特表 2022-518031 歯周炎の治療および歯間乳頭の再生のための組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-03-11

(54)【発明の名称】歯周炎の治療および歯間乳頭の再生のための組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/728 20060101AFI20220304BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20220304BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20220304BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20220304BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20220304BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20220304BHJP

【ＦＩ】

A61K31/728

A61K31/711

A61P1/02

A61P43/00 121

A61K9/08

A61K47/26

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021541308

(86)(22)【出願日】2020-01-24

(85)【翻訳文提出日】2021-07-15

(86)【国際出願番号】 IB2020050567

(87)【国際公開番号】W WO2020152643

(87)【国際公開日】2020-07-30

(31)【優先権主張番号】102019000001081

(32)【優先日】2019-01-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521314389

【氏名又は名称】マステッリ・ソチエタ・ア・レスポンサビリタ・リミタータ

【氏名又は名称原語表記】ＭＡＳＴＥＬＬＩ Ｓ．Ｒ．Ｌ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100150500

【弁理士】

【氏名又は名称】森本 靖

(74)【代理人】

【識別番号】100176474

【弁理士】

【氏名又は名称】秋山 信彦

(72)【発明者】

【氏名】プルッシア，ジョヴァンニ

(72)【発明者】

【氏名】プルッシア，クラウディア

(72)【発明者】

【氏名】カッタリーニ マステッリ，ジュリア

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076BB22

4C076CC09

4C076DD26

4C076DD38A

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086EA25

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA57

4C086NA05

4C086ZA67

4C086ZC75

(57)【要約】

歯間乳頭の再生のための治療的および／もしくは美容的処置における、または切縁間乳頭の後退（ブラックトライアングル症候群）の治療的および／もしくは美容的処置における、または歯周炎の治療的および／もしくは美容的処置における、活性物質としての使用のための、ヒアルロン酸および天然源から抽出されたポリヌクレオチドの混合物を含む組成物が本明細書に記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

歯間乳頭の再生のための治療的および／もしくは美容的処置における、または切縁間乳頭の後退（ブラックトライアングル症候群）の治療的および／もしくは美容的処置における、または歯周炎の治療的および／もしくは美容的処置における、活性物質としての使用のための、ヒアルロン酸および天然源から抽出されたポリヌクレオチドの混合物を含む組成物。

【請求項2】

前記歯周炎が急性歯周炎または慢性歯周炎である、請求項１に記載の使用のための組成物。

【請求項3】

前記治療的および／または美容的処置が、歯周ポケットの深さの減少および／または痛みの軽減および／または刺痛の軽減および／または不快感の軽減および／または出血の減少をもたらす、請求項１または２に記載の使用のための組成物。

【請求項4】

前記治療的および／または美容的処置が乳頭の再生を引き起こす、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項5】

前記治療的および／または美容的処置が、歯肉線維芽細胞の増殖の増加およびタンパク質マトリックスの沈着の増加をもたらす、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項6】

前記治療が局所適用および／または局所浸透によって行われる、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項7】

前記治療が前記歯周ポケット内の局所適用によって行われる、請求項１～６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項8】

前記治療が、乳頭および／または前庭における局所的な歯肉浸透によって行われる、請求項１～７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項9】

１ｍｇ／ｍｌ～２０ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸、および１ｍｇ／ｍｌ～２０ｍｇ／ｍｌの前記ポリヌクレオチドの混合物を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項10】

５ｍｇ／ｍｌ～１２ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸、および５ｍｇ／ｍｌ～１２ｍｇ／ｍｌの前記ポリヌクレオチドの混合物を含む、請求項９に記載の使用のための組成物。

【請求項11】

前記ポリヌクレオチドおよび前記ヒアルロン酸を０．２：１～２：１の重量比で含む、請求項９または１０に記載の使用のための組成物。

【請求項12】

前記ポリヌクレオチドの混合物が部分的に脱プリンされている、請求項１～１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項13】

前記ポリヌクレオチドの混合物が、元々存在していた全プリン塩基から１％～５％のプリン塩基が除去される範囲の脱プリン比を有する、請求項１２に記載の使用のための組成物。

【請求項14】

前記ポリヌクレオチドの混合物が、０．５キロダルトン～３０００キロダルトン、または好ましくは３０キロダルトン～２０００キロダルトンの範囲の分子量分布、例えば、約２５０キロダルトンの平均分子量を有する核酸ポリマー鎖の画分である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項15】

前記ポリヌクレオチドの混合物が、前記ポリヌクレオチド核酸鎖の部分的断片化の工程および前記核酸の部分的な脱プリンの工程を含むプロセスによって、天然の動物または植物源からの抽出によって得ることができる、請求項１～１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項16】

前記ヒアルロン酸が架橋されていない、請求項１～１５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項17】

５００キロダルトン～３０００キロダルトンの分子量を有するヒアルロン酸を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項18】

薬学的に許容されるポリオール、好ましくはマンニトールを含む水性溶媒中の、生理食塩水を含まない液体形態の、請求項１～１７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【請求項19】

１０ｍ．ｏ．ｓ．／ｌ～５００ｍ．ｏ．ｓ．／ｌ、好ましくは２５０ｍ．ｏ．ｓ．／ｌ～３５０ｍ．ｏ．ｓ．／ｌのモル浸透圧濃度を有する、請求項１８に記載の使用のための組成物。

【請求項20】

局所適用または局所浸透に適した剤形である、請求項１～１９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、歯周炎の治療的および／または美容的処置ならびに歯間乳頭の再生において活性な組成物に言及する。

【背景技術】

【0002】

歯周炎は、歯周組織の炎症を特徴とする病気である。これは、西欧諸国の集団において最も蔓延している慢性炎症性疾患の１つであり、イタリアでは、重症の場合、成人の約１０～１５％に影響を与えると推定されているが、２～３０％の割合はその穏やかな型の影響を受ける。歯周炎は、歯の要素の喪失の主な原因であり、それは深刻な機能障害の原因であると同時に、人間関係に悪影響を及ぼす可能性があり、心理的領域に重大な影響を及ぼし、笑顔の美学を損なう。

【0003】

歯周炎の特徴的な兆候は、歯の歯槽への付着が失われることであり、これにより、歯周ポケット、緩い歯、歯茎の出血、膿瘍、化膿が形成され、１つ以上の歯が失われる。

【0004】

従来、歯周炎の治療は、まず細菌および炎症を抑えることを含み、その直後に、歯の付着を回復し、歯肉および骨のポケットをなくすために、失われた硬い歯周組織と柔らかい歯周組織を再生する次の工程が不可欠になる。

