▶ ノヴァロック バイオセラピューティクス， リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2022-03-18
(54)【発明の名称】抗クローディン１８抗体及びそれらの使用の方法
(51)【国際特許分類】
C07K 16/30 20060101AFI20220311BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20220311BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20220311BHJP
【ＦＩ】
C07K16/30
C12N15/13
C07K16/46
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2021544859
(86)(22)【出願日】2020-02-03
(85)【翻訳文提出日】2021-09-15
(86)【国際出願番号】 US2020016459
(87)【国際公開番号】W WO2020160560
(87)【国際公開日】2020-08-06
(31)【優先権主張番号】62/800,359
(32)【優先日】2019-02-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/891,925
(32)【優先日】2019-08-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521339223
【氏名又は名称】ノヴァロック バイオセラピューティクス， リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】リー， ハン
(72)【発明者】
【氏名】レイ， ミン
(72)【発明者】
【氏名】ペイ， イー
(72)【発明者】
【氏名】フアン， ハイチュン
【テーマコード（参考）】
4H045
【Ｆターム（参考）】
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA42
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
ヒト密着結合分子ＣＬＤＮ１８．２に特異的に結合し、それらをＣＬＤＮ１８．２の異常発現と関連する疾患の抗体ベース免疫療法における使用に好適であるようにする機能的特性を有する抗体が、開示される。いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、抗体フラグメントである。さらなる実施形態において、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びｓｃＦｖ－Ｆｃフラグメント、単鎖抗体、ミニボディ、ならびにダイアボディからなる群から選択される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
単離された完全にヒトの抗ヒトＣＬＤＮ１８．２であって、抗体がヒトＣＬＤＮ１８．１に結合せず、前記抗体が、（ａ）ＣＤＲ１：配列番号２２１、ＣＤＲ２：配列番号２２２、ＣＤＲ３：配列番号２２３を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２２４、ＣＤＲ２：配列番号２２５、ＣＤＲ３：配列番号２２６を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）ＣＤＲ１：配列番号２２７、ＣＤＲ２：配列番号２２８、ＣＤＲ３：配列番号２２９を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２３０、ＣＤＲ２：配列番号２３１、ＣＤＲ３：配列番号２３２を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）ＣＤＲ１：配列番号２３３、ＣＤＲ２：配列番号２３４、ＣＤＲ３：配列番号２３５を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２３６、ＣＤＲ２：配列番号２３７、ＣＤＲ３：配列番号２３８を含む軽鎖可変領域、
（ｄ）ＣＤＲ１：配列番号２３９、ＣＤＲ２：配列番号２４０、ＣＤＲ３：配列番号２４１を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２４２、ＣＤＲ２：配列番号２４３、ＣＤＲ３：配列番号２４４を含む軽鎖可変領域、
（ｅ）ＣＤＲ１：配列番号２４５、ＣＤＲ２：配列番号２４６、ＣＤＲ３：配列番号２４７を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２４８、ＣＤＲ２：配列番号２４９、ＣＤＲ３：配列番号２５０を含む軽鎖可変領域、
（ｆ）ＣＤＲ１：配列番号２５１、ＣＤＲ２：配列番号２５２、ＣＤＲ３：配列番号２５３を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２５４、ＣＤＲ２：配列番号２５５、ＣＤＲ３：配列番号２５６を含む軽鎖可変領域、
（ｇ）ＣＤＲ１：配列番号２５７、ＣＤＲ２：配列番号２５８、ＣＤＲ３：配列番号２５９を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２６０、ＣＤＲ２：配列番号２６１、ＣＤＲ３：配列番号２６２を含む軽鎖可変領域、
（ｈ）ＣＤＲ１：配列番号２６３、ＣＤＲ２：配列番号２６４、ＣＤＲ３：配列番号２６５を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２６６、ＣＤＲ２：配列番号２６７、ＣＤＲ３：配列番号２６８を含む軽鎖可変領域、
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号２６９、ＣＤＲ２：配列番号２７０、ＣＤＲ３：配列番号２７１を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２７２、ＣＤＲ２：配列番号２７３、ＣＤＲ３：配列番号２７４を含む軽鎖可変領域、
（ｊ）ＣＤＲ１：配列番号２７５、ＣＤＲ２：配列番号２７６、ＣＤＲ３：配列番号２７７を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２７８、ＣＤＲ２：配列番号２７９、ＣＤＲ３：配列番号２８０を含む軽鎖可変領域、
（ｋ）ＣＤＲ１：配列番号２８１、ＣＤＲ２：配列番号２８２、ＣＤＲ３：配列番号２８３を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２８４、ＣＤＲ２：配列番号２８５、ＣＤＲ３：配列番号２８６を含む軽鎖可変領域、
（ｌ）ＣＤＲ１：配列番号２８７、ＣＤＲ２：配列番号２８８、ＣＤＲ３：配列番号２８９を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２９０、ＣＤＲ２：配列番号２９１、ＣＤＲ３：配列番号２９２を含む軽鎖可変領域、
（ｍ）ＣＤＲ１：配列番号２９３、ＣＤＲ２：配列番号２９４、ＣＤＲ３：配列番号２９５を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号２９６、ＣＤＲ２：配列番号２９７、ＣＤＲ３：配列番号２９８を含む軽鎖可変領域、
（ｎ）ＣＤＲ１：配列番号２９９、ＣＤＲ２：配列番号３００、ＣＤＲ３：配列番号３０１を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号３０２、ＣＤＲ２：配列番号３０３、ＣＤＲ３：配列番号３０４を含む軽鎖可変領域、
（ｏ）ＣＤＲ１：配列番号３１１、ＣＤＲ２：配列番号３１２、ＣＤＲ３：配列番号３１３を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号３１４、ＣＤＲ２：配列番号３１５、ＣＤＲ３：配列番号３１６を含む軽鎖可変領域、
（ｐ）ＣＤＲ１：配列番号３１７、ＣＤＲ２：配列番号３１８、ＣＤＲ３：配列番号３１９を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号３２０、ＣＤＲ２：配列番号３２１、ＣＤＲ３：配列番号３２２を含む軽鎖可変領域、または
（ｑ）ＣＤＲ１：配列番号３２３、ＣＤＲ２：配列番号３２４、ＣＤＲ３：配列番号３２５を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号３２６、ＣＤＲ２：配列番号３２７、ＣＤＲ３：配列番号３２８を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された完全にヒトの抗ヒトＣＬＤＮ１８．２。
【請求項2】
単離された抗ヒトＣＬＤＮ１８．２であって、抗体が、ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合せず、前記抗体が、（ａ）ＣＤＲ１：配列番号４７、ＣＤＲ２：配列番号４８、ＣＤＲ３：配列番号４９を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号５０、ＣＤＲ２：配列番号５１、ＣＤＲ３：配列番号５２を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）ＣＤＲ１：配列番号５３、ＣＤＲ２：配列番号５４、ＣＤＲ３：配列番号５５を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号５６、ＣＤＲ２：配列番号５７、ＣＤＲ３：配列番号５８を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）ＣＤＲ１：配列番号５９、ＣＤＲ２：配列番号６０、ＣＤＲ３：配列番号６１を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号６２、ＣＤＲ２：配列番号６３、ＣＤＲ３：配列番号６４を含む軽鎖可変領域、
（ｄ）ＣＤＲ１：配列番号６５、ＣＤＲ２：配列番号６６、ＣＤＲ３：配列番号６７を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号６８、ＣＤＲ２：配列番号６９、ＣＤＲ３：配列番号７０を含む軽鎖可変領域、
（ｅ）ＣＤＲ１：配列番号７１、ＣＤＲ２：配列番号７２、ＣＤＲ３：配列番号７３を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号７４、ＣＤＲ２：配列番号７５、ＣＤＲ３：配列番号７６を含む軽鎖可変領域、
（ｆ）ＣＤＲ１：配列番号７７、ＣＤＲ２：配列番号７８、ＣＤＲ３：配列番号７９を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号８０、ＣＤＲ２：配列番号８１、ＣＤＲ３：配列番号８２を含む軽鎖可変領域、
（ｇ）ＣＤＲ１：配列番号８３、ＣＤＲ２：配列番号８４、ＣＤＲ３：配列番号８５を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号８６、ＣＤＲ２：配列番号８７、ＣＤＲ３：配列番号８８を含む軽鎖可変領域、
（ｈ）ＣＤＲ１：配列番号８９、ＣＤＲ２：配列番号９０、ＣＤＲ３：配列番号９１を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号９２、ＣＤＲ２：配列番号９３、ＣＤＲ３：配列番号９４を含む軽鎖可変領域、
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号９５、ＣＤＲ２：配列番号９６、ＣＤＲ３：配列番号９７を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号９８、ＣＤＲ２：配列番号９９、ＣＤＲ３：配列番号１００を含む軽鎖可変領域、
（ｊ）ＣＤＲ１：配列番号１０１、ＣＤＲ２：配列番号１０２、ＣＤＲ３：配列番号１０３を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１０４、ＣＤＲ２：配列番号１０５、ＣＤＲ３：配列番号１０６を含む軽鎖可変領域、
（ｋ）ＣＤＲ１：配列番号１０７、ＣＤＲ２：配列番号１０８、ＣＤＲ３：配列番号１０９を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１１０、ＣＤＲ２：配列番号１１１、ＣＤＲ３：配列番号１１２を含む軽鎖可変領域、
（ｌ）ＣＤＲ１：配列番号１１３、ＣＤＲ２：配列番号１１４、ＣＤＲ３：配列番号１１５を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１１６、ＣＤＲ２：配列番号１１７、ＣＤＲ３：配列番号１１８を含む軽鎖可変領域、
（ｍ）ＣＤＲ１：配列番号１１９、ＣＤＲ２：配列番号１２０、ＣＤＲ３：配列番号１２１を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１２２、ＣＤＲ２：配列番号１２３、ＣＤＲ３：配列番号１２４を含む軽鎖可変領域、
（ｎ）ＣＤＲ１：配列番号１２５、ＣＤＲ２：配列番号１２６、ＣＤＲ３：配列番号１２７を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１２８、ＣＤＲ２：配列番号１２９、ＣＤＲ３：配列番号１３０を含む軽鎖可変領域、
（ｏ）ＣＤＲ１：配列番号１３１、ＣＤＲ２：配列番号１３２、ＣＤＲ３：配列番号１３３を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１３４、ＣＤＲ２：配列番号１３５、ＣＤＲ３：配列番号１３６を含む軽鎖可変領域、
（ｐ）ＣＤＲ１：配列番号１３７、ＣＤＲ２：配列番号１３８、ＣＤＲ３：配列番号１３９を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１４０、ＣＤＲ２：配列番号１４１、ＣＤＲ３：配列番号１４２を含む軽鎖可変領域、
（ｑ）ＣＤＲ１：配列番号１４３、ＣＤＲ２：配列番号１４４、ＣＤＲ３：配列番号１４５を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１４６、ＣＤＲ２：配列番号１４７、ＣＤＲ３：配列番号１４８を含む軽鎖可変領域、
（ｒ）ＣＤＲ１：配列番号１４９、ＣＤＲ２：配列番号１５０、ＣＤＲ３：配列番号１５１を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１５２、ＣＤＲ２：配列番号１５３、ＣＤＲ３：配列番号１５４を含む軽鎖可変領域、
（ｓ）ＣＤＲ１：配列番号１５５、ＣＤＲ２：配列番号１５６、ＣＤＲ３：配列番号１５７を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１５８、ＣＤＲ２：配列番号１５９、ＣＤＲ３：配列番号１６０を含む軽鎖可変領域、
（ｔ）ＣＤＲ１：配列番号１６１、ＣＤＲ２：配列番号１６２、ＣＤＲ３：配列番号１６３を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１６４、ＣＤＲ２：配列番号１６５、ＣＤＲ３：配列番号１６６を含む軽鎖可変領域、
（ｕ）ＣＤＲ１：配列番号１６７、ＣＤＲ２：配列番号１６８、ＣＤＲ３：配列番号１６９を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１７０、ＣＤＲ２：配列番号１７１、ＣＤＲ３：配列番号１７２を含む軽鎖可変領域、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号１７３、ＣＤＲ２：配列番号１７４、ＣＤＲ３：配列番号１７５を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１７６、ＣＤＲ２：配列番号１７７、ＣＤＲ３：配列番号１７８を含む軽鎖可変領域、または
（ｗ）ＣＤＲ１：配列番号１７９、ＣＤＲ２：配列番号１８０、ＣＤＲ３：配列番号１８１を含む重鎖可変領域、及びＣＤＲ１：配列番号１８２、ＣＤＲ２：配列番号１８３、ＣＤＲ３：配列番号１８４を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗ヒトＣＬＤＮ１８．２。
【請求項3】
単離された抗ヒトＣＬＤＮ１８．２であって、抗体が、ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合せず、前記抗体が、（ａ）配列番号１の重鎖可変領域配列及び配列番号２の軽鎖可変領域配列、
（ｂ）配列番号３の重鎖可変領域配列及び配列番号４の軽鎖可変領域配列、
（ｃ）配列番号５の重鎖可変領域配列及び配列番号６の軽鎖可変領域配列、
（ｄ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列、
（ｅ）配列番号９の重鎖可変領域配列及び配列番号１０の軽鎖可変領域配列、
（ｆ）配列番号１１の重鎖可変領域配列及び配列番号１２の軽鎖可変領域配列、
（ｇ）配列番号１３の重鎖可変領域配列及び配列番号１４の軽鎖可変領域配列、
（ｈ）配列番号１５の重鎖可変領域配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列、
（ｉ）配列番号１７の重鎖可変領域配列及び配列番号１８の軽鎖可変領域配列、
（ｊ）配列番号１９の重鎖可変領域配列及び配列番号２０の軽鎖可変領域配列、
（ｋ）配列番号２１の重鎖可変領域配列及び配列番号２２の軽鎖可変領域配列、
（ｌ）配列番号２３の重鎖可変領域配列及び配列番号２４の軽鎖可変領域配列、
（ｍ）配列番号２５の重鎖可変領域配列及び配列番号２６の軽鎖可変領域配列、
（ｎ）配列番号２７の重鎖可変領域配列及び配列番号２８の軽鎖可変領域配列、
（ｏ）配列番号２９の重鎖可変領域配列及び配列番号３０の軽鎖可変領域配列、
（ｐ）配列番号３１の重鎖可変領域配列及び配列番号３２の軽鎖可変領域配列、
（ｑ）配列番号３３の重鎖可変領域配列及び配列番号３４の軽鎖可変領域配列、
（ｒ）配列番号３５の重鎖可変領域配列及び配列番号３６の軽鎖可変領域配列、
（ｓ）配列番号３７の重鎖可変領域配列及び配列番号３８の軽鎖可変領域配列、
（ｔ）配列番号３９の重鎖可変領域配列及び配列番号４０の軽鎖可変領域配列、
（ｕ）配列番号４１の重鎖可変領域配列及び配列番号４２の軽鎖可変領域配列、
（ｖ）配列番号４３の重鎖可変領域配列及び配列番号４４の軽鎖可変領域配列、または
（ｗ）配列番号４５の重鎖可変領域配列及び配列番号４６の軽鎖可変領域配列を含む、前記単離された抗ヒトＣＬＤＮ１８．２。
【請求項4】
前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項３に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体。
【請求項5】
前記抗体が、キメラ抗体である、請求項３に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体。
【請求項6】
単離された完全にヒトの抗ヒトＣＬＤＮ１８．２であって、抗体が、ヒトＣＬＤＮ１８．１に結合せず、前記抗体が、（ａ）配列番号１８５の重鎖可変領域配列及び配列番号１８６の軽鎖可変領域配列、
（ｂ）配列番号１８７の重鎖可変領域配列及び配列番号１８８の軽鎖可変領域配列、
（ｃ）配列番号１８９の重鎖可変領域配列及び配列番号１９０の軽鎖可変領域配列、
（ｄ）配列番号１９１の重鎖可変領域配列及び配列番号１９２の軽鎖可変領域配列、
（ｅ）配列番号１９３の重鎖可変領域配列及び配列番号１９４の軽鎖可変領域配列、
（ｆ）配列番号１９５の重鎖可変領域配列及び配列番号１９６の軽鎖可変領域配列、
（ｇ）配列番号１９７の重鎖可変領域配列及び配列番号１９８の軽鎖可変領域配列、
（ｈ）配列番号１９９の重鎖可変領域配列及び配列番号２００の軽鎖可変領域配列、
（ｉ）配列番号２０１の重鎖可変領域配列及び配列番号２０２の軽鎖可変領域配列、
（ｊ）配列番号２０３の重鎖可変領域配列及び配列番号２０４の軽鎖可変領域配列、
（ｋ）配列番号２０５の重鎖可変領域配列及び配列番号２０６の軽鎖可変領域配列、
（ｌ）配列番号２０７の重鎖可変領域配列及び配列番号２０８の軽鎖可変領域配列、
（ｍ）配列番号２０９の重鎖可変領域配列及び配列番号２１０の軽鎖可変領域配列、
（ｎ）配列番号２１１の重鎖可変領域配列及び配列番号２１２の軽鎖可変領域配列、
（ｏ）配列番号２１５の重鎖可変領域配列及び配列番号２１６の軽鎖可変領域配列、
（ｐ）配列番号２１７の重鎖可変領域配列及び配列番号２１８の軽鎖可変領域配列、または
（ｑ）配列番号２１９の重鎖可変領域配列及び配列番号２２０の軽鎖可変領域配列を含む、前記単離された完全にヒトの抗ヒトＣＬＤＮ１８．２。
【請求項7】
（ａ）配列番号１の重鎖可変領域配列及び配列番号２の軽鎖可変領域配列と、（ｂ）配列番号３の重鎖可変領域配列及び配列番号４の軽鎖可変領域配列と、
（ｃ）配列番号２０１の重鎖可変領域配列及び配列番号２０２の軽鎖可変領域配列と、
（ｄ）配列番号２０３の重鎖可変領域配列及び配列番号２０４の軽鎖可変領域配列と、から選択されるＶＨ配列及びＶＬ配列を含む、単離されたＦｃ改変抗ヒトＣＬＤＮ１８．２であって、
抗体が、ＣＬＤＮ１８．１に結合せず、さらに、Ｆｃ改変抗体が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインと組み合わせて同一可変ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体のＡＤＣＣ活性と比較して増強された前記ＡＤＣＣ活性を特徴とする、前記単離されたＦｃ改変抗ヒトＣＬＤＮ１８．２。
【請求項8】
配列番号３３６であるアミノ酸配列を有する組換え重鎖及び配列番号３３７に示される配列を含む軽鎖を含む、単離されたＦｃ改変抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体。
【請求項9】
配列番号３３８であるアミノ酸配列を有する組換え重鎖及び配列番号３３７に示される配列を含む軽鎖を含む、単離されたＦｃ改変抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体。
【請求項10】
Ｆｃ改変抗体が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインと組み合わせて同一可変ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体のＡＤＣＣ活性と比較して、増強された前記ＡＤＣＣ活性を特徴とする、請求項６に記載の単離された抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本出願は、２０１９年２月１日に出願された米国仮特許出願第６２／８００，３５９号及び２０１９年８月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／８９１，９２５号の利益を主張する。上記出願の教示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１９年２月１日に出願された米国仮特許出願第６２／８００，３５９号及び２０１９年８月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／８９１，９２５号の利益を主張する。上記出願の教示全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本開示は、全般的には、クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）特異的抗体及びそれらの抗体フラグメントに関する。抗体は、上皮細胞に由来する原発性及び転移性のがんを含む、ＣＬＤＮ１８．２の異常発現と関連する疾患の免疫療法のために有用である。
【背景技術】
【0003】
肺限定的（ＣＬＤＮ１８．１）及び胃限定的（ＣＬＤＮ１８．２）発現をプロモーター依存性手段で示す異なるアイソフォームをコードする、２つの交互にスプライスされたヒトクローディン１８転写物変異体（Ｎｉｉｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２１：７３８０－９０，２００１）が、既に報告されている。スプライス変異体の主要なタンパク質配列は、Ｎ末端細胞内領域、第１の膜貫通領域（ＴＭＤ１）、及び細胞外ループ１（ＥＣＬ１）を含むＮ末端部分で異なる。ＣＬＤＮ１８．２は、１つの細胞系統に厳格な制限を有するヒトクローニングファミリーのいくつかのメンバーのうちの１つである（Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．）。より具体的には、短命化分化上皮細胞に限定されて胃腺の幹細胞ゾーンに存在しない発現パターンを有する高度に選択的な胃系統（例えば、胃細胞特異的）マーカーを提供する（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４（２３）７６２４－７６３４，２００８）。
【0004】
ＣＬＤＮ１８．２は、悪性形質転換に維持され、原発性腫瘍及びそれらの転移の著しい部分において発現される。Ｓａｈｉｎらはまた、ＣＬＤＮ１８．２が膵臓、胃、食道、肺、及び卵巣癌を含むいくつかの異なるタイプのがんでしばしば過剰発現されるが、ＣＬＤＮ１８．１はそうではないことを報告している。したがって、がんの文脈において、ＣＬＤＮ１８．２は、胃細胞系統に限定されるにとどまらない（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．）。考え合わせると、公表された報告の発見は、ＣＬＤＮ１８．２が、上皮細胞由来腫瘍と関連する疾患のがん免疫療法の開発において、診断ツール及び新薬開発につながる標的の両方を提供することを確立する。
【0005】
密着結合透過性は、しばしば正常細胞よりも腫瘍細胞において高く、腫瘍細胞におけるクローディンタンパク質が、インタクトな密着結合を有する正常組織におけるよりも到達可能であり得るという推測を導き出すことが報告されている。この潜在性は、クローディンタンパク質を治療的ながん介入における魅力的な標的にする。さらに、公開される発現プロファイリング結果は、ＣＬＤＮ１８．２を標的にするがん療法は、正常な代謝回転及び恒常性プロセスが２～７日毎に胃上皮細胞を補充するため、都合の良い全身毒性プロファイルを有することを示唆する（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．）。限定された持続期間の一時的な胃腸毒性は、一般的であり、がん療法における管理可能な有害事象である。
膵臓癌及び胃食道癌は、悪性腫瘍の中でも、最も高い未対応で医学的必要性を有する（Ｓａｈｉｎ，ｅｔ ａｌ．）。胃癌及び膵臓癌が著しいがん関連の罹患率及び死亡率に関与しているという事実にもかかわらず、治療選択肢は限定されている。そのため、上皮細胞由来の原発性及び転移性固形腫瘍と関連するがんの免疫療法における使用のために、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体及び結合剤が必要とされている。
膵臓癌及び胃食道癌は、悪性腫瘍の中でも、最も高い未対応で医学的必要性を有する（Ｓａｈｉｎ，ｅｔ ａｌ．）。胃癌及び膵臓癌が著しいがん関連の罹患率及び死亡率に関与しているという事実にもかかわらず、治療選択肢は限定されている。そのため、上皮細胞由来の原発性及び転移性固形腫瘍と関連するがんの免疫療法における使用のために、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体及び結合剤が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Ｎｉｉｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２１：７３８０－９０，２００１
【非特許文献2】Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４（２３）７６２４－７６３４，２００８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0007】
本開示は、ヒト密着結合分子ＣＬＤＮ１８アイソフォーム２（ＣＬＤＮ１８．２）に特異的に結合し、望ましい機能的特性を有する抗体及び抗体フラグメントを提供することによって、上記必要性に取り組む。抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメント、またはＣＬＤＮ１８．２もしくは抗体フラグメントを含む二重特異性分子もしくは融合タンパク質が、ＣＬＤＮ１８．２発現の下方調節と関連する疾患の抗体ベース療法のために使用され得る。例えば、抗体は、胃癌、膵臓癌、及び食道癌、肺癌、卵巣癌、結腸癌、ならびに肝臓癌などの、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞と関連する固形腫瘍がん疾患を治療するために使用され得る。
【0008】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化、もしくはヒト抗体、二重特異性もしくは多重特異性抗体の成分、または抗体の抗原結合部分であり得、ＣＬＤＮ１８．２の第１の細胞外ドメイン／ループに結合し、以下の特性：（ａ）ＣＬＤＮ１８．２に対する特異性（ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合するがＣＬＤＮ１８．１に結合しない）、（ｂ）ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞のＡＤＣＣ殺傷を媒介する能力、及び（ｃ）ＣＬＤＮ１８．２発現細胞でのＣＬＤＮ１８．２結合時の効率的内部移行、したがってＡＤＣ開発における好適性、のうちの１つ以上を示す。
【0009】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体またはそれらの抗体フラグメントは、ヒト腫瘍細胞によって天然に発現されるＣＬＤＮ１８．２（アイソフォーム２）に優先的に結合し、ＣＬＤＮ１８アイソフォーム１（ＣＬＤＮ１８．１）に結合しない。標的細胞の表面に発現されるＣＬＤＮ１８．２と結合する結果として、本開示の抗体は、アポトーシスの誘発、増殖の阻害、ＣＤＣ溶解、ＡＤＣＣ溶解、または細胞毒性剤の送達などの１つ以上の作用メカニズムによって、標的細胞殺傷を媒介することができる。一実施形態において、標的細胞は、原発性または転移性がん細胞である。
【0010】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、全長抗体である。
【0011】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、抗体フラグメントである。さらなる実施形態において、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びｓｃＦｖ－Ｆｃフラグメント、単鎖抗体、ミニボディ、ならびにダイアボディからなる群から選択される。
【0012】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、モノクローナル抗体である。
【0013】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、ネズミ抗体である。
【0014】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、ヒト化抗体である。
【0015】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、キメラ抗体である。
【0016】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、非改変（例えば、天然発生）Ｆｃフラグメント、または特定のＦＣ媒介性機能を最適化、もしくは代替的にそれを排除するように設計された改変Ｆｃフラグメントのいずれかを含む、二重特異性抗体である。
【0017】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号４７（ＨＣＤＲ１）と、配列番号４８（ＨＣＤＲ２）と、配列番号４９（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号５０（ＬＣＤＲ１）と、配列番号５１（ＬＣＤＲ２）と、配列番号５２（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0018】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号５３（ＨＣＤＲ１）と、配列番号５４（ＨＣＤＲ２）と、配列番号５５（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号５６（ＬＣＤＲ１）と、配列番号５７（ＬＣＤＲ２）と、配列番号５８（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0019】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号５９（ＨＣＤＲ１）と、配列番号６０（ＨＣＤＲ２）と、配列番号６１（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号６２（ＬＣＤＲ１）と、配列番号６３（ＬＣＤＲ２）と、配列番号６４（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0020】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号６５（ＨＣＤＲ１）と、配列番号６６（ＨＣＤＲ２）と、配列番号６７（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号６８（ＬＣＤＲ１）と、配列番号６９（ＬＣＤＲ２）と、配列番号７０（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0021】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号７１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号７２（ＨＣＤＲ２）と、配列番号７３（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号７４（ＬＣＤＲ１）と、配列番号７５（ＬＣＤＲ２）と、配列番号７６（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0022】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号７７（ＨＣＤＲ１）と、配列番号７８（ＨＣＤＲ２）と、配列番号７９（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号８０（ＬＣＤＲ１）と、配列番号８１（ＬＣＤＲ２）と、配列番号８２（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0023】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号８３（ＨＣＤＲ１）と、配列番号８４（ＨＣＤＲ２）と、配列番号８５（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号８６（ＬＣＤＲ１）と、配列番号８７（ＬＣＤＲ２）と、配列番号８８（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0024】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号８９（ＨＣＤＲ１）と、配列番号９０（ＨＣＤＲ２）と、配列番号９１（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号９２（ＬＣＤＲ１）と、配列番号９３（ＬＣＤＲ２）と、配列番号９４（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0025】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号９５（ＨＣＤＲ１）と、配列番号９６（ＨＣＤＲ２）と、配列番号９７（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号９８（ＬＣＤＲ１）と、配列番号９９（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１００（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0026】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１０１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１０２（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１０３（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１０４（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１０５（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１０６（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0027】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１０７（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１０８（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１０９（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１１０（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１１１（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１１２（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0028】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１１３（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１１４（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１１５（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１１６（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１１７（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１１８（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0029】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１１９（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１２０（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１２１（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１２２（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１２３（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１２４（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0030】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１２５（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１２６（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１２７（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１２８（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１２９（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１３０（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0031】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１３１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１３２（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１３３（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１３４（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１３５（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１３６（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0032】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１３７（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１３８（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１３９（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１４０（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１４１（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１４２（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0033】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１４３（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１４４（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１４５（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１４６（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１４７（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１４８（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0034】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１４９（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１５０（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１５１（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１５２（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１５３（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１５４（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0035】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１５５（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１５６（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１５７（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１５８（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１５９（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１６０（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0036】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１６１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１６２（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１６３（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１６４（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１６５（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１６６（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0037】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１６７（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１６８（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１６９（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１７０（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１７１（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