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特表2022-518931遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症２型に対するＡＡＶベクター治療法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-03-17
(54)【発明の名称】遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症２型に対するＡＡＶベクター治療法
(51)【国際特許分類】
A61K 35/76 20150101AFI20220310BHJP
C12N 15/864 20060101ALI20220310BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20220310BHJP
A61K 38/48 20060101ALI20220310BHJP
A61P 27/10 20060101ALI20220310BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20220310BHJP
A61P 25/14 20060101ALI20220310BHJP
A61K 9/50 20060101ALI20220310BHJP
A61K 9/16 20060101ALI20220310BHJP
A61K 47/06 20060101ALI20220310BHJP
C12N 9/48 20060101ALN20220310BHJP
C12N 15/57 20060101ALN20220310BHJP
【ＦＩ】
A61K35/76
C12N15/864 100Z
C12N15/12
A61K38/48
A61P27/10
A61P25/28
A61P25/14
A61K9/50
A61K9/16
A61K47/06
C12N9/48 ZNA
C12N15/57
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021544194
(86)(22)【出願日】2020-01-31
(85)【翻訳文提出日】2021-09-17
(86)【国際出願番号】 US2020016235
(87)【国際公開番号】W WO2020160486
(87)【国際公開日】2020-08-06
(31)【優先権主張番号】62/800,131
(32)【優先日】2019-02-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518138077
【氏名又は名称】スパーク セラピューティクス インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＳＰＡＲＫ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100107456
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 成人
(74)【代理人】
【識別番号】100162352
【弁理士】
【氏名又は名称】酒巻 順一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100123995
【弁理士】
【氏名又は名称】野田 雅一
(72)【発明者】
【氏名】アンダーソン， デイビッド ウィリアム
(72)【発明者】
【氏名】トト， メアリーアン
(72)【発明者】
【氏名】ダーセン， スー イー．アイ．
【テーマコード（参考）】
4B050
4C076
4C084
4C087
【Ｆターム（参考）】
4B050CC03
4B050DD11
4B050JJ10
4B050LL01
4C076AA31
4C076AA61
4C076BB21
4C076DD01
4C084AA02
4C084BA01
4C084BA44
4C084DC02
4C084MA17
4C084MA56
4C084NA05
4C084NA14
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC83
4C087MA17
4C087MA56
4C087NA05
4C087NA14
4C087ZA01
4C087ZC51
(57)【要約】
本明細書では、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）を必要とする霊長類を治療する方法であって、（ａ）ＴＰＰ１をコードする核酸を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供するステップと；（ｂ）所定量の組換えＡＡＶベクターを霊長類の中枢神経系（ＣＮＳ）に投与するステップであって、ＴＰＰ１が霊長類において発現される、ステップとを含む、方法が開示される。
【選択図】 図３Ｂ
【選択図】 図３Ｂ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）を必要とする霊長類を治療する方法であって、（ａ）ＴＰＰ１をコードする核酸を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供するステップと；
（ｂ）所定量の前記組換えＡＡＶベクターを、前記霊長類の中枢神経系（ＣＮＳ）に投与するステップであって、前記ＴＰＰ１は前記霊長類において発現される、ステップと
を含む方法。
【請求項2】
前記霊長類がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ヒトが、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症（ＣＬＮ２）を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記ヒトが、約１～１０歳であるか、又は１０歳を超える、請求項２に記載の方法。
【請求項5】
前記ヒトが、約２～５歳である、請求項２に記載の方法。
【請求項6】
前記投与が、側脳室又は大槽への投与である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記投与が、前記側脳室の後頭角への投与である、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記組換えＡＡＶベクターが、一方の側脳室に、片側投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記組換えＡＡＶベクターが、各側脳室に、両側投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記組換えＡＡＶベクターが、片側又は両側の側脳室に複数回、片側又は両側投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記ＴＰＰ１が、前記ＣＮＳ中で増加したレベルで発現される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記ＴＰＰ１が、ＣＮＳ全体にわたって発現又は送達される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記ＴＰＰ１が、上衣細胞において発現されるか、又は上衣細胞に送達される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記ＴＰＰ１が、実質に送達される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記ＴＰＰ１発現が、ニューロンへの最大半量のＴＰＰ１取り込みに必要とされるものに等しいか又はそれを超えるレベルで持続される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記ＴＰＰ１発現が、Ｋ取り込みに等しいか又はそれを超えるレベルで持続され、Ｋ取り込みが、少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記ＴＰＰ１発現が、Ｋ取り込みに等しいか又はそれを超えるレベルで持続され、Ｋ取り込みが、少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬ～１２０ｎｇ／ｍＬである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記ＴＰＰ１発現が、約１２０ｎｇ／ｍＬを超えるレベルで持続される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記ＴＰＰ１発現が、約１５０ｎｇ／ｍＬを超えるか、約２００ｎｇ／ｍＬを超えるか、約２５０ｎｇ／ｍＬを超えるか、又は約３００ｎｇ／ｍＬを超えるレベルで持続される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
ＴＰＰ１発現が、ＣＮＳにおいて少なくとも約５週間、又は少なくとも約１０週間、又は少なくとも約２０週間持続される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
検出可能なＴＰＰ１発現又はＴＰＰ１活性が、ＣＮＳにおいて少なくとも５週間、又は少なくとも１０週間、又は少なくとも２０週間持続される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記組換えＡＡＶベクターが、約１．５×１０１３ＡＡＶベクターゲノムを超える用量で；約５×１０１３ＡＡＶベクターゲノム、若しくは約５×１０１３ＡＡＶベクターゲノムを超える用量で；約１×１０１４ＡＡＶベクターゲノム、若しくは約１×１０１４ＡＡＶベクターゲノムを超える用量で；約５×１０１４ＡＡＶベクターゲノム、若しくは約５×１０１４ＡＡＶベクターゲノムを超える用量で；約１×１０１５ＡＡＶベクターゲノム、若しくは約１×１０１５ＡＡＶベクターゲノムを超える用量で；又は約５×１０１５ＡＡＶベクターゲノム、若しくは約５×１０１５ＡＡＶベクターゲノムを超える用量で前記ＣＮＳに投与される、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記組換えＡＡＶベクターが、約１．５×１０１３～約５×１０１５ベクターゲノムの用量範囲で；約１×１０１４～約３×１０１５ベクターゲノムの用量範囲で；約２×１０１４～約２×１０１５ベクターゲノムの用量範囲で；約２．５×１０１４～約７．５×１０１４ベクターゲノムの用量範囲で；約５×１０１４～約５×１０１５ベクターゲノムの用量範囲で；又は約１×１０１５～約５×１０１５ベクターゲノムの用量範囲で前記ＣＮＳに投与される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
前記組換えＡＡＶベクターが、約１×１０１４ベクターゲノムの用量で、約２×１０１４ベクターゲノムの用量で、約３×１０１４ベクターゲノムの用量で、約４×１０１４ベクターゲノムの用量で、約５×１０１４ベクターゲノムの用量で、約６×１０１４ベクターゲノムの用量で、約７×１０１４ベクターゲノムの用量で、約８×１０１４ベクターゲノムの用量で、約９×１０１４ベクターゲノムの用量で、約１×１０１５ベクターゲノムの用量で、約２×１０１５ベクターゲノムの用量で、約３×１０１５ベクターゲノムの用量で、約４×１０１５ベクターゲノムの用量で、又は約５×１０１５ベクターゲノムの用量で前記ＣＮＳに投与される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
前記方法が、前記ＣＬＮ２の１つ又は複数の症状を、低下させる、減少させる、又は阻害するか；又は前記ＣＬＮ２の１つ又は複数の症状の進行若しくは悪化を、予防する、又は低下するか；又は前記ＣＬＮ２の１つ又は複数の症状を安定化するか；又は前記ＣＬＮ２の１つ又は複数の症状を改善する、請求項３～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記１つ又は複数の症状が、視力障害、認知発達障害又は認知発達の不良、運動制御の喪失及び発作からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
ＴＰＰ１をコードする前記核酸が、発現制御エレメントに作動可能に連結された発現カセットを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記発現制御エレメントが、前記核酸の５’側に位置する、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記発現制御エレメントが、ＣＡＧ（配列番号３）プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター／エンハンサー、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター／エンハンサー、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）プロモーター、又はニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーターを含む、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項30】
前記異種核酸が、１つ又は複数の５’及び／又は３’ＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）の間に位置する、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記１つ又は複数のＡＡＶ ＩＴＲが、ＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質によってプロセシングされない、変異した、改変された、又はバリアントＡＡＶ ＩＴＲを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記１つ又は複数のＡＡＶ ＩＴＲが、前記組換えＡＡＶベクター中の二本鎖逆方向反復配列構造に、自己相補的レポーター導入遺伝子ゲノムの形成を可能にするか、又は促進にする、変異した、改変された、又はバリアントＡＡＶ ＩＴＲを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項33】
前記変異した、改変された、又はバリアントＡＡＶ ＩＴＲが、欠失されたＤ配列、及び／又は変異した、改変された、若しくはバリアント末端分離部位（ＴＲＳ）配列を有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記組換えＡＡＶベクターが、５’→３’方向で、第１のＡＡＶ ＩＴＲ；哺乳動物細胞において作動可能なプロモーター；異種核酸；ポリアデニル化シグナル；及び任意選択で、第２のＡＡＶ ＩＴＲを含む、請求項３０～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