【0005】

歯間乳頭は、２つの隣接する歯の間の空間を占める遊離の歯肉の部分であり、遊離の歯肉縁が花綱状に歯列弓を走るようにする。乳頭は、歯の近位部分の生物学およびコーティングにおいて重要であることに加えて、特に前部領域において重要な審美的重要性を有する。審美的な目的であるすべての隣接組織を保存することへの明確な注目は、Ｅｖｉａｎおよび共同研究者らによる１９８５年の記事（Ｅｖｉａｎ ＣＩ，Ｃｏｍ Ｈ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＥＳ．Ｒｅｔａｉｎｅｄ ｉｎｔｅｒｄｅｎｔａｌ ｐａｐｉｌｌａ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｅｓｔｈｅｔｉｃｓ．Ｃｏｍｐｅｎｄ Ｃｏｎｔｉｎ Ｅｄｕｃ Ｄｅｎｔ １９８５；６（ｌ）：５８－６４）から始まり、これは、特定の審美的目的を伴う外科的方法を説明し、それを「保持歯間乳頭手術」と定義している。

【0006】

歯肉組織のこの部分の喪失もまた、特に可能な保存および再生技術に関して、研究の対象である。実際、歯科医と患者の両方にとって、歯科的審美性はますます重要になっている。上顎前歯の間に隣接歯間乳頭が存在することは、実際、重要な審美的要素である。歯間乳頭の後退は、いわゆるブラックトライアングル（「ブラックトライアングル症候群」（または「切縁間乳頭の後退」）の形成などの審美的問題だけでなく、多くの機能的問題を引き起こす。

【0007】

１９９８年、ＮｏｒｄｌａｎｄおよびＴａｒｎｏｗは、乳頭の高さの喪失を、スケールを使用して分類した。このスケールは、現在でも広く使用されており、正常、クラスＩ、クラスＩＩ、クラスＩＩＩの４つのクラスを識別する（Ｎｏｒｄｌａｎｄ ＷＰ，Ｔａｒｎｏｗ ＤＰ．Ａ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｌｏｓｓ ｏｆ ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｈｅｉｇｈｔ．Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ １９９８；６９：１１２４－６）。ＮｏｒｄｌａｎｄおよびＴａｒｎｏｗによって識別されたクラスは、以下の解剖学的参照、
１）歯間接点、
２）ＣＥＪ（セメント質エナメル質接合部）の頂端／顔面拡張、
３）ＣＥＪの冠状／近位方向の拡張を使用する。

【0008】

これらのクラスについて、以下で簡単に説明する。
－正常：乳頭は歯間空間を接触点まで満たす。
－クラスＩ：乳頭の先端は接触点とＣＥＪの冠状部分の間にある（空間は存在するが、冠状／近位ＣＥＪは見えない）。
－クラスＩＩ：乳頭の先端は冠状／近位ＣＥＪの頂端にあるが、顔面ＣＥＪ（目に見える冠状／近位ＣＥＪ）と同じ高さにある。
－クラスＩＩＩ：乳頭の先端は顔面ＣＥＪの頂端にある。

【0009】

歯間組織の喪失がすでに発生している場合は、再建を目的とした多数の技術を実装できる。この組織欠損を解決するために適している文献において提案された方法は、外科的技術と非外科的技術を互いに組み合わせることができることが多いため、この区別は単に説明的なものであるにもかかわらず、全体として外科的技術と非外科的技術に分けることができる。

【0010】

外科的再建技術
歯間組織の欠損を矯正する目的で、多くの外科的戦略が文献に記載されている。しかし、引用される知識は、症例研究に限定されることがよくある。

【0011】

１９９２年、Ｂｅａｇｌｅは、上顎中切歯の間に歯間乳頭を再現するために、有茎皮弁技術と呼ばれる外科的方法を提案した（Ｂｅａｇｌｅ ＪＲ．Ｓｕｒｇｉｃａｌ ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｄｅｎｔａｌ ｐａｐｉｌｌａ：ｃａｓｅ ｒｅｐｏｒｔ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｃｓ Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ Ｄｅｎｔ １９９２；１２（２）：１４５－５１）。この技術の適用性は、大きな歯間領域に限定されており、結合組織の存在が大きいため、厚いバイオタイプによって促進される可能性がある。

【0012】

１９９４年に、Ａｕｂｅｒｔおよび共同研究者らは、関与する組織への栄養供給のより大きな保存を求めて、深く回転した結合組織皮弁法を提案した（Ａｕｂｅｒｔ Ｈ，Ｂｅｒｔｒａｎｄ Ｇ，Ｏｒｌａｎｄｏ Ｓ，Ｂｅｎｇｕｉｇｕｉ Ｆ，Ａｃｏｃｅｌｌａ Ｇ．Ｌｅｍｂｏ ｃｏｎｎｅｔｔｉｖａｌｅ ｐｒｏｆｏｎｄｏ ｄｉ ｒｏｔａｚｉｏｎｅ ｐｅｒ ｒｉｃｏｓｔｒｕｉｒｅ ｌａ ｐａｐｉｌｌａ ｉｎｔｅｒｄｅｎｔａｌｅ．Ｍｉｎｅｒｖａ Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｉｃａ １９９４；４３（７－８）：３５１－３５７）。しかし、この手法には、一度に１つの乳頭に使用できるという欠点がある。

【0013】

結合組織フィラーの有用性の直感に基づいてはいるが、外科的技術を簡素化する目的で、１９９６年にＨａｎおよびＴａｋｅｉは半月状の冠状動脈再配置乳頭技術を提案した（Ｈａｎ ＴＪ，Ｔａｋｅｉ ＨＨ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｇｉｎｇｉｖａｌ ｐａｐｉｌｌａ ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２０００ １９９６；１１：６５－８）。この方法は、部分的な厚さの皮弁の下に結合組織移植片を使用することからなる、二層技術の統合された信頼性に触発されている。この技術の利点の１つは、結合組織とその上にある皮弁の両方からの二重血液供給であり、移植片の生存に有利である（Ｌａｎｇｅｒ Β，Ｌａｎｇｅｒ Ｌ．Ｓｕｂｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｇｒａｆｔ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｆｏｒ ｒｏｏｔ ｃｏｖｅｒａｇｅ．Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ １９８５；５６（１２）：７１５－２０）。二層技術の使用が実用的な利点につながるという直感にもかかわらず、Ａｕｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９４によって以前に提案された方法と比較して、ＨａｎおよびＴａｋｅｉによって導入された歯間組織複合体の冠状動脈シフトは依然として実際の技術的困難を表している。

【0014】

１９９８年に、Ａｚｚｉらは、前述のアプローチと同様のアプローチであるが、その適用性を改善する可能性のあるいくつかの変更を加えたエンベロープ技術を提案した（Ａｚｚｉ Ｒ，Ｅｔｉｅｎｎｅ Ｄ，Ｃａｒｒａｎｚａ Ｆ．Ｓｕｒｇｉｃａｌ ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｄｅｎｔａｌ ｐａｐｉｌｌａ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｃｓ Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ Ｄｅｎｔ．１９９８；１８（５）：４６６－７３）。

