している。

【図19B】機能不全のミトコンドリアがｉＴｒｅｇに移行しないことを示している。

【発明を実施するための形態】

【0026】

本発明の実施形態において、Ｔ細胞を増殖するための方法は、隣接する細胞からのミトコンドリアのトンネルナノチューブ（ＴＮＴ）移行を誘導することを含むように提供される。本発明の実施形態において、隣接する細胞は、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層であり得る。本発明の実施形態において、ミトコンドリア移行は、Ｔ細胞を含む目的の細胞間でＴＮＴ形成を誘導することによって増加させることができる。他の実施形態において、ミトコンドリア移行は、癌性細胞を含む目的の細胞間のＴＮＴ形成を阻害することによって減少させることができる。

【0027】

ＴＮＴ形成およびミトコンドリア移行は、腫瘍壊死因子－α誘導タンパク質としても知られるＭ－Ｓｅｃ、Ｒｈｏ ＧＴＰアーゼファミリーＲａｃ１およびＣｄｃ４２を含むアクチン重合因子、およびそれらの下流エフェクターであるＷＡＶＥおよびＷＡＳＰなどの化合物によって、ならびに、以下に記載されているように、ＨｅＬａおよびＨＥＫ細胞株における白血球特異的転写物１（ＬＳＴ１）タンパク質の発現によって誘導され得る。ＤｕＰｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２５ Ｊａｎｕａｒｙ ２０１８（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１８．０００４３）。ＴＮＴおよびミトコンドリア移行は、Ｄｅｓｉｒ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，ｖｏｌｕｍｅ ８，Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：９４８４（２０１８）に記載されているように、ドキソルビシンおよびその他のアントラサイクリン類似体、ならびに細胞ストレス反応を引き起こすその他の薬剤などの化合物によっても誘導される可能性がある。Ｏｍｓｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，ｖｏｌｕｍｅ ８，Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：１１１１８（２０１８）に記載されているように、ＴＮＴおよびミトコンドリア移行は、サイトカラシンＢ、およびシタラビン（シタラビン、ＡｒａＣ）などのヌクレオシド類似体によって阻害される可能性がある。さらに、サイトカラシンＤは細胞透過性であり、アクチン阻害剤である。Ｓａｅｎｚ－ｄｅ－Ｓａｎｔａ－Ｍａｒｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１７に示されているように、サイトカラシンＤはＴＮＴ形成の大幅な低減を引き起こす可能性がある。Ｈａｎｎａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ（２０１７）、Ｋｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．（２０１７）も参照されたい。

【0028】

Ｔｒｅｇは、ミトコンドリア移行を促進するアピラーゼ（ＣＤ３９）およびエクト－５’－ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）を発現する。ＣＤ３９／ＣＤ７３は、１型ＩＦＮ、ＴＮＦａ、ＩＬ－１ｂ、プロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２、ＴＧＦ－β、ｗｎｔシグナル伝達経路のアゴニスト、Ｅ２Ｆ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｐ１、ＨＩＦ１－ａ、Ｓｔａｔ３、および低酸素症を使用して上方調節され得る。Ｂｅａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１２）、Ｂａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ Ｊ．ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄ（２０１２）、Ｒｅｇａｔｅｉｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１１）、Ｓｙｎｎｅｓｔｖｅｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ（２００２）、Ｅｌｔｚｓｃｈｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ ｏｆ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ（２００３）、Ｅｌｔｚｓｃｈｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２００９）、およびＣｈａｌｍｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１２）を参照されたい。Ｇｆｉ－１は、Ｃｈａｌｍｉｎ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０１２）に記載されているように、ＣＤ３９／ＣＤ７３の発現を抑制する。ＣＤ３９／ＣＤ７３は、遮断抗体またはＰＯＭ１（Ｅ－ＮＴＰＤアーゼ阻害剤）およびアデノシン５’－（α、β－メチレン）二リン酸などの薬理学的阻害剤を使用して阻害することもできる。

【0029】

血液から誘導性調節性Ｔ細胞を産生するための方法が提供されている。実施形態において、血液は、例えば、臍帯または成人の瀉血またはアフェレーシスから得ることができる。特定の実施形態において、血液から誘導性調節性Ｔ細胞を産生するための方法は、血液を準備することと、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を血液から単離することと、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導してｉＴｒｅｇを含む第１の組成物に分化させることと、ｉＴｒｅｇを第１の組成物から分離して、実質的に精製されたｉＴｒｅｇ組成物を形成することと、精製されたｉＴｒｅｇ組成物を間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上に増殖させて、持続的なＦｏｘＰ３発現および炎症状態における抑制機能を備えた増殖ｉＴｒｅｇ組成物を形成することと、を含む。実施形態において、ＭＳＣは、ミトコンドリア移行を促進するためにＴＮＴを形成するように誘導される。

【0030】

誘導されたＴＮＴ形成を伴う間葉系間質細胞上に増殖した血液由来の誘導性調節性Ｔ細胞を使用して、炎症性または自己免疫状態（例えば、自己免疫疾患、移植片拒絶、および移植片対宿主病）を治療するための方法も提供される。特定の実施形態において、炎症性または自己免疫状態の治療を必要とする対象におけるそれを治療するための方法は、ミトコンドリア移行を提供する間葉系間質細胞上に増殖した治療有効用量の血液由来ｉＴｒｅｇを含む組成物を対象に投与することを含む。

【0031】

増強されたミトコンドリア移行ＴＮＴ活性を有する間葉系間質細胞上に増殖した臍帯血または成人血液由来の誘導性調節性Ｔ細胞を含む組成物も提供される。いくつかの実施形態において、臍帯血ｉＴｒｅｇは、ＦｏｘＰ３発現のＢＡＣＨ２転写調節を誘導することによって分化されてきた。

【0032】

臍帯血または成人血液から治療用Ｔ細胞を産生するための方法が提供される。特定の実施形態において、臍帯血または成人血液から治療用Ｔ細胞を産生するための方法は、臍帯血または成人血液を準備することと、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を臍帯血または成人の血液から単離することと、単離されたナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞から治療用Ｔ細胞組成物を製造することと、を含む。特定の実施形態において、製造ステップは、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上で治療用Ｔ細胞組成物またはその前駆体を培養することを含む。

【0033】

特定の実施形態において、方法および製造ステップは、限定されないが、レンチウイルス形質導入またはエレクトロポレーションを介した遺伝子形質導入などの方法によって、ＦｏｘＰ３の発現を増加させるためにＢＡＣＨ２転写調節を誘導することを含む。

【0034】

免疫関連の疾患または状態を治療するための方法も提供される。特定の実施形態において、免疫関連疾患または状態の治療を必要とする対象におけるそれを治療するための方法は、治療有効用量の血液由来Ｔ細胞組成物を含む組成物を対象に投与することを含み、血液由来の治療用Ｔ細胞組成物またはその前駆細胞は、ミトコンドリア移行ＴＮＴ活性が増強された間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上で培養された。

【0035】

臍帯または成人血液由来の治療用Ｔ細胞を含む組成物が提供され、臍帯または成人血液由来のＴ細胞またはその前駆体は、誘導されたＴＮＴ活性を有する間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上で培養された。癌性組織の治療などのために、ミトコンドリア移行を阻害するための方法および組成物も提供される。

【0036】

細胞内で利用可能なＡＴＰを増加させる方法が提供されている。特定の実施形態において、細胞内のＡＴＰを増加させるための方法は、第１の細胞と第２の増殖細胞との間のミトコンドリア移行を促進する有効量の薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ミトコンドリア移行は、低酸素症で促進され得る。特定の実施形態において、ミトコンドリア移行は、ＴＮＴの形成を促進することによって増加する。特定の実施形態において、ミトコンドリア移行は、ＣＤ３９および／またはＣＤ７３の上方調節を介して促進される。いくつかの実施形態において、ミトコンドリア移行は、１型ＩＦＮ、ＴＮＦａ、ＩＬ－１ｂ、プロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２、ＴＧＦ－β、ｗｎｔシグナル伝達経路のアゴニスト、Ｅ２Ｆ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｐ１、ＨＩＦ１－ａ、Ｓｔａｔ３、またはそれらの任意の組み合わせを使用して促進され得る。いくつかの実施形態において、ミトコンドリア移行は、Ｍ－Ｓｅｃ、Ｒｈｏ ＧＴＰアーゼファミリーＲａｃ１およびＣｄｃ４２に含まれるアクチン重合因子、またはそれらの下流エフェクターであるＷＡＶＥおよびＷＡＳＰ、白血球特異的転写物１（ＬＳＴ１）、ドキソルビシンもしくは別のアントラサイクリン類似体、または細胞ストレス反応を引き起こす別の薬剤を使用して促進される。

【0037】

特定の疾患は低いＡＴＰによって特徴付けられる。例えば、損傷したニューロンは周囲の細胞からミトコンドリアを取り込む可能性があり、このプロセスの促進は神経修復に有益である可能性がある。したがって、いくつかの実施形態において、細胞内のＡＴＰを増加させるための方法は、神経疾患、免疫疾患、またはアレルギー性疾患を含むがこれらに限定されない疾患の治療に使用され得る。他の実施形態において、ＡＴＰは、培養増殖条件において、Ｔ細胞などの細胞において増加されて、それらを対象に投与する前に十分な治療的細胞用量を達成し得る。いくつかの実施形態において、ミトコンドリア移行に影響を与える薬剤は、対象に直接投与される。いくつかの実施形態において、ミトコンドリアを提供する細胞型はＭＳＣである。

【0038】

細胞内で利用可能なＡＴＰを減少させる方法が提供されている。特定の実施形態において、細胞中のＡＴＰを減少させるための方法は、第１の細胞と第２の増殖細胞との間のミトコンドリア移行を防止する有効量の薬剤を投与することを含む。特定の実施形態において、ミトコンドリア移行は、ＴＮＴの形成を防止することによって減少される。特定の実施形態において、アクチン阻害剤が投与される。特定の実施形態において、サイトカラシンＢ、サイトカラシンＤ、またはシタラビンなどのヌクレオシド類似体が投与される。特定の実施形態において、ミトコンドリア移行は、ＣＤ３９および／またはＣＤ７３シグナル伝達経路の下方調節を通じて減少する。特定の実施形態において、ＣＤ３９および／またはＣＤ７３は、表面遮断抗体を使用して下方調節される。特定の実施形態において、Ｇｆｉ－１、Ｅ－ＮＴＰＤアーゼ阻害剤、またはアデノシン５’－（α、β－メチレン）二リン酸が投与される。

【0039】

特定の疾患は高いＡＴＰによって特徴付けられる。例えば、癌性細胞は、癌性増殖を促進するために周囲の細胞からミトコンドリアを取り込む可能性がある。したがって、いくつかの実施形態において、細胞内のＡＴＰを減少させるための方法が、癌を含むがこれに限定されない疾患の治療に使用され得る。

【0040】

全体として、細胞間のミトコンドリア移行の促進または防止を通じて、多くの異なる疾患または状態を治療することができる。いくつかの実施形態において、細胞は、培養物中で増殖され、次いで、対象に導入され得る。他の実施形態において、細胞間のミトコンドリア移行を促進または防止する薬剤は、対象に直接投与され得る。

【0041】

本発明またはその好ましい実施形態（複数可）の要素を導入するとき、冠詞「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および「ｓａｉｄ」は、要素のうちの１つ以上が存在することを意味すると意図される。「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「有する」という用語は、包括的であることを意図し、列挙される要素以外の追加の要素が存在する可能性があることを意味する。

【0042】

本明細書に記載の本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態「からなる」および／または「から本質的になる」を含むことが理解される。

【0043】

本開示を通して、本発明の様々な態様が範囲形式で提示されている。範囲形式での説明は、便宜上かつ簡潔さのためにすぎず、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、考えられるすべての部分範囲とその範囲内の個々の数値が具体的に開示されているとみなされるべきである。例えば、１～６などの範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの部分範囲、ならびにその範囲内の個々の数字、例えば、１、２、３、４、５、および６が具体的に開示されているとみなされるべきである。このことは、範囲の幅に関係なく適用される。

【0044】

本明細書で使用される場合、「約」は当業者によって理解され、それが使用される状況に応じてある程度変化する。当業者には明らかでない用語の使用がある場合、それが使用される文脈を考えると、「約」は、特定の用語の最大±１０％を意味する。

【0045】

本明細書で使用される場合、「異常な免疫応答」という用語は、患者の症状につながる不適切に調節された免疫応答を指す。異常な免疫応答には、対象の免疫系が自己と非自己を区別できないこと（例えば、自己免疫）、外来抗原に適切に応答できないこと、外来抗原に対する過免疫応答（例えば、アレルギー性障害）、および外来抗原に対する望ましくない免疫応答（例えば、細胞、組織および臓器移植の免疫拒絶、および移植片対宿主病）が含まれ得る。

【0046】

本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、免疫応答を生成することができる任意の分子を包含する。自己免疫障害の文脈では、抗原は自己抗原である。

【0047】

本明細書で使用される場合、「免疫応答」は、外来または自己抗原に対する対象の応答を包含する。この用語には、細胞性、体液性、および炎症性応答が含まれる。

【0048】

本明細書で使用される場合、「不適切に調節される」は、不適切に誘導され、不適切に抑制され、無反応、望ましくない誘導、望ましくない抑制、および／または望ましくない無反応の状態を包含する。

【0049】

本明細書で使用される場合、「患者」または「対象」は、治療されるヒトまたは動物の対象を意味する。

【0050】

本明細書で使用する場合、「増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）」または「増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）」は、細胞または細胞の集団が数を増加させる能力を指す。

【0051】

本明細書で使用する場合、「精製細胞集団」または「精製細胞組成物」を含有する組成物は、組成物中の細胞の少なくとも３０％、５０％、６０％、典型的に少なくとも７０％、より好ましくは８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、またはそれ以上が、特定された種類のものである。

【0052】

本明細書で使用される場合、「調節性Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋表現型を発現するＴ細胞を包含する。

【0053】

本明細書で使用される場合、「実質的に精製された」、「から実質的に分離された」または「実質的に分離している」は、第２の物質の集団の近傍から除去される第１の物質の集団の特徴を指し、第１の物質の集団は必ずしも第２の物質を欠いておらず、第２の物質の集団は必ずしも第１の物質を欠いているわけではない。しかしながら、第２の物質の集団から「実質的に精製され」または「実質的に分離され」ている第１の物質の集団は、第１および第２の物質の分離されていない混合物と比較して、測定可能に低い第２の物質の含有量を有する。一態様において、第２の物質の少なくとも３０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、またはそれ以上が第１の物質から除去される。