前記１つ又は複数のＩＴＲが、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ７４、又はＲｈ１０ ＩＴＲを含む、請求項３０～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
前記組換えＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ７４、Ｒｈ１０、ＳＰＫ１（配列番号１）、又はＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／若しくはＶＰ３、又は前述のＡＡＶ血清型のいずれかのハイブリッド若しくはキメラのＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３配列と６０％又はそれ以上同一であるＶＰ１、ＶＰ２又はＶＰ３配列を含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
前記組換えＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、ＳＰＫ１（配列番号１）及びＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質からなる群から選択されるＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質と１００％の配列同一性を有するＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質を含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
前記組換えＡＡＶベクターが、前記核酸の３’に位置するポリアデニル化配列をさらに含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
ＴＰＰ１、発現制御エレメント、又はポリアデニル化配列をコードする前記核酸が、ＴＰＰ１、発現制御エレメント、又はポリアデニル化配列をコードする野生型核酸と比較して低下したＣｐＧである、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
前記ポリアデニル化配列が、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化配列を含む、請求項３８又は３９に記載の方法。
【請求項41】
前記ＴＰＰ１がヒトであり、配列番号４に示される配列を含むか若しくはそれからなるか、又はその機能的バリアント若しくは多型形態である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項42】
前記組換えＡＡＶベクターが、（ａ）１つ又は複数のＡＡＶカプシド、及び
（ｂ）１つ又は複数のＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）であって、前記１つ又は複数のＡＡＶ ＩＴＲが、前記核酸又は前記発現カセットの５’末端又は３’末端に隣接する、ＩＴＲ
を含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項43】
前記１つ又は複数のＩＴＲの５’又は３’に位置するイントロンをさらに含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
少なくとも１つ又は複数の前記１つ又は複数のＩＴＲ及び／又は前記イントロンが、ＣｐＧが減少するように改変されている、請求項４２又は４３に記載の方法。
【請求項45】
前記組換えＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、又はＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３配列と９０％又はそれ以上の配列同一性を有するＡＡＶ ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシド、又はＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、又はＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３配列と９５％又はそれ以上の配列同一性を有するカプシド、又はＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、又はＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３配列と１００％の配列同一性を有するカプシドを含むカプシド血清型を有する、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項46】
前記１つ又は複数のＩＴＲが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、若しくはＲｈ７４ ＡＡＶ血清型、又はそれらの組み合わせのいずれかの１つ又は複数のＩＴＲを含む、請求項４１～４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項47】
前記組換えＡＡＶベクターが、生物学的に適合性のある担体又は賦形剤を含む医薬組成物中にある、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項48】
前記医薬組成物が空ＡＡＶカプシドをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項49】
前記空ＡＡＶカプシド対前記組換えＡＡＶベクターの比が、約１００：１～５０：１、約５０：１～２５：１、約２５：１～１０：１、約１０：１～１：１、約１：１～１：１０、約１：１０～１：２５、約１：２５～１：５０、又は約１：５０～１：１００内又はその間である、請求項４８に記載の方法。
【請求項50】
前記空ＡＡＶカプシド対前記組換えＡＡＶベクターの比が、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、又は１０：１である、請求項４８に記載の方法。
【請求項51】
前記医薬組成物が、界面活性剤をさらに含む、請求項４７～５０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
[0002]遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症２型（ＣＬＮ２）はまた、Ｊａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病及び遅発型小児性ＮＣＬ（ＬＩＮＣＬ）とも呼ばれ、約２～４歳の小児に発症する進行性神経変性疾患である。症状には、けいれん、運動制御及び視覚の喪失、認知及び発達障害が含まれ、生後２０年以内に死に至る。基礎にある病理学的機序は、対応する遺伝子の変異に起因した、可溶性リソソーム酵素トリペプチジルペプチダーゼ－１（ＴＰＰ１）の欠損又は欠陥である。
【0002】
[0003]報告は、脳の側脳室を裏打ちする上衣細胞のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター形質導入が、ヒトＴＰＰ１の脳脊髄液（ＣＳＦ）への持続的分泌を提供し、それによって中枢神経系全体にわたって発現されたＴＰＰ１タンパク質を送達することができることを示している（Ｍａｒｔｚ，Ｌ．、Ｂｉｏｃｅｎｔｕｒｙ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ、２０１５年１２月１０日）。ＣＬＮ２のイヌモデルにおける上衣形質導入を介したＡＡＶ２－ＣＡＧ－ＴＰＰ１の送達は、疾患修飾及び延命を提供することが報告された（Ｋａｔｚ，Ｍ．Ｌ．ら、（２０１５年）．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ、７巻（３１３頁））。
【発明の概要】
【0003】
[0004]本明細書には、ＡＡＶ２－ＣＡＧ－ヒトＴＰＰ１ベクターの安全性及び忍容性を評価する非ヒト霊長類研究が開示される。ＡＡＶベクターは、１Ｅ１３～２．１７Ｅ１４ベクターゲノム／脳の範囲の３用量で側脳室への片側
注射によって送達され、続いて５週間及び２０週間の観察が行われた。各動物におけるベースラインからのＣＳＦ中のＴＰＰ１活性及び抗原レベルの変化をモニターした。ＴＰＰ１活性レベルは、ベースラインと比較して、低用量コホートでは約１７倍、高用量コホートでは約４８倍のピーク増加を示した。さらに、研究期間中、試験した全用量での平均ｈＴＰＰ１導入遺伝子発現レベルは、ＴＰＰ１のＫ取り込み範囲を超えた。関連する中枢神経系（ＣＮＳ）組織の予備分析では、ベクターの送達又はＴＰＰ１導入遺伝子の発現に関連する病理学的変化は同定されていない。結論として、非ヒト霊長類におけるＡＡＶ２ベクターを利用した上衣細胞形質導入後のヒトＴＰＰ１の発現は、ＣＬＮ２を有する動物に治療効果を与えるのに十分な約６０～約１２０ｎｇ／ｍＬのＫ取り込み値以内又はそれ超える持続的なＣＳＦ ＴＰＰ１タンパク質発現が一貫して認められれば、十分に忍容的であった。
注射によって送達され、続いて５週間及び２０週間の観察が行われた。各動物におけるベースラインからのＣＳＦ中のＴＰＰ１活性及び抗原レベルの変化をモニターした。ＴＰＰ１活性レベルは、ベースラインと比較して、低用量コホートでは約１７倍、高用量コホートでは約４８倍のピーク増加を示した。さらに、研究期間中、試験した全用量での平均ｈＴＰＰ１導入遺伝子発現レベルは、ＴＰＰ１のＫ取り込み範囲を超えた。関連する中枢神経系（ＣＮＳ）組織の予備分析では、ベクターの送達又はＴＰＰ１導入遺伝子の発現に関連する病理学的変化は同定されていない。結論として、非ヒト霊長類におけるＡＡＶ２ベクターを利用した上衣細胞形質導入後のヒトＴＰＰ１の発現は、ＣＬＮ２を有する動物に治療効果を与えるのに十分な約６０～約１２０ｎｇ／ｍＬのＫ取り込み値以内又はそれ超える持続的なＣＳＦ ＴＰＰ１タンパク質発現が一貫して認められれば、十分に忍容的であった。
【0004】
[0005]ある実施形態では、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）を必要とする霊長類を治療する方法であって、（ａ）ＴＰＰ１をコードする核酸を含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供するステップと；（ｂ）所定量の上記組換えＡＡＶベクターを、上記霊長類の中枢神経系（ＣＮＳ）に投与するステップであって、上記ＴＰＰ１は上記霊長類において発現される、ステップとを含む。
【0005】
[0006]ある実施形態では、霊長類はヒトである。ある実施形態では、ヒトは、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症（ＣＬＮ２）を有する。ある実施形態では、ヒトは、約１～１０歳であるか、又は１０歳を超える。ある実施形態では、ヒトは、約２～５歳である。
【0006】
[0007]ある実施形態では、霊長類を治療する方法において、組換えＡＡＶベクターは、側脳室又は大槽に投与される。ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、側脳室の後頭角に投与される。ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、一方の側脳室に、片側投与される。ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、各側脳室に、両側投与される。ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、片側又は両側の側脳室に複数回、片側又は両側投与される。
【0007】
[0008]ある実施形態では、ＴＰＰ１は、ＣＮＳにおいて増加したレベルで発現される。ある実施形態では、ＴＰＰ１は、ＣＮＳ全体にわたって発現又は送達される。ある実施形態では、ＴＰＰ１は、上衣細胞において発現されるか、又は送達される。ある実施形態では、ＴＰＰ１は、実質に送達される。
【0008】
[0009]ある実施形態では、ＴＰＰ１発現は、ニューロンへの最大半量のＴＰＰ１取り込みに必要とされるものに等しいか又はそれ超えるレベルで持続される。ある実施形態では、ＴＰＰ１発現は、Ｋ取り込みに等しいか又はそれ超えるレベルで持続され、Ｋ取り込みは、少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬである。ある実施形態では、ＴＰＰ１発現は、Ｋ取り込みに等しいか又はそれ超えるレベルで持続され、Ｋ取り込みは、少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬ～１２０ｎｇ／ｍＬである。ある実施形態では、ＴＰＰ１発現は、約１２０ｎｇ／ｍＬを超えるレベルで持続される。ある実施形態では、ＴＰＰ１発現は、約１５０ｎｇ／ｍＬを超えるか、約２００ｎｇ／ｍＬを超えるか、約２５０ｎｇ／ｍＬを超えるか、又は約３００ｎｇ／ｍＬを超えるレベルで持続される。ある実施形態では、ＴＰＰ１発現は、ＣＮＳにおいて、少なくとも約５週間、又は少なくとも約１０週間、又は少なくとも約２０週間持続される。ある実施形態では、検出可能なＴＰＰ１発現又はＴＰＰ１活性は、ＣＮＳにおいて、少なくとも５週間、又は少なくとも１０週間、又は少なくとも２０週間持続される。
【0009】
[0010]ある実施形態では、霊長類を治療する方法において、組換えＡＡＶベクターは、約１．５×１０１３ＡＡＶベクターゲノムを超える用量で；約５×１０１３ＡＡＶベクターゲノム若しくは約５×１０１３を超えるＡＡＶベクターゲノムの用量で；約１×１０１４ＡＡＶベクターゲノム若しくは約１×１０１４を超えるＡＡＶベクターゲノムの用量で；約５×１０１４ＡＡＶベクターゲノム若しくは約５×１０１４を超えるＡＡＶベクターゲノムの用量で；約１×１０１５ＡＡＶベクターゲノム若しくは約１×１０１５を超えるＡＡＶベクターゲノムの用量で；又は約５×１０１５ＡＡＶベクターゲノム若しくは約５×１０１５を超えるＡＡＶベクターゲノムの用量でＣＮＳに投与される。
【0010】
[0011]ある実施形態では、霊長類を治療する方法において、組換えＡＡＶベクターは、約１．５×１０１３～約５×１０１５ベクターゲノムの用量範囲で；約１×１０１４～約３×１０１５ベクターゲノムの用量範囲で；約２×１０１４～約２×１０１５ベクターゲノムの用量範囲で；約２．５×１０１４～約７．５×１０１４ベクターゲノムの用量範囲で；約５×１０１４～約５×１０１５ベクターゲノムの用量範囲で；又は約１×１０１５～約５×１０１５ベクターゲノムの用量範囲でＣＮＳに投与される。
【0011】
[0012]ある実施形態では、霊長類を治療する方法において、組換えＡＡＶベクターは、約１×１０１４ベクターゲノムの用量で、約２×１０１４ベクターゲノムの用量で、約３×１０１４ベクターゲノムの用量で、約４×１０１４ベクターゲノムの用量で、約５×１０１４ベクターゲノムの用量で、約６×１０１４ベクターゲノムの用量で、約７×１０１４ベクターゲノムの用量で、約８×１０１４ベクターゲノムの用量で、約９×１０１４ベクターゲノムの用量で、約１×１０１５ベクターゲノムの用量で、約２×１０１５ベクターゲノムの用量で、約３×１０１５ベクターゲノムの用量で、約４×１０１５ベクターゲノムの用量で、又は約５×１０１５ベクターゲノムの用量でＣＮＳに投与される。