【0015】

最後に、重大な組織欠損に関連する治療上の困難性と長期安定性の探求により、Ａｚｚｉらは２００１年に自家骨移植片の使用を提案した（Ａｚｚｉ Ｒ，Ｔａｋｅｉ ＨＨ，Ｅｔｉｅｎｎｅ Ｄ，Ｃａｒｒａｎｚａ ＦＡ．Ｒｏｏｔ ｃｏｖｅｒａｇｅ ａｎｄ ｐａｐｉｌｌａ ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ａｕｔｏｇｅｎｏｕｓ ｏｓｓｅｏｕｓ ａｎｄ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｇｒａｆｔｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｃｓ Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ Ｄｅｎｔ ２００１；２１（２）：１４１－７）。

【0016】

一般に、前述の外科的再建療法は、審美的－解剖学的妥協を生み出し、軟性歯周組織と硬い歯周組織との間の生理学的関係を変化させる。臨床的結果は、歯周ポケット、またはせいぜい長い接合上皮が歯の要素と新しい歯間組織との間に形成されることである。同時に、組織間の正常な関係の崩壊は、長期的には結果の不確実性の高さにつながる。

【0017】

非外科的再建技術
非外科的再建技術は、基本的に、歯間組織の存在に関連する非歯肉の解剖学的決定要因を修正することを目的としている。したがって、それらの使用は、歯間空間および／または接触点と骨頂との間の距離に作用することを可能にする。これらの手法には、次の３種類のアプローチが提案されている。
・修復／補綴
・矯正歯科
・掻爬と線維芽細胞の注入を伴うこと

【0018】

修復／補綴治療の可能性は、歯の冠状形態を修正すること、したがって、より多くの頂端接触点を作成すること、歯隙閉鎖を誘発すること、または歯間空間を減らすことの可能性である（Ｐｒａｔｏ ＧＰ，Ｒｏｔｕｎｄｏ Ｒ，Ｃｏｒｔｅｌｌｉｎｉ Ｐ，Ｔｉｎｔｉ Ｃ，Ａｚｚｉ Ｒ．Ｉｎｔｅｒｄｅｎｔａｌ ｐａｐｉｌｌａ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｃｓ Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ Ｄｅｎｔ ２００４；２４（３）：２４６－５５）。軟組織の増殖反応を誘発することを目的として、新しくより好ましい解剖学的決定因子を再現する可能性も、いわゆるブラックトライアングルの審美的な閉鎖につながる。重要なことに、歯の形態学的修飾の程度は、軟組織の予想される反応に基づいて評価されるべきである。したがって、歯の完全な再建的閉鎖を用いて乳頭のない歯間領域を矯正することは良い習慣とは見なされない。得られる過剰矯正は、実際、望ましくない組織反応を引き起こす可能性がある。

【0019】

歯科矯正治療も解剖学的決定要因を変更するが、この場合、これは完全により生理学的なアプローチで行われる。歯周病は、骨吸収と軟部組織の後退の問題とともに、特に前上部領域でしばしば歯の変位を引き起こす。支持組織が減少して炎症を起こすと、歯科要素は、移動、傾斜、およびフレア運動を伴う機能的な力に応答する。これにより、解剖学的決定要因間の関係が変化するため、隣接組織の喪失が強調される。したがって、適切な歯周治療の後、矯正治療は矯正目的に役立つ可能性がある（Ｃａｒｄａｒｏｐｏｌｉ Ｄ，Ｒｅ Ｓ，Ｃｏｒｒｅｎｔｅ Ｇ，Ａｂｕｎｄｏ Ｒ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｘｉｌｌａｒｙ ｍｉｄｌｉｎｅ ｐａｐｉｌｌａ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ－ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２００４；３１（２）：７９－８４；Ｃａｒｄａｒｏｐｏｌｉ Ｄ，Ｒｅ Ｓ．Ｉｎｔｅｒｄｅｎｔａｌ ｐａｐｉｌｌａ ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ａ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｐａｔｉｅｎｔ．Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２００５；７６（４）：６５５－６１；Ｍｅｌｓｅｎ Β，Ａｇｅｒｂａｅｋ Ｎ，Ｍａｒｋｅｎｓｔａｍ Ｇ．Ｉｎｔｒｕｓｉｏｎ ｏｆ ｉｎｃｉｓｏｒｓ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍａｒｇｉｎａｌ ｂｏｎｅ ｌｏｓｓ．Ａｍ Ｊ Ｏｒｔｈｏｄ Ｄｅｎｔｏｆａｃｉａｌ Ｏｒｔｈｏｐ １９８９；９６（３）：２３２－４１）。しかし、矯正治療でさえ適用限界がある。可能性のある固定の難しさに関係なく、明らかな制限は、実際には、アーチ間の関係に由来する。この理由のため、歯科矯正治療は、最終段階で、保守的な補綴物の矯正によって支援されることがよくある。

【0020】

１９８５年に、Ｓｈａｐｉｒｏは、乳頭組織の再生を刺激するための乳頭組織の定期的な掻爬の手順を説明した（Ｓｈａｐｉｒｏ Ａ．Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｄｅｎｔａｌ ｐａｐｉｌｌａｅ ｕｓｉｎｇ ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｃｕｒｅｔｔａｇｅ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｉｃｓ Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ Ｄｅｎｔ １９８５；５（５）：２６－３３）。この単純な操作は、１５日ごとに３か月間繰り返され、軟部組織の過形成を誘発できることが証明されている。しかし、この技術は非常に侵攻性の歯周病の場合にのみもっともらしい選択肢であり、とにかく、著者によって治療されたすべての症例で肯定的な結果が得られたわけではない。

【0021】

２００７年に、歯間組織への線維芽細胞の注射の提案が発表された（ＭｃＧｕｉｒｅ ＭＫ，Ｓｃｈｅｙｅｒ ＥＴ．Ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｓｔｕｄｙ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｎｄ ｅｘｐａｎｄｅｄ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｔｅｒｄｅｎｔａｌ ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐａｐｉｌｌａ ｐｒｉｍｉｎｇ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ．Ｊ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ ２００７；７８（ｌ）：４－１７）。著者らは、自家線維芽細胞（ＦＢＬ）を連続して注入することで表される非外科的方法について説明した。この技術の基礎は、これらの細胞に起因する栄養的な役割にある。ＦＢＬは、コラーゲンマトリックスと繊維を生成することにより、歯茎の治癒と健康維持に重要な役割を果たす。したがって、これらの細胞を使用することにより、乳頭の再成長を促進できるとの仮説が立てられた。しかし、提案された技術の特殊性は、外来患者ベースでの適用性を制限する。

