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特表2022-517723ＣＤＫ阻害剤としての大環状化合物、その製造方法及びその医薬品における応用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-03-10
(54)【発明の名称】ＣＤＫ阻害剤としての大環状化合物、その製造方法及びその医薬品における応用
(51)【国際特許分類】
C07D 471/22 20060101AFI20220303BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20220303BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20220303BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20220303BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20220303BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20220303BHJP
A61P 31/18 20060101ALI20220303BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20220303BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20220303BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20220303BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20220303BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20220303BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20220303BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20220303BHJP
A61P 31/22 20060101ALI20220303BHJP
A61P 31/20 20060101ALI20220303BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20220303BHJP
A61K 31/529 20060101ALI20220303BHJP
【ＦＩ】
C07D471/22 CSP
A61P43/00 111
A61P35/00
A61P29/00
A61P31/12
A61P9/00
A61P31/18
A61P35/02
A61P29/00 101
A61P19/02
A61P17/02
A61P3/10
A61P13/12
A61P25/00
A61P37/06
A61P31/22
A61P31/20
A61P43/00 121
A61K45/00
A61K31/529
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021533362
(86)(22)【出願日】2019-12-11
(85)【翻訳文提出日】2021-08-10
(86)【国際出願番号】 CN2019124575
(87)【国際公開番号】W WO2020125513
(87)【国際公開日】2020-06-25
(31)【優先権主張番号】201811558752.4
(32)【優先日】2018-12-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
２．ＢＲＩＪ
(71)【出願人】
【識別番号】521254247
【氏名又は名称】キーセラ・（スーチョウ）・ファーマシューティカルズ・カンパニー・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】ヨンキ・デン
(72)【発明者】
【氏名】ジャン・スン
【テーマコード（参考）】
4C065
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C065AA09
4C065AA19
4C065BB06
4C065CC06
4C065DD05
4C065EE04
4C065HH06
4C065JJ01
4C065KK02
4C065LL04
4C065PP15
4C065QQ02
4C084AA19
4C084MA02
4C084MA17
4C084MA23
4C084MA55
4C084MA58
4C084MA59
4C084MA66
4C084NA05
4C084ZA011
4C084ZA361
4C084ZA811
4C084ZA891
4C084ZA961
4C084ZB072
4C084ZB081
4C084ZB082
4C084ZB111
4C084ZB112
4C084ZB151
4C084ZB261
4C084ZB262
4C084ZB271
4C084ZB272
4C084ZB331
4C084ZC351
4C084ZC551
4C084ZC751
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086CB14
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA17
4C086MA23
4C086MA55
4C086MA58
4C086MA59
4C086MA66
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZA01
4C086ZA36
4C086ZA81
4C086ZA89
4C086ZA96
4C086ZB08
4C086ZB11
4C086ZB15
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZB33
4C086ZC02
4C086ZC35
4C086ZC55
4C086ZC75
(57)【要約】
ＣＤＫ阻害剤としての大環状化合物、その製造方法及びその医薬品における応用に関する。具体的には、一般式（Ｉ）で表される新規な大環状化合物、その製造方法及び該化合物を含有する医薬組成物、その治療剤、特にＣＤＫ阻害剤としての用途、並びに癌、炎症、ウイルス感染、心臓肥大及びＨＩＶの治療のための用途に関し、ここで一般式（Ｉ）の各置換基は明細書における定義と同じである。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
一般式（Ｉ）で表される化合物、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、それらの混合物形態、又はその薬学的に許容される塩。【化1】
Ａ及びＢは、それぞれ独立して、ＣＨ及びＮ原子から選択され、
Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して、ＣＨ及びＮ原子から選択され、
Ｑは、単結合、Ｃ１－４アルキレン基及び－Ｃ（＝Ｏ）－から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基は、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｇは、単結合、－Ｏ－、－Ｎ（Ｒ７）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基、－Ｓ－、－ＳＯ－、－ＳＯ２－及び３～６員の複素環基から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｊは、単結合、－Ｏ－、－Ｎ（Ｒ７）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基、－Ｓ－、－ＳＯ－、－ＳＯ２－及び３～６員の複素環基から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｌは、単結合、－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基、－Ｓ－、－ＳＯ－、－ＳＯ２－及び３～６員の複素環基から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ１は、Ｈ原子、Ｃ１－４アルキル基、シアノ基、Ｃ２－４アルケニル基及びＣ２－４アルキニル基から選択され、前記Ｃ１－４アルキル基、Ｃ２－４アルケニル基及びＣ２－４アルキニル基は、それぞれ独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ２は、Ｈ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、前記Ｃ１－４アルキル基は、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
又は、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している原子と共にＣ３－６シクロアルキル基又は３～６員の複素環基を形成し、前記Ｃ３－６シクロアルキル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ３及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、前記アルキル基は、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ原子、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基及びＣ１－４アルコキシ基から選択され、前記Ｃ１－４アルキル基及びＣ１－４アルコキシ基は、それぞれ独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、そして
Ｒ７は、Ｈ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、前記アルキル基は、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換される。）
【請求項2】
－Ｇ－Ｊ－Ｌ－は、－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－及び－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－から選択される、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項3】
Ｑは、単結合又はメチレン基である、請求項１又は２に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項4】
Ｖ、Ｘ及びＹは、それぞれ独立してＣＨである、請求項１～３のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項5】
Ｗは、Ｎ原子である、請求項１～４のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項6】
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立してＨ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、又は、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している原子と共にＣ３－６シクロアルキル基を形成する、請求項１～５のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項7】
Ｒ３及びＲ６は、それぞれ独立してＣ１－４アルキル基である、請求項１～６のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項8】
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立してハロゲンであり、好ましくはＦ原子である、請求項１～７のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項9】
【化2】
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法であって、【化3】
式中、
ＬＧ１及びＬＧ２は、それぞれ独立して脱離基であり、
Ａ、Ｂ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｒ１～Ｒ６は、請求項１で定義されるとおりである、製造方法。
【請求項11】
前記縮合剤は、２－（７－オキシベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート及び１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファートから選択され、好ましくは２－（７－オキシベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファートであり、ＬＧ１及びＬＧ２は、それぞれ独立して、Ｈ原子、ＯＨ、ハロゲン、メタンスルホン酸エステル、トリフルオロメタンスルホン酸エステル及びｐ－トルエンスルホン酸エステルから選択され、好ましくは、ＬＧ１及びＬＧ２は、それぞれ独立して、Ｈ原子、ＯＨ、Ｃｌ原子及びＢｒ原子から選択され、より好ましくは、ＬＧ１は、Ｈ原子であり、ＬＧ２は、ＯＨ原子である、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
Ｇは－ＮＨ－であり、ＬＧ１はＨ原子であり、Ｊは－Ｃ（＝Ｏ）－であり、かつ－ＬＧ２はＯＨ原子である、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項13】
治療有効量の請求項１～９のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物、及び薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含み、好ましくは、１種以上の追加の抗腫瘍剤、抗炎症剤、免疫抑制剤及び／又は免疫チェックポイント阻害剤をさらに含む、医薬組成物。
【請求項14】
請求項１～９のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物又は請求項１３に記載の医薬組成物の、ＣＤＫ関連障害を治療する薬物の製造における用途であって、好ましくは、前記ＣＤＫ関連障害は、癌、炎症、ウイルス感染、心臓肥大及びＨＩＶから選択される、用途。
【請求項15】
前記癌は、膀胱癌、頭頸部癌、乳癌、胃癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、脳癌、喉頭癌、リンパ系癌、造血系癌、尿生殖器管癌、胃腸癌、卵巣癌、前立腺癌、胃癌、骨癌、小細胞肺癌、神経膠腫、結腸直腸癌及び膵臓癌から選択され、前記炎症は、リウマチ性関節炎、狼瘡、Ｉ型糖尿病、糖尿病性腎症、多発性硬化、糸球体腎炎、慢性炎症及び臓器移植拒絶に関連し、前記ウイルス感染は、ＨＩＶウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ＥＢウイルス、シンドビスウイルス又はアデノウイルスに関連する、請求項１４に記載の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医薬品の分野に属し、一般式（Ｉ）で表される新規な大環状化合物、その製造方法及び該誘導体を含有する医薬組成物、並びに過剰増殖性疾患の治療におけるその治療剤、特にＣＤＫ阻害剤としての用途に関する。
【背景技術】
【0002】
近年、腫瘍は、心血管疾患を超え、世界の死因第１位の疾患となり、抗腫瘍薬の研究は、重要な学術的及び現実的意義を有する。過剰活性化、持続的な細胞増殖は、腫瘍の基本的な特徴であるため、細胞周期停止を誘導することで腫瘍の成長を効果的に阻害することができる。サイクリン依存性キナーゼ（ｃｙｃｌｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅ、ＣＤＫ）は、セリン／トレオニンタンパク質キナーゼファミリーに属し、細胞周期の調節に関与する重要なキナーゼである。これまでに、２０個の異なるＣＤＫが報告され、ＣＤＫ機能に応じて主に２つの種類に分類することができる。１つの種類のＣＤＫは、細胞周期の調節に関与し、主にＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６などを含む。別の種類のＣＤＫは、転写の調節に関与し、主にＣＤＫ７、ＣＤＫ８、ＣＤＫ９、ＣＤＫ１０、ＣＤＫ１１などを含む。腫瘍細胞において、サイクリン（ｃｙｃｌｉｎ）の過剰発現又は過剰活性化、ＣＤＫＩ活性の阻害、上流分裂シグナルの持続的な活性化などは、いずれもＣＤＫの活性の変化を引き起こす。ＣＤＫ活性の調節異常は、細胞増殖の制御不能、ゲノムの不安定化（ＤＮＡ変異の増加、染色体の欠失など）及び染色体の不安定化（染色体の数の変化）などを直接的又は間接的に引き起こし、腫瘍の発生発展に関与する。ＣＤＫ活性は、細胞分裂に必要なものであり、また腫瘍細胞においてＣＤＫ活性が常に増強されるため、長期にわたって、ＣＤＫは、終始よく、腫瘍及び他の増殖性障害疾患に対する医薬品の研究開発のための良好な標的であると考えられる。
【0003】
ＬＹ２８３５２１９（Ｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ又はＡｂｅｍａｃｉｃｌｉｂとも呼ばれる）は、イーライリリー（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）社により開発された、サイクリン依存性キナーゼ４及び６（ＣＤＫ４／６）の阻害をメカニズムとする乳癌治療薬である。その構造式は、
である。一期臨床データは、該薬が単独で転移性乳癌患者を治療する早期治療効果が高いことを示し、特にホルモン受容体陽性の乳癌患者に対して、臨床的有用性が６１％に達することができ、これは、患者の疾患制御時間が２４週間を超えたか、又は腫瘍の大きさが３０％以上減少したことを意味する。現在、米国ＦＤＡは、閉経後ホルモン受容体（ＨＲ）陽性、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）陰性の進行性又は転移性乳癌の第一選択治療としてのイーライリリー（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）のＡｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ（ＶＥＲＺＥＮＩＯ）と非ステロイド性アロマターゼ阻害剤（ｎｏｎ－ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｒｏｍａｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、ＮＳＡＩ）であるレトロゾール又はアナストロゾールとの併用を承認した。非小細胞肺癌の臨床研究も始まっている。
【化1】
【0004】
ＰＤ０３３２９９１（Ｉｂｒａｎｃｅ又はＰａｌｂｏｃｉｃｌｉｂとも呼ばれる）は、ファイザー（Ｐｆｉｚｅｒ）社によって開発されたＣＤＫ４／６阻害剤である。その構造式は、
である。２０１５年２月３日に、ＦＤＡは、レトロゾールと併用してエストロゲン受容体（ＥＲ）陽性、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）陰性の閉経後女性転移性乳癌を治療するＰＤ０３３２９９１の上市申請を迅速に承認した。
【化2】
【0005】
ＣＤＫ阻害剤は、再狭窄及びアテローム性動脈硬化などの心血管障害、及び異常細胞増殖による他の血管障害の治療にも用いることができる。サイクリン依存性キナーゼ阻害剤タンパク質の過剰発現は、バルーン血管形成術後の血管平滑筋増殖及び内膜増殖を阻害する。そして、プリンＣＤＫ２阻害剤ＣＶＴ－３１３（Ｋｉ＝９５ｎＭ）によりラットの新生内膜の生成の阻害が８０％よりも大きい。
【0006】
ＣＤＫ阻害剤は、真菌、熱帯熱マラリア原虫などの原生動物寄生虫、ＤＮＡ及びＲＮＡウイルスを含む様々な感染性物質による疾患の治療に用いることができる。
【0007】
最近、ＣＤＫ９は、ＨＩＶ複製の予防に関連するため、ＣＤＫの新たな生物学的発見によりＣＤＫ阻害剤の新たな治療適応症が出現し続ける。
【0008】
ＣＤＫは、好中球により媒介された炎症において非常に重要であり、かつＣＤＫ阻害剤は、動物モデルにおける炎症の減退を促進する。したがって、ＣＤＫ９阻害剤を含むＣＤＫ阻害剤は、抗炎症剤として使用することができる。
【0009】
選択的ＣＤＫ阻害剤は、様々な自己免疫障害の影響を改善するために用いることができる。慢性炎症性疾患－リウマチ性関節炎の特徴は、滑膜組織増殖であり、滑膜組織増殖の阻害は、炎症を最小限に抑え、かつ関節破壊を予防すべきである。ラット関節炎モデルにおいて、ＣＤＫ阻害剤タンパク質ｐ１６を発現するアデノウイルスで治療することにより関節の腫れ及び痛みを基本的に阻害する。ＣＤＫ阻害剤は、（角化細胞の過度な増殖を特徴とする）乾癬、糸球体腎炎、慢性炎症及び狼瘡を含む細胞増殖による他の障害に対して効果的である。
【0010】
現在既存のＣＤＫ阻害剤の特許出願は、例えば、ＷＯ２０１５１０１２９３Ａ１、ＷＯ２０１６０１５６０５Ａ１、ＷＯ２０１６１９４８３１Ａ１、ＷＯ２００８０７９９３３Ａ２などを含む。巨大な市場需要に起因して、依然として低毒性で効率的なＣＤＫ阻害剤を開発し続ける必要がある。
【0011】
大環状抗生物質は、医薬品の発見における重要な構造種類として認識されている。同じ数の重原子の場合、大環状化合物自体は、その非環状アナログよりも少ない数の回転可能結合を有し、これは、経口生物学的利用能の有益な特徴である（Ｍａｌｌｉｎｓｏｎ、Ｊ．、Ｃｏｌｌｉｎｓ、Ｉ．Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅｓ ｉｎ ｎｅｗ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．Ｆｕｔｕｒｅ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１２、４、１４０９－１４３８）。結果として、大環状化合物は、その非環状アナログに比べてより立体配座制限を有し、これは、より高い標的結合及び選択性を付与し、かつ経口生物学的利用能を改善する可能性がある。