【0012】
[0013]ある実施形態では、方法は、ＣＬＮ２の１つ又は複数の症状を、低下させる、減少させる若しくは抑制するか；又はＣＬＮ２の１つ又は複数の症状の進行又は悪化を、予防する、若しくは低下させるか；又はＣＬＮ２の１つ又は複数の症状を安定化するか；又はＣＬＮ２の１つ又は複数の症状を改善する。
【0013】
[0014]ある実施形態では、１つ又は複数の症状は、視覚障害、認知発達障害又は認知発達の不良、運動制御の喪失及び発作からなる群から選択される。
【0014】
[0015]ある実施形態では、ＴＰＰ１をコードする核酸は、発現制御エレメントを作動可能に連結された発現カセットを含む。ある実施形態では、発現制御エレメントは、核酸の５’側に位置される。ある実施形態では、発現制御エレメントは、ＣＡＧ（配列番号３）プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター／エンハンサー、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター／エンハンサー、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）プロモーター、又はニワトリβ－アクチン（ＣＢＡ）プロモーターを含む。
【0015】
[0016]ある実施形態では、異種核酸は、１つ又は複数の５’及び／又は３’ＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ（複数可））の間に位置する。ある実施形態では、１つ又は複数の５’及び／又は３’ＡＡＶ ＩＴＲ（複数可）は、ＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質によってプロセシングされない変異した、改変された又はバリアントＡＡＶ ＩＴＲを含む。ある実施形態では、１つ又は複数の５’及び／又は３’ＡＡＶ ＩＴＲ（複数可）は、組換えＡＡＶベクター中の二本鎖逆方向反復配列構造への自己相補的レポーター導入遺伝子ゲノムの形成を可能にするか又は促進する、変異した、改変された又はバリアントＡＡＶ ＩＴＲを含む。ある実施形態では、変異した、改変された又はバリアントＡＡＶ ＩＴＲは、欠失されたＤ配列、及び／又は変異した、改変された若しくはバリアント末端分離部位（ＴＲＳ）配列を有する。
【0016】
[0017]ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、第１のＡＡＶ ＩＴＲ；哺乳動物細胞において作動可能なプロモーター；異種核酸；ポリアデニル化シグナル；及び任意選択で第２のＡＡＶ ＩＴＲを５’→３’方向で含む。
【0017】
[0018]ある実施形態では、１つ又は複数のＩＴＲ（複数可）は、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ７４又はＲｈ１０ ＩＴＲを含む。
【0018】
[0019]ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ７４、Ｒｈ１０、ＳＰＫ１（配列番号１）、又はＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／若しくはＶＰ３、又は前述のＡＡＶ血清型のいずれかのハイブリッド若しくはキメラのＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３配列と６０％又はそれ以上同一であるＶＰ１、ＶＰ２又はＶＰ３配列を含む。ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、ＳＰＫ１（配列番号１）及びＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質からなる群から選択されるＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質と１００％の配列同一性を有するＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質を含む。
【0019】
[0020]ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、核酸の３’側に位置するポリアデニル化配列をさらに含む。ある実施形態では、ＴＰＰ１をコードする核酸、発現制御エレメント又はポリアデニル化配列は、ＴＰＰ１をコードする野生型核酸、発現制御エレメント又はポリアデニル化配列と比較して、ＣｐＧが低下している。ある実施形態では、ポリアデニル化配列は、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化配列を含む。
【0020】
[0021]ある実施形態では、ＴＰＰ１は、ヒトであり、配列番号４として示される配列を含むか若しくはそれからなり、又はその機能的バリアント若しくは多型形態（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｆｏｒｍ）である。
【0021】
[0022]ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、（ａ）１つ又は複数のＡＡＶカプシド、及び（ｂ）１つ又は複数のＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ（複数可））を含み、１つ又は複数のＡＡＶ ＩＴＲは、核酸又は発現カセットの５’末端若しくは３’末端に隣接する。
【0022】
[0023]ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、１つ又は複数のＩＴＲ（複数可）の５’又は３’に位置するイントロンをさらに含む。
【0023】
[0024]ある実施形態では、少なくとも１つ又は複数の１つ又は複数のＩＴＲ（複数可）及び／又はイントロンは、ＣｐＧが減少するように改変されている。
【0024】
[0025]ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、若しくはＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／若しくはＶＰ３配列と９０％以上の配列同一性を有するＡＡＶ ＶＰ１、ＶＰ２及び／若しくはＶＰ３カプシドを含むカプシド血清型；或いはＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、ＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／若しくはＶＰ３配列と９５％以上の配列同一性を有するカプシド；或いはＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、若しくはＳＰＫ２（配列番号２）ＶＰ１、ＶＰ２及び／若しくはＶＰ３配列と１００％の配列同一性を有するカプシドを有する。
【0025】
[0026]ある実施形態では、１つ又は複数のＩＴＲ（複数可）は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、Ｒｈ１０、若しくはＲｈ７４ ＡＡＶ血清型の、又はそれらの組合せのいずれかの１つ又は複数のＩＴＲを含む。
【0026】
[0027]ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターは、生物学的に適合性のある担体又は賦形剤を含む医薬組成物中にある。
【0027】
[0028]ある実施形態では、医薬組成物は、空ＡＡＶカプシドをさらに含む。ある実施形態では、空ＡＡＶカプシド対組換えＡＡＶベクターの比は、約１００：１～５０：１、約５０：１～２５：１、約２５：１～１０：１、約１０：１～１：１、約１：１～１：１０、約１：１０～１：２５、約１：２５～１：５０、又は約１：５０～１：１００の範囲内又はその間である。ある実施形態では、空のＡＡＶカプシド対組換えＡＡＶベクターの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、又は１０：１である。
【0028】
[0029]ある実施形態では、医薬組成物は、界面活性剤をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【0029】
【図1】側脳室後頭角（白い垂直線）の標的の代表的な磁気共鳴画像（ＭＲＩ）画像を示す図である。
【図2A】ＣＳＦにおけるヒトＴＰＰ１タンパク質の迅速な発現を示す図である。（Ａ）ベクター投与後の３０日間のＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１レベル。全用量（１．０×１０１３ｖｇ、５．０×１０１３ｖｇ及び２．１７×１０１４ｖｇ／動物）は、形質導入後の２週間からＴＰＰ１タンパク質レベルの測定可能な増加が認められた。アスタリスク（＊）は、溶血した試料を示し、転帰が上昇する可能性がある。（Ｂ）ＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１活性レベルの分析は、機能的タンパク質発現を示した。
【図2B】ＣＳＦにおけるヒトＴＰＰ１タンパク質の迅速な発現を示す図である。（Ａ）ベクター投与後の３０日間のＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１レベル。全用量（１．０×１０１３ｖｇ、５．０×１０１３ｖｇ及び２．１７×１０１４ｖｇ／動物）は、形質導入後の２週間からＴＰＰ１タンパク質レベルの測定可能な増加が認められた。アスタリスク（＊）は、溶血した試料を示し、転帰が上昇する可能性がある。（Ｂ）ＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１活性レベルの分析は、機能的タンパク質発現を示した。
【図3A】２０週間にわたるＣＳＦにおける持続的なヒトＴＰＰ１タンパク質発現及び活性を示す図である。（Ａ）ＡＡＶ２－ＣＡＧ－ｈＴＰＰ１送達後、２０週間にわたるＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１レベル。ｈＴＰＰ１の発現レベルは、１匹を除いた全ての動物において、ニューロンリソソームへの最大半量の取り込みに必要なレベルを超えた（Ｋ取り込みは約６０～１２０ｎｇ／ｍＬである）。５．０×１０１３ｖｇ／動物の用量の発現レベルは、試験終了時にＫ取り込みの上限値の平均１．５５倍であり、１０～２０週にかけて、動物単位で比較的一貫した発現を示した。（Ｂ）ＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１活性レベル。ＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１の持続的発現を示した全ての動物は、時間経過の期間にわたって、ＴＰＰ１活性の上昇レベルを持続した。ＴＰＰ１タンパク質発現に見られたように、平均活性レベルは、５．０×１０１３ｖｇ／動物の用量を受けた動物において最高であることが見出された。
【図3B】２０週間にわたるＣＳＦにおける持続的なヒトＴＰＰ１タンパク質発現及び活性を示す図である。（Ａ）ＡＡＶ２－ＣＡＧ－ｈＴＰＰ１送達後、２０週間にわたるＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１レベル。ｈＴＰＰ１の発現レベルは、１匹を除いた全ての動物において、ニューロンリソソームへの最大半量の取り込みに必要なレベルを超えた（Ｋ取り込みは約６０～１２０ｎｇ／ｍＬである）。５．０×１０１３ｖｇ／動物の用量の発現レベルは、試験終了時にＫ取り込みの上限値の平均１．５５倍であり、１０～２０週にかけて、動物単位で比較的一貫した発現を示した。（Ｂ）ＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１活性レベル。ＣＳＦ中のヒトＴＰＰ１の持続的発現を示した全ての動物は、時間経過の期間にわたって、ＴＰＰ１活性の上昇レベルを持続した。ＴＰＰ１タンパク質発現に見られたように、平均活性レベルは、５．０×１０１３ｖｇ／動物の用量を受けた動物において最高であることが見出された。
【図4】ＣＳＦにおけるＴＰＰタンパク質発現の平均レベルを時間経過の期間にわたって示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0030】
[0034]「核酸」又は「ポリヌクレオチド」配列によりコードされるＴＰＰ１「ポリペプチド」、「タンパク質」及び「ペプチド」は、天然に存在する野生型ＴＰＰ１タンパク質と同様に、完全長天然型ＴＰＰ１配列、並びに機能的ＴＰＰ１サブ配列、改変された形態又は配列バリアントを、サブ配列、改変された形態又はバリアントが天然の全長ＴＰＰ１タンパク質のある程度の機能性を保持する限り含む。本発明の方法及び使用において、核酸配列によりコードされるこのようなＴＰＰ１ポリペプチド、タンパク質及びペプチドは、欠陥があるか、又はその発現が不十分であるか、又は治療された哺乳動物において欠損している、内因性ＴＰＰ１タンパク質と同一であることができるが、必要ではない。
【0031】
[0035]ポリヌクレオチドをコードするＴＴＰ１ポリペプチド又はＴＰＰ１は、それぞれ、１つ又は複数のアミノ酸残基又はヌクレオチド改変、例えば、限定されないが、１つ又は複数のアミノ酸残基又はヌクレオチド置換（例えば、１～３、３～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～４０、４０～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、２００～２５０、２５０～５００、５００～７５０、７５０～８５０個又はそれ以上のアミノ酸残基又はヌクレオチド）を含み得る。
【0032】
[0036]アミノ酸改変の例は、例えば、ＴＰＰ１における参照配列の保存的アミノ酸置換又は欠失（例えば、サブ配列又は断片）である。ある実施形態では、改変された又はバリアントＴＰＰ１配列は、未改変のＴＰＰ１配列の機能又は活性の少なくとも一部を保持する。
【0033】
[0037]ＴＰＰ１の他の哺乳動物形態を含む、ＴＰＰ１をコードするすべての哺乳動物及び非哺乳動物形態の核酸は、公知であるか又は公知でないかに関わらず、明示的に含まれる。
【0034】
[0038]本明細書で使用される場合、用語「ベクター」とは、核酸の挿入又は組み込みによって操作することができる小型担体核酸分子、プラスミド、ウイルス（例えば、ＡＡＶベクター）、又は他のビヒクルを指す。このようなベクターは、遺伝子操作（すなわち、「クローニングベクター」）のため、細胞内へのポリヌクレオチドの導入／移入、及び細胞で挿入されたポリヌクレオチドの転写又は翻訳に使用することができる。「発現ベクター」は、宿主細胞における発現に必要とされる必須の調節領域を有する遺伝子又は核酸配列を含む特殊化されたベクターである。
【0035】