【0022】

より最近では、従来の治療法に加えて、ヒアルロン酸を歯茎に浸透させることにより、侵襲性の低い治療法が提案された。治療は、失われた乳頭組織にフィラーを充填することによって行われる。この充填は、充填剤として機能する架橋ヒアルロン酸を使用することにより行われ、体積を作成し、乳頭の欠落した領域を充填する（Ｂｅｒｔｌ Ｋ，Ｇｏｔｆｒｅｄｓｅｎ Ｋ，Ｊｅｎｓｅｎ ＳＳ，Ｂｒｕｃｋｍａｎｎ Ｃ，Ｓｔａｖｒｏｐｏｕｌｏｓ Ａ．Ｃａｎ ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ ａｕｇｍｅｎｔ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｐａｐｉｌｌａｅ ａｔ ｉｍｐｌａｎｔ－ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｃｒｏｗｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｍａｘｉｌｌａ？Ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｗｉｔｈ ６ ｍｏｎｔｈｓ ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ．Ｃｌｉｎ Ｏｒａｌ Ｉｍｐｌａｎｔｓ Ｒｅｓ．２０１７ Ｓｅｐ；２８（９）：１０５４－１０６１（ａ））。架橋ヒアルロン酸は、浸透した組織に体積効果をもたらすが、分解が非常に遅く起こるため、何ヶ月も持続する可能性がある。実際、分子は、架橋工程によって実施される化学修飾処理の結果として、ヒアルロニダーゼ分解から保護されている。しかし、得られた結果は矛盾しており、副作用の発生がないわけではない（Ｂｅｒｔｌ Ｋ，Ｇｏｔｆｒｅｄｓｅｎ Ｋ，Ｊｅｎｓｅｎ ＳＳ，Ｂｒｕｃｋｍａｎｎ Ｃ，Ｓｔａｖｒｏｐｏｕｌｏｓ Ａ．Ａｄｖｅｒｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｍｉｎｉｍａｌｌｙ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｐａｐｉｌｌａ ｖｏｌｕｍｅ ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ａ ｒｅｐｏｒｔ ｏｎ ｔｗｏ ｃａｓｅｓ．Ｃｌｉｎ Ｏｒａｌ Ｉｍｐｌａｎｔｓ Ｒｅｓ．２０１７ Ｊｕｌ；２８（７）：８７１－８７６）（ｂ））。

【0023】

本発明は、ヒアルロン酸とポリヌクレオチドの同時投与が、好ましくは局所および／または浸透経路を介して、歯周炎および歯間乳頭の再生の両方に正の効果を発揮し、成分間の相乗効果を示し、別々に使用されるコンポーネントの投与よりも優れた結果の達成を可能にするという認識に基づく。

【0024】

本発明者らは、例えば、ブラックトライアングル症候群などの歯間乳頭の後退を特徴とする歯周炎および疾患の状況において、ポリヌクレオチドおよびヒアルロン酸の組み合わせが、浸透領域において抗炎症、栄養および生体刺激効果を有することを見出した。ポリヌクレオチドとヒアルロン酸の組み合わせを含み、ヒアルロン酸が好ましくは架橋されていない、本発明による使用のための組成物は、迅速に再吸収されることも見出された。したがって、先行技術に記載されている架橋ヒアルロン酸浸透（例えば、ＥＰ１５２５０１１およびＢｅｒｔｌ ｅｔ ａｌ．，２０１７による前述の刊行物を参照）と比較して、この場合、これは単なる充填処理ではないことを認めることが本質的である。

【0025】

実際、ポリヌクレオチドおよびヒアルロン酸の生化学的特性のおかげで、本発明は、組織の抗炎症効果および生理学的応答の達成を可能にし、これは、歯間乳頭の顕著かつ自発的な再生および組織栄養の改善を促進することができる。

【0026】

さらなる利点は、局所および浸透経路を介した本発明による使用のための組成物の投与が、局所麻酔を使用しなくても、忍容性が高く、患者にとってあまり不快ではないことであり、治療は迅速で非侵襲的であり、治療は反復可能であり、そして患者の日常生活に不快感を与えることなく、その代わりに手術後に起こることとは反対に、患者が通常の社会生活と通常の食事をすぐに再開することができ、副作用は報告されておらず、治療は非常に効果的であり、したがって患者は非常に満足していることである。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0027】

したがって、本発明の目的は、ポリヌクレオチドおよびヒアルロン酸を有効成分として含む相乗効果を有する組成物、ならびに本説明の不可欠な部分を形成する添付の特許請求の範囲によって定義される用途におけるそれらの使用である。

【課題を解決するための手段】

【0028】

ヒアルロン酸（ＨＡ）は、グリコサミノグリカンファミリーに属する硫黄を含まないポリマーである。それは哺乳動物の組織に遍在し、分岐していない構造を有し、グルクロン酸とＮ－アセチルグルコサミンから構成される二糖の規則正しい繰り返しからなる。

【0029】

ＨＡのサイズは様々であるが、１００万ダルトンを超えており、一部の組織では３００万～９００万ダルトンの範囲である。当初、ＨＡは１９３４年にＭａｙｅｒによって硝子体の硝子体物質から分離されたため、その名前が付けられ、ＨＡは、何年もの間、特別な生物学的役割を有さない、並外れた親水性を備えた充填および構造物質と見なされてきた。特にＣＤ４４およびＲＨＡＭＭなどのＨＡの組織受容体が発見された後、過去１０年間だけ、このポリマーの生物学的役割に注目が集まってきた。したがって、組織の再生と修復に関するより複雑なプロセスにおける活性物質としてのＨＡの役割に関する知識が広がってきた。したがって、ＨＡはもはや不活性分子とは見なされないが、細胞の移動と複製、血管新生、および組織の成長と成熟などの重要な生物学的プロセスに積極的に関与する分子である。

【0030】

本発明の範囲内で、ヒアルロン酸は、それ自体で使用することができ、または、例えばナトリウムとともに様々に塩化させることができる。

【0031】

典型的には、ヒアルロン酸またはそのナトリウム塩は、５００～３０００キロダルトン、好ましくは６００～１６００キロダルトンの分子量で使用される。本発明の範囲内で使用可能なヒアルロン酸のさらなる分子量は、７００キロダルトン、８００キロダルトン、９００キロダルトン、１０００キロダルトン、１２００キロダルトン、１４００キロダルトン、１６００キロダルトン、１８００キロダルトン、２０００キロダルトン、２２００キロダルトン、２４００キロダルトン、２８００キロダルトンである。

