特表 2022-515980 ポリプレックスを形成するための方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-24

(54)【発明の名称】ポリプレックスを形成するための方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7088 20060101AFI20220216BHJP

   A61K 47/32 20060101ALI20220216BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20220216BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20220216BHJP

   A61K 47/69 20170101ALI20220216BHJP

   A61K 47/34 20170101ALI20220216BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7088

A61K47/32

A61K48/00

A61P17/00

A61K47/69

A61K47/34

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021531230

(86)(22)【出願日】2019-12-30

(85)【翻訳文提出日】2021-05-31

(86)【国際出願番号】 US2019068954

(87)【国際公開番号】W WO2020140116

(87)【国際公開日】2020-07-02

(31)【優先権主張番号】62/786,050

(32)【優先日】2018-12-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＳＰＡＮ

(71)【出願人】

【識別番号】521154741

【氏名又は名称】アムリット・ジェネティクス・リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】コナル・オブロイン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA29

4C076BB31

4C076CC18

4C076EE02A

4C076FF32

4C076FF36

4C076FF61

4C076FF63

4C076GG06

4C084AA13

4C084MA44

4C084NA03

4C084ZA891

4C084ZA892

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA02

4C086MA05

4C086MA44

4C086NA03

4C086ZA89

(57)【要約】

本開示は、安全で非毒性の核酸トランスフェクション剤として遺伝子治療用途での使用を見出すポリプレックスを形成するための方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

１つ以上のポリプレックスを作製するための方法であって、前記方法が、
（ａ）ｉ．第１の液体流中のポリマー、
ｉｉ．第２の液体流中の核酸構成成分、
を提供すること、
（ｂ）前記第１の液体流中の前記ポリマーを、前記第２の液体流中の前記核酸構成成分と接触させて、治療的投与に適するサイズ及び電荷を有するポリプレックスを形成すること、ならびに
（ｃ）前記ポリプレックスを単離して、安定化ポリプレックスを得ること、
を含む、前記方法。

【請求項2】

前記単離が、前記ポリプレックスを安定化するのに十分な滞留時間の間、液体チャネル内で前記ポリプレックスを輸送することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

さらに、１つ以上のポリプレックスを評価及び収集することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項4】

前記第１の液体流及び第２の液体流が、溶液である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

さらに、経皮投与に適するサイズ及び電荷を有するポリプレックスを提供する速度で、流量調整装置に、前記第１の液体流及び前記第２の液体流を流すことを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

流量調整装置が、容積式ポンプ、シリンジ駆動ポンプ、圧力駆動ポンプ、及び重力供給ポンプからなる群より選択される、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記接触ステップが、ノズル、マイクロ流体混合装置、接触チューブ、液体ブリッジ、縦型混合機、回転二重チューブ、または噴霧器を使用する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

前記接触ステップが、空隙内または前記液体チャネル内のキャリア流体内で生じる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記安定化ポリプレックスが、わずかに正電荷を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記液体チャネルが、わずかに負電荷を持つ、請求項２～９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記液体チャネルが、キャリア流体に囲まれた水相を含む、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記キャリア流体の密度が、１，３００～２，０００ｋｇ／ｍ^３の範囲の値であり、前記水相の密度が、９００～１２００ｋｇ／ｍ^３の範囲の値である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

前記水相が、酢酸ナトリウム緩衝液を含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記キャリア流体が、オイルである、請求項１１に記載の方法。

【請求項15】

前記オイルが、（ａ）Ｆｌｕｏｒｉｎｅｒｔ ＦＣ－４０（フルオロ炭酸オイル）、（ｂ）シリコンオイル、（ｃ）ミネラルオイル、（ｄ）過フッ素化アミンオイル、（ｅ）フェニルメチルポリシロキサン、及び（ｆ）フェニルメチルポリシロキサンベースのオイル及び添加剤、からなる群より選択される、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記添加剤が、２～８の範囲の親水性－親油性バランス数を有する、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記添加剤が、ポリソルベート添加剤である、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

前記ポリソルベート添加剤が、ＳＰＡＮ８０、ＳＰＡＮ６５、またはＴｗｅｅｎ２０である、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記水相中の前記添加剤の濃度が、約０．００１％～約１０％（ｗｔ／ｗｔ％）である、請求項１５に記載の方法。

【請求項20】

前記単離が、前記液体チャネル内の前記ポリプレックスを分割することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記分割されたポリプレックス間の空間が、前記チャネル内の液体の速度により制御される、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記滞留時間が、約１秒～約２０分である、請求項２～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記滞留時間が、約１０分である、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

評価が、
前記液体チャネル内のポリプレックスの屈折率を測定すること、及び
任意に、仕様に適合しない屈折率を有するポリプレックスを除去すること、
を含む、請求項３～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

さらに、前記安定化ポリプレックスを濾過、洗浄、凍結、及び／または凍結乾燥することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記ポリマーが、正電荷を有し、前記核酸構成成分が、負電荷を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記ポリマー及び核酸構成成分が、約０．１：１～約２００：１（ｗ／ｗ）の比で混合される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記ポリマー及び前記核酸構成成分が、約２０：１～約８０：１（ｗ／ｗ）の比で混合される、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記ポリマー及び前記核酸構成成分が、約３０：１（ｗ／ｗ）の比で混合される、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

前記ポリマーが、ＨＰＡＥである、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

前記ポリマー及び核酸構成成分が、前記ポリプレックス中に約０．１：１～約２００：１（ｗ／ｗ）の比で存在する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

ポリマー及び核酸構成成分が、前記ポリプレックス中に約２０：１～約８０：１（ｗ／ｗ）の比で存在する、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

ポリマー及び核酸構成成分が、前記ポリプレックス中に約３０：１（ｗ／ｗ）の比で存在する、請求項３１に記載の方法。

【請求項34】

前記安定化ポリプレックスの粒径が、約２μｍ未満である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記安定化ポリプレックスの粒径が、約６０ｎｍ～約２５０ｎｍである、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記安定化ポリプレックスの粒径が、約１７５ｎｍ～約２５０ｎｍである、請求項３４に記載の方法。

【請求項37】

前記安定化ポリプレックスのゼータ電位が、約０ｍＶ～約１００ｍＶである、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記安定化ポリプレックスのゼータ電位が、約３０ｍＶ～約３４ｍＶである、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記安定化ポリプレックスが、球状である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

前記ポリマーが、約１０ｋＤａのＭ_Ｗを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記核酸構成成分が、プラスミド、ナノプラスミド、核酸、ミニサークル、または遺伝子編集システムである、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記核酸構成成分が、遺伝性疾患または障害と関連する遺伝子を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記遺伝性疾患または障害が、タンパク質発現の低下、不存在、または機能不全をもたらす１つ以上の遺伝子の変異により引き起こされる、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記遺伝子が、ＣＯＬ７Ａ１、ＬＡＭＢ３、ＡＤＡ、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＣＦＴＲ、ＨＴＴ、ＮＦ１、ＰＨＡ、ＨＢＳ、ＦＥＲＭＴ１、ＫＲＴ１４、ＤＳＰ、ＳＰＩＮＫ５、及びＦＬＧからなる群より選択される、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記遺伝子が、ＣＯＬ７Ａ１であり、前記遺伝性疾患または障害が、表皮水疱症の一形態である、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記遺伝子の前記配列が、前記ポリプレックスの細胞への送達時に、最大タンパク質発現について最適化される、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記ポリマーが、約０．５未満の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

前記ポリマーが、約０．２～約０．５の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記ポリマーが、約１．０１～約８．０のＰＤＩを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記ポリマーが、約２．５のＰＤＩを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記ポリマーが、少なくとも３ｋＤａのＭ_Ｗを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記ポリマーが、約５ｋＤａ～５０ｋＤａのＭ_Ｗを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記ポリマーが、約１０ｋＤａのＭ_Ｗを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１２月２８日に出願された米国仮出願第６２／７８６，０５０号の優先権の利益を主張し、この内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

遺伝子治療は、健康状態を改善して遺伝障害を修正するためのナノ医薬品の急速な成長分野である。^［１］現在では、遺伝子送達プロトコールの大部分は、遺伝子キャリアとしてウイルスベクターを利用する。しかし、免疫原性応答及び導入遺伝子の挿入変異導入のリスク、大規模製造と関連する制限、及び遺伝物質の「カーゴ容量」の低さ、ベクターの移動性の予測不可能性を含む、ウイルスベクターと関連する懸念は、依然として、対処されていない。^{［２，３］}

【0003】

非ウイルスベクターは、最小の免疫原性、非腫瘍形成性、費用効果の高い製造、核酸の高いペイロード、及び局所的な遺伝子発現の可能性などのウイルスシステムに優る多くの利点を提供する。２０１０年以降、非ウイルス性遺伝子ベクターを使用した遺伝子治療の臨床試験数が大幅に増加している。プラスミドＤＮＡ及び小型干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、遺伝子修正、治療用タンパク質発現、及び抗原ワクチン接種のために少なくとも４０のナノ粒子ベースの遺伝子治療で製剤化されており、２７の臨床試験で１２の主要なリポソームシステムが調査され、１３の臨床試験で７つのポリマーベースのシステムが調査された。^［３］ポリマーベースの遺伝子治療の臨床試験の中で、既製のカチオン性ポリマーであるポリエチレンイミン（ＰＥＩ）が有望であることが示されている。しかし、ＰＥＩは、非分解性であり、安全上の懸念がネックになっている。^［４］従って、ポリマーベースの遺伝子治療を臨床用途に近づけることができるように、ポリマー遺伝子ベクターの遺伝子トランスフェクション効率及び安全性を改善する多くの取り組みがなされている。ポリマーのサイズ、分子量、ポリマー分岐の程度、電荷密度、ならびに、製剤媒体の組成及びポリマー対核酸構成成分の比などのいくつかの要因が、ポリプレックスのトランスフェクション効率及び生物学的活性に影響を与える。^［５］

【0004】

商業的に有用であるために、物理的パラメーターの厳密な制御を伴う、均一で安定したポリプレックス複合体を組み立てるための再現及び拡張可能な方法が必要である。いくつかの実施形態では、本開示は、商業規模製造のために拡張可能な方法を含む、ポリプレックスを調製するための改善された方法を提供する。

【発明の概要】

【0005】

いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のポリプレックスを作製するための方法を提供し、方法は、
（ａ）ｉ．第１の液体流中のポリマー、
ｉｉ．第２の液体流中の核酸構成成分、
を提供すること、
（ｂ）第１の液体流中のポリマーを、第２の液体流中の核酸構成成分と接触させて、治療的投与に適するサイズ及び電荷を有するポリプレックスを形成すること、ならびに
（ｃ）ポリプレックスを単離して、安定化ポリプレックスを得ること、を含む。

【0006】

いくつかの実施形態では、方法は、さらに、１つ以上のポリプレックスを評価及び収集することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、形成された各ポリプレックスが、方法で形成された他のポリプレックスから単離される連続プロセスである。いくつかの実施形態では、各ポリプレックスは、第１及び第２の液体流と接触した後に、安定化段階中に他のポリプレックスから分離される。

【0007】

いくつかの実施形態では、方法は、さらに、安定化ポリプレックスを濾過、洗浄、凍結、及び／または凍結乾燥することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】ポリプレックスを製造するための本開示の例示的方法を説明する。

【発明を実施するための形態】

【0009】

上記で及び本開示を通して使用される場合、以下の用語は、別途指示のない限り、以下の意味を有するように理解されるものとする。用語がない場合、当業者に既知の従来の用語が優先される。

【0010】

本明細書で使用される場合、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、及び「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、オープンな非限定的な意味で使用される。

【0011】

冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本開示では、その冠詞の文法的目的語の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または複数の要素を意味する。

【0012】

「及び／または」という用語は、別途指示のない限り、本開示では「及び」または「または」のいずれかを意味するために使用される。

【0013】

数値の直前の「約」という用語は、範囲（例えば、その値の±１０％）を意味する。例えば、開示の文脈で別途指示のない限り、または、そのような解釈と矛盾しない限り、「約５０」は、４５～５５を意味し得、「約２５，０００」は、２２，５００～２７，５００などを意味し得る。例えば、「約４９、約５０、約５５、…」、「約５０」などの数値のリストでは、前値及び後値間の間隔（複数可）の半分未満、例えば、４９．５超～５２．５未満、に及ぶ範囲を意味する。さらに、「約」値「未満」または「約」値「超」という語句は、本明細書で提供される「約」という用語の定義を考慮して理解されるべきである。同様に、一連の数値または値の範囲（例えば、「約１０、２０、３０」または「約１０～３０」）の前の「約」という用語は、それぞれ、一連の全ての値、または範囲の端点を指す。別途指示のない限り、パーセンテージで示される濃度は、質量比を指す。

【0014】

「障害」という用語は、別途指示のない限り、本開示では、疾患、状態、または病気という用語を意味するために使用され、これらの用語と互換的に使用される。

【0015】

「薬学的に許容される」または「薬理学的に許容される」という用語を使用することにより、生物学的に、または、別途望ましくない物質であることを意味することが意図されており、そのような物質は、実質的に望ましくない生物学的作用を引き起こすことなく、または、それが含有される組成物の任意の構成成分のいずれかと有害に相互作用することなく、個体に投与されてもよい。

【0016】

本明細書で参照される全ての文献は、あらゆる目的のために全体が参照により組み込まれる。

【0017】

本明細書で使用される場合、「アルキル」は、１～４０個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状飽和鎖を意味する。代表的な飽和アルキル基としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、２－メチル－１－プロピル、２－メチル－２－プロピル、２－メチル－１－ブチル、３－メチル－１－ブチル、２－メチル－３－ブチル、２，２－ジメチル－１－プロピル、２－メチル－１－ペンチル、３－メチル－１－ペンチル、４－メチル－１－ペンチル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、２，２－ジメチル－１－ブチル、３，３－ジメチル－１－ブチル、２－エチル－１－ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシルなど、ならびに、より長いアルキル基、例えば、ヘプチル及びオクチルなど、が挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、非置換または置換であり得る。３個以上の炭素原子を含有するアルキル基は、直鎖状または分枝状であってよい。本明細書で使用される場合、「低級アルキル」は、１～１０個の炭素原子を有するアルキルを意味する。

【0018】

本明細書で使用される場合、「アルケニル」には、２～４０個の炭素原子を含有する非分枝状または分枝状炭化水素鎖が含まれる。「アルケニル」基は、少なくとも１つの二重結合を含有する。アルケニル基の二重結合は、別の不飽和基と共役しない可能性も、共役する可能性もある。アルケニル基の例としては、エチレニル、ビニル、アリル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、ヘキサジエニル、２－エチルヘキセニル、２－プロピル－２－ブテニル、４－（２－メチル－３－ブテン）－ペンテニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、非置換または置換であり得る。本明細書で定義する場合、アルケニルは、分枝状または直鎖状であってもよい。

【0019】

本明細書で使用される場合、「アルキニル」には、２～４０個の炭素原子を含有する非分枝状または分枝状不飽和炭化水素鎖が含まれる。「アルキニル」基は、少なくとも１つの三重結合を含有する。アルキニル基の三重結合は、別の不飽和基に共役しない可能性も、共役する可能性もある。アルキニル基の例としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、メチルプロピニル、４－メチル－１－ブチニル、４－プロピル－２－ペンチニル、４－ブチル－２－ヘキシニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基は、非置換または置換であり得る。

【0020】

本明細書に記載の満たされていない原子価を有する任意の炭素ならびにヘテロ原子は、原子価を満たすのに十分な水素原子（複数可）の数を有すると想定されることも理解されるべきである。

【0021】

「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指す。

【0022】

本明細書で使用される「ハロアルキル」という用語は、本明細書で定義される、１つ以上のハロゲンで置換されているアルキル基を指す。ハロアルキル基の例としては、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、トリクロロメチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0023】

別途具体的な規定のない限り、「アリール」という用語は、フェニル、ビフェニル、またはナフチルなどの単環式または二環式基を含む、１～３つの芳香環を有する環式芳香族炭化水素基を指す。２つの芳香環（二環式など）を含有する場合、アリール基の芳香環は、一点で結合されても（例えば、ビフェニル）、縮合されてもよい（例えば、ナフチル）。アリール基は、任意の結合点において、１つ以上の置換基（例えば、１～５つの置換基）で任意に置換されてもよい。置換基は、それ自体が任意に置換することができる。さらに、２つの縮合環を含有する場合、本明細書で定義されるアリール基は、完全に飽和した環と縮合している不飽和または部分的飽和環を有してもよい。これらのアリール基の例示的な環系としては、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナレニル、フェナントレニル、インダニル、インデニル、テトラヒドロナフタレニル、テトラヒドロベンゾアヌレニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0024】

別途具体的な規定のない限り、「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択される１つ以上の環ヘテロ原子を含有し、残りの環原子がＣである、５～１８環原子の一価の単環式もしくは多環式芳香族ラジカル、または多環式芳香族ラジカルを意味する。本明細書で定義されるヘテロアリールは、また、ヘテロ原子がＮ、Ｏ、またはＳから選択される二環式ヘテロ芳香族基を意味する。芳香族ラジカルは、独立して、本明細書に記載の１つ以上の置換基で任意に置換される。置換基は、それ自体が任意に置換することができる。例としては、ベンゾチオフェン、フリル、チエニル、ピロリル、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、ピラジニル、インドリル、チオフェン－２－イル、キノリル、ベンゾピラニル、イソチアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、チエノ［３，２－ｂ］チオフェン、トリアゾリル、トリアジニル、イミダゾ［１，２－ｂ］ピラゾリル、フロ［２，３－ｃ］ピリジニル、イミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、インダゾリル、ピロロ［２，３－ｃ］ピリジニル、ピロロ［３，２－ｃ］ピリジニル、ピラゾロ［３，４－ｃ］ピリジニル、ベンゾイミダゾリル、チエノ［３，２－ｃ］ピリジニル、チエノ［２，３－ｃ］ピリジニル、チエノ［２，３－ｂ］ピリジニル、ベンゾチアゾリル、インドリル、インドリニル、インドリノニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾフラン、クロマニル、チオクロマニル、テトラヒドロキノリニル、ジヒドロベンゾチアジン、ジヒドロベンゾオキサニル、キノリニル、イソキノリニル、１，６－ナフチリジニル、ベンゾ［ｄｅ］イソキノリニル、ピリド［４，３－ｂ］［１，６］ナフチリジニル、チエノ［２，３－ｂ］ピラジニル、キナゾリニル、テトラゾロ［１，５－ａ］ピリジニル、［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリジニル、イソインドリル、ピロロ［２，３－ｂ］ピリジニル、ピロロ［３，４－ｂ］ピリジニル、ピロロ［３，２－ｂ］ピリジニル、イミダゾ［５，４－ｂ］ピリジニル、ピロロ［１，２－ａ］ピリミジニル、テトラヒドロピロロ［１，２－ａ］ピリミジニル、３，４－ジヒドロ－２Ｈ－１λ^２－ピロロ［２，１－ｂ］ピリミジン、ジベンゾ［ｂ，ｄ］チオフェン、ピリジン－２－オン、フロ［３，２－ｃ］ピリジニル、フロ［２，３－ｃ］ピリジニル、１Ｈ－ピリド［３，４－ｂ］［１，４］チアジニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、フロ［２，３－ｂ］ピリジニル、ベンゾチオフェニル、１，５－ナフチリジニル、フロ［３，２－ｂ］ピリジン、［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピリジニル、ベンゾ［１，２，３］トリアゾリル、イミダゾ［１，２－ａ］ピリミジニル、［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ｂ］ピリダジニル、ベンゾ［ｃ］［１，２，５］チアジアゾリル、ベンゾ［ｃ］［１，２，５］オキサジアゾール、１，３－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２－オン、３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［１，５－ｂ］［１，２］オキサジニル、４，５，６，７－テトラヒドロピラゾロ［１，５－ａ］ピリジニル、チアゾロ［５，４－ｄ］チアゾリル、イミダゾ［２，１－ｂ］［１，３，４］チアジアゾリル、チエノ［２，３－ｂ］ピロリル、３Ｈ－インドリル、及びその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、２つの縮合環を含有する場合、本明細書で定義されるヘテロアリール基は、完全飽和環と縮合している不飽和または部分的飽和環を有してもよい。

【0025】

本明細書で使用される場合、「シクロアルキル」という用語は、環当たり３～１８個の炭素原子を有する、飽和または部分飽和の単環式炭素環、縮合炭素環、またはスピロ多環式炭素環を指す。シクロアルキル環または炭素環は、任意の結合点において、１つ以上の置換基、例えば、１～５つの置換基、で任意に置換されてもよい。置換基は、それ自体が任意に置換することができる。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプタニル、シクロオクタニル、ノルボラニル、ノルボレニル、ビシクロ［２．２．２］オクタニル、ビシクロ［２．２．２］オクテニル、デカヒドロナフタレニル、オクタヒドロ－１Ｈ－インデニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサ－１，４－ジエニル、シクロヘキサ－１，３－ジエニル、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレニル、オクタヒドロペンタレニル、３ａ，４，５，６，７，７ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデニル、１，２，３，３ａ－テトラヒドロペンタレニル、ビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、ビシクロ［２．１．０］ペンタニル、スピロ［３．３］ヘプタニル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタ－２－エニル、ビシクロ［２．２．２］オクタニル、６－メチルビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、２，６，６－トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、及びその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0026】

本明細書で使用される場合、「シクロアルケニル」という用語は、環当たり３～１８個の炭素原子を有する、部分飽和の単環式炭素環、縮合炭素環、またはスピロ多環式炭素環を指し、少なくとも１つの二重結合を含有する。シクロアルケニル環は、任意の結合点において、１つ以上の置換基（例えば、１～５つの置換基）で任意に置換されてもよい。置換基は、それ自体が任意に置換することができる。