１７２（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0038】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１７３（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１７４（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１７５（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１７６（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１７７（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１７８（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0039】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１７９（ＨＣＤＲ１）と、配列番号１８０（ＨＣＤＲ２）と、配列番号１８１（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号１８２（ＬＣＤＲ１）と、配列番号１８３（ＬＣＤＲ２）と、配列番号１８４（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0040】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２２１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２２２（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２２３（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２２４（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２２５（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２２６（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0041】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２２７（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２２８（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２２９（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２３０（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２３１（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２３２（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0042】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２３３（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２３４（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２３５（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２３６（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２３７（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２３８（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0043】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２３９（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２４０（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２４１（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２４２（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２４３（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２４４（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0044】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２４５（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２４６（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２４７（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２４８（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２４９（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２５０（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0045】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２５１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２５２（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２５３（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２５４（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２５５（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２５６（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0046】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２５７（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２５８（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２５９（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２６０（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２６１（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２６２（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0047】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２６３（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２６４（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２６５（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２６６（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２６７（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２６８（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0048】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２６９（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２７０（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２７１（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２７２（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２７３（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２７４（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0049】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２７５（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２７６（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２７７（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２７８（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２７９（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２８０（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0050】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２８１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２８２（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２８３（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２８４（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２８５（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２８６（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0051】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２８７（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２８８（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２８９（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２９０（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２９１（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２９２（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0052】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２９３（ＨＣＤＲ１）と、配列番号２９４（ＨＣＤＲ２）と、配列番号２９５（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号２９６（ＬＣＤＲ１）と、配列番号２９７（ＬＣＤＲ２）と、配列番号２９８（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0053】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２９９（ＨＣＤＲ１）と、配列番号３００（ＨＣＤＲ２）と、配列番号３０１（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号３０２（ＬＣＤＲ１）と、配列番号３０３（ＬＣＤＲ２）と、配列番号３０４（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0054】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号３１１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号３１２（ＨＣＤＲ２）と、配列番号３１３（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号３１４（ＬＣＤＲ１）と、配列番号３１５（ＬＣＤＲ２）と、配列番号３１６（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0055】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号３１７（ＨＣＤＲ１）と、配列番号３１８（ＨＣＤＲ２）と、配列番号３１９（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号３２０（ＬＣＤＲ１）と、配列番号３２１（ＬＣＤＲ２）と、配列番号３２２（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0056】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメントは、配列番号３２３（ＨＣＤＲ１）と、配列番号３２４（ＨＣＤＲ２）と、配列番号３２５（ＨＣＤＲ３）と、を有する重鎖可変領域、及び／または配列番号３２６（ＬＣＤＲ１）と、配列番号３２７（ＬＣＤＲ２）と、配列番号３２８（ＬＣＤＲ３）と、を有する軽鎖可変領域を含む。
【0057】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１５、２１７、及び２１９からなる群から選択される可変重鎖配列を含む。
【0058】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１６、２１８、及び２２０からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む。
【0059】
本発明はさらに、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体、あるいは可変重鎖及び可変軽鎖配列の特定の組み合わせもしくは対を含む抗体またはＣＬＤＮ１８．２結合フラグメントを含むそれらの結合フラグメントを提供する。
【0060】
実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体またはそれらの抗体フラグメントは、それぞれ配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、及び４６からなる群から選択される可変軽鎖配列と対形成される、それぞれ配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、及び４５からなる群から選択される可変重鎖配列を含む抗体もしくはそのＣＬＤＮ１８．２結合フラグメントを含む。
【0061】
実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体またはそれらの抗体フラグメントは、それぞれ配列番号１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１６、２１８、及び２２０からなる群から選択される可変軽鎖配列と対形成される、それぞれ配列番号１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１５、２１７、及び２１９からなる群から選択される可変重鎖配列を含む抗体もしくはそのＣＬＤＮ１８．２結合フラグメントを含む。
【0062】
実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体あるいはその結合フラグメントは、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列の組み合わせもしくは対を含む抗体またはＣＬＤＮ１８．２結合フラグメントを含む。代替の実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体あるいはその結合フラグメントは、本発明の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体のＶＨ及び／またはＶＬドメイン領域に由来するＣＤＲ配列の所定のセットもしくは組み合わせを含む抗体またはＣＬＤＮ１８．２結合フラグメントもしくは結合剤を含む。
【0063】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはその抗原結合フラグメントは、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列の特定の対を含み、以下の組み合わせから選択される。
（ａ）配列番号１を含む可変重鎖配列及び配列番号２を含む可変軽鎖配列、
（ｂ）配列番号３を含む可変重鎖配列及び配列番号４を含む可変軽鎖配列、
（ｃ）配列番号５を含む可変重鎖配列及び配列番号６を含む可変軽鎖配列、
（ｄ）配列番号７を含む可変重鎖配列及び配列番号８を含む可変軽鎖配列、
（ｅ）配列番号９を含む可変重鎖配列及び配列番号１０を含む可変軽鎖配列、
（ｆ）配列番号１１を含む可変重鎖配列及び配列番号１２を含む可変軽鎖配列、
（ｇ）配列番号１３を含む可変重鎖配列及び配列番号１４を含む可変軽鎖配列、
（ｈ）配列番号１５を含む可変重鎖配列及び配列番号１６を含む可変軽鎖配列、
（ｉ）配列番号１７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８を含む可変軽鎖配列、
（ｊ）配列番号１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２０を含む可変軽鎖配列、
（ｋ）配列番号２１を含む可変重鎖配列及び配列番号２２を含む可変軽鎖配列、
（ｌ）配列番号２３を含む可変重鎖配列及び配列番号２４を含む可変軽鎖配列、
（ｍ）配列番号２５を含む可変重鎖配列及び配列番号２６を含む可変軽鎖配列、
（ｎ）配列番号２７を含む可変重鎖配列及び配列番号２８を含む可変軽鎖配列、
（ｏ）配列番号２９を含む可変重鎖配列及び配列番号３０を含む可変軽鎖配列、
（ｐ）配列番号３１を含む可変重鎖配列及び配列番号３２を含む可変軽鎖配列、
（ｑ）配列番号３３を含む可変重鎖配列及び配列番号３４を含む可変軽鎖配列、
（ｒ）配列番号３５を含む可変重鎖配列及び配列番号３６を含む可変軽鎖配列、
（ｓ）配列番号３７を含む可変重鎖配列及び配列番号３８を含む可変軽鎖配列、
（ｔ）配列番号３９を含む可変重鎖配列及び配列番号４０を含む可変軽鎖配列、
（ｕ）配列番号４１を含む可変重鎖配列及び配列番号４２を含む可変軽鎖配列、
（ｖ）配列番号４３を含む可変重鎖配列及び配列番号４４を含む可変軽鎖配列、ならびに
（ｗ）配列番号４５を含む可変重鎖配列及び配列番号４６を含む可変軽鎖配列。
（ａ）配列番号１を含む可変重鎖配列及び配列番号２を含む可変軽鎖配列、
（ｂ）配列番号３を含む可変重鎖配列及び配列番号４を含む可変軽鎖配列、
（ｃ）配列番号５を含む可変重鎖配列及び配列番号６を含む可変軽鎖配列、
（ｄ）配列番号７を含む可変重鎖配列及び配列番号８を含む可変軽鎖配列、
（ｅ）配列番号９を含む可変重鎖配列及び配列番号１０を含む可変軽鎖配列、
（ｆ）配列番号１１を含む可変重鎖配列及び配列番号１２を含む可変軽鎖配列、
（ｇ）配列番号１３を含む可変重鎖配列及び配列番号１４を含む可変軽鎖配列、
（ｈ）配列番号１５を含む可変重鎖配列及び配列番号１６を含む可変軽鎖配列、
（ｉ）配列番号１７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８を含む可変軽鎖配列、
（ｊ）配列番号１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２０を含む可変軽鎖配列、
（ｋ）配列番号２１を含む可変重鎖配列及び配列番号２２を含む可変軽鎖配列、
（ｌ）配列番号２３を含む可変重鎖配列及び配列番号２４を含む可変軽鎖配列、
（ｍ）配列番号２５を含む可変重鎖配列及び配列番号２６を含む可変軽鎖配列、
（ｎ）配列番号２７を含む可変重鎖配列及び配列番号２８を含む可変軽鎖配列、
（ｏ）配列番号２９を含む可変重鎖配列及び配列番号３０を含む可変軽鎖配列、
（ｐ）配列番号３１を含む可変重鎖配列及び配列番号３２を含む可変軽鎖配列、
（ｑ）配列番号３３を含む可変重鎖配列及び配列番号３４を含む可変軽鎖配列、
（ｒ）配列番号３５を含む可変重鎖配列及び配列番号３６を含む可変軽鎖配列、
（ｓ）配列番号３７を含む可変重鎖配列及び配列番号３８を含む可変軽鎖配列、
（ｔ）配列番号３９を含む可変重鎖配列及び配列番号４０を含む可変軽鎖配列、
（ｕ）配列番号４１を含む可変重鎖配列及び配列番号４２を含む可変軽鎖配列、
（ｖ）配列番号４３を含む可変重鎖配列及び配列番号４４を含む可変軽鎖配列、ならびに
（ｗ）配列番号４５を含む可変重鎖配列及び配列番号４６を含む可変軽鎖配列。
【0064】
いくつかの実施形態において、提供される抗体は、完全にヒトの抗ＣＬＤＮ１８．２抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列の特定の対を含み、以下の組み合わせから選択される。
（ａａ）配列番号１８５を含む可変重鎖配列及び配列番号１８６を含む可変軽鎖配列、
（ｂｂ）配列番号１８７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８８を含む可変軽鎖配列、
（ｃｃ）配列番号１８９を含む可変重鎖配列及び配列番号１９０を含む可変軽鎖配列、
（ｄｄ）配列番号１９１を含む可変重鎖配列及び配列番号１９２を含む可変軽鎖配列、
（ｅｅ）配列番号１９３を含む可変重鎖配列及び配列番号１９４を含む可変軽鎖配列、
（ｆｆ）配列番号１９５を含む可変重鎖配列及び配列番号１９６を含む可変軽鎖配列、
（ｇｇ）配列番号１９７を含む可変重鎖配列及び配列番号１９８を含む可変軽鎖配列、
（ｈｈ）配列番号１９９を含む可変重鎖配列及び配列番号２００を含む可変軽鎖配列、
（ｉｉ）配列番号２０１を含む可変重鎖配列及び配列番号２０２を含む可変軽鎖配列、
（ｊｊ）配列番号２０３を含む可変重鎖配列及び配列番号２０４を含む可変軽鎖配列、
（ｋｋ）配列番号２０５を含む可変重鎖配列及び配列番号２０６を含む可変軽鎖配列、
（ｌｌ）配列番号２０７を含む可変重鎖配列及び配列番号２０８を含む可変軽鎖配列、
（ｍｍ）配列番号２０９を含む可変重鎖配列及び配列番号２１０を含む可変軽鎖配列、
（ｎｎ）配列番号２１１を含む可変重鎖配列及び配列番号２１２を含む可変軽鎖配列、
（ｏｏ）配列番号２１５を含む可変重鎖配列及び配列番号２１６を含む可変軽鎖配列、
（ｐｐ）配列番号２１７を含む可変重鎖配列及び配列番号２１８を含む可変軽鎖配列、ならびに
（ｑｑ）配列番号２１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２２０を含む可変軽鎖配列。
（ａａ）配列番号１８５を含む可変重鎖配列及び配列番号１８６を含む可変軽鎖配列、
（ｂｂ）配列番号１８７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８８を含む可変軽鎖配列、
（ｃｃ）配列番号１８９を含む可変重鎖配列及び配列番号１９０を含む可変軽鎖配列、
（ｄｄ）配列番号１９１を含む可変重鎖配列及び配列番号１９２を含む可変軽鎖配列、
（ｅｅ）配列番号１９３を含む可変重鎖配列及び配列番号１９４を含む可変軽鎖配列、
（ｆｆ）配列番号１９５を含む可変重鎖配列及び配列番号１９６を含む可変軽鎖配列、
（ｇｇ）配列番号１９７を含む可変重鎖配列及び配列番号１９８を含む可変軽鎖配列、
（ｈｈ）配列番号１９９を含む可変重鎖配列及び配列番号２００を含む可変軽鎖配列、
（ｉｉ）配列番号２０１を含む可変重鎖配列及び配列番号２０２を含む可変軽鎖配列、
（ｊｊ）配列番号２０３を含む可変重鎖配列及び配列番号２０４を含む可変軽鎖配列、
（ｋｋ）配列番号２０５を含む可変重鎖配列及び配列番号２０６を含む可変軽鎖配列、
（ｌｌ）配列番号２０７を含む可変重鎖配列及び配列番号２０８を含む可変軽鎖配列、
（ｍｍ）配列番号２０９を含む可変重鎖配列及び配列番号２１０を含む可変軽鎖配列、
（ｎｎ）配列番号２１１を含む可変重鎖配列及び配列番号２１２を含む可変軽鎖配列、
（ｏｏ）配列番号２１５を含む可変重鎖配列及び配列番号２１６を含む可変軽鎖配列、
（ｐｐ）配列番号２１７を含む可変重鎖配列及び配列番号２１８を含む可変軽鎖配列、ならびに
（ｑｑ）配列番号２１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２２０を含む可変軽鎖配列。
【0065】
当業者は、可変軽鎖及び可変重鎖が、独立して、本明細書に提供される抗体から選択され得るか、または混合及び適合され得ることをさらに理解するであろう。
【0066】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、及び４５からなる群から選択される可変重鎖配列、ならびに配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、及び４６からなる群から選択される可変軽鎖配列に由来するＣＤＲ配列の組み合わせを含む。
【0067】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１５、２１７、及び２１９からなる群から選択される可変重鎖配列、ならびに配列番号１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１６、２１８及び２２０からなる群から選択される可変軽鎖配列に由来するＣＤＲ配列の組み合わせを含む。
【0068】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８抗体及びそれらの抗体フラグメントは、表１に開示される１つ以上の重鎖可変領域ＣＤＲ及び／または表３に開示される１つ以上の軽鎖可変領域ＣＤＲを含む。
【0069】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８抗体及びそれらの抗体フラグメントは、表２に開示される１つ以上の重鎖可変領域ＣＤＲ及び／または表４に開示される１つ以上の軽鎖可変領域ＣＤＲを含む。
【0070】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体または抗体フラグメントは、６つのＣＤＲを含む組換え抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、または二重特異性抗体）であり、ＣＤＲは全てが本明細書に開示される単一の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体のＶＨまたはＶＬドメインに由来する。例えば、結合剤は、Ｈｕ－１と称される抗ＣＬＤＮ１８．２抗体における６つ全てのＣＤＲ領域を含み得る。この場合において、抗体または結合剤は、Ｈｕ－１抗体のそれぞれ可変重鎖領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびに可変軽鎖領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を示す配列番号２２１～２２３ならびに配列番号２２４～２２６のアミノ酸配列を含む。
【0071】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、ＣＬＤＮ１８．２の第１の細胞外ドメイン／ループに結合して、ヒト腫瘍細胞によって天然に発現されるＣＬＤＮ１８アイソフォーム２に優先的に結合することと、ＣＬＤＮ１８アイソフォーム１（ＣＬＤＮ１８．１）に結合しないことと、結合後にＣＬＤＮ１８．２陽性細胞の表面から効率的に内部移行されることと、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）媒介性溶解、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、または細胞依存性食作用（ＡＤＰＣ）を誘発することによってＣＬＤＮ１８．２陽性細胞の殺傷を指向させることができることと、のうちの１つ以上を示す。
【0072】
本開示はまた、上皮細胞由来の原発性または転移性がんの治療のための方法も提供し、この方法は、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的結合剤を含む二重特異性抗体、またはその抗体フラグメントを含む組成物もしくは製剤、及び任意選択的に別の免疫ベース療法を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、がんは、固形腫瘍、胃癌、食道癌、食道胃接合部の癌、膵臓癌、胆管癌、肺癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、胆嚢癌から選択される。いくつかの場合において、他の免疫ベース療法は、チェックポイント阻害剤である。
【0073】
本開示の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体はまた、二重特異性Ｔ細胞結合抗体、もしくはＮＫ細胞に向け直す二重特異性分子を含む、患者のエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を腫瘍に向けるＣＬＤＮ１８．２特異的結合に依存する抗体ベース免疫療法、またはＣＡＲ－Ｔ療法などの細胞療法を開発するため、あるいはＣＬＤＮ１８．２陽性固形腫瘍への毒性ペイロード（例えば、コンジュゲート化細胞傷害性薬剤）の送達のために、使用することができる。
【0074】
本開示の抗ＣＬＤＮ１８．２はまた、胃癌、食道癌、食道胃接合部の癌、膵臓癌、胆管癌、肺癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、胆嚢癌の診断のために使用することができる。
【0075】
上記の概要、ならびに本開示の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読み取ると、よりよく理解されるであろう。本開示を例示する目的で、図に示されるのは、現在好ましい実施形態である。しかしながら、本開示は、示される正確な配置、実施例、及び手段に限定されないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【0076】
【図1-1】ネズミ抗ＣＬＤＮ１８．２抗体のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列、ならびにそれらそれぞれのＣＤＲ配列を提供する。配列識別子が提供され、ＣＤＲは可変ドメイン配列に下線されている。
【図1-2】同上。
【図1-3】同上。
【図1-4】同上。
【図1-5】同上。
【図1-6】同上。
【図1-7】同上。
【図1-8】同上。
【図2-1】ヒト抗ＣＬＤＮ１８．２抗体のＶＨ及びＶＬドメインのアミノ酸配列、ならびにそれらそれぞれのＣＤＲ配列を提供する。配列識別子が提供され、ＣＤＲには可変ドメイン配列において下線が引かれている。
【図2-2】同上。
【図2-3】同上。
【図2-4】同上。
【図2-5】同上。
【図2-6】同上。
【図3A】マウス抗クローディン１８．２抗体のＣＨＯ－クローディン１８．２細胞との結合を示す。ネズミ抗クローディン１８．２抗体の結合強度カウントを示す。
【図3B】マウス抗クローディン１８．２抗体のＣＨＯ－クローディン１８．２細胞との結合を示す。ネズミ抗クローディン１８．２抗体Ｍｓ－１、Ｍｓ－２、及びＭｓ－３のＣＨＯ－クローディン１８．２細胞との結合曲線を示す。
【図3C】マウス抗クローディン１８．２抗体のＣＨＯ－クローディン１８．２細胞との結合を示す。クローディン１８．２抗体Ｍｓ－４及びＨｕ－３のＣＨＯ－クローディン１８．２細胞との結合を示すが、ＣＨＯ－クローディン１８．１とは結合しない。
【図4】ヒト抗クローディン１８．２抗体の、ＣＨＯ－クローディン１８．２細胞及びＣＨＯ－クローディン１８．１細胞との結合を示すグラフである。Ａは、ヒト抗クローディン１８．２抗体の結合を示す。Ｂは、ヒト抗クローディン１８．２抗体Ｈｕ－２、Ｈｕ－９、及びＨｕ－１０のＣＨＯ－クローディン１８．２細胞との結合曲線を示す。
【図5】ＣＨＯ－クローディン１８．２ならびに腫瘍細胞株ＰＡＴＵ８９８８Ｓ及びＮＵＧＣ－４における表面クローディン１８．２発現レベルの比較を示す棒グラフである。
【図6】抗クローディン１８．２抗体の腫瘍細胞株ＰＡＴＵ８９８８Ｓとの結合を示す棒グラフである。Ａは、ネズミ抗クローディン１８．２抗体の結合強度カウントを示す。Ｂは、ヒト抗クローディン１８．２抗体の結合を示す。
【図7】ヒト抗クローディン１８．２抗体の腫瘍細胞株ＮＵＧＣ－４との結合を示す棒グラフである。
【図8】ヒト抗クローディン１８．２抗体の腫瘍細胞株ＫａｔｏＩＩＩとの結合を示す棒グラフである。
【図9】Ｈｕ－２、Ｈｕ－７、及びＨｕ－９媒介性抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を示す。
【図10】抗クローディン１８．２抗体Ｈｕ－２、Ｈｕ－７、Ｈｕ－９、及びＨｕ－１１によって誘導される抗体媒介性エンドサイトーシスを示す。
【図11A】本開示の抗ＣＬＤＮ１８．２ＶＨ及びＶＬドメイン及び／またはＣＤＲ配列と組み合わせて使用するために好適である４つのヒト免疫グロブリンＩｇＧ１ ＣＨドメイン（図１１Ａ）ならびにヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖ＣＬドメイン（図１１Ｂ）のアミノ酸配列を提供する。配列識別子が提供される。
【図11B】本開示の抗ＣＬＤＮ１８．２ＶＨ及びＶＬドメイン及び／またはＣＤＲ配列と組み合わせて使用するために好適である４つのヒト免疫グロブリンＩｇＧ１ ＣＨドメイン（図１１Ａ）ならびにヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖ＣＬドメイン（図１１Ｂ）のアミノ酸配列を提供する。配列識別子が提供される。
【図12】配列番号３３６または配列番号３３８に提供されるアミノ酸配列を含む２つの代表的な全長抗ＣＬＤＮ１８．２抗体）組換え重鎖のアミノ酸配列を提供し、これらのいずれかは、配列番号３３７に提供されるアミノ酸配列を有する組換えκ軽鎖と対形成して、全長ヒトＩｇＧ１抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を提供することができる。
【図13】Ｆｃ改変クローディン１８．２抗体ＮＢＬ－０１４Ｐ及びＮＢＬ－０１４Ｇは、Ｐｒｏｍｅｇａ代用エフェクター細胞（図１３Ａ）またはＣＤ１６Ａを過剰発現するＮＫ９２ＭＩ細胞（図１３Ｂ）を使用して、ヒトクローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ細胞に対する増強されたＡＤＣＣを誘発することを示す。
【図15】Ｆｃ改変抗クローディン１８．２抗体ＮＢＬ－０１４Ｐ及びＮＢＬ－０１４Ｇは、ヒトクローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ細胞に対して、ＰＣ１のＣＤＣ活性と比較して増強されたＣＤＣを誘導することを示す。
【図16】Ｆｃ改変抗クローディン１８．２抗体ＮＢＬ－０１４Ｐ及びＮＢＬ－０１４Ｇは、ＰＡＴＵ８９８８Ｓ細胞に対して、ＰＣ１のＣＤＣ活性と比較して増強されたＣＤＣ活性を誘発することを示す。
【図18】ヒトクローディン１８．２を過剰発現する皮下ＰＡＴＵ８９８８Ｓモデルにおける抗クローディン１８．２抗体ＮＢＬ－０１４及びＰＣ１の抗腫瘍効能を、時間経過における腫瘍体積の変化（図１８Ａ）及び３４日目の腫瘍重量（図１８Ｂ）の決定に基づいて示す。
【図19】皮下ＮＵＧＣ－４モデルにおける抗クローディン１８．２抗体ＮＢＬ－０１４及びＰＣ１の抗腫瘍有効性を、時間経過による腫瘍体積の変化に基づいて示すグラフである。
【図20】ヒトＰＢＭＣ移植したＮＯＧｄＫＯマウスに埋め込まれた皮下ＮＵＧＣ－４モデルにおける抗クローディン１８．２抗体ＮＢＬ－０１４Ｐの抗腫瘍有効性を、時間経過による腫瘍体積の変化（図２０Ａ）及び２８日目の腫瘍重量（図２０Ｂ）の決定に基づいて示す。
【図21】ヒトクローディン１８アイソフォーム２（クローディン１８．２）（配列番号３２９）及びヒトクローディン１８アイソフォーム１（クローディン１８．１）（配列番号３３０）のアミノ酸配列を提供する。
【発明を実施するための形態】
【0077】
本開示は、全般的には、クローディン１８．２（ＣＬＤＮ１８．２）特異的抗体及びそれらの抗体フラグメントに関する。抗ＣＬＤＮ１８．２抗体もしくはそれらの抗体フラグメント、あるいは開示される抗ＣＬＤＮ１８．２抗体のＣＤＲもしくはＶＨ及びＶＬ配列を含む、二重特異性分子、または融合タンパク質は、ＣＬＤＮ１８．２発現の調節不全に関連する疾患の抗体ベース療法のために使用され得る。より具体的には、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、胃癌、膵臓癌、及び食道癌、肺癌、卵巣癌、結腸癌、ならびに肝臓癌を含む、上皮細胞由来の原発性及び転移性がんの免疫療法のために使用することができる。
【0078】
本発明は、ある特定の技術用語及び科学用語が以下に具体的に定義されることによって、より容易に理解され得る。本文書の他の箇所で特に定義されない限り、本明細書で使用される他の全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解される意味を有する。
【0079】
本開示を通して、以下の略語が使用される。
ＡＤＣ－抗体薬物コンジュゲート。
ＡＤＣＣ－抗体依存性細胞性細胞傷害。
ＣＤＣ－補体依存性細胞傷害。
ＣＤＲ－免疫グロブリン可変領域における相補性決定領域。
ＥＣＤ－細胞外ドメイン。
ＦＲ－抗体フレームワーク領域、ＣＤＲ領域を除く免疫グロブリン可変領域。
ＥＣ５０－最大半量の結合をもたらす抗体の濃度、またはその最大応答の５０％を生じる抗体の効果的な濃度。
ＩＣ５０－５０％阻害をもたらす濃度。
ｍＡｂまたはＭａｂもしくはＭＡｂ－モノクローナル抗体
ＶＨまたはＶＨ－免疫グロブリン重鎖可変領域。
ＶＬまたはＶＬ－免疫グロブリン軽鎖可変領域。
ｅＡＤＣＣ－増強された抗体依存性細胞性細胞傷害。
ＡＤＣＰ－抗体依存性細胞食作用。
Ｆｃ－結晶化可能な領域のフラグメント。
ＦｃＲｎ－新生児のＦｃ受容体。
ＡＤＣ－抗体薬物コンジュゲート。
ＡＤＣＣ－抗体依存性細胞性細胞傷害。
ＣＤＣ－補体依存性細胞傷害。
ＣＤＲ－免疫グロブリン可変領域における相補性決定領域。
ＥＣＤ－細胞外ドメイン。
ＦＲ－抗体フレームワーク領域、ＣＤＲ領域を除く免疫グロブリン可変領域。
ＥＣ５０－最大半量の結合をもたらす抗体の濃度、またはその最大応答の５０％を生じる抗体の効果的な濃度。
ＩＣ５０－５０％阻害をもたらす濃度。
ｍＡｂまたはＭａｂもしくはＭＡｂ－モノクローナル抗体
ＶＨまたはＶＨ－免疫グロブリン重鎖可変領域。
ＶＬまたはＶＬ－免疫グロブリン軽鎖可変領域。
ｅＡＤＣＣ－増強された抗体依存性細胞性細胞傷害。
ＡＤＣＰ－抗体依存性細胞食作用。
Ｆｃ－結晶化可能な領域のフラグメント。
ＦｃＲｎ－新生児のＦｃ受容体。
【0080】
本明細書で使用される場合、「ＣＬＤＮ」という用語は、クローディンを意味し、ＣＬＤＮ１８．２及びＣＬＤＮ１８．１を含む。好ましくは、クローディンは、ヒトクローディンである。
【0081】
本明細書で使用される場合、「クローディン１８アイソフォーム２」（ＣＬＤＮ１８．２と互換的に使用される）という用語は、Ｐ５６８５６－２、アイソフォーム（スプライス変異体２）として識別されるＵｎｉ－Ｐｒｏｔ登録Ｐ５６８５６（ＣＬＤ１８＿ヒト）に提供されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるペプチドを指し、通常もしくは形質転換されたがん細胞の表面に存在するか、またはＣＬＤＮ１８．２遺伝子によってトランスフェクトされた細胞で発現される翻訳後改変された変異体及び種ホモログを含む。クローディン１８．２は、好ましくは、配列番号３２９によるアミノ酸配列を有する。
【0082】
本明細書で使用される場合、「クローディン１８アイソフォーム１」（ＣＬＤＮ１８．１と互換的に使用される）という用語は、Ｐ５６８５６－１、アイソフォーム（スプライス変異体１）として識別されるＵｎｉ－Ｐｒｏｔ登録Ｐ５６８５６（ＣＬＤ１８＿ヒト）に提供されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるペプチドを指し、通常もしくは形質転換されたがん細胞の表面に存在するか、またはＣＬＤＮ１８．１遺伝子によってトランスフェクトされた細胞で発現される翻訳後改変された変異体及び種ホモログを含む。クローディン１８．１は、好ましくは、配列番号３３０によるアミノ酸配列を有する。
【0083】
本明細書で使用される「細胞外ドメイン」または「細胞外部分」という用語は、細胞の細胞外空間に面し、好ましくは、当該細胞の外側から、例えば、細胞の外側に配置される抗体などの抗原結合分子によって到達可能である、タンパク質などの分子の一部を指す。好ましくは、本用語は、１つ以上の細胞外ループもしくはドメインまたはそれらのフラグメントを指す。
【0084】
本明細書で使用される場合、「ＣＬＤＮ１８関連疾患または障害」という用語は、ＣＬＤＮ１８．２の変化したレベルもしくは活性、または到達可能性が認められる、疾患状態及び／または疾患状態に関連する症状を含む。例示的なＣＬＤＮ１８．２関連疾患または障害には、膵臓癌及び胃食道癌などのＣＬＤＮ１８．２を発現する上皮性腫瘍に関連するがん疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【0085】
本明細書において「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、様々な抗体構造を包含し、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）が含まれるが、これらに限定されない。
【0086】
ＩｇＧなどの例示的な抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨとして本明細書で略される）及び重鎖定常領域から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬとして本明細書で略される）及び軽鎖定常領域から構成される。ＶＨ及びＶＬ領域はさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に細分化され、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存される領域に点在される。各ＶＨ及びＶＬは３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配列される。
【0087】
抗体の「クラス」または「アイソタイプ」は、重鎖によって有される定常ドメインまたは定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に分けられる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【0088】
本明細書で使用される場合、「ＩｇＧ」という用語は、４つのサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に属する抗体を含むヒト免疫グロブリンのアイソタイプを指す。
【0089】
超可変領域は、一般的に、軽鎖可変領域におけるアミノ酸残基約２４～３４（ＬＣＤＲ１、「Ｌ」は軽鎖を示す）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変領域における約３１～３５（ＨＣＤＲ１、「Ｈ」は重鎖を示す）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）、及び／または軽鎖可変領域における超可変ループ（例えば、残基２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）、及び９１～９６（ＬＣＤＲ３）、ならびに重鎖可変領域における２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５３～５５（ＨＣＤＲ２）、及び９６～１０１（ＨＣＤＲ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７からのアミノ酸残基を包含する。
【0090】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／または同じエピトープに結合するが、ただし、例えば、天然に発生する変異を含むか、またはモノクローナル抗体調製物の産生の際に生じる可能性のある変異体抗体が除外され、かかる変異体は一般的に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一決定基に対して指向される。したがって、修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特徴を指し示し、任意の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、様々な技法によって作成され得、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する遺伝子導入した動物を利用する方法が含まれるが、これらに限定されず、モノクローナル抗体を作成するためのかかる方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載される。
【0091】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の供給源もしくは種に由来する一方で、重鎖及び／または軽鎖の残分が異なる供給源または種に由来する組換え抗体を指す。