【0012】
天然生成物の大環状化合物の開発により複数種の抗腫瘍薬が生成され、これらの薬物は、臨床での使用が承認されたか又は後期の臨床開発に入り、例えば、ｍＴＯＲ阻害剤Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標）（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）［Ｋｗｉｔｋｏｗｓｋｉ ＶＥ、Ｐｒｏｗｅｌｌ ＴＭ、Ｉｂｒａｈｉｍ Ａ ｅｔ ａｌ．ＦＤＡ ａｐｐｒｏｖａｌ ｓｕｍｍａｒｙ：ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ ａｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ａｄｖａｎｃｅｄ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ １５（４）、４２８－４３５（２０１０）］、チューブリン安定剤Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標）（イキサベピロン）及びＨｓｐ９０阻害剤１７－アリルアミノゲルダナマイシン［Ｍｃｄｏｎａｌｄ Ｅ、Ｗｏｒｋｍａｎ Ｐ、Ｊｏｎｅｓ Ｋ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＳＰ９０ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｐｅｒｏｎｅ：ａｔｔａｃｋｉｎｇ ｔｈｅ ｍａｓｔｅｒ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．６（１１）、１０９１－１１０７（２００６）］である。 多くの合成大環状化合物は、既に臨床開発段階に入り、例えば、二重ＪＡＫ２／ＦＬＴ３阻害剤ｐａｃｒｉｔｉｎｉｂは、現在第ＩＩ相臨床試験中であり［Ｈａｒｔ Ｓ、ＧｏＨＫＣ、Ｎｏｖｏｔｎｙ－Ｄｉｅｒｍａｙｒ Ｖ ｅｔ ａｌ．ＳＢ１５１８、ａ ｎｏｖｅｌ ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｂａｓｅｄ ＪＡＫ２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｙｅｌｏｉｄ ａｎｄ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２５（１１）、１７５１－１７５９（２０１１）］、ＣＤＫ２／ＪＡＫ２／ＦＬＴ３阻害剤ＳＢ１３１７は、第ＩＩ相臨床試験中であり［Ｗｉｌｌｉａｍ ＡＤ、Ｌｅｅ ＡＣＨ、ＧｏＨＫＣｅｔ ａｌ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｋｉｎａｓｅ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅ（１６Ｅ）－１４－ｍｅｔｈｙｌ－２０ｏｘａ５，７，１４，２６－ｔｅｔｒａａｚａｔｅｔｒａｃｙｃｌｏ［１９．３．１．１（２，６）．１（８，１２）］ｈｅｐｔａｃｏｓａ１（２５）、２（２６）、３、５、８（２７）、９、１１、１６、２１、２３－ｄｅｃａｅｎｅ（ＳＢ１３１７／ＴＧ０２）、ａ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｃｙｃｌｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅｓ（ＣＤＫｓ）、ｊａｎｕｓ ｋｉｎａｓｅ ２（ＪＡＫ２）、ａｎｄ Ｆｍｓ－ｌｉｋｅ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ－３（ＦＬＴ３）ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５５（１）、１６９－１９６（２０１２）］、シレンギチド（ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）は、膠芽腫を治療する、第ＩＩＩ相臨床試験中の合成シクロペプチドである［Ｓｔｕｐｐ Ｒ、Ｖａｎ Ｄｅｎ Ｂｅｎｔ ＭＪ、Ｅｒｒｉｄｇｅ ＳＣ ｅｔ ａｌ．Ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ ｉｎ ｎｅｗｌｙ ｄｉａｇｎｏｓｅｄ ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ ｗｉｔｈ ＭＧＭＴ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ：Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｏｆ ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ、ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ、ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌ、ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｔｒｉａｌ（ＣＥＮＴＲＩＣ）．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２８（１５ｓ）、ＴＰＳ１５２（２０１０）］。汎ＣＤＫ阻害剤化合物Ｍは、開発候補物として提案された合成大環状化合物の別の例である［Ｈｉｒａｉ Ｈ、Ｔａｋａｈａｓｈｉ－Ｓｕｚｉｋｉ Ｉ、Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ Ｔ ｅｔ ａｌ．Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａ ｍａｃｒｏｃｙｃｌｅ－ｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｏｎｅ ｃｌａｓｓ ｐａｎ－Ｃｄｋ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ ２９（４）、５３４－５４３（２０１１）］。
【発明の概要】
【0013】
本発明の目的は、優れたＣＤＫ阻害活性を有する化合物を提供することであり、本発明者らは、該目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、分子内環化反応により優れたＣＤＫ阻害活性を有する新規な大環状化合物が得られることを見出し、本発明を完成した。
【0014】
本発明は、特に、以下の一般式（Ｉ）の化合物、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、それらの混合物形態、又はその薬学的に許容される塩に関する。
（式中、
Ａ及びＢは、それぞれ独立して、ＣＨ及びＮ原子から選択され、
Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して、ＣＨ及びＮ原子から選択され、
Ｑは、単結合、Ｃ１－４アルキレン基及び－Ｃ（＝Ｏ）－から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基は、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｇは、単結合、－Ｏ－、－Ｎ（Ｒ７）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基、－Ｓ－、－ＳＯ－、－ＳＯ２－及び３～６員の複素環基から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｊは、単結合、－Ｏ－、－Ｎ（Ｒ７）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基、－Ｓ－、－ＳＯ－、－ＳＯ２－及び３～６員の複素環基から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｌは、単結合、－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基、－Ｓ－、－ＳＯ－、－ＳＯ２－及び３～６員の複素環基から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ１は、Ｈ原子、Ｃ１－４アルキル基、シアノ基、Ｃ２－４アルケニル基及びＣ２－４アルキニル基から選択され、前記Ｃ１－４アルキル基、Ｃ２－４アルケニル基及びＣ２－４アルキニル基は、それぞれ独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ２は、Ｈ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、前記Ｃ１－４アルキル基は、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
又は、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している原子と共にＣ３－６シクロアルキル基又は３～６員の複素環基を形成し、前記Ｃ３－６シクロアルキル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ３及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、前記アルキル基は、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ原子、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基及びＣ１－４アルコキシ基から選択され、前記Ｃ１－４アルキル基及びＣ１－４アルコキシ基は、それぞれ独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、そして
Ｒ７は、Ｈ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、前記アルキル基は、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換される。）
【化3】
Ａ及びＢは、それぞれ独立して、ＣＨ及びＮ原子から選択され、
Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して、ＣＨ及びＮ原子から選択され、
Ｑは、単結合、Ｃ１－４アルキレン基及び－Ｃ（＝Ｏ）－から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基は、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｇは、単結合、－Ｏ－、－Ｎ（Ｒ７）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基、－Ｓ－、－ＳＯ－、－ＳＯ２－及び３～６員の複素環基から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｊは、単結合、－Ｏ－、－Ｎ（Ｒ７）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基、－Ｓ－、－ＳＯ－、－ＳＯ２－及び３～６員の複素環基から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｌは、単結合、－Ｃ（＝Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基、－Ｓ－、－ＳＯ－、－ＳＯ２－及び３～６員の複素環基から選択され、前記Ｃ１－４アルキレン基、Ｃ２－４アルケニル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ１は、Ｈ原子、Ｃ１－４アルキル基、シアノ基、Ｃ２－４アルケニル基及びＣ２－４アルキニル基から選択され、前記Ｃ１－４アルキル基、Ｃ２－４アルケニル基及びＣ２－４アルキニル基は、それぞれ独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ２は、Ｈ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、前記Ｃ１－４アルキル基は、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
又は、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している原子と共にＣ３－６シクロアルキル基又は３～６員の複素環基を形成し、前記Ｃ３－６シクロアルキル基及び３～６員の複素環基は、それぞれ独立して、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ３及びＲ６は、それぞれ独立して、Ｈ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、前記アルキル基は、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｈ原子、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基及びＣ１－４アルコキシ基から選択され、前記Ｃ１－４アルキル基及びＣ１－４アルコキシ基は、それぞれ独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換され、そして
Ｒ７は、Ｈ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、前記アルキル基は、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ヒドロキシ基及びシアノ基から選択される１つ以上の基で任意に置換される。）
【0015】
１つの好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、－Ｇ－Ｊ－Ｌ－は、－ＮＨ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－及び－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－から選択される。
【0016】
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ａ及びＢは、それぞれ独立してＮ原子である。
【0017】
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ｑは、単結合又はメチレン基である。
【0018】
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ｕは、ＣＨ及びＮ原子から選択される。
【0019】
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ｖ、Ｘ及びＹは、それぞれ独立してＣＨである。
【0020】
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ｗは、Ｎ原子である。
【0021】
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立してＨ原子及びＣ１－４アルキル基から選択され、又は、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している原子と共にＣ３－６シクロアルキル基を形成する。
【0022】
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ３及びＲ６は、それぞれ独立してＣ１－４アルキル基であり、好ましくは、Ｒ３はメチル基であり、かつＲ６はエチル基である。
【0023】
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立してハロゲンであり、好ましくはＦ原子である。
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ７は、Ｈ原子である。
別の好ましい実施形態では、一般式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ７は、Ｈ原子である。
【0024】
本発明の典型的な化合物は、以下の化合物、又はそれらの互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、それらの混合物形態、又はその薬学的に許容される塩を含むが、これらに限定されない。
【表1】
【0025】
本発明はまた、一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法に関し、それは、
縮合剤の存在下で一般式（ＩＡ）の化合物に分子内環化反応を行って一般式（Ｉ）の化合物を形成することを含み、
式中、
ＬＧ１及びＬＧ２は、それぞれ独立して脱離基であり、
Ａ、Ｂ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｒ１～Ｒ６は、一般式（Ｉ）で定義されるとおりである。
【化4】
式中、
ＬＧ１及びＬＧ２は、それぞれ独立して脱離基であり、
Ａ、Ｂ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｒ１～Ｒ６は、一般式（Ｉ）で定義されるとおりである。
【0026】
１つの好ましい実施形態では、前記縮合剤は、２－（７－オキシベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート及び１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファートから選択され、好ましくは２－（７－オキシベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ）である。
【0027】
別の好ましい実施形態では、ＬＧ１及びＬＧ２は、それぞれ独立して、Ｈ原子、ＯＨ、ハロゲン、メタンスルホン酸エステル、トリフルオロメタンスルホン酸エステル及びｐ－トルエンスルホン酸エステルから選択され、好ましくは、ＬＧ１及びＬＧ２は、それぞれ独立して、Ｈ原子、ＯＨ、Ｃｌ原子及びＢｒ原子から選択され、より好ましくは、ＬＧ１は、Ｈ原子であり、ＬＧ２は、ＯＨ原子である。
【0028】
別の好ましい実施形態では、Ｇは－ＮＨ－であり、ＬＧ１はＨ原子であり、Ｊは－Ｃ（＝Ｏ）－であり、かつ－ＬＧ２はＯＨ原子である。
【0029】
本発明はまた、治療有効量の一般式（Ｉ）で表される化合物、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、それらの混合物形態、又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【0030】
１つの好ましい実施形態では、前記医薬組成物は、１種以上の追加の抗腫瘍剤、抗炎症剤、免疫抑制剤及び／又は免疫チェックポイント阻害剤をさらに含む。
【0031】
別の好ましい実施形態では、前記医薬組成物は、ＰＴＫ阻害剤、シクロスポリンＡ、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ、抗ＩＣＡＭ－３、抗ＩＬ－２受容体、抗ＣＤ４５ＲＢ、抗ＣＤ２、抗ＣＤ３、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８０、抗ＣＤ８６及びモノクローナル抗体ＯＫＴ３から選択される抗体、ＣＶＴ－３１３、ＣＤ４０とｇｐ３９との間の相互作用を遮断する活性剤、ＣＤ４０及びｇｐ３９で構築される融合タンパク質、ＮＦ－κＢ機能阻害剤、非ステロイド性抗炎症剤、ステロイド、金化合物、ＦＫ５０６、ミコフェノール酸モフェチル、細胞毒性薬、ＴＮＦ－α阻害剤、抗ＴＮＦ抗体又は可溶性ＴＮＦ受容体、ＴＮＦα、ＴＲＡＩＬ、ＨＤＡＣ阻害剤、グリベック及び細胞増殖に関するシグナル伝達経路の他の阻害剤、細胞低酸素応答阻害剤、ラパマイシン、レフルノミド、シクロオキシゲナーゼ－２阻害剤、パクリタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、アドリアマイシン、カルミノマイシン、ダウノルビシン、アミノプテリン、メトトレキサート、メチル葉酸、マイトマイシンＣ、エクテイナシジン７４３、ポルフィロマイシン、５－フルオロウラシル、６－メルカプトプリン、ゲムシタビン、シタラビン、ポドフィロトキシン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド、メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ロイロシジン、エポチロン、ビンデシン、ビンロイロシン、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１又はその誘導体のうちの１種以上をさらに含む。
【0032】
本発明はまた、一般式（Ｉ）で表される化合物、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、それらの混合物形態、又はその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物の、ＣＤＫ関連障害を治療する薬物の製造における用途に関する。
【0033】
本発明はまた、医薬品として用いられる、一般式（Ｉ）で表される化合物、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、それらの混合物形態、又はその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物に関する。
【0034】
本発明はまた、ＣＤＫ関連障害を治療するために用いられる、一般式（Ｉ）で表される化合物、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、それらの混合物形態、又はその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物に関する。
【0035】
