特表2022-516483抗ヒトインターロイキン－４受容体αのモノクローナル抗体およびその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-02-28
(54)【発明の名称】抗ヒトインターロイキン－４受容体αのモノクローナル抗体およびその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20220218BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20220218BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20220218BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20220218BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20220218BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20220218BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20220218BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20220218BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20220218BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20220218BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20220218BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20220218BHJP
A61P 31/22 20060101ALI20220218BHJP
A61P 13/08 20060101ALI20220218BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20220218BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20220218BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220218BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220218BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20220218BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20220218BHJP
A61P 7/00 20060101ALI20220218BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20220218BHJP
A61P 7/06 20060101ALI20220218BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20220218BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C07K16/28
C12P21/08
A61K39/395 N
A61K39/395 J
A61P17/00
A61P11/06
A61P11/02
A61P19/02
A61P31/22
A61P13/08
A61P11/00
A61P37/08
A61P43/00 111
A61P29/00
A61P1/04
A61P17/06
A61P7/00
A61P37/02
A61P7/06
A61P27/02
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021537939
(86)(22)【出願日】2019-12-25
(85)【翻訳文提出日】2021-06-25
(86)【国際出願番号】 CN2019128156
(87)【国際公開番号】W WO2020135471
(87)【国際公開日】2020-07-02
(31)【優先権主張番号】201811592427.X
(32)【優先日】2018-12-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520451681
【氏名又は名称】江蘇▲筌▼信生物医薬股▲分▼有限公司
【氏名又は名称原語表記】ＱＹＵＮＳ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ １３１０，Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １，Ｎｏ．９０７ Ｙａｏｃｈｅｎｇ Ａｖｅｎｕｅ，Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ，２２５３００，Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100080791
【弁理士】
【氏名又は名称】高島 一
(74)【代理人】
【識別番号】100136629
【弁理士】
【氏名又は名称】鎌田 光宜
(74)【代理人】
【識別番号】100125070
【弁理士】
【氏名又は名称】土井 京子
(74)【代理人】
【識別番号】100121212
【弁理士】
【氏名又は名称】田村 弥栄子
(74)【代理人】
【識別番号】100174296
【弁理士】
【氏名又は名称】當麻 博文
(74)【代理人】
【識別番号】100137729
【弁理士】
【氏名又は名称】赤井 厚子
(74)【代理人】
【識別番号】100151301
【弁理士】
【氏名又は名称】戸崎 富哉
(74)【代理人】
【識別番号】100125081
【弁理士】
【氏名又は名称】小合 宗一
(72)【発明者】
【氏名】裘 霽宛
(72)【発明者】
【氏名】陳 衛
(72)【発明者】
【氏名】裘 之華
(72)【発明者】
【氏名】橋 懐耀
(72)【発明者】
【氏名】呉 亦亮
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE12
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA90X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB36
4C085DD23
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG02
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG05
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA72
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
本発明は、抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）の抗体およびフラグメント、並びにそれらの使用を提供する。前記抗体及びフラグメントは好ましくは、配列番号１～３または１４～１６に示される重鎖相補性決定領域および配列番号４～６または１７～１９に示される軽鎖相補性決定領域を有する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）に結合することができる抗体またはそのフラグメントであって、ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）のループ２に有意に結合することができ、特にｈＩＬ－４Ｒαのループ２におけるＬ４２、Ｌ４３、Ｓ４４、及びＥ４５に有意に結合することができる、抗体またはそのフラグメント。
【請求項2】
前記抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）のループ３に有意に結合せず、特にｈＩＬ－４Ｒαのループ３におけるＭ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｓ７０、Ａ７１、Ｄ７２、およびＮ７３に有意に結合しない、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項3】
前記抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩＬ－４Ｒαに結合するレベルの９０％以上でマーモセットＩＬ－４Ｒαに結合する、請求項１または２に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項4】
ａ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の組換え抗体またはそのフラグメント；またはｂ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の単離されたモノクローナル抗体
である抗体またはそのフラグメントであって、ａ）とｂ）において、ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列は配列番号１に示され、ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列は配列番号２に示され、ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は配列番号３に示され、ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列は配列番号４に示され、ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列は配列番号５に示され、ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は配列番号６に示される、抗体またはそのフラグメント。
【請求項5】
前記抗体またはそのフラグメントは、前記単離されたモノクローナル抗体である、請求項４に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項6】
前記単離されたモノクローナル抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号７に示され、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号８に示される、請求項５に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項7】
前記抗体またはそのフラグメントは、前記組換え抗体またはそのフラグメントである、請求項４に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項8】
前記組換え抗体またはそのフラグメントはヒト化されている、請求項７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項9】
前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項８に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項10】
前記組換え抗体またはそのフラグメントはＩｇＧ４抗体である、請求項９に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項11】
前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号１０に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号１１に示される軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体である、請求項９に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項12】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項13】
ａ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の組換え抗体またはそのフラグメント；またはｂ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の単離されたモノクローナル抗体
である抗体またはそのフラグメントであって、ａ）とｂ）において、ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列は配列番号１４に示され、ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列は配列番号１５に示され、ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は配列番号１６に示され、ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列は配列番号１７に示され、ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列は配列番号１８に示され、ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は配列番号１９に示される、抗体またはそのフラグメント。
【請求項14】
前記抗体またはそのフラグメントは、前記単離されたモノクローナル抗体である、請求項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項15】
前記単離されたモノクローナル抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２に示され、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１３に示される、請求項１４に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項16】
前記抗体またはそのフラグメントは、前記組換え抗体またはそのフラグメントである、請求項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項17】
前記組換え抗体またはそのフラグメントはヒト化されている、請求項１６に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項18】
前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項19】
前記組換え抗体またはそのフラグメントはＩｇＧ４抗体である、請求項１８に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項20】
前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号２０に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号２１に示される軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体である、請求項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項21】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項２０に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項22】
請求項１～１１及び１３～２０のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントをコードする、単離された核酸。
【請求項23】
請求項２２に記載の単離された核酸を含む、宿主細胞。
【請求項24】
請求項５、６、１４または１５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体をコードする核酸を宿主細胞において発現するステップを含む、モノクローナル抗体を産生する方法。
【請求項25】
前記宿主細胞がＣＨＯまたはＨＥＫ２９３である、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記抗体またはそのフラグメントをコードする核酸を発現するステップを含む、請求項１～４、７～１３、及び１６～２１のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを産生する方法。
【請求項27】
前記宿主細胞がＣＨＯまたはＨＥＫ２９３である、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
請求項２４または２５に記載の方法によって産生される抗体またはそのフラグメント。
【請求項29】
請求項２６または２７に記載の方法によって産生される抗体またはそのフラグメント。
【請求項30】
請求項１～２１、２８及び２９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメント、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項31】
有効量の請求項１～２１、２８及び２９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを、それを必要とするヒト患者に投与するステップを含む、ＩＬ－４またはＩＬ－４／ＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療する方法。
【請求項32】
前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（軽度、中等度、および重度の喘息を含む）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患を含む）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項34】
前記疾患がアトピー性皮膚炎である、請求項３２に記載の方法。
【請求項35】
前記疾患が喘息である、請求項３２に記載の方法。
【請求項36】
ＩＬ－４またはＩＬ－４／ＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療するための、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項37】
前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（軽度、中等度、および重度の喘息を含む）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患を含む）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項38】
前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項39】
ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療するための医薬の調製における、請求項１～２１、２８及び２９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
【請求項40】
前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（軽度、中等度、および重度の喘息を含む）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患を含む）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる、請求項３９に記載の使用。
【請求項41】
前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、請求項３９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は抗体医薬の分野に関する。具体的には、本発明は、抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）の抗体およびそのフラグメント（モノクローナル抗体を含む）並びにそれらの使用に関する。
【背景技術】
【0002】
ヒトインターロイキン－４受容体α（ヒトＩＬ－４Ｒα、またはｈＩＬ－４Ｒα）サブユニットは、ＩＬ－４に高い親和性で結合する１４０ｋＤのＩ型膜貫通タンパク質である。それに結合した後、ＩＬ－４は共通γ鎖（ＩＬ－２などの多くのサイトカインの共通の受容体サブユニット）をリクルートしてＩＬ－４のＩ型受容体を構成するか、ＩＬ－１３Ｒα１をリクルートしてＩＬ－４のＩＩ型受容体（この受容体、ＩＬ－１３に結合してその生物学的効果を媒介することができる）を構成することによって、シグナルを伝達するため、ＩＬ－４Ｒαは、ＩＬ－４、ＩＬ－１３の生物学的活性を媒介することができる。Ｉ型受容体は造血細胞で優勢であり、ＩＩ型受容体は造血細胞と非造血細胞の両方で発現する。ＩＬ－４及びＩＬ－１３がＩ／ＩＩ型受容体を介して、複数の細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好酸球、肥満細胞、好塩基球、気道平滑筋細胞、気道上皮細胞、肺線維芽細胞、及び内皮細胞など）のエフェクター機能を活性化することは、インビトロ研究で示されている。ＩＬ－４は、ナイーブＴｈ細胞（ヘルパーＴ細胞）のＴｈ２への分化と発達を促進する重要なサイトカインであり、Ｂ細胞によるＣＤ２３及びＭＨＣ ＩＩ（主要組織適合遺伝子複合体）の発現、細胞活性化、及びＩｇＥの分泌を促進でき、Ｂ細胞、肥満細胞などによるＩｇＥ受容体発現のアップレギュレーションを促進でき、それらの反応性を高めることができる。同時に、血管内皮細胞からの血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ－１）の放出を促進し、さらにＴ細胞、単球、好酸球／好塩基球の炎症部位への移行を誘導する。
【0003】
ＩＬ－４とＩＬ－４受容体複合体及びＩＬ－４受容体活性のモジュレーターは、Ｐａｕｌ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ７５（１）：３－７，２０１５；Ｏｈ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｒｅｖ． １９（１１５）：４８－５４，２０１０；およびＪｕｎｔｔｉｌａ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９：８８８，２０１８に記載されている。