【0032】

非架橋ヒアルロン酸が好ましく使用される。

【0033】

「ポリヌクレオチド」という用語は、好ましくは０．５キロダルトン～３０００キロダルトンの範囲、より好ましくは３０キロダルトン～２０００キロダルトンの範囲の分子量分布を有し、例えば、約２５０キロダルトンの重量数値平均分子量を有する、核酸ポリマー鎖、好ましくはＤＮＡの画分を示すことを意図する。ＤＮＡポリマー鎖の前記画分は、分子量を低減するために、好ましくは、ＤＮＡ鎖の部分的断片化の工程、および、その情報能力を排除するためのＤＮＡの部分的脱プリンの工程を含むプロセスによって、魚の精子または植物などの動物または植物の天然源からの抽出によって得られる。

【0034】

ＤＮＡ脱プリンの好ましい割合は、好ましくは、元々存在していた全プリン塩基から、１％～５％のプリン塩基が除去される（すなわち、脱プリン部位）範囲である。好ましい脱プリンの割合は２％～２．５％である。本発明の範囲内で使用可能なポリヌクレオチドのさらなる脱プリンの割合は、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％、３％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％、３．５％、３．６％、３．７％、３．８％、３．９％、４％、４．１％、４．２％、４．３％、４．４％、４．５％、４．６％、４．７％、４．８％、４．９％である。

【0035】

前述のことから、ＰＮの特性は、以下に供されていない従来のポリヌクレオチドの特性とは著しく異なることが明らかである。
・部分的な脱プリン、
・ウイルスおよびプリオンの滅菌技術、
・乾燥時に純度が９８％を超え、タンパク質の量が０．５％未満で、分子量範囲が０．２～３０００キロダルトンである生成物の精製手順。

【0036】

ＰＮは、線維芽細胞、内皮細胞、その他の細胞において有糸分裂を誘発する能力があることが知られており、文書化されている。それらは組織修復を刺激するために使用されており、多くの実験モデルで細胞外マトリックス分子のエキゾノボ合成を促進する顕著な能力を示している。

【0037】

すべての創傷治癒過程において、科学文献は、ＰＮが損傷修復にポジティブな効果をもたらすことを確認した。ＰＮはまた、多くの炎症性因子の作用を調節し、生理学的増殖因子と相互作用する顕著な能力を有しており、これにより、これらの分子は非常に重要になり、様々な細胞株の増殖とその分泌活性において生物学的に非常に活発になる。

【0038】

本発明で使用されるポリヌクレオチドは、例えば、好ましくは０．２キロダルトン～３０００キロダルトンの範囲、より好ましくは３０キロダルトン～２０００キロダルトンの範囲の分子量分布を有し、数値平均分子量は約２５０キロダルトンである。本発明の範囲で使用されるポリヌクレオチドの分子量分布はまた、以下の範囲内、５～２５００キロダルトン、５０～１５００キロダルトン、１００～１０００キロダルトンに含まれ得る。

【0039】

本発明による組成物は、
－上記のヒアルロン酸
－上記のポリヌクレオチド（ＰＮ）を含む。

【0040】

液体製剤（例えば、注射または局所適用に適した製剤）の場合、例えば、適切なモル浸透圧濃度を得るためにポリオールが使用される。好ましいポリオールは、０ｍｇ／ｍｌ～５０ｍｇ／ｍｌの濃度のマンニトールである。ほぼ中性のｐＨ（７．０＋／－１．０）を確保するために、緩衝液システム、好ましくはリン酸緩衝液が使用される。

【0041】

使用されるマンニトールは、欧州薬局方による注射用の、無菌でパイロジェンフリーの医薬品グレードにすることができる。

【0042】

使用するリン酸緩衝液は、医薬品グレード、注射用、無菌、パイロジェンフリーにすることができる。

【0043】

液体製剤に加えて、本発明に従って使用するためのＰＮ＋ＨＡの組み合わせは、それ自体が知られており、例えば、Ｍａｓｔｅｌｌｉ Ｓ．ｒ．ｌ．からのＮｕｃｌｉａｓｋｉｎ（登録商標）オーラルケアとして市販されているゲル製剤の形態で使用することもできる。

【0044】

使用される組成物は、通常、以下を含む。
－１ｍｇ／ｍｌ～２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５ｍｇ／ｍｌ～１２ｍｇ／ｍｌのポリヌクレオチド、
－１ｍｇ／ｍｌ～２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは５ｍｇ／ｍｌ～１２ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸、ポリヌクレオチド／ヒアルロン酸の重量比は０．２：１から２：１の範囲内。

【表1】

【0045】

歯周炎の治療における上記の組成物の有効性は、急性または慢性の歯周炎を患っている患者を対象とした臨床試験によって決定されている。以下の実験セクションで詳細に説明されるこれらの臨床試験では、本発明の範囲内にある市販の組成物（２０ｍｇ／ｍｌ最新－クラスＩＩＩ医療機器－ＣＥ０３７３）が患者に前庭への局所浸透を介して歯周ポケットに投与された。得られた結果は、投与された組成物が、治療された症例の９４％で歯周ポケットの深さを減少させることができたことを示している。灼熱感、痛み、不快感、出血、腫れ、発赤などの主観的なパラメータにも有意な改善が見られた。

【0046】

歯間乳頭の再生における上記の組成物の有効性は、審美的領域に乳頭喪失を伴う少なくとも１つの部位、一般に「ブラックトライアングル症候群」と呼ばれる乳頭欠損を示した患者を対象とした臨床試験によって決定された。以下の実験セクションで詳細に説明されるこれらの臨床試験では、本発明の範囲内にある市販の組成物（２０ｍｇ／ｍｌ最新－クラスＩＩＩ医療機器－ＣＥ０３７３）が、乳頭とその周辺（前庭）への浸透を通して患者に投与された。得られた結果は、投与された組成物が、治療された症例の１００％において乳頭の臨床像の改善を誘発することができたことを示している。さらに、拡張された臨床研究によって示されるように、前述の市販の組成物の浸透による投与は、おそらくヒアルロン酸ポリヌクレオチドとの組み合わせのおかげで、当該技術の状態に記載されている副作用または有害作用を引き起こさなかった（特にＢｅｒｔｌ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｏｒａｌ Ｉｍｐｌａｎｔｓ Ｒｅｓ．２０１７ Ｓｅｐ；２８（９）：１０５４－１０６１（ａ）およびＢｅｒｔｌ Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｏｒａｌ Ｉｍｐｌａｎｔｓ Ｒｅｓ．２０１７ Ｊｕｌ；２８（７）：８７１－８７６）（ｂ））。