[0039]ベクター核酸配列は、一般的に、細胞で増殖するための少なくとも複製起点、及び任意選択で、異種核酸（例えば、ＴＰＰ１をコードする核酸）、発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー）、イントロン、逆方向末端反復（ＩＴＲ）、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性）、ポリアデニル化シグナルなどの付加的エレメントを含有する。
【0036】
[0040]ウイルスベクターは、ウイルスゲノムを含む１つ又は複数の核酸エレメントに由来するか又はそれに基づく。特定のウイルスベクターには、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）及びレンチウイルスベクターが含まれる。
【0037】
[0041]用語「組換え体」は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターなどのベクターのモディファイヤー、並びに組換え核酸及びポリペプチドなどの配列のモディファイヤーとして、組成物が、一般的に自然界では起こらない様式で操作された（すなわち、遺伝子操作された）ことを意味する。組換えＡＡＶベクターの特定の例は、野生型ＡＡＶゲノムに通常は存在しない核酸配列がＡＡＶゲノム内に挿入される場合である。用語「組換え体」は、ＡＡＶベクター、並びに核酸などの配列に関しては、本明細書において常に使用されるわけではないが、ポリヌクレオチドを含む組換え体は、このような省略にもかかわらず、明示的に含まれる。
【0038】
[0042]「組換えＡＡＶベクター」又は「ｒＡＡＶ」は、ＡＡＶゲノムから野生型ゲノムを除去するための分子方法を使用し、異種核酸と呼ばれる非天然核酸配列で置換することによって、ＡＡＶの野生型ゲノムから誘導される。典型的には、ＡＡＶに関して、ＡＡＶゲノムの一方又は両方の逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列は、ＡＡＶベクターに保持される。ｒＡＡＶは、ＡＡＶゲノムの全部又は一部が、ＡＡＶゲノム核酸に関して非天然配列に置換されているため、ＡＡＶゲノムと区別される。したがって、非天然（非ＡＡＶ）配列の組み込みは、ＡＡＶベクターを「組換え」ベクターとして定義し、これを「ｒＡＡＶベクター」と称することができる。
【0039】
[0043]ｒＡＡＶ配列は、細胞のその後の感染（形質導入）について、エクスビボ、インビトロ又はインビボでパッケージすることができる（本明細書では「粒子」と称する）。組換えＡＡＶベクター配列がＡＡＶ粒子にカプシド化又はパッケージされる場合、粒子は「ｒＡＡＶベクター」又は「ｒＡＡＶ粒子」とも称することができる。このようなｒＡＡＶ粒子は、ベクターゲノムをカプシド化又はパッケージするタンパク質を含み、ＡＡＶの場合、それらはカプシドタンパク質と称される。
【0040】
[0044]「ベクターゲノム」又は「ｖｇ」と簡便に略されるものは、組換えプラスミド配列の部分を指し、最終的にパッケージングされるか又はカプシド化されて、ウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）粒子を形成する。組換えプラスミドを用いて組換えベクターを構築又は製造する場合、ベクターゲノムは、組換えプラスミドのベクターゲノム配列に対応しない「プラスミド」の部分を含まない。組換えプラスミドのこの非ベクターゲノム部分は、プラスミドのクローニング及び増幅に重要である「プラスミド骨格」と称することができ、このプロセスは、増殖及び組換えウイルス生成に必要であるが、それ自体は、ウイルス（例えば、ＡＡＶ）粒子にパッケージ又はカプシド化されない。したがって、「ベクターゲノム」とは、ウイルス（例えば、ＡＡＶ）によってパッケージされ又はカプシド化された核酸を指す。
【0041】
[0045]本明細書で使用される場合、ＡＡＶベクターに関して用語「血清型」とは、他のＡＡＶ血清型と血清学的に区別されるカプシドを意味する。血清学的識別性は、別のＡＡＶと比較して、１つのＡＡＶに対する抗体間の交差反応性の欠如に基づいて決定される。交差反応性の差は、通常、カプシドタンパク質配列／抗原決定基の差（例えば、ＡＡＶ血清型のＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３配列の差）によるものである。
【0042】
[0046]従来の定義では、血清型とは、目的のウイルスが、中和活性のために、全ての既存の及び特徴付けられた血清型に特異的な血清に対して試験されており、目的のウイルスを中和する抗体が見つからなかったことを意味する。より多くの天然に存在するウイルス分離株が発見され、及び／又はカプシド変異体が生成されるにつれて、現在存在する血清型のいずれとも血清学的差異が存在するか又は存在しない場合もある。したがって、新しいウイルス（例えば、ＡＡＶ）が血清学的差異を持たない場合、この新しいウイルス（例えば、ＡＡＶ）は、対応する血清型のサブグループ又はバリアントである。多くの場合、カプシド配列改変を有する変異ウイルスに対して、なおも中和活性の血清学的試験を行う必要があり、従来の血清型の定義に従った別の血清型であるかどうかを決定する必要がある。したがって、便宜上、及び繰り返しを避けるために、用語「血清型」は、広くは、血清学的に区別されるウイルス（例えば、ＡＡＶ）、並びに所与の血清型のサブグループ又はバリアント内にあり得る血清学的に区別されないウイルス（例えば、ＡＡＶ）の両方を指す。
【0043】
[0047]ｒＡＡＶベクター／粒子は、任意のウイルス株又は血清型を含む。例えば、限定されないが、ｒＡＡＶベクターゲノム又は粒子（ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３などのカプシド）は、例えば、ＡＡＶ－１、－２、－３、－４、－５、－６、－７、－８、－９、－１０、－１１、－１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０又はＡＡＶ－２ｉ８などの任意のＡＡＶ血清型に基づくことができる。このようなｒＡＡＶベクター／粒子は、同一の株又は血清型（又はサブグループ若しくはバリアント）に基づくことができるか、あるいは互いに異なることができる。例えば、限定されないが、１つの血清型ゲノムに基づくｒＡＡＶベクターゲノム又は粒子（カプシド）は、ベクターをパッケージングする１つ又は複数のカプシドタンパク質と同一であり得る。さらに、ｒＡＡＶベクターゲノムは、ベクターゲノムをパッケージングする１又は複数のカプシドタンパク質とは異なるＡＡＶ血清型ゲノムに基づくことができ、その場合、３つのカプシドタンパク質のうちの少なくとも１つは、異なるＡＡＶ血清型、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、ＳＰＫ２（配列番号２）、又はそのバリアントであり得る。より具体的には、ｒＡＡＶ２ベクターゲノムは、ＡＡＶ２ ＩＴＲを含むことができるが、異なる血清型、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、ＳＰＫ２（配列番号２）、又はそのバリアントからのカプシドを含むことができる。したがって、ｒＡＡＶベクターには、特定の血清型に特徴的な遺伝子／タンパク質配列と同一の遺伝子／タンパク質配列、並びに「シュードタイプ」とも呼ばれる「混合」血清型が含まれる。
【0044】
[0048]ある実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、１つ又は複数のＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、又はＳＰＫ２（配列番号２）カプシドタンパク質（ＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３配列）と少なくとも７０％又はそれ以上（例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など）同一のカプシド配列を含むか、又はそれからなる。ある実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、１つ又は複数のＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４又は－ｒｈ１０ ＩＴＲ（複数可）と少なくとも７０％又はそれ以上（例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など）同一の配列を含みか、又はそれからなる。
【0045】
[0049]ある実施形態では、ｒＡＡＶベクター／粒子には、そのＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４及びＡＡＶ－２ｉ８バリアント（例えば、アミノ酸挿入、付加、置換及び欠失などの、ＩＴＲ及びカプシドバリアント）、例えば、国際公開第ＷＯ２０１３／１５８８７９号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３７１７０）、国際公開第ＷＯ２０１５／０１３３１３（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０４７６７０）及び米国特許出願公開第２０１３／００５９７３２号（米国出願第１３／５９４，７７３号）に記載されているものが含まれる。
【0046】
[0050]ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、ＳＰＫ２（配列番号２）、並びにバリアント、ハイブリッド、及びキメラ配列などのｒＡＡＶ粒子は、５’及び／又は３’末端に１つ又は複数の機能性ＡＡＡＶ ＩＴＲ配列が隣接する１つ又は複数の異種ポリヌクレオチド配列（導入遺伝子）を含むように、当業者に公知である組換え技術を用いて構築することができる。ｒＡＡＶベクターは、典型的には、ｒＡＡＶベクター粒子への組換えベクターの救出、複製、及びパッケージングのために必要に応じて、少なくとも１つの機能的な隣接ＩＴＲ配列（複数可）を保持する。したがって、ｒＡＡＶベクターゲノムは、複製及びパッケージングのために必要とされる配列（例えば、機能的ＩＴＲ配列）をシスで含む。
【0047】
[0051]組換えＡＡＶ粒子を生成するための宿主細胞は、限定されないが、異種ｒＡＡＶベクターのレシピエントとして使用され得る又は使用されてきた微生物、酵母細胞、昆虫細胞、及び哺乳動物細胞を含む。安定なヒト細胞株ＨＥＫ２９３（例えば、受託番号ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５７３下のＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎを介して容易に入手可能）からの細胞を使用することができる。ある実施形態では、アデノウイルス５型ＤＮＡ断片で形質転換され、アデノウイルスＥ１ａ及びＥ１ｂ遺伝子を発現する改変されたヒト胚腎細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３）を用いて、組換えＡＡＶ粒子を作製する。改変されたＨＥＫ２９３細胞株は、容易にトランスフェクトされ、ｒＡＡＶ粒子を生成するための特に便利なプラットフォームを提供する。組換えＡＡＶ生成に適した他の宿主細胞株は、国際出願ＰＣＴ／２０１７／０２４９５１に記載される。
【0048】
[0052]ある実施形態では、ＡＡＶヘルパー機能は、ＡＡＶ発現ベクターのトランスフェクションの前に、又はそれと同時に、ＡＡＶヘルパー構築物を宿主細胞にトランスフェクトすることによって、宿主細胞に導入される。したがって、ＡＡＶヘルパー構築物は、生産的なＡＡＶ形質導入に必要とされる、欠落しているＡＡＶ機能を補完するために、ＡＡＶ ｒｅｐ及び／又はｃａｐ遺伝子の少なくとも一過性の発現を提供するために時々使用される。ＡＡＶヘルパー構築物は、しばしばＡＡＶ ＩＴＲを欠いており、それ自体で複製もパッケージ化もできない。これらの構築物は、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、ウイルス、又はビリオンの形態であり得る。Ｒｅｐ及びＣａｐ発現生成物の両方をコードする一般的に使用されるプラスミドｐＡＡＶ／Ａｄ及びｐＩＭ２９＋４５などの多数のＡＡＶヘルパー構築物が記載されている。Ｒｅｐ及び／又はＣａｐ発現生成物をコードする多数の他のベクターが公知である。
【0049】
[0053]哺乳動物細胞を形質導入することができる組換えＡＡＶベクター／粒子を作製する方法は、当該技術分野において公知である。例えば、組換えＡＡＶベクター／粒子は、米国特許第９，４０８，９０４号；国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２５３９６及び同ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６４４１４に記載されるように生成することができる。
【0050】
[0054]用語「核酸」及び「ポリヌクレオチド」は、本明細書において、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）を含む全ての形態の核酸、オリゴヌクレオチドに言及するように互換的に使用される。核酸には、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ及びアンチセンスＤＮＡ、並びにスプライシングされた又はスプライシングされていないｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及び抑制性ＤＮＡ又はＲＮＡ（ＲＮＡｉ、例えば、低分子又はショートヘアピン（ｓｈ）ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子又は短鎖干渉（ｓｉ）ＲＮＡ、トランス－スプライシングＲＮＡ、又はアンチセンスＲＮＡ）が含まれる。核酸には、天然に存在する、合成の、及び意図的に改変された又は組換えされたポリヌクレオチド（例えば、バリアント核酸）が含まれる。
【0051】
[0055]ベクターゲノム、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ、及びそれらの断片などの核酸は、一重、二重、若しくは三重、線状又は環状であり得、任意の長さであり得る。核酸の検討において、特定の核酸の配列又は構造は、５’から３’方向に配列を提供する慣例に従って本明細書に記載され得る。
【0052】
[0056]「導入遺伝子」は、本明細書において、細胞又は生物内に導入されることを意図するか又は導入された異種核酸を便宜的に言及するために使用される。導入遺伝子には、ＴＰＰ１をコードする核酸などの任意の異種核酸が含まれる。
【0053】
[0057]用語「形質導入する」及びその文法的変形は、ｒＡＡＶベクターなどの分子の細胞又は宿主生物への導入を指す。異種核酸／導入遺伝子は、レシピエント細胞のゲノム核酸に組み込まれ得るか又は組み込まれなくてもよい。導入された異種核酸はまた、レシピエント細胞又は宿主生物中に染色体外に又は一時的にのみ存在し得る。
【0054】