【0054】

「抑制」、「阻害」および「予防」という用語は、受け入れられた定義に従って本明細書で使用される。「抑制」は、進行中の免疫応答が、不在の治療をもたらす免疫応答のレベルと比較して遮断されるか、または著しく低減される場合にもたらされる（例えば、本明細書に開示されるｉＴｒｅｇ細胞による）。同様に、「阻害」は、免疫応答の発生を遮断すること、または不在の治療をもたらす免疫応答のレベルと比較してそのような応答を有意に低減させることを指す（例えば、本明細書に開示されるｉＴｒｅｇ細胞による）。予防的に投与される場合、そのような遮断は、標的免疫応答が起こらないように完全でよく、発症前に免疫応答を完全に遮断することは、通常、「予防」と呼ばれる。

【0055】

本明細書で使用する場合、「治療上有効な」とは、異常な免疫応答などの疾患に関連する症状を、治療もしくは改善する、または何らかの方法で低減するのに十分な細胞の量を指す。方法に関して使用する場合、その方法は、異常な免疫応答などの疾患に関連する症状を、治療もしくは改善するか、または何らかの方法で低減するのに十分に有効である。例えば、疾患に関して有効量とは、その発症を遮断または予防するのに十分な量であるか、あるいは疾患病状が始まっている場合は、その疾患の進行を緩和する、改善する、安定化させる、回復に向かわせる、もしくは遅らせるか、またはその疾患の病理学的結果を低減させるのに十分な量である。いずれの場合も、有効量は単回投与で与えても、または分割投与で与えてもよい。

【0056】

本明細書で使用する場合、「治療」という用語は、患者の疾患または状態に関連する症状を少なくとも改善することを包含し、その場合、改善とは、広い意味で使用され、治療されている状態に関連する症状などのパラメータの程度が少なくとも低減することを指す。したがって、「治療」には、疾患、障害、または病的状態、または少なくともそれらに関連する症状が、完全に阻害される（例えば、発生が予防される）かまたは停止され（ｓｔｏｐｐｅｄ）（例えば、停止（ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ））、患者がそれ以上その状態、または少なくともその状態を特徴付ける症状に罹患することがないようにする状況が含まれる。

【0057】

ｉＴｒｅｇを生成するための方法が提供されている。実施形態において、方法は、以下のステップのうちの１つ以上を含む：臍帯血を準備すること、臍帯血からナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を単離すること、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導してｉＴｒｅｇを含む第１の組成物に分化させること、ｉＴｒｅｇを第１の組成物から分離して、実質的に精製されたｉＴｒｅｇ組成物を形成すること、精製されたｉＴｒｅｇ組成物を間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上に増殖させて、増殖されたｉＴｒｅｇ組成物を形成すること。

【0058】

いくつかの実施形態において、臍帯血は、例えば、ヒトを含む様々な動物源に由来し得る。したがって、いくつかの実施形態は、ヒト臍帯血を準備することを含むことができる。

【0059】

いくつかの実施形態において、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、臍帯血から分離／単離される。いくつかの実施形態において、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、臍帯血中の他の細胞から実質的に分離されて、精製されたナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞組成物を形成する。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を血液から分離／精製する方法は当技術分野でよく知られている。例示的な技術には、単純な遠心分離手順を使用して生存可能な単核細胞を血液から単離するためのフィコール－パック密度勾配分離、およびナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を単核細胞から分離するための親和性分離が含まれ得る。例示的な親和性分離技術は、例えば、磁気分離（例えば、抗体でコーティングされた磁気ビーズ）および蛍光活性化セルソーティングを含むことができる。１つの非限定的な例において、単核細胞は、フィコールを使用する勾配密度分離によって臍帯血から得ることができる。単核細胞画分からの望ましくない細胞（すなわち、非ＣＤ４＋Ｔ細胞）は、ビオチン化抗ＣＤ４５ＲＯ抗体で標識し、磁気支援セルソーティング（「ＭＡＣＳ」）を使用して磁気的に分離／枯渇させ、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の濃縮／精製集団を残すことができる。いくつかの実施形態において、得られた組成物の細胞の、少なくとも７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の純度は、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上である。

【0060】

いくつかの実施形態において、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の精製された集団は、ｉＴｒｅｇを含む第１の組成物を提供するように誘導される。当技術分野で周知の方法を使用して、ナイーブＴ細胞を刺激してｉＴｒｅｇを提供することができる。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を刺激してｉＴｒｅｇを提供するための１つの例示的な技術には、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍｌ）およびＴＧＦ－β１（５ｎｇ／ｍｌ）で１：１の比率でダイナビーズ（抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８）を用いてナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞を培養することが含まれる。活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、例えば、これらの刺激方法の９６時間などの好適な期間の後に採取および洗浄することができる。

【0061】

いくつかの実施形態において、ｉＴｒｅｇは、ｉＴｒｅｇを含む第１の組成物から分離／単離されて、実質的に精製されたｉＴｒｅｇ組成物を形成する。いくつかの実施形態において、ｉＴｒｅｇは、ｉＴｒｅｇを含む第１の組成物において他の細胞から実質的に分離されて、実質的に精製されたｉＴｒｅｇ組成物を形成する。ｉＴｒｅｇを分離／精製／濃縮するための方法は、当技術分野でよく知られている。例示的な技術には、磁気セルソーティング（例えば、抗体でコーティングされた磁気ビーズ）および他の細胞からｉＴｒｅｇを分離するための蛍光活性化セルソーティングなどの親和性分離法が含まれ得る。１つの非限定的な例において、ｉＴｒｅｇは、磁気分離キットを使用して精製される。いくつかの実施形態において、実質的に精製されたｉＴｒｅｇ組成物の、少なくとも７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の細胞は、ｉＴｒｅｇである。いくつかの実施形態において、ｉＴｒｅｇの純度は、７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上である。いくつかの実施形態において、実質的に精製されたｉＴｒｅｇ組成物の、少なくとも７５％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の細胞は、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^＋である。

【0062】

いくつかの実施形態において、精製されたｉＴｒｅｇ組成物は、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上に増殖されて、増殖されたｉＴｒｅｇ組成物を形成する。したがって、実施形態において、精製されたｉＴｒｅｇ組成物は、より大きな集団のｉＴｒｅｇを産生するように増殖される。増殖ステップは、当技術分野でよく知られている培養技術および条件を使用することができる。特定の実施形態において、ｉＴｒｅｇは、細胞を培養中に約１日～約３ヶ月維持することによって増殖される。さらなる実施形態において、ｉＴｒｅｇは、培養において、約２日～約２ヶ月、約４日～約１ヶ月、約５日～約２０日、約６日～約１５日、約７日～約１０日、および約８日～約９日間増殖される。間葉系間質細胞（ＭＳＣ）は、任意の好適な供給源（例えば、骨髄、脂肪組織、胎盤組織、臍帯血、臍帯組織）に由来する可能性がある。

【0063】

いくつかの実施形態において、培養されたｉＴｒｅｇは、少なくとも２倍、少なくとも３倍、４、５、６、７、８、９、１０、５０、１００、２００、３００、５００、または少なくとも８００倍に増殖される。いくつかの実施形態において、増殖されたｉＴｒｅｇを含む組成物は、臨床的に関連する数または集団のｉＴｒｅｇ細胞を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、約１０^３、約１０^４、約１０^５個の細胞、約１０^６個の細胞、約１０^７個の細胞、約１０^８個の細胞、約１０^９個の細胞、約１０^１０個の細胞またはそれ以上を含む。いくつかの実施形態において、組成物中に存在する細胞の数は、組成物が意図される最終的な用途、例えば、疾患または状態（ｓｔａｔｅ）または状態（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）、患者の状態（例えば、サイズ、体重、健康など）、および当業者が容易に理解できる他の健康関連パラメータに依拠することになる。加えて、いくつかの実施形態において、細胞の臨床的に関連する数が累積的に等しいか、または、所望の投与を上回る複数の注入、例えば、１０^９または１０^１０個の細胞に分配することができる。

【0064】

実施形態において、転写因子である「広範な複合体－Ｔｒａｍｔｒａｃｋ－Ｂｒｉｃ－ａ－ｂｒａｃドメイン（ＢＴＢ）およびＣａｐ「ｎ」ｃｏｌｌａｒ（ＣＮＣ）相同性１、基本的なロイシンジッパー転写因子２’（ＢＡＣＨ２）は、ＵＣＢ由来ｉＴｒｅｇのエクスビボ培養と組み合わせて、Ｆｏｘｐ３発現の調節およびＵＣＢ由来ｉＴｒｅｇの抑制機能によりｉＴｒｅｇ生成を増強する。

【0065】

実質的に精製されたｉＴｒｅｇはすぐに使用できる。実質的に精製されたｉＴｒｅｇはまた、液体窒素温度で凍結し、長期間保存して解凍し、使用することもできる。細胞は、例えば、培地、グルコースなどと組み合わせて、ＤＭＳＯおよび／またはＦＣＳに保存することができる。

【0066】

炎症性または自己免疫状態の治療を必要とする対象におけるそれを治療するための方法が提供される。実施形態において、方法は、間葉系間質細胞上に増殖された治療有効用量の臍帯血由来のｉＴｒｅｇを含む組成物を対象に投与することを含む。

【0067】

いくつかの実施形態において、間葉系間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇを含む本開示の組成物は、患者の免疫機能の抑制に有用である。例えば、自家細胞は、本明細書に記載されるようにインビトロで単離、増殖、および培養され、その後、同じ患者に投与されてもよい。いくつかの実施形態において、そのような治療は、例えば、自己および外来抗原に対する有害なＴ細胞応答を下方調節するために、および／または長期耐性を誘導するために有用である。

【0068】

いくつかの実施形態において、間葉系間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇを含む治療有効量の組成物は、薬学的に許容される担体とともに対象に投与され得る。投与経路は、血管内（静脈内または動脈内）を含むがこれらに限定されない任意の好適な手段を含み得る。いくつかの実施形態において、好ましい投与経路は、静脈内注入によるものである。いくつかの実施形態において、選択される特定の投与様式は、患者の特定の治療、病状または状態、対象に投与される他の薬物または治療薬の性質または投与経路などに依存するであろう。

【0069】

いくつかの実施形態において、約１０^５～１０^１１個の細胞を、５ｍｌ～１リットル、５０ｍｌ～２５０ｍｌ、５０ｍｌ～１５０ｍｌ、および典型的には１００ｍｌの体積で投与することができる。いくつかの実施形態において、体積は、治療される障害、投与経路、患者の状態、病状などに依存する。細胞は、例えば、用量を滴定するために、選択された時間間隔にわたって単回投与または複数回投与で投与することができる。

【0070】

一態様において、本明細書に開示される組成物および方法は、本明細書に開示されるようにミトコンドリア移行の増加を伴う間葉系間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇを投与することによって、自己免疫障害またはアレルギーなどの対象における異常な免疫応答を調節することを対象とする。いくつかの実施形態において、対象は、自己免疫障害またはアレルギー反応に罹患しており、間葉系間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇを使用して、自己免疫障害またはアレルギー障害を治療する。いくつかの実施形態において、対象は、自己免疫障害またはアレルギー性障害に罹患しているヒトである。

【0071】

本明細書に開示される間葉系間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇは、多種多様な自己免疫障害の症状を治療、緩和または改善するか、または抑制するために使用することができる。いくつかの実施形態において、自己免疫障害は、アディソン病、普遍性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、喘息、自己免疫性肝炎、自己免疫性不妊症、自己免疫性甲状腺炎、自己免疫性好中球減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、チャガス病、肝硬変、セリアック病、大腸炎、クローン病、慢性疲労症候群、慢性活動性肝炎、高密度沈着症（ｄｅｎｓｅ ｄｅｐｏｓｉｔ ｄｉｓｅａｓｅ）、円板状ループス、変性心臓病、皮膚炎、インスリン依存性真性糖尿病、自律神経失調症、子宮内膜症、糸球体腎炎、グッドパスチャー病、グレイブス病、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、固形臓器（例えば、心臓、肝臓、腎臓、肺）、組織、骨髄、または幹細胞移植後のレシピエントにおける移植片拒絶、グレイブス病、ギラン－バレー症候群、橋本病、溶血性貧血、化膿性汗腺炎、特発性血小板減少性紫斑症、炎症性腸疾患（「ＩＢＤ」）、インスリン依存性真性糖尿病、間質性嚢胞炎、混合結合組織疾患、多発性硬化症（「ＭＳ」）、重症筋無力症、ニューロミオトニア、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多関節炎、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、ライター症候群、関節リウマチ（「ＲＡ」）、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少性紫斑病、潰瘍性大腸炎、白斑、慢性外陰痛、温式自己免疫性溶血性貧血、またはウェゲナー肉芽腫症を含むがこれらに限定されない。

【0072】

追加的または代替的に、いくつかの実施形態において、本明細書に開示される間葉系間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇは、多種多様な免疫関連疾患または状態の症状を治療、緩和または改善するか、または抑制するために使用され得る。いくつかの実施形態において、免疫関連疾患または状態は、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性接触皮膚炎、アナフィラキシー様紫斑病、喘息、持久性隆起性紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｅｌｅｖａｔｕｍ ｄｉｕｔｉｎｕｍ）、辺縁紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｍａｒｇｉｎａｔｕｍ）、多形紅斑（ｅｒｙｔｈｅｍａ ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ）、アレルギー性肉芽腫症、環状肉芽腫、顆粒球減少症、過敏性肺炎、角膜炎、腎症症候群、重複症候群、ハトブリーダー病、花粉症、特発性多発神経炎、蕁麻疹、ブドウ膜炎、若年性皮膚筋炎、急性播種性脳脊髄炎（ａｄｅｍ）、アディソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症抗、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、抗合成酵素症候群、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多発性内分泌症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ブドウ膜炎、バロ病／バロ同心性硬化症、ベーチェット病、ベルガー病、ビッカースタッフ脳炎、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、癌、キャッスルマン病、セリアック病、チャガス病、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、慢性再発性多発性骨髄炎、慢性閉塞性肺疾患、チャーグ－ストラウス症候群、良性粘膜類天疱瘡、コーガン症候群、冷凝集素疾患、補体成分２欠乏症、接触性皮膚炎、頭蓋動脈炎、クレスト症候群、クローン病、クッシング症候群、皮膚白血球破砕性血管炎、デゴ病、ダーカム病、ヘルペス性皮膚炎、皮膚筋炎、真性糖尿病１型、びまん性皮膚全身性硬化症、ドレスラー症候群、薬物誘発性ループス、円板状ループス紅斑、湿疹、子宮内膜症、腱付着部関連関節炎（ｅｎｔｈｅｓｉｔｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、必須混合型クリオグロブリン血症、エバンス症候群、進行性骨化性線維異形成症、線維性肺胞炎（特発性肺線維症）、胃炎、胃腸類天疱瘡（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレイブス病、ギラン－バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹（妊娠性類天疱瘡）、化膿性汗腺炎、ヒューズ－ストビン症候群（Ｈｕｇｈｅｓ－Ｓｔｏｖｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症性脱髄性疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（自己免疫性血小板減少性紫斑病）、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、間質性嚢胞炎、若年性特発性関節炎（若年性関節リウマチ）、川崎病、ランバート・イートン筋無力症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ疾患（ｌａｄ）、ルーゲーリック病（筋萎縮性側索硬化症）、ルポイド肝炎（自己免疫性肝炎）、紅斑性ループス、マジード症候群、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、ミラー・フィッシャー症候群（ギラン－バレー症候群）、混合結合組織疾患、モルフィア、ムチャ－ハーバーマン病（急性痘瘡状苔癬状粃糠疹）、多発性硬化症、重力筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（デビック病）、ニューロミオトニア、眼部瘢痕性類天疱瘡、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、オード甲状腺炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（連鎖球菌に関連する小児自己免疫性神経精神障害）、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ｐｎｈ）、パリーロンバーグ症候群、パーソネージターナー症候群、毛様体扁平部炎（ｐａｒｓ ｐｌａｎｉｔｉｓ）、尋常性天疱瘡、悪性貧血、静脈周囲性脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、多発性動脈炎結節症、多発性筋痛リウマチ、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性ニューロパチー、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、赤芽球癆、ラスムッセン脳炎、レイノー現象、再発性多軟骨炎、ライター症候群、レストレスレッグス症候群、後腹膜線維症、関節リウマチ、リウマチ熱、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、スティル病（若年性関節リウマチ）、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ｓｂｅ）、Ｓｕｓａｃ症候群、スウィート症候群、シデナム舞踏病（ＰＡＮＤＡＳ参照）、交感神経性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎（巨細胞性動脈炎）、血小板減少症、トロサハント症候群、横断脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化結合組織疾患、未分化脊椎関節炎、蕁麻疹性血管炎、血管炎、白斑、ウェゲナー肉芽腫症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を含むがこれらに限定されない。