本発明はまた、治療有効量の一般式（Ｉ）で表される化合物、又はその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、それらの混合物形態、又はその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含むＣＤＫ関連障害の治療方法に関する。
【0036】
１つの好ましい実施形態では、前記ＣＤＫ関連障害は、癌、炎症、ウイルス感染、心臓肥大及びＨＩＶから選択される。
【0037】
１つのより好ましい実施形態では、前記癌は、膀胱癌、頭頸部癌、乳癌、胃癌、卵巣癌、結腸癌、肺癌、脳癌、喉頭癌、リンパ系癌、造血系癌、尿生殖器管癌、胃腸癌、卵巣癌、前立腺癌、胃癌、骨癌、小細胞肺癌、神経膠腫、結腸直腸癌及び膵臓癌から選択され、
前記炎症は、リウマチ性関節炎、狼瘡、１型糖尿病、糖尿病性腎症、多発性硬化、糸球体腎炎、慢性炎症及び臓器移植拒絶に関連し、
前記ウイルス感染は、ＨＩＶウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ＥＢウイルス、シンドビスウイルス又はアデノウイルスに関連する。
前記炎症は、リウマチ性関節炎、狼瘡、１型糖尿病、糖尿病性腎症、多発性硬化、糸球体腎炎、慢性炎症及び臓器移植拒絶に関連し、
前記ウイルス感染は、ＨＩＶウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ＥＢウイルス、シンドビスウイルス又はアデノウイルスに関連する。
【0038】
本発明に係る化合物は、経口投与、舌下投与、非経口投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、経皮投与、局所投与又は直腸投与されてよい。
【0039】
本発明の医薬用化合物において、経口投与、舌下投与、非経口投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、経皮投与、局所投与又は直腸投与の場合、活性成分は、一般的な医薬用担体と混合されて、投与単位の形態で動物又はヒトに投与されてよい。適切な投与単位の形態は、錠剤、ゲルカプセル剤、粉剤、顆粒剤及び経口用溶液剤又は懸濁剤などの経口形態、舌下又は口腔投与形態、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、鼻内又は眼内投与形態及び直腸投与形態を含む。
【0040】
固体組成物が錠剤の形態に製造される場合、主な活性成分は、ゼラチン、デンプン、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アラビアゴムなどの医薬用担体と混合される。錠剤は、スクロース又は他の適切な材料でコーティングされてもよく、持続又は遅延した活性を有し、かつ所定量の活性成分を連続的に放出するように処理されてもよい。
【0041】
ゲルカプセル製剤は、活性成分と希釈剤とを混合し、かつ得られた混合物を軟質又は硬質カプセルに注ぐことにより得られる。
【0042】
シロップ剤又はチンキ剤の形態の製剤は、活性成分、甘味剤、防腐剤及び芳香剤、並びに適切な着色剤を含んでよい。
【0043】
水に分散可能な粉剤又は顆粒剤は、活性成分を含んでよく、分散剤、湿潤剤又は懸濁剤及び矯味剤又は甘味剤と混合される。
【0044】
坐剤は、直腸投与に用いられ、直腸温度で溶融した接着剤、例えば、ココアバター又はポリエチレングリコールを用いて製造される。
【0045】
水性懸濁剤、等張生理食塩水溶液剤又は無菌で注射可能な溶液剤（薬理学的に適合性のある分散剤及び／又は湿潤剤を含む）は、非経口、鼻内又は眼内投与に用いられる。
【0046】
活性成分（１種以上の添加剤担体と一緒になる可能性がある）は、マイクロカプセル剤として調製されてもよい。
【0047】
本発明の化合物は、０．０１ｍｇ／日と１０００ｍｇ／日との間の投与量で使用され、単回投与／日の方式で提供され、又は１日間に複数回投与され、例えば、同じ投与量で１日２回に分けて投与されてよい。投与される１日投与量は、好ましくは０．１ｍｇと１００ｍｇとの間にあり、さらに好ましくは２．５ｍｇと５０ｍｇとの間にある。これらの範囲外の投与量を使用することが必要である可能性があることは、当業者自身には認識されるだろう。
【0048】
本発明の１つの特定の実施形態では、医薬組成物は、外部投与のために調製されてもよい。それは、該投与タイプの一般的な形態（すなわち、特にローション剤、発泡剤、ゲル剤、分散剤、噴霧剤）内に導入されてよく、前記一般的な形態は、賦形剤を有し、前記賦形剤は、特に、皮膚を透過することにより、活性成分の性質及び接近性を改善することができる。本発明に係る組成物に加えて、これらの組成物は、一般的に、生理的に許容される媒体をさらに含み、前記媒体は、一般的に、水又は溶媒、例えば、アルコール、エーテル又はエチレングリコールを含む。前記組成物は、界面活性剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、増粘剤、相補効果又は可能な相乗効果を発生させる他の活性成分、微量元素、精油、香料、着色剤、コラーゲン、化学又は鉱物フィルターをさらに含んでよい。
【0049】
定義
特に反する記載がない限り、明細書及び特許請求の範囲に用いられる以下の用語は、下記意味を有する。
特に反する記載がない限り、明細書及び特許請求の範囲に用いられる以下の用語は、下記意味を有する。
【0050】
本発明の意味において、「立体異性体」とは、幾何異性体（又は立体配置異性体）又は光学異性体を指す。
【0051】
幾何異性体は、二重結合上の異なる位置の置換基により引き起こされ、これによってＺ又はＥ立体配置を有することができ、シス体又はトランス体とも呼ばれる。
【0052】
光学異性体は、特に炭素原子上の異なる空間位置の置換基により引き起こされ、前記炭素原子は、４つの異なる置換基を含む。この炭素原子は、キラル中心又は不斉中心を構成する。光学異性体は、ジアステレオマー及びエナンチオマーを含む。互いに重なることができない鏡像である光学異性体は、「エナンチオマー」と呼ばれる。互いに重なることができる鏡像ではない光学異性体は、「ジアステレオマー」と呼ばれる。
【0053】
等量であり、キラリティーが反対である２種の個々のエナンチオマー形態を含有する混合物は、「ラセミ混合物」と呼ばれる。
【0054】
本発明の意味において、「互変異性体」とは、プロトトロピー転位（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｉｅ）であり、すなわち水素原子の移動及び二重結合の位置の変化により得られた化合物の構造異性体を指す。化合物の異なる互変異性体は、一般的に、互いに変換し、かつ比率で溶液中に平衡に存在することができるものであり、前記比率は、使用される溶媒、温度又はｐＨに応じて変化することができる。
【0055】
本発明では、「薬学的に許容される」は、医薬組成物の製造に用いられることを指すと理解され、前記組成物が一般的に安全で、非毒性であり、生物学的に又はその他の点で需要を満たし、かつ前記組成物が動物及びヒト医薬用途に許容可能である。
【0056】
本発明では、化合物の「薬学的に許容される塩」は、以下の塩を指すと理解され、それは、薬学的に許容される（本明細書で定義される）塩であり、かつ所望の親化合物の薬理学的活性を有する。このような塩は、
（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸と形成される酸付加塩、又は、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、２－ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、ジベンゾイル－Ｌ－酒石酸、酒石酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸と形成される酸付加塩と、
（２）親化合物中に存在する酸プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン（例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋又はＬｉ＋）、アルカリ土類金属イオン（例えばＣａ２＋又はＭＧ２＋）又はアルミニウムイオンで置換されるか、又は有機塩基又は無機塩基と配位する時に形成される塩とを含む。許容される有機塩基は、ジエタノールアミン、エタノールアミン、Ｎ－メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンなどを含む。許容される無機塩基は、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム及び水酸化ナトリウムを含む。
（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸と形成される酸付加塩、又は、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、２－ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、ジベンゾイル－Ｌ－酒石酸、酒石酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸と形成される酸付加塩と、
（２）親化合物中に存在する酸プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン（例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋又はＬｉ＋）、アルカリ土類金属イオン（例えばＣａ２＋又はＭＧ２＋）又はアルミニウムイオンで置換されるか、又は有機塩基又は無機塩基と配位する時に形成される塩とを含む。許容される有機塩基は、ジエタノールアミン、エタノールアミン、Ｎ－メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンなどを含む。許容される無機塩基は、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム及び水酸化ナトリウムを含む。
【0057】
本発明では、用語「ハロゲン」とは、フッ素、臭素、塩素又はヨウ素原子を指す。
【0058】
用語「Ｃ１－４アルキル基」とは、１～４個の炭素原子を含む飽和の直鎖又は分岐鎖炭化水素鎖を指す。代表的な例は、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基を含むが、これらに限定されない。
【0059】
用語「Ｃ１－４アルキレン基」とは、１～４個の炭素原子を含む二価炭化水素鎖を指す。代表的な例は、ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－などを含むが、これらに限定されない。
【0060】
用語「Ｃ２－４アルケニル基」とは、少なくとも１つの二重結合を有し、かつ２～４個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖炭化水素鎖を指す。代表的な例は、ビニル基、プロペニル基、ブテニル基などを含むが、これらに限定されない。
【0061】
用語「Ｃ２－４アルキニル基」とは、少なくとも１つの三重結合を有し、かつ２～４個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖炭化水素鎖を指す。代表的な例は、エチニル基、プロピニル基、ブチニル基などを含むが、これらに限定されない。
【0062】
用語「Ｃ１－４アルコキシ基」とは、－Ｏ－（Ｃ１－４アルキル基）を指し、Ｃ１－４アルキル基の定義は上述のとおりである。非限定的な例は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基を含む。
【0063】
用語「ハロゲン化Ｃ１－４アルキル基」とは、Ｃ１－４アルキル基が１つ以上のハロゲンで置換されるものを指し、Ｃ１－４アルキル基、ハロゲンの定義は上述のとおりである。
【0064】
用語「ハロゲン化Ｃ１－４アルコキシ基」とは、Ｃ１－４アルコキシ基が１つ以上のハロゲンで置換されるものを指し、Ｃ１－４アルコキシ基、ハロゲンの定義は上述のとおりである。
【0065】
用語「Ｃ３－６シクロアルキル基」とは、３～６個の炭素原子を含む飽和又は部分的に不飽和の単環式炭化水素系を指し、代表的な例は、シクロヘキシル基、シクロペンチル基、シクロブチル基、シクロプロピル基、シクロヘキセニル基などを含むが、これらに限定されない。
【0066】
用語「３～６員のヘテロアルキル基」とは、３～６個の環原子を含み、１～３個の環原子が窒素、酸素又はＳ（Ｏ）ｍ（ここでｍは０、１又は２である）から選択されるヘテロ原子である飽和又は部分的に不飽和の単環式炭化水素系を指し、代表的な例は、ピロリジニル基、イミダゾリジニル基、テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロチエニル基、ジヒドロイミダゾリル基、ジヒドロフラニル基、ジヒドロピラゾリル基、ジヒドロピロール基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、モルホリニル基などを含むが、これらに限定されない。
【0067】
用語「ヒドロキシ基」とは、－ＯＨ基を指す。
【0068】
用語「ニトロ基」とは、－ＮＯ２を指す。
【0069】
用語「アミノ基」とは、－ＮＨ２を指す。
【0070】
用語「シアノ基」とは、－ＣＮを指す。
【0071】
用語「単結合」とは、「－」で表される１つの共有結合を指す。
【0072】
用語「脱離基」とは、求核置換反応期間に求核試薬で容易に置換することができる化学基を指し、例えば、Ｈ原子、ＯＨ、塩素原子又は臭素原子などのハロゲン原子、又はスルホン酸エステルである。スルホン酸エステルは、特に、メタンスルホン酸エステル（－ＯＳ（Ｏ２）－ＣＨ３）、トリフルオロメタンスルホン酸エステル（－ＯＳ（Ｏ）２－ＣＦ３）又はｐ－トルエンスルホン酸エステル（－ＯＳ（Ｏ）２－（ｐ－Ｍｅ－Ｃ６Ｈ４））であってよい。
【0073】
「任意」又は「任意に」は、後に記載される事象又は状況が発生しても発生しなくてもよいことを意味し、かかる記載は、該事象又は状況が発生する場合と発生しない場合を含む。例えば、「アルキル基で任意に置換される複素環基」は、アルキル基が存在しても存在しなくてもよいことを意味し、かかる記載は、複素環基がアルキル基で置換された場合と、複素環基がアルキル基で置換されない場合とを含む。
【0074】
「置換」とは、基における１個以上の水素原子、好ましくは最多５個、より好ましくは１～３個の水素原子が、それぞれ独立して、対応する数量の置換基で置換されることを指す。置換基が可能な化学部位のみにあることは言うまでもなく、当業者であれば、努力することなく、（実験又は理論により）可能又は不可能な置換を決定することができる。例えば、遊離水素を有するアミノ基又はヒドロキシ基と、不飽和（例えば、エチレン性）結合を有する炭素原子とが結合した場合に、不安定になる可能性がある。
【0075】
「医薬組成物」は、１種以上の本明細書に記載の化合物又はその生理学的／薬学的に許容される塩又はプロドラッグと他の化学成分との混合物、及び生理学的／薬学的に許容される担体と賦形剤などの他の成分を含有するものを意味する。医薬組成物は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収を容易にすることにより生物学的活性を発揮することを目的とする。
【発明を実施するための形態】
【0076】
以下の実施例を読むことにより、当業者であれば、本発明をよりよく理解することができる。これらの実施例は、本発明を解釈するためのものに過ぎない。
【0077】
本発明の実施例において具体的な条件が記載されていない実験方法は、通常、一般的な条件下で、又は原料若しくは商品製造メーカーにより提案された条件下で実施される。その出所が具体的に与えられていない試薬は、市販されている一般的な試薬である。
【0078】
化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）又は／及び質量分析（ＭＳ）により決定される。ＮＭＲ化学シフト（δ）は、１０－６（ｐｐｍ）の単位で示される。測定溶媒は重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）であり、内部標準はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）である。以下の略語が使用される：ｓ：一重線、ｂｓ：広い一重線、ｄ：二重線、ｔ：三重線、ｑｄｔ：四重線、ｍ：多重線又は大量ピーク、ｄｄ：二重線の二重線。
【0079】
液体クロマトグラフ質量分析計：Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣＭＳ１２６０／ＭＳＤ６１２０、クロマトグラフィーカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ－Ｃ１８、２．１＊５０ｍｍ、１．８μｍ、移動相：Ａ：Ｈ２Ｏ（０．１％ＦＡ）、Ｂ：アセトニトリル、勾配溶離、０．５ｍＬ／ｍｉｎ、４５．０℃、イオン化モード：ＡＰＩ－ＥＳ、極性：正。
【0080】
核磁気共鳴装置：Ｂｒｕｋｅｒ ＡＲＸ－５００タイプ及びＢｒｕｋｅｒ ＡＲＸ－４００タイプ。
【0081】
ＭＴＴ検出機器：Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＧＯ全波長マイクロプレートリーダー。
【0082】
薄層クロマトグラフィーシリカゲルプレートは、青島ＧＦ２５４シリカゲルプレートを使用し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）において使用されるシリカゲルプレートの規格は０．１５ｍｍ～０．２ｍｍであり、薄層クロマトグラフィーにより製品を分離精製する時に採用される規格は０．４ｍｍ～０．５ｍｍである。
【0083】
カラムクロマトグラフィーは、一般的に、煙台黄海シリカゲルの２００～３００メッシュのシリカゲルを担体として使用する。
【0084】
実施例では特に説明しない限り、反応は、いずれもアルゴン雰囲気又は窒素雰囲気下で行われる。
【0085】
実施例では特に説明しない限り、反応中の溶液とは、水溶液を指す。
【0086】
実施例では特に説明しない限り、反応温度は、室温である。
【0087】
実施例における反応プロセスの監視は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を使用する。
【0088】
実施例１
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン１
第１ステップ
４－（ベンジルアミン）－６－クロロ－ニコチン酸メチル１０２
４，６－ジクロロニコチン酸メチル１０１（６ｇ、２９．１ｍｍｏｌ）、ベンジルアミン（３．４ｇ、３２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（９．５ｇ、８７．３ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのＤＭＦに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、２００ｍＬの水を添加し、３０分間撹拌し、濾過し、水で洗浄し、吸引乾燥させた。表題化合物として、白色固体７．６ｇを得て、収率が９４．１％であった。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン１
【化5】
４－（ベンジルアミン）－６－クロロ－ニコチン酸メチル１０２
４，６－ジクロロニコチン酸メチル１０１（６ｇ、２９．１ｍｍｏｌ）、ベンジルアミン（３．４ｇ、３２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（９．５ｇ、８７．３ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのＤＭＦに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、２００ｍＬの水を添加し、３０分間撹拌し、濾過し、水で洗浄し、吸引乾燥させた。表題化合物として、白色固体７．６ｇを得て、収率が９４．１％であった。
【0089】
ＭＳ（ＥＳＩ）：２７７．７［Ｍ＋１］＋。
【0090】
第２ステップ
（４－（ベンジルアミノ）－６－クロロピリジン－３－イル）メタノール１０３
水素化リチウムアルミニウム（２．１ｇ、５４．９ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのテトラヒドロフラン中に懸濁させ、－２０℃に冷却し、４－（ベンジルアミン）－６－クロロ－ニコチン酸メチル１０２（７．６ｇ、２７．４ｍｍｏｌ）を添加し、－２０℃で２時間反応させた。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）により反応の終了を検出した後、２．１ｍＬの水、３．２ｍＬの１０％水酸化ナトリウム溶液、１０．２ｍＬの水を順次添加し、３０分間撹拌し、乾燥させ、濾過し、スピン乾燥させた。表題化合物として、白色固体７．５ｇを得て、収率が１００％であった。
（４－（ベンジルアミノ）－６－クロロピリジン－３－イル）メタノール１０３
水素化リチウムアルミニウム（２．１ｇ、５４．９ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのテトラヒドロフラン中に懸濁させ、－２０℃に冷却し、４－（ベンジルアミン）－６－クロロ－ニコチン酸メチル１０２（７．６ｇ、２７．４ｍｍｏｌ）を添加し、－２０℃で２時間反応させた。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝３：１）により反応の終了を検出した後、２．１ｍＬの水、３．２ｍＬの１０％水酸化ナトリウム溶液、１０．２ｍＬの水を順次添加し、３０分間撹拌し、乾燥させ、濾過し、スピン乾燥させた。表題化合物として、白色固体７．５ｇを得て、収率が１００％であった。
【0091】
ＭＳ（ＥＳＩ）：２４９．７［Ｍ＋１］＋。
【0092】
第３ステップ
４－（ベンジルアミン）－６－クロロニコチンアルデヒド１０４