【0004】
ＩＬ－４受容体阻害剤およびＩＬ－４受容体阻害剤の標的となる疾患を説明するための特許出版物は、米国特許ＵＳ５，７１４，１４６、ＵＳ７，８７２，１１３、ＵＳ８，６７９，４８７、ＵＳ８，８７７，１８９およびＵＳ８，９８０，２７３；米国特許公開ＵＳ２０１９／０１７７４０８；欧州特許公開ＥＰ２７９１１６９；および国際特許公開ＷＯ９４１４９７５；ＷＯ２００１６２２８７；ＷＯ２００５０４７３３１；ＷＯ２００７０８５８１５；ＷＯ２００８０５４６０６；ＷＯ２００８０７６７８４；ＷＯ２００９０８１２０１；ＷＯ２００９１１４８２８；ＷＯ２００９１２１８４７；ＷＯ２００９１２４０９０；ＷＯ２０１００７０３４６；ＷＯ２０１４０３１６１0；ＷＯ２０１４１６５７７１；ＷＯ２０１４１９７４７０；ＷＯ２０１４２０５３６５；ＷＯ２０１５００６５７１；ＷＯ２０１５１２７２２９；ＷＯ２０１５１３０９７５；ＷＯ２０１６０７７６７５；ＷＯ２０１７２１１３１９；ＷＯ２０１８０４５１３０；ＷＯ２０１８０５７７７６； ＷＯ２０１８１０２５９７およびＷＯ２０１９０２８３６７を含む。
【発明の概要】
【0005】
ＩＬ－４は、アトピー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（軽度、中等度、および重度の喘息など）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（炎症性腸疾患など）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、遺伝性アレルギー性皮膚炎、潰瘍性大腸炎、線維症、および腎臓病など、ＩＬ－４及び／またはＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患の発生と発達において重要な役割を果たす。ＩＬ－４と同様に、ＩＬ－１３はアレルギー性疾患の病理学的プロセスと密接に関連しており、杯細胞の過形成、Ｂ細胞から放出される抗体の種類のＩｇＥへの変換、ケモカイン放出の誘導、そして好酸球の走化性を促進し、上皮細胞の線維化と気道の高い反応性を引き起こすことができる。
【0006】
サノフィ（Ｓａｎｏｆｉ）などの企業が研究開発したｈＩＬ－４Ｒαを標的とするモノクローナル抗体薬であるデュピルマブ（商品名Ｄｕｐｉｘｅｎｔ(R)）は、アトピー性皮膚炎の治療薬として米国ＦＤＡから承認されている。
【0007】
第一の方面では、本発明は、新しい抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）のモノクローナル抗体、当該モノクローナル抗体を含む医薬組成物、および当該モノクローナル抗体の製薬用途を提供することを目的とする。
【0008】
本発明の第二の方面は、配列番号１～３または１４～１６に示される重鎖相補性決定領域、及び配列番号４～６または１７～１９に示される軽鎖相補性決定領域を有する、抗ｈＩＬ－４Ｒαの抗体またはそのフラグメントに係る。異なる実施形態は、前記抗体またはそのフラグメントをコードする核酸、前記抗体またはそのフラグメントを調製する方法、前記抗体またはそのフラグメントを使用する治療方法、前記抗体またはそのフラグメントを含む医薬組成物、前記抗体またはそのフラグメントの製薬用途、及び、前記抗体またはそのフラグメントを含む医薬の調製を含む。
【0009】
すなわち、本発明は下記を含む：
１．ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）に結合することができる抗体またはそのフラグメントであって、ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）のループ２に有意に結合することができ、特にｈＩＬ－４Ｒαのループ２におけるＬ４２、Ｌ４３、Ｓ４４、及びＥ４５に有意に結合することができる、抗体またはそのフラグメント。
２．前記抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）のループ３に有意に結合せず、特にｈＩＬ－４Ｒαのループ３におけるＭ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｓ７０、Ａ７１、Ｄ７２、およびＮ７３に有意に結合しない、項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
３．前記抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩＬ－４Ｒαに結合するレベルの９０％以上でマーモセットＩＬ－４Ｒαに結合する、項１または２に記載の抗体またはそのフラグメント。
４．ａ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の組換え抗体またはそのフラグメント；または
ｂ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の単離されたモノクローナル抗体
である抗体またはそのフラグメントであって、ａ）とｂ）において、ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列は配列番号１に示され、ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列は配列番号２に示され、ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は配列番号３に示され、ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列は配列番号４に示され、ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列は配列番号５に示され、ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は配列番号６に示される、抗体またはそのフラグメント。
５．前記抗体またはそのフラグメントは、前記単離されたモノクローナル抗体である、
項４に記載の抗体またはそのフラグメント。
６．前記単離されたモノクローナル抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号７に示され、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号８に示される、項５に記載の抗体またはそのフラグメント。
７．前記抗体またはそのフラグメントは、前記組換え抗体またはそのフラグメントである、項４に記載の抗体またはそのフラグメント。
８．前記組換え抗体またはそのフラグメントはヒト化されている、項７に記載の抗体またはそのフラグメント。
９．前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、項８に記載の抗体またはそのフラグメント。
１０．前記組換え抗体またはそのフラグメントはＩｇＧ４抗体である、項９に記載の抗体またはそのフラグメント。
１１．前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号１０に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号１１に示される軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体である、項９に記載の抗体またはそのフラグメント。
１２．前記抗体がモノクローナル抗体である、項１１に記載の抗体またはそのフラグメント。
１３．ａ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の組換え抗体またはそのフラグメント；または
ｂ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の単離されたモノクローナル抗体
である抗体またはそのフラグメントであって、ａ）とｂ）において、ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列は配列番号１４に示され、ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列は配列番号１５に示され、ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は配列番号１６に示され、ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列は配列番号１７に示され、ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列は配列番号１８に示され、ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は配列番号１９に示される、抗体またはそのフラグメント。
１４．前記抗体またはそのフラグメントは、前記単離されたモノクローナル抗体である、項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。
１５．前記単離されたモノクローナル抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２に示され、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１３に示される、項１４に記載の抗体またはそのフラグメント。
１６．前記抗体またはそのフラグメントは、前記組換え抗体またはそのフラグメントである、項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。
１７．前記組換え抗体またはそのフラグメントはヒト化されている、項１６に記載の抗体またはそのフラグメント。
１８．前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
１９．前記組換え抗体またはそのフラグメントはＩｇＧ４抗体である、項１８に記載の抗体またはそのフラグメント。
２０．前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号２０に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号２１に示される軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体である、項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
２１．前記抗体がモノクローナル抗体である、項２０に記載の抗体またはそのフラグメント。
２２．項１～１１及び１３～２０のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントをコードする、単離された核酸。
２３．項２２に記載の単離された核酸を含む、宿主細胞。
前記核酸はベクター上に存在することができる。ベクターは、任意のタイプ、例えば、発現ベクターなどの組換えベクターであってもよい。複数の宿主細胞のいずれかを使用できる。一実施形態では、宿主細胞は、原核細胞、例えば、大腸菌である。別の実施形態では、宿主細胞は真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞である。
２４．項５、６、１４または１５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体をコードする核酸を宿主細胞において発現するステップを含む、モノクローナル抗体を産生する方法。
２５．前記宿主細胞がＣＨＯまたはＨＥＫ２９３である、項２４に記載の方法。
２６．前記抗体またはそのフラグメントをコードする核酸を発現するステップを含む、項１～４、７～１３、及び１６～２１のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを産生する方法。
２７．前記宿主細胞がＣＨＯまたはＨＥＫ２９３である、項２６に記載の方法。
上記の方法は、モノクローナル抗体を産生するための、適切な宿主細胞において抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）のモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする組換え発現ベクターを含む。特定の実施形態において、この方法は、抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）のモノクローナル抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養してその核酸を発現させることを含む。この方法は、宿主細胞培養物または宿主細胞培地から抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）のモノクローナル抗体を回収することをさらに含むことができる。
２８．項２４または２５に記載の方法によって産生される抗体またはそのフラグメント。
２９．項２６または２７に記載の方法によって産生される抗体またはそのフラグメント。
３０．項１～２１、２８及び２９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメント、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
この医薬組成物は、別の治療剤（例えば、ヒトインターロイキン４受容体αに対する別の抗体（ｈＩＬ－４Ｒα）をさらに含むことができる。
３１．有効量の項１～２１、２８及び２９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを、それを必要とするヒト患者に投与するステップを含む、ＩＬ－４またはＩＬ－４／ＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療する方法。
３２．前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（例えば軽度、中等度、および重度の喘息）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（例えば潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる、項３１に記載の方法。
３３．前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、項３１に記載の方法。
３４．前記疾患がアトピー性皮膚炎である、項３２に記載の方法。
３５．前記疾患が喘息である、項３２に記載の方法。
３６．ＩＬ－４またはＩＬ－４／ＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療するための、項３０に記載の医薬組成物。
３７．前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（例えば軽度、中等度、および重度の喘息）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（例えば潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる、項３６に記載の医薬組成物。
３８．前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、項３６に記載の医薬組成物。
３９．ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療するための医薬の調製における、項１～２１、２８及び２９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
４０．前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（例えば軽度、中等度、および重度の喘息）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（例えば潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる、項３９に記載の使用。
４１．前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、項３９に記載の使用。
１．ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）に結合することができる抗体またはそのフラグメントであって、ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）のループ２に有意に結合することができ、特にｈＩＬ－４Ｒαのループ２におけるＬ４２、Ｌ４３、Ｓ４４、及びＥ４５に有意に結合することができる、抗体またはそのフラグメント。
２．前記抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）のループ３に有意に結合せず、特にｈＩＬ－４Ｒαのループ３におけるＭ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｓ７０、Ａ７１、Ｄ７２、およびＮ７３に有意に結合しない、項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
３．前記抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩＬ－４Ｒαに結合するレベルの９０％以上でマーモセットＩＬ－４Ｒαに結合する、項１または２に記載の抗体またはそのフラグメント。
４．ａ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の組換え抗体またはそのフラグメント；または
ｂ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の単離されたモノクローナル抗体
である抗体またはそのフラグメントであって、ａ）とｂ）において、ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列は配列番号１に示され、ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列は配列番号２に示され、ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は配列番号３に示され、ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列は配列番号４に示され、ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列は配列番号５に示され、ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は配列番号６に示される、抗体またはそのフラグメント。
５．前記抗体またはそのフラグメントは、前記単離されたモノクローナル抗体である、
項４に記載の抗体またはそのフラグメント。
６．前記単離されたモノクローナル抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号７に示され、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号８に示される、項５に記載の抗体またはそのフラグメント。
７．前記抗体またはそのフラグメントは、前記組換え抗体またはそのフラグメントである、項４に記載の抗体またはそのフラグメント。
８．前記組換え抗体またはそのフラグメントはヒト化されている、項７に記載の抗体またはそのフラグメント。
９．前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、項８に記載の抗体またはそのフラグメント。
１０．前記組換え抗体またはそのフラグメントはＩｇＧ４抗体である、項９に記載の抗体またはそのフラグメント。
１１．前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号１０に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号１１に示される軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体である、項９に記載の抗体またはそのフラグメント。
１２．前記抗体がモノクローナル抗体である、項１１に記載の抗体またはそのフラグメント。
１３．ａ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の組換え抗体またはそのフラグメント；または
ｂ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の単離されたモノクローナル抗体
である抗体またはそのフラグメントであって、ａ）とｂ）において、ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列は配列番号１４に示され、ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列は配列番号１５に示され、ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は配列番号１６に示され、ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列は配列番号１７に示され、ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列は配列番号１８に示され、ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は配列番号１９に示される、抗体またはそのフラグメント。
１４．前記抗体またはそのフラグメントは、前記単離されたモノクローナル抗体である、項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。
１５．前記単離されたモノクローナル抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２に示され、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１３に示される、項１４に記載の抗体またはそのフラグメント。
１６．前記抗体またはそのフラグメントは、前記組換え抗体またはそのフラグメントである、項１３に記載の抗体またはそのフラグメント。
１７．前記組換え抗体またはそのフラグメントはヒト化されている、項１６に記載の抗体またはそのフラグメント。