【0073】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示される間葉性間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇを使用して、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性接触皮膚炎、全身性脱毛症、アナフィラキシー様紫斑病、喘息、アトピー性皮膚炎、疱疹状皮膚炎、持久性隆起性紅斑、辺縁紅斑、多形紅斑、結節性紅斑、アレルギー性肉芽腫症、環状肉芽腫、顆粒球減少症、過敏性肺炎、角膜炎、ネフローゼ症候群、オーバーラップ症候群、ハトブリーダー病、花粉症、特発性多発神経炎、蕁麻疹、ブドウ膜炎、若年性皮膚筋炎、および白斑を含むがこれらに限定されない多種多様なアレルギー性障害の症状を治療、緩和または改善、または抑制することができる。

【0074】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示される誘導されたＴＮＴ形成を伴う間葉系間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇは、自己免疫障害またはアレルギー障害を治療または調節するために対象に導入され得る。例えば、対象は、進行中または再発性の自己免疫反応またはアレルギー反応を有することを特徴とする疾患に罹患している可能性がある。いくつかの実施形態において、調節は、自己免疫反応またはアレルギー反応を阻害することを含む。

【0075】

いくつかの実施形態において、本明細書に開示される間葉性間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇは、例えば、腫瘍監視において、固形腫瘍癌（例えば、肺癌）などの癌の免疫抑制、および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を含むがこれに限定されないインビボ同種反応および自己免疫反応の抑制などの免疫療法のために対象に投与され得る。

【0076】

主題の方法は、患者の異常な免疫応答の調節が望まれる様々な異なる状態および移植状況の治療に使用されている。例として、しかし限定ではないが、細胞、組織、または臓器移植の場合、本明細書に開示されるように間葉系間質細胞上に増殖された臍帯血由来のｉＴｒｅｇを含む組成物を、臓器移植患者における移植片拒絶を予防するために手術中に投与することができる。外科的処置が完了するまで細胞をその部位に維持するために、いくつかの実施形態において、人工ゲルなどの薬学的に許容される担体、または凝固血漿中、または当該分野で公知の他の制御放出メカニズムを利用することによって細胞を投与することが便利である。

【0077】

ＴＮＴの操作およびミトコンドリア移行は、いくつもの疾患の治療に使用できる。例えば、ミトコンドリア移行を誘導することにより、数および機能が改善されたｉＴｒｅｇが産生される。これらのｉＴｒｅｇは、自己免疫障害またはアレルギー性障害などの多くの疾患の治療に使用される可能性がある。いくつかの実施形態において、開示された方法は、非Ｔ細胞型へのミトコンドリア移行を促進または阻害するために使用され得る。ＭＳＣによる細胞間ミトコンドリア移行は、以前に神経損傷および癌モデルで説明されている（Ｂａｂｅｎｋｏ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。例えば、骨髄微小環境で増殖している急性白血病芽球は、ＭＳＣからミトコンドリアを奪うことが示されている（Ｍａｒｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。したがって、ミトコンドリア移行阻害は、癌の治療に使用される可能性がある。逆に、ミトコンドリア移行の促進は、例えば神経疾患を治療するために使用することができる。

【実施例】

【0078】

概要
標準培地／ＩＬ－２浮遊培養のみと比較して、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇ数、表現型、および機能を大幅に改善したＭＳＣプラットフォーム上で、標準培地／ＩＬ－２条件でのエクスビボ増殖が観察された。

【0079】

ＭＳＣを介した３週間のＩＬ－２によるエクスビボ増殖中の改善されたｉＴｒｅｇ数および機能の根底にある潜在的なメカニズムを決定するために、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にミトコンドリアがＭＳＣから増殖中のＵＣＢ ｉＴｒｅｇに移行するかどうかを決定する実験を行った。実験は、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にトンネルナノチューブ（ＴＮＴ）を介して増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を示した。

【0080】

ヒト骨髄間葉系間質細胞（ｈＢＭ－ＭＳＣ）プラットフォームを使用すると、ＩＬ－２による２１日間のエクスビボ増殖中のｉＴｒｅｇの数が、標準的な浮遊培養条件に対して顕著に向上した（ＭＳＣプラットフォーム：８０．２×１０^６対ＩＬ２／培地：３９．３×１０^６、ｎ＝６；ｐ＜０．０１）。また、ナイーブな表現型（ＣＤ４^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋およびＣＤ４^＋ＣＤ６２Ｌ^＋）を発現するｉＴｒｅｇの数が顕著に増加した（ＣＤ４５ＲＡ^＋；ＭＳＣプラットフォーム：７４．４±１．６×１０^６対ＩＬ２／培地：４５．９±２．９×１０^６、ｎ＝６、ｐ＜０．００１；ＣＤ６２Ｌ^＋；ＭＳＣプラットフォーム：７９．１±１．３×１０^６対ＩＬ２／培地：５４．５±２．１×１０^６、ｎ＝６、ｐ＜０．００１）、およびＦｏｘｐ３発現の安定性（ＩＬ－２／培地：８８．２±１．７％対ＭＳＣプラットフォーム：９６．２±１．１％、ｎ＝７；ｐ＜０．０５）。加えて、ｉＴｒｅｇ抑制機能は、標準的なＩＬ－２／培地培養条件と比較して２１日間のＩＬ－２によるエクスビボ増殖中により強力であることが認められた（ＭＳＣプラットフォーム：７９％対培地：３５％のＴ細胞増殖の阻害１０：１の比率、ｎ＝６；ｐ＜０．０１）。ｈＢＭ－ＭＳＣプラットフォーム上で増殖されたｉＴｒｅｇは、より高い表面ＣＤ２５、ＣＴＬＡ－４、およびＩＣＯＳ ＭＦＩ発現を示した（ＣＤ２５；ＭＳＣプラットフォーム：１４１０対培地：７７４；ｐ＜０．００１、ＣＴＬＡ－４；ＭＳＣプラットフォーム：１０８４対培地：３１８；ｐ＜０．００１、ＩＣＯＳ；ＭＳＣプラットフォーム：４３８６対培地：２６４１、ｐ＜０．０１、ｎ＝６）。特に、ｉＴｒｅｇでのＦｏｘｐ３発現はｈＢＭ－ＭＳＣ馴化培地によって増強されなかったため、ｉＴｒｅｇのエクスビボ増殖のｈＢＭ－ＭＳＣ増強には直接の細胞間接触が必要である（ＣＭ：７３．４±６．８％対ＭＳＣプラットフォーム：９６．２±１．０％、ｐ＜０．００１；およびＩＬ２／培地：８８．８±１．６％対ＭＳＣプラットフォーム：９６．２±１．０％、ｐ＜０．０１）またはトランスウェル培養実験（トランスウェル：８３．４±２．５％対ＩＬ２／培地：８８．８±１．６％、およびＴｒａｎｓｗｅｌｌ：８３．４±２．５％対ＭＳＣプラットフォーム：９６．２±１．０％、ｐ＜０．０１）。

【0081】

光学セクショニング顕微鏡法およびフローサイトメトリーにより、ｈＢＭ－ＭＳＣが直接接触依存性ミトコンドリア移行を介してｉＴｒｅｇの数および機能をサポートしていることが明らかになった。サイトカラシンＢ処置はミトコンドリア移行を遮断し、このことは、トンネルナノチューブ（ＴＮＴ）がＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にｈＢＭ－ＭＳＣからｉＴｒｅｇへのミトコンドリア移行を促進することを示唆している（モック：２２０８±１２２．１対Ｃｙｔｏ Ｂ：９２３．８±８９ＭＦＩ、ｎ＝６、ｐ＜０．０００１）。さらに、ｉＴｒｅｇのＡＴＰ（ｎ＝６；ｐ＜０．０１）ミトコンドリア電位の量（ＭＳＣプラットフォーム：９０１０±２２４．５対培地：７３１６±１２２．７ＭＦＩ、ｎ＝６；ｐ＜０．０１）は、ｈＢＭ－ＭＳＣプラットフォーム上でのＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にｉＴｒｅｇで有意に増強された。まとめると、ｈＢＭ－ＭＳＣは、２１日間のＩＬ－２によるエクスビボ増殖中に、ｉＴｒｅｇの数、成熟、および機能を大幅に改善する。エクスビボ増殖中のｉＴｒｅｇに対するこれらの好ましい効果の根底にあるｈＢＭ－ＭＳＣの作用の１つの重要なメカニズムは、ＴＮＴを介したミトコンドリア移行であることが確認された。特に、本発明は、Ｔ細胞老化およびＦｏｘｐ３発現の喪失を含むＩＬ－２／培地浮遊培養条件における現在の制限を克服するためのｈＢＭ－ＭＳＣの新規の役割を特定する。

【0082】

ＭＳＣミトコンドリア移行がエピソーム移行によるのではなくＴＮＴに依存していることが観察された後（Ｓｉｎｃｌａｉｒ ｅｔ ａｌ．，２０１３、Ｖｉｇｎａｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１７）、短期（２１日）のＩＬ－２エクスビボ増殖中のｉＴｒｅｇを増殖するミトコンドリア代謝機能（ＣＤ３９／ＣＤ７３シグナル伝達）によって促進されていると判断された。ＢＡＣＨ２、ＳＥＮＰ３の発現の増強は、ＭＳＣと共培養されたｉＴｒｅｇで認められ、この条件で増殖したｉＴｒｅｇでＦｏｘｐ３の安定性を促進した。増殖中のｉＴｒｅｇにおけるミトコンドリア代謝機能（ＣＤ３９／ＣＤ７３シグナル伝達）も、ＭＳＣミトコンドリアＲｈｏ－ＧＰＴａｓｅ １）Ｍｉｒｏ１発現を誘導することが認められた。Ｍｉｒｏ－１は、ミトコンドリアをＫＬＦ ５キネシンモータータンパク質に結合させて、ミトコンドリアの協調輸送を確保する働きをする（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１、Ｑｕｉｎｔｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，２００９）。

【0083】

まとめると、これらの研究は、インビトロおよびインビボでの有害な炎症環境にもかかわらず、強力なＦｏｘｐ３発現および抑制機能を維持するのに役立つ増殖中のｉＴｒｅｇへのＭＳＣミトコンドリア移行を促進する細胞および分子メカニズムへの洞察を提供する。

【0084】

実施例の詳細な説明
実験方法の概要
Ｆｏｘｐ３＋ｉＴｒｅｇ誘導：ＵＣＢ ＣＤ４＋Ｔ細胞ビーズで富化した磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）を、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍｌ）およびＴＧＦ－β（５ｎｇ／ｍｌ）中、濃度５×１０^５個の細胞／ｍｌで、ダイナビーズ（ＣＤ２／３／２８）で刺激した。

【0085】

増殖ｉＴｒｅｇ：ｉＴｒｅｇはＴＧＦ－βでの４日間の分化後に回収され、エクスビボ増殖用に設定された。細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｆａｒ Ｒｅｄで染色し、５×１０^５個の細胞／ｍｌを１００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２とともに播種した。

【0086】

色素染色：ＢＭ－ＭＳＣを２×１０６個の細胞／ｍｌで完全培地に再懸濁した。細胞を２００ｎＭのＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ ＦＭとともに３７℃で４５分間インキュベートした。ｉＴｒｅｇも２×１０ｅ６個の細胞／ｍｌで再懸濁した。細胞を５ｕＭ ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｆａｒ Ｒｅｄとともに３７℃で２０分間インキュベートした。ＢＭ－ＭＳＣ ５×１０ｅ５個の細胞／ｍｌを６ウェルプレート（９．４ｃｍ２）に播種した。分析：ＦＡＣＳ Ｆｏｒｔｅｓｓａ。

【0087】

図１Ａ～１Ｃは、ＢＭ－ＭＳＣをＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ ｇｒｅｅｎ ＦＭで３０分間予備染色し、ｉＴｒｅｇで培養したことを示している。２４時間の共培養後、フローサイトメトリーによりＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ ｇｒｅｅｎ ＭＦＩを使用してｉＴｒｅｇを分析した。ＣｅｌｌＴｒａｃｅおよびＣＤ４＋ｉＴｒｅｇ細胞をゲート制御し（ｇａｔｅｄ）（９８．２％）、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ＋ｉＴｒｅｇ細胞について分析した。培地条件である培地／ＩＬ－２のみ（培地）で増殖されたＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ＋ｉＴｒｅｇは０．５５７％であり、ＭＳＣプラットフォームの増殖条件では、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ＋ｉＴｒｅｇは２８．８％を示した。これらの結果は、ミトコンドリアがＩＬ－２によるエクスビボ培養中にＢＭ－ＭＳＣからｉＴｒｅｇに移行することを示している。３つの異なる実験から示されたデータ±ＳＤ（ｎ＝６）。＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１。