[0058]「形質導入された細胞」は、導入遺伝子が導入されている細胞である。したがって、「形質導入された」細胞（例えば、細胞又は組織又は臓器細胞などの哺乳動物）は、例えば、核酸（例えば、導入遺伝子）を細胞内に取り込んだ後の細胞における遺伝的変化を意味する。したがって、「形質導入された」細胞は、外因性核酸（例えば、ＴＰＰ１をコードする核酸）が導入されている細胞、又はその子孫である。細胞（複数可）を増殖させ、導入されたタンパク質を発現させることができる。遺伝子治療の使用及び方法に関して、形質導入された細胞は、哺乳動物、霊長類、又はヒトなどの対象中にあり得る。
【0055】
[0059]「発現制御エレメント」とは、作動可能に連結された核酸の発現に影響する核酸配列（複数可）を指す。本明細書に記載される発現制御エレメントには、プロモーター及びエンハンサーが含まれる。ＡＡＶベクターを含むベクター配列は、１つ又は複数の「発現制御エレメント」を含むことができる。典型的には、このようなエレメントは、適した異種ポリヌクレオチド転写、及び必要に応じて翻訳を促進するために含まれる（例えば、プロモーター、エンハンサー、イントロンのスプライシングシグナル、ｍＲＮＡのインフレーム翻訳を可能にする遺伝子の正しいリーディングフレームの維持、及び終止コドンなど）。このようなエレメントは、典型的には、「シス作用性」エレメントと称されるシスに作用するが、トランスにも作用する場合がある。
【0056】
[0060]発現制御は、転写、翻訳、スプライシング、メッセージ安定性などのレベルで行うことができる。典型的には、転写を調節する発現制御エレメントは、転写された核酸の５’末端（すなわち、「上流」）付近に並置される。発現制御エレメントは、転写された配列の３’末端（すなわち、「下流」）又は転写物内（例えば、イントロン内）に位置することもできる。発現制御エレメントは、かなりの距離においてさえ、転写された配列（例えば、ポリヌクレオチドからの１～１０、１０～２５、２５～５０、５０～１００、１００～５００、又はそれ以上のヌクレオチド）に隣接して又は離れて位置させることができる。それにもかかわらず、ＡＡＶベクターの長さの制限のために、発現制御エレメントは、典型的には、異種核酸の転写開始部位から１～１０００ヌクレオチド以内である。
【0057】
[0061]機能的には、作動可能に連結された核酸の発現は、エレメント（例えば、プロモーター）によって少なくとも部分的に制御可能であり、その結果、エレメントは、核酸の転写、及び必要に応じて、転写物の翻訳を調節する。発現制御エレメントの具体例は、プロモーターであり、これは、通常、転写された核酸配列の５’側に位置する。プロモーターは、典型的には、プロモーターが存在しない場合に発現される量と比較して、作動可能に連結された核酸から発現される量を増加させる。
【0058】
[0062]本明細書で使用される「エンハンサー」とは、異種核酸に隣接して位置する配列を指すことができる。エンハンサーエレメントは、典型的には、プロモーターエレメントの上流に位置するが、また機能もし、配列の下流又は配列内に位置することができる。したがって、エンハンサーエレメントは、異種核酸配列の上流又は下流に、１０～５０塩基対、５０～１００塩基対、１００～２００塩基対、又は２００～３００塩基対、又はより多くの塩基対を位置させることができる。エンハンサーエレメントは、典型的には、プロモーターエレメントによってもたらされる発現よりも、作動可能に連結された核酸の発現を増加させる。
【0059】
[0063]発現構築物又はカセットは、特定の細胞型又は組織型における発現を駆動するのに役立つ調節エレメントを含み得る。発現制御エレメント（例えば、プロモーター）は、特定の組織又は細胞型において活性であり、本明細書では「組織特異的発現制御エレメント／プロモーター」と称される。組織特異的発現制御エレメントは、典型的には、特定の細胞又は組織（例えば、肝臓）において活性である。発現制御エレメントは、典型的には、特定の細胞、組織、又は臓器において活性である。これは、それらは、特定の細胞型、組織型、又は臓器型に固有である転写活性化タンパク質、又は転写の他の調節因子によって認識されるためである。このような調節エレメントは、当業者に公知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９年）、及びＡｕｓｕｂｅｌら（１９９２年）を参照されたい）。
【0060】
[0064]発現制御エレメントはまた、多くの異なる細胞型においてポリヌクレオチドの発現を駆動することができるユビキタス又は無差別のプロモーター／エンハンサーを含む。このようなエレメントには、限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター／エンハンサー配列、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター／エンハンサー配列、及び種々の哺乳動物細胞型において活性である他のウイルスプロモーター／エンハンサー、又は天然に存在しない合成エレメント（例えば、Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ、４１巻：５２１～５３０頁（１９８５年）を参照されたい）、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼプロモーター、細胞質β－アクチンプロモーター及びホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが含まれる。
【0061】
[0065]発現制御エレメントはまた、調節可能な様式、すなわち、シグナル又は刺激が、作動可能に連結された異種性ポリヌクレオチドの発現を増加又は減少させる様式で発現を付与することができる。シグナル又は刺激に応答して作動可能に連結されたポリヌクレオチドの発現を増加させる調節可能なエレメントは、「誘導性エレメント」（すなわち、シグナルによって誘導される）とも称される。特定の例としては、限定されないが、ホルモン（例えば、ステロイド）誘導性プロモーターが挙げられる。典型的には、このようなエレメントによって付与される増加又は減少の量は、存在するシグナル又は刺激の量に比例し、シグナル又は刺激の量が大きいほど、発現の増加又は減少が大きい。調節可能な発現制御エレメントには、例えば、限定されないが、亜鉛誘導性ヒツジメタロチオニン（ＭＴ）プロモーター；ステロイドホルモン誘導性マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター；Ｔ７ポリメラーゼプロモーターシステム（国際公開第ＷＯ９８／１００８８号）；テトラサイクリン抑制システム（Ｇｏｓｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９巻：５５４７～５５５１頁（１９９２年））；テトラサイクリン誘導システム（Ｇｏｓｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６８巻：１７６６～１７６９頁（１９９５年）；またＨａｒｖｅｙら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２巻：５１２～５１８頁（１９９８年）参照）；ＲＵ４８６誘導システム（Ｗａｎｇら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５巻：２３９～２４３頁（１９９７年）及びＷａｎｇら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．４巻：４３２～４４１頁（１９９７年））；及びラパマイシン誘導システム（Ｍａｇａｒｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００巻：２８６５～２８７２頁（１９９７年）；Ｒｉｖｅｒａら、Ｎａｔ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２巻：１０２８～１０３２頁（１９９６年））が含まれる。本発明において使用され得る他の調節可能な制御エレメントは、特定の生理学的状態、例えば、温度、急性期、発達によって調節されるものである。
【0062】
[0066]発現制御エレメントはまた、異種ポリヌクレオチドの天然エレメント（複数可）を含む。天然の制御エレメント（例えば、プロモーター）は、異種ポリヌクレオチドの発現が天然の発現を模倣すべきであることが望ましい場合に、本発明で使用され得る。天然のエレメントは、異種ポリヌクレオチドの発現が一時的若しくは発生的に、又は組織特異的な様式で、又は特定の転写刺激に応答して調節される場合に、本発明で使用され得る。イントロン、ポリアデニル化部位又はＫｏｚａｋコンセンサス配列などの他の天然の発現制御エレメントを使用することもできる。
【0063】
[0067]用語「作動可能に連結された」とは、核酸配列の発現に必要な調節配列が、核酸配列の発現をもたらすように、配列に対して適切な位置に配置されることを意味する。この同じ定義は、発現ベクター、例えばｒＡＡＶベクター中の核酸配列及び転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、及び終結エレメント）の配列に適用されることがある。
【0064】
[0068]核酸と作動可能に連結した発現制御エレメントの例において、その関係は、制御エレメントが核酸の発現を調節するようなものである。より具体的には、例えば、限定されないが、作動可能に連結された２つのＤＮＡ配列は、２つのＤＮＡが、少なくとも１つのＤＮＡ配列が他の配列に対して生理学的効果を発揮することができるような関係で配列（シス又はトランス）されることを意味する。
【0065】
[0069]したがって、ベクターのためのさらなるエレメントは、限定されないが、ＡＡＶ ＩＴＲ配列の１つ又は複数のコピー、又はイントロンなどの配列に隣接する発現制御（例えば、プロモーター／エンハンサー）エレメント、転写終結シグナル又は終止コドン、５’又は３’非翻訳領域（例えば、ポリアデニル化（ｐｏｌｙＡ）配列）を含む。
【0066】
[0070]さらなるエレメントは、例えば、パッケージングを改善し、汚染核酸の存在を低下するために、例えば、限定されないが、充填剤又はスタッファーポリヌクレオチド配列を含む。ＡＡＶベクターは、一般的に約４ｋｂ～約５．２ｋｂ、又はわずかに大きいサイズ範囲を有するＤＮＡの挿入物を典型的には受容する。したがって、より短い配列については、ウイルス粒子内にＡＡＶベクターをパッケージするのに許容されるウイルスゲノム配列のほぼ又は正常なサイズに長さを調節するために、スタッファー又は充填剤を含める。ある実施形態では、充填剤／スタッファー核酸配列は、核酸の非翻訳（非タンパク質コード化）セグメントである。４．７ｋｂ未満の核酸配列について、充填剤又はスタッファーポリヌクレオチド配列は、配列と組み合わされた場合（例えば、ベクターに挿入された場合）、約３．０～５．５ｋｂ、又は約４．０～５．０ｋｂ、又は約４．３～４．８ｋｂの全長を有する長さを有する。
【0067】
[0071]用語「単離された」とは、組成物のモディファイヤーとして使用される場合、組成物がヒトの手で作製されるか、又はそれらの天然に存在するインビボ環境から完全に若しくは少なくとも部分的に分離されることを意味する。一般的に、単離された組成物は、それらが通常自然界で関連付けられた１つ又は複数の物質、例えば、限定されないが、１つ又は複数のタンパク質、核酸、脂質、炭水化物、細胞膜を実質的に含まない。
【0068】
[0072]用語「単離された」は、ヒトの手で生成された組合せ、例えば、限定されないが、ｒＡＡＶ配列、又はＡＡＶベクターゲノム及び医薬製剤をパッケージ又はカプシド化するｒＡＡＶ粒子を排除しない。用語「単離された」はまた、ハイブリッド／キメラ、多量体／オリゴマー、修飾（例えば、リン酸化、グリコシル化、脂質化）、又は誘導体化された形態、又はヒトの手によって生成された宿主細胞において発現される形態などの組成物の代替の物理的形態を排除しない。
【0069】
[0073]用語「実質的に純粋な」とは、目的の化合物（例えば、核酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質など）を少なくとも５０～６０重量％含む調製物を指す。調製物は、目的の化合物の少なくとも７５重量％、又は少なくとも８５重量％、又は約９０～９９重量％を含むことができる。純度は、目的の化合物に適した方法（例えば、クロマトグラフィー法、アガロース又はポリアクリルアミドゲル電気泳動、ＨＰＬＣ分析など）によって測定される。
【0070】
[0074]特定のヌクレオチド配列又はアミノ酸配列を参照する場合、語句「から本質的になる」とは、所与の配列番号の特徴を有する配列を意味する。例えば、限定されないが、アミノ酸配列を参照して使用する場合、この語句は、配列自体、並びに配列の基本的及び新規な特性に影響を及ぼさない分子修飾を含む。
【0071】
[0075]ＴＰＰ１をコードする核酸を含む核酸、発現ベクター（例えば、ＡＡＶベクターゲノム）、プラスミドは、組換えＤＮＡ技術法を用いて調製することができる。ヌクレオチド配列情報の利用可能性は、種々の手段による本発明の単離された核酸分子の調製を可能にする。ＴＰＰ１をコードする核酸は、種々の標準的なクローニング、組換えＤＮＡ技術を用いて、細胞発現又はインビトロ翻訳及び化学合成技術を介して作製することができる。ポリヌクレオチドの純度は、配列決定、ゲル電気泳動などによって決定することができる。例えば、限定されないが、核酸は、ハイブリダイゼーション又はコンピュータベースのデータベーススクリーニング技術を用いて単離することができる。このような技術には、限定されないが、（１）ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡライブラリーをプローブとハイブリダイズさせて、相同なヌクレオチド配列を検出すること；（２）共有された構造的特徴を有するポリペプチドを検出するために、例えば、限定されないが、発現ライブラリーを用いて、抗体スクリーニングを行うこと；（３）目的の核酸配列にアニーリングすることができるプライマーを用いて、ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡ上でポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行うこと；（４）関連配列の配列データベースをコンピュータで検索すること；及び（５）減算核酸ライブラリーの差分スクリーニングを行うことが含まれる。
【0072】
[0076]核酸は、任意の好都合なクローニングベクター中でＤＮＡとして維持することができる。ある実施形態では、クローンは、プラスミドクローニング／発現ベクター、例えば、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）中に維持され、これは、適切な大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）宿主細胞中で増殖される。或いは、核酸は、哺乳動物細胞における発現に適したベクター、例えば、限定されないが、ＡＡＶベクター中に維持され得る。翻訳後修飾がタンパク質機能に影響を与える場合、核酸分子は、哺乳動物細胞において発現され得る。
【0073】