（４－（ベンジルアミノ）－６－クロロピリジン－３－イル）メタノール１０３（７．５ｇ、３０．２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、０℃に冷却し、ＤＭＰ（デス－マーチンペルヨージナン、１５．３ｇ、３６．３ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬの１０％ＮａＯＨ溶液を添加して３０分間撹拌し、分液し、ジクロロメタンで抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝３：１）により精製し、表題化合物として黄色油状物６．５ｇを得た。収率が８７．１％であった。
４－（ベンジルアミン）－６－クロロニコチンアルデヒド１０４
（４－（ベンジルアミノ）－６－クロロピリジン－３－イル）メタノール１０３（７．５ｇ、３０．２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、０℃に冷却し、ＤＭＰ（デス－マーチンペルヨージナン、１５．３ｇ、３６．３ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬの１０％ＮａＯＨ溶液を添加して３０分間撹拌し、分液し、ジクロロメタンで抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝３：１）により精製し、表題化合物として黄色油状物６．５ｇを得た。収率が８７．１％であった。
【0093】
ＭＳ（ＥＳＩ）：２４７．７［Ｍ＋１］＋。
【0094】
第４ステップ
Ｎ－ベンジル－２－クロロ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－４－アミン１０５
４－（ベンジルアミン）－６－クロロニコチンアルデヒド１０４（６．５ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）及びＮ－エチルピペラジンを５０ｍＬのジクロロメタン（３．６ｇ、３１．６ｍｍｏｌ）に溶解し、０℃に冷却し、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（８．３ｇ、３９．４５ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加して３０分間撹拌し、分液し、ジクロロメタン（１００ｍＬ×３）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝１０：１）により精製し、表題化合物として無色油状物７．８ｇを得た。収率が８５．９％であった。
Ｎ－ベンジル－２－クロロ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－４－アミン１０５
４－（ベンジルアミン）－６－クロロニコチンアルデヒド１０４（６．５ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）及びＮ－エチルピペラジンを５０ｍＬのジクロロメタン（３．６ｇ、３１．６ｍｍｏｌ）に溶解し、０℃に冷却し、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（８．３ｇ、３９．４５ｍｍｏｌ）を数回に分けて添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加して３０分間撹拌し、分液し、ジクロロメタン（１００ｍＬ×３）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝１０：１）により精製し、表題化合物として無色油状物７．８ｇを得た。収率が８５．９％であった。
【0095】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３４８．５［Ｍ＋１］＋。
【0096】
第５ステップ
Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２，４－ジアミン１０６
窒素下で、中間体Ｎ－ベンジル－２－クロロ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－４－アミン１０５（６ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）、ベンゾフェノンイミン（３．７ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔ－ブトキシド（２．３４ｇ、２４．３６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１．６ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）及びＢＩＮＡＰ（３．２４ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのトルエンに溶解し、１００℃で１４時間反応させた。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬのメチル－ｔ－ブチルエーテルを添加して３０分間撹拌し、濾過し、洗浄し、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を５０ｍＬのＴＨＦ及び２０ｍＬのメタノールに溶解し、１０ｍＬの濃塩酸を添加して室温で２時間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、飽和炭酸水素ナトリウムを添加し、酢酸エチルで抽出し、水相を残し、ジクロロメタンで抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させた。表題化合物として白色固体３ｇを得て、収率が５２．９％であった。
Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２，４－ジアミン１０６
窒素下で、中間体Ｎ－ベンジル－２－クロロ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－４－アミン１０５（６ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）、ベンゾフェノンイミン（３．７ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔ－ブトキシド（２．３４ｇ、２４．３６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１．６ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）及びＢＩＮＡＰ（３．２４ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのトルエンに溶解し、１００℃で１４時間反応させた。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬのメチル－ｔ－ブチルエーテルを添加して３０分間撹拌し、濾過し、洗浄し、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を５０ｍＬのＴＨＦ及び２０ｍＬのメタノールに溶解し、１０ｍＬの濃塩酸を添加して室温で２時間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、飽和炭酸水素ナトリウムを添加し、酢酸エチルで抽出し、水相を残し、ジクロロメタンで抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させた。表題化合物として白色固体３ｇを得て、収率が５２．９％であった。
【0097】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３２６．２［Ｍ＋１］＋。
【0098】
第６ステップ
３－アミノ酪酸メチル１０８
０℃で、塩化チオニル（８．４ｍＬ、１１６．４ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのメタノールに滴下し、１時間撹拌し、３－アミノ酪酸１０７（４ｇ、３８．８ｍｍｏｌ）を反応系に添加し、室温で５時間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、メタノールで２回乾燥させた。表題化合物として無色油状物５ｇを得て、収率が１００％であった。
３－アミノ酪酸メチル１０８
０℃で、塩化チオニル（８．４ｍＬ、１１６．４ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのメタノールに滴下し、１時間撹拌し、３－アミノ酪酸１０７（４ｇ、３８．８ｍｍｏｌ）を反応系に添加し、室温で５時間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、メタノールで２回乾燥させた。表題化合物として無色油状物５ｇを得て、収率が１００％であった。
【0099】
第７ステップ
３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）酪酸メチル１０９
１，３－ジフルオロ－５ブロモ－２－ニトロベンゼン（２ｇ、８．４ｍｍｏｌ）及び３－アミノ酪酸メチル１０８（０．９８ｇ、８．４ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＤＭＦに溶解し、ＤＩＥＡ（３．２５ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、５０ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５０：１）により精製し、表題化合物として黄色固体２．４ｇを得て、収率が８４．５％であった。
３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）酪酸メチル１０９
１，３－ジフルオロ－５ブロモ－２－ニトロベンゼン（２ｇ、８．４ｍｍｏｌ）及び３－アミノ酪酸メチル１０８（０．９８ｇ、８．４ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのＤＭＦに溶解し、ＤＩＥＡ（３．２５ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、５０ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５０：１）により精製し、表題化合物として黄色固体２．４ｇを得て、収率が８４．５％であった。
【0100】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３３６．１［Ｍ＋１］＋。
【0101】
第８ステップ
３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３－フルオロフェニル）アミノ）酪酸メチル１１０
３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）酪酸メチル１０９（２ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を１５ｍＬのＤＭＦに溶解し、塩化第一スズ（６．７ｇ、２９．８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、５０ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させた。表題化合物としてオレンジ色油状物２．２ｇを得て、収率が１００％であった。
３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３－フルオロフェニル）アミノ）酪酸メチル１１０
３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）酪酸メチル１０９（２ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を１５ｍＬのＤＭＦに溶解し、塩化第一スズ（６．７ｇ、２９．８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、５０ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させた。表題化合物としてオレンジ色油状物２．２ｇを得て、収率が１００％であった。
【0102】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３０６．２［Ｍ＋１］＋。
【0103】
第９ステップ
３－（６－ブロモ－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１１
３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３－フルオロフェニル）アミノ）酪酸メチル１１０（２．２ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を９ｍＬのオルトギ酸トリメチル及び６ｍＬの酢酸に溶解し、９０℃で８時間反応させた。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を石油エーテル：酢酸エチル＝１：１０の１０ｍＬの溶液に溶解し、１時間撹拌し、濾過し、石油エーテルで洗浄し、吸引乾燥させ、表題化合物として白色固体１．２ｇを得て、収率が６１．２％であった。
３－（６－ブロモ－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１１
３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３－フルオロフェニル）アミノ）酪酸メチル１１０（２．２ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を９ｍＬのオルトギ酸トリメチル及び６ｍＬの酢酸に溶解し、９０℃で８時間反応させた。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチル（３×１５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を石油エーテル：酢酸エチル＝１：１０の１０ｍＬの溶液に溶解し、１時間撹拌し、濾過し、石油エーテルで洗浄し、吸引乾燥させ、表題化合物として白色固体１．２ｇを得て、収率が６１．２％であった。
【0104】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３３０．１［Ｍ＋１］＋。
【0105】
第１０ステップ
３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１３
窒素保護下で、３－（６－ブロモ－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１１（２．５ｇ、８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．３ｇ、９．１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２．４ｇ、２４ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３２６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに溶解し、１００℃で２時間反応させた。反応をＨＰＬＣで検出し、反応終了後、中間体２，４－ジクロロ－５－フルオロピリミジン（１．７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（７．８ｇ、２４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３２６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及び７ｍＬの水を反応液に添加し、１１０℃で１４時間反応させた。反応をＬＣ－ＭＳで検出し、原料がそれ以上減少しないときに反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により精製し、表題化合物として黄色固体１ｇを得て、収率が３２．５％であった。
３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１３
窒素保護下で、３－（６－ブロモ－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１１（２．５ｇ、８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．３ｇ、９．１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２．４ｇ、２４ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３２６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに溶解し、１００℃で２時間反応させた。反応をＨＰＬＣで検出し、反応終了後、中間体２，４－ジクロロ－５－フルオロピリミジン（１．７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（７．８ｇ、２４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３２６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及び７ｍＬの水を反応液に添加し、１１０℃で１４時間反応させた。反応をＬＣ－ＭＳで検出し、原料がそれ以上減少しないときに反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により精製し、表題化合物として黄色固体１ｇを得て、収率が３２．５％であった。
【0106】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３８１．１［Ｍ＋１］＋。
【0107】
第１１ステップ
３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１４
窒素保護下で、３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１３（０．７ｇ、１．８ｍｍｏｌ）、Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２，４－ジアミン（０．７２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピルビフェニル（Ｘ－ｐｈｏｓ）（１２８ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．７４５ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに懸濁させ、１００℃で１２時間反応させた。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により精製し、表題化合物として黄褐色固体０．５ｇを得て、収率が３８．９％であった。
３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１４
窒素保護下で、３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１３（０．７ｇ、１．８ｍｍｏｌ）、Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２，４－ジアミン（０．７２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピルビフェニル（Ｘ－ｐｈｏｓ）（１２８ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．７４５ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに懸濁させ、１００℃で１２時間反応させた。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により精製し、表題化合物として黄褐色固体０．５ｇを得て、収率が３８．９％であった。
【0108】
ＭＳ（ＥＳＩ）：６７０．７［Ｍ＋１］＋。
【0109】
第１２ステップ
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１５
０℃で、３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１４（０．５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を４ｍＬの濃硫酸に溶解し、３０分間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液を砕氷に注ぎ、１０％水酸化ナトリウムでｐＨ＝８～９に調節し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて表題化合物０．４ｇを得て、褐色固体であり、収率が１００％であった。
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１５
０℃で、３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１４（０．５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を４ｍＬの濃硫酸に溶解し、３０分間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液を砕氷に注ぎ、１０％水酸化ナトリウムでｐＨ＝８～９に調節し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて表題化合物０．４ｇを得て、褐色固体であり、収率が１００％であった。
【0110】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５８０．６［Ｍ＋１］＋。
【0111】
第１３ステップ
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸１１６