【0088】

ＵＣＢ ｉＴｒｅｇは、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にＭＳＣからミトコンドリアを取り込む。０～４日目のＦｏｘｐ３＋ｉＴｒｅｇ誘導：ＵＣＢ ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍｌ）およびＴＧＦ－β（５ｎｇ／ｍｌ）中で５×１０^５個の細胞／ｍｌで、ダイナビーズ（ＣＤ２／３／２８）で刺激した。増殖ｉＴｒｅｇ：ｉＴｒｅｇ細胞は、ＴＧＦ－βでの４日間の分化＋２日間の休止後に回収され、ＢＭ－ＭＳＣ単層上での共培養に使用された。色素標識ｉＴｒｅｇを、添加した培地／１００Ｕ／ｍｌのＩＬ－２で５×１０^５個の細胞／ｍｌで播種した。染色色素：ＢＭ－ＭＳＣは、２×１０^６個の細胞／ｍｌで完全培地に再懸濁した。細胞をＣＦＳＥまたはＰＫＨで染色し、すぐにＢＭ－ＭＳＣをＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭ（５００ｎＭ）またはＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ ｇｒｅｅｎ ＦＭ（２００ｎＭ）とともに３７℃で４５分間インキュベートした。ｉＴｒｅｇも２×１０^６個の細胞／ｍｌで再懸濁した。ｉＴｒｅｇを１ｕｇのヘキストとともに３７℃で３０分間インキュベートした。ＢＭ－ＭＳＣ：５×１０^５個の細胞／ｍｌである。顕微鏡画像分析は、ＺＥＮ ２０１２ソフトウェア（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ）を使用して実行された。

【0089】

図２は、ＢＭ－ＭＳＣからのミトコンドリアのＵＣＢ ｉＴｒｅｇ取り込みが、ＩＬ－２によるエクスビボ拡題中にトンネルナノチューブを介して発生することを示している。２４時間後、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇ（ヘキスト）をＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭを使用して共焦点顕微鏡で分析した。ＢＭ－ＭＳＣはＣＦＳＥおよびＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒＲｅｄで事前に染色された。記録された画像の分析は、Ｚｅｎ ２０１２（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ）ソフトウェアを使用して実行された。このデータは、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇがＴＮＴの直接接触を介してＢＭ－ＭＳＣミトコンドリアを受け取ることを支持している。画像は４つの異なる実験からの代表である（ｎ＝６）。

【0090】

図３は、２４時間後、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇがＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭを使用して共焦点顕微鏡で分析されたことを高倍率で示している。ＢＭ－ＭＳＣはＣＦＳＥおよびＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭで予備染色し、２４時間培養した。記録された画像の分析は、Ｚｅｎ ２０１２（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ）ソフトウェアを使用して実行された。ｉＴｒｅｇは、ミトコンドリアを含むＭＳＣ ＴＮＴのすぐ隣で観察される（赤い矢印）。このデータは、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇがＴＮＴの直接接触を介してＢＭ－ＭＳＣミトコンドリアを取り込むことを支持している。画像は４つの異なる実験からの代表である（ｎ＝６）。

【0091】

図４は、スライド１８で説明されている実験方法を示している。ＢＭ－ＭＳＣはＣＦＳＥおよびＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭで予備染色し、ｉＴｒｅｇで２４時間培養した。２４時間後、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇは、共焦点顕微鏡によりＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭを使用して分析された。記録された画像の分析は、Ｚｅｎ ２０１２（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ）ソフトウェアを使用して実行された。これらの画像は、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇがＴＮＴの直接接触を介してＭＳＣミトコンドリアを取り込むことを支持している。画像は４つの異なる実験からの代表である（ｎ＝６）。

【0092】

図５Ａ～５Ｂは、ＢＭ－ＭＳＣをＣＦＳＥおよびＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭで予備染色し、ｉＴｒｅｇで２４時間培養したことを示している。２４時間後、共焦点顕微鏡によりＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭを使用してＵＣＢＴｒｅｇを分析した。記録された画像の分析は、Ｚｅｎ ２０１２（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ）ソフトウェアを使用して実行された。ここで、画像は、ｉＴｒｅｇの大部分がＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ陽性であることを示しており、ＭＳＣミトコンドリアの取り込みを示している。結果は、培地／ＩＬ－２のみで培養されたｉＴｒｅｇによって正規化された。データは、３つの独立した実験±ＳＤ（ｎ＝６）を表している。＊＊、Ｐ＜０．０１。

【0093】

図６は、ＴＮＴ形成を無効にすることが知られているＦ－アクチン解重合剤であるサイトカラシンＢの使用を示している。ミトコンドリア移行がトンネルナノチューブ（ＴＮＴ）を介して発生するかどうかを試験するために、ＢＭ－ＭＳＣをＤＭＳＯに溶解したサイトカラシンＢで処置し、モック制御のためにＤＭＳＯのみと比較した。ＭＳＣをＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ ｇｒｅｅｎ ＦＭで３０分間予備染色した後、モックＤＭＳＯコントロール（モックコントロール）およびサイトカラシンＢ（３５０ｎＭ）で処置したＢＭ－ＭＳＣ（サイトカラシンＢ）を含むｉＴｒｅｇ（ＭＳＣプラットフォーム）で２４時間培養し、ｉＴｒｅｇのみ（Ｔｒｅｇのみ）と比較した。２４時間後、フローサイトメトリーによりＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ ｇｒｅｅｎ ＭＦＩを使用してｉＴｒｅｇを分析した。フローデータは、３つの異なる実験からの代表である（ｎ＝６）。

【0094】

図７Ａ～７Ｂは、ミトコンドリア移行がトンネルナノチューブル（ＴＮＴ）を介して発生することを示している。ＢＭ－ＭＳＣをサイトカラシンＢで処置し、モックコントロール（共培養）と比較した。ＭＳＣをＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ ｇｒｅｅｎ ＦＭで３０分間予備染色し、ｉＴｒｅｇ（共培養；赤）で培養し、ｉＴｒｅｇ単独（Ｔｒｅｇ単独；影付き）およびサイトカラシンＢ（３５０ｎＭ）で処置したＢＭ－ＭＳＣ（Ｃｙｔｏ Ｂ ｔｘ；青）と２４時間比較した。サイトカラシンＢで処置したＢＭ－ＭＳＣと２４時間共培養した後、フローサイトメトリーによりＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ ｇｒｅｅｎ ＭＦＩを使用してｉＴｒｅｇを分析した。

【0095】

図８Ａ～８Ｂは、ＢＭ－ＭＳＣをＣＦＳＥおよびＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭで予備染色し、サイトカラシンＢ（３５０ｎＭ）の有無にかかわらずＵＣＢ ｉＴｒｅｇで２４時間培養したことを示している。２４時間後、ＵＣＢ ｉＴｒｅｇ（ヘキスト）をＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ Ｒｅｄ ＦＭを使用して共焦点顕微鏡で分析した。記録された画像の分析は、ＩｍａｇｅＪまたはＺｅｎ ２０１２（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ）ソフトウェアを使用して実行された。矢印は、ｉＴｒｅｇ内のＢＭ－ＭＳＣミトコンドリアを示している。画像データは、検出されたＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ＋ｉＴｒｅｇの数が大幅に低減していることを示している。３つの異なる実験から示されたデータ±ＳＤ（ｎ＝６）。＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１。これらのデータは、サイトカラシンＢ処置が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にＭＳＣからＵＣＢ ｉＴｒｅｇへのミトコンドリア移行を大幅に遮断することを示している。一緒に、これらの結果は、ＴＮＴがＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にＢＭ－ＭＳＣからＵＣＢ ｉＴｒｅｇへのミトコンドリア移行のための重要な導管であることを支持する。

【0096】

図９Ａ～９Ｂは、ＲＯＳ阻害剤：抗酸化剤Ｎ－アセチルシステイン（ＮＡＣ）２００ｕＭをＢＭ－ＭＳＣ＋ｉＴｒｅｇ培養に２４～３６時間添加したことを示している。データは、２つの独立した実験±ＳＤ（ｎ＝６）を表している。＊＊、Ｐ＜０．０１。画像は２４～３６時間のインキュベーションで撮影された。記録された画像の分析は、Ｚｅｎ ２０１２（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ）ソフトウェアを使用して実行された。矢印は、ｉＴｒｅｇのＢＭ－ＭＳＣミトコンドリアを示している。画像の結果は、ＭｉｔｏＴｒａｃｋｅｒ＋ｉＴｒｅｇが検出されているため、このＲＯＳ阻害剤の添加によりＴｒｅｇによるミトコンドリアの取り込みが最小限に抑えられたことを示している。これらの画像結果は、ＢＭ－ＭＳＣからＴｒｅｇへのミトコンドリア移行がＲＯＳを介した作用機序に依存していないことを裏付けている。＊Ｐ＜０．０５。

【0097】

図１０Ａ～１０Ｂは、ＭＳＣプラットフォーム培養のｉＴｒｅｇがＲＯＳレベルを大幅に増強させたことを示している。

【0098】

研究は、ＭＳＣを介したｉＴｒｅｇのＩＬ－２によるエクスビボ増殖がｉＴｒｅｇの数および機能を大幅に増強するという観察の根底にあるメカニズムを特定するために設計された。細胞増殖：２～５×１０^５個の細胞を、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍｌ）を添加したエクスビボ培地で継代培養した。メディアは２～３日ごとに交換された。ＵＣＢ ｉＴｒｅｇ細胞は、２１～２３日目に、ＭＳＣプラットフォームを介して培地／ＩＬ－２のみおよび培地／ＩＬ－２から採取された。テトラメチルローダミン（ＴＭＲＭ）：メチルエステルは細胞透過性色素である。それは健康な活動的なミトコンドリア膜に蓄積する。メーカーの指示に従って、細胞をＩｍａｇｅ－ｉＴＴＭ ＴＭＲＭ（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。細胞をＦＡＣＳおよび共焦点顕微鏡で分析した。

【0099】

図１１Ａ～１１Ｂは、ＴＧＦ－β誘導ＵＣＢ ｉＴｒｅｇが、培地／ＩＬ－２のみ（培地）ｖ．ＢＭ－ＭＳＣ（ＢＭ－ＭＳＣ）上の培地／ＩＬ－２のいずれかでＩＬ－２駆動増殖中に採取され、ＣＤ４－ＡＰＣで表面が染色されたことを示している。細胞を２×１０ｅ６個の細胞／ｍｌの濃度で培地に再懸濁した。細胞をテトラメチルローダミン、メチルエステル（ＴＭＲＭ）（２０ｎＭ）とともに３７℃で３０分間インキュベートした。細胞を緩衝液で洗浄し、分析した。２つの異なる実験から示されたデータ。＊＊、Ｐ＜０．０１。このデータは、ＭＳＣ単層上でＩＬ－２／培地でエクスビボ増殖したｉＴｒｅｇがミトコンドリア膜電位を増加させたことを示している。これらの結果は、ＭＳＣミトコンドリアが移行後のミトコンドリア活性の増強によってｉＴｒｅｇ機能を増強することを支持している。

【0100】

図１２Ａ～１２Ｂは、エクスビボでＢＭ－ＭＳＣ上に増殖されたｉＴｒｅｇがミトコンドリア膜電位を増加させたことを示している。これらの結果は、ＢＭ－ＭＳＣミトコンドリアがｉＴｒｅｇへの移行後のミトコンドリア活性の増加によってｉＴｒｅｇ機能を増強することを支持している。記録された画像の分析は、ＩｍａｇｅＪまたはＺｅｎ ２０１２（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ）ソフトウェアを使用して実行された。２つの異なる実験から示されたデータ。＊＊＊、Ｐ＜０．０１。

【0101】

図１３は、ｉＴｒｅｇのＡＴＰがＢＭ ＭＳＣプラットフォームで増強されたことを示している。

【0102】

ＭＳＣミトコンドリアの増殖中のｉＴｒｅｇへの移行を促進するメカニズムを決定するために、追加の実験が行われた。Ｔｒｅｇは、アデノシンを生成することによって阻害機能に寄与することが示されているアピラーゼ（ＣＤ３９）およびエクト－５’－ヌクレオチダーゼ（ＣＤ７３）を発現する（Ａｌａｍ ｅｔ ａｌ．，２００９、Ｋｅｒｋｅｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。また、ＣＤ７３で生成されたアデノシンは、アクチン関連タンパク質２および３（ＡＲＰ２／３）アクチン重合複合体メンバーＮ－ＷＡＳＰのＲｈｏ ＧＴＰアーゼ ＣＤＣ４２依存性コンフォメーション変化のアデノシンＡ１受容体（Ａ１Ｒ）誘導を介して皮質アクチン重合を誘導することが示されている（Ｂｏｗｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。ＣＤ７３がＭＳＣミトコンドリア移行の促進に寄与するかどうかを試験するために、ＣＤ７３遮断ＡｂをＭＳＣ共培養に追加し、ｉＴｒｅｇミトコンドリアの質量を測定した。

【0103】

図１４Ｂは、ＣＤ７３の遮断後、ｉＴｒｅｇミトコンドリアの質量が大幅に減少したことを示している。

【0104】

図１４Ａ～１４Ｈおよび１５Ａ～１５Ｄは、ＣＤ３９／ＣＤ７３経路がＭＳＣミトコンドリア（ｍｔ）の増殖中のｉＴｒｅｇへの移行を促進することを示している。ＭＳＣにｍｔ－ＧＦＰレンチウイルスを形質導入して、安定したｍｔ－ＧＦＰ＋ＭＳＣを生成した（図１５Ａ）。Ｍｔ－ＧＦＰ＋ｉＴｒｅｇが検出され、ｍｔ－ＧＦＰレンチウイルスを形質導入したＭＳＣと共培養した２１日間で有意に増加した（図１５Ｂ～１５Ｃ）。Ｍｔ－ＧＦＰ＋ｉＴｒｅｇは、表面ＣＤ７３の遮断またはＴＮＴ形成の阻害により、大幅に減少した（図１４Ｃ）。ＣＤ３９およびＣＤ７３は、それぞれＡＤＰ／ＡＴＰからＡＭＰへの変換、およびＡＭＰからアデノシンへの変換を通じて免疫細胞に送達されるプリン作動性シグナルを較正する。（Ａｌｌａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２０１７、Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。各経路を阻害するための実験が行われ、ｍｔ－ＧＦＰ＋ｉＴｒｅｇが大幅に低減していることがわかった（図１４Ｄおよび１５Ｄ）。

【0105】

Ｍｉｒｏ１はミトコンドリアの細胞内輸送における重要な調節因子であることが示されているため（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１２）、ＴＮＴを介したＭＳＣミトコンドリアのｉＴｒｅｇへの移行におけるその役割を決定するための実験が設計された。Ｍｉｒｏ１の発現は、ｉＴｒｅｇとの共培養後にＭＳＣで測定された。ｉＴｒｅｇの共培養は、タンパク質レベルおよびＲＮＡレベルの両方を含むＭＳＣでのＭｉｒｏ１の発現の有意な増強と関連していた（図１４Ｅ）。さらに、Ｍｉｒｏ１の増強されたＭＳＣ発現は、ＣＤ３９阻害によって阻害された（図１４Ｆ）。