【0027】

本明細書で使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」または「ヘテロシクリル」いう用語は、炭素原子、及び酸素、窒素、または硫黄から得られるヘテロ原子を含有する４～１８個の原子の飽和もしくは部分不飽和で非芳香族の単環式、または縮合もしくはスピロ多環式の環構造を指し、環炭素またはヘテロ原子間で共有される非局在化π電子（芳香族性）は存在しない。ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクリル環構造は、１つ以上の置換基で置換されてもよい。置換基は、それ自体が任意に置換することができる。ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクリル環の例としては、オキセタニル、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル、ピロリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、ピラニル、チオピラニル、テトラヒドロピラニル、ジオキサリニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チオモルホリニルＳ－オキシド、チオモルホリニルＳ－ジオキシド、ピペラジニル、アゼピニル、オキセピニル、ジアゼピニル、トロパニル、ホモトロパニル、ジヒドロチオフェン－２（３Ｈ）－オニル、テトラヒドロチオフェン１，１－ジオキシド、２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロリル、イミダゾリジン－２－オン、ピロリジン－２－オン、ジヒドロフラン－２（３Ｈ）－オン、１，３－ジオキソラン－２－オン、イソチアゾリジン１，１－ジオキシド、４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾリル、４，５－ジヒドロオキサゾリル、オキシラニル、ピラゾリジニル、４Ｈ－１，４－チアジニル、チオモルホリニル、１，２，３，４－テトラヒドロピリジニル、１，２，３，４－テトラヒドロピラジニル、１，３－オキサジナン－２－オン、テトラヒドロ－２Ｈ－チオピラン１，１－ジオキシド、７－オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、１，２－チアゼパン１，１－ジオキシド、オクタヒドロ－２Ｈ－キノリジニル、１，３－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタニル、２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン、３－アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、８－アザスピロ［４．５］デカン、８－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、２－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン、２，８－ジアザスピロ［５．５］ウンデカニル、２－アザスピロ［５．５］ウンデカニル、３－アザスピロ［５．５］ウンデカニル、デカヒドロイソキノリニル、１－オキサ－８－アザスピロ［４．５］デカニル、８－アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、１，４’－ビピペリジニル、アゼパニル、８－オキサ－３－アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジニル、５，６，７，８－テトラヒドロイミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、１，４－ジアゼパニル、フェノキサチイニル、ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソリル、２，３－ジヒドロベンゾフラニル、２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシニル、４－（ピペリジン－４－イル）モルホリニル、３－アザスピロ［５．５］ウンデカニル、デカヒドロキノリニル、ピペラジン－２－オン、１－（ピロリジン－２－イルメチル）ピロリジニル、１，３’－ビピロリジニル、及び６，７，８，９－テトラヒドロ－１Ｈ，５Ｈ－ピラゾロ［１，２－ａ］［１，２］ジアゼピニルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0028】

本明細書で使用される場合、数値範囲は、別途記載のない限り、連続的な整数を含むように意図される。例えば、「０～５」と表現される範囲は、０、１、２、３、４及び５を含むことになる。

【0029】

本明細書で使用される場合、「置換された」という用語は、特定の基または部分が、１つ以上の位置でその特定の基または部分に結合し得る１つ以上の好適な置換基を有することを意味する。例えば、シクロアルキルで置換されたアリールは、シクロアルキルが、結合により、またはアリールと融合し２個以上の共通の原子を共有することにより、アリールの１個の原子に結合することを示し得る。

【0030】

本明細書で使用される場合、「非置換」という用語は、特定の基が置換基を有さないことを意味する。

【0031】

「任意に置換された」という用語は、所与の化学部分（例えば、アルキル基）が、（必須ではないが）他の置換基（例えば、ヘテロ原子）に結合し得ることを意味するものと理解される。例えば、任意に置換されたアルキル基は、完全飽和アルキル鎖（すなわち、純粋な炭化水素）であり得る。あるいは、同じ任意に置換されたアルキル基は、水素とは異なる置換基を有し得る。例えば、それは、鎖に沿った任意の点で、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、または本明細書に記載の他の任意の置換基に結合させることができる。従って、「任意に置換された」という用語は、所与の化学部分が他の官能基を含有する可能性があるが、必ずしも任意のさらなる官能基を有するわけではないことを意味する。別途指定のない場合、説明された基の任意の置換で使用される好適な置換基としては、オキソ、－ハロゲン、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシ、－ＯＣ_１－Ｃ_６アルケニル、－ＯＣ_１－Ｃ_６アルキニル、－Ｃ_１－Ｃ_６アルケニル、－Ｃ_１－Ｃ_６アルキニル、－ＯＨ、ＣＮ（シアノ）、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－ＯＣ（Ｏ）Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_０－Ｃ_６アルキレニル－シクロアルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_０－Ｃ_６アルキレニル－ヘテロシクロアルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_０－Ｃ_６アルキレニル－アリール、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_０－Ｃ_６アルキレニル－ヘテロアリール、－ＯＣ（Ｏ）ＯＣ_１－Ｃ_６アルキル、ＮＨ_２、ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）、Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨシクロアルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）シクロアルキル、－Ｃ（Ｏ）ＮＨヘテロシクロアルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）ヘテロシクロアルキル、－Ｃ（Ｏ）ＮＨアリール、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）アリール、－Ｃ（Ｏ）ＮＨヘテロアリール、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）ヘテロアリール、－Ｓ（Ｏ）_２－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、－Ｓ（Ｏ）_２－Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、－Ｓ（Ｏ）_２－シクロアルキル、－Ｓ（Ｏ）_２－ヘテロシクロアルキル、－Ｓ（Ｏ）_２－アリール、－Ｓ（Ｏ）_２－ヘテロアリール－Ｃ_０－Ｃ_６アルキレニル－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ_２、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨＣ_１－Ｃ_６アルキル、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）_２、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨシクロアルキル、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨヘテロシクロアルキル、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨアリール、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨヘテレオアリール（ｈｅｔｅｒｅｏａｒｙｌ）、－ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、－Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）、－ＮＨＳ（Ｏ）_２アリール、－Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２アリール、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ヘテロアリール、－Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ヘテロアリール、－ＮＨＳ（Ｏ）_２シクロアルキル、－Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２シクロアルキル、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ヘテロシクロアルキル、－Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２ヘテロシクロアルキル、－Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_２アリール，－Ｃ_０－Ｃ_６アルキレニル－アリール、－Ｃ_０－Ｃ_６アルキレニル－ヘテロアリール、－Ｃ_０－Ｃ_６アルキレニル－シクロアルキル、－Ｃ_０－Ｃ_６アルキレニル－ヘテロシクロアルキル、－Ｏ－アリール、－ＮＨ－アリール、及びＮ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）アリールが挙げられるが、これらに限定されない。置換基は、それ自体が任意に置換することができる。多官能部分が示される場合、コアへの結合点が線で示され、例えば、（シクロアルキルオキシ）アルキル－は、コアへの結合点であるアルキルを指す一方、シクロアルキルは、オキシ基を介してアルキルに結合している。「任意に置換された」は、上記の意味を伴う「置換された」または「置換されていない」も指す。

【0032】

本明細書で使用される場合、「リンカー」または「連結部分」という用語は、２つの基を結合し、０～１００個の原子の骨格を有する基を指す。リンカーまたは連結は、２つの基または、長さが１～１００個の原子、例えば、長さが約１、２、３、４、５、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、または１００個の炭素原子、の鎖を結合する共有結合（すなわち、０個の原子の骨格）であってよく、リンカーは、直鎖状、分枝状、環状、または単一の原子であってよい。特定の場合では、リンカー骨格の１つ以上の炭素原子は、硫黄、窒素、または酸素ヘテロ原子で任意に置換されてもよい。骨格原子間の結合は、飽和または不飽和であってよい。リンカーには、１つ以上の置換基、例えば、アルキル、アリール、またはアルケニル基、が含まれてもよい。リンカーには、オリゴ（エチレングリコール）、エーテル、チオエーテル、３級アミン、直鎖状または分枝状であり得るアルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１－メチルエチル（イソ－プロピル）、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルエチル（ｔ－ブチル）など、が含まれるが、これらに限定されない。リンカー骨格としては、環状基、例えば、アリール、複素環、またはシクロアルキル基を挙げられ得、環状基の２個以上の原子、例えば、２個、３個、または４個の原子が骨格に含まれる。リンカーは、切断可能または切断不可能であってよい。

【0033】

別途記載のない限り、分子量という用語は、量平均分子量（Ｍ_Ｗ）を指す。

【0034】

「ヘテロアルキレン」という用語は、硫黄、酸素、またはＮＲ^ｄ（式中、Ｒ^ｄは、水素またはアルキルである）で置き換えられた１個以上の炭素原子を有する２価アルキレンを指す。ヘテロアルキレンは、直鎖状、分枝状、環状、またはこれらの組み合わせであり得る。

【0035】

「ヘテロアルケニレン」という用語は、その骨格内に、少なくとも１つの炭素間二重結合及び１個以上のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、またはＯ）を有する、２価の直鎖状または分枝状鎖ヒドロカルビル基を指す。

【0036】

「ヘテロアルキニレン」という用語は、その骨格内に、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合及び１個以上のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、またはＯ）を有する、２価の直鎖状または分枝状鎖ヒドロカルビル基を指す。

【0037】

本明細書で使用される場合、「ポリプレックス」という用語は、核酸及びポリマー間の複合体を指す。核酸は、非共有力、例えば、静電相互作用を介して、ポリマーに結合、カプセル化、または連結する。

【0038】

「プラスミド」という用語は、多くの場合、細胞の中枢代謝の一部ではなく、通常は、環状二本鎖ＤＮＡ分子の形態で、遺伝子を運ぶ染色体外要素を指す。そのような要素は、任意の供給源に由来する１本鎖または２本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡの、直鎖状、環状、またはスーパーコイル状の、自己複製配列、ゲノム組み込み配列、ファージ、またはヌクレオチド配列であってよく、多数のヌクレオチド配列は、適切な３’非翻訳配列と共に、選択された遺伝子産物のプロモーターフラグメント及びＤＮＡ配列を細胞に導入可能なユニークな構造に、連結または組み換えされている。本明細書で使用される場合、「プラスミド」という用語は、遺伝物質（すなわち、核酸）から構成された構築物を指す。通常は、プラスミドは、細菌宿主細胞、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、内で機能的である複製起点、及びプラスミドを含む細菌宿主細胞を検出するための選択マーカーを含有する。

【0039】

「ナノプラスミド」という用語は、より小さなプラスミドに所望の遺伝子挿入物を提供する、低減した細菌配列を有する環状ＤＮＡ配列を指す。例えば、抗生物質を含まないＲＮＡ－ＯＵＴ選択システムにより生成されたナノプラスミド、及びその作製方法は、Ｎａｔｕｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙが特許を取得した米国特許第９，１０９，０１２号に記載され、これは、全体が本明細書に参照により組み込まれる。

【0040】

「核酸」という用語は、ヌクレオチド塩基の生物学的ポリマーを指し、これには、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）が含まれてもよいが、これらに限定されない。

【0041】

「ミニサークル」という用語は、細菌の複製配列を除去するために分子内組み換えにより親プラスミドから誘導された最小サイズの小型環状ＤＮＡを指す。

【0042】

「遺伝子編集システム」という用語は、多くのＤＮＡ修復経路の１つにより標的核酸を改変可能なシステムを指す。

【0043】

ポリプレックスが、限定されないが、サイズ、形状、ゼータ電位、形態（例えば、非凝集形態）、または屈折率を含む仕様に適合するかどうかを決定するために、ポリプレックスの１つ以上の特性を評価することを意味する「評価」という用語は、本開示で使用される。

【0044】

方法
本開示は、ポリプレックスを製造するための方法を提供し、方法は、ポリマー及び核酸構成成分（例えば、ＤＮＡ）を混合して、単離される安定化ポリプレックスを提供することを含む。

【0045】

ポリプレックスを調製するための従来のプロセスは、好適なポリマーの溶液を、好適なＤＮＡ（またはＲＮＡ）の溶液と混合することを提供する。得られた混合物は、一般に、静電相互作用を介して、ＤＮＡ（またはＲＮＡ）及びポリマー間に複合体を形成する。得られたポリプレックスは、様々なサイズで存在し、標的細胞への吸収に適さない凝集したポリプレックスを含む。本明細書に記載の方法は、制御された条件下で、選択された体積及び濃度のＤＮＡ及びポリマー溶液に接触させることにより、そのようなポリプレックスの制御された形成を提供し、その結果、得られるポリプレックスは、ポリプレックス特性（例えば、サイズ、電荷など）の比較的狭く輪郭のはっきりした分布を有する。さらに、ポリプレックスが逐次的に形成されるので、自動品質管理方法は、定義された製造仕様外の特性を有するポリプレックスを廃棄し、及び／または定義された製造仕様を満たすポリプレックスを選択及び単離するために、使用することができる。このようにして、得られるポリプレックスは、より均一な特性及び治療効果の改善を有する。

【0046】

いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のポリプレックスを作製するための方法を提供し、方法は、
（ａ）ｉ．第１の液体流中のポリマー、
ｉｉ．第２の液体流中の核酸構成成分、
を提供すること、
（ｂ）第１の液体流中のポリマーを、第２の液体流中の核酸構成成分と接触させて、治療的投与（例えば、経皮投与）に適するサイズ及び電荷を有するポリプレックスを形成すること、ならびに
（ｃ）ポリプレックスを単離して、安定化ポリプレックスを得ること、を含む。

【0047】

いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流は、溶液である。

【0048】

いくつかの実施形態では、本開示は、ポリプレックスを作製するための連続的な方法を提供する。

【0049】

本開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の液体流の核酸構成成分を伴う第１の液体流中のポリマーは、本明細書に記載されるように、核酸構成成分対ポリマーの特定比を提供する量で接触させる。

【0050】

いくつかの実施形態では、方法は、経皮投与または注射に適するサイズ及び電荷を有するポリプレックスを提供する速度で、流量調整装置に第１の液体流及び第２の液体流を流すことを含む。

【0051】

いくつかの実施形態では、方法は、マイクロリットルの速度で、流量調整装置に、第１の液体流及び第２の液体流を流すことを含む。

【0052】

いくつかの実施形態では、ポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流は、それぞれ、独立して、約１．０μＬ／ｍｉｎ、約２．０μＬ／ｍｉｎ、約３．０μＬ／ｍｉｎ、約４．０μＬ／ｍｉｎ、約５．０μＬ／ｍｉｎ、約６．０μＬ／ｍｉｎ、約７．０μＬ／ｍｉｎ、約８．０μＬ／ｍｉｎ、約９．０μＬ／ｍｉｎ、約１０μＬ／ｍｉｎ、約１５μＬ／ｍｉｎ、約２０μＬ／ｍｉｎ、約２５μＬ／ｍｉｎ、約３０μＬ／ｍｉｎ、約３５μＬ／ｍｉｎ、約４０μＬ／ｍｉｎ、約４５μＬ／ｍｉｎ、約５０μＬ／ｍｉｎ、約５５μＬ／ｍｉｎ、約６０μＬ／ｍｉｎ、約６５μＬ／ｍｉｎ、約７０μＬ／ｍｉｎ、約７５μＬ／ｍｉｎ、約８０μＬ／ｍｉｎ、約８５μＬ／ｍｉｎ、約９０μＬ／ｍｉｎ、約９５μＬ／ｍｉｎ、約１００μＬ／ｍｉｎ、約１５０μＬ／ｍｉｎ、約２００μＬ／ｍｉｎ、約２５０μＬ／ｍｉｎ、約３００μＬ／ｍｉｎ、約３５０μＬ／ｍｉｎ、約４００μＬ／ｍｉｎ、約４５０μＬ／ｍｉｎ、約５００μＬ／ｍｉｎ、約５５０μＬ／ｍｉｎ、約６００μＬ／ｍｉｎ、約６５０μＬ／ｍｉｎ、約７００μＬ／ｍｉｎ、約７５０μＬ／ｍｉｎ、約８００μＬ／ｍｉｎ、約８５０μＬ／ｍｉｎ、約９００μＬ／ｍｉｎ、約９５０μＬ／ｍｉｎ、及び約１０００μＬ／ｍｉｎ（その間の全ての範囲を含む）を含む、約１μＬ／ｍｉｎ～約１０００μＬ／ｍｉｎの速度で流量調整装置を通って流れる。

【0053】

いくつかの実施形態では、ポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流は、それぞれ、独立して、約１μＬ／ｍｉｎ、約２．０μＬ／ｍｉｎ、約３．０μＬ／ｍｉｎ、約４．０μＬ／ｍｉｎ、約５．０μＬ／ｍｉｎ、約６．０μＬ／ｍｉｎ、約７．０μＬ／ｍｉｎ、約８．０μＬ／ｍｉｎ、約９．０μＬ／ｍｉｎ、約１０μＬ／ｍｉｎ、約１５μＬ／ｍｉｎ、約２０μＬ／ｍｉｎ、約２５μＬ／ｍｉｎ、約３０μＬ／ｍｉｎ、約３５μＬ／ｍｉｎ、約４０μＬ／ｍｉｎ、約４５μＬ／ｍｉｎ、約５０μＬ／ｍｉｎ、約５５μＬ／ｍｉｎ、約６０μＬ／ｍｉｎ、約６５μＬ／ｍｉｎ、約７０μＬ／ｍｉｎ、約７５μＬ／ｍｉｎ、約８０μＬ／ｍｉｎ、約８５μＬ／ｍｉｎ、約９０μＬ／ｍｉｎ、約９５μＬ／ｍｉｎ、約１００μＬ／ｍｉｎ、約１５０μＬ／ｍｉｎ、約２００μＬ／ｍｉｎ、約２５０μＬ／ｍｉｎ、約３００μＬ／ｍｉｎ、約３５０μＬ／ｍｉｎ、約４００μＬ／ｍｉｎ、約４５０μＬ／ｍｉｎ、約５００μＬ／ｍｉｎ、約５５０μＬ／ｍｉｎ、約６００μＬ／ｍｉｎ、約６５０μＬ／ｍｉｎ、約７００μＬ／ｍｉｎ、約７５０μＬ／ｍｉｎ、約８００μＬ／ｍｉｎ、約８５０μＬ／ｍｉｎ、約９００μＬ／ｍｉｎ、約９５０μＬ／ｍｉｎ、または約１０００μＬ／ｍｉｎの速度で流量調整装置を通って流れる。

【0054】

いくつかの実施形態では、方法は、約５００ｍｂａｒ、約５５０ｍｂａｒ、約６００ｍｂａｒ、約６５０ｍｂａｒ、約７００ｍｂａｒ、約７５０ｍｂａｒ、約８００ｍｂａｒ、約８５０ｍｂａｒ、約９００ｍｂａｒ、約９５０ｍｂａｒ、約１ｂａｒ、約１．１ｂａｒ、約１．２ｂａｒ、約１．３ｂａｒ、約１．４ｂａｒ、約１．５ｂａｒ、約１．６ｂａｒ、約１．７ｂａｒ、約１．８ｂａｒ、約１．９ｂａｒ、及び約２ｂａｒ（その間の全ての範囲を含む）を含む、約５００ｍｂａｒ～約２ｂａｒの圧力で実施される。いくつかの実施形態では、方法は、約５００ｍｂａｒ、約５５０ｍｂａｒ、約６００ｍｂａｒ、約６５０ｍｂａｒ、約７００ｍｂａｒ、約７５０ｍｂａｒ、約８００ｍｂａｒ、約８５０ｍｂａｒ、約９００ｍｂａｒ、約９５０ｍｂａｒ、約１ｂａｒ、約１．１ｂａｒ、約１．２ｂａｒ、約１．３ｂａｒ、約１．４ｂａｒ、約１．５ｂａｒ、約１．６ｂａｒ、約１．７ｂａｒ、約１．８ｂａｒ、約１．９ｂａｒ、または約２ｂａｒの圧力で実施される。いくつかの実施形態では、方法は、約１～約２ｂａｒの圧力で実施される。本明細書に記載の全ての圧力は、絶対圧力である。

【0055】

いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分を運ぶ第１及び第２の液体流は、約１ｍｍ、約２ｍｍ、約３ｍｍ、約４ｍｍ、約５ｍｍ、約６ｍｍ、約７ｍｍ、約８ｍｍ、約９ｍｍ、約１０ｍｍ、約１１ｍｍ、及び約１２ｍｍ（その間の全ての範囲を含む）を含む、約１ｍｍ～約１２ｍｍの幅を有するチャネルに封入される。いくつかの実施形態では、チャネルの幅は、約１ｍｍ、約２ｍｍ、約３ｍｍ、約４ｍｍ、約５ｍｍ、約６ｍｍ、約７ｍｍ、約８ｍｍ、約９ｍｍ、約１０ｍｍ、約１１ｍｍ、または約１２ｍｍである。

【0056】

いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分を運ぶ第１及び第２の液体流は、約１ｍｍ、約２ｍｍ、約３ｍｍ、約４ｍｍ、約５ｍｍ、約６ｍｍ、約７ｍｍ、約８ｍｍ、約９ｍｍ、約１０ｍｍ、約１１ｍｍ、及び約１２ｍｍ（その間の全ての範囲を含む）を含む、約１ｍｍ～約１２ｍｍの高さを有するチャネルに封入される。いくつかの実施形態では、チャネルの高さは、約１ｍｍ、約２ｍｍ、約３ｍｍ、約４ｍｍ、約５ｍｍ、約６ｍｍ、約７ｍｍ、約８ｍｍ、約９ｍｍ、約１０ｍｍ、約１１ｍｍ、または約１２ｍｍである。チャネルの断面は、ほぼ長方形、楕円形、または円形とし得る。