[0077]ある実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、任意選択で、宿主細胞内でコードされたタンパク質の発現を可能にするような方法で配置された細胞内での異種核酸の発現に必要な調節エレメントを含み得る。発現に必要なこのような調節エレメントは、限定されないが、本明細書に記載され、当業者に公知であるプロモーター配列、エンハンサー配列及び転写開始配列を含む。
【0074】
[0078]本発明の方法及び使用には、分裂細胞及び／又は非分裂細胞を含む、宿主細胞への核酸（導入遺伝子）の送達（形質導入）が含まれる。本発明の核酸、ｒＡＡＶベクター、方法、使用及び医薬製剤は、治療方法として、異種核酸によってコードされる配列を、それを必要とする対象に送達し、投与し、又は提供する方法において、さらに有用である。このようにして、核酸は、対象においてインビボで転写され、タンパク質が生成される。対象は、タンパク質が欠乏しているため、又は対象におけるタンパク質の生成により、治療方法として若しくは他の方法として、何らかの治療効果を付与し得るために、タンパク質から利益を得ることができ、又はタンパク質を必要とすることができる。
【0075】
[0079]本発明は、ヒト及び獣医学的用途を含む動物に有用である。したがって、適切な対象には、ヒトなどの哺乳動物、並びにヒト以外の哺乳動物が含まれる。用語「対象」とは、動物、典型的には、ヒト、ヒト以外の霊長類（類人猿、ギブン、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカク）、家畜（イヌ及びネコ）、及び実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）などの哺乳動物を指す。ヒト対象には、胎児、新生児、乳児、幼児及び若年成人の対象が含まれる。対象には、動物疾患モデル、例えば、限定されないが、ＣＬＮ２などのタンパク質／酵素欠乏のマウス及び他の動物モデルが含まれる。
【0076】
[0080]本発明による治療に適した対象には、ＴＰＰ１欠損又は欠乏性を有するか若しくは有するリスクを有する対象、又は異常な、部分的に機能的な若しくは機能的でないＴＰＰ１を生成する対象が含まれる。対象は、ＴＰＰ１発現及び／又は活性について試験されて、このような対象が本発明の方法による治療に適切であるかどうかを決定することができる。対象は、ＴＰＰ１をコードする内因性核酸における変異についても試験することができる。ある種の遺伝子変異は、ＴＰＰ１活性を低下するか又は破壊することが公知である。本発明による治療に適した対象にはまた、ＴＰＰ１から恩恵を受ける対象が含まれる。治療された対象は、治療後、定期的に、例えば、１～４週間毎、１～６ヵ月毎、６～１２ヵ月毎、又は１、２、３、４、５年若しくはそれ以上毎にモニターされ得る。
【0077】
[0081]ＴＰＰ１活性を検出する及び／又は測定するためのアッセイは、当該技術分野において公知であり、Ｌｉｕら、２０１７年、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、６３巻：１１１８－１１２６頁、ｄｏｉ：１０．１３７３／ｃｌｉｎｃｈｅｍ．２０１６．２６９１６７、及びＢａｒｃｅｎａｓら、２０１４年、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、８７巻：７９６２－７９６８頁に記載されたアッセイが挙げられる。
【0078】
[0082]対象は、免疫応答、例えば、ＡＡＶに対する抗体について試験され得る。したがって、候補対象は、本発明の方法による治療前にスクリーニングすることができる。対象はまた、治療後にＡＡＶに対する抗体について試験することができ、任意選択で、治療療後の一定期間、モニターすることができる。ＡＡＶ抗体を発生させている対象は、免疫抑制剤、又は本明細書に記載される他のレジメンで治療することができる。
【0079】
[0083]また、本発明による治療に適した対象には、ＡＡＶに対する抗体（抗ＡＡＶ抗体）を有するか又は生成するリスクを有する対象が含まれる。ｒＡＡＶベクターは、いくつかの技術を用いて、このような対象に投与又は送達することができる。例えば、限定されないが、ＡＡＶ空のカプシド（すなわち、ベクターゲノムを欠くＡＡＶ）は、対象中の抗ＡＡＶ抗体に結合するように送達され得、それによって、異種核酸を含むｒＡＡＶベクターが対象の細胞を形質導入することを可能にする。
【0080】
[0084]本明細書に記載されるように、ｒＡＡＶは、細胞を透過し、核酸／遺伝物質を細胞内に導入することができるため、遺伝子療法ベクターとして有用である。ＡＡＶはヒトの病原性疾患と関連付けられないため、ｒＡＡＶベクターは、実質的なＡＡＶの病因又は疾患を引き起こすことなく、異種ポリヌクレオチド配列（例えば、治療タンパク質及び薬剤）をヒト患者に送達することができる。
【0081】
[0085]ｒＡＡＶベクターは、分裂細胞及び非分裂細胞に対する指向性を含む、このような用途のための多くの望ましい特徴を有する。これらのベクターを用いた初期の臨床経験はまた、持続的な毒性を示さず、免疫応答は一般にごくわずかであるか検出不能である。ＡＡＶは、受容体媒介性のエンドサイトーシス又はトランスサイトーシスにより、インビボで広範な細胞型に感染することが公知である。これらのベクター系は、中枢神経系、脳、網膜上皮、肝臓、骨格筋、気道、関節及び造血幹細胞などの多くの組織を標的とするヒトにおいて試験されている。
【0082】
[0086]例えば、限定されないが、複数コピーのＴＰＰ１、従ってより多量のＴＰＰ１タンパク質を提供することができるｒＡＡＶベクターを導入することが望ましい場合がある。改良されたｒＡＡＶベクター及びこれらのベクターを生成する方法はＷｒｉｇｈｔ Ｊ．Ｆ．（Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２０巻：６９８～７０６頁、２００９年）などの多数の参考文献、特許、及び特許出願において詳細に記載される。
【0083】
[0087]ｒＡＡＶベクターは、例えば、限定されないが、頭蓋内注入を介して、生物学的に適合性のある担体中の注入を介して患者に投与することができる。ｒＡＡＶベクターは、単独で又は他の分子と組み合わせて投与することができる。したがって、ｒＡＡＶベクター及び他の組成物、薬剤、薬物、生物学的製剤（タンパク質）を医薬組成物に組み込むことができる。このような医薬組成物は、特に、対象へのインビボ又はエクスビボでの投与及び送達に有用である。
【0084】
[0088]ある実施形態では、医薬組成物はまた、薬学的に若しくは生物学的に許容される担体又は賦形剤を含む。このような賦形剤は、それ自体が、組成物を受け取る個体に有害な免疫応答を誘導せず、過度の毒性なしに投与され得る任意の医薬物質を含む。
【0085】
[0089]本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される」及び「生理学的に許容される」とは、１つ又は複数の投与経路、インビボ送達又は接触に適した、生物学的に許容される製剤、気体、液体若しくは固体、又はそれらの混合物を意味する。「薬学的に許容される」又は「生理学的に許容される」組成物は、生物学的又は他には望ましくない物質であり、例えば、実質的な望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、物質を対象に投与することができる。したがって、このような医薬組成物は、例えば、核酸、ベクター、ウイルス粒子又はタンパク質を対象に投与する際に、本発明で使用することができる。
【0086】
[0090]薬学的に許容される賦形剤には、限定されないが、水、生理食塩水、グリセロール、糖及びエタノールなどの液体が含まれる。薬学的に許容される塩はまた、本明細書において、例えば、限定されないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩などの無機酸塩；及び酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩などの有機酸の塩を含み得る。さらに、湿潤剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝物質などの補助物質がこのようなビヒクルに存在し得る。
【0087】
[0091]医薬組成物は、塩として提供することができ、限定されないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などを含む多数の酸で形成することができる。塩は、対応する遊離塩基形態よりも、水性又は他のプロトン性溶媒中でより溶解性である傾向がある。他の場合には、調製物は、使用前に緩衝液と組み合わせて、ｐＨ４．５～５．５の範囲で、以下：１～５０ｍＭのヒスチジン、０．１～２％のスクロース、及び２～７％のマンニトールのいずれか又は全てを含有し得る凍結乾燥粉末であり得る。
【0088】
[0092]医薬組成物は、本明細書に記載されるか又は当業者に公知であるように、投与又は送達の特定の経路と適合性があるように製剤化することができる。したがって、医薬組成物は、種々の経路による投与に適した担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。
【0089】
[0093]非経口投与に適した組成物は、活性化合物の水性及び非水性溶液、懸濁液又はエマルジョンを含み、これらの調製物は、典型的には無菌であり、意図されたレシピエントの血液と等張であり得る。組成物は、例えば、限定されないが、水、緩衝化生理食塩水、ハンクス液、リンゲル液、デキストロース、フルクトース、エタノール、動物油、植物油又は合成油を含む。水性注入懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含み得る。
【0090】
[0094]さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油注入懸濁液として調製することができる。適切な親油性溶媒又はビヒクルには、ゴマ油などの脂肪油、又はオレイン酸エチル若しくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、又はリポソームが含まれる。任意選択で、懸濁液はまた、高濃度溶液の調製を可能にするために化合物の溶解度を増加させる適切な安定化剤又は試薬を含み得る。
【0091】
[0095]共溶媒及びアジュバントを製剤に添加することができる。共溶媒には、ヒドロキシル基又は他の極性基、例えば、限定されないが、イソプロピルアルコールなどのアルコール；プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリコールエーテルなどのグリコール；グリセロール；ポリオキシエチレンアルコール及びポリオキシエチレン脂肪酸エステルが含まれる。アジュバントには、例えば、限定されないが、大豆レシチン及びオレイン酸などの界面活性剤；ソルビタントリオレエートなどのソルビタンエステル；及びポリビニルピロリドンが含まれ得る。
【0092】
[0096]医薬組成物が調製された後、それらを適切な容器に入れ、治療のためにラベルを付けることができる。このようなラベルには、投与量、頻度、及び方法が含まれ得る。
【0093】
[0097]本発明の組成物、方法及び使用に適した医薬組成物及び送達システムは、当該技術分野において公知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（２００３年）、第２０版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０年）、第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ；Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ （１９９６年）、第１２版、Ｍｅｒｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ、Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ、ＮＪ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｓｏｌｉｄ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（１９９３年）、Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、Ｐａ．；Ａｎｓｅｌ ａｎｄ Ｓｔｏｋｌｏｓａ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（２００１年）、第１１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ；及びＰｏｚｎａｎｓｋｙら、Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９８０年）、Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ編集、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｎ．Ｙ．、２５３～３１５頁を参照されたい）。
【0094】
[0098]「有効量」又は「十分量」とは、単回又は複数回用量において、単独で又は組み合わせて、１つ又は複数の他の組成物（薬物などの治療剤又は免疫抑制剤）、治療、プロトコール、又は治療レジメン剤とともに、任意の持続時間（長期又は短期）の検出可能な応答、任意の測定可能若しくは検出可能な程度の対象における又は任意の持続時間（例えば、分、時間、日、月、年、又は治癒）の期待される又は望ましい結果を提供する量を指す。
【0095】
[0099]用量は様々であり、治療が指示される疾患のタイプ、発症、進行、重症度、頻度、持続期間、又は確率、望ましい臨床エンドポイント、以前の又は同時の治療、対象の一般的な健康、年齢、性別、人種又は免疫学的能力、及び当業者によって認識される他の要因に依存し得る。投薬量、数、頻度又は持続期間は、治療若しくは療法の副作用、合併症又は他の危険因子、及び対象の状態によって示されるように、比例的に増加又は減少させることができる。当業者は、治療的又は予防的利益を提供するのに十分な量を提供するのに必要な投薬量及び時期に影響し得る因子を理解する。
【0096】
[0100]治療効果を達成するための用量、例えば、対象若しくは患者の体重１キログラムあたりのベクターゲノムの用量（ｖｇ／ｋｇ）、又は対象又は患者の脳あたりのベクターゲノムの用量（ｖｇ／脳）、又は対象若しくは患者のＣＮＳに送達されるベクターゲノムの用量（ｖｇ／ＣＮＳ）は、限定されないが、投与経路、治療効果を達成するために必要な異種ポリヌクレオチド発現のレベル、治療される特定の疾患、ウイルスベクターに対する任意の宿主免疫応答、異種ポリヌクレオチド又は発現産物（タンパク質）に対する宿主免疫応答、及び発現されるタンパク質の安定性を含むいくつかの要因に基づいて変化する。
【0097】