１８．前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
１９．前記組換え抗体またはそのフラグメントはＩｇＧ４抗体である、項１８に記載の抗体またはそのフラグメント。
２０．前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号２０に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号２１に示される軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体である、項１７に記載の抗体またはそのフラグメント。
２１．前記抗体がモノクローナル抗体である、項２０に記載の抗体またはそのフラグメント。
２２．項１～１１及び１３～２０のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントをコードする、単離された核酸。
２３．項２２に記載の単離された核酸を含む、宿主細胞。
前記核酸はベクター上に存在することができる。ベクターは、任意のタイプ、例えば、発現ベクターなどの組換えベクターであってもよい。複数の宿主細胞のいずれかを使用できる。一実施形態では、宿主細胞は、原核細胞、例えば、大腸菌である。別の実施形態では、宿主細胞は真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞である。
２４．項５、６、１４または１５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体をコードする核酸を宿主細胞において発現するステップを含む、モノクローナル抗体を産生する方法。
２５．前記宿主細胞がＣＨＯまたはＨＥＫ２９３である、項２４に記載の方法。
２６．前記抗体またはそのフラグメントをコードする核酸を発現するステップを含む、項１～４、７～１３、及び１６～２１のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを産生する方法。
２７．前記宿主細胞がＣＨＯまたはＨＥＫ２９３である、項２６に記載の方法。
上記の方法は、モノクローナル抗体を産生するための、適切な宿主細胞において抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）のモノクローナル抗体またはそのフラグメントをコードする組換え発現ベクターを含む。特定の実施形態において、この方法は、抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）のモノクローナル抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養してその核酸を発現させることを含む。この方法は、宿主細胞培養物または宿主細胞培地から抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）のモノクローナル抗体を回収することをさらに含むことができる。
２８．項２４または２５に記載の方法によって産生される抗体またはそのフラグメント。
２９．項２６または２７に記載の方法によって産生される抗体またはそのフラグメント。
３０．項１～２１、２８及び２９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメント、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
この医薬組成物は、別の治療剤（例えば、ヒトインターロイキン４受容体αに対する別の抗体（ｈＩＬ－４Ｒα）をさらに含むことができる。
３１．有効量の項１～２１、２８及び２９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを、それを必要とするヒト患者に投与するステップを含む、ＩＬ－４またはＩＬ－４／ＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療する方法。
３２．前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（例えば軽度、中等度、および重度の喘息）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（例えば潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる、項３１に記載の方法。
３３．前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、項３１に記載の方法。
３４．前記疾患がアトピー性皮膚炎である、項３２に記載の方法。
３５．前記疾患が喘息である、項３２に記載の方法。
３６．ＩＬ－４またはＩＬ－４／ＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療するための、項３０に記載の医薬組成物。
３７．前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（例えば軽度、中等度、および重度の喘息）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（例えば潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる、項３６に記載の医薬組成物。
３８．前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、項３６に記載の医薬組成物。
３９．ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療するための医薬の調製における、項１～２１、２８及び２９のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
４０．前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（例えば軽度、中等度、および重度の喘息）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（例えば潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる、項３９に記載の使用。
４１．前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、項３９に記載の使用。
【発明の効果】
【0010】
本発明は、抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ｈＩＬ－４Ｒα）の抗体またはそのフラグメント（新しいモノクローナル抗体を含む）を提供する。以下の実施例における新しいモノクローナル抗体によって例示的に説明されるように、その抗体またはそのフラグメントは、高い親和性でｈＩＬ－４Ｒαに結合し、ＩＬ－４及び／またはＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達及び生物学的効果を阻害する。抗体およびそのフラグメントの使用は、ＩＬ－４及び／またはＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患の病理学的発達を効果的に阻害することを含む。したがって、その抗体およびそのフラグメントは、有効な予防的及び治療的価値を有する。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】図１は、ＱＸ００５Ｎ一過性発現プラスミドを構築した核酸電気泳動の結果を示す図である。図１（Ａ）は、ＱＸ００５Ｎ（ＰＤ２－３１）の核酸電気泳動の結果を示す図である。その中で、Ｍ：Ｍａｒｋｅｒ（マーカー）；レーン１：ｐＨＺＤＣＨ、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＮｈｅＩ；レーン２：ｐＵＣ５７－２ＶＨ－Ｈｕ１、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＮｈｅＩ；レーン３：ｐＨＺＤＣＫ、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＢｓｉＷＩ；およびレーン４：ＰＣＲ産物２ＶＫ－ｐｄ１８、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＢｓｉＷＩ。図１（Ｂ）は、ＱＸ００５Ｎ（ＨＺＤ８２－１２）の核酸電気泳動の結果を示す図である。その中で、Ｍ：マーカー；レーン１：ｐＨＺＤＣＨ、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＮｈｅＩ；レーン２：ＰＣＲ産物８２ＶＨ－Ｈｕ３、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＮｈｅＩ；レーン３：ｐＨＺＤＣＫ、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＢｓｉＷＩ；およびレーン４：ｐＵＣ５７－８２ＶＫ－Ｈｕ１、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＢｓｉＷＩ。
【図3-1】図３は、タンパク質電気泳動の結果を示す図である。図３（Ａ）は、ＱＸ００５Ｎ（ＰＤ２－３１）の電気泳動の結果を示す図であり、図３（Ｂ）は、ＱＸ００５Ｎ（ＨＺＤ８２－１２）の電気泳動の結果を示す図である。
【図3-2】図３は、タンパク質電気泳動の結果を示す図である。図３（Ａ）は、ＱＸ００５Ｎ（ＰＤ２－３１）の電気泳動の結果を示す図であり、図３（Ｂ）は、ＱＸ００５Ｎ（ＨＺＤ８２－１２）の電気泳動の結果を示す図である。
【図4-1】図４は、ＱＸ００５Ｎが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害することを示す図である。図４（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図である。
【図4-2】図４は、ＱＸ００５Ｎが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害することを示す図である。図４（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図である。
【図4-3】図４は、ＱＸ００５Ｎが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害することを示す図である。図４（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図である。
【図4-4】図４は、ＱＸ００５Ｎが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害することを示す図である。図４（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図であり、図４（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発された、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞におけるＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害した結果を示す図である。
【図5-1】図５は、ＱＸ００５Ｎが、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害することを示す図である。図５（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図5-2】図５は、ＱＸ００５Ｎが、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害することを示す図である。図５（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図5-3】図５は、ＱＸ００５Ｎが、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害することを示す図である。図５（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図5-4】図５は、ＱＸ００５Ｎが、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害することを示す図である。図５（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図５（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図6-1】図６は、ＱＸ００５Ｎが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害することを示す図である。図６（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図である。
【図6-2】図６は、ＱＸ００５Ｎが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害することを示す図である。図６（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図である。
【図6-3】図６は、ＱＸ００５Ｎが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害することを示す図である。図６（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図である。
【図6-4】図６は、ＱＸ００５Ｎが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害することを示す図である。図６（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図であり、図６（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖活性を阻害した結果を示す図である。
【図7-1】図７は、ＱＸ００５Ｎが、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害することを示す図である。図７（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図7-2】図７は、ＱＸ００５Ｎが、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害することを示す図である。図７（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図7-3】図７は、ＱＸ００５Ｎが、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害することを示す図である。図７（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図7-4】図７は、ＱＸ００５Ｎが、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害することを示す図である。図７（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図であり、図７（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図8-1】図８は、ＱＸ００２Ｎが、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＤ２３発現活性を阻害することを示す図である。図８（Ａ）は、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＤ２３発現活性を阻害した結果を示す図であり、図８（Ｂ）は、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＤ２３発現活性を阻害した結果を示す図であり、図中のＤｕｐは、デュピルマブ（Ｄｕｐｉｌｕｍａｂ）を表す。
【図8-2】図８は、ＱＸ００２Ｎが、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）における、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＤ２３発現活性を阻害することを示す図である。図８（Ａ）は、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＤ２３発現活性を阻害した結果を示す図であり、図８（Ｂ）は、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＤ２３発現活性を阻害した結果を示す図であり、図中のＤｕｐは、デュピルマブ（Ｄｕｐｉｌｕｍａｂ）を表す。
【図9-1】図９は、ＱＸ００５Ｎが、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害することを示す図である。図９（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図9-2】図９は、ＱＸ００５Ｎが、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害することを示す図である。図９（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図9-3】図９は、ＱＸ００５Ｎが、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害することを示す図である。図９（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図である。
【図9-4】図９は、ＱＸ００５Ｎが、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害することを示す図である。図９（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図であり、図９（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害した結果を示す図である。
【発明の詳細】
【0012】
本出願は、ｈＩＬ－４Ｒαに高い親和性で結合し、ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達および生物学的効果を阻害する抗体およびそのフラグメントを提供する。例示される２つの抗体は、ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２である。実施例には、デュピルマブと比較したＰＤ２－３１の１つまたは複数の利点を例示的に説明するデータも含まれている。デュピルマブは、ｈＩＬ－４Ｒαを標的とする臨床的に承認されたモノクローナル抗体である。提供されたデータにより、デュピルマブとは異なるエピトープに結合するＰＤ２－３１は、異なるアッセイでＩＬ－４／ＩＬ－１３シグナル伝達を阻害するのによりよい活性を有し、かつマーモセットＩＬ－４Ｒαに結合することを示している。また、ＰＤ２－３１はデュピルマブと比較して異なるエピトープに結合し、さらに、デュピルマブのＫＤが強いが、異なるアッセイでは活性が低いことから、ＰＤ２－３１の阻害活性がデュピルマブと比較して追加の阻害成分を持っている可能性があることは示されており、これも追加の利点を提供することができる。
【0013】
本明細書に記載されている科学技術用語は、当業者が一般に理解している用語と同じ意味を有するが、矛盾する場合には、本明細書の定義に準ずる。
【0014】
一般的にいえば、本明細書で使用されている用語は、以下の意味を有する。
【0015】
本明細書において、「単離された」抗体とは、その自然環境の成分から分離された抗体をいう。ある一部の実施形態では、抗体を９５％または９９％を超える純度に精製し、前記純度は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等電集束（ＩＥＦ）、毛細管電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって確定される。抗体の純度を評価する方法について、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。
【0016】
本明細書において、「モノクローナル抗体」とは、実質的に相同な抗体の群から得られた抗体のことであり、すなわち、一般に微量で存在する可能な変異体抗体（例えば、自然に存在する突然変異またはモノクローナル抗体の製品の製造過程において発生する）を除き、該群を構成する各抗体は同一であり、および／または同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含む典型的なポリクローナル抗体製品と違って、モノクローナル抗体製品における各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。よって、修飾語「モノクローナル」とは、前記抗体が実質的に相同な抗体群から得られるという特徴を示し、いずれか特定の方法で前記抗体を調製する必要のあると解釈すべきではない。例えば、本発明のモノクローナル抗体は複数の技術によって製造することができ、前記技術は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限られていない。本文は、このような方法、およびモノクローナル抗体を調製するその他の例示的な方法を記載している。
【0017】
本明細書において、「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合サイトとその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別途説明する場合を除き、本明細書で使用されている「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に平衡解離定数（ＫＤ）で表すことができる。親和性は、本分野で既知の常用方法によって測定することができる。
【0018】
本明細書において、ヒトインターロイキン－４受容体α（Ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ４ ｒｅｃｅｐｔｏｒ α、ｈＩＬ－４Ｒα、ＩＬ－４Ｒαと略記することもある）は、ヒト由来タンパク質を表し、その細胞外ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有し、下線部分は、シグナルペプチドを表す。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９：