【0047】

ＰＮとＨＡを含む組成物の相乗効果は、ヒト歯肉線維芽細胞の増殖およびタンパク質マトリックス沈着に対する効果を決定することを目的とした、以下の実験セクションで詳細に説明されるインビトロ試験によって決定された。得られた結果は、ＨＡ単独の効果は中程度であるが、ＰＮとの組み合わせにより後者の効果が高まることを示している。したがって、ＨＡとＰＮを組み合わせることにより、細胞再生とタンパク質マトリックス沈着の両方の観点から、歯肉線維芽細胞で相乗効果が得られると結論付けることができる。これは、特に、ブラックトライアングル症候群の治療および歯周治療におけるＨＡとＰＮの組み合わせの特別な有効性を説明する可能性がある。

【0048】

最後に、炎症性サイトカインに対する製品の調節作用、ならびにＰＮとＨＡの組み合わせを含む組成物の局所的忍容性を検証するために、歯周ポケットでの局所炎症とメタロプロテイナーゼの存在を評価するための研究が行われた（歯肉溝液の採取とＥＬＩＳＡ法によって分析されたアルファ－２－マクログロブリンとＭＭＰ－９マーカーの測定を通して評価された）。

【0049】

この研究では、少なくとも２つの歯周ポケットを有する歯周病を患っている２５人の患者が評価された。すべての患者は、通常の衛生および予防の標準治療で治療され、さらに、試験ＭＤは、歯周ポケットでの１回の適用を通じて、ランダム化された方法で２つのポケットの１つで使用された。

【0050】

結果は、アルファ－２－マクログロブリンの場合、試験ＭＤで治療された歯周ポケットの１００％が改善、つまり６８％の改善を示したのに対し、未治療群では１つのポケットが悪化し、平均改善は６３％であった。

【0051】

ＭＭＰ－９パラメータに関しては、結果は、試験ＭＤで治療された歯周ポケットが６９％の改善を示したのに対し、６つの未治療ポケットは悪化し（２４％）、未治療ポケットの平均改善は４９％と有意に低かったことを示している。これらの結果は、各患者が自己制御として機能するため、つまり、患者が治療済みポケットと未治療ポケットの両方を有しているため、個人差による干渉の可能性を排除するためにも特に重要である。

【0052】

したがって、実験室では、客観的かつ盲目的なパラメータを用いて、ポリヌクレオチド＋ヒアルロン酸を用いる治療が、特に炎症に関連するパラメータを調整および低減すること、ならびにＭＭＰ９活性を低減することにより、標準的な衛生および予防療法と比較して改善をもたらすようでもある。また、デバイスの高い耐容性と生体適合性を強調している。

【図面の簡単な説明】

【0053】

（原文に該当部分なし）

【発明を実施するための形態】

【0054】

実験設計
１．歯周治療－臨床研究
この研究では、急性歯周炎（３人の患者）または慢性歯周炎（１２人の患者）を患っている男性２人と女性１３人を含む３０歳から８３歳までの１５人の患者が治療された。歯周炎は、歯周組織の炎症として定義され、歯周ポケット、緩い歯、出血している歯茎、膿瘍および化膿の形成をもたらし、１つ以上の歯の喪失をもたらす。１２／１５の患者は研究に参加したときに病気に精通しており、６／１５は喫煙者であった。各患者はガイドラインに従って衛生と予防を受け、次にポリヌクレオチドとヒアルロン酸ゲル（２０ｍｇ／ｍｌ最新－クラスＩＩＩ医療機器－ＣＥ０３７３）で治療された。

【表2】

【0055】

材料および方法
各患者は、３つの主要な段階からなる特定の治療プログラムを受けた。段階ごとに１回の訪問、合計３回の訪問をスケジュールされた。プログラムの詳細を以下に説明する。
１）前治療段階：衛生および予防セッションがスケジュールされ、実施される（例えば、歯垢、歯石、したがって細菌の存在を減らすことを目的とした手動および超音波療法）。

【0056】

毎月平均２～３回の２０～３０分の衛生と予防のセッションが各患者に対して行われた。各患者は、この段階で最初の訪問（Ｖ１）を受けた。

【0057】

Ｖ１では、主観的パラメータ（患者によって報告された症状）と客観的パラメータ（医師によって検出された兆候）を記録するために、患者が臨床的に評価された。

【0058】

２）試験医療機器による治療段階：きれいになったら、患者は、ポリヌクレオチドとヒアルロン酸ゲル（２０ｍｇ／ｍｌ最新）を局所および浸透経路で投与され、この段階はいくつかのセッションに分けられた。
－最初のセッションでは、歯周ポケットへの局所塗布と前庭への局所浸透が行われた。
－毎月行われるその後のセッションでは、前庭への局所的な浸透のみが含まれていた。

【0059】

各患者は、この段階で２回目の訪問（Ｖ２）を受けた。Ｖ２では、主観的および客観的なパラメータが再度評価された。

【0060】

３）維持段階：ポリヌクレオチドとヒアルロン酸ゲル（２０ｍｇ／ｍｌ最新）による前庭への衛生と局所浸透のセッションが３～６か月ごとに行われる。

【0061】

各患者は、この段階の間に研究の最後の訪問（Ｖ３）を受けた。Ｖ３では、初期（基本）状況と比較した疾患の臨床経過を評価するために、主観的および客観的パラメータが再度評価された。

【0062】

歯周ポケットへの塗布は、鈍い先端のアプリケーターを使用して行われた。

【0063】

前庭への局所浸透は、適切な局所消毒後、０．５～１ｃｍの距離で３０Ｇ針を用いて行われた。

【0064】

結果
研究の終わりに、治療された症例の２７％が２ｍｍのポケット深さの減少を示したのに対し、症例の６７％は１ｍｍの減少を示した。ポケットの深さが変わらないのは６％の場合のみであった。

【0065】

灼熱感、痛み、不快感、出血、腫れ、発赤は、Ｖ１（治療前段階）、Ｖ２（治療段階）、Ｖ３（維持段階）での研究中に評価された主観的なパラメータであった。試験されたすべてのパラメータは、開始条件の改善を示した。詳細には：
０～１０のスコアのＶＡＳスケールを使用して評価した痛みの軽減は、平均６７．３％であった。実際、平均値はＶ１での３．７からＶ３での１．２の範囲であり、平均で２．５ポイント減少した。

【0066】

図１のグラフは、訪問Ｖ１から訪問Ｖ３までの各患者が感じる痛みの感覚の減少を示している。

【0067】

０～１０のスコアのＶＡＳスケールを使用して評価した灼熱感の減少は、平均６４．４％であった。実際、平均値はＶ１での３．９からＶ３での１．４の範囲であり、平均で２．５ポイント減少した。

【0068】

図２のグラフは、訪問Ｖ１から訪問Ｖ３までの各患者が知覚する灼熱感の減少を示している。

【0069】

０～１０のスコアのＶＡＳスケールを使用して評価した不快感の軽減は、平均６３．６％であった。実際、平均値はＶ１での３．７～Ｖ３での１．３の範囲であり、平均で２．３ポイント減少した。