【0057】

いくつかの実施形態では、流量調整装置は、容積式ポンプ、シリンジ駆動ポンプ、圧力駆動ポンプ、及び重力供給ポンプまたはシステムからなる群より選択される。

【0058】

いくつかの実施形態では、接触ステップは、ノズル、マイクロ流体混合装置、接触チューブ、液体ブリッジ、縦型混合機、回転二重チューブ、または噴霧器を使用する。

【0059】

以下の実施形態は、ポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流を接触させるための方法の非限定例を提供する。

【0060】

ノズル。いくつかの実施形態では、ノズルは、本開示の方法で使用される。いくつかの実施形態では、１つのノズルは、制御量の核酸構成成分をオイル／液体チャネルに注入し、制御システムによりセンサー（例えば、カメラ）により決定される指定される時間及び位置で、第２のノズルは、ポリプレックスを得るために、核酸を含有する第２の液体流に、ポリマーを含有する第１の液体流を注入する。正確に制御された時間、速度、体積、密度、及び位置パラメーター下で、複数の注入を提供するこの精度は、比較的均一で制御された特性を有するポリプレックスの制御された形成を提供する。いくつかの実施形態では、２つのノズル（１つは、核酸を含有する第２の液体流用であり、１つは、ポリマーを含有する第１の液体流用）は、混合チャンバーに２つの対向する液体流を高速で注入するように、相対して構成される（すなわち、ジェット混合に作用する）。

【0061】

マイクロ流体。いくつかの実施形態では、マイクロ流体が、本開示の方法で使用される。いくつかの実施形態では、２つのマイクロ流体流（例えば、ポリマーを含む第１の液体流及び核酸を含む第２の液体流）は、ポリプレックスを形成するために一緒になる。いくつかの実施形態では、制御量の核酸構成成分及びポリマー（例えば、ＨＰＡＥ）を含有する液体のパルスは、各マイクロ流体流から、混合領域に、正しい量の原材料（例えば、核酸構成成分またはＨＰＡＥ）を放出するために、各マイクロ流体流に沿って移動する。混合は、瞬時及び正確である。

【0062】

接触チューブ。いくつかの実施形態では、接触チューブは、本開示の方法で使用される。いくつかの実施形態では、ポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流は、それらがそれぞれのノズルまたはマイクロ流体流から排出された後に、接触チューブ内で合流及び混合するために一緒になる。いくつかの実施形態では、チューブは、互いに、小さな空隙で隔てられる。いくつかの実施形態では、複数の接触チューブは、個別または集合的に、ポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流をキャリア流に排出する。

【0063】

液体ブリッジング：いくつかの実施形態では、液体ブリッジングは、本開示の方法で使用される。いくつかの実施形態では、ポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流は、それらが合流及び複合化する縦型配向プラットフォーム上で、ほぼ平行なチューブを通って運ばれる。次に、得られたポリプレックスは、本明細書に記載されるように、縦型プラットフォームからはずれて液体チャネルに入る可能性があり、これは、形成されたポリプレックスを、例えば、収集用リザーバー、に運ぶ。

【0064】

縦型混合機：いくつかの実施形態では、縦型混合は、本開示の方法で使用される。いくつかの実施形態では、ポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流は、２つの同心配向チューブ内で別々に供給され、一方のチューブは他方のチューブの内側にある。排出時に、内側のチューブの内容物（例えば、核酸構成成分またはポリマー）は、ポリプレックスを形成するために、同心配向の外側のチューブの内容物（例えば、核酸構成成分またはポリマー）と混合する。ポリプレックスが形成されると、密度が変化し、形成されたポリプレックスは、本明細書に記載されるように、外側に移動し、液体チャネルに流れ込み、これは、形成されたポリプレックスを、例えば、収集用リザーバー、に運ぶ。

【0065】

回転縦型混合機：いくつかの実施形態では、回転縦型混合機は、本開示の方法で使用される。いくつかの実施形態では、ポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流は、チューブインチューブシナリオで供給され、遠心力により、両方の材料が異なる速度で中心から移動して混合される。ポリプレックスが形成されると、密度が変化し、それにより、形成されたポリプレックスは、外側に移動し、本明細書に記載の液体チャネルに流れ込み、これは、例えば、収集用リザーバーに、形成されたポリプレックスを運ぶ。

【0066】

いくつかの実施形態では、接触ステップは、ノズルを使用する。いくつかの実施形態では、ノズルは、個々の材料それぞれの移動方向に対して９０°をなす第１の液体流及び第２の液体流間のパルス流接触を得るように向けられる。液体輸送チャネルに対するノズルの角度は、０°から９０°まで変動し得る。

【0067】

いくつかの実施形態では、接触ステップは、本明細書に記載される空隙内または液体チャネル内のキャリアオイル内で生じる。いくつかの実施形態では、ポリプレックス形成は、外部混合（例えば、機械的混合）なしで直ちに生じる。いくつかの実施形態では、ポリプレックス形成は、接触ステップ後に外部混合を必要とする。いくつかの実施形態では、外部混合は、接触ステップ後に混合物上に空気流を吹き付けることを含む。いくつかの実施形態では、気流は、安定化段階中に新たに形成されたポリプレックスの移動を支援する。

【0068】

いくつかの実施形態では、接触ステップにおけるポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流の体積は、マイクロリットルの範囲（例えば、約１μＬ～約１０００μＬ）である。いくつかの実施形態では、接触ステップにおけるポリマーを含有する第１の液体流及び核酸を含有する第２の液体流の体積は、約５μＬ未満である。

【0069】

いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流の体積は、それぞれ、独立して、約１μＬ、約５μＬ、約１０μＬ、約１５μＬ、約２０μＬ、約２５μＬ、約３０μＬ、約３５μＬ、約４０μＬ、約４５μＬ、約５０μＬ、約５５μＬ、約６０μＬ、約６５μＬ、約７０μＬ、約７５μＬ、約８０μＬ、約８５μＬ、約９０μＬ、約９５μＬ、約１００μＬ、約１０５μＬ、約１１０μＬ、約１１５μＬ、約１２０μＬ、約１２５μＬ、約１３０μＬ、約１３５μＬ、約１４０μＬ、約１４５μＬ、約１５０μＬ、約１５５μＬ、約１６０μＬ、約１６５μＬ、約１７０μＬ、約１７５μＬ、約１８０μＬ、約１８５μＬ、約１９０μＬ、約１９５μＬ、約２００μＬ、約２０５μＬ、約２１０μＬ、約２１５μＬ、約２２０μＬ、約２２５μＬ、約２３０μＬ、約２３５μＬ、約２４０μＬ、約２４５μＬ、約２５０μＬ、約２５５μＬ、約２６０μＬ、約２６５μＬ、約２７０μＬ、約２７５μＬ、約２８０μＬ、約２８５μＬ、約２９０μＬ、約２９５μＬ、約３００μＬ、約３０５μＬ、約３１０μＬ、約３１５μＬ、約３２０μＬ、約３２５μＬ、約３３０μＬ、約３３５μＬ、約３４０μＬ、約３４５μＬ、約３５０μＬ、約３５５μＬ、約３６０μＬ、約３６５μＬ、約３７０μＬ、約３７５μＬ、約３８０μＬ、約３８５μＬ、約３９０μＬ、約３９５μＬ、約４００μＬ、約４０５μＬ、約４１０μＬ、約４１５μＬ、約４２０μＬ、約４２５μＬ、約４３０μＬ、約４３５μＬ、約４４０μＬ、約４４５μＬ、約４５０μＬ、約４５５μＬ、約４６０μＬ、約４６５μＬ、約４７０μＬ、約４７５μＬ、約４８０μＬ、約４８５μＬ、約４９０μＬ、約４９５μＬ、約５００μＬ、約５０５μＬ、約５１０μＬ、約５１５μＬ、約５２０μＬ、約５２５μＬ、約５３０μＬ、約５３５μＬ、約５４０μＬ、約５４５μＬ、約５５０μＬ、約５５５μＬ、約５６０μＬ、約５６５μＬ、約５７０μＬ、約５７５μＬ、約５８０μＬ、約５８５μＬ、約５９０μＬ、約５９５μＬ、約６００μＬ、約６０５μＬ、約６１０μＬ、約６１５μＬ、約６２０μＬ、約６２５μＬ、約６３０μＬ、約６３５μＬ、約６４０μＬ、約６４５μＬ、約６５０μＬ、約６５５μＬ、約６６０μＬ、約６６５μＬ、約６７０μＬ、約６７５μＬ、約６８０μＬ、約６８５μＬ、約６９０μＬ、約６９５μＬ、約７００μＬ、約７０５μＬ、約７１０μＬ、約７１５μＬ、約７２０μＬ、約７２５μＬ、約７３０μＬ、約７３５μＬ、約７４０μＬ、約７４５μＬ、約７５０μＬ、約７５５μＬ、約７６０μＬ、約７６５μＬ、約７７０μＬ、約７７５μＬ、約７８０μＬ、約７８５μＬ、約７９０μＬ、約７９５μＬ、約８００μＬ、約８１０μＬ、約８１５μＬ、約８２０μＬ、約８２５μＬ、約８３０μＬ、約８３５μＬ、約８４０μＬ、約８４５μＬ、約８５０μＬ、約８５５μＬ、約８６０μＬ、約８６５μＬ、約８７０μＬ、約８７５μＬ、約８８０μＬ、約８８５μＬ、約８９０μＬ、約８９５μＬ、約９００μＬ、約９０５μＬ、約９１０μＬ、約９１５μＬ、約９２０μＬ、約９２５μＬ、約９３０μＬ、約９３５μＬ、約９４０μＬ、約９４５μＬ、約９５０μＬ、約９５５μＬ、約９６０μＬ、約９６５μＬ、約９７０μＬ、約９７５μＬ、約９８０μＬ、約９８５μＬ、約９９０μＬ、約９９５μＬ、及び約１０００μＬ（その間の全ての範囲を含む）を含む、約１μＬ～約１０００μＬである。

【0070】

いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流の体積は、それぞれ、独立して、約１μＬ、約５μＬ、約１０μＬ、約１５μＬ、約２０μＬ、約２５μＬ、約３０μＬ、約３５μＬ、約４０μＬ、約４５μＬ、約５０μＬ、約５５μＬ、約６０μＬ、約６５μＬ、約７０μＬ、約７５μＬ、約８０μＬ、約８５μＬ、約９０μＬ、約９５μＬ、約１００μＬ、約１０５μＬ、約１１０μＬ、約１１５μＬ、約１２０μＬ、約１２５μＬ、約１３０μＬ、約１３５μＬ、約１４０μＬ、約１４５μＬ、約１５０μＬ、約１５５μＬ、約１６０μＬ、約１６５μＬ、約１７０μＬ、約１７５μＬ、約１８０μＬ、約１８５μＬ、約１９０μＬ、約１９５μＬ、約２００μＬ、約２０５μＬ、約２１０μＬ、約２１５μＬ、約２２０μＬ、約２２５μＬ、約２３０μＬ、約２３５μＬ、約２４０μＬ、約２４５μＬ、約２５０μＬ、約２５５μＬ、約２６０μＬ、約２６５μＬ、約２７０μＬ、約２７５μＬ、約２８０μＬ、約２８５μＬ、約２９０μＬ、約２９５μＬ、約３００μＬ、約３０５μＬ、約３１０μＬ、約３１５μＬ、約３２０μＬ、約３２５μＬ、約３３０μＬ、約３３５μＬ、約３４０μＬ、約３４５μＬ、約３５０μＬ、約３５５μＬ、約３６０μＬ、約３６５μＬ、約３７０μＬ、約３７５μＬ、約３８０μＬ、約３８５μＬ、約３９０μＬ、約３９５μＬ、約４００μＬ、約４０５μＬ、約４１０μＬ、約４１５μＬ、約４２０μＬ、約４２５μＬ、約４３０μＬ、約４３５μＬ、約４４０μＬ、約４４５μＬ、約４５０μＬ、約４５５μＬ、約４６０μＬ、約４６５μＬ、約４７０μＬ、約４７５μＬ、約４８０μＬ、約４８５μＬ、約４９０μＬ、約４９５μＬ、約５００μＬ、約５０５μＬ、約５１０μＬ、約５１５μＬ、約５２０μＬ、約５２５μＬ、約５３０μＬ、約５３５μＬ、約５４０μＬ、約５４５μＬ、約５５０μＬ、約５５５μＬ、約５６０μＬ、約５６５μＬ、約５７０μＬ、約５７５μＬ、約５８０μＬ、約５８５μＬ、約５９０μＬ、約５９５μＬ、約６００μＬ、約６０５μＬ、約６１０μＬ、約６１５μＬ、約６２０μＬ、約６２５μＬ、約６３０μＬ、約６３５μＬ、約６４０μＬ、約６４５μＬ、約６５０μＬ、約６５５μＬ、約６６０μＬ、約６６５μＬ、約６７０μＬ、約６７５μＬ、約６８０μＬ、約６８５μＬ、約６９０μＬ、約６９５μＬ、約７００μＬ、約７０５μＬ、約７１０μＬ、約７１５μＬ、約７２０μＬ、約７２５μＬ、約７３０μＬ、約７３５μＬ、約７４０μＬ、約７４５μＬ、約７５０μＬ、約７５５μＬ、約７６０μＬ、約７６５μＬ、約７７０μＬ、約７７５μＬ、約７８０μＬ、約７８５μＬ、約７９０μＬ、約７９５μＬ、約８００μＬ、約８１０μＬ、約８１５μＬ、約８２０μＬ、約８２５μＬ、約８３０μＬ、約８３５μＬ、約８４０μＬ、約８４５μＬ、約８５０μＬ、約８５５μＬ、約８６０μＬ、約８６５μＬ、約８７０μＬ、約８７５μＬ、約８８０μＬ、約８８５μＬ、約８９０μＬ、約８９５μＬ、約９００μＬ、約９０５μＬ、約９１０μＬ、約９１５μＬ、約９２０μＬ、約９２５μＬ、約９３０μＬ、約９３５μＬ、約９４０μＬ、約９４５μＬ、約９５０μＬ、約９５５μＬ、約９６０μＬ、約９６５μＬ、約９７０μＬ、約９７５μＬ、約９８０μＬ、約９８５μＬ、約９９０μＬ、約９９５μＬ、または約１０００μＬである。

【0071】

いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流の体積は、それぞれ、独立して、約１μＬ～約３００μＬの体積である。いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流の体積は、それぞれ、独立して、約１０μＬである。

【0072】

いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流の体積（例えば、ノズルからの、例えば、第１及び第２の液体流の各パルス）は、それぞれ、独立して、約０．１μＬ、約０．５μＬ、約１μＬ、約２μＬ、約３μＬ、約４μＬ、約５μＬ、約６μＬ、約７μＬ、約８μＬ、約９μＬ、約１０μＬ、約１１μＬ、約１２μＬ、約１３μＬ、約１４μＬ、約１５μＬ、約１６μＬ、約１７μＬ、約１８μＬ、約１９μＬ、約２０μＬ、約２１μＬ、約２２μＬ、約２３μＬ、約２４μＬ、約２５μＬ、約２６μＬ、約２７μＬ、約２８μＬ、約２９μＬ、約３０μＬ、約３１μＬ、約３２μＬ、約３３μＬ、約３４μＬ、約３５μＬ、約３６μＬ、約３７μＬ、約３８μＬ、約３９μＬ、約４０μＬ、約４１μＬ、約４２μＬ、約４３μＬ、約４４μＬ、約４５μＬ、約４６μＬ、約４７μＬ、約４８μＬ、約４９μＬ、約５０μＬ、約５１μＬ、約５２μＬ、約５３μＬ、約５４μＬ、約５５μＬ、約５６μＬ、約５７μＬ、約５８μＬ、約５９μＬ、約６０μＬ、約６１μＬ、約６２μＬ、約６３μＬ、約６４μＬ、約６５μＬ、約６７μＬ、約６８μＬ、約６９μＬ、約７０μＬ、約７１μＬ、約７２μＬ、約７３μＬ、約７４μＬ、約７５μＬ、約７６μＬ、約７７μＬ、約７８μＬ、約７９μＬ、約８０μＬ、約８１μＬ、約８２μＬ、約８３μＬ、約８４μＬ、約８５μＬ、約８６μＬ、約８７μＬ、約８８μＬ、約８９μＬ、約９０μＬ、約９１μＬ、約９２μＬ、約９３μＬ、約９４μＬ、約９５μＬ、約９６μＬ、約９７μＬ、約９８μＬ、約９９μＬ、約１００μＬ、約１０１μＬ、約１０２μＬ、約１０３μＬ、約１０４μＬ、約１０５μＬ、約１０６μＬ、約１０７μＬ、約１０８μＬ、約１０９μＬ、約１１０μＬ、約１１１μＬ、約１１２μＬ、約１１３μＬ、約１１４μＬ、約１１５μＬ、約１１６μＬ、約１１７μＬ、約１１８μＬ、約１１９μＬ、約１２０μＬ、約１２１μＬ、約１２２μＬ、約１２３μＬ、約１２４μＬ、約１２５μＬ、約１２６μＬ、約１２７μＬ、約１２８μＬ、約１２９μＬ、約１３０μＬ、約１３１μＬ、約１３２μＬ、約１３３μＬ、約１３４μＬ、約１３５μＬ、約１３６μＬ、約１３７μＬ、約１３８μＬ、約１３９μＬ、約１４０μＬ、約１４１μＬ、約１４２μＬ、約１４３μＬ、約１４４μＬ、約１４５μＬ、約１４６μＬ、約１４７μＬ、約１４８μＬ、約１４９μＬ、約１５０μＬ、約１５１μＬ、約１５２μＬ、約１５３μＬ、約１５４μＬ、約１５５μＬ、約１５６μＬ、約１５７μＬ、約１５８μＬ、約１５９μＬ、約１６０μＬ、約１６１μＬ、約１６２μＬ、約１６３μＬ、約１６４μＬ、約１６５μＬ、約１６６μＬ、約１６７μＬ、約１６８μＬ、約１６９μＬ、約１７０μＬ、約１７１μＬ、約１７２μＬ、約１７３μＬ、約１７４μＬ、約１７５μＬ、約１７６μＬ、約１７７μＬ、約１７８μＬ、約１７９μＬ、約１８０μＬ、約１８１μＬ、約１８２μＬ、約１８３μＬ、約１８４μＬ、約１８５μＬ、約１８６μＬ、約１８７μＬ、約１８８μＬ、約１８９μＬ、約１９０μＬ、約１９１μＬ、約１９２μＬ、約１９３μＬ、約１９４μＬ、約１９５μＬ、約１９６μＬ、約１９７μＬ、約１９８μＬ、約１９９μＬ、約２００μＬ、約２０１μＬ、約２０２μＬ、約２０３μＬ、約２０４μＬ、約２０５μＬ、約２０６μＬ、約２０７μＬ、約２０８μＬ、約２０９μＬ、約２１０μＬ、約２１１μＬ、約２１２μＬ、約２１３μＬ、約２１４μＬ、約２１５μＬ、約２１６μＬ、約２１７μＬ、約２１８μＬ、約２１９μＬ、約２２０μＬ、約２２１μＬ、約２２２μＬ、約２２３μＬ、約２２４μＬ、約２２５μＬ、約２２６μＬ、約２２７μＬ、約２２８μＬ、約２２９μＬ、約２３０μＬ、約２３１μＬ、約２３２μＬ、約２３３μＬ、約２３４μＬ、約２３５μＬ、約２３６μＬ、約２３７μＬ、約２３８μＬ、約２３９μＬ、約２４０μＬ、約２４１μＬ、約２４２μＬ、約２４３μＬ、約２４４μＬ、約２４５μＬ、約２４６μＬ、約２４７μＬ、約２４８μＬ、約２４９μＬ、約２５０μＬ、約２５１μＬ、約２５２μＬ、約２５３μＬ、約２５４μＬ、約２５５μＬ、約２５６μＬ、約２５７μＬ、約２５８μＬ、約２５９μＬ、約２６０μＬ、約２６１μＬ、約２６２μＬ、約２６３μＬ、約２６４μＬ、約２６５μＬ、約２６６μＬ、約２６７μＬ、約２６８μＬ、約２６９μＬ、約２７０μＬ、約２７１μＬ、約２７２μＬ、約２７３μＬ、約２７４μＬ、約２７５μＬ、約２７６μＬ、約２７７μＬ、約２７８μＬ、約２７９μＬ、約２８０μＬ、約２８１μＬ、約２８２μＬ、約２８３μＬ、約２８４μＬ、約２８５μＬ、約２８６μＬ、約２８７μＬ、約２８８μＬ、約２８９μＬ、約２９０μＬ、約２９１μＬ、約２９２μＬ、約２９３μＬ、約２９４μＬ、約２９５μＬ、約２９６μＬ、約２９７μＬ、約２９８μＬ、約２９９μＬ、約３００μＬ、約３０５μＬ、約３１０μＬ、約３１５μＬ、約３２０μＬ、約３２５μＬ、約３３０μＬ、約３３５μＬ、約３４０μＬ、約３４５μＬ、約３５０μＬ、約３５５μＬ、約３６０μＬ、約３６５μＬ、約３７０μＬ、約３７５μＬ、約３８０μＬ、約３８５μＬ、約３９０μＬ、約３９５μＬ、約４００μＬ、約４０５μＬ、約４１０μＬ、約４１５μＬ、約４２０μＬ、約４２５μＬ、約４３０μＬ、約４３５μＬ、約４４０μＬ、約４４５μＬ、約４５０μＬ、約４５５μＬ、約４６０μＬ、約４６５μＬ、約４７０μＬ、約４７５μＬ、約４８０μＬ、約４８５μＬ、約４９０μＬ、約４９５μＬ、約５００μＬ、約５０５μＬ、約５１０μＬ、約５１５μＬ、約５２０μＬ、約５２５μＬ、約５３０μＬ、約５３５μＬ、約５４０μＬ、約５４５μＬ、約５５０μＬ、約５５５μＬ、約５６０μＬ、約５６５μＬ、約５７０μＬ、約５７５μＬ、約５８０μＬ、約５８５μＬ、約５９０μＬ、約５９５μＬ、約６００μＬ、約６０５μＬ、約６１０μＬ、約６１５μＬ、約６２０μＬ、約６２５μＬ、約６３０μＬ、約６３５μＬ、約６４０μＬ、約６４５μＬ、約６５０μＬ、約６５５μＬ、約６６０μＬ、約６６５μＬ、約６７０μＬ、約６７５μＬ、約６８０μＬ、約６８５μＬ、約６９０μＬ、約６９５μＬ、約７００μＬ、約７０５μＬ、約７１０μＬ、約７１５μＬ、約７２０μＬ、約７２５μＬ、約７３０μＬ、約７３５μＬ、約７４０μＬ、約７４５μＬ、約７５０μＬ、約７５５μＬ、約７６０μＬ、約７６５μＬ、約７７０μＬ、約７７５μＬ、約７８０μＬ、約７８５μＬ、約７９０μＬ、約７９５μＬ、約８００μＬ、約８０５μＬ、約８１０μＬ、約８１５μＬ、約８２０μＬ、約８２５μＬ、約８３０μＬ、約８３５μＬ、約８４０μＬ、約８４５μＬ、約８５０μＬ、約８５５μＬ、約８６０μＬ、約８６５μＬ、約８７０μＬ、約８７５μＬ、約８８０μＬ、約８８５μＬ、約８９０μＬ、約８９５μＬ、約９００μＬ、約９０５μＬ、約９１０μＬ、約９１５μＬ、約９２０μＬ、約９２５μＬ、約９３０μＬ、約９３５μＬ、約９４０μＬ、約９４５μＬ、約９５０μＬ、約９５５μＬ、約９６０μＬ、約９６５μＬ、約９７０μＬ、約９７５μＬ、約９８０μＬ、約９８５μＬ、約９９０μＬ、約９９５μＬ、または約１０００μＬである。