ＭＧＷＬＣＳＧＬＬＦＰＶＳＣＬＶＬＬＱＶＡＳＳＧＮＭＫＶＬＱＥＰＴＣＶＳＤＹＭＳＩＳＴＣＥＷＫＭＮＧＰＴＮＣＳＴＥＬＲＬＬＹＱＬＶＦＬＬＳＥＡＨＴＣＩＰＥＮＮＧＧＡＧＣＶＣＨＬＬＭＤＤＶＶＳＡＤＮＹＴＬＤＬＷＡＧＱＱＬＬＷＫＧＳＦＫＰＳＥＨＶＫＰＲＡＰＧＮＬＴＶＨＴＮＶＳＤＴＬＬＬＴＷＳＮＰＹＰＰＤＮＹＬＹＮＨＬＴＹＡＶＮＩＷＳＥＮＤＰＡＤＦＲＩＹＮＶＴＹＬＥＰＳＬＲＩＡＡＳＴＬＫＳＧＩＳＹＲＡＲＶＲＡＷＡＱＣＹＮＴＴＷＳＥＷＳＰＳＴＫＷＨＮＳＹＲＥＰＦＥＱＨ
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９：
ＭＧＷＬＣＳＧＬＬＦＰＶＳＣＬＶＬＬＱＶＡＳＳＧＮＭＫＶＬＱＥＰＴＣＶＳＤＹＭＳＩＳＴＣＥＷＫＭＮＧＰＴＮＣＳＴＥＬＲＬＬＹＱＬＶＦＬＬＳＥＡＨＴＣＩＰＥＮＮＧＧＡＧＣＶＣＨＬＬＭＤＤＶＶＳＡＤＮＹＴＬＤＬＷＡＧＱＱＬＬＷＫＧＳＦＫＰＳＥＨＶＫＰＲＡＰＧＮＬＴＶＨＴＮＶＳＤＴＬＬＬＴＷＳＮＰＹＰＰＤＮＹＬＹＮＨＬＴＹＡＶＮＩＷＳＥＮＤＰＡＤＦＲＩＹＮＶＴＹＬＥＰＳＬＲＩＡＡＳＴＬＫＳＧＩＳＹＲＡＲＶＲＡＷＡＱＣＹＮＴＴＷＳＥＷＳＰＳＴＫＷＨＮＳＹＲＥＰＦＥＱＨ
【0019】
本明細書において、「抗ヒトインターロイキン－４受容体αのモノクローナル抗体」とは、ヒトインターロイキン－４受容体αを標的とする診断薬および／または治療薬として使用できるように、十分な親和性でヒトインターロイキン－４受容体αに結合できるモノクローナル抗体を意味する。
【0020】
一部の実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ｈＩＬ－４Ｒαのループ２におけるＬ４２、Ｌ４３、Ｓ４４、及びＥ４５に有意に結合する。本明細書において、１つまたは複数のアミノ酸の有意な結合は、平衡解離定数（ＫＤ）値の変化倍率によって示される。１つのアミノ酸が変異している場合、または複数のアミノ酸が変異している場合、そのような変異タンパク質に結合する抗体のＫＤは、そのようなアミノ酸またはそれらのアミノ酸変異がないタンパク質よりも１０倍高くなり（つまり、倍率変化は１０を超える）、これは、抗体の結合活性がこの部位の変異またはこれらの部位の変異によって有意に変化されることを意味し、抗体の結合活性が有意に変化したことを示し、抗体がこれらのアミノ酸に有意に結合することを意味する。
【0021】
一部の実施形態では、抗体またはそのフラグメントは、ヒトＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα）のループ３に有意に結合せず、特に、ｈＩＬ－４Ｒαのループ３におけるＭ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｓ７０、Ａ７１、Ｄ７２およびＮ７３に有意に結合しない。本明細書では、１つのアミノ酸または複数のアミノ酸に有意に結合しないことは、平衡解離定数（ＫＤ）の値の変化倍率によって示される。１つのアミノ酸が変異している場合、または複数のアミノ酸が変異している場合、そのような変異タンパク質に結合する抗体のＫＤは、そのようなアミノ酸またはそれらのアミノ酸変異がないタンパク質のＫＤの１０倍未満である場合（つまり、倍数変化は１から１０未満）、これは、抗体の結合活性がこの部位の変異またはこれらの部位の変異によって低下させられないことを意味し、これらの変異部位は抗体のエピトープではなく、抗体がこれらのアミノ酸に有意に結合しないことを意味する。
【0022】
本明細書では、平衡解離定数（ＫＤ）の上記の値は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。
【0023】
本明細書において、「エピトープ」という用語は、抗体によって認識され得る抗原の一部を指す。
【0024】
実施例に例示的に説明されるように、ＰＤ２－３１の生物学的活性はデュピルマブより優れている。生物学的活性は、例えば、細胞におけるＩＬ－４および／またはＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性の阻害、Ａ５４９細胞及びＰＢＭＣにおけるＩＬ－４および／またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性の阻害、ＩＬ－４および/またはＩＬ－１３によって誘発された細胞増殖活性の阻害、細胞におけるＩＬ－４および/またはＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性の阻害である。
【0025】
一実施形態では、本発明の抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）のモノクローナル抗体の重鎖アミノ酸配列は、配列番号１０に示され、軽鎖アミノ酸配列は、配列番号１１に示される。
【0026】
別の一実施形態では、本発明の抗ヒトインターロイキン－４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）のモノクローナル抗体の重鎖アミノ酸配列は、配列番号２０に示され、軽鎖アミノ酸配列は、配列番号２１に示される。
【0027】
配列番号１０と１１、及び２０と２１はいずれもヒト化された配列である。
【0028】
本明細書において、「単離された」核酸とは、その自然環境の成分から分離された核酸分子を意味する。単離された核酸は、通常は核酸分子を含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、前記核酸分子は、染色体外、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【0029】
本明細書において、「抗ヒトインターロイキン－４受容体αモノクローナル抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体の重鎖および軽鎖をコードする１つまたは複数の核酸分子を意味し、単一のベクターまたは別個のベクター中のそのような核酸分子、および宿主細胞に存在する１つまたは複数の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
【0030】
本明細書において、「ベクター」とは、それに結合した別の核酸を増幅することができる核酸分子を意味する。この用語には、自己複製核酸構造であるベクター、およびそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある一部のベクターは、それらに操作可能に連結されている核酸の発現を指導することができる。このようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と呼ばれる。
【0031】
本明細書において、「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養」は互いに置き換えて使用することができ、外因性核酸が導入された細胞を表し、そのような細胞の後代を含む。宿主細胞は、「形質転換体」と「形質転換細胞」とを含み、初代形質転換細胞とそれに由来する後代（継代数を問わず）とを含む。後代は、核酸内容物では親細胞と完全に同じでなくてもよく、突然変異を含んでもよい。最初に形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択された、同じ機能または生物学的活性を有する変異体後代は、本明細書に含まれている。
【0032】
本明細書において、「医薬組成物」とは、その中に含まれている活性成分の生物学的活性を有効にする形を取っており、製剤が投与される被験者に対して容認できない毒性を持つ追加の成分を含まない組成物のような製品を指す。
【0033】
本明細書において、「薬学的に許容される担体」とは、活性成分を除き、医薬組成物に含まれる成分が被験者に対して無毒であることを意味する。薬学的に許容される担体は、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤を含むが、これらに限られていない。
【0034】
「患者」への言及は、治療を受けているヒトを指す。
【0035】
抗体及び抗体フラグメント
ｈＩＬ－４Ｒαに結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）及び抗体フラグメント（ここで、ＩＬ－４Ｒα結合剤とも呼ばれる）は、ｈＩＬ－４Ｒαに結合できる抗体重鎖可変領域を含む。好ましくは、ＩＬ－４Ｒα結合剤は、ｈＩＬ－４Ｒαへの結合特異性を提供するようにさらに重鎖に結合する可変軽鎖領域を含む。
ｈＩＬ－４Ｒαに結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）及び抗体フラグメント（ここで、ＩＬ－４Ｒα結合剤とも呼ばれる）は、ｈＩＬ－４Ｒαに結合できる抗体重鎖可変領域を含む。好ましくは、ＩＬ－４Ｒα結合剤は、ｈＩＬ－４Ｒαへの結合特異性を提供するようにさらに重鎖に結合する可変軽鎖領域を含む。
【0036】
抗体は、２つの同じのポリペプチド重鎖と２つのポリペプチド軽鎖を含む。ポリペプチドは、非共有結合とジスルフィド結合によって連結され、Ｙ字型の構成を形成する。軽鎖領域（ＶＬ－ＣＬ）と重鎖領域（ＶＨ－ＣＨ１）によって形成される２つのＦａｂフラグメントは、Ｙの上部を提供する。各可変領域は、フレームワーク領域内に間隔を置いて配置された３つの超可変または相補性決定領域（ＣＤＲ－１、ＣＤＲ－２、およびＣＤＲ－３）を有する。ＣＤＲは、エピトープに接触する特異性決定残基（ＳＤＲ）を提供する。場合によっては、フレームワーク残基もエピトープ結合に役立つか重要である可能性がある。各重鎖ＣＨ１領域は、ヒンジ領域を介して他の重鎖定常領域に共有結合し、その中で、２つの重鎖定常領域が互いに結合してＦｃ領域を形成する。これは、抗体Ｙ構成のステムとして視覚化できる。前記重鎖は任意選択でグリコシル化されている。
【0037】
ＩＬ－４Ｒα結合剤可変領域は、好ましくはヒト化されている。ヒト可変領域は、ヒト患者の免疫系が結合剤を攻撃する可能性を減らすために重要である。ヒト化可変領域は、非ヒトＣＤＲが得られた非ヒトフレームワークと比較して、フレームワーク内に１つまたは複数の非ヒトＣＤＲを有しており、溶媒に曝露されたヒトアミノ酸残基の数が増加した。ヒト化のための２つの一般的な技術は、（１）ＣＤＲ移植；（２）フレームワークのリサーフェシングである。ＣＤＲグラフト化は、ＣＤＲ領域をヒトフレームワーク領域に挿入することを含み、これは、例えば、抗原結合に重要または有用な逆突然変異によってさらに修飾され得る。フレームワークのリサーフェシングは、非ヒトフレームワークの表面に露出した残基を修飾して、ヒトに免疫応答を引き起こす可能性が低いヒト曝露領域を提供することを含む（Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， １３：１６１９－１６３３，２００８；およびＣｈｉｕ ａｎｄ Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３８：１６３－１７３，２０１６）。
【0038】
以下の実施例に示されているＣＤＲは、ウサギ抗体から取得したものである。６つすべてのＣＤＲをヒトフレームワークに移植した後、前記フレームワークを微調整することは、マウスおよびウサギの抗体をヒト化するための常用の技術である。（Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４９：Ｅ３０５）。Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｈｏ， ＭＡＢＳ， ９：４１９－４２９，２０１７は、ウサギの抗体のヒト化を示しています。これには、Ｋａｂａｔ/ＩＭＧＴ/Ｐａｒａｔｏｍｅ ＣＤＲの組み合わせを識別し、ヒト生殖細胞系列（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）フレームワークに移植した後、別のフレームワーク変異を通して抗体を最適化することが含まれる。
【0039】
抗体のＦｃ領域は、さまざまなエフェクター機能を提供し、抗体のクラスとサブクラスを定義する。ヒト抗体クラスは、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥである。ＩｇＧは、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４に分けることができる。ＩｇＡは、サブクラスＩｇＡ１とＩｇＡ２に分けることができる。Ｆｃ領域は、エフェクター細胞のＦｃ受容体に結合し、他の免疫メディエーターを活性化することにより、エフェクター機能を媒介することができる。Ｆｃグリコシル化は、Ｆｃエフェクター機能に影響を与える一部である（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ． Ｉｍｕｎｏｌ．， １２５（２０２）：Ｓ４１－Ｓ５２，２０１０）。
【0040】
ＩｇＧ Ｆｃエフェクター機能は、ＩｇＧサブクラスによって異なり、抗体依存性細胞によって媒介される細胞傷害性、抗体依存性細胞貪食、補体活性、および半減期の増加を含むことができる。ＩｇＧ Ｆｃ領域を、エフェクター機能を増加または減少させるように修飾できる（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ ９（１）：６３－７３，２０１８；およびＳｔｒｏｈｌ， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ ９（１）８６－１２０，２０１８）。一実施形態では、前記ＩＬ－４Ｒα結合剤は、ＩｇＧ抗体である。
【0041】
「ＩｇＧ」への言及には、天然に存在する配列を有する異なるＩｇＧクラスおよびサブクラス；または、１つまたは複数の残基が、好ましくは、安定性を高めるために、および／またはエフェクター機能を改変するために（例えば、細胞死滅を低減し、および／または抗体半減期を増強するために）改変される修飾配列が含まれる。一実施形態では、前記ＩｇＧ重鎖は、天然に存在する配列および／または重鎖定常配列とは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸の違いを有する。それぞれのアミノ酸の違いは、付加、置換、または欠失である。別の一実施形態において、前記ＩｇＧは、ＩｇＧ４サブタイプである。ＩｇＧ４は、細胞を殺すエフェクター機能を誘導する能力が限られている。ＩｇＧ４を、たとえばエフェクター機能を変更したり、Ｆａｂアーム交換を減らしたりするために修飾できる（Ｄａｖｉｅｓ ａｎｄ Ｓｕｔｔｏｎ， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２６８；１３９－１５９，２０１５）。
【0042】
ＩＬ－４Ｒα―に結合する抗体フラグメントには、Ｆａｂフラグメント、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ドメイン抗体、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、および二重特異性コンストラクトが含まれる。二重特異性構築体は、異なるエピトープへの特異性を提供するように、少なくとも２つの異なる可変領域を含む。抗体への言及は、完全長の抗体を指す。そのフラグメントへの言及は、言及された抗体に提供されるような可変領域の少なくとも１つを含む構築体を指し、これは、二重特異性構築体を含むことができる。二重特異性は、２つの異なるＩＬ－４Ｒαエピトープを標的とし得るか、またはＩＬ－１３Ｒなどの異なる実体上のエピトープと共にＩＬ－４Ｒαエピトープを標的とし得る。異なる可変領域を有する完全長抗体構築体、異なる可変領域を有する完全長未満の抗体、および付加された可変領域を有する完全長抗体を含む、様々な二重特異性構築体が可能である（Ｓｔｒｏｈｌ， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ ９（１）８６－１２０，２０１８）。
【0043】
抗体および抗体フラグメントの半減期を延ばすことができ、これは投与量および投与頻度を減らすのに役立つ。上記のように、Ｆｃ領域を修飾して抗体の半減期を延ばすことができる。半減期を延長するための他の技術には、ＰＥＧ基の付加、別のタンパク質への融合、およびヒドロゲル、リポソーム、マイクロ/ナノ粒子、ミセルの使用などの送達策が含まれる（Ａｗｗａｄ ａｎｄ Ａｎｇｋａｗｉｎｉｔｗｏｎｇ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １０，８３，２０１８）。
【0044】
抗体産生
ＩＬ－４Ｒα結合剤は、組換え細胞技術を使用して容易に産生することができる。組換え発現の潜在的な宿主には、原核生物および真核生物の宿主が含まれる。特定の発現産物を考慮して、好ましい宿主を選択することができる。原核生物の宿主は、より小さな抗体フラグメントのために、そしてグリコシル化が必要とされない場合に使用され得る。真核生物の宿主細胞、特に哺乳動物は、完全長の抗体の発現に好ましい。哺乳類細胞株は、ヒトと同じフォールディングおよび翻訳後修飾を有する抗体を産生するために使用することができる。哺乳類細胞株の別の利点は、分泌のレベルである（Ｆｒｅｎｚｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４： Ａｒｔｉｃｌｅ ２１７，２０１３；およびＫｕｎｅｒｔ ａｎｄ Ｒｅｉｎｈａｒｔ， Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １００：３４５１－３４６１，２０１６）。異なる実施形態では、前記宿主細胞は、ＣＨＯ，ＮＳ０、Ｓｐ２／０、ＨＥＫ２９３、またはＰＥＲ．Ｃ６である。別の実施形態では、前記宿主細胞はＣＨＯである。
ＩＬ－４Ｒα結合剤は、組換え細胞技術を使用して容易に産生することができる。組換え発現の潜在的な宿主には、原核生物および真核生物の宿主が含まれる。特定の発現産物を考慮して、好ましい宿主を選択することができる。原核生物の宿主は、より小さな抗体フラグメントのために、そしてグリコシル化が必要とされない場合に使用され得る。真核生物の宿主細胞、特に哺乳動物は、完全長の抗体の発現に好ましい。哺乳類細胞株は、ヒトと同じフォールディングおよび翻訳後修飾を有する抗体を産生するために使用することができる。哺乳類細胞株の別の利点は、分泌のレベルである（Ｆｒｅｎｚｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４： Ａｒｔｉｃｌｅ ２１７，２０１３；およびＫｕｎｅｒｔ ａｎｄ Ｒｅｉｎｈａｒｔ， Ａｐｐｌ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １００：３４５１－３４６１，２０１６）。異なる実施形態では、前記宿主細胞は、ＣＨＯ，ＮＳ０、Ｓｐ２／０、ＨＥＫ２９３、またはＰＥＲ．Ｃ６である。別の実施形態では、前記宿主細胞はＣＨＯである。
【0045】
特定の宿主細胞と特定の抗体および抗体フラグメントを考慮に入れて、複数の異なる技術を使用してＩＬ－４Ｒα結合剤を回収および精製することができる。複数の精製ステップを採用することができる。回収および精製ステップのいくつかの例には、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、Ｆｃ領域を有する全長抗体のプロテインＡ、ＶＬカッパ軽鎖およびアフィニティータグを有する抗体または抗体フラグメントのプロテインLクロマトグラフィー）、合成アフィニティークロマトグラフィー、アニオン／カチオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、遠心分離および濾過が含まれる（Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ６：１７－３２，２０１６；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．， ｍＡｂｓ ２（５）：４８０－４９９，２０１０；およびＲｏｄｒｉｇｏ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ４：２５９－２７７，２０１５）。
【0046】
ＩＬ－４Ｒαのループ２を標的とする抗体
ＩＬ－４Ｒαのループ２アミノ酸Ｌ４２、Ｌ４３、Ｓ４４、およびＥ４５に有意に結合する（好ましくはＩＬ－４Ｒαのループ３に有意に結合しない）抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ２－３１に基づいて容易に得ることができる。ＰＤ２－３１に基づく技術には、以下の例で説明するように、ＰＤ２－３１ ＣＤＲの親和性成熟と、それに続く変異したＩＬ－４Ｒαに対するスクリーニングが含まれる。ＩＬ－４Ｒαを標的とする他の抗体を取得し、ＰＤ２－３１との競合アッセイを実施し、以下の実施例に記載のアッセイを使用して結合を確認する。ＩＬ－４Ｒαを標的とする抗体は、ＩＬ－４Ｒαを動物（マウス、ウサギ、ラット、ラクダなど）の免疫原として、またはファージディスプレイの抗原として使用するさまざまな手法を使用して取得できる。
ＩＬ－４Ｒαのループ２アミノ酸Ｌ４２、Ｌ４３、Ｓ４４、およびＥ４５に有意に結合する（好ましくはＩＬ－４Ｒαのループ３に有意に結合しない）抗体またはそのフラグメントは、ＰＤ２－３１に基づいて容易に得ることができる。ＰＤ２－３１に基づく技術には、以下の例で説明するように、ＰＤ２－３１ ＣＤＲの親和性成熟と、それに続く変異したＩＬ－４Ｒαに対するスクリーニングが含まれる。ＩＬ－４Ｒαを標的とする他の抗体を取得し、ＰＤ２－３１との競合アッセイを実施し、以下の実施例に記載のアッセイを使用して結合を確認する。ＩＬ－４Ｒαを標的とする抗体は、ＩＬ－４Ｒαを動物（マウス、ウサギ、ラット、ラクダなど）の免疫原として、またはファージディスプレイの抗原として使用するさまざまな手法を使用して取得できる。
【0047】
「ヒトＩＬ－４Ｒαのループ２に有意に結合することができる抗体またはそのフラグメント」または「ヒトＩＬ－４Ｒαのループ２に有意に結合することができるが、ヒトＩＬ－４Ｒαのループ３に有意に結合しない抗体またはそのフラグメント」は、例えば、以下の方法で調製することができる。すなわち、まず、ＩＬ－４Ｒαに対する抗体（抗ＩＬ－４Ｒα抗体）またはそのフラグメントを既知の方法で調製する。次に、調製した抗ＩＬ－４Ｒα抗体および野生型ＩＬ－４Ｒαまたは変異型ＩＬ－４Ｒα（例えば、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２１９、２２０、２４１、２４２、２４４、２４５の中からの１つまたは複数）をテストして、抗ＩＬ－４Ｒα抗体またはそのフラグメントがヒトＩＬ－４Ｒαのループ２に有意に結合できるかどうかを確定し、またはヒトＩＬ－４Ｒαのループ２に有意に結合できるがヒトＩＬ－４Ｒαのループ３に有意に結合しない抗ＩＬ－４Ｒα抗体またはそのフラグメントを確定し、これによって、「ヒトＩＬ－４Ｒαのループ２に有意に結合できる抗体またはそのフラグメント」または「ヒトＩＬ－４Ｒαのループ２に有意に結合できるがヒトＩＬ－４Ｒαのループ３に有意に結合しない抗体またはそのフラグメント」をスクリーニングする。