【0106】

ＢＡＣＨ２は、マウスＴｒｅｇの安定性および機能を維持することが示されている（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，２０１４、Ｒｏｙｃｈｏｕｄｈｕｒｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。ＢＡＣＨ２は、以前はヒトｉＴｒｅｇで高度に発現していることが確認されており、ｉＴｒｅｇの安定性に重要な役割を果たしている（Ｄｏ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。追加の研究により、ＳＥＮＰ３がＢＡＣＨ２のＳＵＭＯ化を調節して、環境条件、特に細胞内ＲＯＳの変化に応答してｉＴｒｅｇの安定性を制御する経路が特定された（Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。ＭＳＣミトコンドリア移行がｉＴｒｅｇ Ｆｏｘｐ３の安定性および抑制機能にプラスの効果を及ぼすという以前の観察を考慮すると、ＭＳＣからのミトコンドリア移行はＢＡＣＨ２／ＳＥＮＰ３の発現および／または機能を調節する可能性があると仮定された（Ｊａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５、Ｗａｔａｎａｂｅ－Ｍａｔｓｕｉ ｅｔ ａｌ．，２０１１、Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。ｉＴｒｅｇ ＢＡＣＨ２およびＳＥＮＰ３タンパク質の発現を測定し、ＭＳＣ共培養と短期（１４日目および２１日目）のインビトロ培養中の標準的なＩＬ－２／培地条件を比較した。ｉＴｒｅｇ Ｆｏｘｐ３、ＢＡＣＨ２、およびＳＥＮＰ３の発現は、ＭＳＣ共培養条件で著しく有意に増加した（図１４Ｇ）。次に、サイトカラシンＢ処置後のｉＴｒｅｇＢＡＣＨ２およびＳＥＮＰ３タンパク質レベルに対するＭＳＣミトコンドリア移行の影響を調べた。ｉＴｒｅｇ ＢＡＣＨ２タンパク質発現のレベルは劇的に減少した（図１４Ｈ）。サイトカラシンＢ処置は、おそらくこの設定でのＳＥＮＰ３の活性化および／または機能のために、ｉＴｒｅｇ ＳＥＮＰ３タンパク質の発現に有意な影響を及ぼさなかった（図１４Ｈ）。全体として、このデータは、ＭＳＣミトコンドリア移行が増強されたＢＡＣＨ２発現と関連しており、Ｆｏｘｐ３の調節により、増強された安定したＦｏｘｐ３発現のプラスの利益を示唆している。

【0107】

図１６Ａ～１６Ｂは、ＣＤ３９／ＣＤ７３薬理学的阻害剤が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にＭＳＣミトコンドリアのＵＣＢ ｉＴｒｅｇへの移行を遮断することを示している。ミトコンドリア移行がＣＤ３９およびＣＤ７３シグナルによって媒介されるかどうかを試験するために、ＩＬ－２による増殖中に薬理学的阻害剤が追加された。分化されたＦｏｘｐ３^＋ｉＴｒｅｇ細胞は、７２時間でＩＬ－２（１００Ｕ／ｍｌ）とともに５×１０^５個の細胞／ｍｌで、ｍｔ－ＧＦＰレンチウイルス形質導入ＭＳＣプラットフォーム（２４ウェルプレート）に添加された。ＣＤ３９およびＣＤ７３シグナルを遮断するために、５０ｕＭ ＣＤ３９阻害剤（ＰＯＭ１、Ｅ－ＮＴＰＤアーゼ阻害剤、シグマ）および１００ｕＭ ＣＤ７３阻害剤（アデノシン５’－（α、β－メチレン）二リン酸、シグマ）を、または一緒に、培養物に添加した。培養７２時間後にｉＴｒｅｇを回収した。フロー分析のために、ｉＴｒｅｇを抗ヒトＣＤ４ＡＰＣ抗体で表面染色した。染色された細胞はＦＡＣＳ Ｆｏｒｔｅｓｓａで分析された。データは３～４回の個別の実験からのものである（ｎ＝５～１４）。＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１。これらのデータは、ＣＤ３９／ＣＤ７３阻害剤の処置が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にＢＭ－ＭＳＣからＵＣＢ ｉＴｒｅｇへのミトコンドリア移行を有意に遮断することを示している。まとめると、これらの結果は、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中のＢＭ－ＭＳＣからＵＣＢ ｉＴｒｅｇへのミトコンドリア移行が外部酵素ＣＤ３９およびＣＤ７３経路によって媒介されることを示唆している。

【0108】

図１７Ａ～１７Ｉおよび１８Ａ～１８Ｇは、ｉＴｒｅｇとのＭＳＣ共培養が、ヒト化マウスモデルにおける異種ＧＶＨＤおよび同種異系ＧＶＨＤを改善することを示している。ＭＳＣミトコンドリアのｉＴｒｅｇへの移行を阻害すると、コントロールに対して抑制機能が大幅に低減した（図１７Ａ）。ＩＬ－２／培地でのｉＴｒｅｇエクスビボ増殖中のＭＳＣ共培養におけるｉＴｒｅｇのインビボ機能を評価するために、ｉＴｒｅｇをＧＶＨＤ誘導ＮＳＧマウスに養子移入した。ＧＶＨＤのこの異種モデルが使用され、短期（２１日）に増殖されたｉＴｒｅｇ培養物が、ＧＶＨＤを誘導するために成人のヒトＰＢＭＣ ｉｖ注射の７日後に注射された。治療群は、ＧＶＨＤ（Ｅｈｘ ｅｔ ａｌ．，２０１８）および生存評価（Ｓｏｎｎｔａｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５）を実施する技術者には知らされていなかった。

【0109】

ＭＳＣ共培養ｉＴｒｅｇで処置されたマウスは、生存率の大幅な改善、体重の安定、およびＧＶＨＤ臨床スコアの低下を示した（図１７Ｂ）。採取した脾臓におけるＦｏｘｐ３発現およびＦｏｘｐ３＋ＣＤ４Ｔ細胞は、ＧＶＨＤ誘導の２週間後にＭＳＣ共培養ｉＴｒｅｇで処置したマウスで有意に高かった（図１７Ｃおよび１８Ａ）。ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞を産生するＩＦＮγは、ＭＳＣ共培養ｉＴｒｅｇで処置されたマウスから採取された脾臓細胞で劇的に低減した（図１８Ｂ）。サイトカイン染色と一致して、炎症誘発性サイトカインＩＦＮγおよびＴＮＦαの血清およびエクスビボレベルは、ＭＳＣ共培養ｉＴｒｅｇで処置された動物において有意に低減した（図１７Ｄおよび１７Ｅ）。

【0110】

ＭＳＣ共培養増殖ｉＴｒｅｇが自己免疫疾患の治療効果を有するかどうかを判断するために、自己免疫表現型と類似したヒト化マウスを使用した慢性ＧＶＨＤモデルを使用した（Ｓｏｎｎｔａｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。ヒトＣＤ４５＋生着は、２４週目にＣＤ３４＋細胞を投与されたマウスで測定された（図１８Ｃ）。ＭＳＣ共培養増殖ｉＴｒｅｇを投与されたマウスは、他の群よりも体重減少がわずかに減少したが（図１７Ｃ）、生存率は改善された（図１７Ｆ）。Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ細胞は、ＭＳＣ共培養で増殖させたｉＴｒｅｇ移植マウスで有意に増強された（図１８Ｄ）。ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞を産生するＩＦＮγは、ＭＳＣ共培養で増殖させたｉＴｒｅｇ処置マウスで有意に低減することが観察された（図１７Ｇ）。インビボでのｉＴｒｅｇに対するＭＳＣミトコンドリア移行の影響を調査するために、ＣＤ３９阻害剤を添加したＭＳＣ共培養ｉＴｒｅｇを生成した。ＣＤ３９阻害剤治療は、成人のＰＢＬ誘発性ＧＶＨＤにおけるＦｏｘｐ３＋ｉＴｒｅｇの割合を低減させた（図１７Ｈ）。ＩＦＮγ産生ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ３９阻害剤で処置したｉＴｒｅｇ処置マウスで有意に増加した（図１７Ｉおよび１８Ｅ）。血清レベルおよびＩＦＮγおよびＴＮＦαの産生は、コントロールと比較して、ＣＤ３９阻害剤ｉＴｒｅｇ処置マウスで有意に増加した（図１８Ｆおよび１８Ｇ）。まとめると、これらの結果は、抑制性ｉＴｒｅｇがＩＬ－２によるエクスビボ増殖中に、ＭＳＣミトコンドリア移行によって維持され、さらにこれらのｉＴｒｅｇがインビボで自己免疫疾患を保護できることを明らかにしている。

【0111】

図１９Ａ～１９Ｂは、機能不全のミトコンドリアがｉＴｒｅｇに移行しないことを示している。アポトーシスＭＳＣがミトコンドリアを増殖中のｉＴｒｅｇに移行するかどうかを試験するために、３×１０^５個のＭＳＣをｍｔ－ＧＦＰレンチウイルスとインキュベートし、２４ウェルプレートに播種した。ＭＳＣを３７度で３０分間インキュベートし、細胞を培地で洗浄した。ＦＯＸＰ３^＋ｉＴｒｅｇ細胞は、７２時間培養中のＩＬ－２（１００Ｕ／ｍｌ）とともに５×１０^５個の細胞／ｍｌで、ｍｔ－ＧＦＰレンチウイルス形質導入モックまたはロテノン処置ＭＳＣプラットフォーム（２４ウェルプレート）に添加した。フロー分析のために、ｉＴｒｅｇを抗ヒトＣＤ４ＡＰＣ抗体で表面染色した。染色された細胞をＦＡＣＳ Ｆｏｒｔｅｓｓａで分析した。データは２つの異なる実験からのものである。Ｎ＝５～６、＊＊＊ｐ＜０．００１。

【0112】

自己免疫疾患患者で観察されるＴｒｅｇの内因性欠陥は、自家ｎＴｒｅｇ療法の成功を妨げる可能性がある（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，２００６、Ｖａｌｅｎｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２００６、Ｖｉｇｌｉｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，２００４）。以前の研究では、同種異系ＵＣＢからのエクスビボで増殖され、部分的にＨＬＡが一致するｎＴｒｅｇは、ヒトで十分に許容されることが示されている（Ｂｒｕｎｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。ＵＣＢ ｉＴｒｅｇの臨床的実施に対する主な障害は、ｉＴｒｅｇ Ｆｏｘｐ３発現の不安定性、および炎症性環境への移行時のサプレッサー機能の喪失である（Ｈｉｐｐｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。本発明で報告された結果は、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中のＢＭ－ＭＳＣ共培養が、Ｆｏｘｐ３発現を維持するための新しい生理学的条件を提供し、それにより、インビトロおよびインビボで炎症環境におけるｉＴｒｅｇ抑制機能を提供することを実証する。

【0113】

ＭＳＣ共培養は、ＣＤ２５、ＣＴＬＡ－４、およびＩＣＯＳの有意に上方調節された発現と関連していることが観察されたが、活性化Ｔ細胞の枯渇に寄与する可能性のあるＬＡＧ－３およびＴＩＭ－３の発現は減少した。短期（２１日）のＭＳＣ共培養後のＣＤ６２Ｌ^＋およびＣＤ４５ＲＡ^＋ｉＴｒｅｇ細胞の割合が高いことが観察された。炎症性環境は、Ｆｏｘｐ３の発現およびｉＴｒｅｇの機能的活性の急速な喪失に起因する（Ｋｏｅｎｅｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，２００９）。データは、インビトロおよびインビボで炎症状態に曝されたＭＳＣ共培養増殖ｉＴｒｅｇにおけるエフェクター細胞活性化の阻害およびＦｏｘｐ３安定性の維持を含む、有意に増強された抑制機能を示している。Ｆｏｘｐ３遺伝子のＴｒｅｇ特異的脱メチル化領域の後成的修飾を調べて、ＢＭ－ＭＳＣで増強されたｉＴｒｅｇの安定性のメカニズムについてさらに洞察を得ることが重要である（Ｓｏｍｅｙａ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。

【0114】

以前の研究は、主にパラクリンメカニズムを介したＴｒｅｇ機能のＭＳＣ増強を指摘しているが（Ｄｅｌ Ｆａｔｔｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５）、本発明は、ｉＴｒｅｇ Ｆｏｘｐ３発現および持続的抑制機能のＭＳＣサポートが直接の細胞間接触を必要とすることを特定する。さらに、本発明は、重要なメカニズムがＭＳＣによるミトコンドリア移行を含むという驚くべき発見を含む。増殖細胞へのＭＳＣミトコンドリア移行を駆動する細胞および分子メカニズムは以前に解明されていないので、本発明はさらに、ｉＴｒｅｇ ＣＤ３９／ＣＤ７３シグナル伝達がＭＳＣミトコンドリア移行を駆動し、さらにミトコンドリア移行が増強されたｉＴｒｅｇ ＢＡＣＨ２およびＳＥＮＰ３発現をもたらすことを特定する。ＢＡＣＨ２は、Ｆｏｘｐ３プロモーターでの直接転写活性を介してヒトＵＣＢ ｉＴｒｅｇの発生を調節する（Ｄｏ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。ＳＥＮＰ３は、Ｔｒｅｇの安定性を維持するのに役立つＳＵＭＯ特異的プロテアーゼである（Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。

【0115】

ＣＤ３９およびＣＤ７３は、免疫応答において一緒に戦略的な役割を果たす（Ａｌｌａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２０１７、Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。ＣＤ３９およびＣＤ７３は、細胞外ＡＴＰを分解して、ＡＭＰと抗炎症性アデノシンを産生する（Ｄｅａｇｌｉｏ ｅｔ ａｌ．，２００７）。ＣＤ７３－／－マウスは、機能的なＣＤ７３コントロールと比較して、抗腫瘍免疫の増強（Ｓｔａｇｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１）および胃炎の悪化を示し、ＷＴ Ｔｒｅｇの養子注射はこれらの免疫応答を逆転させる（Ａｌａｍ ｅｔ ａｌ．，２００９）。本発明および他の発明は、Ｔｒｅｇ上のＣＤ７３シグナル伝達がＴｒｅｇ抑制機能を維持するために重要であることを特定している（Ｅｈｒｅｎｔｒａｕｔ ｅｔ ａｌ．，２０１３、Ｋｏｂｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００６）。Ｔｒｅｇへのミトコンドリア移行は以前に検討されていないので、本発明は、増殖中のｉＴｒｅｇ上のＣＤ３９およびＣＤ７３シグナル伝達が、ＩＬ－２によるエクスビボ増殖中にＭＳＣミトコンドリアのｉＴｒｅｇへの移行を促進することを特定する。