【0092】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体であり、及び／または当業者に知られているヒト抗体を作成するための技法のうちのいずれかを使用して作成されている抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特定的に除外する。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して作成することができ、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４７（Ｉ）：８６－９５（１９９１）に記載される方法が含まれる。また、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，５：３６８－７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原負荷に応答してかかる抗体を産生するように改変されているが、その内因性対立遺伝子が無効化されている遺伝子導入動物、例えば、免疫化ＨｕＭａｂマウス（例えば、ＨｕＭａｂマウスに関して、Ｎｉｌｓ Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９、ＷＯ９８／２４８８４、ＷＯ９４／２５５８５、ＷＯ９３／１２２７、ＷＯ９２／２２６４５、ＷＯ９２／０３９１８、及びＷＯ０１／０９１８７を参照のこと）、ゼノマウス（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関して、米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号を参照のこと）、またはＴｒｉａｎｎｉマウス（例えば、Ｔｒｉａｎｎｉマウスに関して、ＷＯ２０１３／０６３３９１、ＷＯ２０１７／０３５２５２、及びＷＯ２０１７／１３６７３４を参照のこと）に抗原を投与することによって作成することができる。
【0093】
「ヒト化抗体」という用語は、重鎖及び／または軽鎖の非ヒト（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）相補性決定領域（ＣＤＲ）と共に、可変領域における１つ以上のヒトフレームワーク領域を含むように操作されている抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域を除いて、完全にヒトである配列を含む。ヒト化抗体は、典型的には、ヒト化されていない抗体と比較して、ヒトに対する免疫原性が低く、したがって、ある特定の状況において治療的利益を提供する。当業者は、ヒト化抗体を認識し、それらの生成に好適な技法も認識するであろう。例えば、Ｈｗａｎｇ，Ｗ．Ｙ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：３５，２００５、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：１００２９－１００３３，１９８９、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－２５，１９８６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－２７，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－３６，１９８８、Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：３８３３－３７，１９８９、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、第６，１８０，３７０号、及びＳｅｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ９０／０７８６１を参照し、それらの各々は、参照により本明細書にその全体が組み込まれる。
【0094】
「多重特異性抗体」という用語は、最も広義に使用され、具体的には、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体を網羅し、ＶＨ－ＶＬ単位は、ポリエピトープ特異性を有する（すなわち、１つの生物学的分子上の２つの異なるエピトープ、または異なる生物学的分子上の各エピトープに結合することができる）。かかる多重特異性抗体には、全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、二重特異性ダイアボディ、及びトリアボディが含まれるが、これらに限定されない。「多重エピトープ特異性」は、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。
【0095】
「二特異性」または「二重特異性」は、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つの異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。しかしながら、二重特異性抗体とは対照的に、二特異性抗体はアミノ酸配列が同一である２つの抗原結合アームを有し、各Ｆａｂアームは２つの抗原を認識することができる。二特異性によって、抗体は、単一のＦａｂまたはＩｇＧ分子として２つの異なる抗原と高親和性で相互作用することができる。一実施形態によれば、ＩｇＧ１形態における多重特異性抗体は、各エピトープに、５μＭ～０．００１ｐＭ、３μＭ～０．００１ｐＭ、１μＭ～０．００１ｐＭ、０．５μＭ～０．００１ｐＭ、または０．１μＭ～０．００１ｐＭの親和性で結合する。「単一特異性」は、１つのエピトープのみに結合する能力を指す。多重特異性抗体は、完全な免疫グロブリン分子と類似の構造を有し得、Ｆｃ領域、例えば、ＩｇＧ Ｆｃ領域を含む。かかる構造は、ＩｇＧ－Ｆｖ、ＩｇＧ－（ｓｃＦｖ）２、ＤＶＤ－Ｉｇ、（ｓｃＦｖ）２－（ｓｃＦｖ）２－Ｆｃ、及び（ｓｃＦｖ）２－Ｆｃ－（ｓｃＦｖ）２を含むことができるが、これらに限定されない。ＩｇＧ－（ｓｃＦｖ）２の場合、ｓｃＦｖは、重鎖または軽鎖のいずれかのＮ末端もしくはＣ末端のいずれかに結合することができる。
【0096】
本明細書で使用される場合、「二重特異性抗体」という用語は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体、多くはヒトまたはヒト化抗体を指す。本発明において、結合特異性の１つは、ＣＬＤＮ１８．２に向けることができ、他は、任意の他の抗原、例えば、細胞表面タンパク質、受容体、受容体サブユニット、組織特異的抗原、ウイルス由来タンパク質、ウイルスによってコードされるエンベロープタンパク質、細菌に由来するタンパク質、または細菌性表面タンパク質などのためのものであることができる。
【0097】
本明細書で使用される場合、「ダイアボディ」という用語は、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体を指し、各ポリペプチド鎖は、同じペプチド鎖上のＶＨ及びＶＬドメインの分子内会合を可能にするのに十分短いリンカー（例えば、５つのアミノ酸からなるリンカー）によって連結されたＶＨ及びＶＬドメインを含む。この構成は、各ドメインを別のポリペプチド鎖上の相補性ドメインと対形成させ、ホモ二量体構造を形成させる。したがって、「トリアボディ」という用語は、３つのペプチド鎖を含む三価抗体を指し、それらの各々は、同じペプチド鎖内のＶＨ及びＶＬドメインの分子内会合を可能にする極めて短いリンカー（例えば、１～２個のアミノ酸からなるリンカー）によって結合された１つのＶＨドメイン及び１つのＶＬドメインを含有する。
【0098】
「抗体フラグメント」という用語は、インタクト抗体が結合する抗原に結合するインタクト抗体の一部を含む、インタクト抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）２、ダイアボディ、直鎖抗体、単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）が含まれるが、これらに限定されない。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント、及び容易に結晶化する能力を反映した命名である残分の「Ｆｃ」フラグメントを生じる。Ｆａｂフラグメントは、重（Ｈ）鎖（ＶＨ）の可変領域ドメインを伴う全軽（Ｌ）鎖（ＶＬ）、及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。抗体のペプシン処理は、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合したＦａｂフラグメントに概ね対応し、依然として抗原に架橋することができる単一の大きなＦ（ａｂ）２フラグメントを生じる。Ｆａｂフラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に追加の数残基を有することによって、Ｆ（ａｂ）２フラグメントと異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、本来、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として作成された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。
【0099】
抗体の「抗原結合ドメイン」または「抗原結合部分」（またはより単純に「結合ドメイン」または「結合部分」）という用語または類似の用語は、抗原複合体に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体の「抗原結合部分」という用語内に包含される結合フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨドメインからなる一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）、（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｖｉｉ）合成リンカーによって任意選択的に結合され得る２つ以上の単離されたＣＤＲの組み合わせ、が含まれる。
【0100】
「Ｆｖ」は、強固な非共有結合性会合における１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインのフォールディングから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与して、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ及びＬ鎖から各々３つのループ）が生じる。
【0101】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをさらに含む。ＳＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。
【0102】
本明細書で使用される「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、特異的抗原認識を媒介することを主に担う、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内の短いポリペプチド配列を指す。各ＶＬ及び各ＶＨ内に３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と称される）がある。
【0103】
当業者に理解されるように、ＣＤＲの正確な番号付け及び配置は、異なる番号付けシステム間で異なり得る。しかしながら、可変重配列及び／または可変軽配列の開示は、関連するＣＤＲの開示を含むことを理解されたい。したがって、各可変重領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各可変軽領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）の開示である。
【0104】
ある特定の実施形態において、抗体のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７：１３２－１３６及びＬｅｆｒａｎｃ Ｍ－Ｐ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２７：２０９－２１２に記載されるＩＭＧＴ番号付けシステムに従って決定することができ、それらの各々はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に別段の記載がない限り、抗体の可変ドメインにおける残基番号への言及は、ＩＭＧＴ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。
【0105】
他の実施形態において、抗体のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭ ｅｔ ａｌ，（１９９６）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２：７３２－７４５に従って決定することができ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。例えば、Ｍａｒｔｉｎ Ａ．”Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ，” ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｉｉｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ３１，ｐｐ．４２２－４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）を参考にし、その全体が本明細書に参照として組み込まれる。他の実施形態において、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協を表す、ＡｂＭ超可変領域を指すＡｂＭ番号付けスキームに従って決定することができ、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0106】
「フレームワーク」または「フレームワーク領域」もしくは「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。
【0107】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に発生するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｍｄ．（１９９１），ｖｏｌｓ．１－３におけるようなサブグループである。一実施形態において、ＶＬについて、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．同上におけるようなサブグループカッパＩである。一実施形態において、ＶＨについて、サブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．同上におけるようなサブグループＩＩＩである。
【0108】
「ヒンジ領域」は、一般に、ヒトＩｇＧ１の２１６～２３８（ＥＵ番号付け）または２２６～２５１（Ｋａｂａｔ番号付け）から延伸するものとして定義される。ヒンジは、さらに、上部、中部（例えば、コア）、及び下部ヒンジの３つの異なる領域に分割することができる。
【0109】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有し、免疫系の細胞の表面に存在する内因性受容体及び補体系のいくつかのタンパク質と相互作用する、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。本用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６からか、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に伸長する。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても存在しなくてもよい。本明細書で別途特定されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に記載されるＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【0110】
「単離された抗体」という用語は、本明細書に開示される様々な抗体を記載するために使用される場合、それが発現された細胞または細胞培養物から同定され、分離され、及び／または回収されている抗体を意味する。その天然環境の混入成分は、典型的には、ポリペプチドにおける診断的または治療的使用を妨げる物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）法によって決定されるとき、９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。好ましい実施形態において、抗体は、（１）スピニングカップシーケネータの使用によって、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（２）クーマシーブルー、好ましくは銀染色を使用した非還元または還元条件下で、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる均一性まで、精製される。単離された抗体には、ポリペプチド天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないことによって、組換え細胞内の原位置での抗体が含まれる。
【0111】
「エピトープ」は、抗体とその抗原（複数可）との間の相互作用の１つの部位または複数の部位を示す技術用語である。（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ，Ｊｒ．，Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．（２００１）．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｐａｒｔ ＩＩ，Ｓｅｃｔｉｏｎ３－８．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．）によって記載されるように、「抗体は、一般に、タンパク質などの大きな分子の表面上の小さな領域のみを認識し・・・［ある特定のエピトープ］は、タンパク質フォールディングによってまとめられている［抗原］ポリペプチド鎖の異なる部分からのアミノ酸から構成される可能性が高い。認識される構造は、抗原のアミノ酸配列において不連続であるが、三次元構造ではまとめられるタンパク質のセグメントから構成されるため、この種の抗原決定基は、立体構造的または不連続的エピトープとして知られている。対照的に、ポリペプチド鎖の単一のセグメントから構成されるエピトープは、連続的または直線的なエピトープと称される（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｊｒ．，Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．（２００１）．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｐａｒｔ ＩＩ，Ｓｅｃｔｉｏｎ３－８．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．）。
【0112】
参照抗体と「同一のエピトープに結合する抗体」とは、参照抗体と比較して抗原のアミノ酸残基の重なる配置で接触するか、または競合アッセイにおいて参照抗体のその抗原への結合を５０％以上ブロックする抗体を指す。抗原に接触する抗体のアミノ酸残基は、例えば、抗原との複合体における抗体の結晶構造を決定することによって、または水素／重水素交換を行うことによって、決定することができる。いくつかの実施形態において、抗原が５Å以内にある抗体の残基は、抗原と接触すると見なされる。いくつかの実施形態において、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体は、競合アッセイにおいて参照抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する。
【0113】
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原の生物活性を阻害もしくは低減するものである。ある特定の遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的に、または完全に阻害する。
【0114】
標的分子への抗体の結合に関して、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープに、「特異的に結合している」もしくは「特異的に結合する」または「特異的である」という用語は、非特異的相互作用と測定可能で異なる結合を意味する。例えば、本明細書で使用される場合、「特異的に結合している」、「特異的に結合する」、及び「選択的に結合する」という用語は、結合が非特異的相互作用と測定可能で異なる、ヒトＣＬＤＮ１８．２のエピトープに結合する抗体を指す。特異的結合は、例えば、対照分子の結合と比較して分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的、例えば、過剰の非標識標的に類似する対照分子との競合によって決定することができる。この場合、特異的結合は、標識された標的のプローブとの結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害される場合に示される。本明細書で使用される場合、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープに「特異的に結合している」もしくは「特異的に結合する」または「特異的である」という用語は、例えば、標的に対して１０ー４Ｍ以下、あるいは１０－５Ｍ以下、あるいは１０－６Ｍ以下、あるいは１０－７Ｍ以下、あるいは１０－８Ｍ以下、あるいは１０－９Ｍ以下、あるいは１０－１０Ｍ以下、あるいは１０－１１Ｍ以下、あるいは１０－１２Ｍ以下のＫＤ、または１０－４Ｍ～１０－６Ｍもしくは１０－６Ｍ～１０－１０Ｍもしくは１０－７Ｍ～１０－９Ｍの範囲のＫＤを有する分子によって示すことができる。当業者によって理解されるように、親和性及びＫＤ値は逆の関係にある。抗原に対する高い親和性は、低いＫＤ値によって測定される。一実施形態において、「特異的に結合している」という用語は、分子が、任意の他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する結合を指す。
【0115】
本明細書で使用される「親和性」という用語は、抗体のエピトープとの結合の強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ－Ａｇ］として定義される解離定数Ｋｄによって与えられ、［Ａｂ－Ａｇ］は、抗体－抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は、非結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は、非結合抗原のモル濃度である。親和性定数Ｋａは、１／Ｋｄによって定義される。ＭＡｂの親和性を決定するための方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）、及びＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９－６０１（１９８３）に認めることができ、これらの参考は、参照により本明細書に全体として組み込まれる。ＭＡｂの親和性を決定するために当該技術分野でよく知られている１つの標準的な方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析デバイスによる分析など）の使用である。
【0116】
薬剤及び特定の活性（例えば、細胞への結合、酵素活性の阻害、免疫細胞の活性化または阻害）に関して「ＥＣ５０」とは、かかる活性についてその最大応答または効果の５０％を生じる薬剤の効率的な濃度を指す。薬剤及び特定の活性に関して「ＥＣ１００」とは、かかる活性に関して実質的に最大の応答を生み出す薬剤の効率的な濃度を指す。
【0117】
「エフェクター機能」という用語は、抗体のアイソタイプによって変化する、抗体のＦｃ領域に起因するこれらの生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、及びＢ細胞活性化が含まれる。
【0118】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃγ受容体」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合し、抗原認識に関与する、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、及び肥満細胞を含む免疫細胞の膜に位置する内因性受容体のファミリーを指す。
【0119】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」という用語は、結合対（例えば、抗体／細胞表面分子）を指す場合、不均一なタンパク質及び／または他の生物製剤の集団におけるタンパク質、例えば、ＣＬＤＮ１８．２の存在を確定する結合反応を示す。したがって、指定された条件下では、特定の抗体は、特定の細胞表面マーカーに結合し、細胞表面上または試料中に存在する他のタンパク質に有意な量で結合しない。
【0120】
本明細書で使用される場合、「ＣＬＤＮ１８．２に特異的に結合する」という用語は、クローディン１８アイソフォーム１（ＣＬＤＮ１８．１）、または任意の他の系統特異的な細胞表面マーカーにではなく、正常または悪性の細胞の表面に生じる内因性クローディン１８アイソフォーム２を認識して、結合する抗体、または抗原結合フラグメントの能力を指す。
【0121】
本明細書で使用される場合、「エンドサイトーシス」という用語は、真核細胞が形質膜のセグメント、細胞表面受容体、及び細胞外流体からの成分を内部移行させるプロセスを指す。エンドサイトーシス機構には、受容体媒介性エンドサイトーシスが含まれる。「受容体媒介性エンドサイトーシス」という用語は、リガンドが、その標的に結合すると、膜陥入及びピンチングを引き起こし、内在化させ、細胞質内に送達するか、または適切な細胞内区画に移行する生物学的機構を指す。
【0122】
本明細書で使用される場合、用語「抗体ベース免疫療法」及び「免疫療法」は、広義には、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体、二重特異性分子、抗原結合ドメイン、あるいはＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントもしくはＣＤＲを含む融合タンパク質の標的化特異性に依存して、ＣＬＤＮ１８．２の異常な発現を特徴とする細胞に対する直接的または間接的な効果を媒介する任意の形態の療法を指すために使用される。本用語は、ネイキッド抗体、二重特異性抗体（Ｔ細胞結合、ＮＫ細胞結合、及び他の免疫細胞／エフェクター細胞結合方式を含む）、抗体薬物コンジュゲートを使用する治療の方法、ＣＬＤＮ１８．２特異的キメラ抗原受容体及びＣＬＤＮ１８．２特異的結合剤を含む腫瘍溶解性ウイルスを含むように操作されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）またはＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ）を使用する細胞療法、ならびに抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の抗原結合配列を送達し、インビボで対応する抗体フラグメントを発現させることによる遺伝子療法を包含することを意味する。
【0123】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈により明らかに他が指示されない限り、複数の参照物を含むことに留意されたい。
【0124】
クローディン１８（ＣＬＤＮ１８）
タンパク質のクローディンファミリーは、密着結合の重要な構造的及び機能的成分として、１９９８年に最初にクローニングされ、命名された。ファミリーとして、クローディンは、上皮細胞及び内皮細胞の障壁機能ならびに細胞骨格の維持に関与する四回膜貫通タンパク質の多遺伝子ファミリーである（Ｆｕｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４１（７）：１５３９－５０，１９９８）。ＣＬＤＮ１８は、ＣＬＤＮ１８アイソフォーム１（ＣＬＤＮ１８．１）及びＣＬＤＮ１８アイソフォーム２（ＣＬＤＮ１８．２）を含む、異なる変異体または立体構造を有する。
タンパク質のクローディンファミリーは、密着結合の重要な構造的及び機能的成分として、１９９８年に最初にクローニングされ、命名された。ファミリーとして、クローディンは、上皮細胞及び内皮細胞の障壁機能ならびに細胞骨格の維持に関与する四回膜貫通タンパク質の多遺伝子ファミリーである（Ｆｕｒｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１４１（７）：１５３９－５０，１９９８）。ＣＬＤＮ１８は、ＣＬＤＮ１８アイソフォーム１（ＣＬＤＮ１８．１）及びＣＬＤＮ１８アイソフォーム２（ＣＬＤＮ１８．２）を含む、異なる変異体または立体構造を有する。
【0125】
クローディンタンパク質の第１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）は、典型的には約５０個のアミノ酸からなり、第２のものは、それより小さく、約２２個のアミノ酸を有する（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，ｅｔ ａｌ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ２１（１０）：１７１１－１７１８，２０１６）。Ｎ末端は通常、非常に短い（例えば、約４～１０個のアミノ酸）が、Ｃ末端は、２１～約６３個のアミノ酸の範囲であり、密着結合においてタンパク質の局在化に必要である。
【0126】
密着結合の透過性は、多くの場合、正常組織中よりも腫瘍組織で高いという観察は、腫瘍細胞におけるクローディンタンパク質が、インタクトな密着結合を有する正常組織よりも到達可能であり得るという推測を導き出している。この観察はまた、クローディンタンパク質を治療的ながん介入における魅力的な標的にする。さらに、公開された発現プロファイリング結果は、ＣＬＤＮ１８．２を標的にするがん療法は、正常な代謝回転及び恒常性プロセスが２～７日毎に胃腸上皮細胞を補充するため、好都合な全身毒性プロファイルを有することを示唆する（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ）。限定された持続期間の一時的な胃腸毒性は一般的であり、がん免疫療法における管理可能な有害事象である。
【0127】
ＣＬＤＮ１８．２は、２つの小さな細胞外ループ（疎水性領域１及び疎水性領域２によって包含されるループ１、疎水性領域３及び４によって包含されるループ２）を有する４つの膜スパニングドメインを含む。ＣＬＤＮ１８．２は、膜貫通タンパク質であり、したがって、その細胞外ループ内に存在するか、またはその細胞外ループによって形成されるエピトープは、抗体ベースがん免疫療法のための望ましい標的を表わす。しかしながら、ＣＬＤＮ１８．１は、毒性に非常に関連する組織である正常肺組織における肺胞上皮細胞によって発現されることを考慮すると、排他的スプライス変異体特異性は、抗体ベースがん免疫療法にＣＬＤＮ１８．２特異的抗体を使用するために認められた前提条件だった。Ｓａｈｉｎらは、ＣＬＤＮ１８．２に排他的に結合し、ＣＬＤＮ１８．１に結合しない抗体（ポリクローナル及びモノクローナル）の単離に基づいて、ＣＬＤＮ１８．２をがん免疫療法の薬剤化可能な標的として検証する概念実証結果を最初に報告した（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４（２３）７６２４－７６３４，２００８）。
【0128】
ＣＬＤＮ１８．２は、多くの原発性腫瘍及びそれらの転移で発現され、胃癌、食道癌、膵臓癌、非小細胞肺癌などの肺癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、及び胆嚢癌が含まれる。クローディンの調節不全化発現は、多くのがんにおいて検出され、腫瘍形成及びがん浸潤性に関与し得る（Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１０；２０１０：５４１９５７）。ＣＬＤＮ１８．２の発現は、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）（Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．２０１１；５９：９４２－９５２）、食道腫瘍、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｈｕ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．２００８；１４：７６２４－７６３４）、及び胆管腺癌（Ｋｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．Ｖｉｒｃｈｏｗｓ，Ａｒｃｈ．２０１５；４６６：２６５－２７７）において顕著に上昇する。
【0129】
胃癌が、がん関連の著しい罹患率及び死亡率に関わっているにもかかわらず、胃癌の治療選択肢は限られている。クローディンは、正常組織、良性新生物、過形成状態、及びがんに存在する（Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｍａｎａｇ．Ｒｅｓ．５：３６７－３７５（２０１３））。クローディンの発現パターンは、高度に組織特異的であり、ほとんどの組織が複数のクローディンを発現する。クローディンタンパク質は、ホモタイプまたはヘテロタイプ形式で隣接細胞からのクローディンと相互作用して、密着結合を形成することができる（Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．）。クローディン発現及びシグナル伝達経路の変化は、がんの発生に関連することが知られており、障害のある密着結合の機能と腫瘍進行との間の関連が広く報告されている。
【0130】
抗ＣＬＤＮ１８．２抗体
ＣＬＤＮ１８．２の第１の細胞外ドメイン／ループに特異的に結合する抗ＣＬＤＮ１８抗体、特にヒト及びネズミモノクローナル抗ＣＬＤＮ１８．２抗体が提供される。ＣＬＤＮ１８．２モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントのＣＬＤＮ１８．２との結合は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性食作用（ＡＤＰＣ）、及び／または抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、あるいは標的化されたがん細胞の死をもたらす他の効果を媒介することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、コンジュゲート化細胞傷害性薬物を送達する役割を果たすことができ、及び／または別のモノクローナル抗体と二重特異性抗体を形成して標的化されたがん細胞の死を媒介することができる。
ＣＬＤＮ１８．２の第１の細胞外ドメイン／ループに特異的に結合する抗ＣＬＤＮ１８抗体、特にヒト及びネズミモノクローナル抗ＣＬＤＮ１８．２抗体が提供される。ＣＬＤＮ１８．２モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントのＣＬＤＮ１８．２との結合は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性食作用（ＡＤＰＣ）、及び／または抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、あるいは標的化されたがん細胞の死をもたらす他の効果を媒介することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば、コンジュゲート化細胞傷害性薬物を送達する役割を果たすことができ、及び／または別のモノクローナル抗体と二重特異性抗体を形成して標的化されたがん細胞の死を媒介することができる。
【0131】
実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、表１もしくは表２に開示されるＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）のセットを有するＶＨを含む。例えば、抗ＣＬＤＮ１８抗体またはそれらの抗体フラグメントは、表２に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体重鎖のうちの１つ以上におけるこれらのＣＤＲに対応するＣＤＲのセット（例えば、Ｈｕ－１抗体のＣＤＲ）を含み得る。
【0132】
別の実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、表３または表４に開示されるようなＣＤＲのセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を有するＶＬを含む。例えば、抗ＣＬＤＮ１８抗体またはそれらの抗体フラグメントは、表４に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体軽鎖のうちの１つ以上におけるそれらのＣＤＲに対応するＣＤＲのセット（例えば、Ｈｕ－１抗体のＣＤＲ）を含み得る。
【0133】
代替の実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８抗体またはそれらの抗体フラグメントは、表１に開示されるＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）を有するＶＨと、表３に開示されるＣＤＲのセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を有するＶＬと、を含む。
【0134】
代替の実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８抗体またはそれらの抗体フラグメントは、表２に開示されるＣＤＲのセット（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）を有するＶＨと、表４に開示されるＣＤＲのセット（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を有するＶＬと、を含む。
【0135】
特定の実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、単一のネズミ抗体（表１のＶＨ ＣＤＲ及び表３のＶＬ ＣＤＲ）または完全にヒトの抗体（表２のＶＨ ＣＤＲ及び表４のＶＬ ＣＤＲ）に由来する６つのＣＤＲのセットを含み得る。例えば、抗体は、完全にヒトの抗ＣＬＤＮ１８．２抗体「Ｈｕ－１」に由来する６つのＣＤＲ領域のセットを含み得る。この場合、結合剤は、それぞれ、Ｈｕ－１抗体の可変重ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに可変軽ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を表す、配列番号２２１～２２３ならびに配列番号２２４～２２６のアミノ酸配列を含むことになる。
表１：ネズミ可変重鎖ドメインのＣＤＲ配列
表２：ヒト可変重鎖ドメインのＣＤＲ配列
表３：ネズミ可変軽鎖ドメインのＣＤＲ配列
表４：ヒト可変軽鎖ドメインのＣＤＲ配列
表１：ネズミ可変重鎖ドメインのＣＤＲ配列
【表1】
【表2-1】
【表2-2】
【表3】
【表4-1】
【表4-2】
【0136】
実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、もしくはヒト抗体、またはその抗原結合部分、あるいはヒトＣＬＤＮ１８アイソフォーム２に特異的に結合する二重特異性もしくは多重特異性結合剤であり得る。
【0137】
別の実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体または抗体フラグメントは、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の開示されるＶＨ及び／またはＶＬドメインに由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の定義されたセット／組み合わせを含む。
【0138】
実施形態において、抗ＣＬＤＮ８．２抗体またはその抗体フラグメントは、以下の特性：ヒト腫瘍細胞によって発現されるＣＬＤＮ１８アイソフォーム２に優先的に結合することと、ＣＬＤＮ１８アイソフォーム１（ＣＬＤＮ１８．１）に結合しないことと、結合後にＣＬＤＮ１８．２陽性細胞の表面から効率的に内部移行されることと、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）媒介性溶解を誘発することによってＣＬＤＮ１８．２陽性細胞の殺傷を指向することができることと、のうちの１つ以上を示す。
【0139】
実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体またはそれらの結合フラグメントは、以下からなる群から選択される相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含むＶＨを含む。
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号４７、ＣＤＲ２：配列番号４８、ＣＤＲ３：配列番号４９、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号５３、ＣＤＲ２：配列番号５４、ＣＤＲ３：配列番号５５、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号５９、ＣＤＲ２：配列番号６０、ＣＤＲ３：配列番号６１、
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号６５、ＣＤＲ２：配列番号６６、ＣＤＲ３：配列番号６７、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号７１、ＣＤＲ２：配列番号７２、ＣＤＲ３：配列番号７３、
（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号７７、ＣＤＲ２：配列番号７８、ＣＤＲ３：配列番号７９、
（ｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号８３、ＣＤＲ２：配列番号８４、ＣＤＲ３：配列番号８５、
（ｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号８９、ＣＤＲ２：配列番号９０、ＣＤＲ３：配列番号９１、
（ｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号９５、ＣＤＲ２：配列番号９６、ＣＤＲ３：配列番号９７、
（ｘ）ＣＤＲ１：配列番号１０１、ＣＤＲ２：配列番号１０２、ＣＤＲ３：配列番号１０３、（ｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号１０７、ＣＤＲ２：配列番号１０８、ＣＤＲ３：配列番号１０９、（ｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１１３、ＣＤＲ２：配列番号１１４、ＣＤＲ３：配列番号１１５、（ｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１１９、ＣＤＲ２：配列番号１２０、ＣＤＲ３：配列番号１２１、
（ｘｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号１２５、ＣＤＲ２：配列番号１２６、ＣＤＲ３：配列番号１２７、
（ｘｖ）ＣＤＲ１：配列番号１３１、ＣＤＲ２：配列番号１３２、ＣＤＲ３：配列番号１３３、（ｘｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号１３７、ＣＤＲ２：配列番号１３８、ＣＤＲ３：配列番号１３９、
（ｘｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１４３、ＣＤＲ２：配列番号１４４、ＣＤＲ３：配列番号１４５、
（ｘｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１４９、ＣＤＲ２：配列番号１５０、ＣＤＲ３：配列番号１５１、
（ｘｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号１５５、ＣＤＲ２：配列番号１５６、ＣＤＲ３：配列番号１５７、
（ｘｘ）ＣＤＲ１：配列番号１６１、ＣＤＲ２：配列番号１６２、ＣＤＲ３：配列番号１６３、（ｘｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号１６７、ＣＤＲ２：配列番号１６８、ＣＤＲ３：配列番号１６９、
（ｘｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１７３、ＣＤＲ２：配列番号１７４、ＣＤＲ３：配列番号１７５、及び
（ｘｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１７９、ＣＤＲ２：配列番号１８０、ＣＤＲ３：配列番号１８１。
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号４７、ＣＤＲ２：配列番号４８、ＣＤＲ３：配列番号４９、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号５３、ＣＤＲ２：配列番号５４、ＣＤＲ３：配列番号５５、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号５９、ＣＤＲ２：配列番号６０、ＣＤＲ３：配列番号６１、
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号６５、ＣＤＲ２：配列番号６６、ＣＤＲ３：配列番号６７、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号７１、ＣＤＲ２：配列番号７２、ＣＤＲ３：配列番号７３、