[0101]一般的に、用量は、約１．５×１０１３組換えＡＡＶベクターゲノムよりも大きい。例えば、約５×１０１３組換えＡＡＶベクターゲノム又は約５×１０１３を超える組換えＡＡＶベクターゲノムの用量；約１×１０１４組換えＡＡＶベクターゲノム又は約１×１０１４を超える組換えＡＡＶベクターゲノムの用量；約５×１０１４組換えＡＡＶベクターゲノム又は約５×１０１４を超える組換えＡＡＶベクターゲノムの用量；約１×１０１５組換えＡＡＶベクターゲノム又は約１×１０１５を超える組換えＡＡＶベクターゲノムの用量；及び約５×１０１５組換えＡＡＶベクターゲノム又は約５×１０１５を超える組換えＡＶベクターゲノムの用量。
【0098】
[0102]ある実施形態では、組換えＡＡＶベクターゲノムは、約１．５×１０１３～約５×１０１５組換えＡＡＶベクターゲノムの用量範囲で；約１×１０１４～約３×１０１５組換えＡＡＶベクターゲノムの用量範囲で；約２×１０１４～約２×１０１５組換えＡＡＶベクターゲノムの用量範囲で；約２．５×１０１４～約７．５×１０１４組換えＡＡＶベクターゲノムの用量範囲で；約５×１０１４～約５×１０１５組換えＡＡＶベクターゲノムの用量範囲で；及び約１×１０１５～約５×１０１５組換えＡＶベクターゲノムの用量範囲で投与される。
【0099】
[0103]ある実施形態では、ｒＡＡＶベクターゲノムは、約１×１０１４ベクターゲノムの用量で投与され、約２×１０１４ベクターゲノムの用量で投与され、約３×１０１４ベクターゲノムの用量で投与され、約４×１０１４ベクターゲノムの用量で投与され、約５×１０１４ベクターゲノムの用量で投与され、約６×１０１４ベクターゲノムの用量で投与され、約７×１０１４ベクターゲノムの用量で投与され、約８×１０１４ベクターゲノムの用量で投与され、約９×１０１４ベクターゲノムの用量で投与され、約１×１０１５ベクターゲノムの用量で投与され、約２×１０１５ベクターゲノムの用量で投与され、約３×１０１５ベクターゲノムの用量で投与され、約４×１０１５ベクターゲノムの用量で投与され、又は約５×１０１５ベクターゲノムの用量で投与される。
【0100】
[0104]ある実施形態では、用量は、約１．５×１０１３ｒＡＡＶ ｖｇ／対象又は患者の脳を超える。例えば、約５×１０１３ｒＡＡＶ ｖｇ／脳又は約５×１０１３ｒＡＡＶ ｖｇ／脳を超える用量；約１×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳又は約１×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳を超える用量；約５×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳又は約５×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳を超える用量；約１×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳又は約１×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳を超える用量；及び約５×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳又は約５×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳を超える用量。
【0101】
[0105]ある実施形態では、ｒＡＡＶ ｖｇは、約１．５×１０１３～約５×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量範囲；約１×１０１４～約３×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量範囲；約２×１０１４～約２×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量範囲；約２．５×１０１４～約７．５×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量範囲；約５×１０１４～約５×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量範囲；及び約１×１０１５～約５×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量範囲で投与される。
【0102】
[0106]ある実施形態では、ｒＡＡＶ ｖｇは、約１×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約２×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約３×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約４×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約５×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約６×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約７×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約８×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約９×１０１４ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約１×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約２×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約３×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、約４×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与され、又は約５×１０１５ｒＡＡＶ ｖｇ／脳の用量で投与される。
【0103】
[0107]本明細書で使用される「単位投薬形態」とは、治療される対象のための単一の投薬量として適した物理的に離散した単位を指し；各単位は、所望の効果（例えば、予防又は治療効果）をもたらすように、１つ又は複数の用量で投与された場合に計算される、医薬担体（賦形剤、希釈剤、ビヒクル又は充填剤）と任意選択で関連付けた所定量を含有する。単位投薬形態は、例えば、液体組成物、又は凍結－乾燥（freeze-dried）若しくは凍結乾燥（lyophilized）状態の組成物を含み得るアンプル及びバイアル内にあり得；例えば、無菌液体担体は、インビボでの投与又は送達の前に添加され得る。個々の単位投薬形態は、複数回の投薬キット又は容器に含めることができる。ｒＡＡＶ粒子、及びその医薬組成物は、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、単一又は複数の単位投薬形態で包装することができる。
【0104】
[0108]治療のための「有効量」又は「十分量」の用量（例えば、向上するため、又は治療上の利益又は改善を提供するため）は、典型的には、疾患の１つ、複数若しくはすべての有害な症状、結果又は合併症、例えば、測定可能な程度まで、疾患に起因して又は関連付けられた、１つ又は複数の有害な症状、障害、病気、病態、又は合併症に対して、応答を提供するのに有効であるが、疾患の進行又は悪化を減少、低下、阻害、抑制、制限又は制御することは満足のいく結果である。
【0105】
[0109]有効量又は十分量は、単一の投与において提供され得るが、必ずしもそうではなく、複数の投与を必要とし得、単独で又は別の組成物（例えば、薬剤）、治療、プロトコール又は治療レジメンと組み合わせて投与され得るが、必ずしもそうではない。例えば、量は、対象の必要性、治療された疾患のタイプ、状態及び重症度、又は治療の副作用（もしあれば）によって示されるように、比例的に増加され得る。さらに、有効量又は十分量は、第２の組成物（例えば、別の薬物又は薬剤）、治療、プロトコール又は治療レジメンを伴わずに、単回又は複数回投薬する場合、有効又は十分である必要はない。これは、追加の用量、このような用量を上回る若しくは超える量又は期間、或いは追加の組成物（例えば、薬物又は薬剤）、治療、プロトコール又は治療レジメンが、所与の対象において有効又は十分と考えられるために含めることができるためである。有効と考えられる量はまた、ＴＰＰ１欠乏症（例えば、ＣＬＮ２）の治療のためのＴＰＰ１をコードする核酸の投与などの、別の治療、治療レジメン又はプロトコールの使用の減少をもたらす量を含む。
【0106】
[0110]したがって、本発明の方法及び使用はまた、とりわけ、別の化合物、薬剤、薬物、療法レジメン、治療プロトコール、プロセス、若しくは救済の減少した必要性又は使用をもたらす方法及び使用を含む。したがって、本発明によれば、別の治療又は療法の必要性又は使用を減少させる方法及び使用が提供される。
【0107】
[0111]有効量又は十分量は、治療された各々の及び全ての対象、又は所与の群若しくは集団における治療された対象の大部分において有効である必要はない。有効量又は十分量とは、群又は一般集団ではなく特定の対象における有効性又は十分性を意味する。このような方法に典型的なように、一部の対象は、所与の治療方法又は使用に対して、より大きな反応を示すか、又はより小さい反応を示すか若しくは反応を示さない。
【0108】
[0112]対象への投与又はインビボ送達は、疾患に起因した又は関連付けられた有害な症状、状態、合併症などの発症に先立って行うことができる。例えば、スクリーニング（例えば、遺伝学的）を用いて、このような対象を、本発明の組成物、方法及び使用のための候補として同定することができる。したがって、このような対象には、機能性遺伝子生成物（例えば、ＴＰＰ１質欠乏）の不十分な量又は欠乏に関して陽性とスクリーニングされた対象、又は異常、部分的に機能性又は非機能性の遺伝子生成物（例えば、ＴＰＰ１）を生成する対象が含まれる。
【0109】
[0113]本明細書に開示される本発明の方法及び使用に従った対象への投与又はインビボ送達は、対象が、治療の標的となる疾患を有し、疾患の１つ又は複数の症状を有し、又は対象が疾患の１つ又は複数の症状を有さないにもかかわらず、スクリーニングされ、本明細書に記載される陽性であるとして同定された後の１～２時間、２～４時間、４～１２時間、１２～２４時間、又は２４～７２時間以内に行うことができる。当然に、本発明の方法及び使用は、対象が、治療の標的となる疾患を有し、疾患の１つ又は複数の症状を有し、又はスクリーニングされ、本明細書に記載される陽性であるとして同定された後の１～７日、７～１４日、１４～２４日、２４～４８日、４８～６４日以上、数カ月又は数年後に行うことができる。
【0110】
[0114]用語「向上する」とは、対象の疾患若しくはその症状、又は根底にある細胞応答における検出可能又は測定可能な改善を意味する。検出可能又は測定可能な改善は、疾患の発生、頻度、重症度、進行、又は期間における主観的若しくは客観的な減少、低下、阻害、抑制、制限若しくは制御、或いは疾患に起因した又は関連付けられた合併症、或いは疾患の症状若しくは基礎原因若しくは結果における改善、或いは疾患の回復を含む。
【0111】
[0115]ＣＬＮ２の場合、有効量は、視力障害、認知発達障害又は認知発達の不良、運動制御の喪失又は発作を抑制する、低下する、又は改善する量である。有効量はまた、ＣＬＮ２の有害症状の悪化を安定化させる又は阻害する又は予防する量である。
【0112】
[0116]治療用量は、他の因子の中でも、対象の年齢及び全身状態、疾患又は障害の重症度に依存する。ヒトにおける治療有効量は、個々の患者の反応に基づいて、医師によって決定され得る比較的広い範囲に含まれる。
【0113】
[0117]医薬組成物などの組成物は、コードされたタンパク質の生成を可能にするために、対象に送達させることができる。ある実施形態では、医薬組成物は、レシピエントが対象中に治療上有効量のタンパク質を生成することを可能にするのに十分な遺伝物質を含む。
【0114】
[0118]組成物は、限定されないが、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、及び水を含む、任意の無菌の生体適合性のある医薬担体中に処方及び／又は投与することができる。組成物は、単独で、又は止血に影響する他の薬剤（例えば、補因子）と組み合わせて、患者に処方及び／又は投与することができる。
【0115】
[0119]本発明の治療方法は、全身的に、局部的に又は局所的に、又は任意の経路、例えば、注入又は輸注による送達及び投与を含む。インビボでの医薬組成物の送達は、一般的に、注入によって達成することができる。例えば、ｒＡＡＶベクター／粒子は、頭蓋内、例えば、ＣＮＳ内、特に、例えば、側脳室などの脳の一部に投与され得る。
【0116】
[0120]本発明による治療方法及びｒＡＡＶベクターは、所望の治療的、有益な、相加的、相乗的若しくは相補的な活性又は効果を有する任意の化合物、薬剤、薬物、治療又は他の治療レジメン若しくはプロトコールの追加使用を含む組み合わせ療法を含む。例示的な組合せ組成物及び治療には、生物学的製剤（タンパク質）、薬剤（例えば、免疫抑制剤）及び薬物などの第２の活性剤が含まれる。このような生物学的製剤（タンパク質）、薬剤、薬物、治療及び療法は、本発明による任意の他の方法又は治療に先立って、実質的に同時に、又はそれに続いて、投与又は実施することができる。
【0117】
[0121]化合物、薬剤、薬物、治療又は他の療法レジメン若しくはプロトコールは、組合せ組成物として投与することができ、又は核酸、ベクター、若しくはｒＡＡＶ粒子の送達若しくは投与と同時に、又は連続的に（送達の前又は後に）投与するなど、別々に投与することができる。したがって、本発明は、本明細書に記載されるか又は当業者に公知の任意の化合物、薬剤、薬物、療法レジメン、治療プロトコール、プロセス、治療薬又は組成物との組合せで本発明による治療方法が行われる組合せを提供する。化合物、薬剤、薬物、療法レジメン、治療プロトコール、プロセス、救済又は組成物は、本発明に従って患者に投与される核酸、ベクター又はｒＡＡＶ粒子の投与に先立って、実質的に同時に、若しくはその後に投与又は実施することができる。
【0118】
[0122]ある実施形態では、少なくとも１つの免疫抑制剤は、ｒＡＡＶベクターの対象への投与に先立って、実質的に同時に、又はその後に対象に投与される。ある実施形態では、免疫抑制剤は、抗炎症剤である。ある実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイドである。ある実施形態では、免疫抑制剤は、プレドニゾン、シクロスポリン（例えば、シクロスポリンＡ）、ミコフェノール酸、リツキシマブ又はその誘導体である。
【0119】
[0123]遺伝子導入におけるＡＡＶに対する体液性免疫を低下する（克服する）又は回避する戦略には、高ベクター用量の投与、抗ＡＡＶ抗体を吸着させるためのデコイとしてのＡＡＶ空カプシドの使用、ＡＡＶに対する体液性免疫応答を減少する、低下する、阻害する、予防する又は根絶するための免疫抑制薬の投与、ＡＡＶカプシド血清型の変更又は中和抗体に対する感受性が低いようにＡＡＶカプシドを操作すること、抗ＡＡＶ免疫グロブリンを吸着させるための血漿交換サイクルの使用、それによって抗ＡＡＶ抗体力価を低下させること、及びバルーンカテーテルなどの送達技術の使用、続いて生理食塩水洗浄が含まれる。このような戦略は、Ｍｉｎｇｏｚｚｉら、２０１３年、Ｂｌｏｏｄ、１２２巻：２３～３６頁に記載されている。