【0073】

いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流は、ほぼ室温（例えば、約２０～２２℃）で接触させる（または混合する）。いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流は、約０℃、約１℃、約２℃、約３℃、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、約３０℃、約３１℃、約３２℃、約３３℃、約３４℃、約３５℃、約３６℃、約３７℃、約３８℃、約３９℃、約４０℃、約４１℃、約４２℃、約４３℃、約４４℃、約４５℃、約４６℃、約４７℃、約４８℃、約４９℃、約５０℃、約５１℃、約５２℃、約５３℃、約５４℃、約５５℃、約５６℃、約５７℃、約５８℃、約５９℃、または約６０℃の温度で接触させる（または混合する）。いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流は、２５℃＋／－５℃で接触させる（または混合する）。いくつかの実施形態では、第１の液体流及び第２の液体流は、２０℃＋／－１０℃で接触させる（または混合する）。

【0074】

いくつかの実施形態では、単離は、ポリプレックスを安定化するのに十分な滞留時間の間、（例えば、ポリマー及び核酸構成成分を混合した後に形成されるように）液体チャネルにポリプレックスを運ぶことを含む。

【0075】

いくつかの実施形態では、滞留時間は、約１ｓｅｃ、約２ｓｅｃ、約３ｓｅｃ、約４ｓｅｃ、約５ｓｅｃ、約６ｓｅｃ、約７ｓｅｃ、約８ｓｅｃ、約９ｓｅｃ、約１０ｓｅｃ、約１５ｓｅｃ、約２０ｓｅｃ、約３０ｓｅｃ、約４０ｓｅｃ、約５０ｓｅｃ、約１ｍｉｎ、約１．５ｍｉｎ、約２ｍｉｎ、約２．５ｍｉｎ、約３ｍｉｎ、約３．５ｍｉｎ、約４ｍｉｎ、約４．５ｍｉｎ、約５ｍｉｎ、約５．５ｍｉｎ、約６ｍｉｎ、約６．５ｍｉｎ、約７ｍｉｎ、約７．５ｍｉｎ、約８ｍｉｎ、約８．５ｍｉｎ、約９ｍｉｎ、約９．５ｍｉｎ、約１０ｍｉｎ、約１０．５ｍｉｎ、約１１ｍｉｎ、約１１．５ｍｉｎ、約１２ｍｉｎ、約１２．５ｍｉｎ、約１３ｍｉｎ、約１３．５ｍｉｎ、約１４ｍｉｎ、約１４．５ｍｉｎ、約１５．０ｍｉｎ、約１５．５ｍｉｎ、約１６ｍｉｎ、約１６．５ｍｉｎ、約１７ｍｉｎ、約１７．５ｍｉｎ、約１８ｍｉｎ、約１８，５ｍｉｎ、約１９ｍｉｎ、約１９．５ｍｉｎ、及び約２０ｍｉｎ（その間の全ての範囲を含む）を含む、約１秒（ｓｅｃ）～約２０分（ｍｉｎ）である。

【0076】

いくつかの実施形態では、滞留時間は、約１ｓｅｃ、約２ｓｅｃ、約３ｓｅｃ、約４ｓｅｃ、約５ｓｅｃ、約６ｓｅｃ、約７ｓｅｃ、約８ｓｅｃ、約９ｓｅｃ、約１０ｓｅｃ、約１５ｓｅｃ、約２０ｓｅｃ、約３０ｓｅｃ、約４０ｓｅｃ、約５０ｓｅｃ、約１ｍｉｎ、約１．５ｍｉｎ、約２ｍｉｎ、約２．５ｍｉｎ、約３ｍｉｎ、約３．５ｍｉｎ、約４ｍｉｎ、約４．５ｍｉｎ、約５ｍｉｎ、約５．５ｍｉｎ、約６ｍｉｎ、約６．５ｍｉｎ、約７ｍｉｎ、約７．５ｍｉｎ、約８ｍｉｎ、約８．５ｍｉｎ、約９ｍｉｎ、約９．５ｍｉｎ、約１０ｍｉｎ、約１０．５ｍｉｎ、約１１ｍｉｎ、約１１．５ｍｉｎ、約１２ｍｉｎ、約１２．５ｍｉｎ、約１３ｍｉｎ、約１３．５ｍｉｎ、約１４ｍｉｎ、約１４．５ｍｉｎ、約１５．０ｍｉｎ、約１５．５ｍｉｎ、約１６ｍｉｎ、約１６．５ｍｉｎ、約１７ｍｉｎ、約１７．５ｍｉｎ、約１８ｍｉｎ、約１８，５ｍｉｎ、約１９ｍｉｎ、約１９．５ｍｉｎ、または約２０ｍｉｎである。

【0077】

いくつかの実施形態では、滞留時間は、１秒以上、１０分以下である。いくつかの実施形態では、滞留時間は、約１０分である。

【0078】

異なるポリプレックス製品（すなわち、ポリマー及び核酸構成成分の異なる組み合わせ）は、異なる沈降または形成時間を必要とし得る。沈降及び形成時間は、液体チャネル内の滞留時間を長くするかまたは短くすることにより変動させてもよい。

【0079】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示の方法は、新たに形成されたポリプレックスが、共に、集塊、凝集、凝固、群化、または固着するのを阻止する。例えば、パルス方式で第１及び第２の液体流を接触させることにより、得られるポリプレックスは、形成中及び／または単離前に、互いに空間的に隔てることができる。

【0080】

いくつかの実施形態では、液体チャネルは、わずかに負電荷を持つ。いくつかの実施形態では、液体チャネルは、キャリア流体に囲まれた水相を含む。いくつかの実施形態では、キャリア流体の密度は、約１，３００ｋｇ／ｍ^３～約２０００ｋｇ／ｍ^３の範囲の値であり、水相の密度は、約９００ｋｇ／ｍ^３～約１２００ｋｇ／ｍ^３の範囲の値である。いくつかの実施形態では、キャリア流体の密度は、約１，３００ｋｇ／ｍ^３、約１，４００ｋｇ／ｍ^３、約１，５００ｋｇ／ｍ^３、約１，６００ｋｇ／ｍ^３、約１，７００ｋｇ／ｍ^３、約１，８００ｋｇ／ｍ^３、約１，９００ｋｇ／ｍ^３、または約２０００ｋｇ／ｍ^３である（本明細書の値のいずれかの間の全ての範囲を含む）。いくつかの実施形態では、水相の密度は、約９００ｋｇ／ｍ^３、約１，０００ｋｇ／ｍ^３、約１，１００ｋｇ／ｍ^３、または約１，２００ｋｇ／ｍ^３（本明細書の値のいずれかの間の全ての範囲を含む）である。いくつかの実施形態では、水相は、酢酸ナトリウム緩衝液を含む。

【0081】

いくつかの実施形態では、キャリア流体は、（本明細書に記載の）オイルである。いくつかの実施形態では、オイルチャネルは、約５～１００ｍｍ幅である。理論に拘束されることを望むものではないが、オイル／液体チャネルのわずかな負電荷は、正電荷を有するポリプレックスを静電的に引き付け、これは、液体チャネルを通して規則正しくポリプレックスを運び、システムの安定性を高める。

【0082】

いくつかの実施形態では、オイルは、（ａ）Ｆｌｕｏｒｉｎｅｒｔ ＦＣ－４０（フルオロ炭酸オイル）、（ｂ）シリコンオイル、（ｃ）ミネラルオイル、（ｄ）過フッ素化アミンオイル、（ｅ）フェニルメチルポリシロキサン、または（ｆ）フェニルメチルポリシロキサンベースのオイル及び添加剤、からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、添加剤は、２～８の範囲の親水性－親油性バランス数を有する。いくつかの実施形態では、添加剤は、ポリソルバート添加剤である。

【0083】

いくつかの実施形態では、ポリソルベート添加剤は、ＳＰＡＮ８０（ソルビタンポリソルバート）、ＳＰＡＮ６５（ソルビタントリステアラート）、またはＴｗｅｅｎ２０（ポリエチレングリコールソルビタンモノラウラート）である。

【0084】

いくつかの実施形態では、水相中の添加剤の濃度は、約０．００１％～約１０％（ｗｔ／ｗｔ％）である。

【0085】

いくつかの実施形態では、添加剤は、水相中で、１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの最終濃度まで添加される。一態様では、ポリプレックスは、液体チャネル内で空間的に分離または分割される。いくつかの実施形態では、分割されたポリプレックス間の空間は、チャネル内の液体の速度により制御される。つまり、個々のポリプレックスは、液体チャネルに導入される前に、離散的な速度でＤＮＡ溶液の一部及びポリマー溶液の一部を接触させることにより形成されるので、液体チャネル内の液体の速度が大きいほど、ポリプレックス間の空間的間隔が小さくなる。

【0086】

いくつかの実施形態では、チャネル内で移動する液体の速度は、約０．１ｍ／ｓ、約０．１１ｍ／ｓ、約０．１２ｍ／ｓ、約０．１３ｍ／ｓ、約０．１４ｍ／ｓ、約０．１５ｍ／ｓ、約０．１６ｍ／ｓ、約０．１７ｍ／ｓ、約０．１８ｍ／ｓ、約０．１９ｍ／ｓ、約０．２ｍ／ｓ、約０．２１ｍ／ｓ、約０．２２ｍ／ｓ、約０．２３ｍ／ｓ、約０．２４ｍ／ｓ、約０．２５ｍ／ｓ、約０．２６ｍ／ｓ、約０．２７ｍ／ｓ、約０．２８ｍ／ｓ、約０．２９ｍ／ｓ、約０．３０ｍ／ｓ、約０．３１ｍ／ｓ、約０．３２ｍ／ｓ、約０．３３ｍ／ｓ、約０．３４ｍ／ｓ、約０．３５ｍ／ｓ、約０．３６ｍ／ｓ、約０．３７ｍ／ｓ、約０．３８ｍ／ｓ、約０．３９ｍ／ｓ、約０．４ｍ／ｓ、約０．４１ｍ／ｓ、約０．４２ｍ／ｓ、約０．４３ｍ／ｓ、約０．４４ｍ／ｓ、約０．４５ｍ／ｓ、約０．４６ｍ／ｓ、約０．４７ｍ／ｓ、約０．４８ｍ／ｓ、約０．４９ｍ／ｓ、約０．５ｍ／ｓ、約０．５１ｍ／ｓ、約０．５２ｍ／ｓ、約０．５３ｍ／ｓ、約０．５４ｍ／ｓ、約０．５５ｍ／ｓ、約０．５６ｍ／ｓ、約０．５７ｍ／ｓ、約０．５７ｍ／ｓ、約０．５９ｍ／ｓ、約０．６ｍ／ｓ、約０．６１ｍ／ｓ、約０．６２ｍ／ｓ、約０．６３ｍ／ｓ、約０．６４ｍ／ｓ、約０．６５ｍ／ｓ、約０．６６ｍ／ｓ、約０．６７ｍ／ｓ、約０．６８ｍ／ｓ、約０．６９ｍ／ｓ、約０．７ｍ／ｓ、約０．７１ｍ／ｓ、約０．７２ｍ／ｓ、約０．７３ｍ／ｓ、約０．７４ｍ／ｓ、約０．７５ｍ／ｓ、約０．７６ｍ／ｓ、約０．７７ｍ／ｓ、約０．７８ｍ／ｓ、約０．７９ｍ／ｓ、約０．８ｍ／ｓ、約０．８１ｍ／ｓ、約０．８２ｍ／ｓ、約０．８３ｍ／ｓ、約０．８４ｍ／ｓ、約０．８５ｍ／ｓ、約０．８６ｍ／ｓ、約０．８７ｍ／ｓ、約０．８８ｍ／ｓ、約０．９ｍ／ｓ、約０．９１ｍ／ｓ、約０．９２ｍ／ｓ、約０．９３ｍ／ｓ、約０．９４ｍ／ｓ、約０．９５ｍ／ｓ、約０．９６ｍ／ｓ、約０．９７ｍ／ｓ、約０．９８ｍ／ｓ、及び約１．０ｍ／ｓ（その間の全ての範囲を含む）を含む、約０．１ｍ／ｓ～約１ｍ／ｓである。

【0087】

いくつかの実施形態では、チャネル内で移動する液体の速度は、約０．１０ｍ／ｓ、約０．１１ｍ／ｓ、約０．１２ｍ／ｓ、約０．１３ｍ／ｓ、約０．１４ｍ／ｓ、約０．１５ｍ／ｓ、約０．１６ｍ／ｓ、約０．１７ｍ／ｓ、約０．１８ｍ／ｓ、約０．１９ｍ／ｓ、約０．２０ｍ／ｓ、約０．２１ｍ／ｓ、約０．２２ｍ／ｓ、約０．２３ｍ／ｓ、約０．２４ｍ／ｓ、約０．２５ｍ／ｓ、約０．２６ｍ／ｓ、約０．２７ｍ／ｓ、約０．２８ｍ／ｓ、約０．２９ｍ／ｓ、約０．３０ｍ／ｓ、約０．３１ｍ／ｓ、約０．３２ｍ／ｓ、約０．３３ｍ／ｓ、約０．３４ｍ／ｓ、約０．３５ｍ／ｓ、約０．３６ｍ／ｓ、約０．３７ｍ／ｓ、約０．３８ｍ／ｓ、約０．３９ｍ／ｓ、約０．４０ｍ／ｓ、約０．４１ｍ／ｓ、約０．４２ｍ／ｓ、約０．４３ｍ／ｓ、約０．４４ｍ／ｓ、約０．４５ｍ／ｓ、約０．４６ｍ／ｓ、約０．４７ｍ／ｓ、約０．４８ｍ／ｓ、約０．４９ｍ／ｓ、約０．５０ｍ／ｓ、約０．５１ｍ／ｓ、約０．５２ｍ／ｓ、約０．５３ｍ／ｓ、約０．５４ｍ／ｓ、約０．５５ｍ／ｓ、約０．５６ｍ／ｓ、約０．５７ｍ／ｓ、約０．５８ｍ／ｓ、約０．５９ｍ／ｓ、約０．６０ｍ／ｓ、約０．６１ｍ／ｓ、約０．６２ｍ／ｓ、約０．６３ｍ／ｓ、約０．６４ｍ／ｓ、約０．６５ｍ／ｓ、約０．６６ｍ／ｓ、約０．６７ｍ／ｓ、約０．６８ｍ／ｓ、約０．６９ｍ／ｓ、約０．７０ｍ／ｓ、約０．７１ｍ／ｓ、約０．７１ｍ／ｓ、約０．７２ｍ／ｓ、約０．７３ｍ／ｓ、約０．７４ｍ／ｓ、約０．７５ｍ／ｓ、約０．７６ｍ／ｓ、約０．７７ｍ／ｓ、約０．７８ｍ／ｓ、約０．７８ｍ／ｓ、約０．７９ｍ／ｓ、約０．８０ｍ／ｓ、約０．８１ｍ／ｓ、約０．８２ｍ／ｓ、約０．８３ｍ／ｓ、約０．８４ｍ／ｓ、約０．８５ｍ／ｓ、約０．８６ｍ／ｓ、約０．８７ｍ／ｓ、約０．８８ｍ／ｓ、約０．８９ｍ／ｓ、約０．９０ｍ／ｓ、約０．９１ｍ／ｓ、約０．９２ｍ／ｓ、約０．９３ｍ／ｓ、約０．９４ｍ／ｓ、約０．９５ｍ／ｓ、約０．９６ｍ／ｓ、約０．９７ｍ／ｓ、約０．９８ｍ／ｓ、約０．９９ｍ／ｓ、または約１．０ｍ／ｓである。

【0088】

いくつかの実施形態では、ポリプレックスが形成される流体の流れは、層流条件下で移動する。いくつかの実施形態では、流体の流れは、部分的な層流条件下で移動する。

【0089】

いくつかの実施形態では、方法は、さらに、１つ以上のポリプレックスを評価及び収集することを含む。

【0090】

いくつかの実施形態では、ポリプレックスの評価は、ポリプレックスが仕様に適合するかどうかを決定するために、ポリプレックスが液体チャネル内を移動する間に（例えば、インラインＱＣ試験により）行われる。例えば、いくつかの実施形態では、液体チャネル及びその中のポリプレックス内の目的の領域は、ポリプレックスの光学特性（例えば、屈折率）を測定する高速カメラで監視される。仕様を満たしていないポリプレックスは、分離されて廃棄物に向けられる。いくつかの実施形態では、仕様を満たさないポリプレックスは、目的の領域に空気圧を加えることにより分離される。仕様を満たすポリプレックスが収集される。

【0091】

いくつかの実施形態では、評価は、液体チャネル内のポリプレックスの屈折率を測定すること、及び、任意に、仕様に適合しない屈折率を有するポリプレックスを除去すること、を含む。ポリプレックスの屈折率は、適切に形成されたポリプレックスの望ましい属性（例えば、所望のポリプレックス粒径）と相関する。

【0092】

いくつかの実施形態では、ポリプレックス粒子が完全に形成されると、ポリプレックス粒子及びオイル／液体チャネルは、負電荷がオイル／液体から除去される領域に入り、粒子がオイル／液体から容易に分離されて収集されることが可能になる。

【0093】

いくつかの実施形態では、安定化ポリプレックスの収集は、以下を含む：
ａ）リザーバーにポリプレックスを収集すること、または
ｂ）規定量の液体ポリプレックスのアリコートを収集すること、及び、治療的使用のためにアリコートを凍結すること、または
ｃ）最終的な治療用製品の調製において、ポリプレックスを凍結または凍結乾燥するための容器にポリプレックスを収集すること。

【0094】

いくつかの実施形態では、方法は、さらに、安定化ポリプレックスを濾過、洗浄、凍結、及び／または凍結乾燥することを含む。

【0095】

いくつかの実施形態では、方法は、さらに、最初にポリプレックスを濾過及び洗浄することを含む。

【0096】

いくつかの実施形態では、方法は、ポリプレックスを凍結及び／または凍結乾燥することを含む。

【0097】

いくつかの実施形態では、凍結乾燥ポリプレックスは、包装して確実に保存することができる。

【0098】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、正電荷を有し、核酸構成成分は、負電荷を有する。

【0099】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、最初に、３００μｇ／μＬ以下の濃度で有機溶媒に溶解させ、次に、酢酸ナトリウム溶液に懸濁させる。いくつかの実施形態では、酢酸ナトリウム溶液は、２５ｍＭ及びｐＨ５．２である。

【0100】

いくつかの実施形態では、有機溶媒中のポリマーの濃度は、約１μｇ／μＬ、約５μｇ／μＬ、約１０μｇ／μＬ、約１５μｇ／μＬ、約２０μｇ／μＬ、約２５μｇ／μＬ、約３０μｇ／μＬ、約３５μｇ／μＬ、約４０μｇ／μＬ、約４５μｇ／μＬ、約５０μｇ／μＬ、約５５μｇ／μＬ、約６０μｇ／μＬ、約６５μｇ／μＬ、約７０μｇ／μＬ、約７５μｇ／μＬ、約８０μｇ／μＬ、約８５μｇ／μＬ、約９０μｇ／μＬ、約９５μｇ／μＬ、約１００μｇ／μＬ、約１０５μｇ／μＬ、約１１０μｇ／μＬ、約１１５μｇ／μＬ、約１２０μｇ／μＬ、約１２５μｇ／μＬ、約１３０μｇ／μＬ、約１３５μｇ／μＬ、約１４０μｇ／μＬ、約１４５μｇ／μＬ、約１５０μｇ／μＬ、約１５５μｇ／μＬ、約１６０μｇ／μＬ、約１６５μｇ／μＬ、約１７０μｇ／μＬ、約１７５μｇ／μＬ、約１８０μｇ／μＬ、約１８５μｇ／μＬ、約１９０μｇ／μＬ、約１９５μｇ／μＬ、約２００μｇ／μＬ、約２０５μｇ／μＬ、約２１０μｇ／μＬ、約２１５μｇ／μＬ、約２２０μｇ／μＬ、約２２５μｇ／μＬ、約２３０μｇ／μＬ、約２３５μｇ／μＬ、約２４０μｇ／μＬ、約２４５μｇ／μＬ、約２５０μｇ／μＬ、約２５５μｇ／μＬ、約２６０μｇ／μＬ、約２６５μｇ／μＬ、約２７０μｇ／μＬ、約２７５μｇ／μＬ、約２８０μｇ／μＬ、約２８５μｇ／μＬ、約２９０μｇ／μＬ、約２９５μｇ／μＬ、及び約３００μｇ／μＬ（その間の全ての範囲を含む）を含む、約１μｇ／μＬ～約３００μｇ／μＬである。