（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号７７、ＣＤＲ２：配列番号７８、ＣＤＲ３：配列番号７９、
（ｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号８３、ＣＤＲ２：配列番号８４、ＣＤＲ３：配列番号８５、
（ｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号８９、ＣＤＲ２：配列番号９０、ＣＤＲ３：配列番号９１、
（ｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号９５、ＣＤＲ２：配列番号９６、ＣＤＲ３：配列番号９７、
（ｘ）ＣＤＲ１：配列番号１０１、ＣＤＲ２：配列番号１０２、ＣＤＲ３：配列番号１０３、（ｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号１０７、ＣＤＲ２：配列番号１０８、ＣＤＲ３：配列番号１０９、（ｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１１３、ＣＤＲ２：配列番号１１４、ＣＤＲ３：配列番号１１５、（ｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１１９、ＣＤＲ２：配列番号１２０、ＣＤＲ３：配列番号１２１、
（ｘｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号１２５、ＣＤＲ２：配列番号１２６、ＣＤＲ３：配列番号１２７、
（ｘｖ）ＣＤＲ１：配列番号１３１、ＣＤＲ２：配列番号１３２、ＣＤＲ３：配列番号１３３、（ｘｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号１３７、ＣＤＲ２：配列番号１３８、ＣＤＲ３：配列番号１３９、
（ｘｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１４３、ＣＤＲ２：配列番号１４４、ＣＤＲ３：配列番号１４５、
（ｘｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１４９、ＣＤＲ２：配列番号１５０、ＣＤＲ３：配列番号１５１、
（ｘｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号１５５、ＣＤＲ２：配列番号１５６、ＣＤＲ３：配列番号１５７、
（ｘｘ）ＣＤＲ１：配列番号１６１、ＣＤＲ２：配列番号１６２、ＣＤＲ３：配列番号１６３、（ｘｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号１６７、ＣＤＲ２：配列番号１６８、ＣＤＲ３：配列番号１６９、
（ｘｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１７３、ＣＤＲ２：配列番号１７４、ＣＤＲ３：配列番号１７５、及び
（ｘｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１７９、ＣＤＲ２：配列番号１８０、ＣＤＲ３：配列番号１８１。
【0140】
実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体またはそれらの結合フラグメントは、以下からなる群から選択される相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含むＶＬを含む。
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号５０、ＣＤＲ２：配列番号５１、ＣＤＲ３：配列番号５２、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号５６、ＣＤＲ２：配列番号５７、ＣＤＲ３：配列番号５８、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号６２、ＣＤＲ２：配列番号６３、ＣＤＲ３：配列番号６４、
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号６８、ＣＤＲ２：配列番号６９、ＣＤＲ３：配列番号７０、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号７４、ＣＤＲ２：配列番号７５、ＣＤＲ３：配列番号７６、
（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号８０、ＣＤＲ２：配列番号８１、ＣＤＲ３：配列番号８２、
（ｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号８６、ＣＤＲ２：配列番号８７、ＣＤＲ３：配列番号８８、
（ｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号９２、ＣＤＲ２：配列番号９３、ＣＤＲ３：配列番号９４、
（ｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号９８、ＣＤＲ２：配列番号９９、ＣＤＲ３：配列番号１００、
（ｘ）ＣＤＲ１：配列番号１０４、ＣＤＲ２、配列番号１０５、ＣＤＲ３：配列番号１０６、
（ｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号１１０、ＣＤＲ２：配列番号１１１、ＣＤＲ３：配列番号１１２、
（ｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１１６、ＣＤＲ２：配列番号１１７、ＣＤＲ３：配列番号１１８、
（ｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１２２、ＣＤＲ２：配列番号１２３、ＣＤＲ３：配列番号１２４、
（ｘｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号１２８、ＣＤＲ２：配列番号１２９、ＣＤＲ３：配列番号１３０、
（ｘｖ）ＣＤＲ１：配列番号１３４、ＣＤＲ２：配列番号１３５、ＣＤＲ３：配列番号１３６、
（ｘｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号１４０、ＣＤＲ２：配列番号１４１、ＣＤＲ３：配列番号１４２、
（ｘｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１４６、ＣＤＲ２：配列番号１４７、ＣＤＲ３：配列番号１４８、
（ｘｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１５２、ＣＤＲ２：配列番号１５３、ＣＤＲ３：配列番号１５４、
（ｘｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号１５８、ＣＤＲ２：配列番号１５９、ＣＤＲ３：配列番号１６０、
（ｘｘ）ＣＤＲ１：配列番号１６４、ＣＤＲ２：配列番号１６５、ＣＤＲ３：配列番号１６６、
（ｘｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号１７０、ＣＤＲ２：配列番号１７１、ＣＤＲ３：配列番号１７２、
（ｘｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１７６、ＣＤＲ２：配列番号１７７、ＣＤＲ３：配列番号１７８、及び
（ｘｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１８２、ＣＤＲ２：配列番号１８３、ＣＤＲ３：配列番号１８４。
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号５０、ＣＤＲ２：配列番号５１、ＣＤＲ３：配列番号５２、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号５６、ＣＤＲ２：配列番号５７、ＣＤＲ３：配列番号５８、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号６２、ＣＤＲ２：配列番号６３、ＣＤＲ３：配列番号６４、
（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号６８、ＣＤＲ２：配列番号６９、ＣＤＲ３：配列番号７０、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号７４、ＣＤＲ２：配列番号７５、ＣＤＲ３：配列番号７６、
（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号８０、ＣＤＲ２：配列番号８１、ＣＤＲ３：配列番号８２、
（ｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号８６、ＣＤＲ２：配列番号８７、ＣＤＲ３：配列番号８８、
（ｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号９２、ＣＤＲ２：配列番号９３、ＣＤＲ３：配列番号９４、
（ｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号９８、ＣＤＲ２：配列番号９９、ＣＤＲ３：配列番号１００、
（ｘ）ＣＤＲ１：配列番号１０４、ＣＤＲ２、配列番号１０５、ＣＤＲ３：配列番号１０６、
（ｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号１１０、ＣＤＲ２：配列番号１１１、ＣＤＲ３：配列番号１１２、
（ｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１１６、ＣＤＲ２：配列番号１１７、ＣＤＲ３：配列番号１１８、
（ｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１２２、ＣＤＲ２：配列番号１２３、ＣＤＲ３：配列番号１２４、
（ｘｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号１２８、ＣＤＲ２：配列番号１２９、ＣＤＲ３：配列番号１３０、
（ｘｖ）ＣＤＲ１：配列番号１３４、ＣＤＲ２：配列番号１３５、ＣＤＲ３：配列番号１３６、
（ｘｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号１４０、ＣＤＲ２：配列番号１４１、ＣＤＲ３：配列番号１４２、
（ｘｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１４６、ＣＤＲ２：配列番号１４７、ＣＤＲ３：配列番号１４８、
（ｘｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１５２、ＣＤＲ２：配列番号１５３、ＣＤＲ３：配列番号１５４、
（ｘｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号１５８、ＣＤＲ２：配列番号１５９、ＣＤＲ３：配列番号１６０、
（ｘｘ）ＣＤＲ１：配列番号１６４、ＣＤＲ２：配列番号１６５、ＣＤＲ３：配列番号１６６、
（ｘｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号１７０、ＣＤＲ２：配列番号１７１、ＣＤＲ３：配列番号１７２、
（ｘｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１７６、ＣＤＲ２：配列番号１７７、ＣＤＲ３：配列番号１７８、及び
（ｘｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号１８２、ＣＤＲ２：配列番号１８３、ＣＤＲ３：配列番号１８４。
【0141】
実施形態において、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、各々が以下からなる群から選択される相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む、ＶＨ及びＶＬの組み合わせを含む。
（ｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号４７、ＣＤＲ２：配列番号４８、ＣＤＲ３：配列番号４９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号５０、ＣＤＲ２：配列番号５１、ＣＤＲ３：配列番号５２、
（ｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号５３、ＣＤＲ２：配列番号５４、ＣＤＲ３：配列番号５５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号５６、ＣＤＲ２：配列番号５７、ＣＤＲ３：配列番号５８、
（ｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号５９、ＣＤＲ２：配列番号６０、ＣＤＲ３：配列番号６１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号６２、ＣＤＲ２：配列番号６３、ＣＤＲ３：配列番号６４、
（ｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号６５、ＣＤＲ２：配列番号６６、ＣＤＲ３：配列番号６７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号６８、ＣＤＲ２：配列番号６９、ＣＤＲ３：配列番号７０、
（ｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号７１、ＣＤＲ２：配列番号７２、ＣＤＲ３：配列番号７３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号７４、ＣＤＲ２：配列番号７５、ＣＤＲ３：配列番号７６、
（ｖｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号７７、ＣＤＲ２：配列番号７８、ＣＤＲ３：配列番号７９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号８０、ＣＤＲ２：配列番号８１、ＣＤＲ３：配列番号８２、
（ｖｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号８３、ＣＤＲ２：配列番号８４、ＣＤＲ３：配列番号８５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号８６、ＣＤＲ２：配列番号８７、ＣＤＲ３：配列番号８８、
（ｖｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号８９、ＣＤＲ２：配列番号９０、ＣＤＲ３：配列番号９１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号９２、ＣＤＲ２：配列番号９３、ＣＤＲ３：配列番号９４、
（ｉｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号９５、ＣＤＲ２：配列番号９６、ＣＤＲ３：配列番号９７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号９８、ＣＤＲ２：配列番号９９、ＣＤＲ３：配列番号１００、
（ｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１０１、ＣＤＲ２：配列番号１０２、ＣＤＲ３：配列番号１０３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１０４、ＣＤＲ２：配列番号１０５、ＣＤＲ３：配列番号１０６、
（ｘｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１０７、ＣＤＲ２：配列番号１０８、ＣＤＲ３：配列番号１０９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１１０、ＣＤＲ２：配列番号１１１、ＣＤＲ３：配列番号１１２、
（ｘｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１１３、ＣＤＲ２：配列番号１１４、ＣＤＲ３：配列番号１１５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１１６、ＣＤＲ２：配列番号１１７、ＣＤＲ３：配列番号１１８、
（ｘｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１１９、ＣＤＲ２：配列番号１２０、ＣＤＲ３：配列番号１２１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１２２、ＣＤＲ２：配列番号１２３、ＣＤＲ３：配列番号１２４、
（ｘｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１２５、ＣＤＲ２：配列番号１２６、ＣＤＲ３：配列番号１２７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１２８、ＣＤＲ２：配列番号１２９、ＣＤＲ３：配列番号１３０、
（ｘｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１３１、ＣＤＲ２：配列番号１３２、ＣＤＲ３：配列番号１３３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１３４、ＣＤＲ２：配列番号１３５、ＣＤＲ３：配列番号１３６、
（ｘｖｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１３７、ＣＤＲ２：配列番号１３８、ＣＤＲ３：配列番号１３９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１４０、ＣＤＲ２：配列番号１４１、ＣＤＲ３：配列番号１４２、
（ｘｖｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１４３、ＣＤＲ２：配列番号１４４、ＣＤＲ３：配列番号１４５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１４６、ＣＤＲ２：配列番号１４７、ＣＤＲ３：配列番号１４８、
（ｘｖｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１４９、ＣＤＲ２：配列番号１５０、ＣＤＲ３：配列番号１５１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１５２、ＣＤＲ２：配列番号１５３、ＣＤＲ３：配列番号１５４、
（ｘｉｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１５５、ＣＤＲ２：配列番号１５６、ＣＤＲ３：配列番号１５７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１５８、ＣＤＲ２：配列番号１５９、ＣＤＲ３：配列番号１６０、
（ｘｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１６１、ＣＤＲ２：配列番号１６２、ＣＤＲ３：配列番号１６３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１６４、ＣＤＲ２：配列番号１６５、ＣＤＲ３：配列番号１６６、
（ｘｘｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１６７、ＣＤＲ２：配列番号１６８、ＣＤＲ３：配列番号１６９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１７０、ＣＤＲ２：配列番号１７１、ＣＤＲ３：配列番号１７２、
（ｘｘｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１７３、ＣＤＲ２：配列番号１７４、ＣＤＲ３：配列番号１７５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１７６、ＣＤＲ２：配列番号１７７、ＣＤＲ３：配列番号１７８、及び
（ｘｘｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１７９、ＣＤＲ２：配列番号１８０、ＣＤＲ３：配列番号１８１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１８２、ＣＤＲ２：配列番号１８３、ＣＤＲ３：配列番号１８４。
（ｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号４７、ＣＤＲ２：配列番号４８、ＣＤＲ３：配列番号４９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号５０、ＣＤＲ２：配列番号５１、ＣＤＲ３：配列番号５２、
（ｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号５３、ＣＤＲ２：配列番号５４、ＣＤＲ３：配列番号５５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号５６、ＣＤＲ２：配列番号５７、ＣＤＲ３：配列番号５８、
（ｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号５９、ＣＤＲ２：配列番号６０、ＣＤＲ３：配列番号６１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号６２、ＣＤＲ２：配列番号６３、ＣＤＲ３：配列番号６４、
（ｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号６５、ＣＤＲ２：配列番号６６、ＣＤＲ３：配列番号６７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号６８、ＣＤＲ２：配列番号６９、ＣＤＲ３：配列番号７０、
（ｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号７１、ＣＤＲ２：配列番号７２、ＣＤＲ３：配列番号７３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号７４、ＣＤＲ２：配列番号７５、ＣＤＲ３：配列番号７６、
（ｖｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号７７、ＣＤＲ２：配列番号７８、ＣＤＲ３：配列番号７９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号８０、ＣＤＲ２：配列番号８１、ＣＤＲ３：配列番号８２、
（ｖｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号８３、ＣＤＲ２：配列番号８４、ＣＤＲ３：配列番号８５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号８６、ＣＤＲ２：配列番号８７、ＣＤＲ３：配列番号８８、
（ｖｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号８９、ＣＤＲ２：配列番号９０、ＣＤＲ３：配列番号９１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号９２、ＣＤＲ２：配列番号９３、ＣＤＲ３：配列番号９４、
（ｉｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号９５、ＣＤＲ２：配列番号９６、ＣＤＲ３：配列番号９７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号９８、ＣＤＲ２：配列番号９９、ＣＤＲ３：配列番号１００、
（ｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１０１、ＣＤＲ２：配列番号１０２、ＣＤＲ３：配列番号１０３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１０４、ＣＤＲ２：配列番号１０５、ＣＤＲ３：配列番号１０６、
（ｘｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１０７、ＣＤＲ２：配列番号１０８、ＣＤＲ３：配列番号１０９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１１０、ＣＤＲ２：配列番号１１１、ＣＤＲ３：配列番号１１２、
（ｘｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１１３、ＣＤＲ２：配列番号１１４、ＣＤＲ３：配列番号１１５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１１６、ＣＤＲ２：配列番号１１７、ＣＤＲ３：配列番号１１８、
（ｘｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１１９、ＣＤＲ２：配列番号１２０、ＣＤＲ３：配列番号１２１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１２２、ＣＤＲ２：配列番号１２３、ＣＤＲ３：配列番号１２４、
（ｘｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１２５、ＣＤＲ２：配列番号１２６、ＣＤＲ３：配列番号１２７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１２８、ＣＤＲ２：配列番号１２９、ＣＤＲ３：配列番号１３０、
（ｘｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１３１、ＣＤＲ２：配列番号１３２、ＣＤＲ３：配列番号１３３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１３４、ＣＤＲ２：配列番号１３５、ＣＤＲ３：配列番号１３６、
（ｘｖｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１３７、ＣＤＲ２：配列番号１３８、ＣＤＲ３：配列番号１３９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１４０、ＣＤＲ２：配列番号１４１、ＣＤＲ３：配列番号１４２、
（ｘｖｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１４３、ＣＤＲ２：配列番号１４４、ＣＤＲ３：配列番号１４５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１４６、ＣＤＲ２：配列番号１４７、ＣＤＲ３：配列番号１４８、
（ｘｖｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１４９、ＣＤＲ２：配列番号１５０、ＣＤＲ３：配列番号１５１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１５２、ＣＤＲ２：配列番号１５３、ＣＤＲ３：配列番号１５４、
（ｘｉｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１５５、ＣＤＲ２：配列番号１５６、ＣＤＲ３：配列番号１５７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１５８、ＣＤＲ２：配列番号１５９、ＣＤＲ３：配列番号１６０、
（ｘｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１６１、ＣＤＲ２：配列番号１６２、ＣＤＲ３：配列番号１６３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１６４、ＣＤＲ２：配列番号１６５、ＣＤＲ３：配列番号１６６、
（ｘｘｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１６７、ＣＤＲ２：配列番号１６８、ＣＤＲ３：配列番号１６９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１７０、ＣＤＲ２：配列番号１７１、ＣＤＲ３：配列番号１７２、
（ｘｘｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１７３、ＣＤＲ２：配列番号１７４、ＣＤＲ３：配列番号１７５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１７６、ＣＤＲ２：配列番号１７７、ＣＤＲ３：配列番号１７８、及び
（ｘｘｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号１７９、ＣＤＲ２：配列番号１８０、ＣＤＲ３：配列番号１８１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号１８２、ＣＤＲ２：配列番号１８３、ＣＤＲ３：配列番号１８４。
【0142】
実施形態において、完全にヒトの抗ＣＬＤＮ１８．２抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントは、以下からなる群から選択される相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含むＶＨを含む。
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号２２１、ＣＤＲ２：配列番号２２２、ＣＤＲ３：配列番号２２３、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２２７、ＣＤＲ２：配列番号２２８、ＣＤＲ３：配列番号２２９、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２３３、ＣＤＲ２：配列番号２３４、ＣＤＲ３：配列番号２３５、（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号２３９、ＣＤＲ２：配列番号２４０、ＣＤＲ３：配列番号２４１、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号２４５、ＣＤＲ２：配列番号２４６、ＣＤＲ３：配列番号２４７、（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号２５１、ＣＤＲ２：配列番号２５２、ＣＤＲ３：配列番号２５３、（ｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２５７、ＣＤＲ２：配列番号２５８、ＣＤＲ３：配列番号２５９、（ｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２６３、ＣＤＲ２：配列番号２６４、ＣＤＲ３：配列番号２６５、（ｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号２６９、ＣＤＲ２：配列番号２７０、ＣＤＲ３：配列番号２７１、
（ｘ）ＣＤＲ１：配列番号２７５、ＣＤＲ２：配列番号２７６、ＣＤＲ３：配列番号２７７、（ｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号２８１、ＣＤＲ２：配列番号２８２、ＣＤＲ３：配列番号２８３、（ｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２８７、ＣＤＲ２：配列番号２８８、ＣＤＲ３：配列番号２８９、（ｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２９３、ＣＤＲ２：配列番号２９４、ＣＤＲ３：配列番号２９５、（ｘｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号２９９、ＣＤＲ２：配列番号３００、ＣＤＲ３：配列番号３０１、（ｘｖ）ＣＤＲ１：配列番号３１１、ＣＤＲ２：配列番号３１２、ＣＤＲ３：配列番号３１３、（ｘｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号３１７、ＣＤＲ２：配列番号３１８、ＣＤＲ３：配列番号３１９、及び
（ｘｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号３２３、ＣＤＲ２：配列番号３２４、ＣＤＲ３：配列番号３２５。
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号２２１、ＣＤＲ２：配列番号２２２、ＣＤＲ３：配列番号２２３、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２２７、ＣＤＲ２：配列番号２２８、ＣＤＲ３：配列番号２２９、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２３３、ＣＤＲ２：配列番号２３４、ＣＤＲ３：配列番号２３５、（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号２３９、ＣＤＲ２：配列番号２４０、ＣＤＲ３：配列番号２４１、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号２４５、ＣＤＲ２：配列番号２４６、ＣＤＲ３：配列番号２４７、（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号２５１、ＣＤＲ２：配列番号２５２、ＣＤＲ３：配列番号２５３、（ｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２５７、ＣＤＲ２：配列番号２５８、ＣＤＲ３：配列番号２５９、（ｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２６３、ＣＤＲ２：配列番号２６４、ＣＤＲ３：配列番号２６５、（ｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号２６９、ＣＤＲ２：配列番号２７０、ＣＤＲ３：配列番号２７１、
（ｘ）ＣＤＲ１：配列番号２７５、ＣＤＲ２：配列番号２７６、ＣＤＲ３：配列番号２７７、（ｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号２８１、ＣＤＲ２：配列番号２８２、ＣＤＲ３：配列番号２８３、（ｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２８７、ＣＤＲ２：配列番号２８８、ＣＤＲ３：配列番号２８９、（ｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２９３、ＣＤＲ２：配列番号２９４、ＣＤＲ３：配列番号２９５、（ｘｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号２９９、ＣＤＲ２：配列番号３００、ＣＤＲ３：配列番号３０１、（ｘｖ）ＣＤＲ１：配列番号３１１、ＣＤＲ２：配列番号３１２、ＣＤＲ３：配列番号３１３、（ｘｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号３１７、ＣＤＲ２：配列番号３１８、ＣＤＲ３：配列番号３１９、及び
（ｘｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号３２３、ＣＤＲ２：配列番号３２４、ＣＤＲ３：配列番号３２５。
【0143】
実施形態において、完全にヒトの抗ＣＬＤＮ１８．２抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントは、以下からなる群から選択される相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットの含むＶＬを含む：
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号２２４、ＣＤＲ２：配列番号２２５、ＣＤＲ３：配列番号２２６、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２３０、ＣＤＲ２：配列番号２３１、ＣＤＲ３：配列番号２３２、（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２３６、ＣＤＲ２、配列番号２３７、ＣＤＲ３、配列番号２３８、（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号２４２、ＣＤＲ２：配列番号２４３、ＣＤＲ３：配列番号２４４、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号２４８、ＣＤＲ２：配列番号２４９、ＣＤＲ３：配列番号２５０、
（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号２５４、ＣＤＲ２：配列番号２５５、ＣＤＲ３：配列番号２５６、（ｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２６０、ＣＤＲ２：配列番号２６１、ＣＤＲ３：配列番号２６２、（ｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２６６、ＣＤＲ２：配列番号２６７、ＣＤＲ３：配列番号２６８、（ｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号２７２、ＣＤＲ２、配列番号２７３、ＣＤＲ３：配列番号２７４、
（ｘ）ＣＤＲ１：配列番号２７８、ＣＤＲ２：配列番号２７９、ＣＤＲ３、配列番号２８０、
（ｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号２８４、ＣＤＲ２：配列番号２８５、ＣＤＲ３：配列番号２８６、（ｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２９０、ＣＤＲ２：配列番号２９１、ＣＤＲ３：配列番号２９２、（ｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２９６、ＣＤＲ２：配列番号２９７、ＣＤＲ３：配列番号２９８、（ｘｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号３０２、ＣＤＲ２：配列番号３０３、ＣＤＲ３：配列番号３０４、（ｘｖ）ＣＤＲ１：配列番号３１４、ＣＤＲ２：配列番号３１５、ＣＤＲ３：配列番号３１６、（ｘｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号３２０、ＣＤＲ２：配列番号３２１、ＣＤＲ３、配列番号３２２、及び
（ｘｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号３２６、ＣＤＲ２：配列番号３２７、ＣＤＲ３：配列番号３２８。
（ｉ）ＣＤＲ１：配列番号２２４、ＣＤＲ２：配列番号２２５、ＣＤＲ３：配列番号２２６、
（ｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２３０、ＣＤＲ２：配列番号２３１、ＣＤＲ３：配列番号２３２、（ｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２３６、ＣＤＲ２、配列番号２３７、ＣＤＲ３、配列番号２３８、（ｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号２４２、ＣＤＲ２：配列番号２４３、ＣＤＲ３：配列番号２４４、
（ｖ）ＣＤＲ１：配列番号２４８、ＣＤＲ２：配列番号２４９、ＣＤＲ３：配列番号２５０、
（ｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号２５４、ＣＤＲ２：配列番号２５５、ＣＤＲ３：配列番号２５６、（ｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２６０、ＣＤＲ２：配列番号２６１、ＣＤＲ３：配列番号２６２、（ｖｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２６６、ＣＤＲ２：配列番号２６７、ＣＤＲ３：配列番号２６８、（ｉｘ）ＣＤＲ１：配列番号２７２、ＣＤＲ２、配列番号２７３、ＣＤＲ３：配列番号２７４、
（ｘ）ＣＤＲ１：配列番号２７８、ＣＤＲ２：配列番号２７９、ＣＤＲ３、配列番号２８０、
（ｘｉ）ＣＤＲ１：配列番号２８４、ＣＤＲ２：配列番号２８５、ＣＤＲ３：配列番号２８６、（ｘｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２９０、ＣＤＲ２：配列番号２９１、ＣＤＲ３：配列番号２９２、（ｘｉｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号２９６、ＣＤＲ２：配列番号２９７、ＣＤＲ３：配列番号２９８、（ｘｉｖ）ＣＤＲ１：配列番号３０２、ＣＤＲ２：配列番号３０３、ＣＤＲ３：配列番号３０４、（ｘｖ）ＣＤＲ１：配列番号３１４、ＣＤＲ２：配列番号３１５、ＣＤＲ３：配列番号３１６、（ｘｖｉ）ＣＤＲ１：配列番号３２０、ＣＤＲ２：配列番号３２１、ＣＤＲ３、配列番号３２２、及び
（ｘｖｉｉ）ＣＤＲ１：配列番号３２６、ＣＤＲ２：配列番号３２７、ＣＤＲ３：配列番号３２８。
【0144】
ネズミ抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の配列番号ならびに可変ドメイン（ＶＨ及びＶＬ）及びＣＤＲのアミノ酸配列を図１に提供する。
【0145】
ヒト抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の配列番号ならびに可変ドメイン（ＶＨ及びＶＬ）及びＣＤＲのアミノ酸配列を図２に提供する。
【0146】
実施形態において、ＣＬＤＮ１８．２に結合する能力を有する抗体は、各々が以下からなる群から選択される相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のセットを含む、ＶＨ及びＶＬの組み合わせを含む。
（ｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２２１、ＣＤＲ２：配列番号２２２、ＣＤＲ３：配列番号２２３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２２４、ＣＤＲ２：配列番号２２５、ＣＤＲ３：配列番号２２６、
（ｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２２７、ＣＤＲ２：配列番号２２８、ＣＤＲ３：配列番号２２９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２３０、ＣＤＲ２：配列番号２３１、ＣＤＲ３：配列番号２３２、
（ｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２３３、ＣＤＲ２：配列番号２３４、ＣＤＲ３：配列番号２３５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２３６、ＣＤＲ２：配列番号２３７、ＣＤＲ３：配列番号２３８、
（ｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２３９、ＣＤＲ２：配列番号２４０、ＣＤＲ３：配列番号２４１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２４２、ＣＤＲ２：配列番号２４３、ＣＤＲ３：配列番号２４４、
（ｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２４５、ＣＤＲ２：配列番号２４６、ＣＤＲ３：配列番号２４７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２４８、ＣＤＲ２：配列番号２４９、ＣＤＲ３：配列番号２５０、
（ｖｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２５１、ＣＤＲ２：配列番号２５２、ＣＤＲ３：配列番号２５３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２５４、ＣＤＲ２：配列番号２５５、ＣＤＲ３：配列番号２５６、
（ｖｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２５７、ＣＤＲ２：配列番号２５８、ＣＤＲ３：配列番号２５９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２６０、ＣＤＲ２：配列番号２６１、ＣＤＲ３：配列番号２６２、
（ｖｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２６３、ＣＤＲ２：配列番号２６４、ＣＤＲ３：配列番号２６５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２６６、ＣＤＲ２：配列番号２６７、ＣＤＲ３：配列番号２６８、
（ｉｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２６９、ＣＤＲ２：配列番号２７０、ＣＤＲ３：配列番号２７１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２７２、ＣＤＲ２：配列番号２７３、ＣＤＲ３：配列番号２７４、
（ｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２７５、ＣＤＲ２：配列番号２７６、ＣＤＲ３：配列番号２７７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２７８、ＣＤＲ２：配列番号２７９、ＣＤＲ３：配列番号２８０、
（ｘｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２８１、ＣＤＲ２：配列番号２８２、ＣＤＲ３：配列番号２８３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２８４、ＣＤＲ２：配列番号２８５、ＣＤＲ３：配列番号２８６、
（ｘｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２８７、ＣＤＲ２：配列番号２８８、ＣＤＲ３：配列番号２８９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２９０、ＣＤＲ２：配列番号２９１、ＣＤＲ３：配列番号２９２、
（ｘｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２９３、ＣＤＲ２：配列番号２９４、ＣＤＲ３：配列番号２９５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２９６、ＣＤＲ２：配列番号２９７、ＣＤＲ３：配列番号２９８、
（ｘｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２９９、ＣＤＲ２：配列番号３００、ＣＤＲ３：配列番号３０１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号３０２、ＣＤＲ２：配列番号３０３、ＣＤＲ３：配列番号３０４、
（ｘｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号３１１、ＣＤＲ２：配列番号３１２、ＣＤＲ３：配列番号３１３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号３１４、ＣＤＲ２：配列番号３１５、ＣＤＲ３：配列番号３１６、
（ｘｖｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号３１７、ＣＤＲ２：配列番号３１８、ＣＤＲ３：配列番号３１９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号３２０、ＣＤＲ２：配列番号３２１、ＣＤＲ３：配列番号３２２、及び
（ｘｖｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号３２３、ＣＤＲ２：配列番号３２４、ＣＤＲ３：配列番号３２５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号３２６、ＣＤＲ２：配列番号３２７、ＣＤＲ３：配列番号３２８。
（ｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２２１、ＣＤＲ２：配列番号２２２、ＣＤＲ３：配列番号２２３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２２４、ＣＤＲ２：配列番号２２５、ＣＤＲ３：配列番号２２６、
（ｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２２７、ＣＤＲ２：配列番号２２８、ＣＤＲ３：配列番号２２９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２３０、ＣＤＲ２：配列番号２３１、ＣＤＲ３：配列番号２３２、
（ｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２３３、ＣＤＲ２：配列番号２３４、ＣＤＲ３：配列番号２３５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２３６、ＣＤＲ２：配列番号２３７、ＣＤＲ３：配列番号２３８、
（ｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２３９、ＣＤＲ２：配列番号２４０、ＣＤＲ３：配列番号２４１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２４２、ＣＤＲ２：配列番号２４３、ＣＤＲ３：配列番号２４４、
（ｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２４５、ＣＤＲ２：配列番号２４６、ＣＤＲ３：配列番号２４７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２４８、ＣＤＲ２：配列番号２４９、ＣＤＲ３：配列番号２５０、
（ｖｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２５１、ＣＤＲ２：配列番号２５２、ＣＤＲ３：配列番号２５３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２５４、ＣＤＲ２：配列番号２５５、ＣＤＲ３：配列番号２５６、
（ｖｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２５７、ＣＤＲ２：配列番号２５８、ＣＤＲ３：配列番号２５９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２６０、ＣＤＲ２：配列番号２６１、ＣＤＲ３：配列番号２６２、
（ｖｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２６３、ＣＤＲ２：配列番号２６４、ＣＤＲ３：配列番号２６５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２６６、ＣＤＲ２：配列番号２６７、ＣＤＲ３：配列番号２６８、
（ｉｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２６９、ＣＤＲ２：配列番号２７０、ＣＤＲ３：配列番号２７１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２７２、ＣＤＲ２：配列番号２７３、ＣＤＲ３：配列番号２７４、
（ｘ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２７５、ＣＤＲ２：配列番号２７６、ＣＤＲ３：配列番号２７７、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２７８、ＣＤＲ２：配列番号２７９、ＣＤＲ３：配列番号２８０、
（ｘｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２８１、ＣＤＲ２：配列番号２８２、ＣＤＲ３：配列番号２８３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２８４、ＣＤＲ２：配列番号２８５、ＣＤＲ３：配列番号２８６、
（ｘｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２８７、ＣＤＲ２：配列番号２８８、ＣＤＲ３：配列番号２８９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２９０、ＣＤＲ２：配列番号２９１、ＣＤＲ３：配列番号２９２、
（ｘｉｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２９３、ＣＤＲ２：配列番号２９４、ＣＤＲ３：配列番号２９５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号２９６、ＣＤＲ２：配列番号２９７、ＣＤＲ３：配列番号２９８、
（ｘｉｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号２９９、ＣＤＲ２：配列番号３００、ＣＤＲ３：配列番号３０１、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号３０２、ＣＤＲ２：配列番号３０３、ＣＤＲ３：配列番号３０４、
（ｘｖ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号３１１、ＣＤＲ２：配列番号３１２、ＣＤＲ３：配列番号３１３、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号３１４、ＣＤＲ２：配列番号３１５、ＣＤＲ３：配列番号３１６、
（ｘｖｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号３１７、ＣＤＲ２：配列番号３１８、ＣＤＲ３：配列番号３１９、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号３２０、ＣＤＲ２：配列番号３２１、ＣＤＲ３：配列番号３２２、及び
（ｘｖｉｉ）ＶＨ：ＣＤＲ１：配列番号３２３、ＣＤＲ２：配列番号３２４、ＣＤＲ３：配列番号３２５、ＶＬ：ＣＤＲ１：配列番号３２６、ＣＤＲ２：配列番号３２７、ＣＤＲ３：配列番号３２８。
【0147】
実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１５、２１７、及び２１９からなる群から選択される可変重鎖配列、及び／または配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１６、２１８、及び２２０からなる群から選択される可変軽鎖配列を含む。
【0148】
実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはその抗原結合フラグメントは、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列の特定の対を含み、以下の組み合わせ：配列番号１を含む可変重鎖配列及び配列番号２を含む可変軽鎖配列、配列番号３を含む可変重鎖配列及び配列番号４を含む可変軽鎖配列、配列番号５を含む可変重鎖配列及び配列番号６を含む可変軽鎖配列、配列番号７を含む可変重鎖配列及び配列番号８を含む可変軽鎖配列、配列番号９を含む可変重鎖配列及び配列番号１０を含む可変軽鎖配列、配列番号１１を含む可変重鎖配列及び配列番号１２を含む可変軽鎖配列、配列番号１３を含む可変重鎖配列及び配列番号１４を含む可変軽鎖配列、配列番号１５を含む可変重鎖配列及び配列番号１６を含む可変軽鎖配列、配列番号１７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８を含む可変軽鎖配列、配列番号１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２０を含む可変軽鎖配列、配列番号２１を含む可変重鎖配列及び配列番号２２を含む可変軽鎖配列、配列番号２３を含む可変重鎖配列及び配列番号２４を含む可変軽鎖配列、配列番号２５を含む可変重鎖配列及び配列番号２６を含む可変軽鎖配列、配列番号２７を含む可変重鎖配列及び配列番号２８を含む可変軽鎖配列、配列番号２９を含む可変重鎖配列及び配列番号３０を含む可変軽鎖配列、配列番号３１を含む可変重鎖配列及び配列番号３２を含む可変軽鎖配列、配列番号３３を含む可変重鎖配列及び配列番号３４を含む可変軽鎖配列、配列番号３５を含む可変重鎖配列及び配列番号３６を含む可変軽鎖配列、配列番号３７を含む可変重鎖配列及び配列番号３８を含む可変軽鎖配列、配列番号３９を含む可変重鎖配列及び配列番号４０を含む可変軽鎖配列、配列番号４１を含む可変重鎖配列及び配列番号４２を含む可変軽鎖配列、配列番号４３を含む可変重鎖配列及び配列番号４４を含む可変軽鎖配列、ならびに配列番号４５を含む可変重鎖配列及び配列番号４６を含む可変重鎖配列、から選択される。
【0149】
代替の実施形態において、完全にヒトの抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗原結合フラグメントは、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列の特定の対を含み、以下の組み合わせ：配列番号１８５を含む可変重鎖配列及び配列番号１８６を含む可変軽鎖配列、配列番号１８７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８８を含む可変軽鎖配列、配列番号１８９を含む可変重鎖配列及び配列番号１９０を含む可変軽鎖配列、配列番号１９１を含む可変重鎖配列及び配列番号１９２を含む可変軽鎖配列、配列番号１９３を含む可変重鎖配列及び配列番号１９４を含む可変軽鎖配列、配列番号１９５を含む可変重鎖配列及び配列番号１９６を含む可変軽鎖配列、配列番号１９７を含む可変重鎖配列及び配列番号１９８を含む可変軽鎖配列、配列番号１９９を含む可変重鎖配列及び配列番号２００を含む可変軽鎖配列、配列番号２０１を含む可変重鎖配列及び配列番号２０２を含む可変軽鎖配列、配列番号２０３を含む可変重鎖配列及び配列番号２０４を含む可変軽鎖配列、配列番号２０５を含む可変重鎖配列及び配列番号２０６を含む可変軽鎖配列、配列番号２０７を含む可変重鎖配列及び配列番号２０８を含む可変軽鎖配列、配列番号２０９を含む可変重鎖配列及び配列番号２１０を含む可変軽鎖配列、配列番号２１１を含む可変重鎖配列及び配列番号２１２を含む可変軽鎖配列、配列番号２１５を含む可変重鎖配列及び配列番号２１６を含む可変軽鎖配列、列番号２１７を含む可変重鎖配列及び配列番号２１８を含む可変軽鎖配列、ならびに配列番号２１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２２０を含む可変軽鎖配列、から選択される。
【0150】
代替の実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列の対を含み、以下の組み合わせ：配列番号１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号３０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号３１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号３２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号３３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号３４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号３５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号３６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、列番号３７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号３８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号３９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号４０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号４１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号４２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号４３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号４４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号４５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号４６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、から選択される。
【0151】
別の代替の実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列の対を含み、以下の組み合わせ：配列番号１８５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１８６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１８７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１８８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１８９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１９０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１９１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１９２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１９３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１９４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１９５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１９６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１９７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号１９８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号１９９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２００と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２０１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２０２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２０３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２０４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２０５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２０６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２０７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２０８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２０９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２１０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２１１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２１２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２１５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２１６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２１７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２１８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、配列番号２１９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列及び配列番号２２０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、から選択される。
【0152】
いくつかの実施形態において、抗体は、全長抗体である。他の実施形態において、抗体は、抗体フラグメントであり、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、及び相補性決定領域（ＣＤＲ）フラグメント、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニ抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、ならびにＣＬＤＮ１８．２特異的結合が付与されるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドからなる群から選択される抗体フラグメントを含む。
【0153】
したがって、一実施形態において、抗体フラグメントは、本明細書に記載の少なくとも１つのＣＤＲを含む。抗体フラグメントは、本明細書に記載されような、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含み得る。抗体フラグメントは、本明細書に記載の抗体の少なくとも１つの可変領域ドメインをさらに含み得る。可変領域ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであり得、一般に、ヒトＣＬＤＮ１８．２に特異的に結合することに関与する少なくとも１つのＣＤＲ配列、例えば、本明細書に記載されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及び／またはＣＤＲ－Ｌ３を含み、それは１つ以上のフレームワーク配列を有するフレームに隣接するか、またはそのフレーム内にある。
【0154】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ８．２抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ８．２抗体は、ヒト抗体である。代替の実施形態において、抗ＣＬＤＮ８．２抗体は、ネズミ抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ８．２抗体は、キメラ抗体、二重特異性抗体、またはヒト化抗体である。
【0155】
いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を含む。当業者は、保存的アミノ酸置換は、１つのアミノ酸の別のアミノ酸による置換であり、別のアミノ酸は、例えば、同様の側鎖などの類似した構造的または化学的特性を有することを認識するであろう。例示的な保存的置換は、当該技術分野、例えば、Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ，４ｔｈ Ｅｄ．（１９８７）に記載されている。
【0156】
「保存的改変」は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に著しく影響を及ぼさないか、または変化させないアミノ酸改変を指す。保存的改変には、アミノ酸置換、付加、及び欠失が含まれる。保存的置換は、アミノ酸が類似の側鎖を有するアミノ酸残基によって置き換えられるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、十分に定義されており、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン）、アミド（例えば、アスパラギン、グルタミン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び硫黄含有側鎖（システイン、メチオニン）を有するアミノ酸が含まれる。さらに、ポリペプチドにおける任意の天然残基は、アラニン系統的変異導入法について既に報告されているように、アラニンによっても置換され得る（ＭａｃＬｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ｓｕｐｐｌ ６４３：５５－６７、Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｄｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ ３５：１－２４）。本発明の抗体に対するアミノ酸置換は、既知の方法、例えば、ＰＣＲ変異誘発によって行われ得る（米国特許第４，６８３，１９５号）。
【0157】
一実施形態において、ＩＬ－ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントは、キメラまたはヒト化抗体として構成されたＭｓ１、Ｍｓ２、Ｍｓ３、Ｍｓ４、Ｍｓ５、Ｍｓ６、Ｍｓ７、Ｍｓ８、Ｍｓ９、Ｍｓ１０、Ｍｓ１１、Ｍｓ１２、Ｍｓ１３、Ｍｓ１４、Ｍｓ１５、Ｍｓ１６、Ｍｓ１７、Ｍｓ１８、Ｍｓ１９、Ｍｓ２０、Ｍｓ２１、Ｍｓ２２、またはＭｓ２３のＣＤＲ領域の６つ全てを含む。他の実施形態において、ＣＬＤＮ１８．２抗体またはその抗体フラグメントは、開示される完全にヒトの抗体のうちの１つのＣＤＲ領域の６つ全てを含む。
【0158】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の可変領域ドメインは、Ｃ末端アミノ酸で少なくとも１つの他の抗体ドメインまたはそのフラグメントに共有結合され得る。したがって、例えば、可変領域ドメインに存在するＶＨドメインは、免疫グロブリンＣＨ１ドメイン、またはそのフラグメントに連結され得る。同様に、ＶＬドメインは、ＣＫドメインまたはそのフラグメントに連結され得る。この方法では、例えば、抗体は、抗原結合ドメインがそれぞれＣＨ１及びＣＫドメインにＣ末端で共有結合される関連するＶＨ及びＶＬドメインを含有するＦａｂフラグメントであり得る。ＣＨ１ドメインをさらなるアミノ酸で伸長して、例えば、Ｆａｂフラグメントに認められるようなヒンジ領域またはヒンジ領域ドメインの一部を提供するか、または抗体ＣＨ２及びＣＨ３ドメインなどのさらなるドメインを提供し得る。
【0159】
抗原結合フラグメント、単一特異性抗体、または多重特異性抗体は、組換えＤＮＡ技法によって、またはインタクト抗体の酵素的もしくは化学的切断によって生成され得る。抗体フラグメントの例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ）２、ダイアボディ、直鎖抗体、単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）が含まれるが、これらに限定されない。「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。開示される抗ＣＬＤＮ１８結合ＣＤＲのうちの１つ以上を、共有結合または非共有結合のいずれかで組換え分子に組み込んで、それをキメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びＣＬＤＮ１８特異的結合が付与されるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドの構成で、抗原結合タンパク質にし得る。
【0160】
したがって、一実施形態において、結合剤は、本明細書に記載される少なくとも１つのＣＤＲを含む。結合剤は、本明細書に記載される少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含み得る。結合剤は、本明細書に記載される抗体の少なくとも１つの可変領域ドメインをさらに含み得る。可変領域ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであり得、ヒトＣＬＤＮ１８．２に結合することに関与する少なくとも１つのＣＤＲ配列、例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、及び／または軽鎖ＣＤＲを含み、それは１つ以上のフレームワーク配列を有するフレームに隣接するか、またはそのフレーム内にある。
【0161】
一般に、可変（Ｖ）領域ドメインは、免疫グロブリン重（ＶＨ）及び／または軽（ＶＬ）鎖可変ドメインの任意の好適な配置であり得る。したがって、例えば、Ｖ領域ドメインは、単量体であり得、以下に記載されるように、ヒトＣＬＤＮ１８．２に独立して結合することができるＶＨまたはＶＬドメインであり得る。あるいは、Ｖ領域ドメインは、二量体であり得、ＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬ、またはＶＬ－ＶＬの二量体を含み得る。Ｖ領域二量体は、非共有結合によって会合し得る少なくとも１つのＶＨ鎖及び少なくとも１つのＶＬ鎖を含む（以下、ＦＶと称する）。所望される場合、鎖は、例えば、２つの可変ドメイン間のジスルフィド結合を介して、またはリンカー、例えば、ペプチドリンカーを介して、直接的に共有結合されて、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦＶ）を形成し得る。
【0162】
当業者は、ヒトＩｇＧ免疫グロブリン分子（抗体）が、２つの同一の５０ｋＤａのγ重（Ｈ）鎖及び２つの同一の２５ｋＤａのκまたはλ軽（Ｌ）鎖から構成される４つのポリペプチド鎖からなり、鎖間ジスルフィド結合によって共に連結されることを認識するであろう。各重鎖は、Ｎ末端可変ドメイン（ＶＨ）及び３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）を含むＦｃ領域からなり、ＣＨ１とＣＨ２との間にさらなる「ヒンジ領域」を有する。各軽鎖は、Ｎ末端可変ドメイン（ＶＬ）及び単一定常ドメイン（ＣＬ）からなる。軽鎖の２つのタイプ、カッパ（κ）及びラムダ（λ）もまた、最初に血清学的に、その後、タンパク質及び遺伝子配列によって定義された。各Ｈ２Ｌ２モジュールは、２つのカッパまたは２つのラムダ軽鎖のいずれかを発現して、Ｈ２κ２またはＨ２λ２ヘテロ二量体を形成する。
【0163】
ＩｇＧ重鎖分子のＦｃ領域はまた、胎盤輸送及びＩｇＧ半減期に関与する新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）のＦｃ ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン間の接点に位置する結合エピトープを含有する。一般に、抗体の可変領域（ＶＨ及びＶＬドメイン）は、標的におけるエピトープの認識に関与し、Ｆｃフラグメントは、抗体の生物学的特性を付与するように機能する。より具体的には、Ｆｃ領域は、抗体がＦｃγ受容体を発現する免疫エフェクター（単球、マクロファージ、樹状細胞、及びナチュラルキラーまたはＮＫ細胞を含む）によって認識され、補体系を活性化し、ＦｃＲｎ（新生児Ｆｃ受容体）に結合することを可能にする。
【0164】
ヒトＩｇＧは、４つの高度に保存されたサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含み、それらはアミノ酸配列に９０％を超える相同性を示し、アクセサリー分子及び受容体とのそれらの結合に影響を及ぼすサブタイプ特異的差異を有する。ＩｇＧのサブクラスは、それらの定常領域の配列において、特に、ＩｇＧ－Ｆｃ受容体（Ｆｃγ受容体）及び補体成分Ｃ１ｑの両方への結合に関与するヒンジ及び上部ＣＨ２ドメインで、互いに異なる。結果として、異なるＩｇＧサブクラスは、免疫エフェクター細胞を活性化することと、補体カスケードを活性化することとの両方に関して、異なるエフェクター機能を有する。ＦｃγＲ媒介性エフェクター細胞応答のタイプには、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、サイトカインの放出、及び提示のための抗原取り込みが含まれるが、これらに限定されない。
【0165】
アイソタイプ変化に加えて、対立遺伝子変化もＩｇＧサブクラスに認められる。個体間及び民族間で異なり得る免疫グロブリンのこれらの多型エピトープは、いくつかの個体からのＩｇＧに見出されるが、他の個体からは見出されない免疫原性決定基として、血清学的所見に基づいて最初に発見された。アロタイプは、共優性のメンデル方式で遺伝され、様々なセットの組合せがアフリカ人、白人、及び東洋人集団に認められる。
【0166】
治療用抗体のために最も一般的に使用されるＩｇＧアイソタイプのサブクラスのうちの１つはＩｇＧ１であり、４つの十分に特徴付けられたアロタイプを有する。代替的なアロタイプを含むＩｇＧ１配列の使用は、ＦｃＲｎ受容体に対する結合親和性を変更することができ（増加または減少）、及び／または改変抗体及びＦｃＲｎによって形成される複合体の安定性を増加させ、それによって、治療用抗体の薬物動態に影響を及ぼすことが報告されている（ＵＳ２０１８／０３６２６２４、及びＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９６（２）：６０７（２０１６），Ｔｅｒｎａｎｔ，Ｄ ｅｔ ａｌ）。現在、４つの有力なアロタイプのＩｇＧ１ ｍＡｂ治療薬が認可され、市場にある。当業者は、本発明のＶＨ領域と共に使用するために好適なＩｇＧ１ ＣＨ配列を容易に決定することができることに留意されたい。
【0167】
一態様において、本明細書に提供される抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、可変重鎖配列及び可変軽鎖配列の特定の対を、野生型ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域（ＣＨ）及び野生型ヒトカッパ軽鎖（ＣＬ）領域と組み合わせて含む。例えば、限定の目的のためではなく、本発明は、配列番号３３１～３３４に示される配列から選択される野生型ヒトＩｇＧ１定常重鎖（ＣＨ）免疫グロブリン配列と組み合わせた本発明の重鎖可変領域（ＶＨ）、及び免疫グロブリン軽鎖定常領域（ＣＬ）と組み合わせた本発明の軽鎖可変領域（ＶＬ）を有する野生型ヒト免疫グロブリン軽鎖を含む、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を提供する。いくつかの態様において、ＣＬ領域は、配列番号３３５に示される配列を含むヒトカッパ軽鎖領域を含む。図１１Ａ及び１１Ｂは、本発明のＶＨ及びＶＬ配列と組み合わせて使用するために好適なヒトＩｇＧ１ ＣＨドメイン（図１１Ａ）及びヒトカッパ鎖ドメイン（図１１Ｂ）に関する配列情報を提供する。
【0168】
別の態様において、本明細書に提供される抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、配列に導入された点変異を含んで、ＡＤＣＣもしくはＡＤＣＰ活性などの望ましいエフェクター機能を増強するか、または抗体の半減期もしくは安定性を延長する改変ＣＨを含む、ヒトＩｇＧ１ ＣＨ領域を含む。一態様において、本発明は、増強されたＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／またはＣＤＣ活性によるがん免疫療法として、「目的に適合」させる意図された方法で操作または作製される抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を提供する。より具体的には、本発明の一態様は、ＩｇＧ－Ｆｃコアフコースが低いかまたはないことを特徴とする抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を特徴とする。非フコシル化抗ＣＬＤＮ１８．２治療用抗体の潜在的な利点は、治療効能を低用量で達成する可能性を含み、低レベルのＣＬＤＮ１８．２を発現する腫瘍細胞に対する高い細胞性細胞傷害を誘導し、ＣＤ１６ａ低親和性Ｆｃγ受容体を発現するＮＫ細胞における高エフェクター機能を誘発する。
【0169】
一態様において、限定の目的のためではなく、本発明は、ＩｇＧコアフコースが低いかまたはない（非もしくは無フコシル化）抗体を特徴とする抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を特徴とする。当業者は、本発明のこの態様が、図１における、抗体配列（ＶＨ及びＶＬ）の対もしくはＶＨ及びＶＬ ＣＤＲのセットから選択される可変（すなわち、ＶＨ及びＶＬ）領域を含むキメラまたはヒト化抗ＣＬＤＮ１８．２抗体であり得ることを容易に理解するであろう。あるいは、ＩｇＧコアフコースが低いかまたはないことを特徴とする抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、図２における抗体配列（ＶＨ及びＶＬ）の対またはＶＨ及びＶＬ ＣＤＲのセットから選択される可変領域を含む完全にヒトの配列であることができる。
【0170】
一態様において、本発明の抗体は、非フルコシル化抗ＣＬＤＮ１８．２抗体、または低いコアＩｇＧコアフコースレベルを特徴とする抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を特徴とし、配列番号１及び配列番号２、配列番号３及び配列番号４、配列番号２０１及び配列番号２０２、ならびに配列番号２０３及び配列番号２０４からそれぞれ選択されるＶＨ配列及びＶＬ配列の対を含む。任意の特定の抗体において、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的可変領域は、配列番号３３１～３３４から選択されるヒトＩｇＧ１定常重鎖免疫グロブリン配列、及び配列番号３３５に示される配列を含むヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む全長ＩｇＧの形式であることができる。
【0171】
代替的な態様において、本発明は、ＣＬＤＮ１８．２抗体が、野生型ヒトＩｇＧ１ ＣＨ配列を含む同じ抗体（例えば、同じ可変ＶＨ及びＶＬ領域または６セットのＣＤＲ配列のセット）の活性と比較して、ＡＤＣＣ、及び／またはＡＤＣＰ及び／またはＣＤＣ活性を増強するようにＦｃ領域における標的化された部位に点変異を含むことを特徴とする。当業者は、本発明のこの態様が、図１における、抗体配列（ＶＨ及びＶＬ）の対もしくはＶＨ及びＶＬ ＣＤＲのセットから選択される可変領域（すなわち、ＶＨ及びＶＬ）領域を含むキメラまたはヒト化抗ＣＬＤＮ１８．２抗体であり得ることを容易に理解するであろう。あるいは、点変異を含むＦｃ操作された抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、図２における抗体配列（ＶＨ及びＶＬ）の対またはＶＨ及びＶＬ ＣＤＲのセットから選択される可変領域を含む完全にヒトの配列であり得る。
【0172】
一態様において、本発明は、配列番号１及び配列番号２、配列番号３及び配列番号４、配列番号２０１及び配列番号２０２、ならびに配列番号２０３及び配列番号２０４からそれぞれ選択されるＶＨ配列及びＶＬ配列を含む、Ｆｃ操作された抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体を提供する。任意の特定の抗体において、抗ＣＬＤＮ１８．２特異的可変領域は、配列番号３３１～３３４から選択されるヒトＩｇＧ１定常重鎖免疫グロブリン配列、及び配列番号３３５に示される配列を含むヒトＩｇカッパ軽鎖定常領域を含む全長ＩｇＧの形式であることができる。
【0173】
例えば、限定の目的のためではなく、本発明は、望ましい生物活性を増強するように設計されたＣＨ１及び／またはＣＨ２及び／またはＣＨ３領域における点変異を含む操作されたＣＨ領域と組み合わせた配列番号２０１に提供されるＶＨ配列と、配列番号３３５に示される配列などのヒトカッパ軽鎖免疫グロブリン配列と組み合わせた配列番号２０２に提供されるＶＬ配列と、を含む、Ｆｃ操作された完全にヒトのＩｇＧ１抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を提供する。一態様において、限定の目的のためではなく、本発明は、アミノ酸配列番号３３６を有する組換え重鎖及び配列番号３３７に示される配列を含む軽鎖を含む、本明細書においてｍＡｂ ＮＢＬ－０１４と称される抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を特徴とする（図１２を参照されたい）。代替の実施形態において、本発明は、アミノ酸配列番号３３８を有する組換え重鎖、及び配列番号３３７に示される配列を含む軽鎖を含む、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を提供し、本明細書においてＮＢＬ－０１４と称される（図１２を参照されたい）。
【0174】
代替の態様において、本発明は、望ましい生物活性を増強するように設計されたＣＨ１及び／またはＣＨ２及び／またはＣＨ３領域における点変異を含む操作されたＣＨ領域と組み合わせた配列番号２０３に提供されるＶＨ配列と、配列番号３３５に示される配列などのヒトカッパ軽鎖免疫グロブリン配列と組み合わせた配列番号２０４に提供されるＶＬ配列と、を含む、Ｆｃ操作された完全にヒトのＩｇＧ１抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を提供する。
【0175】
代替の態様において、本発明は、図１及び２に提供されるＶＨ及びＶＬ ＣＤＲのセットから選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を含むＶＨ配列を含む、Ｆｃ改変されたか、糖鎖操作されたか、またはタンパク質操作された（例えば、ＣＨ Ｆｃ領域における点変異の導入）抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体を提供する。より具体的には、本発明は、望ましい生物活性を増強するように設計されたＣＨ１及び／またはＣＨ２及び／またはＣＨ３領域における点変異を含む操作されたＣＨ領域と組み合わせた、配列番号４７～４９、配列番号５３～５５、配列番号２６９～２７１、及び配列番号２７５～２７７から選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列のセットを含むＶＨドメインが、ヒトカッパ軽鎖免疫グロブリン配列と組み合わせた、それぞれ配列番号５０～５２、配列番号５６～５８、配列番号２７２～２７４、及び配列番号２７８～２８０から選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列のセットを含むＶＬ配列と対形成される、操作された抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を特徴とする。
【0176】
本開示の抗体の治療的価値は、その有効性及び効力を向上させる細胞傷害性薬物または薬剤へのコンジュゲーションによって増強することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、放射性同位体、薬物、または細胞毒素などの細胞傷害性エフェクター剤に結合したＣＬＤＮ１８．２特異的抗体を含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。エンドサイトーシスによる内部移行は、抗体が抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の開発に適していることを示す。これらの特性を有する抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、ＣＬＤＮ１８．２関連疾患または障害を治療するために、二重特異性のキメラ抗原受容体Ｔ細胞またはＮＫ細胞、細胞療法、及び併用療法に適用することもできるが、これらに限定されない。
【0177】
本開示の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体はまた、ＣＬＤＮ１８．２特異的結合に依存する抗体ベース免疫療法剤を開発するために使用して、患者エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を、二重特異性Ｔ細胞結合抗体、もしくはＮＫ細胞を向け直す二重特異性分子、またはＣＡＲ－Ｔ療法などの細胞療法を含む腫瘍に導くことができる。
【0178】
抗体を産生する方法
多くの好適な方法は、抗体生成に適用することができ、当業者に知られている。例えば、レシピエントは、クローディン１８．２、可溶性組換えクローディン１８．２タンパク質、または担体タンパク質とコンジュゲートされたそのフラグメントもしくはペプチドを発現する細胞で免疫され得る。当業者に既知の任意の好適な方法を使用して、所望の生物学特性を有する抗体を誘発して、クローディン１８．２を阻害し得る。かかる方法は、アジュバント、他の免疫刺激剤、反復ブースター免疫化、及び１つ以上の免疫化経路の使用を含む免疫の方法を含むことができる。
多くの好適な方法は、抗体生成に適用することができ、当業者に知られている。例えば、レシピエントは、クローディン１８．２、可溶性組換えクローディン１８．２タンパク質、または担体タンパク質とコンジュゲートされたそのフラグメントもしくはペプチドを発現する細胞で免疫され得る。当業者に既知の任意の好適な方法を使用して、所望の生物学特性を有する抗体を誘発して、クローディン１８．２を阻害し得る。かかる方法は、アジュバント、他の免疫刺激剤、反復ブースター免疫化、及び１つ以上の免疫化経路の使用を含む免疫の方法を含むことができる。
【0179】
任意の好適なクローディン１８．２供給源を、本明細書に開示される組成物及び方法のクローディン１８．２に特異的な、非ヒト抗体またはヒト抗体の生成のための免疫原として使用することができる。かかる形態には、限定されないが、クローディン１８．２を発現する細胞（内因性細胞またはクローディン１８．２遺伝子でトランスフェクトされる細胞）全タンパク質、ペプチド（複数可）、及びエピトープが含まれ、当該技術分野で既知の組換え、合成的、化学的、または酵素的分解手段を通じて生成される。
【0180】
異なる形態の抗原を使用して、生物学的に活性な抗体をもたらすのに十分な抗体を生成し得る。したがって、誘発性抗原は、単一のエピトープ、複数のエピトープ、またはタンパク質全体の単独もしくは１つ以上の免疫原性誘発性薬剤との組み合わせであり得る。いくつかの場合において、誘発性抗原は、単離された全長タンパク質、細胞表面タンパク質（例えば、抗原の少なくとも一部でトランスフェクトされた細胞で免疫する）、または可溶性タンパク質（例えば、タンパク質の細胞外ドメイン部分のみで免疫する）である。
【0181】
いくつかの実施形態において、抗原は、遺伝子改変細胞で産生される。抗原をコードするＤＮＡは、ゲノムまたは非ゲノム（例えば、ｃＤＮＡ）であり得、細胞外ドメインの少なくとも一部をコードし得る。本明細書で使用される場合、「部分」という用語は、目的対象の抗原の免疫原性エピトープを構成するために、適切である最小数のアミノ酸または核酸を指す。目的対象の細胞の形質転換に好適である任意の遺伝子ベクターが用いられ得、アデノウイルスベクター、プラスミド、及びカチオン性脂質などの非ウイルスベクターが含まれるが、これらに限定されない。