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１５（０．４ｇ、６．９ｍｍｏｌ）を５ｍＬのメタノール及び５ｍＬの１０％水酸化ナトリウムに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、濃塩酸でｐＨ＝４～５に調節し、スピン乾燥させ、乾燥させ、５０ｍＬのエタノールを添加して５時間撹拌し、濾過し、洗浄し、スピン乾燥させ、表題化合物として黄色固体０．８ｇを得て、収率が１００％であった。
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸１１６
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル１１５（０．４ｇ、６．９ｍｍｏｌ）を５ｍＬのメタノール及び５ｍＬの１０％水酸化ナトリウムに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、濃塩酸でｐＨ＝４～５に調節し、スピン乾燥させ、乾燥させ、５０ｍＬのエタノールを添加して５時間撹拌し、濾過し、洗浄し、スピン乾燥させ、表題化合物として黄色固体０．８ｇを得て、収率が１００％であった。
【0112】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５６６．６［Ｍ＋１］＋。
【0113】
第１４ステップ
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン１
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸１１６（０．８ｇ、０．７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２１２ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ＨＡＴＵ（３２３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、表題化合物として白色固体３２ｍｇを得た。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン１
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸１１６（０．８ｇ、０．７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２１２ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ＨＡＴＵ（３２３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、表題化合物として白色固体３２ｍｇを得た。
【0114】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５４８．６［Ｍ＋１］＋。
【0115】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３））δ１０．４１（ｓ，１Ｈ），１０．２１（ｓ，１Ｈ），９．７３（ｓ，１Ｈ），８．８９－８．４７（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｓ，１Ｈ），４．０２（ｍ，１Ｈ），３．６５－３．３５（ｍ，２Ｈ），３．１０－２．５５（ｍ，９Ｈ），２．４７－２．０８（ｍ，５Ｈ），１．７９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【0116】
実施例２
（Ｒ）－４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン２
第１ステップ
（Ｒ）－３－アミノ酪酸メチル２０２
０℃で、塩化チオニル（５．１ｇ、４３ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのメタノールに滴下し、１時間撹拌し、（Ｒ）－３－アミノ酪酸２０１（３ｇ、２９ｍｍｏｌ）を反応系に添加し、室温で５時間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、メタノールで２回乾燥させた。表題化合物として無色油状物４．０ｇを得て、収率が１００％であった。得られた製品をそのまま次の反応に使用した。
（Ｒ）－４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン２
【化6】
（Ｒ）－３－アミノ酪酸メチル２０２
０℃で、塩化チオニル（５．１ｇ、４３ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのメタノールに滴下し、１時間撹拌し、（Ｒ）－３－アミノ酪酸２０１（３ｇ、２９ｍｍｏｌ）を反応系に添加し、室温で５時間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、メタノールで２回乾燥させた。表題化合物として無色油状物４．０ｇを得て、収率が１００％であった。得られた製品をそのまま次の反応に使用した。
【0117】
第２ステップ
（Ｒ）－３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）酪酸メチル２０３
１，３－ジフルオロ－５ブロモ－２－ニトロベンゼン（６．８ｇ、２９ｍｍｏｌ）及び（Ｒ）－３－アミノ酪酸メチル２０２（４．０ｇ、２９ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのＤＭＦに溶解し、ＤＩＥＡ（１１．２ｇ、８７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５０：１）により精製し、表題化合物として黄色固体９ｇを得て、収率が９０．３％であった。
（Ｒ）－３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）酪酸メチル２０３
１，３－ジフルオロ－５ブロモ－２－ニトロベンゼン（６．８ｇ、２９ｍｍｏｌ）及び（Ｒ）－３－アミノ酪酸メチル２０２（４．０ｇ、２９ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのＤＭＦに溶解し、ＤＩＥＡ（１１．２ｇ、８７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝５０：１）により精製し、表題化合物として黄色固体９ｇを得て、収率が９０．３％であった。
【0118】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３３５．２［Ｍ＋１］＋。
【0119】
第３ステップ
（Ｒ）－３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３フルオロフェニル）アミノ）酪酸メチル２０４
（Ｓ）－３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）酪酸メチル２０３（９ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのＤＭＦに溶解し、塩化第一スズ（３０．３ｇ、３４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させた。表題化合物としてオレンジ色油状物１０ｇを得て、収率が１００％であった。
（Ｒ）－３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３フルオロフェニル）アミノ）酪酸メチル２０４
（Ｓ）－３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）酪酸メチル２０３（９ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのＤＭＦに溶解し、塩化第一スズ（３０．３ｇ、３４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、１００ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させた。表題化合物としてオレンジ色油状物１０ｇを得て、収率が１００％であった。
【0120】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３０６．２［Ｍ＋１］＋。
【0121】
第４ステップ
（Ｒ）－３－（６－ブロモ－４フルオロ－２メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０５
（Ｓ）－３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３フルオロフェニル）アミノ）酪酸メチル２０４（１０ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）を４５ｍＬのオルトギ酸トリメチル及び３０ｍＬの酢酸に溶解し、９０℃で８時間反応させた。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を酢酸エチル：石油エーテル＝１：１０の２０ｍＬの溶液に溶解し、１時間撹拌し、濾過し、石油エーテルで洗浄し、吸引乾燥させ、表題化合物として白色固体６．２ｇを得て、収率が６９．７％であった。
（Ｒ）－３－（６－ブロモ－４フルオロ－２メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０５
（Ｓ）－３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３フルオロフェニル）アミノ）酪酸メチル２０４（１０ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）を４５ｍＬのオルトギ酸トリメチル及び３０ｍＬの酢酸に溶解し、９０℃で８時間反応させた。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を酢酸エチル：石油エーテル＝１：１０の２０ｍＬの溶液に溶解し、１時間撹拌し、濾過し、石油エーテルで洗浄し、吸引乾燥させ、表題化合物として白色固体６．２ｇを得て、収率が６９．７％であった。
【0122】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３３０．１［Ｍ＋１］＋。
【0123】
第５ステップ
（Ｒ）－３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０７
窒素保護下で、（Ｒ）－３－（６－ブロモ－４フルオロ－２メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０５（５ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４．６ｇ、１８．２ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（４．８４ｇ、４５．３ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．６４ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を１２０ｍＬのジオキサンに溶解し、１００℃で２時間反応させた。反応をＨＰＬＣで検出し、反応終了後、中間体２，４－ジクロロ－５フルオロピリミジン（３．２ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１４．７ｇ、４５．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．６１ｇ、０．７ｍｍｏｌ）及び１２ｍＬの水を反応液に添加し、１１０℃で１４時間反応させた。反応をＬＣ－ＭＳで検出し、原料がそれ以上減少しないときに反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、酢酸エチル（３×４０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により精製し、表題化合物として黄色固体３．１ｇを得て、収率が５３．６％であった。
（Ｒ）－３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０７
窒素保護下で、（Ｒ）－３－（６－ブロモ－４フルオロ－２メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０５（５ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４．６ｇ、１８．２ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（４．８４ｇ、４５．３ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．６４ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を１２０ｍＬのジオキサンに溶解し、１００℃で２時間反応させた。反応をＨＰＬＣで検出し、反応終了後、中間体２，４－ジクロロ－５フルオロピリミジン（３．２ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１４．７ｇ、４５．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．６１ｇ、０．７ｍｍｏｌ）及び１２ｍＬの水を反応液に添加し、１１０℃で１４時間反応させた。反応をＬＣ－ＭＳで検出し、原料がそれ以上減少しないときに反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、酢酸エチル（３×４０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により精製し、表題化合物として黄色固体３．１ｇを得て、収率が５３．６％であった。
【0124】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３８１．１［Ｍ＋１］＋。
【0125】
第６ステップ
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０８
窒素保護下で、（Ｒ）－３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０７（１．１ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）、Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２，４－ジアミン（０．８ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１１２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、Ｘ－ｐｈｏｓ（１７５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．０２ｇ、７．３８ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのジオキサンに懸濁させ、１００℃で１２時間反応させた。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により精製し、表題化合物として黄褐色固体０．４ｇを得て、収率が２０．３％であった。
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０８
窒素保護下で、（Ｒ）－３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０７（１．１ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）、Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２，４－ジアミン（０．８ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１１２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、Ｘ－ｐｈｏｓ（１７５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．０２ｇ、７．３８ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのジオキサンに懸濁させ、１００℃で１２時間反応させた。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により精製し、表題化合物として黄褐色固体０．４ｇを得て、収率が２０．３％であった。
【0126】
ＭＳ（ＥＳＩ）：６７０．７［Ｍ＋１］＋。
【0127】
第７ステップ
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０９
０℃で、（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０８（０．４ｇ、０．６ｍｍｏｌ）を４ｍＬの濃硫酸に溶解し、３０分間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液を砕氷に注ぎ、１０％水酸化ナトリウムでｐＨ＝８～９に調節し、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて表題化合物０．４ｇを得て、褐色固体であり、収率が１００％であった。
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０９
０℃で、（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０８（０．４ｇ、０．６ｍｍｏｌ）を４ｍＬの濃硫酸に溶解し、３０分間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液を砕氷に注ぎ、１０％水酸化ナトリウムでｐＨ＝８～９に調節し、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて表題化合物０．４ｇを得て、褐色固体であり、収率が１００％であった。
【0128】
第８ステップ
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸２１０
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０９（０．４ｇ、６．９ｍｍｏｌ）を５ｍＬのメタノール及び５ｍＬの１０％水酸化ナトリウムに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、濃塩酸でｐＨ＝４～５に調節し、スピン乾燥させ、乾燥させ、５０ｍＬのエタノールを添加して５時間撹拌し、濾過し、洗浄し、スピン乾燥させ、表題化合物として黄色固体０．５ｇを得て、収率が１００％であった。
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸２１０
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸メチル２０９（０．４ｇ、６．９ｍｍｏｌ）を５ｍＬのメタノール及び５ｍＬの１０％水酸化ナトリウムに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、濃塩酸でｐＨ＝４～５に調節し、スピン乾燥させ、乾燥させ、５０ｍＬのエタノールを添加して５時間撹拌し、濾過し、洗浄し、スピン乾燥させ、表題化合物として黄色固体０．５ｇを得て、収率が１００％であった。
【0129】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５６６．６［Ｍ＋１］＋。
【0130】
第９ステップ
（Ｒ）－４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン２
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸２１０（０．５ｇ、０．６９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２１２ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ＨＡＴＵ（３２３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を分取シリカゲルプレート（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により精製し、表題化合物として白色固体２４ｍｇを得て、収率が７．４％であった。
（Ｒ）－４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン２
（Ｒ）－３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）酪酸２１０（０．５ｇ、０．６９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２１２ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ＨＡＴＵ（３２３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を分取シリカゲルプレート（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により精製し、表題化合物として白色固体２４ｍｇを得て、収率が７．４％であった。
【0131】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５４８．６［Ｍ＋１］＋。