【0048】
治療と投与
ＩＬ－４Ｒ結合剤は、ＩＬ－４受容体複合体によって媒介される疾患を治療するために使用することができる。ＩＬ－４Ｒαは、共通のδ鎖（Ｉ型）およびＩＬ－１３受容体（ＩＩ型）と受容体複合体を形成する。Ｉ型受容体活性は、シグナル伝達を引き起こすＩＬ－４結合によって開始され、ＩＬ－４Ｒαを標的とする薬剤によって阻害されることができる。ＩＩ型受容体活性は、シグナル伝達を引き起こすＩＬ－４またはＩＬ－１３の結合によって開始され、ＩＬ－４ＲαまたはＩＬ－１３Ｒを標的とする薬剤によって阻害されることができる。
ＩＬ－４Ｒ結合剤は、ＩＬ－４受容体複合体によって媒介される疾患を治療するために使用することができる。ＩＬ－４Ｒαは、共通のδ鎖（Ｉ型）およびＩＬ－１３受容体（ＩＩ型）と受容体複合体を形成する。Ｉ型受容体活性は、シグナル伝達を引き起こすＩＬ－４結合によって開始され、ＩＬ－４Ｒαを標的とする薬剤によって阻害されることができる。ＩＩ型受容体活性は、シグナル伝達を引き起こすＩＬ－４またはＩＬ－１３の結合によって開始され、ＩＬ－４ＲαまたはＩＬ－１３Ｒを標的とする薬剤によって阻害されることができる。
【0049】
ＩＬ－４Ｒα結合剤は、患者の、ＩＬ－４（Ｉ型）またはＩＬ－４／ＩＬ－１３（ＩＩ型）によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療するために使用することができる。一実施形態では、前記患者は、アトピー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（軽度、中等度、および重度の喘息など）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（炎症性腸疾患など）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、遺伝性アレルギー性皮膚炎、潰瘍性大腸炎、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれる疾患を有する。
【0050】
他の実施形態では、前記患者は、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる疾患を有する；前記患者は喘息に罹患している；または、前記患者は、アトピー性皮膚炎に罹患している。
【0051】
他の実施形態では、前記患者は、ＩＬ－４Ｒα、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、またはＩＬ－１３Ｒα１受容体複合体によって媒介される疾患を有する。
【0052】
他の実施形態では、前記患者は、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、鼻炎、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、好酸球性食道炎、慢性閉塞性肺疾患、食物アレルギー、蕁麻疹、強皮症、特発性肺線維症、類天疱瘡、及びかゆみからなる群より選ばれる疾患を有する。
【0053】
アトピー性皮膚炎は、慢性の再発性掻痒性炎症性皮膚疾患である。アトピー性皮膚炎は、一般的に喘息とアレルギー性鼻炎に関連している。ＩＬ－４Ｒα結合剤は、アトピー性皮膚炎を治療するための単独療法として使用することもできるし、１つまたは複数の他の療法と組み合わせて使用することもできる。アトピー性皮膚炎の既存の治療法には、局所コルチコステロイド、局所カルシニューリン阻害剤、抗菌療法（細菌感染を伴う患者向け）、抗ヒスタミン療法、ホスホジエステラーゼ阻害剤、光線療法、クリサボロール（ｃｒｉｓａｂｏｒｏｌｅ）、およびデュピルマブが含まれる（Ｍａｌｉｙａｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｓｋｉｎ ａｎｄ Ｗｏｕｎｄ Ｃａｒｅ ３１（１２）：５３８－５５０，２０１８）。
【0054】
喘息は閉塞性肺疾患であり、断続的、軽度、中等度、重度の持続性喘息に分類できる。ＩＬ－４Ｒα結合剤は、喘息を治療するための単独療法として使用することもできるし、１つまたは複数の治療法と組み合わせて使用することもできる。既存の治療法として、β２アゴニスト（例えば、アルブテロール、レバルブテロール、テルブタリン（ｔｅｒｂｕｔａｌｉｎｅ）、メタプロテレノール（ｍｅｔａｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ）、ピルブテロール（ｐｉｒｂｕｔｅｒｏｌ）、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒｏｌ）、及びホルモテロール（ｆｏｒｍｏｔｅｒｏｌ））、コルチコステロイド（例えば、ベクロメタゾン、トリアムシノロン、フルニソリド、シクレソニド（ｃｉｃｌｅｓｏｎｉｄｅ）、ブデソニド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、フルチカソン、及びモメタゾン）、ロイコトリエン受容体拮抗剤および合成阻害剤（例えば、ザフィルルカスト（ｚａｆｉｒｌｕｋａｓｔ）、モンテルカスト、及びジレウトン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ））、抗ムスカリン薬（例えば、イプラトロピウム（ｉｐｒａｔｒｏｐｉｕｍ）、チオトロピウム（ｔｉｏｔｒｏｐｉｕｍ）、アクリジニウム（ａｃｌｉｄｉｎｉｕｍ）、ウメクリジニウム（ｕｍｅｃｌｉｄｉｎｉｕｍ）、及びグリコピロニウム）、生物学的製剤（例えば、オマリズマブ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）、メポリズマブ（Ｍｅｐｏｌｉｚｕｍａｂ）、レスリズマブ（Ｒｅｓｌｉｚｕｍａｂ）、ベンラリズマブ（Ｂｅｎｒａｌｉｚｕｍａｂ）、デュピルマブ（Ｄｕｐｉｌｕｍａｂ）、及びテピルマブ（Ｔｅｚｅｐｅｌｕｍａｂ））、及び気管支熱形成術（ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｔｙ）が挙げられる。異なる実施形態において、喘息患者は、断続的、軽度、中等度または重度の持続性喘息を有する（Ｓｏ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＪ ３（４）：１１１－１２１，２０１８）。
【0055】
疾患治療は、治療有効量のＩＬ－４Ｒα結合剤を使用して促進される。治療有効量とは、患者が示した疾患の１つまたは複数の症状の臨床的に有意な減少を引き起こすのに十分な量である。
【0056】
ＩＬ－４Ｒα結合剤は、非経口注射（静脈内、皮下、筋肉内または皮内）、経口、および粘膜を含むさまざまな経路で投与できる。皮下注射は一般的に選択される経路である（Ａｗｗａｄ ａｎｄ Ａｎｇｋａｗｉｎｉｔｗｏｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １０，８３，２０１８）。
【0057】
最適な投与量および投与計画は、治療薬の有効性、治療される疾患、患者の年齢、患者の病状、患者の体重、患者の性別、投与経路、及び期待される効果を含むさまざまな要因を考慮して決定することができる。異なる実施形態において、単回投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ；約０．５０ｍｇ/ｋｇから約１５ｍｇ/ｋｇ；または約１ｍｇ/ｋｇから１０ｍｇ/ｋｇである。投与量に関する他の実施形態は、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、及び約１，０００ｍｇでの単回投与量を含む。「単回投与量」への言及は、投与のタイミングを指す。用量の大きさに応じて、患者にほぼ同時に提供される２つの別々の投与として、単回用量で投与することが好ましい場合がある。投与計画は、１日１回以上、週１回以上、週１回、隔週、および月１回以上など、投与の間に異なる時間を提供することができる。毎回同じ用量を与える必要はない。たとえば、患者は高用量で開始し、その後低用量で投与されることができる。または低用量で開始し、その後高用量で投与される。患者における特定の用量の有効性と副作用に応じて、投与のタイミングと量を調整することができる。
【0058】
ＩＬ－４Ｒα結合剤の投与は、薬学的に許容される担体を使用することで促進される。好ましい薬学的に許容される担体は、本明細書に記載のＩＬ－４Ｒα結合剤の安定化および投与に寄与する。存在し得る一般的な担体賦形剤は、炭水化物、アミノ酸、緩衝塩、および界面活性剤を含む。一般的な賦形剤として、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー１８８、スクロース、トレハロース、ＮａＣｌ、アルギニン、グリシン、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、およびヒスチジンが挙げられる。適切な処方は、本技術分野で公知の考慮要素および技術を使用して最適化することができる（例えば、Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｒａｐｉｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，２０１６年４月にｈｔｔｐｓ：／／ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｉｎｔｌ.ｃｏｍ／ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ／ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ／ｒａｐｉｄ－ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ－ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ－ｆｏｒ－ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ－ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ／から検索された；Ｒａｚｉｎｋｏｖ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ２０（４）：４６８－４８３，２０１５；およびＡｗｗａｄ ａｎｄ Ａｎｇｋａｗｉｎｉｔｗｏｎｇ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １０，８３，２０１８を参照）。
【0059】
マーモセット動物モデル
ＰＤ２－３１がマーモセットＩＬ－４Ｒαに高い親和性で結合する能力は、以下を含むいくつかの利点を提供する。すなわち、ＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患に対するＰＤ２－３１の前臨床効果を評価する研究でマーモセットの使用を可能にする；他の医薬と組み合わせてｈＩＬ－４Ｒαを標的とする抗体の有効性を評価するための前臨床モデルとしてマーモセットの使用を可能にする；さらに、毒物学と安全性の研究を促進する。呼吸系モデルおよびヒトアレルギー性喘息のモデルとしてのマーモセットの使用は、Ｃｕｒｔｈｓ ｅｔ ａｌ．， Ｖｅｔ． Ｓｃｉ． １：６３－７６，２０１４、およびＣｕｒｔｈｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｃｒｉｔ． Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． １９３：２０１６：Ａ４９１９（Ｃｕｒｔｈｓ Ａ４９１９）に例示的に説明されている。
ＰＤ２－３１がマーモセットＩＬ－４Ｒαに高い親和性で結合する能力は、以下を含むいくつかの利点を提供する。すなわち、ＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患に対するＰＤ２－３１の前臨床効果を評価する研究でマーモセットの使用を可能にする；他の医薬と組み合わせてｈＩＬ－４Ｒαを標的とする抗体の有効性を評価するための前臨床モデルとしてマーモセットの使用を可能にする；さらに、毒物学と安全性の研究を促進する。呼吸系モデルおよびヒトアレルギー性喘息のモデルとしてのマーモセットの使用は、Ｃｕｒｔｈｓ ｅｔ ａｌ．， Ｖｅｔ． Ｓｃｉ． １：６３－７６，２０１４、およびＣｕｒｔｈｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｃｒｉｔ． Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． １９３：２０１６：Ａ４９１９（Ｃｕｒｔｈｓ Ａ４９１９）に例示的に説明されている。
【0060】
ＰＤ２－３１の有効性または併用療法を評価する研究では、特定の疾患に基づいて適切な刺激物とエンドポイントを選択できる。たとえば、ＣｕｒｔｈｓらＡ４９１９は、ハウスダストダニアレルゲンを使用して感作し、好酸球レベルに対する治療薬（ブデソニド）の影響を測定することにより、ヒトアレルギー性喘息のモデルとしてマーモセットを使用することを例示的に説明している。特定の疾患に応じて、他の刺激物とエンドポイントを使用することができる。
【実施例】
【0061】
以下、実施例を通して本発明をより具体的に説明する。本出願はこれらの実施例に限られていないことを理解されたい。
【実施例】
【0062】
抗ヒトインターロイキン－４受容体αに対するモノクローナル抗体ＱＸ００５Ｎの調製
ニュージーランドのウサギの免疫のためにヒトインターロイキン－４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）を上海近岸タンパク質科技有限公司（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）から購入し、Ｂ細胞クローニング技術を使用して抗原結合特異的抗体クローンを獲得し、さらにＩＬ－４Ｒαに結合し、ＩＬ－４及び／またはＩＬ－１３阻害活性を有するモノクローナル抗体をスクリーニングした。まず、ｂｉｎｄｉｎｇ ＥＬＩＳＡを利用して細胞上清を検出し、ＩＬ－４Ｒαに結合するクローンを選択した後、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭ ＩＬ－４／ＩＬ－１３レポーター遺伝子細胞システム（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）で検出し、ＩＬ－４／ＩＬ－１３阻害活性を有するクローンを選択した。上記の免疫およびスクリーニングプロセスは、商業会社に依頼されて完成された。
組換え発現のために１６個のクローンを選択してシーケンシングした。＃２および＃８２クローンに対して親和性成熟とヒト化を実行した。ＮＣＢＩ ＩｇＢｌａｓｔを使用してヒトＩｇＧ生殖系列（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）配列の相同性比較を行い、ＩＧＨＶ３－６６＊０１を選択して重鎖ＣＤＲ移植テンプレートとし、＃２クローンの重鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１（配列番号１）、ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２）、およびＣＤＲ－Ｈ３（配列番号３））をＩＧＨＶ３－６６＊０１のフレームワーク領域に移植した。ＩＧＫＶ１－３９＊０１を選択して軽鎖ＣＤＲ移植テンプレートとし、＃２クローンの軽鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号４）、ＣＤＲ－Ｌ２（配列番号５）、およびＣＤＲ－Ｌ３（配列番号６））をＩＧＫＶ１－３９＊０１のフレームワーク領域に移植した。フレームワーク領域の特定の部位に対して逆突然変異を行って本発明のモノクローナル抗体ＰＤ２－３１の可変領域を得た。最後に、ヒト化された重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７に示され、ヒト化された軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８に示される。
或いは、ＮＣＢＩ ＩｇＢｌａｓｔを使用してヒトＩｇＧ生殖系列配列の相同性比較を行い、ＩＧＨＶ３－６６＊０１を選択して重鎖ＣＤＲ移植テンプレートとし、＃８２クローンの重鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１（配列番号１４）、ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号１５）、およびＣＤＲ－Ｈ３（配列番号１６））をＩＧＨＶ３－６６＊０１のフレームワーク領域に移植した。ＩＧＫＶ１－３９＊０１を選択して軽鎖ＣＤＲ移植テンプレートとし、＃８２クローンの軽鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号１７）、ＣＤＲ－Ｌ２（配列番号１８）、およびＣＤＲ－Ｌ３（配列番号１９））をＩＧＫＶ１－３９＊０１のフレームワーク領域に移植した。フレームワーク領域の特定の部位に対して逆突然変異を行って本発明のモノクローナル抗体ＨＺＤ８２－１２の可変領域を得た。最後に、ヒト化された重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２に示され、ヒト化された軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１３に示される。
上記の重鎖可変領域（配列番号７）の遺伝子は人工的に合成され、ｐＵＣ５７ベクターに挿入された。軽鎖可変領域（配列番号８）の遺伝子はＰＣＲ増幅によって得られた。ＨｉｎｄＩＩＩとＮｈｅＩを使用して重鎖可変領域遺伝子と重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨを二重消化させ、ＨｉｎｄＩＩＩとＢｓｉＷＩを使用して軽鎖可変領域遺伝子と軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨを二重消化させ、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを使用して消化により得られたフラグメントをそれぞれ対応する発現プラスミドに挿入して、重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨ－２ＶＨ－Ｈｕ１と軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＫ－２ＶＫ－ｐｄ１８を構築した。
上記の重鎖可変領域（配列番号１２）の遺伝子はＰＣＲ増幅によって得られ、軽鎖可変領域（配列番号１３）の遺伝子は人工的に合成され、ｐＵＣ５７ベクターに挿入された。ＨｉｎｄＩＩＩとＮｈｅＩを使用して重鎖可変領域遺伝子と重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨを二重消化させ、ＨｉｎｄＩＩＩとＢｓｉＷＩを使用して軽鎖可変領域遺伝子と軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨを二重消化させ、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを使用して消化により得られたフラグメントをそれぞれ対応する発現プラスミドに挿入して、重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨ－８２ＶＨ－Ｈｕ３と軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＫ－８２ＶＫ－Ｈｕ１を構築した。
プラスミドの二重消化の結果を核酸電気泳動で検出した。図１（Ａ）の結果から分かるように、二重消化抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域、および重鎖と軽鎖の発現プラスミドを二重消化させた結果、重鎖と軽鎖のプラスミドは約１００００ｂｐであり、軽鎖可変領域は約４０８ｂｐであり、重鎖可変領域は約４２９ｂｐである。図１（Ｂ）の結果から分かるように、二重消化抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域、および重鎖と軽鎖の発現プラスミドを二重消化させた結果、重鎖と軽鎖のプラスミドは約１００００ｂｐであり、軽鎖可変領域は約４０８ｂｐであり、重鎖可変領域は約４２６ｂｐである。
配列が正しい重鎖発現プラスミドと軽鎖発現プラスミドをＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞にコトランスフェクションした。トランスフェクションの前日、トランスフェクション前の継代のために、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞を３×１０６細胞／ｍｌに希釈した。トランスフェクションの当日、細胞密度を６×１０６細胞／ｍｌに希釈し、トランスフェクションのために２５ｍｌの細胞を１２５ｍｌの振とうフラスコに入れた。トランスフェクションと発現のプロセスを図２に示す。
トランスフェクション後４～８日目に、培養上清を採取し、Ｐｒｏｔｅｉ Ａでワンステップで精製した。精製された抗体をＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動で検出し、ＱＸ００５Ｎと名付けた。具体的に言えば、それぞれＱＸ００５Ｎ（ＰＤ２－３１）とＱＸ００５Ｎ（ＨＺＤ８２－１２）である。当該抗体をタンパク質電気泳動で検出した結果を図３（Ａ）と（Ｂ）に示す。タンパク質電気泳動は変性還元ゲルで検出され、図３（Ａ）に示される結果から分かるように、２つのバンドがあり、２つのバンドのサイズはそれぞれ約５０ｋＤａと２５ｋＤａであり、重鎖（４８．５ｋＤａ）と軽鎖（２３．７ｋＤａ）の理論上の分子量と一致している。図３（Ｂ）に示される結果から分かるように、２つのバンドがあり、２つのバンドのサイズはそれぞれ約５０ｋＤａと２５ｋＤａであり、重鎖（４８．３ｋＤａ）と軽鎖（２３．６ｋＤａ）の理論上の分子量と一致している。
ニュージーランドのウサギの免疫のためにヒトインターロイキン－４受容体α（ＩＬ－４Ｒα）を上海近岸タンパク質科技有限公司（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）から購入し、Ｂ細胞クローニング技術を使用して抗原結合特異的抗体クローンを獲得し、さらにＩＬ－４Ｒαに結合し、ＩＬ－４及び／またはＩＬ－１３阻害活性を有するモノクローナル抗体をスクリーニングした。まず、ｂｉｎｄｉｎｇ ＥＬＩＳＡを利用して細胞上清を検出し、ＩＬ－４Ｒαに結合するクローンを選択した後、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭ ＩＬ－４／ＩＬ－１３レポーター遺伝子細胞システム（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）で検出し、ＩＬ－４／ＩＬ－１３阻害活性を有するクローンを選択した。上記の免疫およびスクリーニングプロセスは、商業会社に依頼されて完成された。