【0182】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒトなどの様々な哺乳類宿主から調製することが望ましい。かかるモノクローナル抗体を調製するための技法の説明は、例えば、Ｓｔｉｅｓ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）ＢＡＳＩＣ ＡＮＤ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（４ｔｈ ｅｄ．）Ｌａｎｃｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，ＣＡ、及び本明細書に引用される参照：Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ、Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ（２Ｄ ｅｄ）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹに認められ得る。典型的には、所望の抗原で免疫した動物からの脾細胞は、一般に、骨髄腫細胞との融合によって不死化される。Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１－５１９を参照されたい。不死化の代替的な方法には、エプスタインバーウイルス、がん遺伝子、もしくはレトロウイルスによる形質転換、または当該技術分野において既知の他の方法が含まれる。例えば、Ｄｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．１９９４ ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）ＣＥＬＬ ＡＮＤ ＴＩＳＳＵＥ ＣＵＬＴＵＲＥ：ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＰＲＯＣＥＤＵＲＥＳ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい。単一の不死化細胞から生じるコロニーは、抗原に対する所望の特異性及び親和性の抗体の産生のためにスクリーニングされ、かかる細胞によって産生されるモノクローナル抗体の収率は、脊椎動物宿主の腹腔への注射を含む、様々な技法によって増強され得る。あるいは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするＤＮＡ配列は、例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１に従って、ヒトＢ細胞からのＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって単離し得る。したがって、モノクローナル抗体は、当業者に熟知されている様々な技法によって得ることができる。
【0183】
他の好適な技法は、ファージ、酵母、ウイルス、または同様なベクターにおける抗体のライブラリーの選択を伴う。例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．同上、及びＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６を参照されたい。本発明のポリペプチド及び抗体は、改変を伴うかまたは伴わずに使用され得、キメラ抗体またはヒト化抗体が含まれる。多くの場合、ポリペプチド及び抗体は、検出可能なシグナルを提供する物質を共有結合または非共有結合のいずれかで結合することによって標識される。多種多様な標識及びコンジュゲーション技法が知られており、科学文献及び特許文献の両方で広く報告されている。好適な標識には、放射性核種、酵素、基質、補因子、阻害剤、蛍光部分、化学発光部分、磁性粒子などが含まれる。かかる標識の使用を教示する特許には、米国特許第３，８１７，８３７号、第３，８５０，７５２号、第３，９３９６，３４５号、第４，２７７，４３７号、第４，２７５，１４９号、及び第４，３６６，２４１号が含まれる。また、組換え免疫グロブリンが産生され得、Ｃａｂｉｌｌｙ米国特許第４，８１６，５６７号、及びＱｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００２３を参照し、または遺伝子導入マウスが作製され得、Ｎｉｌｓ Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（１９９４），Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９、及びＭｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１５：１４６－１５６、ＴＲＡＮＳＧＥＮＩＣ ＡＮＩＭＡＬＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤＳ ＯＦ ＵＳＥ（ＷＯ２０１２ＵＳ６２１１８Ａ），Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｔｒｉａｎｎｉ，Ａｂｇｅｎｉｘ，Ａｂｌｅｘｉｓ，ＯｍｉｎｉＡｂ，Ｈａｒｂｏｕｒ、及び他の技術を参照する。
【0184】
いくつかの実施形態において、産生される抗体が抗原（例えば、ＣＬＤＮ１８）に結合する能力は、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、免疫蛍光、及びフローサイトメトリー分析などの標準的な結合アッセイを使用して評価することができる。いくつかの態様において、産生される抗体は、ＣＬＤＮ１８を発現する標的細胞（例えば、腫瘍細胞）の殺傷を媒介するその能力（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性食作用（ＡＤＣＰ）、及び／または細胞増殖の阻害）についても評価され得る。
【0185】
細胞から調製される抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及び親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーは、典型的な精製技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡを使用して、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製することができる（例えば、Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，１９８３ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１－１３を参照されたい）．。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ３について推奨される（例えば、Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６ ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７－１５７５を参照されたい）。親和性リガンドが結合しているマトリックスは、ほとんどの場合、アガロースであるが、他のマトリックスが利用可能である。制御された孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスは、アガロースで達成され得るよりも速い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が精製のために有用である。イオン交換カラムでの画分化、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、アニオンまたはカチオン交換樹脂でのヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー（ポリアスパラギン酸カラムなど）、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿などのタンパク質精製のための他の技法もまた、回収される抗体に応じて利用可能である。
【0186】
任意の予備的精製ステップ（複数可）に続いて、目的対象の抗体及び混入物質を含む混合物は、低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩）で典型的に実施される、約２．５～４．５のｐＨでの溶離緩衝液を使用して、低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し得る。
【0187】
本開示の抗体または抗体フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチド配列（複数可）によって表されるヌクレオチド配列の全部または一部（例えば、可変領域をコードする部分）に、本明細書に定義されるような低度、中度、及び高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸もまた含まれる。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイゼーション部分は、典型的には、長さが少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０、または５０）ヌクレオチドである。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイゼーション部分は、抗ＣＬＤＮ１８ポリペプチド（例えば、重鎖または軽鎖可変領域）またはその相補鎖をコードする核酸の一部もしくは全ての配列と、少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一である。本明細書に記載のタイプのハイブリダイズする核酸は、例えば、クローニングプローブ、プライマー、例えば、ＰＣＲプライマー、または診断用プローブとして使用することができる。
【0188】
ポリヌクレオチド、ベクター、及び宿主細胞
他の実施形態は、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドと、ポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞と、抗体の産生のための組換え技法と、を包含する。単離されたポリヌクレオチドは、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の任意の所望の形態をコードすることができ、例えば、全長モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体分子、ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が含まれる。
他の実施形態は、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントをコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチドと、ポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞と、抗体の産生のための組換え技法と、を包含する。単離されたポリヌクレオチドは、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の任意の所望の形態をコードすることができ、例えば、全長モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体分子、ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が含まれる。
【0189】
いくつかの実施形態は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、１８５、１８７、１８９、１９１、１９３、１９５、１９７、１９９、２０１、２０３、２０５、２０７、２０９、２１１、２１５、２１７、または２１９のアミノ酸配列を有する抗体または抗体フラグメントの重鎖可変領域をコードする配列を含む、単離されたポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４、２０６、２０８、２１０、２１２、２１６、２１８、または２２０のうちのいずれかのアミノ酸配列を有する抗体または抗体フラグメントの軽鎖可変領域をコードする配列を含む、単離されたポリヌクレオチドを含む。
【0190】
実施形態において、単離されたポリヌクレオチド配列（複数可）は、以下のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を有する抗体または抗体フラグメントをコードする。
（ａ）配列番号１を含む可変重鎖配列及び配列番号２を含む可変軽鎖配列、
（ｂ）配列番号３を含む可変重鎖配列及び配列番号４を含む可変軽鎖配列、
（ｃ）配列番号５を含む可変重鎖配列及び配列番号６を含む可変軽鎖配列、
（ｄ）配列番号７を含む可変重鎖配列及び配列番号８を含む可変軽鎖配列、
（ｅ）配列番号９を含む可変重鎖配列及び配列番号１０を含む可変軽鎖配列、
（ｆ）配列番号１１を含む可変重鎖配列及び配列番号１２を含む可変軽鎖配列、
（ｇ）配列番号１３を含む可変重鎖配列及び配列番号１４を含む可変軽鎖配列、
（ｈ）配列番号１５を含む可変重鎖配列及び配列番号１６を含む可変軽鎖配列、
（ｉ）配列番号１７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８を含む可変軽鎖配列、
（ｊ）配列番号１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２０を含む可変軽鎖配列、
（ｋ）配列番号２１を含む可変重鎖配列及び配列番号２２を含む可変軽鎖配列、
（ｌ）配列番号２３を含む可変重鎖配列及び配列番号２４を含む可変軽鎖配列、
（ｍ）配列番号２５を含む可変重鎖配列及び配列番号２６を含む可変軽鎖配列、
（ｎ）配列番号２７を含む可変重鎖配列及び配列番号２８を含む可変軽鎖配列、
（ｏ）配列番号２９を含む可変重鎖配列及び配列番号３０を含む可変軽鎖配列、
（ｐ）配列番号３１を含む可変重鎖配列及び配列番号３２を含む可変軽鎖配列、
（ｑ）配列番号３３を含む可変重鎖配列及び配列番号３４を含む可変軽鎖配列、
（ｒ）配列番号３５を含む可変重鎖配列及び配列番号３６を含む可変軽鎖配列、
（ｓ）配列番号３７を含む可変重鎖配列及び配列番号３８を含む可変軽鎖配列、
（ｔ）配列番号３９を含む可変重鎖配列及び配列番号４０を含む可変軽鎖配列、
（ｕ）配列番号４１を含む可変重鎖配列及び配列番号４２を含む可変軽鎖配列、
（ｖ）配列番号４３を含む可変重鎖配列及び配列番号４４を含む可変軽鎖配列、または
（ｗ）配列番号４５を含む可変重鎖配列及び配列番号４６を含む可変軽鎖配列。
（ａ）配列番号１を含む可変重鎖配列及び配列番号２を含む可変軽鎖配列、
（ｂ）配列番号３を含む可変重鎖配列及び配列番号４を含む可変軽鎖配列、
（ｃ）配列番号５を含む可変重鎖配列及び配列番号６を含む可変軽鎖配列、
（ｄ）配列番号７を含む可変重鎖配列及び配列番号８を含む可変軽鎖配列、
（ｅ）配列番号９を含む可変重鎖配列及び配列番号１０を含む可変軽鎖配列、
（ｆ）配列番号１１を含む可変重鎖配列及び配列番号１２を含む可変軽鎖配列、
（ｇ）配列番号１３を含む可変重鎖配列及び配列番号１４を含む可変軽鎖配列、
（ｈ）配列番号１５を含む可変重鎖配列及び配列番号１６を含む可変軽鎖配列、
（ｉ）配列番号１７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８を含む可変軽鎖配列、
（ｊ）配列番号１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２０を含む可変軽鎖配列、
（ｋ）配列番号２１を含む可変重鎖配列及び配列番号２２を含む可変軽鎖配列、
（ｌ）配列番号２３を含む可変重鎖配列及び配列番号２４を含む可変軽鎖配列、
（ｍ）配列番号２５を含む可変重鎖配列及び配列番号２６を含む可変軽鎖配列、
（ｎ）配列番号２７を含む可変重鎖配列及び配列番号２８を含む可変軽鎖配列、
（ｏ）配列番号２９を含む可変重鎖配列及び配列番号３０を含む可変軽鎖配列、
（ｐ）配列番号３１を含む可変重鎖配列及び配列番号３２を含む可変軽鎖配列、
（ｑ）配列番号３３を含む可変重鎖配列及び配列番号３４を含む可変軽鎖配列、
（ｒ）配列番号３５を含む可変重鎖配列及び配列番号３６を含む可変軽鎖配列、
（ｓ）配列番号３７を含む可変重鎖配列及び配列番号３８を含む可変軽鎖配列、
（ｔ）配列番号３９を含む可変重鎖配列及び配列番号４０を含む可変軽鎖配列、
（ｕ）配列番号４１を含む可変重鎖配列及び配列番号４２を含む可変軽鎖配列、
（ｖ）配列番号４３を含む可変重鎖配列及び配列番号４４を含む可変軽鎖配列、または
（ｗ）配列番号４５を含む可変重鎖配列及び配列番号４６を含む可変軽鎖配列。
【0191】
別の実施形態において、単離されたポリヌクレオチド配列（複数可）は、以下のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を有する抗体または抗体フラグメントをコードする。
（ａａ）配列番号１８５を含む可変重鎖配列及び配列番号１８６を含む可変軽鎖配列、
（ｂｂ）配列番号１８７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８８を含む可変軽鎖配列、
（ｃｃ）配列番号１８９を含む可変重鎖配列及び配列番号１９０を含む可変軽鎖配列、
（ｄｄ）配列番号１９１を含む可変重鎖配列及び配列番号１９２を含む可変軽鎖配列、
（ｅｅ）配列番号１９３を含む可変重鎖配列及び配列番号１９４を含む可変軽鎖配列、
（ｆｆ）配列番号１９５を含む可変重鎖配列及び配列番号１９６を含む可変軽鎖配列、
（ｇｇ）配列番号１９７を含む可変重鎖配列及び配列番号１９８を含む可変軽鎖配列、
（ｈｈ）配列番号１９９を含む可変重鎖配列及び配列番号２００を含む可変軽鎖配列、
（ｉｉ）配列番号２０１を含む可変重鎖配列及び配列番号２０２を含む可変軽鎖配列、
（ｊｊ）配列番号２０３を含む可変重鎖配列及び配列番号２０４を含む可変軽鎖配列、
（ｋｋ）配列番号２０５を含む可変重鎖配列及び配列番号２０６を含む可変軽鎖配列、
（ｌｌ）配列番号２０７を含む可変重鎖配列及び配列番号２０８を含む可変軽鎖配列、
（ｍｍ）配列番号２０９を含む可変重鎖配列及び配列番号２１０を含む可変軽鎖配列、
（ｎｎ）配列番号２１１を含む可変重鎖配列及び配列番号２１２を含む可変軽鎖配列、
（ｏｏ）配列番号２１５を含む可変重鎖配列及び配列番号２１６を含む可変軽鎖配列、
（ｐｐ）配列番号２１７を含む可変重鎖配列及び配列番号２１８を含む可変軽鎖配列、または
（ｑｑ）配列番号２１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２２０を含む可変軽鎖配列。
（ａａ）配列番号１８５を含む可変重鎖配列及び配列番号１８６を含む可変軽鎖配列、
（ｂｂ）配列番号１８７を含む可変重鎖配列及び配列番号１８８を含む可変軽鎖配列、
（ｃｃ）配列番号１８９を含む可変重鎖配列及び配列番号１９０を含む可変軽鎖配列、
（ｄｄ）配列番号１９１を含む可変重鎖配列及び配列番号１９２を含む可変軽鎖配列、
（ｅｅ）配列番号１９３を含む可変重鎖配列及び配列番号１９４を含む可変軽鎖配列、
（ｆｆ）配列番号１９５を含む可変重鎖配列及び配列番号１９６を含む可変軽鎖配列、
（ｇｇ）配列番号１９７を含む可変重鎖配列及び配列番号１９８を含む可変軽鎖配列、
（ｈｈ）配列番号１９９を含む可変重鎖配列及び配列番号２００を含む可変軽鎖配列、
（ｉｉ）配列番号２０１を含む可変重鎖配列及び配列番号２０２を含む可変軽鎖配列、
（ｊｊ）配列番号２０３を含む可変重鎖配列及び配列番号２０４を含む可変軽鎖配列、
（ｋｋ）配列番号２０５を含む可変重鎖配列及び配列番号２０６を含む可変軽鎖配列、
（ｌｌ）配列番号２０７を含む可変重鎖配列及び配列番号２０８を含む可変軽鎖配列、
（ｍｍ）配列番号２０９を含む可変重鎖配列及び配列番号２１０を含む可変軽鎖配列、
（ｎｎ）配列番号２１１を含む可変重鎖配列及び配列番号２１２を含む可変軽鎖配列、
（ｏｏ）配列番号２１５を含む可変重鎖配列及び配列番号２１６を含む可変軽鎖配列、
（ｐｐ）配列番号２１７を含む可変重鎖配列及び配列番号２１８を含む可変軽鎖配列、または
（ｑｑ）配列番号２１９を含む可変重鎖配列及び配列番号２２０を含む可変軽鎖配列。
【0192】
代替の実施形態において、単離されたポリヌクレオチド配列（複数可）は、以下のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を有する抗体または抗体フラグメントをコードする。
（ａａ）配列番号１８５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１８６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｂｂ）配列番号１８７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１８８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｃｃ）配列番号１８９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｄｄ）配列番号１９１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｅｅ）配列番号１９３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｆｆ）配列番号１９５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｇｇ）配列番号１９７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｈｈ）配列番号１９９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２００と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｉｉ）配列番号２０１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｊｊ）配列番号２０３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｋｋ）配列番号２０５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｌｌ）配列番号２０７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｍｍ）配列番号２０９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２１０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｎｎ）配列番号２１１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２１２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｏｏ）配列番号２１５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２１６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｐｐ）配列番号２１７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２１８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、あるいは
（ｑｑ）配列番号２１９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２２０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列。
（ａａ）配列番号１８５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１８６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｂｂ）配列番号１８７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１８８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｃｃ）配列番号１８９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｄｄ）配列番号１９１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｅｅ）配列番号１９３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｆｆ）配列番号１９５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｇｇ）配列番号１９７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１９８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｈｈ）配列番号１９９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２００と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｉｉ）配列番号２０１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｊｊ）配列番号２０３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｋｋ）配列番号２０５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｌｌ）配列番号２０７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｍｍ）配列番号２０９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２１０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｎｎ）配列番号２１１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２１２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｏｏ）配列番号２１５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２１６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｐｐ）配列番号２１７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２１８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、あるいは
（ｑｑ）配列番号２１９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２２０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列。
【0193】
代替の実施形態において、単離されたポリヌクレオチド配列（複数可）は、以下のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を有する抗体または抗体フラグメントをコードする。
（ａ）配列番号１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｂ）配列番号３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｃ）配列番号５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｄ）配列番号７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｅ）配列番号９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｆ）配列番号１１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｇ）配列番号１３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｈ）配列番号１５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｉ）配列番号１７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｊ）配列番号１９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｋ）配列番号２１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｌ）配列番号２３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｍ）配列番号２５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｎ）配列番号２７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｏ）配列番号２９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｐ）配列番号３１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｑ）配列番号３３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｒ）配列番号３５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｓ）配列番号３７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｔ）配列番号３９と９０％、９５％または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４０と９０％、９５％または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｕ）配列番号４１と９０％、９５％または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４２と９０％、９５％または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｖ）配列番号４３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、あるいは
（ｗ）配列番号４５と９０％、９５％または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４６と９０％、９５％または９９％同一である可変軽鎖配列。
（ａ）配列番号１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｂ）配列番号３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｃ）配列番号５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｄ）配列番号７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｅ）配列番号９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｆ）配列番号１１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｇ）配列番号１３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｈ）配列番号１５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｉ）配列番号１７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号１８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｊ）配列番号１９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｋ）配列番号２１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｌ）配列番号２３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｍ）配列番号２５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｎ）配列番号２７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号２８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｏ）配列番号２９と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３０と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｐ）配列番号３１と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３２と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｑ）配列番号３３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｒ）配列番号３５と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３６と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｓ）配列番号３７と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号３８と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｔ）配列番号３９と９０％、９５％または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４０と９０％、９５％または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｕ）配列番号４１と９０％、９５％または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４２と９０％、９５％または９９％同一である可変軽鎖配列、
（ｖ）配列番号４３と９０％、９５％、または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４４と９０％、９５％、または９９％同一である可変軽鎖配列、あるいは
（ｗ）配列番号４５と９０％、９５％または９９％同一である可変重鎖配列、及び配列番号４６と９０％、９５％または９９％同一である可変軽鎖配列。
【0194】
抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはその抗体フラグメントをコードする配列を含むポリヌクレオチド（複数可）は、当該技術分野で知られている、１つ以上の調節配列または制御配列に融合することができ、当該技術分野で知られている好適な発現ベクターまたは宿主細胞に含有することができる。重鎖または軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド分子の各々は、独立して、ヒト定常ドメインなどの定常ドメインをコードするポリヌクレオチド配列に融合することができ、インタクト抗体の産生を可能にする。あるいは、ポリヌクレオチド、またはその部分を一緒に融合させることができ、単鎖抗体の産生のための鋳型を提供する。
【0195】
組換え産生のために、抗体をコードするポリヌクレオチドは、クローニング（ＤＮＡの増幅）用または発現用の複製可能なベクターに挿入される。組換え抗体を発現させるために多くの好適なベクターが利用可能である。ベクター構成要素には、一般に、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター、及び転写終結配列が含まれるが、これらに限定されない。
【0196】
抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントはまた、抗体またはフラグメントが、成熟タンパク質もしくはポリペプチドのアミノ末端に特異的な切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドなどの異種ポリペプチドと融合される、融合ポリペプチドとして産生することができる。選択された異種シグナル配列は、典型的には、宿主細胞によって認識され、処理される（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものである。抗ＣＬＤＮ１８．２抗体シグナル配列を認識及び処理しない原核宿主細胞では、シグナル配列は、原核シグナル配列によって置換することができる。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、リポタンパク質、熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーなどであることができる。酵母分泌では、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼα因子（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ及びＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓのα因子リーダーを含む）、酸ホスファターゼ、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓグルコアミラーゼ、またはＷＯ９０／１３６４６に記載のシグナルから得られるリーダー配列によって置換することができる。哺乳類細胞では、哺乳類シグナル配列、ならびにウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルを使用することができる。かかる前駆体領域におけるＤＮＡは、リーディングフレームにおいて抗ＣＬＤＮ１８．２抗体をコードするＤＮＡに連結される。
【0197】
発現及びクローニングベクターは、ベクターが１つ以上の選択された宿主細胞において複製することを可能にする核酸配列を含む。一般に、クローニングベクターにおいて、この配列は、ベクターが宿主の染色体ＤＮＡから独立して複製することを可能にする配列であり、複製起点または自己複製配列を含む。かかる配列は、様々な細菌、酵母、及びウイルスについてよく知られている。プラスミドｐＢＲ３２２に由来する複製起点は、ほとんどのグラム陰性細菌に好適であり、２－υ．プラスミド起点は、酵母に好適であり、様々なウイルス起点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ、及びＢＰＶ）は、哺乳類細胞におけるベクターのクローニングに有用である。一般に、複製成分の起点は、哺乳類発現ベクターに必要とされない（ＳＶ４０起点は、典型的には、それが初期プロモーターを含有するという理由のみで使用され得る）。
【0198】
発現及びクローニングベクターは、発現の特定を容易にするために選択可能なマーカーをコードする遺伝子を含有し得る。典型的な選択可能なマーカー遺伝子は、抗生物質または他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、もしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するか、あるいは代替的に、補完的な栄養要求欠如であるか、または他の代替において、複合培地に存在しない特定の栄養素を供給する、タンパク質をコードし、例えば、ＢａｃｉｌｌｉのＤ－アラニンラセマーゼをコードする遺伝子が挙げられる。
【0199】
抗体ベース免疫療法
腫瘍抗原標的化抗体を使用する抗体ベース免疫療法の目標は、正常な組織を害さずにがん細胞を排除することである。したがって、腫瘍学における抗体ベース免疫療法の有効性及び安全性は、意図される作用機序、免疫系の関連するエフェクター機能、及び腫瘍関連標的抗原の性質に大きく依存して変化する。最適な標的抗原は、到達可能であり、がん細胞の表面に均一かつ排他的に発現されるべきである。意図される作用機序が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体媒介性細胞傷害（ＣＤＣ）である場合、補体系または免疫エフェクター細胞の成分との抗体Ｆｃ領域相互作用を最大化するために、抗原－ｍＡｂ複合体は、急速に内部移行されるべきではない。
腫瘍抗原標的化抗体を使用する抗体ベース免疫療法の目標は、正常な組織を害さずにがん細胞を排除することである。したがって、腫瘍学における抗体ベース免疫療法の有効性及び安全性は、意図される作用機序、免疫系の関連するエフェクター機能、及び腫瘍関連標的抗原の性質に大きく依存して変化する。最適な標的抗原は、到達可能であり、がん細胞の表面に均一かつ排他的に発現されるべきである。意図される作用機序が、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体媒介性細胞傷害（ＣＤＣ）である場合、補体系または免疫エフェクター細胞の成分との抗体Ｆｃ領域相互作用を最大化するために、抗原－ｍＡｂ複合体は、急速に内部移行されるべきではない。
【0200】
モノクローナル抗体の重要な特徴は、標的腫瘍細胞における増殖を直接的に低下させ、及び／またはアポトーシスを誘発するか、あるいは免疫エフェクター媒介性細胞殺傷（補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ））のいずれかのためにそれらをマーキングする、それらの高い特異性及びそれらの能力である（Ｋｕｂｏｔａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．１００（９），１５６６－１５７２）。細胞傷害性薬物へのコンジュゲーションは、モノクローナル抗体の有用性を拡大し、それらの効力及び有効性を向上させることができる（Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒ，Ｖ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｔｈｅｒ．Ｄｅｌｉｖ．２（３），３９７－４１６、Ｓｉｅｖｅｒｓ，Ｅ．Ｌ．（２０１３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．６４，１５－２９）．
【0201】
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、好ましくは、標的細胞が抗体によってマーキングされることを必要とする、エフェクター細胞の細胞殺傷能力を説明している。エフェクター細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、キラー細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、単球、好酸球、好中球、多形核細胞、顆粒球、肥満細胞、及び／または好塩基球を含み得、より具体的には、エフェクター細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。ある特定の態様において、ＡＤＣＣは、抗体が腫瘍細胞で抗原に結合し、抗体Ｆｃドメインが免疫エフェクター細胞の表面でＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合するときに生じる。Ｆｃ受容体のいくつかのファミリーが同定されており、特定の細胞集団が定義されたＦｃ受容体を特徴的に発現する。ＡＤＣＣは、抗原提示及び腫瘍指向性Ｔ細胞応答の誘導につながる、即時腫瘍破壊の可変的な程度を直接誘導する機構として見なすことができる。好ましくは、ＡＤＣＣのインビボ誘導は、腫瘍指向性Ｔ細胞応答及び宿主由来抗体応答をもたらす。
【0202】
より具体的には、骨髄系統及びリンパ系統の両方の白血球で発現される６つの構造的に異なるヒトＦｃγ受容体（ＦｃγＲＩまたはＣＤ６４、ＦｃγＲＩＩａ／ＣＤ３２ａ、ＦｃγＲＩＩｂ／ＣＤ３２ｂ、ＦｃγＲＩＩｃ／ＣＤ３２ｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ／ＣＤ１６ａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂ／ＣＤ１６ｂ）が存在する。Ｆｃγ受容体は、細胞質尾部または共受容体分子上の免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を介して免疫細胞活性化をもたらす活性化受容体（ＣＤ６４、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｃ、ＣＤ１６ａ、及びＣＤ１６ｂ）と、免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を介してシグナル伝達する阻害受容体（ＣＤ３２ｂ）との、２タイプに分けられる。
【0203】
ＦＣＧＲ２Ａ（Ｈ１３１Ｒ）及びＦＣＧＲ３Ａ（Ｖ１５８Ｆ）における一塩基多型（ＳＮＰ）は、ＡＤＣＣ活性の増加をもたらす、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ２治療用抗体に対する、より高い抗体結合親和性に帰される改善された結果と関連付けられる（Ｖａｒｇａｓ，Ｆ．Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３３：６４９－６６３（２０１８）、Ｍｕｓｏｌｉｎｏ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２６：１７８９－１７９６（２００８）、Ｚｈａｎｇ，Ｗ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２５：３７１２－３７１８（２００７）、Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１３：Ｒ１２３（２０１１））。活性化ＣＤ１６Ａ ＦｃγＲは、ＩｇＧ１のＦｃドメインに対して高いか（１５８Ｖ）もしくは低い（１５８Ｆ）親和性を有する２つの変異体、または対立遺伝子で生じる。集団の大部分（約８５％）は、ホモ接合型または１５８Ｖとのヘテロ接合型のいずれかで、１５８Ｆ遺伝子型を有する。したがって、より大きな有益な応答に最も頻繁に関連付けられるＦｃｇＲ遺伝子型は、集団の少数で生じる。これはがん治療のために開発される治療用抗体のＦｃドメインを操作するための強力な根拠を提供し、ＦｃγＲ遺伝子型に関係なく、活性化ＦｃγＲの低結合性対立遺伝子とより良好に相互作用して拡大させ、より高い割合の患者に利益を与えることができる治療薬を開発する目標を有する。
【0204】
細胞傷害性細胞の活性化における重要なステップは、免疫エフェクター細胞におけるＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６Ａ）とのｍＡｂの結合であり、この相互作用の強度は、抗体アイソタイプ、抗体Ｆｃ領域のグリコシル化パターン、及びＦｃγＲＩＩＩａ多型によって決定される。多くの刊行物が、臨床試験から導き出される抗体ベースがん療法におけるＦｃγＲ媒介性エフェクター機能の役割を示す結果を報告している。試験結果は、臨床応答（例えば、抗体有効性）と活性化ヒトＦｃγＲの特定のアロフォームとの間の関連性を示す。１５８Ｆ対立遺伝子を担持する患者は、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、インフリキシマブ、及びイピリムマブを含むある特定の治療用抗体、ならびに主要な作用機序としてＡＤＣＣを利用する他の治療用抗体に対する臨床応答の低下を示すことが報告されている。改良されたＦｃｇＲ結合プロファイルを有するように操作された抗体は、優れた抗腫瘍応答を駆動し、より大きな臨床的利益をもたらすことが報告されている。