【0132】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１０．４１（ｓ，１Ｈ），１０．２１（ｓ，１Ｈ），９．７３（ｓ，１Ｈ），８．８９－８．４７（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｓ，１Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６５－３．３５（ｍ，２Ｈ），３．１０－２．５５（ｍ，９Ｈ），２．４７－２．０８（ｍ，５Ｈ），１．７９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【0133】
実施例３
（Ｓ）－４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン３
実施例２に記載される方法に従って、（Ｓ）－３－アミノ酪酸メチルを出発原料として、白色固体である（Ｓ）－４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン３を得た。
（Ｓ）－４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン３
【化7】
【0134】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５４８．６［Ｍ＋１］＋。
【0135】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ１０．４１（ｓ，１Ｈ），１０．２１（ｓ，１Ｈ），９．７３（ｓ，１Ｈ），８．８９－８．４７（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｓ，１Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６５－３．３５（ｍ，２Ｈ），３．１０－２．５５（ｍ，９Ｈ），２．４７－２．０８（ｍ，５Ｈ），１．７９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【0136】
実施例４
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２－メチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン４
第１ステップ
アミノ酪酸メチル４０２
０℃で、塩化チオニル（１０ｇ、８４ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのメタノールに滴下し、１時間撹拌し、アミノ酪酸（５ｇ、５６ｍｍｏｌ）を反応系に添加し、室温で５時間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、ＭｅＯＨで２回乾燥させた。表題化合物として無色油状物６ｇを得て、収率が１００％であった。得られた製品をそのまま次の反応に使用した。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２－メチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン４
【化8】
アミノ酪酸メチル４０２
０℃で、塩化チオニル（１０ｇ、８４ｍｍｏｌ）を４０ｍＬのメタノールに滴下し、１時間撹拌し、アミノ酪酸（５ｇ、５６ｍｍｏｌ）を反応系に添加し、室温で５時間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、ＭｅＯＨで２回乾燥させた。表題化合物として無色油状物６ｇを得て、収率が１００％であった。得られた製品をそのまま次の反応に使用した。
【0137】
第２ステップ
３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）プロピオン酸メチル４０３
１，３－ジフルオロ－５ブロモ－２－ニトロベンゼン４０２（１３．３ｇ（５６ｍｍｏｌ）及び３－アミノプロピオン酸メチル（６ｇ（５６ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＤＭＦに溶解し、ＤＩＥＡ（２１．６ｇ（１６８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により反応の終了を検出した後、１５０ｍＬの水を添加し、等体積の酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１）により精製し、表題化合物としてオレンジ色固体１４ｇを得て、収率が７７．８％であった。
３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）プロピオン酸メチル４０３
１，３－ジフルオロ－５ブロモ－２－ニトロベンゼン４０２（１３．３ｇ（５６ｍｍｏｌ）及び３－アミノプロピオン酸メチル（６ｇ（５６ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのＤＭＦに溶解し、ＤＩＥＡ（２１．６ｇ（１６８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＰＥ：ＥＡ＝５：１）により反応の終了を検出した後、１５０ｍＬの水を添加し、等体積の酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ＝５０：１）により精製し、表題化合物としてオレンジ色固体１４ｇを得て、収率が７７．８％であった。
【0138】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３２２．１［Ｍ＋１］＋。
【0139】
第３ステップ
３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３フルオロフェニル）アミノ）プロピオン酸メチル４０４
３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）プロピオン酸メチル４０３（１４ｇ、４３．６ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬのＤＭＦに溶解し、塩化第一スズ（４９ｇ、２１８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、５００ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させた。表題化合物として黄白色油状物１２ｇを得て、収率が１００％であった。
３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３フルオロフェニル）アミノ）プロピオン酸メチル４０４
３－（（５－ブロモ－３－フルオロ－２－ニトロフェニル）アミノ）プロピオン酸メチル４０３（１４ｇ、４３．６ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬのＤＭＦに溶解し、塩化第一スズ（４９ｇ、２１８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１）により反応の終了を検出した後、５００ｍＬの水を添加し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させた。表題化合物として黄白色油状物１２ｇを得て、収率が１００％であった。
【0140】
ＭＳ（ＥＳＩ）：２９２．２［Ｍ＋１］＋。
【0141】
第４ステップ
３－（６－ブロモ－４フルオロ－２メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０５
３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３フルオロフェニル）アミノ）プロピオン酸メチル４０４（１２ｇ、４１ｍｍｏｌ）を９０ｍＬのオルト酢酸トリメチル及び５４ｍＬの酢酸に溶解し、９０℃で８時間反応させた。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、約１００ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を酢酸エチル：石油エーテル＝１：１０の１０ｍＬ溶液に溶解し、１時間撹拌し、濾過し、石油エーテルで洗浄し、吸引乾燥させ、表題化合物として白色固体６．８ｇを得て、収率が５２．３％であった。
３－（６－ブロモ－４フルオロ－２メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０５
３－（（２－アミノ－５－ブロモ－３フルオロフェニル）アミノ）プロピオン酸メチル４０４（１２ｇ、４１ｍｍｏｌ）を９０ｍＬのオルト酢酸トリメチル及び５４ｍＬの酢酸に溶解し、９０℃で８時間反応させた。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により反応の終了を検出した後、反応液をスピン乾燥させ、約１００ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を酢酸エチル：石油エーテル＝１：１０の１０ｍＬ溶液に溶解し、１時間撹拌し、濾過し、石油エーテルで洗浄し、吸引乾燥させ、表題化合物として白色固体６．８ｇを得て、収率が５２．３％であった。
【0142】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３１６．１［Ｍ＋１］＋。
【0143】
第５ステップ
３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０７
窒素保護下で、３－（６－ブロモ－４フルオロ－２メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０５（５ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４．８ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（４．７ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのジオキサンに溶解し、１００℃で２時間反応させた。反応をＨＰＬＣで検出し、反応終了後、中間体２，４－ジクロロ－５フルオロピリミジン（３．４ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１５．５ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）及び１５ｍＬの水を反応液に添加し、１１０℃で１４時間反応させた。反応をＬＣ－ＭＳで検出し、原料がそれ以上減少しないときに反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、約１００ｍｌの水を添加し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により精製し、表題化合物として褐色固体２．８ｇを得て、収率が４８．２％であった。
３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０７
窒素保護下で、３－（６－ブロモ－４フルオロ－２メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０５（５ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４．８ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（４．７ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのジオキサンに溶解し、１００℃で２時間反応させた。反応をＨＰＬＣで検出し、反応終了後、中間体２，４－ジクロロ－５フルオロピリミジン（３．４ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１５．５ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（６５０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）及び１５ｍＬの水を反応液に添加し、１１０℃で１４時間反応させた。反応をＬＣ－ＭＳで検出し、原料がそれ以上減少しないときに反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、約１００ｍｌの水を添加し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により精製し、表題化合物として褐色固体２．８ｇを得て、収率が４８．２％であった。
【0144】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３６７．１［Ｍ＋１］＋。
【0145】
第６ステップ
３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０８
窒素保護下で、３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０７（２．８ｇ、７．６ｍｍｏｌ）、Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２，４－ジアミン（２ｇ、６．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（５８０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、Ｘ－ｐｈｏｓ（９００ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２．６ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに懸濁させ、１００℃で１２時間反応させた。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、約７０ｍｌの水を添加し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相をを合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、表題化合物として褐色油状物１．５ｇを得て、収率が３０．９％であった。
３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０８
窒素保護下で、３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０７（２．８ｇ、７．６ｍｍｏｌ）、Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２，４－ジアミン（２ｇ、６．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（５８０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、Ｘ－ｐｈｏｓ（９００ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（２．６ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに懸濁させ、１００℃で１２時間反応させた。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、約７０ｍｌの水を添加し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相をを合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、表題化合物として褐色油状物１．５ｇを得て、収率が３０．９％であった。
【0146】
ＭＳ（ＥＳＩ）：６５６．７［Ｍ＋１］＋。
【0147】
第７ステップ
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０９
０℃で、３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０８（１．５ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を４ｍＬの濃硫酸に溶解し、３０分間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液を約１００ｇの砕氷に注ぎ、１０％水酸化ナトリウムでｐＨ＝８～９に調節し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて表題化合物０．９ｇを得て、褐色固体であり、収率が６３．６％であった。
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０９
０℃で、３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミン）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－４フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０８（１．５ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を４ｍＬの濃硫酸に溶解し、３０分間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液を約１００ｇの砕氷に注ぎ、１０％水酸化ナトリウムでｐＨ＝８～９に調節し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、有機相を合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて表題化合物０．９ｇを得て、褐色固体であり、収率が６３．６％であった。
【0148】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５６６．６［Ｍ＋１］＋。
【0149】
第８ステップ
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸４１０
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０９（０．９ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を５ｍＬのメタノール及び５ｍＬの１０％水酸化ナトリウムに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、濃塩酸でｐＨ＝４～５に調節し、スピン乾燥させ、乾燥させ、５０ｍＬのエタノールを添加して５時間撹拌し、濾過し、洗浄し、濾液をスピン乾燥させ、表題化合物としてオフホワイトの固体１．６ｇを得て、収率が１００％であった。
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸４１０
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸メチル４０９（０．９ｇ、１．６ｍｍｏｌ）を５ｍＬのメタノール及び５ｍＬの１０％水酸化ナトリウムに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、濃塩酸でｐＨ＝４～５に調節し、スピン乾燥させ、乾燥させ、５０ｍＬのエタノールを添加して５時間撹拌し、濾過し、洗浄し、濾液をスピン乾燥させ、表題化合物としてオフホワイトの固体１．６ｇを得て、収率が１００％であった。
【0150】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５５２．６［Ｍ＋１］＋。
【0151】
第９ステップ
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２－メチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン４
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸４１０（１．６ｇ、０．９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２７０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ＨＡＴＵ（５１０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、約５０ｍｌの水を添加し、分液し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、表題化合物として白色固体３５ｍｇを得た。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２－メチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン４
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピペリジン－２－イル）アミノ）５－フルオロピリミジン－４－イル）－４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－１－イル）プロピオン酸４１０（１．６ｇ、０．９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２７０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ＨＡＴＵ（５１０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、約５０ｍｌの水を添加し、分液し、酢酸エチル（５０ｍｌ×３）で抽出し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、表題化合物として白色固体３５ｍｇを得た。
【0152】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５３４．６［Ｍ＋１］＋。
【0153】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．６８（ｓ，１Ｈ），１０．１１（ｓ，１Ｈ），９．５２（ｓ，１Ｈ），８．６７（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），８．３９（ｓ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｓ，２Ｈ），３．９７－３．４１（ｍ，２Ｈ），３．０３－２．６０（ｍ，９Ｈ），２．４８－１．９３（ｍ，６Ｈ），１．０２（ｓ，３Ｈ）．