【0101】

いくつかの実施形態では、有機溶媒中のポリマーの濃度は、約１μｇ／μＬ、約２μｇ／μＬ、約３μｇ／μＬ、約４μｇ／μＬ、約５μｇ／μＬ、約６μｇ／μＬ、約７μｇ／μＬ、約８μｇ／μＬ、約９μｇ／μＬ、約１０μｇ／μＬ、約１１μｇ／μＬ、約１２μｇ／μＬ、約１３μｇ／μＬ、約１４μｇ／μＬ、約１５μｇ／μＬ、約１６μｇ／μＬ、約１７μｇ／μＬ、約１８μｇ／μＬ、約１９μｇ／μＬ、約２０μｇ／μＬ、約２１μｇ／μＬ、約２２μｇ／μＬ、約２３μｇ／μＬ、約２４μｇ／μＬ、約２５μｇ／μＬ、約２６μｇ／μＬ、約２７μｇ／μＬ、約２８μｇ／μＬ、約２９μｇ／μＬ、約３０μｇ／μＬ、約３１μｇ／μＬ、約３２μｇ／μＬ、約３３μｇ／μＬ、約３４μｇ／μＬ、約３５μｇ／μＬ、約３６μｇ／μＬ、約３７μｇ／μＬ、約３８μｇ／μＬ、約３９μｇ／μＬ、約４０μｇ／μＬ、約４１μｇ／μＬ、約４２μｇ／μＬ、約４３μｇ／μＬ、約４４μｇ／μＬ、約４５μｇ／μＬ、約４６μｇ／μＬ、約４７μｇ／μＬ、約４８μｇ／μＬ、約４９μｇ／μＬ、約５０μｇ／μＬ、約５１μｇ／μＬ、約５２μｇ／μＬ、約５３μｇ／μＬ、約５４μｇ／μＬ、約５５μｇ／μＬ、約５６μｇ／μＬ、約５７μｇ／μＬ、約５８μｇ／μＬ、約５９μｇ／μＬ、約６０μｇ／μＬ、約６１μｇ／μＬ、約６２μｇ／μＬ、約６３μｇ／μＬ、約６４μｇ／μＬ、約６５μｇ／μＬ、約６７μｇ／μＬ、約６８μｇ／μＬ、約６９μｇ／μＬ、約７０μｇ／μＬ、約７１μｇ／μＬ、約７２μｇ／μＬ、約７３μｇ／μＬ、約７４μｇ／μＬ、約７５μｇ／μＬ、約７６μｇ／μＬ、約７７μｇ／μＬ、約７８μｇ／μＬ、約７９μｇ／μＬ、約８０μｇ／μＬ、約８１μｇ／μＬ、約８２μｇ／μＬ、約８３μｇ／μＬ、約８４μｇ／μＬ、約８５μｇ／μＬ、約８６μｇ／μＬ、約８７μｇ／μＬ、約８８μｇ／μＬ、約８９μｇ／μＬ、約９０μｇ／μＬ、約９１μｇ／μＬ、約９２μｇ／μＬ、約９３μｇ／μＬ、約９４μｇ／μＬ、約９５μｇ／μＬ、約９６μｇ／μＬ、約９７μｇ／μＬ、約９８μｇ／μＬ、約９９μｇ／μＬ、約１００μｇ／μＬ、約１０１μｇ／μＬ、約１０２μｇ／μＬ、約１０３μｇ／μＬ、約１０４μｇ／μＬ、約１０５μｇ／μＬ、約１０６μｇ／μＬ、約１０７μｇ／μＬ、約１０８μｇ／μＬ、約１０９μｇ／μＬ、約１１０μｇ／μＬ、約１１１μｇ／μＬ、約１１２μｇ／μＬ、約１１３μｇ／μＬ、約１１４μｇ／μＬ、約１１５μｇ／μＬ、約１１６μｇ／μＬ、約１１７μｇ／μＬ、約１１８μｇ／μＬ、約１１９μｇ／μＬ、約１２０μｇ／μＬ、約１２１μｇ／μＬ、約１２２μｇ／μＬ、約１２３μｇ／μＬ、約１２４μｇ／μＬ、約１２５μｇ／μＬ、約１２６μｇ／μＬ、約１２７μｇ／μＬ、約１２８μｇ／μＬ、約１２９μｇ／μＬ、約１３０μｇ／μＬ、約１３１μｇ／μＬ、約１３２μｇ／μＬ、約１３３μｇ／μＬ、約１３４μｇ／μＬ、約１３５μｇ／μＬ、約１３６μｇ／μＬ、約１３７μｇ／μＬ、約１３８μｇ／μＬ、約１３９μｇ／μＬ、約１４０μｇ／μＬ、約１４１μｇ／μＬ、約１４２μｇ／μＬ、約１４３μｇ／μＬ、約１４４μｇ／μＬ、約１４５μｇ／μＬ、約１４６μｇ／μＬ、約１４７μｇ／μＬ、約１４８μｇ／μＬ、約１４９μｇ／μＬ、約１５０μｇ／μＬ、約１５１μｇ／μＬ、約１５２μｇ／μＬ、約１５３μｇ／μＬ、約１５４μｇ／μＬ、約１５５μｇ／μＬ、約１５６μｇ／μＬ、約１５７μｇ／μＬ、約１５８μｇ／μＬ、約１５９μｇ／μＬ、約１６０μｇ／μＬ、約１６１μｇ／μＬ、約１６２μｇ／μＬ、約１６３μｇ／μＬ、約１６４μｇ／μＬ、約１６５μｇ／μＬ、約１６６μｇ／μＬ、約１６７μｇ／μＬ、約１６８μｇ／μＬ、約１６９μｇ／μＬ、約１７０μｇ／μＬ、約１７１μｇ／μＬ、約１７２μｇ／μＬ、約１７３μｇ／μＬ、約１７４μｇ／μＬ、約１７５μｇ／μＬ、約１７６μｇ／μＬ、約１７７μｇ／μＬ、約１７８μｇ／μＬ、約１７９μｇ／μＬ、約１８０μｇ／μＬ、約１８１μｇ／μＬ、約１８２μｇ／μＬ、約１８３μｇ／μＬ、約１８４μｇ／μＬ、約１８５μｇ／μＬ、約１８６μｇ／μＬ、約１８７μｇ／μＬ、約１８８μｇ／μＬ、約１８９μｇ／μＬ、約１９０μｇ／μＬ、約１９１μｇ／μＬ、約１９２μｇ／μＬ、約１９３μｇ／μＬ、約１９４μｇ／μＬ、約１９５μｇ／μＬ、約１９６μｇ／μＬ、約１９７μｇ／μＬ、約１９８μｇ／μＬ、約１９９μｇ／μＬ、約２００μｇ／μＬ、約２０１μｇ／μＬ、約２０２μｇ／μＬ、約２０３μｇ／μＬ、約２０４μｇ／μＬ、約２０５μｇ／μＬ、約２０６μｇ／μＬ、約２０７μｇ／μＬ、約２０８μｇ／μＬ、約２０９μｇ／μＬ、約２１０μｇ／μＬ、約２１１μｇ／μＬ、約２１２μｇ／μＬ、約２１３μｇ／μＬ、約２１４μｇ／μＬ、約２１５μｇ／μＬ、約２１６μｇ／μＬ、約２１７μｇ／μＬ、約２１８μｇ／μＬ、約２１９μｇ／μＬ、約２２０μｇ／μＬ、約２２１μｇ／μＬ、約２２２μｇ／μＬ、約２２３μｇ／μＬ、約２２４μｇ／μＬ、約２２５μｇ／μＬ、約２２６μｇ／μＬ、約２２７μｇ／μＬ、約２２８μｇ／μＬ、約２２９μｇ／μＬ、約２３０μｇ／μＬ、約２３１μｇ／μＬ、約２３２μｇ／μＬ、約２３３μｇ／μＬ、約２３４μｇ／μＬ、約２３５μｇ／μＬ、約２３６μｇ／μＬ、約２３７μｇ／μＬ、約２３８μｇ／μＬ、約２３９μｇ／μＬ、約２４０μｇ／μＬ、約２４１μｇ／μＬ、約２４２μｇ／μＬ、約２４３μｇ／μＬ、約２４４μｇ／μＬ、約２４５μｇ／μＬ、約２４６μｇ／μＬ、約２４７μｇ／μＬ、約２４８μｇ／μＬ、約２４９μｇ／μＬ、約２５０μｇ／μＬ、約２５１μｇ／μＬ、約２５２μｇ／μＬ、約２５３μｇ／μＬ、約２５４μｇ／μＬ、約２５５μｇ／μＬ、約２５６μｇ／μＬ、約２５７μｇ／μＬ、約２５８μｇ／μＬ、約２５９μｇ／μＬ、約２６０μｇ／μＬ、約２６１μｇ／μＬ、約２６２μｇ／μＬ、約２６３μｇ／μＬ、約２６４μｇ／μＬ、約２６５μｇ／μＬ、約２６６μｇ／μＬ、約２６７μｇ／μＬ、約２６８μｇ／μＬ、約２６９μｇ／μＬ、約２７０μｇ／μＬ、約２７１μｇ／μＬ、約２７２μｇ／μＬ、約２７３μｇ／μＬ、約２７４μｇ／μＬ、約２７５μｇ／μＬ、約２７６μｇ／μＬ、約２７７μｇ／μＬ、約２７８μｇ／μＬ、約２７９μｇ／μＬ、約２８０μｇ／μＬ、約２８１μｇ／μＬ、約２８２μｇ／μＬ、約２８３μｇ／μＬ、約２８４μｇ／μＬ、約２８５μｇ／μＬ、約２８６μｇ／μＬ、約２８７μｇ／μＬ、約２８８μｇ／μＬ、約２８９μｇ／μＬ、約２９０μｇ／μＬ、約２９１μｇ／μＬ、約２９２μｇ／μＬ、約２９３μｇ／μＬ、約２９４μｇ／μＬ、約２９５μｇ／μＬ、約２９６μｇ／μＬ、約２９７μｇ／μＬ、約２９８μｇ／μＬ、約２９９μｇ／μＬ、または約３００μｇ／μＬである。

【0102】

いくつかの実施形態では、最初にポリマーを溶解させるために使用される有機溶媒は、水混和性有機溶媒である。いくつかの実施形態では、有機溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、またはイソプロパノールである。いくつかの実施形態では、有機溶媒は、ＤＭＳＯ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ－メチルピロリドン（ＮＭＰ）など；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン；またはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）などのエーテルである。いくつかの実施形態では、有機溶媒は、ＤＭＳＯである。

【0103】

いくつかの実施形態では、核酸構成成分（例えば、ＤＮＡ）は、最初に、４ｍｇ／ｍＬ以下の濃度で溶媒に溶解させ、次に、酢酸ナトリウム溶液に懸濁させる。いくつかの実施形態では、酢酸ナトリウム溶液は、２５ｍＭ及びｐＨ５．２である。

【0104】

いくつかの実施形態では、核酸構成成分（例えば、ＤＮＡ）は、約３．５ｍｇ／ｍＬ以下、約３．０ｍｇ／ｍＬ以下、約２．５ｍｇ／ｍＬ以下、約２．０ｍｇ／ｍＬ以下、約１．５ｍｇ／ｍＬ以下、約１．０ｍｇ／ｍＬ以下、約０．５ｍｇ／ｍＬ以下、約０．１ｍｇ／ｍＬ以下、約０．０５ｍｇ／ｍＬ以下、及び約０．０１ｍｇ／ｍＬ以下（間の全ての濃度を含む）を含む、約４ｍｇ／ｍＬ以下の濃度を有する溶液を得るために溶解させる。

【0105】

いくつかの実施形態では、核酸構成成分（例えば、ＤＮＡ）は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．０２ｍｇ／ｍＬ、約０．０６ｍｇ／ｍＬ、約０．０７ｍｇ／ｍＬ、約０．０８ｍｇ／ｍＬ、約０．０９ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．１１ｍｇ／ｍＬ、約０．１２ｍｇ／ｍＬ、約０．１３ｍｇ／ｍＬ、約０．１４ｍｇ／ｍＬ、約０．１５ｍｇ／ｍＬ、約０．１６ｍｇ／ｍＬ、約０．１７ｍｇ／ｍＬ、約０．１８ｍｇ／ｍＬ、約０．１９ｍｇ／ｍＬ、約０．２０ｍｇ／ｍＬ、約０．２５ｍｇ／ｍＬ、約０．３０ｍｇ／ｍＬ、約０．３５ｍｇ／ｍＬ、約０．４０ｍｇ／ｍＬ、約０．４５ｍｇ／ｍＬ、約０．５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５５ｍｇ／ｍＬ、約０．６０ｍｇ／ｍＬ、約０．６５ｍｇ／ｍＬ、約０．７０ｍｇ／ｍＬ、約０．７５ｍｇ／ｍＬ、約０．８０ｍｇ／ｍＬ、約０．８５ｍｇ／ｍＬ、約０．９０ｍｇ／ｍＬ、約０．９５ｍｇ／ｍＬ、約１．０ｍｇ／ｍＬ、約１．０５ｍｇ／ｍＬ、約１．１０ｍｇ／ｍＬ、約１．１５ｍｇ／ｍＬ、約１．２０ｍｇ／ｍＬ、約１．２５ｍｇ／ｍＬ、約１．３０ｍｇ／ｍＬ、約１．３５ｍｇ／ｍＬ、約１．４０ｍｇ／ｍＬ、約１．４５ｍｇ／ｍＬ、約１．５０ｍｇ／ｍＬ、約１．５５ｍｇ／ｍＬ、約１．６０ｍｇ／ｍＬ、約１．６５ｍｇ／ｍＬ、約１．７０ｍｇ／ｍＬ、約１．７５ｍｇ／ｍＬ、約１．８０ｍｇ／ｍＬ、約１．８５ｍｇ／ｍＬ、約１．９０ｍｇ／ｍＬ、約１．９５ｍｇ／ｍＬ、約２．０ｍｇ／ｍＬ、約２．１０ｍｇ／ｍＬ、約２．１５ｍｇ／ｍＬ、約２．２０ｍｇ／ｍＬ、約２．２５ｍｇ／ｍＬ、約２．３０ｍｇ／ｍＬ、約２．３５ｍｇ／ｍＬ、約２．４０ｍｇ／ｍＬ、約２．４５ｍｇ／ｍＬ、約２．５０ｍｇ／ｍＬ、約２．５５ｍｇ／ｍＬ、約２．６０ｍｇ／ｍＬ、約２．６５ｍｇ／ｍＬ、約２．７０ｍｇ／ｍＬ、約２．７５ｍｇ／ｍＬ、約２．８０ｍｇ／ｍＬ、約２．８５ｍｇ／ｍＬ、約２．９０ｍｇ／ｍＬ、約２．９５ｍｇ／ｍＬ、約３．０ｍｇ／ｍＬ、約３．１０ｍｇ／ｍＬ、約３．１５ｍｇ／ｍＬ、約３．２０ｍｇ／ｍＬ、約３．２５ｍｇ／ｍＬ、約３．３０ｍｇ／ｍＬ、約３．３５ｍｇ／ｍＬ、約３．４０ｍｇ／ｍＬ、約３．４５ｍｇ／ｍＬ、約３．５０ｍｇ／ｍＬ、約３．５５ｍｇ／ｍＬ、約３．６０ｍｇ／ｍＬ、約３．６５ｍｇ／ｍＬ、約３．７０ｍｇ／ｍＬ、約３．７５ｍｇ／ｍＬ、約３．８０ｍｇ／ｍＬ、約３．８５ｍｇ／ｍＬ、約３．９０ｍｇ／ｍＬ、約３．９５ｍｇ／ｍＬ、及び約４．０ｍｇ／ｍＬ（その間の全ての値を含む）を含む、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～４ｍｇ／ｍＬの濃度を有する溶液を得るために溶解させる。いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分（例えば、ＤＮＡ）は、糖を含有する液体に懸濁させる。例えば、トレハロース、スクロース、グルコース、及びマンニトール。いくつかの実施形態では、糖は、スクロースである。

【0106】

いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ポリエチレンイミン、直鎖状ポリ（アミノエステル）（ＬＰＡＥ）［例えば、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００５，１１（３），４２６－４３４；及びＭｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００９；４８０，５３－６３に記載のもの（これらの内容は、それぞれ、全体が本明細書に参照により組み込まれる）］、キトサン、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）ポリマー、ポリ乳酸ポリマー、及び高度に分岐したポリ（アミノエステル）、例えば、高度に分岐した（ｂ－アミノエステル）［例えば、Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１６，１７，３６４０－３６４７；Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１５，１６，２６０９－２６１７；ＡＣＳ Ａｐｐｌ．Ｍａｔｅｒ．Ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ ２０１６，８，５０，３４２１８－３４２２６；Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ，２０１６，２４４（Ｐｔ Ｂ），３３６－３４６；Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ．２０１３ Ｎｏｖ；１８（２１－２２），１０９０－１０９８；Ｓｃｉ．Ａｄｖ．２０１６；２：ｅ１６００１０２；ＷＯ２０１４／０５３６５４；ＵＳ２０１５／０２６６９８６；及びＷＯ２０１６／０２０４７４に記載されるもの（これらの内容は、それぞれ、全体が本明細書に参照により組み込まれる）］を含む、ポリプレックスを形成することが可能な任意のポリマーを用いる。いくつかの実施形態では、ポリマーは、例えば、以下に記載されるように、高度に分岐したポリ（アミノエステル）（ＨＰＡＥ）である。

【0107】

一態様では、本明細書に記載の方法は、核酸構成成分、及び以下を含むポリマーを含むポリプレックスを提供する：

【化1】

（式中、
各Ｊは、－Ｏ－であり、
Ｚ’’は、連結部分であり、
Ｚは、１～３０個の炭素原子の直鎖状もしくは分枝状炭素鎖、１～３０個の原子の直鎖状もしくは分枝状ヘテロ原子含有炭素鎖、３～３０個の炭素原子を含有する炭素環、もしくは３～３０個の原子を含有する複素環であるか、または、Ｚは、

【化2】

（式中、ｘは、１～１０００である）であり、
Ｚは、非置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシル、アミノ基、スルホニル基、スルホンアミド基、チオール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６エーテル、Ｃ_１－Ｃ_６チオエーテル、Ｃ_１－Ｃ_６スルホン、Ｃ_１－Ｃ_６スルホキシド、Ｃ_１－Ｃ_６１級アミド、Ｃ_１－Ｃ_６２級アミド、ハロＣ_１－Ｃ_６アルキル、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ニトロソ基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６ヘテロシクリル、Ｃ_２－Ｃ_５ヘテロアリール、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールのうちの少なくとも１つで置換され；各Ｒ’は、独立して、水素及びＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択され、
Ａは、１～３０個の炭素原子の直鎖状もしくは分枝状炭素鎖、２～３０個の原子の直鎖状もしくは分枝状ヘテロ原子含有炭素鎖、３～３０個の炭素原子を含有する炭素環、または３～３０個の原子を含有する複素環であり、
Ａは、１つ以上のハロゲン、ヒドロキシル、アミノ基、スルホニル基、スルホンアミド基、チオール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６エーテル、Ｃ_１－Ｃ_６チオエーテル、Ｃ_１－Ｃ_６スルホン、Ｃ_１－Ｃ_６スルホキシド、Ｃ_１－Ｃ_６１級アミド、Ｃ_１－Ｃ_６２級アミド、ハロＣ_１－Ｃ_６アルキル、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ニトロソ基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６ヘテロシクリル、Ｃ_２－Ｃ_５ヘテロアリール、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールで任意に置換され；各Ｒ’は、独立して、水素及びＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群より選択される、
Ｇは、－Ｃ－であり、
各Ｑは、Ｈであり、
各Ｅ_１は、ヘテロアルキレンであり、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ、独立して、Ｃ_１－Ｃ_４０アルキル、Ｃ_１－Ｃ_４０ヘテロアルキル、Ｃ_２－Ｃ_４０アルケニル、Ｃ_２－Ｃ_４０ヘテロアルケニレン、Ｃ_４－Ｃ_８シクロアルケニル、Ｃ_２－Ｃ_４０アルキニル、Ｃ_２－Ｃ_４０ヘテロアルキニレン、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールであり；ヘテロシクリル及びヘテロアリールは、Ｎ、Ｓ、Ｐ、及びＯからなる群より選択される１～５個のヘテロ原子を含み、Ｃ_１－Ｃ_４０アルキル、Ｃ_２－Ｃ_４０アルケニル、Ｃ_４－Ｃ_８シクロアルケニル、Ｃ_２－Ｃ_４０アルキニル、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、及びヘテロアリールは、Ｄ、ハロゲン、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、－ＯＨ、－Ｏ－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）、または－Ｎ（Ｃ_１－Ｃ_６アルキル）_２で任意に置換されており、Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ、独立して、非置換であるか、またはハロゲン、ヒドロキシル、アミノ基、スルホニル基、スルホンアミド基、チオール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６エーテル、Ｃ_１－Ｃ_６チオエーテル、Ｃ_１－Ｃ_６スルホン、Ｃ_１－Ｃ_６スルホキシド、Ｃ_１－Ｃ_６１級アミド、Ｃ_１－Ｃ_６２級アミド、ハローＣ_１－Ｃ_６アルキル、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ニトロソ基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６ヘテロシクリル、Ｃ_２－Ｃ_５ヘテロアリール、及びＣ_６－Ｃ_１０アリールのうちの少なくとも１つで置換されており；各Ｒ’は、独立して、水素及びＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択され、
各ｎは、少なくとも１である）。