組換え発現のために１６個のクローンを選択してシーケンシングした。＃２および＃８２クローンに対して親和性成熟とヒト化を実行した。ＮＣＢＩ ＩｇＢｌａｓｔを使用してヒトＩｇＧ生殖系列（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）配列の相同性比較を行い、ＩＧＨＶ３－６６＊０１を選択して重鎖ＣＤＲ移植テンプレートとし、＃２クローンの重鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１（配列番号１）、ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２）、およびＣＤＲ－Ｈ３（配列番号３））をＩＧＨＶ３－６６＊０１のフレームワーク領域に移植した。ＩＧＫＶ１－３９＊０１を選択して軽鎖ＣＤＲ移植テンプレートとし、＃２クローンの軽鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号４）、ＣＤＲ－Ｌ２（配列番号５）、およびＣＤＲ－Ｌ３（配列番号６））をＩＧＫＶ１－３９＊０１のフレームワーク領域に移植した。フレームワーク領域の特定の部位に対して逆突然変異を行って本発明のモノクローナル抗体ＰＤ２－３１の可変領域を得た。最後に、ヒト化された重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７に示され、ヒト化された軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８に示される。
或いは、ＮＣＢＩ ＩｇＢｌａｓｔを使用してヒトＩｇＧ生殖系列配列の相同性比較を行い、ＩＧＨＶ３－６６＊０１を選択して重鎖ＣＤＲ移植テンプレートとし、＃８２クローンの重鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｈ１（配列番号１４）、ＣＤＲ－Ｈ２（配列番号１５）、およびＣＤＲ－Ｈ３（配列番号１６））をＩＧＨＶ３－６６＊０１のフレームワーク領域に移植した。ＩＧＫＶ１－３９＊０１を選択して軽鎖ＣＤＲ移植テンプレートとし、＃８２クローンの軽鎖のＣＤＲ領域（すなわち、ＣＤＲ－Ｌ１（配列番号１７）、ＣＤＲ－Ｌ２（配列番号１８）、およびＣＤＲ－Ｌ３（配列番号１９））をＩＧＫＶ１－３９＊０１のフレームワーク領域に移植した。フレームワーク領域の特定の部位に対して逆突然変異を行って本発明のモノクローナル抗体ＨＺＤ８２－１２の可変領域を得た。最後に、ヒト化された重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１２に示され、ヒト化された軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号１３に示される。
上記の重鎖可変領域（配列番号７）の遺伝子は人工的に合成され、ｐＵＣ５７ベクターに挿入された。軽鎖可変領域（配列番号８）の遺伝子はＰＣＲ増幅によって得られた。ＨｉｎｄＩＩＩとＮｈｅＩを使用して重鎖可変領域遺伝子と重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨを二重消化させ、ＨｉｎｄＩＩＩとＢｓｉＷＩを使用して軽鎖可変領域遺伝子と軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨを二重消化させ、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを使用して消化により得られたフラグメントをそれぞれ対応する発現プラスミドに挿入して、重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨ－２ＶＨ－Ｈｕ１と軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＫ－２ＶＫ－ｐｄ１８を構築した。
上記の重鎖可変領域（配列番号１２）の遺伝子はＰＣＲ増幅によって得られ、軽鎖可変領域（配列番号１３）の遺伝子は人工的に合成され、ｐＵＣ５７ベクターに挿入された。ＨｉｎｄＩＩＩとＮｈｅＩを使用して重鎖可変領域遺伝子と重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨを二重消化させ、ＨｉｎｄＩＩＩとＢｓｉＷＩを使用して軽鎖可変領域遺伝子と軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨを二重消化させ、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを使用して消化により得られたフラグメントをそれぞれ対応する発現プラスミドに挿入して、重鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＨ－８２ＶＨ－Ｈｕ３と軽鎖発現プラスミドｐＨＺＤＣＫ－８２ＶＫ－Ｈｕ１を構築した。
プラスミドの二重消化の結果を核酸電気泳動で検出した。図１（Ａ）の結果から分かるように、二重消化抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域、および重鎖と軽鎖の発現プラスミドを二重消化させた結果、重鎖と軽鎖のプラスミドは約１００００ｂｐであり、軽鎖可変領域は約４０８ｂｐであり、重鎖可変領域は約４２９ｂｐである。図１（Ｂ）の結果から分かるように、二重消化抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域、および重鎖と軽鎖の発現プラスミドを二重消化させた結果、重鎖と軽鎖のプラスミドは約１００００ｂｐであり、軽鎖可変領域は約４０８ｂｐであり、重鎖可変領域は約４２６ｂｐである。
配列が正しい重鎖発現プラスミドと軽鎖発現プラスミドをＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞にコトランスフェクションした。トランスフェクションの前日、トランスフェクション前の継代のために、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞を３×１０６細胞／ｍｌに希釈した。トランスフェクションの当日、細胞密度を６×１０６細胞／ｍｌに希釈し、トランスフェクションのために２５ｍｌの細胞を１２５ｍｌの振とうフラスコに入れた。トランスフェクションと発現のプロセスを図２に示す。
トランスフェクション後４～８日目に、培養上清を採取し、Ｐｒｏｔｅｉ Ａでワンステップで精製した。精製された抗体をＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動で検出し、ＱＸ００５Ｎと名付けた。具体的に言えば、それぞれＱＸ００５Ｎ（ＰＤ２－３１）とＱＸ００５Ｎ（ＨＺＤ８２－１２）である。当該抗体をタンパク質電気泳動で検出した結果を図３（Ａ）と（Ｂ）に示す。タンパク質電気泳動は変性還元ゲルで検出され、図３（Ａ）に示される結果から分かるように、２つのバンドがあり、２つのバンドのサイズはそれぞれ約５０ｋＤａと２５ｋＤａであり、重鎖（４８．５ｋＤａ）と軽鎖（２３．７ｋＤａ）の理論上の分子量と一致している。図３（Ｂ）に示される結果から分かるように、２つのバンドがあり、２つのバンドのサイズはそれぞれ約５０ｋＤａと２５ｋＤａであり、重鎖（４８．３ｋＤａ）と軽鎖（２３．６ｋＤａ）の理論上の分子量と一致している。
【実施例】
【0063】
平衡解離定数（ＫＤ）の測定
モノクローナル抗体ＰＤ２－３１、ＨＺＤ８２－１２、及びデュピルマブのヒトＩＬ－４Ｒα（上海近岸タンパク質科技有限公司）に対する親和性をＱＸ００２ＮとｈＩＬ－１７Ａの親和性をＢｉａｃｏｒｅＴ２００を使用して検出し、すべてのプロセスを２５℃で行った。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａタンパク質をＣＭ５チップ上に化学的にカップリングし、Ｒｍａｘが５０ＲＵ未満、捕捉流量が１０μｌ／ｍｉｎになるように、捕捉法によって適切な量の抗体を固定した。抗原を段階的に希釈し、機器の流量を３０μｌ／ｍｉｎに切り替え、濃度が低いものから高いものへの順番で参照チャネルと抗体固定チャネルを流し、ネガティブ対照として電気泳動緩衝液（ｒｕｎｎｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）を流した。各結合と解離が完了した後、ｐＨ１．５グリシンでチップを再生した。機器に付属されているソフトウェアを使用して、１：１結合モデルに従って適合させ、抗体の結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄ、および平衡解離定数ＫＤの値を計算した。デュピルマブは、市販の薬剤を購入することによって得られた。
結果を下記表１に示す。
モノクローナル抗体ＰＤ２－３１、ＨＺＤ８２－１２、及びデュピルマブのヒトＩＬ－４Ｒα（上海近岸タンパク質科技有限公司）に対する親和性をＱＸ００２ＮとｈＩＬ－１７Ａの親和性をＢｉａｃｏｒｅＴ２００を使用して検出し、すべてのプロセスを２５℃で行った。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａタンパク質をＣＭ５チップ上に化学的にカップリングし、Ｒｍａｘが５０ＲＵ未満、捕捉流量が１０μｌ／ｍｉｎになるように、捕捉法によって適切な量の抗体を固定した。抗原を段階的に希釈し、機器の流量を３０μｌ／ｍｉｎに切り替え、濃度が低いものから高いものへの順番で参照チャネルと抗体固定チャネルを流し、ネガティブ対照として電気泳動緩衝液（ｒｕｎｎｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ）を流した。各結合と解離が完了した後、ｐＨ１．５グリシンでチップを再生した。機器に付属されているソフトウェアを使用して、１：１結合モデルに従って適合させ、抗体の結合速度定数ｋａ、解離速度定数ｋｄ、および平衡解離定数ＫＤの値を計算した。デュピルマブは、市販の薬剤を購入することによって得られた。
結果を下記表１に示す。
【0064】
【表1】
【実施例】
【0065】
マーモセットＩＬ－４Ｒαへの結合の測定
モノクローナル抗体ＰＤ２－３およびデュピルマブのマーモセットＩＬ－４Rαへの結合は、実施例２の方法に従って、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００によって研究された。マーモセットＩＬ－４Ｒαは、標準的な技術によって調製された。簡単に説明すると、マーモセットＩＬ－４Ｒαの細胞外領域を含む発現プラスミドを構築し（登録番号Ｑ０ＰＩＴ７）、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞にトランスフェクトした。発現後、Ｃ末端にｈｉｓ－タグが付いたマーモセットＩＬ－４Ｒαの細胞外領域（Ｇｌｙ ２４－Ｈｉｓ ２３２）をニッケルクロマトグラフィーで精製した。
マーモセットＩＬ－４Ｒαに結合するＰＤ２－３１のＫＤ値は約１００ｐＭである。結果は、ＰＤ２－３１がヒトＩＬ－４Ｒαに結合するのと同じ程度にマーモセットＩＬ－４Ｒαに結合することを示している。デュピルマブはマーモセットＩＬ－４Ｒαに結合しないため、ＰＤ２－３１とは異なるエピトープを認識する。
モノクローナル抗体ＰＤ２－３およびデュピルマブのマーモセットＩＬ－４Rαへの結合は、実施例２の方法に従って、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００によって研究された。マーモセットＩＬ－４Ｒαは、標準的な技術によって調製された。簡単に説明すると、マーモセットＩＬ－４Ｒαの細胞外領域を含む発現プラスミドを構築し（登録番号Ｑ０ＰＩＴ７）、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞にトランスフェクトした。発現後、Ｃ末端にｈｉｓ－タグが付いたマーモセットＩＬ－４Ｒαの細胞外領域（Ｇｌｙ ２４－Ｈｉｓ ２３２）をニッケルクロマトグラフィーで精製した。
マーモセットＩＬ－４Ｒαに結合するＰＤ２－３１のＫＤ値は約１００ｐＭである。結果は、ＰＤ２－３１がヒトＩＬ－４Ｒαに結合するのと同じ程度にマーモセットＩＬ－４Ｒαに結合することを示している。デュピルマブはマーモセットＩＬ－４Ｒαに結合しないため、ＰＤ２－３１とは異なるエピトープを認識する。
【実施例】
【0066】
異なる変異したｈＩＬ－４ＲαへのＰＤ２－３１の結合
ＰＤ２－３１が結合する主要なアミノ酸をさらに絞り込むために、ｈＩＬ－４Ｒαの複数の変異体をループ２（Ｖ４０ＦＬＬＳＥＡ４６）およびループ３（Ｍ６５ＤＤＶＶＳＡＤＮ７３）（表２）で設計した。野生型ｈＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα－ＥＣＤ）およびｈＩＬ－４Ｒα変異体は、標準的な技術を使用して調製された。簡単に説明すると、野生型ｈＩＬ－４Ｒαおよび異なる変異型ｈＩＬ－４Ｒαの細胞外領域を含む発現プラスミドを構築し、ＨＥＫ ２９３Ｆ細胞にトランスフェクトした。発現後、Ｃ末端ｈｉｓ－タグを持つ野生型ｈＩＬ－４ＲαとｈＩＬ－４Ｒα変異体の細胞外領域をニッケルクロマトグラフィーで精製した。野生型ｈＩＬ－４ＲαおよびｈＩＬ－４Ｒα変異体の精製タンパク質を、ＰＤ２－３１およびデュピルマブとの相互作用のために分析した。相互作用を、実施例２の方法に従って、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００によって研究した。結果を表２に示す。
ＰＤ２－３１が結合する主要なアミノ酸をさらに絞り込むために、ｈＩＬ－４Ｒαの複数の変異体をループ２（Ｖ４０ＦＬＬＳＥＡ４６）およびループ３（Ｍ６５ＤＤＶＶＳＡＤＮ７３）（表２）で設計した。野生型ｈＩＬ－４Ｒα（ｈＩＬ－４Ｒα－ＥＣＤ）およびｈＩＬ－４Ｒα変異体は、標準的な技術を使用して調製された。簡単に説明すると、野生型ｈＩＬ－４Ｒαおよび異なる変異型ｈＩＬ－４Ｒαの細胞外領域を含む発現プラスミドを構築し、ＨＥＫ ２９３Ｆ細胞にトランスフェクトした。発現後、Ｃ末端ｈｉｓ－タグを持つ野生型ｈＩＬ－４ＲαとｈＩＬ－４Ｒα変異体の細胞外領域をニッケルクロマトグラフィーで精製した。野生型ｈＩＬ－４ＲαおよびｈＩＬ－４Ｒα変異体の精製タンパク質を、ＰＤ２－３１およびデュピルマブとの相互作用のために分析した。相互作用を、実施例２の方法に従って、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００によって研究した。結果を表２に示す。
【0067】
【表2】
【0068】
ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２１９およびｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２２０に結合するＰＤ２－３１のＫＤ値は低すぎて正確に測定できず、８つの異なるループ３が変異されたｈＩＬ－４Ｒα（すなわち、表２のｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２３９、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４０、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４１、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４２、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４３、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４４、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４５、及びｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ４５３）に結合するＰＤ２－３１のＫＤ値は約１ｎＭ以下である。上記の結果は、ＰＤ２－３１がｈＩＬ－４Ｒαのループ２のアミノ酸に結合でき、特にｈＩＬ－４Ｒαのループ２のＬ４２、Ｌ４３、Ｓ４４、およびＥ４５に結合できるが、ｈＩＬ－４Ｒαのループ３のアミノ酸６５－７３への結合、特に、ｈＩＬ－４Ｒαのループ３のＭ６５、Ｄ６６、Ｄ６７、Ｖ６８、Ｖ６９、Ｓ７０、Ａ７１、Ｄ７２、およびＮ７３への有意な結合が現れなかったことを示している。
ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２１９およびｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２２０に結合するデュピルマブのＫＤ値は低すぎて正確に測定できず、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４１、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４２、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４４、およびｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４５に結合するデュピルマブのＫＤ値は１０ｎＭを超えている。上記の結果は、デュピルマブがループ２とループ３にあるアミノ酸に結合することを示している。
ヒトとマーモセットのＩＬ－４Ｒαとループ領域の間のアラインメントの結果を図１０（Ａ）と図１０（Ｂ）に示す。
本明細書では、変異型ｈＩＬ－４Ｒαに結合する抗体のＫＤが野生型ｈＩＬ－４Ｒαに結合するもののＫＤの１０倍未満しか増加していない場合、これらの部位の変異によって抗体の結合活性が低下しないことを意味し、これらの変異部位は抗体のエピトープではなく、抗体がこれらのアミノ酸に有意に結合しないことを意味する。変異型ｈＩＬ－４Ｒαに結合する抗体のＫＤが野生型ｈＩＬ－４Ｒαに結合するものの１０倍以上に増加した場合、これらの部位の変異により抗体の結合活性が大きく変化したことを意味し、抗体の結合活性が有意に変化したことを示し、抗体がこれらのアミノ酸に有意に結合していることを意味する。
ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２１９およびｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２２０に結合するデュピルマブのＫＤ値は低すぎて正確に測定できず、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４１、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４２、ｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４４、およびｈＩＬ－４Ｒα－Ｍｕ２４５に結合するデュピルマブのＫＤ値は１０ｎＭを超えている。上記の結果は、デュピルマブがループ２とループ３にあるアミノ酸に結合することを示している。
ヒトとマーモセットのＩＬ－４Ｒαとループ領域の間のアラインメントの結果を図１０（Ａ）と図１０（Ｂ）に示す。
本明細書では、変異型ｈＩＬ－４Ｒαに結合する抗体のＫＤが野生型ｈＩＬ－４Ｒαに結合するもののＫＤの１０倍未満しか増加していない場合、これらの部位の変異によって抗体の結合活性が低下しないことを意味し、これらの変異部位は抗体のエピトープではなく、抗体がこれらのアミノ酸に有意に結合しないことを意味する。変異型ｈＩＬ－４Ｒαに結合する抗体のＫＤが野生型ｈＩＬ－４Ｒαに結合するものの１０倍以上に増加した場合、これらの部位の変異により抗体の結合活性が大きく変化したことを意味し、抗体の結合活性が有意に変化したことを示し、抗体がこれらのアミノ酸に有意に結合していることを意味する。
【実施例】
【0069】
ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４及びＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性の阻害
ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭ ＩＬ－４／ＩＬ－１３レポーター遺伝子細胞株を使用して、モノクローナル抗体ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介される細胞内シグナル伝達分子ＳＴＡＴ６リン酸化活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに４×１０４細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～１０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、０．２ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養した。細胞培養上清を回収し、１０％ＱＵＡＮＴＩ－ＢｌｕｅＴＭ検出試薬を添加して３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１時間反応させた。次に、ＯＤ６３０ｎｍ値を検出し、用量反応曲線を作成して（図４（Ａ）－４（Ｄ））、抗体の拮抗活性を分析した。その結果、２つのモノクローナル抗体がいずれも、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化を阻害できることは示されている。図４（Ａ）は、ＰＤ２－３１がＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害する結果を示している。図４（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ３．１９ｎｇ／ｍｌと４．３９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図４（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２がＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害する結果を示している。図４（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ６．５ｎｇ／ｍｌと４．５４ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図４（Ｃ）は、ＰＤ２－３１がＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害する結果を示している。図４（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ８．７８ｎｇ／ｍｌと１２．８ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図４（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２がＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害する結果を示している。図４（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ２１．３ｎｇ／ｍｌと１２．７ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭ ＩＬ－４／ＩＬ－１３レポーター遺伝子細胞株を使用して、モノクローナル抗体ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介される細胞内シグナル伝達分子ＳＴＡＴ６リン酸化活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに４×１０４細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～１０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、０．２ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で２４時間培養した。細胞培養上清を回収し、１０％ＱＵＡＮＴＩ－ＢｌｕｅＴＭ検出試薬を添加して３７℃、５％ＣＯ２の条件下で１時間反応させた。次に、ＯＤ６３０ｎｍ値を検出し、用量反応曲線を作成して（図４（Ａ）－４（Ｄ））、抗体の拮抗活性を分析した。その結果、２つのモノクローナル抗体がいずれも、ＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化を阻害できることは示されている。図４（Ａ）は、ＰＤ２－３１がＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害する結果を示している。図４（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ３．１９ｎｇ／ｍｌと４．３９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図４（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２がＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害する結果を示している。図４（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ６．５ｎｇ／ｍｌと４．５４ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図４（Ｃ）は、ＰＤ２－３１がＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害する結果を示している。図４（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ８．７８ｎｇ／ｍｌと１２．８ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図４（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２がＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害する結果を示している。図４（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＨＥＫ ＢｌｕｅＴＭＩＬ－４／ＩＬ－１３細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＳＴＡＴ６リン酸化活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ２１．３ｎｇ／ｍｌと１２．７ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
【実施例】
【0070】
Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４及びＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性の阻害
Ａ５４９ヒト肺がん上皮細胞株を使用して、モノクローナル抗体ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるＣＣＬ－１７放出活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに３×１０４細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～２０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ－αおよび１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を２４時間培養した。細胞培養上清を収集した。抗体の拮抗活性を分析するために、上清中のＣＣＬ－１７の発現をサンドイッチＥＬＩＳＡ法で検出し、用量反応曲線を作成した（図５（Ａ）～（Ｄ））。その結果、前記抗体がいずれも、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出を阻害できることは示されている。図５（Ａ）は、ＰＤ２－３１がＡ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図５（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＡ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ３２．６ｎｇ／ｍｌと４４．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図５（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２がＡ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図５（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＡ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ４６．１ｎｇ／ｍｌと４４．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図５（Ｃ）は、ＰＤ２－３１がＡ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図５（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＡ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ２８．９ｎｇ／ｍｌと３７．３ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図５（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２がＡ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図５（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＡ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ４９．５ｎｇ／ｍｌと４６．５ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
Ａ５４９ヒト肺がん上皮細胞株を使用して、モノクローナル抗体ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるＣＣＬ－１７放出活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに３×１０４細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～２０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ－αおよび１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を２４時間培養した。細胞培養上清を収集した。抗体の拮抗活性を分析するために、上清中のＣＣＬ－１７の発現をサンドイッチＥＬＩＳＡ法で検出し、用量反応曲線を作成した（図５（Ａ）～（Ｄ））。その結果、前記抗体がいずれも、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出を阻害できることは示されている。図５（Ａ）は、ＰＤ２－３１がＡ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図５（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＡ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ３２．６ｎｇ／ｍｌと４４．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図５（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２がＡ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図５（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＡ５４９細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ４６．１ｎｇ／ｍｌと４４．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図５（Ｃ）は、ＰＤ２－３１がＡ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図５（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＡ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ２８．９ｎｇ／ｍｌと３７．３ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図５（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２がＡ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図５（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＡ５４９細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ４９．５ｎｇ／ｍｌと４６．５ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
【実施例】
【0071】
ＩＬ－４及びＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性の阻害
ＴＦ－１ヒト赤芽球性白血病細胞株を使用して、ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介される細胞増殖活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに２×１０４細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～２０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を７２時間培養した。細胞培養物を収集した。抗体の拮抗活性を分析するために、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイにより細胞増殖状態を検出し、用量反応曲線作成した（図６（Ａ）～（Ｄ））。その結果、前記抗体がいずれも、ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖を阻害できることは示されている。図６（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害する結果を示している。図６（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブは、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１３．９ｎｇ／ｍｌと２１．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図６（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害する結果を示している。図６（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブは、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１９．３ｎｇ／ｍｌと１８．８ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図６（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害する結果を示している。図６（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブは、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１５．５ｎｇ／ｍｌと２０．５ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図６（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害する結果を示している。図６（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブは、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１６．１ｎｇ／ｍｌと１４．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
ＴＦ－１ヒト赤芽球性白血病細胞株を使用して、ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介される細胞増殖活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに２×１０４細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～２０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を７２時間培養した。細胞培養物を収集した。抗体の拮抗活性を分析するために、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイにより細胞増殖状態を検出し、用量反応曲線作成した（図６（Ａ）～（Ｄ））。その結果、前記抗体がいずれも、ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖を阻害できることは示されている。図６（Ａ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害する結果を示している。図６（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブは、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１３．９ｎｇ／ｍｌと２１．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図６（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害する結果を示している。図６（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブは、ＩＬ－４によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１９．３ｎｇ／ｍｌと１８．８ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図６（Ｃ）は、ＰＤ２－３１が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害する結果を示している。図６（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブは、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１５．５ｎｇ／ｍｌと２０．５ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図６（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２が、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害する結果を示している。図６（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブは、ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞増殖活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１６．１ｎｇ／ｍｌと１４．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
【実施例】
【0072】
ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４及びＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性の阻害
ＨＦＬ－１ヒト肺線維芽細胞株を使用して、ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるＣＣＬ－１１放出活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに４×１０４細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～２０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ－αおよび１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を２４時間培養した。細胞培養上清を収集した。抗体の拮抗活性を分析するために、上清中のＣＣＬ－１１の発現をサンドイッチＥＬＩＳＡ法で検出し、用量反応曲線を作成した（図７（Ａ）～（Ｄ））。その結果、ＱＸ００５Ｎ、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４／ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出を阻害できることは示されている。図７（Ａ）は、ＰＤ２－３１がＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害する結果を示している。図７（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ４３．１ｎｇ／ｍｌと９６．８ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図７（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２がＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害する結果を示している。図７（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ６４．３ｎｇ／ｍｌと３３．４ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図７（Ｃ）は、ＰＤ２－３１がＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害する結果を示している。図７（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ３８．５ｎｇ／ｍｌと４７．８ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図７（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２がＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害する結果を示している。図７（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ８９．５ｎｇ／ｍｌと８６．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