【0154】
実施例５
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン５
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン１（１００ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に０℃でＬｉＡｌＨ４（１０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、０℃で約１０ｍｌの飽和塩化アンモニウム水溶液を添加し、分液し、酢酸エチル（１０ｍｌ×３）で抽出し、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、表題化合物として白色固体６０ｍｇを得た。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン５
【化9】
【0155】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５３４．２［Ｍ＋１］＋。
【0156】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３））δ１０．４１（ｓ，１Ｈ），１０．２１（ｓ，１Ｈ），９．７３（ｓ，１Ｈ），８．８９－８．４７（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｓ，１Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３２－３．２０（ｍ，２Ｈ），３．１０－２．５５（ｍ，９Ｈ），２．４７－２．０８（ｍ，５Ｈ），２．００－１．８４（ｍ，２Ｈ），１．７９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【0157】
実施例７
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－２５－フルオロ－８－メチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－インドール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン７
第１ステップ
３－（６－ブロモ－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－１
６－ブロモインドール（１．０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）、３－ブロモ酪酸メチル（１．３８ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（０．４３ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）にＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１０ｍＬ）を添加し、窒素保護下で７０℃で１０時間反応させた。反応液に水（５０ｍＬ）／酢酸エチル（５０ｍＬ）を添加し、撹拌して抽出し、有機相を乾燥させ、濾過し、濃縮した後にシリカゲルカラム（溶離剤：酢酸エチル／石油エーテル：１／３０～１／１０）に通して白色固体７－１（１．２ｇ、収率８０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：２９６．１［Ｍ＋１］＋。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－２５－フルオロ－８－メチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－インドール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン７
【化10】
３－（６－ブロモ－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－１
６－ブロモインドール（１．０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）、３－ブロモ酪酸メチル（１．３８ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（０．４３ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）にＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１０ｍＬ）を添加し、窒素保護下で７０℃で１０時間反応させた。反応液に水（５０ｍＬ）／酢酸エチル（５０ｍＬ）を添加し、撹拌して抽出し、有機相を乾燥させ、濾過し、濃縮した後にシリカゲルカラム（溶離剤：酢酸エチル／石油エーテル：１／３０～１／１０）に通して白色固体７－１（１．２ｇ、収率８０％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：２９６．１［Ｍ＋１］＋。
【0158】
第２ステップ
３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－３
窒素保護下で、３－（６－ブロモ－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－１（２．４ｇ、８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．３ｇ、９．１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２．４ｇ、２４ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３２６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに溶解し、１００℃で２時間反応させた。反応をＨＰＬＣで検出し、反応終了後、中間体２，４－ジクロロ－５フルオロピリミジン（１．７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（７．８ｇ、２４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３２６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及び７ｍＬの水を反応液に添加し、１１０℃で１４時間反応させた。反応をＬＣ－ＭＳで検出し、原料がそれ以上減少しないときに反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により精製し、表題化合物として黄色固体１ｇを得て、収率が３２．５％であった。
３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－３
窒素保護下で、３－（６－ブロモ－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－１（２．４ｇ、８ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．３ｇ、９．１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２．４ｇ、２４ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３２６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに溶解し、１００℃で２時間反応させた。反応をＨＰＬＣで検出し、反応終了後、中間体２，４－ジクロロ－５フルオロピリミジン（１．７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（７．８ｇ、２４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３２６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）及び７ｍＬの水を反応液に添加し、１１０℃で１４時間反応させた。反応をＬＣ－ＭＳで検出し、原料がそれ以上減少しないときに反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１）により精製し、表題化合物として黄色固体１ｇを得て、収率が３２．５％であった。
【0159】
ＭＳ（ＥＳＩ）：３４８．１［Ｍ＋１］＋。
【0160】
第３ステップ
３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミノ）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－４
窒素保護下で、３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－３（０．６３ｇ、１．８ｍｍｏｌ）、Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２，４－ジアミン（０．７２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピルビフェニル（Ｘ－ｐｈｏｓ）（１２８ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．７４５ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに懸濁させ、１００℃で１２時間反応させた。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により精製し、表題化合物として黄褐色固体０．４５ｇを得て、収率が４０％であった。
３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミノ）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－４
窒素保護下で、３－（６－（２－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－３（０．６３ｇ、１．８ｍｍｏｌ）、Ｎ４－ベンジル－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２，４－ジアミン（０．７２ｇ、２．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８２ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピルビフェニル（Ｘ－ｐｈｏｓ）（１２８ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．７４５ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を７０ｍＬのジオキサンに懸濁させ、１００℃で１２時間反応させた。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液をスピン乾燥させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により精製し、表題化合物として黄褐色固体０．４５ｇを得て、収率が４０％であった。
【0161】
ＭＳ（ＥＳＩ）：６３７．１［Ｍ＋１］＋。
【0162】
第４ステップ
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－５
０℃で、３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミノ）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－４（０．４５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を４ｍＬの濃硫酸に溶解し、３０分間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液を砕氷に注ぎ、１０％水酸化ナトリウムでｐＨ＝８～９に調節し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて表題化合物０．４ｇを得て、褐色固体であり、収率が１００％であった。
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－５
０℃で、３－（６－（２－（（４－（ベンジルアミノ）－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－４（０．４５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を４ｍＬの濃硫酸に溶解し、３０分間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、反応液を砕氷に注ぎ、１０％水酸化ナトリウムでｐＨ＝８～９に調節し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて表題化合物０．４ｇを得て、褐色固体であり、収率が１００％であった。
【0163】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５４７．１［Ｍ＋１］＋。
【0164】
第５ステップ
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸７－６
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－５（０．３８ｇ、６．９ｍｍｏｌ）を５ｍＬのメタノール及び５ｍＬの１０％水酸化ナトリウムに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、濃塩酸でｐＨ＝４～５に調節し、スピン乾燥させ、乾燥させ、５０ｍＬのエタノールを添加して５時間撹拌し、濾過し、洗浄し、スピン乾燥させ、表題化合物として黄色固体０．３８ｇを得て、収率が１００％であった。
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸７－６
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸メチル７－５（０．３８ｇ、６．９ｍｍｏｌ）を５ｍＬのメタノール及び５ｍＬの１０％水酸化ナトリウムに溶解し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、濃塩酸でｐＨ＝４～５に調節し、スピン乾燥させ、乾燥させ、５０ｍＬのエタノールを添加して５時間撹拌し、濾過し、洗浄し、スピン乾燥させ、表題化合物として黄色固体０．３８ｇを得て、収率が１００％であった。
【0165】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５５１．１［Ｍ＋１］＋。
【0166】
第６ステップ
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－インドール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン７
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸７－６（０．３８ｇ、０．７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２１２ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ＨＡＴＵ（３２３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、表題化合物７として白色固体１２０ｍｇを得た。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－インドール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン７
３－（６－（２－（（４－アミノ－５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）ピリジン－２－イル）アミノ）－５－フルオロピリミジン－４－イル）－１Ｈ－インドール－１－イル）酪酸７－６（０．３８ｇ、０．７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２１２ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を５０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、ＨＡＴＵ（３２３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により反応の完了を検出した後、反応を停止させ、水を添加し、ジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせ、乾燥させ、スピン乾燥させて粗生成物を得た。粗生成物を分取シリカゲルプレート（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）により精製し、表題化合物７として白色固体１２０ｍｇを得た。
【0167】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５１５．２［Ｍ＋１］＋。
【0168】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３））δ１０．２３（ｓ，１Ｈ），１０．０１（ｓ，１Ｈ），９．２１（ｓ，１Ｈ），８．４５－８．２０（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｓ，１Ｈ），４．５（ｂｒ，１Ｈ），４．０６（ｍ，１Ｈ），３．６５（ｓ，２Ｈ），２．８４－２．６２（ｍ，２Ｈ），２．４７－２．０８（ｍ，８Ｈ），１．６８（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【0169】
実施例８
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８，８－トリメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン８
実施例１に記載される方法に従って、第６ステップにおける反応原料３－アミノ酪酸１０７を３－アミノ－３－メチル酪酸に置き換えて、白色固体である４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８，８－トリメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン８を得た。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８，８－トリメチル－１１Ｈ－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－６－オン８
【化11】
【0170】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５６２．２［Ｍ＋１］＋。
【0171】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３））δ１０．３１（ｓ，１Ｈ），１０．０１（ｓ，１Ｈ），９．７３（ｓ，１Ｈ），８．８９－８．４７（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７５（ｓ，２Ｈ），３．３５（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６４（ｓ，２Ｈ），２．５１（ｓ，３Ｈ），２．４７－２．３５（ｍ，８Ｈ），１．４３（ｓ，６Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）。
【0172】
実施例９
５’－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－４’，５’－ジフルオロ－２’－メチルスピロ［シクロプロパン－１，８’－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン］－６’－オン９
実施例１に記載される方法に従って、第６ステップにおける反応原料３－アミノ酪酸１０７を２－（１－アミノシクロプロピル）酢酸に置き換えて、白色固体である５’－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－４’，５’－ジフルオロ－２’－メチルスピロ［シクロプロパン－１，８’－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン］－６’－オン９を得た。
５’－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－４’，５’－ジフルオロ－２’－メチルスピロ［シクロプロパン－１，８’－３，５－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン］－６’－オン９
【化12】
【0173】
ＭＳ（ＥＳＩ）：５６０．１［Ｍ＋１］＋。
【0174】
１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３））δ１０．３４（ｓ，１Ｈ），１０．２４（ｓ，１Ｈ），９．７１（ｓ，１Ｈ），８．８９－８．４７（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７５（ｓ，２Ｈ），３．３５（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８４（ｓ，２Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），２．４７－２．３５（ｍ，８Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．７６－０．７４（ｍ，２Ｈ），０．５２－０．４８（ｍ，２Ｈ）