【0120】
[0124]ＡＡＶ空カプシド対ｒＡＡＶベクターの例示的な比は、約１００：１～５０：１、約５０：１～２５：１、約２５：１～１０：１、約１０：１～１：１、約１：１～１：１０、約１：１０～１：２５、約１：２５～１：５０、又は約１：５０～１：１００の範囲内又はその間であり得る。比はまた、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、又は１０：１であり得る。
【0121】
[0125]投与するＡＡＶ空カプシドの量は、特定の対象において生成されるＡＡＶ抗体の量（力価）に基づいて較正することができる。
【0122】
[0126]ＡＡＶ抗体は、既存であり得、標的細胞のＴＰＰ１遺伝子導入ベクター形質導入を低下又はブロックするレベルで存在し得る。或いは、ＡＡＶ抗体は、ＡＡＶへの曝露又はＡＡＶベクターの投与後に発現し得る。このような抗体がＡＡＶベクターの投与後に発現される場合、これらの対象は、それに応じて治療することもできる。
【0123】
[0127]別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は研究に使用することができるが、適切な方法及び材料を本明細書に記載する。
【0124】
[0128]本明細書に引用される全ての特許、特許出願、刊行物、及び他の参考文献、ＧｅｎＢａｎｋ引用、及びＡＴＣＣ引用は、それらの全体が参照により組み込まれる。矛盾が生じた場合、定義を含む本明細書が支配する。
【0125】
[0129]本明細書に開示される特徴の全ては、任意の組合せで組み合わせることができる。本明細書に開示される各特徴は、同一、同等又は類似の目的を果たす代替の特徴に置き換えることができる。したがって、特に明示的に述べられない限り、開示される特徴（例えば、ＴＰＰ１をコードする核酸、ＴＰＰ１をコードする核酸を含む発現カセット、及びＴＰＰ１をコードする核酸を含むｒＡＡＶ粒子）は、同等又は類似の特徴の属の例である。
【0126】
[0130]本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「ａｎｄ」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に別の意味を示さない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「核酸」への言及は複数のこのような核酸を含み、「ベクター」への言及は複数のこのようなベクターを含み、「ウイルス」又は「粒子」への言及は複数のこのようなウイルス／粒子を含む。
【0127】
[0131]本明細書で使用される場合、全ての数値又は数値範囲は、文脈が明確に別の意味を示さない限り、このような範囲内の整数及び範囲内の値又は整数の端数を含む。したがって、説明するために、８６％以上の同一性への言及は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％など、並びに８６．１％、８６．２％、８６．３％、８６．４％、８６．５％など、８７．１％、８８．２％、８８．３％、８８．４％、８８．５％などを含む。
【0128】
[0132]より大きい（morethan）（超える（greater than））又はより小さい（less than）を伴う整数への言及は、それぞれ参照された数値より大きい又は小さい任意の数を含む。したがって、例えば、１．５×１０１３超への言及は、１．６×１０１３、１．７×１０１３、１．８×１０１３、１．９×１０１３、２．０×１０１３、２．１×１０１３、２．２×１０１３、２．３×１０１３、２．４×１０１３、２．５×１０１３、２．６×１０１３、２．７×１０１３、２．８×１０１３、２．９×１０１３、３．０×１０１３、３．１×１０１３、３．２×１０１３などを含む。
【0129】
[0133]本明細書で使用される場合、全ての数値又は範囲は、文脈が明確に別の意味を示さない限り、部分範囲並びにこのような範囲内の値及び整数の端数を含む。したがって、説明するために、１～１０などの数値範囲への言及は、１～２、１～３、１～４、１～５、１～６、１～７、１～８、１～９、２～３、２～４、２～５、２～６、２～７、２～８、２～９、２～１０、３～４、３～５、３～６、３～７、３～８、３～９、３～１０など；及び１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、並びに１．１、１．２、１．３、１．４、１．５などを含む。したがって、１～５０の範囲への言及は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０などから、最大５０まで、並びに１．１、１．２、１．３、１．４、１．５など、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５などを含む。
【0130】
[0134]一連の範囲への言及は、シリーズ内の異なる範囲の境界の値を結合する範囲を含む。したがって、一連の範囲への言及を説明するために、例えば、１～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７５、７５～１００、１００～１５０、１５０～２００、２００～２５０、２５０～３００、３００～４００、４００～５００、５００～７５０、７５０～８５０は、１～２０、１～３０、１～４０、１～５０、１～６０、１０～３０、１０～４０、１０～５０、１０～６０、１０～７０、１０～８０、２０～４０、２０～５０、２０～６０、２０～７０、２０～８０、２０～９０、５０～７５、５０～１００、５０～１５０、５０～２００、５０～２５０、１００～２００、１００～２５０、１００～３００、１００～３５０、１００～４００、１００～５００、１５０～２５０、１５０～３００、１５０～３５０、１５０～４００、１５０～４５０、１５０～５００などの範囲を含む。
【0131】
[0135]本発明は、本発明の多数の実施形態を説明するために、肯定的な言語を使用して、本明細書において一般的に開示される。本発明はまた、具体的には、物質又は材料、方法ステップ及び条件、プロトコール、又は手順などの、特定の主題が全部又は一部除外される実施形態を含む。例えば、本発明の特定の実施形態では、材料及び／又は方法ステップは除外される。したがって、本発明が、本発明において明示的に除外されない態様を含まないものに関して、本明細書において一般的に表現されていないとしても、それにもかかわらず、本明細書において開示される。
【0132】
[0136]本発明の多くの実施形態が記載されている。それにもかかわらず、当業者は、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、種々の用途及び条件に適合させるために本発明の種々の変更及び修正を行うことができる。したがって、以下の実施例は、いかなる方法であれ、請求された発明の範囲を例示することを意図しているが、限定するものではない。
【実施例】
【0133】
実施例１
[0137]本研究では、成体アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）の非ヒト霊長類（雌及び雄）を用いた。投与群は、対照（ビヒクルのみ）；低用量（１．０×１０１３ｖｇ／動物）；中用量（５．０×１０１３ｖｇ／動物）；高用量（２．１７×１０１４ｖｇ／動物）であった。
[0137]本研究では、成体アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）の非ヒト霊長類（雌及び雄）を用いた。投与群は、対照（ビヒクルのみ）；低用量（１．０×１０１３ｖｇ／動物）；中用量（５．０×１０１３ｖｇ／動物）；高用量（２．１７×１０１４ｖｇ／動物）であった。
【0134】
[0138]投与群別動物数：対照（各時間点でｎ＝３）、低用量（各時間点でＮ＝３）、中用量（各時間点でｎ＝３）及び高用量群（各時間点でｎ＝４）。時間点は３０日及び９０日であった。
【0135】
[0139]ＡＡＶ２－ＣＡＧ－ｈＴＴＰ１投与：脊椎針（２２Ｇ、３．５”Ｑｕｉｎｋｅ ＢＤ）を用いた側脳室後頭角へのＭＲＩガイド下片側送達（図１；垂直線）。総体積４ｍＬを（１００μＬ／分）で送達させた。
【0136】
[0140]脳脊髄液（ＣＳＦ）分析には、ＴＰＰ１酵素活性アッセイ及びヒトＴＰＰ１タンパク質発現アッセイ（ＷＥＳ Ｗｅｓｔｅｒｎ）が含まれた。
【0137】
実施例２
[0141]本実施例は、ＡＡＶ２－ＣＡＧ－ヒトＴＰＰ１の脳室内送達後のＣＮＳにおけるヒトＴＰＰ１の短期及び長期発現並びに活性を示すデータの記載を含む。
[0141]本実施例は、ＡＡＶ２－ＣＡＧ－ヒトＴＰＰ１の脳室内送達後のＣＮＳにおけるヒトＴＰＰ１の短期及び長期発現並びに活性を示すデータの記載を含む。
【0138】
[0142]ヒトＴＰＰは、ＣＮＳの側脳室の上衣細胞を標的とするＡＡＶ－ＣＡＧ－ヒトＴＰＰ１（ＡＡＶ－ＣＡＧ－ｈＴＰＰ１とも呼ばれる）ベクターの送達後に、非ヒト霊長類のＣＳＦ中に分泌された。ＡＡＶベクターの送達後、２０週間の時間経過にわたって、ヒトＴＰＰ１の測定可能であり、持続的な発現があった（図２Ａ、３Ａ及び４）。さらに、３つ全てのＡＡＶベクター用量におけるＴＰＰ１発現レベルは、以前に報告されたように、ＴＰＰ１のＫ取り込み内又はそれを超えるレベルをもたらした（Ｖｕｉｌｌｅｍｅｎｏｔ，Ｂ．Ｒ．ら、（２０１４年）Ｔｏｘｉｃｏｌ Ａｐｐｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２７７巻（１号）、４９～５７頁）。これは、これらの動物における実質への長期であり、持続的な細胞取り込みの可能性が高いことを示している（Ｋａｔｚ，Ｍ．Ｌ．ら、（２０１５年）Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ、７巻（３１３頁）；Ｔｅｃｅｄｏｒ，Ｌ．（２０１８年）１６ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ ＮＣＬ、Ｌｏｎｄｏｎ、ＵＫ）。ＴＰＰ１活性分析は、発現されたＴＰＰ１タンパク質の機能的生存性を確認する（図２Ｂ及び３Ｂ）。ＡＡＶ２－ＣＡＧ－ｈＴＰＰ１を受けた動物の死後組織の予備分析では、希釈剤のみを受けた対照動物と比較して、有意な病理学的変化は示されなかった。動物における発現したｈＴＰＰ１の組織取り込みの分析が行われている。
【0139】
[0143]これらの研究は、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症の治療のために側脳室の上衣細胞からヒトＴＰＰ１の発現をもたらす、効果的な上衣指向性遺伝子治療アプローチを実証している。
【0140】
実施例３
Ｓｐｋ１ ＶＰ１カプシド（配列番号１）：
MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVESPVKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL
Ｓｐｋ１ ＶＰ１カプシド（配列番号１）：
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【0141】
Ｓｐｋ２ ＶＰ１カプシド（配列番号２）：
MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRPL
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【0142】
ＣＡＧプロモーター配列（配列番号３）：
ATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAA
ATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAA
【0143】
ＴＰＰ１（配列番号４、ヒト）：
MGLQACLLGLFALILSGKCSYSPEPDQRRTLPPGWVSLGRADPEEELSLTFALRQQNVERLSELVQAVSDPSSPQYGKYLTLENVADLVRPSPLTLHTVQKWLLAAGAQKCHSVITQDFLTCWLSIRQAELLLPGAEFHHYVGGPTETHVVRSPHPYQLPQALAPHVDFVGGLHRFPPTSSLRQRPEPQVTGTVGLHLGVTPSVIRKRYNLTSQDVGSGTSNNSQACAQFLEQYFHDSDLAQFMRLFGGNFAHQASVARVVGQQGRGRAGIEASLDVQYLMSAGANISTWVYSSPGRHEGQEPFLQWLMLLSNESALPHVHTVSYGDDEDSLSSAYIQRVNTELMKAAARGLTLLFASGDSGAGCWSVSGRHQFRPTFPASSPYVTTVGGTSFQEPFLITNEIVDYISGGGFSNVFPRPSYQEEAVTKFLSSSPHLPPSSYFNASGRAYPDVAALSDGYWVVSNRVPIPWVSGTSASTPVFGGILSLINEHRILSGRPPLGFLNPRLYQQHGAGLFDVTRGCHESCLDEEVEGQGFCSGPGWDPVTGWGTPNFPALLKTLLNP
MGLQACLLGLFALILSGKCSYSPEPDQRRTLPPGWVSLGRADPEEELSLTFALRQQNVERLSELVQAVSDPSSPQYGKYLTLENVADLVRPSPLTLHTVQKWLLAAGAQKCHSVITQDFLTCWLSIRQAELLLPGAEFHHYVGGPTETHVVRSPHPYQLPQALAPHVDFVGGLHRFPPTSSLRQRPEPQVTGTVGLHLGVTPSVIRKRYNLTSQDVGSGTSNNSQACAQFLEQYFHDSDLAQFMRLFGGNFAHQASVARVVGQQGRGRAGIEASLDVQYLMSAGANISTWVYSSPGRHEGQEPFLQWLMLLSNESALPHVHTVSYGDDEDSLSSAYIQRVNTELMKAAARGLTLLFASGDSGAGCWSVSGRHQFRPTFPASSPYVTTVGGTSFQEPFLITNEIVDYISGGGFSNVFPRPSYQEEAVTKFLSSSPHLPPSSYFNASGRAYPDVAALSDGYWVVSNRVPIPWVSGTSASTPVFGGILSLINEHRILSGRPPLGFLNPRLYQQHGAGLFDVTRGCHESCLDEEVEGQGFCSGPGWDPVTGWGTPNFPALLKTLLNP
【0144】
［関連出願］
[0001]本特許出願は、２０１９年２月１日に出願された米国特許仮出願第６２／８００，１３１号の優先権の利益を主張する。全てのテキスト、表、図面及び配列を含む上述の出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
[0001]本特許出願は、２０１９年２月１日に出願された米国特許仮出願第６２／８００，１３１号の優先権の利益を主張する。全てのテキスト、表、図面及び配列を含む上述の出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【配列表】
【国際調査報告】