【0108】

いくつかの実施形態では、Ｚは、１～３０個の炭素原子の直鎖状または分枝状炭素鎖、または１～３０個の原子の直鎖状または分枝状ヘテロ原子含有炭素鎖であり；Ｚは、非置換であるか、または、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ基、スルホニル基、スルホンアミド基、チオール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６エーテル、Ｃ_１－Ｃ_６チオエーテル、Ｃ_１－Ｃ_６スルホン、Ｃ_１－Ｃ_６スルホキシド、Ｃ_１－Ｃ_６１級アミド、Ｃ_１－Ｃ_６２級アミド、ハロＣ_１－Ｃ_６アルキル、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ニトロソ基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６ヘテロシクリル、Ｃ_２－Ｃ_５ヘテロアリール、またはＣ_６－Ｃ_１０アリール（式中、各Ｒ’は、独立して、水素及びＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択される）のうちの少なくとも１つで置換されているか；または、Ｚは、

【化3】

（式中、ｘは、１～１０００である）である。

【0109】

いくつかの実施形態では、Ｚ’’は、１～３０個の炭素原子の直鎖状または分枝状炭素鎖、１～３０個の原子の直鎖状または分枝状ヘテロ原子含有炭素鎖、３～３０個の炭素原子を含有する炭素環、または３～３０個の原子を含有する複素環であり；Ｚは、非置換であるか、または、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ基、スルホニル基、スルホンアミド基、チオール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６エーテル、Ｃ_１－Ｃ_６チオエーテル、Ｃ_１－Ｃ_６スルホン、Ｃ_１－Ｃ_６スルホキシド、Ｃ_１－Ｃ_６１級アミド、Ｃ_１－Ｃ_６２級アミド、ハロＣ_１－Ｃ_６アルキル、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ニトロソ基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６ヘテロシクリル、Ｃ_２－Ｃ_５ヘテロアリール、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールのうちの少なくとも１つで置換されており；各Ｒ’は、独立して、水素及びＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択される。

【0110】

いくつかの実施形態では、Ｚ’’は、１～３０個の炭素原子の直鎖状炭素鎖である。例えば、Ｚ’’は、限定されないが、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_２０アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_１６アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_８アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_６アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_４アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_３アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_２アルキレン、Ｃ_１アルキレンを含むアルキレン基であってよい。代表的なアルキレン基としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ－ブチレン、エテニレン、プロペニレン、ｎ－ブテニレン、プロピニレン、ｎ－ブチニレンなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0111】

いくつかの実施形態では、Ｚ’’は、１～３０個の炭素原子の直鎖状または分枝状炭素鎖、または１～３０個の原子の直鎖状または分枝状ヘテロ原子含有炭素鎖である。

【0112】

いくつかの実施形態では、Ｚは、１～３０個の炭素原子の直鎖状または分枝状炭素鎖、１～３０個の原子の直鎖状または分枝状ヘテロ原子含有炭素鎖、３～３０個の炭素原子を含有する炭素環、または３～３０個の原子を含有する複素環であり；Ｚは、非置換であるか、または、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ基、スルホニル基、スルホンアミド基、チオール、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６エーテル、Ｃ_１－Ｃ_６チオエーテル、Ｃ_１－Ｃ_６スルホン、Ｃ_１－Ｃ_６スルホキシド、Ｃ_１－Ｃ_６１級アミド、Ｃ_１－Ｃ_６２級アミド、ハロＣ_１－Ｃ_６アルキル、カルボキシル基、シアノ基、ニトロ基、ニトロソ基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６ヘテロシクリル、Ｃ_２－Ｃ_５ヘテロアリール、またはＣ_６－Ｃ_１０アリールのうちの少なくとも１つで置換されており；各Ｒ’は、独立して、水素及びＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択される。

【0113】

いくつかの実施形態では、Ｚは、１～３０個の炭素原子の直鎖状もしくは分枝状炭素鎖、または１～３０個の原子の直鎖状もしくは分枝状ヘテロ原子含有炭素鎖である。いくつかの実施形態では、Ｚは、１～３０個の炭素原子の直鎖状炭素鎖である。例えば、Ｚは、限定されないが、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_２０アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_１６アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_８アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_６アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_４アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_３アルキレン、Ｃ_１－Ｃ_２アルキレン、Ｃ_１アルキレンを含むアルキレン基であってよい。代表的なアルキレン基としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ－ブチレン、エテニレン、プロペニレン、ｎ－ブテニレン、プロピニレン、ｎ－ブチニレンなどが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｚは、１～３０個の炭素原子の分枝状炭素鎖である。いくつかの実施形態では、Ｚは、１～３０個の原子の直鎖状または分枝状ヘテロ原子含有炭素鎖である。例えば、Ｚは、限定されないが、Ｏ、Ｎ、Ｓ、またはＰを含むヘテロ原子で置換された炭素原子のうちの１つ以上を有する直鎖状または分枝状炭素鎖であってよい。いくつかの実施形態では、Ｚは、１から１０個の炭素原子の直鎖状または分枝状炭素鎖である。いくつかの実施形態では、Ｚは、

【化4】

であり、ｘは、１～１０００である。いくつかの実施形態では、Ｚは、

【化5】

である。

【0114】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１及びＲ_２は、独立して、Ｃ_１－Ｃ_２０アルキルである。例えば、Ｒ_１及びＲ_２は、Ｃ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、Ｃ_８、Ｃ_９、Ｃ_１０、Ｃ_１１、Ｃ_１２、Ｃ_１３、Ｃ_１４、Ｃ_１５、Ｃ_１６、Ｃ_１７、Ｃ_１８、Ｃ_１９、またはＣ_２０アルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、２－メチル－１－プロピル、２－メチル－２－プロピル、２－メチル－１－ブチル、３－メチル－１－ブチル、２－メチル－３－ブチル、２，２－ジメチル－１－プロピル、２－メチル－１－ペンチル、３－メチル－１－ペンチル、４－メチル－１－ペンチル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、２，２－ジメチル－１－ブチル、３，３－ジメチル－１－ブチル、２－エチル－１－ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシル、ｎ－ウンデシル、ｎ－ドデシル、ｎ－トリデシル、ｎ－テトラデシル、ｎ－ペンタデシル、ｎ－ヘキサデシル、ｎ－ヘプタデシル、ｎ－オクタデシル、ｎ－ノナデシル、またはｎ－イコシルであってよい。いくつかの実施形態では、Ｒ_１及びＲ_２は、独立して、非置換である。いくつかの実施形態では、Ｒ_１及びＲ_２は、独立して、置換されている。いくつかの実施形態では、Ｒ_１及びＲ_２は、独立して、

【化6】

からなる群から選択される。

【0115】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１は、

【化7】

であり、Ｒ_２は、

【化8】

である。

【0116】

いくつかの実施形態では、Ｒ_１は、

【化9】

であり、Ｒ_２は、

【化10】

である。

【0117】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、以下を含む：

【化11】

【0118】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、以下を含む：

【化12】

【0119】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、以下を含む：

【化13】

【0120】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、以下を含む：

【化14】

（式中、
Ｊは、Ｏであり、Ｚは、

【化15】

であり、ｘは、１～１０００である）。

【0121】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、以下を含む：

【化16】

【0122】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、以下を含む：

【化17】

（式中、
Ｒ_１は、

【化18】

であり、
Ｒ_２は、

【化19】

から選択される）。

【0123】

いくつかの実施形態では、ポリプレックスは、核酸構成成分、及び以下を含むポリマーを含む：

【化20】

（式中、
Ｊは、Ｏであり、Ｚは、

【化21】

であり、ｘは、１～１０００であり、
Ｒ_１は、

【化22】

であり、
Ｒ_２は、

【化23】

である）。

【0124】

いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約０．５未満の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する。例えば、本開示のポリマーは、約０．０１～約０．４９の範囲の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する。例えば、本開示のポリマーは、約０．０１、約０．０２、約０．０３、約０．０４、約０．０５、約０．０６、約０．０７、約０．０８、約０．０９、約０．１０、約０．１１、約０．１２、約０．１３、約０．１４、約０．１５、約０．１６、約０．１７、約０．１８、約０．１９、約０．２０、約０．２１、約０．２２、約０．２３、約０．２４、約０．２５、約０．２６、約０．２７、約０．２８、約０．２９、約０．３０、約０．３１、約０．３２、約０．３３、約０．３４、約０．３５、約０．３６、約０．３７、約０．３８、約０．３９、約０．４０、約０．４１、約０．４２、約０．４３、約０．４４、約０．４５、約０．４６、約０．４７、約０．４８から、約０．４９まで（その間の全ての範囲を含む）の範囲の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約０．２～約０．５の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する。

【0125】

いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約０．０１、約０．０２、約０．０３、約０．０４、約０．０５、約０．０６、約０．０７、約０．０８、約０．０９、約０．１０、約０．１１、約０．１２、約０．１３、約０．１４、約０．１５、約０．１６、約０．１７、約０．１８、約０．１９、約０．２０、約０．２１、約０．２２、約０．２３、約０．２４、約０．２５、約０．２６、約０．２７、約０．２８、約０．２９、約０．３０、約０．３１、約０．３２、約０．３３、約０．３４、約０．３５、約０．３６、約０．３７、約０．３８、約０．３９、約０．４０、約０．４１、約０．４２、約０．４３、約０．４４、約０．４５、約０．４６、約０．４７、約０．４８、または約０．４９の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する。

【0126】

いくつかの実施形態では、ポリマーは、約０．５未満の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約０．２～約０．５の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する。

【0127】

「多分散指数」（ＰＤＩ）という用語は、所与のポリマー試料中の分子量分布の程度を指す。多分散性指数は、重量平均分子量（Ｍｗ）を数平均分子量（Ｍｎ）で除することにより計算される。本明細書で使用される場合、「重量平均分子量」という用語は、一般に、そのサイズに応じて、ポリマー分子の寄与に依存する分子量測定値を指す。本明細書で使用される場合、「数平均分子量」という用語は、一般に、試料中の全てのポリマー分子の総重量を、試料中のポリマー分子の総数で除することにより計算される分子量測定値を指す。これらの用語は、当業者らに周知である。

【0128】

いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約１．０１～約８．０のＰＤＩを有する。例えば、ＰＤＩは、約１．０１、約１．０２、約１．０３、約１．０４、約１．０５、約１．０６、約１．０７、約１．０８、約１．０９、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９から、約８．０まで（その間の全ての範囲を含む）の範囲であってよい。

【0129】

いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約１．０１、約１．０２、約１．０３、約１．０４、約１．０５、約１．０６、約１．０７、約１．０８、約１．０９、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、または約８．０のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約２．５のＰＤＩを有する。

【0130】

いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約１．０１～約８．０のＰＤＩを有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約２．５のＰＤＩを有する。

【0131】

いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、少なくとも３ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約３ｋＤａ～約２００ｋＤａのＭ_Ｗを有する。従って、本開示のポリマーは、約３ｋＤａ、約４ｋＤａ、約５ｋＤａ、約６ｋＤａ、約７ｋＤａ、約８ｋＤａ、約９ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約１１ｋＤａ、約１２ｋＤａ、約１３ｋＤａ、約１４ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約１６ｋＤａ、約１７ｋＤａ、約１８ｋＤａ、約１９ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２１ｋＤａ、約２２ｋＤａ、約２３ｋＤａ、約２４ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約２６ｋＤａ、約２７ｋＤａ、約２８ｋＤａ、約２９ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３１ｋＤａ、約３２ｋＤａ、約３３ｋＤａ、約３４ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約３６ｋＤａ、約３７ｋＤａ、約３８ｋＤａ、約３９ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約４１ｋＤａ、約４２ｋＤａ、約４３ｋＤａ、約４４ｋＤａ、約４５ｋＤａ、約４６ｋＤａ、約４７ｋＤａ、約４８ｋＤａ、約４９ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約５１ｋＤａ、約５２ｋＤａ、約５３ｋＤａ、約５４ｋＤａ、約５５ｋＤａ、約５６ｋＤａ、約５７ｋＤａ、約５８ｋＤａ、約５９ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約６１ｋＤａ、約６２ｋＤａ、約６３ｋＤａ、約６４ｋＤａ、約６５ｋＤａ、約６６ｋＤａ、約６７ｋＤａ、約６８ｋＤａ、約６９ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約７１ｋＤａ、約７２ｋＤａ、約７３ｋＤａ、約７４ｋＤａ、約７５ｋＤａ、約７６ｋＤａ、約７７ｋＤａ、約７８ｋＤａ、約７９ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約８１ｋＤａ、約８２ｋＤａ、約８３ｋＤａ、約８４ｋＤａ、約８５ｋＤａ、約８６ｋＤａ、約８７ｋＤａ、約８８ｋＤａ、約８９ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約９１ｋＤａ、約９２ｋＤａ、約９３ｋＤａ、約９４ｋＤａ、約９５ｋＤａ、約９６ｋＤａ、約９７ｋＤａ、約９８ｋＤａ、約９９ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１０１ｋＤａ、約１０２ｋＤａ、約１０３ｋＤａ、約１０４ｋＤａ、約１０５ｋＤａ、約１０６ｋＤａ、約１０７ｋＤａ、約１０８ｋＤａ、約１０９ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１１１ｋＤａ、約１１２ｋＤａ、約１１３ｋＤａ、約１１４ｋＤａ、約１１５ｋＤａ、約１１６ｋＤａ、約１１７ｋＤａ、約１１８ｋＤａ、約１１９ｋＤａ、約１２０ｋＤａ、約１２１ｋＤａ、約１２２ｋＤａ、約１２３ｋＤａ、約１２４ｋＤａ、約１２５ｋＤａ、約１２６ｋＤａ、約１２７ｋＤａ、約１２８ｋＤａ、約１２９ｋＤａ、約１３０ｋＤａ、約１３１ｋＤａ、約１３２ｋＤａ、約１３３ｋＤａ、約１３４ｋＤａ、約１３５ｋＤａ、約１３６ｋＤａ、約１３７ｋＤａ、約１３８ｋＤａ、約１３９ｋＤａ、約１４０ｋＤａ、約１４１ｋＤａ、約１４２ｋＤａ、約１４３ｋＤａ、約１４４ｋＤａ、約１４５ｋＤａ、約１４６ｋＤａ、約１４７ｋＤａ、約１４８ｋＤａ、約１４９ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約１５１ｋＤａ、約１５２ｋＤａ、約１５３ｋＤａ、約１５４ｋＤａ、約１５５ｋＤａ、約１５６ｋＤａ、約１５７ｋＤａ、約１５８ｋＤａ、約１５９ｋＤａ、約１６０ｋＤａ、約１６１ｋＤａ、約１６２ｋＤａ、約１６３ｋＤａ、約１６４ｋＤａ、約１６５ｋＤａ、約１６６ｋＤａ、約１６７ｋＤａ、約１６８ｋＤａ、約１６９ｋＤａ、約１７０ｋＤａ、約１７１ｋＤａ、約１７２ｋＤａ、約１７３ｋＤａ、約１７４ｋＤａ、約１７５ｋＤａ、約１７６ｋＤａ、約１７７ｋＤａ、約１７８ｋＤａ、約１７９ｋＤａ、約１８０ｋＤａ、約１８１ｋＤａ、約１８２ｋＤａ、約１８３ｋＤａ、約１８４ｋＤａ、約１８５ｋＤａ、約１８６ｋＤａ、約１８７ｋＤａ、約１８８ｋＤａ、約１８９ｋＤａ、約１９０ｋＤａ、約１９１ｋＤａ、約１９２ｋＤａ、約１９３ｋＤａ、約１９４ｋＤａ、約１９５ｋＤａ、約１９６ｋＤａ、約１９７ｋＤａ、約１９８ｋＤａ、約１９９ｋＤａから、約２００ｋＤａまで（その間の全ての範囲を含む）の範囲のＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約５ｋＤａ～５０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約１０ｋＤａ～５０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。

【0132】

いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約３ｋＤａ、約４ｋＤａ、約５ｋＤａ、約６ｋＤａ、約７ｋＤａ、約８ｋＤａ、約９ｋＤａ、約１０ｋＤａ、約１１ｋＤａ、約１２ｋＤａ、約１３ｋＤａ、約１４ｋＤａ、約１５ｋＤａ、約１６ｋＤａ、約１７ｋＤａ、約１８ｋＤａ、約１９ｋＤａ、約２０ｋＤａ、約２１ｋＤａ、約２２ｋＤａ、約２３ｋＤａ、約２４ｋＤａ、約２５ｋＤａ、約２６ｋＤａ、約２７ｋＤａ、約２８ｋＤａ、約２９ｋＤａ、約３０ｋＤａ、約３１ｋＤａ、約３２ｋＤａ、約３３ｋＤａ、約３４ｋＤａ、約３５ｋＤａ、約３６ｋＤａ、約３７ｋＤａ、約３８ｋＤａ、約３９ｋＤａ、約４０ｋＤａ、約４１ｋＤａ、約４２ｋＤａ、約４３ｋＤａ、約４４ｋＤａ、約４５ｋＤａ、約４６ｋＤａ、約４７ｋＤａ、約４８ｋＤａ、約４９ｋＤａ、約５０ｋＤａ、約５１ｋＤａ、約５２ｋＤａ、約５３ｋＤａ、約５４ｋＤａ、約５５ｋＤａ、約５６ｋＤａ、約５７ｋＤａ、約５８ｋＤａ、約５９ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約６１ｋＤａ、約６２ｋＤａ、約６３ｋＤａ、約６４ｋＤａ、約６５ｋＤａ、約６６ｋＤａ、約６７ｋＤａ、約６８ｋＤａ、約６９ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約７１ｋＤａ、約７２ｋＤａ、約７３ｋＤａ、約７４ｋＤａ、約７５ｋＤａ、約７６ｋＤａ、約７７ｋＤａ、約７８ｋＤａ、約７９ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約８１ｋＤａ、約８２ｋＤａ、約８３ｋＤａ、約８４ｋＤａ、約８５ｋＤａ、約８６ｋＤａ、約８７ｋＤａ、約８８ｋＤａ、約８９ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約９１ｋＤａ、約９２ｋＤａ、約９３ｋＤａ、約９４ｋＤａ、約９５ｋＤａ、約９６ｋＤａ、約９７ｋＤａ、約９８ｋＤａ、約９９ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１０１ｋＤａ、約１０２ｋＤａ、約１０３ｋＤａ、約１０４ｋＤａ、約１０５ｋＤａ、約１０６ｋＤａ、約１０７ｋＤａ、約１０８ｋＤａ、約１０９ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１１１ｋＤａ、約１１２ｋＤａ、約１１３ｋＤａ、約１１４ｋＤａ、約１１５ｋＤａ、約１１６ｋＤａ、約１１７ｋＤａ、約１１８ｋＤａ、約１１９ｋＤａ、約１２０ｋＤａ、約１２１ｋＤａ、約１２２ｋＤａ、約１２３ｋＤａ、約１２４ｋＤａ、約１２５ｋＤａ、約１２６ｋＤａ、約１２７ｋＤａ、約１２８ｋＤａ、約１２９ｋＤａ、約１３０ｋＤａ、約１３１ｋＤａ、約１３２ｋＤａ、約１３３ｋＤａ、約１３４ｋＤａ、約１３５ｋＤａ、約１３６ｋＤａ、約１３７ｋＤａ、約１３８ｋＤａ、約１３９ｋＤａ、約１４０ｋＤａ、約１４１ｋＤａ、約１４２ｋＤａ、約１４３ｋＤａ、約１４４ｋＤａ、約１４５ｋＤａ、約１４６ｋＤａ、約１４７ｋＤａ、約１４８ｋＤａ、約１４９ｋＤａ、約１５０ｋＤａ、約１５１ｋＤａ、約１５２ｋＤａ、約１５３ｋＤａ、約１５４ｋＤａ、約１５５ｋＤａ、約１５６ｋＤａ、約１５７ｋＤａ、約１５８ｋＤａ、約１５９ｋＤａ、約１６０ｋＤａ、約１６１ｋＤａ、約１６２ｋＤａ、約１６３ｋＤａ、約１６４ｋＤａ、約１６５ｋＤａ、約１６６ｋＤａ、約１６７ｋＤａ、約１６８ｋＤａ、約１６９ｋＤａ、約１７０ｋＤａ、約１７１ｋＤａ、約１７２ｋＤａ、約１７３ｋＤａ、約１７４ｋＤａ、約１７５ｋＤａ、約１７６ｋＤａ、約１７７ｋＤａ、約１７８ｋＤａ、約１７９ｋＤａ、約１８０ｋＤａ、約１８１ｋＤａ、約１８２ｋＤａ、約１８３ｋＤａ、約１８４ｋＤａ、約１８５ｋＤａ、約１８６ｋＤａ、約１８７ｋＤａ、約１８８ｋＤａ、約１８９ｋＤａ、約１９０ｋＤａ、約１９１ｋＤａ、約１９２ｋＤａ、約１９３ｋＤａ、約１９４ｋＤａ、約１９５ｋＤａ、約１９６ｋＤａ、約１９７ｋＤａ、約１９８ｋＤａ、約１９９ｋＤａ、～約２００ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約５ｋＤａ～５０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約１０ｋＤａ～５０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約１０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約２０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約３０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは、約４０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。