【0116】

Ｍｉｒｏ１は、細胞間ミトコンドリア移行を調節し、損傷した細胞の回復を増強することが示されている（Ａｈｍａｄ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。以前の研究では、損傷した星状細胞がＭＳＣでＭｉｒｏ１発現レベルの上昇を誘発し、これはミトコンドリア移行と相関していた（Ｂａｂｅｎｋｏ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。本発明において、データは、増殖するｉＴｒｅｇが、エクスビボでの共培養中にＢＭ－ＭＳＣ上でＭｉｒｏ１発現を誘導したことを示している。さらに、ＭＳＣミトコンドリア移行はＴＮＴを介して起こる。

【0117】

ミトコンドリアはＲＯＳの重要な供給源である（Ｔｕｒｒｅｎｓ、２００３）。興味深いことに、ＲＯＳはシグナル伝達における細胞周期および機能を調節することができ（Ｂｙｕｎ ｅｔ ａｌ．，２００８、Ｓｃｈｉｅｋｅ ｅｔ ａｌ．，２００８）、癌細胞の腫瘍形成に重要である（（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０）。これは、ＲＯＳが骨髄間質細胞から白血病芽球へのＴＮＴを介したミトコンドリア移行の主要な推進力であるという発見に照らして特に興味深いものである（Ｍａｒｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。さらなる研究により、ミトコンドリアの代謝もＴ細胞の活性化に重要な役割を果たすことが実証されている。本発明は、ＭＳＣミトコンドリア移行を駆動する増殖中のｉＴｒｅｇにおけるＣＤ３９／７３発現の役割を初めて特定する。本発明における観察は、ｉＴｒｅｇにおけるミトコンドリア量の増加がＴＮＴ移行を介したＭＳＣに由来することを強く示しているが、興味深いことに、ＲＯＳ発現ではなく増殖細胞の代謝シグナル伝達がこのプロセスを推進する重要なメカニズムであるように思われる。

【0118】

細胞の種類に関係なく、ミトコンドリアは現在、エネルギーの生成をはるかに超えた役割を果たすと認識されている。多くの研究から浮かび上がってきた中心的な考えは、Ｔ細胞は活性化中に細胞代謝の変化を受けるというものである（Ａｋｋａｙａ ｅｔ ａｌ．，２０１８）。代謝要件が主に細胞輸送およびハウスキーピング機能のみを含む静止Ｔ細胞とは対照的に、活発に増殖する細胞は、様々な生合成経路で必要な中間体の生成および同化代謝のシグナル伝達分子の産生などの機能のために追加のＡＴＰを生成する必要がある。ミトコンドリア移行を増強するためにシグナル伝達メカニズムをどのように調節することができるかを特定するための本発明からの将来の研究が示されている。重要なことに、本発明は、ミトコンドリア移行が、増殖する細胞に対するＭＳＣ支持機能の重要なメカニズムであることを支持している。重要なことに、ｉＴｒｅｇミトコンドリア膜電位はＭＳＣとの共培養によって後押しされる。第二に、ミトコンドリア移行の薬理学的阻害は、ｉＴｒｅｇ Ｆｏｘｐ３の発現と抑制機能に対するＭＳＣの利点をほぼ完全に打ち消す。

【0119】

要約すると、これらの驚くべき結果は、ｉＴｒｅｇ ＦｏｘＰ３の発現を維持するミトコンドリア機能ならびにインビトロおよびインビボでの炎症状態における抑制機能の重要性を浮き彫りにしている。いくつかの要因が様々な疾患モデルでｉＴｒｅｇの安定性および機能を調節できるが、これらの結果は、ミトコンドリアＢＡＣＨ２経路がＭＳＣで増強されたｉＴｒｅｇの安定性および機能の顕著なメカニズムであり、増殖細胞でのＣＤ３９／７３シグナル伝達がＭＳＣを介したミトコンドリア移行を促進することを示している。

【0120】

本発明のこれらのおよび追加の実施形態は、特許請求の範囲に限定することを意図されていない本開示を参酌すると当業者には明らかであろう。引用された参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