ＨＦＬ－１ヒト肺線維芽細胞株を使用して、ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるＣＣＬ－１１放出活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに４×１０４細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～２０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ－αおよび１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を２４時間培養した。細胞培養上清を収集した。抗体の拮抗活性を分析するために、上清中のＣＣＬ－１１の発現をサンドイッチＥＬＩＳＡ法で検出し、用量反応曲線を作成した（図７（Ａ）～（Ｄ））。その結果、ＱＸ００５Ｎ、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４／ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出を阻害できることは示されている。図７（Ａ）は、ＰＤ２－３１がＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害する結果を示している。図７（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ４３．１ｎｇ／ｍｌと９６．８ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図７（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２がＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害する結果を示している。図７（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ６４．３ｎｇ／ｍｌと３３．４ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図７（Ｃ）は、ＰＤ２－３１がＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害する結果を示している。図７（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ３８．５ｎｇ／ｍｌと４７．８ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図７（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２がＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害する結果を示している。図７（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ８９．５ｎｇ／ｍｌと８６．９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
【実施例】
【0073】
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）における、ＩＬ－４及びＩＬ－１３によって誘発されたＣＤ３４発現活性の阻害
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単離された単核球を使用して、ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるＣＤ２３発現活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を２４ウェルに１．５×１０６細胞／ウェルで添加した。抗体濃度が０、３０ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ（ＩＬ－４の場合）、または０、２００ｎｇ／ｍｌ、１０００ｎｇ／ｍｌ（ＩＬ－３の場合）の範囲の段階希釈液を細胞に添加し、１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を４８時間培養した。細胞を収集し、抗体の拮抗活性を分析するために、細胞内のＣＤ２３の発現をＦＡＣＳフローサイトメトリーで検出した。その結果、図８（Ａ）と（Ｂ）に示すように、前期抗体がＰＢＭＣ細胞における、ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって誘発されるＣＤ２３発現を阻害することができる。ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２は、さまざまな濃度（３０ｎｇ／ｍｌおよび１５０ｎｇ／ｍｌ、または２００ｎｇ／ｍｌおよび１０００ｎｇ／ｍｌ）で良好な阻害効果を達成できる。
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単離された単核球を使用して、ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるＣＤ２３発現活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を２４ウェルに１．５×１０６細胞／ウェルで添加した。抗体濃度が０、３０ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ（ＩＬ－４の場合）、または０、２００ｎｇ／ｍｌ、１０００ｎｇ／ｍｌ（ＩＬ－３の場合）の範囲の段階希釈液を細胞に添加し、１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を４８時間培養した。細胞を収集し、抗体の拮抗活性を分析するために、細胞内のＣＤ２３の発現をＦＡＣＳフローサイトメトリーで検出した。その結果、図８（Ａ）と（Ｂ）に示すように、前期抗体がＰＢＭＣ細胞における、ＩＬ－４およびＩＬ－１３によって誘発されるＣＤ２３発現を阻害することができる。ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２は、さまざまな濃度（３０ｎｇ／ｍｌおよび１５０ｎｇ／ｍｌ、または２００ｎｇ／ｍｌおよび１０００ｎｇ／ｍｌ）で良好な阻害効果を達成できる。
【実施例】
【0074】
ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４及びＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性の阻害
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単離された単核球を使用して、ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるＣＣＬ－１７放出活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに３×１０５細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～２０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を４８時間培養した。細胞培養上清を収集した。抗体の拮抗活性を分析するために、上清中のＣＣＬ－１７の発現をサンドイッチＥＬＩＳＡ法で検出し、用量反応曲線を作成した（図９（Ａ）～（Ｄ））。その結果、前記抗体がいずれも、ＰＢＭＣ細胞における、ＩＬ－４／ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出を阻害できることは示されている。図９（Ａ）は、ＰＤ２－３１がＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図９（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ２４．８ｎｇ／ｍｌと２９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図９（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２がＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図９（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ６７．８ｎｇ／ｍｌと４３．６ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図９（Ｃ）は、ＰＤ２－３１がＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図９（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ６８．６ｎｇ／ｍｌと９８．４ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図９（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２がＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図９（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１１７ｎｇ／ｍｌと８２ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単離された単核球を使用して、ＰＤ２－３１およびＨＺＤ８２－１２がＩＬ－４Ｒαを介してＩＬ－４/ＩＬ－１３によって媒介されるＣＣＬ－１７放出活性に拮抗する能力を測定した。培養液中の細胞を９６ウェルに３×１０５細胞／ウェルで添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で一晩培養した。抗体濃度が０～２０ｕｇ／ｍｌの範囲の段階希釈液を細胞に添加し、１ｎｇ／ｍｌのＩＬ－４または２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１３を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で細胞を４８時間培養した。細胞培養上清を収集した。抗体の拮抗活性を分析するために、上清中のＣＣＬ－１７の発現をサンドイッチＥＬＩＳＡ法で検出し、用量反応曲線を作成した（図９（Ａ）～（Ｄ））。その結果、前記抗体がいずれも、ＰＢＭＣ細胞における、ＩＬ－４／ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出を阻害できることは示されている。図９（Ａ）は、ＰＤ２－３１がＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図９（Ａ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ２４．８ｎｇ／ｍｌと２９ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図９（Ｂ）は、ＨＺＤ８２－１２がＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図９（Ｂ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ６７．８ｎｇ／ｍｌと４３．６ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図９（Ｃ）は、ＰＤ２－３１がＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図９（Ｃ）の結果から、ＰＤ２－３１とデュピルマブはＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ６８．６ｎｇ／ｍｌと９８．４ｎｇ／ｍｌであることが分かる。図９（Ｄ）は、ＨＺＤ８２－１２がＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害する結果を示している。図９（Ｄ）の結果から、ＨＺＤ８２－１２とデュピルマブはＰＢＭＣにおける、ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性を阻害し、ＩＣ５０がそれぞれ１１７ｎｇ／ｍｌと８２ｎｇ／ｍｌであることが分かる。
【0075】
本明細書に記載の異なるアッセイの結果は、デュピルマブと比較したＰＤ２－３１の１つまたは複数の利点を示している。その利点は、マーモセットＩＬ－４Ｒへの結合（実施例３）；しかも、よりよいＩＬ－４／ＩＬ－１３シグナル伝達の活性の阻害（実施例５）、Ａ５４９細胞における、ＩＬ－４／ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出の阻害（実施例６）、ＩＬ－４／ＩＬ－１３によって誘発されたＴＦ－１細胞の増殖の阻害（実施例７）、ＨＦＬ－１細胞における、ＩＬ－４/ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１１放出活性の阻害（実施例８）;ＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４／ＩＬ－１３によって誘発されたＣＤ２３発現活性の阻害（実施例９）、およびＰＢＭＣにおける、ＩＬ－４／ＩＬ－１３によって誘発されたＣＣＬ－１７放出活性の阻害（実施例１０）を示していることを含む。また、ＰＤ２－３１はデュピルマブと比較して異なるエピトープに結合し、さらに、デュピルマブのＫＤが強いが、異なるアッセイでは活性が低いことから、ＰＤ２－３１の阻害活性がデュピルマブと比較して追加の阻害成分を持っている可能性があることは示されており、これも追加の利点を提供することができる。
【図1】
【図2】
【図3-1】
【図3-2】
【図4-1】
【図4-2】
【図4-3】
【図4-4】
【図5-1】
【図5-2】
【図5-3】
【図5-4】
【図6-1】
【図6-2】
【図6-3】
【図6-4】
【図7-1】
【図7-2】
【図7-3】
【図7-4】
【図8-1】
【図8-2】
【図9-1】
【図9-2】
【図9-3】
【図9-4】
【図10-1】
【図10-2】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2021-07-02
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の組換え抗体またはそのフラグメント；またはｂ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）と３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３）を含む抗ヒトＩＬ－Ｒ４α受容体の単離されたモノクローナル抗体である抗体またはそのフラグメントであって、ａ）とｂ）において、
ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列は配列番号１に示され、ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列は配列番号２に示され、ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は配列番号３に示され、ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列は配列番号４に示され、ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列は配列番号５に示され、ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は配列番号６に示される、又は、
ＣＤＲ－Ｈ１のアミノ酸配列は配列番号１４に示され、ＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列は配列番号１５に示され、ＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は配列番号１６に示され、ＣＤＲ－Ｌ１のアミノ酸配列は配列番号１７に示され、ＣＤＲ－Ｌ２のアミノ酸配列は配列番号１８に示され、ＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は配列番号１９に示される、抗体またはそのフラグメント。
【請求項2】
前記抗体またはそのフラグメントは、前記単離されたモノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項3】
前記単離されたモノクローナル抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号７に示され、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号８に示され、
前記単離されたモノクローナル抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２に示され、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１３に示される、請求項２に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項4】
前記抗体またはそのフラグメントは、前記組換え抗体またはそのフラグメントであり、
好ましくは、前記組換え抗体またはそのフラグメントはヒト化されている、請求項１に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項5】
前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、又は
前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項４に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項6】
前記組換え抗体またはそのフラグメントはＩｇＧ４抗体である、請求項５に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項7】
前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号１０に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号１１に示される軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体であり、又は
前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号２０に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号２１に示される軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体である、請求項５に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項8】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項７に記載の抗体またはそのフラグメント。
【請求項9】
請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントをコードする、単離された核酸。
【請求項10】
請求項９に記載の単離された核酸を含む、宿主細胞。
【請求項11】
請求項２～４のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体をコードする核酸を宿主細胞において発現するステップを含み、
好ましくは、前記組換え抗体またはそのフラグメントは、配列番号２０に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号２１に示される軽鎖アミノ酸配列とを含む抗体である、モノクローナル抗体を産生する方法。
【請求項12】
前記抗体またはそのフラグメントをコードする核酸を発現するステップを含み、好ましくは、前記宿主細胞がＣＨＯまたはＨＥＫ２９３である、請求項１～２、４～８のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントを産生する方法。
【請求項13】
請求項１１または１２に記載の方法によって産生される抗体またはそのフラグメント。
【請求項14】
請求項１～８及び１３のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメント、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項15】
ＩＬ－４またはＩＬ－４／ＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療するための、好ましくは、前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（軽度、中等度、および重度の喘息を含む）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患を含む）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれ、
更に好ましくは、前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項16】
ＩＬ－４および／またはＩＬ－１３によって媒介されるシグナル伝達に関連する疾患を治療するための医薬の調製における、好ましくは、前記疾患が、アトピー性皮膚炎、遺伝性アレルギー性皮膚炎、関節炎（敗血症性関節炎を含む）、ヘルペス、慢性原発性蕁麻疹、強皮症、肥厚性瘢痕 、ホイップル病、良性前立腺過形成、肺疾患（軽度、中等度、および重度の喘息を含む）、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、干し草熱、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、好酸球増加症、乾癬、乾癬性関節炎、炎症性疾患（潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患を含む）、アレルギー反応、川崎病、鎌状赤血球症、チャーグ－ストラウス（Ｃｈｕｒｇ－Ｓｔｒａｕｓｓ）症候群、グレイブス病、発疹前紫斑病、シェーグレン症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性溶血性貧血、バレット食道、自己免疫性ブドウ膜炎、結核、線維症、および腎臓病からなる群より選ばれ、
更に好ましくは、前記疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、副鼻腔炎、鼻ポリポーシス、鼻ポリープ、硬化症、好酸球性食道炎、アレルギー性食道炎、食道炎、シェーグレン症候群、慢性閉塞性肺疾患、および肺気腫からなる群より選ばれる、請求項１～８及び１３のいずれか一項に記載の抗体またはそのフラグメントの使用。
【手続補正書】
【提出日】2021-08-18
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】