【0205】
活性化及び阻害性ＦｃγＲの発見は、免疫エフェクター細胞を活性化して特定の機能を実行するように設計された活性化／阻害化（Ａ：Ｉ）比を特徴とするＦｃγＲ結合活性を有することに基づいた「目的に適合する」治療用抗体の設計に焦点を当てた、探索医療の取り組みをもたらした。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）によるがんの免疫療法は、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／またはＣＤＣ活性を含む様々な機構によって腫瘍細胞の排除を促進する。実際には、いくつかの承認されたｍＡｂの治療活性は、エフェクター細胞に発現される低親和性Ｆｃγ受容体とのＦｃγ領域の結合に依存する。
【0206】
いくつかの出版物は、最適化されたＦｃｇＲ結合プロファイル及び細胞媒介性エフェクター機能を最適化するのに適した活性化／阻害化（Ａ：Ｉ）比を有する変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（ＣＨ領域）を設計するタンパク質操作戦略の成功した使用を報告している。特に、取り組みは、低親和性受容体ＦｃγＩＩＩａに対するＦｃドメインの親和性を増加させることに焦点を当てている。Ｆｃドメイン内の多くの変異は、Ｆｃ受容体の結合を直接的または間接的に増強し、結果として、細胞性細胞傷害を有意に増強することが特定されている（Ｌａｚａｒ，Ｇ．Ａ．ＰＮＡＳ １０３：４００５－４０１０（２００６），Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６６０４（２００１）Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２４：６７１－６７８（２０１１））。Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈの研究者は、変異Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを特定し、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅは、変異Ｆ２４３Ｌを特定し（Ｓｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ）、Ｘｅｎｃｏｒは、Ｇ２３６Ａを特定した（Ｒｉｃｈａｒｄｓ，Ｊ．Ｏ．ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．７：２５１７－２５７５（２００８））。
【0207】
Ｘｅｎｃｏｒ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、及びＭａｃｒｏｇｅｎｉｃｓを含むいくつかの異なる会社は、野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸改変を含む抗体変異体を報告しており、変異体Ｆｃ領域は、ＦｃγＲＩＩＩＡ及び／またはＦｃγＲＩＩＡに、野生型Ｆｃ領域を含む相当する分子と比較して、高い親和性で結合する。Ｘｅｎｃｏｒは、Ｘｍａｂプラットフォーム技術を開発し、望ましいＡ：Ｉ比を有する最適化されたＦｃ変異体として、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ点変異及びＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含むＩｇＧ１ Ｆｃ変異体の結果を公表している。Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎは、Ｐ２４７Ｉ及びＡ３３９Ｑ点変異を含むＩｇＧ変異体を特定している。Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓは、Ｖ３０５Ｉ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、及びＰ３９６Ｌ（変異体１８）（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６７：８８８２－８９９０（２００７））、またはＬ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、及びＰ３９６Ｌ（Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍ，Ｊ．Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１３：Ｒ１２３（２０１１））での変異を含む変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を報告している。
【0208】
Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍらは、転移性乳癌におけるトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標））に対する応答が、活性化Ｆｃγ受容体ＣＤ１６Ａの高結合性変異体（１５８Ｖ）の発現と相関することを報告した。ヒトＣＤ１６Ａの両方の対立遺伝子との結合の増加のために操作されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含むキメラ抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体ＭＧＡＨ２２（トラスツズマブに類似の特異性及び親和性を有する）を使用して、Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍは、操作されたＦｃドメインが、トラスツズマブの抗増殖活性に耐性があるか、または低レベルのＨＥＲ２を発現する細胞を含む、試験した全てのＨＥＲ２陽性腫瘍細胞に対して増強されたＡＤＣＣを付与することを実証した。最大の改善は、低結合性対立遺伝子であるＣＤ１６Ａ－１５８Ｆについてホモ接合またはヘテロ接合のドナーから単離されたエフェクター細胞で生じる。
【0209】
ＭＧＨＡ２２に組み込まれたＦｃ変異を、活性化Ｆｃ－γ受容体（ＣＤ１６Ａ）に結合する能力の増加と、免疫エフェクター細胞でＦｃ－γ阻害性受容体ＣＤ３２Ｂに結合する能力の低下と、を有するように操作されている臨床段階の抗体製品候補メルゲツキシマブに組み込んだ。Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓは最近、Ｆｃ改変の潜在的な利点及び抗ＨＥＲ２抗体有効性に対するＦｃ－γ受容体遺伝子型の役割を検討するように設計された最初の無作為化第３相試験の予備データを公表している。ＳＯＰＨＩＡ試験（ＮＣＴ０２４９２７１１）は、ＨＥＲ２陽性転移性乳癌を有する患者におけるトラスツズマブ＋化学療法と比較して、マルゲツキシマブ＋化学療法を評価する無作為化非盲検第３相臨床試験である。本試験は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）のその最初の逐次的主要評価項目を満たした。マルゲツキシマブ及び化学療法で治療した患者のＰＦＳ中央値は、トラスツズマブ及び化学療法で治療した患者における４．９ヶ月と比較して５．８ヶ月だった。一次ＰＦＳ解析の時点で、１５８例の事象に基づく全生存期間（ＯＳ）データは未完了だった。その時のＯＳ中央値は、トラスツズマブ及び化学療法で治療した患者と比較して、マルゲツキシマブ及び化学療法で治療した患者で１．７ヶ月延長された。ＣＤ１６Ａ １５８Ｆ対立遺伝子を担持する患者の探索的亜集団に関して、ＯＳ中央値は、トラスツズマブ群と比較して、マルゲツキシマブ群において６．８ヶ月延長された（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ Ｐｒｅｓｓ Ｒｅｌｅａｓｅ）。
【0210】
糖鎖工学戦略も、がんの治療に合わせて最適化されたエフェクター機能を有する治療用抗体を開発するために使用されている。ＦｃγＲは、ＣＨ２ドメインで炭水化物と相互作用し、これらのグリカンの組成は、エフェクター機能活性に実質的な影響を及ぼすことが知られている。Ｆｃ領域における２９７位の高度に保存されたグリカンは、Ｆｃγ受容体との結合に必要とされるＦｃ領域への構造変化を推測させる。この部位でのグリカン組成における微妙な違いは、Ｆｃ構造に影響を及ぼすことができ、また、直接的な接触によってＦｃγＲとの相互作用を変化させ得る。おそらく、この最も良い例は、ＣＤ１６Ａとの結合の増加を示し、ＡＤＣＣ活性の大幅な増強を示す、非フコシル化抗体である（Ｎｉｗａ，Ｒ ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：６２４８－６２５５（２００４）、Ｆｅｒｒａｒａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２８１：５０３２－５０３６（２００６））。
【0211】
治療用抗体の有効性は、適切な翻訳後改変に大きく依存する。特に、抗体Ｆｃのグリコシル化は、Ｆｃ受容体媒介性活性に欠くことができない。抗体治療薬のエフェクター機能のうち、ＡＤＣＣは、抗がん抗体の重要なメカニズムとして臨床的に特定されている。ＩｇＧ－Ｆｃコアフコースの不存在は、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ１６ａ）との結合を著しく増加させ、より高いＡＤＣＣ効力（例えば、より低いＥＣ５０）をもたらすことは、当該技術分野において周知であり、この結果は、治療用抗体の有効性を改善するために成功裏に使用されている。糖鎖工学戦略は、低フコシル化またはフコシル化なし（例えば、非フコシル化ｍＡｂ）を提供する条件下で抗体を産生して、ＦｃＧＲＩＩＩａ結合を増加させることによってＡＤＣＣを高めることを含む。
【0212】
当業者は、ＢｉｏＷａ／Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｉｒｉｎ及びＧｌｙｃＡｒｔ／Ｒｏｃｈｅが各々、脱フコシル化抗体を産生する独占の細胞株を開発していることを認めるだろう。この結果を達成するために、ＢｉｏＷａ／Ｋｙｏｗａ Ｋｉｒｉｎ Ｈａｋｋｏは、α－１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）酵素ノックアウトチャイニーズハムスター卵巣細胞株（ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標）技術）を確立し、一方、ＧｌｙｃＡｒｔ／Ｒｏｃｈｅは、抗体産生細胞において異種のβ－１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩを過剰発現することを選択した（ＧｌｙｃｏＭａｂ（商標）技術、米国特許第６，６０２，６８４号）。
【0213】
向上したＡＤＣＣ活性を有する糖鎖操作された抗体は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認されており、現在米国で市販され、モガムリズマブ（ＰＯＴＥＬＩＧＥＯ（商標））、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ（商標））、及びベンラリズマブ（ＦＡＳＥＮＲＡ（商標））が含まれる。モガムリズマブは、Ｂｉｏｗａによって開発されたＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（商標）技術プラットフォームを使用して、ＦＵＴ８（ａ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ）遺伝子に変異を有する細胞株で産生される無フコシル化抗ＣＣＲ４抗体である。哺乳類では、Ｎ－グリカンでのほとんどのコア－フコシル化は、α－１，６結合によって生成される。ＦＵＴ８は、α－１，６結合を介したＧＤＰ－フコースからトリ－マンノシルコア構造の最内側のＧｌｃＮＡｃへのフコース残基の移動を触媒する、唯一のα－１，６フコシルトランスフェラーゼである。ベンラリズマブも、ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（商標）技術プラットフォームを使用して製造される抗ＩＬ５受容体抗体であり、抗体依存性細胞媒介性ＡＤＣＣの＞１０００倍の増幅を誘導することができることが報告されている（Ｐｅｌａｉａ，Ｃ ｅｔ ａｌ，ＢｉｏＭｅｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｔ．，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ４８３９２３０（２０１８））。
【0214】
オビヌツズマブは、産生細胞株（Ｇｌｙｃａｒｔ ＧＬＹＣＯＭＡＢ（商標）技術）におけるＢ－１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニル－トランスフェラーゼ（ＧｎＩＩＩ）遺伝子の追加の結果として低いフコース含有量を有することを特徴とする、ＩＩ型抗ＣＤ２０ｍＡｂである。この改変は、Ｎ－グリカン構造に二分したＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮａｃ）を添加する効果を有し、その存在は、フコシル化を妨げ、高度に豊富化された二分した非フコシル化グリコシル化変異体の産生をもたらす。オビヌツズマブを製造するために使用される糖鎖工学戦略は、増強されたＡＤＣＣ及びＡＤＣＰに依存する独自の作用機序を付与し、主にＣＤＣに依存する２つの他の抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ及びオファツムマブ）によって使用される主要な作用機序への依存が低減される（Ｔｏｂｉｎａｉ，Ｋ ｅｔ ａｌ，Ａｄｖ．Ｔｈｅｒ．３４（２）：３２４－３５６（２０１７））。当業者はまた、２－デオキシ－２－フルオロ－１－フコース（２ＦＦ）などのグリコシルトランスフェラーゼのデコイ基質、または２Ｆ－ペルアセチル－フコースなどのフコシルトランスフェラーゼ阻害剤を使用することによって、低フコース含有量を有する抗体を産生し、哺乳類細胞で発現される抗体のグリカン中のフコースの組み込みの低下を引き起こすことが可能であることを、認識するであろう（Ｄｅｋｋｅｒｓ，Ｇ，ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ６，ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ３６９６４（２０１６））。フコシルトランスフェラーゼ阻害剤を使用して産生された抗体は、フコシル化グリカン種（Ｇ０ｆ、Ｇ１ｆ、及びＧ２ｆ）の相対的な割合の有意な減少を示し、フコシル化の割合は、阻害剤の存在下で８６％から１９％に減少できることが、報告されている（Ｈｏ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ：Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（ＡＤＣＣ）Ｐｏｔｅｎｃｙ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ，Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ａｐｒｉｌ １２，２０１６）。
【0215】
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）は、抗体によって指向され得る別の細胞殺傷方法である。ＩｇＭは、補体活性化のための最も効果的なアイソタイプであるが、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３も共に、古典的な補体活性化経路を介してＣＤＣを指向させるのに非常に効果的である。
【0216】
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗体は、細胞毒素、薬物、もしくは放射性同位体などの治療用部分または薬剤と、組み合わせて使用されるか、またはコンジュゲートされる。ある特定の態様において、本明細書に記載の抗体は、化学療法剤と組み合わせて使用される。ある特定の態様において、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、治療用部分または薬剤にコンジュゲート（例えば、共有結合によって結合）された本明細書に記載の抗体を含む。
【0217】
抗体とのコンジュゲーションで使用され得る治療剤の例には、抗代謝物質（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブルマイシン、ミスラムシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、及び抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）が含まれる。ある特定の態様において、治療剤は、細胞傷害性薬剤または放射性毒性剤である。別の態様において、治療剤は、ポルフィマーナトリウムなどの光力学療法における使用に好適な光感作性薬剤である。いくつかの態様において、治療剤は、免疫抑制剤である。いくつかの態様において、治療剤はＧＭ－ＣＳＦである。いくつかの態様において、治療薬は、ドキソルビシン、シスプラチン、ブレオマイシン、硫酸塩、カルムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、またはリシンＡである。
【0218】
細胞毒素または細胞傷害性薬剤の例には、細胞に有害であり、特に細胞を殺傷する任意の薬剤が含まれ、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン、ならびにこれらの類似体または同族体などが挙げられる。
【0219】
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗体は、ヨウ素－１３１、イットリウム－９０、またはインジウム－１１１などの放射性同位体にコンジュゲートして、がんなどのＣＬＤ１８関連障害を治療するための細胞傷害性放射性医薬品を生成することができる。
【0220】
治療用部分を抗体にコンジュゲートするための技法は、当業者に周知であり、例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５））、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３－５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７））、Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６（１９８５））、“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３－１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５））、及びＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９－５８（１９８２）を参照されたい。
【0221】
いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、標的依存的方式でがん細胞を殺傷するように設計される。このプロセスにおける最初のステップは、抗体のその抗原との結合である。ＡＤＣが結合すると、抗原－ＡＤＣ複合体全体が内部移行され、細胞傷害性ペイロードが腫瘍細胞内に放出されて細胞死をもたらす。ＡＤＣの治療指標に影響を与える因子には、標的化抗体の腫瘍特異性、腫瘍標的抗原の発現レベル、細胞傷害性薬物、及びリンカーが含まれる（Ｐａｎｏｗｋｓｉ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）ＭＡｂｓ ６（１），３４－４５）。治療用抗体の意図された作用機序が腫瘍関連抗原の下方調節である場合、または抗体が、がん細胞に毒素を送達するように設計されたＡＤＣである場合、内部移行が、標的化された腫瘍細胞に毒性ペイロードを送達するために使用される抗体の望ましい特性である。
【0222】
いくつかの態様において、ＡＤＣは、がん細胞に治療効果を及ぼす任意の薬剤、及び本明細書に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはその誘導体を含む。薬物のコンジュゲーションは、結合特性、特に抗体の特異性を変化または有意に変化させない。ある特定の態様において、薬物は、細胞傷害性または細胞増殖抑制剤（例えば、がん細胞に有害であり、及び／またはがん細胞を殺傷する任意の薬剤）である。かかる細胞傷害性薬剤のクラスの例には、抗チューブリン剤、ＤＮＡ小溝結合剤（例えば、エネジイン及びレキシトロプシン）、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、モノ（白金）、ビス（白金）、及び三核白金複合体、ならびにカルボプラチンなどの白金複合体）、アントラサイクリン、抗生物質、抗葉酸剤、代謝拮抗剤、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド、フッ素化ピリミジン、イオノフォア、ニトロソ尿素、プラチノール、形成前化合物、プリン代謝拮抗剤、ピューロマイシン、放射線増感剤、ステロイド、タキサン（例えば、パクリタキセル及びドセタキセル）、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイドなどが含まれる。かかる細胞傷害性薬剤の追加の例は、米国公開第２０１８／０１１７１７４号に記載されている。
【0223】
抗体－薬物コンジュゲートの生成は、当業者に既知の任意の技法によって達成することができる。抗体－薬物コンジュゲートは、従来の技法に従って、薬物を抗体に結合させることによって調製することができる。抗体及び薬物は、それら自体のリンカー基を介して互いに直接的に、またはリンカーもしくは他の物質を介して間接的に結合され得る。ＡＤＣを生成する際に使用され得るリンカーの例は、米国公開第２０１８／０１１７１７４号に記載されている。
【0224】
免疫療法に使用される抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の一例は、ＣＬＤＮ１８．２の第１の細胞外ドメインにおけるエピトープに特異的なキメラＩｇＧ１モノクローナル抗体であるｉＭＡｂ３６２である。ｉＭＡｂ３６２、そのネズミ親抗体、及び他の抗ＣＬＤＮ１８特異的抗体は、ＷＯ２００７／０５９９９７、ＷＯ２０１４／０７５７８８、及びＷＯ２０１６／１６６１２２パテントファミリーに属する特許及び特許出願に開示されている。
【0225】
前臨床において、ｉＭＡｂ３６２は、間接的（補体依存性細胞傷害、抗体依存性細胞性細胞傷害）及び直接的（抗増殖性及びアポトーシス促進効果）な作用機序の両方によって、腫瘍成長を阻害し、がん細胞を殺傷することが示された。Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａは、バリン－シトルリンリンカーを用いた、抗有糸分裂剤モノメチルオーリスタチンＥを含むｉＭＡｂ３６２抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（ｉＭＡｂ－ｖｃＭＭＡＥ）の前臨床的特徴付けが進行中であることを示す報告を公表している（Ｋｒｅｕｚｂｅｒｇ，Ｍ ｅｔ ａｌ，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２８（５）ｖ１２２－ｖ１４１，ａｂｓｔｒａｃｔ ３７７Ｐ，ＷＯ２０１６／１６５７６２）。
【0226】
第ＩＩｂ相ＦＡＳＴ治験では、進行性もしくは再発性の胃または胃食道接合部腺癌を有する患者が登録された（ＮＣＴ０１６３００８３）。登録の適格性は、ＣＬＤＮ１８．２陽性腫瘍（すなわち、免疫組織化学によって腫瘍細胞の＞４０％で２＋／３＋強度）を有することが患者に求められた。この治験では、第一選択設定で、化学療法と併用したｉＭＡｂ３６２の役割を、化学療法単独と比較して評価した。最終結果によると、抗体ｉＭＡＢ３６２を化学療法（ＥＯＸ、エピルビシン、オキサリプラチン、及びカペシタビン）に加えることによって、進行性胃癌、食道癌、または胃食道接合部腺癌を有する患者における全生存期間中央値が５ヶ月増加した（８．４対１３．２ヶ月、Ｐ＝０．０００１）（Ｓｃｈｕｌｅｒ，Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２７（６）：ｖｉ２０７－ｖｉ２４２，ａｂｓｔｒａｃｔ ６１４Ｏ（２０１６））。併用療法はまた、無増悪生存率及び奏効率を有意に改善した。報告は、結果がＣＬＤＮ１８．２発現レベルによって層別化されると、最良の転帰が高発現者（＞７０％で２＋強度）で認められ、全生存期間の中央値は９．０ヶ月に対して１６．７ヶ月だった（Ｐ＜０．０００５）。結果によって、第一選択の化学療法に抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を加えることが、進行性／再発性胃癌を有する患者において臨床的に関連する利益をもたらすことを確証される。
【0227】
組成物及び治療方法
本開示はまた、例えば、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントを含む医薬組成物を含む、組成物を提供する。かかる組成物は、疾患または障害（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞を伴う疾患または障害）の治療のために多数の治療的使用を有する。いくつかの態様において、本明細書に記載の組成物は、例えば、インビボで、患者に投与され、ＣＬＤＮ１８．２の発現調節不全に関連する疾患を治療または予防する。好ましい患者には、上皮細胞由来の原発性または転移性がんを有するヒト患者が含まれる。
本開示はまた、例えば、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体またはそれらの抗体フラグメントを含む医薬組成物を含む、組成物を提供する。かかる組成物は、疾患または障害（例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現する細胞を伴う疾患または障害）の治療のために多数の治療的使用を有する。いくつかの態様において、本明細書に記載の組成物は、例えば、インビボで、患者に投与され、ＣＬＤＮ１８．２の発現調節不全に関連する疾患を治療または予防する。好ましい患者には、上皮細胞由来の原発性または転移性がんを有するヒト患者が含まれる。
【0228】
抗体は、単独、または免疫媒介性炎症性障害または自己免疫疾患の治療のために有用である他の組成物と組み合わせたいずれかで、投与することができる。いくつかの実施形態において、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を含む、例えば、医薬組成物を含む組成物は、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体または抗体フラグメントにコンジュゲートされたか、またはコンジュゲートされていない、いずれかの治療剤をさらに含むことができる。
【0229】
いくつかの態様において、本発明は、本発明の１つ以上の抗体を含有する組成物、例えば、医薬組成物を提供する。医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤、ならびに任意の他の既知のアジュバント及び賦形剤と共に、従来の技法、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９５に従って製剤化され得る。いくつかの態様において、医薬組成物は、がんを治療するために対象に投与される。
【0230】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合性である任意及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤などが含まれる。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与（例えば、注射または注入による）に好適である。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち、抗体、二重特異性、及び多重特異性分子は、化合物を、酸の作用及び化合物を不活性化し得る他の天然条件から保護するために、材料でコーティングされ得る
【0231】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合性である任意及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤などが含まれる。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与（例えば、注射または注入による）に好適である。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち、抗体、二重特異性及び多重特異性分子は、化合物を、酸の作用及び化合物を不活性化し得る他の天然条件から保護するために、材料でコーティングされ得る。
【0232】
典型的には、注射による投与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝剤での溶液である。必要に応じて、医薬品はまた、可溶化剤、及び注射部位の痛みを緩和するリグノカインなどの局所麻酔薬を含むことができる。一般に、成分は、例えば、活性剤の量を指示するアンプルまたは小袋などの密封容器中で、乾燥した凍結乾燥粉末または水無含有濃縮物として、単位用量形態で別々に、または一緒に混合して供給される。医薬品が注入によって投与される場合、滅菌医薬品グレードの水または生理食塩水を含む注入ボトルを用いて分配することができる。医薬品が注射によって投与される場合、成分を投与前に混合することができるように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【0233】
本発明の組成物は、当該技術分野における既知の様々な方法によって投与することができる。当業者によって理解されるように、投与の経路及び／または方式は、所望の結果に応じて変化する。活性化合物は、化合物を急速な放出から保護する、制御放出製剤などの担体と共に調製することができ、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達システムが挙げられる。生体分解性、生体適合性ポリマーを使用することができ、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などが挙げられる。かかる製剤を調製するための方法は、一般に、当業者に既知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【0234】
医薬組成物中の活性成分の投与量は、対象に毒性を有さずに、特定の対象、組成物、及び投与方式について所望の治療応答を達成するのに有効な量の活性成分を得るように変化され得る。選択された投与量レベルは、様々な薬物動態学的要因に依存し、用いられる本発明の特定の組成物の活性、投与の経路、投与の期間、用いられる特定の化合物の排泄速度、治療の持続期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、及び／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康状態、及び既往歴、ならびに医学分野で周知の同様の要因が含まれる。
【0235】
本明細書に記載の医薬組成物は、有効量で投与され得る。「有効量」は、単独で、もしくはさらなる用量と共に所望の反応または所望の効果を達成する量を指す。特定の疾患または特定の状態の治療の場合、所望の反応は、好ましくは、疾患の経過の阻害に関連する。これは、疾患の進行を遅延させること、及び特に、疾患の進行を中断または逆転させることを含む。
【0236】
いくつかの態様において、がんの治療は、２つ、３つ、４つ、またはさらにそれ以上のがん薬物／療法を併用した作用が、単剤療法の影響よりもかなり強い相乗効果を生じるため、併用戦略が特に望ましい分野を表す。本明細書で提供される薬剤及び組成物（例えば、医薬組成物）は、単独で、または手術、放射線照射、化学療法、及び／または骨髄移植（自己、同系、同種異系、または無関連）などの従来の治療レジメンと組み合わせて使用され得る。薬剤及び組成物はまた、サイトカイン、ケモカイン、共刺激分子、または融合タンパク質、細菌学的処理、キナーゼ阻害剤、トール様受容体、血管新生阻害剤、小分子標的化療法剤、ウイルスベースのワクチン、マルチエピトープ戦略、養子縁組性Ｔ細胞移入、及びペプチドベースの標的療法のうちの１つ以上と組み合わせて使用され得る。米国特許第１０，０９３，７３６号を参照されたい。したがって、本発明の別の実施形態において、がん治療は、様々な他の薬物と効果的に組み合わされ得る。
【0237】
いくつかの態様において、本明細書に記載の薬剤及び組成物は、本明細書に記載のものなどの様々な障害を治療または予防するために、例えば、インビボで、患者に投与される。好ましい患者には、本明細書に記載の薬剤及び組成物を投与することによって、矯正または改善することができる障害を有するヒト患者が含まれる。これには、ＣＬＤＮ１８．２発現の調節不全を特徴とする細胞が関与する障害が含まれる。
【0238】
例えば、一実施形態において、本明細書に記載の薬剤及び組成物を使用して、がん疾患、例えば、ＣＬＤＮ１８．２を発現するがん細胞の存在を特徴とする本明細書に記載されるようながん疾患を有する患者を治療することができる。いくつかの態様において、がん疾患は、胃癌、食道癌、膵臓癌、肺癌、卵巣癌、結腸癌、肝臓癌、頭頸部癌、胆嚢癌、またはそれらの転移である。
【0239】
提供される治療方法の実施形態において、治療を必要とする対象は、抗新生物剤、化学療法剤、成長阻害剤、細胞傷害剤、及び免疫チェックポイント阻害剤からなる群から選択される治療剤も投与される。
【0240】
提供される治療方法の実施形態において、本発明の抗ＣＬＤＮ１８．２結合剤を含む抗体、抗体フラグメント、または二重特異性抗体は、細胞傷害性剤であり得る化学療法剤と同時投与される。例えば、エピツビシン、オキサリプラチン、及び／または５－ＦＵは、抗クローディン１８．２療法を受けている患者に投与することができる。
【0241】
本明細書で考察される治療薬の組み合わせは、薬学的に許容される担体における、二重特異性もしくは多重特異性結合剤または融合タンパク質の成分として、あるいは単一組成物として、同時に投与することができる。あるいは、治療薬の組み合わせは、薬学的に許容される担体中の各薬剤を有する別個の組成物として同時に投与することができる。別の実施形態において、治療剤の組み合わせは、順次投与され得る。
【0242】
一実施形態において、本発明の治療方法は、がん細胞の細胞表面におけるクローディン１８．２の発現を安定化または増加させることができる薬剤を投与することをさらに含む。例えば、クローディン１８．２の発現を安定化または増加させる薬剤は、オキサリプラチン及び／または５－ＦＵであり得る。
【0243】
いくつかの態様において、従来のウイルス及び非ウイルスベースの遺伝子導入方法を使用して、本明細書に記載の抗体またはそれらの誘導体をコードする核酸を哺乳類細胞または標的組織に導入することができる。かかる方法を使用して、抗体をコードする核酸をインビトロで細胞に投与することができる。いくつかの実施形態において、抗体またはそれらの誘導体をコードする核酸は、インビボまたはエクスビボ遺伝子治療使用のために投与される。他の実施形態において、遺伝子送達技法を使用して、細胞ベースまたは動物のモデルにおいて抗体の活性を試験する。非ウイルスベクター送達システムには、ＤＮＡプラスミド、ネイキッド核酸、及びリポソームなどの送達ビヒクルと複合体化された核酸が含まれる。ウイルスベクター送達システムには、細胞への送達後にエピソームまたは組み込まれたゲノムのいずれかを有する、ＤＮＡ及びＲＮＡウイルスが含まれる。かかる方法は、当該技術分野で周知である。
【0244】
本開示の操作されたポリペプチドをコードする核酸の非ウイルス送達方法には、リポフェクション、微量注入、遺伝子銃、ビロソーム、リポソーム、イムノリポソーム、ポリカチオンまたは脂質、核酸コンジュゲート、ネイキッドＤＮＡ、人工ビリオン、及び薬剤強化されたＤＮＡの取り込みが含まれる。リポフェクション法及びリポフェクション試薬は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標）及びＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標））。ポリヌクレオチドの効率的な受容体認識リポフェクションに適したカチオン性及び中性脂質には、Ｆｅｌｇｎｅｒ、ＷＯ９１／１７４２４、ＷＯ９１／１６０２４のものが含まれる。送達は、細胞（エクスビボ投与）または標的組織（インビボ投与）に行うことができる。免疫脂質複合体などの標的化されたリポソームを含む脂質：核酸複合体の調製は、当業者に周知である。
【0245】
本明細書に記載の抗体をコードする核酸の送達のためのＲＮＡまたはＤＮＡウイルスベースのシステムの使用は、ウイルスを体内の特定の細胞に標的化し、ウイルスのペイロードを核に輸送するための、高度に進化したプロセスの利点を活かす。ウイルスベクターは、患者に（インビボで）直接投与できるか、またはそれらは、インビトロで細胞を処理するために使用することができ、改変された細胞は患者に投与される（エクスビボで）。本開示のポリペプチドの送達における従来のウイルスベースのシステムには、遺伝子導入のためのレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ヘルペスウイルス、及び単純ヘルペスウイルスのベクターが含まれ得る。ウイルスベクターは、現在、標的細胞及び組織における遺伝子導入の最も効率的かつ汎用的な方法である。宿主ゲノムにおける組み込みは、レトロウイルス、レンチウイルス、及びアデノ随伴ウイルス遺伝子導入法で可能であり、多くの場合、挿入された導入遺伝子の長期的発現をもたらす。さらに、高い形質導入効率が、多くの異なる細胞型及び標的組織において観察されている。
【0246】
特定された全ての特許及び刊行物は、例えば、本開示に関連して使用され得るかかる刊行物に記載されている方法論を、説明及び開示することを目的として、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。これらの刊行物は、本出願の出願日より前のそれらの開示についてのみ提供される。この点におけるいかなるものも、本発明者らが、先行発明またはいかなる他の理由によってもかかる開示に先行する権利がないことを認めるものとして解釈されるべきではない。これらの文書の内容に関する日付または表明に関する全ての記述は、出願者が利用可能な情報に基づいており、これらの文書の日付または内容の正確性に関するいかなる承認も担うものではない。
【0247】
先に示されていない範囲で、本明細書に記載及び例示される様々な実施形態のうちのいずれか１つが、本明細書に開示される他の実施形態のうちのいずれかに示される特性を組み込むようにさらに修正され得ることが、当業者によって理解されるであろう。
【0248】
本開示の広範な範囲は、以下の実施例を参照して最もよく理解されるが、開示を特定の実施形態に限定することを意図するものではない。本明細書に記載される特定の実施形態は、例としてのみ提供され、本開示は、添付の特許請求の範囲の条件によって、かかる特許請求の範囲が権利を有する等価物の完全な範囲と共に制限される。
【実施例】
【0249】
一般的方法
免疫沈降、クロマトグラフィー、及び電気泳動を含むタンパク質精製のための方法が記載されている。Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。化学的分析、化学的修飾、翻訳後改変、融合タンパク質の産生、及びタンパク質のグリコシル化が記載されている。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．，ｐｐ．１６．０．５－１６．２２．１７、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．；ｐｐ．４５－８９、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４－３９１を参照されたい。ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の産生、精製、及びフラグメント化について記載されている。Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ、同上。
免疫沈降、クロマトグラフィー、及び電気泳動を含むタンパク質精製のための方法が記載されている。Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。化学的分析、化学的修飾、翻訳後改変、融合タンパク質の産生、及びタンパク質のグリコシル化が記載されている。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．，ｐｐ．１６．０．５－１６．２２．１７、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．；ｐｐ．４５－８９、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４－３９１を参照されたい。ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の産生、精製、及びフラグメント化について記載されている。Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ、同上。
【0250】
ハイブリドーマ上清を、ＨｉＴｒａｐプロテインＧカラム（ＧＥ、カタログ番号１７０４０４０１）によって、製造業者の手順に従って精製した。簡単に説明すると、ハイブリドーマ上清を５ＣＶのＤＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１４１９０－１３６）によって平衡化し、シリンジ／注入ポンプ（Ｌｅｇａｔｏ２００、ＫＤＳ）を介して、周囲温度及び３分間の滞留時間でロードした。カラムを５ＣＶのＤＰＢＳで洗浄し、溶離を４ＣＶのｐＨ２．８溶離緩衝液（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＰＩ２１００４）によって行った。溶離を画分化し、画分を１ＭのＴｒｉｓ－ＨＣＬ、ｐＨ８．５（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号５０－８４３－２７０）で中和し、Ａ２８０（ＤｒｏｐＳｅｎｓｅ９６、Ｔｒｉｎｅａｎ）によってアッセイした。ピーク画分をプールし、緩衝液をＤＰＢＳに交換した。遠心フィルター（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＵＦＣ８０３０２４）を、４，０００×ｇで２分間、ＤＰＢＳ中で平衡化した。精製した試料をロードし、ＤＰＢＳを添加して、試料を４，０００×ｇ、５～１０分間スピンで、総ＤＰＢＳ体積が≧６ＤＶになるまでスピンした。最終プールをＡ２８０によって分析した。
【0251】
分子生物学における標準的な方法が記載されている。Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．、Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１－４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．にもみられ、細菌細胞及びＤＮＡ変異誘発におけるクローニング（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞及び酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質及びタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）が記載されている。
【0252】
ＣＬＤＮ１８．２またはＣＬＤＮ１８．１を発現する安定した細胞株は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｌ３００００１５）を使用した脂質ベースのトランスフェクションを使用して、選択された宿主細胞（すなわち、ＣＨＯ－Ｋ１、ＮＩＨ／３Ｔ３、またはＨＥＫ２９３細胞、いずれもＡＴＣＣから購入）を、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓクローディン１８転写変異体２（ＣＬＤＮ１８．２）またはＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓクローディン１８転写変異体１（ＣＬＤＮ１８．１）を発現するｐｃＤＮＡ３．１ベースのプラスミドでトランスフェクトすることによって生成した。
【0253】
発現は、表面発現についてアッセイするためにフローサイトメトリーを使用して、トランスフェクションの２４時間及び４８時間後に適切な抗体を使用して確証した。抗生物質選択を、組み込まれた細胞を選択するために使用し、ジェネティシン選択の７～１０日後、形質移入体を選択圧（ジェネティシン）下に維持しながら、限界希釈を９６ウェルプレート中で生存細胞に実行した。
【0254】
１０～１４日後、単一コロニーを、ＣＬＤＮ１８．２またはＣＬＤＮ１８．１特異的抗体（ＣＬＤＮ１８．２：ＣＬＤＮ１８．２に特異的である（ＣＬＤＮ１８．１に対して特異的ではない）ＵＳ２０１８／０１１７１７４に報告されているモノクローナル抗体について公的に入手可能な配列情報を用いて合成された陽性対照抗体の社内バージョン（本明細書において「陽性対照」抗体と称される）、ＣＬＤＮ１８．１：クローディン１８ポリクローナル抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号３８－８０００）））を用いたフローサイトメトリーを使用したスクリーニングのために拾い上げた。高度に発現した上位３～５クローンを、さらなる開発のために選択した。２継代後、発現レベルをフローサイトメトリー及び画像アッセイによって確認して、それが安定的であることを確証した。特定の遺伝子発現もＰＣＲによって確認した。
【0255】