【0133】

いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、少なくとも３ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約５ｋＤａ～５０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかの実施形態では、本開示のポリマーは、約１０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。

【0134】

いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分は、約０．１：１～約２００：１（ｗ／ｗ）の比で混合される。例えば、ポリマーと核酸構成成分は、約０．１：１、約０．２：１、約０．３：１、約０．４：１、約０．５：１、約０．６：１、約０．７：１、約０．８：１、約０．９：１、約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１１：１、約１２：１、約１３：１、約１４：１、約１５：１、約１６：１、約１７：１、約１８：１、約１９：１、約２０：１、約２１：１、約２２：１、約２３：１、約２４：１、約２５：１、約２６：１、約２７：１、約２８：１、約２９：１、約３０：１、約３１：１、約３２：１、約３３：１、約３４：１、約３５：１、約３６：１、約３７：１、約３８：１、約３９：１、約４０：１、約４１：１、約４２：１、約４３：１、約４４：１、約４５：１、約４６：１、約４７：１、約４８：１、約４９：１、約５０：１、約５１：１、約５２：１、約５３：１、約５４：１、約５５：１、約５６：１、約５７：１、約５８：１、約５９：１、約６０：１、約６１：１、約６２：１、約６３：１、約６４：１、約６５：１、約６６：１、約６７：１、約６８：１、約６９：１、約７０：１、約７１：１、約７２：１、約７３：１、約７４：１、約７５：１、約７６：１、約７７：１、約７８：１、約７９：１、約８０：１、約８１：１、約８２：１、約８３：１、約８４：１、約８５：１、約８６：１、約８７：１、約８８：１、約８９：１、約９０：１、約９１：１、約９２：１、約９３：１、約９４：１、約９５：１、約９６：１、約９７：１、約９８：１、約９９：１、約１００：１、約１０１：１、約１０２：１、約１０３：１、約１０４：１、約１０５：１、約１０６：１、約１０７：１、約１０８：１、約１０９：１、約１１０：１、約１１１：１、約１１２：１、約１１３：１、約１１４：１、約１１５：１、約１１６：１、約１１７：１、約１１８：１、約１１９：１、約１２０：１、約１２１：１、約１２２：１、約１２３：１、約１２４：１、約１２５：１、約１２６：１、約１２７：１、約１２８：１、約１２９：１、約１３０：１、約１３１：１、約１３２：１、約１３３：１、約１３４：１、約１３５：１、約１３６：１、約１３７：１、約１３８：１、約１３９：１、約１４０：１、約１４１：１、約１４２：１、約１４３：１、約１４４：１、約１４５：１、約１４６：１、約１４７：１、約１４８：１、約１４９：１、約１５０：１、約１５１：１、約１５２：１、約１５３：１、約１５４：１、約１５５：１、約１５６：１、約１５７：１、約１５８：１、約１５９：１、約１６０：１、約１６１：１、約１６２：１、約１６３：１、約１６４：１、約１６５：１、約１６６：１、約１６７：１、約１６８：１、約１６９：１、約１７０：１、約１７１：１、約１７２：１、約１７３：１、約１７４：１、約１７５：１、約１７６：１、約１７７：１、約１７８：１、約１７９：１、約１８０：１、約１８１：１、約１８２：１、約１８３：１、約１８４：１、約１８５：１、約１８６：１、約１８７：１、約１８８：１、約１８９：１、約１９０：１、約１９１：１、約１９２：１、約１９３：１、約１９４：１、約１９５：１、約１９６：１、約１９７：１、約１９８：１、約１９９：１から、約２００：１まで（その間の全ての範囲を含む）の範囲の比で混合される。いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分は、約２０：１～約８０：１（ｗ／ｗ）の比で混合される。

【0135】

いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分は、約０．１：１、約０．２：１、約０．３：１、約０．４：１、約０．５：１、約０．６：１、約０．７：１、約０．８：１、約０．９：１、約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１１：１、約１２：１、約１３：１、約１４：１、約１５：１、約１６：１、約１７：１、約１８：１、約１９：１、約２０：１、約２１：１、約２２：１、約２３：１、約２４：１、約２５：１、約２６：１、約２７：１、約２８：１、約２９：１、約３０：１、約３１：１、約３２：１、約３３：１、約３４：１、約３５：１、約３６：１、約３７：１、約３８：１、約３９：１、約４０：１、約４１：１、約４２：１、約４３：１、約４４：１、約４５：１、約４６：１、約４７：１、約４８：１、約４９：１、約５０：１、約５１：１、約５２：１、約５３：１、約５４：１、約５５：１、約５６：１、約５７：１、約５８：１、約５９：１、約６０：１、約６１：１、約６２：１、約６３：１、約６４：１、約６５：１、約６６：１、約６７：１、約６８：１、約６９：１、約７０：１、約７１：１、約７２：１、約７３：１、約７４：１、約７５：１、約７６：１、約７７：１、約７８：１、約７９：１、約８０：１、約８１：１、約８２：１、約８３：１、約８４：１、約８５：１、約８６：１、約８７：１、約８８：１、約８９：１、約９０：１、約９１：１、約９２：１、約９３：１、約９４：１、約９５：１、約９６：１、約９７：１、約９８：１、約９９：１、約１００：１、約１０１：１、約１０２：１、約１０３：１、約１０４：１、約１０５：１、約１０６：１、約１０７：１、約１０８：１、約１０９：１、約１１０：１、約１１１：１、約１１２：１、約１１３：１、約１１４：１、約１１５：１、約１１６：１、約１１７：１、約１１８：１、約１１９：１、約１２０：１、約１２１：１、約１２２：１、約１２３：１、約１２４：１、約１２５：１、約１２６：１、約１２７：１、約１２８：１、約１２９：１、約１３０：１、約１３１：１、約１３２：１、約１３３：１、約１３４：１、約１３５：１、約１３６：１、約１３７：１、約１３８：１、約１３９：１、約１４０：１、約１４１：１、約１４２：１、約１４３：１、約１４４：１、約１４５：１、約１４６：１、約１４７：１、約１４８：１、約１４９：１、約１５０：１、約１５１：１、約１５２：１、約１５３：１、約１５４：１、約１５５：１、約１５６：１、約１５７：１、約１５８：１、約１５９：１、約１６０：１、約１６１：１、約１６２：１、約１６３：１、約１６４：１、約１６５：１、約１６６：１、約１６７：１、約１６８：１、約１６９：１、約１７０：１、約１７１：１、約１７２：１、約１７３：１、約１７４：１、約１７５：１、約１７６：１、約１７７：１、約１７８：１、約１７９：１、約１８０：１、約１８１：１、約１８２：１、約１８３：１、約１８４：１、約１８５：１、約１８６：１、約１８７：１、約１８８：１、約１８９：１、約１９０：１、約１９１：１、約１９２：１、約１９３：１、約１９４：１、約１９５：１、約１９６：１、約１９７：１、約１９８：１、約１９９：１、または約２００：１の比で混合される。いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分は、約３０：１（ｗ／ｗ）の比で混合される。

【0136】

いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約３ｋＤａ～約２００ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約５ｋＤａ～約５０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約１０ｋＤａ～５０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約５ｋＤａ～約１５ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約１０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約２０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約３０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約４０ｋＤａのＭ_Ｗを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約０．５未満の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約０．３～約０．５の範囲の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約１．０～約８．０のＰＤＩを有する。いくつかのさらなる実施形態では、ポリマーは、約２．５のＰＤＩである。

【0137】

一態様では、ポリマーは、ＨＰＡＥである。

【0138】

いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分は、ポリプレックス中に、約０．１：１～約２００：１（ｗ／ｗ）の比で存在する。例えば、ポリマー及び核酸構成成分は、ポリプレックス中に、約０．１：１、約０．２：１、約０．３：１、約０．４：１、約０．５：１、約０．６：１、約０．７：１、約０．８：１、約０．９：１、約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１１：１、約１２：１、約１３：１、約１４：１、約１５：１、約１６：１、約１７：１、約１８：１、約１９：１、約２０：１、約２１：１、約２２：１、約２３：１、約２４：１、約２５：１、約２６：１、約２７：１、約２８：１、約２９：１、約３０：１、約３１：１、約３２：１、約３３：１、約３４：１、約３５：１、約３６：１、約３７：１、約３８：１、約３９：１、約４０：１、約４１：１、約４２：１、約４３：１、約４４：１、約４５：１、約４６：１、約４７：１、約４８：１、約４９：１、約５０：１、約５１：１、約５２：１、約５３：１、約５４：１、約５５：１、約５６：１、約５７：１、約５８：１、約５９：１、約６０：１、約６１：１、約６２：１、約６３：１、約６４：１、約６５：１、約６６：１、約６７：１、約６８：１、約６９：１、約７０：１、約７１：１、約７２：１、約７３：１、約７４：１、約７５：１、約７６：１、約７７：１、約７８：１、約７９：１、約８０：１、約８１：１、約８２：１、約８３：１、約８４：１、約８５：１、約８６：１、約８７：１、約８８：１、約８９：１、約９０：１、約９１：１、約９２：１、約９３：１、約９４：１、約９５：１、約９６：１、約９７：１、約９８：１、約９９：１、約１００：１、約１０１：１、約１０２：１、約１０３：１、約１０４：１、約１０５：１、約１０６：１、約１０７：１、約１０８：１、約１０９：１、約１１０：１、約１１１：１、約１１２：１、約１１３：１、約１１４：１、約１１５：１、約１１６：１、約１１７：１、約１１８：１、約１１９：１、約１２０：１、約１２１：１、約１２２：１、約１２３：１、約１２４：１、約１２５：１、約１２６：１、約１２７：１、約１２８：１、約１２９：１、約１３０：１、約１３１：１、約１３２：１、約１３３：１、約１３４：１、約１３５：１、約１３６：１、約１３７：１、約１３８：１、約１３９：１、約１４０：１、約１４１：１、約１４２：１、約１４３：１、約１４４：１、約１４５：１、約１４６：１、約１４７：１、約１４８：１、約１４９：１、約１５０：１、約１５１：１、約１５２：１、約１５３：１、約１５４：１、約１５５：１、約１５６：１、約１５７：１、約１５８：１、約１５９：１、約１６０：１、約１６１：１、約１６２：１、約１６３：１、約１６４：１、約１６５：１、約１６６：１、約１６７：１、約１６８：１、約１６９：１、約１７０：１、約１７１：１、約１７２：１、約１７３：１、約１７４：１、約１７５：１、約１７６：１、約１７７：１、約１７８：１、約１７９：１、約１８０：１、約１８１：１、約１８２：１、約１８３：１、約１８４：１、約１８５：１、約１８６：１、約１８７：１、約１８８：１、約１８９：１、約１９０：１、約１９１：１、約１９２：１、約１９３：１、約１９４：１、約１９５：１、約１９６：１、約１９７：１、約１９８：１、約１９９：１から、約２００：１まで（その範囲の全ての範囲を含む）の範囲の比で存在する。いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分は、ポリプレックス中に、約２０：１～約８０：１（ｗ／ｗ）の比で存在する。

【0139】

いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分は、ポリプレックス中に、約０．１：１、約０．２：１、約０．３：１、約０．４：１、約０．５：１、約０．６：１、約０．７：１、約０．８：１、約０．９：１、約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、約５：１、約６：１、約７：１、約８：１、約９：１、約１０：１、約１１：１、約１２：１、約１３：１、約１４：１、約１５：１、約１６：１、約１７：１、約１８：１、約１９：１、約２０：１、約２１：１、約２２：１、約２３：１、約２４：１、約２５：１、約２６：１、約２７：１、約２８：１、約２９：１、約３０：１、約３１：１、約３２：１、約３３：１、約３４：１、約３５：１、約３６：１、約３７：１、約３８：１、約３９：１、約４０：１、約４１：１、約４２：１、約４３：１、約４４：１、約４５：１、約４６：１、約４７：１、約４８：１、約４９：１、約５０：１、約５１：１、約５２：１、約５３：１、約５４：１、約５５：１、約５６：１、約５７：１、約５８：１、約５９：１、約６０：１、約６１：１、約６２：１、約６３：１、約６４：１、約６５：１、約６６：１、約６７：１、約６８：１、約６９：１、約７０：１、約７１：１、約７２：１、約７３：１、約７４：１、約７５：１、約７６：１、約７７：１、約７８：１、約７９：１、約８０：１、約８１：１、約８２：１、約８３：１、約８４：１、約８５：１、約８６：１、約８７：１、約８８：１、約８９：１、約９０：１、約９１：１、約９２：１、約９３：１、約９４：１、約９５：１、約９６：１、約９７：１、約９８：１、約９９：１、約１００：１、約１０１：１、約１０２：１、約１０３：１、約１０４：１、約１０５：１、約１０６：１、約１０７：１、約１０８：１、約１０９：１、約１１０：１、約１１１：１、約１１２：１、約１１３：１、約１１４：１、約１１５：１、約１１６：１、約１１７：１、約１１８：１、約１１９：１、約１２０：１、約１２１：１、約１２２：１、約１２３：１、約１２４：１、約１２５：１、約１２６：１、約１２７：１、約１２８：１、約１２９：１、約１３０：１、約１３１：１、約１３２：１、約１３３：１、約１３４：１、約１３５：１、約１３６：１、約１３７：１、約１３８：１、約１３９：１、約１４０：１、約１４１：１、約１４２：１、約１４３：１、約１４４：１、約１４５：１、約１４６：１、約１４７：１、約１４８：１、約１４９：１、約１５０：１、約１５１：１、約１５２：１、約１５３：１、約１５４：１、約１５５：１、約１５６：１、約１５７：１、約１５８：１、約１５９：１、約１６０：１、約１６１：１、約１６２：１、約１６３：１、約１６４：１、約１６５：１、約１６６：１、約１６７：１、約１６８：１、約１６９：１、約１７０：１、約１７１：１、約１７２：１、約１７３：１、約１７４：１、約１７５：１、約１７６：１、約１７７：１、約１７８：１、約１７９：１、約１８０：１、約１８１：１、約１８２：１、約１８３：１、約１８４：１、約１８５：１、約１８６：１、約１８７：１、約１８８：１、約１８９：１、約１９０：１、約１９１：１、約１９２：１、約１９３：１、約１９４：１、約１９５：１、約１９６：１、約１９７：１、約１９８：１、約１９９：１、または約２００：１の比で存在する。いくつかの実施形態では、ポリマー及び核酸構成成分は、ポリプレックス中に、約３０：１（ｗ／ｗ）の比で存在する。

【0140】

いくつかの実施形態では、安定化ポリプレックスの粒径は、２μｍ未満である。いくつかの実施形態では、安定化ポリプレックスの粒径は、約３００ｎｍ未満である。いくつかの実施形態では、安定化ポリプレックスの粒径は、約５０ｎｍ、約５１ｎｍ、約５２ｎｍ、約５３ｎｍ、約５４ｎｍ、約５５ｎｍ、約５６ｎｍ、約５７ｎｍ、約５８ｎｍ、約５９ｎｍ、約６０ｎｍ、約６１ｎｍ、約６２ｎｍ、約６３ｎｍ、約６４ｎｍ、約６５ｎｍ、約６６ｎｍ、約６７ｎｍ、約６８ｎｍ、約６９ｎｍ、約７０ｎｍ、約７１ｎｍ、約７２ｎｍ、約７３ｎｍ、約７４ｎｍ、約７５ｎｍ、約７６ｎｍ、約７７ｎｍ、約７８ｎｍ、約７９ｎｍ、約８０ｎｍ、約８１ｎｍ、約８２ｎｍ、約８３ｎｍ、約８４ｎｍ、約８５ｎｍ、約８６ｎｍ、約８７ｎｍ、約８８ｎｍ、約８９ｎｍ、約９０ｎｍ、約９１ｎｍ、約９２ｎｍ、約９３ｎｍ、約９４ｎｍ、約９５ｎｍ、約９６ｎｍ、約９７ｎｍ、約９８ｎｍ、約９９ｎｍ、約１００ｎｍ、約１０１ｎｍ、約１０２ｎｍ、約１０３ｎｍ、約１０４ｎｍ、約１０５ｎｍ、約１０６ｎｍ、約１０７ｎｍ、約１０８ｎｍ、約１０９ｎｍ、約１１０ｎｍ、約１１１ｎｍ、約１１２ｎｍ、約１１３ｎｍ、約１１４ｎｍ、約１１５ｎｍ、約１１６ｎｍ、約１１７ｎｍ、約１１８ｎｍ、約１１９ｎｍ、約１２０ｎｍ、約１２１ｎｍ、約１２２ｎｍ、約１２３ｎｍ、約１２４ｎｍ、約１２５ｎｍ、約１２６ｎｍ、約１２７ｎｍ、約１２８ｎｍ、約１２９ｎｍ、約１３０ｎｍ、約１３１ｎｍ、約１３２ｎｍ、約１３３ｎｍ、約１３４ｎｍ、約１３５ｎｍ、約１３６ｎｍ、約１３７ｎｍ、約１３８ｎｍ、約１３９ｎｍ、約１４０ｎｍ、約１４１ｎｍ、約１４２ｎｍ、約１４３ｎｍ、約１４４ｎｍ、約１４５ｎｍ、約１４６ｎｍ、約１４７ｎｍ、約１４８ｎｍ、約１４９ｎｍ、約１５０ｎｍ、約１５１ｎｍ、約１５２ｎｍ、約１５３ｎｍ、約１５４ｎｍ、約１５５ｎｍ、約１５６ｎｍ、約１５７ｎｍ、約１５８ｎｍ、約１５９ｎｍ、約１６０ｎｍ、約１６１ｎｍ、約１６２ｎｍ、約１６３ｎｍ、約１６４ｎｍ、約１６５ｎｍ、約１６６ｎｍ、約１６７ｎｍ、約１６８ｎｍ、約１６９ｎｍ、約１７０ｎｍ、約１７１ｎｍ、約１７２ｎｍ、約１７３ｎｍ、約１７４ｎｍ、約１７５ｎｍ、約１７６ｎｍ、約１７７ｎｍ、約１７８ｎｍ、約１７９ｎｍ、約１８０ｎｍ、約１８１ｎｍ、約１８２ｎｍ、約１８３ｎｍ、約１８４ｎｍ、約１８５ｎｍ、約１８６ｎｍ、約１８７ｎｍ、約１８８ｎｍ、約１８９ｎｍ、約１９０ｎｍ、約１９１ｎｍ、約１９２ｎｍ、約１９３ｎｍ、約１９４ｎｍ、約１９５ｎｍ、約１９６ｎｍ、約１９７ｎｍ、約１９８ｎｍ、約１９９ｎｍ、約２００ｎｍ、約２０１ｎｍ、約２０２ｎｍ、約２０３ｎｍ、約２０４ｎｍ、約２０５ｎｍ、約２０６ｎｍ、約２０７ｎｍ、約２０８ｎｍ、約２０９ｎｍ、約２１０ｎｍ、約２１１ｎｍ、約２１２ｎｍ、約２１３ｎｍ、約２１４ｎｍ、約２１５ｎｍ、約２１６ｎｍ、約２１７ｎｍ、約２１８ｎｍ、約２１９ｎｍ、約２２０ｎｍ、約２２１ｎｍ、約２２２ｎｍ、約２２３ｎｍ、約２２４ｎｍ、約２２５ｎｍ、約２２６ｎｍ、約２２７ｎｍ、約２２８ｎｍ、約２２９ｎｍ、約２３０ｎｍ、約２３１ｎｍ、約２３２ｎｍ、約２３３ｎｍ、約２３４ｎｍ、約２３５ｎｍ、約２３６ｎｍ、約２３７ｎｍ、約２３８ｎｍ、約２３９ｎｍ、約２４０ｎｍ、約２４１ｎｍ、約２４２ｎｍ、約２４３ｎｍ、約２４４ｎｍ、約２４５ｎｍ、約２４６ｎｍ、約２４７ｎｍ、約２４８ｎｍ、約２４９ｎｍ、約２５０ｎｍ、約２５１ｎｍ、約２５２ｎｍ、約２５３ｎｍ、約２５４ｎｍ、約２５５ｎｍ、約２５６ｎｍ、約２５７ｎｍ、約２５８ｎｍ、約２５９ｎｍ、約２６０ｎｍ、約２６１ｎｍ、約２６２ｎｍ、約２６３ｎｍ、約２６４ｎｍ、約２６５ｎｍ、約２６６ｎｍ、約２６７ｎｍ、約２６８ｎｍ、約２６９ｎｍ、約２７０ｎｍ、約２７１ｎｍ、約２７２ｎｍ、約２７３ｎｍ、約２７４ｎｍ、約２７５ｎｍ、約２７６ｎｍ、約２７７ｎｍ、約２７８ｎｍ、約２７９ｎｍ、約２８０ｎｍ、約２８１ｎｍ、約２８２ｎｍ、約２８３ｎｍ、約２８４ｎｍ、約２８５ｎｍ、約２８６ｎｍ、約２８７ｎｍ、約２８８ｎｍ、約２８９ｎｍ、約２９０ｎｍ、約２９１ｎｍ、約２９２ｎｍ、約２９３ｎｍ、約２９４ｎｍ、約２９５ｎｍ、約２９６ｎｍ、約２９７ｎｍ、約２９８ｎｍ、約２９９ｎｍ、または約３００ｎｍである。いくつかの実施形態では、本開示の安定化ポリプレックスは、約６０ｎｍ～約２５０ｎｍの粒径を有する。いくつかの実施形態では、本開示の安定化ポリプレックスは、約１７５ｎｍ～約２５０ｎｍの粒径を有する。

【0141】

いくつかの実施形態では、安定化ポリプレックスは、わずかに負電荷を有する。いくつかの実施形態では、わずかに正電荷を有するのは、約１０及び４０ｍＶのゼータ電位である。