【0175】
実施例６、１０及び１１
実施例１～３に記載される方法に従って、適切な化合物を出発原料として、以下の化合物を得た。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－５－オキサ－３－アザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン６、
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，６－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－５－オン１０、
４５－（４－エチルピペラジン－１－イル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，６－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－５－オン１１。
実施例１～３に記載される方法に従って、適切な化合物を出発原料として、以下の化合物を得た。
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－５－オキサ－３－アザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン６、
４５－（（４－エチルピペラジン－１－イル）メチル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，６－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－５－オン１０、
４５－（４－エチルピペラジン－１－イル）－１４，２５－ジフルオロ－１２，８－ジメチル－１１Ｈ－３，６－ジアザ－１（６，１）－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－２（４，２）－ピリミジン－４（２，４）－ピリジンシクロオクタファン－５－オン１１。
【0176】
試験例１
ＣＤＫ４／Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１阻害作用の測定
ＣＤＫ４／Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１についてのＩＣ５０の測定法は以下のステップで行われた。９６ウェルフィルタプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＭＡＤＶＮ６５５０）を用いた。総体積が０．１ｍｌであり、緩衝液Ａ（２０ｍＭのＴＲＩＳ（トリス［ヒドロキシメチル］アミノメタン）（ｐＨ７．４）、５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのジチオトレイトール、１０ｍＭのＭｇＣｌ２）、２５μＭのＡＴＰ（０．２５μＣｉの［３２Ｐ］ＡＴＰを含有する）、２０ｎＧのＣＤＫ４、１μｇの網膜芽細胞腫タンパク質及び試験化合物を含有する適切な比率の緩衝液Ａ希釈液である。試験化合物を添加しない緩衝液Ａのみを阻害作用のない対照として採用した。過剰のＥＤＴＡを含有する緩衝液Ａを用いて酵素活性の不存在下のバックグラウンド３２Ｐのレベルを測定した。ＡＴＰ以外の全ての成分をウェルに添加し、プレートをプレートミキサ上に２分間置いた。［３２Ｐ］ＡＴＰを添加することにより反応を開始し、プレートを２５℃で１５分間インキュベートした。０．１ｍｌの２０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を添加することにより反応を停止させた。プレートを少なくとも４℃に１時間維持することにより、基質を沈殿させた。次にウェルを０．２ｍｌの１０％ＴＣＡで５回洗浄し、βプレートカウンタ（ｗａｌｌａＣＩｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を用いて３２Ｐの結合を測定した。中央値効果法を用いて試験化合物のＩＣ５０を測定した（Ｃｈｏｕ、Ｔ－Ｃ ａｎｄ Ｔａｌａｌａｙ Ｐ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｄｉａｎ ｅｆｆｅｃｔ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓ ａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆｓｙｎｅｒｇｉｓｍ ａｎｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｏｆ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ．Ｉｎ Ｎｅｗ Ａｖｅｎｕｅｓ ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（Ｅｄｓ．Ｈａｒｒａｐ、Ｋ．Ｔ．ａｎｄ Ｃｏｎｎｏｒｓ、Ｔ．Ａ．）、ｐｐ．３７－６４．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７）。
ＣＤＫ４／Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１阻害作用の測定
ＣＤＫ４／Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１についてのＩＣ５０の測定法は以下のステップで行われた。９６ウェルフィルタプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＭＡＤＶＮ６５５０）を用いた。総体積が０．１ｍｌであり、緩衝液Ａ（２０ｍＭのＴＲＩＳ（トリス［ヒドロキシメチル］アミノメタン）（ｐＨ７．４）、５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのジチオトレイトール、１０ｍＭのＭｇＣｌ２）、２５μＭのＡＴＰ（０．２５μＣｉの［３２Ｐ］ＡＴＰを含有する）、２０ｎＧのＣＤＫ４、１μｇの網膜芽細胞腫タンパク質及び試験化合物を含有する適切な比率の緩衝液Ａ希釈液である。試験化合物を添加しない緩衝液Ａのみを阻害作用のない対照として採用した。過剰のＥＤＴＡを含有する緩衝液Ａを用いて酵素活性の不存在下のバックグラウンド３２Ｐのレベルを測定した。ＡＴＰ以外の全ての成分をウェルに添加し、プレートをプレートミキサ上に２分間置いた。［３２Ｐ］ＡＴＰを添加することにより反応を開始し、プレートを２５℃で１５分間インキュベートした。０．１ｍｌの２０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を添加することにより反応を停止させた。プレートを少なくとも４℃に１時間維持することにより、基質を沈殿させた。次にウェルを０．２ｍｌの１０％ＴＣＡで５回洗浄し、βプレートカウンタ（ｗａｌｌａＣＩｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を用いて３２Ｐの結合を測定した。中央値効果法を用いて試験化合物のＩＣ５０を測定した（Ｃｈｏｕ、Ｔ－Ｃ ａｎｄ Ｔａｌａｌａｙ Ｐ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｄｉａｎ ｅｆｆｅｃｔ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓ ａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆｓｙｎｅｒｇｉｓｍ ａｎｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｏｆ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ．Ｉｎ Ｎｅｗ Ａｖｅｎｕｅｓ ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（Ｅｄｓ．Ｈａｒｒａｐ、Ｋ．Ｔ．ａｎｄ Ｃｏｎｎｏｒｓ、Ｔ．Ａ．）、ｐｐ．３７－６４．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７）。
【0177】
実験方法：Ｃａｌｉｐｅｒ移動度（Ｍｏｂｉｌｉｔｙ Ｓｈｉｆｔ）方法を用いるＣＤＫ４／６キナーゼの阻害活性の測定
１、１倍キナーゼ緩衝液の調製：
１）、１倍ＣＤＫ４キナーゼ緩衝液の調製
８００μＬのストック濃度１０００ｍＭ ｐＨ７．５のＨＥＰＥＳ、４０μＬのストック濃度１０％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００をそれぞれ３９１６０μＬの超純水に添加し、均一に混合した。
１、１倍キナーゼ緩衝液の調製：
１）、１倍ＣＤＫ４キナーゼ緩衝液の調製
８００μＬのストック濃度１０００ｍＭ ｐＨ７．５のＨＥＰＥＳ、４０μＬのストック濃度１０％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００をそれぞれ３９１６０μＬの超純水に添加し、均一に混合した。
【0178】
２）、１倍ＣＤＫ６キナーゼ緩衝液の調製
５０ｍＬのストック濃度１０００ｍＭ ｐＨ７．５のＨＥＰＥＳ、５０μＬのストック濃度３０％のＢｒｉｊ－３５をそれぞれ９４９．９５ｍＬの超純水に添加し、均一に混合した。
５０ｍＬのストック濃度１０００ｍＭ ｐＨ７．５のＨＥＰＥＳ、５０μＬのストック濃度３０％のＢｒｉｊ－３５をそれぞれ９４９．９５ｍＬの超純水に添加し、均一に混合した。
【0179】
２、停止液の調製
２５ｍＬのストック濃度４％のコーティング液Ｃｏａｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ＃３（Ｃａｌｉｐｅｒ機器に使用される１２－シッパーチップ（ｓｉｐｐｅｒ ｃｈｉｐ）に含まれる）、５０ｍＬのストック濃度１０００ｍＭ ｐＨ７．５のＨＥＰＥＳ、５０ｍＬのストック濃度０．５ＭのＥＤＴＡ、０．２５ｍＬのストック濃度３０％のＢｒｉｊ－３５をそれぞれ３７４．７５ｍＬの超純水に添加し、均一に混合した。
２５ｍＬのストック濃度４％のコーティング液Ｃｏａｔｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ＃３（Ｃａｌｉｐｅｒ機器に使用される１２－シッパーチップ（ｓｉｐｐｅｒ ｃｈｉｐ）に含まれる）、５０ｍＬのストック濃度１０００ｍＭ ｐＨ７．５のＨＥＰＥＳ、５０ｍＬのストック濃度０．５ＭのＥＤＴＡ、０．２５ｍＬのストック濃度３０％のＢｒｉｊ－３５をそれぞれ３７４．７５ｍＬの超純水に添加し、均一に混合した。
【0180】
３、２．５倍キナーゼ溶液の調製
１）、２．５倍ＣＤＫ４／Ｄ３キナーゼ溶液の調製
７μＬのＣＤＫ４／Ｄ３酵素溶液、９μＬのストック濃度１ＭのＤＴＴをそれぞれ１７８４μＬの１倍ＣＤＫ４キナーゼ緩衝液に添加し、均一に混合した。
１）、２．５倍ＣＤＫ４／Ｄ３キナーゼ溶液の調製
７μＬのＣＤＫ４／Ｄ３酵素溶液、９μＬのストック濃度１ＭのＤＴＴをそれぞれ１７８４μＬの１倍ＣＤＫ４キナーゼ緩衝液に添加し、均一に混合した。
【0181】
２）、２．５倍ＣＤＫ６／Ｄ３キナーゼ溶液の調製
１８μＬのＣＤＫ６／Ｄ３酵素溶液、１４μＬのストック濃度１ＭのＤＴＴをそれぞれ２７６８μＬの１倍ＣＤＫ６キナーゼ緩衝液に添加し、均一に混合した。
１８μＬのＣＤＫ６／Ｄ３酵素溶液、１４μＬのストック濃度１ＭのＤＴＴをそれぞれ２７６８μＬの１倍ＣＤＫ６キナーゼ緩衝液に添加し、均一に混合した。
【0182】
４、２．５倍ポリペプチド溶液の調製
１）、２．５倍ＣＤＫ４／Ｄ３ポリペプチド溶液の調製
１０μＬのストック濃度１００ｍＭのＡＴＰ溶液、４５μＬのストック濃度１ＭのＭｇＣｌ２、４５μＬのＦＡＭ標識ポリペプチド８をそれぞれ１７００μＬの１倍ＣＤＫ４キナーゼ緩衝液に添加し、均一に混合した。
１）、２．５倍ＣＤＫ４／Ｄ３ポリペプチド溶液の調製
１０μＬのストック濃度１００ｍＭのＡＴＰ溶液、４５μＬのストック濃度１ＭのＭｇＣｌ２、４５μＬのＦＡＭ標識ポリペプチド８をそれぞれ１７００μＬの１倍ＣＤＫ４キナーゼ緩衝液に添加し、均一に混合した。
【0183】
２）、２．５倍ＣＤＫ６／Ｄ３ポリペプチド溶液の調製
２３μＬのストック濃度１００ｍＭのＡＴＰ溶液、７５μＬのストック濃度１ＭのＭｇＣｌ２、７５μＬのＦＡＭ標識ポリペプチド８をそれぞれ２８２７μＬの１倍ＣＤＫ６キナーゼ緩衝液に添加し、均一に混合した。
２３μＬのストック濃度１００ｍＭのＡＴＰ溶液、７５μＬのストック濃度１ＭのＭｇＣｌ２、７５μＬのＦＡＭ標識ポリペプチド８をそれぞれ２８２７μＬの１倍ＣＤＫ６キナーゼ緩衝液に添加し、均一に混合した。
【0184】
５、５倍試験化合物溶液の調製：
１０ｍＭの試験化合物のＤＭＳＯ原液をＤＭＳＯで濃度５０μＭの溶液に希釈し、ストック溶液として用いた。上記ストック溶液をＤＭＳＯによる４倍の段階希釈に供して１２．５μＭ、３．１２５μＭ、０．７８μＭ、０．１９５μＭ、０．０４８８μＭ、１２．２ｎＭ、３ｎＭ、０．７６ｎＭ、０．１９ｎＭの溶液を調製し、次に各濃度をそれぞれ１倍キナーゼ緩衝液で１０倍希釈し、５倍化合物溶液を調製した。
１０ｍＭの試験化合物のＤＭＳＯ原液をＤＭＳＯで濃度５０μＭの溶液に希釈し、ストック溶液として用いた。上記ストック溶液をＤＭＳＯによる４倍の段階希釈に供して１２．５μＭ、３．１２５μＭ、０．７８μＭ、０．１９５μＭ、０．０４８８μＭ、１２．２ｎＭ、３ｎＭ、０．７６ｎＭ、０．１９ｎＭの溶液を調製し、次に各濃度をそれぞれ１倍キナーゼ緩衝液で１０倍希釈し、５倍化合物溶液を調製した。
【0185】
６、ＣＤＫ４／６酵素反応：
１）、３８４ウェルプレートの対応するウェルに５μＬの調製された５倍試験化合物溶液、１０μＬの調製された２．５倍キナーゼ溶液をそれぞれ添加し、室温で１０分間インキュベートした。
１）、３８４ウェルプレートの対応するウェルに５μＬの調製された５倍試験化合物溶液、１０μＬの調製された２．５倍キナーゼ溶液をそれぞれ添加し、室温で１０分間インキュベートした。
【0186】
２）、対応するウェルに１０μＬの調製された２．５倍ポリペプチド溶液をそれぞれ添加し、酵素反応を開始し、２８℃で５時間インキュベートした。
【0187】
７、酵素アッセイ：
各対応するウェルに２５μＬの停止液をそれぞれ添加し、反応を停止させた。
各対応するウェルに２５μＬの停止液をそれぞれ添加し、反応を停止させた。
【0188】
８、Ｃａｌｉｐｅｒ機器によりデータを読み取り、かつ以下の式により阻害率を計算し、次にＧｒａｐｈＰａｄ５．０ソフトウェアによって曲線あてはめを行って、ＩＣ５０値を得た。
【表2】
【0189】
試験例２
本発明の化合物のインビトロ細胞阻害活性
実験方法：ＢｒｄＵ方法（ＢｒｄＵ細胞増殖試験キット、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を用いて細胞増殖アッセイを行った。
本発明の化合物のインビトロ細胞阻害活性
実験方法：ＢｒｄＵ方法（ＢｒｄＵ細胞増殖試験キット、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を用いて細胞増殖アッセイを行った。
【0190】
１、試薬及び化合物の調製
１倍洗浄液の調製：
ストック濃度２０倍の洗浄液を超純水で１倍洗浄液に希釈した。
１倍洗浄液の調製：
ストック濃度２０倍の洗浄液を超純水で１倍洗浄液に希釈した。
【0191】
１倍検出抗体溶液の調製：
ストック濃度１００倍のＢｒｄＵ検出抗体を検出抗体希釈剤で１倍検出抗体溶液に希釈した。
ストック濃度１００倍のＢｒｄＵ検出抗体を検出抗体希釈剤で１倍検出抗体溶液に希釈した。
【0192】
１倍ＨＲＰ標識二次抗体溶液の調製：
ストック濃度１００倍の抗マウスＩｇＧ、ＨＲＰ標識抗体をＨＲＰ標識抗体希釈剤で１倍ＨＲＰ標識二次抗体溶液に希釈した。
ストック濃度１００倍の抗マウスＩｇＧ、ＨＲＰ標識抗体をＨＲＰ標識抗体希釈剤で１倍ＨＲＰ標識二次抗体溶液に希釈した。
【0193】
１０倍ＢｒｄＵ溶液：
ストック濃度１０００倍のＢｒｄＵ溶液を細胞に対応する培地で１０倍ＢｒｄＵ溶液に希釈した。
ストック濃度１０００倍のＢｒｄＵ溶液を細胞に対応する培地で１０倍ＢｒｄＵ溶液に希釈した。
【0194】
試験化合物の調製：
試験化合物ストック溶液の調製：１００％ＤＭＳＯを用いて１０ｍＭのストック溶液を調製した。
試験化合物ストック溶液の調製：１００％ＤＭＳＯを用いて１０ｍＭのストック溶液を調製した。
【0195】
試験化合物の勾配希釈溶液の調製：１０ｍＭの試験化合物ストック溶液をＤＭＳＯによる４倍の連続勾配希釈に供し、濃度がそれぞれ２．５ｍＭ、６２５μＭ、１５６μＭ、３９μＭ、９．８μＭ、２．５μＭであった。２μＬのＤＭＳＯ希釈化合物をそれぞれ、１０％ＦＢＳを含有する１９８μＬの培地に添加して、１０倍試験化合物を調製し、試験化合物の最大濃度が１００μＭであり、ＤＭＳＯの濃度が１％であり、合計７つの濃度勾配があった。
【0196】
培地の調製：
ＭＣＦ－７培地：ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋０．０１ｍｇ／ｍＬインスリン
２、試験ステップ
（１）８０％コンフルエンスまで成長させた細胞（対数増殖期）をトリプシン処理し、遠心分離を行って細胞を収集した。ＦＢＳを含まない培地にＭＤＡ－ＭＢ－４３５Ｓ及びＵ８７ＭＧ細胞を再懸濁させ、計数し、９６ウェルプレートへの接種を調整し、ＭＤＡ－ＭＢ－４３５Ｓ細胞を３０００個／ウェル／８１μＬで接種し、Ｕ８７ＭＧ細胞を４０００個／ウェル／８１μＬで接種し、１％ＦＢＳを含む培地にＭＣＦ－７細胞を再懸濁させ、計数し、かつ９６ウェルプレートへの接種を調整し、４０００個／ウェル／８２μＬで接種し、３７℃の細胞インキュベータに入れて培養し、
（２）２４時間培養した後に、ＭＤＡ－ＭＢ－４３５Ｓ及びＵ８７ＭＧ細胞に対してウェルあたりにＦＢＳ（９μＬ）を添加し、ＭＣＦ－７細胞に対してウェルあたりに８μＬのＦＢＳを添加することにより、ＦＢＳの最終濃度を１０％にし、
（３）異なる濃度の１０倍試験化合物（１０μＬ）をウェルあたりに添加することにより、試験化合物の最終濃度をそれぞれ１０μＭ、２．５μＭ、６２５ｎＭ、１５６ｎＭ、３９ｎＭ、９．８ｎＭ、２．５ｎＭにし、群あたりに３つの反復ウェルにし、３７℃で７２時間培養し、
溶媒対照：０．１％ＤＭＳＯ
ブランク対照：培地のみを添加し、細胞がない
正常細胞対照：いかなる処理も行わない正常細胞
（４）ウェルあたりに１０倍ＢｒｄＵ溶液（１０μＬ）を添加し、細胞インキュベータで４時間インキュベートした後に培地を廃棄し、
（５）ウェルあたりに固定／変性溶液（１０μＬ）を添加し、室温で３０分間インキュベートして、溶液を廃棄し、
（６）ウェルあたりに１倍検出抗体溶液（１００μＬ）を添加し、室温で１時間インキュベートして、溶液を廃棄し、１倍洗浄液で２００μＬ／ウェルで３回洗浄し、
（７）ウェルあたりに１倍ＨＲＰ標識二次抗体溶液（１００μＬ）を添加し、室温で３０分間インキュベートして、溶液を廃棄し、１倍洗浄液で２００μＬ／ウェルで３回洗浄し、
（８）ウェルあたりにＴＭＢ基質溶液（１００μＬ）を添加し、室温で３０分間インキュベートし、
（９）ウェルあたりに停止液（１００μＬ）を添加し、マイクロプレートリーダーにより４５０ｎｍでＯＤ値を検出した。
ＭＣＦ－７培地：ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋０．０１ｍｇ／ｍＬインスリン
２、試験ステップ
（１）８０％コンフルエンスまで成長させた細胞（対数増殖期）をトリプシン処理し、遠心分離を行って細胞を収集した。ＦＢＳを含まない培地にＭＤＡ－ＭＢ－４３５Ｓ及びＵ８７ＭＧ細胞を再懸濁させ、計数し、９６ウェルプレートへの接種を調整し、ＭＤＡ－ＭＢ－４３５Ｓ細胞を３０００個／ウェル／８１μＬで接種し、Ｕ８７ＭＧ細胞を４０００個／ウェル／８１μＬで接種し、１％ＦＢＳを含む培地にＭＣＦ－７細胞を再懸濁させ、計数し、かつ９６ウェルプレートへの接種を調整し、４０００個／ウェル／８２μＬで接種し、３７℃の細胞インキュベータに入れて培養し、
（２）２４時間培養した後に、ＭＤＡ－ＭＢ－４３５Ｓ及びＵ８７ＭＧ細胞に対してウェルあたりにＦＢＳ（９μＬ）を添加し、ＭＣＦ－７細胞に対してウェルあたりに８μＬのＦＢＳを添加することにより、ＦＢＳの最終濃度を１０％にし、
（３）異なる濃度の１０倍試験化合物（１０μＬ）をウェルあたりに添加することにより、試験化合物の最終濃度をそれぞれ１０μＭ、２．５μＭ、６２５ｎＭ、１５６ｎＭ、３９ｎＭ、９．８ｎＭ、２．５ｎＭにし、群あたりに３つの反復ウェルにし、３７℃で７２時間培養し、
溶媒対照：０．１％ＤＭＳＯ
ブランク対照：培地のみを添加し、細胞がない
正常細胞対照：いかなる処理も行わない正常細胞
（４）ウェルあたりに１０倍ＢｒｄＵ溶液（１０μＬ）を添加し、細胞インキュベータで４時間インキュベートした後に培地を廃棄し、
（５）ウェルあたりに固定／変性溶液（１０μＬ）を添加し、室温で３０分間インキュベートして、溶液を廃棄し、
（６）ウェルあたりに１倍検出抗体溶液（１００μＬ）を添加し、室温で１時間インキュベートして、溶液を廃棄し、１倍洗浄液で２００μＬ／ウェルで３回洗浄し、
（７）ウェルあたりに１倍ＨＲＰ標識二次抗体溶液（１００μＬ）を添加し、室温で３０分間インキュベートして、溶液を廃棄し、１倍洗浄液で２００μＬ／ウェルで３回洗浄し、
（８）ウェルあたりにＴＭＢ基質溶液（１００μＬ）を添加し、室温で３０分間インキュベートし、
（９）ウェルあたりに停止液（１００μＬ）を添加し、マイクロプレートリーダーにより４５０ｎｍでＯＤ値を検出した。
【0197】
３、データ処理
１）細胞生存率（％）＝（ＯＤ試験化合物－ＯＤブランク対照）／（ＯＤ正常細胞対照－ＯＤブランク対照）×１００％、
ＯＤブランク対照：ブランク対照値、ＯＤ正常細胞対照：正常細胞対照値。
２）データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウェアで処理し、曲線及びＩＣ５０値を得た。
１）細胞生存率（％）＝（ＯＤ試験化合物－ＯＤブランク対照）／（ＯＤ正常細胞対照－ＯＤブランク対照）×１００％、
ＯＤブランク対照：ブランク対照値、ＯＤ正常細胞対照：正常細胞対照値。
２）データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ５ソフトウェアで処理し、曲線及びＩＣ５０値を得た。
【表3】
【国際調査報告】