ハイブリドーマクローンについて重鎖及び軽鎖可変領域の配列を以下に記載のように決定した。全ＲＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＭＤ、ＵＳＡ）のＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔを使用して、１～２×１０６個のハイブリドーマ細胞から抽出した。ｃＤＮＡは、Ｔａｋａｒａ（Ｍｏｕｎｔａｉｎｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）のＳＭＡＲＴｅｒ ＲＡＣＥ ５’／３’Ｋｉｔを使用して５’ＲＡＣＥ反応を実行することによって生成した。ＰＣＲは、ＮＥＢ（Ｉｐｓｗｉｔｃｈ、ＭＡ、ＵＳＡ）のＱ５ Ｈｉｇｈ－Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅを使用して実行し、適切な免疫グロブリンの３’マウス定常領域における遺伝子特異的プライマーと組み合わせて、Ｔａｋａｒａ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｉｍｅｒ ｍｉｘを使用して重鎖及び軽鎖からの可変領域を増幅させた。重鎖及び軽鎖について増幅された可変領域を２％アガロースゲル上で実行し、適切なバンドを切り取り、次いでＱｉａｇｅｎのＭｉｎｉ Ｅｌｕｔｅ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用してゲル精製した。精製したＰＣＲ産物を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）のＺｅｒｏ Ｂｌｕｎｔ ＰＣＲ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｋｉｔを使用してクローニングし、ＴａｋａｒａのＳｔｅｌｌａｒ Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ Ｅ．Ｃｏｌｉ細胞に形質転換し、ＬＢ寒天培地＋５０μｇ／ｍＬカナマイシンプレートに播種した。直接コロニーサンガー配列決定をＧｅｎｅＷｉｚ（Ｓｏｕｔｈ Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ、ＮＪ、ＵＳＡ）によって実行した。得られたヌクレオチド配列を、ＩＭＧＴ Ｖ－ＱＵＥＳＴを使用して分析し、生産的再配列を特定し、翻訳されたタンパク質配列を分析した。ＣＤＲ決定は、ＩＭＧＴ番号付けに基づいた。
【0256】
蛍光活性化細胞選別検出システム（ＦＡＣＳ（登録商標））を含む、フローサイトメトリーのための方法が利用可能である。例えば、Ｏｗｅｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，Ｎ．Ｊ．、Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，Ｎ．Ｊ．、Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，Ｎ．Ｊ．を参照されたい。核酸プライマー及びプローブ、ポリペプチド、ならびに抗体を含む、核酸を修飾するのに好適な蛍光試薬が、例えば、診断試薬として使用するために利用可能である。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ。
【0257】
本明細書において「ＰＣ１」と称される社内陽性対照ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体ゾルベツキシマブ（以前はクローディキシマブと称された）は、それらのＶＨ及びＶＬ配列に関する公開情報に基づいてＣＲＯによって作成された（ＶＨ配列：ＵＳ２０１８／０１１７１７４の配列番号３２、ＶＬ配列：ＵＳ２０１８／０１１７１７４の配列番号３９）。ＰＣ１抗体を使用して、実施例で使用される形質移入体及び腫瘍細胞株によるＣＬＤＮ１８．２発現を確認し、本明細書に開示される抗ＣＬＤＮ１８．２特異的抗体を評価及び特徴付けるために使用される結合アッセイ及び機能アッセイを確立した。
【0258】
簡単に説明すると、対照及び基準的抗体配列を含有するプラスミドを、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）発現システム（カタログ番号Ａ２９１３３、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）を製造業者のプロトコルに従って使用してトランスフェクトした。細胞は、１日目に３７℃及び８％ＣＯ２で、次いでトランスフェクション後にキットに提供される培地中で、３２℃及び５％ＣＯ２で培養した。抗体を、１，０００ｇで１０分間遠心分離し、続いて５，０００ｇで３０分間遠心分離することによって、ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）培地を澄明化することで精製した。次いで、上清を、０．４５μηιフィルター、続いて０．２２μηιフィルターを使用して濾過した。続いて、上清は、プロテインＡ／Ｇ樹脂（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、カタログ番号２０４２４）を製造業者のプロトコルに従って使用して、親和性精製に供した。ＥＬＩＳＡ精製の前に、培養培地中の抗体力価を大まかに決定して、ロードされる培地の量によって占められるのが樹脂結合容量の８０％未満であることを確実にした。インキュベーション後、樹脂をＰＢＳで洗浄し、Ｅｌｕｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号２１００４）によって溶離した。溶離画分は、直ちにトリス緩衝液、ｐＨ８．０を添加することによって、生理的ｐＨに調整した。続いて、精製した抗体を、ＰＢＳ緩衝液中でＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ＵＦＣ９００３２４）を使用して、緩衝液交換及びタンパク質濃縮に供した。抗体濃度は、ＢＣＡタンパク質アッセイによって決定した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びクマシー染色を実行して、抗体純度を試験した。精製したタンパク質を小分けして、長期保存のために－８０℃で保存するか、または即時使用のために４℃で維持した。
【0259】
抗体の完全性は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、続いて、非還元条件下対還元条件下のクマシー染色によって検証し、非還元条件下では、約１５０ｋＤａの支配的な１本のバンド、一方、還元条件下では、５０ｋＤａ及び２５ｋＤａの２本のバンドが観察された。
【0260】
リガンド／受容体相互作用を特徴付けるための標準的な技法が利用可能である。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。特定の作用機序を有する抗体の特徴付けに好適な抗体機能特徴付けの標準的な方法も、当業者に周知である。
【0261】
例えば、抗原性フラグメント、リーダー配列、タンパク質折り畳み、機能的ドメイン、ＣＤＲ注釈、グリコシル化部位、及び配列アラインメントを決定するためのソフトウェアパッケージ及びデータベースが利用可能である。
【0262】
実施例１：抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の生成
マウス抗クローディン１８．２抗体は、ヒトクローディン１８．２遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞によって、Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫することによって生成した。
マウス抗クローディン１８．２抗体は、ヒトクローディン１８．２遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞によって、Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫することによって生成した。
【0263】
ヒト抗クローディン１８．２抗体は、ヒトクローディン１８．２遺伝子でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞によって、ヒトＩｇ遺伝子導入マウスであるＴｒｉａｎｎｉマウス株（ＷＯ２０１３／０６３３９１）を免疫することによって生成した。
【0264】
マウス（Ｂａｌｂ／ｃまたはヒトＩｇ遺伝子導入）は、腹腔内（ＩＰ）または皮下（ＳＣ）のいずれかで免疫した。免疫応答は、後眼窩採血によって監視した。血漿をＦＡＣＳまたはイメージング（後述）によってスクリーニングし、十分な力価の抗クローディン１８．２を有するマウスを融合のために使用した。マウスは、屠殺及び脾臓及びリンパ節の取り出しの前に、免疫原によって腹腔内または静脈内で追加免疫した。
【0265】
クローディン１８．２に結合する抗体を産生するＢａｌｂ／ｃまたはヒトＩｇ遺伝子導入マウスを選択するために、免疫したマウスからの血清を、クローディン１８．２を発現する細胞株（ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３、または３Ｔ３－クローディン１８．２細胞株）に結合して、クローディン１８．２を発現しない対照細胞株に結合しないことについて、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によってスクリーニングした。簡単に説明すると、クローディン１８．２－ＣＨＯ（ＨＥＫまたは３Ｔ３細胞）を、免疫したマウスからの血清の希釈液と共にインキュベートした。細胞を洗浄し、特異的抗体結合をＰＥ標識抗マウスＩｇＧ Ａｂによって検出した。フローサイトメトリー分析は、フローサイトメトリー装置（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔｅ、ＩＱｕｅ ｐｌｕｓ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）で行った。さらに、血清マウスをイメージングによって試験した。簡単に述べると、クローディン１８．２－Ｃｈｏ（ＨＥＫまたは３Ｔ３細胞）を、免疫したマウスからの血清の希釈液と共にインキュベートした。細胞を洗浄し、パラホルムアルデヒドで固定し、洗浄し、特異化した抗体結合を、二次Ａｌｅｘａ４８８ヤギ抗マウス抗体及びＨｏｅｃｈｓｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｌｓｂａｄ、ＣＡ）によって検出した。プレートを走査し、イメージングマシン（Ｃｙｔａｔｉｏｎ ５、Ｂｉｏｔｅｋ、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）で分析した。ハイブリドーマ上清を、上記のようにＦＡＣＳ及びイメージングによって抗クローディン１８．２特異的結合について試験した。
【0266】
本発明のヒト抗体及びマウス抗体を産生するハイブリドーマを生成するために、脾細胞及びリンパ節細胞を免疫したマウスから単離し、マウス骨髄腫細胞株などの適切な不死化細胞株に融合した。得られたハイブリドーマを、抗原特異的抗体の産生についてスクリーニングした。例えば、免疫したマウスからの脾細胞、リンパ節細胞の単一細胞懸濁液を、電気融合によって等しい数のＳｐ２／０非分泌性マウスＩｇＧ骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ１５８１）に融合した。細胞を平底９６ウェル組織培養プレートに播種し、続いて選択培地（ＨＡＴ培地）で２週間インキュベーションし、次いでハイブリドーマ培養培地に切り替えた。細胞播種の約１０～１４日後に、個々のウェルからの上清を、上記のようにＦＡＣＳまたはイメージングによってスクリーニングした。抗体分泌性ハイブリドーマを２４ウェルプレートに移し、再びスクリーニングし、抗クローディン１８．２がさらに陽性である場合、陽性ハイブリドーマを、限界希釈または単一細胞ソーターを使用した選別によって、サブクローニングした。次いで、安定したサブクローンをインビトロで培養して、精製及び特徴決定のために使用する少量の抗体を生成した。
【0267】
実施例２：抗クローディン１８．２抗体の特異性
抗クローディン抗体の結合特異性を、免疫蛍光イメージングアッセイを使用して評価した。
抗クローディン抗体の結合特異性を、免疫蛍光イメージングアッセイを使用して評価した。
【0268】
抗クローディン１８．２抗体の特異的な細胞結合親和性を、ＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．２（組換えヒトＣＬＤＮ１８．２を発現するトランスフェクトＣＨＯ細胞）及びＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．１（組換えヒトＣＬＤＮ１８．１を発現するトランスフェクトＣＨＯ細胞）細胞で試験した。細胞を、１０％ＦＢＳ添加したＦ１２を含有する完全培地中に播種してから３７℃で一晩インキュベートし、抗クローディン１８．２抗体を連続希釈してアッセイプレートに添加して４℃で２時間インキュベートした後、続いて細胞を固定し、さらに細胞を検出のためにＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ａ－１１０１３によって３０分間染色した。結合を、細胞をイメージングし、Ｂｉｏｔｅｋ Ｃｙｔａｔｉｏｎを使用して蛍光強度を定量化することによって評価した。
【0269】
図３Ａに示されるように、精製されたネズミ抗クローディン１８．２抗体の群は、ＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．２細胞に結合するが、試験で１０μｇ／ｍｌの抗体を使用する場合、ＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．１細胞には結合せず、図３Ｂは、ＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．２細胞に用量依存的に結合するＭｓ－１、Ｍｓ－２、及びＭｓ－３の代表的なデータを示し、それぞれ１．２ｎＭ、２．８ｎＭ、及び１．８ｎＭのＥＣ５０値を有する。対照Ａｂ ＰＣ１は、文献報告と一致する３．２ｎＭのＥＣ５０値を有する。陰性対照抗体は、ＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．２細胞に結合しない。
【0270】
リードパネル抗体の結合親和性は、クローディン１８．１を安定的に発現するＣＨＯ ＣＬＤＮ１８．１細胞株でも試験した。いずれの抗体も、１３３．４ｎＭの最高試験濃度で有効な結合活性を示さなかった。代表的なクローンからのデータを図３Ｃに示す。クローンＭｓ－４及びＨｕ－３の両方は、ＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．１細胞には結合しないが、０．７５ｎＭ及び１．３４ｎＭのＥＣ５０値を有するＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．２細胞との用量依存的結合を示した。
【0271】
ネズミ抗クローディン１８．２リードパネルの用量依存性結合データの全セットを表５に要約する。精製されたネズミ抗クローディン１８．２抗体の群は、ＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．２細胞に０．８～３．３ｎＭの範囲のＥＣ５０値で結合する。
表５ ネズミ抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の特異性
表５ ネズミ抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の特異性
【表5-1】
【表5-2】
【0272】
同様に、図４Ａに示されるように、代表的な精製したヒト抗クローディン１８．２抗体は、ＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．２細胞に結合するが、試験で１０μｇ／ｍｌの抗体を使用する場合、ＣＨＯ－ＣＬＤＮ１８．１細胞に結合しない。
【0273】
ヒト抗クローディン１８．２リードパネルの用量依存性結合データの全セットを表６に要約する。１７例の精製クローディン１８．２抗体の群は、ＣＨＯ ＣＬＤＮ１８．２に結合し、ＥＣ５０値を０．７７ｎＭ～１９ｎＭの範囲で有する。代表的なクローンデータを図４Ｂに示す。クローンＨｕ－２、Ｈｕ－９、及びＨｕ－１０は、１．５、１．１、及び１．５ｎＭの結合ＥＣ５０を示した。
表６ ヒト抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の特異性
表６ ヒト抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の特異性
【表6】
【0274】
実施例３：クローディン１８．２を発現する腫瘍細胞株とのクローディン１８．２抗体の結合親和性
標的タンパク質密度及びグリコシル化状態は、細胞型によって異なる。ＡＤＣＣ及びＣＤＣなどの親和性依存性メカニズムの結合親和性及び活性は、標的密度及びグリコシル化状態によって著しく影響を受ける。クローディン１８．２を内因的に発現する細胞株を使用して決定される効果は、抗クローディン１８．２抗体の有効性に対して、より併進的関連性を有する。
標的タンパク質密度及びグリコシル化状態は、細胞型によって異なる。ＡＤＣＣ及びＣＤＣなどの親和性依存性メカニズムの結合親和性及び活性は、標的密度及びグリコシル化状態によって著しく影響を受ける。クローディン１８．２を内因的に発現する細胞株を使用して決定される効果は、抗クローディン１８．２抗体の有効性に対して、より併進的関連性を有する。
【0275】
腫瘍細胞を、＋１０％ＦＢＳ添加したＲＰＭＩ１６４０を含有する完全培地中に播種してから３７℃で一晩インキュベートし、クローディン１８．２抗体を連続希釈してアッセイプレートに添加して４℃で２時間インキュベートした後、続いて細胞を固定し、さらに細胞を検出のためにＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ａ－１１０１３）によって３０分間染色した。結合を、細胞をイメージングし、Ｂｉｏｔｅｋ Ｃｙｔａｔｉｏｎを使用して蛍光強度を定量化することによって評価した。
【0276】
異なるタイプの細胞の相対発現レベルを図５に提供する。胃腫瘍細胞株ＮＵＧＣ－４及び膵臓腫瘍細胞株ＰＡＴＵ８９８８Ｓと並行した、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２を過剰発現させるように操作された組換えＣＨＯ－クローディン１８．２細胞におけるＣｌａｕｄｉｎ１８．２発現レベルの評価は、ＣＨＯ－クローディン１８．２発現レベルがＮＵＧＣ－４及びＰＡＴＵ８９８８Ｓ細胞の内因性発現レベルよりも１００倍以上高いことを明らかにする。
【0277】
開示される抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、膵臓腫瘍細胞株ＰＡＴＵ８９８８Ｓへの結合（上記表５及び６を参照されたい）を２ｎＭ未満～約１００ｎＭの範囲のＥＣ５０値で示す。結合の強度は、表５及び表６に４つのカテゴリで報告され、２ｎＭ未満のＥＣ５０値を有する最強の結合は、「＋＋＋＋」として定義され、２ｎＭ～２０ｎＭの結合ＥＣ５０値は、「＋＋＋」として定義され、２０ｎＭ～１００ｎＭの結合ＥＣ５０値は、「＋＋」として印され、約１００ｎＭの弱い結合ＥＣ５０は、「＋」として示された。
【0278】
図６Ａ及び６Ｂに示されるように、抗クローディン１８．２抗体パネルの結合は、社内の陽性対照ＰＣ１よりも、ＰＡＴＵ８９８８Ｓ細胞に対して良好な結合親和性を示した。２０μｇ／ｍＬの抗体を使用して細胞を染色した場合、ＰＣ１の結合蛍光強度は、Ｍｓ１～１０及びＨｕ１～１６抗体の蛍光強度よりも有意に低い。
【0279】
同様に、ヒト抗体パネルにおける抗体Ｈｕ－２、Ｈｕ－９、及びＨｕ－１０の結合親和性は、ヒト胃腫瘍細胞株ＮＵＧＣ－４に対してより良好な結合親和性を表わし、図７において代表的なデータによって示される。
【0280】
腫瘍細胞に対する抗クローディン１８．２Ａｂ結合親和性をさらに評価するために、クローディン１８．２を内因的に発現する別のヒト胃腫瘍細胞株であるＫＡＴＯＩＩＩを、フローサイトメトリー結合アッセイで使用した（図８）。簡単に説明すると、ＫａｔｏＩＩＩを、＋１０％ＦＢＳ添加したＲＰＭＩ１６４０を含有する完全培地中に播種し、クローディン１８．２抗体を連続希釈してアッセイプレートに添加して４℃で２時間インキュベートした後、続いて細胞を固定し、さらに細胞を検出のためにＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号Ａ－１１０１３）によって３０分間染色した。
【0281】
抗体結合を、フローサイトメトリー装置ＩＱＵＥ ｐｌｕｓ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、Ｇｏｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によって評価した。図８に示されるように、６．６７μｇ／ｍｌ抗体を用いて細胞を染色した場合、ＰＣ１抗体の社内ｉＭＡｂ３６２の結合蛍光強度は、Ｈｕ－２、Ｈｕ－９、及びＨｕ－１０抗体の蛍光強度よりも有意に低い。
【0282】
実施例４：抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）
クローディン１８．２陽性細胞に結合したクローディン１８．２抗体の抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を、生物発光アッセイによって測定し、マウスＦｃγＲＩＶに特異的に結合して活性化する抗体の活性を決定した。トランスフェクトされたＣＨＯ細胞によって発現される組換えタンパク質もしくは内因性ＣＬＤＮ１８．２を発現するヒト細胞株のいずれかである、ＣＬＤＮ１８．２を安定的に発現する細胞、または陰性細胞を、Ｆ１２＋１０％ＦＢＳを含有する完全培地に播種し、細胞を３７℃で一晩インキュベートした。次いで、クローディン１８．２抗体を連続希釈し、エフェクター細胞と共に添加した。細胞生存率を、Ｐｒｏｍｅｇａ生物発光アッセイを製造業者の指示に従って使用して検出した（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｍ１２０１）。
クローディン１８．２陽性細胞に結合したクローディン１８．２抗体の抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を、生物発光アッセイによって測定し、マウスＦｃγＲＩＶに特異的に結合して活性化する抗体の活性を決定した。トランスフェクトされたＣＨＯ細胞によって発現される組換えタンパク質もしくは内因性ＣＬＤＮ１８．２を発現するヒト細胞株のいずれかである、ＣＬＤＮ１８．２を安定的に発現する細胞、または陰性細胞を、Ｆ１２＋１０％ＦＢＳを含有する完全培地に播種し、細胞を３７℃で一晩インキュベートした。次いで、クローディン１８．２抗体を連続希釈し、エフェクター細胞と共に添加した。細胞生存率を、Ｐｒｏｍｅｇａ生物発光アッセイを製造業者の指示に従って使用して検出した（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｍ１２０１）。
【0283】
表７に示されるように、マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃを伴うヒト可変領域を有する代表的なヒトクローディン１８．２抗体は、ＡＤＣＣを０．７７ｎＭ～７．０９ｎＭの範囲のＥＣ５０値で誘導した。代表的なデータを図９に示す。抗体Ｈｕ－２、Ｈｕ－７、及びＨｕ－９は、３．５１、３．５２、及び１．１０ｎＭのＡＤＣＣ ＥＣ５０を示した。ＣＬＤＮ１８．２に特異的でない無関係のマウスＩｇＧ２ａ抗体は、アッセイで活性を示さない。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃを含むように操作されたＰＣ１抗体は、ヒトエフェクター細胞を添加すると、同様のアッセイで０．６６ｎＭのＥＣ５０を有した（データは図示せず）。
表７ 抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性
表７ 抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性
【表7】
【0284】
実施例５：エンドサイトーシススクリーニング
クローディン１８．２陽性細胞に結合した開示のＣＬＤＮ１８．２特異的抗体のエンドサイトーシスを、標的結合抗体の共内部移行を抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ－ＭＭＡＦ抗体と共に使用した細胞傷害性ベースのエンドサイトーシスアッセイによって測定した。
クローディン１８．２陽性細胞に結合した開示のＣＬＤＮ１８．２特異的抗体のエンドサイトーシスを、標的結合抗体の共内部移行を抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ－ＭＭＡＦ抗体と共に使用した細胞傷害性ベースのエンドサイトーシスアッセイによって測定した。
【0285】
クローディン１８．２または陰性細胞を安定的に発現する細胞を、Ｆ１２＋１０％ＦＢＳを含有する完全培地に播種し、細胞を３７℃で一晩インキュベートした。次いで、クローディン１８．２抗体を連続希釈し、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ－ＭＭＡＦ抗体と共にアッセイプレートに添加し、３７℃で７２時間インキュベートした。細胞生存率は、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｅｌｌ－ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ生物発光アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号７５７０）を製造業者の説明書に従って使用して検出した。
【0286】
表８に示すように、精製マウスクローディン１８．２抗体のリードパネルは、ＣＨＯ ＣＬＤＮ１８．２細胞においてエンドサイトーシス由来細胞傷害を、０．７１～２．５５ｎＭの範囲のＥＣ５０値で誘導した。
【0287】
同様に、表９に示されるように、精製ヒトクローディン１８．２抗体のＴｒｉａｎｎｉパネルは、ＣＨＯ ＣＬＤＮ１８．２においてエンドサイトーシス由来細胞傷害を、０．８５ｎＭ～１３．３９ｎＭの範囲のＥＣ５０値で誘導した。代表的なクローンデータを図１０に示す。クローンＨｕ－２、Ｈｕ－７、Ｈｕ－９、及びＨｕ－１１は、それぞれ１．４３、１．６５、０．８５、及び１．３１ｎＭのエンドサイトーシス由来の細胞傷害性ＥＣ５０を示した。
【0288】
リードパネル抗体はまた、クローディン１８．２を内因的に発現する膵臓腫瘍細胞株ＰＡＴＵ８９８８Ｓにおいてエンドサイトーシス由来細胞性細胞傷害を示したが、クローディン１８．１を安定的に発現するＣＨＯ ＣＬＤＮ１８．１細胞株においてエンドサイトーシスに由来する細胞殺傷活性を示さなかった（データは図示せず）。
表８ ネズミ抗クローディン１８．２ｍＡｂのエンドサイトーシス
表９ ヒト抗クローディン１８．２ｍＡｂのエンドサイトーシス
表８ ネズミ抗クローディン１８．２ｍＡｂのエンドサイトーシス
【表8-1】
【表8-2】
【表9】
【0289】
実施例６：増強された抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）
クローディン１８．２陽性細胞に結合したクローディン１８．２抗体のＡＤＣＣ活性を、生物発光アッセイによって測定し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａに特異的に結合して活性化する抗体の活性を決定した。ＣＬＤＮ１８．２を安定的に発現するＣＨＯ細胞、または陰性細胞を、Ｆ１２＋１０％ＦＢＳを含有する完全培地に播種し、細胞を３７℃で一晩インキュベートした。次いで、クローディン１８．２抗体を連続希釈し、エフェクター細胞と共に添加した。細胞生存率を、Ｐｒｏｍｅｇａ生物発光アッセイを製造業者の指示に従って使用して検出した（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号７０１０）。
クローディン１８．２陽性細胞に結合したクローディン１８．２抗体のＡＤＣＣ活性を、生物発光アッセイによって測定し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａに特異的に結合して活性化する抗体の活性を決定した。ＣＬＤＮ１８．２を安定的に発現するＣＨＯ細胞、または陰性細胞を、Ｆ１２＋１０％ＦＢＳを含有する完全培地に播種し、細胞を３７℃で一晩インキュベートした。次いで、クローディン１８．２抗体を連続希釈し、エフェクター細胞と共に添加した。細胞生存率を、Ｐｒｏｍｅｇａ生物発光アッセイを製造業者の指示に従って使用して検出した（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号７０１０）。
【0290】
図１３Ａに示されるように、非改変抗クローディン１８．２抗体ＮＢＬ－０１４及びＡＤＣＣ活性を増強するために導入された点変異を含む、Ｆｃ可変抗体ＮＢＬ－０１４Ｐ、ならびにＩｇＧコアフコースが低いかまたはない（例えば、非もしくは無フコシル化）ことを特徴とする抗体を発現するように選択された条件下でＨＥＫ細胞において生成されたＦｃ改変変異体であるＮＢＬ－０１４Ｇは、ＣＨＯ－クローディン１８．２細胞及びＰＡＴＵ８９８８Ｓ細胞において、増強されたＡＤＣＣ活性を誘導した。
【0291】
高標的密度のＣＨＯ－クローディン１８．２細胞において、ＮＢＬ－０１４Ｐ及びＮＢＬ－０１４Ｇは、０．０６ｎＭ～０．０２ｎＭのＥＣ５０値を示し、０．７３ｎＭのＡＤＣＣ ＥＣ５０を有する非改変親ＮＢＬ－０１４抗体よりも１０倍及び３５倍優れていた（図１３Ａ）。
【0292】
代替のＡＤＣＣアッセイも使用して、エフェクター細胞株ＮＫ９２ＭＩ－ＣＤ１６ａを使用して標的細胞溶解％を直接的に測定することによって、抗クローディン１８．２抗体のＡＤＣＣ活性を評価した。簡単に説明すると、ＣＨＯ－クローディン１８．２標的細胞を製造業者の指示に従ってＣＦＳＥで染色し、次いで、細胞をＵ底３８４ウェルプレートに、ＲＰＭＩ培地（抗生物質なし）中に８００ｋ個／ｍＬで播種した。連続希釈したＡｂ及びアイソタイプ対照をプレートに添加した。ＮＫ９２ＭＩ細胞を採取して計数し、指示濃度３２０ｋ個／ｍＬに希釈した後、ＮＫ９２ＭＩ細胞：腫瘍細胞が最終１：５の比を有するように１０ｕｌ／ウェル添加して、３７℃、５％ＣＯ２で４時間、３７℃、５％ＣＯ２インキュベートし、次いで室温で１０分間取り出した。死細胞色素７－ＡＡＤ（１：１００）を添加し、ウェル内で混合し、１０分間静置させ、次いでプレートにＦＡＣＳを実行して、細胞死／殺傷能力を決定した（ＣＦＳＥでゲーティングして陽性を死細胞７－ＡＡＤ＋として定義する）。
【0293】
図１３Ｂに示されるように、Ｆｃ改変抗体ＮＢＬ－０１４Ｐ及びＮＢＬ－０１４Ｇは、このアッセイ形式で、適度に増強されたＡＤＣＣ活性を誘導した。
【0294】
実施例７：クローディン１８．２を内因的に発現する腫瘍細胞において増強されたＡＤＣＣ活性
クローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ－クローディン１８．２細胞と比較して、ヒト腫瘍細胞株ＰＡＴＵ８９８８Ｓ及びＮＵＧＣ－４は、はるかに少ないクローディン１８．２を発現する（図５）。抗クローディン１８．２抗体を、標的細胞としてヒト腫瘍細胞株を使用し、それらのＡＤＣＣ活性について試験した。クローディン１８．２抗体のＡＤＣＣ活性を、生物発光アッセイによって測定し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａに特異的に結合して活性化する抗体の活性を決定した。内因性ＣＬＤＮ１８．２を発現するヒト細胞株を、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳを含有する完全培地に播種し、細胞を３７℃で一晩インキュベートした。
クローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ－クローディン１８．２細胞と比較して、ヒト腫瘍細胞株ＰＡＴＵ８９８８Ｓ及びＮＵＧＣ－４は、はるかに少ないクローディン１８．２を発現する（図５）。抗クローディン１８．２抗体を、標的細胞としてヒト腫瘍細胞株を使用し、それらのＡＤＣＣ活性について試験した。クローディン１８．２抗体のＡＤＣＣ活性を、生物発光アッセイによって測定し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａに特異的に結合して活性化する抗体の活性を決定した。内因性ＣＬＤＮ１８．２を発現するヒト細胞株を、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳを含有する完全培地に播種し、細胞を３７℃で一晩インキュベートした。
【0295】
次いで、クローディン１８．２抗体を連続希釈し、エフェクター細胞と共に添加した。細胞生存率を、Ｐｒｏｍｅｇａ生物発光アッセイを製造業者の指示に従って使用して検出した（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号７０１０）。ＰＡＴＵ８９８８Ｓ細胞株ＡＤＣＣアッセイにおいて、ＮＢＬ－０１４Ｐ及びＮＢＬ－０１４Ｇは、それぞれ０．０６ｎＭ及び０．０４ｎＭのＡＤＣＣ ＥＣ５０値を示し、これらは、親クローンＮＢＬ－０１４のＡＤＣＣ活性（０．１２ｎＭのＥＣ５０、図１３Ａを参照されたい）と比較して増強される。さらに、この膵臓細胞モデルでは、ＡＤＣＣ効果の最大値は、親抗体ＮＢＬ－０１４の最大ＡＤＣＣ応答よりも約３３倍上昇した（図１４Ｂ）。
【0296】
ＮＵＧＣ－４細胞株では、ＮＢＬ－０１４Ｐ及びＮＢＬ－０１４Ｇは、それぞれ０．０４ｎＭ及び０．０６ｎＭのＡＤＣＣ ＥＣ５０を示し、また、０．４０ｎＭのＡＤＣＣ ＥＣ５０を有する親クローンＮＢＬ－０１４から増強された。さらに、この胃細胞アッセイでは、ＡＤＣＣ効果の最大値は、親抗体ＮＢＬ－０１４の最大ＡＤＣＣ応答よりも約３倍上昇した（図１４Ａ）。
【0297】
実施例８：抗クローディン１８．２抗体の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）
抗クローディン１８．２抗体がＣＤＣ活性を誘導する能力を、最初にクローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ細胞株を使用して評価した。このフローサイトメーターベースのＣＤＣアッセイは、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ（Ｒｏｃｋｙｈｉｌｌ、ＮＪ）のプールされたヒト血清を使用して行った。ＣＨＯ－クローディン１８．２細胞を、３８４ウェルプレートにウェル当たり８，０００個の細胞で播種した。１０μｌの選択された抗体を、１０μｇ／ｍＬの濃度から開始する連続希釈で添加した。プレートを、３７℃で１５分間インキュベートするように放置した。インキュベーション後、１０μｌのヒト血清を体積当たり１／１６の最終希釈でウェルに添加した。その後、プレートを３７℃で２．５時間インキュベートするように放置した。７ＡＡＤ生存性染料を添加し、１０分後にｉＱｕｅ ｐｌｕｓ（フローサイトメーター）を取得した。
抗クローディン１８．２抗体がＣＤＣ活性を誘導する能力を、最初にクローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ細胞株を使用して評価した。このフローサイトメーターベースのＣＤＣアッセイは、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ（Ｒｏｃｋｙｈｉｌｌ、ＮＪ）のプールされたヒト血清を使用して行った。ＣＨＯ－クローディン１８．２細胞を、３８４ウェルプレートにウェル当たり８，０００個の細胞で播種した。１０μｌの選択された抗体を、１０μｇ／ｍＬの濃度から開始する連続希釈で添加した。プレートを、３７℃で１５分間インキュベートするように放置した。インキュベーション後、１０μｌのヒト血清を体積当たり１／１６の最終希釈でウェルに添加した。その後、プレートを３７℃で２．５時間インキュベートするように放置した。７ＡＡＤ生存性染料を添加し、１０分後にｉＱｕｅ ｐｌｕｓ（フローサイトメーター）を取得した。
【0298】
高標的密度のＣＨＯ－クローディン１８．２細胞において、ＮＢＬ－０１４Ｐ及びＮＢＬ－０１４Ｇは、０．１５ｎＭ～０．３０ｎＭの強力なＥＣ５０値を示し、０．２２ｎＭのＣＤＣ ＥＣ５０を有するその非操作形態ＮＢＬ－０１４と同様だった（図１５）。ＰＣ１（社内ｉＭＡｂ３６）のＣＤＣ活性（ＥＣ５０値１．７６）と比較して、ＮＢＬ－０１４の観察されたＥＣ５０活性は、約１０倍の改善を表す。
【0299】
抗クローディン１８．２抗体のＣＤＣ活性を、クローディン１８．２を内因的に発現するヒト腫瘍細胞株ＰＡＴＵ８９８８Ｓにおいてさらに評価した。図１６に示されるように、ＮＢＬ－０１４、ＮＢＬ－０１４Ｐ、及びＮＢＬ－０１４Ｇはいずれも、ＰＡＴＵ８９８８Ｓにおける強力なＣＤＣ活性を誘導し、ＮＢＬ－０１４Ｐは最大のＣＤＣ％殺傷を有した。
【0300】
実施例９：抗クローディン１８．２抗体の抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）
抗クローディン１８．２抗体がＡＤＣＰを誘導する能力を、Ｐｒｏｍｅｇａ生物発光アッセイを使用して評価した。アッセイは、標的細胞としてローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ細胞またはＮＵＧＣ細胞を使用する。エフェクター細胞を、抗クローディン１８．２抗体の存在下で標的細胞と共培養した。抗体は、標的細胞で標的に結合し、次いで、エフェクター細胞でＦｃγＲＩＩａを活性化し、ＮＦＡＴ－ＲＥ媒介性ルシフェラーゼ活性をもたらし、これは、Ｂｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムを使用して定量化することができる。
抗クローディン１８．２抗体がＡＤＣＰを誘導する能力を、Ｐｒｏｍｅｇａ生物発光アッセイを使用して評価した。アッセイは、標的細胞としてローディン１８．２を過剰発現するＣＨＯ細胞またはＮＵＧＣ細胞を使用する。エフェクター細胞を、抗クローディン１８．２抗体の存在下で標的細胞と共培養した。抗体は、標的細胞で標的に結合し、次いで、エフェクター細胞でＦｃγＲＩＩａを活性化し、ＮＦＡＴ－ＲＥ媒介性ルシフェラーゼ活性をもたらし、これは、Ｂｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムを使用して定量化することができる。
【0301】
簡単に説明すると、ＣＨＯ－クローディン１８．２またはＮＵＧＣ－４細胞を、白色３８４ウェルプレートにアッセイ緩衝液中で１２０００個／２０ｕｌ／ウェル（０．６Ｍ／ｍｌ）播種した。エフェクター細胞を解凍し、１Ｍ／ｍｌに再懸濁し、１０μｌをアッセイプレート（１００００個／ウェル）に添加した。抗体をアッセイ緩衝液中で希釈し、標的細胞の上に１０μｌ／ウェを加えた。細胞プレートを一晩インキュベートした。翌日、製造業者の説明書に従ってｌｕｃ基質２０ｕＬを直接添加し、プレートをスピンダウンさせて直ちに読み取った。
【0302】
抗クローディン１８．２抗体ＮＢＬ－０１４、ＮＢＬ－０１４Ｇ、及びＮＢＬ－０１４ＰのＡＤＣＰ活性を、図１７Ａ（ＣＨＯ－クローディン１８．２細胞）及び図１７Ｂ（ＮＵＧＣ－４細胞）に示した。高密度ＣＬＤＮ１８．２標的細胞を使用する場合、Ｆｃ操作したＡｂからの活性は、親抗体のもの同様だったが、一方、社内ＰＣ１抗体（ｉＭＡｂ３６２）のＡＤＣＰ活性は、高い応答だが低い効力を示した。
【0303】
ＡＤＣＰ活性を評価するためのヒト腫瘍細胞株ＮＵＧＣ－４（ＣＬＤＮ１８．２の内因性発現）の使用は、社内ＰＣ１抗体が１００倍低い効力だが、その最大活性がＮＢＬ－０１４、ＮＢＬ－０１４Ｐ、及びＮＢＬ－０１４Ｇよりも高いことを示すデータを生じる。
【0304】
これらの結果に基づいて、ＮＢＬ－０１４のＡＤＣＰ活性は、クローディン１８．２発現レベルに関係なく強力であり、Ｆｃ改変（タンパク質工学またはグリコール工学）のいずれも、観察された活性の効力を変化させなかったようである。ＮＢＬ－０１４Ｇ及びＮＢＬ－０１４ＰのＥＣ５０値は、それらの親クローンＮＢＬ－０１４と同様である。試験した両方の細胞株において、ＣＨＯ－クローディン１８．２、ならびにＮＵＧＣ－４、ＮＢＬ－１４、ＮＢＬ－１４Ｇ、及びＮＢＬ－１４Ｐは、ＰＣ１よりもＥＣ５０値の点で優れたＡＤＣＰ活性を示した。しかし、ＰＣ１の１０μｇ／ｍｌの高い抗体濃度でのＡＤＣＰ効果は、ＮＢＬ－０１４よりも２倍高い応答を有する。
【0305】
実施例１０：膵臓癌のクローディン１８．２を過剰発現するＰＡＴＵ８９８８Ｓの皮下腫瘍モデルにおける抗クローディン１８．２抗体の抗腫瘍有効性
６～７週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、クローディン１８．２を過剰発現する生きたＰＡＴＵ８９８８Ｓ細胞の５×１０６個を０．１ｍｌのＰＢＳ中で右脇腹に皮下注射した。３日後、マウスを無作為に群（Ｎ＝１０）に分け、腹腔内注射による処置を開始した（０日目）。群１はＰＢＳ対照を受け、群２は２００ｕｇのアイソタイプ抗体対照を受け、群３は２００ｕｇのＮＢＬ－０１４、及び群４は２００ｕｇのＰＣ１抗体を受けた。処置は週に２回、４週間投与した。
６～７週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、クローディン１８．２を過剰発現する生きたＰＡＴＵ８９８８Ｓ細胞の５×１０６個を０．１ｍｌのＰＢＳ中で右脇腹に皮下注射した。３日後、マウスを無作為に群（Ｎ＝１０）に分け、腹腔内注射による処置を開始した（０日目）。群１はＰＢＳ対照を受け、群２は２００ｕｇのアイソタイプ抗体対照を受け、群３は２００ｕｇのＮＢＬ－０１４、及び群４は２００ｕｇのＰＣ１抗体を受けた。処置は週に２回、４週間投与した。
【0306】
体重を週に２回測定した。腫瘍体積は、式Ｖ＝１／２×Ｌ×Ｗ×Ｗを使用して異なる時点で決定し、式中、Ｌは異種移植片の長い寸法であり、Ｗは短い寸法である。２５００ｍｍ３を超える腫瘍を有するいずれのマウスも屠殺した。
【0307】
図１８Ａに示されるように、試験した抗体ＮＢＬ－０１４及びＰＣ１は、腫瘍サイズの成長を阻害した。試験の３４日目に、マウスを屠殺し、腫瘍を取り出して重量を測定した。ＮＢＬ－０１４及び社内ＰＣ１抗体（ｉＭＡｂ３６２）の両方は、指標として腫瘍重量を使用して、強力な抗腫瘍有効性を示した（図１８Ｂ）。
【0308】
実施例１１：胃癌のＮＵＧＣ－４皮下モデルにおける抗クローディン１８．２抗体の抗腫瘍有効性
６～７週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、生きたＮＵＧＣ－４細胞の５×１０６個を０．１ｍｌのＰＢＳ中で右脇腹に皮下注射した。３日後、マウスを無作為に群（Ｎ＝１０）に分け、腹腔内注射による処置を開始した（０日目）。群１はＰＢＳ対照を受け、群２は２００ｕｇのＮＢＬ－０１４を、群３は２００ｕｇのＰＣ１抗体を受けた。処置は週２回、５週間投与した。
６～７週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、生きたＮＵＧＣ－４細胞の５×１０６個を０．１ｍｌのＰＢＳ中で右脇腹に皮下注射した。３日後、マウスを無作為に群（Ｎ＝１０）に分け、腹腔内注射による処置を開始した（０日目）。群１はＰＢＳ対照を受け、群２は２００ｕｇのＮＢＬ－０１４を、群３は２００ｕｇのＰＣ１抗体を受けた。処置は週２回、５週間投与した。
【0309】
体重を週に２回測定した。腫瘍体積は、式Ｖ＝１／２×Ｌ×Ｗ×Ｗを使用して異なる時点で決定し、式中、Ｌは異種移植片の長い寸法であり、Ｗは短い寸法である。２５００ｍｍ３を超える腫瘍を有するいずれのマウスも屠殺した。
【0310】
図１９に示すように、試験した抗体ＮＢＬ－０１４は、腫瘍成長を阻害した。試験の３５日目に、ＮＢＬ－０１４及びＰＣ１の両方が、有意な抗腫瘍有効性を示した。ＮＢＬ－０１４は、社内ＰＣ１抗体（ｉＭＡｂ３６２）よりも優れた抗腫瘍活性を示した。
【0311】
実施例１２：胃癌のＰＢＭＣヒト化ＮＵＧＣ－４皮下モデルにおけるＦｃ操作した抗クローディン１８．２抗体の抗腫瘍有効性
Ｆｃ操作した抗クランディン１８．２抗体の治療可能性を調べるために、Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙのＮＯＧ－ＭＨＣＩ／ＩＩ－２ＫＯ（ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｂ２ｍｅｍ１ＴａｃＰｒｋｄｃｓｃｉｄＨ２－Ａｂ１ｔｍ１ＤｏｉＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｓｕｇ／ＪｉｃＴａｃ）マウスを、ＧＶＨＤ発症を伴わない延長した治療期間のために使用することを選択した。
Ｆｃ操作した抗クランディン１８．２抗体の治療可能性を調べるために、Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙのＮＯＧ－ＭＨＣＩ／ＩＩ－２ＫＯ（ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｂ２ｍｅｍ１ＴａｃＰｒｋｄｃｓｃｉｄＨ２－Ａｂ１ｔｍ１ＤｏｉＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｓｕｇ／ＪｉｃＴａｃ）マウスを、ＧＶＨＤ発症を伴わない延長した治療期間のために使用することを選択した。
【0312】
簡単に説明すると、６～７週齢の雌ＮＯＧ ｄｋｏマウスに、５×１０６個の生きたＮＵＧＣ－４細胞を０．１ｍｌのＰＢＳ中で右脇腹に皮下接種した。３日後、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を解凍し、計数した。３００ｕｌのＰＢＳで希釈した１×１０７個のＰＢＭＣを、尾静脈を通して各マウスに移植した。マウスを群に無作為に分け、抗体の腹腔内注射による処置を開始した（０日目）。群１はＰＢＭＣと共にＰＢＳを受け、群２は操作されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃを有するＮＢＬ－０１４を２００ｕｇ受けた。
【0313】
処置は週に２回、５週間投与した。ＰＢＭＣ移植を週に１回を４回繰り返した。マウスの体重を週に２回測定した。腫瘍体積は、式Ｖ＝１／２×Ｌ×Ｗ×Ｗを使用して異なる時点で決定し、式中、Ｌは異種移植片の長い寸法であり、Ｗは短い寸法である。２５００ｍｍ３を超える腫瘍を有するいずれのマウスも屠殺した。
【0314】
【図1-1】
【図1-2】
【図1-3】
【図1-4】
【図1-5】
【図1-6】
【図1-7】
【図1-8】
【図2-1】
【図2-2】
【図2-3】
【図2-4】
【図2-5】
【図2-6】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17A】
【図17B】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【配列表】
【国際調査報告】