【0070】

図３のグラフは、訪問Ｖ１から訪問Ｖ３までの各患者が感じる不快感の減少を示している。

【0071】

出血の減少は、０～３のスコアで評価され、０は出血がないことを示し、３は重度の出血を示し、平均６４．７％であり、実際、平均値はＶ１の２．３からＶ３の０．８の範囲であり、１．５ポイントの平均削減であった。

【0072】

図４のグラフは、訪問Ｖ１から訪問Ｖ３までの各患者で得られた出血の減少を示している。

【0073】

結論として、ＰＮ＋ＨＡの組み合わせを含むゲルによる慢性および全体的な歯周病の治療（治療された１１／１５例）は、腫れと赤みの消失に関して優れた結果をもたらした。出血などの兆候ならびに、灼熱感、痛み、および不快感などの症状も６０％以上改善した。ポケットの深さの減少に関しても客観的な改善があった。

【0074】

したがって、歯科分野では、ＰＮ＋ＨＡの組み合わせを含むゲルによる治療は、従来の衛生および予防療法への反応を改善および強化するために、衛生および予防セッションに関連する価値のある革新的な治療選択肢を提示する。

【0075】

２．乳頭再生の臨床試験（ブラックトライアングル症候群）
この研究では、男性７人と女性３人を含む平均年齢５２歳の１０人の患者が治療を受けた。研究開始時の患者のうち２人は喫煙者であった。すべての場合において、患者は審美的領域に乳頭喪失を伴う少なくとも１つの部位を示し、これは一般に「ブラックトライアングル症候群」と呼ばれる乳頭欠損である。

【表3】

【0076】

材料および方法
各患者は、２つの主要な段階からなる特定の治療プログラムを受けた。研究中の各段階で１回の訪問が予定され、治療段階の後に１回のフォローアップ訪問が予定され、合計３回の訪問が行われた。プログラムの詳細を以下に説明する。
１）前治療段階：衛生および予防セッションがスケジュールされ、実施された段階（例えば、歯垢、歯石、したがって細菌の存在を減らすことを目的とした手動および超音波療法）。すべての患者は、超軟らかい歯ブラシと頂端－冠状方向の動きを伴うブラッシング技術を使用して、自宅で機械的洗浄を実施するように指示された。

【0077】

毎月平均２～３回の２０～３０分の衛生と予防のセッションが各患者に対して行われた。各患者は、この段階で最初の訪問（Ｖ１）を受けた。

【0078】

写真はＶ１で撮影され、医師の臨床評価と患者の満足度が記録された。

【0079】

２）試験医療機器による治療段階：衛生および予防セッション後の臨床像の安定化から少なくとも１か月後、患者にポリヌクレオチドおよびヒアルロン酸ゲル（２０ｍｇ／ｍｌ最新）を投与した。

【0080】

浸透部位でうがい薬と局所消毒剤で消毒した後、患部を乳頭とその周辺（前庭）に少量の生成物（一般に０．１～０．２ｍｌ未満）を浸透させることによって治療した。前庭への局所浸透は、０．５～１ｃｍの距離で３０Ｇ針を用いて行われた。

【0081】

治療は、合計３～１０回の浸透のために、３～６週間間隔で繰り返された。

【0082】

各患者は、この段階で２回目の訪問（Ｖ２）を受けた。Ｖ２では、治療前に撮影したものと比較して、医師の臨床評価と患者の満足度を記録したデータ収集フォームに記入することにより、効果を写真で記録した。

【0083】

結果
患者の主観的評価は、痛みと治療の順守、および上記治療への満足度の両方の観点から非常に肯定的であり、以下の結果が得られた。

【0084】

臨床結果は非常に心強いものであった。四分位スケールに基づく評価では、１００％の患者で改善を示した。すべての症例が完全な治癒を示したわけではないが、すべての症例で乳頭の臨床的改善を示した。

【0085】

平均して、再成長は２回目または３回目のセッションの後に現れ始めたが、場合によっては７回目または８回目のセッションの後に再成長を開始した。

【0086】

乳頭の客観的評価に関しては、すべての患者が、分類を変更するなど、乳頭構造の改善を示した。
・３例でクラスＩＩＩ乳頭がクラスＩ乳頭になった
・６例でクラスＩＩ乳頭がクラスＩ乳頭になった
・あるケースでは、クラスＩの乳頭が正常乳頭になった（乳頭は接触点まで再び歯間空間を満たす）。

【0087】

特に、乳頭の改善が非常に迅速に起こったことを強調するべきであり、すべての患者は、１週間後にすでに乳頭の初期再生を示し、この再生プロセスは時間の経過とともに続いた。実際、フォローアップで部位がチェックされ、最後の治療から１か月後の適用後に起こった改善はまだ存在していた。どの症例においても再発はなかった。

【0088】

結論として、局所的にのみ浸透されたポリヌクレオチドの栄養／再生効果は、これまで歯科矯正、修復および外科的介入などの侵襲的方法で治療されたが、臨床結果は不良であった疾患であるブラックトライアングル症候群の治療で初めて示された。

【0089】

３．歯肉線維芽細胞に関するインビトロ研究
ヒト歯肉線維芽細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＢＦＳ）を補充した増殖培地（ダルベッコ改変イーグル培地）で培養した。細胞を１０，０００／ｃｍ^２の密度で播種した。播種の２４時間後、細胞を表３に示す条件下でインキュベートし、再びＤＭＥＭ＋１０％ＢＦＳで調製した。

【0090】

細胞を計数し、タンパク質を３日間の処理後に定量した。

【0091】

細胞数はパーティクルカウンターで測定した。タンパク質は、ローリーの方法の改変を使用することにより、染色されたタンパク質溶解物の分光光度法による読み取りによって定量化した。

【0092】

表３は、試験された組成物の濃度、ならびに細胞増殖およびタンパク質含有量に関連する値を、対照の％として表して表現している。対照は、同じ時点で測定された、いかなる処理にも供されていない線維芽細胞培養物である。

【表4】

【0093】

細胞増殖とタンパク質の定量結果も図５および６に示されている。

【0094】

結果は、ヒアルロン酸がその濃度が増加するにつれてその作用を変化させず、タンパク質発現と細胞増殖の両方の点で常に穏やかな効果を定常的に維持することを示している。代わりに、ポリヌクレオチドは用量が増加するにつれてそれらの効果を増加させることは明らかである。個々の成分と比較して、混合物で得られた効果（各総濃度について、５０％のヒアルロン酸と５０％のポリヌクレオチドからなる）は、単独で使用されたＰＮおよび単独で使用されたＨＡの効果よりも一貫して優れていた。