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Ｈａｎ，Ｈ．，Ｈｕ，Ｊ．，Ｙａｎ，Ｑ．，Ｚｈｕ，Ｊ．，Ｚｈｕ，Ｚ．，Ｃｈｅｎ，Ｙ．，Ｓｕｎ，Ｊ．，ａｎｄ Ｚｈａｎｇ，Ｒ．（２０１６）．Ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｃｕｅ ｉｎｊｕｒｅｄ Ｈ９ｃ２ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇ ｉｎｔａｃｔ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ ｎａｎｏｔｕｂｅｓ ｉｎ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｉｍｕｌａｔｅｄ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｒｅｐｏｒｔｓ １３，１５１７－１５２４．
Ｈａｙａｋａｗａ，Ｋ．，Ｅｓｐｏｓｉｔｏ，Ｅ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｔｅｒａｓａｋｉ，Ｙ．，Ｌｉｕ，Ｙ．，Ｘｉｎｇ，Ｃ．，Ｊｉ，Ｘ．，ａｎｄ Ｌｏ，Ｅ．Ｈ．（２０１６）．Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｆｒｏｍ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｔｏ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｆｔｅｒ ｓｔｒｏｋｅ．Ｎａｔｕｒｅ ５３５，５５１－５５５．
Ｈｉｐｐｅｎ，Ｋ．Ｌ．，Ｍｅｒｋｅｌ，Ｓ．Ｃ．，Ｓｃｈｉｒｍ，Ｄ．Ｋ．，Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．，Ｔｅｎｎｉｓ，Ｎ．Ｃ．，Ｒｉｌｅｙ，Ｊ．Ｌ．，Ｊｕｎｅ，Ｃ．Ｈ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｊ．Ｓ．，Ｗａｇｎｅｒ，Ｊ．Ｅ．，ａｎｄ Ｂｌａｚａｒ，Ｂ．Ｒ．（２０１１）．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １１，１１４８－１１５７．
Ｈｕｅｈｎ，Ｊ．，Ｐｏｌａｎｓｋｙ，Ｊ．Ｋ．，ａｎｄ Ｈａｍａｎｎ，Ａ．（２００９）．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ＦＯＸＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：ｔｈｅ ｋｅｙ ｔｏ ａ ｓｔａｂｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｌｉｎｅａｇｅ？Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９，８３－８９．
Ｊａｎｇ，Ｋ．Ｊ．，Ｍａｎｏ，Ｈ．，Ａｏｋｉ，Ｋ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔ．，Ｍｕｔｏ，Ａ．，Ｎａｍｂｕ，Ｙ．，Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｋ．，Ｉｔｏｈ，Ｋ．，Ｔａｋｅｔａｎｉ，Ｓ．，Ｎｕｔｔ，Ｓ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２０１５）．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｓｉｇｎａｌｓ ｆｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ Ｂ－ｃｅｌｌ ｆａｔｅｓ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ６，６７５０．
Ｋａｎａｍｏｒｉ，Ｍ．，Ｎａｋａｔｓｕｋａｓａ，Ｈ．，Ｏｋａｄａ，Ｍ．，Ｌｕ，Ｑ．，ａｎｄ Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ，Ａ．（２０１６）．Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ Ｃｅｌｌｓ：Ｔｈｅｉｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３７，８０３－８１１．
Ｋａｓａｋｏｖｓｋｉ，Ｄ．，Ｘｕ，Ｌ．，ａｎｄ Ｌｉ，Ｙ．（２０１８）．Ｔ ｃｅｌｌ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌ ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １１，９１．
Ｋｅｒｋｅｌａ，Ｅ．，Ｌａｉｔｉｎｅｎ，Ａ．，Ｒａｂｉｎａ，Ｊ．，Ｖａｌｋｏｎｅｎ，Ｓ．，Ｔａｋａｔａｌｏ，Ｍ．，Ｌａｒｊｏ，Ａ．，Ｖｅｉｊｏｌａ，Ｊ．，Ｌａｍｐｉｎｅｎ，Ｍ．，Ｓｉｌｊａｎｄｅｒ，Ｐ．，Ｌｅｈｅｎｋａｒｉ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．Ａｄｅｎｏｓｉｎｅｒｇｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ Ｈｕｍａｎ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｒｏｍａｌ Ｃｅｌｌｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｓ Ｃｏ－Ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ３４，７８１－７９０．
Ｋｉｍ，Ｅ．Ｈ．，Ｇａｓｐｅｒ，Ｄ．Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｈ．，Ｐｌｉｓｃｈ，Ｅ．Ｈ．，Ｓｖａｒｅｎ，Ｊ．，ａｎｄ Ｓｕｒｅｓｈ，Ｍ．（２０１４）．Ｂａｃｈ２ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｏｆ Ｆｏｘｐ３＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｆａｔａｌ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９２，９８５－９９５．
Ｋｏｂｉｅ，Ｊ．Ｊ．，Ｓｈａｈ，Ｐ．Ｒ．，Ｙａｎｇ，Ｌ．，Ｒｅｂｈａｈｎ，Ｊ．Ａ．，Ｆｏｗｅｌｌ，Ｄ．Ｊ．，ａｎｄ Ｍｏｓｍａｎｎ，Ｔ．Ｒ．（２００６）．Ｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ａｎｄ ｐｒｉｍｅｄ ｕｎｃｏｍｍｉｔｔｅｄ ＣＤ４ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓ ＣＤ７３，ｗｈｉｃｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ＣＤ４ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ５’－ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｔｏ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７７，６７８０－６７８６．
Ｋｏｅｎｅｃｋｅ，Ｃ．，Ｃｚｅｌｏｔｈ，Ｎ．，Ｂｕｂｋｅ，Ａ．，Ｓｃｈｍｉｔｚ，Ｓ．，Ｋｉｓｓｅｎｐｆｅｎｎｉｇ，Ａ．，Ｍａｌｉｓｓｅｎ，Ｂ．，Ｈｕｅｈｎ，Ｊ．，Ｇａｎｓｅｒ，Ａ．，Ｆｏｒｓｔｅｒ，Ｒ．，ａｎｄ Ｐｒｉｎｚ，Ｉ．（２００９）．Ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅ ｎｏｖｏ－ｉｎｄｕｃｅｄ Ｆｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇ ｒｅｖｅｒｔ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｄｏ ｎｏｔ ｐｒｏｔｅｃｔ ｆｒｏｍ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ＧＶＨＤ．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３９，３０９１－３０９６．
Ｋｕｍａｒ，Ｍ．，Ｐｕｔｚｋｉ，Ｎ．，Ｌｉｍｍｒｏｔｈ，Ｖ．，Ｒｅｍｕｓ，Ｒ．，Ｌｉｎｄｅｍａｎｎ，Ｍ．，Ｋｎｏｐ，Ｄ．，Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｎ．，Ｈａｒｄｔ，Ｃ．，Ｋｒｅｕｚｆｅｌｄｅｒ，Ｅ．，ａｎｄ Ｇｒｏｓｓｅ－Ｗｉｌｄｅ，Ｈ．（２００６）．ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｆａｉｌ ｔｏ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｍｙｅｌｉｎ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ １８０，１７８－１８４．
Ｌａｎｇｅ，Ｃ．，Ｓｃｈｏｌｌ，Ｍ．，Ｍｅｌｍｓ，Ａ．，ａｎｄ Ｂｉｓｃｈｏｆ，Ｆ．（２０１１）．ＣＤ６２Ｌ（ｈｉｇｈ）Ｔｒｅｇ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｃｃｕｍｕｌａｔｅ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ＣＮＳ ｄｕｒｉｎｇ ｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＥＡＥ．Ｂｒａｉｎ，ｂｅｈａｖｉｏｒ，ａｎｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２５，１２０－１２６．
Ｌｅ Ｔｅｘｉｅｒ，Ｌ．，Ｌｉｎｅｂｕｒｇ，Ｋ．Ｅ．，Ｃａｏ，Ｂ．，ＭｃＤｏｎａｌｄ－Ｈｙｍａｎ，Ｃ．，Ｌｅｖｅｑｕｅ－Ｅｌ Ｍｏｕｔｔｉｅ，Ｌ．，Ｎｉｃｈｏｌｌｓ，Ｊ．，Ｍｅｌｉｎｏ，Ｍ．，Ｎａｌｋｕｒｔｈｉ，Ｂ．Ｃ．，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，Ｋ．Ａ．，Ｔｅａｌ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ．ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ １，ｅ８６８５０．
Ｌｅｅ，Ｓ．，Ｐａｒｋ，Ｋ．，Ｋｉｍ，Ｊ．，Ｍｉｎ，Ｈ．，ａｎｄ Ｓｅｏｎｇ，Ｒ．Ｈ．（２０１８）．Ｆｏｘｐ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｓ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｂｙ Ｃ／ＥＢＰ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ．ＥＭＢＯ Ｒｅｐ １９．
Ｌｅｐｒａｔ，Ｐ．，Ｒａｔｉｎａｕｄ，Ｍ．Ｈ．，ａｎｄ Ｊｕｌｉｅｎ，Ｒ．（１９９０）．Ａ ｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｅｓｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ａｇｅｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ｔｗｏ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｂｅｓ．Ｍｅｃｈ Ａｇｅｉｎｇ Ｄｅｖ ５２，１４９－１６７．
Ｌｉｕ，Ｓ．，Ｓａｗａｄａ，Ｔ．，Ｌｅｅ，Ｓ．，Ｙｕ，Ｗ．，Ｓｉｌｖｅｒｉｏ，Ｇ．，Ａｌａｐａｔｔ，Ｐ．，Ｍｉｌｌａｎ，Ｉ．，Ｓｈｅｎ，Ａ．，Ｓａｘｔｏｎ，Ｗ．，Ｋａｎａｏ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．（２０１２）．Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ＰＩＮＫ１ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｍｉｒｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ａｘｏｎａｌ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔ ８，ｅ１００２５３７．
Ｌｏｎｇ，Ｓ．Ａ．，Ｃｅｒｏｓａｌｅｔｔｉ，Ｋ．，Ｂｏｌｌｙｋｙ，Ｐ．Ｌ．，Ｔａｔｕｍ，Ｍ．，Ｓｈｉｌｌｉｎｇ，Ｈ．，Ｚｈａｎｇ，Ｓ．，Ｚｈａｎｇ，Ｚ．Ｙ．，Ｐｉｈｏｋｅｒ，Ｃ．，Ｓａｎｄａ，Ｓ．，Ｇｒｅｅｎｂａｕｍ，Ｃ．，ａｎｄ Ｂｕｃｋｎｅｒ，Ｊ．Ｈ．（２０１０）．Ｄｅｆｅｃｔｓ ｉｎ ＩＬ－２Ｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｔｏ ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ＦＯＸＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ－ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｔｙｐｅ １ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｓｕｂｊｅｃｔｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５９，４０７－４１５．
Ｌｕ，Ｓ．Ｙ．，Ｌｉｕ，Ｋ．Ｙ．，Ｌｉｕ，Ｄ．Ｈ．，Ｘｕ，Ｌ．Ｐ．，ａｎｄ Ｈｕａｎｇ，Ｘ．Ｊ．（２０１１）．Ｈｉｇｈ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ＣＤ６２Ｌ（＋）ｎａｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｌｏｗ ｒｉｓｋ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｕｎｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６５，２６４－２７７．
Ｍａｒｌｅｉｎ，Ｃ．Ｒ．，Ｚａｉｔｓｅｖａ，Ｌ．，Ｐｉｄｄｏｃｋ，Ｒ．Ｅ．，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｓ．Ｄ．，Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｄ．Ｒ．，Ｓｈａｆａｔ，Ｍ．Ｓ．，Ｚｈｏｕ，Ｚ．，Ｌａｗｅｓ，Ｍ．，Ｂｏｗｌｅｓ，Ｋ．Ｍ．，ａｎｄ Ｒｕｓｈｗｏｒｔｈ，Ｓ．Ａ． （２０１７）．ＮＡＤＰＨ ｏｘｉｄａｓｅ－２ ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｒｉｖｅｓ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｆｒｏｍ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｂｌａｓｔｓ．Ｂｌｏｏｄ １３０，１６４９－１６６０．
Ｍｅｌｉｅｆ，Ｓ．Ｍ．，Ｓｃｈｒａｍａ，Ｅ．，Ｂｒｕｇｍａｎ，Ｍ．Ｈ．，Ｔｉｅｍｅｓｓｅｎ，Ｍ．Ｍ．，Ｈｏｏｇｄｕｉｊｎ，Ｍ．Ｊ．，Ｆｉｂｂｅ，Ｗ．Ｅ．，ａｎｄ Ｒｏｅｌｏｆｓ，Ｈ．（２０１３）．Ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅ ｈｕｍａｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａ ｎｏｖｅｌ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ｓｋｅｗｉｎｇ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｔｏｗａｒｄ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ３１，１９８０－１９９１．
Ｑｕｉｎｔｅｒｏ，Ｏ．Ａ．，ＤｉＶｉｔｏ，Ｍ．Ｍ．，Ａｄｉｋｅｓ，Ｒ．Ｃ．，Ｋｏｒｔａｎ，Ｍ．Ｂ．，Ｃａｓｅ，Ｌ．Ｂ．，Ｌｉｅｒ，Ａ．Ｊ．，Ｐａｎａｒｅｔｏｓ，Ｎ．Ｓ．，Ｓｌａｔｅｒ，Ｓ．Ｑ．，Ｒｅｎｇａｒａｊａｎ，Ｍ．，Ｆｅｌｉｕ，Ｍ．，ａｎｄ Ｃｈｅｎｅｙ，Ｒ．Ｅ．（２００９）．Ｈｕｍａｎ Ｍｙｏ１９ ｉｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｍｙｏｓｉｎ ｔｈａｔ ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ １９，２００８－２０１３．
Ｒａｕｃｈ，Ｋ．Ｓ．，Ｈｉｌｓ，Ｍ．，Ｌｕｐａｒ，Ｅ．，Ｍｉｎｇｕｅｔ，Ｓ．，Ｓｉｇｖａｒｄｓｓｏｎ，Ｍ．，Ｒｏｔｔｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．Ｅ．，Ｉｚｃｕｅ，Ａ．，Ｓｃｈａｃｈｔｒｕｐ，Ｃ．，ａｎｄ Ｓｃｈａｃｈｔｒｕｐ，Ｋ．（２０１６）．Ｉｄ３ Ｍａｉｎｔａｉｎｓ Ｆｏｘｐ３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ａ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｆ Ｅ４７，Ｓｐｉ－Ｂ，ａｎｄ ＳＯＣＳ３．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ １７，２８２７－２８３６．
Ｒｏｊｅｗｓｋｉ，Ｍ．Ｔ．，Ｗｅｂｅｒ，Ｂ．Ｍ．，ａｎｄ Ｓｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｅｒ，Ｈ．（２００８）．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ Ｖａｒｉｏｕｓ Ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｒａｎｓｆｕｓ Ｍｅｄ Ｈｅｍｏｔｈｅｒ ３５，１６８－１８４．
Ｒｏｙｃｈｏｕｄｈｕｒｉ，Ｒ．，Ｅｉｌ，Ｒ．Ｌ．，Ｃｌｅｖｅｒ，Ｄ．，Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ，Ｃ．Ａ．，Ｓｕｋｕｍａｒ，Ｍ．，Ｇｒａｎｔ，Ｆ．Ｍ．，Ｙｕ，Ｚ．，Ｍｅｈｔａ，Ｇ．，Ｌｉｕ，Ｈ．，Ｊｉｎ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＢＡＣＨ２ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２６，５９９－６０４．
Ｒｏｙｃｈｏｕｄｈｕｒｉ，Ｒ．，Ｈｉｒａｈａｒａ，Ｋ．，Ｍｏｕｓａｖｉ，Ｋ．，Ｃｌｅｖｅｒ，Ｄ．，Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ，Ｃ．Ａ．，Ｂｏｎｅｌｌｉ，Ｍ．，Ｓｃｉｕｍｅ，Ｇ．，Ｚａｒｅ，Ｈ．，Ｖａｈｅｄｉ，Ｇ．，Ｄｅｍａ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．（２０１３）．ＢＡＣＨ２ ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｐｒｏｇｒａｍｓ ｔｏ ｓｔａｂｉｌｉｚｅ Ｔ（ｒｅｇ）－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ ４９８，５０６－５１０．
Ｓｃｈｉｅｋｅ，Ｓ．Ｍ．，ＭｃＣｏｙ，Ｊ．Ｐ．，Ｊｒ．，ａｎｄ Ｆｉｎｋｅｌ，Ｔ．（２００８）．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｂｉｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ ｗｉｔｈ Ｇ１ ｐｈａｓｅ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ７，１７８２－１７８７．
Ｓｃｈｍｉｔｔ，Ｅ．Ｇ．，ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｃ．Ｂ．（２０１３）．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４，１５２．
Ｓｉｎｃｌａｉｒ，Ｋ．，Ｙｅｒｋｏｖｉｃｈ，Ｓ．Ｔ．，ａｎｄ Ｃｈａｍｂｅｒｓ，Ｄ．Ｃ． （２０１３）．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｕｎｇ．Ｒｅｓｐｉｒｏｌｏｇｙ １８，３９７－４１１．
Ｓｏｍｅｙａ，Ｋ．，Ｎａｋａｔｓｕｋａｓａ，Ｈ．，Ｉｔｏ，Ｍ．，Ｋｏｎｄｏ，Ｔ．，Ｔａｔｅｄａ，Ｋ．Ｉ．，Ａｋａｎｕｍａ，Ｔ．，Ｋｏｙａ，Ｉ．，Ｓａｎｏｓａｋａ，Ｔ．，Ｋｏｈｙａｍａ，Ｊ．，Ｔｓｕｋａｄａ，Ｙ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．（２０１７）．Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｆｏｘｐ３ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ＣＮＳ２ ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＴＥＴ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９，３６５－３７５．
Ｓｏｎｎｔａｇ，Ｋ．，Ｅｃｋｅｒｔ，Ｆ．，Ｗｅｌｋｅｒ，Ｃ．，Ｍｕｌｌｅｒ，Ｈ．，Ｍｕｌｌｅｒ，Ｆ．，Ｚｉｐｓ，Ｄ．，Ｓｉｐｏｓ，Ｂ．，Ｋｌｅｉｎ，Ｒ．，Ｂｌａｎｋ，Ｇ．，Ｆｅｕｃｈｔｉｎｇｅｒ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．（２０１５）．Ｃｈｒｏｎｉｃ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ－ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ＣＤ３４（＋）－ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ＮＳＧ ｍｉｃｅ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ＨＬＡ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｆｏｒ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ ６２，５５－６６．
Ｓｔａｇｇ，Ｊ．，Ｄｉｖｉｓｅｋｅｒａ，Ｕ．，Ｄｕｒｅｔ，Ｈ．，Ｓｐａｒｗａｓｓｅｒ，Ｔ．，Ｔｅｎｇ，Ｍ．Ｗ．，Ｄａｒｃｙ，Ｐ．Ｋ．，ａｎｄ Ｓｍｙｔｈ，Ｍ．Ｊ．（２０１１）．ＣＤ７３－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ ｈａｖｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ａｒｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７１，２８９２－２９００．
Ｔａｓｓｏ，Ｒ．，Ｉｌｅｎｇｏ，Ｃ．，Ｑｕａｒｔｏ，Ｒ．，Ｃａｎｃｅｄｄａ，Ｒ．，Ｃａｓｐｉ，Ｒ．Ｒ．，ａｎｄ Ｐｅｎｎｅｓｉ，Ｇ．（２０１２）．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ Ｔ－ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ａ ｐａｒａｃｒｉｎｅ ｆａｓｈｉｏｎ ａｎｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｕｖｅｉｔｉｓ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ ｖｉｓｕａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ５３，７８６－７９３．
Ｔｏｎｅ，Ｙ．，Ｆｕｒｕｕｃｈｉ，Ｋ．，Ｋｏｊｉｍａ，Ｙ．，Ｔｙｋｏｃｉｎｓｋｉ，Ｍ．Ｌ．，Ｇｒｅｅｎｅ，Ｍ．Ｉ．，ａｎｄ Ｔｏｎｅ，Ｍ．（２００８）．Ｓｍａｄ３ ａｎｄ ＮＦＡＴ ｃｏｏｐｅｒａｔｅ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ Ｆｏｘｐ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｔｓ ｅｎｈａｎｃｅｒ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９，１９４－２０２．
Ｔｒｚｏｎｋｏｗｓｋｉ，Ｐ．，Ｓｚａｒｙｎｓｋａ，Ｍ．，Ｍｙｓｌｉｗｓｋａ，Ｊ．，ａｎｄ Ｍｙｓｌｉｗｓｋｉ，Ａ．（２００９）．Ｅｘ ｖｉｖｏ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４（＋）ＣＤ２５（＋）Ｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ ７５，１７５－１８８．
Ｔｕｒｒｅｎｓ，Ｊ．Ｆ．（２００３）．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ５５２，３３５－３４４．
Ｖａｌｅｎｃｉａ，Ｘ．，Ｓｔｅｐｈｅｎｓ，Ｇ．，Ｇｏｌｄｂａｃｈ－Ｍａｎｓｋｙ，Ｒ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｍ．，Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｅ．Ｍ．，ａｎｄ Ｌｉｐｓｋｙ，Ｐ．Ｅ．（２００６）．ＴＮＦ ｄｏｗｎｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉ Ｔ－ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ １０８，２５３－２６１．
ｖａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎ，Ｍ．Ａ．，ｄｕ Ｐｒｅ，Ｍ．Ｆ．，ｖａｎ Ｗａｎｒｏｏｉｊ，Ｒ．Ｌ．，ｄｅ Ｒｕｉｔｅｒ，Ｌ．Ｆ．，Ｒａａｔｇｅｅｐ，Ｈ．Ｒ．，Ｌｉｎｄｅｎｂｅｒｇｈ－Ｋｏｒｔｌｅｖｅ，Ｄ．Ｊ．，Ｍｕｌｄｅｒ，Ｃ．Ｊ．，ｄｅ Ｒｉｄｄｅｒ，Ｌ．，Ｅｓｃｈｅｒ，Ｊ．Ｃ．，ａｎｄ Ｓａｍｓｏｍ，Ｊ．Ｎ．（２０１３）．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌ Ｆｏｘｐ３（＋）Ｔｒｅｇ ｂｕｔ ｎｏｔ ｍｕｃｏｓａｌｌｙ－ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ ＣＤ６２Ｌ（ｎｅｇ）ＣＤ３８（＋）Ｆｏｘｐ３（＋）Ｔｒｅｇ ｉｎ ｔｈｅ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｉａｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ ８，ｅ６８４３２．
Ｖｉｇｌｉｅｔｔａ，Ｖ．，Ｂａｅｃｈｅｒ－Ａｌｌａｎ，Ｃ．，Ｗｅｉｎｅｒ，Ｈ．Ｌ．，ａｎｄ Ｈａｆｌｅｒ，Ｄ．Ａ．（２００４）．Ｌｏｓｓ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９，９７１－９７９．
Ｖｉｇｎａｉｓ，Ｍ．Ｌ．，Ｃａｉｃｅｄｏ，Ａ．，Ｂｒｏｎｄｅｌｌｏ，Ｊ．Ｍ．，ａｎｄ Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，Ｃ．（２０１７）．Ｃｅｌｌ Ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｓ ｂｙ Ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ Ｎａｎｏｔｕｂｅｓ：Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ｏｎ Ｔａｒｇｅｔ Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｔ ２０１７，６９１７９４１．
Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｌｉｕ，Ｘ．，Ｑｉｕ，Ｙ．，Ｓｈｉ，Ｙ．，Ｃａｉ，Ｊ．，Ｗａｎｇ，Ｂ．，Ｗｅｉ，Ｘ．，Ｋｅ，Ｑ．，Ｓｕｉ，Ｘ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）．Ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｎ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １１，１１．
Ｗａｔａｎａｂｅ－Ｍａｔｓｕｉ，Ｍ．，Ｍｕｔｏ，Ａ．，Ｍａｔｓｕｉ，Ｔ．，Ｉｔｏｈ－Ｎａｋａｄａｉ，Ａ．，Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｏ．，Ｍｕｒａｙａｍａ，Ｋ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｍ．，Ｉｋｅｄａ－Ｓａｉｔｏ，Ｍ．，ａｎｄ Ｉｇａｒａｓｈｉ，Ｋ．（２０１１）．Ｈｅｍｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｂ－ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｌａｓｓ ｓｗｉｔｃｈ，ａｎｄ ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ－１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ａｓ ａ ｌｉｇａｎｄ ｏｆ Ｂａｃｈ２．Ｂｌｏｏｄ １１７，５４３８－５４４８．
Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｆ．，Ｈａｍａｎａｋａ，Ｒ．，Ｗｈｅａｔｏｎ，Ｗ．Ｗ．，Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｓ．，Ｊｏｓｅｐｈ，Ｊ．，Ｌｏｐｅｚ，Ｍ．，Ｋａｌｙａｎａｒａｍａｎ，Ｂ．，Ｍｕｔｌｕ，Ｇ．Ｍ．，Ｂｕｄｉｎｇｅｒ，Ｇ．Ｒ．，ａｎｄ Ｃｈａｎｄｅｌ，Ｎ．Ｓ．（２０１０）．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ＲＯＳ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｒｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ Ｋｒａｓ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ １０７，８７８８－８７９３．
Ｘｕ，Ｙ．，Ｍｅｌｏ－Ｃａｒｄｅｎａｓ，Ｊ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｇａｕ，Ｉ．，Ｗｅｉ，Ｊ．，Ｍｏｎｔａｕｔｉ，Ｅ．，Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，Ｇａｏ，Ｂ．，Ｊｉｎ，Ｈ．，Ｓｕｎ，Ｚ．，ｅｔ ａｌ．（２０１９）．Ｔｈｅ Ｅ３ ｌｉｇａｓｅ Ｈｒｄ１ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｓ Ｔｒｅｇｓ ｂｙ ａｎｔａｇｏｎｉｚｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＥＲ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ ４．
Ｙｕ，Ｘ．，Ｌａｏ，Ｙ．，Ｔｅｎｇ，Ｘ．Ｌ．，Ｌｉ，Ｓ．，Ｚｈｏｕ，Ｙ．，Ｗａｎｇ，Ｆ．，Ｇｕｏ，Ｘ．，Ｄｅｎｇ，Ｓ．，Ｃｈａｎｇ，Ｙ．，Ｗｕ，Ｘ．，ｅｔ ａｌ．（２０１８）．ＳＥＮＰ３ ｍａｉｎｔａｉｎｓ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ＢＡＣＨ２ ｄｅＳＵＭＯｙｌａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ９，３１５７．
Ｚｈｅｎｇ，Ｊ．，Ｃｈａｎ，Ｐ．Ｌ．，Ｌｉｕ，Ｙ．，Ｑｉｎ，Ｇ．，Ｘｉａｎｇ，Ｚ．，Ｌａｍ，Ｋ．Ｔ．，Ｌｅｗｉｓ，Ｄ．Ｂ．，Ｌａｕ，Ｙ．Ｌ．，ａｎｄ Ｔｕ，Ｗ．（２０１３）．ＩＣＯＳ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ Ｔｒｅｇ ｉｎ ａ ＣＴＬＡ－４ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ８，ｅ８２２０３．
Ｚｏｒｎ，Ｅ．，Ｎｅｌｓｏｎ，Ｅ．Ａ．，Ｍｏｈｓｅｎｉ，Ｍ．，Ｐｏｒｃｈｅｒａｙ，Ｆ．，Ｋｉｍ，Ｈ．，Ｌｉｔｓａ，Ｄ．，Ｂｅｌｌｕｃｃｉ，Ｒ．，Ｒａｄｅｒｓｃｈａｌｌ，Ｅ．，Ｃａｎｎｉｎｇ，Ｃ．，Ｓｏｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２００６）．ＩＬ－２ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＦＯＸＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａ ＳＴＡＴ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｂｌｏｏｄ １０８，１５７１－１５７９．
Ｂａｏ，Ｒ．，Ｓｈｕｉ，Ｘ．，ｅｔ ａｌ．（２０１６）．Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ａ_２Ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔ，ＣＧＳ２１６８０，ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ ＣＤ３９ ａｎｄ ＣＤ７３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｅ２Ｆ－１ ａｎｄ ＣＲＥＢ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｅｐｔｉｃ ｍｉｃｅ．Ｉｎｔ’ｌ Ｊ．ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄ．，３８，９６９－９７５，ＤＯＩ：１０．３８９２／ｉｊｍｍ．２０１６．２６７９．
Ｂｅａｖｉｓ，Ｐ．Ａ．，Ｓｔａｇｇ，Ｊ．，Ｄａｒｃｙ，Ｐ．Ｋ．，ａｎｄ Ｓｍｙｔｈ，Ｍ．Ｊ．（２０１２）．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．５．
Ｃｈａｌｍｉｎ，Ｆ．，Ｍｉｇｎｏｔ，Ｇ．，Ｂｒｕｃｈａｒｄ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（２０１２）．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３６，３６２－３７３，ＤＯＩ １０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２０１１．１２．０１９．
Ｅｌｔｚｓｃｈｉｇ，Ｈ．Ｋ．，Ｋｏｈｌｅｒ，Ｄ．，Ｅｃｋｌｅ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．（２００９）．Ｃｅｎｔｒａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｓｐ１－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ＣＤ３９ ｉｎ ｈｙｐｏｘｉａ／ｉｓｃｈｅｍｉａ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．Ｂｌｏｏｄ，１１３，２２４－２３２．
Ｅｌｔｚｓｃｈｉｇ，Ｈ．Ｋ．，Ｉｂｌａ，Ｊ．Ｃ．，Ｆｕｒｕｔａ，Ｇ．Ｔ．，ｅｔ ａｌ．（２００３）．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ Ａｄｅｎｉｎｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ Ｐｏｓｔｈｙｐｏｘｉｃ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ：Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｅｃｔｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅｓ ａｎｄ Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ａ２Ｂ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｊ ｏｆ Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．１９８，Ｎｏ．５，７８３－７９６ ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８４／ｊｅｍ．２００３０８９１．
Ｈａｎｎａ Ｓ．Ｊ．，ＭｃＣｏｙ－Ｓｉｍａｎｄｌｅ Ｋ．，Ｍｉｓｋｏｌｃｉ Ｖ．，ｅｔ ａｌ．（２０１７）．Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｒｈｏ－ＧＴＰａｓｅｓ ａｎｄ ａｃｔｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ Ｎａｎｏｔｕｂｅ Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，７：８５４７，ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１７－０８９５０－７ １．
Ｋｅｌｌｅｒ，Ｋ．Ｅ．，Ｂｒａｄｌｅｙ Ｊ．Ｍ．，Ｓｕｎ Ｙ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．（２０１７）．Ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ Ｎａｎｏｔｕｂｅｓ ａｒｅ Ｎｏｖｅｌ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ｔｈａｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｅ Ｓｉｇｎａｌｓ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ Ｍｅｓｈｗｏｒｋ Ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２０１７；５８：５２９８－５３０７．ＤＯＩ：１０．１１６７／ｉｏｖｓ．１７－２２７３２．
Ｒｅｇａｔｅｉｒｏ，Ｆ．Ｓ．，Ｈｏｗｉｅ，Ｄ．，Ｎｏｌａｎ，Ｋ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．（２０１１）．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｂｙ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＴＧＦ－β．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１１．４１：２９５５－２９６５，ＤＯＩ １０．１００２／ｅｊｉ．２０１１４１５１２．
Ｓａｅｎｚ－ｄｅ－Ｓａｎｔａ－Ｍａｒｉａ，Ｉ．，Ｂｅｒｎａｒｄｏ－Ｃａｓｔｉｎｅｉｒａ，Ｃ．，Ｅｎｃｉｓｏ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．（２０１７）．Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｌｏｎｇ－ｄｉｓｔａｎｃｅ ｃｅｌｌ－ｔｏ－ｃｅｌｌ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｖｉａ ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ ｎａｎｏｔｕｂｅｓ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，Ｖｏｌ．８，Ｎｏ．１３，２０９３９－２０９６０．
Ｓｙｎｎｅｓｔｖｅｄｔ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．（２００２）．Ｅｃｔｏ－５’－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ （ＣＤ７３）ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ－１ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａ．Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１１０（７），９９３－１００２，ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１７２／ＪＣＩ１５３３７．