【0142】

いくつかの実施形態では、本開示の安定化ポリプレックスは、約０ｍＶ、約１ｍＶ、約２ｍＶ、約３ｍＶ、約４ｍＶ、約５ｍＶ、約６ｍＶ、約７ｍＶ、約８ｍＶ、約９ｍＶ、約１０ｍＶ、約１１ｍＶ、約１２ｍＶ、約１３ｍＶ、約１４ｍＶ、約１５ｍＶ、約１６ｍＶ、約１７ｍＶ、約１８ｍＶ、約１９ｍＶ、約２０ｍＶ、約２１ｍＶ、約２２ｍＶ、約２３ｍＶ、約２４ｍＶ、約２５ｍＶ、約２６ｍＶ、約２７ｍＶ、約２８ｍＶ、約２９ｍＶ、約３０ｍＶ、約３１ｍＶ、約３２ｍＶ、約３３ｍＶ、約３４ｍＶ、約３５ｍＶ、約３６ｍＶ、約３７ｍＶ、約３８ｍＶ、約３９ｍＶ、約４０ｍＶ、約４１ｍＶ、約４２ｍＶ、約４３ｍＶ、約４４ｍＶ、約４５ｍＶ、約４６ｍＶ、約４７ｍＶ、約４８ｍＶ、約４９ｍＶ、約５０ｍＶ、約５１ｍＶ、約５２ｍＶ、約５３ｍＶ、約５４ｍＶ、約５５ｍＶ、約５６ｍＶ、約５７ｍＶ、約５８ｍＶ、約５９ｍＶ、約６０ｍＶ、約６１ｍＶ、約６２ｍＶ、約６３ｍＶ、約６４ｍＶ、約６５ｍＶ、約６６ｍＶ、約６７ｍＶ、約６８ｍＶ、約６９ｍＶ、約７０ｍＶ、約７１ｍＶ、約７２ｍＶ、約７３ｍＶ、約７４ｍＶ、約７５ｍＶ、約７６ｍＶ、約７７ｍＶ、約７８ｍＶ、約７８ｍＶ、約７９ｍＶ、約８０ｍＶ、約８１ｍＶ、約８２ｍＶ、約８３ｍＶ、約８４ｍＶ、約８５ｍＶ、約８６ｍＶ、約８７ｍＶ、約８８ｍＶ、約８９ｍＶ、約９０ｍＶ、約９１ｍＶ、約９２ｍＶ、約９３ｍＶ、約９４ｍＶ、約９５ｍＶ、約９６ｍＶ、約９７ｍＶ、約９８ｍＶ、約９９ｍＶ、及び約１００ｍＶ（その間の全ての範囲を含む）を含む、約０ｍＶ～約１００ｍＶのゼータ電位を有する。いくつかの実施形態では、安定化ポリプレックスのゼータ電位は、約３０ｍＶ～約３４ｍＶである。

【0143】

いくつかの実施形態では、本開示の安定化ポリプレックスは、約０ｍＶ、約１ｍＶ、約２ｍＶ、約３ｍＶ、約４ｍＶ、約５ｍＶ、約６ｍＶ、約７ｍＶ、約８ｍＶ、約９ｍＶ、約１０ｍＶ、約１１ｍＶ、約１２ｍＶ、約１３ｍＶ、約１４ｍＶ、約１５ｍＶ、約１６ｍＶ、約１７ｍＶ、約１８ｍＶ、約１９ｍＶ、約２０ｍＶ、約２１ｍＶ、約２２ｍＶ、約２３ｍＶ、約２４ｍＶ、約２５ｍＶ、約２６ｍＶ、約２７ｍＶ、約２８ｍＶ、約２９ｍＶ、約３０ｍＶ、約３１ｍＶ、約３２ｍＶ、約３３ｍＶ、約３４ｍＶ、約３５ｍＶ、約３６ｍＶ、約３７ｍＶ、約３８ｍＶ、約３９ｍＶ、約４０ｍＶ、約４１ｍＶ、約４２ｍＶ、約４３ｍＶ、約４４ｍＶ、約４５ｍＶ、約４６ｍＶ、約４７ｍＶ、約４８ｍＶ、約４９ｍＶ、約５０ｍＶ、約５１ｍＶ、約５２ｍＶ、約５３ｍＶ、約５４ｍＶ、約５５ｍＶ、約５６ｍＶ、約５７ｍＶ、約５８ｍＶ、約５９ｍＶ、約６０ｍＶ、約６１ｍＶ、約６２ｍＶ、約６３ｍＶ、約６４ｍＶ、約６５ｍＶ、約６６ｍＶ、約６７ｍＶ、約６８ｍＶ、約６９ｍＶ、約７０ｍＶ、約７１ｍＶ、約７２ｍＶ、約７３ｍＶ、約７４ｍＶ、約７５ｍＶ、約７６ｍＶ、約７７ｍＶ、約７８ｍＶ、約７８ｍＶ、約７９ｍＶ、約８０ｍＶ、約８１ｍＶ、約８２ｍＶ、約８３ｍＶ、約８４ｍＶ、約８５ｍＶ、約８６ｍＶ、約８７ｍＶ、約８８ｍＶ、約８９ｍＶ、約９０ｍＶ、約９１ｍＶ、約９２ｍＶ、約９３ｍＶ、約９４ｍＶ、約９５ｍＶ、約９６ｍＶ、約９７ｍＶ、約９８ｍＶ、約９９ｍＶ、または約１００ｍＶのゼータ電位を有する。

【0144】

いくつかの実施形態では、安定化ポリプレックスは、球状である。

【0145】

いくつかの実施形態では、ポリプレックスの核酸構成成分は、プラスミド、ナノプラスミド、核酸、ミニサークル、または遺伝子編集システムである。いくつかの実施形態では、ポリプレックスの核酸構成成分は、プラスミドである。いくつかの実施形態では、ポリプレックスの核酸構成成分は、ナノプラスミドである。いくつかの実施形態では、ナノプラスミドは、真核導入遺伝子及び０．５ｋｂ未満のサイズの細菌骨格を含む。いくつかの実施形態では、プラスミドまたはナノプラスミドは、抗生物質耐性マーカーなしのプラスミドまたは抗生物質耐性マーカーなしのナノプラスミドである。いくつかの実施形態では、プラスミドまたはナノプラスミドは、スクロース選択マーカーまたはナンセンスサプレッサーマーカーを含む。

【0146】

いくつかの実施形態では、ポリプレックスの核酸構成成分は、遺伝子編集システムである。いくつかの実施形態では、遺伝子編集システムは、（ｉ）クラスター化され、規則的に間隔があいた短い回文構造の繰り返し（ＣＲＩＳＰＲ）関連（Ｃａｓ）システム；（ｉｉ）転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム；または、（ｉｉｉ）ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システムである。

【0147】

いくつかの実施形態では、核酸構成成分は、ＲＮＡｉ誘導分子である。ＲＮＡｉ誘導分子は、ｓｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、及びマイクロＲＮＡからなる群より選択されてもよい。

【0148】

いくつかの実施形態では、核酸構成成分は、組織特異的プロモーターを含む。

【0149】

いくつかの実施形態では、核酸構成成分は、遺伝性疾患または障害と関連する遺伝子を含む。遺伝性疾患または障害は、タンパク質発現の低下、不存在、または機能不全をもたらす１つ以上の遺伝子の変異により引き起こされ得る。いくつかの実施形態では、遺伝子は、ＣＯＬ７Ａ１、ＬＡＭＢ３、ＡＤＡ、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＣＦＴＲ、ＨＴＴ、ＮＦ１、ＰＨＡ、ＨＢＳ、ＦＥＲＭＴ１、ＫＲＴ１４、ＤＳＰ、ＳＰＩＮＫ５、及びＦＬＧからなる群より選択される。

【0150】

いくつかの実施形態では、遺伝子は、ＣＯＬ７Ａ１であり、遺伝性疾患または障害は、表皮水疱症の一形態である。表皮水疱症には、栄養障害型表皮水疱症（常染色体劣性）、栄養障害型表皮水疱症（限局型バリアント）、痒疹型表皮水疱症、表皮水疱症（前脛骨型）、単純型表皮水疱症（Ｄｏｗｌｉｎｇ－Ｍｅａｒａ型）、単純型表皮水疱症（Ｋｏｅｂｎｅｒ型）、単純型表皮水疱症（劣性１）、単純型表皮水疱症（Ｗｅｂｅｒ－Ｃｏｃｋａｙｎｅ型）、表皮水疱症（致死性棘融解型症）が含まれる。いくつかの実施形態では、遺伝子障害または遺伝性疾患は、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損症、アルファ－１アンチトリプシン欠損症、嚢胞性線維症、ハンチントン病、１型神経線維腫症、フェニルケトン尿症、鎌状赤血球症、孤発性封入体筋炎、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、キンドラー症候群、接合部型表皮水疱症、網状色素性皮膚症、Ｎａｅｇｅｌｉ－Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｅｔｔｉ－Ｊａｄａｓｓｏｈｎ症候群、ネザートン症候群、尋常性魚鱗癬、アトピー性皮膚炎、アッシャー症候群、Ｅｈｌｅｒｓ－Ｄａｎｌｏｓ症候群、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、またはクローン病である。

【0151】

いくつかの実施形態では、遺伝子の配列は、ポリプレックスを細胞に送達した際に、タンパク質発現が最大になるように最適化される。

【0152】

医薬組成物
いくつかの実施形態では、本開示は、凍結保護剤と組み合わせて、本明細書に記載の１つ以上のポリプレックスの有効量を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、凍結保護剤は、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、マンニトール、ソルビトール、アエロジル（コロイド状二酸化ケイ素）、マルトース、ポリ（ビニルピロリドン）、フルクトース、デキストラン、グリセロール、ポリ（ビニルアルコール）、グリシン、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、及びゼラチンからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、凍結保護剤は、トレハロース、スクロース、グルコース、及びマンニトールからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、凍結保護剤は、スクロースである。

【0153】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、凍結乾燥物質である。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物質は、薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて、本明細書に記載の１つ以上のポリプレックスの有効量を含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、凍結保護剤を含む。いくつかの実施形態では、凍結保護剤は、トレハロース、スクロース、グルコース、及びマンニトールからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、凍結保護剤は、スクロースである。

【0154】

いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の１つ以上のポリプレックスを好適な溶媒と組み合わせることを含む。いくつかの実施形態では、好適な溶媒は、水、ジメチルスルホキシド、及びそれらの混合物からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、好適な溶媒は、水を含む。

【0155】

いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
（ａ）本明細書に記載の１つ以上のポリプレックスを好適な溶媒と組み合わせること、
（ｂ）１つ以上の薬学的に許容される賦形剤をステップ（ａ）の混合物に添加すること、及び
（ｃ）ステップ（ｂ）の混合物を凍結乾燥して、凍結乾燥物を得ること。

【0156】

いくつかの実施形態では、ステップ（ｂ）の１つ以上の薬学的に許容される賦形剤は、凍結保護剤を含む。いくつかの実施形態では、凍結保護剤の濃度は、ステップ（ｂ）の混合物の、約２重量％、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、及び約１９重量％（それらの間の全ての範囲を含む）を含む、約１重量％～約２０重量％である。いくつかの実施形態では、凍結保護剤の濃度は、ステップ（ｂ）の混合物の、約１重量％、約２重量％、約３重量％、約４重量％、約５重量％、約６重量％、約７重量％、約８重量％、約９重量％、約１０重量％、約１１重量％、約１２重量％、約１３重量％、約１４重量％、約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％、約１８重量％、約１９重量％、または約２０重量％である。いくつかの実施形態では、凍結保護剤の濃度は、ステップ（ｂ）の混合物の約１重量％である。いくつかの実施形態では、凍結保護剤の濃度は、ステップ（ｂ）の混合物の約３重量％である。いくつかの実施形態では、凍結保護剤の濃度は、ステップ（ｂ）の混合物の約５重量％である。

【実施例】

【0157】

以下の実施例は、本開示を例示するために提供され、それらを限定するものとして解釈されるべきではない。これらの実施例では、別途記載のない限り、全ての部分及びパーセンテージは、重量によるものである。実施例中の略語が以下に示される。

【0158】

実施例１．
例示的な高度分岐ＰＡＥ（ＨＰＡＥ）ポリマーの合成：０．２８ｇのトリメチロールプロパントリアクリラート（ＴＭＰＴＡ）、０．２９ｇのビスフェノールエトキシレートジアクリラート（ＢＥ）及び０．１８ｇの４－アミノ－１－ブタノール（Ｓ４）を、７．５ｍＬのＤＭＳＯに溶解させ、９０℃に到達させる。アクリル酸末端ベースのポリマーを室温で２４時間エンドキャップするために、分子量が５０００～７０００Ｄａの範囲にあると、２．８８ｍＬのＤＭＳＯに溶解させた０．２８８ｇの３－モルホリノプロピルアミン（ＭＰＡ）を添加する。ポリマー生成物を、ジエチルエーテルに３回沈殿させ、真空下で２４時間乾燥させ、次に、後続の研究のために－２０℃で保存する。

【0159】

ポリプレックスの調製：最初に、ＨＰＡＥポリマーを、約１００μｇ／μＬの濃度までＤＭＳＯに溶解させる。ＨＰＡＥポリマー／ＤＮＡの重量比３０：１（ｗ／ｗ）に従って、必要量のＨＰＡＥポリマーストック溶液及び４ｍｇ／ｍＬのナノプラスミドＣＯＬ７Ａ１溶液を、酢酸ナトリウム緩衝液（０．０２５Ｍ、ｐＨ＝５．２）で希釈して必要体積にする。次に、別々のノズルを通して、１０μＬのＨＰＡＥ溶液及び１０μＬのＤＮＡ溶液を混合チャンバーに分注し、２つの溶液を接触させて混合する。新たに形成されたポリプレックスドロップは、シリコンオイル／酢酸ナトリウム緩衝液を含有するわずかに負電荷を有する液体チャネルに流れ込む。ポリプレックスは、０．１～１ｍ／ｓの範囲の速度で、約１０分間の滞留時間の間、液体チャネルを通って運ばれる。経皮投与に適するサイズ及び電荷を有するポリプレックスは、治療的使用のために再懸濁させるために凍結及び凍結乾燥させる。

【0160】

実施形態：
１．１つ以上のポリプレックスを作製するための方法であって、前記方法が、
（ａ）ｉ．第１の液体流中のポリマー、
ｉｉ．第２の液体流中の核酸構成成分、
を提供すること、
（ｂ）第１の液体流中のポリマーを、第２の液体流中の核酸構成成分と接触させて、治療的投与に適するサイズ及び電荷を有するポリプレックスを形成すること、ならびに
（ｃ）ポリプレックスを単離して、安定化ポリプレックスを得ること、
を含む、前記方法。
２．単離が、ポリプレックスを安定化するのに十分な滞留時間の間、液体チャネル内で、ポリプレックスを輸送することを含む、実施形態１に記載の方法。
３．さらに、１つ以上のポリプレックスを評価及び収集することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
４．第１の液体流及び第２の液体流が、溶液である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
５．さらに、経皮投与に適するサイズ及び電荷を有するポリプレックスを提供する速度で、流量調整装置に第１の液体流及び第２の液体流を流すことを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
６．流量調整装置が、容積式ポンプ、シリンジ駆動ポンプ、圧力駆動ポンプ、及び重力供給ポンプからなる群より選択される、実施形態５に記載の方法。
７．前記接触ステップが、ノズル、マイクロ流体混合装置、接触チューブ、液体ブリッジ、縦型混合機、回転二重チューブ、または噴霧器を使用する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
８．接触ステップが、空隙内または液体チャネル内のキャリア流体内で生じる、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
９．安定化ポリプレックスが、わずかに正電荷を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
１０．液体チャネルが、わずかに負に帯電している、実施形態２～９のいずれか１つに記載の方法。
１１．液体チャネルが、キャリア流体に囲まれた水相を含む、実施形態１０に記載の方法。
１２．キャリア流体の密度が、１，３００～２，０００ｋｇ／ｍ^３の範囲の値であり、水相の密度が、９００～１２００ｋｇ／ｍ^３の範囲の値である、実施形態１１に記載の方法。
１３．水相が、酢酸ナトリウム緩衝液を含む、実施形態１２に記載の方法。
１４．キャリア流体が、オイルである、任意の実施形態１１に記載の方法。
１５．オイルが、（ａ）Ｆｌｕｏｒｉｎｅｒｔ ＦＣ－４０（フルオロ炭酸オイル）、（ｂ）シリコンオイル、（ｃ）ミネラルオイル、（ｄ）ペルフルオロ化アミンオイル、（ｅ）フェニルメチルポリシロキサン、及び（ｆ）フェニルメチルポリシロキサンベースのオイル及び添加剤、からなる群より選択される、実施形態１４に記載の方法。
１６．添加剤が、２～８の範囲の親水性－親油性バランス数を有する、実施形態１５に記載の方法。
１７．添加剤が、ポリソルバート添加剤である、実施形態１５に記載の方法。
１８．ポリソルベート添加剤が、ＳＰＡＮ８０、ＳＰＡＮ６５、またはＴｗｅｅｎ２０である、実施形態１７に記載の方法。
１９．水相中の添加剤の濃度が、約０．００１％～約１０％（ｗｔ／ｗｔ％）である、実施形態１５に記載の方法。
２０．単離が、液体チャネル内でポリプレックスを分割することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
２１．分割されたポリプレックス間の空間が、チャネル内の液体の速度により制御される、実施形態２０に記載の方法。
２２．滞留時間が、約１秒～約２０分である、実施形態２～２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．滞留時間が、約１０分である、実施形態２２に記載の方法。
２４．評価が、
液体チャネル内のポリプレックスの屈折率を測定すること、及び
任意に、仕様に適合しない屈折率を有するポリプレックスを除去すること、
を含む、実施形態３～２３のいずれか１つに記載の方法。
２５．さらに、安定化ポリプレックスを濾過、洗浄、凍結、及び／または凍結乾燥することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
２６．ポリマーが、正電荷を有し、核酸構成成分が、負電荷を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
２７．ポリマー及び核酸構成成分が、約０．１：１～約２００：１（ｗ／ｗ）の比で混合される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
２８．ポリマー及び核酸構成成分が、約２０：１～約８０：１（ｗ／ｗ）の比で混合される、実施形態２７に記載の方法。
２９．ポリマー及び核酸構成成分が、約３０：１（ｗ／ｗ）の比で混合される、実施形態２７に記載の方法。
３０．ポリマーが、ＨＰＡＥである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
３１．ポリマー及び核酸構成成分が、ポリプレックス中に約０．１：１～約２００：１（ｗ／ｗ）の比で存在する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
３２．ポリマー及び核酸構成成分が、ポリプレックス中に約２０：１～約８０：１（ｗ／ｗ）の比で存在する、実施形態３１に記載の方法。
３３．ポリマー及び核酸構成成分が、ポリプレックス中に約３０：１（ｗ／ｗ）の比で存在する、実施形態３１に記載の方法。
３４．安定化ポリプレックスの粒径が、約２μｍ未満である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
３５．安定化ポリプレックスの粒径が、約６０ｎｍ～約２５０ｎｍである、実施形態３４に記載の方法。
３６．安定化ポリプレックスの粒径が、約１７５ｎｍ～約２５０ｎｍである、実施形態３４に記載の方法。
３７．安定化ポリプレックスのゼータ電位が、約０ｍＶ～約１００ｍＶである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
３８．安定化ポリプレックスのゼータ電位が、約３０ｍＶ～約３４ｍＶである、実施形態３７に記載の方法。
３９．安定化ポリプレックスが、球状である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
４０．ポリマーが、約１０ｋＤａのＭ_Ｗを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
４１．核酸構成成分が、プラスミド、ナノプラスミド、核酸、ミニサークル、または遺伝子編集システムである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
４２．核酸構成成分が、遺伝性疾患または障害と関連する遺伝子を含む、実施形態４１に記載の方法。
４３．遺伝性疾患または障害が、タンパク質発現の低下、不存在、または機能不全をもたらす１つ以上の遺伝子の変異により引き起こされる、実施形態４２に記載の方法。
４４．遺伝子が、ＣＯＬ７Ａ１、ＬＡＭＢ３、ＡＤＡ、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＣＦＴＲ、ＨＴＴ、ＮＦ１、ＰＨＡ、ＨＢＳ、ＦＥＲＭＴ１、ＫＲＴ１４、ＤＳＰ、ＳＰＩＮＫ５、及びＦＬＧからなる群より選択される、実施形態４３に記載の方法。
４５．遺伝子が、ＣＯＬ７Ａ１であり、遺伝性疾患または障害が、表皮水疱症の一形態である、実施形態４４に記載の方法。
４６．遺伝子の配列が、細胞へのポリプレックスの送達時に、最大タンパク質発現について最適化される、実施形態４５に記載の方法。
４７．ポリマーが、約０．５未満の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
４８．ポリマーが、約０．２～約０．５の、マーク－ハウウィンク方程式で規定されたアルファパラメーターを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
４９．ポリマーが、約１．０１～約８．０のＰＤＩを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
５０．ポリマーが、約２．５のＰＤＩを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
５１．ポリマーが、少なくとも３ｋＤａのＭ_Ｗを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
５２．ポリマーが、約５ｋＤａ～５０ｋＤａのＭ_Ｗを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
５３．ポリマーが、約１０ｋＤａのＭ_Ｗを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
５４．ポリマーが、

【化24】

（式中、
Ｊは、Ｏであり、Ｚは、

【化25】

であり、ｘは、１～１０００であり、
Ｒ_１は、

【化26】

であり、
Ｒ_２は、

【化27】

である）
を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。


参考文献
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【図1】

【国際調査報告】