【0095】

したがって、ヒアルロン酸単独の効果が低いことを念頭に置くと、ヒアルロン酸の存在が、細胞増殖およびタンパク質発現において最も活性な成分であるＰＮの効果を高めるために重要であることは明らかである。ＨＡとＰＮを組み合わせることにより、細胞再生とタンパク質マトリックス沈着の両方の観点から、歯肉線維芽細胞で相乗効果が得られると結論付けることができる。これは、特に、ブラックトライアングル症候群の治療および歯周治療におけるＨＡとＰＮの組み合わせの特別な有効性を説明する可能性がある。

【0096】

４．歯肉溝液のインビボ研究
歯周炎の治療は、まず細菌と炎症を制御することを含み、その後すぐに、歯の付着を回復し、歯肉と骨のポケットを除去するために、失われた硬い歯周組織と柔らかい歯周組織を再生する次の工程が不可欠になる。

【0097】

ＯＤＯＮＴＯ－ＰＮＨＡは、Ｍａｓｔｅｌｌｉ Ｓｒｌ－Ｓａｎｒｅｍｏ（ＩＭ）によって製造されたクラスＩＨ医療機器である。これは、歯周ポケットに適用するためのポリヌクレオチドとヒアルロン酸の独自の組み合わせである。

【0098】

Ｏｄｏｎｔｏ－ＰＮＨＡを使用した臨床試験の主な目的は、非外科的歯周治療における医療機器の有効性と安全性を評価することである。実験的仮説は、ＯＤＯＮＴＯ－ＰＮＨＡの追加は、外科的処置を回避するために、歯周ポケットで歯周付着ゲインを得るのに役立つ可能性があるというものである。

【0099】

このことを評価するために、合計５０人の患者が採用され、各患者は試験部位（ＯＤＯＮＴＯ－ＰＮＨＡで治療）および対照部位（未治療）を提供した。患者は治療後１２ヶ月間フォローアップされる。この研究は、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａ Ｌａ Ｓａｐｉｅｎｚａの単一の臨床センターで実施されている。

【0100】

主な目的：プロービングポケット深度（ＰＰＤ）、限界出血指数（ＭＢ）、修正プラーク指数（ｍＰＬＩ）、痛み、デバイスの使いやすさに伴う治験責任医師のグローバル満足度、およびデバイスの性能に伴う患者のグローバル満足度（５ポイントのリッカート尺度）に対するＯＤＯＮＴＯ－ＰＮＨＡの性能の評価。耐容性と安全性の評価。

【0101】

生化学的分析の目的：２５人の被験者の歯の周りの組織の炎症状態に対するＯＤＯＮＴＯ－ＰＮＨＡの効果の評価。これは、歯肉溝液を採取し、ベースライン時および６週目の液中のアルファ２マクログロブリン（ａ２Ｍ）およびメタロプロテアーゼ－９（ＭＭＰ－９）を評価することを通して評価された。

【0102】

メチルセルロースストリップに吸着された歯肉溝液サンプルは、ＥＬＩＳＡ法で処理および分析された。

【0103】

マトリックスメタロプロテイナーゼは、歯周病の破壊過程の間のコラーゲン分解に関連するプロテイナーゼの重要なグループであり、歯肉溝滲出液で測定することができる。アルファ２マクログロブリンは、血液凝固と免疫応答の調節に関与し、慢性感染症の存在下で増加する血漿タンパク質である。歯周病を患い、ＯＤＯＮＴＯ－ＰＮＨＡ－０１臨床試験で採用された２５人の患者は、２回の歯肉溝液の採取を受け、１回は試験ＭＤで治療された歯周ポケットから、もう１回は未治療のポケットから採取された。

【0104】

採取はベースライン（訪問１）と６週目（訪問２）に実施した。合計４つのサンプルについて、炎症マーカーの存在と濃度について評価した。

【0105】

結果
６週間後、ポリヌクレオチドとヒアルロン酸ＭＤで治療したポケットと未治療のポケットの両方のマーカーの濃度は、０週と比較して有意に低く、標準的な衛生状態と予防療法のおかげで、歯周病の一般的な改善を示した。

【0106】

試験ＭＤで治療された歯周ポケットと未治療の歯周ポケットからのデータの分析は、試験ＭＤで治療を受けた患者の利点に対して、以下に説明するさらなる違いを示した。

【0107】

治療されたポケットでは、平均アルファ２マクログロブリン値は時間０で１８９８．７１、６週間後は６０５．９０であり、平均減少は１２９２．８１で６８．０９％に相当する。２５の処理されたポケットのうち、１９（７６％）は５０％より高い改善を示した（表４）。

【0108】

未治療のポケットでは、アルファ２マクログロブリンの平均値は時間０で１６６５、６週間後に６０１であり、平均１０６４の減少は６３．９１％に相当する。２５の処理されたポケットのうち、１７（６８％）は５０％より高い改善を示した（表４）。

【表5】

【0109】

ＭＭＰ－９パラメータには、治療群と対照群のさらに大きな違いが見られた。治療されたポケットでは、平均ＭＭＰ－９値は時間０で２３４．９、６週間後に７２．９であり、平均１６２．００の減少は６８．９６％に相当する。２５の処理されたポケットのうち、１８（７２％）は５０％より高い改善を示した（表５）。

【0110】

未処理のポケットでは、平均ＭＭＰ－９値は時間０で１７３．４、６週間後に８７．４であり、平均８６の減少は４９．５８％に相当する。２５の処理されたポケットのうち、９つ（３６％）だけが５０％以上の改善を示した（表５）。

【表6】

【0111】

結果は、アルファ２マクログロブリンの場合、すべての治療を受けた患者が改善を示したのに対し、未治療のグループでは、１人の患者が悪化したことを示し、ＭＭＰ－９パラメータの場合、１人を除くすべての患者が改善を示したのに対し、未治療群では６人の患者が悪化を示した。

【0112】

一般に、改善は試験ＭＤで治療を受けた患者でより大きく、この改善はＭＭＰ－９パラメータで特に明白であった。

【0113】

これらの結果は、各患者が自己制御として機能するため、すなわち、患者が治療済みポケットと未治療ポケットの両方を有しているため、特に重要であり、したがって、個人差による干渉のいかなる可能性も排除する。

【0114】

結論
したがって、実験室では、客観的かつ盲目的なパラメータを使用して、ポリヌクレオチド＋ヒアルロン酸を用いる治療は、特に炎症に関連するパラメータを調整および低減し、ＭＭＰ９活性を低減することにより、標準的な衛生および予防療法と比較して改善をもたらすようでもある。

【0115】

したがって、上に示した予備的な実験結果は、ＰＮ＋ＨＡの組み合わせが、外科的処置を回避するために、歯周ポケットで歯周付着ゲインを得るのに役立つという実験的仮説を支持する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【国際調査報告】