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図14E】

【図14F】

【図14G】

【図14H】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図15D】

【図16A】

【図16B】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図17D】

【図17E】

【図17F】

【図17G】

【図17H】

【図17I】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図18D】

【図18E】

【図18F】

【図18G】

【図19A】

【図19B】

【手続補正書】

【提出日】2021-06-23

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

血液から誘導性調節性Ｔ細胞（ｉＴｒｅｇ）を産生するための方法であって、
ナイーブＣＤ４ ^＋ Ｔ細胞を血液から単離することと、
前記ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞を誘導してｉＴｒｅｇを含む第１の組成物に分化させることと、
前記ｉＴｒｅｇを前記第１の組成物から分離して、実質的に精製されたｉＴｒｅｇ組成物を形成することと、
前記精製されたｉＴｒｅｇ組成物を間葉系間質細胞（ＭＳＣ）フィーダー層上で増殖（ｅｘｐａｎｄｉｎｇ）させることと、
ミトコンドリア移行を増加させるために前記ＭＳＣフィーダー層でトンネルナノチューブ（ＴＮＴ）の形成を誘導し、持続的なＦｏｘＰ３発現および炎症状態における抑制機能を備えた増殖ｉＴｒｅｇ組成物を産生することと、を含む、方法。

【請求項2】

前記血液がヒト臍帯血である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記誘導ステップが、前記ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞をＴＧＦ－βで処置することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記ｉＴｒｅｇが、フローサイトメトリーのセルソーティングまたは磁気セルソーティングを使用して、前記第１の組成物から分離される、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記精製されたｉＴｒｅｇ組成物が、少なくとも９０％純粋である、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記ｉＴｒｅｇが、ＣＤ４^＋、ＣＤ２５^＋、およびＦｏｘＰ３^＋タンパク質を発現する、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

ＦｏｘＰ３発現のＢＡＣＨ２転写調節を増加させることによって、前記精製されたｉＴｒｅｇ組成物を増殖させることをさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記ミトコンドリア移行が、増殖中のｉＴｒｅｇ上のＣＤ３９および／またはＣＤ７３経路を上方調節することによって促進される、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか１項によって産生された増殖されたｉＴｒｅｇ組成物を含む、誘導性調節性Ｔ細胞組成物。

【請求項10】

炎症性または自己免疫状態の治療を必要とするヒト対象における、炎症性または自己免疫状態を治療するための医薬組成物であって、
間葉系間質細胞上で増殖し、ＴＮＴ形成が誘導された、治療有効用量の臍帯血由来のｉＴｒｅｇを含む、医薬組成物。

【請求項11】

前記臍帯血ｉＴｒｅｇが、ＦｏｘＰ３発現のＢＡＣＨ２転写調節を誘導することによって分化されている、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項12】

前記ｉＴｒｅｇが自家である、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項13】

前記ｉＴｒｅｇが同種異系である、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記ｉＴｒｅｇが単一の抗原に特異的である、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項15】

前記ｉＴｒｅｇがポリクローナルである、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項16】

前記対象が糖尿病合併症に罹患している、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項17】

間葉系間質細胞上で増殖し、ＴＮＴ形成が誘導された、有効用量の臍帯血由来のｉＴｒｅｇを含む治療用調節性Ｔ細胞組成物。

【請求項18】

前記臍帯血ｉＴｒｅｇが、ＦｏｘＰ３発現のＢＡＣＨ２転写調節を誘導することによって分化されている、請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

前記組成物が、免疫関連の疾患または状態の治療を必要とする対象における、免疫関連の疾患または状態を治療するためのものである、請求項１７に記載の組成物。

【請求項20】

前記治療用Ｔ細胞組成物が誘導性調節性Ｔ細胞を含む、請求項１９に記載の組成物。

【請求項21】

前記治療用Ｔ細胞組成物が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞を含む、請求項１９に記載の組成物。

【請求項22】

前記治療用Ｔ細胞組成物が、ウイルス特異的エフェクターＴ細胞を含む、請求項１９に記載の組成物。

【請求項23】

前記対象が癌に罹患している、請求項１９に記載の組成物。

【請求項24】

細胞内で利用可能なＡＴＰをインビトロで増加させる方法であって、第１の細胞、および前記第１の細胞から第２の増殖細胞へのミトコンドリア移行を促進する有効量の薬剤を投与することを含む、方法。

【請求項25】

前記第１の細胞がＭＳＣである、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記第２の細胞がニューロンである、請求項２４に記載の方法。

【請求項27】

前記第２の細胞がＴ細胞である、請求項２４に記載の方法。

【請求項28】

前記第２の細胞が癌細胞である、請求項２４に記載の方法。

【請求項29】

前記ミトコンドリア移行が、前記増殖細胞上のＣＤ３９および／またはＣＤ７３を上方調節する薬剤によって促進される、請求項２４に記載の方法。

【請求項30】

前記ＣＤ３９またはＣＤ７３上方調節剤が、１型ＩＦＮ、ＴＮＦａ、ＩＬ－１ｂ、プロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２、ＴＧＦ－β、ｗｎｔシグナル伝達経路のアゴニスト、Ｅ２Ｆ－１、ＣＲＥＢ、Ｓｐ１、ＨＩＦ１－ａ、Ｓｔａｔ３、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

ミトコンドリア移行が、ＴＮＴ形成を誘導する薬剤によって促進される、請求項２４に記載の方法。

【請求項32】

ＴＮＴ形成を誘導する前記薬剤が、Ｍ－Ｓｅｃ、Ｒｈｏ ＧＴＰアーゼファミリーＲａｃ１およびＣｄｃ４２に含まれるアクチン重合因子、またはそれらの下流エフェクターＷＡＶＥおよびＷＡＳＰ、白血球特異的転写物１（ＬＳＴ１）、ドキソルビシンもしくは別のアントラサイクリン類似体、または細胞ストレス応答を引き起こす別の薬剤である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

細胞内で利用可能なＡＴＰを減少させる方法であって、第１の細胞、および前記第１の細胞から第２の増殖細胞へのミトコンドリア移行を防止する有効量の薬剤を投与することを含む、方法。

【請求項34】

前記第２の細胞が癌性細胞である、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記癌性細胞が白血病細胞である、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

ミトコンドリア移行を防止する前記薬剤がＴＮＴ形成を阻害する、請求項３３に記載の方法。

【請求項37】

ＴＮＴ形成を阻害する前記薬剤が、サイトカラシンＢ、サイトカラシンＤ、またはシタラビンなどのヌクレオシド類似体である、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

ミトコンドリア移行を防止する前記薬剤が、前記ＣＤ３９および／またはＣＤ７３シグナル伝達経路を阻害する、請求項３３に記載の方法。

【請求項39】

前記ＣＤ３９および／またはＣＤ７３シグナル伝達経路を阻害する前記薬剤が表面遮断薬である、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記ＣＤ３９および／またはＣＤ７３シグナル伝達経路を阻害する前記薬剤が、Ｇｆｉ－１、ＣＤ３９／ＣＤ７３遮断抗体、Ｅ－ＮＴＰＤアーゼ阻害剤、またはアデノシン５’－（α、β－メチレン）二リン酸である、請求項３８または３９に記載の方法。

【請求項41】

対象における低ＡＴＰを特徴とする疾患を治療するための医薬組成物であって、第１の細胞型から第２の増殖細胞型へのミトコンドリア移行を促進する有効量の薬剤を含む、医薬組成物。

【請求項42】

対象における高ＡＴＰを特徴とする疾患を治療するための医薬組成物であって、第１の細胞型から第２の増殖細胞型へのミトコンドリア移行を防止する有効量の薬剤を含む、医薬組成物。

【国際調査報告】